WO2021004535A1 - Cinnolines as inhibitors of hpk 1 - Google Patents

Cinnolines as inhibitors of hpk 1 Download PDF

Info

Publication number
WO2021004535A1
WO2021004535A1 PCT/CN2020/101409 CN2020101409W WO2021004535A1 WO 2021004535 A1 WO2021004535 A1 WO 2021004535A1 CN 2020101409 W CN2020101409 W CN 2020101409W WO 2021004535 A1 WO2021004535 A1 WO 2021004535A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
amino
mmol
methyl
cinnolin
Prior art date
Application number
PCT/CN2020/101409
Other languages
French (fr)
Inventor
Xiaolin Hao
Original Assignee
Nanjing Zhengxiang Pharmaceuticals Co., Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Zhengxiang Pharmaceuticals Co., Ltd. filed Critical Nanjing Zhengxiang Pharmaceuticals Co., Ltd.
Publication of WO2021004535A1 publication Critical patent/WO2021004535A1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/645—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6509—Six-membered rings
    • C07F9/650905—Six-membered rings having the nitrogen atoms in the positions 1 and 2
    • C07F9/650947—Six-membered rings having the nitrogen atoms in the positions 1 and 2 condensed with carbocyclic rings or carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65583—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system each of the hetero rings containing nitrogen as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings

Definitions

  • This invention pertains to compounds that modulate the function of HPK1 and are useful for treatment of HPK1 mediated diseases and conditions such as cancer.
  • Immunotherapies designed to elicit or amplify an immune response are classified as activation immunotherapies, while those to reduce or suppress immune response are classified as suppression immunotherapies, one of which is to inhibit negative regulators of immune responses that normally function to maintain peripheral tolerance, allowing tumor antigens to be recognized as non-self-entities.
  • HPK1 The hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1, or MAP4K1) is an example of a negative regulator of hematopoietic compartments activation (eg. T cells, B cells and dendritic cells) , inhibiting T cell receptor (TCR) signaling and T cell proliferation.
  • HPK1 is expressed predominantly by hematopoietic cells, including early progenitors, which can be activated by HPK1 through JNK/SAPK pathway.
  • cytosolic HPK1 is recruited to the plasma membrane where it is phosphorylated at residues Tyr381, Ser171 and Thr165 by Lck/Zap70 (Shui JR et al. Nat. Immunol.
  • HPK1 is believed to negatively regulate T cell activation through reducing the persistence of signaling microclusters (Di Bartolo et al. JEM 2007, 204: 681-691) , which leads to the recruitment of 14-3-3 proteins that bind to the phosphorylated SLP76 and Gads, releasing the SLP76-Gads-14-3-3 complex from LAT-containing microclusters (Lasserre et al. J Cell Biol 2011, 195: 839-853) .
  • HPK1 also negatively regulates T cell signaling by the prostaglandin E2 (PGE2) receptor in a PKA dependent manner (Sawasdikosol, S.
  • PGE2 prostaglandin E2
  • HPK1 plays a role in activation-induced cell death (AICD) and regulation of leukocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) integrin activation on T cells.
  • AICD activation-induced cell death
  • LFA-1 leukocyte function-associated antigen-1
  • the present disclosure describes antagonists of the enzyme HPKl.
  • the present disclosure provides compounds having a structure set forth in Formula (I) or (Ia) , pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers, tautomers, solvates and prodrugs thereof. Further provided are methods of preparing the compounds of Formula (I) or (Ia) .
  • compositions comprising a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate and prodrug thereof are also provided.
  • Methods of inhibiting HPKl with an effective amount of a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutically acceptable salt, solvates and prodrug thereof are provided.
  • Methods of treating a HPK1-dependent disorder comprising administering to a subject in need thereof a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutical composition thereof are provided.
  • a use of a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate and prodrug thereof as a medicament or as a drug is also provided.
  • the medicament or the drug can inhibit HPK1 kinase activity and treat HPK1-dependent disorders.
  • the present disclosure provides compounds of Formula (I) or (Ia) and pharmaceutical compositions as inhibitors or modulators of HPKl (hematopoietic progenitor kinase 1) .
  • HPKl hematopoietic progenitor kinase 1
  • the present disclosure also provides that the use of compounds and compositions in treating diseases and disorders mediated by HPKl. Its therapeutic application is to enhance immune response in a patient, such as treatment of cancer patient, in the form of single agent or combination with the other cancer treatments.
  • the present disclosure provides a compound of Formula (I) or (Ia) , or pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers, tautomers, solvates, and prodrugs thereof.
  • a compound of Formula (I) is provided.
  • R 1 is C-M or N
  • M is H, halo, CN
  • R 2 is selected from 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl, having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N, and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl, fused with a ring selected from the group consisting of 5 or 6 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl, wherein the C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl of R 2 and the fused ring are optionally substituted with one to four substituents;
  • R 3 is hydrogen, cyano, halogen
  • R 4 is A-C (O) -or D
  • A is selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl, -NHR or -OR; wherein the C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of A are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents;
  • R is independently C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl, or C4-9 heterocyclyl; wherein the C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of R are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; and
  • D is a C6-10 aryl, or a 5-10 membered heteroaryl having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; or a 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5-or 6-numbered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6 aryl and C3-7 cycloalkyl; wherein the 5-10 membered heteroaryl of D and the fused ring are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
  • R 1 is C-M
  • M is H, halo, CN
  • R 2 is selected from 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl, having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N, and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5 or 6 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl, wherein the C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl of R 2 and the fused ring are optionally substituted with one to four substituents;
  • R 4 is A-C (O) -or D
  • A is selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl, -NHR or -OR; wherein the C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of A are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents;
  • R is independently C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl, or C4-9 heterocyclyl; wherein the C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of R are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; and
  • D is a C6-10 aryl, or a 5-10 membered heteroaryl having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; or a 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5-or 6-numbered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6 aryl and C3-7 cycloalkyl; wherein the 5-10 membered heteroaryl of D and the fused ring are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
  • R 1 is selected from the group consisting of CH, CF, CCl, CCN and N.
  • R 1 is selected from the group consisting of N, CH and CF
  • R 2 is selected from the group consisting of 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl, having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5 or 6 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl, wherein the 5-10 membered heteroaryl of R 2 and the fused ring are optionally substituted with one to four substituents.
  • R 4 is A-C (O) -;
  • A is selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl, -NHR or -OR; wherein the C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of A are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents;
  • R is independently selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl; wherein the C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of R is optionally substituted
  • R 4 is selected from the group consisting of C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl substituted independently with one, two, three, four or five substituents, wherein the subsituents are selected from the group consisting of a 5-10 membered heterocyclyl having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; and a 5-10 membered heterocyclyl fused with a ring selected from the group consisting of 5-or 6-numbered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl; wherein the 5-10 membered heterocyclyl and the fused ring are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
  • R 2 is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heteroaryl is pyridinyl, imidazolyl, thiazolyl, pyrazolyl or oxazolyl) .
  • R 2 is a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents, wherein the heterocyclyl is saturated or partially unsaturated (For example, the above heterocyclyl is oxazolidinyl) .
  • R 2 is a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above aryl is phenyl) .
  • R 2 is a C6-10 aryl or a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, wherein the C6-10 aryl or the 5 or 6 membered heteroaryl is fused with a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the aryl, the heteroaryl and the heterocyclyl are optionally substituted with one, two, three or four substituents (For example, the above aryl or heteroaryl and the above heterocyclyl are fused to form 2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazinyl, 2-hydro-3H-benzo [d] oxazolyl or 2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4]
  • R 3 is selected from the group consisting of H or Cl.
  • the compound of Formula (I) or Formula (Ia) wherein A is a C3, C4, C5 or C6 cycloalkyl or a 4, 5 or 6 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the cycloalkyl or heterocyclyl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heterocyclyl is tetrahydrofuranyl, azetidinyl or tetrahydropyranyl) .
  • D is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, wherein the heteroaryl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heteroaryl is pyrazolyl, pyridinyl, pyrazinyl or pyridazinyl) .
  • the compound of Formula (I) or Formula (Ia) wherein D is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and fused with a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the heteroaryl and the heterocyclyl are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heteroaryl and the above heterocyclyl are fused to form 5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepinyl, 5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridinyl or 4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazinyl) .
  • the above heteroaryl is pyrazolyl
  • the above heterocyclyl is morpholinyl, piperazin
  • R 1 is C-M
  • M is H, halo, CN
  • R 2 is selected from one of the groups below and its enantiomers:
  • R 4 is selected from the following and each of its corresponding enantiomers or diastereomers:
  • X H, R, C (O) G, SO 2 G, G is C1-9 alkyl groups substituted by H, D, F, OH, OMe, CN;
  • R is independently C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl, or C4-9 heterocyclyl;
  • Y, Y 1 and Y 2 are independently H, D, F, CN, OH, OMe, C1-9 alkyl substituted by F, OH, OMe, CN; Y 1 and Y 2 together can form a C3-7 cycloalkyl, or C4-9 heterocycle ring.
  • C0-6 alkyl if mentioned, is H, C1 alkyl, C2 alkyl, C3 alkyl, C4 alkyl, C5 alkyl or C6 alkyl.
  • C4-9 heterocyclyl if mentioned, is 4, 5, 6, 7, 8 or 9 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated.
  • the compounds are selected from table 1:
  • HPK1 The hematopoietic progenitor kinase 1
  • HPK1 is an example of a negative regulator of hematopoietic compartments activation (eg. T cells, B cells and dendritic cells) , inhibiting T cell receptor (TCR) signaling and T cell proliferation.
  • HPK1 is of particular interest as it has been implicated in several important steps that are thought to limit T cell responsiveness, particularly in cancer.
  • HPK1 is expressed predominantly by hematopoietic cells, including early progenitors, which can be activated by HPK1 through JNK/SAPK pathway.
  • cytosolic HPK1 is recruited to the plasma membrane where it is phosphorylated at residues Tyr381, Ser171 and Thr165 by Lck/Zap70 (Shui JR et al. Nat. Immunol. 2007, 8, 84-91) .
  • HPK1 is believed to negatively regulates T cell activation through reducing the persistence of signaling microclusters (Di Bartolo et al.
  • HPK1 also negatively regulates T cell signaling by the prostaglandin E2 (PGE2) receptor in a PKA dependent manner (Sawasdikosol, S. et al, Blood 2003, 101, 3687–3689) .
  • PGE2 prostaglandin E2
  • HPK1 plays a role in activation-induced cell death (AICD) and regulation of leukocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) integrin activation on T cells.
  • AICD activation-induced cell death
  • LFA-1 leukocyte function-associated antigen-1
  • the bone marrow-derived dendritic cells (BDMCs) from HPK1 knockout mice showed higher expression of co-stimulatory molecules (e.g. CD80/CD86) and enhanced production of proinflammatory cytokines (IL-12, TNF-aetc) , and demonstrated superior ability to stimulate T cell proliferation in vitro and in vivo as compared to wild-type DCs (Alzabin, S., et al, J Immunol, 2009, 182: 6187-94) .
  • co-stimulatory molecules e.g. CD80/CD86
  • proinflammatory cytokines IL-12, TNF-aetc
  • HPK1 is also an important negative regulator of dendritic cell activation (Alzabin, S., et al., J Immunol, 2009, 182: 6187-94) .
  • the signaling mechanisms underlying HPK1 mediated negative regulation of DC activation remains to be elucidated.
  • HPK1 appears to be a positive regulator of suppressive functions of regulatory T cells (Treg) (Sawasdikosol, S. et al, The journal of immunology, 2012, 188, supplement 1: 163) .
  • Treg regulatory T cells
  • HPK1 deficient mouse Foxp3+ Tregs were defective in suppressing TCR-induced effector T cell proliferation, and paradoxically gained the ability to produce IL-2 following TCR engagement.
  • provided herein are also crystalline and amorphous forms of the compounds of Formula (I) and (Ia) , or pharmaceutically acceptable salts, prodrugs, or solvates thereof.
  • “Pharmaceutically acceptable salt” means a salt prepared by conventional means, and are well known by those skilled in the art.
  • the “pharmaceutically acceptable salts” include basic salts of inorganic and organic acids (Berge et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1) .
  • a “solvate” is formed by treating a compound in a solvent. Solvates of salts of the compounds of Formula (I) and (Ia) are also provided. In the case of treating compounds with water, the solvate is hydrates. Hydrates of the compounds of Formula (I) and (Ia) are also provided.
  • a “prodrug” includes any compound that converts into a compound of Formula (I) and (Ia) , when administered to a subject, e.g., upon metabolic processing of the prodrug.
  • the compounds of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used for treating HPK1 mediated diseases or disorders.
  • treat or “treating” in reference to a disorder means to ameliorate or prevent the disorder or one or more of the biological manifestations of the disorder, to interfere with one or more points in the biological cascade that leads to or is responsible for the disorder, to alleviate one or more of the symptoms or effects associated with the disorder.
  • treatment includes prevention of the disorder, and “prevention” is understood to refer to the prophylactic administration of a drug to substantially diminish the likelihood or severity of a disorder or biological manifestation thereof, or to delay the onset of such disorder or biological manifestation thereof.
  • Subject refers to a human (including adults and children) or other animal.
  • patient refers to a human.
  • safe and effective dose in reference to a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof an amount sufficient to treat the patient's condition but low enough to avoid serious side effects.
  • a safe and effective dose of a compound will vary with the particular compound chosen (e.g. consider the potency, efficacy, and half-life of the compound) ; the route of administration chosen; the disorder being treated; the severity of the disorder being treated; the age, size, weight, and physical condition of the patient being treated; the medical history of the patient to be treated; the duration of the treatment; the nature of concurrent therapy; the desired therapeutic effect; and like factors.
  • “Inhibition of HPK1 activity” or variants refer to a decrease in HPK1 activity as a direct or indirect response to the presence of a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof, relative to the activity of HPK1 gamma in the absence of the compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof.
  • potencies of compounds as inhibitors of an enzyme activity can be established by determining the concentrations at which each compound inhibits the activity to a predefined extent and then comparing the results.
  • concentrations at which each compound inhibits the activity can be determined by the concentration that inhibits 50%or 90%of the activity in a biochemical assay, which can be accomplished using conventional techniques known in the art, including the techniques describes in the Examples below.
  • HPK1 is expressed primarily in the hematopoietic compartment (e.g., T cells, B cells, and dendritic cells) and it has been implicated as a negative regulator of signal transduction in T-cells through phosphorylation and activation of the T-cell receptor adaptor protein SLP-76 (Di Bartolo et al., J. Exp. Med. 2007, 204: 681) . Based on in vitro and in vivo studies, HPKl was identified as a novel target for cancer immunotherapy (Sawasdikosol et al., Immunol Res. 2012, 54: 262-5) .
  • the invention thus provides a method of treating a disorder mediated by inappropriate HPK1 activity comprising administering a safe and effective dose of a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof
  • the compounds described herein may be used to treat cancers that are mediated by inappropriate HPK1 activity.
  • the disease is a hematologic malignancy.
  • the disease is lymphoma, such as Burkitt lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and mantle cell lymphoma (MCL) , follicular lymphoma, lymphoplasmacytic lymphoma, Waldenstrom macroglobulinemia, and marginal zone lymphoma.
  • the disorder is multiple myeloma, or leukemia, such as acute lymphocytic leukemia (ALL) , acute myeloid leukemia (AML) , chronic lymphocytic leukemia (CLL) , small lymphocytic lymphoma (SLL) , myelodysplastic syndrome (MDS) , myeloproliferative disease (MPD) , chronic myeloid leukemia (CML) .
  • ALL acute lymphocytic leukemia
  • AML acute myeloid leukemia
  • CLL chronic lymphocytic leukemia
  • SLL small lymphocytic lymphoma
  • MDS myelodysplastic syndrome
  • MPD myeloproliferative disease
  • CML chronic myeloid leukemia
  • the disease is a solid tumor.
  • the indication is to treat solid tumor with abnormal HPK1 expression, such as pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) and hepatocellular carcinoma (HCC) , gastrointestinal cancer, prostate cancer, ovarian cancer, medulloblastoma, and breast cancer.
  • PDAC pancreatic ductal adenocarcinoma
  • HCC hepatocellular carcinoma
  • the compounds alone or with combination of other anti-cancer therapies may be used to treat prostate cancer, bladder cancer, colorectal cancer, renal cancer, hepatocellular cancer, lung cancer, ovarian cancer, cervical cancer, head and neck cancer, melanoma, neuroendocrine cancers, brain tumors, bone cancer, or soft tissue sarcoma.
  • a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with one or more additional therapeutic agents to treat cancers or inflammatory disorders.
  • the one or more additional therapeutic agents may be a chemotherapeutic agent, a radiotherapy, a targeted therapy, an immunotherapeutic agent or any current best of care treatment, either as a small molecule or a biologic nature.
  • Targeted therapies include but not limit to an inhibitor to cyclin-dependent kinase (CDK) such as CDK1, CDK2, CDK4/6, CDK7, and CDK9, Janus kinase (JAK) such as JAK1, JAK2 and/or JAK3 , spleen tyrosine kinase (SYK) , Bruton’s tyrosine kinase (BTK) , mitogen-activated protein kinase (MEK) such as MEK 1 and MEK2, bromodomain containing protein (BRD) such as BRD4, isocitrate dehydrogenase (IDH) such as IDH1, histone deacetylase (HDAC) , PI3K kinases or any combination thereof
  • CDK cyclin-dependent kinase
  • JAK1 JAK2 and/or JAK3 Janus kinase
  • SYK spleen tyrosine kin
  • Chemotherapeutic agents may be categorized by their mechanism of action into: alkylating agents, antimetabolites, anti-microtubule agents, topoisomerase inhibitors and cytotoxic agents.
  • a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with chemotherapeutics to sensitize and improve the efficacy of certain chemotherapeutic agents to treat blood or solid tumors.
  • the immunotherapeutic agents include and are not limited to therapeutic antibodies, small molecules and vaccines suitable for treating patients; such as IDO1 and TDO2 inhibitors, A2A receptor inhibitors, arginase inhibitors, toll-like receptor agonists, chemokine regulators (including CCR and CXCR families) , check point blockage antibodies such as antibodies that regulate PD-1, PD-L1, CTLA-4, OX40–OX40 ligand, LAG3, TIM3, or any combination thereof.
  • IDO1 and TDO2 inhibitors such as IDO1 and TDO2 inhibitors, A2A receptor inhibitors, arginase inhibitors, toll-like receptor agonists, chemokine regulators (including CCR and CXCR families) , check point blockage antibodies such as antibodies that regulate PD-1, PD-L1, CTLA-4, OX40–OX40 ligand, LAG3, TIM3, or any combination thereof.
  • Radiotherapy is part of cancer treatment to control or kill malignant cells and commonly applied to the cancerous tumor because of its ability to control cell growth.
  • a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with radiotherapy, to improve the efficacy of radiotherapy to treat blood or solid tumors, or with surgery, chemotherapy, immunotherapy and combination of the four.
  • a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with one or more additional therapeutic agents to treat patients who are substantially refractory to at least one chemotherapy treatment, or in relapse after treatment with chemotherapy.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.
  • the pharmaceutical composition can be formulated for particular routes of administration such as oral administration, parenteral administration, and topical administration, etc.
  • compositions intended for oral use are prepared according to any method known in the art for the manufacture of pharmaceutical compositions and can be prepared in the form of tablets, pills, powders, suspensions, emulsions, solutions, syrups, and capsules.
  • Oral composition may contain the active ingredient in admixture with nontoxic pharmaceutically acceptable excipients which are suitable for the manufacture of tablets.
  • the tablets are uncoated or coated by known techniques to delay disintegration and absorption in the gastrointestinal tract and thereby provide a sustained action over a longer period.
  • Formulations for oral use can be presented as hard gelatin capsules wherein the active ingredient is mixed with an inert solid diluent, for example, calcium carbonate, calcium phosphate or kaolin, or as soft gelatin capsules wherein the active ingredient is mixed with water or an oil medium, for example, peanut oil, liquid paraffin or olive oil.
  • an inert solid diluent for example, calcium carbonate, calcium phosphate or kaolin
  • water or an oil medium for example, peanut oil, liquid paraffin or olive oil.
  • compositions are aqueous isotonic solutions or suspensions, and suppositories are advantageously prepared from fatty emulsions or suspensions.
  • compositions for transdermal application include an effective amount of a compound of the invention with a suitable carrier.
  • Carriers suitable for transdermal delivery include absorbable pharmacologically acceptable solvents to assist passage through the skin of the host.
  • transdermal devices are in the form of a bandage comprising a backing member, a reservoir containing the compound optionally with carriers, optionally a rate controlling barrier to deliver the compound of the skin of the host at a controlled and predetermined rate over a prolonged period of time, and means to secure the device to the skin.
  • compositions for topical application include aqueous solutions, suspensions, ointments, creams, gels or spray formulations, e.g., for delivery by aerosol or the like.
  • Such topical delivery systems will in particular be appropriate for dermal application, e.g., for the treatment of skin cancer, e.g., for prophylactic use in sun creams, lotions, sprays and the like.
  • a topical application may also pertain to an inhalation or to an intranasal application. They may be conveniently delivered in the form of a dry powder (either alone, as a mixture, for example a dry blend with lactose, or a mixed component particle, for example with phospholipids) from a dry powder inhaler or an aerosol spray presentation from a pressurized container, pump, spray, atomizer or nebulizer, with or without the use of a suitable propellant.
  • a dry powder either alone, as a mixture, for example a dry blend with lactose, or a mixed component particle, for example with phospholipids
  • compositions and dosage forms that comprise one or more agents that reduce the rate by which the compound of the present invention as an active ingredient will decompose.
  • agents which are referred to herein as “stabilizers, " include, but are not limited to, antioxidants such as ascorbic acid, pH buffers, or salt buffers, etc.
  • compositions may be administered in either single or multiple doses.
  • a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof can be formulated so as to provide the desired release schedule of the active ingredient based on the therapeutic treatment purpose.
  • the pharmaceutical composition is preferably made in the form of a dosage unit containing a particular amount of the active ingredient in the form of tablets, pills, powders, suspensions, emulsions, solutions, syrups, and capsules.
  • these may contain an amount of active ingredient from about 0.1 to 1000 mg, preferably from about 0.1 to 500 mg.
  • a suitable daily dose for a human or other mammal may vary widely depending on the condition of the patient and other factors, but, once again, can be determined using routine methods.
  • the daily dose can be administered in one to four doses per day.
  • the active compounds of this invention are ordinarily combined with one or more adjuvants appropriate to the indicated route of administration drops suitable for administration to the eye, ear, or nose.
  • a suitable topical dose of active ingredient of a compound of the invention is 0.1 mg to 150 mg administered one to four, preferably one or two times daily.
  • the active ingredient may comprise from 0.001 %to 10%w/w, e.g. from 1 %to 2%by weight of the formulation, preferably not more than 5%w/w, and more preferably from 0.1 %to 1 %of the formulation.
  • the method comprises administering to the subject an initial daily dose of about 0.1 to 500 mg of a compound of Formula (I) and (Ia) and increasing the dose by increments until clinical efficacy is achieved. Increments of about 5, 10, 25, 50, or 100 mg can be used to increase the dose. The dosage can be increased daily, every other day, twice per week, or once per week.
  • the compounds of Formula (I) or (Ia) may be prepared using the methods disclosed herein and routine modifications thereof, which will be apparent given the disclosure herein and methods are well known in the art. Conventional and well-known synthetic methods may be used in addition to the teachings herein. The synthesis of representative compounds described herein may be accomplished as described in the following examples. If available, reagents may be purchased commercially, e.g., from Sigma Aldrich or other chemical suppliers.
  • solvent refers to a solvent inert under the conditions of the reaction being described in conjunction therewith (including, for example, benzene, toluene, acetonitrile, tetrahydrofuran ( “THF” ) , dimethylformamide ( “DMF” ) , ethyl acetate (EA or EtOAc) , dichloromethane (DCM) , diethyl ether, methanol, pyridine and the like.
  • the solvents used in the reactions of the present invention are inert organic solvents, and the reactions are carried out under an inert gas, preferably nitrogen and argon.
  • Step 1 To a solution of methyl propargylate (25.0 g, 255 mmol) in DCM (100 mL) , morpholine (22.2 g, 255 mmol) was added dropwise at 0 °C. The mixture was stirred at rt for another 3 hours . The mixture was then concentrated and the residue was dissolved in CH 3 CN (300 mL) . This solution was named as C. To a solution of 4-bromo-2-chloroaniline (52.8 g, 255 mmol) in 4N HCl (255 mL) at 0 °C, sodium nitrite (17.6 g, 255 mmol) in water was added carefully within 45 min.
  • Step 2 A solution of (Z) -methyl 2- ( (4-bromo-2-chlorophenyl) diazenyl) -3-oxopropanoate (5.00 g, 15.6 mmol) in conc. H 2 SO 4 (50.0 mL) was stirred at 100 °C for 10 h under Ar. The mixture was cooled to rt and poured into the ice water (200 mL) . The mixture was filtered and the filter solid was dissolved in NaOH (2 M) solution (50.0 mL) and extracted with ethyl acetate (50.0 mL X 3) .
  • Step 3 To a solution of 6-bromo-8-chlorocinnoline-3-carboxylic acid (380 mg, 1.33 mmol) in MeCN (10.0 mL) was added DPPA (diphenyl phosphoryl azide) (500 uL) and Et 3 N (350 uL) at rt. The mixture was stirred at rt for 20 min, then the mixture was stirred at 70 °C for 50 min. The mixture was diluted with toluene (10.0 mL) and heated to 100 °C. H 2 O (5.00mL) was added at 100 °C and stirred at 100 °C for another 3 h. The mixture was cooled rt and concentrated under reduced pressure.
  • DPPA diphenyl phosphoryl azide
  • Step 1 NBS (N-bromosuccinimide) (129 g, 1.05 eq) was added to a solution of 2-chloro-3-fluoroaniline (100 g, 687 mmol) in DMF (500 mL) at 0 °C. The resulted mixture was stirred at room temperature for 16 h before pouring it into water (1000 mL) and the resulted solid was filtered, washed with water and dried to give an off-white solid (140 g, 91%) .
  • Step 2 To a solution of ethyl propargylate (50 g, 510 mmol) in DCM (200 mL) , morpholine (44.4 mL, 510 mmol) is added dropwise at 0 °C. The mixture was stirred at rt for another 3 hours . The mixture is then concentrated and the residue was dissolved in CH 3 CN (600 mL) . This solution is named as C.
  • Step 3 A solution of ethyl (Z) -2- ( (4-bromo-2-chloro-3-fluorophenyl) diazenyl) -3-oxopropanoate (68 g, 193 mmol) in conc. H 2 SO 4 (500 mL) is stirred at 100 °C for 10 h under Ar. The mixture is cooled to rt and poured into the ice water (2000 mL) . The mixture is filtered and dried to give a yellow solid (53 g, 90%) . LCMS (ESI) [M+H] + 307.
  • Step 4 To a solution of 6-bromo-8-chloro-7-fluorocinnoline-3-carboxylic acid (307 mg, 1.00 mmol) in MeCN (10.0 mL) is added DPPA (500 uL) and Et 3 N (350 uL) at rt. The mixture is stirred at rt for 20 min, then the mixture is stirred at 70°C for 50 min. The mixture is diluted with toluene (10.0 mL) and heated to 100 °C. H 2 O (5.00mL) is added at 100 °C and stirred at 100 °Cfor another 3 h. The mixture is cooled rt and concentrated under reduced pressure.
  • Step a N- (6-bromo-8-chlorocinnolin-3-yl) -N- (cyclopropanecarbonyl) cyclopropane carboxamide
  • Step b N- (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide
  • Step c N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide
  • N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (MC18-673-068-P1) 50.0 mg, 0.104 mmol
  • THF 3.00 mL
  • HCl/Dioxane 4.0 M, 3.00 mL
  • the mixture was stirred at rt for 30 min.
  • the mixture was diluted with H 2 O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (5.00 mL X 3) .
  • Step 1 To a solution of tetrahydrofuran-2-carboxylic acid (36.0 mg, 0.308 mmol) was added DMF (1 drop) and oxalyl chloride (196 mg, 1.54 mmol) at 0°C under Ar. The reaction mixture was stirred at RT for 1 h. The mixture was concentrated and dried, and then was dissolved in DCM (2 mL) and added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (100 mg, 0.370 mmol) and pyridine (87.7 mg, 1.11 mmol) in DCM (5 mL) at 0°C under Ar slowly. The mixture was stirred at RT for 16 h.
  • Step 2 According to the method described in general procedure A (130°C, 3h) , N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydrofuran-2-carboxamide was synthesized (34.3 mg, 0.067 mmol, 41.0%) as a yellow solid.
  • Step 3 According to the method described in general procedure C (rt, 1h) , the title product (Compound 2) was synthesized (7.08 mg, 0.020 mmol, 34.7 %yield) as a yellow solid.
  • Step 1 To a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (intermediate C, 160 mg, 0.592mmol) , 2- (4-bromo-1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (132 mg g, 0.66 mmol) (WO2018183964A1) , t-BuBrettPhos Pd G3 (205 mg, 0.237 mmol) , t-BuBrettPhos (144 mg, 0.296 mmol) in 1, 4-dioxane (20 mL) is added cesium carbonate (0.97g, 2.96 mmol) at 25°C.
  • Step 2 A mixture of 2- (4- ( (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (80.0 mg, 0.206 mmol) , diphenylmethanimine (41.0 mg, 0.227 mmol) , Pd (OAc) 2 (9.2 mg, 0.041 mmol) , Xantphos (24.0 mg, 0.041 mmol) and Cs 2 CO 3 (134 mg, 0.412 mmol) in toluene (2.00 mL) and DMF (2.00 mL) is heated in a microwave at 150 °C for 3 h under N 2 .
  • Step 1 A solution of (trans) -2-cyanocyclopropanecarboxylic acid (173 mg, 1.33 mmol) and SOCl 2 (950 mg, 7.98 mmol) in toluene (8 mL) was heated to 80°C for 2 h. The solvent was removed under reduced pressure. The mixture was dissolved in DCM (2 mL) and was added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (120 mg, 0.440 mmol) and pyridine (0.5 mL) in DCM (18 mL) at 0 °C under Ar. The mixture was stirred at rt for 2 h.
  • Step 2 According to the method described in general procedure A (130 °C for 3 h) , (1R, 2R) -2-cyano-N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (25.0 mg, 0.049 mmol, 16.2%) as yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H] + 509.0.
  • Step 3 According to the method described in general procedure C (rt for 1 h) , compound 4 was synthesized (7.00 mg, 0.020 mmol, 41.3 %) as a yellow solid.
  • Step 1 To a solution of 2-cyanocyclobutane-1-carboxylic acid (111 mg, 0.886 mmol) and DMF (1 drop) in DCM (3 mL) was added oxalyl chloride (337 mg, 2.66 mmol) dropwise at 0°C. After being stirred at room temperature for 1 hour, the mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with DCM (1 mL) and added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (120 mg, 0.443 mmol) and pyridine (105 mg, 1.33 mmol) in DCM (2 mL) dropwise at 0°C.
  • Step 1 According to the method described in general procedure B (110°C for 2h under ) , 2- ( (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (95.0 mg, 22.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 462.0.
  • Step 2 According to the method described in general procedure A (130°C for 3h under microwave) , 2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (14.0 mg, 26.6%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 607.2
  • N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1- (cyanomethyl) azetidine-2-carboxamide is prepared according to the general procedure 2, via intermediate C and 1- (cyanomethyl) azetidine-2-carbonyl chloride, generated in situ from 1- (cyanomethyl) azetidine-2-carboxylic acid and thionyl chloride in the same manner of compound 2.
  • N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxamide is prepared according to the general procedure 2, via intermediate C and 1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carbonyl chloride, generated in situ from 1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxylic acid (preparation via CuI-catalyzed coupling reaction of azetidine-2-carboxylic acid and 4-bromo-1-methyl-1H-pyrazole reported by PCT Int. Appl., 2010147791) and thionyl chloride.
  • N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-2-carboxamide is prepared according to the general procedure 2, via intermediate C and tetrahydro-2H-pyran-2-carbonyl chloride (Packiarajan, Mathivanan et al , Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters, 23 (14) , 4037-4043; 2013) .
  • Step 1 A solution of tetrahydro-2H-pyran-3-carboxylic acid (145 mg, 1.11 mmol) in SOCl 2 (2 mL) was heated to 80°C for 2 h. After cooling to rt, the solvent was removed under reduced pressure at rt. The mixture was dissolved in DCM (2 mL) and was added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (100 mg, 0.370 mmol) and TEA (0.8 mL) in DCM (5 mL) at 0 °C under Ar. The mixture was stirred at rt for 16 h.
  • Step 2 According to the method described in general procedure A (150°C for 3h) , N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-3- carboxamide was synthesized (14.9 mg, 0.028 mmol, 15.4%) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H] + 528.1.
  • Step 3 According to the method described in general procedure C (room temperature for 1h) , compound 10 was synthesized (1.18 mg, 0.003 mmol, 14.3 %) as a yellow solid.
  • Step 1 According to the method described in similar procedure as compound 4, a racemic mixture of tert-butyl 7- (8-chloro-3- ( (1R, 2R) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate and tert-butyl 7- (8-chloro-3- ( (1S, 2S) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1- carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (130 mg, 56.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M
  • Step 2 According to the method described in general procedure A (130°C for 3h, tert-butyl 7- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (30 mg, 24.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 721.1.
  • Step 3 According to the method described in general procedure C, tert-butyl 7- (8-amino-3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (20 mg, 87.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 557.3.
  • Step 1 According to general procedure A, intermediate D was synthesized (80 mg, 0.187 mmol, 48.3 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 428.0.
  • Step 2 According to the method described in general procedure B (via intermediate D and 2-bromo-6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one, a known compound prepared according to WO2018183964A1) , tert-butyl 7- (8-chloro-3- ( (6-isopropyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-2-yl) amino) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (58 mg, 0.0939 mmol, 26.7 %) as a yellow solid.
  • Step 3 According to the method described in general procedure A, 2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (17.0 mg, 0.0256 mmol, 28.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 664.1.
  • Compound 16 is prepared in a similar manner as compound 13 via (5-methoxy-4-methylpyridin-3-yl) boronic acid (Biagetti, Matteo et al, US20150166549 A1) .
  • Compound 18 is prepared in a similar manner as compound 17 via (5-methyl-2-oxo-2, 3-dihydrobenzo [d] oxazol-6-yl) boronic acid (WO2018183964A1) .
  • Compound 19 is prepared according to the general procedure 1, via intermediate A, (5-methyl-2-oxo-2, 3-dihydrobenzo [d] oxazol-6-yl) boronic acid (WO2018183964A1) and 2-cyanocyclopropane-1-carbonyl chloride.
  • Compound 20-22 are prepared according to the general procedures A-F.
  • Step 1 To a solution of 4-bromo-2-chloro-3-fluoroaniline (3.00 g, 13.4 mmol) in 4.0 M HCl (14 mL) was added a water solution of NaNO 2 (0.970 g in 1.4 mL, 14.0 mmol) slowly at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. A acetonitrile solution of (E) -N, N-dimethyl-2-nitroethen-1-amine (1.55 g in 15 mL, 13.4 mmol) was added at 0°C. The reaction mixture was allowed to warm to r.t. and stirred for 3 hours. The reaction mixture was diluted with water (15 mL) . The resulting suspension was filtered.
  • Step 2 A solution of (Z) -2- ( (Z) - (4-bromo-2-chloro-3-fluorophenyl) diazenyl) -2-nitroethen-1-ol (2.00 g, 6.16 mmol) in conc. H 2 SO 4 (20 mL) under Ar was stirred at 100°C for 8 hours. The reaction mixture was poured onto ice and then extracted with ethyl acetate (30 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 3 To a solution of 6-bromo-8-chloro-7-fluoro-3-nitrocinnoline (600 mg, 1.96 mmol) EtOH/H 2 O (7.5 mL/2.5 mL) was added Fe (549 mg, 9.80 mmol) , NH 4 Cl (520 mg, 9.80 mmol) . The resulting mixture was stirred at 80°C for 1 hour. After being cooled to rt, the mixture was filtered and the filtrate was diluted with H 2 O (50 mL) and extracted with EA (30 mL x 3) .
  • N- (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide is prepared according to the general procedure 1, via intermediate B, cyclopropanecarbonyl chloride and 4-methyl-3- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) pyridine (aknown compound from WO2018183964A1) .
  • Step 1 According to the method described in general procedure B using 1- (2-chloro-7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethanone, 1- (2- ( (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethan-1-one was synthesized (60.0 mg, 24.3%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 445.1.
  • Step 2 According to the method described in general procedure A (150°C for 3h under microwave) , 1- (2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethan-1-one was synthesized (20.0 mg, 21.5%) as a brown solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 590.1.
  • Step 1 To a solution of 2, 6-dichloronicotinaldehyde (700 mg, 4.00 mmol) , propan-2-amine (281 mg, 4.80 mmol) and Ti (i-PrO) 4 (400 mg, 1.40 mmol) in methanol (10 mL) was added NaBH 3 CN (630 mg, 10.0 mmol) slowly at rt. The reaction mixture was stirred at 25°C overnight and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluted with petroleum ether/ethyl acetate (10: 1 ⁇ 8: 1) to give the product (780 mg, 89.0%) as colorless liquid. LC-MS (ESI) [M+H] + 219.1.
  • Step 2 To a solution of N- ( (2, 6-dichloropyridin-3-yl) methyl) propan-2-amine (850 mg, 3.88 mmol) , 3- (tert-butoxy) -3-oxopropanoic acid (622 mg, 3.88 mmol) and DIPEA (1.00 g, 7.76 mmol) in DMF (9 mL) was added HATU (1.92 g, 5.04 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (20 mL X 3) .
  • Step 3 To a solution of tert-butyl 3- ( ( (2, 6-dichloropyridin-3-yl) methyl) (isopropyl) amino) -3-oxopropanoate (1.00 g, 2.77 mmol) in DMF (20 mL) under Ar was added NaH (222 mg, 5.54 mmol) slowly at 0°C. The resulting mixture was stirred at 70°C for 5 hours. The reaction mixture was diluted with aq. NH 4 Cl (30 mL) , extracted with ethyl acetate (30 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 4 To a solution of tert-butyl 2-chloro-6-isopropyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridine-8-carboxylate (300 mg, 0.924 mmol) in dichloromethane (3 mL) was added TFA (0.6 mL) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in dichloromethane (15 mL) and washed with aq. NaHCO 3 (15 mL X 3) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The crude (180 mg, 87.0%) was used for the next step directly. LC-MS (ESI) [M+H] + 225.1.
  • Step 1 To a solution of tert-butyl methyl malonate (25 g, 133 mmol) in DMF (250 mL) was added NaH (4.83 g, 121 mmol) at 0°C. After being stirred at 0°C for 1 hour, methyl 4, 6-dichloropyridazine-3-carboxylate (25 g, 121 mmol) was added at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 18 hours and then diluted with a. q. NH 4 Cl (1 L) , extracted with ethyl acetate (200 mL *3) .
  • Step 3 A solution of methyl 6-chloro-4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) pyridazine-3-carboxylate (12 g, 46.4 mmol) in NH 3 /MeOH (200 mL, 7 mol/L) was stirred at 100°C for 18 hours in a sealed tube. The mixture was cooled to room temperature and concentrated to give 3-chloropyrido [3, 4-c]pyridazine-6, 8-diol (8.5 g, 92.8%yield) as a red solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 198.0.
  • 1 H NMR 400 MHz, DMSO-d 4 ) : ⁇ 10.06 (s, 1H) , 7.10 (s, 4H) , 6.75 (s, 1H) , 4.60 (s, 1H) .
  • Step 4 To a solution of DIEA (1.31 g, 10.2 mmol) in MeCN (30 mL) was added POBr 3 (7.30 g, 25.4 mmol) in one portion, and then 3-chloropyrido [3, 4-c] pyridazine-6, 8-diol (1.00 g, 5.08 mmol) at room temperature. The reaction was stirred at 90°C for 1 hour. The cold mixture was poured into ice-water (100 mL) and extracted with ethyl acetate (100 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 5 A solution of 6, 8-dibromo-3-chloropyrido [3, 4-c] pyridazine (1.20 g, 3.72 mmol) in THF (20 mL) was added slowly to NH 3 . H 2 O (10 mL) at 0°C. The reaction mixture was stirred at r.t. for 16 hours. The mixture was concentrated to remove the solvent THF. The resulting suspension was diluted with MeOH (6 mL) . Then the mixture was filtered and dried to give the product (650 mg, 57.0%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 304.8.
  • Step 6 A mixture of 6, 8-dibromopyrido [3, 4-c] pyridazin-3-amine (650 mg, 2.14 mmol) and bis-2, 4-dimethoxybenzylamine (2.70 g, 8.55 mmol) in NMP (2 mL) was stirred at 120°C for 16 hours. The cold mixture was poured into ice-water (10 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 7 To a solution of 6-bromo-N8, N8-bis (2, 4-dimethoxybenzyl) pyrido [3, 4-c] pyridazine-3, 8-diamine (70.0 mg, 0.130 mmol) and Et 3 N (53.0 mg, 0.520 mmol) in DCM (3 mL) was added cyclopropanecarbonyl chloride (34.0 mg, 0.325 mmol) slowly at 0°C. The resulting mixture was stirred at r.t. overnight. The mixture was diluted with a. q. NaHCO 3 (5 mL) , extracted with ethyl acetate (5 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by prep-TLC to give the product (75.0 mg, 85.0%yield) as a yellow oil.
  • Step 8 According to the method described in general procedure F, the title product was synthesized (14.0 mg, 20.0%yield) as a yellow solid.
  • Step 9 A solution of N- (8- (bis (2, 4-dimethoxybenzyl) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) pyrido [3, 4-c] pyridazin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (14.0 mg, 0.0226 mmol) in TFA (0.5 mL) was stirred at 50°C for 3 hours. The reaction mixture was purged with argon to remove TFA. The crude was purified by prep-HPLC to give the product (6.75 mg, 93.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 321.0.
  • Step 1 To a solution of (trans) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (70 mg, 0.422 mmol) in dichloromethane (5.00 mL) was added N, N-dimethylformamide (1 drop) and oxalyl chloride (251 mg, 2.11 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was concentrated under reduced pressure.
  • Step 2 According to the method described in general procedure A, tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (5- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl) carbamate was synthesized (45 mg, 21.5%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 779.4.
  • Step 3 According to the method described in general procedure C, tert-butyl (5- (8-amino-3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl)(tert-butoxycarbonyl) carbamate was synthesized (30 mg, 96.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 615.3.
  • Step 2 A mixture of N- (8-amino-7-iodo-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropane-carboxamide (5.00 mg, 0.0112 mmol) , Pd (t-Bu 3 P) 2 (1.00 mg, 0.00170 mmol) , Zn (CN) 2 (3.00 mg, 0.0224 mmol) and Zn (0.30 mg, 0.00390 mmol) in DMF (0.5 mL) under Ar was stirred at 110°C for 16 hours. The mixture was filtered. The filtrate was purified by prep-HPLC to give the product (3.70 mg, 96%yield) as a yellow solid.
  • Step 1 To a solution of tetrahydro-2H-pyran-4-ol (1.00 g, 9.80 mol) and TEA (1.19 g, 11.7 mmol) in DCM (40.0 mL) was added 4-nitrophenyl chloroformate (1.97 g, 9.80 mol) at 0°C, the resulting mixture was stirred at rt for 2 h. The mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EtOAc (40 mL x 3) .
  • Step 2 To a solution of 4-nitrophenyl (tetrahydro-2H-pyran-4-yl) carbonate (160 mg g, 0.329 mol) in DMF (12.0 mL) was added K 2 CO 3 (455 mg, 3.29 mol) and tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (5-(8-chloro-3-aminocinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl) carbamate (439 mg, 1.64 mol) at rt. The resulting mixture was stirred at 70°C for 16 hours. After being cooled to rt, the mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EA (20 mL X 3) .
  • Step 4 According to the method described in general procedure C, desired compound was synthesized (30 mg, crude) as a yellow solid, which was used to the next step without further purification.
  • Step 1 According to the method described in general procedure D (90°C for 2h, using (1- (tert-butoxycarbonyl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) boronic acid) , tert-butyl 7- (8-chloro-7-fluoro-3-nitrocinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (400 mg, 64.0%) as a yellow solid.
  • Step 2 A mixture of tert-butyl 7- (8-chloro-7-fluoro-3-nitrocinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate (580 mg, 1.22 mmol) , Fe (546 mg, 9.75 mmol) and NH 4 Cl (522 mg, 9.75 mmol) in the solvent system EtOH/H 2 O (20/2 mL) under Ar was heated at 90°C for 16 hours. The mixture was cooled to room temperature. The mixture was diluted with aq. NaHCO 3 (30 mL) , extracted with ethyl acetate (30 mL X 3) .
  • Step 4 According to the method described in similar procedure as the preparation of 69, the desired product was synthesized (260 mg, 75.0%, crude) , which was used to the next step directly.
  • Step 5 According to the method described in general procedure A, the desired product was synthesized (40.0 mg, 14.6%) as a yellow solid.
  • Step 6 According to the method described in general procedure C, the desired product was synthesized (25 mg, 80.4%) as a yellow solid.
  • Step 7 According to the method described in general procedure E, the desired product was synthesized (10.0 mg, 48.4%) as a yellow solid.
  • Compound 74 was prepared in a similar manner as Compounds 73a and 73b using (1- (tert-butoxycarbonyl) -3, 8-dimethyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) boronic acid as a yellow solid (14.4 mg, 57.8%) as a yellow solid.
  • Step 1 According to the method described in general procedure D, 8-chloro-6- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) -7-fluorocinnolin-3-amine was synthesized (215 mg, 67.2%) as a yellow solid.
  • 2-bromo-4-chloroaniline (4.85 g, 23.5 mmol) in 4.0M HCl (23.5 mL) was added a 4 mL H 2 O solution of NaNO 2 (1.62 g, 23.5 mmol) slowly at 0 °C. The mixture was stirred at 0 °C for 1 hour.
  • a solution of (E) -N, N-dimethyl-2-nitroethen-1-amine (3.00 g, 25.9 mmol) in acetonitrile (15 mL) was added at 0 °C. The reaction mixture was allowed to warm to r.t. and stirred for 16 h.
  • Step 3 A solution of (Z) -2- ( (Z) - (2-bromo-4-chlorophenyl) diazenyl) -2-nitroethen-1-ol (178 g, 582 mmol) in PPA (polyphosphoric acid) (900 mL) was stirred at 160 °C for 5 h. The reaction mixture was poured onto ice and then extracted with ethyl acetate (500 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • PPA polyphosphoric acid
  • Step 4 According to the method described in general procedure A, the title product was synthesized (69.0 mg, 0.178 mmol, 27.0 %) as a yellow solid.
  • Step 8 A solution of tert-butyl (3-amino-6-chlorocinnolin-8-yl) (tert-butoxycarbonyl) carbamate (31.0 mg, 0.0787 mmol) , (trans) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (26.0 mg, 0.157 mmol) and TEA (160 mg, 1.57 mmol) in DCM (5 mL) was added POCl 3 (40.0 mg, 0.260 mmol) at 0 °C under Ar. The mixture was stirred at RT for 16 h. and then was diluted with water (50 mL) , extracted with EA (30 mL x 3) .
  • Step 9 According to the method described in general procedure F, the title product was synthesized (7.00 mg, 0.0104 mmol, 47.3 %) as yellow oil.
  • Step 1 According to the method described in step 2 of preparation of 73a/73b, the title product was synthesized (4.3 g, 57.7%) as a yellow solid.
  • Step 2 According to the method described in step 4 of preparation of 73a/73b, trans-N- (6-chloro-8- ( (diphenylmethylene) amino) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (4.0 g, 94.3%) as an off-white solid.
  • Step 1 (8-amino-3-trans-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) boronic acid was synthesized (80 mg, 57.6%yield) as a black solid according to a standard procedure.
  • Step 2 According to the method described in general procedure F (90°C for 2h, 6-bromo-5-methyloxazolo [4, 5-b] pyridin-2 (3H) -one was used) , the title product (84) was synthesized (2.19 mg, 2.43%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 457.1.
  • Step 1 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine was synthesized (360 mg, 0.867 mmol, 69.0 %yield) as a yellow oil.
  • Step 2 To a solution of 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (200 mg, 0.482 mmol) and pyridine (190 mg, 2.41 mmol) in DCM (10 mL) was added 4-nitrophenyl carbonochloridate (117 mg, 0.578 mmol) at 0°C under Ar. The mixture was stirred at RT for 2 h. The mixture was used for next step directly. LC-MS (ESI) [M+H] + 581.6.
  • Step 3 To a solution of 4-nitrophenyl (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) carbamate (279 mg, 0.482 mmol, crude) and TEA (98.0 mg, 0.964 mmol) in DCM (10 mL) was added azetidine-3-carbonitrile hydrochloride (57.0 mg, 0.482 mmol) at 0°C under Ar. The mixture was stirred at RT for 16 h. and then quenched with NaHCO 3 solution (30 mL) and extracted with EA (20 mL x 3) .
  • Step 1-2 To a mixture of activated Zn (880 mg, 13.8 mmol) in THF (80 mL) was added dibromoethane (200 mg, 1.06 mmol) at RT under Ar. The reaction mixture was heated to 65°C for 10 mins. After cooling to RT, trimethyl chlorosilane (115 mg, 1.06 mmol) was added and stirred at room temperature for another 1 h. and then tert-butyl 3-iodoazetidine-1-carboxylate (3.00 g, 10.6 mmol) in THF (30 mL) was added dropwise.
  • Step 3 A solution of tert-butyl 3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-1-carboxylate (18.0 mg, 0.0759 mmol) in DCM (5 mL) was added TFA (1 mL) at RT. The mixture was stirred at RT for 3 h. The mixture was concentrated and dried, the crude was used to the next step directly.
  • Step 4 A solution of 4-nitrophenyl (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) carbamate (41 mg, 0.0766 mmol) and TEA (23.2 mg, 0.230 mmol) in DCM (5 mL) was added 4- (azetidin-3-yl) -1-methyl-1H-pyrazole TFA salt (18.0 mg, 0.0766 mmol) at 0°C under Ar. The mixture was stirred at RT for 16 h, and then diluted with NaHCO 3 solution (30 mL) and extracted with EA (20 mL x 3) .
  • the mixture was stirred at 110°C in a sealed tube for 3 hours.
  • the mixture was cooled to room temperature.
  • the mixture was filtered, the filter cake was washed with ethyl acetate (20.0 mL X 2) .
  • the filter was diluted with water (40.0 mL) , extracted with ethyl acetate (20.0 mL X 3) .
  • the combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulphate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 3 A solid of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (100 mg, 0.245 mmol) was separated with SFC (System: Waters SFC 80; Column name: Column size: 250*25mm 10 ⁇ m; Mobile Phase A: Supercritical CO 2 ; Mobile Phase B: MeOH (0.1%NH 3 ⁇ H 2 O) ; A: B: 60:40; Wavelength: 214nm; Flow: 70 mL/min; Column temp: RT; Back Pressure: 100bar; Injection: 3.5mL; Cycle time: 5min; Preparation of sample solution: The sample was dissolved in about 23 mL of MeOH) to give (1S, 2S) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxo
  • Step 1 To a solution of (trans) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (210 mg, 1.16 mmol, prepared according to WO2018183964) , 6-chloro-8- ( (diphenylmethylene) amino) cinnolin-3-amine (418 mg, 1.16 mmol) in DCM (25 mL) was added Pyridine (3.60 mL) . After being stirred at rt for 30 min, the solution of POCl 3 (508 mg, 3.32 mmol) in DCM (3.00 mL) was added at 0°C and stirred at rt for 20 min. The mixture was diluted with sat.
  • Step 1 A solution of ethyl (trans) -2- (1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate (180 mg, 1.00 mmol) , cyclopropylboronic acid (172 mg, 2.00 mmol) , sodium carbonate (212 mg, 2.00 mmol) , Cu (OAc) 2 (181 mg, 1.00 mmol) and 2, 2-bipyridine (156 mg, 1.00 mmol) in DCE (10.0 mL) was stirred at 80 °C under O 2 balloon for 16 hours. The mixture was diluted with water (50.0 mL) and then extracted with EtOAc (20.0 mL x 3) .
  • Step 1 Hydrolysis of ethyl (trans) -2- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate with LiOH in MeOH/H 2 O provided the (trans) -2- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (167 mg, 42.9 %yield) as a brown oil.
  • Step 3 To a solution of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4- (hydroxymethyl) -2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (40.0 mg, 0.0946 mmol) and Et 3 N (86.0 mg, 0.852 mmol) in acetonitrile (2 mL) was added PBSF (perfluoro-1-butanesulfonyl fluoride) (86.0 mg, 0.284 mmol) slowly at 0°C. The resulting mixture was stirred at 0°C for 5 min. Then Et 3 N.
  • PBSF perfluoro-1-butanesulfonyl fluoride
  • Step 1 According to the method described in the preparation of 87a/b, (trans) -N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- ( (S) -4-isopropyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (28.0 mg, 29.6 %yield) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H] + 600.4.
  • Step 1 To a suspension of ethyl (trans) -2- (1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate (62.0 mg, 0.344 mmol) and cesium carbonate (223 mg, 0.684 mmol) in N, N-dimethylformamide (2.00 mL) was added 3- (methylsulfonyl) propyl 4-methylbenzenesulfonate (100 mg, 0.342 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 100°C for 18 hours. The mixture was cooled to room temperature, and then diluted with water (20.0 mL) , extracted with ethyl acetate (20.0 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of 1- (2-bromoethyl) -4-iodo-1H-pyrazole (2.00 g, 6.64 mmol) in DMSO (10.0 mL) was added DBU (1, 8-Diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene) (5.00 mL) at room temperature. The mixture was stirred at 80°C for 18 hours. The mixture was cooled to room temperature. The mixture was diluted with water (50.0 mL) and extracted with ethyl acetate (20.0 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 2 To a solution of 4-iodo-1-vinyl-1H-pyrazole (1.70 g, 7.73 mmol) in dichloromethane (20.0 mL) was added Rhodium (II) acetate dimer (500 mg) and ethyl 2-diazoacetate (1.76 g, 15.5 mmol) at 0°C. The mixture was stirred at room temperature for 18 hours, and then diluted with water (30.0 mL) , extracted with dichloromethane (20.0 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Rhodium (II) acetate dimer 500 mg
  • ethyl 2-diazoacetate 15.5 mmol
  • Step 3 To a solution of ethyl (trans) -2- (4-iodo-1H-pyrazol-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (170 mg, 0.556 mmol) and sodium methanesulfinate (114 mg, 1.12 mmol) in DMSO (4.00 mL) was added (trans) -N1, N2-dimethylcyclohexane-1, 2-diamine (16 mg, 0.112 mmol) and Cu (OTf) 2 (40 mg, 0.112 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 110°C for 18 hours.
  • Step 4 -6 According to the method described in the preparation of Compounds 73a/73b, compound 104 was synthesized (27.0 mg, 50.9%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 521.1.
  • Step 1 To a solution of 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (50 mg, 0.120 mmol) and 2- (6-chloropyridin-3-yl) acetonitrile (37 mg, 0.295 mmol) in dioxane (2.00 mL) was added 4, 5-Bis (diphenylphosphino) -9, 9-dimethylxanthene (28 mg, 0.0.0482 mmol) , cesium carbonate (118 mg, 0.362 mmol) and tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (22 mg, 0.0241 mmol) at room temperature.
  • the mixture was irradiated in a microwave at 150°C for 2 hours under Ar. After being cooled to room temperature, the mixture was diluted with water (30 mL) and extracted with ethyl acetate (20.0 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulphate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure.
  • Step 1 To a solution of 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (250 mg, 0.602 mmol) and methyl 6-bromonicotinate (110 mg, 0.509 mmol) in dioxane (15 mL) was added Pd (OAc) 2 (12.5 mg, 0.0509 mmol) , CyJhonPhos (35 mg, 0.101 mmol) and Cs 2 CO 3 (490 mg, 1.527 mmol) . After being stirred at 100°C under argon atmosphere for 16 h, the reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with water (100 mL) and extracted with DCM (50 mL *3) .
  • Step 3 To a solution of 6- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) nicotinic acid (40.0 mg, 0.074 mmol) and morpholine (1.5 eq) in DCM (2 mL) was added TEA (22.5 mg, 0.223 mmol) and HATU (36 mg, 0.962 mmol) . After being stirred at room temperature for 16 h, the mixture was diluted with H 2 O (20 mL) and extracted with EA (10 mL *3) .
  • Step 1 To a solution of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (100 mg, 0.245 mmol) in DMF (3 mL) was added NIS (66.0 mg, 0.295 mmol) slowly at 0°C. After being stirred at r.t. for 3 hours, the mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) .
  • Step 2 To a solution of (trans) -N- (8-amino-7-iodo-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (130 mg, 0.244 mmol) in AcOH (1 mL) was added NCS (N-chlorosuccinimide) (33.0 mg, 0.244 mmol) slowly at r.t.. The resulting mixture was stirred at r.t. overnight. The mixture was diluted with a. q.
  • Step 3 To a solution of (trans) -N- (8-amino-5-chloro-7-iodo-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (45.0 mg, 0.0794 mmol) and Et 3 N (8.00 mg, 0.0794 mmol) in EtOAc (3 mL) was added Pd/C (5.00 mg) under argon. The resulting mixture was stirred at r.t. under H 2 atmosphere for 6 hour. The reaction mixture was filtered and the filtrate was concentrated. The crude was purified by prep-HPLC (NH 3 .
  • Step 1 According to the general procedure F (90°C under argon atmosphere for 3 hours, 6-chloro-8- ( (diphenylmethylene) amino) cinnolin-3-amine and (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) boronic acid as reactants) , 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) cinnolin-3-amine was synthesized (95 mg, 6.70%yield) as a yellow solid.
  • Step 2 According to the general procedure B, 2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (30 mg, 28.1%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 646.3.
  • Step 3 According to the general procedure C, 2- ( (8-amino-6- (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (109) was synthesized (5.00 mg, 22.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 482.1.
  • Step 1 To a solution of diethyl (cyanomethyl) phosphonate (127 mg, 0.72 mmol) in THF (2.00 mL) was added NaH (24 mg, 0.60 mmol) at 0°C and it was stirred at room temperature for 1 hour, followed by dropwise added a solution of 2-bromo-6-methyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepine-4, 7 (8H) -dione (103 mg, 0.40 mmol) in THF (1.00 mL) at 0°C and then it was stirred at room temperature for another 2 hours. The mixture was quenched with sat.
  • Step 3 According to the general procedure C, (E) -2- (2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-4-ylidene) acetonitrile (110) was synthesized (3.30 mg, %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 452.1; [M-H] - 450.2.
  • Step 1 To a solution of 4-iodo-1-methyl-1H-pyrazole (4.50 g, 21.63 mmol) in N, N-dimethylformamide (100.0 mL) was added DIEA (1.40 g, 108.0 mmol) , ethyl methacrylate (7.40 g, 64.9 mmol) , Pd (PPh 3 ) 2 Cl 2 (607 mg, 0.865 mmol) and TBAB (1.40 g, 4.33 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 110°C for 16 hours under Ar. The mixture was cooled to room temperature and diluted with water (100.0 mL) , then extracted with ethyl acetate (100.0 mL x 3) .
  • Step 2 To a solution of trimethylsulfoxonium iodide (5.24 g, 23.8 mmol) in dimethyl sulfoxide (20.0 mL) was added sodium hydride (722 mg, 18.0 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. To the reaction mixture was added a solution of ethyl (E) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) acrylate (1.40 g, 7.22 mmol) in tetrahydrofuran (5.00 mL) at room temperature. The mixture was stirred at 50°C for 2 days.
  • E ethyl -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) acrylate
  • Step 3 -6 In a similar manner as the preparation of compound 87a/b, (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1-methyl-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (113) was synthesized (2.24 mg, 44.2%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 422.4.
  • Step 1 To a solution of ethyl 2-cyano-1-fluorocyclopropane-1-carboxylate (240 mg, 1.529 mmol) in methanol (3.00 mL) and water (3.00 mL) was added sodium hydroxide (73 mg, 1.834 mmol) at room temperature and then it was stirred at room temperature for 4 hours. The mixture was adjusted to pH ⁇ 2 with 1N KHSO 4 (aq. ) and then it was extracted with ethyl acetate (10.0 mL x 3) .
  • Step 2-3 In a similar manner as the preparation of compound 87a/b, N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyano-1-fluorocyclopropane-1-carboxamide (114) was synthesized (3.30 mg, 10.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 420.2.
  • Step 1 According to the general procedure B, tert-butyl 7- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -3- ( (5-methyl-6, 6-dioxido-4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazin-2-yl) amino) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (6.67 mg, 25.1 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H] + 758.2.
  • Exemplary compounds of Formula (I) or (Ia) were tested to assess compound inhibition of HPK-1.
  • the Ki or IC 50 for each exemplary compound were determined in binding or ADP-Glo assays.
  • Eu Kinase Binding Assays are based on the binding and displacement of a proprietary, Alexa 647-labeled, ATP-competitive kinase inhibitor scaffold (kinase tracer) to HPK1. Binding of the tracer to the kinase is detected using anti ⁇ tag antibody, which binds to HPK1. Simultaneous binding of both the tracer and antibody to HPK1 results in a high degree of FRET (fluorescence resonance energy transfer) from the europium (Eu) donor fluorophore to the Alexa 647 acceptor fluorophore on the kinase tracer. Binding of an inhibitor to HPK1 competes for binding with the tracer, resulting in a loss of FRET.
  • FRET fluorescence resonance energy transfer
  • Assay Buffer 2mM DTT, 0.01%BRIJ-35, 100mM MgCl 2 , 50mM HEPES
  • Stock solution of test compounds were prepared at concentration of 5mM (100X) .
  • compound dilution in 384-plate prepare 12.5 ⁇ L/well of stock solution in columns 2-13, 10uL/well of DMSO in columns 3-12, 14-23, wells A1-H1, I24-P24.
  • the top concentration was 1mM.
  • the compound plate was centrifuged at 2500rpm for l min. Transfer 80 ⁇ L of the compounds solution into an assay plate. One compound plate makes two assay plates.
  • TR_FRET 340nm ex/615nm and 665nm em; 100usee Delay; and 200usee integration.
  • HPK1 enzyme (Carna) , BSA (PE)
  • Assay buffer Tris (40mM) , MgCl 2 (20mM) , BSA (0.1%) , DTT (0.5mM) in ddH 2 O
  • Inhibitor solution Starting at 1000nM, 3X dilution, 12 concentration points.
  • test compounds 50X dilution of test compounds and reference compound stock solution (10mM) in 100%DMSO. 4X series dilution of test compounds by DMSO in 96-well dilution plate. Mix 1 ⁇ L diluted inhibitor solution with 49 ⁇ L assay buffer;
  • Exemplary compounds of Formula (I) or (Ia) were tested in Jurkat cell functional Assay and Pan T cell functional Assay.
  • Jurkat E6-1 cell line (Cat#SCSP-513) was purchased from Chinese Academy of Sciences. The cells are cultured in full medium (90%RPMI Medium, 10%FBS) . Cells are passaged about three times a week, and maintained between 1 ⁇ 10 5 cells/mL to 1 ⁇ 10 6 cells/mL confluence.
  • Test compounds were initially dissolved in DMSO with a final concentration of 10mM as stock solution.
  • CD3 + cells Incubation Completely medium in a 37 °C water bath, and allow warming for at least 15 minutes prior to use. Transfer a vial of cryopreserved T cells from storage, ensuring that vials remain at cryogenic temperatures until thawing process ensures. Thaw the cells by placing the vial in a 37°C water bath and gently shaking the vials for 2 minutes. After thawing was completed, spray vial with 70%ethanol, transfer the vial to a biosafety cabinet. Use wide-bore pipette tip to transfer T cells into 25 mL conical tube containing full culture medium. Counting cells by placing the 50 mL conical tube into a centrifuge and spin at 1200 rpm for 10 minutes. Upon completion of spin, aspirate the medium and re-suspend T cells in enough incubation medium at a density of 1 ⁇ 10 6 cells/mL, transfer the cells to T25 cell dish and return the plate to the incubator for 1 hours.
  • Test compounds were initially dissolved in DMSO with final concentration of 10mM as stock solution.
  • a compound described herein was incubated with hepatocytes derived from humans, monkeys, dogs, rats and mice at cell density of cell density of 0.5 ⁇ 10 6 viable cells/mL. The incubation was carried out at the compound concentration of 1 ⁇ M. Samples were taken at 0, 15, 30, 60, 90 and 120 minutes and mixed with acetonitrile with internal standard to stop the reaction. The quenched samples were centrifuged and the supernatants were analyzed using LC/MS/MS to determine remaining of the compound at each time point. t 1/2 was calculated from the disappearance of the compound. In certain embodiments, the determined t 1/2 and in vitro clearance (Cl) of Compound 87b in different species is described herein in Table 4. A common approach (Obach RS (1999) , Drug Metabolism and Disposition 27, 1350 –1359) was used in calculation of in vitro CL from determined metabolic stability t 1/2 .
  • a dosing solution of a compound described herein prepared in 5%DMSO/40%PEG400 /55%water at 0.2 mg/mL was administered to a group of 2-3 male CD-1 mice (4-6 weeks old, 20-30 grams) via intravenous (IV) bolus at 1 mg/kg.
  • IV intravenous
  • Blood samples were collected via the jugular vein into tubes containing sodium heparin as the anticoagulant at 0.033, 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8 and 24 hours post dose. The blood samples were then centrifuged and the resultant plasma samples were analyzed using LC/MS/MS to determine concentration of the compound.
  • Non-compartmental model was used to calculate pharmacokinetic (PK) parameters.
  • PK pharmacokinetics of the compounds in mice is described herein in Table 5.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Compounds of Formula (I) or (Ia), pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers, tautomers, solvates or prodrugs, and their use as HPK1 inhibitors are described herein, and also described are methods for preparing the compounds, and methods of treating HPK1-dependent diseases or disorders, such as cancer.

