AT7457U1

AT7457U1 - SYNERGISTIC COMPOSITION CONTAINING ASCORBATE AND LYSINE FOR THE TREATMENT OF COLLAGENASE-DEPENDENT DEGENERATIVE DISEASES

Info

Publication number: AT7457U1
Application number: AT0806304U
Authority: AT
Original assignee: Rath Matthias Dr
Priority date: 2001-01-16
Filing date: 2004-11-12
Publication date: 2005-04-25

Abstract

Die Erfindung betrifft die Verwendung einer synergistischen Zusammensetzung, die Ascorbinsäure oder ein pharmazeutisch akzeptables Ascorbatsalz oder Mischungen derselben, mindestens einen Fibrinolysehemmer und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst, zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung collagenase-bedingter degenerativer Erkrankungen.The invention relates to the use of a synergistic composition comprising ascorbic acid or a pharmaceutically acceptable ascorbate salt or mixtures thereof, at least one fibrinolytic inhibitor and a pharmaceutically acceptable carrier for the manufacture of a medicament for the treatment of collagenase-related degenerative diseases.

Description

AT 007 457 U1AT 007 457 U1

Gegenstand der Erfindung sind Substanzen und Zusammensetzungen für die Vorbeugung und Behandlung von Krankheiten oder pathologischen Zuständen, die mit der Degeneration der extrazellularen Matrix, insbesondere mit degenerativen Erkrankungen, Arteriosklerose, Krebs, Infektionen und anderen entzündlichen Krankheiten in Zusammenhang stehen. 5 Es ist bekannt, dass Plasminogen und Plasmin eventuell die Produktion von Collagenase stimulieren, was letztendlich zu Schädigungen des Collagenbindegewebes in der extrazellularen Matrix durch Einflüsse proteolytischer Enzyme führt. Es ist ferner festgestellt worden, dass Lysin nicht nur wirksam ist, potentielle Rezeptoren für das Lipoprotein (a) zu blockieren, sondern auch die Wirkung proteolytischer Enzyme zu verhindern. io Nach Studien der Ovulation in weiblichen Säugetieren scheint es, dass Gondadotropine, Prostaglandine und bestimmte andere Substanzen die Freisetzung von Plasminogenaktivatoren (PA) aus Eizellen anregen, die in Eileitern eingebettet sind (Strickland, S., et al., (1976) J. Biol. ehern. 751; 5694-5702) (Figur 1). PA regen dann die extrazellulare Aktivierung von Plasminogen zu Plasmin an. Plasmin ist dafür bekannt, Procollagenase zu Collagenase zu aktivieren, die dann 15 Collagen abbaut.The invention relates to substances and compositions for the prevention and treatment of diseases or pathological conditions which are associated with the degeneration of the extracellular matrix, in particular with degenerative diseases, atherosclerosis, cancer, infections and other inflammatory diseases. It is known that plasminogen and plasmin may stimulate the production of collagenase, ultimately leading to collagen connective tissue damage in the extracellular matrix due to the effects of proteolytic enzymes. It has also been found that lysine is not only effective in blocking potential receptors for the lipoprotein (a) but also in preventing the action of proteolytic enzymes. Following studies of ovulation in female mammals, it appears that gondadotropins, prostaglandins and certain other substances stimulate the release of plasminogen activators (PA) from eggs embedded in fallopian tubes (Strickland, S., et al., (1976) J. Biol., Et al., 751; 5694-5702) (FIG. 1). PA then stimulate extracellular activation of plasminogen to plasmin. Plasmin is known to activate procollagenase to collagenase, which then degrades 15 collagen.

Unter pathologischen Bedingungen werden PA auch von Krebszellen, Makrophagen und viral umgeformten Zellen in gleicher Weise freigesetzt, wie dies bei Eizellen hormonell angeregt wird (Unkeless, et al. (1974) J. Biol. Chem. 249; 4295-4305) (Figur 2). PA sind in hohen Konzentrationen in metastasierenden Lungentumoren gefunden worden (Skriver, et al. (1984) J. Cell Biol. 99; 20 753-758). PA sind im Zusammenhang mit einer Reihe von menschlichen Tumoren wie auch beiUnder pathological conditions, PA are also released by cancer cells, macrophages and virally transformed cells in the same way as is stimulated hormonally in oocytes (Unkeless, et al. (1974) J. Biol. Chem. 249: 4295-4305) (FIG ). PA has been found in high concentrations in metastatic lung tumors (Skriver, et al. (1984) J. Cell Biol. 99; 20 753-758). PA are associated with a number of human tumors as well

Nieren- und Blasenkarzinomen gefunden worden (Corasanti, et al. (1980) J. Natl. Canc. Inst. 65; 345-351 Ladehoff, A. (1962) Act Path. Micro. Scand. 55; 273-280).Kidney and bladder carcinomas have been found (Corasanti, et al. (1980) J. Natl. Canc. Inst. 65; 345-351 Ladehoff, A. (1962) Act Path., Micro. Scand. 55; 273-280).

