TW201643143A - 抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡之化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明能提供一種以下述式(I)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽、包含該化合物之醫藥組成物、使用該化合物來處理疾病的方法，其中，該化合物能進行根本的治療，也就是抑制細胞死亡，而非以往的症狀療法； □

Description

抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡之化合物
本發明關於抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之化合物，尤其是抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡之化合物，並提供一種包含該化合物之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，以及含有抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑之醫藥組成物，其中，該醫藥組成物是用來預防及/或治療下述與氧化壓迫相關的疾病：帕金森氏症、阿茲海默症、脊隨小腦萎縮症(SCD)、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症(PSP)、大腦皮質基底核退化症、肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、因腦缺血引起的腦神經損傷(缺血性腦血管疾病)、腦中風、心臟衰竭、糖尿病、類風濕性關節炎、急性缺血性腦中風、動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、乾眼症、粒線體腦肌肉病變、發炎性腸道疾病、冠狀動脈硬化、克隆氏症、因放射治療引起的黏膜炎、腦缺血、及心肌梗塞等。
又，本發明關於一種前述疾病的預防及/或治療方法，其特徵在於將前述抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之化合物，尤其是抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡之化合物或其鹽，以有效劑量來進行投藥；一種前述抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之化合物用於製造前述醫藥組成物 之用途，尤其是抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡之化合物用於製造前述醫藥組成物之用途。
人類為了獲得維持生命所需要的能量，會在粒線體不斷的消耗氧。而這些氧的一部分，會在代謝過程中變成活性氧。
活性氧是指氧分子變成反應性更高的化合物的總稱，一般而言，為人所知的是超氧陰離子自由基、羥基自由基、過氧化氫、單重態氧這四種(非專利文獻1)。
活性氧有著負責對進入體內的病原菌進行攻擊、殺菌的免疫機能等作用，而這樣有益的作用的反面，則是會對各式各樣的物質引發非特異性的化學反應，而造成細胞或組織損傷。為了防止這樣的情況，各組織中存在著消除或去除活性氧的抗氧化酵素，也就是過氧化氫分解酶、超氧化物歧化酶、過氧化酶等，該等抗氧化酵素會使活性氧變得無害。又，因活性氧所造成的細胞或組織損傷，通常會被立刻修復(非專利文獻2)。
氧化壓迫是指下述狀態：該活性氧對生物體內的細胞或臟器所引起的危害，以及生物體內系統將活性氧物質解毒並將所產生的危害加以修復的機能，這兩者之間的平衡崩壞，而使對細胞或臟器的危害持續攀升。
就人類的情況而言，已知氧化壓迫是與各式各樣的疾病有關。例如，已有報告提出，氧化壓迫是與阿茲海默症、帕金森氏症、糖尿病併發症、類風濕性關節炎、 運動神經元疾病所引起的神經退化、自閉症系列障礙(autism spectrum disorder)、瑞特氏症、癌症、星狀細胞亢進、動脈粥樣硬化、狹心症、心肌梗塞、思覺失調症、躁鬱症、X染色體脆裂症、慢性疲勞症候群等廣泛的病症的病情發展或老化的促進有關。
關於心血管疾病，已深刻了解其與氧化壓迫有所關聯。低密度脂蛋白(低密度脂蛋白膽固醇)的氧化會誘發動脈粥狀瘤發生，而變成動脈粥樣硬化，最終會導致心血管的疾病(非專利文獻3)
帕金森氏症是神經退化疾病的其中一種，是一種60歲以後發病率急增的老年病，在越來越高齡化的社會中，預計今後仍會持續增加。帕金森氏症這個病症本身的病情發展，一般來說並不會導致死亡，有報告指出，帕金森氏症的病患的平均壽命與全體的平均壽命，幾乎沒有差異。然而，由於帕金森氏症的特徵，也就是震顫、肌肉僵直、無法動作、動作遲緩、姿勢性反射障礙，會造成生活品質(Quality of life，QOL)大幅降低，而迫使病患本人與照護者長期不自由。
一般認為，帕金森氏症的其中一個病因是由於產生被稱為多巴胺的神經傳導物質之神經細胞脫落，雖然多巴胺的前驅物及多巴胺的分解抑制劑等被使用作為治療藥物來彌補不足的多巴胺，但使用該等治療藥物的治療方法，充其量只是症狀療法，即使進行治療亦無法阻止神經細胞持續死亡。同樣地，對大多數的神經退化疾病，有 很多甚至連症狀療法都無法進行，一直在等待開發出具有抑制神經細胞死亡效果之藥劑，來用於進行根本的治療。
被認為與上述氧化壓迫相關的疾病，大部分會檢測出活性氧等氧化物質，但這些氧化物質是否為病症的主要因素，或是由病症與一般組織的損傷所產生的二次氧化物質，目前並不清楚(非專利文獻4)。
許多報告已揭示了能抑制或消除氧化物質的抗氧化物質。例如，由於腦有高代謝率與高濃度的多價不飽和脂肪，對於氧化性的損傷非常脆弱，因此抗氧化物質被廣泛使用作為治療腦損傷的藥劑(非專利文獻5)。又，由於自由基會損傷DNA，關於抗氧化物質對於癌症的預防效果亦被加以研究。
作為神經退化疾病的治療劑，有報告指出，與具有抗氧化壓迫機能之DJ-1蛋白質鍵結的下述化合物，是會表現出抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的活性之化合物，而期待能用於進行根本的治療(非專利文獻6、專利文獻1)。
已知DJ-1蛋白質的機能損害是造成帕金森氏症、腦中風等原因。這些化合物被認為是藉由維持DJ-1蛋白質的活性，透過DJ-1蛋白質所具有的抗氧化能力來發揮藥理作用(專利文獻1)。
另一方面，雖有報告揭示SMO受體鍵結化合物，其是作為刺蝟傳訊級聯反應(hedgehog signaling cascade)的阻斷劑來發揮作用(專利文獻2和專利文獻3)、以及用來標識雙螺旋狀絲的化合物(專利文獻4)，但完全未對這些化合物的抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的活性加以檢討。
[先前技術文獻] [專利文獻]
專利文獻1：國際公開第2011/118812號
專利文獻2：國際公開第2009/077956號
專利文獻3：國際公開第2010/129620號
專利文獻4：國際公開第2010/034982號
[非專利文獻]
非專利文獻1：吉川敏一、河野雅弘、野原一子『活性氧．自由基的一切』(丸善2000年)p.13
非專利文獻2：『癌與人。別冊』，大阪癌症研究會，2011年6月
非專利文獻3：Van Gaal L, Mertens I, De Block C(2006). “Mechanisms linking obesity with cardiovascular disease”. Nature 444,875-80.
非專利文獻4：Valko M, Leibfritz D, Moncol J, Cronin M, Mazur M, Telse r J(2007). “Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease”. Int J Biochem Cell Biol 39,44-84.
非專利文獻5：Reiter R(1995). “Oxidative processes and antioxidative defense mechanisms in the aging brain” (PDF). FASEB J9(7)：526-33.
非專利文獻6：Kitamura et al.：Neuroprotective effect of a new DJ-1 binding compound against neurodegeneration in Parkinson’s disease and stroke model rats. Molecular Neurodegeneration 2011 6：48.
如上所述，對大多數的氧化壓迫關聯疾病，特別是神經退化疾病，有很多甚至連症狀療法都無法進行。因此，本發明的目的是提供一種抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之化合物，特別是抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡之化合物、包含該化合物之抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的製劑、包含該抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的製劑之醫藥組成物、使用該化合物來處理疾病的方法，其中，不同於以往的症狀療法，而是抑制因氧化壓迫引起的細胞死亡這種進行根本的治療的方法，可藉由該化合物加以實現。
本發明人為了解決上述問題而持續用心研究時，發現相較於抑制細胞死亡的效果幾乎是依賴DJ-1蛋白質所擁有的抗氧化能力之物(以下，稱為DJ-1依存性抑制細胞死亡效果或是僅稱為DJ-1依存性效果)，也就是專利文獻1所記載的前述化合物23，有一種具有特定結構之化合物，其並非僅依賴DJ-1蛋白質的活性來發揮抑制神經細胞死亡的效果。而且，進一步研究的結果，發現藉由特定位置的取代基，不依賴DJ-1的抑制細胞死亡效果(以下，稱為非DJ-1依存性抑制細胞死亡效果或簡稱為非 DJ-1依存性效果)會有所變化，進一步發現一種化合物，其非DJ-1依存性的抑制細胞死亡效果顯著，因此能高度抑制氧化壓迫引發的細胞死亡，遂完成本發明。
亦即，本發明關於下述內容。
[1]一種抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其包含以下述式(I)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽：
式(I)中，W、Y、及Z各自獨立地是C(碳)或N(氮)，當W是C時，R1是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當W是N時，R1不存在，當Y是C時，R2是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當Y是N時，R2不存在，當Z是C時，R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基，當Z是N時，R3不存在； R4和R5各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基；X是以下述式所表示的基團， 上述式中，＊表示鍵結點，R6、R7、R8及R9各自獨立地是氫、C1-C6烷基、或鹵素；R10是氫或C1-C6烷基；其中，3,4,5-三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺除外。
[2]如[1]所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，以式(1)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽，其抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED50是1000nM以下。
[3]如[1]或[2]所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，以式(1)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽，具有抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED90值。
[4]如[1]至[3]中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，X是選自下述群組：
[5]如[1]至[4]中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，R1~R5中的至少1個是鹵素。
[6]如[5]所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，R1~R5中的至少1個是氟。
[7]如[1]至[6]中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，以式(I)所表示的化合物，是選自下述化合物：[表1-1]
[8]一種化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述式(Ia)來表示：
式(Ia)中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、-CH3、或-OCH3；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、-CH3、-OCH3、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；R1和R5各自獨立地是氫、或-NO2、-NH2；X是以下述式所表示的基團，
上述式中，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基；其中，3,4-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3,5-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲 醯胺、3,4,5-三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3-氟-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3-甲氧基-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、4-甲氧基-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、4-四氯苯醌-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、及N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2,a]吡啶-2-基)苯基]-[1,1-聯苯基]-4-甲醯胺除外。
[9]如[8]所述之化合物或是其藥學上可容許的鹽，其是以下述的結構式來表示：[表2-1]
[10]如[8]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其中，R2、R3及R4各自獨立地是氫、鹵素、或甲氧基。
[11]如[8]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述的結構式來表示：[表3]
[12]一種化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述式(Ib)、(Ic)、(Id)或(Ie)來表示：
上述式中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、或甲氧基；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、甲氧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被 取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；X是以下述式所表示的基團， 上述式中，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基；其中，N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺、及N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺除外。
[13]如[12]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述式(Ib)、(Ic)、或(Ie)來表示：
上述式中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、或甲氧基；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、甲氧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；X是以下述式所表示之基，
上述式中，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基。。
[14]如[13]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述的結構式來表示：[表4]