Description

CINNOLINES AS INHIBITORS OF HPK 1
This invention pertains to compounds that modulate the function of HPK1 and are useful for treatment of HPK1 mediated diseases and conditions such as cancer.
BACKGROUND
Surgery, chemotherapy, and radiation therapy are major cancer treatment modalities currently used by oncologists depending upon the location and grade of the tumor and the stage of the disease. Complete removal of tumor without damage to the rest of body is the ideal goal of treatment. Unfortunately, surgical resection, radiation therapy and chemotherapeutics do not specifically aim at diseased cells, and damaging healthy cells at the same time. Targeted therapies take advantages of tumor-specific expression of antigens or inappropriate overexpression of specific proteins in some types of cancer, but tumor cells are prone to mutation and can become resistant to those therapeutic agents.
As the understanding of biological processes of cancer has increased, cancer immunotherapy has emerged to be an effective therapy, which induces the patient's own immune system to fight cancer. Immunotherapies designed to elicit or amplify an immune response are classified as activation immunotherapies, while those to reduce or suppress immune response are classified as suppression immunotherapies, one of which is to inhibit negative regulators of immune responses that normally function to maintain peripheral tolerance, allowing tumor antigens to be recognized as non-self-entities.
The hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1, or MAP4K1) is an example of a negative regulator of hematopoietic compartments activation (eg. T cells, B cells and dendritic cells) , inhibiting T cell receptor (TCR) signaling and T cell proliferation. HPK1 is expressed predominantly by hematopoietic cells, including early progenitors, which can be activated by HPK1 through JNK/SAPK pathway. On TCR activation, cytosolic HPK1 is recruited to the plasma membrane where it is phosphorylated at residues Tyr381, Ser171 and Thr165 by Lck/Zap70 (Shui JR et al. Nat. Immunol. 2007, 8, 84-91) . In T cells, HPK1 is believed to negatively regulate T cell activation through reducing the persistence of signaling microclusters (Di Bartolo et al. JEM 2007, 204: 681-691) , which leads to the recruitment of 14-3-3 proteins that bind to the phosphorylated SLP76 and Gads, releasing the SLP76-Gads-14-3-3 complex  from LAT-containing microclusters (Lasserre et al. J Cell Biol 2011, 195: 839-853) . In addition to TCR signaling, HPK1 also negatively regulates T cell signaling by the prostaglandin E2 (PGE2) receptor in a PKA dependent manner (Sawasdikosol, S. et al, Blood 2003, 101, 3687–3689) . Further studies suggest that HPK1 plays a role in activation-induced cell death (AICD) and regulation of leukocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) integrin activation on T cells. (Brenner, D. et al, EMBO J. 2005, 24, 4279–4290; Patzak, I.M, et al, Eur. J. Immunol. 2010, 40, 3220–3225. )
Although cinnolines are known to have biological activities and potential for treatment of various diseases (Y.N. Yu, et al, Bioorg. Med. Chem. 2003, 11, 1475; A.L. Ruchelma et al, Bioorg. Med. Chem. 2004, 12, 795) , due to difficulty and lack of accessible synthesis of more complex cinnoline analogs, this class of compounds have not been widely prepared and evaluated for therapeutic uses and drug properties.
SUMMARY
The present disclosure describes antagonists of the enzyme HPKl. The present disclosure provides compounds having a structure set forth in Formula (I) or (Ia) , pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers, tautomers, solvates and prodrugs thereof. Further provided are methods of preparing the compounds of Formula (I) or (Ia) .
The present disclosure also provides the use of compounds for inhibiting HPKl kinase activity, enhancing an immune response, and the treatment of HPKl -dependent disorders. Accordingly, pharmaceutical compositions comprising a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate and prodrug thereof are also provided. Methods of inhibiting HPKl with an effective amount of a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutically acceptable salt, solvates and prodrug thereof are provided. Methods of treating a HPK1-dependent disorder comprising administering to a subject in need thereof a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutical composition thereof are provided. A use of a compound of Formula (I) or (Ia) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate and prodrug thereof as a medicament or as a drug is also provided. The medicament or the drug can inhibit HPK1 kinase activity and treat HPK1-dependent disorders.
DETAILED DESCRIPTION
The present disclosure provides compounds of Formula (I) or (Ia) and pharmaceutical compositions as inhibitors or modulators of HPKl (hematopoietic progenitor kinase 1) . The present disclosure also provides that the use of compounds and compositions in treating diseases and disorders mediated by HPKl. Its therapeutic application is to enhance immune response in a patient, such as treatment of cancer patient, in the form of single agent or combination with the other cancer treatments.
Compounds
The present disclosure provides a compound of Formula (I) or (Ia) , or pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers, tautomers, solvates, and prodrugs thereof. In one aspect, provided is a compound of Formula (I) :
Figure PCTCN2020101409-appb-000001
or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate, or prodrug thereof, wherein:
R 1 is C-M or N;
M is H, halo, CN;
R 2 is selected from 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl, having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N, and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl, fused with a ring selected from the group consisting of 5 or 6 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl, wherein the C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl of R 2 and the fused ring are optionally substituted with one to four substituents;
R 3 is hydrogen, cyano, halogen; and
R 4 is A-C (O) -or D;
A is selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl, -NHR or -OR; wherein the C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of A are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; R is independently C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl, or C4-9 heterocyclyl; wherein the C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of R are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; and
D is a C6-10 aryl, or a 5-10 membered heteroaryl having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; or a 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5-or 6-numbered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6 aryl and C3-7 cycloalkyl; wherein the 5-10 membered heteroaryl of D and the fused ring are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
In another aspect, provided is a compound of Formula (Ia) :
Figure PCTCN2020101409-appb-000002
or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate, or prodrug thereof, wherein:
R 1 is C-M;
M is H, halo, CN;
R 2 is selected from 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl, having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N, and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5 or 6 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and  C3-7 cycloalkyl, wherein the C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl of R 2 and the fused ring are optionally substituted with one to four substituents;
R 4 is A-C (O) -or D;
A is selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl, -NHR or -OR; wherein the C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of A are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; R is independently C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl, or C4-9 heterocyclyl; wherein the C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of R are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; and
D is a C6-10 aryl, or a 5-10 membered heteroaryl having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; or a 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5-or 6-numbered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6 aryl and C3-7 cycloalkyl; wherein the 5-10 membered heteroaryl of D and the fused ring are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 1 is selected from the group consisting of CH, CF, CCl, CCN and N.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 1 is CH.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 1 is selected from the group consisting of N, CH and CF; R 2 is selected from the group consisting of 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl, having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5 or 6 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl, wherein the 5-10 membered heteroaryl of R 2 and the fused ring are optionally substituted with one to four substituents.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 4 is A-C (O) -; A is selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl, -NHR or -OR; wherein the C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of A are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; R is independently selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl; wherein the C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of R is optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 4 is selected from the group consisting of C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl substituted independently with one, two, three, four or five substituents, wherein the subsituents are selected from the group consisting of a 5-10 membered heterocyclyl having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; and a 5-10 membered heterocyclyl fused with a ring selected from the group consisting of 5-or 6-numbered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl; wherein the 5-10 membered heterocyclyl and the fused ring are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 2 is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heteroaryl is pyridinyl, imidazolyl, thiazolyl, pyrazolyl or oxazolyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 2 is a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents, wherein the heterocyclyl is saturated or partially unsaturated (For example, the above heterocyclyl is oxazolidinyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 2 is a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above aryl is phenyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein R 2 is a C6-10 aryl or a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, wherein the C6-10 aryl or the 5 or 6 membered heteroaryl is fused with a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the aryl, the heteroaryl and the heterocyclyl are optionally substituted with one, two, three or four substituents (For example, the above aryl or heteroaryl and the above heterocyclyl are fused to form 2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazinyl, 2-hydro-3H-benzo [d] oxazolyl or 2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] thiazinyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein the substituents on R 2 or mentioned with respect to R 2 are independently selected from, if feasible, the group consisting of C1-6 alkyl, amino, C1-6 alkyloxy, oxo, (C1-6 alkyl)  2P (=O) -, halo, cyano and C1-6 haloalkyl.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) , wherein R 3 is selected from the group consisting of H or Cl.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein A is a C3, C4, C5 or C6 cycloalkyl or a 4, 5 or 6 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the cycloalkyl or heterocyclyl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heterocyclyl is tetrahydrofuranyl, azetidinyl or tetrahydropyranyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein A is -OR, wherein R is a 4, 5 or 6 heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the heterocyclyl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heterocyclyl is tetrahydropyranyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein D is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, wherein the heteroaryl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heteroaryl is pyrazolyl, pyridinyl, pyrazinyl or pyridazinyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein D is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and fused with a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the heteroaryl and the heterocyclyl are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents (For example, the above heteroaryl and the above heterocyclyl are fused to form 5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepinyl, 5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridinyl or 4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazinyl) .
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein the substituents on A or D or mentioned with respect to A or D are independently selected from, if feasible, the group consisting of C1-C6 alkyl, cyano, oxo, 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, C1-6 alkyl-C (=O) -, C1-6 alkyl-S (=O)  2-, 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, (5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated) -C (=O) -, C1-6 alkylidene and halo (For example, the above heteroaryl is pyrazolyl) (For example, the above heterocyclyl is morpholinyl, piperazinyl, thiomorpholinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl or azetidinyl) ;
wherein the above substituents are optionally further substituted with one, two, three, four or five substituents independently selected from, if feasible, the group consisting of cyano, C1-6 alkyl, C1-6 alkyl-S (=O)  2-, C1-6 alkyl-C (=O) -, oxo, 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, and C3, C4, C5 or C6 cycloalkyl (For example, the above heterocyclyl is oxetanyl or azetidinyl) (For example, the above heteroaryl is pyrazolyl) ; and
wherein the above further substituents are optionally substituted, if feasible, with one, two, three, four or five groups independently selected from the group consisting of halo, C1-6 alkyloxy, C1-6 alkyl-S (=O)  2-, hydroxyl, C1-6 alkyl-C (=O) -and C1-6 alkyl.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (Ia) , in which:
R 1 is C-M;
M is H, halo, CN;
R 2 is selected from one of the groups below and its enantiomers:
Figure PCTCN2020101409-appb-000003
In some embodiments, provided is the compound of Formula (Ia) , wherein R 4 is selected from the following and each of its corresponding enantiomers or diastereomers:
Figure PCTCN2020101409-appb-000004
Figure PCTCN2020101409-appb-000005
X = H, R, C (O) G, SO 2G, G is C1-9 alkyl groups substituted by H, D, F, OH, OMe, CN; R is independently C1-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl, or C4-9 heterocyclyl;
Y, Y 1 and Y 2 are independently H, D, F, CN, OH, OMe, C1-9 alkyl substituted by F, OH, OMe, CN; Y 1 and Y 2 together can form a C3-7 cycloalkyl, or C4-9 heterocycle ring.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein C0-6 alkyl, if mentioned, is H, C1 alkyl, C2 alkyl, C3 alkyl, C4 alkyl, C5 alkyl or C6 alkyl.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein C5-9 heteroaryl, if mentioned, is 5, 6, 7, 8 or 9 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N.
In some embodiments, provided is the compound of Formula (I) or Formula (Ia) , wherein C4-9 heterocyclyl, if mentioned, is 4, 5, 6, 7, 8 or 9 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated.
In some embodiments, the compounds are selected from table 1:
Table 1. Representative Compounds of Formula (I) and (Ia)
Figure PCTCN2020101409-appb-000006
Figure PCTCN2020101409-appb-000007
Figure PCTCN2020101409-appb-000008
Figure PCTCN2020101409-appb-000009
Figure PCTCN2020101409-appb-000010
Figure PCTCN2020101409-appb-000011
Figure PCTCN2020101409-appb-000012
Figure PCTCN2020101409-appb-000013
Figure PCTCN2020101409-appb-000014
Figure PCTCN2020101409-appb-000015
Figure PCTCN2020101409-appb-000016
Figure PCTCN2020101409-appb-000017
Figure PCTCN2020101409-appb-000018
Figure PCTCN2020101409-appb-000019
Figure PCTCN2020101409-appb-000020
Figure PCTCN2020101409-appb-000021
Figure PCTCN2020101409-appb-000022
Figure PCTCN2020101409-appb-000023
Figure PCTCN2020101409-appb-000024
Figure PCTCN2020101409-appb-000025
Figure PCTCN2020101409-appb-000026
Figure PCTCN2020101409-appb-000027
Figure PCTCN2020101409-appb-000028
Figure PCTCN2020101409-appb-000029
Figure PCTCN2020101409-appb-000030
Figure PCTCN2020101409-appb-000031
Figure PCTCN2020101409-appb-000032
Figure PCTCN2020101409-appb-000033
Figure PCTCN2020101409-appb-000034
Figure PCTCN2020101409-appb-000035
HPK1 Kinase
The hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1 or called MAP4K1) is an example of a negative regulator of hematopoietic compartments activation (eg. T cells, B cells and dendritic cells) , inhibiting T cell receptor (TCR) signaling and T cell proliferation. HPK1 is of particular interest as it has been implicated in several important steps that are thought to limit T cell responsiveness, particularly in cancer.
HPK1 is expressed predominantly by hematopoietic cells, including early progenitors, which can be activated by HPK1 through JNK/SAPK pathway. On TCR activation, cytosolic HPK1 is recruited to the plasma membrane where it is phosphorylated at residues Tyr381, Ser171 and Thr165 by Lck/Zap70 (Shui JR et al. Nat. Immunol. 2007, 8, 84-91) . In T cells, HPK1 is believed to negatively regulates T cell activation through reducing the persistence of signaling microclusters (Di Bartolo et al. JEM 2007, 204: 681-691) , which leads to the recruitment of 14-3-3 proteins that bind to the phosphorylated SLP76 and Gads, releasing the SLP76-Gads-14-3-3 complex from LAT-containing microclusters (Lasserre et al. J Cell Biol 2007, 195: 839-853) . In addition to TCR signaling, HPK1 also negatively regulates T cell signaling by the prostaglandin  E2 (PGE2) receptor in a PKA dependent manner (Sawasdikosol, S. et al, Blood 2003, 101, 3687–3689) . Further studies suggest that HPK1 plays a role in activation-induced cell death (AICD) and regulation of leukocyte function-associated antigen-1 (LFA-1) integrin activation on T cells. (Brenner, D., et al, EMBO J. 2005, 24, 4279–4290; Patzak, I.M, et al, Eur. J. Immunol. 2010, 40, 3220–3225. )
The bone marrow-derived dendritic cells (BDMCs) from HPK1 knockout mice showed higher expression of co-stimulatory molecules (e.g. CD80/CD86) and enhanced production of proinflammatory cytokines (IL-12, TNF-aetc) , and demonstrated superior ability to stimulate T cell proliferation in vitro and in vivo as compared to wild-type DCs (Alzabin, S., et al, J Immunol, 2009, 182: 6187-94) . These data suggest that HPK1 is also an important negative regulator of dendritic cell activation (Alzabin, S., et al., J Immunol, 2009, 182: 6187-94) . However, the signaling mechanisms underlying HPK1 mediated negative regulation of DC activation remains to be elucidated.
In contrast, HPK1 appears to be a positive regulator of suppressive functions of regulatory T cells (Treg) (Sawasdikosol, S. et al, The journal of immunology, 2012, 188, supplement 1: 163) . HPK1 deficient mouse Foxp3+ Tregs were defective in suppressing TCR-induced effector T cell proliferation, and paradoxically gained the ability to produce IL-2 following TCR engagement. These data suggest that HPK1 is an important regulator of Treg functions and peripheral self-tolerance.
Provided are also compounds of Formula (I) and (Ia) , or pharmaceutically acceptable salts, prodrugs, or solvates thereof. In certain embodiments, provided herein are also crystalline and amorphous forms of the compounds of Formula (I) and (Ia) , or pharmaceutically acceptable salts, prodrugs, or solvates thereof.
"Pharmaceutically acceptable salt” means a salt prepared by conventional means, and are well known by those skilled in the art. The “pharmaceutically acceptable salts” include basic salts of inorganic and organic acids (Berge et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1) .
A "solvate" is formed by treating a compound in a solvent. Solvates of salts of the compounds of Formula (I) and (Ia) are also provided. In the case of treating compounds with water, the solvate is hydrates. Hydrates of the compounds of Formula (I) and (Ia) are also provided.
A "prodrug" includes any compound that converts into a compound of Formula (I) and (Ia) , when administered to a subject, e.g., upon metabolic processing of the prodrug.
Therapeutic Uses of the Compounds
The compounds of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used for treating HPK1 mediated diseases or disorders. In one embodiment, provided are methods for inhibiting HPK1 activity using a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof.
As used herein, "treat" or “treating” in reference to a disorder means to ameliorate or prevent the disorder or one or more of the biological manifestations of the disorder, to interfere with one or more points in the biological cascade that leads to or is responsible for the disorder, to alleviate one or more of the symptoms or effects associated with the disorder. As indicated above, "treatment" of a disorder includes prevention of the disorder, and "prevention" is understood to refer to the prophylactic administration of a drug to substantially diminish the likelihood or severity of a disorder or biological manifestation thereof, or to delay the onset of such disorder or biological manifestation thereof.
“Subject” refers to a human (including adults and children) or other animal. In one embodiment, "patient" refers to a human.
As used herein, "safe and effective dose" in reference to a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof an amount sufficient to treat the patient's condition but low enough to avoid serious side effects. A safe and effective dose of a compound will vary with the particular compound chosen (e.g. consider the potency, efficacy, and half-life of the compound) ; the route of administration chosen; the disorder being treated; the severity of the disorder being treated; the age, size, weight, and physical condition of the patient being treated; the medical history of the patient to be treated; the duration of the treatment; the nature of concurrent therapy; the desired therapeutic effect; and like factors.
“Inhibition of HPK1 activity” or variants refer to a decrease in HPK1 activity as a direct or indirect response to the presence of a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically  acceptable salt, prodrug, or solvate thereof, relative to the activity of HPK1 gamma in the absence of the compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof.
The potencies of compounds as inhibitors of an enzyme activity (or other biological activity) can be established by determining the concentrations at which each compound inhibits the activity to a predefined extent and then comparing the results. “IC50” or “IC90” of an inhibitor can be determined by the concentration that inhibits 50%or 90%of the activity in a biochemical assay, which can be accomplished using conventional techniques known in the art, including the techniques describes in the Examples below.
HPK1 is expressed primarily in the hematopoietic compartment (e.g., T cells, B cells, and dendritic cells) and it has been implicated as a negative regulator of signal transduction in T-cells through phosphorylation and activation of the T-cell receptor adaptor protein SLP-76 (Di Bartolo et al., J. Exp. Med. 2007, 204: 681) . Based on in vitro and in vivo studies, HPKl was identified as a novel target for cancer immunotherapy (Sawasdikosol et al., Immunol Res. 2012, 54: 262-5) .
In one aspect, the invention thus provides a method of treating a disorder mediated by inappropriate HPK1 activity comprising administering a safe and effective dose of a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof
In one embodiment, the compounds described herein may be used to treat cancers that are mediated by inappropriate HPK1 activity. In certain embodiments, the disease is a hematologic malignancy. In certain embodiments, the disease is lymphoma, such as Burkitt lymphoma, diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and mantle cell lymphoma (MCL) , follicular lymphoma, lymphoplasmacytic lymphoma, Waldenstrom macroglobulinemia, and marginal zone lymphoma. In one embodiment, the disorder is multiple myeloma, or leukemia, such as acute lymphocytic leukemia (ALL) , acute myeloid leukemia (AML) , chronic lymphocytic leukemia (CLL) , small lymphocytic lymphoma (SLL) , myelodysplastic syndrome (MDS) , myeloproliferative disease (MPD) , chronic myeloid leukemia (CML) .
In other embodiments, the disease is a solid tumor. In particular embodiments, the indication is to treat solid tumor with abnormal HPK1 expression, such as pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) and hepatocellular carcinoma (HCC) , gastrointestinal cancer, prostate cancer, ovarian  cancer, medulloblastoma, and breast cancer. In some embodiment, the compounds alone or with combination of other anti-cancer therapies may be used to treat prostate cancer, bladder cancer, colorectal cancer, renal cancer, hepatocellular cancer, lung cancer, ovarian cancer, cervical cancer, head and neck cancer, melanoma, neuroendocrine cancers, brain tumors, bone cancer, or soft tissue sarcoma.
Combination Therapies
In one embodiment, a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with one or more additional therapeutic agents to treat cancers or inflammatory disorders. The one or more additional therapeutic agents may be a chemotherapeutic agent, a radiotherapy, a targeted therapy, an immunotherapeutic agent or any current best of care treatment, either as a small molecule or a biologic nature.
Targeted therapies include but not limit to an inhibitor to cyclin-dependent kinase (CDK) such as CDK1, CDK2, CDK4/6, CDK7, and CDK9, Janus kinase (JAK) such as JAK1, JAK2 and/or JAK3 , spleen tyrosine kinase (SYK) , Bruton’s tyrosine kinase (BTK) , mitogen-activated protein kinase (MEK) such as MEK 1 and MEK2, bromodomain containing protein (BRD) such as BRD4, isocitrate dehydrogenase (IDH) such as IDH1, histone deacetylase (HDAC) , PI3K kinases or any combination thereof
Chemotherapeutic agents may be categorized by their mechanism of action into: alkylating agents, antimetabolites, anti-microtubule agents, topoisomerase inhibitors and cytotoxic agents. A compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with chemotherapeutics to sensitize and improve the efficacy of certain chemotherapeutic agents to treat blood or solid tumors.
The immunotherapeutic agents include and are not limited to therapeutic antibodies, small molecules and vaccines suitable for treating patients; such as IDO1 and TDO2 inhibitors, A2A receptor inhibitors, arginase inhibitors, toll-like receptor agonists, chemokine regulators (including CCR and CXCR families) , check point blockage antibodies such as antibodies that regulate PD-1, PD-L1, CTLA-4, OX40–OX40 ligand, LAG3, TIM3, or any combination thereof.
Radiotherapy is part of cancer treatment to control or kill malignant cells and commonly applied to the cancerous tumor because of its ability to control cell growth. A compound of Formula (I)  and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with radiotherapy, to improve the efficacy of radiotherapy to treat blood or solid tumors, or with surgery, chemotherapy, immunotherapy and combination of the four.
In certain embodiments, a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof may be used in combination with one or more additional therapeutic agents to treat patients who are substantially refractory to at least one chemotherapy treatment, or in relapse after treatment with chemotherapy.
Pharmaceutical Compositions
In another aspect, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. The pharmaceutical composition can be formulated for particular routes of administration such as oral administration, parenteral administration, and topical administration, etc.
Compositions intended for oral use are prepared according to any method known in the art for the manufacture of pharmaceutical compositions and can be prepared in the form of tablets, pills, powders, suspensions, emulsions, solutions, syrups, and capsules. Oral composition may contain the active ingredient in admixture with nontoxic pharmaceutically acceptable excipients which are suitable for the manufacture of tablets. The tablets are uncoated or coated by known techniques to delay disintegration and absorption in the gastrointestinal tract and thereby provide a sustained action over a longer period. Formulations for oral use can be presented as hard gelatin capsules wherein the active ingredient is mixed with an inert solid diluent, for example, calcium carbonate, calcium phosphate or kaolin, or as soft gelatin capsules wherein the active ingredient is mixed with water or an oil medium, for example, peanut oil, liquid paraffin or olive oil.
Certain injectable compositions are aqueous isotonic solutions or suspensions, and suppositories are advantageously prepared from fatty emulsions or suspensions.
Suitable compositions for transdermal application include an effective amount of a compound of the invention with a suitable carrier. Carriers suitable for transdermal delivery include absorbable pharmacologically acceptable solvents to assist passage through the skin of the host. For example, transdermal devices are in the form of a bandage comprising a backing member, a reservoir containing the compound optionally with carriers, optionally a rate controlling barrier to deliver the compound of the skin of the host at a controlled and predetermined rate over a prolonged period of time, and means to secure the device to the skin.
Suitable compositions for topical application, e.g., to the skin and eyes, include aqueous solutions, suspensions, ointments, creams, gels or spray formulations, e.g., for delivery by aerosol or the like. Such topical delivery systems will in particular be appropriate for dermal application, e.g., for the treatment of skin cancer, e.g., for prophylactic use in sun creams, lotions, sprays and the like.
As used herein a topical application may also pertain to an inhalation or to an intranasal application. They may be conveniently delivered in the form of a dry powder (either alone, as a mixture, for example a dry blend with lactose, or a mixed component particle, for example with phospholipids) from a dry powder inhaler or an aerosol spray presentation from a pressurized container, pump, spray, atomizer or nebulizer, with or without the use of a suitable propellant.
The invention further provides pharmaceutical compositions and dosage forms that comprise one or more agents that reduce the rate by which the compound of the present invention as an active ingredient will decompose. Such agents, which are referred to herein as "stabilizers, " include, but are not limited to, antioxidants such as ascorbic acid, pH buffers, or salt buffers, etc.
Modes of Administration and Dosing
The pharmaceutical compositions may be administered in either single or multiple doses. A compound of Formula (I) and (Ia) , or a pharmaceutically acceptable salt, prodrug, or solvate thereof can be formulated so as to provide the desired release schedule of the active ingredient based on the therapeutic treatment purpose.
The pharmaceutical composition is preferably made in the form of a dosage unit containing a particular amount of the active ingredient in the form of tablets, pills, powders, suspensions, emulsions, solutions, syrups, and capsules. For example, these may contain an amount of active ingredient from about 0.1 to 1000 mg, preferably from about 0.1 to 500 mg. A suitable daily dose for a human or other mammal may vary widely depending on the condition of the patient and other factors, but, once again, can be determined using routine methods. The daily dose can be administered in one to four doses per day. For therapeutic purposes, the active compounds of this invention are ordinarily combined with one or more adjuvants appropriate to the indicated route of administration drops suitable for administration to the eye, ear, or nose. A suitable topical dose of active ingredient of a compound of the invention is 0.1 mg to 150 mg administered one to four, preferably one or two times daily. For topical administration, the active ingredient may comprise from 0.001 %to 10%w/w, e.g. from 1 %to 2%by weight of the formulation, preferably not more than 5%w/w, and more preferably from 0.1 %to 1 %of the formulation.
In a particular embodiment, the method comprises administering to the subject an initial daily dose of about 0.1 to 500 mg of a compound of Formula (I) and (Ia) and increasing the dose by increments until clinical efficacy is achieved. Increments of about 5, 10, 25, 50, or 100 mg can be used to increase the dose. The dosage can be increased daily, every other day, twice per week, or once per week.
Synthesis of the Compounds of Formula (I)
The compounds of Formula (I) or (Ia) may be prepared using the methods disclosed herein and routine modifications thereof, which will be apparent given the disclosure herein and methods are well known in the art. Conventional and well-known synthetic methods may be used in addition to the teachings herein. The synthesis of representative compounds described herein may be accomplished as described in the following examples. If available, reagents may be purchased commercially, e.g., from Sigma Aldrich or other chemical suppliers.
General
Reagents and solvents used below can be obtained from commercial sources.  1H-NMR spectra were recorded on a Bruker 400 MHZ NMR spectrometer. Significant peaks are tabulated in the order: multiplicity (s, singlet; d, doublet; t, triplet; q, quartet; m, multiplet; brs, broad singlet) , coupling constant (s) in Hertz (Hz) and number of protons. Mass spectrometry results are reported as the ratio of mass over charge, followed by the relative abundance of each ion (in parentheses Electrospray ionization (ESl) mass spectrometry analysis was conducted on an Shimadzu LC/MSD electrospray mass spectrometer.
Synthetic Reaction
The terms “solvent” , “inert organic solvent” , or “inert solvent” refer to a solvent inert under the conditions of the reaction being described in conjunction therewith (including, for example, benzene, toluene, acetonitrile, tetrahydrofuran ( “THF” ) , dimethylformamide ( “DMF” ) , ethyl acetate (EA or EtOAc) , dichloromethane (DCM) , diethyl ether, methanol, pyridine and the like. Unless specified to the contrary, the solvents used in the reactions of the present invention are inert organic solvents, and the reactions are carried out under an inert gas, preferably nitrogen and argon.
Synthesis of intermediate A:
Figure PCTCN2020101409-appb-000036
Step 1. To a solution of methyl propargylate (25.0 g, 255 mmol) in DCM (100 mL) , morpholine (22.2 g, 255 mmol) was added dropwise at 0 ℃. The mixture was stirred at rt for another 3 hours . The mixture was then concentrated and the residue was dissolved in CH 3CN (300 mL) . This solution was named as C. To a solution of 4-bromo-2-chloroaniline (52.8 g, 255 mmol) in 4N HCl (255 mL) at 0 ℃, sodium nitrite (17.6 g, 255 mmol) in water was added carefully within  45 min. After addition, the solution was stirred at 0 ℃ for another 1 hour. This solution was named as B. The above solution B was added carefully to the solution C with stirring at 0 ℃. After addition, the mixture was stirred at rt for another 3 hours. Then the mixture was filtered and the filtered cake was washed with water and dried to give the title product (17.7 g, 21.7%) as a yellow solid.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 14.52 (s, 0.6H) , 13.23 (s, 0.4H) , 9.88 (s, 0.6H) , 9.55 (s, 0.4H) , 7.89 (s, 1H) , 7.72 -7.65 (m, 2H) , 3.86 (d, J = 15.6 Hz, 3H) .
Step 2. A solution of (Z) -methyl 2- ( (4-bromo-2-chlorophenyl) diazenyl) -3-oxopropanoate (5.00 g, 15.6 mmol) in conc. H 2SO 4 (50.0 mL) was stirred at 100 ℃ for 10 h under Ar. The mixture was cooled to rt and poured into the ice water (200 mL) . The mixture was filtered and the filter solid was dissolved in NaOH (2 M) solution (50.0 mL) and extracted with ethyl acetate (50.0 mL X 3) . And then the water phase was adjusted pH= 3 with HCl solution (2 M) and extracted with ethyl acetate (50.0 mL X 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure to give the residue (2.00 g) , which was recrystallized to give 6-bromo-8-chlorocinnoline-3-carboxylic acid (1.20 g, 26.9%) as a brown solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 288.9.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 13.99 (s, 1H) , 8.89 (s, 1H) , 8.62 (d, J =1.6 Hz, 1H) , 8.51 (d, J = 2.0 Hz, 1H) .
Step 3. To a solution of 6-bromo-8-chlorocinnoline-3-carboxylic acid (380 mg, 1.33 mmol) in MeCN (10.0 mL) was added DPPA (diphenyl phosphoryl azide) (500 uL) and Et 3N (350 uL) at rt.The mixture was stirred at rt for 20 min, then the mixture was stirred at 70 ℃ for 50 min. The mixture was diluted with toluene (10.0 mL) and heated to 100 ℃. H 2O (5.00mL) was added at 100 ℃ and stirred at 100 ℃ for another 3 h. The mixture was cooled rt and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (10.0 mL X 3) . The combined organic layers was dried by Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure to give the residue, which was purified by silica gel column chromatography (PE: EA=10: 1-1: 1, v/v) to give 6-bromo-8-chlorocinnolin-3-amine as intermediate A (120 mg, 34.9%) as a brown solid. LC-MS (ESI) [M+CH 3CN]  + 257.9.
Synthesis of 6-bromo-8-chloro-7-fluorocinnolin-3-amine (Intermediate B)
Figure PCTCN2020101409-appb-000037
Step 1. NBS (N-bromosuccinimide) (129 g, 1.05 eq) was added to a solution of 2-chloro-3-fluoroaniline (100 g, 687 mmol) in DMF (500 mL) at 0 ℃. The resulted mixture was stirred at room temperature for 16 h before pouring it into water (1000 mL) and the resulted solid was filtered, washed with water and dried to give an off-white solid (140 g, 91%) . LCMS (ESI) [M+H]  + 226.
Step 2. To a solution of ethyl propargylate (50 g, 510 mmol) in DCM (200 mL) , morpholine (44.4 mL, 510 mmol) is added dropwise at 0 ℃. The mixture was stirred at rt for another 3 hours . The mixture is then concentrated and the residue was dissolved in CH 3CN (600 mL) . This solution is named as C. To a solution of 4-bromo-2-chloro-3-fluoroaniline (123 g, 510 mmol) in 4N HCl (510 mL) at 0 ℃, sodium nitrite (33.3 g, 510 mmol) in water (100 mL) is added carefully within 45 min. After all addition, the solution is stirred at 0 ℃ for another 1 hour. This solution is named as D. The above solution D is added carefully to the solution C with stirring at 0 ℃. After all addition, the mixture is stirred at rt for another 3 hours. Then the mixture is filtered and the filtered cake is washed with water and dried to give the title product (100 g crude) . The crude material was slurried with EtOAc (300 ml) , filtered and dried to give a bright yellow solid (73 g, 38%) . LCMS (ESI) [M+H]  + 353.
Step 3. A solution of ethyl (Z) -2- ( (4-bromo-2-chloro-3-fluorophenyl) diazenyl) -3-oxopropanoate (68 g, 193 mmol) in conc. H 2SO 4 (500 mL) is stirred at 100 ℃ for 10 h under Ar. The mixture is cooled to rt and poured into the ice water (2000 mL) . The mixture is filtered and dried to give a yellow solid (53 g, 90%) . LCMS (ESI) [M+H]  + 307.
Step 4. To a solution of 6-bromo-8-chloro-7-fluorocinnoline-3-carboxylic acid (307 mg, 1.00 mmol) in MeCN (10.0 mL) is added DPPA (500 uL) and Et 3N (350 uL) at rt. The mixture is stirred at rt for 20 min, then the mixture is stirred at 70℃ for 50 min. The mixture is diluted with toluene (10.0 mL) and heated to 100 ℃. H 2O (5.00mL) is added at 100 ℃ and stirred at 100 ℃for another 3 h. The mixture is cooled rt and concentrated under reduced pressure. The residue is diluted with H 2O (20.0 mL) and extracted with ethyl acetate (20.0 mL X 3) . The combined organic layers was dried by Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure to give the residue, which is purified by silica gel column chromatography (PE: EA=10: 1-1: 1, v/v) to give 6-bromo-8-chloro-7-fluorocinnolin-3-amine (Intermediate B) .
General procedures to prepare final compounds:
General procedure 1:
Figure PCTCN2020101409-appb-000038
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (Compound 1)
Step a. N- (6-bromo-8-chlorocinnolin-3-yl) -N- (cyclopropanecarbonyl) cyclopropane carboxamide
Figure PCTCN2020101409-appb-000039
To a solution of 6-bromo-8-chlorocinnolin-3-amine (120 mg, 0.464 mmol) in DCM (2.0 mL) was added cyclopropanecarbonyl chloride (121 mg, 1.16 mmol) and Et 3N (141 mg, 1.39 mmol) at rt. The mixture was stirred at r t for 6 h under Ar. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (10.0 mL X 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure to give the residue, which was purified by silica gel column chromatography (PE: EA=10: 1-1: 1, v/v) to give N- (6-bromo-8-chlorocinnolin-3-yl) -N-(cyclopropanecarbonyl) cyclopropanecarboxamide (100 mg, 54.5%) as colorless oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 395.9.
