PT98871A

PT98871A - Processo para a preparacao de novos derivados do espiro {4,5}decano

Info

Publication number: PT98871A
Application number: PT98871A
Authority: PT
Inventors: Gilbert Regnier; Claude Guillonneau; Jean-Pierre Iliou; Jean-Paul Vilaine; Albert Lenaers
Original assignee: Adir
Priority date: 1990-09-06
Filing date: 1991-09-05
Publication date: 1992-07-31
Also published as: FR2666583B1; ES2066390T3; EP0479631B1; ATE113595T1; DE69104948D1; FR2666583A1; DK0479631T3; IE913131A1; JPH0786106B2; ZA917107B; NZ239677A; EP0479631A1; DE69104948T2; AU638354B2; IE66024B1; JPH04247082A; CA2050730A1; AU8369491A; US5206247A

Description

"PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS DO ESPIRO[4,5]DECANO" A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de derivados do espiro[4,5]decano de fórmula geral

Γ C -A L

C) na qual : - X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; A representa um radical hidrogenocarbonado contendo 2 a 10 átomos de carbono de cadeia linear ou ramificada comportando eventualmente uma ligação dupla e/ou eventualmente substituído por um radical hidroxi; 2-

- Y representa um átomo de oxigénio ou de enxofre ou um radical CI^; T representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; Z representa : CH-Ry na hidrogénio 1 a 3 átomos . quer um grupo de fórmula geral qual Ry representa um átomo de ou um radical alquilo contendo de carbono, . quer um grupo carbonilo; . quer representam, cada um, simultaneamente, um átomo de hidrogénio, . quer considerados em conjunto formam uma ponte de formula geral na Çua·^ n representa o número 1 ou 2, . quer R^ representa um radical metilo e simultaneamente representa um átomo de hidrogénio; -3- 1/. R_2 e Rg, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um radical metilo, e R^ e R^ iguais ou diferentes, representam, cada um, um radical alquilo contendo 1 a 6 átomos de carbono de cadeia linear ou ramificada. 0 estado anterior da técnica neste domínio é ilustrado especialmente pela : patente de invenção francesa NQ 1441.575 que diz respeito aos derivados do espiro[4.5]decano de formula geral

0 NH \ / 0 na qual R representa, entre outros, um grupo de fórmula geral Ar-A'- na qual Ar pode representar especialmente um radical fenilo mono- ou dissubs-tituído por radicais alquilo ou hidroxi; e A' pode representar especialmente uma cadeia -0-CH2-CH2; -4- Ιγ. e pelo Β S Μ NQ 4463 Μ que menciona as propriedades analgé sicas, anti-inflamatôrias e broncolíticas destes ditos derivados, assim como a sua utilização como medicamentos para o tratamento dos estados inflamatórios, dos broncoespasmos e da dor.

As modificações de estrutura especial ao nível do substituinte R permite obter os derivados de fórmula geral I preparados pelo processo de acordo com a presente invenção, os quais se diferenciam dos derivados mais próximos da técnica anterior não somente pela sua estrutura química mas também pelo seu perfil farmacológico e pela sua aplicação em terapêutica, como o prova o estudo farmacológico exemplificado adiante. A presente invenção diz respeito a um processo para a preparação de derivados de fórmula geral I, caracterizado pelo facto de : se condensar um derivado de fórmula geral

RO

*3

Pi r5

R6 r2 (II) -5-

na qual : - X, A, Rp R2, R^, R^, R^ e Rg têm os signifi cados definidos antes, - W representa um átomo de cloro ou de bromo ou um radical tosiloxi, e - R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector facilmente hidrolisãvel tal como um grupo acilado ou sililado; com um derivado de fórmula geral

(III) na qual Y, Z e T têm os significados definidos antes 5 e, no caso em que 0 símbolo R não representa um átomo de hidrogénio, submete-se 0 derivado assim obtido a uma hidrólise. A condensação dos derivados de fórmulas gerais XX e IIX realiza-se de um modo particularmente adequado no seio -6- W- de um dissolvente apropriado tal como por exemplo o acetoni-trilo, a metiletil-cetona, o tetra-hidrofurano, a dimetilforma-mida, o etanol ou o propanol, a uma temperatura compreendida entre 80° C e 100° C, na presença de um agente de fixação do ácido formado durante a reacção. Como agente de fixação, pode-se utilizar por exemplo um carbonato alcalino, a trietil-amina ou um excesso do derivado de fórmula geral III utilizado na reacção.