Eine besondere Rolle in dem Ablauf dieses Mechanismus spielt das Lipoprotein (a) (Lp(a)), ein LDL ähnliches Partikel, das ein einzigartiges Glykoprotein, genannt Apoprotein (a) (apo(a)) trägt. 25 Es ist angenommen worden, dass dieser Partikel an der Wundheilung und der allgemeinen Zellreparatur teilnimmt (Brown, M., et. al., (1987) Nature 330; 113-114). Die cDNA-Sequenz von apo(a) zeigt eine erstaunliche Ähnlichkeit mit Plasminogen mit vielfältigen Wiederholungen der Schleife 4, einer Schleife 5 und einer Protease-Domäne. Die Isoformen von apo(a) variieren in der Größenordnung von 300 - 800 kDa und unterscheiden sich hauptsächlich in ihrer genetisch bestimmten 30 Anzahl von Schleife 4 Strukturen (McLean, J.W., et al. (1987) Nature 300; 132-137). Während apo(a) keine plasminähnliche Proteaseaktivität aufweist (Eaton, D.L., et al., (1987) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84; 3224-3228), ist hingegen eine Serin-Proteaseaktivität beobachtet worden (Salonen, E. et al. (1989) EMBO J. 8; 4035-4040).A particular role in the mechanism of this mechanism plays the lipoprotein (a) (Lp (a)), a LDL-like particle carrying a unique glycoprotein called apoprotein (a) (apo (a)). It has been suggested that this particle participates in wound healing and general cell repair (Brown, M., et al., (1987) Nature 330: 113-114). The cDNA sequence of apo (a) shows a striking similarity to plasminogen with multiple repeats of loop 4, a loop 5 and a protease domain. The isoforms of apo (a) vary in the order of 300-800 kDa and differ mainly in their genetically determined number of loop 4 structures (McLean, J.W., et al., (1987) Nature 300, 132-137). While apo (a) has no plasmin-like protease activity (Eaton, DL, et al., (1987) Proc Natl Acad., USA 84, 3224-3228), serine protease activity has been observed (Salonen, E., et al. et al. (1989) EMBO J. 8; 4035-4040).

Trotz des Mangels funktioneller Analogie ist die starke strukturelle Ähnlichkeit (Homologie) zu 35 Plasminogen entscheidend in dem Verständnis der physiologischen und pathologischen Rolle von Lp(a). Wie Plasminogen kann Lp(a) Lysin-Sepharose, immobilisiertes Fibrin, Fibrinogen und den Plasminogenrezeptor an Endothelzellen zu binden (Harpel, P.C. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86; 3847-3851; Gonzalez-Gronow, M. et al. (1989) Biochemistry 28; 2374-2377 Miles, L. et al. (1989) Nature 339; 301-302 Hajjar, K.A., et al. (1989) Nature 339; 303-305). Darüber hinaus wurde 40 festgestellt, dass Lp(a) andere Komponenten der Arterienwand wie Fibronectin und Glycosami- noglycan bindet. Die genauen Zusammenhänge dieser Bindungen sind jedoch kaum erforscht. Es wurde festgestellt, dass bei Krebs, Arteriosklerose und anderen Erkrankungen der Plasmagehalt von Lp(a) erhöht ist. Umgekehrt sind mit dem starken Vorkommen dieser Krankheiten niedrige Ascorbatgehalte festgestellt worden (Knox, E.A. (1973) Lancet, i.e. 1465-1467; Wright, L.C. et al. 45 (1989) Int. J. Cancer 43; 241-244). Auf der Basis dieser und anderer Beobachtungen ist ange nommen worden, dass Lp(a) ein Surrogat für Ascorbinsäurederivate ist (Rath, M. & L. Pauling (1990) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87; 6204-6207).Despite the lack of functional analogy, the strong structural similarity (homology) to plasminogen is crucial in understanding the physiological and pathological role of Lp (a). Like plasminogen, Lp (a) can bind lysine-sepharose, immobilized fibrin, fibrinogen, and the plasminogen receptor to endothelial cells (Harpel, PC et al., (1989) Proc Natl Acad., U.S.A. 86, 3847-3851, Gonzalez-Gronow , M. et al. (1989) Biochemistry 28; 2374-2377 Miles, L. et al. (1989) Nature 339; 301-302 Hajjar, KA, et al. (1989) Nature 339; 303-305). In addition, it was found that Lp (a) binds other components of the arterial wall, such as fibronectin and glycosaminoglycan. However, the exact connections of these bonds are hardly explored. It has been found that the plasma content of Lp (a) is increased in cancer, arteriosclerosis and other diseases. Conversely, with the prevalence of these diseases, low levels of ascorbate have been found (Knox, E.A. (1973) Lancet, 1465-1467, Wright, L.C., et al., 45 (1989) Int.J. Cancer 43, 241-244). Based on these and other observations, it has been suggested that Lp (a) is a surrogate for ascorbic acid derivatives (Rath, M. & L. Pauling (1990) Proc Natl Acad, U.S.A. 87, 6204-6207). ,

Es besteht ein Bedarf an einer therapeutischen Zusammensetzung, die den Abbau der extrazellularen Matrix durch Proteolyse bzw. Fibrinolyse, die insbesonders durch Plasmin und frei Radi-50 kale verursacht worden ist, zu verringern. Von besonderem Wert ist eine Zusammensetzung, die gleichzeitig den Abbau verringert und die Collagensynthese, dem wichtigsten Bestandteil der extra-zellularen Matrix, fördert, und dadurch hilft, die Ausbreitung dieser Erkrankungen zu verhindern.There is a need for a therapeutic composition that can reduce degradation of the extracellular matrix by proteolysis or fibrinolysis, which has been particularly caused by plasmin and free radiofrequals. Of particular value is a composition that simultaneously reduces degradation and promotes collagen synthesis, the key component of the extracellular matrix, thereby helping prevent the spread of these diseases.

Die Lösung dieser Aufgabe wird in der Verwendung einer synergistischen Zusammensetzung gesehen, die für die Behandlung degenerativer Erkrankungen geeignet ist, deren Ursache in dem 55 Abbau der extrazellularen Matrix zu suchen ist, und die wenigstens einen Fibrinolysehemmer 2 AT 007 457 U1 umfasst in einer Menge, die ausreicht, um eine durch Plasmin und freie Radikale verursachte Collagenaseproduktion zu verringern. Ein weiterer Aspekt der Erfindung wird in einer Zusammensetzung gesehen, die einen Aktivator umfasst, der geeignet ist, die Collagensynthese zu fördern.The solution to this problem is seen in the use of a synergistic composition suitable for the treatment of degenerative diseases whose cause is to be found in the breakdown of the extracellular matrix and which comprises at least one fibrinolytic inhibitor in an amount, sufficient to reduce collagenase production caused by plasmin and free radicals. Another aspect of the invention is seen in a composition comprising an activator suitable for promoting collagen synthesis.

