WO2000004000A1 - Derives de piperazinones et leurs applications - Google Patents

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WO2000004000A1
WO2000004000A1 PCT/FR1999/001747 FR9901747W WO0004000A1 WO 2000004000 A1 WO2000004000 A1 WO 2000004000A1 FR 9901747 W FR9901747 W FR 9901747W WO 0004000 A1 WO0004000 A1 WO 0004000A1
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WO
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amino
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alkyl
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oxopiperazino
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PCT/FR1999/001747
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Christophe Yue
Marguerite Henry
Thierry Giboulot
Brigitte Lesur
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Laboratoire L. Lafon
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Definitions

  • the present invention relates to new compounds which are inhibitors of the binding of fibrinogen to the Gpllb / IIIa platelet receptors, and which can be used therapeutically as antithrombotics.
  • platelet aggregation represents a key stage because it is at the origin of the gravity of the phenomenon. Indeed, from the initiation of the thrombus, in particular in the arterial blood circulation, the bringing into play of several interdependent biochemical reactions induces the aggregation of an increasingly large number of platelets through the transformation of the fibrinogen soluble in insoluble fibrin filaments which increase the size of the platelet cluster, first at the very site of the arterial vascular lesion, then increasingly in the lumen of the vessel.
  • Gpllb / IIIa receptors In this mechanism of platelet aggregation, the activation of Gpllb / IIIa receptors is at the origin of the amplification of platelet aggregation. Fibrinogen, which can bind its two dimers to these receptors, enhances the binding of platelets to each other and thus induces the formation of a platelet mass forming a thrombus at the rupture site of the atheroma plaque.
  • This platelet aggregation mechanism is particularly active in all arterial thromboses that they appear during interventional cardiology practices (percutaneous transluminal angioplasty; placement of "stents"), cardiac surgery (aorto-coronary artery bypass grafting; valvular surgery), during acute cardiac diseases (myocardial infarction, unstable angina, acute coronary syndromes, etc.) or during certain cerebral ischemias, or finally during myocardial ischemias which can complicate the consequences of antithrombotic treatment.
  • interventional cardiology practices percutaneous transluminal angioplasty; placement of "stents”
  • cardiac surgery aorto-coronary artery bypass grafting; valvular surgery
  • acute cardiac diseases myocardial infarction, unstable angina, acute coronary syndromes, etc.
  • cerebral ischemias or finally during myocardial ischemias which can complicate the consequences of antithrombotic treatment.
  • Reducing or preventing the activation of platelets in contact with a ruptured atherosclerotic plaque therefore represents an original and effective therapeutic approach to the treatment of thromboses, in particular arterial thromboses and therefore a means of effective prevention of acute coronary syndromes, including angina unstable and myocardial infarction.
  • the present invention aims to provide new competitive inhibitors of fibrinogen binding to Gpllb / IIIa receptors which can be used as antithrombotic drugs.
  • the present invention further aims to provide compounds which can be administered orally, which allow obtaining a prolonged duration of action and which minimize or avoid the risks of bleeding.
  • R is chosen from hydrogen, a CC 4 alkyl or phenyl (C ⁇ C 4 alkyl) group
  • R 2 is chosen from hydrogen, the hydroxyl group and a protective group from the amidino group;
  • R 3 is chosen from - hydrogen,
  • heteroaryl groups chosen from pyridyl, thienyl, furannyl, quinolyl, benzodioxannyl, benzodioxolyl, benzothienyl, benzofuranyl and pyrazinyl groups;
  • R 4 and R 5 are chosen independently of one another from hydrogen, an alkyl group or, together with the nitrogen atom, form a group chosen from the piperidinyl and morpholinyl groups, the aryl and heteroaryl groups which may be substituted by one or more groups independently chosen from halogens, CC 4 alkyl, trifluoromethyl, (C 1 -C 4 ) alkyl, thio, C 1 -C 6 alkyl sulfonyl, (C 1 alkyl) groups
  • aryl group mention may be made of phenyl, ⁇ -naphthyl, ⁇ -naphthyl and fluorenyl groups.
  • the alkyl groups in can be linear or branched.
  • methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl and pentyl groups examples, mention may be made of methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl and pentyl groups.
  • the alkynyl groups may be, for example, the ethynyl, propargyl, butynyl groups.
  • the alkenyl groups can be, for example, vinyl and allyl groups.
  • CC 4 alkoxy groups can likewise be linear or branched. As examples, mention may be made of methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy groups.
  • the halogens can be chosen from fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • salts with pharmaceutically acceptable acids designate the salts which give the biological properties of the free bases, without having an undesirable effect.
  • These salts can be in particular those formed with mineral acids, such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid; acidic metal salts, such as disodium orthophosphate and monopotassium sulfate, and organic acids.
  • the compounds of formula I can be prepared by: a) reaction of an acid of formula
  • R is a CC 4 alkyl or phenyl group
  • the reaction of the acids of formula II with the amines of formula III can be carried out in a polar solvent such as DMF, THF or ethyl acetate, in the presence of a coupling agent (DCC / HOBT, BOP; isobutyl chloroformate ) at a temperature of 15 to 50 ° C.
  • a coupling agent DCC / HOBT, BOP; isobutyl chloroformate
  • the group Z can be converted to amidoxime by adding hydroxylamine to the nitrile group in the presence of an appropriate base (K 2 CO 3 , Et 3 N, C 2 H 5 ONa) in an alcoholic solvent.
  • an appropriate base K 2 CO 3 , Et 3 N, C 2 H 5 ONa
  • the group Z can also be converted to imidate by addition of ethanol in the presence of HCl in ethyl acetate.
  • the imidate obtained is then converted into compounds of formula (I) in which R 2 is hydrogen and -NR 4 R 5 is either a piperidinyl group or a morpholinyl group, by reaction with the corresponding amine in ethanol-acetate medium. 'ethyl.
  • the 4-fluorobenzonitrile is reacted with an excess of ethylenediamine in an aprotic solvent to give 4- (2-aminoethyl) benzonitrile which is then mono-alkylated with ethyl bromoacetate in a polar solvent such as ethanol or acetonitrile in the presence of an inorganic base or a tertiary amine.
  • a polar solvent such as ethanol or acetonitrile
  • addition salts are obtained conventionally by reaction of the compound of formula I with a pharmaceutically acceptable acid in an appropriate solvent.
  • the bases can be obtained from the addition salts by treatment with a strong base.
  • Example 1 The method described in Example 1 was used to prepare the following products:
  • Example 12 The method described in Example 12 was used to prepare the following products:
  • Example 16 The method described in Example 16 was used to prepare the following products (with transformation of acetate into hydrochloride for the compounds of Examples 17, 19, 28 and 30).
  • EXAMPLE 22 Acetate of 3 - ⁇ [2- (4- ⁇ 4- [amino (imino) methyl] phenyl ⁇ -2- oxopiperazino) acetyl] amino ⁇ -5-ethyl phenylpentanoate (CRL 42904)
  • Example 18 ( ⁇ 2- [4- (4- ⁇ amino [(ethoxycarbonyl) imino] methyl ⁇ phenyl) -2- oxopiperazino] acetyl ⁇ amino) -3- (1,3-benzodioxol-5-yl) propanoate ethyl (CRL42960)
  • the product of Example 18 is transformed into the hydrochloride by the addition of a hydrochloric acid solution HCl 2N followed by filtration.
  • Example 32 The method described in Example 32 was used to prepare the following products:
  • the study of the inhibitory activity of platelet aggregation of the compounds of formula I was carried out in vitro, that is to say by direct contact of solution of variable concentrations of the compounds with platelets freshly separated from a sample. whole blood, taken under standardized conditions, from laboratory animals (guinea pig) and from healthy human subjects who have not received substances or drugs which may interfere with blood clotting.
  • the anti-aggregating activity of platelets has also been studied ex vivo / vitro, that is to say after administration of the substances claimed in the guinea pig to measure the intensity and the duration of the anti-aggregating action induced by the absorbed fraction. and circulating in the blood of the product studied.
  • Plasma samples are taken by intracardiac puncture from male Dunkin-Hartley guinea pigs (weight about 330 g), at the rate of 4.5 ml per 0.5 ml of trisodium citrate (concentration of the aqueous solution: 1.55%). in order to prevent any trace of coagulation.
  • Platelet rich plasma (PRP) is obtained by centrifuging whole blood tubes for 15 minutes at 150 g.
  • the PRPs are grouped into "pools". A count of the platelets contained in these pools is performed using a Coulter ZM type hematology automat: if necessary, a dilution is carried out so that the concentration of plasma in platelets is between 200,000 and 400,000 platelets / mm 3 . Simultaneously, other samples from these pools are used to prepare platelet-poor plasma (PPP) by centrifugation at 1,500 g for 15 minutes.
  • PPP platelet-poor plasma
  • the kinetic study of platelet aggregation is carried out by adding a collagen solution (1 ⁇ g / ml) to a volume of PRP, using an aggregometer of the Chrono-log Corporation type (490 - D ⁇ or 560 VS) which uses optical detection of the appearance of the thrombus.
  • the determination of the inhibitory concentration 50% (Cl ⁇ ) is carried out by adding to samples of PRP pools, a determined volume of solvent (control reference) and increasing concentrations of the compounds: 1.5 x 10 8 M, 7 x 10 "8 M, 1.5 x 10 '7 M, 3 x 10 " 7 M, 7 x 10 "7 M, 1.5 x 10- ° M and 7 x 10 -5 M. Measures of inhibition of aggregation are done after 3 minutes of contact at 37 ° C with stirring.
  • venous blood is taken by puncture in a vein of the elbow fold to be collected in a glass tube containing an aqueous solution of sodium citrate. 0.129 M (1 volume of citrate solution for 9 volumes of blood).
  • PRP platelet-rich plasma
  • PRP platelet-poor plasma
  • a platelet count is performed using the Coulter ZM counter.