[15]一種醫藥組成物，其包含[8]~[14]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽。
[16]一種抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其包含[8]~[14]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽。
[17]如[16]所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，[8]~[14]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED50是1000nM以下。
[18]如[16]或[17]所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，[8]~[14]所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，具有抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED90值。
[19]一種醫藥組成物，其包含[1]~[7]及[16]~[18]中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，且該醫藥組成物是用來預防及/或治療選自由下述所組成之群組中的疾病：帕金森氏症、阿茲海默症、脊隨小腦萎縮症(SCD)、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症(PSP)、大腦皮質基底核退化症、肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、因腦缺血引起的腦神經損傷(缺血性腦血管疾病)、腦中風、心臟衰竭、糖尿病、類風濕性關節炎、急性缺血性腦中風、動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、乾眼症、粒線體腦肌肉病變、發炎性腸道疾病、冠狀動脈硬化、克隆氏症、因放射治療引起的黏膜炎、腦缺血、及心肌梗塞。
[20]如[19]所述之醫藥組成物，其中，該疾病是選自由下述所組成之群組中的神經退化疾病：帕金森氏症、阿茲海默症、腦中風、缺血性腦血管疾病、帕金森氏症、粒線體腦肌肉病變、脊隨小腦萎縮症(SCD)、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症(PSP)、大腦皮質基底核退化症、及肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。
[21]一種化合物的製造方法，該化合物是以下述式(I)來表示：
式(I)中，W、Y、及Z各自獨立地是C或N，當W是C時，R1是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當W是N時，R1不存在，當Y是C時，R2是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當Y是N時，R2不存在，當Z是C時，R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可 被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基，當Z是N時，R3不存在；R4和R5各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基；X是以下述式所表示的基團，
上述式中，＊表示鍵結點，R6、R7、R8及R9各自獨立地是氫、C1-C6烷基、或鹵素；R10是氫或C1-C6烷基；且前述方法包含下述步驟：將以下述式所表示的苯胺，藉由加入過量的氫氧化鈉來製成苯胺的鈉鹽，
上述式中，X如前所述；再與以下述式所表示的化合物進行反應，
上述式中，R1~R5、W、Y、及Z如前所述，Hal是鹵素。
又，由於本發明的化合物的膜滲透性高，因此即使是口服投藥亦能高效率地被吸收至生物體內，此外，由於沒有酚基，因此不會像多酚性的抗氧化劑般受到葡萄醛酸結合(glucuronic acid conjugation)而在短時間內被代謝，故藉由口服投藥的藥理效果高。又，因為本發明的化合物對於藉由氧化性代謝酵素的細胞色素P(CYP)所進行的代謝，會表現抵抗性，故認為本發明的化合物可被吸收至循環血中，在生物體內穩定地分佈。此外，由於本發明的化合物是低分子，故能效率良好地通過血腦障壁(blood brain barrier，BBB)，亦能夠容易地到達腦神經系細胞，抑制神經細胞死亡。因此，雖然已知中樞神經(central nervous system，CNS)藥物為了用於一般口服投藥，而將結構進行最佳化是一件困難的事，但能期待使用本發明的化合物來作為能以口服投藥的CNS藥物。
因此，若根據本發明，能夠提供一種抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之化合物，其以口服仍為有效，且能 夠對例如帕金森氏症、阿茲海默症、脊隨小腦萎縮症(SCD)、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症(PSP)、大腦皮質基底核退化症、肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、因腦缺血引起的腦神經損傷(缺血性腦血管疾病)、腦中風、心臟衰竭、糖尿病、類風濕性關節炎、急性缺血性腦中風、動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、乾眼症、粒線體腦肌肉病變、發炎性腸道疾病、冠狀動脈硬化、克隆氏症、因放射治療引起的黏膜炎、腦缺血、心肌梗塞等與氧化壓迫相關疾病進行治療，特別是能夠對帕金森氏症、阿茲海默症、腦中風、缺血性腦血管疾病、帕金森氏症、粒線體腦肌肉病變、脊隨小腦萎縮症(SCD)、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症(PSP)、大腦皮質基底核退化症、及肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)等神經退化疾病進行根本的治療。
第1圖是表示使用SH-SY5Y細胞和剔除DJ-1基因之SH-SY5Y細胞(DJ-1 knockout SH-SY5Y cell)的溶胞產物的西方點墨法的結果圖；雖然在SH-SY5Y細胞的溶胞產物中確認到條帶(band)(箭頭處)，而該條帶推測是DJ-1，但在剔除DJ-1基因之SH-SY5Y細胞的溶胞產物中無法確認到該條帶。
第2圖是表示化合物HUP0344對於SH-SY5Y的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的效果的試驗結果圖；各濃度 中，由左邊依序是SHH2O2無(未添加過氧化氫的SH-SY5Y)、SHH2O2有(有添加過氧化氫的SH-SY5Y)、KOH2O2無(未添加過氧化氫的剔除DJ-1基因之SH-SY5Y)、KOH2O2有(有添加過氧化氫的剔除DJ-1基因之SH-SY5Y)的結果。
第3圖是表示化合物HUP0381對於SH-SY5Y的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的效果的試驗結果圖；各濃度中，由左邊依序是SHH2O2無(未添加過氧化氫的SH-SY5Y)、SHH2O2有(有添加過氧化氫的SH-SY5Y)、KOH2O2無(未添加過氧化氫的剔除DJ-1基因之SH-SY5Y)、KOH2O2有(有添加過氧化氫的剔除DJ-1基因之SH-SY5Y)的結果。
第4圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第5圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第6圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第7圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第8圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第9圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第10圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第11圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第12圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第13圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第14圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第15圖是表示抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果圖。
第16圖是表示於抑制運動能力低下的活性的試驗中，小鼠體重變化過程的圖，該抑制運動能力低下的活性的試驗是使用以1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)誘發帕金森氏症的小鼠模型。
第17圖是表示抑制運動能力低下的活性的結果的圖，該抑制運動能力低下的活性的結果是使用以MPTP誘發帕金森氏症的小鼠模型。表示於投藥結束2天後，使用滾筒式跑步機(Rotarod)所測定的潛時的結果。
本發明是基於2015年3月13日所申請的日本特願2015-051460和2015年11月13日所申請的日本 特願2015-223494來主張優先權，本說明書是參考並擷取該等申請案的內容而成。
本說明書中，若無特別以別種方式加以定義，本說明書中所用的所有技術用語和科學用語，是與所屬技術領域中具有通常知識者所一般理解之用語具有相同的意義。本說明書中所參考的所有專利、申請案、及其他出版品或資訊，是藉由參考該等整體內容而引用於本說明書中。再者，若所引用的記載內容與本說明書的記載內容為矛盾時，則以本說明書的記載內容為優先。
以下，對本發明進行詳細說明。
一方面，本發明關於一種抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其包含以下述式(I)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽：
式(I)中，W、Y、及Z各自獨立地是C或N，當W是C時，R1是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當W是N時，R1不存在，當Y是C時，R2是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6 烷氧基或羧基，當Y是N時，R2不存在，當Z是C時，R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基，當Z是N時，R3不存在；R4和R5各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基；X是以下述式所表示的基團，
上述式中，＊表示鍵結點，R6、R7、R8及R9各自獨立地是氫、C1-C6烷基、或鹵素；R10是氫或C1-C6烷基；其中，3,4,5-三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺除外。
本發明中的「鹵素」是指，屬於週期表第17族的元素，或是指該等原子變成烴、芳香族碳環、芳香族雜環等的取代基。作為本發明的「鹵素」，可舉出例如： 氟、氯、溴、碘等。當本發明中的鹵素變成烴、芳香族碳環、芳香族雜環等的取代基時，作為較佳的鹵素，可舉出例如氟、氯及溴。
「C1-C6烷基」是指，由碳數1~6的直鏈狀或支鏈狀的脂肪族烴，去除任意的1個氫原子所衍生的1價基。具體而言，可舉出：甲基、乙基、異丙基、丁基、正丁基、異丁基、二級丁基、三級丁基、戊基、異戊基、2,3-二甲基丙基、己基等。
「C1-C6烷氧基」是指，前述的「C1-C6烷基」與氧原子鍵結所形成的1價基。具體而言，可舉出：甲氧基、乙氧基、異丙氧基、丁氧基、正丁氧基、異丁氧基、二級丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、異戊氧基、2,3-二甲基丙基氧基、己氧基等。
「芳基」是指，單環、稠合環、或由單環以單鍵結的方式來鍵結而成的多環式環等芳香環基，可舉出苯基、聯苯基、萘基等。
「雜芳基」是指，包含選自O、N、及S中的至少1種元素之單環或稠合環的芳香環基，可舉出吡啶基、苯基吡啶基(phenylpyridinyl)、喹啉基等。
「芳醯胺基」和「雜芳醯胺基」是指下述基團：前述「芳基」和「雜芳基」具有-C(O)-NH-＊或-NH-C(O)-＊(＊表示與其他元素的鍵結點)。
作為雜芳醯胺基，可舉出例如下述基團。
本發明中的「可被取代」是指，能被任意的取代基取代，作為取代基，可舉出例如上述R2或R4中所示的取代基等，具體而言可舉出C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烯基、鹵素等。
因此，R3中的可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的雜芳基、及可被取代的芳醯胺基，其芳基或雜芳基的1個或2個以上的氫原子能各自獨立地可被前述取代基取代。
W、Y、及Z各自獨立地表示C或N，較佳是W、Y、及Z全部都是C、或其中1個或2個是N。
R1~R5中，較佳的烷基是C1-C4烷基，更佳是C1-C3烷基，特佳是甲基。
R1~R5中，較佳的烷氧基是C1-C4烷氧基，更佳是C1-C3烷氧基，進一步更佳是甲氧基。
由抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性較高，且不引起CYP的不可逆阻礙的觀點而言，在本發明的其中一種較佳態樣中，R1~R5中的至少1個是鹵素，尤其是以氟為佳。
在本發明的其中一種較佳態樣中，R1和R5是氫。在本態樣的其中一種較佳態樣中，R2、R3、及R4皆是氫，或者，至少有一個是鹵素而其餘為氫。若為後者的 情況時，較佳是：R2是鹵素而R3和R4是氫的情況、R2和R3是鹵素而R4是氫的情況、R2和R4是氟而R3是氫的情況、以及R3是鹵素而R2和R4是氫的情況；不論是何種情況，較佳是R1和R5為氫。
當R1和R5是氫時，於另一種較佳態樣中，R2、R3、及R4中的至少1個是烷氧基。尤其是以甲氧基為佳。
X是以下述式(A)、(B)、或(C)所表示的基團。
由抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性為高的觀點而言，在前述式(A)和(B)中，較佳是R6~R9全部同時是氫的情況、或僅R9是C1-C6烷基而R6~R8是氫的情況。
R6~R9中，較佳的烷基是C1-C4烷基，更佳是C1-C3烷基，特佳是甲基。
R6~R9中，較佳的烷氧基是C1-C4烷氧基，更佳是C1-C3烷氧基，進一步更佳是甲氧基。
作為X與R6~R9的較佳組合的態樣，可舉出下述態樣：X是以式(A)所表示的雜環基，而R6~R9全部同時是氫；X是以式(A)所表示的雜環基，僅R9是C1-C6烷基，R6~R8是氫；X是以式(B)所表示的雜環基， 而R6~R9全部同時是氫；X是以式(A)所表示的雜環基，僅R9是C1-C6烷基，R6~R8是氫。
尤其是由抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性為高的觀點而言，X較佳是選自下述群組的基團。
R10中，較佳的烷基是C1-C4烷基，更佳是C1-C3烷基，特佳是甲基。
由抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性為高的觀點而言，較佳是R10為氫。
藉由將上述R1~R5的較佳組合的態樣、X與R6~R9之間較佳組合的態樣、及R10的較佳態樣加以組合，能夠使本發明的化合物具有更佳的態樣。
在本發明的其中一種較佳態樣中，當X是以式(A)所表示的雜環基，R1、R5、R6、R7及R8是氫，且R2、R3及R4是甲氧基時，則R9和R10同為甲基，或者，R9和R10同為氫。更佳是R9和R10同為甲基的情況。
在本發明的其中一種較佳態樣中，本發明的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，能夠包含以下述式(Iaa)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽：
式(Iaa)中，R2~R4及R10，與式(I)所定義相同；X是以下述式所表示的雜環基，
此處，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基。
在本發明的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑的其中一種較佳態樣中，式(Iaa)中，R4是氫。
在本發明的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑的其中一種較佳態樣中，式(Iaa)中：R2和R3各自獨立地是氫或鹵素，此處，鹵素較佳是氟；R4是氫；R9是氫或C1-C6烷基，較佳是甲基；R10是氫或C1-C6烷基，較佳是甲基。
在本發明的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑的其中一種較佳態樣中，式(Iaa)中：R2和R3各自獨立地是氫或鹵素，此處，鹵素較佳是氟；R4是氫；R9是氫或C1-C6烷基，較佳是甲基；R10是氫。
