TWI293882B - Polymeric modifiers and pharmaceutical compositions - Google Patents

Polymeric modifiers and pharmaceutical compositions Download PDF

Info

Publication number
TWI293882B
TWI293882B TW093107766A TW93107766A TWI293882B TW I293882 B TWI293882 B TW I293882B TW 093107766 A TW093107766 A TW 093107766A TW 93107766 A TW93107766 A TW 93107766A TW I293882 B TWI293882 B TW I293882B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
group
copolymer
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
ratio
Prior art date
Application number
TW093107766A
Other languages
English (en)
Other versions
TW200501986A (en
Inventor
Yuji Kasuya
Masashi Honma
Original Assignee
Sankyo Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sankyo Co filed Critical Sankyo Co
Publication of TW200501986A publication Critical patent/TW200501986A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI293882B publication Critical patent/TWI293882B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F216/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal or ketal radical
    • C08F216/12—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal or ketal radical by an ether radical
    • C08F216/14—Monomers containing only one unsaturated aliphatic radical
    • C08F216/16—Monomers containing no hetero atoms other than the ether oxygen
    • C08F216/18—Acyclic compounds
    • C08F216/20—Monomers containing three or more carbon atoms in the unsaturated aliphatic radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L71/02—Polyalkylene oxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F222/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a carboxyl radical and containing at least one other carboxyl radical in the molecule; Salts, anhydrides, esters, amides, imides, or nitriles thereof
    • C08F222/04—Anhydrides, e.g. cyclic anhydrides
    • C08F222/06—Maleic anhydride
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C08F8/30—Introducing nitrogen atoms or nitrogen-containing groups
    • C08F8/32—Introducing nitrogen atoms or nitrogen-containing groups by reaction with amines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F216/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal or ketal radical
    • C08F216/12—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal or ketal radical by an ether radical
    • C08F216/14—Monomers containing only one unsaturated aliphatic radical
    • C08F216/1416—Monomers containing oxygen in addition to the ether oxygen, e.g. allyl glycidyl ether
    • C08F216/1425—Monomers containing side chains of polyether groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L2203/00—Applications
    • C08L2203/02—Applications for biomedical use

