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LA BETAINE ET SES DERIVES POUR LEUR USAGE
EMI1.1
ANTITHROMBOTIQUE.
L'invention consiste en l'utilisation de la bétaïne et ses dérivés pour éliminer les atteintes physiopathologiques cardio-vasculaires.
L'invention se rapporte à l'activité curative et préventive de la bétaïne et ses dérivés dans la pathogénie des maladies thromboemboliques et hémostatiques d'origine artérielles ou veineuses.
L'invention consiste en l'utilisation comme agent thérapeutiquement actif, contre les atteintes physiopathologiques cardio-vasculaires et la pathogénie des maladies
EMI1.2
thromboemboliques et hémostatiques, un acide aminé mono, bi ou triméthylé à l'extrêmité N-terminale et se représentant sous la formule générale
EMI1.3
EMI1.4
où R'= CH3 R = chaîne latérale carbonée x =t, 2ou3 si x=I = > y=2 si x = 2 = > y n'existe pas si x = 3 = > Hy n'existe pas Les résultats expérimentaux ont été remarquablement vérifiés dans le cas de la bétaïne
EMI1.5
ainsi que dans les cas de la glycine bétaïne, de la proline bétaïne, de l'homarine, de la carnitine, de la térgonelline, de la lysine bétaïne, de la butyro bétaïne,
toutes ces molécules revendiquant selon l'invention une activité thérapeutique pour traiter les accidents de la circulation sanguine dans le corps humain Ces molécules ne sont énumérées qu'à titre d'exemple pour leur efficacté antithrombotique et ne doivent pas limiter la portée de l'invention
L'intérêt suscité par les pathologies thromboemboliques ces dernières années a permis d'incriminer plusieurs facteurs :
- Le vaisseau ta paroi vasculaire et les cellules endothéliales - Le rôle des éléments figurés du sang - Les systèmes de coagulation, de fibrinolyse et leurs inhibiteurs
L'invention consiste en ce que la bétaïne et ses dérivés exercent une activité tant à l'état préthrombotique qu'à l'état post-thrombotique En effet, la bétaïne et ses dérivés ont une
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EMI2.1
activité préventive en empêchant la formation des thrombi et une activité curative en inhibant la thrombose. L'intérêt de l'invention réside dans le fait que l'utilisation de la bétaïne et ses dérivés ne présente aucun risque hémorragique par opposition aux molécules et traitements actuellement utilisés.
Les thromboses vasculaires sont une réponse de l'organisme face à l'agression de la paroi du vaisseau et de son contenu cellulaire et plasmatique. La thrombose est une masse organisée d'éléments sanguins (plaquettes, globules rouges et globules blancs), de fibrine et d'autres protéines plasmatiques, qui est déposée à la surface ou qui obstrue la lumière du système cardio-vasculaire. Les mécanismes de la thrombose ressemblent à ceux de l'hémostase, mais sont pathologiques par la localisation intravasculaire anormale.
Les thromboses et les embolies sont la cause principale des complications cliniques des maladies cardio-vasculaires et de l'athérosclérose.
Il existe plusieurs types de thromboses qui peuvent survenir au niveau des artères, des veines, de la microcirculation des organes, des cavités du coeur et des surfaces artificielles en contact avec le sang. Les thromboses vasculaires sont une réponse de l'organisme à l'agression de la paroi du vaisseau et de son contenu cellulaire et plasmatique. La thrombose est une masse organisée d'éléments sanguins (plaquettes, globules rouges et globules blancs), de fibrine et d'autres protéines plasmatiques, qui est déposée à la surface ou qui obstrue la lumière du système cardio-vasculaire. Les mécanismes de la thrombose ressemblent à ceux de l'hémostase, mais sont pathologiques par la localisation intravasculaire anormale.
Les thromboses et les embolies sont la cause principale des complications cliniques des maladies cardio-vasculaires et de l'athérosclérose.
Il existe plusieurs types de thromboses qui peuvent survenir au niveau des artères, des veines, de la microcirculation des organes, des cavités du coeur et des surfaces artificielles en contact avec le sang.
D'après Virchow, au moins trois types de facteurs thrombogènes déterminent la localisation, l'extension et la régression d'une thrombose : - Les facteurs hémodynamiques et rhéologiques ; - La lésion endothéliale ; - L'activation des constituants du sang, en particulier des plaquettes et de la coagulation qui aboutit à la formation de thrombine.
La maladie thromboembolique, d'origine artérielle ou veineuse reste la cause principale de décès dans les pays développés.
La thrombose artérielle est souvent une complication de l'athérosclérose alors que la thrombose veineuse résulte plus fréquemment d'un déficit en un inhibiteur de la coagulation et de la fibrinolyse ou d'une stase. En effet, si tous les deux résultent d'une interaction entre le sang et la paroi vasculaire, la formation d'une thrombose veineuse et/ou par une anomalie de l'hémostase. La thrombose artérielle est le plus souvent secondaire à une anomalie pariétale et implique principalement les plaquettes sanguines Elle contribue à une large variété de tableaux cliniques selon les lits artériels intéressés par l'interruption de la vascularisation. La thrombose peut atteindre principalement les artères cardiaques (coronaires), les artères des membres inférieurs, cérébrales ou digestives.
Ainsi, la maladie artérielle favorise la formation du thrombus lui même responsable de la majorité des occlusions vasculaires terminales De plus la participation du désordre de l'hémostase et du thrombus formé à d'autres lésions vasculaires est manifeste : aggravation des lésions de la paroi, ischémie et troubles de la microcirculation
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On peut distinguer trois stratégies thérapeutiques dans la prévention des accidents liés aux thromboses.
Les anticoagulants Ils constituent l'élément majeur de la prise en charge d'un patient présentant une affection thromboembolique. L'héparine et ses dérivées sont couramment utilisés. Cependant, l'utilisation des héparines peut engendrer deux complications majeures, l'hémorragie ou la thrombopenie
Les anti-vitamines K (AVK). Prescrites pour des traitements au long cours, elles ne peuvent être utilisées dans l'urgence et ne peuvent être prescrites simultanément avec d'autres anti-agrégants dont elles potentialisent l'effet hémorragique.
Les anti-agrégants plaquetaires. Prescrits pour prévenir la thrombose artérielle liée à l'athérosclérose Actuellement les principaux inhibiteurs du fonctionnement plaquetaire prescrits sont : l'aspirine, la ticlopidine, le dipyridamole, et certains anti-inflammatoires non stéroïdiens comme le flurbiprofène, la prostacycline Ces traitements possèdent une réelle efficacité toute en présentant des effets indésirables sur les patients à terrains allergiques ou hémorragiques.
Tous ces traitements malgré leur efficacité nécessitent des précautions particulières dans leurs utilisations, telles que l'administration d'antidotes, les problèmes de surdosages et les effets secondaires non désirables. Il était donc intéressant de trouver des molécules ou des familles de molécules à haut potentiel antithrombotique sans effets indésirables
La bétaïne et ses dérivés tout en possédant un haut potentiel d'efficacité contre les risques thromboemboliques, ne présentent aucun effet indésirable. En effet, les résultats expérimentaux liés à la toxicité de ces molécules démontrent leur parfaite innocuité - Aucune toxicité par voie orale, intraveineuse et intrapéritonéale - Aucun effet sensibilisant - Aucun effet allergique - Aucun effet phototoxique ou photoallergique - Aucune toxicité cutanée ou oculaire.
