SE470074B - Method for diagnosis of picorene and / or flavivirus infection, peptides, diagnostic antigens and vaccine composition with these peptides - Google Patents
Method for diagnosis of picorene and / or flavivirus infection, peptides, diagnostic antigens and vaccine composition with these peptidesInfo
- Publication number
- SE470074B SE470074B SE9002671A SE9002671A SE470074B SE 470074 B SE470074 B SE 470074B SE 9002671 A SE9002671 A SE 9002671A SE 9002671 A SE9002671 A SE 9002671A SE 470074 B SE470074 B SE 470074B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- thr
- val
- ala
- gly
- amino acid
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 50
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 50
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 50
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 49
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 28
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims description 13
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 8
- 206010054261 Flavivirus infection Diseases 0.000 title claims description 7
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 34
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 claims description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 27
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 27
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 15
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 14
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 9
- 208000005155 Picornaviridae Infections Diseases 0.000 claims description 8
- 208000034657 Convalescence Diseases 0.000 claims description 6
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 6
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 claims description 4
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 claims description 4
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 claims description 4
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 4
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 claims description 3
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 3
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 claims description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 claims description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims 2
- 241000710829 Dengue virus group Species 0.000 claims 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims 1
- 101710197658 Capsid protein VP1 Proteins 0.000 description 15
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 14
- 101710118046 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 14
- 101710108545 Viral protein 1 Proteins 0.000 description 14
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 12
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 208000006740 Aseptic Meningitis Diseases 0.000 description 3
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 3
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 3
- 206010027201 Meningitis aseptic Diseases 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010014909 Enterovirus infection Diseases 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000709701 Human poliovirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000710203 Human rhinovirus 1B Species 0.000 description 1
- 101710145006 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- 241000710888 St. Louis encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000006334 disulfide bridging Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 208000012022 enterovirus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 108010023958 glycyl-threonyl-alanyl-methionyl-arginyl-isoleucyl-leucyl-glycyl-glycyl-valyl-isoleucine Proteins 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- -1 microplates Polymers 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000012070 reactive reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 201000010653 vesiculitis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/24011—Flaviviridae
- C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
- C12N2770/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32311—Enterovirus
- C12N2770/32322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32611—Poliovirus
- C12N2770/32622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32711—Rhinovirus
- C12N2770/32722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
470 074 2 Det finns för närvarande ingen terapi för dessa in- fektioner, varför diagnosticering av picornavirus- och flavivirusinfektioner oftast tjänar till att utesluta andra sjukdomar eller för att ge epidemiologisk infor- mation. 470 074 2 There is currently no therapy for these infections, so diagnosing picornavirus and flavivirus infections usually serves to rule out other diseases or to provide epidemiological information.
Diagnosticering av en picornavirusinfektion kan antingen göras med hjälp av isolering av virus eller med hjälp av serologi. I det senare fallet med avseende på enterovirus, analyseras ett serumprov som tagits på ett tidigt stadium av sjukdomsförloppet (ett serum från akut- fasen) och ett serum taget l-3 veckor senare (ett serum från konvalescensfasen) med hjälp av en antikroppanalys, oftast en komplementär fixeringsanalys (se t ex Sever JL.Diagnosis of a picornavirus infection can be made either by virus isolation or by serology. In the latter case with regard to enterovirus, a serum sample taken at an early stage of the disease course (a serum from the acute phase) and a serum taken 1-3 weeks later (a serum from the convalescence phase) are analyzed by means of an antibody analysis, usually a complementary fixation analysis (see eg Sever JL.
Application of a microtechnique to viral serological investigations. J. Immunol, 88:320-329). Antigenet är då ett renat eller halvrenat preparat från picornavirus- infekterade celler. Om-ej värmebehandlade virusantigener används, erhålls en relativt typspecifik antikroppanalys.Application of a microtechnique to viral serological investigations. J. Immunol, 88: 320-329). The antigen is then a purified or semi-purified preparation from picornavirus-infected cells. If heat-treated virus antigens are not used, a relatively type-specific antibody assay is obtained.
Om ett värmebehandlat viralt antigen används, erhålls en mera gruppspecifik analys. Förmodligen undergår viruset en konformationsändring vid upphettning, vilket exponerar gruppspecifika, antigena determinanter. Konformations- ändringen förefaller oftast involvera den N-terminala änden av VP1 [Fricks CE, Hogle JM. Cell-induced confor- mational change in poliovirus: Externalization of the amino terminus of VP1 is responsible for liposome binding.If a heat-treated viral antigen is used, a more group-specific assay is obtained. Presumably, the virus undergoes a conformational change upon heating, exposing group-specific antigenic determinants. The conformational change usually appears to involve the N-terminal end of VP1 [Fricks CE, Hogle JM. Cell-induced conformational change in poliovirus: Externalization of the amino terminus of VP1 is responsible for liposome binding.
J. Virol. 64:l93-1945 (l990)]. Det finns vissa indika- tioner på att antikroppar mot denna del av VP1 kan in- fluera infektionsförloppet lChow M, Yabrov R, Bittle J, Hogle JM, Baltimore D. Synthetic peptides from four separate regions of the poliovirus capsid protein VP1 induce neutralizing antibodies. Proc Natl Acad Sci USA 82:9l0-914 (1985)], vilket gör det intressant även som en kandidat för vaccinationssyften. För flavivirus existerar ett flertal serologiska tekniker, som samtliga dock är begränsade på grund av avsaknad av känslighet eller specificitet. 470 074 3 Sålunda föreligger ett behov av en mer exakt diagnos- ticering av sjukdomar som orsakas av picornavirus och flavivirus, vilken diagnosticering skulle kunna ytterli- gare specificera och underlätta behandling av det aktuella sjukdomstillstàndet.J. Virol. 64: l93-1945 (l990)]. There are some indications that antibodies to this part of VP1 may influence the course of infection lChow M, Yabrov R, Bittle J, Hogle JM, Baltimore D. Synthetic peptides from four separate regions of the poliovirus capsid protein VP1 induce neutralizing antibodies. Proc Natl Acad Sci USA 82: 910-914 (1985)], which makes it interesting also as a candidate for vaccination purposes. For flavivirus, a number of serological techniques exist, all of which, however, are limited due to a lack of sensitivity or specificity. 470 074 3 Thus, there is a need for a more accurate diagnosis of diseases caused by picornavirus and flavivirus, which diagnosis could further specify and facilitate treatment of the current disease state.
