TWI324684B - Micro-array system for micro amount reaction - Google Patents

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TWI324684B TW091125053A TW91125053A TWI324684B TW I324684 B TWI324684 B TW I324684B TW 091125053 A TW091125053 A TW 091125053A TW 91125053 A TW91125053 A TW 91125053A TW I324684 B TWI324684 B TW I324684B
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Nat Univ Tsing Hua
Univ Stanford
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Description

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發明領域 本發明係關於一種微陣列系統。 發明背景 「生物晶片」係指在一基材上，利用微電子、微機械等 工業技術以製成可應用於生物化學分析之產品。目前因生 物晶片具有分析速度快、樣品及試劑少、可獲得整體性（平 行化）實驗數據之多種優點，成為研究基因、蛋白質、細胞 及组織上的一大利器。 於各式生物晶片中，「去氧核糖核酸/蛋白質微陣列晶 片」係將各種不同序列的去氧核糖核酸/蛋白質固定於一基 板上作為探針。此晶片可以廣泛應用於基因圖譜分析、基 因突變分析、大量基因表現之差異分析、藥物研發及疾病 #斷等領域。然而’習用之微陣列晶片具有下列之缺點（1 ) _ 偵測之靈敏度不佳’尤其是當應用在人類組織切片等微量 檢體時特別明顯，其原因在於該等探針固定於一平面上， 無法與檢體充份或均勻反應；（2)依所固定的探針種類，現 有的微陣列晶片只能單獨針對去氧核糖核酸或蛋白質進行 偵測；（3 )成本高昂’因探針須經繁複的固定操作（如光罩法 或印刷法），始得以固定於該基板上，且每一晶片僅可進行 單次檢測，故成本的考量一直是微陣列晶片無法廣泛應用 之最大因素；（4)訊號可信度低’利用現有之微陣列晶片進 行反應時，反應訊號係產生於基板平面上，當應用檢測系 統如掃描器偵測訊號時，不易於基板上定位，且容易與背 景值相混淆，造成訊號可信度低。 _-4- '本紙張尺度適財關轉準(CNS) Ai格(21GX 297公爱) " - ----- 丄 五、發明説明（
反mr展中，不同於「微陣列晶片」，「生化 =二」曰：：半導體製程、微機電等技術，將微量之 ^ 、ηθ π成反應，如聚合酶連鎖反應晶片（PCR 二：晶片。以聚合酶連鎖反應反應晶片為 例，其係於-基板表面運用微細加工技術蚀刻出微井，並 在其底部或反面製作溫度控制模組，藉以調控微井内的溫 度。由於其體積小、表面積大，微井之溫度可迅速改變， 因通*需數小時的聚合酶連鎖反應，於生化反應晶片 上操作卻僅需數分鐘。但「生化反應晶片」亦有下列缺 點.（1)依據不同的需求，不同的生化反應皆須設計不同的 晶片應用上較為不便；（2)由於在生化反應晶片上反應的 反應液體積小，如需針對該反應液進行進一步處理（如純 化），則相當不易操作。 综上所述，開發一種新微陣列系統改良上述缺點，乃為 本發明所欲解決之課題。 發明概述 本發明係提供一種用以供微量之生物分子反應之微陣列 系統’具有應用範圍廣、反應快 '操作方便、易於處理等 優點。 本發明之目的在於提供一種微陣列系統，其係用以供微 量之生物分子於反應液中反應，該系統包含一基板，該基 板上具有用以承載該反應液之複數個微井；複數個微珠， 其係置於該等反應液中，該等微珠之表面可供該生物分子 附著於其上；及一震動模组，用以震動該基板，俾使附著 -5- 各纸張又度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1324684 A7 B7 五、發明説明（3 ) 於該等微珠上之該生物分子可於該反應液中均勾反應；視 需要本發明之微陣列系統包含一溫度控制模组，用以控制 該反應液之溫度。 