RU2777911C2 - Combination of cell therapy and immunomodulator compound - Google Patents

Combination of cell therapy and immunomodulator compound Download PDF

Info

Publication number
RU2777911C2
RU2777911C2 RU2019138707A RU2019138707A RU2777911C2 RU 2777911 C2 RU2777911 C2 RU 2777911C2 RU 2019138707 A RU2019138707 A RU 2019138707A RU 2019138707 A RU2019138707 A RU 2019138707A RU 2777911 C2 RU2777911 C2 RU 2777911C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
lymphocytes
immunomodulatory compound
paragraphs
cell therapy
Prior art date
Application number
RU2019138707A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2019138707A (en
RU2019138707A3 (en
Inventor
Майкл ПОРТС
Мелисса Воркс
Олександр БАТУРЕВИЧ
Рут Салмон
Рональд Джеймс Мл. ХАУЗЕ
Тимоти Г. ДЖОНСТОУН
Дэвид Г. КАГЛЕР
Джон Джоунс
Неха СОНИ
Original Assignee
Джуно Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джуно Терапьютикс, Инк. filed Critical Джуно Терапьютикс, Инк.
Priority claimed from PCT/US2018/030545 external-priority patent/WO2018204427A1/en
Publication of RU2019138707A publication Critical patent/RU2019138707A/en
Publication of RU2019138707A3 publication Critical patent/RU2019138707A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2777911C2 publication Critical patent/RU2777911C2/en

Links

Images

Abstract

FIELD: immunotherapy.
SUBSTANCE: treatment method includes the administration of T-cell therapy to a subject with cancer, where T-cell therapy includes genetically engineered T-lymphocytes expressing a chimeric antigen receptor (CAR), which is specifically binds to an antigen related to cancer; and the administration to a subject of an immunomodulator compound, which relieves degradation of Ikaros (IKZF1) and/or Aiolos (IKZF3), where the beginning of the administration of the specified immunomodulator compound is performed at least two days after the beginning of the administration of T-cell therapy. Another option of the treatment method is also disclosed.
EFFECT: group of inventions provides for increased or improved activity, efficiency, persistency, reproduction and/or proliferation of T-lymphocytes for adoptive cell therapy or endogenous T-lymphocytes recruited by immunotherapeutic agents.
80 cl, 40 dwg, 6 tbl, 18 ex

Description

Перекрестные ссылки на родственные заявкиCross-references to related applications

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет Временной заявки на патент США № 62/492947, поданной 1 мая 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, Временной заявки на патент США № 62/538670, поданной 29 июля 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL ТЕРАПИ AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, Временной заявки на патент США № 62/549390, поданной 23 августа 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL ТЕРАПИ AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, Временной заявки на патент США № 62/580433, поданной 1 ноября 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, и Временной заявки на патент США № 62/596753, поданной 8 декабря 2017 года, озаглавленной “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, содержание которых включаются в качестве ссылок во всей своей полноте.[0001] This application claims priority of U.S. Provisional Application No. 62/492,947, filed May 1, 2017, entitled "COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND", U.S. Provisional Application No. 62/538,670, filed July 29, 2017 entitled “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, U.S. Provisional Application No. 62/549390, filed August 23, 2017, entitled “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, U.S. Provisional Application No. 62/580433, filed November 1, 2017, entitled “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, and U.S. Provisional Application No. 62/596753, filed December 8, 2017, entitled “COMBINATION OF A CELL THERAPY AND AN IMMUNOMODULATORY COMPOUND”, the contents of which are incorporated by reference in their entirety.

Включение в качестве ссылки Списка последовательностейInclusion as a reference of Sequence Listing

[0002] Настоящая заявка подается вместе со Списком последовательностей в электронном формате. Список последовательностей предлагается как файл, озаглавленный 735042009640SeqList.TXT, созданный 30 апреля 2018 года, который имеет размер 328355 бит. Информация в электронном формате Списка последовательностей включается в качестве ссылки во всей своей полноте.[0002] This application is filed with the Sequence Listing in electronic format. The sequence list is offered as a file named 735042009640SeqList.TXT, created on April 30, 2018, which has a size of 328355 bits. Information in the electronic format of the Sequence Listing is incorporated by reference in its entirety.

Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention relates

[0003] Настоящее изобретение в некоторых аспектах относится к способам, композициям и к применению, включающему иммунотерапию, такую как адоптивная клеточная терапия, например, Т-клеточная терапия, и к иммуномодуляторному соединению, такому как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитора E3-убиквитинлигазы. Предлагаемые способы, композиции и применения включают способы, композиции и применения для сочетанной терапии, включающей введение или нанесение одного или нескольких иммуномодуляторных соединений в сочетании с Т-клеточной терапией, такой как терапия с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов, включая клетки с рекомбинантными рецепторами, например, с помощью Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы антигенов (CAR). Также предлагаются композиции, способы введения субъектам, промышленные изделия и наборы для использования в способах. В некоторых аспектах, особенности способов и клеток обеспечивают повышенную или улучшенную активность, эффективность, персистентность, размножение и/или пролиферацию Т-лимфоцитов для адоптивной клеточной терапии или эндогенных Т-лимфоцитов, рекрутированных с помощью иммунотерапевтических агентов. [0003] The present invention in some aspects relates to methods, compositions and uses, including immunotherapy, such as adoptive cell therapy, for example, T-cell therapy, and an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and / or an E3 ubiquitin ligase inhibitor. The provided methods, compositions, and uses include methods, compositions, and uses for combination therapy involving the administration or application of one or more immunomodulatory compounds in combination with T cell therapy, such as genetically engineered T lymphocyte therapy, including cells with recombinant receptors. , for example, using T-lymphocytes expressing chimeric antigen receptors (CARs). Also provided are compositions, methods of administration to subjects, articles of manufacture, and kits for use in the methods. In some aspects, the features of the methods and cells provide increased or improved activity, efficacy, persistence, expansion and/or proliferation of T lymphocytes for adoptive cell therapy or endogenous T lymphocytes recruited with immunotherapeutic agents.

Уровень техникиState of the art

[0004] Доступны различные стратегии иммунотерапии, например, введение генно-инженерных Т-лимфоцитов для адоптивной терапии. Например, доступны стратегии для генной инженерии Т-лимфоцитов, экспрессирующих генно-инженерные рецепторы антигенов, такие как CAR, и введение композиций, содержащих такие клетки, субъектам. Требуются улучшенные стратегии для улучшения эффективности клеток, например, для улучшения персистентности, активности и/или пролиферации клеток при введении субъектам. Предлагаются способы, композиции, наборы и системы, которые удовлетворяют такие потребности.[0004] Various immunotherapy strategies are available, for example, the introduction of genetically engineered T-lymphocytes for adoptive therapy. For example, strategies are available for genetically engineering T lymphocytes expressing engineered antigen receptors such as CARs and administering compositions containing such cells to subjects. Improved strategies are needed to improve the efficiency of cells, for example, to improve the persistence, activity and/or proliferation of cells when administered to subjects. Methods, compositions, kits, and systems are provided that meet such needs.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

[0005] В настоящем документе предлагается сочетанная терапия, включающая введение иммунотерапии, включающей функционирование или активность Т-лимфоцитов, такая как Т-клеточная терапия, и иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитора E3-убиквитинлигазы. В некоторых аспектах, предлагаемые способы улучшают или модулируют пролиферацию и/или активность или активности Т-лимфоцитов, связанные с введением иммунотерапии или иммунотерапевтического агента, такого как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты). В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, как правило, включает введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог талидомида и/или ингибитор E3-убиквитинлигазы (например, леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион)), и введение Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты).[0005] This document proposes a combination therapy, including the introduction of immunotherapy, including the functioning or activity T lymphocytes, such as T cell therapy; and an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor. In some aspects, the present methods improve or modulate the proliferation and/or activity or activities of T lymphocytes associated with the administration of immunotherapy or an immunotherapeutic agent, such as a composition containing cells for adoptive cell therapy, such as, for example, T cell therapy (for example, CAR-expressing T-lymphocytes). In some embodiments, combination therapy typically comprises administering an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor (e.g., lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3- dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione)) and administering a T cell therapy, such as a composition containing cells for adoptive cell therapy, such as, for example, T cell therapy (e.g., CAR expressing T-lymphocytes).

[0006] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают: (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения.[0006] Provided herein are methods of treatment that include: (a) administering T cell therapy to a subject having a disease or condition; and (b) administering to the subject an immunomodulatory compound.

[0007] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения Т-клеточной терапии, субъекту вводят иммуномодуляторное соединение и/или он подвергается лечению с его помощью, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов.[0007] Provided herein are methods of treatment that include administering T cell therapy to a subject having a disease or condition, wherein at the time the T cell therapy is started, the subject is being administered and/or being treated with an immunomodulatory compound, and/ or a blood sample or biopsy of the subject contains detectable levels of T-lymphocytes from therapy with genetically engineered T-lymphocytes.

[0008] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения иммуномодуляторного соединения, субъекту уже ранее вводилась Т-клеточная терапия для лечения заболевания или состояния, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, способ тем самым предотвращает, уменьшает или облегчает один или несколько симптомов или результатов заболеваний или состояний.[0008] Provided herein are methods of treatment that include administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition where, at the time the immunomodulatory compound is started, the subject has previously received T cell therapy for the treatment of the disease or condition, and/or a blood sample or a biopsy of the subject contains detectable levels of T-lymphocytes from therapy with genetically engineered T-lymphocytes. In some embodiments, the method thereby prevents, reduces, or alleviates one or more symptoms or outcomes of diseases or conditions.

[0009] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, (a) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или результата; и/или (b) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния у субъекта или симптома или результата; и/или (c) тем самым способ уменьшает или облегчает симптом или результат или тяжесть заболевания или состояния до степени, которая больше сочетания (i) степени уменьшения или облегчения, осуществляемой при введении одного только иммуномодуляторного агента, необязательно, среднего значения этого показателя для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, и (ii) степени уменьшения или облегчения посредством введения одной только Т-клеточной терапии, необязательно, среднего значения этого показателя для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние; и/или (d) количество вводимого иммуномодуляторного соединения в способе, или соединения, вводимого одной или несколькими дозами, представляет собой поддерживающую дозу соединения или соответствует дозе соединения, вводимой субъектам, демонстрирующим реакцию, необязательно, полную реакцию, после введения соединения для лечения.[0009] In some embodiments of any of the methods provided herein, (a) the amount of immunomodulatory compound administered is insufficient, as a single agent and/or without the administration of T cell therapy, to alleviate, reduce, or prevent the disease or condition, or symptom or result; and/or (b) the amount of the immunomodulatory compound administered is insufficient, as a single agent and/or without the administration of T cell therapy, to alleviate, reduce, or prevent the subject's disease or condition or symptom or result; and/or (c) thereby the method reduces or alleviates the symptom or outcome or severity disease or condition to a degree that is greater than a combination of (i) the degree of reduction or amelioration effected by the administration of the immunomodulatory agent alone, optionally the average of this indicator for a population of subjects having the disease or condition, and (ii) the degree of reduction or amelioration by the administration one only T-cell therapy, optionally, the average value of this indicator for a population of subjects with a disease or condition; and/or (d) the amount of the immunomodulatory compound administered in the method, or the compound administered in one or more doses, is a maintenance dose of the compound or corresponds to the dose of the compound administered to subjects showing a response, optionally a complete response, following administration of the compound for treatment.

[0010] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, заболевание или состояние не поддается лечению или является резистентным к иммуномодуляторному соединению и/или становится не поддающимся лечению или резистентным к нему после лечения иммуномодуляторным соединением; и/или субъект или заболевание или состояние, как определено, имеет мутацию или фактор, придающий заболеванию или состоянию резистентность к лечению иммуномодуляторным соединением.[0010] In some embodiments of any of the methods provided herein, the disease or condition is untreatable or resistant to an immunomodulatory compound and/or becomes untreatable or resistant thereto after treatment with an immunomodulatory compound; and/or the subject or disease or condition is determined to have a mutation or factor that renders the disease or condition resistant to treatment with an immunomodulatory compound.

[0011] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение выбирается из: иммуномодуляторных лекарственных средств (IMiD), аналогов талидомида, производных талидомида, соединений, которые взаимодействуют и/или связываются с цереблоном (CRBN) и/или из одного или нескольких элементов комплекса CRBN и E3 убиквитинлигазы, ингибиторов Ikaros (IKZF1), ингибиторов Aiolos (IKZF3), соединений, которые усиливают или облегчают убиквитинирование и/или деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3).[0011] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is selected from: immunomodulatory drugs (IMiDs), thalidomide analogs, thalidomide derivatives, compounds that interact and/or bind to cereblon (CRBN) and/or from one or more elements of the CRBN and E3 ubiquitin ligase complex, Ikaros (IKZF1) inhibitors, Aiolos (IKZF3) inhibitors, compounds that enhance or facilitate the ubiquitination and/or degradation of Ikaros (IKZF1) and/or Aiolos (IKZF3).

[0012] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.[0012] Provided herein are methods of treatment that include (a) administering T cell therapy to a subject having a disease or condition; and (b) administering to the subject an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2, 6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo- 4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomers, enantiomers or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

[0013] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения Т-клеточной терапии, субъекту вводят иммуномодуляторное соединение и/или он подвергается лечению с его помощью, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.[0013] Provided herein are methods of treatment that include administering T cell therapy to a subject having a disease or condition, wherein at the time the T cell therapy is started, the subject is being administered and/or being treated with an immunomodulatory compound, and/ or a blood sample or biopsy of the subject contains detectable levels of T-lymphocytes from therapy with genetically engineered T-lymphocytes, where the specified immunomodulatory compound is selected from the group consisting of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3- dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3 -(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomers, enantiomers or mixture of enantiomers, or their pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph.

[0014] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения иммуномодуляторного соединения, субъекту уже вводилась ранее Т-клеточная терапия для лечения заболевания или состояния, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.[0014] Provided herein are methods of treatment that include administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition where, at the time the immunomodulatory compound is administered, the subject has previously received T cell therapy for the treatment of the disease or condition, and/or a blood sample or the subject's biopsy contains detectable levels of T lymphocytes from genetically engineered T lymphocyte therapy, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H- isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5- amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomers, enantiomers or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph.

[0015] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того, или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментов времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0015] Provided herein are methods of treatment that include (a) administering T cell therapy to a subject having a disease or condition; and (b) administering to the subject an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2, 6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo- 4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomers, enantiomers, or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof, and where the start of administration of the immunomodulatory compound corresponds to the time time: (1) at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after the start of T- cell therapy, and/or it is carried out after 2-28 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or (2) at or after the time point, optionally immediately after, or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time points after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0016] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят, Т-клеточную терапия для лечения заболевания или состояния, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0016] Provided herein are methods of treatment that include administering an immunomodulatory compound to a subject who is administered prior to initiation of administration of the immunomodulatory compound, T cell therapy for treating a disease or condition, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of lenalidomide (3-( 4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxpiperidin-3-yl) isoindole-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof, and wherein the start of administration of the immunomodulatory compound corresponds to the time point: (1) at least 2 days, at least 1 week, at least , 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after the start of T-cell administration therapy, and/or it is carried out after 2-28 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or (2) at or after a time point, optionally immediately thereafter or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0017] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомеров, энантиомеров или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где субъект является таким, у которого в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.[0017] Provided herein are methods of treatment that comprise administering a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H- isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5- amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomers, enantiomers or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph, to a subject who, prior to the start of administration of an immunomodulatory compound, is administered T-cell therapy for the treatment of a disease or condition, where the subject is such that on or about day 12-15, optionally on or about day 14, after the initiation of T cell therapy for the treatment of a disease or condition: (i) the number of cells from T cells less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy in a subject at the same time in a plurality of subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or (ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, less than 10 cells per µl, less than 5 cells per µl, or less than 1 cell per µl in the blood.

[0018] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) выбор субъекта, который соответствует или примерно соответствует дню 12-15, необязательно, дню 14 или примерно этому дню, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл; и (b) введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.[0018] Provided herein are methods of treatment that include (a) selecting a subject that corresponds to or approximately corresponds to day 12-15, optionally, day 14 or so, after the start of the administration of T cell therapy for the treatment of a disease or condition: (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy at the same time in a plurality of subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or (ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T-cell therapy, optionally CAR+ T-lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per µl, less than 5 cells per µl, or less than 1 cell per µl; and (b) administering a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound to a subject, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine -2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4 -oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

[0019] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где субъекту до начала Т-клеточной терапии вводят иммуномодуляторное соединение, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем: (i) введение в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение в течение не более 14 последовательных дней.[0019] Provided herein are methods of treatment that include administering T cell therapy to a subject having a disease or condition, wherein the subject is administered an immunomodulatory compound prior to initiation of T cell therapy, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3 -(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxpiperidin-3- yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or a mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof, and wherein the immunomodulatory compound is administered in a cycle comprising: (i) administration for up to 21 days, sequentially, where the cycle comprises more than 30 days from start administration of an immunomodulatory compound; and/or (ii) administration for multiple consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or (iii) administration for no more than 14 consecutive days.

[0020] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, где субъект имеет заболевание или состояние и ему вводят Т-клеточную терапию, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.[0020] Provided herein are methods of treatment that include administering an immunomodulatory compound to a subject, wherein the subject has a disease or condition and is being administered T cell therapy, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4-amino -1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1 ,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof, and wherein the immunomodulatory compound is administered in a cycle comprising: (i) administering the immunomodulatory compound for up to 21 days, consecutively, wherein the cycle comprises more than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound ; and/or (ii) administering an immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or (iii) administering an immunomodulatory compound for up to 14 consecutive days.

[0021] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение иммуномодуляторного соединения включает: (i) по меньшей мере, один цикл больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения, где цикл включает введение соединения, необязательно, ежедневно или, по меньшей мере, ежедневно, в течение до 21 дня, последовательно, и/или где последнее введение соединения в цикле соответствует 21 дню или меньше после первого введения соединения в цикле; и/или (ii) по меньшей мере, два цикла, каждые, по меньшей мере, два цикла включают введение соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение, необязательно, ежедневное или, по меньшей мере, ежедневное, в течение не более 14 последовательных дней. [0021] In some embodiments of any of the methods provided herein, administering an immunomodulatory compound comprises: (i) at least one cycle greater than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound, wherein the cycle comprises administering the compound, optionally daily, or, at least daily, for up to 21 days, consecutively, and/or where the last administration of the compound in the cycle corresponds to 21 days or less after the first administration of the compound in the cycle; and/or (ii) at least two cycles, every at least two cycles comprising administering the compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or (iii) administration, optionally daily, or at least daily, for no more than 14 consecutive days.

[0022] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле, и начало введения Т-клеточной терапии происходит в один и тот же день или в последовательные дни, необязательно, одновременно; и/или, по меньшей мере, одна доза иммуномодуляторного соединения вводится в один и тот же день, в пределах одного или двух дней, до или после введения дозы Т-клеточной терапии. [0022] In some embodiments of any of the methods provided herein, the start of the administration of the immunomodulatory compound or the start of the administration of the compound in at least one cycle, and the start of the administration of T-cell therapy occurs on the same day or in consecutive days, optionally, simultaneously; and/or at least one dose of the immunomodulatory compound is administered on the same day, within one or two days, before or after a dose of T cell therapy.

[0023] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения, или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит до начала введения Т-клеточной терапии.[0023] In some embodiments of any of the methods provided herein, the initiation of administration of the immunomodulatory compound, or the initiation of administration of the compound in at least one cycle, occurs prior to the initiation of administration of T cell therapy.

[0024] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где субъекту до начала Т-клеточной терапии вводят иммуномодуляторное соединение, где цикл включает: (i) введение в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение в течение не более 14 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 14 дней до начала Т-клеточной терапии.[0024] Provided herein are methods of treatment that include administering T cell therapy to a subject having a disease or condition, wherein the subject is administered an immunomodulatory compound prior to initiation of T cell therapy, wherein the cycle comprises: (i) administering for up to 21 days, sequentially, where the cycle includes more than 30 days from the start of the administration of the immunomodulatory compound; and/or (ii) administration for multiple consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or (iii) administration for no more than 14 consecutive days. In some embodiments, the start of administration of the immunomodulatory compound occurs within 14 days prior to the start of T cell therapy.

[0025] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: аналогов талидомида; производных талидомида; соединений, которые взаимодействуют и/или связываются с цереблоном (CRBN) и/или с одним или несколькими элементами комплекса CRBN и E3 убиквитинлигазы; ингибиторов Ikaros (IKZF1); ингибиторов Aiolos (IKZF3) и соединений, которые усиливают или облегчают убиквитинирование и/или деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3).[0025] In some embodiments provided herein, the immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: thalidomide analogs; thalidomide derivatives; compounds that interact and/or bind to cereblon (CRBN) and/or one or more elements of the CRBN and E3 ubiquitin ligase complex; Ikaros inhibitors (IKZF1); inhibitors of Aiolos (IKZF3); and compounds that enhance or facilitate the ubiquitination and/or degradation of Ikaros (IKZF1) and/or Aiolos (IKZF3).

[0026] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение иммуномодуляторного соединения начинается до введения Т-клеточной терапии, оно начинается: (i) через неделю или в пределах одной недели до или после отбора у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны обрабатываться и/или подвергаться генной инженерии для получения терапии, необязательно, где образец представляет собой образец от афереза; и/или (ii) в пределах 14 дней до начала введения Т-клеточной терапии. [0026] In some embodiments of any of the methods provided herein, the administration of an immunomodulatory compound begins prior to the administration of T cell therapy, it begins: (i) one week or within one week before or after the collection of a sample containing T from the subject -lymphocytes to be processed and/or genetically engineered to receive therapy, optionally, where the sample is an apheresis sample; and/or (ii) within 14 days prior to initiation of T cell therapy.

[0027] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные клетки для экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых вариантах осуществления, генная инженерия включает одну или несколько стадий способа приготовления ex vivo, необязательно выбранных из: (1) выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза; (2) выбора или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов; (3) введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки; (4) инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования; (5) приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или (6) приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.[0027] In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy comprises engineered cells to express the recombinant receptor. In some embodiments, the genetic engineering comprises one or more ex vivo preparation method steps, optionally selected from: (1) isolating cells from a biological sample using leukapheresis or apheresis; (2) selecting or enriching cells using immunoaffinity methods; (3) introducing the recombinant nucleic acid, optionally a viral vector, into the cells; (4) incubating cells, optionally genetically engineered cells, in the presence of one or more stimulation conditions; (5) preparing cells in the presence of a cryoprotectant; and/or (6) preparing cells for administration to a subject, optionally in the presence of a pharmaceutically acceptable excipient.

[0028] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ включает осуществление способа приготовления и/или дополнительно включает генную инженерию Т-лимфоцитов для экспрессирования рекомбинантного рецептора, тем самым генерируя Т-клеточную терапию. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ включает приведение в контакт клеток с иммуномодуляторным соединением в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo.[0028] In some embodiments of any of the methods provided herein, the method includes performing the preparation method and/or further comprising genetically engineering T lymphocytes to express the recombinant receptor, thereby generating a T cell therapy. In some embodiments of any of the methods provided herein, the method comprises contacting cells with an immunomodulatory compound during one or more of the ex vivo preparation steps of the method.

[0029] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные Т-лимфоциты, полученные с помощью способа приготовления, включающего инкубирование клеток ex vivo в присутствии иммуномодуляторного соединения.[0029] In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy comprises engineered T lymphocytes obtained by a preparation method comprising ex vivo incubation of the cells in the presence of an immunomodulatory compound.

[0030] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ включает инкубирование клеток в присутствии одного или нескольких условий стимулирования, которое осуществляют в присутствии иммуномодуляторного соединения.[0030] In some embodiments of any of the methods provided herein, the method includes incubating cells in the presence of one or more stimulation conditions, which is carried out in the presence of an immunomodulatory compound.

[0031] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит после начала введения Т-клеточной терапии.[0031] In some embodiments of any of the methods provided herein, the start of administration of the immunomodulatory compound occurs within 10 days, 7 days, 4 days, 3 days, or 2 days prior to the start of T cell therapy. In some embodiments of any of the methods provided herein, the start of administration of the immunomodulatory compound, at least one cycle, occurs after the start of administration of T cell therapy.

[0032] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, где субъект имеет заболевание или состояние и ему вводят Т-клеточную терапию, где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.[0032] Provided herein are methods of treatment that include administering an immunomodulatory compound to a subject, wherein the subject has a disease or condition and is being administered T cell therapy, wherein the immunomodulatory compound is administered in a cycle including: (i) administering the immunomodulatory compound for up to 21 days, consecutively, where the cycle includes more than 30 days from the start of the administration of the immunomodulatory compound; and/or (ii) administering an immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or (iii) administering an immunomodulatory compound for up to 14 consecutive days.

[0033] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия представляет собой такую терапию, при которой пиковое количество популяции клеток от терапии, которые необязательно представляют собой клетки CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, и/или, необязательно представляют собой Т-лимфоциты CAR+, в крови представляет собой ((a) среднее значение для множества субъектов, леченых с помощью Т-клеточной терапии без введения иммуномодуляторного соединения, или (b) субъектам после введения Т-клеточной терапии) составляет меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.[0033] In some embodiments of any of the methods provided herein, T cell therapy is a therapy in which the peak population cells from therapy, which are optionally CD3+ or CD8+ cells from T-cell therapy, and/or optionally are CAR+ T-lymphocytes, in blood is ((a) the mean of multiple subjects treated with T-cell therapy without administration of an immunomodulatory compound, or (b) subjects after administration of T-cell therapy) is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

[0034] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, необязательно, CAR. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, рекомбинантный рецептор содержит антиген-связывающий домен специфичный к B-клеточному антигену созревания (BCMA). [0034] In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy comprises cells expressing a recombinant receptor, optionally a CAR. In some embodiments of any of the methods provided herein, the recombinant receptor comprises a B cell maturation antigen (BCMA) specific antigen-binding domain.

[0035] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, в одном цикле осуществляют после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии.[0035] In some embodiments of any of the methods provided herein, the start of administration of the immunomodulatory compound, at least one cycle, is carried out after the start of the administration of T-cell therapy. In some embodiments of any of the methods provided herein, the start of administration of the immunomodulatory compound is at least 2 days later, at least 1 week later, at least 2 weeks later, at least 3 weeks later or at least 4 weeks after the start of administration or after the last dose of T-cell therapy, and/or it is carried out 2-28 or 7-21 days after the start of administration or after the last dose of T-cell therapy.

[0036] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (a) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (b) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0036] Provided herein are methods of treatment that include (a) administering T cell therapy to a subject having a disease or condition; and (b) administering to the subject an immunomodulatory compound, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound corresponds to the time point: (a) at least 2 days later, at least 1 week later, at least 2 weeks later, at least 3 weeks or at least 4 weeks after the start of the introduction of T-cell therapy, and/or it is carried out after 2-28 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or (b) at or after a time point, optionally immediately after or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0037] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени: (a) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (b) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0037] Provided herein are methods of treatment that include administering an immunomodulatory compound to a subject who is receiving T cell therapy prior to initiation of administration of the immunomodulatory compound for the treatment of a disease or condition, where the onset of administration of the immunomodulatory compound corresponds to a time point of: (a) at least after 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after the start of the introduction of T-cell therapy, and / or it is carried out through 2-28 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or (b) at or after a time point, optionally immediately after or within 1-3 days after: (i) a peak peak cell level from T cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0038] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется через промежуток времени, который примерно больше 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии.[0038] In some embodiments of any of the methods provided herein, the start of administration of the immunomodulatory compound is after a period of time that is greater than about 14 days, 15 days, 16 days, 17 days, 18 days, 19 days, 20 days, 21 days, 24 days, or 28 days after initiation of T-cell therapy.

[0039] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, до начала введения иммуномодуляторного соединения, выбирают субъекта, у которого: (i) в крови детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0039] In some embodiments of any of the methods provided herein, prior to initiation of administration of an immunomodulatory compound, a subject is selected in which: (i) a peak maximum cell level from T cell therapy is detected in the blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared to the previous point in time after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0040] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где субъект является таким, у которого в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.[0040] Provided herein are methods of treatment that include administering a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound to a subject who, prior to initiation of administration of the immunomodulatory compound, is receiving T-cell therapy for the treatment of a disease or condition, wherein the subject is one who on day 12-15 or on or about that day, optionally on or about day 14, after initiation of T cell therapy for the treatment of a disease or condition: (i) the subject's T cell count is less than 75% of the mean T cell count -cell therapy at the same time in multiple subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or (ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

[0041] В настоящем документе предлагаются способы лечения, которые включают (a) выбор субъекта, который соответствует или примерно соответствует дню 12-15, необязательно, дню 14 или примерно этому дню, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл; и (b) введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится ежедневно, необязательно, один раз в день.[0041] Provided herein are methods of treatment that include (a) selecting a subject that corresponds to, or approximately corresponds to, day 12-15, optionally, day 14 or so, after initiation of T cell therapy for the treatment of a disease or condition: (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy at the same time in a plurality of subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or (ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl; and (b) administering a therapeutically effective amount of the immunomodulatory compound to the subject. In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is administered daily, optionally once daily.

[0042] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем введение ежедневно в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится. В некоторых вариантах осуществления, период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней.[0042] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is administered for more than or about more than 7 consecutive days, more than about more than about 14 consecutive days, more than or about more than about 21 consecutive days, more than or about more than about 21 consecutive days. consecutive day, or more, or more than about 28 consecutive days. In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is administered in a cycle comprising daily administration for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered. In some embodiments, the rest period during which no immunomodulatory compound is administered is greater than 7 consecutive days, greater than 14 consecutive days, greater than 21 days, or greater than 28 days.

[0043] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, цикл введения иммуномодуляторного соединения повторяют, по меньшей мере, один раз. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится в течение, по меньшей мере, 2 циклов, по меньшей мере, 3 циклов, по меньшей мере, 4 циклов, по меньшей мере, 5 циклов, по меньшей мере, 6 циклов, по меньшей мере, 7 циклов, по меньшей мере, 8 циклов, по меньшей мере, 9 циклов, по меньшей мере, 10 циклов, по меньшей мере, 11 циклов, или, по меньшей мере, 12 циклов.[0043] In some embodiments of any of the methods provided herein, the cycle of administration of the immunomodulatory compound is repeated at least once. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered for at least 2 cycles, at least 3 cycles, at least 4 cycles, at least 5 cycles, at least 6 cycles, at least 7 cycles, at least 8 cycles, at least 9 cycles, at least 10 cycles, at least 11 cycles, or at least 12 cycles.

[0044] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение иммуномодуляторного соединения продолжается, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов, до тех пор, пока: количество клеток от введенной Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; количество клеток от Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов; количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/или субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.[0044] In some embodiments of any of the methods provided herein, the administration of the immunomodulatory compound continues at least from the time after the start of the administration of T-lymphocytes, until: the number of cells from the administered T-cell therapy or received of those detected in the subject's blood will not increase compared to the subject's cell count at the time immediately prior to the administration of the immunomodulatory compound or compared to the time prior to the administration of the T-cell therapy; the number of cells from or derived from T-cell therapy detected in the blood will not be within 2.0 times (more or less) the peak or maximum number observed in the blood of the subject after the start of the administration of T-lymphocytes; the number of cells from T-cell therapy detected in the subject's blood will not become greater than or about greater than 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, or 60% of the total number of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in subject's blood; and/or the subject will not show a reduction in tumor weight relative to tumor weight at the time immediately prior to administration of the T cell therapy or at the time immediately prior to administration of the immunomodulatory compound; and/or the subject will not demonstrate complete or clinical remission.

[0045] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует транскрипционный ростовой фактор Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).[0045] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound binds to Cereblon (CRBN) and/or to the CRBN and E3 ubiquitin ligase complex; and/or inhibits the transcription growth factor Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3); and/or enhances ubiquitination or degradation of Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3).

[0046] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.[0046] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is thalidomide or is a derivative or analog of thalidomide. In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione) or pomalidomide (4-amino -2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione), avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine -2,6-dione), stereoisomer of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione), pomalidomide (4-amino -2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione), avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine -2,6-dione) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione), a stereoisomer of lenalidomide (3- (4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

[0047] В некоторых вариантах осуществления в настоящем документе предлагаются, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион) или авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид(4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион) или авадомид(3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.[0047] In some embodiments, provided herein, the immunomodulatory compound is lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione ), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxo-piperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazoline -3-yl)-piperidin-2,6-dione), stereoisomer of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione ), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxo-piperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazoline -3-yl)-piperidine-2,6-dione), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

[0048] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, или стереоизомер их, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, или стереоизомер их, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.[0048] In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione, or a stereoisomer thereof, or their pharmaceutically acceptable salt, MES, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione, or a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof , solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione.

[0049] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится перорально, подкожно или внутривенно. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится перорально. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится в капсуле или таблетке.[0049] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is administered orally, subcutaneously, or intravenously. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered orally. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered in a capsule or tablet.

[0050] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в количестве от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно.[0050] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is administered in an amount of from or about 0.1 mg to about 100 mg, from or about 0.1 mg to 50 mg, from or about 0.1 mg to 25 mg, from or about 0.1 mg to 10 mg, from or about 0.1 mg to 5 mg, from or about 0.1 mg to 1 mg, from or about 1 mg up to 100 mg, from or about 1 mg to 50 mg, from or about 1 mg to 25 mg, from or about 1 mg to 10 mg, from or about 1 mg to 5 mg, from or about 5 mg up to 100 mg, from or about 5 mg to 50 mg, from or about 5 mg to 25 mg, from or about 5 mg to 10 mg, from or about 10 mg to 100 mg, from or about 10 mg up to 50 mg, from or from 10 mg to 25 mg, from or about 25 mg to 100 mg, from or about 25 mg to 50 mg, or from or about 50 mg to 100 mg, each inclusive.

[0051] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день или шесть раз в день. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится при общем ежедневном дозируемом количестве, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день.[0051] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is administered once a day, twice a day, three times a day, four times a day, five times a day, or six times a day. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered at a total daily dosage amount of at least, or about, at least 0.1 mg per day, 0.5 mg per day, 1.0 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 10 mg per day, 25 mg per day, 50 mg per day, or 100 mg per day.

[0052] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг; или иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день, 15 мг в день и меньше, чем 25 мг в день.[0052] In some embodiments of any of the methods provided herein, the immunomodulatory compound is administered in an amount greater than or about greater than 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg, 15 mg, and less than 25 mg; or the immunomodulatory compound is administered in an amount greater than or about greater than 1 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 7.5 mg per day, 10 mg per day, 15 mg per day, and less than 25 mg per day day.

[0053] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение размножения Т-лимфоцитов, связанных с Т-клеточной терапией, по сравнению с размножением после введения Т-клеточной терапии без иммуномодуляторного соединения. [0053] In some embodiments of any of the methods provided herein, the administration of a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound stimulates an increase in the proliferation of T-lymphocytes associated with T-cell therapy, compared with the reproduction after administration of T-cell therapy without an immunomodulatory compound.

[0054] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение медиируемой Т-лимфоцитами цитолитической активности, связанной с Т-клеточной терапией, по сравнению с цитолитической активностью после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения.[0054] In some embodiments of any of the methods provided herein, the administration of a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound stimulates an increase in T-lymphocyte-mediated cytolytic activity associated with T-cell therapy, compared with cytolytic activity after administration of T-lymphocytes without immunomodulatory connections.

[0055] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение продуцирования цитокинов Т-лимфоцитами, связанными с Т-клеточной терапией, по сравнению с продуцированием цитокинов после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, это увеличение более или примерно более 1,5-кратного, 2,0-кратного, 3,0-кратного, 4,0-кратного, 5,0-кратного, 10,0-кратного или более.[0055] In some embodiments of any of the methods provided herein, the administration of a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound stimulates an increase in cytokine production by T-lymphocytes associated with T-cell therapy, compared with the production of cytokines after administration of T-lymphocytes without an immunomodulatory compound . In some embodiments, this is greater than or about greater than 1.5x, 2.0x, 3.0x, 4.0x, 5.0x, 10.0x, or greater.

[0056] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или его антиген-связывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR). [0056] In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy is or comprises tumor infiltrating lymphocyte (TIL) therapy or engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen. In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy is or contains engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen. In some embodiments, the T cell therapy comprises cells expressing a recombinant receptor that is or contains a functional non-TCR antigen receptor, or a TCR or antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the recombinant antigen receptor is a chimeric antigen receptor (CAR).

[0057] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор антигена, который содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней. В некоторых вариантах осуществления, заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой опухолевый антиген.[0057] In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy comprises a recombinant antigen receptor that contains an extracellular domain containing an antigen-binding domain that specifically binds to an antigen. In some embodiments, the antigen is associated with, specific to, and/or expressed on a cell or tissue of the disease, disorder, or condition. In some embodiments, the disease, disorder, or condition is an infectious disease or disorder, an autoimmune disease, an inflammatory disease, or a tumor or cancer. In some embodiments, the antigen is a tumor antigen.

[0058] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии клеток L1, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше антигенов; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает CD19, необязательно, CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает антиген, ассоциированный с множественной миеломой, необязательно, BCMA, необязательно, BCMA человека. [0058] In some embodiments of any of the methods provided herein, the antigen is selected from ROR1, B-cell maturation antigen (BCMA), carbonic anhydrase 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1- CAM, CD19, CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG -40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate-binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL- 22R-alpha, IL-13R-alpha2, kinase insert domain-containing receptor (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE -A3, MAGE-A6, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor alpha 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CA IX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, folate receptor-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, Foetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, cancer-testicular antigen, mesothelin, mouse CMV, mucin 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein coupled receptor 5D (GPCR5D), oncofetal antigen , ROR1, TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen (CEA), Her2/neu, estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, A2 cyclin, CCL-1, CD138, optionally, a human antigen to any of the above antigens; a pathogen-specific antigen; and an antigen associated with a universal label. In some embodiments, the antigen is or includes CD19, optionally human CD19. In some embodiments, the antigen is or includes an antigen associated with multiple myeloma, optionally BCMA, optionally human BCMA.

[0059] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит scFv.[0059] In some embodiments of any of the methods provided herein, the antigen binding domain is or contains an antibody or antibody fragment, which is optionally a single chain fragment. In some embodiments, the fragment contains the variable regions of the antibody connected by a flexible linker. In some embodiments, the fragment contains scFv.

[0060] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор, который дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или его сигнальную часть.[0060] In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy comprises a recombinant receptor that further comprises a spacer, optionally derived from an immunoglobulin, optionally containing a hinge region. In some embodiments, the recombinant antigen receptor contains an intracellular signaling region. In some embodiments, the intracellular signaling region contains an intracellular signaling domain. In some embodiments, the intracellular signaling domain is or contains a primary signaling domain, a signaling domain that can induce a primary activation signal in a T-lymphocyte, a T-lymphocyte receptor (TCR) signaling domain component, and/or a signaling domain containing an immunoreceptor tyrosine activating motive (ITAM). In some embodiments of any of the methods provided herein, the intracellular signaling domain is or contains an intracellular signaling domain of the CD3 chain, optionally the CD3-zeta (CD3ζ) chain, or a signal portion thereof.

[0061] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен, необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область дополнительно включает костимуляторную сигнальную область. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.[0061] In some embodiments of any of the methods provided herein, the recombinant receptor further comprises a transmembrane domain located between the extracellular domain and the intracellular signaling region, where the transmembrane domain is optionally a CD8 or CD28 transmembrane domain. In some embodiments, the intracellular signaling region further includes a costimulatory signaling region. In some embodiments, the co-stimulatory signaling region comprises the intracellular signaling domain of the co-stimulatory T-lymphocyte molecule or a signaling portion thereof. In some embodiments, the co-stimulatory signaling region comprises a CD28, 4-1BB, or ICOS intracellular signaling domain, or a signaling portion thereof. In some embodiments, the co-stimulatory signaling region contains the 4-1BB intracellular signaling domain. In some embodiments of any of the methods provided herein, the costimulatory signaling region is located between the transmembrane domain and the intracellular signaling region.

[0062] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит:[0062] In some embodiments of any of the methods provided herein, T cell therapy comprises:

Т-лимфоциты, выбранные из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.T lymphocytes selected from central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T lymphocytes, effector T lymphocytes and regulatory T lymphocytes; and/or a plurality of cells, the plurality comprising at least 50% of a population of cells selected from CD4+ T lymphocytes, CD8+ T lymphocytes, central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central Memory T-lymphocytes, effector T-lymphocytes and regulatory T-lymphocytes.

[0063] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит клетки, которые являются аутологичными для субъекта. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые являются аллогенными для субъекта. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, субъект является человеком.[0063] In some embodiments of any of the methods provided herein, the T cell therapy comprises T lymphocytes that are CD4+ or CD8+. In some embodiments, the T cell therapy comprises primary cells obtained from a subject. In some embodiments, the T cell therapy comprises cells that are autologous to the subject. In some embodiments, the T cell therapy comprises T lymphocytes that are allogeneic to the subject. In some embodiments of any of the methods provided herein, the subject is a human.

[0064] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия включает введение в целом, от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 клеток, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.[0064] In some embodiments of any of the methods provided herein, T cell therapy comprises administering a total of, from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 cells, T lymphocytes expressing recombinant receptors, in total , or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in in total, or from or about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, each value inclusive.

[0065] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия включает введение не более 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.[0065] In some embodiments of any of the methods provided herein, T cell therapy comprises the administration of no more than 1 x 10 8 cells, in total, T lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC ), in total, not more than 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 0.5 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, no more than 1 × 10 6 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or mononuclear cells peripheral blood cells (PBMC), in general, no more than 0.5 × 10 6 cells, in general, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in general.

[0066] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, количество клеток, вводимых при Т-клеточной терапии, меньше, чем это количество в другом способе, в котором Т-клеточная терапия вводится без введения иммуномодуляторного соединения, необязательно, этот другой способ дает в результате сходную или более низкую степень облегчения или уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или их тяжести, по сравнению с результатом настоящего способа. В некоторых вариантах осуществления, количество вводимых клеток является 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно или 10-кратно меньшим, чем количество, вводимое в другом способе. [0066] In some embodiments of any of the methods provided herein, the number of cells administered in T cell therapy is less than that in another method in which T cell therapy is administered without administration of an immunomodulatory compound, optionally this the other method results in a similar or lower degree of alleviation or reduction or prevention of the disease or condition or symptom, or their severity, compared to the result of the present method. In some embodiments, the number of cells administered is 1.5-fold, 2-fold, 3-fold, 4-fold, 5-fold, or 10-fold less than the amount administered in the other method.

[0067] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая клетки. В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия включает дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.[0067] In some embodiments of any of the methods provided herein, T cell therapy is administered as a separate pharmaceutical composition containing cells. In some embodiments of any of the methods provided herein, T cell therapy comprises a cell dose that is a divided dose, where the cells of the dose are administered in a plurality of compositions collectively containing all the cells of the dose, over a period of no more than three days.

[0068] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии. [0068] In some embodiments of any of the methods provided herein, the method further comprises administering antilymphocyte chemotherapy prior to administering T cell therapy.

[0069] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL). В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.[0069] In some embodiments of any of the methods provided herein, the disease or condition is a cancer. In some embodiments, the cancer is B-lymphocyte cancer and/or myeloma, lymphoma, or leukemia. In some embodiments, the cancer is mantle cell lymphoma (MCL), multiple myeloma (MM), acute lymphocytic leukemia (ALL), adult ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), or diffuse large B cell lymphoma. (DLBCL). In some embodiments, the cancer is a non-hematologic cancer or is a solid tumor.

[0070] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, Т-клеточная терапия демонстрирует повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности у субъекта по сравнению со способом, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения.[0070] In some embodiments of any of the methods provided herein, T cell therapy demonstrates an increase or prolongation of proliferation and/or persistence in a subject compared to a method in which T cell therapy is administered to a subject without an immunomodulatory compound.

[0071] В некоторых вариантах осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе, способ понижает массу опухоли до большей степени и/или в течение большего периода времени по сравнению с уменьшением, которое наблюдалось бы для сравнимого способа, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения и/или, в котором иммуномодуляторное соединение вводится без Т-клеточной терапии, необязательно, при такой же дозе или временном графике дозирования.[0071] In some embodiments of any of the methods provided herein, the method reduces tumor mass to a greater extent and/or for a longer period of time compared to the reduction that would be observed for a comparable method in which T cell therapy is administered a subject without an immunomodulatory compound and/or in which an immunomodulatory compound is administered without T cell therapy, optionally at the same dose or dosing time schedule.

[0072] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах согласно циклу введения, включая введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней. [0072] This document provides a kit containing a pharmaceutical composition containing a standard unit dose of T-cell therapy; and instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a composition comprising an immunomodulatory compound, wherein the instructions specify administering the immunomodulatory compound in one or more unit doses according to an administration cycle, including administering the immunomodulatory compound for up to 21 days, sequentially where the cycle includes more than 30 days from the start of the administration of the immunomodulatory compound; and/or administering an immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or administration of an immunomodulatory compound for up to 14 consecutive days.

[0073] Также, в настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в соответствии с циклом введения, включающим введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней. [0073] Also provided herein is a kit containing a pharmaceutical composition comprising one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound; and instructions for administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a unit dose of a pharmaceutical composition comprising T cell therapy, wherein the instructions specify administering one or more unit dose units of the immunomodulatory compound in accordance with an administration cycle including administration of the immunomodulatory compounds for up to 21 days, consecutively, where the cycle includes more than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound; and/or administering an immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or administration of an immunomodulatory compound for up to 14 consecutive days.

[0074] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в один и тот же день, необязательно, одновременно, как начало введения Т-клеточной терапии. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения до начала введения Т-клеточной терапии. [0074] In some such embodiments, the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound on the same day, optionally simultaneously, as the initiation of administration of T cell therapy. In some such embodiments, the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound prior to the initiation of administration of T cell therapy.

[0075] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения за неделю или в пределах недели перед отбором у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны подвергаться генной инженерии, необязательно, когда образец представляет собой образец от афереза; и/или в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo для получения терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов; и/или в пределах 14 дней до введения Т-клеточной терапии. [0075] In some such embodiments, the instructions specify commencing administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound one week or within a week prior to collection of a sample containing T lymphocytes to be genetically engineered from a subject, optionally when the sample is sample from apheresis; and/or during one or more steps of an ex vivo preparation method for receiving therapy with genetically engineered T-lymphocytes; and/or within 14 days prior to the introduction of T-cell therapy.

[0076] В некоторых вариантах осуществления, одну или несколько стадий способа приготовления ex vivo выбирают из выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза; выбора или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов; введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки; инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования; приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.[0076] In some embodiments, one or more steps of the ex vivo preparation method is selected from isolating cells from a biological sample using leukapheresis or apheresis; selecting or enriching cells using immunoaffinity methods; introducing a recombinant nucleic acid, optionally a viral vector, into cells ; incubating cells, optionally genetically engineered cells, in the presence of one or more stimulation conditions; preparation of cells in the presence of a cryoprotectant; and/or preparing cells for administration to a subject, optionally in the presence of a pharmaceutically acceptable excipient.

[0077] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых примерах, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых аспектах, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии.[0077] In some such embodiments, the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound within 10 days, 7 days, 4 days, 3 days, or 2 days prior to the administration of T cell therapy. In some examples, the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound following the initiation of administration of T cell therapy. In some aspects, the instructions specify the start of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound after at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least at least 4 weeks after the start of the administration of T-cell therapy, and/or 2-28 days or 7-21 days after the start of the administration of T-cell therapy.

[0078] Также, в настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют начало введения иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах в момент времени, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0078] Also provided herein is a kit containing a pharmaceutical composition comprising a standard unit dose of T cell therapy; and instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering an immunomodulatory compound, wherein the instructions specify the start of administration of the immunomodulatory compound at one or more unit doses at a time point of at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after the start of T-cell therapy administration, and/or it is carried out after 2-28 or after 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or at or after a time point, optionally immediately after or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0079] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в момент времени, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0079] Provided herein is a kit containing a pharmaceutical composition comprising one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound; and instructions for administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a unit dose of a pharmaceutical composition comprising a T cell therapy, wherein the instructions specify the start of administration of one or more unit unit doses of the immunomodulatory compound at a time point of at least after 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after the start of the introduction of T-cell therapy, and / or it is carried out through 2-28 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or at or after a time point, optionally immediately after or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0080] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения через промежуток времени, который более или примерно более 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют выбор субъекта для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения, после введения Т-клеточной терапии, в которой: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0080] In some such embodiments, the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound after a period of time that is greater than or about greater than 14 days, 15 days, 16 days, 17 days, 18 days, 19 days, 20 days, 21 days, 24 days, or 28 days after the start of T-cell therapy. In some such embodiments, the instructions specify the selection of a subject to administer one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound, following administration of a T cell therapy, wherein: (i) a peak peak cell level from the T cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0081] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения субъекту в одной или нескольких стандартных единичных дозах, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния, количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.[0081] This document provides a kit containing a pharmaceutical composition containing a standard unit dose of T-cell therapy; and instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering an immunomodulatory compound, wherein the instructions specify administering the immunomodulatory compound to a subject in one or more unit doses if on or about day 12-15, optionally on the day On or about the 14th day after initiation of T-cell therapy for the treatment of the disease or condition, the cell count from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the mean cell count from T-cell therapy at the same time in the plurality of subjects administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in blood less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

[0082] В настоящем документе предлагается набор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и инструкции для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением фармацевтической композиции, содержащей стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния, количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.[0082] Provided herein is a kit containing a pharmaceutical composition comprising one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound; and instructions for administering one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a pharmaceutical composition comprising a unit dose of T cell therapy, wherein the instructions specify administering one or more unit doses of an immunomodulatory compound to a subject if on or about day 12-15, optionally on or about day 14, after initiation of T-cell therapy for the treatment of a disease or condition, the subject's T-cell therapy cell count is less than 75% of the mean cells from T-cell therapy at the same time in multiple subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in blood less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

[0083] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и (b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах согласно циклу введения, включающему: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней.[0083] Provided herein are kits that contain (a) a pharmaceutical composition containing a unit dose of T cell therapy; and (b) instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a composition comprising an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1 ,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-diox-piperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate thereof , hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph, and where the instructions specify the administration of the immunomodulatory compound in one or more standard unit doses according to an administration cycle comprising: (i) administration of the immunomodulatory compound for up to 21 days, sequentially, where the cycle includes more than 30 days from starting the administration of the immunomodulatory compound; and/or (ii) administering an immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or (iii) administering an immunomodulatory compound for up to 14 consecutive days.

[0084] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и (b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения согласно циклу введения, включающему: (i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 последовательных дней. [0084] Provided herein are kits that contain (a) a pharmaceutical composition containing one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound; and (b) instructions for administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition, in conjunction with administering a standard unit dose of a pharmaceutical composition containing T cell therapy, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4- amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol- 1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof, and wherein the instructions specify the administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound according to an administration cycle comprising: (i) administering the immunomodulatory compound for up to 21 days, sequentially, where the cycle includes more than 30 days from the start of the introduction of an immunomodulatory compound opinions; and/or (ii) administering an immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or (iii) administering an immunomodulatory compound for up to 14 consecutive days.

[0085] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и (b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют начало введения иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах в момент времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0085] Provided herein are kits that contain (a) a pharmaceutical composition containing a unit dose of T cell therapy; and (b) instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3- dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3 -(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or their pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph, and where the instructions specify the start of administration of the immunomodulatory compound in one or more standard unit doses at the time point: (1) at least 2 days later, at least 1 week later, at least 2 weeks, at least 3 weeks or at least 4 weeks after the start of the introduction of T-cell therapy, and / or it is carried out after 2-2 8 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or (2) at or after a time point, optionally immediately thereafter or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0086] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ила)-пиперидин-2,6-дион), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа; и (b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в момент времени: (1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или (2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0086] Provided herein are kits that comprise (a) a pharmaceutical composition comprising one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo -1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione ) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), a stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof , solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph; and (b) instructions for administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a unit dose of a pharmaceutical composition comprising a T cell therapy, wherein the instructions specify the start of administration of one or more unit unit doses of the immunomodulatory compound at a time point: ( 1) at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after the start of T-cell therapy, and/or it is carried out after 2-28 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or (2) at or after a time point, optionally immediately thereafter or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0087] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и (b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа, и где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения субъекту в одной или нескольких стандартных единичных дозах если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.[0087] Provided herein are kits that contain (a) a pharmaceutical composition containing a unit dose of T cell therapy; and (b) instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3- dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3 -(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or their pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph, and wherein the instructions specify administering the immunomodulatory compound to a subject in one or more unit doses if on or about day 12-15, optionally on or about day 14, after initiation of T-cell administration. therapy for the treatment of a disease or condition: (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the average number cells from T-cell therapy at the same time in a plurality of subjects receiving the same or similar dose of T-cell therapy; and/or (ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

[0088] В настоящем документе предлагаются наборы, которые содержат (a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа; и (b) инструкции для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением фармацевтической композиции, содержащей стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния: (i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.[0088] Provided herein are kits that comprise (a) a pharmaceutical composition comprising one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo -1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione ) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt thereof , solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph; and (b) instructions for administering one or more unit dose units of an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a pharmaceutical composition comprising a unit dose of T cell therapy, wherein the instructions specify the administration of one or more unit unit doses of the immunomodulatory compound to a subject, if on or about day 12-15, optionally, on or about day 14, after initiation of T-cell therapy administration for the treatment of a disease or condition: (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy at the same time in multiple subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or (ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

[0089] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве для ежедневного введения и/или инструкции конкретизируют ежедневное введение иммуномодуляторного соединения. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней.[0089] In some such embodiments, the immunomodulatory compound is formulated in an amount for daily administration and/or instructions specify daily administration of the immunomodulatory compound. In some such embodiments, the instructions specify administering the immunomodulatory compound for more than or about more than 7 consecutive days, more than or about more than 14 consecutive days, more than or about more than 21 consecutive days, more than or about more than 21 consecutive days, or more than or about more 28 consecutive days.

[0090] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в цикле введения, включая ежедневное введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится. В некоторых примерах, инструкции конкретизируют период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней. В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют цикл введения иммуномодуляторного соединения, который повторяют, по меньшей мере, один раз.[0090] In some such embodiments, the instructions specify the administration of the immunomodulatory compound in an administration cycle , including daily administration for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered. In some examples, the instructions specify a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, greater than 7 consecutive days, greater than 14 consecutive days, greater than 21 days, or greater than 28 days. In some such embodiments, the instructions specify an immunomodulatory compound administration cycle that is repeated at least once.

[0091] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции конкретизируют продолжение введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов, до тех пор, пока количество клеток от введенной Т-клеточной терапии, или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; пока количество клеток от Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов; пока количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50% или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/или пока субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или пока субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.[0091] In some such embodiments, the instructions specify the continuation of the administration of the immunomodulatory compound, at least from the time after the start of the administration of T-lymphocytes, until the number of cells from the administered T-cell therapy, or derived from them, is detected in the subject's blood will not increase compared to the subject's cell count at the time immediately prior to the administration of the immunomodulatory compound or compared to the time prior to the administration of the T-cell therapy; until the number of cells from or derived from T-cell therapy detected in the blood is within 2.0 times (more or less) the peak or maximum number observed in the blood of the subject after the start of T-lymphocyte administration; until the number of cells from T-cell therapy detected in the subject's blood is greater than or about greater than 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, or 60% of the total number of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in subject's blood; and/or until the subject demonstrates a reduction in tumor weight compared to tumor weight at the time immediately prior to administration of the T cell therapy or at the time immediately prior to administration of the immunomodulatory compound; and/or until the subject demonstrates complete or clinical remission.

[0092] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует ростовой фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3). В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.[0092] In some such embodiments, the immunomodulatory compound binds to Cereblon (CRBN) and/or to the CRBN-E3 ubiquitin ligase complex; and/or inhibits the growth transcription factor Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3); and/or enhances ubiquitination or degradation of Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3). In some such embodiments, the immunomodulatory compound is thalidomide or is a derivative or analogue of thalidomide. In some such embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione) or pomalidomide (4- amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione), avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)- piperidin-2,6-dione), stereoisomer of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4- amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione), avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)- piperidine-2,6-dione) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In some such embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione), a stereoisomer of lenalidomide (3 -(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

[0093] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают для введения перорально, подкожно или внутривенно. В некоторых примерах, иммуномодуляторное соединение приготавливают для перорального введения. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают в капсулах или таблетках.[0093] In some such embodiments, the immunomodulatory compound is formulated for oral, subcutaneous, or intravenous administration. In some examples, the immunomodulatory compound is formulated for oral administration. In some such embodiments, the immunomodulatory compound is formulated into capsules or tablets.

[0094] В некоторых таких вариантах осуществления, каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/или каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг. В некоторых таких вариантах осуществления, одна или несколько единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше 25 мг.[0094] In some such embodiments, each of the one or more unit dose unit doses of the immunomodulatory compound contains an amount of from or about 0.1 mg to about 100 mg, from or about 0.1 mg to 50 mg, from or about 0.1 mg to 25 mg, from or about 0.1 mg to 10 mg, from or about 0.1 mg to 5 mg, from or about 0.1 mg to 1 mg, from or about 1 mg up to 100 mg, from or about 1 mg to 50 mg, from or about 1 mg to 25 mg, from or about 1 mg to 10 mg, from or about 1 mg to 5 mg, from or about 5 mg up to 100 mg, from or about 5 mg to 50 mg, from or about 5 mg to 25 mg, from or about 5 mg to 10 mg, from or about 10 mg to 100 mg, from or about 10 mg up to 50 mg, from or from 10 mg to 25 mg, from or about 25 mg to 100 mg, from or about 25 mg to 50 mg, or from or about 50 mg to 100 mg, each inclusive; and/or each of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound contains an amount of at least, or about, at least 0.1 mg, 0.5 mg, 1.0 mg, 2.5 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg or 100 mg. In some such embodiments, one or more unit doses of the immunomodulatory compound contains an amount greater than or about greater than 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg, 15 mg, and less than 25 mg.

[0095] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.[0095] In some such embodiments, the T cell therapy is or comprises tumor infiltrating lymphocyte (TIL) therapy or engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen. In some such embodiments, the T cell therapy is or contains engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen.

[0096] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR). В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.[0096] In some such embodiments, the recombinant receptor is or contains a functional non-TCR antigen receptor, or a TCR or antigen-binding fragment thereof. In some such embodiments, the recombinant antigen receptor is a chimeric antigen receptor (CAR). In some such embodiments, the recombinant antigen receptor comprises an extracellular domain containing an antigen-binding domain that specifically binds to an antigen.

[0097] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней. В некоторых случаях, заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.[0097] In some such embodiments, the antigen is associated with, specific to, and/or expressed on a cell or tissue of the disease, disorder, or condition. In some instances, the disease, disorder, or condition is an infectious disease or disorder, an autoimmune disease, an inflammatory disease, or a tumor or cancer.

[0098] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген представляет собой опухолевый антиген. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы клеточной адгезии L1, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому объекту из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает CD19, необязательно, CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает BCMA, необязательно, BCMA человека. [0098] In some such embodiments, the antigen is a tumor antigen. In some such embodiments, the antigen is selected from ROR1, B cell maturation antigen (BCMA), charcoal anhydrase 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alpha, IL-13R-alpha2, kinase insert domain-containing receptor (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, preferably expressed antigen melanoma (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor alpha 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY- ESO-1, PSCA, receptor-a folates, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, Foetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, testicular cancer antigen, mesothelin, mouse CMV, mucin 1 (MUC1), MUC16, PSCA , NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein coupled receptor 5D (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1, TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen (CEA), Her2/neu, estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, cyclin A2, CCL-1, CD138, optional, human antigen to any object from the above; a pathogen-specific antigen; and an antigen associated with a universal label. In some embodiments, the antigen is or includes CD19, optionally human CD19. In some embodiments, the antigen is or includes BCMA, optionally human BCMA.

[0099] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген-связывающий фрагмент представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент. В некоторых случаях, фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент scFv. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область. [0099] In some such embodiments, the antigen-binding fragment is or contains an antibody or antibody fragment, which is optionally a single chain fragment. In some cases, the fragment contains the variable regions of the antibody connected by a flexible linker. In some embodiments, the fragment comprises a single chain scFv variable fragment. In some such embodiments, the recombinant receptor further comprises a spacer, optionally derived from an immunoglobulin, optionally containing a hinge region.

[0100] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область. В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых примерах, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).[0100] In some such embodiments, the recombinant antigen receptor contains an intracellular signaling region. In some such embodiments, the intracellular signaling region contains an intracellular signaling domain. In some examples, the intracellular signaling domain is or contains a primary signaling domain, a signaling domain that can induce a primary activation signal in a T-lymphocyte, a T-lymphocyte receptor (TCR) signaling domain component, and/or a signaling domain containing an immunoreceptor tyrosine activating motif. (ITAM).

[0101] В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или ее сигнальную часть. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.[0101] In some such embodiments, the intracellular signaling domain is or comprises an intracellular signaling domain of the CD3 chain, optionally the CD3-zeta (CD3ζ) chain, or a signal portion thereof. In some such embodiments, the recombinant receptor further comprises a transmembrane domain located between the extracellular domain and the intracellular signaling region, where the transmembrane domain is optionally a CD8 or CD28 transmembrane domain.

[0102] В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область. В некоторых случаях, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. В некоторых примерах, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB. В некоторых таких вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.[0102] In some such embodiments, the intracellular signaling region further comprises a costimulatory signaling region. In some cases, the costimulatory signaling region contains the intracellular signaling domain of the costimulatory T-lymphocyte molecule or a signaling portion thereof. In some embodiments, the co-stimulatory signaling region comprises a CD28, 4-1BB, or ICOS intracellular signaling domain, or a signaling portion thereof. In some examples, the costimulatory signaling region contains the 4-1BB intracellular signaling domain. In some such embodiments, the costimulatory signaling region is located between the transmembrane domain and the intracellular signaling region.

[0103] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или множество клеток, множество составляет, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+. [0103] In some such embodiments, the T cell therapy comprises T lymphocytes selected from the group consisting of central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T lymphocytes, effector T -lymphocytes and regulatory T-lymphocytes; and/or a plurality of cells, the plurality being at least 50% of a population of cells selected from the group consisting of CD4+ T lymphocytes, CD8+ T lymphocytes, central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes , stem central memory T-lymphocytes, effector T-lymphocytes and regulatory T-lymphocytes. In some such embodiments, the T cell therapy comprises T lymphocytes that are CD4+ or CD8+.

[0104] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия является аутологичной для субъекта. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная является аллогенной для субъекта. В некоторых таких вариантах осуществления, субъект является человеком.[0104] In some such embodiments, the T cell therapy comprises primary cells obtained from a subject. In some such embodiments, the T cell therapy is autologous to the subject. In some such embodiments, the T cell is allogeneic to the subject. In some such embodiments, the subject is a human.

[0105] В некоторых таких вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно. В некоторых таких вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.[0105] In some such embodiments, a unit dose of T-cell therapy contains from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, or from or from about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, each value is inclusive. In some such embodiments, a standard unit dose of T cell therapy comprises administering no more than 1 x 10 8 cells, in total, no more than total recombinant receptor-expressing T lymphocytes, or no more than total peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). than 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 0.5 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes, expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in total, not more than 1 × 10 6 cells in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in total in general, not more than 0.5×10 6 cells in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in general.

[0106] В некоторых таких вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии содержит дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.[0106] In some such embodiments, a unit dose of T cell therapy comprises a cell dose that is a divided dose, where the cells of the dose are administered in a plurality of compositions collectively containing all the cells of the dose, over a period of no more than three days.

[0107] В некоторых таких вариантах осуществления, инструкции дополнительно конкретизируют введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии. В некоторых таких вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание. В некоторых таких вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL). В некоторых случаях, раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.[0107] In some such embodiments, the instructions further specify the administration of anti-lymphocyte chemotherapy prior to the administration of T cell therapy. In some such embodiments, the disease or condition is a cancer. In some such embodiments, the cancer is B-lymphocyte cancer and/or myeloma, lymphoma, or leukemia. In some embodiments, the cancer is mantle cell lymphoma (MCL), multiple myeloma (MM), acute lymphocytic leukemia (ALL), adult ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), or diffuse large B cell lymphoma ( DLBCL). In some cases, the cancer is a non-hematologic cancer or is a solid tumor.

[0108] В настоящем документе предлагается промышленное изделие, содержащее любой из наборов, описанных в настоящем документе.[0108] This document proposes an industrial product containing any of the kits described in this document.

[0109] Также, в настоящем документе предлагается фармацевтическая композиция, содержащая Т-клеточную терапию, иммуномодуляторное соединение и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточную терапию приготавливают в количестве стандартной единичной дозы. В некоторых случаях, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.[0109] Also provided herein is a pharmaceutical composition comprising a T cell therapy, an immunomodulatory compound, and a pharmaceutically acceptable carrier. In some embodiments, the T cell therapy is formulated in a unit dose amount. In some cases, a standard unit dose of T-cell therapy contains from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, or from or from about 1 × 10 6 to 1 x 10 7 cells in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in total, each value inclusive.

[0110] В настоящем документе предлагаются фармацевтические композиции, которые включают Т-клеточную терапию, иммуномодуляторное соединение и фармацевтически приемлемый носитель, где указанное иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона), помалидомида (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-диона) или авадомида (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона), их стереоизомера, энантиомера или смеси энантиомеров, или их фармацевтически приемлемой соли, сольвата, гидрата, сокристалла, клатрата или полиморфа.[0110] Provided herein are pharmaceutical compositions that include T cell therapy, an immunomodulatory compound, and a pharmaceutically acceptable carrier, wherein said immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1, 3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione) or avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione), their stereoisomer, enantiomer or mixture of enantiomers, or their pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph.

[0111] В некоторых вариантах осуществления, стандартная единичная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.[0111] In some embodiments, a standard unit dose of T cell therapy comprises administering no more than 1 x 10 8 cells, in total, T lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), in total, not more than 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 0.5 × 10 7 cells, in total, T- recombinant receptor-expressing lymphocytes in total or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in total not more than 1 × 10 6 cells in total recombinant receptor-expressing T-lymphocytes in total or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) , in general, not more than 0.5 × 10 6 cells, in general, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in general.

[0112] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует ростовой фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3). В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), помалидомид (4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндол-1,3-дион), авадомид (3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион), стереоизомер леналидомида (3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион) или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.[0112] In some such embodiments, the immunomodulatory compound binds to Cereblon (CRBN) and/or to the CRBN and E3 ubiquitin ligase complex; and/or inhibits the growth transcription factor Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3); and/or enhances ubiquitination or degradation of Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3). In some such embodiments, the immunomodulatory compound is thalidomide or is a derivative or analogue of thalidomide. In some such embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione) or pomalidomide (4- amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione), avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)- piperidin-2,6-dione), stereoisomer of lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione), pomalidomide (4- amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindol-1,3-dione), avadomide (3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)- piperidine-2,6-dione) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In some such embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide (3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione), a stereoisomer of lenalidomide (3 -(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

[0113] В некоторых таких вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве стандартной единичной дозы. В некоторых таких вариантах осуществления, количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/или количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг. В некоторых таких вариантах осуществления, количество иммуномодуляторного соединения в композиции больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг.[0113] In some such embodiments, the immunomodulatory compound is formulated in a unit dose amount. In some such embodiments, the amount of the immunomodulatory compound in the composition is from or about 0.1 mg to about 100 mg, from or about 0.1 mg to 50 mg, from or about 0.1 mg to 25 mg, from or about 0.1 mg to 10 mg, from or about 0.1 mg to 5 mg, from or about 0.1 mg to 1 mg, from or about 1 mg to 100 mg, from or about 1 mg to 50 mg, from or about 1 mg to 25 mg, from or about 1 mg to 10 mg, from or about 1 mg to 5 mg, from or about 5 mg to 100 mg, from or about 5 mg to 50 mg, from or about 5 mg to 25 mg, from or about 5 mg to 10 mg, from or about 10 mg to 100 mg, from or about 10 mg to 50 mg, from or from 10 mg up to 25 mg, from or about 25 mg to 100 mg, from or about 25 mg to 50 mg, or from or about 50 mg to 100 mg, each inclusive; and/or the amount of the immunomodulatory compound in the composition is at least or approximately at least 0.1 mg, 0.5 mg, 1.0 mg, 2.5 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg or 100 mg. In some such embodiments, the amount of the immunomodulatory compound in the composition is greater than or greater than about 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg, 15 mg, and less than 25 mg.

[0114] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).[0114] In some such embodiments, the T cell therapy is or comprises tumor infiltrating lymphocyte (TIL) therapy or engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen. In some such embodiments, the T cell therapy is or contains engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen. In some such embodiments, the recombinant receptor is or contains a functional non-TCR antigen receptor, or a TCR or antigen-binding fragment thereof. In some such embodiments, the recombinant antigen receptor is a chimeric antigen receptor (CAR).

[0115] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней. В некоторых случаях, заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание или опухоль, или раковое заболевание. [0115] In some such embodiments, the recombinant antigen receptor comprises an extracellular domain containing an antigen-binding domain that specifically binds to an antigen. In some such embodiments, the antigen is associated with, specific to, and/or expressed on a cell or tissue of the disease, disorder, or condition. In some instances, the disease, disorder, or condition is an infectious disease or disorder, an autoimmune disease, an inflammatory disease or tumor, or a cancer.

[0116] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген представляет собой опухолевый антиген. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, фетального AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой. В некоторых таких вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит BCMA, необязательно, BCMA человека. [0116] In some such embodiments, the antigen is a tumor antigen. In some such embodiments, the antigen is selected from ROR1, B cell maturation antigen (BCMA), charcoal anhydrase 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alpha, IL-13R-alpha2, kinase insert domain-containing receptor (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, preferably expressed antigen melanoma (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor alpha 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY- ESO-1, PSCA, Pho receptor-a lats, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, fetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, testicular cancer antigen, mesothelin, mouse CMV, mucin 1 (MUC1), MUC16, PSCA , NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein coupled receptor 5D (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1, TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen (CEA), Her2/neu, estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, cyclin A2, CCL-1, CD138, optional, human antigen to any of the above; a pathogen-specific antigen; and an antigen associated with a universal label. In some such embodiments, the antigen is or comprises CD19, optionally human CD19. In some embodiments, the antigen is or contains BCMA, optionally human BCMA.

[0117] В некоторых таких вариантах осуществления, антиген-связывающий фрагмент представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент. В некоторых примерах, фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером. В некоторых вариантах осуществления, фрагмент содержит scFv. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.[0117] In some such embodiments, the antigen-binding fragment is or contains an antibody or antibody fragment, which is optionally a single chain fragment. In some examples, the fragment contains the variable regions of the antibody connected by a flexible linker. In some embodiments, the fragment contains scFv. In some such embodiments, the recombinant receptor further comprises a spacer, optionally derived from an immunoglobulin, optionally containing a hinge region.

[0118] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область. В некоторых примерах, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых случаях, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или ее сигнальную часть.[0118] In some such embodiments, the recombinant antigen receptor contains an intracellular signaling region. In some examples, the intracellular signaling region contains an intracellular signaling domain. In some cases, the intracellular signaling domain is or contains a primary signaling domain, a signaling domain that can induce a primary activation signal in a T-lymphocyte, a T-lymphocyte receptor (TCR) signaling domain component, and/or a signaling domain containing an immunoreceptor tyrosine activating motif. (ITAM). In some embodiments, the intracellular signaling domain is or contains an intracellular signaling domain of the CD3 chain, optionally the CD3-zeta (CD3ζ) chain, or a signal portion thereof.

[0119] В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8, CD28, CTLA-4, или PD-1. В некоторых таких вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.[0119] In some such embodiments, the recombinant receptor further comprises a transmembrane domain located between the extracellular domain and the intracellular signaling region, where the transmembrane domain is optionally a CD8, CD28, CTLA-4, or PD-1 transmembrane domain. In some such embodiments, the intracellular signaling region further comprises a costimulatory signaling region.

[0120] В некоторых таких вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть. В некоторых вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. В некоторых примерах, костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB. В некоторых таких вариантах осуществления, костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью. В некоторых таких вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит химерный рецептор антигена, содержащий антиген-связывающий домен, спейсер, трансмембранный домен от CD28, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий цепь CD3-зета (CD3ζ), и внутриклеточный сигнальный домен от 4-1BB. [0120] In some such embodiments, the co-stimulatory signaling region comprises an intracellular signaling domain of a co-stimulatory T-lymphocyte molecule or a signaling portion thereof. In some embodiments, the co-stimulatory signaling region comprises a CD28, 4-1BB, or ICOS intracellular signaling domain, or a signaling portion thereof. In some examples, the costimulatory signaling region contains the 4-1BB intracellular signaling domain. In some such embodiments, the costimulatory signaling region is located between the transmembrane domain and the intracellular signaling region. In some such embodiments, the recombinant receptor is or comprises a chimeric antigen receptor comprising an antigen binding domain, a spacer, a transmembrane domain from CD28, an intracellular signaling domain containing a CD3-zeta chain (CD3ζ), and an intracellular signaling domain from 4-1BB .

[0121] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/или множество клеток, множество составляет по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов. В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+. В некоторых примерах, отношение Т-лимфоцитов CD4+ к Т-лимфоцитам CD8+ составляет от или примерно от 1:3 до 3:1, необязательно, 1:1.[0121] In some such embodiments, the T cell therapy comprises T lymphocytes selected from the group consisting of central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T lymphocytes, effector T -lymphocytes and regulatory T-lymphocytes; and/or a plurality of cells, the plurality being at least 50% of a population of cells selected from the group consisting of CD4+ T lymphocytes, CD8+ T lymphocytes, central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T-lymphocytes, effector T-lymphocytes and regulatory T-lymphocytes. In some such embodiments, the T cell therapy comprises T lymphocytes that are CD4+ or CD8+. In some examples, the ratio of CD4+ T lymphocytes to CD8+ T lymphocytes is from or about 1:3 to 3:1, optionally 1:1.

[0122] В некоторых таких вариантах осуществления, Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта. В некоторых случаях, субъект является человеком.[0122] In some such embodiments, the T cell therapy comprises primary cells obtained from a subject. In some cases, the subject is a human.

[0123] В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция содержит объем от или примерно от 1 мл до 100 мл, от 1 мл до 75 мл, от 1 мл до 50 мл, от 1 мл до 25 мл, от 1 мл до 10 мл, от 1 мл до 5 моет 5 мл до 100 мл, от 5 мл до 75 мл, от 5 мл до 50 мл, от 5 мл до 25 моет 5 мл до 10 мл, от 10 мл до 100 мл, от 10 мл до 75 мл, от 10 мл до 50 мл, от 10 мл до 25 мл, от 25 мл до 100 мл, от 25 мл до 75 мл, от 25 мл до 50 мл, от 50 мл до 100 мл, от 50 мл до 75 мл или от 75 мл до 100 мл. В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция содержит объем, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, или примерно 1 мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл, 25 мл, 30 мл, 40 мл, 50 мл, 60 мл, 70 мл, 80 мл, 90 мл или 100 мл. [0123] In some such embodiments, the pharmaceutical composition comprises a volume of from or about 1 ml to 100 ml, 1 ml to 75 ml, 1 ml to 50 ml, 1 ml to 25 ml, 1 ml to 10 ml , 1 ml to 5 washes 5 ml to 100 ml, 5 ml to 75 ml, 5 ml to 50 ml, 5 ml to 25 washes 5 ml to 10 ml, 10 ml to 100 ml, 10 ml to 75 ml, 10 ml to 50 ml, 10 ml to 25 ml, 25 ml to 100 ml, 25 ml to 75 ml, 25 ml to 50 ml, 50 ml to 100 ml, 50 ml to 75 ml or from 75 ml to 100 ml. In some such embodiments, the pharmaceutical composition contains a volume of at least, or about, at least, or about 1 ml, 5 ml, 10 ml, 20 ml, 25 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml, 60 ml , 70 ml, 80 ml, 90 ml or 100 ml.

[0124] В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция дополнительно содержит криопротектор. В некоторых таких вариантах осуществления, фармацевтическая композиция является стерильной.[0124] In some such embodiments, the pharmaceutical composition further comprises a cryoprotectant. In some such embodiments, the pharmaceutical composition is sterile.

[0125] В настоящем документе предлагается промышленное изделие, содержащее любую из фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе. [0125] This document proposes an industrial product containing any of the pharmaceutical compositions described in this document.

[0126] Также предлагается способ лечения, включающий введение любой из фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе, субъекту для лечения заболевания или состояния. В некоторых случаях, заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание. В некоторых случаях, раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLB) или фолликулярную лимфому (FL).[0126] A method of treatment is also provided, comprising administering any of the pharmaceutical compositions described herein to a subject for the treatment of a disease or condition. In some cases, the disease or condition is a cancer. In some cases, the cancer is B-lymphocyte cancer and/or myeloma, lymphoma, or leukemia. In some embodiments, the cancer is mantle cell lymphoma (MCL), multiple myeloma (MM), acute lymphocytic leukemia (ALL), adult ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), diffuse large B cell lymphoma ( DLB) or follicular lymphoma (FL).

Краткое описание чертежейBrief description of the drawings

[0127] Фиг.1A показывает поверхностное экспрессирование BCMA линиями клеток множественной миеломы (RPMI-8226, MM1.S и OPM-2). Штриховая линия показывает фон анализа и BCMA-отрицательные линии клеток окрашены антителом анти-BCMA. MFI - медианная интенсивность флуоресценции.[0127] Figure 1A shows surface expression of BCMA by multiple myeloma cell lines (RPMI-8226, MM1.S and OPM-2). The dashed line shows the background of the assay and BCMA-negative cell lines are stained with anti-BCMA antibody. MFI - median fluorescence intensity.

[0128] Фиг.1B показывает процент уменьшения количества BCMA-экспрессирующих целевых клеток (RPMI-8226) под действием Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в присутствии и в отсутствие леналидомида (10 мкМ) после 6 дней сокультивирования. Фиг.1C показывает воздействие леналидомида на цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA против целевых клеток RPMI-8226.[0128] Figure 1B shows the percent reduction in BCMA-expressing target cells (RPMI-8226) by anti-BCMA CAR+ T lymphocytes in the presence and absence of lenalidomide (10 μM) after 6 days of co-culture. 1C shows the effect of lenalidomide on the cytolytic activity of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes against RPMI-8226 target cells.

[0129] Фигуры 2A-2C показывают количество IL-2 (Фиг.2A), IFNγ (Фиг.2B) и TNF-α (Фиг.2C), наблюдаемое в супернатантах после инкубирования целевых клеток RPMI-8226 с Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA в присутствии в присутствии и в отсутствие. [0129] Figures 2A-2C show the amount of IL-2 (Figure 2A), IFNγ (Figure 2B) and TNF-α (Figure 2C) observed in supernatants after incubation of target RPMI-8226 cells with CAR anti -BCMA in the presence in the presence and in the absence.

[0130] Фиг.3A показывает воздействие повышения концентраций леналидомида на цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA против целевых клеток OPM2. [0130] Figure 3A shows the effect of increasing lenalidomide concentrations on the cytolytic activity of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes against target OPM2 cells.

[0131] Фигуры 3B-D показывает количество IFNγ (Фиг.3B), IL-2 (Фиг.3C) и TNF-α (Фиг.3D), наблюдаемое в супернатантах после инкубирования целевых клеток OPM2 с Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA в присутствии повышенных концентраций леналидомида, или в отсутствие леналидомида.[0131] Figures 3B-D show the amount of IFNγ (FIG. 3B), IL-2 (FIG. 3C), and TNF-α (FIG. 3D) observed in supernatants after target OPM2 cells were incubated with anti-BCMA CAR T lymphocytes in the presence of elevated concentrations of lenalidomide, or in the absence of lenalidomide.

[0132] Фиг.3E показывает антиген-специфичную цитолитическую активность CAR-T анти-BCMA и продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, полученными от репрезентативных здоровых доноров и пациентов с множественной миеломой, против целевых клеток OPM-2 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида.[0132] Figure 3E shows antigen-specific cytolytic activity of CAR-T anti-BCMA and cytokine production by CAR+ anti-BCMA T lymphocytes derived from representative healthy donors and multiple myeloma patients against target OPM-2 cells in the presence of various concentrations lenalidomide (0.01 μM, 0.1 μM, 1.0 μM or 10 μM lenalidomide) or in the absence of lenalidomide.

[0133] Фиг.3F показывает антиген-специфичную цитолитическую активность CAR-T анти-BCMA Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, полученных от трех здоровых доноров и одного пациента со множественной миеломой, против целевых клеток OPM-2 и RPMI-8226 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида. Фиг.3G показывает продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, полученных от трех здоровых доноров и одного пациента со множественной миеломой, против целевых клеток OPM-2 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида. Фиг.3H показывает продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, полученных от трех здоровых доноров и одного пациента со множественной миеломой, против целевых клеток RPMI-8226 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида.[0133] Figure 3F shows the antigen-specific cytolytic activity of CAR-T anti-BCMA T-lymphocytes CAR+ anti-BCMA derived from three healthy donors and one multiple myeloma patient against target OPM-2 and RPMI-8226 cells in the presence of various concentrations of lenalidomide (0.01 μM, 0.1 μM, 1.0 μM or 10 μM lenalidomide) or in the absence of lenalidomide. 3G shows cytokine production by anti-BCMA CAR+ T lymphocytes derived from three healthy donors and one multiple myeloma patient against target OPM-2 cells in the presence of various concentrations of lenalidomide (0.01 μM, 0.1 μM, 1, 0 µM or 10 µM lenalidomide) or in the absence of lenalidomide. 3H shows cytokine production by anti-BCMA CAR+ T lymphocytes derived from three healthy donors and one multiple myeloma patient against target RPMI-8226 cells in the presence of various concentrations of lenalidomide (0.01 μM, 0.1 μM, 1, 0 µM or 10 µM lenalidomide) or in the absence of lenalidomide.

[0134] Фиг.4A показывает размножение Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA после повторного стимулирования в присутствии различных концентраций леналидомида.[0134] Figure 4A shows the expansion of anti-BCMA CAR T lymphocytes after re-stimulation in the presence of various concentrations of lenalidomide.

[0135] Фиг.4B показывает размножение Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA после повторного стимулирования как в присутствии, так и в отсутствии леналидомида.[0135] Figure 4B shows the expansion of anti-BCMA CAR T lymphocytes after re-stimulation in both the presence and absence of lenalidomide.

[0136] Фиг.5A показывает отсчеты клеток (проективные удвоения популяции) Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от трех доноров в каждый момент времени при анализе повторного стимулирования, в присутствии несущей среды или 0,1 мкМ леналидомида. “×” показывает недостаточность клеток для реинокуляции при анализе. Фиг.5B показывает CD25 медианную интенсивность флуоресценции (MFI) (настроенную на живых CD3+ CAR+). Фиг.5C показывает продуцирование цитокинов, нормированное на количество инокулированных клеток (верхняя и левая нижняя панели) и медианную интенсивность флуоресценции (MFI) CD25 (настроенную на живых CD3+ CAR+) (правая нижняя панель).[0136] Figure 5A shows cell counts (projective population doublings) of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes from three donors at each time point in the restimulation assay, in the presence of vehicle or 0.1 μM lenalidomide. “×” indicates the insufficiency of cells for reinoculation in the assay. 5B shows CD25 median fluorescence intensity (MFI) (tuned to live CD3+ CAR+). 5C shows cytokine production normalized to the number of cells inoculated (upper and lower left panels) and CD25 median fluorescence intensity (MFI) (tuned to live CD3+ CAR+) (lower right panel).

[0137] Фиг.6A показывает общее количество клеток CD3+ в культуре в дни 2 и 7 после инкубирования T-лимфоцитов CAR анти-BCMA или Т-лимфоцитов, которые не экспрессируют CAR (имитационные), в присутствии или в отсутствие леналидомида. Фигуры 6B и 6C показывают экспрессирование CD25+ в Т-лимфоцитах CD4+ (Фиг.6B) и CD8+ (Фиг.6C) в культуре в дни 2 и 7 после инкубирования T-лимфоцитов CAR анти-BCMA или Т-лимфоцитов, которые не экспрессируют CAR (имитационные) в присутствии или в отсутствие леналидомида.[0137] Figure 6A shows the total number of CD3+ cells in culture on days 2 and 7 after anti-BCMA CAR T-lymphocyte incubation. or T-lymphocytes that do not express CAR (sham), in the presence or absence of lenalidomide. Figures 6B and 6C show CD25+ expression in CD4+ (FIG. 6B) and CD8+ (FIG. 6C) T lymphocytes in culture on days 2 and 7 after anti-BCMA CAR T lymphocyte incubation. or T lymphocytes that do not express CAR (mock) in the presence or absence of lenalidomide.

[0138] Фиг.7A показывает объем опухоли у мышей в зависимости от времени после введения низкой дозы Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в присутствии в присутствии и в отсутствие. [0138] Figure 7A shows tumor volume in mice as a function of time after administration of a low dose of anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes in the presence, presence and absence.

[0139] Фиг.7B показывает процент выживаемости мышей, которым вводят низкую дозу Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в присутствии в присутствии и в отсутствие. Для контрольных групп вводят Т-лимфоциты, которые не экспрессируют CAR (имитационные), в присутствии в присутствии и в отсутствие, и также вводят леналидомид без Т-лимфоцитов.[0139] FIG. 7B shows the percentage survival of mice treated with a low dose of anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes in the presence, presence and absence. For control groups, T-lymphocytes that do not express CAR (sham), in the presence in the presence and in the absence, are administered, and lenalidomide is also administered without T-lymphocytes.

[0140] Фиг.8A показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7 и 14. Фиг.8B показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови у мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36. Фиг.8C показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7 и 14. Фиг.8D показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36.[0140] Fig.8A shows the levels of T-lymphocytes CD4+ CAR+ in the blood of mice treated with CAR+ T lymphocytes anti-BCMA and lenalidomide compared with the other treatment groups on days 7 and 14. FIG. BCMA and lenalidomide compared with other treatment groups on days 21 and 36. Figure 8C shows blood levels of CD8+ CAR+ T lymphocytes in mice treated with anti-BCMA CAR+ T lymphocytes and lenalidomide compared with other treatment groups on days 7 and 14. FIG. 8D shows blood levels of CD8+ CAR+ T lymphocytes in mice treated with anti-BCMA CAR+ T lymphocytes and lenalidomide compared to other treatment groups on days 21 and 36.

[0141] Фиг.8E показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7, и 14. Фиг.8F показывает уровни Т-лимфоцитов CD4+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36. Фиг.8G показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 7 и 14. Фиг.8H показывает уровни Т-лимфоцитов CD8+ CAR+ в крови мышей, леченых Т-лимфоцитами не-CAR+ и леналидомидом, по сравнению с другими группами лечения в дни 21 и 36.[0141] FIG. 8E shows blood levels of CD4+ CAR+ T lymphocytes in mice treated with non-CAR+ T lymphocytes and lenalidomide compared with other treatment groups on days 7 and 14. FIG. 8F shows levels of CD4+ CAR+ T lymphocytes. in the blood of mice treated with non-CAR+ T lymphocytes and lenalidomide compared with other treatment groups on days 21 and 36. Figure 8G shows the blood levels of CD8+ CAR+ T lymphocytes in mice treated with non-CAR+ T lymphocytes and lenalidomide compared with other treatment groups on days 7 and 14. FIG. 8H shows blood levels of CD8+ CAR+ T lymphocytes in mice treated with non-CAR+ T lymphocytes and lenalidomide compared with other treatment groups on days 21 and 36.

[0142] Фигуры 9A и 9B показывают результаты относительно массы опухоли у мышей, леченых согласно режиму A (LenA), при котором мышам вводят леналидомид за один день перед приемом Т-лимфоцитов CAR+. [0142] Figures 9A and 9B show the results of tumor weight in mice treated with Regimen A (LenA), in which mice are treated with lenalidomide one day prior to administration of CAR+ T-lymphocytes.

[0143] Фиг.9C показывает массу опухоли отдельной мыши как функцию времени до дня 53. [0143] Figure 9C shows single mouse tumor weight as a function of time to day 53.

[0144] Фиг.9D показывает результаты как изображения опухоли в день 46 после введения клеток CAR+ для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 106), с леналидомидом в день -1 (Len A). Фиг.9E показывает результаты как изображения опухоли в день 46 после введения клеток CAR+ для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 106), без леналидомида в день -1 (Len A).[0144] FIG. 9D shows the results as images of the tumor at day 46 after CAR+ cell injection for a single mouse receiving a higher dose of CAR+ (1 x 10 6 ) with lenalidomide at day -1 (Len A). Fig. 9E shows the results as images of the tumor at day 46 post CAR+ cell injection for a single mouse receiving a higher dose of CAR+ (1 x 10 6 ) without lenalidomide on day -1 (Len A).

[0145] Фигуры 9F и 9G показывают результаты относительно массы опухоли мыши, леченых согласно режиму B (LenB), при котором введение леналидомида начинается в день 14 после введения CAR+ T.[0145] Figures 9F and 9G show the results on tumor weight of mice treated according to regimen B (LenB), in which administration of lenalidomide begins on day 14 after administration of CAR+ T.

[0146] Фиг.9H показывает массу опухоли отдельной мыши со временем до дня 53. [0146] Figure 9H shows tumor mass of an individual mouse over time to day 53.

[0147] Фиг.9I показывает результаты как изображение опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 106), с леналидомидом в день -1 (Len A). Фиг.9J показывает результаты как изображение опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельной мыши, принимающей более высокую дозу CAR+ (1 × 106), без леналидомида в день -1 (Len A).[0147] Figure 9I shows the results as a tumor image (day 46 after CAR+ cell injection) for a single mouse receiving a higher dose of CAR+ (1 x 10 6 ) with lenalidomide on day -1 (Len A). FIG. 9J shows the results as a tumor image (day 46 after CAR+ cell injection) for a single mouse receiving a higher dose of CAR+ (1 x 10 6 ) without lenalidomide on day -1 (Len A).

[0148] Фигуры 10A-10D показывают выживаемость мышей в присутствии или в отсутствие леналидомида. Леналидомид вводят посредством Режима A (Len A; введение леналидомида начинается в день -1) или Режима B (Len B; введение леналидомида начинается в день 14) в сочетании с низкими (5 × 105 или 5e5) или высокими (1 × 106 или 1e6) дозами Т-лимфоцитов CAR+. Для контрольных групп, Т-лимфоциты, которые не экспрессируют CAR (имитационные) вводятся в присутствии в присутствии и в отсутствие как в Режиме A, так и в Режиме B, и леналидомид без Т-лимфоцитов также вводится посредством как Режима A, так и Режима B.[0148] Figures 10A-10D show the survival of mice in the presence or absence of lenalidomide. Lenalidomide is administered via Mode A (Len A; lenalidomide administration begins on day -1) or Mode B (Len B; lenalidomide administration begins on day 14) in combination with low (5 × 10 5 or 5e 5 ) or high (1 × 10 6 or 1e 6 ) doses of CAR+ T-lymphocytes. For control groups, T-lymphocytes that do not express CAR (sham) are administered in the presence in the presence and absence of both Mode A and Mode B, and lenalidomide without T-lymphocytes is also administered through both Mode A and Mode b.

[0149] Фиг.10E показывает результаты оценок массы опухоли для мышей, принимающих более высокую дозу CAR+ (1 × 106) и получающих ежедневное внутрибрюшинное введение 10 мг/кг леналидомида или контрольной несущей среды, либо начинающееся в день -1 (за день до введения CAR-T) (одновременно с леналидомидом (леналидомид (C), либо несущей среды (несущая среда (C)) в день 14 после введения T-лимфоцитов CAR (или имитационных клеток) (отсроченный леналидомид (D)). Результаты показаны до дня 60, как анализируется по биолюминесценции, измеренной посредством проточной цитометрии. Фиг.10F показывает процент выживаемости мышей в присутствии или в отсутствие леналидомида. Фигуры 10G и 10H показывают проточный цитометрический анализ контрольных имитационных клеток и Т-лимфоцитов CAR в крови мышей в дни 8, 14, 22 и 28 после инъекции Т-лимфоцитов CAR от двух доноров.[0149] Figure 10E shows the results of tumor weight assessments for mice receiving a higher dose of CAR+ (1 x 10 6 ) and receiving daily intraperitoneal administration of 10 mg/kg lenalidomide or vehicle control, or starting on day -1 (the day before administration of CAR-T) (simultaneously with lenalidomide (lenalidomide (C) or vehicle (vehicle (C)) on day 14 after administration of CAR T-lymphocytes (or dummy cells) (delayed lenalidomide (D)). Results are shown up to day 60 as analyzed by bioluminescence measured by flow cytometry Figure 10F shows the percent survival of mice in the presence or absence of lenalidomide Figures 10G and 10H show flow cytometric analysis of control dummy cells and CAR T-lymphocytes in the blood of mice at day 8, 14, 22 and 28 after injection of CAR T-lymphocytes from two donors.

[0150] Фиг.11 показывает количество Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ в культурах Т-лимфоцитов CAR анти-CD19, стимулируемых субоптимальной концентрацией анти-CD3, в присутствии в присутствии и в отсутствие леналидомида.[0150] Figure 11 shows the number of CD4+ and CD8+ T lymphocytes in cultures of anti-CD19 CAR T lymphocytes stimulated with a suboptimal concentration of anti-CD3 in the presence, presence and absence of lenalidomide.

[0151] Фиг.12A показывает количество Т-лимфоцитов CD3+/ CAR+ в периферической крови, измеренное в определенные моменты времени после вливания, для субъектов, сгруппированных по наилучшей общей реакции. [0151] FIG. 12A shows peripheral blood CD3+/CAR+ T-lymphocyte counts measured at specific time points post-infusion for subjects grouped by best overall response.

[0152] Фиг.12B показывает количество Т-лимфоцитов CD3+/CAR+ в периферической крови, измеренное в определенные моменты времени, после вливания субъектам, которые достигают реакции, сгруппированным по непрерывной реакции через 3 месяца.[0152] FIG. 12B shows peripheral blood CD3+/CAR+ T-lymphocyte counts measured at specific time points after infusion in subjects that achieve a response, grouped by continuous response at 3 months.

[0153] Фигуры 12C-12D показывают уровни T-лимфоцитов CD4+/CAR+ и CD8+/CAR+ в периферической крови, измеренные в определенные моменты времени, после вливания субъектам, которые достигают реакции, сгруппированным по непрерывной реакции через 3 месяца.[0153] Figures 12C-12D show CD4+/CAR + and CD8+/CAR+ T-lymphocyte levels in peripheral blood measured at specific time points after infusion in subjects that achieve a response, grouped by continuous response at 3 months.

[0154] Фиг.13A показывает количество T-лимфоцитов CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ в периферической крови субъекта с превращенной в неподдающуюся химиотерапии DLBCL, измеренное в определенные моменты времени. Фиг.13B показывает изображение аксиальной ПЭТ-КТ до лечения, показывающие интракраниальную аномалию в правой средней черепной ямке и обширную аномалию в подкожных тканях в правой задней аурикулярной области. Фиг.13C представляет собой изображение ПЭТ-КТ после лечения, показывающее разрешение аномалии на Фиг.13B после лечения Т-лимфоцитами CAR+ анти-CD19. Фиг.13D представляет собой изображение МРТ головного мозга до лечения (T1-взвешенное изображение высокого разрешения с использованием контрастного материала; аксиальный вид), показывающий однородное увеличение массы в правой средней черепной ямке. Фиг.13E представляет собой изображение МРТ после лечения, показывающее почти полное разрешение увеличения массы. Фиг.13F представляет собой аксиальное изображение ПЭТ-КТ при возобновлении заболевания, показывающее повторное появление правой задней аурикулярной опухоли, связанное с интенсивным потреблением 18F-фтордеоксигликозы (стрелка). Фиг.13G представляет собой изображение ПЭТ-КТ, показывающее разрешение задней аурикулярной опухоли после инцизионной биопсии и повторного размножения Т-лимфоцитов CAR+.[0154] FIG. 13A shows the number of CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ T lymphocytes in the peripheral blood of a subject with chemotherapy-resistant DLBCL, measured at specific time points. 13B shows a pre-treatment axial PET-CT image showing intracranial abnormality in the right middle cranial fossa and extensive subcutaneous tissue abnormality in the right posterior auricular region. Fig. 13C is a post-treatment PET-CT image showing resolution of the anomaly in Fig. 13B after treatment with anti-CD19 CAR+ T lymphocytes. 13D is a pre-treatment MRI image of the brain (T 1 -weighted high resolution image using contrast material; axial view) showing a uniform increase in mass in the right middle cranial fossa. 13E is a post-treatment MRI image showing almost complete resolution of the mass increase. 13F is an axial PET-CT image at relapse showing the reappearance of a right posterior auricular tumor associated with heavy consumption of 18 F-fluorodeoxyglycose (arrow). 13G is a PET-CT image showing resolution of a posterior auricular tumor after incisional biopsy and reexpansion of CAR+ T-lymphocytes.

[0155] Фиг.14 показывает уровень жизнеспособных целевых клеток в течение периода приблизительно 120 часов, когда Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 5:1 в присутствии или в отсутствие 1 нМ, 5 нМ, 60 нМ, 550 нМ или 5000 нМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (контроль).[0155] Figure 14 shows the level of viable target cells over a period of approximately 120 hours when anti-CD19 CAR+ T lymphocytes are incubated with K562-CD19 effector cells at an effector to target cell ratio (E:T) of 5:1 in the presence of or in the absence of 1 nM, 5 nM, 60 nM, 550 nM or 5000 nM lenalidomide or in the absence of lenalidomide (control).

[0156] Фиг.15A показывает уровни экспрессирования CD25+ в Т-лимфоцитах как CD4+, так и в CD8+, когда Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют с эффекторными клетками K562-CD19 в присутствии леналидомида или альтернативного соединения, нацеленного на киназу. [0156] Figure 15A shows levels of CD25+ expression in both CD4+ and CD8+ T lymphocytes when anti-CD19 CAR+ T lymphocytes are incubated with K562-CD19 effector cells in the presence of lenalidomide or an alternative kinase-targeting compound.

[0157] Фиг.15B показывает уровни экспрессирования CD25+ в Т-лимфоцитах, как CD4+, так и CD8+, когда Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют с эффекторными клетками PD-1 в присутствии леналидомида или альтернативного соединения, нацеленного на киназу.[0157] Figure 15B shows levels of CD25+ expression in T lymphocytes, both CD4+ and CD8+, when anti-CD19 CAR+ T lymphocytes are incubated with PD-1 effector cells in the presence of lenalidomide or an alternative kinase-targeting compound.

[0158] Фиг.16 показывает количество IL-10 в супернатантах культур после инкубирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 3:1 или 9:1, в присутствии или в отсутствие различных концентраций леналидомида.[0158] Figure 16 shows the amount of IL-10 in culture supernatants after incubation of anti-CD19 CAR+ T lymphocytes with K562-CD19 effector cells at an effector to target cell ratio (E:T) of 3:1 or 9:1, in the presence of or in the absence of various concentrations of lenalidomide.

[0159] Фиг.17A показывает кратное увеличение количества клеток после стимулирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 от двух доноров (pt 1 и pt 2) эффекторными клетками K562-CD19 в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу. Фиг.17B показывает количество удвоений клеток по сравнению с начальным количеством после 2-ого и 4-ого стимулирования.[0159] Figure 17A shows the fold increase in cell numbers after stimulation of CAR+ T lymphocytes with anti-CD19 from two donors (pt 1 and pt 2) with K562-CD19 effector cells in the presence or absence of 1 μM lenalidomide or 50 nM or 500 nM alternative kinase-targeting compound. Figv shows the number of doublings of cells compared with the initial number after the 2nd and 4th stimulation.

[0160] Фиг.18A показывает цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 от двух донорных клеток (pt 1 и pt 2), повторно стимулируемых клетками K562-CD19 (мечеными NucLight Red (NLR)) и в присутствии 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу. [0160] Figure 18A shows the cytolytic activity of anti-CD19 CAR+ T-lymphocytes from two donor cells (pt 1 and pt 2) restimulated with K562-CD19 cells (labeled with NucLight Red (NLR)) and in the presence of 1 μM lenalidomide or 50 nM or 500 nM alternative compound targeting the kinase.

[0161] Фиг.18B показывает процент уничтожения целевых клеток Т-лимфоцитами CAR+ анти-CD19 от двух донорных клеток (1 или 2), повторно стимулируемыми с помощью клеток K562-CD19, по сравнению с контролем - только несущая среда (установленным при 100%).[0161] FIG. 18B shows the percent killing of target cells by anti-CD19 CAR+ T-lymphocytes from two donor cells (1 or 2) restimulated with K562-CD19 cells compared to a vehicle-only control (set at 100% ).

[0162] Фиг.19A показывает гистограмму окрашивания CTV клеток, в целом, в композиции T-лимфоциттов CAR+ анти-BCMA после инкубирования с шариками (200 мкг/мл композиции BCMA-конъюгированные шарики) при отношении Т-лимфоцитов к шарикам 1:1 и в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида. [0162] FIG. 19A shows a histogram of CTV cell staining, in general, in a CAR+ anti-BCMA T-lymphocyte composition after incubation with beads (200 μg/ml BCMA-conjugated beads composition) at a ratio of T-lymphocytes to beads of 1:1 and in the presence or absence of 5 μM lenalidomide.

[0163] Фиг.19B и Фиг.19C показывают гистограммы проточной цитометрии для CD25 в Т-лимфоцитах CD4+ (левая панель) или в Т-лимфоцитах CD8+ (правая панель), присутствующего в композиции T-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA? после инкубирования с шариками (200 мкг/мл композиции BCMA-конъюгированные шарики) при отношении Т-лимфоцитов к шарикам или иммобилизованным анти-CD3 1:1, соответственно, в присутствии или в отсутствие леналидомида. [0163] FIGS. 19B and 19C show flow cytometry histograms for CD25 in CD4+ T lymphocytes (left panel) or CD8+ T lymphocytes (right panel) present in the CAR+ anti-BCMA? T lymphocyte composition. after incubation with beads (200 μg/ml composition BCMA-conjugated beads) at a ratio of T-lymphocytes to beads or immobilized anti-CD3 1:1, respectively, in the presence or absence of lenalidomide.

[0164] Фигуры 20A-20I показывают графики, изображающие уровни факторов транскрипции и маркеров активирования в Т-лимфоцитах CD4+ (левые панели) или Т-лимфоцитах CD8+ (правые панели)? присутствующих в композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA или на них, после инкубирования без стимулирования или при различных количествах BCMA-конъюгированных шариков или конъюгированных шариков анти-CD3 и анти-CD28 и в присутствии 0 мкМ, 0,5 мкМ или 50 мкМ леналидомида. Показаны уровни Blimp1 (Фиг.20A), CD25 (Фиг.20B), CD31 (Фиг.20C), PD-1 (Фиг.20D), Tbet (Фиг.20E), EOMES (Фиг.20F), GATA3 (Фиг.20G), Helios (Фиг.20H) и Ikaros (Фиг.20I). 200 BCMA, 50 BCMA и 5 BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками в количестве 200, 50 и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 108 шариков, соответственно.[0164] Figures 20A-20I show graphs depicting the levels of transcription factors and activation markers in CD4+ T lymphocytes (left panels) or CD8+ T lymphocytes (right panels)? present in or on anti-BCMA CAR+ T cell composition, after incubation without stimulation or with varying amounts of BCMA-conjugated beads or anti-CD3 and anti-CD28 conjugated beads and in the presence of 0 μM, 0.5 μM, or 50 μM lenalidomide . The levels of Blimp1 (Fig. 20A), CD25 (Fig. 20B), CD31 (Fig. 20C), PD-1 (Fig. 20D), Tbet (Fig. 20E), EOMES (Fig. 20F), GATA3 (Fig. 20G), Helios (Fig. 20H) and Ikaros (Fig. 20I). 200 BCMA, 50 BCMA, and 5 BCMA show BCMA-conjugated beads generated by incubating BCMA with beads of 200, 50, and 5 μg BCMA for approximately 4×10 8 beads, respectively.

[0165] Фиг.21A-C показывают графики, изображающие уровни внеклеточного IFN-гамма (Фиг.21A), IL-2 (Фиг.21B) и TNF альфа (Фиг.21C) от культур после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA с двумя различными количествами BCMA-конъюгированных шариков? в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида. 50 мкг BCMA и 5 мкг BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками в количестве 50 и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 108 шариков, соответственно.[0165] Figures 21A-C show graphs depicting the levels of extracellular IFN-gamma (Figure 21A), IL-2 (Figure 21B), and TNF alpha (Figure 21C) from cultures after incubation of a CAR+ anti- BCMA with two different numbers of BCMA-conjugated beads? in the presence or absence of 5 μM lenalidomide. 50 µg BCMA and 5 µg BCMA show BCMA-conjugated beads generated by incubating BCMA with 50 and 5 µg BCMA beads for approximately 4×10 8 beads, respectively.

[0166] Фиг.21D показывает график, изображающий уровни внеклеточного IL-2 от культур после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от двух разных доноров с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков, в присутствии 0 мкМ, 1 мкМ, или 5 мкМ леналидомида. 200 BCMA и 5 BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками, в количестве 200 мкг и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 108 шариков, соответственно.[0166] Figure 21D shows a graph depicting extracellular IL-2 levels from cultures after incubation of an anti-BCMA CAR+ T-lymphocyte composition from two different donors with different amounts of BCMA-conjugated beads, in the presence of 0 μM, 1 μM, or 5 μM lenalidomide. 200 BCMA and 5 BCMA show BCMA-conjugated beads generated by incubating BCMA with beads at 200 μg and 5 μg BCMA for approximately 4×10 8 beads, respectively.

[0167] Фиг.21E и Фиг.21F показывают общие отсчеты клеток после культивирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA после инкубирования в течение 4 дней (Фиг.21E) или 7 дней (Фиг.21F) с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков в присутствии 5 мкМ леналидомида. 50 BCMA и 5 BCMA показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования антигена BCMA с шариками в количестве 50 мкг и 5 мкг BCMA, приблизительно на 4 × 108 шариков, соответственно.[0167] Fig. 21E and Fig. 21F show total cell counts after culturing a CAR+ anti-BCMA T cell composition after incubation for 4 days (FIG. 21E) or 7 days (FIG. 21F) with varying amounts of BCMA-conjugated beads in the presence of 5 μM lenalidomide. 50 BCMA and 5 BCMA show BCMA-conjugated beads generated by incubating the BCMA antigen with 50 µg and 5 µg BCMA beads for approximately 4 x 10eight balls, respectively.

[0168] Фиг.21G показывает гистограммы окрашивания CTV Т-лимфоцитов CD4+ или Т-лимфоцитов CD8+ в композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA после инкубирования в течение 4 или 7 дней с BCMA-конъюгированными шариками в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (несущая среда).[0168] FIG. 21G shows histograms of CTV staining of CD4+ T lymphocytes or CD8+ T lymphocytes in anti-BCMA CAR+ T lymphocyte composition after incubation for 4 or 7 days with BCMA conjugated beads in the presence of 5 μM lenalidomide or in the absence of lenalidomide (carrier medium).

[0169] Фиг.21H и 21I показывают графики, изображающие процент клеток положительных по суррогатному маркеру EGFRt, как определено с помощью антитела анти-EGFR, после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в течение 4 дней (Фиг.21H) или 7 дней (Фиг.21I) с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (несущая среда). “50” и “5” показывают шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA с шариками, в количестве 50 мкг и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 108 шариков, соответственно.[0169] FIGS. 21H and 21I show graphs depicting the percentage of cells positive for the EGFRt surrogate marker, as determined by an anti-EGFR antibody, after incubating a CAR+ anti-BCMA T cell composition for 4 days (FIG. 21H) or 7 days (FIG. 21I) with varying amounts of BCMA-conjugated beads in the presence of 5 μM lenalidomide or in the absence of lenalidomide (carrier medium). “50” and “5” show beads generated by incubating BCMA with beads, at 50 μg and 5 μg BCMA for approximately 4×10 8 beads, respectively.

[0170] Фиг.21J показывает процент уничтожения клеток для целевых клеток RPMI-8226 с помощью эффекторных Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, которые инкубируют с различными количествами BCMA-конъюгированных шариков, в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (несущая среда). Показана цитолитическая активность композиций, содержащих отношение эффекторных клеток к целевым клеткам 3:1 или 1:1 и в присутствии или в отсутствие, в будущем, леналидомида. “50” и “5” показывают BCMA-конъюгированные шарики, генерируемые посредством инкубирования BCMA, с шариками в количестве 50 и 5 мкг BCMA приблизительно на 4 × 108 шариков, соответственно.[0170] FIG. 21J shows percent cell killing for target RPMI-8226 cells by CAR+ anti-BCMA effector T lymphocytes that are incubated with various amounts of BCMA-conjugated beads, in the presence of 5 μM lenalidomide or in the absence of lenalidomide (vehicle medium) . The cytolytic activity of compositions containing a ratio of effector cells to target cells of 3:1 or 1:1 and in the presence or absence, in the future, of lenalidomide is shown. “50” and “5” show BCMA-conjugated beads generated by incubating BCMA with beads of 50 and 5 μg BCMA for approximately 4×10 8 beads, respectively.

[0171] Фиг.22A показывает проточный цитометрический анализ фосфорилированных STAT5 после 2 часов стимулирования CAR (stim) с 50 мкг шариков BCMA. Отсутствие контрольного стимулирования показано точечной линией. Фиг.22B показывает проточный цитометрический анализ внутриклеточных уровней цитокинов на репрезентативном доноре нормальных T CAR после 24 часов стимулирования шариками BCMA (настроенного на трансдуцированных живых CD3+).[0171] Figure 22A shows a flow cytometric analysis of phosphorylated STAT5 after 2 hours of CAR stimulation (stim) with 50 μg BCMA beads. The absence of control stimulation is indicated by the dotted line. 22B shows flow cytometric analysis of intracellular cytokine levels on a representative normal T CAR donor after 24 hours of BCMA bead stimulation (tuned to transduced live CD3+).

[0172] Фиг.23A-23B показывает результаты анализа последовательного повторного стимулирования композиций T-лимфоцитов CAR анти-BCMA, которые инкубируют в течение семи дней с BCMA-конъюгированными шариками (50 мкг/мл). Показаны результаты композиций от трех разных доноров. Фиг.23A и Фиг.23B показывают цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в каждый из моментов времени для двух разных доноров.[0172] FIGS. 23A-23B show the results of a sequential restimulation assay of anti-BCMA CAR T-lymphocyte compositions that are incubated for seven days with BCMA-conjugated beads (50 μg/ml). The results of compositions from three different donors are shown. Fig.23A and Fig.23B show the cytolytic activity of T-lymphocytes CAR+ anti-BCMA at each time point for two different donors.

[0173] Фиг.24A показывает результаты антиген-специфичной цитолитической активности CAR, и Фиг.24B показывает результаты для продуцирования цитокинов для Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, которые предварительно стимулируют шариками с BCMA (по сравнению с свежеоттаявшими (не стимулируемыми предварительно) Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA) в сокультурах, сравнивая клетки, культивируемые в присутствии и в отсутствие леналидомида. Фиг.24C показывает общую жизнеспособность и отсчеты клеток, оцениваемые для трех доноров T CAR анти-BCMA. Фиг.24D показывает результаты проточного цитометрического анализа поверхностной экспрессии CD25 и PD-1 (средняя интенсивность флуоресценции (MFI), для T-лимфоцитов CD4+ или CD8+ CAR анти-BCMA после стимулирования (предварительной обработки) с BCMA шариками в течение 7 дней, в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида. Фиг.24E показывает проточный цитометрический анализ среди доноров CAR T относительно медианной интенсивности флуоресценции (MFI; CD25 и Tim3) или процент положительных маркеров PD-1 и Lag3 на поверхности T-лимфоцитов в подмножествах CD4+ CAR+ и CD8+ CAR+ (настроенных на живых клетках CD3+). Показанные значения представляют собой фоновый процент (Veh) MFI, жизнеспособность или отсчеты.[0173] Figure 24A shows results for antigen-specific CAR cytolytic activity and Figure 24B shows results for cytokine production for anti-BCMA CAR T lymphocytes that are pre-stimulated with BCMA beads (versus freshly thawed (not pre-stimulated) T -lymphocytes CAR anti-BCMA) in cocultures, comparing cells cultured in the presence and absence of lenalidomide. 24C shows overall viability and cell counts assessed for three anti-BCMA T CAR donors. 24D shows the results of flow cytometric analysis of CD25 and PD-1 surface expression (mean fluorescence intensity (MFI), for CD4+ or CD8+ CAR anti-BCMA T-lymphocytes after stimulation (pre-treatment) with BCMA beads for 7 days, in the presence of or in the absence of 1 μM lenalidomide Figure 24E shows flow cytometric analysis among CAR T donors for median fluorescence intensity (MFI; CD25 and Tim3) or the percentage of positive PD-1 and Lag3 markers on the surface of T lymphocytes in the CD4+ CAR+ and CD8+ CAR+ subsets (set on live CD3+ cells) Values shown are MFI baseline percent (Veh), viability or counts.

[0174] Фиг.25A показывает анализ продуцирования эффекторных цитокинов после CAR-специфичного стимулирования 50 мкг шариков BCMA в течение 24 часов в присутствии 1 мкМ леналидомида по сравнению с фоновой (от несущей среды) реакцией для каждого из трех доноров.[0174] Figure 25A shows an analysis of effector cytokine production following CAR-specific stimulation with 50 μg BCMA beads for 24 hours in the presence of 1 μM lenalidomide compared to baseline (vehicle) response for each of the three donors.

[0175] Фиг.25B показывает воздействия Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, активированных на различных концентрациях шариков BCMA (то есть, 5 мкг, 50 мкг и 200 мкг), в присутствии или в отсутствие леналидомида (0,1 мкМ или 1 мкМ) на продуцирование эффекторных цитокинов CAR T.[0175] Figure 25B shows the effects of anti-BCMA CAR T lymphocytes activated at various concentrations of BCMA beads (i.e., 5 μg, 50 μg, and 200 μg), in the presence or absence of lenalidomide (0.1 μM or 1 μM ) on the production of CAR T effector cytokines.

[0176] Фиг.25C показывает продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA, полученными от репрезентативных здоровых доноров и от пациентов с множественной миеломой, стимулируемых шариками BCMA с добавлением PD-L1 на шарики или без него, в присутствии 1 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида.[0176] Figure 25C shows cytokine production by anti-BCMA CAR T lymphocytes derived from representative healthy donors and multiple myeloma patients stimulated with BCMA beads with or without the addition of PD-L1 to the beads, in the presence of 1 μM lenalidomide) or in the absence of lenalidomide.

[0177] Фигуры 26A и 26B показывают результаты анализа главных компонентов (PCA) для экспрессирования генов (на основе результатов RNA-seq; Фиг.26A) и доступности хроматина (на основе результатов ATAC-seq; Фиг.26B), в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-BCMA, генерируемых 4 разными донорами (Доноры 1-4), стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками в течение 24 часов (24 час+stim) или 7 дней (d7+stim), или культивируемых без стимулирования в течение 24 часов (24 час), в присутствии или в отсутствие леналидомида.[0177] Figures 26A and 26B show principal component analysis (PCA) results for gene expression (based on RNA-seq results; Figure 26A) and chromatin availability (based on ATAC-seq results; Figure 26B), in CAR-expressing Anti-BCMA T-lymphocytes generated by 4 different donors (Donors 1-4), stimulated with BCMA-conjugated beads for 24 hours (24 hours + stim) or 7 days (d7 + stim), or cultured without stimulation for 24 hours (24 hours), in the presence or absence of lenalidomide.

[0178] Фигуры 27A и 27B показывают вулканные диаграммы, изображающие статистическую значимость выражения (log10 установленной p-величины) с log2-кратным изменением экспрессии генов, включая гены или пики, которые показывают повышенную (правая сторона) или пониженную (левая сторона) экспрессию в Т-лимфоцитах CAR+, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в течение 24 часов (24 час+stim, Фиг.27A) или 7 дней (d7+stim, Фиг.27B), в присутствии или в отсутствие леналидомида. Таблицы показывают количество генов или пиков, которые показывают статистически значимое увеличение (up) или уменьшение (down) экспрессирования. [0178] Figures 27A and 27B show volcano plots depicting the statistical significance of expression (log 10 p-value) with log 2 -fold change in gene expression, including genes or peaks that show increased (right side) or decreased (left side) expression in CAR+ T-lymphocytes stimulated with BCMA-conjugated beads for 24 hours (24 hours+stim, Fig. 27A) or 7 days (d7+stim, Fig. 27B), in the presence or absence of lenalidomide. The tables show the number of genes or peaks that show a statistically significant increase (up) or decrease (down) in expression.

[0179] Фигуры 27C и 27D показывают вулканные диаграммы, изображающие статистическую значимость выражения (установленной log10 p-величины) с log2-кратным изменением доступности хроматина G, включая гены или пики, которые показывают повышенную (правая сторона) или пониженную (левая сторона) доступность, в Т-лимфоцитах CAR+, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в течение 24 часов (24 час+stim, Фиг.27C) или 7 дней (d7+stim, Фиг.27D). Таблицы показывают количество генов или пиков, которые показывают статистически значимое увеличение (up) или уменьшение (down) доступности. [0179] Figures 27C and 27D show volcano plots depicting the statistical significance of an expression (established log 10 p-value) with a log 2 fold change in G chromatin availability, including genes or peaks that show increased (right side) or decreased (left side ) availability, in CAR+ T-lymphocytes stimulated with BCMA-conjugated beads, within 24 hours (24 hours+stim, Fig. 27C) or 7 days (d7+stim, Fig. 27D). The tables show the number of genes or peaks that show a statistically significant increase (up) or decrease (down) in availability.

[0180] Фигуры 28A и 28B показывают направленность и значимость экспрессирования для генов на биологических сигнальных путях, которые являются обогащенными в наборах генов, для которых экспрессирование является статистически значимо повышенным или пониженным в Т-лимфоцитах CAR+, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в течение 24 часов (24 час+stim, Фиг.28A) или 7 дней (d7+stim, Фиг.28B).[0180] Figures 28A and 28B show the direction and significance of expression for genes in biological signaling pathways that are enriched in sets of genes for which expression is statistically significantly up or down in CAR+ T lymphocytes stimulated with BCMA-conjugated beads over 24 hours (24 hours+stim, Fig. 28A) or 7 days (d7+stim, Fig. 28B).

[0181] Фиг.29 показывает график, сравнивающий пики индивидуальной доступности хроматина (ромбики) и изменения средней доступности хроматина для каждого гена (кружочки), при изменении экспрессии генов, выбранные гены вовлечены в активацию Т-лимфоцитов и передачу сигналов.[0181] Figure 29 shows a graph comparing individual chromatin availability peaks (diamonds) and changes in mean chromatin availability for each gene (circles), as gene expression changes, selected genes are involved in T-lymphocyte activation and signaling.

[0182] Фиг.30 показывает анализ обогащения мотивов, log p-значения обогащения, распространенность и факторы транскрипции, которые, как предсказано, связывают мотивы для пиков с повышенной доступностью в присутствии леналидомида в культурах дня 7.[0182] Figure 30 shows analysis of motif enrichment, enrichment log p-values, abundance, and transcription factors predicted to associate motifs for increased availability peaks in the presence of lenalidomide in day 7 cultures.

[0183] Фиг.31 показывает проточный цитометрический анализ внутриклеточного экспрессирования Ikaros, как в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ анти-CD19, так и в CAR- экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ анти-CD19. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты стимулируются анти-идиотипическим антителом CAR-T (5 мкг/мл), обработанным в некотором диапазоне концентраций леналидомида или Соединения 1. Значения медианной интенсивности флуоресценции (MFI) для Ikaros нормируют и вычисляют как процент по отношению к контрольной несущей среде.[0183] Figure 31 shows a flow cytometric analysis of intracellular expression of Ikaros in both CAR-expressing CD4+ anti-CD19 T lymphocytes and CAR-expressing CD8+ anti-CD19 T lymphocytes. CAR-expressing T lymphocytes are stimulated with CAR-T anti-idiotypic antibody (5 μg/mL) treated over a range of concentrations of lenalidomide or Compound 1. Median fluorescence intensity (MFI) values for Ikaros are normalized and calculated as a percentage of the control carrier. environment.

[0184] Фигуры 32A и 32B показывают анализ продуцирования цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19 в присутствии Соединения 1 (Фиг.32A) или леналидомида (Фиг.32B) после инкубирования с целевыми клетками. Мультиплексный анализ цитокинов супернатантов, осуществляемый через 24 часа из тройных лунок CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 сокультивируемых с целевыми клетками K562.CD19 в присутствии нескольких концентраций Соединения 1 или леналидомида. Определяют концентрации IFN-γ, IL-2 и TNF-α для CAR-экспрессирующих T-лимфоцитов от трех разных доноров для двух отношений E:T. Данные представляют собой среднее значение +/- S.D. (среднеквадратичное отклонение) по 3 экспериментам.[0184] Figures 32A and 32B show an analysis of cytokine production by CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes in the presence of Compound 1 (FIG. 32A) or lenalidomide (FIG. 32B) after incubation with target cells. Multiplex cytokine analysis of supernatants performed 24 hours later from triple wells of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes co-cultured with target K562.CD19 cells in the presence of several concentrations of Compound 1 or lenalidomide. Determine the concentration of IFN-γ, IL-2 and TNF-α for CAR-expressing T-lymphocytes from three different donors for two E:T ratios. Data are mean +/- S.D. (standard deviation) for 3 experiments.

[0185] Фиг.33 показывает анализ цитолитической функции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в присутствии Соединения 1 или леналидомида после инкубирования с целевыми клетками. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров сокультивируют с целевыми клетками K562.CD19 в трех повторностях для двух отношений E:T в присутствии Соединения 1 или леналидомида в течение 5 дней. Результаты вычисляются как нормированный коэффициент гибели. Данные представляют собой среднее значение +/- S.D. по 3 экспериментам. [0185] Fig.33 shows the analysis of the cytolytic function of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes in the presence of Compound 1 or lenalidomide after incubation with target cells. CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes from three different donors were co-cultured with target K562.CD19 cells in triplicate for two E:T ratios in the presence of Compound 1 or lenalidomide for 5 days. The results are calculated as a normalized death rate. Data are mean +/- S.D. for 3 experiments.

[0186] Фигуры 34A и 34B показывают анализ продуцирования цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19 в присутствии Соединения 1 (Фиг.34A) или леналидомида (Фиг.34B) стимулирования анти-идиотипическими антителами. Мультиплексный анализ цитокинов супернатантов осуществляют через 24 часа из тройных лунок CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19, сокультивируемых с агонистом анти-идиотипического антитела в присутствии 100 или 1000 нМ Соединения 1 (Фиг.34A), или 500 или 5000 нМ леналидомида (Фиг.34B). Определяют концентрации IFN-γ, IL-2 и TNF-α для CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов от трех разных доноров. Данные представляют собой среднее значение +/- S.D. по 3 экспериментам.[0186] Figures 34A and 34B show an analysis of cytokine production by CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes in the presence of Compound 1 (FIG. 34A) or lenalidomide (FIG. 34B) stimulated with anti-idiotypic antibodies. Multiplex cytokine analysis of supernatants was performed 24 hours later from triple wells of anti-CD19 CAR-expressing T-lymphocytes co-cultured with an anti-idiotypic antibody agonist in the presence of 100 or 1000 nM Compound 1 (FIG. 34A), or 500 or 5000 nM lenalidomide (FIG. .34B). Determine the concentration of IFN-γ, IL-2 and TNF-α for CAR-expressing T-lymphocytes from three different donors. Data are mean +/- S.D. for 3 experiments.

[0187] Фигуры 35A и 35B показывают анализ поверхностного экспрессирования маркера на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ анти-CD19 (Фиг.35A) и CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ анти-CD19, (Фиг.35B) в присутствии Соединения 1 стимулирования анти-идиотипическими антителами. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют анти-идиотипическим антителом при 0, 0,3, 3, или 30 мкг/мл в присутствии 100 или 1000 нМ Соединения 1. Клетки анализируют с помощью проточной цитометрии в день 4. Вычисляют абсолютное изменение медианной интенсивности флуоресценции по отношению к контрольной несущей среде для каждой концентрации анти-идиотипического антитела. Данные представлены по 3 экспериментам.[0187] Figures 35A and 35B show an analysis of surface marker expression on CAR-expressing CD4+ anti-CD19 T lymphocytes (FIG. 35A) and CAR-expressing CD8+ anti-CD19 T lymphocytes (FIG. 35B) in the presence of Stimulating Compound 1 anti-idiotypic antibodies. CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes from three different donors are stimulated with anti-idiotypic antibody at 0, 0.3, 3, or 30 μg/ml in the presence of 100 or 1000 nM Compound 1. Cells are analyzed by flow cytometry on day 4 Calculate the absolute change in median fluorescence intensity with respect to vehicle control for each concentration of anti-idiotypic antibody. Data are presented for 3 experiments.

[0188] Фигуры 36A и 36B показывают анализ поверхностного экспрессирования маркера на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ анти-CD19 (Фиг.36A) и CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ анти-CD19 (Фиг.36B) в присутствии леналидомида после стимулирования анти-идиотипическими антителами. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют анти-идиотипическим антителом при 0, 0,3, 3 или 30 мкг/мл в присутствии 500 или 5000 нМ леналидомида. Клетки анализируют с помощью проточной цитометрии в день 4. Вычисляют абсолютное изменение медианной интенсивности флуоресценции по отношению к контрольной несущей среде для каждой концентрации анти-идиотипического антитела. Данные представляют по 3 экспериментам.[0188] Figures 36A and 36B show an analysis of surface marker expression on CD4+ anti-CD19 CAR-expressing T lymphocytes (FIG. 36A) and CD8+ anti-CD19 CAR-expressing T lymphocytes (FIG. 36B) in the presence of lenalidomide after anti-CD19 stimulation. - idiotypic antibodies. CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes from three different donors are stimulated with anti-idiotypic antibody at 0, 0.3, 3 or 30 μg/ml in the presence of 500 or 5000 nM lenalidomide. Cells are analyzed by flow cytometry on day 4. The absolute change in median fluorescence intensity relative to vehicle control for each concentration of anti-idiotypic antibody is calculated. Data are from 3 experiments.

[0189] Фигуры 37A и 37B показывают анализ поверхностного экспрессирования CD28 на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+ анти-CD19 в присутствии Соединения 1 (Фиг.37A) или леналидомида (Фиг.37B) после последовательного стимулирования. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют K562.CD19 при отношении E:T 2,5:1 каждые 3-4 дня в присутствии Соединения 1 (Фиг.37A) или леналидомида (Фиг.37B). Процент клеток положительных по CD28 измеряют с помощью проточной цитометрии в день 28.[0189] Figures 37A and 37B show an analysis of CD28 surface expression on CAR-expressing CD4+ and CD8+ anti-CD19 T lymphocytes in the presence of Compound 1 (FIG. 37A) or lenalidomide (FIG. 37B) after sequential stimulation. CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes from three different donors stimulate K562.CD19 at an E:T ratio of 2.5:1 every 3-4 days in the presence of Compound 1 (FIG. 37A) or lenalidomide (FIG. 37B). The percentage of cells positive for CD28 is measured by flow cytometry on day 28.

[0190] Фиг.38 показывает анализ цитолитической функции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в присутствии Соединения 1 или леналидомида после последовательного стимулирования. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров после 24 дней последовательного стимулирования сокультивируются с облучаемыми целевыми клетками K562.CD19 в трех повторностях при двух отношениях E:T в присутствии Соединения 1 или леналидомида. Результаты вычисляются как нормированный коэффициент гибели.[0190] Fig.38 shows the analysis of the cytolytic function of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes in the presence of Compound 1 or lenalidomide after sequential stimulation. CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes from three different donors, after 24 consecutive days of stimulation, are co-cultured with irradiated target K562.CD19 cells in triplicate at two E:T ratios in the presence of Compound 1 or lenalidomide. The results are calculated as a normalized death rate.

[0191] Фигуры 39A и 39B показывают анализ удвоений популяции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в течение 28-дневнего периода последовательного стимулирования в присутствии или в отсутствие Соединения 1. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют целевыми клетками K562.CD19 при отношении E:T 2,5:1 или 10:1 каждые 3-4 дня в присутствии 500 нМ Соединения 1 в течение 28 дней (представлены с помощью оси х). Клетки считают после каждого стимулирования и вычисляют удвоение клеток. (Фиг.39A) Процентное изменение удвоений клеток в день 24 последовательного стимулирования в присутствии 10 нМ, 100 нМ или 500 нМ Соединения 1 показано на Фиг.39B. Данные представляют среднее значение +/-S.E.M (стандартная ошибка среднего) обработок с тройной повторностью от 3 доноров. Каждая стрелка представляет момент времени повторного стимулирования.[0191] Figures 39A and 39B show an analysis of population doublings of anti-CD19 CAR-expressing T lymphocytes during a 28-day sequential stimulation period in the presence or absence of Compound 1. Anti-CD19 CAR-expressing T lymphocytes from three different donors are stimulated target K562.CD19 cells at an E:T ratio of 2.5:1 or 10:1 every 3-4 days in the presence of 500 nM Compound 1 for 28 days (represented by the x-axis). Cells are counted after each stimulation and cell doubling is calculated. (FIG. 39A) The percentage change in cell doublings on day 24 of sequential stimulation in the presence of 10 nM, 100 nM, or 500 nM Compound 1 is shown in FIG. 39B. Data represent the mean +/-S.E.M (standard error of the mean) of triplicate treatments from 3 donors. Each arrow represents a time point in restimulation.

[0192] Фигуры 40A и 40B показывают анализ удвоений популяции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 в течение 28-дневного периода последовательного стимулирования в присутствии или в отсутствие леналидомида. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 от трех разных доноров стимулируют целевыми клетками K562.CD19 при отношении E:T 2,5:1 или 10:1 каждые 3-4 дня в присутствии 1000 нМ леналидомида в течение 28 дней (представлено на оси х). Клетки считают после каждого стимулирования и вычисляют удвоение клеток. (Фиг.40A) Процентное изменение удвоений клеток в день 24 последовательного стимулирования в присутствии 100 нМ или 1000 нМ леналидомида показано на Фиг.40B. Данные представляют среднее значение +/-S.E.M обработок с тройной повторностью от трех доноров. Каждая стрелка представляет момент времени повторного стимулирования.[0192] Figures 40A and 40B show an analysis of population doublings of anti-CD19 CAR-expressing T-lymphocytes during a 28-day sequential stimulation period in the presence or absence of lenalidomide. CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes from three different donors are stimulated with target K562.CD19 cells at an E:T ratio of 2.5:1 or 10:1 every 3-4 days in the presence of 1000 nM lenalidomide for 28 days (shown in Figure 1). x axis). Cells are counted after each stimulation and cell doubling is calculated. (FIG. 40A) The percentage change in cell doublings on day 24 of sequential stimulation in the presence of 100 nM or 1000 nM lenalidomide is shown in FIG. 40B. Data represent the mean +/-S.E.M of triplicate treatments from three donors. Each arrow represents a time point in restimulation.

Подробное описаниеDetailed description

[0193] В настоящем документе предлагается сочетанная терапия, включающая введение иммунотерапии, включающей функционирование или активность T-лимфоцитов, такой как Т-клеточная терапия, и иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида, и/или ингибитор E3-убиквитинлигазы. В некоторых аспектах, предлагаемые способы усиливают или модулируют пролиферацию и/или активность T-лимфоцитов, связанную с введением иммунотерапии или иммунотерапевтического агента, такого как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, такой, например, как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов). В некоторых таких вариантах осуществления, сочетанная терапия включает введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог талидомида и/или ингибитор E3-убиквитинлигазы, и введение Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов).[0193] Provided herein is a combination therapy comprising the administration of an immunotherapy involving T-lymphocyte function or activity, such as T-cell therapy, and an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide, and/or an inhibitor of E3 ubiquitin ligase . In some aspects, the present methods enhance or modulate the proliferation and/or activity of T lymphocytes associated with the administration of immunotherapy or an immunotherapeutic agent, such as a composition containing cells for adoptive cell therapy, such as, for example, T cell therapy (e.g., CAR -expressing T-lymphocytes). In some such embodiments, the combination therapy comprises administering an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, and administering a T cell therapy, such as a composition containing cells for adoptive cell therapy, such as, for example, T-cell therapy (for example, CAR-expressing T-lymphocytes).

[0194] Терапия на основе T-лимфоцитов, такая как адоптивная T-клеточная терапия (включая терапию, включающую введение клеток, экспрессирующих химерные рецепторы специфичные для заболевания или расстройства, представляющего интерес, такие как химерные рецепторы антигенов (CAR) и/или другие рекомбинантные рецепторы антигенов, а также другие виды адоптивной иммунноклеточной и адоптивной T-клеточной терапии) могут быть эффективными при лечении ракового заболевания и других заболеваний и расстройств. Сконструированное экспрессирование рекомбинантных рецепторов, таких как химерные рецепторы антигенов (CAR), на поверхности Т-лимфоцитов делает возможным перенаправление специфичности T-лимфоцитов. В клинических исследованиях, Т-лимфоциты CAR, например, Т-лимфоциты CAR анти-CD19, продуцируют стойкие полные реакции у пациентов, как с лейкозом, так и с лимфомой (Porter et al. (2015) Sci Transl Med., 7:303ra139; Kochenderfer (2015) J. Clin. Oncol., 33: 540-9; Lee et al. (2015) Lancet, 385:517-28; Maude et al. (2014) N Engl J Med, 371:1507-17).[0194] T-lymphocyte-based therapy, such as adoptive T-cell therapy (including therapy involving the introduction of cells expressing chimeric receptors specific for the disease or disorder of interest, such as chimeric antigen receptors (CARs) and/or other recombinant antigen receptors, as well as other types of adoptive immune cell and adoptive T-cell therapies) may be effective in the treatment of cancer and other diseases and disorders. The engineered expression of recombinant receptors, such as chimeric antigen receptors (CARs), on the surface of T lymphocytes makes it possible to redirect the specificity of T lymphocytes. In clinical studies, CAR T lymphocytes, such as anti-CD19 CAR T lymphocytes, produce persistent complete responses in patients with both leukemia and lymphoma (Porter et al. (2015) Sci Transl Med., 7:303ra139 ; Kochenderfer (2015) J. Clin. Oncol., 33: 540-9; Lee et al. (2015) Lancet, 385:517-28; Maude et al. (2014) N Engl J Med, 371:1507-17 ).

[0195] В определенном контексте, доступные подходы к адоптивной клеточной терапии не всегда могут быть полностью удовлетворительными. В некотором контексте, оптимальная эффективность может зависеть от способности вводимых клеток распознавать и связывать мишень, например, целевой антиген, к нахождению локализации и успешному проникновению в соответствующие центры у субъекта, в опухоли и в их окружение. В некотором контексте, оптимальная эффективность может зависеть от способности вводимых клеток активироваться, размножаться, осуществлять различные эффекторные функции, включая цитотоксическое уничтожение и секрецию различных факторов, таких как цитокины, к персистентности, включая долговременную, к дифференциации, к переходу или вступлению при перепрограммировании в определенные фенотипические состояния (такие как состояние с долгоживущей памятью, менее дифференцированные и эффекторные состояния), чтобы исключить или уменьшить иммуносупрессивные состояния в локальном микроокружении заболевания, к обеспечению эффективных и устойчивых повторных реакций после перерыва и повторного экспонирования для целевого лиганда или антигена и для предотвращения или уменьшения истощения, слабости, периферической толерантности, конечной дифференциации и/или дифференциации в супрессивное состояние. [0195] In a certain context, available approaches to adoptive cell therapy may not always be completely satisfactory. In some context, optimal performance may depend on the ability of the injected cells to recognize and bind the target, eg, the target antigen, to locate and successfully enter the appropriate centers in the subject, tumors and their environment. In some context, optimal efficacy may depend on the ability of the injected cells to activate, proliferate, perform various effector functions, including cytotoxic killing and secretion of various factors such as cytokines, persistence, including long-term, differentiation, transition or entry when reprogrammed into certain phenotypic conditions (such as long-lived memory, less differentiated, and effector conditions) to eliminate or reduce immunosuppressive conditions in the local disease microenvironment, to ensure efficient and robust re-responses after interruption and re-exposure for the target ligand or antigen, and to prevent or reduce exhaustion, weakness, peripheral tolerance, eventual differentiation and/or differentiation into a suppressive state.

[0196] В некоторых вариантах осуществления, экспонирование и персистентность генно-инженерных клеток уменьшаются или падают после введения субъекту. Кроме того, наблюдение показывает, что, в некоторых случаях, повышенное экспонирование субъекта для вводимых клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, (например, увеличение количества клеток или продолжительности по времени) может улучшить эффективность и терапевтические результаты адоптивной клеточной терапии. Предварительный анализ, осуществляемый после введения различных нацеленных на CD19 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов субъектам с различными CD19-экспрессирующими раковыми заболеваниями, во множестве клинических исследований, доказывает корреляцию между большей и/или более продолжительной степенью экспонирования для CAR-экспрессирующих клеток и результатами лечения. Такие результаты включают выживаемость и ремиссию у пациента, даже у индивидуумов с острой стадией или значительной массой опухоли. [0196] In some embodiments, the exposure and persistence of the genetically engineered cells decrease or fall after administration to a subject. Furthermore, the observation indicates that, in some cases, increased exposure of the subject to administered cells expressing recombinant receptors (eg, increased cell number or time duration) may improve the efficacy and therapeutic outcomes of adoptive cell therapy. Preliminary analysis following administration of various CD19-targeted CAR-expressing T-lymphocytes to subjects with various CD19-expressing cancers in a variety of clinical studies proves a correlation between greater and/or longer exposure for CAR-expressing cells and treatment outcomes. Such results include patient survival and remission, even in individuals with an acute stage or significant tumor mass.

[0197] В некоторых аспектах, предлагаемые способы и применения обеспечивают или достигают улучшенных или более стойких реакций или эффективности по сравнению с определенными альтернативными способами, например, в конкретных группах леченых субъектов. В некоторых вариантах осуществления, способы являются преимущественными, благодаря введению Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, такой, например, как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты), и иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомида.[0197] In some aspects, the proposed methods and applications provide or achieve improved or more robust responses or efficacy compared to certain alternative methods, for example, in specific groups of treated subjects. In some embodiments, the methods are advantageous by administering a T cell therapy, such as a composition containing cells for adoptive cell therapy, such as, for example, T cell therapy (e.g., CAR expressing T lymphocytes), and an immunomodulatory compound , such as a structural or functional analogue or derivative of thalidomide and/or an inhibitor of E3 ubiquitin ligase, for example, lenalidomide.

[0198] Предлагаемые способы основаны на тех наблюдениях, что иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, улучшает функционирование T-лимфоцитов, включая функции, относящиеся к размножению, пролиферации и персистентности Т-лимфоцитов. Леналидомид представляет собой иммуномодуляторное лекарственное средство, одобренное в настоящее время для лечения множественной миеломы (MM) и мантийноклеточной лимфомы (MCL) и клинически исследованное при терапии диффузной В-крупноклеточной лимфомы, иммунофенотипа с активированными B-лимфоцитами. В некоторых случаях, леналидомид повышает противоопухолевые иммунные реакции, по меньшей мере, частично, посредством модулирования активности комплекса E3 убиквитинлигазы и цереблона (CRBN), что приводит к повышению убиквитинилирования факторов транскрипции Ikaros и Aiolos, что в свою очередь дает в результате изменение экспрессирования различных рецепторов на поверхности опухолевых клеток (смотри, например,

Figure 00000001
et al. (2016) Oncoimmunology, April; 5(4): e1115940).[0198] The proposed methods are based on the observation that an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analogue or derivative of thalidomide and/or an inhibitor of E3 ubiquitin ligase, for example, lenalidomide, improves the functioning of T-lymphocytes, including functions related to reproduction, proliferation and persistence T-lymphocytes. Lenalidomide is an immunomodulatory drug currently approved for the treatment of multiple myeloma (MM) and mantle cell lymphoma (MCL) and has been clinically studied in the treatment of diffuse large B-cell lymphoma, an immunophenotype with activated B-lymphocytes. In some cases, lenalidomide enhances antitumor immune responses, at least in part, by modulating the activity of the E3 ubiquitin ligase-cereblon complex (CRBN), resulting in increased ubiquitinylation of the transcription factors Ikaros and Aiolos, which in turn results in altered expression of various receptors. on the surface of tumor cells (see, for example,
Figure 00000001
et al. (2016) Oncoimmunology, April; 5(4): e1115940).

[0199] Предлагаемые данные показывают, что сочетанная терапия с иммуномодуляторным соединением, таким как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, в способах, включающих Т-лимфоциты, например, включающих введение адоптивной Т-клеточной терапии, достигает улучшения функции Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, сочетание клеточной терапии (например, введение генно-инженерных Т-лимфоцитов) с иммуномодуляторным соединением, например, леналидомидом, улучшает или усиливает одну или несколько функций и/или воздействий Т-клеточной терапии, такую как персистентность, размножение, цитотоксичность, и/или терапевтические результаты, например, способность уничтожать или уменьшать массу опухоли или другой болезненной или целевой клетки. [0199] The present data show that combination therapy with an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analogue or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, e.g. lenalidomide, in methods involving T lymphocytes, e.g. therapy, achieves an improvement in the function of T-cell therapy. In some embodiments, the combination of cell therapy (e.g., administration of engineered T lymphocytes) with an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, improves or enhances one or more of the functions and/or effects of T cell therapy, such as persistence, proliferation, cytotoxicity. , and/or therapeutic results, for example, the ability to destroy or reduce the mass of a tumor or other diseased or target cell.