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

1293882 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本案發明係關於~種新穎性共聚物、具有該共聚物之 醫藥組成物、具有該共聚物之蛋白質修飾劑、具有蛋白質 的共聚物之複合物、使用該複合物預防或治療疾病之方 法、使用該複合物在製造藥物以預防或治療疾病及合成該 共聚物及其複合物之方法。 【先前技術】 以加成劑例如聚合物而修飾蛋白質一般已經使用於提 供改良醫藥特性之目的，例如在血中改良的穩定度及滯留 及抗原滯留[例如：請參照F.M. Veronese及J.M. Harris，「胜 肽及蛋白質聚乙烯乙二醇干擾素（Pegylation)」，改善的藥 給藥評論第54(4)卷，2002]。 當以該聚合物修飾蛋白質時，一種過去所使用的技術 係包括經由共價鍵鍵結蛋白質及聚合物修飾劑（例如請參 照WO-A-97/23 6 14)。在另一個蛋白質聚合物修飾之實施例 中，例如具有聚合物藥之修飾中，該藥已經由非共價鍵修 飾。此等實施例之一係如日本專利申請（Kokai)No·平 1 1 -302 1 99，其係揭示一種接枝共聚物，其包括一非離子性 聚合物之接枝鏈及一帶陰電的聚合物之主鏈，在生理條件 下形成具有可爲正電荷基質之包涵物複合物，例如：帶有 正電荷的脂質體或聚-L-賴胺酸，以改善在血中的停滯。另 一個選擇的係如W0-A-99/02 1 3 1所建議，其係揭示一種蛋 白質及水溶性聚合物，其係可在有機溶劑存在的特殊條件 下混合，以提供受控制的釋放微粒子。 1293882 然而不幸地，不少此等聚合物蛋白質修飾 地由於各種的理由而成功。一種聚合物蛋白質 的實施例係顯示某種改良特性，其包括聚馬來 共聚物，其包括一種聚氧伸烷基烷基醚化合物 成單位[請參照，例如：日本專利N 〇 s . 3 0 3 5 6 7 5 J 這些聚合物修飾劑無疑地顯示對目標蛋白質改 然而，此等共聚物仍有相當的問題。發現其馬 係非專一性地鍵結至蛋白質。其結果該共聚物 得的複合物係根據條件而顯示不均勻特性。特 現此等聚合物修飾劑傾向容易形成具有蛋白質 構造、然後形成本體複合物，其係引起過量的 修飾且因此使所欲的蛋白質活性停滯。此外， 聚合物蛋白質修飾劑之複合物及一種蛋白質 後，於血中顯示不令人滿意的停滯。 因此，其係需要一種聚合物修飾劑，可提 均勻特性之複合物，特別是減少具有蛋白質無 之製備，該複合物在給藥之後於血中更維持蛋 極佳的停滯性。 【發明內容】 因此，本案發明目的之一係提供一種聚合 可提供一種具有均勻特性之複合物，特別是減 質無規交聯構造之製備，該複合物在給藥之後 持蛋白質活性且極佳的停滯性。 本發明人等已經廣泛地硏究各種蛋白質修 果已成功獲得一種新穎共聚物，其可形成具有 劑已經特別 修飾劑近來 酸化合物系 作爲一種組 327 1 265] 〇 良的鍵結。 來酸酐部分 及蛋白質所 別是，其發 的無規交聯 蛋白質構造 已發現此等 係在給藥之 供一種具有 規交聯構造 白賢活性且 物修飾劑， 少具有蛋白 於血中更維 飾劑，其結 蛋白質之複 1293882 合物，其具有均勻特性’及顯著地改善該複合物之蛋白質 於血中的停滯，因而完成本案發明. 其他本案發明的目的及優點係將由下列詳細步,驟而得 知。 因此，本案發明係提供一種共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其係包括下列作爲構成單位： (a) —或多個構is單位’其係可彼此爲相同或不同且其 係如下式（I)所示： R1 ——CH2—C- (I)
其中： m爲3〜100的整數，
Aik係表示具有1〜6個碳原子之伸烷基，及 R1及R2爲相同或不同且分別表示氫原子、或可視需要 經至少一種選自羥基、鹵素原子所構成族群之取代基取代 的具有1〜6個碳原子之烷基、及可視需要經選自於如下述 所定義的取代基A之1〜5個取代基取代的具有6〜1 4碳原 子之芳基，及 (b)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其 係如下式（II)所示 1293882 -CH—CH—— / \ 〇=C C=0 (II)
R3 OH 其中： R3係表示 羥基， 可視需要經至少一種選自羥基、鹵素原子所構成族群 之取代基取代的具有i〜6個碳原子之烷氧基、及可視需要 經選自於如下述所定義的取代基A之1〜5個取代基取代的 具有6〜14碳原子之芳基， 可視需要經選自於如下述所定義的取代基A之1〜5個 取代基取代的具有6〜14碳原子之芳氧基、或 如式-NR4R5所示之基，其中R4及R5係彼此爲相同或 不同且分別表示氫原子或可視需要經至少一種選自羥基、 鹵素原子所構成族群之取代基取代的具有i〜6個碳原子之 院基、及可視需要經選自於如下述所定義的取代基A之1〜5 個取代基取代的具有6〜14碳原子之芳基； 取代基A係選自於具有1〜6個碳原子之烷基、具有1〜6 個碳原子之烷氧基、鹵素原子、羥基、硝基及羧基。 本案發明係進一步提供一種共聚物或其醫藥上可接受 鹽’其可藉由經一或多個在共聚物式（III)的羧酸酐部分而 獲得，該共聚物係包括下列爲構成單位， U)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其 係如下式（I)所示： 1293882 本案發明亦提供一種具有至少一種蛋白質或類似物或 其變異體之複合物，其係鍵結至上述本案發明之至少一種 共聚物或其醫藥上可接受鹽。 本案發明亦提供一種具有醫藥上有效量的活性劑及其 載體或稀釋劑之醫藥組成物，其中該醫藥上活性劑爲一種 具有至少一種蛋白質或類似物或其變異體之複合物，其係 鍵結至上述本案發明之至少一種共聚物或其醫藥上可接受 鹽。 本案發明提供亦提供一種方法，其係在將藉由複合該 蛋白質或類似物或其變異體及至少一種上述本案發明之共 聚物或其醫藥上可接受鹽類給藥至病患之後，延長其時間 使該蛋白質或類似物或其變異體仍保流於血流中。 本案發明亦提供一種用以預防或治療病患易感染蛋白 質或類似物或其變異體之疾病之方法，其包括給藥該病患 具有至少一種上述本發明共聚物或其醫藥上可接受鹽之該 蛋白質或類似物或其變異體之複合物有效量。 本案發明亦提供一種複合物之用途，其包括在醫藥製 造中鍵結至上述本發明至少一種共聚物或其醫藥上可接受 鹽之蛋白質或類似物或其變異體，以預防或治療易感染蛋 白質或類似物或其變異體之疾病。 本案發明亦提供一種方法以製備共聚物或其醫藥上可 接受鹽，其包括下列爲構成單位： (a)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其 係如下式（I)所示： 1293882 ^該蛋白質或類似物或其變異體反應。 發明之詳細說明 (1 )如上所述，本案發明的觀點之一係提供一種共聚物 $其醫藥上可接受鹽，其包括下列作爲構成單位： (a)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其 係如下式（1)所示： ’ R1 -CH2一C- (I)
其中： ΙΪ1、Aik、R1及R2係如上述所定義，及 (b)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其 係如下式（Π)所示 -CH—CH- (Π)
o=c R3 其中R3係如上述所定義。此等共聚物及其醫藥上可接 受鹽之中，較佳係包括： (2)如（1)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式（I)所 示之構造單位及式（II)所示之構造單位係分佈至交替頭對 頭序列、交替頭對尾序列或頭對頭及頭對尾之交替混合序 列； (3)如（1)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式（I)所 示之構造單位及式（Π)所示之構造單位係在隨機序列上分 •13- 1293882 佈； (4) 如（1)~(3)中任〜項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽’其中Aik係爲伸乙基或三伸甲基； (5) 如（4)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中Aik爲伸 乙基； (6) 如（1)〜（5)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中m爲3〜5〇之整數； (7) 如（6)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中❿爲3〜4〇 之整數； (8) 如（7)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中❿爲6〜16 或28〜38之整數； (9) 如（8)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中以爲6〜16 之整數； (10) 如（1)〜（9)中任〜項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中R1爲氫原子或甲基； (11) 如（10)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中Rl爲 氫原子； (12) 如（1)〜（11)中任〜項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中R2爲氫原子或甲基； (13) 如（12)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中r2爲 甲基； (14) 如（1)~(13)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中R3爲羥基、具有1〜6個碳原子之烷氧基或式_nr4r5 所示之基，其中R4及R5爲相同或不同且分別表示氫原子 或具有1〜6個碳原子之烷基； -14- 1293882 (15) 如（14)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中R3爲 羥基或具有1〜6個碳原子之烷氧基； (16) 如（15)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其包括至少 一種式（II)所示R3爲具有1〜6個碳原子之烷氧基之構造單 位，與視需要至少一種式（Π)所示R3爲羥基之肩造單位， 其中式（II)所示R3爲羥基之構造單位與式（II)所示R3爲具 有1〜6個碳原子之烷氧基之構造單位之比例爲4: 6至0: 10 ； (17) 如（15)或（16)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中 R3爲具有1〜6個碳原子之烷氧基； (18) 如（15)〜（17)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中該具有1〜6個碳原子之烷氧基爲乙氧基； (19) 如（14)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中r3爲 羥基或式-NR4R5所示之基，其中R4及R5爲相同或不同且 分別表示氫原子或具有1〜6個碳原子之烷基； (20) 如（19)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其包括至少 一種如式（II)之R3爲式-NR4R5所示基之構造單位，其中R4 及R5爲相同或不同且分別表示氫原子或具有個碳原子 之烷基與視需要至少一種式（II)所示R3爲羥基之構造單 位，其中式（II)所示R3爲羥基之構造單位及式（11)之R3爲 式-NR4R5所示基之構造單位之比例爲5 : 5至0 : 10 ; (21) 如（2〇)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式（11) 所示R3爲羥基之構造單位及式（II)之R3爲式_NR4R5所示基 之構造單位之比例爲4 : 6至0 : 1 0 ; (2 2 )如（1 9 )〜（2 1)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 -15- 1293882 鹽’其中R爲式- NR R5所不之基，且R4及r5爲相同或不 同且分別表示氫原子或具有1〜6個碳原子之烷基； (23) 如（19)〜（22)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中式-NR4R5所示之基爲胺基、甲基胺基或二甲基胺 基； (24) 如（23)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式 -NR4R5所示之基爲胺基； (25) 如（23)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式 -NR4R5所示之基爲二甲基胺基； (26) 如（14)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中R3爲 羥基； (27) 如（14)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中R3爲 1-胺基-2-丙醇基； (28) 如（1)〜（27)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中式（I)所示構造單位與式（11)所示構造單位之比例 爲 1 〇 : 1 至 1 : 1 〇 ; (29) 如（28)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式（1) 所示構造單位與式（Π)所示構造單位之比例爲3: 1至1: 8; (3 0)如（2 8)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式⑴ 所示構造單位與式（11)所示構造單位之比例爲2 : 1至1 : 2 或 1 : 2 至 1 : 6 ; (3 1)如（2 8)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中式⑴ 所示構造單位與式（Π)所示構造單位之比例爲丨：1或爲i : 2 至 1 ·· 4 ; (3 2)如（1)~(3 Π中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 -16- 1293882 鹽，其中平均聚合度爲5〜200; (33) 如（32)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中平均聚 合度爲5〜50 ; (34) 如（33)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中平均聚 合度爲5〜20 ; (35) 如（3 2)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中平均聚 合度爲20〜30 ; (36) 如（32)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中平均聚 合度爲30〜40 ; (37) 如（1)〜（31)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中其司脫克半徑爲9.3奈米或以下； (38) 如（37)之共a物或其醫藥上可接受鹽，其中其司脫 克半徑爲7.3奈米或以下； (3 9)如（38)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中其司脫 克半徑爲6.2奈米或以下； (4〇)如（39)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中其司脫 克半徑爲4 · 7奈米或以下； (41) 如（4〇)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中其司脫 克半徑爲3 · 1奈米或以下； (42) 如（3 7)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中其司脫 克半徑爲爲1·5奈米至4.7奈米； (43) 如（3 7)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中其司脫 克半徑爲爲3· 1奈米至6·2奈米；及 (44) 如（1)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中： m爲3〜100的整數， -17- 1293882
Aik係表示具有1〜6個碳原子之伸烷基， R1及R2爲相同或不同且分別表示氫原子或具有1〜6 個碳原子之院基，及 R3係表示羥基、具有1〜6個碳原子之烷氧基（可視需要 經一羥基取代）、或式-NR4R5所示之基，其中R4及R5係彼 此爲相同或不同且分別表示氫原子或具有1〜6個碳原子之 烷基（可視需要經一羥基取代）； (45)如（1)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中Aik係 表示伸乙基，R1係表示氫原子，R2係表示甲基及m，R3, 式（I)及（II)之構造單位的比例（組成物比例）及，其相關地， 式（II)所示R3爲羥基之單位及式（II)所示R3爲羥基以外之 基之單位的比例（水解比例）係選自於下列： (i) m爲6〜16之數，R3爲羥基，組成物比例爲1 : 1及 平均聚合度爲30至40 ; (ii) m爲28〜3 8，R3爲羥基，組成物比例爲1 : 1及平 均聚合度爲1 〇至1 5 ; (iii) m爲6〜16之數，R3爲胺基，組成物比例爲1 : 1 及平均聚合度爲30至40 ; (iv) m爲6〜16之數，R3爲二甲基胺基，組成物比例爲 1 : 1及平均聚合度爲30至40 ; (v) m爲6〜16之數，R3爲1-胺基-2-丙醇基，組成物比 例爲1: 1及平均聚合度爲30至40; (vi) m爲6〜16之數，R3係選自於乙氧基及羥基，組成 物比例爲1 : 1，平均聚合度爲30至40且水解比例爲4 : 6 ; (vii) m爲28至16，R3係選自於胺基及羥基，組成物 -18- 1293882 比例爲1 : 1，平均聚合度爲1 〇至1 5且水解比例爲4 ·· 6 ; (viii) m爲28〜38，R3爲二甲基胺基，組成物比例爲1 : 1及平均聚合度爲10至15; (ix) m爲6〜16之數’ R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1: 1，平均聚合度爲30至40,水解比例爲3. 1: 6.9 且該共聚物爲鈉鹽； (x) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : i，平均聚合度爲30至40且水解比例爲1.4 : 8.6 ； (xi) m爲6〜16之數，R3係選自於二甲基胺基及羥基， 組成物比例爲1 : 1，平均聚合度爲3 0至4 0，水解比例爲 2·9 : 7.1且該共聚物爲鈉鹽； (xii) m爲6〜1 6之數，R3爲胺基，組成物比例爲} : 2 4 及平均聚合度爲20〜30; (xiii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲〇.4 : 9.6 ； (xiv) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲2.9 : 7.1； (X v) m爲6〜1 6之數’ R3係選自於胺基及經基，組成物 比例爲1:2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.9:9.1; (xvi)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲〇 . 5 : 9.5 ； 1293882 (x v i i) m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2 ·4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲丨.3 : 8.7 ； (X v i i i) m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲1 · 9 : 8.1 ； (xix)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 ·· 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲1 . 〇 : 9.0 ； (X X ) m爲6 ~ 1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1: 2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲〇.8: 9.2; (xxi) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲4.6 : 5.4 ； (xxii) m爲6~16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.2 : 8.8 ; (xxiii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及經基，組成 物比例爲1 ·· 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲2.0 : 8.0 ； (xxiv) m爲6〜16之數，&3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.1 : 8.9 ； (xxv) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲2.4 : - 20- 1293882 (x X V i) m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1: 2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲〇·9: 9.1； (XX vii)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲i .5 : 8.5 ； (xxviii)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組 成物比例爲1:2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲〇.7: 9.3 ； (X X i X ) m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1: 2.4，平均聚合度爲20~30且水解比例爲4.5: 5.5 ； (X X X ) m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1: 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.4: 8.6 ； (xxxi) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲〇 . 7 : 9.3 ； (xxxii) m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及經基，組成 物比例爲1 : 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲〇 · 8 : 9.2 ； (xxxiii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組 成物比例爲1:2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.4: -21- 1293882 (xxxiv) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組 成物比例爲1 : 3 · 1，平均聚合度爲2 〇〜3 〇且水解比例爲0.7 : 9.3 ; (xxxv) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲〇 . 9 : (xxxvi)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組 成物比例爲1: 2·4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.9: (xxxvii)m爲6〜16之數，R3係選自於乙氧基及羥基， 組成物比例爲約i : 3，平均聚合度爲2〇〜3〇且水解比例爲 3.1： 6.9 ； (XXXV111)111爲1〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組 成物比例爲1 : 1，水解比例爲I·4 : 8.6且司托克半徑爲9.3 奈米或以下； (xxxix)m ® ^ 0 、 爲6〜16之數，r3係選自於胺基及羥基，組 成物比例爲1 : 1 1 ’水解比例爲1 · 4 : 8.6及司托克半徑係爲 3.1至6.2奈米； (xl)m 爲 比例爲1 : 1 至4·7奈米； (xli)m 爲 比例爲1 : i， 米或以下； ~ 1之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 水解比例爲I·4 : 8.6及司托克半徑係爲1.5 6~ 16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 水解比例爲I·4 : 8·1且司托克半徑爲3.1奈 -22- 1 之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 1293882 (47)如（4 6)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中共聚物 中式（I)所示之構造單位及式（III)所示之構造單位係分佈至 交替頭對頭序列 '交替頭對尾序列或頭對頭及頭對尾之交 替混合序列； (4 8)如（4 6)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中共聚物 中式（I)所示之構造單位及式（ΠΙ)所示之構造單位係在隨機 序列上分佈；
(49) 如（46)〜（49)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中Aik爲伸乙基或三伸甲基； (50) 如（49)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中Aik爲 伸乙基； (5 1)如（46)〜（50)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中m爲3〜50之整數； (52) 如（51)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中m爲 3〜40之整數；