Il apparaît donc que la bétaïne et ses dérivés peuvent être utilisés pour diverses applications cliniques telles que : - les maladies cardio-vasculaires (infarctus, angine de poitrine, anévrisme, athérosclérose, embolie pulmonaire, phlébite, insuffisance cardiaque), - Les accidents de circulation sanguine dans le cerveau et leur prévention, les chocs post-traumatiques d'origine chirurgicale ou non.
- La prévention des accidents de microcirculation dans les cas suivants diabète, hémophilie, chimiothérapie, âge, contraception orale par les oestrogènes, obésité, tabagisme, prothèse
La prévention des risques liés à l'administration des produits de contraste ioniques et non ioniques.
MATERIE ET METHODE
At Principe
Dans ce modèle, la lésion de la paroi vasculaire est induite par un faisceau laser. Ce faisceau d'un diamètre de 2 micromètres, entraîne une lésion limitée de l'endothélium vasculaire (seulement 1 à 2 cellules sont détruites) La mise a nu du sous-endothélium, surface
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thrombogène, amène l'adhésion des plaquettes par l'intermédiaire de la glycoprotéine Ib.
Cette adhésion des plaquettes est suivie par leur activation Elle forment des pseudopodes et sécrètent le contenu de leurs granules. Cette activation entraîne l'apparition de la glycoprotéine IIb-IIIa nécessaire à l'agrégation des plaquettes entre elles Cela en présence du fibrinogène.
Cette lésion est induite au niveau de la microcirculation mésentérique du rat. Elle est immédiatement suivie par la formation d'un thrombus (quelques secondes). Ce thrombus qui grossit rapidement, sous l'effet du flux sanguin, embolise avant de se former à nouveau. a : Dispositif de thrombose expérimentale.
Un laser de type ARGON ION LASER 4W émet des photons identiques en phase, direction et amplitude. La longueur d'onde utilisée est de 514.5 nm. La puissance du faisceau laser est réglée manuellement à l'aide d'un potentiomètre à 120 mW Le diamètre du faisceau à la sortie du tube laser est de 2 um Un microscope INVERSE Axiovert 10 (Zeiss, ) dont le grossissement oculaire est de 10 et le coefficient de champ de 20.
Un obturateur permettant de régler le temps d'exposition du faisceau laser sur la préparation.
Une caméra DXC 107 P (Sony) disposant d'un contrôle automatique de la vitesse d'obturation selon la luminosité, ce qui permet une exposition stable Un moniteur TRINITRON COLOR VIDEO MONITEUR PVM 1442 QM 5 (Sony). Il permet la visualisation de l'expérimentation. Ce moniteur possède un tube image à grille trinitron ultra-fine qui offre une définition d'image élevée. b : Animaux
Cette étude nécessite des rats Wistar mâles. Leur poids est compris entre 250 et 300 gr.
B/Méthode
L'évaluation de l'effet de la bétaïne et ses dérivés a été mené conjointement à l'étude de deux molécules pharmacologiquement actives utilisées comme référence l'acide acétylsalicylique et l'héparine
Après une période de stabulation de 8 jours, les rats sont soumis à un jeûne de 12 heures. Ils sont ensuite anesthésiés.
Une laparotomie médiane est effectuée et le mésentère peut alors être dégagé, puis placé sur la platine du microscope Trois artérioles et une veinule, d'un diamètre compris entre 15 et 25 um, sont visualisées puis analysées pour chaque rat Au cours de l'expérience, le mésentère sera régulièrement humidifié avec une solution isotonique de chlorure de sodium à 0. 9% maintenue à 37 C, afin d'éviter son dessèchement En effet, l'éclairement de la préparation est réalisé grâce à une lampe halogène puissante qui peut assécher le mésentère La puissance du faisceau laser à la sortie du tube est de 120 mW, et ce faisceau est appliqué sur l'artériole pendant 1/15me de seconde Ces paramètres ont fait l'objet d'études préliminaires et ont été validés.
EXEMPLES : L'efficacité d'une molécule dérivée de la bétaïne sera étudiée ici : '-La glycine bétaïne dont la formule est (CH3) 3N------CH2------COOH
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Exemple 1 : Evaluation du nombre d'emboles et de la durée d'embolisation après altération vasculaire par les tirs lasers
EMI5.1
<tb>
<tb> Nombre <SEP> d'emboles <SEP> D <SEP> u <SEP> r <SEP> é <SEP> e <SEP> d'embolisation
<tb> (minutes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 5. <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58 <SEP> 2 <SEP> ¯ <SEP> 0
<tb> 0.
<SEP> 9%
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 2 <SEP> 10
<tb> 5mg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 0,33 <SEP> 0, <SEP> 58
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 2,67 <SEP> 0, <SEP> 58 <SEP> 1 <SEP> 0
<tb>
Les résultats montrent que la glycine étame réduit d'une façon significative le nombre d'emboles et le temps d'embolisation après altération vasculaire par des tirs lasers Exemple 2 :
Evaluation du temps d'hémorragie provoquée
EMI5.2
<tb>
<tb> THP <SEP> (secondes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 101. <SEP> 5257
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 95 <SEP> ¯ <SEP> 5
<tb> Smg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 276,67 <SEP> ¯ <SEP> 20,82
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 313,33 <SEP> ¯ <SEP> 20
<tb>
Les résultats montrent que la glycine bétaïne diminue significativement le temps d'hémorragie provoquée comparativement aux témoins positifs Exemple 3 :
Evaluation de l'agrégation plaquetaire après altération vasculaire par les tirs lasers
EMI5.3
<tb>
<tb> Amplitude <SEP> (Ohms) <SEP> Vélocité <SEP> (Ohms/min)
<tb> Témoin <SEP> (NaCI <SEP> 0. <SEP> 9%) <SEP> 13 <SEP> zu
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 0 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 15 <SEP> 1 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 15
<tb> 5mg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 2,33 <SEP> 2 <SEP> 08 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 4 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 57 <SEP> 2 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 50
<tb>
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Les résultats montrent que la glycine bétaïne diminue significativement les paramètres de l'agrégation plaquetaire comparativement aux témoins positifs Exemple 4 :
Evaluation de l'effet de la glycine bétaïne vis à vis des cellules sanguines a/Dénombrement des plaquettes
EMI6.1
<tb>
<tb> Nombre <SEP> de <SEP> plaquettes <SEP> (10)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCl <SEP> 788 <SEP> ¯ <SEP> 30 <SEP> 14
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïe <SEP> 804.67¯20 <SEP> 03
<tb> 5mg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 855. <SEP> 33 <SEP> i <SEP> 63 <SEP> 17
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 777 <SEP> 33 <SEP> 6 <SEP> 43
<tb>
b/Dénombrement des globules blancs
EMI6.2
<tb>
<tb> Nombre <SEP> des <SEP> globules <SEP> blancs
<tb> 109
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCl <SEP> 5 <SEP> 03 <SEP> 0 <SEP> 20
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 4. <SEP> 43 <SEP> 0 <SEP> 32
<tb> Smgg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 4. <SEP> 33 <SEP> d <SEP> :
<SEP> ! <SEP> 00
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg <SEP> ! <SEP> kg <SEP> 5 <SEP> 80 <SEP> 0 <SEP> 10
<tb>
c/Dénombrement des globules rouges
EMI6.3
<tb>
<tb> Nombre <SEP> des <SEP> globules
<tb> rouges <SEP> (109)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCl <SEP> 6 <SEP> 56 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 15
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 6 <SEP> 19 <SEP> ¯ <SEP> 0. <SEP> 25
<tb> Smg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 6. <SEP> 15 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 31
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 6 <SEP> 20 <SEP> ¯ <SEP> 20
<tb>
<Desc/Clms Page number 7>
Exemple 5 :
Bilan biologique a/Temps de Quick
EMI7.1
<tb>
<tb> TQ <SEP> (secondes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCl <SEP> 17 <SEP> !