  • Each sample is then used to study the variation in the inhibition of aggregation platelet triggered by the addition of a glucose collagen solution Chromo-par-Reagent from Coultronics (used at a concentration of 5 ⁇ g / ml) according to the addition of increasing concentrations of each compound in a range covering the interval 10 "8 M ⁇ IO " 5 M (example of concentrations: 10 M, 5 x 10 "7 M, 3 x10 " 7 M, 10- 7 M, 8 x10- ° M, 4 x10- ° M, 2 x10 * M, 10 * M, 5 x 10 '5 M, 10 _5 M).
  • an aqueous solution at 10 _3 M is prepared.
  • a control test is introduced intended to check the possible effect of the solvents (reference value) on the platelet aggregation which is measured after 3 minutes of contact at 37 ° C. with stirring.
  • the evaluation of the anti-platelet aggregation activity of the compounds is carried out in the same guinea pigs as those mentioned above (Dunkin-Hartley strain).
  • the administration of each product in a dose range which goes from 150 to 10 mg / kg and of each vehicle (5 ml / kg) is made by gastric route (vg) 1 h or 2 h or 4 h or 6 h or 8 h or 12 h before drawing blood from guinea pigs fasted the day before.
  • the allocation of treatments to animals is random.
  • ND not determinable (insoluble product) -: data not available.
  • the potency of the inhibitory activity of platelet aggregation is found at much lower doses. This is for example the case for CRL 42789, CRL 42788 and CRL 42 903 for which the anti-aggregating action, obtained ex vivo in the guinea pig treated with an oral dose (gastric route) of 10 mg / kg, when the administration is carried out 1 hour and 2 hours before the aggregation test, is 69 and 72% (CRL 42789), 57 and 24% (CRL 42788) or 72% (at 1 hour for CRL 42903), respectively.
  • the present invention therefore also relates to pharmaceutical compositions comprising an effective amount of a compound of formula I or of a salt thereof with pharmaceutically acceptable acids.
  • compositions for inhibiting the aggregation of blood platelets comprising an effective amount of one of these compounds. Its purpose is also
  • a method for treating a thrombosis in a patient comprising the administration to this patient of an effective amount of one of these compounds; - A method for preventing the thrombotic risk in a patient comprising the administration to this patient of an effective amount of one of these compounds.
  • the compounds of formula I can be used, in particular in the following fields: i) Acute prevention of the arterial thrombotic risk during cardiac surgery (coronary bypass) or interventional cardiology (percutaneous transluminal angioplasty, endartectomy, placement of "stent ”) : in these situations, the compounds are added to the recognized preventive treatment of the arterial thrombotic risk; oral administration of acetylsalicylic acid starting before the intervention (150 to 500 mg / d per os) then continuing thereafter; intravenous infusion of unfractionated heparin started during the intervention and then continued for 48 to 96 hours.
  • the administration of the compound of formula I can then be done either orally (0.5 to 1.5 mg / kg) at the same time as the administration of aspirin, or by intravenous infusion (0.25 to 1 mg / kg / 24 h) associated or not with a bolus. After the 48th th hour, if the treatment was administered intravenously, it will be relayed by the oral administration (0.25 to 10 mg / kg in two 12-hour dosing interval) to facilitate the hospitalization care and then in outpatient treatment.
  • these compounds may advantageously be administered at the rate of 1 to 3 oral intakes per day, thanks to their high bioavailability and their long duration of action, the dose being chosen from the range 0.5-10 mg / kg.
  • compositions which comprise one of the active principles described in the present application incorporate the active substance either in the form of the base, or in the form of a pharmaceutically acceptable salt, or also in the form of a pro-drug comprising one or more functions protected, functions which are then released in vivo after oral administration.
  • These pharmaceutical compositions incorporate manufacturing aids, vehicles which are known to those skilled in the art. These are chosen from the panoply of pharmaceutical tools recognized by the Pharmacopoeias. As examples, may be mentioned for the preparation of the dosage forms intended for the oral route: starch, magnesium stearate, talc, gelatin, agar, pectin, lactose, polyethylene glycols, etc.
  • the dosage forms usable will be chosen from the proposals following: breakable tablets or not, capsules, lyocs, granules, powders.
  • the daily oral dosage will be between 0.02 and 50 mg / kg / day in 1 to 3 doses regularly spaced to maintain an effective occupancy rate of receptors Gpllb / llla platelet.
  • the pharmaceutical forms intended for the acute phase of treatment are designed so as to allow an individual dosage adjustment on the basis of the inhibition of the most effective platelet aggregation as a function of the immediate evolution of the operative suites.
  • the lyophilisate the ready-to-use solution for infusion, allows the dosage to be individually adjusted in the dose range 0.01 mg / kg / day - 20 mg / kg / day.

Abstract

La présente invention concerne des composés de formule générale (I) dans lequelle R1, R2, R3, R4 et R5 sont tels que définis à la revendication 1. Ces composés sont utilisables en thérapeutique comme antithrombotiques.

Description

Dérivés de pipérazinones et leurs applications
La présente invention concerne de nouveaux composés qui sont des inhibiteurs de la fixation du fibrinogène sur les récepteurs plaquettaires Gpllb/llla, et qui sont utilisables en thérapeutique comme antithrombotiques.
Au cours des processus pathologiques qui conduisent à la constitution du thrombus (caillot) puis de son extension, l'agrégation plaquettaire représente une étape-clé parce qu'elle est à l'origine de la gravité du phénomène. En effet, dès l'initiation du thrombus, en particulier dans la circulation sanguine artérielle, la mise en jeu de plusieurs réactions biochimiques interdépendantes induit l'agrégation d'un nombre de plus en plus grand de plaquettes par l'intermédiaire de la transformation du fibrinogène soluble en filaments de fibrine insolubles qui augmentent la taille de l'amas de plaquettes, d'abord au siège même de la lésion vasculaire artérielle, puis de plus en plus dans la lumière du vaisseau.
Dans ce mécanisme d'agrégation plaquettaire, l'activation des récepteurs Gpllb/llla est à l'origine de l'amplification de l'agrégation plaquettaire. Le fibrinogène, qui peut se lier par ses deux dimères à ces récepteurs, amplifie la liaison des plaquettes entre elles et induit ainsi la constitution d'une masse plaquettaire formant un thrombus au site de rupture de la plaque d'athérome. Ce mécanisme d'agrégation plaquettaire est particulièrement actif dans toutes les thromboses artérielles qu'elles apparaissent au cours de pratiques de cardiologie interventionnelle (angioplastie percutanée transluminale ; pose de "stents"), de chirurgie cardiaque (pontage aorto- coronarien ; chirurgie valvulaire), au cours de maladies cardiaques aiguës (infarctus du myocarde, angor instable, syndromes coronariens aigus, ..) ou au cours de certaines ischémies cérébrales, ou enfin au cours des ischémies myocardiques qui peuvent venir compliquer les suites d'un traitement antithrombotique.
Réduire ou empêcher l'activation des plaquettes au contact d'une plaque athérosclérotique rompue représente donc une approche thérapeutique originale et efficace du traitement des thromboses, en particulier des thromboses artérielles et donc un moyen de prévention efficace des syndromes coronariens aigus, dont l'angor instable et l'infarctus du myocarde. La présente invention vise à fournir de nouveaux inhibiteurs compétitifs de la fixation du fibrinogène sur les récepteurs Gpllb/llla utilisables comme médicaments antithrombotiques.
La présente invention vise en outre à fournir des composés qui puissent être administrés par voie orale, qui permettent l'obtention d'une durée d'action prolongée et qui minimisent ou évitent les risques de saignement.
La présente invention a pour objet des composés de formule générale (I) :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle : R est choisi parmi l'hydrogène, un groupe alkyle en C C4 ou phényl (alkyle en CΓC4) ;
R2 est choisi parmi l'hydrogène, le groupe hydroxyle et un groupe protecteur du groupe amidino ; R3 est choisi parmi - l'hydrogène,
- les groupes alkyle en C,-^ cycloalkyle mono ou bicyclique en C3-C12, alkényle en C2-C4 ou alkynyle en C2-C4, ces groupes étant éventuellement substitués par des groupes choisis parmi les halogènes et le groupe hydroxy ; - les groupes aryle mono, bi ou tricycliques en C6-C14,
- les groupes hétéroaryle choisis parmi les groupes pyridyle, thiényle, furannyle, quinolyle, benzodioxannyle, benzodioxolyle, benzothiényle, benzofurannyle et pyrazinyle ;
- les groupes phénylalkyle(C1-C4) et naphtylalkyle(C1-C4) éventuellement substitués sur le noyau aryle, et pipéronyie,
R4 et R5 sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi l'hydrogène, un groupe alkyle en ou forment ensemble avec l'atome d'azote un groupe choisi parmi les groupes pipéridinyle et morpholinyle, les groupes aryle et hétéroaryle pouvant être substitués par un ou plusieurs groupes choisis indépendamment parmi les halogènes, les groupes alkyle en C C4, trifluorométhyle, alkyl(C1-C4)thio, alky C^C sulfonyle, alkyl(C
C4)oxy, nitro, les groupes -COOR, -CH2COOR ou -O-CH2-COOR, R étant un groupe alkyle en C,-C4, et le groupe oxo est en position 2 ou 3 sur la pipérazine ; et leurs sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables.
Comme exemple de groupe aryle on peut citer les groupes phényle, α-naphtyle, β-naphtyle, fluorényle. Les groupes alcoyle en
Figure imgf000005_0001
peuvent être linéaires ou ramifiés.
Comme exemples on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tertiobutyle, pentyle.
Les groupes alkynyle peuvent être, par exemple, les groupes éthynyle, propargyle, butynyle. Les groupes alkényle peuvent être, par exemple, les groupes vinyle et allyle.
Les groupes alcoxy en C C4 peuvent de même être linéaires ou ramifiés. Comme exemples on peut citer les groupes méthoxy, éthoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy. Les halogènes peuvent être choisis parmi le fluor, le chlore, le brome et l'iode.