Dessutom föreligger ett behov av vacciner för olika sjukdomar som orsakas av picornavirus och flavivirus.In addition, there is a need for vaccines for various diseases caused by picornavirus and flavivirus.
' Ett ändamål med föreliggande uppfinning är att àstad- komma nya peptider, som kan användas som ett diagnostiskt antigen vid immunoanalyser. I Étt annat ändamål med föreliggande uppfinning är att använda ett diagnostiskt antigen för mera specifik diagnosticering av sjukdomar eller infektioner som orsakas av picornavirus och/eller flavivirus.An object of the present invention is to provide novel peptides which can be used as a diagnostic antigen in immunoassays. Another object of the present invention is to use a diagnostic antigen for more specific diagnosis of diseases or infections caused by picornavirus and / or flavivirus.
Ett ytterligare ändamål med föreliggande uppfinning är att åstadkomma ett vaccin, som är baserat på nämnda peptider, mot sjukdomar eller infektioner som orsakas av picornavirus och/eller flavivirus.A further object of the present invention is to provide a vaccine, which is based on said peptides, against diseases or infections caused by picornavirus and / or flavivirus.
Alla dessa ändamål uppnås med hjälp av föreliggande uppfinning.All these objects are achieved by means of the present invention.
BESKRIVNING AV UPPFINNINGEN I en aspekt hänför sig föreliggande uppfinning till peptider med formeln: a) H-X-RlfAla-Y1-Glu-Thr-Gly-His-Thr-Ser-Gln-Val-R2-X-Z, där Yl är Ala eller Val, b) H-X-Rl-Ala-Yl-Glu-Thr-Gly-Ala-Thr-Asn-Pro-Leu-R2-X-Z, där Yl är Ala eller Val, c) H-x-Rl-Ala-Ala-ciu--rhr-Gly-His-Tnr-ser-Yl-val-Rz-x-z, - där Yl är Ser eller Asn, d) H-X-Rl-Yl-Asp-Thr-Gly-His-Gly-Thr-Val-Y2-R2-X-Z, där Y1_är Ala eller Thr och Y2 är Val eller Ile, 4 4 1 l _ 2 2 U e) H-X-R -Thr-Asp-Y -Gly-His-Asp-Thr-Val-Y -R -X-Z, dar Yl är Ser eller Thr och YZ är Ile eller Val, och f) H-x-Rl-Ala-Glu-Tnr-Gln-Yl-sly-Thr-Yz-val-Rz-x-z, där Yl är His eller Tyr och Y2 är Ile eller Thr, med undantag av när någon av peptiderna b), c), d) och f) används ensam som diagnostiskt antigen eller i vaccin, varvid'ett X representerar en kemisk bindning och det andra X representerar en kemisk bindning eller en kopp- lingsunderlättande aminosyrasekvens, Rl och R2 represen- terar eventuella aminosyrarester, där Rl och R2 till-n _ sammans representerar högst 25 aminosyrarester, och Z representerar -NH2 eller -OH.DESCRIPTION OF THE INVENTION In one aspect, the present invention relates to peptides of the formula: a) HX-RlfAla-Y1-Glu-Thr-Gly-His-Thr-Ser-Gln-Val-R2-XZ, wherein Y1 is Ala or Val, b) HX-R1-Ala-Y1-Glu-Thr-Gly-Ala-Thr-Asn-Pro-Leu-R2-XZ, where Y1 is Ala or Val, c) Hx-R1-Ala-Ala-ciu-- rhr-Gly-His-Tnr-ser-Y1-val-Rz-xz, - where Y1 is Ser or Asn, d) HX-R1-Y1-Asp-Thr-Gly-His-Gly-Thr-Val-Y2- R 2 -X 2, where Y 1 is Ala or Thr and Y 2 is Val or Ile, 4) 1 H 2 R 2) e e) HXR -Thr-Asp-Y -Gly-His-Asp-Thr-Val-Y -R -XZ, where Y1 is Ser or Thr and YZ is Ile or Val, and f) Hx-R1-Ala-Glu-Tnr-Gln-Y1-sly-Thr-Yz-val-Rz-xz, where Y1 is His or Tyr and Y2 is Ile or Thr, except when one of the peptides b), c), d) and f) is used alone as a diagnostic antigen or in vaccine, one X representing a chemical bond and the other X representing a chemical bond or a coupling-facilitating amino acid sequence, R1 and R2 represent possible amino acid residues, where R1 and R 2 to -n- together represent at most 25 amino acid residues, and Z represents -NH 2 or -OH.
I en annan aspekt hänför sig föreliggande uppfinning - till ett diagnostiskt antigen med förmåga att detektera antikroppar mot åtminstone en typ av picornavirus och flavivirus i sera, och/eller med förmåga att binda till antikroppar med bindningsaffinitet för föreningar inne- hållande en aminosyrasekvens motsvarande en epitop eller anhopning av epitoper hos HIV-1 p17, varvid antigenet huvudsakligen inbegriper ett antigen som är valt bland peptiderna enligt kravet l och antigena delar därav.In another aspect, the present invention relates to a diagnostic antigen capable of detecting antibodies to at least one type of picornavirus and flavivirus in sera, and / or capable of binding to antibodies having binding affinity for compounds containing an amino acid sequence corresponding to an epitope or accumulation of epitopes in HIV-1 p17, wherein the antigen mainly comprises an antigen selected from the peptides of claim 1 and antigenic portions thereof.
