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Compositions contenant des produits pesticides biosynthétiques et au moins un tannin, procédés pour leur production et leur utilisation
La présente invention concerne des compositions contenant des produits pesticides biosynthétiques provenant de microorganismes de la famille des Bacillacées ainsi que des procédés pour leur production et leur utilisation.
Le procédé d'obtention des produits pesticides biosynthétiques provenant de microorganismes comporte généralement les étapes principales suivantes : - fermentation du microorganisme jusqu'à l'obtention d'une culture, - récolte de cette culture et - formulation du produit sous forme de pâte, poudre, granulé ou crème.
La récolte de la culture est une étape délicate dans ce procédé, en effet cette étape qui consiste principalement en une séparation de la culture sous forme de biomasse et du liquide de culture, est une des causes de perte de produit et donc du faible rendement généralement obtenu.
De plus la matière active du produit pesticide est un composé sensible de par sa structure biologique qui est dénaturée aisément si certaines conditions ne sont pas respectées, telles que notamment la température, le pH, les solvants, les additifs.
Les faibles rendements observés lors de la récolte sont dus notamment à la mauvaise séparation de nombreux constituants de la culture qui est plus ou moins visqueuse, aux effets mécaniques de la séparation qui engendrent la dégradation de la matière active du produit pesticide, et donc entraînent une baisse de son activité biologique, à l'addition d'adjuvants qui affectent la stabilité de la composition et/ou son aspect physique tel que la fluidité de la pâte, la décantation de la pâte ou de la crème lors du stockage, la dispersion de la composition dans l'eau.
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Par ailleurs, on observe également une baisse apparente de l'activité biologique, en particulier lorsque la composition est formulée sous forme de pâte. Cette formulation est avantageuse dans certains cas, car elle évite l'étape du séchage qui dégrade plus ou moins le produit et qui est onéreuse, elle est cependant nécessaire pour une conservation de longue durée.
En effet, lors du calcul du bilan de l'activité biologique, on observe un déficit de 30 à 50 % entre l'activité biologique de la culture et celle de la pâte, alors qu'on observe un déficit inférieur entre l'activité biologique de la poudre, provenant du séchage de cette pâte, et celle de la culture. L'activité biologique de la pâte n'est donc apparemment pas totalement disponible ou accessible.
La présente invention vise à procurer des compositions qui ne présente plus ces inconvénients. Notamment, elle vise à procurer des compositions ayant une activité biologique la plus élevée possible et obtenues de façon économique c'est à dire en évitant les pertes de rendement à tous les niveaux, aussi bien du point de vue de la quantité que de la qualité, comme de l'activité biologique, tout en étant stable et en présentant un aspect physique satisfaisant. De plus on observe que les compositions selon l'invention ont une activité biologique particulièrement élevée.
L'invention concerne à cet effet des compositions contenant des produits pesticides biosynthétiques, provenant de microorganismes de la famille des Bacillacées, et au moins un tannin ou un dérivé de tannin.
Les compositions préférées selon l'invention sont celles qui contiennent l'acide tannique.
Dans les compositions selon l'invention le tannin ou le dérivé de tannin peut être présent à des doses variables compatibles avec le produit pesticide biosynthétique particulier mis en oeuvre. En général la quantité de tannin ou de dérivé de tannin est comprise entre 0,01 et 20 X en poids de la composition.
Lorsqu'on met en oeuvre l'acide tannique, la quantité mise
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en oeuvre est comprise entre 0,05 et 15 X et de préférence entre 0,1 et 5 X en poids de la composition.
Par pesticides biosynthétiques provenant de microorganismes de la famille des Bacillacées, on entend également des microorganismes transformés par insertion d'ADN codant pour la fabrication de toxines et provenant d'autres microorganismes.