(53) 如（52)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中m爲 6〜16或28〜38之整數； (5 4)如（5 3)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中m爲 6〜16之整數； (55) 如（46)〜（54)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中R1爲氫原子或甲基； (56) 如（55)之共聚物或其醫藥上可接受鹽，其中R1爲 氫原子； (5 7)如（46)〜（5 6)中任一項之共聚物或其醫藥上可接受 鹽，其中R2爲氫原子或甲基； -24- 1293882 本案發明亦關於本案發明之共聚物及其醫藥上可接受 鹽之用途以提供一種醫藥組成物，一種可以修飾蛋白質之 修飾劑、一種複合物、一種方法用以延長蛋白質保流於血 流中時間之方法、一種用於治療或預防疾病之方法及一種 本發明複合物用以製造治療或預防疾病醫藥之用途。此等 發明之較佳實施例係包括： (75) —種醫藥組成物，其包括本案發明（1)至（74)中任 一項之醫藥上可接受稀釋劑或載體及至少一種共聚物或其 醫藥上可接受鹽； (76) 如（75)之醫藥組成物，其中該組成物更含有至少一 種蛋白質或類似物或其變異體； (7 7)如（7 6)之醫藥組成物，其中蛋白質或類似物或其變 異體爲鹼性蛋白質； (7 8)如（77)之醫藥組成物，其中鹼性蛋白質爲鹼性纖維 母細胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞 原抑制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子（PDGF)、腦衍 生神經營養因子或（BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類 生長激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長 因子（VEGF)、或類似物或其變異體； (7 9)如（77)之醫藥組成物，其中鹼性蛋白質爲破骨細胞 原抑制因子或（OCIF)或類似物或其變異體； (80)如（79)之醫藥組成物，其中該OCIF或類似物或其 變異體爲自然型或重組型OCIF ; (8 1)如（79)之醫藥組成物，其中該OCIF或類似物或其 變異體係爲單體或二聚物； -27- 1293882 (82) 如（79)之醫藥組成物，其中該 〇CIF係爲以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約60,000之人 類OCIF單體或以SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量 爲約1 20,000之人類OCIF二聚物； (83) 如（7 9)之醫藥組成物，其中該OCIF係包括序列表 SEQ.ID.N0.1 之胺基酸-2 1 至 + 380 ; (84) 如（79)之醫藥組成物，其中該OCIF係包括序列表 SEQ.ID.NO. 1 之胺基酸 +1 至 + 380 ; (8 5)—種可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修飾 劑，其中該修飾劑係包括（1)至（74)中任一項之共聚物或其 醫藥上可接受鹽； (8 6)如（85)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑，其中該蛋白質爲鹼性蛋白質； (87)如（8 6)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑，其中鹼性蛋白質爲驗性纖維母細胞生長因子 (bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞原抑制因子或 (OCIF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、腦衍生神經營養因 子或（BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類生長激素 (HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長因子 (VEGF)、或類似物或其變異體； (8 8)如（86)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑’其中鹼性蛋白質爲破骨細胞原抑制因子或（OCIF)或 類似物或其變異體； (8 9)如（8 8)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑，其中該OCIF或類似物或其變異體爲自然型或重組型 -28- 1293882 ocif ； (9 0)如（8 8)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑，其中該OCIF或類似物或其變異體係爲單體或二聚 物； (9 1)如（8 8)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑，其中該OCIF係爲以SDS-PAGE在非還原條件下測量 之分子量爲約60,000之人類OCIF單體或以SDS-PAGE在 非還原條件下測量之分子量爲約1 20,000之人類OCIF二聚 物； (9 2)如（8 8)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑，其中該 OCIF係包括序列表SEQ.ID.N0.1之胺基 酸-2 1 至 + 3 80 ; (93)如（8 8)之可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修 飾劑，其中該OCIF係包括序列表SEQ.ID.NO. 1之胺基酸 + 1 至 +3 80 ; (9 4)一種具有至少一種蛋白質或類似物或其變異體之 複合物，其係鍵結至本發明（1)至（74)中任一項之至少一種 共聚物或其醫藥上可接受鹽； (9 5)如（94)之複合物，其中該蛋白質爲鹼性蛋白質； (96)如（95)之複合物，其中鹼性蛋白質爲鹼性纖維母細 胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞原抑 制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子（PDGF)、腦衍生神 經營養因子或（BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類生長 激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長因子 (VEGF)、或類似物或其變異體； -29- 1293882 (97) 如（95)之複合物，其中鹼性蛋白質爲破骨細胞原抑 制因子或（OCIF)或類似物或其變異體； (98) 如（97)之複合物，其中該〇CIF或類似物或其變異 體爲自然型或重組型OCIF ; (99) 如（97)之複合物，其中該OCIF或類似物或其變異 體係爲單體或二聚物； (100) 如（97)之複合物，其中該OCIF係爲以SDS-PAGE 在非還原條件下測量之分子量爲約60,000之人類OCIF單 體或以SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約 120,000之人類OCIF二聚物； (101) 如（97)之複合物，其中該OCIF係包括序列表 SEQ.ID.N0.1 之胺基酸-21 至 + 380 ; (102) 如（9 7)之複合物，其中該OCIF係包括序列表 SEQ.ID.N0.1 之胺基酸 +1 至 + 380 ; (103) —種具有醫藥上活性劑有效量及載體或其稀釋 劑之醫藥組成物，其中該醫藥上活性劑係爲（94)至（102)中 任一項之複合物； (104) —種在給藥於病患之後延長蛋白質或類似物或 其變異體保流於血流中時間之方法，其係藉由使該蛋白質 或類似物或其變異體與至少一種（1)至（74)中任一項之共聚 物或其醫藥上可接受鹽進行複合； (105) 如（104)之方法，其中該蛋白質爲鹼性蛋白質； (106) 如（105)之方法，其中鹼性蛋白質爲鹼性纖維母細 胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞原抑 制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子（PDGF)、腦衍生神 -30- 1293882 經營養因子或（BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類生長 激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長因子 (VEGF)、或類似物或其變異體； (107) 如（105)之方法，其中鹼性蛋白質爲破骨細胞原抑 制因子或（〇C IF)或類似物或其變異體； (108) 如（107)之方法，其中該OCIF或類似物或其變異 體爲自然型或重組型OCIF ; (109) 如（107)之方法，其中該OCIF或類似物或其變異 體係爲單體或二聚物； (1 10)如（107)之方法，其中該OCIF係爲以SDS-PAGE 在非還原條件下測量之分子量爲約60,000之人類OCIF單 體或以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約 1 20,000之人類OCIF二聚物； (111) 如（107)之方法，其中該 OCIF係包括序列表 SEQ.ID.NO.l 之胺基酸-21 至 + 380 ; (112) 如（1〇7)之方法，其中該 OCIF係包括序列表 SEQ.ID.N0.1 之胺基酸 +1 至 + 380 ; (113) —種用於疾病治療或預肪之方法，其中病患係容 易感染蛋白質或類似物或其變異體，其包括將鍵結至（1)至 (74)中任一項之至少一種共聚物或其醫藥上可接受鹽之蛋 白質或類似物或其變異體的複合物有效量給藥至該病患； (114) 如（11 3)之方法，其中該蛋白質爲鹼性蛋白質； (115) 如（114)之方法，其中鹼性蛋白質爲鹼性纖維母細 胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞原抑 制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子（PDGF)、腦衍生神 -31- 1293882 經營養因子或（BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類生長 激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長因子 (VEGF)、或類似物或其變異體； (11 6)如（11 4)之方法，其中鹼性蛋白質爲破骨細胞原抑 制因子或（OCIF)或類似物或其變異體； (117) 如（116)之方法，其中該OCIF或類似物或其變異 體爲自然型或重組型OCIF ; (118) 如（116)之方法，其中該OCIF或類似物或其變異 體係爲單體或二聚物； (119) 如（116)之方法，其中該OCIF係爲以SDS-PAGE 在非還原條件下測量之分子量爲約60,000之人類OCIF單 體或以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約 1 20,000之人類OCIF二聚物； (12〇)如（11 6)之方法，其中該 OCIF係包括序列表 SEQ.ID.NO.l 之胺基酸-21 至 + 380 ; (12 1)如（116)之方法，其中該 OCIF係包括序列表 SEQ.ID.N0.1 之胺基酸 +1 至 + 3 80 ; (122)如（116)至（121)中任一項之方法，其中疾病爲骨 代謝疾病； (1 2 3 ) —種具有蛋白質或類似物或其變異體之複合物 之用途，其係在醫藥製造中鍵結至（1)至（74)中任一項之至 少一種共聚物或其醫藥上可接受鹽，以製備預防或治療容 易感染蛋白質或類似物或其變異體之疾病的醫藥； (124) 如（122)之用途，其中該蛋白質爲鹼性蛋白質； (125) 如（123)之用途，其中鹼性蛋白質爲鹼性纖維母細 -32- 1293882 胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞原抑 制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子（PDGF)、腦衍生神 經營養因子或（BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類生長 激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長因子 (VEGF)、或類似物或其變異體； (126) 如（123)之用途，其中鹼性蛋白質爲破骨細胞原抑 制因子或（OCIF)或類似物或其變異體；
(127) 如（126)之用途，其中該OCIF或類似物或其變異 體爲自然型或重組型OCIF ; (128) 如（126)之用途，其中該OCIF或類似物或其變異 體係爲單體或二聚物； (129) 如（126)之用途，其中該OCIF係爲以SDS-PAGE 在非還原條件下測量之分子量爲約60,000之人類OCIF單 體或以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約 120,000之人類OCIF二聚物；
(130) 如（126)之用途，其中該 OCIF係包括序列表 SEQ.ID.N0.1 之胺基酸-21 至 + 380 ; (131) 如（126)之用途，其中該 OCIF係包括序列表 SEQ.ID.N0.1之胺基酸+1至+ 3 80 ;及 (132) 如（126)至（13 1)中任一項之用途，其中疾病爲骨 代謝疾病。 取代基Aik「具有1〜6個碳原子之伸烷基」之定義爲 直鏈-或分枝鏈具有1〜6個碳原子之伸烷基例如伸甲基、甲 基伸甲基、伸乙基、伸丙基、三伸甲基、四伸甲基、^甲 基一·伸甲基、2 -甲基二伸甲基、3 -甲基二伸甲基、五伸甲 -33- 1293882 基或六伸甲基。此等伸院基之中、以直鏈-或分枝鏈具有1〜4 個碳原子之伸烷基爲佳、以伸乙基或三伸甲基爲更佳且以 伸乙基爲最佳。 「具有1〜6個碳原子之烷基可視需要經至少一種選自 於羥基、鹵素原子所構成族群之取代基取代及可視需要經 選自於如下述所定義的取代基A之1〜5個取代基取代的具 有6〜14碳原子之芳基」中的烷基，如上述式（I)及（11)之定 義取代基R1、R2、R4、R5及取代基A係爲直鏈·或分枝鏈 具有1〜6個碳原子之烷基例如：甲基、乙基、正丙基、異 丙基、η-丁基、異丁基、s-丁基、第三丁基、n-戊基、異戊 基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、η-己基、異己基、 4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3，3-二甲基丁基、2,2 -二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲 基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基或2-乙基丁基。 此等烷基之中，以直鏈-或分枝鏈具有1〜4個碳原子之烷基 爲佳、以甲基及乙基爲更佳及甲基爲更佳。 「具有1〜6個碳原子之烷氧基可視需要經至少一種選 自於羥基、鹵素原子所構成族群之取代基取代及可視需要 經選自於如下述所定羲的取代基Α之1〜5個取代基取代的 具有6〜14碳原子之芳基」之烷氧基，在上述式（I)及（II)之 定義取代基R3及取代基A爲一具有1〜6個碳原子之烷基的 取代基鍵結至氧原子。此等烷氧基之實施例包括直鏈-或分 枝鏈具有1〜6個碳原子之烷氧基例如：甲氧基、乙氧基、 η-丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、s-丁氧基、第 三丁氧基、η-戊氧基、異戊氧基、2-甲基丁氧基、新戊氧 -34- 1293882 基、η-己氧基、4-甲基戊氧基、3-甲基戊氧基、2-甲達 氧基、3,3-二甲基丁氧基、2,2-二甲基丁氧基、1,卜二 丁氧基、1,2-二甲基丁氧基、1，3_二甲基丁氧基、及 二甲基丁氧基。此等烷氧基係以直鏈-或分枝鏈具有1 個碳原子之烷氧基爲更佳及乙氧基爲最佳。 上述「取代基Α」之一的「鹵素原子」，係爲在上 (1)及（11)定義取代基&1，112，1^及1^之「具有1〜6個 子之烷基可視需要經至少一種選自於羥基、鹵素原子 成族群之取代基取代及可視需要經選自於如下述所定 取代基Α之1〜5個取代基取代的具有6〜14碳原子之5 之視需要的取代基、及在上述式（II)定義取代基R3「 1〜6個碳原子之烷氧基可視需要經至少一種選自於羥 鹵素原子所構成族群之取代基取代及可視需要經選自 下述所定義的取代基A之1〜5個取代基取代的具有 碳原子之芳基」之視需要的取代基爲氟原子、氯原子 原子或碘原子；及較佳爲氟原子或氯原子。 「具有6至14個碳原子之芳基」係在定義取代基 R2，R4及R5「具有1〜6個碳原子之烷基可視需要經至 種選自於羥基、鹵素原子所構成族群之取代基取代及 需要經選自於如下述所定義的取代基A之1〜5個取代 代的具有6〜14碳原子之芳基」之視需要的取代基、及 述式（II)定義取代基R3「具有1〜6個碳原子之烷氧基 需要經至少一種選自於羥基、鹵素原子所構成族群之 基取代及具有6至1 4個碳原子之芳基」之視需要的取 爲具有6至1 4個碳原子之芳香族烴基及可爲例如：萍 !-戊 甲基 2,3-至4 述式 碳原 所構 義的 ?基」 具有 基、 於如 6〜14 、溴 R1， 少一 可視 基取 在上 可視 取代 代基 :基、 -35- 1293882 節基、萘基、菲基或蒽基。較佳爲苯基。 在上述式（Π)定義取代基R3「具有6至14個碳原子之 芳氧基可視需要經選自於取代基A之i至5個取代基取代 上述定義之方基係鍵結至氧原子且可爲例如：苯氧基、節 氧基、萘氧基、菲氧基或蒽氧基。較佳爲苯氧基。 在上述式（I)及（II)定義取代基Rl，R2，R4及R5「具有 1〜6個碳原子之烷基可視需要經至少一種鹵素原子取代」 中係上述描述爲具有1〜6個碳原子之烷基爲經至少一種上 述之鹵素原子取代且可爲例如：三氟甲基、三氯甲基、一 氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、氟甲基、2，2,2-三氟乙基、 2，2,2-三氯乙基、2-溴乙基、2-氯乙基、2-氟乙基、2__卩引噪 乙基、3-氯丙基、4 -氟丁基、6-卩引喂己基、2,2 -二溴乙基或 五氧乙基。較佳爲二每甲基、二氣甲基、二氣甲基或五氣 乙基；及更佳爲三氟甲基。 「具有1〜6個碳原子之烷基可視需要經至少一種羥基 取代」之實施例的定義取代基R1，R4及R5在上述式⑴及 (H)係包括羥基甲基、卜羥基乙基、1-羥基丙基及2-羥基丙 基。 定義取代基R3「具有1〜6個碳原子之烷氧基可視需要 經至少一種鹵素原子取代」在上述式（II)爲具有1〜6個碳原 子之上述烷氧基係經至少一種上述鹵素原子取代且可爲例 如：三氟甲氧基、三氯甲氧基、二氟甲氧基、二氯甲氧基、 二溴甲氧基、氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2,2,2-三氯乙 氧基、2-溴乙氧基、2-氯乙氧基、2-氟乙氧基、2-吲哚乙氧 基、3-氯丙氧基、4-氟丁氧基、6-吲哚己氧基、2,2-二溴乙 -36- 1293882 氧基或五氟乙氧基；較佳爲CrQ烷氧基經氟或氯原子取 代例如：三氟甲氧基、三氯甲氧基、二氟甲氧基或五氟乙 氧基。更佳爲三氟甲氧基。 r'具：有1〜6個碳原子之烷氧基可視需要經至少一種羥 基取代」之實施例定義取代基R3在上述式（π)係包括羥基 甲氧基、1-經基乙氧基、^羥基丙氧基及羥基丙氧基。 具有1〜6個碳原子之烷基可視需要經1至5個視需 要選自於取代基>之至少一種具有6至14個碳原子芳基取 代」在上述式⑴及（Π)係定義取代基Ri，R2，R4及R5可例 如：苯甲基、1-萘基甲基、2_萘基甲基、茚基甲基、苯乙 基、2 -苯乙基、丨_萘基乙基、2 -萘基乙基、^苯基丙基、2_ 苯基丙基、3-苯基丙基、1_萘基丙基、2-萘基丙基、3-萘基 丙基、1-苯基丁基、2-苯基丁基、3-苯基丁基、4-苯基丁基、 b萘基丁基、2-萘基丁基、3-萘基丁基、4-萘基丁基、1 — 本基戊基、2 -苯基戊基、3 -苯基戊基、4 -苯基戊基、5 -苯基 戊基、1-苯基己基、2-苯基己基、3-苯基己基、4-苯基己基、 5-苯基己基或6-苯基己基；較佳爲經具有6至10個碳原子 芳基取代之烷基例如··苯甲基、1 -萘基甲基、2-萘基甲基、 卜苯乙基、2-苯乙基、1-萘基乙基、2_萘基乙基、丨_苯基丙 基、2-苯基丙基、3-苯基丙基或 b萘基丙基；及更佳爲苯 甲基。 「具有1〜6個碳原子之烷氧基可視需要經1至5個視 需要選启於取代基A之至少一種具有6至1 4個碳原子芳基 取代」在上述式（Π)定義取代基R3可例如：苯氧基、1-萘 基甲氧基、2-萘基甲氧基、茚基甲氧基、1-苯乙氧基、2_ -37- 1293882 苯乙氧基、1-萘基乙氧基、2 -萘基乙氧基、ι_苯基丙氧基、 2 -苯基丙氧基、苯基丙氧基、1-萘基丙氧基、2 -萘基丙氧 基、3-萘基丙氧基、1-苯基丁氧基、I苯基丁氧基、％苯基 丁氧基、4 -苯基丁氧基、1-萘基丁氧基、2 -萘基丁氧基、3·» 萘基丁氧基、心萘基丁氧基、1-苯基戊氧基、2 -苯基戊氧基、 3-苯基戊氧基、4_苯基戊氧基、5-苯基戊氧基、1-苯基己氧 基、2_苯基己氧基、3 -苯基己氧基、4 -苯基己氧基、5 -苯基 己氧基或6 -苯基己氧基；較佳爲經具有6至1〇個碳原子芳 基取代之烷基例如苯氧基、1-萘基甲氧基、2 -萘基甲氧基、 1-苯乙氧基、2-苯乙氧基、1-萘基乙氧基、2_萘基乙氧基、 1-苯基丙氧基、2-苯基丙氧基、3_苯基丙氧基或^萘基丙 氧基，及更佳爲苯氧基。 其中R3爲「具有6至14個碳原子之芳氧基可視需要 經選自於取代基A之1至5個取代基取代」，其較佳爲具有 6至1 0個碳原子之芳氧基可視需要取代經1至3個選自於 取代基A之取代基取代；更佳爲苯氧基可視需要取代經j 至3個選自於取代基A之取代基取代；仍更佳爲需要經1 至3個鹵素原子取代的苯氧基、具有個碳原子之烷基、 羥基或硝基；且最佳爲苯氧基或p_硝基苯氧基。 虽本發明之共聚物含有一鹼基，該化合物可藉由使部 分或全部的驗基與酸反應而換成其醫藥上可接受鹽。此 外’本發明之共聚物含有該共聚物之酸性羧基的話，可藉 由使部分或全部的羧基與鹼反應而轉換成其醫藥上可接受 鹽0 在本發明共聚物中’醫藥上可接受鹽類具有鹼基之較 -38- 1293882 佳實施例係包括無機酸鹽類例如：氫鹵化酸鹽類（例如：氫 氯化物、氫溴化物及氫碘化物）、硝酸鹽、過氯酸鹽、硫酸 鹽及磷酸鹽；有機酸鹽類例如低級烷基磺酸鹽，其中其低 級烷基部分係如上述所定義（例如：甲磺酸鹽，三氟甲基磺 酸鹽及乙磺酸鹽）、芳基磺酸鹽，其中其芳基部分係如上述 所定義（例如：苯磺酸鹽或對甲苯磺酸鹽），乙酸鹽，蘋果 酸鹽，富馬酸鹽’琥珀酸鹽，檸檬酸鹽，抗壞血酸鹽，酒 石酸鹽，草酸鹽及馬來酸鹽；及胺基酸鹽類例如甘胺酸鹽 類，賴胺酸鹽類，精胺酸鹽類、烏胺酸鹽類，麩胺酸鹽及 天冬胺酸鹽。氫鹵化酸鹽類係爲特佳。 本發明中形成醫藥上可接受鹽類之較佳實施例的酸性 羧基係包括金屬鹽類例如鹼金屬鹽（例如：鈉鹽、鉀鹽類及 鋰鹽類）、鹼土金屬鹽類（例如：鈣鹽類及鎂鹽類）、金屬鹽 類例如鋁鹽類、鐵鹽類、鋅鹽類、銅鹽類、鎳鹽類及鈷_ 類；胺鹽類例如、無機胺鹽類（例如：氨鹽類）及有機胺鹽類（例 如：t-辛胺鹽類、二苯胺鹽類、嗎啉鹽類、葡萄胺鹽類、 苯基甘胺酸烷基酯鹽類、伸乙基二胺鹽類、N -甲基葡聚月安 鹽類、胍鹽類、二乙基胺鹽類、三乙基胺鹽類、二環己基 胺鹽類、N，N’-二苯伸乙基二胺鹽類、氯普羅卡因鹽類、普 羅卡因鹽類、二乙醇胺鹽類、N-苯基苯乙基胺鹽類、哌哄 鹽類、四甲基氨鹽類及三（羥基甲基）胺基甲烷鹽類；及月安 基酸鹽類例如甘胺酸鹽類、賴胺酸鹽類、精胺酸鹽類、 胺酸鹽類、麩胺酸鹽及天冬胺酸鹽。鹼金屬鹽類及鹼土金 屬鹽類係爲特佳。 本案發明中，該「構造單位」係訂爲本發明共聚物^ -39- 1293882 最小構造單位且係如上述共聚物所描述作爲式（1)之單位或 式（II)之單位。該「構造單位」並非在合成本發明共聚物中 所使用的單體起始材料之單位；相反地，其係衍生自該單 體起始材料之單位且顯示於本發明之該共聚物。 本案發明中，「頭對頭序列」係指由式⑴及（11)所表示 之構造單位係如下式所示：
本案發明中，「頭對尾序列」係指由式（I)及（11)所表示 之構造單位係如下式所示： -CH〇—C- 一㈣- c c=o 〇4Alk~〇hR2 OH R3 (Π) (I) m 本案發明中’該共聚物及其醫藥上可接受鹽可爲交替 共聚物或隨機共聚物。交替共聚物係式（I)之構造單位與式 (II)之構造單位的比例爲1: 1且該構造單位如式（I)及式（11) · 所示之構造單位係分佈至交替頭對頭序列、交替頭對尾序 列或頭對頭及頭對尾之交替混合序列。隨機共聚物係式（I) · 所示之構造單位及式（II)所示之構造單位分佈至隨機序列。 _ 本案發明中，「組成物比例」係本發朋之共聚物中式（I) 構造單位與式（II)構造單位的數量平均比例。當共聚物爲具 體地交替共聚物時，組成物比例爲1 ·· 1。然而當共聚物爲 隨機共聚物時，該比例可以改變。在本發明之共聚物中， -40- 1293882 該比例並未特別限制，及一般可爲1 〇 : 1至1 : 1 〇之範圍； 較佳爲3: 1至1:8，更佳爲2: 1至1:2或1:2至1:6, 及最佳爲1 : 1或1 : 2至1 : 4。需注意的是組成物比値必 然相當些微改變起始材料、聚合條件等。其結果所得組成 物比例爲近似値；上述所得組成物比例中高達±30%的變異 體値係仍認爲在該比例之內。 本案發明共聚物之組成物比例可由已知分析技術測 定。由電導滴定測定共聚物之羧基含量（毫莫耳/克）[該測定 需要對應完全水解共聚物（即R3爲0Η)之製備，或分別地 藉由水解該共聚物而分析或由合成對應水解共聚物]，且由 已知該共聚物各構造單位的式量，其可使用下式來測定組 成物比例：