[0200] В конкретных аспектах, в настоящем документе, обнаружено, что иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, способствует непрерывному функционированию и/или выживанию клеток от Т-клеточной терапии (например, Т-лимфоцитов CAR) после активирования, в том числе после встречи с антигеном. В некоторых аспектах, леналидомид повышает способность таких Т-лимфоцитов к персистентности или долговременному функционированию, например, посредством предотвращения истощения или гибели клеток. В некоторых вариантах осуществления, такие улучшения могут давать в результате сочетанную терапию, демонстрирующую улучшенные общие реакции, например, уменьшение массы опухоли, и/или улучшенную выживаемость по сравнению с субъектами, лечеными с помощью монотерапии, включающей введение одной только Т-клеточной терапии (например, T-лимфоцитов CAR) или иммуномодуляторного соединения (например, леналидомида). В некоторых аспектах, предлагаемые способы повышают общую реакцию и/или выживаемость более чем 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более, по сравнению с альтернативным лечением, например, по сравнению с монотерапией, включающей введение одной только Т-клеточной терапии (например, T-лимфоцитов CAR) или иммуномодуляторного соединения (например, леналидомид). [0200] In specific aspects, herein, an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, such as lenalidomide, is found to promote continued function and/or survival of cells from T cell therapy (for example, CAR T-lymphocytes) after activation, including after encountering an antigen. In some aspects, lenalidomide enhances the persistence or long-term capacity of such T lymphocytes, for example by preventing cell depletion or death. In some embodiments, such improvements may result in a combination therapy demonstrating improved overall responses, e.g., reduction in tumor mass, and/or improved survival compared to subjects treated with a monotherapy comprising administration of T cell therapy alone (e.g., , CAR T-lymphocytes) or an immunomodulatory compound (eg, lenalidomide). In some aspects, the proposed methods increase overall response and/or survival greater than 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more , compared with alternative treatment, for example, compared with monotherapy, including the introduction of one T-cell therapy (eg, CAR T-lymphocytes) or an immunomodulatory compound (eg, lenalidomide).

[0201] В некоторых вариантах осуществления, сочетание с иммуномодуляторным соединением, хотя улучшает один или несколько результатов или функциональных атрибутов, не влияет на одно или несколько побочных воздействий или нежелательных изменений в Т-лимфоцитах, например, не уменьшает способности клеток к активированию, секретированию одного или нескольких желательных цитокинов, размножению и/или персистентности, например, как измерено при анализе in vitro, по сравнению с такими клетками, культивируемыми при условиях во всем остальном таких же, но в отсутствие иммуномодуляторного соединения. Таким образом в некоторых вариантах осуществления, предлагаются способы и сочетания, которые дают в результате улучшение функции или фенотипа T-лимфоцитов, например, собственной функциональности T-лимфоцитов и/или собственного фенотипа T-лимфоцитов, как правило, без ослабления одного или нескольких других желаемых свойств или функциональности, например, функциональности T-лимфоцитов CAR.[0201] In some embodiments, the combination with an immunomodulatory compound although improves one or more outcomes or functional attributes, does not affect one or more side effects or undesirable changes in T-lymphocytes, for example, does not reduce the ability of cells to activate, secrete one or more desired cytokines, proliferate and/or persist, for example, as measured by an in vitro assay compared to such cells cultured under otherwise the same conditions but in the absence of the immunomodulatory compound. Thus, in some embodiments, methods and combinations are provided that result in an improvement in T-lymphocyte function or phenotype, e.g., intrinsic T-lymphocyte functionality and/or intrinsic T-lymphocyte phenotype, generally without impairing one or more other desired properties or functionality, for example, the functionality of CAR T-lymphocytes.

[0202] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы могут усиливать Т-клеточную терапию, например, терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR, что, в некоторых аспектах, может улучшить результаты лечения. В некоторых вариантах осуществления, эти способы являются особенно преимущественными для субъектов, у которых клетки от Т-клеточной терапии демонстрируют слабое размножение, истощаются, демонстрирует уменьшенную или пониженную персистентность у субъекта и/или субъектов, которые имеют раковое заболевание, которое является стойким или не поддающимся лечению при других видах терапии, представляет собой агрессивный рак или рак с высокой степенью риска и/или который демонстрирует или, вероятно, демонстрирует относительно более низкую долю реакции на терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR, вводимую без иммуномодуляторного соединения, по сравнению с другим типом ракового заболевания или по сравнению с введением другой терапии с помощью Т-лимфоцитов CAR. [0202] In some embodiments, the proposed methods can enhance T-cell therapy, for example, therapy with CAR T-lymphocytes, which, in some aspects, can improve treatment outcomes. In some embodiments, these methods are particularly advantageous for subjects in which cells from T cell therapy show poor proliferating, deplete, show decreased or decreased persistence in a subject, and/or subjects who have a cancer that is persistent or refractory. treatment with other therapies is an aggressive or high-risk cancer and/or that shows or is likely to show a relatively lower proportion of response to CAR T-lymphocyte therapy administered without an immunomodulatory compound compared to the other type cancer or compared with the introduction of another therapy with CAR T-lymphocytes.

[0203] В некоторых аспектах, предлагаемые способы могут улучшить, увеличить или усилить Т-клеточную терапию таким образом, чтобы преодолеть отсутствие персистентности и/или истощение Т-лимфоцитов, например, у субъектов, которые соответствуют или примерно соответствуют дню 12-15 после начала введения Т-клеточной терапии, в крови детектируется меньше 10 мкл, например, меньше 5 мкл или меньше 1 мкл таких клеток, или их подмножества CD8+ или CD3+. В некоторых вариантах осуществления, субъект, получающий введение Т-клеточной терапии, например, Т-лимфоцитов CAR, отслеживается относительно присутствия, отсутствия или уровня Т-лимфоцитов от терапии у субъекта, например, в биологическом образце от субъекта, например, в крови субъекта. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, вводится субъекту, получающему Т-клеточную терапию (например, Т-лимфоциты CAR), но у него такие клетки слабо размножаются и/или находятся на пороговом уровне или ниже его в образце от субъекта, например, в образце крови, в то время когда сильное или устойчивое размножение Т-лимфоцитов CAR у субъекта, как правило, наблюдается у множества субъектов, получающих Т-клеточную терапию (например, CAR-T), в некоторых случаях, такую же Т-клеточную терапию (например, такие же Т-лимфоциты CAR). В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, вводится, если в день 12-15 или примерно в этот день после начала введения Т-клеточной терапии в крови детектируются меньше 10 мкл, например, меньше 5 мкл или меньше 1 мкл таких клеток, или их подмножества CD8+ или CD3+. [0203] In some aspects, the proposed methods can improve, increase or enhance T-cell therapy so as to overcome the lack of persistence and / or depletion of T-lymphocytes, for example, in subjects that correspond or approximately correspond to days 12-15 after the start administration of T-cell therapy, less than 10 μl, for example, less than 5 μl or less than 1 μl of such cells, or their CD8+ or CD3+ subset, are detected in the blood. In some embodiments, a subject receiving an administration of a T cell therapy, e.g., CAR T cells, is monitored for the presence, absence, or level of T cells from the therapy in the subject, e.g., in a biological sample from the subject, e.g., in the subject's blood. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analogue or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, e.g., lenalidomide, is administered to a subject receiving T cell therapy (e.g., CAR T lymphocytes), but has proliferate weakly and/or are at or below a threshold level in a sample from a subject, e.g., in a blood sample, while strong or sustained proliferation of CAR T lymphocytes in a subject is typically seen in multiple subjects receiving T-cell therapy (eg, CAR-T), in some cases, the same T-cell therapy (eg, the same CAR T-lymphocytes). In some aspects, an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, such as lenalidomide, is administered if, on or about day 12-15 after initiation of T cell therapy, blood is detected less than 10 μl, for example, less than 5 μl or less than 1 μl of such cells, or a subset of CD8+ or CD3+.

[0204] В определенных аспектах, предлагаемые способы могут улучшить, увеличить или усиливать Т-клеточную терапию у субъектов, у которых наблюдается пиковая реакция на Т-клеточную терапию, но, у которых реакция, например, присутствие Т-лимфоцитов и/или уменьшение массы опухоли, уменьшается или больше не детектируется. В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, вводится субъекту в пределах одной недели, например, в пределах, 1, 2 или 3 дней после того как: (i) пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии детектируется в крови субъекта; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0204] In certain aspects, the proposed methods can improve, increase or enhance T-cell therapy in subjects who have a peak response to T-cell therapy, but who have a response, for example, the presence of T-lymphocytes and / or weight loss tumor is reduced or no longer detected. In some aspects, an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, such as lenalidomide, is administered to a subject within one week, such as within, 1, 2, or 3 days after: ( i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0205] В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения заболевания или состояния, например, рака В-лимфоцитов или гематологического злокачественного новообразования, и в частности, заболеваний, состояний или злокачественных новообразований, при которых реакции, например, полная реакция, на лечение с помощью одной только Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, такая например как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты), является относительно низкой по сравнению с лечением с помощью других видов T-клеточной терапии или лечением других заболеваний или злокачественных новообразований (например, CR у менее чем или у менее примерно 60%, у менее примерно 50% или у менее примерно 45% субъектов, леченых таким образом) и/или, при котором субъект не реагирует на лечение иммуномодуляторным соединением, таким как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, само по себе.[0205] In some embodiments, the methods can be used to treat a disease or condition, e.g., B-lymphocyte cancer or hematological malignancy, and in particular, diseases, conditions, or malignancies in which responses, e.g., complete response, to treatment with T-cell therapy alone, such as a composition containing cells for adoptive cell therapy, such as T-cell therapy (eg, CAR-expressing T-lymphocytes), is relatively low compared to treatment with other types of T cell therapy or treatment of other diseases or malignancies (e.g., CR in less than or less than about 60%, less than about 50%, or less than about 45% of subjects so treated) and/or in which the subject does not respond to treatment with an immunomodulatory compound such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E inhibitor 3 ubiquitin ligases, such as lenalidomide, by itself.

[0206] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, предложенная в настоящем документе, предназначена для применения к субъекта, имеющего раковое заболевание, у которого после начала введения Т-клеточной терапии, такой как композиция, содержащая клетки для адоптивной клеточной терапии, например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, у субъекта возобновляется заболевание после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, субъектам, которые имеют рецидив после такой ремиссии, вводится иммуномодуляторное соединение, такое как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид. В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, предложенная в настоящем документе, предназначается для применения у субъекта, имеющего заболевание или состояние, например, раковое заболевание, у которого количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или их результата, например, является недостаточным для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния у субъекта или симптома или результата. В некоторых вариантах осуществления, способ тем самым уменьшает или облегчает симптом или результат или тяжесть заболевания или состояния до степени, которая больше, чем сочетание (i) степени уменьшения или облегчения, осуществляемой при введении только одного иммуномодуляторного агента, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, и (ii) степени уменьшения или облегчения посредством введения одной только Т-клеточной терапии, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние. В некоторых вариантах осуществления, способ уменьшает или облегчает такие симптомы, результаты лечения или тяжести заболевания, например, по сравнению со средним значением для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, больше, чем или больше примерно, чем 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 6,0-кратно, 7,0-кратно, 8,0-кратно, 9,0-кратно, 10,0-кратно, 20,0-кратно, 30,0-кратно, 40,0-кратно, 50,0-кратно или больше.[0206] In some embodiments, the combination therapy provided herein is for use in a subject having a cancer who, upon initiation of T cell therapy, such as a composition containing cells for adoptive cell therapy, e.g., CAR expressing T-lymphocytes, the subject relapses into remission following treatment with T-cell therapy. In some embodiments, subjects who relapse after such remission are administered an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, such as lenalidomide. In some embodiments, the combination therapy provided herein is for use in a subject having a disease or condition, such as cancer, in which the amount of immunomodulatory compound administered is deficient, as a single agent and/or without administration of a T cell therapy, to alleviate, reduce or prevent the disease or condition or symptom or result, for example, is insufficient to alleviate, reduce or prevent the disease or condition in the subject or symptom or result. In some embodiments, the method thereby reduces or alleviates the symptom or outcome or severity of the disease or condition to an extent that is greater than a combination of (i) the amount of reduction or alleviation achieved by administering the immunomodulatory agent alone, optionally the average of the subject population having the disease or condition, and (ii) the degree of reduction or amelioration by the administration of T cell therapy alone, optionally, the average for the population of subjects having the disease or condition. In some embodiments, the method reduces or alleviates such symptoms, treatment outcomes, or disease severity, e.g., compared to the mean for a population of subjects having the disease or condition greater than or greater than about 1.5-fold, 2, 0x, 3.0x, 4.0x, 5.0x, 6.0x, 7.0x, 8.0x, 9.0x, 10.0x times, 20.0 times, 30.0 times, 40.0 times, 50.0 times or more.

[0207] В некоторых вариантах осуществления, предложенная сочетанная терапия используется в сочетании с лечением определенных заболеваний или состояний, например, ракового заболевания, при котором оптимальное стимулирование рекомбинантного рецептора антигена, например, Т-лимфоцитов CAR, является сложным для достижения и/или не наблюдается постоянно. В некоторых вариантах осуществления, стимулирование меньше оптимального может представлять собой результат низких или недоступных уровней болезненного антигена in vivo, например, в опухоли или на ней. В некоторых вариантах осуществления, определенные виды рака, такие как NHL, например, NHL с высоким риском или агрессивная NHL, такая как DLBCL, и/или хронический лимфолейкоз (CLL), могут быть связаны с дефектами или уменьшением собственной функциональности Т-лимфоцитов, на которые, в некоторых случаях, влияет само заболевание. Например, патогенез многих раковых заболеваний, таких как CLL и NHL, например, DLBCL, может быть связан с иммунодефицитом, приводящим к облегчению роста опухоли и к иммунному уклонению, например, вызываемому иммуносупрессией Т-лимфоцитов, например, запускаемому одним или несколькими факторами в микроокружении опухоли. В некоторых случаях, облегчение собственных дефектов Т-лимфоцитов, полученных от раковых заболеваний таких пациентов, для применения в сочетании с адоптивной клеточной терапией могло бы обеспечить более сильные реакции на адоптивную Т-клеточную терапию, например, терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR. В некоторых случаях, стимулирование меньше оптимального может вызываться различиями в уровне экспрессирования CAR на Генно-инженерных Т-лимфоцитах, вводимых субъекту. В любом из таких вариантов осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, может улучшить стимулирование или активность таких Т-лимфоцитов in vivo у субъекта.[0207] In some embodiments, the proposed combination therapy is used in combination with the treatment of certain diseases or conditions, for example, cancer, in which optimal stimulation of the recombinant antigen receptor, for example, CAR T-lymphocytes, is difficult to achieve and / or is not observed constantly. In some embodiments, less than optimal stimulation may result from low or unavailable levels of the disease antigen in vivo, eg, in or on a tumor. In some embodiments, certain cancers, such as NHL, e.g., high-risk NHL or aggressive NHL, such as DLBCL and/or chronic lymphocytic leukemia (CLL), may be associated with defects or a decrease in intrinsic T-lymphocyte functionality, by which, in some cases, is affected by the disease itself. For example, the pathogenesis of many cancers, such as CLL and NHL, e.g., DLBCL, may be associated with immunodeficiency resulting in facilitation of tumor growth and immune evasion, e.g. tumors. In some cases, alleviating intrinsic defects of T lymphocytes derived from such patients' cancers for use in combination with adoptive cell therapy could provide stronger responses to adoptive T cell therapy, such as CAR T cell therapy. In some cases, less than optimal stimulation may be caused by differences in the level of CAR expression on the GE T lymphocytes administered to the subject. In any such embodiment, administration of an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, such as lenalidomide, may improve the stimulation or activity of such T lymphocytes in vivo in a subject.

[0208] В некоторых вариантах осуществления предлагаемых способов, одно или несколько свойств вводимых генно-инженерных клеток можно улучшить или увеличить или сделать больше по сравнению с вводимыми клетками эталонной композиции, например, увеличить или продлить размножение и/или персистентность таких вводимых клеток у субъекта или увеличить или сделать больше вызванную реакцию при повторном стимулировании с помощью антигена. В некоторых вариантах осуществления, повышение может представлять собой, по меньшей мере, 1,2-кратное, по меньшей мере, 1,5-кратнео, по меньшей мере, 2-кратное, по меньшей мере, 3-кратнео, по меньшей мере, 4-кратное, по меньшей мере, 5-кратное, по меньшей мере, 6-кратное, по меньшей мере, 7-кратное, по меньшей мере, 8-кратное, по меньшей мере, 9-кратное, или, по меньшей мере, 10-кратное увеличение такого свойства или особенности по сравнению с таким же свойством или особенностью при введении эталонной композиции клеток. В некоторых вариантах осуществления, увеличение одного или нескольких таких свойств или особенностей можно наблюдать или оно присутствует в пределах 7 дней, 14 дней, 21 дней, в пределах одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев, пяти месяцев, шести месяцев или 12 месяцев после введения генно-инженерных клеток и начала введения иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид.[0208] In some embodiments of the proposed methods, one or more properties of the injected genetically engineered cells can be improved or increased or made more compared to the input cells of the reference composition, for example, to increase or prolong the multiplication and / or persistence of such input cells in a subject or increase or increase the evoked response when re-stimulated with the antigen. In some embodiments, the increase may be at least 1.2-fold, at least 1.5-fold, at least 2-fold, at least 3-fold, at least 4-fold, at least 5-fold, at least 6-fold, at least 7-fold, at least 8-fold, at least 9-fold, or at least A 10-fold increase in such a property or feature compared to the same property or feature when a reference cell composition is administered. In some embodiments, an increase in one or more of these properties or features can be observed or is present within 7 days, 14 days, 21 days, within one month, two months, three months, four months, five months, six months, or 12 months after administration of the engineered cells and initiation of administration of an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analogue or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, for example, lenalidomide.

[0209] В некоторых вариантах осуществления, эталонная композиция клеток может представлять собой композицию Т-лимфоцитов из крови субъекта, не имеющего или, как ожидается, не имеющего ракового заболевания, или представляет собой популяцию Т-лимфоцитов, полученных, выделенных, генерируемых, продуцируемых, инкубируемых и/или вводимых при таких же или, по существу, при таких же условиях, за исключением того, что они не инкубируются или не вводятся в присутствии иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, эталонная композиция клеток содержит генно-инженерные клетки, которые являются по существу таким же, включая экспрессирование такого же рекомбинантного рецептора, например, CAR. В некоторых аспектах, такие Т-лимфоциты обрабатываются идентично или, по существу, идентично, например, производятся сходным образом, приготавливаются сходным образом, вводятся при такой же или примерно при такой же величине дозы и при других сходных факторах.[0209] In some embodiments, the reference cell composition may be a composition of T lymphocytes from the blood of a subject who does not have or is expected to have no cancer, or is a population of T lymphocytes obtained, isolated, generated, produced, incubated and/or administered under the same or substantially the same conditions, except that they are not incubated or administered in the presence of an immunomodulatory compound. In some embodiments, the reference cell composition contains engineered cells that are essentially the same, including expressing the same recombinant receptor, such as CAR. In some aspects, such T-lymphocytes are processed identically or substantially identically, for example, they are produced in a similar way, prepared in a similar way, administered at the same or about the same dose level, and other similar factors.

[0210] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы дают в результате генно-инженерные клетки с улучшенной персистентностью и/или с большей потенцией у субъекта, которому их вводят. В некоторых вариантах осуществления, персистентность генно-инженерных клеток, таких как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, у субъекта больше по сравнению с тем, чего можно было бы достигнуть с помощью альтернативных способов, таких как способы, включающие введение эталонной композиции клеток, например, введение Т-клеточной терапии, но без введения иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, персистентность увеличивается, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно, 6-кратно, 7-кратно, 8-кратно, 9-кратно, 10-кратно, 20-кратно, 30-кратно, 50-кратно, 60-кратно, 70-кратно, 80-кратно, 90-кратно, 100-кратно или больше.[0210] In some embodiments, the proposed methods result in engineered cells with improved persistence and/or greater potency in the subject to which they are administered. In some embodiments, the persistence of engineered cells, such as CAR-expressing T-lymphocytes, in a subject is greater than what could be achieved with alternative methods, such as methods comprising administering a reference cell composition, for example, the introduction of T-cell therapy, but without the introduction of an immunomodulatory compound. In some embodiments, persistence is increased at least, or about, at least 1.5-fold, 2-fold, 3-fold, 4-fold, 5-fold, 6-fold, 7-fold, 8 times, 9 times, 10 times, 20 times, 30 times, 50 times, 60 times, 70 times, 80 times, 90 times, 100 times or more.

[0211] В некоторых вариантах осуществления, степень или уровень персистентности вводимых клеток можно детектировать или определять количественно после введения субъекту. Например, в некоторых аспектах, используют количественную PCR (qPCR) для оценки количества клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток) в крови или сыворотке или органе или ткани (например, болезненном центре) субъекта. В некоторых аспектах, персистентность количествеено определяется как количество копий ДНК или плазмиды, кодирующей рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК, или как количество рецептор-экспрессирующих, например, CAR-экспрессирующих клеток на микролитр образца, например, крови или сыворотки, или относительно общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) или лейкоцитов или T-лимфоцитов на микролитр образца. В некоторых вариантах осуществления, можно также осуществлять проточный цитометрический анализ для детектирования клеток, экспрессирующих рецептор, как правило, с использованием антител специфичных к этим рецепторам. Анализы на основе клеток также можно использовать для детектирования количества или процента функциональных клеток, таких как клетки способные к связыванию и/или нейтрализации и/или индуцированию реакций, например, цитотоксических реакций, против клеток заболевания или состояния или экспрессирующих антиген, распознаваемый рецептором. В любом из таких вариантов осуществления, степень или уровень экспрессирования другого маркера, связанного с рекомбинантным рецептором (например, CAR-экспрессирующих клеток), можно использовать, чтобы отличить введенные клетки из эндогенных клеток у субъекта.[0211] In some embodiments, the degree or level of persistence of administered cells can be detected or quantified after administration to a subject. For example, in some aspects, quantitative PCR (qPCR) is used to evaluate the number of cells expressing the recombinant receptor (eg, CAR expressing cells) in the blood or serum or organ or tissue (eg, disease center) of a subject. In some aspects, quantification persistence is defined as the number of copies of a DNA or plasmid encoding a receptor, e.g., CAR, per microgram of DNA, or as the number of receptor-expressing, e.g., CAR-expressing cells per microliter of a sample, e.g., blood or serum, or relative to total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) or leukocytes or T-lymphocytes per microliter of sample. In some embodiments, flow cytometric analysis can also be performed to detect cells expressing the receptor, typically using antibodies specific for those receptors. Cell-based assays can also be used to detect the number or percentage of functional cells, such as cells capable of binding and/or neutralizing and/or inducing reactions, e.g., cytotoxic reactions, against cells of a disease or condition or expressing an antigen recognized by a receptor. In any such embodiment, the extent or level of expression of another marker associated with the recombinant receptor (eg, CAR-expressing cells) can be used to distinguish the introduced cells from endogenous cells in the subject.

[0212] Также предлагаются способы генной инженерии, приготовления и продуцирования клеток, композиции, содержащие клетки и/или иммуномодуляторное соединение и наборы, и устройства, содержащие клетки и/или иммуномодуляторные соединения и предназначенные для использования, продуцирования и введения клеток и/или иммуномодуляторного соединения, например, вместе с предлагаемыми способами сочетанной терапии.[0212] Also provided are methods of genetic engineering, preparation and production of cells, compositions containing cells and/or immunomodulatory compound and kits, and devices containing cells and/or immunomodulatory compounds and intended for use, production and administration of cells and/or immunomodulatory compound , for example, together with the proposed methods of combination therapy.

[0213] Все публикации, включая патентные документы, научные статьи и базы данных, упоминаемые в настоящей заявке, включаются в качестве ссылок во всей их полноте для всех целей до такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация отдельно включалась как ссылка. Если определение, приведенное в настоящем документе, противоречит или иным образом не совпадает с определением, приведенным в патентах, заявках, опубликованных заявках и других публикациях, которые включаются в настоящий документ в качестве ссылок, определение, приведенное в настоящем документе, преобладает над определением, которое включается в настоящий документ в качестве ссылки.[0213] All publications, including patent documents, scientific articles and databases referred to in this application, are incorporated by reference in their entirety for all purposes to the same extent as if each individual publication were separately incorporated by reference. If the definition given herein conflicts with or otherwise does not match the definition given in patents, applications, published applications and other publications, which are incorporated herein by reference, the definition given in this document shall take precedence over the definition that is incorporated herein by reference.

[0214] Заголовки разделов, используемые в настоящем документе, предназначены только для целей организации и не рассматриваются как ограничивающие описанный предмет изобретения.[0214] The section headings used herein are for organizational purposes only and are not intended to limit the subject matter described.

I. Cочетанная терапияI. Combined therapy

[0215] В настоящем документе предлагаются способы сочетанной терапии для лечения заболевания или расстройства, например, ракового или пролиферативного заболевания, которые включают введение субъекту сочетанной терапии из 1) иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомида, и 2) Т-клеточной терапии, например, CAR-экспрессирующих клеток, например, Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия представляет собой адоптивную иммуноклеточную терапию, включающую Т-лимфоциты, которые специфично распознают антиген, связанный с заболеванием или расстройством, например, раковым или пролиферативным заболеванием, и/или нацелены на него. Также предлагаются сочетания и промышленные изделия, такие как наборы, которые содержат композицию, содержащую Т-клеточную терапию, и/или композицию, содержащую иммуномодуляторное соединение, и применения таких композиций и сочетаний для лечения или предотвращения заболеваний, состояний и расстройств, включая раковые заболевания. [0215] Provided herein are methods of combination therapy for treating a disease or disorder, such as a cancerous or proliferative disease, which comprises administering to a subject a combination therapy of 1) an immunomodulatory compound such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor , for example, lenalidomide, and 2) T-cell therapy, for example, CAR-expressing cells, for example, T-lymphocytes. In some embodiments, the T cell therapy is an adoptive immunocellular therapy comprising T lymphocytes that specifically recognize and/or target an antigen associated with a disease or disorder, such as a cancerous or proliferative disease. Also provided are combinations and articles of manufacture, such as kits, that contain a composition containing a T cell therapy and/or a composition containing an immunomodulatory compound, and uses of such compositions and combinations for the treatment or prevention of diseases, conditions, and disorders, including cancers.

[0216] В некоторых вариантах осуществления, такие способы могут включать введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомида, до, одновременно, в ходе, в течение курса (включая однократно и/или периодически в течение курса), и/или после введения (например, начала введения) Т-клеточной терапии (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов). В некоторых вариантах осуществления, введение может включать последовательное или чередующееся введение иммуномодуляторного соединения и Т-клеточной терапии.[0216] In some embodiments, such methods may include administering an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, e.g., lenalidomide, before, simultaneously, during, during a course (including once and / or periodically during the course), and / or after the introduction (for example, the beginning of the introduction) of T-cell therapy (for example, CAR-expressing T-lymphocytes). In some embodiments, administration may include sequential or alternating administration of an immunomodulatory compound and T cell therapy.

[0217] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия представляет собой адоптивную клеточную терапию. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия представляет собой или включает проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию, трансгенную TCR терапию или терапию с помощью клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (необязательно, Т-клеточную терапию), который необязательно представляет собой терапию с помощью клеток, экспрессирующих химерный рецептор антигена (CAR). В некоторых вариантах осуществления, терапия представляет собой терапию, нацеленную на B-лимфоциты. В некоторых вариантах осуществления, терапия нацелена на антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA). В некоторых вариантах осуществления, терапия нацелена на CD19. В некоторых вариантах осуществления, клетки и режимы дозирования для введения клеток могут включать любые клетки и режимы дозирования, как описано в следующем далее подразделе A под заглавием “Введение Т-клеточной терапии”. [0217] In some embodiments, the cell therapy is an adoptive cell therapy. In some embodiments, the cell therapy is or includes tumor infiltrating lymphocyte (TIL) therapy, transgenic TCR therapy, or therapy with cells expressing a recombinant receptor (optionally, T-cell therapy), which is optionally a therapy with cells, expressing a chimeric antigen receptor (CAR). In some embodiments, the therapy is a B-lymphocyte-targeting therapy. In some embodiments, the therapy targets B-lymphocyte maturation antigen (BCMA). In some embodiments, the therapy targets CD19. In some embodiments, the cells and dosing regimens for administering the cells may include any of the cells and dosing regimens as described in the following subsection A, titled "Administration of T Cell Therapy".

[0218] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает функциональность T-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение приводит в действие анти-миеломную активность. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение изменяет супрессивное микроокружение. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой структурный или функциональный аналог или производное талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид или соединение с такими же свойствами как у леналидомида или со сходными свойствами, включая аналоги или производные, стереоизомер леналидомида или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, режимы дозирования для введения иммуномодуляторного соединения могут включать любой режим, как описано в следующем далее подразделе B под заглавием “Введение иммуномодуляторного соединения”.[0218] In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances the functionality of T-lymphocytes. In some embodiments, the immunomodulatory compound elicits anti-myeloma activity. In some embodiments, the immunomodulatory compound alters the suppressive microenvironment. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a structural or functional analog or derivative of thalidomide. In some embodiments, the immunomodulatory compound is an E3 ubiquitin ligase inhibitor. In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide or a compound with the same or similar properties as lenalidomide, including analogues or derivatives, a stereoisomer of lenalidomide, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, cocrystal, clathrate, or polymorph thereof. In some embodiments, dosing regimens for administering an immunomodulatory compound may include any of the regimens as described in the following subsection B, entitled "Administration of an immunomodulatory compound."

[0219] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) и иммуномодуляторное соединение предлагаются как фармацевтические композиции для введения субъекту. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции содержат терапевтически эффективные количества одного или обоих агентов для сочетанной терапии, например, Т-лимфоциты для адоптивной клеточной терапии и иммуномодуляторное соединение, как описано. В некоторых вариантах осуществления, агенты приготавливают для введения в отдельных фармацевтических композициях. В некоторых вариантах осуществления, любые фармацевтические композиции, предлагаемые в настоящем документе, могут приготавливаться в воде дозированных форм, соответствующих каждому способу введения. [0219] In some embodiments, the T cell therapy (eg, CAR expressing T lymphocytes) and the immunomodulatory compound are provided as pharmaceutical compositions for administration to a subject. In some embodiments, the pharmaceutical compositions contain therapeutically effective amounts of one or both of the combination therapy agents, eg, adoptive cell therapy T lymphocytes and an immunomodulatory compound, as described. In some embodiments, the agents are formulated for administration in separate pharmaceutical compositions. In some embodiments, any pharmaceutical compositions provided herein may be formulated in water in dosage forms appropriate for each route of administration.

[0220] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия, которая включает введение Т-клеточной терапии, включая генно-инженерные клетки, например, терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR, и иммуномодуляторного соединения, вводится субъекту или пациенту, имеющему заболевание или состояние, которое должно лечиться (например, раковое заболевание), или имеет риск возникновения заболевания или состояния (например, ракового заболевания). В некоторых аспектах, способы лечат, например, облегчают один или несколько симптом заболевания или состояния, например, посредством уменьшения массы опухоли при раковом заболевании, экспрессирующем антиген, распознаваемый с помощью иммунотерапии или иммунотерапевтического агента, например, распознаваемый с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов. [0220] In some embodiments, a combination therapy that includes administering a T cell therapy, including genetically engineered cells, such as CAR T cell therapy, and an immunomodulatory compound, is administered to a subject or patient having a disease or condition that must be treated (eg, cancer), or is at risk of developing a disease or condition (eg, cancer). In some aspects, the methods treat, for example, alleviate one or more symptoms of a disease or condition, for example, by reducing tumor mass in a cancer expressing an antigen recognized by immunotherapy or an immunotherapeutic agent, for example, recognized by genetically engineered T-lymphocytes .

[0221] В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние, которое лечат, может представлять собой любое заболевание или состояние, при котором экспрессирование антигена связано с этиологией болезненного состояния или расстройства и/или вовлечено в него, например, вызывает, обостряет или иным образом вовлечено в такое заболевание, состояние или расстройство. Иллюстративные заболевания и состояния могут включать заболевания или состояния, связанные со злокачественным новообразованием или с трансформацией клеток (например, с раковым заболеванием), аутоиммунным или воспалительным заболеванием, или с инфекционным заболеванием, например, вызываемым бактериальными, вирусными или другими патогенами. Иллюстративные антигены, которые включают антигены, связанные с различными заболеваниями и состояниями, которые могут лечиться, включают любые антигены, описанные в настоящем документе. В конкретных вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор, экспрессируемый на генно-инженерных клетках от сочетанной терапии, включая химерные рецепторы антигена или трансгенный TCR, специфично связывается с антигеном, связанным с заболеванием или состоянием. [0221] In some embodiments, the disease or condition being treated can be any disease or condition in which antigen expression is associated with and/or involved in the etiology of the disease state or disorder, e.g., causes, exacerbates, or is otherwise involved to such a disease, condition or disorder. Exemplary diseases and conditions may include diseases or conditions associated with cancer or cell transformation (eg, cancer), an autoimmune or inflammatory disease, or an infectious disease, such as those caused by bacterial, viral, or other pathogens. Illustrative antigens, which include antigens associated with various diseases and conditions that can be treated, include any of the antigens described herein. In specific embodiments, a recombinant receptor expressed on genetically engineered cells from combination therapy, including chimeric antigen receptors or a transgenic TCR, specifically binds to an antigen associated with a disease or condition.

[0222] В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой опухоль, такую как плотная опухоль, лимфома, лейкоз, кровяная опухоль, метастатическая опухоль или другой тип ракового заболевания или опухоли. [0222] In some embodiments, the disease or condition is a tumor, such as a solid tumor, lymphoma, leukemia, a blood tumor, a metastatic tumor, or another type of cancer or tumor.

[0223] В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание или пролиферативное заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов или гематологическое злокачественное новообразование. В некоторых вариантах осуществления раковое заболевание или пролиферативное заболевание представляет собой лимфоцитарный лейкоз (ALL), неходжкинскую лимфому (NHL) или хронический лимфолейкоз (CLL). В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание представляет собой CLL. В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения миеломы, лимфомы или лейкоза. В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения неходжкинской лимфомы (NHL), острого лимфоцитарного лейкоза (ALL), хронического лимфолейкоза (CLL), диффузной В-крупноклеточной лимфомы (DLBCL), острого миелолейкоза (AML) или миеломы, например, множественной миеломы (MM). В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения MM или DBCBL. [0223] In some embodiments, the cancer or proliferative disease is a B-lymphocyte cancer or a hematologic malignancy. In some embodiments, the cancer or proliferative disease is lymphocytic leukemia (ALL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), or chronic lymphocytic leukemia (CLL). In some embodiments, the cancer is CLL. In some embodiments, the methods can be used to treat myeloma, lymphoma, or leukemia. In some embodiments, the methods can be used to treat non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphocytic leukemia (ALL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), acute myeloid leukemia (AML), or myeloma, e.g., multiple myeloma. (MM). In some embodiments, the methods can be used to treat MM or DBCBL.

[0224] В некоторых вариантах осуществления, антиген, связанный с заболеванием или расстройством, выбирается из группы, состоящей из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, или 4, димеров erbB, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, kdr, легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 рецептора a2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена и антигена, связанного с универсальной меткой, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, MUC1, MUC16, PSCA, лигандов NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), специфичного антигена предстательной железы, PSMA, Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138 и патоген-специфичного антигена. В некоторых вариантах осуществления, антиген связан с универсальной меткой или представляет собой ее.[0224] In some embodiments, the antigen associated with the disease or disorder is selected from the group consisting of ROR1, B cell maturation antigen (BCMA), tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, or 4, erbB dimers , EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alpha, IL-13R-alpha2, kdr, kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), antigen, melanoma associated (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), survivin, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor a2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, folate receptor-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptor, 5T4, Foetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen and ant universal label-associated gene, cancer-testicular antigen, mesothelin, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D ligands, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein-coupled 5D receptor (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1 , TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen (CEA), prostate specific antigen, PSMA, Her2/neu, estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2) , CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, cyclin A2, CCL-1, CD138 and pathogen-specific antigen. In some embodiments, the antigen is associated with or is a universal tag.

[0225] В некоторых вариантах осуществления раковое заболевание или пролиферативное заболевание экспрессирует BCMA. В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы используют Т-лимфоцит, экспрессирующий рекомбинантный рецептор (например, Т-лимфоциты CAR), который нацелен на BCMA.[0225] In some embodiments, the cancer or proliferative disease expresses BCMA. In some embodiments, the proposed methods use a T lymphocyte expressing a recombinant receptor (eg, CAR T lymphocytes) that targets BCMA.

[0226] В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения не-гематологического ракового заболевания, такого как плотная опухоль. В некоторых вариантах осуществления, способы можно использовать для лечения рака мочевого пузыря, легких, головного мозга, меланомы (например, мелкоклеточной меланомы легких), рака молочной железы, рака шейки матки, яичников, ободочной и прямой кишки, поджелудочной железы, эндометрия, пищевода, почек, печени, предстательной железы, кожи, щитовидной железы или матки. В некоторых вариантах осуществления, раковое заболевание или пролиферативное заболевание представляет собой рак поджелудочной железы, рак мочевого пузыря, рак ободочной и прямой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак почек, гепатоцеллюлярный рак, рак легких, рак яичников, рак шейки матки, рак поджелудочной железы, ректальный рак, рак щитовидной железы, рак матки, рак ЖКТ, рак пищевода, рак головы и шеи, меланому, нейроэндокринные раковые заболевания, раковые заболевания ЦНС, опухоли мозга, рак костей или саркому мягких тканей. [0226] In some embodiments, the methods can be used to treat a non-hematologic cancer, such as a solid tumor. In some embodiments, the methods can be used to treat bladder, lung, brain, melanoma (e.g., small cell lung melanoma), breast, cervical, ovarian, colorectal, pancreatic, endometrial, esophageal, kidneys, liver, prostate, skin, thyroid, or uterus. In some embodiments, the cancer or proliferative disease is pancreatic cancer, bladder cancer, colorectal cancer, breast cancer, prostate cancer, kidney cancer, hepatocellular cancer, lung cancer, ovarian cancer, cervical cancer, pancreatic cancer, rectal cancer, thyroid cancer, uterine cancer, gastrointestinal cancer, esophageal cancer, head and neck cancer, melanoma, neuroendocrine cancers, CNS cancers, brain tumors, bone cancer or soft tissue sarcoma.

[0227] В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой инфекционное заболевание или состояние, такое как, но, не ограничиваясь этим, вирусную, ретровирусную, бактериальную и протозойную инфекцию, иммунодефицит, цитомегаловирус (CMV), вирус Эпштейна-Барра (EBV), аденовирус, BK полиомавирусы. В некоторых вариантах осуществления, заболевание или состояние представляет собой аутоиммунное или воспалительное заболевание или состояние, такое как артрит, например, ревматоидный артрит (RA), диабет Типа I, системную красную волчанку (SLE), воспалительное заболевание пищеварительного тракта, псориаз, склеродермию, аутоиммунное заболевание щитовидной железы, болезнь Грейвса, болезнь Крона, множественный склероз, астму и/или заболевание или состояние, связанное с трансплантантом.[0227] In some embodiments, the disease or condition is an infectious disease or condition such as, but not limited to, viral, retroviral, bacterial, and protozoal infection, immunodeficiency, cytomegalovirus (CMV), Epstein-Barr virus (EBV) , adenovirus, BK polyomaviruses. In some embodiments, the disease or condition is an autoimmune or inflammatory disease or condition, such as arthritis, e.g., rheumatoid arthritis (RA), Type I diabetes, systemic lupus erythematosus (SLE), inflammatory bowel disease, psoriasis, scleroderma, autoimmune thyroid disease, Graves' disease, Crohn's disease, multiple sclerosis, asthma, and/or a transplant related disease or condition.

[0228] Для предотвращения или лечения заболевания, соответствующая доза иммуномодуляторного соединения (например, леналидомида) и/или иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов), может зависеть от типа заболевания, которое должно лечиться, конкретного иммуномодуляторного соединения, клеток и/или рекомбинантных рецепторов, экспрессируемых на клетках, тяжести и хода заболевания, способа введения, от того вводится ли иммуномодуляторное соединение и/или Т-клеточная терапия для превентивных или терапевтических целей, от предыдущей терапии, частоты введения, истории болезни субъекта и реакции на клетки, и от суждения лечащего врача. Композиции и клетки в некоторых вариантах осуществления вводятся соответствующим образом субъекту за один раз или в ходе ряда сеансов лечения. Описываются иллюстративные режимы дозирования и временные графики предлагаемой сочетанной терапии.[0228] To prevent or treat a disease, the appropriate dose of an immunomodulatory compound (e.g., lenalidomide) and/or immunotherapy, e.g., T-cell therapy (e.g., CAR-expressing T-lymphocytes), may depend on the type of disease to be treated , the particular immunomodulatory compound, cells and/or recombinant receptors expressed on the cells, the severity and course of the disease, the route of administration, whether the immunomodulatory compound and/or T-cell therapy is administered for preventive or therapeutic purposes, previous therapy, frequency of administration, the subject's medical history and response to cells, and the judgment of the attending physician. Compositions and cells in some embodiments, the implementation is appropriately administered to the subject at one time or over a series of treatment sessions. Exemplary dosing regimens and time schedules of proposed combination therapy are described.

[0229] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия и иммуномодуляторное соединение вводятся как часть дополнительного сочетанного лечения, которое может вводиться одновременно или последовательно с другим терапевтическим вмешательством, в любом порядке. В некотором контексте, Т-клеточная терапия, например, генно-инженерные Т-лимфоциты, такие как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, вводятся совместно с другой терапией, достаточно близко по времени, так что Т-клеточная терапия усиливает воздействие одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов, или наоборот. В некоторых вариантах осуществления, клетки вводятся до одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия, например, генно-инженерные Т-лимфоциты, такие как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, вводятся после одного или нескольких дополнительных терапевтических агентов. В некоторых вариантах осуществления, способы сочетанной терапии дополнительно включают противолимфоцитарную терапию, такую как введение химиотерапевтического агента. В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия дополнительно включает введение другого терапевтического агента, такого как противораковый агент, ингибитор контрольных точек или другой иммуномодулирующий агент. Использование включает применение сочетанной терапии в таких способах и видах лечения и применение таких композиций при приготовлении медикаментов для осуществления таких способов сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, способы и применение тем самым излечивают заболевание или состояние, или расстройство, такое как раковое заболевание или пролиферативное заболевание, у субъекта.[0229] In some embodiments, the T cell therapy and the immunomodulatory compound are administered as part of an additional concomitant treatment, which may be administered simultaneously or sequentially with another therapeutic intervention, in any order. In some context, T-cell therapy, for example, engineered T-lymphocytes, such as CAR-expressing T-lymphocytes, are co-administered with another therapy close enough in time that the T-cell therapy enhances the effect of one or more additional therapeutic agents, or vice versa. In some embodiments, the cells are administered prior to one or more additional therapeutic agents. In some embodiments, T cell therapy, eg, engineered T lymphocytes, such as CAR expressing T lymphocytes, is administered after one or more additional therapeutic agents. In some embodiments, the combination therapy methods further comprise anti-lymphocyte therapy, such as administration of a chemotherapeutic agent. In some embodiments, the combination therapy further comprises administering another therapeutic agent, such as an anticancer agent, checkpoint inhibitor, or other immunomodulatory agent. Uses include the use of combination therapy in such methods and treatments and the use of such compositions in the preparation of medicaments for such combination therapy methods. In some embodiments, the methods and uses thereby cure a disease or condition or disorder, such as a cancer or proliferative disease, in a subject.

[0230] До, в ходе или после введения иммунотерапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR) и/или иммуномодуляторного соединения, измеряется биологическая активность Т-клеточной терапии, например, биологическая активность популяций генно-инженерных клеток, в некоторых вариантах осуществления, например, с помощью любого количества, известных способов. Параметры оценки включают способность генно-инженерных клеток, к разрушению целевых клеток, персистентность и другие меры активности T-лимфоцитов, например, как измеряется с использованием любого пригодного для использования способа известного в данной области, такого как анализы, дополнительно описанные ниже в Разделе III. В некоторых вариантах осуществления, биологическую активность клеток, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе T-лимфоцитов, измеряют посредством анализа цитотоксического уничтожения клеток, экспрессирования и/или секретирования одного или нескольких цитокинов, пролиферации или размножения, например, при повторном стимулировании антигеном. В некоторых аспектах биологическая активность измеряется посредством оценки тяжести заболевания и/или клинического результата, такого как уменьшение массы или нагрузки опухоли. В некоторых вариантах осуществления, введение одного или обоих агентов сочетанной терапии и/или многократное введение терапии, может определяться на основе результатов анализов до, во время, в ходе курса или после введения одного или обоих агентов сочетанной терапии.[0230] Before, during, or after the administration of immunotherapy (e.g., T-cell therapy, such as therapy with CAR T-lymphocytes) and/or immunomodulatory compound, the biological activity of the T-cell therapy is measured, for example, the biological activity of gene populations. engineered cells, in some embodiments, for example, using any number of known methods. Evaluation parameters include the ability of engineered cells to destroy target cells, persistence, and other measures of T-lymphocyte activity, for example, as measured using any usable method known in the art, such as the assays further described below in Section III. In some embodiments, the biological activity of cells, e.g., T cells, administered for T cell therapy is measured by cytotoxic cell killing assay, expression and/or secretion of one or more cytokines, proliferation, or expansion, e.g., upon restimulation antigen. In some aspects, biological activity is measured by assessing disease severity and/or clinical outcome, such as reduction in tumor mass or burden. In some embodiments, administration of one or both of the combination therapy agents and/or multiple administration of therapy may be determined based on test results before, during, during, or after administration of one or both of the combination therapy agents.

[0231] В некоторых вариантах осуществления, объединенное воздействие иммуномодуляторного соединения в сочетании с клеточной терапией может быть синергическим по сравнению с лечением, включающем только иммуномодуляторное соединение или монотерапию с помощью клеточной терапии. Например, в некоторых вариантах осуществления, способы, предлагаемые в настоящем документе, приводят в результате к увеличению или улучшению желаемого терапевтического воздействия, такому как повышение или улучшение уменьшения или замедления одного или нескольких симптомов, связанных с раковым заболеванием. [0231] In some embodiments, the combined effect of an immunomodulatory compound in combination with a cell therapy may be synergistic compared to a treatment comprising the immunomodulatory compound alone or cell therapy alone. For example, in some embodiments, the methods provided herein result in an increase or improvement in the desired therapeutic effect, such as an increase in or improvement in the reduction or slowing of one or more symptoms associated with a cancer.

[0232] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение увеличивает размножение или пролиферацию генно-инженерных Т-лимфоцитов таких как T-лимфоцитов CAR. В некоторых вариантах осуществления, увеличение размножения или пролиферации наблюдается in vivo при введении субъекту. В некоторых вариантах осуществления, количество генно-инженерных Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов CAR, увеличивается больше или больше примерно, чем 1,2-кратно, 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 6,0-кратно, 7,0-кратно, 8,0-кратно, 9,0-кратно, 10,0-кратно или больше.[0232] In some embodiments, the immunomodulatory compound increases the multiplication or proliferation of engineered T lymphocytes such as CAR T lymphocytes. In some embodiments, an increase in multiplication or proliferation is observed in vivo when administered to a subject. In some embodiments, the number of engineered T lymphocytes, e.g., CAR T lymphocytes, increases more or more than about 1.2-fold, 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold , 4.0 times, 5.0 times, 6.0 times, 7.0 times, 8.0 times, 9.0 times, 10.0 times or more.

A. Введение Т-клеточной терапии A. Introduction of T cell therapy

[0233] В некоторых вариантах осуществления способов, композиций, сочетаний, наборов и применений, предлагаемых в настоящем документе, сочетанная терапия включает введение субъекту иммунноклеточной терапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов). Введение такой терапии может начинаться до, после или одновременно с введением одного или нескольких иммуномодуляторных соединений, как описано.[0233] In some embodiments of the methods, compositions, combinations, kits, and uses provided herein, combination therapy comprises administering an immune cell therapy, such as T-cell therapy (eg, CAR-expressing T-lymphocytes) to a subject. The introduction of such therapy can begin before, after or simultaneously with the introduction of one or more immunomodulatory compounds, as described.

[0234] В некоторых вариантах осуществления, терапия на клеточной основе представляет собой или включает введение клеток, таких как иммунные клетки, например, T-лимфоциты или NK-клетки, которые нацелены на молекулу, экспрессируемую на поверхности повреждения, такого как опухоль или рак. В некоторых вариантах осуществления, иммунные клетки экспрессируют рецептор Т-лимфоцитов (TCR) или другой антиген-связывающий рецептор. В некоторых вариантах осуществления, иммунные клетки экспрессируют рекомбинантный рецептор, такой как трансгенный TCR или химерный рецептор антигена (CAR). В некоторых вариантах осуществления, клетки являются аутологичными для субъекта. В некоторых вариантах осуществления, клетки являются аллогенными для субъекта. [0234] In some embodiments, a cell-based therapy is or includes the administration of cells, such as immune cells, e.g., T-lymphocytes or NK cells, that target a molecule expressed on the surface of a lesion, such as a tumor or cancer. In some embodiments, the immune cells express the T-lymphocyte receptor (TCR) or other antigen-binding receptor. In some embodiments, the immune cells express a recombinant receptor, such as a transgenic TCR or a chimeric antigen receptor (CAR). In some embodiments, the cells are autologous to the subject. In some embodiments, the cells are allogeneic to the subject.

[0235] В некоторых аспектах, Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию, трансгенную TCR-терапию или Т-клеточную терапию, включающую генно-инженерные клетки, такую как терапия с помощью клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор специфично связывается с лигандом, таким как лиганд, связанный с заболеванием или состоянием, например, связанный с клетками опухоли или рака или экспрессируемый ею. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия включает введение генно-инженерных Т-лимфоцитов для экспрессирования химерного рецептора антигена (CAR). [0235] In some aspects, T cell therapy is or comprises tumor infiltrating lymphocytic (TIL) therapy, transgenic TCR therapy, or T cell therapy involving genetically engineered cells, such as therapy with cells expressing a recombinant receptor . In some embodiments, the recombinant receptor specifically binds to a ligand, such as a ligand associated with a disease or condition, such as associated with or expressed by tumor or cancer cells. In some embodiments, T cell therapy comprises administering engineered T lymphocytes to express a chimeric antigen receptor (CAR).

[0236] В некоторых вариантах осуществления, предложенные клетки экспрессируются и/или получаются с помощью генной инженерии для экспрессирования рецепторов, таких как рекомбинантные рецепторы, включая рецепторы, содержащие лиганд-связывающие домены или их связывающие фрагменты, и рецепторы Т-лимфоцитов (TCR) и их компоненты, и/или функциональные рецепторы антигена, отличные от TCR, такие как химерные рецепторы антигена (CAR). В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор содержит внеклеточный лиганд-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой CAR, который содержит внеклеточный антиген-распознающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, лиганд, такой как антиген, представляет собой белок, экспрессируемый на поверхности клеток. В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой TCR-подобный CAR и антиген представляет собой процессированный пептидный антиген, такой как пептидный антиген внутриклеточного белка, который, подобно TCR, распознается на поверхности клетки в контексте молекулы главного комплекса гистосовместимости (MHC). [0236] In some embodiments, the cells of the invention are expressed and/or genetically engineered to express receptors such as recombinant receptors, including receptors containing ligand-binding domains or binding fragments thereof, and T-lymphocyte receptors (TCR) and components thereof, and/or functional antigen receptors other than TCRs, such as chimeric antigen receptors (CARs). In some embodiments, the recombinant receptor contains an extracellular ligand-binding domain that specifically binds to an antigen. In some embodiments, the recombinant receptor is a CAR that contains an extracellular antigen recognition domain that specifically binds to an antigen. In some embodiments, the ligand, such as an antigen, is a protein expressed on the surface of cells. In some embodiments, the CAR is a TCR-like CAR and the antigen is a truncated peptide antigen, such as an intracellular protein peptide antigen that, like TCR, is recognized on the cell surface in the context of a major histocompatibility complex (MHC) molecule.

[0237] Генно-инженерные клетки, включая генно-инженерные клетки, содержащие рекомбинантные рецепторы, описаны в Разделе II, ниже. Иллюстративные рекомбинантные рецепторы, включая CAR и рекомбинантный TCR, а также способы генной инженерии и введения рецепторов в клетки, включают способы, описанные, например, в публикациях Международных заявок на патент номера WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/090320, WO2016/094304, WO2017/025038, WO2017/173256, в публикациях заявок на патент США номера US2002131960, US2013287748, US20130149337, в патентах США №№ 6451995, 7446190, 8252592, 8339645, 8398282, 7446179, 6410319, 7070995, 7265209, 7354762, 7446191, 8324353, 8479118 и 9765342, и в заявках на Европейский патент номер EP2537416, и/или те, которые описаны Sadelain et al., Cancer Discov., 3(4): 388-398 (2013); Davila et al., PLoS ОДН 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012). В некоторых аспектах генно-инженерные рецепторы антигена включают CAR, как описано в патенте США №: 7446190, и они описаны в публикации Международной заявки на патент №: WO/2014055668 A1. [0237] Genetically engineered cells, including genetically engineered cells containing recombinant receptors, are described in Section II, below. Exemplary recombinant receptors, including CAR and recombinant TCR, as well as methods of genetic engineering and introduction of receptors into cells, include those described, for example, in International Patent Applications Nos. /071154, WO2013/123061, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/090320, WO2016/094304, WO2017/025038, WO2017/173256, в публикациях заявок на патент США номера US2002131960, US2013287748, US20130149337, в патентах США №№ 6451995 , 7446190, 8252592, 8339645, 8398282, 7446179, 6410319, 7070995, 7265209, 7354762, 7446191, 8324353, 8479118 и 9765342, и в заявках на Европейский патент номер EP2537416, и/или те, которые описаны Sadelain et al., Cancer Discov ., 3(4): 388-398 (2013); Davila et al., PLoS ODN 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012). In some aspects, engineered antigen receptors include CARs as described in US Patent No: 7446190 and are described in International Patent Application Publication No: WO/2014055668 A1.

[0238] В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает интегрин αvβ6 (интегрин avb6), антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA), B7-H3, B7-H6, угольную ангидразу 9 (CA9 известную также как CAIX или G250), антиген рака яичек, антиген рака яичек 1B (CTAG, также известный как NY-ESO-1 и LAGE-2), канцероэмбриональный антиген (CEA), циклин, A2 циклин, лиганд 1 C-C мотива хемокинов (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, хондроитинсульфат протеогликан 4 (CSPG4), белок эпидермального фактора роста (EGFR), усеченный белок эпидермального фактора роста (tEGFR), мутацию рецептора эпидермального фактора роста типа III (EGFR vIII), эпителиальный гликопротеин 2 (EPG-2), эпителиальный гликопротеин 40 (EPG-40), эфрин B2, рецептор эфрина A2 (EPHa2), рецептор эстрогенов, Fc-рецептор подобный 5 (FCRL5; также известный как гомолог 5 Fc-рецептора или FCRH5), рецептор фетального ацетилхолина (фетальный AchR), фолат-связывающий белок (FBP), рецептор фолата альфа, ганглиозид GD2, O-ацетилированный GD2 (OGD2), ганглиозид GD3, гликопротеин 100 (gp100), глипикан-3 (GPC3), рецептор 5D, связанный с белком G (GPCR5D), Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), димеры erbB, высокомолекулярный антиген, ассоциированный с меланомой человека, (HMW-MAA), поверхностный антиген гепатита B, антиген лейкоцита A1 человека (HLA-A1), антиген лейкоцита A2 человека (HLA-A2), рецептор альфа IL-22 (IL-22Rα), рецептор альфа 2 IL-13 (IL-13Rα2), рецептор, содержащий домен вставки киназы (kdr), легкую цепь каппа, молекулу адгезии клетки L1 (L1-CAM), CE7 эпитоп L1-CAM, обогащенную лейцином вставку, содержащую элемент A семейства 8 (LRRC8A), антиген Ley, антиген, ассоциированный с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, мезотелин (MSLN), c-Met, мышиный цитомегаловирус (CMV), муцин 1 (MUC1), MUC16, лиганды элемента D группы 2 природных киллеров (NKG2D), мелан A (MART-1), молекулу адгезии нервных клеток (NCAM), онкофетальный антиген, предпочтительно экспрессируемый антиген меланомы (PRAME), рецептор прогестерона, простата-специфичый антиген, антиген стволовых клеток простаты (PSCA), простата-специфичный мембранный антиген (PSMA), рецептор тирозинкиназы подобный орфанному рецептору 1 (ROR1), сурвивин, гликопротеин трофобластов (TPBG также известный как 5T4), гликопротеин 72, ассоциированный с опухолью (TAG72), белок 1 родственный тирозиназе (TRP1, также известный как TYRP1 или gp75), белок 2 родственный тирозиназе (TRP2, также известный как допахромтаутомераза, допахром дельта-изомераза или DCT), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов (VEGFR), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов 2 (VEGFR2), опухоль Вильмса 1 (WT-1), патоген-специфичый или экспрессируемый патогеном антиген, или антиген, ассоциированный с универсальной меткой, и/или биотинилированные молекулы, и/или молекулы, экспрессируемые ВИЧ, ВГС, ВГВ или другими патогенами. Антигены, на которые нацелены рецепторы в некоторых вариантах осуществления, включают антигены, ассоцированные с раком В-лимфоцитов, такие как любой из ряда известных маркеров B-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig каппа, Ig лямбда, CD79a, CD79b или CD30. [0238] In some embodiments, the antigen is or includes an αvβ6 integrin (avb6 integrin), B-lymphocyte maturation antigen (BCMA), B7-H3, B7-H6, carbonic anhydrase 9 (CA9 also known as CAIX or G250), testicular cancer antigen, testicular cancer antigen 1B (CTAG, also known as NY-ESO-1 and LAGE-2), carcinoembryonic antigen (CEA), cyclin, cyclin A2, chemokine motif C-C ligand 1 (CCL-1), CD19, CD20 , CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, chondroitin sulfate proteoglycan 4 (CSPG4), epidermal growth factor protein (EGFR), truncated epidermal growth factor protein ( tEGFR), epidermal growth factor receptor type III (EGFR vIII) mutation, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40), ephrin B2, ephrin A2 receptor (EPHa2), estrogen receptor, Fc receptor like 5 (FCRL5; also known as the Fc receptor homologue 5 or FCRH5), fetal acetylcholine receptor (fetal AchR), fola t-binding protein (FBP), folate receptor alpha, ganglioside GD2, O-acetylated GD2 (OGD2), ganglioside GD3, glycoprotein 100 (gp100), glypican-3 (GPC3), G protein-coupled 5D receptor (GPCR5D), Her2/neu (erb-B2 tyrosine kinase receptor), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB dimers, human melanoma-associated high molecular weight antigen (HMW-MAA), hepatitis B surface antigen, leukocyte A1 antigen human leukocyte A2 antigen (HLA-A2), IL-22 receptor alpha (IL-22Rα), IL-13 alpha 2 receptor (IL-13Rα2), kinase insert domain containing receptor (kdr), kappa light chain, L1 cell adhesion molecule (L1-CAM), L1-CAM CE7 epitope, leucine-rich insert containing family 8 element A (LRRC8A), Ley antigen, melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3 , MAGE-A6, MAGE-A10, mesothelin (MSLN), c-Met, mouse cytomegalovirus (CMV), mucin 1 (MUC1), MUC16, natural killer group 2 element D ligands (NKG2D), melan A (MART-1) , adhesion molecule neuronal cell antigen (NCAM), oncofetal antigen, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), progesterone receptor, prostate specific antigen, prostate stem cell antigen (PSCA), prostate specific membrane antigen (PSMA), tyrosine kinase receptor orphan receptor 1 (ROR1) ), survivin, trophoblast glycoprotein (TPBG also known as 5T4), tumor-associated glycoprotein 72 (TAG72), tyrosinase-related protein 1 (TRP1, also known as TYRP1 or gp75), tyrosinase-related protein 2 (TRP2, also known as dopachromtautomerase , dopachrome delta isomerase or DCT), vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR), vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2), Wilms tumor 1 (WT-1), pathogen-specific or pathogen-expressed antigen, or antigen associated with universal label, and/or biotinylated molecules, and/or molecules expressed by HIV, HCV, HBV or other pathogens. The antigens targeted by the receptors in some embodiments include antigens associated with B-lymphocyte cancer, such as any of a number of known B-lymphocyte markers. In some embodiments, the antigen is or includes CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, kappa Ig, lambda Ig, CD79a, CD79b, or CD30.

[0239] В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или включает патоген-специфичый или экспрессируемый патогеном антиген. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой вирусный антиген, (такой как вирусный антиген от ВИЧ, ВГС, ВГВ, и тому подобное), бактериальные антигены и/или паразитарные антигены.[0239] In some embodiments, the antigen is or includes a pathogen-specific or pathogen-expressed antigen. In some embodiments, the antigen is a viral antigen (such as a viral antigen from HIV, HCV, HBV, and the like), bacterial antigens, and/or parasitic antigens.

[0240] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия включает введение субъекту клеток, например, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, который специфически распознает антиген, связанный с раковым заболеванием и/или присутствующий на универсальной метке, и/или нацелен на него. В некоторых вариантах осуществления, антиген, распознаваемый Т-лимфоцитами или на который они нацелены, представляют собой ROR1, антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA), угольную ангидразу 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелин, CEA и поверхностный антиген гепатита B, рецептор анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиальный гликопротеин 2 (EPG-2), эпителиальный гликопротеин 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеры erbB, EGFR vIII, фолат-связывающий белок (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептор фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептор, содержащий домен вставки киназы (kdr), легкую цепь каппа, антиген Ley, молекулу адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антиген, ассоциированный с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемый антиген меланомы (PRAME), сурвивин, TAG72, B7-H6, рецептор альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2, PSCA, рецептор-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрин avb6, 8H9, NCAM, рецепторы VEGF, 5T4, Foetal AchR, лиганды NKG2D, CD44v6, двойной антиген, раково-тестикулярный антиген, мезотелин, мышиный CMV, муцин 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептор 5D, связанный с белком G (GPCR5D), онкофетальный антиген, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбриональный антиген (CEA), Her2/neu, рецептор эстрогенов, рецептор прогестерона, эфрин B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированный GD2 (OGD2), CE7, опухоль Вильмса 1 (WT-1), циклин, A2 циклин, CCL-1, CD138, необязательно, антиген человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена.[0240] In some embodiments, the combination therapy comprises administering to the subject cells, e.g., T-lymphocytes, expressing a recombinant receptor that specifically recognizes and/or targets an antigen associated with cancer and/or present on a universal tag. In some embodiments, the antigen recognized or targeted by T lymphocytes is ROR1, B lymphocyte maturation antigen (BCMA), carbonic anhydrase 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1- CAM, CD19, CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG -40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL- 22R-alpha, IL-13R-alpha2, receptor containing kinase insertion domain (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE -A3, MAGE-A6, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor alpha 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA -AI MAGE Al , HLA-A2, PSCA, folate receptor-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, Foetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, testicular cancer antigen, mesothelin, mouse CMV , mucin 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein-coupled 5D receptor (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1, TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen ( CEA), Her2/neu, estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, A2 cyclin, CCL-1, CD138, optionally a human antigen to any of the above; pathogen-specific antigen.

[0241] Способы введения генно-инженерных клеток для адоптивной клеточной терапии известны и могут использоваться в сочетании с предлагаемыми способами и композициями. Например, способы адоптивной Т-клеточной терапии описаны, например, в публикации заявки на патент США № 2003/0170238, Gruenberg et al; патент США № 4690915, Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85). Смотри, например, Themeli et al., (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al., (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4): e61338.[0241] Methods for introducing genetically engineered cells for adoptive cell therapy are known and can be used in combination with the proposed methods and compositions. For example, adoptive T cell therapy methods are described, for example, in US Patent Application Publication No. 2003/0170238, Gruenberg et al; US patent No. 4690915, Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85). See, for example, Themeli et al., (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al., (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4): e61338.

[0242] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия, например, адоптивная Т-клеточная терапия, осуществляется с помощью аутологичного переноса, при котором клетки выделяются и/или иным образом приготавливаются от субъекта, который должен получать клеточную терапию, или из образца, полученного у такого субъекта. Таким образом, в некоторых аспектах, клетки получают у субъекта, например, пациента, нуждающегося в лечении, и клетки после выделения и обработки вводятся этому же субъекту.[0242] In some embodiments, cell therapy, such as adoptive T cell therapy, is performed using autologous transfer, in which cells are isolated and/or otherwise prepared from a subject to be treated with cell therapy, or from a sample obtained from such a subject. Thus, in some aspects, cells are obtained from a subject, such as a patient in need of treatment, and the cells, after isolation and processing, are administered to the same subject.

[0243] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия, например, адоптивная Т-клеточная терапия, осуществляется с помощью аллогенного переноса, при котором клетки выделяются и/или иным образом приготавливаются от субъекта иного, чем субъект, который должен принимать или который в конечном счете получает клеточную терапию, например, первый субъект. В таких вариантах осуществления, клетки затем вводят другому субъекту, например, второму субъекту, того же вида. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй субъекты являются генетически идентичными. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй субъекты являются генетически сходными. В некоторых вариантах осуществления, второй субъект экспрессирует такой же класс или супертип HLA, как и первый субъект. [0243] In some embodiments, cell therapy, for example, adoptive T cell therapy, is performed using allogeneic transfer, in which cells are isolated and / or otherwise prepared from a subject other than the subject who is to receive or who ultimately receiving cell therapy, for example, the first subject. In such embodiments, the cells are then administered to another subject, such as a second subject, of the same species. In some embodiments, the first and second subjects are genetically identical. In some embodiments, the first and second subjects are genetically similar. In some embodiments, the second subject expresses the same HLA class or supertype as the first subject.

[0244] В определенных вариантах осуществления, клетки или отдельные популяции субтипов клеток, вводятся субъекту в диапазоне примерно от одного миллионов примерно до 100 миллиардов клеток и/или в количестве клеток на килограмм массы тела, например, от 1 миллионов примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 5 миллионов клеток, примерно 25 миллионов клеток, примерно 500 миллионов клеток, примерно 1 миллиардов клеток, примерно 5 миллиардов клеток, примерно 20 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 40 миллиардов клеток, или это количество в диапазоне, определенном любыми двумя рассмотренными выше значениями), например, примерно 10 миллионов примерно до 100 миллиардов клеток (например, примерно 20 миллионов клеток, примерно 30 миллионов клеток, примерно 40 миллионов клеток, примерно 60 миллионов клеток, примерно 70 миллионов клеток, примерно 80 миллионов клеток, примерно 90 миллионов клеток, примерно 10 миллиардов клеток, примерно 25 миллиардов клеток, примерно 50 миллиардов клеток, примерно 75 миллиардов клеток, примерно 90 миллиардов клеток, или это количество в диапазоне, определенном любыми двумя рассмотренными выше значениями), и в некоторых случаях примерно от 100 миллионов клеток примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 120 миллионов клеток, примерно 250 миллионов клеток, примерно 350 миллионов клеток, примерно 450 миллионов клеток, примерно 650 миллионов клеток, примерно 800 миллионов клеток, примерно 900 миллионов клеток, примерно 3 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 45 миллиардов клеток) или это любое значение в этих диапазонах и/или на килограмм массы тела. Дозы могут изменяться в зависимости от конкретных параметров заболевания или расстройства и/или пациента и/или других видов лечения.[0244] In certain embodiments, cells, or distinct populations of cell subtypes, are administered to a subject in the range of about one million to about 100 billion cells and/or in a number of cells per kilogram of body weight, e.g., from 1 million to about 50 billion cells ( for example, about 5 million cells, about 25 million cells, about 500 million cells, about 1 billion cells, about 5 billion cells, about 20 billion cells, about 30 billion cells, about 40 billion cells, or as many as in the range specified by any the two values discussed above), e.g., about 10 million to about 100 billion cells (e.g., about 20 million cells, about 30 million cells, about 40 million cells, about 60 million cells, about 70 million cells, about 80 million cells, about 90 million cells Approximately 10 billion cells Approximately 25 billion cells Approximately 50 billion cells, about 75 billion cells, about 90 billion cells, or as many as any two of the above values), and in some cases from about 100 million cells to about 50 billion cells (e.g., about 120 million cells, approximately 250 million cells, approximately 350 million cells, approximately 450 million cells, approximately 650 million cells, approximately 800 million cells, approximately 900 million cells, approximately 3 billion cells, approximately 30 billion cells, approximately 45 billion cells) or any value in these ranges and/or per kilogram of body weight. Doses may vary depending on the specific parameters of the disease or disorder and/or the patient and/or other treatments.

[0245] В некоторых вариантах осуществления, например, когда субъект является человеком, доза содержит меньше примерно, чем 1 × 108 клеток, в целом, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), Т-лимфоцитов или мононуклеаров периферической крови (PBMC), например, в диапазоне примерно от 1 × 106 до 1 × 108 таких клеток, например, 2 × 106, 5 × 106, 1 × 107, 5 × 107, или 1 × 108 или таких клеток, в целом, или количество в диапазоне между любыми двумя из рассмотренных выше значений.[0245] In some embodiments, for example, when the subject is a human, the dose contains less than about 1 x 10 8 cells, in total, expressing the recombinant receptor (e.g., CAR), T-lymphocytes, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), for example, in the range from about 1 x 10 6 to 1 x 10 8 such cells, for example, 2 x 10 6 , 5 x 10 6 , 1 x 10 7 , 5 x 10 7 , or 1 x 10 8 or such cells, in in general, or an amount in the range between any two of the above values.

[0246] Клетки могут вводиться с помощью любых соответствующих средств. Клетки вводятся в режиме дозирования для достижения терапевтического воздействия, такого как уменьшение массы опухоли. Дозирование и введение могут частично зависеть от временного графика введения иммуномодуляторного соединения, которое может вводиться до, после и/или одновременно с началом введения Т-клеточной терапии. Различные временные графики дозирования Т-клеточной терапии включают, но, не ограничиваясь этим, однократные или многократные введения в различные моменты времени, введение болюса и импульсное вливание.[0246] Cells can be administered by any appropriate means. The cells are administered in a dosing regimen to achieve a therapeutic effect, such as reduction in tumor mass. Dosing and administration may depend in part on the timing of the administration of the immunomodulatory compound, which may be administered before, after and/or simultaneously with the start of the administration of the T cell therapy. Various dosing schedules for T cell therapy include, but are not limited to, single or multiple doses at different time points, bolus administration, and pulsed infusion.

1. Композиции и препараты 1. Compositions and formulations

[0247] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток от Т-клеточной терапии, такой Т-клеточная терапия, содержащая генно-инженерные клетки, с рекомбинантным рецептором антигена, например, CAR или TCR, предлагается как композиция или препарат, такой как фармацевтическая композиция или препарат. Такие композиции можно использовать согласно предлагаемым способам, например, при предотвращении или лечении заболеваний, состояний и расстройств. [0247] In some embodiments, a dose of cells from a T cell therapy, such a T cell therapy containing genetically engineered cells with a recombinant antigen receptor, e.g., CAR or TCR, is provided as a composition or preparation, such as a pharmaceutical composition or a drug. Such compositions can be used according to the proposed methods, for example, in the prevention or treatment of diseases, conditions and disorders.

[0248] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия, такая как генно-инженерные Т-лимфоциты (например, Т-лимфоциты CAR), приготавливают вместе с фармацевтически приемлемым носителем. В некоторых аспектах, выбор носителя определяется отчасти конкретной клеткой или агентом и/или способом введения. Соответственно, имеется множество соответствующих препаратов. Например, фармацевтическая композиция может содержать консерванты. Пригодные для использования консерванты могут включать, например, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия и бензалконийхлорид. В некоторых аспектах используют смесь двух или более консервантов. Консервант или их смеси, как правило, присутствуют в количестве примерно от 0,0001% примерно до 2% масс композиции в целом. Носители описаны, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980). Фармацевтически приемлемые носители, как правило, являются нетоксичными для тех, кто их принимает, при используемых дозировках и концентрациях, и включают, но, не ограничиваясь этим: буферы, такие как фосфатный, цитратный и другие буферы на основе органических кислот; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид; бензетонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (меньше примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глютамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; противоионы, образующие соль, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (PEG).[0248] In some embodiments, a T cell therapy, such as engineered T lymphocytes (eg, CAR T lymphocytes), is formulated with a pharmaceutically acceptable carrier. In some aspects, the choice of carrier is determined in part by the particular cell or agent and/or route of administration. Accordingly, there are many suitable preparations. For example, the pharmaceutical composition may contain preservatives. Suitable preservatives may include, for example, methyl paraben, propyl paraben, sodium benzoate and benzalkonium chloride. In some aspects, a mixture of two or more preservatives is used. The preservative or mixtures thereof are typically present in an amount of from about 0.0001% to about 2% by weight of the composition as a whole. Carriers are described, for example, in Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980). Pharmaceutically acceptable carriers are generally non-toxic to users at the dosages and concentrations employed and include, but are not limited to: buffers such as phosphate, citrate and other organic acid buffers; antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride; benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol and m-cresol); low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates, including glucose, mannose, or dextrins; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (eg Zn-protein complexes) and/or non-ionic surfactants such as polyethylene glycol (PEG).

[0249] Буферные агенты в некоторых аспектах включаются в композиции. Пригодные для использования буферные агенты включают, например, лимонную кислоту, цитрат натрия, фосфорную кислоту, фосфат калия и различные другие кислоты и соли. В некоторых аспектах используют смесь двух или более буферных агентов. Буферный агент или их смеси, как правило, присутствуют в количестве примерно от 0,001% примерно до 4% масс от композиции в целом. Способы приготовления пригодных для введения фармацевтических композиций известны. Иллюстративные способы описываются более подробно, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005).[0249] Buffer agents in some aspects are included in the compositions. Suitable buffering agents include, for example, citric acid, sodium citrate, phosphoric acid, potassium phosphate, and various other acids and salts. In some aspects, a mixture of two or more buffering agents is used. The buffering agent, or mixtures thereof, is typically present in an amount of from about 0.001% to about 4% by weight of the total composition. Methods for preparing pharmaceutical compositions suitable for administration are known. Illustrative methods are described in more detail, for example, in Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams &Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005).

[0250] Препараты могут содержать водные растворы. Препарат или композиция может также содержать несколько активных ингредиентов полезных для конкретного показания, заболевания или состояния, которое предотвращается или лечится с помощью клеток или агентов, где соответствующие активности не влияют отрицательно друг на друга. Такие активные ингредиенты удобным образом присутствуют в сочетаниях, в количествах, которые являются эффективными для предполагаемой цели. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция дополнительно содержит другие фармацевтически активные агенты или лекарственные средства, такие как химиотерапевтические агенты, например, аспарагиназу, бусульфан, карбоплатин, цисплатин, даунорубицин, доксорубицин, фторурацилы, гемцитабин, гидроксимочевина, метотрексат, паклитаксел, ритуксимаб, винбластин, винкристин, и тому подобное. [0250] The formulations may contain aqueous solutions. The preparation or composition may also contain several active ingredients useful for a particular indication, disease or condition that is prevented or treated by cells or agents, where the respective activities do not adversely affect each other. Such active ingredients are conveniently present in combinations, in amounts that are effective for the intended purpose. Thus, in some embodiments, the pharmaceutical composition further comprises other pharmaceutically active agents or drugs such as chemotherapeutic agents, e.g., asparaginase, busulfan, carboplatin, cisplatin, daunorubicin, doxorubicin, fluorouracils, gemcitabine, hydroxyurea, methotrexate, paclitaxel, rituximab , vinblastine, vincristine, and the like.

[0251] Фармацевтическая композиция в некоторых вариантах осуществления содержит клетки в количестве эффективном для лечения или предотвращения заболевания или состояния, в таком как терапевтически эффективное или профилактически эффективное количество. Терапевтическая или профилактическая эффективность в некоторых вариантах осуществления отслеживается с помощью периодической оценки леченых субъектов. Для многократного введения в течение нескольких дней или больше, в зависимости от состояния, лечение повторяют до тех пор, пока не произойдет желаемое подавление симптомов заболевания. Однако и другие режимы дозирования могут быть полезными и могут определяться. Желаемая доза может доставляться с помощью отдельного введения болюса композиции, с помощью множества введений болюса композиции или посредством непрерывного введения композиции посредством вливания.[0251] The pharmaceutical composition in some embodiments contains cells in an amount effective to treat or prevent a disease or condition, such as a therapeutically effective or prophylactically effective amount. Therapeutic or prophylactic efficacy is, in some embodiments, monitored by periodic evaluation of treated subjects. For repeated administration over several days or more, depending on the condition, the treatment is repeated until the desired suppression of the symptoms of the disease occurs. However, other dosing regimens may be useful and may be determined. The desired dose can be delivered by separate administration bolus of the composition, by multiple bolus administrations of the composition, or by continuous administration of the composition by infusion.

[0252] Клетки могут вводиться с использованием стандартных методик введения, препаратов и/или устройств. Предлагаются препараты и устройства, такие как шприцы и флаконы, для хранения и введения композиций. Относительно клеток, введение может быть аутологичным или гетерологичным. Например, иммунореактивные клетки или прогениторы можно получить от одного субъекта и ввести этому же субъекту или другому совместимому субъекту. Иммунореактивные клетки, полученные из периферической крови, или их потомство (например, полученное in vivo, ex vivo или in vitro) можно вводить посредством местной инъекции, включая катетерное введение, системную инъекцию, местную инъекцию, внутривенную инъекцию или парентеральное введение. При введении терапевтической композиции (например, фармацевтической композиции, содержащей генетически модифицированные иммунореактивные клетки), она, как правило, будет приготавливаться в форме стандартной единичной дозы для инъекций (раствора, суспензии, эмульсии).[0252] Cells can be administered using standard techniques administration, preparations and/or devices. Formulations and devices such as syringes and vials are provided for storing and administering the compositions. With respect to cells, administration may be autologous or heterologous. For example, immunoreactive cells or progenitors can be obtained from one subject and administered to the same subject or another compatible subject. Immunoreactive cells derived from peripheral blood or their progeny (eg, obtained in vivo, ex vivo or in vitro) can be administered by local injection, including catheter injection, systemic injection, local injection, intravenous injection or parenteral administration. When a therapeutic composition (eg, a pharmaceutical composition containing genetically modified immunoreactive cells) is administered, it will generally be in the form of a standard injectable unit dose (solution, suspension, emulsion).

[0253] Препараты включают препараты для перорального, внутривенного, внутрибрюшинного, подкожного, пульмонарного, трансдермального, внутримышечного, интраназального, буккального, сублингвального или суппозиторного введения. В некоторых вариантах осуществления, агент или популяции клеток вводятся парентерально. Термин “парентеральный”, как используется в настоящем документе, включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, ректальное, вагинальное и внутрибрюшинное введение. В некоторых вариантах осуществления, агент или популяции клеток вводятся субъекту с использованием периферической системной доставки с помощью внутривенной, внутрибрюшинной или подкожной инъекции. [0253] Preparations include preparations for oral, intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, pulmonary, transdermal, intramuscular, intranasal, buccal, sublingual, or suppository administration. In some embodiments, the agent or cell populations are administered parenterally. The term "parenteral" as used herein includes intravenous, intramuscular, subcutaneous, rectal, vaginal and intraperitoneal administration. In some embodiments, the agent or cell populations are administered to a subject using peripheral systemic delivery via intravenous, intraperitoneal, or subcutaneous injection.

[0254] В некоторых вариантах осуществления композиции предлагаются как стерильные жидкие препараты, например, изотонические водные растворы, суспензии, эмульсии, дисперсии или вязкие композиции, которые могут в некоторых аспектах доводиться до выбранного pH с помощью буфера. Жидкие препараты обычно легче приготовить чем гели, другие вязкие композиции и твердые композиции. В дополнение к этому, жидкие композиции немного удобнее вводить, в особенности, с помощью инъекции. С другой стороны, вязкие композиции можно приготовить в соответствующем диапазоне вязкости для обеспечения более продолжительных периодов контакта с конкретными тканями. Жидкие или вязкие композиции могут содержать носители, которые могут представлять собой растворитель или диспергирующую среду, содержащую, например, воду, солевой раствор, фосфатный буферный солевой раствор, полиол (например, глицерол, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и соответствующие их смеси. [0254] In some embodiments, the compositions are provided as sterile liquid preparations, eg, isotonic aqueous solutions, suspensions, emulsions, dispersions, or viscous compositions, which can, in some aspects, be adjusted to a selected pH with a buffer. Liquid formulations are generally easier to prepare than gels, other viscous formulations, and solid formulations. In addition, liquid formulations are slightly more convenient to administer, especially by injection. On the other hand, viscous compositions can be formulated in an appropriate viscosity range to provide longer periods of contact with particular tissues. Liquid or viscous compositions may contain carriers, which may be a solvent or dispersion medium containing, for example, water, saline, phosphate buffered saline, a polyol (eg, glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol), and appropriate mixtures thereof.

[0255] Стерильные растворы для инъекций можно приготовить посредством введения клеток в растворителе, таком как смесь соответствующего носителя, разбавителя или наполнителя, таких как стерильная вода, физиологический солевой раствор, глюкоза, декстроза, или что-либо подобное. Композиции могут также лиофилизироваться. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как смачивающие, диспергирующие или эмульгирующие агенты (например, метилцеллюлозу), буферные агенты для регулировки pH, гелеобразующие или повышающие вязкость добавки, консерванты, ароматизирующие агенты, красители, и тому подобное, в зависимости от способа введения и желаемого препарата. В некоторых аспектах можно проконсультироваться со стандартными текстами относительно приготовления соответствующих препаратов. [0255] Sterile injectable solutions can be prepared by administering the cells in a solvent such as a mixture of an appropriate carrier, diluent or excipient such as sterile water, physiological saline, glucose, dextrose, or the like. The compositions may also be lyophilized. The compositions may contain adjuvants such as wetting, dispersing, or emulsifying agents (e.g., methylcellulose), pH buffering agents, gelling or viscosity enhancing agents, preservatives, flavoring agents, coloring agents, and the like, depending on the route of administration and the desired drug. In some respects, standard texts may be consulted for the preparation of appropriate preparations.

[0256] Могут добавляться различные добавки, которые повышают стабильность и стерильность композиций, включая антимикробные консерванты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и буферы. Предотвращение действия микроорганизмов можно обеспечить с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, и тому подобное. Пролонгированное поглощение фармацевтической формы для инъекций может быть получено при использовании агентов, замедляющих поглощение, например, моностеарата алюминия и желатина.[0256] Various additives can be added that enhance the stability and sterility of the compositions, including antimicrobial preservatives, antioxidants, chelating agents, and buffers. Prevention of the action of microorganisms can be provided by various antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, and the like. Prolonged absorption of a pharmaceutical form for injection can be obtained using agents that delay absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.

[0257] Препараты для использования при введении in vivo, как правило, являются стерильными. Стерильность можно легко получить, например, посредством фильтрования через стерильные фильтровальные мембраны.[0257] Formulations for use in in vivo administration are generally sterile. Sterility can be easily obtained, for example, by filtration through sterile filter membranes.

[0258] Для предотвращения или лечения заболевания, соответствующая доза может зависеть от типа заболевания, которое должно лечиться, от типа агента или агентов, типа клеток или рекомбинантных рецепторов, тяжести и хода заболевания, от того, вводится ли агент или клетки для превентивных или терапевтических целей, от предыдущей терапии, от истории болезни субъекта и его реакции на агент или клетки и от суждения лечащего врача. Композиции в некоторых вариантах осуществления вводятся соответствующим образом субъекту за один раз или как ряд сеансов лечения. [0258] For the prevention or treatment of a disease, the appropriate dose may depend on the type of disease to be treated, the type of agent or agents, the type of cell or recombinant receptor, the severity and course of the disease, whether the agent or cells are administered for preventive or therapeutic goals, from previous therapy, from the subject's medical history and response to the agent or cells, and from the judgment of the attending physician. The compositions, in some embodiments, are administered appropriately to a subject at one time or as a series of treatments.

[0259] В некоторых случаях, клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая клетки. В некоторых вариантах осуществления, данная доза вводится посредством введения отдельного болюса клеток или агентов. В некоторых вариантах осуществления, она вводится с помощью многократного введения болюса клеток или агента, например, в течение периода не более 3 дней, или посредством непрерывного введения вливанием клеток или агента.[0259] In some cases, cell therapy is administered as a separate pharmaceutical composition containing cells. In some embodiments, a given dose is administered by administering a single bolus of cells or agents. In some embodiments, it is administered by multiple bolus of cells or agent, eg over a period of no more than 3 days, or by continuous infusion of cells or agent.

2. Временной график дозирования и введения2. Time schedule for dosing and administration

[0260] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток вводится субъектам согласно предлагаемым способам сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, размер или распределение по времени доз определяется в зависимости от конкретного заболевания или от состояния субъекта. Можно эмпирически определить размер или распределение по времени доз для конкретного заболевания с учетом предлагаемого описания. [0260] In some embodiments, the implementation, the dose of cells is administered to subjects according to the proposed methods of combination therapy. In some embodiments, the size or timing of doses is determined depending on the particular disease or condition of the subject. You can empirically determine the size or timing of doses for a particular disease given the proposed description.

[0261] В определенных вариантах осуществления, клетки или отдельные популяции субтипов клеток вводят субъекту в диапазоне примерно от 0,1 миллионов примерно до 100 миллиардов клеток и/или такого же количества клеток на килограмм массы тела субъекта, например, от 0,1 миллионов примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 5 миллионов клеток, примерно 25 миллионов клеток, примерно 500 миллионов клеток, примерно 1 миллиардов клеток, примерно 5 миллиардов клеток, примерно 20 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 40 миллиардов клеток, или количества в диапазоне, определяемом с помощью любых двух рассмотренных выше значений), от 1 миллиона примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 5 миллионов клеток, примерно 25 миллионов клеток, примерно 500 миллионов клеток, примерно 1 миллиард клеток, примерно 5 миллиардов клеток, примерно 20 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 40 миллиардов клеток, или количества в диапазоне, определяемом с помощью любых двух рассмотренных выше значений), например, примерно от 10 миллионов примерно до 100 миллиардов клеток (например, примерно 20 миллионов клеток, примерно 30 миллионов клеток, примерно 40 миллионов клеток, примерно 60 миллионов клеток, примерно 70 миллионов клеток, примерно 80 миллионов клеток, примерно 90 миллионов клеток, примерно 10 миллиардов клеток, примерно 25 миллиардов клеток, примерно 50 миллиардов клеток, примерно 75 миллиардов клеток, примерно 90 миллиардов клеток, или количества в диапазоне, определяемом с помощью любых двух рассмотренных выше значений), и в некоторых случаях примерно от 100 миллионов клеток примерно до 50 миллиардов клеток (например, примерно 120 миллионов клеток, примерно 250 миллионов клеток, примерно 350 миллионов клеток, примерно 450 миллионов клеток, примерно 650 миллионов клеток, примерно 800 миллионов клеток, примерно 900 миллионов клеток, примерно 3 миллиардов клеток, примерно 30 миллиардов клеток, примерно 45 миллиардов клеток) или любого количества в этих диапазонах и/или на килограмм массы тела субъекта. Дозы могут изменяться в зависимости от конкретных параметров заболевания или расстройства и/или пациента и/или от других видов лечения. В некоторых вариантах осуществления, такие значения относятся к количеству клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор; в других вариантах осуществления, они относятся к количеству Т-лимфоцитов или PBMC или к вводимым клеткам, в целом. [0261] In certain embodiments, cells or distinct populations of cell subtypes are administered to a subject in the range of about 0.1 million to about 100 billion cells and/or the same number of cells per kilogram of the subject's body weight, e.g., about 0.1 million up to 50 billion cells (e.g., about 5 million cells, about 25 million cells, about 500 million cells, about 1 billion cells, about 5 billion cells, about 20 billion cells, about 30 billion cells, about 40 billion cells, or range defined by any two of the above values), from 1 million to about 50 billion cells (e.g., about 5 million cells, about 25 million cells, about 500 million cells, about 1 billion cells, about 5 billion cells, about 20 billion cells, about 30 billion cells, about 40 billion cells, or amounts in the range from to any two of the above values), e.g., about 10 million to about 100 billion cells (e.g., about 20 million cells, about 30 million cells, about 40 million cells, about 60 million cells, about 70 million cells, about 80 million cells, about 90 million cells, about 10 billion cells, about 25 billion cells, about 50 billion cells, about 75 billion cells, about 90 billion cells, or an amount in the range defined by any two of the above), and in some about 100 million cells to about 50 billion cells (e.g., about 120 million cells, about 250 million cells, about 350 million cells, about 450 million cells, about 650 million cells, about 800 million cells, about 900 million cells, about 3 billion cells, approximately 30 billion cells, approximately 45 billion cells) or any th amount in these ranges and/or per kilogram of the subject's body weight. Doses may vary depending on the specific parameters of the disease or disorder and/or the patient and/or other treatments. In some embodiments, such values refer to the number of cells expressing the recombinant receptor; in other embodiments, they refer to the number of T-lymphocytes or PBMCs, or to the cells administered, in general.

[0262] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы клеток, содержащих количество клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 105 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, например, по меньшей мере, или, по меньшей мере, 1 × 106, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 107, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 108 таких клеток. [0262] In some embodiments, the cell therapy comprises administering a dose containing a cell count of from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, or from or from about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, each value is inclusive. In some embodiments, cell therapy comprises administering a dose of cells containing a cell count of at least, or about, at least 1 x 10 5 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or mononuclear cells of peripheral blood (PBMC), in general, for example, at least, or at least 1 × 10 6 at least, or approximately, at least 1 × 10 7 at least, or approximately, at least at least 1 × 10 8 such cells.

[0263] В некоторых вариантах осуществления, например, когда субъект является человеком, доза содержит меньше примерно, чем 5 × 108 клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), Т-лимфоцитов или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, например, в диапазоне примерно от 1 × 106 до 5 × 108 таких клеток, например, 2 × 106, 5 × 106, 1 × 107, 5 × 107, 1 × 108, или 5 × 108 таких клеток, в целом, или количества в диапазоне между любыми двумя из рассмотренных выше значений.[0263] In some embodiments, for example, when the subject is a human, the dose contains less than about 5 x 10 8 cells expressing the recombinant receptor (e.g., CAR), T-lymphocytes, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, for example, in the range from about 1 x 10 6 to 5 x 10 8 such cells, for example, 2 x 10 6 , 5 x 10 6 , 1 x 10 7 , 5 x 10 7 , 1 x 10 8 , or 5 x 10 8 such cells, in general, or the number in the range between any two of the above values.

[0264] В некоторых вариантах осуществления, количество относится к общему количеству CD3+ или CD8+, в некоторых случаях, также клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR+). В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108, в целом, клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107, в целом, клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107, в целом, клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, каждое значение включительно.[0264] In some embodiments, the number refers to the total number of CD3+ or CD8+, in some cases, also cells expressing the recombinant receptor (eg, CAR+). In some embodiments, the cell therapy comprises administering a dose containing from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 CD3+ or CD8+ T lymphocytes in total, or CD3+ or CD8+ cells expressing the recombinant receptor from or about 5 x 10 5 to 1 x 10 7 CD3+ or CD8+ T lymphocytes in total, or CD3+ or CD8+ cells expressing the recombinant receptor, or from or about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 CD3+ or CD8+ T lymphocytes , in general, or CD3+ or CD8+ cells expressing the recombinant receptor, each value inclusive. In some embodiments, the cell therapy comprises administering a dose containing a cell count of from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 , in total, CD3+/CAR+ or CD8+/CAR+ cells from or about 5 x 10 5 to 1 x 10 7 total CD3+/CAR+ or CD8+/CAR+ cells, or from or about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 total CD3+/CAR+ or CD8+/CAR+ cells, each inclusive.

[0265] В некоторых вариантах осуществления, доза генно-инженерных клеток содержит от или примерно от 1 × 105 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 2,5 × 108 , CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 1 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 2,5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 1 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 5 × 106 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 2,5 × 106 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 105 до 1 × 106 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 1 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 2,5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 1 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 5 × 106 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 106 до 2,5 × 106 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 106 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 106 до 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 106 до 1 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 106 до 5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 106 до 2,5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 106 до 1 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 106 до 5 × 106 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 106 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 106 до 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 106 до 1 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 106 до 5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 106 до 2,5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 106 до 1 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 107 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 107 до 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 107 до 1 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 107 до 5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 107 до 2,5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 107 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 107 до 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 107 до 1 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 2,5 × 107 до 5 × 107 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 107 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 107 до 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 5 × 107 до 1 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 108 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, от 1 × 108 до 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом, или от 2,5 × 108 до 5 × 108 CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в целом.[0265] In some embodiments, the dose of genetically engineered cells contains from or about 1 x 10 5 to 5 x 10 8 CAR-expressing T lymphocytes, in total, from 1 x 10 5 to 2.5 x 10 8 , CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 x 10 5 to 1 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, 1 x 10 5 to 5 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, 1 x 10 5 to 2.5 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 x 10 5 to 1 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 x 10 5 to 5 x 10 6 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 × 10 5 to 2.5 × 10 6 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 × 10 5 to 1 × 10 6 CAR-expressing T-lymphocytes 1 x 10 6 to 5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes in total, 1 x 10 6 to 2.5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes in total, 1 x 10 in total 6 to 1 x 10 8 CAR-expressing T cells, overall 1 x 10 6 to 5 x 10 7 CAR-expressing T cells, overall 1 x 10 6 to 2.5 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 × 10 6 to 1 × 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 × 10 6 to 5 × 10 6 CAR-expressing T-lymphocytes, in overall 1 x 10 6 to 2.5 x 10 6 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 2.5 x 10 6 to 5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 2.5 × 10 6 to 2.5 × 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 2.5 × 10 6 to 1 × 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 2.5 × 10 6 to 5 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 2.5 x 10 6 to 2.5 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 2.5 x 10 6 to 1 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, from 2.5 × 10 6 to 5 × 10 6 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, from 5 × 10 6 to 5 × 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in overall 5 x 10 6 to 2.5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 5 x 10 6 to 1 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 5 x 10 6 to 5 × 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in overall 5 x 10 6 to 2.5 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 5 x 10 6 to 1 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 1 x 10 7 to 5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 x 10 7 to 2.5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 1 x 10 7 to 1 x 10 8 CAR-expressing T -lymphocytes, in total, from 1 × 10 7 to 5 × 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, from 1 × 10 7 to 2.5 × 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, from 2 .5 × 10 7 to 5 × 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total from 2.5 × 10 7 to 2.5 × 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total from 2.5 × 10 7 to 1 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 2.5 x 10 7 to 5 x 10 7 CAR-expressing T-lymphocytes, overall 5 x 10 7 to 5 x 10 8 CAR- expressing T-lymphocytes, in total, from 5 × 10 7 to 2.5 × 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, from 5 × 10 7 to 1 × 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, from 1 × 10 8 to 5 × 10 8 CAR Express T-lymphocytes, in total, 1 x 10 8 to 2.5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total, or 2.5 x 10 8 to 5 x 10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, generally.

[0266] В некоторых вариантах осуществления, доза генно-инженерных клеток содержит, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 1 × 105 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 2,5 × 105 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 5 × 105 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 106 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2,5 × 106 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 × 106 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 107 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2,5 × 107 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 × 107 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 108 CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2,5 × 108 CAR-экспрессирующих клеток, или, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 × 108 CAR-экспрессирующих клеток.[0266] In some embodiments, the dose of genetically engineered cells contains at least, or at least about 1 x 10 5 CAR-expressing cells, at least, or at least about 2.5 x 10 5 CAR-expressing cells, at least, or at least about 5 × 10 5 CAR-expressing cells, at least, or approximately, at least 1 × 10 6 CAR-expressing cells, at least , or about at least 2.5 x 10 6 CAR-expressing cells, at least, or about at least 5 x 10 6 CAR-expressing cells, at least, or about, at least 1 x 10 7 CAR expressing cells, at least or about at least 2.5 x 10 7 CAR expressing cells, at least or about 5 x 10 7 CAR expressing cells at least, or about, at least 1 x 10 8 CAR-expressing cells, at least, or about, at least 2.5 x 10 8 CA R-expressing cells, or at least or about at least 5×10 8 CAR-expressing cells.

[0267] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 105 до 5 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы клеток, содержащей количество клеток, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 105 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, например, по меньшей мере, или, по меньшей мере, 1 × 106, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 107, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 108 таких клеток. В некоторых вариантах осуществления, это количество относится к общему количеству CD3+ или CD8+, в некоторых случаях, также и к клеткам, экспрессирующим рекомбинантный рецептор (например, CAR+). В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 105 до 5 × 108 Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 Т-лимфоцитов CD3+ или CD8+, в целом, или клеток CD3+ или CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток от или примерно от 1 × 105 до 5 × 108, в целом, CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+ клетки, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток CD3+/CAR+ или CD8+/CAR+, в целом, каждое значение включительно.[0267] In some embodiments, cell therapy comprises administering a dose containing a cell count of from or about 1 x 10 5 to 5 x 10 8 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, or from or from about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, each value is inclusive. In some embodiments, cell therapy comprises administering a cell dose containing a cell count of at least, or about, at least 1 x 10 5 cells, in total, recombinant receptor-expressing T-lymphocytes in total, or mononuclear cells of peripheral blood (PBMC), in general, for example, at least, or at least 1 × 10 6 at least, or about, at least 1 × 10 7 at least, or approximately, at least at least 1 × 10 8 such cells. In some embodiments, this number refers to the total number of CD3+ or CD8+, in some cases, also to cells expressing the recombinant receptor (eg, CAR+). In some embodiments, the cell therapy comprises administering a dose containing from or about 1 x 10 5 to 5 x 10 8 CD3+ or CD8+ T lymphocytes in total, or CD3+ or CD8+ cells expressing the recombinant receptor from or about 5 x 10 5 to 1 x 10 7 CD3+ or CD8+ T lymphocytes in total, or CD3+ or CD8+ cells expressing the recombinant receptor, or from or about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 CD3+ or CD8+ T lymphocytes , in general, or CD3+ or CD8+ cells expressing the recombinant receptor, each value inclusive. In some embodiments, cell therapy comprises administering a dose containing a cell count of from or about 1 x 10 5 to 5 x 10 8 , in total, CD3+/CAR+ or CD8+/CAR+ cells from or about 5 x 10 5 to 1 x 10 7 cells, in total, CD3+/CAR+ or CD8+/CAR+, or from or about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells of CD3+/CAR+ or CD8+/CAR+, in total, each value inclusive.

[0268] В некоторых вариантах осуществления, дозы Т-лимфоцитов содержат Т-лимфоциты CD4+, Т-лимфоциты CD8+ или CD4+ и Т-лимфоциты CD8+.[0268] In some embodiments, the doses of T lymphocytes comprise CD4+ T lymphocytes, CD8+ or CD4+ T lymphocytes, and CD8+ T lymphocytes.

[0269] В некоторых вариантах осуществления, например, когда субъект является человеком, доза Т-лимфоцитов CD8+, включая дозу, содержащую Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, содержит в пределах примерно между 1 × 106 и 5 × 108 клеток CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), в целом, например, в диапазоне примерно от 5 × 106 до 1 × 108 таких клеток, например, 1 × 107, 2,5 × 107, 5 × 107, 7,5 × 107, 1 × 108 или 5 × 108 таких клеток, в целом, или их количество в диапазоне между любыми двумя из рассмотренных выше значений. В некоторых вариантах осуществления, пациенту вводят множество доз, и каждая из доз или доза в целом может находиться в пределах любых рассмотренных выше значений. В некоторых вариантах осуществления, дозирование клеток включает введение от или примерно от 1 × 107 до 0,75 × 108 Т-лимфоцитов CD8+, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, в целом, от 1 × 107 до 2,5 × 107 Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор CD8+, в целом, от или примерно от 1 × 107 до 0,75 × 108 Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор CD8+, в целом, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, дозирование клеток включает введение 1 × 107, 2,5 × 107, 5 × 107 7,5 × 107, 1 × 108 или 5 × 108 или примерно 1 × 107, 2,5 × 107, 5 × 107 7,5 × 107, 1 × 108 или 5 × 108 Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор CD8+, в целом.[0269] In some embodiments, for example, when the subject is human, the dose of CD8+ T lymphocytes, including the dose containing CD4+ and CD8+ T lymphocytes, contains between about 1 x 10 6 and 5 x 10 8 CD8+ cells expressing recombinant receptor (e.g., CAR), in general, e.g., in the range of about 5 x 10 6 to 1 x 10 8 such cells, e.g., 1 x 10 7 , 2.5 x 10 7 , 5 x 10 7 , 7, 5 x 10 7 , 1 x 10 8 or 5 x 10 8 such cells, in total, or between any two of the above values. In some embodiments, a plurality of doses are administered to a patient, and each of the doses, or the dose as a whole, may be within any of the values discussed above. In some embodiments, cell dosing comprises administering from or about 1 x 10 7 to 0.75 x 10 8 CD8+ T lymphocytes expressing the recombinant receptor, in total 1 x 10 7 to 2.5 x 10 7 T- recombinant CD8+ receptor-expressing lymphocytes, in total, from or about 1×10 7 to 0.75×10 8 recombinant CD8+ receptor-expressing T-lymphocytes, in total, each value inclusive. In some embodiments, cell dosing comprises administering 1 x 10 7 , 2.5 x 10 7 , 5 x 10 7 7.5 x 10 7 , 1 x 10 8 or 5 x 10 8 or about 1 x 10 7 , 2, 5 x 10 7 , 5 x 10 7 7.5 x 10 7 , 1 x 10 8 or 5 x 10 8 T-lymphocytes expressing the recombinant CD8+ receptor, in total.

[0270] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, например, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту как отдельная доза, или она вводится только один раз в пределах периода двух недель, одного месяца, трех месяцев, шесть месяцев, 1 года или более.[0270] In some embodiments, the dose of cells, e.g., T-lymphocytes expressing the recombinant receptor, is administered to the subject as a single dose, or it is administered only once within a period of two weeks, one month, three months, six months, 1 year or more.

[0271] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток, которое составляет, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно или составляет примерно 0,1 × 106 клеток/кг массы тела субъекта, 0,2 × 106 клеток/кг, 0,3 × 106 клеток/кг, 0,4 × 106 клеток/кг, 0,5 × 106 клеток/кг, 1 × 106 клеток/кг, 2,0 × 106 клеток/кг, 3 × 106 клеток/кг или 5 × 106 клеток/кг.[0271] In some embodiments, cell therapy comprises administering a dose containing a cell count that is at least, or at least about, or about 0.1 x 10 6 cells/kg subject body weight, 0. 2 x 10 6 cells/kg, 0.3 x 10 6 cells/kg, 0.4 x 10 6 cells/kg, 0.5 x 10 6 cells/kg, 1 x 10 6 cells/kg, 2.0 x 10 6 cells/kg, 3 x 10 6 cells/kg or 5 x 10 6 cells/kg.

[0272] В некоторых вариантах осуществления, клеточная терапия включает введение дозы, содержащей количество клеток находящееся в пределах между или примерно между 0,1 × 106 клеток/кг массы тела субъекта и 1,0 × 107 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 106 клеток/кг и 5 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 106 клеток/кг и 3 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 106 клеток/кг и 2 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 0,5 × 106 клеток/кг и 1 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 1,0 × 106 клеток/кг масса тела субъекта и 5 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 1,0 × 106 клеток/кг и 3 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 1,0 × 106 клеток/кг и 2 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 2,0 × 106 клеток/кг массы тела субъекта и 5 × 106 клеток/кг, находящееся в пределах между или примерно между 2,0 × 106 клеток/кг и 3 × 106 клеток/кг, или находящееся в пределах между или примерно между 3,0 × 106 клеток/кг массы тела субъекта и 5 × 106 клеток/кг, каждое значение включительно. [0272] In some embodiments, cell therapy comprises administering a dose containing a cell count between or about 0.1×10 6 cells/kg of the subject's body weight and 1.0×10 7 cells/kg within between or approximately between 0.5 × 10 6 cells/kg and 5 × 10 6 cells/kg, within or between 0.5 × 10 6 cells/kg and 3 × 10 6 cells/kg, within between or approximately between 0.5 × 10 6 cells/kg and 2 × 10 6 cells/kg, within or between 0.5 × 10 6 cells/kg and 1 × 10 6 cells/kg, within between or about 1.0 x 10 6 cells/kg body weight of the subject and 5 x 10 6 cells/kg, between or about 1.0 x 10 6 cells/kg and 3 x 10 6 cells/kg, between or about 1.0 x 10 6 cells/kg and 2 x 10 6 cells/kg, between or about 2.0 x 10 6 cells/kg of the subject's body weight and 5 x 10 6 cells /kg, naho between or about 2.0 x 10 6 cells/kg and 3 x 10 6 cells/kg, or between or about 3.0 x 10 6 cells/kg of the subject's body weight and 5 x 10 6 cells/kg, each value inclusive.

[0273] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит в пределах между 2 × 105 или примерно 2 × 105 клеток/кг и 2 × 106 или примерно 2 × 106 клеток/кг, например в пределах между 4 × 105 или примерно 4 × 105 клеток/кг и 1 × 106 или примерно 1 × 106 клеток/кг или в пределах между 6 × 105 или примерно 6 × 105 клеток/кг и 8 × 105 или примерно 8 × 105 клеток/кг. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит не более 2 × 105 клеток (например, антиген-экспрессирующих, таких как CAR-экспрессирующие клетки) на килограмм массы тела субъекта (клеток/кг), например, не более (или примерно) 3 × 105 клеток/кг, не более (или примерно) 4 × 105 клеток/кг, не более (или примерно) 5 × 105 клеток/кг, не более (или примерно) 6 × 105 клеток/кг, не более (или примерно) 7 × 105 клеток/кг, не более (или примерно) 8 × 105 клеток/кг, не более (или примерно) 9 × 105 клеток/кг, не более (или примерно) 1 × 106 клеток/кг, или не более (или примерно) 2 × 106 клеток/кг. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 2 × 105 клеток (например, антиген-экспрессирующих клеток, таких как CAR-экспрессирующие клетки) на килограмм массы тела субъекта (клеток/кг), например, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 3 × 105 клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 4 × 105 клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей примерно 5 × 105 клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 6 × 105 клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 7 × 105 клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 8 × 105 клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 9 × 105 клеток/кг, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 1 × 106 клеток/кг, или, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 2 × 106 клеток/кг.[0273] In some embodiments, the dose of cells is between 2 x 10 5 or about 2 x 10 5 cells/kg and 2 x 10 6 or about 2 x 10 6 cells/kg, such as between 4 x 10 5 or about 4 x 10 5 cells/kg and 1 x 10 6 or about 1 x 10 6 cells/kg or between 6 x 10 5 or about 6 x 10 5 cells/kg and 8 x 10 5 or about 8 x 10 5 cells/kg. In some embodiments, the cell dose contains no more than 2 x 10 5 cells (e.g., antigen-expressing, such as CAR-expressing cells) per kilogram of the subject's body weight (cells/kg), e.g., no more than (or about) 3 x 10 5 cells/kg, no more (or approximately) 4 × 10 5 cells/kg, no more than (or approximately) 5 × 10 5 cells/kg, no more (or approximately) 6 × 10 5 cells/kg, no more (or approximately) 7 × 10 5 cells/kg, not more than (or approximately) 8 × 10 5 cells/kg, not more than (or approximately) 9 × 10 5 cells/kg, not more than (or approximately) 1 × 10 6 cells/kg, or not more than (or approximately) 2 × 10 6 cells/kg. In some embodiments, the cell dose contains at least, or at least about, 2 x 10 5 cells (e.g., antigen-expressing cells, such as CAR-expressing cells) per kilogram of the subject's body weight (cells/kg) , for example, at least, or at least about 3 x 10 5 cells/kg, at least, or at least about 4 x 10 5 cells/kg, at least, or at least about 5 x 10 5 cells/kg at least, or at least about 6 x 10 5 cells/kg, or at least about 7 x 10 5 cells/kg, at least or at least about 8 x 10 5 cells/kg, or at least about 9 x 10 5 cells/kg, or at least about 1 x 10 6 cells /kg, or at least, or at least about 2×10 6 cells/kg.

[0274] В контексте адоптивной клеточной терапии, введение данной “дозы” клеток охватывает введение данного количества или количества клеток как отдельной композиции и/или в виде отдельного непрерывного введения, например, как отдельной инъекции или непрерывного вливания, а также охватывает введение данного количества или количества числа клеток как разделенной дозы, предлагаемой во множестве отдельных композиций или вливаний, в течение указанного периода времени, который не превышает 3 дней. Таким образом, в некотором контексте, доза представляет собой отдельное или непрерывное введение заданного количества клеток, осуществленного или начатого в один момент времени. В некотором контексте, однако, дозу вводят во множестве инъекций или вливаний за период не более трех дней, например, раз в день в течение трех дней или двух дней, или как множество вливаний за однодневный период. [0274] In the context of adoptive cell therapy, administering a given “dose” of cells encompasses administering a given number or amount of cells as a single composition and/or as a separate continuous administration, such as a single injection or continuous infusion, and also encompasses administering a given amount or the number of cells as a divided dose, offered in a variety of separate compositions or infusions, for a specified period of time, which does not exceed 3 days. Thus, in a certain context, a dose is a single or continuous administration of a given number of cells, delivered or started at one time. In some context, however, the dose is administered in multiple injections or infusions over a period of no more than three days, such as once a day for three days or two days, or as multiple infusions over a one-day period.

[0275] Таким образом, в некоторых аспектах, клетки дозы вводятся в отдельной фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления, клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих клетки дозы.[0275] Thus, in some aspects, the dose cells are administered in a separate pharmaceutical composition. In some embodiments, the dose cells are administered in a plurality of compositions collectively containing the dose cells.

[0276] Термин “разделенная доза” относится к дозе, которая разделена таким образом, что она вводится в течение нескольких дней. Такой тип дозирования охватывается настоящими способами и считается отдельной дозой. В некоторых вариантах осуществления, клетки разделенной дозы вводят во множестве композиций, коллективно содержащих клетки дозы, в течение периода не более трех дней.[0276] The term "split dose" refers to a dose that is divided in such a way that it is administered over several days. This type of dosing is covered by the present methods and is considered a separate dose. In some embodiments, the divided dose cells are administered in a plurality of dose cell compositions over a period of no more than three days.

[0277] Таким образом, доза клеток может вводиться как разделенная доза. Например, в некоторых вариантах осуществления, доза может вводиться субъекту в течение 2 дней или в течение 3 дней. Иллюстративные способы разделенного дозирования включают введение 25% дозы в первый день и введение остальных 75% дозы во второй день. В других вариантах осуществления, 33% дозы может вводиться в первый день, а остальные 67% вводиться во второй день. В некоторых аспектах, 10% дозы вводится в первый день, 30% дозы вводится во второй день, а 60% дозы вводится в третий день. В некоторых вариантах осуществления, разделенная доза не распределяется более чем на 3 дня.[0277] Thus, the dose of cells can be administered as a divided dose. For example, in some embodiments, the dose may be administered to the subject over 2 days or over 3 days. Exemplary split dosing methods include administering 25% of the dose on the first day and administering the remaining 75% of the dose on the second day. In other embodiments, 33% of the dose may be administered on the first day and the remaining 67% administered on the second day. In some aspects, 10% of the dose is administered on the first day, 30% of the dose is administered on the second day, and 60% of the dose is administered on the third day. In some embodiments, the divided dose is not spread over more than 3 days.

[0278] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, как правило, является достаточно большой, чтобы быть эффективной при уменьшении и тяжести заболевания. [0278] In some embodiments, the implementation, the dose of cells, as a rule, is large enough to be effective in reducing and the severity of the disease.

[0279] В некоторых вариантах осуществления, клетки вводят при желаемой дозе, которая в некоторых аспектах содержит желаемую дозу или количество клеток или типа (типов) клеток и/или желаемое отношение типов клеток. Таким образом, дозирование клеток в некоторых вариантах осуществления относится к общему количеству клеток (или к количеству на кг массы тела) и к желаемому отношению отдельных популяций или субтипов, таких как отношение CD4+ к CD8+. В некоторых вариантах осуществления, дозирование клеток относится к желаемому общему количеству (или к количеству на кг массы тела) клеток в отдельных популяциях или в отдельных типах клеток. В некоторых вариантах осуществления, дозирование относится к сочетанию таких особенностей, таких как желаемое количество клеток, в целом, желаемое отношение и желаемое общее количество клеток в отдельных популяциях.[0279] In some embodiments, the cells are administered at the desired dose, which in some aspects contains the desired dose or number of cells or cell type(s) and/or the desired ratio of cell types. Thus, cell dosing in some embodiments refers to the total number of cells (or number per kg of body weight) and to the desired ratio of individual populations or subtypes, such as the ratio of CD4+ to CD8+. In some embodiments, cell dosing refers to the desired total number (or number per kg of body weight) of cells in particular populations or in particular cell types. In some embodiments, dosing refers to a combination of features such as the desired number of cells in general, the desired ratio, and the desired total number of cells in individual populations.

[0280] В некоторых вариантах осуществления, популяции или субтипы клеток, таких как Т-лимфоциты CD8+ и CD4+, вводятся при допустимой разнице (или в пределах) желаемой дозы клеток, в целом, такой как желаемая доза Т-лимфоцитов. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой желаемое количество клеток или желаемое количество клеток на единицу массы тела субъекта, которому вводят клетки, например, клетки/кг. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой минимальное количество (или выше) клеток или минимальное количество клеток на единицу массы тела. В некоторых аспектах, из клеток, в целом, вводимых при желаемой дозе, отдельные популяции или субтипы присутствуют при (или около) желаемом выходном отношении (таком как отношение CD4+ к CD8+), например, в пределах определенной допустимой разницы или ошибки такого отношение.[0280] In some embodiments, populations or subtypes of cells, such as CD8+ and CD4+ T lymphocytes, are administered at a tolerable difference (or within) the desired dose of cells, in general, such as the desired dose of T lymphocytes. In some aspects, the desired dose is the desired number of cells, or the desired number of cells per unit body weight of the subject to which the cells are administered, eg, cells/kg. In some aspects, the desired dose is the minimum number (or higher) of cells or the minimum number of cells per unit body weight. In some aspects, from cells generally administered at the desired dose, distinct populations or subtypes are present at (or near) the desired output ratio (such as the ratio of CD4+ to CD8+), e.g., within a certain margin or error of such ratio.

[0281] В некоторых вариантах осуществления, клетки вводят при (или в пределах) допустимой разнице желаемой дозы для одной или нескольких отдельных популяций или субтипов клеток, таких как желаемая доза клеток CD4+ и/или желаемая доза клеток CD8+. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой желаемое количество клеток данного субтипа или популяции, или желаемое количество таких клеток на единицу массы тела субъекта, которому вводят клетки, например, клетки/кг. В некоторых аспектах, желаемая доза представляет собой минимальное количество (или выше) клеток в популяции или субтипе, или минимальное количество клеток в популяции или субтипе на единицу массы тела. [0281] In some embodiments, cells are administered at (or within) an acceptable desired dose difference for one or more distinct cell populations or subtypes, such as a desired CD4+ cell dose and/or a desired CD8+ cell dose. In some aspects, the desired dose is the desired number of cells of a given subtype or population, or the desired number of such cells per unit body weight of the subject to which the cells are administered, eg, cells/kg. In some aspects, the desired dose is the minimum number (or higher) of cells in a population or subtype, or the minimum number of cells in a population or subtype per unit body weight.

[0282] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, доза относится к желаемой фиксированной дозе клеток, в целом, и к желаемому отношению, и/или относится к желаемой фиксированной дозе одного или нескольких, например, каждого, отдельных субтипов или субпопуляций. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, доза относится к желаемой фиксированной или минимальной дозе Т-лимфоцитов и к желаемому отношению клеток CD4+ и CD8+ и/или относится к желаемой фиксированной или минимальной дозе клеток CD4+ и/или CD8+.[0282] Thus, in some embodiments, dose refers to a desired fixed dose of cells in general and to a desired ratio, and/or refers to a desired fixed dose of one or more, e.g. each, individual subtypes or subpopulations. Thus, in some embodiments, dose refers to a desired fixed or minimum dose of T-lymphocytes and a desired ratio of CD4+ and CD8+ cells and/or refers to a desired fixed or minimum dose of CD4+ and/or CD8+ cells.

[0283] В некоторых вариантах осуществления, клетки вводят при (или в допустимых пределах) желаемом выходном отношении множества популяций или субтипов клеток, таких как клетки или субтипы CD4+ и CD8+. В некоторых аспектах, желаемое отношение может представлять собой конкретное отношение или может представлять собой диапазон отношений, например, в некоторых вариантах осуществления, желаемое отношение (например, отношение клеток CD4+ и CD8+) находится в пределах между (или примерно) 1:5 и (или примерно) 5:1 (или больше примерно, чем 1:5 и меньше примерно 5:1) или находится в пределах между (или примерно) 1:3 и (или примерно) 3:1 (или больше примерно, чем 1:3 и меньше примерно, чем 3:1), например, в пределах между (или примерно) 2:1 и (или примерно) 1:5 (или больше примерно, чем 1:5 и меньше примерно, чем 2:1, например, (или примерно) 5:1, 4,5:1, 4:1, 3,5:1, 3:1, 2,5:1, 2:1, 1,9:1, 1,8:1, 1,7:1, 1,6:1, 1,5:1, 1,4:1, 1,3:1, 1,2:1, 1,1:1, 1:1, 1:1,1, 1:1,2, 1:1,3, 1:1,4, 1:1,5, 1:1,6, 1:1,7, 1:1,8, 1:1,9: 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:3,5, 1:4, 1:4,5 или 1:5. В некоторых аспектах, допустимая разница находится в пределах примерно 1%, примерно 2%, примерно 3%, примерно 4% примерно 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50% от желаемого отношения, включая любое значение в этих диапазонах. [0283] In some embodiments, cells are administered at (or within acceptable limits) the desired output ratio of multiple cell populations or subtypes, such as CD4+ and CD8+ cells or subtypes. In some aspects, the desired ratio may be a specific ratio, or may be a range of ratios, e.g., in some embodiments, the desired ratio (e.g., ratio of CD4+ to CD8+ cells) is between (or about) 1:5 and/or approximately) 5:1 (or greater than approximately 1:5 and less than approximately 5:1) or between (or approximately) 1:3 and (or approximately) 3:1 (or greater than approximately 1:3 and less than about 3:1), e.g., between (or about) 2:1 and (or about) 1:5 (or greater than about 1:5 and less than about 2:1, e.g., (or approximately) 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1, 1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5 or 1:5 In some aspects, the allowable difference is in the range of about 1%, about 2% , about 3%, about 4% about 5%, about 10%, n about 15%, about 20%, about 25%, about 30%, about 35%, about 40%, about 45%, about 50% of the desired ratio, including any value in these ranges.

[0284] В конкретных вариантах осуществления, количества и/или концентрации клеток относятся к количеству клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR). В других вариантах осуществления, количества и/или концентрации клеток относятся к количеству или концентрации всех вводимых клеток, Т-лимфоцитов или мононуклеаров периферической крови (PBMC). [0284] In specific embodiments, the numbers and/or concentrations of cells refer to the number of cells expressing the recombinant receptor (eg, CAR). In other embodiments, cell numbers and/or concentrations refer to the number or concentration of all cells, T-lymphocytes, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) administered.

[0285] В некоторых аспектах, размер дозы определяется по отношению одного или нескольких критериев, таких как реакция субъекта на предыдущее лечение, например, на химиотерапию, тяжесть заболевания субъекта, например, нагрузка, объем, размер опухоли или степень, распространение или тип метастаз, стадия и/или вероятность или частота развития токсических результатов лечения у субъекта, например, CRS, синдрома активирования макрогфагов, синдрома лизиса опухоли, нейротоксичности и/или иммунной реакции хозяина против вводимых клеток и/или рекомбинантных рецепторов.[0285] In some aspects, the dose size is determined in relation to one or more criteria, such as the response of the subject to previous treatment, for example, chemotherapy, the severity of the subject's disease, for example, load, volume, tumor size or extent, spread or type of metastases, the stage and/or likelihood or frequency of development of toxic treatment outcomes in the subject, eg, CRS, macrogphage activation syndrome, tumor lysis syndrome, neurotoxicity, and/or host immune response against administered cells and/or recombinant receptors.

[0286] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения в сочетании с клетками может значительно увеличить размножение или пролиферацию клеток и, таким образом, понизить дозу клеток, которые можно вводить субъекту. В некоторых случаях, предлагаемые способы делают возможным введение меньшей дозы таких клеток для достижения такой же или лучшей эффективности лечения, как для дозы в способе, в котором клеточную терапию вводят без введения иммуномодуляторного соединения, например, по меньшей мере, 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно или 10-кратно меньшей, чем доза в способе, в котором клеточную терапию вводят без введения иммуномодуляторное соединение, например, леналидомида. [0286] In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound in combination with cells can significantly increase cell multiplication or proliferation and thus decrease the dose of cells that can be administered to a subject. In some cases, the present methods make it possible to administer a lower dose of such cells to achieve the same or better treatment efficacy as a dose in a method in which the cell therapy is administered without the administration of an immunomodulatory compound, for example, at least 1.5-fold, 2-fold, 3-fold, 4-fold, 5-fold or 10-fold less than the dose in a method in which cell therapy is administered without the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide.

[0287] В некоторых вариантах осуществления, доза, например, содержит в пределах между или примерно между 5,0 × 106 и 2,25 × 107, 5,0 × 106 и 2,0 × 107, 5,0 × 106 и 1,5 × 107, 5,0 × 106 и 1,0 × 107, 5,0 × 106 и 7,5 × 106, 7,5 × 106 и 2,25 × 107, 7,5 × 106 и 2,0 × 107, 7,5 × 106 и 1,5 × 107, 7,5 × 106 и 1,0 × 107, 1,0 × 107 и 2,25 × 107, 1,0 × 107 и 2,0 × 107, 1,0 × 107 и 1,5 × 107, 1,5 × 107 и 2,25 × 107, 1,5 × 107 и 2,0 × 107, 2,0 × 107 и 2,25 × 107. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток содержит количество клеток, которое находится в пределах между, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 5 × 106, 6 × 106, 7 × 106, 8 × 106, 9 × 106, 10 × 106 и примерно 15 × 106 клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, таких как клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, которые представляют собой CD8+. В некоторых вариантах осуществления, такая доза, например, такое целевое количество клеток, относится к клеткам, экспрессирующим рекомбинантный рецептор, в целом, во вводимой композиции.[0287] In some embodiments, the dose, for example, contains between or about between 5.0 x 10 6 and 2.25 x 10 7 , 5.0 x 10 6 and 2.0 x 10 7 , 5.0 × 10 6 and 1.5 × 10 7 , 5.0 × 10 6 and 1.0 × 10 7 , 5.0 × 10 6 and 7.5 × 10 6 , 7.5 × 10 6 and 2.25 × 10 7 , 7.5 × 10 6 and 2.0 × 10 7 , 7.5 × 10 6 and 1.5 × 10 7 , 7.5 × 10 6 and 1.0 × 10 7 , 1.0 × 10 7 and 2.25 × 10 7 , 1.0 × 10 7 and 2.0 × 10 7 , 1.0 × 10 7 and 1.5 × 10 7 , 1.5 × 10 7 and 2.25 × 10 7 , 1.5 × 10 7 and 2.0 × 10 7 , 2.0 × 10 7 and 2.25 × 10 7 . In some embodiments, the cell dose contains a number of cells that is between at least, or at least about 5 x 10 6 , 6 x 10 6 , 7 x 10 6 , 8 x 10 6 , 9 x 10 6 , 10 x 10 6 , and about 15 x 10 6 recombinant receptor expressing cells, such as recombinant receptor expressing cells that are CD8+. In some embodiments, such a dose, for example, such a target number of cells, refers to cells expressing the recombinant receptor, in general, in the administered composition.

[0288] В некоторых вариантах осуществления, например, более низкая доза содержит меньше примерно 5 × 106 клеток, клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR), Т-лимфоцитов и/или PBMC на килограмм массы тела субъекта, например, меньше примерно 4,5 × 106, 4 × 106, 3,5 × 106, 3 × 106, 2,5 × 106, 2 × 106, 1,5 × 106, 1 × 106, 5 × 105, 2,5 × 105 или 1 × 105 таких клеток на килограмм массы тела субъекта. В некоторых вариантах осуществления, более низкая доза содержит меньше примерно 1 × 105, 2 × 105, 5 × 105 или 1 × 106 таких клеток на килограмм массы тела субъекта или имеет величину в пределах между любыми двумя из рассмотренных выше значений. В некоторых вариантах осуществления, такие значения относятся к количествам клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор; в других вариантах осуществления, они относятся к количеству Т-лимфоцитов или PBMC или к введенным клеткам в целом. [0288] In some embodiments, for example, a lower dose contains less than about 5 x 10 6 cells, cells expressing a recombinant receptor (e.g., CAR), T-lymphocytes, and/or PBMC per kilogram of the subject's body weight, for example, less than about 4.5 × 10 6 , 4 × 10 6 , 3.5 × 10 6 , 3 × 10 6 , 2.5 × 10 6 , 2 × 10 6 , 1.5 × 10 6 , 1 × 10 6 , 5 × 10 5 , 2.5 x 10 5 or 1 x 10 5 such cells per kilogram of the subject's body weight. In some embodiments, the lower dose contains less than about 1 x 10 5 , 2 x 10 5 , 5 x 10 5 , or 1 x 10 6 such cells per kilogram of the subject's body weight, or has a value between any two of the values discussed above. In some embodiments, such values refer to numbers of cells expressing the recombinant receptor; in other embodiments, they refer to the number of T-lymphocytes or PBMCs, or to the injected cells in general.

[0289] В некоторых вариантах осуществления, субъект получает множество доз, например, две или более дозы, или множество последовательных доз клеток. В некоторых вариантах субъекту осуществления вводят две дозы. В некоторых вариантах осуществления, субъект получает последовательную дозу, например, вторая доза вводится приблизительно через 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 день после первой дозы. В некоторых вариантах осуществления, множество последовательных доз вводятся после первой дозы, так что дополнительная доза или дозы вводятся после введения последовательной дозы. В некоторых аспектах, количество клеток, вводимых субъекту в дополнительной дозе, является таким же или сходным с первой дозой и/или последовательной дозой. В некоторых вариантах осуществления, дополнительная доза или дозы больше, чем предыдущие дозы. В некоторых вариантах осуществления, субъекту могут вводиться одна или несколько последовательных доз клеток. В некоторых вариантах осуществления, последовательная доза клеток вводится больше или больше примерно, чем через 7 дней, 14 дней, 21 дней, 28 дней или 35 дней после начала введения первой дозы клеток. Последовательная доза клеток может быть больше, приблизительно такой же или меньше, чем первая доза. В некоторых вариантах осуществления, введение Т-клеточной терапии, такой как введение первой и/или второй дозы клеток, может повторяться. [0289] In some embodiments, the subject receives multiple doses, such as two or more doses, or multiple consecutive doses of cells. In some embodiments, two doses are administered to the subject. In some embodiments, the subject receives a sequential dose, e.g., the second dose is administered approximately 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 or 21 days after the first dose. In some embodiments, a plurality of consecutive doses are administered after the first dose such that an additional dose or doses are administered after the sequential dose is administered. In some aspects, the number of cells administered to a subject at an additional dose is the same or similar to the first dose and/or subsequent dose. In some embodiments, the additional dose or doses are greater than previous doses. In some embodiments, one or more consecutive doses of cells may be administered to a subject. In some embodiments, the sequential dose of cells is administered more or more than about 7 days, 14 days, 21 days, 28 days, or 35 days after the start of the first dose of cells. The sequential dose of cells may be greater than, about the same as, or less than the first dose. In some embodiments, administration of T cell therapy, such as administration of the first and/or second dose of cells, may be repeated.

[0290] В некоторых вариантах осуществления, начало введения клеточной терапии, например, дозы клеток или первой дозы из разделенной дозы клеток, осуществляется до (перед), одновременно или после (последовательно или серийно) введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. [0290] In some embodiments, the initiation of administration of a cell therapy, e.g., a dose of cells or the first dose of a divided dose of cells, is before (before), simultaneously with, or after (sequentially or serially) administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide.

[0291] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, или последовательная доза клеток, вводится одновременно с началом введения иммуномодуляторного соединения в соответствии со способами сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток, или последовательная доза клеток, вводится в тот же день, когда начинают введение иммуномодуляторного соединения в соответствии со способами сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток или последовательная доза клеток, вводится в пределах 1 дня, в пределах 2 дней, в пределах 3 дней, в пределах 4 дней, в пределах 5 дней, в пределах 6 дней, или в пределах 7 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения в соответствии со способами сочетанной терапии. [0291] In some embodiments, the cell dose, or sequential cell dose, is administered concurrently with the initiation of administration of the immunomodulatory compound in accordance with combination therapy methods. In some embodiments, the cell dose, or sequential cell dose, is administered on the same day that the administration of the immunomodulatory compound is started according to the combination therapy methods. In some embodiments, a dose of cells, or a sequential dose of cells, is administered within 1 day, within 2 days, within 3 days, within 4 days, within 5 days, within 6 days, or within 7 days of onset administering an immunomodulatory compound according to combination therapy methods.

[0292] В некоторых вариантах осуществления, доза клеток или последовательная доза клеток вводится до старта или начала введения иммуномодуляторного соединения в соответствии с предлагаемой сочетанной терапией. В некоторых вариантах осуществления, доза клеток вводится, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 1 час, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 2 часа, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 3 часа, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 6 часов, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 12 часов, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 1 день, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 2 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 3 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 4 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 5 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 6 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 7 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 12 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 14 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 15 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 21 день, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 28 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 30 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, через примерно 35 дней, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 42 дня, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно через 60 дней или, по меньшей мере, или, по меньшей мере, примерно 90 дней до введения иммуномодуляторного соединения в соответствии с предлагаемой сочетанной терапией.[0292] In some embodiments, a dose of cells or a sequential dose of cells is administered prior to the start or start of administration of the immunomodulatory compound in accordance with the proposed combination therapy. In some embodiments, the cell dose is administered at least, or at least about 1 hour, at least, or at least about 2 hours, at least, or at least about after 3 hours, at least, or at least about 6 hours, at least, or at least about 12 hours, at least, or at least about 1 day, by at least, or at least about 2 days later, at least, or at least about 3 days later, at least, or at least about 4 days later, at least, or, at least about 5 days, at least, or at least about 6 days, at least, or at least about 7 days, at least, or at least about after 12 days, at least, or at least about 14 days, at least, or at least about 15 days, at least at least, or at least after about 21 days, at least, or at least after about 28 days, at least, or at least after about 30 days, at least, or, at least about 35 days, at least, or at least about 42 days, at least, or at least about 60 days, or at least, or at least about 90 days prior to the administration of an immunomodulatory compound in accordance with the proposed combination therapy.

[0293] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения (например, леналидомида) в соответствии с предлагаемой сочетанной терапией происходит в момент времени, в который предыдущее введение иммунотерапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR) связано или вероятно должно быть связано с уменьшением функциональности Т-лимфоцитов по сравнению с функциональностью Т-лимфоцитов в момент времени непосредственно перед началом иммунотерапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR) или в предыдущий момент времени после начала Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, способ включает, после введения дозы клеток от Т-клеточной терапии, например, адоптивной Т-клеточной терапии, но до введения иммуномодуляторного соединения, оценку образца от субъекта относительно одной или нескольких функций Т-лимфоцитов, таких как размножение или персистентность клеток, например, как определяется по их уровню или количеству в крови, или других фенотипов или желаемых результатов лечения, как описано в настоящем документе, например, как те, что описаны в Разделе III. Различные параметры для определения или оценки режима сочетанной терапии описаны в Разделе III.[0293] In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound (e.g., lenalidomide) according to the proposed combination therapy occurs at a time point at which previous administration of immunotherapy (e.g., T cell therapy, such as CAR T cell therapy) is, or likely to be, related to a decrease in T-lymphocyte functionality relative to T-lymphocyte functionality at the time immediately before the start of immunotherapy (eg, T-cell therapy, such as CAR T-lymphocyte therapy) or at a previous time point after initiation of T-cell therapy. In some embodiments, the method comprises, after administration of a dose of cells from a T cell therapy, such as adoptive T cell therapy, but prior to administration of an immunomodulatory compound, evaluating a sample from the subject for one or more T cell functions, such as proliferation or persistence. cells, for example, as determined by their level or amount in the blood, or other phenotypes or desired treatment outcomes, as described herein, for example, as those described in Section III. Various parameters for determining or evaluating a combination therapy regimen are described in Section III.

B. Введение иммуномодуляторного соединения B. Administration of an Immunomodulatory Compound

[0294] Предлагаемые способы сочетанной терапии, композиции, сочетания, наборы и применения включают введение иммуномодуляторного соединения, такого как структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы, например, леналидомид, которые могут вводиться до, после, в ходе, одновременно или почти одновременно, последовательно и/или поочередно с введением Т-клеточной терапии, например, с введением Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерный рецептор антигена (CAR). [0294] Proposed combination therapy methods, compositions, combinations, kits, and uses include administering an immunomodulatory compound, such as a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor, such as lenalidomide, which can be administered before, after, during, simultaneously or almost simultaneously, sequentially and/or alternately with the introduction of T-cell therapy, for example, with the introduction of T-lymphocytes expressing the chimeric antigen receptor (CAR).

[0295] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение из класса иммуномодуляторных соединений, которое представляет собой структурный или функциональный аналог или производное талидомида и/или ингибитор E3 убиквитинлигазы. [0295] In some embodiments, the immunomodulatory compound is a compound from the class of immunomodulatory compounds that is a structural or functional analog or derivative of thalidomide and/or an E3 ubiquitin ligase inhibitor.

[0296] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение связывается с CRBN и с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение ап-регулирует экспрессирование белка или гена CRBN. В некоторых аспектах, CRBN представляет собой адаптор субстрата для CRL4CRBN и E3 убиквитинлигазы и модулирует специфичность фермента. В некоторых вариантах осуществления, связывание с CRB или с комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы ингибирует активность E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение индуцирует убиквитинирование KZF1 (Ikaros) и IKZF3 (Aiolos) и/или индуцирует деградацию IKZF1 (Ikaros) и IKZF3 (Aiolos). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение индуцирует убиквитинирование казеинкиназы 1A1 (CK1α) посредством CRL4CRBN и E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, убиквитинирование CK1α дает в результате в деградацию CK1α.[0296] In some embodiments, the immunomodulatory compound binds to cereblon (CRBN). In some embodiments, the immunomodulatory compound binds to the CRBN and E3 ubiquitin ligase complex. In some embodiments, the immunomodulatory compound binds to CRBN and to the CRBN-E3 ubiquitin ligase complex. In some embodiments, the immunomodulatory compound up-regulates CRBN protein or gene expression. In some aspects, CRBN is a substrate adapter for CRL4CRBN and E3 ubiquitin ligase and modulates enzyme specificity. In some embodiments, binding to CRB or to the complex of CRBN and E3 ubiquitin ligase inhibits the activity of E3 ubiquitin ligase. In some embodiments, the immunomodulatory compound induces ubiquitination of KZF1 (Ikaros) and IKZF3 (Aiolos) and/or induces degradation of IKZF1 (Ikaros) and IKZF3 (Aiolos). In some embodiments, the immunomodulatory compound induces ubiquitination of casein kinase 1A1 (CK1α) by CRL4CRBN and E3 ubiquitin ligase. In some embodiments, ubiquitination of CK1α results in degradation of CK1α.

[0297] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор фактора транскрипции Ikaros (IKZF1). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование Ikaros. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает деградацию Ikaros. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение даун-регулирует экспрессирование белка или гена Ikaros. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения вызывает уменьшение уровня белков Ikaros.[0297] In some embodiments, the immunomodulatory compound is an inhibitor of the Ikaros transcription factor (IKZF1). In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances Ikaros ubiquitination. In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances the degradation of Ikaros. In some embodiments, the immunomodulatory compound down-regulates the expression of an Ikaros protein or gene. In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound causes a decrease in the level of Ikaros proteins.

[0298] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор фактора транскрипции Aiolos (IKZF3). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает деградацию Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение даун-регулирует экспрессирование белка или гена Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения вызывает понижение уровня белка Aiolos. [0298] In some embodiments, the immunomodulatory compound is an inhibitor of the Aiolos transcription factor (IKZF3). In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances Aiolos ubiquitination. In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances the degradation of Aiolos. In some embodiments, the immunomodulatory compound down-regulates the expression of an Aiolos protein or gene. In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound causes a decrease in the level of the Aiolos protein.

[0299] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор факторов транскрипции, как Ikaros (IKZF1), так и Aiolos (IKZF3). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование как Ikaros, так и Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает деградацию как Ikaros, так и Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение усиливает убиквитинирование и деградацию как Ikaros, так и Aiolos. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения вызывает понижение уровней как белков Aiolos, так и уровни белков Ikaros.[0299] In some embodiments, the immunomodulatory compound is an inhibitor of both Ikaros (IKZF1) and Aiolos (IKZF3) transcription factors. In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances ubiquitination of both Ikaros and Aiolos. In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances the degradation of both Ikaros and Aiolos. In some embodiments, the immunomodulatory compound enhances ubiquitination and degradation of both Ikaros and Aiolos. In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound causes a decrease in the levels of both the Aiolos proteins and the levels of the Ikaros proteins.

[0300] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой селективное цитокин-ингибиторное лекарственное средство (SelCID). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение ингибирует активность фосфодиэстеразы-4 (PDE4). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение подавляет ферментативную активность CDC25 фосфатаз. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение изменяет внутриклеточную направленную миграцию CDC25 фосфатаз. [0300] In some embodiments, the immunomodulatory compound is a selective cytokine inhibitory drug (SelCID). In some embodiments, the immunomodulatory compound inhibits phosphodiesterase-4 (PDE4) activity. In some embodiments, the immunomodulatory compound inhibits the enzymatic activity of CDC25 phosphatases. In some embodiments, the immunomodulatory compound alters the intracellular targeted migration of CDC25 phosphatases.

[0301] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение при сочетанной терапии представляет собой талидомид (2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1H-изоиндол-1,3(2H)-дион) или аналог или производное талидомида. В определенных вариантах осуществления, производное талидомида включает структурные варианты талидомида, которые имеют сходную биологическую активность. Иллюстративное производное талидомида включают, но, не ограничиваясь этим, леналидомид (REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™; Celgene Corporation), помалидомид (также известный как ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™ или POMALYST™ (Celgene Corporation)), CC-1088, CDC-501, и CDC-801, и соединения, описанные в патентах США №№ 5712291; 7320991; и 8716315; в заявке на патент США № 2016/0313300; и публикации PCT №№ WO 2002/068414 и WO 2008/154252. [0301] In some embodiments, the immunomodulatory compound in combination therapy is thalidomide (2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindol-1,3(2H)-dione) or an analog or derivative of thalidomide. In certain embodiments, the thalidomide derivative includes structural variants of thalidomide that have similar biological activity. Exemplary thalidomide derivatives include, but are not limited to, lenalidomide (REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™; Celgene Corporation), pomalidomide (also known as ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™ or POMALYST™ (Celgene Corporation)), CC-1088, CDC-501, and CDC-801 , and the compounds described in US patent No. 5712291; 7320991; and 8716315; in US Patent Application No. 2016/0313300; and PCT Publication Nos. WO 2002/068414 and WO 2008/154252.

[0302] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 1-оксо- и 1,3- диоксо-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолины, замещенные амино в бензо-кольце, как описано в патенте США № 5635517, который включается в настоящий документ в качестве ссылки. [0302] In some embodiments, the immunomodulatory compound is 1-oxo- and 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxo-piperidin-3-yl)isoindolines substituted with amino on the benzo ring, as described in the US patent No. 5635517, which is incorporated herein by reference.

[0303] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:[0303] In some embodiments, the immunomodulatory compound is a compound of the following formula:

Figure 00000002
Figure 00000002

где один из X и Y представляет собой -C(O)-, а другой из X и Y представляет собой -C(O)- или -CH2-, и R5 представляет собой водород или низший алкил, или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах осуществления, X представляет сбой -C(O)- и Y представляет собой -CH2-. В некоторых вариантах осуществления как X, так и Y представляют собой -C(O)-. В некоторых вариантах осуществления, R5 представляет собой водород. В других вариантах осуществления, R5 представляет собой метил.where one of X and Y is -C(O)- and the other of X and Y is -C(O)- or -CH 2 - and R 5 is hydrogen or lower alkyl or a pharmaceutically acceptable salt thereof . In some embodiments, X is -C(O)- and Y is -CH 2 -. In some embodiments, both X and Y are -C(O)-. In some embodiments, R 5 is hydrogen. In other embodiments, R 5 is methyl.

[0304] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение, которое принадлежит к классу замещенных 2-(2, 6-диоксопиперидин-3-ил)фтальиммуномодуляторных соединений и замещенных 2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксоизоиндолов, таких как те, которые описаны в патентах США №№ 6281230; 6316471; 6335349 и 6476052, и в Международной заявке на патент № PCT/US97/13375 (Международная публикация № WO 98/03502), каждая из них включается в настоящий документ в качестве ссылки. [0304] In some embodiments, the immunomodulatory compound is a compound that belongs to the class of substituted 2-(2,6-dioxpiperidin-3-yl)phthalimmunomodulatory compounds and substituted 2-(2,6-dioxpiperidin-3-yl)- 1-oxoisoindoles such as those described in US Pat. Nos. 6,281,230; 6316471; 6,335,349 and 6,476,052 and International Patent Application No. PCT/US97/13375 (International Publication No. WO 98/03502), each of which is incorporated herein by reference.