Les pesticides biosynthétiques provenant de la famille des Bacillacées peuvent se trouver dans les compositions concentrées selon l'invention sous des formes très diverses. Ainsi, ils peuvent se présenter sous la forme des organismes eux-mêmes à un stade quelconque de leur évolution, en ce comprises les formes végétatives éventuelles, tels quels, en association avec leur milieu de culture, sous forme totalement ou partiellement lysée, sous forme totalement ou partiellement sporulée, sous une forme ayant libéré partiellement ou totalement les spores par divers moyens tels que l'autolyse bactérienne, ou sous la forme des produits qui sont excrétés spontanément par les organismes tels que les exotoxines,
sous la forme des produits que l'on peut extraire de ces organismes tels que les endotoxines par toute méthode connue en elle-même impliquant ou non une lyse de l'organisme en cause, sous la forme des produits éventuellement libérés par les organismes au cours de certaines étapes de leur évolution (cristaux ou endotoxines associés ou non aux spores) ou encore sous plusieurs de ces formes simultanément.
Ces différentes formes peuvent éventuellement être associées à des résidus du milieu de culture. De bons résultats ont été obtenus avec le mélange contenant les spores, les cristaux ou les endotoxines associés et éventuellement des exotoxines qui se forment spontanément lors de l'autolyse de la bactérie en fin de sporulation. Un tel mélange peut contenir, outre les spores, les cristaux associés ou non aux spores et les exotoxines éventuelles, des cellules ou des débris de cellules ainsi que des produits solides résiduaires de milieu nutritif mis en oeuvre lors de la culture.
Comme microorganismes de la famille des Bacillacées convenant bien en général comme source de pesticides
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biosynthétiques, on utilise les microorganismes du genre Bacillus tels que le Bacillus thuringiensis, le Bacillus sphaericus, le Bacillus popilliae, le Bacillus cereus, le Bacillus larvae, le Bacillus lentimorbus, le Bacillus fribourgensis et le Bacillus penetrans (Pasteuria).
De bons résultats ont été obtenus avec les Bacillus sphaericus et les Bacillus thuringiensis de tous sérotypes, y compris les bactéries issues de transformation génétique, et plus particulièrement les Bacillus sphaericus de sérotypes la, 2a2b, 2a2c, 5a5b, 6,25, 26a26b, 26a26c et les Bacillus thuringiensis de sérotypes 1,3a, 3a3b, 4,6, 7,8, 8a8b, 9,10 et 14. Les meilleurs résultats ont été obtenus avec le Bacillus sphaericus de sérotypes 5a5b et 25 et les Bacillus thuringiensis de sérotypes 1 (variété thuringiensis), 3a3b (variété kurstaki), 6 (variétés subtoxieus et entomocidus), 7 (variété aizavai), 8a8b (variété morrisoni) et 14 (variété israëlensis).
Les divers types de Bacillus thuringiensis et de Bacillus sphaericus peuvent être mis en oeuvre dans les compositions selon l'invention sous forme des microorganismes eux-mêmes, tels quels ou lysés, de leurs spores, des endotoxines ou des cristaux associés ou non à leurs spores ou sous plusieurs de ces formes. Ces différentes formes peuvent éventuellement être associées à des résidus du milieu de culture. De bons résultats ont été obtenus en utilisant le mélange contenant des spores et les cristaux associés qui se forme spontanément lors de l'autolyse de la bactérie en fin de sporulation. Un tel mélange peut contenir, outre les spores et les cristaux associés ou non aux spores, des cellules ou des débris de cellules ainsi que des produits solides résiduaires du milieu nutritif mis en oeuvre lors de la culture.
Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous la forme d'une suspension de particules solides de produits pesticides biosynthétiques dans un liquide ou sous la forme d'un solide telle qu'une poudre ou un granulé.
Les compositions selon l'invention peuvent contenir en outre divers autres additifs dont la nature et la fonction dépendent de l'utilisation de ces compositions et qui sont connus par l'homme
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du métier.
Les compositions selon l'invention peuvent également contenir des résidus de la fabrication du pesticide biosynthétique.
Lorsque les compositions selon l'invention se présentent sous forme de suspensions dans un liquide, ces suspensions contiennent en général de 10 à 45 % en poids et le plus souvent de 15 à 40 % en poids de produits pesticides biosynthétiques. Le liquide doit être inerte vis-à-vis des pesticides biosynthétiques et il ne doit notamment pas les désactiver ni provoquer leur coagulation ni toute autre altération physique. Le liquide peut être constitué par un solvant unique ou par un mélange de solvants. En général, le solvant contient de l'eau.