Step b. N- (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide
Figure PCTCN2020101409-appb-000040
A mixture of N- (6-bromo-8-chlorocinnolin-3-yl) -N- (cyclopropanecarbonyl) cyclopropane-carboxamide (MC18-673-066-P1) (100 mg, 0.253 mmol) , 4-methyl-3- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) pyridine (66.7 mg, 0.304 mmol) , Pd (dppf) Cl 2 (37.4 mg, 0.051 mmol) , Na 2CO 3 (54.0 mg, 0.509 mmol) in dioxane (5 mL) and H 2O (1.00 mL) was stirred at 90 ℃ for 2 h under N 2 The mixture was cooled to rt and concentrated under reduced pressure to give the residue, which was diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (10.0 mL X 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (PE: EA=10: 1-1: 1, v/v) to give N- (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (80.0 mg, 93.2%) as white oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 339.1.
Step c. N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide
Figure PCTCN2020101409-appb-000041
A mixture of N- (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (MC18-673-067-P1) (80 mg, 0.237 mmol) , diphenylmethanimine (47.2 mg, 0.261 mmol) , Pd (OAc)  2 (11.0 mg, 0.048 mmol) , Xantphos (27.7 mg, 0.048 mmol) and Cs 2CO 3 (91 mg, 0.474 mmol) in toluene (2.00 mL) and DMF (2.00 mL) was heated in a microwave at 150 ℃ for 3 h under N 2. The mixture was cooled to rt and diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (10.0 mL X 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure to give the residue, which was purified by silica gel column chromatography (PE: EA=10: 1-1: 1, v/v) to give N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (50.0 mg, 43.63 %) as a white oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 484.1.
Step d. N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (Compound 1)
Figure PCTCN2020101409-appb-000042
To a solution of N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (MC18-673-068-P1) (50.0 mg, 0.104 mmol) in THF (3.00 mL) was added HCl/Dioxane (4.0 M, 3.00 mL) at rt. The mixture was stirred at rt for 30 min. The mixture was diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (5.00 mL X 3) . The water phase  was adjusted pH = 10 with aq. NaHCO 3 and extracted with ethyl acetate (5.00 mL X 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4 and concentrated under reduced pressure to give the residue, which was recrystallizated with ether to give N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (9.96 mg, 30.0%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 320.1.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ 8.57 (s, 1H) , 8.39 (s, 2H) , 7.39 -7.36 (m, 1H) , 6.95 -6.94 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 6.80 -6.79 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 2.37 (s, 3H) , 2.06 -2.00 (m, 1H) , 1.04 -1.03 (m, 2H) , 0.96 -0.94 (m, 2H) .
General Procedure A:
A mixture of halides (0.237 mmol) , diphenylmethanimine (47.2 mg, 0.261 mmol) , Pd (OAc)  2 (11.0 mg, 0.048 mmol) , Xantphos (27.7 mg, 0.048 mmol) and Cs 2CO 3 (91 mg, 0.474 mmol) in toluene (2 mL) and DMF (2.00 mL) was heated in a microwave at 150 ℃ for 3 h under N 2. The mixture was cooled to room temperature and diluted with H 2O (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL X 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure to give the residue, which was purified by silica gel column chromatography or prep-HPLC to give the desired product.
General Procedure B:
To a solution of amine (0.923 mmol) and halides (2.31 mmol) in dioxane (10 mL) was added t-butylBrettPhos (225 mg, 0.464 mmol) , tert-BuBrettPhos-Pd-G3 (131 mg, 0.138 mmol) and cesium carbonate (906 mg, 2.78 mmol) at room temperature. The mixture was irradiated in the microwave at 110 ℃ for 2 hours under Ar. The mixture was cooled to room temperature. The mixture was diluted with water (50 mL) , extracted with dichloromethane (50 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulphate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography or prep-HPLC to give the desired product.
General Procedure C:
A solution of diphenylmethanimine compound (0.058 mmol) in MeCN (5 mL) was added TFA/water (2 drops/2 drops) at RT. The mixture was stirred at RT for 1 h. The solvent was removed under reduced pressure and the residue was diluted with NaHCO 3 solution (30 mL) and extracted with EA (20 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered and  concentrated. The residue was purified by silica gel column chromatography or prep-HPLC to give the desired compound.
General Procedure D:
A mixture of halides (0.253 mmol) , boronic acid or boronic ester (0.304 mmol) , Pd (dppf) Cl 2 (37.4 mg, 0.051 mmol) and Na 2CO 3 (54.0 mg, 0.509 mmol) in dioxane (5 mL) and H 2O (1 mL) was stirred at 90 ℃ for 2 h under N 2. The mixture was cooled to RT and concentrated under reduced pressure to give the residue, which was diluted with H 2O (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL X 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography or prep-HPLC to give the desired product.
General Procedure E:
To a solution of Boc protection compound (0.0236 mmol) in DCM (1.50 mL) was TFA (two drops) and stirred at RT for 1 h. The mixture was concentrated and purified by prep-HPLC (base, NH 3H 2O) to give the desired product.
General Procedure F:
A solution of halides (0.0220 mmol) , boronic acid or boronic ester (0.0.0266 mmol) , Xphos Pd G3 (3.70 mg, 0.00443 mmol) , Xphos (4.20 mg, 0.00886 mmol) and K 2CO 3 (6.10 mg, 0.0443 mmol) in dioxane/H 2O (2 mL/0.5 mL) was stirred to 80 ℃ under Ar for 2 h. The reaction mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EA (20 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered, concentrated and purified by prep-TLC or prep-HPLC to give the desired product.
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydrofuran-2-carboxamide (Compound 2)
Figure PCTCN2020101409-appb-000043
Preparation of Intermediate C:
A solution of 6-bromo-8-chlorocinnolin-3-amine (intermediate A, 194 mg, 0.75 mmol) , 4-methyl-3- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) pyridine (198 mg, 0.90 mmol) , Pd (dppf) Cl 2 (110 mg, 0.15 mmol) , Na 2CO 3 (160 mg, 1.5 mmol) in dioxane (10 mL) and H 2O (2.00 mL) is stirred at 90 ℃ for 2 h under N 2 The mixture is cooled to rt and concentrated under reduced pressure to give the residue, which is diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (30.0 mL X 3) . The combined organic layers is dried over Na 2SO 4 and concentrated under reduced pressure. The residue is purified by silica gel column chromatography (PE: EA=10: 1-1: 1, v/v) to give 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (Intermediate C) .
Step 1. To a solution of tetrahydrofuran-2-carboxylic acid (36.0 mg, 0.308 mmol) was added DMF (1 drop) and oxalyl chloride (196 mg, 1.54 mmol) at 0℃ under Ar. The reaction mixture was stirred at RT for 1 h. The mixture was concentrated and dried, and then was dissolved in DCM (2 mL) and added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (100 mg, 0.370 mmol) and pyridine (87.7 mg, 1.11 mmol) in DCM (5 mL) at 0℃ under Ar slowly. The mixture was stirred at RT for 16 h. The reaction mixture was diluted with water (50 mL) and extracted with EA (30 mL x 3) . The organic layer was washed by brine (50 mL x 3) and dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered, concentrated and purified by TLC (DCM: MeOH = 30: 1) to give N- (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydrofuran-2-carboxamide (80.0 mg, 0.217 mmol, 58.8 %) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 369.0.
Step 2. According to the method described in general procedure A (130℃, 3h) , N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydrofuran-2-carboxamide was synthesized (34.3 mg, 0.067 mmol, 41.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 514.1.
Step 3. According to the method described in general procedure C (rt, 1h) , the title product (Compound 2) was synthesized (7.08 mg, 0.020 mmol, 34.7 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 350.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 10.60 (s, 1H) , 8.55 (s, 1H) , 8.48 (d, J =5.2 Hz, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.38 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.02 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.77 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.74 (brs, 2H) , 4.64 –4.61 (m, 1H) , 4.07 –4.02 (m, 1H) , 3.91 –3.86 (m, 1H) , 2.32 (s, 3H) , 2.30 –2.25 (m, 1H) , 2.07 –2.01 (m, 1H) , 1.97 –1.90 (m, 2H) .
Preparation of 2- (4- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (Compound 3)
Figure PCTCN2020101409-appb-000044
Step 1. To a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (intermediate C, 160 mg, 0.592mmol) , 2- (4-bromo-1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (132 mg g, 0.66 mmol) (WO2018183964A1) , t-BuBrettPhos Pd G3 (205 mg, 0.237 mmol) , t-BuBrettPhos (144 mg, 0.296 mmol) in 1, 4-dioxane (20 mL) is added cesium carbonate (0.97g, 2.96 mmol) at 25℃. The mixture is degassed and heated at 120 ℃ for 6h under nitrogen atmosphere. The reaction is concentrated in vacuo. The residue is purified by flash chromatography on silica gel eluting with  dichloromethane/methanol (9/1) to afford 2- (4- ( (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile.
Step 2. A mixture of 2- (4- ( (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (80.0 mg, 0.206 mmol) , diphenylmethanimine (41.0 mg, 0.227 mmol) , Pd (OAc)  2 (9.2 mg, 0.041 mmol) , Xantphos (24.0 mg, 0.041 mmol) and Cs 2CO 3 (134 mg, 0.412 mmol) in toluene (2.00 mL) and DMF (2.00 mL) is heated in a microwave at 150 ℃ for 3 h under N 2. The mixture is cooled to rt and diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (20.0 mL X 3) . The combined organic layers is dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure to give the residue, which is purified by silica gel column chromatography (PE: EA=10: 1-1: 1, v/v) to give 2- (4- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile.
Step 3. To a solution of 2- (4- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (65 mg, 0.122mmol) in THF (3.00 mL) is added HCl/Dioxane (4.0 M, 3.00 mL) at rt. The mixture is stirred at rt for 30 min. The mixture is diluted with H 2O (10.0 mL) and extracted with ethyl acetate (5.00 mL X 3) . The water phase is adjusted pH = 10 with aq. NaHCO 3 and extracted with ethyl acetate (10.00 mL X 3) . The combined organic layers is dried over Na 2SO 4 and concentrated under reduced pressure to give the residue, which is recrystallized with ether to give 2- (4- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile.
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 4)
Figure PCTCN2020101409-appb-000045
Step 1. A solution of (trans) -2-cyanocyclopropanecarboxylic acid (173 mg, 1.33 mmol) and SOCl 2 (950 mg, 7.98 mmol) in toluene (8 mL) was heated to 80℃ for 2 h. The solvent was removed under reduced pressure. The mixture was dissolved in DCM (2 mL) and was added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (120 mg, 0.440 mmol) and pyridine (0.5 mL) in DCM (18 mL) at 0 ℃ under Ar. The mixture was stirred at rt for 2 h. And then diluted with water (30 mL) , extracted with DCM (20 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered and concentrated to get the crude product, which was washed by EA and filtered to give (trans) -N- (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropanecarboxamide (110 mg, 0.303 mmol, 68.3 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 363.9.
Step 2. According to the method described in general procedure A (130 ℃ for 3 h) , (1R, 2R) -2-cyano-N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (25.0 mg, 0.049 mmol, 16.2%) as yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  +509.0.
Step 3. According to the method described in general procedure C (rt for 1 h) , compound 4 was synthesized (7.00 mg, 0.020 mmol, 41.3 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 345.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.86 (s, 1H) , 8.51 (s, 1H) , 8.47 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 8.43 (s, 1H) , 7.37 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 6.98 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.76 -6.75 (m, 3H) , 2.86 –2.83 (m, 1H) , 2.31 (s, 3H) , 2.22 –2.17 (m, 1H) , 1.67 –1.64 (m, 1H) , 1.48 –1.46 (m, 1H) .
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclobutane-1-carboxamide (Compound 5)
Figure PCTCN2020101409-appb-000046
Step 1. To a solution of 2-cyanocyclobutane-1-carboxylic acid (111 mg, 0.886 mmol) and DMF (1 drop) in DCM (3 mL) was added oxalyl chloride (337 mg, 2.66 mmol) dropwise at 0℃. After being stirred at room temperature for 1 hour, the mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with DCM (1 mL) and added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (120 mg, 0.443 mmol) and pyridine (105 mg, 1.33 mmol) in DCM (2 mL) dropwise at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 16 h. The mixture was diluted with water (10 mL) , extracted with DCM (10 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography eluted with DCM/MeOH (100: 1～20: 1) to give the title product (80 mg, yield: 48.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 378.0.
Ste p 2. According to the method described in general procedure A (150 ℃ for 3h) , N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclobutane-1-carboxamide was synthesized (3.00 mg, 21.7%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 523.0.
Step 3. According to the method described in general procedure C, Compound 5 was synthesized (2.08 mg, 0.006 mmol, 20.2 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 359.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.41 (s, 1H) , 8.58 (s, 1H) , 8.47 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 8.44 (s, 1H) , 7.37 (d, J =4.8 Hz, 1H) , 7.00 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.76 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 6.72 (brs, 2H) , 3.89 –3.82 (m, 1H) , 3.67 –3.58 (m, 1H) , 2.32 (s, 3H) , 2.26 –2.21 (m, 4H) .
2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 6)
Figure PCTCN2020101409-appb-000047
Step 1. According to the method described in general procedure B (110℃ for 2h under ) , 2- ( (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (95.0 mg, 22.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 462.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 10.33 (s, 1H) , 8.53 -8.50 (m, 2H) , 8.34 (s, 1H) , 7.93 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 7.79 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.41 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 6.06 (s, 1H) , 5.03 (s, 2H) , 4.61 -4.57 (m, 1H) , 3.82 -3.78 (m, 2H) , 3.03 -3.00 (m, 2H) , 2.36 (s, 3H) , 1.12 (d, J = 6.8 Hz, 6H) .
Step 2. According to the method described in general procedure A (130℃ for 3h under microwave) , 2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (14.0 mg, 26.6%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 607.2
Step 3. According to the method described in general procedure C (room temperature for 30 min) , Compound 6 was synthesized (9.06 mg, 59.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 443.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 9.85 (s, 1H) , 8.44 (s, 2H) , 8.03 (s, 1H) , 7.36 (s, 1H) , 6.83 (s, 1H) , 6.53 (s, 3H) , 6.04 (s, 1H) , 5.00 (s, 2H) , 4.59 (s, 1H) , 3.79 (s, 2H) , 3.00 (s, 2H) , 2.30 (s, 3H) , 1.12 (d, J = 4.4 Hz, 6H) .
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1- (cyanomethyl) azetidine-2-carboxamide (Compound 7)
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1- (cyanomethyl) azetidine-2-carboxamide is prepared according to the general procedure 2, via intermediate C and 1- (cyanomethyl) azetidine-2-carbonyl chloride, generated in situ from 1- (cyanomethyl) azetidine-2-carboxylic acid and thionyl chloride in the same manner of compound 2.
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxamide (Compound 8)
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxamide is prepared according to the general procedure 2, via intermediate C and 1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carbonyl chloride, generated in situ from 1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxylic acid (preparation via CuI-catalyzed coupling reaction of azetidine-2-carboxylic acid and 4-bromo-1-methyl-1H-pyrazole reported by PCT Int. Appl., 2010147791) and thionyl chloride.
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-2-carboxamide (Compound 9)
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-2-carboxamide is prepared according to the general procedure 2, via intermediate C and tetrahydro-2H-pyran-2-carbonyl chloride (Packiarajan, Mathivanan et al , Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters, 23 (14) , 4037-4043; 2013) .
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-3-carboxamide (Compound 10)
Figure PCTCN2020101409-appb-000048
Step 1. A solution of tetrahydro-2H-pyran-3-carboxylic acid (145 mg, 1.11 mmol) in SOCl 2 (2 mL) was heated to 80℃ for 2 h. After cooling to rt, the solvent was removed under reduced pressure at rt. The mixture was dissolved in DCM (2 mL) and was added to a solution of 8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (100 mg, 0.370 mmol) and TEA (0.8 mL) in DCM (5 mL) at 0 ℃ under Ar. The mixture was stirred at rt for 16 h. and then diluted with water (30 mL) , extracted with DCM (20 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered, concentrated and purified by silica gel column chromatography (DCM: MeOH=50: 1) to give N-(8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-3-carboxamide (72.7 mg, 0.191 mmol, 51.5 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 383.0.
Step 2. According to the method described in general procedure A (150℃ for 3h) , N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-3- carboxamide was synthesized (14.9 mg, 0.028 mmol, 15.4%) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 528.1.
Step 3. According to the method described in general procedure C (room temperature for 1h) , compound 10 was synthesized (1.18 mg, 0.003 mmol, 14.3 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 364.1.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ 8.60 (s, 1H) , 8.41 (br s, 1H) , 7.40 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 6.97 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 6.81 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 4.12 -4.09 (m, 1H) , 3.92 -3.89 (m, 1H) , 3.69 -3.64 (m, 1H) , 3.54 -3.47 (m, 1H) , 2.93 -2.89 (m, 1H) , 2.38 (s, 3H) , 2.18 -2.08 (m, 1H) , 1.94 -1.89 (m, 1H) , 1.79 -1.73 (m, 2H) .
N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydrofuran-3-carboxamide (Compound 11)
Compound 11 was prepared in a similar manner as the preparation of Compound 10 (8.71 mg, 32.2%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 350.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ11.38 (s, 1H) , 8.57 (s, 1H) , 8.48 -8.44 (m, 2H) , 7.37 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 6.99 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 6.75 -6.71 (m, 3H) , 4.02 -3.97 (m, 1H) , 3.82 -3.73 (m, 3H) , 3.47 -3.44 (m, 1H) , 2.31 (s, 3H) , 2.17 -2.12 (m, 3H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (12)
Figure PCTCN2020101409-appb-000049
Step 1. According to the method described in similar procedure as compound 4, a racemic mixture of tert-butyl 7- (8-chloro-3- ( (1R, 2R) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate and tert-butyl 7- (8-chloro-3- ( (1S, 2S) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1- carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (130 mg, 56.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 574.2.
Step 2. According to the method described in general procedure A (130℃ for 3h, tert-butyl 7- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (30 mg, 24.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 721.1.
Step 3. According to the method described in general procedure C, tert-butyl 7- (8-amino-3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (20 mg, 87.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 557.3.
Step 4. According to the method described in general procedure E, the title product (69) was synthesized (8.52 mg, 57.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 457.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.48 (s, 1H) , 8.51 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.84 (s, 1H) , 6.68 (s, 1H) , 6.62 (s, 2H) , 5.67 (s, 1H) , 4.27 (s, 2H) , 3.78 (s, 3H) , 3.36 -3.32 (m, 2H) , 2.30 -2.23 (m, 2H) , 2.03 (s, 3H) , 1.43 -1.41 (m, 1H) , 1.23 (s, 1H) .
2- ( (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 13)
Figure PCTCN2020101409-appb-000050
Step 1. According to general procedure A, intermediate D was synthesized (80 mg, 0.187 mmol, 48.3 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 428.0.
Step 2. According to the method described in general procedure B (via intermediate D and 2-bromo-6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one, a known compound prepared according to WO2018183964A1) , tert-butyl 7- (8-chloro-3- ( (6-isopropyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-2-yl) amino) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (58 mg, 0.0939 mmol, 26.7 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 619.2.
Step 3. According to the method described in general procedure A, 2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (17.0 mg, 0.0256 mmol, 28.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 664.1.
Step 4. According to the method described in general procedure C, Compound 13 was synthesized (1.43 mg, 0.00287 mmol, 11.2 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 500.2.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ 8.00 (s, 1H) , 7.38 (s, 1H) , 6.79 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.59 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.06 (s, 1H) , 5.06 (s, 1H) , 4.77 -4.74 (m, 1H) , 4.57 (s, 1H) , 4.39 -4.36 (m, 2H) , 3.88 -3.85 (m, 2H) , 2.49 -3.47 (m, 2H) , 3.13 -3.11 (m, 2H) , 2.11 (s, 3H) , 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 6H) .
2- (4- ( (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (Compound 14)
2- (4- ( (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile is prepared in a similar manner as compound 13, via intermediate E and 2- (4-bromo-1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (WO2018183964A1) .
2- ( (8-amino-6- (5-amino-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 15)
2- ( (8-amino-6- (5-amino-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one is prepared in a similar manner as compound 13, via (5- (bis (tert-butoxycarbonyl) amino) -4-methylpyridin-3-yl) boronic acid (WO2018183964A1) and 2-bromo-6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (WO2018183964A1) .
(trans) -N- (8-amino-6- (5-methoxy-4-methylpyridin-3-yl) isoquinolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 16)
Compound 16 is prepared in a similar manner as compound 13 via (5-methoxy-4-methylpyridin-3-yl) boronic acid (Biagetti, Matteo et al, US20150166549 A1) .
2- ( (8-amino-6- (5-methoxy-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 17)
2- ( (8-amino-6- (5-methoxy-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one is prepared in a similar manner as compound 13, via intermediate F and 2-bromo-6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (WO2018183964A1) .
6- (8-amino-3- ( (6-isopropyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-2-yl) amino) cinnolin-6-yl) -5-methylbenzo [d] oxazol-2 (3H) -one (Compound 18)
Compound 18 is prepared in a similar manner as compound 17 via (5-methyl-2-oxo-2, 3-dihydrobenzo [d] oxazol-6-yl) boronic acid (WO2018183964A1) .
(trans) -N- (8-amino-6- (5-methyl-2-oxo-2, 3-dihydrobenzo [d] oxazol-6-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 19)
Compound 19 is prepared according to the general procedure 1, via intermediate A, (5-methyl-2-oxo-2, 3-dihydrobenzo [d] oxazol-6-yl) boronic acid (WO2018183964A1) and 2-cyanocyclopropane-1-carbonyl chloride.
(trans) -N- (8-amino-6- (5- (dimethylphosphoryl) -2-methylphenyl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 20)
N- (8-amino-6- (5- (dimethylphosphoryl) -2-methylphenyl) cinnolin-3-yl) -1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxamide (Compound 21)
2- ( (8-amino-6- (5- (dimethylphosphoryl) -2-methylphenyl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 22)
Compound 20-22 are prepared according to the general procedures A-F.
N- (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (Compound 23)
Figure PCTCN2020101409-appb-000051
Step 1. To a solution of 4-bromo-2-chloro-3-fluoroaniline (3.00 g, 13.4 mmol) in 4.0 M HCl (14 mL) was added a water solution of NaNO 2 (0.970 g in 1.4 mL, 14.0 mmol) slowly at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. A acetonitrile solution of (E) -N, N-dimethyl-2-nitroethen-1-amine (1.55 g in 15 mL, 13.4 mmol) was added at 0℃. The reaction mixture was allowed to warm to r.t. and stirred for 3 hours. The reaction mixture was diluted with water (15  mL) . The resulting suspension was filtered. The filter cake was washed with cold Et 2O (10 mL) to give the product (3.50 g, 80.0%) as an orange solid. LC-MS (ESI) [M-H]  -323.8.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 13.70 (br s, 1H) , 11.15 –10.05 (m, 1 H) , 7.80 (d, J = 6.4 Hz, 1H) , 7.52 (d, J = 6.4 Hz, 1H) .
Step 2. A solution of (Z) -2- ( (Z) - (4-bromo-2-chloro-3-fluorophenyl) diazenyl) -2-nitroethen-1-ol (2.00 g, 6.16 mmol) in conc. H 2SO 4 (20 mL) under Ar was stirred at 100℃ for 8 hours. The reaction mixture was poured onto ice and then extracted with ethyl acetate (30 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate=10/1) to give the product (400 mg, 21.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 308.1.  1H NMR (400 MHz, CDCl 3) : δ 8.77 (s, 1H) , 8.36 (d, J = 6.4 Hz, 1H) .
Step 3. To a solution of 6-bromo-8-chloro-7-fluoro-3-nitrocinnoline (600 mg, 1.96 mmol) EtOH/H 2O (7.5 mL/2.5 mL) was added Fe (549 mg, 9.80 mmol) , NH 4Cl (520 mg, 9.80 mmol) . The resulting mixture was stirred at 80℃ for 1 hour. After being cooled to rt, the mixture was filtered and the filtrate was diluted with H 2O (50 mL) and extracted with EA (30 mL x 3) . The combined organic phase was dried over Na 2SO 4 and concentrated in vacuum to give the residue, which was purified by chromatography in silica gel (PE: EA = 20: 1 to 2: 1, v/v) to give the title compound (500 mg, yield 93.1%) as white solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 278.1
N- (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide is prepared according to the general procedure 1, via intermediate B, cyclopropanecarbonyl chloride and 4-methyl-3- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) pyridine (aknown compound from WO2018183964A1) .
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 24)
(trans) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 25)
N- (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclobutane-1-carboxamide (Compound 26)
2- (4- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -1H-pyrazol-1-yl) propanenitrile (Compound 27)
N- (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-2-carboxamide (Compound 28)
N- (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) tetrahydro-2H-pyran-3-carboxamide (Compound 29)
(trans) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 30)
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 31)
N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclobutane-1-carboxamide (Compound 32)
N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxamide (Compound 33)
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (5-methoxy-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5,6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 34)
(trans) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (5-methoxy-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 35)
6- (8-amino-7-fluoro-3- ( (6-isopropyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-2-yl) amino) cinnolin-6-yl) -5-methylbenzo [d] oxazol-2 (3H) -one (Compound 36)
(trans) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (5-methyl-2-oxo-2, 3-dihydrobenzo [d] oxazol-6-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 37)
N- (8-amino-6- (5- (dimethylphosphoryl) -2-methylphenyl) -7-fluorocinnolin-3-yl) -1- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-2-carboxamide (Compound 38)
N- (8-amino-6- (5- (dimethylphosphoryl) -2-methylphenyl) -7-fluorocinnolin-3-yl) -2-cyanocyclobutane-1-carboxamide (Compound 39)
(trans) -N- (8-amino-6- (5- (dimethylphosphoryl) -2-methylphenyl) -7-fluorocinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (Compound 40)
2- ( (8-amino-6- (5- (dimethylphosphoryl) -2-methylphenyl) -7-fluorocinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 41)
Compound 24 –41 are prepared according to the procedures described for corresponding de-fluoro analogs.
Preparation of 1- (2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethan-1-one (52)
Figure PCTCN2020101409-appb-000052
Step 1. According to the method described in general procedure B using 1- (2-chloro-7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethanone, 1- (2- ( (8-chloro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethan-1-one was synthesized (60.0 mg, 24.3%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 445.1.
Step 2. According to the method described in general procedure A (150℃ for 3h under microwave) , 1- (2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethan-1-one was synthesized (20.0 mg, 21.5%) as a brown solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 590.1.
Step 3. According to the method described in general procedure C (room temperature for 1h) , compound 52 was synthesized (5.60 mg, 51.9%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 426.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 10.34 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 8.70 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 8.47 -8.45 (m, 2H) , 7.54 -7.50 (m, 1H) , 7.37 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 7.26 -7.22 (m, 1H) , 6.89 -6.87 (m, 1H) , 6.61 -6.60 (m, 3H) , 4.60 (s, 1H) , 4.55 (s, 1H) , 3.78 -3.74 (m, 2H) , 2.98 -2.82 (m, 2H) , 2.32 (s, 3H) , 2.10 (d, J = 4.4 Hz, 3H) .
Preparation of 6- (4-methylpyridin-3-yl) -N3- (6- (methylsulfonyl) -5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridin-2-yl) cinnoline-3, 8-diamine (53)
Figure PCTCN2020101409-appb-000053
Synthesis of 2-chloro-6- (methylsulfonyl) -5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridine
To a solution of 2-chloro-5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridine dihydrochloride (400 mg, 1.66 mmol) in N, N-dimethylformamide (10 mL) was added triethylamine (836 mg, 8.26 mmol) and methanesulfonyl chloride (566 mg, 4.94 mmol) at 0 ℃. The mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The mixture was diluted with water (100 mL) , extracted with ethyl acetate (50 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulphate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate=1/1) to give 2-chloro-6-(methylsulfonyl) -5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridine (400 mg, 97.9%) as a white solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 247.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.42 (s, 2H) , 3.54 -3.51 (m, 2H) , 3.00 -2.97 (m, 5H) .
Compound 53 was prepared in a similar manner as compound 52 (3.00 mg, 27.1%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 462.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 10.38 (s, 1H) , 8.71 (s, 1H) , 8.48 -8.45 (m, 2H) , 7.53 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.37 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 7.24 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 6.89 (s, 1H) , 6.62 -6.60 (m, 3H) , 4.33 (s, 2H) , 3.54 -3.51 (m, 2H) , 3.00 -2.97 (m, 5H) , 2.32 (s, 3H) .
Preparation of 2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-7 (6H) -one (56)
Figure PCTCN2020101409-appb-000054
Step 1. To a solution of 2, 6-dichloronicotinaldehyde (700 mg, 4.00 mmol) , propan-2-amine (281 mg, 4.80 mmol) and Ti (i-PrO)  4 (400 mg, 1.40 mmol) in methanol (10 mL) was added NaBH 3CN (630 mg, 10.0 mmol) slowly at rt. The reaction mixture was stirred at 25℃ overnight and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography eluted with petroleum ether/ethyl acetate (10: 1 ～ 8: 1) to give the product (780 mg, 89.0%) as colorless liquid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 219.1.  1H NMR (400 MHz, CDCl 3) : δ 7.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 3.95 (s, 2H) , 2.95 -2.92 (m, 1 H) , 1.20 (d, J = 6.4 Hz, 6H) .
Step 2. To a solution of N- ( (2, 6-dichloropyridin-3-yl) methyl) propan-2-amine (850 mg, 3.88 mmol) , 3- (tert-butoxy) -3-oxopropanoic acid (622 mg, 3.88 mmol) and DIPEA (1.00 g, 7.76 mmol) in DMF (9 mL) was added HATU (1.92 g, 5.04 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with ethyl acetate (20 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate=10/1) to give the product (1.20 g, 90.7%) as a white solid. LC-MS (ESI) [M-56+H]  + 305.3.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.50 (s, 2H) , 4.23 –4.21 (m, 1 H) , 3.64 (s, 2H) , 1.51 (s, 9H) , 1.19 (d, J = 6.4 Hz, 1H) .
Step 3. To a solution of tert-butyl 3- ( ( (2, 6-dichloropyridin-3-yl) methyl) (isopropyl) amino) -3-oxopropanoate (1.00 g, 2.77 mmol) in DMF (20 mL) under Ar was added NaH (222 mg, 5.54 mmol) slowly at 0℃. The resulting mixture was stirred at 70℃ for 5 hours. The reaction mixture was diluted with aq. NH 4Cl (30 mL) , extracted with ethyl acetate (30 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate=5/1) to give the product (300 mg, 33.0%) as yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 325.1.  1H NMR (400 MHz, CDCl 3) : δ 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 5.00 -4.97 (m, 1 H) , 4.66 (s, 1H) , 4.55 (d, J = 15.6 Hz, 1H) , 4.23 (d, J =15.6 Hz, 1H) , 1.51 (s, 9H) , 1.22 (dd, J = 15.6 Hz, 6.4 Hz, 6H) .
Step 4. To a solution of tert-butyl 2-chloro-6-isopropyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridine-8-carboxylate (300 mg, 0.924 mmol) in dichloromethane (3 mL) was added TFA (0.6 mL) at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in dichloromethane (15 mL) and washed with aq. NaHCO 3 (15 mL X 3) . The organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The crude (180 mg, 87.0%) was used for the next step directly. LC-MS (ESI) [M+H]  + 225.1.
Compound 56 was prepared in a similar manner as compound 52 (1.63 mg, 44.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 440.2.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ 8.76 (s, 1H) , 8.42 –8.41 (m, 2H) , 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 6.95 (s, 1H) , 6.70 (s, 1H) , 4.94 –4.92 (m, 1H) , 4.44 (s, 2H) , 3.74 (s, 2H) , 2.40 (s, 3H) , 1.24 (d, J = 6.8 Hz, 6H) . In Figure 1, the following compounds are prepared according to the general procedures.
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (5-methyl-1H-imidazol-1-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 42) ;
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (thiazol-5-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 43) ;
2- ( (8-amino-6- (5-methyl-1H-imidazol-1-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 44) ;
2- ( (8-amino-6- (thiazol-5-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 45) ;
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (1-methyl-1H-imidazol-5-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 46) ;
2- ( (8-amino-6- (1-ethyl-1H-imidazol-5-yl) -7-fluorocinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 47) ;
2- ( (8-amino-6- (1-methyl-1H-imidazol-5-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 48) ;
2- ( (8-amino-6- (1-ethyl-1H-imidazol-5-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (Compound 49) ;
1- (2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-6 (5H) -yl) ethan-1-one (Compound 50) ;
7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) -N3- (6- (methylsulfonyl) -5, 6, 7, 8-tetrahydro-1, 6-naphthyridin-2-yl) cinnoline-3, 8-diamine (Compound 51) ;
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-5, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-7 (6H) -one (Compound 54) ;
2- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-5 (6H) -one (Compound 55) ;
2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-isopropyl-7, 8-dihydro-1, 6-naphthyridin-5 (6H) -one (Compound 57) ;
Figure PCTCN2020101409-appb-000055
Figure 1.
In Figure 2, the following compounds are prepared according to the general procedures.
7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) -N3- (5-morpholinopyridin-2-yl) cinnoline-3, 8-diamine (Compound 58) ;
7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) -N3- (5-morpholinopyrazin-2-yl) cinnoline-3, 8-diamine (Compound 59) ;
6- (4-methylpyridin-3-yl) -N3- (6-morpholinopyridazin-3-yl) cinnoline-3, 8-diamine (Compound 60) ;
6- (4-methylpyridin-3-yl) -N3- (5- (4- (methylsulfonyl) piperazin-1-yl) pyridin-2-yl) cinnoline-3, 8-diamine (Compound 61) ;
1- (4- (6- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) piperazin-1-yl) ethan-1-one (Compound 62) ;
4- (6- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) piperazin-2-one (Compound 63) ;
4- (6- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridazin-3-yl) thiomorpholine 1, 1-dioxide (Compound 64) ;
4- (6- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) thiomorpholine 1, 1-dioxide (Compound 65) ;
1- (6- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) pyrrolidin-2-one (Compound 66) ;
1- (6- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) piperidin-2-one (Compound 67) ;
1- (6- ( (8-amino-7-fluoro-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) azetidin-2-one (Compound 68) .
Figure PCTCN2020101409-appb-000056
Figure 2.
Preparation of N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) pyrido [3, 4-c] pyridazin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (69)
Figure PCTCN2020101409-appb-000057
Step 1. To a solution of tert-butyl methyl malonate (25 g, 133 mmol) in DMF (250 mL) was added NaH (4.83 g, 121 mmol) at 0℃. After being stirred at 0℃ for 1 hour, methyl 4, 6-dichloropyridazine-3-carboxylate (25 g, 121 mmol) was added at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 18 hours and then diluted with a. q. NH 4Cl (1 L) , extracted with ethyl acetate (200 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (PE/EA=3/1) to give 1- (tert-butyl) 3-ethyl 2- (6-chloro-3-(methoxycarbonyl) pyridazin-4-yl) malonate (25.0 g, 43.2%yield) as yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 359.2.
Step 2. To a solution of 1- (tert-butyl) 3-ethyl 2- (6-chloro-3- (methoxycarbonyl) pyridazin-4-yl)malonate (20.0 g, 55.7 mmol) in DCM (100 mL) was added TFA (50.0 mL) at 0℃. After being stirred at room temperature for 1.5 hours, the mixture was adjusted pH = 7 with a. q. NaHCO 3 and extracted with DCM (100 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (PE/EA=2/1) to give methyl 6-chloro-4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) pyridazine-3-carboxylate (13.7 g, 95.1%yield) as a white solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 258.8.  1H NMR (400 MHz, CDCl 3) : δ 7.52 (s, 1H) , 4.19 (q, J = 6.8 Hz, 2H) , 4.04 (s, 3H) , 4.02 (s, 2H) , 1.27 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
Step 3. A solution of methyl 6-chloro-4- (2-ethoxy-2-oxoethyl) pyridazine-3-carboxylate (12 g, 46.4 mmol) in NH 3/MeOH (200 mL, 7 mol/L) was stirred at 100℃ for 18 hours in a sealed tube. The mixture was cooled to room temperature and concentrated to give 3-chloropyrido [3, 4-c]pyridazine-6, 8-diol (8.5 g, 92.8%yield) as a red solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 198.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 4) : δ 10.06 (s, 1H) , 7.10 (s, 4H) , 6.75 (s, 1H) , 4.60 (s, 1H) .
Step 4. To a solution of DIEA (1.31 g, 10.2 mmol) in MeCN (30 mL) was added POBr 3 (7.30 g, 25.4 mmol) in one portion, and then 3-chloropyrido [3, 4-c] pyridazine-6, 8-diol (1.00 g, 5.08 mmol) at room temperature. The reaction was stirred at 90℃ for 1 hour. The cold mixture was poured into ice-water (100 mL) and extracted with ethyl acetate (100 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography eluted with petroleum ether/ethyl acetate (50: 1 ～ 40: 1) to give the product (400 mg, 24.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 323.8.
Step 5. A solution of 6, 8-dibromo-3-chloropyrido [3, 4-c] pyridazine (1.20 g, 3.72 mmol) in THF (20 mL) was added slowly to NH 3. H 2O (10 mL) at 0℃. The reaction mixture was stirred at r.t. for 16 hours. The mixture was concentrated to remove the solvent THF. The resulting suspension was diluted with MeOH (6 mL) . Then the mixture was filtered and dried to give the product (650 mg, 57.0%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 304.8.
