RU2705816C1

RU2705816C1 - Diagnostic technique of cervical intraepithelial neoplasia

Info

Publication number: RU2705816C1
Application number: RU2019101703A
Authority: RU
Inventors: Наталия Михайловна Захарова; Ольга Николаевна Ветчинникова; Анатолий Александрович Цыбин
Priority date: 2019-01-22
Filing date: 2019-01-22
Publication date: 2019-11-12

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to gynecology, and aims at diagnosing intraepithelial neoplasia. That is ensured by scraping from endocervical mucosa, creating and analysing the preparation using light microscopy. If observing in a preparation in flat epithelial cells the changes characteristic of dysplasia, clusters of 11–50 epithelial cells with signs of glandular differentiation and papillary structures from proliferating immature epithelial cells are diagnosed cervical intraepithelial neoplasia (CIN).EFFECT: invention provides higher accuracy and reliability of diagnosis before surgical management, as well as the possibility of non-invasive verification CIN in hard- and inaccessible areas of uterine cervix.1 cl, 3 dwg, 2 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к цитологии и гинекологии и предназначено для диагностики цервикальной интраэпителиальной неоплазии.The invention relates to medicine, namely to cytology and gynecology, and is intended for the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia.

Цервикальная интраэпителиальная неоплазия (ЦИН), ассоциированная с персистенцией вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска, возникает в зоне трансформации и эндоцервикальных криптах, чаще в виде сочетанных поражений разной степени, усугубляющихся со временем. Более выраженная степень неоплазии может существовать за пределами видимой части зоны трансформации - в цервикальном канале и эндоцервикальных криптах, при одновременном наличии на эктоцервиксе меньших патологических изменений. Результаты ограниченных и даже многофокусных биопсий эктоцервикса в таких случаях нередко приводят к гиподиагностике степени неоплазии. Диагностика ЦИН представляет серьезные трудности. С целью верификации патологического процесса в шейке матки используют современные инструментальные технологии, как неинвазивные, так и инвазивные.Cervical intraepithelial neoplasia (CIN), associated with persistence of the human carcinogenic virus papilloma virus, occurs in the transformation zone and endocervical crypts, often in the form of combined lesions of varying degrees, worsening over time. A more pronounced degree of neoplasia may exist outside the visible part of the transformation zone - in the cervical canal and endocervical crypts, while there are less pathological changes on the ectocervix. The results of limited and even multifocal ectocervix biopsies in such cases often lead to a hypodiagnosis of the degree of neoplasia. Diagnosis of CIN presents serious difficulties. In order to verify the pathological process in the cervix, modern instrumental technologies are used, both non-invasive and invasive.

Так, в уровне техники известен способ диагностики ЦИН (Шабалова И.П. и др., Цитология жидкостная и традиционная при заболеваниях шейки матки. Цитологический атлас, М.-Тверь, ООО «Издательство «Триада», 2016 г., с. 275), включающий в себя проведение расширенной кольпоскопии. В данном способе с помощью оптического прибора - кольпоскопа, и химических реактивов проводят исследование слизистой оболочки шейки матки. Данный способ широко применяется в клинической практике, однако обладает существенными недостатками. При кольпоскопии не представляется возможным оценить состояние слизистой оболочки эндоцервикса в труднодоступных местах. Также кольпоскопические признаки ЦИН не всегда достоверны, нет высокой точности диагностики.So, in the prior art, there is a known method for diagnosing CIN (Shabalova I.P. et al., Liquid and traditional cytology for diseases of the cervix. Cytological atlas, M.-Tver, LLC Triada Publishing House, 2016, p. 275 ), including an extended colposcopy. In this method, with the help of an optical device - a colposcope, and chemical reagents, a study of the mucous membrane of the cervix is performed. This method is widely used in clinical practice, however, it has significant disadvantages. With colposcopy, it is not possible to assess the condition of the endocervix mucosa in hard-to-reach places. Also, colposcopic signs of CIN are not always reliable, there is no high diagnostic accuracy.

Также известен способ диагностики ЦИН (Короленкова Л.И. и др., Вовлеченность эндоцервикальных крипт как негативный фактор прогноза интраэпителиальных неоплазий и микроинвазивного рака шейки матки, Вестник РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, т. 22, №3, 2011, с. 72), включающий в себя гистологическое исследование материала, полученного в результате петлевой эксцизии или конизации шейки матки, а именно глубины поражения крипт на гистологических срезах. Недостатком данного способа являются последствия недостаточно глубокой зоны эксцизии, приводящие к снижению точности диагностики.There is also a known method for diagnosing CIN (Korolenkova L.I. et al., Involvement of endocervical crypts as a negative factor in predicting intraepithelial neoplasia and microinvasive cancer of the cervix uteri, Bulletin of the Russian N.C. Blokhin Russian Cancer Research Center, vol. 22, No. 3, 2011, p. 72), which includes a histological examination of the material obtained as a result of loop excision or conization of the cervix, namely, the depth of damage to the crypts on histological sections. The disadvantage of this method is the consequences of not sufficiently deep excision zone, leading to a decrease in the accuracy of diagnosis.

