RU2322248C2 - Method for treating chronic diseases (variants), method for obtaining a biotransplant (variants), a biotransplant (variants) - Google Patents
Method for treating chronic diseases (variants), method for obtaining a biotransplant (variants), a biotransplant (variants) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2322248C2 RU2322248C2 RU2006103865/14A RU2006103865A RU2322248C2 RU 2322248 C2 RU2322248 C2 RU 2322248C2 RU 2006103865/14 A RU2006103865/14 A RU 2006103865/14A RU 2006103865 A RU2006103865 A RU 2006103865A RU 2322248 C2 RU2322248 C2 RU 2322248C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- tissue
- mononuclear
- autologous
- patient
- Prior art date
Links
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 67
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 22
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 22
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 7
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 claims description 6
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000001707 3',5'-Cyclic-AMP Phosphodiesterases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010054479 3',5'-Cyclic-AMP Phosphodiesterases Proteins 0.000 claims description 3
- 229940099471 Phosphodiesterase inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 3
- 239000002571 phosphodiesterase inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 10
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 39
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 31
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 24
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 19
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 10
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 10
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 9
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 8
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 8
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 8
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 7
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 6
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 5
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 5
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 4
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 4
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 3
- UOMKBIIXHQIERR-UHFFFAOYSA-N cridanimod Chemical compound C1=CC=C2N(CC(=O)O)C3=CC=CC=C3C(=O)C2=C1 UOMKBIIXHQIERR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 230000002612 cardiopulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000015864 chronic erosive gastritis Diseases 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 238000002565 electrocardiography Methods 0.000 description 2
- 210000001174 endocardium Anatomy 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229920005617 polyoxidonium Polymers 0.000 description 2
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 1
- 208000031104 Arterial Occlusive disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 206010007027 Calculus urinary Diseases 0.000 description 1
- 206010009192 Circulatory collapse Diseases 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 206010049811 Extraskeletal ossification Diseases 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 206010017865 Gastritis erosive Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 208000034970 Heterotopic Ossification Diseases 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010078049 Interferon alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000006735 Periostitis Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010044279 T-activin Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 1
- 206010047924 Wheezing Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- IYIKLHRQXLHMJQ-UHFFFAOYSA-N amiodarone Chemical compound CCCCC=1OC2=CC=CC=C2C=1C(=O)C1=CC(I)=C(OCCN(CC)CC)C(I)=C1 IYIKLHRQXLHMJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000021328 arterial occlusion Diseases 0.000 description 1
- 230000036523 atherogenesis Effects 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000001168 carotid artery common Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000002192 cholecystectomy Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000037020 contractile activity Effects 0.000 description 1
- 229940088540 cordarone Drugs 0.000 description 1
- 238000002586 coronary angiography Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 229960000459 cridanimod Drugs 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N dipyridamole Chemical compound C=12N=C(N(CCO)CCO)N=C(N3CCCCC3)C2=NC(N(CCO)CCO)=NC=1N1CCCCC1 IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001258 dyslipidemic effect Effects 0.000 description 1
- 206010013990 dysuria Diseases 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000002692 epidural anesthesia Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002607 hemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000002799 interferon inducing agent Substances 0.000 description 1
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000000083 maturity-onset diabetes of the young type 1 Diseases 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000003460 periosteum Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 210000005245 right atrium Anatomy 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 206010040560 shock Diseases 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 238000002693 spinal anesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000002047 thymogen Effects 0.000 description 1
- 108010014252 thymogen Proteins 0.000 description 1
- 108010015893 thymohexin Proteins 0.000 description 1
- 208000008281 urolithiasis Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0645—Macrophages, e.g. Kuepfer cells in the liver; Monocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4621—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells immunosuppressive or immunotolerising
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/46434—Antigens related to induction of tolerance to non-self
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Description
Уровень техникиState of the art
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения хронических заболеваний.The invention relates to medicine and can be used to treat chronic diseases.
Известны способы лечения заболеваний сердца (Шевченко Ю.Л. Клеточные технологии в кардиологии, №11, Вестник РАМН, 2003 г, стр.6-10), основанные на получении взвеси фетальных клеток из абортивного донорского материала, содержащих стволовые и прогениторные клетки, и введении их в миокард. Недостатками указанного аналога являются:Known methods of treating heart diseases (Shevchenko, Yu.L. Cellular technologies in cardiology, No. 11, Vestnik RAMS, 2003, pp. 6-10), based on the suspension of fetal cells from abortive donor material containing stem and progenitor cells, and introducing them into the myocardium. The disadvantages of this analogue are:
1. Нелегитивность использования фетального материала, который не может быть применен в клинике у больных.1. The illegitimacy of the use of fetal material, which cannot be used in a clinic in patients.
2. Опасность заражения реципиента нераспознанными инфекциями, содержащимися в донорском материале.2. The risk of infection of the recipient with unrecognized infections contained in the donor material.
3. Остальные клетки представляют собой аллогенный материал, эффективность применения которого постепенно снижается из-за иммунного отторжения.3. The remaining cells are allogeneic material, the effectiveness of which is gradually reduced due to immune rejection.
Известен другой аналог (Bel A., Messas E., Agbulut О., et al. Transplantation of autologous fresh bone marrow into infarcted myocardium: A word of caution. // Circulation. - 2003. - 108. - P. II-247), предложенный для лечения заболеваний сердца методом клеточной терапии. Этот метод основан на получении аутологичного свежевыделенного костного мозга, содержащего клетки гемопоэтического и стромального ряда, и возвращении их в миокард или коронарное русло пациенту.Another analogue is known (Bel A., Messas E., Agbulut O., et al. Transplantation of autologous fresh bone marrow into infarcted myocardium: A word of caution. // Circulation. - 2003. - 108. - P. II-247 ), proposed for the treatment of heart disease by cell therapy. This method is based on obtaining an autologous freshly isolated bone marrow containing hematopoietic and stromal cells and returning them to the myocardium or coronary bed.
Преимущество этого метода перед известным заключается в отсутствии правовых и этических проблем; отсутствии риска привнесения инфекции в организм реципиента.The advantage of this method over the well-known is the absence of legal and ethical problems; no risk of introducing infection into the recipient's body.
К недостаткам этого аналога, снижающим эффективность восстановительных процессов в поврежденном органе с помощью клеточной терапии относятся:The disadvantages of this analogue, which reduce the effectiveness of restoration processes in a damaged organ with the help of cell therapy include:
1. Развитие костной ткани в зоне введения клеток, из-за дифференцировки стромальных клеток по остеогенному пути (Sale G.E., Storb R. Bilateral diffuse pulmonary ectopic ossification after marrow allograft in a dog. Evidence for allotransplantation of hemopoietic and mesenchymal stem cells. Exp Hematol. - 1983. - 11. - №10. - Р.961-966).1. Development of bone tissue in the cell injection zone due to the differentiation of stromal cells along the osteogenic pathway (Sale GE, Storb R. Bilateral diffuse pulmonary ectopic ossification after marrow allograft in a dog. Evidence for allotransplantation of hemopoietic and mesenchymal stem cells. Exp Hematol . - 1983. - 11. - No. 10. - P.961-966).
2. Исходно сниженный регенерационный потенциал клеточной взвеси, т.к. источником клеток является сам больной, регенерационный потенциал клеток которого (в том числе и клеток костного мозга) снижен из-за болезни.2. The initially reduced regenerative potential of cell suspension, because the source of the cells is the patient himself, whose regenerative potential (including bone marrow cells) is reduced due to the disease.
3. Отсутствие или резкое снижение в клеточной взвеси тканеспецифических клонов клеток (лимфоидных), способствующих регенерации соответствующего хронически поврежденного органа, и этот недостаток в еще большой степени снижает регенерационный потенциал используемой клеточной взвеси и тем самым существенно ослабляет эффективность метода.3. The absence or a sharp decrease in tissue suspension of tissue-specific cell clones (lymphoid) that contribute to the regeneration of the corresponding chronically damaged organ, and this drawback reduces to a still greater extent the regeneration potential of the used cell suspension and thereby significantly reduces the effectiveness of the method.
