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Die Erfindung betrifft die Herstellung von lagerstabilen, intravenös zu verabreichenden, wässerigen Proteinlösungen, insbesondere von Infusionslösungen, aus Humanplasma oder Human- serum.
Die intravenöse Verarbeitung von Proteinlösungen findet in der Medizin zu verschiedenen
Zwecken verbreitet Anwendung. Sie dient einerseits zu Zwecken der parenteralen Ernährung, dient aber anderseits auch zur unterstützenden Behandlung bei Infekten oder zur Behandlung von Schockzuständen. Diese Lösungen besitzen jedoch den Nachteil, dass sie oft schon nach relativ kurzer Lagerungszeit, manchmal sogar schon gleich nach der Abfüllung des Präparates, zur
Ausscheidung fester Proteinpartikel neigen, eine Erscheinung, die auf das Vorhandensein denaturier- ter Proteine zurückgeführt wird. Derartige feste Ausscheidungen machen solche Lösungen für die intravenöse Verabreichung, insbesondere als Infusion,. ungeeignet.
Es konnte nun gefunden werden, dass die Neigung zur Niederschlagsbildung bei solchen
Proteinlösungen unterbunden werden kann, indem man jene Proteinanteile, die die Instabilität der Lösung bewirken, durch Behandlung der Lösung mit Luft und anschliessende Inkubation der Lösung etwa bei Körpertemperatur gezielt und selektiv zur Ausscheidung bringt und abtrennt.
Die so erhaltenen Lösungen zeigen dann keinerlei Tendenz zur Niederschlagsbildung mehr und können problemlos gelagert und verabreicht werden.
Gegenstand der Erfindung ist demnach ein Verfahren zur Herstellung von lagerstabilen, intravenös zu verabreichenden, wässerigen Proteinlösungen aus Humanplasma oder Humanserum durch wiederholte Reinigungs- und Anreicherungsschritte, wie Fällen, Filtrieren, Adsorbieren und Dialysieren, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man in die gereinigte und angereicherte
Serumproteinlösung während 1 bis 3 h unter Rühren sterile Luft einleitet und die Lösung an- schliessend 2 bis 3 Tage lang auf 30 bis 400C erhitzt, den dabei auftretenden Proteinniederschlag abtrennt und die Lösung durch Sterilfiltration sterilisiert.
Hiebei wird die Hitzebehandlung vorzugsweise bei etwa 37 C durchgeführt.
Es war überraschend, dass es möglich ist, durch eine so einfache Behandlung eine selektive Alterung und Ausflockung der denaturierten Proteine zu erzielen, die eine weitere Fraktionierung zu Reinigungszwecken überflüssig macht.
Die Abtrennung der ausgeflockten Proteine gelingt auf übliche Weise, insbesondere durch eine übliche Klarfiltration, wobei Silikate (Aerosil, Celite), Cellulosen (Filtercell) od. ähnl. als Filtermittel dienen können.
Das erfindungsgemässe Verfahren ist auf alle, auf übliche Weise hergestellte, wässerige Proteinlösungen anwendbar, die die geschilderte Instabilität aufweisen. Bevorzugt können damit Lösungen behandelt werden, die neben Albumin auch Plasmaproteinfraktionen, insbesondere einschliesslich Immunglobulinen enthalten, da vor allem die hochmolekularen Immunglobuline stark der Gefahr der Denaturierung ausgesetzt sind.
Beispiel :
Durch 10 l einer 5%igen, durch Ammoniumsulfatfraktionierung und Mischung der Albuminmit der Globulinfraktion hergestellten Serumproteinlösung mit einem Gehalt von 15 Relativprozent Immunglobulinen wurde unter Rühren 2 h lang bei Zimmertemperatur sterile Luft geblasen. Die so erhaltene Lösung wurde anschliessend auf 37 C erwärmt und diese Temperatur wurde 3 Tage lang konstant gehalten. Der erhaltene Niederschlag wurde durch Klärfiltration von ausgeschiedenen Proteinanteilen abfiltriert, anschliessend durch Sterilfiltration sterilisiert und abgefüllt. Der Proteinverlust durch die Behandlung betrug 5%. Die Lösung blieb bei zweimonatiger Lagerung völlig klar.
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The invention relates to the production of storage-stable, aqueous protein solutions to be administered intravenously, in particular infusion solutions, from human plasma or human serum.
The intravenous processing of protein solutions takes place in medicine in various ways
Application purposes. On the one hand, it serves for the purposes of parenteral nutrition, but on the other hand it also serves as supportive treatment for infections or for the treatment of shock conditions. However, these solutions have the disadvantage that they are often used after a relatively short storage period, sometimes even immediately after the preparation has been filled
Excretion of solid protein particles tend to occur, a phenomenon that is attributed to the presence of denatured proteins. Such solid excretions make such solutions for intravenous administration, especially as an infusion. not suitable.
It has now been found that the tendency to form precipitation in such
Protein solutions can be prevented by deliberately and selectively removing and separating those protein fractions which cause the instability of the solution by treating the solution with air and then incubating the solution at about body temperature.
The solutions thus obtained no longer show any tendency to form precipitates and can be stored and administered without problems.
The invention accordingly relates to a process for the preparation of storage-stable, intravenously administered, aqueous protein solutions from human plasma or human serum by repeated purification and enrichment steps, such as precipitation, filtering, adsorbing and dialyzing, which is characterized in that the purified and enriched
Introduces sterile air into the serum protein solution with stirring for 1 to 3 h and then heats the solution to 30 to 400 ° C for 2 to 3 days, separates the protein precipitate that occurs and sterilizes the solution by sterile filtration.
The heat treatment is preferably carried out at about 37.degree.
It was surprising that it is possible to achieve selective aging and flocculation of the denatured proteins by such a simple treatment, which makes further fractionation for cleaning purposes superfluous.
The flocculated proteins can be separated off in a customary manner, in particular by means of customary clarification, with silicates (Aerosil, Celite), celluloses (filter cell) or the like. can serve as filter media.
The method according to the invention can be used in all aqueous protein solutions which are produced in the customary manner and which have the instability described. Solutions which, in addition to albumin, also contain plasma protein fractions, in particular including immunoglobulins, can thus preferably be treated, since the high-molecular immunoglobulins in particular are strongly exposed to the risk of denaturation.
For example:
Sterile air was blown through 10 l of a 5% serum protein solution, prepared by ammonium sulfate fractionation and mixing the albumin with the globulin fraction, containing 15 relative percent immunoglobulins, with stirring for 2 hours at room temperature. The solution thus obtained was then heated to 37 ° C. and this temperature was kept constant for 3 days. The precipitate obtained was filtered off by clarifying the separated protein portions, then sterilized by sterile filtration and filled. The protein loss from the treatment was 5%. The solution remained completely clear after two months of storage.
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