RU2808675C1 - Method of differential diagnosis of childhood autism of mild severity, atypical autism and schizophrenia in children - Google Patents
Method of differential diagnosis of childhood autism of mild severity, atypical autism and schizophrenia in children Download PDFInfo
- Publication number
- RU2808675C1 RU2808675C1 RU2022118416A RU2022118416A RU2808675C1 RU 2808675 C1 RU2808675 C1 RU 2808675C1 RU 2022118416 A RU2022118416 A RU 2022118416A RU 2022118416 A RU2022118416 A RU 2022118416A RU 2808675 C1 RU2808675 C1 RU 2808675C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- level
- autism
- oxodg
- children
- peripheral blood
- Prior art date
Links
- 201000007197 atypical autism Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 title claims abstract description 30
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 8
- HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2NC(=O)N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 0.000 claims abstract description 43
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 24
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 208000029560 autism spectrum disease Diseases 0.000 abstract description 36
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 abstract description 24
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 abstract description 21
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 abstract description 14
- 102100034533 Histone H2AX Human genes 0.000 abstract description 5
- 101001067891 Homo sapiens Histone H2AX Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 12
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 description 9
- 208000007192 Childhood Schizophrenia Diseases 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 206010061040 Childhood psychosis Diseases 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 230000008789 oxidative DNA damage Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 206010007776 catatonia Diseases 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 2
- 206010012559 Developmental delay Diseases 0.000 description 2
- 208000012239 Developmental disease Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000001660 hyperkinetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 2
- 230000036630 mental development Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 208000010594 motor stereotypies Diseases 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000008132 psychomotor development Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000003007 single stranded DNA break Effects 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- VFNKZQNIXUFLBC-UHFFFAOYSA-N 2',7'-dichlorofluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Cl)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(Cl)C(O)=C1 VFNKZQNIXUFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXEZTIWVRVSYOK-UHFFFAOYSA-N 2-(3,6-diacetyloxy-2,7-dichloro-9h-xanthen-9-yl)benzoic acid Chemical compound C1=2C=C(Cl)C(OC(=O)C)=CC=2OC2=CC(OC(C)=O)=C(Cl)C=C2C1C1=CC=CC=C1C(O)=O PXEZTIWVRVSYOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001022 Acute psychosis Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 206010014128 Echopraxia Diseases 0.000 description 1
- 101710195517 Histone H2AX Proteins 0.000 description 1
- 108010028275 Leukocyte Elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016799 Leukocyte elastase Human genes 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 208000036626 Mental retardation Diseases 0.000 description 1
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 1
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 206010028899 Negativism Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010023918 S100 Calcium Binding Protein beta Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000011425 S100 Calcium Binding Protein beta Subunit Human genes 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004630 mental health Effects 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002610 neuroimaging Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004796 pathophysiological change Effects 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009457 physiological apoptosis Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000005783 single-strand break Effects 0.000 description 1
- 230000003997 social interaction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Настоящее изобретение относится к области медицинской генетики, молекулярной биологии, психиатрии и может быть использовано в детской психиатрии, а именно для выявления тяжести течения расстройств аутистического спектра и шизофрении у детей на основании уровня окислительных повреждений ДНК в клетках периферической крови и характеристик циркулирующей внеклеточной ДНК, и может быть использовано для клинико-биологической оценки необходимости введения психофармакотерапии пациентов детского возраста с расстройством аутистического спектра и детской шизофренией.The present invention relates to the field of medical genetics, molecular biology, psychiatry and can be used in child psychiatry, namely to identify the severity of autism spectrum disorders and schizophrenia in children based on the level of oxidative DNA damage in peripheral blood cells and the characteristics of circulating extracellular DNA, and can be used for clinical and biological assessment of the need to introduce psychopharmacotherapy for pediatric patients with autism spectrum disorder and childhood schizophrenia.
Расстройства аутистического спектра (РАС) - одна из наиболее сложных проблем современной психиатрии XXI века [1]. РАС характеризуется наличием нарушений психического развития, отсутствием способности к коммуникации и социальному взаимодействию, наличием стереотипности поведения, социальной дезадаптацией [2]. По данным Минздрава РФ, общая численность детей с расстройством аутистического спектра, согласно мониторингу 2020 года, превысила 32 тысячи человек [3]. Проведенный мониторинг выявил выраженную динамику увеличения численности детей с РАС по сравнению с 2019 годом на 42%, и в 2,3 раза - по сравнению с 2014 годом [3]. В декабре 2018 года Минздраву поручено организовать в России систему раннего выявления детского аутизма и дальнейшей маршрутизации детей с РАС [3]. По последним эпидемиологическим данным в России показатели общей заболеваемости детей шизофренией увеличиваются на 6,5% за два года, так, число детей, больных шизофренией, увеличилось с 13,53 тысяч на 100 тысяч населения в 2000 году до 14,41 тысяч на 100 тысяч населения в 2018 году [13]. На лечение психических расстройств у детей расходуется существенная доля бюджета РФ. Своевременно поставленный правильный диагноз психического расстройства у ребенка позволит назначить эффективное лечение и реабилитационные мероприятия, что может привести к выздоровлению или улучшению состояния у детей с психическими расстройствами [4].Autism spectrum disorders (ASD) are one of the most difficult problems of modern psychiatry of the 21st century [1]. ASD is characterized by the presence of mental development disorders, lack of ability to communicate and social interaction, the presence of stereotypical behavior, and social maladjustment [2]. According to the Ministry of Health of the Russian Federation, the total number of children with autism spectrum disorder, according to 2020 monitoring, exceeded 32 thousand people [3]. The monitoring revealed a pronounced increase in the number of children with ASD compared to 2019 by 42%, and 2.3 times compared to 2014 [3]. In December 2018, the Ministry of Health was instructed to organize in Russia a system for early detection of childhood autism and further routing of children with ASD [3]. According to the latest epidemiological data in Russia, the overall incidence of schizophrenia in children is increasing by 6.5% over two years, so the number of children with schizophrenia has increased from 13.53 thousand per 100 thousand population in 2000 to 14.41 thousand per 100 thousand population in 2018 [13]. A significant share of the Russian budget is spent on the treatment of mental disorders in children. A timely and correct diagnosis of a mental disorder in a child will allow the appointment of effective treatment and rehabilitation measures, which can lead to recovery or improvement in the condition of children with mental disorders [4].