Rii/Ri = (Cx FWi)/(2000-C x FWii) 其中Ri係爲構造單位（I)之平均數量，Rii爲構造單位 (II)之平均數量，C爲該共聚物之羧基含量（毫莫耳/克），FWi 爲構造單位（I)之式量及FWii係爲構造單位（II)之式量。 一般而言，該聚合物分子量相對於含有類似構造之標 準化合物，其係作爲一相對分子量且含有已知相對分子量 値。這樣的一種評估方法係常常作爲測定如本發明之新穎 共聚物分子量。 本發明共聚物之平均分子量係使用凝膠過濾層析法測 定，其係藉由使用具有已知絕對分子量之聚合物作爲標準 化合物而測定。該凝膠種類，溶析條件及已知絕對分子量 之聚合物係可由熟悉該項技術者使用習知技術及一般知識 -41- 1293882 而適當地選擇，例如：參照「綜合聚合物科學」， pub.Pergamon Press(牛津）1 9 8 9。所使用於對照目的之標準 化合物係較佳爲具有類似構造及特性之聚合物。對於本案 發明之共聚物，其側鏈部分係爲特徵構造。因此，使用爲 對照之該標準化合物係較佳爲具有類似構造之聚合物，以 測定本發明共聚物之側鏈部分的平均分子量爲。更佳係使 用聚（乙二醇）爲標準化合物。 本案發明中，「聚合平均度」爲在本發明之共聚物中構 造單位聚合度之平均値，即其係爲共聚物中構造單位的平 均數量。該測定係基於該共聚物之平均分子量、共聚物各 構造單位之式量及共聚物構造單位之組成物比例。本發明 具有構造單位I及Π的共聚物之「聚合平均度」可由下式 加以計算： 聚合平均度=Mc/(FWi X Ri + FWii X Rii) 其中Me係爲共聚物之平均分子量，Fwi及Fwii係分 別爲構造單位I及Π之式量及Ri及Rii係表示共聚物中由 組成物比例所計算的構造單位I及II的部分（組成物比例 =Ri : Rii ; Ri + Rii= 1 卜 在用以測量本案發明共聚物平均聚合度之上式中，構 造單位組成物比例的値、共聚物的平均分子量及構造單位 的式量係可均如上述所討論者。爲了如此，其係需要製備 對應完全水解、氨解、胺解或醇解共聚物（較佳係對應完全 水解共聚物）。或者，若使用於製，備本發明共聚物之起始共 聚物爲已知的組成物的話，該値可不需要分析而測定。該 -42- 1293882 平均聚合度在本發明之共聚物中並沒有特別地限制。典型 地係爲5至200 ;較佳爲5至50 ;更佳爲5至2〇或2〇至 30 或 30 至 40。 在本發明之共聚物中，式（II)構造單位可包括至少一種 式（II)構造單位，其中R3爲視需要取代的具有丨〜6個碳原 子之院氧基、視需要取代的芳氧基或式_NR4R5所示之基、 與視需要至少一種式（II)所示R3爲羥基之構造單位。式（11) 所示R3爲羥基之構造單位、及式（11)所示R3爲視需要取代 的院氧基、視需要取代的芳氧基或式-NR4R5所示之基之構 造單位係作爲水解比例。藉由以電導滴定決定其共聚物竣 基含量（毫莫耳/克）且由共聚物各構造單位的式量及組成物 比例（請參照上述），其係可由下式決定水解比例H : a : 2000 x(Rii/Rn~ C X fFWi H- FWii xTRii/Ri)] H + A (Rii/Ri)x [C x(FW(A)ii ~ FWii)+ 1 000] 其中H ·· A爲水解比例，Ri : Rii爲組成物比例，c係 爲其共聚物羧基含量（毫莫耳/克），Fwi係爲構造單位（I)式 量，Fwii爲構造單位（II)中R3爲0H之式量及FW(A)ii係 爲構造單位（II)中R3爲視需要取代的烷氧基、視需要取代 的芳氧基或式-NR4R5所示之基之式量。 較佳的水解比例範圍係爲5 : 5至0 : 10，4 : 6至0 : 10， 3:7 至 0: 10， 2:8 至 0: 1〇及 1:9至 0: 10。需注 意的是組成物比値必然相當些微改變起始材料、反應條件 等。其結果所得組成物比例爲近似値；上述所得組成物比 例中高達±30%的變異體値係仍認爲在該比例之內 本案共聚物分子尺寸可藉由已知的分析技術而測量， -43- 1293882 0至100 °C且較佳爲10至40°c。 反應時間變化係根據反應溫度，起始化合物，試劑， 及所使用的溶劑種類，但是通常爲1 〇分鐘至3天且較佳爲 6小時至3 6小時。 反應結束之後’胺解反應所欲的化合物可以熟悉該項 技藝者所熟知之方法自反應混合物分離。該所得的反應混 合物可爲例如：可以下列步驟自目標化合物分離：〇)使用 酸經由半透膜而透析，例如以水性醋酸溶液去除過量的氣 (透析係在如反應混合物溶液不會變成酸性之條件下進 行’若需要的話可加水），繼而使用超濾薄膜濃縮且然後將 濃縮液冷凍乾燥而獲得；或（2)添加水性氫氧化鈉溶液及不 溶混的有機溶劑例如二乙基醚，搖晃所得的混合物（或需要 的話，可以搖晃2次以上）且然後將含有目標混合物之分 離水性層冷凍乾燥以得到化合物。或者，當所欲的化合物 用於蛋白質修飾時’其可不經分離而作爲一溶液使用。 然後得到所欲的化合物，若需要的話，可進一步以習 知技術分離，例如：凝膠過濾管柱。爲得到具有特別所欲 平均聚合度或所欲的分子量之化合物，過濾的化合物可進 一步使用凝膠過濾層析法分餾. 其需注意的是胺解反應之目標化合物可含有式（II)構 造單位，其中在起始材料某些單位水解的結果中、於溶劑 或試劑含水的情形下，R3爲羥基。其亦需注意的是爲了改 良儲存性可添加鹼至目標化合物中。 本案發明中，「醇解」係表示含醇或芳基醇之式（111) 殘酸酐部分的開環反應，以產生部分式（Π)，其中R3爲上 -50- 1293882 述定義之烷氧基或芳氧基。實質醇解反應的本質並沒有特 別限制，只要該方法爲熟知該項技藝者一般所使用者。 使用於醇解反應之溶劑實施例係包括水；及醯胺例如 甲醯胺，Ν,Ν-二甲基甲醯胺，Ν,Ν-二甲基乙醯胺，N-甲基 -2-吡咯烷酮，Ν-甲基毗咯啶酮及六甲基磷酸三醯胺。此等 溶劑中，水爲較佳。其需注意的是所使用的試劑亦可作爲 溶劑使用。 使用的試劑係明顯地裉據目標烷氧基或芳氧基之本 質。使甩醇以獲得所欲的烷氧基的典型實施例包括甲醇， 乙醇，乙二醇，η-丙醇，丙二醇，2-羥基-η-丙醇及異丙醇， 及其水性溶液，當使用醇以獲得所欲的芳氧基之實施例係 凹包括酚及Ρ-硝基酚。此等試劑之中，以乙醇爲佳。 反應溫度變化係根據起始化合物及試劑但是通常爲 〇至1 〇 0 °C且較佳爲1 0至4 0 °C。 反應時間變化係根據反應溫度，起始化合物，試劑及 所使用的溶劑種類但是通常爲10分鐘至3天且較佳爲6 小時至3 6小時。 反應結束之後，醇解反應所欲的化合物可藉由熟悉該 項技藝者所知之習知方法而自反應混合物分離。例如：反 應混合物可使用超濾薄膜濃縮，加水且然後混合物進一步 使用超濾薄膜濃縮二以上以移除過量的醇，然後使所得濃 縮液冷凍乾燥以獲得目標化合物。或者，當所欲的化合物 用於蛋白質修飾時，其可不經分離而作爲一溶液使用。 然後得到所欲的化合物，若需要的話，可進一步以習 知技術分離，例如：凝膠過濾管柱。爲得到具有特別所欲 -51- 1293882 平均聚合度或所欲的分子量之化合物’過濾的化合物可進 步使用膠過濾、層析法分飽。 其需注意的是胺解反應之目標化合物可含有式（II)構 XQ單位’其中在起始材料某些單位水解的結果中、於溶劑 或試劑含水的情形下，R3爲羥基。其亦需注意的是爲了改 良儲存性可添加鹼至目標化合物中。 當本案發明爲醫藥上可接受鹽之所欲的共聚物，製備 該鹽之方法該並沒有特別地限制，只要其爲該領域一般所 使用的方法。例如：醫藥上可接受鹽可在有機溶劑中溶解 本發明共聚物而獲得，在溶液中添加鹼而獲得，且然後沈 澱收集所得的該鹽。 可使用各種不同的戰術以控制其本發明共聚物之均分 子量、交替分佈範圍及組成物比例。 眾所周知的係馬來酸酐單體係傾向於與含有聚氧基伸 乙基嫌丙基甲基二醚之共單體交替地共聚和[例如：請參照 綜合聚合物科學第4卷，鏈聚合部分II，G.C.Eastmond等 人編輯，第 377-422 頁，Pergamon Press(1989); T.Yoshimoto 寺人’生化生理硏究通訊（Biochemical Biophysical Research Communication)第 148 卷，8 7 6 - 8 8 2 ( 1 9 8 7 ) ] 〇 共聚 物的平均分子量及分佈可由熟悉之技藝加以控制（例如：請 參照 T.Ohtsu 及 M.Kinoshita， Koubunshi Gousei no Jikkenhou 第 125-154 頁，Kagaku-Dojin 1972)。此夕f，雖 然馬來酸酐傾向於與共單體交替地聚合，共聚物中包括於 馬來酸酐單位之組成物比例可能大於50莫耳％係爲熟悉 該項技藝者所知悉的（日本專利No.2621308, No.2701295, -52- 1293882
No.2803265 ， No.3271265 ， No.3035675 及 No.3106265 ，及 曰本專利申請公開案No.2003-105003及No.2003- 105040)。 一般而言，爲獲得具有高分子量及較大的交替分佈度 之聚合物，聚合反應應在溫和的條件下進行，例如較低溫 度及較低的起始劑濃度。降低起始劑相對濃度之較高的單 體濃度及較低的溶劑濃度，亦可導致較高的分子量及較高 的交替分佈度。 或者，爲獲得具有低分子量及低交替分佈度之聚合 物，其係可爲高溫、高起始劑濃度、低單體濃度及高溶劑 濃度。再者，在此等相對分離聚合反應條件及/或單體混合 物中高於5 0莫耳％總單體量爲馬來酸酐下，在所得共聚物 之馬來酸酐單位組成物比例可高於5 0莫耳％。 某些實施例對於聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚及馬來 酸酐之聚合反應條件係如T · Y 〇 s h i m 〇 t 〇等人所描述，生化 生理硏究通訊第148卷，876-882(1987)。根據該報告，混 合聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚、馬來酸酐、甲苯及過氧 化苯醯（起始劑）且聚合反應係在8 0 °C下迴流7小時。結果 聚合物具有13KD分子量，及擁有8 PEG鏈及8馬來酸酐 單位。共聚物的交替分佈係根據事實建議具有1 : 1的組成 物比例且馬來酸酐單體傾向於與共單體交替地共聚合。若 共聚物需要具有低分子量及低交替分佈範圍，則應施加高 起始劑濃度、低單體濃度及/或高溶劑濃度。例如：當聚合 反應中使用甲本做爲溶劑且聚合反應係在1大氣壓下進 行’聚合反應可在高於其1 1 0 °C沸點下進行。此外，具有 不同溶劑之高溫，其沸點係以高於甲苯爲較佳。在此等情 -53- 1293882 形下’需要適當地選擇起始劑之種類，其係由於各種起始 齊I彳系具有比分解速率常數且某些起始劑將在此類高溫下分 解。具有不同分解速率之起始劑類係已爲習知[例如：請參 照聚合物手冊，第三版，第ΙΙ/1-Π/65頁，Ed.by J.Brandrup 及 E.Immergut，John Wiley & Sons( 1 9 89)]。 交替溶劑、起始劑及反應條件以改變在聚氧基伸乙基 Μ丙基甲基二醚及馬來酸酐的共聚合反應中組成物比例、 分子量及交替分佈度，係已經揭示於其他的先前文件例如 曰本專利申請公開案No.2003-105003。例如：在1大氣壓 下二甲苯具有比甲苯高的沸點（140ΐ )。其亦應知共聚合反 應在某些情形下（移除在聚合反應溫度下溶劑沸點限制）可 不需要任何的溶劑。各種的交替起始劑例如過氧化苯醯、 過氧化二-第三丁基酯及過氧化第三丁基異丁酯，及偶氮起 始劑例如已揭示的偶氮雙異丁腈。其係可藉由使用鏈轉移 試劑以降低共聚物的平均分子量。 若共聚物中總單體的馬來酸酐單位組成物比例需要大 & 50%的話，無論有無相當嚴格的聚合反應條件在單體混 合物中均應多施加馬來酸酐單體％。 當醫藥上活性成分係使用本發明共聚物或其醫藥上可 接受鹽及蛋白質或類似物或其變異體而製備時，共聚物對 蛋白質或類似物或其變異體之比例沒有特別地限制，只要 所得複合物具有所欲的醫藥活性即可。本案發明或其醫藥 上可接受鹽之共聚物對蛋白質或類似物或其變異體的代表 性地重量比係爲0. 〇 1至1 〇〇 : 1 ;較佳爲〇. 1指5 0 : 1 ;更 佳爲1至1〇 : ；1 ;及更佳爲1至: i。 -54- 1293882 在至少邰分的本案發明及蛋白質或類似物或其變異體蛋白 質fb飾劑之殘基彳谷解反應中爲正電荷。例如：蛋白質或類 似物或其變異體之pH可設定成3至等電位之値，且較佳爲 5又疋成4至8之値。在此等條件下，其需注意的是該蛋白 質或類似物或其變異體之等電位可由電泳決定。 蛋白質修飾劑係溶解於上述的溶劑中，然後如此所得 之溶液係係添加至該蛋白質或類似物或其變異體水性溶液 中。若需要的話可搖晃所得溶液以加速反應。視需要的話 所得混合物的pH可藉由添加酸及/或鹼以調整成所欲pH。 本案發明所使用的蛋白質修飾劑對該蛋白質或類似物或其 變異體之比例並未限制至任何比値，只要其對蛋白質產生 所欲的修飾。代表性地比例係爲0 · 0 i至1 〇〇重量；較佳爲 〇·1至50 ;更佳爲1至10 ;及最佳爲1至i.5 : 修飾方法之反應溫度的變化係根據所使用的化合物及 試劑，但是通常爲0至100 °C、較佳爲4至40 °C及更佳爲 30 至 40〇C。 反應時間變化係根據反應溫度、所使用的化合物、試 劑及所使用的溶劑種類，但是通常爲5分鐘至14天，較佳 爲1小時至12天，及更佳爲5天至10天。 有時候在蛋白質修飾方法所使用的條件，係爲共聚物 中某些式（II)的構造單位轉換成具有不同特性的式（II)之單 位。例如：其中式（II)的構造單位中的R3係爲羥基以外的 基，其修飾方法中所使用的條件係爲某些該R3基被水解以 產生式（II)中R3爲羥基之構造單位。 如上所述，本案發明之複合物係具有至少一種蛋白質 -56- 1293882 或類似物或其變異體，其係鍵結至至少一種本案發明的共 聚物或其醫藥上可接受鹽。在該複合物中，蛋白質或類似 物或其變異體及共聚物或其醫藥上可接受鹽係彼此以化學 鍵鍵結’例如··共價鍵（例如··希夫鹼形成，醯胺鍵形成及 酯鍵形成）’離子鍵或配位共價鍵、或非化學鍵例如：疏水 性交互作用、氫鍵、靜電交互作用或共鳴鍵結。 本案發明之複合物較佳係爲在非還原條件下當經歷尺 寸排除層析法或SDS-PAGE時，係在任何有效範圍內並未 偵測到其爲游離的類型。本案發明之複合物更佳爲在非還 原條件下當經歷尺寸排除層析法或S D S - P A GE時，係在任 何有效範圍內並未偵測到其爲游離的類型。此外，其進一 步更佳係無法藉由ELS IA偵測本案發明複合物蛋白質，其 結果係由共聚物及其醫藥上可接受鹽之蛋白質構造的修飾 係非常低（較佳係失誤比例爲20%或以下、更佳爲15%或以 下且更佳爲10%或以下）。 本案發明中，蛋白質類似物係定義爲一種蛋白質，其 係在嚴格的條件下藉由雜交蛋白質的cDNA而編碼自衍生 於動物細胞、人體體液或組織的cDN A資料庫無性繁殖的 cDNA (60 至 70〇C，6xSSC)。 本案發明中，蛋白質變異體係定義爲一種蛋白質，其 係得自於藉由取代、刪除、添加、插入一或多個胺基酸於 原始蛋白質中且仍含有至少一部分的原始蛋白質活性爲可 被偵測到的程度。 較佳係該蛋白質或類似物或其變異體爲鹼性蛋白質。 更較佳係鹼性蛋白質爲鹼性纖維母細胞生長因子（bFGF)、 -57- 1293882 上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞原抑制因子或（〇CIF)、血 小板衍生生長因子（PDGF)、腦衍生神經營養因子或 (BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類生長激素（HGH)、肝 細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長因子（VEGF)、或類 似物或其變異體。最佳係鹼性蛋白質爲破骨細胞原抑制因 子或（OCIF)或類似物或其變異體。 本發明中所使用的OCIF、其類似物或其變異體可爲天 然型或重組型，並沒有特別地限制。天然型〇C IF係表示 OCIF爲藉由萃取、純化及/或分離有機、體液、細胞培養 或衍生自人類或非人類動物的培養基，而獲得的天然產生 蛋白質。重組型〇C IF、其類似物或其變異體爲重組蛋白 質，得自於萃取、純化及/或分離於一般下列技術所使用 的寄主之蛋白質’例如·原核寄主細胞（例如：c e r / c办/ β 或真核細胞例如：已轉移至具有編碼有〇CIF、其類似 物或其變異體的多核苷酸之載體上的人類或非人類細胞系 統[例如··請參照揭示於 EP-A-08 1 63 80(W〇-A-9 6/262 17；^ WO-A-97/23 6 1 4之重組方法]。 使用於本案發明的OCIF，其類似物或其變異體之起源 並沒有特別地限制且其可衍生自人類或非人類動物。較佳 係其衍生自哺乳類動物例如：人類，大鼠，小鼠，兔子， 狗’猫’牛，豬’綿羊或山羊；或鳥類例如：禽鳥，鵝， 雞或火雞。更較佳係衍生自哺乳類動物且更佳爲衍生自人 類。 本發明中所使用的〇 C IF或其類似物係可爲一單體類 型OCIF(例如·在非還原條件下人類中一種具有藉由 -58- 1293882 SDS-PAGE測量的分子量約60000之單體）或二聚物類型（例 如：在非還原條件下人類中一種具有藉由SDS-PAGE測量 的分子量約 1 20000之二聚物）[請參照 EP-A-0 8 1 6 3 80 (WO-A-9 6/2 62 1 7)]。較佳爲在非還原條件下人類OCIF具有 藉由SDS-PAGE測量的分子量約60000之單體或在非還原 條件下人類OCIF具有藉由 SDS-PAGE測量的分子量約 1 20000之二聚物，及更佳爲在非還原條件下人類OCIF具 有藉由SDS-PAGE測量的分子量約120000之二聚物。 已知OCIF係轉錄至細胞中作爲一在其胺基末端具有 單胜肽之聚胜肽，且然後其係藉由包括移除該單胜肽之方 法而成熟[例如：請參照重住方法，揭示於 EP-A-08 1 63 80(WO-A-96/262 17)及 WO-A-97/236 1 4]。使用 於本發明中的OCIF、其類似物或變異體係包括含有單胜肽 之聚胜肽及其成熟的類型。較佳實施例係包括人類OCIF， 其包括具有序列表SEQ. ID.ΝΟ·1中-21至+ 380之胺基酸的 單胜肽及不包括具有序列表SEQ.ID.NO. 1中+1至+3 80之胺 基酸的單胜肽之成熟人類。其中當然以人類OCIF係爲特別 佳。 其亦應知甲硫胺酸亦可添加至OCIF、其類似物或其 變異體之成熟類型，當其在寄主細胞中表現爲一重組蛋白 質，特別在原核寄主細胞例如大腸桿菌 〜/〇。其可藉由添加具有序列ATG(AUG)之核苷酸三聯體 至編碼有一成熟類型OCIF、其類似物或其變異體多核苷酸 的5，-端，且將該所得的多核苷酸插入至合適的表現載體中 而獲得。所欲的在其胺基末端具有甲硫胺酸之成熟蛋白質 -59- 1293882 可然後藉由一合適的寄主而表現，其中該寄主已被一重組 型表現載體轉移。此外，一或多個的胺基酸可添加至該蛋 白質胺基末端甲硫胺酸附近的位置，其係藉由進一步添加 核苷酸三聯體至在其多核苷酸編碼有成熟類型的OCIF、其 類似物或其變異體之5’-端加入ATG三聯體的附近。在胺 基端具有甲硫胺酸之OCIF、其類似物或其變異體之目標成 熟類型可根據習知方法從轉移寄主細胞的培養中純化及分 離出來。此外，一或多個的胺基酸可在緊鄰甲硫胺酸且比 甲硫胺酸要接近羧基端之位置，插入至成熟類型的在其胺 基末端具有甲硫胺酸OCIF、其類似物或其變異體。
本案發明中，OCIF類似物係表示一種由天然細胞、體 液及/或器官如上述所舉例的有機人類或非人類動物多核 苷酸編碼之蛋白質。該類似物的特佳實施例係包括 0CIF2，0CIF3、0CIF4 及 0 C IF 5 [請參照 E P - A - 0 8 1 6 3 8 0 (W096/262 17)]。此類OCIF類似物或其活性片段可藉由下 列方法而獲得，例如：由人類或非人類動物的細胞、器官、 組織或體液所萃取的RNA ;使用一反轉錄所合成與RNA互 補的cDNA第一股，且然後使用該第一股爲模板使用DNA 聚合酶以合成該cDNA的第二股；如此獲得的雙股cDNA係 插入至一合適的、傳統使用的表現載體；然後藉由如此所 得之載體轉移至一合適的、傳統使用的寄主細胞；該寄主 產生的所欲的胜肽係在嚴格的條件下接者使用雜交技術例 如噬菌斑雜交篩檢或使用OCIF的cDNA或其片段作爲探針 之噬菌斑雜交[請參照 EP-A-08 1 63 80 (WO-A-96/262 1 7)]; 且最後藉由所得之寄主細胞以習知技術表現所欲的 OCIF -60- 1293882 類似物。 本案發明中，OCIF變異體係表示一蛋白質，其具有一 胺基酸序列其中一或多個的胺基酸殘基經取代至、刪除 至、添加至或插入至〇 C IF或其類似物胺基酸序列，且至少 含有部分的OCIF活性。此類OCIF變異體可藉由下列方法 而獲得，例如：取代、刪除、添加及/或插入一段核苷酸或 一以上的核苷酸至使用聚合酶鏈反應法（下述簡稱爲PCR) 編碼有OCIF或其類似物之核苷酸序列、一種基因重組方法 或使用外核酸酶或內核酸酶例如：限制酵素之核酸酶分解 方法；以表現載體其中所得核苷酸編碼有已插入所欲的 0 C IF變異體轉移真核寄主細胞例如：動物細胞或例如 之原核寄主細胞；且然後根據熟悉該項技 術者所眾所周知的方法，自產自於該轉移寄主細胞培養之 含蛋白質分餾萃取、純化及/或分離所欲的胜肽。 截頭類型的OCIF係其中大部分的胺基酸序列已經自 刪除亦已知保留至少某些 OCIF活性[例如：請參照 EP-A-0 816380(WO-A-96/262 17)及 WO-A-97/2361 4]。此等 截頭類型的OCIF保留至少某些完整〇CIF聚胜肽之活性亦 已包括於本案發明的OCIF變異體內。 此外，OCIF或其截頭形成係與免疫血球素區域例如 Fc區域融合（例如：融合聚胜肽，其中該人類IgG的FC區 域係接觸至OCIF的羧基端）及其保留某些已知完整的〇CIF 聚胜肽活性（參照WO-A-97/236 14)，及此等融合蛋白質亦 已包括於本案發明的OCIF變異體內。 任何天然產生的OCIF或其類似物或組合型OCIF或類 -61- 1293882 似物或其變異體可包括接觸至〇CIF或類似物或其後轉錄 變異體之糖鏈。包括糖鏈的天然產生的0CIF或其類似物可 得自於利用習知技術衍生於人類或非人類動物的細胞培 養、組織、器官、體液或細胞源。含有糖鏈的組合型〇 CIp 或類似物或其變異體可利用載體含有編碼有任何0CIF或 類似物或其變異體例如此處所述及上述例示之核苷酸序列 的載體得自於轉移真核寄主細胞的培養。實施例的合適寄 主細胞可使用能後轉錄修飾OCIF或類似物或其變異體，以 接觸包括中國倉鼠卵巢細胞及COS細胞之糖鏈[Yasuda， Η·等人，內分泌學，139，1329-1337(1998)]。含有此等糖 鏈之OCIF或類似物或其變異體係合適使用於形成本案發 明的複合物。含有糖鏈的在OCIF或類似物或其變異體可與 聚合物、多糖或修飾的多糖而人工修飾（特別是以酵素修 飾）。 包括本案發明或其醫藥上可接受鹽及蛋白質或其類似 物之共聚物之本發明醫藥組成物可爲根擄上述方法所製備 的溶液或以冷凍乾燥該溶液而獲得者。或者，此等醫藥組 成物可根據替代方法而表述或其可爲套件組的形式。在下 列的情形中，本案發明或其醫藥上可接受鹽及蛋白質或類 似物或其變異體之共聚物係儲存於不同的容器中，且然後 在使用前混合至製備所欲的醫藥上組成物。 本發明的醫藥組成物可視需要更含有鹼。該鹼並不限 於任何鹼，只要其爲一般使用於醫藥組成物者。該鹼的實 施例係包括：無機鹼類例如鹼金屬碳酸鹽類（例如：碳酸 鈉，碳酸鉀及碳酸鋰）、鹼金屬碳酸氫類（例如：碳酸氫鈉、 -62- 1293882 碳酸氫鉀及碳酸氫鋰）、鹼金屬氫化物類（例如：氫化鋰、 氫化鈉、及氫化鉀）、鹼金屬氫氧化物（例如·：氫氧化鈉、 氫氧化鉀、氫氧化鋇及氫氧化鋰）、鹼金屬氟化物（例如： 氟化鈉及氟化鉀）；及有機鹼類例如鹼金屬烷氧類（例如： 甲氧基鈉、乙氧基鈉、甲氧基鉀、乙氧基鉀、第三丁氧基 鉀及甲氧基鋰）、鹼金屬硫醇類（例如：硫醇甲基鈉及硫醇 乙基鈉）、N-甲基嗎啉、三乙基胺、三丙基胺、三丁基胺、 二異丙基乙基胺、二環己基胺、N-甲基哌啶、吡啶、4-吡 咯啶吡啶、甲基吡啶、4-(N，N-二甲基胺基）吡D定、2,6-二（t-丁基）-4 -甲基吡啶、喹啉、Ν,Ν-二甲基苯胺、N，N-二乙基 苯胺、1，5-二偶氮二環[4_3.0]壬-5-烯（DBN)、1，4-二偶氮二 環[2·2·2]辛烷（DABCO)及 1，8-二偶氮二環[5·4·0]十一 -7-烯 (DBU) 〇此等鹼類之中，鹼金屬氫氧化物類爲佳及氫氧化鈉 爲特佳。就這點而言，其需注意的是部分或全部的鹼類可 與本案發明的共聚物形成鹼類。 醫藥組成物的實施例，根據本案發明係一種複合物， 其包括至少一種物質選自於本案發明或其醫藥上可接受鹽 及蛋白質或類似物或其變異體之共聚物，選自於bFGF(用 於治療或預防局部缺血動脈病及難治的表皮潰瘍），E GF (用 於治療或預防潰瘍疾病例如潰瘍結腸炎及延長的結腸炎上 皮病），PDGF(用於治療傷害），BDNF及NGF(用於治療或 預防中樞神經系統例如帕金森氏症及老年癡呆症之疾 病），HGH(用於治療或預防生長賀爾蒙缺陷、生長賀爾蒙 分泌減少倂發症、特納氏綜合症及軟骨成骨營養失調）， HGF(用於治療或預防糖尿病蜜劑、動脈硬化例如大腦栓塞 -63- 1293882 及肝炎纖維化）及VEGF(局部缺血動脈疾病及體表動脈閉 塞疾病）。 根據本案發明的醫藥組成物特別較佳實施例係包括至 少一種物質選自於OCIF，類似物及其變異體之複合物及至 少一種物質選自於本案發明或其醫藥上可接受鹽之共聚 物。此等醫藥組成物係特別合適於預防或治療骨代謝疾 病。本案發明中，該骨代謝疾病係包括任何疾病，其特徵 係包括從此病患實質上遭受骨頭重量減少，且其需要抑制 骨的再吸收或骨再吸收的比例以防止或或治療該疾病。 可使用本發明之醫藥組成物而治療或預防骨代謝疾病 如包括：初級骨質疏鬆症（老年骨質疏鬆症，絕經後的骨質 疏鬆症，及突發性少年骨質疏鬆症）；內分泌的骨質疏鬆症 (甲狀腺機能亢進、甲狀旁腺機能過盛、庫興氏症候群、及 肢端肥大症）；骨質疏鬆症伴隨骨質疏鬆症（垂體機能減 退、克來恩費爾特氏綜合症候群、及特納氏症）；遺傳性及 先天性骨質疏鬆症（成骨不全、高胱胺酸尿、梅克氏（Menkes) 症，及憂鬱症）；由於重量負荷造成的位移或固定之骨質稀 少及肢解的固定；柏哲德氏疾病；骨髓炎；骨質流失所造 成的感染病徵；固體癌所致‘的血碳酸過多症（乳癌，肺癌， 腎癌，及前列腺癌）；血液性致命疾病（多骨髓瘤，淋巴瘤， 及白血病）；突發性血碳酸過多症；血碳酸過多症伴隨甲 狀腺機能亢進或腎臟機能失常；由類固醇藥物治療所造成 的骨質稀少；由給藥其他藥物（例如：抑制免疫力的藥劑例 如胺基甲基葉酸（抗腫瘤藥）及拒絕反應抑制藥A，肝磷脂， 及止吐劑）所造成的骨質稀少；伴隨腎臟機能失常的骨質稀 -64- 1293882 少；骨質稀少所伴隨的外科手術或消化器官疾病(例如：小 腸障礙’大腸障礙，慢性肝炎，胃切除術，初級膽汁肝臟 硬化’及肝臟硬化）；由於各種的類型的風濕病例如類風濕 性關節炎的骨質稀少；由於各種類型的風濕病例如類風濕 性關節炎的折骨術及關節破壞；肢體殘缺型類風濕性關節 炎；骨關節炎；牙周骨的流失；腫瘤轉移至骨（溶骨轉移）； 骨壞死或骨細胞死亡伴隨創傷，高歇氏病，鐮狀紅細胞貧 血，組織性狼瘡紅斑、或非創傷性傷害；骨發育不全例如 腎性骨發育不全；骨質稀少伴隨磷酸酶過少症或糖尿病； 骨質稀少伴隨營養病或飲食病；及其他骨質稀少。此外， 本案發明中，上述固體腫瘤所引起的惡質病，腫瘤轉移至 骨（溶骨轉移）或血液致命疾病係亦包括於骨代謝疾病（參照 日本專利申請（Kokai)No.2000- 178200) 〇 根據上述本案發明的醫藥組成物可安全地以口服或非 口服方式至人類或人類以外的動物內。醫藥組成物的劑量 類型可大約根據疾病種類、疾病程度及病患的條件、年紀、 性別及重量而選擇。例如：醫藥組成物可以下列形式口服： 藥片、膠囊、粉末、顆粒或漿液；以僅由注射通過靜脈方 式注射或結合一般注射劑例如葡萄糖，胺基酸等而注射、 或注射肌肉內地，皮下地，皮內地或僅經由腹·膜內；以糊 劑形式經皮膚給藥；以鼻滴劑形式經皮膚給藥；經黏膜給 藥或以黏膜製備而給藥至口腔；或以栓劑形式經皮膚給 藥。製備此等製備可使用利用眾所周知的輔助劑，其係使 用於一般醫藥領域例如賦形劑，黏結劑，崩散劑，潤滑劑， 調味劑，溶解化劑，懸浮劑，染劑，pH調整劑，抗菌劑， -65- 1293882 膠化劑，界面活性劑及塗布劑。 當製備藥片類型的醫藥組成物時，可使用該項技術領 域已使用的各種的載體。此等載體實施例係包括··賦形劑 例如乳糖’蔗糖’氯化鈉，葡萄糖，尿素，澱粉，碳酸鈣， 高嶺土，結晶的纖維素及矽酸；黏結劑例如水，乙醇，丙 醇，單一漿液，葡萄糖溶液，激粉溶液，凝膠溶液， 羧基甲基纖維素，蟲膠，甲基纖維素，磷酸鉀及聚乙烯吡 咯烷酮；崩散劑例如乾式澱粉，藻酸鈉，石花菜粉末，昆 布糖粉末，碳酸氫鈉，碳酸鈣，聚氧基伸乙基山梨糖醇酐 脂肪酸酯，硫酸月桂基鈉，硬酯酸甘油一酸酯，澱粉及乳 糖；崩散劑抑制劑例如蔗糖，硬酯酸甘油，可可及氫化油； 吸收加速劑例如四級氨鹼類及硫酸月桂基鈉；吸濕劑例如 甘油及澱粉；吸收劑例如澱粉，乳糖，高嶺土，膨潤土及 膠狀矽酸；及潤滑劑例如純化滑石，硬酯酸鹽，硼酸粉末 及聚乙二醇。此外，此等藥片若需要的話可以習知塗覆轉 換。此等塗覆藥片的實施例係包括糖-塗覆藥片、凝膠-塗 覆藥片、腸膜塗覆藥片、膜·塗覆藥片、雙層藥片及多層藥 片， 當以九形式製備醫藥組成物時，可使用該技術已知的 各種載體。此等載體的實施例係包括：賦形劑例如葡萄糖， 乳糖、可可、澱粉、氫化植物油、高嶺土及滑石；黏結劑 例如阿拉伯膠粉末’、黃芪膠粉末、凝膠及乙醇；及崩散劑 例如昆布糖石花菜。 當以栓劑形式製備醫藥組成物時，可使用該技術已知 的各種載體。此等載體的實施例係包括聚乙二醇、可可、 -66- 1293882 高級醇、高級醇酯、凝膠及半合成甘油。 當以注射形式製備醫藥組成物時，其較佳係組成物之 類型爲溶液或滅菌的懸浮液且與血等滲透壓。當此等組成 物係爲溶液形式時’製備乳液、懸浮液或實質上同質的水 性溶液，可使用該技術已知所使用的各種的稀釋劑。此等 稀釋劑的實施例係包括水、乙醇、丙二醇、乙氧基化硬酯 醯醇、聚氧基化硬酯醯醇及聚氧基伸乙基山梨糖醇酐脂肪 酸酯。在此等情形下，該醫藥組成物可包括足夠量的一般 鹽、葡萄糖或甘油，以保持與血爲等滲透壓。此外，醫藥 組成物亦可包括習知的溶解化劑、緩衝劑、緩和劑、p Η調 整劑、安定劑或增溶劑。此等注射可爲冷凍乾燥。 此外，本發明之醫藥組成物亦可包括染劑、防腐劑、 芳香劑、調味劑、增甜劑或其他所需之醫藥。 OC IF或類似物或其變異體及共聚物或其醫藥上可接 受鹽之複合物包括於本發明之醫藥組成物之暈並不限於任 何比値，但是通常爲0.1至70重量％，及較佳爲1至30 重量％。 本案發明中，OCIF或類似物或其變異體及共聚物或其 醫藥上可接受鹽之複合物包括於本發明之醫藥組成物之劑 量係根據各種因子而有所不同，其包括病患的條件及年 紀、給藥路徑及藥的形式。一般而言，給藥給成人的給藥 量係上限爲1至50毫克/公斤及下限爲0.001至0」毫克/ 公斤，其中以0.01至1毫克/公斤爲佳，且以〇·1至1毫克 /公斤爲更佳。 根據本案發明之醫藥組成物的給藥應爲每數月一次、 -67- 1293882 每月一次、每數天一次、每天一次或每天數次，其係根據 醫樂組成物所包含成分的種類、給藥路徑及藥的形式。當 該組成物包括OCIF或類似物或其變異體及一種共聚物或 其醫藥上可接受鹽之複合物使用作爲治療或預防骨代謝疾 病之試劑’根據本案發明其給藥方式應爲每數月一次、每 月一次、每數天一次、每天一次或每天數次，其係根據用 於治療或預防骨代謝疾病之試劑中所包含的活性成分種 類、給藥路徑及藥的形式。 本案發明及其醫藥上可接受鹽之共聚物係用於作爲能 夠提供具有均勻特性、特別是減少與蛋白質的無規交聯構 造維持最佳蛋白質活性及在該複合物給藥之後蛋白質的極 佳停滯性的聚合物修飾劑。使得其特別適於作爲用於修飾 具有醫藥活性的蛋白質的醫藥特性之修飾劑。 【實施方式】 實施例 下列實施例、參考例及測試例係進一步說明本案發明 且並無法以任何方式限制本發明之範圍。在下列的實施例 中，m及R3係如上述式（I)及（II)所定義，「comp.ratio」係 爲組成物比例[即構造單位（I)及（II)的比例]，「av.deg.pol·」 係爲製備共聚物的平均聚合度及「hyd.ratio」係爲製備共 聚物的水解比例[即構造單位的平均比例，其中R3爲對構 造單位之-0H，其中R3不爲-0H]。 奮施例 1 製備聚（PEGswMA)水解液f聚（PE_G5QQ-MA)h)l，其中一 m = 6-16，R3 = OH，comt).ratio =約 1 : 1，av.deg.pol. = 30 - 4 0_ -68- 1293882
