BE1027451B1 - A method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins - Google Patents
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Abstract
La présente invention rend public un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, comprenant les étapes suivantes; étape un, ajout d'eau distillée dans des tissus cartilagineux et placement dans un autoclave pour résolution par pressage à chaud ; étape deux, ajout de trypsine dans la solution liquéfiée de cartilage et première enzymolyse, puis ajout de papaïne et deuxième enzymolyse, une solution d'enzymolyse est obtenue ; étape trois, séparation de la solution d'enzymolyse pour obtenir respectivement des polysaccharides de cartilage et des peptides de cartilage; le procédé de préparation de solution liquéfiée de cartilage est : les tissus cartilagineux et l'eau distillée sont placés dans un autoclave, puis une résolution par pressage à chaud est effectuée à 0,07~0,1 MPa et 110~120°C pendant 0,5~2,5 heures, puis une homogénéisation est réalisée à 1000~1500 tpm pendant 10~20 secondes, la solution liquéfiée de cartilage est alors obtenue. L'utilisation par la présente invention du traitement de résolution par pressage à chaud avant résolution par enzymolyse permet non seulement de résoudre complètement les glycoprotéines de cartilage, mais également d'éviter efficacement l'emploi d'alcalis forts dans le procédé.The present invention discloses a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, comprising the following steps; step one, adding distilled water to cartilaginous tissues and placing in an autoclave for resolution by hot pressing; step two, addition of trypsin in the liquefied solution of cartilage and first enzymolysis, then addition of papain and second enzymolysis, an enzymolysis solution is obtained; step three, separation of the enzymolysis solution to obtain cartilage polysaccharides and cartilage peptides respectively; the method of preparing cartilage liquefied solution is: cartilage tissues and distilled water are placed in an autoclave, then hot pressing resolution is performed at 0.07~0.1MPa and 110~120°C for 0.5~2.5 hours, then homogenization is performed at 1000~1500 rpm for 10~20 seconds, then the liquefied cartilage solution is obtained. The present invention's use of the hot pressing resolving treatment prior to enzymolysis resolving not only fully resolves cartilage glycoproteins, but also effectively avoids the use of strong alkalis in the process.
Description
Un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage Domaine technique La présente invention concerne le domaine technique de l’usinage des os.A method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins Technical Field The present invention relates to the technical field of bone machining.
Concrètement la présente invention concerne un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage.Concretely, the present invention relates to a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins.
État de la technique Les composants principaux des os des animaux sont les protéines et les composés hydrates de carbone.STATE OF THE ART The main components of animal bones are proteins and carbohydrate compounds.
Des études montrent que les composés hydrates de carbone présents dans les os relèvent principalement d’un mucopolysaccharide, le sulfate de chondroïtine, les protéines sont principalement du collagène de type II.Studies show that the carbohydrate compounds found in the bones are primarily a mucopolysaccharide, chondroitin sulfate, the proteins are primarily type II collagen.
Les polysaccharides de cartilage sont des mucopolysaccharides acides naturels courants, il s’agit d’une poudre blanche ou jaune pâle, facilement soluble dans l’eau, non soluble dans l’éthanol.Cartilage polysaccharides are common natural acidic mucopolysaccharides, it is white or pale yellow powder, easily soluble in water, not soluble in ethanol.
En tant que matière première courante des produits diététiques et cosmétiques les polysaccharides de cartilage peuvent constituer un complément au traitement des douleurs articulaires, des maux de tête nerveux, de la névralgie du trijumeau et de l’artériosclérose, ses applications sont vastes dans le domaine médical et alimentaire.As a common raw material of dietary and cosmetic products, cartilage polysaccharides can be an addition to the treatment of joint pain, nervous headache, trigeminal neuralgia and arteriosclerosis, its applications are wide in medical field. and food.
La Chine est un grand pays producteur de polysaccharides de cartilage, plus de 80% de la production mondiale est fournie par la Chine.China is a major producer of cartilage polysaccharides, more than 80% of the world's production is supplied by China.
Le collagène de type II est constitué de 3 chaînes peptidiques similaires, formant une structure à trois spirales, riche en hydroxyproline, en hydroxylysine, et relativement riche en proline et en lysine, son poids moléculaire relatif est situé entre 95 et 100 kDa.Type II collagen consists of 3 similar peptide chains, forming a three-coil structure, rich in hydroxyproline, hydroxylysine, and relatively rich in proline and lysine, its relative molecular weight is between 95 and 100 kDa.
Le collagène de type II est largement employé dans les médicaments, l’industrie de chimie fine et l’industrie agro-alimentaire.Type II collagen is widely used in medicine, the fine chemical industry and the food industry.
Des études montrent que les oligopeptides de cartilage sternal de poulet (poids moléculaire peptidique < 1 kDa) a de très bons effets anti ostéoporose.Studies show that chicken sternal cartilage oligopeptides (peptide molecular weight < 1 kDa) has very good anti-osteoporosis effects.
La prise orale de collagène de type II engendre une tolérance immunitaire de l’organisme permettant d’inhiber l’apparition de l’arthrite rhumatoïde.Oral intake of type II collagen generates immune tolerance in the body to inhibit the onset of rheumatoid arthritis.
L’utilisation de collagène de type II comme complément diététique permet d’inhiber l’arthrite rhumatoïde et d’entretenir la santé du squelette.The use of type II collagen as a dietary supplement can inhibit rheumatoid arthritis and maintain skeletal health.
Les préparations classiques de polysaccharide de cartilage utilisent principalement le cartilage laryngé, nasal et trachéale de requin, porc et bovins comme matières premières, un produit brut est obtenu par techniques d’enzymolyse, d’absorption résineuse et de sédimentation à l’éthanol, cependant les techniques de préparation de polysaccharides de cartilage nécessitent un traitement aux alcalis forts, engendrant de grandes quantités d’eau de rebut industriel qui polluent gravement l’environnement. Contenu de l’invention L’un des buts de la présente invention est d’au moins résoudre le problème susmentionné, et de fournir les nombreux avantages décrits ci-après.Conventional cartilage polysaccharide preparations mainly use laryngeal, nasal and tracheal cartilage from shark, pig and cattle as raw materials, a crude product is obtained by enzymolysis, resin absorption and ethanol sedimentation techniques, however the techniques for preparing cartilage polysaccharides require treatment with strong alkalis, generating large quantities of industrial waste water which seriously pollutes the environment. Content of the invention One of the objects of the present invention is to at least solve the aforementioned problem, and to provide the many advantages described below.
Un autre des buts de la présente invention est de fournir un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, procédant par traitement de résolution par pressage à chaud avant résolution par enzymolyse, permettant non seulement de résoudre entièrement les glycoprotéines de cartilage, mais également d’éviter efficacement l’emploi d’alcalis forts dans le procédé.Another of the objects of the present invention is to provide a process for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, proceeding by treatment of resolution by hot pressing before resolution by enzymolysis, making it possible not only to completely resolve the cartilage glycoproteins, but also to effectively avoid the use of strong alkalis in the process.
Afin d’atteindre ces buts et ses autres avantages, la présente invention fournit un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, comprenant les étapes suivantes : étape un, ajout d’eau distillée dans des tissus cartilagineux et placement dans un autoclave pour résolution par pressage à chaud, obtention d’une solution liquéfiée de cartilage ; étape deux, ajout de trypsine dans la solution liquéfiée de cartilage et première enzymolyse, puis ajout de papaïne et deuxième enzymolyse, désactivation des enzymes, et obtention d’une solution d’enzymolyse ; étape trois, séparation de la solution d’enzymolyse pour obtenir respectivement des polysaccharides de cartilage et des peptides de cartilage.In order to achieve these objects and its other advantages, the present invention provides a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, comprising the following steps: step one, adding distilled water to cartilage tissues and placing in an autoclave to resolution by hot pressing, obtaining a liquefied solution of cartilage; step two, addition of trypsin to the liquefied cartilage solution and first enzymolysis, then addition of papain and second enzymolysis, deactivation of the enzymes, and obtaining an enzymolysis solution; step three, separation of the enzymolysis solution to obtain cartilage polysaccharides and cartilage peptides respectively.
Préférablement, à l’étape un, le rapport massique des tissus cartilagineux et de l’eau distillée est de 1 : 1,5-2,5. à l’étape un, le procédé de préparation de solution liquéfiée de cartilage est le suivant : les tissus cartilagineux et l’eau distillée sont placés dans un autoclave, puis une résolution par pressage à chaud est effectuée à 0,07-0,1 MPa et 110-120°C pendant 0,5-2,5 heures, résolution par pressage à chaud une homogénéisation à 1000-1500 tpm pendant 10-20 secondes est effectuée, la solution liquéfiée de cartilage est alors obtenue.Preferably, in step one, the mass ratio of cartilage tissue and distilled water is 1:1.5-2.5. In step one, the method of preparing cartilage liquefied solution is as follows: cartilage tissues and distilled water are placed in an autoclave, and then hot pressing resolution is performed at 0.07-0.1 MPa and 110-120°C for 0.5-2.5 hours, resolution by hot pressing homogenization at 1000-1500 rpm for 10-20 seconds is carried out, the liquefied solution of cartilage is then obtained.