Также, из уровня техники известен способ диагностики ЦИН (Кондриков Н.И. и др., Патология матки, Руководство для врачей, 2-е изд-е, 2019 г., с. 336), включающий взятие соскоба со слизистой оболочки шейки матки, создание и исследование препарата с помощью световой микроскопии, выбранные нами за прототип. Недостатком данного способа является отсутствие объективных критериев вовлеченности крипт в процесс ЦИН.Also, from the prior art, a method for diagnosing CIN is known (Kondrikov N.I. et al., Uterine Pathology, Manual for Doctors, 2nd ed., 2019, p. 336), including taking a scraping from the mucous membrane of the cervix , the creation and study of the drug using light microscopy, we have chosen for the prototype. The disadvantage of this method is the lack of objective criteria for the involvement of crypts in the CIN process.

Таким образом, существует потребность в способе диагностики ЦИН, лишенном вышеуказанных недостатков.Thus, there is a need for a method for diagnosing CIN, devoid of the above disadvantages.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение точности и достоверности диагностики до начала хирургического лечения за счет объективных критериев вовлеченности эндоцервикальных крипт в патологический процесс, а также возможность неинвазивно верифицировать ЦИН в трудно - и недоступных участках шейки матки.The technical result of the invention is to increase the accuracy and reliability of diagnosis before the start of surgical treatment due to objective criteria for the involvement of endocervical crypts in the pathological process, as well as the ability to non-invasively verify CIN in difficult and inaccessible areas of the cervix.

Для достижения указанного технического результата в способе диагностики цервикальной интраэпителиальной неоплазии, включающем взятие соскоба со слизистой оболочки эндоцервикса, создание и исследование препарата с помощью световой микроскопии, предлагается при обнаружении в препарате в клетках плоского эпителия изменений, характерных для дисплазии, скоплений по 11-50 эпителиальных клеток с признаками железистой дифференцировки и папиллярных структур из пролиферирующих незрелых эпителиальных клеток диагностировать цервикальную интраэпителиальную неоплазию.To achieve the specified technical result in a method for the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia, including taking a scraping from the mucous membrane of the endocervix, the creation and study of the drug using light microscopy, it is proposed that in the preparation of squamous cells the changes characteristic of dysplasia in clusters of 11-50 epithelial cells with signs of glandular differentiation and papillary structures from proliferating immature epithelial cells to diagnose cervical int raepithelial neoplasia.

На фиг. 1 изображен фрагмент цитограммы, на котором представлены клетки плоского эпителия с изменениями по типу HSIL ((High squamous intraepithelial lesion - высокая степень тяжести дисплазии). Азур-эозин. Х400 (иллюстрирует пример 1).In FIG. Figure 1 shows a fragment of a cytogram showing squamous cells with HSIL type changes ((High squamous intraepithelial lesion - high severity of dysplasia). Azure-eosin. X400 (illustrates Example 1).

На фиг. 2 изображен фрагмент цитограммы, на котором представлено скопление эпителиальных клеток с явными признаками железистой дифференцировки. Азур-эозин. Х400 (иллюстрирует пример 2).In FIG. Figure 2 shows a fragment of a cytogram showing an accumulation of epithelial cells with clear signs of glandular differentiation. Azur-eosin. X400 (illustrates example 2).

На фиг. 3 изображен фрагмент цитограммы, на котором представлена сосочкоподобная структура из пролиферирующих, незрелых эпителиальных клеток. Азур-эозин. Х400 (иллюстрирует пример 2).In FIG. Figure 3 shows a fragment of a cytogram showing a papillary-like structure of proliferating, immature epithelial cells. Azur-eosin. X400 (illustrates example 2).

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

Материал получают методом соскоба со слизистой оболочки эндоцервикса не ранее чем на 5-й день менструального цикла и не позднее чем за 5 дней до начала предполагаемой менструации с помощью цитологической щетки типа Cytobrush, Cervex-Brush или Cervex Brash Combi, наносят тонким, равномерным слоем на обезжиренные предметные стекла, высушивают на воздухе и красят методом Паппенгейма. Исследование препаратов проводят с использованием световой микроскопии при увеличении х100, х400.The material is obtained by scraping from the mucous membrane of the endocervix not earlier than on the 5th day of the menstrual cycle and not later than 5 days before the start of the expected menstruation using a cytology brush such as Cytobrush, Cervex-Brush or Cervex Brash Combi, applied with a thin, uniform layer on fat-free glass slides, dried in air and stained with the Pappenheim method. The study of drugs is carried out using light microscopy with an increase of x100, x400.