Наиболее близким аналогом заявляемого изобретения является работа, проведенная в институте трансплантологии (Шумаков В.И. и соавт. Тезисы доклада на 11-м Всероссийском съезде сердечнососудистых хирургов. - Москва, 23-26 октября 2005 г., стр.296; Автореферат кандидатской диссертации Берсенева А.В. Трансплантация клеток эмбриональной печени и стволовых клеток костного мозга для коррекции дислипидемии и ранних стадий атерогенеза. М., 2003 г.), в которой для лечения хронических заболеваний внутренних органов используются культивируемые аутологичные мононуклеарные клетки, содержащие стволовые и прогениторные клетки, полученные из костного мозга больного.The closest analogue of the claimed invention is the work carried out at the Institute of Transplantology (V. Shumakov et al. Abstracts at the 11th All-Russian Congress of Cardiovascular Surgeons. - Moscow, October 23-26, 2005, p. 266; Abstract of the dissertation Berseneva A.V. Transplantation of embryonic liver cells and bone marrow stem cells for the correction of dyslipidemia and early stages of atherogenesis. M., 2003), in which cultivated autologous m is used to treat chronic diseases of internal organs ononuclear cells containing stem and progenitor cells obtained from the bone marrow of the patient.
Данный метод позволяет исключить возможность появления костной ткани в зоне введения клеток за счет культивирования. Однако использование клеток костного мозга, забираемых у больных с хроническими заболеваниями, не позволяет существенно повысить эффективность метода, т.к. используемая взвесь состоит из клеток со сниженным регенерационным потенциалом и почти не содержит клеток, имеющих тканеспецифицескую направленность регенерационного воздействия, на соответствующий поврежденный орган. Последнее обусловлено тем, что при хроническом повреждении органа в крови и костном мозге снижено содержание тканиспецифических клонов клеток из-за суммарного снижения в нем жизнеспособной функционирующей ткани, способной обеспечить выработку тканеспецифических клонов. Именно этим объясняется, что эффективность используемого метода не превышает 60-70% (Шумаков В.И. и др. ВестРАМН 2004 г., №9, стр44-47).This method eliminates the possibility of bone tissue appearing in the cell injection zone due to cultivation. However, the use of bone marrow cells taken from patients with chronic diseases does not significantly increase the effectiveness of the method, because the suspension used consists of cells with a reduced regenerative potential and almost does not contain cells having a tissue-specific orientation of the regenerative effect on the corresponding damaged organ. The latter is due to the fact that in case of chronic organ damage in the blood and bone marrow, the content of tissue-specific cell clones is reduced due to the total decrease in it of viable functioning tissue capable of producing tissue-specific clones. This explains why the effectiveness of the method used does not exceed 60-70% (Shumakov V.I. et al. VestRAMN 2004, No. 9, pp. 44-47).
Заявляемые изобретения направлены на устранение перечисленных выше недостатков и достижение технического результата, заключающегося в повышении регенерационного потенциала аутологичных мононуклеарных клеток, что в свою очередь обеспечивает повышение эффективности лечения большого спектра хронических заболеваний.The claimed inventions are aimed at eliminating the above disadvantages and achieving a technical result, which consists in increasing the regeneration potential of autologous mononuclear cells, which in turn provides an increase in the effectiveness of treatment of a wide range of chronic diseases.
Технический результат достигается за счет того, что в способе лечения хронических заболеваний, включающем забор у больного клеточного материала с последующим выделением из него мононуклеарных аутологичных клеток, содержащих стволовые клетки, культивирование мононуклеарных аутологичных клеток с получением биотрансплантата и последующую трансплантацию последнего больному, культивирование осуществляют с добавлением тканеспецифического антигена, соответствующего поврежденному органу.The technical result is achieved due to the fact that in the method of treating chronic diseases, including the collection of cellular material from a patient with subsequent isolation of mononuclear autologous cells containing stem cells from it, the cultivation of mononuclear autologous cells to produce a biotransplant and the subsequent transplantation of the latter to the patient, cultivation is carried out with the addition of tissue-specific antigen corresponding to a damaged organ.
А также тем, что в способе лечения хронических заболеваний, включающем забор у больного клеточного материала с последующим выделением из него мононуклеарных аутологичных клеток, содержащих стволовые клетки, культивирование мононуклеарных аутологичных клеток с получением биотрансплантата и последующую трансплантацию последнего больному к выделенным мононуклеарным аутологичным клеткам перед культивированием добавляют лимфоидные и/или дендритные клетки, предварительно культивированные с добавлением тканеспецифического антигена, соответствующего поврежденному органу.And also by the fact that in a method of treating chronic diseases, including collecting cellular material from a patient with subsequent isolation of mononuclear autologous cells containing stem cells from it, culturing mononuclear autologous cells to produce a biotransplant and subsequent transplantation of the latter to the patient, the isolated mononuclear autologous cells are added before cultivation lymphoid and / or dendritic cells, previously cultured with the addition of tissue-specific antigen, The appropriate organ damage.
А также за счет того, что в способе лечения хронических заболеваний предварительно, до забора клеточного материала, больному осуществляют иммуннокоррекцию.And also due to the fact that in the method of treating chronic diseases previously, before the collection of cellular material, the patient is immunocorrection.
А также за счет того, что в способе лечения хронических заболеваний для осуществления иммунокоррекции определяют индекс стимуляции как отношение суммарной продукции активных форм кислорода клетками крови, обработанными ингибитором цАМФ-фосфодиэстеразы к суммарной продукции активных форм кислорода интактными клетками.And also due to the fact that in the method of treating chronic diseases for the implementation of immunocorrection, the stimulation index is determined as the ratio of the total production of reactive oxygen species by blood cells treated with a cAMP-phosphodiesterase inhibitor to the total production of reactive oxygen species by intact cells.
А также за счет того, что в способе получения биотрансплантата, включающем забор у больного клеточного материала с последующим выделением из него мононуклеарных аутологичных клеток, содержащих стволовые клетки, культивирование мононуклеарных аутологичных клеток в ростовой среде, в ростовую среду при культивировании добавляют тканеспецифической антиген, соответствующий поврежденному органу.And also due to the fact that in the method for producing a biograft, including sampling cellular material from a patient with subsequent isolation of mononuclear autologous cells containing stem cells from it, culturing mononuclear autologous cells in a growth medium, a tissue-specific antigen corresponding to the damaged one is added to the growth medium during cultivation body.
А также за счет того, что в способе получения биотрансплантата, включающем забор у больного клеточного материала с последующим выделением из него мононуклеарных аутологичных клеток, содержащих стволовые клетки, культивирование мононуклеарных аутологичных клеток в ростовой среде к выделенным мононуклеарным аутологичным клеткам перед культивированием добавляются лимфоидные и/или дендритные клетки, предварительно культивированные с добавлением тканеспецифического антигена, соответствующего поврежденному органу.And also due to the fact that in the method for producing a biograft, including sampling cellular material from a patient with subsequent isolation of mononuclear autologous cells containing stem cells from it, culturing mononuclear autologous cells in a growth medium, lymphoid and / or are added to the isolated mononuclear autologous cells before cultivation dendritic cells, previously cultured with the addition of tissue-specific antigen corresponding to the damaged organ.
А также за счет того, что биотрансплантат, включающий выделенные мононуклеарные аутологичные клетки, содержит в своем составе стволовые клетки, предварительно культивированные с тканеспецифическим антигеном, соответствующим поврежденному органу.And also due to the fact that the biograft, including the selected mononuclear autologous cells, contains stem cells pre-cultured with a tissue-specific antigen corresponding to the damaged organ.
А также за счет того, что биотрансплантат, включающий выделенные мононуклеарные аутологичные клетки, содержит в своем составе лимфоидные и/или дендритные клетки, предварительно культивированные с добавлением тканеспецифического антигена, соответствующего поврежденному органу.And also due to the fact that the biograft, including the isolated autologous mononuclear cells, contains lymphoid and / or dendritic cells, previously cultured with the addition of tissue-specific antigen corresponding to the damaged organ.
Заявляемые способы лечения хронических заболеваний устраняют перечисленные недостатки аналогов в силу того, что еще до забора аутологичных мононуклеарных клеток (АМК) у больного проводится исследование иммунного статуса и осуществляется иммунокоррекция под контролем «индекса стимуляции клеток крови», что позволяет существенно повысить регенерационный потенциал этих клеток. Для обеспечения формирования тканеспецифической направленности регенерационного потенциала клеток, предназначенных для клеточной терапии, на стадии их культивирования в ростовую среду вводится тканеспецифический антиген, идентичный тому органу, регенерацию которого необходимо восстановить в организме больного.The claimed methods of treating chronic diseases eliminate the above disadvantages of analogues due to the fact that even before the collection of autologous mononuclear cells (AMA) in a patient, the immune status is examined and immunocorrection is carried out under the control of the “blood cell stimulation index”, which can significantly increase the regenerative potential of these cells. To ensure the formation of a tissue-specific orientation of the regenerative potential of cells intended for cell therapy, at the stage of their cultivation, a tissue-specific antigen is introduced into the growth medium that is identical to the organ whose regeneration must be restored in the patient's body.