Неоднородность и сложность патогенеза являются основными препятствиями для дифференциальной диагностики степени тяжести шизофрении и расстройств аутистического спектра у детей [4]. Наряду с изучением генетической составляющей психических заболеваний, биологи и клиницисты в настоящее время все больше внимания уделяют анализу патофизиологических изменений, наблюдаемых при РАС и детской шизофрении, что способствует дифференциальной диагностике психических расстройств и пониманию их этиологии и патогенеза [7, 8]. Достижения молекулярной биологии в понимании ключевых биологических механизмов, лежащих в основе окислительного стресса, развитие инструментальных методов визуализации и диагностики головного мозга, привели к возрастающему вниманию исследователей к роли окислительного стресса в патогенезе психических расстройств, в том числе, аутизма и шизофрении [5, 7, 10]. У пациентов с шизофренией и с РАС отмечаются признаки окислительного стресса не только в мозге пациентов, но и системно - в периферической крови [5, 10]. Окислительный стресс возникает в результате дисбаланса между избыточным синтезом активных форм кислорода (АФК) и дефицитом антиоксидантов [6, 9]. Окислительный стресс, вероятно, может увеличивать риск развития психоза в кризовые «уязвимые» периоды онтогенеза, «физиологического апоптоза» [11]. Свободные радикалы, накапливающиеся при развитии окислительного стресса, могут вызывать окислительные модификации и образование разрывов внеклеточной ДНК и ядерной ДНК клеток крови [6]. Маркеры окислительного стресса могут не только свидетельствовать о тяжести течения психических расстройств в континууме РАС и шизофрении с началом в детском возрасте (ШД) [4], но и представлять собой биомаркеры для определения стратегий лечения пациентов с психозами: инфантильным психозом (ИП) при детском аутизме (ДА), атипичным детским психозом (АДП) при атипичном аутизме (АА) и шизофренией с началом в детском возрасте.The heterogeneity and complexity of pathogenesis are the main obstacles to the differential diagnosis of the severity of schizophrenia and autism spectrum disorders in children [4]. Along with studying the genetic component of mental illnesses, biologists and clinicians are now paying more and more attention to the analysis of pathophysiological changes observed in ASD and childhood schizophrenia, which contributes to the differential diagnosis of mental disorders and understanding of their etiology and pathogenesis [7, 8]. Advances in molecular biology in understanding the key biological mechanisms underlying oxidative stress and the development of instrumental methods for brain imaging and diagnostics have led to increasing research attention to the role of oxidative stress in the pathogenesis of mental disorders, including autism and schizophrenia [5, 7, 10]. Patients with schizophrenia and ASD show signs of oxidative stress not only in the patients’ brain, but also systemically in the peripheral blood [5, 10]. Oxidative stress results from an imbalance between excess production of reactive oxygen species (ROS) and deficiency of antioxidants [6, 9]. Oxidative stress can probably increase the risk of developing psychosis during critical “vulnerable” periods of ontogenesis, “physiological apoptosis” [11]. Free radicals that accumulate during the development of oxidative stress can cause oxidative modifications and the formation of breaks in extracellular DNA and nuclear DNA of blood cells [6]. Markers of oxidative stress can not only indicate the severity of mental disorders in the continuum of ASD and childhood-onset schizophrenia (CS) [4], but also represent biomarkers for determining treatment strategies for patients with psychoses: infantile psychosis (IP) and childhood autism (DA), atypical childhood psychosis (ACP) with atypical autism (AA) and childhood-onset schizophrenia.
Известны способы диагностики психических расстройств у детей (РАС и ШД), основанные на клиническом наблюдении и психометрическом обследовании пациентов, с использованием международных диагностических и оценочных шкал. Клиническое наблюдение включает клиническую оценку психопатологических проявлений психического расстройства у детей, оценивается синдромальное состояние по характерному комплексу симптомов, проводится оценка выраженности позитивных и негативных психических расстройств, что позволяет определить нозологическую принадлежность расстройства психики пациента. Психометрическое обследование с использованием психометрических шкал позволяет разграничить разные нозологии и оценить степень тяжести отдельных симптомов в виде суммы балов [12]. Недостатком данных способов, включающих клиническую и психометрическую оценку, является субъективность методов, поскольку результаты обслуживания зависят от квалификации и опыта врача.There are known methods for diagnosing mental disorders in children (ASD and SD), based on clinical observation and psychometric examination of patients, using international diagnostic and rating scales. Clinical observation includes a clinical assessment of psychopathological manifestations of a mental disorder in children, the syndromic state is assessed based on a characteristic set of symptoms, and the severity of positive and negative mental disorders is assessed, which makes it possible to determine the nosological affiliation of the patient’s mental disorder. A psychometric examination using psychometric scales makes it possible to distinguish between different nosologies and assess the severity of individual symptoms in the form of a sum of points [12]. The disadvantage of these methods, which include clinical and psychometric assessment, is the subjectivity of the methods, since the results of the service depend on the qualifications and experience of the doctor.
Известен способ диагностики расстройств аутистического спектра у детей с использованием нейрофизиологического маркера РАС, по изменению уровня постоянных потенциалов головного мозга в монополярном отведении от пяти областей: лобной (Fz), центральной (Cz), затылочной (Oz), правой (Td) и левой (Ts) височных. Наличие РАС у ребенка определяют при повышении интенсивности энергообмена в лобном отделе, определяемого по отклонению показателя уровня постоянных потенциалов на одно или более стандартных отклонений [патент РФ №2687580, 2018]. Однако, данный способ позволяет диагностировать РАС, но не обеспечивает дифференциальной диагностики степени тяжести проявления аутизма у детей.There is a known method for diagnosing autism spectrum disorders in children using a neurophysiological marker of ASD, by changing the level of constant brain potentials in a monopolar lead from five areas: frontal (Fz), central (Cz), occipital (Oz), right (Td) and left ( Ts) temporal. The presence of ASD in a child is determined by an increase in the intensity of energy exchange in the frontal region, determined by the deviation of the level of constant potentials by one or more standard deviations [RF patent No. 2687580, 2018]. However, this method makes it possible to diagnose ASD, but does not provide a differential diagnosis of the severity of autism in children.
Известен способ выявления группы риска развития психических расстройств у детей на основании мониторинга биометрических показателей, в частности индикаторов сердечного ритма: индекса напряжения и амплитуды моды. Изменение исследуемых показателей относительно здорового контроля делают вывод о соответствии состояния ребенка группе риска по возникновению РАС [патент РФ №2655073, 2018 г.]. Данный способ обеспечивает упрощенное раннее выявление детей группы риска по возникновению РАС среди выборки детей с нарушениями коммуникативных функций, но не позволяет оценить тяжесть течения РАС.There is a known method for identifying a group at risk of developing mental disorders in children based on monitoring biometric indicators, in particular heart rate indicators: tension index and mode amplitude. Changes in the studied indicators relative to healthy controls make it possible to conclude that the child’s condition corresponds to the risk group for ASD [RF patent No. 2655073, 2018]. This method provides simplified early identification of children at risk for ASD among a sample of children with impaired communication functions, but does not allow assessing the severity of ASD.
Известен также способ диагностики аутизма и на основе определения высоких концентраций определенных пептидов в плазме или сыворотке крови. Способ предусматривает выявление в плазме крови аминокислотных последовательностей SKITHRIHWESASLL, SSKITHRIHWESASLL и SSKITHRIHWESASLLR, с молекулярной массой соответственно 1779±1 Да, 1865±1 Да и 2022±1 Да. Превышение концентраций данных пептидов в 10 и более раз по сравнению с нормой является маркером для диагностики аутизма. [патент РФ №2340900, 2004 г.].There is also a known method for diagnosing autism based on the determination of high concentrations of certain peptides in blood plasma or serum. The method involves detecting in blood plasma the amino acid sequences SKITHRIHWESASLL, SSKITHRIHWESASLL and SSKITHRIHWESASLLR, with a molecular weight of 1779±1 Da, 1865±1 Da and 2022±1 Da, respectively. An increase in the concentrations of these peptides by 10 or more times compared to the norm is a marker for diagnosing autism. [RF patent No. 2340900, 2004].
Известен способ прогнозирования психомоторного развития детей с перинатальным поражением центральной нервной системы, [патент РФ №2475747, 2011 г.]; способ лабораторного выявления последствий перинатальных поражений центральной нервной системы и определения степени их тяжести у детей, [патент РФ №2425371, 2010 г.]; способ определения характера патофизиологических нарушений психомоторного развития детей первого года жизни [патент РФ №2231074, 2003 г.]; способ выявления групп риска развития нервно-психических заболеваний [патент РФ №2218569, 2002 г.], а также лабораторный способ оценки психического состояния пациентов с эндогенными психическими расстройствами по выявлению изменений уровня иммунологических показателей в плазме крови по сравнению с физиологической нормой: активности лейкоцитарной эластазы, функциональной активности α1 протеиназного ингибитора, уровня аутоантител к нейроантигенам - основному белку миелина и белку S100B в комплексе с определением клинических параметров - «Нейро-иммуно-тест» [патент РФ №2643760, 2018 г.], однако ни один из описанных способов не позволяет проводить дифференциальную диагностику тяжести течения аутизма и шизофрении у детей для своевременного назначения эффективной терапии, различающейся при легком и тяжелом течении аутизма, и при шизофрении.There is a known method for predicting the psychomotor development of children with perinatal damage to the central nervous system, [RF patent No. 2475747, 2011]; a method for laboratory detection of the consequences of perinatal lesions of the central nervous system and determining the degree of their severity in children, [RF patent No. 2425371, 2010]; a method for determining the nature of pathophysiological disorders of psychomotor development in children of the first year of life [RF patent No. 2231074, 2003]; a method for identifying risk groups for the development of neuropsychiatric diseases [RF patent No. 2218569, 2002], as well as a laboratory method for assessing the mental state of patients with endogenous mental disorders by identifying changes in the level of immunological parameters in the blood plasma compared to the physiological norm: leukocyte elastase activity , functional activity of α1 proteinase inhibitor, the level of autoantibodies to neuroantigens - myelin basic protein and S100B protein in combination with the determination of clinical parameters - “Neuro-immuno-test” [RF patent No. 2643760, 2018], however, none of the described methods allows for differential diagnosis of the severity of autism and schizophrenia in children for the timely prescription of effective therapy, which differs between mild and severe autism and schizophrenia.