在本發明的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑的其中一種較佳態樣中，式(Iaa)中：R2是氫或鹵素，此處，鹵素較佳是氟；R3是氟；R4是氫；R9是氫或C1-C6烷基，較佳是甲基；R10是氫。
本發明的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，尤其是由抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性為高的觀點而言，較佳是包含選自下述化合物中的1種或2種以上的化合物。
[表5-1]
以上述式(I)所表示的化合物，雖然是以具有抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的效果之化合物來被重新發現，但該等化合物中，尤其是以下述式(Ia)~(Ie)所表示的化合物，包含以往所不知的新穎的化合物。因此，一方面，本發明是關於一種新穎化合物，其以式(Ia)~(Ie)所表示。
在此方面的其中一種態樣中，是關於一種化合物或其藥學上可容許的鹽，該化合物是以下述式(Ia)所表示：
式(Ia)中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、-CH3、或-OCH3；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、-CH3、-OCH3、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；R1和R5各自獨立地是氫、或-NO2、-NH2，X是以下述式所表示的基團；
此處，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基。
此處，下述的化合物，雖然並未具體驗證是否具有抑制氧化壓迫的效果，但已記載於文獻中：3,4-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3,5-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡 啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3,4,5-三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3-氟-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3-甲氧基-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、4-甲氧基-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、4-四氯苯醌-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、及N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2,a]吡啶-2-基)苯基]-[1,1-聯苯基]-4-甲醯胺。
該等化合物的具體結構如下所述。
[表6]
因此，在其中一種較佳態樣中，本發明的化合物是自以式(Ia)所表示的化合物中，將已記載於文獻的上述化合物除外後的化合物。
在本發明的化合物或其藥學上可容許的鹽的其中一種較佳態樣中，式(Ia)中，R2、R3及R4各自獨立地是氫、鹵素、或甲氧基。
在本發明的化合物或其藥學上可容許的鹽的其中一種較佳態樣中，式(Ia)中，R2、R3及R4各自獨立地是氫或鹵素，此處，當R2是氟時，R3和R4的任一個是氟，R9是C1-C6烷基，較佳是甲基，R10是氫，前述鹵素較佳是氟。
在本發明的化合物或其藥學上可容許的鹽的其中一種較佳態樣中，式(Ia)中，R2、R3及R4各自獨立地是氫、鹵素、或烷氧基，R9是氫或C1-C6烷基，此處，C1-C6烷基較佳是甲基，R10是C1-C6烷基，較佳是甲基，前述鹵素較佳是氟。
在本發明的化合物或其藥學上可容許的鹽的其中一種較佳態樣中，式(Ia)中，X是以式(B1)所表示的雜環基，R2、R3及R4各自獨立地是氫、鹵素、或烷氧基，R9是氫或C1-C6烷基，此處，C1-C6烷基較佳是甲基，R10是氫，前述鹵素較佳是氟。
關於本發明較佳的化合物，可舉出例如下述化合物。
上述化合物中，雖然HUP2290是以CAS編號1371052-86-6來登錄的化合物，HUP0373是以CAS編號1209725-03-0來登錄的化合物，HUP2298是以CAS編號1170188-20-1來登錄的化合物，HUP2479是以CAS編號1371267-96-7來登錄的化合物，HUP2480是以CAS編號1581030-55-8來登錄的化合物，HUP2490是以CAS編號1370971-77-9來登錄的化合物，HUP2291是以CAS編號1293881-32-9來登錄的化合物，但對於其物性或製造方法並無任何記載，因此，根本沒有實際製造該化合物的紀錄。
進一步更佳是，以下所舉出的化合物。
[表8]
由抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性為高的觀點而言，特佳是下述的化合物。
一方面，本發明的一種態樣中，是關於以下述式(Ib)、(Ic)、(Id)或(Ie)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽：
上述式中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、或甲氧基；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、甲氧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；X是以下述式所表示的基團，
上述式中，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基；
其中，N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺、及N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺除外。
此處，前述N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺，及N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺，分別具有下述構造。
本發明較佳的化合物，可舉出例如下述化合物。
[表10]
尤其是以上述式(Ib)、(Ic)、(Ie)所表示的化合物為佳，而下述的化合物為特佳。
本發明的化合物中，下述的化合物，特別是在抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性為高，故較佳。
雖然本發明的化合物抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的機制尚未十分明確，但由使用剔除DJ-1基因的神經細胞的實驗，確認與先導化合物(lead compound)的HUP0334相異，HUP0381並非僅依賴DJ-1蛋白質的活性，且能發揮強大的藥理效果。
本發明的化合物的抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED50的數值是越小越佳，較佳是1000nM以下，更佳是100nM以下，進一步更佳是10nM以下，特佳是1nM以下。
在本發明中，作為以式(I)所表示的化合物的鹽是包含例如：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、磷酸鹽、亞磷酸鹽、硫酸鹽；甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等磺酸鹽；乙酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、水楊酸鹽等羧酸鹽；或鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽；鎂鹽、鈣鹽等鹼土金屬鹽；銨鹽、烷基銨鹽、二烷基銨鹽、三烷基銨鹽、四烷基銨鹽等銨鹽；等。這些鹽亦可藉由使該化合物與能夠使用於製造醫藥品的酸或鹼接觸來製造而成。
在本發明中以式(I)所表示的化合物或其鹽，可以是無水物，亦可形成水合物等溶劑合物。此處的「溶劑合」是指，於溶液中，溶質分子或離子強力拉附鄰近的溶劑分子，而成為一個分子集團的現象，例如，若溶劑是水，則稱為水合。溶劑合物可以是水合物或非水合物的任一種。作為非水合物，可使用醇(例如，甲醇、乙醇、正丙醇)、二甲基甲醯胺等。
又，本發明的化合物及其鹽，能夠以互變異構型態存在，例如醯胺鍵的酮和烯醇型態，及該等的混合物。互變異構體，在溶液中以互變異構組合的混合物存在。在固體的型態中，通常會有一方的互變異構體較佔優勢。雖然有時記載其中一方的互變異構體，但本發明包含本發明化合物的所有互變異構體。
當所獲得的本發明化合物是游離體時，可依照慣用方法，變換成可形成該化合物的鹽的狀態，或變換成該等的水合物或溶劑合物的狀態。又，當所獲得的本發明化合物，是該化合物的鹽、水合物、或溶劑合物時，則能夠依照慣用方法變換成該化合物的游離體。
本發明是包含以式(I)所表示的化合物的所有同位素。本發明化合物的同位素，是指至少1個的原子，被原子序(質子數)相同、質量數(質子數與中子數的和)相異的原子所取代之物。作為本發明化合物所包含的同位素的例子，有氫原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子等，分別包含2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl等。
尤其，如3H或14C般，會散發放射能而衰變的放射性同位素，能在醫藥品或化合物的體內組織分布試驗等時候有所作用。
穩定同位素並不會發生衰變，存在量幾乎不會改變，亦沒有放射能，故能夠安全地加以使用。本發明化合物的 同位素，藉由將使用於合成的試劑，取代成包含對應的同位素之試劑，而能夠依照慣用方法來進行變換。
又，本發明的化合物亦包含式(I)的化合物的前驅藥(prodrug)。本發明中的「式(I)化合物的前驅藥」是指，一種式(I)化合物的衍生物，其於投藥後，在生理條件下，藉由酵素性或非酵素性的分解，會變換成式(I)的化合物或其藥學上可容許的該等鹽。前驅藥，雖然在投藥至患者時可以是非活性的，但於生物體內是會變換成具有活性的式(I)的化合物存在。若是該技術領域中具有通常知識者，則可立即理解能以衍生物作為前驅藥來使用。
作為前驅藥的例子，並不限定於此，可舉出例如下述前驅藥：在變成特定的pH值時，或藉由酵素作用來轉化成所期望的藥物型態。典型的前驅藥，是會在生物體內生成游離酸的化合物，且具有加水分解性的酯殘基之化合物。這種加水分解性的酯殘基，並不限定於此，例如，包含具有羧基部分之殘基，且該羧基部分的游離氫(例如，當式(I)中的醯胺是具有N-羧基時，其羧基中的游離氫)，是被下述基取代：C1-C4烷基、C2-C7烷醯氧基甲基、具有4~9個碳原子之1-(烷醯氧基)乙基、具有5~10個碳原子之1-甲基-1-(烷醯氧基)-乙基、具有3~6個碳原子之烷氧基羰基氧基甲基、具有4~7個碳原子之1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有5~8個碳原子之1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有3~9個碳原子之N-(烷氧基羰基)胺基甲基、具有4~10個碳原子之1-(N-(烷氧 基羰基)胺基)乙基、3-酞基、4-巴豆內酯基(Crotonolactonyl)、γ-丁內酯-4-基、二-N,N-(C1-C2)烷基胺基(C2-C3)烷基(例如N,N-二甲基胺基乙基)、胺甲醯基-(C1-C2)烷基、N,N-二(C1-C2)烷基胺甲醯基-(C1-C2)烷基、N-六氫吡啶基(C2-C3)烷基、吡咯啶基(C2-C3)烷基、或N-嗎林基(C2-C3)烷基。
<代表性的製造方法>
關於本發明以式(I)所表示的化合物，可依照例如下述的方法來製造而成，但本發明的化合物的製造方法並不限於此。又，可依所需將導入取代基等反應步驟的順序加以更改。此外，作為在製造時所使用的原料化合物，可使用市售品，或可依所需藉由慣用方法來製造。
在表示以下反應步驟的式子中，R1~R10如式(I)中所定義。
以下的反應式中所使用的其他簡稱，是該技術領域中具有通常知識者一般能理解意義的簡稱。
又，以下的一般合成法和實施例中通用的簡稱、化學式所對應的試藥或溶劑的名稱如下所述。
DCM 二氯甲烷
EtOAc 乙酸乙酯
MeCN 乙腈
MeI 碘甲烷
EtI 碘乙烷
i-Pri 碘異丙烷
MeOH 甲醇
NaH 氫化鈉
THF 四氫呋喃
DMF N,N-二甲基甲醯胺
DMSO 二甲亞碸
另一方面，本發明是關於以前述式(I)所表示的化合物的製造方法，其中，包含下述步驟：將以下述式所表示的苯胺，藉由加入過量的氫氧化鈉來製成苯胺的鈉鹽，
上述式中，X如前述式(I)中所述；再與以下述式所表示的化合物進行反應，
上述式中，R1~R5、W、Y、及Z如前述式(I)所表示，Hal是鹵素。
可舉出例如下述的方法。
<製造方法I>
本發明的化合物可依照下述方案來製造。
<步驟I-1>
是藉由將苯乙酮衍生物IIa和2-胺基吡啶衍生物IIb進行聚合，來建構咪唑并吡啶骨架IIc的步驟。該步驟可藉由下述方式來進行：使苯乙酮衍生物IIa於鹼存在的情況下，與2-胺基吡啶衍生物IIb進行反應；例如可參考Bioorganic and medicinal chemistry letters,2002,vol.12,# 22,p.3309-3312所記載的方法等來加以實施。
反應是以下述的反應條件來進行：在鹼存在或不存在的情況下，於溶劑中由室溫升至溶劑沸點，並進一步使用微波合成裝置升至300℃為止。反應結束後，將反應溶液注入水中，藉此使生成物結晶化，並過濾收集沈澱物，加以乾燥，之後再將其使用於接下來的步驟。
作為苯乙酮衍生物，是使用2-溴-4’-硝-苯乙酮、2-溴-3-硝苯乙酮，較佳是2-溴-4’-硝-苯乙酮。
作為2-胺基吡啶衍生物，是使用2-胺基吡啶、3-甲基-2-胺基吡啶、4-甲基-2-胺基吡啶、3-氟-2-胺基吡啶、4-氟-2-胺基吡啶、5-氟-2-胺基吡啶、6-氟-2-胺基吡啶，較佳是2-胺基吡啶，或3-甲基-2-胺基吡啶。進一步更佳是3-甲基-2-胺基吡啶。
雖然反應在鹼不存在的情況下亦能進行，但為了提升產量和提升反應速度，較佳是使用鹼。作為鹼，可舉出：氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫化鈉、氫化鉀、氫化鈣等無機鹼；或三級丁醇鉀(t-BuOK)、三級丁醇鈉(t-BuONa)、吡啶、四乙胺基(TEA)、N,N-二異丙基乙基胺(DIPEA)、二異丙胺鋰(LDA)、雙(三甲矽)醯胺化鋰(LiHMDS)、正丁醇鋰(n-BuLi)等有機鹼；較佳是碳酸鈉。
作為溶劑，可舉出例如：甲苯、二甲苯、正己烷、環己烷、DMF、DMA、EtOAc、DMSO、二氯甲烷、四氯化碳、THF、二噁烷(dioxane)、乙腈等；水、甲醇、乙醇等；及該等溶劑的混合物；較佳是乙腈。
反應溫度可舉出：由室溫升至溶劑沸點的反應溫度、進一步使用微波合成裝置升至300℃為止的反應溫度；較佳是在使用微波合成裝置的狀態下為150℃，而反應時間是15分鐘。
精製是將反應溶液注入水中，藉此使生成物結晶化，並過濾收集沈澱物，再以乙腈-水的混合溶劑來清洗沈澱物，之後於減壓狀態下進行乾燥，並將該經減壓乾燥之物使用於接下來的步驟。
<步驟I-2>
是將硝基還原成胺的催化還原反應。一般的步驟中，也就是在氫氣氣氛下使用鈀碳催化劑(palladium on carbon，Pd/C)的硝基還原反應中，隨著硝基的還原，咪唑并吡啶骨架亦會被還原，故一般的步驟並不適合。因此，可藉由下述方式來進行：使用1,4-環己二烯作為氫的來源，來進行反應；例如，可參考Bioorganic and medicinal chemistry letters,2002,vol.12,# 22,p.3309-3312中所記載的方法等來加以實施。
反應是以下述的反應條件來進行：在鈀碳催化劑的存在下，於溶劑中由室溫升至溶劑沸點，並進一步使用微波合成裝置升至300℃為止。反應結束後，藉由過濾去除鈀碳催化劑，之後將反應溶液餾除，過濾收集所生成的沈澱物，加以乾燥後使用於接下來的步驟。
用於反應的鈀碳催化劑，例如，可使用5%的鈀碳催化劑或10%的鈀碳催化劑，較佳是10%的鈀碳催化劑。
作為氫來源所使用的1,4-環己二烯必須是過量，較佳是10當量。
作為溶劑，可舉出例如甲醇、乙醇等醇系溶劑，較佳是甲醇。
反應溫度，可舉出於溶劑中由室溫升至溶劑沸點、並進一步使用微波合成裝置升至300℃為止的反應條件，較佳是於使用微波合成裝置的狀態下為120℃，而反應時間是10分鐘。
精製，是在反應結束後，藉由過濾去除鈀碳催化劑，之後將反應溶液餾除，過濾收集所生成的沈澱物，由乙酸乙酯-正己烷進行結晶化，然後進行過濾收集，於減壓狀態下乾燥而獲得苯胺IId，並將該苯胺IId用於接下來的步驟。
<步驟I-3>
是醯胺化步驟。
該步驟通常可藉由苯胺與羧酸的脫水聚合反應來合成。然而，步驟I-2所合成的苯胺衍生物IId，對有機溶劑是難溶性，在一般所使用的脫水聚合反應的反應條件下會產生沈澱，因此使得反應的進行遲緩無法結束。因此，發現到將步驟I-2所合成的苯胺衍生物IId，分散於THF溶劑中，之後加入過量的氫化鈉，製作成苯胺的鈉鹽，藉此使其變成溶液，而非懸浮液，因此加入與生成的苯胺鈉鹽等量的羧酸鹵化物IIe，於室溫下進行攪拌。
將反應液注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑，之後將減壓濃縮所獲得的殘留物，以矽凝膠管柱層析法進行精製或再結晶，藉此精製醯胺IIf。