Ein weiterer Aspekt der Erfindung sieht eine Zusammensetzung vor, die ein Ascorbat und 5 eventuell eine oder mehrere Antioxidantien umfasst. Der Ausdruck Antioxidans wird hier in der Beschreibung und in den Ansprüchen unter Ausschluss von Ascorbinsäurederivaten, die selbst starke Antioxidantien sind, gebraucht.Another aspect of the invention provides a composition comprising an ascorbate and optionally one or more antioxidants. The term antioxidant is used herein in the specification and claims excluding ascorbic acid derivatives which are themselves powerful antioxidants.

Ein weiterer Gesichtspunkt der Erfindung betrifft eine therapeutische Zusammensetzung, die wenigstens einen Fibrinolysehemmer, einen Collagensyntheseaktivator, ein Ascorbat und eventuell 10 einen oder mehrere Antioxidantien umfasst in Mengen, die ausreichend sind, um die durch Plasmin und freie Radikale veranlasste Produktion von Collagenase zu verringern.Another aspect of the invention relates to a therapeutic composition comprising at least one fibrinolytic inhibitor, a collagen synthesis activator, an ascorbate, and optionally one or more antioxidants in amounts sufficient to reduce plasmin-free radical induced collagenase production.

Zur weiteren Erläuterung der Erfindung wird auf die beigefügten Zeichnungen und die in der Beschreibung dargestellten Ausführungsbeispiele der Erfindung verwiesen.To further explain the invention, reference is made to the accompanying drawings and the embodiments of the invention shown in the description.

Figur 1 zeigt ein Schema des Plasmin-verursachten Abbaues des Bindegewebes unter physio-15 logischen Bedingungen, die zum Eisprung führen;Figure 1 shows a scheme of plasmin-induced connective tissue degradation under physiological conditions leading to ovulation;

Figur 2 zeigt in einem Flussdiagramm die Entstehungsphysiologie des Abbaues der extrazellularen Matrix als Ergebnis einer durch freie Radikale verursachten Proteolyse;Figure 2 is a flow chart showing the developmental physiology of extracellular matrix degradation as a result of free radical-induced proteolysis;

Figur 3 zeigt ein Schema der physiologischen Rolle von apo(a) im Zusammenhang mit durch Plasmin und freie Radikale verursachter Proteolyse; 20 Figur 4 zeigt ein Schema des synergistischen Effektes von Ascorbat und Fibrinolysehemmem in der Therapie gegen durch Plasmin und freie Radikale veranlasste Proteolyse.Figure 3 shows a schematic of the physiological role of apo (a) in the context of plasmin and free radical proteolysis; Figure 4 shows a scheme of the synergistic effect of ascorbate and fibrinolysis inhibitors in the treatment of plasmin and free radical proteolysis.