Comme groupes protecteurs du groupe amidino, on peut citer les groupes éthoxycarbonyle, benzyloxycarbonyle, p-nitrobenzyloxycarbonyle et t-butoxycarbonyle. Les "sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables" désignent les sels qui donnent les propriétés biologiques des bases libres, sans avoir d'effet indésirable. Ces sels peuvent être notamment ceux formés avec des acides minéraux, tels que l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'acide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique ; des sels métalliques acides, tels que l'orthophosphate disodique et le sulfate monopotassique, et des acides organiques.
Les composés de formule I peuvent être préparés par : a) réaction d'un acide de formule
Figure imgf000006_0001
dans laquelle Z est un groupe précurseur d'un groupe
Figure imgf000006_0002
avec une aminé de formule
Figure imgf000006_0003
dans laquelle R est un groupe alkyle en C C4 ou phényl(alkyle r obtenir un composé de formule
Figure imgf000006_0004
b) conversion du groupe Z en groupe
Figure imgf000007_0001
et c) éventuellement conversion du groupe R en un atome d'hydrogène.
La réaction des acides de formule II avec les aminés de formule III peut être effectuée dans un solvant polaire tel que DMF, THF ou acétate d'éthyle, en présence d'un agent de couplage (DCC/HOBT, BOP; chloroformiate d'isobutyle) à une température de 15 à 50°C.
Dans le cas où Z est un groupe N≡C-, le groupe Z peut être converti en amidoxime par addition d'hydroxylamine sur le groupe nitrile en présence d'une base appropriée (K2CO3, Et3N, C2H5ONa) dans un solvant alcoolique. L'hydrogénolyse, en présence de palladium sur charbon dans un mélange d'anhydride acétique et d'acide acétique, des composés obtenus conduit aux composés de formule I dans lesquels R2 est l'hydrogène (avec formation directe d'un composé où R.,=H dans le cas où R'1 est un groupe benzyle). Dans le cas où Z est un groupe N≡C-, le groupe Z peut également être converti en imidate par addition d'éthanol en présence d'HCI dans l'acétate d'éthyle. L'imidate obtenu est ensuite converti en composés de formule (I) dans lesquels R2 est un hydrogène et -NR4R5 est soit un groupe pipéridinyle soit un groupe morpholinyle, par réaction avec l'aminé correspondante en milieu éthanol-acétate d'éthyle.
Les composés de formule II à groupe 2-pipérazinone, dans le cas où Z est un groupe nitrile peuvent être obtenus selon le schéma suivant : 00/04000
Figure imgf000008_0001
bromoacétate d'éthyle ! dnsopropyléthylamme
Figure imgf000008_0002
Figure imgf000008_0003
Schéma 1
Le 4-fluorobenzonitrile est mis en réaction avec un excès d'éthylènediamine dans un solvant aprotique pour donner le 4-(2- aminoéthyl)benzonitrile qui est ensuite mono-alkylé par le bromoacétate d'éthyle dans un solvant polaire comme l'éthanol ou l'acétonitrile en présence d'une base inorganique ou d'une aminé tertiaire. Une acylation avec du chlorure de chloroacétyle suivi d'une cyclisation et d'une hydrolyse conduisent à l'acide (I).
Les composés de formule II à groupe 3-pipérazinone dans le cas où Z est un groupe nitrile peuvent être obtenus selon le schéma suivant :
Figure imgf000009_0001
Schéma 2
Le 4-(2-aminoéthyl)benzonitrile est dialkylé par le bromoacétate d'éthyle ; la cyclisation s'opère en présence d'une amine tertiaire, d'une base inorganique ou de leur mélange ; après hydrolyse on obtient l'acide (2).
Les sels d'addition s'obtiennent de façon classique par réaction du composé de formule I avec un acide pharmaceutiquement acceptable dans un solvant approprié. Inversement, les bases peuvent être obtenues à partir des sels d'addition par traitement par une base forte.
Les exemples suivants illustrent la préparation des composés de formule I.
A - Préparation des composés de formule II.
1. Synthèse de l'acide 2-[4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino]acétique (1)
a) 4-(2-aminoéthylamino)benzonitrile
Une suspension du 4-fluorobenzonitrile (167 g, 1 ,38 moles), de l'éthylènediamine (330 g, 5,5 moles) et du carbonate de potassium (300 g, 2,17 moles) dans 2 I de toluène est chauffée à reflux pendant 6 heures. Après refroidissement à température ambiante, on filtre et rince avec du toluène, le filtrat est évaporé pour donner une huile jaune qui est cristallisée dans du toluène. On filtre et rince avec du toluène, sèche sous vide à 50°C et obtient 200 g d'un solide légèrement jaune. Rendement = 90%. Point de fusion = 85°C. 1 H-RMN (400MHz, CDCI3) : δ1 ,2 (bs, 2H), 2,9 (t, 2H), 3,12 (q, 2H), 4,7 (bs, 1H), 6,5 (d, 2H), 7,3 (d, 2H).
b) 2-{2-(chloroacétyl)-2-(4-cyanoanilino)éthylamino}acétate d'éthyle
A une suspension du 4-(2-aminoéthylamino)benzonitrile (80,5 g, 0,5 mole) et de diisopropyléthylamine (65 g, 0,5 mole) dans 800 ml d'acétonitrile, est ajouté du bromoacétate d'éthyle (84 g, 0,5 mole). L'agitation est maintenue pendant 18 heures à température ambiante. On évapore la plupart de l'acétonitrile, le résidu est repris dans du dichlorométhane. On lave avec de l'eau, sèche sur du sulfate de sodium ; le produit brut est passé sur une colonne de silice courte [éluant dichlorométhane puis dichlorométhane/méthanol, 20/1 )] pour donner une huile.
Le produit obtenu ci-dessus est solubilisé dans 11 de tétrahydrofuranne; on ajoute la diisopropyléthylamine (51 g, 0,4 mole); ensuite le chlorure de chloroacétyle (45 g, 0,4 mole) est additionné lentement à ~5°C. Après 18 heures d'agitation à température ambiante, on ajoute 11 d'acétate d'éthyle et lave avec de l'eau 3 fois, sèche sur du sulfate de sodium, puis évapore; on obtient un solide qui est agité avec un mélange dichlorométhane-éther (1/3). On filtre la suspension et rince avec dichlorométhane-éther (1/3), sèche sous vide pour obtenir 100 g d'un solide beige cristallin. Rendement = 62%.
1 H-RMN (400MHz, CDCI3) : δ 1 ,2 (q, 6H), 3,3 (m, 4H), 3,65 (m, 4H), 3,8 (s, 2H), 3,9 (d, 4H), 4,1 (s, 4H), 4,15 (q, 4H), 4,9 (t, 1 H), 5,3 (t, 1 H), 6,5 (dd, 4H), 7,3 (dd, 4H).
c) 2-[4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino]acétate d'éthyle
Une suspension du 2-{2-(chloroacétyl)-2-(4-cyanoanilino)éthylamino} acétate d'éthyle (152 g, 0,47 mole), de la diisopropyléthylamine (73 g, 0,57 mole) et de l'iodure de sodium (85 g, 0,57 mole) dans 1 ,2 I d'acétonitrile est chauffée à reflux pendant 2 heures. On évapore le solvant et le résidu est repris dans du dichlorométhane et lavé à l'eau, séché sur du sulfate de sodium, puis évapore pour donner une huile brune qui est cristallisée dans un mélange cyclohéxane-acétate d'éthyle pour donner 125 g d'un solide cristallin brunâtre. Rendement = 93%.
Point de fusion = 108°C.
1 H-RMN (400MHZ, CDCI3) : δ 1 ,3 (t, 3H), 3,65 (m, 4H), 4,05 (s, 2H), 4,2 (m,
4H), 6,8 (d, 2H), 7,5 (d, 2H).
d) Acide 2-[4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino]acétique
Le 2-[4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino]acétate d'éthyle (20,7 g, 72 mmoles) est solubilisé dans 80 ml de méthanol, 80 ml de tétrahydrofuranne et 100 ml d'eau, ensuite le lithium hydroxyde monohydrate (4 g, 98 mmoles) est ajouté. L'agitation est maintenue pendant 20 minutes puis on élimine le solvant organique sous vide. On rajoute environ 100 ml d'eau à la suspension obtenue et acidifie. On filtre et rince à l'eau, sèche sous vide à 50°C pour obtenir 18,5 g d'une poudre beige. Rendement = 100%. Point de fusion = 215°C (d). 1 H-RMN (200MHz, DMSO-d6) : δ 3,5 (t, 2H), 3,65 (t, 2H), 4,0 (s, 2H), 4,1 (s,
2H), 7,0 (d, 2H), 7,6 (d, 2H).
2. Synthèse de l'acide 2-[4-(4-cyanophényl)-3-oxopipérazino]acétique (2)
a) 2-[2-(4-cyanoanilino)éthyl(2-éthoxy-2-oxoéthyl)amino]acétate d'éthyle
Une suspension du 4-(2-aminoéthylamino)benzonitrile (1a) (32 g, 0,2 mole), du carbonate de potassium (55g, 0,4 mole) et du bromoacétate d'éthyle (67g, 0,4 mole) dans 400 ml d'acétonitrile est chauffée à reflux pendant 18 heures. On filtre et le produit brut est passé sur une colonne courte de silice (éluant : dichlorométhane) pour donner 58 g d'une huile brune. Rendement = 87%.
