RU2548803C2 - PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING EYE INFECTIONS P. Aeruginosa CONTAINING RECOMBINANT LYSOZYME - Google Patents
PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING EYE INFECTIONS P. Aeruginosa CONTAINING RECOMBINANT LYSOZYME Download PDFInfo
- Publication number
- RU2548803C2 RU2548803C2 RU2011148108/10A RU2011148108A RU2548803C2 RU 2548803 C2 RU2548803 C2 RU 2548803C2 RU 2011148108/10 A RU2011148108/10 A RU 2011148108/10A RU 2011148108 A RU2011148108 A RU 2011148108A RU 2548803 C2 RU2548803 C2 RU 2548803C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lysozyme
- pharmaceutical composition
- rabbits
- aeruginosa
- eye
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION
Изобретение относится к биотехнологии и медицине и касается разработки новых антимикробных препаратов, основанных на рекомбинантных лизоцимах бактериофагов, эффективных в отношении множественно устойчивых к антибиотикам штаммов микроорганизмов, в частности, изобретение касается фармацевтической композиции на основе рекомбинантного лизоцима бактериофага FMV P. Aeruginosa.The invention relates to biotechnology and medicine and relates to the development of new antimicrobial agents based on recombinant bacteriophage lysozymes effective against microbial strains of microorganisms that are multi-resistant to antibiotics, in particular, the invention relates to a pharmaceutical composition based on the recombinant lysozyme of bacteriophage FMV P. Aeruginosa.
Уровень техникиState of the art
Многолетнее использование антибиотиков привело к тому, что многие патогенные микроорганизмы приобрели множественную лекарственную устойчивость. Разработка нового антибиотика и его клинические испытания занимают многие годы, а их клиническое использование часто приводит к формированию бактерий, устойчивых к вновь синтезированным антибиотикам.Long-term use of antibiotics has led to the fact that many pathogenic microorganisms have acquired multidrug resistance. The development of a new antibiotic and its clinical trials take many years, and their clinical use often leads to the formation of bacteria resistant to newly synthesized antibiotics.
Проблема лекарственной устойчивости является острой для бактерий Pseudomonas aeruginosa, одним из основных возбудителей гнойно-воспалительных процессов, особенно в условиях стационара. Р. aeruginosa распространена повсеместно, существенное значение в циркуляции возбудителя имеет вода, в которой он может выживать до года (при 37°С), в том числе во многих растворах, применяемых в медицине (например, жидкость для хранения контактных линз). Р. aeruginosa является одним из основных возбудителей нозокомиальных пневмоний, поражений мочеполовой системы у урологических больных, раневых и ожоговых инфекций, вызывает 20-25% гнойных хирургических инфекций и первичных грамотрицательных бактериемий. Для заболеваний, вызываемых Pseudomonas aeruginosa, характерна чрезвычайно высокая устойчивость к действию антибиотиков в связи с множественной резистентностью, передаваемой R-плазмидами, и связанное с этим тяжелое течение заболеваний [Поздеев О.К. Медицинская микробиология / под редакцией В.И.Покровского. Москва: ГЭОТАР-МЕД, 2002, с.230].The problem of drug resistance is an acute one for the bacteria Pseudomonas aeruginosa, one of the main causative agents of purulent-inflammatory processes, especially in a hospital setting. P. aeruginosa is ubiquitous, water is of great importance in the circulation of the pathogen, in which it can survive up to a year (at 37 ° C), including in many solutions used in medicine (for example, liquid for storing contact lenses). P. aeruginosa is one of the main causative agents of nosocomial pneumonia, lesions of the genitourinary system in urological patients, wound and burn infections, causes 20-25% of purulent surgical infections and primary gram-negative bacteremia. Diseases caused by Pseudomonas aeruginosa are characterized by an extremely high antibiotic resistance due to the multiple resistance transmitted by R-plasmids, and the associated severe course of the diseases [Pozdeev OK. Medical Microbiology / edited by V.I. Pokrovsky. Moscow: GEOTAR-MED, 2002, p.230].
Бактерии Pseudomonas aeruginosa способны к формированию биопленки, которая при некоторых инфекциях инкапсулируется в альгинатный матрикс. Известно, что бактерии, способные образовывать бактериальные колонии в форме биопленки, более устойчивы к лечению антибиотиками, чем в жидких культурах [Davies D. Understanding biofilm resistance to antibacterial agents. Nat. Rev. Drug Discov., 2003, v. 2, p.114-122]. Предполагают, что антибиотикоустойчивость бактерий в биопленках связана, в частности, с задержкой или ограниченным проникновением антимикробных агентов через экзополисахаридный матрикс биопленки. Лечение антибиотиками, в особенности в субингибирующих концентрациях, может способствовать образованию биопленок [Rachid S. et.al. Effect of subinhibitory antibiotic concentrations on polysaccharide intercellular adhesin expression in biofilm-forming S. epidermidis. Antimicrob. Agents Chemother., 2000, v. 44, p.3357-63; Otto M. Bacterial evasion of antimicrobial peptides by biofilm formation. Curr. Top Microbiol. Immunol., 2006, v. 306, p.251-258].Bacteria Pseudomonas aeruginosa are capable of forming a biofilm, which in some infections is encapsulated in an alginate matrix. Bacteria capable of forming bacterial colonies in the form of biofilms are known to be more resistant to antibiotic treatment than in liquid cultures [Davies D. Understanding biofilm resistance to antibacterial agents. Nat. Rev. Drug Discov., 2003, v. 2, p. 114-122]. It is suggested that the antibiotic resistance of bacteria in biofilms is associated, in particular, with the delay or limited penetration of antimicrobial agents through the exopolysaccharide matrix of the biofilm. Antibiotic treatment, especially at subinhibitory concentrations, may contribute to the formation of biofilms [Rachid S. et.al. Effect of subinhibitory antibiotic concentration on polysaccharide intercellular adhesin expression in biofilm-forming S. epidermidis. Antimicrob. Agents Chemother., 2000, v. 44, p. 3357-63; Otto M. Bacterial evasion of antimicrobial peptides by biofilm formation. Curr. Top Microbiol. Immunol., 2006, v. 306, p. 251-258].
Таким образом, актуальной проблемой в успешном лечении заболеваний, вызываемых Pseudomonas aeruginosa, явлется поиск и создание препаратов на основе соединений, способных деградировать альгинатную пленку.Thus, the urgent problem in the successful treatment of diseases caused by Pseudomonas aeruginosa is the search and development of drugs based on compounds that can degrade the alginate film.
Относительно новый подход к терапии бактериальных инфекций состоит в использовании кодируемых фаговым геномом продуктов, обладающих бактерицидным действием [Fishetti V.A. Bacteriophage lytic enzymes:novel anti-infectives. TRENDS in Microbiology, 2005, v.l3, 491-496]. Повышенный интерес к использованию фаговых лизоцимов, ферментов класса гидролаз, способных расщеплять гликозидные связи в молекулах бактериальных пептидогликанов (представляющих гетерополимеры, состоящие из повторяющихся дисахаридных групп - N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных через р-гликозидные связи) и вызывать тем самым разрушение клеточных стенок и гибель бактерий, связан с увеличившимся распространением штаммов патогенных грамотрицательных бактерий, обладающих множественной устойчивостью к антибиотикам.A relatively new approach to the treatment of bacterial infections is the use of phage genome encoded products with bactericidal action [Fishetti V.A. Bacteriophage lytic enzymes: novel anti-infectives. TRENDS in Microbiology, 2005, v.l3, 491-496]. Increased interest in the use of phage lysozymes, enzymes of the class of hydrolases, capable of cleaving glycosidic bonds in the molecules of bacterial peptidoglycans (representing heteropolymers consisting of repeating disaccharide groups - N-acetylglucosamine and N-acetylmuramic acid, connected via r-glycosidic bonds) and thereby cause cell walls and bacterial death associated with an increased spread of pathogenic gram-negative bacteria strains with multiple antibiotic resistance Cams.
Фаги, развивающиеся по литическому пути, синтезируют литические ферменты (эндолизины или лизоцимы), разрушающие клеточную стенку. Расщепление бактериальной клеточной стенки необходимо для освобождения фагового потомства. Литические ферменты бактериофагов объединяют под общим термином пептидогликановые гидролазы, хотя химический механизм их действия может быть различен в зависимости от того, какой именно тип связи в мукополимере клеточной стенки они разрывают (в частности, лизоцим гидролизует пептидогликан, расщепляя гликозидные связи между N-ацетилглюкозамином и N-ацетилмурамовой кислотой). Более того, даже сходные по механизму действия литические ферменты разных видов фагов могут обладать разными физико-химическими свойствами, что может иметь критическое значение при изготовлении конечного продукта - лекарственного препарата (например, повышенную температурную устойчивость при хранении). Главное преимущество фаговых эндолизинов по сравнению с антибиотиками состоит в специфичности их действия в отношении патогенных бактерий и сохранении нормальной микрофлоры. Накопленные к настоящему времени немногочисленные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что среди бактерий-мишеней не возникает устойчивость к лизинам фагов.Phages that develop along the lytic pathway synthesize lytic enzymes (endolysins or lysozymes) that destroy the cell wall. Cleavage of the bacterial cell wall is necessary to release phage offspring. The lytic enzymes of bacteriophages are combined under the general term peptidoglycan hydrolases, although the chemical mechanism of their action may be different depending on what type of bond they break in the mucopolymer of the cell wall (in particular, lysozyme hydrolyzes peptidoglycan, cleaving glycosidic bonds between N-acetylglucosamine and N -acetylmuramic acid). Moreover, even lytic enzymes of different types of phages that are similar in mechanism of action may have different physicochemical properties, which can be critical in the manufacture of the final product, a drug (for example, increased temperature stability during storage). The main advantage of phage endolysins in comparison with antibiotics is the specificity of their action against pathogenic bacteria and the maintenance of normal microflora. The few experimental data that have been accumulated to date indicate that among the target bacteria there is no resistance to phage lysines.