當羧酸鹵化物IIe是2-吡啶衍生物時(當W是N時)，上述的反應中並未獲得生成物。因此，將苯胺與羧酸分散於無水DMF溶劑中，之後加入脫水劑也就是1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽和三乙胺，於室溫下攪拌一天，進一步在50℃持續攪拌一天。將反應液注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑，之後將減壓濃縮所獲得的殘留物，以矽凝膠管柱層析法精製或再結晶，藉此精製2-吡啶衍生物。因此，在製造本發明化合物的方法的較佳態樣中，羧酸鹵化物IIe中的W是C。
<步驟I-4>
是對醯胺IIf的胺基進行烷化的步驟。該步驟可藉由於鹼存在下將醯胺IIf與烷化劑反應來加以實施，例如，可參考Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2008,vol.18,# 20,p.5537-5540所記載的方法等來加以實施。
作為烷化劑，可舉出：MeI、EtI、i-PrI等烷基鹵化物；硫酸二甲酯、甲磺酸甲酯、甲苯磺酸甲酯、三氟甲烷磺酸甲酯等磺酸酯；較佳是MeI等烷基鹵化物。
作為鹼，可舉出：氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫化鈉、氫化鉀、氫化鈣等無機鹼；或t-BuOK、t-BuONa、吡啶、TEA、DIPEA、LDA、LiHMDS、n-BuLi等有機鹼；較佳是氫化鈉。
作為溶劑，可舉出例如：甲苯、二甲苯、正己烷、環己烷、DMF、DMA、EtOAc、DMSO、二氯甲烷、四氯化碳、THF、二噁烷、乙腈等、及該等溶劑的混合物；較佳是THF。
[原料化合物的合成]
本發明的化合物的原料化合物的一部分是新穎化合物，這些化合物是以與公知的原料化合物相同的方式進行、或使用公知的方法，而能夠容易地合成。
以上揭示了本發明的式(I)的化合物的製造方法的其中一例，但上述的反應步驟所表示的目的化合物的單離/精製，可應用萃取、濃縮、餾除、結晶化、過濾、再結晶、各種管柱層析等一般化學操作來進行。
一方面，本發明是關於包含本發明的化合物或其藥學上可容許的鹽之醫藥組成物，尤其是關於用來預防及/或治療氧化壓迫相關的疾病之醫藥組成物。在本說明書中，氧化壓迫相關的疾病是指下述疾病：活性氧對生物體內的細胞或臟器所引起的危害，與生物體內系統將活性含氧物質解毒並修復所產生的危害的機能，兩者之間的平衡崩壞，而對細胞或臟器的危害持續攀升，由這樣的氧化壓迫狀態，導致發展成引起發炎或細胞死亡的結果；不限定於此，包含例如：帕金森氏症、阿茲海默症、脊隨小腦萎縮症(SCD)、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症(PSP)、大腦皮質基底核退化症、肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、因腦缺血引起的腦神經損傷(缺血性腦血管 疾病)、腦中風、心臟衰竭、糖尿病、類風濕性關節炎、急性缺血性腦中風、動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、乾眼症、粒線體腦肌肉病變、發炎性腸道疾病、冠狀動脈硬化、克隆氏症、因放射治療引起的黏膜炎、腦缺血、心肌梗塞等。
本發明的醫藥組成物，作為其中一種較佳的態樣，包含以式(Ia)~(Ie)所表示的至少一種的新式化合物。
本發明的醫藥組成物，包含至少一種的本發明的化合物來作為有效成分，但只要對藥理效果沒有負面影響，或不會產生大於使用所帶來的益處的負面影響，可進一步包含其他的本發明化合物及/或公知的抗氧化劑。又，例如可包含藥學上可容許的載體(carrier)、界面活性劑等用來有效達成本發明化合物的治療效果的成分、或賦形劑等其他的任意成分。這些其他成分於該技術領域中為周知，所屬技術領域中具有通常知識者可依照其目的或使用方法，適當地選擇這些成分。
在本說明書中，「藥學上可容許的載體」這個用語，是指一種以上的具相容性的固體或液體的賦形稀釋劑或膠囊化材料，且適合用於對哺乳類投藥。在本說明書中，「可容許」這個用語，是指於一般的使用條件下，藉由不會互相引起使組成物在醫藥的有效性實質上減少的反應的方法，能夠使組成物中的成分與對象化合物加以混合。藥學上可容許的載體，當然必須具有非常高的純度與 非常低的毒性，使得能夠適合投藥至所欲處置的動物為佳，能夠適合投藥至所欲處置的哺乳類更佳。
作為能夠作為藥學上可容許的載體來使用的材料的例子，可舉出：乳糖、葡萄糖、蔗糖等醣類；玉米澱粉、馬鈴薯澱粉等澱粉類；纖維素及羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、甲基纖維素等衍生物；龍鬚膠粉末；麥芽；明膠；滑石；硬脂酸或硬脂酸鎂等固體潤滑劑；硫酸鈣；花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油、植物油、可可油等植物油；丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇等多元醇；海藻酸；如TWEEN般的乳化劑；如卵磷脂般的潤濕劑；著色劑；香料；錠化劑(tableting agent)；穩定劑；抗氧化劑；防腐劑；無熱原水(pyrogen free water)；等張鹽水溶液；及磷酸緩衝液等。
當將本發明的醫藥組成物，作為氧化壓迫引發的疾病的治療劑或預防劑來使用時，其投藥方法可舉出：口服、直腸、非口服(靜脈、肌肉、皮下)、小腦延髓池、陰道內、腹腔內、膀胱內、經皮膚(貼附劑、軟膏、凝膠劑或霜劑等)、經黏膜(口腔用貼劑、栓劑、舌下錠等)、局部(點滴、散劑等)投藥及吸入(口腔內或鼻子噴劑)等。本發明的醫藥組成物的有效成分，也就是本發明的化合物，其具有的特徵之一是可口服投藥。因此，較佳是口服投藥。
作為其投藥型態，可舉出例如：錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、水性和非水性的口服用溶液及懸浮液、 以及非口服用溶液，該非口服用溶液是填充在適合於將投藥量個別分成小份的容器中。又，投藥型態，能夠適合各種投藥方法，包括像是以皮下植入來調節的釋放處方物。
上述的製劑是使用賦形劑、潤滑劑(包覆劑)、黏合劑、裂解劑、穩定劑、矯味矯臭劑、稀釋劑等添加劑，並以周知的方式來製造。
例如，作為賦形劑，可舉出：澱粉、馬鈴薯澱粉、玉米澱粉等澱粉；乳糖；結晶纖維素；磷酸氫鈣等。
作為包覆劑，可舉出例如：乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、蟲膠、滑石、棕櫚蠟、石蠟等。
作為黏合劑，可舉出例如：聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯二醇、及與前述賦形劑相同的化合物。
作為裂解劑，可舉出例如：與前述賦形劑相同的化合物；如交聯羧甲基纖維素鈉、羧基甲基澱粉鈉、交聯聚乙烯吡咯啶酮般經化學修飾後的澱粉/纖維素類。
作為穩定劑，可舉出例如：如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯般的對羥基苯甲酸酯類；如氯丁醇、苯甲醇、苯乙醇般的醇類；氯化烷基二甲基苯甲基銨(benzalkonium chloride)；如苯酚、甲酚般的苯酚類；乙汞硫柳酸鈉；去氫乙酸；及山梨酸。
作為矯味矯臭劑，可舉出例如一般所使用的甜味劑、酸味劑、香料等。
又，作為用來製造液劑的溶劑，能使用乙醇、苯酚、氯甲酚、純水、蒸餾水等。
作為界面活性劑或乳化劑，可舉出例如：聚山梨醇酯80、聚氧乙烯硬脂酸酯40(polyoxyl stearate 40)、聚桂醇(lauromacrogol)等。
又，本發明是一種將對象的氧化壓迫相關疾病進行預防及/或治療的方法，亦關於包含下述步驟之方法：將1種或2種以上的本發明的化合物的有效量，投藥至需要本發明化合物的對象的步驟。當將本發明的醫藥組成物，作為氧化壓迫引發的疾病的治療劑或預防劑來使用時，本發明的化合物或其鹽、或溶劑合物的使用量，是因症狀、年齡、體重、相對的健康狀態、其他投予藥物的存在、投藥方法等而有所差異。例如，對於患者(溫血動物，特別是人類)，一般的有效量，以有效成分(以式(I)所表示的本發明化合物)而言，在口服劑的情況下，相對於體重每1公斤，一天較佳是0.001~1000mg，進一步更佳是相對於體重每1公斤為0.01~300mg，而一天的使用量，例如當對象是人類時，相對於普通體重的成人患者，較佳是在1~800mg的範圍內。在非口服劑的情況下，相對於體重每1公斤，一天較佳是0.001~1000mg，進一步更佳是相對於體重每1公斤為0.01~300mg。較佳是能依照症狀於一天內一次或分成數次來進行投藥。
一方面，本發明又關於一種使用本發明的化合物來抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的方法。該方法包含將1種或2種以上的本發明化合物的有效量，投藥至需要本發明化合物的對象的步驟。
以下，藉由實施例進一步詳細說明本發明，但本發明並不限於該等實施例。
微波反應是使用Biotage股份有限公司製的Initator，並使用壓蓋反應瓶(snap cap vial)來進行。最大輸出的設定，包含冷卻反應容器的空氣，這是為了避免因微波所造成的溫度上升。
合成的化合物的精製是使用Biotage股份有限公司製的Isolera Prime，精製用管柱是使用Biotage公司製的SNAP Cartridge。
質譜數據是使用Waters股份有限公司製的SQ Detector2來獲得。
核磁共振(NMR)分析，是使用JEOL股份有限公司製的JNM-EC500(500MHz)、同公司製造的JNM-ECX400P(400MHz)、或JNM-ECX400(400MHz)來進行，NMR數據是以ppm(part per million)(δ)來表示，並參考源自樣品溶劑的氘鎖定訊號(Deuterium lock signal)。
市售的試藥，不需進一步精製便能使用。室溫是指20~25℃左右的範圍。
所有的非水性反應是在氮氣或氬氣氣氛下，於無水溶劑中加以實施。減壓濃縮或溶劑餾除，是使用旋轉蒸發器。
在化合物的製備中，若有發生不佳的副反應的可能性時，則依所需藉由保護基來保護官能基，於製備目標分子後，再去除前述保護基。保護基的選擇和脫附操作，例如， 是藉由Greene and Wuts,“Protective Groups in Organic Sythesis”(第5版，John Wiley & Sons 2014)所記載的方法來加以實施。
<步驟I-1>
[實施例1]
化合物HUP0360：8-甲基-2-(4-硝苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
將3-甲基-2-胺基吡啶(561μL，8.2mmol)、2-溴-4’-硝基-苯乙酮(1.0g，4.1mmol)、碳酸鈉(318mg，3.0mmol)，加入Biotage股份有限公司製的20mL壓蓋反應瓶中，進一步於室溫添加乙腈(18mL)加以懸浮，並在使用微波合成裝置的狀態下以150℃、反應時間為15分鐘的條件，來進行過熱、攪拌。
冷卻至室溫後，將反應懸浮液注入水中(80mL)，過濾收集析出的生成物，之後以50mL的乙腈：水=1：1的溶液來加以清洗，並於減壓下進行乾燥，藉此獲得黃土色粉末的目標化合物(950mg，91%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.68(3H,s),6.74(1H,t),7.01(1H,d),7.25(1H,s),8.01(1H,d),8.13(2H,d),8.28(2H,d)。
LCMS：m/z 254[M+H]+。
[實施例2]
化合物HUP0358：2-(4-硝苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0360相同的條件，並使用2-胺基吡啶(772mg，8.2mmol)來代替3-甲基-2-胺基吡啶，藉此獲得黃土色粉末的目標化合物(889mg，90%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：6.90(1H,t),7.28(1H,dd),7.59(1H,d),8.20(2H,d),8.27(2H,d),8.54(1H,d),8.62(1H,s)。
LCMS m/z 240[M+H]+。
[實施例3]
化合物A3：7-甲基-2-(4-硝苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0360相同的條件，並使用4-甲基-2-胺基吡啶(443mg，4.1mmol)來代替3-甲基-2-胺基吡啶，藉此獲得黃土色粉末的目標化合物(468mg，92%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.42(3H,s),6.66(1H,d),7.39(1H,s),7.90(1H,s),8.02(1H,d),8.07(2H,d),8.26(2H,d)。
LCMS：m/z 254[M+H]+。
[實施例4]
化合物A4：6-甲基-2-(4-硝苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0360相同的條件，並使用5-甲基-2-胺基吡啶(443mg，4.1mmol)來代替3-甲基-2-胺基吡啶，藉此獲得黃土色粉末的目標化合物(452mg，89%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.34(3H,s),7.08(1H,d),7.54(1H,d),7.90(1H,s),7.93(1H,s),8.08(2H,d),8.27(2H,d)。
LCMS：m/z 254[M+H]+。
[實施例5]
化合物A5：7-甲基-2-(4-硝苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0360相同的條件，並使用6-甲基-2-胺基吡啶(887mg，8.2mmol)來代替3-甲基-2-胺基吡啶，藉此獲得黃土色粉末的目標化合物(441mg，42%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.64(3H,s),6.68(1H,t),7.23(1H,dd),7.57(1H,d),7.89(1H,s),8.15(2H,d),8.31(2H,d)。
LCMS：m/z 254[M+H]+。
[實施例6]
化合物A6：2-(3-硝苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0360相同的條件，並使用2-溴-3’-硝基-苯乙酮(1.0g，4.1mmol)來代替2-溴-4，-硝基-苯乙酮，藉此獲得黃土色粉末的目標化合物(900mg，92%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：6.82(1H,t),7.22(1H,dd),7.55~7.70(2H,m),7.95(1H,s),8.14(2H,d),8.34(2H,d),8.73(1H,s)。
LCMS：m/z 240[M+H]+。
[實施例7]
化合物A7：2-(4-硝苯基)-4-甲基-苯并噁唑。
依照文獻中已知的合成方式(Tetrahedron Letters,2003,vol.44,175-178)，而獲得白色粉末的目標化合物(990mg)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.68(3H,s),7.19(1H,d),7.31(1H,t),7.43(1H,d),8.38(2H,d),8.44(2H,d)。
LCMS：m/z 255[M+H]+。
[實施例8]
化合物HUP2560：1-N-甲基-4-(4-硝苯基)-2-苯基咪唑。
將苯甲脒鹽酸鹽(313.2mg，2.0mmol)、2-溴-4’-硝基-苯乙酮(244.0mg，1.0mmol)、碳酸鉀(552.8mg，4.0mmol)，加入Biotage股份有限公司製的20mL壓蓋反應瓶中，進一步於室溫添加DMF(20mL)加以懸浮，並在使用微波合成裝置的狀態下以180℃、反應時間為30分鐘的條件，來進行過熱、攪拌。
冷卻至室溫後，於水中利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑 後，將減壓濃縮所獲得的殘留物，以管柱層析法進行精製(11g NH矽凝膠，利用20%至100%的乙酸乙酯/己烷溶析)，減壓餾除溶劑，之後於減壓下進行乾燥，藉此獲得4-(4-硝苯基)-2-苯基咪唑(84.1mg，0.32mmol)。
將所獲得的4-(4-硝苯基)-2-苯基咪唑(84.1mg，0.32mmol)，加入10mL的無水THF中進行攪拌，而產生懸浮液，在該懸浮液中加入60%的氫化鈉(20mg，0.5mmol)和MeI(59.8μL，0.96mmol)，於室溫下持續攪拌1個半小時。
於反應液中加入飽和氯化銨水溶液5mL，來停止反應，之後於水中利用乙酸乙酯萃取，並將減壓濃縮所獲得的殘留物，以管柱層析法進行精製(10g矽凝膠，以20~30%的乙酸乙酯/己烷溶析)，減壓餾除溶劑，之後於減壓狀態下進行乾燥，藉此獲得褐色粉末的目標化合物(40.3mg，7%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.79(3H,s),7.42(1H,s),7.47(3H,m),7.66(2H,dd),7.95(2H,d),8.22(2H,d)。
LCMS：m/z 280[M+H]+。
<步驟I-2>
[實施例9]
化合物HUP0361：8-甲基-2-(4-胺苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
將化合物HUP0360(500mg，1.97mmol)、1,4-環己二烯(1.84ml，19.7mmol)、10%的鈀碳催化劑(50mg)，加入Biotage股份有限公司製的20mL壓蓋反應瓶中，進一步於室溫添加甲醇(18mL)加以懸浮，並在使用微波合成裝置的狀態下以130℃、反應時間為10分鐘的條件，來進行過熱、攪拌。