Os derivados assim obtidos podem ser purificados mediante cromatografia rápida ("flash") sobre sílica (35 - 70 jk) utilizando como eluente: 11^0000021^ ou C^C^/CH^OH, por exemplo, ou mediante formação de sais e cristalização destes últimos. 0s compostos iniciais de formula geral II e III utili zados no processo anteriormente descrito são quer compostos conhecidos quer compostos preparados a partir de substâncias conhecidas de acordo com processos descritos na literatura para preparar compostos análogos.

Os derivados de fórmula geral I formam sais com os ácidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico - sais cuja preparação está incluída na presente invenção. -7- U-

Além disso, quando na fórmula geral I, o símbolo R^ e diferente do símbolo R2, e/ou o símbolo Ry não representa um átomo de hidrogénio, e/ou o símbolo A representa uma cadeia ramificada, existe, segundo os casos, uma ou várias quirali-dades que fazem com que os derivados de fórmula geral I se apresentem sob a forma de enantiómeros ou de diastereoisómeros, cuja preparação faz igualmente parte dà presente invenção.

Os derivados, preparados pelo processo de acordo com a presente invenção, possuem propriedades farmacológicas e terapêuticas interessantes. Em particular, para estes compostos, demonstrou-se, por um lado "in vitro" e "in vivo" a sua capacidade para proteger as LDL humanas (lipoproteínas de baixa densidade que asseguram o transporte do colesterol, face às modificações oxidativas induzidas pelo cobre e pelas células endoteliais e, por outro, lado o seu efeito protector "in vitro" sobre a necrose oxidativa de células cardíacas.

As modificações oxidativas das LDL parecem, actual-mente, constituir um mecanismo importante da formação e da extensão das lesões vasculares ateromatosas. As propriedades anti-oxidantes, especialmente ao nível das LDL, dos derivados preparados pelo processo de acordo com a presente invenção permitem também a sua utilização como medicamento no tratamento: -8- W- de dislipidémias para prevenir as suas complicações particularmente vasculares, da aterosclerose com as suas diferentes localizações vasculares periféricas, coronárias e cerebrais, mas também das patologias em que uma peroxidação lipídica membranar desempenha um papel iniciador e/ou agravante tais como as caediopatias isquémicas, a reperfusão de orgãos, compre endendo transplantados, as patologias isquémicas traumáticas ou degenerativas do sistema nervoso central ou periférico, as doenças inflamatórias agudas ou crónicas e as doenças auto--imunes. A presente invenção tem igualmente por objectivo um processo para a preparação de composições farmacêuticas contendo como ingrediente activo um composto de fórmula geral I ou um dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, misturado ou associado a um excipiente farmacêutico apropriado como, por exemplo, a glucose, a lactose, o amido, o talco, a etilcelulose, o estearato de magnésio ou a manteiga de cacau.

Estas composições farmacêuticas apresentam-se geral-mente sob forma doseada e podem conter entre 5 e 250 mg de ingrediente activo. -9-

Podem apresentar-se, por exemplo, sob a forma de comprimidos, drageias, gélulas, supositórios, soluções injectá-veis ou bebíveis e ser, conforme os casos, administradas por via oral, rectal ou parenteral em doses compreendidas entre 5 e 500 mg em 1 ou 2 tomas diárias.