В результате использования заявляемых изобретений наступает быстрое и почти стопроцентное улучшение функционирования поврежденных органов при их хроническом повреждении (на примере миокарда).As a result of using the claimed inventions, a quick and almost one hundred percent improvement in the functioning of damaged organs occurs during their chronic damage (for example, myocardium).
Изобретения поясняются следующими чертежами.The invention is illustrated by the following drawings.
Фиг.1 - график расчета индекса стимуляции.Figure 1 is a graph of the calculation of the stimulation index.
Фиг.2 - график прогноза благоприятного результата введения аутологичных клеток больному при индексе стимуляции >1.0.Figure 2 - graph of the forecast of a favorable result of the introduction of autologous cells to the patient with a stimulation index> 1.0.
Фиг.3 - график прогноза неблагоприятного результата введения аутологичных клеток больному при индексе стимуляции <1.0.Figure 3 - graph of the forecast of an unfavorable result of the introduction of autologous cells to the patient with a stimulation index <1.0.
Фиг.4 - график прогноза неблагоприятного результата введения АМК больной Л. при индексе стимуляции <1.0.Figure 4 is a graph of the forecast of an unfavorable result of the administration of AMA of patient L. with a stimulation index <1.0.
Фиг.5 - график индивидуального подбора иммунокорректоров методом хемилюминесценции.Figure 5 is a graph of individual selection of immunocorrections by chemiluminescence.
Фиг.6 - график прогноза благоприятного результата введения АМК больной Л. при индексе стимуляции >1.0.6 is a graph of the prognosis of a favorable result of the introduction of AMA patient L. with a stimulation index> 1.0.
Фиг.7 - динамика изменения клеточного состава АМК в зависимости от условий культивирования (без и с добавлением тканеспецифического антигена (ТА)).Fig.7 - the dynamics of changes in the cellular composition of AMA depending on the cultivation conditions (without and with the addition of tissue-specific antigen (TA)).
Фиг.8 - количественная оценка региональных изменений перфузии по стандартным проекциям статической сцинтиграфии миокарда с Тс-99м у больной Л. до и через 1 мес. после введения АМК (культивирование с ТА).Fig - quantitative assessment of regional changes in perfusion according to standard projections of static myocardial scintigraphy with TC-99m in patient L. before and after 1 month. after administration of AMA (cultivation with TA).
Сущность изобретения.SUMMARY OF THE INVENTION
Предлагаемый способ включает: иммунологическое обследование больных и проведение иммунокорекции под контролем «индекса стимуляции» мононуклеарных клеток из крови больных (нормализация которого свидетельствует о восстановлении иммунологического гомеостаза); забор аутологичных клеток (костный мозг, кровь); выделение из них фракции ядросодержащих клеток, культивирование клеток в ростовой среде в присутствии тканеспецифического антигена (ТА), идентичного поврежденному органу, в течение 1-15 дней и трансплантацию подготовленной культуры клеток в организм больного с хроническим заболеванием внутренних органов.The proposed method includes: immunological examination of patients and immunocorrection under the control of the "stimulation index" of mononuclear cells from the blood of patients (normalization of which indicates the restoration of immunological homeostasis); autologous cell collection (bone marrow, blood); isolation of fractions of nucleated cells from them, cultivation of cells in a growth medium in the presence of a tissue-specific antigen (TA) identical to the damaged organ for 1-15 days and transplantation of the prepared cell culture into a patient with a chronic disease of internal organs.
Оценку иммунного статуса больных проводили на взвеси ядросодержащих клеток из крови до и после проведения иммунокоррекции.Evaluation of the immune status of patients was carried out by suspension of nucleated cells from the blood before and after immunocorrection.
Оценка индекса стимуляции клеток иммунной системы включает следующие этапы:Evaluation of the stimulation index of cells of the immune system includes the following steps:
Для получения ядросодержащих клеток 2 мл гепаринизированной крови смешивали с 1 мл подогретого до 37°С 3% раствора желатина и инкубировали в термостате при 37°С в течение 30 мин. После оседания эритроцитов слой плазмы, обогащенный лейкоцитами, отбирали в пластиковые пробирки и отмывали 10-кратным объемом фосфатно-солевого буфера (рН 7,4). Затем лейкоциты центрифугированием в течение 10 мин при 1000 об/мин ресуспендировали в растворе Хенкса без Са2+ и Mg2+. После подсчета числа ядросодержащих клеток концентрацию последних доводили до 106 л/мл.To obtain nucleated cells, 2 ml of heparinized blood was mixed with 1 ml of a 3% gelatin solution heated to 37 ° C and incubated in an incubator at 37 ° C for 30 minutes. After erythrocyte sedimentation, the plasma layer enriched in leukocytes was taken into plastic tubes and washed with a 10-fold volume of phosphate-saline buffer (pH 7.4). Then, the white blood cells by centrifugation for 10 min at 1000 rpm were resuspended in a Hanks solution without Ca 2+ and Mg 2+ . After counting the number of nucleated cells, the concentration of the latter was adjusted to 10 6 l / ml.
Определение индекса стимуляции осуществляли следующим образом.The determination of the stimulation index was carried out as follows.
В 2-е кюветы контрольную и опытную вносили по 40*103 клеток. В опытную кювету дополнительно вносили препарат индуктор интерферона, содержащий ингибитор цАМФ-фосфодиэстеразы производную акридонуксусной кислоты (10-карбоксиметил-9-акриданон) и N-метилглюкамин. В контрольную кювету вносили раствора Хэнкса. Контрольную и опытную кюветы инкубировали в термостате в течение 60 мин при 37°С. После инкубации клеток с проводили запись кривых хемилюминесцентной реакции (ХЛР) клеток в контрольной и опытной кюветах с использованием хемилюминометра «Хемилюм-2001 01/01» (Россия) в комплексе с компьютером IBM-PC при температуре счетной камеры 37°С, в течение 15 мин. В качестве усилителя свечения использовали люминол (5-амино-2,3-дигидро-1,4-фталазиндион, «Sigma») в конечной концентрации 10-3 М, а в качестве активатора образования активных форм кислорода - РМА (форбол-12-миристат-13-ацетат, «Sigma») в концентрации 10-6 М.In the 2nd cuvette, the control and experimental cells were introduced with 40 * 10 3 cells. An interferon inducer containing a cAMP-phosphodiesterase inhibitor, a derivative of acridonoacetic acid (10-carboxymethyl-9-acridanone) and N-methylglucamine was additionally added to the experimental cuvette. Hanks solution was added to the control cuvette. The control and experimental cuvettes were incubated in a thermostat for 60 min at 37 ° C. After incubation of the cells, the curves of the chemiluminescent reaction (HLR) of the cells were recorded in the control and experimental cuvettes using a chemiluminometer Chemilum-2001 01/01 (Russia) in combination with an IBM-PC computer at a temperature of the counting chamber of 37 ° C for 15 min Luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, Sigma) at a final concentration of 10 -3 M was used as a luminescence enhancer, and RMA (phorbol-12- myristate-13-acetate, Sigma) at a concentration of 10 -6 M.
Затем вычисляли суммарную продукцию активных форм кислорода (АФК) как площадь под кривой хемилюминесцентной реакции. Рассчитывался индекс стимуляции (ИС) используемого препарата как отношение площади хемилюминесцентной реакции в контроле и опыте (фиг.1).Then, the total production of reactive oxygen species (ROS) was calculated as the area under the chemiluminescent reaction curve. The stimulation index (IS) of the drug used was calculated as the ratio of the area of the chemiluminescent reaction in the control and experiment (Fig. 1).
Индекс стимуляции >1.0 прогнозирует благоприятный результат введения аутологичных клеток данному больному (фиг.2), индекс стимуляции <1.0 прогнозирует неблагоприятный результат введения аутолбгйчных клеток данному больному (фиг.3).A stimulation index> 1.0 predicts a favorable result of the introduction of autologous cells to a given patient (Fig. 2), a stimulation index <1.0 predicts an unfavorable result of the introduction of autologous cells to a given patient (Fig. 3).
Затем больному проводится иммунокоррекция одним из ниже перечисленных препаратов, используемых в терапевтических дозах.Then the patient is immunocorrection with one of the following drugs used in therapeutic doses.