冷卻至室溫後，過濾反應懸浮液，去除10%的鈀碳催化劑。減壓餾除溶劑，由乙酸乙酯-正己烷將油狀物進行結晶化，再過濾收集生成的沈澱，並於減壓下進行乾燥，藉此獲得淡黃色結晶的目標化合物(423mg，96%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.64(3H,s),3.72(2H,brs),6.63(1H,t),6.73(2H,d),6.90(1H,d),7.68(1H,s),7.75(2H,d),7.92(1H,d)。
LCMS：m/z 224[M+H]+。
[實施例10]
化合物HUP0359：2-(4-胺苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0361相同的條件，並使用化合物HUP0358(500mg，2.09mmol)來代替HUP0360，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(372mg，85%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：5.24(2H,drs),6.57(2H,d),6.78(1H,t),7.12(1H,t),7.45(1H,d),7.59(2H,d),8.07(1H,s),8.41(1H,d)。
LCMS：m/z 210[M+H]+。
[實施例11]
化合物B3：7-甲基-2-(4-胺苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0361相同的條件，並使用化合物A3(300mg，1.18mmol)來代替HUP0360，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(236mg，89%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.28(3H,s),5.16(2H,drs),6.55(2H,d),6.62(1H,d),7.21(1H,s),7.55(2H,d),7.98(1H,s),8.28(1H,d)。
LCMS：m/z 224[M+H]+。
[實施例12]
化合物B4：6-甲基-2-(4-胺苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0361相同的條件，並使用化合物A4(100mg，0.39mmol)來代替HUP0360，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(68mg，77%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.22(3H,s),5.17(2H,drs),6.56(2H,d),6.99(1H,d),7.36(1H,d),7.56(2H,d),7.98(1H,s),8.20(1H,s)。
LCMS：m/z 224[M+H]+。
[實施例13]
化合物B5：5-甲基-2-(4-胺苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0361相同的條件，並使用化合物A5(500mg，1.97mmol)來代替HUP0360，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(251mg，57%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.59(3H,s),3.75(2H,drs),6.59(1H,d),6.75(2H,d), 7.50(1H,d),7.62(1H,d),7.61(1H,s),7.80(2H,d)。
LCMS：m/z 224[M+H]+。
[實施例14]
化合物B6：5-甲基-2-(4-胺苯基)-咪唑并[1,2-a]吡啶。
以與化合物HUP0361相同的條件，並使用化合物A6(500mg，2.09mmol)來代替HUP0360，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(313mg，71%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.74(2H,drs),6.66(1H,d),6.76(1H,t),7.16(1H,dd),7.22(1H,t),7.28(1H,d),7.39(1H,s),7.61(1H,d),7.83(1H,s),8.10(1H,d)。
LCMS：m/z 210[M+H]+。
[實施例15]
化合物B7：2-(4-胺苯基)-4-甲基-苯并噁唑(benzoxazole)。
以與化合物HUP0361相同的條件，並使用化合物A7(300mg，1.18mmol)來代替HUP0360，藉此獲得白色粉末的目標化合物(250mg，94%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.64(3H,s),4.01(2H,drs),6.75(2H,d),7.12(1H,d),7.17(1H,t),7.33(1H,d),8.16(2H,d)。
LCMS：m/z 225[M+H]+。
[實施例16]
化合物HUP2559：4-(5,6,7,8-四氫咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯胺。
將HUP0358(50mg，0.21mmol)、10%的鈀碳催化劑(10mg)、1N鹽酸(210μL)加入4ml的甲醇中，於氫氣氣氛下在室溫攪拌16小時。過濾去除鈀碳催化劑後，於濾液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液，利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑後，將減壓濃縮所獲得的殘留物，以矽凝膠管柱層析法(SiO2 10g，利用5%甲醇/氯仿溶析)進行精製，藉此獲得目標化合物(41.8mg，93%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.94(4H,m),2.89(2H,t),3.61(2H,brs),3.93(2H,t),6.68(2H,d),6.92(1H,s),7.52(2H,d)。
LCMS：m/z 214[M+H]+。
[實施例17]
化合物HUP2561：1-N-甲基-4-(4-胺苯基)-2-苯基咪唑。
以與化合物HUP0361相同的條件，並使用化合物HUP2560(40.3mg，0.14mmol)來代替HUP0360，藉此獲得黑色粉末的目標化合物(15.6mg，45%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.74(3H,s),6.71(2H,d),7.41(3H,m),7.64(4H,m)。
LCMS：m/z 250[M+H]+。
<步驟I-3>
[實施例18]
化合物HUP0344：3,4,5-三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
將化合物HUP0361(85.3mg，0.38mmol)加入8ml的無水THF中進行攪拌，而產生懸浮液，在該懸浮液中加入60%的氫化鈉(18.4mg，0.46mmol)，於室溫下持續攪拌10分鐘，藉此成為茶褐色的溶液。於該反應 液中加入3,4,5-三甲氧基苯甲醯氯(87.6mg，0.38mmol)，進一步於室溫下攪拌30分鐘。
於反應液中加入飽和氯化銨水溶液4mL，來停止反應，之後將其注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑後，將減壓濃縮所獲得的殘留物，由乙酸乙酯進行結晶化。過濾收集結晶後，於減壓下進行乾燥，藉此獲得白色粉末的目標化合物(130mg，81%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.50(3H,s),3.70(3H,s),3.85(6H,s),6.76(1H,t),7.01(1H,d),7.27(2H,s),7.79(2H,d),7.94(2H,d),8.30(1H,s),8.33(1H,d),10.18(1H,s)。
LCMS：m/z 835[2M+H]+,418[M+H]+。
[實施例19]
化合物C2：3,4,5-三甲氧基-N-[2-(4-胺苯基)-4-甲基-苯并噁唑基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用化合物B7(78.4mg，1.18mmol)來代替HUP0361，而獲得白色結晶的目標化合物(113mg，77%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.67(3H,s),3.91(3H,s),3.95(6H,s),7.09(2H,s),7.14(1H,d),7.22(1H,t),7.40(1H,d),7.82(2H,d),7.93(1H,s),8.28(2H,d)。
LCMS：m/z 859[2M+Na]+,837[2M+H]+,441[M+Na]+,419[M+H]+。
[實施例20]
化合物HUP0351：3,4-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,4-二甲氧基苯甲醯氯來代替3,4,5-三甲氧基苯甲醯氯，藉此獲得白色結晶的目標化合物(73.1mg，86%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.52(3H,s),3.81(3H,s),3.83(3H,s),6.85(1H,t),7.08(1H,d),7.12(1H,t),7.53(1H,s),7.62(1H,d),7.85(2H,d),7.94(2H,d),8.36(1H,s),8.39(1H,d),10.18(1H,s)。
LCMS：m/z 797[2M+Na]+,775[2M+H]+,388[M+H]+。
[實施例21]
化合物HUP0353：3,5-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,5-二甲氧基苯甲醯氯來代替3,4,5-三甲氧基苯甲醯氯，藉此獲得白色結晶的目標化合物(54.0mg，67%)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.65(3H,s),3.84(6H,s),6.61(1H,t),6.68(1H,t),6.95(1H,d),6.99(2H,s),7.71(2H,d),7.82(1H,s),7.87(1H,s),7.97(2H,d),7.98(1H,dd)。
LCMS：m/z 775[2M+H]+,388[M+H]+。
[實施例22]
化合物HUP0357：3,4,5-三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,4,5-三甲氧基苯甲醯氯與HUP0359，藉此獲得白色結晶的目標化合物(40.4mg，48%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：3.70(3H,s),3.84(6H,s),6.85(1H,t),7.23(1H,dd),7.25(2H,s),7.52(1H,d),7.79(2H,d),7.92(2H,d),8.32(1H,s),8.49(1H,d),10.16(1H,s)。
LCMS：m/z 807[2M+H]+,404[M+H]+。
[實施例23]
化合物HUP0373：3,4-二(氟)-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,4-二氟苯甲醯氯與HUP0359，藉此獲得白色結晶的目標化合物(261.0mg，74%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：6.86(1H,t),7.19(1H,dd),7.52(1H,d),7.56~7.65(2H,m),7.82(2H,d),7.84(1H,m),7.93(2H,d),8.05(1H,dd),8.32(1H,s),8.48(1H,d),10.37(1H,s)。
LCMS：m/z 699[2M+H]+,350[M+H]+。
[實施例24]
化合物HUP0376：1-溴-N-[4-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用1-溴苯甲醯氯與HUP0361，藉此獲得白色結晶的目標化合物(15.0mg，54%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.61(3H,s),6.67(1H,t),6.94(1H,d),7.12~7.18(2H,m),7.21~7.27(1H,m),7.45(2H,d),7.47~7.54(2H,m),7.79(1H,s),7.92(2H,d),7.94(1H,dd)。
LCMS：m/z 815：813：811=1：2：1[2M+H]+,408：406=1：1[M+H]+。
[實施例25]
化合物HUP0377：1-溴-N-[4-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用鄰苯二甲酸酐與HUP0361，藉此獲得白色結晶的目標化合物(32.1mg，38%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：3.28(3H,s),7.10(1H,t),7.43(1H,d),7.56(2H,t),7.67(1H,t),7.82(2H,d),7.90(2H,d),8.03(1H,d),8.30(1H,s),8.4(1H,d)。
LCMS：m/z 765[2M+Na]+,743[2M+H]+,394[M+Na]+,372[M+H]+。
[實施例26]
化合物HUP1345：3,4-二(氟)-N-[4-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,4-二氟苯甲醯氯與化合物B3，藉此獲得白色結晶的目標化合物(28.5mg，35%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.32(3H,s),6.71(1H,d),7.31(1H,s),7.61(1H,dd),7.80(2H,d),7.85(1H,m),7.91(2H,d),8.03(1H,m),8.21(1H,s),8.38(1H,d),10.36(1H,s)。
LCMS：m/z 725[2M+H]+,364[M+H]+。
[實施例27]
化合物HUP1346：3,4-二(氟)-N-[4-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,4-二氟苯甲醯氯與化合物B4，藉此獲得白色結晶的目標化合物(31.1mg，65%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.24(3H,s),7.07(1H,d),7.44(1H,d),7.58(1H,dd),7.80~7.92(5H,m),8.09(1H,m),8.23(1H,s),8.28(1H,s),10.59(1H,s)。
LCMS：m/z 749[2M+Na]+,727[2M+H]+,386[M+Na]+,364[M+H]+。
[實施例28]
化合物HUP1347：3,4-二(氟)-N-[4-(5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,4-二氟苯甲醯氯與化合物B5，藉此獲得白色結晶的目標化合物(50.0mg，61%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.60(3H,s),6.74(1H,d),7.18(1H,dd),7.43(1H,d),7.61(1H,ddd),7.81(2H,d),7.86(1H,m),8.01(2H,d),8.03(1H,m),10.36(1H,s)。
LCMS：m/z 727[2M+H]+,364[M+H]+。
[實施例29]
化合物HUP0382：3-茀基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3-氟苯甲醯氯與化合物HUP0361，藉此獲得白色結晶的目標化合物(33.6mg，43%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.65(3H,s),6.67(1H,t),6.94(1H,d),7.24(1H,m),7.46(1H,dd),7.60(1H,dd),7.63(1H,dd),7.71(2H,d),7.82(1H,s),7.92~7.99(4H,m)。
LCMS：m/z 713[2M+Na]+,691[2M+H]+,346[M+H]+。
[實施例30]
化合物HUP1348：3,4-二(氟)-N-[3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用3,4-二氟苯甲醯氯與化合物B6，藉此獲得白色結晶的目標化合物(72.3mg，86%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：6.73(1H,t),7.05~7.15(2H,m),7.39(1H,t),7.50(2H,d),7.60(1H,dd),7.64(1H,d),7.81(1H,s),7.83(1H,d),8.05(1H,d),8.20(1H,s),8.66(1H,s)。