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 16 <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 1. <SEP> 05
<tb> 5mg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 18 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 2 <SEP> 08
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 29.50 <SEP> ¯ <SEP> 52
<tb>
b/Temps de céphaline activée (TCA)
EMI7.2
<tb>
<tb> TCA <SEP> (secondes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 20 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 5
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 39 <SEP> 9 <SEP> 1 <SEP> 05
<tb> Smg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 27 <SEP> 26 <SEP> 1 <SEP> I
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 39 <SEP> 46 <SEP> 1 <SEP> 36
<tb>
ci Dosage du fibrinogène
EMI7.3
<tb>
<tb> Fibrinogène <SEP> (g/l)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 245 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 19
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 17 <SEP> 01
<tb> 5mg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 2 <SEP> 19 <SEP> 0. <SEP> 33
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 2 <SEP> 13 <SEP> ¯ <SEP> 25
<tb>
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d/Dosage de l'alpha. 2-Antiplasmine (a2AP)
EMI8.1
<tb>
<tb> a <SEP> 2AP <SEP> (%)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCi <SEP> 30. <SEP> 16 <SEP> 0.
<SEP> 85
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 29 <SEP> 7 <SEP> ¯ <SEP> 0. <SEP> 68
<tb> 5mg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 29. <SEP> 36 <SEP> 0. <SEP> 92
<tb> 100mg/kg
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 294 <SEP> : <SEP> ! <SEP> : <SEP> 1. <SEP> 01
<tb>
e/Dosage de l'Antithrombine 3 (AT3)
EMI8.2
<tb>
<tb> AT3 <SEP> (%)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCi863
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 89.5 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 37
<tb> 5mg/kg
<tb> Acide <SEP> acétylsalicylique <SEP> 85. <SEP> 33 <SEP> 351
<tb> lOOmg <SEP> ! <SEP> k2
<tb> Héparine <SEP> 2 <SEP> mg/kg <SEP> 77.66 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 52
<tb>
Commentaire :
Dans les études menées sur la base du modèle de thrombose expérimentale induite par lésion endothéliale, l'application d'un tir laser sur la paroi vasculaire provoque une destruction limitée de quelques cellules endothéliales. Cette destruction provoque l'activation du complexe plaquette-paroi vasculaire qui est immédiatement suivie par l'activation de l'hémostase plasmatique déclenchant ainsi le processus d'apparition d'une thrombose Rappelons que ce modèle expérimental, largement utilisé par ailleurs (Seiffge D et coll., 1989, Weichter W et coli, 1983), est régulé par des inhibiteurs endogènes de l'agrégation plaquetaire prostacycline et ses analogues (Maraganore J.
M., 1993) D'où l'intérêt représenté par l'utilisation de ce modèle pour étudier les effets des produits de contraste, car il permet l'observation directe de la formation du thrombus au site de la lésion vasculaire. Ces résultats expliquent l'apparition d'occlusions thrombotiques lors des angioplasties, surtout chez des patients, dont l'endothélium est déjà endommagé ou lésé L'angioplastie coronaire cause une dénudation de l'endothélium, exposant le collagène, l'élastine et les cellules musculaires lisses au sang circulant, en analogie avec le modèle de thrombose expérimentale utilisé Ainsi,
l'apparition de nouveaux thrombi est plus élevée chez des patients présentant un infarctus du myocarde récent ou une plaque coronaire excentrique
Le traitement avec la glycine-bétaïne inhibe les complications thromboemboliques déclenchées par les tirs lasers En effet, ce traitement avec la glycine-bétaïne, avant les tirs lasers diminue l'adhésion des plaquettes et leur agrégation au niveau vasculaire.
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EMI9.1
Le traitement avec la glycine-bétaïne inhibe les complications thromboemboliques. En effet, ce traitement avec la glycine-bétaïne, avant l'induction de la thrombose, a montré un haut potentiel antithrombotique au niveau de tous les paramètres entrant en jeu dans le processus de la formation du thrombus. De plus, les résultats des paramètres biologiques démontrent la parfaite innocuité de la glycine-bétaïne qui contrairement aux produits de référence utilisés (aspirine et héparine), n'induit aucun effet secondaire (voir exemples). Ces caractéristiques confèrent à la glycine-bétaïne, en plus de son efficacité démontrée, la particularité de pouvoir être administrée aux personnes à risque (diabétiques, hémophiles, allergiques). La glycinebétaïne a également une activité antihémorragique (exemple 2).
Le résultat expérimental de l'exemple 5, c, démontre un haut potentiel anti-inflammatoire de la glycine-bétaïne.
Il est à noter que, dans les mêmes conditions expérimentales, pour la conservation du sang la glycine-bétaïne est apparue comme possédant un haut pouvoir anti-coagulant comparativement à des tubes héparinés ou contenant de l'E D T A. Les doses actives de glycine-bétaïne sont apparues entre 3 et 5 mg par tube à hémolyse. Ce résultat expérimental démontre un haut potentiel anticoagulant de la glycine-bétaïne L'utilisation de la glycinebétaïne ainsi que de la bétaïne et ses dérivés comme anticoagulants peut être revendiquée, tant pour le traitement du corps humain, in vivo, que pour la conservation du sang ex vivo.
Dans le cadre de la recherche sur les effets anti-thrombotiques et dans le souci de compléter l'approche de l'efficacité de la glycine-bétaïne, nous avons évalué l'effet de la glycine-bétaïne sur l'augmentation des risques thromboemboliques liés à l'utilisation des produits de contraste connus pour leurs pouvoirs prothrombotiques
Deux produits de contrastes ont été étudiés Hexabrixt (ionique) et Iopamidol (S (non ionique)
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Exemple 6 :
Evaluation du nombre d'emboles et de la durée d'embolisation après altération vasculaire par les tirs lasers et administration des produits de contrastes.
EMI10.1
1
EMI10.2
<tb>
<tb> Nombre <SEP> d'emboles <SEP> Durée <SEP> d'embolisation
<tb> (minutes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (Na <SEP> CI <SEP> 5. <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58 <SEP> 2 <SEP> ¯ <SEP> 0
<tb> 0.9%)
<tb> hexabrix# <SEP> 8 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 67 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58
<tb> Iopamidol# <SEP> 11 <SEP> 67¯ <SEP> 0 <SEP> 50 <SEP> 6 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 52
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 4 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 0
<tb> Hexabrixt
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 5.33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58 <SEP> 2 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 48
<tb> Iopamidol#
<tb>
Exemple 7 :
Evaluation du temps d'hémorragie provoquée (THP)
EMI10.3
<tb>
<tb> THP <SEP> (secondes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCl <SEP> 101 <SEP> 52 <SEP> ¯ <SEP> 5 <SEP> 7
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 195 <SEP> ¯ <SEP> 13 <SEP> 23
<tb> Iopamidol# <SEP> 128 <SEP> ¯ <SEP> 7 <SEP> 64
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 150 <SEP> ¯ <SEP> 5
<tb> Hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 111 <SEP> ¯ <SEP> 6 <SEP> 60
<tb> lopamidolg
<tb>
Exemple 8 :
Evaluation de l'agrégation plaquetaire après altération vasculaire par les tirs lasers
EMI10.4
<tb>
<tb> Amplitude <SEP> (Ohms) <SEP> Velocité <SEP> (Ohms/min)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCt <SEP> 13 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 1
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> hexabrix# <SEP> 6 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> 66 <SEP> 0 <SEP> 57
<tb> Iopamidol# <SEP> 15 <SEP> 2 <SEP> 64 <SEP> 12 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 50
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 2 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0
<tb> Hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 4 <SEP> 66 <SEP> 0 <SEP> 52 <SEP> 9 <SEP> 33 <SEP> 0 <SEP> 8
<tb> Iopamidol#
<tb>
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Exemple 9 :
Evaluation de l'effet de la glycine bétaïne vis à vis des cellules sanguines a/Dénombrement des plaquettes
EMI11.1
<tb>
<tb> Nombre <SEP> plaquettes <SEP> (109)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 788 <SEP> 33 <SEP> 30. <SEP> 14
<tb> 0.9%)
<tb> hexabrix# <SEP> 620 <SEP> Ì <SEP> 10
<tb> Iopamidol# <SEP> 585 <SEP> 67 <SEP> 23 <SEP> 54
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 669 <SEP> 67 <SEP> 7 <SEP> 37
<tb> Hexabrix@
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 704 <SEP> 33 <SEP> 92 <SEP> 33
<tb> lopamidoig
<tb>
b/Dénombrement des globules blancs
EMI11.2
1 1 1
EMI11.3
<tb>
<tb> Nombre <SEP> globules <SEP> blancs
<tb> (109)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NACI <SEP> 5 <SEP> 03 <SEP> 0 <SEP> 20
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 2 <SEP> 960 <SEP> 21
<tb> lopamido <SEP> 3 <SEP> # <SEP> 3 <SEP> 06 <SEP> ¯ <SEP> 0.35
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 4 <SEP> 20 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 1
<tb> Hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5gm/kg <SEP> + <SEP> 3 <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 3
<tb> Iopamidol#
<tb>
c/Dénombrement des globules rouges
EMI11.4
<tb>
<tb> Nombre <SEP> globules <SEP> rouges
<tb> (l09)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 6 <SEP> 56 <SEP> 0 <SEP> 15
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 5 <SEP> 43 <SEP> 0.
<SEP> 47
<tb> Iopamidol# <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 36
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 15
<tb> hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 19
<tb> Iopamidol#
<tb>
<Desc/Clms Page number 12>
- 12Exemple 10 :
Bilan biologique a/Temps de Quick
EMI12.1
<tb>
<tb> TQ <SEP> (secondes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 17 <SEP> 7 <SEP> ¯ <SEP> 1
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> hexabrix# <SEP> 24 <SEP> 13 <SEP> ¯ <SEP> 1
<tb> lopamidol <SEP> # <SEP> 28 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 75
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 16 <SEP> 36 <SEP> : <SEP> i <SEP> :
<SEP> 0 <SEP> 56
<tb> Hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 17 <SEP> 83 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 2
<tb> Iopamidol#
<tb>
b/Temps de céphaline activé (TCA)
EMI12.2
<tb>
<tb> TCA <SEP> (secondes)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (Na <SEP> CI <SEP> 20 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 5
<tb> 0.9%)
<tb> Hexabrix# <SEP> 49 <SEP> 3 <SEP> I <SEP> 85
<tb> lopamidolg <SEP> 41 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 8
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 25 <SEP> 4 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 61
<tb> Hexabrixt
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 22 <SEP> 4 <SEP> 0 <SEP> 7
<tb> Iopamidol#
<tb>
c/Dosagedufibrinogène
EMI12.3
<tb>
<tb> Fibrinogène <SEP> (go)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCl <SEP> 2 <SEP> 45¯ <SEP> 0 <SEP> 19
<tb> 0.
<SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 1 <SEP> 49¯ <SEP> 0 <SEP> 18
<tb> Iopamidol# <SEP> l <SEP> 5 <SEP> 0 <SEP> 8
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 1 <SEP> 7 <SEP> : <SEP> E <SEP> 0. <SEP> 09
<tb> Hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> l <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 1
<tb> iopamidol#
<tb>
<Desc/Clms Page number 13>
EMI13.1
d/Uosagedet a) pha. 2-Anttptasm) ne (aZAF)
EMI13.2
<tb>
<tb> a <SEP> 2AP <SEP> (%)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 30. <SEP> 16 <SEP> 0 <SEP> 85
<tb> 0.9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 23 <SEP> 26 <SEP> : <SEP> ! <SEP> :
<SEP> 1. <SEP> 06
<tb> Iopamidot <SEP> 25 <SEP> 23 <SEP> 0.95
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 25 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 0.64
<tb> hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 28.13 <SEP> ¯ <SEP> 0.8
<tb> Iopamidol#
<tb>
e/Dosage de l'Antithrombine 3 (AT3)
EMI13.3
..
EMI13.4
<tb>
<tb>
AT3 <SEP> (%)
<tb> Témoin <SEP> négatif <SEP> (NaCI <SEP> 86.3 <SEP> 3
<tb> 0.9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 8163 <SEP> 0. <SEP> 66
<tb> Iopamidol# <SEP> 70.6 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 51
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 79 <SEP> 1 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 05
<tb> Hexabrix#
<tb> Glycine <SEP> bétaïne <SEP> 5mg/kg <SEP> + <SEP> 87 <SEP> 26 <SEP> ¯ <SEP> 0.9
<tb> lopamidolg
<tb>
Commentaire : L'administration des produits de contraste, diminue le nombre de globules blancs, le nombre de globules rouges et le nombre de plaquettes.
Les produits de contraste interagissent avec les leucocytes, induisent la libération de leukotriènes, augmentent ainsi la perméabilité vasculaire et exercent un effet chimiotactique De plus, les produits de contraste agissent sur le contrôle de l'expression de la P-selectine et provoquent l'adhésion des globules blancs à l'endothélium vasculaire Il a été suggéré que l'utilisation des produits de contraste était associée avec l'apparition de thrombus d'importance variable en fonction du produit utilisé Cela signifie que l'effet de ces produits sur la fonction plaquetaire est différent et que les résultats obtenus dans les études expérimentales doivent avoir une importance en Clinique Humaine
<Desc/Clms Page number 14>
Le traitement avec la glycine bétaïne inhibe les complications thromboemboliques associées à l'utilisation des produits de contraste En
effet, ce traitement avec la glycine bétaïne, avant ou pendant l'injection des produits de contraste, diminue l'adhésion des plaquettes et leur agrégation au niveau vasculaire. Ces résultats démontrent l'effet antithrombotique et thrombolytique de la glycine bétaïne Il est à noter que les produits de contraste peuvent avoir d'autres effets secondaires telle que la stase sanguine au niveau des cathéters et les lésions endothéliales causées par les procédures d'administrations ellesmêmes. La glycine bétaïne remédie à ces effets indésirables.
CONCLUSION
La glycine bétaine possède les mêmes, voire de meilleures, caractéristiques thérapeutiques que les anti-coagulants et les anti-agrégants étudiés (acide acétylsalicylique et l'héparine), tout en ne présentant aucun effet indésirable.
Les performances supérieures en terme d'efficacité thérapeutique de la glycine bétaïne par rapport à ces deux molécules (acide acétylsalicylique et héparine) incitent à la formulation d'un médicament ayant pour principe thérapeutiquement actif la glycine bétaïne. Ce médicament revendiquant, pour le moins, l'indication anti-coagulant et l'indication antiagrégant. L'efficacité de la glycine bétaïne ne se limitant pas aux exemples décrits
De plus le haut potentiel anticoagulant de la glycine bétaïne, et selon les résultats expérimentaux, permet une conservation efficace du sang.
Ces résultats démontrés pour la glycine bétaïne ainsi que ses propriétés thérapeutiques peuvent être revendiqués pour la bétaïne et ses dérivés comme décrits et selon l'invention.
<Desc / Clms Page number 1>
BETAINE AND ITS DERIVATIVES FOR THEIR USE
EMI1.1
ANTITHROMBOTIC.
The invention consists in the use of betaine and its derivatives to eliminate the pathophysiological cardiovascular damage.
The invention relates to the curative and preventive activity of betaine and its derivatives in the pathogenesis of thromboembolic and hemostatic diseases of arterial or venous origin.
The invention consists in the use as a therapeutically active agent, against cardiovascular pathophysiological damage and the pathogenesis of diseases.
EMI1.2
thromboembolic and hemostatic, a mono, bi or trimethylated amino acid at the N-terminal end and represented under the general formula
EMI1.3
EMI1.4
where R '= CH3 R = carbon side chain x = t, 2ou3 if x = I => y = 2 if x = 2 => y does not exist if x = 3 => Hy does not exist The experimental results have been remarkably verified in the case of betaine
EMI1.5
as well as in the case of glycine betaine, proline betaine, homarine, carnitine, térgonelline, lysine betaine, butyro betaine,
all these molecules claiming according to the invention a therapeutic activity for treating accidents of blood circulation in the human body These molecules are only listed by way of example for their antithrombotic efficacy and should not limit the scope of the invention
The interest aroused by thromboembolic pathologies in recent years has made it possible to incriminate several factors:
- The vessel, your vascular wall and endothelial cells - The role of the figured elements of the blood - The coagulation and fibrinolysis systems and their inhibitors
The invention consists in that betaine and its derivatives exert an activity both in the pre-thrombotic state and in the post-thrombotic state. Indeed, betaine and its derivatives have a
<Desc / Clms Page number 2>
EMI2.1
preventive activity by preventing the formation of thrombi and curative activity by inhibiting thrombosis. The advantage of the invention lies in the fact that the use of betaine and its derivatives does not present any haemorrhagic risk as opposed to the molecules and treatments currently used.
Vascular thrombosis is an organism response to the aggression of the vessel wall and its cell and plasma content. Thrombosis is an organized mass of blood elements (platelets, red blood cells and white blood cells), fibrin and other plasma proteins, which is deposited on the surface or obstructs the lumen of the cardiovascular system. The mechanisms of thrombosis resemble those of hemostasis, but are pathological due to abnormal intravascular localization.
Thrombosis and embolism are the main cause of clinical complications of cardiovascular disease and atherosclerosis.
There are several types of thrombosis that can occur in arteries, veins, microcirculation of organs, heart chambers and artificial surfaces in contact with blood. Vascular thrombosis is an organism response to the aggression of the vessel wall and its cell and plasma content. Thrombosis is an organized mass of blood elements (platelets, red blood cells and white blood cells), fibrin and other plasma proteins, which is deposited on the surface or obstructs the lumen of the cardiovascular system. The mechanisms of thrombosis resemble those of hemostasis, but are pathological due to abnormal intravascular localization.
Thrombosis and embolism are the main cause of clinical complications of cardiovascular disease and atherosclerosis.
There are several types of thrombosis that can occur in arteries, veins, microcirculation of organs, heart chambers and artificial surfaces in contact with blood.
According to Virchow, at least three types of thrombogenic factors determine the location, extension and regression of a thrombosis: - Hemodynamic and rheological factors; - The endothelial lesion; - Activation of the constituents of the blood, in particular platelets and coagulation which leads to the formation of thrombin.
Thromboembolic disease, arterial or venous, remains the main cause of death in developed countries.
Arterial thrombosis is often a complication of atherosclerosis while venous thrombosis is more frequently the result of a deficiency in a coagulation inhibitor and fibrinolysis or stasis. Indeed, if both result from an interaction between the blood and the vascular wall, the formation of venous thrombosis and / or by an abnormality of hemostasis. Arterial thrombosis is most often secondary to a parietal anomaly and mainly involves blood platelets. It contributes to a wide variety of clinical pictures depending on the arterial beds interested in interrupting the vascular supply. Thrombosis can mainly affect the cardiac (coronary) arteries, arteries of the lower limbs, cerebral or digestive.
Thus, arterial disease promotes the formation of the thrombus itself responsible for the majority of terminal vascular occlusions. Furthermore, the participation of the haemostasis disorder and of the thrombus formed in other vascular lesions is manifest: aggravation of the lesions of the wall, ischemia and microcirculation disorders
<Desc / Clms Page number 3>
Three therapeutic strategies can be distinguished in the prevention of accidents linked to thromboses.
Anticoagulants They constitute the major element in the management of a patient with a thromboembolic disease. Heparin and its derivatives are commonly used. However, the use of heparins can cause two major complications, hemorrhage or thrombocytopenia.
Anti-vitamin K (AVK). Prescribed for long-term treatments, they cannot be used urgently and cannot be prescribed simultaneously with other anti-aggregating agents, of which they potentiate the hemorrhagic effect.
Antiplatelet agents. Prescribed to prevent arterial thrombosis linked to atherosclerosis Currently the main inhibitors of platelet function prescribed are: aspirin, ticlopidine, dipyridamole, and certain non-steroidal anti-inflammatory drugs such as flurbiprofen, prostacyclin These treatments have real effectiveness while presenting undesirable effects on patients with allergic or haemorrhagic grounds.
All these treatments, despite their effectiveness, require special precautions in their uses, such as the administration of antidotes, overdose problems and undesirable side effects. It was therefore interesting to find molecules or families of molecules with high antithrombotic potential without adverse effects.
Betaine and its derivatives, while having a high potential for efficacy against thromboembolic risks, do not have any undesirable effects. In fact, the experimental results linked to the toxicity of these molecules demonstrate their perfect safety - No oral, intravenous and intraperitoneal toxicity - No sensitizing effect - No allergic effect - No phototoxic or photoallergic effect - No cutaneous or ocular toxicity.
It therefore appears that betaine and its derivatives can be used for various clinical applications such as: - cardiovascular diseases (infarction, angina pectoris, aneurysm, atherosclerosis, pulmonary embolism, phlebitis, heart failure), - Traffic accidents blood in the brain and their prevention, post-traumatic shock of surgical origin or not.
- The prevention of microcirculation accidents in the following cases diabetes, hemophilia, chemotherapy, age, oral contraception by estrogens, obesity, smoking, prosthesis
Prevention of risks linked to the administration of ionic and non-ionic contrast media
MATERIAL AND METHOD
At Principle
In this model, the lesion of the vascular wall is induced by a laser beam. This beam with a diameter of 2 micrometers, leads to a limited lesion of the vascular endothelium (only 1 to 2 cells are destroyed) The exposure of the subendothelium, surface
<Desc / Clms Page number 4>
thrombogenic, leads to adhesion of platelets via glycoprotein Ib.
This adhesion of the platelets is followed by their activation. They form pseudopods and secrete the content of their granules. This activation leads to the appearance of the glycoprotein IIb-IIIa necessary for the aggregation of the platelets together. This in the presence of fibrinogen.
This lesion is induced in the mesenteric microcirculation of the rat. It is immediately followed by the formation of a thrombus (a few seconds). This rapidly growing thrombus, under the effect of blood flow, embolizes before forming again. a: Experimental thrombosis device.
An ARGON ION LASER 4W type laser emits identical photons in phase, direction and amplitude. The wavelength used is 514.5 nm. The power of the laser beam is manually adjusted using a potentiometer at 120 mW The diameter of the beam at the exit of the laser tube is 2 μm An INVERSE Axiovert 10 microscope (Zeiss,) with an ocular magnification of 10 and the field coefficient of 20.
A shutter for adjusting the exposure time of the laser beam on the preparation.
A DXC 107 P camera (Sony) with automatic shutter speed control depending on the brightness, which allows stable exposure. A TRINITRON COLOR VIDEO MONITOR PVM 1442 QM 5 monitor (Sony). It allows viewing of the experiment. This monitor has an ultra-fine trinitron grid picture tube that provides high image definition. b: Animals
This study requires male Wistar rats. Their weight is between 250 and 300 gr.
B / Method
The evaluation of the effect of betaine and its derivatives was carried out jointly with the study of two pharmacologically active molecules used as reference acetylsalicylic acid and heparin
After an 8-day housing period, the rats are fasted for 12 hours. They are then anesthetized.
A median laparotomy is performed and the mesentery can then be released, then placed on the microscope stage Three arterioles and a venule, with a diameter between 15 and 25 µm, are visualized and analyzed for each rat During the experiment , the mesentery will be regularly moistened with an isotonic solution of sodium chloride at 0. 9% maintained at 37 C, in order to avoid its drying. Indeed, the lighting of the preparation is carried out thanks to a powerful halogen lamp which can dry mesentery The power of the laser beam at the outlet of the tube is 120 mW, and this beam is applied to the arteriole for 1 / 15th of a second These parameters have been the subject of preliminary studies and have been validated.
EXAMPLES: The effectiveness of a molecule derived from betaine will be studied here: '-Glycine betaine whose formula is (CH3) 3N ------ CH2 ------ COOH
<Desc / Clms Page number 5>
Example 1: Evaluation of the number of emboli and the duration of embolization after vascular damage by laser shots
EMI5.1
<tb>
<tb> Number <SEP> of emboli <SEP> D <SEP> u <SEP> r <SEP> é <SEP> e <SEP> of embolization
<tb> (minutes)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 5. <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58 <SEP> 2 <SEP> ¯ <SEP> 0
<tb> 0.
<SEP> 9%
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 2 <SEP> 10
<tb> 5mg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 0.33 <SEP> 0, <SEP> 58
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 2.67 <SEP> 0, <SEP> 58 <SEP> 1 <SEP> 0
<tb>
The results show that the tin glycine significantly reduces the number of emboli and the embolization time after vascular damage by laser shots. Example 2:
Assessment of the time of induced hemorrhage
EMI5.2
<tb>
<tb> THP <SEP> (seconds)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 101. <SEP> 5257
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 95 <SEP> ¯ <SEP> 5
<tb> Smg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic <SEP> 276.67 <SEP> ¯ <SEP> 20.82
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 313.33 <SEP> ¯ <SEP> 20
<tb>
The results show that the glycine betaine significantly reduces the time of hemorrhage caused compared to the positive controls Example 3:
Assessment of platelet aggregation after vascular damage by laser fire
EMI5.3
<tb>
<tb> Amplitude <SEP> (Ohms) <SEP> Velocity <SEP> (Ohms / min)
<tb> Control <SEP> (NaCI <SEP> 0. <SEP> 9%) <SEP> 13 <SEP> zu
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 0 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 15 <SEP> 1 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 15
<tb> 5mg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 2.33 <SEP> 2 <SEP> 08 <SEP> 2 <SEP> 1
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 4 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 57 <SEP> 2 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 50
<tb>
<Desc / Clms Page number 6>
The results show that betaine glycine significantly decreases the parameters of platelet aggregation compared to the positive controls Example 4:
Evaluation of the effect of glycine betaine on blood cells a / Platelet count
EMI6.1
<tb>
<tb> Number <SEP> of <SEP> plates <SEP> (10)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCl <SEP> 788 <SEP> ¯ <SEP> 30 <SEP> 14
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> betaïe <SEP> 804.67¯20 <SEP> 03
<tb> 5mg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 855. <SEP> 33 <SEP> i <SEP> 63 <SEP> 17
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 777 <SEP> 33 <SEP> 6 <SEP> 43
<tb>
b / Enumeration of white blood cells
EMI6.2
<tb>
<tb> Number <SEP> of <SEP> white <SEP> cells
<tb> 109
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCl <SEP> 5 <SEP> 03 <SEP> 0 <SEP> 20
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 4. <SEP> 43 <SEP> 0 <SEP> 32
<tb> Smgg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 4. <SEP> 33 <SEP> d <SEP>:
<SEP>! <SEP> 00
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg <SEP>! <SEP> kg <SEP> 5 <SEP> 80 <SEP> 0 <SEP> 10
<tb>
c / Enumeration of red blood cells
EMI6.3
<tb>
<tb> Number <SEP> of <SEP> cells
<tb> red <SEP> (109)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCl <SEP> 6 <SEP> 56 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 15
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 6 <SEP> 19 <SEP> ¯ <SEP> 0. <SEP> 25
<tb> Smg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 6. <SEP> 15 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 31
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 6 <SEP> 20 <SEP> ¯ <SEP> 20
<tb>
<Desc / Clms Page number 7>
Example 5:
Biological assessment a / Quick time
EMI7.1
<tb>
<tb> TQ <SEP> (seconds)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCl <SEP> 17 <SEP>!
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 16 <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 1. <SEP> 05
<tb> 5mg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 18 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 2 <SEP> 08
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 29.50 <SEP> ¯ <SEP> 52
<tb>
b / Activated partial thromboplastin time (TCA)
EMI7.2
<tb>
<tb> TCA <SEP> (seconds)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 20 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 5
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 39 <SEP> 9 <SEP> 1 <SEP> 05
<tb> Smg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 27 <SEP> 26 <SEP> 1 <SEP> I
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 39 <SEP> 46 <SEP> 1 <SEP> 36
<tb>
ci Determination of fibrinogen
EMI7.3
<tb>
<tb> Fibrinogen <SEP> (g / l)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 245 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 19
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 17 <SEP> 01
<tb> 5mg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 2 <SEP> 19 <SEP> 0. <SEP> 33
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 2 <SEP> 13 <SEP> ¯ <SEP> 25
<tb>
<Desc / Clms Page number 8>
d / Determination of alpha. 2-Antiplasmin (a2AP)
EMI8.1
<tb>
<tb> a <SEP> 2AP <SEP> (%)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCi <SEP> 30. <SEP> 16 <SEP> 0.
<SEP> 85
<tb> 0.9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 29 <SEP> 7 <SEP> ¯ <SEP> 0. <SEP> 68
<tb> 5mg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic acid <SEP> 29. <SEP> 36 <SEP> 0. <SEP> 92
<tb> 100mg / kg
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 294 <SEP>: <SEP>! <SEP>: <SEP> 1. <SEP> 01
<tb>
e / Determination of Antithrombin 3 (AT3)
EMI8.2
<tb>
<tb> AT3 <SEP> (%)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCi863
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 89.5 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 37
<tb> 5mg / kg
<tb> Acid <SEP> acetylsalicylic <SEP> 85. <SEP> 33 <SEP> 351
<tb> lOOmg <SEP>! <SEP> k2
<tb> Heparin <SEP> 2 <SEP> mg / kg <SEP> 77.66 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 52
<tb>
Comment:
In studies carried out on the basis of the endothelial lesion-induced experimental thrombosis model, the application of laser fire on the vascular wall causes limited destruction of a few endothelial cells. This destruction causes the activation of the platelet-vascular wall complex which is immediately followed by the activation of plasma hemostasis thus triggering the process of the appearance of thrombosis. Let us recall that this experimental model, widely used elsewhere (Seiffge D and coll., 1989, Weichter W et al., 1983), is regulated by endogenous inhibitors of platelet aggregation prostacyclin and its analogs (Maraganore J.
M., 1993) Hence the interest represented by the use of this model to study the effects of contrast products, since it allows direct observation of the formation of the thrombus at the site of vascular injury. These results explain the appearance of thrombotic occlusions during angioplasties, especially in patients, whose endothelium is already damaged or injured. Coronary angioplasty causes denudation of the endothelium, exposing collagen, elastin and cells. muscles smooth with circulating blood, in analogy with the experimental thrombosis model used Thus,
new thrombi appear higher in patients with recent myocardial infarction or eccentric coronary plaque
Treatment with glycine-betaine inhibits thromboembolic complications triggered by laser shots In fact, this treatment with glycine-betaine, before laser shots, decreases the adhesion of platelets and their aggregation at the vascular level.
<Desc / Clms Page number 9>
EMI9.1
Treatment with glycine betaine inhibits thromboembolic complications. Indeed, this treatment with glycine-betaine, before the induction of thrombosis, showed a high antithrombotic potential in all the parameters involved in the process of thrombus formation. In addition, the results of the biological parameters demonstrate the perfect safety of glycine-betaine which, unlike the reference products used (aspirin and heparin), does not induce any side effects (see examples). These characteristics give glycine-betaine, in addition to its proven effectiveness, the particularity of being able to be administered to people at risk (diabetics, hemophiliacs, allergic). Glycine betaine also has antihemorrhagic activity (example 2).
The experimental result of Example 5, c, demonstrates a high anti-inflammatory potential of glycine-betaine.
It should be noted that, under the same experimental conditions, for the preservation of the blood glycine-betaine appeared to have a high anti-coagulant power compared to heparinized tubes or containing E DT A. Active doses of glycine -betaine appeared between 3 and 5 mg per hemolysis tube. This experimental result demonstrates a high anticoagulant potential of glycine betaine The use of glycine betaine as well as betaine and its derivatives as anticoagulants can be claimed, both for the treatment of the human body, in vivo, and for the preservation of blood ex vivo.
In the context of research on anti-thrombotic effects and in order to complete the approach to the efficacy of glycine-betaine, we evaluated the effect of glycine-betaine on the increase in thromboembolic risks linked the use of contrast media known for their prothrombotic powers
Two contrast products have been studied Hexabrixt (ionic) and Iopamidol (S (nonionic)
<Desc / Clms Page number 10>
Example 6:
Evaluation of the number of emboli and the duration of embolization after vascular damage by laser shots and administration of contrast products.
EMI10.1
1
EMI10.2
<tb>
<tb> Number <SEP> of emboli <SEP> Duration <SEP> of embolization
<tb> (minutes)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (Na <SEP> CI <SEP> 5. <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58 <SEP> 2 <SEP> ¯ <SEP> 0
<tb> 0.9%)
<tb> hexabrix # <SEP> 8 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 67 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58
<tb> Iopamidol # <SEP> 11 <SEP> 67¯ <SEP> 0 <SEP> 50 <SEP> 6 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 52
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 4 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 0
<tb> Hexabrixt
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 5.33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 58 <SEP> 2 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 48
<tb> Iopamidol #
<tb>
Example 7:
Assessment of the time of induced hemorrhage (THP)
EMI10.3
<tb>
<tb> THP <SEP> (seconds)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCl <SEP> 101 <SEP> 52 <SEP> ¯ <SEP> 5 <SEP> 7
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 195 <SEP> ¯ <SEP> 13 <SEP> 23
<tb> Iopamidol # <SEP> 128 <SEP> ¯ <SEP> 7 <SEP> 64
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 150 <SEP> ¯ <SEP> 5
<tb> Hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 111 <SEP> ¯ <SEP> 6 <SEP> 60
<tb> lopamidolg
<tb>
Example 8:
Assessment of platelet aggregation after vascular damage by laser fire
EMI10.4
<tb>
<tb> Amplitude <SEP> (Ohms) <SEP> Velocity <SEP> (Ohms / min)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCt <SEP> 13 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 1
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> hexabrix # <SEP> 6 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> 66 <SEP> 0 <SEP> 57
<tb> Iopamidol # <SEP> 15 <SEP> 2 <SEP> 64 <SEP> 12 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0, <SEP> 50
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 2 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0
<tb> Hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 4 <SEP> 66 <SEP> 0 <SEP> 52 <SEP> 9 <SEP> 33 <SEP> 0 <SEP> 8
<tb> Iopamidol #
<tb>
<Desc / Clms Page number 11>
Example 9:
Evaluation of the effect of glycine betaine on blood cells a / Platelet count
EMI11.1
<tb>
<tb> Number <SEP> plates <SEP> (109)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 788 <SEP> 33 <SEP> 30. <SEP> 14
<tb> 0.9%)
<tb> hexabrix # <SEP> 620 <SEP> Ì <SEP> 10
<tb> Iopamidol # <SEP> 585 <SEP> 67 <SEP> 23 <SEP> 54
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 669 <SEP> 67 <SEP> 7 <SEP> 37
<tb> Hexabrix @
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 704 <SEP> 33 <SEP> 92 <SEP> 33
<tb> lopamidoig
<tb>
b / Enumeration of white blood cells
EMI11.2
1 1 1
EMI11.3
<tb>
<tb> Number <SEP> white <SEP> cells
<tb> (109)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NACI <SEP> 5 <SEP> 03 <SEP> 0 <SEP> 20
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 2 <SEP> 960 <SEP> 21
<tb> lopamido <SEP> 3 <SEP> # <SEP> 3 <SEP> 06 <SEP> ¯ <SEP> 0.35
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 4 <SEP> 20 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 1
<tb> Hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5gm / kg <SEP> + <SEP> 3 <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 3
<tb> Iopamidol #
<tb>
c / Enumeration of red blood cells
EMI11.4
<tb>
<tb> Number <SEP> red <SEP> cells
<tb> (l09)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 6 <SEP> 56 <SEP> 0 <SEP> 15
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 5 <SEP> 43 <SEP> 0.
<SEP> 47
<tb> Iopamidol # <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 36
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 6 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 15
<tb> hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 19
<tb> Iopamidol #
<tb>
<Desc / Clms Page number 12>
- 12 Example 10:
Biological assessment a / Quick time
EMI12.1
<tb>
<tb> TQ <SEP> (seconds)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 17 <SEP> 7 <SEP> ¯ <SEP> 1
<tb> 0. <SEP> 9%)
<tb> hexabrix # <SEP> 24 <SEP> 13 <SEP> ¯ <SEP> 1
<tb> lopamidol <SEP> # <SEP> 28 <SEP> 1 <SEP> 0 <SEP> 75
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 16 <SEP> 36 <SEP>: <SEP> i <SEP>:
<SEP> 0 <SEP> 56
<tb> Hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 17 <SEP> 83 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 2
<tb> Iopamidol #
<tb>
b / Activated partial thromboplastin time (TCA)
EMI12.2
<tb>
<tb> TCA <SEP> (seconds)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (Na <SEP> CI <SEP> 20 <SEP> 5 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 5
<tb> 0.9%)
<tb> Hexabrix # <SEP> 49 <SEP> 3 <SEP> I <SEP> 85
<tb> lopamidolg <SEP> 41 <SEP> 33 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 8
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 25 <SEP> 4 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 61
<tb> Hexabrixt
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 22 <SEP> 4 <SEP> 0 <SEP> 7
<tb> Iopamidol #
<tb>
c / Dosage of fibrinogen
EMI12.3
<tb>
<tb> Fibrinogen <SEP> (go)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCl <SEP> 2 <SEP> 45¯ <SEP> 0 <SEP> 19
<tb> 0.
<SEP> 9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 1 <SEP> 49¯ <SEP> 0 <SEP> 18
<tb> Iopamidol # <SEP> l <SEP> 5 <SEP> 0 <SEP> 8
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 1 <SEP> 7 <SEP>: <SEP> E <SEP> 0. <SEP> 09
<tb> Hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> l <SEP> 9 <SEP> ¯ <SEP> 0 <SEP> 1
<tb> iopamidol #
<tb>
<Desc / Clms Page number 13>
EMI13.1
d / Uosagedet a) pha. 2-Anttptasm) ne (aZAF)
EMI13.2
<tb>
<tb> a <SEP> 2AP <SEP> (%)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 30. <SEP> 16 <SEP> 0 <SEP> 85
<tb> 0.9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 23 <SEP> 26 <SEP>: <SEP>! <SEP>:
<SEP> 1. <SEP> 06
<tb> Iopamidot <SEP> 25 <SEP> 23 <SEP> 0.95
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 25 <SEP> 66 <SEP> ¯ <SEP> 0.64
<tb> hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 28.13 <SEP> ¯ <SEP> 0.8
<tb> Iopamidol #
<tb>
e / Determination of Antithrombin 3 (AT3)
EMI13.3
..
EMI13.4
<tb>
<tb>
AT3 <SEP> (%)
<tb> Negative <SEP> control <SEP> (NaCI <SEP> 86.3 <SEP> 3
<tb> 0.9%)
<tb> Hexabrixt <SEP> 8163 <SEP> 0. <SEP> 66
<tb> Iopamidol # <SEP> 70.6 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 51
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 79 <SEP> 1 <SEP> ¯ <SEP> 1 <SEP> 05
<tb> Hexabrix #
<tb> Glycine <SEP> betaine <SEP> 5mg / kg <SEP> + <SEP> 87 <SEP> 26 <SEP> ¯ <SEP> 0.9
<tb> lopamidolg
<tb>
Comment: The administration of contrast media decreases the number of white blood cells, the number of red blood cells and the number of platelets.
Contrast agents interact with leukocytes, induce the release of leukotrienes, thus increase vascular permeability and exert a chemotactic effect. In addition, contrast agents act on the control of P-selectin expression and cause adhesion. white blood cells in the vascular endothelium It has been suggested that the use of contrast media is associated with the appearance of thrombi of varying importance depending on the product used This means that the effect of these products on platelet function is different and that the results obtained in experimental studies must be of importance in Human Clinic
<Desc / Clms Page number 14>
Treatment with glycine betaine inhibits thromboembolic complications associated with the use of contrast agents
Indeed, this treatment with glycine betaine, before or during the injection of contrast media, decreases the adhesion of platelets and their aggregation at the vascular level. These results demonstrate the antithrombotic and thrombolytic effect of glycine betaine. It should be noted that contrast agents can have other side effects such as blood stasis at the level of the catheters and endothelial lesions caused by the administration procedures themselves. . Glycine betaine overcomes these side effects.
CONCLUSION
Glycine betaine has the same, or even better, therapeutic characteristics than the anti-coagulants and anti-aggregants studied (acetylsalicylic acid and heparin), while exhibiting no undesirable effects.
The superior performance in terms of therapeutic efficacy of betaine glycine compared to these two molecules (acetylsalicylic acid and heparin) encourage the formulation of a drug having betaine glycine as a therapeutically active principle. This drug claiming, at the very least, the indication anti-coagulant and the indication anti-aggregating. The effectiveness of glycine betaine is not limited to the examples described
In addition, the high anticoagulant potential of glycine betaine, and according to experimental results, allows effective storage of the blood.
These results demonstrated for betaine glycine as well as its therapeutic properties can be claimed for betaine and its derivatives as described and according to the invention.