Основные цитологические признаки вовлеченности крипт эндоцервикса в процесс цервикальной интраэпителиальной неоплазии:The main cytological signs of the involvement of endocervix crypts in the process of cervical intraepithelial neoplasia:

1) изменения в клетках плоского эпителия, характерные для дисплазии с изменениями по типу HSIL (Фиг. 1) ((High squamous intraepithelial lesion - высокая степень тяжести дисплазии - (Шабалова И.П. и др., Цитология жидкостная и традиционная при заболеваниях шейки матки. Цитологический атлас, М.-Тверь, ООО «Издательство «Триада», 2016 г., 320 с. ) - а именно клетки среднего и мелкого размера, увеличение ядерно-цитоплазматического отношения; клетки располагаются разрозненно, в группах или синцитиоподобных структурах; неровная ядерная мембрана; нежный или крупнозернистый хроматин, глыбки в хроматине; вариабельность цитоплазмы - «незрелая», кружевная и нежная, или плотная, как в метаплазированных клетках, иногда цитоплазма «зрелая» и ороговевшая; ядрышки, как правило, отсутствуют, но иногда могут быть видны;1) changes in squamous cells characteristic of dysplasia with changes in the type of HSIL (Fig. 1) ((High squamous intraepithelial lesion - high severity of dysplasia - (Shabalova I.P. et al., Liquid and traditional cytology for neck diseases uterus. Cytological atlas, M.-Tver, Triada Publishing House, 2016, 320 pp.) - namely, medium and small sized cells, an increase in the nuclear-cytoplasmic ratio; cells are scattered, in groups or syncytoid-like structures; irregular nuclear membrane; tender or coarse-grained Matin, chromatin clumps; cytoplasm variability - "immature" lacy and delicate or dense as in metaplazirovannyh cells cytoplasm sometimes "mature" and keratinized; nucleoli are generally available, but sometimes can be seen;

2) скопления по 11-50 эпителиальных клеток с признаками железистой дифференцировки (Фиг. 2) - а именно, клетки вытянутой формы, с эксцентрически расположенным округло-овальным ядром, нагромождаются друг на друга и располагаются в виде сотоподобных структур, ядерно-цитоплазменное соотношение сдвинуто в сторону ядра, хроматин зернистый, цитоплазма часто вакуолизирована, с признаками секреции;2) clusters of 11-50 epithelial cells with signs of glandular differentiation (Fig. 2) - namely, elongated cells with an eccentrically arranged round-oval nucleus are piled on top of each other and arranged in the form of honeycomb structures, the nuclear-cytoplasmic ratio is shifted towards the nucleus, granular chromatin, the cytoplasm is often vacuolated, with signs of secretion;

3) сосочкоподобные структуры из пролиферирующих незрелых эпителиальных клеток, представляющие собой по сути содержимое из патологически измененных крипт (Фиг. 3).3) papillary-like structures from proliferating immature epithelial cells, which are essentially the contents of pathologically altered crypts (Fig. 3).

Именно вышеуказанные изменения в клетках эндоцервикальных крипт, полученных с помощью соскоба со слизистой оболочки эндоцервикса, патогномоничны для интраэпителиальной неоплазии. Способ высокоэффективен и точен как в случаях, когда интраэпителиальная неоплазия имеет видимые проявления, так и в тех случаях, когда патологический процесс протекает скрыто в криптах шейки матки, что подтверждают приведенные клинические примеры.It is the above changes in the cells of endocervical crypts obtained by scraping from the mucous membrane of endocervix that are pathognomonic for intraepithelial neoplasia. The method is highly effective and accurate both in cases where intraepithelial neoplasia has visible manifestations, and in cases where the pathological process proceeds hidden in the crypts of the cervix, which is confirmed by the clinical examples given.

Пример 1. Б-ая Р., 23 лет. Диагноз: Эрозия шейки матки. Носитель вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска.Example 1. B-th R., 23 years old. Diagnosis: Cervical erosion. Carrier of human papillomavirus high carcinogenic risk.