Таким образом, до настоящего времени не существует способа, позволяющего определять тяжесть течения психических расстройств в континууме РАС и ШД, для определения стратегий лечения пациентов с психозами: инфантильным психозом при детском аутизме и атипичным детским психозом при атипичном аутизме и при ШД.Thus, to date there is no way to determine the severity of mental disorders in the continuum of ASD and SD, to determine treatment strategies for patients with psychosis: infantile psychosis in childhood autism and atypical childhood psychosis in atypical autism and SD.
Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the invention
Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является получение способа, позволяющего определять тяжесть течения психических расстройств при расстройствах аутистического спектра и шизофрении у детей для дифференциальной диагностики диагнозов детского аутизма, атипичного аутизма и шизофрении с началом в раннем детском возрасте.The problem to be solved by the claimed invention is to obtain a method that makes it possible to determine the severity of mental disorders in autism spectrum disorders and schizophrenia in children for the differential diagnosis of childhood autism, atypical autism and schizophrenia with onset in early childhood.
Технический результат, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в получении способа определения тяжести течения психических расстройств при РАС и ШД с использованием в качестве маркеров: уровней активных форм кислорода (АФК), 8-oxodG и γН2АХ в мононуклеарах периферической крови, а также концентрации и окислительной модификации внеклеточной ДНК плазмы периферической крови.The technical result obtained in solving the problem is expressed in obtaining a method for determining the severity of mental disorders in ASD and SD using as markers: levels of reactive oxygen species (ROS), 8-oxodG and γH2AX in peripheral blood mononuclear cells, as well as concentration and oxidative modification of extracellular DNA in peripheral blood plasma.
Предлагаемый способ определения тяжести течения психических расстройств при расстройствах аутистического спектра и шизофрении у детей включает следующие стадии:The proposed method for determining the severity of mental disorders in autism spectrum disorders and schizophrenia in children includes the following stages:
А) отбор крови и выделение ДНК: венозную кровь отбирают в вакуумные пробирки с антикоагулянтом; отделяют центрифугированием (400g) плазму; выделяют из плазмы внеклеточную циркулирующую ДНК (вкДНК) экстракцией фенол-хлороформом (однократная экстракция забуференым фенолом рН 8.0, экстракция хлороформом, осаждение изопропиловым спиртом в присутствии 2М ацетата аммония); определяют концентрацию внеклеточной ДНК по флуоресценции ДНК-связывающего красителя (например, методом флуориметрии с ДНК-интеркалирующим красителем PicoGreen (Invitrogen) на планшетном мультиридере EnSpire (PerkinElmer));A) blood sampling and DNA extraction: venous blood is collected into vacuum tubes with an anticoagulant; plasma is separated by centrifugation (400g); extracellular circulating DNA (cfDNA) is isolated from plasma by phenol-chloroform extraction (single extraction with buffered phenol pH 8.0, extraction with chloroform, precipitation with isopropyl alcohol in the presence of 2M ammonium acetate); determine the concentration of extracellular DNA by the fluorescence of a DNA-binding dye (for example, by fluorimetry with the DNA-intercalating dye PicoGreen (Invitrogen) on an EnSpire multi-reader (PerkinElmer));
Б) определение уровня 8-окси-дезоксигуанозина (8-oxodG) в составе внеклеточной ДНК методом дот-иммуноблоттинга по связыванию соответствующих антител на мембранных фильтрах по следующему оригинальному протоколу: пробы внеклеточной ДНК с предварительно измеренной концентрацией наносятся на нитроцеллюлозный фильтр (Optitran, Whatman), по 1 мкл в нескольких повторах, также на этот фильтр наносятся калибровочные образцы - окисленную под воздействием ультрафиолета ДНК с определенным масс-спектрометрически содержанием 8-oxodG; далее фильтры подсушиваются; ДНК иммобилизуется запеканием (80°C, 20 мин); проводятся последовательные обработки: блокировка неспецифического связывания (0,5% сухое обезжиренное молоко на PBS, 30 мин при 37°C), инкубация со специфическими антителами (3 часа в свежеприготовленном растворе мышиных анти-SOHDG антител (SC-66036, SantaCruz, США) 3 мкг/мл в PBS - 0,5% сухое обезжиренное молоко, отмывки (трижды по 5 мин PBS-0,05%TWEEN20), инкубация со вторичными антителами анти-мышь-щелочная фосфатаза (CLCC30008, Cedarline, Канада) в концентрации 1 мкг/мл на PBS-0,05%TWEEN20 30 мин при комнатной температуре, отмывки (дважды по 5 минут PBS-0,05%TWEEN20, один раз 0,05М ТРИС рН 9,5, 0,2М NaCl), проявление в растворе субстрата (BCIP-NBT); обработка полученных сигналов проводится компьютерным анализом изображения фильтра;B) determination of the level of 8-hydroxy-deoxyguanosine (8-oxodG) in the composition of extracellular DNA by dot-immunoblotting using the binding of appropriate antibodies on membrane filters according to the following original protocol: extracellular DNA samples with a pre-measured concentration are applied to a nitrocellulose filter (Optitran, Whatman) , 1 µl in several repetitions, calibration samples are also applied to this filter - DNA oxidized under the influence of ultraviolet with a mass spectrometrically determined content of 8-oxodG; then the filters are dried; DNA is immobilized by baking (80 ° C, 20 min); sequential treatments are carried out: blocking nonspecific binding (0.5% skimmed milk powder in PBS, 30 min at 37 ° C), incubation with specific antibodies (3 hours in a freshly prepared solution of mouse anti-SOHDG antibodies (SC-66036, Santa Cruz, USA) 3 μg/ml in PBS - 0.5% skimmed milk powder, washes (three times for 5 min PBS-0.05%TWEEN20), incubation with secondary antibodies anti-mouse alkaline phosphatase (CLCC30008, Cedarline, Canada) at a concentration of 1 µg/ml on PBS-0.05%TWEEN20 for 30 minutes at room temperature, washing (twice for 5 minutes with PBS-0.05%TWEEN20, once with 0.05M TRIS pH 9.5, 0.2M NaCl), development in substrate solution (BCIP-NBT); processing of the received signals is carried out by computer analysis of the filter image;
В) выделение мононуклеаров периферической крови, которое проводят в системе фиколл-урографин из периферической крови (гепаринизированной);C) isolation of peripheral blood mononuclear cells, which is carried out in the Ficoll-Urografin system from peripheral blood (heparinized);
Г) определение уровня активных форм кислорода (АФК) методом проточной цитометрии осуществляют с помощью красителя 2,7-дихлордигидрофлуоресцеин диацетата (DCFH-DA) («Molecular Probes/Invitrogen», США), который под действием АФК окисляется с образованием флуоресцирующего производного - 2,7-дихлорфлуоресцеина (DCF); краситель добавлют к суспензии клеток (до рабочей концентрации 10 мкМ) и инкубируют 10 минут в темноте, после чего клетки осаждаются и проводят анализ в фосфатно-солевом буфере (PBS, «ПанЭко», Россия) на проточном цитофлуориметре CyFlow® (Sysmex Partec GmbH, Германия);D) determination of the level of reactive oxygen species (ROS) by flow cytometry is carried out using the dye 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) (Molecular Probes/Invitrogen, USA), which under the influence of ROS is oxidized to form a fluorescent derivative - 2 ,7-dichlorofluorescein (DCF); the dye is added to the cell suspension (to a working concentration of 10 μM) and incubated for 10 minutes in the dark, after which the cells are sedimented and analyzed in phosphate-buffered saline (PBS, PanEko, Russia) on a CyFlow® flow cytometer (Sysmex Partec GmbH, Germany);