ПолиоксидонийPolyoxidonium
ИмунофанImunofan
НеовирNeovir
СпленопидSplenopid
РеаферонReaferon
РоферонRoferon
РонколейкинRoncoleukin
Т-активинT-activin
ТимогенThymogen
ЦиклоферонCycloferon
Курс иммунокоррекции при индексе стимуляции ниже 1.0 составляет 14 дней. Для контроля эффективности иммунокоррекции у больных с исходным индексом стимуляции меньше 1.0 проводится повторное определение индекса стимуляции. Забор клеточного материала осуществляют у больных только с индексом стимуляции больше 1.0.The course of immunocorrection with a stimulation index below 1.0 is 14 days. To control the effectiveness of immunocorrection in patients with an initial stimulation index less than 1.0, a re-determination of the stimulation index is carried out. Cellular material is taken in patients only with a stimulation index greater than 1.0.
Получение аутологичных мононуклеарных клеток (АМК), содержащих стволовые и прогениторные клетки, из костного мозга (или периферической крови) для трансплантации больному осуществляют следующим образом.Obtaining autologous mononuclear cells (AMA) containing stem and progenitor cells from bone marrow (or peripheral blood) for transplantation to a patient is as follows.
Для забора костного мозга используют доступ из переднего гребня подвздошной кости. Забор костного мозга проводится в условиях операционной при соблюдении тех же правил асептики, как и при других оперативных вмешательствах. Болевые ощущения при заборе костного мозга главным образом связаны с высокой чувствительностью надкостницы при прокалывании иглой и требуют проведения адекватного обезболивания. Выбор между общей, спинальной, эпидуральной или местной анестезией для обезболивания зависит как от медицинских показаний, так и от предпочтений донора и анестезиолога. В 95% случаев возможно адекватное обезболивание методом местной анестезии. Донор госпитализируется утром накануне забора и при отсутствии осложнений может быть выписан во второй половине дня забора с назначением анальгетиков, рекомендациями смены повязки в местах инъекций.For bone marrow collection, access from the anterior iliac crest is used. Bone marrow is taken under operating conditions, subject to the same aseptic rules, as with other surgical interventions. Pain sensations during bone marrow harvesting are mainly associated with a high sensitivity of the periosteum when piercing with a needle and require adequate pain relief. The choice between general, spinal, epidural or local anesthesia for analgesia depends on both medical indications and the preferences of the donor and anesthetist. In 95% of cases, adequate analgesia by local anesthesia is possible. The donor is hospitalized in the morning on the eve of the fence and, in the absence of complications, can be discharged in the afternoon of the fence with the appointment of analgesics, recommendations for changing the dressing at the injection site.
После обработки кожи йодсодержащими растворами в области передних гребней делают прокол кожи и подкожно-жировой клетчатки, через который вставляют иглы для аспирации. После чего прокалывают кортикальную пластинку гребня подвздошной кости и аспирируют костный мозг из губчатого вещества кости. Для забора 50-150 мл костного мозга необходимо сделать несколько проколов кортикальной пластинки кости, для этого кожу и подкожно-жировую клетчатку перемещают аспирационной иглой. Классическая технология требует аспирировать костный мозга из каждого вкола малыми порциями (3-5) мл в 20-миллилитровый шприц. После наполнения шприца врач отсоединяет его от иглы и передает медсестре, которая переносит содержимое шприца в полимерный контейнер с антикоагулянтом.After treating the skin with iodine-containing solutions in the area of the anterior crests, a puncture of the skin and subcutaneous fat is made, through which needles for aspiration are inserted. After that, the cortical plate of the iliac crest is pierced and the bone marrow is aspirated from the spongy bone. For the collection of 50-150 ml of bone marrow, it is necessary to make several punctures of the cortical plate of the bone, for this the skin and subcutaneous fat are moved with an aspiration needle. Classical technology requires aspirating the bone marrow from each injection in small portions (3-5) ml into a 20-ml syringe. After filling the syringe, the doctor disconnects it from the needle and passes it to the nurse, who transfers the contents of the syringe into a polymer container with an anticoagulant.
После окончания забора в области прокола кожи накладывают повязку, а КМ сразу же отправляют в лабораторию для дальнейшей обработки в специальном контейнере с антикоагулянтом при +4С°. Объем забираемого КМ должен составлять 150-200 мл.After the end of the fence, a bandage is applied in the area of skin puncture, and the CM is immediately sent to the laboratory for further processing in a special container with an anticoagulant at + 4 ° C. The volume of the taken KM should be 150-200 ml.
Аспират костномозговой взвеси клеток помещают в пробирки объемом 50 мл и центрифугируют. Плазму и интерфазу с ядросодержащими клетками собирают и осуществляют повторное центрифугирование. Плазму убирают, а к полученному осадку добавляют лизирующий раствор для элиминации эритроцитов. Пробирку закрывают и энергично встряхивают, затем центрифугируют. Осадок ресуспендируют в ростовой среде DMEM, содержащей эмбриональную сыворотку, инсулин, гентамицин и тканеспецифический антиген (получение см. ниже). Клетки высевают на чашки Петри и культивируют при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2 и при 95% влажности, в течение 1-15 суток. Биотрансплантат представляет собой оставшиеся мононуклеарные клетки после культивирования и центрифугирования при 1500 об/мин в течении 5 мин. К полученному осадку добавляли р-р Хенкса (5 мл) и трансплантировали реципиенту.An aspirate of bone marrow suspension of cells is placed in 50 ml tubes and centrifuged. Plasma and interphase with nucleated cells are collected and centrifuged again. Plasma is removed, and a lysis solution is added to the resulting pellet to eliminate red blood cells. The tube is closed and shaken vigorously, then centrifuged. The precipitate was resuspended in DMEM growth medium containing fetal serum, insulin, gentamicin and a tissue-specific antigen (for preparation see below). Cells are seeded on Petri dishes and cultured at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO 2 and at 95% humidity for 1-15 days. The biograft is the remaining mononuclear cells after cultivation and centrifugation at 1500 rpm for 5 minutes Hanks solution (5 ml) was added to the resulting pellet and transplanted to the recipient.
Получение другого варианта биотрансплантата осуществляется следующим образом.Obtaining another version of the biograft is as follows.
Из крови больного выделяется лейкоцитарная фракция клеток крови, содержащая лимфоциты и моноциты, которая затем культивируется с тканеспецифическим антигеном. После культивирования лейкоцитарная фракция, содержащая лимфоциты и моноциты, отмывается от тканеспецифического антигена методом центрифугирования. Полученные лейкоцитарные клетки добавляют к выделенным аутологичным мононуклеарным клеткам, содержащим стволовые клетки, и культивируют при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2 и при 95% влажности, в течение 1-15 суток. Оставшиеся мононуклеарные клетки после культивирования центрифугировали при 1500 об/мин в течении 5 мин, добавляли р-р Хенкса (5 мл) и трансплантировали реципиенту.A leukocyte fraction of blood cells containing lymphocytes and monocytes is released from the patient’s blood, which is then cultivated with a tissue-specific antigen. After cultivation, the leukocyte fraction containing lymphocytes and monocytes is washed from the tissue-specific antigen by centrifugation. The obtained leukocyte cells are added to the isolated autologous mononuclear cells containing stem cells and cultured at 37 ° C in an atmosphere containing 5% CO 2 and at 95% humidity for 1-15 days. The remaining mononuclear cells after cultivation were centrifuged at 1500 rpm for 5 min, Hanks solution (5 ml) was added and transplanted to the recipient.
Для получения тканеспецифичекого антигена брали свежевыделенную ткань органа, идентичного поврежденному. В качестве источника может быть использована аллогенная или ксеногенная ткань, при возможности используется биопсийный материал.To obtain tissue-specific antigen, freshly isolated tissue of an organ identical to the damaged was taken. Allogeneic or xenogenic tissue may be used as a source, and biopsy material may be used if possible.