De bons résultats ont été obtenus lorsque le solvant contient au moins 80 X et le plus souvent au moins 95 X en poids d'eau. En général, le liquide présent dans la composition selon l'invention est constitué essentiellement d'eau.
La présente invention concerne également des procédés pour la fabrication des compositions contenant des produits pesticides biosynthétiques selon l'invention.
Un procédé qui convient pour la fabrication des compositions selon l'invention comporte notamment les étapes suivantes : 1) dans une première étape, on cultive le microorganisme dans un milieu de culture jusqu'à l'obtention d'une culture abondante de ce microorganisme, 2) dans une deuxième étape, on ajoute à la culture obtenue une quantité de tannin ou de dérivé de tannin, 3) dans une troisième étape, on sépare l'eau de la culture contenant le tannin ou le dérivé de tannin en vue d'obtenir une pâte.
4) dans une quatrième étape, on procédé à la formulation de la pâte ainsi obtenue.
En général, lors de la deuxième étape, la quantité nécessaire de tannin ou de dérivés de tannin est comprise entre 0,05 et 4 % en poids de la culture, habituellement entre 0,1 et 3 % et de préférence entre 0,25 et 2 %.
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La troisième étape qui consiste à séparer l'eau de la culture, est réalisée par des techniques habituelles de séparation d'eau telles que la centrifugation, l'ultrafiltration, la précipitation par addition d'un non-solvant tel que l'acétone, la filtration ou la floculation de manière à obtenir une pâte. De préférence elle est réalisée par centrifugation et/ou ultrafiltration.
Les autres additifs éventuels sont ensuite ajoutés à cette pâte lors de la formulation.
Dans le cas du Bacillus thuringiensis et du Bacillus sphaericus, le milieu de culture est prélevé par exemple à la fin de la phase de sporulation.
Un autre procédé consiste à séparer du milieu de culture des microorganismes générateurs de produits pesticides biosynthétiques, à la fin de la phase de sporulation, des fractions riches en endotoxines ou en spores ou en ces deux produits simultanément. Ces fractions sont ensuite traitées selon les mêmes techniques que celles utilisées pour le traitement des pâtes.
Pour obtenir des compositions sous forme de poudres sèches, on sèche la pâte ainsi obtenue par des techniques habituelles telles que le séchage par atomisation, le séchage par lyophilisation ou le séchage en tambour de manière à obtenir des particules solides contenant en général moins de 12 % et de préférence moins de 7 X d'eau.
Une autre technique consiste à ajouter les autres additifs éventuels à la pâte avant de la sécher et à soumettre le mélange au séchage selon l'une ou l'autre des techniques indiquées ci-avant.
Pour obtenir les compositions selon l'invention sous forme de suspensions, on peut disperser les particules solides de pesticide dans une phase liquide qui contient de préférence de l'eau et qui contient en outre le tannin ou le dérivé de tannin ainsi que les autres additifs éventuels, pour former une crème.
La présente invention concerne également un procédé pour l'utilisation des compositions.
Les compositions selon l'invention peuvent être utilisées
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comme pesticides et plus particulièrement comme agents pour éliminer les insectes à un stade quelconque de leur développement. Pour ce faire, elles sont pulvérisées sur les surfaces infestées, végétaux, fleuves, rivières et toute étendue d'eau selon toutes méthodes connues en elles-mêmes telles que la pulvérisation manuelle, la pulvérisation mécanique et plus particulièrement la pulvérisation par voie aérienne. Elles peuvent notamment être pulvérisées sur les surfaces infestées par des insectes et plus particulièrement par des lépidoptères, des diptères, des coléoptères, des aphaniptères, des orthoptères, des isoptères et des homoptères.
Les doses à mettre en oeuvre sont fonction du pesticide biosynthétique utilisé et de la cible à éliminer.