Д) определение двуцепочечных разрывов ДНК ядер клеток проводят по методу гамма-фокусов: фосфорилирование по остатоку серина 139 высококонсервативного гистона Н2АХ происходит в сайте образования двуцепочечного разрыва ДНК; для проведения анализа клетки фиксируются формальдегидом (3,7% на PBS, 10 мин при 37°C), пермеабилизуются (0,5% Тритон Х-100 («Merck», Германия) 10 мин 24°C), после чего инкубируются с флуоресцентно меченными специфическими антителами к фосфорилированной форме Н2АХ (γН2АХ) (nb100-78356G NovusBio, USA) в рабочей концентрации 1 мкг/мл 2 часа при 24°С; детекция производится методом проточной цитометрии на проточном цитофлуориметре CyFlow® (Sysmex Partec GmbH, Германия);E) determination of double-stranded DNA breaks in cell nuclei is carried out using the gamma-focus method: phosphorylation at serine 139 of the highly conserved histone H2AX occurs at the site of formation of a double-stranded DNA break; For analysis, cells are fixed with formaldehyde (3.7% in PBS, 10 min at 37°C), permeabilized (0.5% Triton X-100 (Merck, Germany) 10 min at 24°C), and then incubated with fluorescently labeled specific antibodies to the phosphorylated form of H2AX (γH2AX) (nb100-78356G NovusBio, USA) at a working concentration of 1 μg/ml for 2 hours at 24°C; detection is carried out by flow cytometry on a CyFlow® flow cytometer (Sysmex Partec GmbH, Germany);
E) определение 8-окси-дезоксигуанозина (8-oxodG) в клетках с использованием проточной цитофлуориметрии: фиксированные формальдегидом (3,7% на PBS, 10 мин при 37°C) клетки пермеабилизируют (0,5% Тритон Х-100 («Мегск», Германия) 10 мин 24°C) и инкубируют с антителами к 8-oxodG, коньюгированными с флуоресцентной меткой (sc393871 «SantaCruz», США) в рабочей концентрации 1 мкг/мл 2 ч при температуре 24°С; уровень 8-окси-дезоксигуанозина (8-oxodG) в ДНК клеток определяется проточной цитометрией на приборе CyFlow® (Sysmex Partec GmbH, Германия).E) determination of 8-hydroxy-deoxyguanosine (8-oxodG) in cells using flow cytometry: formaldehyde-fixed (3.7% in PBS, 10 min at 37°C) cells permeabilized (0.5% Triton X-100 (“ Megsk, Germany) 10 min at 24°C) and incubated with antibodies to 8-oxodG conjugated with a fluorescent label (sc393871 SantaCruz, USA) at a working concentration of 1 μg/ml for 2 h at 24°C; the level of 8-hydroxy-deoxyguanosine (8-oxodG) in cell DNA is determined by flow cytometry using a CyFlow® device (Sysmex Partec GmbH, Germany).
Осуществление изобретенияCarrying out the invention
Для осуществления изобретения была привлечена выборка из 96 больных детского возраста (4-12 лет), отнесенных к трем группам, согласно диагнозам, охарактеризованным на основе клинических критериев МКБ-10 [2], DSM-5 (Diagnostic and Statistical Manual of mental disorders, fifth edition - Диагностическое и статистическое руководство по психическим расстройствам 5-го издания) [14]: 1-я группа - больные с диагнозом детский аутизм (ДА); 2-я группа - больные с диагнозом атипичный аутизм (АА), 3-я группа - больные с диагнозом детская шизофрения (ШД); также была сформирована 4-я группа - групп контроля, состоящая из 34 здоровых доноров соответствующего возраста. Первоначальный скрининг пациентов с РАС осуществлялся психиатром с использованием Рейтинговой шкалы детского аутизма - CARS [15]. Больные шизофренией дети оценивались по шкале PANSS [16]. Критерии включения: больные ДА, инфантильным психозом; больные АА, атипичным детским психозом; больные ШД с началом в раннем детском возрасте. Критерии исключения: больные с синдромальными формами АА (врожденные дефекты обмена веществ, хромосомные аномалии); прогрессирующие дегенеративные заболевания.To implement the invention, a sample of 96 pediatric patients (4-12 years old) was recruited, classified into three groups, according to diagnoses characterized on the basis of clinical criteria ICD-10 [2], DSM-5 (Diagnostic and Statistical Manual of mental disorders, fifth edition - Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 5th edition) [14]: Group 1 - patients diagnosed with childhood autism (DA); Group 2 - patients diagnosed with atypical autism (AA), Group 3 - patients diagnosed with childhood schizophrenia (SC); a 4th group was also formed - control groups, consisting of 34 healthy donors of the appropriate age. Initial screening of patients with ASD was carried out by a psychiatrist using the Childhood Autism Rating Scale - CARS [15]. Children with schizophrenia were assessed using the PANSS scale [16]. Inclusion criteria: patients with YES, infantile psychosis; patients with AA, atypical childhood psychosis; patients with SD with onset in early childhood. Exclusion criteria: patients with syndromic forms of AA (congenital metabolic defects, chromosomal abnormalities); progressive degenerative diseases.
Выборка детей-аутистов была разбита на 2 группы по тяжести течения заболевания. В первую группу вошли 30 детей, больных легкой и средней степенью тяжести аутизма с диагнозом ДА, «инфантильный психоз» (F84.0). Вторую группу составила выборка больных с тяжелым течение аутизма, с диагнозом «атипичный детский психоз» в рамках АА (F84.1) - 28 человек.The sample of autistic children was divided into 2 groups according to the severity of the disease. The first group included 30 children with mild to moderate autism and diagnosed with DA, “infantile psychosis” (F84.0). The second group consisted of a sample of patients with severe autism, diagnosed with “atypical childhood psychosis” within the framework of AA (F84.1) - 28 people.
Выборку детей, больных шизофренией с началом в раннем детском возрасте, злокачественным непрерывным течением (F20.8) составили 38 пациентов.The sample of children with schizophrenia with onset in early childhood and a malignant continuous course (F20.8) consisted of 38 patients.
В выделенных мононуклеарах периферической крови всех подгрупп исследовали уровень АФК (фигура 1). В мононуклеарах периферической крови детей группы 1-й группы (ДА) уровень АФК был на 30-40% выше, чем в мононуклеарах детей из контрольной группы, что свидетельствует о наличии компенсируемого окислительного стресса у этих детей. В группе 2-й (АА) уровень АФК был в 2,2-2,5 раз выше (р<0,01), чем в мононуклеарах детей из контрольной группы, а в группе 3-й детей с диагнозом ШД уровень АФК в 3-3,3 раза выше (р<0,01), чем в мононуклеарах детей из контрольной группы (фигура 1). Таким образом, повышение уровня АФК в выделенных мононуклеарах периферической крови в 2-2,8 раз и в 2,8-3,5 раз может служить маркером уровня выраженного окислительного стресса у детей с тяжелым АА и ШД, соответственно.The level of ROS was studied in isolated peripheral blood mononuclear cells of all subgroups (Figure 1). In the peripheral blood mononuclear cells of children of group 1 (DA), the level of ROS was 30-40% higher than in the mononuclear cells of children from the control group, which indicates the presence of compensated oxidative stress in these children. In group 2 (AA), the level of ROS was 2.2-2.5 times higher (p <0.01) than in mononuclear cells of children from the control group, and in group 3 of children diagnosed with SD, the level of ROS in 3-3.3 times higher (p<0.01) than in mononuclear cells of children from the control group (Figure 1). Thus, an increase in the level of ROS in isolated peripheral blood mononuclear cells by 2-2.8 times and 2.8-3.5 times can serve as a marker of the level of severe oxidative stress in children with severe AA and SD, respectively.