Die Erfindung bezieht sich auf die Verwendung von Zusammensetzungen, die den Abbau der extrazellularen Matrix verhindern oder verlangsamen und dadurch für die Behandlung von Krebs, degenerativen Erkrankungen, Infektionen und Entzündungen oder pathologischen Zuständen, die 25 mit dem Abbau der extrazellularen Matrix in Zusammenhang stehen, geeignet sind. Bei einer Vielzahl dieser Erkrankungen scheint die Entstehung oder Verschlimmerung des Krankheitsbildes ein Ergebnis des Abbaues der extrazellularen Matrix zu sein. Krebs zum Beispiel wird höchst lebensbedrohend, wenn ein einzelner Tumor metastasiert, also nachdem einzelne Zellen den Verbund im Bindegewebe verlassen haben und in andere Teile des Körpers verbracht worden 30 sind, wo sich die Erkrankung ausbreitet. Neben Krebs zeigen degenerative Erkrankungen wie fortgeschrittene Arteriosklerose ähnliche Ausbreitungsmechanismen. Der hier benutzte Ausdruck „Collagenase-veranlasste degenerative Erkrankungen“ umfasst degenerative Erkrankungen, neoplastische Erkrankungen, Infektionen oder Entzündungen oder pathologische Zustände, die mit dem Abbau der extrazellularen Matrix verbunden sind. Wie in Figur 2 gezeigt, gibt es zwei grundle-35 gende Pathomechanismen, nämlich die durch Plasmin einerseits und durch freie Radikale andererseits verursachte Proteolyse, die durch Synergieeffekte zu einer erheblichen Verschlimmerung der Erkrankung führen. Besonders im Falle von Krebs konzentriert sich die Behandlung auf die Entfernung oder Abtötung des Tumors, während der Verhinderung der Ausbreitung des Krebses oder der Entwicklung andere Methoden als die chirurgische für die Eindämmung der Tumorbildung 40 wenig Aufmerksamkeit gewidmet wird. Diese Eindämmung kann durch Substanzen erreicht werden, die diese Pathomechanismen einschränken oder verhindern, wie durch Fibrinolysehemmer. Beispielsweise wurde in einem Versuch Tranexamsäure benutzt, um die Krebsausbreitung zu verhindern, allerdings sind wenig überzeugende Ergebnisse erzielt worden (Marcus, G. (1984) Sem. Thromb. Hemost. 10; 61 - 70). 45 Die Wirkweise der Erfindung beruht teilweise auf der Entdeckung, dass die durch Plasmin veranlasste Proteolyse ein wesentlicher physiologischer Umstand ist, der für den Ablauf vieler, anscheinend nicht miteinander verbundener physiologischer Prozesse verantwortlich ist. Insbesondere sondern Krebszellen und normales Bindegewebe innerhalb des Körpers PA ab, die die Bildung von Plasmin aktivieren und schließlich zum Collagenabbau und der Degeneration der extrazellula-50 ren Matrix führen, was auch vorteilhaft sein kann. Beispielsweise muss im Falle der Ovulation das Bindegewebe abgebaut werden, um das Ei in die Gebärmutter austreten zu lassen. Eizellen sondern PA ab, welche das Plasminogen zur Piasminerzeugung aktivieren. Plasmin wiederum aktiviert die Collagenase, was zur Proteolyse des Bindegewebes führt, dadurch zur Ausdehnung und zum Riss des Follikels und damit die Loslösung des Eis. Viele Krebszellen produzieren ebenfalls große 55 Mengen von PA, was dann über den gleichen physiologischen Ablauf zur Degeneration von Colla- 3 AT 007 457 U1 gen und der extrazellularen Matrix führen kann. In diesem Falle hat die Degeneration den schädlichen Effekt, dass einzelne Zellen eines Tumors sich befreien, so dass sie in entfernte Teile des Körpers geraten können. Es scheint so, dass das Auftreten von Metastasen bei allen Krebserkrankungen zu einem großen Teil vom Abbau der extrazellularen Matrix abhängig ist. Es ist festgestellt 5 worden, dass bestimmte Substanzen mit Plasminogen und Lp(a) um die Bindungsstellen an den Endothelzellen von Blutgefäßen konkurieren. Es ist nun entdeckt worden, dass diese Substanzen, die bisher als Lp(a)-Bindungshemmer und hier als Fibrinolysehemmer bezeichnet werden, Antagonisten zu Plasmin in seiner Umwandlung von Procollagenase zur Collagenase sind. Dies zeigt, dass die Verabreichung von Fibrinolysehemmer, besonders in Kombination mit Ascorbinsäurederi-10 vaten, die die Collagensynthese fördern, den Abbau der extrazellularen Matrix aufgrund vermehrter Aktivierung von Plasmin verhindern oder zumindest verzögern kann.The invention relates to the use of compositions which prevent or retard degradation of the extracellular matrix and thereby are useful in the treatment of cancer, degenerative diseases, infections and inflammatory or pathological conditions associated with degradation of the extracellular matrix are. In a large number of these diseases, the onset or aggravation of the disease appears to be a result of the degradation of the extracellular matrix. Cancer, for example, becomes highly life-threatening if a single tumor is metastasized, that is, after individual cells have left the composite in the connective tissue and been transferred to other parts of the body where the disease is spreading. In addition to cancer, degenerative diseases such as advanced arteriosclerosis show similar propagation mechanisms. As used herein, the term "collagenase-induced degenerative diseases" includes degenerative diseases, neoplastic diseases, infections or inflammations or pathological conditions associated with degradation of the extracellular matrix. As shown in Figure 2, there are two basic pathogenic mechanisms, namely proteolysis caused by plasmin, on the one hand, and free radicals, on the other, which, by synergistic effects, result in a significant aggravation of the disease. Particularly in the case of cancer, treatment focuses on the removal or killing of the tumor, while little attention is paid to preventing the spread of cancer or developing other methods than the surgical one used to control tumor formation. This containment can be achieved by substances that restrict or prevent these pathomechanisms, such as fibrinolytic inhibitors. For example, in one experiment, tranexamic acid was used to prevent the spread of cancer, but poor results have been obtained (Marcus, G. (1984) Sem. Thromb., Hemost., 10; 61-70). The mode of action of the invention is based, in part, on the discovery that plasmin-induced proteolysis is an essential physiological circumstance responsible for the course of many seemingly unrelated physiological processes. In particular, cancer cells and normal connective tissue within the body PA, which activate the formation of plasmin and ultimately lead to collagen degradation and the degeneration of the extracellular matrix, which may also be beneficial. For example, in case of ovulation, the connective tissue must be broken down to allow the egg to escape into the uterus. Eggs but PA, which activate the plasminogen to Piasminerzeugung. In turn, plasmin activates collagenase, resulting in proteolysis of the connective tissue, thereby expanding and rupturing the follicle and thus releasing the ice. Many cancer cells also produce large amounts of PA, which can then result in the degeneration of collagen and the extracellular matrix via the same physiological process. In this case, degeneration has the deleterious effect of liberating individual cells of a tumor so that they can get into distant parts of the body. It appears that the occurrence of metastases in all cancers is largely dependent on the degradation of the extracellular matrix. It has been found 5 that certain substances compete with plasminogen and Lp (a) for the binding sites on the endothelial cells of blood vessels. It has now been discovered that these substances, heretofore referred to as Lp (a) -binding inhibitors and here as fibrinolysis inhibitors, are antagonists to plasmin in its conversion of procollagenase to collagenase. This demonstrates that the administration of fibrinolysis inhibitors, particularly in combination with ascorbic acid derivatives which promote collagen synthesis, can prevent or at least delay degradation of the extracellular matrix due to increased activation of plasmin.

Der Ausdruck Fibrinolysehemmer innerhalb der Beschreibung und der Ansprüche umfasst alle Substanzen, die als Antagonisten für durch Plasmin verursachte proteolytische Aktivitäten gelten, insbesondere die durch Fibrinolyse erzeugte Collagenaseproduktion. Einige derartiger Verbindun-15 gen werden in hoher Dosierung zur klinischen Behandlung von hyperfibrinolytischen Zuständen benutzt.The term fibrinolytic inhibitor within the specification and claims encompasses all substances which are considered to be antagonists of plasmin-induced proteolytic activities, in particular fibrinolysis-produced collagenase production. Some such compounds are used in high dosage for the clinical treatment of hyperfibrinolytic conditions.

