RU2569510C2 - Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof - Google Patents

Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof Download PDF

Info

Publication number
RU2569510C2
RU2569510C2 RU2013117675/05A RU2013117675A RU2569510C2 RU 2569510 C2 RU2569510 C2 RU 2569510C2 RU 2013117675/05 A RU2013117675/05 A RU 2013117675/05A RU 2013117675 A RU2013117675 A RU 2013117675A RU 2569510 C2 RU2569510 C2 RU 2569510C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
viruses
sorbent
virus
nanodiamonds
detonation
Prior art date
Application number
RU2013117675/05A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2013117675A (en
Inventor
Валерия Тимофеевна Иванова
Марина Викторовна Иванова
Борис Владимирович Спицын
Светлана Викторовна Трушакова
Елена Ивановна Бурцева
Александра Александровна Исакова
Александр Павлович Коржаневский
Сергей Александрович Денисов
Федор Николаевич Олесик
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравохранения Российской Федерации
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физической химии и электрохимии имени А.Н. Фрумкина Российской академии наук
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравохранения Российской Федерации, Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физической химии и электрохимии имени А.Н. Фрумкина Российской академии наук filed Critical федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравохранения Российской Федерации
Priority to RU2013117675/05A priority Critical patent/RU2569510C2/en
Publication of RU2013117675A publication Critical patent/RU2013117675A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2569510C2 publication Critical patent/RU2569510C2/en

Links

Images

Landscapes

  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry.
SUBSTANCE: group of inventions relates to nanodiamond-based sorbents, which can be used for immobilisation or removal of viruses, specific antibodies, immunosorption, for diagnostic purposes, for deactivation and removal of viruses from external environment. Sorbents from nanodiamond-containing materials are obtained as a result of detonation synthesis and modification. Surface of detonation nanodiamonds is subjected to purposeful change by modification with chemically active liquid and gaseous substances at higher temperatures. As a result of modification, composition of surface radicals, which contain atoms of non-carbon nature (O, H, N, S), is replenished with additional atoms, which results in appearance of additional analogous or new functional groups, capable of forming bonds with functional groups of biological objects.
EFFECT: invention provides possibility of removing wide spectrum of protein materials by means of obtained sorbents from various biological liquids.
21 cl, 10 dwg, 9 ex

Description

Изобретение относится к медицине, в частности вирусологии, а также технологии сорбентов, конкретно к детонационным наноалмазсодержащим материалам, способу получения иммуносорбентов на их основе для иммобилизации или удаления вирусов, специфических антител, иммуносорбции, и может быть использовано в диагностических целях, для дезактивации и удаления вирусов из внешней среды.The invention relates to medicine, in particular virology, as well as sorbent technology, specifically to detonation nanodiamond-containing materials, a method for producing immunosorbents based on them for immobilization or removal of viruses, specific antibodies, immunosorption, and can be used for diagnostic purposes, for deactivation and removal of viruses from the external environment.

Загрязнение окружающей среды продуктами жизнедеятельности человека, вредными, токсичными для людей веществами, патогенными микроорганизмами, в том числе и вирусами, ставит вопрос об их дезактивации и удалении из окружающей среды. Для деконтаминации растворов, содержащих вирусы, необходимо использовать фильтры, работающие на принципе геометрического отбора (размера пор) или состоящие из веществ, способных сорбировать микроорганизмы. К последним, например, относятся иммуносорбенты, действие которых основано на образовании комплексов антиген -антитело. Для создания высокоэффективных сорбентов, наряду с использованием уже известных, идет активный поиск новых материалов, основанных на использовании нанотехнологий.Environmental pollution by human vital products, harmful substances, toxic to humans, pathogenic microorganisms, including viruses, raises the question of their deactivation and removal from the environment. For decontamination of solutions containing viruses, it is necessary to use filters that work on the principle of geometric selection (pore size) or consisting of substances that can sorb microorganisms. The latter, for example, include immunosorbents, the action of which is based on the formation of antigen-antibody complexes. In order to create highly effective sorbents, along with the use of already known ones, an active search is underway for new materials based on the use of nanotechnology.

Во второй половине 20 века были получены новые углеродсодержащие материалы - модифицированный с помощью различных методов графит, наноуглеродные трубки, детонационная шихта, получаемые из нее ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза или детонационные наноалмазы (ДНА).In the second half of the 20th century, new carbon-containing materials were obtained - graphite modified by various methods, nanocarbon tubes, detonation charge, ultrafine detonation synthesis diamonds or detonation nanodiamonds obtained from it, or DND.

ДНА впервые были получены Волковым К.В., Даниленко В.В., Елиным В.И. в 1963 г. в СССР [1]. Кристаллы ДНА (1-10 нм) образуются обычно при детонации взрывчатых веществ с отрицательным кислородным балансом, например смесей тротил(ТНТ)/гексоген 50/50, при давлении 22 ГПа, температуре 3200 К в течение 1 мкс, с последующей очисткой в кислотных средах для удаления неалмазных форм углерода с поверхности кристаллитов и удаления неуглеродных примесей [2]. Получаемая шихта - первичный продукт детонационного синтеза. Она содержит 30-60 масс.% ДНА, средний размер которых 4.2 нм. Удельная поверхность шихты составляет 450 м2/г, что существенно выше, чем у ДНА, которая составляет 250-300 м2/г [3]. Существенные отличия поверхностных свойств шихты от ДНА могут быть обусловлены как различием в величине поверхности, так и ее строением. В шихте содержится аморфный углерод, большая доля атомов которого находится в sp2 электронном состоянии. Структура поверхности наноалмазов имеет дефекты, обусловленные способом получения и очистки. Наличие на поверхности наноалмазов атомов углерода, имеющих некомпенсированные связи, приводит к высокой поверхностной активности наноалмазов. В среднем ДНА состоит из 80-88% углерода, который находится в алмазной фазе. Помимо углерода в ДНА обнаружены значительные концентрации других элементов - кислорода, водорода, азота, а также Fe, Ti, Cr, Cu, K, Ca, Si, Zn, Pb, относящихся к группе трудноудаляемых твердофазных примесей [4]. Наличие этих элементов на поверхности ДНА приводит к образованию функциональных групп - метиленовых, метальных, кислородсодержащих - гидроксильных, карбонильных, альдегидных, карбоксильных, эфирных и ангидридных, сера- и азотсодержащих - сульфогруппы, нитрогруппы, аминные и амидные и многие другие [5].DNDs were first obtained by Volkov K.V., Danilenko V.V., Elin V.I. in 1963 in the USSR [1]. DND crystals (1-10 nm) are usually formed upon detonation of explosives with a negative oxygen balance, for example, mixtures of TNT / TNT / RDX 50/50, at a pressure of 22 GPa, a temperature of 3200 K for 1 μs, followed by purification in acidic media to remove non-diamond forms of carbon from the surface of crystallites and remove non-carbon impurities [2]. The resulting mixture is the primary product of detonation synthesis. It contains 30-60 wt.% DNA, the average size of which is 4.2 nm. The specific surface of the charge is 450 m 2 / g, which is significantly higher than that of DND, which is 250-300 m 2 / g [3]. Significant differences in the surface properties of the charge from DND can be due to both the difference in the size of the surface and its structure. The charge contains amorphous carbon, a large fraction of the atoms of which are in the sp 2 electronic state. The surface structure of nanodiamonds has defects due to the method of preparation and purification. The presence on the surface of nanodiamonds of carbon atoms having uncompensated bonds leads to a high surface activity of nanodiamonds. On average, DND consists of 80-88% carbon, which is in the diamond phase. In addition to carbon, significant concentrations of other elements — oxygen, hydrogen, nitrogen, and also Fe, Ti, Cr, Cu, K, Ca, Si, Zn, Pb, belonging to the group of hard-to-remove solid-phase impurities [4], were found in DNDs. The presence of these elements on the surface of the DND leads to the formation of functional groups - methylene, methyl, oxygen-containing - hydroxyl, carbonyl, aldehyde, carboxyl, ether and anhydride, sulfur and nitrogen-containing sulfo groups, nitro groups, amine and amide, and many others [5].

Известно несколько способов получения наноалмазов из шихты. Например, предложен способ удаления примеси неалмазного углерода путем пропускания через шихту озоновоздушной смеси с одновременным нагревом до 120-400°C до полного выгорания неалмазного углерода [6] или способ получения наноалмазов путем неизотермического окисления алмазной шихты на воздухе при 380-440°C, со скоростью 2,5-10,0 град/мин с последующей изотермической выдержкой в течение 2-4 ч [7]. Известен способ выделения ДНА из шихты жидкофазным методом с помощью двухстадийной обработки азотной кислотой при температурах от 80 до 280°C и давлении ~80 атм [8].Several methods are known for producing nanodiamonds from a charge. For example, a method for removing non-diamond carbon impurities by passing an ozone-air mixture through a batch with simultaneous heating to 120-400 ° C until complete burning of non-diamond carbon [6] or a method for producing nanodiamonds by non-isothermal oxidation of a diamond charge in air at 380-440 ° C, with a speed of 2.5-10.0 deg / min followed by isothermal exposure for 2-4 hours [7]. There is a method of separating DND from a charge by the liquid-phase method using a two-stage treatment with nitric acid at temperatures from 80 to 280 ° C and a pressure of ~ 80 atm [8].

Известно, что стадия очистки наноалмазов из шихты является определяющей в формировании их потребительских свойств, именно этим определяется возможность получения разнообразных модифицированных наноалмазов. Поверхность ДНА, полученных из шихты, может быть модифицирована при воздействии химических веществ в диапазоне высоких температур [9]. Для очистки и модифицирования поверхности предложено использовать обработку наноалмазов при высокой температуре в водород- (H2, NH3) и хлорсодержащей (Cl2, CCl4) газовой среде [10]. В инертной атмосфере в интервале температур 720-1400 K происходит изменение структуры наночастиц ДНА (в кластерах) при фазовом переходе алмаз-графит [11].It is known that the stage of purification of nanodiamonds from a charge is crucial in the formation of their consumer properties, this determines the possibility of obtaining a variety of modified nanodiamonds. The surface of DNDs obtained from a charge can be modified by exposure to chemicals in the high temperature range [9]. To clean and modify the surface, it was proposed to use the processing of nanodiamonds at high temperature in hydrogen (H 2 , NH 3 ) and chlorine-containing (Cl 2 , CCl 4 ) gas environments [10]. In an inert atmosphere in the temperature range 720–1400 K, the structure of DND nanoparticles (in clusters) changes during the diamond – graphite phase transition [11].