LCMS：m/z 721[2M+Na]+,699[2M+H]+,372[M+Na]+,372[M+H]+。
[實施例31]
化合物HUP0383：2-氟-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用2-氟苯甲醯氯與HUP0361，藉此獲得白色結晶的目標化合物(70.9mg，62%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.66(3H,s),6.67(1H,t),6.95(1H,d),7.20(1H,dd),7.32(1H,t),7.52(1H,dd),7.76(2H,d),7.83(1H,s),7.98(1H,s),7.99(2H,d),8.19(1H,ddd),8.53(1H,d)。
LCMS：m/z 691[2M+H]+,346[M+H]+。
[實施例32]
化合物HUP0384：1,4-二(氟)-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0344相同的條件，並使用2,4-二氟苯甲醯氯與HUP0361，藉此獲得白色結晶的目標化合物(58.7mg，72%)。
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ：2.66(3H,s),6.69(1H,t),6.90~6.98(2H,m),7.05(1H,t), 7.73(2H,d),7.84(1H,s),7.98(1H,s),8.00(2H,d),8.22(1H,dd),8.44(1H,d)。
LCMS：m/z 749[2M+Na]+,727[2M+H]+,364[M+H]+。
[實施例33]
化合物HUP0381：4-茀基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
將化合物HUP0361(50.0mg，0.22mmol)加入4ml的無水THF中攪拌，而產生懸浮液，在該懸浮液中加入60%的氫化鈉(10mg，0.24mmol)，於室溫下持續攪拌10分鐘，藉此成為茶褐色的溶液。於該反應液中加入4-氟苯甲醯氯(30μL，0.25mmol)，進一步於室溫下攪拌30分鐘。
藉由薄層色層分析(Thin layer chromatography，TLC)確認反應結束後，於反應液中加入飽和氯化銨水溶液5mL，來停止反應，之後將其注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗。以無水硫酸鈉乾燥，之後進行過濾，將濾液減壓濃縮所獲得的沈澱物以甲醇清洗，然後進行減壓乾燥，藉此獲得白色粉末的目標化合物(29.6mg，38%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.66(3H,s),6.69(1H,t),6.96(1H,d),7.18(2H,t),7.71(2H,d),7.81(1H,s),7.84(1H,s),7.92(2H,m),7.98(1H,s),8.00(2H,d)。
LCMS：m/z 713[2M+Na]+,691[2M+H]+,368[M+Na]+,346[M+H]+。
[實施例34]
化合物HUP0354：3,4-二(氟)-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用3,4-二氟苯甲醯氯來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得白色結晶的目標化合物(48.9mg，68%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.64(3H,s),6.67(1H,dd),6.93(1H,t),7.29(1H,m),7.55~7.85(6H,m),7.95~8.00(3H,m)。
LCMS：m/z 749[2M+Na]+,364[M+H]+。
[實施例35]
化合物HUP0380：N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用苯甲醯氯來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得白色結晶的目標化合物(38.5mg，52%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.64(3H,s),6.67(1H,t),6.93(1H,d),7.48(2H,t),7.54(1H,t),7.72(2H,d),7.81(1H,s),7.88(2H,d),7.94~8.02(4H,m)。
LCMS：m/z 677[2M+Na]+,655[2M+H]+,350[M+Na]+,328[M+H]+。
[實施例36]
化合物HUP0355：3,5-二(氟)-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用3,5-二氟苯甲醯氯來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得白色結晶的目標化合物(40.3mg，58%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.60(3H,s),6.76(1H,t),7.01(1H,d),7.52(1H,t), 7.68(2H,d),7.82(2H,d),7.95(2H,d),8.31(1H,s),8.34(1H,d),10.41(1H,s)。
LCMS：m/z 749[2M+Na]+,364[M+H]+。
[實施例37]
化合物HUP2494：4-三氟甲基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用4-三氟甲基苯甲醯氯(30.0μl，0.20mmol)來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得白色結晶的目標化合物(51.5mg，65%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),6.79(1H,dd),7.04(1H,d),7.88(2H,d),7.93(2H,d),7.98(2H,d),8.18(2H,d),8.34(1H,s),8.37(1H,d),10.57(1H,s)。
LCMS：m/z 813[M+Na]+,791[M+H]+,396[M+H]+。
[實施例38]
化合物HUP2293：N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-3-吡啶甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用3-吡啶苯甲醯氯(35.6mg，0.20mmol)來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得黃色粉末的目標化合物(39.6mg，60%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：2.61(3H,s),6.81(1H,dd),7.09(1H,d),7.60(1H,dd),7.83(2H,d),7.95(2H,d),8.15(1H,s),8.26(1H,d),8.38(1H,d),8.73(1H,d),9.11(1H,s)。
LCMS：m/z 679[2M+Na]+,657[2M+H]+,329[M+H]+。
[實施例39]
化合物HUP2481：4-疊氮-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用4-疊氮苯甲醯氯(203.3mg，1.12mmol)來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(332.6mg，80%)。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：2.66(3H,s),7.10(1H,dd),7.22(2H,d),7.41(1H,d),7.88(2H,d),7.95(2H,d),8.01(2H,d),8.32(1H,s),8.34(1H,d)。
LCMS：m/z 369[M+H]+。
[實施例40]
化合物HUP2299：3-甲基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用3-甲基苯甲醯氯(203.3mg，1.12mmol)來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得黃褐色粉末的目標化合物(26.0mg，38%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.35(3H,s),2.59(3H,s),6.75(1H,dd),7.01(1H,d),7.40(2H,m),7.74(1H,d),7.76(1H,s),7.83(2H,d),7.92(2H,d),8.29(1H,d),8.33(1H,d),10.26(1H,s)。
LCMS：m/z 683[2M+H]+；342[M+H]+。
[實施例41]
化合物HUP0356：3,4,5-三甲氧基-N-[4-(5,6,7,8-四氫咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯甲脒]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用3,4,5-三甲氧基苯甲醯氯與HUP2559，藉此獲得白色結晶的目標化合物(26.7mg，33%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：1.85(4H,m),2.72(2H,m),3.70(3H,s),3.83(6H,s),3.92(2H,m),7.24(2H,s),7.38(1H,s),7.66(4H,s),10.06(1H,s)。
LCMS：m/z 815[2M+H]+,408[M+H]+。
[實施例42]
化合物HUP2297：4-氟-N-[4-(N-甲基-2-苯基咪唑-4-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用4-氟苯甲醯氯與HUP2561，藉此獲得白色粉末的目標化合物(12.3mg，55%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：3.78(3H,s),7.38(2H,dd),7.46(1H,m),7.52(2H,dd),7.71(1H,s),7.76(6H,m),8.05(2H,dd),10.28(1H,s)。
LCMS：m/z 743[2M+H]+,372[M+H]+。
[實施例43]
化合物HUP2406：N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-2-吡啶甲醯胺。
將HUP0361(419.1mg，1.88mmol)、吡啶甲酸(462.8mg，3.76mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽(865.0mg，4.52mmol)、三乙胺(657μl，9.40mmol)，加入18.8ml的無水DMF中，於室溫下攪拌一天，進一步於50℃持續攪拌一天。
將反應液注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑後，將減壓濃縮所獲得的殘留物，以矽凝膠管柱層析法(SiO2 12g，利用10%甲醇/氯仿溶析，之後進一步以50%乙酸乙酯/己烷溶析)進行精製，藉此獲得黃色粉末的目標化合物(15.1mg，2.4%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.54(3H,s),6.79(1H,dd),7.04(1H,d),7.69(1H,ddd),7.97(2H,d),8.00(2H,d),8.09(1H,ddd),8.18(1H,d),8.34(1H,s),8.37(1H,d),8.75(1H,d),10.70(1H,s)。
LCMS：m/z 679[2M+Na]+,657[2M+H]+,329[M+H]+。
[實施例44]
化合物HUP2493：4-氟-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-2-吡啶甲醯胺。
以與化合物HUP2406相同的條件，並使用4-氟吡啶甲酸來代替吡啶甲酸，藉此獲得淡橙色粉末的目標化合物(80.8mg，52%)。
1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ：2.62(3H,s),6.83(1H,dd),7.11(1H,d),7.83(1H,ddd),7.90(2H,d),7.98(2H,d),8.17(1H,s),8.29(2H,m),8.62(1H,d)。
LCMS：m/z 693[2M+H]+,347[M+H]+。
[實施例45]
化合物HUP2495：4-氰基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-2-吡啶甲醯胺。
以與化合物HUP2406相同的條件，並使用4-氰基吡啶甲酸(133.3mg，0.90mmol)來代替吡啶甲酸，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(114mg，72%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),6.79(1H,dd),7.05(1H,d),7.98(1H,ddd), 8.01(2H,d),8.31(1H,dd),8.36(1H,s),8.37(1H,d),8.60(1H,dd),9.22(1H,dd),10.90(1H,s)。
LCMS：m/z 729[2M+Na]+,707[2M+H]+,354[M+H]+。
[實施例46]
化合物HUP2507：4-甲基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-2-吡啶甲醯胺。
以與化物HUP2406相同的條件，並使用4-甲基吡啶甲酸(133.3mg，0.90mmol)來代替吡啶甲酸，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(66.9mg，41%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.43(3H,s),2.53(3H,s),6.79(1H,dd),7.04(1H,d),7.89(1H,d),7.96(2H,d),7.99(2H,d),8.08(1H,d),8.34(1H,s),8.37(1H,d),8.59(1H,s),10.64(1H,s)。
LCMS：m/z 707[2M+Na]+,685[2M+H]+,343[M+H]+。
[實施例47]
化合物HUP2508：N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-2,3-嘧啶甲醯胺。
以與化合物HUP2406相同的條件，並使用4-嘧啶甲酸(123.4mg，0.90mmol)來代替吡啶甲酸，藉此獲得棕色粉末的目標化合物(80.5mg，51%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),6.79(1H,dd),7.05(1H,d),7.99(2H,d),8.01(2H,d),8.16(1H,dd),8.35(1H,s),8.37(1H,d),9.15(1H,d),9.44(1H,d),10.91(1H,s)。
LCMS：m/z 659[2M+H]+,330[M+H]+。
[實施例48]
化合物HUP2492：4-(2-吡啶甲醯胺)-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0381相同的條件，並使用4-硝基苯甲醯氯(74.2mg，0.40mmol)來代替4-氟苯甲醯氯，藉此獲得黃色粉末的HUP2479也就是4-硝基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺(108.3mg，73%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),6.79(1H,dd),7.05(1H,d),7.87(2H,d),7.99(2H,d),8.21(2H,d),8.35(1H,s),8.37(1H,m),8.38(2H,d),10.65(1H,s)。
LCMS：m/z 373[M+H]+。
接下來，將HUP2479(60mg，0.16mmol)、1,4-環己二烯(150μl，1.6mmol)、10%的鈀碳催化劑(6mg)，加入Biotage股份有限公司製的5mL壓蓋反應瓶中，進一步於室溫添加甲醇(2mL)加以懸浮，並在使用微波合成裝置的狀態下以130℃、反應時間為10分鐘的條件，來進行過熱、攪拌。冷卻至室溫後，加熱過濾反應懸浮液，去除10%的鈀碳催化劑。減壓餾除溶劑，將結晶由甲醇進行結晶化，過濾收集生成的沈澱，並於減壓下進行乾燥，而獲得白色結晶的HUP2480也就是4-胺基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺(18.1mg，33%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),5.76(2H,s),6.61(2H,d),6.78(1H,dd),7.03(1H,d),7.74(2H,d),7.83(2H,d),7.91(2H,d),8.30(1H,s),8.36(1H,d),9.83(1H,s)。
