RU2164944C1 - Способ изменения генетических свойств организма - Google Patents

Способ изменения генетических свойств организма Download PDF

Info

Publication number
RU2164944C1
RU2164944C1 RU99125827/13A RU99125827A RU2164944C1 RU 2164944 C1 RU2164944 C1 RU 2164944C1 RU 99125827/13 A RU99125827/13 A RU 99125827/13A RU 99125827 A RU99125827 A RU 99125827A RU 2164944 C1 RU2164944 C1 RU 2164944C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
gene
rna
synthesized
alternation
specific silencing
Prior art date
Application number
RU99125827/13A
Other languages
English (en)
Inventor
Н.А. Чуриков
Original Assignee
Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН
Чуриков Николай Андреевич
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Чуриков Николай Андреевич filed Critical Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН
Priority to RU99125827/13A priority Critical patent/RU2164944C1/ru
Priority to EP00981979A priority patent/EP1152056B1/en
Priority to US09/913,040 priority patent/US20020137210A1/en
Priority to DE60044056T priority patent/DE60044056D1/de
Priority to PCT/RU2000/000504 priority patent/WO2001042443A1/ru
Priority to JP2001544319A priority patent/JP2003516146A/ja
Application granted granted Critical
Publication of RU2164944C1 publication Critical patent/RU2164944C1/ru
Priority to US11/500,910 priority patent/US20070092499A1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/30—Production chemically synthesised

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Предложен способ изменения генетических свойств организмов путем РНК-интерференции, приводящей к ген-специфическому сайленсингу выбранного гена с помощью молекул РНК, синтезированных in vitro, при этом используют молекулы РНК, комплементарные в параллельном направлении (пкРНК) мРНК выбранного гена, которые синтезируют in vivo или in vitro на искусственной последовательности ДНК, имеющей зеркально-симметричную последовательность нуклеотидов по отношению к последовательности нуклеотидов гена. Изобретением предложен общий подход к изменению генетических свойств организма, основанный на биологических свойствах зеркальных инверсий нуклеотидных последовательностей и реализующийся в РНК-интерференции, приводящей к ген-специфическому сайленсингу. Изобретение может быть использовано для целей генотерапии в медицине, а также в сельском хозяйстве и в промышленной биотехнологии для ген-специфического сайленсинга тех генов, экспрессия которых способствует развитию тех или иных заболеваний или нарушает процесс наработки необходимого продукта. 1 з.п. ф-лы, 4 ил.