I en ytterligare aspekt hänför sig föreliggande upp- finning till ett förfarande för diagnosticering av infek- tioner som orsakats av picornavirus och/eller flavivirus, varvid minst ett diagnostiskt antigen, företrädesvis en kombination av diagnostiska antigener, med förmåga att detektera antikroppar mot minst en typ av picornavirus och flavivirus sätts till ett serum fràn en individ som miss- tänkts ha en nyligen erhållen eller tidigare picornavirus- och/eller flavivirusinfektion, och att eventuella bildade antigen/antikroppkomplex detekteras genom användning av en immunoanalys, varvid diagnosticeringen av den eller de nyligen erhållna eller tidigare infektionerna som har orsakats av picornavirus och/eller flavivirus fastställs 0374 .Jï \,J CD med basis pà antingen pàvisande av antikroppar i ett enkelt serum eller på en jämförelse mellan mängderna av detekterade antikroppar i både akut- och konvalscenssera, och om mängden i konvalescensserat är avsevärt större än den i akutserat, lider sannolikt personen från vilken serum erhållits av en picorna- och flavivirusinfektion, varvid varje antigen inbegriper en peptid som är vald från den grupp som består av a) b) c) Ö) e) och f) H-x-nl-Ala-Y1-G1u-Thr-c1y-His-Thr-ser-G1n-va1-R2-x-z, där Y1 är Ala eller Val, huvudsakligen använd för diagnosticering av sjukdomar orsakade av Coxsackie- virus, H-X-Rl-Ala-Y1-Glu-Thr-Gly-Ala-Thr-Asn-Pro-Leu-R2-X-Z, där Y1 är Ala eller Val, huvudsakligen använd för diagnosticering av sjukdomar orsakade av poliovirus, H-x-R1-Ala-Ala-clu-Th:-sly-His-Thr-ser-Y1-val-R2-x-z, där Yl är Ser eller Asn, huvudsakligen använd för diagnosticering av sjukdomar orsakade av rhinovirus, H-x-R1-Y1-Asp-Thr-sly-His-G1y-Thr-va1-Y2-R2-x-z, där Y1 är Ala eller Thr och Y2 är Val eller Ile, huvudsakligen använd för diagnosticering av sjukdomar orsakade av gula febern-virus och japansk encefalit- virus, c 2-R2-X-Z, där H-X-Rl-Thr-Asp-Yl-Gly-His-Asp-Thr-Val-Y Y1 är Ser eller Thr och YZ är Ile eller Val, huvudsakligen använd för diagnosticering av sjukdomar orsakade av TBE-virus, H-X-R1-Ala-Glu-Thr-Gln-Y1-Gly-Thr-Y2-Val-R2-X-Z, där Y1 är His eller Tyr och Y2 är Ile eller Thr, 4 7 07 åzs 4 6 huvudsakligen använd för diagnosticering av sjukdomar orsakade av dengue- och rhinovirus, med undantag av när någon av peptiderna b), c), d) och f) används ensam som diagnostiskt antigen, varvid ett X rep- resenterar en kemisk bindning och det andra X represente- rar en kemisk binding eller en kopplingsunderlättande aminosyrasekvens, Rl och R2 representerar valfria amino- syrarester, varvid Rl och R2 tillsammans representerar högst 25 aminosvrarester, och Z representerar -NH2 eller -OH.In a further aspect, the present invention relates to a method for diagnosing infections caused by picornavirus and / or flavivirus, wherein at least one diagnostic antigen, preferably a combination of diagnostic antigens, is capable of detecting antibodies to at least one type of picornavirus and flavivirus is added to a serum from an individual suspected of having a recently acquired or previous picornavirus and / or flavivirus infection, and that any antigen / antibody complexes formed are detected using an immunoassay, thereby diagnosing the newly obtained or previous infections caused by picornavirus and / or flavivirus are determined on the basis of either the detection of antibodies in a single serum or on a comparison between the amounts of antibodies detected in both acute and convalescent sensors, and whether the amount in convalescence is significantly greater than that in acute, suffered is likely the person from whom serum was obtained from a picorna and flavivirus infection, each antigen including a peptide selected from the group consisting of a) b) c) Ö) e) and f) Hx-nl-Ala-Y1- G1u-Thr-c1y-His-Thr-ser-G1n-va1-R2-xz, where Y1 is Ala or Val, mainly used to diagnose diseases caused by Coxsackie virus, HX-R1-Ala-Y1-Glu-Thr -Gly-Ala-Thr-Asn-Pro-Leu-R2-XZ, where Y1 is Ala or Val, mainly used for diagnosing diseases caused by poliovirus, Hx-R1-Ala-Ala-clu-Th: -sly-His -Thr-ser-Y1-val-R2-xz, where Y1 is Ser or Asn, mainly used for diagnosing diseases caused by rhinovirus, Hx-R1-Y1-Asp-Thr-sly-His-G1y-Thr-va1- Y2-R2-xz, where Y1 is Ala or Thr and Y2 is Val or Ile, mainly used to diagnose diseases caused by yellow fever virus and Japanese encephalitis virus, c 2-R2-XZ, where HX-R1-Thr -Asp-Y1-Gly-His-Asp-Thr-Val-Y Y1 is Ser or Thr and YZ is Ile or Val, mainly an used to diagnose diseases caused by TBE virus, HX-R1-Ala-Glu-Thr-Gln-Y1-Gly-Thr-Y2-Val-R2-XZ, where Y1 is His or Tyr and Y2 is Ile or Thr, 4 7 07 åss 4 6 is mainly used for the diagnosis of diseases caused by dengue and rhinovirus, except when one of the peptides b), c), d) and f) is used alone as a diagnostic antigen, where an X represents a chemical bond and the other X represents a chemical bond or a linker facilitating amino acid sequence, R 1 and R 2 represent optional amino acid residues, R 1 and R 2 together representing at most 25 amino acid residues, and Z represents -NH 2 or -OH.
I en ytterligare aspekt hänför sig föreliggande upp- finning till en vaccinkomposition som såsom immuniserande komponent inbegriper åtminstone ett picornavirus- och/el- ler flavivirusantigen, som är valt bland åtminstone en av peptiderna ovan. _ Andra kännetecken och egenskaper hos föreliggande uppfinning framgår av de efterföljande patentkraven.In a further aspect, the present invention relates to a vaccine composition comprising as an immunizing component at least one picornavirus and / or flavivirus antigen, which is selected from at least one of the above peptides. Other features and characteristics of the present invention are set forth in the appended claims.
I peptiderna enligt föreliggande uppfinning repre- senterar det ena X en kemisk bindning, och det andra X representerar en kemisk bindning eller en kopplingsunder- lättande sekvens av åtminstone 4, och företrädesvis 8, särskilda aminosyrarester, som samtliga är valda från den grupp som består av -Thr- och -Ser-. När X är en amino- syrasekvens, kan den befinna sig antingen i peptidernas C- eller N-terminala ände, men inte i båda ändarna sam- tidigt. Om den till exempel befinner sig i den C-terminala änden, motsvarar X i den N-terminala änden en kemisk bind- ning och vice versa. Emellertid kan X vara en bindning i båda ändarna av peptiden enligt föreliggande uppfinning.In the peptides of the present invention, one X represents a chemical bond, and the other X represents a chemical bond or a linker facilitating sequence of at least 4, and preferably 8, particular amino acid residues, all of which are selected from the group consisting of -Thr- and -Ser-. When X is an amino acid sequence, it may be at either the C- or N-terminal end of the peptides, but not at both ends simultaneously. For example, if it is at the C-terminal end, X at the N-terminal end corresponds to a chemical bond and vice versa. However, X may be a bond at both ends of the peptide of the present invention.
Aminosyrasekvensen fungerar som en kopplingsunderlättande spacer, som möjliggör riktig bindning till bäraren till vilken peptiderna enligt föreliggande uppfinning binds vid diskrimineringsförfarandet. Sekvensen X bör inte vara en aminosyrasekvens som skadligt påverkar resultatet av diag- nosticeringsförfarandet. Följaktligen bör den inte ha alltför stor laddning eller vara alltför hydrofob, och den 'z 4-70 074 7 bör inte störa peptidernas konformation. Aminosyrorna treonin och serin uppfyller också dessa krav särskilt väl, och vilken som helst av aminosyrorna i sekvensen X kan vara treonin eller serin. Antalet aminosyror i denna spacersekvens bör vara åtminstone 4, men vid en föredragen utföringsform enligt föreliggande uppfinning används 8 aminosyror.The amino acid sequence acts as a coupling-facilitating spacer, which enables proper binding to the carrier to which the peptides of the present invention bind in the discrimination process. Sequence X should not be an amino acid sequence that adversely affects the outcome of the diagnostic procedure. Consequently, it should not be overcharged or overly hydrophobic, and it should not interfere with the conformation of the peptides. The amino acids threonine and serine also meet these requirements particularly well, and any of the amino acids in the sequence X may be threonine or serine. The number of amino acids in this spacer sequence should be at least 4, but in a preferred embodiment of the present invention, 8 amino acids are used.
Rl och R2 är valfria aminosyrarester och represen- terar tillsammans högst 25 aminosyrarester, företrädesvis . Detta innebär dessutom att den ena eller båda av Rl och R2 kan vara kemisk bindning, dvs inte innehålla några aminosyror. Om Rl är en sekvens som innehåller t ex 25 aminosyrarester, måste R2 vara en kemisk bindning eller vice versa.R1 and R2 are optional amino acid residues and together represent a maximum of 25 amino acid residues, preferably. This also means that one or both of R1 and R2 may be chemical bonding, ie do not contain any amino acids. If R1 is a sequence that contains, for example, 25 amino acid residues, R2 must be a chemical bond or vice versa.
Det här använda uttrycket "och antigena delar därav" avser antigena delar i den väsentliga aminosyrasekvensen mellan Rl och R2 i peptiderna enligt föreliggande uppfin- ning.As used herein, the term "and antigenic moieties thereof" refers to antigenic moieties in the essential amino acid sequence between R1 and R2 in the peptides of the present invention.
Polypeptiderna enligt föreliggande uppfinning kan via aminosyrasekvensen X bindas till en bärare genom fysika- lisk-kemisk interaktion, såsom t ex kovalent bindning, jonbindning, vätebindning eller hydrofob bindning. Exempel på kovalent bindning är ester-, eter- och disulfidbind- ning.The polypeptides of the present invention can be bound to a carrier via the amino acid sequence X by physicochemical interaction, such as, for example, covalent bonding, ionic bonding, hydrogen bonding or hydrophobic bonding. Examples of covalent bonding are ester, ether and disulfide bonding.
Det här använda uttrycket "bärare" bör tolkas vittom- fattande, och det kan vara vilket material som helst som är kompatibelt med och som inte negativt påverkar förfa- randet enligt föreliggande uppfinning, t ex hartser, mik- roplattor, plastytor, geler, matriser etc.The term "carrier" as used herein should be construed broadly, and may be any material that is compatible with and does not adversely affect the process of the present invention, such as resins, microplates, plastic surfaces, gels, matrices. etc.
Det här använda uttrycket "epitop" avser en antigen eller immunogen determinant och hänför sig till en speci- fik del av en struktur av ett antigen som inducerar ett immunsvar, och de producerade antikropparna är riktade mot denna del.The term "epitope" as used herein refers to an antigen or immunogenic determinant and refers to a specific portion of a structure of an antigen that induces an immune response, and the antibodies produced are directed to that portion.
Immunoanalysförfarandet enligt föreliggande uppfin- ning kan vara en enzymimmunoanalys (EIA), radioimmunoana- lys (RIA), immunoanalys som involverar märkning med me- 4 '7 0 A 8 tall, fluorescensimmunoanalys (FIA) eller en immunoanalys där peptiden är löslig och inhiberar en annan reaktion.The immunoassay method of the present invention may be an enzyme immunoassay (EIA), radioimmunoassay (RIA), immunoassay involving labeling, fluorescence immunoassay (FIA) or an immunoassay where the peptide is soluble and inhibits a another reaction.