Step 6. A mixture of 6, 8-dibromopyrido [3, 4-c] pyridazin-3-amine (650 mg, 2.14 mmol) and bis-2, 4-dimethoxybenzylamine (2.70 g, 8.55 mmol) in NMP (2 mL) was stirred at 120℃ for 16 hours. The cold mixture was poured into ice-water (10 mL) and extracted with ethyl acetate (20 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash column chromatography eluted with petroleum ether/ethyl acetate (65%: 35%) to give the product (140 mg, 12.1%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 541.9.
Step 7. To a solution of 6-bromo-N8, N8-bis (2, 4-dimethoxybenzyl) pyrido [3, 4-c] pyridazine-3, 8-diamine (70.0 mg, 0.130 mmol) and Et 3N (53.0 mg, 0.520 mmol) in DCM (3 mL) was added cyclopropanecarbonyl chloride (34.0 mg, 0.325 mmol) slowly at 0℃. The resulting mixture was stirred at r.t. overnight. The mixture was diluted with a. q. NaHCO 3 (5 mL) , extracted with ethyl acetate (5 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over anhydrous  sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by prep-TLC to give the product (75.0 mg, 85.0%yield) as a yellow oil.
Step 8. According to the method described in general procedure F, the title product was synthesized (14.0 mg, 20.0%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 621.0.
Step 9. A solution of N- (8- (bis (2, 4-dimethoxybenzyl) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) pyrido [3, 4-c] pyridazin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (14.0 mg, 0.0226 mmol) in TFA (0.5 mL) was stirred at 50℃ for 3 hours. The reaction mixture was purged with argon to remove TFA. The crude was purified by prep-HPLC to give the product (6.75 mg, 93.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 321.0.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ 8.60 (s, 1H) , 8.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.69 (s, 1H) , 7.48 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 6.24 (s, 1H) , 2.44 (s, 3H) , 2.43 –2.42 (m, 1H) , 1.13 –1.11 (m, 2H) , 1.04 –1.01 (m, 2H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (5-amino-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (70)
Figure PCTCN2020101409-appb-000058
Preparation of tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (5- (8-chloro-3-aminocinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl) carbamate (intermediate F)
According to the method described in general procedure D (90℃ for 2h, intermediate A and tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (4-methyl-5- (4, 4, 5, 5-tetramethyl-1, 3, 2-dioxaborolan-2-yl) pyridin-3-yl) carbamate were utilized) , the title product (intermediate F) was synthesized (930 mg, 41.3%) as colorless oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 486.2.
Step 1. To a solution of (trans) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (70 mg, 0.422 mmol) in dichloromethane (5.00 mL) was added N, N-dimethylformamide (1 drop) and oxalyl chloride (251 mg, 2.11 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in dichloromethane (5.00 mL) and added to a solution of tert-butyl (5- (3-amino-8-chlorocinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl) (tert-butoxycarbonyl) carbamate (137 mg, 0.282 mmol) and triethylamine (128 mg, 1.27 mmol) in DCM (5.00 mL) . The mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was diluted with water (20 mL) , extracted with dichloromethane (20 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulphate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (dichloromethane/methanol=20/1) to give tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) - (5- (8-chloro-3- ( (trans) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl) carbamate (130 mg, 72.6%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 634.3.
Step 2. According to the method described in general procedure A, tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (5- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl) carbamate was synthesized (45 mg, 21.5%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 779.4.
Step 3. According to the method described in general procedure C, tert-butyl (5- (8-amino-3- (-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl)(tert-butoxycarbonyl) carbamate was synthesized (30 mg, 96.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 615.3.
Step 4. According to the method described in general procedure E, the title product (70) was synthesized (10.3 mg, 61.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 415.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.48 (s, 1H) , 8.52 (s, 1H) , 7.96 (s, 1H) , 7.67 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.87 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.69 -6.64 (m, 3H) , 5.23 (s, 2H) , 3.78 (s, 3H) , 2.50 -2.23 (m, 2H) , 2.01 (s, 3H) , 1.44 -1.41 (m, 1H) , 1.25 -1.21 (m, 1H) .
Preparation of N- (8-amino-7-cyano-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropanecarboxamide (71)
Figure PCTCN2020101409-appb-000059
Step 1. To a solution of N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropane-carboxamide (1) (10.0 mg, 0.0312 mmol) in DMF (2 mL) was added NIS (N-iodosuccinimide) (7.00 mg, 0.0312 mmol) slowly at 0℃. The reaction mixture was stirred at 25℃ for 3 hours. The reaction mixture was concentrated. The residue was purified by prep-TLC (DCM/MeOH=20/1) to give the product (6.00 mg, 43.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 446.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.72 (s, 1H) , 8.83 (s, 1H) , 8.51 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 8.28 (s, 1H) , 7.40 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 6.97 (s, 2H) , 6.70 (s, 1H) , 2.20 –2.18 (m, 1 H) , 2.07 (s, 3H) , 0.94 –0.89 (m, 4 H) .
Step 2. A mixture of N- (8-amino-7-iodo-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropane-carboxamide (5.00 mg, 0.0112 mmol) , Pd (t-Bu 3P)  2 (1.00 mg, 0.00170 mmol) , Zn (CN)  2 (3.00 mg, 0.0224 mmol) and Zn (0.30 mg, 0.00390 mmol) in DMF (0.5 mL) under Ar was stirred at 110℃ for 16 hours. The mixture was filtered. The filtrate was purified by prep-HPLC to give the product (3.70 mg, 96%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 345.1.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ 8.95 (s, 1H) , 8.86 –8.85 (m, 2H) , 8.16 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 6.77 (s, 1H) , 2.61 (s, 3H) , 2.06 –2.04 (m, 1H) , 1.08 –0.97 (m, 4 H) .
Preparation of tetrahydro-2H-pyran-4-yl (8-amino-6- (5-amino-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) carbamate (72)
Figure PCTCN2020101409-appb-000060
Step 1. To a solution of tetrahydro-2H-pyran-4-ol (1.00 g, 9.80 mol) and TEA (1.19 g, 11.7 mmol) in DCM (40.0 mL) was added 4-nitrophenyl chloroformate (1.97 g, 9.80 mol) at 0℃, the resulting mixture was stirred at rt for 2 h. The mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EtOAc (40 mL x 3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4 and concentrated in vacuum to give the residue, which was purified by column chromatography on silica gel (PE: EA=10: 1 to 5: 1, v/v) to give the title compound (2.40 g, yield 91.7%) as a white solid.  1H NMR (400 MHz, CDCl 3) : δ 8.30 –8.28 (m, 1H) , 7.41 –7.26 (m, 1H) , 4.98 –4.92 (m, 1H) , 4.00 –3.97 (m, 2H) , 3.61 –3.55 (m, 2H) , 2.06 –2.05 (m, 2H) , 1.87 –1.83 (m, 2H) .
Step 2. To a solution of 4-nitrophenyl (tetrahydro-2H-pyran-4-yl) carbonate (160 mg g, 0.329 mol) in DMF (12.0 mL) was added K 2CO 3 (455 mg, 3.29 mol) and tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (5-(8-chloro-3-aminocinnolin-6-yl) -4-methylpyridin-3-yl) carbamate (439 mg, 1.64 mol) at rt. The resulting mixture was stirred at 70℃ for 16 hours. After being cooled to rt, the mixture was diluted with water (20 mL) and extracted with EA (20 mL X 3) . The combined organic phase was washed with brine (15 mL x 3) , dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated in vacuum to give the residue, which was purified by prep-TLC (PE: EA = 1: 2, v/v) to give the title compound (60.0 mg, 29.7%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 614.2.
Step 3. According to the method described in general procedure A, the title product was synthesized (25 mg, 40.7%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 759.2.
Step 4. According to the method described in general procedure C, desired compound was synthesized (30 mg, crude) as a yellow solid, which was used to the next step without further purification.
Step 5. According to the method described in general procedure E, the title product (72) was synthesized (1.44 mg, 7.72 %) as a white solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 395.2.  1H NMR (400 MHz, MeOD-d 4) : δ 8.37 (s, 1H) , 7.96 (s, 1H) , 7.74 (s, 1H) , 6.91 (s, 3H ) , 6.75 (s, 1H ) , 5.03 –5.01 (m, 1H) , 3.99 –3.96 (m, 2H) , 3.63 –3.58 (m , 2H) , 2.13 (s, 3H) , 2.07 –2.03 (m, 2H) , 1.80 –1.78 (m, 2H) .
Preparation of (1R, 2R) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (73a) and (1S, 2S) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin- 7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (73b)
Figure PCTCN2020101409-appb-000061
Step 1. According to the method described in general procedure D (90℃ for 2h, using (1- (tert-butoxycarbonyl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) boronic acid) , tert-butyl 7- (8-chloro-7-fluoro-3-nitrocinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (400 mg, 64.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+Na]  + 498.1.
Step 2. A mixture of tert-butyl 7- (8-chloro-7-fluoro-3-nitrocinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate (580 mg, 1.22 mmol) , Fe (546 mg, 9.75 mmol) and NH 4Cl (522 mg, 9.75 mmol) in the solvent system EtOH/H 2O (20/2 mL) under Ar was heated at 90℃ for 16 hours. The mixture was cooled to room temperature. The mixture was diluted with aq. NaHCO 3 (30 mL) , extracted with ethyl acetate (30 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The crude (500 mg, 91.9%) was used for the next step directly. LC-MS (ESI) [M+H]  +448.1.
Step 3. A mixture of tert-butyl 7- (3-amino-8-chloro-7-fluoro-1, 2-dihydrocinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate (460 mg, 1.03 mmol) and Pb (OAc)  4  (455 mg, 1.03 mmol) in toluene (8 mL) was heated at 120℃ for 1 hour. The mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (DCM/MeOH=50/1) to give the product (260 mg, 57.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 446.3.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 7.98 (s, 1H) , 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.09 (s, 1H) , 6.84 (s, 2H) , 4.68 –4.18 (m, 3H) , 3.20 (br s, 1H) , 1.91 (s, 3H) , 1.47 (s, 9H) .
Step 4. According to the method described in similar procedure as the preparation of 69, the desired product was synthesized (260 mg, 75.0%, crude) , which was used to the next step directly. LC-MS (ESI) [M+H]  + 594.4.
Step 5. According to the method described in general procedure A, the desired product was synthesized (40.0 mg, 14.6%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 739.2.
Step 6. According to the method described in general procedure C, the desired product was synthesized (25 mg, 80.4%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 575.1.
Step 7. According to the method described in general procedure E, the desired product was synthesized (10.0 mg, 48.4%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 475.1.
Chiral separation. A solid of (trans) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (8.00 mg, 0.0169 mmol) was separated with SFC (System: Waters SFC 80; Column name: Daicel chiralpak IB; Column size: 250*25mm 10μm; Mobile Phase A: Supercritical CO 2; Mobile Phase B: MeOH (0.1%NH 3·H 2O) ; A: B: 45: 55; Wavelength: 214nm; Flow: 70 g/min; Column temp: 25℃ (RT) ; Back Pressure: 100bar; Injection: 3.6mL; Cycle time: 27 min; Preparation of sample solution: The sample was dissolved in about 13ml MeOH. ) to give (1R, 2R) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (1.03 mg, 73a) as a yellow solid and (1S, 2S) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (1.38 mg, 73b) as a yellow solid.
(1R, 2R) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (73a) . LC-MS (ESI)  [M+H]  + 475.5. SFC Method Comments: CO 2/MeOH/DEA 60/40/0.04 1.8ml/min IB, 3um, 3*100 (Daicel) . RT = 2.763 min, e. e%=100%.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.55 (s, 1H) , 8.60 (s, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.33 (d, J=12.8Hz, 2H) , 6.96 (d, J=6.8Hz, 1H) , 6.52 (s, 2H) , 5.73 (s, 1H) , 4.30 (s, 2H) , 3.78 (s, 3H) , 3.35 –3.34 (m, 2H) , 2.28 –2.25 (s, 2H) , 1.93 (s, 3H) , 1.44 –1.41 (m, 1H) , 1.26 –1.23 (m, 1H) .
(1S, 2S) -N- (8-amino-7-fluoro-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (73b) . LC-MS (ESI) [M+H]  + 475.5. SFC Method Comments: CO 2/MeOH/DEA 60/40/0.04 1.8ml/min IB, 3um, 3*100 (Daicel) . RT = 3.726 min, e. e%=100%.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.55 (s, 1H) , 8.60 (s, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.33 (d, J=12.8Hz, 2H) , 6.96 (d, J=6.0Hz, 1H) , 6.53 (s, 2H) , 5.73 (s, 1H) , 4.30 (s, 2H) , 3.78 (s, 3H) , 3.35 –3.34 (m, 2H) , 2.27 (s, 2H) , 1.93 (s, 3H) , 1.43 (s, 1H) , 1.23 (s, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (3, 8-dimethyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) -7-fluorocinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (74) 
Compound 74 was prepared in a similar manner as Compounds 73a and 73b using (1- (tert-butoxycarbonyl) -3, 8-dimethyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) boronic acid as a yellow solid (14.4 mg, 57.8%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 489.6.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.54 (s, 1H) , 8.59 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.96 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 6.51 (s, 2H) , 5.73 (s, 1H) , 4.30 –4.27 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 3.49 –3.42 (m, 1H) , 3.02 –2.99 (m, 1H) , 2.33 –2.23 (m, 2H) , 1.94 (s, 3H) , 1.44 –1.43 (m, 1H) , 1.42 (d, J = 4.8 Hz, 3H) , 1.24 –1.22 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) -7-fluorocinnolin-3-yl) -2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (75)
Figure PCTCN2020101409-appb-000062
Step 1. According to the method described in general procedure D, 8-chloro-6- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) -7-fluorocinnolin-3-amine was synthesized (215 mg, 67.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+Na]  + 292.1.
Compound 75 was prepared in a similar manner as the preparation of Compound 73a/73b (16.7 mg, 46.4%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 421.5.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ11.51 (s, 1H) , 8.59 (s, 1H) , 7.62 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 7.00 (d, J = 7.2 Hz, 1H) , 6.46 (s, 2H) , 3.83 (s, 3H) , 3.78 (s, 3H) , 2.37 (s, 3H) , 2.29 –2.22 (m, 2H) , 1.43 –1.41 (m, 1H) , 1.24 –1.23 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2-oxo-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (76)
Figure PCTCN2020101409-appb-000063
Step 1 &2. To a solution of 2-bromo-4-chloroaniline (4.85 g, 23.5 mmol) in 4.0M HCl (23.5 mL) was added a 4 mL H 2O solution of NaNO 2 (1.62 g, 23.5 mmol) slowly at 0 ℃. The mixture was stirred at 0 ℃ for 1 hour. And then a solution of (E) -N, N-dimethyl-2-nitroethen-1-amine (3.00 g, 25.9 mmol) in acetonitrile (15 mL) was added at 0 ℃. The reaction mixture was allowed to warm to r.t. and stirred for 16 h. The reaction mixture was diluted with water (100 mL) . The resulting suspension was filtered. The filter cake was washed with cold Et 2O (50 mL) and dried to give (Z) - 2- ( (Z) - (2-bromo-4-chlorophenyl) diazenyl) -2-nitroethen-1-ol (5.40 g, 17.7 mmol, 75.0 %) as an orange solid.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 13.7 (br s, 1H) , 11.1 (s, 1H) , 7.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.75 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.66 -7.63 (m, 2H) .
Step 3. A solution of (Z) -2- ( (Z) - (2-bromo-4-chlorophenyl) diazenyl) -2-nitroethen-1-ol (178 g, 582 mmol) in PPA (polyphosphoric acid) (900 mL) was stirred at 160 ℃ for 5 h. The reaction mixture was poured onto ice and then extracted with ethyl acetate (500 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate=2/1) to give 8-bromo-6-chloro-3-nitrocinnoline (30.0 g, 104 mmol, 18.0 %) as a yellow solid.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 9.36 (s, 1H) , 8.73 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 8.61 (d, J = 2.0 Hz, 1H) .
Step 4. According to the method described in general procedure A, the title product was synthesized (69.0 mg, 0.178 mmol, 27.0 %) as a yellow solid.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ9.16 (s, 1H) , 8.07 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.61 –7.24 (m, 11H) .
Step 5. According to the method described in general procedure C, the title product was synthesized (314 mg, 1.40 mmol, 81.8 %) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 225.1.
Step 6. To a solution of 6-chloro-3-nitrocinnolin-8-amine (283 mg, 1.26 mmol) and TEA (255 mg, 2.53 mmol) in DCM (10 mL) was added Boc 2O (413 mg, 1.90 mmol) and DMAP (3.10 mg, 0.0253 mmol) at rt. The mixture was stirred at rt for 2 h. The mixture was concentrated and purified by silica gel column chromatography (PE: EA=100: 1-30: 1) to give tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (6-chloro-3-nitrocinnolin-8-yl) carbamate (100 mg, 0.236 mmol, 18.7 %) as brown oil. LC-MS (ESI) [M-Boc+H]  + 325.0.
Step 7. A solution of tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (6-chloro-3-nitrocinnolin-8-yl) carbamate (90.0 mg, 0.212 mmol) and Pt 2O (8.00 mg) in EA (50 mL) was stirred under H 2 at RT for 3 h. The mixture was filtered and the filtrated was concentrated and purified by prep-TLC (PE: EA=1: 1) to give tert-butyl (3-amino-6-chlorocinnolin-8-yl) (tert-butoxycarbonyl) carbamate (66 mg, 0.168 mmol, 79.2 %) as brown oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 395.0.
Step 8. A solution of tert-butyl (3-amino-6-chlorocinnolin-8-yl) (tert-butoxycarbonyl) carbamate (31.0 mg, 0.0787 mmol) , (trans) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid  (26.0 mg, 0.157 mmol) and TEA (160 mg, 1.57 mmol) in DCM (5 mL) was added POCl 3 (40.0 mg, 0.260 mmol) at 0 ℃ under Ar. The mixture was stirred at RT for 16 h. and then was diluted with water (50 mL) , extracted with EA (30 mL x 3) . The organic layer was washed with brine (50 mL x 3) , dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered, concentrated and purified by prep-TLC (DCM: MeOH=20: 1) to give tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (6-chloro-3- ( (trans) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-8-yl) carbamate (12.0 mg, 0.0221 mmol, 28.1 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 543.3.
Step 9. According to the method described in general procedure F, the title product was synthesized (7.00 mg, 0.0104 mmol, 47.3 %) as yellow oil. LC-MS (ESI) [M-Boc+H]  + 571.3.
Step 10. According to the method described in general procedure E, Compound 76 was synthesized (4.02 mg, 0.00855 mmol, 24.9 %) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 471.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.5 (s, 1H) , 8.53 (s, 1H) , 7.63 –7.59 (m, 2H) , 7.32 (s, 1H) , 6.88 (s, 1H) , 6.69 –6.67 (m, 3H) , 4.67 (s, 2H) , 3.78 (s, 3H) , 2.33 –2.22 (m, 2H) , 2.18 (s, 3H) , 1.44 –1.40 (m, 1H) , 1.26 –1.22 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (2-fluoro-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (77)
Figure PCTCN2020101409-appb-000064
Step 1. According to the method described in step 2 of preparation of 73a/73b, the title product was synthesized (4.3 g, 57.7%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 359.1.
Step 2. According to the method described in step 4 of preparation of 73a/73b, trans-N- (6-chloro-8- ( (diphenylmethylene) amino) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (4.0 g, 94.3%) as an off-white solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 507.2.
Step 3. According to the method described in general procedure F, the title product was synthesized (48.0 mg, 52.3 %) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 582.1.
Step 4. According to the method described in general procedure C, compound 77 was synthesized (25.9 mg, 72.1 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 418.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.5 (s, 1H) , 8.54 (s, 1H) , 8.15 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.37 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 6.95 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 6.74 (s, 2H) , 6.64 (s, 1H) , 3.78 (s, 3H) , 2.30 –2.22 (m, 5H) , 1.44 –1.41 (m, 1H) , 1.26 –1.722 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (5-cyano-2-methylphenyl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (78)
Compound 78 was prepared in a similar manner as preparation of compound 77 (21.0 mg, 36.5%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  +424.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.52 (s, 1H) , 8.54 (s, 1H) , 7.80 –7.74 (m, 2H) , 7.58 –7.54 (m, 2H ) , 7.31 (s, 1H ) , 6.94 (s, 1H) , 6.70 (s, 3H) , 3.78 (s, 3H) , 2.35 (s, 3H) , 2.30 –2.25 (m, 2H) , 1.44 –1.42 (m, 2H) , 1.25 –1.23 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (2-chloro-6-fluorophenyl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (79)
Compound 79 was prepared in a similar manner as preparation of compound 77 (23.0 mg, 62.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 437.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.55 (s, 1H) , 8.54 (s, 1H) , 7.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 7.53 -7.49 (m, 2H) , 7.40 -7.37 (m, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 6.95 (s, 1H) , 6.74 (s, 2H) , 6.66 (s, 1H) , 3.78 (s, 3H) , 2.29 -2.23 (m, 2H) , 1.44 -1.42 (m, 1H) , 1.27 -1.15 (m, 1H) .
Preparation of trans-N- (8-amino-6- (1-methyl-1H-imidazol-5-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (80)
Compound 80 was prepared in a similar manner as preparation of compound 77 (23.1 mg, 63.9%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 389.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.50 (s, 1H) , 8.56 (s, 1H) , 7.77 (s, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 7.21 (s, 1H) , 7.11 (s, 1H) , 6.90 (s, 1H) , 6.65  (s, 2H) , 3.79 (d, J = 8.4 Hz, 6H) , 2.44 -2.24 (m, 2H) , 1.44 -1.41 (m, 1H) , 1.24 -1.22 (m, 1H) .
Preparation of trans-N- (8-amino-6- (5-chloro-3, 4-dihydro-2H-pyrido [4, 3-b] [1, 4] oxazin-8-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (81)
Compound 81 was prepared in a similar manner as preparation of compound 77 (11 mg, 22.2%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 477.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.49 (s, 1H) , 8.52 (s, 1H) , 7.62 (s, 1H) , 7.58 (s, 3H ) , 7.31 (s, 1H ) , 7.05 (s, 1H) , 6.90 (s, 1H) , 6.61 (s, 2H) , 6.02 (s, 1H) , 4.29 –4.23 (m, 2H) , 3.46 –3.40 (m, 2H) , 2.29 –2.48 (m, 2H) , 1.40 –1.45 (m, 1H) , 1.25 –1.22 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] thiazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (82)
Compound 82 was prepared in a similar manner as preparation of compound 77 (12.0 mg, 24.4%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  +473.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.49 (s, 1H) , 8.52 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.57 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.85 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 6.66 –6.65 (m, 3H) , 5.72 (s, 1H) , 3.78 (s, 3H) , 3.60 –3.50 (m, 2H) , 3.18 –3.12 (m, 2H) , 2.29 –2.22 (m, 2H) , 1.99 (s, 3H) , 1.43 –1.40 (m, 1H) , 1.25 –1.20 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-4, 4-dioxido-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] thiazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (83)
Compound 83 was prepared in a similar manner as preparation of compound 77 (7.3 mg, 19.5%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 505.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.53 (s, 1H) , 8.55 (s, 1H) , 7.85 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.92 (s, 1H) , 6.76 (s, 2H) , 6.67 -6.65 (m, 2H) , 3.80 -3.77 (m, 5H) , 3.55 -3.53 (m, 2H) , 2.30 -2.24 (m, 2H) , 2.08 (s, 3H) , 1.44 -1.42 (m, 1H) , 1.24 -1.22 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (5-methyl-2-oxo-2, 3-dihydrooxazolo [4, 5-b] pyridin-6-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (84)
Figure PCTCN2020101409-appb-000065
Step 1. (8-amino-3-trans-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamido) cinnolin-6-yl) boronic acid was synthesized (80 mg, 57.6%yield) as a black solid according to a standard procedure. LC-MS (ESI) [M+H]  + 353.0.
Step 2. According to the method described in general procedure F (90℃ for 2h, 6-bromo-5-methyloxazolo [4, 5-b] pyridin-2 (3H) -one was used) , the title product (84) was synthesized (2.19 mg, 2.43%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 457.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.42 (br s, 1H) , 8.48 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.86 (s, 2H) , 6.76 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.52 (s, 2H) , 6.06 (br s, 1H) , 3.78 (s, 3H) , 2.32 (s, 3H) , 2.30 -2.22 (m, 2H) , 1.45 -1.40 (m, 1H) , 1.24 -1.20 (m, 1H) .
Preparation of N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -3-cyanoazetidine-1-carboxamide (85)
Figure PCTCN2020101409-appb-000066
Step 1. According to the method described in general procedure F, 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine was synthesized (360 mg, 0.867 mmol, 69.0 %yield) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 416.1.
Step 2. To a solution of 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (200 mg, 0.482 mmol) and pyridine (190 mg, 2.41 mmol) in DCM (10 mL) was added 4-nitrophenyl carbonochloridate (117 mg, 0.578 mmol) at 0℃ under Ar. The mixture was stirred at RT for 2 h. The mixture was used for next step directly. LC-MS (ESI) [M+H]  + 581.6.
Step 3. To a solution of 4-nitrophenyl (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) carbamate (279 mg, 0.482 mmol, crude) and TEA (98.0 mg, 0.964 mmol) in DCM (10 mL) was added azetidine-3-carbonitrile hydrochloride (57.0 mg, 0.482 mmol) at 0℃ under Ar. The mixture was stirred at RT for 16 h. and then quenched with NaHCO 3 solution (30 mL) and extracted with EA (20 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered, concentrated and purified by silica gel column chromatography (DCM: MeOH=80: 1-20: 1, v/v) and then prep-TLC (DCM: MeOH=20: 1) to give 3-cyano-N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) azetidine-1-carboxamide (35.0 mg, 0.0669 mmol, 19.4 %yield) as yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 524.2.
Step 4. According to the method described in general procedure C, compound 85 was synthesized (8.65 mg, 0.0241 mmol, 42.0 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 360.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 10.1 (s, 1H) , 8.46 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 8.43 (s, 1H) , 8.31 (s, 1H) , 7.36 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 6.93 (s, 1H) , 6.69 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.63 (s, 2H) , 4.39 –4.34 (m, 2H) , 4.24 –4.20 (m, 2H) , 3.81 –3.77 (m, 1H) , 2.31 (s, 3H) .
Preparation of N- (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-1-carboxamide (86)
Figure PCTCN2020101409-appb-000067
Step 1-2. To a mixture of activated Zn (880 mg, 13.8 mmol) in THF (80 mL) was added dibromoethane (200 mg, 1.06 mmol) at RT under Ar. The reaction mixture was heated to 65℃ for 10 mins. After cooling to RT, trimethyl chlorosilane (115 mg, 1.06 mmol) was added and stirred at room temperature for another 1 h. and then tert-butyl 3-iodoazetidine-1-carboxylate (3.00 g, 10.6 mmol) in THF (30 mL) was added dropwise. The mixture was stirred for another 1 h, and then added to a mixture of 4-iodo-1-methyl-1H-pyrazole (1.10 g, 5.29 mmol) , CuI (120 mg, 6.35 mmol) and Pd (dppf) Cl 2· DCM (432 mg, 0.529 mmol) in THF (20 mL) dropwise. The mixture was stirred at 65℃ under Ar for 3 h. The reaction mixture was diluted with water (100 mL) and extracted with EA (30 mL x 3) . The combined organic layers was washed with brine (50 mL x 3) , dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (PE: EA=20: 1-1: 1, v. v) and then prep-HPLC (NH 3. H 2O) to give tert-butyl 3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-1-carboxylate (18.0 mg, 0.0759 mmol, 1.32 %yield) as pale oil.  1H NMR (400 MHz, CDCl 3) : δ 7.46 (s, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 6.29 (d, J = 11.6 Hz, 1H) , 5.51 –5.45 (m, 1H) , 4.63 (br s, 1H) , 3.98 –3.97 (m, 2H) , 3.95 (s, 3H) , 1.44 (s, 9H) .
Step 3. A solution of tert-butyl 3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-1-carboxylate (18.0 mg, 0.0759 mmol) in DCM (5 mL) was added TFA (1 mL) at RT. The mixture was stirred at RT for 3 h. The mixture was concentrated and dried, the crude was used to the next step directly. LC-MS (ESI) [M+H]  + 138.2.
Step 4. A solution of 4-nitrophenyl (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) carbamate (41 mg, 0.0766 mmol) and TEA (23.2 mg, 0.230 mmol) in DCM (5  mL) was added 4- (azetidin-3-yl) -1-methyl-1H-pyrazole TFA salt (18.0 mg, 0.0766 mmol) at 0℃ under Ar. The mixture was stirred at RT for 16 h, and then diluted with NaHCO 3 solution (30 mL) and extracted with EA (20 mL x 3) . The organic layer was dried over anhydrous Na 2SO 4, filtered and concentrated to get N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) -3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) azetidine-1-carboxamide (40.0 mg, crude, 100 %yield) as yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 579.6.
Step 5. According to the method described in general procedure C, Compound 86 was synthesized (1.98 mg, 0.00478 mmol, 6.91 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 415.5.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 9.88 (s, 1H) , 8.46 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 8.44 (s, 1H) , 8.34 (s, 1H) , 7.72 (s, 1H) , 7.44 (s, 1H) , 7.36 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 6.92 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.68 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.61 (s, 2H) , 4.44 –4.39 (m, 2H) , 3.97 –3.93 (m, 2H) , 3.80 (s, 3H) , 3.76 –3.72 (m, 1H) , 2.33 (s, 3H) .
Preparation of (1S, 2S) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (87a) and (1R, 2R) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (87b)
Figure PCTCN2020101409-appb-000068
Step1. To a solution of (trans) -N- (6-chloro-8- ( (diphenylmethylene) amino) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (750 mg, 1.48 mmol) and (S) -4-methyloxazolidin-2-one (300 mg, 2.97 mmol) in dioxane (6.00 mL) was added 4, 5-bis (diphenylphosphino) -9, 9-dimethylxanthene (342 mg, 0.591 mmol) , potassium phosphate (942  mg, 4.44 mmol) and tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (276 mg, 0.300 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 110℃ in a sealed tube for 3 hours. The mixture was cooled to room temperature. The mixture was filtered, the filter cake was washed with ethyl acetate (20.0 mL X 2) . The filter was diluted with water (40.0 mL) , extracted with ethyl acetate (20.0 mL X 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulphate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (dichloromethane/methanol=20/1) to give (trans) -N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (400 mg, 47.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 572.1.
Step 2. According to the method described in general procedure C, trans-N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (100 mg, 35.1%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  +408.1.
Step 3. A solid of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (100 mg, 0.245 mmol) was separated with SFC (System: Waters SFC 80; Column name: 
Figure PCTCN2020101409-appb-000069
Column size: 250*25mm 10μm; Mobile Phase A: Supercritical CO 2; Mobile Phase B: MeOH (0.1%NH 3·H 2O) ; A: B: 60:40; Wavelength: 214nm; Flow: 70 mL/min; Column temp: RT; Back Pressure: 100bar; Injection: 3.5mL; Cycle time: 5min; Preparation of sample solution: The sample was dissolved in about 23 mL of MeOH) to give (1S, 2S) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (27.09 mg, P1, 117) as a yellow solid and (1R, 2R) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (35.37 mg, P2, 118) as a yellow solid.
(1S, 2S) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (P1, 87a) , LC-MS (ESI) [M+H]  + 408.0. SFC Method Comments: CO 2/MeOH/DEA 70/30/0.03 1.8mL/min OJ, 3um, 3*100 (Daicel) . RT = 1.826 min, e. e%=99.3%.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.41 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.24 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 6.94 (d, J = 2.4Hz, 1H) , 6.68 (s, 2H) , 4.74 -4.70 (m, 1H) , 4.59 -4.55 (m, 1H) , 4.09 -4.06 (m, 1H) , 3.78 (s, 3H) , 2.29 -2.23 (m, 2H) , 1.44 -1.39 (m, 1H) , 1.32 (d, J = 6.4 Hz, 3H) , 1.25 -1.20 (m, 1H) . (1R, 2R) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (P2, 87b) . LC-MS (ESI) [M+H]  + 408.0. SFC Method Comments: CO 2/MeOH/DEA 70/30/0.03 1.8mL/min OJ, 3um, 3*100 (Daicel) . RT = 2.569 min, e.e%=99.28%.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.39 (s, 1H) , 8.43 (s, 1H) , 7.56 (s, 1H) , 7.29 (s, 1H) , 7.23 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 6.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 6.67 (s, 2H) , 4.73 -4.68 (m, 1H) , 4.57 -4.53 (m, 1H) , 4.07 -4.04 (m, 1H) , 3.76 (s, 3H) , 2.29 -2.19 (m, 2H) , 1.43 -1.38 (m, 1H) , 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 3H) , 1.23 -1.18 (m, 1H) .
Preparation of (1R, 2R, 3R) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (88a) , (1S, 2S, 3S) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (88b) , (1S, 2R, 3S) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (88c) and (1R, 2S, 3R) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (88d)
Figure PCTCN2020101409-appb-000070
Step 1. To a solution of (trans) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (210 mg, 1.16 mmol, prepared according to WO2018183964) , 6-chloro-8- ( (diphenylmethylene) amino) cinnolin-3-amine (418 mg, 1.16 mmol) in DCM (25 mL) was added Pyridine (3.60 mL) . After being stirred at rt for 30 min, the solution of POCl 3 (508 mg, 3.32 mmol) in DCM (3.00 mL) was added at 0℃ and stirred at rt for 20 min. The mixture was diluted with sat. NaHCO 3 and extracted with EA (10.0 mL x 3) . The combined organic phase was dried over Na 2SO 4 and concentrated in vacuum to give the residue, which was purified by prep-TLC (PE: EA=2: 1) to give the title compound (260 mg, yield 43.1%) as a yellow solid. LC-MS (ESI)  [M+H]  + 521.0.
Step 2. In a similar manner as preparation of compound 87a/b, trans-N- (8-( (diphenylmethylene) amino) -6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (150 mg, yield 89.3%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 586.2.
Step 3. According to the method described in general procedure C, racemic 88 was synthesized (100 mg, yield 92.7%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.0.
The racemates of 88 (100 mg, 0.238 mmol) were separated by SFC (ChiralPak AD-H Daicel chemical Industries, Ltd, IC 3.0*25cm, 5um, A: Supercritical CO 2, B: EtOH; A: B=60/40; Flow expressed in 50mL/min; column temperature (T) in 38℃; Backpressure (BPR) in 100bars) to give 88a (7.00 mg, R T = 1.560 min, ee = 100.00%, 7.00%yield) , 88b (22.0 mg, R T = 1.682 min, ee =100.00%, 22.0%yield) , 88c (4.00 mg, R T = 1.882 min, ee = 95.30%, 4.00%yield) , 88d (14.0 mg, R T = 2.378 min, ee = 99.68%, 14.0%yield) .
88a: LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.35 (s, 1H) , 8.48 (s, 1H) , 7.54 (s, 1H) , 7.26 (s, 2H ) , 6.94 (s, 1H) , 6.67 (s, 2H) , 4.74 –4.70 (m , 1H) , 4.59 –4.51 (m, 1H) , 4.10 –4.05 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 2.33 –2.28 (m, 1H) , 2.21 –2.18 (m, 1H) , 1.63 –1.60 (m, 1H) , 1.33 –1.26 (m, 6H) .
88b: LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.36 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.55 (s, 1H) , 7.30 (s, 1H ) , 7.24 (s, 1H ) , 6.93 (s, 1H) , 6.70 (s, 2H) , 4.74 –4.70 (m , 1H) , 4.59 –4.51 (m, 1H) , 4.10 –4.05 (m, 1H) , 3.81 (s, 3H) , 2.36 –2.30 (m, 1H) , 2.25 –2.18 (m, 1H) , 1.63 –1.60 (m, 1H) , 1.33 –1.31 (m, 3H) , 0.98 –0.96 (m, 3H) .
88c: LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.33 (s, 1H) , 8.47 (s, 1H) , 7.54 (s, 1H) , 7.26 (s, 2H ) , 6.94 (s, 1H) , 6.67 (s, 2H) , 4.73 –4.70 (m , 1H) , 4.59 –4.51 (m, 1H) , 4.10 –4.05 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 2.35 –2.28 (m, 1H) , 2.21 –2.17 (m, 1H) , 1.63 –1.58 (m, 1H) , 1.33 –1.23 (m, 6H) .
88d: LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.37 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.56 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H ) , 7.24 (s, 1H ) , 6.93 (s, 1H) , 6.70 (s, 2H) , 4.73 –4.70 (m , 1H) , 4.59 –4.51 (m, 1H) , 4.10 –4.05 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 2.38 –2.30 (m, 1H) , 2.24 –2.18 (m, 1H) , 1.65 –1.62 (m, 1H) , 1.33 –1.30 (m, 3H) , 0.98 –. 096 (m, 3H) .
Compound 89-93 were prepared in a similar manner as the preparation of compound 87a/b (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-ethyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (89)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.40 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.64 (s, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 6.94 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 6.69 (s, 2H) , 4.73 -4.70 (m, 1H) , 4.59 -4.55 (m, 1H) , 4.09 -4.03 (m, 3H) , 2.29 -2.22 (m, 2H) , 1.44 -1.42 (m, 1H) , 1.36 -1.31 (m, 6H) , 1.30 -1.23 (m, 1H) .
(trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1- (oxetan-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (90)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 450.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.41 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.82 (s, 1H) , 7.49 (s, 1H) , 7.24 –7.23 (m, 1H) , 6.94 –6.93 (m, 1H) , 6.68 (s, 2H) , 5.52 –5.49 (m, 1H) , 4.83 –4.92 (m, 4H) , 4.74 –4.72 (m, 1H) , 4.57 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.09 –4.05 (m, 1H) , 2.30 –2.23 (m, 2H) , 1.46 –1.41 (m, 1H) , 1.46 –1.40 (m, 1H) , 1.32 (d, J = 6.0 Hz, 3H) , 1.29 –1.23 (m, 1H) .
(trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1- (2, 2, 2-trifluoroethyl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (91)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 476.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.44 (s, 1H) , 8.46 (d, J = 4.8 Hz, 1H) , 7.75 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.50 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.25 (s, 1H) , 6.94 (s, 1H) , 6.70 (s, 2H) , 5.12 -5.03 (m, 2H) , 4.77 -4.71 (m, 1H) , 4.62 -4.55 (m, 1H) , 4.11 -4.06 (m, 1H) , 2.38 -2.26 (m, 2H) , 1.49 -1.42 (m, 1H) , 1.36 -1.24 (m, 4H) .
(trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-isopropyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (92)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 436.5.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.39 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.68 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 6.94 (s, 1H) , 6.69 (s, 2H) , 4.73 -4.70 (m, 1H) , 4.59 -4.55 (m, 1H) , 4.43 -4.39 (m, 1H) , 4.09 -4.06 (m, 1H) , 2.44 -2.42 (m, 2H) , 1.43 –1.24 (m, 11H) .
(trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1- (2-methoxyethyl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (93)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 452.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.41 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.60 (s, 1H) , 7.33 (s, 1H) , 7.24 –7.23 (m, 1H) , 6.94 –6.93 (m, 1H) , 6.68 (s, 2H) , 4.74 -4.70 (m, 1H) , 4.57 (t, J = 6.0 Hz, 1H) , 4.18 (t, J = 6.0 Hz, 2H) , 4.09 -4.06 (m, 1H) , 3.65 (t, J = 5.2 Hz, 2H) , 3.23 (s, 3H) , 2.32 –2.22 (m, 2H) , 1.45 –1.40 (m, 1H) , 1.32 (d, J = 6.4 Hz, 3H) , 1.25 –1.21 (m, 1H) .
(trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-cyclopropyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (94)
Figure PCTCN2020101409-appb-000071
Step 1. A solution of ethyl (trans) -2- (1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate (180 mg, 1.00 mmol) , cyclopropylboronic acid (172 mg, 2.00 mmol) , sodium carbonate (212 mg, 2.00 mmol) , Cu (OAc)  2 (181 mg, 1.00 mmol) and 2, 2-bipyridine (156 mg, 1.00 mmol) in DCE (10.0 mL) was stirred at 80 ℃ under O 2 balloon for 16 hours. The mixture was diluted with water (50.0 mL) and then extracted with EtOAc (20.0 mL x 3) . The combined organic layer was dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated to give the crude product. The residue was purified by column chromatography (silica gel, petroleum ether/ethyl acetate=3/1) to give ethyl (trans) -2- (1-cyclopropyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate (81.0 mg, 36.7 %yield) as brown oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 221.1.
Step 2. Ethyl (trans) -2- (1-cyclopropyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate was hydrolyzed with LiOH in MeOH/H 2O to provide (trans) -2- (1-cyclopropyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (70.0 mg, 89.1 %yield) as brown oil. LC-MS (ESI) [M+MeCN]  + 234.2