Préférablement, à l’étape deux le procédé de préparation de solution d’enzymolyse est le suivant : de la trypsine est ajoutée dans la solution liquéfiée de cartilage et une première enzymolyse est effectuée à 50-60°C pendant 1-2 heures, de la papaïne est ensuite ajoutée et une deuxième enzymolyse est effectuée à 50-60°C pendant 1-2 heures, une fois la deuxième enzymolyse achevée, une désactivation des enzymes est effectuée au bain-Marie à 100°C pendant 3-5 minutes, dans laquelle le rapport quantitatif de la solution liquéfiée de cartilage et de trypsine et de papaïne est de 1 : 0,015-0,045 : 0,015-0,03.Preferably, in step two, the process for preparing the enzymolysis solution is as follows: trypsin is added to the liquefied cartilage solution and a first enzymolysis is carried out at 50-60°C for 1-2 hours, the papain is then added and a second enzymolysis is carried out at 50-60°C for 1-2 hours, once the second enzymolysis is completed, the enzymes are deactivated in a water bath at 100°C for 3-5 minutes, wherein the quantitative ratio of the liquefied solution of cartilage and trypsin and papain is 1:0.015-0.045:0.015-0.03.
Préférablement, à l’étape trois, le procédé de séparation de la solution d’enzymolyse est le suivant : la solution d’enzymolyse est filtrée par membrane de microfiltration, un premier rétentat et un premier filtrat sont obtenus, le premier filtrat est filtré par membrane de nanofiltration, et un deuxième rétentat ainsi qu’un deuxième filtrat sont obtenus, le premier rétentat et le deuxième filtrat sont combinés et séchés, les peptides de cartilage sont ainsi obtenus, le deuxième rétentat est séché et les polysaccharides de cartilage sont ainsi obtenus.Preferably, in step three, the process for separating the enzymolysis solution is as follows: the enzymolysis solution is filtered by microfiltration membrane, a first retentate and a first filtrate are obtained, the first filtrate is filtered by nanofiltration membrane, and a second retentate and a second filtrate are obtained, the first retentate and the second filtrate are combined and dried, the cartilage peptides are thus obtained, the second retentate is dried, and the cartilage polysaccharides are thus obtained .
Préférablement, à l’étape un, les tissus cartilagineux sont prétraités avant résolution par pressage à chaud, le procédé de prétraitement étant le suivant : la chair et le fascia qui adhèrent aux tissus cartilagineux sont éliminés, et les tissus cartilagineux sont lavés à l’eau.Preferably, in step one, the cartilaginous tissues are pretreated before resolution by hot pressing, the pretreatment method being as follows: the flesh and the fascia which adhere to the cartilaginous tissues are removed, and the cartilaginous tissues are washed with water.
Préférablement, les tissus cartilagineux peuvent être du cartilage sternal, du cartilage costal ou du cartilage laryngé.Preferably, the cartilage tissues may be sternal cartilage, costal cartilage or laryngeal cartilage.
Préférablement, à l’étape deux, la solution liquéfiée de cartilage est prétraitée avant d’effectuer l’enzymolyse, le procédé de prétraitement étant le suivant : la teneur en solides solubles de la solution liquéfiée de cartilage est mesurée, puis la solution liquéfiée de cartilage est diluée à l’eau distillée jusqu’à ce que la teneur en solides solubles soit de 0,5-1%.Preferably, in step two, the liquefied cartilage solution is pretreated before carrying out the enzymolysis, the pretreatment method being as follows: the soluble solids content of the liquefied cartilage solution is measured, then the liquefied solution of cartilage is diluted with distilled water until the soluble solids content is 0.5-1%.
La présente invention comprend au moins les effets bénéfiques suivants : Premièrement, dans le procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage fourni par la présente invention, l’utilisation de la résolution par pressage à chaud, de la résolution par enzymolyse et de la séparation par procédé membraneux permet de résoudre entièrement les glycoprotéines de cartilage et d’augmenter efficacement le taux d’utilisation de cartilage.The present invention includes at least the following beneficial effects: First, in the high efficiency cartilage glycoprotein resolution method provided by the present invention, the use of hot press resolution, enzymolysis resolution, and Separation by membranous process can fully resolve cartilage glycoproteins and effectively increase cartilage utilization rate.
Deuxièmement, le procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage fourni par la présente invention comprend trois processus, la résolution par pressage à chaud des glycoprotéines de cartilage, la résolution par enzymolyse et la séparation par procédé membraneux ; la résolution par pressage à chaud est un traitement de pressage à chaud des tissus cartilagineux, de sorte que le transfert en phase aqueuse des polysaccharides de cartilage présentes dans les tissus cartilagineux atteint le but de première résolution des glycoprotéines ; la résolution par enzymolyse permet, via enzymolyse par gradients, de transformer les protéines reliées aux polysaccharides de cartilage par hydrolyse en peptides de cartilage et ainsi d’atteindre le but de deuxième résolution ; la séparation par procédé membraneux procède par utilisation d’une membrane de microfiltration et d’une membrane de nanofiltration pour successivement séparer les polysaccharides de cartilage et les peptides de cartilage.Second, the high-efficiency cartilage glycoprotein resolution method provided by the present invention includes three processes, heat-press resolution of cartilage glycoproteins, enzymolysis resolution, and membrane process separation; hot pressing resolution is a heat pressing treatment of cartilage tissues, so that the aqueous phase transfer of cartilage polysaccharides present in cartilage tissues achieves the purpose of first resolution of glycoproteins; resolution by enzymolysis makes it possible, via enzymolysis by gradients, to transform the proteins linked to cartilage polysaccharides by hydrolysis into cartilage peptides and thus to achieve the goal of second resolution; separation by membrane process proceeds by using a microfiltration membrane and a nanofiltration membrane to successively separate the cartilage polysaccharides and the cartilage peptides.
Troisièmement, dans le procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage fourni par la présente invention, les processus de résolution n’impliquent pas d’ajout de solvants organiques exogènes tels que les alcalis forts, le produit préparé est plus sûr, et il n’y a pas de pollution environnementale ; par ailleurs, l’enzymolyse par gradients réduit de façon manifeste la durée d’enzymolyse et accroît les rendements de production ; l’utilisation d’une eau distillée peu coûteuse, sécurisée et propre permet de réaliser la résolution des glycoprotéines de cartilage, ce qui augmente les rendements de production et la qualité des produits (polysaccharides de cartilage et peptides de cartilage), réduisant les coûts de production tout en résolvant le problème de pollution environnementale.Third, in the high-efficiency cartilage glycoprotein resolution method provided by the present invention, the resolution processes do not involve the addition of exogenous organic solvents such as strong alkalis, the prepared product is safer, and it there is no environmental pollution; moreover, enzymolysis by gradients clearly reduces the duration of enzymolysis and increases production yields; the use of inexpensive, safe and clean distilled water allows the resolution of cartilage glycoproteins to be achieved, which increases production yields and product quality (cartilage polysaccharides and cartilage peptides), reducing the cost of production while solving the problem of environmental pollution.
Quatrièmement, dans le procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage fourni par la présente invention, l’utilisation de la technique de séparation par membranes combinées de microfiltration et de nanofiltration pour obtenir finalement des polysaccharides de cartilage (sulfate de chondroïtine) et peptides de cartilage (oligopeptides de cartilage) remplace les procédés traditionnels de sédimentation par éthanol, réalisant la coproduction de polysaccharides de cartilage et de peptides de cartilage, ce qui bénéficie à la réalisation d’une production de masse.Fourth, in the high-efficiency resolution method of cartilage glycoproteins provided by the present invention, using the combined membrane separation technique of microfiltration and nanofiltration to finally obtain cartilage polysaccharides (chondroitin sulfate) and peptides Cartilage (Cartilage Oligopeptides) replaces the traditional ethanol sedimentation processes, realizing the co-production of cartilage polysaccharides and cartilage peptides, which benefits the realization of mass production.
Les autres avantages, buts et caractéristiques de la présente invention sont mentionnés dans la description ci-dessous, dont une partie, via les études et la pratique de la présente invention, est connue de l’homme du métier.The other advantages, objects and characteristics of the present invention are mentioned in the description below, part of which, through the studies and the practice of the present invention, is known to those skilled in the art.