LCMS：m/z 685[2M+H]+,343[M+H]+。
之後，將HUP2480(152mg，0.44mmol)、吡啶甲酸(137mg，0.82mmol)、1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳二醯亞胺鹽酸鹽(157.2mg，0.82mmol)、1-羥苯并三唑(125.5mg，0.82mmol)、N,N-二異丙基乙基胺(289μl，1.7mmol)，加入5ml的無水DMF中，於室溫下持續攪拌4小時。將減壓濃縮所獲得的殘留物，以水、甲醇清洗，再進行減壓乾燥，藉此獲得淡藍色粉末的目標化合物HUP2492(124.6mg，63%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.54(3H,s),6.79(1H,dd),7.04(1H,d),7.71(1H,ddd),7.88(2H,d),7.97(2H,d),8.02(2H,d),8.10(3H,m),8.20(1H,d),8.33(1H,s),8.37(1H,d),8.77(1H,dd),10.26(1H,s),10.92(1H,s)。
LCMS：m/z 895[2M+H]+,448[M+H]+。
[實施例49]
化合物HUP2483：3-胺基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
將3-硝基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺(60mg，0.16mmol)、1,4-環己二烯(150μl，1.6mmol)、10%的鈀碳催化劑(6mg)，加入Biotage股份有限公司製的5mL壓蓋反應瓶中，進一步於室溫添加甲醇(2mL)加以懸浮，並在使用微波合成裝置的狀態下以130℃、反應時間為10分鐘的條件，來進行過熱、攪拌。
冷卻至室溫後，加熱過濾反應懸浮液，去除10%的鈀碳催化劑。將減壓濃縮溶劑所獲得的殘留物，以乙酸乙酯：己烷=1：4的溶液清洗，再進行減壓乾燥，藉此獲得白色結晶的目標化合物(37.8mg，69%)。
1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),5.33(2H,bs),6.75(1H,dd),6.80(1H,dd),7.05(1H,d),7.08(1H,d),7.11(1H,s),7.16(1H,dd),7.85(2H,d),7.93(2H,d),8.32(1H,s),8.37(1H,d),10.14(1H,s)。
LCMS：m/z 685[2M+H]+,343[M+H]+。
[實施例50]
化合物HUP2491：2-胺基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
將2-硝基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺(60mg，0.16mmol)、1,4-環己二烯(150μl，1.6mmol)、10%的鈀碳催化劑(6mg)，加入Biotage股份有限公司製的5mL壓蓋反應瓶中，進一步於室溫添加甲醇(2mL)加以懸浮，並在使用微波合成裝置的狀態下以130℃、反應時間為10分鐘的條件，來進行過熱、攪拌。
冷卻至室溫後，加熱過濾反應懸浮液，去除10%的鈀碳催化劑。將減壓濃縮溶劑所獲得的殘留物，以乙酸乙酯：己烷=1：4的溶液清洗，再進行減壓乾燥，藉此獲得白色結晶的目標化合物(39.0mg，42%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),6.36(2H,s),6.60(1H,dd),6.78(2H,m),7.04(1H,d),7.21(1H,dd),7.65(1H,d),7.81(2H,d),7.93(2H,d),8.33(1H,s),8.37(1H,d),10.10(1H,s)。
LCMS：m/z 685[2M+H]+,343[M+H]+。
<步驟I-4>
[實施例51]
化合物HUP0352：3,4,5-三甲氧基-N-甲基[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
將HUP0344(43.6mg，0.10mmol)，加入2mL的無水DMF中進行攪拌，而產生懸浮液，在該懸浮液中加入60%的氫化鈉(5.0mg，0.12mmol)和MeI(7.8μL，0.12mmol)，於室溫下持續攪拌1個小時。於反應液中加入飽和氯化銨水溶液5mL，來停止反應，之後於水中利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑後，將減壓濃縮所獲得的殘留物，以管柱層析法(矽凝膠10g，利用50%至100%的乙酸乙酯/己烷溶析)進行精製，減壓餾除溶劑，之後再於減壓下進行乾燥，藉此獲得無色油狀物的目標化合物HUP0352(31.3mg，69%)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ：2.63(3H,s),3.51(3H,s),3.63(6H,s),3.78(3H,s),6.60(2H,s),6.67(1H,t),6.94(1H,d),7.10(2H,d),7.78(1H,s),7.85(2H,d),7.96(1H,d)。
LCMS：m/z 863[2M+H]+,432[M+H]+。
[實施例52]
化合物HUP0374：3,4-二氟-N-甲基[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0352相同的條件，並使用HUP0354來代替HUP0344，藉此獲得無色油狀物的目標化合物(16.3mg，78%)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：2.62(3H,s),3.50(3H,s),6.68(1H,t),6.85~6.98(2H,m),7.04(1H,m),7.07(2H,d),7.22(1H,m),7.79(1H,s),7.86(2H,d),7.97(1H,d)。
LCMS：m/z 777[2M+Na]+,755[2M+H]+,400[M+Na]+,378[M+H]+。
[實施例53]
化合物HUP0375：3,4-二氟-N-甲基[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0352相同的條件，並使用HUP0373來代替HUP0344，藉此獲得無色油狀物的目標化合物(13.4mg，25%)。
1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ：3.50(3H,s),6.77(1H,t),6.91(1H,dd),7.03(1H,m), 7.08(2H,d),7.15~7.26(2H,m),7.59(1H,d),7.82(1H,s),7.84(2H,d),8.10(1H,d)。
LCMS：m/z 749[2M+Na]+,727[2M+H]+,386[M+Na]+,364[M+H]+。
[實施例54]
化合物HUP0378：3,4-二氟-N-乙基[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0352相同的條件，並使用碘乙烷來代替碘甲烷，藉此獲得無色油狀物的目標化合物(4.2mg，27%)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：1.23(3H,t),3.99(3H,q),6.79(1H,t),6.90(1H,dd),7.03(1H,m),7.08(2H,d),7.15~7.26(2H,m),7.61(1H,d),7.82(1H,s),7.83(2H,d),8.12(1H,d)。
LCMS：m/z 777[2M+Na]+,755[2M+H]+,400[M+Na]+,378[M+H]+。
[實施例55]
化合物HUP0379：3,4-二氟-N-異丙基[4-咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
以與化合物HUP0352相同的條件，並使用碘異丙烷來代替碘甲烷，藉此獲得無色油狀物的目標化合物(13.3mg，23%)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.22(6H,d),5.06(1H,m),6.78(1H,t),6.87(1H,dd),6.98(1H,m),7.06(2H,d),7.12~7.20(2H,m),7.59(1H,d),7.82(1H,s),7.84(2H,d),8.11(1H,d)。
LCMS：m/z 805[2M+Na]+,783[2M+H]+,414[M+Na]+,392[M+H]+。
<步驟I-3>
[實施例56]
化合物HUP2290：4-氰基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
將化合物HUP0361(44.7mg，0.20mmol)，加入5mL的無水THF中進行攪拌，而產生懸浮液，在該懸浮 液中加入60%的氫化鈉(20mg，0.5mmol)，於室溫下持續攪拌10分鐘，藉此變成棕褐色的液體。在該反應液中加入4-氰基苯甲醯氯(33.1mg，0.20mmol)，進一步於室溫下攪拌1小時。
於反應液中加入飽和氯化銨水溶液5mL，來停止反應，之後將其注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，將減壓濃縮所獲得的殘留物，以水、乙酸乙酯：己烷=1：1的溶液清洗，再進行減壓乾燥，藉此而獲得白色粉末的目標化合物(21.2mg，30%)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：2.53(3H,s),6.81(1H,dd),7.07(1H,d),7.89(2H,d),7.98(2H,d),8.04(2H,d),8.13(2H,d),8.36(1H,s),8.38(1H,d),10.59(1H,s)。
LCMS：m/z 353[M+H]+。
[實施例57]
化合物HUP2292：N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]吡啶甲醯胺。
將化合物HUP0361(44.7mg，0.20mmol)，加入5mL的無水THF中進行攪拌，而產生懸浮液，在該懸浮液中加入60%的氫化鈉(20mg，0.5mmol)，於室溫下持續攪拌10分鐘，藉此變成棕褐色的液體。在該反應液 中加入4-吡啶苯甲醯氯(35.6mg，0.20mmol)，進一步於室溫下攪拌1小時。
於反應液中加入飽和氯化銨水溶液5mL，來停止反應，之後將其注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，將減壓濃縮所獲得的殘留物，以水、乙酸乙酯：己烷=3：7的溶液清洗，再進行減壓乾燥，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(39.6mg，60%)。
1H-NMR(500MHz，CD3OD)δ：2.62(3H,s),6.82(1H,dd),7.10(1H,d),7.84(2H,d),7.92(2H,d),7.98(2H,d),8.16(1H,s),8.27(1H,d),8.75(2H,d),10.59(1H,s)。
LCMS：m/z 679[2M+Na]+,657[2M+H]+,329[M+H]+。
[實施例58]
化合物HUP2298：4-甲基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺。
將化合物HUP0361(44.7mg，0.20mmol)，加入5mL的無水THF中進行攪拌，而產生懸浮液，在該懸浮液中加入60%的氫化鈉(20mg，0.5mmol)，於室溫下持續攪拌10分鐘，藉此變成棕褐色的液體。在該反應液 中加入4-甲基苯甲醯氯(26.42μl，0.20mmol)，進一步於室溫下攪拌1小時。
於反應液中加入飽和氯化銨水溶液5mL，來停止反應，之後將其注入水中，再利用乙酸乙酯萃取，並將有機層以飽和食鹽水清洗，再以硫酸鈉乾燥。過濾去除乾燥劑後，將減壓濃縮所獲得的殘留物，以乙酸乙酯：己烷=1：4的溶液清洗，再進行減壓乾燥，藉此獲得淡黃色粉末的目標化合物(51.8mg，76%)。
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：2.40(3H,s),2.54(3H,s),6.79(1H,dd),7.04(1H,d),7.35(2H,d),7.87(2H,d),7.91(2H,d),7.96(2H,d),8.33(1H,s),8.36(1H,d),10.25(1H,s)。
LCMS：m/z 705[2M+Na]+,683[2M+H]+,342[M+H]+。
[實施例59]相對於在培養細胞的過氧化氫濃度，DJ-1鍵結化合物的抑制細胞死亡效果
(1)剔除DJ-1的神經細胞的製備
為了評估DJ-1蛋白質表現對於抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的效果的作用，是使用CRISPR-Cas9系統，製作出DJ-1-KO SH-SY5Y細胞來使用，其中，該DJ-1-KO SH-SY5Y細胞，是由會高度表現DJ-1蛋白質的人類多巴胺生成神經細胞SH-SU5Y，將DJ-1基因剔除而成。
藉由使用該細胞破碎物的西方點墨法，由所製成的細胞確認到其DJ-1蛋白質的表現已消失(第1圖)。
(2)測定抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的效果
於人類多巴胺生成神經細胞SH-SY5Y的培養液中，投予以0.1%DMSO溶解的化合物，並培養24小時，之後添加200μM的H2O2於培養物中並培養3小時，再以MTS試驗(MTS(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium)assay)來測定細胞死亡的比率。為了進行比較，使用剔除了DJ-1基因之DJ-1-KO人類多巴胺生成神經細胞SH-SY5Y，並實施相同的方法。
作為先前技術，已報告一種與DJ-1鍵結而表現抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性之化合物，其是與本發明具有相同核心的3,4,5-三甲氧基衍生物(CAS No：724737-74-0)(專利文獻1)。以本發明中的化合物編號HUP0344來合成該化合物，並作為陽性化合物，調查其抑制氧化壓迫的細胞死亡的活性，結果與專利文獻1所記載的幾乎相同，在5μM的濃度顯示ED50，但並未具有ED90值。
另一方面，本發明的4-氟衍生物(HUP0381)，在1nM以下的濃度達到抑制氧化壓迫的細胞死亡的活性ED50，進一步在10nM以下的濃度達到ED90，因此證 明，相較於三甲氧基衍生物，本發明的化合物的活性大約是1000倍以上的高活性。
又，第4至第15圖中，表示下表所記載的化合物的抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果的試驗結果。縱軸是細胞生存活性比。此外，C2和HUP1348並未顯示出抑制氧化壓迫引發的神經細胞死亡的效果(無數據)。
[表13-1]
[表13-2]
[表13-3]
[表13-4]
下述的市售帕金森氏症治療藥物，在上述MTS試驗中並無顯示具有抑制細胞死亡的效果。
Dopamine(神經傳導物質)
L-DOPA(多巴胺補充劑)
Rasagiline(單胺氧化酶(MAO)-B抑制劑)
Tolcapone(鄰苯二酚-O-甲基轉移酶(COMT)抑制劑)
Istradefyline(腺核苷A2A受體拮抗劑)
Amantadine(多巴胺釋放促進劑)
L-DOPS(正腎上腺素補充劑)
Zonisamide(左旋多巴釋放增加劑)
Donepezil(乙醯膽鹼水解酵素抑制劑)
Rivastigmine(乙醯膽鹼水解酵素抑制劑)
Safinamide(MAO-B抑制劑)
Ropinirole(多巴胺促效劑)
又，多重激酶抑制劑的SU5416，在上述MTS試驗中亦無顯示具有抑制細胞死亡的效果。
類藥性的評估(吸收、分佈、代謝、排泄、毒性(ADMET)的評估)
已被確認為強烈活性的衍生物，為了選出能夠進行在細胞株及動物模型的藥效和安全性評估的化合物，而進行ADMET的評價(Bleicher NATURE REVIEWS 2003)。
各試驗的分析系統是使用： HPLC系統：高性能液相層析LC-20A系列(島津製作所股份有限公司)；質量分析裝置：API 4000(AB Sciex Pte.股份有限公司)；盤式分析儀(plate reader)：Molecular Devices SpectraMax 190。
[實施例60]代謝穩定性試驗
由XenoTech有限公司取得人類肝臟微粒體(Mixed Gender，Pool of 50 livers)及小鼠肝臟微粒體(CD1)。
試驗是以n=2來加以實施。
化合物是使用1mmol/L DMSO溶液。
<代謝穩定性試驗方法>
將化合物的1mmol/L DMSO溶液，以乙腈稀釋成10μmol/L，之後以6.5mmol/L β-NADPH溶液進一步稀釋成200nmol/L。
分別添加0.2mg protein/mL的肝臟微粒體溶液50μL於該溶液50μL，之後以37℃一邊振盪一邊進行培養35分鐘。進行培養後，添加甲醇400μL，使反應停止。將溶液靜置於-20℃約30分鐘，之後以4℃、3000rpm的條件進行離心分離約10分鐘。之後，將其上清液利用液相層析質譜儀(LC/MS/MS)來進行測定，計算出化合物的殘留率。
[表14]
實施評估後的化合物，在人類肝臟微粒體中皆為穩定，但醯胺的N-甲基衍生物HUP0374，在小鼠肝臟微粒體中的代謝穩定性低，而被判定為高風險。
[實施例61]
<CYP抑制試驗>
