RU2187111C2 - Method for determining functional state of mammalian follicles - Google Patents
Method for determining functional state of mammalian follicles Download PDFInfo
- Publication number
- RU2187111C2 RU2187111C2 RU99123209A RU99123209A RU2187111C2 RU 2187111 C2 RU2187111 C2 RU 2187111C2 RU 99123209 A RU99123209 A RU 99123209A RU 99123209 A RU99123209 A RU 99123209A RU 2187111 C2 RU2187111 C2 RU 2187111C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- follicles
- follicle
- functional state
- determining
- vitro
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам определения функционального состояния фолликулов, ооциты из которых используются для эмбриотрансплантации. The invention relates to biotechnology, in particular to methods for determining the functional state of follicles, oocytes from which are used for embryo transplantation.
Известны способы определения функционального состояния фолликулов, основанные на применении гистологических исследований (Structural changes occuring during atresiainsheep ovarian follecles. Hay M.F., Gran D.C., Moor R.M - Cell and Tiasue Reserch, 1979, 169, p. 515-529), однако данные способы трудоемки, мало информативны и не лишены субъективности. Для изучения процессов фолликуло- и гаметогенеза, происходящих в яичнике в разные фазы полового цикла, подобный метод отбора фолликулов по степени их атрезии мало пригоден, т.к. трудоемок и нет информации о практической пригодности фолликулов для их культивирования. Known methods for determining the functional state of follicles based on the use of histological studies (Structural changes occuring during atresiainsheep ovarian follecles. Hay MF, Gran DC, Moor RM - Cell and Tiasue Reserch, 1979, 169, p. 515-529), however, these methods are laborious , little informative and not without subjectivity. To study the processes of follicle and gametogenesis occurring in the ovary at different phases of the reproductive cycle, a similar method for selecting follicles according to their degree of atresia is of little use, because time-consuming and there is no information on the practical suitability of follicles for their cultivation.
Наиболее близким из аналогов к предлагаемому способу является полярографический способ, который получил широкое распространение после введения в практику (в 1956 г.) закрытого Кларковского электрода. В настоящее время он широко используется в клинической и исследовательской практике (Определение концентрации кислорода в биологических жидкостях методом полярографии с неподвижным электродом. Островский Д.Н., Гельман Н.С. - Биохимия, 1962, 27, с. 534). При полярографическом способе изучаемый биологический объект помещают в специальную камеру с питательной средой, например ТС-199. С помощью полярографического электрода снимают показания о содержании кислорода в жидкости, окружающей изучаемый биологический объект, в течение 25-30 минут, после чего требуется расшифровка диаграммы. The closest of the analogues to the proposed method is the polarographic method, which became widespread after the introduction into practice (in 1956) of a closed Klarkovsky electrode. Currently, it is widely used in clinical and research practice (Determination of oxygen concentration in biological fluids by the method of polarography with a fixed electrode. Ostrovsky D.N., Gelman N.S. - Biochemistry, 1962, 27, p. 534). In the polarographic method, the biological object under study is placed in a special chamber with a nutrient medium, for example, TC-199. Using a polarographic electrode, readings are taken about the oxygen content in the fluid surrounding the biological object under study for 25-30 minutes, after which a diagram is required to be decrypted.
Существенным недостатком данного способа является его длительность и невысокая степень достоверности получаемых результатов из-за невозможности контролировать рН. A significant disadvantage of this method is its duration and a low degree of reliability of the results due to the inability to control the pH.
Технической задачей способа является разработка экспресс-способа и получение достоверных данных о практической пригодности фолликулов для культивирования их in vitro. The technical task of the method is to develop an express method and obtain reliable data on the practical suitability of follicles for culturing them in vitro.
Для решения технической задачи в способе определения функционального состояния фолликулов млекопитающих, включающем изучения физико-химических свойств раствора инкубационной среды, например TС-199, которая известна из кн. Анджапаридзе О.Г. и др. Культура клетки в вирусологических исследованиях. - М.: Медгиз, 1962, с.28-30, сосуд с размещенным в растворе инкубационной среды фолликулом при рН 7,2-7,3 герметизируют, предварительно удалив воздух, выдерживают его при температуре, равной t=37oС±0,5oC в течение часа, после чего помещают содержимое сосуда в газоанализатор кислотно-основного равновесия, определяют значение дыхательного коэффициента, и если он равен 2,0-4,5%, то фолликул пригоден для культивирования in vitro.To solve the technical problem in a method for determining the functional state of mammalian follicles, including studying the physicochemical properties of a solution of an incubation medium, for example TC-199, which is known from the book. Anjaparidze O.G. et al. Cell culture in virological studies. - M .: Medgiz, 1962, p.28-30, a vessel with a follicle placed in a solution of incubation medium at a pH of 7.2-7.3 is sealed, having previously removed the air, kept at a temperature equal to t = 37 o С ± 0 , 5 o C for an hour, after which the contents of the vessel are placed in a gas analyzer of acid-base equilibrium, the value of the respiratory coefficient is determined, and if it is 2.0-4.5%, then the follicle is suitable for cultivation in vitro.