且 hvd.ratio =約 10 : 0(化合物 No· U 將聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚（m = 6-16，Alk=伸乙 基，Rk氫及R2=甲基）及馬來酸酐之共聚物作爲起始材料， 其中該聚氧基伸乙基側鏈具有約500的平均分子量且主鏈 的平均聚合度爲30〜40，[AM-0530K，NOF公司製造（以下 簡稱爲「聚（PEG^o-MA)」]。添加50毫升的蒸餾水至3克 的聚（PEG^o-MA)中以溶解該起始材料，及然後將所得的溶 液在40 °C下攪拌15小時。結果溶液係利用製自於聚醚颯 的超濾薄膜濃縮，其中聚醚楓（具有一分子量界線10,000, 微孔公司製造，模型號碼PBGC07 6 1 0)，且使所得的濃縮液 冷凍乾燥以獲得1.3克的目標化合物聚（PEG5G()-MA)h(化合 物N 〇 . 1)之油狀化合物。 聚（PEG5G()-MA)h(化合物No.l)係使用下述的凝膠過濾 加以純化。將100毫克的聚（PEG5()()-MA)h(化合物No·l)溶 解於4毫升0.001N氫氧化鈉溶液中。該溶液係分成4批 且以每1毫升 1批施加至凝膠過濾管柱（PD-10，製造於 Amersham-Pharmacia)。拋棄第一次1毫升的溶析液。將1.5 毫升的0.0 0 1 N氫氧化鈉溶液施加至每根管柱中及然後由 管柱溶析出1./5毫升且拋棄。將2.5毫升的0.001N氫氧化 鈉溶液施加至每根管柱中及然後由管柱溶析出2.5毫升及 其係含有（PEG5G()-MA)h(化合物No. 1)之分餾。組合來自四 根管柱的純化分餾以獲得1 〇毫升目標化合物的純化溶 液。純北步驟後的產率（在純化作用之前或之後藉由測量聚 (PEGsoo-MA)在2 10奈米的光譜吸收率而測量）係測定爲 80%(80毫克的聚合物）及純化溶液的濃度係測定爲8毫克/ -69- 1293882 毫升。 目標化合物的羧基含量係由下列電導滴定而測定。上 述所得7.5毫升該溶液的純化目標化合物（含有60毫克的 目標化合物）係添加蒸餾水至50毫升且然後所得該溶液 以1 Μ水性氫氧化鈉調整至.pH 1 2。將0.1毫升的0 · 1 Μ氫 氯酸添加至該溶液，在各別添加氫氯酸後測量該溶液的pH 及導電度。共聚物的羧基含量係藉由添加〇·1Μ的氫氯酸至 導電度緩衝區而加以計算（即抵抗氫氯酸量的導電度圖表 區域，其中該目標化合物共聚物的羧基係作爲一緩衝劑， 該對應pH的區域係爲約1 〇 · 5至3);在導電度緩衝區所使 用氫氯酸分子量係等於該目標化合物共聚物的羧基分子 量。其結果，每克目標化合物的羧基含量係測定爲3.22毫 莫耳。因此，組成物比例係計算爲1 : 1 · 07。該圖表係應用 於下列使用相同起始材料的實施例。 實施例 2 製備聚（PEG〗 w〇-MAV7k 解液 f聚（PEG! ,茸中 m = 28-38，R3 = OH，comt).ratio =約 1 : 1，av.deg.p〇l. = l〇~i 5 及 h v d · r a t i ο =約 1 0 : 0 (化合物 N ο · 2 ) 將聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚（m = 28 - 3 8，Alk =伸乙 基，R、氫及R2=甲基）及馬來酸酐之共聚物作爲起始材料， 其中該聚氧基伸乙基具有約1 500的平均分子量及主鏈的 平均聚合度係爲10-15，（AM-1510K，NOF公司製造）[以下 簡稱爲「聚（PE G 15 〇〇- Μ A)」]。添加2 5毫升的蒸餾水至1 5 克的聚（PEG15G()-MA)中以溶解該起始材料，及然後將所得 該溶液在室溫下攪拌20小時。反應終了，該溶液係使用如 -70- 1293882 殘基含量係計算爲Ο · 8 0 m m ο 1。根據其結果，藉由計算目標 化合物中經胺解的馬來酸酐殘基對起始材料中馬來酸酐殘 基的總量之比例，及係測定爲1 · 0。因此，其可確定賓質上 全部馬來酸酐殘基係經二甲基胺而胺解。 實施例 9 以OCIF製.備實施例1至8之聚合物修師劑複合物 將製備至實施例1至8的聚合物修飾劑溶解於磷酸鹽 緩衝鹽水（PBS)pH 6.0(該溶液係將含有1〇 磷酸氫二鈉 與150 mM氯化鈉之溶液及含有1〇 mM磷酸二氫鈉及150 mM氯化鈉之溶液，以適當比例混合，以產生具有pH6.0 之緩衝液），以製備含有濃度爲1至20毫克/毫升之修飾劑 之溶液。依序對於各修飾劑之溶液，將0.6 2 5毫升製備的 聚合物修飾劑溶液及 0.625毫升含有純化人類成熟 OCIF(OCIF 係製備如 W0 96/262 1 7 及 EP 8 1 63 80 所述）[蛋 白質濃度：2毫克/毫升，培養基：PBS(pH 6.0)]之溶液混 合，且將如此得到的混合物在4 °C至3 7 °C下靜置至少一種 小時，以產生一系列的溶液[培養基：PBS (pH 6.0)]，該溶 液係含有以實施例1至8聚合物修飾劑修飾的〇C IF，其中 各溶液中OCIF修飾劑的比例係根據添加的修飾劑溶液濃 度及反應條件而決定。對於某些製備的複合物之修飾劑 /OC IF的重量比（且該條件係其已製備）係如下述測試例2表 6所示。各所得結果複合物之分子尺寸係如下述測試例1 1 所示。複合物中OCIF的ELISA檢測率係如下述測試例3 所示。 此外，對於各個聚合物修飾劑，除了在培養基中所使 •79- 1293882 注射至管柱的量：100 μι (2)分餾方法：使用Superdex 200(以下稱爲SDF方法） 管柱·· Superdex 200 HR 16/60 Amersham 生物 科技 管柱溫度：室溫 流動相：PBS(pH 7.4) 偵測波長：2 8 0奈米 流速：2毫升/分 注射至管柱的量：5 ml 此兩種分餾方法以X至y分鐘的時間所洗提的聚合物 修飾劑係分S!i地定義爲聚（PEG 5 0 0 -MA)a-Na(SRFx-y)及聚 (PEG 5 0 0 -MA)a-Na(SDFx_y)。 在各個分餾（水性溶液）之聚合物修飾劑濃度係 以高性能液相層析法測量。高性能液相層析法所使用的條 件係如下所示： 管柱：Shodex OHpak SB-806M HQ(可得自於 SHOWA DENKO K.K.) 保護管柱：Shodex OHpak SB-G(可得自於 SHOWA DENKO K.K.)
管柱溫度：4 0 °C 流動相：以1Μ氫氯酸調整5 0 mM磷酸氫二 鈉的水性溶液爲pH 7.0 偵測波長：2 1 0奈米 流速：0.5毫升/分 注射至管柱的量：50 μΐ -84- 1293882 根據SRF方法及SDF方法分別地分餾所得的聚 (PEG 5 0 0 -MA)a、Na(SRFx_y)及聚係 進一步經凝膠過濾層析法（SRF方法）使用上述第一分餾方 法根據S RF方法相同的洗提條件，以評估分餾後各樣品的 分子尺寸。各個已知其分子尺寸的蛋白質（得自於 Amersham生物科技）係作爲一標準樣品。在這方面，各蛋 白質的分子量及分子尺寸係已得知於購買時附註於表示目 計算分餾所得的聚合物修飾劑之分子尺寸係如表1所 示0 -85- 1293882 表1 分子量 司托克半徑 (nm) 停滯時間(分） 標準蛋白質 甲狀腺球蛋白 669 k 8.50 38.48 鐵蛋白 440 k 6.10 44.85 過氧化氫酶 232 k 5.22 48.77 醛縮酶 158 k 4.81 50.11 白蛋白 67 k 3.55 51.85 卵白蛋白 43 k 3.05 53.95 胰凝乳蛋白酶原A 25 k 2.09 59.26 核糖核酸酶A 13.7 k 1.64 60.23 實施例15之修飾劑 比較例號碼 聚(PEG5GCrMA)a-Na (未分飽） 9·3或以下** 35-65* 9 聚(PEG5〇(rMA)a-Na (SRF5G_55)產率 23% 3.1-6.2** 45-55* 13 聚(PEG5(XrMA)a-Na (SRF55_6〇)產率 29% 1.5-4.7** 50-60* 14 聚(PEG50(rMA)a-Na (SRF_5)產率 12% 3.1或以下** 55-65* 15 聚(PEG5(XrMA)a-Na (SDF46_52)產率 22% 7·8或以下** 40-65* 16 聚(PEG5(XrMA)a-Na (SDF52_58)產率 22% 6.2或以下** 45-65* 17 聚(PEG5(XrMA)a-Na (SDF58_64)產率 13% 3.1或以下** 55-65* 18 聚(PEG5CKrMA)a-Na (SDF6G_7())產率 13% 3.1或以下** 55-65* 19 *停滯時間期間的存在係顯示樣品具有分子量分佈 -86- 1293882 表2 實施例1 6的修飾劑 化合物號碼 聚（PEG 1 5 0 0 -MA)a 7 (未分餾） 聚（PEG 1 5 0 0 -MA)a 20 (SRF5〇-55)12.2% 聚（PEG 1 5 0 0 -MA)a 2 1 (SRF55.60)13.1% 聚（PEG 1 5 0 0 -MA)a 22 (SRF6〇.65)16.4% 使用該步驟，製備具有不同分子尺寸的各種聚 (PEG15〇G-MA)a聚合物（化合物Nos.20-22)。在先前實施例 所測量化合物N 〇 s · 2 0、2 1及2 2之平均聚合度係分別地測 定爲 <10、<<10 及 <<<10 ° 實施例 17 以OCIF製備實施例15及16的聚合物修飾劑複合物 本案發明的聚合物-OCIF複合物係製備成水性溶液， 其係基本上使用與上述實施例1 4相同的製備步驟，使用製 備自上述化合物1 5及1 6的化合物N 〇 s · 1 3至2 2 (培養基： 具有ρΗ7·4的PBS)的水性溶液及純化人類成熟〇CIF(OCIF 製備於WO 96/262 17及EP 8 1 63 80所述）（培養基：具有 p Η 6 · 0的PB S )之水性溶液作爲起始材料。更具體地是，各 修飾劑係以體積比1 : 1的比例，混合0 · 5毫克/毫升溶液之 PBS(PH 7·4)(製備自如上述實施例9所述）與〇·5毫克/毫升 OCIF之PBS(pH 6·0)之溶液。其結果反應混合物係允許在 25 °C下靜置7天。所得複合物的分子尺寸係如下列測試例 -88- 1293882 例10相同的條件’以產生目標化合物聚（PEG5()()-MA)a__ 鹽（化合物No.2フ）及聚（PEG5()()-MA)a-鈉鹽（化合物No·28)。 目標聚合物的羧基含量係如下述測試例1之方式測量及得 到化合物No.27爲2.73毫莫耳/克及化合物N〇.28爲2.05 毫莫耳/克。 實施例 19 级Ο C IF製備實施例1 8的聚合物修飾劑複合物 本案發明的聚合物-OCIF複合物的製備係使用基本上 上述實施例1 4相同的製備步驟製備成水性溶液，使用上述 實施例18中的化合物Nos .27及28水性溶液作爲起始材 料。更具體地’對於各修飾劑以體積比爲1 : 1之比例每5 毫克/毫升溶液之PBS (pH 7.4)係混合5毫克/毫升人類成熟 OCIF之PBS(pH 6.0)溶液。所得混合物的pH係以1M氫 氯酸調整至5 · 5且然後將該反應混合物在2 5 °C下靜置7 天。所得複合物的分子尺寸的測量係如下述測試例1 1所 述。 實旆例 2 0 1各種條件下評估聚（PEGmd-MA)組成物且製備及評 估聚（PEGswMAU(化合物 Nos.29-53) 20(1)聚（PEG5G()-MA)組成物比例的檢測 測試不同組成物的大量聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚 及馬來酸酐，聚（PEG5〇()-MA)之共聚物以測量此處PEG烯 丙基甲基二醚及馬來酸酐單位（組成物比例）之比例〈大量不 同的AM-0510K，其係使用類似日本專利No.262 1 308及日 本專利申請公開案Nos. 2003- 105040及2003- 104003之步驟 -90- 1293882 而製被），聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚（m = 6-16，Alk =伸 乙基，Rk氫及R2=甲基）及馬來酸酐之隨機共聚物，其中 該聚氧基伸乙基側鏈具有約500的平均分子量及主鏈的平 均聚合度爲20〜30。大量共聚物的數量平均分子量（Mn)及 分子量分佈指數（Mw/Mn，其中Mw重量平均分子量）係測試 如下所示。各種、大量的聚（PEG5G()-MA)之分子量（MW)係使 用利用具有預先測量的M W爲標準之聚（乙二醇）的凝膠過 濾層析法加以測量。隨後，聚（PEG5G()-MA)的MW如下所示 並非絕對MW，但是使用PEG爲標準測量出相對MW。 Μ30538 Μη=6431; Mw /Mn= 1.27 Μ3Ν549 Μη=6360 ； Mw / M n = 1.2 3 M3N550 Μη=5891； Mw /Mn= 1.28 Μ3Ν569 Μη=5897 ； Mw /M n = 1.2 5 爲測量各個共聚物的組成物比例，其需要將其轉換成 其水解共聚物的¥彳應納鹽’即聚（PEG5〇Q-MA)h納鹽。所使 用的水解條件係如下所示。 將25毫升的1，4·二噁烷，1〇〇毫升的醚及42毫升的 〇· 1 N NaOH水性溶液添加至1克的聚（PEG5G()-M A)(許多 M3 05 3 8)。然後將所得混合物激烈地搖晃及，在靜置之後， 然後收集所得該水層。在經過濾紙（704 X 40 m/m ，其係 得自於Nihon Rikagaku-kiki公司）過濾之後，將所得水層 係在4 0 °C下攪拌2小時。反應終了，將結果溶液冷凍乾 燥。可得到起始材料水解產物的鈉鹽，即聚 (PEG5〇Q-MA)h(許多M30538)鈉鹽之黃色固體（100%產率）。 將1 2毫升的1，4 -二噁院及9毫升的1 N N a Ο Η水性溶 -91- 1293882 液添加至1克的聚（PEG5〇()-MA)(lotM3N549)。將所得混合 物在在室溫下攪拌24小時。反應終了，添加1毫升的i N NaOH水性溶液且使所得混合物冷凍乾燥。可得到起始材料 水解產物的鈉鹽，即聚（PEG5〇()-MA)h(M3N549)鈉鹽之黃色 固體（100%產率）。 將5毫升的1，4-二噁烷及9毫升的1 n NaOH水性溶液 添加至2克的聚（p E G 5 〇 〇 - M A) (1 〇 t Μ 3 N 5 5 0)。將所得混合物 在40 °C下攪拌23小時。反應終了，使反應混合物冷凍乾 燥。可得到起始材料水解產物的納鹽，即聚 (PEG5o()-MA)h(許多M3N550)鈉鹽之黃色固體（100%產率）。 將5毫升的1，4-二噁烷及9毫升的1 N NaOH水性溶液 添加至2克的聚（PEG5G()-MA)(lot M3N569)。將所得混合物 在40 °C下攪拌23小時。反應終了，使反應混合物冷凍乾 燥。可得到起始材料水解產物的鈉鹽，即聚（PEG5()()-MA：)h 之黃色固體（100%產率）。 所製備的各個聚（PEG5〇〇-MA)h鈉鹽的羧基含量係以上 述的電導滴定進行測量。其結果係如下述表3所示。 聚（PEG5QO-MA)h鈉鹽係包括下列的兩種單體單位： FW (PEG) = 500 | O-iCHs-CHs-OJ^CHs! —[-CH-CH-]— '***CH'2 0=9 ?:〇 —[-CH2-CH~]— 0Na ONa FW (PEG烯丙基甲基二乙醚)=541 FW (馬來酸鈉_ = 160 若該馬來酸鈉鹽單體單位每1單位的PEG燃丙基甲基 二醚之數値係定義爲「a」’且理論最小重複單位係包括一 單位的PEG嫌丙基甲基二醚及「a」單位的馬來酸鈉鹽， -92- 1293882 然後該式量（FW)的最小重複單位係方程式1加以計算： FW [(PEG烯丙基甲基二醚）！ +(馬來酸鈉鹽）a] ’ = FW(PEG烯丙基甲基二醚）+ [FW(馬來酸鈉鹽）] =541 + 160a (Eq.1) 聚（PEG5C()-MA)h鈉鹽之最小重複單位羧基之數値定義 爲2a。隨後，在聚（PEG5G()-MA)h鈉鹽中最小重複單位的羧 基含量（C，毫莫耳/克）係如方程式2所示： C = 2a /(541 + 160a)* 1000 (E q . 2 )
馬來酸鈉鹽單位數値與PEG烯丙基甲基二醚單位數値 之比例於實質聚（PEG5C()-MA)h鈉鹽中係與最小重複單位的 比例相同。隨後，C値係亦與最小重複單位相同且在聚 (PEG5G()-MA)h鈉鹽中，其羧基含量係以電導滴定（參照上述） 而測量。因此，藉由測量錢基含量及根據方程式2，可得 到組成物比例之値「a」，即馬來酸鈉鹽單位每1單位的PEG 烯丙基甲基二醚[其係爲聚（PEG5GC)-MA)之單體組成物]之 値。所得結果係如下述表3所示。
表3 大量聚 (PEG5〇〇-MA)h 殘基含量(毫莫耳/ 克） ΜΑ/PEG烯丙基甲基二 醚 #1 Μ 30538 4.66 2.01 聚(PEG50(rMA)h 鈉鹽 #2 Μ 3Ν549 5.21 2.42 #3 Μ3Ν550 5.98 3.10 #4 Μ 3Ν569 6.14 3.26 -93- 1293882 表4 大量聚 (PEG-MA) 添加的0.5Μ νη3 反應 羧基含量 (毫莫耳/ 克聚合 物） 胺成分的 反應速率 (%) 溫度 時間 #8 Μ 3Ν549 38毫升/克 25〇C 20小時 2.79 99.5 #9 Μ 3Ν549 17·5毫升/克 25〇C 20小時 2.87 96.4 #10 Μ 3Ν549 6毫升/克 25〇C 24小時 3.26 80.9 #11 Μ 3Ν549 10毫升/克 25〇C 24小時 3.01 90.9 #12 Μ 3Ν549 15毫升/克 25〇C 24小時 2.91 94.6 #13 Μ 3Ν549 20毫升/克 25〇C 24小時 3.11 86.9 #14 Μ 3Ν549 11毫升/克 25〇C 24小時 3.26 81.1 #15 Μ 3Ν549 12,毫升/克 25〇C 24小時 3.02 90.3 #16 Μ 3Ν549 13毫升/克 25〇C 24小時 2.98 92.1 #17 Μ 3Ν549 7毫升/克 25〇C 24小時 3.94 53.8 #18 Μ 3Ν549 8毫升/克 25〇C 24小時 3.08 88.1 聚（PEG5(XrMA)a #19 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 24小時 3.29 80.0 鈉鹽 #25 Μ 3Ν549 9毫升/克 15°C 24小時 3.05 89.4 #27 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 24小時 3.40 75.6 #28 Μ 3Ν549 9毫升度 30°C 24小時 3.02 90.6 #29 Μ 3Ν549 9毫升境 37〇C 24小時 3.16 85.0 #30 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 16小時 3.00 91.3 #31 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 1小時 2.95 93.2 #32 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 5小時 3.25 81.3 #33 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 4天 3.92 54.8 #34 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 21小時 3.13 86.2 #35 Μ 3Ν549 9毫升/克 25cC 21小時 2.95 93.3 #36 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 21小時 2.98 91.9 #37 Μ 3Ν549 9毫升/克 25〇C 21小時 3.15 85.5 銨鹽 #41 Μ 3Ν550 氨氣 培養基 ：DMF1 3.43 92.7 -96- 1 DMF: N，N-二乙基胺 #8-19、25及27-37係爲目標聚合物聚（PEG 5 oo-M A) a (化 合物Nos. 29-5 2)。此等各個聚合物係爲無規且 m = 6-16， 1293882 1^3 = 1^2，組成物比例=1:2.4及聚合平均度=20-30。 如表 4所示，反應產物聚（P E G 5。ο - M A) a (化合物 Nos· 29-5 2)均含有非常的「胺成分之反應速率」，其表示係 用下述的各種反應條件可得到接近1 00 %的胺基轉換率。 下面係進一步敘述數個聚（PEG5Q()-MA)a替代製備方法 之實施例·· (b) 將0.44克的聚（PEG5〇〇-MA)溶解至9毫升的二甲基 甲醯胺。氨氣係在-50 t下以氣泡方式灌入溶液中。反應 混合物中最終氨量爲0.67克。然後在氮氣大氣下將得到的 反應混合物封閉在玻璃封閉管中，及在室溫下攪拌24小 時。反應終了，在打開後玻璃管於低壓下蒸發氨氣。反應 混合物係以滴定方式添加90毫升的二乙基醚。在低壓下沈 澱後收集且乾燥。得到0.28克的聚（PEG5G()-MA)a氨鹽（化 合物Νο·53)(參照上述表4中之#41)之黃色粉末。該聚合物 係爲無規且m = 6-16，R3 = NH2，組成物比例=1 : 3.10及聚 合平均度=20-30 。 (c) 使用甲苯取代二甲基甲醯胺之外，以與（B)相同方法 得到聚（PEG5〇〇-MA)a氨鹽。 (4)使用1，4-二噁烷取代二甲基甲醯胺之外，以與（B )相 同方法得到聚（PEG5G()-MA)a氨鹽。 實施例 21 製備乙醇及聚（PEGu0-MA丫『聚（PEG5〇〇-MA)ea-Nal 之 醇解反應產物，其中 m = 16，Rq = 〇CH，CH、，comp.ratio = 糸勺 1 ： 3， av.deg.pol. = 20-30 > hyd ratio = ^ 3.1： 6.9(^, ^ No. 5 4) -97- 1293882 聚（PEG5G〇-MA)(AM-051〇K，大量 M3N550 係使用類似 日本專利 N 〇 . 2 6 2 1 3 0 8及日本專利申請公開案 Nos.2003-105040及2003-1〇4〇〇3所揭不的步驟而製備）， 係爲聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚（m = 6-16，Alk =伸乙基， Ri =氫及R2=甲基）及馬來酸酐之共聚物，其中該聚氧基伸 乙基側鏈具有約500的平均分子量，主鏈的平均聚合度爲 20〜30,聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚單位與馬來酸酐單位 之比例爲約1 : 3，數量平均分子量（Μη)爲5 89 1及分子量 分佈指數（Mn/Mw)爲1.28(參照上述實施例20)，而作爲起 始材料。添加1毫升的乙醇至1 00毫克的該起始化合物且 所得反應混合物可在40 t下靜置1 6小時。反應終了，添 加含52 μΐ的2.5 N氫氧化鈉溶液之乙醇。所得的混合物係 在3 5 °C下以蒸發加以濃縮，且在真空下乾燥以獲得聚 (P E G 5 〇 〇 - M A) e a鈉鹽（化合物N 〇 · 5 4)作爲油狀材料。水解比 例係利用上述實施例3及6所述之方法加以計算。即，藉 由測量聚（PEG5()o-MA)ea鈉鹽（化合物No.5 4)之羧基含量及 其對應的聚（P E G5 〇 〇 - M A) h鈉鹽，計算目標化合物中經醇解 的馬來酸酐殘基與起始材料中馬來酸酐殘基的總量之比 例，及係測定爲0 · 6 9。因此，由此可知在起始材料中有6 9 %的馬來酸酐殘基經醇解，及剩餘3 1 %的馬來酸酐殘基係 經水解。 實施例 22 以，ogif ,製備實施__例2J聚合物修飾劑夕·複合物 本案發明的聚合物-0CIF複合物係製備成水性溶液， 其係以基本上與上述實施例1 4所使用相同的製備步驟，其 -98- 1293882 係利用製備自上述實施例21的化合物No· 54之水性溶液 [化合物No. 54的濃度，17.2毫克/毫升；培養基，PBS pH 7.4 (溶液係獲自於以合適比例將含有1 〇 m Μ的磷酸氫二鈉 及1 5 0 mM的氯化鈉之水性溶液與含有1 0 mM的亞磷酸二 氫鈉及150 mM的氯化鈉之水性溶液混合，以得到具有 PH7.4的緩衝液）]及純化人類成熟OCIF(OCIF係製備於WO 9 6/262 17及EP 8 1 6380)(0 C IF濃度，4毫克/毫升；培養基， 含有10 mM磷酸鹽離子及150 mM NaCl之緩衝液，pH 6.0) 之水性溶液。更具體地，將0.472毫升的17.2毫克/毫升化 合物Nck54溶液添加至1.328毫升的該4毫克/毫升OCIF 溶液中，以得到4.5毫克/毫升的化合物No. 54及3毫克/ 毫升的OC IF之溶液。所得反應混合物可在4、10或25 °C 下靜置3天以獲得本案發明所欲複合物之水性溶液。其複 合物尺寸係測量如上述測試例1 3所示。 實施例 2 3 製備乙醇及聚（PEGwn-MAU聚（PEGswMAUal之醇解 反應產物，其中 m = 6-16，Ri = OC Η，C Η1，c 〇 m d · r a t i 〇 =約 1 : 3 av. deg ^〇1, = 20-3 0(^, No. 5 5) 聚（PEG5〇〇-MA)(AM-0510K，大量 M3N5 50 係使用類似 日本專利 Ν〇·262 1 308 及日本專利申請公開案 No s· 2003- 105040及2003- 1 04003所掲示的步驟而製備）， 係爲聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚（m = 6>16，Alk =伸乙基， 氫及R2=甲基）及馬來酸酐之隨機共聚物，其中該聚氧 基伸乙基側鏈具有約500的平均分子量，主鏈的平均聚合 度爲20〜30，聚氧基伸乙基烯丙基甲基二醚單位與馬來酸 -99- 1293882 酐單位之比例爲約1 : 3，數量平均分子量（Μη)爲589 1及 分子量分佈指數（Mn/Mw)爲1.28(參照上述賓施例20),而 作爲起始材料。將0 · 5毫升的絕對乙醇添加至5 0毫克的該 起始化合物且所得反應混合物可在3 7。C下靜置24小時。 可得到目標化合物聚（？£05〇()-^^)^(化合物1^〇.5 5)作爲一 乙醇系溶液[聚（PEG5〇〇-MA)ea濃度·· 1〇〇毫克/毫升]。 實施例 24 以_ OCIF製備實施例23聚合物修飾劑之複含物 本發明的聚合物-Ο C IF複合物製備成水性溶液係利用 與上述實施例1 4基本上相同製備步驟，其係使用在上述實 施例2 3所製備化合物N 〇 · 5 5的乙醇系溶液及純化人類成熟 OCIF(OCIF 的製備係如 WO 96/262 1 7 及 EP 8 1 63 80 所 述）（OCIF濃度，5毫克/毫升；培養基，含有1〇 mM磷酸鹽 離子及150 mM NaCl、pH 6·0之緩衝液）之水性溶液。更 具體地，將37.5 μΐ化合物Νο·55之乙醇系溶液添加至〇.5 毫升的該5毫克/毫升之OCIF溶液中且在25 °C下靜置所得 反應混合物3天以得到本案發明所欲複合物之溶液。其複 合物尺寸係測量如上述測試例13所示。 比較例1 製備單甲氧基聚乙二醇-甲基乙烯基醚-馬來酸共聚物 (PEG-PMVMA) 接枝共聚物單甲氧基聚乙二醇-甲基乙烯基醚-馬來酸 共聚物（PEG-PMVMA)的製備係根據在日本專利申請 (Kokai)No.平11-3 02199實施例2中之方法。 比較例2 -100- 1293882 製備含有單甲氧基聚乙二醇-甲某乙烯某醮-馬夾酸共 聚物（PEG-PMVMA)及OCIF蛋ή晳夕複合物 以大體上與實施例9相同的方式，製備自上述比較例 1所描述之PEG-PMVA來修飾純化人類〇CIF(OCIF係製備 如W0 96/262 17及EP 8 1 6 3 80所述）以作爲溶液[培養基： PBS(pH 6.0)]。更具體地，將1毫升的OCIF溶液[OCIF濃 度：2毫克/毫升；培養基 PBS(pH 6.0)]及 1毫升的 PEG-PMVA溶液[PEG-PMVA濃度：2或20毫克/毫升；培 養基PBS(pH 6.0)]混合及使混合物在25°C下靜置24小時， 以得到目標複合物。 比較例3 便J聚（PEG5QQ-MA)作爲聚合物修飾劑以製備具有聚 合物修飾劑及OCIF蛋白質之複合物 將含有聚（PEG5oo-MA)[AM-0530K，NOF公司製造（以 下簡稱爲「聚（PEGsoq-MA)」](聚合物濃度：35至350毫克 /毫升）之2.2 μΐ的二甲亞颯溶液添加至28.4 μΐ純化人類 OCIF(OCIF 係製備如 W0 96/262 17 及 ΕΡ 8 1 6380 所述）（蛋 白賢濃度：3.5毫克/毫升，培養基：〇·5Μ NaH2P04水性溶 液，其pH係以5M的NaOH水性溶液調整至7.6)的水性溶 液中，且如此所得之溶液（OCIF濃度：3.2毫克/毫升，聚 (PEG5G()-MA)濃度：2.5毫克/毫升或6.3毫克/毫升）係在25 °C下搖盪40小時。反應終了，該溶液係以pBS(pH 7.0)加 以稀釋’以得到用含有0 · 2 5毫克/毫升〇 c IF濃度之聚合物 修飾劑修飾的OCIF溶液。所製備的溶液係儲存於4 °C。 測試例 1 -101- 1293882 定測量謇施例l 〇至13聚合物之羧某含量 在實施例 10 至 13 中所製備的聚合物[聚 (PEG5〇〇-MA)a(化合物 Nos.9 及 10)、聚（PEG5()()-MA)dma(化 合物Νο·11)及聚（PEG5G()_MA)h(化合物No.12)]的各個羧基 含量係以電導滴定方法測量如下。 首先’各聚合物係使用下述的凝膠過濾加以純化。對 於此等聚合物，將100毫克的聚合物溶解於4毫升0.001N 氫氧化鈉溶液中。該溶液係分成4批及以每1毫升1批施 加至凝膠過濾管柱（PD-10，製造於Amersham-Pharmacia)。 拋棄第一次1毫升的溶析液。將1.5毫升的0.00 IN氫氧化 鈉溶液施加至每根管柱中及然後由管柱溶析出1 .5毫升且 拋棄。將2.5毫升的〇.〇〇 1N氫氧化鈉溶液施加至每根管柱 中及然後由管柱溶析出2.5毫升且該分餾含有過濾的化合 物。組合來自四根管柱的純化分餾以得到目標化合物之純 化溶液。純化步驟後的產率（在純化作用之前或之後於2 1 0 奈米測量聚（PEG5GG-MA)h光譜的吸收率）係測定爲80%及 純化溶液的濃度係測定爲8毫克/毫升。 對各個純化聚合物的溶液，用蒸餾水或00 1 Μ水性氫 氧化鈉溶液調整至一整除數（2.5至7.5 ml)50毫升，然後添 加1M水性氫氧化鈉溶液至所得溶液中以調整pH 12。0·1 Μ 氫氯酸係以增加0.1 ml或以毫升/分的速率繼續添加至該 溶液。在其產物中，在各自添加之後測量其pH及導電度， 且之後每1 5秒鐘進行測量。然後在導電度緩衝區（對應於 pH範圍爲約10至5.5)加入0.1M氫氯酸以計算複合物的羧 基含量。其結果係如表5所示。 -102- 1293882 各樣品在給藥之後於血漿中的濃度係如下述表 示0 -105- 1293882 所揭示及上述比較例2所製備者）的複合物與本案發明在修 飾劑及蛋白質（1或10)之間具有相同重量比之複合物，發 現本案發明修飾劑及蛋白質之複合物相對於先前技藝 PEG-PMVMA及蛋白質之複合物，係得到在血中重要改良 的蛋白質停滯。 測試例 3 藉由ELIS A評估OCIF的檢測率 先前技藝的蛋白質修飾劑所遭遇的問題之一，係修飾 劑鍵結至蛋白質而引起蛋白質構造的修飾及/或保護蛋白 質，其係由於體積複合物的形成。爲了測試本案發明的 OCIF-修飾劑複合物，實施例9及比較例2所述製備的各複 合物係基於未修飾的純化人類 〇CIF(OCIF係製備如 WO 96/262 1 7及EP 8 1 6 3 80所述）用ELIS A測量各個檢測率。 ELISA的進行係如下所述。
