Claims (14)
1. Фермент, содержащий комбинацию указанных далее (А) и (В):1. An enzyme containing a combination of the following (A) and (B):
(A) белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2; или белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, но который содержит замену, делению, вставку и/или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков и имеет активность гептапренилдифосфатсинтазы с белком (В); или белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2, но который имеет идентичность аминокислотной последовательности не менее чем 50%, не менее чем 55%, не менее чем 60%, не менее чем 65%, не менее чем 70%, не менее чем 75%, не менее чем 80%, не менее чем 85%, не менее чем 90%, не менее чем 95% или не менее чем 98% по отношению к целой аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:2, и имеющий активность гептапренилдифосфатсинтазы с белком (В); и(A) a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2; or a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, but which contains the substitution, division, insertion and / or addition of one or more amino acid residues and has heptaprenyl diphosphate synthase activity with protein (B); or a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, but which has an amino acid sequence identity of at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least more than 75%, not less than 80%, not less than 85%, not less than 90%, not less than 95% or not less than 98% with respect to the whole amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2, and having heptaprenyl diphosphate synthase activity with protein (B); and
(B) белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4; или белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, но который содержит замену, делецию, вставку и/или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков и имеет активность гептапренилдифосфатсинтазы с белком (А); или белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4, но который имеет идентичность аминокислотной последовательности не менее чем 50%, не менее чем 55%, не менее чем 60%, не менее чем 65%, не менее чем 70%, не менее чем 75%, не менее чем 80%, не менее чем 85%, не менее чем 90%, не менее чем 95% или не менее чем 98% по отношению к целой аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO:4, и имеющий активность гептапренилдифосфатсинтазы с белком (А); отличающийся тем, что указанный фермент имеет изопренсинтезирующую активность.(B) a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4; or a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, but which contains a substitution, deletion, insertion and / or addition of one or more amino acid residues and has heptaprenyl diphosphate synthase activity with protein (A); or a protein having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, but which has an amino acid sequence identity of at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least more than 75%, not less than 80%, not less than 85%, not less than 90%, not less than 95% or not less than 98% with respect to the whole amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4, and having heptaprenyl diphosphate synthase activity with protein (A); characterized in that said enzyme has isoprenic synthesizing activity.
2. Фермент по п.1, отличающийся тем, что указанный фермент из бактерии, принадлежащей к роду Bacillus.2. The enzyme according to claim 1, characterized in that said enzyme is from a bacterium belonging to the genus Bacillus.
3. Фермент по п.2, отличающийся тем, что указанный фермент из бактерии, принадлежащей к виду Bacillus subtilis.3. The enzyme according to claim 2, characterized in that said enzyme is from a bacterium belonging to the species Bacillus subtilis.
4. ДНК, кодирующая фермент по любому из пп.1-3, имеющий изопренсинтезирующую активность.4. DNA encoding an enzyme according to any one of claims 1 to 3, having isoprene synthesizing activity.
5. ДНК по п.4, отличающаяся тем, что указанная ДНК содержит комбинацию указанных далее (С) и (D):5. DNA according to claim 4, characterized in that said DNA contains a combination of the following (C) and (D):
(C) ген hepS, кодируемый нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:1; или вариант нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1, кодирующий белок как определено в предшествующем (А); или вариант нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:1 вследствие вырожденности генетического кода; и(C) the hepS gene encoded by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1; or a variant of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 encoding a protein as defined in the preceding (A); or a variant of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1 due to the degeneracy of the genetic code; and
(D) ген hepT, кодируемый нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO:3; или вариант нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:3, кодирующий белок как определено в предшествующем (В); или вариант нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:3 вследствие вырожденности генетического кода.(D) the hepT gene encoded by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3; or a variant of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3 encoding a protein as defined in the preceding (B); or a variant of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3 due to the degeneracy of the genetic code.
6. Бактерия-продуцент изопрена рода Bacillus, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что ДНК по любому из пп.4 или 5 сверхэкспрессирована.6. A bacterium-producer of isoprene of the genus Bacillus, characterized in that said bacterium is modified so that the DNA according to any one of claims 4 or 5 is overexpressed.
7. Бактерия по п.6, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что гены hepS и hepT сверхэкспрессированы.7. The bacterium according to claim 6, characterized in that said bacterium is modified in such a way that the hepS and hepT genes are overexpressed.
8. Бактерия по п.6, отличающаяся тем, что указанная ДНК сверхэкспрессирована увеличением числа копий этой ДНК или модификацией последовательности, контролирующей экспрессию указанной ДНК, так что экспрессия указанной ДНК повышена по сравнению с немодифицированной бактерией.8. The bacterium according to claim 6, characterized in that said DNA is overexpressed by increasing the number of copies of this DNA or by modifying a sequence controlling the expression of said DNA, so that the expression of said DNA is increased compared to an unmodified bacterium.
9. Бактерия по любому из пп.6-8, отличающаяся тем, что указанная бактерия есть Bacillus subtilis.9. The bacterium according to any one of claims 6 to 8, characterized in that said bacterium is Bacillus subtilis.
10. Бактерия-продуцент изопрена рода Bacillus, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что изопренсинтезирующая активность фермента по любому из пп.1-3 повышена.10. A bacterium-producer of isoprene of the genus Bacillus, characterized in that said bacterium is modified in such a way that the isoprenic synthesizing activity of the enzyme according to any one of claims 1 to 3 is increased.
11. Бактерия по п.10, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что изопренсинтезирующая активность фермента, кодируемого генами hepS и hepT, повышена.11. The bacterium of claim 10, characterized in that said bacterium is modified in such a way that the isoprene synthesizing activity of the enzyme encoded by the hepS and hepT genes is increased.
12. Бактерия по п.11, отличающаяся тем, что указанная изопренсинтезирующая активность повышена сверхэкспрессией генов hepS и hepT.12. The bacterium according to claim 11, characterized in that said isoprenic synthesizing activity is enhanced by overexpression of the hepS and hepT genes.
13. Бактерия по любому из пп.10-12, отличающаяся тем, что указанная бактерия есть Bacillus subtilis.13. The bacterium according to any one of paragraphs.10-12, characterized in that said bacterium is Bacillus subtilis.
14. Способ получения изопрена, включающий:14. A method of producing isoprene, including:
(i) выращивание бактерии по любому из пп.6-13 в питательной среде для продукции указанного изопрена; и(i) growing a bacterium according to any one of claims 6 to 13 in a nutrient medium for the production of said isoprene; and
(ii) выделение указанного изопрена из среды.
(ii) recovering said isoprene from the medium.