Ткань механически гомогенизируется на фрагменты не более 0,5 мм3. Полученный гомогенат заливается раствором Хенкса 1:1 и помещается в морозильную камеру на 1 час, затем ткань размораживают, данный цикл повторяют 3 раза. Затем гомогенат центрифугирую при 2000 об/мин 10 мин. Супернатант отбирают и фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм для обеспечения стерильности раствора. Концентрация белка в растворе определяется методом Лоури и должна находиться в диапазоне от 0,5 до 1 мг/мл.The fabric is mechanically homogenized into fragments of not more than 0.5 mm 3 . The resulting homogenate is poured with Hanks' solution 1: 1 and placed in the freezer for 1 hour, then the tissue is thawed, this cycle is repeated 3 times. Then the homogenate is centrifuged at 2000 rpm for 10 minutes. The supernatant is collected and filtered through a filter with a pore diameter of 0.22 μm to ensure sterility of the solution. The protein concentration in the solution is determined by the Lowry method and should be in the range from 0.5 to 1 mg / ml.
Культивирование с добавлением тканеспецифического антигена проводят при добавлении, в частности супернатанта тканеспецифического антигена в культуральную среду в соотношении в среднем 1:30 (проверялся диапазон от 1:10 до 1:80).Cultivation with the addition of tissue-specific antigen is carried out by adding, in particular, the supernatant of tissue-specific antigen to the culture medium in an average ratio of 1:30 (the range from 1:10 to 1:80 was checked).
Настоящее изобретение поясняется описанием конкретных, но не исчерпывающих его, примеров реализации.The present invention is illustrated by a description of specific, but not exhaustive, examples of implementation.
Были проанализированы результаты лечения 80 больных, которым проводилась трансплантация аутологичных мононуклеарных клеток при лечении сердечно-сосудистой патологии.The results of treatment of 80 patients who underwent transplantation of autologous mononuclear cells in the treatment of cardiovascular pathology were analyzed.
Реципиенты аутологичных мононуклеарных клеток были разделены на 2 группы, в зависимости от исходного индекса стимуляции (ИС) аутологичных мононуклеарных клеток: группа пациентов с ИС>1.0 (n=40) и группа больных с ИС<1.0 (n=15). Группы больных не отличались между собой по медианам таких параметров, как возраст, длительность сердечной недостаточности, количество перенесенных инфарктов миокарда. У этих больных до и после трансплантации аутологичных мононуклеарных клеток определяли значения объемных характеристик левого желудочка (ЛЖ): конечный систолический объем левого желудочка (КСО ЛЖ), конечный диастолический объем левого желудочка (КДО ЛЖ), конечный систолический размер левого желудочка (КСР ЛЖ), конечный диастолический размер левого желудочка (КДР ЛЖ), фракция изгнания левого желудочка (ФИ ЛЖ) и рассчитывали прирост этих показателей, которые обозначали в виде (Δ = ((Показатель после лечения - Показатель до лечения)/Показатель до лечения)* 100%).Recipients of autologous mononuclear cells were divided into 2 groups, depending on the initial stimulation index (IS) of autologous mononuclear cells: a group of patients with IS> 1.0 (n = 40) and a group of patients with IS <1.0 (n = 15). The groups of patients did not differ from each other in medians of such parameters as age, duration of heart failure, and the number of myocardial infarctions. In these patients, before and after transplantation of autologous mononuclear cells, the values of the volume characteristics of the left ventricle (LV) were determined: the final systolic volume of the left ventricle (CSR LV), the final diastolic volume of the left ventricle (BWW LV), the final systolic size of the left ventricle (CSR LV), the final diastolic size of the left ventricle (LV CRD), the fraction of expulsion of the left ventricle (LV PH) and the growth of these indicators was calculated, which were indicated in the form (Δ = ((Indicator after treatment - Indicator before treatment) / Indicator before treatment) * 100%).
Были обнаружены статистически значимые различия в таких показателях, как дельта уменьшения КДО ЛЖ, КСО ЛЖ, КСР ЛЖ, КДР ЛЖ и ФИ через 1 мес. (табл.1) и 6 мес. (табл.2) после клеточной терапии по данным ЭхоКГ.Statistically significant differences were found in indicators such as the delta of decrease in BWW of the LV, CSR of the LV, KSR of the LV, KDR of the LV and FI after 1 month. (table 1) and 6 months. (table 2) after cell therapy according to echocardiography.
Как видно из таблицы 1, в группе где ИС>1,0 уже через месяц происходит достоверно выраженное благоприятное уменьшение КДО, КСО, КДР и КСР и увеличение ФИ по сравнению с группой реципиентов, у которых ИС<1,0. Эти данные свидетельствовали о позитивном изменение гемодинамике в группе с ИС>1.0 и об отсутствие позитивного клинического эффекта при использование клеток у больных с ИС<1.0.As can be seen from table 1, in the group where IP> 1.0, after a month there occurs a reliably pronounced favorable decrease in BWW, CSR, DDR and DAC and an increase in FI compared with the group of recipients with IP <1.0. These data indicated a positive change in hemodynamics in the group with IS> 1.0 and the absence of a positive clinical effect when using cells in patients with IS <1.0.
Из таблицы 2 видно, через 6 месяцев наблюдения отмеченные позитивные тенденции при использовании клеток с ИС>1.0 не только сохраняются, но по некоторым показателям (КСО, КСР, ФИ) становятся более выраженными.From table 2 it can be seen that after 6 months of observation, the noted positive trends when using cells with IP> 1.0 not only persist, but according to some indicators (CSR, DAC, FI) become more pronounced.
Таким образом, сравнительный анализ показал, что клинический эффект клеточной трансплантации напрямую зависит от исходного значения показателя индекса стимуляции.Thus, a comparative analysis showed that the clinical effect of cell transplantation directly depends on the initial value of the stimulation index.
Проводя иммунокоррекцию, перед забором костного мозга удалось повысить эффективность проводимой клеточной терапии, т.к у всех больных исходно перед забором АМК ИС стал >1.0. Группа без иммунокоррекции включала в себя пациентов с ИС>1,0 и ИС<1.0. Как видно из табл.3, в группе пациентов, которым проводили иммунокоррекцию до забора АМК через 6 месяцев после трансплантации клинический эффект был достоверно более выражен по сравнению с группой больных без иммунокоррекции.Carrying out immunocorrection, before harvesting the bone marrow, it was possible to increase the effectiveness of cell therapy, because in all patients, initially, before collection, AMA IP became> 1.0. The group without immunocorrection included patients with IP> 1.0 and IP <1.0. As can be seen from table 3, in the group of patients who underwent immunocorrection before taking AMA 6 months after transplantation, the clinical effect was significantly more pronounced compared to the group of patients without immunocorrection.
Таким образом, предварительная иммунокоррекция повышает функциональную активность АМК и достоверно позитивно влияет на процессы ремоделирования ЛЖ у больных с сердечной недостаточностью (СН).Thus, preliminary immunocorrection increases the functional activity of AMA and significantly positively affects the processes of LV remodeling in patients with heart failure (HF).
Необходимость добавления ТА была изучена в опытах с моделированием дислипидемического повреждения печени у морских свинок и криогенного повреждения миокарда крыс.The need to add TA was studied in experiments with modeling dyslipidemic liver damage in guinea pigs and cryogenic damage to rat myocardium.
1. У морских свинок с хронической дислипидемией в течение 4 месяцев развивается жировая дистрофия печени и резко нарушается морфометрическая характеристика гепатоцитов (табл.4). Для ускорения восстановительных процессов в печени была проведена клеточная трансплантация с использованием АМК прокультивированных с и без добавления ТА. Тканеспецифический антиген получали из печени здоровых морских свинок по вышеописанной технологии. ТА добавляли к культуре мононуклеарных клеток костного мозга и проводили культивирование в среднем в течение 7 суток (от 1 до 15 суток). Затем клетки отмывали раствором Хенкса и трансплантировали животным. В качестве контролей использовали животных, которым трансплантировали аутологичный костный мозг, культивированный без ТА (контроль 2), и животных, которым проводили инъекцию р-ра Хенкса (Контроль 1).1. Guinea pigs with chronic dyslipidemia develop fatty liver in 4 months and the morphometric characteristics of hepatocytes are sharply violated (Table 4). To accelerate the recovery processes in the liver, cell transplantation was performed using AMA cultured with and without the addition of TA. Tissue-specific antigen was obtained from the liver of healthy guinea pigs using the above technology. TA was added to the bone marrow mononuclear cell culture and cultured on average for 7 days (1 to 15 days). Then the cells were washed with Hanks solution and transplanted into animals. As controls, we used animals that were transplanted with autologous bone marrow cultured without TA (control 2), and animals that were injected with Hanks solution (Control 1).