Os exemplos seguintes ilustram a presente invenção sem contudo a limitarem de modo algum, sendo os pontos de fusão determinados na platina aquecida de Kofler (K) ou em tubo capilar (cap.). EXEMPLO 1 (R,S)-8-[3-(3,5-dibutil t er c*- 4-hidroxi-feniltio)-2-hidroxi--propil]-l-oxa-2-oxo-3,8-diaza-espiro[4.5]decano :_

Aquece-se durante 20 horas a refluxo, uma suspensão de 6,5 g de 3-(3,5-dibutil terc.-4-hidroxi-feniltio)-2-hidroxi- -10-

-1-cloropropano que funde (K) a 68° C e 9 g de l-oxa-2-oxo-3,8--diaza-espiro[4.5]decano que funde a 202° C, em 200 ml de aceto nitrilo na presença de 0,5 g de iodeto de potássio.

Uma vez terminada a reacção, arrefece-se e filtra-se o sal insolúvel. Evapora-se a solução e dissolve-se o resíduo em cloreto de metileno. Lava-se a solução obtida com água e hidrogenocarbonato de sódio a 10 I. Após evaporação, submete-se a uma cromatografia sobre sílica e elui-se com cloreto de metileno/metanol (95/5). Após evaporação dos líquidos eluídos obtém-se 4 g de (R,S)-8-[3-(3,5-dibutil terc.-4-hidroxi-fenil-tio)-2-hidroxi-propil]-l-oxa-2-oxo-3,8-diaza-espiro[4.5]decano, sob a forma de cristais de cor bege que fundem (K) a 170° C.

Prepara-se o derivado clorado inicial mediante reacção de epicloridrina com o 3,5-dibutil terc.-4-hidroxi-tio-fenol em tetra-hidrofurano na presença de BH^ N®F®como catali sador. EXEMPLO 2 8-[3-(2,3,5-trimetil-4-hidroxi-fenoxi)-propil]-l-oxa-2-oxo-3,8--diaza-espiro[4.53decano ;_ -11-

Aquece-se durante 20 horas a refluxo, uma solução de 5,04 g de 3-(4-acetoxi-2,3,5-trimetil-fenoxi)-l-bromo-propano que funde (K) a 54° C e de 5 g de l-oxa-2-oxo-3,8-diaza-espiro-[4.5]decano em 300 ml de acetonitrilo na presença de 1,2 g de iodeto de potássio. Uma vez terminada a reacção, evapora-se o dissolvente sob pressão reduzida e retoma-se o resíduo com hidrogenocarbonato de sódio a 10 % e cloreto de metileno. Decan ta-se a camada orgânica e lava-se várias vezes com água.

Após evaporação do dissolvente, submete-se o resíduo a uma cromatografia sobre 300 g de sílica e elui-se com o sistema cloreto de metileno/metanol (93/7). Após evaporação dos líquidos eluídos, obtém-se 5,2 g de composto acetilado sob a forma de um óleo.

Hidrolisa-se 4,5 g deste composto em solução em 120 ml de etanol com 47 ml de ácido clorídrico 4 N, mediante aquecimento a refluxo durante duas horas. Após evaporação do dissolvente, retoma-se o resíduo com cloreto de metileno e -12- W· hidrogenocarbonato de sódio a 10 %, decanta-se e evapora-se a fase orgânica.

Purifica-se mediante cromatografia sobre 200 g de sílica e elui-se com cloreto de metileno/metanol (90/10). Após evaporação dos líquidos eluídos obtém-se 3,6 g de cristais de 8-[3-(2,3,5-trimetil-4-hidroxi-fenoxi)-propil]-l-oxa-2-oxo-3,8--diaza-espiro[4.5]decano, que funde (K) a 155° C. -13- «· νθ co cd