本發明之另一目的在於提供一種微量生物分子於反應液 中反應之方法，其包含： (a) 提供複數個微珠； (b) 將該生物分子附著於該等微珠上； (c) 將（b>中附著有該生物分子之微珠置於該反應液中； 及 (d) 將該反應液置入一基板上之複數個微井中以進行該 生物反應；其中該基板可由一震動模組而震動，俾 使附著於該等微珠上之該生物分子可於該反應液中 均勾反應；視需要可另以一溫度控制模組以控制該 — 微井中該反應液之溫度。 圖式簡要說明 本發明將以下列圖示進一步說明。 圖1表示本發明微陣列系統之部分剖面圖。 圖2表示本發明微陣列系統之控制電路板示意圖。 圖3表示利用本發明微陣列系統進行聚合酶連鎖反應合成 TRAIL之產物電泳分析圖，其中1為以游離的T7及T3引子 進行反應（對照組）；2為以游離的T7及固定在含有羧基之 PolyScience磁珠上的T 3引子進行反應；3為以游離的T 7及固 定在含有沒基之BANG'S Laboratory磁珠上的T 3引子進行反 應；4為以游離的T3及固定在含有胺基PolyScience磁珠上的 ______-_6-_ 本纸張尺度逋用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1324684 A7 B7
五、發明説明（6 元件符號說明 1表示基板 11表示微井 2表示微珠 3表示反應液 41表示靜電式微震動器 42表示震動器電路 5 1表示加熱/感測電阻 52表示熱電冷卻器 53表示溫度感應器電路 54表示加熱器電路 55表示冷卻器電路 6表示覆蓋板 6 1表示封邊 7表示金屬封裝半球 8表示控制電路板 9表示雷射源 · 91表示微透鏡 發明詳細說明 本發明係利用微珠及生化反應晶片的結合，而R , 叩開發出具 有反應靈敏度高、易於操作、及可多次使用等多項優點^ 微陣列系統。 本發明之微陣列系統係用以供微量之生物分子於反應液 中反應，該系統包含一基板’該基板上具有用以承載該反 -9- 本纸張尺度適用中國國家S事(CNS) Α4規格(210X297公爱)~ 1324684 A7 B7 五、發明説明（8 ) 蛋白質間之交互作用、核酸與蛋白質間之交互作用、或是 生物分子間之交互作用。該等結合通常需於適當反應條件 下進行（如適當的溫度、離子濃度 '酸鹼度等）。當反應結束 時，可利用物理方法（如改變溫度）或化學方法（如改變酸驗 值及離子濃度）改變反應條件，使該等結合消失，並使作為 探針之生物分子與目標物分離’即可再使用該探針，故根 據本發明之微陣列系統具有可重複使用之優點。 本文中所使用之「基板」乙辭為一支撐物，其上有複數 個微井’並供附以溫度控制模組及震動模组。其相對於本 發明之生物分子反應為不具生物反應活性者，如由碎材質 製成。位於該基板上之複數個微井可以業界習用之方法形 成，以矽基板而言’可以微影技術定位並以蝕刻方式完 成’而蝕刻之方法包含但不限於以氫氧化鉀溶液進行或以_ 感應耦合電漿方式進行。該等微井之體積及數量可視所欲 進行反應之體積及所欲同時進行之反應數而定。 本發明所έ之「微珠」係指表面可供生物分子附著，或 經適當之活化作用後可附著之小珠。較佳地，該微珠可輕 易自該反應液中分離，俾以達到將固定於其上之該生物分 子自該反應液中分離之目的，在一具體實施例中，該微珠 為一磁珠，其可藉磁力之作用達到分離之目的。該微珠可 利用熟習孩項技術者所熟知任何方法處理，使該生物分子 得以附著於該微珠表面上；例如先處理微珠表面使其具有 羧基，以供與具胺基之生物分子形成醯胺鍵，或處理微珠 表面胺基，以供與具羧基之生物分子形成醯胺鍵而固定。 _____* 1324684 A7 B7 五、發明説明（9 ) 根據本發明之一具體實施例，活化該微珠之方法可以偶合 劑，如1-乙基-3-(3·二甲基胺基丙基）-碳二醯胺鹽酸鹽[1-ethyl-3-( 3-dimethylaminopropyl) - carbodiimide hydrochloride ，EDC]活化處理該微珠之表面，使其可與該生物分子相結 合。 本文所使用之「震動模組」乙辭係用以震動該基板，使 位於該等微井内之該等微珠可於該反應液中充份且均勻反 應之裝置。參看圖1及圖2，於本發明之一具體實施例中， 該震動模組包含位於該基板1下方之一靜電式微震動器41及 一震動器電路42，其中該靜電式微震動器4 1為熟習該項技 術者可由兩金屬平行板以微機電（MEMS)技術製成，及該 震動器電路42可由互補式金氧半（CMOS)製程製成。 