При кольпоскопии выявлены ацетобелый эпителий и йод-негативная зона. При цитологическом исследовании соскоба со слизистой оболочки экзоцервикса и эндоцервикса по предлагаемому способу обнаружены цитологические признаки HSIL (фиг. 1), скопления по 11-50 эпителиальных клеток с признаками железистой дифференцировки и сосочкоподобные структуры из пролиферирующих незрелых эпителиальных клеток.Colposcopy revealed acetoblast epithelium and an iodine-negative zone. When cytological examination of scraping from the mucous membrane of exocervix and endocervix by the proposed method, cytological signs of HSIL were detected (Fig. 1), clusters of 11-50 epithelial cells with signs of glandular differentiation and papillary structures from proliferating immature epithelial cells.

Проведена эксцизия шейки матки с последующим гистологическим исследованием. Гистологическое заключение: ЦИН III с вовлечением в процесс крипт эндоцервикса.Excision of the cervix followed by histological examination. Histological conclusion: CIN III with the involvement of endocervix crypts in the process.

Пример 2. Б-ая Т. 29 лет. Диагноз: Эктопия шейки матки.Example 2. B-th T. 29 years. Diagnosis: Ectopy of the cervix.

При кольпоскопии выявлены ацетобелый эпителий и мелкая пунктация. При цитологическом исследовании соскоба со слизистой оболочки экзоцервикса и эндоцервикса по предлагаемому способу обнаружены цитологические признаки HSIL, вероятно, связанные с ВПЧ, скопления эпителиальных клеток с признаками железистой дифференцировки (фиг. 2) и сосочкоподобные структуры из пролиферирующих незрелых эпителиальных клеток (фиг. 3).Colposcopy revealed acetabular epithelium and small puncture. When cytological examination of scraping from the mucous membrane of exocervix and endocervix by the proposed method, cytological signs of HSIL were detected, probably associated with HPV, clusters of epithelial cells with signs of glandular differentiation (Fig. 2) and papillary structures from proliferating immature epithelial cells (Fig. 3).

Проведены биопсия ацетобелой зоны и эндоцервикальный кюретаж. Гистологическое заключение: ЦИН II с вовлечением в процесс крипт эндоцервикса.Acetabular zone biopsy and endocervical curettage were performed. Histological conclusion: CIN II with the involvement of endocervix crypts in the process.

Нами было обследовано 76 пациенток (в возрасте от 18 до 45 лет) в программе предварительного обследования перед трансплантацией почки, с 2007 по 2018 годы. У 17 пациенток не было выявлено полного спектра диагностических признаков по предлагаемому способу, отсутствие ЦИН было подтверждено гистологически (кюретаж, биопсии). При этом, у 59 пациенток выявлены все три ряда признаков - изменения в клетках плоского эпителия, характерных для дисплазии, скопления по 11-50 эпителиальных клеток с признаками железистой дифференцировки и папиллярные структуры из пролиферирующих незрелых эпителиальных клеток. Все пациентки также были обследованы кольпоскопически, материал, полученный в результате инвазивных хирургических вмешательств, был исследован гистологически.We examined 76 patients (aged 18 to 45 years) in a preliminary examination program before kidney transplantation, from 2007 to 2018. In 17 patients, the full range of diagnostic signs was not revealed by the proposed method, the absence of CIN was histologically confirmed (curettage, biopsy). Moreover, in 59 patients, all three rows of signs were revealed - changes in squamous cells characteristic of dysplasia, accumulations of 11-50 epithelial cells with signs of glandular differentiation, and papillary structures from proliferating immature epithelial cells. All patients were also examined colposcopically, the material obtained as a result of invasive surgical interventions was examined histologically.

Высокая эффективность предлагаемого способа была подтверждена вышеуказанными методами.The high efficiency of the proposed method was confirmed by the above methods.

Таким образом, способ диагностики интраэпителиальной неоплазии прост и доступен, позволяет повысить точность и достоверность диагностики до начала хирургического лечения за счет объективных критериев вовлеченности эндоцервикальных крипт в патологический процесс, а также возможность неинвазивно верифицировать ЦИН в трудно- и недоступных участках шейки матки.Thus, the method for diagnosing intraepithelial neoplasia is simple and affordable, it allows to increase the accuracy and reliability of diagnosis before the start of surgical treatment due to objective criteria for the involvement of endocervical crypts in the pathological process, as well as the ability to non-invasively verify CIN in hard and inaccessible areas of the cervix.

Claims

A method for diagnosing intraepithelial neoplasia, including taking a scraping from the mucous membrane of endocervix, creating and examining the drug using light microscopy, characterized in that when the preparation reveals changes in the epithelial cells characteristic of dysplasia, clusters of 11-50 epithelial cells with signs of glandular differentiation and papillary structures from proliferating immature epithelial cells diagnose cervical intraepithelial neoplasia.