Dessins annexes Le Dessin 1 représente le schéma de processus dudit procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage de l’un desdits plans techniques de la présente invention ; Le Dessin 2 représente les images de liquéfaction de l’un desdits plans techniques de la présente invention ; Le Dessin 3 représente le graphique de variation Brix (teneur en solides solubles) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Attached Drawings Drawing 1 shows the flow diagram of said high efficiency cartilage glycoprotein resolution method of one of said technical plans of the present invention; Drawing 2 represents the liquefaction images of one of said technical plans of the present invention; Drawing 3 represents the Brix variation graph (soluble solids content) of one of said technical plans of the present invention;
Le Dessin 4 représente les images de coloration de polysaccharides de cartilage l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Drawing 4 represents the staining images of cartilage polysaccharides one of said technical plans of the present invention;
Le Dessin 5 représente l’image d’électrophorèse sur gel de l’un desdits plans techniquesDrawing 5 represents the gel electrophoresis image of one of said technical plans
5 de la présente invention ;5 of the present invention;
Le Dessin 6 représente le spectre infrarouge à transformée de Fourier des polysaccharides de cartilage (correspondant aux polysaccharides de cartilage préparées aux modes de réalisation 1 et 2) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Drawing 6 shows the Fourier transform infrared spectrum of the cartilage polysaccharides (corresponding to the cartilage polysaccharides prepared in embodiments 1 and 2) of one of said technical drawings of the present invention;
Le Dessin 7 représente le spectre à résonance magnétique nucléaire carbone des polysaccharides de cartilage (correspondant au mode de réalisation 1) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Drawing 7 shows the carbon nuclear magnetic resonance spectrum of cartilage polysaccharides (corresponding to embodiment 1) of one of said technical drawings of the present invention;
Le Dessin 8 représente le spectre à résonance magnétique nucléaire carbone des polysaccharides de cartilage (correspondant au mode de réalisation 2) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Drawing 8 shows the carbon nuclear magnetic resonance spectrum of cartilage polysaccharides (corresponding to embodiment 2) of one of said technical drawings of the present invention;
Le Dessin 9 représente le taux de rendement et le taux de récupération de polysaccharides de cartilage (correspondant aux polysaccharides de cartilage préparées aux modes de réalisation 1 et 2) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Drawing 9 shows the rate of yield and the rate of recovery of cartilage polysaccharides (corresponding to the cartilage polysaccharides prepared in embodiments 1 and 2) of one of said technical plans of the present invention;
Le Dessin 10 représente le spectre infrarouge des peptides de cartilage (correspondant aux peptides de cartilage préparées aux modes de réalisation 1 et 2) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Drawing 10 represents the infrared spectrum of the cartilage peptides (corresponding to the cartilage peptides prepared in embodiments 1 and 2) of one of said technical plans of the present invention;
Le Dessin 11 représente le spectre infrarouge à transformée de Fourier des peptides de cartilage (correspondant aux peptides de cartilage préparées aux modes de réalisation 1 et 2) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Drawing 11 shows the Fourier transform infrared spectrum of the cartilage peptides (corresponding to the cartilage peptides prepared in embodiments 1 and 2) of one of said technical drawings of the present invention;
Le Dessin 12 représente le spectre de chromatographie par exclusion de taille des peptides de cartilage (correspondant aux peptides de cartilage préparées aux modes de réalisation 1 et 2) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Figure 12 shows the size exclusion chromatography spectrum of the cartilage peptides (corresponding to the cartilage peptides prepared in embodiments 1 and 2) of one of said technical drawings of the present invention;
Le Dessin 13 représente les graphiques de répartition de poids moléculaire des peptides de cartilage (correspondant aux peptides de cartilage préparées aux modes de réalisation 1 et 2) de l’un desdits plans techniques de la présente invention ;Figure 13 shows the molecular weight distribution graphs of the cartilage peptides (corresponding to the cartilage peptides prepared in embodiments 1 and 2) of one of said technical drawings of the present invention;
Le Dessin 14 représente les taux de rendement et les taux de récupération des peptides de cartilage (correspondant aux peptides de cartilage préparées aux modes de réalisation 1 et 2)Figure 14 shows yield rates and recovery rates of cartilage peptides (corresponding to cartilage peptides prepared in Embodiments 1 and 2)
de l’un desdits plans techniques de la présente invention ; Modes de réalisation Une description approfondie de la présente invention combinée aux modes de réalisation est donnée ci-dessous, afin que l’homme du métier puisse la mettre en pratique en référence à la description.one of said technical plans of the present invention; Embodiments A thorough description of the present invention combined with the embodiments is given below, so that those skilled in the art can put it into practice by reference to the description.
<Mode de réalisation 1> Tel que représenté au Dessin 1, un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, comprenant les étapes suivantes : étape un, ajout d’eau distillée dans des tissus cartilagineux (les tissus cartilagineux comprenant des glycoprotéines de cartilage) et placement dans un autoclave pour résolution par pressage à chaud, filtration et obtention d’une solution liquéfiée de cartilage ; étape deux, ajout de trypsine dans la solution liquéfiée de cartilage et première enzymolyse, puis ajout de papaïne et deuxième enzymolyse, désactivation des enzymes, et obtention d’une solution d’enzymolyse ; étape trois, séparation de la solution d’enzymolyse et obtention respective des polysaccharides de cartilage et des peptides de cartilage ; à l’étape un, le rapport massique des tissus cartilagineux et de l’eau distillée est de 1 : 2,5.<Embodiment 1> As shown in Drawing 1, a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, comprising the following steps: step one, adding distilled water to cartilage tissues (the cartilage tissues comprising glycoproteins of cartilage) and placement in an autoclave for resolution by hot pressing, filtration and obtaining a liquefied solution of cartilage; step two, addition of trypsin to the liquefied cartilage solution and first enzymolysis, then addition of papain and second enzymolysis, deactivation of the enzymes, and obtaining an enzymolysis solution; step three, separation of the enzymolysis solution and respective obtaining of cartilage polysaccharides and cartilage peptides; in step one, the mass ratio of cartilage tissue and distilled water is 1:2.5.
à l’étape un, le procédé de préparation de solution liquéfiée de cartilage est le suivant : les tissus cartilagineux et l’eau distillée sont placés dans un autoclave, puis une résolution par pressage à chaud est effectuée à 0,07 MPa et 110°C pendant 2,5 heures, résolution par pressage à chaud une homogénéisation à 1500 tpm pendant 20 secondes est effectuée, la solution liquéfiée de cartilage est alors obtenue.In step one, the process for preparing cartilage liquefied solution is as follows: cartilage tissues and distilled water are placed in an autoclave, and then hot pressing resolution is performed at 0.07 MPa and 110° C for 2.5 hours, resolution by hot pressing homogenization at 1500 rpm for 20 seconds is carried out, the liquefied solution of cartilage is then obtained.
à l’étape deux le procédé de préparation de solution d’enzymolyse est le suivant : de la trypsine est ajoutée dans la solution liquéfiée de cartilage et une première enzymolyse est effectuée à 60°C pendant 2 heures, de la papaïne est ensuite ajoutée et une deuxième enzymolyse est effectuée à 60°C pendant 1 heure, une fois la deuxième enzymolyse achevée, une désactivation des enzymes est effectuée au bain-Marie à 100°C pendant 5 minutes, dans laquelle le rapport quantitatif de la solution liquéfiée de cartilage et de trypsine et de papaïne est de 1 : 0,015 : 0,015.in step two, the process for preparing the enzymolysis solution is as follows: trypsin is added to the liquefied cartilage solution and a first enzymolysis is carried out at 60°C for 2 hours, papain is then added and a second enzymolysis is carried out at 60°C for 1 hour, after the second enzymolysis is completed, deactivation of enzymes is carried out in a water bath at 100°C for 5 minutes, in which the quantitative ratio of the liquefied solution of cartilage and of trypsin and papain is 1:0.015:0.015.
à l’étape trois, le procédé de séparation de la solution d’enzymolyse est le suivant : la solution d’enzymolyse est filtrée par membrane de microfiltration (0,45 um), un premier rétentat et un premier filtrat sont obtenus, le premier filtrat est filtré par membrane de nanofiltration (10 kDa), et un deuxième rétentat ainsi qu’un deuxième filtrat sont obtenus, le premier rétentat et le deuxième filtrat sont combinés et séchés, les peptides de cartilage sont ainsi obtenus, le deuxième rétentat est séché et les polysaccharides de cartilage sont ainsi obtenus. à l’étape un, les tissus cartilagineux sont prétraités avant résolution par pressage à chaud, le procédé de prétraitement étant le suivant : la chair et le fascia qui adhèrent aux tissus cartilagineux sont éliminés, et les tissus cartilagineux sont lavés à l’eau, lors du lavage à l’eau, de l’eau est rapidement pulvérisée afin d’éviter que les tissus cartilagineux soient trop longtemps imbibés d’eau, qu’ils absorbent l’eau et gonflent, affectant le rapport solide-liquide.in step three, the method for separating the enzymolysis solution is as follows: the enzymolysis solution is filtered by microfiltration membrane (0.45 μm), a first retentate and a first filtrate are obtained, the first filtrate is filtered by nanofiltration membrane (10 kDa), and a second retentate and a second filtrate are obtained, the first retentate and the second filtrate are combined and dried, the cartilage peptides are thus obtained, the second retentate is dried and cartilage polysaccharides are thus obtained. in step one, the cartilaginous tissues are pretreated before resolution by hot pressing, the pretreatment process being as follows: the flesh and the fascia which adhere to the cartilaginous tissues are removed, and the cartilaginous tissues are washed with water, when washing with water, water is quickly sprayed out, to prevent cartilage tissue from being soaked in water for too long, absorbing water and swelling, affecting the solid-liquid ratio.