Bei der Entstehung und Ausbreitung der meisten pathologischen Zustände spielen aktivierte Makrophagen eine wesentliche Rolle. Sind diese Zellen aktiviert, so scheiden sie eine Vielzahl von Produkten einschließlich von Enzymen wie Collagenase aus. Darüber hinaus, wie aus Figur 2 20 ersichtlich, sondern sie reaktivierte Sauerstoffverbindungen wie Superoxid, Flydrogenperoxid und Hydroxylradikale ab, die als freie Radikale bezeichnet werden (Nathan, C. (1987) J. Clin. Invest. 79; 319-326). Somit wird über einen anderen Mechanismus die Krankheitsausbreitung durch freie Radikale verursacht. Diese oxidativen Radikalen können durch aktivierte Makrophagen und andere Zellen bei pathologischen Zuständen erzeugt werden. Ähnlich wie die durch Plasmin verursachte 25 Proteolyse bewirken freie Radikale den Abbau der extrazellularen Matrix und fördern dadurch die Ausbreitung von Erkrankungen. Es ist bekannt, dass freie Radikale Proteolyse auf verschiedene Art verursachen. Eine wesentliche Art davon ist die Aktivierung von Procollagenase und Collagenase. Ascorbate sind starke Antioxidantien und sind daher ein wesentliches therapeutisches Mittel für die Einschränkung von durch freie Radikale veranlassten Proteolysen. Wie in Figur 4 darge-30 stellt, lassen die vorteilhaften Wirkungen von Ascorbaten vermuten, dass Ascorbate in Verbindung mit diesen Fibrinolysehemmem einen synergistischen Effekt aufweisen und sowohl die durch Plasmin verursachte als auch die durch freie Radikale herbeigeführte Proteolyse verhindern. Ascorbate förderen die Bildung Collagen (Murad, et al. 1981 Proc. Natl. Acad. Sei. USA 78; 2879-2882) und regen auch die Bildung von Lymphozyten an, die bereits bestehende Krebszellen 35 bekämpfen können (Yonemoto, et al. 1976 Proc. Amer. Assoc. Canc. Res. 17; 288).Activated macrophages play a key role in the development and spread of most pathological conditions. When activated, these cells secrete a variety of products, including enzymes such as collagenase. In addition, as seen in Figure 2, 20, they re-reactivated oxygen compounds, such as superoxide, flydrug peroxide and hydroxyl radicals, termed free radicals (Nathan, C. (1987) J. Clin. Invest. 79; 319-326). Thus, another mechanism causes disease spread by free radicals. These oxidative radicals can be generated by activated macrophages and other cells in pathological conditions. Similar to plasmin-induced proteolysis, free radicals cause the degradation of the extracellular matrix, thereby promoting the spread of disease. It is known that free radicals cause proteolysis in various ways. An essential type of this is the activation of procollagenase and collagenase. Ascorbates are powerful antioxidants and are therefore an essential therapeutic agent for limiting free radical proteolysis. As shown in Figure 4, the beneficial effects of ascorbates suggest that ascorbates in combination with these fibrinolysis inhibitors have a synergistic effect and prevent both proteolysis caused by plasmin and free radical induced proteolysis. Ascorbates promote the formation of collagen (Murad, et al 1981 Proc Natl Acad., USA 78; 2879-2882) and also stimulate the formation of lymphocytes that can fight existing cancer cells 35 (Yonemoto, et al., 1976) Proc. Amer. Assoc. Canc. Res. 17; 288).

Fibrinolysehemmer verhindern die Auflösung von Blutgerinseln und haben damit eine prokoa-gulative Wirkung. Diese Eigenschaft hat bisher die Benutzung dieser Substanzen in der Behandlung von Krebs und anderen Erkrankungen eingeschränkt oder verhindert, weil bekannt ist, dass Neoplasmen häufig mit thromboembolytischen Komplikationen verbunden sind. Es ist bekannt, 40 dass Ascorbate anti-koagulative Eigenschaften haben, durch die beispielsweise Prostacyclin angeregt und damit Thromboxanentwicklungen verhindert werden. Es ist ein wesentlicher Gesichtspunkt dieser Erfindung, durch die Kombination von Fibrinolysehemmem mit Ascorbaten unerwünschte Nebenwirkungen von Monotherapien auszuschließen. Die Erfindung umfasst die Verwendung von Zusammensetzungen für die Behandlung und Vorbeugung von Erkrankungen, 45 die mit dem Abbau der extrazellularen Matrix in Verbindung stehen.Fibrinolysis inhibitors prevent the dissolution of blood clots and thus have a procoagulant effect. This property has heretofore limited or prevented the use of these substances in the treatment of cancer and other diseases because it is known that neoplasms are often associated with thromboembolytic complications. It is known that ascorbates have anti-coagulative properties which, for example, stimulate prostacyclin and thus prevent thromboxane developments. It is an essential aspect of this invention to eliminate undesirable side effects of monotherapies by combining fibrinolytic inhibitors with ascorbates. The invention encompasses the use of compositions for the treatment and prevention of diseases associated with degradation of the extracellular matrix.

Die Erfindung offenbart somit eine Zusammensetzung für die Behandlung und Vorbeugung von degenerativen Erkrankungen wie Krebs und viele andere durch die Verabreichung einer wirksamen Menge von wenigstens einem Fibrinolysehemmer, der die durch Plasmin und freie Radikale verursachte Umwandlungen von Procollagenase zu Collagenase verhindert. Auf diese Weise ist die 50 Zerstörung der extrazellularen Matrix, die vornehmlich aus Collagen besteht, eingeschränkt oder verhindert.The invention thus discloses a composition for the treatment and prevention of degenerative diseases, such as cancer and many others, by the administration of an effective amount of at least one fibrinolytic inhibitor which prevents plasmin and free radical transformations of procollagenase to collagenase. In this way, the destruction of the extracellular matrix, which consists primarily of collagen, is restricted or prevented.

Vorzugsweise umfassen ohne Einschränkung Fibrinolysehemmer ε-Aminocapronsäure (EACA), Lysin, Tranexamsäure (4-Aminomethylcyclohexancarbonsäure), P-Aminomethylbenzoe-säure (PAMPA), 4-Aminobenzolsulfonsäure, α-N-Acetyl-Lysin-Methylester, Cis-4-Aminomethyl-55 cyclohexancarbonsäure (AMCHA), Trans-4-Aminomethylcyclohexancarbonsäure (AMCA) und 4 AT 007 457 U1 4-Aminomethyl-bicyclo-2,2,2-oktancarbonsäure (AMBOCA). Eine wirksame Menge eines Fibrinolysehemmers oder eine Mischung aus einem oder mehreren Fibrinolysehemmern kann verwendet werden. Durch die Kombination von zwei oder mehr Fibrinolysehemmern kann die therapeutische Wirkung erheblich vergrößert werden, während gleichzeitig die Toxizität verringert wird, weil ver-5 schiedene fibrinolytische Substanzen auf verschiedenen katabolischen Wegen abgebaut werden. Zudem können die Zusammensetzungen Ascorbate in Kombination mit Fibrinolysehemmern umfassen. Die Bezeichnung „Ascorbat“ umfasst jedes pharmazeutisch akzeptabel Salz der Ascorbinsäure einschließlich Natriumascorbat, als auch Ascorbinsäure selbst. Andere Substanzen, die in der Behandlung von Herz-Kreislauferkrankungen verwendet werden, können zusätzlich verabreicht 10 werden, einschließlich von Antioxidantien wie Tocopherol, Karotin, Selen, N-Acetylcystein, Probu-col und verwandten Substanzen; Vitamine, Pro-Vitamine und Spurenelemente. Obwohl Ascorbate wegen ihrer fördernden Wirkung auf die Collagensynthese allein verwendet werden können, ist es vorteilhaft, bei der Behandlung von bereits existierenden degenerativen Erkrankungen Ascorbate mit wenigstens einem Fibrinolysehemmer und einem weiteren Antioxidans in Dosierungen zu 15 verwenden, wie sie in Tabelle 1 vorgesehen sind. Es wird daraufhingewiesen, dass sich die Dosierungen in Tabelle 1 abhängig davon, ob die Zusammensetzung oral oder parenteral verabreicht wird, unterscheiden. Die unterschiedlichen Dosierungen entsprechen den unterschiedlichen Krankheitserscheinungen. Im Falle der Diagnose eines fortgeschrittenen Zustandes einer bestimmten degenerativen Erkrankung sollten höhere Dosierungen eingesetzt werden. Wenn es jedoch nur 20 um die Vorbeugung eines Collagenabbaus geht, bevor ernstere Symptome auftreten, sollte eine niedrigere Dosierung verwendet werden.Preferably, without limitation, fibrinolytic inhibitors include ε-aminocaproic acid (EACA), lysine, tranexamic acid (4-aminomethylcyclohexanecarboxylic acid), P-aminomethylbenzoic acid (PAMPA), 4-aminobenzenesulfonic acid, α-N-acetyl-lysine methyl ester, cis-4-aminomethyl- 55 cyclohexanecarboxylic acid (AMCHA), trans-4-aminomethylcyclohexanecarboxylic acid (AMCA) and 4 AT 007 457 U1 4-aminomethyl-bicyclo-2,2,2-octanecarboxylic acid (AMBOCA). An effective amount of a fibrinolysis inhibitor or a mixture of one or more fibrinolytic inhibitors may be used. By combining two or more fibrinolysis inhibitors, the therapeutic effect can be significantly increased while at the same time reducing toxicity by degrading different fibrinolytic agents in various catabolic pathways. In addition, the compositions may comprise ascorbates in combination with fibrinolysis inhibitors. The term "ascorbate" includes any pharmaceutically acceptable salt of ascorbic acid including sodium ascorbate, as well as ascorbic acid itself. Other substances used in the treatment of cardiovascular disease may be additionally administered, including antioxidants such as tocopherol, carotene, selenium, N-acetylcysteine, Probu-col and related substances; Vitamins, pro-vitamins and trace elements. Although ascorbates can be used alone because of their promoting effect on collagen synthesis, it is advantageous to use ascorbates with at least one fibrinolytic inhibitor and another antioxidant in dosages as provided in Table 1 in the treatment of existing degenerative diseases. It should be noted that the dosages in Table 1 differ depending on whether the composition is administered orally or parenterally. The different dosages correspond to the different symptoms of the disease. In case of diagnosis of an advanced condition of a particular degenerative disease, higher dosages should be used. However, if it is only about preventing collagen degradation before more serious symptoms occur, a lower dose should be used.

Alternativ kann eine pharmazeutische Zusammensetzung, die mit den oben Beschriebenen identisch ist, auch ohne Ascorbate benutzt werden. Wo Ascorbate und Fibrinolysehemmer in der gleichen Zusammensetzung benutzt werden, können sie einfach gemixt oder durch bekannte 25 Synthesemethoden chemisch miteinander verbunden sein, wie z.B. Verbindungen, in denen Ascorbate und der Hemmstoff kovalent verbunden sind oder ionisch gebundene Salze bilden. Beispielsweise können Ascorbate kovalent über Esterbindung mit Lysin oder anderen Aminosäuren oder mit ε-Aminocapronsäure verbunden sein. Aminocapronat oder Ascorbyl-Aminomethylcyclohexan-carbonsäure sind solche Beispiele. In dieser Form ist der Ascorbatanteil besonders wirksam in der 30 Vorbeugung unerwünschter Lipidperoxidationen.Alternatively, a pharmaceutical composition identical to those described above may also be used without ascorbate. Where ascorbates and fibrinolysis inhibitors are used in the same composition, they may simply be mixed or chemically linked by known synthesis methods, such as e.g. Compounds in which ascorbates and the inhibitor are covalently linked or form ionically bound salts. For example, ascorbates may be covalently linked via ester linkage with lysine or other amino acids or with ε-aminocaproic acid. Aminocapronate or ascorbyl-aminomethylcyclohexane-carboxylic acid are such examples. In this form, the ascorbate moiety is particularly effective in preventing unwanted lipid peroxidation.