將抗人類OCIF單株抗體01-19(根據EP097467 1所揭 示的方法製備）溶解至〇·1Μ碳酸鈉溶液（PH 9.6)中，以得到 具有01-19濃度爲10 gg/ml之溶液。然後將所製備的100 μ1 之01-19溶液放置於96格免疫盤（由Nunc所製造）的每格 個中，且將盤在4°C下靜置一整夜。反應終了，將50 % Block Ace(購自於白雪牌牛奶產物股份有限公司）添加至各個格 中以阻隔，且然後該盤用含有〇· 1 % Tween 20之PBS (沖洗 緩衝液）沖洗三次。將純化人類〇CIF(OCIF係製備如WO 96/262 1 7及EP 8 1 63 80所述）溶解至初次反應緩衝液（即含 有 40 % Block Ace、0.1 % Tween 20 及 10 pg/mi 之小鼠 ig〇 之0·2Μ三氫氯酸緩衝溶液（pH 7.4))，以製備具有各種ociF -107- 1293882 濃度之標準溶液。將如此製備的具有各種OCIF濃度的溶液 各100 μΐ添加至各個格中，在室溫下搖晃2小時且然後以 沖洗緩衝液各沖洗6次。POD-01-4(即，以過氧化物酶及辨 識OCIF標記的抗體，其係以EP 097467 1所述而製備）係然 後以第二反應緩衝液（即，含有 25 % Block Ace、0.1 % Tween 20及1 0 pg/ml的小鼠Ig G之0 · l Μ三氫氯酸緩衝溶 液（!>117.4))稀釋10,000倍，將10041的所得溶液添加至各 格中，在在室溫下搖晃2小時且然後沖洗各格6次。上述 步驟之後，將1〇〇 μΐ的基質溶液（ΤΜΒ溶劑，得自於Scytek) 添加至各格中，及該盤係在在室溫下搖晃1 0至1 5分鐘。 此後，將100 μΐ的反應停止劑（TMB停止緩衝液，得自於 Scytek)添加至各格且緩慢地搖晃該盤。反應終了，各格在 450奈米的吸收率波長係以微片讀取器（MEML 001，製造於 分子裝置公司）進行測試。根據其結果製備OCIF濃度對吸 收率之刻度曲線。完成該刻度曲線後，對每格的OCIF及修 飾劑測試複合物重覆該步驟，將1〇〇 μΐ的各個含有測試複 合物之溶液添加至各格中，與POD-01-4的反應係如上述相 同方法所述且然後各格在450奈米的吸收率波長係以微片 讀取器進行測試。比較所得吸收率與刻度曲線，使得OCIF 濃度在所測量的每格複合物可爲ELISA所偵測。 對於各個樣品，計算無法以ELISA偵測OCIF的比例 且其結果係如下述表7所示。無法以ELIS A偵測OCIF的 比例係以下式方程式定義： 比例=[1-(以ELISA測量的OCIF濃度）/(以Lowry測量 的 OCIF 濃度）]X 1〇〇 -108- 1293882 在上述方程式中，用該Lowry方法以測： OCIF濃度係以日本專利申請ν〇.2〇〇2·19〇4〇7 其係得到複合物中全部的OCIF濃度。在複合物 無法偵測的OCIF比例，係爲藉由以修飾劑複合 成的改變量。大量失敗的比例係證明複合物中的 01-19及ΟΙ-4抗- OCIF抗體所鍵結，因此顯示 少量或沒有OCIF構造的修飾。 蠹複合物中 所述進行。 中用ELISA OCIF之形 OCIF可被 在複合物中 -109- 1293882 表7 以ELISA無法偵測OCIF樣品的比 列 修飾劑 (及化合物Να) 修飾劑/OCIF (重量比） 用ELISA無法偵測的 OCDF的比例(％) (基於未修飾的OCDF) OCEF - - PEG-PMVMA 1 25 10 39 聚(PEG150(rMA)h(2) 10 13 聚(PEG150(rMA)a(7) 10 15 聚(PEG150(rMA)dma(8) 10 0 聚(PEG5〇(rMA)h(l) 10 17 聚(PEG5〇〇-MA)a ⑶ 10 0 2.5 0 聚(PEG5(xrMA)dma(4) 1 12 根據上述表7結果所示，由此可知對於本發明的各聚 合物修飾劑及蛋白質之複合物，其相對於得自上述測試例 2製備的先前技藝PEG-PMVMA及蛋白質之複合物，其用 ELISA無法偵測OCIF的比例結果顯示蛋白質構造的修飾 係大幅的降低。 根據其測試例2及3之結果，其可確認的是蛋白質偵 測敏感度的降低係起因於蛋白質對於聚合物修飾劑之複合 物的過量修飾且本案發明的蛋白質係非常低，此外，在複 合物中蛋白質於血中的停滯係大幅地優於先前技藝所得的 複合物。 -110- 1293882 測試例 4 血中OCIF濃度之測量 實施例9所述製備各個樣品及純化人類OCIF(OCIF係 製備如 W0 96/262 1 7 及 EP 8 1 63 80 所述）係以 PBS(pH 爲 6.0 至7.4)進行稀釋，以得到OCIF濃度爲0.1至1毫克/毫升。 如此所得的各稀釋的樣品係經由背部的隱靜脈或皮下地給 藥至六或七歲大的雌性cynomolgus猴子（體重爲2至4公 斤且刻意避食一天），以給藥OCIF劑量爲0.1至1毫克/公 斤（1 ml/kg體積）。在給藥後5分鐘到一個月期間的預先處 理時間中，從其大腿血靜脈抽取500 μΐ的血，且以上述測 試例3所述之ELISA方法測量血漿中的OCIF濃度。 測試例 5 骨密度之測量 實施例9所述製備各個樣品及純化人類OCIF( OCIF係 製備如 WO 9 6/26217 及 EP 816380 所述）係以 PBS (pH 爲 6,0 至7.4)稀釋，使OCIF濃度爲0.7至3.5毫克/毫升。使用 Mycakcieriwm bwiyr/cwm的殺手細胞及液態石蠟製備佐 藥，且注射至五至十週大的雌性Lewis大鼠的尾巴根部表 皮，以恢復該大鼠的關節炎。注射佐藥兩週之後，各製備 的樣品係經由背部尾巴靜脈或皮下地給藥至大鼠，使OCIF 劑量爲1.4至7毫克/公斤（2 ml/kg體積）。注射佐藥三週之 後，解剖大鼠萃取右-及-左腿骨，且測量其骨密度。 測試例 6 以SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳在非還原條件下評估分子 尺寸 -111- 1293882 如實施例1 4及比較例3所製備的聚合物修飾劑各複合 物的分子尺寸及OCIF及純化人類OCIF(OCIF係製備如w〇 96/262 17及EP 8 1 63 80所述）係以SDS-PAGE在非還原條件 下評估如下。 將5 μΐ的NuPAGE(商標）LDS樣品緩衝液（4X)(得自於 Invitrogen生活科技）及5 μΐ的純化水添加至10 μΐ的各個 測試樣品[需要的話以磷酸鹽緩衝鹽水（PBS(pH 7.0)稀釋， 其係爲緩衝溶液，得自於適當體積比例之含有1 〇 mM磷酸 氫二鈉及1 5 0 mM氯化鈉之混合溶液及含有1 〇 mM亞磷酸 二氫鈉及1 5 0 mM氯化鈉之溶液，使緩衝液p Η爲7 · 0 )，使 蛋白質濃度爲250 μ g/ml]且將各個結果溶液在95 °C下加熱 7分鐘。反應終了，將該反應混合物的全量添加至SDS-聚 丙烯醯胺電泳凝膠（具有3至8 %、厚度1 mm的三乙酸酯 凝膠且由NOVEX所製造），及使用電源供應裝置（PhoreStar Pro，由Anatech所製造）施加150 V電壓至凝膠。電泳完成 之後’凝膠中的蛋白質係使用考馬斯藍（Coomassie)根據熟 悉該項技藝者所熟知的方法加以染色。 如第1圖及第2圖所示，本發明以聚合物修飾劑修飾 的OCIF在所有混合比例（基於分子量標誌偵測第一條帶爲 130至150 kD且第二條帶爲180至200 kD)中係穩定地偵 測爲具有分子量高於未修飾的〇CIF(120kD)之基質，且此 外沒有偵測到有分子量超過2 1 0 kD之複合物。本發朋其他 聚合物修飾劑之胺解及醇解產物亦得到類似的結果（並未 顯示）。換言之，如第3圖所示，在以製備於比較例3習知 聚合物修飾劑聚（PEG5QQ-MA)修飾OCIF之情形下，若修飾 -112- 1293882 劑的比例增加，體積複合物的量係顯著地增加。 其結果顯示使用本發明的聚合物修飾劑，其係可顯著 地抑制其非醫藥上較佳的體積複合物的形成，及可製備具 有不需考慮混合比例的穩定特性之聚合物修飾劑及蛋白質 的複合物，當其相對於結構上相當類似的先前技藝聚合物 修飾劑聚（PEG5Q()-MA)。 測試例 7 評估聚（PEG5Q()-MA)a的共價鍵形成活性 測量各聚合物修飾劑聚（P E G 5 〇 〇 - M A) a (化合物N 〇 . 9 )及 聚（？£〇5〇〇^八）11(化合物^.12)對四甲基若丹明屍胺的反 應性，其係爲具有胺基的螢光基質且分子量爲514.62(得自 於下列兩種聚合物分子探針公司）（以下簡稱爲 「R h 〇 - N Η 2」），且藉由對比於下列兩種聚合物修飾劑的活 性來評估修飾劑的共價鍵形成活性。 將各3·8 μΐ溶液的聚（PEG5()()-MA)h(化合物Νο·12)(係 如上述實施例 13所述製備）及聚（PEG5O()-MA)a(化合物 Νο·9)[聚合物濃度：21毫克/毫升，培養基：PBS(PH係以 •1M NaOH調整至9·5)](係如上述實施例10所述製備）添加 至 18·9 μΐ 含有 1.08 毫克 / 毫升 Rho-NH2 的 PBS(pH 6.0)。 使如此所得之該溶液在25 °C下靜置3天。反應終了，反應 混合物係以下述凝膠過濾層析法（管柱：PD-10製造於 Amersham生物科技，流動相：純水）進行分餾。將〇·5毫 升的反應混合物施加至凝膠過濾管柱中及0.5 ·毫升流乾管 柱且拋棄。2毫升的蒸餾水添加至管柱及添加另外2毫升 洗提且拋棄。將另外的2毫升蒸餾水添加至管柱及洗提2 -113- 1293882 毫升且該分餾含有其聚合物分餾。以螢光光譜（刺激被長： 544奈米，螢光波長：571奈米，培養基：純水調整至pH 3) 定量聚合物分餾中的Rho-NH2，以計算聚合物的各複合物 中所含有Rho-NH2的量與相對於反應混合物中Rho-NH2的 總量之Rho-NH2的比例，即Rho-NH2鍵結至聚合物的比例。 其結果係如表8所示。 表8 聚合物修飾劑的Re活性
Rho-NH2對聚合物之鍵結比例*(%) Rho-NH2 + 聚(PEG500-MA)a 11.5，12.6 Rho-NH2 + 聚(PEG50CrMA)h 0·8 ， 1.6 僅 Rho-NH2 0，0 *測試係經二次進行。 其可從上述表8得知在聚合物分餾中，具有Rho-NH2 之聚合物修飾劑聚（？£05〇()-1^^)&(化合物1^〇.9)的反應混合 物，可以偵測到相當高程度的Rho-NH2。當僅有低程度的 Rho_N；H2在聚合物分餾被偵測，其係相比於具有Rho-NH2 之聚合物修飾劑聚（PEG5G()-MA)h(化合物No. 12)的反應混 合物。當僅有Rh〇-NH2施加至管柱時，沒有Rho-NH2被洗 提至「聚合物分餾」。其結果顯示本案發明的聚合物修飾劑 聚（PEG5G()-MA)a(化合物Νο·9)強固地鍵結至Rh〇-NH2之胺 基上。換言之，本案發明的聚合物修飾劑聚 (?£05(>()-^^)11(化合物1^〇.12)的低鍵結比例係暗示該聚合 物修飾劑並非強固地鍵結至Rho-NH2的胺基上。 測試例8 -114- 1293882 以ELISA評估OCIF的檢測率 以ELISA偵測製備於上述實施例14及比較例3之 〇C IF及聚合物修飾劑的各複合物檢測率，其係基於未修飾 的純化人類 OCIF(OCIF係製備如 W0 96/262 17及EP 8 1 63 80所述）。ELISA係實施如下所述。 將抗人類〇(：1?單株抗體〇1-19(根據£?097467 1所揭 示的方法製備）溶解至0.1M碳酸鈉溶液（pH 9.6)中，以得到 含有01-19濃度爲10 gg/ml之溶液。所製備的100 μΐ之 01-19溶液放置於96格免疫盤（製造於Nunc)之各格中，且 將盤在4 °C下靜置一整夜。反應終了，將50 % Block Ace(購 自於白雪牌牛奶產物股份有限公司）添加至各格以阻塞，且 然後以含有0.1 % Tween 20之PBS(沖洗緩衝液）沖洗三 次。將純化人類0CIF(0CIF係製備如W0 96/262 1 7及EP 8 1 6 3 80所述）溶解於初次反應緩衝液（即，〇.2M三氫氯酸緩 衝溶液（pH 7.4)，其含有 40 % Block Ace、0·1 % Tween 20 及10 pg/ml的小鼠IgG)以製備含有各種OCIF濃度的標準 溶液。將100 μΐ具有各種的OCIF濃度的各個所製備的溶 液添加至各格，該盤係在室溫下搖晃2小時且然後以沖洗 緩衝液沖洗各格6次。POD-01-4(即，以過氧化物酶及辨識 OCIF標記抗體，以EP097467 1所述製備）係以第二反應緩 衝液（即，0.1M三氫氯酸緩衝溶液（pH 7.4)，其含有25 % Block Ace、0.1 % Tween 20 及 10 pg/ml 的小鼠 IgG)稀釋 1 0，0 0 0倍，添加1 0 0 μΐ的所得溶液至各格，該盤係在室溫 下搖晃2小時且然後沖洗各格6次。上述步驟之後，1 〇〇 μΐ 的基質溶液（ΤΜΒ溶劑，購自於Scytek)添加至各格，且該 -115- 1293882 盤係在室溫下搖晃1 0至1 5分鐘。此後，將1 〇〇 μΐ的反應 停止劑（ΤΜΒ停止緩衝液，購自於Scytek)添加至各格且緩 慢地搖晃該盤反應終了，各格在波長4 5 0奈米的吸收率係 以微片讀取器（MEML 001，製造於分子裝置公司）測量。各 標準OCIF樣品的OCIF濃度係基於使用已知OCIF濃度所 製備的刻度曲線加以計算。 對於測試複合物的各樣品測量其吸收率，由標準曲線 所計算的OCIF濃度及無法以ELIS A偵測OCIF的比例係以 上述測試例3方式進行計算。所得結果係如下述表9所示。 表9 以ELISA無法偵測OCIF樣品的比例 修飾劑 修飾劑/OCIF 以ELISA無法偵測OCIF的比例(％) (及化合物No.) (重量比） (基於未修飾的OCIF) 僅 OCIF - - 聚(PEG5〇(rMA)h(12) 1 8 聚(PEG50(rMA)a-鈉鹽(9) 1 0 0.75 0 0.5 0 0.25 0 聚(PEG50crMA) 7.8 98 1.9 89 0.78 60 可輕易地由上述表9得知，對於實施例1 4所製備的本 案發明聚合物修飾劑及蛋白質之各複合物’無法以ELISA 偵測OCIF的比例，係起因於蛋白質的修飾相對於比較例3 所製備的先前技藝聚合物及蛋白質之複合物係大幅地減 -116- 1293882 少，所以無法以ELISA偵測OC IF的比例係非常的高。 根據其結果，其清楚的顯示本案發明的聚合物修飾劑 及蛋白質之複合物在用ELISA偵測敏感度時僅有少量的減 少，其可能係起因於蛋白質過量的修飾及/或體積複合物的 形成。 測試例9 使用大鼠評估血中停滯 在實施例1 4所製備的各個樣品及未修飾的純化人類 OCIF(OC IF 係製備如 WO 96/26217 及 EP 816380 所述）係以 PBS(pH7.0)大量稀釋，使OCIF濃度爲0.25或0.025毫克/ 毫升。將如此所得的各稀釋的樣品經大腿靜脈注射至五週 大的Wistar雌性大鼠（重量約1〇〇克且已經避食一天），其 OCIF劑量爲0.5或〇·〇5毫克/公斤（2ml/kg體積）。在給藥 6小時之後，從大鼠頸部靜脈抽取200 μΐ的血，然後以上 述ELISA方法測量血中OCIF濃度。 各樣品給藥後於血漿中所測量的OCIF濃度係如下述 表1 0所示。 -117- 1293882 表10 各O C IF樣品在靜給藥之後於血漿中的o c工F濃度 修飾劑(及化合物No.) 修飾劑 /OCDF (重量比） 劑量 (毫克/公斤） 在給藥之6小時後 OCEF在血漿中的濃度 (ng/ml) 僅 OCIF - 0.5 18 聚(PEG5(xrMA)h(12) 1 0.05 127 聚(PEG5(KrMA)a-鈉鹽(9) 1 0.05 603 1 0.5 5,549 0.75 0.5 4,770 0.5 0.5 4,292 0.25 0.5 3,020 從上述表1 0可明顯得知，當與僅給藥蛋白質相比時， 本案發明的聚合物修飾劑及蛋白質的複合物係有效地改良 血中蛋白質的停滯。 根據上述結果，可清楚得知在廣泛條件下本案發明的 聚合物修飾劑及蛋白質的複合物可被穩定的製造且該複合 物在給藥該複合物之後係有效地改善蛋白質的血中停滯。 因此，該複合物係可預期極適用於醫藥及生物化學領域。 測試例 1 〇 使用大鼠評估血中停滯 在實施例1中7及實施例1 9所製備的各樣品係以測試 例9中相同方法進行評估。各樣品在給藥後所測量血漿中 的OCIF濃度係如下述表11所示。 -118- 1293882 表11 各OC IF樣品在靜脈給藥後於血漿中的OCIF濃度 貫施例 號碼 ~—^^ 修飾劑 (及化合物Να) 分餾 修飾劑/OCIF (重量比） 劑量 (毫克/公斤) 6小時後ώι漿中的 OCEF 濃度(ng/ml) 17 聚 (PEG500-MA)a-Na 14 SRF55-60 1 0.05 437 14 2.5 0.05 460 15 SRF60-65 1 0.05 478 19 SDF60-70 1 0.5 4,255 17 聚(PEG150(rMA)a 21 SRF55-60 1 0.5 256 21 2.5 0.05 334 19 聚(PEG5Q()-MA); 1 27 未分飽 1 0.5 6,138 28 未分餾 1 0.5 6,713 從上述表1 1可得知相對於僅給藥蛋白質，本案發明具 有各種的分子尺寸的所有測試聚合物修飾劑係有效地增加 蛋白質在血中的停滯。 測試例 11 以尺寸排除層析法評估分子尺寸 製備於實施例9、實施例14、實施例17及實施例i 9 的聚合物修飾劑及OCIF之各種複合物的分子尺寸，係以尺 寸排除層析法進行評估。測試條件係如下述表1 2所示。 -119- 1293882 表1 2 尺寸排除層析法的條件_ 層析法裝置：Explorer 10S(Amersham生物科技） 管柱：Superdex200HR10/30(Amersham 生物科技） 流動相：磷酸鹽緩衝鹽水 (8 mM Na2HP04，15 mM KH2P〇4，145 mM NaQ，0.5 g/LNaN3) 分析溫度：4〇C 偵測波長：280奈米 流動相的流動速率：0.6毫升/分 下列標準蛋白質的停滯時間在上述條件下，係如下述 表1 3所示。 表1 3 各標準蛋白質的停滯時間 蛋白質種類 分子量(kD) 司托克半徑(run) 停滯時間(分） 鐵蛋白 440 6.10 18.41 醛糖 158 4.81 22.48 卵白蛋白 43 3.05 25.19 核糖核酸酶 13.7 1.64 29.56 根據其尺寸排除層析法結果，非複合的0CIF之司托克 半徑係測定爲 5.63奈米，且本發明其各聚合物修飾 劑-0CIF複合物係測量如下： 實施例9製備的複合物： 聚（PEG5〇〇-MA)h(化合物No.l)-OCIF複合物（司托克半 徑係爲6.13奈米至7.32奈米）， 聚（PEG5()()-MA)a(化合物 N〇.3)-OCIF 複合物（6.12 奈米 至6.54奈米）， -120- 1293882 聚（PEG5〇〇-MA)dma(化合物 n〇.4)-OCIF 複合物（6·39 奈 米）， 聚（PEG5〇〇-MA)ipa(化合物 n〇.5)-OCIF 複合物（6·26 奈 米）， 聚（PEG5〇〇-MA)ea(化合物 No.6)-OCIF 複合物（6.44 奈 米）， 聚（PEG15〇G-MA)h(化合物 No.2)-OCIF 複合物（6.44 奈 米至6.71奈米）， 聚（PEG15G()-MA)a(化合物 No.7)-OCIF 複合物（6.40 奈 米g 6.47奈米）， 聚（PEGi5〇〇-MA)dma(化合物 No.8)-OCIF 複合物（6.55 奈米）。 根據上述結果，其係顯示本發明的各複合物所含有的 司托克半徑係比在磷酸鹽緩衝鹽水爲流動相之非複合的 OCIF大上約1奈米。此外，在各樣品中並未偵測到衍生至 未修飾的OCIF的高峰，其係顯示複合物的穩定性。 在類似上述條件下，測量其他複合物的司托克半徑。 其結果如下所示： 實施例14製備的複合物： 在下述條件下所製備的複合物：OCIF cone.爲5毫克/ 毫升；聚合物修飾劑conc.爲1.25毫克/毫升至5毫克/毫 升；pH 7.4 ; 25 °C ; 36小時；培養基，磷酸鹽緩衝鹽水（磷 酸鹽濃度，10 mM ; NaCl conc·爲150 mM)，係發現其司托 克半徑爲6 · 2奈米至6.5奈米。此外，在各樣品中並未偵測 到衍生至未修飾的〇 C IF的高峰，其係顯示複合物的穩定 -121- 1293882 性。 實施例1 7製備的複合物： 在下述培育條件下所製備的複合物：OCIF cone.爲0.5 毫克/毫升；聚合物修飾劑cone·爲0.5毫克/毫升；ρΗ6·0; 2 5 °C ; 1 6 8小時；培養基，磷酸鹽緩衝鹽水（磷酸鹽濃度， 1〇1111^;心(：1〇〇11(：.爲15〇1111^)，係發現其司托克半徑爲6.1 奈米至6 · 7奈米。此外，在各樣品中並未偵測到衍生至未 修飾的〇C IF的高峰，其係顯示複合物的穩定性。 實施例1 9製備的複合物： 在下述培育條件下所製備的複合物：OCIF cone.爲5 毫克/毫升；聚合物修飾劑cone·爲5毫克/毫升；pH 5.5 ; 25 °C ; 168小時；培養基，磷酸鹽緩衝鹽水（磷酸鹽濃度， 10mM;NaClconc·爲150 mM)，係發現其司托克半徑爲6.3 奈米至6 · 8奈米。此外，在各樣品中並未偵測到衍生至未 修飾的OCIF的高峰，其係顯示複合物的穩定性。 當相對於非複合的OCIF時，本案發明聚合物修飾 劑-OCIF複合物司托克半徑的增加，可歸因於以本發明聚合 物修飾劑修飾OCIF的結果。 測試例 12 使闲大鼠評估血中停滯及以ELISA評估OCIF的檢測 率
用ELISA測試在實施例22(化合物Νο·54及OCIF之複 合物）（培育溫度：25 °C)以上述測試例2及3的相同方法所 製備的複合物的OCIF血中停滯及檢測率。OCIF-當量劑量 係設定爲0.1毫克/公斤。在靜脈注射複合物6小時後OCIF -122- 1293882 的血漿濃度係測定爲189 ng/ml。因此，可確任在上述實施 例22所製備含有聚（PEG5()()-MA)ea鈉鹽（化合物No·54)之複 合物係顯示在血中有極佳程度的停滯。此外，以ELISA偵 測的OC IF偵測敏感度降低，係起因於在複合物中發現以修 飾劑蛋白質的過量修飾爲非常低。 測試例 13 複合物尺寸評估 實施例22(化合物Νο·54及OCIF之複合物）及24(化合 物No .5 5及OCIF之複合物)所製備的複合物分子尺寸，係 以凝膠過濾層析法用上述測試例1 1所述方法進行測量。可 發現此等複合物的分子尺寸係顯示出高程度的均勻度。化 合物No.54及OCIF之複合物在4°C、10°C及25°C複合化 所得的司托克半徑爲6.0奈米、6.0奈米及6.0奈米。化合 物No .55及OCIF之複合物，其司托克半徑爲6.4奈米。在 實施例22及24中所製備的各複合物含有比未修飾的純化 人類OCIF(司托克半徑：5.63奈米）大的司托克半徑。 製備例 用上述實施例1 4所述相同方式、在無菌條件下所製備 含有複合物的溶液，係用冷凍乾燥以獲得冷凍乾燥製備。 【圖式簡單說明】 第1圖係顯不在如上述測試例6之非還原條件下，聚 (PEG5G()-MA)a-OCIF之本案發明複合物之SDS聚丙烯醯胺 凝膠電泳之結果： U)分子量標誌 (2)聚（PEG5Gc)-MA)a-Na(化合物 No. 9)- OCIF 之複合物 -123- 1293882 [0 C IF :聚合物修飾劑=i ·· i (重量比）] (3) 聚（PEG5G()-MA)a-Na(化合物 N ο . 9 ) - 0 C IF 之複合物 [〇CIF :聚合物修飾劑=1 : 2(重量比）] (4) 聚（PEG5G()-MA)a-Na(化合物 N 〇 . 9 ) - 0 C IF 之複合物 [Ο C IF :聚合物修飾劑=1 : 3 (重量比）] (5) 聚（？£05(>()-1^^)&-^(化合物^^〇.9)-〇(：1?之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 : 4(重量比）] (6) 聚（PEG5()()-MA)a-NaC 化合物 No.9)-〇CIF 之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 ·· 5(重量比）] (7) 未修飾的OCIF. 第2圖係顯示在如上述測試例6之非還原條件下，聚 (PEG5G()-MA)a-OCIF之本案發明複合物之SDS聚丙烯醯胺 凝膠電泳的進一步結果： U)分子量標誌 (2) 聚（PEG5〇〇-MA)a-Na(化合物 N 〇 · 9 ) - 0 C IF 之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 : 1(重量比），培養時OCIF 的濃度：3.5毫克/毫升] (3) 聚（PEG5〇〇-MA)a-Na(化合物 No.9)-〇CIF 之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 : 1(重量比），培養時〇CIF 的濃度：1.75毫克/毫升] (4) 聚（PEG5Q〇-MA)a-Na(化合物 N 〇 · 9 ) - 〇 C IF 之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 ·· 1(重量比），培養時OCIF 的濃度·· 0.875毫克/毫升]
(5) 聚（PEG5〇〇-MA)a-Na(化合物 No.9)-〇CIF 之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 ·· 2(重量比），培養時OCIF -124- 1293882 的濃度：1.75毫克/毫升] (6) 聚（PEG5GQ-MA)a-Na(化合物 N 〇 · 9 ) - 0 CIF 之複合物 [0 C IF :聚合物修飾劑=1 : 4 (重量比），培養時0 C IF 的濃度：0_8 7 5毫克/毫升] (7) 未修飾的OCIF。 第3圖係顯示在如上述測試例6之非還原條件下，聚 (PEG5G()〜MA)a-OCIF之先前技藝複合物之SDS聚丙烯醯胺 凝膠電泳結果： (1) 分子量標誌 t (2) 聚（PEG5〇〇-MA)(AM-0530K)_OCIF 之複合物 [0 C IF :聚合物修飾劑=1 : 1 〇 (重量比）] (3) 聚（PEG5〇〇-MA)(AM-0530K)-OCIF 之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 ·· 2.5(重量比）] (4) 聚（PEG5〇〇-MA)(AM-0530K)-OCIF 之複合物 [OCIF :聚合物修飾劑=1 : 1(重量比）] (10)未修飾的OCIF。 -125-