1 H-RMN (200MHz, CDCI3) : δ 1 ,3 (t, 3H), 3,05 (t, 2H), 3,4 (s, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,8 (t, 2H), 4,2 (q, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,6 (d, 2H). MS-CI m/z : 287 (M+H)+
b) Acide 2-[4-(4-cyanophényl)-3-oxopipérazino]acétique
Une suspension du 2-[2-(4-cyanoanilino)éthyl(2-éthoxy-2-oxoéthyl) aminojacétate d'éthyle (58 g, 0,174 mole), de la diisopropyléthylamine (4g, 0,03 mole) et du carbonate de potassium (24 g, 0,174 mole) dans 400 ml d'acétonitrile est chauffée à reflux pendant 2 jours. On filtre et rince avec du dichlorométhane. Le filtrat est évaporé pour donner un solide brun qui est solubilisé dans 150 ml de méthanol et 50 ml d'eau, ensuite le lithium hydroxyde monohydrate (8,4 g, 0,2 mole) est ajouté. Après 30 minutes d'agitation à température ambiante, la moitié du méthanol est éliminée sous vide pour donner une suspension. On rajoute environ 100 ml d'eau et acidifie à 5°C. On filtre et rince à l'eau, sèche sous vide à 50°C pour obtenir 27,2 g d'une poudre beige. Rendement = 55%.
Point de fusion = 120°C.
1 H-RMN (200MHz, DMSO-d6) : δ 2,95 (t, 2H), 3,3 (s, 2H), 3,4 (s, 2H), 3,7 (t,
2H), 7,65 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
B - Préparation des produits intermédiaires de formule IV
1 - Synthèse du 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino) acétyljamino}- propanoate d'éthyle (intermédiaire B1)
A une suspension de l'acide 2-[4-(4-cyanophényl)-2- oxopipérazinojacétique (2,59g, 10 mmoles), et de la N-méthylmorpholine (2,1 g, 20,8 mmoles) dans 30 ml de tétrahydrofuranne, est ajouté le chloroformiate d'isobutyle (1 ,39 g, 10 mmoles) à 5-10°C, puis le mélange est agité à température ambiante pendant 10 minutes; ensuite le 3-aminopropanoate d'éthyle chlorhydrate (1 ,55 g, 10 mmoles) est ajouté. L'agitation est maintenue pendant une heure; on évapore le solvant et le résidu est purifié par flash chromatographie (dichlorométhane/methanol, 15/1 ) pour donner 2 g d'un solide blanc.
Rendement = 56 %.
1 H-RMN (200MHz, CDCI3) : δ 1 ,25 (t, 3H), 2,5 (t, 2H), 3,5 (dd, 2H), 3,65 (m, 4H), 4,05 (s, 2H), 4,08 (s, 2H), 4,1 (q, 2H), 6,75 (bs, 1 H), 6,8 (d, 2H), 7,55 (d, 2H).
La méthode décrite en 1 a été utilisée pour préparer les produits intermédiaires suivants :
2 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}propanoate de benzyle (intermédiaire B2)
Produit de départ : le tosylate du 3-aminopropanoate de benzyle. Rendement = 71 %.
1H-RMN (200MHz, CDCI3) : δ 2,55 (t, 2H), 3,5 (q, 2H), 3,6 (s, 4H), 4,0 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 5,1 (s, 2H), 6,8 (m, 3H), 7,3 (m, 5H), 7,5 (d, 2H).
3 - 3-(1,3-benzodioxol-5-yl)-3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino) acétyl]amino}propanoate d'éthyle (intermédiaire B3)
Produit de départ le chlorhydrate du 3-amino-3-(1 ,3-benzodioxol-5- yl)propanoate d'éthyle. Rendement = 59%. 1 H-RMN (400MHz, CDCI3) : δ 1 ,15 (t, 3H), 2,8 (m, 2H), 3,65 (m, 4H), 4,1 (m, 6H), 5,3 (q, 1 H), 5,9 (d, 2H), 6,85 (m, 5H), 6,9 (d, 1 H), 7,5 (d, 2H).
4 - 3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)-3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-propanoate de benzyle (intermédiaire B4)
Produit de départ : le tosylate du 3-amino-3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)propanoate de benzyle. Rendement = 49%. 1 H-RMN (400MHz, CDCI3) : δ 2,8 (m, 2H), 3,55 (s, 4H), 4,0 (s, 2H), 4,1 (q, 2H), 5,0 (d, 2H), 5,3 (q, 1 H), 5,9 (d, 2H), 6,7 (m, 6H), 7,25 (m, 6H), 7,5 (d, 2H).
5 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(pyridinyl) propanoate d'éthyle (intermédiaire B5)
Produit de départ : le dichlorhydrate du 3-amino-3-(pyridinyl)propanoate d'éthyle.
Rendement = 54%. 1 H-RMN (400MHz, CDCI3) : δ 1 ,05 (t, 3H), 2,85 (m, 2H), 3,65 (m, 4H), 4,1 (m, 6H), 5,4 (q, 1 H), 6,75 (d, 2H), 7,25 (q, 1 H), 7,5 (d, 2H), 7,65 (d, 1 H), 7,75 (bs, 1 H), 8,45 (d, 1 H), 8,55 (s, 1 H).
6 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(pyridinyl) propanoate de benzyle (intermédiaire B6)
Produit de départ : le ditosylate du 3-amino-3-(pyridinyl)propanoate de benzyle. Rendement = 48%.
1 H-RMN (400MHz, CDCI3) : δ 2,95 (dd, 2H), 3,6 (s, 4H), 4,0 (s, 2H), 4,1 (q, 2H), 5,0 (s, 2H), 5,45 (q, 1 H), 6,75 (d, 2H), 7,25 (m, 6H), 7,5 (d, 2H), 7,65 (d, 1 H), 7,75 (d, 1 H), 8,5 (d, 1 H), 8,6 (s, 1 H).
7 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}-5- phénylpentanoate d'éthyle (intermédiaire B7) Produit de départ : le chlorhydrate du 3-amino-5-phénylpentanoate d'éthyle. Rendement = 63%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,2 (t, 3H), 1 ,8 (m, 2H), 2,5 (dq, 2H), 2,6 (t, 2H), 3,6 (dd, 4H), 4,1 (m, 6H), 4,2 (m, 1 H), 6,65 (d, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,1 (m, 3H), 7,2 (m, 3H), 7,5 (d, 2H).
8 - 3- [2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}-3-cyclohexyl propanoate d'éthyle (intermédiaire B8) Produit de départ : le chlorhydrate du 3-amino-3-cyclohexylpropanoate d'éthyle. Rendement = 59%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ °-9 (m. 2H). 1 -1 (m- 3H), 1 ,15 (t, 3H), 1 ,35, (m, 1 H), 1 ,6 (m, 5H), 2,3 (dd, 1 H), 2,5 (dd, 1 H), 3,5 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 4,0 (m, 7H), 6,95 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,8 (d, 1 H).
9 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}-5-méthyl hexanoate d'éthyle (intermédiaire B9) Produit de départ : le chlorhydrate du 3-amino-5-méthylhexanoate d'éthyle. Le produit brut a été utilisé directement pour l'exemple 9.
10 - 3- [2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}-4,4-diméthyi pentanoate d'éthyle (intermédiaire B10)
Produit de départ : le chlorhydrate du 3-amino-4,4-diméthylpentanoate d'éthyle. Ce produit a été utilisé directement pour l'exemple 10.
11 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2-oxopipérazino)acétyl]amino}-4-methyl pentanoate d'éthyle (intermédiaire B11)
Produit de départ : le chlorhydrate du 3-amino-4-méthylpentanoate d'éthyle. Ce produit a été utilisé directement pour l'exemple 11.
12 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-3-oxopipérazino) acétyl]amino}propanoate d'éthyle (intermédiaire B12)
A une suspension de l'acide 2-[4-(4-cyanophényl)-3- oxopipérazinojacétique (exemple 2b) (2,59g, 10 mmoles), et de la N- méthylmorpholine (2,1 g, 20 mmoles) dans 30 ml de tétrahydrofuranne, est ajouté le chloroformiate d'isobutyle (1 ,39 g, 10 mmoles), puis le mélange est chauffé dans un bain de 40°C pendant 5 minutes; ensuite, le chlorhydrate du 3- aminopropanoate d'éthyle (1 ,55 g, 10 mmoles) est ajouté. L'agitation est maintenue à température ambiante pendant 18 heures; on évapore le solvant et le résidu est purifié par flash chromatographie (dichlorométhane/methanol, 15/1 ) pour donner 1 ,7 g d'un solide blanc. Rendement = 48%.
1 H-RMN (200MHz, CDCI3) : δ 1 ,25 (t, 3H), 2,6 (t, 2H), 2,95 (t, 2H), 3,15 (s, 1 H), 3,4 (s, 2H), 3,55 (dd, 2H), 3,8 (dd, 2H), 4,1 (q, 2H), 7,45 (bs, 1H), 7,5 (d, 2H), 7,7 (d, 2H).
La méthode décrite en 12 a été utilisée pour préparer les produits intermédiaires suivants :
13 - 3- [2-(4-(4-cyanophényl)-3-oxopipérazino)acétyl]amino}propanoate de benzyle (intermédiaire B13)
Produit de départ : le tosylate du 3-aminopropanoate de benzyle. Rendement = 69%.
1 H-RMN (200MHz, CDCI3) : δ 2,6 (t, 2H), 2,8 (t, 2H), 3,1 (s, 2H), 3,4 (s, 2H), 3,55 (q, 2H), 3,65 (dd, 2H), 5,1 (s, 2H), 7,3 (s, 5H), 7,4 (bs, 1 H), 7,45 (d, 2H), 7,6 (d, 2H).
14 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-3-oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(1 ,3- benzodioxol-5-yl)propanoate d'éthyle (intermédiaire B14)
Produit de départ : le chlorhydrate du 3-amino-3-(1 ,3-benzodioxol-5- yl)propanoate d'éthyle. Rendement = 48%.
15 - 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-3-oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(1 ,3- benzodioxol-5-yl)propanoate de benzyle (intermédiaire B15) Produit de départ : le tosylate du 3-amino-3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)propanoate de benzyle. Rendement = 48%. EXEMPLE 1
3-{[2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino} propanoate d'éthyle (CRL 42656) Un mélange de l'intermédiaire B1 , le 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2- oxopipérazino)acétyl]amino}propanoate d'éthyle (6,2 g, 17,3 mmoles), de la triéthylamine (3,8 g, 37,6 mmoles) et de l'hydroxylamine chlorhydrate (2,5 g, 6 mmoles) dans 150 ml d'éthanol est chauffée à reflux pendant 3 heures. Après refroidissement, on filtre et rince à l'éthanol, sèche sous vide pour obtenir 5,2 g de cristaux blancs. Rendement = 77%.