Ascorbate und Fibrinolysehemmer alleine oder in irgendeiner Kombination können mit anderen Substanzen zusammen in der Chemotherapie von Krebs benutzt werden. Diese Substanzen umfassen ohne Einschränkung Verbindungen aus den Gruppen der Antibiotika, Antiöstrogene, Antimetabolika, Hormone, cytotoxische Substanzen, Tris(2-Chlorethyl)-amin („nitrogenmustard“) -35 Derivate oder Steroide sowie Kombinationen davon. Im Falle einer oralen Verabreichung werden pharmazeutisch akzeptable inerte Träger verwendet. Im Falle oraler Verabreichung können die aktiven Bestandteile in Tablettenform verabreicht werden. Die Tabletten können als Bindemittel Traganth, Maisstärke oder Gelatine enthalten; als Lösemittel z.B. Alginsäure und/oder als Gleitmittel können Magnesiumstearate verwendet werden. Fall die Verabreichung in flüssiger Form ge-40 wünscht ist, können Süßstoffe oder Aromastoffe verwendet werden. Im Falle der Verabreichung durch parenterale Injektion können isotonische Salzlösungen, phosphatgepufferte Lösungen oder ähnliches als pharmazeutisch akzeptable Träger verwendet werden.Ascorbates and fibrinolysis inhibitors alone or in any combination can be used together with other substances in the chemotherapy of cancer. These substances include, without limitation, compounds from the groups of antibiotics, antiestrogens, antimetabolics, hormones, cytotoxic substances, tris (2-chloroethyl) amine ("nitrogenmustard") derivatives or steroids, and combinations thereof. In the case of oral administration, pharmaceutically acceptable inert carriers are used. In the case of oral administration, the active ingredients may be administered in tablet form. The tablets may contain tragacanth, corn starch or gelatin as binders; as a solvent, e.g. Alginic acid and / or as lubricants magnesium stearates can be used. If administration in liquid form is desired sweeteners or flavorings may be used. In the case of administration by parenteral injection, isotonic saline solutions, phosphate buffered solutions or the like can be used as pharmaceutically acceptable carriers.

Zusätzlich können die Aminosäure Prolin oder Prolinsalze in der Vorbeugung und Behandlung der oben beschriebenen pathologischen Bedingungen eines Patienten verwendet werden. 45 Abgesehen von der Rolle eines LP(a)-Bindungshemmer ist Prolin auch erforderlich als eine Aminosäurekomponente für die Proteinsynthese. Collagen und andere extrazelluläre Matrixproteine sind besonders reich an Lysin und Prolin, welche ungefähr 25 % der totalen Masse an Collagen ausmachen.In addition, the amino acid proline or proline salts may be used in the prevention and treatment of the above-described pathological conditions of a patient. 45 Apart from the role of an LP (a) -binding inhibitor, proline is also required as an amino acid component for protein synthesis. Collagen and other extracellular matrix proteins are particularly rich in lysine and proline, which account for approximately 25% of the total mass of collagen.

Obwohl Prolin im Gegensatz zu Lysin im Körper synthetisiert werden kann, ist dessen Synthe-50 serate speziell bei chronischen Erkrankungen gesenkt. In diesen pathologischen Zuständen, in denen ein übermäßiger Collagenabbau über Monate oder Jahre andauert, ist die ausreichende Verfügbarkeit von Prolin für die Collagensynthese und andere extrazellulare Matrixmoleküle ein kritischer Faktor, der das Optimum der Erzeugung von neuem Collagen bestimmt und dadurch das Fortschreiten der Erkrankungen einschränkt. 55 Es ist daher wesentlich, dass entsprechende Mengen von Prolin und Prolinsalzen im Körper 5 AT 007 457 U1 verfügbar sind.Although proline, unlike lysine, can be synthesized in the body, its synthesis counterpart is especially lowered in chronic diseases. In these pathological conditions where excessive collagen degradation persists for months or years, the sufficient availability of proline for collagen synthesis and other extracellular matrix molecules is a critical factor determining the optimum of new collagen production and thereby limiting the progression of the disease. It is therefore essential that appropriate amounts of proline and proline salts are available in the body. 5 AT 007 457 U1.

Die Benutzung von Fibrinolysehemmern in der Behandlung von Krebs, Angiohämatomen und anderer Erkrankungen ist bis zu einem gewissen Ausmaß von dem allgemeinen Gesundheitszustand des Patienten abhängig, insbesondere mit Rücksicht auf hyperfibrinolytische Zustände. Es 5 ist daher empfehlenswert, die Koagulation und das fibrinolytische System des Patienten vor und während der Behandlung zu überwachen. Es wird jedoch darauf hingeweisen, dass hämostatische Komplikationen unwahrscheinlich sind, weil die Fibrinolysehemmer im allgemeinen Proteasehemmer sind, die auch zur Koagulationshemmung eingesetzt wurden (Aoki, N. et al. (1978) Blood 52; 1-12). Langzeitverabreichungen von Fibrinolysehemmern erfordern Formulierungen, in denen die io Dosierung von Fibrinolysehemmern im unteren Bereich der in der Tabelle 1 angegebenen Dosierungen sind. Es ist bekannt, dass Ascorbate die Prostaglandin- und Prostacyclinsynthese anregen, thromboxane Gehalte vermindern und auf diese Weise einen Anti-Aggregationseffekt bewirken. Diese Eigenschaften können in Kombination mit der Benutzung von Fibrinolysehemmern wünschenswert sein, um potentiellen koagulativen Nebenwirkungen entgegenzuwirken. 15 Ascorbate und Fibrinolysehemmer können wie oben beschrieben von einander getrennt verabreicht werden. Eine weitere Verbesserung der therapeutischen Wirkung kann dadurch gewonnen werden, dass zum Erreichen relativ gleichmäßiger Serumkonzentrationen eine zeitverzögerte Freisetzung der Zusammensetzungen angewendet wird. 20 Tabelle 1The use of fibrinolytic inhibitors in the treatment of cancer, angiohematomas and other diseases is dependent to some extent on the general health of the patient, especially with regard to hyperfibrinolytic conditions. It is therefore advisable to monitor the patient's coagulation and fibrinolytic system before and during treatment. It should be noted, however, that hemostatic complications are unlikely because the fibrinolysis inhibitors are generally protease inhibitors which have also been used for coagulation inhibition (Aoki, N. et al. (1978) Blood 52: 1-12). Long-term administrations of fibrinolysis inhibitors require formulations in which the dosages of fibrinolytic inhibitors are in the lower range of the dosages given in Table 1. Ascorbates are known to stimulate prostaglandin and prostacyclin synthesis, reduce thromboxane levels, and thus provide an anti-aggregation effect. These properties, in combination with the use of fibrinolytic inhibitors, may be desirable to counteract potential coagulant side effects. Ascorbates and fibrinolysis inhibitors may be administered separately from each other as described above. A further improvement in the therapeutic effect can be obtained by using a time-delayed release of the compositions to achieve relatively uniform serum concentrations. 20 Table 1