Description

Изобретение относится к области молекулярной биологии, молекулярной генетике и биотехнологии и может быть использовано для целей генотерапии в медицине, а также в сельском хозяйстве и в промышленной биотехнологии для ген-специфического сайленсинга тех генов, экспрессия которых способствует развитию тех или иных заболеваний или нарушает процесс наработки необходимого продукта.
Известны разные способы изменения генетических свойств организма. Одни из них предполагают повреждение самого гена. К их числу относится так называемый "нокаут" генов. Эти подходы предполагают внесение повреждений (мутаций) в выбранном гене в клетках зародышевого пути или в стволовых клетках и поэтому далеко не всегда могут использоваться для изменения свойств развившегося организма [L. V. Varga, S. Toth, I. Novak, A. Falus, Immunol. Lett. , 1999, vol. 69, p. 217; J. Osada, N. Maeda, Methods Mol. Biol., 1998, vol. 110, p. 79].
В последние годы вызывает повышенный интерес другой подход к изменению генетических свойств организма - использование РНК-интерференции, приводящей к ген-специфическому сайленсингу, при котором ген не повреждается, а изменяется его регуляция [M.K. Montgomery, A. Fire, Trends in Genetics, 1998, vol. 14, p. 255; P. Sharp, Genes & Development, 1999, vol. 13, p. 139]. РНК-интерференция может использоваться для ген-специфического сайленсинга на любых стадиях развития, в том числе и для изменений свойств взрослого организма. Повышенное внимание к исследованиям РНК-интерференции связано с тем, что они позволили случайно обнаружить ранее неизвестные древние механизмы генной регуляции. Физиологическая роль этих механизмов может заключаться в изменении в локальных структурах хромосом, во влиянии на активность транскрипции, на процессинг мРНК, ее транспорт в цитоплазму и на ее стабильность.
К настоящему времени РНК-интерференция, приводящая к ген-специфическому сайленсингу, описана на различных организмах - нематоде, дрозофиле, грибах, растениях.
Известен способ изменения генетических свойств организма, основанный на РНК-интерференции с использованием для этой цели антисмысловой РНК (асРНК), которая комплементарна в антипараллельном направлении мРНК выбранного гена, синтезируется in vitro и вводится в организм [A. Fire, S-Q. Xu, M.K. Montgomery, S.V. Kostas, S.E. Driver, C.C. Mello, Nature, 1998, vol. 391, p. 806].
Описанный способ осуществляют следующим образом:
1. Выбирают ген, активность которого нежелательна;
2. Готовят генетическую конструкцию, в которой данный ген или соответствующая ему кДНК (последовательность, соответствующая мРНК), т.е. природная ДНК, ориентирована в противоположном направлении и находится под контролем нужного промотора. Этим обеспечивается транскрипция незначащей цепи гена. Для получения конструкций используют разнообразные векторы, которые могут содержать последовательности ДНК, важные для селекции трансформанта, для эффективной экспрессии перевернутого гена и для "правильного вписывания" конструкции в хромосомные домены;
3. На полученной конструкции in vitro синтезируют и вводят в организм асРНК с помощью разных методов (электропорация, инъекции, per os).
Существенным недостатком этого способа изменения генетических свойств организма с помощью РНК-интерференции является то, что при использовании конструкций, предназначенных для синтеза асРНК в результате перестроек, может произойти реверсия, т. е. прекратится экспрессия асРНК и начнется синтез последовательности соответствующей цепи мРНК. Т.е. вместо подавления активности выбранного гена можно получить его активирование. Синтез цепи мРНК может также начаться из-за того, что в месте инсерции конструкции могут оказаться последовательности хозяина, имеющие промоторную активность в цепи, соответствующей цепи мРНК. Вероятность таких событий высока.
Наиболее демонстративно высокая вероятность реверсий подтверждена работами с трансгенными организмами. Конструкции при этом вводились с противоположной целью - добиться большей активности какого-либо гена. Однако, реверсии в результате спонтанного активирования транскрипции с противоположной цепи приводили не к увеличению активности гена, а к полному ее подавлению, т.е. к ген-специфическому сайленсингу в результате РНК-интерференции [M. K. Montgomery, A. Fire, Trends in Genetics, 1998, vol. 14, p. 255; P. Sharp, Genes & Development, 1999, vol. 13, p. 139].
В основу предлагаемого изобретения положена задача повышения надежности РНК-интерференции, при которой были бы невозможны реверсии, приводящие к синтезу цепи мРНК на конструкциях, исходно предназначенных для ген-специфичекого сайленсинга.