1 H-RMN (200MHz, CD3OD) : δ 1 ,25 (t, 3H), 2,55 (t, 2H), 3,45 (t, 2H), 3,58 (dd, 2H), 3,72 (dd, 2H), 4,0 (s, 2H), 4,1 (m, 4H), 7,0 (d, 2H), 7,6 (d, 2H). MS-CI m/z : 392 (M+H)+-
La méthode décrite dans l'exemple 1 a été utilisée pour préparer les produits suivants :
EXEMPLE 2 3-{[2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}propanoate de benzyle
Produit de départ : intermédiaire B2. Rendement = 71%.
1 H-RMN (200MHz, DMSO-dô) : δ 2'55 (t 2H)> 3>4 (m- 6H). 3-85 (s- 2 ). 4.° (s. 2H), 5,1 (s, 2H), 5,6 (s, 2H), 6,9 (d, 2H), 7,34 (m, 4H), 7,55 (d, 2H), 8,05 (t, 1 H), 9,35 (s, 1 H).
EXEMPLE 3
3-{[2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino)acétyl] amino}-3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)propanoate d'éthyle (CRL42789)
Produit de départ : intermédiaire B3.
Rendement = 77%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-dβ) : δ 1 ,1 (t, 3H), 2,75 (dd, 2H), 3,4 (bs, 2H), 3,5 (bs, 2H), 3,9 (s, 2H), 4,0 (s, 4H), 5,15 (q, 1 H), 5,65 (s, 2H), 6,0 (s, 2H), 6,85 (m, 5H), 7,55 (d, 2H), 8,4 (d, 1 H), 9,4 (s, 1 H). MS-ES t77/z : 534 (M+Na)+-
EXEMPLE 4
3-{[2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)propanoate de benzyle
Produit de départ : intermédiaire B4. Rendement = 73%. 1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 2,8 (dd, 2H), 3,45 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 3,8 (s, 2H), 4,0 (s, 2H), 5,0 (s, 2H), 5,1 (q, 1 H), 5,6 (s, 2H), 6,0 (s, 2H), 6,8 (dd, 2H), 6,9 (m, 3H), 7,3 (m, 5H), 7,55(d, 2H), 8,5 (d, 1 H), 9,4 (s, 1 H).
EXEMPLE 5 3-{[2-(4- 4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-3-(pyridinyl)propanoate d'éthyle (CRL 42770)
Produit de départ : intermédiaire B5. Rendement = 72%. H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,15 (t, 3H), 3,0 (d, 2H), 3,45 (bs, 2H), 3,65 (bs, 2H), 4,0 (s, 2H), 4,05 (q, 2H), 4,1 (s, 2H), 5,4 (q, 1 H), 7,0 (d, 2H), 7,7 (d, 2H), 8,1 (dd, 1 H), 8,6 (bs, 1 H), 8,65 (d, 1 H), 8,8 (d, 1 H), 8,95 (s, 1 H), 9,15 (bs, 1 H), 9,25 (d, 1 H). MS-ES m/z : 469 (M+H)+-
EXEMPLE 6
3-{[2-(4- 4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-3-(pyridinyl)propanoate de benzyle
Produit de départ : intermédiaire B6. Rendement = 57%. 1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 2,9 (d, 2H), 3,5 (m, 4H), 3,85 (s, 2H), 4,0 (s,
2H), 5,0 (s, 2H), 5,25 (q, 1 H), 5,6 (bs, 2H), 6,85 (d, 2H), 7,3 (m, 6H), 7,5 (d, 2H), 7,7 (d, 1 H), 8,4 (d, 1 H), 8,5 (s, 1 H), 8,6 (d, 1 H), 9,3 (s, 1 H). EXEMPLE 7
3-{[2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-5-phénylpentanoate d'éthyle (CRL42903)
Produit de départ : intermédiaire B7.
Rendement = 73%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,2 (t, 3H), 1 ,75 (m, 2H), 2,45-2,7 (m, 4H),
3,5 (dd, 4H), 3,85 (s, 2H), 4,1 (m, 5H), 5,7 (s, 2H), 6,9 (d, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,25
(t, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,95 (d, 1 H), 9,2 (s, 1H).
MS-ES m/z : 518 (M+Na)+-
EXEMPLE 8
3- [2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-3-cyclohexylpropanoate d'éthyle (CRL42933)
Produit de départ : intermédiaire B8. Rendement = 72%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 0,9 (m, 2H), 1 ,1( m, 3H), 1 ,15 (t, 3H), 1 ,35 (m, 1 H), 1 ,6 (m, 5H), 2,3 (dd, 1 H), 2,5 (dd, 1H), 3,5 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 4,0 (m, 7H), 6,95 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,8( d, 1H), 9,4 (s, 1H). MS-ES m/z : 496 (M+Na)+-
EXEMPLE 9
3-{[2-(4- 4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-5-méthylhexanoate d'éthyle (CRL 42935)
Produit de départ : intermédiaire B9. Rendement = 40% (pour les deux étapes).
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 0,9 (t, 6H), 1 ,17 (t, 3H), 1 ,20 (m, 1 H), 1 ,4 (m, 1 H), 1 ,6 (m, 1 H), 2,4 (d, 2H), 3,4 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 3,8 (s, 2H), 4,0 (d, 2H), 4,1 (q, 2H), 4,18 (m, 1 H), 5,65 (s, 2H), 6,92 (d, 2H), 7,5 (d, 2H), 7,8 (d, 1 H), 9,35 (s, 1 H). MS-ES m/z : 470 (M+Na)+- EXEMPLE 10
3-{[2-(4- 4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-4,4-diméthylpentanoate d'éthyle (CRL 42963) Produit de départ : intermédiaire B10.
Rendement = 39% (pour les deux étapes).
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 0,85 (s, 9H), 1 ,20 (t, 3H), 2,25 (dd, 1 H), 2,6
(dd, 1 H), 3,45 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 4,05 (m, 5H), 5,7 (s, 2H), 6,95
(d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,85 (d, 1 H), 9,4 (s, 1 H). MS-ES m/z : 470 (M+Na)+-
EXEMPLE 11
3- [2-(4- 4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-4-méthylpentanoate d'éthyle (CRL 42965) Produit de départ : intermédiaire B1 1.
Rendement = 36% (pour les deux étapes).
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 0,85 (d, 6H), 1 ,2 (t, 3H), 1 ,75 (m, 1 H), 2,4 (dd, 1 H), 2,55 (dd, 1 H), 3,45 (m, 2H), 3,55 (m, 2H), 3,8 (s, 2H), 4,1 (m, 5H), 5,7 (s, 2H), 6,95 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,85 (d, 1 H), 9,45 (s, 1 H). MS-ES m/z : 456 (M+Na)+-
EXEMPLE 12
3- [2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-3- oxopipérazino)acétyl]amino}propanoate d'éthyle (CRL 42655) Une solution de l'intermédiaire B12, le 3-{2-[4-(4-cyanophényl)-3- oxopipérazino)acétyl]amino}propanoate d'éthyle, (4,96 g, 13,9 mmoles), de la triéthylamine (2,9 g, 28,7 mmoles) et de l'hydroxylamine chlorhydrate (2 g, 28,8 mmoles) dans 200 ml d'éthanol, est chauffée à reflux pendant 4 heures, puis le solvant est éliminé sous vide. On ajoute environ 30 ml d'eau et la solution est saturée par du chlorure de sodium. On filtre et rince à l'eau froide, sèche sous vide pour obtenir 3 g de solide beige. Rendement = 55%. H-RMN (200MHz, DMSO-dô) : δ 1 ,10 (t, 3H), 2,75 (t, 2H), 3,0 (s, 2H), 3,2 (s, 2H), 3,25 (m, 4H), 3,65 (t, 2H), 4,0 (q, 2H), 5,75 (bs, 2H), 7,25 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,95 (bs, 1 H), 9,5 (s, 1 H). MS-ES m/z : 392 (M+H)+-
La méthode décrite dans l'exemple 12 a été utilisée pour préparer les produits suivants :
EXEMPLE 13
3- [2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyi]phényl}-3-oxopipérazino) acétyljamino} propanoate de benzyle
Produit de départ : intermédiaire B13. Rendement = 86%.
EXEMPLE 14 3-{[2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-3-oxopipérazino) acétyl]amino}-3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)propanoate d'éthyle (CRL42838)
Produit de départ : intermédiaire B14. Rendement = 71 %.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,1 (t, 3H), 2,8 (m, 4H), 3,1 (q, 2H), 3,35 (s, 2H), 3,75 (t, 2H), 4,0 (q, 2H), 5,2 (q, 1 H), 5,8 (s, 2H), 6,0 (s, 2H), 6,8 (dd, 2H), 7,0 (s, 1 H), 7,3 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 8,4 (d, 1 H), 9,65 (s, 1 H). MS-ES m/z : 534 (M+Na)+-
EXEMPLE 15 3-{[2-(4-{4-amino(hydroxyimino)phényl}-3-oxopipérazino)acétyl]amino}-3- (1,3-benzodioxol-5-yl)propanoate de benzyle
Produit de départ : intermédiaire B15. Rendement = 92%.