Как видно из представленных данных, трансплантация мононуклеарных стволовых клеток повышала регенерационную способность гепатоцитов при жировой дистрофии печени. Однако данный эффект был недостаточно выражен. Совместное культивирование аутологичных мононуклеарных клеток с ТА резко повышает эффект клеточной трансплантации и приводит к достоверному повышению процессов регенерации гепатоцитов в печени экспериментальных животных.As can be seen from the data presented, transplantation of mononuclear stem cells increased the regenerative ability of hepatocytes with fatty degeneration of the liver. However, this effect was not sufficiently pronounced. Co-cultivation of autologous mononuclear cells with TA dramatically increases the effect of cell transplantation and leads to a significant increase in the hepatocyte regeneration processes in the liver of experimental animals.
2. На модели повреждения миокарда методом криодеструкции (КД) крыс. На 30 сутки в зоне повреждения ЛЖ происходило формирование рубцовой ткани округлой формы диаметром 6-7 мм со стороны эпикарда и 3 мм со стороны эндокарда; толщина стенки ЛЖ в центре рубца не превышала 1 мм. Как видно из таблицы 7, убыль относительной массы ЛЖ (на единицу массы тела) после криодеструкции составила примерно 13%, а для свободной стенки ЛЖ этот показатель составил 17%.2. On a model of myocardial damage by rat cryodestruction (CD). On the 30th day in the area of the LV damage, the formation of rounded scar tissue with a diameter of 6-7 mm from the side of the epicardium and 3 mm from the side of the endocardium occurred; LV wall thickness in the center of the scar did not exceed 1 mm. As can be seen from table 7, the decrease in the relative mass of the left ventricle (per unit mass) after cryodestruction was approximately 13%, and for the free wall of the left ventricle this indicator was 17%.
Площадь некроза после криодеструкции по отношению к общей площади свободной стенки ЛЖ составила со стороны эпикарда 25.1±3.6%, со стороны эндокарда - 23.0±4.2%. Площадь трансмурального некроза после криодеструкции по отношению к общей площади свободной стенки ЛЖ составила со стороны эпикарда 11.4±0.7%, со стороны эндокарда - 6.4±2.5%.The area of necrosis after cryodestruction with respect to the total area of the left LV wall was 25.1 ± 3.6% on the epicardial side and 23.0 ± 4.2% on the endocardial side. The area of transmural necrosis after cryodestruction with respect to the total area of the free wall of the LV was 11.4 ± 0.7% from the side of the epicardium and 6.4 ± 2.5% from the side of the endocardium.
Таким образом, проведенная морфометрия макропрепаратов поврежденного сердца позволила установить достоверное снижение мышечной массы ЛЖ, что неизбежно должно было бы привести к снижению его сократительной активности.Thus, the morphometry of macro preparations of the damaged heart made it possible to establish a significant decrease in LV muscle mass, which would inevitably lead to a decrease in its contractile activity.
Тканеспецифичесий антиген (ТА) получали из сердца интактных крыс по выше описанной технологии. ТА добавляли к культуре мононуклеарных клеток костного мозга и проводили культивирование в среднем в течение 7 суток (от 3 до 15 суток). Затем клетки отмывали раствором Хенкса и трансплантировали животным. В качестве контролей использовали животных, которым трансплантировали аутологичный костный мозг, культивированный без ТА, и животных, которым проводили инъекцию физиологического раствора.Tissue-specific antigen (TA) was obtained from the heart of intact rats according to the technology described above. TA was added to the bone marrow mononuclear cell culture and cultured on average for 7 days (3 to 15 days). Then the cells were washed with Hanks solution and transplanted into animals. As controls, we used animals that were transplanted with autologous bone marrow cultured without TA, and animals that were injected with saline.
При введении в миокард животным с криодеструкцией (КД) аутологичных мононуклеарных клеток культивируемых в течение 3-10 дней нами было отмечено увеличение массы миокарда, улучшение сократительной способности сердца, однако ни в одном из проведенных опытов не было получено полного восстановления сердечной мышцы. В группе животных с КД, которым вводили АМК, прокультивирурованные с ТА, нами было отмечено достоверно более полная регенерация поврежденного органа. Следует отметить, что масса левого желудочка у крыс с КД, которым вводили АМК+ТА, достоверно не отличалась от массы миокарда интактных животных (табл.5).When autologous mononuclear cells cultured for 3-10 days were introduced into the myocardium in animals with cryodestruction (CD), we noted an increase in myocardial mass and an improvement in the contractility of the heart, however, in none of the experiments performed, a complete restoration of the heart muscle was obtained. In the group of animals with CD, which were injected with AMA, cultured with TA, we noted a significantly more complete regeneration of the damaged organ. It should be noted that the mass of the left ventricle in rats with CD injected with AMA + TA did not significantly differ from the myocardial mass of intact animals (Table 5).
Проведенные нами эксперименты на животных продемонстрировали целесообразность предварительного культивирование АМК с ТА, в результате чего повышалась эффективность клеточной терапии.Our experiments on animals have demonstrated the feasibility of pre-culturing AMA with TA, resulting in increased efficiency of cell therapy.
Пример осуществления заявляемого способа лечения.An example implementation of the proposed method of treatment.
Клинический пример эффективности трансплантации аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга (КМ).A clinical example of the effectiveness of transplantation of autologous mononuclear bone marrow (CM) cells.
Пациентка Л., 67 лет, ИБ № 1934/05 поступила в отделение коронарной хирургии и трансплантации сердца с жалобами на жгучие боли за грудиной при минимальной физической нагрузке, редко - в покое; одышку.Patient L., 67 years old, IS No. 1934/05 was admitted to the department of coronary surgery and heart transplantation with complaints of burning pains behind the sternum with minimal physical exertion, rarely at rest; shortness of breath.
Из анамнеза: ангинозный анамнез более 3-х лет. Ухудшение состояния с июля 2005 года, когда был диагностирован острый не Q-образующий ИМ в области ПСЛЖ. Более 10-ти лет страдает артериальной гипертонией. Поступила для проведения коронарографии и определения дальнейшей тактики лечения.From the anamnesis: anginal history of more than 3 years. Deterioration since July 2005, when an acute non-Q-forming MI was diagnosed in the field of PSLH. More than 10 years suffering from arterial hypertension. Received for coronary angiography and determine further treatment tactics.
Сопутствующие заболевания: Гипертоническая болезнь 2 ст.Сахарный диабет 2-го типа, средне-тяжелого течения. Состояние после холецистэктомии (февраль 2005 года). Мочекаменная болезнь. Эрозивный гастрит.Concomitant diseases:
Аллергоанамнез - не отягощен.Allergic history - not burdened.
При поступлении: общее состояние средней тяжести, повышенного питания, отеков нет. Над общими сонными и бедренными артериями шумов нет. В легких дыхание жесткое, проводится во все отделы, хрипов нет, ЧДД-16 в 1 мин. Границы сердца расширены влево, верхушечный толчок разлитой. Тоны сердца приглушены, ритм правильный, акцент 2-го тона на ЛА, ЧСС - 68 в 1 мин, АД-140/80 мм рт.ст. Живот при пальпации мягкий, б/б, печень не пальпируется. Дизурии нет, симптом поколачивания отрицательный с обеих сторон. Отеков нет. ЦНС - без грубой патологии.At admission: general condition of moderate severity, increased nutrition, no edema. There is no noise over the common carotid and femoral arteries. In the lungs, harsh breathing is carried out in all departments, no wheezing, NPV-16 in 1 min. The borders of the heart are extended to the left, the apical impulse spilled. Heart sounds are muffled, the rhythm is correct, the emphasis of the 2nd tone on LA, heart rate - 68 in 1 min, AD-140/80 mm Hg The abdomen on palpation is soft, b / w, the liver is not palpable. There is no dysuria, the shocking symptom is negative on both sides. No swelling. CNS - without gross pathology.
Обследование в отделении: данные общеклинических анализов крови и мочи в пределах нормы. При R-графии органов гр.кл. патологии не выявлено.Examination in the department: data from general clinical blood and urine tests within normal limits. When R-graph organs gr.kl. pathology is not revealed.
АНАЛИЗЫ НА ВИЧ, РВ, ГЕПАТИТЫ В и С - отрицательные.ANALYSIS ON HIV, RV, HEPATITIS B and C are negative.
ЭКГ: ритм синусовый, ЧСС=69. Диффузное снижение амплитуды зубца «Т».ECG: sinus rhythm, heart rate = 69. Diffuse decrease in the amplitude of the tooth "T".