Steps 3-5. Compound 94 was prepared in a similar manner as the preparation of compound 87a/b (2.95 mg, 33.9 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 434.5.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.39 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.68 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 6.94 (s, 1H) , 6.69 (s, 2H) , 4.73 –4.72 (m, 1H) , 4.59 –4.55 (m, 1H) , 4.09 –4.06 (m, 1H) , 3.64 –3.62 (m, 1H) , 2.28 –2.22 (m, 2H) , 1.42 –1.41 (m, 1H) , 1.33 –1.24 (m, 4H) , 0.97 –0.92 (m, 4H) .
(trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (95)
Figure PCTCN2020101409-appb-000072
Step 1. Hydrolysis of ethyl (trans) -2- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate with LiOH in MeOH/H 2O provided the (trans) -2- (1, 5-dimethyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylic acid (167 mg, 42.9 %yield) as a brown oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 181.2.
Steps 3-5. Compound 95 was prepared in a similar manner as the preparation of compound 87a/b (3.06 mg, 12.2 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.45 (s, 1H) , 8.47 (s, 1H) , 7.25 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.13 (s, 1H) , 6.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 6.69 (s, 2H) , 4.73 –4.70 (m, 1H) , 4.57 (t, J = 8.4 Hz, 1H) , 4.09 –4.06 (m, 1H) , 3.69 (s, 3H) , 2.29 –2.26 (m, 1H) , 2.23 (s, 3H) , 2.13 –2.09 (m, 1H) , 1.42 –1.39 (m, 1H) , 1.32 (d, J = 6.0 Hz, 3H) , 1.18 –1.17 (m, 1H) .
(1R, 2R) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-ethyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (96a) and (1S, 2S) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-ethyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (96b)
In a similar manner as preparation of compound 87a/b, the racemates of 96a and 96b (19.7 mg, 0.0467 mmol) was separated by SFC (ChiralPak AD-H Daicel chemical Industries, Ltd, IC 3.0*25cm, 5um, A: Supercritical CO 2, B: EtOH; A: B=60/40; Flow expressed in 50mL/min; column temperature (T) in 38℃; Backpressure (BPR) in 100bars) to give 96a (4.00 mg, R T = 1.970 min, ee = 100.00%, 20.3%yield) and 96b (6.00 mg, R T = 2.803 min, ee = 99.48%, 30.4%yield) . 96a: LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.41 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 -7.26 (m, 2H ) , 6.97 (s, 1H) , 6.68 (s, 2H) , 4.66 –4.61 (m , 1H) , 4.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H) , 4.24 –4.21 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 2.29 –2.21 (m, 2H) , 1.71 –1.66 (m, 2H) , 1.43 –1.40 (m, 1H) , 1.24 –1.20 (m, 1H) , 0.84 (t, J = 8.4 Hz, 3H) ; 96b: LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.41 (s, 1H) , 8.45 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 -7.26 (m, 2H ) , 6.97 (s,  1H) , 6.68 (s, 2H) , 4.66 –4.61 (m , 1H) , 4.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H) , 4.24 –4.21 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 2.29 –2.21 (m, 2H) , 1.71 –1.66 (m, 2H) , 1.43 –1.40 (m, 1H) , 1.24 –1.20 (m, 1H) , 0.84 (t, J =8.4 Hz, 3H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- ( (R) -4- (fluoromethyl) -2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (97)
Figure PCTCN2020101409-appb-000073
Step 1. According to the method described in the preparation of 87a/b, the title product was synthesized (150 mg, 37.8%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 672.3
Step 2. A mixture of (trans) -N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- ( (4S) -2-oxo-4- ( ( (tetrahydro-2H-pyran-2-yl) oxy) methyl) oxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (100 mg, 0.149 mmol) and TsOH. H 2O (3.00 mg, 0.0149) in EtOH (2 mL) was stirred at 55℃ for 3 hours. The reaction mixture was concentrated. The crude was purified by Prep-HPLC to give the product (50.0 mg, 79.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 424.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.40 (s, 1H) , 8.43 (s, 1H) , 7.57 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.96 (s, 1H) , 6.65 (br s, 2H) , 4.67 (br s, 1H) , 4.51 –4.50 (m, 1H) , 4.35 –4.34 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 3.69 –3.66 (m, 1H) , 3.54 –3.51 (m, 1H) , 2.28 –2.24 (m, 2H) , 1.42 –1.41 (m, 1H) , 1.22 –1.21 (m, 1H) .
Step 3. To a solution of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4- (hydroxymethyl) -2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (40.0 mg, 0.0946 mmol) and Et 3N (86.0 mg, 0.852 mmol) in acetonitrile (2 mL) was added PBSF (perfluoro-1-butanesulfonyl fluoride) (86.0 mg, 0.284 mmol) slowly at 0℃. The resulting mixture was stirred at 0℃ for 5 min. Then Et 3N. 3HF (46.0 mg, 0.284 mmol) was added. The reaction mixture was stirred at 0℃ for 1 hour. The mixture was diluted with a. q. NaHCO 3 (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The crude was purified by prep-HPLC to give the product (4.21 mg, 10.5%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 426.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.44 (s, 1H) , 8.46 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.36  (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 6.96 (s, 1H) , 6.72 (s, 2H) , 5.00 –4.93 (m, 1H) , 4.78 –4.53 (m, 3H) , 4.41 –4.39 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 2.41 –2.22 (m, 2H) , 1.42 –1.41 (m, 1H) , 1.22 –1.21 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4- (isopropyl) -2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (98)
Figure PCTCN2020101409-appb-000074
Step 1. According to the method described in the preparation of 87a/b, (trans) -N- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- ( (S) -4-isopropyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide was synthesized (28.0 mg, 29.6 %yield) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 600.4.
Step 2. According to general procedure C, (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-isopropyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (98) was synthesized (8.93 mg, 34.3 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 436.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.42 (s, 1H) , 8.46 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.26 (t, J = 2.0 Hz, 1H ) , 7.01 (s, 1H) , 6.69 (s, 2H) , 4.68 –4.65 (m, 1H) , 4.45 (t, J = 8.8 Hz, 1H) , 4.35 –4.32 (m, 1H) , 3.78 (s, 3H) , 2.29 –2.16 (m, 3H) , 1.43 –1.39 (m, 1H) , 1.25 –1.23 (m, 1H) , 0.90 (d, J = 7.2 Hz, 3H) , 0.76 (d, J = 6.8 Hz, 3H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1- (3- (methylsulfonyl) propyl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (99)
Figure PCTCN2020101409-appb-000075
Step 1. To a suspension of ethyl (trans) -2- (1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate (62.0 mg, 0.344 mmol) and cesium carbonate (223 mg, 0.684 mmol) in N, N-dimethylformamide (2.00 mL) was added 3- (methylsulfonyl) propyl 4-methylbenzenesulfonate (100 mg, 0.342 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 100℃ for 18 hours. The mixture was cooled to room temperature, and then diluted with water (20.0 mL) , extracted with ethyl acetate (20.0 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure to give the crude product. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate =10/1) to give ethyl (trans) -2- (1-(3- (methylsulfonyl) propyl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate (100 mg, 97.3%yield) as a white solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 301.0.
Step 2 –4. According to the method described in the preparation of compound 73a/73b, compound 99 was synthesized (34.9 mg, 64.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  +563.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.48 (s, 1H) , 8.51 (s, 1H) , 7.67 (s, 1H) , 7.38 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 6.84 (s, 1H) , 6.68 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 6.63 (s, 2H) , 5.67 (s, 1H) , 4.28 -4.27 (m, 2H) , 4.17 (t, J = 6.8 Hz, 2H) , 3.37 -3.36 (m, 2H) , 3.10 -3.06 (m, 2H) , 2.99 (s, 3H) , 2.33 -2.24 (m, 2H) , 2.19 -2.15 (m, 2H) , 2.03 (s, 3H) , 1.45 -1.42 (m, 1H) , 1.26 -1.23 (m, 1H) .
Compound 100-103 were prepared in a similar manner as compound 99.
(trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1- (2-hydroxyethyl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (100) LC-MS (ESI) [M+H]  + 487.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.49 (s, 1H) , 8.51 (s, 1H) , 7.61 (s, 1H) , 7.33 (d, J = 6.0 Hz, 2H) , 6.84 (s, 1H) , 6.67 –6.62 (m, 3H) , 5.67 (s, 1H) , 4.89 –4.86 (m, 1H) , 4.86 (s, 2H) , 4.07 (t, J = 4.8 Hz, 2H) , 3.70 (t, J = 4.8 Hz, 2H) , 3.39 –3.35 (m, 2H) , 2.32 –2.29 (m, 2H) , 2.03 (s, 3H) , 1.43 –1.40 (m, 1H) , 1.24 –1.23 (m, 1H) .
(trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1- (2- (methylsulfonyl) ethyl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (101)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 549.6.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.50 (s, 1H) , 8.51 (s, 1H) , 7.73 (s, 1H) , 7.42 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 6.85 (s, 1H) , 6.68 (s, 1H) , 6.63 (s, 2H) , 5.67 (s, 1H) , 4.50 –4.46 (m, 2H) , 4.27 (s, 2H) , 3.69 –3.65 (m, 2H) , 3.36 (s, 2H) , 2.85 (s, 3H) , 2.32 –2.26 (m, 2H) , 2.03 (s, 3H) , 1.49 –1.42 (m, 1H) , 1.27 –1.23 (m, 1H)
Preparation of (trans) -2- (1- (1-acetylazetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) cyclopropane-1-carboxamide (102)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 540.6.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.48 (s, 1H) , 8.51 (s, 1H) , 7.83 (s, 1H) , 7.49 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 6.84 (d, J =1.6 Hz, 1H) , 6.68 (d, J =1.6 Hz, 1H) , 6.63 (s, 2H) , 5.67 (s, 1H) , 5.19 –5.15 (m, 1H) , 4.56 –4.52 (m, 1H) , 4.37 –4.33 (m, 1H) , 4.28 –4.24 (m, 3H) , 4.07 –4.04 (m, 1H) , 3.37 (s, 2H) , 2.33 –2.24 (m, 2H) , 2.03 (s, 3 H) , 1.80 (s, 3 H) , 1.46 –1.43 (m, 1H) , 1.30 –1.27 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1- (1- (methylsulfonyl) azetidin-3-yl) -1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (103)
LC-MS (ESI) [M+H]  + 576.6.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.49 (s, 1H) , 8.51 (s, 1H) , 7.81 (s, 1H) , 7.52 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 6.84 (d, J =1.2 Hz, 1H) , 6.68 (d, J =1.2 Hz, 1H) , 6.63 (s, 2H) , 5.67 (s, 1H) , 5.23 –5.20 (m, 1H) , 4.28 –4.20 (m, 6H) , 3.36 –3.35 (m, 2H) , 3.12 (s, 3 H) , 2.33 –2.26 (m, 2H) , 2.03 (s, 3 H) , 1.45 –1.43 (m, 1H) , 1.29 –1.27 (m, 1H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2- (4- (methylsulfonyl) -1H-pyrazol-1-yl) cyclopropane-1-carboxamide (104)
Figure PCTCN2020101409-appb-000076
Step 1. To a solution of 1- (2-bromoethyl) -4-iodo-1H-pyrazole (2.00 g, 6.64 mmol) in DMSO (10.0 mL) was added DBU (1, 8-Diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene) (5.00 mL) at room temperature. The mixture was stirred at 80℃ for 18 hours. The mixture was cooled to room temperature. The mixture was diluted with water (50.0 mL) and extracted with ethyl acetate (20.0 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate =5/1) to give 4-iodo-1-vinyl-1H-pyrazole (1.20 g, 51.5%yield) as colorless oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 220.7.
Step 2. To a solution of 4-iodo-1-vinyl-1H-pyrazole (1.70 g, 7.73 mmol) in dichloromethane (20.0 mL) was added Rhodium (II) acetate dimer (500 mg) and ethyl 2-diazoacetate (1.76 g, 15.5 mmol) at 0℃. The mixture was stirred at room temperature for 18 hours, and then diluted with water (30.0 mL) , extracted with dichloromethane (20.0 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate =3/1) to give ethyl (trans) -2- (4-iodo-1H-pyrazol-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (220 mg, 9.32%yield) as a brown solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 306.9.
Step 3. To a solution of ethyl (trans) -2- (4-iodo-1H-pyrazol-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (170 mg, 0.556 mmol) and sodium methanesulfinate (114 mg, 1.12 mmol) in DMSO (4.00 mL) was added (trans) -N1, N2-dimethylcyclohexane-1, 2-diamine (16 mg, 0.112 mmol) and Cu (OTf)  2 (40 mg, 0.112 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 110℃ for 18 hours. The mixture was cooled to room temperature and diluted with water (30.0 mL) , extracted with ethyl acetate (20.0 mL *3) . The combined organic layers was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate =2/1) to give ethyl (trans) -2- (4- (methylsulfonyl) -1H-pyrazol-1-yl) cyclopropane-1-carboxylate (75.0 mg, 52.4%yield) as a brown solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 258.9.
Step 4 -6. According to the method described in the preparation of Compounds 73a/73b, compound 104 was synthesized (27.0 mg, 50.9%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  +521.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 8.69 (s, 1H) , 8.52 (s, 1H) , 7.98 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 6.87 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.70 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.66 (s, 2H) , 6.06 (s, 1H) , 5.68 (s, 1H) , 4.31 -4.26 (m, 3H) , 3.36 -3.32 (m, 2H) , 3.22 (s, 3H) , 2.90 -2.85 (m, 1H) , 2.03 (s, 3H) , 1.94 -1.89 (m, 1H) , 1.67 -1.62 (m, 1H) .
Preparation of 2- (6- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) acetonitrile (105)
Figure PCTCN2020101409-appb-000077
Step 1. To a solution of 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (50 mg, 0.120 mmol) and 2- (6-chloropyridin-3-yl) acetonitrile (37 mg, 0.295 mmol) in dioxane (2.00 mL) was added 4, 5-Bis (diphenylphosphino) -9, 9-dimethylxanthene (28 mg, 0.0.0482 mmol) , cesium carbonate (118 mg, 0.362 mmol) and tris (dibenzylideneacetone) dipalladium (22 mg, 0.0241 mmol) at room temperature. The mixture was irradiated in a microwave at 150℃ for 2 hours under Ar. After being cooled to room temperature, the mixture was diluted with water (30 mL) and extracted with ethyl acetate (20.0 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulphate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography (dichloromethane/methanol=20/1) to give 2- (6- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) acetonitrile (30 mg, 46.9%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 532.0.
Step 2. According to general procedure C, compound 105 was synthesized (11.0 mg, 64.7%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 368.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 10.48 (s, 1H) , 8.61 (s, 1H) , 8.47 -8.45 (m, 2H) , 8.25 (s, 1H) , 7.72 -7.69 (m, 1H) , 7.41 -7.36 (m, 2H) , 6.90 (s,  1H) , 6.63 -6.61 (m, 3H) , 3.99 (s, 2H) , 2.33 (s, 3H) .
Preparation of (6- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) pyridin-3-yl) (morpholino) methanone (106)
Figure PCTCN2020101409-appb-000078
Step 1. To a solution of 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-amine (250 mg, 0.602 mmol) and methyl 6-bromonicotinate (110 mg, 0.509 mmol) in dioxane (15 mL) was added Pd (OAc)  2 (12.5 mg, 0.0509 mmol) , CyJhonPhos (35 mg, 0.101 mmol) and Cs 2CO 3 (490 mg, 1.527 mmol) . After being stirred at 100℃ under argon atmosphere for 16 h, the reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with water (100 mL) and extracted with DCM (50 mL *3) . The combined organic layers was dried over Na 2SO 4 and concentrated in vacuum to give the residue, which was purified by prep-TLC (PE: EA=2: 1, v/v) to give the title compound (100 mg, yield 35.7%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 551.2.
Step 2. To a solution of methyl 6- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) nicotinate (100 mg, 0.182 mmol) in DMSO/H 2O (4.00 mL/1 mL) was added LiOH. H 2O (76.0 mg, 1.82 mmol) . After being stirred at 30℃ for 16 h, the mixture was diluted with H 2O (20 mL) , acidized with HCl (1N) to pH = 5 and extracted with ethyl acetate (15 mL *3) . The combined organic layers were washed with brine (15 mL *3) , dried over Na 2SO 4, filtered and concentrated in vacuum to give the residue, which was purified by prep-TLC (DCM: MeOH = 20: 1, v/v) to give the title compound (80.0 mg, yield 82.0%) as a white solid. LC- MS (ESI) [M+H]  + 537.0.
Step 3. To a solution of 6- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) nicotinic acid (40.0 mg, 0.074 mmol) and morpholine (1.5 eq) in DCM (2 mL) was added TEA (22.5 mg, 0.223 mmol) and HATU (36 mg, 0.962 mmol) . After being stirred at room temperature for 16 h, the mixture was diluted with H 2O (20 mL) and extracted with EA (10 mL *3) . The combined organic phase was dried over Na 2SO 4 , and concentrated in vacuum to give the residue, which was purified by prep-TLC (DCM: MeOH = 20: 1, v/v) to give the title compound (20 mg, yield 48.0%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 606.2
Step 4. According to the method described in general procedure C, compound 106 was synthesized (1.01 mg, yield 6.94%) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 442.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 8.79 (s, 1H) , 8.43 –8.40 (m, 3H) , 7.81 –7.74 (m, 1H) , 7.40 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 6.95 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 6.73 (d, J = 1.2 Hz, 1H) , 3.85 –3.70 (m , 8H) , 2.40 (s, 3H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-7-chloro-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (107)
Figure PCTCN2020101409-appb-000079
To a solution of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (50 mg, 0.123 mmol) in acetonitrile (5.00 mL) was added N-chlorosuccinimide (13 mg, 0.0982 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 50℃ for 3 hours. After being cooled to room temperature, the mixture was purified by Pre-HPLC (NH 3 . H 2O) to give (trans) -N- (8-amino-7-chloro-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (27.83 mg, 51.5%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 442.0.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.73 (s, 1H) , 8.82 (s, 1H) , 7.59 (s, 1H) , 7.32 (s, 1H) , 7.00 (s, 2H) , 6.76 (s, 1H) , 4.72 -4.67 (m, 1H) , 4.58 -4.53 (m, 1H) , 4.11 -4.07 (m, 1H) , 3.78 (s, 3H) , 2.33 -2.26 (m, 2H) , 1.48 -1.44 (m, 1H) , 1.29 -1.24 (m, 1H) , 1.15 (d, J = 6.0 Hz, 3H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-5-chloro-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (108)
Figure PCTCN2020101409-appb-000080
Step 1. To a solution of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (100 mg, 0.245 mmol) in DMF (3 mL) was added NIS (66.0 mg, 0.295 mmol) slowly at 0℃. After being stirred at r.t. for 3 hours, the mixture was diluted with water (10 mL) and extracted with ethyl acetate (10 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by prep-TLC (DCM/MeOH=20/1) to give the product (130 mg, 99.5%yield) as a brown solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 534.3.
Step 2. To a solution of (trans) -N- (8-amino-7-iodo-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (130 mg, 0.244 mmol) in AcOH (1 mL) was added NCS (N-chlorosuccinimide) (33.0 mg, 0.244 mmol) slowly at r.t.. The resulting mixture was stirred at r.t. overnight. The mixture was diluted with a. q. NaHCO 3 (5 mL) and extracted with ethyl acetate (5 mL *3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by prep-TLC (DCM/MeOH=20/1) to give the product (45 mg, 32.5%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 567.8.
Step 3. To a solution of (trans) -N- (8-amino-5-chloro-7-iodo-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (45.0 mg, 0.0794 mmol) and Et 3N (8.00 mg, 0.0794 mmol) in EtOAc (3 mL) was added Pd/C (5.00 mg) under argon. The resulting mixture was stirred at r.t. under H 2 atmosphere for 6 hour. The reaction mixture was filtered and the filtrate was concentrated. The crude was purified by prep-HPLC (NH 3 . H 2O) to give the product (8.57 mg, 24.5%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 442.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 11.64 (s, 1H) , 8.59 (s, 1H) , 7.58 (s, 1H) , 7.31 (s, 1H) , 7.24 (s, 1H) , 6.92 (s, 2H) , 4.72 –4.68 (m, 1H) , 4.51 –4.50 (m, 1H) , 4.10 –4.06 (m, 1H) , 3.77 (s, 3H) , 2.30 –2.24 (m, 2H) , 1.44 –1.42 (m, 1H) , 1.26 –1.24 (m, 1H) , 1.15 (d, J = 6.4 Hz, 3H) .
Preparation of 2- ( (8-amino-6- (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (109)
Figure PCTCN2020101409-appb-000081
Step 1. According to the general procedure F (90℃ under argon atmosphere for 3 hours, 6-chloro-8- ( (diphenylmethylene) amino) cinnolin-3-amine and (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) boronic acid as reactants) , 8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) cinnolin-3-amine was synthesized (95 mg, 6.70%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 483.1.
Step 2. According to the general procedure B, 2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one was synthesized (30 mg, 28.1%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 646.3.
Step 3. According to the general procedure C, 2- ( (8-amino-6- (4-methyl-6- (oxazol-2-yl) pyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (109) was synthesized (5.00 mg, 22.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 482.1.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 9.87 (s, 1H) , 8.57 (s, 1H) , 8.33 (s, 1H) , 8.09 –8.05 (m, 2H) , 7.49 (s, 1H) , 6.90 (s, 1H) , 6.57 (s, 3H) , 6.05 (s, 1H) , 5.00 (s, 2H) , 3.85 –3.82 (m, 2H) , 3.08 –3.06 (m, 2H) , 2.95 (s, 3H) , 2.42 (s, 3H) .
Preparation of (E) -2- (2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-4-ylidene) acetonitrile (110)
Figure PCTCN2020101409-appb-000082
Step 1. To a solution of diethyl (cyanomethyl) phosphonate (127 mg, 0.72 mmol) in THF (2.00 mL) was added NaH (24 mg, 0.60 mmol) at 0℃ and it was stirred at room temperature for 1 hour, followed by dropwise added a solution of 2-bromo-6-methyl-5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepine-4, 7 (8H) -dione (103 mg, 0.40 mmol) in THF (1.00 mL) at 0℃ and then it was stirred at room temperature for another 2 hours. The mixture was quenched with sat. NH 4Cl solution at 0℃ and extracted with EtOAc (5.00 mL x 3) . The combined organic layer was dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated to give the crude product. The residue was purified by prep-TLC (silica gel, petroleum ether: ethyl acetate =1: 3) to give (E) -2- (2-bromo-6-methyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-4-ylidene) acetonitrile (35 mg, 31.3%yield) as a brown oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 281.0; [M-H]  -279.0.
Step 2. According to general procedure B, (E) -2- (2- ( (8- ( (diphenylmethylene) amino) -6- (4-methyl pyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-4-ylidene) acetonitrile was synthesized (15 mg, 24.4%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 616.2; [M-H]  -614.3.
Step 3. According to the general procedure C, (E) -2- (2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-7-oxo-5, 6, 7, 8-tetrahydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-4-ylidene) acetonitrile (110) was synthesized (3.30 mg, %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 452.1; [M-H]  -450.2.  1H NMR (400 MHz, CD 3OD) : δ 8.57 -8.53 (m, 2H) , 8.12 (s, 1H) , 7.69 -7.67 (m, 1H) , 6.92 (s, 1H) , 6.66 -6.64 (m, 2H) , 6.49 (s, 1H) , 4.80 (s, 2H) , 3.80 (s, 2H) , 3.23 (s, 2H) , 2.50 (s, 3H) .
Preparation of (E) -2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-4- ( (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methylene) -5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (111) In a similar manner as preparation of compound 110, (E) -2- ( (8-amino-6- (4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -6-methyl-4- ( (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) methylene) -5, 6-dihydro-4H-pyrazolo [1, 5-d] [1, 4] diazepin-7 (8H) -one (111) was synthesized (7.62 mg, 25.4%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 507.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 9.94 (s, 1H) , 8.46 -8.43 (m, 2H) , 8.10 (s, 1H) , 7.95 (s, 1H) , 7.78 (s, 1H) , 7.36 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.03 (s, 1H) , 6.84 (s, 1H) , 6.59 (s, 1H) , 6.55 (s, 3H) , 5.13 (s, 2H) , 4.69 (s, 2H) , 3.89 (s, 3H) , 2.90 (s, 3H) , 2.33 (s, 3H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (112)
In a similar manner as the preparation of compound 87a/b, (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyanocyclopropane-1-carboxamide (112) was synthesized (3.90 mg, 28.5 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 353.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.75 (s, 1H) , 8.40 (s, 1H) , 7.28 –7.27 (m, 1H) , 6.95 (d, J = 6.0 Hz, 1H) , 6.72 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 4.73 –4.70 (m, 1H) , 4.57 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.09 –4.06 (m, 1H) , 2.86 –2.82 (m, 1H) , 2.20 –2.16 (m, 1H) , 1.67 –1.62 (m, 1H) , 1.48 –1.44 (m, 1H) , 1.31 (d, J = 6.0 Hz, 3H) .
Preparation of (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1-methyl-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (113)
Figure PCTCN2020101409-appb-000083
Step 1. To a solution of 4-iodo-1-methyl-1H-pyrazole (4.50 g, 21.63 mmol) in N, N-dimethylformamide (100.0 mL) was added DIEA (1.40 g, 108.0 mmol) , ethyl methacrylate (7.40 g, 64.9 mmol) , Pd (PPh 3)  2Cl 2 (607 mg, 0.865 mmol) and TBAB (1.40 g, 4.33 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at 110℃ for 16 hours under Ar. The mixture was cooled to room temperature and diluted with water (100.0 mL) , then extracted with ethyl acetate (100.0 mL x 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure to give the crude product. The residue was purified by column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate=2/1) to give ethyl (E) -2- methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) acrylate (1.64 g, 8.45 mmol, 39.1 %yield) as a colorless oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 195.2.  1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8.09 (s, 1H) , 7.74 (s, 1H) , 7.48 (d, J = 0.8 Hz, 1H) , 4.16 (q, J = 7.2 Hz, 2H) , 3.87 (s, 3H) , 2.01 (s, 3H) , 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H) .
Step 2. To a solution of trimethylsulfoxonium iodide (5.24 g, 23.8 mmol) in dimethyl sulfoxide (20.0 mL) was added sodium hydride (722 mg, 18.0 mmol) at room temperature. The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. To the reaction mixture was added a solution of ethyl (E) -2-methyl-3- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) acrylate (1.40 g, 7.22 mmol) in tetrahydrofuran (5.00 mL) at room temperature. The mixture was stirred at 50℃ for 2 days. The mixture was cooled to room temperature and diluted with water (100.0 mL) , extracted with ethyl acetate (100.0 mL x 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure to give the crude product. The residue was purified by column chromatography (petroleum ether/ethyl acetate=1/1) to give ethyl (trans) -1-methyl-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxylate (800 mg crude, 53.3%yield) as a yellow oil. LC-MS (ESI) [M+H]  + 209.1.
Step 3 -6. In a similar manner as the preparation of compound 87a/b, (trans) -N- (8-amino-6- ( (S) -4-methyl-2-oxooxazolidin-3-yl) cinnolin-3-yl) -1-methyl-2- (1-methyl-1H-pyrazol-4-yl) cyclopropane-1-carboxamide (113) was synthesized (2.24 mg, 44.2%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 422.4.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) : δ 10.21 (s, 1H) , 8.41 (s, 1H) , 7.62 (s, 1H) , 7.36 (s, 1H) , 7.27 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 6.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 6.68 (s, 2H) , 4.75 –4.70 (m, 1H) , 4.60 –4.56 (m, 1H) , 4.10 –4.06 (m, 1H) , 3.82 (s, 3H) , 1.70 –1.68 (m, 1H) , 1.33 (d, J =6.0 Hz, 3H) , 1.30 (s, 3H) , 1.27 –1.22 (m, 1H) , 1.03 –1.02 (m, 1H) .
Preparation of N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyano-1-fluorocyclopropane-1-carboxamide (114)
Figure PCTCN2020101409-appb-000084
Step 1. To a solution of ethyl 2-cyano-1-fluorocyclopropane-1-carboxylate (240 mg, 1.529 mmol) in methanol (3.00 mL) and water (3.00 mL) was added sodium hydroxide (73 mg, 1.834 mmol) at room temperature and then it was stirred at room temperature for 4 hours. The mixture was adjusted to pH～2 with 1N KHSO 4 (aq. ) and then it was extracted with ethyl acetate (10.0 mL x 3) . The combined organic layer was washed with brine, dried over sodium sulfate anhydrous, filtered and concentrated under reduced pressure to give crude 2-cyano-1-fluorocyclopropane-1-carboxylic acid (90 mg crude, 45.6%yield) as a brown oil, which was used for the next step directly. LC-MS (ESI) [M-H]  -128.1.
Step 2-3. In a similar manner as the preparation of compound 87a/b, N- (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) -2-cyano-1-fluorocyclopropane-1-carboxamide (114) was synthesized (3.30 mg, 10.3%yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 420.2.  1H NMR (400 MHz, CD 3OD) : δ 8.62 (s, 1H) , 7.39 (s, 1H) , 6.95 (s, 1H) , 6.83 (s, 1H) , 4.38 (t, J = 4.4 Hz, 2H) , 3.48 (t, J = 4.4 Hz, 2H) , 2.89 -2.71 (m, 1H) , 2.18 -2.12 (m, 2H) , 2.10 (s, 3H) .
Preparation of 2- ( (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -5-methyl-4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazine 6, 6-dioxide (115)
Figure PCTCN2020101409-appb-000085
Step 1. According to the general procedure B, tert-butyl 7- (8- ( (diphenylmethylene) amino) -3- ( (5-methyl-6, 6-dioxido-4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazin-2-yl) amino) cinnolin-6-yl) -8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazine-1-carboxylate was synthesized (6.67 mg, 25.1 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 758.2.
Step 2. According to the general procedure E, 2- ( (8-amino-6- (8-methyl-2, 3-dihydro-1H-pyrido [2, 3-b] [1, 4] oxazin-7-yl) cinnolin-3-yl) amino) -5-methyl-4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazine 6, 6-dioxide (115) was synthesized (5.47 mg, 56.0 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 494.6.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.05 (s, 1H) , 7.97 (s, 1H) , 7.35 (s, 1H) , 6.64 (s, 1H) , 6.51 (s, 3H) , 6.23 (s, 1H) , 5.65 –5.63 (m, 3H) , 4.62 (s, 2H) , 4.27 (s, 2H) , 3.38 –3.36 (m, 2H) , 2.88 (s, 3H) , 2.04 (s, 3 H) .
Preparation of 2- ( (8-amino-6- (5-amino-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -5-methyl-4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazine 6, 6-dioxide (116)
In a similar manner as the preparation of compound 115, 2- ( (8-amino-6- (5-amino-4-methylpyridin-3-yl) cinnolin-3-yl) amino) -5-methyl-4, 5-dihydro-7H-pyrazolo [5, 1-d] [1, 2, 5] thiadiazine 6, 6-dioxide (116) was synthesized (4.36 mg, 0.00967 mmol, 39.5 %yield) as a yellow solid. LC-MS (ESI) [M+H]  + 452.5.  1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.06 (s, 1H) , 7.99 (s, 1H) , 7.95 (s, 1H) , 7.67 (s, 1H) , 6.66 (s, 1H) , 6.54 –6.51 (m, 3H) , 6.23 (s, 1H) , 5.62 (s, 2H) , 5.22 (s, 2H) , 4.62 (s, 2H) , 2.88 (s, 3H) , 2.02 (s, 3 H) .
Biological Evaluation
Exemplary compounds of Formula (I) or (Ia) were tested to assess compound inhibition of HPK-1. The Ki or IC 50 for each exemplary compound were determined in binding or ADP-Glo assays.
Biochemical Binding Assay
1. Assay Principle
Figure PCTCN2020101409-appb-000086
Eu Kinase Binding Assays are based on the binding and displacement of a proprietary, Alexa
Figure PCTCN2020101409-appb-000087
647-labeled, ATP-competitive kinase inhibitor scaffold (kinase tracer) to HPK1. Binding of the tracer to the kinase is detected using anti‐tag antibody, which binds to HPK1. Simultaneous binding of both the tracer and antibody to HPK1 results in a high degree of FRET (fluorescence resonance energy transfer) from the europium (Eu) donor fluorophore to the Alexa
Figure PCTCN2020101409-appb-000088
647 acceptor fluorophore on the kinase tracer. Binding of an inhibitor to HPK1 competes for binding with the tracer, resulting in a loss of FRET.
2. Materials
White ProxiPlate 384F (assay plate) (PerkinElmer #6008289) ;
384 well-microplate (compound plate) (Corning #3701) ;
HPK-1 Enzyme (SingalChem-M23-11G)
Tracer 222 (Invitrogen-PV6121)
Eu-Anti-GST antibody (Invitrogen-PV5594)
Assay Buffer: 2mM DTT, 0.01%BRIJ-35, 100mM MgCl 2, 50mM HEPES
3. Methods
3.1 Plate Layout and Compound Dilution:
Stock solution of test compounds were prepared at concentration of 5mM (100X) . For compound dilution in 384-plate, prepare 12.5μL/well of stock solution in columns 2-13, 10uL/well of DMSO in columns 3-12, 14-23, wells A1-H1, I24-P24. For the reference compound, the top concentration was 1mM. Add 10μL/well 2mM staurosporine in wells J1-P1 and A24-H24. All point 5-fold compound serial dilution was performed. From the plate were transferred 2.5μL of the solutions from column 2 and column 13 to the 10μL DMSO in columns 3 and 14 &so on.
The compound plate was centrifuged at 2500rpm for l min. Transfer 80μL of the compounds solution into an assay plate. One compound plate makes two assay plates.
3.2 Assay Condition and Parameters:
2nM HPK1, 2nM Eu-Anti-GST Ab, and 15nM Tracer222, with 60min incubation time.
TR_FRET, 340nm ex/615nm and 665nm em; 100usee Delay; and 200usee integration.
3.3 Binding Assay:
4μL 2X HPK1 and Eu-anti-GST antibody were added to each well of the assay plate. The solutions were incubated in a 23℃ incubator for 1h. To each well of the assay plate was added Add 4μL 2X Tracer-222 to each well and again incubated in a 23 ℃ incubator for lh.
3.4 Data Analysis:
Compound K was analyzed using Morrison ki fit model in XL-fit
fit = (l- ( ( ( (E+x) + (Ki* (l+ (S/Kd) ) ) ) - ( ( ( ( (E+x>+- (Ki* (l+ (S/Kd) ) ) ) 2) - ( (4*E) *c) ) ^0.5) ) / (2*E) ) )
E = enzyme concentration S= Tracer222 concentration, Kd = Tracer222 Kd
ADP-Glo Assay
1. Materials and Instrumentation
Tris (Sinopharm) ,
MgCl 2, DTT (Sigma)
HPK1 enzyme (Carna) , BSA (PE)
ADP-Glo Kinase Assay kits, ATP (Promega)
384 polystyrene shallow flat white (Greiner)
Biotek plate reader (Biotek)
Microplate low-speed centrifuge (Xiangzhi)
2. Method
2.1 Solution preparation
a. Assay buffer: Tris (40mM) , MgCl 2 (20mM) , BSA (0.1%) , DTT (0.5mM) in ddH 2O
b. Kinase solution : HPK-1 (0.2ng/μL) in 1X assay buffer
c. Substrate solution: ATP (2μM) in 1X assay buffer
d. Inhibitor solution: Starting at 1000nM, 3X dilution, 12 concentration points.
2.2 Assay protocol
a. 50X dilution of test compounds and reference compound stock solution (10mM) in 100%DMSO. 4X series dilution of test compounds by DMSO in 96-well dilution plate. Mix 1μL diluted inhibitor solution with 49μL assay buffer;
b. Vibrate for 20mins
c. Add 2μL HPK-1 to 384-well assay plate with 1μL inhibitor solution. 1000 rpm/min 1 min, incubate at 25℃ for 10 min.
d. Transfer 1μL substrate solution to assay system, 1000rpm/min 1 min, incubate at 25℃ for 60mins.
e. Add 4μL ADP-Glo reagent, 1000 rpm/min 1 min, incubate at 25℃ for 40 min.
f. Transfer 8μL Detection reagent to assay system, 1000rpm/min 1 min, incubate at 25℃ for 40 min
g. Reader RLU (Relative luminescence unit) signal in plate reader.
Table 2: IC 50 value of different Compounds
Figure PCTCN2020101409-appb-000089
Figure PCTCN2020101409-appb-000090
Exemplary compounds of Formula (I) or (Ia) were tested in Jurkat cell functional Assay and Pan T cell functional Assay.
Cellular Functional Assay on Jurkat cells
1. Materials and Instrumentation
Figure PCTCN2020101409-appb-000091
2. Cell lines and cell culture
Jurkat E6-1 cell line (Cat#SCSP-513) was purchased from Chinese Academy of Sciences. The cells are cultured in full medium (90%RPMI Medium, 10%FBS) . Cells are passaged about three times a week, and maintained between 1× 10 5 cells/mL to 1× 10 6 cells/mL confluence.
3. Working solution preparation for test compound
3.1 Test compounds were initially dissolved in DMSO with a final concentration of 10mM as stock solution.
3.2 Stock solution of each compound was serial-diluted by ratio of 1: 3 with DMSO to prepare additional 6 intermediate solutions including 7 points
3.3 Before the assay, the working solutions were prepared by dilution of intermediate solutions in 250 folds using full medium (4x final concentration)
4. Experimental procedures.
4.1 Count cells and determine the viable cell density, Dilute cells with incubation medium to a working cell density of 1 × 10 6 viable cells/mL.
4.2 Pipette100μLJurkat cell suspension into each well of a 96-well culture plate.
4.3 Pipette 50μL working solution of test compound into respective wells of the 96-well culture plate to start the reaction. Return the plate to the incubator for 1 hour.
4.4 Dilute the ImmunoCult Hu CD3/CD28 T cell activator: Add 100μL of stock solution into 900μL full medium, then pipette 50μL working solution of T cell activator into respective wells of the 96-well culture plate to start the reaction. Return the plate to the incubator for 24 hours.
4.5 After 24 hours incubation time, extract 100μL of the culture supernatant for IFN-beta detection.
5. Data Analysis
All calculations were carried out and the IC 50 determined by Graphpad prism V8.
Cellular Functional Assay on CD3 + T cell
1. Materials and instrumentation
Figure PCTCN2020101409-appb-000092
2. Preparation of CD3 + cells
2.1 Cryopreserved PB CD3 + Total T cells (Cat#SLB-CD3T-10B) were purchased from Saily Bio and stored in liquid nitrogen.
2.2 Prepare fresh full medium prior to use: Add 4μL rhIL-2 into ImmunoCult-XF T Cell Exp Medium (rhIL-2: 32.8 IU/ml, 800pg/ml) .
2.3 Prepare CD3 + cells: Incubation Completely medium in a 37 ℃ water bath, and allow warming for at least 15 minutes prior to use. Transfer a vial of cryopreserved T cells from storage, ensuring that vials remain at cryogenic temperatures until thawing process ensures. Thaw the cells by placing the vial in a 37℃ water bath and gently shaking the vials for 2 minutes. After thawing was completed, spray vial with 70%ethanol, transfer the vial to a biosafety cabinet. Use wide-bore pipette tip to transfer T cells into 25 mL conical tube containing full culture medium. Counting cells by placing the 50 mL conical tube into a centrifuge and spin at 1200 rpm for 10 minutes. Upon completion of spin, aspirate the medium and re-suspend T cells in enough incubation medium at a density of 1 × 10 6 cells/mL, transfer the cells to T25 cell dish and return the plate to the incubator for 1 hours.
3. Working solution preparation for test compound
3.1 Test compounds were initially dissolved in DMSO with final concentration of 10mM as stock solution.
3.2 Stock solution of each compound was serial-diluted by ratio of 1: 3 with DMSO to prepare additional 6 intermediate solutions including 7 points
3.3 Before the assay, the working solutions were prepared by dilution of intermediate solutions in 250 folds using complete medium (4x final concentration)
4. Experimental procedures:
4.1 Pipette100μL T cell suspension into each wells of a 96-well culture plate.
4.2 Pipette 50μL working solution of test compound into respective wells of the 96-well culture plate to start the reaction. Return the plate to the incubator for 1 hour.
4.3 Dilution the ImmunoCult Hu CD3/CD28 T cell activator, Add 100μL stock solution into 900μL full medium, then pipette 50μL working solution of T cell activator into respective wells of the 96-well culture plate to start the reaction. Return the plate to the incubator for 24 hours.
4.4 After 24 hours incubation time, extract 100μL cell culture supernatant for IFN-beta detection.
5. Data Analysis
All calculations were carried out and the IC 50 determined by Graphpad prism V8. Emax=maximum percentage of IL-2 increase to untreated cells.
Table 3
Figure PCTCN2020101409-appb-000093
Figure PCTCN2020101409-appb-000094
Figure PCTCN2020101409-appb-000095
Metabolic stability in hepatocytes
A compound described herein was incubated with hepatocytes derived from humans, monkeys, dogs, rats and mice at cell density of cell density of 0.5 × 10 6 viable cells/mL. The incubation was carried out at the compound concentration of 1 μM. Samples were taken at 0, 15, 30, 60, 90 and 120 minutes and mixed with acetonitrile with internal standard to stop the reaction. The quenched samples were centrifuged and the supernatants were analyzed using LC/MS/MS to determine remaining of the compound at each time point. t 1/2 was calculated from the disappearance of the compound. In certain embodiments, the determined t 1/2 and in vitro clearance (Cl) of Compound 87b in different species is described herein in Table 4. A common approach (Obach RS (1999) , Drug Metabolism and Disposition 27, 1350 –1359) was used in calculation of in vitro CL from determined metabolic stability t 1/2.
Table 4. Metabolic stability of Compound 87b in hepatocytes
Species t 1/2 (min) In vitro CL (mL/min/kg)
Human 394 6.26
Monkey 76 26.2
Dog > 1253 ＜ 6.10
Rat 76 33.5
Mouse 128 52.9
Pharmacokinetics
A dosing solution of a compound described herein prepared in 5%DMSO/40%PEG400 /55%water at 0.2 mg/mL was administered to a group of 2-3 male CD-1 mice (4-6 weeks old, 20-30 grams) via intravenous (IV) bolus at 1 mg/kg. Blood samples were collected via the jugular vein into tubes containing sodium heparin as the anticoagulant at 0.033, 0.083, 0.25, 0.5,  1, 2, 4, 8 and 24 hours post dose. The blood samples were then centrifuged and the resultant plasma samples were analyzed using LC/MS/MS to determine concentration of the compound. Non-compartmental model was used to calculate pharmacokinetic (PK) parameters. In certain embodiments, the pharmacokinetics of the compounds in mice is described herein in Table 5.
Table 5. Pharmacokinetics in mice
Figure PCTCN2020101409-appb-000096