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o o CO 1 CO 1 oo i CO 1 o o Μ II II E E E E E E E E II II o — o cj— o o — o cj— α o o 1 1 1 1 o CJ Η o o o o o o o o CS CS >* b e cj cj o o o o o o cn oo CO oo 00 00 CO co /-x ✓“N /Λ /—N /^N /—s CO OO 00 CO CO CO CO co ΙΟ e E E E E E E E Pd o cj o o o cj CJ CJ N-/ V s-/ V w w u CJ 1 o U 1 u 1 α 1 0 1 CJ 00 00 00 OO oo 00 CO 00 /-s /-N ✓—s /-\ /-X. co 00 co 00 co CO CO OO <r e E E E E E E E Pd o α o u cj o O CJ s/ 'w' 'w' v«/ N-/ o α 1 O α 1 cj 1 O 1 o 1 CJ 1 VO Pd tu tu b E w E E E CS Pd E e tu E E E E E oo Pd s s b e E E E E ϊ—1 pd e b e E E E E E CS CS CS cS CS cs E E cs cs /—N /-X /—X o CJ /—X /-N <1 os CS CS CS 1 cs CS e E e E E E E E E E o o o α cj— o cj— o CJ CJ v-x V-/ 1 1 V-/ W X! o w o co o cn O co o r-4 & 6 oi u0 vO h- co o 1—1 <U z rH rS iH i—1 rH i—! CS cs w -16

CS O II cj O II CJ CS 33 cj cs 33 O cs 3! CJ cs 33 CJ CS 33 CJ cs 33 CJ Η o o o o O o O O X o o o o o o O o m Pá cn /—\ cn 33 cj V-/ cj 1 cn cn 33 CJ cj 1 cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 O PÍ cn <—·. cn 33 u —^ cj 1 cn λ cn 33 CJ v/ O 1 cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ CO Pá 33 33 cn 33 O cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ cn 33 CJ CS Pá W 33 33 33 cn 33 O 33 cn 33 O cn 33 o cn Pá 33 33 33 33 33 33 cs λ cs 33 O 1 cs .---- cs 33 CJ ^—' 1 l““4 Pá 33 33 33 33 cn 33 CJ 33 <5 CS 33 cj 33 33 CJ— o 1 CS 33 O 33 33 o—o 1 cs cs 33 O w cs 33 O 1 33 33 CJ— O 1 cs cs 33 CJ cs 33 cn cj cn 33 i 33 CJ-CJ-CJ cs 33 cj cs 33 CJ X O cn o O o o o O Exemplo N9 cs CS cn CS <N m CS sO CS r·- cs oo cs as cs 17 r\ /'“Ν m /*N a cm Merengue 0) n 0) n o Ο Ο __' 1¾ a (cap) 164-16 1C1 (ca 250-25 bO tí 0) i-i cu s UO f3 0) u ««✓ CM CM CM CM CM CM CM Μ a a a a a a a u o o o u t? O Η o o o o o o o >* o o o o o o o cn cn cn cn cn cn cn cn ιΟ a a a a a a a pá o o o o u u o 'w' u I cn /-N co cn cn cn cn cn cn a a a a a a a pá o o o o o CJ o o 1 cn cn cn cn cn cn νΟ a a a a a a a Pá o u o o o o cn cn cn cn CM a a a a a a a Pá o o o o cn Pá a a a 1 CM 1 CM a CM a CM a o a cn o o a \-( pá a CH a 'W 1 CM sr CM a CM cn CM cn S o y-N /-N CM CM à a CM CM CM CM <! a a a a a a o o O — o o CJ o u s/ 1 w o cn cn o O cn o o 1—1 & g Ol o t—4 CM cn <í* m VO <u K X W cn cn cn cn cn cn cn

-18-Os compostos iniciais utilizados para preparar os derivados da presente invenção estão reunidos nos Quadros XI e III a seguir :

0 rJ cd | o o a) cuttio •y-α cu o>* ítf iu tf ^ S i—1 i—1 i—1 Cfl tf 0 •H u y « II w tf O vy o o o U -H fc>á CO 1 o o o m 1¾ tf cu m u CO tf o u μ u £ CQ CQ CQ CM ~cj- CM /«S N ✓~N CM CM CM <í Cd cd cd CJ o o V-/ X-/ co co co ✓"S CO co co m Cd Cd Cd Pá U u u w V V-/ 0 1 u 1 CJ CO co co Λ y-S co CO CO <r Cd Cd cd Pá o u u Ny» V-/ 0 1 O 1 O 1 VO Pá w cd Cd CM pá cd td Cd co Pá w Cd Cd H Pá w Cd Cd Pá td Cd td * o o CQ