EXEMPLE 16 acétate du 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}propanoate d'éthyle (CRL 42673)
Le 3-{[2-(4-{4-[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2oxopipérazino)acétyl] amino} propanoate d'éthyle (exemple 1 ) (2,88 g, 7,36 mmoles) est solubilisé dans 100 ml d'acide acétique, ensuite de l'anhydride acétique (1 ,5 g, 14,7 mmoles) et 0,5g de palladium sur charbon à 10% sont ajoutés. Le mélange est hydrogéné à température ambiante sous 50 psi pendant 3 heures. On filtre et évapore à sec sous vide pour obtenir une poudre, on ajoute de l'éther à la suspension ainsi obtenue et on filtre, on obtient 2,8 g d'une poudre légèrement rose qui est solubilisée dans 100 ml d'eau, traitée avec du charbon, et filtrée, le filtrat est lyophilisé pour donner 2,5 g d'un solide beige. Rendement = 78%. 1 H-RMN (400MHz, DMSO-dô) : δ 1 ,3 (t, 3H), 1 ,8 (s 3H), 3,4 (dd, 2H), 3,6 (t, 2H), 3,8 (t, 2H), 4,0 (d, 4H), 4,05 (q, 2H), 7,2 (d, 2H), 7,85 (d, 2H), 8,25 (bs, 1 H). MS-ES m/z : 376 (M+H)+
La méthode décrite dans l'exemple 16 a été utilisée pour préparer les produits suivants (avec transformation de l'acétate en chlorhydrate pour les composés des exemples 17, 19, 28 et 30).
EXEMPLE 17 Chlorhydrate de l'acide 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino} propanoique (CRL 42674)
Produit de départ : exemple 2. Rendement = 88%.
1 H-RMN (200MHz, DMSO-d6) : δ 2,35 (t, 2H), 3,25 (dd, 2H), 3,35-3,7 (m, 4H), 4,0 (d, 4H), 7,0 (d, 2H), 7,8 (d, 2H), 8,1 (bs, 1 H), 8,85 (bd, 2H), 9,05 (bs, 2H). MS-ES m/z : 348 (M+H)+
EXEMPLE 18
Acétate du 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino)- acétyl]amino}-3-(1,3-benzodioxol-5-yl)propanoate d'éthyle (CRL42827)
Produit de départ : exemple 3.
Rendement = 68%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-dβ) : δ 1 ,1 (t, 3H), 1 ,7 (s, 3H), 2,75 (dd, 2H), 3,5 (t, 2H), 3,7 (t, 2H), 4,0 (m, 6H), 5,2 (q, 1 H), 6,0 (s, 2H), 6,8 (dd, 1 H), 6,85 (d, 1 H), 6,9 (s, 1 H), 7,0 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,55 (d, 1 H). MS-ES m/z : 496 (M+H)+
EXEMPLE 19
Chlorhydrate de l'acide 3-([2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(1,3-benzodioxol-5-yl)propanoique (CRL 42788)
Produit de départ : exemple 4. Rendement = 47%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-de) : δ 2,65 (t, 2H), 3,5 (bs, 2H), 3,7 (bs, 2H), 4,05 (d, 4H), 5,2 (q, 1 H), 6,0 (s, 2H), 6,75 (d, 1H), 6,8 (d, 1 H), 6,9 (s, 1H), 7,05 (d, 2H), 7,8 (d, 2H), 8,7 (d, 1 H), 9,0 (bs, 2H), 9,1 (bs, 2H), 12,3 (bs, 1 H). MS-CI m/z : 468 (M+H)+
EXEMPLE 20
Acétate du 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino)- acétyl]amino}-3-(pyridinyl)propanoate d'éthyle (CRL 42828)
Produit de départ : exemple 5. Rendement = 75%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,1 (t, 3H), 1 ,75 (bs, 3H), 2,9 (d, 2H), 3,45 (bs, 2H), 3,7 (bs, 2H), 4,0 (m, 6H), 5,2 (q, 1 H), 7,0 (d, 2H), 7,4 (t, 1 H), 7,8 (bd, 3H), 8,45 (bs, 1 H), 8,5 (bs, 1 H), 8,8 (bd, 1 H). MS-ES m/z : 453 (M+H)+
EXEMPLE 21
Acétate de l'acide 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(pyridinyl)propanoique (CRL 42799)
Produit de départ : exemple 6. Rendement = 67%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,9 (s, 6H), 2,65 (bs, 2H), 3,5 (bs, 2H), 3,7 (bs, 2H), 3,9 (d, 1 H), 4,05 (s, 2H), 4,2 (d, 1 H), 5,2 (bs, 1 H), 6,9 (d, 2H), 7,3 (dd, 1H), 7,7 (d, 2H), 7,75 (d, 1 H), 8,4 (bs, 2H), 8,55 (s, 1H), 9,4 (bd, 1H), 11 ,1 (bs, 2H).
MS-CI m/z : 425 (M+H)+
EXEMPLE 22 Acétate du 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-5-phénylpentanoate d'éthyle (CRL 42904)
Produit de départ : exemple 7. Rendement = 70%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,15 (t, 3H), 1 ,73 (s, 3H), 1 ,74 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 4,0 (m, 7H), 7,05 (d, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,26 (t, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,0 (d, 1H). MS-ES m/z : 480 (M+H)+
EXEMPLE 23 Acétate du 3-{[2-(4- 4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-3-cyclohexylpropanoate d'éthyle(CRL 42932)
Produit de départ : exemple 8. Rendement = 62%.
1 H-RMN (400MHz, D2O) : δ 1 ,05 (m, 2H), 1 ,25 (m, 3H), 1 ,3 (t, 3H), 1 ,5 (m, 1 H), 1 ,75 (m, 5H), 2,0 (s, 3H), 2,55 (dd, 1H), 2,8 (dd, 1H), 3,68 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 4,2 (m, 7H), 7,12 (d, 2H), 7,8 (d, 2H). MS-ES m/z : 458 (M+H)+
EXEMPLE 24 Acétate du 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-5-méthylhexanoate d'éthyle (CRL 42934)
Produit de départ : exemple 9. Rendement = 74%.
1 H-RMN (400MHz, D2O) : δ 1 ,15 (t, 3H), 1 ,73 (s, 3H), 1 ,74 (m, 2H), 2,45 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 4,0 (m, 7H), 7,05 (d, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,26 (t, 2H), 7,75 (d, 2H), 8,0 (d, 1 H). MS-ES m/z : 432 (M+H)+ EXEMPLE 25
Acétate du 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-4,4-diméthylpentanoate d'éthyle (CRL 42964)
Produit de départ : exemple 10.
Rendement = 74%.
1 H-RMN (400MHz, D2O) : δ 1 ,0 (s, 9H), 1 ,35 (t, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,5 (dd, 1 H),
2,85 (dd, 1 H), 3,7 (m, 2H), 3,85 (m, 2H), 4,2 (m, 7H), 7,15 (d, 2H), 7,8 (d, 2H).
MS-ES m/z : 432 (M+H)+
EXEMPLE 26
Acétate du 3- [2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-4-méthylpentanoate d'éthyle (CRL 42966) Produit de départ : exemple 11.
Rendement = 100%.
1 H-RMN (400MHz, D2O) : δ 1 ,0 (t, 6H), 1 ,35 (t, 3H), 1 ,9 (m, 1 H), 2,0 (s, 3H),
2,55 (dd, 1 H), 2,8 (dd, 1H), 3,7 (m, 2H), 3,8 (m, 1H), 4,2 (m, 7H), 7,1 (d, 2H),
7,8 (d, 2H). MS-ES m/z : 418 (M+H)+
EXEMPLE 27
Acétate du 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-3-oxopipérazino) acétyljamino} propanoate d'éthyle (CRL 42672)
Produit de départ : exemple 12.
Rendement = 53%.
1 H-RMN (200MHz, DMSO-dô) : δ 1 ,2 (t, 3H), 1 ,75 (s, 3H), 2,5 (s, 2H), 2 ; 85 (s,
2H), 3,3 (s, 4H), 3,8 (s, 2H), 4,05 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,8 (d, 2H), 8,1 (s, 1 H). EXEMPLE 28
Chlorhydrate de l'acide 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)méthyl]phényl}-3- oxopipérazino)acétyl]amino} propanoique (CRL42675)
Produit de départ : exemple 13.
Rendement = 70%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 2,25 (bs 2H), 2,5 (s, 2H), 2,8 (bs, 2H), 3,1 (s,
2H), 3,3( m, 2H), 3,8 (bs, 2H), 7,55 (d, 2H), 7,65 (d, 2H), 8,2 (bs, 1H), 8,9 (bs,
1 H).
MS-ES m/z : 370 (M+Na)+-
EXEMPLE 29
Acétate du 3-{2-[4-(4-[amino(imino)méthyl]phényl}-3-oxopipérazino) acétyl]amino}-3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)propanoate d'éthyle (CRL42837)
Produit de départ : exemple 14. Rendement = 80%.
1 H-RMN (400MHz, DMSO-dβ) : δ 1 ,1 (t, 3H), 1 ,75 (bs, 3H), 2,8 (m, 4H), 3,1 (q, 2H), 3,3 (s, 2H), 3,75 (bs, 2H), 4,0 (q, 2H), 5,2 (q, 1 H), 6,0 (s, 2H), 6,75 (m, 2H), 6,9 (s, 1 H), 7,55 (d, 2H), 7,8 (d, 2H), 8,45 (d, 1 H). MS-ES m/z : 496 (M+H)+
EXEMPLE 30
Chlorhydrate de l'acide 3-{[2-(4- 4-[amino(imino)méthyl]phényl}-3- oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(1,3-benzodioxol-5-yl)propanoique (CRL42839)
Produit de départ : exemple 15.
Rendement = 76%. H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 2,75 (m, 2H), 3,65 (bs, 2H), 4,1 (m, 6H), 5,2
(q, 1 H), 5,95 (s, 2H), 6,8 (m, 2H), 7,0 (s, 1 H), 7,6 (d, 2H), 7,9 (d, 2H), 9,25 (s, 3H), 9,45 (s, 2H).
MS-ES m/z : 468 (M+H)+ EXEMPLE 31
3-({2-[4-(4-{amino[(éthoxycarbonyl)imino]méthyl}phényl)-2- oxopipérazino]acétyl}amino)-3-(1,3-benzodioxol-5-yl)propanoate d'éthyle (CRL42960) Le produit de l'exemple 18 est transformé en chlorhydrate par l'addition d'une solution d'acide chlorhydrique HCI 2N suivie de filtration.