Для биомедицинских целей работа химиков-синтетиков и токсикологов должна привести к оптимизации функций наноалмазов и минимизации негативного воздействия для здоровья.For biomedical purposes, the work of synthetic chemists and toxicologists should lead to the optimization of the functions of nanodiamonds and minimize the negative effects on health.

Для наноалмазов характерно отсутствие или наличие малой токсичности при оральном введении в организм животного [12]. Известна разработка, в которой ДНА применяют в качестве вещества, проявляющего противоопухолевую активность [13]. Предложена композиция ДНА с фуллереном, модифицированным порфирином, обладающая иммуностимулирующими свойствами [14].Nanodiamonds are characterized by the absence or presence of low toxicity upon oral administration to an animal [12]. A known development in which DND is used as a substance exhibiting antitumor activity [13]. A DND composition with fullerene modified with porphyrin has been proposed, which has immunostimulating properties [14].

Для ДНА присущи высокие сорбционные свойства по отношению к биомакромолекулам. Модифицированные наноалмазы детонационного синтеза, содержащие молекулы железа и сформированные в кластеры, способны сорбировать линейные фрагменты молекулы ДНК от 0,25 kb до 10 kb, однако они не связывают кольцевые молекулы плазмидной ДНК pUC19 [15]. Известно использование сорбционных свойств наноалмазов для выделения и очистки (с помощью десорбции) белков, например рекомбинантных белков из E.coli [16]. Наноалмазы способны сорбировать белок лизоцим, который при этом сохраняет антибактериальную активность, например, к E.coli [17]. Сорбционные свойства наноалмазов использованы для создания люминесцентного биочипа на основе светоизлучающего белка - люцеферазы, однако при этом наблюдается частичная десорбция фермента с поверхности частиц наноалмазов [18]. Наноалмазы, соединенные в кластеры размером до 100 нм, способны сорбировать лекарства и транспортировать их к раковым клеткам [19].DND is characterized by high sorption properties with respect to biomacromolecules. Modified detonation synthesis nanodiamonds containing iron molecules and formed into clusters are capable of adsorbing linear fragments of a DNA molecule from 0.25 kb to 10 kb, but they do not bind the ring molecules of plasmid DNA pUC19 [15]. It is known to use the sorption properties of nanodiamonds for the isolation and purification (via desorption) of proteins, for example, recombinant proteins from E. coli [16]. Nanodiamonds are capable of sorbing the lysozyme protein, which at the same time retains antibacterial activity, for example, to E. coli [17]. The sorption properties of nanodiamonds were used to create a luminescent biochip based on a light-emitting protein - luciferase, but partial desorption of the enzyme from the surface of nanodiamond particles is observed [18]. Nanodiamonds connected in clusters up to 100 nm in size are capable of sorbing drugs and transporting them to cancer cells [19].

Известно изобретение [20], в котором предложено использовать детонационные наноалмазы для иммобилизации вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и его ДНК, т.е. для удалении вируса из растворов, с целью создания антиВИЧ вакцины. Удаление биологических объектов проводится с помощью комплексов, созданных из наноалмазов и лигандов из полимерных молекул. Для сорбции вируса ВИЧ-1 предложено в качестве лиганда использовать белок - конковалин A, который обладает сильным сродством к соединениям, содержащим углевод - маннозу. Таким веществом является поверхностный белок ВИЧ-1 - gp120 - гликопротеин, содержащий маннозу. С помощью gp120 вирусы присоединяются к рецепторам, находящимся на внешней поверхности клеток иммунной системы [21]. Таким образом, указанная особенность структуры конковалина A и гликопротеина gp120 и обуславливает их специфическое взаимодействие. Для сорбции нуклеиновых кислот на наноалмазы в качестве лиганда предложена смола или модифицированный полистирол. Известно изобретение, в котором для связи ДНА с конковалином A введен дополнительный лиганд - полиметакриловая кислота [22]. Недостатком этих технических решений является то, что сорбент обладает специфической сорбцией и не может быть использован для других вирусов, так как строение и химический состав белков наружных оболочек различных вирусов отличны от gp120 вируса ВИЧ. У других вирусов гликопротеины содержат различные сахара, а не только маннозу, как у белка gp120. В то же время существует большое число вирусов, которые не обладают наружной оболочкой, например вирус полиомиелита. В силу перечисленных выше данных нам представлялось важным исследовать сорбционную способность детонационных наноалмазсодержащих материалов к вирусам.The invention is known [20], in which it is proposed to use detonation nanodiamonds to immobilize the human immunodeficiency virus (HIV) and its DNA, i.e. to remove the virus from solutions, in order to create an anti-HIV vaccine. The removal of biological objects is carried out using complexes created from nanodiamonds and ligands from polymer molecules. For sorption of the HIV-1 virus, it has been proposed to use the protein conkovalin A as a ligand, which has a strong affinity for compounds containing carbohydrate mannose. Such a substance is the surface protein of HIV-1 - gp120 - a glycoprotein containing mannose. Using gp120, viruses attach to receptors located on the outer surface of cells of the immune system [21]. Thus, the indicated structural feature of conkovalin A and glycoprotein gp120 determines their specific interaction. A resin or modified polystyrene is proposed as a ligand for sorption of nucleic acids on nanodiamonds. An invention is known in which an additional ligand, polymethacrylic acid, is introduced to bond DND with conkovalin A [22]. The disadvantage of these technical solutions is that the sorbent has specific sorption and cannot be used for other viruses, since the structure and chemical composition of the proteins of the outer shells of various viruses are different from gp120 of the HIV virus. In other viruses, glycoproteins contain various sugars, and not just mannose, as in the gp120 protein. At the same time, there are a large number of viruses that do not have an outer shell, such as polio virus. In view of the data listed above, it seemed important to us to study the sorption ability of detonation nanodiamond materials to viruses.

Предлагаемое изобретение решает задачу создания сорбентов вирусов на основе наноалмазных материалов, не прибегая к использованию вспомогательных лигандов различной природы и, таким образом, удешевляя процесс, расширить спектр их применения. Это достигается путем сорбции вирусов, вирусных антител, белков невирусной природы или фрагментов ДНК непосредственно на наноалмазсодержащие материалы детонационного синтеза или на их модифицированные продукты. Для этого поверхность ДНА подвергается целенаправленному изменению путем модифицирования, включающего обработку поверхности наноалмазов химически активными жидкими и газообразными веществами при повышенных температурах. При этом состав поверхностных радикалов, содержащих атомы неуглеродной природы (O, H, N, S), пополняется дополнительными атомами аналогичной природы или другими, например Cl, и, соответственно, появляются дополнительные аналогичные или новые функциональные группы, способные образовывать связи с функциональными группами биологических объектов.The present invention solves the problem of creating virus sorbents based on nanodiamond materials without resorting to the use of auxiliary ligands of various nature and, thus, reducing the cost of the process, expand the spectrum of their application. This is achieved by sorption of viruses, viral antibodies, non-viral proteins or DNA fragments directly onto nanodiamonds containing detonation synthesis materials or their modified products. For this, the surface of the DND undergoes a targeted change by modification, including surface treatment of nanodiamonds with chemically active liquid and gaseous substances at elevated temperatures. The composition of surface radicals containing non-carbon atoms (O, H, N, S) is replenished with additional atoms of a similar nature or others, for example, Cl, and, accordingly, additional similar or new functional groups appear that can form bonds with functional groups of biological objects.

Поэтому представляло интерес исследовать ДНА с различными модифицированными поверхностями, с целью отбора материалов, наиболее способных к адсорбции из водных растворов биологических объектов. В качестве сорбируемого вещества были взяты вирусы с различными антигенными свойствами, обладающие или не обладающие наружной оболочкой, вирусные антитела, белки невирусной природы, а также к фрагменты ДНК.Therefore, it was of interest to study DNDs with various modified surfaces in order to select the materials most capable of adsorption from aqueous solutions of biological objects. Viruses with various antigenic properties, with or without outer shell, viral antibodies, non-viral proteins, as well as DNA fragments, were taken as the adsorbed substance.

В качестве вирусов, имеющих внешнюю оболочку, предложены вирусы гриппа A и B семейства ортомиксовирусов. Их выбор в качестве модельных обусловлен не только широким распространением гриппа среди млекопитающих и птиц и тяжелыми последствиями, которые они вызывают, но и тем фактом, что их распространение имеет как воздушно-капельный, так водный путь передачи. Последний способ характерен для вирусов гриппа птиц. В 21 веке зарегистрировано большое число заболеваний человека, вызванных постоянно регистрируемой интродукцией вирусов гриппа птиц с гемагглютинином A/H5, A/H7 в человеческую популяцию. Выбор в качестве вируса, не имеющего внешней оболочки, вируса полиомиелита I типа (вакцинный штамм Сэбина) из семейства пикорновирусов обусловлен тем, что он имеет размеры 24-30 нм и является тест-вирусом в дезинфектологии. Этот вирус распространяется водным путем. Выбор шихты, ДНА и их модификаций был обусловлен тем, что они является углеродными материалами с известной структурой, химическим составом и физико-химическими свойствами. Наноалмазы, их модификации и шихта обладают шероховатой поверхностью, и их химическое состояние обеспечивает способность вступать во взаимодействия с другими материалами, например с вирусными антигенами или антителами или фрагментами ДНК.As viruses having an outer envelope, influenza A and B viruses of the orthomyxovirus family are proposed. Their choice as model is caused not only by the wide spread of influenza among mammals and birds and the grave consequences that they cause, but also by the fact that their spread has both airborne and waterborne transmission. The latter method is characteristic of avian influenza viruses. In the 21st century, a large number of human diseases were registered due to the constantly recorded introduction of avian influenza viruses with hemagglutinin A / H5, A / H7 into the human population. The choice of the virus without an outer shell, type I polio virus (Sabin vaccine strain) from the picornovirus family is due to the fact that it has sizes of 24-30 nm and is a test virus in disinfectology. This virus is spread by water. The choice of charge, DND and their modifications was due to the fact that they are carbon materials with a known structure, chemical composition and physico-chemical properties. Nanodiamonds, their modifications and charge have a rough surface, and their chemical state provides the ability to interact with other materials, such as viral antigens or antibodies or DNA fragments.