4* -19 Ο cu t cd T3 O cd O M ^ Ό cd -}c rH rH rH CS cn <r O •u ω '01 μ a a u u α 1 cn o o o μ i—I μ μ μ co a PP u a PP a 0 0 H rH ' CN] /"s CS cs cs CS <-> a a /-N y—s CM < <N o u CS CS a a 1 a w a a o o a 1 o u o — -o a a o — -o «n cn cn /*s /-N cn cn cn cn a cn m K a a a a a PÍ CJ o o O o o >*✓ V u 1 0 1 u 1 cn cn «n /-S v*s cn cn cn cn cn cn írj a a a a a Pá O u o u u o '•w' O 1 0 1 U 1 cn cn cn VO a a a a a a Pá o o o cn cs a a a a a a pá o cn Pá a a a a a CS Λ CS a iH od a a a a a u N-i' cn y—\ cn cn a a o cn CS Nw' a u Pá a a a cn O cn o 1 a 1 a o u- -o — -CJ o 1 1 o CS •iH 1 a cn 1 O I X cn cn a o o o

-20-

(*) Métodos de preparação :

XH + 3r-CH2-A-3r (em excesso)

K2CO3 AcCN ►

II 2 T. YOSHIOKA e Colab. "J. med. Chem." 32, 421-428, (1989)

CH3 K2CO3 ,

........ II

AcCN de acordo com J. SCOTT e Colab. (5), 200-203, (1974). 4 Tosilação de álcool preparado "J. am. oil. Chem. Soc." 51, ··

QUADRO IIIDerivados de fórmula geral XXI

Ê- II U CS >1 s.

Γ-» z <J\ H σ\ 00 1 <J H 1 tí CU > 1 00 o cd PI LO σ\ Oh • rs w 00 00 CO >4 vO to t—1 CU α o to g CJO s to y-s u 0 r—l o /N o o sy r*^ g oO V*/ o 00 O : s-/ /^» o 00 i—1 O • CJ CO 0 TJ 00 o 1 cn l'- tj u r-i ·· 0 0 Tj MO σο cd 0 t—Í Ό co Ph cr\ rH rH o 1 y-V P H •H cd <J\ Pd 0 • CS w 4-1 \y o f Cd led o cd h “ •ri d cs 1 0 P rH <D CU *H •H 0) ai 0 • Cd > \ / n cd i—1 o •rl s •rl V / CU cd T—1 cj 00 u H g u v rH 0 cd -d- cu cd o CU to 0 cj S-/ CS TJ Λ α Tj y-s u Ph Γ CTs 0) o II o o O <1- 0) ICti tj • icd Td OO Pd § Oi cd y—\ bá o g <u o cd o ·· \ r-l xy W <1 1—l sy icd tH i cd <u 1 H h4 •H pH o cj •rl θ’ X3 cs z i-l P Ph cd N cd cd i—1 o M •rl P 0 P P CJ o fd <J u (U cd M <U cd •H 1 σ\ S |jç| P P Oh <! rQ Ph P cn CO 0 0) o CO ω P Cd to • • cu 0) u <1 0) U cd M0 rH | o Ω Ό Ph S -d Ph Oh CO H co o cd o O CJ υ cj o Ή o O oo O 4-1 CO <N II o o co O CO cd O /-\ vo -d“ CO <3· vh υ <N Ph <N tf CS U ·Η cd CS Vr4 0 0h O 4-1 /*v Pu m cd y-s cd fcd Ph <r cd o cd C4 V CS N-/ s-y Sy» cd Pu Pu Pu Pu U Ph Ph Pd Ph o O oo 1 CS (N Ctí cd cs II II Cd CJ-O Cd u 1 o o O o o cn o O cs cd >4 o o O o cj