При оценке уровеня 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови детей с РАС, ШД и здоровых детей в мононуклеарах крови пациентов из группы 1 (ДА) медиана уровня 8-oxodG была недостоверно выше этого показателя, чем у детей из контрольной выборки (фигура 2). Однако, уровень 8-oxodG в мононуклеарах крови пациентов из 2-й группы (АА) был в 2 раза выше, чем в контрольной выборке (р<0,01, фигура 2). Уровень 8-oxodG в мононуклеарах крови пациентов из 3-й группы (ШД) был в 2,8-3 раза выше (р<0,01), чем у детей из контрольной выборки (р<0,01, фигура 2). Повышение уровня 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови в 2-2,8 раз и в 2,8-3,5 раз также может служить маркером уровня выраженности окислительного стресса у детей, соответственно, с тяжелым АА и ШД.When assessing the level of 8-oxodG in peripheral blood mononuclear cells of children with ASD, SD and healthy children, in the blood mononuclear cells of patients from group 1 (DA), the median level of 8-oxodG was not significantly higher than this indicator than in children from the control sample (Figure 2). However, the level of 8-oxodG in the blood mononuclear cells of patients from group 2 (AA) was 2 times higher than in the control sample (p <0.01, Figure 2). The level of 8-oxodG in the blood mononuclear cells of patients from group 3 (SD) was 2.8-3 times higher (p<0.01) than in children from the control sample (p<0.01, Figure 2). An increase in the level of 8-oxodG in peripheral blood mononuclear cells by 2-2.8 times and 2.8-3.5 times can also serve as a marker of the level of severity of oxidative stress in children, respectively, with severe AA and SD.
В мононуклеарах крови пациентов из группы 1 (ДА) медиана уровня γН2АХ, отражающего уровень двунитевых разрывов, в ядрах мононуклеаров была недостоверно выше этого показателя у детей из контрольной выборки (фигура 2). Уровень γН2АХ в ядрах мононуклеаров крови пациентов из 2-й группы (АА) был в 2 раза выше, чем в контрольной выборке (р<0,01, фигура 2). Уровень γН2АХ в мононуклеарах крови пациентов из 3-й группы (ШД) был в 2,6-2,9 раза выше (р<0,01), чем у детей из контрольной выборки (р<0.01, фигура 2). Повышение уровня γН2АХ в мононуклеарах периферической крови в 2-2,5 раз и в 2,6-3,5 раз может служить маркером уровня генотоксического повреждения ДНК мононуклеаров периферической крови у детей, соответственно, с тяжелым АА и ШД.In the blood mononuclear cells of patients from group 1 (DA), the median level of γH2AX, reflecting the level of double-strand breaks, in the nuclei of mononuclear cells was not significantly higher than this indicator in children from the control sample (Figure 2). The level of γH2AX in the nuclei of blood mononuclear cells of patients from group 2 (AA) was 2 times higher than in the control sample (p <0.01, Figure 2). The level of γH2AX in the blood mononuclear cells of patients from group 3 (SD) was 2.6-2.9 times higher (p<0.01) than in children from the control sample (p<0.01, figure 2). An increase in the level of γH2AX in peripheral blood mononuclear cells by 2-2.5 times and 2.6-3.5 times can serve as a marker of the level of genotoxic DNA damage in peripheral blood mononuclear cells in children with severe AA and SD, respectively.
Таким образом, при тяжелой степени аутизма (АА по МКБ-10), так же, как и при шизофрении в детском возрасте, окислительный стресс имеет геннотоксичный эффект, что проявляется в накопление одно- и двуцепочечных разрывов в ядрах клеток периферической крови.Thus, in severe autism (AA according to ICD-10), as well as in schizophrenia in childhood, oxidative stress has a genotoxic effect, which is manifested in the accumulation of single- and double-strand breaks in the nuclei of peripheral blood cells.
На фигуре 3 представлены результаты измерения концентрации вкДНК в образцах плазмы пациентов с РАС, шизофренией в детском возрасте и здоровых детей из контрольной выборки. Обнаружили статистически значимое повышение уровня вкДНК в плазме в группах 1 (ДА) и 2 (АА) и в группе 3 (ШД) по сравнению со здоровыми детьми из контрольной группы (р<0,001, фигура 3); кроме того, статистически значимое различие было достигнуто и при сравнении значений концентрации в группе 1 (ДА) и в группе 2 (АА) (р<0,01), а также в группе 1 (ДА) и в группе 3 (ШД) (р<0,01). Во 2-й группе (АА - тяжелая форма РАС) среднее значение концентрации вкДНК было приблизительно в 3,5 раза выше, чем тот же показатель у здоровых людей (р<0,001), в группе 3 (ШД) значение концентрации вкДНК было приблизительно в 3,2 раза выше, чем тот же показатель у здоровых людей (р<0,001). Вероятно, более низкие значения концентрации в выборке детей, больных шизофренией, по сравнению с выборкой детей с тяжелой степенью аутизма обусловлены более высокой активностью компонентов системы элиминации вкДНК из кровотока на фоне повышенного уровня повреждения ДНК лимфоцитов крови. У пациентов группы 1 (легкая и средняя тяжесть РАС), увеличение концентрации вкДНК по сравнению с нормальным исходным уровнем была достоверной, хоть и менее выраженной (р=0,0096). Повышение концентрации вкДНК в плазме крови в 3-4 раза сопровождает течение тяжелой формы РАС и ДШ.Figure 3 presents the results of measuring cfDNA concentrations in plasma samples from patients with ASD, childhood schizophrenia, and healthy children from the control sample. We found a statistically significant increase in the level of cfDNA in plasma in groups 1 (DA) and 2 (AA) and in group 3 (SD) compared to healthy children from the control group (p <0.001, figure 3); in addition, a statistically significant difference was achieved when comparing concentration values in group 1 (DA) and in group 2 (AA) (p <0.01), as well as in group 1 (DA) and in group 3 (SD) ( p<0.01). In group 2 (AA - severe form of ASD), the average cfDNA concentration was approximately 3.5 times higher than the same indicator in healthy people (p <0.001); in group 3 (SD), the cfDNA concentration was approximately 3.2 times higher than the same indicator in healthy people (p <0.001). Probably, the lower concentration values in the sample of children with schizophrenia compared to the sample of children with severe autism are due to the higher activity of the components of the system for eliminating cfDNA from the bloodstream against the background of an increased level of DNA damage to blood lymphocytes. In patients of group 1 (mild and moderate severity of ASD), the increase in cfDNA concentration compared to the normal baseline level was significant, although less pronounced (p = 0.0096). An increase in the concentration of cfDNA in the blood plasma by 3-4 times accompanies the course of severe forms of ASD and SD.
Уровень 8-oxodG в составе вкДНК детей больных аутизмом и шизофренией: количество 8-oxodG в составе вкДНК повышается в 3,3-3,7 раз (р<0,01) в группе 3 (ШД), и в 2,5-3 раза (р<0,01) в группе 2 пациентов с АА (с тяжелым течением РАС); в группе 1 пациентов с ДА (легкой и средним течением РАС) различий с контролем не наблюдается (фигура 3). Повышение уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 2,5-3,3 раза и в 3,3-4 раза также может служить маркером уровня выраженности окислительного стресса у детей с тяжелым АА и ШД соответственно.The level of 8-oxodG in cfDNA of children with autism and schizophrenia: the amount of 8-oxodG in cfDNA increases by 3.3-3.7 times (p <0.01) in group 3 (SD), and by 2.5- 3 times (p<0.01) in group 2 patients with AA (with severe ASD); in group 1 of patients with DA (mild and moderate ASD), no differences from controls were observed (Figure 3). An increase in the level of 8-oxodG in the cfDNA of peripheral blood plasma by 2.5-3.3 times and 3.3-4 times can also serve as a marker of the level of severity of oxidative stress in children with severe AA and SD, respectively.