Vaccinkompositionen enligt föreliggande uppfinning inbegriper åtminstone ett picornavirus- och/eller flavi- virusantigen, som är valt bland peptider enligt förelig- gande uppfinning, tillsammans med en icke-toxisk, farma- ceutiskt acceptabel bärare och/eller ett utspädningsmedel i en mängd som är effektiv för att skydda en individ från sjukdomar orsakade av picornavirus och/eller flavivirus.The vaccine composition of the present invention comprises at least one picornavirus and / or flavivirus antigen selected from peptides of the present invention, together with a non-toxic, pharmaceutically acceptable carrier and / or a diluent in an amount effective to protect an individual from diseases caused by picornavirus and / or flavivirus.
Vaccinkompositionen inbegriper dessutom ett antigen- adjuvans i en mängd som tillsammans med en mängd av picornavirus- och/eller flavivirusantigenen eller -anti- generna är effektiv för att skyddaxen individ från sjuk- domar orsakade av picornavirus och/eller flavivirus.The vaccine composition further comprises an antigen adjuvant in an amount which, together with an amount of the picornavirus and / or flavivirus antigen or antigens, is effective to protect the individual from diseases caused by picornavirus and / or flavivirus.
Vaccinkompositionen inbegriper dessutom en eller flera buffertar och/eller konserveringsmedel.The vaccine composition further comprises one or more buffers and / or preservatives.
Peptiderna enligt uppfinningen erhålls från sekvenser som exponeras vid värmeinaktivering av picornavirus eller befinner sig på de andra proteinerna pà höljet hos flavi- viruspartiklar, och de kan detektera brett korsreaktiva picornavirus- och flavivirusantikroppar. Detta möjliggör diagnosticering av picornavirus- och/eller flavivirusin- fektioner eller -sjukdomar genom användning av endast en eller ett fåtal peptider från de i hög grad konserverade, antigeniskt aktiva picornavirus- och flavivirussekven- serna.The peptides of the invention are obtained from sequences exposed upon heat inactivation of picornavirus or located on the other proteins on the envelope of flavivirus particles, and they can detect broadly cross-reactive picornavirus and flavivirus antibodies. This enables the diagnosis of picornavirus and / or flavivirus infections or diseases by using only one or a few peptides from the highly conserved, antigenically active picornavirus and flavivirus sequences.
Lokaliseringen av denna sekvens på proteinets hölje, dess uttalade evolutionära konservering hos flavivirus och den visade antigeniciteten hos analoga sekvenser i picor- navirus gör denna sekvens särskilt tillgänglig för anti- kroppar lämpade för diagnosticerande och immuniserande syften. Tabell l avser gruppering av vissa olika virala aminosyrasekvenser fràn den region som har likhet med HIV-1 pl7.The location of this sequence on the envelope of the protein, its pronounced evolutionary conservation in flavivirus and the shown antigenicity of analogous sequences in picornavirus make this sequence particularly accessible to antibodies suitable for diagnostic and immunizing purposes. Table 1 refers to the grouping of certain different viral amino acid sequences from the region similar to HIV-1 p17.
TABELL 1 - Gruppering av picorna(VP1)-, flavivirus(E-protein)- och koronavirus (VP1)- 9 aminosyrasekvenser från den region son uppvisar likhet med HIV-1 p17.TABLE 1 - Grouping of picorna (VP1), flavivirus (E-protein) and coronavirus (VP1) - 9 amino acid sequences from the region that show similarity to HIV-1 p17.
HIV-1 3b klon hxb2 en rf nal HIV-1 - överensstämmelse Mindre vanliga varianter Picornavirus Coxsackie Bl VP1 Svinvesikulit VP1 Coxsackie B3 VP1 Coxsackie B4 VP1 Poliovirus 1 av Mahoney-stammen duplicering Humant rhinovirus 1B VP1 Humant rhinovirus 2 VP1 dupliceríng Mul- och klövsjuka v VP1 Flavivirus Gula febern-virus Japanskt encefalitvirus St Louis-encefalitvirus Fästingburen encefalit v Dengue ZJ Dengue 4 ABADTGH SNQVSQNY AAADTGnrgnSsQVSQNYpivon1og AAADTGn AAAAQQAAAaTkn AAADTGH A N gak a vsskptnsesípa1tAAETGH gsQVSQNY SssVSQNY SNQVSQNY SS g k n TSQVvpsdtnqtrhv igsgpvnsesipa1tAAETGH vgtgpnnseaipa1tAAETGH iargpsnseqipaltAvETGH teasgpthskeípa1tAvETGa TSQVvpsdtnqtrh TSQVvpgdtngtrh TSQVdpsdtnqtrh TNpLvpsdtvqtrh psdtvg ikeshhttsnsapl1dAAETGH trhv TSNVqpedaietry inssnpttsnsapa1dAAETGH pedvie AsDTae tsykictdknífvknptDTGH ttygnctekfsfaknpADTGH ttygnodsaftfsknptDTGH ptdsgh AETqH nnrqh TSSVqpedvietry try TTNV gTvVngkvskgapc gTvVie1sysqsdg gTvIvelgytgsng dtvv gTIV gTtV 074 position i polyprotein 603-612 --> 601-610 603-612 601-610 624-633 ---> 606-615 ---> 603-612 676-685 595-604 537-545 603-612 598-607 593-601 592-600 4 0 07 A Peptiderna enligt föreliggande uppfinning kan an- vändas som ett diagnostiskt antigen för detektion av an- tikroppar i serum från bàde akut- och konvalescensfas. Om mängden antikropp som detekteras i konvalescensserat är betydligt större än den i akutserat, förmodas personen som lämnat blovproverna lida av en picornavirusinfektion. Det här använda uttrycket "avsevärt större" är ett standard- begrepp på detta område (se J. Blomberg, I. Nilsson and M. Andersson. 