Используемая в способе величина рН 7,0-7,3 является оптимальной для поддержания гомеостаза, температура, равная 37oС±0,5oC соответствует температуре тела животного. Сосуд помещают в термостат на 1 час, т.к. экспериментально установлено, что протекающие в течение этого времени реакции наиболее оптимально свидетельствуют о величине парциальных давлений углекислого газа и кислорода, необходимых для определения значения дыхательного коэффициента и постоянной рН среды культивирования. При значениях коэффициента, равных 2,0-4,5%, независимо от диаметра фолликула его определяют как пригодный для культивирования in vitro, т.к. эксперимент показал, что из их числа образуются до 90% яйцеклеток, пригодных для оплодотворения in vitro.The pH value 7.0-7.3 used in the method is optimal for maintaining homeostasis, a temperature of 37 ° C ± 0.5 ° C corresponds to the body temperature of the animal. The vessel is placed in a thermostat for 1 hour, because It was experimentally established that the reactions proceeding during this time most optimally indicate the partial pressures of carbon dioxide and oxygen, which are necessary to determine the value of the respiratory coefficient and the constant pH of the culture medium. When the coefficient is 2.0-4.5%, regardless of the diameter of the follicle, it is determined to be suitable for in vitro cultivation, because the experiment showed that up to 90% of eggs suitable for in vitro fertilization are formed from them.
Преимущество заявляемого способа заключается в том, что он позволяет за небольшой промежуток времени 2-2,5 часа получать сведения о функциональном состоянии и степени атрезии большой популяции фолликулов, тогда как у прототипа за этот промежуток времени можно исследовать 5-6 фолликулов. Поддержание рН в оптимальных пределах и контроль с помощью газоанализатора кислотно-основного равновесия позволяет повысить достоверность получаемых данных по ДК. The advantage of the proposed method is that it allows for a small period of time 2-2.5 hours to obtain information about the functional state and degree of atresia of a large population of follicles, while the prototype for this period of time you can explore 5-6 follicles. Maintaining the pH in the optimal range and control with the help of a gas analyzer of acid-base equilibrium can increase the reliability of the obtained data on DC.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена заявляемая совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне предъявляемого технического решения. According to the patent and scientific and technical literature, the claimed combination of features was not found, which allows us to judge the inventive step of the technical solution.
Пример конкретного осуществления способа. An example of a specific implementation of the method.
В качестве материала исследований использовали фолликулы коровы. Выделенный из яичника фолликул помещали в разовый шприц (объем 2 мл) и закрывали поршнем. Через штуцер для инъекционной иглы с помощью дозатора вводили 1 мл среды ТС-199 с рН 7,2. Поршнем удалили из шприца имеющийся в нем воздух и шприц герметизировали. Затем с интервалом 2 минуты шприцы помещали в термостат при температуре 37oС. Исследование инкубационной жидкости в сосуде проводили через час, для чего небольшой объем пробы помещали через капиллярное отверстие в измерительную камеру анализатора кислотно-основного равновесия и газов крови (ВМУ 33/ВСА-2, фирмы "Radiometr"). В течение одной минуты определяли парциальное давление кислорода и углекислого газа в пробе.Cow follicles were used as research material. The follicle isolated from the ovary was placed in a single syringe (2 ml volume) and closed with a piston. Through the nozzle for the injection needle, 1 ml of TC-199 medium with a pH of 7.2 was introduced using a dispenser. The piston removed the air in it from the syringe and the syringe was sealed. Then, with an interval of 2 minutes, the syringes were placed in a thermostat at a temperature of 37 o С. The incubation liquid in the vessel was studied after an hour, for which a small sample volume was placed through a capillary hole in the measuring chamber of the acid-base equilibrium analyzer and blood gases (VMU 33 / VSA- 2, the company "Radiometr"). The partial pressure of oxygen and carbon dioxide in the sample was determined within one minute.
рСО2=2,28 мм рт.ст.; рО2=104 мм рт.ст.pCO 2 = 2.28 mm Hg; pO 2 = 104 mm Hg
Значение дыхательного коэффициента определяли отношением рСО2/рО2•100%, ДК=2,2%.The value of the respiratory coefficient was determined by the ratio pCO 2 / pO 2 • 100%, DC = 2.2%.
Предлагаемый способ может быть использован в учебной и лабораторной практике для исследования фармакологических препаратов, эмбриотрансплантации, причем данный способ позволяет за небольшой промежуток времени получать сведения о функциональном состоянии и степени атрезии популяции атральных фолликулов, выделенных из одного яичника, и охарактеризовать их обменные процессы по значению дыхательного коэффициента. The proposed method can be used in educational and laboratory practice for the study of pharmacological preparations, embryo transplantation, and this method allows for a short period of time to obtain information about the functional state and degree of atresia of the population of atral follicles isolated from one ovary, and to characterize their metabolic processes by the value of respiratory coefficient.