à l’étape un, les tissus cartilagineux sont du cartilage sternal de poulet.in stage one, the cartilaginous tissues are chicken sternal cartilage.
à l’étape deux, la solution liquéfiée de cartilage est prétraitée avant d’effectuer l’enzymolyse, le procédé de prétraitement étant le suivant : la teneur en solides solubles de la solution liquéfiée de cartilage est d’abord mesurée, puis la solution liquéfiée de cartilage est diluée à l’eau distillée jusqu’à ce que la teneur en solides solubles soit de 1%, la teneur en solides solubles de la solution liquéfiée de cartilage est mesurée à l’aide d’un réfractomètre portable.in step two, the cartilage liquefied solution is pretreated before performing enzymolysis, the pretreatment method is as follows: the soluble solids content of the cartilage liquefied solution is measured first, and then the liquefied solution of cartilage is diluted with distilled water until the soluble solids content is 1%, the soluble solids content of the liquefied cartilage solution is measured using a portable refractometer.
<Mode de réalisation 2> Tel que représenté au Dessin 1, un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, comprenant les étapes suivantes : étape un, ajout d’eau distillée dans des tissus cartilagineux (les tissus cartilagineux comprenant des glycoprotéines de cartilage) et placement dans un autoclave pour résolution par pressage à chaud, filtration et obtention d’une solution liquéfiée de cartilage ; étape deux, ajout de trypsine dans la solution liquéfiée de cartilage et première enzymolyse, puis ajout de papaïne et deuxième enzymolyse, désactivation des enzymes, et obtention d’une solution d’enzymolyse ; étape trois, séparation de la solution d’enzymolyse et obtention respective des polysaccharides de cartilage et des peptides de cartilage ; à l’étape un, le rapport massique des tissus cartilagineux et de l’eau distillée est de 1 :<Embodiment 2> As shown in Drawing 1, a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, comprising the following steps: step one, adding distilled water to cartilage tissues (the cartilage tissues comprising glycoproteins of cartilage) and placement in an autoclave for resolution by hot pressing, filtration and obtaining a liquefied solution of cartilage; step two, addition of trypsin to the liquefied cartilage solution and first enzymolysis, then addition of papain and second enzymolysis, deactivation of the enzymes, and obtaining an enzymolysis solution; step three, separation of the enzymolysis solution and respective obtaining of cartilage polysaccharides and cartilage peptides; in step one, the mass ratio of cartilaginous tissue and distilled water is 1:
2,5.2.5.
à l’étape un, le procédé de préparation de solution liquéfiée de cartilage est le suivant : les tissus cartilagineux et l’eau distillée sont placés dans un autoclave, puis une résolution par pressage à chaud est effectuée à 0,1 MPa et 120°C pendant 1,5 heures, résolution par pressage à chaud une homogénéisation à 1500 tpm pendant 20 secondes est effectuée, la solution liquéfiée de cartilage est alors obtenue.In step one, the process for preparing cartilage liquefied solution is as follows: cartilage tissues and distilled water are placed in an autoclave, and then hot pressing resolution is performed at 0.1 MPa and 120° C for 1.5 hours, resolution by hot pressing homogenization at 1500 rpm for 20 seconds is carried out, the liquefied solution of cartilage is then obtained.
à l’étape deux le procédé de préparation de solution d’enzymolyse est le suivant : de la trypsine est ajoutée dans la solution liquéfiée de cartilage et une première enzymolyse est effectuée à 60°C pendant 2 heures, de la papaïne est ensuite ajoutée et une deuxième enzymolyse est effectuée à 60°C pendant 1 heure, une fois la deuxième enzymolyse achevée, une désactivation des enzymes est effectuée au bain-Marie à 100°C pendant 5 minutes, dans laquelle le rapport quantitatif de la solution liquéfiée de cartilage et de trypsine et de papaïne est de 1 : 0,015 : 0,015.in step two, the process for preparing the enzymolysis solution is as follows: trypsin is added to the liquefied cartilage solution and a first enzymolysis is carried out at 60°C for 2 hours, papain is then added and a second enzymolysis is carried out at 60°C for 1 hour, after the second enzymolysis is completed, deactivation of enzymes is carried out in a water bath at 100°C for 5 minutes, in which the quantitative ratio of the liquefied solution of cartilage and of trypsin and papain is 1:0.015:0.015.
à l’étape trois, le procédé de séparation de la solution d’enzymolyse est le suivant : la solution d’enzymolyse est filtrée par membrane de microfiltration (0,45 um), un premier rétentat et un premier filtrat sont obtenus, le premier filtrat est filtré par membrane de nanofiltration (10 kDa), et un deuxième rétentat ainsi qu’un deuxième filtrat sont obtenus, le premier rétentat et le deuxième filtrat sont combinés et séchés, les peptides de cartilage sont ainsi obtenus, le deuxième rétentat est séché et les polysaccharides de cartilage sont ainsi obtenus.in step three, the method for separating the enzymolysis solution is as follows: the enzymolysis solution is filtered by microfiltration membrane (0.45 μm), a first retentate and a first filtrate are obtained, the first filtrate is filtered by nanofiltration membrane (10 kDa), and a second retentate and a second filtrate are obtained, the first retentate and the second filtrate are combined and dried, the cartilage peptides are thus obtained, the second retentate is dried and cartilage polysaccharides are thus obtained.
à l’étape un, les tissus cartilagineux sont prétraités avant résolution par pressage à chaud, le procédé de prétraitement étant le suivant : la chair et le fascia qui adhèrent aux tissus cartilagineux sont éliminés, et les tissus cartilagineux sont lavés à l’eau, lors du lavage à l’eau, de l’eau est rapidement pulvérisée afin d’éviter que les tissus cartilagineux soient trop longtemps imbibés d’eau, qu’ils absorbent l’eau et gonflent, affectant le rapport solide-liquide.in step one, the cartilaginous tissues are pretreated before resolution by hot pressing, the pretreatment process being as follows: the flesh and the fascia which adhere to the cartilaginous tissues are removed, and the cartilaginous tissues are washed with water, when washing with water, water is quickly sprayed out, to prevent cartilage tissue from being soaked in water for too long, absorbing water and swelling, affecting the solid-liquid ratio.
à l’étape un, les tissus cartilagineux sont du cartilage sternal de poulet.in stage one, the cartilaginous tissues are chicken sternal cartilage.
à l’étape deux, la solution liquéfiée de cartilage est prétraitée avant d’effectuer l’enzymolyse, le procédé de prétraitement étant le suivant : la teneur en solides solubles de la solution liquéfiée de cartilage est d’abord mesurée, puis la solution liquéfiée de cartilage est diluée à l’eau distillée jusqu’à ce que la teneur en solides solubles soit de 1%.in step two, the cartilage liquefied solution is pretreated before performing enzymolysis, the pretreatment method is as follows: the soluble solids content of the cartilage liquefied solution is measured first, and then the liquefied solution of cartilage is diluted with distilled water until the soluble solids content is 1%.
<Mode de réalisation 3><Embodiment 3>
Tel que représenté au Dessin 1, un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, comprenant les étapes suivantes : étape un, ajout d’eau distillée dans des tissus cartilagineux (les tissus cartilagineux comprenant des glycoprotéines de cartilage) et placement dans un autoclave pour résolution par pressage à chaud, filtration et obtention d’une solution liquéfiée de cartilage ; étape deux, ajout de trypsine dans la solution liquéfiée de cartilage et première enzymolyse, puis ajout de papaïne et deuxième enzymolyse, désactivation des enzymes, et obtention d’une solution d’enzymolyse ; étape trois, séparation de la solution d’enzymolyse et obtention respective des polysaccharides de cartilage et des peptides de cartilage ; à l’étape un, le rapport massique des tissus cartilagineux et de l’eau distillée est de 1 : 1,5.As shown in Drawing 1, a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, comprising the following steps: step one, adding distilled water to cartilage tissues (the cartilage tissues comprising cartilage glycoproteins) and placing in a autoclave for resolution by hot pressing, filtration and obtaining a liquefied solution of cartilage; step two, addition of trypsin to the liquefied cartilage solution and first enzymolysis, then addition of papain and second enzymolysis, deactivation of the enzymes, and obtaining an enzymolysis solution; step three, separation of the enzymolysis solution and respective obtaining of cartilage polysaccharides and cartilage peptides; in step one, the mass ratio of cartilage tissue and distilled water is 1:1.5.