Полученные результаты дают основания считать, что окислительный стресс (его маркеры - в периферической крови: уровень АФК, уровень 8-oxodG; уровень γН2АХ; в плазме периферической крови: концентрация вкДНК; 8-oxodG в составе внеклеточной ДНК), его генотоксическое воздействие на ДНК клеток крови входит в число факторов, определяющих тяжесть течения РАС и сопровождает течение ШД. Диагноз атипичного аутизма подтверждается при повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2-2,8 раз, уровня γН2АХ в 2-2,5 раз, концентрации вкДНК в 3-4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 2,5-3,3 раза по сравнению с контролем. Диагноз шизофрении с началом в детском возрасте подтверждается при повышении в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 2,8-3,5 раз, уровня γН2АХ в 2,6-3,5 раз, концентрации вкДНК в 3-4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3,3-4 раза по сравнению с контролем.The results obtained give grounds to believe that oxidative stress (its markers in peripheral blood: ROS level, 8-oxodG level; γH2AX level; in peripheral blood plasma: cfDNA concentration; 8-oxodG in extracellular DNA), its genotoxic effect on DNA blood cells is one of the factors that determine the severity of ASD and accompanies the course of SD. The diagnosis of atypical autism is confirmed by an increase in the level of ROS and 8-oxodG in peripheral blood mononuclear cells by 2-2.8 times, the level of γH2AX by 2-2.5 times, the concentration of cfDNA by 3-4 times, the level of 8-oxodG in plasma cfDNA peripheral blood 2.5-3.3 times compared to the control. The diagnosis of schizophrenia with onset in childhood is confirmed when the level of ROS and 8-oxodG in peripheral blood mononuclear cells increases by 2.8-3.5 times, the level of γH2AX by 2.6-3.5 times, the concentration of cfDNA by 3-4 times, the level of 8-oxodG in the composition of cfDNA in peripheral blood plasma was 3.3-4 times compared to the control.
Статистическую обработку проводили с использованием программы Excel Microsoft Office, Statistica 6.0, StatGraph. При анализе предполагаемых различий между выборками исходили из нуль-гипотезы об отсутствии различий, которую проверяли с помощью расчета U-критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при р<0,01.Statistical processing was carried out using Excel Microsoft Office, Statistica 6.0, StatGraph. When analyzing the expected differences between samples, we proceeded from the null hypothesis of no differences, which was tested using the Mann-Whitney U test. Differences were considered significant at p<0.01.
Пример 1.Example 1.
У пациента Д., 9 лет, в процессе обследования с использованием дифференциально-диагностических шкал CARS, BFCRS, PSP был поставлен диагноз детского аутизма (ДА), «инфантильного психоза» (F84.0). Наблюдались кататонические расстройства, которые имели генерализованный гиперкинетический характер, эхопраксия, поведенческие и двигательные стереотипии, моторное возбуждение сопровождалось негативизмом, речь отсутствовала. Для исключения диагноза атипичного аутизма провели молекулярно-биологическое исследование уровня окислительных повреждений ДНК. Повышение уровня АФК и 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови по сравнению с контролем было незначительным - в 1,2-1,4 раза, уровня γН2АХ - в 1,3 раз; концентрация вкДНК плазмы периферической крови возрастала в 1,6 раз, однако, уровень 8-oxodG в составе вкДНК не отличался от контроля. Был подтвержден диагноз детского аутизма (ДА), «инфантильного психоза» (F84.0), исключен диагноз атипичного аутизма.Patient D., 9 years old, was diagnosed with childhood autism (CA), “infantile psychosis” (F84.0) during examination using the differential diagnostic scales CARS, BFCRS, PSP. Catatonic disorders were observed, which were of a generalized hyperkinetic nature, echopraxia, behavioral and motor stereotypies, motor agitation was accompanied by negativism, and there was no speech. To exclude the diagnosis of atypical autism, a molecular biological study of the level of oxidative DNA damage was performed. The increase in the level of ROS and 8-oxodG in peripheral blood mononuclear cells compared to the control was insignificant - 1.2-1.4 times, the level of γH2AX - 1.3 times; the concentration of cfDNA in peripheral blood plasma increased 1.6 times; however, the level of 8-oxodG in cfDNA did not differ from the control. The diagnosis of childhood autism (CA), “infantile psychosis” (F84.0) was confirmed, and the diagnosis of atypical autism was excluded.
Пример 2.Example 2.
У пациентки М., 5 лет, с использованием дифференциально-диагностических шкал CARS, BFCRS, PSP был поставлен диагноз «атипичный детский психоз», АА (F84.1). Наблюдался острый психоз с кататонической симптоматикой, гиперкинетическое возбуждение, двигательные стереотипии, отсутствие речи, когнитивный дефект. Для подтверждения диагноза атипичного аутизма провели молекулярно-биологическое исследование уровня окислительных повреждений ДНК. Повышение уровня АФК и 8-oxodG в мононуклеарах периферической крови по сравнению с контролем было в 2,5 и 2,7 раз, соответственно; уровня γН2АХ - в 2,4 раз, концентрации вкДНК в 3,4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3 раза по сравнению с контролем. Диагноз атипичного аутизма был лабораторными методами подтвержден.Patient M., 5 years old, was diagnosed with “atypical childhood psychosis”, AA (F84.1), using the differential diagnostic scales CARS, BFCRS, PSP. Acute psychosis with catatonic symptoms, hyperkinetic agitation, motor stereotypies, lack of speech, and cognitive defect were observed. To confirm the diagnosis of atypical autism, a molecular biological study of the level of oxidative DNA damage was carried out. The increase in the level of ROS and 8-oxodG in peripheral blood mononuclear cells compared to the control was 2.5 and 2.7 times, respectively; the level of γH2AX - by 2.4 times, the concentration of cfDNA by 3.4 times, the level of 8-oxodG in cfDNA of peripheral blood plasma by 3 times compared to the control. The diagnosis of atypical autism was confirmed by laboratory methods.
Пример 3.Example 3.
Пациенту Ф., 4 года, с использованием дифференциально-диагностических шкал PANSS, BFCRS, PSP поставлен диагноз шизофрении с началом в раннем детском возрасте - ШД (F20.8). Речь отсутствовала, наблюдалась кататоничесая симптоматика, астения, снижения энергетического потенциала, эмоциональное оскуднение, олигофреноподобный дефект. Для подтверждения диагноза ДШ провели молекулярно-биологическое исследование уровня окислительных повреждений ДНК. Обнаружено повышение в мононуклеарах периферической крови уровня АФК и 8-oxodG в 3,2 и 3,5 раз, соответственно; уровня γН2АХ в 3,4 раза, концентрации вкДНК в 4 раза, уровня 8-oxodG в составе вкДНК плазмы периферической крови в 3,8 раза по сравнению с контролем, что подтверждает у пациента Ф. диагноз ШД. Краткое описание чертежейPatient F., 4 years old, was diagnosed with schizophrenia with onset in early childhood - SD (F20.8) using the differential diagnostic scales PANSS, BFCRS, PSP. There was no speech, catatonic symptoms, asthenia, decreased energy potential, emotional impoverishment, and an oligophrenia-like defect were observed. To confirm the diagnosis of DS, a molecular biological study of the level of oxidative DNA damage was performed. An increase in the level of ROS and 8-oxodG in peripheral blood mononuclear cells was detected by 3.2 and 3.5 times, respectively; the level of γH2AX by 3.4 times, the concentration of cfDNA by 4 times, the level of 8-oxodG in cfDNA of peripheral blood plasma by 3.8 times compared to the control, which confirms the diagnosis of SD in patient F. Brief description of drawings
Фигура 1. Уровень флуоресценции DCF (красителя 2,7-дихлорфлуоресцеина), соответствующий уровню синтеза активных форм кислорода (АФК) в мононуклеарах периферической крови детей с ДА, АА, ШД и здоровых детей. Группа 1- с диагнозом ДА, группа 2- с диагнозом АА, группа 3- с диагнозом ШД, контроль - контрольная группа здоровых детей (*- различия с контрольной группой достоверны, р<0,01).Figure 1. The level of DCF fluorescence (dye 2,7-dichlorofluorescein), corresponding to the level of synthesis of reactive oxygen species (ROS) in peripheral blood mononuclear cells of children with DA, AA, SD and healthy children. Group 1 - with a diagnosis of DA, group 2 - with a diagnosis of AA, group 3 - with a diagnosis of SD, control - a control group of healthy children (* - differences with the control group are significant, p < 0.01).