由XenoTech有限公司取得人類肝臟微粒體(Mixed Gender，Pool of 50 livers)。
試驗是以n=1來加以實施。
(試驗所用的基質、阻斷劑)
作為各CYP的基質，是使用：
CYP1A2 乙氧乙醯胺苯(phenacetin)
CYP2B6 安非他酮鹽酸鹽 (bupropion hydrochloride)
CYP2C8 阿莫待喹二鹽酸鹽二水合物 (amodiaquine dihydrochloride dihydrate)
CYP2C9 二克氯吩鈉(diclofenac sodium)
CYP2C19 (S)-美芬妥因((S)-mephenytoin)
CYP2D6 丁呋洛爾(bufuralol)
CYP3A4 咪達唑侖(midazolam)。
又，作為各CYP的抑制劑，是使用：
CYP1A2 7,8-苯并黃酮(α-naphthoflavone)
CYP2C8 槲黃素二水合物
CYP2C9 磺胺苯吡唑(sulfaphenazole)
CYP2C19 (S)-(+)-N-3-苯甲基尼凡諾 ((S)-(+)-N-3-Benzylnirvanol)
CYP2D6 無水奎尼丁(quinidine anhydrous)
CYP3A4 克康那唑(ketoconazole)
作為機制性抑制(Mechanism-based
inhibition，MBI)測定用的阻斷劑，是使用：
CYP1A2 呋拉茶碱(furafylline)
CYP2C9 蘇普芬(suprofen)
CYP2B6/2C19 鹽酸梯可匹定
CYP2D6 帕羅西汀(paroxetine)馬來酸鹽
CYP3A4 紅黴素
反應溶液如下所述：
微粒體緩衝混合液組成 液量
0.5mol/L 磷酸鉀緩衝液(pH7.4) 12mL
165mmol/L 氯化鎂水溶液 1.2mL
水 34.65mL
20mg protein/mL 人類肝臟微粒體 150μL
(反應液中的最終濃度是0.05mg protein/mL)。
<CYP抑制試驗方法>
化合物或DMSO(對照組)，將抑制劑混合液以DMSO階段式地稀釋成1倍、5倍、25倍、125倍，之後分別將各溶液5μL與微粒體緩衝混合液295μL混合。
將該溶液30μL與微粒體緩衝混合液50μL混合，並添加13mM β-NADPH水溶液10μL。當需要預培養時，則在添加前在37℃培養30分鐘。
培養後，添加甲醇50μL，來停止反應，並進行稀釋，之後以3000rpm、4℃的條件來進行離心分離10分鐘，取上清液作為注入LC/MS/MS的樣品。
<計算殘留活性率及MBI判定>
由在各井孔(well)中的代謝生成物-面積比與對照組的代謝生成物-面積比，來計算殘留活性率，由濃度曲線來算出IC50的數值。當預培養的IC50的數值的變動是2倍以上時，則判定為MBI(+)。又，當預培養的IC50的數值的變動是2倍以下時，則判定為MBI(+/-)。
[表15]
試驗的結果，所有的化合物，即使是以能展現藥效的濃度的100倍高濃度條件，並未觀察到抑制各CYP的情況。然而，HUP0380及HUP0373對於CYP1A2有出現MBI的判定。
當化合物有出現MBI判定時，藉由投予該化合物，會出現累積性的CYP抑制，其結果，會有由於併用藥的濃度上升等導致出現毒性的情況。
[實施例62]平行人工膜穿透性試驗(parallel artificial membrane permeability assay，PAMPA)
人工膜是使用pION股份有限公司製的GIT-0 Lipid(GIT：胃腸道(Gastrointestinal tract))。緩衝液是使用pION股份有限公司製的ASB-7.4 Acceptor Sink Buffer或ASB-5.0 Acceptor Sink Buffer。
<人工膜穿透性試驗方法>
將稀釋的化合物加在供體(Donor)側，在室溫下培養4小時後，測定受體(Acceptor)和Donor光譜。使用PAMPA解析軟體，由該結果計算出膜穿透係數(Pe值)。
[表16]
雖然HUP2495因溶解度不足而無法進行評估，但其他進行了評估的化合物，在pH5.0及pH7.4這兩種條件下皆顯示了良好的膜穿透性。
[實施例63]水溶性溶液沈澱法(DMSO法)
人工空腹時人工腸液(FaSSIF)，是取自Celeste股份有限公司。
<試驗方法>
將稀釋為100倍的化合物溶液，在96井培養盤(96-well plate)中，各以15μL，分注於4井，之後置入離心蒸發器，以40℃、90分鐘的條件來進行蒸發乾燥固化。確認乾燥固化後，添加DMSO 3μL，再次溶解，之後添加FaSSIF 300μL，於25℃的恆溫振盪機進行振盪90分鐘後，在同溫度靜置16小時以上。離心分離後，以96爪分注器提取上清液90μL於96井培養盤。在其他96井培養盤中製備標準溶液，並進行比較，藉此計算出溶解度。
[表17]
雖然所有的化合物的水溶性皆低，但當溶解濃度的數值除以個別的化合物的ED50的數值超過100倍時，則能夠充分用於使用了小鼠模型的藥效試驗上。
[實施例64]使用以MPTP誘發帕金森氏症的小鼠模型來進行於體內(in vivo)抑制神經細胞死亡的活性與安全性的評估
多數的帕金森氏症治療劑的藥效評價，是使用以MPTP(methy-phenyl-tetrahydropyridine)引發帕金森氏症的小鼠模型。可使用該小鼠模型來進行藥效劑量的評估，以及投予其10倍、30倍、可能的話100倍的劑量時的安全性評估。亦可同時實施體內的藥效評估、及體重減輕、行動異常、血液毒性、腸管出血等安全性評估。
在本試驗中，使用小鼠MPTP＊誘發帕金森氏症模型，來評估HUP0381對於實驗性帕金森氏症的改善作用。
小鼠：44匹8週齡的C57BL/6J公鼠(試驗時是9週齡)。購入後於7天內進行檢疫和馴化。
對滾筒式跑步機(Rotarod)的馴化方法：將直徑為3.0cm的旋轉棒設定成低速(約3rpm)，將小鼠置於旋轉棒的上部，保持約120秒。進一步階段式地設定成高速，同樣地保持約120秒，最後花費3天馴化成以12rpm保持120秒。
<投藥>
MPTP：30mg/kg、腹胺內投藥、4天、在投入檢體的1小時前進行投藥。
HUP0381：1鹽酸鹽(lot ms0339)、口服投藥、4天。
載體(Vehicle)：1%DMSO、0.5%羧甲基纖維素(CMC)(溶於蒸餾水中)。
投藥結束2天後，實施滾筒式跑步機(20rpm)試驗。
以各群為n=6來加以實施。
死亡例：對照群中有發生一死亡例(被認為是MPTP的影響)。
體重的變化過程如第16圖所示，結果如第17圖所示。在第16圖中，個別的數值表示5~6例的平均值±標準偏差。在投藥期間中，相較於對照組，各組的體重都顯示了同樣的變化過程。在第17圖中，確認到滾筒式跑步機的潛時延長，由此可知HUP0381對實驗性帕金森氏症的改善作用。

Claims (21)

  1. 一種抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其包含以下述式(I)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽： 式(I)中，W、Y、及Z各自獨立地是C或N，當W是C時，R1是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當W是N時，R1不存在，當Y是C時，R2是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當Y是N時，R2不存在，當Z是C時，R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基，當Z是N時，R3不存在；R4和R5各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6 烷氧基或羧基；X是以下述式所表示的基團， 上述式中，＊表示鍵結點，R6、R7、R8及R9各自獨立地是氫、C1-C6烷基、或鹵素；R10是氫或C1-C6烷基；其中，3,4,5-三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺除外。
  2. 如請求項1所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，以式(1)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽，其抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED50是1000nM以下。
  3. 如請求項1或2所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，以式(1)所表示的化合物或其藥學上可容許的鹽，具有抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED90值。
  4. 如請求項1至3項中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，X是選自下述群組：
  5. 如請求項1至4項中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，R1~R5中的至少1個是鹵素。
  6. 如請求項5所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，R1~R5中的至少1個是氟。
  7. 如請求項1至6項中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，以式(1)所表示的化合物，是選自下述化合物：[表1-1]
  8. 一種化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下 述式(Ia)來表示： 式(Ia)中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、-CH3、或-OCH3；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、-CH3、-OCH3、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；R1和R5各自獨立地是氫、或-NO2、-NH2；X是下述式， 上述式中，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基；其中，3,4-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3,5-二甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3,4,5- 三甲氧基-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3-氟-N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、3-甲氧基-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、4-甲氧基-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、4-四氯苯醌-N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]苯甲醯胺、及N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2,a]吡啶-2-基)苯基]-[1,1-聯苯基]-4-甲醯胺除外。
  9. 如請求項8所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述的結構式來表示：[表2-1]
  10. 如請求項8所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其中，R2、R3及R4各自獨立地是氫、鹵素、或甲氧基。
  11. 如請求項8所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述的結構式來表示：[表3]
  12. 一種化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述式(Ib)、(Ic)、(Id)或(Ie)來表示： 上述式中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、或甲氧基；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、甲氧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被 取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；X是以下述式所表示的基團， 上述式中，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基；其中，N-[4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺、及N-[4-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)苯基]-4-吡啶甲醯胺除外。
  13. 如請求項12所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述式(Ib)、(Ic)、或(Ie)來表示： 上述式中，R2和R4各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、或甲氧基；R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-N3、C1-C6烷基、甲氧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基；X是以下述式所表示之基， 上述式中，＊表示鍵結點，R9是氫或C1-C6烷基；R10是氫或C1-C6烷基。
  14. 如請求項13所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其是以下述的結構式來表示：[表4]
  15. 一種醫藥組成物，其包含請求項8~14所述之化合物或其藥學上可容許的鹽。
  16. 一種抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製 劑，其包含請求項8~14所述之化合物或其藥學上可容許的鹽。
  17. 如請求項16所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，請求項8~14所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，其抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED50是1000nM以下。
  18. 如請求項16或17所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，其中，請求項8~14所述之化合物或其藥學上可容許的鹽，具有抑制氧化壓迫引發的細胞死亡的活性ED90值。
  19. 一種醫藥組成物，其包含請求項1~7及請求項16~18中任一項所述之抑制氧化壓迫引發的細胞死亡之製劑，且該醫藥組成物是用來預防及/或治療選自由下述所組成之群組中的疾病：帕金森氏症、阿茲海默症、脊隨小腦萎縮症、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症、大腦皮質基底核退化症、肌萎縮性脊髓側索硬化症、因腦缺血引起的腦神經損傷也就是缺血性腦血管疾病、腦中風、心臟衰竭、糖尿病、類風濕性關節炎、急性缺血性腦中風、動脈粥樣硬化、發炎性腸道疾病、乾眼症、粒線體腦肌肉病變、發炎性腸道疾病、冠狀動脈硬化、克隆氏症、因放射治療引起的黏膜炎、腦缺血、及心肌梗塞。
  20. 如請求項19所述之醫藥組成物，其中，該 疾病是選自由下述所組成之群組中的神經退化疾病：帕金森氏症、阿茲海默症、腦中風、缺血性腦血管疾病、帕金森氏症、粒線體腦肌肉病變、脊隨小腦萎縮症、亨丁頓舞蹈症、進行性上眼神經核麻痺症、大腦皮質基底核退化症、及肌萎縮性脊髓側索硬化症。
  21. 一種化合物的製造方法，其中，該化合物是以下述式(I)來表示： 式(I)中，W、Y、及Z各自獨立地是C或N，當W是C時，R1是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當W是N時，R1不存在，當Y是C時，R2是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基，當Y是N時，R2不存在，當Z是C時，R3是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羧基、可被取代的芳基、可被取代的雜芳基、可 被取代的芳醯胺基、或可被取代的雜芳醯胺基，當Z是N時，R3不存在；R4和R5各自獨立地是氫、鹵素、-CN、-NH2、-NO2、-N3、可被鹵素取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或羧基；X是以下述式所表示的基團， 上述式中，＊表示鍵結點，R6、R7、R8及R9各自獨立地是氫、C1-C6烷基、或鹵素；R10是氫或C1-C6烷基；並且，前述方法包含下述步驟：將以下述式所表示的苯胺，藉由加入過量的氫氧化鈉來製成苯胺的鈉鹽， 上述式中，X如前所述；再與以下述式所表示的化合物進行反應， 上述式中，R1~R5、W、Y、及Z如前所述，Hal是鹵素。
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