à l’étape un, le procédé de préparation de solution liquéfiée de cartilage est le suivant : les tissus cartilagineux et l’eau distillée sont placés dans un autoclave, puis une résolution par pressage à chaud est effectuée à 0,07 MPa et 110°C pendant 0,5 heures, résolution par pressage à chaud une homogénéisation à 1000 tpm pendant 10 secondes est effectuée, la solution liquéfiée de cartilage est alors obtenue.In step one, the process for preparing cartilage liquefied solution is as follows: cartilage tissues and distilled water are placed in an autoclave, and then hot pressing resolution is performed at 0.07 MPa and 110° C for 0.5 hours, resolution by hot pressing homogenization at 1000 rpm for 10 seconds is carried out, the liquefied solution of cartilage is then obtained.
à l’étape deux le procédé de préparation de solution d’enzymolyse est le suivant : de la trypsine est ajoutée dans la solution liquéfiée de cartilage et une première enzymolyse est effectuée à 50°C pendant 2 heures, de la papaïne est ensuite ajoutée et une deuxième enzymolyse est effectuée à 50°C pendant 1 heure, une fois la deuxième enzymolyse achevée, une désactivation des enzymes est effectuée au bain-Marie à 100°C pendant 3 minutes, dans laquelle le rapport quantitatif de la solution liquéfiée de cartilage et de trypsine et de papaïne est de 1 : 0,015 : 0,015.in step two, the process for preparing the enzymolysis solution is as follows: trypsin is added to the liquefied solution of cartilage and a first enzymolysis is carried out at 50° C. for 2 hours, papain is then added and a second enzymolysis is carried out at 50°C for 1 hour, after the second enzymolysis is completed, enzyme deactivation is carried out in a water bath at 100°C for 3 minutes, in which the quantitative ratio of the liquefied solution of cartilage and of trypsin and papain is 1:0.015:0.015.
à l’étape trois, le procédé de séparation de la solution d’enzymolyse est le suivant : la solution d’enzymolyse est filtrée par membrane de microfiltration (0,45 um), un premier rétentat et un premier filtrat sont obtenus, le premier filtrat est filtré par membrane de nanofiltration (10 kDa), et un deuxième rétentat ainsi qu’un deuxième filtrat sont obtenus, le premier rétentat et le deuxième filtrat sont combinés et séchés, les peptides de cartilage sont ainsi obtenus, le deuxième rétentat est séché et les polysaccharides de cartilage sont ainsi obtenus.in step three, the method for separating the enzymolysis solution is as follows: the enzymolysis solution is filtered by microfiltration membrane (0.45 μm), a first retentate and a first filtrate are obtained, the first filtrate is filtered by nanofiltration membrane (10 kDa), and a second retentate and a second filtrate are obtained, the first retentate and the second filtrate are combined and dried, the cartilage peptides are thus obtained, the second retentate is dried and cartilage polysaccharides are thus obtained.
à l’étape un, les tissus cartilagineux sont prétraités avant résolution par pressage à chaud,in step one, the cartilaginous tissues are pretreated before resolution by hot pressing,
le procédé de prétraitement étant le suivant : la chair et le fascia qui adhèrent aux tissus cartilagineux sont éliminés, et les tissus cartilagineux sont lavés à l’eau, lors du lavage à l’eau.the pre-treatment process being as follows: the flesh and fascia which adhere to the cartilaginous tissues are removed, and the cartilaginous tissues are washed with water, during the water washing.
à l’étape un, les tissus cartilagineux sont du cartilage sternal de poulet.in stage one, the cartilaginous tissues are chicken sternal cartilage.
à l’étape deux, la solution liquéfiée de cartilage est prétraitée avant d’effectuer l’enzymolyse, le procédé de prétraitement étant le suivant : la teneur en solides solubles de la solution liquéfiée de cartilage est d’abord mesurée, puis la solution liquéfiée de cartilage est diluée à l’eau distillée jusqu’à ce que la teneur en solides solubles soit de 0,5%.in step two, the cartilage liquefied solution is pretreated before performing enzymolysis, the pretreatment method is as follows: the soluble solids content of the cartilage liquefied solution is measured first, and then the liquefied solution cartilage is diluted with distilled water until the soluble solids content is 0.5%.
<Mode de réalisation 4> Tel que représenté au Dessin 1, un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, comprenant les étapes suivantes : étape un, ajout d’eau distillée dans des tissus cartilagineux (les tissus cartilagineux comprenant des glycoprotéines de cartilage) et placement dans un autoclave pour résolution par pressage à chaud, filtration et obtention d’une solution liquéfiée de cartilage ; étape deux, ajout de trypsine dans la solution liquéfiée de cartilage et première enzymolyse, puis ajout de papaïne et deuxième enzymolyse, désactivation des enzymes, et obtention d’une solution d’enzymolyse ; étape trois, séparation de la solution d’enzymolyse et obtention respective des polysaccharides de cartilage et des peptides de cartilage ; à l’étape un, le rapport massique des tissus cartilagineux et de l’eau distillée est de 1 : 2.<Embodiment 4> As shown in Drawing 1, a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, comprising the following steps: step one, adding distilled water to cartilage tissues (the cartilage tissues comprising glycoproteins of cartilage) and placement in an autoclave for resolution by hot pressing, filtration and obtaining a liquefied solution of cartilage; step two, addition of trypsin to the liquefied cartilage solution and first enzymolysis, then addition of papain and second enzymolysis, deactivation of the enzymes, and obtaining an enzymolysis solution; step three, separation of the enzymolysis solution and respective obtaining of cartilage polysaccharides and cartilage peptides; in step one, the mass ratio of cartilage tissue and distilled water is 1:2.
à l’étape un, le procédé de préparation de solution liquéfiée de cartilage est le suivant : les tissus cartilagineux et l’eau distillée sont placés dans un autoclave, puis une résolution par pressage à chaud est effectuée à 0,08 MPa et 115°C pendant 1,5 heures, résolution par pressage à chaud une homogénéisation à 1250 tpm pendant 15 secondes est effectuée, la solution liquéfiée de cartilage est alors obtenue.In step one, the process for preparing cartilage liquefied solution is as follows: cartilage tissues and distilled water are placed in an autoclave, and then hot pressing resolution is performed at 0.08 MPa and 115° C for 1.5 hours, resolution by hot pressing homogenization at 1250 rpm for 15 seconds is carried out, the liquefied solution of cartilage is then obtained.
à l’étape deux le procédé de préparation de solution d’enzymolyse est le suivant : de la trypsine est ajoutée dans la solution liquéfiée de cartilage et une première enzymolyse est effectuée à 55°C pendant 1,5 heure, de la papaïne est ensuite ajoutée et une deuxième enzymolyse est effectuée à 55°C pendant 1,5 heure, une fois la deuxième enzymolyse achevée, une désactivation des enzymes est effectuée au bain-Marie à 100°C pendant 4 minutes, dans laquelle le rapport quantitatif de la solution liquéfiée de cartilage et de trypsine et de papaïne est de 1 : 0,03 : 0,022.in step two, the process for preparing the enzymolysis solution is as follows: trypsin is added to the liquefied cartilage solution and a first enzymolysis is carried out at 55°C for 1.5 hours, papain is then added and a second enzymolysis is carried out at 55°C for 1.5 hours, after the second enzymolysis is completed, deactivation of the enzymes is carried out in a water bath at 100°C for 4 minutes, in which the quantitative ratio of the solution liquefied cartilage and trypsin and papain is 1:0.03:0.022.
à l’étape trois, le procédé de séparation de la solution d’enzymolyse est le suivant : la solution d’enzymolyse est filtrée par membrane de microfiltration (0,45 um), un premier rétentat et un premier filtrat sont obtenus, le premier filtrat est filtré par membrane de nanofiltration (10 kDa), et un deuxième rétentat ainsi qu’un deuxième filtrat sont obtenus, le premier rétentat et le deuxième filtrat sont combinés et séchés, les peptides de cartilage sont ainsi obtenus, le deuxième rétentat est séché et les polysaccharides de cartilage sont ainsi obtenus.in step three, the method for separating the enzymolysis solution is as follows: the enzymolysis solution is filtered by microfiltration membrane (0.45 μm), a first retentate and a first filtrate are obtained, the first filtrate is filtered by nanofiltration membrane (10 kDa), and a second retentate and a second filtrate are obtained, the first retentate and the second filtrate are combined and dried, the cartilage peptides are thus obtained, the second retentate is dried and cartilage polysaccharides are thus obtained.