Сущность изобретения заключается в разработке сорбента (варианты) из наноалмазсодержащих материалов с такой структурой и таким составом, которые обеспечивают высокую сорбционную способность к вирусам животных, обладающих или не обладающих наружной (внешней) оболочкой, вирусным антителам, белкам невирусной природы, а также к фрагментам ДНК, в создании иммуносорбентов с фиксированным антигеном или антителом, а также для иммобилизации или удаления вирусов и специфических антител. Это достигается путем использования наноалмазсодержащих материалов, полученных в результате детонационного синтеза и модифицированных с помощью химических реагентов, которые также могут быть использованы в качестве матрицы для создания иммуносорбента с фиксированным антигеном или антителом.The invention consists in the development of a sorbent (options) from nanodiamond-containing materials with such a structure and composition that provide high sorption ability to animal viruses with or without an outer (outer) membrane, viral antibodies, non-viral proteins, as well as DNA fragments , in the creation of immunosorbents with a fixed antigen or antibody, as well as for the immobilization or removal of viruses and specific antibodies. This is achieved by using nanodiamond-containing materials obtained as a result of detonation synthesis and modified using chemical reagents, which can also be used as a matrix to create an immunosorbent with a fixed antigen or antibody.

Сорбенты, представляющие собой алмазные нанопорошки, получены путем детонационного синтеза при нижеуказанных условиях. Предлагаемые наноалмазсодержащие материалы представляют собой шихту, содержащую неалмазные и неуглеродные примеси, ДНА и их модификации. Их индивидуальные частицы группируются в кластеры различных размеров и форм, содержат агрегаты наноалмазов и обладают сорбционной способностью, в том числе к вирусам. Наноструктурированные сорбенты используют для удаления из различных жидкостей вирусов, имеющих наружную (внешнюю) оболочку, например вирусов гриппа, или не имеющих ее, например вирусов полиомиелита, либо антител, а также для получения иммуносорбента (варианты), с помощью которого проводят иммобилизацию специфических антител или антигенов. Предлагаемое изобретение решает задачу увеличения сорбционной способности сорбента (варианты), упрощения и расширения возможностей и условий сорбции.Sorbents, which are diamond nanopowders, were obtained by detonation synthesis under the following conditions. The proposed nanodiamond-containing materials are a mixture containing non-diamond and non-carbon impurities, DNDs and their modifications. Their individual particles are grouped into clusters of various sizes and shapes, contain aggregates of nanodiamonds and have sorption ability, including viruses. Nanostructured sorbents are used to remove viruses from various fluids that have an outer (outer) envelope, such as influenza viruses, or lack it, such as polio viruses or antibodies, as well as to obtain an immunosorbent (variants) by which specific antibodies are immobilized or antigens. The present invention solves the problem of increasing the sorption ability of the sorbent (options), simplifying and expanding the capabilities and conditions of sorption.

СорбентыSorbents

Взятые для исследований наноалмазсодержащие материалы получены при следующих условиях:The nanodiamond-containing materials taken for research were obtained under the following conditions:

1. Шихта, извлекаемая со стен взрывной камеры после взрыва смеси ТНТ /гексоген = 50/50, подвергается нагреву в течение 1 ч при температуре T=120°С для очистки от летучих примесей.1. The mixture is removed from the walls of the blast chamber after the explosion of a mixture of TNT / RDX = 50/50, is heated for 1 h at a temperature of T = 120 ° C to clean from volatile impurities.

2. Детонационные наноалмазы (ДНАгазфаз) получены в результате газофазовой (газфаз) очистки шихты, в парах азотной кислоты при температуре до 300°C, в ходе чего происходит окисление неалмазных форм углерода. Последующая очистка порошка ДНА от неуглеродных примесей проведена в токе осушенного хлористого водорода при температуре 850°C, pH суспензий такого ДНА с концентрацией 1 г/л составляет 5.2. Detonation nanodiamonds ( DND of gas phases ) were obtained as a result of gas-phase (gas phase) purification of the charge in nitric acid vapors at temperatures up to 300 ° C, during which oxidation of non-diamond forms of carbon occurs. Subsequent purification of DND powder from non-carbon impurities was carried out in a stream of dried hydrogen chloride at a temperature of 850 ° C; the pH of suspensions of such DND with a concentration of 1 g / L is 5.

3. Детонационные наноалмазы (ДНАжидфаз) получены в результате жидкофазной (жидфаз) очистки шихты, в разбавленной азотной кислоте при давлении ~80 атм и температуре ~220°C с последующей многостадийной отмывкой порошка ДНА от кислоты, использованной в процессе очистки шихты. pH суспензии составляет 6,2 при концентрации ДНА 1 г/л.3. Detonation nanodiamonds ( DND liquid phase) were obtained as a result of liquid phase (liquid phase) purification of the mixture in dilute nitric acid at a pressure of ~ 80 atm and a temperature of ~ 220 ° C, followed by multistage washing of the DND powder from the acid used in the process of purification of the mixture. The pH of the suspension is 6.2 at a DND concentration of 1 g / L.

4. Детонационные графитизированные наноалмазы ДНАграф, получаемые из ДНАжидфаз, (подвергнутые частичному фазовому переходу алмаз - графит) в течение 1 ч нагревом в аргоне высокой чистоты при T=1000°C.4. Detonation graphitized nanodiamonds of the DND graph obtained from liquid DNDs (subjected to a partial diamond – graphite phase transition) for 1 h by heating in high purity argon at T = 1000 ° C.

5. Детонационные хлорированные наноалмазы ДНАхл, которые получены нагревом ДНАжидфаз в парогазовой смеси CCl4/Ar, содержащей 3% (по объему) CCl4, при температуре T=450°C в течение 2 ч.5. beam Detonation chlorinated chl nanodiamonds that are obtained by heating beam zhidfaz vapor mixture in CCl 4 / Ar, containing 3% (by volume) CCl 4 at a temperature T = 450 ° C for 2 hours.

6. Детонационный аминированный ДНАамин получен из ДНАхл нагревом в аммиаке высокой чистоты при давлении 1 атм в течение 1 часа при температуре T=400°C.6. The detonation aminated DND amine was obtained from DND chl by heating in high purity ammonia at a pressure of 1 atm for 1 hour at a temperature of T = 400 ° C.

Краткое описание чертежейBrief Description of the Drawings

Для более ясного понимания предлагаемого изобретения, суть которого отражена в формуле изобретения, а также для демонстрации его особенностей и преимуществ, далее подробно описаны чертежи.For a clearer understanding of the invention, the essence of which is reflected in the claims, as well as to demonstrate its features and advantages, the drawings are described in detail below.

Фиг.1. Представлены в виде Таблицы 1 результаты взаимодействия наноалмазсодержащих материалов (шихты, ДНА и их модификаций) с вирусами гриппа A и B, изолированными в разные годы, имеющими различную антигенную структуру наружных белков, концентрированными или очищенными в градиенте концентрации сахарозы в растворах. (Способ получения иммуносорбента.) Наличие вирусов регистрировали до и после сорбции в реакции гемагглютинации (РГА).Figure 1. Table 1 presents the results of the interaction of nanodiamond-containing materials (charge, DND and their modifications) with influenza A and B viruses, isolated in different years, having different antigenic structure of external proteins, concentrated or purified in a gradient of sucrose concentration in solutions. (Method for the production of immunosorbent.) The presence of viruses was recorded before and after sorption in the hemagglutination reaction (RGA).

Фиг.2. Представлены в виде Таблицы 2 данные по сорбции вирусов на шихту и ДНАгазфаз в зависимости от температуры. Опыты проводили в диапазоне температур от 4 до 37°C.Figure 2. Presented in the form of Table 2 are data on the sorption of viruses on a charge and DND of gas phases depending on temperature. The experiments were carried out in the temperature range from 4 to 37 ° C.

Фиг.3. Представлена в виде Таблицы 3 эффективность сорбции от времени контакта вируса гриппа A(H3N2) с шихтой и ДНАгазфаз. Опыты проводили в течение 10-60 мин.Figure 3. Presented in the form of Table 3 is the efficiency of sorption on the time of contact of influenza A virus (H3N2) with the mixture and DND gas phase . The experiments were carried out for 10-60 minutes

Фиг.4. Представлена в виде Таблицы 4 зависимость сорбции вирусов гриппа A(H3N2) от массы сорбентов (шихты и ДНАгазфаз).Figure 4. The dependence of the sorption of influenza A (H3N2) viruses on the mass of sorbents (charge and DND of gas phases ) is presented in the form of Table 4.

Фиг.5. Представлено в виде Таблицы 5 влияние различной концентрации альбумина на последующую сорбцию вирусов гриппа A(H3N2). Сорбент - шихта.Figure 5. Presented in the form of Table 5 is the effect of different concentrations of albumin on the subsequent sorption of influenza A (H3N2) viruses. Sorbent - charge.

Фиг.6. Представлено в виде Таблицы 6 выявление антител в сыворотках крыс, иммунизированных иммуносорбентом, представляющим собой комплекс ДНАжидфаз с концентрированным вирусом A(H1N1)pdm09. В качестве контроля использованы крысы, иммунизированные аллантоисными вирусами гриппа A(H1N1)pdm09 или B/Бангладеш/3333/07.6. Presented in the form of Table 6 is the detection of antibodies in the sera of rats immunized with an immunosorbent, which is a complex of DND liquid phase with concentrated virus A (H1N1) pdm09. As a control, rats immunized with allantoic influenza viruses A (H1N1) pdm09 or B / Bangladesh / 3333/07 were used.

Фиг.7. Представлены в виде Таблицы 7 данные по сорбции вирусспецифических антител на иммуносорбенты - комплексы, содержащие наноалмазные сорбенты и вирусы гриппа A(H3N2).7. Data on the sorption of virus-specific antibodies to immunosorbents — complexes containing nanodiamond sorbents and influenza A viruses (H3N2) are presented in the form of Table 7.

Фиг.8. Представлены в виде Таблицы 8 данные по сорбции вирусспецифических антител, полученных к вирусам гриппа B/Флорида/04/06, на наноалмазные сорбенты. (Способ получения иммуносорбента.)Fig. 8. Data on the sorption of virus-specific antibodies obtained to influenza viruses B / Florida / 04/06 on nanodiamond sorbents are presented in the form of Table 8. (A method of obtaining an immunosorbent.)

Фиг.9. Представлены в виде диаграммы сорбция и десорбция аллантоисного пандемического вируса гриппа A/Калифорния/04/09 (H1N1)pdm09 и концентрированного вируса B/Флорида/04/06 на ДНАгазфаз. Десорбция вирусов с иммуносорбентов проведена в течение 24 и 48 часов.Fig.9. Sorption and desorption of the allantoic pandemic influenza virus A / California / 04/09 (H1N1) pdm09 and concentrated virus B / Florida / 04/06 on DNase phases are presented in the form of a diagram. Desorption of viruses from immunosorbents carried out within 24 and 48 hours.

Фиг.10а, б - представлены результаты электрофореза в 2% агарозе фрагментов кДНК вирусов гриппа A и B до и после сорбции из растворов на наноалмазные материалы(шихту, ДНА и их модификации):Figa, b - presents the results of electrophoresis in 2% agarose of cDNA fragments of influenza A and B viruses before and after sorption from solutions on nanodiamonds (charge, DND and their modifications):

10а. Наличие в геле полосы кДНК после сорбции (дорожки 4, 5) свидетельствует о неполной сорбции нуклеиновой кислоты на ДНАгазфаз. Отсутствие полосы ДНК (дорожки 6, 7) свидетельствует о полной сорбции кДНК на шихту.10a. The presence of cDNA bands in the gel after sorption (lanes 4, 5) indicates incomplete sorption of nucleic acid on the gas phase DNA . The absence of a DNA band (lanes 6, 7) indicates the complete sorption of cDNA on the charge.

10б. Наличие в геле полосы кДНК после сорбции (дорожки 13, 14) свидетельствует о неполной сорбции нуклеиновой кислоты на ДНА амин и ДНАхл.. Отсутствие полосы ДНК (дорожки 10, 11, 12) свидетельствует о полной сорбции кДНК на ДНАграф.10b. The presence of cDNA bands in the gel after sorption (lanes 13, 14) indicates incomplete sorption of nucleic acid on the DNA amine and DNA chl. . The absence of a DNA band (lanes 10, 11, 12) indicates complete sorption of cDNA on the DNA graph .

Вирусы, вируспецифические антитела и нуклеиновые кислотыViruses, virus-specific antibodies and nucleic acids

Как известно, вирусы семейства ортомиксовирусов (например, вирусы гриппа), парамиксовирусов, тогавирусов (например, флавивирусы) имеют внешнюю оболочку, которая обусловливают их способность сорбироваться, например, на эритроциты животных.As is known, viruses of the family of orthomyxoviruses (for example, influenza viruses), paramyxoviruses, togaviruses (for example, flaviviruses) have an outer shell, which determine their ability to be sorbed, for example, on red blood cells of animals.

В качестве представителей вирусов, имеющих внешнюю оболочку, были взяты эталонные и эпидемические штаммы вируса гриппа A(H1N1), (H3N2) и В, изолированные в период 1995-2011 гг., и пандемические штаммы вируса гриппа A(H1N1)pdm09, изолированные в 2009-10 гг. и обладающие различной структурой поверхностных белков и, соответственно, антигенными свойствами. Вирусы были культивированы в различных системах (куриные эмбрионы, культуры тканей клеток MDCK (Madin Darby Canine Kidney). В работе использовались также концентрированные вирусы, выращенные в куриных эмбрионах и сконцентрированные при ультрацентрифугировании. В качестве вируса, не имеющего внешней оболочки, выбран вирус полиомиелита I типа (вакцинный штамм Сэбина) из семейства пикорновирусов, культивирование которых проводили в клетках Vero. Для исследования антител использовались сыворотки иммунных животных (крыс). Биологическим объектом были ампликоны - двухцепочные молекулы ДНК размером 190-560 пн, полученные в результате полимеразной цепной реакции изолятов вирусов гриппа A и B.Reference and epidemic strains of influenza A (H1N1), (H3N2) and B virus isolated from 1995-2011 and pandemic strains of influenza A (H1N1) pdm09 virus isolated in 2009-10 and having a different structure of surface proteins and, accordingly, antigenic properties. Viruses were cultured in various systems (chicken embryos, MDCK cell tissue cultures (Madin Darby Canine Kidney). We also used concentrated viruses grown in chicken embryos and concentrated by ultracentrifugation. Polio I was selected as the virus without an outer shell type (Sabin vaccine strain) from the picornovirus family cultured in Vero cells. Serum from immune animals (rats) was used to study the antibodies. horses - double-stranded DNA molecules of 190-560 bp in size, obtained as a result of the polymerase chain reaction of influenza A and B virus isolates

МетодыMethods

1) Выявление вирусов гриппа в растворе проводили с помощью реакции гемагглютинирующей активности (РГА), позволяющей оценить по величине гемагглютинирующего (ГА) титра концентрацию вируса в растворе, выявление вируса полиомиелита - с помощью цитопатического действия его на клетки.1) The detection of influenza viruses in solution was carried out using the reaction of hemagglutinating activity (RGA), which allows one to estimate the concentration of the virus in solution by the value of the hemagglutinating (GA) titer, and the detection of poliomyelitis virus using its cytopathic effect on cells.

2) Для определения наличия инфекционной активности вируса проводили титрование вирусов в последовательных разведениях в куриных эмбрионах.2) To determine the presence of infectious activity of the virus, titration of viruses was carried out in serial dilutions in chicken embryos.

3) Для определения титра антител в растворах, содержащих иммунные сыворотки, использовали реакцию торможения гемагглютинирующей активности (РТГА) с использованием 0.75% взвеси эритроцитов человека 0 (I) группой крови.3) To determine the titer of antibodies in solutions containing immune sera, the inhibition of hemagglutinating activity (RTGA) was used using a 0.75% suspension of human red blood cells 0 (I) by a blood group.

4) Выявление цитопатического действия вируса полиомиелита на клеточную культуру.4) Identification of the cytopathic effect of polio virus on cell culture.

5) Получение ампликонов проводили в две стадии: вначале РНК вирусы гриппа переводили в ДНК с помощью обратной транскриптазы и затем с помощью тест-системы "ДНК технология" получали ампликоны в полимеразной цепной реакции (ПЦР) по протоколу фирмы.5) The preparation of amplicons was carried out in two stages: first, RNA influenza viruses were converted into DNA using reverse transcriptase, and then using the DNA technology test system, amplicons were obtained in the polymerase chain reaction (PCR) according to the company protocol.

6) Для определения кДНК-ампликонов использовали горизонтальный электрофорез в 2% агарозе в течение 1.5 ч при напряжении 80 вольт.6) To determine the cDNA amplicons, horizontal electrophoresis was used in 2% agarose for 1.5 h at a voltage of 80 volts.

7) Электронно-микроскопическое исследование сорбентов позволяет визуально исследовать форму и структуру поверхности сорбентов. Взвеси сорбентов в воде были окрашены 2% раствором уранилацетата и изучены методом электронной микроскопии с увеличением 20000-25000×. Исследования подтвердили, что исследуемые сорбенты являются ДНА-содержащими материалами, которые образуют разнообразной формы кластеры различного размера, с зернистой поверхностью и содержат индивидуальные частицы размером от 5 нм до кластеров различной формы размером 300 нм.7) Electron microscopic study of sorbents allows you to visually examine the shape and surface structure of sorbents. Suspensions of sorbents in water were stained with a 2% solution of uranyl acetate and studied by electron microscopy with an increase of 20000-25000 ×. Studies have confirmed that the studied sorbents are DND-containing materials that form clusters of various sizes of various sizes, with a granular surface and contain individual particles ranging in size from 5 nm to clusters of various shapes with a size of 300 nm.

В исследованиях с сорбентом на разных стадиях использовали шейкер (Shaker PSU 2T plus); настольную низкоскоростную центрифугу (Comb spin); термостат Гном, фирмы ДНК-технология; амплификатор фирмы Rotor Gene Corbett research.In studies with a sorbent at different stages, a shaker was used (Shaker PSU 2T plus); desktop low-speed centrifuge (Comb spin); Gnome thermostat; DNA technology firms; Rotor Gene Corbett Research Amplifier.

В этой разработке представлены данные по изучению условий сорбции и десорбции с сорбентов вирусов гриппа A, B, полиомиелита I типа и фрагментов ДНК.This development presents data on the study of the conditions of sorption and desorption from sorbents of influenza A, B viruses, type I polio, and DNA fragments.

Для более полной иллюстрации настоящего изобретения ниже приводятся примеры. Однако эти примеры не должны рассматриваться как некое ограничение объема настоящего изобретения во всех отношениях.To more fully illustrate the present invention, examples are provided below. However, these examples should not be construed as a limitation on the scope of the present invention in all respects.

Пример 1. Сорбция вирусов гриппа A и B на сорбентахExample 1. Sorption of influenza A and B viruses on sorbents

Процедура сорбции вирусов была нами разработана ранее [23]. Сорбент добавляли к анализируемому объекту (вирус-содержащему, антителсодержащему или ДНК-содержащему раствору) и емкость помещали на шейкер для активного контакта аналита с сорбентом. После контакта вируса или ДНК с сорбентом смесь центрифугировали при 2000 об/мин в течение 4 мин, надосадочную жидкость исследовали на наличие аналита: например вируса гриппа в РГА или ДНК при электрофорезе в агарозе.The virus sorption procedure was developed by us earlier [23]. The sorbent was added to the analyzed object (virus-containing, antibody-containing or DNA-containing solution) and the container was placed on a shaker for active contact of the analyte with the sorbent. After contact of the virus or DNA with the sorbent, the mixture was centrifuged at 2000 rpm for 4 minutes, the supernatant was examined for the presence of analyte: for example, influenza virus in RGA or DNA during electrophoresis in agarose.

В последующем осадок, содержащий сорбент и иммобилизованный вирус, т.е. иммуносорбент, исследовали в экспериментах по взаимодействию с гомологичными антителами, по десорбции вируса, а также по сорбции антител на иммуносорбент. Сорбция вирусов изучалась в зависимости от природы сорбентов, антигенной структуры вирусов гриппа A и B, а также от различных условий эксперимента. Падение гемагглютинирующего титра в растворе сопровождалось снижением инфекционного титра. В случае шихты уменьшение составляло 4,5lg ЭИД50 (эмбриональная инфекционная доза). Исследования сорбции различных штаммов вирусов гриппа A и B на выбранных сорбентах показали, что они с изменяемой эффективностью способны сорбировать вирусы из растворов, независимо от антигенной структуры поверхностных белков (фиг.1). Подобные результаты получены для вируса полиомиелита.Subsequently, a precipitate containing sorbent and immobilized virus, i.e. immunosorbent, investigated in experiments on interaction with homologous antibodies, on the desorption of the virus, as well as on the sorption of antibodies on the immunosorbent. Virus sorption was studied depending on the nature of the sorbents, the antigenic structure of influenza A and B viruses, and also on various experimental conditions. The drop in hemagglutinating titer in solution was accompanied by a decrease in the infectious titer. In the case of the charge, the decrease was 4.5 lg EID 50 (embryonic infectious dose). Studies of the sorption of various strains of influenza A and B viruses on selected sorbents showed that they are capable of adsorbing viruses from solutions with variable efficiency, regardless of the antigenic structure of surface proteins (Fig. 1). Similar results were obtained for the polio virus.

Пример 2. Взаимодействие вирусов с сорбентами в зависимости от условий экспериментаExample 2. The interaction of viruses with sorbents depending on the experimental conditions

Для успешного применения выбранных материалов необходимо выявить влияние условий опытов на сорбционную способность наноалмазных материалов. Варьировали следующие параметры - температура среды, масса сорбентов, время сорбции и состав растворов.For the successful use of the selected materials, it is necessary to identify the influence of the experimental conditions on the sorption ability of nanodiamonds. The following parameters varied: medium temperature, sorbent mass, sorption time, and solution composition.

Например, вирусы гриппа A и B сорбировались на сорбент из вируссодержащих жидкостей: физиологического раствора (ФР) и фосфатного буфера PBS pH 7.2. В опытах навески сорбента варьировались от 1,0 до 10,0 мг, объем (V) вируссодержащей жидкости варьировал от 150,0 до 300,0 мкл. Начальные титры вирусов, исследуемых в данном эксперименте, в пересчете на 1,0 мг сорбента находились в диапазоне от 10 до 400 гемагглютинирующих единиц (ГАЕ). Конечные титры в пересчете на 1 мг сорбента варьировали в диапазоне меньше 2-10 ГАЕ. Падение гемагглютинирующего титра вирусов гриппа, содержащихся в растворе после сорбции, происходило в 8-1000 раз, в зависимости от начальной концентрации вирусов и массы сорбентов.For example, influenza A and B viruses were adsorbed onto a sorbent from virus-containing fluids: physiological saline (RF) and PBS pH 7.2 phosphate buffer. In the experiments, the weights of the sorbent ranged from 1.0 to 10.0 mg; the volume (V) of the virus-containing liquid varied from 150.0 to 300.0 μl. The initial titers of the viruses studied in this experiment, in terms of 1.0 mg of sorbent, were in the range from 10 to 400 hemagglutinating units (GAE). The final titers in terms of 1 mg of sorbent varied in the range of less than 2-10 GAU. The drop in the hemagglutinating titer of influenza viruses contained in the solution after sorption occurred 8-1000 times, depending on the initial concentration of viruses and the mass of sorbents.

Было проанализировано влияние температуры на сорбцию вирусов. Параметры опыта: контакт 20 мин, масса сорбента 2 мг, объем смеси V=150, растворитель ФР. Полученные данные свидетельствовали, что адсорбция вирусов происходила с практически одинаковой интенсивностью при температурах 4°, 20° и 37°C (фиг.2).The effect of temperature on the sorption of viruses was analyzed. The parameters of the experiment: contact 20 min, the mass of the sorbent 2 mg, the volume of the mixture V = 150, solvent FR. The data obtained showed that the adsorption of viruses occurred with almost the same intensity at temperatures of 4 °, 20 ° and 37 ° C (figure 2).

Для определения оптимального времени контакта вирус - сорбент были проведены исследования влияния длительности взаимодействия вируса с сорбентом на сорбцию вирусов в диапазоне времени от 10 до 60 мин.To determine the optimal time of the virus - sorbent contact, studies were conducted on the effect of the duration of the interaction of the virus with the sorbent on the sorption of viruses in the time range from 10 to 60 minutes

Параметры опыта: контакт 10, 20, 60 мин, масса сорбента 3 мг, объем смеси V=150,0, температура среды 22°C, растворитель ФР. Результаты исследования показали, что сорбция вирусов гриппа происходила наиболее интенсивно в первые 10-20 мин, затем интенсивность снижалась (фиг.3).Test parameters: contact 10, 20, 60 min, sorbent mass 3 mg, mixture volume V = 150.0, medium temperature 22 ° C, solvent solvent. The results of the study showed that the sorption of influenza viruses occurred most intensively in the first 10-20 minutes, then the intensity decreased (figure 3).

Для определения оптимального соотношения массы сорбентов к используемому постоянному объему раствора вируса, V=150,0 мкл, были проведены исследования сорбентов, масса которых варьировала от 1,0 до 10,0 мг, температура среды T=22°C, растворитель ФР. Как показали исследования, сорбция вирусов происходила интенсивно при навесках ДНА или шихты в 2,0-4,0 мг. Было установлено, что практически полное удаление вирусов из растворов происходило при навесках от 4,0 до 6,0 мг, в случае шихты наступала полная деконтаминация растворов от вирусов, в случае наноалмазов она происходила при большей массе сорбента - 8,0 мг (фиг.4).To determine the optimal ratio of the mass of sorbents to the used constant volume of the virus solution, V = 150.0 μl, sorbents were studied, the mass of which varied from 1.0 to 10.0 mg, the temperature of the medium was T = 22 ° C, and the solvent was FR. As studies have shown, sorption of viruses occurred intensively with weighed samples of DND or a mixture of 2.0-4.0 mg. It was found that almost complete removal of viruses from solutions occurred with weights from 4.0 to 6.0 mg; in the case of a charge, decontamination of solutions from viruses occurred; in the case of nanodiamonds, it occurred with a larger sorbent mass of 8.0 mg (Fig. four).

Пример 3. Взаимодействие сорбентов с белками невирусной природыExample 3. The interaction of sorbents with proteins of non-viral nature

Определение возможности конкуренции белков и вирусов за места связывания на сорбенте проведено с помощью сорбции белков невирусной природы, а именно сывороточных белков: иммуноглобулинов и бычьего сывороточного альбумина, которые активно используются в иммунологических исследованиях. В таблице 5 (фиг.5) приведены результаты влияния сорбции альбумина на последующую сорбцию вирусов на примере вируса гриппа A.The possibility of competition of proteins and viruses for binding sites on the sorbent was determined by sorption of proteins of non-viral nature, namely whey proteins: immunoglobulins and bovine serum albumin, which are actively used in immunological studies. Table 5 (figure 5) shows the results of the effect of sorption of albumin on subsequent sorption of viruses on the example of influenza A.

Исследования возможности конкурировать за места связывания на сорбенте белков с вирионными белками проводили по следующей схеме. Первый этап включал сорбцию препаратов альбумина с концентрацией C=1,0, 2,0,4,0 мг/мл на шихту в качестве сорбента, объем 120,0 мкл, контакт 1 ч. Затем комплекс шихта + альбумин массой 2,0 мг добавляли в растворы, содержащие равное количество вируса. Далее анализировали по вышеописанному методу. Как видно из Таблицы 5 (фиг.5), альбумин в концентрациях 2,0-4,0 мг/мл конкурировал с вирусом за места связывания на сорбенте. При концентрации альбумина 1,0 мг/мл он не препятствовал связыванию сорбента с вирусами, что приводило к снижению ГА титра с 4000 до 4 ГА единиц, то есть в 1000 раз. Таким образом, показано, что белок невирусной природы - бычий сывороточный альбумин - способен взаимодействовать с сорбентами, содержащими ДНА и конкурировать за места связывания.Studies of the ability to compete for binding sites on the sorbent of proteins with virion proteins were carried out according to the following scheme. The first stage included the sorption of albumin preparations with a concentration of C = 1.0, 2.0.4.0 mg / ml per charge as a sorbent, a volume of 120.0 μl, 1 hour contact. Then, a charge + albumin complex weighing 2.0 mg added to solutions containing an equal amount of virus. Further analyzed by the method described above. As can be seen from Table 5 (figure 5), albumin in concentrations of 2.0-4.0 mg / ml competed with the virus for binding sites on the sorbent. At an albumin concentration of 1.0 mg / ml, it did not interfere with the binding of the sorbent to viruses, which led to a decrease in the GA titer from 4000 to 4 GA units, i.e., 1000 times. Thus, it was shown that a non-viral protein of nature - bovine serum albumin - is able to interact with sorbents containing DND and compete for binding sites.

Пример 4. Формирование вирусспецифических антител к гемагглютинину вирусов гриппа при иммунизации иммуносорбентом, представленным комплексом ДНА с вирусом гриппа AExample 4. The formation of virus-specific antibodies to hemagglutinin of influenza viruses during immunization with an immunosorbent represented by a complex of DND with influenza A virus

Для выяснения, сохранена ли антигенная (биологическая) активность вирионных поверхностных белков, в частности гемагглютинина, в иммуносорбенте проведено исследование возможности формирования антител к гемагглютинину в модельных опытах на животных. С этой целью крыс иммунизировали иммуносорбентом - комплексом ДНАжидфаз с вирусом A/Южная Каролина/02/2010 (H1N1)pdm09. Контролем служили крысы, иммунизированные аллантоисным пандемическим штаммом вируса гриппа A/Южная Каролина/02/2010 (H1N1)pdm09 или эталонным штаммом вируса гриппа B/Бангладеш/3333/07. В реакции торможения гемагглютинации (РТГА) после обработки крыс получены следующие титры антител, представленные в таблице 6 (фиг.6). После иммунизации комплексов вирусов с ДНА в организме животных формировались антитела в титре 80, что свидетельствует о сохранении антигенных свойств вирусов в составе комплексов с ДНА. В контрольных сыворотках животных, иммунизированных вирусами гриппа A или B, также выявлены антитела к соответствующим вирусам.To find out whether the antigenic (biological) activity of virionic surface proteins, in particular hemagglutinin, is preserved, an immunosorbent investigated the possibility of forming antibodies to hemagglutinin in animal model experiments. For this purpose, rats were immunized with an immunosorbent, a DNA complex of liquid phases with virus A / South Carolina / 02/2010 (H1N1) pdm09. Rats immunized with an allantoic pandemic strain of influenza A virus / South Carolina / 02/2010 (H1N1) pdm09 or a reference strain of influenza virus B / Bangladesh / 3333/07 served as a control. In the reaction of inhibition of hemagglutination (RTGA) after treatment of rats, the following antibody titers were obtained, are presented in table 6 (Fig.6). After immunization of complexes of viruses with DND, antibodies were formed in the body of animals in titer 80 in animals, which indicates the preservation of the antigenic properties of viruses in the complexes with DND. Antibodies to the corresponding viruses were also detected in control sera of animals immunized with influenza A or B viruses.

Пример 5. Иммобилизация специфических антител на иммуносорбент (Иммуносорбция).Example 5. Immobilization of specific antibodies to an immunosorbent (Immunosorption).

Определение способности гемагглютинина вирусов гриппа, например штамма A/Перт/06/09 (H3N2) в комплексе с сорбентом, связываться с антителами в растворах проводили следующим образом. В раствор 1% альбумина помещали комплексы вирусов с шихтой и вирусов с ДНА на 1 ч, T=20°C, для соединения свободных функциональных групп сорбента с белковыми группами альбумина. Далее несвязанный альбумин удаляли центрифугированием, добавляли по 150,0 мкл сыворотки и ставили на контакт в холодильник на 18 ч при 4°C. После контакта сыворотку отделяли от образованного комплекса центрифугированием и исследовали на наличие антител в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Результаты, представленные в таблице 7 (фиг.7), показывают, что произошла иммобилизация специфических антител на иммуносорбент.Determination of the ability of hemagglutinin of influenza viruses, for example strain A / Perth / 06/09 (H3N2) in combination with a sorbent, to bind to antibodies in solutions was carried out as follows. In a solution of 1% albumin, complexes of viruses with a charge and viruses with DND for 1 h, T = 20 ° C, were placed to combine the free functional groups of the sorbent with albumin protein groups. Next, unbound albumin was removed by centrifugation, 150.0 μl of serum was added and contacted in a refrigerator for 18 hours at 4 ° C. After contact, the serum was separated from the formed complex by centrifugation and examined for the presence of antibodies in the hemagglutination inhibition reaction (RTGA). The results presented in table 7 (Fig.7) show that there was an immobilization of specific antibodies to the immunosorbent.

Пример 6. Получение иммуносорбента. С этой целью на наноалмазные материалы, например на ДНА, сорбировали антитела из разведенной иммунной сыворотки, например сыворотки к вирусу B.Example 6. Obtaining immunosorbent. For this purpose, antibodies from divorced immune serum, for example, serum to virus B, were adsorbed onto nanodiamonds, for example DND.

Образовавшийся иммуносорбент отделяли центрифугированием. Титр сыворотки определяли в РТГА. Результаты показывают, что ДНА содержащие материалы способны связываться с вирусспецифическими антителами из раствора (фиг.8).The resulting immunosorbent was separated by centrifugation. Serum titer was determined in rtga. The results show that DND-containing materials are able to bind to virus-specific antibodies from solution (Fig. 8).

Пример 7. Десорбция вируса с иммуносорбентаExample 7. Desorption of the virus from the immunosorbent

Как известно, иммуносорбент - это вещество с сорбированными на нем антигенами или антителами, используемое для извлечения соответственно антител или антигенов из сложных смесей. Особый интерес представляло определить, насколько стабильно связан вирус с сорбентом в иммуносорбентах. Для этого исследовали десорбцию вируса с иммуносорбентов, например с иммуносорбентов, представленных комплексом ДНАгазфаз с вирусами гриппа A или B Десорбция вируса с иммуносорбентов была исследована на аллантоисных вирусах гриппа A/Калифорния/04/06(НШ1)рс1 т09 и концентрированных вирусах гриппа B/Флорида/04/06. Иммуносорбенты смешивали в ФР и ставили на контакт при 4°C и 22°C в течение 1, 24, 48 ч. Затем иммуносорбенты осаждали и центрифугировали в центрифуге в течение 5 мин. Надосадочную жидкость исследовали на наличие вируса в РГА. Было установлено, что десорбция вирусов с поверхности иммуносорбента не наблюдалась при заданных условиях (фиг.9).As you know, an immunosorbent is a substance with antigens or antibodies adsorbed on it, used to extract antibodies or antigens from complex mixtures, respectively. Of particular interest was to determine how stable the virus is associated with the sorbent in the immunosorbents. For this, desorption of the virus from immunosorbents, for example, from immunosorbents represented by a complex of DND gas phases with influenza A or B viruses, was studied. Desorption of the virus from immunosorbents was studied on allantoic influenza viruses A / California / 04/06 (НС1) pc1 t09 and concentrated influenza viruses B / Florida / 04/06. The immunosorbents were mixed in the RF and contacted at 4 ° C and 22 ° C for 1, 24, 48 hours. Then, the immunosorbents were precipitated and centrifuged in a centrifuge for 5 minutes. The supernatant was examined for the presence of virus in the RGA. It was found that the desorption of viruses from the surface of the immunosorbent was not observed under given conditions (Fig.9).

Пример 8. Определение токсичности ДНАExample 8. Determination of toxicity of DNA

Для исследования токсичности ДНА использовали 2 модели - клетки и животные (белые крысы). При анализе влияния ДНА на культуру клеток MDCK не была выявлена токсичность ДНА и шихты при концентрации ≤1,0 mg/ml. Для исследования животные были иммунизированы комплексами ДНАжидфаз с концентрированным вирусом гриппа пандемический штамм A/Южная Каролина/02/2010 (H1N1)pdm09. Контрольная группа крыс была иммунизирована только вирусом A/Южная Каролина/02/2010 (H1N1)pdm09, вторая была не иммунная. Результаты исследования иммунограмм выявили двухкратное увеличение уровня только моноцитов в сыворотках животных, иммунизированных комплексами ДНА с вирусами гриппа A, в то время как другие параметры формулы крови были в норме.To study the toxicity of DND, 2 models were used - cells and animals (white rats). An analysis of the effect of DND on the MDCK cell culture did not reveal the toxicity of DND and the mixture at a concentration of ≤1.0 mg / ml For the study, animals were immunized with DND complexes of the liquid phase with concentrated influenza virus pandemic strain A / South Carolina / 02/2010 (H1N1) pdm09. The control group of rats was immunized only with virus A / South Carolina / 02/2010 (H1N1) pdm09, the second was not immune. The results of the study of immunograms revealed a twofold increase in the level of only monocytes in the sera of animals immunized with DNA complexes with influenza A viruses, while other parameters of the blood formula were normal.

Пример 9. Взаимодействие двунитевых фрагментов ДНК с ДНАExample 9. The interaction of double-stranded DNA fragments with DNA

Фрагменты кДНК получены в полимеразной цепной реакции при амплифицировании фрагментов генов (РНК) вирусов гриппа A и B. Сорбция проведена при температуре T=22°C. Результаты анализа представлены на Фиг.10а, б. Фрагменты кДНК вируса гриппа B с размерами 190 пн адсорбировались как на ДНА, так и на шихту, фрагменты с размерами 560 пн полностью сорбировались только шихтой (Фиг.10 а, б).Fragments of cDNA obtained in the polymerase chain reaction during amplification of gene fragments (RNA) of influenza A and B viruses. Sorption was carried out at a temperature of T = 22 ° C. The results of the analysis are presented in Fig.10a, b. Influenza B virus cDNA fragments with sizes of 190 bp were adsorbed on both the BOTTOM and the charge, fragments with sizes of 560 bp were completely adsorbed only by the charge (Fig. 10 a, b).

При исследовании сорбции кДНК вирусов гриппа A на модифицированные при разных температурах от 600 до 1000°C ДНАграф, установлена полная сорбция кДНК, в то время как на амининированные и хлорированные ДНА - лишь частичная. Сорбция фрагментов кДНК на наноалмазные материалы существенно зависит от состояния их поверхности. Наибольшая сорбция наблюдалась в случае шихты и графитизированных при разных температурах наноалмазов.When cDNA sorption study of influenza A viruses in modified at various temperatures from 600 to 1000 ° C BOTTOM graph installed complete sorption cDNA while on amininirovannye and chlorinated beam - only partial. The sorption of cDNA fragments on nanodiamonds substantially depends on the state of their surface. The greatest sorption was observed in the case of a mixture and nanodiamonds graphitized at different temperatures.

Таким образом, предлагаемые сорбенты - шихта, ДНА и их модифицированные аналоги, способны в широком диапазоне температур за короткое время сорбировать вирусы как оболочечные, так и необолочечные. Вирусы, в том числе и вирусы гриппа, независимо от их антигенной структуры, степени очистки и способа культивирования, с помощью предлагаемых сорбентов могут быть удалены из вируссодержащих жидкостей. При этом иммобилизованные на наноалмазные материалы вирусы сохраняют способность взаимодействовать с антителами в растворах и вызывать продукцию сывороточных вирусспецифических антител при иммунизации животных. Кроме того, из раствора на сорбенты могут сорбироваться иммуноглобулины - вирусспецифические антитела. Изученные сорбенты можно также использовать для деконтаминации растворов от других вирусов. Полученные данные указывают на широкий спектр белковых материалов, которые могут быть удалены с помощью предлагаемых сорбентов из различных биологических жидкостей. Это белки невирусной природы, например альбумин и иммуноглобулины. Изобретение также решает задачу создания сорбентов для деконтаминации растворов от нанопатогенов, например вирусов, на основе наноалмазных материалов. Предлагаемое изобретение может быть использовано для обеззараживания жидкостей. В последние годы участились случаи передачи вируса гриппа A от птиц к людям в районах близкого контакта птиц с человеком. Предлагаемое изобретение можно использовать для удаления вирусов из водных резервуаров, зараженных вирусами гриппа птиц. Комплексы вирусов с наноалмазсодержащими сорбентами - иммуносорбенты - могут быть использованы для адресной доставки вирионных белков или ампликонов. Совокупность выявленных адсорбционных свойств препаратов наноалмазных сорбентов с уникальными физико-химическими свойствами (инертностью), экономичностью (дешевизной сырья: 1 г наноалмаза стоит порядка 2.5$ и 1 грамм шихты в порядка 1$), позволяет приступить к разработке фильтров. Модифицирование ДНА увеличивает их стоимость не более чем на 50%.Thus, the proposed sorbents - the mixture, DND and their modified analogs, are capable of absorbing both enveloped and non-enveloped viruses in a wide temperature range in a short time. Viruses, including influenza viruses, regardless of their antigenic structure, degree of purification and method of cultivation, using the proposed sorbents can be removed from virus-containing liquids. Moreover, viruses immobilized on nanodiamond materials retain the ability to interact with antibodies in solutions and cause the production of serum virus-specific antibodies during immunization of animals. In addition, immunoglobulins, virus-specific antibodies, can be adsorbed from the solution onto sorbents. The studied sorbents can also be used for decontamination of solutions from other viruses. The data obtained indicate a wide range of protein materials that can be removed using the proposed sorbents from various biological fluids. These are non-viral proteins, such as albumin and immunoglobulins. The invention also solves the problem of creating sorbents for decontamination of solutions from nanopathogens, such as viruses, based on nanodiamonds. The present invention can be used for disinfection of liquids. In recent years, cases of transmission of influenza A virus from birds to people in areas of close contact between birds and humans have become more frequent. The present invention can be used to remove viruses from water tanks infected with avian influenza viruses. Virus complexes with nanodiamond-containing sorbents - immunosorbents - can be used for targeted delivery of virion proteins or amplicons. The combination of the revealed adsorption properties of nanodiamond sorbent preparations with unique physicochemical properties (inertness), cost-effectiveness (low cost of raw materials: 1 g of nanodiamond costs about $ 2.5 and 1 gram of charge in the order of $ 1), allows you to start developing filters. Modification of DND increases their cost by no more than 50%.

ЛитератураLiterature

1. Даниленко В.В. Из истории открытия синтеза наноалмазов. Физика твердого тела. 2004, т.46, вып.4, с.581-584.1. Danilenko VV From the history of the discovery of the synthesis of nanodiamonds. Solid State Physics. 2004, v. 46, issue 4, p. 581-584.

2. Долматов В.Ю., Веретеннникова М.В., Марчуков В.А и др. Современные промышленные возможности синтеза наноалмазов. Физика твердого тела, 2004, т.46, в. 4, с.596-600.2. Dolmatov V.Yu., Veretennnikova MV, Marchukov V.A. et al. Modern industrial possibilities for the synthesis of nanodiamonds. Solid State Physics, 2004, vol. 46, c. 4, p. 596-600.

3. Долматов В.Ю. Ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза: свойства и применение. Успехи химии. 2001, т.70(7), с.687-708.3. Dolmatov V.Yu. Ultrafine detonation synthesis diamonds: properties and applications. The success of chemistry. 2001, v. 70 (7), p. 687-708.

4. Кулакова И.И. Химия поверхности наноалмазов. Физика твердого тела. 2004, т.46, №4, с.621-628.4. Kulakova I.I. Surface chemistry of nanodiamonds. Solid State Physics. 2004, vol. 46, No. 4, p. 621-628.

5. Кулакова И.И. Модифицирование детонационного наноалмаза: влияние на физико-химические свойства. Рос. хим. ж. (Ж. Рос. хим. Общества им. Д.И.Менделеева). 2004, т.XLVIII, 5, с.97-106.5. Kulakova I.I. Modification of detonation nanodiamonds: effects on physicochemical properties. Grew up. Chem. g. (J. Ros. Chemical. Society named after D.I. Mendeleev). 2004, vol. XLVIII, 5, pp. 97-106.

6. Павлов Е.В., Скрябин Ю.А. Способ удаления примеси неалмазного углерода и устройство для его осуществления. Патент RU 2019502.6. Pavlov E.V., Scriabin Yu.A. A method of removing impurities of non-diamond carbon and a device for its implementation. Patent RU 2019502.

7. Ларионова И.С., Молостов И.Н., Кулагина Л.С и др. Способ очистки синтетических ультрадисперсных алмазов. Патент RU 2168462.7. Larionova IS, Molostov IN, Kulagina L.S. et al. Method for the purification of synthetic ultrafine diamonds. Patent RU 2168462.

8. Долматов В.Ю., Сущев В.Г., Марчуков В.А. и др. Способ выделения синтетических ультрадисперсных алмазов. Патент RU 2109683.8. Dolmatov V.Yu., Suschev V.G., Marchukov V.A. et al. Method for isolating synthetic ultrafine diamonds. Patent RU 2109683.

9. Долматов В.Ю., Веретенникова М.В., Марчуков В.А. и др. Современные промышленные возможности синтеза наноалмазов. Физика твердого тела. 2004, т.46, вып.4, с.596-600.9. Dolmatov V.Yu., Veretennikova M.V., Marchukov V.A. and others. Modern industrial capabilities of the synthesis of nanodiamonds. Solid State Physics. 2004, vol. 46, issue 4, p. 596-600.

10. Spitsyn B.V. et al. Inroad to modification of detonation nanodiamond, Diamond and Related Material. 2006, v. 15, p.296-299.10. Spitsyn B.V. et al. Inroad to modification of detonation nanodiamond, Diamond and Related Material. 2006, v. 15, p. 296-299.

11. Долматов В.Ю. Ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза: свойства и применение. Успехи химии. 2001, т.70(7), с.687-708.11. Dolmatov V.Yu. Ultrafine detonation synthesis diamonds: properties and applications. The success of chemistry. 2001, v. 70 (7), p. 687-708.

12. Пузырь А.П., Бондарь B.C., Селимханова З.Ю. и др. Результаты исследования возможности применения детонационных наноалмазов в качестве энтеросорбента. Сибирское медицинское обозрение. 2004, т.2-3, с.25-28.12. Bubble A.P., Cooper B.C., Selimkhanova Z.Yu. et al. Research results on the possibility of using detonation nanodiamonds as an enterosorbent. Siberian Medical Review. 2004, v.2-3, p.25-28.

13. Долматов В.Ю. Биологические активные ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза. Патент RU 2203068.13. Dolmatov V.Yu. Biological active ultrafine diamonds of detonation synthesis. Patent RU 2203068.

14. Елинсон В.М., Плотников В.М. и др. Композиция, обладающая иммуностимулирующими свойствами. Патент RU 2348416.14. Elinson V.M., Plotnikov V.M. and others. A composition having immunostimulating properties. Patent RU 2348416.

15. Purtov K.V. et al. The interaction of linear and ring form of DNA molecules with nanodiamonds synthesized by detonation. Nanotechnology 2008, 325101, v. 19, p.1-3.15. Purtov K.V. et al. The interaction of linear and ring form of DNA molecules with nanodiamonds synthesized by detonation. Nanotechnology 2008, 325101, v. 19, p. 1-3.

16. Бондарь B.C., Позднякова И.О., Пузырь А.П. Применение наноалмазов для разделения и очистки белков. Физика твердого тела. 2004, т.46, вып.4, с.737-739.16. Cooper B.C., Pozdnyakova I.O., Bubble A.P. The use of nanodiamonds for the separation and purification of proteins. Solid State Physics. 2004, v. 46, issue 4, p. 737-739.

17. E. Perevedentseva et al. The interaction of the protein lysozyme with bacteria E.coli observed using nanodiamond labeling. Nanotechnology 2007, v. 18, 315102; Liu Y. L., Sun K.W. Protein Functionalized Nanodiamond Arrays. Nanoscale Res. Lett, 2010, June 5(6), p.1045-1050.17. E. Perevedentseva et al. The interaction of the protein lysozyme with bacteria E. coli observed using nanodiamond labeling. Nanotechnology 2007, v. 18, 315102; Liu Y. L., Sun K.W. Protein Functionalized Nanodiamond Arrays. Nanoscale res. Lett, 2010, June 5 (6), p.1045-1050.

18. Пузырь А.П., Позднякова И.О., Бондарь B.C. Создание люминесцентного биочипа с использованием наноалмазов и бактериальной люциферазы. Физика твердого тела, 2004, т.46, вып.4, с.740-742.18. Bubble A.P., Pozdnyakova I.O., Cooper B.C. Creation of a luminescent biochip using nanodiamonds and bacterial luciferase. Solid State Physics, 2004, v. 46, issue 4, pp. 740-742.

19. Adnan A., Lam R., Chen H et al. Nanodiamond: Atomistic Simulation and Measurement of pH Dependent Cancer Therapeutic Interactions with Nanodiamond Carrier. Molecular Pharmaceutics, 2011, v. 8 (2), p.368-374) (http://www.nanonewsnet.ru/news/2007/nanoalmazy-protiv-raka).19. Adnan A., Lam R., Chen H et al. Nanodiamond: Atomistic Simulation and Measurement of pH Dependent Cancer Therapeutic Interactions with Nanodiamond Carrier. Molecular Pharmaceutics, 2011, v. 8 (2), p.368-374) (http://www.nanonewsnet.ru/news/2007/nanoalmazy-protiv-raka).

20. Fujimura et al. Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus. Patent US 7491554.20. Fujimura et al. Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus. Patent US 7491554.

21. Sirois S., Touaibia M. Glycosylation of HIV-1 gp 120 V3 loop: towards the rational design of a synthetic carbohydrate vaccine. Curr. Med. Chem. 2007, 14(30), p.3232-42).21. Sirois S., Touaibia M. Glycosylation of HIV-1 gp 120 V3 loop: towards the rational design of a synthetic carbohydrate vaccine. Curr. Med. Chem. 2007, 14 (30), p. 3232-42).

22. Fujimura et al. Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus. Patent US 7498178.22. Fujimura et al. Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus. Patent US 7498178.

23. Иванова B.T., Курочкина Я.Е., Буравцев B.H. и др. Изучение взаимодействия вирусов гриппа А и В с углеродсодержащим сорбентом. Вопросы вирусологии. 2008, 2, с.40-43.23. Ivanova B.T., Kurochkina Y.E., Buravtsev B.H. et al. Study of the interaction of influenza A and B viruses with a carbon-containing sorbent. Questions of virology. 2008, 2, pp. 40-43.

Claims (21)