Dans le cas du Bacillus thuringiensis et du Bacillus sphaericus, on pulvérise en général de 50 à 5000 g de particules solides à l'hectare. Les compositions selon l'invention peuvent être pulvérisées telles quelles lorsqu'elles se présentent sous forme de suspensions. Elles peuvent être également dispersées, diluées ou émulsionnées dans un diluant comme l'eau ou un diluant organique. Dans ce cas, on les dilue par 1 à 300 fois, habituellement 2 à 120 fois et de préférence 4 à 60 fois leur volume de diluant.
Les exemples qui suivent servent à illustrer l'invention.
Exemple 1
Dans un fermenteur BIOLAFFITE de 15 1 équipé d'un agitateur, d'une sonde de pH, d'une sonde d'oxygène, d'un système d'aération, stérilisable, on introduit 450 g de farine de soja contenant 52 r. environ de protéines, 250 g d'amidon hydrolysé, 20 g de KH2P04, 20 g de K2HP04, 3,2 g de MgS04. 7H20, 0,12 g de MnSO. HO, 0,14 g de ZnS04. 7H20, 0,2 g de Fe2 (S04) 3, 1,5 g de CaCl2. H20 et 10 l d'eau.
On mélange ce milieu de culture jusqu'à ce qu'il soit homogène ; on amène le pH de ce milieu à 7.
On stérilise ce milieu de culture à 1200C durant 30 minutes.
On le refroidit jusqu'à amener le milieu de culture à une température de 30 C et on introduit stérilement dans le
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fermenteur 1 1 d'une culture de Bacillus thuringiensis sérotype 14 (variété israelensis) en phase de croissance.
Le fermenteur est agité à 450 tours par minute et aéré à 0,4 vvm (volume d'air par volume de milieu par minute).
Après 32 heures, le Bacillus thuringiensis se présente sous la forme d'une bactérie sporulée partiellement lysée. Cette culture contient 1,1. 109 spores par ml, son pH est de 7,5 et sa matière sèche est de 3 g par 1.
L'activité insecticide de cette culture est mesurée à l'aide d'Aedes aegypti d'après la méthode de titrage biologique de H. de Barjac et I. Larget, VHO-VBC-79. 744. Elle s'élevé à 300 u/ml +/-20 X.
On ajoute 2 pour mille d'acide citrique en poudre au produit ainsi obtenu.
Le pH de ce produit est ajusté à 4 par addition d'acide phosphorique.
Dans 500 g du produit ainsi obtenu, on introduit 5 g de tannin, de marque TANIN PB5 de la société PHARMACHEMIC et contenant 99 Z d'acide tannique.
L'activité insecticide du produit obtenu est, aux erreurs de mesure près, égale à celle de la culture, les acides et le tannin ajoutés ne sont donc pas toxiques pour les insectes cibles.
Le produit est alors concentré par centrifugation pour donner une pâte contenant environ 12 % de matières sèches.
Cette pâte a une activité insecticide de 2800 u/mg +/-20 X.
Cette pâte est fluide et stable dans le temps.
Exemple 2 R (de comparaison)
On réalise une culture de Bacillus thuringiensis sérotype 14 comme à l'exemple 1. Puis on prépare une pâte identique à celle de l'exemple 1 à l'exception de l'addition de tannin.
La pâte obtenue a une activité insecticide de 1500 u/mg +/-20 X.
Les résultats comparés entre l'exemple 1 selon l'invention et l'exemple 2R de comparaison mettent en évidence que l'incorporation d'acide tannique à la culture avant la centrifugation permet de faciliter la récolte, d'améliorer le rendement de
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centrifugation, de mettre à disposition la matière active du produit.
Exemple 3R (de comparaison)
On réalise une culture de Bacillus thuringiensis sérotype 14 comme à l'exemple 1. Puis on prépare une pâte identique à celle de l'exemple 1 à l'exception de l'addition de tannin qui est remplacé par l'addition de 0,1 X de silice, silice de marque AEROSIL R 972 de la Société DEGUSSA.
L'activité insecticide de la pâte obtenue s'élève à 1300 u/mg +/-20 X. La pâte est compacte et ne se disperse pas dans l'eau.
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Compositions containing biosynthetic pesticides and at least one tannin, processes for their production and their use
The present invention relates to compositions containing biosynthetic pesticide products from microorganisms of the Bacillaceae family as well as methods for their production and use.
The process for obtaining biosynthetic pesticide products from microorganisms generally comprises the following main stages: - fermentation of the microorganism until a culture is obtained, - harvesting of this culture and - formulation of the product in the form of a paste, powder , granulated or cream.
Harvesting the culture is a delicate step in this process, in fact this step which consists mainly of a separation of the culture in the form of biomass and the culture liquid, is one of the causes of loss of product and therefore of the low yield generally got.
In addition, the active ingredient of the pesticide product is a sensitive compound due to its biological structure which is easily denatured if certain conditions are not respected, such as in particular the temperature, the pH, the solvents, the additives.
The low yields observed during harvesting are due in particular to the poor separation of many constituents of the crop which is more or less viscous, to the mechanical effects of the separation which cause the degradation of the active material of the pesticide product, and therefore cause a decrease in its biological activity, with the addition of adjuvants which affect the stability of the composition and / or its physical appearance such as the fluidity of the dough, the settling of the dough or the cream during storage, the dispersion of the composition in water.
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Furthermore, there is also an apparent decrease in biological activity, in particular when the composition is formulated in the form of a paste. This formulation is advantageous in certain cases, because it avoids the drying stage which more or less degrades the product and which is expensive, it is however necessary for a long-term preservation.
Indeed, when calculating the balance of biological activity, there is a deficit of 30 to 50% between the biological activity of the culture and that of the pulp, while we observe a lower deficit between biological activity powder, from the drying of this paste, and that from the culture. The biological activity of the dough is therefore apparently not completely available or accessible.
The present invention aims to provide compositions which no longer have these drawbacks. In particular, it aims to provide compositions having the highest possible biological activity and obtained economically, that is to say by avoiding yield losses at all levels, both from the point of view of quantity and of quality , as biological activity, while being stable and having a satisfactory physical appearance. In addition, it is observed that the compositions according to the invention have a particularly high biological activity.
To this end, the invention relates to compositions containing biosynthetic pesticide products, originating from microorganisms of the Bacillaceae family, and at least one tannin or a tannin derivative.
The preferred compositions according to the invention are those which contain tannic acid.
In the compositions according to the invention, the tannin or the tannin derivative may be present in variable doses compatible with the particular biosynthetic pesticide product used. In general, the amount of tannin or tannin derivative is between 0.01 and 20% by weight of the composition.
When using tannic acid, the amount used
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in use is between 0.05 and 15 X and preferably between 0.1 and 5 X by weight of the composition.
By biosynthetic pesticides coming from microorganisms of the Bacillaceae family, one also understands microorganisms transformed by insertion of DNA coding for the manufacture of toxins and coming from other microorganisms.
Biosynthetic pesticides from the Bacillaceae family can be found in the concentrated compositions according to the invention in very diverse forms. Thus, they can be in the form of the organisms themselves at any stage of their evolution, including the possible vegetative forms, as such, in association with their culture medium, in fully or partially lysed form, in the form totally or partially spore-forming, in a form which has partially or completely released the spores by various means such as bacterial autolysis, or in the form of products which are spontaneously excreted by organisms such as exotoxins,
in the form of the products which can be extracted from these organisms such as endotoxins by any method known in itself involving or not lysis of the organism in question, in the form of the products possibly released by the organisms during certain stages of their evolution (crystals or endotoxins associated or not with spores) or in several of these forms simultaneously.
These different forms can possibly be associated with residues of the culture medium. Good results have been obtained with the mixture containing the spores, the crystals or the associated endotoxins and possibly exotoxins which form spontaneously during the autolysis of the bacterium at the end of sporulation. Such a mixture may contain, in addition to the spores, the crystals associated or not with the spores and any exotoxins, cells or cell debris as well as residual solid products of nutritive medium used during the culture.
As microorganisms of the Bacillaceae family generally suitable as a source of pesticides
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biosynthetics, microorganisms of the genus Bacillus are used such as Bacillus thuringiensis, Bacillus sphaericus, Bacillus popilliae, Bacillus cereus, Bacillus larvae, Bacillus lentimorbus, Bacillus fribourgensis and Bacillus penetrans (Pasteuria).