Dosierungen von Substanzen in den Zusammensetzungen aem. der ErfindungDosages of substances in the compositions aem. the invention

Oral Parenteral 25 Verabreichuna Verabreichuna Ascorbat: 5-500 mg/kg KG/d 25-2500 mg/kg 30 EACA 1-1500 mg/kg KG/d gleich Tranexamsäure 1-500 mg/kg KG/d gleich 4-Aminomethylbenzoesäure 1 -500 mg/kg KG/d gleich Lysin 1-1500 mg/kg KG/d gleich 35 Prolin 1-1500 mg/kg KG/d gleich Antioxidantien: 40 Tocopherol 0.1-500 lU/kg KG/d gleich Karotin 0,1-10.000 lU/kg KG/d gleich N-Acetylcystein 0,1-5000 mg/kg KG/d gleichOral Parenteral 25 Administration Ascorbate: 5-500 mg / kg bw / d 25-2500 mg / kg 30 EACA 1-1500 mg / kg bw / d equal to tranexamic acid 1-500 mg / kg bw / d equal to 4-aminomethylbenzoic acid 1 - 500 mg / kg bw / d equal to lysine 1-1500 mg / kg bw / d equal to 35 proline 1-1500 mg / kg bw / d equal to antioxidants: 40 tocopherol 0.1-500 lU / kg bw / d equal to carotene 0.1- 10,000 lU / kg bw / d equal to N-acetylcysteine 0.1-5000 mg / kg bw / d

Es wurde festgestellt, dass LP(a) ein Co-Regulator der durch Plasmin verursachten Proteolyse 45 ist, der kritisch in die Umwandlung und Reparatur im Bindegewebe eingebunden ist. Mit Hinblick auf die Homologie mit Plasminogen und Plasmin ist LP(a) ein physiologisch kompetitiver Hemmstoff der durch Plasmin verursachten Proteolyse. Darüber hinaus verfügt das Apoprotein (a) über 100 Sulfidbindungen und fungiert deshalb als Antioxidans wie andere Proteinverbindungen (wie z. B. Proteinthiole). 50 Zusammenfassend ergibt sich, dass die Verwendung der Zusammensetzungen dieser Erfindung für die Vorbeugung und Behandlung pathologischer Zustände im Bezug auf die Degeneration der extrazellularen Matrix markante Verbesserungen gegenüber bekannten Methoden darstellen. Es wird darauf hingewiesen, dass, obwohl bestimmte bevorzugte Ausführungsformen offenbart, illustriert und beschrieben wurden, andere Ausführungsformen möglich sind, ohne von der be-55 schriebenen Erfindung abzuweichen. 6It has been discovered that LP (a) is a co-regulator of plasmin-induced proteolysis 45, which is critically involved in connective tissue transformation and repair. With regard to homology with plasminogen and plasmin, LP (a) is a physiologically competitive inhibitor of plasmin-induced proteolysis. In addition, the apoprotein (a) has over 100 sulfide bonds and therefore functions as an antioxidant like other protein compounds (such as protein thiols). In summary, it can be seen that the use of the compositions of this invention for the prevention and treatment of pathological conditions related to extracellular matrix degeneration are marked improvements over known methods. It is to be understood that while certain preferred embodiments have been disclosed, illustrated and described, other embodiments are possible without departing from the invention as described. 6

Claims

AT 007 457 U1 CLAIMS: 1. Use of a synergistic composition comprising ascorbic acid or a pharmaceutically acceptable ascorbate salt or mixtures thereof, at least one fibrinolytic inhibitor and a pharmaceutically acceptable carrier for the manufacture of a medicament for the treatment of collagenase-related degenerative diseases, in particular for the treatment of arteriosclerosis and primarily chronic polyarthritis.

2. Use according to claim 1, in which the fibrinolysis inhibitor is at least one member selected from the group consisting of lysine, or a compound of lysine salts or synthetic analogues selected from the group ε-aminocaproic acid, tranexamic acid, p-aminomethylbenzoic acid, 4-aminobenzenesulfonic acid, aN Acetyl-lysine methyl ester, CIS-4-aminomethylcyclohexanecarboxylic acid and 4-aminomethyl-bicyclo-2,2,2-octanecarboxylic acid.

Use according to claim 1, characterized in that at least one component is proline or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

4. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that the composition comprises at least one antioxidant.

5. Use according to claim 4, characterized in that the antioxidant comprises at least one substance selected from the group consisting of tocopherol, carotene, selenium, N-acetylcysteine, probucol and mixtures thereof.

Use according to any one of claims 1 to 4, wherein the composition comprises further active ingredients for the prevention and treatment of collagenase-related degenerative diseases selected from the group of vitamins, pro-vitamins and trace elements. HIEZU 4 SHEET DRAWINGS 7