[0305] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:[0305] In some embodiments, the immunomodulatory compound is a compound of the following formula:

Figure 00000003
Figure 00000003

где where

один из X и Y представляет собой -C(O)-, а другой из X и Y представляет собой -C(O)- или -CH2-;one of X and Y is -C(O)- and the other of X and Y is -C(O)- or -CH 2 -;

(1) каждый из R1, R2, R3 и R4 независимо представляет собой галоген, алкил с 1-4 атомами углерода или алкокси из 1-4 атомов углерода, или (1) each of Rone, R2, R3 and Rfour independently represents a halogen, alkyl with 1-4 carbon atoms or alkoxy from 1-4 carbon atoms, or

(2) один из R1, R3, R4 и R5 представляет собой -NHRa и остальные R1, R2, R3 и R4 представляют собой водород, где Ra представляет собой водород или алкил с 1-8 атомами углерода;(2) one of Rone, R3, Rfour and R5represents -NHRaand the rest Rone, R2, R3 and Rfourrepresent hydrogen, where Rarepresents hydrogen or alkyl with 1-8 carbon atoms;

R5 представляет собой водород или алкил с 1-8 атомами углерода, бензил или галоген;R 5 is hydrogen or alkyl with 1-8 carbon atoms, benzyl or halogen;

при условии, что R5 не является водородом, если X и Y представляют собой -C(O)- и (i) каждый из R1, R2, R3 и R4 представляет собой фтор или (ii) один из R1, R2, R3 и R4 представляет собой амино;with the proviso that R 5 is not hydrogen, if X and Y are -C(O)- and (i) each of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 is fluoro or (ii) one of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 is amino;

или их фармацевтически приемлемую соль. or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0306] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение, которое принадлежит к классу изоиндол-иммуномодуляторных соединений, описанных в патенте США № 7091353, в публикации патента США № 2003/0045552 и в Международной заявке № PCT/USOI/50401 (Международная публикация № WO02/059106), каждая из них включается в настоящий документ в качестве ссылки. Например, в некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой [2-(2,6-диоксо-пиперидин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-илметил]амид; сложный трет-бутиловый эфир (2-(2,6-диоксо-пиперидин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-илметил)карабаминовой кислоты; 4-(аминометил)-2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))изоиндолин-1,3-дион; N-(2-(2,6-диоксо-пиперидин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-4-илметил)-ацетамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил)-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}циклопропил-карбоксамид; 2-хлор-N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}ацетамид; N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)-3-пиридилкарбоксамид; 3-{1-оксо-4-(бензиламино)изоиндолин-2-ил}пиперидин-2,6-дион; 2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-4-(бензиламино)изоиндолин-1,3-дион; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}пропанамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}-3-пиридилкарбоксамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}гептанамид; N-{(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)метил}-2-фурилкарбоксамид; {N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)карбамоил}метилацетат; N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)пентанамид; N-(2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил)-2-тиенилкарбоксамид; N-{[2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил]метил}-(бутиламино)карбоксамид; N-{[2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил]метил}(октиламино)карбоксамид; или N-{[2-(2,6-диоксо(3-пиперидил))-1,3-диоксоизоиндолин-4-ил]метил}(бензиламино)карбоксамид.[0306] In some embodiments, the immunomodulatory compound is a compound that belongs to the class of isoindole-immunomodulatory compounds described in US Patent No. 7,091,353, US Patent Publication No. 2003/0045552, and International Application No. publication No. WO02/059106), each of which is incorporated herein by reference. For example, in some embodiments, the immunomodulatory compound is [2-(2,6-dioxo-piperidin-3-yl)-1,3-dioxo-2,3-dihydro-1H-isoindol-4-ylmethyl]amide; (2-(2,6-dioxo-piperidin-3-yl)-1,3-dioxo-2,3-dihydro-1H-isoindol-4-ylmethyl)-carbamic acid tert-butyl ester; 4-(aminomethyl)-2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))isoindoline-1,3-dione; N-(2-(2,6-dioxo-piperidin-3-yl)-1,3-dioxo-2,3-dihydro-1H-isoindol-4-ylmethyl)acetamide; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidyl)-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)methyl}cyclopropylcarboxamide; 2-chloro-N-{(2-(2,6-dioxo (3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)methyl}acetamide; N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)- 3-pyridylcarboxamide;3-{1-oxo-4-(benzylamino)isoindolin-2-yl}piperidin-2,6-dione;2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-4-(benzylamino) isoindolin-1,3-dione; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)methyl}propanamide; N-{(2-(2, 6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)methyl}-3-pyridylcarboxamide; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3- dioxoisoindolin-4-yl)methyl}heptanamide;N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)methyl}-2-furylcarboxamide;{N-( 2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)carbamoyl}methyl acetate;N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3 -dioxoisoindolin-4-yl)pentanamide;N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl)-2-thienylcarboxamide;N-{[2-(2 ,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl]methyl}-(butylam ino)carboxamide; N-{[2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl]methyl}(octylamino)carboxamide; or N-{[2-(2,6-dioxo(3-piperidyl))-1,3-dioxoisoindolin-4-yl]methyl}(benzylamino)carboxamide.

[0307] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение, которое принадлежит к классу изоиндол-иммуномодуляторных соединений, описанных в публикации заявки на патент США № 2002/0045643, в Международной публикации № WO 98/54170 и в патенте США № 6395754, каждый из которых включается в настоящий документ в качестве ссылок. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой тетразамещенные 2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксоизоиндолины, описанные в патенте США № 5798368, который включается в настоящий документ в качестве ссылки. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 1-оксо и 1,3-диоксо-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолины, описанные в патенте США № 6403613, который включается в настоящий документ в качестве ссылки. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 1-оксо или 1,3-диоксоизоиндолин, замещенный в 4- или 5-положении индолинового кольца, как описано в патенте США № 6380239 и в патенте США № 7244759, оба они включаются в настоящий документ в качестве ссылок. [0307] In some embodiments, the immunomodulatory compound is a compound that belongs to the class of isoindole-immunomodulatory compounds described in U.S. Patent Application Publication No. 2002/0045643, International Publication No. WO 98/54170, and U.S. Patent No. 6,395,754, each of which is incorporated herein by reference. In some embodiments, the immunomodulatory compound is the tetrasubstituted 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1-oxoisoindolines described in US Pat. No. 5,798,368, which is incorporated herein by reference. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 1-oxo and 1,3-dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindolines as described in US Pat. No. 6,403,613, which is incorporated herein by reference. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 1-oxo or 1,3-dioxoisoindoline substituted at the 4- or 5-position of the indoline ring as described in US Pat. No. 6,380,239 and US Pat. No. 7,244,759, both of which are incorporated herein. as links.

[0308] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 2-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)-4-карбамоил-масляную кислоту или 4-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)-4-карбамоил-масляную кислоту. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 4-карбамоил-4-{4-[(фуран-2-ил-метил)амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}масляную кислоту, 4-карбамоил-2-{4-[(фуран-2-ил-метил)-амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}-масляную кислоту, 2-{4-[(фуран-2-ил-метил)-амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}-4-фенилкарбамоил-масляную кислоту или 2-{4-[(фуран-2-ил-метил)амино]-1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил}глутаровую кислоту.[0308] In some embodiments, the immunomodulatory compound is 2-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl)-4-carbamoyl-butyric acid or 4-(4-amino- 1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl)-4-carbamoylbutyric acid. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 4-carbamoyl-4-{4-[(furan-2-yl-methyl)amino]-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl}butyric acid, 4-carbamoyl-2-{4-[(furan-2-yl-methyl)-amino]-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl}-butyric acid, 2-{ 4-[(furan-2-yl-methyl)-amino]-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl}-4-phenylcarbamoyl-butyric acid or 2-{4-[(furan -2-yl-methyl)amino]-1,3-dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl}glutaric acid.

[0309] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой изоиндолин-1-он или изоиндолин-1,3-дион, замещенный в 2-положении 2,6-диоксо-3-гидроксипиперидин-5-илом, как описано в патенте США № 6458810, который включается в настоящий документ в качестве ссылки. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, или энантиомер или смесь его энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-[4-(4-морфолин-4-илметил-бензилокси)-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил]-пиперидин-2,6-дион. [0309] In some embodiments, the immunomodulatory compound is isoindolin-1-one or isoindolin-1,3-dione substituted at the 2-position with 2,6-dioxo-3-hydroxypiperidin-5-yl, as described in the US patent No. 6458810, which is incorporated herein by reference. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione, or an enantiomer or a mixture of enantiomers thereof; or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-[4-(4-morpholin-4-ylmethyl-benzyloxy)-1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl]-piperidin-2,6-dione .

[0310] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение является таким, как описано в Oshima, K. et al., Nihon Rinsho., 72(6):1130-5 (2014); Millrine, D. et al., Trends Mol Med., 23(4):348-364 (2017); и Collins, et al., Biochem J., 474(7):1127-1147 (2017).[0310] In some embodiments, the immunomodulatory compound is as described in Oshima, K. et al., Nihon Rinsho., 72(6):1130-5 (2014); Millrine, D. et al., Trends Mol Med., 23(4):348-364 (2017); and Collins, et al., Biochem J., 474(7):1127-1147 (2017).

[0311] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой ингибитор E3 убиквитинлигазы. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой производное талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой структурный и/или функциональный аналог талидомида. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль. [0311] In some embodiments, the immunomodulatory compound is an E3 ubiquitin ligase inhibitor. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a thalidomide derivative. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a structural and/or functional analogue of thalidomide. In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide, pomalidomide, avadomide, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[0312] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомида, авадомида или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, стереоизомер леналидомида или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. [0312] In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide, pomalidomide, avadomide, a stereoisomer of lenalidomide, pomalidomide, avadomide, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof. In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide, a stereoisomer of lenalidomide, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, cocrystal, clathrate, or polymorph thereof.

[0313] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой авадомид, которое также известно как 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, имеющее следующую структуру

Figure 00000004
(Формула I), или представляет собой их энантиомер или смесь энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф (ниже Соединение 1).[0313] In some embodiments, the immunomodulatory compound is avadomide, which is also known as 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione, having the following structure
Figure 00000004
(Formula I), or represents their enantiomer or mixture of enantiomers; or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof (below Compound 1).

[0314] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой энантиомер или смесь энантиомеров 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой сольват 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрат 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой полиморф 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы I.[0314] In some embodiments, the immunomodulatory compound is an enantiomer or mixture of enantiomers of 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione, or their a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph of 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione solvate. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione hydrate. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a pharmaceutically acceptable salt of 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione polymorph. In some embodiments, the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound has the structure of Formula I.

[0315] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, оно также известно как 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, или представляет собой энантиомер или смесь их энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, леналидомид представляет собой 2,6-пиперидиндион, 3-(4-амино-1,3-дигидро-1-оксо-2H-изоиндол-2-ил)-, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)-2,6-пиперидиндион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)-2,6-пиперидиндион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, все их можно использовать взаимозаменяемо, или представляет собой энантиомер или смесь их энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.[0315] In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide, also known as 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione , or is an enantiomer or a mixture of their enantiomers; or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In some embodiments, lenalidomide is 2,6-piperidinedione, 3-(4-amino-1,3-dihydro-1-oxo-2H-isoindol-2-yl)-, 3-(4-amino-1- oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)-2,6-piperidinedione, 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)-2 ,6-piperidinedione, 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione, 3-(4-amino-1-oxo-1 ,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2,6-dione, 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidin-2, 6-dione, all of which can be used interchangeably, or is an enantiomer or a mixture of their enantiomers; or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

[0316] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой смесь (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. [0316] In some embodiments, the immunomodulatory compound is (R)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is (S)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a mixture of (R)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione and (S) -3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione.

[0317] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой

Figure 00000005
(Формула II), или энантиомер или смесь энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат, или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой
Figure 00000006
(Формула IIA), или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В других вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой
Figure 00000007
(Формула IIB), или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В определенных вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение содержит смесь
Figure 00000008
(Формула IIA) и
Figure 00000009
(Формула IIB), или их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, гидраты, сокристаллы, клатраты или полиморфы. [0317] In some embodiments, the immunomodulatory compound is
Figure 00000005
(Formula II), or an enantiomer or a mixture of enantiomers; or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate, or polymorph thereof. In some embodiments, the immunomodulatory compound is
Figure 00000006
(Formula IIA), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In other embodiments, the immunomodulatory compound is
Figure 00000007
(Formula IIB), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In certain embodiments, the immunomodulatory compound comprises a mixture
Figure 00000008
(Formula IIA) and
Figure 00000009
(Formula IIB), or their pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, co-crystals, clathrates or polymorphs.

[0318] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой энантиомер или смесь энантиомеров 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона, или фармацевтическую приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой сольват (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и/или (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрат (RS)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и/или (S)-3-(4-Амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль (R)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона и/или (S)-3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид или 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы II. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы IIA или Формулы IIB или представляет собой их смесь. [0318] In some embodiments, the immunomodulatory compound is an enantiomer or mixture of enantiomers of 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph of 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a solvate of (R)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione and/or ( S)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is (RS)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione hydrate and/or ( S)-3-(4-Amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a pharmaceutically acceptable salt of (R)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione and/ or (S)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is lenalidomide or 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound has the structure of Formula II. In some embodiments, the immunomodulatory compound has the structure of Formula IIA or Formula IIB, or is a mixture thereof.

[0319] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой помалидомид, который также известен как 4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион, или представляет собой энантиомер или смесь его энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой

Figure 00000010
(Формула III) или энантиомер или смесь их энантиомеров; или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой
Figure 00000011
(Формула IIIA), или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В других вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой
Figure 00000012
(Формула IIIB) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф. В определенных вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение содержит смесь
Figure 00000013
(Формула IIIA) и
Figure 00000014
(Формула IIIB), или их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, гидраты, сокристаллы, клатраты или полиморфы. [0319] In some embodiments, the immunomodulatory compound is pomalidomide, which is also known as 4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione, or is an enantiomer or a mixture thereof enantiomers; or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In some embodiments, the immunomodulatory compound is
Figure 00000010
(Formula III) or an enantiomer or a mixture of their enantiomers; or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In some embodiments, the immunomodulatory compound is
Figure 00000011
(Formula IIIA), or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In other embodiments, the immunomodulatory compound is
Figure 00000012
(Formula IIIB) or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof. In certain embodiments, the immunomodulatory compound comprises a mixture
Figure 00000013
(Formula IIIA) and
Figure 00000014
(Formula IIIB), or their pharmaceutically acceptable salts, solvates, hydrates, co-crystals, clathrates or polymorphs.

[0320] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой энантиомер или смесь энантиомеров 4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона, или фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф 4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-изоиндолин-1,3-дион и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой сольват (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрат (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона и/или (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой (R)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион, (S)-4-амино-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)изоиндолин-1,3-дион или их смесь при любом отношении. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы III. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение имеет структуру Формулы IIIA или Формулы IIIB или представляет собой их смесь.[0320] In some embodiments, the immunomodulatory compound is an enantiomer or mixture of enantiomers of 4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph of 4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is (R)-4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-isoindoline-1,3-dione and/or (S)-4-amino-2 -(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof (R)-4-amino-2-(2,6-dioxpiperidine -3-yl)isoindoline-1,3-dione and/or (S)-4-amino-2-(2,6-diox-piperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a solvate of (R)-4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione and/or (S)-4-amino-2 -(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a hydrate of (R)-4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione and/or (S)-4-amino-2 -(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is a pharmaceutically acceptable salt of (R)-4-amino-2-(2,6-diox-piperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione and/or (S)-4-amino -2-(2,6-diox-piperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione. In some embodiments, the immunomodulatory compound is (R)-4-amino-2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione, (S)-4-amino-2-(2 ,6-dioxopiperidin-3-yl)isoindoline-1,3-dione or a mixture thereof in any ratio. In some embodiments, the immunomodulatory compound has the structure of Formula III. In some embodiments, the immunomodulatory compound has the structure of Formula IIIA or Formula IIIB, or a mixture thereof.

[0321] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение представляет собой или содержит леналидомид. Леналидомид одобрен FDA для лечения множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, связанного с делецией 5q, а чаще всего, при повторной/не поддающейся лечению мантийноклеточной лимфоме (MCL). Леналидомид представляет собой синтетическое производное талидомида, и как понимается в настоящее время, имеет множество иммуномодуляторных воздействий, включая усиление образования иммунных синапсов между Т-лимфоцитом и антиген-презентирующими клетками (APC). Например, в некоторых случаях, леналидомид модулирует реакции и результаты Т-лимфоцитов при повышенном продуцировании интерлейкина (IL)-2 в Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+, индуцирует сдвиг реакций T-хелперов (Th) от Th2 до Th1, ингибирует размножение регуляторного подмножества Т-лимфоцитов (Treg), и улучшает функционирование иммунологических синапсов при фолликулярной лимфоме (FL) и хроническом лимфолейкозе (CLL) (Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). Леналидомид также имеет непосредственную тумороцидную активность у пациентов с множественной миеломой (MM) и прямо и косвенно модулирует выживаемость клеток опухоли CLL посредством влияния поддерживающих клеток, таких как стромальные клетки, находящиеся в микроокружении лимфоидных тканей.[0321] In some embodiments, the immunomodulatory compound is or contains lenalidomide. Lenalidomide is FDA approved for the treatment of multiple myeloma, 5q deletion myelodysplastic syndrome, and most commonly recurrent/refractory mantle cell lymphoma (MCL). Lenalidomide is a synthetic derivative of thalidomide and is currently understood to have a variety of immunomodulatory effects, including increased immune synapse formation between T lymphocyte and antigen presenting cells (APCs). For example, in some cases, lenalidomide modulates the responses and outcomes of T-lymphocytes with increased production of interleukin (IL)-2 in CD4+ and CD8+ T-lymphocytes, induces a shift in T-helper (Th) responses from Th2 to Th1, inhibits the expansion of the T regulatory subset -lymphocytes (Treg), and improves the functioning of immunological synapses in follicular lymphoma (FL) and chronic lymphocytic leukemia (CLL) (Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). Lenalidomide also has direct tumoricidal activity in patients with multiple myeloma (MM) and directly and indirectly modulates CLL tumor cell survival through the influence of supporting cells such as stromal cells found in the microenvironment of lymphoid tissues.

1. Композиции и препараты1. Compositions and preparations

[0322] В некоторых вариантах осуществления способов, композиций, сочетаний, наборов и применений сочетанной терапии, предлагаемых в настоящем документе, сочетанная терапия может вводиться в одной или нескольких композициях, например, в фармацевтической композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид. [0322] In some embodiments of the combination therapy methods, compositions, combinations, kits, and uses provided herein, the combination therapy may be administered in one or more compositions, such as a pharmaceutical composition containing an immunomodulatory compound, such as lenalidomide.

[0323] В некоторых вариантах осуществления, композиция, например, фармацевтическая композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может включать носители, такие как разбавитель, вспомогательное вещество, наполнитель, или несущую среду, вместе с которыми вводят иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, и/или клетки. Примеры пригодных для использования фармацевтических носителей описаны в “Remington’s Pharmaceutical Sciences” by E. W. Martin. Такие композиции будут содержать терапевтически эффективное количество иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, как правило, в очищенной форме, вместе с соответствующим количеством носителя, с тем чтобы обеспечить форму для правильного введения пациенту. Такие фармацевтические носители могут представлять собой стерильные жидкости, такие как вода и масла, включая масла из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло и кунжутное масло. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерола также можно использовать в качестве жидких носителей, в частности, для растворов для инъекций. Фармацевтические композиции могут содержать любой один или несколько компонентов из разбавителей, вспомогательных веществ, антиадгезивов, связующих, покрытий, заполнителей, ароматизаторов, красителей, смазывающих веществ, глидантов, консервантов, детергентов, сорбентов, эмульгирующих агентов, фармацевтических наполнителей, буферных агентов для регулировки pH или подсластителей и их сочетания. В некоторых вариантах осуществления, фармацевтическая композиция может представлять собой жидкость, твердый продукт, лиофилизированный порошок, иметь форму геля и/или представлять собой их сочетание. В некоторых аспектах, выбор носителя частично определяется конкретным ингибитором и/или способом введения. [0323] In some embodiments, a composition, e.g., a pharmaceutical composition, containing an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, may include carriers, such as a diluent, excipient, excipient, or vehicle, with which the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered. and/or cells. Examples of suitable pharmaceutical carriers are described in "Remington's Pharmaceutical Sciences" by E. W. Martin. Such compositions will contain a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound, eg lenalidomide, generally in purified form, together with an appropriate amount of carrier, to provide a form for proper administration to the patient. Such pharmaceutical carriers may be sterile liquids such as water and oils, including petroleum, animal, vegetable or synthetic oils such as peanut oil, soybean oil, mineral oil and sesame oil. Saline solutions and aqueous solutions of dextrose and glycerol can also be used as liquid carriers, in particular for injectable solutions. Pharmaceutical compositions may contain any one or more of diluents, excipients, release agents, binders, coatings, fillers, flavoring agents, coloring agents, lubricants, glidants, preservatives, detergents, sorbents, emulsifying agents, pharmaceutical excipients, pH buffering agents, or sweeteners and their combinations. In some embodiments, the pharmaceutical composition may be a liquid, a solid, a lyophilized powder, in the form of a gel, and/or a combination thereof. In some aspects, the choice of carrier is determined in part by the particular inhibitor and/or route of administration.

[0324] Фармацевтически приемлемые носители, как правило, являются нетоксичными для пациентов при используемых дозах и концентрациях и включают, но, не ограничиваясь этим: буферы, такие как фосфатный, цитратный, и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмонийхлорид; гексаметонийхлорид; бензалконийхлорид; бензетонийхлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (меньше примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глютамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннитол, трегалоза или сорбитол; противоионы, образующие соли, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок) и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (PEG), стабилизаторы и/или консерванты. Композиции, содержащие иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, могут также лиофилизироваться.[0324] Pharmaceutically acceptable carriers are generally non-toxic to patients at the doses and concentrations used and include, but are not limited to: buffers such as phosphate, citrate, and other organic acids; antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride; benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol and m-cresol); low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates, including glucose, mannose, or dextrins; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (eg Zn-protein complexes) and/or non-ionic surfactants such as polyethylene glycol (PEG), stabilizers and/or preservatives. Compositions containing an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, may also be lyophilized.

[0325] В некоторых вариантах осуществления, фармацевтические композиции можно приготавливать для введения с помощью любого известного способа, включая внутримышечную, внутривенную, интрадермальную, вводимую внутрь пораженных тканей, внутрибрюшинную инъекцию, подкожное, внутриопухолевое, эпидуральное, назальное, пероральное, вагинальное, ректальное, местное, наружное, внутриушное, ингаляционное, буккальное (например, сублингвальное) и трансдермальное введение или любой другой способ. В некоторых вариантах осуществления, предполагаются также другие способы введения. В некоторых вариантах осуществления, введение осуществляют посредством вливания болюса, посредством инъекции, например, внутривенных или подкожных инъекций, интраокулярной инъекции, периокулярной инъекции, субретинальной инъекции, интравитреальной инъекции, трнасептальной инъекции, субсклеральной инъекции, интрахориоидальной инъекции, интракамеральной инъекции, подконъюктивальной инъекции, подконъюктивальной инъекции, инъекции в теноновую капсулу, ретробульбарной инъекции, перибульбарной инъекции или постериорной джукстасклерной доставки. В некоторых вариантах осуществления, введение осуществляют посредством парентерального, внутрилегочного и интраназального, и, при желании, местного лечения, вводимого внутрь пораженных тканей. Парентеральные вливания включают внутримышечное, внутривенное, интраартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. В некоторых вариантах осуществления, назначенная доза вводится посредством одного введения болюса. В некоторых вариантах осуществления, она вводится посредством множества введений болюса, например, за период не более чем 3 дней, или посредством непрерывного введения вливанием. [0325] In some embodiments, pharmaceutical compositions can be formulated for administration by any known route, including intramuscular, intravenous, intradermal, intralesional, intraperitoneal injection, subcutaneous, intratumoral, epidural, nasal, oral, vaginal, rectal, topical , external, intra-aural, inhalation, buccal (eg, sublingual) and transdermal administration, or any other method. In some embodiments, other routes of administration are also contemplated. In some embodiments, administration is by bolus infusion, by injection, such as intravenous or subcutaneous injection, intraocular injection, periocular injection, subretinal injection, intravitreal injection, transseptal injection, subscleral injection, intrachoroidal injection, intracameral injection, subconjunctival injection, subconjunctival injection , Tenon's capsule injection, retrobulbar injection, peribulbar injection, or posterior juxtascleral delivery. In some embodiments, administration is via parenteral, intrapulmonary, and intranasal, and, if desired, topical treatments administered within the affected tissues. Parenteral infusions include intramuscular, intravenous, intraarterial, intraperitoneal or subcutaneous administration. In some embodiments, the prescribed dose is administered via a single bolus injection. In some embodiments, it is administered via multiple bolus administrations, such as over a period of no more than 3 days, or via continuous infusion administration.

[0326] В некоторых вариантах осуществления, введение может быть местным, наружным или системным, в зависимости от локуса лечения. В некоторых вариантах осуществления местное введение в область, нуждающуюся в лечении, может достигаться, например, но, не ограничиваясь этим, посредством местного вливания в ходе хирургической операции, наружного нанесения, например, в сочетании с повязкой на раны после хирургической операции, посредством инъекции, посредством катетера, посредством суппозитория, или посредством импланта. В некоторых вариантах осуществления, композиции также можно вводить вместе с другими биологически активными агентами, либо последовательно, поочередно, либо в одной и той же композиции. В некоторых вариантах осуществления, введение также может включать системы с контролируемым высвобождением, включая препараты с контролируемым высвобождением и устройства с контролируемым высвобождением, например, посредством насоса. В некоторых вариантах осуществления, введение является пероральным.[0326] In some embodiments, the implementation, the introduction can be local, external or systemic, depending on the locus of treatment. In some embodiments, local administration to the area in need of treatment can be achieved, for example, but not limited to, by local infusion during surgery, external application, for example, in combination with a wound dressing after surgery, by injection, via a catheter, via a suppository, or via an implant. In some embodiments, the compositions can also be administered together with other biologically active agents, either sequentially, alternately, or in the same composition. In some embodiments, administration may also include controlled release systems, including controlled release formulations and controlled release devices, such as by means of a pump. In some embodiments, the administration is oral.

[0327] В некоторых вариантах осуществления, фармацевтически и терапевтически активные соединения и их производные, как правило, приготавливаются и вводятся в отдельных стандартных дозированных формах или во множестве стандартных дозированных форм. Каждая стандартная единичная доза содержит заданное количество терапевтически активного соединения достаточное для оказания желаемого терапевтического воздействия в ассоциации с необходимым фармацевтическим носителем, несущей средой или разбавителем. В некоторых вариантах осуществления, стандартные единичные дозы включают, но, не ограничиваясь этим, таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, стерильные парентеральные растворы или суспензии и пероральные растворы или суспензии, и эмульсии типа масло в воде, содержащие соответствующие количества соединений или их фармацевтически приемлемых производных. Единичные стандартные дозы могут содержаться в ампулах и шприцах или в отдельно упакованных таблетках или капсулах. Единичные стандартные дозы могут вводиться частями или во множестве их. В некоторых вариантах осуществления, множество единичных стандартных доз представляет собой множество идентичных единичных стандартных доз, упакованных в один контейнер для введения в форме разделенных единичных стандартных доз. Примеры множества единичных стандартных доз включают флаконы, бутылки с таблетками или капсулами или бутылки объемом в пинты или галлоны.[0327] In some embodiments, the pharmaceutically and therapeutically active compounds and derivatives thereof are typically formulated and administered in single unit dosage forms or in multiple unit dosage forms. Each unit dose contains a predetermined amount of a therapeutically active compound sufficient to produce the desired therapeutic effect in association with the necessary pharmaceutical carrier, vehicle or diluent. In some embodiments, unit dosage units include, but are not limited to, tablets, capsules, pills, powders, granules, sterile parenteral solutions or suspensions, and oral solutions or suspensions, and oil-in-water emulsions containing appropriate amounts of the compounds or their pharmaceutically acceptable derivatives. Unit dosage units may be contained in ampoules and syringes or in individually packaged tablets or capsules. Single unit doses may be administered in portions or in multiples. In some embodiments, the plurality of unit dose units is a plurality of identical unit dose units packaged in a single administration container in the form of divided unit dose units. Examples of multiple unit dosage units include vials, tablet or capsule bottles, or pint or gallon bottles.

[0328] Активные ингредиенты могут упаковываться в микрокапсулы, в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. В определенных вариантах осуществления, фармацевтическая композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, приготавливается как комплекс включения, такой как циклодекстриновый комплекс включения, или как липосома. Липосомы могут служить для нацеливания клеток-хозяев (например, T-лимфоцитов или NK-клеток) на конкретную ткань. Для приготовления липосом доступно множество способов, такие как те, которые описаны, например, в Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980), и в патентах США №№ 4235871, 4501728, 4837028 и 5019369. [0328] Active ingredients can be packaged in microcapsules, colloidal drug delivery systems (eg, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules), or macroemulsions. In certain embodiments, a pharmaceutical composition containing an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is formulated as an inclusion complex, such as a cyclodextrin inclusion complex, or as a liposome. Liposomes can serve to target host cells (eg, T-lymphocytes or NK cells) to a specific tissue. Many methods are available for preparing liposomes, such as those described, for example, in Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980), and US Pat. Nos. 4,235,871, 4,501,728, 4,837,028 and 5,019,369.

[0329] Фармацевтическая композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, в некоторых аспектах может использовать системы доставки с высвобождением в заданное время, с замедленным высвобождением и распределенным по времени высвобождением, так что доставка композиции происходит до сенсибилизации того места, которое должно лечиться, и за время до этого достаточное, чтобы вызвать сенсибилизацию. Доступно и известно множество типов систем доставки и высвобождения. Такие системы могут устранить многократные введения композиции, тем самым повышая удобство для субъекта и врача. [0329] A pharmaceutical composition containing an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, in some aspects may use timed release, sustained release, and timed release delivery systems such that delivery of the composition occurs prior to sensitization of the site to be treated, and enough time before that to cause sensitization. Many types of delivery and release systems are available and known. Such systems can eliminate multiple administrations of the composition, thereby increasing convenience for the subject and the clinician.

[0330] Композиции, содержащие иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, могут также лиофилизироваться. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как смачивающие, диспергирующие или эмульгирующие агенты (например, метилцеллюлозу), буферные агенты для регулировки pH, гелеобразующие или увеличивающие вязкость добавки, консерванты, ароматизирующие агенты, красители, и тому подобное, в зависимости от способа введения и желаемого препарата. В некоторых аспектах можно проконсультироваться со стандартными текстами для приготовления соответствующих препаратов. [0330] Compositions containing an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, may also be lyophilized. The compositions may contain adjuvants such as wetting, dispersing, or emulsifying agents (e.g., methylcellulose), pH buffering agents, gelling or viscosity-increasing additives, preservatives, flavoring agents, coloring agents, and the like, depending on the route of administration and the desired drug. In some respects, standard texts may be consulted for the preparation of appropriate preparations.

[0331] Могут добавляться различные добавки, которые повышают стабильность и стерильность композиций, включая антимикробные консерванты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и буферы. Предотвращение действия микроорганизмов может обеспечиваться с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, и тому подобное. Пролонгированное поглощение фармацевтической формы для инъекций можно получить при использовании агентов, замедляющих поглощение, например, алюминия моностеарата и желатина. [0331] Various additives can be added that enhance the stability and sterility of the compositions, including antimicrobial preservatives, antioxidants, chelating agents, and buffers. Prevention of the action of microorganisms can be provided by various antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, and the like. Prolonged absorption of the pharmaceutical form for injection can be obtained using agents that delay absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.

[0332] Можно приготовить препараты с длительным высвобождение. Соответствующие примеры препаратов с длительным высвобождением включают полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, эти матрицы имеют форму формованных изделий, например, пленок или микрокапсул. [0332] Sustained release formulations can be prepared. Suitable examples of sustained release formulations include semi-permeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the antibody, these matrices are in the form of molded articles such as films or microcapsules.

[0333] В некоторых вариантах осуществления, композиция, содержащая иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в форме соли, например, фармацевтически приемлемой соли. Соответствующие фармацевтически приемлемые соли добавления кислот включают соли, полученные из минеральных кислот, таких как хлористоводородная, бромистоводородная, фосфорная, метафосфорная, азотная и серная кислота, и из органических кислот, таких как винная, уксусная, лимонная, яблочная, молочная, фумаровая, бензойная, гликолевая, глюконовая, янтарная и арилсульфоновая кислота, например, п-толуолсульфоновая кислота.[0333] In some embodiments, the composition containing the immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is administered in the form of a salt, eg, a pharmaceutically acceptable salt. Suitable pharmaceutically acceptable acid addition salts include salts derived from mineral acids such as hydrochloric, hydrobromic, phosphoric, metaphosphoric, nitric and sulfuric acids, and from organic acids such as tartaric, acetic, citric, malic, lactic, fumaric, benzoic, glycolic, gluconic, succinic and arylsulfonic acid, for example p-toluenesulfonic acid.

2. Временной график дозирования иммуномодуляторного соединения 2. Timing Schedule for Dosing an Immunomodulatory Compound

[0334] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемый способ сочетанной терапии включает введение субъекту терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного лекарственного средства (иммуномодуляторного соединения), например, леналидомида, и клеточной терапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов). [0334] In some embodiments, the proposed method of combination therapy includes administering to the subject a therapeutically effective amount of an immunomodulatory drug (immunomodulatory compound), for example, lenalidomide, and a cellular therapy, such as T-cell therapy (for example, CAR-expressing T-lymphocytes) .

[0335] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, начинается до, после, в ходе, в течение курса, одновременно или почти одновременно, последовательно и/или поочередно с введением клеточной терапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты). В некоторых вариантах осуществления, способ включает начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, до введения Т-клеточной терапии. В других вариантах осуществления, способ включает начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, после введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, временной график дозирования включает начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, одновременно или синхронно с введением Т-клеточной терапии. [0335] In some embodiments, the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, begins before, after, during, during the course, simultaneously or almost simultaneously, sequentially and/or alternately with the introduction of cell therapy, such as T-cell therapy (for example, CAR-expressing T-lymphocytes). In some embodiments, the method includes initiating administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, prior to administration of T cell therapy. In other embodiments, the method includes initiating administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, following administration of T cell therapy. In some embodiments, the dosing timing includes initiating administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, at the same time or simultaneously with the administration of T cell therapy.

[0336] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в цикле. В некоторых вариантах осуществления, цикл включает период введения, при котором иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, не вводится. В некоторых вариантах осуществления, общее количество дней цикла, например, от начала старта введения иммуномодуляторного соединения, более или примерно более, чем, или составляет примерно 21 день, 28 дней, 30 дней, 40 дней, 50 дней, 60 дней или больше. [0336] In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered in a cycle. In some embodiments, the cycle includes an administration period in which an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is administered followed by a rest period during which an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is not administered. In some embodiments, the total number of cycle days, e.g., from start of immunomodulatory compound administration, is greater than or about greater than, or about 21 days, 28 days, 30 days, 40 days, 50 days, 60 days or more.

[0337] В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют, по меньшей мере, в одном цикле, и начало введения Т-клеточной терапии происходит в один и тот же день, необязательно, одновременно. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, по меньшей мере, в одном цикле происходит до начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомид, по меньшей мере, в одном цикле происходит одновременно или в один и тот же день, что и начало введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится от или примерно от 0 до 30 дней, например, от 0 до 15 дней, от 0 до 6 дней, от 0 до 96 часов, от 0 до 24 часов, от 0 до 12 часов, от 0 до 6 часов или от 0 до 2 часов, от 2 часов до 15 дней, от 2 часов до 6 дней, от 2 часов до 96 часов, от 2 часов до 24 часов, от 2 часов до 12 часов, от 2 часов до 6 часов, от 6 часов до 30 дней, от 6 часов до 15 дней, от 6 часов до 6 дней, от 6 часов до 96 часов, от 6 часов до 24 часов, от 6 часов до 12 часов, от 12 часов до 30 дней, от 12 часов до 15 дней, от 12 часов до 6 дней, от 12 часов до 96 часов, от 12 часов до 24 часов, от 24 часов до 30 дней, от 24 часов до 15 дней, от 24 часов до 6 дней, от 24 часов до 96 часов, от 96 часов до 30 дней, от 96 часов до 15 дней, от 96 часов до 6 дней, от 6 дней до 30 дней, от 6 дней до 15 дней или от 15 дней до 30 дней до начала Т-клеточной терапии. В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится примерно не более, чем за 96 часов, 72 часов, 48 часов, 24 часов, 12 часов, 6 часов, 2 часов или за 1 час до начала Т-клеточной терапии.[0337] In some embodiments, the start of administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, is carried out in at least one cycle, and the start of administration of T-cell therapy occurs on the same day, optionally simultaneously. In some embodiments, the initiation of administration of an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, in at least one cycle occurs prior to the initiation of administration of T cell therapy. In some embodiments, the initiation of administration of an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, in at least one cycle occurs at the same time or on the same day as the initiation of administration of T cell therapy. In some embodiments, the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered from or about 0 to 30 days, e.g., 0 to 15 days, 0 to 6 days, 0 to 96 hours, 0 to 24 hours, 0 to 12 hours, 0 to 6 hours or 0 to 2 hours, 2 hours to 15 days, 2 hours to 6 days, 2 hours to 96 hours, 2 hours to 24 hours, 2 hours to 12 hours , 2 hours to 6 hours, 6 hours to 30 days, 6 hours to 15 days, 6 hours to 6 days, 6 hours to 96 hours, 6 hours to 24 hours, 6 hours to 12 hours, 12 hours to 30 days 12 hours to 15 days 12 hours to 6 days 12 hours to 96 hours 12 hours to 24 hours 24 hours to 30 days 24 hours to 15 days 24 hours to 6 days, 24 hours to 96 hours, 96 hours to 30 days, 96 hours to 15 days, 96 hours to 6 days, 6 days to 30 days, 6 days to 15 days, or 15 days days to 30 days before starting T-cell therapy. In some aspects, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered no more than about 96 hours, 72 hours, 48 hours, 24 hours, 12 hours, 6 hours, 2 hours, or 1 hour before the start of T cell therapy.

[0338] В некоторых таких вариантов осуществления, в которых иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, назначают до клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR), введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, продолжается через регулярные интервалы до начала клеточной терапии и/или в течение некоторого времени после начал клеточной терапии.[0338] In some such embodiments, in which an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered prior to cell therapy (e.g., T cell therapy, such as CAR T cell therapy), administration of the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is continued at regular intervals before the start of cell therapy and/or for some time after the start of cell therapy.

[0339] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится или продолжает вводиться после введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR). В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в пределах или примерно в пределах 1 часа, 2 часов, 6 часов, 12 часов, 24 часов, 48 часов, 96 часов, 4 дней, 5 дней, 6 дней или 7 дней, 14 дней, 15 дней, 21 дней, 24 дней, 28 дней, 30 дней, 36 дней, 42 дней, 60 дней, 72 дней или 90 дней после начала введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии,). В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы включают непрерывное введение, например, через регулярные интервалы, иммуномодуляторного соединения после начала введения клеточной терапии.[0339] In some embodiments, an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is administered or continues to be administered following the administration of cell therapy (eg, T cell therapy, such as CAR T cell therapy). In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered within or about within 1 hour, 2 hours, 6 hours, 12 hours, 24 hours, 48 hours, 96 hours, 4 days, 5 days, 6 days, or 7 days, 14 days, 15 days, 21 days, 24 days, 28 days, 30 days, 36 days, 42 days, 60 days, 72 days, or 90 days after starting cell therapy (eg, T-cell therapy,). In some embodiments, the proposed methods include continuously administering, for example, at regular intervals, an immunomodulatory compound after the start of a cell therapy administration.

[0340] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до или примерно до 1 дня, до или примерно до 2 дней, до или примерно до 3 дней, до или примерно до 4 дней, до или примерно до 5 дней, до или примерно до 6 дней, до или примерно до 7 дней, до или примерно до 12 дней, до или примерно до 14 дней, до или примерно до 21 дней, до или примерно до 24 дней, до или примерно до 28 дней, до или примерно до 30 дней, до или примерно до 35 дней, до или примерно до 42 дней, до или примерно до 60 дней или до или примерно до 90 дней, до или примерно до 120 дней, до или примерно до 180 дней, до или примерно до 240 дней, до или примерно до 360 дней, или до или примерно до 720 дней или более после начала введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR).[0340] In some embodiments, the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered before or about 1 day, before or about 2 days, before or about 3 days, before or about 4 days, before or about 5 days up to or up to about 6 days, up to or up to about 7 days, up to or up to about 12 days, up to or up to about 14 days, up to or up to about 21 days, up to or up to about 24 days, up to or up to about 28 days, up to or up to about 30 days, up to or up to about 35 days, up to or up to about 42 days, up to or up to about 60 days, or up to or up to about 90 days, up to or up to about 120 days, up to or up to about 180 days, up to or up to about 240 days, up to or up to about 360 days, or up to or up to about 720 days or more after the start of the administration of cell therapy (eg, T cell therapy, such as CAR T cell therapy).

[0341] В некоторых таких приведенных выше вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до и после начала введения клеточной терапии (например, Т-клеточной терапии, такой как терапия с помощью Т-лимфоцитов CAR). [0341] In some of the above embodiments, an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is administered before and after the start of the cell therapy (eg, T cell therapy, such as CAR T cell therapy).

[0342] В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.[0342] In some embodiments, the start of administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, is carried out at or after a time point, optionally immediately after or within 1-3 days after: (i) a peak maximum is detected in the subject's blood cell levels from T-cell therapy; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0343] В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, по меньшей мере, в одном цикле происходит после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, происходит, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, через 1 день, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 3 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 4 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 5 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 6 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 7 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 8 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 9 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 10 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 12 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 14 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 15 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 21 день, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 24 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 28 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 30 дней, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 35 дней или, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 42 дня, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 60 дней, или, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, через 90 дней после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, начало введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, осуществляют в момент времени, который наступает более или примерно более, чем через 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится несколько раз в день, дважды день, ежедневно, через день, три раза в неделю, дважды в неделю, или один раз в неделю после начала клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится ежедневно. В некоторых вариантах осуществления иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится дважды в день. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится три раза день. В других вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится через день. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится ежедневно. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение множества последовательных дней, например, примерно до 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более 30 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение до 21 дня, последовательно. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения. [0343] In some embodiments, the initiation of administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, in at least one cycle occurs after the initiation of administration of T-cell therapy. In some embodiments, the onset of administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, occurs when at least, or about, at least 1 day, at least, or about, at least 2 days, at least, or about, at least 3 days, at least, or about, at least 4 days, at least, or about at least 5 days, at least, or about at least 6 days, at least, or about at least 7 days, at least, or about, at least 8 days, at least, or about, at least 9 days, at least, or about, at least 10 days, at least, or about, at least at least 12 days at least or about at least 14 days at least or about at least 15 days at least or about at least 21 days at least , or at least about 24 days, at least, or about at least 28 days, at least, or about at least 30 days, at least, or about at least at least 35 days or at least or about at least 42 days, at least or about at least 60 days, or at least or about at least 90 days days after initiation of T-cell therapy. In some embodiments, the start of administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is at least 2 days later, at least 1 week later, at least 2 weeks later, at least 3 weeks later, or at least at least 4 weeks after the start of the introduction of T-cell therapy. In some embodiments, the start of administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is 2-28 or 7-21 days after the start of T-cell therapy. In some embodiments, the start of the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, is carried out at a time point that occurs more than or about more than 14 days, 15 days, 16 days, 17 days, 18 days, 19 days, 20 days, 21 days, 24 days, or 28 days after initiation of T-cell therapy. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered several times a day, twice a day, daily, every other day, three times a week, twice a week, or once a week after starting cell therapy. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered daily. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered twice a day. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered three times a day. In other embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered every other day. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered daily. In some embodiments, an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered over a period of administration over multiple consecutive days, e.g., up to about 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 or more than 30 consecutive days. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered for more than or about more than 7 consecutive days, more than or about more than 14 consecutive days, more than or about more than 21 consecutive days, or more than or about more than 28 consecutive days. In some embodiments, an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is administered during an administration period of up to 21 days, sequentially. In some embodiments, the immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, is administered during an administration period of up to 21 days, sequentially, where the cycle includes more than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound.

[0344] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение не более примерно, чем 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или не более чем 30 последовательных дней. В определенных вариантах осуществления, леналидомид вводится один раз в день в течение 14 дней в течение 21-дневного цикла лечения. В определенных вариантах осуществления, леналидомид вводится один раз в день в течение 21 дня в течение 28-дневного цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в ходе периода введения в течение не более 14 последовательных дней.[0344] In some embodiments, an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered during an administration period of no more than about 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 or no more than 30 consecutive days. In certain embodiments, lenalidomide is administered once a day for 14 days during a 21 day treatment cycle. In certain embodiments, lenalidomide is administered once daily for 21 days during a 28 day treatment cycle. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered during an administration period of no more than 14 consecutive days.

[0345] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в цикле, где цикл включает введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится. В некоторых вариантах осуществления, период покоя больше примерно, чем 1 день, больше примерно, чем 3 последовательных дня, больше примерно, чем 5 последовательных дней, больше примерно, чем 7 последовательных дней, больше примерно, чем 8 последовательных дней, больше примерно, чем 9 последовательных дней, больше примерно, чем 10 последовательных дней, больше примерно, чем 11 последовательных дней, больше примерно, чем 12 последовательных дней, больше примерно, чем 13 последовательных дней, больше примерно, чем 14 последовательных дней, больше примерно, чем 15 последовательных дней, больше примерно, чем 16 последовательных дней, больше примерно, чем 17 последовательных дней, больше примерно, чем 18 последовательных дней, больше примерно, чем 19 последовательных дней, больше примерно, чем 20 последовательных дней, или больше примерно, чем 21 или более последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, период покоя больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней. В некоторых вариантах осуществления, период покоя больше примерно, чем 14 последовательных дней. В некоторых вариантах осуществления, цикл введения иммуномодуляторного соединения не включает периода покоя. [0345] In some embodiments, the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered in a cycle, where the cycle comprises administering the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered. In some embodiments, the rest period is greater than about 1 day, greater than about 3 consecutive days, greater than about 5 consecutive days, greater than about 7 consecutive days, greater than about 8 consecutive days, greater than about 9 consecutive days, more than about 10 consecutive days, more than about 11 consecutive days, more than about 12 consecutive days, more than about 13 consecutive days, more than about 14 consecutive days, more than about 15 consecutive days more than about 16 consecutive days, more than about 17 consecutive days, more than about 18 consecutive days, more than about 19 consecutive days, more than about 20 consecutive days, or more than about 21 or more consecutive days. In some embodiments, the rest period is greater than 7 consecutive days, greater than 14 consecutive days, greater than 21 days, or greater than 28 days. In some embodiments, the rest period is greater than about 14 consecutive days. In some embodiments, the immunomodulatory compound administration cycle does not include a rest period.

[0346] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в цикле, где цикл повторяют, по меньшей мере, один раз. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в течение, по меньшей мере, 2 циклов, по меньшей мере, 3 циклов, по меньшей мере, 4 циклов, по меньшей мере, 5 циклов, по меньшей мере, 6 циклов, по меньшей мере, 7 циклов, по меньшей мере, 8 циклов, по меньшей мере, 9 циклов, по меньшей мере, 10 циклов, по меньшей мере, 11 циклов, или, по меньшей мере, 12 циклов. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в течение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или 24 циклов.[0346] In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered in a cycle where the cycle is repeated at least once. In some embodiments, an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered for at least 2 cycles, at least 3 cycles, at least 4 cycles, at least 5 cycles, at least 6 cycles , at least 7 cycles, at least 8 cycles, at least 9 cycles, at least 10 cycles, at least 11 cycles, or at least 12 cycles. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered for 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23 or 24 cycles.

[0347] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится шесть раз в день, пять раз в день, четыре раза в день, три раза в день, два раза в день, один раз в день, через день, каждые три дня, дважды в неделю, один раз в неделю или только один раз до или после начала введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится во множестве доз через регулярные интервалы до, в ходе, в течение курса и/или после периода введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в одной или нескольких дозах через регулярные интервалы до введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в одной или нескольких дозах через регулярные интервалы после введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, одно или несколько дозирований иммуномодуляторного соединения, например, леналидомид, могут осуществляться одновременно с введением дозы Т-клеточной терапии.[0347] In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered six times a day, five times a day, four times a day, three times a day, twice a day, once a day, every other day, every three days, twice a week, once a week, or only once before or after the start of T-cell therapy. In some embodiments, the immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is administered at multiple doses at regular intervals before, during, during, and/or after the T cell therapy administration period. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered at one or more doses at regular intervals prior to the administration of T cell therapy. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered at one or more doses at regular intervals following the administration of T cell therapy. In some embodiments, one or more dosages of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, may be administered concurrently with a dose of T cell therapy.

[0348] В некоторых вариантах осуществления, доза, частота, продолжительность, распределение по времени и/или порядок введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, определяется, на основе конкретных порогов или критериев, результатов стадии скрининга и/или оценки результатов лечения, описанных в настоящем документе, например, описанных в Разделе III настоящего документа. [0348] In some embodiments, the dose, frequency, duration, timing, and/or order of administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is determined based on specific thresholds or criteria, the results of the screening step and/or evaluation of treatment outcomes described in herein, such as those described in Section III of this document.

[0349] В некоторых вариантах осуществления, способ включает введение клеточной терапии субъекту, которому ранее вводили терапевтически эффективное количество иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится субъекту до введения дозы клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, лечение иммуномодуляторным соединением происходит в тот же момент времени, что и введение дозы клеток. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится после введения дозы клеток. [0349] In some embodiments, the method includes administering the cell therapy to a subject who has previously received a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered to the subject prior to administration of a dose of cells expressing the recombinant receptor in the subject. In some embodiments, the treatment with the immunomodulatory compound occurs at the same time as the administration of the cell dose. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered following a dose of cells.

[0350] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится ежедневно в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится дважды в день в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится три раза день в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится через день в течение 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 дня или более.[0350] In some embodiments, an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered daily for 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 days, or more. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered twice a day for 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 days or more . In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered three times a day for 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 days or more . In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered every other day for 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 days or more.

[0351] В некоторых вариантах осуществления способов, предлагаемых в настоящем документе, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, и Т-клеточная терапия вводятся одновременно или почти одновременно.[0351] In some embodiments of the methods provided herein, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, and T cell therapy are administered simultaneously or nearly simultaneously.

[0352] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится при дозе от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно. В некоторых вариантах осуществления, это количество представляет собой ежедневно вводимое количество иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.[0352] In some embodiments, the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered at a dose of from or about 0.1 mg to about 100 mg, from or about 0.1 mg to 50 mg, from or about 0.1 mg to 25 mg, from or about 0.1 mg to 10 mg, from or about 0.1 mg to 5 mg, from or about 0.1 mg to 1 mg, from or about 1 mg to 100 mg , from or about 1 mg to 50 mg, from or about 1 mg to 25 mg, from or about 1 mg to 10 mg, from or about 1 mg to 5 mg, from or about 5 mg to 100 mg , from or about 5 mg to 50 mg, from or about 5 mg to 25 mg, from or about 5 mg to 10 mg, from or about 10 mg to 100 mg, from or about 10 mg to 50 mg , from or from 10 mg to 25 mg, from or from about 25 mg to 100 mg, from or from about 25 mg to 50 mg, or from or from about 50 mg to 100 mg, each value inclusive. In some embodiments, this amount is a daily administered amount of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide.

[0353] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится при дозе примерно от 1 мг примерно до 20 мг, например, примерно от 1 мг примерно до 10 мг, примерно от 2,5 мг примерно до 7,5 мг, примерно от 5 мг примерно до 15 мг, например, примерно 5 мг, 10 мг, 15 мг или 20 мг. В некоторых вариантах осуществления, леналидомид вводится при дозе примерно от 10 мкг/кг до 5 мг/кг, например, примерно 100 мкг/кг примерно до 2 мг/кг, примерно 200 мкг/кг примерно до 1 мг/кг, примерно 400 мкг/кг примерно до 600 мкг/кг, например, примерно 500 мкг/кг. В некоторых вариантах осуществления, это количество представляет собой ежедневно вводимое количество иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.[0353] In some embodiments, the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered at a dose of about 1 mg to about 20 mg, e.g., about 1 mg to about 10 mg, about 2.5 mg to about 7.5 mg, about 5 mg to about 15 mg, e.g., about 5 mg, 10 mg , 15 mg or 20 mg. In some embodiments, lenalidomide is administered at a dose of from about 10 µg/kg to 5 mg/kg, for example, about 100 µg/kg to about 2 mg/kg, about 200 µg/kg to about 1 mg/kg, about 400 µg /kg to about 600 µg/kg, for example, about 500 µg/kg. In some embodiments, this amount is a daily administered amount of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide.

[0354] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится при общем ежедневном дозируемом количестве, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день. В некоторых вариантах осуществления, доза леналидомида составляет или примерно составляет 25 мг в день. В конкретных вариантах осуществления, доза леналидомида составляет или примерно составляет 10 мг в день. [0354] In some embodiments, an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered at a total daily dosage amount of at least, or about, at least 0.1 mg per day, 0.5 mg per day, 1.0 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 10 mg per day, 25 mg per day, 50 mg per day, or 100 mg per day. In some embodiments, the dose of lenalidomide is or about 25 mg per day. In specific embodiments, the dose of lenalidomide is or about 10 mg per day.

[0355] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше 25 мг. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день, 15 мг в день и меньше 25 мг в день.[0355] In some embodiments, the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered in an amount greater than or about greater than 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg, 15 mg, and less than 25 mg. In some embodiments, the immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered in an amount greater than or about greater than 1 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 7.5 mg per day, 10 mg per day, 15 mg per day and less than 25 mg per day.

[0356] В любом из рассмотренных выше вариантов осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может вводиться перорально. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится в виде таблетки или капсулы.[0356] In any of the above embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, may be administered orally. In some embodiments, the immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered as a tablet or capsule.

[0357] В некоторых вариантах осуществления, дозировки, такие как ежедневная дозировка, вводятся в одной или нескольких разделенных дозах, например, в 2, 3 или 4 дозах, или в одном препарате. Иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может вводиться отдельно в присутствии фармацевтически приемлемого носителя или в присутствии других терапевтических агентов. [0357] In some embodiments, dosages, such as a daily dosage, are administered in one or more divided doses, such as 2, 3, or 4 doses, or in a single preparation. An immunomodulatory compound, such as lenalidomide, may be administered alone in the presence of a pharmaceutically acceptable carrier or in the presence of other therapeutic agents.

[0358] Понятно, что можно использовать более высокие или более низкие дозы иммуномодуляторного соединения, например, в зависимости от конкретного агента и способа введения. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение может вводиться отдельно или в форме фармацевтической композиции, где соединение присутствует в добавке или смеси с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или разбавителями. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение может вводиться либо системно, либо местным образом в орган или ткань, которая должна лечиться. Иллюстративные способы введения включают, но, не ограничиваясь этим, наружный, инъекцию (такую как подкожная, внутримышечная, интрадермальная, внутрибрюшинная, внутриопухолевая и внутривенная), пероральный, сублингвальный, ректальный, трансдермальный, интраназальный, вагинальный и ингаляционный способы. В некоторых вариантах осуществления, способ введения представляет собой пероральный, парентеральный, ректальный, назальный, наружный или окулярный способ, или ингаляцию. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится перорально. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение вводится перорально в твердых дозированных формах, таких как капсулы, таблетки и порошки, или в жидких дозированных формах, таких как эликсиры, сиропы и суспензии.[0358] It is understood that higher or lower doses of the immunomodulatory compound may be used, for example, depending on the particular agent and route of administration. In some embodiments, the immunomodulatory compound may be administered alone or in the form of a pharmaceutical composition, wherein the compound is present in an additive or admixture with one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or diluents. In some embodiments, the immunomodulatory compound may be administered either systemically or locally to the organ or tissue to be treated. Exemplary routes of administration include, but are not limited to, external, injection (such as subcutaneous, intramuscular, intradermal, intraperitoneal, intratumoral, and intravenous), oral, sublingual, rectal, transdermal, intranasal, vaginal, and inhalation routes. In some embodiments, the route of administration is oral, parenteral, rectal, nasal, topical, or ocular, or inhalation. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered orally. In some embodiments, the immunomodulatory compound is administered orally in solid dosage forms such as capsules, tablets and powders, or in liquid dosage forms such as elixirs, syrups and suspensions.

[0359] После улучшения состояния пациента доза может регулироваться для превентивного или поддерживающего лечения. Например, доза или частота введения, или как то, так и другое, могут уменьшаться в зависимости от симптомов, до уровня, при котором поддерживается желаемое терапевтическое или профилактическое воздействие. Если симптомы облегчаются до соответствующего уровня, лечение может прекратиться. Однако пациенты могут требовать периодического лечения на долговременной основе при любом возобновлении симптомов. Пациенты могут также потребовать хронического лечения на долговременной основе.[0359] After improvement in the patient's condition, the dose may be adjusted for preventive or maintenance treatment. For example, the dose or frequency of administration, or both, may be reduced depending on the symptoms, to a level at which the desired therapeutic or prophylactic effect is maintained. If symptoms improve to an appropriate level, treatment may be discontinued. However, patients may require intermittent treatment on a long-term basis for any recurrence of symptoms. Patients may also require chronic treatment on a long-term basis.

C. Противолимфоцитарное лечениеC. Antilymphocyte treatment

[0360] В некоторых аспектах, предлагаемые способы могут дополнительно включать введение одного или нескольких видов противолимфоцитарной терапии, например, до или одновременно с началом введения Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарная терапия включает введение фосфамида, такого как циклофосфамид. В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарная терапия может включать введение флударабина.[0360] In some aspects, the proposed methods may further include the introduction of one or more types of antilymphocyte therapy, for example, before or simultaneously with the start of the introduction of T-cell therapy. In some embodiments, the anti-lymphocyte therapy comprises the administration of a phosphamide, such as cyclophosphamide. In some embodiments, the anti-lymphocyte therapy may include the administration of fludarabine.

[0361] В некоторых аспектах, предварительная подготовка субъектов с помощью с иммунодеплеционной (например, противолимфоцитарной) терапии может улучшить воздействия адоптивной клеточной терапии (ACT). Предварительная подготовка с помощью противолимфоцитарных агентов, включающая сочетания циклоспорина и флударабина, является эффективной при улучшении эффективности переносимых противоопухолевых эффекторных лимфоцитов (TIL) при клеточной терапии, включая улучшение реакции и/или персистентности переносимых клеток. Смотри, например, Dudley et al., Science, 298, 850-54 (2002); Rosenberg et al., Clin Cancer Res, 17(13):4550-4557 (2011). Подобным же образом, в контексте Т-лимфоцитов CAR+, несколько исследований включали противолимфоцитарные агенты, чаще всего, циклофосфамид, флударабин, бендамустин или их сочетания, иногда сопровождавшиеся низкими дозами облучения. Смотри Han et al. Journal of Hematology & Oncology, 6:47 (2013); Kochenderfer et al., Blood, 119: 2709-2720 (2012); Kalos et al., Sci Transl Med, 3(95):95ra73 (2011); Clinical Trial Study Record Nos.: NCT02315612; NCT01822652. [0361] In some aspects, pre-treatment of subjects with immunodepletion (eg, anti-lymphocyte) therapy may improve the effects of adoptive cell therapy (ACT). Pretreatment with anti-lymphocyte agents, including combinations of cyclosporine and fludarabine, is effective in improving the efficacy of tolerated antitumor effector lymphocytes (TILs) in cell therapy, including improving the response and/or persistence of transferred cells. See, for example, Dudley et al., Science, 298, 850-54 (2002); Rosenberg et al., Clin Cancer Res, 17(13):4550-4557 (2011). Similarly, in the context of CAR+ T lymphocytes, several studies have included anti-lymphocyte agents, most commonly cyclophosphamide, fludarabine, bendamustine, or combinations thereof, sometimes accompanied by low doses of radiation. See Han et al. Journal of Hematology & Oncology, 6:47 (2013); Kochenderfer et al., Blood, 119: 2709-2720 (2012); Kalos et al., Sci Transl Med, 3(95):95ra73 (2011); Clinical Trial Study Record No.: NCT02315612; NCT01822652.

[0362] Такая предварительная подготовка может осуществляться с целью уменьшения риска появления одного или нескольких из различных результатов, которые могли бы уменьшить эффективность терапии. Они включают явление известное как “сток цитокинов”, при котором Т-лимфоциты, B-лимфоциты, NK-клетки конкурируют с TIL за гомеостатические и активирующие цитокины, такие как IL-2, IL-7 и/или IL-15; подавление TIL регуляторными Т-лимфоцитами, NK-клетками или другими клетками иммунной системы; воздействие отрицательных регуляторов на микроокружение опухоли. Muranski et al., Nat Clin Pract Oncol. December; 3(12): 668-681 (2006). [0362] Such pre-training may be carried out in order to reduce the risk of one or more of the various results that could reduce the effectiveness of therapy. These include a phenomenon known as "cytokine sink" in which T-lymphocytes, B-lymphocytes, NK cells compete with TIL for homeostatic and activating cytokines such as IL-2, IL-7 and/or IL-15; suppression of TIL by regulatory T lymphocytes, NK cells, or other cells of the immune system; impact of negative regulators on the tumor microenvironment. Muranski et al., Nat Clin Pract Oncol. December; 3(12): 668-681 (2006).

[0363] Таким образом в некоторых вариантах осуществления, предлагаемый способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной терапии субъекту. В некоторых вариантах осуществления, способ включает введение противолимфоцитарной терапии субъекту до введения дозы клеток. В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарная терапия включает химиотерапевтический агент, такой как флударабин и/или циклофосфамид. В некоторых вариантах осуществления, введение клеток и/или противолимфоцитарной терапии осуществляют посредством экстракорпоральной доставки.[0363] Thus, in some embodiments, the proposed method further comprises administering anti-lymphocyte therapy to the subject. In some embodiments, the method includes administering an anti-lymphocyte therapy to a subject prior to administration of a dose of cells. In some embodiments, the anti-lymphocyte therapy comprises a chemotherapeutic agent such as fludarabine and/or cyclophosphamide. In some embodiments, administration of cells and/or anti-lymphocyte therapy is via in vitro delivery.

[0364] В некоторых вариантах осуществления, способы включают введение агента для предварительной подготовки, такого как противолимфоцитарный или химиотерапевтический агент, такой как циклофосфамид, флударабин или их сочетания, субъекту до введения дозы клеток. Например, субъекту можно вводить агент для предварительной подготовки, по меньшей мере, за 2 дня, например, по меньшей мере, за 3, 4, 5, 6, или 7 дней до первого или последующего дозирования. В некоторых вариантах осуществления, субъекту вводят агент для предварительной подготовки не более чем за 7 дней, например, не более чем 6, 5, 4, 3 или 2 дня до введения дозы клеток.[0364] In some embodiments, the methods include administering a pretreatment agent, such as an anti-lymphocyte or chemotherapeutic agent, such as cyclophosphamide, fludarabine, or combinations thereof, to the subject prior to administration of the cell dose. For example, the pretreatment agent may be administered to the subject at least 2 days, such as at least 3, 4, 5, 6, or 7 days prior to the first or subsequent dosing. In some embodiments, the pretreatment agent is administered to the subject no more than 7 days, such as no more than 6, 5, 4, 3, or 2 days prior to cell dosing.

[0365] В некоторых вариантах осуществления, субъект предварительно подготавливается с помощью циклофосфамида при дозе, находящейся в пределах между или примерно между 20 мг/кг и 100 мг/кг, например, находящейся в пределах между или примерно между 40 мг/кг и 80 мг/кг. В некоторых аспектах, субъект предварительно подготавливается с помощью (или примерно) 60 мг/кг циклофосфамида. В некоторых вариантах осуществления, флударабин может вводиться в одной дозе или может вводиться во множестве доз, например, получаемых ежедневно, через день или каждые три дня. В некоторых вариантах осуществления, циклофосфамид вводится один раз в день в течение одного или двух дней.[0365] In some embodiments, the subject is pretreated with cyclophosphamide at a dose between or about 20 mg/kg and 100 mg/kg, such as between or about 40 mg/kg and 80 mg /kg. In some aspects, the subject is pretreated with (or about) 60 mg/kg cyclophosphamide. In some embodiments, fludarabine may be administered in a single dose or may be administered in multiple doses, such as daily, every other day, or every three days. In some embodiments, the implementation, cyclophosphamide is administered once a day for one or two days.

[0366] В некоторых вариантах осуществления, когда противолимфоцитарный агент содержит флударабин, субъекту вводится флударабин при дозе, находящейся в пределах между или примерно между 1 мг/м2 и 100 мг/м2, например, находящейся в пределах между или примерно между 10 мг/м2 и 75 мг/м2, 15 мг/м2 и 50 мг/м2, 20 мг/м2 и 30 мг/м2, или 24 мг/м2 и 26 мг/м2. В некоторых случаях, субъекту вводится 25 мг/м2 флударабина. В некоторых вариантах осуществления, флударабин может вводиться в одной дозе или может вводиться во множестве доз, например, получаемых ежедневно, через день или каждые три дня. В некоторых вариантах осуществления, флударабин вводится ежедневно, например, в течение 1-5 дней, например, в течение 3-5 дней.[0366] In some embodiments, when the antilymphocyte agent comprises fludarabine, fludarabine is administered to the subject at a dose between or about 1 mg/m 2 and 100 mg/m 2 , such as between or about 10 mg / m 2 and 75 mg / m 2 , 15 mg / m 2 and 50 mg / m 2 , 20 mg / m 2 and 30 mg / m 2 , or 24 mg / m 2 and 26 mg / m 2 . In some cases, the subject is administered 25 mg/m 2 fludarabine. In some embodiments, fludarabine may be administered in a single dose or may be administered in multiple doses, such as daily, every other day, or every three days. In some embodiments, fludarabine is administered daily, eg for 1-5 days, eg for 3-5 days.

[0367] В некоторых вариантах осуществления, противолимфоцитарный агент содержит сочетание агентов, такое как сочетание циклофосфамида и флударабина. Таким образом, сочетание агентов может содержать циклофосфамид при любом временном графике дозирования или введения, например, как описано выше, и флударабин при любом временном графике дозирования или введения, например, как описано выше. Например, в некоторых аспектах, перед дозированием клеток субъекту вводится 60 мг/кг (~2 г/м2) циклофосфамида и 3-5 доз 25 мг/м2 флударабина.[0367] In some embodiments, the anti-lymphocyte agent comprises a combination of agents, such as a combination of cyclophosphamide and fludarabine. Thus, the combination of agents may contain cyclophosphamide at any dosing or administration schedule, eg, as described above, and fludarabine at any dosage or administration schedule, eg, as described above. For example, in some aspects, prior to cell dosing, the subject is administered 60 mg/kg (~2 g/m 2 ) cyclophosphamide and 3-5 doses of 25 mg/m 2 fludarabine.

[0368] В одном из иллюстративных режимов дозирования перед получением первой дозы субъект получает иммуномодуляторное соединение за 1 день до введения клеток и противолимфоцитарную химиотерапию из циклофосфамида и флударабина (CY/FLU) для предварительной подготовки, которую вводят, по меньшей мере, за два дня до первой дозы CAR-экспрессирующих клеток и, как правило, не более чем за 7 дней до введения клеток. В другом иллюстративном режиме дозирования субъекты получают иммуномодуляторное соединение одновременно с введением клеток, например, в тот же день. Еще в одном иллюстративном режиме дозирования субъекты получают иммуномодуляторное соединение через несколько дней после введения клеток, например, через 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или более чем через 14 дней. В некоторых случаях, например, циклофосфамид дают через 24-27 дней после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. После предварительной подготовки субъектам вводят дозу CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, как описано выше.[0368] In one exemplary dosing regimen, before receiving the first dose, the subject receives an immunomodulatory compound 1 day prior to cell administration and antilymphocyte chemotherapy of cyclophosphamide and fludarabine (CY/FLU) for pretreatment, which is administered at least two days prior to the first dose of CAR-expressing cells and, as a rule, no more than 7 days before the introduction of cells. In another exemplary dosing regimen, subjects receive the immunomodulatory compound at the same time as the cells are administered, eg, on the same day. In yet another exemplary dosing regimen, subjects receive the immunomodulatory compound several days after cell administration, eg, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, or more than 14 days. In some cases, for example, cyclophosphamide is given 24-27 days after the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide. After pretreatment, subjects are dosed with CAR-expressing T-lymphocytes as described above.

[0369] В некоторых вариантах осуществления, введение агента для предварительной подготовки перед вливанием дозы клеток улучшает результат лечения. Например, в некоторых аспектах, предварительная подготовка улучшает эффективность лечения с помощью дозы или увеличивает персистентность клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, таких как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, предварительная подготовка увеличивает выживаемость после заболевания, такую как процент субъектов, которые выживают и не демонстрируют минимального остаточного или молекулярно детектируемого заболевания через заданный период времени после дозирования клеток. В некоторых вариантах осуществления, увеличивается время медианной выживаемости после заболевания.[0369] In some embodiments, administration of a pretreatment agent prior to cell dose infusion improves treatment outcome. For example, in some aspects, the pretreatment improves the efficacy of treatment with a dose or increases the persistence of cells expressing the recombinant receptor (eg, CAR-expressing cells, such as CAR-expressing T lymphocytes) in a subject. In some embodiments, pretreatment increases disease survival, such as the percentage of subjects who survive and do not exhibit minimal residual or molecularly detectable disease after a given period of time after cell dosing. In some embodiments, the median survival time after illness is increased.

[0370] После введения клеток субъекту (например, человеку), биологическая активность популяций генно-инженерных клеток в некоторых аспектах измеряется с помощью любого из многочисленных известных способов. Параметры оценки включают специфичное связывание генно-инженерных или природных Т-лимфоцитов или других иммунных клеток с антигеном, in vivo, например, посредством получения изображений, или ex vivo, например, с помощью ELISA или проточной цитометрии. В определенных вариантах осуществления, способность генно-инженерных клеток разрушать целевые клетки можно измерить с использованием любого соответствующего способа известного в данной области, такого как анализы цитотоксичности, описанные, например, в Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009) и Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). В определенных вариантах осуществления, биологическая активность клеток может также измеряться по анализу экспрессирования и/или секретирования определенных цитокинов, таких как CD107a, IFNγ, IL-2 и TNF. В некоторых аспектах биологическая активность измеряется посредством оценки клинических результатов лечения, таких как уменьшение массы или нагрузки опухоли. В некоторых аспектах оценивают токсические результаты лечения, персистентность и/или размножение клеток, и/или присутствие или отсутствие иммунной реакции хозяина.[0370] After the cells are introduced into a subject (eg, a human), the biological activity of populations of genetically engineered cells, in some aspects, is measured using any of the numerous known methods. Evaluation parameters include specific binding of engineered or natural T-lymphocytes or other immune cells to an antigen, in vivo, eg, by imaging, or ex vivo, eg, by ELISA or flow cytometry. In certain embodiments, the ability of engineered cells to destroy target cells can be measured using any appropriate method known in the art, such as cytotoxicity assays, as described, for example, in Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689 -702 (2009) and Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). In certain embodiments, the biological activity of cells can also be measured by assaying the expression and/or secretion of certain cytokines such as CD107a, IFNγ, IL-2, and TNF. In some aspects, biological activity is measured by assessing clinical outcomes of treatment, such as reduction in tumor mass or burden. In some aspects, the toxic effects of the treatment, the persistence and/or proliferation of cells, and/or the presence or absence of a host immune response are assessed.

[0371] В некоторых вариантах осуществления, введение агента для предварительной подготовки перед вливанием дозы клеток улучшает результат лечения, например, посредством улучшения эффективности лечения с помощью этой дозы, или повышает персистентность клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, таких как CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) у субъекта. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления, доза агента для предварительной подготовки, которую дают в способе, который представляет собой сочетанную терапию с иммуномодуляторным соединением и клеточной терапией, выше, чем доза, которую дают в способе без иммуномодуляторного соединения. [0371] In some embodiments, administration of a pretreatment agent prior to cell dose infusion improves treatment outcome, e.g., by improving treatment efficacy with that dose, or increases the persistence of cells expressing the recombinant receptor (e.g., CAR-expressing cells, such as CAR-expressing T-lymphocytes) in a subject. Therefore, in some embodiments, the dose of the pretreatment agent given in a method that is combination therapy with an immunomodulatory compound and cell therapy is higher than the dose given in a method without an immunomodulatory compound.

II. Т-клеточная терапия и генно-инженерные клетки II. T-cell therapy and genetically engineered cells

[0372] В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия для применения вместе с предлагаемыми способами сочетанной терапии включает введение генно-инженерных клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, сконструированных для распознавания и/или специфичного связывания молекул, ассоциируемых с заболеванием или состоянием, и они дают в результате реакцию, такую как иммунная реакция, против таких молекул при связывании с такими молекулами. Рецепторы могут включать химерные рецепторы, например, химерные рецепторы антигенов (CAR), и другие трансгенные рецепторы антигенов, включая трансгенные рецепторы Т-лимфоцитов (TCR). [0372] In some embodiments, T-cell therapy for use in conjunction with the proposed methods of combination therapy includes the introduction of genetically engineered cells expressing recombinant receptors designed to recognize and/or specifically bind molecules associated with a disease or condition, and they give resulting in a reaction, such as an immune reaction, against such molecules upon binding to such molecules. Receptors may include chimeric receptors, such as chimeric antigen receptors (CARs), and other transgenic antigen receptors, including transgenic T-lymphocyte receptors (TCRs).

[0373] В некоторых вариантах осуществления, клетки включают генно-инженерные клетки или получаются из них таким образом, чтобы они содержали генно-инженерный рецептор, например, генно-инженерный рецептор антигена, такой как химерный рецептор антигена (CAR) или рецептор Т-лимфоцитов (TCR). Также предлагаются популяции таких клеток, композиции, содержащие такие клетки и/или обогащенные такими клетками, например, в которых клетки определенного типа, такие как Т-лимфоциты или клетки CD8+ или CD4+, являются обогащенными или выбранными. Среди композиций находятся фармацевтические композиции и препараты для введения, например, для адоптивной клеточной терапии. Также предлагаются терапевтические способы введения клеток и композиций субъектам, например, пациентам.[0373] In some embodiments, cells comprise or are derived from engineered cells such that they contain a genetically engineered receptor, such as a genetically engineered antigen receptor, such as a chimeric antigen receptor (CAR) or a T-lymphocyte receptor (TCR). Also provided are populations of such cells, compositions containing such cells and/or enriched with such cells, for example, in which cells of a certain type, such as T-lymphocytes or CD8+ or CD4+ cells, are enriched or selected. Among the compositions are pharmaceutical compositions and preparations for administration, for example, for adoptive cell therapy. Also provided are therapeutic methods for administering cells and compositions to subjects, such as patients.

[0374] Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, клетки содержат одну или несколько нуклеиновых кислот, введенных посредством генной инженерии, и при этом экспрессируют рекомбинантные или генно-инженерные продукты таких нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах осуществления, перенос гена осуществляется посредством сначала стимулирования клеток, например, посредством объединения их со стимулом, который индуцирует реакцию, такую как пролиферация, выживаемость и/или активирование, например, как измерено с помощью экспрессирования цитокина или маркера активации, с последующим трансдуцированием активированных клеток и размножением в культуре до количеств, достаточных для клинических применений. [0374] Thus, in some embodiments, cells contain one or more genetically engineered nucleic acids and express recombinant or genetically engineered products of such nucleic acids. In some embodiments, gene transfer is accomplished by first stimulating cells, e.g., by combining them with a stimulus that induces a response, such as proliferation, survival, and/or activation, e.g., as measured by expression of a cytokine or an activation marker, followed by transduction activated cells and propagation in culture to quantities sufficient for clinical applications.

A. Рекомбинантные рецепторыA. Recombinant receptors

[0375] Клетки, как правило, экспрессируют рекомбинантные рецепторы, такие как рецепторы антигена, включая функциональные рецепторы не-TCR антигена, например, химерные рецепторы антигена (CAR), и другие антиген-связывающие рецепторы, такие как трансгенные рецепторы Т-лимфоцитов (TCR). Также среди рецепторов имеются другие химерные рецепторы. [0375] Cells typically express recombinant receptors, such as antigen receptors, including functional non-TCR antigen receptors, such as chimeric antigen receptors (CAR), and other antigen-binding receptors, such as transgenic T-lymphocyte receptors (TCR ). Also among the receptors are other chimeric receptors.

1. Химерные рецепторы антигена (CAR)1. Chimeric antigen receptors (CARs)

[0376] В некоторых вариантах осуществления, генно-инженерные клетки, такие как Т-лимфоциты, используемые в предлагаемых вариантах осуществления, экспрессируют CAR со специфичностью к конкретному антигену (или маркеру или лиганду), такому как антиген, экспрессируемый на поверхности конкретного типа клеток. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой полипептид. В некоторых вариантах осуществления, он представляет собой углевод или другую молекулу. В некоторых вариантах осуществления, антиген селективно экспрессируется или сверхэкспрессируется на клетках заболевания или состояния, например, на клетках опухоли или патогенных клетках, по сравнению с нормальными или нецелевыми клетками или тканями. В других вариантах осуществления, антиген экспрессируется на нормальных клетках и/или экспрессируется на генно-инженерных клетках.[0376] In some embodiments, engineered cells, such as T-lymphocytes used in the proposed embodiments, express CAR with specificity for a particular antigen (or marker or ligand), such as an antigen expressed on the surface of a particular cell type. In some embodiments, the antigen is a polypeptide. In some embodiments, it is a carbohydrate or other molecule. In some embodiments, the antigen is selectively expressed or overexpressed on cells of the disease or condition, such as tumor cells or pathogenic cells, over normal or non-target cells or tissues. In other embodiments, the antigen is expressed on normal cells and/or is expressed on genetically engineered cells.

[0377] В конкретных вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор, такой как химерный рецептор, содержит внутриклеточную сигнальную область, которая содержит цитоплазматический сигнальный домен или область (также взаимозаменяемо называемую внутриклеточным сигнальным доменом или областью), такую как цитоплазматическая (внутриклеточная) область способная индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, например, цитоплазматический сигнальный домен или область компонента рецептора Т-лимфоцита (TCR) (например, цитоплазматический сигнальный домен или область цепи зета цепи CD3-зета (CD3ζ) или функциональный вариант или ее сигнальную часть) и/или которая содержит иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).[0377] In specific embodiments, the recombinant receptor, such as a chimeric receptor, contains an intracellular signaling region that contains a cytoplasmic signaling domain or a region (also interchangeably referred to as an intracellular signaling domain or region), such as a cytoplasmic (intracellular) region capable of inducing a primary activation in a T-lymphocyte, e.g., a cytoplasmic signaling domain or a T-lymphocyte receptor (TCR) component region (e.g., a cytoplasmic signaling domain or a CD3-zeta (CD3ζ) zeta chain region or a functional variant or a signaling portion thereof) and/or which contains an immunoreceptor tyrosine activating motif (ITAM).

[0378] В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор дополнительно содержит внеклеточный лиганд-связывающий домен, который специфично связывается с лигандом антигена (например, антигена). В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор представляет собой CAR, который содержит внеклеточный антиген-распознающий домен, который специфично связывается с антигеном. В некоторых вариантах осуществления, лиганд, такой как антиген, представляет собой белок, экспрессируемый на поверхности клеток. [0378] In some embodiments, the chimeric receptor further comprises an extracellular ligand-binding domain that specifically binds to an antigen (eg, antigen) ligand. In some embodiments, the chimeric receptor is a CAR that contains an extracellular antigen recognition domain that specifically binds to an antigen. In some embodiments, the ligand, such as an antigen, is a protein expressed on the surface of cells.

[0379] В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой TCR-подобный CAR и антиген представляет собой процессированный пептидный антиген, такой как пептидный антиген внутриклеточного белка, который, подобно TCR, распознается на поверхности клетки в контексте молекулы главного комплекса гистосовместимости (MHC). Как правило, CAR содержащий антитело или антиген-связывающий фрагмент, который демонстрирует TCR-подобную специфичность, направленную против комплексов пептид-MHC, также может упоминаться как TCR-подобный CAR. В некоторых вариантах осуществления, внеклеточный антиген-связывающий домен специфичный к комплексу MHC-пептид TCR-подобного CAR связывается с одним или несколькими внутриклеточными сигнальными компонентами, в некоторых аспектах посредством линкеров и/или трансмембранного домена (доменов). В некоторых вариантах осуществления, такие молекулы, как правило, могут воспроизводить или примерно воспроизводить сигнал через природный рецептор антигена, такой как TCR, и необязательно, сигнал через такой рецептор в сочетании с костимуляторным рецептором.[0379] In some embodiments, the CAR is a TCR-like CAR and the antigen is a truncated peptide antigen, such as an intracellular protein peptide antigen that, like TCR, is recognized on the cell surface in the context of a major histocompatibility complex (MHC) molecule. Generally, a CAR containing an antibody or antigen-binding fragment that exhibits TCR-like specificity against peptide-MHC complexes may also be referred to as a TCR-like CAR. In some embodiments, the extracellular antigen-binding domain specific for the MHC-peptide TCR-like CAR complex is associated with one or more intracellular signaling components, in some aspects via linkers and/or transmembrane domain(s). In some embodiments, such molecules generally can signal, or approximately reproduce, a signal through a natural antigen receptor, such as a TCR, and optionally, a signal through such a receptor in combination with a co-stimulatory receptor.

[0380] Иллюстративные рецепторы антигенов, включая CAR, и способы генной инженерии и введения таких рецепторов в клетки, включают способы, описанные, например, в публикациях Международных заявок на патенты номера WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/090320, WO2016/094304, WO2017/025038, WO2017/173256, публикациях заявок на патент США номера US2002131960, US2013287748, US20130149337, в патентах США №№ 6451995, 7446190, 8252592, 8339645, 8398282, 7446179, 6410319, 7070995, 7265209, 7354762, 7446191, 8324353, 8479118 и 9765342 и в заявке на Европейский патент номер EP2537416, и/или способы, описанные Sadelain et al., Cancer Discov., 3(4): 388-398 (2013); Davila et al., PLoS ONE 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012). В некоторых аспектах, рецепторы антигенов включают CAR, как описано в патенте США № 7446190, и те, которые описаны в публикации Международной заявки на патент № WO/2014055668 A1. Примеры CAR включают CAR, как описано в любой из рассмотренных выше публикаций, таких как WO2014031687, патент США №№ 8339645, патент США № 7446179, патент США № 2013/0149337, патент США № 7446190, патент США № 8389282, Kochenderfer et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al., J. Immunother. 35(9): 689-701 (2012); и Brentjens et al., Sci Transl Med. 5(177) (2013). Смотри также WO2014031687, патент США № 8339645, патент США № 7446179, патент США № 2013/0149337, патент США № 7446190 и патент США № 8389282. Химерные рецепторы, такие как CAR, как правило, содержат внеклеточный антиген-связывающий домен, такие как часть молекулы антитела, как правило, вариабельную область тяжелой цепи (VH) и/или вариабельную область легкой цепи (VL) антитела, например, фрагмент scFv антитела.[0380] Exemplary antigen receptors, including CARs, and methods for genetically engineering and introducing such receptors into cells include those described, for example, in International Patent Applications Nos. /071154, WO2013/123061, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/090320, WO2016/094304, WO2017/025038, WO2017/173256, публикациях заявок на патент США номера US2002131960, US2013287748, US20130149337, в патентах США №№ 6451995, 7446190, 8252592, 8339645, 8398282, 7446179, 6410319, 7070995, 7265209, 7354762, 7446191, 8324353, 8479118 и 9765342 и в заявке на Европейский патент номер EP2537416, и/или способы, описанные Sadelain et al., Cancer Discov., 3 (4): 388-398 (2013); Davila et al., PLoS ONE 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012). In some aspects, antigen receptors include CARs as described in US Pat. No. 7,446,190 and those described in International Patent Application Publication No. WO/2014055668 A1. Examples of CARs include CARs as described in any of the publications discussed above such as WO2014031687, US Patent No. 8339645, US Patent No. 7446179, US Patent No. 2013/0149337, US Patent No. 7446190, US Patent No. 8389282, Kochenderfer et al. , Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al., J. Immunother. 35(9): 689-701 (2012); and Brentjens et al., Sci Transl Med. 5(177) (2013). See also WO2014031687, US Patent No. 8339645, US Patent No. 7446179, US Patent No. 2013/0149337, US Patent No. 7446190 and US Patent No. 8389282. Chimeric receptors, such as CAR, typically contain an extracellular antigen-binding domain, such as part of an antibody molecule, typically the heavy chain variable region (V H ) and/or the light chain variable region (V L ) of an antibody, eg, a fragment of an scFv antibody.

[0381] В некоторых вариантах осуществления, CAR конструируют со специфичностью к конкретному антигену (или маркеру или лиганду), такому как антиген, экспрессируемый в конкретном типе клеток, на который должна нацеливаться адоптивная терапия, например, маркер ракового заболевания и/или антиген, предназначенный для индуцирования демпфирующей реакции, такой как антиген, экспрессируемый на нормальном или неболезненном типе клеток. Таким образом, CAR, как правило, содержит в своей внеклеточной части одну или несколько антиген-связывающих молекул, таких как один или несколько антиген-связывающих фрагментов, доменов или частей, или один или несколько вариабельных доменов антител и/или молекулы антитела. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антиген-связывающую часть или части молекулы антитела, такую как одноцепочечный фрагмент антитела (scFv), полученный из вариабельных тяжелых (VH) и вариабельных легких (VL) цепей моноклонального антитела (mAb), или однодоменного антитела (sdAb), такого как sdFv, нанотело, VHH и VNAR. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером. [0381] In some embodiments, CARs are designed with specificity for a particular antigen (or marker or ligand), such as an antigen expressed in a particular cell type to which adoptive therapy is to be targeted, for example, a cancer marker and/or an antigen targeted to induce a damping response, such as an antigen expressed on a normal or non-diseased cell type. Thus, a CAR typically contains in its extracellular portion one or more antigen-binding molecules, such as one or more antigen-binding fragments, domains, or moieties, or one or more antibody variable domains and/or antibody molecules. In some embodiments, the CAR comprises an antigen-binding antibody moiety or moieties, such as a single chain antibody fragment (scFv) derived from the variable heavy (V H ) and variable light (V L ) chains of a monoclonal antibody (mAb), or a single domain antibody. (sdAb) such as sdFv, nanobody, V H H and V NAR. In some embodiments, the antigen-binding fragment contains the variable regions of the antibody connected by a flexible linker.

[0382] Среди антиген-связывающих доменов, включенных в CAR, имеются фрагменты антитела. “Фрагмент антитела” или “антиген-связывающий фрагмент” относится к молекуле иной, чем интактное антитело, которая содержит часть интактного антитела, которая связывает антиген, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антитела включают, но, не ограничиваясь этим, Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2; диатела; линейные антитела; вариабельные области тяжелой цепи (VH), одноцепочечные молекулы антител, такие как scFv, и однодоменные антитела, содержащие только область VH; и мультиспецифичные антитела, сформированные из фрагментов антител. В конкретных вариантах осуществления, антитела представляют собой одноцепочечные фрагменты антител, содержащие вариабельную область тяжелой цепи (VH) и/или вариабельную область легкой цепи (VL), такие как scFv.[0382] Among the antigen-binding domains included in CARs are antibody fragments. “Antibody fragment” or “antigen-binding fragment” refers to a molecule, other than an intact antibody, that contains a portion of the intact antibody that binds the antigen to which the intact antibody binds. Examples of antibody fragments include, but are not limited to, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab') 2 ; diabody; linear antibodies; heavy chain variable regions (V H ), single chain antibody molecules such as scFv, and single domain antibodies containing only the V H region; and multispecific antibodies formed from antibody fragments. In specific embodiments, the antibodies are single chain antibody fragments containing a heavy chain variable region (V H ) and/or a light chain variable region (V L ), such as scFv.

[0383] В определенных вариантах осуществления, мультиспецифичные связывающие молекулы, например, мультиспецифичные химерные рецепторы, такие как мультиспецифичные CAR, могут содержать любое из мультиспецифичных антител, включая, например, биспецифичные антитела, мультиспецифичные одноцепочечные антитела, например, диатела, триатела и тетратела, тандем ди-scFv и тандем три-scFv.[0383] In certain embodiments, multispecific binding molecules, e.g., multispecific chimeric receptors, such as multispecific CARs, may comprise any of the multispecific antibodies, including, e.g., bispecific antibodies, multispecific single chain antibodies, e.g., diabodies, tribodies, and tetrabodies, tandem di-scFv and tri-scFv tandem.

[0384] Однодоменные антитела (sdAbs) представляют собой фрагменты антител, содержащие всю вариабельную область тяжелой цепи антитела или часть ее или всю вариабельную область легкой цепи или часть ее. В определенных вариантах осуществления, однодоменное антитело представляет собой однодоменное антитело человека. [0384] Single domain antibodies (sdAbs) are antibody fragments containing all or part of the antibody heavy chain variable region or all or part of the light chain variable region. In certain embodiments, the single domain antibody is a human single domain antibody.

[0385] Фрагменты антитела могут быть получены с помощью различных методик, включая, но, не ограничиваясь этим, протеолитическую ферментацию интактного антитела, а также продуцирование рекомбинантными клетками-хозяевами. В некоторых вариантах осуществления, антитела представляют собой рекомбинантно-продуцируемые фрагменты, такие как фрагменты, содержащие группировки, которые не встречаются в природе, такие как фрагменты с двумя или более областями или цепями антител, соединенные синтетическими линкерами, например, пептидными линкерами, и/или такие, которые не могут быть получены с помощью ферментативного переваривания встречающегося в природе интактного антитела. В некоторых аспектах, фрагменты антитела представляют собой scFv. [0385] Antibody fragments can be obtained using various techniques, including, but not limited to, proteolytic fermentation of intact antibodies, as well as production by recombinant host cells. In some embodiments, antibodies are recombinantly produced fragments, such as fragments containing moieties that do not occur naturally, such as fragments with two or more antibody regions or chains connected by synthetic linkers, e.g., peptide linkers, and/or those that cannot be obtained by enzymatic digestion of a naturally occurring intact antibody. In some aspects, the antibody fragments are scFv.

[0386] В некоторых вариантах осуществления, антитело или его антиген-связывающий фрагмент представляет собой одноцепочечный фрагмент антитела, такой как одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv) или диатело или однодоменное антитело (sdAb). В некоторых вариантах осуществления, антитело или антиген-связывающий фрагмент представляет собой однодоменное антитело, содержащее только область VH. В некоторых вариантах осуществления, антитело или антиген-связывающий фрагмент представляет собой scFv, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL).[0386] In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment thereof is a single chain antibody fragment, such as a single chain variable fragment (scFv) or a diabody or single domain antibody (sdAb). In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment is a single domain antibody containing only the V H region. In some embodiments, the antibody or antigen-binding fragment is an scFv containing a heavy chain variable region (V H ) and a light chain variable region (V L ).

[0387] В некоторых вариантах осуществления, антиген, на который нацелен рецептор, представляет собой полипептид. В некоторых вариантах осуществления, он представляет собой углевод или другую молекулу. В некоторых вариантах осуществления, антиген селективно экспрессируется или сверхэкспрессируется на клетках заболевания или состояния, например, на опухолевых или патогенных клетках, по сравнению с нормальными или нецелевыми клетками или тканями. В других вариантах осуществления, антиген экспрессируется на нормальных клетках и/или экспрессируется на генно-инженерных клетках.[0387] In some embodiments, the antigen targeted by the receptor is a polypeptide. In some embodiments, it is a carbohydrate or other molecule. In some embodiments, the antigen is selectively expressed or overexpressed on cells of the disease or condition, such as tumor or pathogenic cells, over normal or non-target cells or tissues. In other embodiments, the antigen is expressed on normal cells and/or is expressed on genetically engineered cells.

[0010] В определенных вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит интегрин αvβ6 (интегрин avb6), антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA), B7-H3, B7-H6, угольную ангидразу 9 (CA9, также известную как CAIX или G250), антиген рака яичек, антиген рака яичек 1B (CTAG, также известный как NY-ESO-1 и LAGE-2), канцероэмбриональный антиген (CEA), циклин, A2 циклин, лиганд 1 C-C мотива хемокинов (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, хондроитинсульфат протеогликан 4 (CSPG4), белок эпидермального фактора роста (EGFR), усеченный белок эпидермального фактора роста (tEGFR), мутацию рецептора эпидермального фактора роста типа III (EGFR vIII), эпителиальный гликопротеин 2 (EPG-2), эпителиальный гликопротеин 40 (EPG-40), эфрин B2, рецептор эфрина A2 (EPHa2), рецептор эстрогенов, Fc рецептор подобный 5 (FCRL5; также известный как Fc рецептор гомолог 5 или FCRH5), рецептор фетального ацетилхолина (фетальный AchR), фолат-связывающий белок (FBP), рецептор фолата альфа, ганглиозид GD2, O-ацетилированный GD2 (OGD2), ганглиозид GD3, гликопротеин 100 (gp100), глипикан-3 (GPC3), рецептор 5D, связанный с белком G (GPCR5D), Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), димеры erbB, высокомолекулярный антиген человека, ассоциированный с меланомой (HMW-MAA), поверхностный антиген гепатита B, антиген лейкоцита A1 человека (HLA-A1), антиген лейкоцита A2 человека (HLA-A2), рецептор альфа IL-22(IL-22Rα), рецептор альфа 2 IL-13 (IL-13Rα2), рецептор, содержащий домен вставки киназы (kdr), легкую цепь каппа, молекулу адгезии клетки L1 (L1-CAM), CE7 эпитоп L1-CAM, обогащенную лейцином вставку, содержащую элемент A семейства 8 (LRRC8A), антиген Ley, антиген, ассоциированный с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, мезотелин (MSLN), c-Met, мышиный цитомегаловирус (CMV), муцин 1 (MUC1), MUC16, лиганды элемента D группы 2 природных киллеров (NKG2D), мелан A (MART-1), молекулу адгезии нервных клеток (NCAM), онкофетальный антиген, предпочтительно экспрессируемый антиген меланомы (PRAME), рецептор прогестерона, простата-специфичный антиген, антиген стволовых клеток простаты (PSCA), простата-специфичный мембранный антиген (PSMA), рецептор тирозинкиназы подобный орфанному рецептору 1 (ROR1), сурвивин, гликопротеин трофобластов (TPBG также известный как 5T4), гликопротеин 72, ассоциированный с опухолью (TAG72), белок 1 родственный тирозиназе (TRP1, также известный как TYRP1 или gp75), белок 2 родственный тирозиназе (TRP2, также известный как допахромтаутомераза, допахром дельта-изомераза или DCT), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов (VEGFR), рецептор эндотелиального фактора роста сосудов 2 (VEGFR2), опухоль Вильмса 1 (WT-1), патоген-специфичный или экспрессируемый патогеном антиген или антиген, ассоциированный с универсальной меткой, и/или биотинилированные молекулы, и/или молекулы, экспрессируемые ВИЧ, ВГС, ВГВ или другими патогенами. Антигены, на которые нацелены рецепторы, в некоторых вариантах осуществления, включают антигены, связанные с раком В-лимфоцитов, такие как любой из множества известных маркеров B-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igкаппа, Igлямбда, CD79a, CD79b или CD30.[0010] In certain embodiments, the antigen is or contains an αvβ6 integrin (avb6 integrin), B-lymphocyte maturation antigen (BCMA), B7-H3, B7-H6, carbonic anhydrase 9 (CA9, also known as CAIX or G250) , testicular cancer antigen, testicular cancer antigen 1B (CTAG, also known as NY-ESO-1 and LAGE-2), carcinoembryonic antigen (CEA), cyclin, cyclin A2, chemokine motif C-C ligand 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, chondroitin sulfate proteoglycan 4 (CSPG4), epidermal growth factor protein (EGFR), truncated epidermal growth factor protein (tEGFR), epidermal growth factor receptor type III (EGFR vIII) mutation, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40), ephrin B2, ephrin A2 receptor (EPHa2), estrogen receptor, Fc receptor like 5 (FCRL5; also known as Fc receptor homologue 5 or FCRH5), fetal acetylcholine receptor (fetal AchR), folate binding protein (FBP), folate receptor alpha, ganglioside GD2, O-acetylated GD2 (OGD2), ganglioside GD3, glycoprotein 100 (gp100), glypican-3 (GPC3), G protein-coupled 5D receptor (GPCR5D), Her2/neu (erb-B2 tyrosine kinase receptor), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB dimers , high molecular weight human melanoma-associated antigen (HMW-MAA), hepatitis B surface antigen, human leukocyte A1 antigen (HLA-A1), human leukocyte A2 antigen (HLA-A2), IL-22 receptor alpha (IL-22Rα), IL-13 alpha 2 receptor (IL-13Rα2), kinase insert domain containing receptor (kdr), kappa light chain, cell adhesion molecule L1 (L1-CAM), CE7 epitope L1-CAM,leucine-enriched insert containing element A of family 8 (LRRC8A), Ley antigen, melanoma associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, mesothelin (MSLN), c-Met, mouse cytomegalovirus (CMV), mucin 1 (MUC1) , MUC16, natural killer group 2 D element ligands (NKG2D), melan A (MART-1), neural cell adhesion molecule (NCAM), oncofetal antigen, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), progesterone receptor, prostate-specific antigen, antigen prostate stem cell (PSCA), prostate-specific membrane antigen (PSMA), tyrosine kinase receptor like orphan receptor 1 (ROR1), survivin, trophoblast glycoprotein (TPBG also known as 5T4), tumor-associated glycoprotein 72 (TAG72), protein 1 tyrosinase related protein (TRP1, also known as TYRP1 or gp75), tyrosinase related protein 2 (TRP2, also known as dopachrom tautomerase, dopachrome delta isomerase or DCT), vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR), vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR 2), Wilms tumor 1 (WT-1), pathogen-specific or pathogen-expressed antigen or universal label-associated antigen, and/or biotinylated molecules and/or molecules expressed by HIV, HCV, HBV or other pathogens. The antigens targeted by the receptors, in some embodiments, include antigens associated with B-lymphocyte cancer, such as any of a variety of known B-lymphocyte markers. In some embodiments, the antigen is or comprises CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b, or CD30.

[0388] В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой или содержит патоген-специфичный или экспрессируемый патогеном антиген. В некоторых вариантах осуществления, антиген представляет собой вирусный антиген (такой как вирусный антиген от ВИЧ, ВГС, ВГВ, и тому подобное), бактериальные антигены и/или паразитарные антигены.[0388] In some embodiments, the antigen is or contains a pathogen-specific or pathogen-expressed antigen. In some embodiments, the antigen is a viral antigen (such as a viral antigen from HIV, HCV, HBV, and the like), bacterial antigens, and/or parasitic antigens.

[0389] В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой CAR анти-BCMA, который является специфичным к BCMA, например, к BCMA человека. Химерные рецепторы антигенов, содержащие антитела анти-BCMA, включая антитела BCMA мыши анти-человек и антитела BCMA человека анти-человек, и клетки, экспрессирующие такие химерные рецепторы, описаны ранее. Смотри Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060, US 9765342, WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2, WO2016/0046724, WO2016/014789, WO2016/094304, WO2017/025038 и WO2017173256. В некоторых вариантах осуществления, CAR анти-BCMA содержит антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержащий вариабельную тяжелую (VH) и/или вариабельную легкую (VL) область, полученную из антитела, описанного в WO 2016/090320 или WO2016090327. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен представляет собой фрагмент антитела, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL). В некоторых аспектах область, VH представляет собой или содержит последовательность аминокислот, имеющую, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с последовательностью аминокислот области VH, приведенной в любой из SEQ ID NOs: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 181, 183, 185 и 188; и/или область VL представляет собой или включает последовательность аминокислот, имеющую, по меньшей мере, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичность последовательности с последовательностью аминокислот области VL, приведенной в любой из SEQ ID NOs: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 182, 184, 186 и 189. [0389] In some embodiments, the CAR is an anti-BCMA CAR that is specific for BCMA, eg, human BCMA. Chimeric antigen receptors containing anti-BCMA antibodies, including mouse anti-human BCMA antibodies and human anti-human BCMA antibodies and cells expressing such chimeric receptors have been previously described. Watch Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19 (8): 2048-2060, US 9765342, Wo 2016/090320, Wo2016090327, Wo2010104949A2, Wo2016/0046724, Wo2016/014789, Wo2016/09430, Wo2017/0258 and WO2017173256. In some embodiments, the anti-BCMA CAR contains an antigen-binding domain, such as an scFv containing a variable heavy (VH) and/or variable light (VL) a region derived from an antibody described in WO 2016/090320 or WO2016090327. In some embodiments, the antigen binding domain is an antibody fragment containing a heavy chain variable region (VH) and the light chain variable region (VL). In some aspects, the area, VH is or contains an amino acid sequence having at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity with the region V amino acid sequenceH, listed in any of SEQ ID NOs: 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103 , 105, 107, 109, 111, 181, 183, 185 and 188; and/or region VL is or includes an amino acid sequence having at least 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity with the region V amino acid sequenceL, listed in any of SEQ ID NOs: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104 , 106, 108, 110, 112, 182, 184, 186 and 189.

[0390] В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 30, и VL, приведенную в SEQ ID NO:31. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 32, и VL приведенную в SEQ ID NO:33. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 34, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 35. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 36 и VL, приведенную в SEQ ID NO:37. В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 38 и VL, приведенную в SEQ ID NO: 39. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 40, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 41. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 42, и VL приведенную в SEQ ID NO: 43. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 77, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 79, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 81, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 82. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 83, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 85, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 86. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 87, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 88. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 89, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 90. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 91, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 92. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 93, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 94. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 95, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 96. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 97, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 98. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 99, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 100. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 101, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 102. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 103, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 104. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 105, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 107, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 106. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 30, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 108. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 109, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 110. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 111, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 112. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 181, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 182. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 183, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 184. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 185, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 186. В некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий домен, такой как scFv, содержит VH, приведенную в SEQ ID NO: 187, и VL, приведенную в SEQ ID NO: 188. В некоторых вариантах осуществления, VH или VL имеет последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с любой из рассмотренных выше последовательностей VH или VL и сохраняет связывание с BCMA. В некоторых вариантах осуществления, область VH находится на амино окончании области VL. В некоторых вариантах осуществления, область VH находится на карбокси окончании области VL. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная тяжелая и вариабельная легкая цепи соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления, линкер приведен в SEQ ID NO: 70, 72, 73, 74 или 189.[0390] In some embodiments, the antigen-binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: 30 and V L as shown in SEQ ID NO: 31. In some embodiments, the antigen-binding domain, such as scFv, contains the V H shown in SEQ ID NO: 32 and the V L shown in SEQ ID NO: 33. In some embodiments, an antigen-binding domain, such as scFv, comprises V H as shown in SEQ ID NO: 34 and V L as shown in SEQ ID NO: 35. In some embodiments, an antigen-binding domain, such as scFv contains V H as shown in SEQ ID NO: 36 and V L as shown in SEQ ID NO: 37. In some embodiments, an antigen-binding domain, such as scFv, comprises V H as shown in SEQ ID NO: 38 and V L as shown in SEQ ID NO: 39. In some embodiments, an antigen-binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: 40 and V L as shown in SEQ ID NO: 41. In some embodiments, an antigen binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: 42, and V L as shown in SEQ ID NO: 43. In some embodiments, the antigen binding domain, such as scFv, comprises V H as shown in SEQ ID NO: 77 and V L as shown in SEQ ID NO: 78. B in some embodiments, an antigen binding domain, such as scFv, comprises V H as shown in SEQ ID NO: 79 and V L as shown in SEQ ID NO: 80. In some embodiments, an antigen binding domain, such as scFv , contains V H as shown in SEQ ID NO: 81 and V L as shown in SEQ ID NO: 82. In some embodiments, a An antigen binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: 83 and V L as shown in SEQ ID NO: 84. In some embodiments, an antigen binding domain, such as scFv, contains V H , shown in SEQ ID NO: 85, and V L shown in SEQ ID NO: 86. In some embodiments, the antigen-binding domain, such as scFv, contains V H shown in SEQ ID NO: 87, and V L shown in SEQ ID NO: 88. In some embodiments, the antigen-binding domain, such as scFv, contains V H shown in SEQ ID NO: 89, and V L shown in SEQ ID NO: 90. In some embodiments, implementation, the antigen-binding domain, such as scFv, contains V H shown in SEQ ID NO: 91, and V L shown in SEQ ID NO: 92. In some embodiments, the antigen-binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: 93 and V L as shown in SEQ ID NO: 94. In some embodiments, an antigen binding domain such as to scFv contains V H as shown in SEQ ID NO: 95 and V L as shown in SEQ ID NO: 96. In some embodiments, an antigen-binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: : 97, and V L as shown in SEQ ID NO: 98. In some embodiments, the antigen-binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: 99 and V L as shown in SEQ ID NO: : 100. In some embodiments, the antigen-binding domain, such as scFv, comprises V H as shown in SEQ ID NO: 101 and V L as shown in SEQ ID NO: 102. In some embodiments, the antigen-binding domain , such as scFv, contains the V H shown in SEQ ID NO: 103 and the V L shown in SEQ ID NO: 104. In some embodiments, an antigen-binding domain, such as scFv, contains the V H shown in SEQ ID NO: 105, and V L shown in SEQ ID NO: 106. In some embodiments, the antigen binding domain, such as scFv, contains V H , as shown in SEQ ID NO: 107 and V L as shown in SEQ ID NO: 106. In some embodiments, the antigen binding domain, such as scFv, contains the V H as shown in SEQ ID NO: 30 and V L , shown in SEQ ID NO: 108. In some embodiments, an antigen binding domain, such as scFv, contains V H shown in SEQ ID NO: 109 and V L shown in SEQ ID NO: 110. In some embodiments, implementation , an antigen binding domain such as scFv contains V H as shown in SEQ ID NO: 111 and V L as shown in SEQ ID NO: 112. In some embodiments, an antigen binding domain such as scFv contains V H as shown in SEQ ID NO: 181 and V L as shown in SEQ ID NO: 182. In some embodiments, an antigen binding domain such as scFv contains V H as shown in SEQ ID NO: 183 and V L as shown in SEQ ID NO: 184. In some embodiments, the antigen binding domain, such as scFv, contains V H as shown in SEQ ID NO: 18 5 and V L as shown in SEQ ID NO: 186. In some embodiments, the antigen binding domain, such as scFv, comprises V H as shown in SEQ ID NO: 187 and V L as shown in SEQ ID NO: 188. In some embodiments, V H or V L has an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity to any of the above V H or V L sequences and retains binding to BCMA. In some embodiments, the V H region is at the amino terminus of the V L region. In some embodiments, the V H region is at the carboxy terminus of the V L region. In some embodiments, the variable heavy and variable light chains are connected by a linker. In some embodiments, the linker is listed in SEQ ID NO: 70, 72, 73, 74, or 189.

[0391] В некоторых вариантах осуществления, CAR представляет собой CAR анти-CD19, который является специфичным к CD19, например, к CD19 человека. В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающий домен содержит VH и/или VL, полученные из FMC63, который, в некоторых аспектах, может представлять собой scFv. В некоторых вариантах осуществления домены scFv и/или VH получают из FMC63. FMC63, в целом, относится к моноклональному антителу IgG1 мыши, полученному против клеток Nalm-1 и -16, экспрессирующих CD19 человеческого происхождения (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). Антитело FMC63 содержит CDRH1 и H2, приведенные в SEQ ID NOS: 44, 45, соответственно, и CDRH3, приведенные в SEQ ID NOS: 46 или 47, и CDRL1, приведенные в SEQ ID NOS: 48, и CDR L2, приведенные в SEQ ID NO: 49 или 50, и последовательности CDR L3, приведенные в SEQ ID NO: 51 или 52. Антитело FMC63 содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность аминокислот SEQ ID NO: 53, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность аминокислот SEQ ID NO: 54. В некоторых вариантах осуществления, svFv содержит вариабельную легкую цепь, содержащую последовательность CDRL1 из SEQ ID NO:48, последовательность CDRL2 из SEQ ID NO:49 и последовательность CDRL3 из SEQ ID NO:51, и/или вариабельную тяжелую цепь, содержащую последовательность из CDRH1 SEQ ID NO:44, последовательность CDRH2 из SEQ ID NO:45, и последовательность из CDRH3 SEQ ID NO:46. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит вариабельную область тяжелой цепи FMC63, приведенную в SEQ ID NO:53, и вариабельную область легкой цепи FMC63, приведенную в SEQ ID NO:54. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная тяжелая и вариабельная легкая цепи соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления, линкер приведен в SEQ ID NO: 70, 72, 73, 74 или 189. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, VH, линкер и VL. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, VL, линкер и VH. В некоторых вариантах осуществления, svFv кодируется последовательностью нуклеотидов, приведенной в SEQ ID NO:69, или последовательностью, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичность последовательности с SEQ ID NO:69. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:55, или последовательность, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, или 99% идентичность последовательности с SEQ ID NO:55.[0391] In some embodiments, the CAR is an anti-CD19 CAR that is specific for CD19, eg, human CD19. In some embodiments, the implementation of the antigen-binding domain contains V H and/or V L derived from FMC63, which, in some aspects, may be scFv. In some embodiments, the scFv and/or V H domains are derived from FMC63. FMC63 generally refers to a mouse IgG1 monoclonal antibody raised against Nalm-1 and -16 cells expressing human CD19 (Ling, NR, et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). The FMC63 antibody contains CDRH1 and H2 listed in SEQ ID NOS: 44, 45, respectively, and CDRH3 listed in SEQ ID NOS: 46 or 47, and CDRL1 listed in SEQ ID NOS: 48, and CDR L2 listed in SEQ ID NO: 49 or 50, and the CDR L3 sequences shown in SEQ ID NO: 51 or 52. The FMC63 antibody contains a heavy chain variable region (V H ) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 53 and a light chain variable region (V L ) comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 54. In some embodiments, the svFv comprises a variable light chain comprising the CDRL1 sequence of SEQ ID NO:48, the CDRL2 sequence of SEQ ID NO:49, and the CDRL3 sequence of SEQ ID NO:51 , and/or a heavy chain variable containing the sequence from CDRH1 of SEQ ID NO:44, the CDRH2 sequence from SEQ ID NO:45, and the sequence from CDRH3 of SEQ ID NO:46. In some embodiments, the scFv comprises the FMC63 heavy chain variable region set forth in SEQ ID NO:53 and the FMC63 light chain variable region set forth in SEQ ID NO:54. In some embodiments, the variable heavy and variable light chains are connected by a linker. In some embodiments, the linker is listed in SEQ ID NO: 70, 72, 73, 74, or 189. In some embodiments, the scFv contains, in that order, V H , linker, and V L . In some embodiments, the scFv contains, in that order, V L , a linker, and V H . In some embodiments, the svFv is encoded by the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO:69 or by a sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92 %, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity with SEQ ID NO:69. In some embodiments, the scFv contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:55, or a sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92 %, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% sequence identity with SEQ ID NO:55.

[0392] В некоторых вариантах осуществления антиген-связывающий домен содержит VH и/или VL, полученные из SJ25C1, который, в некоторых аспектах, может представлять собой scFv. SJ25C1 представляет собой моноклональное антитело IgG1 мыши, полученное против клеток Nalm-1 и -16, экспрессирующих CD19 человеческого происхождения (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). Антитело SJ25C1 содержит CDRH1, H2 и H3, приведенные в SEQ ID NOS: 59-61, соответственно, и последовательности CDRL1, L2 и L3, приведенные в SEQ ID NOS: 56-58, соответственно. Антитело SJ25C1 содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность аминокислот из SEQ ID NO: 62, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность аминокислот из SEQ ID NO: 63. В некоторых вариантах осуществления, svFv содержит вариабельную легкую цепь, содержащую последовательность CDRL1 из SEQ ID NO:56, последовательность CDRL2 из SEQ ID NO: 57 и последовательность из CDRL3 SEQ ID NO:58 и/или вариабельную тяжелую цепь, содержащую последовательность CDRH1 из SEQ ID NO:59, последовательность CDRH2 из SEQ ID NO:60 и последовательность из CDRH3 SEQ ID NO:61. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит вариабельную область тяжелой цепи SJ25C1, приведенную в SEQ ID NO:62, и вариабельную область легкой цепи SJ25C1, приведенную в SEQ ID NO:63. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная тяжелая и вариабельная легкая цепи соединены линкером. В некоторых вариантах осуществления, линкер приведен в SEQ ID NO:64. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, VH, линкер и VL. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит, именно в этом порядке, VL, линкер и VH. В некоторых вариантах осуществления, scFv содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:65, или последовательность, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность последовательности с SEQ ID NO:65. [0392] In some embodiments, the implementation of the antigen-binding domain contains V H and/or V L derived from SJ25C1, which, in some aspects, may be scFv. SJ25C1 is a mouse IgG1 monoclonal antibody raised against Nalm-1 and -16 cells expressing human CD19 (Ling, NR, et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). The SJ25C1 antibody contains the CDRH1, H2, and H3 sequences shown in SEQ ID NOS: 59-61, respectively, and the CDRL1, L2, and L3 sequences shown in SEQ ID NOS: 56-58, respectively. The SJ25C1 antibody comprises a heavy chain variable region (V H ) containing the amino acid sequence from SEQ ID NO: 62 and a light chain variable region (V L ) containing the amino acid sequence from SEQ ID NO: 63. In some embodiments, the svFv contains the variable a light chain containing a CDRL1 sequence from SEQ ID NO:56, a CDRL2 sequence from SEQ ID NO:57 and a sequence from CDRL3 of SEQ ID NO:58 and/or a variable heavy chain containing a CDRH1 sequence from SEQ ID NO:59, a CDRH2 sequence from SEQ ID NO:60 and sequence from CDRH3 SEQ ID NO:61. In some embodiments, the scFv comprises the SJ25C1 heavy chain variable region set forth in SEQ ID NO:62 and the SJ25C1 light chain variable region set forth in SEQ ID NO:63. In some embodiments, the variable heavy and variable light chains are connected by a linker. In some embodiments, the linker is shown in SEQ ID NO:64. In some embodiments, the scFv contains, in that order, V H , a linker, and V L . In some embodiments, the scFv contains, in that order, V L , a linker, and V H . In some embodiments, the scFv contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:65 or a sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92 %, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence identity with SEQ ID NO:65.

[0393] В некоторых вариантах осуществления, антитело представляет собой антиген-связывающий фрагмент, такой как scFv, который содержит один или несколько линкеров, соединяющих два домена или области антитела, таких как вариабельная область тяжелой цепи (VH) и вариабельная область легкой цепи (VL). Соответственно, антитела содержат одноцепочечные фрагменты антител, такие как scFv, и диатела, в частности, одноцепочечные фрагменты антител человека, как правило, содержащие линкер (линкеры), соединяющий два домена или области антитела, такие как области VH и VL. Как правило, линкер представляет собой пептидный линкер, например, гибкий и/или растворимый пептидный линкер, например, обогащенный глицином и серином. Среди линкеров имеются обогащенные глицином и серином, и/или, в некоторых случаях, треонином. В некоторых вариантах осуществления, линкеры дополнительно содержат заряженные остатки, такие как лизин и/или глютамат, которые могут улучшить растворимость. В некоторых вариантах осуществления, линкеры дополнительно содержат один или несколько пролинов. [0393] In some embodiments, the antibody is an antigen-binding fragment, such as scFv, that contains one or more linkers connecting two antibody domains or regions, such as a heavy chain variable region (V H ) and a light chain variable region ( V L ). Accordingly, antibodies comprise single chain antibody fragments, such as scFv, and diabodies, in particular human single chain antibody fragments, typically containing a linker(s) connecting two antibody domains or regions, such as the V H and V L regions. Typically, the linker is a peptide linker, eg a flexible and/or soluble peptide linker, eg enriched in glycine and serine. Among the linkers are enriched in glycine and serine, and/or, in some cases, threonine. In some embodiments, the linkers further contain charged moieties such as lysine and/or glutamate, which may improve solubility. In some embodiments, the linkers further comprise one or more prolines.

[0394] В некоторых аспектах, линкеры, обогащенные глицином и серином (и/или треонином), содержат, по меньшей мере, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% такой аминокислоты (аминокислот). В некоторых вариантах осуществления, они содержат, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 50%, 55%, 60%, 70% или 75%, глицина, серина и/или треонина. В некоторых вариантах осуществления, линкер состоит, по существу, полностью из глицина, серина и/или треонина. Как правило, линкеры содержат в пределах примерно между 5 и примерно 50 аминокислотами, как правило, между (или примерно) 10 и (или примерно) 30, например, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30, а в некоторых примерах, в пределах между 10 и 25 аминокислотами. Иллюстративные линкеры включают линкеры, содержащие различные количества повторов последовательности GGGGS (4GS; SEQ ID NO:19) или GGGS (3GS; SEQ ID NO:71), например, в пределах между 2, 3, 4 и 5 повторами такой последовательности. Иллюстративные линкеры включают линкеры, содержащие, или состоящие из нее, последовательность, приведенную в SEQ ID NO:72 (GGGGSGGGGSGGGGS), SEQ ID NO:189 (ASGGGGSGGRASGGGGS), SEQ ID NO:73 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG) или SEQ ID NO: 74 (SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA).[0394] In some aspects, linkers enriched in glycine and serine (and/or threonine) contain at least 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% of such amino acid(s). In some embodiments, they contain at least, or about at least 50%, 55%, 60%, 70%, or 75%, glycine, serine, and/or threonine. In some embodiments, the linker consists essentially entirely of glycine, serine, and/or threonine. Typically, linkers contain between about 5 and about 50 amino acids, typically between (or about) 10 and (or about) 30, e.g., 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 , 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, or 30, and in some examples, between 10 and 25 amino acids. Exemplary linkers include linkers containing varying numbers of repeats of the sequence GGGGS (4GS; SEQ ID NO:19) or GGGS (3GS; SEQ ID NO:71), for example between 2, 3, 4 and 5 repeats of such a sequence. Illustrative linkers include linkers containing, or consisting of, the sequence shown in SEQ ID NO: 72 (GGGGSGGGGSGGGGS), SEQ ID NO: 189 (ASGGGGSGGRASGGGGS), SEQ ID NO: 73 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG) or SEQ ID NO: 74 (SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA ).

[0395] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор, такой как CAR, такой как часть антитела рекомбинантного рецептора, например, CAR, дополнительно содержит спейсер, который может представлять собой или содержать, по меньшей мере, часть константной области иммуноглобулина или его вариантной или модифицированной версии, такую как шарнирная область, например, шарнирная область IgG4, шарнирная область IgG1, CH1/CL и/или область Fc. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер и/или шарнирную область. В некоторых вариантах осуществления, константная область или часть происходит из IgG человека, такого как IgG4 или IgG1. В некоторых аспектах, часть константной области служит в качестве области спейсера между антиген-распознающим компонентом, например, scFv, и трансмембранным доменом. Спейсер может иметь такую длину, которая обеспечивает повышенную отзывчивость клетки после связывания антигена по сравнению с отсутствием спейсера.[0395] In some embodiments, a recombinant receptor, such as CAR, such as part of an antibody of a recombinant receptor, such as CAR, further comprises a spacer, which may be or contain at least a portion of an immunoglobulin constant region, or a variant or modified thereof version, such as the hinge region, for example, the IgG4 hinge region, the IgG1 hinge region, C H 1/C L and/or the Fc region. In some embodiments, the recombinant receptor further comprises a spacer and/or a hinge region. In some embodiments, the constant region or portion is derived from human IgG, such as IgG4 or IgG1. In some aspects, a portion of the constant region serves as a spacer region between the antigen recognition component, eg, scFv, and the transmembrane domain. The spacer may be of a length that provides increased responsiveness of the cell after antigen binding compared to no spacer.

[0396] Иллюстративные спейсеры, например, шарнирные области, содержат области, описанные в публикации Международной заявки на патент WO2014031687. В некоторых примерах, спейсер содержит или примерно содержит 12 аминокислот или содержит не более 12 аминокислот. Иллюстративные спейсеры включают спейсеры, содержащие, по меньшей мере, примерно 10-229 аминокислот, примерно 10-200 аминокислот, примерно 10-175 аминокислот, примерно 10-150 аминокислот, примерно 10-125 аминокислот, примерно 10-100 аминокислот, примерно 10-75 аминокислот, примерно 10-50 аминокислот, примерно 10-40 аминокислот, примерно 10-30 аминокислот, примерно 10-20 аминокислот или примерно 10-15 аминокислот, и включая любое целое число между конечными точками любого из перечисленных диапазонов. В некоторых вариантах осуществления, область спейсера содержит примерно 12 аминокислот или меньше, примерно 119 аминокислот или меньше или примерно 229 аминокислот или меньше. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой спейсер, имеющий, по меньшей мере, конкретную длину, например, длину, которая составляет, по меньшей мере, 100 аминокислот, например, по меньшей мере, 110, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 или 250 аминокислот. Иллюстративные спейсеры включают шарнир IgG4 сам по себе, шарнир IgG4, связанный с доменами CH2 и CH3, или шарнир IgG4, связанный с доменом CH3. Иллюстративные спейсеры включают шарнир IgG4 сам по себе, шарнир IgG4, связанный с доменами CH2 и CH3, или шарнир IgG4, связанный с доменом CH3. Иллюстративные спейсеры включают, но, не ограничиваясь этим, спейсеры, описанные в Hudecek et al., Clin. Cancer Res., 19:3153 (2013), Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol Res. 3(2): 125-135, в публикации Международной заявки на патент номер WO2014031687, в патенте США № 8822647 или в опубликованной заявке на патент США № 2014/0271635. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность шарнирной области иммуноглобулина, области CH2 и CH3. В некоторых вариантах осуществления, одна или несколько групп из шарнира CH2 и CH3 получаются полностью или частично из IgG4 или IgG2. В некоторых случаях, шарнир CH2 и CH3 получают из IgG4. В некоторых аспектах, одна или несколько групп из шарнира CH2 и CH3 является химерной и содержит последовательность, полученную из IgG4 и IgG2. В некоторых примерах, спейсер содержит химерный шарнир IgG4/2, область CH2 IgG2/4 и область CH3 IgG4. [0396] Exemplary spacers, such as hinge regions, comprise the regions described in International Patent Application Publication WO2014031687. In some examples, the spacer contains or approximately contains 12 amino acids, or contains no more than 12 amino acids. Exemplary spacers include spacers containing at least about 10-229 amino acids, about 10-200 amino acids, about 10-175 amino acids, about 10-150 amino acids, about 10-125 amino acids, about 10-100 amino acids, about 10- 75 amino acids, about 10-50 amino acids, about 10-40 amino acids, about 10-30 amino acids, about 10-20 amino acids, or about 10-15 amino acids, and including any integer between the endpoints of any of the listed ranges. In some embodiments, the spacer region is about 12 amino acids or less, about 119 amino acids or less, or about 229 amino acids or less. In some embodiments, the spacer is a spacer having at least a specific length, such as a length that is at least 100 amino acids, such as at least 110, 125, 130, 135, 140, 145 , 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 or 250 amino acids. Exemplary spacers include an IgG4 hinge per se, an IgG4 hinge associated with C H 2 and C H 3 domains, or an IgG4 hinge associated with a C H 3 domain. Exemplary spacers include an IgG4 hinge per se, an IgG4 hinge associated with C domains H 2 and C H 3, or an IgG4 hinge associated with a C H 3 domain. Exemplary spacers include, but are not limited to, those described in Hudecek et al., Clin. Cancer Res., 19:3153 (2013), Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol Res. 3(2): 125-135, in International Patent Application Publication No. WO2014031687, in US Patent No. 8822647 or in US Published Application No. 2014/0271635. In some embodiments, the spacer comprises an immunoglobulin hinge, C H 2 and C H 3 region sequence. In some embodiments, one or more of the C H 2 and C H 3 hinge groups are derived entirely or partially from IgG4 or IgG2. In some cases, the C H 2 and C H 3 hinges are derived from IgG4. In some aspects, one or more of the C H 2 and C H 3 hinge groups is chimeric and contains a sequence derived from IgG4 and IgG2. In some examples, the spacer contains an IgG4/2 chimeric hinge, an IgG2/4 C H 2 region, and an IgG4 C H 3 region.

[0397] В некоторых вариантах осуществления, спейсер, который может представлять собой константную область или часть ее, у иммуноглобулина происходит от IgG человека, такого как IgG4 или IgG1. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность ESKYGPPCPPCP (приведенную в SEQ ID NO: 1). В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, спейсер имеет последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, кодируемый спейсер представляет собой или содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29. В некоторых вариантах осуществления, константная область или часть происходит от IgD. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125. [0397] In some embodiments, the spacer, which may be a constant region or part thereof, of an immunoglobulin is derived from a human IgG, such as IgG4 or IgG1. In some embodiments, the spacer contains the sequence ESKYGPPCPPCP (shown in SEQ ID NO: 1). In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 3. In some embodiments, the spacer has the sequence shown in SEQ ID NO: 4. In some embodiments, the encoded spacer is or contains the sequence shown in SEQ ID NO: 29. In some embodiments, the constant region or portion is derived from IgD. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 5. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 125.

[0398] В некоторых вариантах осуществления, спейсер может быть получен полностью или частично из IgG4 и/или IgG2 и может содержать мутации, такие как одна или несколько мутаций отдельных аминокислот в одном или нескольких доменах. В некоторых примерах, модификация аминокислоты представляет собой замещение пролина (P) вместо серина (S) в шарнирной области IgG4. В некоторых вариантах осуществления, модификация аминокислоты представляет собой замещение глютамина (Q) вместо аспарагина (N) для уменьшения гетерогенности гликозилирования, такое как мутация N177Q в положении 177, в области CH2 полноразмерной последовательности Fc IgG4 или N176Q в положении 176, в области CH2 полноразмерной последовательности Fc IgG4.[0398] In some embodiments, the spacer may be derived in whole or in part from IgG4 and/or IgG2 and may contain mutations, such as one or more single amino acid mutations in one or more domains. In some examples, the amino acid modification is a substitution of proline (P) instead of serine (S) in the IgG4 hinge region. In some embodiments, the amino acid modification is a substitution of glutamine (Q) instead of asparagine (N) to reduce glycosylation heterogeneity, such as the N177Q mutation at position 177, in the C H 2 region of the full-length Fc IgG4 sequence, or N176Q at position 176, in region C H 2 full-length sequence of Fc IgG4.

[0399] Другие иллюстративные области спейсеров включают шарнирные области, полученные из CD8a, CD28, CTLA4, PD-1 или FcγRIIIa. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит усеченный внеклеточный домен или шарнирную область CD8a, CD28, CTLA4, PD-1 или FcγRIIIa. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой усеченную шарнирную область CD28. В некоторых вариантах осуществления, короткий олиго- или полипептидный линкер, например, линкер из 2-10 аминокислот, такой как линкер, содержащий аланины или аланин и аргинин, например, аланиновый триплет (AAA) или RAAA (SEQ ID NO: 180), присутствует и образует связь между scFv и областью спейсера CAR. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 114. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 116. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в люб SEQ ID NO: 117-119. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 120. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 122. В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124. [0399] Other exemplary spacer regions include hinge regions derived from CD8a, CD28, CTLA4, PD-1, or FcγRIIIa. In some embodiments, the spacer comprises a truncated extracellular domain or hinge region of CD8a, CD28, CTLA4, PD-1, or FcγRIIIa. In some embodiments, the spacer is a truncated hinge region of CD28. In some embodiments, a short oligo or polypeptide linker, e.g., a 2-10 amino acid linker, such as an alanine or alanine and arginine containing linker, e.g., an alanine triplet (AAA) or RAAA (SEQ ID NO: 180), is present. and forms a link between the scFv and the CAR spacer region. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 114. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 116. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in any SEQ ID NO: 117-119. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 120. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 122. In some embodiments, the spacer contains the sequence shown in SEQ ID NO: 124 .

[0400] В некоторых вариантах осуществления, спейсер содержит последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с любыми из SEQ ID NOS: 1, 3, 4, 5 или 29, 114, 116, 117, 118, 119, 120, 122, 124 или 125.[0400] In some embodiments, the spacer contains an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity to any of SEQ ID NOS: 1, 3, 4, 5, or 29, 114, 116, 117, 118, 119, 120, 122, 124 or 125.

[0401] Этот домен распознавания антигена, как правило, связан с одним или несколькими внутриклеточными сигнальными компонентами, такими как сигнальные компоненты, которые воспроизводят стимулирование и/или активирование с помощью комплекса антиген-рецептор, такого как комплекс TCR, в случае CAR, и/или сигнала через другой рецептор на поверхности клетки. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, антиген-связывающий компонент (например, антитело) связан с одним или несколькими трансмембранными и внутриклеточными сигнальными доменами. В некоторых вариантах осуществления, трансмембранный домен слит с внеклеточным доменом. В одном из вариантов осуществления, используется трансмембранный домен, который в природе ассоциируется с одним из доменов в рецепторе, например, CAR. В некоторых случаях, трансмембранный домен выбирается или модифицируется посредством замещения аминокислоты для устранения связывания таких доменов с трансмембранными доменами таких же или иных поверхностных мембранных белков для сведения к минимуму взаимодействий с другими элементами комплекса рецептора.[0401] This antigen recognition domain is typically associated with one or more intracellular signaling components, such as signaling components that mimic stimulation and/or activation by an antigen-receptor complex, such as the TCR complex, in the case of CAR, and/ or a signal through another receptor on the cell surface. Thus, in some embodiments, the antigen-binding component (eg, antibody) is associated with one or more transmembrane and intracellular signaling domains. In some embodiments, the transmembrane domain is fused to the extracellular domain. In one embodiment, a transmembrane domain is used that naturally associates with one of the domains in the receptor, such as CAR. In some cases, a transmembrane domain is selected or modified by amino acid substitution to eliminate the binding of such domains to transmembrane domains of the same or different surface membrane proteins to minimize interactions with other elements of the receptor complex.

[0402] Трансмембранный домен в некоторых вариантах осуществления получают либо из природного, либо из синтетического источника. Когда источник является природным, домен в некоторых аспектах получают из любого мембранно-связанного или трансмембранного белка. Трансмембранные области включают области, полученные (то есть, они содержат, по меньшей мере, их трансмембранную область (области)) альфа, бета или зета цепи рецептора T-лимфоцитов, CD28, CD3 эпсилон, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8a, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137 (4-1BB), CD154, CTLA-4 или PD-1. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления трансмембранный домен является синтетическим. В некоторых аспектах, синтетический трансмембранный домен преимущественно содержит гидрофобные остатки, такие как лейцин и валин. В некоторых аспектах, триплет фенилаланина, триптофана и валина будет находиться на каждом краю синтетического трансмембранного домена. В некоторых вариантах осуществления, связывание осуществляется с помощью линкеров, спейсеров и/или трансмембранного домена (доменов). Иллюстративные последовательности трансмембранных доменов представляют собой или содержат последовательности, приведенные в SEQ ID NOs: 8, 115, 121, 123, 178 или 179. [0402] The transmembrane domain, in some embodiments, is derived from either a natural or synthetic source. When the source is natural, the domain in some aspects is derived from any membrane-bound or transmembrane protein. Transmembrane regions include regions derived from (i.e., they contain at least their transmembrane region(s)) T-lymphocyte receptor alpha, beta or zeta chains, CD28, CD3 epsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8a, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 (4-1BB), CD154, CTLA-4 or PD-1. Alternatively, in some embodiments, the transmembrane domain is synthetic. In some aspects, the synthetic transmembrane domain predominantly contains hydrophobic residues such as leucine and valine. In some aspects, a triplet of phenylalanine, tryptophan and valine will be located at each end of the synthetic transmembrane domain. In some embodiments, linking is via linkers, spacers, and/or transmembrane domain(s). Exemplary transmembrane domain sequences are or contain the sequences shown in SEQ ID NOs: 8, 115, 121, 123, 178, or 179.

[0403] Среди внутриклеточных сигнальных доменов имеются такие, которые воспроизводят или примерно воспроизводят сигнал через природный рецептор антигена, сигнал через такой рецептор в сочетании с костимуляторным рецептором и/или сигнал через костимуляторный рецептор сам по себе. В некоторых вариантах осуществления, присутствует короткий олиго- или полипептидный линкер, например, линкер из 2-10 аминокислот, например, содержащий глицины и серины, например, дублет глицин-серин, и он образует связь между трансмембранным доменом и цитоплазматическим сигнальным доменом CAR. [0403] Among the intracellular signaling domains are those that reproduce or approximately reproduce the signal through the natural antigen receptor, the signal through such a receptor in combination with a costimulatory receptor, and/or the signal through the costimulatory receptor itself. In some embodiments, a short oligo or polypeptide linker is present, e.g., a linker of 2-10 amino acids, e.g., containing glycines and serines, e.g., a glycine-serine doublet, and forms a link between the transmembrane domain and the CAR cytoplasmic signaling domain.

[0404] Рецептор, например, CAR, как правило, содержит, по меньшей мере, один или несколько внутриклеточных сигнальных компонентов. В некоторых вариантах осуществления, рецептор содержит внутриклеточный компонент комплекса TCR, такой как цепь CD3 TCR, которая медиирует стимулирование T-лимфоцита и/или активирование и цитотоксичность, например, цепь CD3 зета. Таким образом, в некоторых аспектах, антиген-связывающая часть связана с одним или несколькими сигнальными модулями клетки. В некоторых вариантах осуществления, сигнальные модули клетки включают трансмембранный домен CD3, внутриклеточные сигнальные домены CD3, и/или другие трансмембранные домены CD. В некоторых вариантах осуществления, рецептор, например, CAR, дополнительно содержит часть одной или нескольких дополнительных молекул, таких как Fc рецептор γ, CD8, CD4, CD25 или CD16. Например, в некоторых аспектах, CAR или другой химерный рецептор содержит химерную молекулу из CD3-зета (CD3-ζ) или Fc рецептора γ и CD8, CD4, CD25 или CD16. [0404] A receptor, such as a CAR, typically contains at least one or more intracellular signaling components. In some embodiments, the receptor comprises an intracellular component of the TCR complex, such as the CD3 TCR chain, which mediates T-lymphocyte stimulation and/or activation and cytotoxicity, such as the CD3 zeta chain. Thus, in some aspects, the antigen-binding portion is associated with one or more signaling modules of the cell. In some embodiments, cell signaling modules include a CD3 transmembrane domain, CD3 intracellular signaling domains, and/or other CD transmembrane domains. In some embodiments, the receptor, eg, CAR, further comprises a portion of one or more additional molecules, such as an Fc receptor γ, CD8, CD4, CD25, or CD16. For example, in some aspects, the CAR or other chimeric receptor comprises a chimeric molecule of CD3-zeta (CD3-ζ) or Fc receptor γ and CD8, CD4, CD25, or CD16.

[0405] В некоторых вариантах осуществления, при лигировании CAR или другого химерного рецептора, цитоплазматический домен или внутриклеточный сигнальный домен рецептора стимулирует и/или активирует, по меньшей мере, одну из нормальных эффекторных функций или реакций иммунной клетки, например, генно-инженерного Т-лимфоцита, для экспрессирования CAR. Например, в некоторых контекстах, CAR индуцируют функцию Т-лимфоцита, такую как цитолитическая активность или T-хелперная активность, такую как секреция цитокинов или других факторов. В некоторых вариантах осуществления, усеченная часть внутриклеточного сигнального домена компонента рецептора антигена или костимуляторной молекулы используется вместо интактной иммуностимулирующей цепи, например, если она трансдуцирует сигнал эффекторной функции. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен или домены содержат цитоплазматические последовательности рецептора Т-лимфоцита (TCR), а в некоторых аспектах, также и те ко-рецепторы, которые в природном контексте действуют совместно с такими рецепторами для инициирования трансдукции сигнала после зацепления антигена и рецептора, и/или с любым производным или вариантом таких молекул и/или с любой синтетической последовательностью, которая имеет такую же функциональную способность.[0405] In some embodiments, upon ligation of a CAR or other chimeric receptor, the cytoplasmic domain or intracellular signaling domain of the receptor stimulates and/or activates at least one of the normal effector functions or responses of an immune cell, such as a genetically engineered T- lymphocyte to express CAR. For example, in some contexts, CARs induce T-lymphocyte function, such as cytolytic activity or T-helper activity, such as the secretion of cytokines or other factors. In some embodiments, a truncated portion of the intracellular signaling domain of an antigen receptor component or costimulatory molecule is used in place of an intact immunostimulatory chain, for example if it transduces an effector function signal. In some embodiments, the intracellular signaling domain or domains comprise cytoplasmic T-lymphocyte receptor (TCR) sequences, and in some aspects also those co-receptors that naturally act in concert with such receptors to initiate signal transduction upon antigen engagement and receptor, and/or any derivative or variant of such molecules and/or any synthetic sequence that has the same functionality.

[0406] В контексте природных TCR, полное активирование, как правило, требует не только передачи сигнала через TCR, но также и костимуляторного сигнала. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, для облегчения полного активирования, компонент для генерирования вторичного или костимуляторного сигнала также включается в CAR. В других вариантах осуществления, CAR не содержит компонента для генерирования костимуляторного сигнала. В некоторых аспектах, дополнительный CAR экспрессируется в той же клетке и обеспечивает компонент для генерирования вторичного или костимуляторного сигнала. [0406] In the context of natural TCRs, complete activation typically requires not only signaling through the TCR, but also a costimulatory signal. Thus, in some embodiments, to facilitate full activation, a component for generating a secondary or costimulatory signal is also included in the CAR. In other embodiments, the CAR does not contain a component for generating a costimulatory signal. In some aspects, the additional CAR is expressed in the same cell and provides a component for generating a secondary or co-stimulatory signal.

[0407] Стимулирование и/или активирование Т-лимфоцитов в некоторых аспектах описывается как медиируемая двумя классами цитоплазматических сигнальных последовательностей: теми, которые инициируют первичное антиген-зависимое стимулирование и/или активирование через TCR (первичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательности), и теми, которые действуют антиген-независимым образом для получения вторичного или костимуляторного сигнала (вторичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательности). В некоторых аспектах, CAR содержит один или оба таких сигнальных компонента.[0407] Stimulation and/or activation of T-lymphocytes in some aspects is described as mediated by two classes of cytoplasmic signaling sequences: those that initiate primary antigen-dependent stimulation and/or activation through TCRs (primary cytoplasmic signaling regions, domains or sequences), and those that act in an antigen-independent manner to produce a secondary or costimulatory signal (secondary cytoplasmic signaling regions, domains or sequences). In some aspects, the CAR contains one or both of these signaling components.

[0408] В некоторых аспектах, CAR содержит первичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательность, которая регулирует первичное активирование комплекса TCR. Первичные цитоплазматические сигнальные области, домены или последовательности, которые действуют стимулирующим образом, могут содержать сигнальные мотивы, которые известны как иммунорецепторные тирозиновые активирующие мотивы или ITAM. Примеры ITAM, содержащих первичные цитоплазматические сигнальные последовательности, включают группы, полученные из TCR зета, FcR гамма, FcR бета, CD3 гамма, CD3 дельта, CD3 эпсилон, CD8, CD22, CD79a, CD79b и CD66d. В некоторых вариантах осуществления, цитоплазматическая сигнальная молекула (молекулы) в CAR содержит (содержат) цитоплазматический сигнальный домен, его часть, или последовательность, полученную из CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит сигнальную область и/или трансмембранную часть костимуляторного рецептора, такого как CD28, 4-1BB, OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, ICOS и/или других костимуляторных рецепторов. В некоторых аспектах, такой же CAR содержит как первичную цитоплазматическую сигнальную область, так и костимуляторные сигнальные компоненты.[0408] In some aspects, the CAR contains primary cytoplasmic signaling regions, domains, or sequence that regulates the primary activation of the TCR complex. Primary cytoplasmic signaling regions, domains or sequences that act in a stimulatory manner may contain signaling motifs, which are known as immunoreceptor tyrosine activating motifs or ITAMs. Examples of ITAMs containing primary cytoplasmic signal sequences include groups derived from TCR zeta, FcR gamma, FcR beta, CD3 gamma, CD3 delta, CD3 epsilon, CD8, CD22, CD79a, CD79b, and CD66d. In some embodiments, the cytoplasmic signaling molecule(s) in the CAR contains (comprises) a cytoplasmic signaling domain, a portion thereof, or a sequence derived from CD3 zeta. In some embodiments, the CAR comprises the signaling region and/or the transmembrane portion of a costimulatory receptor such as CD28, 4-1BB, OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, ICOS, and/or other costimulatory receptors. In some aspects, the same CAR contains both a primary cytoplasmic signaling region and costimulatory signaling components.

[0409] В некоторых вариантах осуществления, один или несколько различных рекомбинантных рецепторов могут содержать одну или несколько различных внутриклеточных сигнальных областей или доменов. В некоторых вариантах осуществления, первичная цитоплазматическая сигнальная область включается в CAR, в то время как костимуляторный компонент обеспечивается другим рецептором, например, другим CAR, распознающим другой антиген. В некоторых вариантах осуществления, CAR включают активирующие или стимулирующие CAR и костимуляторные CAR, все они экспрессируются на одной и той же клетке (смотри WO2014/055668). [0409] In some embodiments, one or more different recombinant receptors may contain one or more different intracellular signaling regions or domains. In some embodiments, the primary cytoplasmic signaling region is included in the CAR while the costimulatory component is provided by another receptor, such as another CAR recognizing a different antigen. In some embodiments, CARs include activating or stimulatory CARs and costimulatory CARs, all of which are expressed on the same cell (see WO2014/055668).

[0410] В некоторых аспектах, клетки содержат один или несколько стимулирующих или активирующих CAR и/или костимуляторных CAR. В некоторых вариантах осуществления, клетки дополнительно включают ингибиторные CAR (iCAR, смотри Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013), такие как CAR, распознающие антиген, иной чем антиген, ассоциируемый и/или специфичный для заболевания или состояния, при этом активирующий сигнал, доставляемый с помощью н на заболевание CAR уменьшается или ингибируется посредством связывания ингибиторного CAR с его лигандом, например, для уменьшения нецелевых воздействий.[0410] In some aspects, the cells contain one or more stimulatory or activating CARs and/or costimulatory CARs. In some embodiments, cells further comprise inhibitory CARs (iCARs, see Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013), such as CARs recognizing an antigen other than an antigen associated and/or specific for disease or condition, wherein the activating signal delivered by the CAR to the disease is reduced or inhibited by binding the inhibitory CAR to its ligand, for example, to reduce off-target effects.

[0411] В определенных вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен содержит трансмембранный и сигнальнный домен CD28, связанный с внутриклеточным доменом CD3 (например, CD3-зета). В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен содержит костимуляторные домены химерных CD28 и CD137 (4-1BB, TNFRSF9), связанные с внутриклеточным доменом CD3 зета. [0411] In certain embodiments, the intracellular signaling domain comprises a CD28 transmembrane and signaling domain associated with an intracellular CD3 domain (eg, CD3-zeta). In some embodiments, the intracellular signaling domain comprises chimeric CD28 and CD137 (4-1BB, TNFRSF9) co-stimulatory domains associated with the CD3 zeta intracellular domain.

[0412] В некоторых вариантах осуществления, CAR охватывает один или несколько, например, два или более, костимуляторных домена и первичную цитоплазматическую сигнальную область в цитоплазматической части. Иллюстративные CAR включают внутриклеточные компоненты, такие как внутриклеточная сигнальная область (области) или домен (домены) CD3-зета, CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D и/или ICOS. В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область или домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита, например, от CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D и/или ICOS, в некоторых случаях, между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью или доменом. В некоторых аспектах, костимуляторная молекула Т-лимфоцита представляет собой одну или несколько CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D и/или ICOS. [0412] In some embodiments, the CAR encompasses one or more, eg, two or more, costimulatory domains and a primary cytoplasmic signaling region in the cytoplasmic portion. Exemplary CARs include intracellular components such as the intracellular signaling region(s) or domain(s) of CD3-zeta, CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D, and/or ICOS. In some embodiments, the chimeric antigen receptor comprises an intracellular signaling region or co-stimulatory T-lymphocyte molecule domain, e.g. in some cases, between a transmembrane domain and an intracellular signaling region or domain. In some aspects, the T lymphocyte costimulatory molecule is one or more of CD28, CD137 (4-1BB), OX40 (CD134), CD27, DAP10, DAP12, NKG2D and/or ICOS.

[0413] [0413]

[0414] В некоторых случаях, CAR упоминаются как CAR первого, второго и/или третьего поколения. В некоторых аспектах, CAR первого поколения представляет собой CAR, который обеспечивает только сигнал, индуцируемый CD3-цепью при связывании антигена; в некоторых аспектах, CAR второго поколения представляет собой CAR, который обеспечивает такой сигнал и костимуляторный сигнал, например, сигнал, включающий внутриклеточный сигнальный домен из костимуляторного рецептора, такого как CD28 или CD137; в некоторых аспектах, CAR третьего поколения представляет собой CAR, который содержит множество костимуляторных доменов различных костимуляторных рецепторов.[0414] In some cases, CARs are referred to as first, second, and/or third generation CARs. In some aspects, a first generation CAR is a CAR that provides only the signal induced by the CD3 chain upon antigen binding; in some aspects, a second generation CAR is a CAR that provides such a signal and a costimulatory signal, eg, a signal comprising an intracellular signaling domain from a costimulatory receptor such as CD28 or CD137; in some aspects, a third generation CAR is a CAR that contains multiple co-stimulatory domains of various co-stimulatory receptors.

[0415] В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит внеклеточную часть, содержащую антитело или фрагмент антитела. В некоторых аспектах, химерный рецептор антигена содержит внеклеточную часть, содержащую антитело или фрагмент, и внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, антитело или фрагмент содержит scFv и внутриклеточный домен содержит ITAM. В некоторых аспектах, внутриклеточный сигнальный домен содержит сигнальный домен зета цепи, цепи CD3-зета (CD3ζ). В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит трансмембранный домен, связывающий внеклеточный домен и внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых аспектах, трансмембранный домен содержит трансмембранную часть CD28. В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержат внутриклеточный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита. Внеклеточный домен и трансмембранный домен могут быть связаны прямо или косвенно. В некоторых вариантах осуществления, внеклеточный домен и трансмембранный домен связаны с помощью спейсера, такого как любой спейсер, описанный в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, рецептор содержит внеклеточную часть молекулы, из которой получен трансмембранный домен, такой как внеклеточная часть CD28. В некоторых вариантах осуществления, химерный рецептор антигена содержит внутриклеточный домен, полученный из костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее функционального варианта, например, связки между трансмембранным доменом и внутриклеточным сигнальным доменом. В некоторых аспектах, костимуляторная молекула Т-лимфоцита представляет собой CD28 или 4-1BB.[0415] In some embodiments, the chimeric antigen receptor comprises an extracellular portion containing an antibody or antibody fragment. In some aspects, the chimeric antigen receptor contains an extracellular portion containing the antibody or fragment, and an intracellular signaling domain. In some embodiments, the antibody or fragment contains scFv and the intracellular domain contains ITAM. In some aspects, the intracellular signaling domain comprises a zeta chain, CD3-zeta (CD3ζ) chain signaling domain. In some embodiments, the chimeric antigen receptor comprises a transmembrane domain linking an extracellular domain and an intracellular signaling domain. In some aspects, the transmembrane domain contains the transmembrane portion of CD28. In some embodiments, the chimeric antigen receptor comprises the intracellular domain of a costimulatory T-lymphocyte molecule. The extracellular domain and the transmembrane domain can be linked directly or indirectly. In some embodiments, the extracellular domain and the transmembrane domain are linked by a spacer, such as any spacer described herein. In some embodiments, the receptor comprises an extracellular portion of the molecule from which the transmembrane domain is derived, such as the extracellular portion of CD28. In some embodiments, the chimeric antigen receptor comprises an intracellular domain derived from a co-stimulatory T-lymphocyte molecule or a functional variant thereof, such as a link between the transmembrane domain and the intracellular signaling domain. In some aspects, the T-lymphocyte costimulatory molecule is CD28 or 4-1BB.

[0416] Например, в некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело, например, фрагмент антитела, трансмембранный домен, который представляет собой или содержит трансмембранную часть CD28 или ее функциональный вариант, и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальную часть CD28 или ее функционального варианта и сигнальную часть CD3 зета или ее функциональный вариант. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело, например, фрагмент антитела, трансмембранный домен, который представляет собой или содержит трансмембранную часть CD28 или ее функциональный вариант, и внутриклеточный сигнальный домен, содержащий сигнальную часть 4-1BB или ее функциональный вариант и сигнальную часть CD3 зета или ее функциональный вариант. В некоторых таких вариантах осуществления, рецептор дополнительно содержит спейсер, содержащий часть молекулы Ig, такой как молекула Ig человека, такой как шарнирная часть Ig, например, шарнирная часть IgG4, такая как спейсер из одной только шарнирной части.[0416] For example, in some embodiments, the CAR comprises an antibody, e.g., an antibody fragment, a transmembrane domain that is or contains the transmembrane portion of CD28 or a functional variant thereof, and an intracellular signaling domain comprising the signal portion of CD28 or a functional variant thereof and a signal part of CD3 zeta or its functional variant. In some embodiments, the CAR comprises an antibody, e.g., an antibody fragment, a transmembrane domain that is or contains a CD28 transmembrane portion or a functional variant thereof, and an intracellular signaling domain comprising a 4-1BB signaling portion or a functional variant thereof and a CD3 zeta signaling portion. or its functional variant. In some such embodiments, the receptor further comprises a spacer comprising a portion of an Ig molecule, such as a human Ig molecule, such as an Ig hinge, eg, an IgG4 hinge, such as a hinge-only spacer.

[0417] В некоторых вариантах осуществления, трансмембранный домен рекомбинантного рецептора, например, CAR, представляет собой или содержит трансмембранный домен CD28 человека (например, Accession No. P10747.1) или CD8a (Accession No. P01732.1) или его вариант, такой как трансмембранный домен, который содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 8, 115, 178 или 179, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 8, 115, 178 или 179; в некоторых вариантах осуществления, часть рекомбинантного рецептора, содержащая трансмембранный домен, содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 9, или последовательность аминокислот, имеющую, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с ней.[0417] In some embodiments, the transmembrane domain of the recombinant receptor, e.g., CAR, is or comprises a transmembrane domain of human CD28 (e.g., Accession No. P10747.1) or CD8a (Accession No. P01732.1), or a variant thereof, such as a transmembrane domain that contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 8, 115, 178, or 179, or an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90 %, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with SEQ ID NO: 8, 115, 178 or 179; in some embodiments, the transmembrane domain-containing portion of the recombinant receptor comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 9, or an amino acid sequence having at least, or about, at least 85%, 86%, 87% , 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with it.

[0418] В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный компонент (компоненты) рекомбинантного рецептора, например, CAR, содержит внутриклеточный костимуляторный сигнальный домен человека CD28 или его функциональный вариант или часть, такой как домен с замещением GG LL в положениях 186-187 нативного белка CD28. Например, внутриклеточный сигнальный домен может содержать последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 10 или 11 или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 10 или 11. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный домен содержит внутриклеточный костимуляторный сигнальный домен 4-1BB (например, Accession No. Q07011.1) или его функциональный вариант или часть, такую как последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 12, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичность последовательности с SEQ ID NO: 12.[0418] In some embodiments, the recombinant receptor intracellular signaling component(s), e.g., CAR, comprises the human CD28 intracellular co-stimulatory signaling domain, or a functional variant or portion thereof, such as the GG LL substitution domain at positions 186-187 of the native CD28 protein . For example, an intracellular signaling domain may contain the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 10 or 11, or an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91% , 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with SEQ ID NO: 10 or 11. In some embodiments, the intracellular domain comprises an intracellular costimulatory signaling domain 4 -1BB (e.g., Accession No. Q07011.1), or a functional variant or portion thereof, such as the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 12, or an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87 %, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with SEQ ID NO: 12.

[0419] В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен рекомбинантного рецептора, например, CAR, содержит стимуляторный сигнальный домен CD3 зета человека или его функциональный вариант, такой как цитоплазматический домен 112 AA изоформы 3 CD3ζ человека (Accession No. P20963,2) или сигнальный домен CD3 зета, как описано в патенте США № 7446190 или в патенте США № 8911993. Например, в некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен содержит последовательность аминокислот, как приведено в SEQ ID NO: 13, 14 или 15, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичность последовательности с SEQ ID NO: 13, 14 или 15.[0419] In some embodiments, the intracellular signaling domain of the recombinant receptor, e.g., CAR, comprises a human CD3 zeta stimulatory signaling domain or a functional variant thereof, such as the human CD3ζ isoform 3 cytoplasmic domain 112 AA (Accession No. P20963,2) or signaling a CD3 zeta domain as described in US Pat. demonstrates at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or greater sequence identity with SEQ ID NO: 13, 14 or 15.

[0420] В некоторых аспектах, спейсер содержит только шарнирную область IgG, такую как шарнирная область IgG4 или IgG1 сама по себе, такую как спейсер только из шарнирной области, приведенной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 125. В других вариантах осуществления, спейсер представляет собой или содержит шарнирную область Ig, например, шарнирную область, полученную из IgG4, необязательно, связанную с доменами CH2 и/или CH3. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой шарнирную область Ig, например, шарнирную область IgG4, связанную с доменами CH2 и CH3, как приведено в SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой шарнирную область Ig, например, шарнирную область IgG4, связанную только с доменом CH3, как приведено в SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой или содержит последовательность, обогащенную глицином-серином, или другой гибкий линкер, такой как известные гибкие линкеры. В некоторых вариантах осуществления, спейсер представляет собой шарнирную область CD8a, такую как приведено в любой из SEQ ID NOs: 117-119, шарнирную область FcγRIIIa, как приведено в SEQ ID NO: 124, шарнирную область CTLA4, как приведено в SEQ ID NO: 120, или шарнирную область PD-1, такую как приведено в SEQ ID NO: 122.[0420] In some aspects, the spacer contains only an IgG hinge region, such as an IgG4 or IgG1 hinge region per se, such as a hinge-only spacer set forth in SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 125. In other embodiments, implementation, the spacer is or contains an Ig hinge region, for example, a hinge region derived from IgG4, optionally associated with CH2 and/or CH3 domains. In some embodiments, the spacer is an Ig hinge, e.g., an IgG4 hinge associated with the CH2 and CH3 domains as set forth in SEQ ID NO: 4. In some embodiments, the spacer is an Ig hinge, e.g. IgG4 bound only to the CH3 domain as set forth in SEQ ID NO: 3. In some embodiments, the spacer is or contains a glycine-serine enriched sequence or other flexible linker such as known flexible linkers. In some embodiments, the spacer is a CD8a hinge such as given in any of SEQ ID NOs: 117-119, an FcγRIIIa hinge as given in SEQ ID NO: 124, a CTLA4 hinge as given in SEQ ID NOs: 120, or a hinge region PD-1 such as shown in SEQ ID NO: 122.

[0421] Например, в некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело, такое как фрагмент антитела, включая scFv, спейсер, такой как спейсер, содержащий часть молекулы иммуноглобулина, такую часть, как шарнирная область и/или одна или несколько константных областей молекулы тяжелой цепи, такой как спейсер, содержащий Ig-шарнирную область, трансмембранный домен, содержащий полностью или частично трансмембранный домен, полученный из CD28, внутриклеточный сигнальный домен, полученный из CD28, и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело или фрагмент, такой как scFv, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, полученный из CD28 трансмембранный домен, полученный из 4-1BB внутриклеточный сигнальный домен и полученный из CD3 зета сигнальный домен. [0421] For example, in some embodiments, the CAR comprises an antibody, such as an antibody fragment, including scFv, a spacer, such as a spacer containing a portion of an immunoglobulin molecule, such as a hinge region, and/or one or more constant regions of a heavy chain molecule , such as a spacer containing an Ig hinge region, a transmembrane domain containing all or part of the transmembrane domain derived from CD28, an intracellular signaling domain derived from CD28, and a CD3 zeta signaling domain. In some embodiments, the CAR comprises an antibody or fragment such as an scFv, a spacer such as any of the spacers comprising an Ig hinge region, a CD28-derived transmembrane domain, a 4-1BB-derived intracellular signaling domain, and a CD3-derived zeta signaling domain. .

[0422] Рекомбинантные рецепторы, такие как CAR, экспрессируемые клетками, вводимыми субъекту, как правило, распознают или специфично связывают молекулу, которая экспрессируется, при заболевании или состоянии, или их клетками, которые лечатся, ассоциируется с ними и/или является специфичной к ним. При специфичном связывании с молекулой, например, с антигеном, рецептор, как правило, доставляет иммуностимулирующий сигнал, такой как ITAM-трансдуцированный сигнал, в клетку, тем самым облегчая иммунную реакцию, нацеленную на заболевание или состояние. Например, в некоторых вариантах осуществления, клетки экспрессируют CAR, который специфично связывается с антигеном, экспрессируемым клеткой или тканью заболевания или состояния или связанным с заболеванием или состоянием. Неограничивающие иллюстративные последовательности CAR приведены в SEQ ID NOs: 126-177. [0422] Recombinant receptors, such as CARs, expressed by cells administered to a subject typically recognize or specifically bind the molecule that is expressed, in the disease or condition, or their cells being treated, associates with, and/or is specific to them . When specifically bound to a molecule, such as an antigen, the receptor typically delivers an immunostimulatory signal, such as an ITAM-transduced signal, into the cell, thereby facilitating an immune response targeting the disease or condition. For example, in some embodiments, the cells express a CAR that specifically binds to an antigen expressed by, or associated with, the disease or condition, cell or tissue. Non-limiting exemplary CAR sequences are shown in SEQ ID NOs: 126-177.

[0423] В некоторых вариантах осуществления, кодируемая последовательность CAR может дополнительно содержать сигнальную последовательность или сигнальный пептид, который направляет или доставляет CAR к поверхности клетки, в которой экспрессируется CAR. В некоторых вариантах осуществления, сигнальный пептид получают из трансмембранного белка. В некоторых примерах сигнальный пептид получают из CD8a, CD33 или IgG. Иллюстративные сигнальные пептиды включают последовательности, приведенные в SEQ ID NOs: 21, 75 и 76, или их вариант.[0423] In some embodiments, the encoded CAR sequence may further comprise a signal sequence or signal peptide that directs or delivers the CAR to the cell surface in which the CAR is expressed. In some embodiments, the signal peptide is derived from a transmembrane protein. In some examples, the signal peptide is derived from CD8a, CD33, or IgG. Illustrative signal peptides include the sequences shown in SEQ ID NOs: 21, 75 and 76, or a variant thereof.

[0424] В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-CD19, такое как фрагмент антитела, включая scFv, спейсер, такой как спейсер, содержащий часть молекулы иммуноглобулина, такую как шарнирная область, и/или одну или несколько константных областей молекулы тяжелой цепи, такой как спейсеры, содержащие любые Ig-шарнирные области, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, трансмембранный домен, содержащий его полностью или частично полученный из трансмембранного домена CD28, полученный из CD28 внутриклеточный сигнальный домен и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-CD19 или фрагмент, такой как scFv, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, полученный из CD28 трансмембранный домен, полученный из 4-1BB внутриклеточный сигнальный домен и полученный из CD3 зета сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, такие конструкции CAR дополнительно содержат рибосомный перескакивающий элемент T2A и/или последовательность tEGFR, например, в прямом направлении после CAR. [0424] In some embodiments, the CAR comprises an anti-CD19 antibody, such as an antibody fragment, including scFv, a spacer, such as a spacer containing an immunoglobulin moiety, such as a hinge region, and/or one or more constant regions of a heavy chain molecule , such as spacers containing any Ig hinge regions or other spacers described herein, a transmembrane domain containing all or part of it CD28 transmembrane domain derived, CD28 derived intracellular signaling domain and CD3 zeta signaling domain. In some embodiments, the CAR comprises an anti-CD19 antibody or fragment such as an scFv, a spacer such as any of the spacers containing an Ig hinge region, or other spacers described herein, a CD28-derived transmembrane domain derived from 4 -1BB intracellular signaling domain and CD3-derived zeta signaling domain. In some embodiments, such CAR constructs further comprise a T2A ribosome jumper and/or a tEGFR sequence, eg, downstream of the CAR.

[0425] В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-BCMA или фрагмент, такой как любое из антител анти-BCMA человека, включая sdAbs и scFv, описанных в настоящем документе, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, трансмембранный домен CD28, внутриклеточный сигнальный домен CD28 и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, CAR содержит антитело анти-BCMA или фрагмент, такой как любое из антител анти-BCMA человека, включая sdAbs и scFv, описанные в настоящем документе, спейсер, такой как любой из спейсеров, содержащих Ig-шарнирную область, или другие спейсеры, описанные в настоящем документе, трансмембранный домен CD28, внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB и сигнальный домен CD3 зета. В некоторых вариантах осуществления, такие конструкции CAR дополнительно содержат рибосомный перескакивающий элемент T2A и/или последовательность tEGFR, например, в прямом направлении после CAR. [0425] In some embodiments, the CAR comprises an anti-BCMA antibody or fragment, such as any of the human anti-BCMA antibodies, including sdAbs and scFv described herein, a spacer, such as any of the spacers containing the Ig hinge region , or other spacers described herein, CD28 transmembrane domain, CD28 intracellular signaling domain, and CD3 zeta signaling domain. In some embodiments, the CAR comprises an anti-BCMA antibody or fragment, such as any of the human anti-BCMA antibodies, including the sdAbs and scFv described herein, a spacer, such as any of the spacers containing an Ig hinge region, or others. the spacers described herein, the CD28 transmembrane domain, the 4-1BB intracellular signaling domain, and the CD3 zeta signaling domain. In some embodiments, such CAR constructs further comprise a T2A ribosome jumper and/or a tEGFR sequence, eg, downstream of the CAR.

2. Химерный рецептор аутоантител (CAAR)2. Chimeric Autoantibody Receptor (CAAR)

[0426] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой химерный рецептор аутоантител (CAAR). В некоторых вариантах осуществления, CAAR связывает, например, специфично связывает, или распознает аутоантитело. В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие CAAR, такие как генно-инженерные Т-лимфоциты для экспрессирования CAAR, можно использовать для связывания и уничтожения аутоантитело-экспрессирующих клеток, но не клеток, экспрессирующих нормальные антитела. В некоторых вариантах осуществления, CAAR-экспрессирующие клетки можно использовать для лечения аутоиммунного заболевания, связанного с экспрессированием аутоантигенов, такого как аутоиммунные заболевания. В некоторых вариантах осуществления, CAAR-экспрессирующие клетки могут нацеливаться на B-лимфоциты, которые в конечном счете продуцируют аутоантитела и проявляют аутоантитела на их клеточных поверхностях, метят эти B-лимфоциты как заболевание-специфичные мишени для терапевтического вмешательства. В некоторых вариантах осуществления, CAAR-экспрессирующие клетки можно использовать для эффективного нацеливания на патогенные B-лимфоциты и на их уничтожение при аутоиммунных заболеваниях посредством нацеливания, вызывающих заболевание B-лимфоцитов с использованием антиген-специфичного химерного рецептора аутоантител. В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантный рецептор представляет собой CAAR, такой как любой CAAR, описанный в публикации заявки на патент США № 2017/0051035.[0426] In some embodiments, the recombinant receptor is a chimeric autoantibody receptor (CAAR). In some embodiments, the CAAR binds, eg, specifically binds to, or recognizes an autoantibody. In some embodiments, cells expressing CAAR, such as engineered T lymphocytes for expressing CAAR, can be used to bind and kill autoantibody expressing cells, but not cells expressing normal antibodies. In some embodiments, CAAR-expressing cells can be used to treat an autoimmune disease associated with the expression of autoantigens, such as autoimmune diseases. In some embodiments, CAAR-expressing cells can target B lymphocytes that eventually produce autoantibodies and display autoantibodies on their cell surfaces, label these B lymphocytes as disease-specific targets for therapeutic intervention. In some embodiments, CAAR-expressing cells can be used to effectively target and kill pathogenic B lymphocytes in autoimmune diseases by targeting disease-causing B lymphocytes using an antigen-specific chimeric autoantibody receptor. In some embodiments, the recombinant receptor is a CAAR, such as any CAAR described in US Patent Application Publication No. 2017/0051035.

[0427] В некоторых вариантах осуществления, CAAR содержит аутоантитело-связывающий домен, трансмембранный домен и одну или несколько внутриклеточных сигнальных областей или доменов (также называемых взаимозаменяемо цитоплазматическим сигнальным доменом или областью). В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен. В некоторых вариантах осуществления, внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичную сигнальную область, сигнальный домен, который может стимулировать и/или индуцировать первичный сигнал активирования в Т-лимфоците, сигнальный домен компонента рецептора Т-лимфоцита (TCR) (например, внутриклеточный сигнальный домен или область зета цепи CD3-зета цепи (CD3ζ) или его функциональный вариант или ее сигнальную часть), и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM). [0427] In some embodiments, the CAAR comprises an autoantibody-binding domain, a transmembrane domain, and one or more intracellular signaling regions or domains (also referred to interchangeably as a cytoplasmic signaling domain or region). In some embodiments, the intracellular signaling region contains an intracellular signaling domain. In some embodiments, the intracellular signaling domain is or contains a primary signaling region, a signaling domain that can stimulate and/or induce a primary activation signal in a T-lymphocyte, a T-lymphocyte receptor (TCR) component signaling domain (e.g., an intracellular signaling domain or a CD3-zeta chain (CD3ζ) chain zeta region or a functional variant thereof or a signal portion thereof), and/or an immunoreceptor tyrosine activating motif (ITAM) signaling domain.

[0428] В некоторых вариантах осуществления, аутоантитело- связывающий домен содержит аутоантиген или его фрагмент. Выбор аутоантигена может зависеть от типа целевого аутоантитела. Например, аутоантиген может выбираться потому, что он распознает аутоантитело на целевой клетке, такой как B-лимфоцит, связанной с конкретным болезненным состоянием, например, с аутоиммунным заболеванием, такими как аутоантитело-медиируемое аутоиммунное заболевание. В некоторых вариантах осуществления, аутоиммунное заболевание включает вульгарный пемфигус (PV). Иллюстративные аутоантигены включют десмоглеин 1 (Dsg1) и Dsg3.[0428] In some embodiments, the autoantibody-binding domain comprises a self-antigen or fragment thereof. The choice of autoantigen may depend on the type of autoantibody targeted. For example, the autoantigen may be selected because it recognizes an autoantibody on a target cell, such as a B-lymphocyte, associated with a particular disease state, such as an autoimmune disease, such as an autoantibody-mediated autoimmune disease. In some embodiments, the autoimmune disease includes pemphigus vulgaris (PV). Exemplary autoantigens include desmoglein 1 (Dsg1) and Dsg3.

3. TCR3.TCR

[0429] В некоторых вариантах осуществления предлагаются генно-инженерные клетки, такие как Т-лимфоциты, которые экспрессируют рецептор Т-лимфоцита (TCR) или его антиген-связывающую часть, которая распознает пептидный эпитоп или эпитоп Т-лимфоцита целевого полипептида, такого как антиген опухоли, вирусный или аутоиммунный белок. В некоторых аспектах, TCR представляет собой или содержит рекомбинантный TCR. [0429] In some embodiments, engineered cells, such as T-lymphocytes, are provided that express a T-lymphocyte receptor (TCR), or an antigen-binding portion thereof, that recognizes a peptide or T-lymphocyte epitope of a target polypeptide, such as an antigen. tumors, viral or autoimmune protein. In some aspects, the TCR is or contains a recombinant TCR.

[0430] В некоторых вариантах осуществления, “рецептор Т-лимфоцитов” или “TCR” представляет собой молекулу, которая содержит вариабельные цепи α и β (также известные как TCRα и TCRβ, соответственно) или вариабельные цепи γ и δ (также известные как TCRγ и TCRδ, соответственно) или их антиген-связывающие части и которые способны специфически связываться с пептидом, связанным с молекулой MHC. В некоторых вариантах осуществления, TCR находится в форме αβ. Как правило, TCR, которые находятся в формах αβ и γδ, являются, в целом, структурно сходными, но Т-лимфоциты, экспрессирующие их, могут иметь различные анатомические положения или функции. TCR может находиться на поверхности клетки или в растворимой форме. Как правило, TCR находится на поверхности Т-лимфоцитов (или T-лимфоцитов), где они, как правило, ответствен за распознавание антигенов, связанных с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC). [0430] In some embodiments, a "T-lymphocyte receptor" or "TCR" is a molecule that contains α and β variable chains (also known as TCRα and TCRβ, respectively) or γ and δ variable chains (also known as TCRγ and TCRδ, respectively) or antigen-binding portions thereof, and which are capable of specifically binding to a peptide associated with an MHC molecule. In some embodiments, the TCR is in the αβ form. Typically, TCRs that are in the αβ and γδ forms are broadly structurally similar, but T lymphocytes expressing them may have different anatomical positions or functions. The TCR may be on the surface of the cell or in a soluble form. Typically, the TCR is found on the surface of T-lymphocytes (or T-lymphocytes), where they are generally responsible for recognizing antigens associated with major histocompatibility complex (MHC) molecules.

[0431] Если не утверждается иного, термин “TCR” как понимается, должен охватывать полноразмерные TCR, а также их антиген-связывающие части или антиген-связывающие фрагменты. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой интактный или полноразмерный TCR, включая TCR в форме αβ или в форме γδ. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой антиген-связывающую часть, которая меньше полноразмерного TCR, но которая связывается со специфичной пептидной связью в молекуле MHC, например, связывается с комплексом MHC-пептид. В некоторых случаях, антиген-связывающая часть или фрагмент TCR может содержать только часть структурных доменов полноразмерного или интактного TCR, но кроме того, он способен связывать пептидный эпитоп, такой как комплекс MHC-пептид, с которым связывается полноразмерный TCR. В некоторых случаях, антиген-связывающая часть содержит вариабельные домены TCR, такие как вариабельная цепь α и вариабельная цепь β TCR, достаточные для образования сайта связывания для связывания конкретного комплекса MHC-пептид. Как правило, вариабельные цепи TCR содержат комплементарность, определяющую области, вовлеченные в распознавание пептида, MHC и/или комплекса MHC-пептид. [0431] Unless otherwise stated, the term “TCR” is understood to encompass full length TCRs as well as their antigen-binding portions or antigen-binding fragments. In some embodiments, the TCR is an intact or full length TCR, including TCR in the αβ form or in the γδ form. In some embodiments, the TCR is an antigen-binding portion that is smaller than the full length TCR, but that binds to a specific peptide bond in the MHC molecule, eg, binds to an MHC-peptide complex. In some cases, an antigen-binding portion or fragment of a TCR may contain only a portion of the structural domains of a full-length or intact TCR, but in addition it is capable of binding a peptide epitope, such as an MHC-peptide complex, to which the full-length TCR binds. In some cases, the antigen-binding portion contains TCR variable domains, such as the TCR variable α and β variable chain, sufficient to form a binding site for binding a particular MHC-peptide complex. Typically, TCR variable chains contain complementarity defining regions involved in recognition of the peptide, MHC, and/or MHC-peptide complex.

[0432] В некоторых вариантах осуществления, вариабельные домены TCR содержат гипервариабельные петли или области, определяющие комплементарность (CDR), которые, как правило, вносят главный вклад в способности распознавания и связывания антигена и в специфичность. В некоторых вариантах осуществления, TCR CDR или их сочетание формируют весь или, по существу, весь антиген-связывающий сайт данной молекулы TCR. Различные CDR в вариабельной области цепи TCR, как правило, разделены рамочными областями (FR), которые, как правило, проявляют меньшую вариабельность среди молекул TCR по сравнению с CDR (смотри, например, Jores et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988; смотри также Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003). В некоторых вариантах осуществления, CDR3 представляет собой главную CDR, ответственную за связывание антигена или специфичность, или является самой важной среди трех CDR в данной вариабельной области TCR для распознавания антигена и/или для взаимодействия с протестированной пептидной частью комплекса пептид-MHC. В некоторых контекстах, CDR1 цепи альфа может взаимодействовать с N-конечной частью определенных антигенных пептидов. В некоторых контекстах, CDR1 цепи бета может взаимодействовать с C-конечной частью пептида. В некоторых контекстах, CDR2 вносит главный вклад или представляет собой главную CDR, ответственную за взаимодействие с частью MHC комплекса MHC-пептид или за ее распознавание. В некоторых вариантах осуществления, вариабельная область β-цепи может содержать дополнительную гипервариабельную область (CDR4 или HVR4), которая, как правило, вовлечена в связывание суперантигена, а не в распознавание антигена (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426).[0432] In some embodiments, the TCR variable domains comprise hypervariable loops or complementarity determining regions (CDRs), which typically make a major contribution to antigen recognition and binding abilities and specificity. In some embodiments, the TCR CDR, or a combination thereof, forms all or substantially all of the antigen-binding site of a given TCR molecule. The various CDRs in the variable region of the TCR chain are generally separated by frame regions (FRs), which tend to exhibit less variability among TCR molecules compared to CDRs (see, e.g., Jores et al., Proc. Nat'l Acad. Sci U.S.A. 87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988; see also Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003). In some embodiments, the CDR3 is the major CDR responsible for antigen binding or specificity, or is the most important of the three CDRs in a given TCR variable region for antigen recognition and/or interaction with the tested peptide portion of the peptide-MHC complex. In some contexts, the CDR1 alpha chain may interact with the N-terminus of certain antigenic peptides. In some contexts, the beta chain CDR1 may interact with the C-terminus of the peptide. In some contexts, CDR2 is the main contributor or is the main CDR responsible for interacting with or recognizing the MHC portion of the MHC-peptide complex. In some embodiments, the β-chain variable region may contain an additional hypervariable region (CDR4 or HVR4) that is typically involved in superantigen binding rather than antigen recognition (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426 ).

[0433] В некоторых вариантах осуществления, TCR также может содержать константный домен, трансмембранный домен и/или короткий цитоплазматический хвост (смотри, например, Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997). В некоторых аспектах, каждая цепь TCR может иметь один N-конечный вариабельный домен иммуноглобулина, один константный домен иммуноглобулина, трансмембранную область и короткий цитоплазматический хвост на C-конечном краю. В некоторых вариантах осуществления, TCR ассоциируется с инвариантными белками комплекса CD3, вовлеченными в медиирование трансдукции сигнала. [0433] In some embodiments, the TCR may also comprise a constant domain, a transmembrane domain, and/or a short cytoplasmic tail (see, e.g., Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications , p. 4:33, 1997). In some aspects, each TCR chain may have one N-terminal immunoglobulin variable domain, one immunoglobulin constant domain, a transmembrane region, and a short cytoplasmic tail at the C-terminal edge. In some embodiments, the TCR is associated with invariant CD3 complex proteins involved in signal transduction mediation.

[0434] В некоторых вариантах осуществления, цепь TCR содержит один или несколько константных доменов. Например, внеклеточная часть данной цепи TCR (например, α-цепи или β-цепи) может содержать два иммуноглобулино-подобных домена, таких как вариабельный домен (например, Vα или Vβ; как правило, аминокислоты 1-116 на основе нумерации Kabat, Kabat et al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.) и константный домен (например, константный домен α-цепи или Cα, как правило, положения 117-259 цепи на основе нумерации Kabat или константный домен цепи β или Cβ, как правило, положения 117-295 цепи согласно Kabat) вблизи клеточной мембраны. Например, в некоторых случаях, внеклеточная часть TCR, сформированная из двух цепей, содержит два удаленных от мембраны константных домена и два близких к мембране вариабельных домена, каждый из этих вариабельных доменов содержит CDR. Константный домен TCR может содержать короткие соединительные последовательности, в которых цистеиновый остаток образует дисульфидную связь, тем самым соединяя две цепи TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR может содержать дополнительный цистеиновый остаток в каждой из цепей α и β, так что TCR содержит две дисульфидные связи в константных доменах. [0434] In some embodiments, the TCR chain contains one or more constant domains. For example, the extracellular portion of a given TCR chain (eg, α-chain or β-chain) may contain two immunoglobulin-like domains, such as a variable domain (eg, Vα or Vβ; typically amino acids 1-116 based on Kabat, Kabat numbering). et al., “Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.) and a constant domain (e.g., α-chain constant domain or Cα, usually , chain positions 117-259 based on Kabat numbering, or chain constant domain β or Cβ, typically chain positions 117-295 according to Kabat) near the cell membrane. For example, in some cases, the extracellular part of the TCR, formed from two chains, contains two constant domains remote from the membrane and two variable domains close to the membrane, each of these variable domains contains a CDR. The TCR constant domain may contain short junction sequences in which a cysteine residue forms a disulfide bond, thereby joining two TCR chains. In some embodiments, the TCR may contain an additional cysteine residue in each of the α and β chains such that the TCR contains two disulfide bonds in the constant domains.

[0435] В некоторых вариантах осуществления, цепи TCR содержат трансмембранный домен. В некоторых вариантах осуществления, трансмембранный домен положительно заряжен. В некоторых случаях, цепь TCR содержит цитоплазматический хвост. В некоторых случаях, структура позволяет TCR ассоциироваться с другими молекулами подобными CD3 и с их субъединицами. Например, TCR, содержащий константные домены с трансмембранной областью, может фиксировать белок в клеточной мембране и ассоциироваться с инвариантными субъединицами сигнального аппарата или комплекса CD3. Внутриклеточные хвосты сигнальных субъединиц CD3 (например, цепи CD3γ, CD3δ, CD3ε и CD3ζ) содержат один или несколько иммунорецепторных тирозиновых активирующих мотивов или ITAM, которые вовлечены в способность передачи сигналов комплекса TCR. [0435] In some embodiments, the TCR chains contain a transmembrane domain. In some embodiments, the transmembrane domain is positively charged. In some cases, the TCR chain contains a cytoplasmic tail. In some cases, the structure allows the TCR to associate with other CD3-like molecules and their subunits. For example, a TCR containing constant domains with a transmembrane region can fix a protein in the cell membrane and associate with invariant signaling subunits or the CD3 complex. The intracellular tails of the CD3 signaling subunits (eg, CD3γ, CD3δ, CD3ε, and CD3ζ chains) contain one or more immunoreceptor tyrosine activating motifs or ITAMs that are involved in the signaling capability of the TCR complex.

[0436] В некоторых вариантах осуществления, TCR может представлять собой гетеродимер из двух цепей α и β (или, необязательно, γ и δ) или он может представлять собой одноцепочечную конструкцию TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой гетеродимер, содержащий две отдельные цепи (цепи α и β или цепи γ и δ), которые связаны, например, дисульфидной связью или дисульфидными связями.[0436] In some embodiments, the TCR may be a two-chain heterodimer of α and β (or optionally γ and δ), or it may be a single chain TCR construct. In some embodiments, the TCR is a heterodimer containing two separate chains (α and β chains or γ and δ chains) that are linked, for example, by a disulfide bond or disulfide bonds.

[0437] В некоторых вариантах осуществления, TCR может генерироваться из известной последовательности (последовательностей) TCR, таких как последовательности цепей Vα,β, для которых легко доступна, по существу, полноразмерная кодирующая последовательность. Способы получения полноразмерных последовательностей TCR, включая последовательности цепи V, из клеточных источников хорошо известны. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты, кодирующие TCR, можно получить из различных источников, например, с помощью цепной реакции полимеразы (PCR), амплификации TCR-кодирующих нуклеиновых кислот внутри данной клетки или клеток или выделенных из них или синтеза публично доступных последовательностей ДНК TCR. [0437] In some embodiments, the TCR may be generated from known TCR sequence(s), such as the Vα,β chain sequences, for which a substantially full length coding sequence is readily available. Methods for obtaining full-length TCR sequences, including V chain sequences, from cellular sources are well known. In some embodiments, TCR-encoding nucleic acids can be obtained from a variety of sources, such as polymerase chain reaction (PCR), amplification of TCR-encoding nucleic acids within or isolated from a given cell or cells, or synthesis of publicly available TCR DNA sequences. .

[0438] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные рецепторы включают рекомбинантные TCR и/или TCR, клонированные из встречающихся в природе Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, клон Т-лимфоцита с высоким сродством к целевому антигену (например, к антигену рака) идентифицируется, выделяется у пациента и вводится в клетки. В некоторых вариантах осуществления, клон TCR к целевому антигену генерируется в трансгенных мышах, полученных с помощью генной инженерии, с генами иммунной системы человека (например, системы антигена лейкоцитов человека или HLA). Смотри, например, антигены опухоли (смотри, например, Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 и Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808. В некоторых вариантах осуществления, используют фаговый дисплей для выделения TCR против целевого антигена (смотри, например, Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 и Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354.[0438] In some embodiments, the recombinant receptors include recombinant TCRs and/or TCRs cloned from naturally occurring T lymphocytes. In some embodiments, a T lymphocyte clone with high affinity for a target antigen (eg, a cancer antigen) is identified, isolated from a patient, and introduced into cells. In some embodiments, a TCR clone for the target antigen is generated in genetically engineered transgenic mice with genes for the human immune system (eg, human leukocyte antigen or HLA system). See, for example, tumor antigens (see, for example, Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 and Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808. In some embodiments, use phage display for isolating TCRs against a target antigen (see e.g. Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 and Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354.

[0439] В некоторых вариантах осуществления, TCR получают из биологического источника, например, из клеток, например, из Т-лимфоцитов (например, цитотоксичных Т-лимфоцитов), гибридом T-лимфоцитов или другого публично доступного источника. В некоторых вариантах осуществления, T-лимфоциты можно получить из выделенных клеток in vivo. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой тимически выбранный TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой неоэпитопно-рестриктированный TCR. В некоторых вариантах осуществления, T-лимфоциты могут представлять собой культивированную гибридому или клон T-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающую часть можно генерировать синтетически, зная последовательность TCR. [0439] In some embodiments, the TCR is derived from a biological source, eg, cells, eg, T-lymphocytes (eg, cytotoxic T-lymphocytes), T-lymphocyte hybridomas, or other publicly available source. In some embodiments, T-lymphocytes can be obtained from isolated cells in vivo. In some embodiments, the TCR is thymically selected TCR. In some embodiments, the TCR is a neoepitope-restricted TCR. In some embodiments, the T lymphocytes may be a cultured hybridoma or a clone of T lymphocytes. In some embodiments, the TCR, or an antigen-binding portion thereof, can be generated synthetically from knowledge of the sequence of the TCR.

[0440] В некоторых вариантах осуществления, TCR генерируется из TCR, идентифицированного или выбранного из скрининга библиотеки кандидатов в TCR против целевого полипептидного антигена или его целевого эпитопа для Т-лимфоцитов. Библиотеки TCR можно генерировать посредством амплификации репертуара Vα и Vβ из Т-лимфоцитов, выделенных у субъектов, включая клетки, присутствующие в PBMC, селезенке или в другом лимфоидном органе. В некоторых случаях, Т-лимфоциты могут амплифицироваться из противоопухолевых эффекторных лимфоцитов (TIL). В некоторых вариантах осуществления, библиотеки TCR можно генерировать из клеток CD4+ или CD8+. В некоторых вариантах осуществления, TCR можно амплифицировать из источника Т-лимфоцитов нормального здорового субъекта, то есть, из библиотек нормальных TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR можно амплифицировать из источника Т-лимфоцитов болезненного субъекта, то есть, из библиотек болезненных TCR. В некоторых вариантах осуществления, используют дегеративные праймеры для амплификации репертуара генов Vα и Vβ, например, посредством RT-PCR, в таких образцах, как Т-лимфоциты, полученные у людей. В некоторых вариантах осуществления, библиотеки scTv могут быть собраны из библиотек наивных Vα и Vβ, в которых амплифицированные продукты клонируются или собираются для разделения линкером. В зависимости от источника субъекта и клеток, библиотеки могут быть специфичными к аллели HLA. Альтернативно, в некоторых вариантах осуществления, библиотеки TCR могут генерироваться посредством мутагенеза или диверсификации исходной или каркасной молекулы TCR. В некоторых аспектах, TCR подвергают воздействию направленной эволюции, например, посредством мутагенеза, например, цепи α или β. В некоторых аспектах, изменяют конкретные остатки в CDR TCR. В некоторых вариантах осуществления, выбранные TCR можно модифицировать посредством созревания сродства. В некоторых вариантах осуществления, антиген-специфичные Т-лимфоциты могут подвергаться селекции, например, с помощью скрининга, для оценки активности CTL против пептида. В некоторых аспектах, TCR, например, присутствующие на антиген-специфичных Т-лимфоцитах, могут подвергаться селекции, например, по активности связывания, например, по конкретному сродству или авидности к антигену. [0440] In some embodiments, the TCR is generated from a TCR identified or selected from a TCR candidate library screened against a target polypeptide antigen or T-lymphocyte target epitope thereof. TCR libraries can be generated by amplifying the Vα and Vβ repertoire from T lymphocytes isolated from subjects, including cells present in the PBMC, spleen, or other lymphoid organ. In some cases, T-lymphocytes can be amplified from antitumor effector lymphocytes (TILs). In some embodiments, TCR libraries can be generated from CD4+ or CD8+ cells. In some embodiments, the TCR can be amplified from a normal healthy subject's T-lymphocyte source, ie, normal TCR libraries. In some embodiments, the TCR can be amplified from the diseased subject's T-lymphocyte source, ie, diseased TCR libraries. In some embodiments, degenerative primers are used to amplify the Vα and Vβ gene repertoire, for example by RT-PCR, in samples such as human T lymphocytes. In some embodiments, scTv libraries may be assembled from libraries naive Vα and Vβ, in which the amplified products are cloned or assembled for linker separation. Depending on the source of the subject and the cells, the libraries may be specific for the HLA allele. Alternatively, in some embodiments, TCR libraries may be generated by mutagenesis or diversification of the parent or framework TCR molecule. In some aspects, the TCR is subjected to directed evolution, eg via mutagenesis, eg, α or β chain. In some aspects, specific residues in the CDR of the TCR are changed. In some embodiments, the selected TCRs can be modified through affinity maturation. In some embodiments, antigen-specific T lymphocytes can be selected, for example by screening, to evaluate CTL activity against a peptide. In some aspects, TCRs, eg, those present on antigen-specific T lymphocytes, may be selected, eg, for binding activity, eg, for specific affinity or avidity for an antigen.

[0441] В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающая часть представляет собой группу, которая модифицируется или которую получают с помощью генной инженерии. В некоторых вариантах осуществления, используют способы направленной эволюции для генерирования TCR с измененными свойствами, например, с более высоким сродством к конкретному комплексу MHC-пептид. В некоторых вариантах осуществления, направленная эволюция достигается с помощью способов дисплея, включая, но, не ограничиваясь этим, дрожжевой дисплей (Holler et al., (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al., (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), фаговый дисплей (Li et al., (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54), или Т-лимфоцитный дисплей (Chervin et al., (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84). В некоторых вариантах осуществления, подходы с дисплеем включают генную инженерию или модифицирование известного исходного или эталонного TCR. Например, в некоторых случаях, TCR дикого типа можно использовать как шаблон для продуцирования мутагенизированных TCR, в которых CDR мутируют в одном или нескольких остатках, и выбираются мутанты с желаемым измененным свойством, таким как более высокое сродство к желаемому целевому антигену.[0441] In some embodiments, the TCR, or an antigen-binding portion thereof, is a group that is modified or that is genetically engineered. In some embodiments, guided evolution techniques are used to generate TCRs with altered properties, such as higher affinity for a particular MHC-peptide complex. In some embodiments, directed evolution is achieved using display methods, including but not limited to yeast display (Holler et al., (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al., (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), phage display (Li et al., (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54), or T-lymphocyte display (Chervin et al., (2008) J Immunol Methods , 339, 175-84). In some embodiments, display approaches include genetic engineering or modification of a known parent or reference TCR. For example, in some cases, wild-type TCRs can be used as a template to produce mutagenized TCRs in which the CDRs are mutated at one or more residues and mutants with a desired altered property, such as higher affinity for the desired target antigen, are selected.

[0442] В некоторых вариантах осуществления, пептиды целевого полипептида для использования при продуцировании или генерировании TCR, представляющего интерес, известны, или их можно легко идентифицировать рутинным образом. В некоторых вариантах осуществления, пептиды, пригодные для использования при генерировании TCR или их антиген-связывающих частей, можно определить на основе присутствия HLA-рестриктированного мотива в целевом полипептиде, представляющем интерес, таком как целевой полипептид, описанный ниже. В некоторых вариантах осуществления, пептиды идентифицируют с использованием компьютерных предикативных моделей рутинным образом. В некоторых вариантах осуществления, для предсказания сайтов связывания MHC класса I, такие модели включают, но, не ограничиваясь этим, ProPred1 (Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17(12):1236-1237, и SYFPEITHI (смотри, Schuler et al., (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007). В некоторых вариантах осуществления, MHC-рестриктированный эпитоп представляет собой HLA-A0201, который экспрессируется приблизительно у 39-46% всех европейцев, и, следовательно, представляет собой пригодный для использования выбор антигена MHC для применения при приготовлении TCR или другой молекулы, связывающей MHC-пептид.[0442] In some embodiments, the peptides of the target polypeptide for use in the production or generation of the TCR of interest are known or can be readily identified in a routine manner. In some embodiments, peptides useful in generating TCRs or antigen-binding portions thereof can be determined based on the presence of an HLA restricted motif in a target polypeptide of interest, such as the target polypeptide described below. In some embodiments, peptides are identified using computer predictive models. in a routine way. In some embodiments, for predicting class I MHC binding sites, such models include, but are not limited to, ProPred1 (Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17(12):1236-1237), and SYFPEITHI (see Schuler et al. , (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007. In some embodiments, the MHC restricted epitope is HLA-A0201, which is expressed in approximately 39-46% of all Europeans, and therefore , is a usable choice of MHC antigen for use in the preparation of a TCR or other MHC-peptide binding molecule.

[0443] Известны HLA-A0201-связывающие мотивы и сайты расщепления для протеасом и иммунных протеасом с использованием компьютерных предикативных моделей. Для предсказания сайтов связывания MHC класса I, такие модели включают, но, не ограничиваясь этим, ProPred1 (описанную более подробно в Singh and Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001), и SYFPEITHI (смотри, Schuler et al., SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007).[0443] HLA-A0201 binding motifs and cleavage sites for proteasomes and immune proteasomes are known using computer predictive models. For prediction of MHC class I binding sites, such models include, but are not limited to, ProPred1 (described in more detail in Singh and Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001), and SYFPEITHI (see Schuler et al., SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007).

[0444] В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающая часть может представлять собой рекомбинантно продуцируемый природный белок или его мутированную форму, в которой изменены одно или несколько свойств, таких как характеристики связывания. В некоторых вариантах осуществления, TCR можно получать от одного из различных видов животных, таких как люди, мыши, крысы или другие млекопитающие. TCR может быть связан с клеткой или находиться в растворимой форме. В некоторых вариантах осуществления, для целей предлагаемых способов, TCR находится в форме, связанной с клеткой, экспрессируемый на поверхности клеток.[0444] In some embodiments, the TCR, or an antigen-binding portion thereof, may be a recombinantly produced natural protein or a mutated form thereof in which one or more properties, such as binding characteristics, are altered. In some embodiments, the TCR may be obtained from one of a variety of animal species such as humans, mice, rats, or other mammals. The TCR may be associated with the cell or be in a soluble form. In some embodiments, for the purposes of the proposed methods, the TCR is in a cell-associated form expressed on the cell surface.

[0445] В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой полноразмерный TCR. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой антиген-связывающую часть. В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой димер TCR (dTCR). В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой одноцепочечный TCR (sc-TCR). В некоторых вариантах осуществления, dTCR или scTCR имеет структуры, описанные в WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186.[0445] In some embodiments, the TCR is a full length TCR. In some embodiments, the TCR is an antigen-binding portion. In some embodiments, the TCR is a TCR dimer (dTCR). In some embodiments, the TCR is a single chain TCR (sc-TCR). In some embodiments, the dTCR or scTCR has the structures described in WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186.

[0446] В некоторых вариантах осуществления, TCR содержит последовательность, соответствующую трансмембранной последовательности. В некоторых вариантах осуществления, TCR содержит последовательность, соответствующую цитоплазматическим последовательностям. В некоторых вариантах осуществления, TCR может образовывать комплекс TCR с CD3. В некоторых вариантах осуществления, любой из TCR, включая dTCR или scTCR, может связываться с сигнальными доменами, который дают активный TCR на поверхности Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, TCR экспрессируется на поверхности клеток. [0446] In some embodiments, the TCR contains a sequence corresponding to a transmembrane sequence. In some embodiments, the TCR contains a sequence corresponding to cytoplasmic sequences. In some embodiments, the TCR may complex the TCR with CD3. In some embodiments, any of the TCRs, including dTCR or scTCR, can bind to signaling domains that give rise to active TCR on the surface of T lymphocytes. In some embodiments, the TCR is expressed on the surface of cells.

[0447] В некоторых вариантах осуществления dTCR содержит первый полипептид, где последовательность, соответствующая последовательности вариабельной области цепи α TCR, слита с N- окончанием последовательности, соответствующей внеклеточной последовательности константной области цепи α TCR, и второй полипептид, где последовательность, соответствующая последовательности вариабельной области цепи β TCR, слита с N-окончанием последовательности, соответствующей внеклеточной последовательности константной области цепи β TCR, эти первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью. В некоторых вариантах осуществления, связь может соответствовать нативной дисульфидной связи между цепями, присутствующей в нативных димерных TCR αβ. В некоторых вариантах осуществления, дисульфидные связи между цепями не присутствуют в нативных TCR. Например, в некоторых вариантах осуществления, один или несколько цистеинов могут вводиться во внеклеточные последовательности константной области полипептидной пары dTCR. В некоторых случаях может быть желательной как нативная, так и ненативная дисульфидная связь. В некоторых вариантах осуществления, TCR содержит трансмембранную последовательность для фиксации в мембране. [0447] In some embodiments, the dTCR comprises a first polypeptide, wherein the sequence corresponding to the TCR α chain variable region sequence is fused to the N-terminus of the sequence corresponding to the TCR α chain extracellular constant region sequence, and a second polypeptide, where the sequence corresponding to the TCR variable region sequence chain β TCR, fused to the N-terminus of the sequence corresponding to the extracellular sequence of the constant region of the β TCR chain, these first and second polypeptides are linked by a disulfide bond. In some embodiments, the bond may correspond to a native interchain disulfide bond present in native αβ dimeric TCRs. In some embodiments, interchain disulfide bonds are not present in native TCRs. For example, in some embodiments, one or more cysteines can be introduced into the extracellular constant region sequences of a dTCR polypeptide pair. In some cases, both native and non-native disulfide bonds may be desirable. In some embodiments, the TCR contains a transmembrane sequence for membrane fixation.

[0448] В некоторых вариантах осуществления, dTCR содержит цепь α TCR, содержащую вариабельный домен α, константный домен α и первый мотив димеризации, присоединенный к C-окончанию константного домена α, и цепь β TCR содержащую вариабельный домен β, константный домен β и первый мотив димеризации, присоединенный к C-окончанию константного домена β, где первый и второй мотивы димеризации легко взаимодействуют с образованием ковалентной связи между аминокислотой в первом мотиве димеризации и аминокислотой во втором мотиве димеризации, связывая вместе цепь α TCR и цепь β TCR.[0448] In some embodiments, the dTCR comprises an α TCR chain comprising an α variable domain, an α constant domain, and a first dimerization motif, attached to the C-terminus of the α constant domain, and a β TCR chain containing the β variable domain, the β constant domain and the first dimerization motif attached to the C-terminus of the β constant domain, where the first and second dimerization motifs easily interact to form a covalent bond between the amino acid in the first dimerization motif and an amino acid in the second dimerization motif, linking together the α TCR chain and the β TCR chain.

[0449] В некоторых вариантах осуществления, TCR представляет собой scTCR. Как правило, scTCR может генерироваться с использованием соответствующих известных способов, смотри, например, Soo Hoo, W. F. et al., PNAS (USA) 89, 4759 (1992);

Figure 00000015
C. и
Figure 00000016
A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. et al., PNAS (USA) 90 3830 (1993); опубликованные Международные заявки PCT №№ WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; и Schlueter, C. J. et al., J. Mol. Biol. 256, 859 (1996). В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит введенную ненативную дисульфидную связь между цепями для облегчения ассоциации цепей TCR (смотри, например, опубликованную Международную заявку PCT № WO 03/020763). В некоторых вариантах осуществления, scTCR представляет собой не имеющий дисульфидной связи усеченный TCR, в котором гетерологичные лейциновые молнии, слитые с его C-окончаниями, облегчают ассоциацию цепей (смотри, например, опубликованную Международную заявку PCT № WO99/60120). В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит вариабельный домен TCRα, ковалентно связанный с вариабельным доменом TCR β с помощью пептидного линкера (смотри, например, опубликованную Международную PCT № WO99/18129).[0449] In some embodiments, the TCR is an scTCR. Typically, scTCR can be generated using appropriate known methods, see, for example, Soo Hoo, W. F. et al., PNAS (USA) 89, 4759 (1992);
Figure 00000015
C. and
Figure 00000016
A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. et al., PNAS (USA) 90 3830 (1993); published PCT International Applications Nos. WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; and Schlueter, C. J. et al., J. Mol. Biol. 256, 859 (1996). In some embodiments, the scTCR contains an introduced non-native strand disulfide bond to facilitate association of the TCR strands (see, for example, PCT Publication No. WO 03/020763). In some embodiments, the scTCR is a disulfide-free truncated TCR in which heterologous leucine zippers fused to its C-terminals facilitate chain association (see, for example, PCT Publication No. WO99/60120). In some embodiments, the scTCR comprises a TCRα variable domain covalently linked to a TCR β variable domain via a peptide linker (see, for example, PCT International Publication No. WO99/18129).

[0450] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит первый сегмент, состоящий из последовательности аминокислот, соответствующей вариабельной области цепи α TCR, второй сегмент, состоящий из последовательности аминокислота, соответствующей последовательности вариабельной области цепи β TCR, слитой с N-окончанием последовательности аминокислот, соответствующей последовательности внеклеточного константного домена цепи β TCR, и линкерную последовательность, соединяющую C-окончание первого сегмента с N-окончанием второго сегмента.[0450] In some embodiments, the scTCR comprises a first segment consisting of an amino acid sequence corresponding to the TCR α chain variable region, a second segment consisting of an amino acid sequence corresponding to the TCR β chain variable region sequence fused to the N-terminus of the amino acid sequence corresponding to sequences of the extracellular constant domain of the β TCR chain, and a linker sequence connecting the C-terminus of the first segment to the N-terminus of the second segment.

[0451] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит первый сегмент состоящий из последовательности вариабельной области цепи α, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домен цепи α, и второй сегмент, состоящий из последовательности вариабельной области цепи β, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домена цепи β, и последовательности трансмембранного домена, и, необязательно, линкерную последовательность, связывающую C-окончание первого сегмента с N-окончанием второго сегмента.[0451] In some embodiments, the scTCR comprises a first segment consisting of an α chain variable region sequence fused to the N-terminus of an α extracellular constant chain domain sequence and a second segment consisting of a β chain variable region sequence fused to the N-terminus of the sequence an extracellular constant domain of the β chain; and a transmembrane domain sequence; and, optionally, a linker sequence linking the C-terminus of the first segment to the N-terminus of the second segment.

[0452] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит первый сегмент, состоящий из последовательности вариабельной области цепи β TCR, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домена цепи β, и второй сегмент, состоящий из последовательности вариабельной области цепи α, слитой с N-окончанием последовательности внеклеточного константного домена цепи α, и последовательности трансмембранного домена, и, необязательно, линкерную последовательность, связывающую C-окончание первого сегмента с N-окончанием второго сегмента.[0452] In some embodiments, the scTCR comprises a first segment consisting of a TCR β chain variable region sequence fused to the N-terminus of a β chain extracellular constant domain sequence, and a second segment consisting of an α chain variable region sequence fused to N- the end of an α chain extracellular constant domain sequence, and a transmembrane domain sequence, and optionally a linker sequence linking the C-terminus of the first segment to the N-terminus of the second segment.

[0453] В некоторых вариантах осуществления, линкер scTCR, который связывает первый и второй сегменты TCR, может представлять собой любой линкер, способный образовывать одинарную полипептидную нить, при этом сохраняя специфичность связывания TCR. В некоторых вариантах осуществления, линкерная последовательность может, например, иметь формулу -P-AA-P-, где P представляет собой пролин и AA представляет последовательность аминокислот, где аминокислоты представляют собой глицин и серин. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй сегменты являются парными, так что последовательности их вариабельных областей ориентированы для такого связывания. Следовательно, в некоторых случаях, линкер имеет достаточную длину для увеличения расстояния между С-окончанием первого сегмента и N-окончанием второго сегмента, или наоборот, но он не слишком длинный, чтобы не блокировать или не уменьшить связывание scTCR с целевым лигандом. В некоторых вариантах осуществления, линкер может содержать от или примерно от 10 до 45 аминокислот, например, 10-30 аминокислот или 26-41 остатков аминокислот, например, 29, 30, 31 или 32 аминокислоты. В некоторых вариантах осуществления, линкер имеет формулу -PGGG-(SGGGG)5-P-, где P представляет собой пролин, G представляет собой глицин и S представляет собой серин (SEQ ID NO: 16). В некоторых вариантах осуществления, линкер имеет последовательность GSADDAKKDAAKKDGKS (SEQ ID NO: 17)[0453] In some embodiments, the scTCR linker that binds the first and second TCR segments can be any linker capable of forming a single polypeptide strand while retaining TCR binding specificity. In some embodiments, the linker sequence may, for example, have the formula -P-AA-P-, where P is proline and AA is an amino acid sequence, where the amino acids are glycine and serine. In some embodiments, the first and second segments are paired such that their variable region sequences are oriented for such binding. Therefore, in some cases, the linker is long enough to increase the distance between the C-terminus of the first segment and the N-terminus of the second segment, or vice versa, but not too long to block or reduce binding of the scTCR to the target ligand. In some embodiments, the linker may contain from or about 10 to 45 amino acids, such as 10-30 amino acids or 26-41 amino acid residues, such as 29, 30, 31, or 32 amino acids. In some embodiments, the linker has the formula -PGGG-(SGGGG)5-P-, where P is proline, G is glycine, and S is serine (SEQ ID NO: 16). In some embodiments, the linker has the sequence GSADDAKKDAAKKDGKS (SEQ ID NO: 17)

[0454] В некоторых вариантах осуществления, scTCR содержит ковалентную дисульфидную связь, связывающую остаток области иммуноглобулина константного домена цепи α с остатком области иммуноглобулина константного домена цепи β. В некоторых вариантах осуществления, дисульфидной связи между цепями в нативном TCR нет. Например, в некоторых вариантах осуществления, один или несколько цистеинов могут вводиться во внеклеточные последовательности константной области первого и второго сегментов полипептида scTCR. В некоторых случаях, может быть желательной как нативная, так и ненативная дисульфидная связь.[0454] In some embodiments, the scTCR comprises a covalent disulfide bond linking a remainder of the α chain constant domain immunoglobulin region to a remainder of the β chain constant domain immunoglobulin region. In some embodiments, there is no disulfide bond between chains in native TCR. For example, in some embodiments, one or more cysteines can be introduced into the extracellular constant region sequences of the first and second segments of the scTCR polypeptide. In some cases, both native and non-native disulfide bonds may be desirable.

[0455] В некоторых вариантах осуществления dTCR или scTCR, содержащих введенные дисульфидные связи между цепями, нативных дисульфидных связей нет. В некоторых вариантах осуществления, один или несколько нативных цистеинов, образующих нативные дисульфидные связи между цепями, замещаются другим остатком, таким как серин или аланин. В некоторых вариантах осуществления, введенная дисульфидная связь может образовываться посредством мутации нецистеиновых остатков на первом и втором сегментах в цистеине. Иллюстративные ненативные дисульфидные связи TCR описаны в опубликованной Международной заявке PCT № WO2006/000830.[0455] In some embodiments, the implementation of dTCR or scTCR containing introduced disulfide bonds between the chains, native disulfide bonds are not present. In some embodiments, one or more native cysteines forming native interchain disulfide bonds are replaced by another residue such as serine or alanine. In some embodiments, the introduced disulfide bond may be formed by mutating non-cysteine residues on the first and second segments in the cysteine. Exemplary non-native TCR disulfide bonds are described in PCT Published International Application No. WO2006/000830.

[0456] В некоторых вариантах осуществления, TCR или его антиген-связывающий фрагмент демонстрирует сродство с равновесной константой связывания целевого антигена в пределах между или примерно между 10-5 и 10-12 M, и включая все индивидуальные величины и диапазоны в этих пределах. В некоторых вариантах осуществления, целевой антиген представляет собой комплекс или лиганд MHC-пептид.[0456] In some embodiments, the TCR, or an antigen-binding fragment thereof, exhibits an affinity for an equilibrium binding constant of the target antigen between or about 10 -5 and 10 -12 M, and including all individual values and ranges within those limits. In some embodiments, the target antigen is an MHC-peptide complex or ligand.

[0457] В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновая кислота или нуклеиновые кислоты, кодирующие TCR, такие как цепи α и β, могут амплифицироваться с помощью PCR, клонирования или других соответствующих средств и клонироваться в соответствующие вектор или векторы экспрессии. Вектор экспрессии может представлять собой любой соответствующий рекомбинантный вектор экспрессии, и его можно использовать для трансофрмирования или трансфицирования любого пригодного для использования хозяина. Соответствующие векторы включают векторы, сконструированные для выращивания и размножения или для экспрессирования, или как для того, так и для другого, такие как плазмиды и вирусы.[0457] In some embodiments, the TCR-encoding nucleic acid or nucleic acids, such as the α and β chains, can be amplified by PCR, cloning, or other appropriate means and cloned into the appropriate expression vector or vectors. The expression vector may be any suitable recombinant expression vector and may be used to transform or transfect any suitable host. Suitable vectors include vectors designed for growth and propagation, or for expression, or both, such as plasmids and viruses.

[0458] В некоторых вариантах осуществления, вектор может представлять собой вектор серии pUC (Fermentas Life Sciences), серии pBluescript (Stratagene, La Jolla, Calif.), серии pET (Novagen, Madison, Wis.), серии pGEX (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) или серии pEX (Clontech, Palo Alto, Calif.). В некоторых случаях, также можно использовать векторы бактериофагов, такие как λG10, λGT11, λZapII (Stratagene), λEMBL4 и λNM1149. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать векторы экспрессии растений, и они включают pBI01, pBI101,2, pBI101,3, pBI121 и pBIN19 (Clontech). В некоторых вариантах осуществления, векторы экспрессии животных включают pEUK-Cl, pMAM и pMAMneo (Clontech). В некоторых вариантах осуществления используют вирусный вектор, такой как ретровирусный вектор.[0458] In some embodiments, the vector may be pUC series (Fermentas Life Sciences), pBluescript series (Stratagene, La Jolla, Calif.), pET series (Novagen, Madison, Wis.), pGEX series (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) or the pEX series (Clontech, Palo Alto, Calif.). In some cases, bacteriophage vectors such as λG10, λGT11, λZapII (Stratagene), λEMBL4 and λNM1149 can also be used. In some embodiments, plant expression vectors can be used and include pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121, and pBIN19 (Clontech). In some embodiments, animal expression vectors include pEUK-Cl, pMAM, and pMAMneo (Clontech). In some embodiments, a viral vector is used, such as a retroviral vector.

[0459] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные векторы экспрессии можно приготовить с использованием стандартных методик рекомбинантной ДНК. В некоторых вариантах осуществления, векторы могут содержать регуляторные последовательности, такие как кодоны транскрипции и инициирования трансляции и терминирующие коды, которые специфичны к типу хозяина (например, бактерии, грибку, растению или животному), которому должен вводиться вектор, соответствующим образом, и учитывая, основан ли вектор на ДНК или на RNA. В некоторых вариантах осуществления, вектор может содержать ненативный промотор, функционально связанный с последовательностью нуклеотидов, кодирурующей TCR или антиген-связывающую часть (или другую молекулу, связывающую MHC-пептид). В некоторых вариантах осуществления, промотор может представлять собой невирусный промотор или вирусный промотор, такой как промотор цитомегаловируса (CMV), промотор SV40, промотор RSV и промотор, находящийся в длинном концевом повторе вируса стволовых клеток мышей. Рассматриваются также и другие известные промоторы. [0459] In some embodiments, recombinant expression vectors can be prepared using standard recombinant DNA techniques. In some embodiments, the vectors may contain regulatory sequences, such as transcription and translation initiation codons and termination codes, that are specific to the type of host (e.g., bacteria, fungus, plant, or animal) to which the vector is to be administered, as appropriate, and given whether the vector is DNA based or RNA based. In some embodiments, the vector may contain a non-native promoter operably linked to a nucleotide sequence encoding a TCR or an antigen binding portion (or other MHC peptide binding molecule). In some embodiments, the promoter may be a non-viral promoter or a viral promoter such as the cytomegalovirus (CMV) promoter, the SV40 promoter, the RSV promoter, and a promoter found in the long terminal repeat of a mouse stem cell virus. Other known promoters are also contemplated.

[0460] В некоторых вариантах осуществления, для генерирования вектора, кодирующего TCR, цепи α и β амплифицируются с помощью PCR с общей цДНК, выделенной из клона Т-лимфоцита, экспрессирующего TCR, представляющий интерес, и клонированного в вектор экспрессии. В некоторых вариантах осуществления, цепи α и β клонируют в один и тот же вектор. В некоторых вариантах осуществления, цепи α и β клонируют в разные векторы. В некоторых вариантах осуществления, генерируемые цепи α и β вводятся в ретровирусный, например, лентивирусный, вектор.[0460] In some embodiments, to generate a vector encoding a TCR, the α and β chains are PCR amplified with total cDNA isolated from a T lymphocyte clone expressing the TCR of interest and cloned into an expression vector. In some embodiments, the α and β chains are cloned into the same vector. In some embodiments, the α and β chains are cloned into different vectors. In some embodiments, the generated α and β chains are introduced into a retroviral, eg, lentiviral, vector.

4. Мультинацеливание4. Multitargeting

[0461] В некоторых вариантах осуществления, клетки и способы включают стратегии мультинацеливания, такие как экспрессирование на клетке двух или более генно-инженерных рецепторов, каждый из них распознает такой же или иной антиген, и, как правило, каждый содержит иной внутриклеточный сигнальный компонент. Такие стратегии мультинацеливания описаны, например, в публикации PCT № WO 2014055668 A1 (описывающей сочетания активирующих и костимуляторных CAR, например, нацеливыание двух различных антигенов, присутствующих по отдельности на нецелевых, например, нормальных клетках, но присутствующих вместе только на клетках заболевания или состояния, которое должно лечиться), и Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013) (описывающей клетки, экспрессирующие активирующие и ингибиторные CAR, такие как те, в которых активирующий CAR связывается с одним антигеном, экспрессируемым как на нормальных или неболезненных клетках, так и на клетках заболевания или состояния, которое должно лечиться, а ингибиторный CAR связывается с другим антигеном, экспрессируемым только на нормальных клетках или на клетках, которые лечить нежелательно). [0461] In some embodiments, cells and methods include multi-targeting strategies, such as expressing two or more engineered receptors on a cell, each recognizing the same or a different antigen, and typically each containing a different intracellular signaling component. Such multi-targeting strategies are described, for example, in PCT Publication No. WO 2014055668 A1 (describing combinations of activating and costimulatory CARs, e.g., targeting two different antigens that are present separately on non-targeted, e.g., normal cells, but present together only on disease or condition cells, to be treated), and Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013) (describes cells expressing activating and inhibitory CARs, such as those in which the activating CAR binds to a single antigen expressed both on normal or non-diseased cells and on cells of a disease or condition that should be treated, and the inhibitory CAR binds to another antigen expressed only on normal cells or on cells that are undesirable to be treated).

[0462] Например, в некоторых вариантах осуществления, клетки содержат рецептор, экспрессирующий первый генно-инженерный рецептор антигена (например, CAR или TCR), который способен индуцировать активирующий сигнал для клетки, как правило, при специфичном связывании с антигеном, распознаваемым первым рецептором, например, с первым антигеном. В некоторых вариантах осуществления, клетка дополнительно содержит второй генно-инженерный рецептор антигена (например, CAR или TCR), например, химерный костимуляторный рецептор, который способен индуцировать костимуляторный сигнал для иммунной клетки, как правило, при специфичном связывании со вторым антигеном, распознаваемым вторым рецептором. В некоторых вариантах осуществления, первый антиген и второй антиген являются одинаковыми. В некоторых вариантах осуществления, первый антиген и второй антиген являются различными.[0462] For example, in some embodiments, the cells comprise a receptor expressing a first engineered antigen receptor (e.g., CAR or TCR) that is capable of inducing an activating signal for the cell, typically upon specific binding to an antigen recognized by the first receptor, for example, with the first antigen. In some embodiments, the cell further comprises a second engineered antigen receptor (e.g., CAR or TCR), e.g., a chimeric co-stimulatory receptor, that is capable of inducing a co-stimulatory signal for an immune cell, typically upon specific binding to a second antigen recognized by the second receptor. . In some embodiments, the first antigen and the second antigen are the same. In some embodiments, the first antigen and the second antigen are different.

[0463] В некоторых вариантах осуществления, первый и/или второй генно-инженерный рецептор антигена (например, CAR или TCR) способен индуцировать активирующий сигнал для клетки. В некоторых вариантах осуществления, рецептор содержит внутриклеточный сигнальный компонент, содержащий мотивы ITAM или мотивы подобные ITAM. В некоторых вариантах осуществления, активирование индуцируемое первым рецептором включает трансдукцию сигнала или изменение экспрессирования белка в клетке, приводящее в результате к инициированию иммунной реакции, такой как фосфорилирование ITAM и/или к инициированию ITAM-медиируемого каскада трансдукции сигнала, формированию иммунологического синапса и/или образованию кластера молекул вблизи связанного рецептора (например, CD4 или CD8, и тому подобное), активированию одного или нескольких факторов транскрипции, таких как NF-κB и/или AP-1, и/или к индуцированию экспрессирования гена для таких факторов, как цитокины, пролиферации и/или выживаемости.[0463] In some embodiments, the first and/or second engineered antigen receptor (eg, CAR or TCR) is capable of inducing an activating signal for the cell. In some embodiments, the receptor contains an intracellular signaling component containing ITAM motifs or ITAM-like motifs. In some embodiments, activation induced by the first receptor comprises signal transduction or a change in protein expression in a cell resulting in initiation of an immune response such as ITAM phosphorylation and/or initiation of an ITAM-mediated signal transduction cascade, formation of an immunological synapse, and/or formation of a cluster of molecules near the associated receptor (e.g., CD4 or CD8, and the like), activating one or more transcription factors such as NF-κB and/or AP-1, and/or inducing gene expression for factors such as cytokines, proliferation and/or survival.

[0464] В некоторых вариантах осуществления, первый и/или второй рецептор содержит внутриклеточные сигнальные домены костимуляторных рецепторов, таких как CD28, CD137 (4-1 BB), OX40 и/или ICOS. В некоторых вариантах осуществления, первый и второй рецепторы содержат внутриклеточные сигнальные домены костимуляторного рецептора, которые различаются. В одном из вариантов осуществления, первый рецептор содержит костимуляторную сигнальную область CD28, и второй рецептор содержит костимуляторную сигнальную область 4-1BB, или наоборот.[0464] In some embodiments, the first and/or second receptor comprises the intracellular signaling domains of co-stimulatory receptors such as CD28, CD137 (4-1 BB), OX40, and/or ICOS. In some embodiments, the first and second receptors contain intracellular co-stimulatory receptor signaling domains that are different. In one embodiment, the first receptor contains the CD28 costimulatory signaling region and the second receptor contains the 4-1BB costimulatory signaling region, or vice versa.

[0465] В некоторых вариантах осуществления, первый и/или второй рецептор включают как внутриклеточный сигнальный домен, содержащий ITAM или ITAM-подобные мотивы, так и внутриклеточный сигнальный домен костимуляторного рецептора. [0465] In some embodiments, the first and/or second receptor includes both an intracellular signaling domain containing ITAM or ITAM-like motifs and an intracellular signaling domain of a co-stimulatory receptor.

[0466] В некоторых вариантах осуществления, первый рецептор содержит внутриклеточный сигнальный домен, содержащий ITAM или ITAM-подобные мотивы, а второй рецептор содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторного рецептора. Костимуляторный сигнал в сочетании с активирующим сигналом, индуцируемым в этой же клетке, дает в результате иммунную реакцию, такую как устойчивая и долговременная иммунная реакция, такая как увеличение экспрессирования генов, секреции цитокинов и других факторов, и медиируемых Т-лимфоцитами эффекторных функций, таких как уничтожение клеток.[0466] In some embodiments, the first receptor contains an intracellular signaling domain containing ITAM or ITAM-like motifs, and the second receptor contains an intracellular signaling domain of a costimulatory receptor. The costimulatory signal, in combination with an activating signal induced in the same cell, results in an immune response, such as a sustained and long-lasting immune response, such as an increase in gene expression, secretion of cytokines and other factors, and T-lymphocyte-mediated effector functions, such as cell destruction.

[0467] В некоторых вариантах осуществления, ни лигирование первого рецептора самого по себе ни лигирование второго рецептора самого по себе не индуцирует устойчивой иммунной реакции. В некоторых аспектах, если лигируется только один рецептор, клетка толеризуется или становится толерантной к антигену или ингибированной, и/или не индуцирует факторов пролиферации или секреции, или не осуществляет эффекторных функций. В некоторых таких вариантах осуществления, однако, когда лигируется множество рецепторов, например, при встрече с клеткой, экспрессирующей первый и второй антигены, достигается желаемая реакция, такая как полное иммунное активирование или стимулирование, например, как показывает секреция одного или нескольких цитокинов, пролиферация, персистентность и/или осуществление иммунной эффекторной функции, такой как цитотоксическое уничтожение целевых клеток. [0467] In some embodiments, neither ligation of the first receptor per se nor ligation of the second receptor per se induces a sustained immune response. In some aspects, if only one receptor is ligated, the cell is tolerized or becomes tolerant to the antigen or inhibited, and/or does not induce proliferation or secretion factors, or does not perform effector functions. In some such embodiments, however, when a plurality of receptors are ligated, for example upon encountering a cell expressing the first and second antigens, the desired response is achieved, such as complete immune activation or stimulation, for example, as indicated by the secretion of one or more cytokines, proliferation, persistence and/or implementation of an immune effector function such as cytotoxic killing of target cells.

[0468] В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, дополнительно содержат ингибиторные CAR (iCAR, смотри Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013), такие как CAR, распознающие антиген иной, чем антиген, связанный с заболеванием или состоянием и/или специфичный к ним, при этом активирующий сигнал, поступающий через не нацеленный на заболевание CAR, уменьшается или ингибируется посредством связывания ингибиторного CAR с его лигандом, например, для уменьшения нецелевых воздействий.[0468] In some embodiments, cells expressing the recombinant receptor further comprise inhibitory CARs (iCARs, see Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013), such as CARs that recognize an antigen other than an antigen associated with and/or specific to a disease or condition, wherein the activating signal from a non-disease-targeting CAR is reduced or inhibited by binding the inhibitory CAR to its ligand, for example, to reduce off-target effects.

[0469] В некоторых вариантах осуществления, эти два рецептора индуцируют, соответственно, активирующий и ингибиторный сигнал для клетки, такой что связывание одного из рецепторов с его антигеном активирует клетку или индуцирует отклик, но связывание второго ингибиторного рецептора с его антигеном индуцирует сигнал, который подавляет или демпфирует такую реакцию. Примеры представляют собой сочетания активирующих CAR и ингибиторных CAR или iCAR. Может, например, использоваться такая стратегия, при которой активирующий CAR связывает антиген, экспрессируемый при заболевании или состоянии, но который экспрессируется также на нормальных клетках, а ингибиторный рецептор связывает отдельный антиген, который экспрессируется на нормальных клетках, но не на клетках заболевания или состояния.[0469] In some embodiments, the two receptors induce, respectively, an activating and inhibitory signal to a cell, such that binding of one of the receptors to its antigen activates the cell or induces a response, but binding of the second inhibitory receptor to its antigen induces a signal that suppresses or dampens such a response. Examples are combinations of activating CARs and inhibitory CARs or iCARs. For example, a strategy can be used in which an activating CAR binds an antigen that is expressed in the disease or condition but is also expressed on normal cells, and an inhibitory receptor binds a single antigen that is expressed on normal cells but not on cells of the disease or condition.

[0470] В некоторых аспектах, химерный рецептор представляет собой или содержит ингибиторный CAR (например, iCAR) и содержит внутриклеточные компоненты, которые демпфируют или подавляют иммунную реакцию, такую как ITAM- и/или костимуляторно-промотированную реакцию в клетке. Примеры таких внутриклеточных сигнальных компонентов представляют собой компоненты, находящиеся на молекулах иммунных контрольных точек, включая рецепторы PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2, рецепторы EP2/4 аденозина, включая A2AR. В некоторых аспектах, генно-инженерная клетка содержит ингибиторный CAR, содержащий сигнальный домен такой ингибиторной молекулы или полученный из нее, так что он служит для демпфирования реакции клетки, например, той, которая индуцируется активирующим и/или костимуляторным CAR.[0470] In some aspects, the chimeric receptor is or contains an inhibitory CAR (eg, iCAR) and contains intracellular components that dampen or suppress an immune response, such as an ITAM and/or costimulatory-promoted response in a cell. Examples of such intracellular signaling components are those found on immune checkpoint molecules, including PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 receptors, EP2/4 adenosine receptors, including A2AR . In some aspects, the engineered cell contains an inhibitory CAR comprising or derived from the signaling domain of such inhibitory molecule, such that it serves to dampen the response of the cell, for example, that induced by an activating and/or co-stimulatory CAR.

[0471] В некоторых вариантах осуществления, стратегия мультинацеливания используется в случае, когда антиген, связанный с конкретным заболеванием или состоянием, экспрессируется на неболезненной клетке и/или экспрессируется на самой генно-инженерной клетке, либо временно (например, при стимулировании в связи с генной инженерией), либо постоянно. В таких случаях, если потребовать лигирования двух отдельных и индивидуально специфичных рецепторов антигенов, можно улучшить специфичность, селективность и/или эффективность. [0471] In some embodiments, a multitargeting strategy is used when an antigen associated with a particular disease or condition is expressed on a non-disease cell and/or is expressed on the genetically engineered cell itself, either transiently (e.g., when stimulated in connection with a gene engineering), or permanently. In such cases, if the ligation of two separate and individually specific antigen receptors is required, specificity, selectivity and/or efficacy can be improved.

[0472] В некоторых вариантах осуществления, множество антигенов, например, первые и вторые антигены, экспрессируются в клетке, ткани или заболевании, или состоянии, которое является целевым, например, на раковой клетке. В некоторых аспектах, клетка, ткань, заболевание или состояние представляет собой множественную миелому или клетку множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления, один или несколько из множества антигенов, как правило, также экспрессируется на клетке, которая не является желательной мишенью клеточной терапии, на такой как нормальная или неболезненная клетка или ткань, и/или сами генно-инженерные клетки. В таких вариантах осуществления, если потребовать лигирования множества рецепторов для достижения реакций клетки, достигается специфичность и/или эффективность. [0472] In some embodiments, a plurality of antigens, such as first and second antigens, are expressed in a cell, tissue, or disease or condition that is targeted, such as on a cancer cell. In some aspects, the cell, tissue, disease, or condition is multiple myeloma or a multiple myeloma cell. In some embodiments, one or more of the plurality of antigens is typically also expressed on a cell that is not the desired target of cell therapy, such as a normal or non-diseased cell or tissue, and/or the genetically engineered cells themselves. In such embodiments, if multiple receptor ligation is required to achieve cell responses, specificity and/or efficacy is achieved.

B. Клетки и приготовление клеток для генной инженерииB. Cells and preparation of cells for genetic engineering

[0473] Среди клеток, экспрессирующих рецепторы и вводимых с помощью предлагаемых способов, имеются генно-инженерные клетки. Генная инженерия, как правило, включает введение нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный или генно-инженерный компонент, в композицию, содержащую клетки, например, с помощью ретровирусной трансдукции, трансфекции или трансформации.[0473] Among the cells expressing the receptors and introduced using the proposed methods, there are genetically engineered cells. Genetic engineering typically involves introducing a nucleic acid encoding a recombinant or genetically engineered component into a composition containing cells, for example, by retroviral transduction, transfection, or transformation.

[0474] В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты являются гетерологичными, то есть, обычно не присутствуют в клетке или в образце, полученном из клетки, таком как образец, полученный из другого организма или клетки, который, например, обычно не находится в генно-инженерной клетке и/или в организме, из которого получают такую клетку. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты не встречаются в природе, например, нуклеиновая кислота не встречается в природе, включая, нуклеиновую кислоту, содержащую химерные сочетания нуклеиновых кислот, кодирующие различные домены из множества различных типов клеток. [0474] In some embodiments, the nucleic acids are heterologous, that is, not normally present in a cell or in a sample derived from a cell, such as a sample derived from another organism or cell, which, for example, is not normally found in the genetic engineered cell and/or in the organism from which such a cell is obtained. In some embodiments, the nucleic acids are not naturally occurring, for example, the nucleic acid is not naturally occurring, including nucleic acid containing chimeric combinations of nucleic acids encoding different domains from many different cell types.

[0475] Клетки, как правило, представляют собой эукариотические клетки, такие как клетки млекопитающих, и как правило, представляют собой клетки человека. В некоторых вариантах осуществления, клетки получают из крови, костного мозга, лимфы или лимфоидных органов, они представляют собой клетки иммунной системы, такие как клетки врожденного или приобретенного иммунитета, например, миелоидные или лимфоидные клетки, включая лимфоциты, как правило, Т-лимфоциты и/или NK-клетки. Другие иллюстративные клетки включают стволовые клетки, такие как мультипотентные и плюрипотентные стволовые клетки, включая индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPSC). Клетки, как правило, представляют собой первичные клетки, такие как клетки, выделенные непосредственно у субъекта и/или выделенные у субъекта и замороженные. В некоторых вариантах осуществления, клетки содержат одно или несколько подмножеств Т-лимфоцитов или других типов клеток, таких как цельные популяции Т-лимфоцитов, клетки CD4+, клетки CD8+ и их субпопуляции, например, определенные по функции, состоянию активирования, зрелости, потенциалам для дифференциации, размножения, рециркуляции, локализации и/или по способностям к персистентности, по типу антиген-специфичности, по типу рецептора антигена, по присутствию в конкретном органе или компартменте, по маркеру или профилю секреции цитокина и/или по степени дифференциации. Относительно субъекта, который должен лечиться, клетки могут быть аллогенными и/или аутологенными. Способы включают стандартные способы. В некоторых аспектах, например, для стандартных технологий, клетки являются плюрипотентными и/или мультипотентными, например, это стволовые клетки, такие как индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (iPSC). В некоторых вариантах осуществления, способы включают выделение клеток у субъекта, их приготовление, процессинг, культивирование и/или генную инженерию, и повторное их введение этому же субъекту, до или после криоконсервации. [0475] The cells are typically eukaryotic cells, such as mammalian cells, and typically are human cells. In some embodiments, the cells are derived from blood, bone marrow, lymph, or lymphoid organs and are cells of the immune system, such as cells of innate or adaptive immunity, e.g., myeloid or lymphoid cells, including lymphocytes, typically T-lymphocytes and /or NK cells. Other exemplary cells include stem cells such as multipotent and pluripotent stem cells, including induced pluripotent stem cells (iPSCs). The cells are typically primary cells, such as cells isolated directly from the subject and/or isolated from the subject and frozen. In some embodiments, the cells contain one or more subsets of T lymphocytes or other cell types, such as whole populations of T lymphocytes, CD4+ cells, CD8+ cells, and subpopulations thereof, e.g., defined by function, activation state, maturity, potentials for differentiation , replication, recycling, localization, and/or persistence capabilities, type of antigen specificity, type of antigen receptor, presence in a particular organ or compartment, cytokine secretion marker or profile, and/or degree of differentiation. With respect to the subject to be treated, the cells may be allogeneic and/or autologous. The methods include standard methods. In some aspects, for example, for standard technologies, the cells are pluripotent and/or multipotent, for example, they are stem cells, such as induced pluripotent stem cells (iPSC). In some embodiments, the methods include isolating cells from a subject, preparing, processing, culturing and/or genetically engineering them, and reintroducing them to the same subject, before or after cryopreservation.

[0476] Среди субтипов и субпопуляций Т-лимфоцитов и/или Т-лимфоцитов CD4+ и/или CD8+ имеются наивные T-лимфоциты (TN), эффекторные Т-лимфоциты (TEFF), Т-лимфоциты памяти и их субтипы, такие как стволовые T-клетки памяти (TSCM), центральные T-лимфоциты памяти (TCM), эффекторные T-лимфоциты памяти (TEM) или окончательно дифференцированные эффекторные Т-лимфоциты памяти, противоопухолевые эффекторные лимфоциты (TIL), незрелые Т-лимфоциты, зрелые Т-лимфоциты, хелперные Т-лимфоциты, цитотоксичные Т-лимфоциты, мукоза-ассоциированные инвариантные T-лимфоциты (MAIT), встречающиеся в природе и адаптивные регуляторные T-лимфоциты (Treg), хелперные Т-лимфоциты, такие как клетки TH1, клетки TH2, клетки TH3, клетки TH17, клетки TH9, клетки TH22, фолликулярные хелперные Т-лимфоциты, альфа/бета Т-лимфоциты и дельта/гамма Т-лимфоциты. [0476] Among the subtypes and subpopulations of T lymphocytes and/or CD4+ and/or CD8+ T lymphocytes are naïve T lymphocytes (T N ), effector T lymphocytes (T EFF ), memory T lymphocytes and their subtypes, such as memory T-cell stem cells (T SCM ), central memory T-lymphocytes (T CM ), effector memory T-lymphocytes (T EM ) or terminally differentiated effector memory T-lymphocytes, antitumor effector lymphocytes (TIL), immature T-lymphocytes, mature T lymphocytes, helper T lymphocytes, cytotoxic T lymphocytes, mucosal-associated invariant T lymphocytes (MAIT), naturally occurring and adaptive regulatory T lymphocytes (Treg), helper T lymphocytes such as TH1 cells, cells TH2, TH3 cells, TH17 cells, TH9 cells, TH22 cells, follicular helper T lymphocytes, alpha/beta T lymphocytes, and delta/gamma T lymphocytes.

[0477] В некоторых вариантах осуществления, клетки представляют собой природные киллерные клетки (NK). В некоторых вариантах осуществления, клетки представляют собой моноциты или гранулоциты, например, миелоидные клетки, макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки, тучные клетки, эозинофилы и/или базофилы.[0477] In some embodiments, the cells are natural killer (NK) cells. In some embodiments, the cells are monocytes or granulocytes, such as myeloid cells, macrophages, neutrophils, dendritic cells, mast cells, eosinophils, and/or basophils.

[0478] В некоторых вариантах осуществления, клетки содержат одну или несколько нуклеиновых кислот, вводимых с помощью генной инженерии, и при этом экспрессируют рекомбинантные или генно-инженерные продукты таких нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты являются гетерологичными, то есть, обычно, не присутствуют в клетке или в образце, полученном из клетки, например, полученном из другого организма, или клетки, которые, например, обычно не находятся в генно-инженерной клетке и/или в организме, из которого такую клетку получают. В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты не встречаются в природе, например, такие как нуклеиновая кислота, не встречающаяся в природе, включая нуклеиновые кислоты, содержащие химерные сочетания нуклеиновых кислот, кодирующих различные домены, от множества различных типов клеток. [0478] In some embodiments, the cells contain one or more genetically engineered nucleic acids and express recombinant or genetically engineered products of such nucleic acids. In some embodiments, nucleic acids are heterologous, that is, not normally present in a cell or in a sample derived from a cell, such as derived from another organism, or cells that, for example, are not normally found in a genetically engineered cell and /or in the organism from which such a cell is obtained. In some embodiments, nucleic acids are not naturally occurring, such as non-naturally occurring nucleic acids, including nucleic acids containing chimeric combinations of nucleic acids encoding different domains from many different cell types.

[0479] В некоторых вариантах осуществления, получение генно-инженерных клеток, включает одну или несколько стадий культивирования и/или приготовления. Клетки для введения нуклеиновой кислоты, кодирующей трансгенный рецептор, такой как CAR, могут выделяться из образца, такого как биологический образец, например, образец, полученный или выделенный у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, субъект, у которого выделяют клетки, представляет собой того, кто имеет заболевание или состояние, или ему необходима клеточная терапия, или ему вводят клеточную терапию. Субъект в некоторых вариантах осуществления представляет собой человека, нуждающегося в конкретном терапевтическом вмешательстве, таком как адоптивная клеточная терапия, клетки для которой выделяют, процессируют и/или получают с помощью генной инженерии. [0479] In some embodiments, obtaining genetically engineered cells includes one or more stages of cultivation and/or preparation. Cells for the introduction of a nucleic acid encoding a transgenic receptor, such as CAR, can be isolated from a sample, such as a biological sample, for example, a sample obtained or isolated from a subject. In some embodiments, the subject from which cells are isolated is one who has a disease or condition, or is in need of cell therapy, or is being administered cell therapy. The subject, in some embodiments, is a human in need of a particular therapeutic intervention, such as an adoptive cell therapy for which cells are isolated, processed, and/or genetically engineered.

[0480] Соответственно, клетки в некоторых вариантах осуществления представляют собой первичные клетки, например, первичные клетки человека. Образцы включают ткань, текучую среду и другие образцы, отобранные непосредственно у субъекта, а также образцы, полученные в результате одной или нескольких стадий обработки, таких как разделение, центрифугирование, генная инженерия (например, трансдукция с помощью вирусного вектора), промывка и/или инкубирование. Биологический образец может представлять собой образец, полученный непосредственно из биологического источника, или образец, который обрабатывают. Биологические образцы включают, но, не ограничиваясь этим, телесные жидкости, такие как кровь, плазма, сыворотка, спинномозговая жидкость, синовиальная жидкость, моча и пот, образцы тканей и органов, включая обработанные образцы, полученные из них.[0480] Accordingly, the cells, in some embodiments, are primary cells, eg, primary human cells. Samples include tissue, fluid and other samples taken directly from the subject, as well as samples obtained as a result of one or more stages. treatments such as separation, centrifugation, genetic engineering (eg transduction with a viral vector), washing and/or incubation. The biological sample may be a sample obtained directly from a biological source or a sample that is being processed. Biological samples include, but are not limited to, bodily fluids such as blood, plasma, serum, cerebrospinal fluid, synovial fluid, urine and sweat, tissue and organ samples, including processed samples derived therefrom.

[0481] В некоторых аспектах, образец, из которого получают или выделяют клетки, представляет собой кровь или образец, полученный из крови, или представляет собой продукт, или продукт, полученный от афереза или лейкафереза. Иллюстративные образцы включают цельную кровь, мононуклеары периферической крови (PBMC), лейкоциты, костный мозг, тимус, биопсию ткани, опухоль, лейкоз, лимфому, лимфоузел, лимфоидную ткань, связанную с желудочно-кишечным трактом, лимфоидную ткань, связанную со слизистой, селезенку, другие лимфоидные ткани, печень, легкое, желудок, кишечник, толстую кишку, почки, поджелудочную железу, молочную железу, кости, предстательную железу, шейку матки, яички, яичники, небную миндалину или другой орган, и/или клетки, полученные из их. Образцы включают, в контексте клеточной терапии, например, адоптивной клеточной терапии, образцы из аутогенных и аллогенных источников. [0481] In some aspects, the sample from which cells are obtained or isolated is blood or a sample obtained from blood, or is a product or product obtained from apheresis or leukapheresis. Illustrative specimens include whole blood, peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), leukocytes, bone marrow, thymus, tissue biopsy, tumor, leukemia, lymphoma, lymph node, gastrointestinal-associated lymphoid tissue, mucosal-associated lymphoid tissue, spleen, other lymphoid tissues, liver, lung, stomach, intestines, colon, kidneys, pancreas, breast, bones, prostate, cervix, testes, ovaries, palatine tonsil or other organ, and/or cells derived from them. Samples include, in the context of cell therapy, such as adoptive cell therapy, samples from autologous and allogeneic sources.

[0482] В некоторых вариантах осуществления, клетки получают от линий клеток, например, линий Т-лимфоцитов. Клетки в некоторых вариантах осуществления получают из ксеногенного источника, например, от мышей, крыс, приматов иных, чем человек и свиней.[0482] In some embodiments, the cells are derived from cell lines, such as T-lymphocyte lines. The cells, in some embodiments, are derived from a xenogeneic source, such as mice, rats, non-human primates, and pigs.

[0483] В некоторых вариантах осуществления, выделение клеток включает одну или несколько стадий приготовления и/или разделения клеток не на основе сродства. В некоторых примерах, клетки отмывают, центрифугируют и/или инкубируют в присутствии одного или нескольких реагентов, например, для удаления нежелательных компонентов, обогащения желательными компонентами, лизиса или удаления клеток, чувствительных к конкретным реагентам. В некоторых примерах, клетки разделяют на основе одного или нескольких свойств, таких как плотность, свойства адгезии, размер, чувствительность и/или резистентность к конкретным компонентам. [0483] In some embodiments, cell isolation includes one or more steps of preparing and/or separating cells not based on affinity. In some examples, cells are washed, centrifuged, and/or incubated in the presence of one or more reagents, for example, to remove unwanted components, enrich in desirable components, lyse, or remove cells sensitive to particular reagents. In some examples, cells are separated based on one or more properties such as density, adhesion properties, size, sensitivity, and/or resistance to particular components.

[0484] В некоторых примерах, клетки из кровотока субъекта получают, например, посредством афереза или лейкафереза. Образцы, в некоторых аспектах, содержат лимфоциты, включая Т-лимфоциты, моноциты, гранулоциты, B-лимфоциты, другие ядросодержащие лейкоциты, эритроциты и/или тромбоциты, и в некоторых аспектах содержат клетки иные, чем эритроциты и тромбоциты. [0484] In some examples, cells from the subject's bloodstream are obtained, for example, by apheresis or leukapheresis. Samples, in some aspects, contain lymphocytes, including T-lymphocytes, monocytes, granulocytes, B-lymphocytes, other nucleated leukocytes, erythrocytes and/or platelets, and in some aspects contain cells other than erythrocytes and platelets.

[0485] В некоторых вариантах осуществления, клетки крови, собранные у субъекта, отмывают, например, для удаления фракции плазмы и для помещения клеток в соответствующий буфер или среду для последующих стадий обработки. В некоторых вариантах осуществления, клетки промывают фосфатным солевым буфером (PBS). В некоторых вариантах осуществления, промывочный раствор не содержит кальция и/или магния и/или многих или всех двухвалентных катионов. В некоторых аспектах, стадия промывки осуществляется в полуавтоматической “проточной” центрифуге (например, Cobe 2991 cell processor, Baxter) согласно инструкции производителя. В некоторых аспектах, стадию промывки осуществляют с помощью проточной фильтрации вдоль потока (TFF) согласно инструкции производителя. В некоторых вариантах осуществления, клетки повторно суспендируются в разнообразных биологически совместимых буферах после промывки, таких, например, как PBS, не содержащий Ca++/Mg++. В определенных вариантах осуществления, компоненты образца клеток крови удаляют и клетки непосредственно повторно суспендируют в среде для культивирования.[0485] In some embodiments, the blood cells collected from the subject are washed, for example, to remove a plasma fraction and to place the cells in an appropriate buffer or medium for subsequent steps. processing. In some embodiments, the cells are washed with phosphate buffered saline (PBS). In some embodiments, the wash solution is free of calcium and/or magnesium and/or many or all of the divalent cations. In some aspects, the washing step is carried out in a semi-automated "through-flow" centrifuge (eg, Cobe 2991 cell processor, Baxter) according to the manufacturer's instructions. In some aspects, the washing step is carried out using flow filtration along the flow (TFF) according to the manufacturer's instructions. In some embodiments, the cells are resuspended in a variety of biocompatible buffers after washing, such as, for example, Ca-free PBS++/Mg++. In certain embodiments, the components of the blood cell sample are removed and the cells directly resuspended in the culture medium.

[0486] В некоторых вариантах осуществления, способы включают способы разделения клеток на основе плотности, таких как приготовление лейкоцитов из периферической крови посредством лизиса эритроцитов и центрифугирования в градиенте Percoll или Ficoll.[0486] In some embodiments, the methods include methods for separating cells based on density, such as preparing leukocytes from peripheral blood by lysing erythrocytes and centrifuging in a Percoll or Ficoll gradient.

[0487] В некоторых вариантах осуществления, способы выделения включают разделение различных типов клеток на основе экспрессирования или присутствия в клетке одной или нескольких специфичных молекул, таких как поверхностные маркеры, например, поверхностные белки, внутриклеточные маркеры или нуклеиновая кислота. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать любой известный способ разделения на основе таких маркеров. В некоторых вариантах осуществления, разделение представляет собой разделение на основе сродства или иммунноафинности. Например, выделение в некоторых аспектах включает разделение клеток и популяций клеток на основе экспрессирования клеток или уровня экспрессирования одного или нескольких маркеров, как правило, поверхностных маркеров клетки, например, посредством инкубирования с антителом или партнером по связыванию, который специфично связывается с такими маркерами, как правило, за этим следуют стадии промывки и разделения клеток, связанных с антителом или партнером по связыванию, и тех клеток, которые не связаны с антителом или партнером по связыванию. [0487] In some embodiments, isolation methods include separating different cell types based on the expression or presence of one or more specific molecules in the cell, such as surface markers, such as surface proteins, intracellular markers, or nucleic acid. In some embodiments, any known separation method based on such markers can be used. In some embodiments, the partition is a partition based on affinity or immunoaffinity. For example, isolation in some aspects includes separating cells and cell populations based on cell expression or the level of expression of one or more markers, typically cell surface markers, for example, by incubation with an antibody or binding partner that specifically binds to markers such as this is typically followed by washing steps and separating cells bound to the antibody or binding partner from those cells not bound to the antibody or binding partner.

[0488] Такие стадии разделения могут основываться на положительной селекции, при которой клетки, связанные с реагентами, удерживаются для дальнейшего использования, и/или отрицательной селекции, при которой удерживаются клетки, не связанные с антителом или партнером по связыванию. В некоторых примерах, для дальнейшего использования удерживают обе фракции. В некоторых аспектах, отрицательная селекция может быть особенно полезной, когда нет доступного антитела, которое специфично идентифицирует тип клеток в гетерогенной популяции, так что разделение осуществляется лучше всего на основе маркеров, экспрессируемых клетками иными, чем желаемая популяция. [0488] Such separation steps may be based on positive selection, in which cells bound to the reagents are retained for further use, and/or negative selection, in which cells not bound to the antibody or binding partner are retained. In some examples, both fractions are retained for later use. In some aspects, negative selection can be particularly useful when there is no antibody available that specifically identifies a cell type in a heterogeneous population such that separation is best done based on markers expressed by cells other than the desired population.

[0489] Разделение не должно давать в результате 100% обогащение или удаление конкретной популяции клеток или клеток, экспрессирующих конкретный маркер. Например, положительная селекции или обогащение клетками конкретного типа, которые, например, экспрессируют маркер, относится к увеличению количества или процента таких клеток, но не должно давать в результате полного отсутствия клеток, не экспрессирующих маркера. Таким образом, отрицательная селекция, удаление или обеднение клеток конкретного типа, такого как те, которые экспрессируют маркер, относится к уменьшению количества или процента таких клеток, но не должно давать в результате полное удаление всех таких клеток. [0489] Separation should not result in 100% enrichment or removal of a particular population of cells or cells expressing a particular marker. For example, positive selection or enrichment for cells of a particular type that, for example, express a marker refers to an increase in the number or percentage of such cells, but should not result in a complete absence of cells not expressing the marker. Thus, negative selection, removal or depletion of cells of a particular type, such as those expressing a marker, refers to a reduction in the number or percentage of such cells, but should not result in the complete removal of all such cells.

[0490] В некоторых примерах, осуществляют множество заходов стадий разделения, когда полученная с помощью положительной или отрицательной селекции фракция с одной стадии подвергается воздействию другой стадии разделения, такой как последующая положительная или отрицательная селекция. В некоторых примерах, одна стадия разделения может вызвать обеднение клеток, экспрессирующих множество маркеров одновременно, например, посредством инкубирования клеток со множеством антител или партнеров по связыванию, каждый из которых специфичен к маркеру, нацеленному для отрицательной селекции. Таким образом, множество типов клеток может подвергаться положительной селекции одновременно посредством инкубирования клеток со множеством антител или партнеров по связыванию, экспрессируемых на различных типах клеток.[0490] In some examples, a plurality of separation steps are performed when a positive or negative selection fraction from one stage is subjected to another separation step, such as a subsequent positive or negative selection. In some examples, a single separation step can deplete cells expressing multiple markers simultaneously, such as by incubating the cells with multiple antibodies or binding partners, each specific for the marker targeted for negative selection. Thus, multiple cell types can be positively selected simultaneously by incubating cells with multiple antibodies or binding partners expressed on different cell types.

[0491] Например, в некоторых аспектах, конкретные субпопуляции Т-лимфоцитов, такие как клетки положительные, или экспрессирующие высокие уровни одного или нескольких поверхностных маркеров, например, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, и/или Т-лимфоциты CD45RO+, выделяют с помощью методик положительной или отрицательной селекции.[0491] For example, in some aspects, specific subpopulations of T-lymphocytes, such as cells positive, or expressing high levels of one or more surface markers, for example, CD28 + , CD62L + , CCR7 + , CD27 + , CD127 + , CD4+, CD8+ , CD45RA + , and/or CD45RO + T lymphocytes are isolated using positive or negative selection techniques.

[0492] Например, Т-лимфоциты CD3+, CD28+ могут подвергаться положительной селекции с использованием конъюгированых магнитных шариков анти-CD3/анти-CD28 (например, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander). [0492] For example, CD3 T lymphocytes+, CD28+ can be positively selected using conjugated magnetic anti-CD3/anti-CD28 beads (e.g. DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T Cell Expander).

[0493] В некоторых вариантах осуществления, выделение осуществляют посредством обогащения конкретной популяции клеток посредством положительной селекции или обеднения конкретной популяции клеток посредством отрицательной селекции. В некоторых вариантах осуществления, положительная или отрицательная селекция осуществляется посредством инкубирования клеток с одним или несколькими антителами или с другим связывающим агентом, который специфично связывается с одним или несколькими поверхностными маркерами, экспрессируемыми (маркер+) при относительно высоком уровне (markerhigh) на клетках, полученных с помощью положительной или отрицательной селекции, соответственно. [0493] In some embodiments, the implementation, the selection is carried out by enriching a particular population of cells through positive selection or depletion of a particular population of cells through negative selection. In some embodiments, positive or negative selection is performed by incubating cells with one or more antibodies or other binding agent that specifically binds to one or more surface markers expressed (marker + ) at a relatively high level (marker high ) on cells, obtained by positive or negative selection, respectively.

[0494] В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты выделяют из образца PBMC посредством отрицательной селекции маркеров, экспрессируемых на клетках отличных от Т-лимфоцитов, таких как B-лимфоциты, моноциты или другие лейкоциты, такие как CD14. В некоторых аспектах, стадию селекции CD4+ или CD8+ используют для разделения хелперных Т-лимфоцитов CD4+ и цитотоксичных Т-лимфоцитов CD8+. Такие популяции CD4+ и CD8+ могут в дальнейшем сортироваться на субпопуляции посредством положительной или отрицательной селекции относительно маркеров, экспрессируемых или экспрессируемых при относительно более высоком уровне в одной или нескольких субпопуляциях наивных Т-лимфоцитов, T-лимфоцитов памяти и/или эффекторных T-лимфоцитов. [0494] In some embodiments, T lymphocytes are isolated from a PBMC sample by negative selection for markers expressed on cells other than T lymphocytes, such as B lymphocytes, monocytes, or other white blood cells such as CD14. In some aspects, a CD4+ or CD8+ selection step is used to separate CD4+ helper T lymphocytes from CD8+ cytotoxic T lymphocytes. Such CD4+ and CD8+ populations can be further sorted into subpopulations by positive or negative selection for markers expressed or expressed at a relatively higher level in one or more subpopulations of naive T lymphocytes, memory T lymphocytes and/or effector T lymphocytes.

[0495] В некоторых вариантах осуществления, клетки CD8+ дополнительно обогащаются или обедняются наивными клетками, центральными клетками памяти, эффекторными клетками памяти, и/или центральными стволовыми клетками памяти, например, с помощью положительной или отрицательной селекции на основе поверхностных антигенов, связанных с соответствующей субпопуляцией. В некоторых вариантах осуществления, осуществляют обогащение центральными T-лимфоцитами памяти (TCM) для увеличения эффективности, например, для улучшения долговременной выживаемости, размножения и/или приживления после введения, которые в некоторых аспектах являются особенно стойкими в таких субпопуляциях. Смотри Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012); Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012). В некоторых вариантах осуществления, объединение TCM-обогащенных Т-лимфоцитов CD8+ и Т-лимфоцитов CD4+ дополнительно повышает эффективность.[0495] In some embodiments, CD8+ cells are further enriched or depleted in naïve cells, central memory cells, effector memory cells, and/or central memory stem cells, e.g., by positive or negative selection based on surface antigens associated with the respective subpopulation. . In some embodiments, memory central T lymphocytes (T CM ) are enriched to increase efficacy, e.g., to improve long-term survival, multiplication, and/or engraftment after administration, which in some aspects are particularly persistent in such subpopulations. See Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012); Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012). In some embodiments, combining TCM-rich CD8+ T lymphocytes and CD4+ T lymphocytes further enhances efficacy.

[0496] В вариантах осуществления, Т-лимфоциты памяти присутствуют в подмножествах CD8+ лимфоцитов периферической крови как в CD62L+, так и в CD62L-. PBMC могут обогащаться или обедняться фракциями CD62L-CD8+ и/или CD62L+CD8+, например, с использованием антител анти-CD8 и анти-CD62L. [0496] In embodiments, memory T lymphocytes are present in subsets of CD8+ peripheral blood lymphocytes in both CD62L + and CD62L-. PBMCs can be enriched or depleted in CD62L-CD8+ and/or CD62L + CD8+ fractions, for example using anti-CD8 and anti-CD62L antibodies.

[0497] В некоторых вариантах осуществления, обогащение центральных T-лимфоцитов памяти (TCM) основано на положительном или высоком поверхностном экспрессировании CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 и/или CD 127; в некоторых аспектах, оно основано на отрицательной селекции клеток, экспрессирующих или сильно экспрессирующих CD45RA и/или гранзим B. В некоторых аспектах, выделение популяции CD8+, обогащенной клетками TCM, осуществляется посредством обеднения клеток, экспрессирующих CD4, CD14, CD45RA, и положительной селекции или обогащения клетками, экспрессирующими CD62L. В одном из аспектов, обогащение центральными T-лимфоцитами памяти (TCM) осуществляется, начиная с отрицательной фракции клеток, полученных селекцией на основе экспрессирования CD4, которые подвергаются отрицательной селекции на основе экспрессирования CD14 и CD45RA, и положительной селекции на основе CD62L. Такие виды селекции в некоторых аспектах осуществляются одновременно, а в других аспектах осуществляются последовательно, в любом порядке. В некоторых аспектах, такая же стадия селекции на основе экспрессирования CD4, как используется при приготовлении популяции или субпопуляции клеток CD8+, используется также для генерирования популяции или субпопуляции клеток CD4+, так что, как положительная, так и отрицательная фракция от разделения на основе CD4 удерживаются и используются на последующих стадиях способов, необязательно, после одной или нескольких дополнительных стадий положительной или отрицательной селекции.[0497] In some embodiments, the enrichment of central memory T lymphocytes (T CM ) is based on positive or high surface expression of CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 and/or CD 127; in some aspects, it is based on negative selection of cells expressing or strongly expressing CD45RA and/or granzyme B. In some aspects, isolation of a CD8+ population enriched in T CM cells is accomplished by depletion of cells expressing CD4, CD14, CD45RA and positive selection or enrichment in cells expressing CD62L. In one aspect, enrichment for central memory T lymphocytes ( TCM ) is performed by starting with a negative fraction of cells selected based on CD4 expression, which are negatively selected based on CD14 and CD45RA expression, and positively selected based on CD62L. These types of selection in some aspects are carried out simultaneously, and in other aspects are carried out sequentially, in any order. In some aspects, the same selection step based on CD4 expression as used in preparing a population or subset of CD8+ cells is also used to generate a population or subset of CD4+ cells such that both positive and negative fractions from the CD4 based separation are retained and used in subsequent steps of the methods, optionally after one or more additional positive or negative selection steps.

[0498] В конкретном примере, образец PBMC или образец других лейкоцитов подвергается воздействию селекции клеток CD4+, где удерживаются как отрицательные, так и положительные фракции. Затем отрицательная фракция подвергается воздействию отрицательной селекции на основе экспрессирования CD14 и CD45RA или CD19 и положительной селекции на основе характеристик маркера центральных Т-лимфоцитов памяти, таких как CD62L или CCR7, где положительная и отрицательная селекция осуществляются в любом порядке.[0498] In a specific example, a PBMC sample or a sample of other leukocytes is subjected to selection of CD4+ cells, where both negative and positive fractions are retained. The negative fraction is then subjected to negative selection based on CD14 and CD45RA or CD19 expression and positive selection based on marker characteristics of central memory T lymphocytes such as CD62L or CCR7, where positive and negative selection is done in any order.

[0499] Хелперные T-лимфоциты CD4+ сортируют на наивные клетки, центральные клетки памяти и эффекторные клетки посредством идентификации популяций клеток, которые имеют антигены на поверхности клеток. Лимфоциты CD4+ можно получить с помощью стандартных способов. В некоторых вариантах осуществления, наивные T-лимфоциты CD4+ представляют собой Т-лимфоциты CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+. В некоторых вариантах осуществления, центральные клетки памяти CD4+ представляют собой CD62L+ и CD45RO+. В некоторых вариантах осуществления, эффекторные клетки CD4+ представляют собой CD62L- и CD45RO-.[0499] CD4+ T helper lymphocytes are sorted into naive cells, central memory cells, and effector cells by identifying cell populations that have cell surface antigens. CD4+ lymphocytes can be obtained using standard methods. In some embodiments, the naïve CD4+ T lymphocytes are CD45RO-, CD45RA + , CD62L + , CD4+ T lymphocytes. In some embodiments, the CD4+ central memory cells are CD62L + and CD45RO + . In some embodiments, the CD4+ effector cells are CD62L- and CD45RO-.

[0500] В одном из примеров, для обогащения клеток CD4+ посредством отрицательной селекции, коктейль моноклональных антител, как правило, содержит антитела к CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR и CD8. В некоторых вариантах осуществления, антитело или партнер по связыванию связывается с твердым носителем или матрицей, такой как магнитный шарик или парамагнитный шарик, чтобы дать возможность для разделения клеток для положительной и/или отрицательной селекции. Например, в некоторых вариантах осуществления, клетки и популяции клеток разделяют или выделяют с использованием иммуномагнитных (или магнитоаффинных) методик разделения (обсуждаемых в Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher © Humana Press Inc., Totowa, NJ). [0500] In one example, to enrich CD4+ cells through negative selection, the monoclonal antibody cocktail typically contains antibodies to CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, and CD8. In some embodiments, the antibody or binding partner is bound to a solid support or matrix, such as a magnetic bead or paramagnetic bead, to allow cells to be separated for positive and/or negative selection. For example, in some embodiments, cells and cell populations are separated or isolated using immunomagnetic (or magnetoaffinity) separation techniques (discussed in Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo , p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher © Humana Press Inc., Totowa, NJ).

[0501] В некоторых аспектах, образец или композиция клеток, которые должны разделяться, инкубируются вместе с мелкодисперсным намагничиваемым или магниточувствительным материалом, таким как магниточувствительные частицы или микрочастицы, такие как парамагнитные шарики (например, такие как Dynalbeads или шарики MACS). Магниточувствительный материал, например, частицы, как правило, прямо или косвенно присоединены к партнеру по связыванию, например, к антителу, которое специфично связывается с молекулой, например, поверхностным маркером, присутствующим на клетке, клетках или на популяции клеток, которые желают разделить, например, их желают подвергнуть воздействию отрицательной или положительной селекции.[0501] In some aspects, a sample or composition of cells to be separated is incubated with a finely divided magnetizable or magnetically sensitive material such as magnetically sensitive particles or microparticles such as paramagnetic beads (such as Dynalbeads or MACS beads). The magnetically sensitive material, e.g., particles, is typically attached directly or indirectly to a binding partner, e.g., an antibody, that specifically binds to a molecule, e.g. , they wish to subject them to negative or positive selection.

[0502] В некоторых вариантах осуществления, магнитная частица или шарик содержит магниточувствительный материал, связанный с элементом специфичного связывания, таким как антитело или другой партнер по связыванию. Имеется множество хорошо известных магниточувствительных материалов, используемых в способах магнитной сепарации. Соответствующие магнитные частицы включают частицы, описанные в Molday, патент США № 4452773, и в описании Европейского патента EP 452342 B, которые тем самым включаются в качестве ссылок. Частицы коллоидных размеров, такие как те, которые описаны в Owen, патент США № 4795698, и Liberti et al., патент США № 5200084, представляют собой другие примеры.[0502] In some embodiments, the magnetic particle or bead comprises a magnetically sensitive material associated with a specific binding element, such as an antibody or other binding partner. There are many well known magnetically sensitive materials used in magnetic separation processes. Suitable magnetic particles include those described in Molday US Pat. No. 4,452,773 and EP 452342 B, which are hereby incorporated by reference. Particles of colloidal size, such as those described in Owen, US patent No. 4795698, and Liberti et al., US patent No. 5200084, are other examples.

[0503] Инкубирование, как правило, осуществляется при условиях, при которых антитела или партнеры по связыванию, или молекулы, такие как вторичные антитела или другие реагенты, которые специфично связываются с такими антителами или партнерами по связыванию, которые присоединяются к магнитной частице или шарику, специфично связываются с молекулами на поверхности клетки, если они присутствуют на клетках в образце. [0503] Incubation is generally carried out under conditions under which antibodies or binding partners, or molecules such as secondary antibodies or other reagents that specifically bind to such antibodies or binding partners that are attached to the magnetic particle or bead, bind specifically to molecules on the cell surface if they are present on the cells in the sample.

[0504] В некоторых аспектах, образец помещают в магнитное поле, и клетки, содержащие магниточувствительные или намагничиваемые частицы, присоединенные к ним, будут притягиваться к магниту и отделяться от немеченых клеток. Для положительной селекции удерживаются клетки, которые притягиваются к магниту; для отрицательной селекции удерживаются клетки, которые не притягиваются (немеченые клетки). В некоторых аспектах, сочетание положительной и отрицательной селекции осуществляется в ходе одной и той же стадии селекции, когда положительные и отрицательные фракции удерживаются и дополнительно обрабатываются или подвергаются воздействию дополнительных стадий разделения. [0504] In some aspects, the sample is placed in a magnetic field, and cells containing magnetically sensitive or magnetizable particles attached to them will be attracted to the magnet and separated from unlabeled cells. For positive selection, cells that are attracted to a magnet are retained; for negative selection, cells that are not attracted (unlabeled cells) are retained. In some aspects, the combination of positive and negative selection is performed during the same selection step, where the positive and negative fractions are retained and further processed or subjected to additional separation steps.

[0505] В определенных вариантах осуществления, магниточувствительные частицы покрывают первичными антителами или другими партнерами по связыванию, вторичными антителами, лектинами, ферментами или стрептавидином. В определенных вариантах осуществления, магнитные частицы присоединяются к клеткам посредством покрытия из первичных антител специфичных к одному или нескольким маркерам. В определенных вариантах осуществления, клетки, а не шарики, метятся первичным антителом или партнером по связыванию, а затем добавляют магнитные частицы, покрытые вторичным антителом специфичным к типу клеток или другим партнером по связыванию (например, стрептавидином). В определенных вариантах осуществления, магнитные частицы, покрытые стрептавидином, используют в сочетании с биотинилированными первичными или вторичными антителами. [0505] In certain embodiments, the magnetically sensitive particles are coated with primary antibodies or other binding partners, secondary antibodies, lectins, enzymes, or streptavidin. In certain embodiments, the magnetic particles are attached to cells via a coating of primary antibodies specific for one or more markers. In certain embodiments, cells, rather than beads, are labeled with a primary antibody or binding partner, and then magnetic particles coated with a cell type-specific secondary antibody or other binding partner (eg, streptavidin) are added. In certain embodiments, streptavidin-coated magnetic particles are used in combination with biotinylated primary or secondary antibodies.

[0506] В некоторых вариантах осуществления, магниточувствительные частицы оставляют присоединенными к клеткам, которые должны впоследствии инкубироваться, культивироваться и/или подвергаться генной инженерии; в некоторых аспектах, частицы остаются присоединенными к клеткам для введения пациенту. В некоторых вариантах осуществления, намагничиваемые или магниточувствительные частицы удаляют с клеток. Способы удаления намагничиваемых частиц с клеток известны и включают, например, использование конкурирующих немеченых антител и намагничиваемых частиц или антител, конъюгированных с расщепляемыми линкерами. В некоторых вариантах осуществления, намагничиваемые частицы являются биодеградируемыми. [0506] In some embodiments, the magnetically sensitive particles are left attached to cells that are to be subsequently incubated, cultured, and/or genetically engineered; in some aspects, the particles remain attached to the cells for administration to the patient. In some embodiments, the magnetizable or magnetically sensitive particles are removed from the cells. Methods for removing magnetizable particles from cells are known and include, for example, the use of competing unlabeled antibodies and magnetizable particles or antibodies conjugated to cleavable linkers. In some embodiments, the magnetizable particles are biodegradable.

[0507] В некоторых вариантах осуществления, селекция на основе сродства осуществляется с помощью сортинга с помощью магнитно активированных клеток (MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Системы Magnetic Activated Cell Sorting (MACS) способны к селекции высокой чистоты клеток, содержащих намагниченные частицы, присоединенные к ним. В определенных вариантах осуществления, MACS работает в режиме, когда нецелевые и целевые частицы последовательно элюируются после приложения внешнего магнитного поля. То есть, клетки, присоединенные к магнитным частицам, удерживаются на месте, в то время как не присоединенные частицы элюируются. Затем, после завершения этой первой стадии элюирования, частицы, которые захвачены в магнитном поле, и их элюирование предотвращается, освобождаются некоторым образом, так что они могут элюироваться. В определенных вариантах осуществления, нецелевые клетки метятся и обедняются в гетерогенной популяции клеток. [0507] In some embodiments, affinity selection is performed using magnetically activated cell sorting (MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Magnetic Activated Cell Sorting (MACS) systems are capable of selecting high purity cells containing magnetized particles attached to them. In certain embodiments, the MACS operates in a mode where non-target and target particles are sequentially eluted following the application of an external magnetic field. That is, the cells attached to the magnetic particles are held in place while the unattached particles are eluted. Then, after this first elution step is completed, the particles that are trapped in the magnetic field and prevented from being eluted are released in some way so that they can be eluted. In certain embodiments, non-target cells are labeled and depleted in a heterogeneous population of cells.

[0508] В определенных вариантах осуществления, выделение или разделение осуществляется с использованием системы, устройства или аппарата, который осуществляет одно или несколько действий из стадий способов выделения, приготовления клеток, разделения, обработки, инкубирования, культивирования и/или подготовки. В некоторых аспектах, систему используют для осуществления каждой из этих стадий в замкнутой или стерильной окружающей среде, например, для сведения к минимуму ошибки, неправильных действий пользователя и/или загрязнения. В одном из примеров, система представляет собой систему, как описано в публикации PCT номер WO2009/072003 или в заявке на патент США № 20110003380 A1.[0508] In certain embodiments, the isolation or separation is performed using a system, device, or apparatus that performs one or more of the isolation, cell preparation, separation, processing, incubation, culture, and/or preparation method steps. In some aspects, the system is used to perform each of these steps in a closed or sterile environment, such as to minimize error, user mismanagement, and/or contamination. In one example, the system is as described in PCT Publication Number WO2009/072003 or US Patent Application No. 20110003380 A1.

[0509] В некоторых вариантах осуществления, система или устройство осуществляет одну или несколько, например, все, стадии из выделения, обработки, генной инженерии и приготовления в объединенной или самодостаточной системе и/или автоматическим или программируемым образом. В некоторых аспектах, система или устройство содержит компьютер и/или компьютерную программу в сообщении с системой или устройством, которая позволяет пользователю программировать, контролировать, оценивать результат и/или регулировать различные аспекты стадий обработки, выделения, генной инженерии и приготовления.[0509] In some embodiments, the system or device performs one or more, for example, all of the steps of isolation, processing, genetic engineering, and preparation in an integrated or self-contained system and/or in an automated or programmable manner. In some aspects, the system or device includes a computer and/or a computer program in communication with the system or device that allows the user to program, control, evaluate the result and/or adjust various aspects of the processing, isolation, genetic engineering and preparation steps.

[0510] В некоторых аспектах, разделение и/или другие стадии осуществляются с использованием системы CliniMACS (Miltenyi Biotec), например, для автоматического разделения клеток на уровне клинического масштаба в замкнутой и стерильной системе. Компоненты могут включать встроенный микрокомпьютер, узел магнитной сепарации, перистальтический насос и различные запорные клапаны. Встроенный компьютер в некоторых аспектах контролирует все компоненты инструмента и направляет систему на осуществление повторяющихся процедур в стандартизированной последовательности. Узел магнитной сепарации в некоторых аспектах включает подвижный постоянный магнит и держатель для селекционной колонки. Перистальтический насос контролирует скорость потока через набор трубок и, вместе с запорными клапанами, обеспечивает контролируемый поток буфера через систему и непрерывное суспендирование клеток. [0510] In some aspects, separation and/or other steps are performed using the CliniMACS system (Miltenyi Biotec), for example, to automatically separate cells at the clinical scale level in a closed and sterile system. Components may include an embedded microcomputer, a magnetic separation unit, a peristaltic pump, and various shut-off valves. The built-in computer in some aspects controls all the components of the tool and directs the system to carry out repetitive procedures in a standardized sequence. The magnetic separation assembly in some aspects includes a movable permanent magnet and a selection column holder. The peristaltic pump controls the flow rate through the tubing set and, together with check valves, provides a controlled flow of buffer through the system and continuous cell suspension.

[0511] Система CliniMACS в некоторых аспектах использует связанные с антителом намагничиваемые частицы, которые поставляются в стерильном, непирогенном растворе. В некоторых вариантах осуществления, после мечения клеток магнитными частицами, клетки промывают для удаления избытка частиц. Затем мешок для приготовления клеток соединяется с набором трубок, который, в свою очередь, соединяется c мешком, содержащим буфер, и мешком для сбора клеток. Набор трубок состоит из предварительно собранных стерильных трубок, включая предварительную колонку и разделительную колонку, и они предназначены для одноразового использования. После начала программы разделения, система автоматически вводит образец клеток в разделительную колонку. Меченые клетки удерживаются в колонке, в то время как немеченые клетки удаляются посредством ряда стадий промывки. В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток для использования с помощью способов, описанных в настоящем документе, являются немечеными и не удерживаются в колонке. В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток для использования вместе со способами, описанными в настоящем документе, являются меченными и удерживаются в колонке. В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток для использования вместе со способами, описанными в настоящем документе, элюируются из колонки после удаления магнитного поля и собираются в мешок для сбора клеток.[0511] The CliniMACS system in some aspects uses antibody-bound magnetizable particles that are supplied in a sterile, non-pyrogenic solution. In some embodiments, after labeling cells with magnetic particles, the cells are washed to remove excess particles. The cell preparation bag is then connected to a tubing set, which in turn is connected to a bag containing buffer and a cell collection bag. The tubing set consists of pre-assembled sterile tubing, including pre-column and separation column, and is intended for single use. After starting the separation program, the system automatically introduces the cell sample into the separation column. Labeled cells are retained on the column while unlabeled cells are removed through a series of washing steps. In some embodiments, cell populations for use with the methods described herein are unlabeled and are not retained on the column. In some embodiments, cell populations for use in conjunction with the methods described herein are labeled and retained in a column. In some embodiments, cell populations for use with the methods described herein are eluted from the column after removal of the magnetic field and collected in a cell collection bag.

[0512] В определенных вариантах осуществления, разделение и/или другие стадии осуществляют с использованием системы CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec). Система CliniMACS Prodigy в некоторых аспектах снабжена узлом обработки клеток, который делает возможным автоматическую промывку и фракционирование клеток посредством центрифугирования. Система CliniMACS Prodigy может также содержит встроенную камеру и программируемое устройство для распознавания изображений, которое определяет оптимальную конечную точку фракционирования клеток посредством определения различий макроскопических слоев исходного продукта клеток. Например, периферическая кровь автоматически разделяется на эритроциты, лейкоциты и слои плазмы. Система CliniMACS Prodigy может также содержать встроенную камеру для культивирования клеток, которая исполняет протоколы культивирования клеток, такие, например, как дифференциация и размножение клеток, нагрузка антигена и долговременное культивирование клеток. Входные узлы могут сделать возможным стерильное удаление и замену сред, и клетки можно наблюдать с использованием встроенного микроскопа. Смотри, например, Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012) и Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012).[0512] In certain embodiments, separation and/or other steps are performed using a CliniMACS Prodigy system (Miltenyi Biotec). The CliniMACS Prodigy system is in some aspects provided with a cell processing unit that enables automatic washing and fractionation of cells by centrifugation. The CliniMACS Prodigy system may also include an integrated camera and programmable image recognition device that determines the optimal cell fractionation end point by detecting differences in macroscopic layers of the original cell product. For example, peripheral blood is automatically separated into erythrocytes, leukocytes, and plasma layers. The CliniMACS Prodigy system may also include an integrated cell culture chamber that performs cell culture protocols such as cell differentiation and expansion, antigen loading, and long-term cell culture. Entry nodes can allow sterile removal and exchange of media, and cells can be observed using an on-board microscope. See, for example, Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012) and Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012).

[0513] В некоторых вариантах осуществления, популяции клеток, описанные в настоящем документе, собираются и обогащаются (или обедняются) с помощью проточной цитометрии, при которой клетки, окрашенные с помощью множества поверхностных маркеров клеток, переносятся в потоке текучей среды. В некоторых вариантах осуществления, популяция клеток, описанная в настоящем документе, собирается и обогащается (или обедняется) с помощью (FACS)-сортинга в препаративном масштабе. В определенных вариантах осуществления, популяция клеток, описанная в настоящем документе, собирается и обогащается (или обедняется) с использованием чипов микроэлектромеханических систем (MEMS) в сочетании с системой детектирования на основе FACS (смотри, например, WO 2010/033140, Cho et al., Lab Chip 10, 1567-1573 (2010); и Godin et al., J Biophoton. 1(5):355-376 (2008). В обоих случаях, клетки могут метиться множеством маркеров с получением возможности выделения хорошо определенных подмножеств T-лимфоцитов высокой чистоты.[0513] In some embodiments, the cell populations described herein are collected and enriched (or depleted) using flow cytometry, in which cells stained with a plurality of cell surface markers are carried in a fluid stream. In some embodiments, the cell population described herein is harvested and enriched (or depleted) by preparative scale (FACS) sorting. In certain embodiments, the cell population described herein is harvested and enriched (or depleted) using microelectromechanical systems (MEMS) chips in combination with a FACS-based detection system (see, for example, WO 2010/033140, Cho et al. , Lab Chip 10, 1567-1573 (2010) and Godin et al., J Biophoton 1(5):355-376 (2008) In both cases, cells can be labeled with a variety of markers to enable well-defined subsets of T - lymphocytes of high purity.

[0514] В некоторых вариантах осуществления, антитела или партнеры по связыванию метятся одним или несколькими детектируемыми маркерами для облегчения разделения для положительной и/или отрицательно селекции. Например, разделение может основываться на связывании флуоресцентно меченых антител. В некоторых примерах, разделение клеток, основанное на связывании антител или других партнеров по связыванию специфичных к одному или нескольким поверхностным маркерам клеткам, осуществляется в потоке текучей среды, например, с помощью клеточного сортера с возбуждением флуоресценции (FACS), включая (FACS) в препаративном масштабе и/или чипы микроэлектромеханических систем (MEMS), например, в сочетании с системой проточного цитометрического детектирования. Такие способы делают возможной положительную и отрицательную селекцию на основе множества маркеров одновременно. [0514] In some embodiments, antibodies or binding partners are labeled with one or more detectable markers to facilitate separation for positive and/or negative selection. For example, separation may be based on the binding of fluorescently labeled antibodies. In some examples, cell separation based on the binding of antibodies or other binding partners specific for one or more cell surface markers is carried out in a fluid stream, for example, using a fluorescence excited cell sorter (FACS), including (FACS) in preparative scale and/or microelectromechanical systems (MEMS) chips, for example in combination with a flow cytometric detection system. Such methods allow positive and negative selection based on multiple markers at the same time.

[0515] В некоторых вариантах осуществления, способы приготовления включают стадии замораживания, например, криоконсервирование клеток, либо до, либо после выделения, инкубирования и/или генной инженерии. В некоторых вариантах осуществления, замораживание и последующая стадия оттаивания удаляет гранулоциты и, до некоторой степени, моноциты в популяции клеток. В некоторых вариантах осуществления, клетки суспендируются в растворе для замораживания, например, после стадии промывки для удаления плазмы и тромбоцитов. Можно использовать в некоторых аспектах любые из множества известных растворов для замораживания и параметров. Один из примеров включает использование PBS, содержащего 20% DMSO и 8% сывороточного альбумина человека (HSA), или других соответствующих сред для замораживания клеток. Затем его разбавляют средами 1:1, так что конечная концентрация DMSO и HSA составляет 10% и 4%, соответственно. Затем клетки, как правило, замораживают до -80°C при скорости 1° в минуту и хранят в паровой фазе в танке-хранилище с жидким азотом. [0515] In some embodiments, the preparation methods include freezing steps, such as cryopreservation of cells, either before or after isolation, incubation, and/or genetic engineering. In some embodiments, the freezing and subsequent thawing step removes granulocytes and, to some extent, monocytes in the cell population. In some embodiments, the cells are suspended in a freezing solution, for example, after a washing step to remove plasma and platelets. Any of a variety of known freezing solutions and parameters may be used in some aspects. One example involves using PBS containing 20% DMSO and 8% human serum albumin (HSA) or other appropriate cell freezing media. It is then diluted with media 1:1 so that the final concentration of DMSO and HSA is 10% and 4%, respectively. The cells are then typically frozen to -80° C. at a rate of 1° per minute and stored in the vapor phase in a liquid nitrogen storage tank.

[0516] В некоторых вариантах осуществления, клетки инкубируют и/или культивируют до генетической инженерии или в объединении с ней. Стадии инкубирования могут включать посев, культивирование, стимулирование, активирование и/или выращивание. Инкубирование и/или генная инженерия могут осуществляться в емкости для культивирования, такой как узел, камера, лунка, колонка, пробирка, набор трубок, клапан, флакон, чашка для культивирования, мешок или другой контейнер для посева или культивирования клеток. В некоторых вариантах осуществления, композиции или клетки инкубируют в присутствии условий стимулирования или стимулирующего агента. Такие условия включют условия, разработанные для индуцирования, пролиферации, размножения, активирования и/или выживаемости клеток в популяции, для воспроизведения экспонирования для антигена, и/или для примирования клеток для генной инженерии, например, для введения рекомбинантного рецептора антигена. [0516] In some embodiments, cells are incubated and/or cultured prior to or in association with genetic engineering. Incubation steps may include seeding, culturing, stimulating, activating and/or growing. Incubation and/or genetic engineering may be carried out in a culture vessel such as a node, chamber, well, column, tube, tube set, valve, vial, culture dish, bag or other container for seeding or culturing cells. In some embodiments, the compositions or cells are incubated in the presence of stimulating conditions or a stimulating agent. Such conditions include conditions designed to induce, proliferate, expand, activate, and/or survive cells in a population, to mimic antigen exposure, and/or to prime cells for genetic engineering, for example, to introduce a recombinant antigen receptor.

[0517] Условия могут включать одну или несколько конкретных сред, температуру, содержание кислорода, содержание диоксида углерода, время, агенты, например, питательные элементы, аминокислоты, антибиотики, ионы и/или стимулирующие факторы, такие как цитокины, хемокины, антигены, партнеры по связыванию, белки слияния, рекомбинантные растворимые рецепторы, и любые другие агенты, разработанные для активирования клеток. [0517] Conditions may include one or more specific environments, temperature, oxygen content, carbon dioxide content, time, agents such as nutrients, amino acids, antibiotics, ions, and/or stimulatory factors such as cytokines, chemokines, antigens, partners binding, fusion proteins, recombinant soluble receptors, and any other agents designed to activate cells.

[0518] В некоторых вариантах осуществления, стимулирующие условия или агенты включают один или несколько агентов, например, лиганд, который может активировать внутриклеточный сигнальный домен комплекса TCR. В некоторых аспектах, агент включает или инициирует внутриклеточный сигнальный каскад TCR/CD3 в T-лимфоците. Такие агенты могут включать антитела, например, специфичные к TCR, например, анти-CD3. В некоторых вариантах осуществления, условия стимулирования включают один или несколько агентов, например, лиганд, который может стимулировать костимуляторный рецептор, например, анти-CD28. В некоторых вариантах осуществления, такие агенты и/или лиганды могут связываться с твердым носителем, таким как шарик, и/или с одним или несколькими цитокинами. Необязательно, способ размножения может дополнительно включать стадию добавления антитела анти-CD3 и/или анти-CD28 в среду для культивирования (например, при концентрации, по меньшей мере, примерно 0,5 нг/мл). В некоторых вариантах осуществления, стимулирующие агенты включают IL-2, IL-15 и/или IL-7. В некоторых аспектах, концентрация IL-2 составляет, по меньшей мере, примерно 10 единиц/мл.[0518] In some embodiments, the stimulating conditions or agents include one or more agents, such as a ligand, that can activate an intracellular signaling domain of the TCR complex. In some aspects, the agent turns on or initiates an intracellular TCR/CD3 signaling cascade in a T lymphocyte. Such agents may include antibodies, eg specific for TCR, eg anti-CD3. In some embodiments, the stimulation conditions include one or more agents, such as a ligand, that can stimulate a co-stimulatory receptor, such as anti-CD28. In some embodiments, such agents and/or ligands can bind to a solid carrier, such as a bead, and/or one or more cytokines. Optionally, the propagation method may further comprise the step of adding the anti-CD3 and/or anti-CD28 antibody to the culture medium (eg, at a concentration of at least about 0.5 ng/mL). In some embodiments, the stimulatory agents include IL-2, IL-15 and/or IL-7. In some aspects, the concentration of IL-2 is at least about 10 units/ml.

[0519] В некоторых аспектах, инкубирование осуществляется согласно методикам, таким как те, которые описаны в патенте США № 6040177, Riddell et al., Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012) и/или Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012). [0519] In some aspects, incubation is carried out according to techniques such as those described in US patent No. 6040177, Riddell et al., Klebanoff et al., J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al., Blood.1:72-82 (2012) and/or Wang et al., J Immunother. 35(9):689-701 (2012).

[0520] В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты размножаются посредством добавления в инициирующую культивирование композицию клеток-фидеров, таких как неделящиеся мононуклеары периферической крови (PBMC) (например, таким образом что получаемая в результате популяция клеток содержит, по меньшей мере, примерно 5, 10, 20 или 40 или больше клеток-фидеров PBMC на каждый T-лимфоцит в начальной популяции, который должен размножаться); и инкубирования культуры (например, в течение времени, достаточного для размножения этих количеств Т-лимфоцитов). В некоторых аспектах, неделящиеся клетки-фидеры могут содержать гамма-облученные клетки-фидеры PBMC. В некоторых вариантах осуществления, PBMC облучают гамма-излучением в диапазоне примерно 3000-3600 рад для предотвращения деления клеток. В некоторых аспектах, клетки-фидеры добавляют в культурную среду перед добавлением популяций Т-лимфоцитов.[0520] In some embodiments, T lymphocytes are propagated by adding feeder cells, such as non-dividing peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) to the initiating culture composition (e.g., such that the resulting cell population contains at least about 5 , 10, 20, or 40 or more PBMC feeder cells for each T-lymphocyte in the initial population to proliferate); and incubating the culture (eg, for a period of time sufficient for these numbers of T-lymphocytes to multiply). In some aspects, non-dividing feeder cells may contain gamma-irradiated PBMC feeder cells. In some embodiments, the PBMC is irradiated with gamma radiation in the range of about 3000-3600 rad to prevent cell division. In some aspects, the feeder cells are added to the culture medium prior to the addition of the T lymphocyte populations.

[0521] В некоторых вариантах осуществления, условия стимулирования включают температуру, соответствующую росту T-лимфоцитов человека, например, по меньшей мере, примерно 25 градусов Цельсия, как правило, по меньшей мере, примерно 30 градусов, и как правило, соответствующую или примерно соответствующую 37 градусам Цельсия. Необязательно, инкубирование может дополнительно включать добавление неделящихся EBV-трансформированных лимфобластных клеток (LCL) в качестве клеток-фидеров. LCL могут облучаться гамма-излучением в диапазоне примерно от 6000 до 10000 рад. Клетки-фидеры LCL в некоторых аспектах обеспечиваются в любом соответствующем количестве, например, при отношении клеток-фидеров LCL к начальным T-лимфоцитам, по меньшей мере, примерно 10:1. [0521] In some embodiments, the stimulation conditions include a temperature appropriate for human T-lymphocyte growth, e.g., at least about 25 degrees Celsius, typically at least about 30 degrees, and typically at or about 37 degrees Celsius. Optionally, the incubation may further include the addition of non-dividing EBV-transformed lymphoblastic cells (LCL) as feeder cells. LCLs can be irradiated with gamma radiation in the range of about 6000 to 10000 rads. LCL feeder cells in some aspects are provided in any appropriate amount, eg, at a ratio of LCL feeder cells to initial T lymphocytes of at least about 10:1.

[0522] В вариантах осуществления, антиген-специфичные Т-лимфоциты, такие как антиген-специфичные Т-лимфоциты CD4+ и/или CD8+, получают посредством стимулирования наивных или антиген-специфичных T-лимфоцитов антигеном. Например, линии или клоны антиген-специфичных Т-лимфоцитов можно генерировать для антигенов цитомегаловируса посредством выделения Т-лимфоцитов у инфицированных субъектов и стимулирования клеток in vitro с помощью этого же антигена.[0522] In embodiments, antigen-specific T-lymphocytes, such as antigen-specific CD4+ and/or CD8+ T-lymphocytes, are obtained by stimulating naive or antigen-specific T-lymphocytes with antigen. For example, lines or clones of antigen-specific T lymphocytes can be generated for cytomegalovirus antigens by isolating T lymphocytes from infected subjects and stimulating the cells in vitro with the same antigen.

C. Нуклеиновые кислоты, векторы и способы генной инженерииC. Nucleic acids, vectors and genetic engineering methods

[0523] В некоторых вариантах осуществления, клетки, например, Т-лимфоциты, получают с помощью генной инженерии для экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых вариантах осуществления, генную инженерию осуществляют посредством введения молекул нуклеиновой кислоты, которые кодируют рекомбинантный рецептор. Также предлагаются молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие рекомбинантный рецептор, и векторы или конструкции, содержащие такие нуклеиновые кислоты и/или молекулы нуклеиновых кислот. [0523] In some embodiments, cells, such as T-lymphocytes, are genetically engineered to express the recombinant receptor. In some embodiments, genetic engineering is carried out by introducing nucleic acid molecules that encode a recombinant receptor. Also provided are nucleic acid molecules encoding a recombinant receptor and vectors or constructs containing such nucleic acids and/or nucleic acid molecules.

[0524] В некоторых случаях, последовательность нуклеиновых кислот, кодирующая рекомбинантный рецептор, например, химерный рецептор антигена (CAR), содержит сигнальную последовательность, которая кодирует сигнальный пептид. В некоторых аспектах, сигнальная последовательность может кодировать сигнальный пептид, полученный из нативного полипептида. В других аспектах, сигнальная последовательность может кодировать гетерологичный или ненативный сигнальный пептид. В некоторых вариантах осуществления, сигнальный пептид получают из трансмембранного белка. В некоторых примерах сигнальный пептид получают из CD8a, CD33 или IgG. Неограничивающие иллюстративные примеры сигнальных пептидов, включают, например, сигнальный пептид CD33, приведенный в SEQ ID NO:21, сигнальный пептид CD8a, приведенный в SEQ ID NO:75, или сигнальный пептид, приведенный в SEQ ID NO:76, или их модифицированный вариант. [0524] In some cases, the nucleic acid sequence encoding a recombinant receptor, for example, a chimeric antigen receptor (CAR), contains a signal sequence that encodes a signal peptide. In some aspects, the signal sequence may encode a signal peptide derived from a native polypeptide. In other aspects, the signal sequence may encode a heterologous or non-native signal peptide. In some embodiments, the signal peptide is derived from a transmembrane protein. In some examples, the signal peptide is derived from CD8a, CD33, or IgG. Non-limiting illustrative examples of signal peptides include, for example, the CD33 signal peptide shown in SEQ ID NO:21, the CD8a signal peptide shown in SEQ ID NO:75, or the signal peptide shown in SEQ ID NO:76, or a modified version thereof. .