Claims (1)

  1. 公告本1
    m㈣66號「聚合物修飾劑及醫藥組成物」專利申請案 十、申請專利範圍： 1. 一種共聚物或其醫藥上可接受鹽，其包括下列作爲構成 單位： (a)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其係 如下式（I)所示： R1 ——CH2—C- (I) CH2 O-^AIk-oj-R2 m 其中： m爲3〜100的整數， Aik係表示具有1〜6個碳原子之伸烷基，及 R及R爲相问或不问且分別表不氣原子或可視需要經至 少一種選自羥基、鹵素原子所構成族群之取代基取代的 具有1〜6個碳原子之烷基及可視需要經選自於如下述所 定義的取代基A之1~5個取代基取代的具有6〜14碳原子 之芳基，及 (b)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其係 如下式（II)所示
    1293882 (2007年9月14曰修正本） 其中： R3係表示羥基、可視需要經至少一種選自羥基、幽素原 子所構成族群之取代基取代的具有1〜6個碳原子之烷氧 基及可視需要經選自於如下述所定義的取代基A之1〜5 個取代基取代的具有6〜14碳原子之芳基、可視需要經選 自於如下述所定義的取代基A之1 個取代基取代的具 有6〜14碳原子之芳氧基、或式-NR4R5所示之基，其中 R4及R5係彼此爲相同或不同且分別表示氫原子或可視需 要經至少一種選自羥基、鹵素原子所構成族群之取代基 取代的具有1〜6個碳原子之烷基及可視需要經選自於如 下述所定義的取代基A之1〜5個取代基取代的具有6〜14 碳原子之芳基； 取代基A係選自於具有1〜6個碳原子之烷基、具有1〜6 個碳原子之烷氧基、鹵素原子、羥基、硝基及羧基。 2. 如申請專利範圍第1項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（I)所示之構造單位及式（II)所示之構造單位係分 佈至交替頭對頭序列、交替頭對尾序列或頭對頭及頭對 尾之交替混合序列。 3. 如申請專利範圍第1項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（I)所示之構造單位及式（Π)所示之構造單位係在 隨機序列上分佈。 4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之共聚物或其醫藥 上可接受鹽，其中Aik爲伸乙基或三伸甲基。 5. 如申請專利範圍第4項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中Aik爲伸乙基。 !293882 (2007年9月14日修正本） 6.如申請專利範圍第1至5項中任一項之共聚物或其醫藥 上可接受鹽，其中m爲3〜50之整數。 7 ·如申請專利範圍第6項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中m爲3〜40之整數。 8 ·如申請專利範圍第7項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中m爲6〜16或28〜38之整數。 9 ·如申請專利範圍第8項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中m爲6〜16之整數。 1 0.如申請專利fe圍弟1至9項中任一項之共聚物或其醫藥 上可接受鹽，其中R1爲氫原子或甲基。 1 1.如申請專利範圍第1 〇項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R1爲氫原子。 1 2.如申請專利範圍第1至11項中任一項之共聚物或其醫藥 上可接受鹽，其中R2爲氫原子或甲基。 1 3 .如申請專利範圍第1 2項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R2爲甲基。 1 4 ·如申請專利範圍第1至1 3項中任一項之共聚物或其醫藥 上可接受鹽，其中R3爲羥基，具有1〜6個碳原子之烷氧 基或式-NR4R5所示之基，其中R4及R5爲相同或不同且分 別表示氫原子或具有1~6個碳原子之烷基。 1 5.如申請專利範圍第1 4項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R3爲經基或具有1〜6個碳原子之院氧基。 1 6 ·如申請專利範圍第1 5項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其包括至少一種式（II)所示R3爲具有1〜6個碳原子之烷 氧基之構造單位，與視需要至少一種式（Π)所示r3爲羥 I293882 (2007年9月14日修正本） 基之構造單位’其中式（11)所示r3爲羥基之構造單位與 式（II)所示R3爲具有1〜6個碳原子之烷氧基之構造單位 的比例係爲4 : 6至〇 : 1 〇。 1 7 _如申請專利範圍第1 5或1 6項之共聚物或其醫藥上可接 受鹽，其中R3爲具有i~6個碳原子之烷氧基。 1 8 .如申請專利範圍第丨5至1 7項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中該具有1〜6個碳原子之烷氧基爲乙 氧基。 1 9 ·如申請專利範圍第丨4項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R3爲羥基或式-NR4R5所示之基，其中R4及R5爲相 同或不同且分別表示氫原子或具有1〜6個碳原子之院 基。 20.如申請專利範圍第19項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其包括至少一種如式（II)之R3爲式-NR4R5所示基之構造 單位，其中R4及R5爲相同或不同且分別表示氫原子或具 有1〜6個碳原子之烷基與視需要至少一種式（II)所示R3 爲羥基之構造單位，其中式（II)所示R3爲羥基之構造單 位及式（II)之R3爲式-NR4R5所示基之構造單位之比例爲 5 : 5 至 0 : 10。 2 1.如申請專利範圍第20項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（II)所示R3爲羥基之構造單位及式（Π)之R3爲式 -NR4R5所示基之構造單位之比例爲4 : 6至〇 : 1 〇。 22.如申請專利範圍第19至21項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中r3係爲式-NR4R5所示之基’且R4 及R5爲相同或不同且分別表示氫原子或具有1〜6個碳原 4- 1293882 (2007年9月14日修正本） 子之烷基。 23·如申請專利範圍第19至22項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中式-NR4R5所示之基爲胺基、甲基胺 基或二甲基胺基。 24·如申請專利範圍第23項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式-NR4R5所示之基爲胺基。 25·如申請專利範圍第23項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式-NR4R5所示之基爲二甲基胺基。 2 6 ·如申請專利範圔第1 4項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R3爲羥基。 2 7 ·如申請專利範圍第1 4項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R3爲1-胺基-2-丙醇基。 2 8 ·如申請專利範圍第1至2 7項中任一項之共聚物或其醫藥 上可接受鹽，其中式（I)所示構造單位與式（II)所示構造單 位之比例爲1 〇 : 1至1 : 1 〇。 2 9 ·如申請專利範圍第2 8項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（I)所示構造單位與式（II)所示構造單位之比例爲 3 : 1 至 1 : 8。 30·如申請專利範圍第28項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（I)所示構造單位與式（II)所示構造單位之比例爲 2 : 1 至 1 : 2 或 1 : 2 至 1 : 6。 3 1.如申請專利範圍第28項之共聚物或其醫藥上可接受鹽’ 其中式（I)所示構造單位與式（II)所示構造單位之比例爲 1 : 1 或爲 1 : 2 至 1 ·· 4。 32.如申請專利範圍第1至31項中任一項之共聚物或其醫藥 1293882 (2007年9月14日修正本） 上可接受鹽，其中平均聚合度爲5〜200。 3 3 ·如申請專利範圍第3 2項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲5〜50。 3 4 .如申請專利範圍第3 3項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲5~20。 3 5 ·如申請專利範圍第3 2項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲20〜30。 3 6 ·如申請專利範圍第3 2項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲30~40。 3 7.如申請專利範圍第1至3 1項中任~項之共聚物或其醫藥 上可接受鹽，其中其司脫克半徑爲9.3奈米或以下。 3 8.如申請專利範圍第37項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中其司脫克半徑爲7.3奈米或以下。 39·如申請專利範圍第38項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中其司脫克半徑爲6.2奈米或以下。 4 0.如申請專利範圍第39項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中其司脫克半徑爲4.7奈米或以下。 41. 如申請專利範圍第40項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中其司脫克半徑爲3.1奈米或以下。 42. 如申請專利範圍第37項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中其司脫克半徑爲爲1.5奈米至4.7奈米。 43. 如申請專利範圍第37項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中其司脫克半徑爲爲3.1奈米至6.2奈米。 44 ·如申請專利範圍第1項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中： I293882 4 (2007年9月14日修正本) m爲3〜100的整數， Aik係表示具有1〜6個碳原子之伸烷基， R1及R2爲相同或不同且分別表示氫原子或具有1〜6個碳 原子之烷基，及 R3係表示羥基、具有1〜6個碳原子之烷氧基（可視需要經 一羥基取代）、或式-NR4R5所示之基，其中R4及R5係彼 此爲相同或不同且分別表示氫原子或具有1〜6個碳原子 之烷基（可視需要經一羥基取代）。 45·如申請專利範圍第1項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中Aik係表不伸乙基，R1係表示氫原子，R2係表示甲 基及m ’ R3，式⑴及（11)之構造單位的比例（組成物比例） 及’其相關地，式（II)所示R3爲羥基之單位及式（II)所示 R3爲@基以外之基之單位的比例（水解比例）係選自於下 列： (i) m爲6〜16之數，R3爲羥基，組成物比例爲1 ·· 1及平 均聚合度爲30至40; (ii) m爲28〜3 8，R3爲羥基，組成物比例爲1 ·· 1及平均聚 合度爲1 0至1 5 ; (iii) m爲6〜16之數，R3爲胺基，組成物比例爲1 : 1及平 均聚合度爲30至40; (iv) m爲6〜16之數，R3爲二甲基胺基，組成物比例爲1 : 1及平均聚合度爲3〇至40; (v) m爲6〜16之數，R3爲1-胺基-2-丙醇基，組成物比例 爲1: 1及平均聚合度爲3〇至4〇; (vi) m爲6〜16之數，R3係選自於乙氧基及羥基，組成物 1293882 (2007年9月14日修正本） 比例爲1 : 1，平均聚合度爲30至40且水解比例爲4 ·· 6 ; (vii) m爲28至16，R3係選自於胺基及羥基，組成物比例 爲1 : 1，平均聚合度爲10至15且水解比例爲4 : 6 ; (viii) m爲28〜3 8，R3爲二甲基胺基，組成物比例爲1 : 1 及平均聚合度爲10至15; (ix) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1 : 1，平均聚合度爲30至40，水解比例爲3.1 : 6.9 且該共聚物爲鈉鹽； (x) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比例 爲1 : 1，平均聚合度爲30至40且水解比例爲1.4 : 8.6 ; (xi) m爲6〜16之數，R3係選自於二甲基胺基及羥基，組 成物比例爲1 : 1，平均聚合度爲30至40，水解比例爲 2.9: 7.1且該共聚物爲鈉鹽； (xii) m爲6〜16之數，R3爲胺基’組成物比例爲1:2.4 及平均聚合度爲20〜30 ; (xiii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲丨：2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.4: 9 ·6 ; (xiv) m爲6〜16之數’ R3係選自於胺基及經基，組成物比 例爲1:2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲2·9:7·1; (xv) m爲6〜16之數’ R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1:2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲〇·9:9·1; (xvi) m爲6〜16之數’ R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1:2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲〇·5:9·5; Uvii)m爲6〜16之數’ R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 ·· 2.4 ’平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.3 : 1293882 (2007年9月14日修正本) 8.7 ； (xviii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 ·· 2.4 ’平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1·9 : 8.*1 ； (xix) m爲6〜16之數’ R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1:2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1·0:9·0; (xx) m爲6〜16之數’ R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1 : 2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.8: 9.2 ; (xxi) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1 : 2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲4.6: 5.4 ; (X X i i) m爲6〜1 6之數’ R3係選自於胺基及經基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.2 : 8.8 ； (X X i i i) m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及經基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲2.0 : 8.0 ； (xxiv)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及經基，組成物 比例爲1 : 2·4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.1 : 8.9 ； (XXv)m爲6〜1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲2.4 ·· 7 : 6 ； (XXvi)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 ·· 2 · 4，平均聚合度爲2 0〜3 0且水解比例爲0 · 9 : 9.1 ； 1293882 (2007年9月14日修正本) (xxvii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.5 : 8.5 ； (xxviii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.7 ·· 9.3 ； (xxix) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲4.5 : 5.5 ； (xxx) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例爲1 : 2.4,平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.4: 8.6 ; (xxxi) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.7 : 9.3 ； (xxxii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.8 : 9.2 ； (xxxiii) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.4 : 8.6 ； (xxxiv) m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及經基，組成物 比例爲1 : 3.1，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.7 : 9.3 ； (XXXv)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲0.9 : -10- 1293882 (2007年9月14日修正本) (xxxvi)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 2.4，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲1.9 ·· 8.1 ； (xxxvu)m爲6~16之數，R3係選自於乙氧基及羥基，組 成物比例爲約1 : 3，平均聚合度爲20〜30且水解比例爲 3.1 ： 6.9 ； (XXXV1U)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成 物比例爲1 : 1 ’水解比例爲1.4 : 8.6且司托克半徑爲9.3 奈米或以下； ~ 1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 水解比例爲1.4 : 8.6及司托克半徑係爲3.1 (xxxix)m 爲 比例爲1 : 1 至6.2奈米； (Xl)m B 6~16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 ^^ 1 ’水解比例爲1.4 : 8.6及司托克半徑係爲1.5 至4.7奈米； (xli)m 爲 6〜] 1 6 $數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 例胃1 · 1 ’水解比例爲1.4 : 8.6且司托克半徑爲3.1奈 米或以下； (xlii)m 爲 6 例爲1 : 1， 米或以下； 1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物比 &解比例爲1.4 ·· 8.6且司托克半徑爲7.8奈 (xliii)m 爲 6〜1 _ 1 6之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 ·· 1， &解比例爲1.4 : 8.6且司托克半徑爲6.2 奈米或以下；& -11- 1293882 (2007年9月14日修正本) UnV)m爲6〜16之數，R3係選自於胺基及羥基，組成物 比例爲1 : 1 ’水解比例爲1.4 : 8.6且司托克半徑爲4.7 奈米或以下。 46·—種共聚物或其醫藥上可接受鹽，其可藉由將一或多個 在共聚物式（III)的羧酸酐部分經歷一或多個選自於由下 列所構成族群之反應：⑴水解、（ii)氨解、（iii)胺解及（iv) 醇解而獲得’該共聚物係包括下列爲構成單位， (a)—或多個構造單位，其係可彼此爲相同或不同且其係 如下式（I)所示：
    ch2
    其中： in爲3〜100的整數， Aik係表示具有1〜6個碳原子之伸烷基，及 R1及R2爲相同或不同且分別表示氫原子或可視需要經至 少一種選自羥基、鹵素原子所構成族群之取代基取代的 具有1〜6個碳原子之烷基及可視需要經選自於如下述所 定義的取代基A之1〜5個取代基取代的具有6〜14碳原子 之芳基，及 ⑻具有式（III)羧酸酐部分之構造單位：
    0八0八0 取代基A係選自於具有1〜6個碳原子之烷基，具有1〜6 -12- 1293882 (2007年9月14日修正本) 個碳原子之烷氧基、幽素原子、羥基、硝基及羧基。 4 7.如申請專利範圍第46項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中共聚物中式（I)所示之構造單位及式（III)所示之構造 單位係分佈至交替頭對頭序列、交替頭對尾序列或頭對 頭及頭對尾之交替混合序列。 48. 如申請專利範圍第46項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中共聚物中式（I)所示之構造單位及式（III)所示之構造 單位係在隨機序列上分佈。 49. 如申請專利範圍第46至48項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中Aik爲伸乙基或三伸甲基。 50. 如申請專利範圍第49項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中Aik爲伸乙基。 5 1.如申請專利範圍第46至50項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中m爲3〜50之整數。 52.如申請專利範圍第51項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中m爲3〜40之整數。 5 3 ·如申請專利範圍第5 2項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中m爲6〜16或28〜38之整數。 5 4 .如申請專利範圍第5 3項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中m爲6〜16之整數。 5 5 ·如申請專利範圍第4 6至5 4項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中R1爲氫原子或甲基。 56. 如申請專利範圍第55項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R1爲氫原子。 57. 如申請專利範圍第46至56項中任一項之共聚物或其醫 -13- !293882 (2007年9月14日修正本） 藥上可接受鹽，其中R2爲氫原子或甲基。 5 8 .如申請專利範圍第5 7項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中R2爲甲基。 5 9 ·如申請專利範圍第4 6至5 8項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中式（I)所示之構造單位與使一或多個 式（ΠΙ)之構造單位經歷至一或多個選自於由下列所構成 族群之反應··（i)水解、（ii)氨解、（iii)胺解及（iv)醇解的 構造單位之比例係爲1 0 : 1至1 : 1 〇。 6〇·如申請專利範圍第59項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（I)所示之構造單位與使一或多個式（III)之構造單 位經歷至一或多個選自於由下列所構成族群之反應：（i) 水解、（i i)氨解、（i i i)胺解及（i v)醇解的構造單位之比例 係爲3 ·· 1至1 ·· 8。 61.如申請專利範圍第59項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（I)所示之構造單位與使一或多個式（III)之構造單 位經歷至一或多個選自於由下列所構成族群之反應：（i) 水解、(ii)氨解、（iii)胺解及（iv)醇解的構造單位之比例 係爲2:1至1:2或1:2至1:6。 62 _如申請專利範圍第5 9項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中式（I)所示之構造單位與使一或多個式（III)之構造單 位經歷至一或多個選自於由下列所構成族群之反應··（i) 水解、（ii)氨解、（iii)胺解及（iv)醇解的構造單位之比例 爲1:1或爲1:2至1:4。 63.如申請專利範圍第46至62項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其中平均聚合度爲5〜200。 -14- 1293882 (2007年9月14日修正本） 6 4 ·如申請專利範圍第6 3項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲5〜50。 65 ·如申請專利範圍第64項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲5〜20。 6 6 _如申請專利範圍第6 3項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲20〜30。 67.如申請專利範圍第63項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中平均聚合度爲30〜40。 6 8 ·如申請專利範圍第4 6項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其中： m爲3〜100的整數， Aik係表示具有1〜6個碳原子之伸烷基，及 R1及R2爲相同或不同且分別表示氫原子或具有1〜6個碳 原子之烷基。 69 _如申請專利範圍第46至68項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其係使共聚物式（III)之羧酸酐部分歷經 氨解而獲得。 7 0.如申請專利範圍第69項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其係藉由以氨水進行氨解而獲得。 7 1 ·如申請專利範圍第4 6至6 8項中任一項之共聚物或其醫 藥上可接受鹽，其係使共聚物的式（III)之羧酸酐部分歷 經胺解而獲得。 72.如申請專利範圍第71項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其係藉由使用二甲基胺溶液進行胺解而獲得。 73·如申請專利範圍第46至68項中任一項之共聚物或其醫 -15- Ϊ293882 (2007年9月14日修正本） 藥上可接受鹽，其係使共聚物的式（111)之羧酸酐部分歷 經醇解而獲得。 7 4.如申請專利範圍第7 3項之共聚物或其醫藥上可接受鹽， 其係使用乙醇進行醇解而獲得， 7 5 . —種醫藥組成物，其包括本案發明申請專利範圍第1至 74項中任一項之醫藥上可接受稀釋劑或載體及至少一種 共聚物或其醫藥上可接受鹽。 76·如申請專利範圍第75項之醫藥組成物，其中該組成物更 含有至少一種蛋白質或類似物或其變異體。 7 7.如申請專利範圍第7 6項之醫藥組成物，其中蛋白質或類 似物或其變異體爲鹼性蛋白質。 7 8 ·如申請專利範圍第7 7項之醫藥組成物，其中鹼性蛋白質 爲鹼性纖維母細胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或 (EGF)、破骨細胞原抑制因子或（〇ciF)、血小板衍生生長 因子（PDGF)、腦衍生神經營養因子或（BDNF)、神經生長 因子或（NGF)、人類生長激素（HGH)、肝細胞生長因子 (HGF)、或血管內皮生長因子（VEGF)、或類似物或其變異 體。 如申請專利範圍第77項之醫藥組成物，其中鹼性蛋白質 爲破骨細胞原抑制因子或（OCIF)或類似物或其變異體。 8〇·如申請專利範圍第79項之醫藥組成物，其中該OCIF或 類似物或其變異體爲自然型或重組型OCIF。 81·如申請專利範圍第79項之醫藥組成物，其中該OCIF或 類似物或其變異體係爲單體或二聚物。 82·如申請專利範圍第79項之醫藥組成物，其中該OCIF係 -16- 1293882 (2007年9月14日修正本） 爲以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約 60,000之人類OCIF單體或以SDS-PAGE在非還原條件下 測量之分子量爲約1 20,000之人類OCIF二聚物。 83. 如申請專利範圍第79項之醫藥組成物，其中該OCIF係 包括序列表SEQ.ID.N0.1之胺基酸-21至+380。 84. 如申請專利範圍第79項之醫藥組成物，其中該OCIF係 包括序列表SEQ.ID.N0.1之胺基酸+1至+ 3 80。 85 · —種可修飾蛋白質或類似物或其變異體之修飾劑，其中 該修飾劑係包括如申請專利範圍第1至74項中任一項之 共聚物或其醫藥上可接受鹽。 86·如申請專利範圍第85項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中該蛋白質爲鹼性蛋白質。 87. 如申請專利範圍第86項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中鹼性蛋白質爲鹼性纖維母細胞生長 因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、破骨細胞原抑制因 子或（OCIF)、血小板衍生生長因子（PDGF)、腦衍生神經 營養因子或（BDNF)、神經生長因子或（NGF)、人類生長激 素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、或血管內皮生長因子 (VEGF)、或類似物或其變異體。 88. 如申請專利範圍第86項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中鹼性蛋白質爲破骨細胞原抑制因子 或（OCIF)或類似物或其變異體。 89. 如申請專利範圍第88項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中該OCIF或類似物或其變異體爲自然 型或重組型〇CIF。 -17- 1293882 (2007年9月14日修正本) 9 0 ·如申請專利範圍第8 8項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中該OCIF或類似物或其變異體係爲單 體或二聚物。 9 1 ·如申請專利範圍第8 8項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中該OCIF係爲以SDS-PAGE在非還原 條件下測量之分子量爲約6 0，〇 0 〇之人類〇 CIF單體或以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約1 20,000之 人類OCIF二聚物。 9 2 ·如申請專利範圍第8 8項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中該OCIF係包括序列表SEQ.ID.NO.1 之胺基酸-21至+3 80。 93·如申請專利範圍第88項之可修飾蛋白質或類似物或其變 異體之修飾劑，其中該OCIF係包括序列表SEQ.ID.NO.1 之胺基酸+1至+3 80。 94. 一種具有至少一種蛋白質或類似物或其變異體之複合 物，其係鍵結至如申請專利範圍第1至74項中任一項之 至少一種共聚物或其醫藥上可接受鹽。 95. 如申請專利範圍第94項之複合物，其中該蛋白質爲鹼性 蛋白質。 96·如申請專利範圍第95項之複合物，其中鹼性蛋白質爲鹼 性纖維母細胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、 破骨細胞原抑制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子 (PDGF)、腦衍生神經營養因子或（BDNF)、神經生長因子 或（NGF)、人類生長激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、 或血管內皮生長因子（VEGF)、或類似物或其變異體。 -18- 1293882 (2007年9月14日修正本) 97. 如申請專利範圍第95項之複合物，其中鹼性蛋白質爲破 骨細胞原抑制因子或（OCIF)或類似物或其變異體。 98. 如申請專利範圍第97項之複合物，其中該OCIF或類似 物或其變異體爲自然型或重組型OCIF。 99. 如申請專利範圍第97項之複合物，其中該OCIF或類似 物或其變異體係爲單體或二聚物。 100. 如申請專利範圍第97項之複合物，其中該OCIF係爲以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約60,000之 人類OCIF單體或以SDS-PAGE在非還原條件下測量之分 子量爲約120,000之人類OCIF二聚物。 101. 如申請專利範圍第97項之複合物，其中該OCIF係包括 序列表SEQ.ID.N 0.1之胺基酸-21至+ 380。 102. 如申請專利範圍第97項之複合物，其中該OCIF係包括 序列表SEQ.ID.N0.1之胺基酸+1至+ 3 80。 1 03. —種具有醫藥上活性劑有效量及載體或其稀釋劑之醫藥 組成物，其中該醫藥上活性劑係爲如申請專利範圍第94 至102項中任一項之複合物。 104.—種延長蛋白質或類似物或其變異體保流於血流中時間 之方法，其係藉由使該蛋白質或類似物或其變異體與至 少一種如申請專利範圍第1至74項中任一項之共聚物或 其醫藥上可接受鹽進行複合。 1 05 .如申請專利範圍第1 04項之方法，其中該蛋白質爲鹼性 蛋白質。 106.如申請專利範圍第105項之方法，其中鹼性蛋白質爲鹼 性纖維母細胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、 -19- 1293882 (2007年9月U日修正本) 破骨細胞原抑制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子 (PDGF)、腦衍生神經營養因子或（BDNF)、神經生長因子 或（NGF)、人類生長激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、 或血管內皮生長因子（VEGF)、或類似物或其變異體。. 1 07 ·如申請專利範圍第1 05項之方法，其中鹼性蛋白質爲破 骨細胞原抑制因子或（OCIF)或類似物或其變異體。 108·如申請專利範圍第107項之方法，其中該〇CIF或類似物 或其變異體爲自然型或重組型OCIF。 109.如申請專利範圍第107項之方法，其中該OCIF或類似物 或其變異體係爲單體或二聚物。 1 10·如申請專利範圍第107項之方法，其中該OCIF係爲以 SOS-PAC^在非還原條件下測量之分子量爲約60,000之 人類OCIF單體或以SDS-PAGE在非還原條件下測量之分 子量爲約120,000之人類OCIF二聚物。 111.如申請專利範圍第107項之方法，其中該〇(：1?係包括序 列表SEQ.ID.N0.1之胺基酸-21至+ 380。 1 12.如申請專利範圍第107項之方法，其中該ociF係包括序 列表SEQ.ID.N0.1之胺基酸+1至+ 3 80。 113. —種具有蛋白質或類似物或其變異體之複合物之用途， 其係鍵結至如申請專利範圍第1至74項中任一項之至少 一種共聚物或其醫藥上可接受鹽’以製備用於預防或治 療容易感染該蛋白質或類似物或其變異體之疾病的醫 藥。 114. 如申請專利範圍第112項之用途，其中該蛋白質爲驗性 蛋白質。 -20- 1293882 (2007年9月14日修正本) 1 1 5 ·如申請專利範圍第丨丨3項之用途，其中鹼性蛋白質爲鹼 性纖維母細胞生長因子（bFGF)、上皮生長因子或（EGF)、 破骨細胞原抑制因子或（OCIF)、血小板衍生生長因子 (PDGF)、腦衍生神經營養因子或（BDNF)、神經生長因子 或（NGF)、人類生長激素（HGH)、肝細胞生長因子（HGF)、 或血管內皮生長因子（VEGF)、或類似物或其變異體。 1 1 6 .如申請專利範圍第丨丨3項之用途，其中鹼性蛋白質爲破 骨細胞原抑制因子或（OCIF)或類似物或其變異體。 117·如申請專利範圍第116項之用途，其中該OCIF或類似物 或其變異體爲自然型或重組型OCIF。 118·如申請專利範圍第116項之用途，其中該OCIF或類似物 或其變異體係爲單體或二聚物。 119. 如申請專利範圍第116項之用途，其中該OCIF係爲以 SDS-PAGE在非還原條件下測量之分子量爲約00,000之 人類OCIF單體或以SDS-PAGE在非還原條件下測量之分 子量爲約1 20,000之人類OCIF二聚物。 120. 如申請專利範圍第116項之用途，其中該OCIF係包括序 列表SEQ. ID.N 0.1之胺基酸-21至+ 380。 121. 如申請專利範圍第116項之用途，其中該OCIF係包括序 列表SEQ.ID.N0.1之胺基酸+1至+ 3 80。 1 22 .如申請專利範圍第1 1 6至1 2 1項中任一項之用途，其中 疾病爲骨代謝疾病。
TW093107766A 2003-03-24 2004-03-23 Polymeric modifiers and pharmaceutical compositions TWI293882B (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2003080389 2003-03-24
JP2003355853 2003-10-16
JP2003426598 2003-12-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW200501986A TW200501986A (en) 2005-01-16
TWI293882B true TWI293882B (en) 2008-03-01