本文所使用之「溫度控制模组」乙辭係指可控制該微井 -中反應液溫度之裝置，如圖1及圖2所示之本發明具體實施 例，該溫度控制模組包含一用於檢測該反應液3溫度之溫度 感應器，並由一溫度感應器電路53所控制；一用於提高該 反應液3溫度之加熱器，且以一加熱器電路5 4所控制；及一 用於降低該反應液3溫度之冷卻器，例如一位於該基板11下 方之熱電冷卻器52，並由一冷卻器電路所控制55。在本發 明之一具體實施例中，該溫度感應器與該加熱器可結合於 一加熱/感測電阻51中；該溫度感應器5 1、加熱器5 1及冷卻 器5 2之製作係熟習該項技術者可以微機電技術製作，如以 硼擴散方式於該等微井1 1之下方製成加熱/感測電阻5 1 ;該 溫度感應器電路53、加熱器電路54及冷卻器電路55則可由 _-12-_ 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1324684 A7 一 —___ B7 五、發明月（n ) — 法，其包含： (a) 提供複數個微珠； (b) 將該生物分子附著於該等微珠上； (c) 將（b)中附著有該生物分子之微珠置於該反應液中； 及 (d) 將該反應液置入一基板上之複數個微井中以進行該 生物反應；其中該基板可由一震動模組而震動，俾 使附著於該等微珠上之該生物分子可於該反應液中 均勻反應；視需要可另以一溫度控制模組以控制該 微井中該反應液之溫度。 本發明之微陣列系統及反應方法具有下列優點：（1)易於 操作’依據本發明’生物分子附著於微珠上之操作方式遠 較習用微陣列晶片將探針固定於基板上之方法簡單，僅需 -單—步驟即可完成，大幅減低操作成本；（2)靈敏度高，根 據本發明，附著於微珠上之生物分子在震動模組之作用 下’可均勻且充份地在反應液中進行反應，與習用將探針 固定於一基板平面上之技術相較，提供較佳之靈敏度；（3) 應用範圍廣泛，可適用於不同的生物分子，如核酸、蛋白 質或醋類分子，如依習用技術必須分別製備不同晶片及不 同系統。本發明之微陣列系統及方法則可適用於各式之生 物分予反應，僅需將待測之生物分子附著於微珠上即可； (4)增加訊號可信度，根據本發明之生物分子反應係於微井 中進行’於訊號判讀時可清楚界定訊號區域（即微井内） 及背景區域，並藉微井定位檢測訊號，檢測結果之可信度 ---- ---- 14- 本紙張尺度相中S S家標準(CNS) A4規格(2lGX 297公釐) 1324684 A7 ____ B7 五、發明説明（12 ) 隨之提高；（5)易於處理反應後之生物分子，因生物分子係 附著於微珠上，且本發明之較佳實施例為該等微珠可輕易 自該反應液中分離，故反應後之生物分子即可與微珠一起 自反應液中分離；及（6)可重複使用，根據本發明，於進行 雜合反應時，固定於微珠上作為探針的生物分子在反應完 成後，利用以物理或化學之方法可使該探針與目標物分 離’故本微陣列系統即可再使用。 兹以下列實例予以詳細說明本發明，惟並不意味本發明 僅侷限於此等實例所揭示之内容。 f例1 :微陣列系絲 參看圖1及圖2 ’本實例之微陣列系統包含一基板1，該基 板1上具有複數個微井11 ;複數個微珠2 ; 一靜電式微震動 器4 1、一加熱/感測電阻5 1、一熱電冷卻器5 2，並分別由整 _ 合於一控制電路板8上之一震動器電路42、一溫度感應器電 路53及加熱器電路54、一冷卻器電路55所控制；複數個金 屬封裝半球7 ;及以聚亞烯銨封邊6丨固定之一 774〇玻璃蓋 覆蓋板6。 實例2 :聚合S每速艄反廠 引子之固定 先以0;2M之2-(N-嗎福林基）乙基項酸[2_(n_
Morpholino)ethanesulfonic acid，MES](pH5.0)緩衝液清洗分 別具有胺基或具叛基磁珠之表面，本實例中所用之磁珠係 分別購自 PolyScience、BANG'S Laboratory與Dynal 等废牌。 將T 3或T 7引子經化學修飾後使其5，端分別帶有羧基或胺 _____ -15· 本纸張尺度適財S @家標邮卿A4规格(21GX 297公爱) ΐ· 裝 訂