Good results have been obtained with Bacillus sphaericus and Bacillus thuringiensis of all serotypes, including bacteria resulting from genetic transformation, and more particularly Bacillus sphaericus of serotypes la, 2a2b, 2a2c, 5a5b, 6,25, 26a26b, 26a26c and Bacillus thuringiensis of serotypes 1,3a, 3a3b, 4,6, 7,8, 8a8b, 9,10 and 14. The best results were obtained with Bacillus sphaericus of serotypes 5a5b and 25 and Bacillus thuringiensis of serotypes 1 (thuringiensis variety), 3a3b (kurstaki variety), 6 (subtoxies and entomocidus varieties), 7 (aizavai variety), 8a8b (morrisoni variety) and 14 (israelensis variety).
The various types of Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus can be used in the compositions according to the invention in the form of the microorganisms themselves, as they are or lysed, their spores, endotoxins or crystals associated or not with their spores or in many of these forms. These different forms can possibly be associated with residues of the culture medium. Good results have been obtained using the mixture containing spores and the associated crystals which forms spontaneously during the autolysis of the bacteria at the end of sporulation. Such a mixture can contain, in addition to the spores and the crystals associated or not with the spores, cells or cell debris as well as residual solid products of the nutritive medium used during the culture.
The compositions according to the invention may be in the form of a suspension of solid particles of biosynthetic pesticide products in a liquid or in the form of a solid such as a powder or a granule.
The compositions according to the invention can also contain various other additives, the nature and function of which depend on the use of these compositions and which are known to man.
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of career.
The compositions according to the invention may also contain residues from the manufacture of the biosynthetic pesticide.
When the compositions according to the invention are in the form of suspensions in a liquid, these suspensions generally contain from 10 to 45% by weight and most often from 15 to 40% by weight of biosynthetic pesticide products. The liquid must be inert vis-à-vis biosynthetic pesticides and it must not in particular deactivate them or cause their coagulation or any other physical alteration. The liquid can be constituted by a single solvent or by a mixture of solvents. In general, the solvent contains water.
Good results have been obtained when the solvent contains at least 80 X and most often at least 95 X by weight of water. In general, the liquid present in the composition according to the invention consists essentially of water.
The present invention also relates to methods for the manufacture of the compositions containing biosynthetic pesticides according to the invention.
A process which is suitable for the manufacture of the compositions according to the invention comprises in particular the following stages: 1) in a first stage, the microorganism is cultivated in a culture medium until an abundant culture of this microorganism is obtained, 2) in a second step, an amount of tannin or tannin derivative is added to the culture obtained, 3) in a third step, the water is separated from the culture containing the tannin or tannin derivative in order to get a paste.
4) in a fourth step, the dough thus obtained is formulated.
In general, during the second step, the necessary amount of tannin or tannin derivatives is between 0.05 and 4% by weight of the culture, usually between 0.1 and 3% and preferably between 0.25 and 2%.
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The third step which consists in separating the water from the culture, is carried out by usual techniques of water separation such as centrifugation, ultrafiltration, precipitation by addition of a non-solvent such as acetone, filtration or flocculation so as to obtain a paste. Preferably it is produced by centrifugation and / or ultrafiltration.
The other optional additives are then added to this paste during the formulation.
In the case of Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus, the culture medium is removed for example at the end of the sporulation phase.
Another method consists in separating from the culture medium microorganisms which generate biosynthetic pesticide products, at the end of the sporulation phase, fractions rich in endotoxins or in spores or in these two products simultaneously. These fractions are then treated according to the same techniques as those used for the treatment of pasta.
To obtain compositions in the form of dry powders, the paste thus obtained is dried by usual techniques such as spray drying, drying by lyophilization or drum drying so as to obtain solid particles generally containing less than 12%. and preferably less than 7 X of water.
Another technique consists in adding any other additives to the dough before drying it and in subjecting the mixture to drying according to one or other of the techniques indicated above.
To obtain the compositions according to the invention in the form of suspensions, the solid particles of pesticide can be dispersed in a liquid phase which preferably contains water and which also contains tannin or the tannin derivative as well as the other additives possible, to form a cream.