Предложен способ изменения генетических свойств организма путем РНК- интерференции, приводящей к ген-специфическому сайленсингу выбранного гена с помощью молекул РНК, синтезированных in vitro, при этом используют молекулы РНК, комплементарные в параллельном направлении (пкРНК) мРНК выбранного гена, которые синтезируют in vivo или in vitro на искусственной последовательности ДНК, имеющей зеркально-симметричную последовательность нуклеотидов по отношению к последовательности нуклеотидов гена.
Предлагаемый способ приводит к эффективной РНК-интерференции и ген-специфическому сайленсингу и исключает синтез мРНК, т.к. в конструкциях используется негомологичная искусственная последовательность ДНК.
Предложенный способ осуществляют следующим образом:
1. Выбирают ген, активность которого нежелательна (т.е. она приводит к заболеванию или нарушает биотехнологический процесс);
2. Химически синтезируют искусственную последовательность ДНК, имеющую зеркальное чередование нуклеотидов по отношению к выбранному гену или его части;
3. Готовят генетическую конструкцию, в которой используют разнообразные векторы, содержащие синтезированную ДНК под нужным промотором и другими последовательностями, важными для эффективной экспрессии и для "правильного вписывания" конструкции в хромосомные домены;
4. Конструкцию тем или иным путем вводят в организм для синтеза пкРНК in vivo (трансформация), либо пкРНК синтезируют in vitro на конструкции и вводят в организм с помощью инъекций.
Изобретение поясняется конкретными примерами осуществления способа изменения генетических свойств организма, в которых эти изменения проявляются как изменения фенотипа, и иллюстрируется фигурами, где
фиг. 1 приводит данные о структуре ДНК-конструкции, содержащей зеркальную последовательность нуклеотидов относительно гена lon E. coli и предназначенной для экспрессии пкРНК;
фиг. 2 показывает результаты люминесценции клеток E. coli, которая наблюдается при сайленсинге гена lon в результате экспрессии пкРНК (parlon);
фиг. 3 представляет данные о структуре ДНК-конструкции, содержащей зеркальную последовательность нуклеотидов относительно гена Kruppel дрозофилы и предназначенной для экспрессии пкРНК (Kr-par);
фиг. 4 (а, б, в) показывает фенотипы нормальной личинки дрозофилы и фенокопий Kr, полученных после инъекций пкРНК Kr-par.
Пример 1. РНК-интерференция в клетках Escherichia coli с помощью молекул РНК, комплементарных в параллельном направлении мРНК гена lon, синтезированных in vivo.
Ген lon выбран в качестве модели, поскольку он является одним из ключевых в регуляции многих процессов в клетках E. coli.
Химически синтезирована искусственная последовательность ДНК длиной 95 bp (bp - пара оснований в ДНК или РНК), имеющая зеркально-симметричную последовательность нуклеотидов по отношению к соответствующей области гена lon.
Эта ДНК использована для создания конструкции на основе вектора pUC12, в которой под контролем lac-промотора находится цепь, экспрессирующая пкРНК parlon (фиг. 1 а, б).
Полученная конструкция с помощью трансформации введена в клетки E. coli.
За влиянием пкРНК parlon на активность эндогенного гена lon следят по эффекту последнего на работу lux-регулона, внесенного в клетки E. coli из клеток Vibrio fischeri. Lon-протеаза является негативным регулятором lux-регулона, т. к. она специфически деградирует белок LuxR. Последний в комплексе с автоиндуктором запускает синтез белков, обеспечивающих люминесценцию. Промоторы pr и pl в lux-регулоне работают на разных цепях, гены показаны светлыми прямоугольниками (фиг. 1 в). Активно работающий ген lon вызывает репрессию транскрипции lux-регулона, что фенотипически проявляется в подавлении люминесценции. Напротив, сайленсинг гена lon приводит к увеличению концентрации LuxR и, следовательно, к активации транскрипции lux-регулона, что приводит к заметному усилению свечения клеток. Lux-регулон в составе 16 kb BamHI фрагмента ДНК Vibrio fischeri, был введен в lon+ клетки E. coli K12 AB1157, а также в lon- клетки E. coli K12 AB1899 (lon1).
В полученные lon+ клетки дополнительно порознь вводят также конструкцию, созданную на основе вектора pUC12, способную экспрессировать пкРНК parlon или исходную плазмиду pUC12, не содержащую вставки. Сайленсинг гена lon определяют по возрастанию свечения клеток. Интенсивность люминесценции клеток, экспрессирующих пкРНК parlon, возрастает на несколько порядков по сравнению с контролем, содержащим исходную плазмиду pUC12 (фиг. 2).
При выращивании трансформантов parlon на твердых средах наблюдали развитие "слизистых" колоний, что характерно для lon- фенотипа или сайленсинга гена lon.
Пример 2.
Получение фенокопий Kruppel (Kr) при инъекциях в эмбрионы дрозофилы РНК, комплементарной мРНК в параллельном направлении, синтезированной in vitro.
Kr - гомеотический ген, активный уже в зиготе и контролирующий образование сегментов на ранней эмбриональной стадии развития дрозофилы, выбран в качестве модели, позволяющей наблюдать раннее развитие в многоклеточном организме. Мутанты Kr имеют делеции прилежащих торакальных и передних абдоминальных сегментов. Фенотипически это заметно сразу после развития кутикулы и вылупливания личинок. Мутанты Kr имеют делеции торакальных сегментов и от одного до нескольких абдоминальных сегментов, а иногда также атопически развившиеся дыхальца в передней части тела личинки [E. Weischaus, C. Nusslein-Volhard, H. Kluding, Development, 1984, vol. 104, p. 172]. Таким образом, мутанты Kruppel имеют уникальный фенотип, проявляющийся уже через сутки развития эмбрионов дрозофилы, что удобно для изучения влияния РНК на фенотип. Дополнительным аргументом в пользу выбора данной модели было то обстоятельство, что влияние инъекций антисмысловой РНК Kr было проведено ранее [U. B. Rosenberg, A. Preiss, E. Seifert, H. Jackle, D.C. Knippe, Nature, 1985, vol. 313, p. 703].
Химически синтезируют искусственную последовательность ДНК длиной 160 bp, имеющую симметричную последовательность нуклеотидов по области гена Kr (фиг. 3 а, б). Следует подчеркнуть, что антисмысловые РНК синтезируют на незначащей цепи того же самого гена, тогда как пкРНК может быть синтезирована только на гетерологичной последовательности ДНК, имеющей зеркально-симметричное чередование.
Синтезированную ДНК используют для получения конструкции в векторе pGEM-1, позволяющем с промотора РНК полимеразы T7 вести синтез пкРНК. пкРНК была названа Kr-par, т.к. она комплементарна мРНК гена Kr в параллельном направлении.
Эмбрионы линии Oregon RC инъецируют препаратами пкРНК в область плазмы заднего полюса на стадии синцития и инкубируют под водой при 25oC в течение 18-24 ч. Затем готовят препараты кутикулы и наблюдают развитие сегментов личинок под фазово-контрастным микроскопом.
Обнаружено развитие личинок, имеющих характерный Kr-фенотип. В контрольных экспериментах, после инъекций РНК, синтезированной на противоположной цепи той же конструкции с помощью SP6 РНК полимеразы, наблюдают только развитие нормальных личинок.
Фиг. 4 представляет нормальную личинку (а), а также две личинки, полученные после инъекций препарата Kr-par (б, в). Последние имеют делеции торакальных сегментов и одного или трех брюшных сегментов и эктопически развитое дыхальце в передней части тела личинки, что характерно для фенотипа Kr. Частота появления фенокопий Kr после инъекций РНК Kr-par примерно соответствует таковой после инъекций соответствующей асРНК [U.B. Rosenberg, A. Preiss, E. Seifert, H. Jackle, D.C. Knippe, Nature, 1985, vol. 313, p. 703]. Показано, что в многоклеточном организме, воздействуя пкРНК на экспрессию ключевого гена дифференцировки, получают направленное изменение генетических свойств организма.
Таким образом, обнаружено влияние зеркальных инверсий нуклеотидных последовательностей, тем или иным путем введенных в организм, на его фенотип. Основное преимущество предлагаемого способа состоит в том, что зеркальные последовательности способны обеспечить синтез пкРНК и РНК-интерференцию, но, будучи гетерологичными последовательностями, не могут синтезировать соответствующую мРНК. Поэтому при использовании этого подхода ("палиндромный подход"), в отличие от традиционного способа, использующего асРНК ("антисмысловой подход"), не может произойти реверсия и начаться синтез цепи мРНК.
Изобретением предложен общий подход к изменению генетических свойств организма, основанный на биологических свойствах зеркальных инверсий нуклеотидных последовательностей и реализующийся в РНК-интерференции, приводящей к ген-специфическому сайленсингу. Предлагаемый способ, основанный на обнаруженной высокой и избирательной биологической активности транскриптов с зеркальных инверсий нуклеотидных последовательностей, приводит к изменению фенотипа и может быть использован для целей генотерапии в медицине, а также в сельском хозяйстве и в промышленной биотехнологии для ген-специфического сайленсинга тех генов, экспрессия которых способствует развитию тех или иных заболеваний или нарушает процесс наработки необходимого продукта.