1983. Viral antibody screening system that uses a standardized single dilution immunoglobulin G enzyme immunoassay with multiple antigens. J. Clin.HIV-1 3b clone hxb2 en rf nal HIV-1 - conformity Uncommon variants Picornavirus Coxsackie Bl VP1 Swine vesiculitis VP1 Coxsackie B3 VP1 Coxsackie B4 VP1 Poliovirus 1 of the Mahoney strain duplication Human rhinovirus 1B violet virus VP1 Human VP1 Flaviviruses yellow fever virus Japanese encephalitis virus, St. Louis encephalitis virus, Tick-borne encephalitis v Dengue ZJ Dengue 4 ABADTGH SNQVSQNY AAADTGnrgnSsQVSQNYpivon1og AAADTGn AAAAQQAAAaTkn AAADTGH AN gak a vsskptnsesípa1tAAETGH gsQVSQNY SssVSQNY SNQVSQNY SS gkn TSQVvpsdtnqtrhv igsgpvnsesipa1tAAETGH vgtgpnnseaipa1tAAETGH iargpsnseqipaltAvETGH teasgpthskeípa1tAvETGa TSQVvpsdtnqtrh TSQVvpgdtngtrh TSQVdpsdtnqtrh TNpLvpsdtvqtrh psdtvg ikeshhttsnsapl1dAAETGH trhv TSNVqpedaietry inssnpttsnsapa1dAAETGH pedvie AsDTae tsykictdknífvknptDTGH ttygnctekfsfaknpADTGH ttygnodsaftfsknptDTGH ptdsgh AETqH nnrqh TSSVqpedvietry try TTNV gTvVngkvskgapc gTvVie1sysqsdg gTvTvvtv gTvIvelg n 603-612 -> 601-610 603-612 601-610 624-633 ---> 606-615 ---> 603-612 676-685 595-604 537-545 603-612 598-607 593- 601 592-600 4 0 07 A The peptides of the present invention can be used as a diagnostic antigen for the detection of antibodies in serum from both the acute and convalescent phases. If the amount of antibody detected in convalescence is significantly greater than that in acute, the person who left the blood samples is presumed to suffer from a picornavirus infection. The term "considerably larger" as used herein is a standard term in this field (see J. Blomberg, I. Nilsson and M. Andersson. 1983. Viral antibody screening system that uses a standardized single dilution immunoglobulin G enzyme immunoassay with multiple antigens. J. Clin.
Microbiol. 17:l08l-1091).Microbiol. 17: l08l-1091).
Om antikroppar som tillhör IgM-klassen och som är reaktiva med åtminstone en av de vid föreliggande upp- finning beskrivna picornavirus- och/eller flaviviruspepti- derna detekteras i ett eller flera sera från en patient, är det sannolikt att patienten lider av en sjukdom som orsakas av ett picornavirus- och/eller flavivirus.If antibodies belonging to the IgM class and reactive with at least one of the picornavirus and / or flavivirus peptides described in the present invention are detected in one or more sera from a patient, it is likely that the patient suffers from a disease which caused by a picornavirus and / or flavivirus.
KORT BESKRIVNING AV RITNINGARNA Fig 1 visar absorption av fem p17-positiva sera med harts utan peptid, harts med HIV-1 gag 118-140, harts med HTLV-I gag lll-130 (den C-termïnala änden av HTLV-I) och harts med Coxsackie Bl VP1 25-53. Intensiteten av pl7- bandet vid EIB (y-axeln) mättes med hjälp av en densito- meter.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS Fig. 1 shows absorption of five p17-positive sera with peptide-free resin, resin with HIV-1 gag 118-140, resin with HTLV-I gag III-130 (the C-terminal end of HTLV-I) and resin with Coxsackie Bl VP1 25-53. The intensity of the p17 band at the EIB (y-axis) was measured using a densitometer.
Fig 2 visar den serologiska reaktiviteten hos en från Coxsackie Bl VP1 25-53 erhállen peptid med a) sera från akut- och konvalescensfas från fem fall av aseptisk meningit med avsevärda Coxsackie CF-ökningar, b) 10 p17-reaktiva sera, c) 19 HIV-seronegativa blodgivare, och d) 6 bekräftat HIV-1-antikroppositiva sera.Figure 2 shows the serological reactivity of a peptide obtained from Coxsackie B1 VP1 25-53 with a) sera from acute and convalescence phase from five cases of aseptic meningitis with significant Coxsackie CF increases, b) 10 p17-reactive sera, c) 19 HIV seronegative blood donors, and d) 6 confirmed HIV-1 antibody-positive sera.
FöRsöK MED EN FRÅN coxsAcxïa Bl VP1 HÄRLEDD PEPTID En peptid av aminosyrorna 25-53 av Coxsackie Bl VP1-sekvensen (Iizuka, N., S. Kuge och A. Nomoto. 1987.EXPERIMENTS FROM COXSACKIE B1 VP3 DERIVED PEPTIDE A peptide of amino acids 25-53 of the Coxsackie B1 VP1 sequence (Iizuka, N., S. Kuge and A. Nomoto. 1987.
Complete nucleotide sequence of the genome of Coxsackie- virus Bl. Virology l56:64-73.) syntetiserades, och dess 4-70 074 ll förmåga att absorbera pl7-antikroppar jämfördes med den för HIV-1 hxb2 gag 118-140 (Fig 1). I fem av fem testade sera absorberade denna peptid i hartsbunden form ut all pl7 EIB-reaktivitet. HIV-1 hxb2 gag 118-140 absorberade också dessa antikroppar, men mindre fullständigt. Absorp- tion med harts ensamt, eller med HTLV-I gag lll-130, på- verkade inte pl7 EIB-reaktiviteten. De pl7-reaktiva anti- kropparna i dessa sera måste sålunda binda till epitoper som simuleras av den hartsbundna, Coxsackie-härledda pep- tiden. Peptiden var närvarande i ett stort molärt över- skott i förhållande till antikroppar, vilket sålunda gyn- nar absorption av även antikroppar med låg affinitet.Complete nucleotide sequence of the genome of Coxsackie virus Bl. Virology 15: 64-73.) Was synthesized, and its ability to absorb p17 antibodies was compared to that of HIV-1 hxb2 gag 118-140 (Fig. 1). In five out of five sera tested, this peptide in resin-bound form absorbed all p17 EIB reactivity. HIV-1 hxb2 gag 118-140 also absorbed these antibodies, but less completely. Absorption with resin alone, or with HTLV-I gag III-130, did not affect p17 EIB reactivity. Thus, the p17 reactive antibodies in these sera must bind to epitopes simulated by the resin-bound, Coxsackie-derived peptide. The peptide was present in a large molar excess relative to antibodies, thus favoring the absorption of even antibodies with low affinity.