1324684 A7 B7__ 五、發明説明（13 ) 基。 取10mg清洗過之磁珠、200pg修飾過後之引子及〇.〇5M 之1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基）-碳二醯胺鹽酸鹽（EDC)於 室溫下均勻搖晃60分鐘，再以磁鐵吸住磁珠而移除EDC 液，並以清洗緩衝液（20 mM NaH2P04/Na2HP04 pH7.5，0.5% Tween 20)清洗兩次後，再儲存於保存缓衝 液[20 mM NaH2P04 pH7.5，0.1 %w/v 牛血清蛋白 (BSA)，0.02 %疊氮化鈉]中，控制磁珠濃度為20 mg/mL ° 聚合酶連銷反應 以清水將固定於磁珠上之T 3或T 7引子沖洗兩次，且該固 定於磁珠上之T3或T7引子及游離之T7及T3引子，分別以 TNF相關細胞凋亡刺激配體基因[TNF-related apoptotosis -inducing ligand (TRAIL)]及鱗酸甘油醛脫氫酵素基因 [glyceraldehydes phosphate dehydrogenase (GAPDH)]之基因 表現標記（E S T)質體作為模版，進行聚合酶連鎖反應。 50μί之反應混合物為0.5 μί之模版、固定於磁珠上之T3及 游離之Τ7或固定於磁珠上之Τ7及游離之Τ3引子各500ηΜ、
dNTP 各 250 μΜ、1U 之 Taq 聚合酶（購自 nnnzymes，Fin， Espoo)、1.0 mM 之 Tris-HCl、1 · 5 mM 之氯化鎂、1 5 0 mM 之氯化鉀、及0. 1 %之Triton X-1 00。 先將上述包含磁珠之反應混合液置於實例1之微井中，並 利用bn度控制模組控制溫度為.9 5 °C 3分鐘，再9 5 °C 3 0 秒、55°C40秒及72。(： 1分鐘循環35次，再於72t：5分鐘。 ____-16 - 本紙張尺度迷用中國国家標準(CNS) A4规格(2l〇x 297公爱) " 1324684 A7 B7 五、發明説明（14 ) 在反應過程中並以靜電式微震動器震動該反應混合液。 另將以游離之T3及T7引子於相同實驗條件下，以習用之 聚合酶連鎖反應儀進行反應作為對照組。 結果 將以TRAIL基因表現標記質體作為模版之反應產物利用1 %瓊自旨凝膠進行電泳分析，其結果如圖3所示。除使用固定 於PolyScience胺基磁珠上之T7引子與游離之T3引子（參看圖 3之4行）未生.產出TRAIL基因片段外，其餘之反應皆可產得 所欲之去氧核糖核酸片段。 實例3 :去氣核糖核酸-去氣核糖核酸雜合反應 探針之製備 含TRAIL或GAPDH去氧核糖核酸片段之磁珠係依實例2 之聚合酶連鎖反應方法製備，所採用之磁珠為PolyScience -胺基磁珠、BANG'S Laboratory胺基磁珠與Dynal胺基磁珠， 再將該等含去氧核糖核酸之磁珠加熱至95°C以製得含單股 去氧核糖核酸之磁珠，即為本雜合反應之探針。 目標物之製備 以游離之T3及T7引子及以GAPDH之基因表現標記質 體作為模版，於與實例2中之條件利用習用之聚合酶連鎖 反應儀進行合成，唯其中以Cy3-dUTP(購自 AP Biotech, Uppsala，Swede η)取代50 %之dTTP以製得含螢光標記之 去氧核糖核酸片段。分別將此等片段加熱至95°C以製得含 單股去氧核糖核酸之目標物。 雜合反應 ___- 17-_ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐）
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1324684 A7 B7 ___ 五、發明説明（15 ) 本實例中之雜合反應液為6 X沙林-檸檬酸納溶液（5&1丨1^-Sodium Citrate，S S C)、0.5 % 硫酸十二酯鈉（S D S)、及 5 X Denhard's 溶液[0 . 1 % 牛血清白蛋白（bovine serum albumin)、 0.1% Ficoll、0.1% 聚乙烯峨洛規(polyvinylpyrrolidone)]。 本實例之目標物取50 ng具Cy3螢光標記之單股GAPDH去氧 核糖核酸片段，並分別加入2pL之固定有TRAIL或GAPDH 之單股片段之20mg/mL磁妹於該雜合反應液中，並加入如 實例1所示微.陣列系統之微井中，並於靜電式微震動器震動 作用下於6 5 °C反應5小時。接著以磁鐵吸出磁珠，並以清洗 緩衝液（0· 1% SSC、0.5% SDS)於室溫下清洗兩次。 訊號偵測及結旲 將反應後之反應液點於一玻片上，並以Axon掃描器偵測 勞光訊號，並以ScanAlyze分析營光訊號影像 (http://www.microarravs.org/software)，其結果如圖 4 所示。 