[0525] В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая рекомбинантный рецептор, содержит, по меньшей мере, один промотор, который функционально связан с ней, для контроля экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых примерах, молекула нуклеиновой кислоты содержит два, три или более промоторов, функционально связанных с ней, для контроля экспрессирования рекомбинантного рецептора. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты может содержать регуляторные последовательности, такие как кодоны инициирования транскрипции и трансляции и стоп-кодоны, которые специфичны к типу хозяина (например, бактерии, грибка, растения или животного), в которого должна вводиться молекула нуклеиновой кислоты, соответствующим образом и учитывая то, основывается ли молекула нуклеиновой кислоты на ДНК или RNA. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты может содержать регуляторные/контрольные элементы, такие как промотор, ген-усилитель, интрон, сигнал полиаденилирования, консенсусная последовательность Козака и акцептор или донор сплайсирования. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты может содержать ненативный промотор, функционально связанный с последовательностью нуклеотидов, кодирующей рекомбинантный рецептор и/или один или несколько дополнительных полипептидов. В некоторых вариантах осуществления, промотор выбирают из промотора RNA pol I, pol II или pol III. В некоторых вариантах осуществления, промотор распознается RNA полимеразой II (например, CMV, ранняя область SV40 или главный поздний промотор аденовируса). В другом варианте осуществления, промотор распознается RNA полимеразой III (например, промотор U6 или H1). В некоторых вариантах осуществления, промотор может представлять собой невирусный промотор или вирусный промотор, такой как промотор цитомегаловируса (CMV), промотор SV40, промотор RSV и промотор, находящийся в длинном концевом повторе вируса стволовых клеток мышей. Рассматриваются также и другие известные промоторы.[0525] In some embodiments, the nucleic acid molecule encoding the recombinant receptor contains at least one promoter that is operably linked to it to control expression of the recombinant receptor. In some examples, the nucleic acid molecule contains two, three or more promoters operably linked to it to control expression of the recombinant receptor. In some embodiments, the nucleic acid molecule may contain regulatory sequences, such as transcription and translation initiation codons and stop codons, that are specific to the type of host (e.g., bacteria, fungus, plant, or animal) into which the nucleic acid molecule is to be introduced, appropriately and considering whether the nucleic acid molecule is based on DNA or RNA. In some embodiments, the nucleic acid molecule may contain regulatory/control elements such as a promoter, an enhancer gene, an intron, a polyadenylation signal, a Kozak consensus sequence, and a splicing acceptor or donor. In some embodiments, the nucleic acid molecule may contain a non-native promoter operably linked to a nucleotide sequence encoding a recombinant receptor and/or one or more additional polypeptides. In some embodiments, the promoter is selected from the pol I, pol II, or pol III RNA promoter. In some embodiments, the promoter is recognized by RNA polymerase II (eg, CMV, SV40 early region, or adenovirus major late promoter). In another embodiment, the promoter is recognized by RNA polymerase III (eg, the U6 or H1 promoter). In some embodiments, the promoter may be a non-viral promoter or a viral promoter such as the cytomegalovirus (CMV) promoter, the SV40 promoter, the RSV promoter, and a promoter found in the long terminal repeat of a mouse stem cell virus. Other known promoters are also contemplated.

[0526] В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой или содержит конститутивный промотор. Иллюстративные конститутивные промоторы включают, например, ранний промотор вируса обезьян 40 (SV40), немедленно-ранний промотор цитомегаловируса (CMV), промотор C убиквитина человека (UBC), промотор фактора элонгации 1α человека (EF1α), промотор фосфоглицераткиназы 1 мышей (PGK) и промотор β-актина цыплят, связанный с ранним геном-усилителем CMV (CAGG). В некоторых вариантах осуществления, конститутивный промотор представляет собой синтетический или модифицированный промотор. В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой или содержит промотор MND, синтетический промотор, который содержит область LTR MoMuLV, U3-модифицированного с помощью гена-усилителя вируса миелопролиферативной саркомы (смотри Challita et al. (1995) J. Virol. 69(2):748-755). В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой тканеспецифичный промотор. В другом варианте осуществления, промотор представляет собой вирусный промотор. В другом варианте осуществления, промотор представляет собой невирусный промотор. [0526] In some embodiments, the promoter is or contains a constitutive promoter. Exemplary constitutive promoters include, for example, the simian virus 40 (SV40) early promoter, the cytomegalovirus immediate-early (CMV) promoter, the human ubiquitin C (UBC) promoter, the human elongation factor 1α (EF1α) promoter, the mouse phosphoglycerate kinase 1 (PGK) promoter, and chick β-actin promoter linked to the early CMV enhancer gene (CAGG). In some embodiments, the constitutive promoter is a synthetic or modified promoter. In some embodiments, the promoter is or contains the MND promoter, a synthetic promoter that contains the LTR region of MoMuLV U3 modified with a myeloproliferative sarcoma virus enhancer gene (see Challita et al. (1995) J. Virol. 69(2) :748-755). In some embodiments, the promoter is a tissue-specific promoter. In another embodiment, the promoter is a viral promoter. In another embodiment, the promoter is a non-viral promoter.

[0527] В другом варианте осуществления, промотор представляет собой регулируемый промотор (например, индуцируемый промотор). В некоторых вариантах осуществления, промотор представляет собой индуцируемый промотор или репрессируемый промотор. В некоторых вариантах осуществления, промотор содержит операторную последовательность Lac, операторную последовательность тетрациклина, операторную последовательность галактозы или операторную последовательность доксициклина, или представляет собой его аналог или способен связываться с репрессором Lac или с тетрациклиновым репрессором или распознаваться им или его аналогом. В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты не содержит регуляторного элемента, например, промотора.[0527] In another embodiment, the promoter is a regulated promoter (eg, an inducible promoter). In some embodiments, the promoter is an inducible promoter or a repressible promoter. In some embodiments, the promoter comprises a Lac operator sequence, a tetracycline operator sequence, a galactose operator sequence, or a doxycycline operator sequence, or is an analog thereof, or is capable of binding to or being recognized by the Lac repressor or the tetracycline repressor or an analog thereof. In some embodiments, the nucleic acid molecule does not contain a regulatory element, such as a promoter.

[0528] В некоторых вариантах осуществления, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая рекомбинантный рецептор, например, CAR или другой рецептор антигена, дополнительно содержит последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие маркер и/или клетки, экспрессирующие CAR или другой рецептор антигена, дополнительно содержит маркер, например, суррогатный маркер, такой как поверхностный маркер клетки, который можно использовать для подтверждения трансдукции или генной инженерии клетки для экспрессирования рецептора, такого как усеченная версия поверхностного рецептора клеток, такого как усеченный EGFR (tEGFR). В некоторых вариантах осуществления, один или несколько маркеров представляют собой маркер трансдукции, суррогатный маркер и/или маркер селекции. [0528] In some embodiments, a nucleic acid molecule encoding a recombinant receptor, e.g., CAR or other antigen receptor, further comprises nucleic acid sequences encoding a marker and/or cells expressing CAR or other antigen receptor, further comprises a marker, e.g., a surrogate marker, such as a cell surface marker, which can be used to confirm transduction or genetic engineering of a cell to express a receptor, such as a truncated version of a cell surface receptor, such as truncated EGFR (tEGFR). In some embodiments, one or more of the markers is a transduction marker, a surrogate marker, and/or a selection marker.

[0529] В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой маркер трансдукции или суррогатный маркер. Маркер трансдукции или суррогатный маркер можно использовать для детектирования клеток, которые вводятся с помощью молекулы нуклеиновой кислоты, например, молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор. В некоторых вариантах осуществления, маркер трансдукции может показывать или подтверждать модифицирование клеток. В некоторых вариантах осуществления, суррогатный маркер представляет собой белок, который получен для соэкспрессирования на поверхности клетки с рекомбинантным рецептором, например, CAR. В конкретных вариантах осуществления, такой суррогатный маркер представляет собой поверхностный белок, который модифицируют, чтобы он имел малую активность или вообще не имел активности. В определенных вариантах осуществления, суррогатный маркер кодируется той же молекулой нуклеиновой кислоты, которая кодирует рекомбинантный рецептор. В некоторых вариантах осуществления, последовательность нуклеиновых кислот, кодирующая рекомбинантный рецептор, функционально связана с последовательностью нуклеиновых кислот, кодирующей маркер, необязательно, отделенной внутренним участком внутренней посадки рибосомы (IRES), или с нуклеиновой кислотой, кодирующей саморасщепляющийся пептид или пептид, который вызывает перескакивание рибосомы, такой как последовательность 2A, такой как T2A, P2A, E2A или F2A. Внешние маркерные гены могут в некоторых случаях использоваться в связи с генно-инженерной клеткой, чтобы сделать возможным детектирование или селекцию клеток и, в некоторых случаях, также облегчить суицид клетки. [0529] In some embodiments, the marker is a transduction marker or a surrogate marker. A transduction marker or surrogate marker can be used to detect cells that are introduced with a nucleic acid molecule, for example, a nucleic acid molecule encoding a recombinant receptor. In some embodiments, the transduction marker may indicate or confirm cell modification. In some embodiments, the surrogate marker is a protein that is designed to be co-expressed on the cell surface with a recombinant receptor, such as CAR. In specific embodiments, such a surrogate marker is a surface protein that is modified to have little or no activity. In certain embodiments, the surrogate marker is encoded by the same nucleic acid molecule that encodes the recombinant receptor. In some embodiments, a nucleic acid sequence encoding a recombinant receptor is operably linked to a nucleic acid sequence encoding a marker, optionally separated by an internal ribosome entry site (IRES), or to a nucleic acid encoding a self-cleaving peptide or a peptide that causes ribosome skipping. , such as a 2A sequence such as T2A, P2A, E2A, or F2A. External marker genes can in some cases be used in connection with a genetically engineered cell to allow detection or selection of cells and, in some cases, also facilitate cell suicide.

[0530] Иллюстративные суррогатные маркеры могут содержать усеченные формы поверхностных полипептидов клетки, таких как усеченные формы, которые являются нефункциональными и не трансдуцируют или не могут трансдуцировать сигнал или сигнал, обычно трансдуцируемый полноразмерной формой поверхностного полипептида клетки, и/или не интернализируются или не способны интернализироваться. Иллюстративные усеченные поверхностные полипептиды клеток включают усеченные формы факторов роста или других рецепторов, таких как усеченный рецептор 2 эпидермального фактора роста человека (tHER2), усеченный рецептор эпидермального фактора роста (tEGFR, иллюстративную последовательность tEGFR, приведенную в SEQ ID NO:11 или 76) или простата-специфичный мембранный антиген (PSMA) или его модифицированную форму. tEGFR может содержать эпитоп, распознаваемый антителом цетуксимаб (Erbitux®) или другим терапевтическим антителом анти-EGFR или связывающейся молекулой, которую можно использовать для идентификации или селекции генно-инженерных клеток, которые получены с помощью конструкции tEGFR и кодированного экзогенного белка, и/или для удаления или разделения клеток, экспрессирующих кодируемый экзогенный белок. Смотри патент США № 8802374 и Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434). В некоторых аспектах, маркер, например, суррогатный маркер, содержит полностью или частично (например, усеченную форму) CD34, NGFR, CD19 или усеченный CD19, например, усеченный CD19 не человека, или рецептор эпидермального фактора роста (например, tEGFR). В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой или содержит флуоресцентный белок, такой как зеленый флуоресцентный белок (GFP), усиленный зеленый флуоресцентный белок (EGFP), такой как суперскладчатый GFP (sfGFP), красный флуоресцентный белок (RFP), такой как tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed или DsRed2, голубой флуоресцентный белок (CFP), сине-зеленый флуоресцентный белок (BFP), усиленный синий флуоресцентный белок (EBFP) и желтый флуоресцентный белок (YFP), и их варианты, включая варианты видов, мономерные варианты и кодон-оптимизированные и/или усиленные варианты флуоресцентных белков. В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой или содержит фермент, такой как люцифераза, ген lacZ из E. coli, щелочная фосфатаза, секретируемая эмбриональная щелочная фосфатаза (SEAP), хлорамфениколацетилтрансфераза (CAT). Иллюстративные светоиспускающие репортерные гены включают люциферазу (luc), β-галактозидазу, хлорамфениколацетилтрансферазу (CAT), β-глюкуронидазу (GUS) или их варианты. [0530] Exemplary surrogate markers may comprise truncated forms of cell surface polypeptides, such as truncated forms that are non-functional and do not or cannot transduce a signal or signal normally transduced by the full-length form of the cell surface polypeptide and/or are not internalized or unable to be internalized . Exemplary truncated cell surface polypeptides include truncated forms of growth factors or other receptors such as truncated human epidermal growth factor receptor 2 (tHER2), truncated epidermal growth factor receptor (tEGFR, exemplary tEGFR sequence shown in SEQ ID NO:11 or 76), or prostate-specific membrane antigen (PSMA) or a modified form thereof. The tEGFR may contain an epitope recognized by the cetuximab antibody (Erbitux®) or other anti-EGFR therapeutic antibody or binding molecule that can be used to identify or select genetically engineered cells that are derived from the tEGFR construct and the encoded exogenous protein, and/or to removal or separation of cells expressing the encoded exogenous protein. See US Pat. No. 8,802,374 and Liu et al., Nature Biotech. April 2016; 34(4): 430-434). In some aspects, the marker, eg, a surrogate marker, comprises all or part (eg, a truncated form) of CD34, NGFR, CD19, or truncated CD19, eg, truncated non-human CD19, or an epidermal growth factor receptor (eg, tEGFR). In some embodiments, the marker is or contains a fluorescent protein such as green fluorescent protein (GFP), enhanced green fluorescent protein (EGFP) such as superfolded GFP (sfGFP), red fluorescent protein (RFP) such as tdTomato, mCherry , mStrawberry, AsRed2, DsRed or DsRed2, blue fluorescent protein (CFP), blue-green fluorescent protein (BFP), enhanced blue fluorescent protein (EBFP), and yellow fluorescent protein (YFP), and variants thereof, including species variants, monomeric variants and codon-optimized and/or enhanced variants of fluorescent proteins. In some embodiments, the marker is or contains an enzyme such as luciferase, the lacZ gene from E. coli, alkaline phosphatase, secreted embryonic alkaline phosphatase (SEAP), chloramphenicol acetyltransferase (CAT). Exemplary light emitting reporter genes include luciferase (luc), β-galactosidase, chloramphenicol acetyltransferase (CAT), β-glucuronidase (GUS), or variants thereof.

[0531] В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой маркер селекции. В некоторых вариантах осуществления, маркер селекции представляет собой или содержит полипептид, который придает резистентность к экзогенным агентам или лекарственным средствам. В некоторых вариантах осуществления, маркер селекции представляет собой ген резистентности к антибиотикам. В некоторых вариантах осуществления, селекции маркер представляет собой ген резистентности к антибиотикам, который придает резистентность к антибиотикам клеткам млекопитающих. В некоторых вариантах осуществления, селекции маркер представляет собой или содержит ген резистентности к пуромицину, ген резистентности к гигромицину, ген резистентности к бластицидину, ген резистентности к неомицину, ген резистентности к генетицину или ген резистентности к зеоцину, или их модифицированную форму.[0531] In some embodiments, the marker is a selection marker. In some embodiments, the selection marker is or contains a polypeptide that confers resistance to exogenous agents or drugs. In some embodiments, the selection marker is an antibiotic resistance gene. In some embodiments, the selection marker is an antibiotic resistance gene that confers antibiotic resistance in mammalian cells. In some embodiments, the selection marker is or comprises a puromycin resistance gene, a hygromycin resistance gene, a blasticidin resistance gene, a neomycin resistance gene, a geneticin resistance gene, or a zeocin resistance gene, or a modified form thereof.

[0532] В некоторых аспектах, маркер, например, суррогатный маркер, включает полностью или частично (например, усеченную форму) CD34, NGFR или рецептор эпидермального фактора роста (например, tEGFR). В некоторых вариантах осуществления, нуклеиновая кислота, кодирующая маркер, функционально связана с полинуклеотидом, кодирующим линкерную последовательность, такую как расщепляемая линкерная последовательность, например, T2A. Например, маркер, и необязательно, линкерная последовательность, могут представлять собой любую руппу, как описано в публикации PCT № WO2014031687. Например, маркер может представлять собой усеченный EGFR (tEGFR), который необязательно связан с линкерной последовательностью, такой как расщепляемая линкерная последовательность T2A. Иллюстративный полипептид для усеченного EGFR (например, tEGFR) содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 7 или 28, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 7 или 28. Иллюстративная T2A линкер последовательность содержит последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO: 6, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 6.[0532] In some aspects, the marker, eg, a surrogate marker, includes all or part (eg, a truncated form) of CD34, NGFR, or an epidermal growth factor receptor (eg, tEGFR). In some embodiments, a nucleic acid encoding a marker is operably linked to a polynucleotide encoding a linker sequence, such as a cleavable linker sequence, eg T2A. For example, the marker, and optionally the linker sequence, may be any group as described in PCT Publication No. WO2014031687. For example, the marker may be a truncated EGFR (tEGFR) that is optionally linked to a linker sequence, such as a cleavable T2A linker sequence. An exemplary polypeptide for truncated EGFR (e.g., tEGFR) contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 7 or 28, or an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with SEQ ID NO: 7 or 28. An exemplary T2A linker sequence contains an amino acid sequence, shown in SEQ ID NO: 6, or an amino acid sequence that shows at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95 %, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity to SEQ ID NO: 6.

[0533] В некоторых вариантах осуществления, молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие конструкции CAR, дополнительно содержат последовательность, кодируемую T2A, рибосомный перескакивающий элемент и/или последовательность tEGFR, например, в прямом направлении после последовательности, кодирующей CAR. В некоторых вариантах осуществления, последовательность кодирует рибосомный перескакивающий элемент T2A, приведенный в SEQ ID NO: 6, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты, экспрессирующие рецептор антигена (например, CAR), могут также генерироваться для экспрессирования усеченного EGFR (EGFRt) как неиммуногенного эпитопа селекции (например, посредством введения конструкции, кодирующей CAR и EGFRt, разделенные рибосомным переключателем T2A, для экспрессирования двух белков из одной конструкции), который затем можно использовать как маркер для детектирования таких клеток (смотри, например, патент США № 8802374). В некоторых вариантах осуществления, последовательность кодирует последовательность tEGFR, приведенную в SEQ ID NO: 7 или 28, или последовательность аминокислот, которая демонстрирует, по меньшей мере, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичность последовательности с SEQ ID NO: 7 или 28.[0533] In some embodiments, nucleic acid molecules encoding such CAR constructs further comprise a sequence encoded by T2A, a ribosomal hopping element, and/or a tEGFR sequence, for example, downstream of the sequence encoding the CAR. In some embodiments, the sequence encodes a T2A ribosome skipping element set forth in SEQ ID NO: 6, or an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with SEQ ID NO: 6. In some embodiments, T lymphocytes expressing an antigen receptor (e.g. . for the detection of such cells (see, for example, US patent No. 8802374). In some embodiments, the sequence encodes a tEGFR sequence shown in SEQ ID NO: 7 or 28, or an amino acid sequence that exhibits at least 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with SEQ ID NO: 7 or 28.

[0534] В некоторых вариантах осуществления, отдельный промотор может направлять экспрессирование RNA, которая содержит отдельную рамку открытого считывания (ORF), два или три гена (например, кодирующих молекулу, вовлеченную в модуляцию метаболического пути и кодирующую рекомбинантный рецептор), отделенных друг от друга последовательностями, кодирующими саморасщепляющийся пептид (например, последовательности 2A) или сайт распознавания протеазы (например, фурин). Таким образом, ORF кодирует отдельный полипептид, который, либо в ходе (в случае 2A), либо после трансляции, процессируется в отдельные белки. В некоторых случаях, пептид, такой как T2A, может заставить рибосому перескочить (рибосомное перескакивание) синтез пептидной связи на C-окончании элемента 2A, приводя к разделению конца последовательности 2A и следующего пептида в прямом направлении после нее (смотри, например, de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) и deFelipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)). В данной области известно множество элементов 2A. Примеры последовательностей 2A, которые можно использовать в способах и нуклеиновых кислотах, описанных в настоящем документе, включают, без ограничения, последовательности 2A вируса эпизоотического стоматита (F2A, например, SEQ ID NO: 27), вируса конского ринита A (E2A, например, SEQ ID NO: 26), вируса Thosea asigna (T2A, например, SEQ ID NO: 6 или 23) и тешовируса-1 свиней (P2A, например, SEQ ID NO: 24 или 25), как описано в публикации патента США № 20070116690.[0534] In some embodiments, a single promoter may direct the expression of an RNA that contains a single open reading frame (ORF), two or three genes (e.g., encoding a molecule involved in metabolic pathway modulation and encoding a recombinant receptor) separated from each other sequences encoding a self-cleaving peptide (eg 2A sequences) or a protease recognition site (eg furin). Thus, the ORF encodes a single polypeptide, which, either during (in the case of 2A) or after translation, is processed into separate proteins. In some cases, a peptide such as T2A can cause a ribosome to skip (ribosomal skipping) the synthesis of a peptide bond at the C-terminus of element 2A, resulting in separation of the end of the 2A sequence and the next peptide downstream of it (see, e.g., de Felipe. Genetic Vaccines and Ther 2:13 (2004) and deFelipe et al Traffic 5:616-626 (2004)). Many 2A elements are known in the art. Examples of 2A sequences that can be used in the methods and nucleic acids described herein include, but are not limited to, 2A sequences of stomatitis virus (F2A, e.g., SEQ ID NO: 27), equine rhinitis virus A (E2A, e.g., SEQ ID NO: 26), Thosea asigna virus (T2A, e.g., SEQ ID NO: 6 or 23), and porcine teshovirus-1 (P2A, e.g., SEQ ID NO: 24 or 25) as described in US Patent Publication No. 20070116690.

[0535] В некоторых вариантах осуществления, маркер представляет собой молекулу, например, поверхностный белок клетки, не встречающийся в природе на Т-лимфоцитах или не встречающейся в природе на поверхности Т-лимфоцитов, или его часть. В некоторых вариантах осуществления, молекула представляет собой чужеродную молекулу, например, чужеродный белок, то есть, белок, который не распознается как “свой” иммунной системой хозяина, которому клетки будут адоптивно переноситься.[0535] In some embodiments, the marker is a molecule, such as a cell surface protein, not naturally occurring on T lymphocytes or not naturally occurring on the surface of T lymphocytes, or a portion thereof. In some embodiments, the molecule is a foreign molecule, such as a foreign protein, that is, a protein that is not recognized as "self" by the immune system of the host to which the cells will be adoptively transferred.

[0536] В некоторых вариантах осуществления, маркер не служит для терапевтической функции и/или не продуцирует воздействия иного, чем использование в качестве маркера для генной инженерии, например, для селекции клеток, успешно полученных с помощью генной инженерии. В других вариантах осуществления, маркер может представлять собой терапевтическую молекулу или молекулу, иным образом оказывающую некоторое желаемое воздействие, например, как лиганд для клетки, которая должна встретиться in vivo, такой как костимуляторная молекула или молекула иммунной контрольной точки для усиления и/или демпфирования реакций клеток при адоптивном переносе и встрече с лигандом. [0536] In some embodiments, the marker does not serve a therapeutic function and/or does not produce an effect other than use as a genetically engineered marker, for example, to select cells successfully obtained by genetic engineering. In other embodiments, the marker may be a therapeutic molecule or a molecule otherwise having some desired effect, such as a ligand for a cell to be encountered in vivo, such as a co-stimulatory molecule or an immune checkpoint molecule to enhance and/or dampen responses. cells during adoptive transfer and encounter with the ligand.

[0537] Введение молекул нуклеиновых кислот, кодирующих рекомбинантный рецептор, в клетку может осуществляться с использованием любого количества известных векторов. Такие векторы включают вирусные и невирусные системы, включая лентивирусные и гаммаретровирусные системы, а также системы на основе транспозона, такие как системы переноса гена на основе PiggyBac или Sleeping Beauty. Иллюстративные способы включают способа переноса нуклеиновых кислот, кодирующих рецепторы, включая вирусную, например, ретровирусную или лентивирусную, трансдукцию, транспозоны и электропорообразование.[0537] The introduction of nucleic acid molecules encoding a recombinant receptor into a cell can be carried out using any number of known vectors. Such vectors include viral and non-viral systems, including lentiviral and gamma-retrovirus systems, as well as transposon based systems such as PiggyBac or Sleeping Beauty based gene transfer systems. Illustrative methods include methods for transferring receptor-encoding nucleic acids, including viral, eg, retroviral or lentiviral, transduction, transposons, and electroporation.

[0538] В некоторых вариантах осуществления, перенос гена осуществляется посредством сначала стимулирования клетки, например, посредством объединения ее со стимулом, который индуцирует реакцию, такую как пролиферация, выживаемость и/или активирование, например, как измеряется по экспрессированию цитокина или маркера активирования, с последующим трансдуцированием активирующих клеток и размножением в культуре до количеств достаточных для клинических применений. [0538] In some embodiments, gene transfer is accomplished by first stimulating the cell, e.g., by combining it with a stimulus that induces a response, such as proliferation, survival, and/or activation, e.g., as measured by expression of a cytokine or activation marker, with followed by transduction of activating cells and expansion in culture to quantities sufficient for clinical applications.

[0539] В некоторых вариантах осуществления, до или в ходе переноса гена, клетки инкубируют или культивируют в присутствии иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, включая любое соединение, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, добавляют в ходе процесса получения клеток, например, в ходе процесса генной инженерии Т-лимфоцитов CAR. В некоторых аспектах, присутствие иммуномодуляторного соединения может улучшить качество популяции получаемых клеток. В некоторых аспектах, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, может увеличить пролиферацию или размножение клеток или может изменить один или несколько путей передачи сигналов с получением в результате клеток с менее дифференцированным или менее активированным фенотипом поверхности, несмотря на демонстрацию достаточного размножения и/или эффекторной функции. [0539] In some embodiments, prior to or during gene transfer, cells are incubated or cultured in the presence of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, including any compound as described herein. In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is added during a cell production process, such as during a CAR T-lymphocyte genetic engineering process. In some aspects, the presence of an immunomodulatory compound may improve the quality of the resulting cell population. In some aspects, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, may increase cell proliferation or proliferation or may alter one or more signaling pathways resulting in cells with a less differentiated or less activated surface phenotype despite demonstrating sufficient proliferation and/or effector function. .

[0540] В некоторых контекстах, сверхэкспрессирование стимулирующего фактора (например, лимфокина или цитокина) может быть токсичным для субъекта. Таким образом, в некоторых контекстах, генно-инженерные клетки содержат сегменты генов, которые делают клетки чувствительными к отрицательной селекции in vivo, например, при введении адоптивной иммунотерапии. Например, в некоторых аспектах, клетки получают с помощью генной инженерии так, что их можно устранить в результате изменения состояния пациента, которому их вводят in vivo. Отрицательно селектируемый фенотип может получаться в результате инсерции гена, который придает чувствительность к вводимому агенту, например, соединению. Отрицательно селектируемые гены включают ген тимидинкиназы вируса герпеса обыкновенного типа I (HSV-I TK) (Wigler et al., Cell 2:223, 1977), который придает чувствительность к ганцикловиру; ген клеточной гипоксантинфосфрибозилтрансферазы (HPRT), ген клеточной аденинфосфорибозилтрансферазы (APRT), ген бактериальной цитозиндезаминазы, (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)).[0540] In some contexts, overexpression of a stimulatory factor (eg, lymphokine or cytokine) can be toxic to the subject. Thus, in some contexts, genetically engineered cells contain gene segments that render the cells susceptible to negative selection in vivo, such as when administered by adoptive immunotherapy. For example, in some aspects, the cells are genetically engineered so that they can be eliminated by altering the condition of the patient to whom they are administered in vivo. A negatively selectable phenotype may result from the insertion of a gene that confers sensitivity to an administered agent, such as a compound. Negatively selectable genes include the herpes simplex virus type I thymidine kinase gene (HSV-I TK) (Wigler et al., Cell 2:223, 1977), which confers sensitivity to ganciclovir; cellular hypoxanthine phosphoribosyl transferase (HPRT) gene, cellular adenine phosphoribosyl transferase (APRT) gene, bacterial cytosine deaminase gene, (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)).

[0541] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в клетки с использованием частиц рекомбинантных инфекционных вирусов, таких, например, как векторы, полученные из вируса обезьян 40 (SV40), аденовирусов, адено-ассоциированного вируса (AAV). В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в Т-лимфоциты с использованием рекомбинантных лентивирусных векторов или ретровирусных векторов, таких как гамма-ретровирусные векторы (смотри, например, Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camibo et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557. [0541] In some embodiments, recombinant nucleic acids are transferred into cells using particles of recombinant infectious viruses, such as, for example, vectors derived from simian virus 40 (SV40), adenoviruses, adeno-associated virus (AAV). In some embodiments, recombinant nucleic acids are transferred to T lymphocytes using recombinant lentiviral vectors or retroviral vectors such as retroviral gamma vectors (see, for example, Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/ gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camibo et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29 (11): 550-557.

[0542] В некоторых вариантах осуществления, ретровирусный вектор имеет последовательность длинного концевого повтора (LTR), например, ретровирусный вектор, полученный из вируса лейкоза мышей Молони (MoMLV), вируса миелопролиферативной саркомы (MPSV), вируса эмбриональных стволовых клеток мышей (MESV), вируса стволовых клеток мышей (MSCV), вируса некроза селезенки (SFFV), или адено-ассоциированного вируса (AAV). Большинство ретровирусных векторов получают из ретровирусов мышей. В некоторых вариантах осуществления, ретровирусы включают вирусы, полученные из любого источника клеток птиц или млекопитающих. Ретровирусы, как правило, являются амфотропными, это означает, что они могут инфицировать клетки-хозяева нескольких видов, включая людей. В одном из вариантов осуществления, ген, который должен экспрессироваться, заменяет ретровирусные последовательности gag, pol и/или env. Описан ряд иллюстративных ретровирусных систем (например, патенты США №№ 5219740; 6207453; 5219740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; и Boris-Lawrie и Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109.[0542] In some embodiments, the retroviral vector has a long terminal repeat (LTR) sequence, e.g., a retroviral vector derived from Moloney murine leukemia virus (MoMLV), myeloproliferative sarcoma virus (MPSV), mouse embryonic stem cell virus (MESV), mouse stem cell virus (MSCV), spleen necrosis virus (SFFV), or adeno-associated virus (AAV). Most retroviral vectors are derived from murine retroviruses. In some embodiments, retroviruses include viruses derived from any source of avian or mammalian cells. Retroviruses are generally amphotropic, meaning that they can infect host cells of several species, including humans. In one embodiment, the gene to be expressed replaces the gag, pol and/or env retroviral sequences. A number of exemplary retroviral systems have been described (e.g., US Pat. Nos. 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; and Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3 :102-109.

[0543] Способы лентивирусной трансдукции известны. Иллюстративные способы описаны, например, в Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; и Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505. [0543] Methods for lentiviral transduction are known. Illustrative methods are described, for example, in Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506:97-114; and Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505.

[0544] В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в Т-лимфоциты посредством электропорообразования (смотри, например, Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 and Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437). В некоторых вариантах осуществления, рекомбинантные нуклеиновые кислоты переносятся в Т-лимфоциты посредством транспозиции (смотри, например, Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; и Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). Другие способы введения и экспрессирования генетического материала в иммунных клетках включают кальций-фосфатное трансфицирование (например, как описано в Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), слияние протопластов, катионное липосомно-медиируемое трансфицирование; бомбардировку микрочастицами с частицами вольфрама (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); и сопреципитацию стронция фосфата и ДНК (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)).[0544] In some embodiments, recombinant nucleic acids are transferred to T lymphocytes via electroporation (see, e.g., Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 and Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7 (16): 1431-1437). In some embodiments, the recombinant nucleic acids are transferred to T lymphocytes via transposition (see, e.g., Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74 and Huang et al (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). Other methods for introducing and expressing genetic material in immune cells include calcium phosphate transfection (eg, as described in Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), protoplast fusion, cationic liposomal mediated transfection; microparticle bombardment with tungsten particles (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); and co-precipitation of strontium phosphate and DNA (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)).

[0545] Другие подходы и векторы для переноса нуклеиновых кислот, кодирующих рекомбинантные продукты, описаны, например, в опубликованной заявке на Международный патент №: WO2014055668 и в патенте США № 7446190.[0545] Other approaches and vectors for transferring nucleic acids encoding recombinant products are described, for example, in Published International Patent Application No: WO2014055668 and US Patent No. 7446190.

[0546] В некоторых вариантах осуществления, клетки, например, Т-лимфоциты могут трансфицироваться либо в ходе, либо после размножения, например, с помощью рецептора T-лимфоцита (TCR) или химерного рецептора антигена (CAR). Это трансфицирование для введения гена желаемого рецептора можно осуществлять, например, с помощью любого соответствующего ретровирусного вектора. Затем популяция генетически модифицированных клеток может освобождаться от начального стимула (например, стимула CD3/CD2), а затем стимулироваться вторым типом стимула, например, с помощью вводимого de novo рецептора). Этот второй тип стимула может содержать антигенный стимул в форме молекулы пептид/MHC, распознанного (поперечно-сшивающего) лиганда генетически вводимого рецептора (например, природного лиганда CAR) или любого лиганда (такого как антитело), который непосредственно связывается в рамке нового рецептора (например, распознавая константные области в рецепторе). Смотри, например, Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy” Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66, или Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014). [0546] In some embodiments, cells, such as T-lymphocytes, can be transfected either during or after expansion, such as with a T-lymphocyte receptor (TCR) or a chimeric antigen receptor (CAR). This transfection to introduce the gene of the desired receptor can be done with, for example, any suitable retroviral vector. The population of genetically modified cells can then be released from the initial stimulus (eg, a CD3/CD2 stimulus) and then stimulated with a second type of stimulus, eg, with a de novo administered receptor). This second type of stimulus may comprise an antigenic stimulus in the form of a peptide/MHC molecule, a recognized (cross-linking) ligand of a genetically introduced receptor (e.g., a natural CAR ligand), or any ligand (such as an antibody) that directly binds in frame to the new receptor (e.g. , recognizing constant regions in the receptor). See, for example, Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy” Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66, or Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65:333-347 (2014).

[0547] В некоторых случаях, можно использовать вектор, который не требует, чтобы клетки, например, Т-лимфоциты, активировались. В некоторых таких случаях, клетки могут селектироваться и/или трансдуцироваться перед активированием. Таким образом, клетки могут быть получены с помощью генной инженерии до, или после культивирования клеток, а в некоторых случаях, в то же время, что и культивирование, или в ходе, по меньшей мере, его части.[0547] In some cases, you can use a vector that does not require cells, such as T-lymphocytes, to be activated. In some of these cases, cells may be selected and/or transduced prior to activation. Thus, cells can be obtained by genetic engineering before or after cell culture, and in some cases, at the same time as culture, or during at least part of it.

[0548] В некоторых аспектах, клетки подвергаются дополнительному воздействию генной инженерии для облегчения экспрессирования цитокинов или других факторов. Среди дополнительных нуклеиновых кислот имеются, например, гены для введения, которые представляют собой такие гены, которые улучшают эффективность терапии, например, способствуя жизнеспособности и/или функционированию переносимых клеток; гены для получения генетического маркера для селекции и/или оценки клеток, например, для оценки выживаемости in vivo или локализации; гены для улучшения безопасности, например, делающие клетки чувствительными к отрицательной селекции in vivo, как описано Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); и Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); смотри также публикации PCT/US91/08442 и PCT/US94/05601, Lupton et al., описывающие использование бифункциональных селектируемых слитых генов, полученных от слияния доминантного положительного селектируемого маркера с отрицательным селектируемым маркером. Смотри, например, Riddell et al., патент США № 6040177, в колонке 14-17.[0548] In some aspects, the cells are subjected to additional genetic engineering to facilitate the expression of cytokines or other factors. Among the additional nucleic acids are, for example, genes for introduction, which are those genes that improve the effectiveness of therapy, for example, contributing to the viability and/or functioning of the transferred cells; genes for obtaining a genetic marker for selection and/or evaluation of cells, for example, for evaluation of in vivo survival or localization; genes to improve safety, for example making cells susceptible to negative selection in vivo, as described by Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); and Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); see also PCT/US91/08442 and PCT/US94/05601, Lupton et al., describing the use of bifunctional selectable fusion genes derived from the fusion of a dominant positive selectable marker with a negative selectable marker. See, for example, Riddell et al., US Pat. No. 6,040,177, columns 14-17.

III. Иллюстративные результаты лечения и способы их оценкиIII. Illustrative Treatment Outcomes and How to Evaluate Them

[0549] В некоторых вариантах осуществления способов, композиций, сочетаний, наборов и применений, предложенных в настоящем документе, предлагаемая сочетанная терапия дает в результате один или несколько результатов лечения, таких как особенность, связанная с любыми одним или несколькими параметрами, связанными с терапией или лечением, как описано ниже. В некоторых вариантах осуществления, способ включает оценку экспонирования, персистентности и пролиферации Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе T-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, экспонирование или пролонгированное размножение и/или персистентность клеток, и/или изменения фенотипов клеток или функциональной активности клеток, например, клеток, вводимых для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, в способах, предложенных в настоящем документе, можно измерить посредством оценки характеристик Т-лимфоцитов in vitro или ex vivo. В некоторых вариантах осуществления, такие анализы можно использовать для определения или подтверждения функции Т-лимфоцитов, например, Т-клеточной терапии, до или после введения сочетанной терапии, предложенной в настоящем документе.[0549] In some embodiments of the methods, compositions, combinations, kits, and uses provided herein, the proposed combination therapy results in one or more treatment outcomes, such as a feature associated with any one or more therapy-related parameters, or treatment as described below. In some embodiments, the method includes assessing the exposure, persistence, and proliferation of T lymphocytes, eg, T lymphocytes administered for T lymphocyte therapy. In some embodiments, exposure or prolonged expansion and/or persistence of cells, and/or changes in cell phenotypes or functional activity of cells, e.g., cells administered for immunotherapy, e.g., T cell therapy, in the methods provided herein, can be measure by characterizing T-lymphocytes in vitro or ex vivo. In some embodiments, such assays can be used to determine or confirm T-lymphocyte function, such as T-cell therapy, before or after administration of the combination therapy provided herein.

[0550] В некоторых вариантах осуществления, сочетанная терапия может дополнительно включать одну или несколько стадий скрининга для идентификации субъектов для лечения с помощью сочетанной терапии и/или продолжения сочетанной терапии, и/или стадию оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения. В некоторых вариантах осуществления, стадия оценки результатов лечения может включать стадии оценки и/или мониторинга лечения и/или идентификации субъектов для введения дополнительных или оставшихся стадий терапии и/или для повторной терапии. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения может использоваться для определения дозы, частоты, продолжительности, распределения по времени и/или порядка осуществления сочетанной терапии, предложенной в настоящем документе. [0550] In some embodiments, the combination therapy may further include one or more screening steps to identify subjects for treatment with the combination therapy and/or continuation of the combination therapy, and/or the step of evaluating treatment outcomes and/or monitoring treatment outcomes. In some embodiments, the stage of evaluating treatment outcomes may include the stages of evaluating and/or monitoring treatment and/or identifying subjects for the introduction of additional or remaining stages of therapy and/or for retreatment. In some embodiments, the screening and/or outcome evaluation step may be used to determine the dose, frequency, duration, timing, and/or sequencing of the combination therapy provided herein.

[0551] В некоторых вариантах осуществления, любая из стадий скрининга и/или оценки результатов лечения, описанных в настоящем документе, может использоваться до, в ходе, в течение курса или после введения одной или нескольких стадий предлагаемой сочетанной терапии, например, введения Т-клеточной терапии (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов), и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления, оценку делают до, в ходе, в течение курса или после осуществления любого из способов, предлагаемых в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, оценку делают до осуществления способов, предложенных в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, оценку делают после осуществления одной или нескольких стадий способов, предлагаемых в настоящем документе. В некоторых вариантах осуществления, оценку осуществляют до введения одной или нескольких стадий предлагаемой сочетанной терапии, например, для скрининга и идентификации пациентов склонных и/или чувствительных к получению сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, оценку осуществляют в ходе, в течение курса или после введения одной или нескольких стадий предлагаемой сочетанной терапии, например, для оценки промежуточных или конечных результатов лечения, например, для определения эффективности лечения и/или чтобы определить продолжать ли или повторять ли лечение и/или чтобы определить вводить ли оставшиеся стадии сочетанной терапии. [0551] In some embodiments, any of the steps of screening and/or evaluating treatment outcomes described herein may be used before, during, during, or after the administration of one or more of the steps of the proposed combination therapy, e.g., administration of T- cell therapy (eg, CAR-expressing T-lymphocytes), and/or immunomodulatory compounds, such as lenalidomide. In some embodiments, the evaluation is done before, during, during the course, or after any of the methods provided herein. In some embodiments, the evaluation is done prior to the implementation of the methods provided herein. In some embodiments, the evaluation is done after one or more of the steps of the methods provided herein. In some embodiments, the evaluation is carried out prior to the introduction of one or more stages of the proposed combination therapy, for example, to screen and identify patients prone and/or susceptible to receive combination therapy. In some embodiments, evaluation is performed during, during, or after the administration of one or more steps of the proposed combination therapy, e.g., to evaluate intermediate or end points of treatment, e.g., to determine the effectiveness of treatment and/or to determine whether to continue or repeat treatment and/or to determine whether to administer the remaining stages of concomitant therapy.

[0552] В некоторых вариантах осуществления, результаты лечения включают улучшение иммунной функции, например, иммунной функции Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе клеток, и/или эндогенных Т-лимфоцитов в организме. В некоторых вариантах осуществления, иллюстративные результаты лечения включают, но, не ограничиваясь этим, усиленную пролиферацию T-лимфоцитов, усиленную функциональную активность T-лимфоцитов, изменения в экспрессировании фенотипического маркера иммунных клеток, например, такие особенности связаны с генно-инженерными Т-лимфоцитами, например, Т-лимфоцитами CAR, вводимыми субъекту. В некоторых вариантах осуществления, иллюстративные результаты лечения включают уменьшение тяжести заболевания, например, массы опухоли, улучшение клинических результатов лечения и/или повышенную эффективность терапии.[0552] In some embodiments, the results of treatment include an improvement in immune function, for example, the immune function of T lymphocytes administered for cell-based therapy and/or endogenous T lymphocytes in the body. In some embodiments, exemplary treatment outcomes include, but are not limited to, increased T-lymphocyte proliferation, increased functional activity of T-lymphocytes, changes in the expression of an immune cell phenotypic marker, for example, such features are associated with engineered T-lymphocytes, for example, CAR T-lymphocytes administered to a subject. In some embodiments, exemplary treatment outcomes include reduced disease severity, such as tumor mass, improved clinical outcomes, and/or increased efficacy of therapy.

[0553] В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения включает оценку выживаемости и/или функционирования Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе клеток. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения включает оценку уровней цитокинов или факторов роста. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения включает оценку тяжести заболевания и/или улучшения, например, оценку массы опухоли и/или клинических результатов. В некоторых вариантах осуществления, стадия либо скрининга и/либо оценки результатов лечения может включать любой из способов оценки и/или анализов, описанных в настоящем документе и/или известных в данной области, и может осуществляться один или несколько раз, например, до, в ходе, в течение курса или после введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии. Иллюстративные наборы параметров, связанные с результатами лечения, которые могут оцениваться в некоторых вариантах осуществления способов, предлагаемых в настоящем документе, включают профиль популяции иммунных клеток периферической крови и/или массу опухоли.[0553] In some embodiments, the step of screening and/or evaluating treatment outcomes includes evaluating the survival and/or function of T lymphocytes administered for cell-based therapy. In some embodiments, the step of screening and/or evaluating treatment outcomes includes evaluating levels of cytokines or growth factors. In some embodiments, the step of screening and/or evaluating treatment outcomes includes assessing disease severity and/or improvement, such as assessing tumor mass and/or clinical outcomes. In some embodiments, the step of either screening and/or evaluating treatment outcomes may include any of the evaluation methods and/or assays described herein and/or known in the art, and may be performed one or more times, for example, before, during course, during the course or after the introduction of one or more stages of combination therapy. Exemplary sets of treatment outcome-related parameters that may be assessed in some embodiments of the methods provided herein include a peripheral blood immune cell population profile and/or tumor mass.

[0554] В некоторых вариантах осуществления, способы влияют на эффективность клеточной терапии для субъекта. В некоторых вариантах осуществления, персистентность, размножение и/или присутствие клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, например, CAR-экспрессирующих клеток, у субъекта после введения дозы клеток в способе с иммуномодуляторным соединением, больше по сравнению с тем, что достигается с помощью способа без введения иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления способов иммунотерапии, предлагаемых в настоящем документе, таких как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты), оценка параметров включает оценку размножения и/или персистентности у субъекта, которому вводят Т-лимфоциты для иммунотерапии, например, Т-клеточную терапию, по сравнению со способом, при котором иммунотерапию вводят субъекту без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, способы дают в результате вводимые Т-лимфоциты, демонстрирующие повышенное или пролонгированное размножение и/или персистентность у субъекта по сравнению со способом, при котором Т-клеточную терапию вводят субъекту без иммуномодуляторного соединения.[0554] In some embodiments, the methods affect the effectiveness of cell therapy for a subject. In some embodiments, the persistence, expansion, and/or presence of recombinant receptor-expressing cells, e.g., CAR-expressing cells, in a subject after dosing cells in a method with an immunomodulatory compound is greater than what is achieved with a method without administration. immunomodulatory compound. In some embodiments of the immunotherapy methods provided herein, such as T-cell therapy (e.g., CAR-expressing T-lymphocytes), the evaluation of parameters includes an assessment of proliferation and/or persistence in a subject receiving T-lymphocytes for immunotherapy, e.g. , T cell therapy, as compared to a method in which immunotherapy is administered to a subject without an immunomodulatory compound. In some embodiments, the methods result in administered T lymphocytes exhibiting increased or prolonged proliferation and/or persistence in the subject compared to a method in which the T cell therapy is administered to the subject without an immunomodulatory compound.

[0555] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, уменьшает тяжесть заболевания, например, массу опухоли, у субъекта по сравнению со способом, в котором доза клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, уменьшает количество бластных клеток костного мозга у субъекта по сравнению со способом, при котором доза клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения. В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, дает в результате улучшенные клинические результаты, например, частоту объективного ответа (ORR), выживаемость без признаков прогрессирования заболевания (PFS) и общую выживаемость (OS), по сравнению со способом, при котором доза клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения. [0555] In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, reduces disease severity, such as tumor mass, in a subject compared to a method in which a dose of cells expressing the recombinant receptor is administered to the subject without the immunomodulatory compound. In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, reduces the number of bone marrow blast cells in a subject compared to a method in which a dose of cells expressing the recombinant receptor is administered to the subject without the immunomodulatory compound. In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, results in improved clinical outcomes, e.g., objective response rate (ORR), progression-free survival (PFS), and overall survival (OS), compared to the method when wherein a dose of cells expressing the recombinant receptor is administered to a subject without an immunomodulatory compound.

[0556] В некоторых вариантах осуществления, субъект может подвергаться скринингу до введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии. Например, субъект может подвергаться скринингу относительно характеристик заболевания и/или тяжести заболевания, например, массы опухоли, до введения сочетанной терапии, для определения соответствия, отвечаемости и/или восприимчивости к введению сочетанной терапии. В некоторых вариантах осуществления, стадия скрининга и/или оценки результатов лечения может использоваться для определения дозы, частоты, продолжительности, распределения по времени и/или порядка осуществления сочетанной терапии, предлагаемой в настоящем документе.[0556] In some embodiments, the subject may be screened prior to the introduction of one or more stages of combination therapy. For example, a subject may be screened for disease characteristics and/or disease severity, eg, tumor mass, prior to administration of combination therapy to determine compliance, responsiveness, and/or responsiveness to administration of combination therapy. In some embodiments, the screening and/or outcome evaluation step may be used to determine the dose, frequency, duration, timing, and/or sequencing of the combination therapy provided herein.

[0557] В некоторых вариантах осуществления, субъект может подвергаться скринингу после введения одной из стадий сочетанной терапии, для определения и идентификации субъектов относительно получения оставшихся стадий сочетанной терапии и/или для мониторинга эффективности терапии. В некоторых вариантах осуществления, число, уровень или количество вводимых Т-лимфоцитов и/или пролиферация и/или активность вводимых Т-лимфоцитов оценивается до введения и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. [0557] In some embodiments, the subject may be screened after the introduction of one of the stages of combination therapy, to determine and identify subjects for receiving the remaining stages of combination therapy and/or to monitor the effectiveness of therapy. In some embodiments, the number, level, or amount of T lymphocytes administered and/or the proliferation and/or activity of T lymphocytes administered is assessed before and/or after administration of an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide.

[0558] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до тех пор, пока концентрация или количество генно-инженерных клеток в крови субъекта не составит (i) по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 10 генно-инженерных клеток на микролитр, (ii) по меньшей мере, 20%, 30%, 40% или 50% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC), (iii) по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 1 × 105 генно-инженерных клеток или (iv) по меньшей мере, 5000 копий ДНК, кодирующей рекомбинантный рецептор, на микрограмм ДНК; и/или в день 90 после начала введения (a) CAR-экспрессирующие клетки детектируются в крови или сыворотке субъекта; и/или в день 90 после начала введения (a) кровь субъекта содержит, по меньшей мере, 20% CAR-экспрессирующих клеток, по меньшей мере, 10 CAR-экспрессирующих клеток на микролитр или, по меньшей мере, 1 × 104 CAR-экспрессирующих клеток. [0558] In some embodiments, an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, is administered until the concentration or number of genetically engineered cells in the subject's blood is (i) at least, or about at least 10 genetically engineered cells. engineered cells per microliter, (ii) at least 20%, 30%, 40%, or 50% of total peripheral blood mononuclear cells (PBMC), (iii) at least, or about at least 1 x 10 5 engineered cells or (iv) at least 5,000 copies of DNA encoding the recombinant receptor per microgram of DNA; and/or on day 90 after the start of administration (a) CAR-expressing cells are detected in the subject's blood or serum; and/or on day 90 after the start of administration (a) the subject's blood contains at least 20% CAR-expressing cells, at least 10 CAR-expressing cells per microliter, or at least 1 x 10 4 CAR- expressing cells.

[0559] В некоторых вариантах осуществления, иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид, вводится до тех пор, пока не появится клиническая выгода от лечения, такая как, по меньшей мере, 50% или большее уменьшение общего объема опухоли или полная реакция (CR), при которой детектируемая опухоль исчезает, выживаемость без признаков прогрессирования заболевания или выживаемость без признаков заболевания в течение более 6 месяцев или более 1 года или больше.[0559] In some embodiments, an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is administered until there is a clinical benefit from the treatment, such as at least a 50% or greater reduction in total tumor volume or a complete response (CR), at which the detectable tumor disappears, progression-free survival, or disease-free survival for more than 6 months or more than 1 year or more.

[0560] В некоторых вариантах осуществления, определяется или оценивается изменение и/или альтернация, например, увеличение, повышение, понижение или уменьшение уровней, значений или измерений параметра или результата по сравнению с уровнями, значениями или измерениями этого же параметра или результата в другой момент времени оценки, в другом состоянии, в опорной точке и/или у другого субъекта. Например, в некоторых вариантах осуществления, может определяться кратное изменение, например, увеличение или уменьшение конкретных параметров, например, количество генно-инженерных Т-лимфоцитов в образце, по сравнению с тем же параметром в другом состоянии, например, до или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления определяются уровни, значения или измерения двух или более параметров, и сравниваются относительные уровни. В некоторых вариантах осуществления, определенные уровни, значения или измерения параметров сравниваются с уровнями, значениями или измерениями от контрольного образца или необработанного образца. В некоторых вариантах осуществления, определенные уровни, значения или измерения параметров сравнивают с уровнями из образца от того же субъекта, но в другой момент времени. Значения, полученные при количественном определении индивидуального параметра, могут объединяться для целей оценки заболевания, например, посредством формирования арифметической или логической операции на уровнях, значениях или измерениях параметров с использованием мультипараметрического анализа. В некоторых вариантах осуществления, можно вычислять отношение двух или более конкретных параметров.[0560] In some embodiments, a change and/or alternation is determined or evaluated, such as an increase, increase, decrease, or decrease in levels, values, or measurements of a parameter or result compared to levels, values, or measurements of the same parameter or result at another time. evaluation time, in another state, at the reference point and/or at another subject. For example, in some embodiments, a fold change, such as an increase or decrease in specific parameters, such as the number of engineered T lymphocytes in a sample, compared to the same parameter in another condition, such as before or after administration of an immunomodulatory compound, may be determined. eg lenalidomide. In some embodiments, the levels, values, or measurements of two or more parameters are determined and the relative levels are compared. In some embodiments, the determined levels, values, or measurements of parameters are compared to levels, values, or measurements from a control sample or an untreated sample. In some embodiments, certain levels, values, or parameter measurements are compared to levels from a sample from the same subject, but at a different point in time. Values derived from the quantification of an individual parameter may be combined for disease assessment purposes, for example, by forming an arithmetic or logical operation on the levels, values, or measurements of the parameters using multiparametric analysis. In some embodiments, a ratio of two or more specific parameters may be calculated.

A. Экспонирование, персистентность и пролиферация Т-лимфоцитовA. Exposure, persistence and proliferation of T-lymphocytes

[0561] В некоторых вариантах осуществления, параметр, связанный с терапией или результатом лечения, который включает параметры, которые могут оцениваться для стадий скрининга и/или для оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения, представляет собой или включает оценку экспонирования, персистентности и пролиферации Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, увеличение экспонирования или пролонгированное размножение и/или персистентность клеток, и/или изменения в фенотипах клеток или функциональной активности клеток, например, клеток, вводимых для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, в способах, предлагаемых в настоящем документе, можно измерить посредством оценки характеристик Т-лимфоцитов in vitro или ex vivo. В некоторых вариантах осуществления, такие анализы можно использоваться для определения или подтверждения функции Т-лимфоцитов, используемых для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, до или после введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии, предложенной в настоящем документе. [0561] In some embodiments, a parameter associated with therapy or treatment outcome, which includes parameters that can be assessed for screening steps and/or for evaluating treatment outcomes and/or monitoring treatment outcomes, is or includes an assessment of exposure, persistence, and proliferation of T-lymphocytes, for example, T-lymphocytes administered for therapy based on T-lymphocytes. In some embodiments, increased exposure or prolonged proliferation and/or persistence of cells, and/or changes in cell phenotypes or functional activity of cells, e.g., cells administered for immunotherapy, e.g., T cell therapy, in the methods provided herein , can be measured by characterizing T-lymphocytes in vitro or ex vivo. In some embodiments, such assays can be used to determine or confirm the function of T-lymphocytes used for immunotherapy, for example, T-cell therapy, before or after the introduction of one or more stages of combination therapy proposed herein.

[0562] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, разрабатывается для облегчения экспонирования субъекта для клеток, например, Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов, например, посредством облегчения их размножения и/или персистентности со временем. В некоторых вариантах осуществления, Т-клеточная терапия демонстрирует повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности у субъекта по сравнению со способом, при котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.[0562] In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, is designed to facilitate exposure of the subject to cells, e.g., T-lymphocytes, administered for T-lymphocyte therapy, e.g., by facilitating their expansion and/or persistence with time. In some embodiments, the T cell therapy demonstrates an increase or prolongation of proliferation and/or persistence in a subject compared to a method in which the T cell therapy is administered to the subject without an immunomodulatory compound, such as lenalidomide.

[0563] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы повышают экспонирование субъекта для вводимых клеток (например, повышается количество клеток или продолжительность во времени) и/или улучшают эффективность и терапевтические результаты иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии. В некоторых аспектах, способы являются преимущественными в том, что более высокая и/или более продолжительная степень экспонирования для клеток, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, например, для CAR-экспрессирующих клеток, улучшает результаты лечения по сравнению с другими способами. Такие результаты могут включать выживаемость и ремиссию у пациента, даже у индивидуумов с большой массой опухоли. [0563] In some embodiments, the methods provide increased exposure of a subject to administered cells (eg, increased cell number or duration) and/or improved efficacy and therapeutic outcomes of immunotherapy, such as T cell therapy. In some aspects, the methods are advantageous in that higher and/or longer exposure for cells expressing recombinant receptors, such as CAR expressing cells, improves treatment outcomes over other methods. Such outcomes may include patient survival and remission, even in individuals with large tumor masses.

[0564] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, может увеличить максимальное экспонирование, общее экспонирование и/или продолжительность экспонирования для клеток, например, для Т-лимфоцитов, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов, у субъекта по сравнению с введением только Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения. В некоторых аспектах, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в контексте большой тяжести заболевания (и таким образом, больших количеств антигена) и/или более агрессивного или резистентного ракового заболевания усиливает эффективность по сравнению с введением только Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения в том же контексте, что может давать в результате иммуносупрессию, слабость и/или истощение, что может предотвратить размножение и/или персистентность клеток. [0564] In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, can increase the maximum exposure, total exposure, and/or duration of exposure for cells, e.g., T-lymphocytes administered for T-lymphocyte-based therapy, in a subject compared with the introduction of only T-lymphocytes without an immunomodulatory compound. In some aspects, administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, in the context of greater disease severity (and thus large amounts of antigen) and/or more aggressive or resistant cancer enhances efficacy compared to administration of T-lymphocytes alone without the immunomodulatory compound, in that same context, which may result in immunosuppression, weakness and/or depletion, which may prevent cell proliferation and/or persistence.

[0565] В некоторых вариантах осуществления, детектируется присутствие и/или количество клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов), у субъекта после введения Т-лимфоцитов и до, в ходе и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых аспектах, используют количественную PCR (qPCR) для оценки количества клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор (например, CAR-экспрессирующих клеток, вводимых для терапии на основе Т-лимфоцитов), в образце крови или сыворотке или в образце органа или ткани (например, в месте заболевания, например, в образце опухоли) субъекта. В некоторых аспектах, персистентность количественно определяется как копии ДНК или плазмиды, кодирующей рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК, или как количество рецептор-экспрессирующих, например, CAR-экспрессирующих клеток на микролитр образца, например, крови или сыворотки, или на общее количество мононуклеаров периферической крови (PBMC) или лейкоцитов или T-лимфоцитов на микролитр образца.[0565] In some embodiments, the presence and/or amount of recombinant receptor-expressing cells (e.g., CAR-expressing cells administered for T-lymphocyte therapy) is detected in a subject after administration of T-lymphocytes and before, during, and /or after administration of an immunomodulatory compound, for example lenalidomide. In some aspects, quantitative PCR (qPCR) is used to evaluate the number of cells expressing a recombinant receptor (e.g., CAR-expressing cells administered for T-lymphocyte therapy) in a blood or serum sample, or in an organ or tissue sample (e.g., at the disease site, e.g., in a tumor sample) of the subject. In some aspects, persistence is quantified as copies of DNA or plasmid encoding a receptor, e.g., CAR, per microgram of DNA, or as the number of receptor-expressing, e.g., CAR-expressing cells per microliter of sample, e.g., blood or serum, or per total the number of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) or leukocytes or T-lymphocytes per microliter of sample.

[0566] В некоторых вариантах осуществления, клетки детектируются у субъекта на или, по меньшей мере, на 4, 14, 15, 27 или 28 день после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов. В некоторых аспектах, клетки детектируются на или, по меньшей мере, на 2, 4 или 6 неделе или на 3, 6 или 12, 18 или 24, или 30 или 36 месяце, или на 1, 2, 3, на 4, 5 или более поздний год после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.[0566] In some embodiments, cells are detected in a subject on or at least on 4, 14, 15, 27 or 28 days after the administration of T-lymphocytes, for example, CAR-expressing T-lymphocytes. In some aspects, cells are detected at or at least at 2, 4, or 6 weeks, or at 3, 6, or 12, 18, or 24, or 30, or 36 months, or at 1, 2, 3, 4, 5 or later one year after the administration of T-lymphocytes, for example, CAR-expressing T-lymphocytes, and/or an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide.

[0567] В некоторых вариантах осуществления, персистентность рецептор-экспрессирующих клеток (например, CAR-экспрессирующих клеток) у субъекта согласно способам, после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, больше по сравнению с тем, что достигалось бы с помощью альтернативных способов, таких как способы, включающие введение только иммунотерапии, например, введение Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, без иммуномодуляторного соединения. [0567] In some embodiments, the persistence of receptor-expressing cells (e.g., CAR-expressing cells) in a subject according to the methods following administration of T lymphocytes, e.g., CAR-expressing T lymphocytes and/or an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, more than what would be achieved with alternative methods, such as methods involving the administration of immunotherapy alone, for example, the administration of T-lymphocytes, for example, CAR-expressing T-lymphocytes, without an immunomodulatory compound.

[0568] Экспонирование, например, количество клеток, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, как показатель размножения и/или персистентности может формулироваться в терминах максимальных количества клеток, для которых экспонируется субъект, продолжительности присутствия детектируемых клеток или клеток выше определенного количества или процента, площади под кривой количества клеток в зависимости от времени и/или их сочетаний и их показателей. Такие результаты можно оценивать с использованием известных способов, таких как qPCR, для детектирования количества копий нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор, по сравнению с общим количеством нуклеиновой кислоты или ДНК в конкретном образце, например, крови, сыворотки, плазмы или ткани, например, в образце опухоли, и/или с помощью проточных цитометрических анализов, детектирующих клетки, экспрессирующие рецептор, как правило, с использованием антител специфичных к этим рецепторам. Анализы на основе клеток также можно использовать для детектирования количества или процента функциональных клеток, таких как клетки способные связываться и/или нейтрализовать и/или вызывать реакции, например, цитотоксические реакции, против клеток заболевания или состояния, или экспрессирующих антиген, распознаваемый рецептором.[0568] Exposure, for example, the number of cells, for example, T-lymphocytes, administered for T-cell therapy, as an indicator of expansion and / or persistence can be formulated in terms of the maximum number of cells for which the subject is exposed, the duration of the presence of detectable cells, or cells above a certain amount or percentage, the area under the curve of the number of cells depending on time and / or their combinations and their indicators. Such results can be assessed using known methods such as qPCR to detect the copy number of a nucleic acid encoding a recombinant receptor compared to the total amount of nucleic acid or DNA in a particular sample, e.g. blood, serum, plasma or tissue, e.g. tumor sample, and/or using flow cytometric assays that detect cells expressing the receptor, usually using antibodies specific for these receptors. Cell-based assays can also be used to detect the number or percentage of functional cells, such as cells capable of binding and/or neutralizing and/or eliciting reactions, such as cytotoxic reactions, against cells of a disease or condition, or expressing an antigen recognized by a receptor.

[0569] В некоторых аспектах, увеличение экспонирования субъекта для клеток включает увеличение размножения клеток. В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рецептор, например, CAR-экспрессирующие клетки, размножаются в субъекте после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых аспектах, способ дает результате увеличение размножения клеток по сравнению с другими способами, например, включающими введение Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, без введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.[0569] In some aspects, increasing a subject's exposure to cells includes increasing cell proliferation. In some embodiments, receptor-expressing cells, eg, CAR-expressing cells, proliferate in the subject after administration of T lymphocytes, eg, CAR-expressing T lymphocytes, and/or after administration of an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide. In some aspects, the method results in an increase in cell proliferation compared to other methods, for example, involving the administration of T lymphocytes, for example, CAR expressing T lymphocytes, without the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide.

[0570] В некоторых аспектах, способ дает в результате высокую пролиферацию in vivo вводимых клеток, например, как измерено с помощью проточной цитометрии. В некоторых аспектах, детектируются высокие пиковые пропорции клеток. Например, в некоторых вариантах осуществления, на пиковом максимальном уровне после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в крови или в месте заболевания субъекта или во фракции его лейкоцитов, например, во фракции PBMC или во фракции T-лимфоцитов, по меньшей мере, примерно 10%, по меньшей мере, примерно 20%, по меньшей мере, примерно 30%, по меньшей мере, примерно 40%, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80% или, по меньшей мере, примерно 90% клеток экспрессируют рекомбинантный рецептор, например, CAR.[0570] In some aspects, the method results in high in vivo proliferation of the administered cells, for example, as measured by flow cytometry. In some aspects, high peak cell proportions are detected. For example, in some embodiments, at a peak peak level following administration of T lymphocytes, e.g., CAR-expressing T lymphocytes, and/or an immunomodulatory compound, e.g. , in the PBMC fraction or in the T-lymphocyte fraction, at least about 10%, at least about 20%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50% , at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, or at least about 90% of the cells express the recombinant receptor, eg, CAR.

[0571] В некоторых вариантах осуществления, способ дает в результате максимальную концентрацию, в крови или сыворотке или другой телесной жидкости или органе или ткани субъекта, по меньшей мере, 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10000 или 15000 копий и самой нуклеиновой кислоты, кодирующей рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК или, по меньшей мере, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9 экспрессирующих рецептор, например, CAR-экспрессирующих клеток на общее количество мононуклеаров периферической крови (PBMC), на общее количество мононуклеаров, на общее количество Т-лимфоцитов или на общее количество микролитров. В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рецептор, детектируются, по меньшей мере, как 10, 20, 30, 40, 50 или 60% от общего количества PBMC в крови субъекта, и/или на таком же уровне в течение, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48 или 52 недель после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, или в течение 1, 2, 3, 4 или 5, или более лет после такого введения.[0571] In some embodiments, the method results in a maximum concentration, in the blood or serum or other bodily fluid or organ or tissue of the subject, of at least 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10,000, or 15,000 copies, and of the nucleic acid itself encoding a receptor, for example, CAR, per microgram of DNA or at least 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0, 8 or 0.9 receptor-expressing, eg, CAR-expressing cells per total peripheral blood mononuclear cells (PBMC), total mononuclear cells, total T-lymphocytes, or total microliters. In some embodiments, cells expressing the receptor are detected at least 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, or 60% of the total amount of PBMC in the subject's blood, and/or at the same level for at least , 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, or 52 weeks after administration of T-lymphocytes, e.g., CAR-expressing T-lymphocytes, and/ or an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, or for 1, 2, 3, 4 or 5 or more years after such administration.

[0572] В некоторых аспектах, способ дает в результате, по меньшей мере, 2-кратное, по меньшей мере, 4-кратное, по меньшей мере, 10-кратное или, по меньшей мере, 20-кратное увеличение копий нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор, например, CAR, на микрограмм ДНК, например, в сыворотке, плазме, крови или ткани, например, в образце опухоли у субъекта. [0572] In some aspects, the method results in at least 2-fold, at least 4-fold, at least 10-fold, or at least 20-fold increase in copies of the nucleic acid encoding a recombinant receptor, eg, CAR, per microgram of DNA, eg, in serum, plasma, blood, or tissue, eg, in a tumor sample from a subject.

[0573] В некоторых вариантах осуществления, клетки, экспрессирующие рецептор, детектируются в сыворотке, плазме, крови или ткани, например, в образце опухоли у субъекта, например, с помощью указанного способа, такого как qPCR или способ детектирования на основе проточной цитометрии, по меньшей мере, через 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 или 60 или более дней после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, или после введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в течение, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, или 24 или более недель после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. [0573] In some embodiments, cells expressing the receptor are detected in serum, plasma, blood, or tissue, e.g., in a tumor sample from a subject, e.g., using a specified method, such as qPCR or a flow cytometric detection method, by at least 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, or 60 days or more after administration of T-lymphocytes, such as CAR-expressing T -lymphocytes, or after the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, for at least, or about, at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 , 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, or 24 or more weeks after administration of T-lymphocytes, e.g., CAR-expressing T-lymphocytes, and/or immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide .

[0574] В некоторых аспектах, по меньшей мере, примерно 1 × 102, по меньшей мере, примерно 1 × 103, по меньшей мере, примерно 1 × 104, по меньшей мере, примерно 1 × 105, или, по меньшей мере, примерно 1 × 106 или, по меньшей мере, примерно 5 × 106 или, по меньшей мере, примерно 1 × 107 или, по меньшей мере, примерно 5 × 107 или, по меньшей мере, примерно 1 × 108 клеток, экспрессирующих рекомбинантный рецептор, например, CAR-экспрессирующих клеток, и/или, по меньшей мере, 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, или 500, или 1000 клеток, экспрессирующих рецептор, на микролитр, например, по меньшей мере, 10 на микролитр, детектируются или присутствуют в субъекте или в его текучей среде, плазме, сыворотке, ткани или компартменте, например, в крови, например, периферической крови, или на месте заболевания, например, в его опухоли. В некоторых вариантах осуществления, такое количество или концентрация клеток детектируется у субъекта, по меньшей мере, в течение примерно 20 дней, по меньшей мере, примерно 40 дней, или, по меньшей мере, примерно 60 дней, или, по меньшей мере, примерно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, или 12 месяцев или, по меньшей мере, в течение 2 или 3 лет после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или после введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. Такие количества клеток могут детектироваться с помощью способов на основе проточной цитометрии или способов на основе количественной PCR и экстраполяции на общие количества клеток с использованием известных способов Смотри, например, Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828.[0574] In some aspects, at least about 1 x 10 2 , at least about 1 x 10 3 , at least about 1 x 10 4 , at least about 1 x 10 5 , or, by at least about 1 x 10 6 or at least about 5 x 10 6 or at least about 1 x 10 7 or at least about 5 x 10 7 or at least about 1 x 10 8 recombinant receptor expressing cells, e.g. CAR expressing cells, and/or at least 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400 or 500 or 1000 receptor expressing cells per microliter, for example, at least 10 per microliter are detected or present in the subject or in its fluid, plasma, serum, tissue or compartment, for example, in the blood, for example, peripheral blood, or at the site of the disease, for example, in its tumor. In some embodiments, such a number or concentration of cells is detected in a subject for at least about 20 days, at least about 40 days, or at least about 60 days, or at least about 3 , 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, or 12 months, or at least 2 or 3 years after administration of T lymphocytes, e.g., CAR-expressing T lymphocytes, and/or after administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide. Such cell numbers can be detected using flow cytometric methods or quantitative PCR methods and extrapolation to total cell numbers using known methods See, for example, Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828.

[0575] В некоторых аспектах, количество копий нуклеиновой кислоты, кодирующей рекомбинантный рецептор, например, количество копий вектора на 100 клеток, например, в периферической крови или костном мозге или в другом компартменте, измеренное с помощью иммуногистохимии, PCR и/или проточной цитометрии, составляет, по меньшей мере, 0,01, по меньшей мере, 0,1, по меньшей мере, 1 или, по меньшей мере, 10, примерно через 1 неделю, примерно через 2 недели, примерно через 3 недели, примерно через 4 недели, примерно через 5 недель или, по меньшей мере, примерно через 6 недели или, по меньшей мере, примерно через 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяц или, по меньшей мере, через 2 или 3 года после введения клеток, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления, количество копий вектора, экспрессирующего рецептор, например, CAR, на микрограмм геномной ДНК, составляет, по меньшей мере, 100, по меньшей мере, 1000, по меньшей мере, 5000 или, по меньшей мере, 10000 или, по меньшей мере, 15000 или, по меньшей мере, 20000, в момент времени примерно 1 неделя, примерно 2 недели, примерно 3 недели или, по меньшей мере, примерно 4 недели после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, или, по меньшей мере, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 месяцев, или, по меньшей мере, 2 или 3 года после такого введения. [0575] In some aspects, the number of copies of the nucleic acid encoding the recombinant receptor, for example, the number of copies of the vector per 100 cells, for example, in peripheral blood or bone marrow or in another compartment, measured using immunohistochemistry, PCR and/or flow cytometry, is at least 0.01, at least 0.1, at least 1, or at least 10 after about 1 week after about 2 weeks after about 3 weeks after about 4 weeks , after about 5 weeks, or at least about 6 weeks, or at least about 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, or 12 months, or at least , 2 or 3 years after the introduction of cells, for example, CAR-expressing T-lymphocytes, and/or an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide. In some embodiments, the number of copies of a vector expressing a receptor, e.g., CAR, per microgram of genomic DNA is at least 100, at least 1000, at least 5000 or at least 10000 or at least 15,000, or at least 20,000, at about 1 week, about 2 weeks, about 3 weeks, or at least about 4 weeks after administration of T lymphocytes, e.g., CAR-expressing T lymphocytes, or an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, or at least 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, or 12 months, or at least 2 or 3 years after such administration .

[0576] В некоторых аспектах, рецептор, например, CAR, экспрессируемый клетками, детектируется с помощью количественной PCR (qPCR) или с помощью проточной цитометрии у субъекта, в его плазме, сыворотке, крови, ткани и/или в месте заболевания, например, в месте опухоли, в момент времени, который составляет, по меньшей мере, примерно 3 месяца, по меньшей мере, примерно 6 месяцев, по меньшей мере, примерно 12 месяцев, по меньшей мере, примерно 1 год, по меньшей мере, примерно 2 года, по меньшей мере, примерно 3 года или более чем 3 года, после введения клеток, например, после начала введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.[0576] In some aspects, a receptor, e.g., CAR, expressed by cells is detected by quantitative PCR (qPCR) or by flow cytometry in the subject, in their plasma, serum, blood, tissue, and/or at the site of the disease, for example, at the site of the tumor, at a time point that is at least about 3 months, at least about 6 months, at least about 12 months, at least about 1 year, at least about 2 years , at least about 3 years, or more than 3 years, after administration of cells, for example, after the start of administration of T-lymphocytes, for example, CAR-expressing T-lymphocytes, and/or an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide.

[0577] В некоторых вариантах осуществления, площадь под кривой (AUC) для концентрации клеток, экспрессирующих рецептор (например, CAR-), в текучей среде, плазме, сыворотке, крови, ткани, органе и/или месте заболевания, например, на месте опухоли у субъекта, со временем после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, больше по сравнению с тем, что достигается с помощью альтернативного режима дозирования, где субъекту вводят Т-лимфоциты, например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты, без введения иммуномодуляторного соединения.[0577] In some embodiments, the area under the curve (AUC) for the concentration of cells expressing a receptor (e.g., CAR-) in a fluid, plasma, serum, blood, tissue, organ, and/or disease site, e.g., in situ tumors in a subject, over time after administration of T-lymphocytes, e.g., CAR-expressing T-lymphocytes, and/or an immunomodulatory compound, e.g. lymphocytes, for example, CAR-expressing T-lymphocytes, without administration of an immunomodulatory compound.

[0578] В некоторых аспектах, способ дает в результате высокую пролиферацию in vivo вводимых клеток, например, измеренную с помощью проточной цитометрии. В некоторых аспектах, детектируются высокие пиковые пропорции клеток. Например, в некоторых вариантах осуществления, на пиковом или максимальном уровне после введения Т-лимфоцитов, например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, в крови, плазме, сыворотке, ткани или в месте заболевания субъекта, или в его фракции лейкоцитов, например, во фракции PBMC или во фракции T-лимфоцитов, по меньшей мере, примерно 10%, по меньшей мере, примерно 20%, по меньшей мере, примерно 30%, по меньшей мере, примерно 40%, по меньшей мере, примерно 50%, по меньшей мере, примерно 60%, по меньшей мере, примерно 70%, по меньшей мере, примерно 80% или, по меньшей мере, примерно 90% клеток экспрессируют рекомбинантный рецептор, например, CAR.[0578] In some aspects, the method results in high in vivo proliferation of the administered cells, such as measured by flow cytometry. In some aspects, high peak cell proportions are detected. For example, in some embodiments, at a peak or maximum level following administration of T lymphocytes, e.g., CAR expressing T lymphocytes, and/or an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, in the blood, plasma, serum, tissue, or disease site of the subject , or in its leukocyte fraction, for example, in the PBMC fraction or in the T-lymphocyte fraction, at least about 10%, at least about 20%, at least about 30%, at least about 40% , at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, or at least about 90% of the cells express the recombinant receptor, eg, CAR.

[0579] В некоторых аспектах, повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности дозы клеток в субъекте, вводимой вместе с иммуномодуляторным соединением, например, леналидомидом, связывается с улучшением результатов лечения, связанных с опухолью у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, результат лечения, связанный с опухолью, включает уменьшение массы опухоли или уменьшение количества бластных клеток костного мозга у субъекта. В некоторых вариантах осуществления, масса опухоли понижается на или, по меньшей мере, на, или примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 процентов после введения согласно этому способу. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания, размер опухоли, объем опухоли, массы опухоли и/или нагрузка опухоли, или ее основная масса уменьшается после дозирования клеток, по меньшей мере, на или примерно на 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более по сравнению с субъектом, которого лечат с помощью способа, который не включает введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида.[0579] In some aspects, increasing or prolonging the proliferation and/or persistence of the dose of cells in a subject administered together with an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, is associated with improved tumor outcomes in the subject. In some embodiments, the outcome of treatment associated with the tumor includes a decrease in the mass of the tumor or a decrease in the number of bone marrow blast cells in the subject. In some embodiments, tumor weight is reduced by, or at least by, or about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, or 100 percent after administration according to this method. In some embodiments, disease severity, tumor size, tumor volume, tumor masses, and/or tumor burden or bulk is reduced after cell dosing by at least or about 50%, 60%, 70%, 80% , 90% or more compared to a subject treated with a method that does not include the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide.

B. Функциональная активность T-лимфоцитов B. Functional activity of T-lymphocytes

[0580] В некоторых вариантах осуществления, параметры, связанные с результатами терапии или лечения, которые включают параметры, которые можно оценивать в течение стадии скрининга и/или оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения, включают один или несколько параметров из активности, фенотипа, пролиферации или функции Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать любой известный в данной области анализ для оценки активности, фенотипов, пролиферации и/или функции Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии. До и/или после введения клеток и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, биологическая активность популяций генно-инженерных клеток, в некоторых вариантах осуществления измеряется, например, с помощью ряда известных способов. Параметры для оценки включают специфичное связывание генно-инженерных или природных T-лимфоцитов или других иммунных клеток с антигеном, in vivo, например, с помощью обработки изображений, или ex vivo, например, с помощью ELISA или проточной цитометрии. В определенных вариантах осуществления, способность генно-инженерных клеток разрушать целевые клетки можно измерить с использованием любого соответствующего способа известного в данной области, такого как анализы цитотоксичности, описанные, например, Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), и Herman et al., J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). В определенных вариантах осуществления, биологическая активность клеток измеряется посредством анализа экспрессирования и/или секретирования одного или нескольких цитокинов, таких как CD107a, IFNγ, IL-2, GM-CSF и TNFα, и/или посредством оценки цитолитической активности.[0580] In some embodiments, parameters associated with therapy or treatment outcomes, which include parameters that can be assessed during the screening and/or evaluation of treatment outcomes and/or monitoring of treatment outcomes, include one or more parameters from activity, phenotype , proliferation or function of T-lymphocytes. In some embodiments, any assay known in the art can be used to evaluate the activity, phenotypes, proliferation, and/or function of T lymphocytes, eg, T lymphocytes administered for T cell therapy. Before and/or after administration of the cells and/or an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, the biological activity of the engineered cell populations is, in some embodiments, measured, for example, by a number of known methods. Parameters for evaluation include specific binding of engineered or natural T-lymphocytes or other immune cells to an antigen, in vivo, eg, by image processing, or ex vivo, eg, by ELISA or flow cytometry. In certain embodiments, the ability of engineered cells to destroy target cells can be measured using any appropriate method known in the art, such as cytotoxicity assays, such as those described in Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689- 702 (2009), and Herman et al., J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). In certain embodiments, cell biological activity is measured by assaying the expression and/or secretion of one or more cytokines such as CD107a, IFNγ, IL-2, GM-CSF, and TNFα and/or by assessing cytolytic activity.

[0581] В некоторых вариантах осуществления, анализы на активность, фенотипы, пролиферацию и/или функцию Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, включают, но, не ограничиваясь этим, ELISPOT, ELISA, клеточную пролиферацию, цитотоксичный анализ лимфоцитов (CTL), связывание с эпитопом, антигеном или лигандом T-лимфоцита или внутриклеточное окрашивание цитокинов, анализы пролиферации, анализы секреции лимфокинов, прямые анализы цитотоксичности, и анализ серийных разведений. В некоторых вариантах осуществления, пролиферативные реакции Т-лимфоцитов можно измерить, например, посредством введения 3H-тимидина, BrdU (5-бром-2’-деоксиуридина) или 2’-деокси-5-этинилуридина (EdU) в их ДНК или посредством анализа разведения красителя, используя такие красители, как карбоксифлуоресцеин диацетат, сложный сукциниммуномодуляторный компаундиловый эфир (CFSE), CellTrace Violet или мембранный краситель PKH26.[0581] In some embodiments, assays for activity, phenotypes, proliferation, and/or function of T lymphocytes, e.g., T lymphocytes administered for T cell therapy, include, but are not limited to, ELISPOT, ELISA, cell proliferation , cytotoxic lymphocyte (CTL) assays, T-lymphocyte epitope, antigen or ligand binding or intracellular cytokine staining, proliferation assays, lymphokine secretion assays, direct cytotoxicity assays, and serial dilution assays. In some embodiments, proliferative responses of T lymphocytes can be measured, for example, by introducing 3 H-thymidine, BrdU (5-bromo-2'-deoxyuridine) or 2'-deoxy-5-ethynyluridine (EdU) into their DNA, or by dye dilution analysis using dyes such as carboxyfluorescein diacetate, succinimmunomodulatory compound ester (CFSE), CellTrace Violet, or PKH26 membrane dye.

[0582] В некоторых вариантах осуществления, оценка активности, фенотипов, пролиферации и/или функции Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, включает измерение продуцирования цитокинов Т-лимфоцитами и/или измерение продуцирования цитокинов в биологическом образце от субъекта, например, в образцах плазмы, сыворотки, крови и/или ткани, например, в образцах опухоли. В некоторых случаях, такие измеряемые цитокины могут включать, без ограничения, интерлейкин-2 (IL-2), интерферон-гамма (IFNγ), интерлейкин-4 (IL-4), TNF-альфа (TNFα), интерлейкин-6 (IL-6), интерлейкин-10 (IL-10), интерлейкин-12 (IL-12), колониестимулирующий фактор гранулоцитов-макрофагов (GM-CSF), CD107a и/или TGF-бета (TGFβ). Анализы измерения цитокинов хорошо известны в данной области, и они включают, но, не ограничиваясь этим, ELISA, внутриклеточное окрашивание цитокинов, цитометрический анализ с использованием шариков, RT-PCR, ELISPOT, проточную цитометрию и биоанализы, при которых клетки чувствительные к релевантному цитокину исследуют на восприимчивость (например, на пролиферацию) в присутствии исследуемого образца.[0582] In some embodiments, the assessment of the activity, phenotypes, proliferation and/or function of T lymphocytes, for example, T lymphocytes administered for T cell therapy, includes measuring cytokine production by T lymphocytes and/or measuring cytokine production in a biological a sample from a subject, for example, in plasma, serum, blood and/or tissue samples, for example, in tumor samples. In some cases, such measurable cytokines may include, without limitation, interleukin-2 (IL-2), interferon-gamma (IFNγ), interleukin-4 (IL-4), TNF-alpha (TNFα), interleukin-6 (IL -6), interleukin-10 (IL-10), interleukin-12 (IL-12), granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF), CD107a and/or TGF-beta (TGFβ). Cytokine measurement assays are well known in the art and include, but are not limited to, ELISA, intracellular cytokine staining, bead cytometry, RT-PCR, ELISPOT, flow cytometry, and bioassays in which cells sensitive to the relevant cytokine are examined. susceptibility (eg proliferation) in the presence of the test sample.

[0583] В некоторых вариантах осуществления, оценка активности, фенотипов, пролиферации и/или функции Т-лимфоцитов, например, Т-лимфоцитов, вводимых для Т-клеточной терапии, включают оценку фенотипов клеток, например, экспрессирования конкретных поверхностных маркеров клеток. В некоторых вариантах осуществления, Т-лимфоциты, например, Т-лимфоциты, вводимые для Т-клеточной терапии, оцениваются на экспрессирование маркеров активирования Т-лимфоцитов, маркеров истощения Т-лимфоцитов и/или маркеров дифференциации Т-лимфоцитов. В некоторых вариантах осуществления, фенотип клеток оценивают до введения. В некоторых вариантах осуществления, фенотип клеток оценивают после введения. Маркеры активирования Т-лимфоцитов, маркеры истощения Т-лимфоцитов и/или маркеры дифференциации Т-лимфоцитов для оценки включают любые маркеры известные в данной области для конкретных подмножеств Т-лимфоцитов, например, CD25, CD38, антигена лейкоцита человека DR (HLA-DR), CD69, CD44, CD137, KLRG1, CD62Llow, CCR7low, CD71, CD2, CD54, CD58, CD244, CD160, белка 1 программируемой гибели клеток (PD-1), белка гена 3 активирования лимфоцитов (LAG-3), домена иммуноглобулина T-лимфоциттов и муцинового домена белка 3 (TIM-3), цитотоксического антигена T-лимфоцитов - белка 4 (CTLA-4), B-лимфоцитарного и T-лимфоцитарного аттенюатора (BTLA) и/или иммуноглобулина T-лимфоцита и ингибиторного домена мотива на основе иммунорецепторного тирозина (TIGIT) (смотри, например, Liu et al., Cell Death and Disease (2015) 6, e1792). В некоторых вариантах осуществления, оцениваемый поверхностный маркер клетки представляет собой CD25, PD-1 и/или TIM-3. В некоторых вариантах осуществления, оцениваемый поверхностный маркер клетки представляет собой CD25.[0583] In some embodiments, the assessment of the activity, phenotypes, proliferation and/or function of T lymphocytes, for example, T lymphocytes administered for T cell therapy, includes assessment of cell phenotypes, for example, the expression of specific cell surface markers. In some embodiments, T lymphocytes, eg, T lymphocytes administered for T cell therapy, are evaluated for expression of T lymphocyte activation markers, T lymphocyte depletion markers, and/or T lymphocyte differentiation markers. In some embodiments, the cell phenotype is assessed prior to administration. In some embodiments, the cell phenotype is assessed after administration. T-lymphocyte activation markers, T-lymphocyte depletion markers, and/or T-lymphocyte differentiation markers for evaluation include any markers known in the art for specific T-lymphocyte subsets, e.g., CD25, CD38, human leukocyte antigen DR (HLA-DR) , CD69, CD44, CD137, KLRG1, CD62L low , CCR7 low , CD71, CD2, CD54, CD58, CD244, CD160, programmed cell death protein 1 (PD-1), lymphocyte activation gene 3 protein (LAG-3), domain immunoglobulin of T-lymphocytes and protein mucin domain 3 (TIM-3), cytotoxic antigen of T-lymphocytes - protein 4 (CTLA-4), B-lymphocyte and T-lymphocyte attenuator (BTLA) and / or immunoglobulin of T-lymphocyte and inhibitory domain immunoreceptor tyrosine (TIGIT) motif (see, for example, Liu et al., Cell Death and Disease (2015) 6, e1792). In some embodiments, the cell surface marker being evaluated is CD25, PD-1, and/or TIM-3. In some embodiments, the cell surface marker being evaluated is CD25.

[0584] В некоторых аспектах, детектирование уровней экспрессии включает осуществление анализа in vitro. В некоторых вариантах осуществления, анализ in vitro представляет собой иммунный анализ, анализ на основе аптамеров, гистологический или цитологический анализ или анализ уровня экспрессирования mRNA. В некоторых вариантах осуществления, параметр или параметры для одного или нескольких из каждого одного или нескольких факторов, эффекторов, ферментов и/или поверхностных маркеров детектируют с помощью иммуносорбентного анализа на связанных ферментах (ELISA), иммуноблоттинга, иммунопреципитации, радиоиммунного анализа (RIA), иммунного окрашивания, анализа проточной цитометрии, поверхностного плазмонного резонанса (SPR), анализа хемилюминесценции, горизонтального проточного иммунноанализа, анализа ингибирования или анализа авидности. В некоторых вариантах осуществления, детектирование цитокинов и/или поверхностных маркеров определяют с использованием связывающего реагента, который специфично связывается, по меньшей мере, с одним биомаркером. В некоторых случаях, связывающий реагент представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент, аптамер или зонд на основе нуклеиновой кислоты.[0584] In some aspects, detecting expression levels includes performing an in vitro assay. In some embodiments, the in vitro assay is an immune assay, an aptamer-based assay, a histological or cytological assay, or an mRNA expression level assay. In some embodiments, the parameter or parameters for one or more of each one or more factors, effectors, enzymes, and/or surface markers are detected using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunoblot, immunoprecipitation, radioimmunoassay (RIA), immune staining, flow cytometry analysis, surface plasmon resonance (SPR), chemiluminescence analysis, horizontal flow immunoassay, inhibition assay, or avidity assay. In some embodiments, detection of cytokines and/or surface markers is determined using a binding reagent that specifically binds to at least one biomarker. In some cases, the binding reagent is an antibody or an antigen-binding fragment, an aptamer, or a nucleic acid probe.

[0585] В некоторых вариантах осуществления, введение иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, увеличивает уровень циркуляции Т-лимфоцитов CAR. [0585] In some embodiments, administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide, increases the level of circulating CAR T lymphocytes.

C. Тяжесть заболевания C. Disease severity

[0586] В некоторых вариантах осуществления, параметры, связанные с терапией или результатами лечения, которые включают параметры, которые можно оценить в течение стадий скрининга и/или оценки результатов лечения и/или мониторинга результатов лечения, включают массу опухоли или тяжесть заболевания. Введение иммунотерапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов) и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, может уменьшить или предотвратить распространение, или тяжесть заболевания или состояния у субъекта. Например, когда заболевание или состояние представляет собой опухоли, способы, как правило, уменьшают размер опухоли, ее основную массу, метастазы, процент бластных клеток в костном мозге или молекулярно детектируемое раковое заболевание, и/или улучшают прогноз или выживаемость, или другой симптом, связанный с массой опухоли. [0586] In some embodiments, parameters associated with therapy or treatment outcomes, which include parameters that can be assessed during the screening and/or evaluation of treatment outcomes and/or monitoring of treatment outcomes, include tumor mass or disease severity. Administration of an immunotherapy, such as T cell therapy (eg, CAR expressing T lymphocytes) and/or an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, can reduce or prevent the spread or severity of a disease or condition in a subject. For example, when the disease or condition is a tumor, the methods generally reduce tumor size, bulk, metastasis, percentage of blast cells in the bone marrow, or molecularly detectable cancer, and/or improve prognosis or survival, or other associated symptom. with tumor mass.

[0587] В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы дают результате уменьшение массы опухоли в леченых субъектов по сравнению с альтернативными способами, при которых иммунотерапия, такая как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) получается без введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. Нет необходимости в том, чтобы масса опухоли реально уменьшалась бы у всех субъектов, принимающих сочетанную терапию, но чтобы масса опухоли уменьшалась в среднем у леченых субъектов, например на основе клинических данных, в которых большинство субъектов, леченых с помощью такой сочетанной терапии, демонстрировало бы уменьшение массы опухоли, например, по меньшей мере, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или больше субъектов, леченых с помощью сочетанной терапии, демонстрировало уменьшение массы опухоли. [0587] In some embodiments, the proposed methods result in a reduction in tumor mass in treated subjects compared to alternative methods in which immunotherapy, such as T-cell therapy (e.g., CAR-expressing T-lymphocytes) is obtained without administering an immunomodulatory compound, such as lenalidomide. It is not necessary that tumor mass actually decrease in all subjects receiving combination therapy, but that tumor mass decrease on average in treated subjects, e.g. based on clinical data in which the majority of subjects treated with such combination therapy would demonstrate reduction in tumor mass, for example, at least 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% or more of subjects treated with combination therapy, showed a reduction in tumor mass.

[0588] Тяжесть заболевания может охватывать общее количество клеток заболевания в субъекте или в органе, ткани или телесной жидкости субъекта, например, в органе или ткани опухоли, или в другом месте, например, которое указывало бы на метастазы. Например, клетки опухоли могут детектироваться и/или количественно определяться в крови, лимфе или костном мозге в контексте определенных гематологических злокачественных новообразований. Тяжесть заболевания может включать, в некоторых вариантах осуществления, массу опухоли, количество или распространенность метастаз и/или процент бластных клеток, присутствующих в костном мозге. [0588] Disease severity can encompass the total number of disease cells in a subject or in an organ, tissue, or bodily fluid of the subject, such as in a tumor organ or tissue, or elsewhere, such as that would indicate metastases. For example, tumor cells can be detected and/or quantified in blood, lymph, or bone marrow in the context of certain hematological malignancies. The severity of the disease may include, in some embodiments, the mass of the tumor, the number or extent of metastases, and/or the percentage of blast cells present in the bone marrow.

[0589] В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет миелому, лимфому или лейкоз. В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет неходжкинскую лимфому (NHL), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), хронический лимфолейкоз (CLL), диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL) или миелому, например, множественную миелому (MM). В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет MM или DBCBL. В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет фолликулярную лимфому (FL).[0589] In some embodiments, the subject has myeloma, lymphoma, or leukemia. In some embodiments, the subject has non-Hodgkin's lymphoma (NHL), acute lymphocytic leukemia (ALL), chronic lymphocytic leukemia (CLL), diffuse large B cell lymphoma (DLBCL), or a myeloma, such as multiple myeloma (MM). In some embodiments, the subject has MM or DBCBL. In some embodiments, the subject has follicular lymphoma (FL).

[0590] В некоторых вариантах осуществления, субъект имеет плотную опухоль. [0590] In some embodiments, the subject has a solid tumor.

[0591] В случае MM, иллюстративные параметры для оценки степени тяжести заболевания включают такие параметры как количество клональных плазматических клеток (например, >10% при биопсии костного мозга, или любое количество при биопсии других тканей; плазмоцитома), присутствие моноклонального белка (парапротеина) либо в сыворотке либо в моче, доказательства ощущения повреждения конечного органа, связанного с расстройством клеток плазмы (например, гиперкальцемии (скорректированный кальций >2,75 ммоль/л); почечную недостаточность, приписываемую миеломе; анемию (гемоглобин <10 г/дл) и/или повреждение костей (литические повреждения или остеопороз с компрессионными переломами)). [0591] In the case of MM, illustrative parameters for assessing the severity of the disease include parameters such as the number of clonal plasma cells (for example, > 10% in a bone marrow biopsy, or any number in a biopsy of other tissues; plasmacytoma), the presence of a monoclonal protein (paraprotein) either in serum or urine, evidence of a sense of end organ damage associated with a plasma cell disorder (eg, hypercalcemia (corrected calcium >2.75 mmol/L); renal failure attributed to myeloma; anemia (hemoglobin <10 g/dL), and / or bone damage (lytic lesions or osteoporosis with compression fractures)).

[0592] В случае DLBCL, иллюстративные параметры для оценки степени тяжести заболевания включают такие параметры как клеточная морфология (например, центробластные, иммунобластные и анапластические клетки), экспрессирование генов, экспрессирование miRNA и экспрессирование белков (например, экспрессирование BCL2, BCL6, MUM1, LMO2, MYC и p21).[0592] In the case of DLBCL, exemplary parameters for assessing disease severity include parameters such as cell morphology (e.g., centroblastic, immunoblastic, and anaplastic cells), gene expression, miRNA expression, and protein expression (e.g., expression of BCL2, BCL6, MUM1, LMO2 , MYC and p21).

[0593] В случае лейкоза, степень тяжести заболевания можно определить по оценке остаточного лейкоза в крови или костном мозге. В некоторых вариантах осуществления, субъект демонстрирует морфологическое заболевание, если имеется 5% или больше бластных клеток в костном мозгу, например, как детектируется с помощью световой микроскопии. В некоторых вариантах осуществления, субъект демонстрирует полную или клиническую ремиссию, если имеется меньше 5% бластных клеток в костном мозгу. [0593] In the case of leukemia, the severity of the disease can be determined by assessing residual leukemia in the blood or bone marrow. In some embodiments, the subject exhibits a morphological disorder if there are 5% or more blast cells in the bone marrow, such as as detected by light microscopy. In some embodiments, the subject demonstrates complete or clinical remission if there are less than 5% blast cells in the bone marrow.

[0594] В некоторых вариантах осуществления, для лейкоза, субъект может демонстрировать полную ремиссию, но малая пропорция морфологически недетектируемых (с помощью методики световой микроскопии) остаточных лейкозных клеток присутствует. Субъект как сказано, демонстрирует минимальное остаточное заболевание (MRD), если субъект демонстрирует меньше 5% бластных клеток в костном мозгу и демонстрирует молекулярно детектируемое раковое заболевание. В некоторых вариантах осуществления, молекулярно детектируемое раковое заболевание может оцениваться с использованием любой из разнообразных молекулярных методик, которые дают возможность для чувствительного детектирования малого количества клеток. В некоторых аспектах, такие методики включают анализы PCR, которые могут определить уникальные перегруппировки Ig/гена рецептора T-лимфоцита или транскрипций слияния, продуцируемые при хромосомных транслокациях. В некоторых вариантах осуществления, можно использовать проточную цитометрию для идентификации раковых клеток на основе лейкоз-специфичных иммунофенотипов. В некоторых вариантах осуществления, молекулярное детектирование ракового заболевания может детектировать всего лишь 1 клетку лейкоза среди 100000 нормальных клеток. В некоторых вариантах осуществления, субъект демонстрирует MRD, которая молекулярно детектируется, если детектируется, по меньшей мере, 1 или больше клеток лейкоза среди 100000 клеток, например, с помощью PCR или проточной цитометрии. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания у субъекта представляет собой MRD-, или оно является молекулярно недетектируемым, так что, в некоторых случаях, клетки лейкоза не могут детектироваться у субъекта с использованием методик PCR или проточной цитометрии.[0594] In some embodiments, for leukemia, the subject may be in complete remission, but a small proportion of morphologically undetectable (by light microscopy technique) residual leukemic cells is present. A subject is said to exhibit minimal residual disease (MRD) if the subject exhibits less than 5% blast cells in the bone marrow and exhibits molecularly detectable cancer. In some embodiments, a molecularly detectable cancer may be assessed using any of a variety of molecular techniques that allow sensitive detection of a small number of cells. In some aspects, such techniques include PCR assays that can detect unique T-lymphocyte receptor Ig/gene rearrangements or fusion transcriptions produced by chromosomal translocations. In some embodiments, flow cytometry can be used to identify cancer cells based on leukemia-specific immunophenotypes. In some embodiments, molecular cancer detection can detect as little as 1 leukemia cell out of 100,000 normal cells. In some embodiments, the subject demonstrates an MRD that is molecularly detectable if at least 1 or more leukemia cells are detected among 100,000 cells, for example, by PCR or flow cytometry. In some embodiments, the severity of the disease in the subject is MRD - , or it is molecularly undetectable such that, in some cases, leukemia cells cannot be detected in the subject using PCR or flow cytometry techniques.

[0595] В некоторых вариантах осуществления, способы и/или введение иммунотерапии, такой как Т-клеточная терапия (например, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты) и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, понижает тяжесть заболевания по сравнению с тяжестью заболевания в момент времени непосредственно перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или иммуномодуляторного соединения. [0595] In some embodiments, the methods and/or administration of immunotherapy, such as T-cell therapy (e.g., CAR-expressing T-lymphocytes) and/or an immunomodulatory compound, e.g., lenalidomide, reduces disease severity relative to disease severity in a point in time just prior to the administration of the immunotherapy, eg, T cell therapy, and/or the immunomodulatory compound.

[0596] В некоторых аспектах, введение иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, может предотвратить увеличение тяжести заболевания, и это может быть показано по отсутствию изменений тяжести заболевания.[0596] In some aspects, administration of an immunotherapy, eg, T cell therapy, and/or an immunomodulatory compound, eg, lenalidomide, may prevent an increase in disease severity, and this may be indicated by no change in disease severity.

[0597] В некоторых вариантах осуществления, способ понижает тяжесть заболевания или состояния, например, количество клеток опухоли, размер опухоли, продолжительность выживаемости пациента или бессобытийной выживаемости, до большей степени и/или в течение большего периода времени, по сравнению с уменьшением, которое наблюдалось бы для сравнимого способа с использованием альтернативной терапии, например, такой при которой субъект получает иммунотерапию, например, Т-клеточную терапию саму по себе, без введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания уменьшается до большей степени или в течение более длительного времени после сочетанной терапии, с введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, по сравнению с уменьшением, которое осуществлялось бы при введении каждого агента самого по себе, например, при введении иммуномодуляторного соединения субъекту, не получающему иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии; или при введении иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, субъекту, который не получает иммуномодуляторного соединения.[0597] In some embodiments, the method reduces the severity of the disease or condition, e.g., tumor cell count, tumor size, patient survival or event-free survival, to a greater extent and/or for a longer period of time than the reduction that was observed would be for a comparable method using an alternative therapy, such as one in which the subject receives immunotherapy, such as T cell therapy alone, without the administration of an immunomodulatory compound, such as lenalidomide. In some embodiments, the severity of the disease is reduced to a greater extent or for a longer time after combination therapy, with the introduction of immunotherapy, for example, T-cell therapy, and an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, compared with the reduction that would be carried out with the introduction each agent by itself, eg, when an immunomodulatory compound is administered to a subject not receiving immunotherapy, eg, T-cell therapy; or when administering immunotherapy, eg, T cell therapy, to a subject who is not receiving an immunomodulatory compound.

[0598] В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания или состояния у субъекта детектируется, оценивается или измеряется. Тяжесть заболевания может детектироваться в некоторых аспектах посредством детектирования общего количества болезненных или связанных с заболеванием клеток, например, клеток опухоли, у субъекта, или в органе, ткани или телесной жидкости субъекта, такой как кровь или сыворотка. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания, например, массу опухоли, оценивают посредством измерения массы твердой опухоли и/или количества или распространения метастаз. В некоторых аспектах, оценивают выживаемость субъекта, выживаемость за определенный период времени, степень выживаемости, присутствие или продолжительность бессобытийной или бессимптомной выживаемости или выживаемости без возобновления. В некоторых вариантах осуществления, оценивают любой симптом заболевания или состояния. В некоторых вариантах осуществления, конкретизируется мера тяжести заболевания или состояния. В некоторых вариантах осуществления, иллюстративные параметры для определения включают конкретные клинические результаты, показывающие облегчение или улучшение при заболевании или состоянии, например, при опухоли. Такие параметры включают: продолжительность контроля заболевания, включая полную реакцию (CR), частичную реакцию (PR) или стабильное заболевание (SD) (смотри, например, Response Evaluation Criteria In Solid Tumors (RECIST) guidelines), реакцию опухоли по результатам объективной оценки (ORR), выживаемость без признаков прогрессирования заболевания (PFS) и общую выживаемость (OS). Конкретные пороги параметров могут подбираться для определения эффективности способа сочетанной терапии, предлагаемого в настоящем документе. [0598] In some embodiments, the severity of a disease or condition in a subject is detected, assessed, or measured. The severity of a disease can be detected in some aspects by detecting the total number of diseased or disease-associated cells, such as tumor cells, in a subject, or in an organ, tissue, or bodily fluid of the subject, such as blood or serum. In some embodiments, disease severity, such as tumor weight, is assessed by measuring solid tumor weight and/or the number or extent of metastases. In some aspects, the survival of the subject, survival over a certain period of time, the degree of survival, the presence or duration of event-free or asymptomatic survival or survival without recurrence is assessed. In some embodiments, any symptom of a disease or condition is evaluated. In some embodiments, a measure of the severity of the disease or condition is specified. In some embodiments, exemplary parameters for determination include specific clinical results showing relief or improvement in a disease or condition, such as a tumor. Such parameters include: duration of disease control, including complete response (CR), partial response (PR), or stable disease (SD) (see e.g. Response Evaluation Criteria In Solid Tumors (RECIST) guidelines), tumor response as measured by objective evaluation ( ORR), progression-free survival (PFS), and overall survival (OS). Specific parameter thresholds may be selected to determine the efficacy of the combination therapy method provided herein.

[0599] В некоторых вариантах осуществления, субъекты, леченые с помощью этого способа, достигают более стойкой реакции. В некоторых случаях, мера продолжительности реакции (DOR) включает время от документирования реакции опухоли до развития заболевания. В некоторых вариантах осуществления, параметр для оценки реакции может включать стойкую реакцию, например, реакцию, которая поддерживается по прохождении некоторого периода времени от начала терапии. В некоторых вариантах осуществления, стойкая реакция показывается по доле реакции приблизительно через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 или 24 месяца после начала терапии. В некоторых вариантах осуществления, реакция является поддерживается в течение больше 3 месяцев, больше 6 месяцев или больше 12 месяцев. В некоторых конкретных вариантах осуществления, субъекты, леченые согласно этому способу, достигают более стойкой реакции после предыдущего возобновления заболевания у субъекта после ремиссии в ответ на введение генно-инженерных клеток.[0599] In some embodiments, subjects treated with this method achieve a more robust response. In some cases, the measure of duration of response (DOR) includes the time from documenting tumor response to disease progression. In some embodiments, the response parameter may include a persistent response, such as a response that is maintained after a period of time has elapsed from the start of therapy. In some embodiments, a persistent response is indicated by a response rate at approximately 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, or 24 months after the start of therapy. In some embodiments, the response is maintained for more than 3 months, more than 6 months, or more than 12 months. In some specific embodiments, subjects treated according to this method achieve a more robust response after a previous recurrence of the disease in the subject after remission in response to the administration of genetically engineered cells.

[0600] В некоторых аспектах, тяжесть заболевания измеряется или детектируется перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, после введения иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, но перед введением иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, после введения иммуномодуляторного соединения, но перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или после введения как иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, так и иммуномодуляторного соединения. В контексте множественного введения одной или нескольких стадий сочетанной терапии, тяжесть заболевания в некоторых вариантах осуществления может измеряться до или после введения любой из стадий, доз и/или циклов введения, или в момент времени между введением любой из стадий, доз и/или циклов введения.[0600] In some aspects, the severity of the disease is measured or detected before the administration of immunotherapy, for example, T-cell therapy, after the administration of immunotherapy, for example, T-cell therapy, but before the administration of an immunomodulatory compound, for example, lenalidomide, after the administration of an immunomodulatory compound, but prior to administration of immunotherapy, eg T cell therapy, and/or after administration of both immunotherapy, eg T cell therapy, and an immunomodulatory compound. In the context of multiple administration of one or more stages of combination therapy, the severity of the disease in some embodiments can be measured before or after the administration of any of the stages, doses and/or cycles of administration, or at the time point between the administration of any of the stages, doses and/or cycles of administration .

[0601] В некоторых вариантах осуществления, тяжесть уменьшается на или, по меньшей мере, на, или примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 процентов с помощью предлагаемых способов по сравнению с тяжестью непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения, например, леналидомида, и иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии. В некоторых вариантах осуществления, тяжесть заболевания, размер опухоли, объем опухоли, масса опухоли и/или нагрузка или основная масса опухоли уменьшается после введения иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и иммуномодуляторного соединения на, по меньшей мере, на или примерно на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% или более по сравнению с параметрами непосредственно перед введением иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии, и/или иммуномодуляторного соединения.[0601] In some embodiments, the severity is reduced by or at least by, or about 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, or 100 percent using the proposed methods compared to the severity immediately prior to administration of an immunomodulatory compound, eg lenalidomide, and immunotherapy, eg T-cell therapy. In some embodiments, disease severity, tumor size, tumor volume, tumor mass, and/or tumor burden or bulk mass is reduced after administration of immunotherapy, e.g., T cell therapy, and an immunomodulatory compound by at least, or about 10 , 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% or more compared with the parameters immediately before the introduction of immunotherapy, for example, T-cell therapy, and/or immunomodulatory compounds.

[0602] В некоторых вариантах осуществления, уменьшение тяжести заболевания с помощью способа включает индуцирование морфологически полной ремиссии, например, как оценивается через 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца или более 3 месяцев после введения, например, после начала сочетанной терапии. [0602] In some embodiments, reducing the severity of the disease by the method includes inducing a morphologically complete remission, for example, as assessed at 1 month, 2 months, 3 months, or more than 3 months after administration, for example, after the start of combination therapy.

[0603] В некоторых аспектах, анализ минимального остаточного заболевания, например, как измерено с помощью мультипараметрической проточной цитометрии, является отрицательным, или уровень минимального остаточного заболевания меньше примерно 0,3%, меньше примерно 0,2%, меньше примерно 0,1% или меньше примерно 0,05%.[0603] In some aspects, the analysis of minimal residual disease, for example, as measured by multiparametric flow cytometry, is negative, or the level of minimal residual disease is less than about 0.3%, less than about 0.2%, less than about 0.1%. or less than about 0.05%.

[0604] В некоторых вариантах осуществления, доля бессобытийной выживаемости или общая доля выживаемости субъекта улучшается с помощью этих способов по сравнению с другими способами. Например, в некоторых вариантах осуществления, доля бессобытийной выживаемости или вероятность для субъектов, леченых с помощью способов, через 6 месяцев после осуществления способа сочетанной терапии, предлагаемого в настоящем документе, больше примерно, чем 40%, больше примерно, чем 50%, больше примерно, чем 60%, больше примерно, чем 70%, больше примерно, чем 80%, больше примерно, чем 90%, или больше примерно, чем 95%. В некоторых аспектах, общая доля выживаемости больше примерно, чем 40%, больше примерно, чем 50%, больше примерно, чем 60%, больше примерно, чем 70%, больше примерно, чем 80%, больше примерно, чем 90%, или больше примерно, чем 95%. В некоторых вариантах осуществления, субъект, леченый с помощью этих способов, демонстрирует бессобытийную выживаемость, выживаемость без возобновления заболевания или выживаемость в течение, по меньшей мере, 6 месяцев, или, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 лет. В некоторых вариантах осуществления, время до развития заболевания увеличивается, например, время до развития заболевания больше, чем или примерно больше, чем 6 месяцев или, по меньшей мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 лет.[0604] In some embodiments, the event-free survival rate or overall survival rate of the subject is improved by these methods compared to other methods. For example, in some embodiments, the FFS or probability for subjects treated with the methods 6 months after the combination therapy method provided herein is greater than about 40%, greater than about 50%, greater than about than 60%, greater than about 70%, greater than about 80%, greater than about 90%, or greater than about 95%. In some aspects, the overall survival rate is greater than about 40%, greater than about 50%, greater than about 60%, greater than about 70%, greater than about 80%, greater than about 90%, or more than about 95%. In some embodiments, the subject treated with these methods demonstrates event-free survival, relapse-free survival, or survival for at least 6 months, or at least 1, 2, 3, 4, 5, 6 , 7, 8, 9 or 10 years. In some embodiments, the time to disease development is increased, e.g., the time to disease development is greater than or about greater than 6 months, or at least 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 years.

[0605] В некоторых вариантах осуществления, после лечения с помощью способа, вероятность возобновления заболевания уменьшается по сравнению с другими способами. Например, в некоторых вариантах осуществления, вероятность возобновления заболевания через 6 месяц после применения способа сочетанной терапии, меньше примерно, чем 80%, меньше примерно, чем 70%, меньше примерно, чем 60%, меньше примерно, чем 50%, меньше примерно, чем 40%, меньше примерно, чем 30%, меньше примерно, чем 20% или меньше примерно, чем 10%.[0605] In some embodiments, after treatment with the method, the likelihood of recurrence of the disease is reduced compared to other methods. For example, in some embodiments, the likelihood of disease recurrence 6 months after application of the combination therapy method is less than about 80%, less than about 70%, less than about 60%, less than about 50%, less than about than 40%, less than about 30%, less than about 20%, or less than about 10%.

IV. Промышленные изделия и наборыIV. Industrial products and kits

[0606] Также предлагаются промышленные изделия, содержащие иммуномодуляторное лекарственное средство (иммуномодуляторное соединение), такое как леналидомид, и компоненты для иммунотерапии, например, антитело или его антиген-связывающий фрагмент, или для Т-клеточную терапию, например, генно-инженерные клетки, и/или их композиции. Промышленные изделия могут включать контейнер и этикетку или вставку в упаковку на контейнере, или связанную с ним. Соответствующие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, мешки с растворами для внутривенных вливаний, и тому подобное. Контейнеры могут формироваться из разнообразных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер в некоторых вариантах осуществления содержит композицию, которая содержится сама по себе или в сочетании с другой композицией эффективной для лечения, предотвращения и/или диагностики состояния. В некоторых вариантах осуществления, контейнер имеет стерильный узел доступа. Иллюстративные контейнеры включают мешки с растворами для внутривенных вливаний, флаконы, включая флаконы с пробками, прокалываемыми иглой для инъекций, или бутылки или флаконы для перорально вводимых агентов. Этикетка или вставка в упаковку могут показывать, что композицию используют для лечения заболевания или состояния. [0606] Industrial products are also provided containing an immunomodulatory drug (immunomodulatory compound), such as lenalidomide, and components for immunotherapy, for example, an antibody or antigen-binding fragment, or for T-cell therapy, for example, genetically engineered cells, and/or compositions thereof. The articles of manufacture may include a container and a label or package insert on or associated with the container. Suitable containers include, for example, bottles, vials, syringes, IV bags, and the like. Containers can be formed from a variety of materials such as glass or plastic. The container, in some embodiments, contains a composition that is contained alone or in combination with another composition effective for treating, preventing, and/or diagnosing a condition. In some embodiments, the container has a sterile access node. Exemplary containers include bags of intravenous solutions, vials, including vials with stoppers pierced by an injection needle, or bottles or vials for orally administered agents. A label or package insert may indicate that the composition is being used to treat a disease or condition.

[0607] Промышленное изделие может содержать (a) первый контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция содержит антитело или генно-инженерные клетки, используемые для иммунотерапии, например, Т-клеточной терапии; и (b) второй контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция содержит второй агент, такой как иммуномодуляторное соединение, например, леналидомид. Промышленное изделие может дополнительно включать вставку в упаковку, показывающую, что композиции можно использовать для лечения конкретного состояния. Альтернативно или в дополнение к этому, промышленное изделие может дополнительно содержать другой или этот же контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер. Кроме того, он может содержать и другие материалы, такие как другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и/или шприцы.[0607] An industrial product may contain (a) a first container with a composition contained therein, where the composition contains an antibody or genetically engineered cells used for immunotherapy, for example, T-cell therapy; and (b) a second container with a composition contained therein, wherein the composition contains a second agent such as an immunomodulatory compound, eg lenalidomide. The article of manufacture may further include a package insert indicating that the compositions can be used to treat a particular condition. Alternatively, or in addition, the article of manufacture may further comprise another or the same container containing a pharmaceutically acceptable buffer. In addition, it may contain other materials such as other buffers, diluents, filters, needles and/or syringes.

V. ОпределенияV Definitions

[0608] Если не определено иного, все термины из данной области, обозначения и другие технические и научные термины или терминология, используемая в настоящем документе, как предполагается, имеют такое же значение как обычно понимается специалистами в области, к которой относится предмет изобретения. В некоторых случаях, термины со всем понятными значениями определяются в настоящем документе для ясности и/или для простоты упоминания, и включение таких определений в настоящий документ не должно обязательно рассматриваться как некоторое существенное отличие от того, что, понимается всеми в данной области.[0608] Unless otherwise specified, all art terms, designations, and other technical and scientific terms or terminology used herein are intended to have the same meaning as commonly understood by those skilled in the art to which the subject matter pertains. In some cases, terms with all intelligible meanings are defined herein for clarity and/or ease of reference, and the inclusion of such definitions in this document should not necessarily be construed as some significant difference from what is understood by everyone in the art.

[0609] Как используется в настоящем документе, “субъект” представляет собой млекопитающее, такое как человек или другое животное, как правило, это человек. В некоторых вариантах осуществления, субъект, например, пациент, которому вводятся иммуномодуляторные полипептиды, генно-инженерные клетки или композиции, представляет собой млекопитающее, как правило, примата, такого как человек. В некоторых вариантах осуществления, примат представляет собой обезьян разных видов. Субъект может быть мужского или женского пола и может находиться в любом соответствующем возрасте, включая субъектов детей, подростков, юношу или девушку, взрослых и субъектов преклонного возраста. В некоторых вариантах осуществления, субъект представляет собой млекопитающее отличное от примата, такого как грызун.[0609] As used herein, a "subject" is a mammal, such as a human or other animal, typically a human. In some embodiments, the subject, eg, the patient, to whom the immunomodulatory polypeptides, engineered cells, or compositions are administered, is a mammal, typically a primate, such as a human. In some embodiments, the primate is a different species of monkey. The subject may be male or female, and may be of any appropriate age, including children, adolescents, male or female, adult, and elderly subjects. In some embodiments, the subject is a mammal other than a primate, such as a rodent.

[0610] Как используется в настоящем документе, “лечение” (и его грамматические варианты их такие как “лечить” или “леченый”) относится к полному или частичному облегчению или уменьшению заболевания или состояния или расстройства, или симптома, отрицательного воздействия или результата, или фенотипа, связанного с этим. Желаемые воздействия лечения включают, но, не ограничиваясь этим, предотвращение возникновения или возобновления заболевания, облегчение симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастаз, уменьшение скорости развития заболевания, ослабления или облегчения болезненного состояния и ремиссию или улучшение прогноза. Термины не предполагают полного излечения заболевания или полного устранения любого симптома или воздействия (воздействий) на все симптомы или результаты. [0610] As used herein, “treatment” (and its grammatical variants such as “treat” or “treated”) refers to the total or partial alleviation or reduction of a disease or condition or disorder, or a symptom, adverse effect, or result, or a phenotype associated with it. The desired effects of treatment include, but are not limited to, preventing the occurrence or recurrence of the disease, alleviating symptoms, reducing any direct or indirect pathological consequences of the disease, preventing metastasis, reducing the rate of disease progression, ameliorating or alleviating the disease state, and remission or improving prognosis. The terms do not imply complete cure of a disease or complete elimination of any symptom or effect(s) on all symptoms or results.

[0611] Как используется в настоящем документе, “замедление развития заболевания" означает отсрочку, затруднение, замедление, задержку, стабилизацию, подавление и/или прекращение развития заболевания (такого как рак). Эта задержка может иметь разную продолжительность во времени, в зависимости от истории заболевания и/или от болезни, которая лечится. Как очевидно, существенная или значительная задержка может в результате охватывать предотвращение, при котором заболевание у индивидуума не развивается. Например, может замедляться раковое заболевание в последней стадии, такое как развитие метастаз.[0611] As used herein, “slowing the progress of a disease” means delaying, hindering, slowing, delaying, stabilizing, suppressing, and/or stopping the development of a disease (such as cancer). This delay can be of varying lengths of time, depending on the history of the disease and/or from the disease being treated As is obvious, a significant or significant delay may result in preventing the disease from developing in an individual For example, a late stage cancer such as the development of metastases may be slowed down.

[0612] “Предотвращение”, как используется в настоящем документе, включает осуществление профилактики относительно появления или возобновления заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но у которого заболевание еще не диагностируется. В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые клетки и композиции используют для задержки развития заболевания или для замедления прогрессирования заболевания.[0612] "Prevention", as used herein, includes the implementation of prevention regarding the occurrence or recurrence of a disease in a subject who may be predisposed to the disease, but in which the disease has not yet been diagnosed. In some embodiments, the provided cells and compositions are used to delay the development of a disease or to slow the progression of a disease.

[0613] Как используется в настоящем документе, “подавление” функции или активности предназначено для уменьшения функции или активности, по сравнению с такими же условиями, за исключением условия или параметра, представляющего интерес, или, альтернативно, по сравнению с другим состоянием. Например, клетки, которые подавляют рост опухоли, уменьшают скорость роста опухоли по сравнению со скоростью роста опухоли в отсутствие клеток.[0613] As used herein, "suppression" of a function or activity is intended to reduce function or activity, compared to the same conditions, except for the condition or parameter of interest, or alternatively, compared to another condition. For example, cells that inhibit tumor growth reduce the rate of tumor growth compared to the rate of tumor growth in the absence of cells.

[0614] “Эффективное количество” агента, например, фармацевтического препарата, клеток или композиции, в контексте введения, относится к количеству эффективному при дозах/количествах и в течение периодов времени необходимых для достижения желаемого результата, такого как терапевтический или профилактический результат. [0614] An “effective amount” of an agent, e.g., pharmaceutical, cell, or composition, in the context of administration, refers to an amount effective at doses/amounts and for periods of time necessary to achieve a desired result, such as a therapeutic or prophylactic result.

[0615] “Терапевтически эффективное количество” агента, например, фармацевтического препарата или генно-инженерных клеток, относится к количеству эффективному при дозах и в течение периодов времени необходимых для достижения желаемого терапевтического результата, например, для лечения заболевания, состояния или расстройства, и/или для фармакокинетического или фармакодинамического воздействия лечения. Терапевтически эффективное количество может изменяться согласно таким факторам, как болезненное состояние, возраст, пол и масса тела субъекта, и вводимые иммуномодуляторные полипептиды или генно-инженерные клетки. В некоторых вариантах осуществления, предлагаемые способы включают введение иммуномодуляторных полипептидов, генно-инженерных клеток, или композиций при эффективных количествах, например, при терапевтически эффективных количествах.[0615] A “therapeutically effective amount” of an agent, such as a pharmaceutical drug or genetically engineered cells, refers to an amount effective at doses and for periods of time necessary to achieve a desired therapeutic result, for example, to treat a disease, condition, or disorder, and/ or for the pharmacokinetic or pharmacodynamic effects of the treatment. The therapeutically effective amount may vary according to such factors as the disease state, age, sex and body weight of the subject, and the immunomodulatory polypeptides or engineered cells administered. In some embodiments, the methods provided include administering the immunomodulatory polypeptides, engineered cells, or compositions at effective amounts, eg, at therapeutically effective amounts.

[0616] “Профилактически эффективное количество” относится к количеству эффективному при дозах и в течение периодов времени необходимых для достижения желаемого профилактического результата. Как правило, но, необязательно, поскольку профилактическую дозу используют для субъектов до заболевания или на его ранней стадии, профилактически эффективное количество будет меньше терапевтически эффективного количества.[0616] A “prophylactically effective amount” refers to an amount effective at dosages and for periods of time necessary to achieve the desired prophylactic result. Typically, but not necessarily, as long as a prophylactic dose is used in subjects before or at an early stage of disease, the prophylactically effective amount will be less than the therapeutically effective amount.

[0617] Термин “фармацевтический препарат” относится к препарату, который находится в такой форме чтобы сделать возможным эффективную биологическую активность активного ингредиента, содержащегося в нем, и который не содержит дополнительных компонентов, которые являются неприемлемо токсичными для субъекта, которому вводился бы препарат. [0617] The term “pharmaceutical preparation” refers to a preparation that is in such a form as to allow effective biological activity of the active ingredient contained therein, and which does not contain additional components that are unacceptably toxic to the subject to whom the preparation would be administered.

[0618] “Фармацевтически приемлемый носитель” относится к ингредиенту в фармацевтическом препарате иному, чем активный ингредиент, который нетоксичен для субъекта. Фармацевтически приемлемый носитель включает, но, не ограничиваясь этим, буфер, наполнитель, стабилизатор или консервант. [0618] A “pharmaceutically acceptable carrier” refers to an ingredient in a pharmaceutical preparation, other than the active ingredient, that is non-toxic to a subject. A pharmaceutically acceptable carrier includes, but is not limited to, a buffer, excipient, stabilizer, or preservative.

[0619] Как используется в настоящем документе, упоминание того, что положения нуклеотидов или аминокислот "соответствуют" положениям нуклеотидов или аминокислот в описанной последовательности, как приведено в Списке последовательностей, относится к положениям нуклеотидов или аминокислот, идентифицируемым при выравнивании с описанной последовательностью до доведения до максимума идентичности с использованием стандартного алгоритма выравнивания, такого как алгоритм GAP. При выравнивании последовательностей, можно идентифицировать соответствующие остатки, например, используя консервативные и идентичные аминокислотные остатки в качестве критериев. Как правило, для идентификации соответствующих положений, последовательности аминокислот выравниваются таким образом, чтобы получить наивысший порядок соответствия (смотри, например: Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New.Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073).[0619] As used herein, reference to nucleotide or amino acid positions "corresponding" to nucleotide or amino acid positions in a described sequence, as given in the Sequence Listing, refers to the nucleotide or amino acid positions identified when aligned with the described sequence prior to being adjusted to maximum identity using a standard alignment algorithm such as the GAP algorithm. When aligning sequences, the corresponding residues can be identified, for example, using conserved and identical amino acid residues as criteria. As a general rule, to identify relevant positions, amino acid sequences are aligned to obtain the highest order of correspondence (see, for example: Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects , Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993;Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New.Jersey, 1994;Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48:1073).

[0620] Термин “вектор”, как используется в настоящем документе, относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной размножать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Термин включает вектор как самореплицирующуюся структуру нуклеиновых кислот, а также как вектор, введенный в геном клетки-хозяина, в которую его вводят. Определенные векторы способны направлять экспрессирование нуклеиновых кислот, с которыми они функционально связаны. Такие векторы упоминаются в настоящем документе как “векторы экспрессии”. Среди векторов имеются вирусные векторы, такие как ретровирусные, например, гаммаретровирусные и лентивирусные векторы.[0620] The term “vector”, as used herein, refers to a nucleic acid molecule capable of propagating another nucleic acid to which it is linked. The term includes a vector as a self-replicating nucleic acid structure, as well as a vector introduced into the genome of the host cell into which it is introduced. Certain vectors are capable of directing the expression of the nucleic acids to which they are operably linked. Such vectors are referred to herein as "expression vectors". Among the vectors are viral vectors such as retroviral, eg gammaretroviral and lentiviral vectors.

[0621] Термины “клетка-хозяин”, “линия клеток-хозяев” и “культура клеток-хозяев” используются взаимозаменяемо и упоминают клетки, в которые введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают “трансформанты” и “трансформированные клетки”, которые включают первичную трансформированную клетку и потомство, полученное из нее, вне зависимости от количества пассажей. Потомство может не быть полностью идентичным по содержанию нуклеиновых кислот с родительской клеткой, но может содержать мутации. Мутантное потомство, которое имеет такую же функцию или биологическую активность, как после скрининга или селекции для исходной трансформированной клетки, включается в настоящий документ. [0621] The terms “host cell”, “host cell line”, and “host cell culture” are used interchangeably and refer to cells into which exogenous nucleic acid has been introduced, including the progeny of such cells. Host cells include "transformants" and "transformed cells", which include the primary transformed cell and the progeny derived from it, regardless of the number of passages. The offspring may not be completely identical in nucleic acid content to the parent cell, but may contain mutations. Mutant progeny that have the same function or biological activity as after screening or selection for the original transformed cell are included herein.

[0622] Как используется в настоящем документе, утверждение, что клетка или популяция клеток является “положительной” относительно конкретного маркера относится к детектируемому присутствию на клетке или в ней конкретного маркера, как правило, поверхностного маркера. При упоминании поверхностного маркера, термин относится к присутствию поверхностного экспрессирования, как детектируется с помощью проточной цитометрии, например, посредством окрашивания антителом, которое специфично связывается с маркером, и детектирования указанного антитела, где окрашивание может детектироваться с помощью проточной цитометрии на уровне существенно выше окрашивания, детектируемого при осуществлении такой же процедуры с изотипически сходным контролем при идентичных в остальном условиях и/или на уровне, по существу, сходном с уровнем для клетки известной как положительная относительно маркера, и/или на уровне существенно выше, чем для клетки известной как отрицательная относительно маркера. [0622] As used herein, a statement that a cell or population of cells is "positive" for a particular marker refers to the detectable presence on or within a cell of a particular marker, typically a surface marker. When referring to a surface marker, the term refers to the presence of surface expression as detected by flow cytometry, for example, by staining with an antibody that specifically binds to the marker and detecting said antibody, where the staining can be detected by flow cytometry at a level substantially above the staining, detectable by the same procedure with an isotype-like control under otherwise identical conditions and/or at a level substantially similar to a cell known to be positive for the marker and/or at a level substantially higher than for a cell known to be negative for the marker. marker.

[0623] Как используется в настоящем документе, утверждение, что клетка или популяция клеток является “отрицательной” относительно конкретного маркера, относится к отсутствию существенного детектируемого присутствия на клетке или в ней конкретного маркера, как правило, поверхностного маркера. При упоминании поверхностного маркера, термин относится к отсутствию поверхностного экспрессирования, как детектируется с помощью проточной цитометрии, например, посредством окрашивания антителом, которое специфично связывается с маркером, и детектирования указанного антитела, где окрашивание не детектируется с помощью проточной цитометрии на уроне существенно выше окрашивания, детектируемого при осуществлении такой же процедуры с помощью изотипически сходного контроля при идентичных в остальном условиях, и/или детектируется на уровне существенно ниже, чем для клетки, известной как положительная относительно маркера, и/или на уровне по существу сходном по сравнению с клеткой, известной как отрицательная относительно маркера. [0623] As used herein, a statement that a cell or population of cells is “negative” for a particular marker refers to the absence of a significant detectable presence on or in the cell of a particular marker, typically a surface marker. When referring to a surface marker, the term refers to the absence of surface expression as detected by flow cytometry, for example, by staining with an antibody that specifically binds to the marker and detecting said antibody, where the staining is not detectable by flow cytometry at a level significantly higher than staining. detectable by the same procedure using an isotype-like control under otherwise identical conditions, and/or detectable at a level substantially lower than for a cell known to be positive for the marker and/or at a level substantially similar compared to a cell known to be as negative relative to the marker.

[0624] Замещение аминокислот может включать замену одной аминокислоты в полипептиде другой аминокислотой. Замещение может представлять собой консервативное замещение аминокислоты или неконсервативное замещение аминокислоты. Замещение аминокислот может вводиться в связывающую молекулу, например, антитело, представляющее интерес, и в продукты, просматриваемые относительно желаемой активности, например, сохраняемого/улучшенного связывания антигена, пониженной иммуногенности или улучшенному ADCC или CDC.[0624] Amino acid substitution may include replacing one amino acid in a polypeptide with another amino acid. The substitution may be a conservative amino acid substitution or a non-conservative amino acid substitution. Amino acid substitution can be introduced into the binding molecule, eg, the antibody of interest, and into products viewed for the desired activity, eg, preserved/improved antigen binding, reduced immunogenicity, or improved ADCC or CDC.

[0625] Аминокислоты, в целом, могут группироваться согласно следующим общим свойствам боковых цепей:[0625] Amino acids can generally be grouped according to the following general side chain properties:

(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;(1) hydrophobic: norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) нейтрально гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;(2) neutral hydrophilic: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) кислотные: Asp, Glu;(3) acidic: Asp, Glu;

(4) основные: His, Lys, Arg;(4) main: His, Lys, Arg;

(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;(5) residues that affect chain orientation: Gly, Pro;

(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.(6) aromatic: Trp, Tyr, Phe.

[0626] В некоторых вариантах осуществления, консервативные замещения могут включать обмен элемента одного из этих классов на другой элемент этого же класса. В некоторых вариантах осуществления, неконсервативные замещения аминокислот могут включать замену элемента одного из этих классов на другой класс.[0626] In some embodiments, conservative substitutions may include exchanging an element of one of these classes for another element of the same class. In some embodiments, non-conservative amino acid substitutions may include replacing an element from one of these classes with another class.

[0627] Как используется в настоящем документе, “процент (%) идентичности последовательности аминокислот” и “процент идентичности”, когда используется относительно последовательности аминокислот (эталонной последовательности полипептидов) определяется как процент остатков аминокислот в последовательности кандидате (например, в антителе субъекта или в его фрагменте), которые идентичны остаткам аминокислот в эталонной последовательности полипептидов, после выравнивания последовательностей и введения разрывов, при необходимости, для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и не рассматривая любые консервативные замещения как часть идентичности последовательностей. Выравнивание для целей определения процента идентичности последовательностей аминокислот может быть достигнуто различными путями, например, используя публично доступное компьютерное программное обеспечение, такое как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Соответствующие параметры для выравнивания последовательностей включая любые алгоритмы необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине последовательностей, которые сравниваются, можно определить.[0627] As used herein, "percent (%) amino acid sequence identity" and "percent identity" when used relative to an amino acid sequence (reference polypeptide sequence) is defined as the percentage of amino acid residues in a candidate sequence (e.g., in a subject's antibody or in its fragment) that are identical to amino acid residues in the reference polypeptide sequence, after aligning the sequences and introducing gaps, if necessary, to achieve the maximum percentage of sequence identity, and not considering any conservative substitutions as part of the sequence identity. Alignment for purposes of determining percent amino acid sequence identity can be achieved in various ways, for example using publicly available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) software. Appropriate parameters for sequence alignment including any algorithms necessary to achieve maximum alignment over the entire length of the sequences being compared can be determined.

[0628] Как используется в настоящем документе, формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если контекст четко не диктует иного. Например, упоминание предмета в единственном числе означает “по меньшей мере, один” или “один или несколько”. Понятно, что аспекты и варианты, описанные в настоящем документе, включают аспекты и варианты “содержащий” и/или “состоящий по существу из”.[0628] As used herein, singular forms include plural references unless the context clearly dictates otherwise. For example, referring to an item in the singular means "at least one" or "one or more". It is understood that aspects and variations described herein include aspects and variations of "comprising" and/or "consisting essentially of".

[0629] В настоящем описании, различные аспекты заявляемого предмета изобретения представлены в формате диапазонов. Необходимо понять, что описание в формате диапазонов осуществляется только для удобства и краткости и не должно рассматриваться как негибкое ограничение рамок заявляемого предмета изобретения. Соответственно, описание диапазона должно рассматриваться как содержащее конкретно описанные все возможные субдиапазоны, а также индивидуальные численные значения в этих диапазонах. Например, когда приводится диапазон значений, понимается, что каждое промежуточное значение между верхним и нижним пределом этого диапазона и любое другое сформулированное или промежуточное значение в этом сформулированном диапазоне охватывается заявляемым предметом изобретения. Верхние и нижние пределы этих меньших диапазонов могут независимо включаться в меньшие диапазоны, и они также охватываются заявляемым предметом изобретения, являясь субъектами любого конкретно исключаемого предела в сформулированном диапазоне. Когда сформулированный диапазон включает один или оба предела, диапазоны, исключающие один или оба этих включенных предела, также включаются в заявляемый предмет изобретения. Это применимо независимо от ширины диапазона.[0629] In the present description, various aspects of the claimed subject matter are presented in range format. It should be understood that the description in range format is for convenience and brevity only and should not be construed as an inflexible limitation on the scope of the claimed subject matter. Accordingly, a description of a range should be considered to include all possible subranges specifically described, as well as individual numerical values within those ranges. For example, when a range of values is given, it is understood that every intermediate value between the upper and lower limit of this range and any other stated or intermediate value in this stated range is covered by the claimed subject matter. The upper and lower limits of these smaller ranges may independently be included in the smaller ranges, and they are also covered by the claimed subject matter, being subject to any specifically excluded limit in the stated range. When a stated range includes one or both of the limits, ranges excluding one or both of these included limits are also included in the claimed subject matter. This applies regardless of the range width.

[0630] Термин “примерно” как используется в настоящем документе, относится к обычному диапазону ошибок для соответствующего значения, хорошо известному в данной области техники. Упоминание “примерного” значения или параметра в настоящем документе включает (и описывает) варианты осуществления, которые направлены на это значение или параметр сам по себе. Например, описание, упоминающее “примерно X” включает описание “X”.[0630] The term "about" as used herein refers to the typical range of errors for the corresponding value, well known in the art. Reference to an “exemplary” value or parameter herein includes (and describes) embodiments that address that value or parameter per se. For example, a description referring to "about X" includes a description of "X".

[0631] Как используется в настоящем документе, композиция относится к любой смеси двух или более продуктов, веществ или соединений, включая клетки. Она может представлять собой раствор, суспензию, жидкость, порошок, пасту, водную, неводную или любое их сочетание.[0631] As used herein, a composition refers to any mixture of two or more products, substances, or compounds, including cells. It may be a solution, suspension, liquid, powder, paste, aqueous, non-aqueous, or any combination thereof.

VI. Иллюстративные варианты осуществленияVI. Illustrative Embodiments

[0632] Среди предлагаемых варианты осуществления имеются:[0632] Among the proposed options for implementation are:

1. Способ лечения, способ включает:1. The method of treatment, the method includes:

(a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние; и(a) administering T cell therapy to a subject having a disease or condition; and

(b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения.(b) administering to the subject an immunomodulatory compound.

2. Способ лечения, способ включает введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения Т-клеточной терапии, субъекту вводят, и/или он подвергается лечению с его помощью, иммуномодуляторное соединение, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов.2. The method of treatment, the method includes the introduction of T-cell therapy to a subject having a disease or condition, where at the time of the beginning of the introduction of T-cell therapy, the subject is administered, and / or he is being treated with it, an immunomodulatory compound, and / or a blood sample or a biopsy of the subject contains detectable levels of T-lymphocytes from therapy with genetically engineered T-lymphocytes.

3. Способ лечения, способ включает введение иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, где в момент начала введения иммуномодуляторного соединения, субъекту уже ранее вводилась Т-клеточная терапия для лечения заболевания или состояния, и/или образец крови или биопсия субъекта содержит детектируемые уровни Т-лимфоцитов от терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов.3. The method of treatment, the method includes administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition, where at the time the administration of the immunomodulatory compound is started, the subject has previously been administered T-cell therapy for the treatment of the disease or condition, and/or a blood sample or a biopsy of the subject contains detectable levels T-lymphocytes from therapy with genetically engineered T-lymphocytes.

4. Способ по любому из вариантов осуществления 1-4 и 28-34, где способ тем самым предотвращает, уменьшает или облегчает один или несколько симптомов или результатов заболеваний или состояний.4. The method of any one of embodiments 1-4 and 28-34, wherein the method thereby prevents, reduces, or alleviates one or more symptoms or outcomes of diseases or conditions.

5. Способ по любому из вариантов осуществления 1-4 и 28-34, где:5. The method according to any of embodiments 1-4 and 28-34, where:

(a) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или его симптома или результата; и/или(a) the amount of the immunomodulatory compound administered is insufficient, as a single agent and/or without the administration of T cell therapy, to alleviate, reduce or prevent the disease or condition or symptom thereof, or result; and/or

(b) количество вводимого иммуномодуляторного соединения является недостаточным, в качестве отдельного агента и/или без введения Т-клеточной терапии, для облегчения, уменьшения или предотвращения заболевания или состояния у субъекта или его симптома или результата; и/или(b) the amount of the immunomodulatory compound administered is insufficient, as a single agent and/or without the administration of T cell therapy, to alleviate, reduce or prevent the disease or condition in the subject or its symptom or result; and/or

(c) способ тем самым уменьшает или облегчает симптом или результат или тяжесть заболевания или состояния до такой степени, которая больше сочетания (i) степени уменьшения или облегчения, осуществляемой при введении только одного иммуномодуляторного агента, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние, и (ii) степени уменьшения или облегчения посредством введения одной только Т-клеточной терапии, необязательно, среднего значения для популяции субъектов, имеющих заболевание или состояние; и/или(c) the method thereby reduces or alleviates the symptom or outcome or severity of the disease or condition to an extent that is greater than the combination of (i) the amount of reduction or alleviation achieved by administration of the immunomodulatory agent alone, optionally the average of the population of subjects having the disease or a condition, and (ii) the degree of reduction or amelioration by the administration of T cell therapy alone, optionally, the average for the population of subjects having the disease or condition; and/or

(d) количество вводимого иммуномодуляторного соединения в способе, или вводимого одной или несколькими дозами, представляет собой поддерживающую дозу соединения или соответствует дозе соединения, вводимой субъектам, демонстрирующим реакцию, необязательно, полную реакцию, после введения соединения для лечения.(d) the amount of the immunomodulatory compound administered in the method, or administered in one or more doses, is the maintenance dose of the compound or corresponds to the dose of the compound administered to subjects showing a response, optionally a complete response, following administration of the compound for treatment.

6. Способ по любому из вариантов осуществления 1-5 и 28-34, где заболевание или состояние не поддается лечению или является резистентным к иммуномодуляторному соединению и/или становится не поддающимся лечению или резистентным к нему после лечения иммуномодуляторным соединением; и/или субъект или заболевание или состояние, как определено, имеет мутацию или фактор, вызывающий резистентность заболевания или состояния к лечению иммуномодуляторным соединением.6. The method according to any one of embodiments 1-5 and 28-34, wherein the disease or condition is untreatable or resistant to the immunomodulatory compound and/or becomes untreatable or resistant thereto after treatment with the immunomodulatory compound; and/or the subject or disease or condition is determined to have a mutation or factor that causes the disease or condition to be resistant to treatment with an immunomodulatory compound.

7. Способ по любому из вариантов осуществления 1-6 и 28-34, где иммуномодуляторное соединение выбирается из группы, состоящей из: иммуномодуляторных лекарственных средств (IMiD), аналогов талидомида, производных талидомида, соединений, которые взаимодействуют и/или связываются с цереблоном (CRBN) и/или с одним или несколькими элементами комплекса CRBN и E3 убиквитинлигазы, ингибиторов Ikaros (IKZF1), ингибиторов Aiolos (IKZF3), соединений, которые усиливают или облегчают убиквитинирование и/или деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3).7. The method of any one of embodiments 1-6 and 28-34, wherein the immunomodulatory compound is selected from the group consisting of: immunomodulatory drugs (IMiDs), thalidomide analogs, thalidomide derivatives, compounds that interact and/or bind to cereblon ( CRBN) and/or with one or more elements of the CRBN and E3 complex of ubiquitin ligase, Ikaros (IKZF1) inhibitors, Aiolos (IKZF3) inhibitors, compounds that enhance or facilitate ubiquitination and/or degradation of Ikaros (IKZF1) and/or Aiolos (IKZF3) .

8. Способ по любому из вариантов осуществления 1-7 и 28-34, где введение иммуномодуляторного соединения включает:8. The method of any one of embodiments 1-7 and 28-34, wherein administering the immunomodulatory compound comprises:

(i) по меньшей мере, один цикл больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения, где цикл включает введение соединения, необязательно, ежедневно или, по меньшей мере, ежедневно, в течение до 21 дня, последовательно, и/или где последнее введение соединения в цикле соответствует 21 дню или меньше после первого введения соединения в цикле; и/или (i) at least one cycle greater than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound, where the cycle includes administration of the compound, optionally daily, or at least daily, for up to 21 days, consecutively, and/or where the last administration of the compound in the cycle corresponds to 21 days or less after the first administration of the compound in the cycle; and/or

(ii) по меньшей мере, два цикла, каждые, по меньшей мере, два цикла включают введение соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (ii) at least two cycles, every at least two cycles, comprising administering the compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or

(iii) введение, необязательно, ежедневное или, по меньшей мере, ежедневное, в течение не более 14 последовательных дней.(iii) administration, optionally daily, or at least daily, for no more than 14 consecutive days.

9. Способ по любому из вариантов осуществления 1-8 и 28-34, где:9. The method according to any of embodiments 1-8 and 28-34, where:

начало введения иммуномодуляторного соединения, или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле, и начало введения Т-клеточной терапии происходит в один и тот же день или в последовательные дни, необязательно, одновременно; и/или the start of administration of the immunomodulatory compound, or the start of administration of the compound in at least one cycle, and the start of administration of the T cell therapy occur on the same day or on consecutive days, optionally simultaneously; and/or

по меньшей мере, одна доза иммуномодуляторного соединения вводится в один и тот же день, в пределах одного или двух дней, до или после введения дозы Т-клеточной терапии. at least one dose of the immunomodulatory compound is administered on the same day, within one or two days, before or after a dose of T cell therapy.

10. Способ по любому из вариантов осуществления 1 и 4-8, и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения, или начало введения соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит до начала введения Т-клеточной терапии.10. The method of any one of embodiments 1 and 4-8, and 28-34, wherein the initiation of administration of the immunomodulatory compound, or the initiation of administration of the compound, in at least one cycle occurs prior to the initiation of administration of the T cell therapy.

11. Способ лечения, способ включает введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, где субъекту до начала Т-клеточной терапии вводят иммуномодуляторное соединение, где цикл включает:11. The method of treatment, the method includes the introduction of T-cell therapy to a subject having a disease or condition, where the subject before the start of T-cell therapy is administered an immunomodulatory compound, where the cycle includes:

(i) введение в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или (i) administration for up to 21 days, consecutively, where the cycle includes more than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound; and/or

(ii) введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или (ii) administration for multiple consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or

(iii) введение в течение не более 14 последовательных дней. (iii) administration for no more than 14 consecutive days.

12. Способ по любому из вариантов осуществления 1, 2 и 4-11, и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 14 дней до начала Т-клеточной терапии.12. The method of any one of embodiments 1, 2 and 4-11, and 28-34, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound occurs within 14 days prior to the start of T cell therapy.

13. Способ по любому из вариантов осуществления 1, 2 и 4-12, и 28-34 где введение иммуномодуляторного соединения начинается до введения Т-клеточной терапии, начинаясь: 13. The method of any one of embodiments 1, 2 and 4-12, and 28-34 wherein administration of the immunomodulatory compound begins prior to administration of T cell therapy, beginning with:

(i) через неделю или в пределах одной недели до или после отбора у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны обрабатываться и/или подвергаться генной инженерии для получения терапии, необязательно, где образец представляет собой образец от афереза; и/или(i) one week or within one week before or after collection from the subject of a sample containing T-lymphocytes to be processed and/or genetically engineered to receive therapy, optionally, where the sample is an apheresis sample; and/or

(ii) в пределах 14 дней до начала введения Т-клеточной терапии.(ii) within 14 days prior to initiation of T cell therapy.

14. Способ по любому из вариантов осуществления 1- 13 и 28-34, где Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные клетки для экспрессирования рекомбинантного рецептора.14. The method of any one of embodiments 1-13 and 28-34, wherein the T cell therapy comprises engineered cells to express the recombinant receptor.

15. Способ по варианту осуществления 14, где генная инженерия включает одну или несколько стадий способа приготовления ex vivo, необязательно выбранных из:15. The method of embodiment 14, wherein the genetic engineering comprises one or more ex vivo preparation method steps, optionally selected from:

(1) выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза;(1) isolating cells from a biological sample using leukapheresis or apheresis;

(2) выбора или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов; (2) selecting or enriching cells using immunoaffinity methods;

(3) введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки; (3) introducing a recombinant nucleic acid, optionally a viral vector, into the cells;

(4) инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования;(4) incubating cells, optionally genetically engineered cells, in the presence of one or more stimulation conditions;

(5) приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или (5) preparing cells in the presence of a cryoprotectant; and/or

(6) приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.(6) preparing cells for administration to a subject, optionally in the presence of a pharmaceutically acceptable excipient.

(6) приготовление клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.(6) preparing cells for administration to a subject, optionally in the presence of a pharmaceutically acceptable excipient.

16. Способ по варианту осуществления 14 или 15, дополнительно включающий осуществление способа приготовления и/или дополнительно генную инженерию Т-лимфоцитов для экспрессирования рекомбинантного рецептора, тем самым, генерируя Т-клеточную терапию.16. The method of embodiment 14 or 15, further comprising performing a method of preparing and/or further genetically engineering T lymphocytes to express the recombinant receptor, thereby generating a T cell therapy.

17. Способ по варианту осуществления 16, дополнительно включающий приведение в контакт клеток с иммуномодуляторным соединением в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo.17. The method of embodiment 16 further comprising contacting the cells with the immunomodulatory compound during one or more steps of the ex vivo preparation method.

18. Способ по любому из вариантов осуществления 1-16 и 28-34, где Т-клеточная терапия содержит генно-инженерные Т-лимфоциты, полученные с помощью способа приготовления, включающего инкубирование клеток ex vivo в присутствии иммуномодуляторного соединения.18. The method of any one of embodiments 1-16 and 28-34, wherein the T cell therapy comprises engineered T lymphocytes obtained by a preparation method comprising ex vivo incubation of the cells in the presence of an immunomodulatory compound.

19. Способ по варианту осуществления 17 или варианта осуществления 18, где инкубирование клеток в присутствии одного или нескольких условий стимулирования осуществляют в присутствии иммуномодуляторного соединения.19. The method of Embodiment 17 or Embodiment 18, wherein the incubation of the cells in the presence of one or more stimulus conditions is carried out in the presence of an immunomodulatory compound.

20. Способ по любому из вариантов осуществления 1, 2 и 4-19, и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения происходит в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии. 20. The method of any one of embodiments 1, 2 and 4-19, and 28-34, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound occurs within 10 days, 7 days, 4 days, 3 days, or 2 days prior to the start of administration of T cell therapy .

21. Способ по варианту осуществления 1, где начало введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, в одном цикле происходит после начала введения Т-клеточной терапии.21. The method of Embodiment 1, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound in at least one cycle occurs after the start of administration of T cell therapy.

22. Способ лечения, способ включает введение иммуномодуляторного соединения субъекту, субъект имеет заболевание или состояние и ему вводят Т-клеточную терапию, где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем:22. A method of treatment, the method includes administering an immunomodulatory compound to a subject, the subject has a disease or condition and is administered T-cell therapy, where the immunomodulatory compound is administered in a cycle including:

(i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или(i) administration of the immunomodulatory compound for up to 21 days, consecutively, where the cycle includes more than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound; and/or

(ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или(ii) administering the immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or

(iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 дней, последовательно.(iii) administering the immunomodulatory compound for no more than 14 days, consecutively.

23. Способ по любому из вариантов осуществления 1-22, где Т-клеточная терапия представляет собой такую терапию, при которой пиковое количество популяции клеток от терапии, которые необязательно представляют собой клетки CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии и/или необязательно представляют собой Т-лимфоциты CAR+, в крови представляет собой ((a) среднее значение для множества субъектов, леченых с помощью Т-клеточной терапии без введения иммуномодуляторного соединения, или (b) субъектам после введения Т-клеточной терапии) меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.23. The method of any one of embodiments 1-22, wherein the T cell therapy is such that the peak population of cells from the therapy, which are optionally CD3+ or CD8+ cells from the T cell therapy and/or optionally are T-lymphocytes CAR+, in blood is ((a) the mean of a plurality of subjects treated with T-cell therapy without administration of an immunomodulatory compound, or (b) subjects after administration of T-cell therapy) less than 10 cells per µl, less 5 cells per µl or less than 1 cell per µl.

24. Способ по любому из вариантов осуществления 1-23, где Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, необязательно, CAR.24. The method of any one of embodiments 1-23, wherein the T cell therapy comprises cells expressing a recombinant receptor, optionally a CAR.

25. Способ по варианту осуществления 24, где рекомбинантный рецептор содержит антиген-связывающий домен специфичный к B-клеточному антигену созревания (BCMA). 25. The method of embodiment 24, wherein the recombinant receptor comprises an antigen-binding domain specific for B-cell maturation antigen (BCMA).

26. Способ по варианту осуществления 1, где начало введения иммуномодуляторного соединения по меньшей мере, в одном цикле осуществляют после начала введения Т-клеточной терапии.26. The method of embodiment 1, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound in at least one cycle is after the start of administration of T cell therapy.

27. Способ по любому из вариантов осуществления 1, и 3-26 и 28-34, где начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется, по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии, и/или осуществляют через 2-28 дней или 7-21 дней после начала введения или после последней дозы Т-клеточной терапии.27. The method according to any one of embodiments 1 and 3-26 and 28-34, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound is at least 2 days later, at least 1 week later, at least 2 weeks later, at least 3 weeks or at least 4 weeks after the start of administration or after the last dose of T-cell therapy, and / or carried out after 2-28 days or 7-21 days after the start of administration or after the last dose of T -cell therapy.

28. Способ лечения, способ включает:28. The method of treatment, the method includes:

(a) введение Т-клеточной терапии субъекту, имеющему заболевание или состояние, и(a) administering T cell therapy to a subject having a disease or condition, and

(b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени:(b) administering to the subject an immunomodulatory compound, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound corresponds to the time point:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 или через 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или(1) at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after starting T cell therapy , and/or it is carried out after 2-28 or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.(2) at or after the time point, optionally immediately thereafter or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

29. Способ лечения, способ включает введение иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где начало введения иммуномодуляторного соединения соответствует моменту времени:29. The method of treatment, the method includes administering an immunomodulatory compound to a subject who, prior to the start of the administration of the immunomodulatory compound, is administered T-cell therapy for the treatment of a disease or condition, where the start of the administration of the immunomodulatory compound corresponds to the time point:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или(1) at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after initiation of T cell therapy , and/or it is carried out after 2-28 days or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.(2) at or after the time point, optionally immediately thereafter or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

30. Способ по любому из вариантов осуществления 26-29, где начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется через промежуток времени, который больше примерно, чем 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии.30. The method of any one of embodiments 26-29, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound is after a period of time that is greater than about 14 days, 15 days, 16 days, 17 days, 18 days, 19 days, 20 days, 21 days, 24 days, or 28 days after the start of T-cell therapy.

31. Способ по любому из вариантов осуществления 26-30, включающий, до начала введения иммуномодуляторного соединения, выбор субъекта, у которого: (i) в крови детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.31. The method of any one of embodiments 26-30, comprising, prior to initiating administration of the immunomodulatory compound, selecting a subject in which: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

32. Способ лечения, включающий введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту, которому до начала введения иммуномодуляторного соединения вводят Т-клеточную терапию для лечения заболевания или состояния, где субъект является таким, у которого в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:32. A method of treatment comprising administering a therapeutically effective amount of an immunomodulatory compound to a subject who, prior to initiation of administration of the immunomodulatory compound, is administered T cell therapy for the treatment of a disease or condition, wherein the subject is one that on or about day 12-15, optionally , on or about day 14 after initiation of T-cell therapy for the treatment of a disease or condition:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy at the same time in a plurality of subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.(ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

33. Способ лечения, включающий:33. Method of treatment, including:

(a) выбор субъекта, который соответствует или примерно соответствует дню 12-15, необязательно, дню 14 или примерно этому дню, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:(a) selecting a subject that corresponds to or approximately corresponds to day 12-15, optionally, day 14 or so, after the start of the administration of T cell therapy for the treatment of the disease or condition:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy at the same time in a plurality of subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл; и(ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl; and

(b) введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения субъекту.(b) administering a therapeutically effective amount of the immunomodulatory compound to the subject.

34. Способ по любому из вариантов осуществления 33, где иммуномодуляторное соединение вводится ежедневно, необязательно, один раз в день.34. The method of any one of embodiments 33 wherein the immunomodulatory compound is administered daily, optionally once daily.

35. Способ по любому из вариантов осуществления 1-34, где иммуномодуляторное соединение вводится в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, или более или примерно более 28 последовательных дней.35. The method according to any of embodiments 1-34, wherein the immunomodulatory compound is administered for more than or about more than 7 consecutive days, more than or about more than 14 consecutive days, more than or about more than 21 consecutive days, or more than or more than about 28 consecutive days.

36. Способ по любому из вариантов осуществления 1-35, где иммуномодуляторное соединение вводится в цикле, включающем введение ежедневно в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится.36. The method of any one of embodiments 1-35, wherein the immunomodulatory compound is administered in a cycle comprising administration daily for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered.

37. Способ по варианту осуществления 36, где период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней.37. The method of embodiment 36, wherein the rest period during which no immunomodulatory compound is administered is greater than 7 consecutive days, greater than 14 consecutive days, greater than 21 days, or greater than 28 days.

38. Способ по любому из вариантов осуществления 1-15, 11-16, 25 и 26, где цикл введения иммуномодуляторного соединения повторяют, по меньшей мере, один раз.38. The method of any one of embodiments 1-15, 11-16, 25 and 26, wherein the cycle of administration of the immunomodulatory compound is repeated at least once.

39. Способ по любому из вариантов осуществления 1-39, где иммуномодуляторное соединение вводится в течение, по меньшей мере, 2 циклов, по меньшей мере, 3 циклов, по меньшей мере, 4 циклов, по меньшей мере, 5 циклов, по меньшей мере, 6 циклов, по меньшей мере, 7 циклов, по меньшей мере, 8 циклов, по меньшей мере, 9 циклов, по меньшей мере, 10 циклов, по меньшей мере, 11 циклов или, по меньшей мере, 12 циклов.39. The method of any one of embodiments 1-39, wherein the immunomodulatory compound is administered for at least 2 cycles, at least 3 cycles, at least 4 cycles, at least 5 cycles, at least , 6 cycles, at least 7 cycles, at least 8 cycles, at least 9 cycles, at least 10 cycles, at least 11 cycles, or at least 12 cycles.

40. Способ по любому из вариантов осуществления 1-39, где введение иммуномодуляторного соединения продолжается, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов и до тех пор, пока:40. The method of any one of embodiments 1-39, wherein the administration of the immunomodulatory compound continues at least from the time after the start of administration of the T-lymphocytes until:

количество клеток от введенной Т-клеточной терапии, или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии;the number of cells from, or derived from, the administered T cell therapy detectable in the blood of the subject will not increase compared to the number of cells in the subject at the time immediately prior to the administration of the immunomodulatory compound or compared to the time prior to the administration of the T cell therapy;

количество клеток от Т-клеточной терапии, или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов; the number of cells from, or derived from, T-cell therapy detectable in the blood will not be within 2.0 times (more or less) the peak or maximum number observed in the subject's blood after initiation of T-lymphocyte administration;

количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/илиthe number of cells from T-cell therapy detected in the subject's blood will not become more than or about more than 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, or 60% of the total number of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; and/or

субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/илиthe subject will not show a reduction in tumor weight compared to tumor weight at the time immediately prior to administration of the T cell therapy or at the time immediately prior to administration of the immunomodulatory compound; and/or

субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.the subject will not demonstrate complete or clinical remission.

41. Способ по любому из вариантов осуществления 1-40, где иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует ростовой фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).41. The method of any one of embodiments 1-40, wherein the immunomodulatory compound binds to cereblon (CRBN) and/or a complex of CRBN and E3 ubiquitin ligase; and/or inhibits the growth transcription factor Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3); and/or enhances ubiquitination or degradation of Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3).

42. Способ по любому из вариантов осуществления 1-41, где иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида.42. The method of any one of embodiments 1-41, wherein the immunomodulatory compound is thalidomide or is a derivative or analogue of thalidomide.

43. Способ по любому из вариантов осуществления 1-42, где иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.43. The method of any one of embodiments 1-42, wherein the immunomodulatory compound is lenalidomide, pomalidomide, avadomide, a stereoisomer of lenalidomide, pomalidomide, avadomide, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, cocrystal, clathrate, or polymorph thereof.

44. Способ по любому из вариантов осуществления 1-43, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.44. The method according to any one of embodiments 1-43, wherein the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione, its stereoisomer or enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

45. Способ по любому из вариантов осуществления 1-44, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион.45. The method of any one of embodiments 1-44, wherein the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione.

46. Способ по любому из вариантов осуществления 1-43, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.46. The method of any one of embodiments 1-43, wherein the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione, its stereoisomer or enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

47. Способ по любому из вариантов осуществления 1-43 и 46, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.47. The method of any of embodiments 1-43 and 46 wherein the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione .

48. Способ по любому из вариантов осуществления 1-47, где иммуномодуляторное соединение вводится перорально, подкожно или внутривенно.48. The method of any one of embodiments 1-47, wherein the immunomodulatory compound is administered orally, subcutaneously, or intravenously.

49. Способ по варианту осуществления 46, где иммуномодуляторное соединение вводится перорально. 49. The method of embodiment 46 wherein the immunomodulatory compound is administered orally.

50. Способ по любому из вариантов осуществления 1-48, где иммуномодуляторное соединение вводится в капсуле или таблетке.50. The method of any one of embodiments 1-48, wherein the immunomodulatory compound is administered in a capsule or tablet.

51. Способ по любому из вариантов осуществления 1-50, где иммуномодуляторное соединение вводится в количестве от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно.51. The method of any one of embodiments 1-50, wherein the immunomodulatory compound is administered in an amount of from or about 0.1 mg to about 100 mg, from or about 0.1 mg to 50 mg, from or about 0.1 mg to 25 mg, from or about 0.1 mg to 10 mg, from or about 0.1 mg to 5 mg, from or about 0.1 mg to 1 mg, from or about 1 mg to 100 mg , from or about 1 mg to 50 mg, from or about 1 mg to 25 mg, from or about 1 mg to 10 mg, from or about 1 mg to 5 mg, from or about 5 mg to 100 mg , from or about 5 mg to 50 mg, from or about 5 mg to 25 mg, from or about 5 mg to 10 mg, from or about 10 mg to 100 mg, from or about 10 mg to 50 mg , from or from 10 mg to 25 mg, from or from about 25 mg to 100 mg, from or from about 25 mg to 50 mg, or from or from about 50 mg to 100 mg, each inclusive.

52. Способ по любому из вариантов осуществления 1-51, где иммуномодуляторное соединение вводится один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день или шесть раз в день.52. The method of any one of embodiments 1-51, wherein the immunomodulatory compound is administered once a day, twice a day, three times a day, four times a day, five times a day, or six times a day.

53. Способ по любому из вариантов осуществления 1-52, где иммуномодуляторное соединение вводится при общем ежедневном дозируемом количестве, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день.53. The method of any one of embodiments 1-52, wherein the immunomodulatory compound is administered at a total daily dosage amount of at least, or about, at least 0.1 mg per day, 0.5 mg per day, 1.0 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 10 mg per day, 25 mg per day, 50 mg per day, or 100 mg per day.

54. Способ по любому из вариантов осуществления 1-53, где:54. The method according to any one of embodiments 1-53, where:

иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг; илиthe immunomodulatory compound is administered in an amount greater than or about greater than 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg, 15 mg, and less than 25 mg; or

иммуномодуляторное соединение вводится в количестве больше или примерно больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день, 15 мг в день и меньше, чем 25 мг в день.the immunomodulatory compound is administered in an amount greater than or about greater than 1 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 7.5 mg per day, 10 mg per day, 15 mg per day, and less than 25 mg per day .

55. Способ по любому из вариантов осуществления 1-54, где введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение размножения Т-лимфоцитов, связанных с Т-клеточной терапией, по сравнению с размножением после введения Т-клеточной терапии без иммуномодуляторного соединения. 55. The method of any one of embodiments 1-54, wherein administration of a therapeutically effective amount of the immunomodulatory compound stimulates an increase in proliferation of T-lymphocytes associated with T cell therapy compared to proliferation following administration of T cell therapy without the immunomodulatory compound.

56. Способ по любому из вариантов осуществления 1-55, где введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение цитолитической активности, медиируемой Т-лимфоцитами, связанными с Т-клеточной терапией, по сравнению с цитолитической активностью после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения.56. The method of any one of embodiments 1-55, wherein administration of a therapeutically effective amount of the immunomodulatory compound stimulates an increase in cytolytic activity mediated by T lymphocytes associated with T cell therapy compared to cytolytic activity following administration of T lymphocytes without the immunomodulatory compound.

57. Способ по любому из вариантов осуществления 1-56, где введение терапевтически эффективного количества иммуномодуляторного соединения стимулирует увеличение продуцирования цитокинов Т-лимфоцитами, связанными с Т-клеточной терапией, по сравнению с продуцированием цитокинов после введения Т-лимфоцитов без иммуномодуляторного соединения.57. The method of any one of embodiments 1-56, wherein administration of a therapeutically effective amount of the immunomodulatory compound stimulates an increase in cytokine production by T lymphocytes associated with T cell therapy compared to cytokine production following administration of T lymphocytes without the immunomodulatory compound.

58. Способ по любому из вариантов осуществления 55-57, где увеличение более или примерно более 1,5-кратного, 2,0-кратного, 3,0-кратного, 4,0-кратного, 5,0-кратного, 10,0-кратного или больше.58. The method of any one of embodiments 55-57 wherein the magnification is greater than or about greater than 1.5x, 2.0x, 3.0x, 4.0x, 5.0x, 10, 0 times or more.

59. Способ по любому из вариантов осуществления 1-58, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.59. The method of any one of embodiments 1-58, wherein the T cell therapy is or comprises tumor infiltrating lymphocyte (TIL) therapy or engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen.

60. Способ по любому из вариантов осуществления 1-59, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.60. The method of any one of embodiments 1-59, wherein the T cell therapy is or comprises engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen.

61. Способ по любому из вариантов осуществления 1-60, где Т-клеточная терапия содержит клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент.61. The method of any one of embodiments 1-60, wherein the T cell therapy comprises cells expressing a recombinant receptor that is or contains a functional non-TCR antigen receptor or a TCR or antigen-binding fragment thereof.

62. Способ по варианту осуществления 61, где рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).62. The method of embodiment 61 wherein the recombinant antigen receptor is a chimeric antigen receptor (CAR).

63. Способ по любому из вариантов осуществления 1-62, где Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор антигена, который содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.63. The method of any one of embodiments 1-62, wherein the T cell therapy comprises a recombinant antigen receptor that contains an extracellular domain containing an antigen-binding domain that specifically binds to an antigen.

64. Способ по любому из вариантов осуществления 62 или 63, где антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется в ней.64. The method of any one of embodiments 62 or 63, wherein the antigen is associated with, specific to, and/or expressed in a cell or tissue of the disease, disorder, or condition.

65. Способ по варианту осуществления 64, где заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.65. The method of embodiment 64, wherein the disease, disorder, or condition is an infectious disease or disorder, an autoimmune disease, an inflammatory disease, or a tumor or cancer.

66. Способ по любому из вариантов осуществления 62 -65, где антиген представляет собой опухолевый антиген.66. The method of any one of embodiments 62-65, wherein the antigen is a tumor antigen.

67. Способ по любому из вариантов осуществления 62-66, где антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептор тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.67. The method of any of embodiments 62-66 wherein the antigen is selected from ROR1, B cell maturation antigen (BCMA), charcoal anhydrase 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1-CAM, CD19 , CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40) , EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate-binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alpha , IL-13R-alpha2, kinase insert domain-containing receptor (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor alpha 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA , folate receptor-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, Foetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, testicular cancer antigen, mesothelin, mouse CMV, mucin 1 (MUC1) , MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein coupled receptor 5D (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1, TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen (CEA), Her2/neu , estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, cyclin A2, CCL-1, CD138, optionally, a human antigen to any of the above; a pathogen-specific antigen; and an antigen associated with a universal label.

68. Способ по любому из вариантов осуществления 62-67, где антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека.68. The method of any one of embodiments 62-67, wherein the antigen is or comprises CD19, optionally human CD19.

69. Способ по любому из вариантов осуществления 62-68, где антиген представляет собой или содержит антиген, ассоциированный с множественной миеломой, необязательно, BCMA, необязательно, BCMA человека. 69. The method of any one of embodiments 62-68, wherein the antigen is or comprises an antigen associated with multiple myeloma, optionally BCMA, optionally human BCMA.

70. Способ по любому из вариантов осуществления 62-69, где антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент.70. The method of any one of embodiments 62-69, wherein the antigen binding domain is or contains an antibody or antibody fragment, which is optionally a single chain fragment.

71. Способ по варианту осуществления 70, где фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.71. The method of embodiment 70, wherein the fragment comprises antibody variable regions connected by a flexible linker.

72. Способ по варианту осуществления 70 или варианта осуществления 71, где фрагмент содержит scFv.72. The method of embodiment 70 or embodiment 71, wherein the fragment contains scFv.

73. Способ по любому из вариантов осуществления 62-72, где Т-клеточная терапия содержит рекомбинантный рецептор, который дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.73. The method of any one of embodiments 62-72, wherein the T cell therapy comprises a recombinant receptor that further comprises a spacer, optionally derived from an immunoglobulin, optionally containing a hinge region.

74. Способ по любому из вариантов осуществления 62-73, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область.74. The method of any one of embodiments 62-73, wherein the recombinant antigen receptor comprises an intracellular signaling region.

75. Способ по варианту осуществления 74, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.75. The method of embodiment 74 wherein the intracellular signaling region comprises an intracellular signaling domain.

76. Способ по варианту осуществления 75, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, это сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR), и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).76. The method of embodiment 75, wherein the intracellular signaling domain is or comprises a primary signaling domain, which is a signaling domain that can induce a primary activation signal in a T-lymphocyte, a component of the T-lymphocyte receptor (TCR) signaling domain, and/or a signaling domain a domain containing an immunoreceptor tyrosine activating motif (ITAM).

77. Способ по варианту осуществления 75 или по варианту осуществления 76, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ) или ее сигнальную часть.77. The method of Embodiment 75 or Embodiment 76, wherein the intracellular signaling domain is or comprises an intracellular signaling domain of the CD3 chain, optionally the CD3-zeta (CD3ζ) chain, or a signal portion thereof.

78. Способ по любому из вариантов осуществления 75-77, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.78. The method of any one of embodiments 75-77, wherein the recombinant receptor further comprises a transmembrane domain located between an extracellular domain and an intracellular signaling region, wherein the transmembrane domain is optionally a CD8 or CD28 transmembrane domain.

79. Способ по любому из вариантов осуществления 75-78, где внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.79. The method of any one of embodiments 75-78, wherein the intracellular signaling region further comprises a costimulatory signaling region.

80. Способ по варианту осуществления 79, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть.80. The method of embodiment 79, wherein the co-stimulatory signaling region comprises an intracellular signaling domain of a co-stimulatory T-lymphocyte molecule or a signaling portion thereof.

81. Способ по варианту осуществления 79 или по варианту осуществления 80, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. 81. The method of embodiment 79 or embodiment 80, wherein the costimulatory signaling region comprises a CD28, 4-1BB, or ICOS intracellular signaling domain, or a signaling portion thereof.

82. Способ по любому из вариантов осуществления 79-81, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB.82. The method of any one of embodiments 79-81, wherein the co-stimulatory signaling region comprises a 4-1BB intracellular signaling domain.

83. Способ по любому из вариантов осуществления 79-82, где костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.83. The method of any one of embodiments 79-82, wherein the co-stimulatory signaling region is between the transmembrane domain and the intracellular signaling region.

84. Способ по любому из вариантов осуществления 1-83, где Т-клеточная терапия содержит:84. The method of any one of embodiments 1-83, wherein the T cell therapy comprises:

Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/илиT-lymphocytes selected from the group consisting of central memory T-lymphocytes, effector memory T-lymphocytes, intact T-lymphocytes, stem central memory T-lymphocytes, effector T-lymphocytes and regulatory T-lymphocytes; and/or

множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.a plurality of cells, this plurality contains at least 50% of a population of cells selected from the group consisting of CD4+ T lymphocytes, CD8+ T lymphocytes, central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T-lymphocytes, effector T-lymphocytes and regulatory T-lymphocytes.

85. Способ по любому из вариантов осуществления 1-84, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+.85. The method of any one of embodiments 1-84, wherein the T cell therapy comprises T lymphocytes that are CD4+ or CD8+.

86. Способ по любому из вариантов осуществления 1-85, где Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта.86. The method of any one of embodiments 1-85, wherein the T cell therapy comprises primary cells obtained from a subject.

87. Способ по любому из вариантов осуществления 1-86, где Т-клеточная терапия содержит клетки, которые являются аутологичными для субъекта.87. The method of any one of embodiments 1-86, wherein the T cell therapy comprises cells that are autologous to the subject.

88. Способ по любому из вариантов осуществления 1-87, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые являются аллогенными для субъекта.88. The method of any one of embodiments 1-87, wherein the T cell therapy comprises T lymphocytes that are allogeneic to the subject.

89. Способ по любому из вариантов осуществления 1-88, где субъект является человеком.89. The method of any one of embodiments 1-88, wherein the subject is a human.

90. Способ по любому из вариантов осуществления 1-89, где Т-клеточная терапия включает введение от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.90. The method of any one of embodiments 1-89, wherein the T cell therapy comprises administering from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 cells, in total, T lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or mononuclear cells peripheral blood cells (PBMC), in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, or from or about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, each value is inclusive.

91. Способ по любому из вариантов осуществления 1-90, где Т-клеточная терапия включает введение не более 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.91. The method of any one of embodiments 1-90, wherein the T cell therapy comprises administering no more than 1 x 10 8 cells, in total, of T lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), in total. not more than 1 × 10 7 cells in total, recombinant receptor-expressing T-lymphocytes in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in total, not more than 0.5 × 10 7 cells in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), in total, not more than 1 × 10 6 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells ( PBMC), in total, not more than 0.5 × 10 6 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in general.

92. Способ по любому из вариантов осуществления 1-91, где количество клеток, вводимых при Т-клеточной терапии, меньше, чем это количество в другом способе, в котором Т-клеточная терапия вводится без введения иммуномодуляторного соединения, необязательно, этот другой способ дает в результате сходную или более низкую степень облегчения или уменьшения или предотвращения заболевания или состояния или симптома или их тяжести, по сравнению с результатом настоящего способа.92. The method of any one of embodiments 1-91, wherein the number of cells administered in the T cell therapy is less than that in the other method, wherein the T cell therapy is administered without the administration of an immunomodulatory compound, optionally, this other method yields resulting in a similar or lower degree of alleviation or reduction or prevention of the disease or condition or symptom, or their severity, compared to the result of the present method.

93. Способ по варианту осуществления 92, где количество вводимых клеток является 1,5-кратно, 2-кратно, 3-кратно, 4-кратно, 5-кратно или 10-кратно меньшим, чем количество, вводимое в другом способе. 93. The method of embodiment 92, wherein the number of cells administered is 1.5-fold, 2-fold, 3-fold, 4-fold, 5-fold, or 10-fold less than the amount administered in the other method.

94. Способ по любому из вариантов осуществления 1-93, где Т-клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая клетки.94. The method of any one of embodiments 1-93, wherein the T cell therapy is administered as a single pharmaceutical composition containing cells.

95. Способ по любому из вариантов осуществления 1-94, где Т-клеточная терапия включает дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.95. The method of any one of embodiments 1-94, wherein the T cell therapy comprises a cell dose that is a divided dose, where the cells of the dose are administered in a plurality of compositions collectively containing all the cells of the dose, over a period of no more than three days.

96. Способ по любому из вариантов осуществления 1-95, где способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии. 96. The method of any one of embodiments 1-95, wherein the method further comprises administering anti-lymphocyte chemotherapy prior to administering T cell therapy.

97. Способ по любому из вариантов осуществления 1-96, где заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание.97. The method of any one of embodiments 1-96, wherein the disease or condition is a cancer.

98. Способ по любому из вариантов осуществления 1-97, где раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз.98. The method of any one of embodiments 1-97, wherein the cancer is B-lymphocyte cancer and/or myeloma, lymphoma, or leukemia.

99. Способ по варианту осуществления 97 или по варианту осуществления 98, где раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL). 99. The method of embodiment 97 or embodiment 98 wherein the cancer is mantle cell lymphoma (MCL), multiple myeloma (MM), acute lymphocytic leukemia (ALL), adult ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma ( NHL) or diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).

100. Способ по варианту осуществления 97, где раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.100. The method of Embodiment 97 wherein the cancer is a non-hematologic cancer or is a solid tumor.

101. Способ по любому из вариантов осуществления 1-100, где Т-клеточная терапия демонстрирует повышение или пролонгирование размножения и/или персистентности у субъекта по сравнению со способом, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения.101. The method of any one of embodiments 1-100, wherein the T cell therapy exhibits an increase or prolongation of proliferation and/or persistence in a subject compared to a method in which the T cell therapy is administered to the subject without an immunomodulatory compound.

102. Способ по любому из вариантов осуществления 1-101, где способ понижает массу опухоли до большей степени и/или в течение большего периода времени по сравнению с уменьшением, которое наблюдалось бы для сравнимого способа, в котором Т-клеточная терапия вводится субъекту без иммуномодуляторного соединения и/или в котором иммуномодуляторное соединение вводится без Т-клеточной терапии, необязательно, при такой же дозе или временном графике дозирования.102. The method of any one of embodiments 1-101, wherein the method reduces tumor mass to a greater extent and/or for a longer period of time compared to the reduction that would be observed for a comparable method in which T cell therapy is administered to a subject without immunomodulatory compounds and/or in which the immunomodulatory compound is administered without T cell therapy, optionally at the same dose or time schedule of dosing.

103. Набор, содержащий:103. A set containing:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и(a) a pharmaceutical composition containing a standard unit dose of T-cell therapy; and

(b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением композиции, содержащей иммуномодуляторное соединение, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах согласно циклу введения, включающему:(b) instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a composition containing an immunomodulatory compound, wherein the instructions specify administering the immunomodulatory compound in one or more unit dose units according to an administration cycle including:

(i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или(i) administration of the immunomodulatory compound for up to 21 days, consecutively, where the cycle includes more than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound; and/or

(ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или(ii) administering the immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or

(iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 дней, последовательно. (iii) administering the immunomodulatory compound for no more than 14 days, consecutively.

104. Набор, содержащий:104. A set containing:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и(a) a pharmaceutical composition containing one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound; and

(b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения согласно циклу введения, включающему:(b) instructions for administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a unit dose of a pharmaceutical composition comprising a T cell therapy, wherein the instructions specify the administration of one or more unit dose units of the immunomodulatory compound according to an administration cycle comprising:

(i) введение иммуномодуляторного соединения в течение до 21 дня, последовательно, где цикл включает больше 30 дней от начала введения иммуномодуляторного соединения; и/или(i) administration of the immunomodulatory compound for up to 21 days, consecutively, where the cycle includes more than 30 days from the start of administration of the immunomodulatory compound; and/or

(ii) введение иммуномодуляторного соединения в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, где период покоя больше 14 последовательных дней; и/или(ii) administering the immunomodulatory compound for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, where the rest period is greater than 14 consecutive days; and/or

(iii) введение иммуномодуляторного соединения в течение не более 14 дней, последовательно. (iii) administering the immunomodulatory compound for no more than 14 days, consecutively.

105. Набор по варианту осуществления 103 или по варианту осуществления 104, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в один и тот же день, необязательно, одновременно, как начало введения Т-клеточной терапии.105. The kit of embodiment 103 or embodiment 104, wherein the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound on the same day, optionally at the same time as the initiation of administration of T cell therapy.

106. Набор по варианту осуществления 103 или по варианту осуществления 104, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения до начала введения Т-клеточной терапии.106. The kit of embodiment 103 or embodiment 104, wherein the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound prior to the initiation of administration of T cell therapy.

107. Набор по варианту осуществления 106, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения:107. The kit of embodiment 106, wherein the instructions specify the start of administration of one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound:

(1) за неделю или в пределах недели перед отбором у субъекта образца, содержащего Т-лимфоциты, которые должны подвергаться генной инженерии, необязательно, где образец представляет собой образец от афереза; и/или(1) a week or within a week prior to collection from the subject of a sample containing T-lymphocytes to be genetically engineered, optionally, where the sample is an apheresis sample; and/or

(2) в ходе одной или нескольких стадий способа приготовления ex vivo для получения терапии с помощью генно-инженерных Т-лимфоцитов; и/или(2) during one or more of the steps of an ex vivo preparation method for receiving therapy with genetically engineered T-lymphocytes; and/or

(3) в пределах 14 дней до введения Т-клеточной терапии. (3) within 14 days prior to the introduction of T-cell therapy.

108. Набор по варианту осуществления 107, где одна или несколько стадий способа приготовления ex vivo выбираются из:108. The kit of embodiment 107 wherein one or more steps of the ex vivo preparation method are selected from:

(1) выделения клеток из биологического образца с помощью лейкафереза или афереза;(1) isolating cells from a biological sample using leukapheresis or apheresis;

(2) селекции или обогащения клеток с помощью иммунноафинных способов; (2) selection or enrichment of cells using immunoaffinity methods;

(3) введения рекомбинантной нуклеиновой кислоты, необязательно, вирусного вектора, в клетки; (3) introducing the recombinant nucleic acid, optionally a viral vector, into the cells;

(4) инкубирования клеток, необязательно, генно-инженерных клеток, в присутствии одного или нескольких условий стимулирования;(4) incubating cells, optionally genetically engineered cells, in the presence of one or more stimulation conditions;

(5) приготовления клеток в присутствии криопротектора; и/или(5) preparing cells in the presence of a cryoprotectant; and/or

(6) приготовления клеток для введения субъекту, необязательно, в присутствии фармацевтически приемлемого наполнителя.(6) preparing cells for administration to a subject, optionally in the presence of a pharmaceutically acceptable excipient.

109. Набор по любому из вариантов осуществления 103-106, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в пределах 10 дней, 7 дней, 4 дней, 3 дней или 2 дней до начала введения Т-клеточной терапии. 109. The kit of any one of embodiments 103-106, wherein the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound within 10 days, 7 days, 4 days, 3 days, or 2 days prior to the administration of T cell therapy.

110. Набор по варианту осуществления 103 или по варианту осуществления 104, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения после начала введения Т-клеточной терапии.110. The kit of embodiment 103 or embodiment 104, wherein the instructions specify the initiation of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound after initiation of administration of T cell therapy.

111. Набор по варианту осуществления 110, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии.111. The kit of embodiment 110, wherein the instructions specify the start of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound in at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks or at least 4 weeks after the start of the administration of T-cell therapy, and/or 2-28 days or 7-21 days after the start of the administration of T-cell therapy.

112. Набор, содержащий:112. A set containing:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии и(a) a pharmaceutical composition containing a standard unit dose of T cell therapy and

(b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют начало введения иммуномодуляторного соединения в одной или нескольких стандартных единичных дозах в момент времени:(b) instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering an immunomodulatory compound, wherein the instructions specify the start of administration of the immunomodulatory compound at one or more unit doses at a point in time:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или(1) at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after starting T cell therapy , and/or it is carried out after 2-28 days or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того, как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.(2) at or after the time point, optionally immediately thereafter or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

113. Набор, содержащий:113. A set containing:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и(a) a pharmaceutical composition containing one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound; and

(b) инструкции для введения иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением стандартной единичной дозы фармацевтической композиции, содержащей Т-клеточную терапию, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения в момент времени:(b) instructions for administering an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a unit dose of a pharmaceutical composition comprising a T cell therapy, wherein the instructions specify the start of administration of one or more unit dose units of the immunomodulatory compound at a time point:

(1) по меньшей мере, через 2 дня, по меньшей мере, через 1 неделю, по меньшей мере, через 2 недели, по меньшей мере, через 3 недели или, по меньшей мере, через 4 недели после начала введения Т-клеточной терапии, и/или его осуществляют через 2-28 дней или 7-21 день после начала введения Т-клеточной терапии; и/или(1) at least 2 days, at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after starting T cell therapy , and/or it is carried out after 2-28 days or 7-21 days after the start of the introduction of T-cell therapy; and/or

(2) в момент времени или после него, необязательно, непосредственно после того или в пределах 1-3 дней после того как: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.(2) at or after the time point, optionally immediately thereafter or within 1-3 days after: (i) a peak maximum cell level from T-cell therapy is detected in the subject's blood; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

114. Набор по варианту осуществления 112 или по варианту осуществления 113, где инструкции конкретизируют начало введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения через промежуток времени, который более или примерно более 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т-клеточной терапии.114. The kit of embodiment 112 or embodiment 113, wherein the instructions specify the commencement of administration of one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound after a period of time that is greater than or greater than about 14 days, 15 days, 16 days, 17 days, 18 days, 19 days, 20 days, 21 days, 24 days, or 28 days after the start of T-cell therapy.

115. Набор по любому из вариантов осуществления 112-114, где инструкции конкретизируют выбор субъекта для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения после введения Т-клеточной терапии, при котором: (i) в крови субъекта детектируется пиковый максимальный уровень клеток от Т-клеточной терапии; (ii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, после их детектирования в крови, становится недетектируемым или уменьшается, необязательно, уменьшается по сравнению с предыдущим моментом времени после введения Т-клеточной терапии; (iii) количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови, понижается 1,5-кратно, 2,0-кратно, 3,0-кратно, 4,0-кратно, 5,0-кратно, 10-кратно или более по сравнению с пиковым или максимальным количеством клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, после начала введения Т-клеточной терапии; (iv) в некоторый момент времени после детектирования пикового или максимального уровня клеток от Т-клеточной терапии в крови субъекта, количество Т-лимфоцитов или клеток, полученных из них, детектируемых в крови субъекта, меньше 10%, меньше 5%, меньше 1% или меньше 0,1% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; (v) субъект демонстрирует развитие заболевания и/или его возобновление после ремиссии после лечения с помощью Т-клеточной терапии; и/или (vi) субъект демонстрирует увеличение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени до или после введения Т-лимфоцитов и до начала введения иммуномодуляторного соединения.115. The kit of any one of embodiments 112-114, wherein the instructions specify the selection of a subject for administration of one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound following administration of T cell therapy, wherein: (i) a peak maximum cell level from T is detected in the subject's blood - cell therapy; (ii) the number of cells from T-cell therapy detectable in the blood, after their detection in the blood, becomes undetectable or decreases, optionally, decreases compared with the previous time point after the introduction of T-cell therapy; (iii) the number of cells from T-cell therapy detected in the blood is reduced by 1.5-fold, 2.0-fold, 3.0-fold, 4.0-fold, 5.0-fold, 10-fold, or more compared to the peak or maximum number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject, after the start of the introduction of T-cell therapy; (iv) at some point in time after detecting the peak or maximum level of cells from T-cell therapy in the blood of the subject, the number of T-lymphocytes or cells derived from them, detected in the blood of the subject, is less than 10%, less than 5%, less than 1% or less than 0.1% of the total peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; (v) the subject demonstrates the development of the disease and/or its recurrence after remission after treatment with T-cell therapy; and/or (vi) the subject exhibits an increase in tumor weight relative to tumor weight at the time point before or after administration of the T-lymphocytes and prior to the start of administration of the immunomodulatory compound.

116. Набор, содержащий:116. A set containing:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии; и(a) a pharmaceutical composition containing a standard unit dose of T-cell therapy; and

(b) инструкции для введения композиции субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением иммуномодуляторного соединения, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения субъекту в одной или нескольких стандартных единичных дозах если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:(b) instructions for administering the composition to a subject having a disease or condition in conjunction with administering an immunomodulatory compound, wherein the instructions specify administering the immunomodulatory compound to a subject in one or more unit doses if on or about day 12-15, optionally, day 14 or so, after initiation of T-cell therapy for the treatment of a disease or condition:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy at the same time in a plurality of subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.(ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

117. Набор, содержащий:117. A set containing:

(a) фармацевтическую композицию, содержащую одну или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения; и(a) a pharmaceutical composition containing one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound; and

(b) инструкции для введения одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, имеющему заболевание или состояние, в сочетании с введением фармацевтической композиции, содержащей стандартную единичную дозу Т-клеточной терапии, где инструкции конкретизируют введение одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения субъекту, если в день 12-15 или примерно в этот день, необязательно, в день 14 или примерно в этот день, после начала введения Т-клеточной терапии для лечения заболевания или состояния:(b) instructions for administering one or more unit dose units of an immunomodulatory compound to a subject having a disease or condition in conjunction with administering a pharmaceutical composition comprising a unit dose of a T cell therapy, wherein the instructions specify administering one or more unit unit doses of an immunomodulatory compound to a subject if on or about day 12-15, optionally on or about day 14, after initiation of T-cell therapy for the treatment of a disease or condition:

(i) количество клеток от Т-клеточной терапии у субъекта меньше 75% от среднего количества клеток от Т-клеточной терапии в это же время у множества субъектов, которым вводят такую же или сходную дозу Т-клеточной терапии; и/или (i) the number of cells from T-cell therapy in the subject is less than 75% of the average number of cells from T-cell therapy at the same time in a plurality of subjects who are administered the same or similar dose of T-cell therapy; and/or

(ii) количество клеток CD3+ или CD8+ от Т-клеточной терапии, необязательно, Т-лимфоцитов CAR+, в крови меньше 10 клеток на мкл, меньше 5 клеток на мкл или меньше 1 клетки на мкл.(ii) the number of CD3+ or CD8+ cells from T cell therapy, optionally CAR+ T lymphocytes, in the blood is less than 10 cells per μl, less than 5 cells per μl, or less than 1 cell per μl.

118. Набор по любому из вариантов осуществления 103-117, где иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве для ежедневного введения и/или инструкции конкретизируют ежедневное введение иммуномодуляторного соединения.118. The kit of any one of embodiments 103-117, wherein the immunomodulatory compound is formulated in an amount for daily administration and/or instructions specify daily administration of the immunomodulatory compound.

119. Набор по любому из вариантов осуществления 103-118, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в течение более или примерно более 7 последовательных дней, более или примерно более 14 последовательных дней, более или примерно более 21 последовательного дня, более или примерно более 21 последовательного дня или более или примерно более 28 последовательных дней.119. The kit of any one of embodiments 103-118, wherein the instructions specify administering the immunomodulatory compound for more than or about more than 7 consecutive days, more than or about more than 14 consecutive days, more than or about more than 21 consecutive days, more than or about more than 21 consecutive days. days or more, or about more than 28 consecutive days.

120. Набор по любому из вариантов осуществления 103-119, где инструкции конкретизируют введение иммуномодуляторного соединения в цикле введения, включая ежедневное введение в течение множества последовательных дней с последующим периодом покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится.120. The kit of any of embodiments 103-119, wherein the instructions specify the administration of the immunomodulatory compound in a cycle of administration, including daily administration for a plurality of consecutive days followed by a rest period during which no immunomodulatory compound is administered.

121. Набор по варианту осуществления 120, где инструкции конкретизируют период покоя, в ходе которого иммуномодуляторное соединение не вводится, больше 7 последовательных дней, больше 14 последовательных дней, больше 21 дня или больше 28 дней.121. The kit of embodiment 120, wherein the instructions specify a rest period during which no immunomodulatory compound is administered, greater than 7 consecutive days, greater than 14 consecutive days, greater than 21 days, or greater than 28 days.

122. Набор по любому из вариантов осуществления 103-121, где инструкции конкретизируют цикл введения иммуномодуляторного соединения, который повторяют, по меньшей мере, один раз.122. The kit of any one of embodiments 103-121, wherein the instructions specify a cycle of administration of the immunomodulatory compound that is repeated at least once.

123. Набор по любому из вариантов осуществления 103-122, где инструкции конкретизируют продолжение введения иммуномодуляторного соединения, по меньшей мере, от момента после начала введения Т-лимфоцитов, до тех пор, пока:123. The kit of any one of embodiments 103-122, wherein the instructions specify the continuation of the administration of the immunomodulatory compound, at least from the time after the start of the administration of T-lymphocytes, until:

количество клеток от введенной Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т-клеточной терапии;the number of cells from or derived from the administered T-cell therapy detectable in the blood of the subject will not increase compared to the number of cells of the subject at the time immediately before the administration of the immunomodulatory compound or compared with the previous time after the administration of the T-cell therapy;

количество клеток от Т-клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0-кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т-лимфоцитов; the number of cells from or derived from T-cell therapy detected in the blood will not be within 2.0 times (more or less) the peak or maximum number observed in the blood of the subject after the start of the administration of T-lymphocytes;

количество клеток от Т-клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше или примерно больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; и/илиthe number of cells from T-cell therapy detected in the subject's blood will not become more than or about more than 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, or 60% of the total number of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; and/or

субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т-клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/илиthe subject will not show a reduction in tumor weight compared to tumor weight at the time immediately prior to administration of the T cell therapy or at the time immediately prior to administration of the immunomodulatory compound; and/or

субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.the subject will not demonstrate complete or clinical remission.

124. Набор по любому из вариантов осуществления 103-123, где иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы; и/или ингибирует фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).124. A kit according to any one of embodiments 103-123, wherein the immunomodulatory compound binds to cereblon (CRBN) and/or a complex of CRBN and E3 ubiquitin ligase; and/or inhibits the transcription factor Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3); and/or enhances ubiquitination or degradation of Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3).

125. Набор по любому из вариантов осуществления 103-124, где иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида.125. The kit of any one of embodiments 103-124, wherein the immunomodulatory compound is thalidomide or is a derivative or analog of thalidomide.

126. Набор по любому из вариантов осуществления 103-125, где иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.126. The kit of any one of embodiments 103-125, wherein the immunomodulatory compound is lenalidomide, pomalidomide, avadomide, a stereoisomer of lenalidomide, pomalidomide, avadomide, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, cocrystal, clathrate, or polymorph thereof.

127. Набор по любому из вариантов осуществления 103-126, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.127. The kit of any one of embodiments 103-126 wherein the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione, its stereoisomer or enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

128. Набор по любому из вариантов осуществления 103-127, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион.128. The kit of any one of embodiments 103-127, wherein the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione.

129. Набор по любому из вариантов осуществления 103-126, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.129. The kit according to any one of embodiments 103-126, wherein the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione, its stereoisomer or enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

130. Набор по любому из вариантов осуществления 103-127 и 129, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.130. The kit of any of embodiments 103-127 and 129, wherein the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione .

131. Набор по любому из вариантов осуществления 103-130, где иммуномодуляторное соединение приготавливают для введения перорально, подкожно или внутривенно.131. The kit of any one of embodiments 103-130, wherein the immunomodulatory compound is formulated for oral, subcutaneous, or intravenous administration.

132. Набор по варианту осуществления 131, где иммуномодуляторное соединение приготавливают для перорального введения. 132. The kit of embodiment 131 wherein the immunomodulatory compound is formulated for oral administration.

133. Набор по любому из вариантов осуществления 103-132, где иммуномодуляторное соединение приготавливают в капсулах или таблетках.133. The kit of any one of embodiments 103-132, wherein the immunomodulatory compound is formulated into capsules or tablets.

134. Набор по любому из вариантов осуществления 103-133, где:134. A set according to any one of embodiments 103-133, where:

каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит количество от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/илиeach of one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound contains an amount of from or about 0.1 mg to about 100 mg, from or about 0.1 mg to 50 mg, from or about 0.1 mg to 25 mg, from or about 0.1 mg to 10 mg, from or about 0.1 mg to 5 mg, from or about 0.1 mg to 1 mg, from or about 1 mg to 100 mg, from or about 1 mg to 50 mg, from or about 1 mg to 25 mg, from or about 1 mg to 10 mg, from or about 1 mg to 5 mg, from or about 5 mg to 100 mg, from or about 5 mg to 50 mg, from or about 5 mg to 25 mg, from or about 5 mg to 10 mg, from or about 10 mg to 100 mg, from or about 10 mg to 50 mg, from or from 10 mg up to 25 mg, from or about 25 mg to 100 mg, from or about 25 mg to 50 mg, or from or about 50 mg to 100 mg, each inclusive; and/or

каждая из одной или нескольких стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержит, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг.each of one or more standard unit doses of an immunomodulatory compound contains at least, or about at least, 0.1 mg, 0.5 mg, 1.0 mg, 2.5 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg or 100 mg.

135. Набор по любому из вариантов осуществления 103-134, где каждая одна или несколько стандартных единичных доз иммуномодуляторного соединения содержат количество больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг.135. The kit of any one of embodiments 103-134, wherein each one or more standard unit doses of the immunomodulatory compound contain an amount greater than or greater than about 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg, 15 mg, and less than 25 mg.

136. Набор по любому из вариантов осуществления 103-135, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.136. The kit of any one of embodiments 103-135, wherein the T cell therapy is or comprises tumor infiltrating lymphocyte (TIL) therapy or engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen.

137. Набор по любому из вариантов осуществления 103-136, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.137. The kit of any one of embodiments 103-136, wherein the T cell therapy is or contains engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen.

138. Набор по варианту осуществления 136 или по варианту осуществления 137, где рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент.138. The kit of embodiment 136 or embodiment 137, wherein the recombinant receptor is or contains a functional non-TCR antigen receptor or a TCR or antigen-binding fragment thereof.

139. Набор по любому из вариантов осуществления 136-138, где рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).139. The kit of any one of embodiments 136-138, wherein the recombinant antigen receptor is a chimeric antigen receptor (CAR).

140. Набор по любому из вариантов осуществления 136-139, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.140. The kit of any one of embodiments 136-139, wherein the recombinant antigen receptor comprises an extracellular domain containing an antigen-binding domain that specifically binds to an antigen.

141. Набор по любому из вариантов осуществления 136-140, где антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней.141. The kit of any one of embodiments 136-140, wherein the antigen is associated with, specific to, and/or expressed on a cell or tissue of the disease, disorder, or condition.

142. Набор по варианту осуществления 141, где заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.142. The kit of embodiment 141 wherein the disease, disorder or condition is an infectious disease or disorder, an autoimmune disease, an inflammatory disease, or a tumor or cancer.

143. Набор по любому из вариантов осуществления 136-142, где антиген представляет собой опухолевый антиген.143. The kit of any one of embodiments 136-142, wherein the antigen is a tumor antigen.

144. Набор по любому из вариантов осуществления 136-143, где антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбриональный антиген (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.144. The kit of any one of embodiments 136-143 wherein the antigen is selected from ROR1, B cell maturation antigen (BCMA), charcoal anhydrase 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1-CAM, CD19 , CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40) , EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate-binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alpha , IL-13R-alpha2, kinase insert domain-containing receptor (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor alpha 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, P SCA, folate receptor-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, Foetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, testicular cancer antigen, mesothelin, mouse CMV, mucin 1 (MUC1 ), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein coupled receptor 5D (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1, TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen (CEA), Her2/ neu, estrogen receptor, progesterone receptor, aphrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, cyclin A2, CCL-1, CD138 optionally, a human antigen to any of the above; a pathogen-specific antigen; and an antigen associated with a universal label.

145. Набор по любому из вариантов осуществления 136-144, где антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека.145. The kit of any one of embodiments 136-144, wherein the antigen is or contains CD19, optionally human CD19.

146. Набор по любому из вариантов осуществления 136-145, где антиген представляет собой или содержит BCMA, необязательно, BCMA человека. 146. The kit of any one of embodiments 136-145, wherein the antigen is or contains BCMA, optionally human BCMA.

147. Набор по любому из вариантов осуществления 136-146, где антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент.147. The kit of any one of embodiments 136-146, wherein the antigen binding domain is or contains an antibody or antibody fragment, which is optionally a single chain fragment.

148. Набор по варианту осуществления 147, где фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.148. The kit of embodiment 147 wherein the fragment contains the variable regions of the antibody connected by a flexible linker.

149. Набор по варианту осуществления 147 или по варианту осуществления 148, где фрагмент содержит scFv.149. The set of embodiment 147 or embodiment 148, wherein the fragment contains scFv.

150. Набор по любому из вариантов осуществления 136-149, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.150. The kit of any one of embodiments 136-149, wherein the recombinant receptor further comprises a spacer, optionally derived from an immunoglobulin, optionally containing a hinge region.

151. Набор по любому из вариантов осуществления 136-150, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область.151. The kit of any one of embodiments 136-150, wherein the recombinant antigen receptor contains an intracellular signaling region.

152. Набор по варианту осуществления 151, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.152. The kit of embodiment 151 wherein the intracellular signaling region contains an intracellular signaling domain.

153. Набор по варианту осуществления 152, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).153. The kit of embodiment 152, wherein the intracellular signaling domain is or contains a primary signaling domain, a signaling domain that can induce a primary activation signal in a T-lymphocyte, a T-lymphocyte receptor (TCR) signaling domain component, and/or a signaling domain, containing an immunoreceptor tyrosine activating motif (ITAM).

154. Набор по варианту осуществления 152 или по варианту осуществления 153, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ), или ее сигнальную часть.154. The kit of embodiment 152 or embodiment 153, wherein the intracellular signaling domain is or comprises an intracellular signaling domain of the CD3 chain, optionally the CD3-zeta (CD3ζ) chain, or a signal portion thereof.

155. Набор по любому из вариантов осуществления 152-154, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.155. The kit of any one of embodiments 152-154, wherein the recombinant receptor further comprises a transmembrane domain located between an extracellular domain and an intracellular signaling region, where the transmembrane domain is optionally a CD8 or CD28 transmembrane domain.

156. Набор по любому из вариантов осуществления 152-155, где внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.156. The kit of any one of embodiments 152-155, wherein the intracellular signaling region further comprises a costimulatory signaling region.

157. Набор по варианту осуществления 156, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть.157. The kit of embodiment 156, wherein the co-stimulatory signaling region comprises an intracellular signaling domain of a co-stimulatory T-lymphocyte molecule or a signaling portion thereof.

158. Набор по варианту осуществления 156 или по варианту осуществления 157, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. 158. The kit of embodiment 156 or embodiment 157, wherein the costimulatory signaling region comprises a CD28, 4-1BB, or ICOS intracellular signaling domain, or a signal portion thereof.

159. Набор по любому из вариантов осуществления 156-158, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB.159. The kit of any one of embodiments 156-158, wherein the co-stimulatory signaling region comprises the 4-1BB intracellular signaling domain.

160. Набор по любому из вариантов осуществления 156-159, где костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.160. The kit of any one of embodiments 156-159, wherein the costimulatory signaling region is located between the transmembrane domain and the intracellular signaling region.

161. Набор по любому из вариантов осуществления 103-160, где Т-клеточная терапия содержит:161. The kit of any one of embodiments 103-160, wherein the T cell therapy comprises:

Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/илиT lymphocytes selected from the group consisting of central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T lymphocytes, effector T lymphocytes and regulatory T lymphocytes; and/or

множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.a plurality of cells, this plurality contains at least 50% of a population of cells selected from the group consisting of CD4+ T lymphocytes, CD8+ T lymphocytes, central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T-lymphocytes, effector T-lymphocytes and regulatory T-lymphocytes.

162. Набор по любому из вариантов осуществления 103-161, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+.162. The kit of any one of embodiments 103-161, wherein the T cell therapy comprises T lymphocytes that are CD4+ or CD8+.

163. Набор по любому из вариантов осуществления 103-162, где Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта.163. The kit of any one of embodiments 103-162, wherein the T cell therapy comprises primary cells obtained from a subject.

164. Набор по любому из вариантов осуществления 103-163, где Т-клеточная терапия является аутологичной для субъекта.164. The kit of any one of embodiments 103-163, wherein the T cell therapy is autologous to the subject.

165. Способ по любому из вариантов осуществления 103-164, где Т-клеточная является аллогенной для субъекта.165. The method of any one of embodiments 103-164, wherein the T cell is allogeneic to the subject.

166. Набор по любому из вариантов осуществления 103-165, где субъект является человеком.166. The kit of any one of embodiments 103-165, wherein the subject is a human.

167. Набор по любому из вариантов осуществления 103-166, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.167. The kit of any one of embodiments 103-166, wherein a single unit dose of T cell therapy contains from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 cells, in total, T lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total , or from or about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, each value inclusive.

168. Набор по любому из вариантов осуществления 103-167, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.168. The kit of any one of embodiments 103-167, wherein the single unit dose of T cell therapy comprises administering not more than 1 x 10 8 cells, in total, T lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). ), in total, not more than 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 0.5 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, no more than 1 × 10 6 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or mononuclear cells blood cells (PBMC), in general, no more than 0.5 × 10 6 cells, in general, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in general.

169. Набор по любому из вариантов осуществления 103-168, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии содержит дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.169. The kit of any one of embodiments 103-168, wherein the single unit dose of T cell therapy comprises a cell dose that is a divided dose, where the dose cells are administered in a plurality of compositions collectively containing all of the dose cells over a period of no more than three days.

170. Набор по любому из вариантов осуществления 103-169, где инструкции дополнительно конкретизируют введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т-клеточной терапии. 170. The kit of any one of embodiments 103-169, wherein the instructions further specify administration of anti-lymphocyte chemotherapy prior to administration of T cell therapy.

171. Набор по любому из вариантов осуществления 103-170, где заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание.171. The kit of any one of embodiments 103-170, wherein the disease or condition is a cancerous disease.

172. Набор по любому из вариантов осуществления 103-171, где раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз.172. The kit of any one of embodiments 103-171, wherein the cancer is B-lymphocyte cancer and/or myeloma, lymphoma, or leukemia.

173. Набор по варианту осуществления 171 или по варианту осуществления 172, где раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфому (DLBCL). 173. The kit of embodiment 171 or embodiment 172, wherein the cancer is mantle cell lymphoma (MCL), multiple myeloma (MM), acute lymphocytic leukemia (ALL), adult ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma ( NHL) or diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).

174. Набор по варианту осуществления 171, где раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.174. The kit of embodiment 171 wherein the cancer is a non-hematologic cancer or is a solid tumor.

175. Промышленное изделие, содержащее набор по любому из вариантов осуществления 103-174.175. An article of manufacture comprising the kit of any one of embodiments 103-174.

176. Фармацевтическая композиция, содержащая Т-клеточную терапию, иммуномодуляторное соединение и фармацевтически приемлемый носитель.176. A pharmaceutical composition containing T-cell therapy, an immunomodulatory compound and a pharmaceutically acceptable carrier.

177. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 176, где Т-клеточную терапию приготавливают в количестве единичной стандартной дозы.177. The pharmaceutical composition of embodiment 176 wherein the T cell therapy is formulated in a single unit dose amount.

178. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 177, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии содержит от или примерно от 1 × 105 до 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от или примерно от 5 × 105 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от или примерно от 1 × 106 до 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждое значение включительно.178. The pharmaceutical composition of embodiment 177, wherein a unit unit dose of T-cell therapy contains from or about 1 x 10 5 to 1 x 10 8 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or mononuclear cells of peripheral blood cells (PBMC), in total, from or about 5 × 10 5 to 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, or from or from about 1 x 10 6 to 1 x 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, each value is inclusive.

179. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 177 или по варианту осуществления 178, где единичная стандартная доза Т-клеточной терапии включает введение не более 1 × 108 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 107 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5 × 106 клеток, в целом, Т-лимфоцитов, экспрессирующих рекомбинантные рецепторы, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.179. The pharmaceutical composition of Embodiment 177 or Embodiment 178, wherein the single unit dose of T cell therapy comprises administering not more than 1 x 10 8 cells, in total, of T lymphocytes expressing recombinant receptors in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 1 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 0.5 × 10 7 cells, in total, T-lymphocytes expressing recombinant receptors, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 1 × 10 6 cells, in total, T-lymphocytes, expressing recombinant receptors, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in total not more than 0.5×10 6 cells in total, recombinant receptor-expressing T-lymphocytes in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in total.

180. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-179, где иммуномодуляторное соединение связывается с цереблоном (CRBN) и/или комплексом CRBN и E3 убиквитинлигазы и/или ингибирует фактор транскрипции Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3); и/или усиливает убиквитинирование или деградацию Ikaros (IKZF1) или Aiolos (IKZF3).180. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-179, wherein the immunomodulatory compound binds to cereblon (CRBN) and/or the CRBN and E3 ubiquitin ligase complex and/or inhibits the transcription factor Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3); and/or enhances ubiquitination or degradation of Ikaros (IKZF1) or Aiolos (IKZF3).

181. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-180, где иммуномодуляторное соединение представляет собой талидомид или представляет собой производное или аналог талидомида.181. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-180, wherein the immunomodulatory compound is thalidomide or is a derivative or analogue of thalidomide.

182. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-181, где иммуномодуляторное соединение представляет собой леналидомид, помалидомид, авадомид, стереоизомер леналидомида, помалидомид, авадомид или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.182. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-181, wherein the immunomodulatory compound is lenalidomide, pomalidomide, avadomide, a stereoisomer of lenalidomide, pomalidomide, avadomide, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, cocrystal, clathrate, or polymorph thereof.

183. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-182, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.183. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-182, wherein the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione , its stereoisomer or enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

184. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-183, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(4-амино-1-оксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пиперидин-2,6-дион.184. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-183, wherein the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione .

185. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-182, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион, его стереоизомер или энантиомер или смесь энантиомеров, или их фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.185. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-182, wherein the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione, its stereoisomer or enantiomer or mixture of enantiomers, or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph thereof.

186. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-182 и 185, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион.186. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-182 and 185, wherein the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6- dione.

187. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 176-186, где иммуномодуляторное соединение приготавливают в количестве единичной стандартной дозы. 187. The pharmaceutical composition of embodiment 176-186, wherein the immunomodulatory compound is formulated in a single unit dose amount.

188. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-187, где:188. Pharmaceutical composition according to any of the embodiments 176-187, where:

количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет от или примерно от 0,1 мг примерно до 100 мг, от или примерно от 0,1 мг до 50 мг, от или примерно от 0,1 мг до 25 мг, от или примерно от 0,1 мг до 10 мг, от или примерно от 0,1 мг до 5 мг, от или примерно от 0,1 мг до 1 мг, от или примерно от 1 мг до 100 мг, от или примерно от 1 мг до 50 мг, от или примерно от 1 мг до 25 мг, от или примерно от 1 мг до 10 мг, от или примерно от 1 мг до 5 мг, от или примерно от 5 мг до 100 мг, от или примерно от 5 мг до 50 мг, от или примерно от 5 мг до 25 мг, от или примерно от 5 мг до 10 мг, от или примерно от 10 мг до 100 мг, от или примерно от 10 мг до 50 мг, от или от 10 мг до 25 мг, от или примерно от 25 мг до 100 мг, от или примерно от 25 мг до 50 мг или от или примерно от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно; и/илиthe amount of immunomodulatory compound in the composition is from or about 0.1 mg to about 100 mg, from or about 0.1 mg to 50 mg, from or about 0.1 mg to 25 mg, from or about 0.1 mg to 10 mg, from or about 0.1 mg to 5 mg, from or about 0.1 mg to 1 mg, from or about 1 mg to 100 mg, from or about 1 mg to 50 mg, from or about 1 mg to 25 mg, from or about 1 mg to 10 mg, from or about 1 mg to 5 mg, from or about 5 mg to 100 mg, from or about 5 mg to 50 mg, from or about 5 mg to 25 mg, from or about 5 mg to 10 mg, from or about 10 mg to 100 mg, from or about 10 mg to 50 mg, from or from 10 mg to 25 mg, from or from about 25 mg to 100 mg, from or from about 25 mg to 50 mg, or from or from about 50 mg to 100 mg, each inclusive; and/or

количество иммуномодуляторного соединения в композиции составляет, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, 0,1 мг, 0,5 мг, 1,0 мг, 2,5 мг, 5 мг, 10 мг, 25 мг, 50 мг или 100 мг.the amount of the immunomodulatory compound in the composition is at least, or about, at least 0.1 mg, 0.5 mg, 1.0 mg, 2.5 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, or 100 mg.

189. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 187 или по варианту осуществления 188, где количество иммуномодуляторного соединения в композиции больше или примерно больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг, 15 мг и меньше, чем 25 мг.189. The pharmaceutical composition of Embodiment 187 or Embodiment 188, wherein the amount of the immunomodulatory compound in the composition is greater than or about greater than 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg, 15 mg, and less than 25 mg.

190. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-189, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит проникающую в опухоль лимфоцитарную (TIL) терапию или генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.190. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-189, wherein the T cell therapy is or comprises tumor infiltrating lymphocyte (TIL) therapy or engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen.

191. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-190, где Т-клеточная терапия представляет собой или содержит генно-инженерные клетки, экспрессирующие рекомбинантный рецептор, который специфично связывается с антигеном.191. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-190, wherein the T cell therapy is or contains engineered cells expressing a recombinant receptor that specifically binds to an antigen.

192. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 190 или по варианту осуществления 191, где рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит функциональный рецептор не-TCR антигена или его TCR или антиген-связывающий фрагмент.192. The pharmaceutical composition of embodiment 190 or embodiment 191, wherein the recombinant receptor is or contains a functional non-TCR antigen receptor or a TCR or antigen-binding fragment thereof.

193. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-192, где рекомбинантный рецептор антигена представляет собой химерный рецептор антигена (CAR).193. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-192, wherein the recombinant antigen receptor is a chimeric antigen receptor (CAR).

194. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-193, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внеклеточный домен, содержащий антиген-связывающий домен, который специфично связывается с антигеном.194. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-193, wherein the recombinant antigen receptor comprises an extracellular domain containing an antigen-binding domain that specifically binds to an antigen.

195. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-194, где антиген связан с клеткой или тканью заболевания, расстройства или состояния, является специфичным к ней и/или экспрессируется на ней.195. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-194, wherein the antigen is associated with, specific to, and/or expressed on a cell or tissue of the disease, disorder, or condition.

196. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 195, где заболевание, расстройство или состояние представляет собой инфекционное заболевание или расстройство, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, или опухоль или раковое заболевание.196. The pharmaceutical composition of embodiment 195, wherein the disease, disorder, or condition is an infectious disease or disorder, an autoimmune disease, an inflammatory disease, or a tumor or cancer.

197. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-195, где антиген представляет собой опухолевый антиген.197. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-195, wherein the antigen is a tumor antigen.

198. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-197, где антиген выбирают из ROR1, B-клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина, CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти-фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG-2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолат-связывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-альфа, IL-13R-альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1-CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7-H6, рецептора альфа 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, рецептора-а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, Foetal AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково-тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF-R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c-Met, GD-2, O-ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT-1), циклина, A2 циклина, CCL-1, CD138, необязательно, антигена человека к любому из указанных выше; патоген-специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.198. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-197, wherein the antigen is selected from ROR1, B-cell maturation antigen (BCMA), charcoal anhydrase 9 (CAIX), tEGFR, Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesothelin, CEA and hepatitis B surface antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40 ), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate-binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R- alpha, IL-13R-alpha2, kinase insert domain-containing receptor (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3 , MAGE-A6, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, IL-13 receptor alpha 2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, folate receptor-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 integrin, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, Foetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, testicular cancer antigen, mesothelin, mouse CMV, mucin 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, G protein coupled receptor 5D (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1, TAG72, VEGF -R2, carcinoembryonic antigen (CEA), Her2/neu, estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c-Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1) , cyclin, cyclin A2, CCL-1, CD138, optionally, a human antigen to any of the above; a pathogen-specific antigen; and an antigen associated with a universal label.

199. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-198, где антиген представляет собой или содержит CD19, необязательно, CD19 человека.199. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-198, wherein the antigen is or contains CD19, optionally human CD19.

200. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-199, где антиген представляет собой или содержит BCMA, необязательно, BCMA человека. 200. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-199, wherein the antigen is or contains BCMA, optionally human BCMA.

201. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-200, где антиген-связывающий домен представляет собой или содержит антитело или фрагмент антитела, который необязательно представляет собой одноцепочечный фрагмент.201. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-200, wherein the antigen binding domain is or contains an antibody or antibody fragment, which is optionally a single chain fragment.

202. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 201, где фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.202. The pharmaceutical composition of embodiment 201, wherein the fragment contains antibody variable regions connected by a flexible linker.

203. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 201 или по варианту осуществления 202, где фрагмент содержит scFv.203. The pharmaceutical composition of embodiment 201 or embodiment 202, wherein the fragment contains scFv.

204. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-203, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит спейсер, необязательно, полученный из иммуноглобулина, необязательно, содержащий шарнирную область.204. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-203, wherein the recombinant receptor further comprises a spacer, optionally derived from an immunoglobulin, optionally containing a hinge region.

205. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 190-204, где рекомбинантный рецептор антигена содержит внутриклеточную сигнальную область.205. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 190-204, wherein the recombinant antigen receptor contains an intracellular signaling region.

206. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 205, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.206. The pharmaceutical composition of embodiment 205, wherein the intracellular signaling region contains an intracellular signaling domain.

207. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 206, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит первичный сигнальный домен, сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т-лимфоците, компонент сигнального домена рецептора Т-лимфоцита (TCR) и/или сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).207. The pharmaceutical composition of embodiment 206, wherein the intracellular signaling domain is or contains a primary signaling domain, a signaling domain that can induce a primary activation signal in a T-lymphocyte, a T-lymphocyte receptor (TCR) signaling domain component, and/or a signaling domain containing an immunoreceptor tyrosine activating motif (ITAM).

208. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 206 или по варианту осуществления 207, где внутриклеточный сигнальный домен представляет собой или содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3, необязательно, цепи CD3-зета (CD3ζ), или ее сигнальную часть.208. The pharmaceutical composition of embodiment 206 or embodiment 207, wherein the intracellular signaling domain is or contains an intracellular signaling domain of the CD3 chain, optionally the CD3-zeta (CD3ζ) chain, or a signal portion thereof.

209. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 205-208, где рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью, где трансмембранный домен необязательно представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.209. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 205-208, wherein the recombinant receptor further comprises a transmembrane domain located between an extracellular domain and an intracellular signaling region, where the transmembrane domain is optionally a CD8 or CD28 transmembrane domain.

210. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 205-209, где внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.210. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 205-209, wherein the intracellular signaling region further comprises a costimulatory signaling region.

211. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 210, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т-лимфоцита или ее сигнальную часть.211. The pharmaceutical composition of embodiment 210, wherein the costimulatory signaling region comprises an intracellular signaling domain of a costimulatory T-lymphocyte molecule or a signaling portion thereof.

212. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 210 или по варианту осуществления 211, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4-1BB или ICOS или его сигнальную часть. 212. The pharmaceutical composition of embodiment 210 or embodiment 211, wherein the costimulatory signaling region comprises a CD28, 4-1BB, or ICOS intracellular signaling domain, or a signaling portion thereof.

213. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 210-212, где костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB.213. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 210-212, wherein the co-stimulatory signaling region comprises the 4-1BB intracellular signaling domain.

214. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 210-213, где костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.214. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 210-213, wherein the costimulatory signaling region is located between the transmembrane domain and the intracellular signaling region.

215. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 210-214, где рекомбинантный рецептор представляет собой или содержит химерный рецептор антигена, содержащий антиген-связывающий домен, спейсер, трансмембранный домен от CD28, внутриклеточный сигнальный домен, содержащий цепь CD3-зета (CD3ζ) и внутриклеточный сигнальный домен от 4-1BB.215. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 210-214, wherein the recombinant receptor is or contains a chimeric antigen receptor containing an antigen-binding domain, a spacer, a transmembrane domain from CD28, an intracellular signaling domain containing the CD3-zeta chain (CD3ζ) and an intracellular signaling domain from 4-1BB.

216. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-215, где Т-клеточная терапия содержит:216. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-215, wherein the T cell therapy comprises:

Т-лимфоциты, выбранные из группы, состоящей из центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов; и/илиT lymphocytes selected from the group consisting of central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T lymphocytes, effector T lymphocytes and regulatory T lymphocytes; and/or

множество клеток, это множество содержит, по меньшей мере, 50% популяции клеток, выбранных из группы, состоящей из Т-лимфоцитов CD4+, Т-лимфоцитов CD8+, центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов памяти, интактных Т-лимфоцитов, стволовых центральных Т-лимфоцитов памяти, эффекторных Т-лимфоцитов и регуляторных Т-лимфоцитов.a plurality of cells, this plurality contains at least 50% of a population of cells selected from the group consisting of CD4+ T lymphocytes, CD8+ T lymphocytes, central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T-lymphocytes, effector T-lymphocytes and regulatory T-lymphocytes.

217. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-216, где Т-клеточная терапия содержит Т-лимфоциты, которые представляют собой CD4+ или CD8+.217. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-216, wherein the T cell therapy comprises T lymphocytes that are CD4+ or CD8+.

218. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 217, где отношение Т-лимфоцитов CD4+ к Т-лимфоцитам CD8+ составляет от или примерно от 1:3 до 3:1, необязательно, 1:1.218. The pharmaceutical composition of embodiment 217 wherein the ratio of CD4+ T lymphocytes to CD8+ T lymphocytes is from or about 1:3 to 3:1, optionally 1:1.

219. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-218, где Т-клеточная терапия содержит первичные клетки, полученные от субъекта.219. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-218, wherein the T cell therapy comprises primary cells obtained from a subject.

220. Фармацевтическая композиция по варианту осуществления 219, где субъект является человеком.220. The pharmaceutical composition of embodiment 219, wherein the subject is a human.

221. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-220, содержащая объем от или примерно от 1 мл до 100 мл, от 1 мл до 75 мл, от 1 мл до 50 мл, от 1 мл до 25 мл, от 1 мл до 10 мл, от 1 мл до 5 мл, от 5 мл до 100 моет 5 мл до 75 мл, от 5 мл до 50 мл, от 5 мл до 25 мл, от 5 мл до 10 мл, от 10 мл до 100 мл, от 10 мл до 75 мл, от 10 мл до 50 мл, от 10 мл до 25 мл, от 25 мл до 100 моет 25 мл до 75 моет 25 мл до 50 мл, от 50 мл до 100 мл, от 50 мл до 75 мл или от 75 мл до 100 мл.221. A pharmaceutical composition according to any one of embodiments 176-220, containing a volume of from or about 1 ml to 100 ml, 1 ml to 75 ml, 1 ml to 50 ml, 1 ml to 25 ml, 1 ml to 10 ml, 1 ml to 5 ml, 5 ml to 100 washes 5 ml to 75 ml, 5 ml to 50 ml, 5 ml to 25 ml, 5 ml to 10 ml, 10 ml to 100 ml, 10 ml to 75 ml, 10 ml to 50 ml, 10 ml to 25 ml, 25 ml to 100 washes 25 ml to 75 washes 25 ml to 50 ml, 50 ml to 100 ml, 50 ml to 75 ml or from 75 ml to 100 ml.

222. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-221, содержащая объем, по меньшей мере, или примерно, по меньшей мере, или примерно 1 мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл, 25 мл, 30 мл, 40 мл, 50 мл, 60 мл, 70 мл, 80 мл, 90 мл или 100 мл.222. A pharmaceutical composition according to any one of embodiments 176-221, containing a volume of at least, or about, at least, or about 1 ml, 5 ml, 10 ml, 20 ml, 25 ml, 30 ml, 40 ml, 50 ml, 60 ml, 70 ml, 80 ml, 90 ml or 100 ml.

223. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-222, дополнительно содержащая криопротектор.223. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-222 further comprising a cryoprotectant.

224. Фармацевтическая композиция по любому из вариантов осуществления 176-223, которая является стерильной.224. The pharmaceutical composition of any one of embodiments 176-223, which is sterile.

225. Промышленное изделие, содержащее фармацевтическую композицию по любому из вариантов осуществления 176-223.225. An industrial product containing a pharmaceutical composition according to any of the embodiments of 176-223.

226. Способ лечения, включающий введение фармацевтической композиции по любому из вариантов осуществления 176-225 субъекту для лечения заболевания или состояния.226. A method of treatment comprising administering a pharmaceutical composition according to any one of embodiments 176-225 to a subject for the treatment of a disease or condition.

227. Способ по варианту осуществления 226, где заболевание или состояние представляет собой раковое заболевание.227. The method of embodiment 226 wherein the disease or condition is cancer.

228. Способ по варианту осуществления 227, где раковое заболевание представляет собой рак В-лимфоцитов и/или миелому, лимфому или лейкоз.228. The method of embodiment 227 wherein the cancer is B-lymphocyte cancer and/or myeloma, lymphoma, or leukemia.

229. Способ по варианту осуществления 216 или вариант осуществления 228, где раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL) или диффузную В-крупноклеточную лимфома (DLBCL). 229. The method of embodiment 216 or embodiment 228 wherein the cancer is mantle cell lymphoma (MCL), multiple myeloma (MM), acute lymphocytic leukemia (ALL), adult ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL ) or diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).

230. Способ по варианту осуществления 227, где раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.230. The method of embodiment 227 wherein the cancer is a non-hematologic cancer or is a solid tumor.

VII. ПримерыVII. Examples

[0633] Следующие далее примеры включаются только для иллюстративных целей и не предназначены для ограничения рамок настоящего изобретения.[0633] The following examples are included for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the present invention.

Пример 1 Цитолитическая активность Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA и продуцирование цитокинов после инкубирования вместе с линиями целевых клеток, экспрессирующих BCMA, в присутствии или в отсутствие леналидомидаExample 1 Anti-BCMA CAR T cell cytolytic activity and cytokine production after incubation with target cell lines expressing BCMA in the presence or absence of lenalidomide

[0634] Т-лимфоциты выделяют посредством обогащения на основе иммунноафинности из образцов лейкафереза от здоровых доноров. Выделенные клетки трансдуцируют вирусным вектором, кодирующим один из разнообразных иллюстративных CAR анти-BCMA. Каждый CAR анти-BCMA содержит scFv анти-BCMA человека, спейсерную область, трансмембранный домен CD28, полученную из 4-1BB внутриклеточную ко-сигнальную последовательность и внутриклеточный сигнальный домен, полученный из CD3-зета. Конструкция вирусного вектора дополнительно кодирует усеченный EGFR (EGFRt), который служит как суррогатный маркер для экспрессирования CAR; EGFRt-кодирующая область отделяется от последовательности CAR перескакивающей последовательностью T2A. После трансдуцирования, клетки размножаются, и полученные в результате композиции замораживают с помощью криоконсерирования. [0634] T-lymphocytes are isolated by immunoaffinity-based enrichment from leukapheresis samples from healthy donors. The isolated cells are transduced with a viral vector encoding one of a variety of exemplary anti-BCMA CARs. Each anti-BCMA CAR contains a human anti-BCMA scFv, a spacer region, a CD28 transmembrane domain, a 4-1BB-derived intracellular co-signaling sequence, and an intracellular signaling domain derived from CD3-zeta. The viral vector construct further encodes a truncated EGFR (EGFRt) that serves as a surrogate marker for CAR expression; The EGFRt-coding region is separated from the CAR sequence by the T2A hopping sequence. After transduction, cells proliferate and the resulting compositions are frozen by cryopreservation.

[0635] Криозамороженные Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA оттаивают и оценивают на различные реакции после сокультивирования с BCMA-экспрессирующими целевыми клетками в присутствии или в отсутствие леналидомида. Анализы in vitro для оценки уничтожения целевых клеток и продуцирования цитокинов осуществляются с использованием двух различных целевых линий клеток множественной миеломы, экспрессирующих BCMA RPMI-8226 или OPM-2. Фиг.1A показывает поверхностное экспрессирование BCMA, оцениваемое с помощью проточной цитометрии после окрашивания антителом анти-BCMA, иллюстративных линий клеток множественной миеломы, включая RPMI-8226 и OPM-2. Штриховая линия показывает фон BCMA-отрицательной линии клеток, окрашенных антителом анти-BCMA. MFI - это медианная интенсивность флуоресценции. Экспрессирование BCMA является относительно низким для обеих линий клеток (смотри Lee et al. (2016) Br J Haematol. 174:911-922). RPMI-8226, как показано, являются более чувствительными к леналидомиду по сравнению с OPM-2 (6,43 и 37,4 мкМ, соответственно) (Wellcome Sanger Institute. Genomics of drug sensitivity in cancer. www.cancerrxgene.org/translation/Drug/1020. Accessed February 7, 2018).[0635] Cryo-frozen anti-BCMA CAR+ T lymphocytes are thawed and evaluated for various responses after co-culture with BCMA-expressing target cells in the presence or absence of lenalidomide. In vitro assays to assess destruction target cells and cytokine production are performed using two different target multiple myeloma cell lines expressing BCMA RPMI-8226 or OPM-2. FIG. 1A shows surface BCMA expression assessed by flow cytometry after anti-BCMA antibody staining of exemplary multiple myeloma cell lines including RPMI-8226 and OPM-2. The dashed line shows the background of a BCMA-negative cell line stained with anti-BCMA antibody. MFI is the median fluorescence intensity. BCMA expression is relatively low for both cell lines (see Lee et al. (2016) Br J Haematol. 174:911-922). RPMI-8226 has been shown to be more sensitive to lenalidomide compared to OPM-2 (6.43 and 37.4 µM, respectively) (Wellcome Sanger Institute. Genomics of drug sensitivity in cancer. www.cancerrxgene.org/translation/ Drug/1020, Accessed February 7, 2018).

A. RPMI-8226A. RPMI-8226

1. Цитолитическая активность1. Cytolytic activity

[0636] Клетки целевой линии клеток, экспрессирующих BCMA (RPMI-8226), инкубируют вместе с иллюстративными Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA, экспрессирующими CAR с scFv анти-BCMA человека, при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 0,3:1 в присутствии 1 мкМ или 10 мкМ леналидомида или без леналидомида (несущая среда). Сокультуры с Т-лимфоцитами, не экспрессирующими CAR (имитационных), или культуры только с целевыми клетками (без CAR T) используют как контроли, каждую, в присутствии или в отсутствие (несущая среда) 10 мкМ или 1 мкМ леналидомида. Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях. [0636] Cells of a target cell line expressing BCMA (RPMI-8226) are incubated with exemplary anti-BCMA CAR T lymphocytes expressing human scFv anti-BCMA CARs at an effector to target cell ratio (E:T) of 0, 3:1 in the presence of 1 μM or 10 μM lenalidomide or without lenalidomide (carrier medium). Co-cultures with T lymphocytes not expressing CAR (sham) or cultures with only target cells (no CAR T) are used as controls, each with or without (carrier medium) 10 μM or 1 μM lenalidomide. Cells from each condition are inoculated in triplicate.

[0637] Целевые клетки RPMI-8226 метят NucLight Red (NLR), чтобы дать возможность их отслеживания с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток за период шесть дней, как определяют с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Нормированные количества целевых клеток генерируют посредством деления отсчетов целевых клеток на отсчеты клеток в начале культивирования каждой культуры. Процент гибели целевых клеток оценивают, измеряя площадь под кривой (AUC) для нормированных отсчетов целевых клеток как функции времени и нормировки обратных значений AUC (1/AUC) посредством определения величины 0% (только целевые клетки) и величины 100% (Т-лимфоциты CAR+ культивируемые совместно с целевыми клетками в контроле несущей среды).[0637] Target RPMI-8226 cells are labeled with NucLight Red (NLR) to enable them to be tracked by microscopy. Cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viable target cells over a period of six days, as determined by the red fluorescence signal (using the IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Normalized target cell counts are generated by dividing the target cell counts by the cell counts at the start of each culture. Percent target cell death is assessed by measuring the area under the curve (AUC) for normalized target cell counts as a function of time and normalizing reciprocal AUC values (1/AUC) by determining a value of 0% (target cells only) and a value of 100% (CAR+ T cells). co-cultured with target cells in vehicle control).

[0638] Как показано, сокультивирование в присутствии 1 мкМ (Фиг.1C) или 10 мкМ (Фиг.1B, 1C) леналидомида дает в результате повышение степени гибели целевых клеток под действием Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в день 6 сокультивирования, по сравнению с инкубированием целевых клеток вместе с Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в отсутствие леналидомида (соответствует 100% на Фиг.1B). Как показано на Фиг.1C, наблюдаемое воздействие леналидомида на цитолитическую активность является доза-чувствительным и отсроченным, не проявляющимся, пока не пройдет приблизительно 50 часов выдерживания в культуре. Результаты согласуются с ролью леналидомида при облегчении непрерывного функционирования и/или выживаемости (например, посредством предотвращения истощения или гибели клеток) Т-лимфоцитов CAR после начального активирования. Сходные результаты наблюдают для генно-инженерных клеток, для экспрессирования ряда других CAR анти-BCMA, каждый из них содержит различные домены связывания scFv.[0638] As shown, co-cultivation in the presence of 1 μM (FIG. 1C) or 10 μM (FIGS. 1B, 1C) lenalidomide results in increased target cell death by CAR+ anti-BCMA T-lymphocytes on day 6 of co-cultivation, by compared to incubation of the target cells together with anti-BCMA CAR+ T lymphocytes in the absence of lenalidomide (corresponding to 100% in FIG. 1B). As shown in FIG. 1C, the observed effect of lenalidomide on cytolytic activity is dose-sensitive and delayed, not appearing until approximately 50 hours in culture. The results are consistent with the role of lenalidomide in facilitating continued function and/or survival (eg, by preventing cell depletion or cell death) of CAR T lymphocytes after initial activation. Similar results are observed for engineered cells expressing a number of other anti-BCMA CARs, each containing different scFv binding domains.

2. Продуцирование/аккумуляция цитокинов2. Production/accumulation of cytokines

[0639] Уровни различных цитокинов оценивают в супернатантах культур после инкубирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA с клетками целевой линии клеток, экспрессирующей BCMA, RPMI-8226 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 0,3:1 в присутствии или в отсутствие 10 мкМ леналидомида. Культуру Т-лимфоцитов, не экспрессирующих CAR анти-BCMA (имитационных), используют как контроль. Количества IL-2 (Фиг.2A), IFNγ (Фиг.2B) и TNF-α (Фиг.2C) в супернатантах культур оценивают через 48 часов после начала культивирования. Как показано на Фигурах 2A-2C, присутствие леналидомида связано с повышением CAR-зависимого продуцирования цитокинов и/или аккумуляции после сокультивирования целевых клеток Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA с антиген-специфичными целевыми клетками. Эти результаты согласуются с ролью леналидомида в облегчении CAR-медиируемых эффекторных функций. Сходные результаты наблюдают для клеток, экспрессирующих различные другие CAR анти-BCMA, содержащих, каждая, различные домены связывания scFv.[0639] The levels of various cytokines are assessed in culture supernatants after incubation of anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes with cells of the target cell line expressing BCMA, RPMI-8226 at an effector to target cell ratio (E:T) of 0.3:1 in the presence of or in the absence of 10 μM lenalidomide. A culture of T-lymphocytes not expressing CAR anti-BCMA (sham) was used as a control. The amounts of IL-2 (FIG. 2A), IFNγ (FIG. 2B) and TNF-α (FIG. 2C) in culture supernatants were assessed 48 hours after the start of culture. As shown in Figures 2A-2C, the presence of lenalidomide is associated with an increase in CAR-dependent cytokine production and/or accumulation after co-culture of anti-BCMA CAR+ T-lymphocyte target cells with antigen-specific target cells. These results are consistent with the role of lenalidomide in facilitating CAR-mediated effector functions. Similar results are observed for cells expressing various other anti-BCMA CARs each containing different scFv binding domains.

B. OPM-2B.OPM-2

3. Цитолитическая активность3. Cytolytic activity

[0640] Целевые клетки множественной миеломы OPM-2 инкубируют вместе с Т-лимфоцитами человека (выделенными у четырех различных независимых доноров), экспрессирующими иллюстративный CAR анти-BCMA), при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида, за период 7 дней. Клетки OPM-2 метят NucLight Red (NLR), чтобы дать возможность для отслеживания целевых клеток с помощью микроскопию, по существу, как описано выше. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособности целевых клеток в конце инкубирования. Степень цитолитической активности, наблюдаемая для культур, инкубируемых в отсутствие леналидомида, устанавливается как фон, 100%. Результаты показаны на Фиг.3A. Добавление леналидомида, как наблюдается, улучшает цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA против целевых клеток OPM-2, зависимым от дозы образом. Сходные результаты наблюдают для других CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-BCMA, включая клетки, экспрессирующие различные CAR анти-BCMA, содержащие, каждая, различные домены связывания scFv и/или генно-инженерные клетки, с использованием клеток от разных доноров.[0640] OPM-2 multiple myeloma target cells are incubated with human T lymphocytes (isolated from four different independent donors) expressing exemplary anti-BCMA CAR) at a 1:1 ratio of effector to target cells (E:T) in the presence of 0.01 µM, 0.1 µM, 1.0 µM or 10 µM lenalidomide or in the absence of lenalidomide, over a period of 7 days. OPM-2 cells are labeled with NucLight Red (NLR) to enable tracking of target cells by microscopy, essentially as described above. Cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viability of target cells at the end of incubation. The degree of cytolytic activity observed for cultures incubated in the absence of lenalidomide is set as background, 100%. The results are shown in Fig. 3A. The addition of lenalidomide was observed to improve the cytolytic activity of anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes against target OPM-2 cells in a dose-dependent manner. Similar results are observed for other anti-BCMA CAR-expressing T-lymphocytes, including cells expressing different anti-BCMA CARs each containing different scFv binding domains and/or engineered cells using cells from different donors.

4. Цитокин4. Cytokine

[0641] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, полученные у четырех независимых доноров, инкубируют вместе с целевой линией клеток, экспрессирующих BCMA, OPM-2, при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии 0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (фон, соответствует 100%). После 24 часов культивирования, оценивают присутствие IFNγ (Фиг.3B), IL-2 (Фиг.3C) и TNF-α (Фиг.3D) в супернатантах культур. Как показано на Фигурах 3B-3D, леналидомид, как наблюдется, повышает продуцирование и/или аккумуляцию цитокинов антиген-стимулируемыми Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA зависимым от дозы образом.[0641] Anti-BCMA CAR+ T lymphocytes from four independent donors are incubated with a target cell line expressing BCMA, OPM-2 at an effector to target cell ratio (E:T) of 1:1 in the presence of 0.01 μM, 0.1 μM, 1.0 μM or 10 μM lenalidomide or in the absence of lenalidomide (background, corresponds to 100%). After 24 hours of culture, the presence of IFNγ (FIG. 3B), IL-2 (FIG. 3C) and TNF-α (FIG. 3D) in the culture supernatants is assessed. As shown in Figures 3B-3D, lenalidomide was observed to increase cytokine production and/or accumulation by antigen-stimulated CAR+ anti-BCMA T lymphocytes in a dose dependent manner.

C. Сравнение активности полученных от множества доноров Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMAC. Comparison of multi-donor anti-BCMA activity of CAR+ T-lymphocytes

[0642] В другом исследовании, Т-лимфоциты CAR анти-BCMA от репрезентативного здорового донора и пациента с множественной миеломой (пациент был не поддающимся лечению помалидомидом) инкубируют вместе с флуоресцентно мечеными целевыми клетками OPM-2 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 0,3:1 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида, в течение 6-7 дней. Цитолитическую активность измеряют по потерям красных флуоресцентных клеток. Для оценки продуцирования цитокинов, Т-лимфоциты CAR анти-BCMA, полученные от здорового донора и от пациента с множественной миеломой, сокультивируют с флуоресцентно мечеными целевыми клетками OPM-2 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии различных концентраций леналидомида (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ леналидомида) или в отсутствие леналидомида. Через 24 часа, отбирают образцы сред для оценки присутствия IFNγ и IL-2. Результаты показаны на Фиг.3E, они представляют собой среднее значение для двух экспериментов; антиген-специфичная цитолитическая активность CAR-T анти-BCMA и продуцирование цитокинов, согласно наблюдениям, повышаются под действием леналидомида зависимым от концентрации образом. [0642] In another study, anti-BCMA CAR T lymphocytes from a representative healthy donor and a multiple myeloma patient (the patient was pomalidomide refractory) are incubated with fluorescently labeled OPM-2 target cells at an effector to target cell ratio (E: T) 0.3:1 in the presence of various concentrations of lenalidomide (0.01 μM, 0.1 μM, 1.0 μM or 10 μM lenalidomide) or in the absence of lenalidomide, for 6-7 days. Cytolytic activity is measured by the loss of red fluorescent cells. To assess cytokine production, anti-BCMA CAR T lymphocytes obtained from a healthy donor and from a multiple myeloma patient are co-cultured with fluorescently labeled OPM-2 target cells at an effector to target cell ratio (E:T) of 1:1 in the presence of various lenalidomide concentrations (0.01 μM, 0.1 μM, 1.0 μM or 10 μM lenalidomide) or in the absence of lenalidomide. After 24 hours, take samples of media to assess the presence of IFNγ and IL-2. The results are shown in Fig.3E, they represent the average of two experiments; antigen-specific cytolytic activity of CAR-T anti-BCMA and cytokine production have been observed to be increased by lenalidomide in a concentration dependent manner.

[0643] Исследования, рассмотренные выше, распространяют на Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, генерируемые из клеток от двух дополнительных здоровых доноров. Активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от трех здоровых доноров и одного пациента, не поддающегося лечению с помощью IMiD (пациент донор был не поддающимся лечению помалидомидом), сравнивают с линиями клеток множественной миеломы, экспрессирующих BCMA, как OPM-2, так и RPMI-8226. Цитолитическую активность и продуцирование цитокинов (IFNγ, IL-2 и TNF-α) анализируют, по существу, как описано выше. Вычисляют абсолютные изменения уровней цитокинов относительно контрольной несущей среды. Эксперименты осуществляют 2-3 раза на каждом доноре.[0643] The studies discussed above extend to anti-BCMA CAR+ T lymphocytes generated from cells from two additional healthy donors. Anti-BCMA CAR+ T-lymphocyte activities from three healthy donors and one IMiD refractory patient (donor patient was refractory to pomalidomide) were compared to multiple myeloma cell lines expressing BCMA, both OPM-2 and RPMI-8226. Cytolytic activity and production of cytokines (IFNγ, IL-2 and TNF-α) are analyzed essentially as described above. The absolute changes in cytokine levels relative to the control carrier medium are calculated. Experiments are carried out 2-3 times on each donor.

[0644] Повышенная цитолитическая активность CAR T анти-BCMA против целевых клеток OPM-2, титруемых с увеличением концентрации леналидомида, наблюдается у всех доноров (P=6,2 × 10-5) (Фиг.3F). Как показано на Фиг.3F, влияние лечения леналидомидом на цитолитическую активность CAR T в сокультуре RPMI-8226видимо зависит от донора, при этом пациент донор демонстрирует значительное увеличение цитолитической активности (P=1,9 × 10-8). В дополнение к этому, все доноры CAR T имеют значительно повышенное продуцирование IFN-γ, IL-2 и TNF-α зависимым от концентрации леналидомида образом в сокультуре с клетками OPM-2 (P<0,002, Фиг.3G). Продуцирование цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами в сокультуре с RPMI-8226 также значительно повышается для всех доноров и цитокинов при лечении леналидомидом (P<0,003, Фиг.3H).[0644] Increased cytolytic activity of CAR T anti-BCMA against OPM-2 target cells titrated with increasing concentrations of lenalidomide is observed in all donors (P=6.2×10 -5 ) (FIG. 3F). As shown in FIG. 3F, the effect of lenalidomide treatment on CAR T cytolytic activity in the RPMI-8226 coculture appears to be donor dependent, with the donor patient showing a significant increase in cytolytic activity (P=1.9 x 10 -8 ). In addition, all CAR T donors have significantly increased production of IFN-γ, IL-2 and TNF-α in a lenalidomide concentration-dependent manner in co-culture with OPM-2 cells (P<0.002, Fig. 3G). Cytokine production by CAR-expressing T lymphocytes co-cultured with RPMI-8226 was also significantly increased for all donors and cytokines by lenalidomide treatment (P<0.003, Fig. 3H).

Пример 2 Воздействие леналидомида на размножение T-лимфоцитов CAR и антиген-специфичную функцию при серийном повторном стимулированииExample 2 Effects of Lenalidomide on CAR T-Lymphocyte Proliferation and Antigen-Specific Function in Serial Restimulation

A. Размножение T-лимфоцитов CARA. Proliferation of CAR T-lymphocytes

[0645] Способность Т-лимфоцитов CAR размножаться и демонстрировать антиген-специфичную функцию ex vivo после повторяющихся заходов стимулирования антигеном может коррелировать с функцией in vivo и/или способностью клеток к персистентности in vivo (например, после введения и начального активирования в ответ на встречу с антигеном) (Zhao et al. (2015) Cancer Cell, 28:415-28). Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, генерируемые, как описано выше, инокулируют в трех повторностях при 1 × 105 клеток/лунка в 96-луночных планшетах. Облучаемые целевые клетки, экспрессирующие BCMA (клетки MM1.S), добавляют при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:2 в присутствии или в отсутствие различных концентраций (0,01 мкМ, 0,1 мкМ, 1,0 мкМ или 10 мкМ) леналидомида. [0645] The ability of CAR T lymphocytes to proliferate and exhibit antigen-specific function ex vivo after repeated rounds of antigen stimulation may correlate with in vivo function and/or the ability of cells to persist in vivo (e.g., after administration and initial activation in response to encounter with antigen) (Zhao et al. (2015) Cancer Cell, 28:415-28). Anti-BCMA CAR+ T lymphocytes generated as described above are inoculated in triplicate at 1 x 10 5 cells/well in 96-well plates. Irradiated target cells expressing BCMA (MM1.S cells) are added at an effector to target cell ratio (E:T) of 1:2 in the presence or absence of various concentrations (0.01 μM, 0.1 μM, 1.0 μM or 10 μM) lenalidomide.

[0646] Каждые 3-4 дня (при начале каждого нового захода), Т-лимфоциты CAR считают. Затем клетки харвестируют и повторно инокулируют при начальной плотности посева со свежими средами, вновь добавляемым леналидомидом, при такой же концентрации, где применимо, и заново оттаявшими, заново облученными целевыми клетками. Осуществляют 8 заходов стимулирования в течение периода культивирования 31 день. Для некоторых заходов, при повторном инокулировании, клетки оценивают на фенотипические маркеры с помощью проточной цитометрии. [0646] Every 3-4 days (at the start of each new entry), CAR T-lymphocytes are counted. Cells are then harvested and re-inoculated at initial seeding density with fresh media, newly added lenalidomide at the same concentration, where applicable, and re-thawed, re-irradiated target cells. Carry out 8 visits stimulation during the cultivation period of 31 days. For some visits, upon re-inoculation, cells are assessed for phenotypic markers using flow cytometry.

[0647] Иллюстративные результаты показаны на Фиг.4A. Как показано, увеличение размножения Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA наблюдают в день 14 при всех концентрациях леналидомида, по сравнению с лунками без леналидомида. Анализ осуществляют для различных композиций Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, каждую генерируют посредством введения CAR в Т-лимфоциты, полученные от одного из шести разных доноров. Анализ осуществляют на генно-инженерных клетках от шести различных независимых доноров, для экспрессирования CAR. Для каждого донора, наблюдают увеличение или отсутствие изменений размножения CAR-T при концентрации леналидомида 0,1 мкМ. Фиг.4B показывает результаты сходного анализа, при котором генно-инженерные клетки для экспрессирования двух различных CAR анти-BCMA человека подвергаются воздействию множества заходов стимулирования целевых клеток в присутствии или в отсутствие леналидомида. Как показано, присутствие леналидомида в культурах, как наблюдают, вызывает увеличение размножения в обеих популяциях клеток, начинающееся в пределах между днем 21 и днем 28. Результаты согласуются с тем выводом, что леналидомид может облегчать непрерывное размножение T-лимфоцитов CAR+ и/или выживаемость после повторной встречи с распознанным антигеном.[0647] Illustrative results are shown in Fig. 4A. As shown, an increase in anti-BCMA CAR T lymphocyte proliferation was observed at day 14 at all lenalidomide concentrations compared to wells without lenalidomide. The assay is performed on different compositions of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes, each generated by injecting CAR into T lymphocytes obtained from one of six different donors. The assay is performed on genetically engineered cells from six different independent donors for CAR expression. For each donor, an increase or no change in CAR-T expansion was observed at a concentration of 0.1 μM lenalidomide. 4B shows the results of a similar assay in which genetically engineered cells to express two different human anti-BCMA CARs are exposed to multiple rounds of target cell stimulation in the presence or absence of lenalidomide. As shown, the presence of lenalidomide in cultures was observed to cause an increase in proliferation in both cell populations beginning between day 21 and day 28. Results are consistent with the conclusion that lenalidomide may facilitate continued expansion of CAR+ T-lymphocytes and/or survival after re-encountering a recognized antigen.

B. Отсчеты T-лимфоцитов CAR, продуцирование цитокинов и активированиеB. CAR T-lymphocyte counts, cytokine production and activation

[0648] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA от 3 доноров, генерируемые как описано выше, инокулируют на трех повторностях на 96-луночные планшеты с облучаемыми целевыми клетками, экспрессирующими BCMA (клетки MM1S), при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:2 в присутствии 0,1 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. Условия культивирования устанавливают заново каждые 3-4 дня. Реинокуляцию поддерживают в течение 28 дней или пока отсчет клеток не будет <50000 клеток. Эксперименты осуществляют в трех повторностях на 3 донорах. Уровни цитокинов (IFNγ, IL-2 и TNF-α) оценивают через 24 часа после реинокуляции в дни 5, 8 и 15. Активирование Т-лимфоцитов CAR измеряют на клетках, собранных в дни 4, 7 и 14, с помощью проточной цитометрии для CD25. [0648] 3-donor CAR+ anti-BCMA T lymphocytes generated as described above are inoculated in triplicate on 96-well plates with irradiated target cells expressing BCMA (MM1S cells) at an effector to target cell ratio (E:T ) 1:2 in the presence of 0.1 μM lenalidomide or vehicle control. Culture conditions are set anew every 3-4 days. Reinoculation is maintained for 28 days or until the cell count is <50,000 cells. The experiments are carried out in triplicate on 3 donors. Cytokine levels (IFNγ, IL-2, and TNF-α) are assessed 24 hours after reinoculation on days 5, 8, and 15. CAR T-lymphocyte activation is measured on cells harvested on days 4, 7, and 14 by flow cytometry for CD25.

[0649] Фиг.5A показывает отсчеты клеток (удвоение проективной популяции) of Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA для каждого момента времени повторного стимулирования. “×” показывает недостаточное количество клеток для реинокуляции при анализе. Результаты показывают, что после повторного стимулирования с помощью целевых клеток, все 3 доноры CAR T, леченые леналидомидом, имеют увеличенные отсчеты проективных клеток в течение 28 дней по сравнению с контролем (P <0,003). Фиг.5B показывает медианную интенсивность флуоресценции CD25 (MFI) (настроенную на живых CAR+ CD3+) и Фиг.5C показывает продуцирование цитокинов, нормированное на количество инокулированных клеток. Увеличение отсчетов клеток связывают со значительным увеличением экспрессирования CD25 у CAR T (P<3,4 × 10-4; Фиг.5B) и продуцирования IL-2, IFN-γ и TNF-α в средах (P<0,5; Фиг.5C). Результаты показывают, что отсчеты Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, продуцирование цитокинов и активирование увеличиваются с помощью леналидомида после повторного стимулирования in vitro.[0649] FIG. 5A shows the cell counts (doubling of the projective population) of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes for each restimulation time point. “×” indicates insufficient number of cells to reinoculate in the assay. The results show that after re-stimulation with target cells, all 3 lenalidomide-treated CAR T donors have increased projective cell counts at 28 days compared to controls (P < 0.003). FIG. 5B shows median CD25 fluorescence intensity (MFI) (tuned for live CAR+ CD3+) and FIG. 5C shows cytokine production normalized to number of cells inoculated. The increase in cell counts is associated with a significant increase in CD25 expression in CAR T (P<3.4×10 -4 ; Fig.5B) and the production of IL-2, IFN-γ and TNF-α in media (P<0.5; Fig. .5C). The results show that anti-BCMA CAR T-lymphocyte counts, cytokine production and activation are increased by lenalidomide after in vitro re-stimulation.

Пример 3 Воздействия леналидомида на пролиферацию и активирование CAR-T BCMA в 3D модели миеломы Example 3 Effects of Lenalidomide on Proliferation and Activation of CAR-T BCMA in a 3D Myeloma Model

[0650] Для оценки функции клеток в контексте трехмерного (3-D) микроокружения ткани, экспрессирующей BCMA человека, реконструированный костный мозг (rBone™) (zPREDICTA, San Jose, CA) погружают в экспрессирующие BCMA RPMI-8226. 20000 Т-лимфоцитов, экспрессирующих другой иллюстративный CAR анти-BCMA человека (или имитационных Т-лимфоцитов не экспрессирующих CAR), инкубируют в 3-D модели в присутствии или в отсутствие 1,0 мкМ леналидомида. [0650] To evaluate cell function in the context of the three-dimensional (3-D) microenvironment of tissue expressing human BCMA, reshaped bone marrow (rBone™) (zPREDICTA, San Jose, CA) is immersed in BCMA-expressing RPMI-8226. 20,000 T lymphocytes expressing another exemplary human anti-BCMA CAR (or mock T lymphocytes not expressing CAR) are incubated in a 3-D model in the presence or absence of 1.0 μM lenalidomide.

[0651] Через 2 или 7 дней, клетки выделяют и оценивают с помощью проточной цитометрии на поверхностное экспрессирование CD3, CD25, CD4 и CD8. Как показано на Фиг.6A, присутствие леналидомида, как наблюдается, дает в результате увеличение общего количества клеток CD3+ в культурах с Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в день 7. Увеличение экспрессирования CD25+ в популяциях Т-лимфоцитов CD4+ (Фиг.6B) и CD8+ (Фиг.6C) также наблюдется в присутствии леналидомида. Результаты согласуются с тем выводом, что леналидомид может облегчать увеличение размножения, выживаемости и/или функции Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в антиген-экспрессирующем микроокружении опухоли.[0651] After 2 or 7 days, cells are isolated and evaluated by flow cytometry for surface expression of CD3, CD25, CD4 and CD8. As shown in Figure 6A, the presence of lenalidomide was observed to result in an increase in total CD3+ cell counts in anti-BCMA CAR+ T cell cultures on day 7. An increase in CD25+ expression in CD4+ T cell populations (Figure 6B) and CD8+ (Fig.6C) is also observed in the presence of lenalidomide. The results are consistent with the conclusion that lenalidomide can facilitate the increase in multiplication, survival and/or function of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes in the antigen-expressing tumor microenvironment.

Пример 4 Воздействие леналидомида на функцию T-лимфоцитов CAR in vivoExample 4 Effect of lenalidomide on CAR T-lymphocyte function in vivo

[0652] Противоопухолевые воздействия Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA самих по себе и в сочетании с леналидомидом, оценивают на двух различных моделях опухолей мышей, экспрессирующих BCMA - модели множественной миеломы RPMI 8226 человека привитой мыши (модель подкожного импланта) и модели множественной миеломы OPM-2 человека привитой мыши (ортотропическая модель костного мозга). [0652] The anti-tumor effects of CAR+ anti-BCMA T-lymphocytes alone and in combination with lenalidomide were evaluated in two different BCMA-expressing mouse tumor models, the grafted human multiple myeloma model RPMI 8226 (subcutaneous implant model) and the OPM multiple myeloma model -2 human grafted mice (orthotropic bone marrow model).

A. Модель RPMI-8226 A. Model RPMI-8226

[0653] Мышам делают подкожную инъекцию (s.c.) 5 × 106 клеток RPMI-8226 и дают возможность для роста объема опухоли приблизительно до 150 мм3. В день 0, композицию, содержащую субоптимальную (низкую) дозу Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA (генерируют посредством трансдуцирования клеток, полученных из образцов субъектов доноров людей, по существу, как описано выше), вводят внутривенно мышам (вместе со сходной композицией Т-лимфоцитов, не экспрессирующих CAR (имитационных), используемых как контроль). Конкретно, композиция содержит приблизительно 5 × 105 Т-лимфоцитов CAR+ (или имитационных) CD4+ и 5 × 105 Т-лимфоцитов CAR+ (или имитационных) CD8+. Т-лимфоциты адоптивно переносятся в мышей, сами по себе или в сочетании с леналидомидом, вводимым ежедневно, при 25 мг/кг, внутрибрюшинно (i.p.), начиная в день 0 (вместе с введением T-лимфоцитов), продолжая до дня 21. В другой контрольной группе мышам вводят леналидомид сам по себе, без введения Т-лимфоцитов. Объем опухоли и выживаемость животных отслеживают в течение исследования. Кровь из ретроорбитального (RO) кровотока отбирают еженедельно для оценки уровней BCMA и IFN-гамма в плазме и для фармакокинетической (PK) оценки Т-лимфоцитов CAR+.[0653] Mice are injected subcutaneously (sc) with 5 x 10 6 RPMI-8226 cells and allowed to grow tumor volume to approximately 150 mm 3 . On day 0, a composition containing a suboptimal (low) dose of anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes (generated by transducing cells derived from samples of human donor subjects, essentially as described above) is administered intravenously to mice (together with a similar composition of T- non-CAR-expressing lymphocytes (sham) used as controls). Specifically, the composition contains approximately 5×10 5 CAR+ (or sham) CD4+ T lymphocytes and 5×10 5 CAR+ (or sham) CD8+ T lymphocytes. T-lymphocytes are adoptively transferred into mice, alone or in combination with lenalidomide given daily at 25 mg/kg, intraperitoneally (ip) starting on day 0 (along with T-lymphocyte administration) continuing until day 21. B the other control group of mice is injected with lenalidomide itself, without the introduction of T-lymphocytes. Tumor volume and animal survival are monitored throughout the study. Blood from the retro-orbital (RO) circulation was collected weekly for assessment of plasma levels of BCMA and IFN-gamma and for pharmacokinetic (PK) assessment of CAR+ T-lymphocytes.

[0654] Измерения объема опухоли показаны для отдельных животных на Фиг.7A, введение леналидомида и низкой дозы Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA в сочетании, как наблюдается, дает в результате замедление роста опухоли, по сравнению с мышами, лечеными леналидомидом или только Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA. Наблюдаемое воздействие очевиднее всего в более поздние моменты времени, включая моменты после последнего ежедневного введения леналидомида (то есть, после дня 21). Результаты согласуются со способностью леналидомида к увеличению способности Т-лимфоцитов к долговременной персистентности и/или функционированию. [0654] Tumor volume measurements are shown for individual animals in FIG. 7A, administration of lenalidomide and a low dose of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes in combination was observed to result in slower tumor growth compared to mice treated with lenalidomide or T alone. -lymphocytes CAR+ anti-BCMA. The observed effect is most evident at later time points, including times after the last daily administration of lenalidomide (ie, after day 21). The results are consistent with the ability of lenalidomide to increase the capacity of T-lymphocytes for long-term persistence and/or function.

[0655] Как показано на Фиг.7B, мыши, которые получали леналидомид и Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, демонстрируют увеличение выживаемости по сравнению с другими группами лечения. Средняя выживаемость (мс) мышей, которым вводили Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA и леналидомид, составляет 85 дней (в два раза больше по сравнению с другими группами лечения, которые демонстрируют среднюю выживаемость 38-43,5 дней).[0655] As shown in Fig.7B, mice that received lenalidomide and anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes show an increase in survival compared to other treatment groups. The median survival (ms) of mice treated with CAR+ anti-BCMA T-lymphocytes and lenalidomide is 85 days (twice as long as the other treatment groups, which show a median survival of 38-43.5 days).

[0656] В дополнение к тому, количество Т-лимфоцитов CAR+ CD4+ и CD8+ и Т-лимфоцитов без CAR в периферической крови каждого животного определяют в дни 7, 14, 21 и 34. Количества Т-лимфоцитов CAR CD4+ и Т-лимфоцитов без CAR показаны на Фигурах 8A и 8E (дни 7 и 14), соответственно, и на Фиг.8B и 8F (дни 21 и 34), соответственно. Количества Т-лимфоцитов CAR CD8+ и Т-лимфоцитов без CAR показаны на Фигурах 8C и 8G (дни 7 и 14), соответственно, и на Фиг.8D и 8H (дни 21 и 34), соответственно. Как показано, увеличение количества Т-лимфоцитов CAR+ CD4+ и CD8+ (но не Т-лимфоцитов без CAR+) в крови наблюдают в день 36 у мышей, получающих сочетание Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA и леналидомида, по сравнению с другими группами лечения.[0656] In addition, the number of CAR+ CD4+ and CD8+ T-lymphocytes and T-lymphocytes without CAR in the peripheral blood of each animal is determined on days 7, 14, 21 and 34. CAR CD4+ T-lymphocytes and T-lymphocytes without CAR are shown in Figures 8A and 8E (days 7 and 14), respectively, and in Figures 8B and 8F (days 21 and 34), respectively. The numbers of CAR CD8+ T lymphocytes and non-CAR T lymphocytes are shown in Figures 8C and 8G (days 7 and 14), respectively, and in Figures 8D and 8H (days 21 and 34), respectively. As shown, an increase in the number of CAR+ CD4+ and CD8+ T lymphocytes (but not non-CAR+ T lymphocytes) in the blood was observed on day 36 in mice receiving a combination of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes and lenalidomide, compared with other treatment groups.

B. Модель Opm-2 B. Model Opm-2

i. Исследование 1i. Study 1

[0657] Воздействие леналидомида в сочетании с CAR T анти-BCMA также оценивают на ортотопической модели опухоли мышей с использованием клеток OPM-2. Мышам (NOD.Cg-PrkdcscidIL-2rgtm1Wjl/мыши SzJ (NSG; Jackson Labs)) делают внутривенную инъекцию (i.v.) 2 × 106 клеток OPM2 (множественной миеломы), трансфицированных люциферазой светлячков (OPM2-ffluc). Дают возможность для приживления опухоли в течение 13 дней перед стадированием (за 14 дней до введения T-лимфоцитов CAR) и проверяют приживление с использованием биолюминесцентных изображений. Мышам вводят одну или несколько композиций в разных группах лечения, как следует далее и приводится в Таблице E1.[0657] The effect of lenalidomide in combination with CAR T anti-BCMA is also evaluated in an orthotopic mouse tumor model using OPM-2 cells. Mice (NOD.Cg-Prkdc scid IL-2rg tm1Wjl /SzJ mice (NSG; Jackson Labs)) are intravenously injected with (iv) 2 x 10 6 OPM2 (multiple myeloma) cells transfected with firefly luciferase (OPM2-ffluc). The tumor is allowed to engraft for 13 days before staging (14 days before CAR T-lymphocyte injection) and engraftment is verified using bioluminescent imaging. Mice are administered one or more compositions in different treatment groups, as follows and is given in Table E1.

[0658] Некоторые группы получают 10 мг/кг леналидомида в фосфатно-буферном солевом растворе посредством внутрибрюшинной инъекции, либо (A) начиная в день -1 (за день до введения Т-лимфоцитов CAR+) (леналидомид (A)); либо (B) в день 14 (день 14 после начала введения T-лимфоцитов CAR+) (леналидомид (B)), в каждом случае, ежедневно, в течение всего исследования. В группах, получающих Т-лимфоциты CAR+, CAR анти-BCMA (генерируемые посредством трансдуцирования клеток, полученных из образцов от субъектов доноров людей, по существу, как описано выше) вводят в день 0 (день 14 после инъекции клеток опухоли), при дозе либо 5 × 105 (низкой) либо 1 × 106 (высокой) CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов. Таблица E1 приводит режимы дозирования.[0658] Some groups receive 10 mg/kg of lenalidomide in phosphate-buffered saline via intraperitoneal injection, either (A) starting on day -1 (the day before administration of CAR+ T-lymphocytes) (lenalidomide (A)); or (B) on day 14 (day 14 after the start of CAR+ T-lymphocyte administration) (lenalidomide (B)), in each case, daily, for the duration of the study. In CAR+ T-lymphocyte receiving groups, CAR anti-BCMA (generated by transducing cells obtained from samples from human donor subjects, essentially as described above) is administered on day 0 (day 14 after tumor cell injection), at a dose of either 5 x 10 5 (low) or 1 x 10 6 (high) CAR-expressing T-lymphocytes. Table E1 lists dosing regimens.

Таблица E1: Дизайн исследованияTable E1: Study Design № ГруппыGroup No. Описание группы Group Description Вводимые Т-лимфоциты CAR, (или имитационные -трансдуцированные
Т-лимфоциты)
Injected CAR T-lymphocytes (or sham-transduced
T-lymphocytes)
1one Только опухоль Only tumor 00 22 Имитационные (высокая)simulation (high) (1 × 106)(1 × 10 6 ) 33 Леналидомид (A)Lenalidomide (A) нетNo 4four Леналидомид (B)Lenalidomide (B) нетNo 55 Имитационные+леналидомид (A)Imitation+lenalidomide (A) (1 × 106)(1 × 10 6 ) 66 Имитационные+леналидомид (B)Imitation+lenalidomide (B) (1 × 106)(1 × 10 6 ) 77 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (высокая)T-lymphocytes CAR+ anti-BCMA (high) 1 × 106 1 x 106 8eight Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (низкая)T-lymphocytes CAR+ anti-BCMA (low) 5 × 105 5 ×105 99 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (высокая) + леналидомид (A)T-lymphocytes CAR+ anti-BCMA (high) + lenalidomide (A) 1 × 106 1 x 106 10ten Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (низкая) + леналидомид (A)T cells CAR+ anti-BCMA (low) + lenalidomide (A) 5 × 105 5 ×105 11eleven Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (высокая) + леналидомид (B)T-lymphocytes CAR+ anti-BCMA (high) + lenalidomide (B) 1 × 106 1 x 106 1212 Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA (низкая) + леналидомид (B)T cells CAR+ anti-BCMA (low) + lenalidomide (B) 5 × 105 5 ×105

[0659] Массу опухоли у животных среди в различных группах отслеживают с помощью биолюминесцентных изображений до дня 39 после дозирования T-лимфоцитов CAR+. Для получения биолюминесцентных изображений мыши получают внутрибрюшинные (i.p.) инъекции субстрата люциферина (CaliperLife Sciences, Hopkinton, MA), повторно суспендированного в PBS (15 мкг/г массы тела). Общий световой поток (фотоны/сек) определяют в каждый момент времени. [0659] The mass of the tumor in animals among in different groups tracked using bioluminescent images until day 39 after dosing T-lymphocytes CAR+. For bioluminescent imaging, mice receive intraperitoneal (i.p.) injections of luciferin substrate (CaliperLife Sciences, Hopkinton, MA) resuspended in PBS (15 μg/g body weight). The total luminous flux (photons/sec) is determined at each moment of time.

[0660] Фиг.9A и Фиг.9B показывает результаты для массы опухоли до дня 46, у мышей, леченых леналидомидом ежедневно, начиная в день -1 (леналидомид A), в присутствии или в отсутствие высокой (1 × 106; Фиг.9A) или низкой (5 × 105; Фиг.9B) дозы T-лимфоцитов CAR+. Фиг.9C показывает графики для массы опухоли у отдельных животных до дня 53. Фиг.9D показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ с леналидомидом в день -1 (леналидомид A). Фиг.9E показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ без леналидомида в день -1 (леналидомид A). Звездочки показывают смерть или умерщвление отдельного животного в момент времени, показанный на графике. Как показано, добавление леналидомида, как наблюдается, дает в результате замедление роста опухоли и уменьшение массы опухоли у мышей, которым вводят Т-лимфоциты CAR+, при обеих дозах T-лимфоцитов CAR+. [0660] Figures 9A and Figure 9B show results for tumor weight up to day 46, in mice treated with lenalidomide daily starting on day -1 (lenalidomide A), in the presence or absence of high (1×10 6 ; Fig. 9A) or low (5 x 10 5 ; Fig. 9B) dose of CAR+ T-lymphocytes. Figure 9C shows graphs for tumor mass in individual animals up to day 53. Figure 9D shows graphs and tumor imaging results (day 46 after CAR+ cell injection) for individual animals receiving a higher dose of CAR+ with lenalidomide on day -1 (lenalidomide A ). 9E shows graphs and tumor imaging results (day 46 after CAR+ cell injection) for selected animals receiving a higher dose of CAR+ without lenalidomide on day -1 (lenalidomide A). The asterisks indicate the death or killing of an individual animal at the time shown in the graph. As shown, the addition of lenalidomide has been observed to result in slower tumor growth and reduced tumor mass in mice administered with CAR+ T-lymphocytes at both doses of CAR+ T-lymphocytes.

[0661] Фиг.9F и Фиг.9G показывают результаты по массе опухоли в момент времени, при исследованиях на мышах, которым вводят леналидомид, начиная с дня 14 после введения T-лимфоцитов CAR+ (леналидомид B) (вертикальные линии на Фигурах 9F и 9G) в присутствии или в отсутствие высокой (1 × 106, Фиг.9F) или низкой (5 × 105, Фиг.9G) дозы T-лимфоцитов CAR+. Фиг.9H показывает графики для массы опухоли отдельных животных до дня 53. Фиг.9I показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ с леналидомидом в день -1 (леналидомид A). Фиг.9J показывает графики и результаты изображений опухоли (день 46 после введения клеток CAR+) для отдельных животных, получающих более высокую дозу CAR+ без леналидомида в день -1 (леналидомид A). Как показано, в то время как леналидомид сам по себе, как наблюдается, не уменьшает роста опухоли или массы опухоли, добавление леналидомида, как наблюдается, дает в результате тренд в направлении замедления роста опухоли и уменьшения массы опухоли у мышей, которым вводят обе дозы Т-лимфоцитов CAR, с четкими различиями, наблюдаемыми, начиная в день 30-40 после инъекции T-лимфоцитов CAR, для более высокой (1 × 106) дозы Т-лимфоцитов CAR+. При такой дозе, сочетание с леналидомидом, как наблюдается, замедляет рост опухоли, дают ли его в день -1 или посредством отсроченного дозирования. [0661] Fig.9F and Fig.9G show the results of tumor weight at time point, in studies on mice administered lenalidomide, starting from day 14 after the introduction of T-lymphocytes CAR+ (lenalidomide B) (vertical lines in Figures 9F and 9G ) in the presence or absence of a high (1 x 10 6 , Fig. 9F) or low (5 x 10 5 , Fig. 9G) dose of CAR+ T-lymphocytes. Figure 9H shows plots for tumor weight of individual animals up to day 53. Figure 9I shows plots and tumor imaging results (day 46 after CAR+ cell injection) for individual animals receiving a higher dose of CAR+ with lenalidomide on day -1 (lenalidomide A) . 9J shows graphs and tumor imaging results (day 46 after CAR+ cell injection) for selected animals receiving a higher dose of CAR+ without lenalidomide on day -1 (lenalidomide A). As shown, while lenalidomide alone was not observed to reduce tumor growth or tumor mass, the addition of lenalidomide was observed to result in a trend towards slowing tumor growth and decreasing tumor mass in mice treated with both doses of T -lymphocytes CAR, with clear differences observed starting on day 30-40 after the injection of T-lymphocytes CAR, for a higher (1 × 10 6 ) dose of T-lymphocytes CAR+. At this dose, combination with lenalidomide has been observed to slow tumor growth, whether given on day -1 or via delayed dosing.

[0662] Результаты выживаемости в момент времени в исследованиях показаны на Фигурах 10A и 10B (для групп, получающих леналидомид с помощью режимов (d-1) и B (d.14 после CAR (отсроченный) соответственно), и Фигуры 10C и 10D (для групп, получающих высокие и низкие дозы CAR, соответственно). Как показано, добавление леналидомида улучшает воздействие на выживаемость, наблюдаемую у мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA (как при высоких, так и при низких оцениваемых дозах), когда они вводятся либо в день -1 (A), либо посредством отсроченного (d.14) дозирования (B). [0662] The results of survival at time point in the studies are shown in Figures 10A and 10B (for groups receiving lenalidomide with regimens (d-1) and B (d.14 after CAR (delayed) respectively), and Figures 10C and 10D ( for high and low dose CAR groups, respectively.) The addition of lenalidomide has been shown to improve the impact on survival observed in mice treated with anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes (at both high and low doses evaluated) when they administered either on day -1 (A) or via delayed (d.14) dosing (B).

[0663] Таблица E2 приводит медианную выживаемость (мс) (как оценивается в день 56 после введения Т-лимфоцитов CAR+) и количество мышей в группе, выживающей до дня 56 после введения Т-лимфоцитов CAR+, для каждой группы животных, оцениваемых в этом исследовании.[0663] Table E2 lists the median survival (ms) (as assessed at day 56 post-treatment with CAR+ T-lymphocytes) and the number of mice per group surviving to day 56 post-treatment with CAR+ T-lymphocytes for each group of animals evaluated in this study .

ТАБЛИЦА E2: ВЫЖИВАЕМОСТЬTABLE E2: SURVIVAL ГруппаGroup Доза клетокDose of cells Медианная выживаемость
(оцениваемая в день 6)
Median survival
(assessed on day 6)
Количество животных, выживших в день 56 после CAR TNumber of animals surviving day 56 after CAR T
Имитационные (высокая)simulation (high) 1,00E+061.00E+06 2424 0/80/8 Леналидомид (A)Lenalidomide (A) N/AN/A 2828 0/80/8 Леналидомид (B)Lenalidomide (B) N/AN/A 2525 0/80/8 Имитационные+леналидомид (A)Imitation+lenalidomide (A) 1,00E+061.00E+06 2828 0/80/8 Имитационные+леналидомид (B)Imitation+lenalidomide (B) 1,00E+061.00E+06 2525 0/80/8 Т-лимфоциты CAR+ (высокая)T-lymphocytes CAR+ (high) 1,00E+061.00E+06 5656 2/82/8 Т-лимфоциты CAR+ (низкая)T-lymphocytes CAR+ (low) 5,00E+055.00E+05 3535 0/80/8 Т-лимфоциты CAR+ (высокая) + леналидомид (A)T-lymphocytes CAR+ (high) + lenalidomide (A) 1,00E+061.00E+06 N/AN/A 6/86/8 Т-лимфоциты CAR+ (низкая) + леналидомид (A)T-lymphocytes CAR+ (low) + lenalidomide (A) 5,00E+055.00E+05 5252 1/81/8 Т-лимфоциты CAR+ (высокая) + леналидомид (B)T-lymphocytes CAR+ (high) + lenalidomide (B) 1,00E+061.00E+06 N/AN/A 6/86/8 Т-лимфоциты CAR+ (низкая) + леналидомид (B)T cells CAR+ (low) + lenalidomide (B) 5,00E+055.00E+05 3636 2/82/8

(ii.) Исследование 2(ii.) Study 2

[0664] При дополнительных исследованиях, мышам NOD/Scid/gc-/- (NSG) вводят инъекцию (i.v.) клеток OPM-2-люциферазы, как описано в Исследовании 1, выше, и дают возможность для приживления в течение 14 дней перед вливанием (i.v.) клеток CAR-T (или имитационных). В некоторых группах, ежедневное внутрибрюшинное введение 10 мг/кг леналидомида или контрольной несущей среды начинают либо в день -1 (за день до введения CAR-T) (одновременно леналидомид (леналидомид (C) или несущая среда (несущая среда (C)), либо в день 14 после введения T-лимфоцитов CAR (или имитационных) (отсроченный леналидомид (D)). [0664] In additional studies, NOD/Scid/gc -/- (NSG) mice are injected with (iv) OPM-2-luciferase cells as described in Study 1 above and allowed to engraft for 14 days prior to infusion (iv) CAR-T (or sham) cells. In some groups, daily intraperitoneal administration of 10 mg/kg of lenalidomide or vehicle control is started either on day -1 (the day before CAR-T administration) (simultaneously with lenalidomide (lenalidomide (C) or vehicle (vehicle (C)), or on day 14 after administration of CAR (or sham) T-lymphocytes (delayed lenalidomide (D)).

[0665] Через 14 дней после инъекции клеток опухоли (день 0), делают внутривенную инъекцию субтерапевтической дозы Т-лимфоцитов CAR+ (1 × 106 Т-лимфоцитов CAR (генерируемых от двух разных доноров)) или имитационных контрольных клеток. Результаты показаны на Фиг.10E, 10F, 10G и 10H. Данные представлены как среднее значение ± SEM (среднеквадратичное отклонение). Для выживаемости in vivo используют тест Гехана-Бреслоу-Вилкоксона для сравнения групп.[0665] 14 days after tumor cell injection (day 0), an intravenous injection of a sub-therapeutic dose of CAR+ T lymphocytes (1 x 10 6 CAR T lymphocytes (generated from two different donors)) or sham control cells is given. The results are shown in Fig.10E, 10F, 10G and 10H. Data are presented as mean ± SEM (standard deviation). For in vivo survival, the Gehan-Breslow-Wilcoxon test is used to compare groups.

[0666] Фиг.10E показывает результаты оценки массы опухоли до дня 60, как анализируют с помощью биолюминесценции, измеренной с помощью проточной цитометрии. Добавление леналидомида, как наблюдается, дает в результате замедление роста опухоли и уменьшение массы опухоли у мышей, которым вводят Т-лимфоциты CAR+, генерируемые из клеток обоих доноров. Как показано на Фиг.10F, добавление леналидомида, как наблюдается, улучшает воздействие на выживаемость у мышей, леченых Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA, особенно после одновременного введения леналидомида. Линейные модели с фиксированным воздействием или со смешанным воздействием используют для оценки значимости лечения леналидомидом для цитолитической активности, при этом лечение, донор и время рассматриваются как фиксированные воздействия, а животное рассматривается как случайное воздействие, вложенные с помощью времени, когда повторяющиеся измерения получают от одного и того же животного. Значения P получают с помощью тестов отношения вероятностей, сравнивая полную модель с представляющим интерес воздействием с моделью без воздействия, представляющего интерес. Одновременное добавление леналидомида ведет к значимому уменьшению массы опухоли для донора 1 (P=0,02) и увеличение выживаемости для донора 1 (P=0,057) и донора 2 (P=0,04), по сравнению с животными, лечеными несущей средой, которым делают инъекцию только CAR T анти-BCMA. Животные на режиме одновременного дозирования леналидомида также показывают увеличение отсчетов CAR T в периферической крови через 7 дней (P=7,3 × 10-6), но в более поздние моменты времени. Леналидомид оказывает малое, но значимое воздействие вместе с имитационными CAR T на массу опухоли только для донора 1 (P=0,003). В этом исследовании, добавление отсроченного дозирования леналидомида не улучшает исчезновение опухоли и выживаемость для обоих доноров CAR T. Результаты показывают, что выживаемость и исчезновение опухоли под действием субтерапевтической дозы CAR-T анти-BCMA усиливаются леналидомидом в модели опухоли OPM-2 in vivo. [0666] FIG. 10E shows the results of tumor weight assessment up to day 60 as analyzed by bioluminescence measured by flow cytometry. The addition of lenalidomide has been observed to result in slower tumor growth and reduced tumor mass in mice treated with CAR+ T-lymphocytes generated from both donor cells. As shown in FIG. 10F, the addition of lenalidomide has been observed to improve the impact on survival in mice treated with anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes, especially after co-administration of lenalidomide. Fixed-exposure or mixed-exposure linear models are used to assess the significance of lenalidomide treatment for cytolytic activity, with treatment, donor, and time considered as fixed exposures, and the animal treated as random exposure nested over time, with repeated measurements obtained from one and the same time. the same animal. P values are obtained by probability ratio tests comparing the full model with the impact of interest to the model without the impact of interest. Simultaneous addition of lenalidomide leads to a significant decrease in tumor mass for donor 1 (P=0.02) and an increase in survival for donor 1 (P=0.057) and donor 2 (P=0.04), compared with vehicle treated animals, who are injected with CAR T anti-BCMA only. Animals on the simultaneous dosing regimen of lenalidomide also show an increase in peripheral blood CAR T counts after 7 days (P=7.3×10 -6 ), but at later time points. Lenalidomide had a small but significant effect, along with sham CAR T, on tumor mass for donor 1 only (P=0.003). In this study, the addition of delayed dosing lenalidomide did not improve tumor vanishing and survival for both CAR T donors. The results show that survival and tumor vanishing with a subtherapeutic dose of CAR-T anti-BCMA is enhanced by lenalidomide in an in vivo OPM-2 tumor model.

[0667] Кровь от леченых мышей собирают для фармакокинетического анализа CAR-T, и клетки окрашивают антителами для исключения специфичных к антигенам мыши клеток (H2-kd, TER119 и muCD45) и анализируют их с помощью проточной цитометрии. Клетки гейтируют на CAR+ CD45+ и CD3+ и определяют количество клеток на микролитр крови. Для фармакокинетических измерений, каждый момент времени анализируют с помощью одностороннего теста ANOVA и post-hoc теста Тьюки. Фигуры 10G и 10H показывают проточный цитометрический анализ имитационных контрольных клеток и Т-лимфоцитов CAR в крови мышей в дни 8, 14, 22 и 28 после инъекции Т-лимфоцитов CAR от двух доноров. Результаты показывают, что наблюдается увеличение отсчетов Т-лимфоцитов CAR в периферической крови в ранние моменты времени, в частности, после одновременного введения леналидомида (**P<0,01).[0667] Blood from treated mice is collected for CAR-T pharmacokinetic analysis and cells are stained with antibodies to exclude mouse specific cells (H2-kd, TER119 and muCD45) and analyzed by flow cytometry. Cells are gated to CAR+ CD45+ and CD3+ and the number of cells per microliter of blood is determined. For pharmacokinetic measurements, each time point is analyzed using a one-way ANOVA test and Tukey's post-hoc test. Figures 10G and 10H show flow cytometric analysis of sham control cells and CAR T lymphocytes in the blood of mice on days 8, 14, 22 and 28 after injection of CAR T lymphocytes from two donors. The results show that there is an increase in peripheral blood CAR T-lymphocyte counts at early time points, in particular after co-administration of lenalidomide (**P<0.01).

Пример 5 Воздействия леналидомида на пролиферацию CAR анти-CD19 при субоптимальном стимулированииExample 5 Effects of lenalidomide on anti-CD19 CAR proliferation upon suboptimal stimulation

[0668] CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 генерируются посредством генной инженерии Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ (которые выделяют посредством обогащения на основе иммунноафинности у субъектов здоровых доноров людей) с помощью вирусного вектора, кодирующего CAR анти-CD19. CAR, содержащий scFv анти-CD19, спейсер, полученный из Ig, трансмембранный домен, полученный из CD28 человека, внутриклеточный сигнальный домен полученный из 4-1BB человека, и сигнальный домен, полученный из CD3 зета человека. Конструкция нуклеиновых кислот, кодирующая CAR, также содержит усеченную последовательность EGFR (tEGFR) для использования в качестве маркера трансдукции, отделенную от последовательности CAR саморасщепляющейся последовательностью T2A. [0668] Anti-CD19 CAR-expressing T lymphocytes are generated by genetically engineering CD4+ and CD8+ T lymphocytes (which are isolated by immunoaffinity-based enrichment in healthy human donor subjects) with a viral vector encoding anti-CD19 CAR. CAR containing anti-CD19 scFv, an Ig-derived spacer, a transmembrane domain derived from human CD28, an intracellular signaling domain derived from human 4-1BB, and a signaling domain derived from human CD3 zeta. The nucleic acid construct encoding CAR also contains a truncated EGFR sequence (tEGFR) for use as a transduction marker, separated from the CAR sequence by a T2A self-cleaving sequence.

[0669] Т-лимфоциты CAR анти-CD19 подвергаются субоптимальному стимулированию посредством инкубирования вместе с анти-CD3 (без второго реагента, такого как анти-CD28, сконструированного для получения костимуляторного сигнала), в присутствии 5 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 метятся красителем CELLTRACE VIOLET (CTV; ThermoFisher Scientific, Waltham MA) перед инкубированием; пролиферацию оценивают с помощью оценки разбавления красителя с помощью проточной цитометрии. Как показано на Фиг.11, в контексте субоптимальных условий стимулирования в течение периода 72 часа, леналидомид, как наблюдается, имеет усиленную пролиферацию Т-лимфоцитов CAR+.[0669] Anti-CD19 CAR T lymphocytes are suboptimally stimulated by incubation with anti-CD3 (without a second reagent such as anti-CD28 engineered to produce a costimulatory signal), in the presence of 5 μM lenalidomide or vehicle control. CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes are labeled with CELLTRACE VIOLET (CTV; ThermoFisher Scientific, Waltham MA) prior to incubation; proliferation is assessed by assessing the dilution of the dye using flow cytometry. As shown in FIG. 11, in the context of suboptimal stimulation conditions over a period of 72 hours, lenalidomide was observed to have increased proliferation of CAR+ T lymphocytes.

Пример 6 Наблюдаемое соотношения между результатами лечения и уровнями Т-лимфоцитов CAR+ в периферической крови в когорте субъектов людей, которым вводят CAR-экспрессирующие клетки анти-CD19.Example 6 Observed relationship between treatment outcomes and peripheral blood CAR+ T-lymphocyte levels in a cohort of human subjects administered CAR-expressing anti-CD19 cells.

[0670] Результаты лечения и количества Т-лимфоцитов CAR+ в крови оценивают на двадцати восьми взрослых субъектах с возвратной или не поддающейся лечению (R/R) неходжкинской лимфомой (NHL), которым вводят аутологичные Т-лимфоциты, экспрессирующие нацеленный на CD19 химерный рецептор антигена (CAR), содержащий антитело scFv анти-CD19 и внутриклеточный сигнальный домен 4-1BB (вводимые при отношении CD4+ к Т-лимфоцитам CAR+ CD8+ приблизительно 1:1). [0670] Treatment outcomes and blood CAR+ T-lymphocyte counts are evaluated in twenty-eight adult subjects with relapsing or refractory (R/R) non-Hodgkin's lymphoma (NHL) treated with autologous T-lymphocytes expressing a CD19-targeted chimeric antigen receptor (CAR) containing an anti-CD19 scFv antibody and a 4-1BB intracellular signaling domain (administered at a ratio of CD4+ to CAR+ CD8+ T-lymphocytes of approximately 1:1).

[0671] До введения CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, субъектов лечат 30 мг/м2 флударабина ежедневно в течение 3 дней и 300 мг/м2 циклофосфамида ежедневно в течение 3 дней. В d=0, субъектов лечат 5 × 107 (DL-1) или 1 × 108 (DL-2) CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов с помощью внутривенного вливания. [0671] Prior to administration of CAR-expressing T-lymphocytes, subjects are treated with 30 mg/m 2 fludarabine daily for 3 days and 300 mg/m 2 cyclophosphamide daily for 3 days. At d=0, subjects are treated with 5 x 10 7 (DL-1) or 1 x 10 8 (DL-2) CAR-expressing T lymphocytes by intravenous infusion.

[0672] Доли реакции, наблюдаемые в конкретный момент времени при осуществляемом исследовании, показаны в Таблице E3 для когорты из 20 субъектов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой (DLBCL), которых лечат однократной дозой DL-1. Как показано, наблюдается общая доля реакции (ORR) 80% (16/20), и 60% (12/20) субъектов, как наблюдается, достигают полной ремиссии (CR). 20% (4/20) субъектов демонстрируют частичную реакцию (PR) и 20% (4/20) демонстрируют прогрессирующее заболевание (PD). Из субъектов, не поддающихся химиотерапии (демонстрирующих стабильное или прогрессирующее заболевание после последнего режима химиотерапии или возврат заболевания менее чем 12 месяцев после аутологичных SCT) перед введением Т-лимфоцитов CAR+, общая доля реакции составляет 83% (10 ORR, 7 CR, 3 PR, 2 PD, n=12). Среди субъектов, не поддающихся лечению (демонстрирующих ремиссию меньше полной после последнего лечения, но не считающихся не поддающимися химиотерапии), общая доля реакции составляет 77% (13 ORR, 9 CR, 4 PR, 4PD, n=17). [0672] The response rates observed at a particular time point in the ongoing study are shown in Table E3 for a cohort of 20 subjects with diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) treated with a single dose of DL-1. As shown, an overall response rate (ORR) of 80% (16/20) is observed, and 60% (12/20) of subjects are observed to achieve complete remission (CR). 20% (4/20) of subjects show a partial response (PR) and 20% (4/20) show progressive disease (PD). Of chemotherapy-refractory subjects (showing stable or progressive disease after the last chemotherapy regimen or disease recurrence less than 12 months after autologous SCTs) before administration of CAR+ T-lymphocytes, the overall response rate is 83% (10 ORR, 7 CR, 3 PR, 2PD, n=12). Among non-responders (showing less than complete remission after the last treatment but not considered non-responders), the overall response rate is 77% (13 ORR, 9 CR, 4 PR, 4PD, n=17).