De pl7-härledda peptidernas reaktivitet jämfördes med den för en Coxsackie Bl-härledd peptid. 10 pl7-positiva sera, 19 HIV-seronegativa blodgivare, 6 sera från bekräf- tat HIV-l-seropositiva personer (1 vuxen och 5 barn i åldern l-7 år) och akut- och konvalescenssera från sex patienter med aseptisk meningit med avsevärda (åtminstone fyrfaldiga) titerökningar vid komplementära antikropp- fixeringstester mot Coxsackie Bl-B6 antigen analyserades.The reactivity of the p17-derived peptides was compared to that of a Coxsackie B1-derived peptide. 10 p17-positive sera, 19 HIV-seronegative blood donors, 6 sera from confirmed HIV-1 seropositive individuals (1 adult and 5 children aged 1-7 years) and acute and convalescent sera from six patients with aseptic meningitis with significant (at least fourfold) titer increases in complementary antibody fixation assays against Coxsackie B1-B6 antigen were analyzed.
Beträffande antikroppaktiviteten mot Coxsackie-pep- tiden bland pl7-reaktiva sera som spätts 200 ggr, fann man att de inte reagerade väsentligt mer än blodgivarsera (Pig 2). Detta kan indikera att Coxsackie-peptiden när den år absorberad på plast inte får den konformation som är lämp- lig för bindning av pl7-reaktiva antikroppar, eller att. den kan binda många antikroppar, vilket döljer en möjlig korrelation. Sex bekräftat HIV-positiva sera med tydliga pl7-band reagerade svagt. Fem av dessa sera var utvalda bland barn för reduktion av sannolikheten av tidigare exponering för ett Coxsackie-liknande virus.Regarding the antibody activity against the Coxsackie peptide time among p17-reactive sera diluted 200-fold, it was found that they did not react significantly more than blood donor sera (Pig 2). This may indicate that the Coxsackie peptide, when absorbed on plastic, does not have the conformation suitable for binding of p17-reactive antibodies, or that. it can bind many antibodies, which hides a possible correlation. Six confirmed HIV-positive sera with clear pl7 bands reacted weakly. Five of these sera were selected from children to reduce the likelihood of previous exposure to a Coxsackie-like virus.
Sålunda förelåg inte någon korsreaktivitet hos pl7-antikroppar uppkomna vid HIV-l-infektion gentemot Coxsackie-peptiden.Thus, there was no cross-reactivity of p17 antibodies arising from HIV-1 infection against the Coxsackie peptide.
Slutligen testades 6 serumpar från patienter med aseptisk meningit, vilka hade betydande titerökningar vid det komplementära fixeringstestet med Coxsackie Bl-B6- 470 074- 12 antigen. Man fann att fem av dessa uppvisade tydliga ökningar i absorbansskillnad, och ett reagerade starkt med båda serumen (Fig 2). En CF-antikropptiterökning i detta system indikerar en enterovirusinfektion, inte nödvändigt- vis med Coxsackie Bl. När samma sera testades vid en späd- ning av 1/50 reagerade nästan samtliga starkt (ej visat), vilket vittnar om denna peptidsekvens höga antigenicitet och frekventa igenkänning. Coxsackie-peptiden är ett gruppreaktivt reagens som är lämpligt för serologisk diagnos av enterovirusinfektioner. Korsreaktionen mellan Coxsackie Bl VPl-peptiden och HIV-1 hxb2 pl7 var sålunda enkelriktad från enteroviruset till HIV-1, men inte vice versa. Antikroppreaktioner med Coxsackie-peptiden var mycket vanliga i svenska sera som spätts 50 ggr. Endast ett fåtal av dessa kan även bindas till HVI-1 pl7 vid EIB.Finally, 6 serum pairs were tested from patients with aseptic meningitis, who had significant titer increases in the complementary fixation test with Coxsackie B1-B6-470 074-12 antigen. It was found that five of these showed clear increases in absorbance difference, and one reacted strongly with both serums (Fig. 2). A CF antibody titer increase in this system indicates an enterovirus infection, not necessarily with Coxsackie Bl. When the same sera were tested at a dilution of 1/50, almost all reacted strongly (not shown), which testifies to the high antigenicity and frequent recognition of this peptide sequence. The Coxsackie peptide is a group-reactive reagent suitable for serological diagnosis of enterovirus infections. Thus, the cross-reaction between the Coxsackie B1 VP1 peptide and HIV-1 hxb2 p17 was unidirectional from the enterovirus to HIV-1, but not vice versa. Antibody reactions with the Coxsackie peptide were very common in Swedish sera that are diluted 50 times. Only a few of these can also be linked to HVI-1 p17 at the EIB.
De använda immunoanalyserna beskrivs i den ovannämnda svenska patentansökningen. Coxsackie-antikroppar mättes genom titrering vid en standardmässig, komplementär mik- rotiterantikroppfixeringsanalys med Coxsackie Bl-, B2-, B3-, B4-, B5- och B6-antigener.The immunoassays used are described in the above-mentioned Swedish patent application. Coxsackie antibodies were measured by titration in a standard complementary microtiter antibody fixation assay with Coxsackie B1, B2, B3, B4, B5 and B6 antigens.
De diagnostiska antigenerna enligt föreliggande upp- finning kan användas vid förfaranden med samma syfte som den i patentkraven angivna användningen av de diagnostiska antigenerna.The diagnostic antigens of the present invention can be used in methods having the same purpose as the use of the diagnostic antigens stated in the claims.