ЭХОКГ: Ао-3,4, ЛП-4,2, ПЖ-3,1, ЛЖ: КДР-4,6, КДО-95, КСР-3,1, КСО-36, УО-59, ФИ-62%. Объемные характеристики ЛЖ не увеличены. Клапанный аппарат интактен. ДЛА 12 мм рт.ст.ECHOKG: AO-3,4, LP-4,2, ПЖ-3,1, LV: КДР-4,6, КДО-95, КСР-3,1, КСО-36, УО-59, ФИ-62% . LV volumetric characteristics are not increased. The valve apparatus is intact. DLA 12 mmHg
КГ: Тип коронарного кровоснабжения: правый тип. ЛЕВАЯ КОРОНАРНАЯ АРТЕРИЯ (ЛКА): Отмечаются выраженные диффузные изменения в виде неровности контуров. Ствол ЛКА: стеноз 3 степени в устье с сохранением просвета около 2 мм. Передняя межжелудочковая ветвь (ПМЖВ): протяженный стеноз 2-3 степени в проксимальной трети, субокклюзия в средней трети, стеноз 3 степени на границе средней и дистальной трети, два последовательных стеноза 1-2 степени в дистальной трети. Диагональная ветвь (ДВ): стеноз 3 степени в устье. Огибающая ветвь (ОВ): протяженный стеноз 2-3 степени от устья. ПРАВАЯ КОРОНАРНАЯ АРТЕРИЯ (ПКА): Два последовательных стеноза 3 степени в средней трети, стеноз 1 степени в дистальной трети.KG: Type of coronary blood supply: right type. LEFT CORONARY ARTERY (LCA): Marked diffuse changes in the form of uneven contours. LCA trunk:
На основании данных обследования больному определен диагноз: ИБС: нестабильная (прогрессирующая) стенокардия. Постинфарктный кардиосклероз. Недостаточность кровообращения 2а. Гипертоническая болезнь 2 ст. Сахарный диабет 2-го типа, среднетяжелого течения. Хронический эрозивный гастрит вне обострения.Based on the examination data, the patient was diagnosed with coronary heart disease: unstable (progressive) angina pectoris. Postinfarction cardiosclerosis. Circulatory failure 2a.
В связи с тяжестью поражения коронарных артерий и клиникой нестабильной стенокардии, больной по жизненным показаниям 30 ноября 2005 года выполнена операция аортокоронарного шунтирования передней межжелудочковой ветви, диагональной ветви и правой коронарной артерии в условиях искусственного кровообращения и фармакохолодовой кардиоплегии. Во время операции перед искусственным кровообращением секционным методом взята биопсия ушка правого предсердия. Протокол операции №181 (0перировал д.м.н. Гуреев С.В.)Due to the severity of coronary artery disease and the clinic of unstable angina, the patient, according to his vital signs, underwent an aortocoronary bypass surgery of the anterior interventricular branch, diagonal branch and right coronary artery under conditions of cardiopulmonary bypass and pharmacological cold cardioplegia. During the operation, a biopsy of the ear of the right atrium was taken before the cardiopulmonary by sectional method. Protocol of operation No. 181 (operated by Dr. med. S. Gureev)
Ранний послеоперационный период протекал без осложнений. Экстубация в операционной. Пациентка переведена из реанимационного блока в отделение на следующие сутки. В отделении отмечались пароксизмы мерцательной аритмии (03.12.2005 и 23.12.2005), гемодинамически не значимые, купировавшиеся препаратами калия и кордароном. В связи с низким уровнем гемоглобина (до 7,8 г/дл) в послеоперационном периоде были проведены два переливания эр. массы (03.12.2005 и 05.12.2005).The early postoperative period was uneventful. Extubation in the operating room. The patient was transferred from the intensive care unit to the department the next day. The department noted paroxysms of atrial fibrillation (12/03/2005 and 12/23/2005), hemodynamically insignificant, stopped with potassium and cordarone. Due to the low hemoglobin level (up to 7.8 g / dl) in the postoperative period, two eruptions were performed. masses (December 3, 2005 and December 5, 2005).
Пациентка была включена в научно-клиническую программу трансплантации аутологичных стволовых клеток костного мозга в миокард. 16.12.2005 произведен забор костного мозга с дальнейшей сепарацией клеток костного мозга. Аутологичные мононуклеарные клетки в течение 5 дней культивировались с тканеспецифицеским антигеном, полученным из биопсийного материала во время операции. 22.12.2005 произведено их интракоронарное и системное (нисходящий отдел аорты) введение. Без осложнений.The patient was included in the scientific-clinical program for the transplantation of autologous stem cells of the bone marrow into the myocardium. 12/16/2005, bone marrow was collected with further separation of bone marrow cells. Autologous mononuclear cells were cultured for 5 days with tissue-specific antigen obtained from biopsy material during surgery. 12/22/2005 their intracoronary and systemic (descending aortic section) administration was performed. No complications.
При контрольной коронарошунтографии: в месте субокклюзии ПМЖВ зафиксирована окклюзия артерии. Шунт к ПМЖВ проходим, хорошо контрастируются дистальные и проксимальные участки ПМЖВ. Шунт в ДВ хорошо проходим, через шунт заполняется вся система ЛКА, за исключением ПМЖВ, окклюзированой в проксимальной трети. Шунт к ПКА хорошо проходим, заполнение всей ПКА и крупной ветви острого края.During the control coronary artery bypassography: at the site of subocclusion of the LAD, arterial occlusion was recorded. We pass the shunt to the LAD, the distal and proximal sections of the LAD are well contrasted. The shunt in the Far East is well traversed, the entire LCA system is filled through the shunt, with the exception of the MAD, which is occluded in the proximal third. The shunt to the PKA is well traversed, filling the entire PKA and a large branch of the sharp edge.
В отделение состояние оставалось стабильным. На серии контрольных ЭКГ и ЭхоКГ без отрицательной динамики. Послеоперационные раны заживали первичным натяжением, швы внутрикожные.In the ward, the condition remained stable. On a series of control ECGs and echocardiography without negative dynamics. Postoperative wounds healed by primary intention, intradermal sutures.
Уровень глюкозы крови за все время наблюдения от 5,1 до 8,9 (26.12.2005: 9-7,5, 12-7,9, 15-8,1, 18-6,7, 21-7,5). Общий холестерин - 7,1. Гб - 9,3. В остальных анализах без особенностей.The blood glucose level for the entire observation period is from 5.1 to 8.9 (12/26/2005: 9-7.5, 12-7.9, 15-8.1, 18-6.7, 21-7.5) . Total cholesterol is 7.1. GB - 9.3. In the remaining analyzes without features.
В удовлетворительном состоянии пациентка выписывается под наблюдение кардиолога по месту жительства.In satisfactory condition, the patient is discharged under the supervision of a cardiologist at the place of residence.
Диагноз заключительный: ИБС: состояние после АКШ ПМЖВ, ДВ и ПКА от 30.11.2005. ПИКС.НК 1. ГБ 2 ст. состояние после трансплантации аутологичных стволовых клеток костного мозга от 22.12.2005. Сахарный диабет 2-го типа, средне-тяжелого течения. Хронический эрозивный гастрит вне обострения.The diagnosis is final: coronary heart disease: condition after CABG of permanent residence, DV and PKA from 11.30.2005.
До забора был определен индекс стимуляции, который был меньше 1.0 (фиг.4).Prior to collection, a stimulation index was determined that was less than 1.0 (FIG. 4).
Для повышения клинического эффекта больной был проведен индивидуальный подбор иммунокорректоров (фиг.5.). Из представленного рисунка видно, что таким препаратом являлся полиоксидоний.To increase the clinical effect of the patient, an individual selection of immunocorrectors was performed (Fig. 5). It can be seen from the figure that polyoxidonium was such a preparation.
Данный препарат был назначен пациентке по схеме: 7 инъекций, 1-й день 12 мг в/м, затем через день по 6 мг в/м. По окончанию курса был повторно проведен анализ по определению индекса стимуляции (фиг.6), который показал восстановление ИС до нормальных значений.This drug was prescribed to the patient according to the scheme: 7 injections, 1st day 12 mg IM, then every other day 6 mg IM. At the end of the course, an analysis was repeated to determine the stimulation index (Fig.6), which showed the restoration of the IS to normal values.