à l’étape un, les tissus cartilagineux sont prétraités avant résolution par pressage à chaud, le procédé de prétraitement étant le suivant : la chair et le fascia qui adhèrent aux tissus cartilagineux sont éliminés, et les tissus cartilagineux sont lavés à l’eau, lors du lavage à l’eau.in step one, the cartilaginous tissues are pretreated before resolution by hot pressing, the pretreatment process being as follows: the flesh and the fascia which adhere to the cartilaginous tissues are removed, and the cartilaginous tissues are washed with water, when washing with water.
à l’étape un, les tissus cartilagineux sont du cartilage laryngé de poulet.in stage one, the cartilaginous tissues are chicken laryngeal cartilage.
à l’étape deux, la solution liquéfiée de cartilage est prétraitée avant d’effectuer l’enzymolyse, le procédé de prétraitement étant le suivant : la teneur en solides solubles de la solution liquéfiée de cartilage est d’abord mesurée, puis la solution liquéfiée de cartilage est diluée à l’eau distillée jusqu’à ce que la teneur en solides solubles soit de 0,8%.in step two, the cartilage liquefied solution is pretreated before performing enzymolysis, the pretreatment method is as follows: the soluble solids content of the cartilage liquefied solution is measured first, and then the liquefied solution cartilage is diluted with distilled water until the soluble solids content is 0.8%.
<Mode de réalisation 5> Tel que représenté au Dessin 1, un procédé de résolution à haute efficacité de glycoprotéines de cartilage, comprenant les étapes suivantes : étape un, ajout d’eau distillée dans des tissus cartilagineux (les tissus cartilagineux comprenant des glycoprotéines de cartilage) et placement dans un autoclave pour résolution par pressage à chaud, filtration et obtention d’une solution liquéfiée de cartilage ; étape deux, ajout de trypsine dans la solution liquéfiée de cartilage et première enzymolyse, puis ajout de papaïne et deuxième enzymolyse, désactivation des enzymes, et obtention d’une solution d’enzymolyse ; étape trois, séparation de la solution d’enzymolyse et obtention respective des polysaccharides de cartilage et des peptides de cartilage ; à l’étape un, le rapport massique des tissus cartilagineux et de l’eau distillée est de 1: 2,5.<Embodiment 5> As shown in Drawing 1, a method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins, comprising the following steps: step one, adding distilled water to cartilage tissues (the cartilage tissues comprising glycoproteins of cartilage) and placement in an autoclave for resolution by hot pressing, filtration and obtaining a liquefied solution of cartilage; step two, addition of trypsin to the liquefied cartilage solution and first enzymolysis, then addition of papain and second enzymolysis, deactivation of the enzymes, and obtaining an enzymolysis solution; step three, separation of the enzymolysis solution and respective obtaining of cartilage polysaccharides and cartilage peptides; in step one, the mass ratio of cartilage tissue and distilled water is 1:2.5.
à l’étape un, le procédé de préparation de solution liquéfiée de cartilage est le suivant : les tissus cartilagineux et l’eau distillée sont placés dans un autoclave, puis une résolution par pressage à chaud est effectuée à 0,1 MPa et 120°C pendant 2,5 heures, résolution par pressage à chaud une homogénéisation à 1500 tpm pendant 20 secondes est effectuée, la solution liquéfiée de cartilage est alors obtenue.In step one, the process for preparing cartilage liquefied solution is as follows: cartilage tissues and distilled water are placed in an autoclave, and then hot pressing resolution is performed at 0.1 MPa and 120° C for 2.5 hours, resolution by hot pressing homogenization at 1500 rpm for 20 seconds is carried out, the liquefied solution of cartilage is then obtained.
à l’étape deux le procédé de préparation de solution d’enzymolyse est le suivant : de la trypsine est ajoutée dans la solution liquéfiée de cartilage et une première enzymolyse est effectuée à 60°C pendant 2 heures, de la papaïne est ensuite ajoutée et une deuxième enzymolyse est effectuée à 60°C pendant 2 heures, une fois la deuxième enzymolyse achevée, une désactivation des enzymes est effectuée au bain-Marie à 100°C pendant 5 minutes, dans laquelle le rapport quantitatif de la solution liquéfiée de cartilage et de trypsine et de papaïne est de 1 : 0,045 : 0,03.in step two, the process for preparing the enzymolysis solution is as follows: trypsin is added to the liquefied cartilage solution and a first enzymolysis is carried out at 60°C for 2 hours, papain is then added and a second enzymolysis is carried out at 60°C for 2 hours, after the second enzymolysis is completed, deactivation of enzymes is carried out in a water bath at 100°C for 5 minutes, in which the quantitative ratio of the liquefied solution of cartilage and of trypsin and papain is 1:0.045:0.03.
Dans lequel, les tissus cartilagineux sont du cartilage costal de poulet.In which, the cartilaginous tissues are chicken rib cartilage.
<Exemple comparatif 1> En se basant sur l’étape un du mode de réalisation 1, quatre groupes de tissus cartilagineux sont respectivement résolus par pressage à chaud à 0,07 Mpa, 110°C durant 0,5 heure, 1,0 heure, 1,5 heure et 2,0 heures ; En se basant sur l’étape un du mode de réalisation 2, quatre groupes de tissus cartilagineux sont respectivement résolus par pressage à chaud à 0,1 Mpa, 120°C durant 0,5 heure, 1,0 heure, 2,0 heure et 2,5 heures.<Comparative Example 1> Based on step one of Embodiment 1, four groups of cartilage tissues are respectively solved by hot pressing at 0.07 Mpa, 110°C for 0.5 hour, 1.0 hour , 1.5 hours and 2.0 hours; Based on step one of Embodiment 2, four cartilage tissue groups are respectively resolved by hot pressing at 0.1 Mpa, 120°C for 0.5 hour, 1.0 hour, 2.0 hour and 2.5 hours.
<Caractérisation des résultats><Characterization of results>
1. Taux de rendement et taux de récupération Les taux de rendement et taux de récupération de polysaccharides de cartilage obtenus au mode de réalisation 1 sont représentés au Dessin 9, le taux de rendement de polysaccharides de cartilage est de 15,4% et le taux de récupération est de 76,2%, les taux de rendement et de récupération de peptides de cartilage obtenus sont représentés au Dessin 14, le taux de rendement de peptides de cartilage est de 65,2% et le taux de récupération est de 88,6% ; Les taux de rendement et taux de récupération de polysaccharides de cartilage obtenus au mode de réalisation 2 sont représentés au Dessin 9, le taux de rendement de polysaccharides de cartilage est de 18,9% et le taux de récupération est de 93,6%, les taux de rendement et de récupération de peptides de cartilage obtenus sont représentés au Dessin 14, le taux de rendement de peptides de cartilage est de 67,9% et le taux de récupération est de 92,7%.1. Yield rate and recovery rate The yield rate and recovery rate of cartilage polysaccharides obtained in embodiment 1 are shown in Drawing 9, the yield rate of cartilage polysaccharides is 15.4% and the rate recovery is 76.2%, the yield and recovery rates of cartilage peptides obtained are shown in Drawing 14, the yield rate of cartilage peptides is 65.2% and the recovery rate is 88, 6%; The yield rates and recovery rates of cartilage polysaccharides obtained in embodiment 2 are shown in Drawing 9, the yield rate of cartilage polysaccharides is 18.9% and the recovery rate is 93.6%, the yield and recovery rates of cartilage peptides obtained are shown in Drawing 14, the yield rate of cartilage peptides is 67.9% and the recovery rate is 92.7%.
2. Images de liquéfaction et graphique de variation Brix Les états de liquéfaction des solides après filtration des huit groupes de l’exemple comparatif 1 et des solides après filtration de l’étape 1 des modes de réalisation 1 et 2 sont observés, les images de liquéfaction sont représentées au Dessin 2, les teneurs en solides solubles (Brix) des solutions de liquéfaction de cartilage obtenus aux huit groupes de l’exemple comparatif 1 et des modes de réalisation 1 et 2 sont respectivement mesurées à l’aide d’un réfractomètre portable, les Brix sont représentées au Dessin 3, d’après le Dessin 2 nous savons que le cartilage sternal de poulet du mode de réalisation 2 (pressage à chaud à 0,1 MPa, 120°C pendant 1,5 heure) est presque entièrement liquéfié, et que le cartilage sternal de poulet du mode de réalisation 1 est (pressage à chaud à 0,07 MPa, 110°C pendant 2,5 heure) est presque entièrement liquéfié, nous savons d’après le Dessin 3 que les Brix après pressage à chaud peuvent atteindre 5%.2. Liquefaction Images and Brix Variation Graph The liquefaction states of the solids after filtration of the eight groups of Comparative Example 1 and the solids after filtration of Step 1 of Embodiments 1 and 2 are observed, the images of liquefaction are shown in Drawing 2, the soluble solids (Brix) contents of the cartilage liquefaction solutions obtained in the eight groups of Comparative Example 1 and Embodiments 1 and 2 are respectively measured using a refractometer portable, the Brix are shown in Drawing 3, from Drawing 2 we know that the chicken sternal cartilage of Embodiment 2 (hot pressing at 0.1 MPa, 120°C for 1.5 hours) is almost fully liquefied, and the chicken sternal cartilage of Embodiment 1 is (hot pressing at 0.07 MPa, 110°C for 2.5 hours) is almost fully liquefied, we know from Drawing 3 that the Brix after hot pressing can reach and 5%.