Таблица E3. Общая реакцияTable E3. General reaction Когорта с DLBCL, однодозовый режим DL1 DLBCL cohort, DL1 single dose regimen Все (n=20)All (n=20) Не поддающиеся
лечению*
(n=17)
Not amenable
treatment *
(n=17)
Не поддающиеся

Figure 00000017

(n=12)Not amenable
Figure 00000017

(n=12) ORR, n (%) [95% CI]ORR, n (%) [95% CI] 16 (80) [56, 94]16 (80) [56, 94] 13 (77) [50, 93]13 (77) [50, 93] 10 (83) [52, 98]10 (83) [52, 98] CR, n (%) [95% CI]CR, n (%) [95% CI] 12 (60) [36, 81]12 (60) [36, 81] 9 (53) [28, 77]9 (53) [28, 77] 7 (58) [28, 85]7 (58) [28, 85] PRPR 4 (20)4 (20) 4 (24)4 (24) 3 (25)3 (25) PDPD 4 (20)4 (20) 4 (24)4 (24) 2 (17)2 (17)

*<CR при последней терапии*<CR at last therapy

Figure 00000018
или PD при последнем режиме химиотерапии или возобновление заболевания <12 месяцев после аутологичных SCT
Figure 00000018
or PD on last chemotherapy regimen or disease recurrence <12 months after autologous SCT

[0673] Из трех субъектов с DLBCL, которых во время оценки лечат двумя дозами DL-1, двое демонстрируют частичную реакцию (PR) и 1 демонстрирует прогрессирующее заболевание (PD). Среди 2 субъектов, которых во время оценки лечат одной дозой DL-2, оба субъекта, как наблюдается, достигают CR. В когорте с MCL с двумя субъектами в целом, подвергаемых лечению во время оценки одной дозой DL-1, наблюдают 1 PR и 1 PD. Два субъекта с двойной дозой, три субъекты с тройной дозой и четыре субъекта с двойной дозой экспрессора DLBCL, как наблюдается, для достигают реакции (7 CR, 2 PR). [0673] Of the three subjects with DLBCL who are treated with two doses of DL-1 at the time of evaluation, two show a partial response (PR) and 1 shows progressive disease (PD). Among 2 subjects treated with a single dose of DL-2 at the time of evaluation, both subjects were observed to achieve CR. In the MCL cohort with 2 total subjects treated at the time of evaluation with a single dose of DL-1, 1 PR and 1 PD are observed. Two double dose subjects, three triple dose subjects, and four double dose subjects of DLBCL Expressor were observed to achieve a response (7 CR, 2 PR).

[0674] Количество Т-лимфоцитов CAR+ в периферической крови определяют в определенные моменты времени после лечения с использованием трансгенно-специфичного реагента. Количество Т-лимфоцитов CAR+/CD3+ в периферической крови, измеренное в определенные моменты времени после вливания, показано для субъектов, сгруппированных по наилучшей общей реакции, на Фиг.12A. У респондеров наблюдают более высокие пиковые количества Т-лимфоцитов CAR+/CD3+ (CR/PR), чем у субъектов с прогрессирующим заболеванием (PD). Фигуры 12B-D показывают уровни Т-лимфоцитов CAR+/CD3+, Т-лимфоцитов CAR+/CD4+ и Т-лимфоцитов CAR+/CD8+ (клеток/мкл крови; среднее значение ±SEM) у субъектов, которые достигают реакции на лечение, сгруппированных по продолжительности реакции (непрерывная реакция (CR/PR) или PD при 3 месяца). Cmax (клетки CAR+/мкл крови) и площадь под кривой (AUC) для респондеров (CR/PR) и PD показаны в Таблице E4. Результаты согласуются с тем выводом, что стойкие реакции коррелируют с более высокими уровнями Т-лимфоцитов CAR+/CD3+ в крови, со временем и при пиковом размножении.[0674] The number of CAR+ T-lymphocytes in peripheral blood is determined at certain time points after treatment using a transgene-specific reagent. Peripheral blood CAR+/CD3+ T-lymphocyte counts measured at specific time points after infusion are shown for subjects grouped by best overall response in FIG. 12A. Responders show higher peak CAR+/CD3+ (CR/PR) T-lymphocyte counts than subjects with progressive disease (PD). Figures 12B-D show the levels of CAR+/CD3+ T-lymphocytes, CAR+/CD4+ T-lymphocytes, and CAR+/CD8+ T-lymphocytes (cells/µl of blood; mean ±SEM) in subjects who achieve response to treatment, grouped by duration of response (continuous response (CR/PR) or PD at 3 months). C max (CAR+ cells/µl blood) and area under the curve (AUC) for responders (CR/PR) and PD are shown in Table E4. The results are consistent with the finding that persistent responses correlate with higher blood levels of CAR+/CD3 + T-lymphocytes over time and at peak reproduction.

Таблица E4. Cmax и AUC0-28 выше у пациентов с CR/PR по сравнению с PDTable E4. C max and AUC 0-28 are higher in patients with CR/PR compared with PD CD3CD3 CD4CD4 CD8CD8 CR/PR
(n=16)
CR/PR
(n=16)
PD
(n=4)
PD
(n=4)
CR/PR
(n=16)
CR/PR
(n=16)
PD
(n=4)
PD
(n=4)
CR/PR
(n=16)
CR/PR
(n=16)
PD
(n=4)
PD
(n=4)
Cmax (клетки CAR+ /мкл крови)C max (CAR+ cells / µl of blood) Среднее значение (SD)Mean value (SD) 612 (1919)612 (1919) 2 (1)2(1) 220 (754)220 (754) 1 (0,6)1 (0.6) 426 (1314)426 (1314) 0,5 (0,5)0.5 (0.5) Медианное значение (Min, Max)Median value (Min, Max) 33 (1, 7726)33 (1, 7726) 1 (1, 3)1 (1, 3) 8 (1, 3040)8 (1, 3040) 1 (0, 2)1 (0, 2) 4 (0, 5238)4 (0.5238) 0,3 (0, 1)0.3 (0.1) Q1, Q3Q1, Q3 7, 1237, 123 0,7, 20.7, 2 2, 462, 46 0,6, 20.6, 2 0,8, 1040.8, 104 0,1, 0,90.1, 0.9 AUC0-28 AUC 0-28 Среднее значение (SD)Mean value (SD) 5883 (18821)5883 (18821) 16 (13)16 (13) 2369 (8388)2369 (8388) 10 (7)10 (7) 3873 (11963)3873 (11963) 6 (6)6 (6) Медианное значение (Min, Max)Median value (Min, Max) 196 (11, 75773)196 (11, 75773) 14 (4, 31)14 (4, 31) 47 (7, 33740)47 (7, 33740) 9 (3, 17)9 (3, 17) 23
(1, 47834)
23
(1, 47834)
4 (1, 14)4 (1, 14)
Q1, Q3Q1, Q3 52, 78152, 781 5, 265, 26 16, 26116, 261 4, 164, 16 4, 7614,761 1, 101, 10

[0675] Для одного субъекта с не поддающейся химиотерапии трансформированной DLBCL (субтип герминального центра с перегруппировкой BCL2 и множеством копий MYC и BCL6), которому вводят Т-лимфоциты CAR+ при DL-1, количества Т-лимфоцитов CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ в периферической крови, измеренные в определенные моменты времени, показаны на Фиг.13A. Субъект ранее лечился ими и был неподдающимся лечению с помощью предыдущих пяти линий терапии, включая этопозид с индивидуально подобранной дозой, доксорубицин и циклофосфамид с винкристином и преднизоном плюс ритуксимаб (DA-EPOCH-R) и трансплантацию аллогенных стволовых клеток промежуточной интенсивности от 8/8 HLA согласованного неродственного донора. После трансплантации аллогенных стволовых клеток и перед приемом Т-лимфоцитов CAR+, субъект показывал 100% донорский химеризм во всех линиях клеток крови, он прекратил принимать иммуносупрессорную терапию и не имел реакции трансплантата против хозяина (GVHD). Перед введением Т-лимфоцитов CAR+ субъект имел массу, расположенную вокруг ушной раковины, и повреждение височной доли головного мозга, наблюдаемое с помощью позитронно-эмиссионной томографии и компьютерной томографии (ПЭТ-КТ) (Фиг.13B) и подтвержденное с помощью магнитной резонансной томографии (МРТ) (Фиг.13D).[0675] For one subject with chemo-refractory transformed DLBCL (germinal center subtype with BCL2 rearrangement and multiple copies of MYC and BCL6) administered CAR+ T lymphocytes at DL-1, CD3+/CAR+, CD4+/CAR+ T cell counts, CD8+/CAR+ in peripheral blood measured at specific time points are shown in FIG. 13A. Subject previously treated with them and was refractory to the previous five lines of therapy, including individually titrated etoposide, doxorubicin and cyclophosphamide with vincristine and prednisone plus rituximab (DA-EPOCH-R) and intermediate-intensity allogeneic stem cell transplantation from 8/8 HLA matched unrelated donor. Following allogeneic stem cell transplantation and prior to receiving CAR+ T-lymphocytes, the subject showed 100% donor chimerism in all blood cell lines, ceased immunosuppressive therapy, and had no graft-versus-host disease (GVHD). Prior to administration of CAR+ T-lymphocytes, the subject had an auricular mass and temporal lobe damage observed by positron emission tomography and computed tomography (PET-CT) (Fig. 13B) and confirmed by magnetic resonance imaging ( MRI) (Fig. 13D).

[0676] После получения лечения Т-лимфоцитами CAR анти-CD19, субъект достигает CR через 28 дней после вливания, как показывает ПЭТ-КТ (Фиг.13C) и MRI головного мозга (Фиг.13E), без наблюдаемых признаков нейротоксичности или CRS. Через три месяца после вливания Т-лимфоцитов CAR, у субъекта отмечают появление массы, расположенной вокруг ушной раковины (Фиг.13F), и осуществляют инцизионную биопсию. Как показано на Фиг.13A, после биопсии, видимая опухоль уменьшилась без дополнительной терапии. Фармакокинетический анализ показал заметное повторное размножение Т-лимфоцитов CAR+ в периферической крови (до уровня выше наблюдаемого начального размножения, с пиковыми уровнями, наблюдаемыми примерно через 113 дней после вливания), что совпало с регрессией опухоли. Затем субъект начал достигать второго CR, как подтверждается посредством повторного стадирования ПЭТ-КТ через месяц после биопсии (Фиг.13G), и сохраняет CR 6 месяцев после вливания Т-лимфоцитов CAR. Дополнительная оценка субъекта показала, что реакция CNS является стойкой и субъект сохраняет CR 12 месяцев.[0676] After receiving treatment With anti-CD19 CAR T-lymphocytes, the subject achieves CR 28 days post-infusion as shown by PET-CT (FIG. 13C) and brain MRI (FIG. 13E), with no observable signs of neurotoxicity or CRS. Three months after the infusion of CAR T-lymphocytes, the appearance of a mass located around the pinna is noted in the subject (Fig. 13F) and an incisional biopsy is performed. As shown in Fig. 13A, after the biopsy, the visible tumor decreased without additional therapy. Pharmacokinetic analysis showed a marked regrowth of CAR+ T-lymphocytes in peripheral blood (to a level above the observed initial proliferation, with peak levels observed approximately 113 days post-infusion), coinciding with tumor regression. The subject then began to achieve a second CR, as confirmed by PET-CT re-staging one month after the biopsy (FIG. 13G), and maintained a CR 6 months after infusion of CAR T-lymphocytes. Additional evaluation of the subject showed that the CNS response is persistent and the subject maintains CR for 12 months.

[0677] Эти результаты согласуются с тем выводом, что повторное размножение и активирование Т-лимфоцитов CAR+ может инициироваться in vivo после уменьшения количества или потерь функциональных или активных Т-лимфоцитов CAR+ и/или возобновляться после противоопухолевой реакции на терапию с помощью Т-лимфоцитов CAR. Затем, после повторного размножения in vivo, гораздо позже после начального вливания Т-лимфоцитов CAR+, Т-лимфоциты CAR+ способны возобновлять противоопухолевую активность. Этот результат подтверждает, что повторное размножение и активирование Т-лимфоцитов CAR+ могут запускаться in vivo и что способы повторного активирования Т-лимфоцитов CAR+, могут дополнительно усилить их эффективность.[0677] These results are consistent with the finding that regrowth and activation of CAR+ T lymphocytes can be initiated in vivo following a decrease in the number or loss of functional or active CAR+ T lymphocytes and/or resume after an antitumor response to therapy with CAR T lymphocytes . Then, after re-propagation in vivo, much later after the initial infusion of CAR+ T-lymphocytes, CAR+ T-lymphocytes are able to resume antitumor activity. This result confirms that replication and activation of CAR+ T lymphocytes can be triggered in vivo and that methods for reactivation of CAR+ T lymphocytes can further enhance their effectiveness.

Пример 7 Воздействия леналидомида на активность Т-лимфоцитов CAR анти-CD19 после серийного повторного стимулированияExample 7 Effects of Lenalidomide on Anti-CD19 CAR T Lymphocyte Activity after Serial Restimulation

[0678] Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19, генерируемые по существу, как описано в Примере 5, оттаивают и инкубируют вместе с CD19-экспрессирующими клетками (клетками K562, трансдуцированными для экспрессирования CD19) при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 2,5:1 в присутствии или в отсутствие 1 нМ, 5 нМ, 60 нМ, 550 нМ или 5000 нМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (контроль). Целевые клетки K562-CD19 метят NucLight Red (NLR), как описано в Примере 1, чтобы дать возможность для отслеживания целевых клеток с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают, измеряя потери жизнеспособных целевых клеток за период примерно 120 часов, как определяют с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях. Как показано на Фиг.14, результаты согласуются с тем выводом, что присутствие леналидомида уменьшает CAR-медиируемую цитолитическую активность в этом анализе. В сходных анализах, результаты меняются в зависимости от отношения E:T и для различных композиций Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 (например, генерируемых в различные моменты времени и/или от клеток от разных доноров). [0678] Anti-CD19 CAR+ T lymphocytes generated essentially as described in Example 5 are thawed and incubated with CD19 expressing cells (K562 cells transduced to express CD19) at an effector to target cell ratio (E:T) 2.5:1 in the presence or absence of 1 nM, 5 nM, 60 nM, 550 nM or 5000 nM lenalidomide or in the absence of lenalidomide (control). Target K562-CD19 cells are labeled with NucLight Red (NLR) as described in Example 1 to allow target cells to be tracked by microscopy. Cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viable target cells over a period of about 120 hours, as determined by the red fluorescence signal (using the IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Cells from each condition are inoculated in triplicate. As shown in Figure 14, the results are consistent with the finding that the presence of lenalidomide reduces CAR-mediated cytolytic activity in this assay. In similar assays, results vary with E:T ratio and for different compositions of anti-CD19 CAR+ T lymphocytes (eg generated at different time points and/or from cells from different donors).

[0679] В другом исследовании, Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19 инкубируют вместе с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении E:T 2,5:1 в присутствии 100 нМ или 1600 нМ леналидомида, 2 нМ или 166 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу, контрольной несущей среды или в отсутствие добавляемого соединения (контроль CAR-T). После 120 часов культивирования, клетки выделяют и оценивают с помощью проточной цитометрии на поверхностное экспрессирование CD25 или PD-1 в подмножествах Т-лимфоцитов CD4+ или CD8+. Как показано на Фиг.15A инкубирование Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 вместе с эффекторными клетками K562-CD19 в присутствии самой высокой концентрации леналидомида (например, 1600 нМ) дает в результате более высокие уровни экспрессирования CD25 в Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+ по сравнению с другими условиями. Не наблюдается различий в поверхностном экспрессировании PD-1 в Т-лимфоцитах CD4+ или CD8+ в присутствии леналидомида, даже при самой высокой концентрации 1600 нМ (Фиг.15B).[0679] In another study, anti-CD19 CAR+ T lymphocytes were incubated with K562-CD19 effector cells at an E:T ratio of 2.5:1 in the presence of 100 nM or 1600 nM lenalidomide, 2 nM or 166 nM of an alternative compound targeted kinase, vehicle control, or no added compound (CAR-T control). After 120 hours of culture, cells are isolated and evaluated by flow cytometry for surface expression of CD25 or PD-1 in subsets of CD4+ or CD8+ T lymphocytes. As shown in FIG. 15A, incubation of anti-CD19 CAR+ T lymphocytes together with K562-CD19 effector cells in the presence of the highest concentration of lenalidomide (e.g., 1600 nM) results in higher levels of CD25 expression in CD4+ and CD8+ T lymphocytes compared to with other conditions. No differences were observed in surface expression of PD-1 in CD4+ or CD8+ T lymphocytes in the presence of lenalidomide, even at the highest concentration of 1600 nM (FIG. 15B).

[0680] В другом исследовании, оценивают количество IL-10 в супернатантах культур после инкубирования, в течение 24 часов, Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 вместе с эффекторными клетками K562-CD19 при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 3:1 или 9:1, в присутствии или в отсутствие различных концентраций леналидомида. Как показано на Фиг.16, леналидомид зависимым от дозы образом увеличивает секретирование и/или аккумуляцию IL-10 в супернатантах культур Т-лимфоцитов.[0680] In another study, the amount of IL-10 in culture supernatants was assessed after incubation, for 24 hours, of anti-CD19 CAR+ T lymphocytes together with K562-CD19 effector cells at an effector to target cell ratio (E:T) of 3: 1 or 9:1, in the presence or absence of various concentrations of lenalidomide. As shown in FIG. 16, lenalidomide dose-dependently increases IL-10 secretion and/or accumulation in T-lymphocyte culture supernatants.

Пример 8 Воздействия леналидомида на размножение Т-лимфоцитов CAR анти-CD19 после серийного повторного стимулированияExample 8 Effects of Lenalidomide on Anti-CD19 CAR T Lymphocyte Proliferation after Serial Restimulation

[0681] Способность Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 к размножению ex vivo после повторных стимулирований оценивают с использованием способов, по существу, как описано в Примере 2. Т-лимфоциты CAR+ анти-CD19, генерируемые от двух доноров (pt1 и pt2), по существу, так же, как описано в Примере 5, культивируют вместе с облученными клетками K562, трансдуцированными для экспрессирования CD19 (клеток K562-CD19) при отношении эффекторных и целевых клеток 2,5:1 в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения, нацеленного на киназу. Для каждого донора, клетки харвестируют каждые 3-5 дней для каждого экспериментального условия в лунках и считают, и повторно стимулируют новыми целевыми клетками с использованием таких же условий культивирования после повторного доведения количества клеток до начальной плотности инокулирования для каждого захода. Осуществляют, в целом, 4 захода стимулирования в ходе 12-дневного периода культивирования. Для каждого захода стимулирования, определяют общее количество клеток, и результаты изображены как кратное изменение количества клеток после стимулирования (Фиг.17A) или количество удвоений по сравнению с начальным количеством (Фиг.17B). Как показано на Фиг.17A и 17B, не наблюдают изменения или наблюдают только небольшое воздействие на размножение клеток Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 при этом анализе повторного стимулирования, когда клетки культивируют в присутствии леналидомида, по сравнению с отсутствием леналидомида. [0681] The ability of anti-CD19 CAR+ T lymphocytes to proliferate ex vivo after repeated stimulations is assessed using methods essentially as described in Example 2. Anti-CD19 CAR+ T lymphocytes generated from two donors (pt1 and pt2) essentially the same as described in Example 5, cultured together with irradiated K562 cells transduced to express CD19 (K562-CD19 cells) at a ratio of effector to target cells of 2.5:1 in the presence or absence of 1 μM lenalidomide or 50 nM or 500 nM alternative compound targeting the kinase. For each donor, cells are harvested every 3-5 days for each experimental condition in the wells and counted and restimulated with new target cells using the same culture conditions after re-adjusting the number of cells to the initial inoculation density for each run. Carry out, in General, 4 call stimulation during the 12-day period of cultivation. For each stimulation run, the total number of cells is determined and the results are plotted as the fold change in the number of cells after stimulation (FIG. 17A) or the number of doublings from the initial number (FIG. 17B). As shown in FIGS. 17A and 17B, no change or little effect on anti-CD19 CAR+ T cell proliferation was observed in this restimulation assay when cells were cultured in the presence of lenalidomide compared to no lenalidomide.

[0682] После каждого возврата к началу после предварительной обработки, оценивают цитолитическую активность посредством инкубирования повторно стимулируемых клеток вместе с клетками K562-CD19 (мечеными NucLight Red (NLR)) при некотором отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) в присутствии 1 мкМ леналидомида или 50 нМ или 500 нМ альтернативного соединения. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода до 40-60 часов, как определяют с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях. Репрезентативная гибель клеток, наблюдаемая при 2-ом и 4-ом повторном стимулировании для обоих доноров, показана на Фигурах 18A (как нормированная на K562-CD19-Nuc-меченые клетки при t=0) или на Фиг.18B (% гибели клеток по сравнению с одной только контрольной несущей средой (соответствует 100%)). Как показано на Фиг.18A и 18B, инкубирование с леналидомидом, как наблюдается, дает в результате уменьшение цитолитической активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-CD19 в этом анализе, при исследуемых условиях стимулирования.[0682] After each return to the beginning after pretreatment, evaluate the cytolytic activity by incubating the re-stimulated cells together with K562-CD19 cells (labeled with NucLight Red (NLR)) at some ratio of effector and target cells (E:T) in the presence of 1 μm lenalidomide or 50 nM or 500 nM alternative compound. Cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viable target cells over a period of up to 40-60 hours, as determined by the red fluorescence signal (using the IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Cells from each condition are inoculated in triplicate. Representative cell death observed at 2nd and 4th restimulation for both donors is shown in Figures 18A (as normalized to K562-CD19-Nuc-labeled cells at t=0) or in Figure 18B (% cell death by compared to the reference carrier medium alone (corresponds to 100%)). As shown in FIGS. 18A and 18B, incubation with lenalidomide was observed to result in a decrease in the cytolytic activity of anti-CD19 CAR+ T-lymphocytes in this assay, under the stimulation conditions tested.

Пример 9 Генерирование шариков, конъюгированных с BCMA Example 9 Generation of BCMA-Conjugated Beads

[0683] Антиген созревания B-лимфоцитов (BCMA) конъюгируется с шариками посредством ковалентного связывания конъюгата BCMA-полипептид слияния Fc, содержащего растворимый BCMA человека слитой на его C-окончании с областью Fc IgG, с поверхностью коммерчески доступных тозил-активированных магнитных шариков (ThermoFisher, Waltham MA). Шарики являются суперпарамагнитными, непористыми, монодисперсными, тозил-активированными шариками, которые ковалентно связывают первичные амино и сульфгидрильные группы. Конъюгирование осуществляют с использованием шариков, имеющих диаметр приблизительно 2,8 мкм (обозначаемых M-280) или 4,5 мкм (обозначаемых M-450). [0683] B-lymphocyte maturation antigen (BCMA) is conjugated to the beads by covalently linking a BCMA-Fc fusion polypeptide conjugate containing soluble human BCMA fused at its C-terminus to an IgG Fc region, to the surface of commercially available tosyl-activated magnetic beads (ThermoFisher , Waltham MA). The beads are superparamagnetic, non-porous, monodisperse, tosyl-activated beads that covalently bond primary amino and sulfhydryl groups. Conjugation is performed using beads having a diameter of approximately 2.8 µm (denoted M-280) or 4.5 µm (denoted M-450).

[0684] BCMA-Fc (SEQ ID NO: 22), содержащий внеклеточный домен BCMA человека (GenBank No. NP_001183.2) и Fc IgG1 человека соединенные с линкером, следующим образом: [0684] BCMA-Fc (SEQ ID NO: 22) containing the human BCMA extracellular domain (GenBank No. NP_001183.2) and human IgG1 Fc linked to a linker as follows:

MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA (внеклеточный домен BCMA; SEQ ID NO: 18)MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA (BCMA extracellular domain; SEQ ID NO: 18)

GGGGS (линкер; SEQ ID NO: 19)GGGGS (linker; SEQ ID NO: 19)

PKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKPKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDQFFLYSKLTVDKW

(Fc IgG1 человека; SEQ ID NO: 20. (Human IgG1 Fc; SEQ ID NO: 20.

[0685] Клон, кодирующий конструкцию слияния Fc - BCMA человека с N-конечной лидерной последовательностью CD33 (SEQ ID NO: 21), вставляют в вектор экспрессии и экспрессируют в клетках HEK 293. Полученный в результате белок слияния BCMA-Fc, как определено, имеет чистоту больше 95%, как оценивают с помощью гель-проникающей хроматографии. Для исследования связывания, белок слияния BCMA-Fc инкубируют с Т-лимфоцитами, экспрессирующими CAR анти-BCMA и Т-лимфоцитами экспрессирующими CAR, которые не связываются с BCMA. Результаты проточной цитометрии показывают, что белок слияния BCMA-Fc специфично связывается с CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-BCMA. [0685] A clone encoding a human Fc-BCMA fusion construct with an N-terminal leader sequence of CD33 (SEQ ID NO: 21) is inserted into an expression vector and expressed in HEK 293 cells. The resulting BCMA-Fc fusion protein is determined to be has a purity greater than 95% as assessed by gel permeation chromatography. For binding studies, the BCMA-Fc fusion protein is incubated with T lymphocytes expressing anti-BCMA CARs and T lymphocytes expressing CARs that do not bind to BCMA. Flow cytometry results show that the BCMA-Fc fusion protein specifically binds to CAR-expressing anti-BCMA T lymphocytes.

[0686] Различные концентрации белка слияния BCMA-Fc в пределах от 5 мкг до 200 мкг добавляют приблизительно к 1 мл тозил-активированных шариков (например, содержащему примерно 4×109 тозил-активированных шариков, имеющих диаметр 2,8 мкм, или примерно 4×108 тозил-активированных шариков, имеющих диаметр 4,5 мкм). Ковалентное связывание осуществляют посредством инкубирования в течение ночи при 37°C в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS), содержащем 0,1% сывороточного альбумина человека (HSA). Шарики промывают и повторно суспендируют в 1 мл PBS с 0,1% HSA. После конъюгирования, концентрацию шариков определяют с использованием Cellometer. В примерах, ниже, BCMA-конъюгированные шарики, используемые в различных исследованиях, упоминаются с упоминанием либо количества антигена BCMA-Fc, добавляемого на мл, либо концентрации антигена (мкг/мл) в ходе конъюгирования, например, 5 мкг или 5 мкг/мл; 50 мкг или 50 мкг/мл; 200 мкг или 200 мкг/мл и так далее. [0686] Various concentrations of BCMA-Fc fusion protein ranging from 5 μg to 200 μg are added to approximately 1 ml of tosyl-activated beads (for example, containing about 4×10 9 tosyl-activated beads having a diameter of 2.8 μm, or about 4×10 8 tosyl-activated beads having a diameter of 4.5 μm). Covalent binding is carried out by overnight incubation at 37° C. in phosphate buffered saline (PBS) containing 0.1% human serum albumin (HSA). The beads are washed and resuspended in 1 ml PBS with 0.1% HSA. After conjugation, the bead concentration is determined using a Cellometer. In the examples below, BCMA-conjugated beads used in various studies are referred to either by the amount of BCMA-Fc antigen added per ml or by the concentration of antigen (µg/ml) during conjugation, for example, 5 µg or 5 µg/ml ; 50 mcg or 50 mcg/ml; 200mcg or 200mcg/ml and so on.

Пример 10 Оценка маркеров Т-лимфоцитов на Т-лимфоцитах CAR+ анти-BCMA, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в присутствии или в отсутствие леналидомидаExample 10 Evaluation of T-lymphocyte markers on anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes stimulated with BCMA-conjugated beads in the presence or absence of lenalidomide

[0687] BCMA-конъюгированные шарики (диаметр 4,5 мкм), конъюгированные с различными количествами антигена BCMA, как описано в Примере 9, инкубируют вместе с Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в присутствии или в отсутствие леналидомида, и оценивают экспрессирование маркеров Т-лимфоцитов. [0687] BCMA-conjugated beads (4.5 µm diameter) conjugated to various amounts of BCMA antigen as described in Example 9 are incubated with anti-BCMA CAR+ T lymphocytes in the presence or absence of lenalidomide and expression of T markers is assessed. -lymphocytes.

[0688] Приблизительно 1,5 × 106 Т-лимфоцитов CAR+ добавляют в лунки 12-луночного планшета и инкубируют с шариками из 200 мкг/мл композиции BCMA-конъюгированных шариков при отношении Т-лимфоцитов CAR+ и BCMA-конъюгированных шариков 1:0,3, 1:1 или 1:3 (приблизительно 0,5×106, 1,5×10 и 4,5×106 шариков на лунку, соответственно). В качестве контроля, на лунки наносят в виде покрытия 5 мкг/мл антитела анти-CD3 (субоптимальная концентрация для стимулирования) или клетки высевают в отсутствие любого агента (контроль без стимулирования). Каждое состояние инкубируют в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида. Клетки инкубируют в течение четырех дней, а затем анализируют с помощью проточной цитометрии на поверхностное экспрессирование CD4, CD8, Tim3, PD-1, CD25 и CD69. [0688] Approximately 1.5 x 10 6 CAR+ T lymphocytes are added to the wells of a 12-well plate and incubated with beads from a 200 μg/ml composition of BCMA-conjugated beads at a ratio of CAR+ T-lymphocytes and BCMA-conjugated beads of 1:0, 3, 1:1 or 1:3 (approximately 0.5×10 6 , 1.5×10 and 4.5×10 6 balls per well, respectively). As a control, wells are coated with 5 μg/ml of anti-CD3 antibody (suboptimal concentration for stimulation) or cells are seeded in the absence of any agent (control without stimulation). Each state is incubated in the presence or absence of 5 μM lenalidomide. Cells are incubated for four days and then analyzed by flow cytometry for surface expression of CD4, CD8, Tim3, PD-1, CD25 and CD69.

[0689] Как показано на Фиг.19A, присутствие 5 мкМ леналидомида увеличивает пролиферативную способность Т-лимфоцитов (наблюдаемую по уменьшению интенсивности красителя CTV) после инкубирования в течение трех дней вместе с шариками, конъюгированными с 200 мкг антигена BCMA, при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1, по сравнению с инкубированием с шариками в отсутствие леналидомида (контрольная несущая среда). Как показано на Фигурах 19B и 19C, присутствие леналидомида в ходе инкубирования дополнительно увеличивает степень поверхностного экспрессирования CD25 в Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+, индуцируемого после инкубирования Т-лимфоцитов CAR+анти-BCMA вместе с BCMA-конъюгированными шариками (Фиг.19B) или стимулирования анти-CD3 (Фиг.19C). [0689] As shown in Fig. 19A, the presence of 5 μM lenalidomide increases the proliferative capacity of T lymphocytes (observed by a decrease in the intensity of the CTV dye) after incubation for three days with beads conjugated with 200 μg of BCMA antigen, in the ratio of T lymphocytes and beads 1:1, compared with incubation with beads in the absence of lenalidomide (control carrier medium). As shown in Figures 19B and 19C, the presence of lenalidomide during incubation further increases the extent of CD25 surface expression in CD4+ and CD8+ T lymphocytes induced after incubation of CAR+anti-BCMA T lymphocytes together with BCMA-conjugated beads (FIG. 19B) or stimulation of anti-CD3 (Fig.19C).

[0690] В другом эксперименте, композиции T-лимфоцитов CAR анти-BCMA, полученные, по существу, как описано в Примере 1, инокулируют в 96-луночные планшеты при плотности 5 × 105 клеток на лунку. Исследуемые композиции Т-лимфоцитов CAR содержат при инокулировании, в среднем, приблизительно 45% клеток CAR+ анти-BCMA. Клетки из каждой композиции инкубируют в течение 18 часов в присутствии шариков из композиции с 5 мкг/мл, 50 мкг/мл или 200 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1. В качестве контроля клетки инкубируют вместе с шариками, конъюгированными с антителом анти-CD3/анти-CD28 (положительный контроль), или без добавленного агента (отрицательный контроль). Инкубирование осуществляют без леналидомида или в присутствии 0,5 мкМ или 5 мкМ леналидомида. После инкубирования, клетки обрабатывают реагентами, которые дают возможность для внеклеточного и внутриклеточного окрашивания антитела с помощью проточной цитометрии относительно факторов транскрипции Blimp1, EOMES, GATA-3, ikaros, Helios и Tbet, и маркеров CD25, CD31 и PD-1. [0690] In another experiment, anti-BCMA CAR T-lymphocyte compositions prepared essentially as described in Example 1 were inoculated into 96-well plates at a density of 5 x 10 5 cells per well. The tested CAR T-lymphocyte compositions contain, on average, approximately 45% anti-BCMA CAR+ cells when inoculated. The cells from each composition are incubated for 18 hours in the presence of beads from the composition with 5 μg/ml, 50 μg/ml or 200 μg/ml BCMA-conjugated beads at a ratio of T-lymphocytes to beads 1:1. As a control, cells are incubated with beads conjugated with anti-CD3/anti-CD28 antibody (positive control) or without added agent (negative control). Incubation is carried out without lenalidomide or in the presence of 0.5 μM or 5 μM lenalidomide. After incubation, cells are treated with reagents that allow extracellular and intracellular antibody staining by flow cytometry for the transcription factors Blimp1, EOMES, GATA-3, ikaros, Helios, and Tbet, and the markers CD25, CD31, and PD-1.

[0691] Уровни маркеров после инкубирования композиции Т-лимфоцитов CAR+ от одного иллюстративного донора показаны для BLIMP-1 (Фиг.20A), CD25 (Фиг.20B), CD31 (Фиг.20C), PD-1 (Фиг.20D), Tbet (Фиг.20E) и EOMES (Фиг.20F), GATA-3 (Фиг.20G) Helios (Фиг.20H) и Ikaros (Фиг.20I). Как показано, экспрессирование ряда оцениваемых факторов транскрипции и маркеров активирования, связанных с эффекторными T-лимфоцитами, увеличивается после стимулирования BCMA-конъюгированными шариками. Для многих оцениваемых маркеров, степень повышения экспрессирования является сходной с экспрессированием, индуцируемым стимулированием шариками анти-CD3/анти-CD28. В некоторых случаях, степень стимулирования BCMA-конъюгированными шариками является самой большой в присутствии 5 мкг шариков. Как показано на Фиг.20I, уровень экспрессирования Ikaros уменьшается в присутствии леналидомида при всех условиях. Сходные результаты наблюдают для композиции Т-лимфоцитов CAR+, генерируемых вторым донором, за исключением того, что изменений экспрессирования Helios из клеток от этого донора не наблюдается, при стимулировании при исследуемых условиях.[0691] Marker levels after incubation of a CAR+ T cell composition from one exemplary donor are shown for BLIMP-1 (FIG. 20A), CD25 (FIG. 20B), CD31 (FIG. 20C), PD-1 (FIG. 20D), Tbet (Fig.20E) and EOMES (Fig.20F), GATA-3 (Fig.20G) Helios (Fig.20H) and Ikaros (Fig.20I). As shown, the expression of a number of assessed transcription factors and activation markers associated with effector T-lymphocytes increases after stimulation with BCMA-conjugated beads. For many of the markers evaluated, the degree of upregulation is similar to that induced by stimulation with anti-CD3/anti-CD28 beads. In some cases, the degree of stimulation with BCMA-conjugated beads is greatest in the presence of 5 µg beads. As shown in Fig.20I, the level of expression of Ikaros is reduced in the presence of lenalidomide under all conditions. Similar results are observed for the composition of CAR+ T-lymphocytes generated by the second donor, except that there is no change in Helios expression from cells from this donor when stimulated under the conditions studied.

Пример 10 Оценка активности Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, стимулируемых BCMA-конъюгированными шариками, в присутствии или в отсутствие леналидомида Example 10 Evaluation of Anti-BCMA CAR T Lymphocyte Activity Stimulated with BCMA-Conjugated Beads in the Presence or Absence of Lenalidomide

a. Эффекторные реакцииa. Effector reactions

[0692] Криозамороженые Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, полученные, по существу, как описано в Примере 2, и приготовленные при отношении Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ 1:1, оттаивают. Если не указано иного, шарики (диаметр примерно 4,5 мкм из композиции 5 мкг/мл или 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, генерируемых, как описано в Примере 9, добавляют в лунки при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1 в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида. Клетки инкубируют до 14 дней и анализируют в различные моменты времени на секретирование цитокинов, размножение клеток, с помощью проточной цитометрии относительно суррогатного маркера EGFRt и на цитолитическую активность. [0692] Cryo-frozen anti-BCMA CAR+ T lymphocytes prepared essentially as described in Example 2 and prepared at a 1:1 ratio of CD4+ and CD8+ T lymphocytes are thawed. Unless otherwise noted, beads (approximately 4.5 µm diameter from a formulation of 5 µg/mL or 50 µg/mL BCMA-conjugated beads generated as described in Example 9 are added to wells at a ratio of T lymphocytes to beads of 1:1 in the presence or absence of 5 μM lenalidomide Cells are incubated for up to 14 days and analyzed at various time points for cytokine secretion, cell expansion, by flow cytometry against the EGFRt surrogate marker, and for cytolytic activity.

a. Экспрессирование цитокиновa. Expression of cytokines

(i) Присутствие цитокинов в супернатанте(i) Presence of cytokines in the supernatant

[0693] Через двадцать четыре часа после добавления BCMA-конъюгированных шариков, оценивают присутствие TNF-α, IFNγ и IL-2 в супернатантах культур. Как показано на Фигурах 21A-21C, инкубирование вместе с BCMA-конъюгированными шариками индуцирует секретирование IFNγ (Фиг.21A), IL-2 (Фиг.21B) и TNF-α (Фиг.21C) в супернатантах культур. Степень продуцирования цитокинов выше, когда клетки инкубируются вместе с шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков по сравнению с композицией 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, демонстрируя, что стимулирование CAR с помощью BCMA шариков является зависимым от дозы. Как показано, леналидомид увеличивает BCMA-индуцированное продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR+ после стимулирования BCMA-конъюгированными шариками. [0693] Twenty-four hours after adding BCMA-conjugated beads, assess the presence of TNF-α, IFNγ and IL-2 in the culture supernatants. As shown in Figures 21A-21C, incubation with BCMA-conjugated beads induces the secretion of IFNγ (FIG. 21A), IL-2 (FIG. 21B), and TNF-α (FIG. 21C) in culture supernatants. The rate of cytokine production is higher when cells are incubated with beads from a 50 μg/ml BCMA conjugated bead formulation compared to a 5 μg/ml BCMA conjugated bead formulation, demonstrating that CAR stimulation by BCMA beads is dose-dependent. Lenalidomide has been shown to increase BCMA-induced cytokine production by CAR+ T lymphocytes after stimulation with BCMA-conjugated beads.

[0694] В другом иллюстративном исследовании, две различных композиции Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA генерируются от разных доноров, каждая из них содержит Т-лимфоциты, экспрессирующие один и тот же CAR анти-BCMA. Клетки оттаивают и инкубируют вместе с шариками (диаметр примерно 4,5 мкм) из композиции 5 мкг/мл или 200 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, генерируемой, как описано в Примере 1. Инкубирование осуществляют при отношении Т-лимфоцитов и шариков 1:1 в присутствии или в отсутствие 1 мкМ или 5 мкМ леналидомида. Через двадцать четыре часа после добавления BCMA-конъюгированных шариков, оценивают продуцирование IL-2 Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA в супернатантах культур. Как показано на Фиг.21D, более высокое продуцирование IL-2 наблюдается в присутствии высокого стимулирования антигеном (200 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков) по сравнению с более низким стимулированием антигеном (5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков). Леналидомид, либо при 1 мкМ, либо при 5 мкМ, увеличивает продуцирование цитокинов в присутствии как высокого, так и низкого стимулирования антигеном. [0694] In another exemplary study, two different compositions of anti-BCMA CAR T lymphocytes are generated from different donors, each containing T lymphocytes expressing the same anti-BCMA CAR. Cells are thawed and incubated with beads (approximately 4.5 µm in diameter) from a formulation of 5 µg/ml or 200 µg/ml BCMA-conjugated beads generated as described in Example 1. Incubation is carried out at a ratio of T lymphocytes to beads of 1: 1 in the presence or absence of 1 μM or 5 μM lenalidomide. Twenty-four hours after the addition of the BCMA-conjugated beads, the production of IL-2 by anti-BCMA CAR+ T lymphocytes in the culture supernatants was assessed. As shown in FIG. 21D, higher IL-2 production is observed in the presence of high antigen challenge (200 μg/ml BCMA-conjugated beads) compared to lower antigen challenge (5 μg/ml BCMA-conjugated beads). Lenalidomide, either at 1 μM or 5 μM, increases cytokine production in the presence of both high and low antigen stimulation.

(ii) Внутриклеточные уровни цитокинов(ii) Intracellular levels of cytokines

[0695] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA инкубируют в присутствии 1 мкМ леналидомида или несущей среды и 50 мкг/мл BCMA-Fc конъюгированных шариков в течение 2 часов, и клетки оценивают с помощью проточной цитометрии на фосфорилированный STAT 5. Для оценки уровней цитокинов IFNγ и TNFα, Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA инкубируют в присутствии 0,1 мкМ или 1 мкМ леналидомида или несущей среды и 5 мкг/мл, 50 мкг/мл или 200 мкг/мл BCMA-Fc конъюгированных шариков в течение 24 часов. Клетки гейтируют на трансдуцированных живых клетках CD3+ и оценивают с помощью проточной цитометрии на внутриклеточное аккумулирование цитокинов IFNγ и TNFα в клетках CD4+ и CD8+. [0695] Anti-BCMA CAR+ T-lymphocytes are incubated in the presence of 1 μM lenalidomide or vehicle and 50 μg/ml BCMA-Fc conjugated beads for 2 hours, and cells are evaluated by flow cytometry for phosphorylated STAT 5. To evaluate cytokine levels IFNγ and TNFα, anti-BCMA CAR+ T lymphocytes are incubated in the presence of 0.1 μM or 1 μM lenalidomide or vehicle and 5 μg/ml, 50 μg/ml, or 200 μg/ml BCMA-Fc conjugated beads for 24 hours. The cells are gated on transduced live CD3+ cells and evaluated by flow cytometry for intracellular accumulation of IFNγ and TNFα cytokines in CD4+ and CD8+ cells.

[0696] Как показано на Фиг.22A, 2-часовое стимулирование антигеном увеличивает процент клеток положительных на фосфорилированный-STAT5 по сравнению с контролем без стимулирования (показанным точечной линией). Результаты для внутриклеточных уровней цитокинов IFNγ и TNFα из Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, генерируемых от репрезентативного нормального донора Т-лимфоцитов CAR, показаны на Фиг.22B. В этом исследовании, продуцирование цитокинов Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA увеличивается под действием леналидомида в широком диапазоне уровней антигена и концентраций.[0696] As shown in FIG. 22A, 2-hour antigen challenge increases the percentage of cells positive for phosphorylated-STAT5 compared to no challenge control (shown by the dotted line). Results for intracellular levels of the cytokines IFNγ and TNFα from anti-BCMA CAR+ T lymphocytes generated from a representative normal CAR T lymphocyte donor are shown in FIG. 22B. In this study, cytokine production by anti-BCMA CAR T lymphocytes is increased by lenalidomide over a wide range of antigen levels and concentrations.

b. Пролиферация клеток b. cell proliferation

[0697] Общие отсчеты клеток, отслеживаемые в день 4 (Фиг.21E) и день 7 (Фиг.21F), увеличиваются после стимулирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, но не из композиции 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, по сравнению с клетками, присутствующими в момент начала инкубирования (штриховая линия). Малое увеличение пролиферации наблюдают в клетках, инкубированных с 50 мкг шариков в присутствии леналидомида, в день 7. [0697] Total cell counts monitored on day 4 (FIG. 21E) and day 7 (FIG. 21F) increase after stimulation of T lymphocytes with CAR+ anti-BCMA beads from a formulation of 50 μg/ml BCMA-conjugated beads, but not from formulations of 5 μg/ml BCMA-conjugated beads compared to cells present at the start of incubation (dashed line). A small increase in proliferation is observed in cells incubated with 50 µg beads in the presence of lenalidomide on day 7.

[0698] Для дополнительной оценки пролиферации, клетки, содержащие CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-BCMA, метят красителем CELLTRACE VIOLET (CTV; ThermoFisher Scientific, Waltham MA) как маркером пролиферации согласно протоколу производителя, перед инкубированием вместе с BCMA-конъюгированными шариками. Пролиферацию оценивают посредством разведения красителя с использованием проточной цитометрии на клетках, которые стимулируют шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. По сравнению с пролиферацией без леналидомида, имеется небольшая задержка пролиферации, как оценивается посредством разбавления CTV в присутствии леналидомида в день 4, но не в день 7 (Фиг.21G). [0698] To further evaluate proliferation, cells containing CAR-expressing anti-BCMA T lymphocytes are labeled with CELLTRACE VIOLET (CTV; ThermoFisher Scientific, Waltham MA) as a proliferation marker according to the manufacturer's protocol prior to incubation with BCMA-conjugated beads. Proliferation is assessed by dye dilution using flow cytometry on cells stimulated with beads from a 50 μg/ml BCMA-conjugated bead formulation. Compared to proliferation without lenalidomide, there is a slight delay in proliferation as assessed by diluting CTV in the presence of lenalidomide on day 4 but not day 7 (FIG. 21G).

c. Размножениеc. reproduction

[0699] Через четыре дня и через семь дней после добавления BCMA-конъюгированных шариков, инкубируемые клетки окрашивают CD4 или CD8 и антителом анти-EGFR для определения процента клеток положительных по EGFRt как суррогатных Т-лимфоцитов CAR+. В момент инокулирования, 26% клеток CD4+ экспрессируют CAR анти-BCMA и 39% клеток CD8+ экспрессируют CAR анти-BCMA, как определяют посредством окрашивания BCMA-Fc. Процент Т-лимфоцитов CD4+ EGFRt+ увеличивается примерно от 26% при начале инкубирования до более 40% в день 4 (Фиг.21H) и до более 60% в день 7 (Фиг.21I), когда клетки инкубируют в присутствии шариков из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Как показано на Фиг.21I, процент Т-лимфоцитов CD8+ EGFRt+ увеличивается в день 7 примерно от 38% при начале инкубирования до более 60%, когда клетки инкубируют в присутствии шариков из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Степень размножения клеток является наибольшей, когда клетки инкубируют в присутствии шариков из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков по сравнению с шариками из композиции 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Присутствие леналидомида не влияет существенно на степень размножения Т-лимфоцитов CAR+ в этом исследовании.[0699] Four days and seven days after the addition of BCMA-conjugated beads, incubated cells are stained with CD4 or CD8 and anti-EGFR antibody to determine the percentage of cells positive for EGFRt as CAR+ surrogate T lymphocytes. At the time of inoculation, 26% of CD4+ cells express anti-BCMA CAR and 39% of CD8+ cells express anti-BCMA CAR as determined by BCMA-Fc staining. The percentage of CD4+ EGFRt+ T lymphocytes increases from about 26% at the start of incubation to over 40% on day 4 (FIG. 21H) and to over 60% on day 7 (FIG. 21I) when cells are incubated in the presence of beads from the 50 μg formulation /ml BCMA-conjugated beads. As shown in FIG. 21I, the percentage of CD8+ EGFRt+ T lymphocytes increased on day 7 from about 38% at the start of incubation to over 60% when cells were incubated in the presence of beads from a 50 μg/mL formulation of BCMA-conjugated beads. Cell proliferation is greatest when cells are incubated in the presence of 50 μg/ml BCMA conjugated beads as compared to 5 μg/ml BCMA conjugated beads. The presence of lenalidomide did not significantly affect the rate of proliferation of CAR+ T-lymphocytes in this study.

d. Цитолитическая активность d. cytolytic activity

[0700] Цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+ после инкубирования вместе с BCMA-конъюгированными шариками оценивают с помощью инкубирования вместе с линией целевых BCMA-экспрессирующих клеток RPMI-8226, которая представляет собой линию клеток множественной миеломы BCMA+. После семи дней инкубирования Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA вместе с BCMA-конъюгированными шариками (5 мкг/мл или 50 мкг/мл) в присутствии или в отсутствие леналидомида, шарики удаляют из культур и клетки инокулируют вместе с целевыми клетками RPMI-8226 при отношении эффекторных клеток к целевым клеткам 3:1 или 1:1 в присутствии или в отсутствие 5 мкМ леналидомида в дальнейшем. Для осуществления цитолитического анализа, целевые клетки RPMI-8226 метят NucLight Red (NLR), чтобы сделать возможным отслеживание целевых клеток с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода четырех дней, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием INCUCYTE® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Количество жизнеспособных клеток нормируют на клетки в день 0 перед инкубированием вместе с целевыми клетками RPMI-8226.[0700] The cytolytic activity of CAR+ T lymphocytes after incubation with BCMA-conjugated beads was assessed by incubation with target BCMA-expressing cell line RPMI-8226, which is a multiple myeloma cell line BCMA+. After seven days of incubation of CAR+ T lymphocytes with anti-BCMA together with BCMA-conjugated beads (5 µg/mL or 50 µg/mL) in the presence or absence of lenalidomide, the beads are removed from the cultures and the cells are inoculated with target RPMI-8226 cells at the ratio of effector cells to target cells 3:1 or 1:1 in the presence or absence of 5 μm lenalidomide in the future. To perform cytolytic analysis, RPMI-8226 target cells are labeled with NucLight Red (NLR) to allow target cells to be tracked by microscopy. Cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viable target cells over a period of four days, as determined by the red fluorescence signal (using the INCUCYTE® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Viable cell counts are normalized per cell on day 0 prior to incubation with target RPMI-8226 cells.

[0701] Иллюстративные результаты при отношении эффекторных и целевых клеток 1:1 показаны на Фиг.21J. Как показано, Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA демонстрируют эффективное уничтожение в этом анализе. Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, которые стимулируют шариками из композиции 5 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, чуть менее эффективны при уничтожении клеток чем Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, которые стимулируют шариками из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков. Для всех условий, предварительное инкубирование с леналидомидом в течение семидневного инкубирования перед анализом уничтожения повышает цитолитическую активность Т-лимфоцитов CAR+. Присутствие леналидомида в ходе анализа уничтожения клеток не влияет существенно на активность уничтожения. Уничтожения клеток не наблюдается, когда клетки RPMI 8226 культивируют сами по себе или в присутствии леналидомида, демонстрируя, что леналидомид не влияет непосредственно на жизнеспособность целевых клеток в этом анализе.[0701] Exemplary results for a 1:1 ratio of effector to target cells are shown in FIG. 21J. As shown, anti-BCMA CAR+ T lymphocytes show efficient killing in this assay. CAR+ anti-BCMA T cells stimulated with 5 μg/mL BCMA conjugated beads are slightly less effective at killing cells than CAR+ anti-BCMA T cells stimulated with 50 μg/ml BCMA conjugated beads . For all conditions, pre-incubation with lenalidomide for a seven-day incubation prior to the kill assay increased the cytolytic activity of CAR+ T-lymphocytes. The presence of lenalidomide during the cell killing assay does not significantly affect the killing activity. Cell killing is not observed when RPMI 8226 cells are cultured alone or in the presence of lenalidomide, demonstrating that lenalidomide does not directly affect the viability of target cells in this assay.

B. Серийное повторное стимулированиеB. Serial restimulation

[0702] Композиции Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA генерируют от трех разных доноров, каждая содержит Т-лимфоциты, экспрессирующие один и тот же CAR анти-BCMA, их оттаивают и инкубируют в течение семи дней вместе с шариками (диаметр примерно 4,5 мкм) при отношении шариков и клеток 1:1 из композиции 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков, генерируемой, как описано в Примере 9. Инкубирование осуществляют в присутствии 5 мкМ леналидомида или в отсутствие леналидомида (контрольная несущая среда). Клетки харвестируют через 7 дней и повторно инокулируют в течение трех дополнительных заходов до 28 дней, каждый заход включает возвращение к началу, к начальной плотности посева и инкубированною в течение дополнительных 7 дней в присутствии такой же концентрации леналидомида. [0702] Anti-BCMA CAR T-lymphocyte compositions were generated from three different donors, each containing T-lymphocytes expressing the same anti-BCMA CAR, thawed and incubated for seven days along with beads (approximately 4.5 µm) at a 1:1 bead to cell ratio from a 50 µg/ml BCMA-conjugated bead formulation generated as described in Example 9. Incubation is carried out in the presence of 5 µM lenalidomide or in the absence of lenalidomide (carrier control medium). Cells are harvested after 7 days and re-inoculated for three additional runs up to 28 days, each run includes a return to the beginning, to the initial seeding density and incubated for an additional 7 days in the presence of the same concentration of lenalidomide.

[0703] При каждом возвращении к началу после предварительной обработки, цитолитическую активность оценивают посредством инкубирования вместе с линией BCMA-экспрессирующих целевых клеток RPMI-8226 (меченых NucLight Red (NLR)) при отношении эффекторных и целевых клеток (E:T) 1:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида в дальнейшем. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода до 80-150 часов, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции (с использованием IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Клетки от каждого состояния инокулируют в трех повторностях. Определяют % уничтожения клеток по сравнению с контрольной несущей средой самой по себе (соответствует 100%). [0703] At each return to the start after pretreatment, cytolytic activity is assessed by incubating with BCMA-expressing target cell line RPMI-8226 (labeled with NucLight Red (NLR)) at an effector to target cell ratio (E:T) of 1:1 in the presence or absence of lenalidomide in the future. Cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viable target cells over a period of up to 80-150 hours, as determined by the red fluorescence signal (using the IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Cells from each condition are inoculated in triplicate. Determine the % killing of cells compared to the control carrier medium itself (corresponding to 100%).

[0704] Фиг.23A показывает результаты для цитолитической активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA от иллюстративного донора после предварительной обработки в течение 7 дней, 14 дней или 21 дня. Как показано, Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, которые предварительно инкубируют вместе с леналидомидом в течение 7 дней или 14 дней, демонстрируют более высокую цитолитическую активность по сравнению с клетками, которые не инкубируют предварительно в присутствии леналидомида. У этого донора, наблюдают общее уменьшение эффективности уничтожения для Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, которые предварительно инкубируют вместе с леналидомидом в течение 14 или 21 дней, по сравнению с днем 7. У донора наблюдают сходные воздействия по цитолитической активности Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA после предварительной обработки леналидомидом в течение 7 или 14 дней; цитолитическую активность после 21 дня после предварительной обработки леналидомидом у этого донора не оценивают. Как показано на Фиг.23B, повышенную эффективность уничтожения у Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA наблюдают для этого донора, для тех клеток, которые предварительно инкубируют вместе с леналидомидом во все моменты времени.[0704] FIG. 23A shows the results for cytolytic activity of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes from an exemplary donor after pretreatment for 7 days, 14 days, or 21 days. As shown, anti-BCMA CAR+ T lymphocytes that are pre-incubated with lenalidomide for 7 days or 14 days show higher cytolytic activity compared to cells that are not pre-incubated with lenalidomide. In this donor, an overall decrease in killing efficiency is observed for CAR+ anti-BCMA T lymphocytes that are pre-incubated with lenalidomide for 14 or 21 days compared to day 7. The donor exhibits similar effects on cytolytic activity of CAR+ anti-BCMA T lymphocytes. -BCMA after pre-treatment with lenalidomide for 7 or 14 days; cytolytic activity after 21 days after pre-treatment with lenalidomide in this donor is not evaluated. As shown in FIG. 23B, increased killing efficiency in CAR+ T lymphocytes by anti-BCMA is observed for this donor, for those cells pre-incubated with lenalidomide at all time points.

Пример 12 Воздействия леналидомида на экспрессирование PD-1 и на передачу сигналов PD-L1 Example 12 Effects of Lenalidomide on PD-1 Expression and PD-L1 Signaling

[0705] Т-лимфоциты CAR анти-BCMA генерируют из образцов материала, полученных от репрезентативных здоровых доноров или от пациента с множественной миеломой, и культивируют вместе с 50 мкг/мл BCMA-Fc конъюгированных шариков (генерируемых, как описано в Примере 9) при отношении шарики : Т-лимфоциты CAR+ 1:1 в течение 7 дней, в присутствии 1 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. Экспрессирование CD25, PD-1, Tim3 и Lag3 на Т-лимфоцитах CAR (используя антитело вместо суррогатного маркера CAR), культивируемых при различных условиях, оценивают затем с помощью проточной цитометрии. [0705] Anti-BCMA CAR T lymphocytes were generated from samples of material obtained from representative healthy donors or from a patient with multiple myeloma and cultured with 50 μg/ml BCMA-Fc conjugated beads (generated as described in Example 9) at ratio of balls : T-lymphocytes CAR+ 1:1 for 7 days, in the presence of 1 μm lenalidomide or control carrier medium. Expression of CD25, PD-1, Tim3 and Lag3 on CAR T-lymphocytes (using an antibody instead of a CAR surrogate marker) cultured under various conditions is then assessed by flow cytometry.

[0706] Такие Т-лимфоциты CAR анти-BCMA, предварительно стимулируемые шариками в присутствии или в отсутствие леналидомида, или свежеоттаявшие Т-лимфоциты CAR анти-BCMA, генерируемые из сравнимых образцов от доноров, отделяют затем от шариков, промывают и культивируют вместе с целевыми клетками RPMI-8226 (мечеными NucLight Red (NLR), чтобы сделать возможным их отслеживание с помощью микроскопии), в присутствии 1 мкМ леналидомида или контрольной несущей среды. Конкретно, для предварительно обработанных клеток, предварительную обработку которых осуществляют в присутствии леналидомида, клетки культивируют вместе с целевыми клетками в присутствии леналидомида; подобным же образом, для предварительно обработанных клеток, предварительную обработку которых осуществляют в присутствии несущей среды, клетки культивируют вместе с целевыми клетками в присутствии несущей среды. После сокультивирования, цитолитическую активность оценивают посредством измерения потерь жизнеспособных целевых клеток в течение периода семи дней, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции. Процент уничтожения нормируют на Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, предварительно стимулируемые на шариках в присутствии несущей среды. Продуцирование цитокинов оценивают с помощью ELISA из супернатанта после культивирования вместе с целевыми клетками в течение 24 часов. Эксперименты осуществляют дважды на 3 донорах. Модели с линейным фиксированным воздействием или модели со смешанным воздействием используют для оценки значимости обработки леналидомидом для цитолитической активности и продуцирования цитокинов, при этом обработка, донор и время рассматриваются как фиксированные воздействия, а животное рассматривается как случайное воздействие, вложенные с помощью времени, когда повторяющиеся измерения получают от одного и того же животного. Значения P получают с помощью тестов отношения вероятностей, сравнивающих полную модель с воздействием, представляющим интерес, и модель без воздействия, представляющего интерес.[0706] Such anti-BCMA CAR T lymphocytes pre-stimulated with beads in the presence or absence of lenalidomide or freshly thawed anti-BCMA CAR T lymphocytes generated from comparable donor samples are then separated from the beads, washed and cultured together with the target RPMI-8226 cells (labeled with NucLight Red (NLR) to allow them to be tracked by microscopy) in the presence of 1 μM lenalidomide or vehicle control. Specifically, for pretreated cells pretreated in the presence of lenalidomide, the cells are cultured together with the target cells in the presence of lenalidomide; similarly, for pretreated cells that are pretreated in the presence of a carrier medium, the cells are cultured together with target cells in the presence of a carrier medium. After co-culture, cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viable target cells over a period of seven days, as determined by the red fluorescence signal. The kill rate is normalized to CAR+ anti-BCMA T-lymphocytes previously stimulated on the beads in the presence of vehicle. Cytokine production is assessed by ELISA from the supernatant after culturing with target cells for 24 hours. The experiments are carried out twice on 3 donors. Linear fixed exposure models or mixed exposure models are used to assess the significance of lenalidomide treatment for cytolytic activity and cytokine production, treating treatment, donor, and time as fixed exposures and the animal as random exposure nested by time when repeated measurements obtained from the same animal. The P values are obtained by probability ratio tests comparing the full model with the impact of interest and the model without the impact of interest.

[0707] Фиг.24A показывает результаты для антиген-специфичной цитолитической активности CAR и Фиг.24B показывает результаты для продуцирования цитокинов для Т-лимфоцитов CAR анти-BCMA, которые предварительно стимулируют с шариками BCMA, (по сравнению со свежеоттаявшими (не стимулируемыми предварительно) Т-лимфоцитами CAR анти-BCMA) в сокультурах, сравнивающие клетки, культивируемые в присутствии и в отсутствие леналидомида. Предварительно стимулируемые Т-лимфоциты CAR показывают пониженную цитолитическую активность (P=2,1×10-4) и продуцирование цитокинов (P=0,03 для IFN-γ) по сравнению со свежеоттаявшими Т-лимфоцитами CAR+ анти-BCMA. В отсутствие леналидомида при предварительной обработке и последующем сокультивировании, предварительно стимулируемые Т-лимфоциты CAR демонстрируют уменьшенное уничтожение клеток и продуцирование цитокинов по сравнению со свежими Т-лимфоцитами CAR, показывая, что хроническое предварительное стимулирование ведет к функциональному ослаблению. Эти результаты согласуются с фенотипом, подобным истощенному, который вызывается предварительным стимулированием на BCMA-конъюгированных шариках. Присутствие леналидомида в ходе периода предварительного стимулирования сохраняет цитолитическую функцию (P=0,04), и имеется тренд к увеличению продуцирования цитокинов по сравнению с клетками, экспонируемыми для несущей среды в ходе периода предварительного стимулирования (Фиг.24B). Присутствие леналидомида в этом анализе согласуется с тем наблюдением, что леналидомид может уменьшить воздействия, указывающие на фенотип, подобный функциональному истощению, у предварительно стимулируемых Т-лимфоцитов CAR.[0707] Figure 24A shows results for antigen-specific CAR cytolytic activity and Figure 24B shows results for cytokine production for anti-BCMA CAR T lymphocytes that are prestimulated with BCMA beads, (versus freshly thawed (not prestimulated) T-lymphocytes CAR anti-BCMA) in cocultures comparing cells cultured in the presence and absence of lenalidomide. Prestimulated CAR T lymphocytes show reduced cytolytic activity (P=2.1×10 -4 ) and cytokine production (P=0.03 for IFN-γ) compared to freshly thawed anti-BCMA CAR+ T lymphocytes. In the absence of lenalidomide in pretreatment and post-coculture, prestimulated CAR T lymphocytes show reduced cell killing and cytokine production compared to fresh CAR T lymphocytes, indicating that chronic prestimulation leads to functional impairment. These results are consistent with a wasted-like phenotype induced by pre-stimulation on BCMA-conjugated beads. The presence of lenalidomide during the pre-stimulation period retains cytolytic function (P=0.04) and there is a trend towards increased cytokine production compared to cells exposed to vehicle during the pre-stimulation period (FIG. 24B). The presence of lenalidomide in this assay is consistent with the observation that lenalidomide can reduce the effects indicative of a wasting-like phenotype in pre-stimulated CAR T lymphocytes.

[0708] Как показано на Фиг.24C, оценивают фенотип Т-лимфоцитов CAR+ анти-BCMA, стимулируемых в течение 7 дней на шариках BCMA, и добавление леналидомида значительно увеличивает жизнеспособность CAR+ материала T-лимфоцитов CAR анти-BCMA для 3 здоровых доноров (P=0,04). Добавление леналидомида не изменяет общий отсчет клеток для всех доноров в этот 7-дневный период, и не наблюдается значительных различий в проценте CAR+ между Т-лимфоцитами CAR, обработанными несущей средой и леналидомидом. Фиг.24D показывает репрезентативные результаты проточного цитометрического анализа поверхностного экспрессирования CD25 и PD-1 (средняя интенсивность флуоресценции (MFI), для T-лимфоцитов CAR анти-BCMA CD4+ или CD8+ после стимулирования (предварительной обработки) шариками BCMA в течение 7 дней, в присутствии или в отсутствие 1 мкМ леналидомида. Как показано, результаты указывают на то, что леналидомид уменьшает экспрессирование PD-1 Т-лимфоцитами CAR BCMA, увеличивая при этом экспрессирование CD25 после пролонгированного стимулирования. Как показано на Фиг.24E, проточный цитометрический анализ для трех доноров CAR T показывает, что добавление леналидомида увеличивает поверхностное экспрессирование Tim3 в популяции CD8+ (P=4,0 × 10-4), при смешанных воздействиях на популяцию CAR+ CD4+. Среди всех доноров и в обеих популяциях CAR+, как CD4+, так и CD8+, леналидомид повышает уровень CD25 (CD4+ и CD8+; P=2,2 × 10-16) и процент положительных по экспрессированию Lag3 (CD8+, P<0,03; CD4+, P=0,002). Заметим, что наблюдается также уменьшение процента клеток PD-1+ в популяции CD4+ (P=0,04), при этом 2 из 3 доноров также показывают уменьшение в популяции CD8+. [0708] As shown in Figure 24C, the phenotype of anti-BCMA CAR+ T lymphocytes stimulated for 7 days on BCMA beads is assessed, and the addition of lenalidomide significantly increases the viability of CAR+ anti-BCMA CAR T lymphocyte material for 3 healthy donors (P =0.04). The addition of lenalidomide did not change the total cell count for all donors during this 7 day period, and there was no significant difference in percentage of CAR+ between CAR T cells treated with vehicle and lenalidomide. 24D shows representative flow cytometric analysis of CD25 and PD-1 surface expression (mean fluorescence intensity (MFI), for anti-BCMA CD4+ or CD8+ CAR T-lymphocytes after stimulation (pre-treatment) with BCMA beads for 7 days, in the presence of or in the absence of 1 μM lenalidomide As shown, the results indicate that lenalidomide reduces PD-1 expression by CAR BCMA T lymphocytes while increasing CD25 expression after prolonged stimulation As shown in Figure 24E, flow cytometric analysis for three donors CAR T shows that the addition of lenalidomide increases the surface expression of Tim3 in the CD8+ population (P=4.0 × 10-4), with mixed effects on the CAR+ CD4+ population.Among all donors and in both CAR+ populations, both CD4+ and CD8+, lenalidomide increases the level of CD25 (CD4+ and CD8+; P=2.2 × 10 -16 ) and the percentage positive for Lag3 expression (CD8+, P<0.03; CD4+, P=0.002). Note that there is also a decrease in the percentage of PD-1+ cells in the CD4+ population (P=0.04), with 2 out of 3 donors also showing a decrease in the CD8+ population.

[0709] В другом исследовании, шарики конъюгированные с рекомбинантным BCMA человека, используют для стимулирования Т-лимфоцитов CAR при различных концентрациях, для титрования величины стимулирования, либо низкого (5 мкг/мл), либо среднего (50 мкг/мл), либо высокого (200 мкг/ мл) стимулирования. При условиях среднего стимулирования, измеряют продуцирование секретируемых цитокинов через 24 часа после стимулирования и наблюдают 200% увеличение концентраций IL-2 и TNF-α по сравнению с контрольной несущей средой, при зависимом от донора увеличении уровня IFN-γ (Фиг.25A). Клетки стимулируют BCMA-конъюгированными шариками в течение 24 часов в присутствии 0,1 мкМ или 1,0 мкМ леналидомида, или контрольной несущей среды. Ингибитор переноса белка добавляют в последние часы инкубирования и клетки окрашивают для внутриклеточного IL-2, IFN-γ и TNF-α. [0709] In another study, recombinant human BCMA-conjugated beads were used to stimulate CAR T lymphocytes at various concentrations to titrate the amount of stimulation, either low (5 µg/mL), medium (50 µg/mL), or high (200 mcg/ml) stimulation. Under conditions of medium stimulation, the production of secreted cytokines is measured 24 hours after stimulation and a 200% increase in IL-2 and TNF-α concentrations compared to vehicle control is observed, with a donor-dependent increase in IFN-γ levels (FIG. 25A). Cells are stimulated with BCMA-conjugated beads for 24 hours in the presence of 0.1 μM or 1.0 μM lenalidomide or vehicle control. A protein transfer inhibitor is added during the last hours of incubation and cells are stained for intracellular IL-2, IFN-γ and TNF-α.

[0710] Т-лимфоциты CAR+ анти-BCMA, активируемые на шариках BCMA, показывает зависимое от уровня стимулирования воздействие на продуцирование цитокинов, при этом 5-мкг шарики BCMA вызывают ограниченное продуцирование эффекторных цитокинов CAR T по сравнению с 50-мкг и 200-мкг шариками BCMA (Фиг.25B). Леналидомид повышает процент внутриклеточного окрашивания IFN-γ+ и TNF-α+ на всех уровнях стимулирования для Т-лимфоцитов CAR, как CD4+, так и CD8+. Величина стимулирования либо повышает, либо понижает IL-2 в ответ на леналидомид, при этом леналидомид уменьшает процент Т-лимфоцитов CAR+ IL-2+ при 50-мкг и 200-мкг при стимулировании, но увеличивает процент Т-лимфоцитов CAR+ IL-2+ при условиях 5-мкг стимулирования. В отсутствие стимулирования, леналидомид не оказывает воздействия на продуцирование цитокинов CAR T, показывая, что усиление продуцирования цитокинов, обеспечиваемое леналидомидом, требует стимулирования.[0710] Anti-BCMA CAR+ T lymphocytes activated on BCMA beads show a stimulation level-dependent effect on cytokine production, with 5 μg BCMA beads eliciting limited production of CAR T effector cytokines compared to 50 μg and 200 μg BCMA beads (Fig. 25B). Lenalidomide increases the percentage of intracellular IFN-γ + and TNF-α + staining at all levels of stimulation for CAR T-lymphocytes, both CD4+ and CD8+. The amount of stimulation either raises or lowers IL-2 in response to lenalidomide, with lenalidomide decreasing the percentage of CAR+ IL-2 + T cells at 50-ug and 200-ug at stimulation, but increasing the percentage of CAR+ IL-2 + T cells under conditions of 5-mcg stimulation. In the absence of stimulation, lenalidomide has no effect on CAR T cytokine production, indicating that the enhancement of cytokine production provided by lenalidomide requires stimulation.

[0711] В другом исследовании, чтобы узнать, перекрывает ли индуцируемое леналидомидом потенциирование активирования CAR T и продуцирование цитокинов пересилить PD-L1-медиируемое ингибирование, клетки культивируют в присутствии шариков BCMA, генерируемых, как описано в Примере 9, с дополнительным конъюгированием рекомбинантного PD-L1-Fc человека или без него. Т-лимфоциты CAR, полученные от здоровых доноров или пациентов, стимулируют в присутствии BCMA-конъюгированных шариков или BCMA/PD-L1-конъюгированных шариков в течение 24 часов в присутствии 1 мкМ леналидомида. Измеряют продуцирование цитокинов в супернатанте. Результаты показаны на Фиг.25C. Как показано на Фиг.25C, оценки Т-лимфоцитов CAR, как от здоровых доноров, так и от пациентов, демонстрируют, что добавление рекомбинантного PD-L1 к рекомбинантным шарикам BCMA уменьшает уровень IFN-γ, IL-2 и TNF-α. Показано, что обработка леналидомидом потенциирует уровни секретируемых цитокинов выше уровней от Т-лимфоцитов CAR, обработанных несущей средой в присутствии PD-L1. Результаты согласуются с тем выводом, что продуцирование цитокинов CAR-T анти-BCMA после инкубирования вместе с BCMA-конъюгированными шариками повышает уровень леналидомида в присутствии PD-L1-медиируемого ингибирования. [0711] In another study, to see if lenalidomide-induced potentiation of CAR T activation and cytokine production overrides PD-L1-mediated inhibition, cells were cultured in the presence of BCMA beads generated as described in Example 9, with additional conjugation of recombinant PD- L1-Fc human or without. CAR T-lymphocytes obtained from healthy donors or patients are stimulated in the presence of BCMA-conjugated beads or BCMA/PD-L1-conjugated beads for 24 hours in the presence of 1 μM lenalidomide. The production of cytokines in the supernatant is measured. The results are shown in Fig.25C. As shown in FIG. 25C, scores of CAR T lymphocytes from both healthy donors and patients demonstrate that the addition of recombinant PD-L1 to recombinant BCMA beads reduces IFN-γ, IL-2, and TNF-α levels. Treatment with lenalidomide has been shown to potentiate levels of secreted cytokines above those from CAR T-lymphocytes treated with vehicle in the presence of PD-L1. The results are consistent with the conclusion that the production of anti-BCMA CAR-T cytokines after incubation with BCMA-conjugated beads increases lenalidomide levels in the presence of PD-L1-mediated inhibition.

Пример 13 Анализ экспрессирования генов и доступности хроматина в Т-лимфоцитах CAR в присутствии или в отсутствие леналидомидаExample 13 Analysis of gene expression and chromatin availability in CAR T-lymphocytes in the presence or absence of lenalidomide

[0712] Оценивают экспрессирование генов и доступность хроматина в Т-лимфоцитах CAR при стимулировании в присутствии или в отсутствие леналидомида. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-BCMA, генерируемые от четырех (4) различных независимых доноров, стимулируют 50 мкг/мл BCMA-конъюгированных шариков в течение 24 часов (24 час+stim) или 7 дней (d7+stim), или культивируют без стимулирования в течение 24 часов (24 час), в присутствии или в отсутствие леналидомида (1 мкМ). Эксперименты осуществляют дважды на 3-4 донорах. CAR-экспрессирующие клетки оценивают с помощью секвенирования RNA (RNA-seq) на экспрессирование генов и анализируют на транспозаза-доступный хроматин, используя секвенирование (ATAC-seq) для анализа доступности хроматина. Анализы осуществляют на 50000 клеток в каждый момент времени.[0712] Gene expression and chromatin availability in CAR T-lymphocytes are assessed when stimulated in the presence or absence of lenalidomide. Anti-BCMA CAR-expressing T-lymphocytes generated from four (4) different independent donors stimulated with 50 μg/ml BCMA-conjugated beads for 24 hours (24 hours+stim) or 7 days (d7+stim), or cultured without stimulation for 24 hours (24 hours), with or without lenalidomide (1 μM). Experiments are carried out twice on 3-4 donors. CAR-expressing cells are assessed by RNA sequencing (RNA-seq) for gene expression and analyzed for transposase-accessible chromatin using chromatin accessibility sequencing (ATAC-seq). Analyzes are performed on 50,000 cells at each time point.

[0713] RNA-seq осуществляют на комплементарных образцах ДНК (cDNA), приготовленных из RNA, выделенных из культивируемых CAR-экспрессирующих клеток анти-BCMA. ATAC-seq осуществляют, в целом, как описано в Buenrostro et al., Nat Methods. (2013) 10(12): 1213-1218. Считываемые фрагменты ATAC со спаренными концами обрезают, выравнивают с помощью Bowtie2 и фильтруют по качеству, длине фрагмента, дупликации и митохондриальному вкладу. Пики доступности ATAC-seq определяют с использованием MACS2 (q<0,01), и консенсусную панель генерируют из перекрывающихся пиков, присутствующих в 2 или более образцах, используя DiffBind. Анализ главных компонентов (PCA) осуществляют для наборов данных RNA-seq и ATAC-seq, генерируемых из DESeq2-нормированных отсчетов. Вычисляют дифференциальное экспрессирование (DE, для RNA-seq) или доступность консенсусных пиков (DA, для ATAC-seq), моделирующее воздействия доноров (Доноры 1-4) и воздействие обработки (леналидомид по сравнению с несущей средой) через 24 часа и в день 7. Дифференциальный порог выбора локуса соответствует q≤0,05 и log2-кратному изменению ≥0,5 для RNA-seq или q≤0,1 для ATAC-seq. Осуществляют анализ обогащения согласно генной онтологии (GO), и z-оценку активирования определяют на подмножестве генов, дифференциально экспрессируемых при q<0,1, с использованием Ingenuity Pathway Analysis software (Qiagen, Inc.), учитывая воздействия донора в пределах каждого условия обработки. Анализ обогащения мотивов осуществляют для пиков, которые, как показано, являются более доступными в присутствии леналидомида, с помощью программного обеспечения HOMER, с использованием консенсусного множества пиков в качестве фона, для данных ATAC-seq при стимулировании в день 7 (d7+stim).[0713] RNA-seq is performed on complementary DNA samples (cDNA) prepared from RNA isolated from cultured CAR-expressing anti-BCMA cells. ATAC-seq is carried out, in general, as described in Buenrostro et al., Nat Methods. (2013) 10(12): 1213-1218. Paired-end ATAC read fragments are cut, aligned with Bowtie2, and filtered for quality, fragment length, duplication, and mitochondrial contribution. ATAC-seq availability peaks are determined using MACS2 (q<0.01) and a consensus panel is generated from overlapping peaks present in 2 or more samples using DiffBind. Principal Component Analysis (PCA) is performed on RNA-seq and ATAC-seq datasets generated from DESeq2 normalized samples. Calculate differential expression (DE, for RNA-seq) or consensus peak availability (DA, for ATAC-seq) simulating the effects of donors (Donors 1-4) and treatment effects (lenalidomide versus vehicle) at 24 hours and per day 7. The differential locus selection threshold corresponds to q≤0.05 and log2-fold change ≥0.5 for RNA-seq or q≤0.1 for ATAC-seq. Gene Ontology (GO) enrichment analysis is performed and activation z-score is determined on a subset of genes differentially expressed at q<0.1 using Ingenuity Pathway Analysis software (Qiagen, Inc.), considering donor exposures within each treatment condition . Motif enrichment analysis is performed for peaks shown to be more accessible in the presence of lenalidomide using the HOMER software, using the peak consensus set as background, for the ATAC-seq data at day 7 stimulation (d7+stim).

[0714] Тепловые карты RNA-seq генерируют на нормированных (транскрипты на миллион) данных экспрессирования, усредненных по донорам на одно условие, и нормируют по строкам с использованием z-оценок. Обогащение мотивов в пиках DA в день 7 осуществляют с помощью HOMER, используя консенсусные множества пиков в качестве фона.[0714] RNA-seq heatmaps are generated from normalized (transcripts per million) expression data averaged across donors per condition and normalized by row using z-scores. Motif enrichment in DA peaks on day 7 was performed with HOMER using consensus peak sets as background.

[0715] Результаты PCA, представляющее общее разнообразие экспрессирования генов или доступности хроматина на геноме, показаны на Фиг.26A (экспрессирование гена; на основе результатов RNA-seq) и Фиг.26B (доступность хроматина; на основе результатов ATAC-seq). Эллипсы вычерчены для указания таких групп, как это наблюдается, что главные факторы, которые вносят вклад в разброс экспрессирования генов или доступности хроматина, представляют собой время культивирования и присутствие стимулирования. Клетки, культивируемые в присутствии леналидомида (кружочки), демонстрируют отличающееся общее экспрессирование генов и доступность хроматина по сравнению с клетками, культивируемыми в отсутствие леналидомида (треугольники, несущая среда), они показывают воздействие обработки леналидомидом для каждого донора и условия культивирования. Для обработки леналидомидом, общее направление изменений (показанное точечной линией между треугольником и кружочком) является сходным для каждого донора, и степень изменения, как правило, больше у клеток, культивируемых в течение 7 дней при стимулировании, по сравнению с изменениями у клеток, культивируемых в течение 24 часов, при стимулировании или без него. Таким образом, PCA демонстрирует кластеризацию на основе стимулирования (stim или no stim) и времени (24 часа или 7 дней) для обоих наборов данных, как RNA-seq (Фигура 26A), так и ATAC-seq (Фигура 26B).[0715] PCA results representing the overall diversity of gene expression or chromatin availability on the genome are shown in Fig. 26A (gene expression; based on RNA-seq results) and Fig. 26B (chromatin accessibility; based on ATAC-seq results). Ellipses are drawn to indicate such groups, as it is observed that the main factors that contribute to the scatter of gene expression or chromatin availability are culture time and the presence of stimulation. Cells cultured in the presence of lenalidomide (circles) show different overall gene expression and chromatin availability compared to cells cultured in the absence of lenalidomide (triangles, vehicle), they show the impact of lenalidomide treatment for each donor and culture conditions. For lenalidomide treatment, the overall direction of change (shown by the dotted line between the triangle and circle) is similar for each donor, and the degree of change is generally greater in cells cultured for 7 days on challenge compared to those in cells cultured in within 24 hours, with or without stimulation. Thus, PCA shows clustering based on stimulation (stim or no stim) and time (24 hours or 7 days) for both RNA-seq (Figure 26A) and ATAC-seq (Figure 26B) datasets.

[0716] Затем исследуют роль леналидомида через 24 часа или через 7 дней стимулирования после учета разброса между донорами. Фигуры 27A-27D показывают изменения экспрессирования генов (Фигуры 27A и 27B, после 24 часов и 7 дней культивирования при стимулировании, соответственно) или доступности хроматина (Фигуры 27C и 27D, после 24 часов и 7 дней культивирования при стимулировании соответственно) в присутствии леналидомида. Анализ RNA-seq показывает ап-регулирование небольшого набора генов (214) через 24 часа, и в присутствии леналидомида изменяется большее количество генов (583) через 7 дней стимулирования (Фигуры 27A и 27B). Анализ ATAC-seq показывает ограниченный набор изменений доступности хроматина, связанный с обработкой леналидомидом через 24 часа стимулирования, с драматическими изменениями профиля и увеличением количества сайтов с изменениями доступности хроматина (изменения доступности хроматина в 2804 пиках) через 7 дней стимулирования в присутствии леналидомида (Фигуры 27C и 27D). Эти результаты показывают, что обработка леналидомидом изменяет как транскрипционный, так и эпигенетический профиль Т-лимфоцитов CAR. [0716] The role of lenalidomide is then examined at 24 hours or 7 days of stimulation after accounting for variation between donors. Figures 27A-27D show changes in gene expression (Figures 27A and 27B, after 24 hours and 7 days of stimulated culture, respectively) or chromatin availability (Figures 27C and 27D, after 24 hours and 7 days of stimulated culture, respectively) in the presence of lenalidomide. RNA-seq analysis shows up-regulation of a small set of genes (214) after 24 hours, and in the presence of lenalidomide more genes (583) are changed after 7 days of stimulation (Figures 27A and 27B). ATAC-seq analysis shows a limited set of changes in chromatin availability associated with lenalidomide treatment after 24 hours of stimulation, with dramatic profile changes and an increase in the number of sites with changes in chromatin accessibility (changes in chromatin availability in 2804 peaks) after 7 days of stimulation in the presence of lenalidomide (Figures 27C and 27D). These results indicate that treatment with lenalidomide alters both the transcriptional and epigenetic profile of CAR T lymphocytes.

[0717] Для дополнительной идентификации конкретных транскрипционных изменений, связанных с обработкой леналидомидом, анализ онтологии генов применяют к набору данных RNA-seq и идентифицируют пути передачи биологических сигналов, которые обогащены дифференциально экспрессируемыми генами (Фигуры 28A и 28B). Направленность и значимость воздействий на биологические пути показаны через 24 часа (Фиг.28A) или через 7 дней (Фиг.28B). Результаты показывают, что присутствие леналидомида дает в результате увеличение экспрессирования генов, вовлеченных в активирование и передачу сигналов Т-лимфоцитов. Результаты показывают, что пути, дифференциально регулируемые в присутствии и в отсутствие леналидомида, показывают обогащение генов, связанных с иммунными синапсами генов, вовлеченных в передачу сигналов цитокинов, и генов, вовлеченных в пути активирования Т-лимфоцитов. Конкретно, пути, связанные с хемотаксисом T-лимфоцитов (экстравазация лейкоцитов, интегрин, ILK и наборы CXCR4-ассоциированных генов), внутриклеточная передача сигналов и цитоскелет (Rac/Rho/Cdc42) ап-регулируются в присутствии леналидомида в пределах 24 часов стимулирования по сравнению с контрольной несущей средой. В дополнение к этому, эти данные поддерживают увеличение в связанных с ICOS путях передачи сигналов - данные, которые согласуются с предыдущими публикациями, демонстрирующими увеличение уровней ICOS и ICOSL в популяции мононуклеаров периферической крови CD3+, обрабатываемой леналидомидом ex vivo (Gorgun et al. (2010) Blood, 116:3227-3237). Через 7 дней стимулирования, леналидомид ап-регулирует пути, связанные с реакцией Th1 T-лимфоцитов и состимулированием, в то же время, уменьшая сигнатуры Th2-ассоциированных генов. [0717] To further identify specific transcriptional changes associated with lenalidomide treatment, gene ontology analysis is applied to the RNA-seq dataset and identifies biological signaling pathways that are enriched in differentially expressed genes (Figures 28A and 28B). The direction and significance of the effects on biological pathways are shown after 24 hours (FIG. 28A) or after 7 days (FIG. 28B). The results show that the presence of lenalidomide results in an increase in the expression of genes involved in the activation and signaling of T-lymphocytes. The results show that pathways differentially regulated in the presence and absence of lenalidomide show gene enrichment in immune synapse-associated genes involved in cytokine signaling and genes involved in T-lymphocyte activation pathways. Specifically, pathways associated with T-lymphocyte chemotaxis (leukocyte extravasation, integrin, ILK, and CXCR4-associated gene sets), intracellular signaling, and the cytoskeleton (Rac/Rho/Cdc42) are up-regulated in the presence of lenalidomide within 24 hours of stimulation compared to with control carrier medium. In addition, these data support an increase in ICOS-related signaling pathways - data that is consistent with previous publications demonstrating an increase in ICOS and ICOSL levels in a population of CD3+ peripheral blood mononuclear cells treated with ex vivo lenalidomide (Gorgun et al. (2010) Blood, 116:3227-3237). After 7 days of stimulation, lenalidomide up-regulates pathways associated with Th1 T-lymphocyte response and co-stimulation, while at the same time reducing the signatures of Th2-associated genes.

[0718] Для выбранного подмножества генов, включая гены, вовлеченные в активирование и передачу сигналов Т-лимфоцитов, изменения экспрессирования генов и доступности хроматина в присутствии леналидомида сравнивают для клеток, культивируемых в течение 7 дней при стимулировании, чтобы определить, коррелирует ли доступность хроматина с транскрипцией. Фиг.29 показывает индивидуальные пики доступности хроматина (ромбики) и среднее изменение доступности хроматина для каждого гена (кружочки) на графике зависимости от соответствующих изменений экспрессирования гена, измеренных с помощью RNA-seq, показывающем соответствие сигнала в этих двух способах. Для доноров наблюдают значительное увеличение доступности хроматина среди множества локусов, ассоциированных с IFN-γ и IL-2RA (CD25), и эти изменения коррелируют со значительным увеличением транскрипции. Важно, что ап-регулирование IFN-γ и CD25 поддерживает предыдущие данные экспериментов по хроническому стимулированию. В дополнение к этому, наблюдают также уменьшение доступности хроматина и транскрипции гена в CD69 и CCR7 при обработке леналидомидом. [0718] For a selected subset of genes, including genes involved in T-lymphocyte activation and signaling, changes in gene expression and chromatin availability in the presence of lenalidomide are compared for cells cultured for 7 days on stimulation to determine if chromatin availability correlates with transcription. 29 shows the individual chromatin availability peaks (diamonds) and the average change in chromatin availability for each gene (circles) in a plot against the respective changes in gene expression measured by RNA-seq showing signal agreement in the two methods. For donors, a significant increase in chromatin availability is observed among multiple loci associated with IFN-γ and IL-2RA (CD25), and these changes correlate with a significant increase in transcription. Importantly, the up-regulation of IFN-γ and CD25 supports previous data from chronic stimulation experiments. In addition, a decrease in chromatin availability and gene transcription in CD69 and CCR7 is also observed upon treatment with lenalidomide.

[0719] Анализируемый набор данных ATAC-seq для обогащения мотивов и результаты анализа обогащения мотивов для пиков с повышенной доступностью в присутствии леналидомида в 7-дневных культурах показаны на Фиг.30. Мотивы, как предсказано, связывают различные факторы транскрипции, как понимается, вовлеченные в активирование и передачу сигналов Т-лимфоцитов, включая AP-1/Jun и ядерный фактор κB, обогащены пиками с повышенной доступностью в присутствии леналидомида. Результаты согласуются с повышением функциональной активности CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в присутствии леналидомида. [0719] The analyzed ATAC-seq dataset for motif enrichment and the results of motif enrichment analysis for peaks with increased availability in the presence of lenalidomide in 7 day old cultures are shown in FIG. Motifs predicted to bind various transcription factors understood to be involved in T-lymphocyte activation and signaling, including AP-1/Jun and nuclear factor κB, are enriched in peaks with increased availability in the presence of lenalidomide. The results are consistent with an increase in the functional activity of CAR-expressing T-lymphocytes in the presence of lenalidomide.

[0720] Без желания ограничиваться теорией, исследования RNA- и ATAC-seq дают в результате ряд правильных представлений относительно возможных механизмов индуцируемых леналидомидом повышений функции CAR T. Во-первых, количество транскрипционных изменений и изменений доступности хроматина, связанных со стимулированием и временем, сравниваются в основном с воздействиями леналидомида, указывая на относительно тонкое воздействие леналидомида на транскрипционные сети. Во-вторых, изменения, связанные с леналидомидом, являются очень широкими, включая ранние изменения в транскриптах, связанные с восстановлением цитоскелета и хемотаксисом. После хронического стимулирования появляется отличающаяся транскрипционная сигнатура, которая включает уменьшение количества транскриптов, связанных с реакцией Th2, контрольной точкой G2/M и ATM, вместе с увеличением Th1, пероксисомным пролифератор-активируемым рецептором γ и генами, связанными с актиновым цитоскелетом. Эти воздействия могут поддерживать роль обработки леналидомидом и контроля клеточного цикла и активирования T-лимфоцитов. Предыдущие исследования продемонстрировали также воздействия IMiD на Th1- и Th2-связанные сигнатуры, а также на изменения элементов, связанных с восстановлением цитоскелета и миграцией T-лимфоцитов. Демонстрируемые ранние изменения продуцирования цитокинов под действием леналидомида могут вносить вклад в изменение состояния T-лимфоцитов, то есть способны усилить одновременно как функцию памяти, так и эффекторную функцию. В целом, эти результаты говорят, что дополнительные факторы, кроме тех, о которых сообщалось ранее, вовлечены в индуцируемую леналидомидом пролонгацию функции CAR T, включая возможные изменения контроля клеточного цикла. [0720] Without wishing to be bound by theory, RNA- and ATAC-seq studies result in a number of insights regarding possible mechanisms for lenalidomide-induced increases in CAR T function. First, the number of transcriptional changes and changes in chromatin availability associated with stimulation and time are compared mainly with the effects of lenalidomide, indicating relatively subtle effects of lenalidomide on transcriptional networks. Second, the changes associated with lenalidomide are very broad, including early transcriptional changes associated with cytoskeletal repair and chemotaxis. After chronic stimulation, a distinct transcriptional signature appears that includes a decrease in transcripts associated with the Th2 response, the G2/M checkpoint, and ATM, along with an increase in Th1, peroxisome proliferator-activated receptor γ, and genes associated with the actin cytoskeleton. These effects may support the role of lenalidomide treatment and cell cycle control and T-lymphocyte activation. Previous studies have also demonstrated the effects of IMiD on Th1- and Th2-associated signatures, as well as changes in elements associated with cytoskeletal repair and T-lymphocyte migration. Demonstrated early changes in cytokine production under the influence of lenalidomide can contribute to the change in the state of T-lymphocytes, that is, they can enhance both memory function and effector function at the same time. Overall, these results suggest that additional factors other than those previously reported are involved in lenalidomide-induced prolongation of CAR T function, including possible alterations in cell cycle control.

[0721] Применение ATAC-seq дает дополнительные правильные представления относительно потенциальных механизмов действия леналидомида. Хотя, как стимулирование, так и время представляют собой одни из главных движущих сил изменений доступности хроматина, обработка леналидомидом связана с увеличением доступности хроматина в локусах, обогащенных мотивами, связанными с активированием и функцией T-лимфоцитов, после хронического стимулирования. Эти эпигенетические изменения совпадают с замеченными функциональными изменениями Т-лимфоцитов CAR, инкубируемых вместе с леналидомидом. Изменения в сигнатурах доступности хроматина связаны с истощением Т-лимфоцитов и могут представлять собой более стойкий показатель истощения по сравнению с поверхностным экспрессированием лигандов Т-лимфоцитов. Эти данные демонстрируют, что хроническое стимулирование леналидомидом дает в результате увеличение доступности хроматина и экспрессирования генов IL-2 и CD25 и уменьшение экспрессирования генов и доступности хроматина CCR7 и CD69. Предыдущие исследования говорят о том, что CCR7-экспрессирующие клетки продуцируют более высокие уровни IL-2; однако современные исследования показывают, что путь IL-2 мог бы быть изменен независимо под действием леналидомида, что приводит в результате к альтернативному состоянию Т-лимфоцита. CD69, маркер активирования Т-лимфоцита, содержит элемент, чувствительный к ядерному фактору κB, который необходим для реакции CD69 на TNF-α. Закрывание CD69-ассоциированного хроматина и уменьшение количества транскриптов могут представлять собой реакцию на долговременное увеличение продуцирования TNF-α Т-лимфоцитами CAR, культивируемыми вместе с леналидомидом, или это может представлять собой реакцию T-лимфоцитов на повышенное активирование в присутствии леналидомида. Клетки, обработанные леналидомидом, демонстрируют увеличение обогащения мотива фактора транскрипции для факторов, связанных с активированием Т-лимфоцитов, поддерживая ту идею, что эти клетки экспонируются для передачи сигналов долговременного активирования. В целом, индуцированное леналидомидом состояние Т-лимфоцита CAR включает такие элементы, как функции эффекторного Т-лимфоцита, включая как увеличение продуцирования IFN-γ и TNF-α, так и функцию Т-лимфоцита, включая повышение уровня IL-2 и долговременную пролиферацию.[0721] The use of ATAC-seq provides additional insight into the potential mechanisms of action of lenalidomide. Although both stimulation and timing are one of the main drivers of changes in chromatin availability, treatment with lenalidomide is associated with an increase in chromatin availability at loci enriched in motifs associated with T-lymphocyte activation and function after chronic stimulation. These epigenetic changes are consistent with the observed functional changes in CAR T-lymphocytes incubated with lenalidomide. Changes in chromatin accessibility signatures are associated with T-lymphocyte depletion and may represent a more robust indicator of depletion compared to surface expression of T-lymphocyte ligands. These data demonstrate that chronic stimulation with lenalidomide results in an increase in chromatin availability and gene expression of IL-2 and CD25 and a decrease in gene expression and availability of CCR7 and CD69 chromatin. Previous studies suggest that CCR7-expressing cells produce higher levels of IL-2; however, current research indicates that the IL-2 pathway could be independently altered by lenalidomide, resulting in an alternate state of the T-lymphocyte. CD69, a T-lymphocyte activation marker, contains a nuclear factor κB responsive element that is required for the CD69 response to TNF-α. Closure of CD69-associated chromatin and reduction in transcripts may be a response to a long-term increase in TNF-α production by CAR T lymphocytes co-cultured with lenalidomide, or it may be a response of T lymphocytes to increased activation in the presence of lenalidomide. Cells treated with lenalidomide show an increase in transcription factor motif enrichment for factors associated with T-lymphocyte activation, supporting the idea that these cells are exposed to long-term activation signaling. In general, the lenalidomide-induced CAR T-lymphocyte state includes elements such as effector T-lymphocyte functions, including both increased IFN-γ and TNF-α production, and T-lymphocyte function, including increased IL-2 levels and long-term proliferation.

Пример 14 Оценка фармакодинамической реакции фактора транскрипции Ikaros в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах в присутствии соединения 1 или леналидомидаExample 14 Evaluation of the pharmacodynamic response of transcription factor Ikaros in CAR-expressing T-lymphocytes in the presence of compound 1 or lenalidomide

[0722] Композиции Т-лимфоцитов, содержащие CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19, генерируют из образцов лейкафереза от трех здоровых взрослых доноров людей с помощью способа, включающего селекцию Т-лимфоцитов на основе иммунноафинности (включая клетки CD4+ и CD8+) из образцов, полученных в результате в двух композициях, обогащенных клетками CD8+ и CD4+, соответственно. Клетки инкубируют в присутствии 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) или леналидомида и оценивают экспрессию фактора транскрипции Ikaros.[0722] T-lymphocyte compositions containing CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes are generated from leukapheresis samples from three healthy adult human donors by a method comprising selecting T-lymphocytes based on immunoaffinity (including CD4+ and CD8+ cells) from the samples resulting in two compositions enriched in CD8+ and CD4+ cells, respectively. Cells are incubated in the presence of 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione (Compound 1) or lenalidomide and expression of the Ikaros transcription factor is evaluated.

[0723] Клетки композиций, обогащенных CD4+ и CD8+, активируют по отдельности шариками анти-CD3/анти-CD28 и подвергают воздействию лентивирусной трансдукции с помощью вектора, кодирующего CAR анти-CD19. CAR анти-CD19 содержит scFv анти-CD19, полученный из антитела мышей (вариабельную область, полученную из FMC63), спейсер, полученный из иммуноглобулина, трансмембранный домен, полученный из CD28, костимуляторную область, полученную из 4-1BB, и внутриклеточный сигнальный домен CD3-зета. Конструкция экспрессии в вирусном векторе дополнительно содержит последовательности, кодирующие усеченный рецептор, который служит как суррогатный маркер для экспрессирования CAR, который выделяется из последовательности CAR с помощью рибосомальной перескакивающей последовательности T2A. Трансдуцированные популяции затем инкубируют по отдельности в присутствии стимулирующих реагентов для размножения клеток. Размноженные клетки CD8+ и CD4+ приготавливают и криоконсервируют по отдельности и хранят. Криоконсервированные CAR-экспрессирующие клетки анти-CD19 CD4+ и CD8+ от каждого донора оттаивают и объединяют при отношении CAR+ CD4+:CD8+ приблизительно 1:1 перед использованием.[0723] Cells of compositions enriched in CD4+ and CD8+ are activated individually with anti-CD3/anti-CD28 beads and subjected to lentiviral transduction with a vector encoding anti-CD19 CAR. The anti-CD19 CAR contains an anti-CD19 scFv derived from a mouse antibody (variable region derived from FMC63), an immunoglobulin derived spacer, a transmembrane domain derived from CD28, a costimulatory region derived from 4-1BB, and a CD3 intracellular signaling domain. -zeta. The expression construct in the viral vector further contains sequences encoding a truncated receptor that serves as a surrogate marker for CAR expression, which is released from the CAR sequence by the T2A ribosomal skipping sequence. The transduced populations are then individually incubated in the presence of stimulatory reagents for cell expansion. Expanded CD8+ and CD4+ cells are prepared and cryopreserved separately and stored. Cryopreserved CAR-expressing anti-CD19 CD4+ and CD8+ cells from each donor are thawed and pooled at a CAR+ CD4+:CD8+ ratio of approximately 1:1 before use.

[0724] Приблизительно 2,5×105 клеток (Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1) из генерируемой композиции Т-лимфоцитов CAR+ стимулируют в течение ночи реагентом специфичным к CAR, а затем клетки инкубируют вместе с леналидомидом (100 нМ - 10000 нМ), Соединением 1 (10 нМ - 3000 нМ) или контрольной несущей средой в течение ночи при 37°C, 5% CO2. Оцениваемые концентрации Соединения 1 и леналидомида охватывают известные клинические Cmax и Cmin. После инкубирования, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19 окрашивают антителами и анализируют с помощью проточной цитометрии для оценки поверхностного экспрессирования CD4, CD8 и суррогатного маркера для экспрессирования CAR, и внутриклеточных уровней Ikaros в клетках CAR+ CD4+ или CAR+ CD8+. Медианные значения интенсивности флуоресценции (MFI) для Ikaros нормируют и вычисляют как процент по отношению к контрольной несущей среде. [0724] Approximately 2.5 x 10 5 cells (CD4+ and CD8+ T lymphocytes pooled at a ratio of 1:1) from the generated CAR+ T lymphocyte composition are stimulated overnight with a CAR specific reagent and then the cells are incubated with lenalidomide ( 100 nM - 10000 nM), Compound 1 (10 nM - 3000 nM) or vehicle control overnight at 37° C., 5% CO 2 . The estimated concentrations of Compound 1 and lenalidomide cover the known clinical C max and C min . After incubation, CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes are stained with antibodies and analyzed by flow cytometry to evaluate surface expression of CD4, CD8 and a surrogate marker for CAR expression, and intracellular levels of Ikaros in CAR+ CD4+ or CAR+ CD8+ cells. Median fluorescence intensity (MFI) values for Ikaros are normalized and calculated as a percentage relative to the control carrier medium.

[0725] Как показано на Фиг.31, зависимое от концентрации уменьшение экспрессирования внутриклеточного Ikaros наблюдают как в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-CD19 CD4+, так и в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-CD19 CD8+, после инкубирования вместе с Соединением 1 или леналидомидом. Большее уменьшение экспрессирования Ikaros наблюдают в клетках в присутствии Соединения 1, по сравнению с леналидомидом. Значение EC50 для уменьшения экспрессирования Ikaros вычисляют, как определено по концентрации ингибитора, которая уменьшает MFI Ikaros до 50% от его максимального MFI в отсутствие ингибитора. Значения EC50 для Соединения 1 и леналидомида показаны в Таблице E5. [0725] As shown in FIG. 31, a concentration-dependent decrease in expression of intracellular Ikaros is observed in both anti-CD19 CD4+ CAR-expressing T lymphocytes and anti-CD19 CD8+ CAR-expressing T lymphocytes after incubation with Compound 1 or lenalidomide. A greater decrease in Ikaros expression is observed in cells in the presence of Compound 1 compared to lenalidomide. The EC50 value for reducing Ikaros expression is calculated as determined by the concentration of inhibitor that reduces the MFI of Ikaros to 50% of its maximum MFI in the absence of inhibitor. The EC50 values for Compound 1 and lenalidomide are shown in Table E5.

Таблица E5. EC50 (нМ) Ikaros в Т-лимфоцитах CAR+ CD4+ и Т-лимфоцитах CAR+ CD8+. Table E5. EC50 (nM) of Ikaros in CAR+ CD4+ T-lymphocytes and CAR+ CD8+ T-lymphocytes.

CD4+CD4+ CD8+CD8+ ЛеналидомидLenalidomide Соединение 1Compound 1 ЛеналидомидLenalidomide Соединение 1Compound 1 Донор 1Donor 1 61,261.2 6767 80,980.9 100,9100.9 Донор 2Donor 2 NDND 41,541.5 NDND 60,860.8 Донор 3Donor 3 169,8169.8 99,899.8 235,5235.5 161,1161.1

ND=не определеноND=not defined

Пример 15 Оценка функциональных воздействий на CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты после инкубирования вместе с целевыми клетками в присутствии Соединения 1 или леналидомидаExample 15 Evaluation of functional effects on CAR-expressing T-lymphocytes after incubation with target cells in the presence of Compound 1 or lenalidomide

[0726] Композиции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 (содержащие клетки CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1) генерируют, по существу, как описано в Примере 14, и инкубируют вместе с целевыми клетками K562, трансдуцированными CD19 человека (K562.CD19), в присутствии 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) (при концентрации 10 нМ, 100 нМ, 500 нМ и 1000 нМ), леналидомида (при концентрации 100 нМ, 1000 нМ и 10000 нМ) или контрольной несущей среды при 37°C, 5% CO2. Оценивают экспрессирование цитокинов, цитолиз целевых клеток и экспрессирование поверхностных маркеров CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19.[0726] Anti-CD19 CAR-expressing T-lymphocyte compositions (containing CD4+ and CD8+ cells combined at a 1:1 ratio) were generated essentially as described in Example 14 and incubated with human CD19 (K562.CD19) transduced target K562 cells in the presence of 3-(5-amino -2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione (Compound 1) (at a concentration of 10 nM, 100 nM, 500 nM and 1000 nM), lenalidomide (at a concentration of 100 nM, 1000 nM and 10000 nM) or control vehicle at 37°C, 5% CO2. Cytokine expression, cytolysis of target cells, and expression of surface markers by CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes are assessed.

A. Продуцирование цитокинов A. Cytokine production

[0727] Для оценки продуцирования цитокинов, 1×105 клеток CAR+ анти-CD19 (Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+, объединенных при отношении 1:1) инкубируют вместе с целевыми клетками K562.CD19 при отношении E:T 5:1 или 2,5:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида или Соединения 1, как описано выше. Через 24 часа, супернатанты харвестируют и анализируют на продуцирование цитокинов IFN-γ, IL-2 и TNF-α. [0727] To evaluate cytokine production, 1×10 5 CAR+ anti-CD19 cells (CD4+ and CD8+ T lymphocytes pooled at a ratio of 1:1) are incubated with target K562.CD19 cells at an E:T ratio of 5:1 or 2 ,5:1 in the presence or absence of lenalidomide or Compound 1 as described above. After 24 hours, the supernatants are harvested and analyzed for the production of the cytokines IFN-γ, IL-2 and TNF-α.

[0728] Как показано на Фигурах 32A (Соединение 1) и 32B (леналидомид), продуцирование цитокинов увеличивается в присутствии Соединения 1 или леналидомида, соответственно, зависимым от концентрации образом по сравнению с контрольной несущей средой, при отношении E:T, как 5:1, так и 2,5:1. Имеются различия уровней цитокинов среди разных доноров. Обработка Соединением 1 дает в результате большее продуцирование цитокинов для множества условий по сравнению с обработкой леналидомидом при эквивалентных концентрациях. Увеличение является статистически значимым, как определено по увеличению продуцирования цитокинов в присутствии 100 нМ и 1000 нМ Соединения 1 по сравнению с эквивалентной концентрацией леналидомида при отношении E:T 2,5:1 и 5:1, как определено с использованием непарного параметрического t-теста с коррекцией Велша, смотри Таблицу E6 (P-значения при E:T 2,5:1/P-значения при E:T 5:1). [0728] As shown in Figures 32A (Compound 1) and 32B (lenalidomide), cytokine production is increased in the presence of Compound 1 or lenalidomide, respectively, in a concentration dependent manner compared to vehicle control, with an E:T ratio of 5: 1 and 2.5:1. There are differences in cytokine levels among different donors. Treatment with Compound 1 results in greater cytokine production for a variety of conditions compared to treatment with lenalidomide at equivalent concentrations. The increase is statistically significant, as determined by the increase in cytokine production in the presence of 100 nM and 1000 nM Compound 1 compared to the equivalent concentration of lenalidomide at an E:T ratio of 2.5:1 and 5:1, as determined using an unpaired parametric t-test with Welsh correction, see Table E6 (P-values at E:T 2.5:1/P-values at E:T 5:1).

[0729] Таблица E6. Продуцирование цитокинов CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами анти-CD19, обработанными Соединением 1 или леналидомидом. [0729] Table E6. Cytokine production by CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes treated with Compound 1 or lenalidomide.

Донор 1Donor 1 Донор 2Donor 2 Донор 3Donor 3 Концентрация (нМ):Concentration (nM): 100100 10001000 100100 10001000 100100 10001000 IFN-γIFN-γ ***/****/* */ns*/ns ns/nsns/ns ns/***ns/*** ***/******/*** ***/******/*** IL-2IL-2 **/***/* */**/* **/**/ ns/nsns/ns ns/*ns/* ns/nsns/ns TNF-αTNF-α ***/****/* ***/******/*** **/**/ ***/******/*** **/***/* **/****/**

p ≤0,05 : *; p ≤0,01: **; p ≤0,001: ***; ns: не значимоеp≤0.05 : *; p ≤0.01: **; p≤0.001: ***; ns: not significant

B. Цитолитическая функция B. Cytolytic function

[0730] Для оценки цитолитической функции, 1×105 или 5×104 клеток CAR+ анти-CD19 (Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+, объединенных при отношении 1:1) инкубируют вместе с 2×104 целевых клеток K562.CD19 при отношении E:T 5:1 или 2,5:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида или Соединения 1 или контрольной несущей среды, как описано выше. Целевые клетки K562.CD19 трансдуцируют NucLight Red, чтобы сделать возможным их отслеживание с помощью микроскопии. Цитолитическую активность оценивают посредством измерения потери жизнеспособных целевых клеток за период пять дней, как определено с помощью сигнала красной флуоресценции (используя IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). Коэффициент гибели определяют с использованием формулы: 1/AUC, и коэффициент гибели нормируют на клетки CAR+, сокультивируемые с целевыми клетками, которые инкубируют вместе с контрольной несущей средой (установлено при уничтожении 100%).[0730] To evaluate cytolytic function, 1×10 5 or 5×10 4 anti-CD19 CAR+ cells (CD4+ and CD8+ T lymphocytes pooled at a ratio of 1:1) are incubated with 2×10 4 target K562.CD19 cells at an E:T ratio of 5:1 or 2.5:1 in the presence or absence of lenalidomide or Compound 1 or vehicle control as described above. Target K562.CD19 cells are transduced with NucLight Red to allow their tracking by microscopy. Cytolytic activity is assessed by measuring the loss of viable target cells over a period of five days, as determined by the red fluorescence signal (using the IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience). The kill rate is determined using the formula: 1/AUC and the kill rate is normalized to CAR+ cells co-cultured with target cells that are incubated with vehicle control (established at 100% kill).

[0731] Как показано на Фиг.33, Соединение 1 и леналидомид, как правило, оказывают ограниченное воздействие на цитолитическую функцию CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19. Когда CAR стимулируют в присутствии более высокого количества антигена, как присутствует в сокультурах, содержащих отношение E:T 2,5:1, Соединение 1 и леналидомид слегка уменьшают цитолитическую активность CAR-экспрессирующих клеток анти-CD19 у тех же доноров. Когда CAR стимулируют в присутствии меньшего количества антигена, как присутствует в сокультурах, содержащих отношение E:T 5:1, наблюдают небольшое, но консистентное увеличение цитолитической активности CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 против целевых клеток по сравнению с клетками, которые инкубируют в присутствии высоких концентраций Соединения 1 или леналидомида для донора 2, в то время как для доноров 1 и 3воздействий не наблюдается. [0731] As shown in Figure 33, Compound 1 and lenalidomide generally have a limited effect on the cytolytic function of anti-CD19 CAR-expressing T lymphocytes. When CAR is stimulated in the presence of a higher amount of antigen, as present in cocultures containing an E:T ratio of 2.5:1, Compound 1 and lenalidomide slightly decrease the cytolytic activity of CAR-expressing anti-CD19 cells in the same donors. When CARs are stimulated in the presence of less antigen, as present in cocultures containing an E:T ratio of 5:1, there is a slight but consistent increase in the cytolytic activity of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes against target cells compared to cells that are incubated in the presence of high concentrations of Compound 1 or lenalidomide for donor 2, while no effects were observed for donors 1 and 3.

C. Экспрессирование поверхностных маркеров T-лимфоцитовC. Expression of T cell surface markers

[0732] Для оценки поверхностного экспрессирования различных маркеров Т-лимфоцитов, 1×105 целевых клеток K562.CD19 инкубируют вместе с клетками CAR+ анти-CD19 (Т-лимфоциты CD4+ и CD8+ объединенные при отношении 1:1) при отношении E:T 5:1 или 2,5:1 в присутствии или в отсутствие леналидомида или Соединения 1 или контрольной несущей среды, как описано выше. Через 24 часа, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты окрашивают на CD3, CD4, CD8 и суррогатный маркер для экспрессирования CAR, а также на следующие поверхностные маркеры: CD69, CD107a, PD-1, CD25, CD62L, CCR7, CD45RO, CD27 и LAG3. [0732] To assess the surface expression of various T lymphocyte markers, 1×10 5 target K562.CD19 cells are incubated with anti-CD19 CAR+ cells (CD4+ and CD8+ T lymphocytes pooled at a ratio of 1:1) at an E:T ratio of 5 :1 or 2.5:1 in the presence or absence of lenalidomide or Compound 1 or vehicle control as described above. After 24 hours, CAR-expressing T lymphocytes stain for CD3, CD4, CD8 and a surrogate marker for CAR expression, as well as the following surface markers: CD69, CD107a, PD-1, CD25, CD62L, CCR7, CD45RO, CD27, and LAG3 .

[0733] Уровни экспрессирования выбранных маркеров на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ и CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD8+ изменяются, как правило, меньше, чем двукратно, по отношению к сокультурам с контрольной несущей средой. Изменения экспрессирования маркеров в присутствии леналидомида или Соединения 1 являются зависимыми от донора, хотя для оцениваемых маркеров памяти экспрессирование CD45RO увеличивается и CD27 уменьшается для всех доноров и отношений E:T. Экспрессирование CD27 является даун-регулируемым зависимым от концентрации образом в ответ на Соединение 1 или леналидомид. Экспрессирование CD69 и LAG3 увеличивается зависимым от концентрации образом для клеток, полученных от донора 3, после инкубирования вместе с Соединением 1, но не после инкубирования полученных от этого же донора клеток CAR+ вместе с леналидомидом. Экспрессирование других оцениваемых маркеров активирования остается неизменным у доноров, обработанных леналидомидом или Соединением 1. Результаты согласуются с тем наблюдением, что Соединение 1 и леналидомид имеют потенциал для собственного модулирования фенотипов раннего активирования CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов.[0733] Expression levels of selected markers on CAR-expressing CD4+ T-lymphocytes and CAR-expressing CD8+ T-lymphocytes change, as a rule, less than twice, in relation to cocultures with a control carrier medium. Changes in marker expression in the presence of lenalidomide or Compound 1 are donor-dependent, although for the memory markers assessed, CD45RO expression is increased and CD27 is decreased for all donors and E:T ratios. Expression of CD27 is down-regulated in a concentration dependent manner in response to Compound 1 or lenalidomide. Expression of CD69 and LAG3 increased in a concentration dependent manner for cells derived from donor 3 after incubation with Compound 1 but not after incubation of CAR+ cells derived from the same donor with lenalidomide. Expression of the other activation markers assessed remains unchanged in donors treated with lenalidomide or Compound 1. The results are consistent with the observation that Compound 1 and lenalidomide have the potential to intrinsically modulate the early activation phenotypes of CAR-expressing T lymphocytes.

Пример 16 Оценка продуцирования цитокинов и экспрессирования поверхностного маркера CAR-экспрессирующими Т-лимфоцитами после стимулирования анти-идиотипическим антителом в присутствии Соединения 1 или леналидомидаExample 16 Evaluation of cytokine production and surface marker expression by CAR-expressing T-lymphocytes after stimulation with an anti-idiotypic antibody in the presence of Compound 1 or lenalidomide

[0734] Исследования сходные с описанными в Примере 15 осуществляют для оценки продуцирования цитокинов и экспрессирования поверхностного маркера после CAR-зависимого стимулирования CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в присутствии или 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) или леналидомида, за исключением того, что CAR-экспрессирующие клетки стимулируются анти-идиотипическим антителом. Анти-идиотипическое антитело используют для моделирования различных уровней стимулирования в сокультурах, что, как правило, невозможно с помощью целевых клеток K562.CD19, поскольку экспрессирование антигена является однородно высоким на клетках K562.CD19. [0734] Assays similar to those described in Example 15 were performed to assess cytokine production and surface marker expression following CAR-dependent stimulation of CAR-expressing T lymphocytes in the presence of or 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H- quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione (Compound 1) or lenalidomide, except that CAR-expressing cells are stimulated by an anti-idiotypic antibody. Anti-idiotypic antibody is used to simulate different levels of stimulation in cocultures, which is generally not possible with target K562.CD19 cells because antigen expression is uniformly high on K562.CD19 cells.

[0735] Композиции CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 (содержащих Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенных при отношении 1:1) генерируют, по существу, как описано в Примере 14. Приблизительно 1×105 CAR-экспрессирующих клеток добавляют в лунки 96-луночного планшета, который предварительно покрывают анти-идиотипическим антителом специфичным к scFv CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19, при концентрации 0, 0,3, 3 и 30 мкг/мл. Клетки культивируют в присутствии Соединения 1 (при концентрации 100 нМ и 1000 нМ), леналидомида (при концентрации 500 нМ и 5000 нМ) или контрольной несущей среды при 37°C, 5% CO2. Оценивают экспрессирование цитокинов и экспрессирование поверхностных маркеров CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19.[0735] Compositions of anti-CD19 CAR expressing T lymphocytes (comprising CD4+ and CD8+ T lymphocytes combined at a ratio of 1:1) are generated essentially as described in Example 14. Approximately 1×10 5 CAR expressing cells are added in the wells of a 96-well plate, which is pre-coated with an anti-idiotypic antibody specific for scFv CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes at a concentration of 0, 0.3, 3 and 30 μg/ml. Cells are cultured in the presence of Compound 1 (at 100 nM and 1000 nM), lenalidomide (at 500 nM and 5000 nM) or vehicle control at 37° C., 5% CO 2 . The expression of cytokines and the expression of surface markers of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes are assessed.

A. Продуцирование цитокиновA. Cytokine production

[0736] Супернатанты стимулируемых культур харвестируют через 24 часа и анализируют на продуцирование цитокинов. На Фигурах 34A и 34B, уровень продуцирования цитокинов в отсутствие Соединения 1 или леналидомида (контрольная несущая среда) показан штриховой линией. Как показано на Фигурах 34A и 34B, продуцирование IFN-γ, IL-2 и TNF-α повышается по сравнению с контрольной несущей средой после обработки Соединением 1 или леналидомидом, соответственно. Повышение является особенно очевидным при промежуточном уровне стимулирования с помощью 3 кг/мл анти-идиотипического антитела. [0736] Stimulated culture supernatants are harvested 24 hours later and analyzed for cytokine production. In Figures 34A and 34B, the level of cytokine production in the absence of Compound 1 or lenalidomide (carrier control) is shown with a dashed line. As shown in Figures 34A and 34B, the production of IFN-γ, IL-2 and TNF-α is increased compared to the control vehicle after treatment with Compound 1 or lenalidomide, respectively. The increase is especially evident at an intermediate level of stimulation with 3 kg/ml anti-idiotypic antibody.

B. Экспрессирование поверхностных маркеров T-лимфоцитов B. Expression of surface markers of T-lymphocytes

[0737] Экспрессирование поверхностного маркера на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах анти-CD19 оценивают через 4 дня в культуре при различных концентрациями анти-идиотипического антитела в присутствии Соединения 1 или леналидомида. CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты окрашивают на CD3, CD4, CD8 и суррогатный маркер для экспрессирования CAR, а также на следующие маркеры: CD25, PD-1 и CD69. [0737] Surface marker expression on CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes was assessed after 4 days in culture at various concentrations of anti-idiotypic antibody in the presence of Compound 1 or lenalidomide. CAR-expressing T lymphocytes are stained for CD3, CD4, CD8 and a surrogate marker for CAR expression, as well as for the following markers: CD25, PD-1 and CD69.

[0738] Фигуры 35A и 35B показывают экспрессирование клеточного поверхностного маркера на CAR-экспрессирующих клетках CD4+ и CD8+, соответственно, на клетках, стимулируемых в присутствии Соединения 1, а Фигуры 36A и 36B показывают экспрессирование клеточного поверхностного маркера на CAR-экспрессирующих клетках CD4+ и CD8+, соответственно, на клетках, стимулируемых в присутствии леналидомида. На фигурах, уровень экспрессирования поверхностного маркера в отсутствие Соединения 1 или леналидомида (контрольная несущая среда) показан штриховой линией. Как показано, повышение уровня поверхностных маркеров CD25 и CD69 наблюдается в CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах CD4+ и CD8+ в присутствии Соединения 1 или леналидомида в некоторых полученных от доноров CAR-экспрессирующих клетках, и оно зависит от величины стимулирования с помощью CAR. Экспрессирование PD-1 также увеличивается в присутствии Соединения 1 или леналидомида в клетках, генерируемых, по меньшей мере, от одного донора, хотя, уровни PD-1 неизменны или понижаются в клетках, генерируемых от других доноров. Повышение экспрессирования суррогатного маркера для экспрессирования CAR наблюдают после добавления Соединения 1 или леналидомида при субоптимальной дозе анти-идиотипического антитела 0,3 мкг/мл, но при более высоких концентрациях анти-идиотипического антитела экспрессирование суррогатного маркера остается неизменным или уменьшается.[0738] Figures 35A and 35B show the expression of a cell surface marker on CAR-expressing CD4+ and CD8+ cells, respectively, on cells stimulated in the presence of Compound 1, and Figures 36A and 36B show the expression of a cell surface marker on CAR-expressing CD4+ and CD8+ cells , respectively, on cells stimulated in the presence of lenalidomide. In the figures, the expression level of the surface marker in the absence of Compound 1 or lenalidomide (carrier control) is indicated by a dashed line. As shown, an increase in the level of surface markers CD25 and CD69 is observed in CAR-expressing CD4+ and CD8+ T lymphocytes in the presence of Compound 1 or lenalidomide in some donor-derived CAR-expressing cells, and it depends on the amount of stimulation with CAR. Expression of PD-1 is also increased in the presence of Compound 1 or lenalidomide in cells generated from at least one donor, although PD-1 levels are unchanged or decreased in cells generated from other donors. An increase in the expression of a surrogate marker for CAR expression is observed after the addition of Compound 1 or lenalidomide at a suboptimal dose of anti-idiotypic antibody of 0.3 μg/ml, but at higher concentrations of anti-idiotypic antibody, expression of the surrogate marker remains unchanged or decreases.

Пример 17 Оценка экспрессирования поверхностного маркера и потенциала размножения CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов после серийного стимулирования в присутствии Соединения 1 или леналидомидаExample 17 Evaluation of surface marker expression and expansion potential of CAR-expressing T-lymphocytes after serial stimulation in the presence of Compound 1 or lenalidomide

[0739] Серийное стимулирование CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 осуществляют для оценки кратковременных и долговременных воздействий 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (Соединения 1) и леналидомида. Композиции CAR-экспрессирующих T-лимфоцитов анти-CD19 (содержащих Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1) генерируют, по существу, как описано в Примере 14. Генерируемые сочетания Т-лимфоцитов CAR+ добавляют как 1×105 клеток на лунку в 96-луночный планшет и инкубируют с облученными положительными по красной флуоресценции целевыми клетками K562.CD19 в присутствии Соединения 1, леналидомида или контрольной несущей среды при 37°C, 5% CO2 при двух различных отношениях эффекторных и целевых клеток (E:T) 10:1 и 2,5:1. Инкубирование осуществляют в присутствии Соединения 1 (10, 100 или 500 нМ), леналидомида (100 или 1000 нМ) или контрольной несущей среды. Клетки считают каждые 3-4 дня (начиная с каждым новым заходом). Затем клетки харвестируют и повторно инокулируют при 1×105 CAR-экспрессирующих клеток анти-CD19 со свежими средами, свежедобавляемым Соединением 1 или леналидомидом при такой же концентрации, и со свежеоблученными целевыми клетками K562.CD19. Это повторяют в течение 7 заходов серийного стимулирования, и клетки оценивают в различные моменты времени на экспрессирование поверхностного маркера, цитолитическую активность и потенциал размножения.[0739] Serial stimulation of CAR-expressing T-lymphocytes with anti-CD19 is performed to assess the short-term and long-term effects of 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6 -dione (Compound 1) and lenalidomide. Compositions of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes (containing CD4+ and CD8+ T-lymphocytes combined at a ratio of 1:1) are generated essentially as described in Example 14. Generated combinations of CAR+ T-lymphocytes are added as 1×10 5 cells per well in a 96-well plate and incubated with irradiated red positive K562.CD19 target cells in the presence of Compound 1, lenalidomide or vehicle control at 37° C., 5% CO 2 at two different ratios of effector to target cells (E: T) 10:1 and 2.5:1. Incubation is carried out in the presence of Compound 1 (10, 100 or 500 nM), lenalidomide (100 or 1000 nM) or vehicle control. Cells are counted every 3-4 days (starting with each new entry). Cells are then harvested and re-inoculated at 1×10 5 CAR-expressing anti-CD19 cells with fresh media, freshly added Compound 1 or lenalidomide at the same concentration, and with freshly irradiated target K562.CD19 cells. This is repeated for 7 rounds of serial stimulation and cells are evaluated at various time points for surface marker expression, cytolytic activity, and expansion potential.

A. Экспрессирование поверхностных маркеровA. Expression of surface markers

[0740] Экспрессирование выбранных поверхностных маркеров оценивают на клетках в день 4 (то есть, через 4 дня после первого стимулирования) и день 28 (то есть, через 4 дня после седьмого стимулирования). Конкретно, харвестированные клетки анализируют с помощью проточной цитометрии на CD3, CD4, CD8 и на суррогатный маркер для экспрессирования CAR, а также на следующие поверхностные маркеры: CD69, CD107a, PD-1, CD25, CD62L, CCR7, CD45RO, CD27 и LAG3. [0740] Expression of selected surface markers is assessed on cells at day 4 (ie, 4 days after the first stimulation) and day 28 (ie, 4 days after the seventh stimulation). Specifically, harvested cells are analyzed by flow cytometry for CD3, CD4, CD8 and a surrogate marker for CAR expression, as well as the following surface markers: CD69, CD107a, PD-1, CD25, CD62L, CCR7, CD45RO, CD27 and LAG3.

[0741] Изменения в оцениваемых поверхностных маркерах на CAR-экспрессирующих клетках CD4+ и CD8+ после инкубирования с помощью Соединения 1 и леналидомида по-разному наблюдаются у всех доноров и при разных отношениях E:T, хотя изменения экспрессирования являются более выраженными в день 28 по сравнению с днем 4. В день 4, CD25 и LAG3 ап-регулируют для всех трех доноров в ответ на обработку Соединением 1 или леналидомидом, при этом большее уменьшение наблюдается на клетках из дня 28 по сравнению с днем 4. CCR7, как правило, уменьшается в день 28 для всех групп обработки, что согласуется с той возможностью, что инкубирование вместе с целевыми клетками в присутствии Соединения 1 или леналидомида может сдвигать продукт Т-лимфоцитов в направлении фенотипа, связанного со статусом терминального дифференцированного эффектора. PD-1 даун-регулируется до некоторой степени у всех доноров и при обоих отношениях E:T на клетках в день 4 и в день 28 после обработки Соединением 1 или леналидомидом, при этом большее даун-регулирование происходит на клетках в день 28. Как показано на Фигурах 37A и 37B, экспрессирование CD28 уменьшается зависимым от дозы образом в присутствии повышающихся концентраций Соединения 1 и леналидомида, соответственно, на CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитах, как CD4+, так и CD8+, от всех трех доноров. Вместе, изменения поверхностных маркеров в день 28 по сравнению с днем 4 согласуются со способностью Соединения 1 и леналидомида влиять на Т-лимфоциты CAR+ после долговременной обработки. [0741] Changes in assessed surface markers on CAR-expressing CD4+ and CD8+ cells after incubation with Compound 1 and lenalidomide are observed differently in all donors and at different E:T ratios, although expression changes are more pronounced at day 28 compared day 4. On day 4, CD25 and LAG3 are up-regulated for all three donors in response to Compound 1 or lenalidomide treatment, with a greater decrease seen on cells from day 28 compared to day 4. CCR7 tends to decrease in day 28 for all treatment groups, consistent with the possibility that incubation with target cells in the presence of Compound 1 or lenalidomide may shift the T lymphocyte product towards a phenotype associated with terminal differentiated effector status. PD-1 is down-regulated to some extent in all donors and at both E:T ratios on cells at day 4 and day 28 after treatment with Compound 1 or lenalidomide, with more down-regulation occurring on cells at day 28. As shown in Figures 37A and 37B, CD28 expression decreases in a dose-dependent manner in the presence of increasing concentrations of Compound 1 and lenalidomide, respectively, on both CD4+ and CD8+ CAR-expressing T lymphocytes from all three donors. Together, the changes in surface markers at day 28 compared to day 4 are consistent with the ability of Compound 1 and lenalidomide to affect CAR+ T lymphocytes after long-term treatment.

B. Цитолитическая функцияB. Cytolytic function

[0742] В день 24 после серийного стимулирования, оценивают цитолитическую активность CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19, в целом, как описано в Примере 15B. Как показано на Фиг.38, долговременная обработка, как Соединением 1, так и леналидомидом, может увеличивать цитолитическую активность CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19. [0742] On day 24 after the serial stimulation, the cytolytic activity of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes was assessed, in general, as described in Example 15B. As shown in FIG. 38, long-term treatment with both Compound 1 and lenalidomide can increase the cytolytic activity of CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes.

C. Размножение C. reproduction

[0743] Для оценки воздействия Соединения 1 и леналидомида на потенциал размножения Т-лимфоцитов CAR+, считают количества клеток CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 после каждого захода стимулирования и вычисляют удвоения клеток. [0743] To evaluate the effect of Compound 1 and lenalidomide on the proliferative potential of CAR+ T lymphocytes, cell numbers of CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes were counted after each stimulation run and cell doublings were calculated.

[0744] Как показано на Фиг.39A, при отношении E:T 2,5:1, CAR-экспрессирующие Т-лимфоциты анти-CD19, обработанные Соединением 1 при концентрации 500 нМ, имеют отсчеты клеток сравнимые с группой, обработанной контролем, до 3-4 заходов стимулирования для всех доноров. Сходные результаты наблюдают при отношении E:T 10:1 для двух доноров. При более высокой концентрации Соединения 1 500 нМ, количество удвоений клеток CAR+ при последующих заходах ниже, чем в контрольных группах без обработки. В противоположность этому, после 24 дней обработки Соединением 1 при более низких концентрациях 10 нМ и 100 нМ, отсчеты клеток CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов анти-CD19 выше, чем для необработанных контролей от двух из трех доноров (Фиг.39B). [0744] As shown in FIG. 39A, at an E:T ratio of 2.5:1, CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes treated with Compound 1 at 500 nM had cell counts comparable to the control treated group, up to 3-4 rounds of stimulation for all donors. Similar results are observed at an E:T ratio of 10:1 for two donors. At a higher Compound concentration of 1,500 nM, the number of doublings of CAR+ cells on subsequent visits is lower than in the untreated control groups. In contrast, after 24 days of Compound 1 treatment at lower concentrations of 10 nM and 100 nM, cell counts of CAR-expressing anti-CD19 T-lymphocytes are higher than for untreated controls from two of the three donors (FIG. 39B).

[0745] Как показано на Фиг.40A, при отношении E:T 2,5:1 в клетках, обработанных 1000 нМ леналидомида, более низкие удвоения клеток наблюдаются только у двух доноров и не до более поздних заходов стимулирования. Этот результат показывает некоторые различия активности Соединения 1 и леналидомида, поскольку 500 нМ Соединения 1 уменьшают отсчеты клеток для всех доноров при этом отношении E:T. При отношении E:T 10:1, наблюдают уменьшение удвоений клеток после 3-4 заходов стимулирования в присутствии 1000 нМ леналидомида, для клеток, генерируемых от всех доноров (Фиг.40A). Как показано на Фиг.40B, обработка леналидомидом при более низкой концентрации 100 нМ увеличивает отсчеты T-лимфоцитов CAR+ для двух из трех доноров. [0745] As shown in FIG. 40A, at an E:T ratio of 2.5:1 in cells treated with 1000 nM lenalidomide, lower cell doublings are observed in only two donors and not until later stimulation runs. This result shows some activity differences between Compound 1 and lenalidomide, as 500 nM Compound 1 reduces cell counts for all donors at this E:T ratio. With an E:T ratio of 10:1, a decrease in cell doublings is observed after 3-4 stimulation rounds in the presence of 1000 nM lenalidomide, for cells generated from all donors (FIG. 40A). As shown in FIG. 40B, treatment with lenalidomide at a lower concentration of 100 nM increased CAR+ T-lymphocyte counts for two of the three donors.

[0746] Результаты согласуются с тем наблюдением, что пролонгированная обработка CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов Соединением 1 или леналидомидом при физиологически релевантных концентрациях может увеличить долговременный потенциал пролиферации CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, в то время как более высокие концентрации могут быть вредными для долговременных характеристики[0746] The results are consistent with the observation that prolonged treatment of CAR-expressing T-lymphocytes with Compound 1 or lenalidomide at physiologically relevant concentrations may increase the long-term proliferation potential of CAR-expressing T-lymphocytes, while higher concentrations may be detrimental to long-term characteristics

Пример 18 Оценка противоопухолевой эффективности CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в сочетании с Соединением 1 in vivoExample 18 Evaluation of the antitumor efficacy of CAR-expressing T-lymphocytes in combination with Compound 1 in vivo

[0747] Противоопухолевую эффективность CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов в сочетании с Соединением 1 оценивают посредством мониторинга опухолей в модели ксенотрансплантата опухоли. Композиции CAR-экспрессирующих T-лимфоцитов анти-CD19, содержащие Т-лимфоциты CD4+ и CD8+, объединенные при отношении 1:1, генерируют, по существу, как описано в Примере 1. Композиции Т-лимфоцитов генерируют от трех разных доноров. [0747] The antitumor efficacy of CAR-expressing T-lymphocytes in combination with Compound 1 was evaluated by monitoring tumors in a tumor xenograft model. Compositions of CAR-expressing anti-CD19 T lymphocytes containing CD4+ and CD8+ T lymphocytes combined at a ratio of 1:1 were generated essentially as described in Example 1. Compositions of T lymphocytes were generated from three different donors.

[0748] Мышам NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) делают внутривенную инъекцию (i.v.) с 0,5×106 клеток опухоли лимфомы Раджи (иммортализованная линия клеток опухоли B лимфоцитов человека, которая экспрессирует CD19), которые трансфицированны люциферазой светлячков (Raji-ffluc). Дают возможность для приживления опухоли в течение 6 дней и проверяют его с использованием биолюминесцентных изображений. В День 7, мыши либо не получают лечения, либо получают одну внутривенную (i.v.) инъекцию CAR-экспрессирующих клеток анти-CD19 при низкой дозе (0,5×106 клеток) или при высокой дозе (1,0×106 клеток). В одной исследуемой группе (обозначенной “одновременная), мышам вводят 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион (Соединение 1) при дозе 0,3 мг/кг или контрольную несущую среду посредством внутрибрюшинной инъекции за один день перед введением CAR-экспрессирующих клеток (день 6), которую продолжают делать раз в день в течение всего исследования. Во второй группе (обозначенной как “отсроченная”), мышам вводят либо контрольную несущую среду, либо 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-дион (Соединение 1) при дозе 0,3 мг/кг посредством внутрибрюшинной инъекции, начиная с дня 14, что происходит после пика размножения CAR-экспрессирующих Т-лимфоцитов, и введение продолжают раз в день в течение всего исследования. Массу опухоли оценивают с помощью биолюминесценции каждые 10 дней. Для получения биолюминесцентных изображений, мыши получают внутрибрюшинные (i.p.) инъекции субстрата люциферина (CaliperLife Sciences, Hopkinton, MA), повторно суспендированного в PBS (15 мкг/г массы тела). Определяют среднюю интенсивность излучения (фотоны/сек/см2/стереорадиан). [0748] NOD.Cg.Prkdc scid IL2rg tm1Wjl /SzJ (NSG) mice are intravenously injected with (iv) 0.5 x 10 6 Raji's lymphoma tumor cells (an immortal human B lymphocyte tumor cell line that expresses CD19) that are transfected firefly luciferase (Raji-ffluc). The tumor is allowed to engraft for 6 days and verified using bioluminescent imaging. On Day 7, mice either receive no treatment or receive a single intravenous (iv) injection of anti-CD19 CAR-expressing cells at low dose (0.5 x 10 6 cells) or high dose (1.0 x 10 6 cells) . In one study group (labeled “simultaneous”), mice are treated with 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione (Compound 1) at a dose of 0 .3 mg/kg or vehicle control via intraperitoneal injection one day prior to administration of CAR-expressing cells (Day 6), which continues to be given once a day throughout the study. In the second group (labeled “delayed”), mice are given either vehicle control or 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione (Compound 1) at a dose of 0.3 mg/kg by intraperitoneal injection starting on day 14, which occurs after the peak of proliferation of CAR-expressing T-lymphocytes, and the introduction is continued once a day throughout the study. Tumor mass is assessed by bioluminescence every 10 days. For bioluminescent imaging, mice receive intraperitoneal (ip) injections of luciferin substrate (CaliperLife Sciences, Hopkinton, MA) resuspended in PBS (15 μg/g body weight). Determine the average intensity of radiation (photons/sec/cm 2 /stereoradian).

[0749] В этом исследовании, сочетание с Соединением 1, согласно наблюдениям, уменьшает массу опухоли и улучшает данные по выживаемости, как в группе “одновременно”, так и в “отсроченной” группе, по сравнению с введением CAR-экспрессирующих клеток самих по себе.[0749] In this study, combination with Compound 1 was observed to reduce tumor mass and improve survival data, both in the "simultaneous" and "delayed" groups, compared with the introduction of CAR-expressing cells by themselves .

[0750] Настоящее изобретение, как предполагается, не ограничивается рамками конкретных описанных вариантов осуществления, которые приводятся, например, для иллюстрации различных аспектов настоящего изобретения. Различные модификации описанных композиций и способов станут очевидными из описания и концепции настоящего документа. Такие варианты могут осуществляться без отклонения от истинных рамок и духа настоящего описания и, как предполагается попадают в рамки настоящего описания.[0750] The present invention is not intended to be limited by the specific embodiments described, which are provided, for example, to illustrate various aspects of the present invention. Various modifications of the described compositions and methods will become apparent from the description and concept of this document. Such variations may be carried out without departing from the true scope and spirit of the present disclosure and are intended to fall within the scope of the present disclosure.