Фигура 2. Уровень 8-oxodG в мононуклеарах (А) и уровень γН2АХ в ядрах мононуклеарах (Б) периферической крови детей с ДА, АА, ШД и здоровых детей. Группа 1- с диагнозом ДА, группа 2- с диагнозом АА, группа 3- с диагнозом ШД, контроль - контрольная группа здоровых детей (*- различия с контрольной группой достоверны, р<0.01).Figure 2. The level of 8-oxodG in mononuclear cells (A) and the level of γH2AX in the nuclei of mononuclear cells (B) in the peripheral blood of children with DA, AA, SD and healthy children. Group 1 - with a diagnosis of DA, group 2 - with a diagnosis of AA, group 3 - with a diagnosis of SD, control - a control group of healthy children (* - differences with the control group are significant, p < 0.01).
Фигура 3. Концентрация внеклеточной ДНК (А) и содержание 8-oxodG в образцах внеклеточной ДНК (Б) плазмы периферической крови детей с диагнозом ДА, АА, ШД и здоровых детей. Группа 1- с диагнозом ДА, группа 2- с диагнозом АА, группа 3- с диагнозом ШД, контроль - контрольная группа здоровых детей (*- различия с контрольной группой достоверны, р<0,01).Figure 3. Concentration of extracellular DNA (A) and 8-oxodG content in extracellular DNA samples (B) of peripheral blood plasma of children diagnosed with DA, AA, SD and healthy children. Group 1 - with a diagnosis of DA, group 2 - with a diagnosis of AA, group 3 - with a diagnosis of SD, control - a control group of healthy children (* - differences with the control group are significant, p < 0.01).
Список литературыBibliography
1. Иванов М.В., Симашкова Н.В., Козловская Г.В. Нарушения психического развития у детей раннего возраста: скрининг, распространенность, профилактика В сборнике: Дети. Общество. Будущее, сборник научных статей по материалам III Конгресса «Психическое здоровье человека XXI века». Москва, 2020. С. 234-236.1. Ivanov M.V., Simashkova N.V., Kozlovskaya G.V. Mental development disorders in young children: screening, prevalence, prevention In the collection: Children. Society. The Future, a collection of scientific articles based on materials from the III Congress “Human Mental Health of the 21st Century”. Moscow, 2020. pp. 234-236.
2. Психические расстройства и расстройства поведения (F00-F99). Класс V МКБ-10, адаптированный для использования в Российской Федерации. Под общей редакцией Казаковцева Б.А., Голланда В.Б. - М.: Минздрав России; 1998: 512 с.2. Mental disorders and behavioral disorders (F00-F99). Class V ICD-10, adapted for use in the Russian Federation. Under the general editorship of Kazakovtsev B.A., Holland V.B. - M.: Ministry of Health of Russia; 1998: 512 p.
3. Хаустов А.В., Шумских М.А. Динамика в развитии системы образования детей с расстройствами аутистического спектра в России: результаты Всероссийского мониторинга 2020 года // Аутизм и нарушения развития. 2021. Том 19. №1 (70). С. 4-11. DOI: https://doi.org/10.17759/autdd.202119010.3. Khaustov A.V., Shumskikh M.A. Dynamics in the development of the education system for children with autism spectrum disorders in Russia: results of the All-Russian Monitoring 2020 // Autism and Developmental Disorders. 2021. Volume 19. No. 1 (70). pp. 4-11. DOI: https://doi.org/10.17759/autdd.202119010.
4. Simashkova NV, Boksha IS, Klyushnik TP, Iakupova LP, Ivanov MV, Mukaetova-Ladinska EB. Diagnosis and Management of Autism Spectrum Disorders in Russia: Clinical-Biological Approaches. Journal Autism and Developmental Disorders. 2019; 49(9):3906-3914.4. Simashkova NV, Boksha IS, Klyushnik TP, Iakupova LP, Ivanov MV, Mukaetova-Ladinska EB. Diagnosis and Management of Autism Spectrum Disorders in Russia: Clinical-Biological Approaches. Journal Autism and Developmental Disorders. 2019; 49(9):3906–3914.
5. Shmarina GV, Ershova ES, Simashkova NV, Nikitina SG, Chudakova JM, Veiko NN, Porokhovnik LN, Basova AY, Shaposhnikova AF, Pukhalskaya DA, Pisarev VM, Korovina NJ, Gorbachevskaya NL, Dolgikh OA, Bogush M, Kutsev SI, Kostyuk SV. Oxidized cell-free DNA as a stress-signaling factor activating the chronic inflammatory process in patients with autism spectrum disorders. Journal of Neuroinflammation. 2020 Jul 16; 17(1):212.5. Shmarina GV, Ershova ES, Simashkova NV, Nikitina SG, Chudakova JM, Veiko NN, Porokhovnik LN, Basova AY, Shaposhnikova AF, Pukhalskaya DA, Pisarev VM, Korovina NJ, Gorbachevskaya NL, Dolgikh OA, Bogush M, Kutsev SI, Kostyuk SV. Oxidized cell-free DNA as a stress-signaling factor activating the chronic inflammatory process in patients with autism spectrum disorders. Journal of Neuroinflammation. 2020 Jul 16; 17(1):212.
6. Fraguas D, Arango C. Oxidative Stress and Inflammation in Early Onset First Episode Psychosis: A Systematic Review and Meta-Analysis. International Journal of Neuropsychopharmacology. Jun 2017; 20(6):435-444.6. Fraguas D, Arango C. Oxidative Stress and Inflammation in Early Onset First Episode Psychosis: A Systematic Review and Meta-Analysis. International Journal of Neuropsychopharmacology. Jun 2017; 20(6):435-444.
7. Thorsen M. Oxidative stress, metabolic and mitochondrial abnormalities associated with autism spectrum disorder. Progress in Molecular Biology and Translational Science. 2020; 173:331-354.7. Thorsen M. Oxidative stress, metabolic and mitochondrial abnormalities associated with autism spectrum disorder. Progress in Molecular Biology and Translational Science. 2020; 173:331-354.
8. McGrath JJ, Mortensen PB, Visscher PM, Wray NR. Where GWAS and epidemiology meet: opportunities for the simultaneous study of genetic and environmental risk factors in schizophrenia. Schizophrenia Bulletin. Sep 2013; 39(5):955-959.8. McGrath JJ, Mortensen PB, Visscher PM, Wray NR. Where GWAS and epidemiology meet: opportunities for the simultaneous study of genetic and environmental risk factors in schizophrenia. Schizophrenia Bulletin. Sep 2013; 39(5):955-959.
9. Abdul F, Sreenivas N, Kommu JVS, Banerjee M, Berk M, Maes M, Leboyer M, Debnath M. Disruption of circadian rhythm and risk of autism spectrum disorder: role of immune-inflammatory, oxidative stress, metabolic and neurotransmitter pathways. Reviews in the Neurosciences. 2021 May 17; ():000010151520210022.9. Abdul F, Sreenivas N, Kommu JVS, Banerjee M, Berk M, Maes M, Leboyer M, Debnath M. Disruption of circadian rhythm and risk of autism spectrum disorder: role of immune-inflammatory, oxidative stress, metabolic and neurotransmitter pathways . Reviews in the Neurosciences. 2021 May 17; ():000010151520210022.
10. Koga M, Serritella AV, Sawa A, Sedlak TW. Implications for reactive oxygen species in schizophrenia pathogenesis. Schizophrenia Research. 2016; 176:52-71.10. Koga M, Serritella AV, Sawa A, Sedlak TW. Implications for reactive oxygen species in schizophrenia pathogenesis. Schizophrenia Research. 2016; 176:52-71.