Практическая значимость способа обусловлена тем, что он используется при воспроизводстве сельскохозяйственных животных, позволяет увеличить выход оплодотворенных яйцеклеток и тем самым повысить число эмбрионов, пригодных для трансплантации. The practical significance of the method is due to the fact that it is used in the reproduction of farm animals, it allows to increase the yield of fertilized eggs and thereby increase the number of embryos suitable for transplantation.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99123209A RU2187111C2 (en) | 1999-11-02 | 1999-11-02 | Method for determining functional state of mammalian follicles |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99123209A RU2187111C2 (en) | 1999-11-02 | 1999-11-02 | Method for determining functional state of mammalian follicles |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU99123209A RU99123209A (en) | 2002-01-27 |
| RU2187111C2 true RU2187111C2 (en) | 2002-08-10 |
Family
ID=20226575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99123209A RU2187111C2 (en) | 1999-11-02 | 1999-11-02 | Method for determining functional state of mammalian follicles |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2187111C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8265357B2 (en) | 2005-10-14 | 2012-09-11 | Unisense Fertilitech A/S | Determination of a change in a cell population |
| US8633017B2 (en) | 2007-06-29 | 2014-01-21 | Unisense Fertilitech A/S | Device, a system and a method for monitoring and/or cultivation of microscopic objects |
-
1999
- 1999-11-02 RU RU99123209A patent/RU2187111C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| НАУ М.F., GRAN D.C., MOOR R.M. Structural changes occuring during atresiainsheep ovarian follecles. Cell and Tiasue Reserch, 1979, 169, р.515-529. ОСТРОВСКИЙ Д.Н., ГЕЛЬМАН Н.С. Определение концентрации кислорода в биологических жидкостях методом полярографии с неподвижным электродом // Биохимия, 1962, №27, с.534. БИОЛОГИЯ, БОЛЬШОЙ ЭНЦИКЛОПЕДИЧЕСКИЙ СЛОВАРЬ. - М.: Большая Российская энциклопедия, 1998, с.190. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8265357B2 (en) | 2005-10-14 | 2012-09-11 | Unisense Fertilitech A/S | Determination of a change in a cell population |
| US8633017B2 (en) | 2007-06-29 | 2014-01-21 | Unisense Fertilitech A/S | Device, a system and a method for monitoring and/or cultivation of microscopic objects |
| US9588104B2 (en) | 2007-06-29 | 2017-03-07 | Unisense Fertilitech A/S | Device, a system and a method for monitoring and/or culturing of microscopic objects |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pesta et al. | High-resolution respirometry: OXPHOS protocols for human cells and permeabilized fibers from small biopsies of human muscle | |
| US20020110905A1 (en) | Perfusion system for cultured cells | |
| Witty et al. | Direct evidence for changes in the resistance of legume root nodules to O2 diffusion | |
| EP2322913B1 (en) | Method and device for measuring multiple physiological properties of cells | |
| US4530907A (en) | Perfusion-cultivation of animal cells and equipment therefor | |
| US8709793B2 (en) | Bioreactor device, and method and system for fabricating tissues in the bioreactor device | |
| WO2010062911A2 (en) | Compositions and methods of functionally enhanced in vitro cell culture system | |
| CN113583939A (en) | Construction method of model for crossing blood brain barrier by adeno-associated virus | |
| CN104870629A (en) | Control of carbon dioxide levels and pH in small volume reactors | |
| RU2187111C2 (en) | Method for determining functional state of mammalian follicles | |
| Boutilier et al. | Some response characteristics of CO2 electrodes | |
| Willenborg et al. | Determination of beta-cell function: insulin secretion of isolated islets | |
| Colin | Rapid repetitive microinjection | |
| US20150093775A1 (en) | System and method for analyte sensing and monitoring | |
| Nolan et al. | The measurement of insulin secretion from isolated rodent islets of Langerhans | |
| Steward et al. | Effects of prior environmental conditions on the subsequent uptake and release of carbon dioxide in the light | |
| JPH072000Y2 (en) | Irrigation device | |
| Pörtner et al. | Cultivation of mammalian cells in fixed-bed reactors | |
| Cross | Rabbit blastocoele pH | |
| Inada et al. | Fibrin membrane endowed with biological function. III. Fixing living cells in fibrin gel without impairing their functions | |
| CN208023017U (en) | A kind of rapid detection system of blood infection microorganism | |
| EP4245839A1 (en) | Method for monitoring at least one substance produced or consumed by a living entity | |
| Maerz et al. | Development of a Pharmacological Test System in a Miniaturized Hollow Fiber Bioreactor | |
| Liang et al. | Cellular electrode for antitumor drug screening | |
| SUGAwARA et al. | STUDIES ON THE METABOLISM OF THE MAMALIAN OVA I. METHOD OF APPLICATION BY CARTESIAN DIVER |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101103 |