Claims (12)

  1. A compound of Formula (I) :
    Figure PCTCN2020101409-appb-100001
    or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof, 
    wherein:
    R 1 is C-M or N;
    M is H, halo, CN;
    R 2 is selected from the group consisting of 5-10 membered heteroaryl or 5-10 membered heterocyclyl, having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N, and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or a C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl, fused with a ring selected from the group consisting of 5 or 6 membered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6-10 aryl and C3-7 cycloalkyl, wherein the C6-10 aryl or 5-10 membered heteroaryl of R 2 and the fused ring are optionally substituted with one to four substituents;
    R 3 is hydrogen, cyano, halogen; and
    R 4 is A-C (O) -or D;
    A is selected from the group consisting of C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl, C4-9 heterocyclyl, -NHR or -OR; wherein the C0-6 alkyl, C3-7 cycloalkyl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of A are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; R is independently C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl, or C4-9 heterocyclyl; wherein the C0-6 alkyl, C2-6 alkenyl, C3-7 cycloalkyl, C6-10 aryl, C5-9 heteroaryl and C4-9 heterocyclyl of R are optionally substituted independently with one, two, three, four or five substituents; and
    D is a C6-10 aryl, or a 5-10 membered heteroaryl having 1-4 heteroatoms selected from O, S, and N; or a 5-10 membered heteroaryl fused with a ring selected from the group consisting of 5-or 6-numbered heteroaryl, 5-10 membered heterocyclyl, C6 aryl and C3-7 cycloalkyl; wherein the 5-10 membered heteroaryl of D and the fused ring are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
  2. The compound of claim 1, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof, wherein R 1 is selected from the group consisting of CH, CF, CCl, CCN and N.
  3. The compound of any one of claims 1 and 2, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof, wherein:
    R 2 is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or
    R 2 is a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and optionally substituted with one, two, three, four or five substituents, wherein the heterocyclyl is saturated or partially unsaturated; or
    R 2 is a C6-10 aryl optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or
    R 2 is a C6-10 aryl or a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, wherein the C6-10 aryl or the 5 or 6 membered heteroaryl is fused with a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the aryl, the heteroaryl and the heterocyclyl are optionally substituted with one, two, three or four substituents.
  4. The compound of any one of claims 1-3, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof, wherein R 3 is H or Cl.
  5. The compound of any one of claims 1-4, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof, wherein:
    A is a C3, C4, C5 or C6 cycloalkyl or a 4, 5 or 6 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the  cycloalkyl or heterocyclyl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or
    A is -OR, wherein R is a 4, 5 or 6 heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the heterocyclyl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
  6. The compound of any one of claims 1-5, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof, wherein:
    D is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N, wherein the heteroaryl is optionally substituted with one, two, three, four or five substituents; or
    D is a 5 or 6 membered heteroaryl having 1, 2, 3 or 4 heteroatoms selected from O, S and N and fused with a 5, 6 or 7 membered heterocyclyl having 1, 2 or 3 heteroatoms selected from O, S and N and being saturated or partially unsaturated, wherein the heteroaryl and the heterocyclyl are optionally substituted with one, two, three, four or five substituents.
  7. The compound of claim 1, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoismer, tautomer, solvate or prodrug thereof, wherein the compound is selected from the group consisting of those listed in Table 1.
  8. A pharmaceutical composition comprising a compound of any one of claims 1-7, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof, and one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  9. A method of inhibiting HPK1 activity comprising administering to a subject in need thereof a compound of any one of claims 1-7, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof.
  10. A method of treating a disease or disorder associated with inhibition of HPK1 interaction comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of a compound of any one of claims 1-7, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof.
  11. A method for treating cancer comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of the compound of any one of claims 1-7, or a pharmaceutically acceptable salt, stereoisomer, tautomer, solvate or prodrug thereof.
  12. The method of claim 11, wherein the cancer is selected from the group consisting of breast cancer, colorectal cancer, lung cancer, ovarian cancer, and pancreatic cancer.
PCT/CN2020/101409 2019-07-11 2020-07-10 Cinnolines as inhibitors of hpk 1 WO2021004535A1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962872966P 2019-07-11 2019-07-11
US62/872,966 2019-07-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021004535A1 true WO2021004535A1 (en) 2021-01-14