1. Сорбент, представляющий собой наноалмазный материал, являющийся продуктом детонационного синтеза, полученный посредством взрыва смеси тринитротолуола и гексогена, взятых в отношении 50/50 при давлении 16-23 ГПа и температуре 3000 K, содержащий индивидуальные частицы размером от 5 нм до агрегатов различной формы размером 300 нм, используемый для удаления вирусов, вирусных антител, фрагментов ДНК, белков невирусной природы и в качестве основы для получения иммуносорбентов.1. Sorbent, which is a nanodiamond material, which is the product of detonation synthesis, obtained by explosion of a mixture of trinitrotoluene and hexogen, taken in the ratio 50/50 at a pressure of 16-23 GPa and a temperature of 3000 K, containing individual particles ranging in size from 5 nm to aggregates of various shapes 300 nm in size, used to remove viruses, viral antibodies, DNA fragments, non-viral proteins and as a basis for the production of immunosorbents. 2. Сорбент, представляющий собой наноалмазный материал, полученный в результате жидкофазной очистки шихты в разбавленной азотной кислоте при давлении 80 атм и температуре 220°C с последующей многостадийной отмывкой наноалмазов от кислоты, при этом pH суспензии составляет 6,2 при концентрации наноалмазов 1 г/л.2. The sorbent, which is a nanodiamond material, obtained as a result of liquid-phase purification of the charge in dilute nitric acid at a pressure of 80 atm and a temperature of 220 ° C, followed by multi-stage washing of the nanodiamonds from the acid, while the pH of the suspension is 6.2 at a concentration of nanodiamonds of 1 g / l 3. Сорбент, представляющий собой наноалмазный материал, полученный в результате газофазовой очистки шихты в парах азотной кислоты при температуре до 300°C с последующей очисткой наноалмазов от неуглеродных примесей в токе осушенного хлористого водорода при температуре 850°C, при этом pH суспензий составляет 5 при концентрации наноалмазов 1 г/л.3. Sorbent, which is a nanodiamond material obtained by gas-phase purification of a mixture in nitric acid vapors at temperatures up to 300 ° C, followed by purification of nanodiamonds from non-carbon impurities in a stream of dried hydrogen chloride at a temperature of 850 ° C, while the pH of the suspensions is 5 at the concentration of nanodiamonds is 1 g / l. 4. Сорбент, представляющий собой детонационный графитизированный наноалмазный материал, полученный при нагреве в аргоне высокой чистоты при 1000°C в течение 1 часа сорбента, охарактеризованного в п. 2, до осуществления частичного фазового перехода алмаз - графит.4. The sorbent, which is a detonation graphitized nanodiamond material, obtained by heating in high-purity argon at 1000 ° C for 1 hour of the sorbent described in paragraph 2, before the partial phase transition diamond - graphite. 5. Сорбент, представляющий собой детонационный хлорированный наноалмазный материал, полученный при нагреве сорбента, охарактеризованного в п. 3, при 450°C в течение 2 часов в парогазовой смеси CCl4/Ar, содержащей 3% по объему CCl4.5. The sorbent, which is a detonation chlorinated nanodiamond material, obtained by heating the sorbent described in paragraph 3, at 450 ° C for 2 hours in a CCl 4 / Ar vapor-gas mixture containing 3% by volume CCl 4 . 6. Сорбент, представляющий собой детонационный аминированный наноалмазный материал, полученный при нагреве сорбента, охарактеризованного в п. 5, при 400°C в течение 1 часа при давлении 1 атм в аммиаке высокой чистоты.6. Sorbent, which is a detonation aminated nanodiamond material obtained by heating the sorbent described in paragraph 5, at 400 ° C for 1 hour at a pressure of 1 atm in high purity ammonia. 7. Способ удаления вирусов, включающий инкубацию вируссодержащей жидкости с сорбентом, охарактеризованным в любом из пп. 1-6.7. A method for removing viruses, including incubating a virus-containing liquid with a sorbent, characterized in any one of paragraphs. 1-6. 8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что жидкость содержит вирусы, имеющие наружную оболочку.8. The method according to p. 7, characterized in that the liquid contains viruses having an outer shell. 9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что жидкость содержит вирусы, не имеющие наружную оболочку.9. The method according to p. 7, characterized in that the liquid contains viruses that do not have an outer shell. 10. Способ по п. 7, отличающийся тем, что жидкость содержит вирусы гриппа.10. The method according to p. 7, characterized in that the liquid contains influenza viruses. 11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что жидкость содержит вирусы гриппа А (H3N2).11. The method according to p. 10, characterized in that the liquid contains influenza A viruses (H3N2). 12. Способ по п. 10, отличающийся тем, что жидкость содержит вирусы гриппа А (H1N1)pdm09.12. The method according to p. 10, characterized in that the liquid contains influenza A (H1N1) pdm09 viruses. 13. Способ по п. 10, отличающийся тем, что жидкость содержит вирусы гриппа В.13. The method according to p. 10, characterized in that the liquid contains influenza viruses B. 14. Способ по п. 10, отличающийся тем, что инкубацию проводят при перемешивании.14. The method according to p. 10, characterized in that the incubation is carried out with stirring. 15. Способ удаления фрагментов ДНК посредством иммобилизации их на сорбент, охарактеризованный в любом из пп. 1-6.15. The method of removing DNA fragments by immobilizing them on a sorbent, characterized in any one of paragraphs. 1-6. 16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что иммобилизацию проводят при перемешивании.16. The method according to p. 15, characterized in that the immobilization is carried out with stirring. 17. Способ удаления специфических антител посредством иммобилизации их на сорбент, охарактеризованный в любом из пп. 1-6.17. A method for removing specific antibodies by immobilizing them on a sorbent, characterized in any one of paragraphs. 1-6. 18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что иммобилизацию проводят при перемешивании.18. The method according to p. 17, characterized in that the immobilization is carried out with stirring. 19. Способ получения иммуносорбента, включающий инкубацию антителсодержащей жидкости или вируссодержащей жидкости с сорбентом, охарактеризованным в любом из пп. 1-6.19. A method of producing an immunosorbent, comprising incubating an antibody-containing liquid or a virus-containing liquid with a sorbent, characterized in any one of paragraphs. 1-6. 20. Способ иммуносорбции, включающий смешивание раствора, содержащего специфические антитела, с иммуносорбентом с фиксированным на нем антигеном, полученным по п. 19.20. An immunosorption method, comprising mixing a solution containing specific antibodies with an immunosorbent with a fixed antigen obtained according to claim 19. 21. Способ иммуносорбции, включающий смешивание вируссодержащего раствора с иммуносорбентом с фиксированным на нем специфическим антителом, полученным по п. 19. 21. The method of immunosorption, comprising mixing a virus-containing solution with an immunosorbent with a specific antibody fixed on it, obtained according to claim 19.
RU2013117675/05A 2013-04-17 2013-04-17 Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof RU2569510C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013117675/05A RU2569510C2 (en) 2013-04-17 2013-04-17 Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013117675/05A RU2569510C2 (en) 2013-04-17 2013-04-17 Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013117675A RU2013117675A (en) 2014-10-27
RU2569510C2 true RU2569510C2 (en) 2015-11-27

Family

ID=53380436

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013117675/05A RU2569510C2 (en) 2013-04-17 2013-04-17 Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2569510C2 (en)

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2306258C1 (en) * 2006-03-06 2007-09-20 Алексей Петрович Пузырь Synthetic diamond-containing substances and a method for separation thereof
US7491554B2 (en) * 2003-04-23 2009-02-17 Tadamasa Fujimura Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus
US7498178B2 (en) * 2003-04-23 2009-03-03 Tadamasa Fujimura Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus
RU2348416C2 (en) * 2006-07-20 2009-03-10 Вера Матвеевна Елинсон Composition with immunopotentiating properties
RU2348580C1 (en) * 2005-12-30 2009-03-10 Государственное Учреждение "Федеральное Агентство По Правовой Защите Результатов Интеллектуальной Деятельности Военного, Специального И Двойного Назначения" При Министерстве Юстиции Российской Федерации Nanodiamond and method of its obtainment
RU2352387C1 (en) * 2007-07-19 2009-04-20 Константин Викторович Пуртов Nanodiamond sorbent and method of its obtaining
RU2366713C2 (en) * 2007-08-10 2009-09-10 Алексей Петрович Пузырь Isolation method for natural and recombinant proteins and other biological compounds
RU2400537C2 (en) * 2008-11-05 2010-09-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный университет" Method of isolation and purification of deoxyribonucleic acids
RU2451544C2 (en) * 2009-12-21 2012-05-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Chromatography sorbent
US8389584B2 (en) * 2007-05-21 2013-03-05 International Technology Center Nanodiamond material, method and device for purifying and modifying a nanodiamond

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7491554B2 (en) * 2003-04-23 2009-02-17 Tadamasa Fujimura Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus
US7498178B2 (en) * 2003-04-23 2009-03-03 Tadamasa Fujimura Carrier of a diamond fine particle for immobilizing virus
RU2348580C1 (en) * 2005-12-30 2009-03-10 Государственное Учреждение "Федеральное Агентство По Правовой Защите Результатов Интеллектуальной Деятельности Военного, Специального И Двойного Назначения" При Министерстве Юстиции Российской Федерации Nanodiamond and method of its obtainment
RU2306258C1 (en) * 2006-03-06 2007-09-20 Алексей Петрович Пузырь Synthetic diamond-containing substances and a method for separation thereof
RU2348416C2 (en) * 2006-07-20 2009-03-10 Вера Матвеевна Елинсон Composition with immunopotentiating properties
US8389584B2 (en) * 2007-05-21 2013-03-05 International Technology Center Nanodiamond material, method and device for purifying and modifying a nanodiamond
RU2352387C1 (en) * 2007-07-19 2009-04-20 Константин Викторович Пуртов Nanodiamond sorbent and method of its obtaining
RU2366713C2 (en) * 2007-08-10 2009-09-10 Алексей Петрович Пузырь Isolation method for natural and recombinant proteins and other biological compounds
RU2400537C2 (en) * 2008-11-05 2010-09-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный университет" Method of isolation and purification of deoxyribonucleic acids
RU2451544C2 (en) * 2009-12-21 2012-05-27 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Chromatography sorbent

Also Published As

Publication number Publication date
RU2013117675A (en) 2014-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kalbfuss et al. Purification of cell culture‐derived human influenza A virus by size‐exclusion and anion‐exchange chromatography
US4168300A (en) Method of removal of hepatitis virus
Taverne et al. The purification and concentration of viruses and virus soluble antigens on calcium phosphate
JP6720288B2 (en) Aseptic purification process for viruses
JP2008505742A (en) Method for separating components in a sample using silane-treated silica filter media
US20120097613A1 (en) Imprinted polymer nanoparticles
AU2013208187B2 (en) Purification of flaviviruses
KR102136694B1 (en) Method for concentrating microorganism and extracting nucleic acid using diatomaceous earth
JPH11511335A (en) Method for adsorbing virus from liquid composition
JP2537850B2 (en) Manufacturing method of immunoglobulin without retrovirus
JPS62286932A (en) Inactivation of proliferative filterable pathogen
RU2569510C2 (en) Sorbent representing nanodiamond material (versions), methods for obtaining and application thereof
KR20150080643A (en) Ipv-dpt vaccine
US20100297604A1 (en) Methods and reagents for virus isolation and detection
Kalbfuss-Zimmermann et al. Viral vaccines purification
JP2003128502A (en) Treating material for harmful substance and method for producing the same
Ivanova et al. Adsorption of influenza A and B viruses on detonation nanodiamonds materials
Ivanova et al. Interaction of nanodiamonds materials with influenza viruses
Petrova et al. Concentration of viruses and electron microscopy
RU2130069C1 (en) Method of virus concentrating
RU2329505C1 (en) Method of immunosorbent production for virus-specific antibody binding
CN102181461A (en) Method for expressing target polypeptide on filobactivirus at high density and application thereof
RU2372951C2 (en) Polyaniline as sorbents for removing viruses, non-viral proteins and as immunosorbent base, method of removing or attaching viruses using said sorbents, immunoadsorption method using said sorbents, sorption method using said sorbents
JP2002505674A (en) Method for removing viruses and molecular pathogens in biological material
CN1583185A (en) Method and apparatus for removing virus and cells from blood by magnetic composite micro-granules

Legal Events

Date Code Title Description
HZ9A Changing address for correspondence with an applicant
PD4A Correction of name of patent owner