Claims (2)

1. Способ изменения генетических свойств организма, отличающийся тем, что выбирают ген, активность которого нежелательна, синтезируют искусственную последовательность ДНК, имеющую зеркальное чередование нуклеотидов по отношению к выбранному гену, готовят генетическую конструкцию, содержащую синтезированную ДНК, и вводят ее в организм для синтеза параллельно комплементарной РНК (пкРНК) по отношению к мРНК in vivo.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что пкРНК синтезируется на конструкции in vitro.
RU99125827/13A 1999-12-09 1999-12-09 Способ изменения генетических свойств организма RU2164944C1 (ru)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99125827/13A RU2164944C1 (ru) 1999-12-09 1999-12-09 Способ изменения генетических свойств организма
EP00981979A EP1152056B1 (en) 1999-12-09 2000-12-07 Method for modifying genetic characteristics of an organism
US09/913,040 US20020137210A1 (en) 1999-12-09 2000-12-07 Method for modifying genetic characteristics of an organism
DE60044056T DE60044056D1 (de) 1999-12-09 2000-12-07 Ristika eines organismus
PCT/RU2000/000504 WO2001042443A1 (fr) 1999-12-09 2000-12-07 Procede de modification des proprietes genetiques d'un organisme
JP2001544319A JP2003516146A (ja) 1999-12-09 2000-12-07 生物の遺伝的特性を変化させるための方法
US11/500,910 US20070092499A1 (en) 1999-12-09 2006-08-09 Method for changing genetic properties of eukaryotic organism

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99125827/13A RU2164944C1 (ru) 1999-12-09 1999-12-09 Способ изменения генетических свойств организма

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2164944C1 true RU2164944C1 (ru) 2001-04-10

Family

ID=20227853

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU99125827/13A RU2164944C1 (ru) 1999-12-09 1999-12-09 Способ изменения генетических свойств организма

Country Status (6)

Country Link
US (2) US20020137210A1 (ru)
EP (1) EP1152056B1 (ru)
JP (1) JP2003516146A (ru)
DE (1) DE60044056D1 (ru)
RU (1) RU2164944C1 (ru)
WO (1) WO2001042443A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2492239C2 (ru) * 2007-12-18 2013-09-10 Е.И.Дюпон Де Немур Энд Компани Понижающая регуляция экспрессии гена с помощью искусственных микрорнк