The present invention also relates to a method for using the compositions.
The compositions according to the invention can be used
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as pesticides and more particularly as agents for eliminating insects at any stage of their development. To do this, they are sprayed on infested surfaces, plants, rivers, rivers and any body of water according to any methods known in themselves such as manual spraying, mechanical spraying and more particularly spraying by air. They can in particular be sprayed on surfaces infested by insects and more particularly by lepidoptera, diptera, beetles, aphaniptera, orthoptera, isoptera and homoptera.
The doses to be used depend on the biosynthetic pesticide used and the target to be eliminated.
In the case of Bacillus thuringiensis and Bacillus sphaericus, generally 50 to 5000 g of solid particles are sprayed per hectare. The compositions according to the invention can be sprayed as they are when they are in the form of suspensions. They can also be dispersed, diluted or emulsified in a diluent such as water or an organic diluent. In this case, they are diluted by 1 to 300 times, usually 2 to 120 times and preferably 4 to 60 times their volume of diluent.
The examples which follow serve to illustrate the invention.
Example 1
450 g of soy flour containing 52 r are introduced into a 15 l BIOLAFFITE fermenter equipped with a stirrer, a pH probe, an oxygen probe, a sterilizable aeration system. about protein, 250 g hydrolyzed starch, 20 g KH2PO4, 20 g K2HPO4, 3.2 g MgSO4. 7H20, 0.12 g MnSO. HO, 0.14 g of ZnS04. 7H20, 0.2 g of Fe2 (SO4) 3, 1.5 g of CaCl2. H20 and 10 l of water.
This culture medium is mixed until it is homogeneous; the pH of this medium is brought to 7.
This culture medium is sterilized at 1200C for 30 minutes.
It is cooled until the culture medium is brought to a temperature of 30 ° C. and it is sterile introduced into the
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fermenter 1 1 of a culture of Bacillus thuringiensis serotype 14 (israelensis variety) in growth phase.
The fermenter is stirred at 450 revolutions per minute and aerated at 0.4 vvm (volume of air per volume of medium per minute).
After 32 hours, Bacillus thuringiensis appears as a partially lysed spore-forming bacteria. This culture contains 1.1. 109 spores per ml, its pH is 7.5 and its dry matter is 3 g per 1.
The insecticidal activity of this crop is measured using Aedes aegypti according to the biological titration method of H. de Barjac and I. Larget, VHO-VBC-79. 744. It amounts to 300 u / ml +/- 20 X.
2 per thousand of powdered citric acid is added to the product thus obtained.
The pH of this product is adjusted to 4 by addition of phosphoric acid.
5 g of tannin, of the brand TANIN PB5 from the company PHARMACHEMIC and containing 99% of tannic acid are introduced into 500 g of the product thus obtained.
The insecticidal activity of the product obtained is, apart from measurement errors, equal to that of the culture, the added acids and tannin are therefore not toxic to the target insects.
The product is then concentrated by centrifugation to give a paste containing about 12% of dry matter.
This paste has an insecticidal activity of 2800 u / mg +/- 20 X.
This paste is fluid and stable over time.
Example 2 R (comparison)
A culture of Bacillus thuringiensis serotype 14 is carried out as in Example 1. Then a paste identical to that of Example 1 is prepared except for the addition of tannin.
The paste obtained has an insecticidal activity of 1500 u / mg +/- 20 X.
The results compared between Example 1 according to the invention and Comparative Example 2R demonstrate that the incorporation of tannic acid into the culture before centrifugation makes it possible to facilitate harvesting, to improve the yield of
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centrifugation, to make available the active ingredient of the product.
Example 3R (comparison)
A culture of Bacillus thuringiensis serotype 14 is carried out as in Example 1. Then a paste identical to that of Example 1 is prepared except for the addition of tannin which is replaced by the addition of 0.1 X of silica, AEROSIL R 972 brand silica from the company DEGUSSA.
The insecticidal activity of the paste obtained amounts to 1300 u / mg +/- 20 X. The paste is compact and does not disperse in water.