Claims (10)
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9002671A SE470074B (en) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Method for diagnosis of picorene and / or flavivirus infection, peptides, diagnostic antigens and vaccine composition with these peptides |
| EP91915656A EP0546031A1 (en) | 1990-08-16 | 1991-08-16 | Enterovirus peptides |
| PCT/SE1991/000542 WO1992003475A1 (en) | 1990-08-16 | 1991-08-16 | Enterovirus peptides |
| AU84002/91A AU649473B2 (en) | 1990-08-16 | 1991-08-16 | Enterovirus peptides |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9002671A SE470074B (en) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Method for diagnosis of picorene and / or flavivirus infection, peptides, diagnostic antigens and vaccine composition with these peptides |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE9002671D0 SE9002671D0 (en) | 1990-08-16 |
| SE9002671L SE9002671L (en) | 1992-02-17 |
| SE470074B true SE470074B (en) | 1993-11-01 |
Family
ID=20380170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE9002671A SE470074B (en) | 1990-08-16 | 1990-08-16 | Method for diagnosis of picorene and / or flavivirus infection, peptides, diagnostic antigens and vaccine composition with these peptides |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0546031A1 (en) |
| AU (1) | AU649473B2 (en) |
| SE (1) | SE470074B (en) |
| WO (1) | WO1992003475A1 (en) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000039303A2 (en) | 1998-12-31 | 2000-07-06 | Chiron Corporation | Modified hiv env polypeptides |
| AU2002320314A1 (en) | 2001-07-05 | 2003-01-21 | Chiron, Corporation | Polynucleotides encoding antigenic hiv type c polypeptides, polypeptides and uses thereof |
| US20030170614A1 (en) | 2001-08-31 | 2003-09-11 | Megede Jan Zur | Polynucleotides encoding antigenic HIV type B polypeptides, polypeptides and uses thereof |
| ES2924914T3 (en) | 2013-03-15 | 2022-10-11 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Human rhinovirus vaccine |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT384363B (en) * | 1982-10-05 | 1987-11-10 | Immuno Ag | METHOD FOR USE OF ANTIGENS REACTIVE PEPTIDES FOR THE PRODUCTION OF VACCINES ACTIVE AGAINST TBE VIRUS INFECTIONS |
| ATE116006T1 (en) * | 1985-04-29 | 1995-01-15 | Genetic Systems Corp | SYNTHETIC ANTIGENS FOR DETECTING AIDS. |
| JPH0768267B2 (en) * | 1986-06-05 | 1995-07-26 | 財団法人阪大微生物病研究会 | Flavivirus antigen |
| JPH01501203A (en) * | 1986-10-27 | 1989-04-27 | フォーニアー，モーリル・ジェイ | Diagnosis and vaccines for Japanese encephalitis virus and similar viruses |
| DE3853693D1 (en) * | 1987-03-20 | 1995-06-08 | Immuno Ag | TBE virus western subtype DNA and RNA molecules, polypeptides encoded by these molecules, and their use. |
| JPH084508B2 (en) * | 1987-09-16 | 1996-01-24 | 国立予防衛生研究所長 | Recombinant vaccinia virus |
| GB8821077D0 (en) * | 1988-09-08 | 1988-10-05 | Wellcome Found | Peptides |
-
1990
- 1990-08-16 SE SE9002671A patent/SE470074B/en not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-08-16 EP EP91915656A patent/EP0546031A1/en not_active Withdrawn
- 1991-08-16 AU AU84002/91A patent/AU649473B2/en not_active Ceased
- 1991-08-16 WO PCT/SE1991/000542 patent/WO1992003475A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU8400291A (en) | 1992-03-17 |
| EP0546031A1 (en) | 1993-06-16 |
| SE9002671D0 (en) | 1990-08-16 |
| WO1992003475A1 (en) | 1992-03-05 |
| AU649473B2 (en) | 1994-05-26 |
| SE9002671L (en) | 1992-02-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110618279B (en) | African swine fever virus epitope antigen polypeptide and application thereof | |
| KR940000755B1 (en) | Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to hcv | |
| JP4097191B2 (en) | HCV-specific peptides and their use | |
| CN110642925B (en) | African swine fever virus synthetic peptide ELISA antibody detection kit | |
| JP3188717B2 (en) | Hepatitis C assay | |
| JP2851278B2 (en) | Antigen for detecting antibody against HTLV-I, peptide composition as vaccine for ATL, and method using the same | |
| CN109485703B (en) | Foot-and-mouth disease A-type structural protein VP1 antigen epitope polypeptide and application thereof | |
| Wang et al. | Immunogenic domains of hepatitis delta virus antigen: peptide mapping of epitopes recognized by human and woodchuck antibodies | |
| TW585872B (en) | Peptides derived from the non-structural proteins of foot and mouth disease virus as diagnostic reagents | |
| Cello et al. | Identification of group-common linear epitopes in structural and nonstructural proteins of enteroviruses by using synthetic peptides | |
| CN111961120B (en) | African swine fever virus MGFs and CD2v ELISA antibody detection kit | |
| CN111978377B (en) | COVID-19 antigen, preparation method and application | |
| CA1340157C (en) | Hiv peptides and methods for detection of hiv | |
| JPH06510861A (en) | Hepatitis C assay | |
| US5824506A (en) | Dengue virus peptides and methods | |
| CN107513101B (en) | Pig foot-and-mouth disease virus non-structural protein antibody enzyme-linked immunoassay kit | |
| US20050100883A1 (en) | Peptide-based diagnostic reagents for SARS | |
| JP2650217B2 (en) | Peptides for diagnosis, treatment and vaccination of HTLV-1 infection | |
| EP0404935B1 (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to htlv-1 | |
| CA2034611C (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to htlv | |
| SE470074B (en) | Method for diagnosis of picorene and / or flavivirus infection, peptides, diagnostic antigens and vaccine composition with these peptides | |
| Choi et al. | Characterization of immunodominant linear B-cell epitopes on the carboxy terminus of the rinderpest virus nucleocapsid protein | |
| Qi et al. | Synthesis and application of hepatitis E virus peptides to diagnosis | |
| BR102021007058B1 (en) | COVID-19 DIAGNOSIS USING SYNTHETIC PEPTIDE ANTIGEN FROM NUCLEOCAPSID PROTEIN | |
| US10921323B2 (en) | Method for the immunological diagnosis of a sample with a potential infection with an arbovirus and test kits suitable for this purpose |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 9002671-7 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 9002671-7 Format of ref document f/p: F |