Family

ID=33101948

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW093107766A TWI293882B (en) 2003-03-24 2004-03-23 Polymeric modifiers and pharmaceutical compositions

Country Status (23)

Country Link
US (1) US7811556B2 (zh)
EP (1) EP1611173B1 (zh)
KR (1) KR20050118201A (zh)
AR (1) AR043917A1 (zh)
AT (1) ATE388173T1 (zh)
AU (1) AU2004223964B2 (zh)
BR (1) BRPI0408526A (zh)
CA (1) CA2520450C (zh)
CL (1) CL2004000633A1 (zh)
DE (1) DE602004012241T2 (zh)
DK (1) DK1611173T3 (zh)
ES (1) ES2301978T3 (zh)
HK (1) HK1078598A1 (zh)
IL (1) IL170489A (zh)
MX (1) MXPA05010289A (zh)
NZ (1) NZ542352A (zh)
PA (1) PA8598701A1 (zh)
PE (1) PE20041067A1 (zh)
PL (1) PL1611173T3 (zh)
PT (1) PT1611173E (zh)
SI (1) SI1611173T1 (zh)
TW (1) TWI293882B (zh)
WO (1) WO2004085500A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2090599A1 (de) * 2008-02-13 2009-08-19 Construction Research and Technology GmbH Copolymer mit Polyetherseitenketten und Dicarbonsäurederivatbausteinen

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1217005A (en) 1916-05-08 1917-02-20 Judson D Mccarthy Photographic-printing frame.
DE3260845D1 (en) * 1981-01-16 1984-11-08 Nippon Catalytic Chem Ind Copolymer and method for manufacture thereof
JP2621308B2 (ja) 1987-03-13 1997-06-18 日本油脂株式会社 アリルエーテル−無水マレイン酸共重合体
JP2701295B2 (ja) 1987-03-13 1998-01-21 日本油脂株式会社 アリルエーテル−無水マレイン酸共重合体
JP2803265B2 (ja) 1989-12-26 1998-09-24 日本油脂株式会社 変性ポリペプチドおよびその用途
US5158622A (en) * 1991-02-12 1992-10-27 Betz Laboratories, Inc. Method and composition for treatment of aluminum
JP3271265B2 (ja) * 1991-03-07 2002-04-02 日本油脂株式会社 修飾プロテアーゼ
JP3035675B2 (ja) * 1991-08-21 2000-04-24 株式会社コーセー 修飾スーパーオキシドディスムターゼ
CA2080174A1 (en) 1991-10-11 1993-04-12 John E. Hayes Polymer polyol dispersants from polymers containing anhydride groups
JP3106265B2 (ja) 1992-05-26 2000-11-06 株式会社コーセー 修飾リゾチーム
US6004583A (en) 1995-03-22 1999-12-21 Orex Pharmaceutical Development Corp. Protein-containing polymer composition for oral administration
US6369027B1 (en) 1995-12-22 2002-04-09 Amgen Inc. Osteoprotegerin
IT1293087B1 (it) 1997-07-10 1999-02-11 Isi Ist Sierovaccinogeno Ital Microparticelle a base di materiali polimerici ibridi per il rilascio controllato di molecole biologicamente attive, procedimento per la
DE19834173A1 (de) * 1997-08-01 1999-02-04 Sueddeutsche Kalkstickstoff Copolymere auf Basis von ungesättigten Dicarbonsäure-Derivaten und Oxyalkylenglykol-Alkenylethern
JPH11302199A (ja) 1998-04-16 1999-11-02 Sankyo Co Ltd 薬物運搬体を構成するグラフト共重合体
DE19847868C2 (de) * 1998-10-16 2003-09-25 Clariant Gmbh Sprengstoffe, enthaltend modifizierte Copolymere aus Polyisobutylen und Maleinsäureanhydrid als Emulgatoren
JP2002534363A (ja) * 1999-01-08 2002-10-15 エミスフェアー・テクノロジーズ・インク ポリマー性デリバリー剤及びデリバリー剤化合物
ITTO20000942A1 (it) 2000-10-10 2001-01-10 Sergio Guzzoni Pricedimento per la gestione di interscambi di messaggi tra fornitorie clienti di servizi di telefonia.
JP5109218B2 (ja) 2001-09-28 2012-12-26 日油株式会社 共重合体の製造方法
JP2003105040A (ja) 2001-09-28 2003-04-09 Nof Corp 共重合体の製造方法およびその用途

Also Published As

Publication number Publication date
EP1611173A1 (en) 2006-01-04
BRPI0408526A (pt) 2006-03-07
EP1611173B1 (en) 2008-03-05
CA2520450A1 (en) 2004-10-07
WO2004085500A1 (en) 2004-10-07
PA8598701A1 (es) 2005-02-04
TW200501986A (en) 2005-01-16
PT1611173E (pt) 2008-05-23
DE602004012241T2 (de) 2009-03-12
ATE388173T1 (de) 2008-03-15
CL2004000633A1 (es) 2005-01-21
DE602004012241D1 (de) 2008-04-17
NZ542352A (en) 2007-02-23
US7811556B2 (en) 2010-10-12
CA2520450C (en) 2009-11-03
IL170489A (en) 2009-06-15
KR20050118201A (ko) 2005-12-15
SI1611173T1 (sl) 2008-08-31
US20060062754A1 (en) 2006-03-23
DK1611173T3 (da) 2008-06-23
MXPA05010289A (es) 2005-11-17
ES2301978T3 (es) 2008-07-01
HK1078598A1 (en) 2006-03-17
PL1611173T3 (pl) 2008-08-29
AU2004223964B2 (en) 2007-02-22
AR043917A1 (es) 2005-08-17
PE20041067A1 (es) 2005-01-22
AU2004223964A1 (en) 2004-10-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101442867B1 (ko) 제거될 수 있는 결합을 지니는 인자 ⅸ 부분­중합체 컨주게이트
JP5448099B2 (ja) エリスロポエチン模倣ペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩、それらの製造並びに使用
JPH07508727A (ja) 生体分子と結合したポリオキシメチレン−オキシエチレン共重合体
CN101389354A (zh) 用于与蛋白质和肽缀合的四个支链的树枝状大分子peg
JP2001525470A (ja) タンパク修飾のためのヘテロ官能化星形ポリ（エチレングリコール）
IL297329A (en) Dimeric interleukin-2 beta gamma receptor-biased human interleukin-2 conjugates conjugated to soluble non-peptide polymers.
JP2008543304A (ja) ヒト顆粒球コロニー刺激因子イソ型（ＨｕｍａｎＧｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ＣｏｌｏｎｙＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＦａｃｔｏｒＩｓｏｆｏｒｍｓ）
TWI491410B (zh) 水溶性聚合物修飾的ｇ－ｃｓｆ偶聯物
JP5105166B2 (ja) ポリエーテルの製造方法
CA2272356C (en) Soluble polypeptides
TWI293882B (en) Polymeric modifiers and pharmaceutical compositions
JP2007530569A (ja) 化学修飾タンパク質組成物及び方法
JP5225393B2 (ja) 水溶性高分子修飾ｇ−ｃｓｆ複合体
KR101104574B1 (ko) 폴리에틸렌글리콜로 화학적으로 수식된 인간 성장 호르몬, 이의 제조방법 및 용도
JP4969769B2 (ja) 高分子修飾剤及び医薬組成物
RU2323227C2 (ru) Полимерные модификаторы и фармацевтические композиции
JP2006117652A (ja) 高分子修飾剤及びタンパク質を含有する医薬組成物
CN1375502A (zh) 聚乙二醇修饰重组人干扰素
US20220185969A1 (en) Conjugate of bio-related substance and block polymer, and block polymer derivative for obtaining said conjugate
JP2006193627A (ja) 薬物複合体および薬物送達用担体
ZA200507721B (en) Polymeric modifiers and pharmaceutical compositions
Chan Peptidomimetic Polymers: Advances in Monomer Design and Polymerization Methods
TW201204391A (en) IL-1ra-polymer conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees