RU2483113C1 - Способ оценки воздействия экзогенных факторов на микрофлору кишечника при его дисбиотических нарушениях - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к биохимии. Для оценки воздействия экзогенных факторов на микрофлору кишечника при его дисбиотических нарушениях у обследуемого определяют количество микроорганизмов эндогенной флоры в 1 г фекалий до начала и по окончании воздействия экзогенного фактора. Рассчитывают показатель скорости изменения количества микроорганизмов эндогенной флоры в виде содержания их в 1 г фекалий в сутки путем вычисления разницы значений количества микроорганизмов эндогенной флоры в 1 г фекалий между началом и окончанием обследования и последующего деления этой разницы на количество суток, прошедших между измерениями. Полученный показатель сравнивают со среднестатистическим показателем скорости изменения количества микроорганизмов эндогенной флоры в 1 г фекалий, вычисленным заранее на большой группе пациентов со сходной патологией желудочно-кишечного тракта. По результатам сравнения выносят суждение об эффективности или отсутствии воздействия экзогенных факторов при дисбиотических нарушениях кишечника. Это обеспечивает повышение точности оценки воздействия экзогенных факторов на микрофлору кишечника при его дисбиотических нарушениях. 3 пр.

Description

Изобретение относится к области медицины и медицинской микробиологии и может быть использовано для определения эффективности воздействия экзогенных факторов на микрофлору кишечника при его дисбиотических нарушениях. Реализация способа позволяет установить лечебные свойства используемых экзогенных факторов для устранения дисбиотических нарушений, а также изучить механизм развития и лечения этой патологии.

Нормальное физиологическое состояние организма - этой сложной, самоорганизующейся и саморегулирующейся системы - в значительной мере обусловлено нормальным составом кишечной микрофлоры и ее функциональной активностью. Взаимоотношения между организмом человека и нормальной микрофлорой, состав которой колеблется от 600 до 1000 биологических видов, предельно четко определены в публикациях зарубежных и отечественных ученых [Gorbach S.L. Function of the normal human microflora // Scand. J. Infect. Diseases. - 1986. - Vol.18, Suppl. №49. - P.17-30; Tannock G.W. The normal microflora: new concepts in health promotion // Microbiol. Sci. - 1988. - Vol.5, №1. - P 4-8; Бабин B.H., Минушкин O.H., Дубинин A.B. и др. Молекулярные аспекты симбиоза в системе хозяин - микрофлора // Рос.журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 1988. - №6. - С.76-82]. Она играет существенную роль в обмене веществ, синтезе витаминов, детоксикации, формировании естественного иммунитета, формировании колонизационной резистентности. Количественные и качественные изменения состава нормальной микрофлоры относят к дисбактериозам, проблема которых со всей остротой поднята в научной литературе [Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дисбактериозы - актуальная проблема медицины // Вестн. РАМН. - 1977. - №3. - С.4-7; Минушкин О.Н., Ардатская М.Д., Зверков И.В., Чичерин И.Ю. Дисбактериоз кишечника (понятие, диагностика, принципы лечебной коррекции). Современные возможности пребиотической терапии: учебно-методическое пособие для врачей и курсантов циклов усовершенствования врачей. - М.: Учебно-научный медицинский центр управления делами Президента Российской Федерации, 2010. - 50 с.]. Нормальная микрофлора является весьма чувствительной микроэкологической системой организма и в то же время одним из главных биогенных факторов, определяющих здоровье или развитие заболевания [Ардатская М.Д., Минушкин О.Н. Дисбактериоз кишечника: эволюция взглядов. Современные принципы диагностики и фармакологической коррекции // Consilium nudicum. Приложение. Гастроэнтерология. - 2006. - №2. - С.4-18; Токарева Н. Коррекция и профилактика дисбактериоза // Эффективная фармакотерапия. Гастроэнтерология. - 2011. - №3. - С.77-84]. К наиболее важным причинам, приводящим к нарушению микробиоценоза кишечника, относят: фактор питания; стрессы различного генеза; острые инфекционные заболевания желудочно-кишечного тракта; снижение иммунного статуса различного происхождения; ксенобиотики и экотоксиканты; расстройство биоритмов; заболевания внутренних органов, прежде всего органов желудочно-кишечного тракта; нарушения моторики кишечника; ятрогенные воздействия (антибактериальная терапия, гормонотерапия, применение цитостатиков, лучевая терапия, оперативные вмешательства). Таким образом, патологические изменения, возникшие в организме, с неизбежностью приводят к изменению состава и свойств кишечной микрофлоры, то есть развитию дисбактериозов.

Современные принципы лечебной коррекции дисбиотических нарушений и восстановления нормальной кишечной микрофлоры включают патогенетическое лечение и строгое соблюдение диеты; нормализацию моторики кишечника; консультацию с психотерапевтом; «функциональное» питание; селективную деконтаминацию; применение пробиотиков, пребиотиков, антибиотиков и микробных метаболитов. Такой комплексный подход к коррекции нарушений микробиоценоза кишечника позволяет, во-первых, улучшить клиническое течение основного заболевания, во-вторых, повысить эффективность других методов лечения, в-третьих, предупредить появление побочных эффектов фармакотерапии, в-четвертых, повысить качество жизни больных [Ардатская М.Д. Клиническое значение ко-роткоцепочечных жирных кислот при патологии желудочно-кишечного тракта: дис. … д-ра мед. наук: защищена 2003 г. - М.: ФГУ « Учебно-научный медицинский центр» Управления делами Президента Российской Федерации, 2003. - 299 с.].

Таким образом, в случае патологических состояний на нормальную микрофлору действует ряд факторов, отрицательно сказывающихся на ее качественном и количественном составе. С другой стороны, комплекс средств и методов лечебной коррекции дисбиотических нарушений оказывает выраженное позитивное воздействие на организм больного, приводящее в большинстве случаев к восстановлению собственной нормальной микрофлоры. В обоих случаях в поле зрения практикующего врача находится микрофлора кишечника и ее метаболиты [Грачева Н.М., Ардатская М.Д., Аваков А.А., Соловьева А.И. Сравнительная оценка клинико-лабораторной эффективности современных про- и пребиотических препаратов в коррекции дисбиотических нарушений желудочно-кишечного тракта: отчет о клинико-лабораторном исследовании. - М.: Московский НИИЭМ им. Г.Н.Габричевского, 2010. - 23 с.].

Данное обстоятельство предполагает необходимость разработки способа оценки воздействия (положительного или отрицательного) экзогенных факторов на микрофлору кишечника. В настоящее время в клинической практике при определении влияния различных веществ или факторов сравнительному изучению подлежат: динамика клинических проявлений; бактериологическая картина содержимого кишечника; биохимические показатели жизнедеятельности кишечной микрофлоры. При этом динамика клинических проявлений, таких как нормализация диспептических явлений со стороны желудочно-кишечного тракта, нормализация консистенции стула при диарее, наличие или отсутствие побочных эффектов - «вздутия живота» и повышенной перистальтики кишечника, количественной характеристике и учету не поддается. Биохимические показатели жизнедеятельности микробов, в частности определение метаболитов микрофлоры, не дают представления о количественном и качественном составе кишечной микрофлоры.

Наиболее близким к заявляемому способу является бактериологический метод изучения популяции микроорганизмов [Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений. Приказ МЗ СССР №535 от 22.04.1985 г.; Скала Л.З., Нехорошева А.Г., Винокуров А.Е., Лукин И.Н. Современные технологии в клинической микробиологии и химиотерапии. Автоматизированное рабочее место врача-микробиолога, химиотерапевта и эпидемиолога // Клин. лаб. диагн. - 2001. - №12 - С.25-32; Дармов И.В., Чичерин И.Ю., Погорельский И.П., Лундовских И.А. Выживаемость микроорганизмов пробиотиков в условиях in vitro, имитирующих процесс пищеварения у человека // Эксперимент, и клин. гастроэнтерол. - 2011. - №3. - С.6-11]. Прямой бактериологический метод (определение видового состава и количества жизнеспособных микроорганизмов до и после воздействия экзогенных факторов) позволяет охарактеризовать кишечную микрофлору и ее динамику в течение всего периода наблюдения, либо трижды - до начала воздействия того или иного фактора, спустя 7 дней от начала воздействия, спустя 14 дней от начала воздействия экзогенного фактора. При этом для каждого пациента или, в случае моделирования дисбиотических состояний - для каждого экспериментального животного, с использованием бактериологического метода определяют численные значения кишечной микрофлоры в течение всего периода наблюдения. Построенная по результатам бактериологического определения количества жизнеспособных микроорганизмов в 1 г фекалий экспоненциальная кривая наглядно характеризует нарастание или снижение общего количества кишечной микрофлоры или отдельных ее представителей под воздействием изучаемого экзогенного фактора. Проблема состоит в том, что у каждого пациента или экспериментального животного исходное количество жизнеспособных микроорганизмов в кишечном содержимом разное в силу выраженной вариабельности содержания микрофлоры кишечника. И, таким образом, каждый участник обследования (эксперимента) приходит к началу бактериологического исследования с различными начальными показателями численности кишечной микрофлоры. В конце обследования (эксперимента) по оценке воздействия того или иного экзогенного фактора на кишечную микрофлору получают большое количество (по числу участников эксперимента) различных кривых, которые трудно статистически обработать и в последующем охарактеризовать изучаемый процесс воздействия экзогенных факторов.

Задачей изобретения является разработка способа оценки воздействия экзогенных факторов на микрофлору кишечника.

Технический результат, который может быть достигнут при использовании предлагаемого способа, заключается в объективизации полученных данных и, следовательно, в повышении точности оценки.

Этот технический результат достигается тем, что в известном способе оценки эффективности действия экзогенных факторов при дисбиотических нарушениях кишечника, включающем определение количества жизнеспособных микроорганизмов пребиотиков в 1 г фекалий обследуемого до начала воздействия экзогенного фактора и по окончании воздействия, сравнение полученных результатов, и при увеличении количества микроорганизмов после начала его воздействия вынесение суждения об эффективности действия лечебных факторов, а при уменьшении количества микроорганизмов после начала воздействия - вынесение суждения о его неэффективности у обследуемого, определяют скорость изменения количества микроорганизмов индигенной микрофлоры в виде содержания их в 1 г фекалий в течение 1 суток путем вычисления разницы показателей между началом и окончанием обследования и последующего деления этой разницы на количество суток, прошедших между измерениями, а полученную величину скорости изменения количества микроорганизмов сравнивают с показателем статистически достоверной скорости изменения количества микроорганизмов в 1 г фекалий контрольной эталонной группы особей, репрезентативных обследуемому по состоянию микрофлоры кишечника на начало обследования, для получения этого показателя проводят математическую обработку индивидуальных скоростей изменения количества микроорганизмов у отдельных особей эталонной группы, и при превышении скорости изменения количества микроорганизмов обследуемого по сравнению со среднестатистической скоростью эталонной группы выносят суждение об эффективности действия лечебных факторов при дисбиотических нарушениях кишечника, а при меньшей скорости изменения количества микроорганизмов у обследуемого, чем в эталонной группе, констатируют отсутствие эффективности действия лечебных факторов.

Способ осуществляют следующим образом

1. Выбирают конкретный экзогенный фактор, оценку эффективности воздействия которого на микрофлору кишечника необходимо изучить. В качестве такового могут быть выбраны антимикробные факторы, например антибактериальные препараты (действие отрицательного экзогенного фактора), либо стимуляторы собственной кишечной микрофлоры, например пребиотические препараты (действие позитивного экзогенного фактора) при пероральном введении.

2. Определяют количество жизнеспособных микроорганизмов индигенной кишечной микрофлоры или отдельных ее представителей в начале воздействия экзогенного фактора и через какой-то временной интервал. Например, на 7 и 14 сутки от начала воздействия.

3. Вычисляют разницу показателей в двух временных точках (в начале воздействия и на 7 день; на 7 день и на 14 день).

4. Делят полученное значение на количество суток между этими временными точками и вычисляют показатель скорости изменения количества микроорганизмов в 1 г фекалий обследуемого. Таким образом, вся экспоненциальная кривая изменения концентрации лактобактерий (бифидобактерий или эшерихий) у пациента представлена только одним числом. Число может быть с отрицательным знаком, что количественно характеризует процесс угнетения микрофлоры, например, при назначении антибиотиков, гормонов, цитостатиков и т.д.

5. Аналогичным образом у репрезентативной группы особей проводят вычисление среднестатистических показателей скорости изменения содержания микроорганизмов индигенной микрофлоры кишечника. Если проводят исследование у животных, то берут группу животных того же вида, достаточную для статистической обработки, у которых моделируют дисбиотические нарушения. Если исследования проводят у людей, то в качестве репрезентативной группы подсчитывают количество микроорганизмов индигенной микрофлоры кишечника у людей, страдающих аналогичными обследуемому заболеваниями. Например, хронические дисбиотические колиты. Как правило, при поступлении в лечебные учреждения таким пациентам в течение первых 7-10 дней проводят лечебные мероприятия в виде диетического питания без использования лечебных факторов из группы антибиотиков, антимикробных средств. При этом как в эталонной (контрольной) группе животных, так и у людей подсчет количества микроорганизмов проводят в начале наблюдения и через определенные временные интервалы, которые могут совпадать со сроками измерения количества микроорганизмов у обследуемого. Указанная эталонная группа не получает лечения и необходима для выявления той составляющей в количественном показателе обследуемого, которая отражает самопроизвольный процесс восстановления микроорганизмов в кишечнике без воздействия внешних лечебных факторов. Этот показатель в ранее известных методиках не учитывался. После измерения исходных показателей и показателей количества микроорганизмов через временной интервал вычисляют разницу показателей в этих двух временных точках и делят полученное значение на количество суток между этими определениями в установленных временных точках. Далее проводят математическую статистическую обработку полученных индивидуальных скоростей и вычисляют статистически достоверный показатель скорости изменения количества микроорганизмов в 1 г фекалий эталонной группы.

6. После этого показатель скорости изменения количества микроорганизмов в 1 г фекалий обследуемого сравнивают со среднестатистическим показателем скорости изменения количества микроорганизмов в 1 г фекалий эталонной, репрезентативной группы, получая результаты сравнения, по которым выносят суждение об эффективности лечебного действия препарата. Так, при назначении пищевых волокон (действие позитивного экзогенного фактора) содержание лактобактерий в 1 г фекалий у пациента на 7 сутки составило 5,0·10⁶ КОЕ·г^-1 а на 14 сутки - 1,0·10⁸ КОЕ·г^-1. Вычисляют скорость нарастания концентрации лактобактерий под влиянием пищевых волокон у обследуемого пациента, деля разницу значений концентрации лактобактерий на 7 (разница в сутках между временными точками определения концентрации лактобактерий: [(1,0·10⁸)-(5,0·10⁶)]:7=1,36·10⁷ КОЕ·г^-1·сут^-1. Таким образом, вся экспоненциальная кривая изменения концентрации лактобактерий у пациента представлена только одним числом. Число может быть с отрицательным знаком, что количественно характеризует процесс угнетения микрофлоры, например, при назначении антибиотиков, гормонов, цитостатиков. Скорость изменения количества микроорганизмов в репрезентативной группе для лактобактерий составила 5,26·10⁵ КОЕ·г^-1·сут^-1. Сравнив показатель скорости обследуемого и среднестатистический показатель эталонной группы, видим, что под влиянием пищевых волокон, принимаемых пациентом в составе лечебно-профилактического препарата, скорость нарастания концентрации лактобактерий превышает среднестатистический показатель, определенный в эталонной группе, в 25,8 раза. Это позволяет сделать вывод об эффективности действия пищевых волокон при дисбиотическом процессе, поскольку имеется рост численности лактобактерий.

Таким образом, способ оценки воздействия эффективности действия лечебных факторов при дисбиотических нарушениях заключается в том, что определяют скорость изменения концентраций общего количества кишечной микрофлоры или отдельных ее представителей при различных исходных количествах микроорганизмов в 1 г фекальных масс обследуемых людей или экспериментальных животных и сравнивают со среднестатистическим показателем скорости изменения микрофлоры кишечника и прогнозируют эффективность (или ее отсутствие) лечебных и профилактических мероприятий, направленных на коррекцию дисбиотических нарушений.

Пример 1

Готовят раствор антибиотика гентамицина на изотоническом растворе хлорида натрия, в 1,0 мл которого содержится 29 мг антибактериального препарата. Берут 20 прошедших акклиматизацию белых мышей массой 18-20 г, рассаживают их в индивидуальные кюветы с крышками. От каждого животного в начале исследования отбирают фекальные массы, взвешивают их, суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают полученную суспензию на селективные плотные питательные среды в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 48 часов, после чего подсчитывают количество выросших колоний. С учетом массы фекалий и количества выросших колоний делают пересчет общего числа микроорганизмов (в том числе бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий как индикаторных бактериальных видов) на 1 г фекалий (КОЕ·г^-1). Вводят по 0,1 мл раствора гентамицина (2,9 мг препарата) с помощью туберкулинового шприца с иглой и канюлей на конце перорально каждому животному. Введение антибактериального препарата гентамицина осуществляют ежедневно в течение 7 дней, после чего от каждого животного отбирают фекалии для определения общего количества микроорганизмов в 1 г фекалий (КОЕ·г^-1) на 7-й день воздействия экзогенного фактора, ингибирующего кишечную микрофлору животных. Вычисляют разницу значений концентраций микроорганизмов в начале обследования и через 7 дней, после чего определяют скорость уменьшения числа жизнеспособных микроорганизмов, деля разницу значений концентрации микроорганизмов на 7.

Результаты определения

Общее количество кишечной микрофлоры (в том числе бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий):

- начало эксперимента: 1,2·10¹⁰-3,8·10⁹ КОЕ·г^-1;

- окончание эксперимента (спустя 7 дней): 3,0·10⁵-1,8·10⁵ КОЕ·г^-1.

Скорость снижения общего количества микроорганизмов кишечной микрофлоры по каждому из обследованных животных (КОЕ·г^-1·сут^-1): 9,3·10⁸; 8,7·10⁸; 1,6·10⁹; 8,3·10⁸; 1,0·10⁹; 8,6·10⁸; 1,4·10⁹; 8,4·10⁸; 1,7·10⁹; 9,4·10⁸; 4,2·10⁸; 8,0·10⁸; 8,3·10⁸; 1,0·10⁹; 1,2·10⁹; 1,7·10⁹; 1,3·10⁹; 5,4·10⁸; 8,1·10⁸; 1,0·10⁹.

Обрабатывают полученные для каждого животного значения скорости снижения концентрации микроорганизмов кишечной микрофлоры и вычисляют значение этого показателя для всей группы животных, обследованных в эксперименте,

Среднестатистический показатель общего содержания микроорганизмов в репрезентативной группе животных без введения антибиотика составил (9,2±0,6)·10⁹ КОЕ·г^-1. Сравнение показателей общего содержания кишечной микрофлоры в опытной группе животных (в том числе и скорости снижения содержания микрофлоры) со среднестатистическим показателем общего содержания микроорганизмов в репрезентативной группе животных свидетельствует о прогрессирующем снижении содержания общего количества живых микроорганизмов кишечной микрофлоры и отдельных ее представителей и развитии дисбактериоза кишечника.

Рассчитанный показатель позволяет установить скорость развития экспериментального антибиотико-ассоциированного дисбактериоза у белых мышей и выявить антибактериальное действие гентамицина на кишечную микрофлору подопытных животных при пероральном его введении.

Вывод: Антибиотик гентамицин как экзогенный фактор, введенный перорально, является эффективным ингибитором роста и размножения индигенной кишечной микрофлоры (уменьшение ее содержания происходит со скоростью

(9,7±1,5)·10⁸ КОЕ·г^-1·сут^-1), что сопровождается явлениями дисбактериоза.

Пример 2

Берут 20 белых мышей с экспериментальным антибиотико-ассоциированным дисбактериозом, рассаживают в индивидуальные кюветы, выдерживают животных 4 дня с момента последнего перорального введения гентамицина с целью уменьшения его концентрации в кишечном содержимом. Отбирают от каждого животного фекальные массы, взвешивают их, суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают полученную суспензию на плотные питательные среды в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 48 часов, после чего подсчитывают количество выросших колоний. С учетом массы фекалий и количества выросших колоний делают пересчет общего числа микроорганизмов на 1 г фекалий (КОЕ·г^-1). Данный показатель является начальным (или стартовым) при самовосстановлении собственной кишечной микрофлоры у белых мышей, находящихся на обычном пищевом рационе. На 7 сутки эксперимента от каждого животного отбирают фекалии для определения общего количества микроорганизмов в 1 г фекалий (КОЕ·г^-1) во второй временной точке изучения фекальной микрофлоры в процессе ее самовосстановления. Вычисляют разницу значений концентраций микрофлоры в конце обследования и в начале обследования, после чего определяют скорость увеличения числа жизнеспособных микроорганизмов, деля разницу значений концентрации микроорганизмов на 7 (количество дней между двумя временными точками определения концентрации микроорганизмов в фекалиях животных).

Результаты определения

Общее количество микроорганизмов:

- начало эксперимента: 6,8·10⁴-9,6·10⁵ КОЕ·г^-1;

- окончание эксперимента (спустя 7 дней): 1,1·10⁶-7,1·10⁶ КОЕ·г^-1.

Скорость увеличения концентрации (самовосстановления) кишечной микрофлоры по каждому из обследованных животных (КОЕ·г^-1·сут^-1): 2,9·10⁵; 1,4·10⁵; 1,6·10⁵; 3,1·10⁵; 2,9·10⁵; 3,4·10⁵; 3,5·10⁵; 3,5·10⁵; 4,0·10⁵; 3,3·10⁵; 9,6·10⁵; 9,9·10⁵; 4,0·10⁵; 2,3·10⁴; 4,1·10⁵; 2,8·10⁵; 3,6·10⁵; 3,7·10⁵; 2,9·10⁵; 3,5·10⁵.

Обрабатывают полученные для каждого животного значения скорости самовосстановления численности собственной микрофлоры кишечника и вычисляют значение этого показателя для всей группы животных, обследованных в эксперименте,

Среднестатистический показатель общего содержания микроорганизмов в репрезентативной группе животных, находящихся в течение всего времени проведения экспериментов с животными опытной группы на обычном пищевом рационе и подвергавшихся, как и животные опытной группы, обычному уходу со сменой подстилки в кюветах, составил (6,8±0,7)·10⁹ КОЕ·г^-1. Сравнение показателей общего содержания кишечной микрофлоры в опытной группе животных (в том числе и скорости увеличения содержания микрофлоры) со среднестатистическим показателем общего содержания микроорганизмов в репрезентативной группе животных свидетельствует о постепенном восстановлении нормальной кишечной микрофлоры животных с экспериментальным антибиотико-ассоциированным дисбактериозом.

Рассчитанный показатель позволяет установить скорость самовосстановления кишечной микрофлоры у белых мышей с экспериментальным антибиотико-ассоциированным дисбактериозом и выявить действие ингредиентов пищевого рациона на самовосстановление кишечной микрофлоры.

Вывод: Ингредиенты пищевого рациона способствуют самовосстановлению кишечной микрофлоры у белых мышей с антибиотико-ассоциированным дисбактериозом. Однако скорость самовосстановления невелика и составляет (3,0±0,9)·10⁵ КОЕ·г^-1·сут^-1, что предопределяет необходимость применения дополнительного экзогенного фактора (например, пребиотика), интенсифицирующего процесс размножения кишечной микрофлоры.

Пример 3

Берут 20 белых мышей с экспериментальным антибиотико-ассоциированным дисбактериозом, рассаживают в индивидуальные кюветы, выдерживают животных 4 дня с момента последнего перорального введения гентамицина с целью уменьшения его концентрации в кишечном содержимом. Отбирают от каждого животного фекальные массы, взвешивают их, суспендируют в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия и высевают полученную суспензию на плотные питательные среды в чашках Петри, которые инкубируют при температуре 37°С в течение 48 часов, после чего подсчитывают количество выросших колоний. С учетом массы фекалий и количества выросших колоний делают пересчет общего числа микроорганизмов на 1 г фекалий (КОЕ·г^-1). Данный показатель является начальным (или стартовым) при восстановлении собственной кишечной микрофлоры под воздействием экзогенного фактора - пребиотика Стимбифид, содержащего фруктополи-, фруктоолигосахариды, премикс витаминно-минеральный «Immuniti» и вспомогательные вещества (натрия бикарбонат, лактозу, кальция стеарат). Пребиотик Стимбифид вводят каждому животному перорально согласно инструкции по его применению с учетом переводного коэффициента на единицу поверхности тела в дозе 13 мг. На 7 сутки эксперимента после начала введения животным пребиотика Стимбифид от каждого животного отбирают фекалии для определения общего количества микроорганизмов в 1 г фекалий (КОЕ·г^-1) во второй временной точке изучения восстановления фекальной микрофлоры под влиянием экзогенного фактора - пребиотика Стимбифид. Вычисляют разницу значений концентраций микрофлоры в конце обследования и в начале обследования, после чего определяют скорость увеличения числа жизнеспособных микроорганизмов, деля разницу концентраций микроорганизмов на 7 (количество дней между двумя временными точками определения концентрации микроорганизмов в фекалиях животных).

Результаты определения

Общее количество микроорганизмов:

- начало эксперимента: 2,7·10⁴-2,8·10⁵ КОЕ·г^-1;

- окончание эксперимента (спустя 7 дней): 2,1·10⁹-3,8·10¹⁰ КОЕ·г^-1.

Скорость увеличения концентрации кишечной микрофлоры под влиянием пребиотика Стимбифид по каждому из обследованных животных (КОЕ·г^-1·сут^-1):

2,9·10⁹; 4,5·10⁹; 4,6·10⁹; 1,4·10⁹; 1,3·10⁹; 3,0·10⁸; 5,4·10⁹; 1,4·10⁹; 1,2·10⁹; 1,7·10⁹; 2,6·10⁹; 9,7·10⁹; 1,2·10⁹; 1,9·10⁹; 1,3·10⁹; 1,3·10⁹; 4,6·10⁸; 1,1·10⁹; 9,6·10⁸; 1,0·10⁹.

Обрабатывают полученные для каждого животного значения скорости восстановления численности собственной микрофлоры кишечника и вычисляют значение этого показателя для всей группы животных, обследованных в эксперименте,

.

Среднестатистический показатель скорости изменения содержания микроорганизмов в репрезентативной группе животных, находящихся на обычном пищевом рационе, составил (3,6±0,7)·10⁵ КОЕ·г^-1·сут^-1. Это свидетельствует о выраженном положительном влиянии пребиотика Стимбифид на восстановление общего содержания кишечной микрофлоры (в том числе бифидобактерий, лактобактерий и эшерихий) у белых мышей с экспериментальным антибиотико-ассоциированным дисбактериозом: скорость восстановления общего содержания кишечной микрофлоры у животных опытной группы превышает аналогичный показатель, определенный для животных репрезентативной группы, в 4444,4 раза.

Рассчитанный показатель позволяет оценить скорость восстановления кишечной микрофлоры у белых мышей под влиянием пребиотика Стимбифид при разных исходных значениях содержания кишечной микрофлоры у каждого животного, сравнить его с показателем самовосстановления кишечной микрофлоры у животных, получающих обычный пищевой рацион, сделать вывод об эффективности пребиотикотерапии.

Вывод: Пребиотик Стимбифид является эффективным экзогенным фактором, стимулирующим восстановление кишечной микрофлоры. При этом скорость восстановления кишечной микрофлоры превышает аналогичный показатель самовосстановления кишечной микрофлоры (по примеру 2) в 5333,3 раза.

Заявленный способ позволяет оценить воздействие (отрицательное или положительное) экзогенных факторов, угнетающих или стимулирующих развитие нормальной микрофлоры кишечника, по скорости изменения содержания микробов кишечной микрофлоры в 1 г фекалий в сутки и прогнозировать сроки восстановления нормальной микрофлоры при дисбактериозах кишечника.

Claims (1)

1. Способ оценки воздействия экзогенных факторов на микрофлору кишечника при его дисбиотических нарушениях, заключающийся в том, что у обследуемого определяют количество микроорганизмов эндогенной флоры в 1 г фекалий до начала и по окончании воздействия экзогенного фактора и рассчитывают показатель скорости изменения количества микроорганизмов эндогенной флоры в виде содержания их в 1 г фекалий в сутки путем вычисления разницы значений количества микроорганизмов эндогенной флоры в 1 г фекалий между началом и окончанием обследования и последующего деления этой разницы на количество суток, прошедших между измерениями, сравнивают полученный показатель со среднестатистическим показателем скорости изменения количества микроорганизмов эндогенной флоры в 1 г фекалий, вычисленным заранее на большой группе пациентов со сходной патологией желудочно-кишечного тракта и по результатам сравнения выносят суждение об эффективности или отсутствии воздействия экзогенных факторов при дисбиотических нарушениях кишечника.