於以單股GAP D Η為探針（圖4中之a組）之雜合反應中， PolyScience胺基磁珠及Dynal胺基磁珠皆可明顯觀察到勞光 訊號’但BANG’S Laboratory胺基磁珠之效果較差，且於以單 股TRAIL為探針（圖4之b組）之對照组實驗中，三種磁珠所觀 察得之訊號皆相當低，可知由本發明微陣列系統所進行之 去氧核糖核酸-去氧核糖核酸雜合實驗具有高度專一性，且 有里敏度向之特性。 實例4 : Jl白質-蛋白質雜合反應 蛋白質疼_赴之製備. 本纸張尺度適财國@家標準(CNS) A4规格(21QX 297公釐) 1 ^4684 A7 ___ 五、發明説明（16 ) 先以0.2M之MES(pH5.0)緩衝液清洗表面分別帶具有胺 基或具羧基之磁珠1〇μί，本實例中所用之磁珠係分別購自 PolyScience、BANG'S Laboratory與 Dynal等廠牌。取處理過之 磁珠、20pg之人類血清白蛋白（HSA)或抗人類血清白蛋白 (anti-HSA)抗體及分別以0、50、100及200 mM之EDC於 室溫下均勻搖晃30分鐘，再以磁鐵吸住磁珠而移除EDC 液，並加入50 mM之甘胺酸阻斷緩衝液（pH5.0)於室溫下 均勻搖晃1 5分鐘，再以1 Μ之氣化鈉溶液清洗兩次，再以 10mM Tris-HCl(pH8.0)清洗一次後，儲存於 10μί 之 Tris-HCl(pH8.0)中。 本實例中以B C A assay( Sigma)方式測量於不同E D C濃度 處理下，固定於不同廠牌磁珠之HSA蛋白質量。圖5a表示 於 PolyScience、BANG’S Laboratory 及 Dynal胺基磁珠上固定-HSA之量，圖 5b表示於PolyScience及BANG’S Laboratory叛基 磁珠上固定HSA之量》 目標蛋白質之劁備 以將HSA或anti-HSA目標蛋白質置於0.1 Μ碳酸鈉pH8.0 緩衝液中，並與經NHS-ester溶液活化之Cy3或Cy5螢光染劑 溶液（購自 Amersham catalog# PA23001 及PA25001)混合，使 最終之蛋白質濃度為2 mg/mL且螢光染劑之濃度為300 μΜ，並於室溫下避光反應45分鐘，並以1M Tris-HCl p Η 8.0終止反應。再以離心方式去除未與蛋白質結合之染 劑’並調整蛋白質濃度為2 mg/mL。接著分析蛋白質量與 螢光檢測量之關係，其結果參看圖6，a係將十倍稀釋之蛋 _____- 19-__ 本紙倀尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X 297公藿〉
裝 訂
線 1324684 A7 ____B7 五、發明説明（19 ) 實例1所示之微陣列系統且於靜電式微震動器震動作用下進 行。 訊號偵測及結杲 訊號偵測及分析之結果示於圖9，其中圖9b係將反應液點 於一玻片上，並以Axon掃描器掃描，圖“則直接以一掃描 器侦測微井中反應液之螢光㈣，並皆以ScanA一分析勞 光訊號影像。其中隨著競爭探針的增加，螢光強度相對減 弱’可知本發明之微陣列系統亦可應用於去氧核糖核酸-蛋 白質雜合反應中。 上述實施例僅為說明本發明之原理及其功效，而非限制 本發明。因此，習於此技術之人士對上述實施例所做之修 改及變化仍不達背本發明之精神。本發明之權利範圍應如 後述之申請專利範圍所列。 "° -22-
本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

Claims (1)

  1. 六、 f;091125〇53號專利申請案 厂文申請專利範圍替換本(95年6月） 申請專利範園 A8 B8 C8 D8
    1 · 一種微陣列系統，用以供微量之生物分子於反應液中 反應，其包含： 一基板，菘基板上具有複數個微井，該等微井係用以 承載該反應液； 複數個微珠，其係置於該等反應液中，該等微珠之表 面可供該生物分子附著於其上；其中該等微珠係為磁 珠；及 一震動模組，用以震動該基板，俾使附著於該等微珠 上之該生物分子可於該反應液中均勻反應。 2 .根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，其中該生物分 子係選自由核酸、胜肽及醣類分子所組成之群。 3 .根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，其中該生物分 子反應係選自由聚合酶連鎖反應、核酸雜合反應、蛋 白负雜合反應及核酸-蛋白質雜合反應所組成之群。 