Family

ID=74114370

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2020/101409 WO2021004535A1 (en) 2019-07-11 2020-07-10 Cinnolines as inhibitors of hpk 1

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW202116753A (en)
WO (1) WO2021004535A1 (en)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11071730B2 (en) 2018-10-31 2021-07-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11203591B2 (en) 2018-10-31 2021-12-21 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
WO2022197763A1 (en) * 2021-03-17 2022-09-22 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Inhibitors of plasma kallikrein
US11453681B2 (en) 2019-05-23 2022-09-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted eneoxindoles and uses thereof
US11787796B2 (en) 2019-09-18 2023-10-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma Kallikrein inhibitors and uses thereof

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008141012A2 (en) * 2007-05-11 2008-11-20 Mpex Pharmaceuticals, Inc. Quaternary alkyl ammonium bacterial efflux pump inhibitors and therapeutic uses thereof
WO2017106556A1 (en) * 2015-12-17 2017-06-22 Gilead Sciences, Inc. Tank-binding kinase inhibitor compounds
WO2018102366A1 (en) * 2016-11-30 2018-06-07 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Anilinopyrimidines as haematopoietic progenitor kinase 1 (hpk1) inhibitors
WO2018183956A1 (en) * 2017-03-30 2018-10-04 Genentech, Inc. Naphthyridines as inhibitors of hpk1
WO2019089835A1 (en) * 2017-10-31 2019-05-09 Samumed, Llc Diazanaphthalen-3-yl carboxamides and preparation and use thereof
WO2020069402A1 (en) * 2018-09-30 2020-04-02 Genentech, Inc. Cinnoline compounds and for the treatment of hpk1-dependent disorders such as cancer

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008141012A2 (en) * 2007-05-11 2008-11-20 Mpex Pharmaceuticals, Inc. Quaternary alkyl ammonium bacterial efflux pump inhibitors and therapeutic uses thereof
WO2017106556A1 (en) * 2015-12-17 2017-06-22 Gilead Sciences, Inc. Tank-binding kinase inhibitor compounds
WO2018102366A1 (en) * 2016-11-30 2018-06-07 Ariad Pharmaceuticals, Inc. Anilinopyrimidines as haematopoietic progenitor kinase 1 (hpk1) inhibitors
WO2018183956A1 (en) * 2017-03-30 2018-10-04 Genentech, Inc. Naphthyridines as inhibitors of hpk1
WO2019089835A1 (en) * 2017-10-31 2019-05-09 Samumed, Llc Diazanaphthalen-3-yl carboxamides and preparation and use thereof
WO2020069402A1 (en) * 2018-09-30 2020-04-02 Genentech, Inc. Cinnoline compounds and for the treatment of hpk1-dependent disorders such as cancer

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11071730B2 (en) 2018-10-31 2021-07-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11203591B2 (en) 2018-10-31 2021-12-21 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11897878B2 (en) 2018-10-31 2024-02-13 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11925631B2 (en) 2018-10-31 2024-03-12 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
US11453681B2 (en) 2019-05-23 2022-09-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted eneoxindoles and uses thereof
US11787796B2 (en) 2019-09-18 2023-10-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Plasma Kallikrein inhibitors and uses thereof
WO2022197763A1 (en) * 2021-03-17 2022-09-22 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Inhibitors of plasma kallikrein

Also Published As

Publication number Publication date
TW202116753A (en) 2021-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11130759B1 (en) 2-oxoquinazoline derivatives as methionine adenosyltransferase 2A inhibitors
WO2021004535A1 (en) Cinnolines as inhibitors of hpk 1
JP6378785B2 (en) TANK binding kinase inhibitor compounds
ES2968252T3 (en) Compound 8,9-dihydroimidazole[1,2-a]pyrimido[5,4-e]pyrimidin-5(6H)-ketone
JP5894980B2 (en) Heterocyclic compounds and uses thereof
TWI464168B (en) 1h-imidazo[4,5-c]quinolinone derivatives
JP6297570B2 (en) Pharmacologically active compounds
EP3841102B1 (en) Tetrahydropyridopyrimidine derivatives as ahr modulators
KR102148681B1 (en) Heteroaromatic compounds as pi3 kinase modulators
KR20120130294A (en) Bicyclic compounds and their uses as dual c-src/jak inhibitors
JP2020509089A (en) FGFR inhibitors and uses thereof
AU2012310168B2 (en) 6 - substituted 3 - (quinolin- 6 - ylthio) - [1,2,4] triazolo [4, 3 -a] pyradines as tyrosine kinase
BR112012003709B1 (en) heterocyclic compounds and their uses
TWI601724B (en) Imidazo quinoline derivatives and salts thereof, preparation process and pharmaceutical use thereof
WO2022265993A1 (en) Urea derivatives which can be used to treat cancer
US20230067237A1 (en) Caffeine inhibitors of mthfd2 and uses thereof
JP2023533771A (en) Triazine-based compound and its composition and use
CA3013490C (en) Quinoline analogs as phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors
KR20210083293A (en) 5-azaindazole derivatives as adenosine receptor antagonists
JP2014534264A (en) Heterocyclic compounds and uses thereof
AU2021226411A1 (en) Pyridopyrimidine derivatives useful in modulation of AhR signalling
CN103596953A (en) Pyridonaphthyridine PI3K/mTOR dual inhibitors and preparation and use thereof
WO2024076300A1 (en) Compounds useful in modulation of ahr signalling

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20836104

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20836104

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 12/05/2023)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20836104

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1