Эндолизины могут быть изолированы и частично очищены из культуральной жидкости лизатов бактерий, инфицированных соответствующими бактериофагами. Однако метод прямого получения белков из лизатов бактерий неудобен, прежде всего, из-за низкого титра фага и, как следствие, низкой концентрация эндолизинов в лизате. Низкое удельное содержание целевого белка делает трудновыполнимым, если не невозможным его очистку от продуктов фагового лизиса. По этой причине, единственным способом наработки очищенных эндолизинов бактериофагов является их микробиологический синтез.Endolysins can be isolated and partially purified from the culture fluid of bacterial lysates infected with the corresponding bacteriophages. However, the direct method of obtaining proteins from bacterial lysates is inconvenient, primarily due to the low titer of phage and, as a consequence, the low concentration of endolysins in the lysate. The low specific content of the target protein makes it difficult, if not impossible, to purify it from phage lysis products. For this reason, the only way to produce purified endolysins of bacteriophages is their microbiological synthesis.
Для очищенных фаговых лизоцимов была продемонстрирована литическая активность в отношении рада патогенных бактерий, таких как стрептококки группы A, Streptococcus pneumonia, Bacillus anthracis, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aurens и др. [Courchesne N. M. D., Parisien A., Lan C. Q. Production and Application ofBacteriophage and Bacteriophage-Encoded Lysins. Recent Patents on Biotechnology, 2009, v. 3,37-45]. В экспериментах по колонизации in vivo, выполненных на модельных животных, была продемонстрирована способность фаговых лизоцимов элиминировать S. pyogenes, пневмококки и стрептококки группы В, а в экспериментах с инфицированными внутривенно S. pneumoniae мышами было показано, что фаговый лизоцим препятствует развитию бактеримии и сепсиса [Fishetti V.A., Bacteriophage lytic enzymes:novel anti-infectives. TRENDS in Microbiology, 2005, v.l3, 491-496].For purified phage lysozymes, lytic activity was demonstrated against a number of pathogenic bacteria such as group A streptococci, Streptococcus pneumonia, Bacillus anthracis, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aurens et al. [Courchesne NMD, Parisien A., Lan CQ Production and Application of Bacteriophage and -Encoded Lysins. Recent Patents on Biotechnology, 2009, v. 3.37-45]. In in vivo colonization experiments performed on model animals, the ability of phage lysozymes to eliminate S. pyogenes, pneumococci and group B streptococci was demonstrated, and in experiments with intravenously infected S. pneumoniae mice, phage lysozyme inhibits the development of bacteremia and sepsis [ Fishetti VA, Bacteriophage lytic enzymes: novel anti-infectives. TRENDS in Microbiology, 2005, v.l3, 491-496].
Также была продемострирована способность рекомбинантного лизоцима бактериофага К лизировать как инактивированные, так и живые культуры S.aureus, S. epidermidis, S. saprophytics, S. chromogenes, S.captis, S. hominis, S. haemolyticus, S. caprea and S. hyicus, включая метициллин-резистентные штаммы S. aureus (MRSA), которые вызывают серьезные госпитальные инфекции по всему миру [WO/2008/001342].The ability of the recombinant bacteriophage K lysozyme K to lyse both inactivated and living cultures of S.aureus, S. epidermidis, S. saprophytics, S. chromogenes, S. captis, S. hominis, S. haemolyticus, S. caprea and S. was also demonstrated. hyicus, including methicillin-resistant strains of S. aureus (MRSA), which cause serious hospital infections worldwide [WO / 2008/001342].
На основе клонирования гена лизоцима KMV- подобного бактериофага FMV Pseudomonas aueruginosa в клетках дрожжей получен очищенный рекомбинантный лизоцим, который обладает антибактериальной активностью в отношении синегнойной палочки [Козлов Д.Г. и др. Клонирование и экспрессия гена лизоцима бактериофага FMV в клетках дрожжей S. cerevisiae и Р. pastoris., 2010, Генетика, т.46, стр.340-348]. Лизоцимную активность оценивали по образованию зон лизиса на газоне тест-культуры клеток бактерий. При тестировании лизоцимной активности тест-культуры предварительно обрабатывали парами хлороформа для обеспечения проникновения лизоцима через альгинатный матрикс.Таким образом, хотя и была продемонстрирована литическая активность рекомбинантного лизоцима фага FMV, возможная терапевтическая активность рекомбинантного лизоцима фага FMV в отношении инфекций, вызываемых Pseudomonas aueruginosa, не была описана.Based on the cloning of the lysozyme gene KMV-like bacteriophage FMV Pseudomonas aueruginosa in yeast cells, a purified recombinant lysozyme was obtained that has antibacterial activity against Pseudomonas aeruginosa [Kozlov D.G. et al. Cloning and expression of the bacteriophage FMV lysozyme gene in yeast cells S. cerevisiae and P. pastoris., 2010, Genetics, t.46, pp. 340-348]. Lysozyme activity was evaluated by the formation of lysis zones on the lawn of a test culture of bacterial cells. When testing lysozyme activity, test cultures were pretreated with chloroform vapor to ensure lysozyme penetration through the alginate matrix. Thus, although the lytic activity of recombinant FMV phage lysozyme was demonstrated, the possible therapeutic activity of recombinant FMV phage lysozyme was against Pseudomonas aueruginosa infections described.
Разработка новых препаратов на основе фаговых лизоцимов, эффективных в отношении множественно устойчивых к антибиотикам штаммов Pseudomonas aueruginosa, способных вызывать тяжелые формы заболеваний человека, является одной из важнейших проблем инфекционной патологии. The development of new drugs based on phage lysozymes that are effective against Pseudomonas aueruginosa strains that are multi-resistant to antibiotics and can cause severe forms of human diseases is one of the most important problems of infectious pathology.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Авторами настоящего изобретения впервые предложена фармацевтическая композиция на основе рекомбинантного эндолизина (лизоцима) бактериофага FMV Pseudomonas aueruginosa, являющаяся эффективным антибактериальным средством в отношении инфекций, вызываемых Pseudomonas aueruginosa. The authors of the present invention for the first time proposed a pharmaceutical composition based on recombinant endolysin (lysozyme) of the bacteriophage FMV Pseudomonas aueruginosa, which is an effective antibacterial agent against infections caused by Pseudomonas aueruginosa.
Осуществление изобретенияThe implementation of the invention
Предложенное изобретение впервые обеспечивает фармацевтическую композицию для профилактики и лечения инфекций, вызываемых Pseudomonas aueruginosa.The proposed invention for the first time provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of infections caused by Pseudomonas aueruginosa.
Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии, что рекомбинантный лизоцим бактериофага FMV Pseudomonas aueruginosa в комбинации с ЭДТА обладает антибактериальной активностью в отношении патогенных штаммов Pseudomonas aueruginosa, в частности, его применение в офтальмологии при инфекциях, вызываемых Р. aueruginosa, приводит к значительному улучшению симптомов или полному исчезновению воспалительного процесса глаз.The present invention is based on the unexpected discovery that the recombinant lysozyme of the bacteriophage FMV Pseudomonas aueruginosa in combination with EDTA has antibacterial activity against pathogenic strains of Pseudomonas aueruginosa, in particular, its use in ophthalmology for infections caused by P. aueruginosa leads to significant or significant improvement the disappearance of the inflammatory process of the eyes.
Фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит рекомбинантный фаговый лизоцим, очищенный из культуральной жидкости S. cerevisiae, включающих структурный ген фага FMV, клонированный в составе вектора pPDX2-GALl-F12 под контролем сильного галактозо-индуцируемого промотора GAL1 в клетках дрожжей S. cerevisiae [Козлов Д.Г. и др. Клонирование и экспрессия гена лизоцима бактериофага FMV в клетках дрожжей S. cerevisiae и Р. pastoris., 2010, Генетика, т.46, стр.340-348], в комбинации с ЭДТА.The pharmaceutical composition according to the invention contains a recombinant phage lysozyme purified from S. cerevisiae culture fluid, including the FMV phage structural gene, cloned into the pPDX2-GALl-F12 vector under the control of the strong galactose-induced promoter GAL1 in S. cerevisiae yeast cells [D. Kozlov D. G. et al. Cloning and expression of the bacteriophage FMV lysozyme gene in yeast cells S. cerevisiae and P. pastoris., 2010, Genetics, Vol. 46, pp. 340-348], in combination with EDTA.
Предпочтительно, фармацевтическая композиция содержит рекомбинантный фаговый лизоцим в эффективном количестве и от 5 до 50 мкг/мл растворимого рекомбинантного лизоцима и от 0,029 до 0,049% ЭДТА. Наиболее предпочтительно фармацевтическая композиция содержит 10 мкг/мл растворимого рекомбинантного лизоцима и 0,049% ЭДТА.Preferably, the pharmaceutical composition contains recombinant phage lysozyme in an effective amount and from 5 to 50 μg / ml of soluble recombinant lysozyme and from 0.029 to 0.049% EDTA. Most preferably, the pharmaceutical composition contains 10 μg / ml of soluble recombinant lysozyme and 0.049% EDTA.
Фармацевтическая композиция на основе рекомбинантного лизоцима бактериофага FMVv. ЭДТА согласно изобретению может быть использована для лечения различных заболеваний, вызываемых Р. aeruginosa, таких как гнойно-воспалительные процессы слизистых поверхностей ушей, носа и глотки, мочеполовой системы, гнойные хирургические инфекции. Предложенная фармацевтическая композиция может использоваться в виде спреев для орошения слизистых мембран при инфекционных заболеваниях носа и глотки, мочеполовой системы, в виде растворов, гелей, паст для обработки поверхностей инфицированных ран и ожогов, для профилактики и лечения инфекционных заболеваний глаз, а также в виде кремов в косметологии для обработки кожных покровов и слизистых оболочек.Pharmaceutical composition based on the recombinant lysozyme of the bacteriophage FMVv. EDTA according to the invention can be used to treat various diseases caused by P. aeruginosa, such as purulent-inflammatory processes of the mucous surfaces of the ears, nose and pharynx, genitourinary system, and purulent surgical infections. The proposed pharmaceutical composition can be used in the form of sprays for irrigation of mucous membranes for infectious diseases of the nose and pharynx, urogenital system, in the form of solutions, gels, pastes for treating the surfaces of infected wounds and burns, for the prevention and treatment of infectious diseases of the eyes, and also in the form of creams in cosmetology for the treatment of skin and mucous membranes.
Фармакологическая активность фармацевтической композиции в отношении офтальмологических заболеваний, вызываемых Р. aeruginosa, была изучена на модели глазных инфекций у кроликов (пример 2).The pharmacological activity of the pharmaceutical composition against ophthalmic diseases caused by P. aeruginosa was studied in a rabbit eye infection model (Example 2).
Для испытаний на кроликах фармацевтическую композицию получают, как описано в Примере 1.For rabbit testing, a pharmaceutical composition is prepared as described in Example 1.
Животные были прооперированы для получения проникающего ранения роговицы в верхнем сегменте. Затем каждый глаз через переднюю камеру был инфицирован Р. aeruginosa в количестве примерно 5,5×109, достаточном для развития воспалительного процесса.Animals were operated on to obtain a penetrating wound of the cornea in the upper segment. Then, each eye through the anterior chamber was infected with P. aeruginosa in an amount of approximately 5.5 × 10 9 , sufficient for the development of the inflammatory process.
Спустя 8 часов и в течение последующих 6-ти дней 3-м кроликам проведена инстилляция в инфицированный левый глаз фармацевтической композиции и другим 3-м кроликам проведена инстилляция офтаквикса (Офтаквикс ®, производство компании Alcon, Бельгия) в инфицированный левый глаз, правый глаз у всех кроликов был оставлен в качестве контроля.After 8 hours and for the next 6 days, 3 rabbits were instilled into the infected left eye of the pharmaceutical composition and other 3 rabbits were instilled of oftaxwix (Oftaquix ®, manufactured by Alcon, Belgium) into the infected left eye, the right eye All rabbits were left as controls.
Клиническая оценка степени воспалительного процесса представлена в табл.2-4 (Пример 2).A clinical assessment of the degree of the inflammatory process is presented in Table 2-4 (Example 2).
Отмечается значительное снижение воспалительного процесса при использовании фармацевтической композиции в соответствии с изобретением.There is a significant decrease in the inflammatory process when using the pharmaceutical composition in accordance with the invention.
Таким образом, результаты исследования фармакологической активности композиции согласно изобретению в отношении офтальмологических заболеваний на модели глазных инфекций у кроликов демонстрируют ее высокую специфичность по отношению к Pseudomonas aeruginosa, быстроту действия и отсутствие побочных эффектов.Thus, the results of a study of the pharmacological activity of the composition according to the invention in relation to ophthalmic diseases in a model of eye infections in rabbits demonstrate its high specificity for Pseudomonas aeruginosa, speed of action and the absence of side effects.
Фармацевтическая композиция согласно изобретению может содержать фармацевтически приемлемый носитель, растворитель или наполнитель. Фармацевтически приемлемый носители включают, но не ограничиваются, фосфатным буфером, дистиллированной водой, эмульсиями масло в воде и т.п.The pharmaceutical composition according to the invention may contain a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient. Pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, phosphate buffer, distilled water, oil in water emulsions, and the like.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами, представленными для подтверждения, но не ограничения объема притязаний.The invention is illustrated by the following examples presented to confirm, but not limit the scope of the claims.
Примеры Examples
Пример 1. Получение фармацевтической композиции.Example 1. Obtaining a pharmaceutical composition.
Смешивают 50 мкл 13,6% р-ра Tris HCl (pH доводят до 7,5 с помощью 10% р-ра НСl), 3,9 мкл 12,7% р-ра ЭДТА и 7,7 мкл 0,13% р-ра рекомбинантного лизоцима с водой до 1 мл общего объема. 50 μl of 13.6% Tris HCl solution are mixed (pH is adjusted to 7.5 with 10% Hcl solution), 3.9 μl of 12.7% EDTA and 7.7 μl of 0.13% solution of recombinant lysozyme with water up to 1 ml of the total volume.
Пример 2. Фармакологическая активность рекомбинантного лизоцима в отношении офтальмологических заболеваний на модели глазных инфекций у кроликов.Example 2. Pharmacological activity of recombinant lysozyme against ophthalmic diseases in a model of eye infections in rabbits.
Эксперимент по изучению эффективности лизоцима проводился на базе МНИИ ГБ им. Гельмгольца в отделе травматологии, реконструктивной и пластической хирургии. При оценке полученных результатов использовались данные микробиологического исследования, проводимого в микробиологической лаборатории Института. В качестве источника инфекции использовали штамм Р. aeruginosa, полученный из коллекции ГИСК (Государственная коллекция патогенных микроорганизмов) им. Тарасовича. В качестве модели использовали 6 кроликов породы шиншилла, массой 3,5-4 кг.An experiment to study the effectiveness of lysozyme was conducted on the basis of the Moscow Scientific Research Institute of GB named after Helmholtz in the Department of Traumatology, Reconstructive and Plastic Surgery. When evaluating the results, we used the data of a microbiological study conducted in the microbiological laboratory of the Institute. As a source of infection used a strain of P. aeruginosa, obtained from the collection of GISC (State collection of pathogenic microorganisms) them. Tarasovich. As a model, 6 rabbits of the chinchilla breed, weighing 3.5-4 kg, were used.
Кроликам было нанесено проникающее ранение роговицы с последующим инфицированием Р. aeruginosa. Операция по нанесению проникающего ранения роговицы кроликам была проведена после предварительной анестезии раствором алкаина (по 2 капли в каждый глаз). Проникающее ранение роговицы контролировалось под операционным микроскопом и сопровождалось выходом влаги из передней камеры (ПК) глаза. После этого всем кроликам в оба глаза (OU) вводилась жидкая суспензия бактерий Р. aeruginosa в концентрации 5,5×109.The rabbits received a penetrating wound of the cornea followed by infection with P. aeruginosa. The operation to inflict a penetrating wound on the cornea to rabbits was carried out after preliminary anesthesia with an alkain solution (2 drops in each eye). A penetrating wound of the cornea was monitored under an operating microscope and was accompanied by the release of moisture from the anterior chamber (PC) of the eye. After that, a rabbit suspension of P. aeruginosa bacteria at a concentration of 5.5 × 10 9 was administered to all rabbits in both eyes (OU).
Через 8 часов после операции кроликам №1, 2, 3 в левый глаз проведена инстилляция 5 капель лизоцима 3 раза с интервалом в 2 часа, правый глаз оставлен контрольным. Кроликам №4, 5, 6 в левый глаз проведена инстилляция 5 капель офтаквикса 3 раза с интервалом в 2 часа, правый глаз оставлен в качестве контроля.8 hours after the operation, rabbits No. 1, 2, 3 were instilled into the left eye with 5 drops of lysozyme 3 times with an interval of 2 hours, the right eye was left as a control. Rabbits No. 4, 5, 6 were instilled in the left eye with 5 drops of ophthaquix 3 times with an interval of 2 hours, the right eye was left as a control.
Оценку клинических проявлений при проникающей ране роговицы проводили в условных баллах по следующим признакам:Assessment of clinical manifestations with a penetrating wound of the cornea was carried out in conditional scores on the following grounds:
На следующий день после операции при осмотре кроликов наблюдались следующие клинические проявления.The day after surgery, when examining rabbits, the following clinical manifestations were observed.
Кролики №1, 2, 3 - на правом глазу выраженные признаки гнойной инфекции, левый глаз практически спокойный.Rabbits No. 1, 2, 3 - on the right eye there are pronounced signs of purulent infection, the left eye is almost calm.
Кролики №4, 5, 6 - на правом глазу выраженные признаки гнойной инфекции, левый глаз - выраженные признаки инфекции, отделяемое на конъюнктиве и веках, экссудат в передней камере.Rabbits No. 4, 5, 6 - in the right eye there are pronounced signs of purulent infection, the left eye is the pronounced signs of infection, separated on the conjunctiva and eyelids, exudate in the anterior chamber.
Практическое отсутствие инфекции на левом глазу у кроликов №1, 2, 3 свидетельствует о высокой эффективности фармацевтической композиции согласно изобретению при инстилляции после травмы/операции.The practical absence of infection in the left eye in rabbits No. 1, 2, 3 indicates the high efficiency of the pharmaceutical composition according to the invention during instillation after an injury / operation.
Кроликам №1, 2, 3 в левый глаз проведена инстилляция 5 капель лизоцима 3 раза с интервалом в 2 часа, правый оставлен контрольным. Rabbits No. 1, 2, 3 were instilled in the left eye with 5 drops of lysozyme 3 times with an interval of 2 hours, the right was left as a control.
Кроликам №4, 5, 6 в левый глаз проведена инстилляция 5 капель офтаквикса 3 раза с интервалом в 2 часа, правый оставлен контрольным.Rabbits No. 4, 5, 6 were instilled in the left eye with 5 drops of ophthaquix 3 times with an interval of 2 hours, the right was left as a control.
На 3-й день после операции при осмотре кроликов наблюдались следующие клинические проявления.On the 3rd day after surgery, the following clinical manifestations were observed during examination of rabbits.
№1, 2, 3 кролики - на правом глазу выраженные признаки гнойной инфекции, левый глаз практически спокойный. No. 1, 2, 3 rabbits - on the right eye there are pronounced signs of purulent infection, the left eye is almost calm.
№4, 5, 6 кролики - на правом глазу выраженные признаки гнойной инфекции, левый глаз - умеренные признаки инфекции, небольшое отделяемое, экссудат в передней камере. No. 4, 5, 6 rabbits - on the right eye expressed signs of purulent infection, the left eye - moderate signs of infection, a small discharge, exudate in the anterior chamber.
Кроликам №1, 2, 3 в левый глаз проведена инстилляция 5 капель лизоцима 3 раза с интервалом в 2 часа, правый оставлен контрольным. Rabbits No. 1, 2, 3 were instilled in the left eye with 5 drops of lysozyme 3 times with an interval of 2 hours, the right was left as a control.
Кроликам №4, 5, 6 в левый глаз проведена инсталляция 5 капель офтаквикса 3 раза с интервалом в 2 часа, правый оставлен контрольным.Rabbits No. 4, 5, 6 in the left eye were installed 5 drops of ophthaquix 3 times with an interval of 2 hours, the right one was left as a control.
На 4-й день после операции при лечении кроликов офтаквиксом также отмечается положительный эффект.On the 4th day after the operation, in the treatment of rabbits with oftaxvix, a positive effect is also noted.
Кроликам №1, 2, 3 в левый глаз проведена инсталляция 5 капель лизоцима 3 раза с интервалом в 2 часа, правый оставлен контрольным. Rabbits No. 1, 2, 3 in the left eye were installed 5 drops of lysozyme 3 times with an interval of 2 hours, the right one was left as a control.
Кроликам №4, 5, 6 в левый глаз проведена инсталляция 5 капель офтаквикса 3 раза с интервалом в 2 часа, правый оставлен контрольным.Rabbits No. 4, 5, 6 in the left eye were installed 5 drops of ophthaquix 3 times with an interval of 2 hours, the right one was left as a control.
На 7-й день после операции положительная симптоматика сохраняется на OS у всех 6 кроликах, расплавление роговицы на OD (контроль) началось у кроликов 1-3.On the 7th day after surgery, positive symptoms persist on OS in all 6 rabbits, corneal fusion on OD (control) began in rabbits 1-3.