Затем у больной был проведен забор костного мозга, выделены АМК и проведена сокультивация их с ТА полученным из биопсийного материала. При культивировании АМК с добавлением ТА в течение 5 суток происходит изменение фенотипического состава культивируемых клеток по сравнению с исходом и теми клетками, которые культивировались без ТА (фиг.7). Как видно из представленного чертежа, в культуре АМК после добавления антигена происходит увеличение доли Т-лимфоцитов, особенно Т-хелперов (CD4), которые, поданным литературы (Бабаева А.Г. Репаративные процессы и иммунитет. - Известия АН, серия «Биологическая» 1999, №3, стр.261-269), определяют эффективность регенерационных процессов в поврежденном органе.Then, the patient underwent bone marrow sampling, AMA were isolated, and their co-cultivation was performed with TA obtained from biopsy material. When culturing AMA with the addition of TA for 5 days, the phenotypic composition of cultured cells changes as compared with the outcome and those cells that were cultured without TA (Fig. 7). As can be seen from the drawing, in the culture of AMA after the addition of antigen, there is an increase in the proportion of T-lymphocytes, especially T-helpers (CD4), which are submitted literature (Babaeva AG Reparative processes and immunity. - Bulletin of the Academy of Sciences, series “Biological 1999, No. 3, pp. 261-269), determine the effectiveness of regeneration processes in a damaged organ.
На контрольном обследовании через 1 месяц после трансплантации клеток было установлено выраженное повышение показателей гемодинамики (ΔКДО - 10%, ΔКСО - 8,5%, ΔФИ 12%) и перфузии миокарда (фиг.8), что может быть обусловлено улучшением микроциркуляции за счет неоангиогенеза.A follow-up
Где а - перфузия миокарда до введения АМК; б - через один месяц после введения АМК; в - исходные данные перфузии миокарда в % по сегментам левого желудочка; г - данные перфузии миокарда левого желудочка по сегментам в % через месяц после интракоронарного введения АМК. Стрелками указаны сегменты с приростом перфузии миокарда более чем на 5%Where a - myocardial perfusion before the introduction of AMA; b - one month after the introduction of AMA; c - initial data on myocardial perfusion in% for segments of the left ventricle; g - data on perfusion of the myocardium of the left ventricle by segments in% one month after intracoronary administration of AMA. Arrows indicate segments with an increase in myocardial perfusion of more than 5%
Заявляемые изобретения позволяют лечить любые хронические заболевания. Это обеспечивается формированием тканиспецифической направленности регенерационного потенциала клеток, предназначенных для клеточной терапии. Проведенные клинические и экспериментальные исследования подтверждают высокую эффективность клеточной трансплантации при введении на стадии культивирования в ростовую среду тканеспецифического антигена идентичного тому органу, регенерацию которого необходимо восстановить в организме больного.The claimed invention allows to treat any chronic diseases. This is ensured by the formation of tissue-specific orientation of the regenerative potential of cells intended for cell therapy. Clinical and experimental studies confirm the high efficiency of cell transplantation when a tissue-specific antigen identical to the organ whose regeneration must be restored in the patient's body is introduced at the stage of cultivation into the growth medium.
Claims (8)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006103865/14A RU2322248C2 (en) | 2006-02-09 | 2006-02-09 | Method for treating chronic diseases (variants), method for obtaining a biotransplant (variants), a biotransplant (variants) |
| PCT/RU2007/000013 WO2007091919A1 (en) | 2006-02-09 | 2007-01-15 | Method for treating chronic illnesses (variants), method for producing a biograft (variants) and a biograft (variants) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006103865/14A RU2322248C2 (en) | 2006-02-09 | 2006-02-09 | Method for treating chronic diseases (variants), method for obtaining a biotransplant (variants), a biotransplant (variants) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2006103865A RU2006103865A (en) | 2007-08-20 |
| RU2322248C2 true RU2322248C2 (en) | 2008-04-20 |
Family
ID=38345426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006103865/14A RU2322248C2 (en) | 2006-02-09 | 2006-02-09 | Method for treating chronic diseases (variants), method for obtaining a biotransplant (variants), a biotransplant (variants) |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2322248C2 (en) |
| WO (1) | WO2007091919A1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2488356C1 (en) * | 2012-02-28 | 2013-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) | Method of correcting immune disorders |
| RU2510096C2 (en) * | 2007-12-13 | 2014-03-20 | Фотонис Франс | Compact image intensifying tube and night vision system equipped with same |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2089204C1 (en) * | 1994-11-24 | 1997-09-10 | Научно-производственное объединение "Иммунопрепарат" | Method of preparing peptides recovering the prostate gland function |
| RU2268061C1 (en) * | 2004-06-04 | 2006-01-20 | ЗАО "РеМеТэкс" | Biotransplant, method for its obtaining (variants) and method for treating ischemic cardiac disease |
-
2006
- 2006-02-09 RU RU2006103865/14A patent/RU2322248C2/en not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-01-15 WO PCT/RU2007/000013 patent/WO2007091919A1/en active Application Filing
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| БЕРСЕНЕВ А.В. Трансплантация клеток эмбриональной печени и стволовых клеток костного мозга для коррекции дислипидемии и ранних стадий атерогенеза, Автореф. дис. к.м.н. - М.: 2003. * |
| КАЗАКОВ А.В. Стволовые клетки и регенерация миокарда человека. Кардиология, 2005, т.45, №11, с.65-75. RMAN G. et al. "Allogenic hematopoietic cell transplantation without myeloablative conditions for patients with advanced hematologic malignancies". Cytotherapy 2001; 3(4):253-60. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2510096C2 (en) * | 2007-12-13 | 2014-03-20 | Фотонис Франс | Compact image intensifying tube and night vision system equipped with same |
| RU2488356C1 (en) * | 2012-02-28 | 2013-07-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) | Method of correcting immune disorders |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2006103865A (en) | 2007-08-20 |
| WO2007091919A1 (en) | 2007-08-16 |
| WO2007091919A8 (en) | 2007-12-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lonardi et al. | Autologous micro-fragmented adipose tissue for the treatment of diabetic foot minor amputations: a randomized controlled single-center clinical trial (MiFrAADiF) | |
| US8142993B1 (en) | Method of preparing neutrophil-depleted platelet-rich plasma | |
| RU2531046C2 (en) | Rapid preparation and use of artificial tissues and frames as individual implants | |
| CN103079577A (en) | Process,tube and device for the preparation of wound healant composition | |
| CN103948575A (en) | Application of cinnamyl aldehyde in preparing medicament for promoting angiogenesis | |
| JP2015129180A (en) | Activated leukocyte composition | |
| US9574180B2 (en) | Cell therapy: a method and a composition for treating diabetes | |
| RU2322248C2 (en) | Method for treating chronic diseases (variants), method for obtaining a biotransplant (variants), a biotransplant (variants) | |
| CN103209682A (en) | Activated leukocyte conditioned supernatant and uses for wound healing | |
| CN108619169A (en) | A kind of mesenchymal stem cell injection and preparation method for treating cerebral arterial thrombosis | |
| CN114984219B (en) | Use of PD1 inhibitors in the preparation of inhibitors of cardiac fibroblast transdifferentiation | |
| US10507220B2 (en) | Cell therapy: a method and a composition for treating diabetes | |
| WO2004045666A1 (en) | Method of organ regeneration | |
| RU2126260C1 (en) | Cell suspension-based immunocorrecting drug and using this drug in a method of treating diabetes mellitus | |
| CN113425731B (en) | Medicine for treating myocardial infarction by synergistic stem cells and application thereof | |
| RU2421160C1 (en) | Method of treating purulent wounds of soft tissues | |
| Okpala et al. | Mesenchymal Stromal Cells Used for Cellular Cardiomyoplasty As a Way To Treat Myocardial Infarction and Heart Failure | |
| RU2405559C2 (en) | Method of treating diabetes mellitus | |
| WO2024086835A1 (en) | Treatment of blood transfusion-dependent patients with hematologic malignancies | |
| WO2012000180A1 (en) | Method for preparing dermis tissue cells aggregation and uses thereof | |
| CN116549611A (en) | Stem cell medicine for treating atherosclerosis | |
| CN112920997A (en) | Preparation method and application of clinical regeneration antibody autologous blood immune cells | |
| CN111214486A (en) | Magnesium-rich artificial cerebrospinal fluid and preparation method and application thereof | |
| Filgueira et al. | 1 Transcription of Lymphokine Genes by Tumor-Infiltrating Lymphocytes (TIL): A Polymerase Chain Reaction (PCR) Study in Human Renal Cell Carcinoma (RCC) and Melanoma Biopsies | |
| Joy | Efficacy of platelet rich plasma (PRP) in third molar impaction surgery |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110210 |