3. Images de variation des teneurs en polysaccharides de cartilage Les solides après filtration des quatre groupes en conditions à 0,07 MPa et 110°C de l’exemple comparatif 1, les solides après filtration de l’étape 1 du mode de réalisation 1 et les tissus cartilagineux non traités sont prélevés puis respectivement placés dans du formol 10% pour fixation, teintés au bleu alcian, et les variations de teneur du cartilage en polysaccharides sont observées, les résultats sont représentés au Dessin 4, dans lequel les tissus cartilagineux non traités et teintés au bleu alcian sont désignés par Normal sur le Dessin 4 (première image en haut à gauche), les zones en bleu foncé constituent les polysaccharides de cartilage teintés au bleu alcian (les flèches indiquent les polysaccharides de cartilage devenus bleus après teinte au bleu alcian), plus les zones bleues indiquées par les flèches sont claires plus cela indique que la teneur en polysaccharides de cartilage est faible ; Nous savons d’après le Dessin 4 qu’en conditions à 0,07 MPa et 110°C, plus la durée de pressage à chaud est prolongée, de 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 à 2,5 heures (mode de réalisation 1) plus les zones indiquées par les flèches deviennent progressivement claires, c’est-à-dire que le prolongement de la durée engendre une diminution progressive de la teneur en polysaccharides de cartilage des solides, ce qui montre que le prolongement de la durée renforce les effets de résolution par pressage à chaud.3. Images of variation in the polysaccharide contents of cartilage The solids after filtration of the four groups under conditions at 0.07 MPa and 110° C. of comparative example 1, the solids after filtration of step 1 of embodiment 1 and the untreated cartilage tissues are removed and then respectively placed in 10% formalin for fixation, stained with alcian blue, and the variations in the polysaccharide content of the cartilage are observed, the results are shown in Drawing 4, in which the untreated cartilage tissues treated and stained with alcian blue are designated as Normal in Figure 4 (first upper left image), the dark blue areas constitute the cartilage polysaccharides stained with alcian blue (the arrows indicate the cartilage polysaccharides which have turned blue after stained with alcian blue). alcian blue), the lighter the blue areas indicated by the arrows, the more this indicates that the content of cartilage polysaccharides is low; We know from Drawing 4 that under conditions of 0.07 MPa and 110°C, the longer the hot pressing time, from 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 to 2 .5 hours (Embodiment 1) the more the areas indicated by the arrows become progressively lighter, i.e., the extension of the time causes a progressive decrease in the content of cartilage polysaccharides of the solids, which shows that the extension of the duration reinforces the effects of resolution by hot pressing.
Pour résumer ce qui précède, nous savons à partir des images de liquéfaction, du graphique Brix et des images de variation des teneurs en polysaccharides de cartilage que les conditions optimales de résolution par pressage à chaud sont 0,1 MPa, 120°C pour une durée de résolution par pressage à chaud de 1,5 heure.To summarize the above, we know from the liquefaction images, the Brix graph and the images of variation of the polysaccharide contents of cartilage that the optimal conditions for resolution by hot pressing are 0.1 MPa, 120°C for a 1.5 hour hot pressing resolution time.
4. Analyse structurelle des polysaccharides de cartilage4. Structural Analysis of Cartilage Polysaccharides
4.1 Analyse d’électrophorèse sur gel des polysaccharides de cartilage4.1 Gel electrophoresis analysis of cartilage polysaccharides
Les résultats d’électrophorèse sur gel des polysaccharides de cartilage des modes de réalisation 1 et 2 sont représentés au dessin 5, dans lesquels « +» indique un traitement au sulfate de chondroïtine ; «-» indique un non traitement au sulfate de chondroïtine, les résultats montrent que le produit standard de sulfate de chondroïtine, les polysaccharides de cartilage obtenus au mode de réalisation 1, les polysaccharides obtenus au mode de réalisation 2 sont tous entièrement hydrosolubles par la chondroïtinase, ce qui indique que les polysaccharides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 sont tous du sulfate de chondroïtine.The gel electrophoresis results of the cartilage polysaccharides of Embodiments 1 and 2 are shown in Figure 5, in which "+" indicates chondroitin sulfate treatment; “-” indicates no treatment with chondroitin sulfate, the results show that the standard product of chondroitin sulfate, the cartilage polysaccharides obtained in embodiment 1, the polysaccharides obtained in embodiment 2 are all completely water-soluble by chondroitinase , indicating that the cartilage polysaccharides prepared in Embodiments 1 and 2 are all chondroitin sulfate.
4.2 Analyse de spectre infrarouge des polysaccharides de cartilage Les spectres infrarouge des polysaccharides de cartilage obtenus aux modes de réalisation 1 et 2 sont représentés au Dessin 6, l’analyse structurelle des polysaccharides de cartilage est la suivante : les pies d’absorption de polysaccharide dans le voisinage de 854,5 em”! et 823,7 cm”! sont souvent respectivement utilisés pour attester de la présence de sulfate de chondroïtine de type A et de sulfate de chondroïtine de type C, le spectre du Dessin présente un très fort pic d’absorption démontrant que le principal composant des polysaccharides de cartilage obtenus à l’aide de ce procédé de résolution de glycoprotéine est le sulfate de chondroïtine de type A ; le pic d’absorption à 1051 cm”! indique une vibration de cycle C-O-C ; les pics d’absorption à 1415 cm! et 1257 cm”! indiquent une vibration d’élongation S=O ; 1560 cm”! représente la chaîne N-H, ceci indique que -NH-C=O est présent dans la structure polysaccharide ; le fort pic d’absorption à 1651 cm”! atteste de la présence d’acide uronique dans les polysaccharides ; le pic d’absorption à 3400 cm”! indique une vibration d’élongation de carboxyle. Nous savons d’après le spectre que les formes spectrales des polysaccharides de cartilage obtenus par les modes de réalisation 1 et 2 sont toutes identiques au spectre du produit standard de sulfate de chondroïtine, ce qui indique que les polysaccharides de cartilage obtenus aux modes de réalisation 1 et 2 sont du sulfate de chondroïtine, et qu’il s’agit du sulfate de chondroïtine de type A.4.2 Infrared spectrum analysis of the cartilage polysaccharides The infrared spectra of the cartilage polysaccharides obtained in embodiments 1 and 2 are shown in Drawing 6, the structural analysis of the cartilage polysaccharides is as follows: the polysaccharide absorption peaks in the neighborhood of 854.5 em”! and 823.7 cm”! are often used to attest to the presence of type A chondroitin sulphate and type C chondroitin sulphate respectively, the spectrum of the Drawing shows a very strong absorption peak demonstrating that the main component of the cartilage polysaccharides obtained at the aid in this glycoprotein resolution process is chondroitin sulfate type A; the absorption peak at 1051 cm”! indicates a C-O-C cycle vibration; absorption peaks at 1415 cm! and 1257 cm”! indicate an S=O stretching vibration; 1560 cm”! represents the N-H chain, this indicates that -NH-C=O is present in the polysaccharide structure; the strong absorption peak at 1651 cm”! attests to the presence of uronic acid in the polysaccharides; the absorption peak at 3400 cm”! indicates a carboxyl stretching vibration. We know from the spectrum that the spectral shapes of the cartilage polysaccharides obtained by Embodiments 1 and 2 are all the same as the spectrum of the standard chondroitin sulfate product, which indicates that the cartilage polysaccharides obtained by Embodiments 1 and 2 are chondroitin sulfate, and that it is chondroitin sulfate type A.
4.3 Analyse de spectre à résonance magnétique nucléaire de carbone des polysaccharides de cartilage Le spectre à résonance magnétique nucléaire carbone des polysaccharides de cartilage préparés au mode de réalisation 1 est représenté au Dessin 7, le spectre à résonance magnétique nucléaire de carbone des polysaccharides de cartilage préparés au mode de réalisation 2 est représenté au Dessin 8, des études indiquent que les signaux de spectre à résonance magnétique nucléaire de carbone du sulfate de chondroïtine sont concentrés à4.3 Carbon Nuclear Magnetic Resonance Spectrum Analysis of Cartilage Polysaccharides The carbon nuclear magnetic resonance spectrum of the cartilage polysaccharides prepared in Embodiment 1 is shown in Figure 7. The carbon nuclear magnetic resonance spectrum of the cartilage polysaccharides prepared to embodiment 2 is shown in Drawing 8, studies indicate that the carbon nuclear magnetic resonance spectrum signals of chondroitin sulfate are concentrated at
50-110 ppm. Nous savons à partir des spectres à résonance magnétique nucléaire de carbone des polysaccharides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 qu’il n’y a pas d’écart entre les signaux carbones globaux entre les deux. 104,26 ppm et 101,36 ppm représentent respectivement l’atome de carbone n°1 de l’acide glycuronique et du sulfate (dérivé sulfaté en position n°6) -N-acétylgalactosamine ; 103,73 ppm et 100,91 ppm représentent respectivement l’atome de carbone n°1 de l’acide glycuronique et du sulfate (dérivé sulfaté en position n°4) -N-acétylgalactosamine ; 37,40 ppm et 61,04 ppm représentent respectivement l’atome de carbone n°6 du sulfate (dérivé sulfaté en position n°6) -N-acétylgalactosamine et l’atome de carbone n°6 du sulfate (dérivé sulfaté en position n°4) -N-acétylgalactosamine. Les Dessins 7 et 8 présentent des structures de polysaccharides de cartilage similaires obtenus aux modes de réalisation 1 et 2.50-110 ppm. We know from the carbon nuclear magnetic resonance spectra of the cartilage polysaccharides prepared in Embodiments 1 and 2 that there is no discrepancy in the overall carbon signals between the two. 104.26 ppm and 101.36 ppm respectively represent carbon atom #1 of glycuronic acid and sulfate (sulfated derivative at position #6) -N-acetylgalactosamine; 103.73 ppm and 100.91 ppm respectively represent carbon atom #1 of glycuronic acid and sulfate (sulfated derivative at position #4) -N-acetylgalactosamine; 37.40 ppm and 61.04 ppm respectively represent carbon atom no. 6 of sulfate (sulfated derivative in position no. 6) -N-acetylgalactosamine and carbon atom no. 6 of sulfate (sulfate derivative in position no. #4) -N-acetylgalactosamine. Figures 7 and 8 show structures of similar cartilage polysaccharides obtained in embodiments 1 and 2.
5. Analyse structurelle des peptides de cartilage5. Structural Analysis of Cartilage Peptides
5.1 Analyse des spectres ultraviolet des peptides de cartilage Les spectres ultraviolet des peptides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 sont représentés au Dessin 10, à partir du Dessin 10 nous savons que le plus grand pic caractéristique d’absorption des ultraviolets des peptides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 se situe à 231 nm, ce qui démontre initialement que les structures des peptides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 sont similaires.5.1 Analysis of the Ultraviolet Spectra of the Cartilage Peptides The ultraviolet spectra of the cartilage peptides prepared in Embodiments 1 and 2 are shown in Figure 10, from Figure 10 we know that the largest peak characteristic of ultraviolet absorption of the peptides cartilage peptides prepared in Embodiments 1 and 2 is at 231 nm, initially demonstrating that the structures of the cartilage peptides prepared in Embodiments 1 and 2 are similar.
5.2 Analyse du spectre infrarouge des peptides de cartilage Les spectres infrarouge des peptides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 sont représentés au Dessin 11, les bandes d’absorption de spectre infrarouge des peptides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 comprennent la bande amide A, la bande amide B, la bande amide I, la bande amide II et la bande amide III. La bande amide A apparaît à 3400-3440 cm“, ce qui est en lien avec la vibration d’étirement N-H ; la bande amide apparaît dans le voisinage de 2920 cm‘, ce qui est en lien avec la vibration symétrique de CH; ; la bande amide I apparaît à 1650 cm”! et est engendrée par la vibration d’étirement C=O du squelette peptidique ou la vibration de couplage chaîne d’hydrogène et COO ; le pic d’absorption de la bande amide II apparaît dans le voisinage de 1550 cm’, et est engendré par la vibration de d’étirement N-H et la vibration de flexion C=N ; en outre, le pic d’absorption dans le voisinage de 1240 cm! est l’absorption caractéristique de la bande amide III, provoqué par la vibration de flexion N-H et la vibration d’étirement C=N, d’après le Dessin 11 nous savons que les peptides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 correspondent aux caractéristiques d’absorption infrarouge du collagène, et que les pics d’absorption des peptides de cartilage préparés aux modes de réalisation 1 et 2 sont similaires.5.2 Infrared spectrum analysis of the cartilage peptides The infrared spectra of the cartilage peptides prepared in embodiments 1 and 2 are shown in Figure 11, the infrared spectrum absorption bands of the cartilage peptides prepared in embodiments 1 and 2 include amide band A, amide band B, amide band I, amide band II and amide band III. The amide A band appears at 3400-3440 cm“, which is related to the N-H stretching vibration; the amide band appears in the vicinity of 2920 cm', which is related to the symmetrical vibration of CH; ; the amide I band appears at 1650 cm”! and is generated by the C=O stretching vibration of the peptide backbone or the hydrogen chain and COO coupling vibration; the absorption peak of the amide band II appears in the vicinity of 1550 cm', and is generated by the N-H stretching vibration and the C=N bending vibration; moreover, the absorption peak in the vicinity of 1240 cm! is the characteristic absorption of the amide III band, caused by the NH bending vibration and the C=N stretching vibration, from Drawing 11 we know that the cartilage peptides prepared in embodiments 1 and 2 correspond to the infrared absorption characteristics of collagen, and that the absorption peaks of the cartilage peptides prepared in Embodiments 1 and 2 are similar.
5.3 Analyse de distribution de poids moléculaire des peptides de cartilage La distribution de poids moléculaire des peptides de cartilage obtenus aux modes de réalisation 1 et 2 est analysée par chromatographie par exclusion de taille, le spectre d’exclusion de taille est représenté au Dessin 12, le Dessin 13 représente la distribution de poids moléculaire des peptides de cartilage, nous savons à partir des Dessin 12 et 13 que plus de 90% des poids moléculaires des peptides de cartilage obtenus aux modes de réalisation 1 et 2 est de moins de 1 kDa, ce qui démontre que les peptides de cartilage obtenus aux modes de réalisation 1 et 2 sont tous des oligopeptides de cartilage.5.3 Molecular weight distribution analysis of the cartilage peptides The molecular weight distribution of the cartilage peptides obtained in embodiments 1 and 2 is analyzed by size exclusion chromatography, the size exclusion spectrum is shown in Drawing 12, Drawing 13 shows the molecular weight distribution of the cartilage peptides, we know from Drawings 12 and 13 that more than 90% of the molecular weights of the cartilage peptides obtained in embodiments 1 and 2 are less than 1 kDa, demonstrating that the cartilage peptides obtained in Embodiments 1 and 2 are all cartilage oligopeptides.
Bien que la présente invention rende public les plans de réalisation susmentionnés, ceux-ci ne se limitent pas uniquement à un emploi mentionné dans la description et les modes de réalisation, ils sont tout à fait adaptés à tout domaine relatif à la présente invention, l’homme du métier peut aisément effectuer des modifications, c’est pourquoi, à la condition de ne pas s’écarter des revendications et des concepts ordinaires définis par une étendue équivalente, la présente invention n’est pas limitée à des détails spécifiques, ni aux exemples et dessins décrits ici.Although the present invention makes public the aforementioned embodiment plans, these are not limited only to a use mentioned in the description and the embodiments, they are quite suitable for any field relating to the present invention, the modifications can readily be made by those skilled in the art, therefore, provided that the ordinary claims and concepts defined by equivalent scope are not departed from, the present invention is not limited to specific details, nor to the examples and drawings described herein.
Claims (8)
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| BE20205817A BE1027451B1 (en) | 2020-11-15 | 2020-11-15 | A method for the high efficiency resolution of cartilage glycoproteins |
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Citations (2)
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| CN110257461A (en) * | 2019-05-27 | 2019-09-20 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | The efficient separating method of cartilage glycoprotein |
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Patent Citations (2)
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SHEN QINGSHAN ET AL: "Co-production of chondroitin sulfate and peptide from liquefied chicken sternal cartilage by hot-pressure", CARBOHYDRATE POLYMERS, APPLIED SCIENCE PUBLISHERS , LTD BARKING, GB, vol. 222, 15 October 2019 (2019-10-15), XP085732650, ISSN: 0144-8617, [retrieved on 20190621], DOI: 10.1016/J.CARBPOL.2019.115015 * |
Also Published As
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Effective date: 20220215 |