A une solution du chlorhydrate ainsi obtenu (2,2 g, 4,1 mmoles) dans 50 ml de DMF, sont ajoutés successivement de la triéthylamine (1 ,1 g, 11 mmoles) et du chloroformiate d'éthyle (0,54 g, 5 mmoles) à 5°C. L'agitation est maintenue à température ambiante pendant 18 heures. On ajoute de l'eau et de l'acétate d'éthyle, la phase organique est lavée à l'eau, séchée sur du sulfate de sodium. On obtient 1 ,3 g d'un solide jaunâtre après chromatographie sur silice (acétate d'éthyle/méthanol, 10/1).
Rendement = 55%. 1 H-RMN (400MHz, CDCI3) : δ 1 ,3 (t, 3H), 1 ,5 (t, 3H), 2,9 (dq, 2H), 3,75 (bs,
4H), 4,2 (m, 6H), 4,4 (q, 2H), 5,45 (m, 1 H), 6,05 (d, 2H), 6,9 (m, 5H), 7,55 (d,
1 H), 8,0 (d, 2H), 9,75 (bs, 1 H).
MS-ES m/z : 590 (M+Na)+
EXEMPLE 32
3-{[2-(4-{4-[imino(pipéridino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-5-phénylpentanoate d'éthyle (CRL43101)
A un mélange du 3-{[2-(4-(4-cyanophényl)-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-5-phénylpentanoate d'éthyle (intermédiaire B7) (3,3 g, 7..1 mmoles) dans 5 ml d'éthanol, sont ajoutés 60 ml d'une solution d'acétate d'éthyle chlorhydrique 4N à 5°C. L'agitation est maintenue à température ambiante pendant 40 heures. On évapore à sec pour obtenir un solide jaunâtre.
A une suspension de l'imidate obtenu ci-dessus (2,1 g, 3,8 mmoles) dans 10 ml d'éthanol et 50 ml d'acétate d'éthyle, est ajoutée de la pipéridine (2,6 g, 30,6 mmoles). Après 24 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est filtré. Le produit brut est recristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éthanol pour donner 0,7 g d'un solide beige. Rendement = 65%
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,15 (t, 3H), 1 ,7 (m, 8H), 2,5 (m, 3H), 2,6 (m, 1 H), 3,45 (m, 1 H), 3,50 (bs, 4H), 3,70 (bs, 4H), 4,05 (m, 6H), 7,1 (d, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,25 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 8,15 (d, 1 H), 9,2 (bs, 2H). MS-ES m/z : 548 (M+H)+
La méthode décrite dans l'exemple 32 a été utilisée pour préparer les produits suivants :
EXEMPLE 33
3-{[2-(4- 4-[imino(morpholino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-5-phénylpentanoate d'éthyle (CRL43102)
Produit de départ : intermédiaire B7 et morpholine Rendement = 56% 1 H-RMN (400MHz, DMSO-dβ) : δ 1 ,15 (t, 3H), 1 ,7 (m, 2H), 2,5 (m, 3H), 2,6 (m, 1 H), 3,50 (bs, 4H), 3,70 (m, 8H), 4,05 (m, 7H), 7,1 (d, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,25 (d, 2H), 7,50 (d, 2H), 8,15 (d, 1 H), 9,4 (bs, 2H). MS-ES m/z : 550 (M+H)+
EXEMPLE 34
Chlorhydrate du 3-(1,3-benzodioxol-5-yl)-3-{[2-(4-{4-
[imino(pipéridino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino)acétyl] amino}propanoate d'éthyle (CRL43103) Produit de départ : intermédiaire B3 et pipéridine Rendement = 61 % H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,15 (t, 3H), 1 ,65 (bs, 6H), 2,75 (m, 2H), 3,45 (m, 4H), 3,55 (m, 2H), 3,65 (bs, 2H), 4,00 (m, 6H), 5,15 (q, 1 H), 6,00 (s, 2H), 6,8 (d, 1 H), 6,85 (d, 1 H), 6,95 (s, 1 H), 7,05 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 8,7(d, 1 H), 9,15 (bs, 2H).
MS-ES m/z : 564 (M+H)+ EXEMPLE 35
Chlorhydrate du 3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)-3-{[2-(4-{4-
[imino(morpholino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino)acétyl] amino}propanoate d'éthyle (CRL43104) Produit de départ : intermédiaire B3 et morpholine Rendement = 65%
1 H-RMN (400MHz, DMSO-d6) : δ 1 ,15 (t, 3H), 2,75 (m, 2H), 3,45 (m, 4H), 3,65 (m, 4H), 3,8 (bs, 4H), 4,00 (m, 6H), 5,15 (q, 1 H), 6,00 (s, 2H), 6,75 (d, 1 H), 6,80 (d, 1 H), 6,90 (s, 1 H), 7,05 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 8,65(d, 1 H), 9,30 (bs, 1 H), 9,35 (bs, 1 H).
MS-ES m/z : 566 (M+H)+
L'étude de l'activité inhibitrice de l'agrégation plaquettaire des composés de formule I a été réalisée in vitro, c'est-à-dire par contact direct de solution de concentrations variables des composés avec des plaquettes fraîchement séparées d'un échantillon de sang total, prélevé dans des conditions standardisées, chez des animaux de laboratoire (cobaye) et chez des sujets humains en bonne santé n'ayant pas reçu de substances ou de médicaments pouvant interférer avec la coagulation du sang. L'activité anti- agrégante plaquettaire a été également étudiée ex vivo/vitro, c'est-à-dire après administration des substances revendiquées au cobaye pour mesurer l'intensité et la durée de l'action anti-agrégante induite par la fraction absorbée et circulant dans le sang du produit étudié.
1. Etudes pharmacoloqiques in vitro
1 .1. Etudes sur plaquettes de cobaye
Du sang est prélevé par ponction intracardiaque sur des cobayes Dunkin-Hartley de sexe mâle (poids 330 g environ), à raison de 4,5 ml pour 0,5 ml de citrate trisodique (concentration de la solution aqueuse : 1 ,55 %) afin de prévenir toute trace de coagulation. Le plasma riche en plaquettes (PRP) est obtenu par centrifugation des tubes de sang total 15 minutes à 150 g.
Les PRP sont rassemblés en "pools". Une numération des plaquettes contenues dans ces pools est pratiquée à l'aide d'un automate d'hématologie de type Coulter ZM : si nécessaire, une dilution est réalisée afin que la concentration du plasma en plaquettes soit comprise entre 200 000 et 400 000 plaquettes/mm3. Simultanément, d'autres échantillons de ces pools servent à préparer du plasma pauvre en plaquettes (PPP) par centrifugation à 1 500 g pendant 15 minutes. L'étude cinétique de l'agrégation plaquettaire est réalisée par addition d'une solution de collagène ( 1 μg/ml) à un volume de PRP, à l'aide d'un agrégomètre de type Chrono-log Corporation (490 - D^ ou 560 VS) qui utilise une détection optique de l'apparition du thrombus.
La détermination de la concentration inhibitrice 50 % (Cl^) est réalisée en additionnant à des échantillons des pools de PRP, un volume déterminé de solvant (référence contrôle) et des concentrations croissantes des composés : 1 ,5 xlO"8 M, 7 xlO"8 M, 1 ,5 x10'7 M, 3 x10"7 M, 7 x 10"7 M, 1 ,5 x 10-° M et 7 x 10-5 M. Les mesures de l'inhibition de l'agrégation sont faites après 3 minutes de contact à 37°C sous agitation.
1.2 Etude sur plaquettes humaines
Chez un groupe d'une dizaine de sujets humains, d'âge homogène et en bonne santé, du sang veineux est prélevé par ponction dans une veine du pli du coude pour être recueilli dans un tube de verre contenant une solution aqueuse de citrate de sodium 0,129 M (1 volume de solution citratee pour 9 volumes de sang). Chaque tube est ensuite centrifugé une première fois à 20°C et 100 g pendant 15 minutes pour obtenir le plasma riche en plaquettes (PRP) ; après prélèvement de ce PRP, le tube est à nouveau centrifugé à 2 000 g pendant 15 minutes pour prélever cette fois le plasma pauvre en plaquettes (PPP).
Pour chaque échantillon identifié de PRP, une numération plaquettaire est réalisée à l'aide du compteur Coulter ZM. Chaque échantillon est alors utilisé pour étudier la variation de l'inhibition de l'agrégation plaquettaire déclenchée par l'addition d'une solution glucosée de collagène Chromo-par-Reagent de Coultronics (utilisé à la concentration de 5 μg/ml) en fonction de l'addition de concentrations croissantes de chaque composé dans une gamme couvrant l'intervalle 10"8 M→IO"5 M (exemple de concentrations : 10 M, 5 x 10"7 M, 3 x10"7 M, 10-7M, 8 x10-° M, 4 x10-°M, 2 x10*M, 10*M, 5 x 10'5M, 10_5M). Au préalable, pour chaque composé, une solution aqueuse à 10_3M est préparée. Dans chaque série de mesure, est introduit un essai contrôle destiné à vérifier l'effet éventuel des solvants (valeur référence) sur l'agrégation plaquettaire qui est mesurée après 3 minutes de contact à 37°C sous agitation.
A partir des pourcentages d'inhibition de l'agrégation plaquettaire mesurés pour chaque concentration de chaque composé, est calculée la concentration inhibitrice 50 % (Cl50).
2. Etude pharmacoloqique ex vivolvitro chez le cobaye
L'évaluation de l'activité anti-agrégante plaquettaire des composés est réalisée chez les mêmes cobayes que ceux évoqués ci-dessus (souche Dunkin-Hartley). L'administration de chaque produit dans une gamme de doses qui va de 150 à 10 mg/kg et de chaque véhicule (5 ml/kg) est faite par voie gastrique (v.g.) 1 h ou 2h ou 4h ou 6h ou 8h ou 12h avant le prélèvement de sang chez les cobayes mis à jeun la veille. L'allocation des traitements aux animaux est aléatoire.