Список последовательностейSequence list

SEQ ID NO.SEQID NO. ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬSUBSEQUENCE ОПИСАНИЕDESCRIPTION 1one ESKYGPPCPPCPESKYGPPCPPCP Спейсер (шарнир IgG4) (aa)
Homo sapiens
Spacer (IgG4 hinge) (aa)
Homo sapiens
22 GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCTGAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCT Спейсер (шарнир IgG4) (nt)
Homo sapiens
Spacer (IgG4 hinge) (nt)
Homo sapiens
33 ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Шарнир-спейсер CH3
Homo sapiens
Hinge spacer CH3
Homo sapiens
4four ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK Шарнир-спейсер CH2-CH3
Homo sapiens
Hinge spacer CH2-CH3
Homo sapiens
55 RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSL
WNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH
RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSL
WNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH
IgD-шарнир-Fc
Homo sapiens
IgD-hinge-Fc
Homo sapiens
66 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPRLEGGGEGRGSLTCGDVEENPGPR Искуственная T2AFaux T2A 77 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM Искуственная tEGFRArtificial tEGFR 8eight FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIFWV CD28 (аминокислоты 153-179, Accession No. P10747)
Homo sapiens
CD28 (amino acids 153-179, Accession No. P10747)
Homo sapiens
99 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (аминокислоты 114-179, Accession No. P10747)
Homo sapiens
CD28 (amino acids 114-179, Accession No. P10747)
Homo sapiens
10ten RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (аминокислоты 180-220 из P10747)
Homo sapiens
CD28 (amino acids 180-220 from P10747)
Homo sapiens
11eleven RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (LL - GG)
Homo sapiens
CD28 (LL - GG)
Homo sapiens
1212 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1BB (аминокислоты 214-255 из Q07011,1)
Homo sapiens
4-1BB (amino acids 214-255 from Q07011.1)
Homo sapiens
1313 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PRRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PR CD3 зета
Homo sapiens
CD3 zeta
Homo sapiens
14fourteen RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PRRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PR CD3 зета
Homo sapiens
CD3 zeta
Homo sapiens
15fifteen RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PRRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYN ELQKDKMAEA YSEIGMKGER RRGKGHDGLY QGLSTATKDTYDALHMQALP PR CD3 зета
Homo sapiens
CD3 zeta
Homo sapiens
1616 PGGG-(SGGGG)5-P-, где P представляет собой пролин, G представляет собой глицин и S представляет собой серинPGGG-(SGGGG)5-P- where P is proline, G is glycine and S is serine ЛинкерLinker 1717 GSADDAKKDAAKKDGKSGSADDAKKDAAKKDGKS ЛинкерLinker 18eighteen MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAMLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNA Внеклеточный домен BCMA человека (GenBank No. NP_001183,2)Human BCMA extracellular domain (GenBank No. NP_001183.2) 1919 GGGGSGGGGS Линкерная последовательностьLinker sequence 20twenty PKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKPKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDQFFLYSKLTVDKW Fc модифицированного IgG1 человекаFc modified human IgG1 2121 MPLLLLLPLLWAGALAMPLLLLPLLWAGALA Сигнальный пептид CD33 Signal peptide CD33 2222 MPLLLLLPLLWAGALAMLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAGGGGSPKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKMPLLLLLPLLWAGALAMLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAGGGGSPKSSDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Конструкция BCMA-Fc BCMA-Fc construction 2323 EGRGSLLTCGDVEENPGPEGRGSLLTCGDVEENPGP T2AT2A 2424 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGPGSGATNFSLLKQAGDVEENPGP P2AP2A 2525 ATNFSLLKQAGDVEENPGPATNFSLLKQAGDVEENPGP P2AP2A 2626 QCTNYALLKLAGDVESNPGPQCTNYALLKLAGDVESNPGP E2AE2A 2727 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP F2AF2A 2828 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM Искуственная
tEGFR
Artificial
tEGFR
2929 ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSLVK Шарнир-спейсер CH2-CH3
Homo sapiens
Hinge spacer CH2-CH3
Homo sapiens
30thirty QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 3131 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 3232 QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSAQIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSA Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 3333 DVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIKDVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 3434 EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 3535 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 3636 EVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 3737 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGQSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 3838 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSSEVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 3939 LPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLGLPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 4040 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 4141 QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 4242 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 4343 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) Анти-BCMAVariable Light (VL) Anti-BCMA 4444 DYGVSDYGVS FMC63 CDR H1FMC63 CDR H1 4545 VIWGSETTYYNSALKSVIWGSETTYYNSALKS FMC63 CDR H2FMC63 CDR H2 4646 YAMDYWGYAMDYWG FMC63 CDR H3FMC63 CDR H3 4747 HYYYGGSYAMDYHYYYGGSYAMDY FMC63 HC-CDR3FMC63HC-CDR3 4848 RASQDISKYLNRASQDISKYLN FMC63 CDR L1FMC63 CDR L1 4949 SRLHSGVSRLHSGV FMC63 CDR L2FMC63 CDR L2 50fifty HTSRLHSHTSRLHS FMC63 LC-CDR2FMC63 LC-CDR2 5151 GNTLPYTFGGNTLPYTFG FMC63 CDR L3FMC63 CDR L3 5252 QQGNTLPYTQQGNTLPYT FMC63 LC-CDR3FMC63 LC-CDR3 5353 EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS FMC63 VH FMC63 V H 5454 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT FMC63 VLFMC63 VL 5555 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS FMC63 scFvFMC63 scFv 5656 KASQNVGTNVAKASQNVGTNVA SJ25C1 CDR L1SJ25C1 CDR L1 5757 SATYRNSSATYRNS SJ25C1 CDR L2SJ25C1 CDR L2 5858 QQYNRYPYTQQYNRYPYT SJ25C1 CDR L3SJ25C1 CDR L3 5959 SYWMNSYWMN SJ25C1 CDR H1SJ25C1 CDR H1 6060 QIYPGDGDTNYNGKFKGQIYPGDGDTNYNGKFKG SJ25C1 CDR H2SJ25C1 CDR H2 6161 KTISSVVDFYFDYKTISSVVDFYFDY SJ25C1 CDR H3SJ25C1 CDR H3 6262 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSSEVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSS SJ25C1 VH SJ25C1 V H 6363 DIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKRDIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR SJ25C1 VLSJ25C1 VL 6464 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS ЛинкерLinker 6565 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKREVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR SJ25C1 scFvSJ25C1 scFv 6666 HYYYGGSYAMDYHYYYGGSYAMDY FMC63 HC-CDR3FMC63HC-CDR3 6767 HTSRLHSHTSRLHS FMC63 LC-CDR2FMC63 LC-CDR2 6868 QQGNTLPYTQQGNTLPYT FMC63 LC-CDR3FMC63 LC-CDR3 6969 gacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagcgacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagc Последовательность, кодирующая scFvscFv encoding sequence 7070 GSTSGSGKPGSGEGSTKGGSTSGSGKPGSGEGSTKG ЛинкерLinker 7171 GGGSGGGS ЛинкерLinker 7272 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS ЛинкерLinker 7373 GSTSGSGKPGSGEGSTKGGSTSGSGKPGSGEGSTKG ЛинкерLinker 7474 SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMASRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA ЛинкерLinker 7575 MALPVTALLLPLALLLHAARPMALPVTALLLPLALLLHAARP Сигнальный пептид CD8a Signal peptide CD8a 7676 METDTLLLWVLLLWVPGSTGMETDTLLLWVLLLWVPGSTG Сигнальный пептидSignal peptide 7777 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 7878 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 7979 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 8080 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 8181 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 8282 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 8383 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 8484 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 8585 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) Анти-BCMAVariable severe (V H ) Anti-BCMA 8686 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) Анти-BCMAVariable Light (VL) Anti-BCMA 8787 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 8888 DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKDIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 8989 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 9090 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 9191 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 9292 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 9393 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 9494 LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGLPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 9595 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 9696 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKDIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 9797 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 9898 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 9999 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSQVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 100100 DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIKDIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 101101 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 102102 DIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIKDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 103103 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 104104 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIKEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 105105 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 106106 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 107107 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 108108 DIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIKDIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 109109 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 110110 DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 111111 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 112112 DIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 113113 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVICISRSDGSTYYADSVKGRFTISRDNAKKTVYLQMISLKPEDTAAYYCAAGADCSGYLRDYEFRGQGTQVTVSSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCEASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVICISRSDGSTYYADSVKGRFTISRDNAKKTVYLQMISLKPEDTAAYYCAAGADCSGYLRDYEFRGQGTQVTVSS sdAb анти-BCMAsdAb anti-BCMA 114114 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP Спейсер CD28 Spacer CD28 115115 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCN CD8a TMCD8aTM 116116 LDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP Спейсер CD28 (усеченный)Spacer CD28 (truncated) 117117 PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD Шарнир CD8a Hinge CD8a 118118 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD Шарнир CD8a Hinge CD8a 119119 FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD Шарнир CD8a Hinge CD8a 120120 DTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSDDTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSD Шарнир CTLA4 Hinge CTLA4 121121 FLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVSFLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVS CTLA4 TMCTLA4TM 122122 QIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSSPSPRPAGQFQTLV Шарнир PD-1 Hinge PD-1 123123 VGVVGGLLGSLVLLVWVLAVIVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVI PD-1 TMPD-1TM 124124 GLAVSTISSFFPPGYQGLAVSTISSFFPPGYQ Шарнир FcγRIIIa Hinge FcγRIIIa 125125 EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDQFFLYNKLSVDKW Шарнир IgG1 IgG1 hinge 126126 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 127127 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRISWPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAEMGAVFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 128128 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 129129 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLGLPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTYLGGLWYFDLWGRGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 130130 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 131131 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYAAYPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESWPMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 132132 QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 133133 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHVWPPTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGRGYATSLAFDIWGQGTMVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 134134 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 135135 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFYYPWTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSTISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSQEHLIFDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 136136 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 137137 DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR DIQLTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQIYTFPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTDFWSGSPPGLDYWGQGTLVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 138138 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 139139 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFAHTPFTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTPEYSSSIWHYYYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 140140 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSGEGSTKGEIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 141141 EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQHHVWPLTFGGGTKVEIKRGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGPLQEPPYDYGMDVWGQGTTVTVSSAAALDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 142142 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 143143 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 144144 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 145145 LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRLPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 146146 QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 147147 LPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRLPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGRSSNIGSNSVNWYRQLPGAAPKLLIYSNNQRPPGVPVRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEATYYCATWDDNLNVHYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYYSHDMWSEDWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 148148 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 149149 QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVFWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSASYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYGSYRWEDSWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 150150 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGFDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMHWVRQAPGQRLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQDRITVTRDTSSNTGYMELTRLRSDDTAVYYCARSPYSGVLDKWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 151151 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 152152 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 153153 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRDIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 154154 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAADTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSDFLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRDIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAADTGLYICKVELMYPPPYYLGIGNGTQIYVIDPEPCPDSDFLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 155155 DIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRDIVLTQSPASLAVSLGERATINCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDAAIYYCLQSRIFPRTFGQGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTDYSINWVRQAPGQGLEWMGWINTETREPAYAYDFRGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYSYAMDYWGQGTLVTVSSAAAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 156156 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 157157 EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFKQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIKESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFKQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIKESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 158158 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSSYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 159159 SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRSYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 160160 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 161161 QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 162162 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPYTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 163163 QVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLGWVSGISRSGENTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCARSPAHYYGGMDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDSAVYYCQQYHSSPSWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 164164 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSDIRLTQSPSPLSASVGDRVTITCQASEDINKFLNWYHQTPGKAPKLLIYDASTLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDIGTYYCQQYESLPLTFGGGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 165165 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPREVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGFALSNHGMSWVRRAPGKGLEWVSGIVYSGSTYYAASVKGRFTISRDNSRNTLYLQMNSLRPEDTAIYYCSAHGGESDVWGQGTTVTVSSASGGGGSGGRASGGGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSIGSSSLAWYQQKPGQAPRLLMYGASSRASGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYAGSPPFTFGQGTKVEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 166166 QIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQIQLVQSGPDLKKPGETVKLSCKASGYTFTNFGMNWVKQAPGKGFKWMAWINTYTGESYFADDFKGRFAFSVETSATTAYLQINNLKTEDTATYFCARGEIYYGYDGGFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSHRFMSTSVGDRVSITCRASQDVNTAVSWYQQKPGQSPKLLIFSASYRYTGVPDRFTGSGSGADFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLDIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 167167 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 168168 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPASLAMSLGKRATISCRASESVSVIGAHLIHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLETGVPARFSGSGSGTDFTLTIDPVEEDDVAIYSCLQSRIFPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 169169 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFRHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTESGVPIYADDFKGRFAFSVETSASTAYLVINNLKDEDTASYFCSNDYLYSLDFWGQGTALTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 170170 QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTHYSMNWVKQAPGKGLKWMGRINTETGEPLYADDFKGRFAFSLETSASTAYLVINNLKNEDTATFFCSNDYLYSCDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIYWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 171171 DIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRDIVLTQSPPSLAMSLGKRATISCRASESVTILGSHLIHWYQQKPGQPPTLLIQLASNVQTGVPARFSGSGSRTDFTLTIDPVEEDDVAVYYCLQSRTIPRTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSGEGSTKGQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSINWVKRAPGKGLKWMGWINTETREPAYAYDFRGRFAFSLETSASTAYLQINNLKYEDTATYFCALDYSYAMDYWGQGTSVTVSSFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 172172 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 173173 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 174174 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSINTAYMELSSLTSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCSQSSIYPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 175175 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 176176 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 177177 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFPDYYINWVRQAPGQGLEWMGWIYFASGNSEYNQKFTGRVTMTRDTSSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCASLYDYDWYFDVWGQGTMVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSLSVTPGEPASISCKSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGADFTLKISRVEAEDVGVYYCAETSHVPWTFGQGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CAR анти-BCMACAR anti-BCMA 178178 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRN CD8a TMCD8aTM 179179 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITIYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT CD8a TMCD8aTM 180180 RAAARAAA Пептид связывания Peptide binding 181181 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 182182 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVLQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVL Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 183183 EVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSSEVQLVQSGGGLVQPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWVGFIRSKAYGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMNSLKTEDTAVYYCAAWSAPTDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 184184 DIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIKDIQMTQSPAFLSASVGDRVTVTCRASQGISNYLAWYQQKPGNAPRLLIYSASTLQSGVPSRFRGTGYGTEFSLTIDSLQPEDFATYYCQQSYTSRQTFGPGTRLDIK Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 185185 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGPPSFDIWGQGTMVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 186186 SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVLSYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGANNIGSKSVHWYQQKPGQAPMLVVYDDDDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGVEAGDEADYFCHLWDRSRDHYVFGTGTKLTVL Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 187187 EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSS EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTMTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGYSKSIVSYMDYWGQGTLVTVSS Вариабельная тяжелая (VH) анти-BCMAVariable heavy (V H ) anti-BCMA 188188 LPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLGLPVLTQPPSTSGTPGQRVTVSCSGSSSNIGSNVVFWYQQLPGTAPKLVIYRNNQRPSGVPDRFSVSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG Вариабельная легкая (VL) анти-BCMAVariable light (VL) anti-BCMA 189189 ASGGGGSGGRASGGGGSASGGGGSGGRASGGGGS ЛинкерLinker

--->--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ SEQUENCE LIST

<110> JUNO THERAPEUTICS, INC.<110> JUNO THERAPEUTICS, INC.

PORTS, Michael PORTS, Michael

WORKS, Melissa WORKS, Melissa

<120> СОЧЕТАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ И ИММУНОМОДУЛЯТОРНОГО СОЕДИНЕНИЯ<120> COMBINATION OF CELL THERAPY AND IMMUNOMODULATOR COMPOUND

<130> 735042009640<130> 735042009640

<140> еще не присвоено <140> not assigned yet

<141> одновременно с данным <141> at the same time as this

<150> 62/492,947 <150> 62/492.947

<151> 2017-05-01 <151> 2017-05-01

<150> 62/538,670 <150> 62/538.670

<151> 2017-07-29 <151> 2017-07-29

<150> 62/549,390 <150> 62/549.390

<151> 2017-08-23 <151> 2017-08-23

<150> 62/580,433 <150> 62/580.433

<151> 2017-11-01 <151> 2017-11-01

<150> 62/596,753 <150> 62/596.753

<151> 2017-12-08 <151> 2017-12-08

<160> 189<160> 189

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1<210> 1

<211> 12<211> 12

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> Спейсер (Шарнир IgG4)<223> Spacer (IgG4 Hinge)

<400> 1<400> 1

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys ProGlu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

1 5 10 1 5 10

<210> 2<210> 2

<211> 36<211> 36

<212> DNA<212> DNA

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> Спейсер (Шарнир IgG4)<223> Spacer (IgG4 Hinge)

<400> 2<400> 2

gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36

<210> 3<210> 3

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> Спейсер Шарнир-CH3<223> Spacer Hinge-CH3

<400> 3<400> 3

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro ArgGlu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr LysGlu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

20 25 30 20 25 30

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser AspAsn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

35 40 45 35 40 45

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr LysIle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

50 55 60 50 55 60

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr SerThr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe SerArg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

85 90 95 85 90 95

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys SerCys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

100 105 110 100 105 110

Leu Ser Leu Ser Leu Gly LysLeu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

115 115

<210> 4<210> 4

<211> 229<211> 229

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> Спейсер шарнир-CH2-CH3<223> Spacer Hinge-CH2-CH3

<400> 4<400> 4

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu PheGlu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15 1 5 10 15

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp ThrLeu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30 20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp ValLeu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly ValSer Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60 50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn SerGlu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp LeuThr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro SerAsn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110 100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu ProSer Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125 115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn GlnGln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140 130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile AlaVal Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr ThrVal Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175 165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg LeuPro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190 180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys SerThr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205 195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu SerVal Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220 210 215 220

Leu Ser Leu Gly LysLeu Ser Leu Gly Lys

225 225

<210> 5<210> 5

<211> 282<211> 282

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> IgD-Шарнир-Fc<223> IgD-Hinge-Fc

<400> 5<400> 5

Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr AlaArg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro AlaGln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala

20 25 30 20 25 30

Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu LysThr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys

35 40 45 35 40 45

Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys ProGlu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro

50 55 60 50 55 60

Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val GlnSer His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val GlyAsp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly

85 90 95 85 90 95

Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys ValSer Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val

100 105 110 100 105 110

Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn GlyPro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp AsnSer Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn

130 135 140 130 135 140

Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro ProAla Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val LysGln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys

165 170 175 165 170 175

Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala SerLeu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser

180 185 190 180 185 190

Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu LeuTrp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu

195 200 205 195 200 205

Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala ProMet Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro

210 215 220 210 215 220

Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp SerAla Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser

225 230 235 240 225 230 235 240

Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr ThrVal Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr

245 250 255 245 250 255

Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser ArgCys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg

260 265 270 260 265 270

Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp HisSer Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His

275 280 275 280

<210> 6<210> 6

<211> 24<211> 24

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> T2A<223> T2A

<400> 6<400> 6

Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly AspLeu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp

1 5 10 15 1 5 10 15

Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro ArgVal Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg

20 twenty

<210> 7<210> 7

<211> 335<211> 335

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> tEGFR<223>tEGFR

<400> 7<400> 7

Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser LeuArg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser IleSer Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile

20 25 30 20 25 30

Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser PheSer Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe

35 40 45 35 40 45

Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys ThrThr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr

50 55 60 50 55 60

Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu AsnVal Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn

65 70 75 80 65 70 75 80

Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly ArgArg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg

85 90 95 85 90 95

Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn IleThr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile

100 105 110 100 105 110

Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp ValThr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val

115 120 125 115 120 125

Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn TrpIle Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser AsnLys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn

145 150 155 160 145 150 155 160

Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala LeuArg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu

165 170 175 165 170 175

Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val SerCys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser

180 185 190 180 185 190

Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn LeuCys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu

195 200 205 195 200 205

Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile GlnLeu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln

210 215 220 210 215 220

Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr GlyCys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly ProArg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro

245 250 255 245 250 255

His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn ThrHis Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr

260 265 270 260 265 270

Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys HisLeu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His

275 280 285 275 280 285

Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys ProPro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro

290 295 300 290 295 300

Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly AlaThr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe MetLeu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

325 330 335 325 330 335

<210> 8<210> 8

<211> 27<211> 27

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> CD28<223>CD28

<300> <300>

<308> UniProt P10747<308> UniProt P10747

<309> 1989-07-01 <309> 1989-07-01

<400> 8<400> 8

Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser LeuPhe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp ValLeu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

20 25 20 25

<210> 9<210> 9

<211> 66<211> 66

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> CD28<223>CD28

<300> <300>

<308> UniProt P10747<308> UniProt P10747

<309> 1989-07-01 <309> 1989-07-01

<400> 9<400> 9

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser AsnIle Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro LeuGly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

20 25 30 20 25 30

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly GlyPhe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly

35 40 45 35 40 45

Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile PheVal Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe

50 55 60 50 55 60

Trp ValTrp Val

65 65

<210> 10<210> 10

<211> 41<211> 41

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> CD28<223>CD28

<300> <300>

<308> UniProt P10747<308> UniProt P10747

<309> 1989-07-01 <309> 1989-07-01

<400> 10<400> 10

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met ThrArg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala ProPro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30 20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg SerPro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40 35 40

<210> 11<210> 11

<211> 41<211> 41

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> CD28<223>CD28

<400> 11<400> 11

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met ThrArg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala ProPro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

20 25 30 20 25 30

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg SerPro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser

35 40 35 40

<210> 12<210> 12

<211> 42<211> 42

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> 4-1BB<223> 4-1BB

<300> <300>

<308> UniProt Q07011.1<308> UniProt Q07011.1

<309> 1995-02-01 <309> 1995-02-01

<400> 12<400> 12

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe MetLys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg PheArg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

20 25 30 20 25 30

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu LeuPro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

35 40 35 40

<210> 13<210> 13

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> CD3 зета<223> CD3 zeta

<400> 13<400> 13

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln GlyArg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu TyrGln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30 20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly LysAsp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45 35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln LysPro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60 50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu ArgAsp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr AlaArg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95 85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110 100 105 110

<210> 14<210> 14

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> CD3 зета<223> CD3 zeta

<400> 14<400> 14

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln GlyArg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu TyrGln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30 20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly LysAsp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45 35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln LysPro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60 50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu ArgAsp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr AlaArg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95 85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110 100 105 110

<210> 15<210> 15

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> CD3 зета<223> CD3 zeta

<400> 15<400> 15

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln GlyArg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu TyrGln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

20 25 30 20 25 30

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly LysAsp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

35 40 45 35 40 45

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln LysPro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

50 55 60 50 55 60

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu ArgAsp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr AlaArg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

85 90 95 85 90 95

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

100 105 110 100 105 110

<210> 16<210> 16

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<220> <220>

<221> ПОВТОР <221> REPEAT

<222> (5)...(9)<222> (5)...(9)

<223> SGGGG повторяется 5 раз<223> SGGGG repeated 5 times

<400> 16<400> 16

Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlyPro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 fifteen

<210> 17<210> 17

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 17<400> 17

Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly LysGly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

SerSer

<210> 18<210> 18

<211> 54<211> 54

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> Внутриклеточный домен BCMA человека<223> Human BCMA intracellular domain

<400> 18<400> 18

Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp SerMet Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn ThrLeu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr

20 25 30 20 25 30

Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn SerPro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser

35 40 45 35 40 45

Val Lys Gly Thr Asn AlaVal Lys Gly Thr Asn Ala

50 fifty

<210> 19<210> 19

<211> 5<211> 5

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 19<400> 19

Gly Gly Gly Gly SerGly Gly Gly Gly Ser

1 5 fifteen

<210> 20<210> 20

<211> 231<211> 231

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Fc модифицированного IgG1 человека<223> Modified human IgG1 Fc

<400> 20<400> 20

Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala ProPro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro LysGlu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30 20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val ValAsp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45 35 40 45

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val AspAsp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60 50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln TyrGly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln AspAsn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95 85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala LeuTrp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro ArgPro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125 115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr LysGlu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

130 135 140 130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser AspAsn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr LysIle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175 165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr SerThr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190 180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe SerLys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205 195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys SerCys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220 210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly LysLeu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230 225 230

<210> 21<210> 21

<211> 16<211> 16

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> сигнальный пептид CD33<223> CD33 signal peptide

<400> 21<400> 21

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu AlaMet Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 22<210> 22

<211> 306<211> 306

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Fc BCMA<223> Fc BCMA

<400> 22<400> 22

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu AlaMet Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp SerMet Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser

20 25 30 20 25 30

Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn ThrLeu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr

35 40 45 35 40 45

Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn SerPro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser

50 55 60 50 55 60

Val Lys Gly Thr Asn Ala Gly Gly Gly Gly Ser Pro Lys Ser Ser AspVal Lys Gly Thr Asn Ala Gly Gly Gly Gly Ser Pro Lys Ser Ser Asp

65 70 75 80 65 70 75 80

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly AlaLys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala

85 90 95 85 90 95

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met IlePro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

100 105 110 100 105 110

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His GluSer Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

115 120 125 115 120 125

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val HisAsp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

130 135 140 130 135 140

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr ArgAsn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly LysVal Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

165 170 175 165 170 175

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile GluGlu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu

180 185 190 180 185 190

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val TyrLys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

195 200 205 195 200 205

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser LeuThr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

210 215 220 210 215 220

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu TrpThr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

225 230 235 240 225 230 235 240

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro ValGlu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

245 250 255 245 250 255

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val AspLeu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

260 265 270 260 265 270

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met HisLys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

275 280 285 275 280 285

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser ProGlu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

290 295 300 290 295 300

Gly LysGly Lys

305 305

<210> 23<210> 23

<211> 18<211> 18

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> T2A<223> T2A

<400> 23<400> 23

Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn ProGlu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly ProGlyPro

<210> 24<210> 24

<211> 22<211> 22

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> P2A<223> P2A

<400> 24<400> 24

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp ValGly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly ProGlu Glu Asn Pro Gly Pro

20 twenty

<210> 25<210> 25

<211> 19<211> 19

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> P2A<223> P2A

<400> 25<400> 25

Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu AsnAla Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Gly ProPro Gly Pro

<210> 26<210> 26

<211> 20<211> 20

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> E2A<223>E2A

<400> 26<400> 26

Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu SerGln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Asn Pro Gly ProAsn Pro Gly Pro

20 twenty

<210> 27<210> 27

<211> 22<211> 22

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> F2A<223> F2A

<400> 27<400> 27

Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp ValVal Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Ser Asn Pro Gly ProGlu Ser Asn Pro Gly Pro

20 twenty

<210> 28<210> 28

<211> 335<211> 335

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> tEGFR<223>tEGFR

<400> 28<400> 28

Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser LeuArg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser IleSer Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile

20 25 30 20 25 30

Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser PheSer Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe

35 40 45 35 40 45

Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys ThrThr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr

50 55 60 50 55 60

Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu AsnVal Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn

65 70 75 80 65 70 75 80

Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly ArgArg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg

85 90 95 85 90 95

Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn IleThr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile

100 105 110 100 105 110

Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp ValThr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val

115 120 125 115 120 125

Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn TrpIle Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser AsnLys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn

145 150 155 160 145 150 155 160

Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala LeuArg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu

165 170 175 165 170 175

Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val SerCys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser

180 185 190 180 185 190

Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn LeuCys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu

195 200 205 195 200 205

Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile GlnLeu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln

210 215 220 210 215 220

Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr GlyCys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly ProArg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro

245 250 255 245 250 255

His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn ThrHis Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr

260 265 270 260 265 270

Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys HisLeu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His

275 280 285 275 280 285

Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys ProPro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro

290 295 300 290 295 300

Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly AlaThr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe MetLeu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met

325 330 335 325 330 335

<210> 29<210> 29

<211> 228<211> 228

<212> PRT<212> PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<220> <220>

<223> Спейсер шарнир-CH2-CH3<223> Spacer Hinge-CH2-CH3

<400> 29<400> 29

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro ValGlu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuAla Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

20 25 30 20 25 30

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

35 40 45 35 40 45

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluGln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

50 55 60 50 55 60

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr

65 70 75 80 65 70 75 80

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

85 90 95 85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser SerGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

100 105 110 100 105 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

115 120 125 115 120 125

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

130 135 140 130 135 140

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

145 150 155 160 145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

165 170 175 165 170 175

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

180 185 190 180 185 190

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

195 200 205 195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220 210 215 220

Ser Leu Gly LysSer Leu Gly Lys

225 225

<210> 30<210> 30

<211> 117<211> 117

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 30<400> 30

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp TyrThr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp MetSer Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp PheGly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala TyrArg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe CysLeu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr SerAla Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser SerVal Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 31<210> 31

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 31<400> 31

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile LeuLys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30 20 25 30

Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro AlaThr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile AspArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgPro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysThr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 32<210> 32

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 32<400> 32

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn PheThr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

20 25 30 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp MetGly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp PheAla Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala TyrLys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe CysLeu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr TrpAla Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser AlaGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 120 115 120

<210> 33<210> 33

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 33<400> 33

Asp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val GlyAsp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr AlaAsp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu IleVal Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr GlyPhe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln AlaSer Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro TrpGlu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys

100 105 100 105

<210> 34<210> 34

<211> 116<211> 116

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 34<400> 34

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly GluGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser TyrSer Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp MetTrp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser PheGly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala TyrGln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr CysLeu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu ValAla Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser SerThr Val Ser Ser

115 115

<210> 35<210> 35

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 35<400> 35

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnSer Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser HisArg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30 20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu LeuSer Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu GlnGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu GlyAsn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 36<210> 36

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 36<400> 36

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly AlaGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp TyrSer Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser MetTyr Val Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala TyrGln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrAla Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser SerLeu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 37<210> 37

<211> 105<211> 105

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 37<400> 37

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly GlnGln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp TyrSer Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30 20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp SerGln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45 35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser GlyLys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu AlaAsn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe GlyAsp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95 85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu GlyGly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 100 105

<210> 38<210> 38

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 38<400> 38

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly SerGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetAla Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala TyrGln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr Met Asp Tyr TrpAla Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr Met Asp Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 39<210> 39

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 39<400> 39

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Thr Ser Gly Thr Pro Gly GlnLeu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ser Thr Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Val Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu ValVal Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Val Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu ArgVal Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlySer Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 40<210> 40

<211> 120<211> 120

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 40<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly SerGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetAla Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala TyrGln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu Asp Ser Trp Gly GlnAla Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu Asp Ser Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 41<210> 41

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 41<400> 41

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnGln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu LeuTyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu ArgGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlySer Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 42<210> 42

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 42<400> 42

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp MetTyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Gly TyrGln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Gly Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys Trp Gly Gln Gly ThrAla Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser SerLeu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 43<210> 43

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 43<400> 43

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuPhe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg PheLeu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser SerGln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlyLeu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 44<210> 44

<211> 5<211> 5

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR H1 FMC63<223> CDR H1 FMC63

<400> 44<400> 44

Asp Tyr Gly Val SerAsp Tyr Gly Val Ser

1 5 fifteen

<210> 45<210> 45

<211> 16<211> 16

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR H2 FMC63<223> CDR H2 FMC63

<400> 45<400> 45

Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys SerVal Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 46<210> 46

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR H3 FMC63<223> CDR H3 FMC63

<400> 46<400> 46

Tyr Ala Met Asp Tyr Trp GlyTyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

1 5 fifteen

<210> 47<210> 47

<211> 12<211> 12

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> HC-CDR3 FMC63<223> HC-CDR3 FMC63

<400> 47<400> 47

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp TyrHis Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10 1 5 10

<210> 48<210> 48

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR L1 FMC63<223> CDR L1 FMC63

<400> 48<400> 48

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu AsnArg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn

1 5 10 1 5 10

<210> 49<210> 49

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR L2 FMC63<223> CDR L2 FMC63

<400> 49<400> 49

Ser Arg Leu His Ser Gly ValSer Arg Leu His Ser Gly Val

1 5 fifteen

<210> 50<210> 50

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> LC-CDR2 FMC63<223> LC-CDR2 FMC63

<400> 50<400> 50

His Thr Ser Arg Leu His SerHis Thr Ser Arg Leu His Ser

1 5 fifteen

<210> 51<210> 51

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR L3 FMC63<223> CDR L3 FMC63

<400> 51<400> 51

Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe GlyGly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly

1 5 fifteen

<210> 52<210> 52

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> LC-CDR3 FMC63<223> LC-CDR3 FMC63

<400> 52<400> 52

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr ThrGln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr

1 5 fifteen

<210> 53<210> 53

<211> 120<211> 120

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> VH FMC63 <223> VH FMC63

<400> 53<400> 53

Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser GlnGlu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp TyrSer Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp LeuGly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45 35 40 45

Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu LysGly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60 50 55 60

Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe LeuSer Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys AlaLys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95 85 90 95

Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly GlnLys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser SerGly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 54<210> 54

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> VL FMC63 <223> VL FMC63

<400> 54<400> 54

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu GlyAsp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys TyrAsp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu IleLeu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu GlnSer Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro TyrGlu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile ThrThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr

100 105 100 105

<210> 55<210> 55

<211> 245<211> 245

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> scFv FMC63 <223> scFv FMC63

<400> 55<400> 55

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu GlyAsp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys TyrAsp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu IleLeu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu GlnSer Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro TyrGlu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser GlyThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val LysSer Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys

115 120 125 115 120 125

Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu SerLeu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val SerVal Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val IleTrp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile

165 170 175 165 170 175

Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg LeuTrp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu

180 185 190 180 185 190

Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met AsnThr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn

195 200 205 195 200 205

Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His TyrSer Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr SerTyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

225 230 235 240 225 230 235 240

Val Thr Val Ser SerVal Thr Val Ser Ser

245 245

<210> 56<210> 56

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR L1 SJ25C1 <223> CDR L1 SJ25C1

<400> 56<400> 56

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val AlaLys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala

1 5 10 1 5 10

<210> 57<210> 57

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR L2 SJ25C1 <223> CDR L2 SJ25C1

<400> 57<400> 57

Ser Ala Thr Tyr Arg Asn SerSer Ala Thr Tyr Arg Asn Ser

1 5 fifteen

<210> 58<210> 58

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR L3 SJ25C1 <223> CDR L3 SJ25C1

<400> 58<400> 58

Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr ThrGln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr

1 5 fifteen

<210> 59<210> 59

<211> 5<211> 5

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR H1 SJ25C1 <223> CDR H1 SJ25C1

<400> 59<400> 59

Ser Tyr Trp Met AsnSer Tyr Trp Met Asn

1 5 fifteen

<210> 60<210> 60

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR H2 SJ25C1 <223> CDR H2 SJ25C1

<400> 60<400> 60

Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe LysGln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Glygly

<210> 61<210> 61

<211> 13<211> 13

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CDR H3 SJ25C1 <223> CDR H3 SJ25C1

<400> 61<400> 61

Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp TyrLys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10 1 5 10

<210> 62<210> 62

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> VH SJ25C1 <223> VH SJ25C1

<400> 62<400> 62

Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly SerGlu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp IleTrp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys PheGly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala TyrLys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe CysMet Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr TrpAla Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser SerGly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 63<210> 63

<211> 108<211> 108

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> VL SJ25C1 <223> VL SJ25C1

<400> 63<400> 63

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val GlyAsp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr AsnAsp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu IleVal Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr GlyTyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln SerSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro TyrLys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys ArgThr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 100 105

<210> 64<210> 64

<211> 15<211> 15

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 64<400> 64

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerGly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 65<210> 65

<211> 245<211> 245

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> scFv SJ25C1 <223> scFv SJ25C1

<400> 65<400> 65

Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly SerGlu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp IleTrp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys PheGly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala TyrLys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe CysMet Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr TrpAla Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser GlyGly Glyn Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln SerGly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser

130 135 140 130 135 140

Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr CysPro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys

145 150 155 160 145 150 155 160

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln LysLys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175 165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg AsnPro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn

180 185 190 180 185 190

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp PheSer Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205 195 200 205

Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr PheThr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe

210 215 220 210 215 220

Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr LysCys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Glu Ile Lys ArgLeu Glu Ile Lys Arg

245 245

<210> 66<210> 66

<211> 12<211> 12

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> HC-CDR3 FMC63<223> HC-CDR3 FMC63

<400> 66<400> 66

His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp TyrHis Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10 1 5 10

<210> 67<210> 67

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> LC-CDR2 FMC63<223> LC-CDR2 FMC63

<400> 67<400> 67

His Thr Ser Arg Leu His SerHis Thr Ser Arg Leu His Ser

1 5 fifteen

<210> 68<210> 68

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> LC-CDR3 FMC63 <223> LC-CDR3 FMC63

<400> 68<400> 68

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr ThrGln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr

1 5 fifteen

<210> 69<210> 69

<211> 735<211> 735

<212> DNA<212> DNA

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> scFv<223>scFv

<400> 69<400> 69

gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60

atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120

gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180

cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240

gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300

ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360

ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420

cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480

tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540

accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600

agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660

gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720

gtgaccgtga gcagc 735gtgaccgtga gcagc 735

<210> 70<210> 70

<211> 18<211> 18

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 70<400> 70

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser ThrGly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15 1 5 10 15

Lys GlyLys Gly

<210> 71<210> 71

<211> 4<211> 4

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 71<400> 71

Gly Gly Gly SerGly Gly Gly Ser

1 one

<210> 72<210> 72

<211> 15<211> 15

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 72<400> 72

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerGly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 73<210> 73

<211> 18<211> 18

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 73<400> 73

Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser ThrGly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr

1 5 10 15 1 5 10 15

Lys GlyLys Gly

<210> 74<210> 74

<211> 21<211> 21

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 74<400> 74

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlySer Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Glu Met AlaSer Leu Glu Met Ala

20 twenty

<210> 75<210> 75

<211> 21<211> 21

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Сигнальный пептид CD8a<223> CD8a signal peptide

<400> 75<400> 75

Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu LeuMet Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

His Ala Ala Arg ProHis Ala Ala Arg Pro

20 twenty

<210> 76<210> 76

<211> 20<211> 20

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Сигнальный пептид<223> Signal peptide

<400> 76<400> 76

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val ProMet Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Ser Thr GlyGly Ser Thr Gly

20 twenty

<210> 77<210> 77

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 77<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly ThrAla Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Met Val Thr Val Ser SerMet Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 78<210> 78

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 78<400> 78

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg TyrGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro PheGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 79<210> 79

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 79<400> 79

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser ValAla Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu TrpAla Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 80<210> 80

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 80<400> 80

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His SerGlu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30 20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln SerAsn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val ProPro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys IleAsp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln GlySer Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95 85 90 95

Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysLeu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 81<210> 81

<211> 116<211> 116

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 81<400> 81

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys PheGly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val TyrGln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr ValAla Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser SerThr Val Ser Ser

115 115

<210> 82<210> 82

<211> 106<211> 106

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 82<400> 82

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro GlyGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser AsnGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln SerSer Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro ThrGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysPhe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 83<210> 83

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 83<400> 83

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser GluGln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser SerThr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30 20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu GluSer Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45 35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro SerTrp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln PheLeu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr TyrSer Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95 85 90 95

Cys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile TrpCys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser SerGly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 84<210> 84

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 84<400> 84

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser TyrGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro ProGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 85<210> 85

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 85<400> 85

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValSer Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln GlyAla Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser SerThr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 86<210> 86

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 86<400> 86

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg TyrGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro TrpGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 87<210> 87

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 87<400> 87

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser ValAla Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr TrpAla Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 88<210> 88

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 88<400> 88

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val GlyAsp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser TrpAsp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro PheGlu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 89<210> 89

<211> 126<211> 126

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 89<400> 89

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly SerGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetAla Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala TyrGln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr GlyAla Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110 100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser SerMet Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125 115 120 125

<210> 90<210> 90

<211> 113<211> 113

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 90<400> 90

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr SerGlu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30 20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly GlnSer Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45 35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly ValPro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60 50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu ThrPro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80 65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln GlnIle Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95 85 90 95

Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu IlePhe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110 100 105 110

LysLys

<210> 91<210> 91

<211> 123<211> 123

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 91<400> 91

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser ValAla Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp ValVal Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110 100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser SerTrp Gly Glyn Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 92<210> 92

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 92<400> 92

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro GlyGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser AsnGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln SerSer Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro LeuGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 93<210> 93

<211> 121<211> 121

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 93<400> 93

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly SerGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetAla Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala TyrGln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp Ser Glu Asp Trp GlyAla Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp Ser Glu Asp Trp Gly

100 105 110 100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 94<210> 94

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 94<400> 94

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnLeu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu LeuSer Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe SerIle Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu GlnGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn LeuSer Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlyAsn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 95<210> 95

<211> 117<211> 117

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 95<400> 95

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetSer Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp PheGly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala TyrArg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr LeuAla Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser SerVal Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 96<210> 96

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 96<400> 96

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val IleGlu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30 20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro AlaLys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgSer Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysIle Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 97<210> 97

<211> 115<211> 115

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 97<400> 97

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn HisSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val LysSer Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr LeuGly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys SerGln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95 85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val ThrAla His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110 100 105 110

Val Ser SerVal Ser Ser

115 115

<210> 98<210> 98

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 98<400> 98

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val GlyAsp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser TyrAsp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu IleLeu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro TyrGlu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile LysThr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 99<210> 99

<211> 120<211> 120

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 99<400> 99

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly GlnAla Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser SerGly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 100<210> 100

<211> 109<211> 109

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 100<400> 100

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser SerGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30 20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu LeuPhe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu GluGly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser ProPro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro

85 90 95 85 90 95

Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysSer Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 101<210> 101

<211> 115<211> 115

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 101<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn HisSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val LysSer Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr LeuGly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys SerGln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95 85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val ThrAla His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110 100 105 110

Val Ser SerVal Ser Ser

115 115

<210> 102<210> 102

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 102<400> 102

Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser Ala Ser Val GlyAsp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys PheAsp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe

20 25 30 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu IleLeu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro LeuGlu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro Leu

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 103<210> 103

<211> 115<211> 115

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 103<400> 103

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn HisSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val LysSer Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr LeuGly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys SerGln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95 85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val ThrAla His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110 100 105 110

Val Ser SerVal Ser Ser

115 115

<210> 104<210> 104

<211> 109<211> 109

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 104<400> 104

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser SerGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser

20 25 30 20 25 30

Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu LeuSer Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe SerMet Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu GluGly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Gly Ser ProPro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Gly Ser Pro

85 90 95 85 90 95

Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile LysPro Phe Thr Phe Gly Glyn Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 105<210> 105

<211> 117<211> 117

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 105<400> 105

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His TyrThr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp MetSer Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp PheGly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala TyrLys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe CysLeu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr AlaSer Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110 100 105 110

Leu Thr Val Ser SerLeu Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 106<210> 106

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 106<400> 106

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile LeuLys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30 20 25 30

Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro AlaThr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile AspArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgPro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysThr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 107<210> 107

<211> 117<211> 117

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 107<400> 107

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His TyrThr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp MetSer Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp PheGly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala TyrLys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe CysLeu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr ThrSer Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Thr Val Ser SerLeu Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 108<210> 108

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 108<400> 108

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Met Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val IleLys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30 20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro AlaLys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile AspArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys Leu Gln Ser ArgPro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysIle Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 109<210> 109

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 109<400> 109

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser SerThr Met Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 110<210> 110

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 110<400> 110

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His SerGln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln SerAsn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val ProPro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys IleAsp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Ser Gln SerSer Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95 85 90 95

Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysSer Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 111<210> 111

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 111<400> 111

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser SerThr Met Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 112<210> 112

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 112<400> 112

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His SerGlu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln SerAsn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val ProPro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Lys IleAsp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Glu ThrSer Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr

85 90 95 85 90 95

Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile LysSer His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 113<210> 113

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> sdAb анти-BCMA<223> sdAb anti-BCMA

<400> 113<400> 113

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly ValAla Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val

35 40 45 35 40 45

Ile Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValIle Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Val TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Val Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr CysLeu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg Asp Tyr Glu Phe ArgAla Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg Asp Tyr Glu Phe Arg

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser SerGly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 114<210> 114

<211> 39<211> 39

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Спейсер CD28<223> Spacer CD28

<400> 114<400> 114

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser AsnIle Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro LeuGly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

20 25 30 20 25 30

Phe Pro Gly Pro Ser Lys ProPhe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

35 35

<210> 115<210> 115

<211> 25<211> 25

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> TM CD8a<223>TM CD8a

<400> 115<400> 115

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu LeuIle Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys AsnSer Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn

20 25 20 25

<210> 116<210> 116

<211> 30<211> 30

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Спейсер CD28 (truncated)<223> Spacer CD28 (truncated)

<400> 116<400> 116

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly LysLeu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys ProHis Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro

20 25 30 20 25 30

<210> 117<210> 117

<211> 46<211> 46

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Шарнир CD8а<223> Hinge CD8a

<400> 117<400> 117

Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr IlePro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala AlaAla Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

20 25 30 20 25 30

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys AspGly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45 35 40 45

<210> 118<210> 118

<211> 45<211> 45

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Шарнир CD8а<223> Hinge CD8a

<400> 118<400> 118

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile AlaThr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala GlySer Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys AspGly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45 35 40 45

<210> 119<210> 119

<211> 55<211> 55

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Шарнир CD8а<223> Hinge CD8a

<400> 119<400> 119

Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala ProPhe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser LeuArg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu

20 25 30 20 25 30

Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr ArgArg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg

35 40 45 35 40 45

Gly Leu Asp Phe Ala Cys AspGly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

50 55 50 55

<210> 120<210> 120

<211> 39<211> 39

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Шарнир CTLA4<223> Hinge CTLA4

<400> 120<400> 120

Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro ProAsp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp ProTyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro

20 25 30 20 25 30

Glu Pro Cys Pro Asp Ser AspGlu Pro Cys Pro Asp Ser Asp

35 35

<210> 121<210> 121

<211> 24<211> 24

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CTLA4 TM<223> CTLA4TM

<400> 121<400> 121

Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe TyrPhe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val SerSer Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser

20 twenty

<210> 122<210> 122

<211> 38<211> 38

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Шарнир PD-1<223> Hinge PD-1

<400> 122<400> 122

Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg ArgGln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala GlyAla Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Gln Phe Gln Thr Leu ValGln Phe Gln Thr Leu Val

35 35

<210> 123<210> 123

<211> 21<211> 21

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> PD-1 TM<223>PD-1TM

<400> 123<400> 123

Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val TrpVal Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp

1 5 10 15 1 5 10 15

Val Leu Ala Val IleVal Leu Ala Val Ile

20 twenty

<210> 124<210> 124

<211> 16<211> 16

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Шарнир Fc(гамма) RIIIa<223> Hinge Fc(gamma) RIIIa

<400> 124<400> 124

Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr GlnGly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 125<210> 125

<211> 231<211> 231

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Шарнир IgG1<223> IgG1 hinge

<400> 125<400> 125

Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro AlaGlu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro LysPro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

20 25 30 20 25 30

Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val ValAsp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

35 40 45 35 40 45

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val AspAsp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

50 55 60 50 55 60

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln TyrGly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln AspAsn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

85 90 95 85 90 95

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala LeuTrp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

100 105 110 100 105 110

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro ArgPro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

115 120 125 115 120 125

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr LysGlu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

130 135 140 130 135 140

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser AspAsn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr LysIle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

165 170 175 165 170 175

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr SerThr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

180 185 190 180 185 190

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe SerLys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

195 200 205 195 200 205

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys SerCys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

210 215 220 210 215 220

Leu Ser Leu Ser Pro Gly LysLeu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

225 230 225 230

<210> 126<210> 126

<211> 457<211> 457

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 126<400> 126

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly ThrAla Arg Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro GlyMet Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser ProSer Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro

130 135 140 130 135 140

Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys ArgAla Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys ProAla Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175 165 170 175

Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala ThrGly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

180 185 190 180 185 190

Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe ThrGly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205 195 200 205

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr CysLeu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220 210 215 220

Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys ValGln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly ThrGlu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr

245 250 255 245 250 255

Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe ProIle Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro

260 265 270 260 265 270

Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val LeuGly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

275 280 285 275 280 285

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp ValAla Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

290 295 300 290 295 300

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met ThrArg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

305 310 315 320 305 310 315 320

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala ProPro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

325 330 335 325 330 335

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg SerPro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

340 345 350 340 345 350

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn GluAla Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

355 360 365 355 360 365

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg ArgLeu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

370 375 380 370 375 380

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro GlnGly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala TyrGlu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

405 410 415 405 410 415

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His AspSer Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

420 425 430 420 425 430

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp AlaGly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

435 440 445 435 440 445

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgLeu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 450 455

<210> 127<210> 127

<211> 457<211> 457

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 127<400> 127

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg TyrGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro PheGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ile Ser Trp Pro Phe

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr SerThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu ValGly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser LeuGln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala MetArg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser AlaSer Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala

165 170 175 165 170 175

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys GlyIle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu GlnArg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

195 200 205 195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala ArgMet Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220 210 215 220

Ala Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met ValAla Glu Met Gly Ala Val Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly ThrThr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr

245 250 255 245 250 255

Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe ProIle Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro

260 265 270 260 265 270

Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val LeuGly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

275 280 285 275 280 285

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp ValAla Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

290 295 300 290 295 300

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met ThrArg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

305 310 315 320 305 310 315 320

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala ProPro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

325 330 335 325 330 335

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg SerPro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

340 345 350 340 345 350

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn GluAla Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

355 360 365 355 360 365

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg ArgLeu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

370 375 380 370 375 380

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro GlnGly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala TyrGlu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

405 410 415 405 410 415

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His AspSer Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

420 425 430 420 425 430

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp AlaGly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

435 440 445 435 440 445

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgLeu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 450 455

<210> 128<210> 128

<211> 466<211> 466

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 128<400> 128

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser ValAla Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu TrpAla Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe Asp Leu Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly SerGly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Val MetGly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Val Met

130 135 140 130 135 140

Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala SerThr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr AsnIle Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn

165 170 175 165 170 175

Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu LeuTyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu

180 185 190 180 185 190

Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

195 200 205 195 200 205

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val GluGly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu

210 215 220 210 215 220

Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Leu Gly Leu ProAla Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Leu Gly Leu Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala AlaLeu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala

245 250 255 245 250 255

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly LysLeu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

260 265 270 260 265 270

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe TrpHis Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

275 280 285 275 280 285

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu ValVal Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

290 295 300 290 295 300

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg LeuThr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro ThrLeu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

325 330 335 325 330 335

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala TyrArg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

340 345 350 340 345 350

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr GlnArg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365 355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380 370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415 405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430 420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445 435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460 450 455 460

Pro ArgPro Arg

465 465

<210> 129<210> 129

<211> 466<211> 466

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 129<400> 129

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His SerGlu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30 20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln SerAsn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val ProPro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys IleAsp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln GlySer Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95 85 90 95

Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysLeu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly SerArg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val GlnThr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln

130 135 140 130 135 140

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr PhePro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly LeuSer Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

165 170 175 165 170 175

Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr AlaGlu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala

180 185 190 180 185 190

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys AsnAsp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn

195 200 205 195 200 205

Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala ValThr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr PheTyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Thr Tyr Leu Gly Gly Leu Trp Tyr Phe

225 230 235 240 225 230 235 240

Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala AlaAsp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

245 250 255 245 250 255

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly LysLeu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

260 265 270 260 265 270

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe TrpHis Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

275 280 285 275 280 285

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu ValVal Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

290 295 300 290 295 300

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg LeuThr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro ThrLeu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

325 330 335 325 330 335

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala TyrArg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

340 345 350 340 345 350

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr GlnArg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365 355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380 370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415 405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430 420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445 435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460 450 455 460

Pro ArgPro Arg

465 465

<210> 130<210> 130

<211> 454<211> 454

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 130<400> 130

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys PheGly Ile Ile Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val TyrGln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr ValAla Arg Glu Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser GlyThr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala ThrGlu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala SerLeu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly GlnGln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

165 170 175 165 170 175

Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly IleAla Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile

180 185 190 180 185 190

Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu ThrPro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr

195 200 205 195 200 205

Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln GlnIle Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

210 215 220 210 215 220

Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile LysTyr Ala Ala Tyr Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile HisArg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His

245 250 255 245 250 255

Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro SerVal Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser

260 265 270 260 265 270

Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys TyrLys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr

275 280 285 275 280 285

Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser LysSer Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys

290 295 300 290 295 300

Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg ArgArg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg

305 310 315 320 305 310 315 320

Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg AspPro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp

325 330 335 325 330 335

Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp AlaPhe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

340 345 350 340 345 350

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn LeuPro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

355 360 365 355 360 365

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg AspGly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

370 375 380 370 375 380

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly LeuPro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu IleTyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

405 410 415 405 410 415

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu TyrGly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

420 425 430 420 425 430

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His MetGln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

435 440 445 435 440 445

Gln Ala Leu Pro Pro ArgGln Ala Leu Pro Pro Arg

450 450

<210> 131<210> 131

<211> 454<211> 454

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 131<400> 131

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro GlyGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser AsnGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln SerSer Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro ThrGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser GlyPhe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val GlnSer Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln

115 120 125 115 120 125

Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val LysLeu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys

130 135 140 130 135 140

Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met HisVal Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

145 150 155 160 145 150 155 160

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile IleTrp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile

165 170 175 165 170 175

Asn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly ArgAsn Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg

180 185 190 180 185 190

Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu LeuVal Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu

195 200 205 195 200 205

Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg GluSer Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu

210 215 220 210 215 220

Ser Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val SerSer Trp Pro Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile HisSer Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His

245 250 255 245 250 255

Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro SerVal Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser

260 265 270 260 265 270

Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys TyrLys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr

275 280 285 275 280 285

Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser LysSer Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys

290 295 300 290 295 300

Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg ArgArg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg

305 310 315 320 305 310 315 320

Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg AspPro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp

325 330 335 325 330 335

Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp AlaPhe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

340 345 350 340 345 350

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn LeuPro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

355 360 365 355 360 365

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg AspGly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

370 375 380 370 375 380

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly LeuPro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu IleTyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

405 410 415 405 410 415

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu TyrGly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

420 425 430 420 425 430

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His MetGln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

435 440 445 435 440 445

Gln Ala Leu Pro Pro ArgGln Ala Leu Pro Pro Arg

450 450

<210> 132<210> 132

<211> 461<211> 461

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 132<400> 132

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser GluGln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser SerThr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30 20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu GluSer Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45 35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro SerTrp Ile Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln PheLeu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr TyrSer Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95 85 90 95

Cys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile TrpCys Ala Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly SerGly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val LeuGly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu

130 135 140 130 135 140

Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala ThrThr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr

145 150 155 160 145 150 155 160

Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp TyrLeu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr

165 170 175 165 170 175

Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala SerGln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser

180 185 190 180 185 190

Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser GlyAsn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205 195 200 205

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe AlaThr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala

210 215 220 210 215 220

Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro Thr Phe Gly GlyVal Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro Thr Phe Gly Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu LysGly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255 245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro SerSer Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270 260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val ValPro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285 275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe IleGly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300 290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp TyrIle Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320 305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr GlnMet Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335 325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val LysPro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350 340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn GlnPhe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365 355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val LeuLeu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380 370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg ArgAsp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys MetLys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415 405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg GlyAla Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430 420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys AspLys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445 435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 133<210> 133

<211> 461<211> 461

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 133<400> 133

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser TyrGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro ProGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr SerThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln LeuGly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Leu

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr LeuGln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu

130 135 140 130 135 140

Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser TyrSer Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp IleTyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

165 170 175 165 170 175

Gly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu LysGly Ser Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

180 185 190 180 185 190

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser LeuSer Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

195 200 205 195 200 205

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys AlaLys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

210 215 220 210 215 220

Arg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp Gly GlnArg Gly Arg Gly Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu LysGly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255 245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro SerSer Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270 260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val ValPro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285 275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe IleGly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300 290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp TyrIle Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320 305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr GlnMet Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335 325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val LysPro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350 340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn GlnPhe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365 355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val LeuLeu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380 370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg ArgAsp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys MetLys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415 405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg GlyAla Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430 420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys AspLys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445 435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 134<210> 134

<211> 458<211> 458

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 134<400> 134

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValSer Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Thr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln GlyAla Arg Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys ProThr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro

115 120 125 115 120 125

Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln SerGly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140 130 135 140

Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser CysPro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

145 150 155 160 145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln LysArg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175 165 170 175

Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg AlaPro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala

180 185 190 180 185 190

Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp PheThr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe

195 200 205 195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr TyrThr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr

210 215 220 210 215 220

Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr LysCys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn GlyVal Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

245 250 255 245 250 255

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu PheThr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

260 265 270 260 265 270

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly ValPro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

275 280 285 275 280 285

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe TrpLeu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

290 295 300 290 295 300

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn MetVal Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

305 310 315 320 305 310 315 320

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr AlaThr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

325 330 335 325 330 335

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser ArgPro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

340 345 350 340 345 350

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr AsnSer Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

355 360 365 355 360 365

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys ArgGlu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

370 375 380 370 375 380

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn ProArg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

385 390 395 400 385 390 395 400

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu AlaGln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

405 410 415 405 410 415

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly HisTyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

420 425 430 420 425 430

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr AspAsp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

435 440 445 435 440 445

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAla Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 450 455

<210> 135<210> 135

<211> 458<211> 458

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 135<400> 135

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro GlyGlu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg TyrGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro TrpGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr SerThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu ValGly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser LeuGln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser MetArg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser ThrAsn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr

165 170 175 165 170 175

Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys GlyIle Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu GlnArg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln

195 200 205 195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala ArgMet Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220 210 215 220

Gly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr LeuGly Ser Gln Glu His Leu Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

225 230 235 240 225 230 235 240

Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn GlyVal Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly

245 250 255 245 250 255

Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu PheThr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe

260 265 270 260 265 270

Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly ValPro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

275 280 285 275 280 285

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe TrpLeu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

290 295 300 290 295 300

Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn MetVal Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met

305 310 315 320 305 310 315 320

Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr AlaThr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala

325 330 335 325 330 335

Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser ArgPro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg

340 345 350 340 345 350

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr AsnSer Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

355 360 365 355 360 365

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys ArgGlu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

370 375 380 370 375 380

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn ProArg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

385 390 395 400 385 390 395 400

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu AlaGln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

405 410 415 405 410 415

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly HisTyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

420 425 430 420 425 430

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr AspAsp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

435 440 445 435 440 445

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAla Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 450 455

<210> 136<210> 136

<211> 461<211> 461

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 136<400> 136

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser ValAla Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr TrpAla Arg Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly SerGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Gln LeuGly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Asp Ile Gln Leu

130 135 140 130 135 140

Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val ThrThr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr

145 150 155 160 145 150 155 160

Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp TyrIle Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr

165 170 175 165 170 175

Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala SerGln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser GlySer Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly

195 200 205 195 200 205

Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe AlaThr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala

210 215 220 210 215 220

Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe Thr Phe Gly GlyThr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu LysGly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255 245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro SerSer Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270 260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val ValPro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285 275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe IleGly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300 290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp TyrIle Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320 305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr GlnMet Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335 325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val LysPro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350 340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn GlnPhe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365 355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val LeuLeu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380 370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg ArgAsp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys MetLys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415 405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg GlyAla Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430 420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys AspLys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445 435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 137<210> 137

<211> 461<211> 461

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 137<400> 137

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val GlyAsp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser TrpAsp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser GlyTyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln ProSer Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro PheGlu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr SerThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln ValGly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser LeuGln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly MetArg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met

145 150 155 160 145 150 155 160

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala ValHis Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val

165 170 175 165 170 175

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys GlyIle Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu GlnArg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

195 200 205 195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala ArgMet Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220 210 215 220

Thr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp Gly GlnThr Asp Phe Trp Ser Gly Ser Pro Pro Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu LysGly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys

245 250 255 245 250 255

Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro SerSer Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser

260 265 270 260 265 270

Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val ValPro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val

275 280 285 275 280 285

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe IleGly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

290 295 300 290 295 300

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp TyrIle Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

305 310 315 320 305 310 315 320

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr GlnMet Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

325 330 335 325 330 335

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val LysPro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

340 345 350 340 345 350

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn GlnPhe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

355 360 365 355 360 365

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val LeuLeu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

370 375 380 370 375 380

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg ArgAsp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys MetLys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

405 410 415 405 410 415

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg GlyAla Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

420 425 430 420 425 430

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys AspLys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

435 440 445 435 440 445

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 138<210> 138

<211> 471<211> 471

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 138<400> 138

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly SerGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetAla Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala TyrGln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr GlyAla Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110 100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly SerMet Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys GlyThr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly

130 135 140 130 135 140

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr SerGlu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly GlnSer Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

180 185 190 180 185 190

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly ValPro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

195 200 205 195 200 205

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu ThrPro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

210 215 220 210 215 220

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln GlnIle Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

225 230 235 240 225 230 235 240

Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu IlePhe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

245 250 255 245 250 255

Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile IleLys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

260 265 270 260 265 270

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly ProHis Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

275 280 285 275 280 285

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala CysSer Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

290 295 300 290 295 300

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg SerTyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro ArgLys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

325 330 335 325 330 335

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro ArgArg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

340 345 350 340 345 350

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala AspAsp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

355 360 365 355 360 365

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu AsnAla Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

370 375 380 370 375 380

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly ArgLeu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu GlyAsp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

405 410 415 405 410 415

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser GluLeu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

420 425 430 420 425 430

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly LeuIle Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

435 440 445 435 440 445

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu HisTyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

450 455 460 450 455 460

Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgMet Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 139<210> 139

<211> 471<211> 471

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 139<400> 139

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr SerGlu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30 20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly GlnSer Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45 35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly ValPro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60 50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu ThrPro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80 65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln GlnIle Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95 85 90 95

Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu IlePhe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110 100 105 110

Lys Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu GlyLys Arg Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val LysSer Thr Lys Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140 130 135 140

Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly ThrLys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr

145 150 155 160 145 150 155 160

Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln GlyPhe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly

165 170 175 165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn TyrLeu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr

180 185 190 180 185 190

Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser ThrAla Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr

195 200 205 195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr AlaSer Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala

210 215 220 210 215 220

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp HisVal Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Pro Glu Tyr Ser Ser Ser Ile Trp His

225 230 235 240 225 230 235 240

Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr ValTyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val

245 250 255 245 250 255

Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile IleSer Ser Ala Ala Ala Leu Asp Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile

260 265 270 260 265 270

His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly ProHis Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro

275 280 285 275 280 285

Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala CysSer Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys

290 295 300 290 295 300

Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg SerTyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro ArgLys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg

325 330 335 325 330 335

Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro ArgArg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg

340 345 350 340 345 350

Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala AspAsp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp

355 360 365 355 360 365

Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu AsnAla Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn

370 375 380 370 375 380

Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly ArgLeu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu GlyAsp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly

405 410 415 405 410 415

Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser GluLeu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu

420 425 430 420 425 430

Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly LeuIle Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu

435 440 445 435 440 445

Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu HisTyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His

450 455 460 450 455 460

Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgMet Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 140<210> 140

<211> 462<211> 462

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 140<400> 140

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser ValAla Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Val Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp ValVal Lys Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val

100 105 110 100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser GlyTrp Gly Glyn Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile ValSer Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Ile Val

130 135 140 130 135 140

Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg AlaMet Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala TrpThr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala Trp

165 170 175 165 170 175

Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser AlaTyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala

180 185 190 180 185 190

Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly SerSer Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser

195 200 205 195 200 205

Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp PheGly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe

210 215 220 210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu Thr Phe GlyAla Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu Thr Phe Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn GluGly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

245 250 255 245 250 255

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys ProLys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

260 265 270 260 265 270

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val ValSer Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

275 280 285 275 280 285

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala PheVal Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

290 295 300 290 295 300

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser AspIle Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His TyrTyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

325 330 335 325 330 335

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg ValGln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

340 345 350 340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln AsnLys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

355 360 365 355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp ValGln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380 370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro ArgLeu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp LysArg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg ArgMet Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430 420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr LysGly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445 435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAsp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 141<210> 141

<211> 462<211> 462

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 141<400> 141

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro GlyGlu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser AsnGlu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser GlyTyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln SerSer Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro LeuGlu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr SerThr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Ser Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln ValGly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser LeuGln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly MetArg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met

145 150 155 160 145 150 155 160

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala ValHis Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val

165 170 175 165 170 175

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys GlyIle Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu GlnArg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln

195 200 205 195 200 205

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val LysMet Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Lys

210 215 220 210 215 220

Gly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp GlyGly Pro Leu Gln Glu Pro Pro Tyr Asp Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn GluGln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Leu Asp Asn Glu

245 250 255 245 250 255

Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys ProLys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro

260 265 270 260 265 270

Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val ValSer Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val

275 280 285 275 280 285

Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala PheVal Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe

290 295 300 290 295 300

Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser AspIle Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His TyrTyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr

325 330 335 325 330 335

Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg ValGln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val

340 345 350 340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln AsnLys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

355 360 365 355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp ValGln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380 370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro ArgLeu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp LysArg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg ArgMet Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430 420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr LysGly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445 435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAsp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 142<210> 142

<211> 466<211> 466

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 142<400> 142

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly GlnGln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp TyrSer Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30 20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp SerGln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45 35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser GlyLys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu AlaAsn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe GlyAsp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95 85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly SerGly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu ValGly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser LeuGln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr ValLys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly TrpTyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175 165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln GlyIle Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met GluArg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205 195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala ArgLeu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220 210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu ValSer Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro TyrThr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr

245 250 255 245 250 255

Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly LysLeu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys

260 265 270 260 265 270

His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe TrpHis Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp

275 280 285 275 280 285

Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu ValVal Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val

290 295 300 290 295 300

Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg LeuThr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro ThrLeu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

325 330 335 325 330 335

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala TyrArg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

340 345 350 340 345 350

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr GlnArg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365 355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380 370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415 405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430 420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445 435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460 450 455 460

Pro ArgPro Arg

465 465

<210> 143<210> 143

<211> 473<211> 473

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 143<400> 143

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuPhe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg PheLeu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser SerGln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlyLeu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlySer Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu ValSer Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly TyrLys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly GlnThr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175 165 170 175

Arg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr AsnArg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn

180 185 190 180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr SerTyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp ThrSer Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr

210 215 220 210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp LysAla Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile GluTrp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu

245 250 255 245 250 255

Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly ThrVal Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr

260 265 270 260 265 270

Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe ProIle Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro

275 280 285 275 280 285

Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val LeuGly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

290 295 300 290 295 300

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp ValAla Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

305 310 315 320 305 310 315 320

Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met ThrArg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr

325 330 335 325 330 335

Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala ProPro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro

340 345 350 340 345 350

Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg SerPro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser

355 360 365 355 360 365

Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn GluAla Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu

370 375 380 370 375 380

Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg ArgLeu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro GlnGly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln

405 410 415 405 410 415

Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala TyrGlu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr

420 425 430 420 425 430

Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His AspSer Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp

435 440 445 435 440 445

Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp AlaGly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala

450 455 460 450 455 460

Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgLeu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 144<210> 144

<211> 470<211> 470

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 144<400> 144

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnSer Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser HisArg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30 20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu LeuSer Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu GlnGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly SerAsn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser

100 105 110 100 105 110

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerArg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val LysLeu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140 130 135 140

Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr SerLys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys GlyPhe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly

165 170 175 165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg TyrLeu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr

180 185 190 180 185 190

Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser IleSer Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile

195 200 205 195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr AlaSer Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala

210 215 220 210 215 220

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly GlnMet Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met TyrGly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Ile Glu Val Met Tyr

245 250 255 245 250 255

Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile HisPro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His

260 265 270 260 265 270

Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro SerVal Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu Phe Pro Gly Pro Ser

275 280 285 275 280 285

Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys TyrLys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr

290 295 300 290 295 300

Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser LysSer Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg ArgArg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg

325 330 335 325 330 335

Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg AspPro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp

340 345 350 340 345 350

Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp AlaPhe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala

355 360 365 355 360 365

Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn LeuPro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu

370 375 380 370 375 380

Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg AspGly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly LeuPro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu

405 410 415 405 410 415

Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu IleTyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile

420 425 430 420 425 430

Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu TyrGly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr

435 440 445 435 440 445

Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His MetGln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met

450 455 460 450 455 460

Gln Ala Leu Pro Pro ArgGln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 145<210> 145

<211> 476<211> 476

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 145<400> 145

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnLeu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu LeuSer Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe SerIle Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu GlnGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn LeuSer Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlyAsn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlySer Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu ValSer Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly GlyLys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly GlnThr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala AsnGly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn

180 185 190 180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys SerTyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser

195 200 205 195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp ThrThr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220 210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met TrpAla Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala AlaSer Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala

245 250 255 245 250 255

Ala Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys SerAla Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser

260 265 270 260 265 270

Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser ProAsn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro

275 280 285 275 280 285

Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val GlyLeu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

290 295 300 290 295 300

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile IleGly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

305 310 315 320 305 310 315 320

Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr MetPhe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met

325 330 335 325 330 335

Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln ProAsn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro

340 345 350 340 345 350

Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys PheTyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe

355 360 365 355 360 365

Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln LeuSer Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

370 375 380 370 375 380

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu AspTyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg LysLys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

405 410 415 405 410 415

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met AlaAsn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

420 425 430 420 425 430

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly LysGlu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

435 440 445 435 440 445

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp ThrGly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

450 455 460 450 455 460

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgTyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475 465 470 475

<210> 146<210> 146

<211> 475<211> 475

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 146<400> 146

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnGln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu LeuTyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu ArgGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlySer Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlySer Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu ValSer Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly GlyLys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly GlnThr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala AsnGly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn

180 185 190 180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu SerTyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser

195 200 205 195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp ThrThr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220 210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp GluAla Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu

225 230 235 240 225 230 235 240

Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala AlaAsp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

245 250 255 245 250 255

Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser AsnIle Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn

260 265 270 260 265 270

Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro LeuGly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu

275 280 285 275 280 285

Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly GlyPhe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly

290 295 300 290 295 300

Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile PheVal Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe

305 310 315 320 305 310 315 320

Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met AsnTrp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn

325 330 335 325 330 335

Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro TyrMet Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr

340 345 350 340 345 350

Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe SerAla Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser

355 360 365 355 360 365

Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu TyrArg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr

370 375 380 370 375 380

Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp LysAsn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys AsnArg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn

405 410 415 405 410 415

Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala GluPro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys GlyAla Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

435 440 445 435 440 445

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr TyrHis Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

450 455 460 450 455 460

Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAsp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475 465 470 475

<210> 147<210> 147

<211> 482<211> 482

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 147<400> 147

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnLeu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu LeuSer Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe SerIle Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu GlnGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn LeuSer Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlyAsn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlySer Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu ValSer Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly GlyLys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly GlnThr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala AsnGly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn

180 185 190 180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys SerTyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser

195 200 205 195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp ThrThr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220 210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met TrpAla Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala AlaSer Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala

245 250 255 245 250 255

Ala Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro ThrAla Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr

260 265 270 260 265 270

Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro AlaIle Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala

275 280 285 275 280 285

Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp IleAla Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile

290 295 300 290 295 300

Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu SerTyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu LeuLeu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

325 330 335 325 330 335

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln GluTyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

340 345 350 340 345 350

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly CysGlu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

355 360 365 355 360 365

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr GlnGlu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln

370 375 380 370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415 405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430 420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445 435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460 450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480 465 470 475 480

Pro ArgPro Arg

<210> 148<210> 148

<211> 476<211> 476

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 148<400> 148

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnSer Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser HisArg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30 20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu LeuSer Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu GlnGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly SerAsn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser

100 105 110 100 105 110

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerArg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val LysLeu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140 130 135 140

Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr SerLys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys GlyPhe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly

165 170 175 165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg TyrLeu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr

180 185 190 180 185 190

Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser IleSer Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile

195 200 205 195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr AlaSer Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala

210 215 220 210 215 220

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly GlnMet Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr Thr Thr ProGly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr Thr Thr Pro

245 250 255 245 250 255

Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro LeuAla Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu

260 265 270 260 265 270

Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val HisSer Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His

275 280 285 275 280 285

Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro LeuThr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu

290 295 300 290 295 300

Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu TyrAla Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr

305 310 315 320 305 310 315 320

Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln ProCys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro

325 330 335 325 330 335

Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser CysPhe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys

340 345 350 340 345 350

Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys PheArg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe

355 360 365 355 360 365

Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln LeuSer Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu

370 375 380 370 375 380

Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu AspTyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg LysLys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys

405 410 415 405 410 415

Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met AlaAsn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala

420 425 430 420 425 430

Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly LysGlu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys

435 440 445 435 440 445

Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp ThrGly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr

450 455 460 450 455 460

Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgTyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475 465 470 475

<210> 149<210> 149

<211> 481<211> 481

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 149<400> 149

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnGln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu LeuTyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu ArgGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlySer Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlySer Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu ValSer Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly GlyLys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly GlnThr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala AsnGly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn

180 185 190 180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu SerTyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser

195 200 205 195 200 205

Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp ThrThr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr

210 215 220 210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp GluAla Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu

225 230 235 240 225 230 235 240

Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala AlaAsp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala

245 250 255 245 250 255

Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr IlePro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

260 265 270 260 265 270

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala AlaAla Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

275 280 285 275 280 285

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile TyrGly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

290 295 300 290 295 300

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser LeuIle Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu TyrVal Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr

325 330 335 325 330 335

Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu GluIle Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu

340 345 350 340 345 350

Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys GluAsp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu

355 360 365 355 360 365

Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln GlnLeu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln

370 375 380 370 375 380

Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu GluGly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu

385 390 395 400 385 390 395 400

Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly GlyTyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly

405 410 415 405 410 415

Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu GlnLys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln

420 425 430 420 425 430

Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly GluLys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu

435 440 445 435 440 445

Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser ThrArg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr

450 455 460 450 455 460

Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro ProAla Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro

465 470 475 480 465 470 475 480

ArgArg

<210> 150<210> 150

<211> 479<211> 479

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 150<400> 150

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly GlnGln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala GlyArg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys LeuPhe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg PheLeu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser SerGln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlyLeu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlySer Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu ValSer Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val

130 135 140 130 135 140

Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly TyrLys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly GlnThr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln

165 170 175 165 170 175

Arg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr AsnArg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn

180 185 190 180 185 190

Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr SerTyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp ThrSer Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr

210 215 220 210 215 220

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp LysAla Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro ThrTrp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr

245 250 255 245 250 255

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala SerThr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

260 265 270 260 265 270

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly GlyGln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

275 280 285 275 280 285

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile TrpAla Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

290 295 300 290 295 300

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val IleAla Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

305 310 315 320 305 310 315 320

Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile PheThr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

325 330 335 325 330 335

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp GlyLys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

340 345 350 340 345 350

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu ArgCys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

355 360 365 355 360 365

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly GlnVal Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

370 375 380 370 375 380

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr AspAsn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys ProVal Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

405 410 415 405 410 415

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys AspArg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

420 425 430 420 425 430

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg ArgLys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

435 440 445 435 440 445

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala ThrArg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

450 455 460 450 455 460

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgLys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 475 465 470 475

<210> 151<210> 151

<211> 472<211> 472

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 151<400> 151

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly GlnGln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp TyrSer Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30 20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp SerGln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45 35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser GlyLys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu AlaAsn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe GlyAsp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95 85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly SerGly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu ValGly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser LeuGln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr ValLys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly TrpTyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175 165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln GlyIle Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met GluArg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205 195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala ArgLeu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220 210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu ValSer Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg ProThr Val Ser Ser Ala Ala Ala Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro

245 250 255 245 250 255

Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg ProPro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro

260 265 270 260 265 270

Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly LeuGlu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu

275 280 285 275 280 285

Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr CysAsp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys

290 295 300 290 295 300

Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys ArgGly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn Lys Arg

305 310 315 320 305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg ProGly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335 325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro GluVal Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350 340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser AlaGlu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365 355 360 365

Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu LeuGlu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380 370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg GlyAsn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln GluArg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415 405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr SerGly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430 420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp GlyGlu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445 435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala LeuLeu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460 450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgHis Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 152<210> 152

<211> 472<211> 472

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 152<400> 152

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile LeuLys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30 20 25 30

Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro AlaThr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile AspArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgPro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys GlyThr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr LysSer Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125 115 120 125

Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro GlyGly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140 130 135 140

Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr AspGlu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys TrpTyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp

165 170 175 165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr AspMet Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190 180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr AlaPhe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala

195 200 205 195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr PheTyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

210 215 220 210 215 220

Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrCys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro ArgSer Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

245 250 255 245 250 255

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu ArgPro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg GlyPro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

275 280 285 275 280 285

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly ThrLeu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

290 295 300 290 295 300

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys ArgCys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

305 310 315 320 305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg ProGly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335 325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro GluVal Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350 340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser AlaGlu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365 355 360 365

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu LeuAsp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380 370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg GlyAsn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln GluArg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415 405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr SerGly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430 420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp GlyGlu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445 435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala LeuLeu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460 450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgHis Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 153<210> 153

<211> 472<211> 472

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 153<400> 153

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val IleGlu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30 20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro AlaLys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgSer Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys GlyIle Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr LysSer Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125 115 120 125

Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro GlyGly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140 130 135 140

Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr AspAla Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu TrpTyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

165 170 175 165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr AspMet Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190 180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr AlaPhe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala

195 200 205 195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr TyrTyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

210 215 220 210 215 220

Cys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrCys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro ArgLeu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

245 250 255 245 250 255

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu ArgPro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg GlyPro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

275 280 285 275 280 285

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly ThrLeu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

290 295 300 290 295 300

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys ArgCys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

305 310 315 320 305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg ProGly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335 325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro GluVal Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350 340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser AlaGlu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365 355 360 365

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu LeuAsp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380 370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg GlyAsn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln GluArg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415 405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr SerGly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430 420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp GlyGlu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445 435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala LeuLeu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460 450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgHis Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 154<210> 154

<211> 466<211> 466

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 154<400> 154

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val IleGlu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30 20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro AlaLys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgSer Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys GlyIle Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr LysSer Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125 115 120 125

Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro GlyGly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140 130 135 140

Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr AspAla Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu TrpTyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

165 170 175 165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr AspMet Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190 180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr AlaPhe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala

195 200 205 195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr TyrTyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

210 215 220 210 215 220

Cys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrCys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Asp Thr Gly Leu Tyr Ile CysLeu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys

245 250 255 245 250 255

Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly AsnLys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn

260 265 270 260 265 270

Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser AspGly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp

275 280 285 275 280 285

Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe TyrPhe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr

290 295 300 290 295 300

Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu LeuSer Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln GluTyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335 325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly CysGlu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350 340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr GlnGlu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

355 360 365 355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380 370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415 405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430 420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445 435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460 450 455 460

Pro ArgPro Arg

465 465

<210> 155<210> 155

<211> 464<211> 464

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 155<400> 155

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val IleGlu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile

20 25 30 20 25 30

Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro AlaLys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgSer Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys GlyIle Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr LysSer Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125 115 120 125

Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro GlyGly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140 130 135 140

Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr AspAla Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu TrpTyr Ser Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp

165 170 175 165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr AspMet Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190 180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr AlaPhe Arg Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala

195 200 205 195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr TyrTyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

210 215 220 210 215 220

Cys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrCys Ala Arg Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu ArgLeu Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg

245 250 255 245 250 255

Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala HisAla Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His

260 265 270 260 265 270

Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val ValPro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val

275 280 285 275 280 285

Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp ValGly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val

290 295 300 290 295 300

Leu Ala Val Ile Cys Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr IleLeu Ala Val Ile Cys Ser Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile

305 310 315 320 305 310 315 320

Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu AspPhe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp

325 330 335 325 330 335

Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu LeuGly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

340 345 350 340 345 350

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln GlyArg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly

355 360 365 355 360 365

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu TyrGln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

370 375 380 370 375 380

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly LysAsp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

385 390 395 400 385 390 395 400

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln LysPro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

405 410 415 405 410 415

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu ArgAsp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

420 425 430 420 425 430

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr AlaArg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

435 440 445 435 440 445

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 156<210> 156

<211> 653<211> 653

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 156<400> 156

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValTyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrAla Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerLeu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val SerGly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser

130 135 140 130 135 140

Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser SerGly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro GlyAsp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly

165 170 175 165 170 175

Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser GlyLys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly

180 185 190 180 185 190

Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr LeuVal Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu

195 200 205 195 200 205

Thr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys SerThr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser

210 215 220 210 215 220

Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys ValSer Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Val Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro AlaThr Val Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala

245 250 255 245 250 255

Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro LysPro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

260 265 270 260 265 270

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val ValAsp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

275 280 285 275 280 285

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val AspAsp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

290 295 300 290 295 300

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln PheGly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

305 310 315 320 305 310 315 320

Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln AspGln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

325 330 335 325 330 335

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly LeuTrp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

340 345 350 340 345 350

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro ArgPro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

355 360 365 355 360 365

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr LysGlu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

370 375 380 370 375 380

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser AspAsn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr LysIle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

405 410 415 405 410 415

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr SerThr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

420 425 430 420 425 430

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe SerArg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

435 440 445 435 440 445

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys SerCys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

450 455 460 450 455 460

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val GlyLeu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly

465 470 475 480 465 470 475 480

Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile IleGly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile

485 490 495 485 490 495

Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys GlnPhe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln

500 505 510 500 505 510

Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys SerPro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser

515 520 525 515 520 525

Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val LysCys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys

530 535 540 530 535 540

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn GlnPhe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

545 550 555 560 545 550 555 560

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val LeuLeu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

565 570 575 565 570 575

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg ArgAsp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

580 585 590 580 585 590

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys MetLys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

595 600 605 595 600 605

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg GlyAla Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

610 615 620 610 615 620

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys AspLys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

625 630 635 640 625 630 635 640

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 645 650

<210> 157<210> 157

<211> 650<211> 650

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 157<400> 157

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly ArgGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Phe Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala AlaGly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala

50 55 60 50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser IleSer Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val TyrAla Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95 85 90 95

Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrTyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerLeu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe LeuGly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu

130 135 140 130 135 140

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser GlnSer Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln

145 150 155 160 145 150 155 160

Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn AlaGly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala

165 170 175 165 170 175

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val ProPro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro

180 185 190 180 185 190

Ser Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr IleSer Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile

195 200 205 195 200 205

Asp Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln SerAsp Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser

210 215 220 210 215 220

Tyr Thr Ser Arg Gln Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile LysTyr Thr Ser Arg Gln Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro ValGlu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val

245 250 255 245 250 255

Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr LeuAla Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

260 265 270 260 265 270

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerMet Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

275 280 285 275 280 285

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val GluGln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

290 295 300 290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser ThrVal His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu AsnTyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

325 330 335 325 330 335

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser SerGly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

340 345 350 340 345 350

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GlnIle Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

355 360 365 355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln ValVal Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

370 375 380 370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValSer Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr ProGlu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

405 410 415 405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu ThrPro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

420 425 430 420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser ValVal Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

435 440 445 435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser LeuMet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

450 455 460 450 455 460

Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val LeuSer Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu

465 470 475 480 465 470 475 480

Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp ValAla Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val

485 490 495 485 490 495

Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe MetLys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met

500 505 510 500 505 510

Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg PheArg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe

515 520 525 515 520 525

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser ArgPro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg

530 535 540 530 535 540

Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr AsnSer Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn

545 550 555 560 545 550 555 560

Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys ArgGlu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg

565 570 575 565 570 575

Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn ProArg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro

580 585 590 580 585 590

Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu AlaGln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala

595 600 605 595 600 605

Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly HisTyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His

610 615 620 610 615 620

Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr AspAsp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp

625 630 635 640 625 630 635 640

Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAla Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 645 650

<210> 158<210> 158

<211> 651<211> 651

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 158<400> 158

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValTyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly ThrAla Lys Val Asp Gly Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerMet Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val SerGly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser

130 135 140 130 135 140

Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn IleVal Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile

145 150 155 160 145 150 155 160

Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala ProGly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

165 170 175 165 170 175

Met Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro GluMet Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205 195 200 205

Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp AspGly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp

210 215 220 210 215 220

Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr ValArg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro ProLeu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro

245 250 255 245 250 255

Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp ThrVal Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

260 265 270 260 265 270

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp ValLeu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

275 280 285 275 280 285

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly ValSer Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

290 295 300 290 295 300

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln SerGlu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser

305 310 315 320 305 310 315 320

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp LeuThr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

325 330 335 325 330 335

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro SerAsn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

340 345 350 340 345 350

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu ProSer Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

355 360 365 355 360 365

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn GlnGln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

370 375 380 370 375 380

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile AlaVal Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

385 390 395 400 385 390 395 400

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr ThrVal Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

405 410 415 405 410 415

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg LeuPro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

420 425 430 420 425 430

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys SerThr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

435 440 445 435 440 445

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu SerVal Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

450 455 460 450 455 460

Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly ValLeu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val

465 470 475 480 465 470 475 480

Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe TrpLeu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp

485 490 495 485 490 495

Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro PheVal Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe

500 505 510 500 505 510

Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys ArgMet Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg

515 520 525 515 520 525

Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe SerPhe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser

530 535 540 530 535 540

Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu TyrArg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr

545 550 555 560 545 550 555 560

Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp LysAsn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys

565 570 575 565 570 575

Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys AsnArg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn

580 585 590 580 585 590

Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala GluPro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu

595 600 605 595 600 605

Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys GlyAla Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly

610 615 620 610 615 620

His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr TyrHis Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr

625 630 635 640 625 630 635 640

Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAsp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 645 650

<210> 159<210> 159

<211> 658<211> 658

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 159<400> 159

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly GlnSer Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser HisArg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His

20 25 30 20 25 30

Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu LeuSer Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu GlnGly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly SerAsn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser

100 105 110 100 105 110

Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly SerArg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125 115 120 125

Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val LysLeu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys

130 135 140 130 135 140

Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr SerLys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys GlyPhe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly

165 170 175 165 170 175

Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg TyrLeu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr

180 185 190 180 185 190

Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser IleSer Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile

195 200 205 195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr AlaSer Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala

210 215 220 210 215 220

Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly GlnMet Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro CysGly Thr Leu Val Thr Val Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

245 250 255 245 250 255

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu PhePro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

260 265 270 260 265 270

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu ValPro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

275 280 285 275 280 285

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln PheThr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe

290 295 300 290 295 300

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys ProAsn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

305 310 315 320 305 310 315 320

Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu ThrArg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

325 330 335 325 330 335

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys ValVal Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

340 345 350 340 345 350

Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys AlaSer Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

355 360 365 355 360 365

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser GlnLys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

370 375 380 370 375 380

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys GlyGlu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln ProPhe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

405 410 415 405 410 415

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly SerGlu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

420 425 430 420 425 430

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln GluPhe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

435 440 445 435 440 445

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn HisGly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

450 455 460 450 455 460

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp ValTyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val

465 470 475 480 465 470 475 480

Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val ThrLeu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr

485 490 495 485 490 495

Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu LeuVal Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

500 505 510 500 505 510

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln GluTyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

515 520 525 515 520 525

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly CysGlu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

530 535 540 530 535 540

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr GlnGlu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

545 550 555 560 545 550 555 560

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

565 570 575 565 570 575

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

580 585 590 580 585 590

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

595 600 605 595 600 605

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

610 615 620 610 615 620

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

625 630 635 640 625 630 635 640

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

645 650 655 645 650 655

Pro ArgPro Arg

<210> 160<210> 160

<211> 654<211> 654

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 160<400> 160

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly GlnGln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp TyrSer Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30 20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp SerGln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45 35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser GlyLys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu AlaAsn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe GlyAsp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95 85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly SerGly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu ValGly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser LeuGln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr ValLys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly TrpTyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175 165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln GlyIle Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met GluArg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205 195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala ArgLeu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220 210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu ValSer Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys ProThr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255 245 250 255

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys ProAla Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

260 265 270 260 265 270

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val ValLys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

275 280 285 275 280 285

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr ValVal Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

290 295 300 290 295 300

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GlnAsp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

305 310 315 320 305 310 315 320

Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His GlnPhe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

325 330 335 325 330 335

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys GlyAsp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln ProLeu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

355 360 365 355 360 365

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met ThrArg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

370 375 380 370 375 380

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro SerLys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn TyrAsp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

405 410 415 405 410 415

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu TyrLys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

420 425 430 420 425 430

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val PheSer Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

435 440 445 435 440 445

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln LysSer Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

450 455 460 450 455 460

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val ValSer Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val

465 470 475 480 465 470 475 480

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe IleGly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

485 490 495 485 490 495

Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe LysIle Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

500 505 510 500 505 510

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly CysGln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

515 520 525 515 520 525

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg ValSer Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

530 535 540 530 535 540

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln AsnLys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn

545 550 555 560 545 550 555 560

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp ValGln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

565 570 575 565 570 575

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro ArgLeu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

580 585 590 580 585 590

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp LysArg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

595 600 605 595 600 605

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg ArgMet Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

610 615 620 610 615 620

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr LysGly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

625 630 635 640 625 630 635 640

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAsp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 645 650

<210> 161<210> 161

<211> 653<211> 653

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 161<400> 161

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly GlnGln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp TyrSer Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr

20 25 30 20 25 30

Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp SerGln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser

35 40 45 35 40 45

Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser GlyLys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu AlaAsn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe GlyAsp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly

85 90 95 85 90 95

Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly SerGly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110 100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu ValGly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser LeuGln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu

130 135 140 130 135 140

Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr ValLys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly TrpTyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp

165 170 175 165 170 175

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln GlyIle Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly

180 185 190 180 185 190

Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met GluArg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu

195 200 205 195 200 205

Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala ArgLeu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg

210 215 220 210 215 220

Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu ValSer Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys ProThr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro

245 250 255 245 250 255

Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys ProAla Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

260 265 270 260 265 270

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val ValLys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

275 280 285 275 280 285

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr ValVal Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

290 295 300 290 295 300

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GlnAsp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

305 310 315 320 305 310 315 320

Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His GlnPhe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

325 330 335 325 330 335

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys GlyAsp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln ProLeu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

355 360 365 355 360 365

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met ThrArg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

370 375 380 370 375 380

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro SerLys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn TyrAsp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

405 410 415 405 410 415

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu TyrLys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

420 425 430 420 425 430

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val PheSer Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

435 440 445 435 440 445

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln LysSer Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

450 455 460 450 455 460

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val ValSer Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val

465 470 475 480 465 470 475 480

Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe IleGly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile

485 490 495 485 490 495

Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp TyrIle Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr

500 505 510 500 505 510

Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr GlnMet Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln

515 520 525 515 520 525

Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val LysPro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys

530 535 540 530 535 540

Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn GlnPhe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln

545 550 555 560 545 550 555 560

Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val LeuLeu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu

565 570 575 565 570 575

Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg ArgAsp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg

580 585 590 580 585 590

Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys MetLys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met

595 600 605 595 600 605

Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg GlyAla Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly

610 615 620 610 615 620

Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys AspLys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp

625 630 635 640 625 630 635 640

Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 645 650

<210> 162<210> 162

<211> 462<211> 462

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 162<400> 162

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn HisSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val LysSer Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr LeuGly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys SerGln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95 85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val ThrAla His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110 100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser GlyVal Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu SerGly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln SerAla Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala ProIle Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro

165 170 175 165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro SerLys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile SerArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

195 200 205 195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser TyrSer Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr

210 215 220 210 215 220

Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys ThrSer Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala SerThr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

245 250 255 245 250 255

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly GlyGln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

260 265 270 260 265 270

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile TrpAla Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

275 280 285 275 280 285

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val IleAla Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

290 295 300 290 295 300

Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe LysThr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly CysGln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

325 330 335 325 330 335

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg ValSer Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

340 345 350 340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln AsnLys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn

355 360 365 355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp ValGln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380 370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro ArgLeu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp LysArg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg ArgMet Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430 420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr LysGly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445 435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAsp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 163<210> 163

<211> 469<211> 469

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 163<400> 163

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly ArgGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp ValAla Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gly Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Gly Ile Ser Arg Ser Gly Glu Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly GlnAla Arg Ser Pro Ala His Tyr Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser GlyGly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln SerGly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser

130 135 140 130 135 140

Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser CysPro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys

145 150 155 160 145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln GlnArg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln

165 170 175 165 170 175

Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Arg ArgLys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Arg

180 185 190 180 185 190

Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr AspAla Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

195 200 205 195 200 205

Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ser Ala Val TyrPhe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr

210 215 220 210 215 220

Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly Gln GlyTyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro ThrThr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

245 250 255 245 250 255

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu AlaPro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

260 265 270 260 265 270

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp PheCys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

275 280 285 275 280 285

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly ValAla Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

290 295 300 290 295 300

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg LysLeu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln ThrLys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

325 330 335 325 330 335

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu GluThr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

340 345 350 340 345 350

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala ProGly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

355 360 365 355 360 365

Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu GlyAla Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

370 375 380 370 375 380

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp ProArg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu TyrGlu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

405 410 415 405 410 415

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile GlyAsn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

420 425 430 420 425 430

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr GlnMet Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

435 440 445 435 440 445

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met GlnGly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

450 455 460 450 455 460

Ala Leu Pro Pro ArgAla Leu Pro Pro Arg

465 465

<210> 164<210> 164

<211> 462<211> 462

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 164<400> 164

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn HisSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val LysSer Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr LeuGly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys SerGln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95 85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val ThrAla His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110 100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser GlyVal Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu SerGly Gly Gly Ser Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu AspAla Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Ile Asn Lys Phe Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala ProIle Asn Lys Phe Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro

165 170 175 165 170 175

Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro SerLys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile AsnArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

195 200 205 195 200 205

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr GluSer Leu Gln Pro Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu

210 215 220 210 215 220

Ser Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys ThrSer Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala SerThr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser

245 250 255 245 250 255

Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly GlyGln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly

260 265 270 260 265 270

Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile TrpAla Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp

275 280 285 275 280 285

Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val IleAla Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile

290 295 300 290 295 300

Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe LysThr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly CysGln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys

325 330 335 325 330 335

Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg ValSer Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val

340 345 350 340 345 350

Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln AsnLys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn

355 360 365 355 360 365

Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp ValGln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val

370 375 380 370 375 380

Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro ArgLeu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp LysArg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg ArgMet Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg

420 425 430 420 425 430

Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr LysGly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys

435 440 445 435 440 445

Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgAsp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 165<210> 165

<211> 464<211> 464

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 165<400> 165

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn HisSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Ala Leu Ser Asn His

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValGly Met Ser Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val LysSer Gly Ile Val Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr LeuGly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys SerGln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser

85 90 95 85 90 95

Ala His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val ThrAla His Gly Gly Glu Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110 100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser GlyVal Ser Ser Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu SerGly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln SerLeu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Ile Gly Ser Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln AlaIle Gly Ser Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

165 170 175 165 170 175

Pro Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile ProPro Arg Leu Leu Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro

180 185 190 180 185 190

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr IleAsp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

195 200 205 195 200 205

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln TyrSer Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

210 215 220 210 215 220

Ala Gly Ser Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu IleAla Gly Ser Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

225 230 235 240 225 230 235 240

Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr IleLys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile

245 250 255 245 250 255

Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala AlaAla Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala

260 265 270 260 265 270

Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile TyrGly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr

275 280 285 275 280 285

Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser LeuIle Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu

290 295 300 290 295 300

Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr IleVal Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile

305 310 315 320 305 310 315 320

Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu AspPhe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp

325 330 335 325 330 335

Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu LeuGly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu

340 345 350 340 345 350

Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln GlyArg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly

355 360 365 355 360 365

Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu TyrGln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr

370 375 380 370 375 380

Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly LysAsp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys

385 390 395 400 385 390 395 400

Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln LysPro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys

405 410 415 405 410 415

Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu ArgAsp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg

420 425 430 420 425 430

Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr AlaArg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala

435 440 445 435 440 445

Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgThr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

450 455 460 450 455 460

<210> 166<210> 166

<211> 467<211> 467

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 166<400> 166

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn PheThr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe

20 25 30 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp MetGly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp PheAla Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala TyrLys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe CysLeu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr TrpAla Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser GlyGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln SerGly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser

130 135 140 130 135 140

His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr CysHis Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys

145 150 155 160 145 150 155 160

Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln LysArg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys

165 170 175 165 170 175

Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ser Ala Ser Tyr Arg TyrPro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr

180 185 190 180 185 190

Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp PheThr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe

195 200 205 195 200 205

Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr TyrThr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr

210 215 220 210 215 220

Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr LysCys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro AlaLeu Asp Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala

245 250 255 245 250 255

Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys ArgPro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg

260 265 270 260 265 270

Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala CysPro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys

275 280 285 275 280 285

Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu LeuAsp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu

290 295 300 290 295 300

Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys LeuLeu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr GlnLeu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln

325 330 335 325 330 335

Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly GlyGlu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly

340 345 350 340 345 350

Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala TyrCys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr

355 360 365 355 360 365

Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg ArgLys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg

370 375 380 370 375 380

Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu MetGlu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn GluGly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu

405 410 415 405 410 415

Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met LysLeu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys

420 425 430 420 425 430

Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly LeuGly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu

435 440 445 435 440 445

Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala LeuSer Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu

450 455 460 450 455 460

Pro Pro ArgPro Pro Arg

465 465

<210> 167<210> 167

<211> 472<211> 472

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 167<400> 167

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp TyrThr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp MetSer Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp PheGly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala TyrArg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe CysLeu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr SerAla Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser GlyVal Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu LysGly Gly Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys

130 135 140 130 135 140

Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr ThrLys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr

145 150 155 160 145 150 155 160

Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys GlyPhe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly

165 170 175 165 170 175

Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala TyrLeu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr

180 185 190 180 185 190

Ala Tyr Asp Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser AlaAla Tyr Asp Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala

195 200 205 195 200 205

Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr AlaSer Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala

210 215 220 210 215 220

Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp GlyThr Tyr Phe Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro ArgGln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg

245 250 255 245 250 255

Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu ArgPro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg GlyPro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly

275 280 285 275 280 285

Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly ThrLeu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

290 295 300 290 295 300

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys ArgCys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

305 310 315 320 305 310 315 320

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg ProGly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

325 330 335 325 330 335

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro GluVal Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

340 345 350 340 345 350

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser AlaGlu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

355 360 365 355 360 365

Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu LeuAsp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

370 375 380 370 375 380

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg GlyAsn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln GluArg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

405 410 415 405 410 415

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr SerGly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

420 425 430 420 425 430

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp GlyGlu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

435 440 445 435 440 445

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala LeuLeu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

450 455 460 450 455 460

His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgHis Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

465 470 465 470

<210> 168<210> 168

<211> 466<211> 466

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 168<400> 168

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp TyrThr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp MetSer Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp PheGly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala TyrArg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe CysLeu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr SerAla Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser GlyVal Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu AlaGly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala

130 135 140 130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu SerMet Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys ProVal Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175 165 170 175

Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu ThrGly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr

180 185 190 180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe ThrGly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

195 200 205 195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser CysLeu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys

210 215 220 210 215 220

Leu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys LeuLeu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240 225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala ProGlu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255 245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg ProThr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270 260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys AspAla Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285 275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu LeuIle Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300 290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu LeuSer Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln GluTyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335 325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly CysGlu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350 340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr LysGlu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365 355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380 370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415 405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430 420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445 435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460 450 455 460

Pro ArgPro Arg

465 465

<210> 169<210> 169

<211> 466<211> 466

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 169<400> 169

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His TyrThr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp MetSer Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp PheGly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala TyrLys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe CysLeu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr AlaSer Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala

100 105 110 100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser GlyLeu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu AlaGly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140 130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu SerMet Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys ProVal Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175 165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln ThrGly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190 180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe ThrGly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205 195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr CysLeu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220 210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys LeuLeu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240 225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala ProGlu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255 245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg ProThr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270 260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys AspAla Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285 275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu LeuIle Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300 290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu LeuSer Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln GluTyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335 325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly CysGlu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350 340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr LysGlu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365 355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380 370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415 405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430 420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445 435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460 450 455 460

Pro ArgPro Arg

465 465

<210> 170<210> 170

<211> 466<211> 466

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 170<400> 170

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly GluGln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His TyrThr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr

20 25 30 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp MetSer Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp PheGly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala TyrLys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe CysLeu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr ThrSer Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser GlyLeu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu AlaGly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala

130 135 140 130 135 140

Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu SerMet Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys ProVal Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

165 170 175 165 170 175

Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln ThrGly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr

180 185 190 180 185 190

Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe ThrGly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr

195 200 205 195 200 205

Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr CysLeu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220 210 215 220

Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys LeuLeu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

225 230 235 240 225 230 235 240

Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala ProGlu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro

245 250 255 245 250 255

Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg ProThr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro

260 265 270 260 265 270

Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys AspAla Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

275 280 285 275 280 285

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu LeuIle Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

290 295 300 290 295 300

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu LeuSer Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln GluTyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu

325 330 335 325 330 335

Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly CysGlu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys

340 345 350 340 345 350

Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr LysGlu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys

355 360 365 355 360 365

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

370 375 380 370 375 380

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

405 410 415 405 410 415

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

420 425 430 420 425 430

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

435 440 445 435 440 445

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

450 455 460 450 455 460

Pro ArgPro Arg

465 465

<210> 171<210> 171

<211> 482<211> 482

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 171<400> 171

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu GlyAsp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile LeuLys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu

20 25 30 20 25 30

Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro ProGly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro AlaThr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile AspArg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser ArgPro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg

85 90 95 85 90 95

Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys GlyThr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly

100 105 110 100 105 110

Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr LysSer Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys

115 120 125 115 120 125

Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro GlyGly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly

130 135 140 130 135 140

Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr AspGlu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys TrpTyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp

165 170 175 165 170 175

Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr AspMet Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp

180 185 190 180 185 190

Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr AlaPhe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala

195 200 205 195 200 205

Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr PheTyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe

210 215 220 210 215 220

Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrCys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Thr Val Ser Ser Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys ProSer Val Thr Val Ser Ser Phe Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro

245 250 255 245 250 255

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile AlaThr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

260 265 270 260 265 270

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala GlySer Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

275 280 285 275 280 285

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr IleGly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile

290 295 300 290 295 300

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu ValTrp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

305 310 315 320 305 310 315 320

Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg LeuIle Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu

325 330 335 325 330 335

Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro ThrLeu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr

340 345 350 340 345 350

Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala TyrArg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr

355 360 365 355 360 365

Arg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr GlnArg Ser Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln

370 375 380 370 375 380

Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg GluGln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met GlyGlu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly

405 410 415 405 410 415

Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu LeuGly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu

420 425 430 420 425 430

Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys GlyGln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly

435 440 445 435 440 445

Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu SerGlu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser

450 455 460 450 455 460

Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu ProThr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro

465 470 475 480 465 470 475 480

Pro ArgPro Arg

<210> 172<210> 172

<211> 440<211> 440

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 172<400> 172

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlyThr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu SerSer Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser SerLeu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr LeuGln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser AsnGln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly ThrArg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205 195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly IleAsp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln GlyTyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser PheThr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe

245 250 255 245 250 255

Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly ThrPhe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

260 265 270 260 265 270

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys ArgCys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

275 280 285 275 280 285

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg ProGly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

290 295 300 290 295 300

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro GluVal Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser AlaGlu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

325 330 335 325 330 335

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu LeuAsp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

340 345 350 340 345 350

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg GlyAsn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

355 360 365 355 360 365

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln GluArg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

370 375 380 370 375 380

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr SerGly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp GlyGlu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

405 410 415 405 410 415

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala LeuLeu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

420 425 430 420 425 430

His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgHis Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

435 440 435 440

<210> 173<210> 173

<211> 469<211> 469

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 173<400> 173

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlyThr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu SerSer Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser SerLeu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr LeuGln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser AsnGln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly ThrArg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205 195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly IleAsp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln GlyTyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro ThrThr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

245 250 255 245 250 255

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu AlaPro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

260 265 270 260 265 270

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp PheCys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

275 280 285 275 280 285

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly ValAla Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

290 295 300 290 295 300

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg LysLeu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln ThrLys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

325 330 335 325 330 335

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu GluThr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

340 345 350 340 345 350

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala ProGly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

355 360 365 355 360 365

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu GlyAla Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

370 375 380 370 375 380

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp ProArg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu TyrGlu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

405 410 415 405 410 415

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile GlyAsn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

420 425 430 420 425 430

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr GlnMet Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

435 440 445 435 440 445

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met GlnGly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

450 455 460 450 455 460

Ala Leu Pro Pro ArgAla Leu Pro Pro Arg

465 465

<210> 174<210> 174

<211> 655<211> 655

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 174<400> 174

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlyThr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu SerSer Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser SerLeu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr LeuGln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser AsnGln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly ThrArg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

195 200 205 195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly IleAsp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln GlyTyr Tyr Cys Ser Gln Ser Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His ThrThr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr

245 250 255 245 250 255

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe LeuCys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

260 265 270 260 265 270

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro GluPhe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu

275 280 285 275 280 285

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val LysVal Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

290 295 300 290 295 300

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr LysPhe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val LeuPro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

325 330 335 325 330 335

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys LysThr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

340 345 350 340 345 350

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser LysVal Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

355 360 365 355 360 365

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro SerAla Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

370 375 380 370 375 380

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val LysArg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly GlnGly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

405 410 415 405 410 415

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp GlyPro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

420 425 430 420 425 430

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp GlnSer Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

435 440 445 435 440 445

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His AsnGln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

450 455 460 450 455 460

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr IleHis Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile

465 470 475 480 465 470 475 480

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu ValTrp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

485 490 495 485 490 495

Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile PheIle Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

500 505 510 500 505 510

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp GlyLys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

515 520 525 515 520 525

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu ArgCys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

530 535 540 530 535 540

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly GlnVal Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

545 550 555 560 545 550 555 560

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr AspAsn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

565 570 575 565 570 575

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys ProVal Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

580 585 590 580 585 590

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys AspArg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

595 600 605 595 600 605

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg ArgLys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

610 615 620 610 615 620

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala ThrArg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

625 630 635 640 625 630 635 640

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgLys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 655 645 650 655

<210> 175<210> 175

<211> 440<211> 440

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 175<400> 175

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlyThr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu SerSer Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser SerLeu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr LeuGln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser AsnGln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly AlaArg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala

195 200 205 195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly ValAsp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln GlyTyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser PheThr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe

245 250 255 245 250 255

Phe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly ThrPhe Pro Pro Gly Tyr Gln Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr

260 265 270 260 265 270

Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys ArgCys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg

275 280 285 275 280 285

Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg ProGly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro

290 295 300 290 295 300

Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro GluVal Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser AlaGlu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala

325 330 335 325 330 335

Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu LeuAsp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu

340 345 350 340 345 350

Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg GlyAsn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly

355 360 365 355 360 365

Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln GluArg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu

370 375 380 370 375 380

Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr SerGly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp GlyGlu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly

405 410 415 405 410 415

Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala LeuLeu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu

420 425 430 420 425 430

His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgHis Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

435 440 435 440

<210> 176<210> 176

<211> 469<211> 469

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 176<400> 176

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlyThr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu SerSer Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser SerLeu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr LeuGln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser AsnGln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly AlaArg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala

195 200 205 195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly ValAsp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln GlyTyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro ThrThr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr

245 250 255 245 250 255

Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu AlaPro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala

260 265 270 260 265 270

Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp PheCys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe

275 280 285 275 280 285

Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly ValAla Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val

290 295 300 290 295 300

Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg LysLeu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln ThrLys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr

325 330 335 325 330 335

Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu GluThr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu

340 345 350 340 345 350

Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala ProGly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro

355 360 365 355 360 365

Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu GlyAla Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly

370 375 380 370 375 380

Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp ProArg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro

385 390 395 400 385 390 395 400

Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu TyrGlu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr

405 410 415 405 410 415

Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile GlyAsn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly

420 425 430 420 425 430

Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr GlnMet Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln

435 440 445 435 440 445

Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met GlnGly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln

450 455 460 450 455 460

Ala Leu Pro Pro ArgAla Leu Pro Pro Arg

465 465

<210> 177<210> 177

<211> 655<211> 655

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> CAR анти-BCMA<223> CAR anti-BCMA

<400> 177<400> 177

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly AlaGln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Pro Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetTyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys PheGly Trp Ile Tyr Phe Ala Ser Gly Asn Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala TyrThr Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln GlyAla Ser Leu Tyr Asp Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly GlyThr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu SerSer Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser

130 135 140 130 135 140

Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser SerLeu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr LeuGln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser AsnGln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn

180 185 190 180 185 190

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly AlaArg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala

195 200 205 195 200 205

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly ValAsp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

210 215 220 210 215 220

Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln GlyTyr Tyr Cys Ala Glu Thr Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly

225 230 235 240 225 230 235 240

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His ThrThr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Pro Asp Lys Thr His Thr

245 250 255 245 250 255

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe LeuCys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu

260 265 270 260 265 270

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro GluPhe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ala Arg Thr Pro Glu

275 280 285 275 280 285

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val LysVal Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

290 295 300 290 295 300

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr LysPhe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val LeuPro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

325 330 335 325 330 335

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys LysThr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

340 345 350 340 345 350

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser LysVal Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

355 360 365 355 360 365

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro SerAla Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

370 375 380 370 375 380

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val LysArg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly GlnGly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

405 410 415 405 410 415

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp GlyPro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

420 425 430 420 425 430

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp GlnSer Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

435 440 445 435 440 445

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His AsnGln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

450 455 460 450 455 460

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr IleHis Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ile Tyr Ile

465 470 475 480 465 470 475 480

Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu ValTrp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val

485 490 495 485 490 495

Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile PheIle Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe

500 505 510 500 505 510

Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp GlyLys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly

515 520 525 515 520 525

Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu ArgCys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg

530 535 540 530 535 540

Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly GlnVal Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln

545 550 555 560 545 550 555 560

Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr AspAsn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp

565 570 575 565 570 575

Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys ProVal Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro

580 585 590 580 585 590

Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys AspArg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp

595 600 605 595 600 605

Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg ArgLys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg

610 615 620 610 615 620

Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala ThrArg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr

625 630 635 640 625 630 635 640

Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro ArgLys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg

645 650 655 645 650 655

<210> 178<210> 178

<211> 28<211> 28

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> TM CD8a<223>TM CD8a

<400> 178<400> 178

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu LeuIle Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg AsnSer Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His Arg Asn

20 25 20 25

<210> 179<210> 179

<211> 21<211> 21

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> TM CD8a<223>TM CD8a

<400> 179<400> 179

Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu LeuIle Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Val Ile ThrSer Leu Val Ile Thr

20 twenty

<210> 180<210> 180

<211> 4<211> 4

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> связывающий пептид<223> binding peptide

<400> 180<400> 180

Arg Ala Ala AlaArg Ala Ala Ala

1 one

<210> 181<210> 181

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 181<400> 181

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValTyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrAla Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser SerLeu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 182<210> 182

<211> 110<211> 110

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 182<400> 182

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly GlnGln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys TyrSer Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys LeuAsn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg PheIle Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly LeuSer Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly SerGln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser

85 90 95 85 90 95

Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val LeuArg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110 100 105 110

<210> 183<210> 183

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 183<400> 183

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly ArgGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValAla Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala AlaGly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala

50 55 60 50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser IleSer Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val TyrAla Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95 85 90 95

Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrTyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser SerLeu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 184<210> 184

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 184<400> 184

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Ala Ser Val GlyAsp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn TyrAsp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu IleLeu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg GlyTyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly

50 55 60 50 55 60

Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln ProThr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg GlnGlu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg Gln

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile LysThr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys

100 105 100 105

<210> 185<210> 185

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 185<400> 185

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly GlyGlu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp TyrSer Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp ValTyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser ValSer Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu TyrLys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysLeu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly ThrAla Lys Val Asp Gly Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Met Val Thr Val Ser SerMet Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 186<210> 186

<211> 108<211> 108

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 186<400> 186

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly GlnSer Tyr Val Leu Thr Gln Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser ValThr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30 20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val TyrHis Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr

35 40 45 35 40 45

Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly SerAsp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala GlyAsn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp HisAsp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His

85 90 95 85 90 95

Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val LeuTyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 100 105

<210> 187<210> 187

<211> 122<211> 122

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная тяжелая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable heavy chain

<400> 187<400> 187

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly SerGlu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser TyrSer Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp MetAla Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys PheGly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala TyrGln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysMet Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr Met Asp Tyr TrpAla Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr Met Asp Tyr Trp

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser SerGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 188<210> 188

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Вариабельная легкая цепь анти-BCMA<223> Anti-BCMA variable light chain

<400> 188<400> 188

Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Thr Ser Gly Thr Pro Gly GlnLeu Pro Val Leu Thr Gln Pro Ser Thr Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser AsnArg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30 20 25 30

Val Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu ValVal Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe SerIle Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Val Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu ArgVal Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser LeuSer Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95 85 90 95

Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu GlySer Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 189<210> 189

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212> PRT

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Линкер<223> Linker

<400> 189<400> 189

Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly GlyAla Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Arg Ala Ser Gly Gly Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

SerSer

<---<---

Claims (102)

1. Способ лечения, где способ включает:1. A method of treatment, where the method includes: (a) введение Т–клеточной терапии субъекту, имеющему рак, где T-клеточная терапия включает генно–инженерные Т-лимфоциты, экспрессирующие химерный рецептор антигена (CAR), который специфически связывается с антигеном, связанным с раком; и(a) administering a T cell therapy to a subject having cancer, wherein the T cell therapy comprises engineered T lymphocytes expressing a chimeric antigen receptor (CAR) that specifically binds to an antigen associated with cancer; and (b) введение субъекту иммуномодуляторного соединения, которое облегчает деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3), где начало введения указанного иммуномодуляторного соединения осуществляют по меньшей мере через два дня после начала введения Т-клеточной терапии.(b) administering to the subject an immunomodulatory compound that facilitates the degradation of Ikaros (IKZF1) and/or Aiolos (IKZF3), wherein the start of administration of said immunomodulatory compound is at least two days after the start of administration of T cell therapy. 2. Способ лечения, где способ включает введение иммуномодуляторного соединения, которое облегчает деградацию Ikaros (IKZF1) и/или Aiolos (IKZF3), субъекту, имеющему рак, где:2. A method of treatment, wherein the method comprises administering an immunomodulatory compound that facilitates the degradation of Ikaros (IKZF1) and/or Aiolos (IKZF3) to a subject having cancer, wherein: в момент начала введения иммуномодуляторного соединения субъекту уже ранее вводилась Т–клеточная терапия для лечения рака, где T-клеточная терапия включает генно–инженерные Т-лимфоциты, экспрессирующие химерный антигенный рецептор (CAR), который специфически связывается с антигеном, связанным с раком; и at the time of initiation of administration of the immunomodulatory compound, the subject has previously received T-cell therapy for the treatment of cancer, wherein the T-cell therapy comprises engineered T-lymphocytes expressing a chimeric antigen receptor (CAR) that specifically binds to an antigen associated with cancer; and начало введения указанного иммуномодуляторного соединения осуществляется по меньшей мере через два дня после начала введения T-клеточной терапии.the beginning of the introduction of the specified immunomodulatory compounds is carried out at least two days after the start of the introduction of T-cell therapy. 3. Способ по п. 1 или 2, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется через промежуток времени, который больше чем 14 дней, 15 дней, 16 дней, 17 дней, 18 дней, 19, дней, 20 дней, 21 дней, 24 дней или 28 дней после начала введения Т–клеточной терапии.3. The method according to claim 1 or 2, in which the start of administration of the immunomodulatory compound is carried out after a period of time that is more than 14 days, 15 days, 16 days, 17 days, 18 days, 19 days, 20 days, 21 days, 24 days or 28 days after the start of T-cell therapy. 4. Способ по любому из пп. 1–3, в котором рак не поддается лечению или является резистентным к иммуномодуляторному соединению.4. The method according to any one of paragraphs. 1-3, in which the cancer is untreatable or resistant to an immunomodulatory compound. 5. Способ по любому из пп. 1–4, где рак становится не поддающимся лечению или резистентным к иммуномодуляторному соединению после лечения иммуномодуляторным соединением. 5. The method according to any one of paragraphs. 1-4, where the cancer becomes untreatable or resistant to the immunomodulatory compound after treatment with the immunomodulatory compound. 6. Способ по любому из пп. 1–5, где субъект или рак имеет мутацию или фактор, придающий раку резистентность к лечению иммуномодуляторным соединением.6. The method according to any one of paragraphs. 1-5, wherein the subject or cancer has a mutation or factor that renders the cancer resistant to treatment with an immunomodulatory compound. 7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется по меньшей мере через 1 неделю, по меньшей мере через 2 недели, по меньшей мере через 3 недели или по меньшей мере через 4 недели после начала введения Т–клеточной терапии.7. The method according to any one of paragraphs. 1-6, wherein the start of administration of the immunomodulatory compound is at least 1 week, at least 2 weeks, at least 3 weeks, or at least 4 weeks after the start of T cell therapy. 8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется в течение 96 часов, 4 дней, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 14 дней, 15 дней, 21 дня, 24 дней, 28 дней, 30 дней, 36 дней, 42 дней, 60 дней, 72 дней или через 90 дней после начала введения T-клеточной терапии.8. The method according to any one of paragraphs. 1-7, in which the start of administration of the immunomodulatory compound is within 96 hours, 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 14 days, 15 days, 21 days, 24 days, 28 days, 30 days, 36 days, 42 days, 60 days, 72 days, or 90 days after the start of T-cell therapy. 9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляют от 2 до 28 дней после начала введения T-клеточной терапии.9. The method according to any one of paragraphs. 1-8, wherein the start of the administration of the immunomodulatory compound is from 2 to 28 days after the start of the administration of the T-cell therapy. 10. Способ по любому из пп. 1-9, в котором начало введения иммуномодуляторного соединения осуществляется от 7 до 21 дня после начала введения T-клеточной терапии.10. The method according to any one of paragraphs. 1-9, in which the start of the administration of the immunomodulatory compound is from 7 to 21 days after the start of the administration of T-cell therapy. 11. Способ по любому из пп. 1–10, в котором иммуномодуляторное соединение вводится ежедневно в течение более 7 последовательных дней, более 14 последовательных дней, более 21 последовательного дня или более 28 последовательных дней.11. The method according to any one of paragraphs. 1-10, wherein the immunomodulatory compound is administered daily for more than 7 consecutive days, more than 14 consecutive days, more than 21 consecutive days, or more than 28 consecutive days. 12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором иммуномодуляторное соединение вводят ежедневно до 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более 30 дней подряд.12. The method according to any one of paragraphs. 1-11, wherein the immunomodulatory compound is administered daily until 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 , 27, 28, 29, 30 or more than 30 consecutive days. 13. Способ по любому из пп. 1–12, в котором введение иммуномодуляторного соединения продолжается по меньшей мере от момента после начала введения Т–клеточной терапии до тех пор, пока:13. The method according to any one of paragraphs. 1-12, in which the administration of the immunomodulatory compound continues at least from the time after the start of the administration of T-cell therapy until: количество клеток от введенной Т–клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови субъекта, не увеличится по сравнению с количеством клеток субъекта в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения или по сравнению с предшествующим моментом времени после введения Т–клеточной терапии;the number of cells from or derived from the administered T-cell therapy detectable in the blood of the subject will not increase compared to the number of cells of the subject at the time immediately before the administration of the immunomodulatory compound or compared with the previous time after the administration of the T-cell therapy; количество клеток от Т–клеточной терапии или полученных из них, детектируемых в крови, не будет находиться в пределах 2,0–кратного (больше или меньше) пикового или максимального количества, наблюдаемого в крови субъекта после начала введения Т–клеточной терапии; the number of cells from or derived from T-cell therapy detectable in the blood will not be within 2.0 times (more or less) the peak or maximum number observed in the blood of the subject after the start of the introduction of T-cell therapy; количество клеток от Т–клеточной терапии, детектируемых в крови субъекта, не станет больше 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50% или 60% от общего количества мононуклеаров периферической крови (PBMC) в крови субъекта; the number of cells from T-cell therapy detected in the blood of the subject will not exceed 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, or 60% of the total number of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in the subject's blood; субъект не будет демонстрировать уменьшение массы опухоли по сравнению с массой опухоли в момент времени непосредственно до введения Т–клеточной терапии или в момент времени непосредственно до введения иммуномодуляторного соединения; и/или the subject will not show a reduction in tumor weight compared to tumor weight at the time immediately prior to administration of the T-cell therapy or at the time immediately prior to administration of the immunomodulatory compound; and/or субъект не продемонстрирует полную или клиническую ремиссию.the subject will not demonstrate complete or clinical remission. 14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой структурный аналог или производное талидомида.14. The method according to any one of paragraphs. 1-13, wherein the immunomodulatory compound is a structural analog or derivative of thalidomide. 15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:15. The method according to any one of paragraphs. 1-14, in which the immunomodulatory compound is a compound of the following formula:
Figure 00000019
, где
Figure 00000019
, where
один из X и Y представляет собой –C(O)– и другой из X и Y представляет собой –C(O)– или –CH2–;one of X and Y is -C(O)- and the other of X and Y is -C(O)- or -CH 2 -; (1) каждый из R1, R2, R3 и R4 независимо представляет собой галоген, алкил с 1–4 атомами углерода или алкокси из 1–4 атомов углерода, или(1) R 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are each independently halogen, C 1 -C 4 alkyl, or C 1 -C 4 alkoxy, or (2) один из R1, R2, R3 и R4 представляет собой –NHRa и остальные R1, R2, R3 и R4 представляют собой водород, где Ra представляет собой водород или алкил с 1–8 атомами углерода;(2) one of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 is -NHR a and the remaining R 1 , R 2 , R 3 and R 4 are hydrogen, where R a is hydrogen or alkyl from 1-8 carbon atoms; R5 представляет собой водород или алкил с 1–8 атомами углерода, бензил или галоген;R 5 is hydrogen or alkyl with 1-8 carbon atoms, benzyl or halogen; при условии, что R5 не является водородом, если X и Y представляют собой –C(O)–, и (i) каждый из R1, R2, R3 и R4 представляет собой фтор или (ii) один из R1, R2, R3 и R4 представляет собой амино;provided that R 5 is not hydrogen, if X and Y are –C(O)–, and (i) each of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 is fluoro or (ii) one of R 1 , R 2 , R 3 and R 4 is amino; или их фармацевтически приемлемую соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой соединение следующей формулы:16. The method according to any one of paragraphs. 1-15, in which the immunomodulatory compound is a compound of the following formula:
Figure 00000020
, где
Figure 00000020
, where
один из X и Y представляет собой –C(O)–, а другой из X и Y представляет собой –C(O)– или –CH2–, и one of X and Y is -C(O)- and the other of X and Y is -C(O)- or -CH 2 -, and R5 представляет собой водород или низший алкил, R 5 is hydrogen or lower alkyl, или его фармацевтически приемлемую соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 17. Способ по любому из пп. 1–14, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–дион, помалидомид, 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–дион, стереоизомер 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–диона, стереоизомер помалидомида, стереоизомер 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–диона или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, сокристалл, клатрат или полиморф.17. The method according to any one of paragraphs. 1-14, in which the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione, pomalidomide, 3-(5- amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione, stereoisomer 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindole-2 -yl)piperidin-2,6-dione, a stereoisomer of pomalidomide, a stereoisomer of 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidin-2,6-dione or a pharmaceutically acceptable thereof salt, solvate, hydrate, co-crystal, clathrate or polymorph. 18. Способ по любому из пп. 1–17, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–дион, или его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемую соль.18. The method according to any one of paragraphs. 1-17, in which the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione, or its stereoisomer, or its pharmaceutically acceptable salt. 19. Способ по любому из пп. 1–18, где иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(4–амино–1–оксо–1,3–дигидро–2H–изоиндол–2–ил)пиперидин–2,6–дион.19. The method according to any one of paragraphs. 1-18, where the immunomodulatory compound is 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydro-2H-isoindol-2-yl)piperidine-2,6-dione. 20. Способ по любому из пп. 1-17, где иммуномодуляторное соединение представляет собой помалидомид, или его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемую соль.20. The method according to any one of paragraphs. 1-17, where the immunomodulatory compound is pomalidomide, or a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 21. Способ по любому из пп. 1-17 и 20, где иммуномодуляторное соединение представляет собой помалидомид.21. The method according to any one of paragraphs. 1-17 and 20, where the immunomodulatory compound is pomalidomide. 22. Способ по любому из пп. 1–14 и 17, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–дион, или его стереоизомер, или его фармацевтически приемлемую соль.22. The method according to any one of paragraphs. 1-14 and 17, in which the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione, or its stereoisomer, or its a pharmaceutically acceptable salt. 23. Способ по любому из пп. 1–14, 17 и 22, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3–(5–амино–2–метил–4–оксо–4H–хиназолин–3–ил)–пиперидин–2,6–дион.23. The method according to any one of paragraphs. 1-14, 17 and 22, in which the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione. 24. Способ по любому из пп. 1-14, 17 и 22, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой гидрохлоридную соль 3-(5-амино-2-метил-4-оксо-4H-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона.24. The method according to any one of paragraphs. 1-14, 17 and 22, wherein the immunomodulatory compound is 3-(5-amino-2-methyl-4-oxo-4H-quinazolin-3-yl)-piperidine-2,6-dione hydrochloride salt. 25. Способ по любому из пп. 1-14, в котором иммуномодуляторное соединение представляет собой 3-[4-(4-морфолин-4-илметилбензилокси)-1-оксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил]-пиперидин-2,6-дион.25. The method according to any one of paragraphs. 1-14, wherein the immunomodulatory compound is 3-[4-(4-morpholin-4-ylmethylbenzyloxy)-1-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl]-piperidin-2,6-dione. 26. Способ по любому из пп. 1–25, в котором иммуномодуляторное соединение вводится перорально, подкожно или внутривенно.26. The method according to any one of paragraphs. 1-25, wherein the immunomodulatory compound is administered orally, subcutaneously, or intravenously. 27. Способ по любому из пп. 1-26, где иммуномодуляторное соединение вводится перорально. 27. The method according to any one of paragraphs. 1-26 wherein the immunomodulatory compound is administered orally. 28. Способ по любому из пп. 1–27, в котором иммуномодуляторное соединение вводится в капсуле или таблетке.28. The method according to any one of paragraphs. 1-27, wherein the immunomodulatory compound is administered in a capsule or tablet. 29. Способ по любому из пп. 1–28, в котором иммуномодуляторное соединение вводится в дозе от 0,1 мг до 100 мг, от 0,1 мг до 50 мг, от 0,1 мг до 25 мг, от 0,1 мг до 10 мг, от 0,1 мг до 5 мг, от 0,1 мг до 1 мг, от 1 мг до 100 мг, от 1 мг до 50 мг, от 1 мг до 25 мг, от 1 мг до 10 мг, от 1 мг до 5 мг, от 5 мг до 100 мг, от 5 мг до 50 мг, от 5 мг до 25 мг, от 5 мг до 10 мг, от 10 мг до 100 мг, от 10 мг до 50 мг, от 10 мг до 25 мг, от 25 мг до 100 мг, от 25 мг до 50 мг или от 50 мг до 100 мг, каждое значение включительно.29. The method according to any one of paragraphs. 1-28, wherein the immunomodulatory compound is administered at a dose of 0.1 mg to 100 mg, 0.1 mg to 50 mg, 0.1 mg to 25 mg, 0.1 mg to 10 mg, 0, 1 mg to 5 mg, 0.1 mg to 1 mg, 1 mg to 100 mg, 1 mg to 50 mg, 1 mg to 25 mg, 1 mg to 10 mg, 1 mg to 5 mg, 5 mg to 100 mg 5 mg to 50 mg 5 mg to 25 mg 5 mg to 10 mg 10 mg to 100 mg 10 mg to 50 mg 10 mg to 25 mg 25 mg to 100 mg, 25 mg to 50 mg, or 50 mg to 100 mg, each inclusive. 30. Способ по любому из пп. 1–29, в котором иммуномодуляторное соединение вводится один раз в день, два раза в день, три раза в день, четыре раза в день, пять раз в день или шесть раз в день.30. The method according to any one of paragraphs. 1-29, wherein the immunomodulatory compound is administered once a day, twice a day, three times a day, four times a day, five times a day, or six times a day. 31. Способ по любому из пп. 1–30, в котором иммуномодуляторное соединение вводится при общем ежедневном дозируемом количестве по меньшей мере 0,1 мг в день, 0,5 мг в день, 1,0 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 10 мг в день, 25 мг в день, 50 мг в день или 100 мг в день.31. The method according to any one of paragraphs. 1-30, wherein the immunomodulatory compound is administered at a total daily dosage amount of at least 0.1 mg per day, 0.5 mg per day, 1.0 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 10 mg per day, 25 mg per day, 50 mg per day, or 100 mg per day. 32. Способ по любому из пп. 1–31, в котором:32. The method according to any one of paragraphs. 1–31, in which: иммуномодуляторное соединение вводится в дозе больше 1 мг, 2,5 мг, 5 мг, 7,5 мг, 10 мг или 15 мг и меньше чем 25 мг.the immunomodulatory compound is administered at a dose greater than 1 mg, 2.5 mg, 5 mg, 7.5 mg, 10 mg or 15 mg and less than 25 mg. 33. Способ по любому из пп. 1–32, в котором:33. The method according to any one of paragraphs. 1–32, in which: иммуномодуляторное соединение вводится в дозе больше 1 мг в день, 2,5 мг в день, 5 мг в день, 7,5 мг в день, 10 мг в день или 15 мг в день и меньше 25 мг в день.the immunomodulatory compound is administered at a dose greater than 1 mg per day, 2.5 mg per day, 5 mg per day, 7.5 mg per day, 10 mg per day, or 15 mg per day and less than 25 mg per day. 34. Способ по любому из пп. 1–33, в котором CAR содержит внеклеточный домен, содержащий антигенсвязывающий домен, который специфично связывается с антигеном.34. The method according to any one of paragraphs. 1-33, in which CAR contains an extracellular domain containing an antigen-binding domain that specifically binds to an antigen. 35. Способ по любому из пп. 1-34, в котором антиген представляет собой опухолевый антиген.35. The method according to any one of paragraphs. 1-34, wherein the antigen is a tumor antigen. 36. Способ по любому из пп. 1-35, в котором антиген выбирают из ROR1, B–клеточного антигена созревания (BCMA), угольной ангидразы 9 (CAIX), Her2/neu (рецептора тирозинкиназы erbB2), L1–CAM, CD19, CD20, CD22, мезотелина CEA и поверхностного антигена гепатита B, рецептора анти–фолата, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, эпителиального гликопротеина 2 (EPG–2), эпителиального гликопротеина 40 (EPG–40), EPHa2, erb–B2, erb–B3, erb–B4, димеров erbB, EGFR vIII, фолатсвязывающего белка (FBP), FCRL5, FCRH5, рецептора фетального ацетилхолина, GD2, GD3, HMW–MAA, IL–22R–альфа, IL–13R–альфа2, рецептора, содержащего домен вставки киназы (kdr), легкой цепи каппа, антигена Ley, молекулы адгезии L1 клеток, (L1–CAM), антигена, ассоциированного с меланомой (MAGE)–A1, MAGE–A3, MAGE–A6, предпочтительно экспрессируемого антигена меланомы (PRAME), сурвивина, TAG72, B7–H6, рецептора альфа 2 IL–13 (IL–13Ra2), CA9, GD3, HMW–MAA, CD171, G250/CAIX, HLA–AI MAGE Al, HLA–A2 NY–ESO–1, PSCA, рецептора–а фолатов, CD44v6, CD44v7/8, интегрина avb6, 8H9, NCAM, рецепторов VEGF, 5T4, фетального AchR, лигандов NKG2D, CD44v6, двойного антигена, раково–тестикулярного антигена, мезотелина, мышиного CMV, муцина 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY–ESO–1, MART–1, gp100, рецептора 5D, сопряженного с белком G (GPCR5D), онкофетального антигена, ROR1, TAG72, VEGF–R2, канцероэмбрионального антигена (CEA), Her2/neu, рецептора эстрогенов, рецептора прогестерона, эфрина B2, CD123, c–Met, GD–2, O–ацетилированного GD2 (OGD2), CE7, опухоли Вильмса 1 (WT–1), циклина, A2 циклина, CCL–1, CD138; патоген–специфичного антигена и антигена, ассоциированного с универсальной меткой.36. The method according to any one of paragraphs. 1-35 wherein the antigen is selected from ROR1, B-cell maturation antigen (BCMA), charcoal anhydrase 9 (CAIX), Her2/neu (erbB2 tyrosine kinase receptor), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesothelin CEA and surface hepatitis B antigen, anti-folate receptor, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, epithelial glycoprotein 2 (EPG-2), epithelial glycoprotein 40 (EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3 , erb-B4, erbB dimers, EGFR vIII, folate-binding protein (FBP), FCRL5, FCRH5, fetal acetylcholine receptor, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alpha, IL-13R-alpha2, receptor containing an insert domain kinase (kdr), kappa light chain, Ley antigen, L1 cell adhesion molecule, (L1-CAM), melanoma-associated antigen (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, preferably expressed melanoma antigen (PRAME), survivin, TAG72, B7-H6, receptor alpha 2 IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA , folate receptor-a, CD44v6, CD44v7/8, integrin avb6, 8H9, NCAM, VEGF receptors, 5T4, fetal AchR, NKG2D ligands, CD44v6, dual antigen, testicular cancer antigen, mesothelin, mouse CMV, mucin 1 (MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY–ESO–1, MART-1, gp100, G protein-coupled 5D receptor (GPCR5D), oncofetal antigen, ROR1, TAG72, VEGF-R2, carcinoembryonic antigen (CEA), Her2/neu, estrogen receptor, progesterone receptor, ephrin B2, CD123, c –Met, GD-2, O-acetylated GD2 (OGD2), CE7, Wilms tumor 1 (WT-1), cyclin, cyclin A2, CCL-1, CD138; a pathogen-specific antigen and an antigen associated with a universal label. 37. Способ по любому из пп. 1-36, в котором антиген представляет собой CD19.37. The method according to any one of paragraphs. 1-36, in which the antigen is CD19. 38. Способ по любому из пп. 1-36, в котором антиген представляет собой BCMA. 38. The method according to any one of paragraphs. 1-36, wherein the antigen is BCMA. 39. Способ по любому из пп. 34-38, в котором антигенсвязывающий домен содержит антитело или фрагмент антитела.39. The method according to any one of paragraphs. 34-38, wherein the antigen binding domain comprises an antibody or antibody fragment. 40. Способ по любому из пп. 34-39, в котором антигенсвязывающий домен представляет собой одноцепочечный фрагмент.40. The method according to any one of paragraphs. 34-39, in which the antigen-binding domain is a single-stranded fragment. 41. Способ по п. 39 или 40, в котором фрагмент содержит вариабельные области антитела, соединенные гибким линкером.41. The method of claim 39 or 40, wherein the fragment contains antibody variable regions connected by a flexible linker. 42. Способ по любому из пп. 39-41, в котором фрагмент содержит scFv.42. The method according to any one of paragraphs. 39-41, in which the fragment contains scFv. 43. Способ по любому из пп. 1-42, в котором CAR содержит спейсер.43. The method according to any one of paragraphs. 1-42, in which CAR contains a spacer. 44. Способ по п. 43, в котором спейсер получен из иммуноглобулина.44. The method of claim 43 wherein the spacer is derived from an immunoglobulin. 45. Способ по п. 43, в котором спейсер содержит шарнирную область.45. The method of claim 43 wherein the spacer comprises a hinge region. 46. Способ по любому из пп. 1-45, в котором CAR содержит внутриклеточную сигнальную область.46. The method according to any one of paragraphs. 1-45, in which CAR contains an intracellular signaling region. 47. Способ по п. 46, где внутриклеточная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен.47. The method of claim 46, wherein the intracellular signaling region contains an intracellular signaling domain. 48. Способ по п. 47, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит первичный сигнальный домен.48. The method of claim 47 wherein the intracellular signaling domain comprises a primary signaling domain. 49. Способ по п. 47 или 48, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит сигнальный домен, который может индуцировать сигнал первичной активации в Т–лимфоците.49. The method of claim 47 or 48, wherein the intracellular signaling domain contains a signaling domain that can induce a primary activation signal in the T-lymphocyte. 50. Способ по любому из пп. 47-49, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит сигнальный домен, содержащий иммунорецепторный тирозиновый активирующий мотив (ITAM).50. The method according to any one of paragraphs. 47-49, in which the intracellular signaling domain contains a signaling domain containing an immunoreceptor tyrosine activating motif (ITAM). 51. Способ по любому из пп. 47-50, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит компонент сигнального домена рецептора Т–лимфоцита (TCR). 51. The method according to any one of paragraphs. 47-50, in which the intracellular signaling domain contains a T-lymphocyte receptor (TCR) signaling domain component. 52. Способ по любому из пп. 47-51, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит внутриклеточный сигнальный домен цепи CD3 или ее сигнальную часть.52. The method according to any one of paragraphs. 47-51, in which the intracellular signaling domain contains an intracellular signaling domain of the CD3 chain or a signaling portion thereof. 53. Способ по любому из пп. 47-52, в котором внутриклеточный сигнальный домен содержит цепь CD3–зета (CD3ζ).53. The method according to any one of paragraphs. 47-52, in which the intracellular signaling domain contains the CD3-zeta (CD3ζ) chain. 54. Способ по любому из пп. 46-53, в котором рекомбинантный рецептор дополнительно содержит трансмембранный домен, расположенный между внеклеточным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.54. The method according to any one of paragraphs. 46-53, wherein the recombinant receptor further comprises a transmembrane domain located between the extracellular domain and the intracellular signaling region. 55. Способ по п. 54, в котором трансмембранный домен представляет собой трансмембранный домен CD8 или CD28.55. The method of claim 54 wherein the transmembrane domain is a CD8 or CD28 transmembrane domain. 56. Способ по любому из пп. 47-55, в котором внутриклеточная сигнальная область дополнительно содержит костимуляторную сигнальную область.56. The method according to any one of paragraphs. 47-55, wherein the intracellular signaling region further comprises a costimulatory signaling region. 57. Способ по п. 56, в котором костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен костимуляторной молекулы Т–лимфоцита или ее сигнальную часть.57. The method according to claim 56, wherein the costimulatory signaling region contains an intracellular signaling domain of the costimulatory T-lymphocyte molecule or a signaling portion thereof. 58. Способ по п. 56 или 57, в котором костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен CD28, 4–1BB или ICOS или его сигнальную часть. 58. The method of claim 56 or 57, wherein the co-stimulatory signaling region comprises an intracellular signaling domain of CD28, 4-1BB or ICOS or a signaling portion thereof. 59. Способ по любому из пп. 56-58, в котором костимуляторная сигнальная область содержит внутриклеточный сигнальный домен 4–1BB.59. The method according to any one of paragraphs. 56-58, in which the costimulatory signaling region contains the 4-1BB intracellular signaling domain. 60. Способ по любому из пп. 56-59, в котором костимуляторная сигнальная область находится между трансмембранным доменом и внутриклеточной сигнальной областью.60. The method according to any one of paragraphs. 56-59, in which the costimulatory signaling region is located between the transmembrane domain and the intracellular signaling region. 61. Способ по любому из пп. 1–60, в котором Т–лимфоциты выбирают из группы, состоящей из центральных Т–лимфоцитов памяти, эффекторных Т–лимфоцитов памяти, интактных Т–лимфоцитов, стволовых центральных Т–лимфоцитов памяти, эффекторных Т–лимфоцитов и регуляторных Т–лимфоцитов.61. The method according to any one of paragraphs. 1-60, wherein the T lymphocytes are selected from the group consisting of central memory T lymphocytes, effector memory T lymphocytes, intact T lymphocytes, stem central memory T lymphocytes, effector T lymphocytes, and regulatory T lymphocytes. 62. Способ по любому из пп. 1–61, в котором Т–лимфоциты содержат Т-лимфоциты CD4+.62. The method according to any one of paragraphs. 1–61, in which T-lymphocytes contain CD4+ T-lymphocytes. 63. Способ по любому из пп. 1–61, в котором Т–лимфоциты содержат Т-лимфоциты CD8+.63. The method according to any one of paragraphs. 1–61, in which T-lymphocytes contain CD8+ T-lymphocytes. 64. Способ по любому из пп. 1–63, в котором Т–лимфоциты представляют собой первичные клетки, полученные от субъекта.64. The method according to any one of paragraphs. 1-63, in which T-lymphocytes are primary cells obtained from the subject. 65. Способ по любому из пп. 1–64, в котором Т–лимфоциты являются аутологичными для субъекта.65. The method according to any one of paragraphs. 1-64, in which T-lymphocytes are autologous for the subject. 66. Способ по любому из пп. 1–64, в котором Т–лимфоциты являются аллогенными для субъекта.66. The method according to any one of paragraphs. 1-64, in which T-lymphocytes are allogeneic for the subject. 67. Способ по любому из пп. 1–66, в котором субъект является человеком.67. The method according to any one of paragraphs. 1–66, in which the subject is a human. 68. Способ по любому из пп. 1-67, в котором Т-клеточная терапия включает введение от 1×105 до 5×108 клеток, экспрессирующих CAR, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (РВМС), в целом, или от 1×106 до 5×108 клеток, экспрессирующих CAR, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (РВМС), в целом.68. The method according to any one of paragraphs. 1-67, in which T-cell therapy comprises the administration of 1×10 5 to 5×10 8 CAR-expressing cells in total, T-lymphocytes in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in total, or from 1x10 6 to 5x10 8 CAR-expressing cells in total, T-lymphocytes in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) in total. 69. Способ по любому из пп. 1-68, в котором Т-клеточная терапия включает введение от 1×105 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 1×106 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 2,5×106 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 5×106 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 1×107 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 2,5×107 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 5×107 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, от 1×108 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом, или от 2,5×108 до 5×108 CAR–экспрессирующих Т–лимфоцитов, в целом.69. The method according to any one of paragraphs. 1-68, wherein the T cell therapy comprises administering 1×10 5 to 5×10 8 CAR-expressing T lymphocytes, in total, 1×10 6 to 5×10 8 CAR-expressing T lymphocytes, in 2.5×10 6 to 5×10 8 CAR-expressing T-lymphocytes overall 5×10 6 to 5×10 8 CAR-expressing T-lymphocytes overall 1×10 7 to 5x10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 2.5x10 7 to 5x10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in total 5x10 7 to 5x10 8 CAR-expressing T -lymphocytes, in total, from 1x10 8 to 5x10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in general, or from 2.5x10 8 to 5x10 8 CAR-expressing T-lymphocytes, in general. 70. Способ по любому из пп. 1–69, в котором Т–клеточная терапия включает введение от 1×105 до 1×108 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, от 5×105 до 1×107 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, или от 1×106 до 1×107 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, каждых включительно.70. The method according to any one of paragraphs. 1-69, in which T-cell therapy includes the introduction of from 1x10 5 to 1x10 8 CAR-expressing cells, in general, T-lymphocytes, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, from 5 x10 5 to 1 x 10 7 CAR-expressing cells in total, T-lymphocytes in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in total, or 1 x 10 6 to 1 x 10 7 CAR-expressing cells, in general, T-lymphocytes in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in general, each inclusive. 71. Способ по любому из пп. 1–70, в котором Т–клеточная терапия включает введение не более чем 1×108 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1×107 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5×107 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 1×106 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом, не более чем 0,5×106 CAR–экспрессирующих клеток, в целом, Т–лимфоцитов, в целом, или мононуклеаров периферической крови (PBMC), в целом.71. The method according to any one of paragraphs. 1-70, in which T-cell therapy includes the introduction of no more than 1x10 8 CAR-expressing cells, in total, T-lymphocytes, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, no more than 1x 10 7 CAR-expressing cells, in total, T-lymphocytes, in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 0.5 × 10 7 CAR-expressing cells, in total, T-lymphocytes, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 1×10 6 CAR-expressing cells, in total, T-lymphocytes, in total, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC), in total, not more than 0 .5×10 6 CAR-expressing cells in general, T-lymphocytes in general, or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in general. 72. Способ по любому из пп. 1–71, в котором количество клеток, вводимых при Т–клеточной терапии, меньше, чем это количество в другом способе, в котором Т–клеточная терапия вводится без введения иммуномодуляторного соединения.72. The method according to any one of paragraphs. 1-71, in which the number of cells administered in T cell therapy is less than that in another method in which T cell therapy is administered without administration of an immunomodulatory compound. 73. Способ по п. 72, в котором количество вводимых клеток является 1,5–кратно, 2–кратно, 3–кратно, 4–кратно, 5–кратно или 10–кратно меньшим, чем количество, вводимое в другом способе. 73. The method of claim 72, wherein the number of cells administered is 1.5-fold, 2-fold, 3-fold, 4-fold, 5-fold, or 10-fold less than the amount administered in the other method. 74. Способ по любому из пп. 1–73, в котором Т–клеточная терапия вводится как отдельная фармацевтическая композиция, содержащая Т-лимфоциты.74. The method according to any one of paragraphs. 1-73, in which T-cell therapy is administered as a separate pharmaceutical composition containing T-lymphocytes. 75. Способ по любому из пп. 1–73, в котором Т–клеточная терапия включает дозу клеток, которая представляет собой разделенную дозу, где клетки дозы вводятся во множестве композиций, коллективно содержащих все клетки дозы, в течение периода не более трех дней.75. The method according to any one of paragraphs. 1-73, wherein the T-cell therapy comprises a cell dose that is a divided dose, where the cells of the dose are administered in a plurality of compositions collectively containing all the cells of the dose, over a period of no more than three days. 76. Способ по любому из пп. 1–75, в котором способ дополнительно включает введение противолимфоцитарной химиотерапии до введения Т–клеточной терапии. 76. The method according to any one of paragraphs. 1-75, wherein the method further comprises administering antilymphocyte chemotherapy prior to administering T cell therapy. 77. Способ по любому из пп. 1–76, в котором рак представляет собой B-клеточный рак.77. The method according to any one of paragraphs. 1-76, wherein the cancer is a B cell cancer. 78. Способ по любому из пп. 1–76, в котором рак представляет собой миелому, лимфому или лейкоз.78. The method according to any one of paragraphs. 1-76, wherein the cancer is myeloma, lymphoma, or leukemia. 79. Способ по любому из пп. 1-78, в котором раковое заболевание представляет собой мантийноклеточную лимфому (MCL), множественную миелому (MM), острый лимфоцитарный лейкоз (ALL), ALL взрослых, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), неходжкинскую лимфому (NHL), диффузную В–крупноклеточную лимфому (DLBCL) или фолликулярную лимфому (FL). 79. The method according to any one of paragraphs. 1-78, wherein the cancer is mantle cell lymphoma (MCL), multiple myeloma (MM), acute lymphocytic leukemia (ALL), adult ALL, chronic lymphocytic leukemia (CLL), non-Hodgkin's lymphoma (NHL), diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) or follicular lymphoma (FL). 80. Способ по любому из пп. 1-76, в котором раковое заболевание представляет собой негематологическое раковое заболевание или представляет собой плотную опухоль.80. The method according to any one of paragraphs. 1-76, wherein the cancer is a non-hematologic cancer or is a solid tumor.
RU2019138707A 2017-05-01 2018-05-01 Combination of cell therapy and immunomodulator compound RU2777911C2 (en)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762492947P 2017-05-01 2017-05-01
US62/492,947 2017-05-01
US201762538670P 2017-07-29 2017-07-29
US62/538,670 2017-07-29
US201762549390P 2017-08-23 2017-08-23
US62/549,390 2017-08-23
US201762580433P 2017-11-01 2017-11-01
US62/580,433 2017-11-01
US201762596753P 2017-12-08 2017-12-08
US62/596,753 2017-12-08
PCT/US2018/030545 WO2018204427A1 (en) 2017-05-01 2018-05-01 Combination of a cell therapy and an immunomodulatory compound

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2022120903A Division RU2022120903A (en) 2017-05-01 2018-05-01 COMBINATION OF CELL THERAPY AND IMMUNOMODULATORY COMPOUND

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2019138707A RU2019138707A (en) 2021-06-02
RU2019138707A3 RU2019138707A3 (en) 2021-12-21
RU2777911C2 true RU2777911C2 (en) 2022-08-11

Family

ID=

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG X. Et al. Lenalidomide Enhances the Function of CS1 Chimeric Antigen Receptor Redirected-T Cells Against Multiple Myeloma // Blood, 2016, 128 (22): 812. OTÁHAL P. Et al. Lenalidomide enhances antitumor functions of chimeric antigen receptor modified T cells // Oncoimmunology, V. 5, N. 4, 2016, P. 1-10. ХАРКЕВИЧ Д.А. Фармакология: Учебник, 2010, 10-е изд. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7299841B2 (en) Combining Cell Therapy with Immunomodulatory Compounds
US20220008477A1 (en) Methods and combinations for treatment and t cell modulation
JP7233425B2 (en) Combination of cell therapy and gamma secretase inhibitor
US20240016840A1 (en) Methods and compositions for use of therapeutic t cells in combination with kinase inhibitors
US20190292246A1 (en) Combination therapy of a cell based therapy and a microglia imhibitor
US20190298772A1 (en) Combination therapy of a t cell-based therapy and a btk inhibitor
US20210069246A1 (en) Combination therapy using adoptive cell therapy and checkpoint inhibitor
RU2777911C2 (en) Combination of cell therapy and immunomodulator compound