Таким образом, результаты исследования фармакологической активности композиции согласно изобретению в отношении офтальмологических заболеваний на модели глазных инфекций Р. aeruginosa у кроликов демонстрируют высокую специфичность фармацевтической композиции по отношению к Р. aeruginosa, быстроту действия и отсутствие побочных эффектов.Thus, the results of a study of the pharmacological activity of the composition according to the invention in relation to ophthalmic diseases in the model of P. aeruginosa eye infections in rabbits demonstrate the high specificity of the pharmaceutical composition with respect to P. aeruginosa, the speed of action and the absence of side effects.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011148108/10A RU2548803C2 (en) | 2011-11-28 | 2011-11-28 | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING EYE INFECTIONS P. Aeruginosa CONTAINING RECOMBINANT LYSOZYME |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011148108/10A RU2548803C2 (en) | 2011-11-28 | 2011-11-28 | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING EYE INFECTIONS P. Aeruginosa CONTAINING RECOMBINANT LYSOZYME |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011148108A RU2011148108A (en) | 2013-06-10 |
| RU2548803C2 true RU2548803C2 (en) | 2015-04-20 |
Family
ID=48784330
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011148108/10A RU2548803C2 (en) | 2011-11-28 | 2011-11-28 | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING EYE INFECTIONS P. Aeruginosa CONTAINING RECOMBINANT LYSOZYME |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2548803C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2092183C1 (en) * | 1988-05-26 | 1997-10-10 | Ника Хелт Продактс Лимитед (Лихтенштейн) | Antiviral or antibacterial composition and a method of its using |
| EP2099466A1 (en) * | 2006-12-01 | 2009-09-16 | Laclede, Inc. | Use of hydrolytic and oxidative enzymes to dissolve biofilm in ears |
-
2011
- 2011-11-28 RU RU2011148108/10A patent/RU2548803C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2092183C1 (en) * | 1988-05-26 | 1997-10-10 | Ника Хелт Продактс Лимитед (Лихтенштейн) | Antiviral or antibacterial composition and a method of its using |
| EP2099466A1 (en) * | 2006-12-01 | 2009-09-16 | Laclede, Inc. | Use of hydrolytic and oxidative enzymes to dissolve biofilm in ears |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Д.Г.КОЗЛОВ и др., Клонирование и экспрессия гена лизоцима бактериофага FMV в клетках дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Pichia pastoris, генетикаб 2010б т.46б N3б стр.340-348. US 0005993809 A1, , 30.11.1999. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011148108A (en) | 2013-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240091332A1 (en) | Compounds and methods for biofilm disruption and prevention | |
| US10342857B2 (en) | Chimeric polypeptides and their use in bacterial decolonization | |
| JP6587655B2 (en) | Streptococcus bacteriophage lysine for detecting and treating gram positive bacteria | |
| Gupta et al. | P-27/HP endolysin as antibacterial agent for antibiotic resistant Staphylococcus aureus of human infections | |
| KR102084388B1 (en) | Biofilm prevention, disruption and treatment with bacteriophage lysin | |
| CA2610791C (en) | Hyaluronic acid binding peptides enhance host defense against pathogenic bacteria | |
| US20140179594A1 (en) | Streptococcus bacteriophage lysins for treatment of gram positive bacteria in companion animals and livestock | |
| US20100291041A1 (en) | Bacteriophage preparation and use | |
| US20240024391A1 (en) | Phage therapy | |
| US10499655B2 (en) | Reagents and methods for inhibiting or disrupting biofilm | |
| KR20190127073A (en) | Novel recombinant protein from bacteriophage having antibacterial activity to pathogenic gram-negative bacterium | |
| US20070264247A1 (en) | Use of Human Lysozyme in Preparation of Medicine for Treating Acne | |
| CA3175024A1 (en) | New recombinant lysin and its use in the treatment of gram-negative bacterial infections | |
| RU2548803C2 (en) | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING EYE INFECTIONS P. Aeruginosa CONTAINING RECOMBINANT LYSOZYME | |
| Veiga-Crespo et al. | Advantages and disadvantages in the use of antibiotics or phages as therapeutic agents | |
| US20210198644A1 (en) | Recombinant lysins | |
| Shrivastava et al. | Enzymes in pharmaceutical industry | |
| US20160304927A1 (en) | Preparation method of new recombinant antibacterial polypeptide medicine | |
| RU2730615C1 (en) | Antibacterial composition (embodiments) and use of protein as antimicrobial agent directed against gram-negative bacteria: pseudomonas aeruginosa, acinetobacter baumannii, klebsiella pneumoniae and salmonella typhi (embodiments) | |
| Oliveira et al. | Bacteriophage proteins as antimicrobials to combat antibiotic resistance | |
| RU2813626C1 (en) | Modified endolysin and antibacterial compositions based thereon for treating infections caused by acinetobacter baumannii, pseudomonas aeruginosa, klebsiella pneumoniae, escherichia coli bacteria | |
| KR102314731B1 (en) | Recombinant endolysin ClyC with potential bacteriocidal activity against Staphylococcus aureus | |
| RU2703043C1 (en) | Bacteriophage lytic enzyme and antibacterial composition based thereon | |
| Homem et al. | Potential biomolecules of microbial origin against infectious diseases | |
| DK175418B1 (en) | Preparation for the treatment of mastitis and other staphylococcal infections |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151129 |