11. Башина B.M., Горбачевская Н.Л., Клюшник Т.П., Симашкова Н.В., Якупова Л.П., Даниловская Е.В., Туркова И.Л. Маркеры критических периодов онтогенеза и их связь с психическими расстройствами у детей// XII Съезд психиатров России. М. 1995, с. 361-363.11. Bashina B.M., Gorbachevskaya N.L., Klyushnik T.P., Simashkova N.V., Yakupova L.P., Danilovskaya E.V., Turkova I.L. Markers of critical periods of ontogenesis and their connection with mental disorders in children // XII Congress of Russian Psychiatrists. M. 1995, p. 361-363.
12. Тиганов А.С. Психиатрия: Руководство для врачей в двух томах. - М.: Медицина. 2012,808 с.12. Tiganov A.S. Psychiatry: A Guide for Doctors in two volumes. - M.: Medicine. 2012.808 pp.
13. Балакирева Е. Е, Иванов М.В., Коваль-Зайцев А.А, Куликов А.В., Макушкин Е.В., Никитина С.Г., Пережогин Л.О., Симашкова Н.В. Шизофрения у детей. Клинические рекомендации РФ. - М.: МЗ РФ. 2021, 63 с.13. Balakireva E. E., Ivanov M.V., Koval-Zaitsev A.A., Kulikov A.V., Makushkin E.V., Nikitina S.G., Perezhogin L.O., Simashkova N.V. Schizophrenia in children. Clinical recommendations of the Russian Federation. - M.: Ministry of Health of the Russian Federation. 2021, 63 p.
14. American Psychiatric Association. Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fifth Edition (DSM-5). Arlington, VA: American Psychiatric Publishing. 2013: 992 p.14. American Psychiatric Association. Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fifth Edition (DSM-5). Arlington, VA: American Psychiatric Publishing. 2013: 992 p.
15. Schopler E, Reichler R, Rochen Renner B. The childhood autism rating scale. Western Psychological Services; 1988.15. Schopler E, Reichler R, Rochen Renner B. The childhood autism rating scale. Western Psychological Services; 1988.
16. Opler LA, Kay SR, Lindenmayer JP, Fiszbein A. Structured Clinical Interview Positive and Negative Syndrome Scale (SCI-PANSS). Multi-Health Systems Inc. 1999, №4:15 p.16. Opler LA, Kay SR, Lindenmayer JP, Fiszbein A. Structured Clinical Interview Positive and Negative Syndrome Scale (SCI-PANSS). Multi-Health Systems Inc. 1999, No. 4:15 p.
17. Bush G, Fink M, Petrides G, Dowling F, Francis A. Catatonia. I. Rating scale and standardized examination, Acta Psychiatrica Scandinavica. Feb 1996; 93(2):129-136.17. Bush G, Fink M, Petrides G, Dowling F, Francis A. Catatonia. I. Rating scale and standardized examination, Acta Psychiatrica Scandinavica. Feb 1996; 93(2):129-136.
18. Nasrallah H, Morosini P, Gagnon DD. Reliability, validity and ability to detect change of the Personal and Social Performance scale in patients with stable schizophrenia. Psychiatry Research. Nov 2008; 161(2):213-224.18. Nasrallah H, Morosini P, Gagnon DD. Reliability, validity and ability to detect change in the Personal and Social Performance scale in patients with stable schizophrenia. Psychiatry Research. Nov 2008; 161(2):213-224.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2808675C1 true RU2808675C1 (en) | 2023-12-01 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110224571A1 (en) * | 2009-11-16 | 2011-09-15 | Alvaro Pascual-Leone | Non-invasive methods for evaluating cortical plasticity impairments |
| WO2011142900A1 (en) * | 2010-05-13 | 2011-11-17 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Diagnostic autoantibody profiles for the detection and diagnosis of neurodegenerative diseases |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110224571A1 (en) * | 2009-11-16 | 2011-09-15 | Alvaro Pascual-Leone | Non-invasive methods for evaluating cortical plasticity impairments |
| WO2011142900A1 (en) * | 2010-05-13 | 2011-11-17 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Diagnostic autoantibody profiles for the detection and diagnosis of neurodegenerative diseases |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| НИКИТИНА С.Г. и др. Окислительные повреждения ДНК клеток периферической крови и внеклеточной ДНК плазмы крови как показатель тяжести окислительного стресса при расстройствах аутистического спектра и шизофрении у детей. Психиатрия. 2021; 19(4): 15-25. КАРАБАНОВА О.А. Возрастная психология. Конспект лекций. ООО "Издательство "Айрис-пресс". - 2005. - 238 с. GOH X.X. et al. 8-Hydroxy-2'-Deoxyguanosine and Reactive Oxygen Species as Biomarkers of Oxidative Stress in Mental Illnesses: A Meta-Analysis. Psychiatry Investig. 2021 Jul; 18(7): 603-618. MARKKANEN E. et al. DNA Damage and Repair in Schizophrenia and Autism: Implications for Cancer Comorbidity and Beyond. Int J Mol Sci. 2016 Jun 1; 17(6): 856. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lövheim et al. | Reactivated herpes simplex infection increases the risk of Alzheimer's disease | |
| Solak et al. | Red cell distribution width is independently related to endothelial dysfunction in patients with chronic kidney disease | |
| González-García et al. | Short-term prognostic value of serum neuron specific enolase and S100B in acute stroke patients | |
| US7906291B2 (en) | Method for diagnosing multiple sclerosis | |
| Peach et al. | Value of plasma calcium, phosphate, and alkaline phosphatase measurements in the diagnosis of histological osteomalacia | |
| Valent et al. | Global classification of mast cell activation disorders: an ICD-10-CM–adjusted proposal of the ECNM-AIM consortium | |
| CA3011353C (en) | Method for measuring tear constituents in a tear sample | |
| Fattouh et al. | Inflammatory biomarkers in chronic obstructive pulmonary disease | |
| CN101010589A (en) | Biomarkers of alzheimer's disease | |
| Qiu et al. | Association between hs-CRP levels and the outcomes of patients with small-artery occlusion | |
| Zhang et al. | Basilar artery tortuosity is associated with white matter hyperintensities by TIMP-1 | |
| RU2393771C1 (en) | Method of predicting development of generalised complications in case of acute destructive pancreatitis | |
| US20110177531A1 (en) | Cell-Based Complement Activation Product Algorithm for Diagnosing Systemic Lupus Erythematosus | |
| Baka et al. | Studying serum neurofilament light chain levels as a potential new biomarker for small fiber neuropathy | |
| RU2808675C1 (en) | Method of differential diagnosis of childhood autism of mild severity, atypical autism and schizophrenia in children | |
| US11499980B2 (en) | Method for measuring tear constituents in a tear sample | |
| WO2017147114A1 (en) | Diagnosing mild cognitive impairment (mci), predicting alzheimer's disease (ad) dementia onset, and screening and monitoring agents for treating mci or preventing dementia onset | |
| US20230079291A1 (en) | Method for measuring tear constituents in a tear sample | |
| Ragusa et al. | Cardiac troponins: Mechanisms of release and role in healthy and diseased subjects | |
| RU2179316C2 (en) | Method of diagnosis of immunodeficiency state | |
| Memon et al. | Study on red cell distribution width, haematocrit and red blood corpuscle (RBC) indices are early markers for the detection of coronary artery disease: a case control study. | |
| Ekinci et al. | Inflammatory parameters and blood lipid values across the different mood states in patients with bipolar disorder | |
| NevineSherif et al. | The Potential Role of Novel Kidney Biomarkers in Diagnosis of Early Contrast-Induced Nephropathy Following Coronary Angiography | |
| RU2788149C1 (en) | Proteins dclk1 and ripk1 biomarkers of simple schizophrenia | |
| US8236514B2 (en) | Method for diagnosing auto-immune chronic urticaria |