4 .根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，其中該基板係 為一 <5夕基板。 根據申請專利範園第1項之微陣列系統，其中該等微珠 係以偶合劑活化，以供生物分子固定於其上 6. 8. 根據申請專利範圍第5項之微陣列系統，其中該偶合劑 為1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基）_碳二醯胺鹽酸鹽。 根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，其中該震動模 组係位於該基板之下方》 根據申請專利範圍第1項之微陣列系續，甘 于、、死其中該震動模 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) ----- 1324684 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範園 組包含一靜電式微震動器。 9.根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，另包含一溫度 控制模組，用以控制該微井中該反應液之溫度。 X ! 0 .根據申請專利範圍第9項之微陣列系統，其中該溫度控 制模組包含一溫度感應器、一加熱器及一冷卻器。 U.根據申請專利範圍第10項之微陣列系統，其中該溫度 感應器及該加熱器為一加熱/感測電阻。 i 2 ·根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，另包含一雷射 源。 i 3·根據申請專利範圍第12項之微陣列系統’另包含一微 透鏡。 i 4 .根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，另包含一覆蓋 板0 15. 根據申請專利範圍第1項之微陣列系統，另包含一訊號 感測器。 16. —種微量生物分子於反應液中反應之方法，其包含： (a) 提供複數個微珠；其中該等微珠係為磁珠； (b) 將該生物分子附著於該等微珠上； (c) 將（b)中附著有該生物分子之微珠置於該反應液 中；及 (d)將孩反應液置入一基板上之複數個微井中以進行 該生物反應’其中該基板可由一震動模組而震 動，俾使附著於該等微珠上之該生物分子可於該 反應液中均勻反應。
    丄 *324684 A8 B8 C8 D8 申請專利範園 1 7 ·根據申請專利範圍第丨6項之方法，其中該生物分子係 選自由核酸、胜肽及醣類分子所組成之群。 1 8 .根據申請專利範圍第〖6項之方法，其中該生物分子反 應係選自由聚合酶連鎖反應、核酸雜合反應、蛋白質 雜合反應及核酸-蛋白質雜合反應所組成之群。 1 9 .根據申請專利範圍第丨6項之方法，其中該基板係為一 碎基板。 2 〇 .根據申請專利範圍第丨6項之方法，其中步驟（b)係以偶 合劑活化該等微珠，以供生物分子固定於其上。 2 1 ·根據申請專利範圍第2 〇項之方法，其中偶合劑為i •乙 基-3-(3-二甲基胺基丙基）·碳二醯胺鹽酸鹽。 2 2 ·根據申請專利範圍第丨6項之方法，其中該震動模組係 位於該基板下方。 2 3 .根據申請專利範圍第丨6項之方法其中該震動模組包 含一靜電式微震動器。 2 4 ·根據申請專利範圍第丨6項之方法，其中該基板以一溫 度控制模組以控制該微井中該反應液之溫度。 2 5 ·根據申請專利範圍第2 4項之方法，其中該溫度控制模 組包含一溫度感應器、一加熱器及一冷卻器。 2 6 .根據申請專利範圍第2 5項之方法其中該溫度感應器 及邊加熱器為一加熱/感測電阻。 27.根據申請專利範圍第16項之方法，另包含以一雷射源 激發該反應液。 28·根據申請專利範圍第27項之方法，另包含以一微透鏡 -3 1324684 8 8 8 8 ABCD 申請專利範圍 調整該雷射源。 2 9 .根據申請專利範圍第1 6項之方法 予一覆蓋板。 3 0 .根據申請專利範圍第1 6項之方法 測器檢測反應之進行。 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 於反應進行中另施 另包含以一訊號感
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