Families Citing this family (99)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
US7829693B2 (en) 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US20050233329A1 (en) * 2002-02-20 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. Inhibition of gene expression using duplex forming oligonucleotides
CA2398282A1 (en) * 2000-02-11 2001-08-16 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for the modulation and diagnosis of cd20 and nogo gene expression
US20050032733A1 (en) * 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
US8273866B2 (en) * 2002-02-20 2012-09-25 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA)
US8202979B2 (en) * 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20080039414A1 (en) * 2002-02-20 2008-02-14 Sima Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20050020525A1 (en) * 2002-02-20 2005-01-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
ES2336887T5 (es) * 2000-03-30 2019-03-06 Whitehead Inst Biomedical Res Mediadores de interferencia por ARN específicos de secuencias de ARN
US20050209179A1 (en) * 2000-08-30 2005-09-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA)
EP1873259B1 (en) * 2000-12-01 2012-01-25 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. RNA interference mediated by 21 and 22nt RNAs
US7423142B2 (en) 2001-01-09 2008-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US7767802B2 (en) 2001-01-09 2010-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US8546143B2 (en) 2001-01-09 2013-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US20050233997A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050187174A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050080031A1 (en) * 2001-05-18 2005-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. Nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of Ras, HER2 and HIV
US20050164966A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of type 1 insulin-like growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050153915A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of early growth response gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050119211A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-02 Sirna Therapeutics, Inc. RNA mediated inhibition connexin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050079610A1 (en) * 2001-05-18 2005-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050182007A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-18 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20050148530A1 (en) 2002-02-20 2005-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050209180A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050203040A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030170891A1 (en) * 2001-06-06 2003-09-11 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060241075A1 (en) * 2001-05-18 2006-10-26 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of desmoglein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050137155A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196767A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acis (siNA)
US9994853B2 (en) 2001-05-18 2018-06-12 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US20060211642A1 (en) * 2001-05-18 2006-09-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA inteference mediated inhibition of hepatitis C virus (HVC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050288242A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of RAS gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070270579A1 (en) * 2001-05-18 2007-11-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050143333A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20050227935A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-13 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of TNF and TNF receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050256068A1 (en) * 2001-05-18 2005-11-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20080188430A1 (en) * 2001-05-18 2008-08-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050153914A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of MDR P-glycoprotein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040019001A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
US20050267058A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (sINA)
US20050171040A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cholesteryl ester transfer protein (CEPT) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050282188A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164224A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233344A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet derived growth factor (PDGF) and platelet derived growth factor receptor (PDGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164968A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of ADAM33 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050054598A1 (en) * 2002-02-20 2005-03-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159381A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of chromosome translocation gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050222066A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159380A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of angiopoietin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050182006A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-18 Sirna Therapeutics, Inc RNA interference mediated inhibition of protein kinase C alpha (PKC-alpha) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070042983A1 (en) * 2001-05-18 2007-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124566A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of myostatin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050119212A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-02 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of FAS and FASL gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050287128A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159382A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164967A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124568A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of acetyl-CoA-carboxylase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124567A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of TRPM7 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050136436A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159376A1 (en) * 2002-02-20 2005-07-21 Slrna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition 5-alpha reductase and androgen receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050182009A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-18 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of NF-Kappa B / REL-A gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7517864B2 (en) * 2001-05-18 2009-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7109165B2 (en) 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US20040209831A1 (en) * 2002-02-20 2004-10-21 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196765A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint Kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040198682A1 (en) * 2001-11-30 2004-10-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176666A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GPRA and AAA1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233996A1 (en) * 2002-02-20 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060142226A1 (en) * 2001-05-18 2006-06-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cholesteryl ester transfer protein (CETP) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
KR20040022449A (ko) 2001-07-12 2004-03-12 유니버시티 오브 매사추세츠 유전자 불활성화를 매개하는 소형 간섭 ｒｎａ의 생체내제조
US7745418B2 (en) 2001-10-12 2010-06-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting viral replication
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
US7294504B1 (en) 2001-12-27 2007-11-13 Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for DNA mediated gene silencing
DE10202419A1 (de) 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
AU2003207708A1 (en) 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of map kinase genes
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
PT1504126E (pt) 2002-05-03 2014-06-02 Univ Duke Um método para regular a expressão génica
AU2003239897A1 (en) 2002-05-23 2003-12-12 Ceptyr, Inc. Modulation of ptp1b signal transduction by rna interference
AU2003261449A1 (en) 2002-08-07 2004-02-25 Compositions for rna interference and methods of use thereof
US7923547B2 (en) 2002-09-05 2011-04-12 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20040231231A1 (en) * 2002-12-20 2004-11-25 Cataldo Dominic A. Use of colloidal clays for sustained release of active ingredients
CN1768139A (zh) * 2003-02-10 2006-05-03 独立行政法人产业技术总合研究所 通过dna干扰调控基因的表达
CA2554212A1 (en) 2004-02-10 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using multifunctional short interfering nucleic acid (multifunctional sina)
CA2557532A1 (en) 2004-04-23 2005-11-10 Angela M. Christiano Inhibition of hairless protein mrna
US10508277B2 (en) 2004-05-24 2019-12-17 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
EP1931789B1 (en) 2005-09-20 2016-05-04 BASF Plant Science GmbH Methods for controlling gene expression using ta-siran
WO2007043049A1 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Compositions for silencing the expression of vdac1 and uses thereof
ATE508191T1 (de) 2006-11-01 2011-05-15 Medical Res And Infrastructure Fund Of The Tel Aviv Sourasky Medical Ct Adipozytenspezifische konstrukte und verfahren zur hemmung der expression von blutplättchen-typ- 12-lipoxygenase
BRPI0809130A8 (pt) 2007-03-21 2021-11-03 Brookhaven Science Ass Llc Composições combinadas hairpin-antissenso e métodos para modulação da expressão
US20100280097A1 (en) * 2007-09-18 2010-11-04 Intradigm Corporation Compositions comprising hif-1 alpha sirna and methods of use thereof
EP2190995A2 (en) * 2007-09-18 2010-06-02 Intradigm Corporation Compositions comprising k-ras sirna and methods of use
CA2717496A1 (en) * 2008-03-12 2009-09-17 Intradigm Corporation Compositions comprising notch1 sirna and methods of use thereof
KR101605932B1 (ko) 2009-12-18 2016-03-24 노파르티스 아게 Ｈｓｆ1-관련 질환을 치료하기 위한 유기 조성물
JP2013519869A (ja) 2010-02-10 2013-05-30 ノバルティス アーゲー 筋肉成長のための方法および化合物
US9260471B2 (en) 2010-10-29 2016-02-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acids (siNA)
BR112014016870A2 (pt) 2012-01-09 2017-06-27 Huesken Dieter composições orgânicas para tratar doenças relacionadas com beta-catenina