Le sang est prélevé puis traité dans les mêmes conditions que celles décrites ci-dessus pour les études in vitro. Les résultats de l'inhibition de l'agrégation plaquettaire obtenus pour chaque concentration essayée, permettent de calculer la concentration Cl50 de chaque produit essayé et la cinétique de l'effet inhibiteur, leur durée d'action. Les résultats des études de l'inhibition de l'agrégation plaquettaire induite par le collagène sont rassemblés dans le tableau suivant :
Figure imgf000032_0001
ND : non déterminable (produit insoluble) - : donnée non disponible. Pour certains composés, la puissance de l'activité inhibitrice de l'agrégation plaquettaire est retrouvée à des doses beaucoup plus basses. C'est par exemple le cas pour le CRL 42789, le CRL 42788 et le CRL 42 903 pour lesquels l'action anti-agrégante, obtenue ex vivo chez le cobaye traité par une dose orale (voie gastrique) de 10 mg/kg, lorsque l'administration est réalisée 1h et 2h avant le test d'agrégation, est de 69 et 72 % (CRL 42789), 57 et 24 % (CRL 42788) ou 72 % (à 1 h pour le CRL 42903), respectivement.
La présente invention a donc également pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant une quantité efficace d'un composé de formule I ou d'un de ses sels avec des acides pharmaceutiquement acceptables.
Elle a plus particulièrement pour objet des compositions pour inhiber l'agrégation des plaquettes sanguines comprenant une quantité efficace d'un de ces composés. Elle a également pour objet
- un procédé pour inhiber la fixation du fibrinogène sur les plaquettes sanguines chez un mammifère comprenant l'administration à ce mammifère d'une quantité efficace d'un de ces composés ;
- un procédé pour inhiber l'aggrégation des plaquettes sanguines chez un patient comprenant l'administration à ce patient d'une quantité efficace d'un de ces composés ;
- un procédé pour traiter une thrombose chez un patient comprenant l'administration à ce patient d'une quantité efficace d'un de ces composés ; - un procédé de prévention du risque thrombotique chez un patient comprenant l'administration à ce patient d'une quantité efficace d'un de ces composés.
Les composés de formule I peuvent être utilisés, tout particulièrement dans les domaines suivants : i) Prévention aiguë du risque thrombotique artériel au cours de la chirurgie cardiaque (pontage coronarien) ou de la cardiologie interventionnelle (angioplastie percutanée transluminale, endartectomie, pose de "stent") : dans ces situations, les composés sont ajoutés au traitement préventif reconnu du risque thrombotique artériel ; administration orale d'acide acétylsalicylique démarrant avant l'intervention (150 à 500 mg/j per os) puis se poursuivant ensuite ; perfusion intraveineuse d'héparine non fractionnée démarrée pendant l'intervention puis se poursuivant pendant 48 à 96 heures. L'administration du composé de formule I peut alors se faire soit par voie orale (0,5 à 1 ,5 mg/kg) en même temps que l'administration d'aspirine, soit par perfusion intraveineuse (0,25 à 1 mg/kg/24 h) associée ou non à un bolus. Après la 48è e heure, si le traitement a été administré par voie intraveineuse, il sera relayé par l'administration orale (0,25 à 10 mg/kg en deux prises espacées de 12 heures) afin de faciliter les soins en hospitalisation puis en traitement ambulatoire. ii) Prophylaxie secondaire du risque thrombotique artériel chez les patients pouvant présenter des épisodes d'angor instable ou un infarctus du myocarde : dans ces situations, la biodisponibilité importante des composés revendiqués, c'est-à-dire la possibilité d'obtenir rapidement des concentrations circulantes efficaces car capables d'inhiber la fixation du fibrinogène sur les plaquettes permet d'utiliser les médicaments revendiqués par la voie orale pendant la période où les patients présentent ce risque de thrombose artérielle. Dans ces situations, ces composés pourront être administrés avantageusement à raison de 1 à 3 prises orales par jour, grâce à leur biodisponibilité élevée et leur longue durée d'action, la dose étant choisie dans la gamme 0,5-10 mg/kg.
Les compositions pharmaceutiques qui comprennent l'un des principes actifs décrits dans la présente demande incorporent la substance active soit sous forme de base, soit sous forme de sel pharmaceutiquement acceptable, soit encore sous la forme d'une pro-drogue comprenant une ou plusieurs fonctions protégées, fonctions qui sont ensuite libérées in vivo après administration orale. Ces compositions pharmaceutiques incorporent les adjuvants de fabrication, les véhicules qui sont connus de l'homme de l'art. Ceux-ci sont choisis parmi la panoplie des outils galéniques reconnus par les Pharmacopées. Comme exemples, peuvent être mentionnés pour la préparation des formes galéniques destinées à la voie orale : amidon, stéarate de magnésium, talc, gélatine, agar, pectine, lactose, polyéthylène-glycols, etc.. Les formes galéniques utilisables seront choisies parmi les propositions suivantes : comprimés sécables ou non, gélules, lyocs, granulés, poudres. Selon les caractéristiques de la pathologie à traiter et la morphologie de chaque patient, la posologie orale quotidienne sera comprise entre 0,02 et 50 mg/kg/jour en 1 à 3 prises régulièrement espacées afin de maintenir un taux d'occupation efficace des récepteurs Gpllb/llla plaquettaires. Pour la voie intraveineuse, les formes pharmaceutiques destinées à la phase aiguë du traitement sont conçues de manière à permettre une adaptation posologique individuelle sur la base de l'inhibition de l'agrégation plaquettaire la plus efficace en fonction de l'évolution immédiate des suites opératoires. Dans ce cadre, le lyophilisât, le soluté pour perfusion prêt à l'emploi, permettent de moduler individuellement la posologie dans l'intervalle de dose 0,01 mg/kg/jour - 20 mg/kg/jour.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composés de formule générale (I) :
Figure imgf000036_0001
dans laquelle :
R est choisi parmi l'hydrogène, un groupe alkyle en C^O, ou phényl (alkyle en C^C ;
R2 est choisi parmi l'hydrogène, le groupe hydroxyle et un groupe protecteur du groupe amidino ; R3 est choisi parmi
- l'hydrogène,
- les groupes alkyle en C Cs, cycloalkyle mono ou bicyclique en C3-C12, alkényle en C2-C4 ou alkynyle en C2-C4, ces groupes étant éventuellement substitués par des groupes choisis parmi les halogènes et le groupe hydroxy ;
- les groupes aryle mono, bi ou tricycliques en C6-C14,
- les groupes hétéroaryle choisis parmi les groupes pyridyle, thiényle, furannyle, quinolyle, benzodioxannyle, benzodioxolyle, benzothiényle, benzofurannyle et pyrazinyle ; - les groupes phénylalkyle(C1-C4), naphtylalkyle(CrC4) éventuellement substitués sur le noyau aryle, et pipéronyle,
R4 et R5 sont choisi indépendamment l'un de l'autre parmi l'hydrogène, un groupe alkyle en C^Cs, ou forment ensemble avec l'atome d'azote un groupe choisi parmi les groupes pipéridinyle et morpholinyle, les groupes aryle et hétéroaryle pouvant être substitués par un ou plusieurs groupes choisis indépendamment parmi les halogènes, les groupes alkyle en C1-C4, trifluorométhyle, alkyl(C1-C4)thio, alkyl(C1-C4)sulfonyle, alkyl(Cr C4)oxy, nitro, les groupes -COOR, -CH2COOR ou -O-CH2-COOR, R étant un groupe alkyle en 0,-0-4, et le groupe oxo est en position 2 ou 3 sur la pipérazine ; et leurs sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables.
2. Composés selon la revendication 1 qui sont choisis parmi le 3-{[2-(4-{4-
[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino)acétyl] amino}-3-(1 ,3- benzodioxol-5-yl)propanoate d'éthyle, le 3-{[2-(4-{4-
[amino(hydroxyimino)méthyl]phényl}-2-oxopipérazino) acétyl]amino}-5- phénylpentanoate d'éthyle, l'acide 3-{[2-(4-{4-[amino(imino)- méthyl]phényl}-2- oxopipérazino)acétyl]amino}-3-(1 ,3-benzodioxol-5-yl)- propanoique, et leurs sels d'addition avec des acides pharmaceutiquement acceptables.
3. Procédé de préparation des composés de formule I selon la revendication 1 par a) réaction d'un acide de formule
Figure imgf000037_0001
O
dans laquelle Z est un groupe précurseur d'un groupe
Figure imgf000037_0002
avec une amine de formule
Figure imgf000037_0003
dans laquelle R^ est un groupe alkyle en CrC4 ou phényl(alkyle en C,-C4) pour obtenir un composé de formule 00/04000 36
Figure imgf000038_0001
b) conversion du groupe Z en groupe
Figure imgf000038_0002
et c) éventuellement conversion du groupe R en un atome d'hydrogène.
4. Composition thérapeutique qui comprend à titre de principe actif un composé tel que défini à la revendication 1 ou à la revendication 2.
5. Utilisation d'un composé tel que défini à la revendication 1 ou à la revendication 2 pour la fabrication d'un médicament antithrombotique.
6. Procédé pour inhiber la fixation du fibrinogène sur les plaquettes sanguines chez un mammifère, comprenant l'administration à ce mammifère d'une quantité efficace d'un composé selon la revendication 1 ou la revendication 2.
7. Procédé pour inhiber l'agrégation des plaquettes sanguines chez un patient, comprenant l'administration à ce patient d'une quantité efficace d'un composé selon la revendication 1 ou la revendication 2.
8. Procédé pour traiter une thrombose chez un patient comprenant l'administration à ce patient d'une quantité efficace d'un composé selon la revendication 1 ou la revendication 2.
9. Procédé de prévention du risque thrombotique chez un patient, comprenant l'administration à ce patient d'une quantité efficace d'un composé selon la revendication 1 ou la revendication 2.
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