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3660354B2 (ja) * 1992-04-02 2005-06-15 セムバイオシス ジェネティクス インコーポレイテッド 調節シグナルとしてのオイルボディタンパク質シスエレメント
US5856152A (en) * 1994-10-28 1999-01-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor
US5700690A (en) * 1995-05-26 1997-12-23 Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for inhibiting fibrogenesis
GB9710475D0 (en) * 1997-05-21 1997-07-16 Zeneca Ltd Gene silencing

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2492239C2 (ru) * 2007-12-18 2013-09-10 Е.И.Дюпон Де Немур Энд Компани Понижающая регуляция экспрессии гена с помощью искусственных микрорнк

Also Published As

Publication number Publication date
EP1152056A4 (en) 2002-06-26
US20070092499A1 (en) 2007-04-26
EP1152056B1 (en) 2010-03-24
US20020137210A1 (en) 2002-09-26
EP1152056A1 (en) 2001-11-07
DE60044056D1 (de) 2010-05-06
WO2001042443A1 (fr) 2001-06-14
JP2003516146A (ja) 2003-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2164944C1 (ru) Способ изменения генетических свойств организма
Yang et al. Specific double-stranded RNA interference in undifferentiated mouse embryonic stem cells
Liubicich et al. Knockdown of Parhyale Ultrabithorax recapitulates evolutionary changes in crustacean appendage morphology
Dodd et al. Zebrafish: bridging the gap between development and disease
Pasquinelli et al. Control of developmental timing by microRNAs and their targets
US6458559B1 (en) Multivalent RNA aptamers and their expression in multicellular organisms
Van Den Heuvel et al. Conserved functions of the pRB and E2F families
Knight et al. The role of RNA editing by ADARs in RNAi
Erdmann et al. Regulatory RNAs
Pavlopoulos et al. Probing the evolution of appendage specialization by Hox gene misexpression in an emerging model crustacean
Roeske et al. Cis-regulatory evolution integrated the Bric-à-brac transcription factors into a novel fruit fly gene regulatory network
Brodigan et al. Cyclin E expression during development in Caenorhabditis elegans
Li et al. Zebrafish foxc1a plays a crucial role in early somitogenesis by restricting the expression of aldh1a2 directly
CN102014928A (zh) 使用小干扰RNA(siRNA)鉴别参与记忆形成的基因的方法
De Robertis et al. Evo-Devo of Urbilateria and its larval forms
Ueda RNAi: a new technology in the post-genomic sequencing era
Soleimani et al. Small regulatory noncoding RNAs in Drosophila melanogaster: biogenesis and biological functions
CN107988231A (zh) 飞蝗节间膜表皮蛋白基因6及其在蝗虫防治中的应用
Hogan et al. Manipulation of gene expression during zebrafish embryonic development using transient approaches
Rohde et al. Homeobox genes and melatonin synthesis: regulatory roles of the cone-rod homeobox transcription factor in the rodent pineal gland
Deiters et al. Conditional transgene and gene targeting methodologies in zebrafish
CN110129358B (zh) 水稻Os01g32730基因的应用
HUP0101961A2 (hu) Az FSH-béta-gén módosítása homológ rekombinációval
Wang et al. Knock down of gfp and no tail expression in zebrafish embryo by in vivo-transcribed short hairpin RNA with T7 plasmid system
CN110106177B (zh) 一种飞蝗脂肪酸延伸酶基因LmElo的dsRNA及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20031210

NF4A Reinstatement of patent
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20121210

NF4A Reinstatement of patent

Effective date: 20140920

PD4A Correction of name of patent owner
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20150220