-n--U -22- -22-

EXEMPLO 31

ESTUDO FAEMACOL0GICO A acçao dos derivados preparados pelo processo de acordo com a presente invenção foi demonstrada sobre LDL humanas e animais. A actividade inibidora destes compostos face à modificação oxidativa das LDL, induzida pelo sulfato de cobre e pelas células endoteliais da aorta de coelho foi demonstrada quer "in vitro" quer depois da administração por via oral no coelho Watanabe. A actividade dos compostos de acordo com a presente invenção foi ensaiada de modo comparativo com o probucol e a vitamina E tomadas como compostos de referência. 1. ESTUDO "IN VITRO"

1.1 MATERIAIS E MÉTODOS 1.1.1 Modificação das LDL· pelo sulfato de cobre

As LDL humanas são incubadas durante 24 horas na presença de sulfato de cobre (5.10~J M ou 5.10’ M) e na ausência ou na presença dos compostos a ensaiar (10’^ M a _ 10"4 M). -23- u

Após incubação, determina-se a peroxidação das LDL mediante electroforese sobre gel de agar e pela formação de um dos compostos da peroxidação lipídica: o malondialdeído (MDA) (Parthasarathy S., Young S. G., Witztum J. L., Pittman R. C., e Steinberg D.; "J. Clin. Invest." 7_7> 641 - 644, 1986).

Determina-se a actividade dos compostos ensaiados pelo cálculo das concentrações que reduzem em 50 % (CI^q) a produção de MDA em relação âs experiências testemunhas na ausência de composto. 1.1.2 Modificação das LDL pelas células endoteliais

Incubam-se as LDL humanas durante 24 horas na presença de células endoteliais da aorta de coelho (linha RECL B4 fornecida pelo Professor Steinberg, USA) e na ausência ou na presença dos compostos a ensaiar (ΙΟ-' M a IO"4 M).

Depois da incubação, determina-se a peroxidação das LDL mediante electroforese sobre gel de agar e pela formação de um dos compostos da peroxidação lipídica: o malondialdeído (MDA) (Steinbrecher V. P., Parthasarathy S. Leake D. S.,

Witztum J. L., e Steinberg D.; "Proc. Nat. Acad. Sei. USA" 81, 3883 - 3887, 1984). -24- U-

Determina-se a actividade dos compostos ensaiados pelo cálculo das concentrações que reduzem em 50 % (CI^q) a produção de MDA em relação às experiências testemunhas na ausência de composto. 1.1.3. Necrose oxidativa das células cardíacas São utilizadas células cardíacas de ratos recém--nascidos, entre o 59 e 6° dias depois do início da cultura. A necrose oxidativa é induzida pelo sistema enzimático produtor de radicais livres hipoxantina (HX, 1 mM) e xantina-oxidose (XO, 10 mU/ml). A necrose é determinada 4 horas depois da adição de XO/HX medindo-se espectrofotometricamente a actividade citosolitica -hidroxi-butirato-desidrogenase ( p( -HBDH) libertada no sobrenadante. São ensaiadas duas moléculas de referência (probucol, vitamina E) e 3 moléculas representativas dos compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção (correspondendo aos exemplos 1, 3 e 4). As células são tratadas com as moléculas 16 horas e 1 hora antes do início da experiência apõs renovação do meio. No início da experiência, o tratamento é renovado uma última vez.

1.2. - RESULTADOS 1.2.1. Efeito sobre a modificação das LDL -25-

0 Quadro A reúne as CI,jq, apreciando o poder inibidor da peroxidação lipídica das LDL humanas obtidas com uma amostra dos derivados preparados pelo processo de acordo com a presente invenção e os compostos de referência: probucol e vitamina E, sobre os dois ensaios de incubação de oxidação das 27 LDL: pelo sulfato de cobre (Cu ) ou pelas células endoteliais (EC). -26- -26-

QUADRO A COMPOSTOS CI50 (M) p 2+ Cu EC Exemplo 1 3 10"7 3 10"8 Exemplo 3 3 10"7 oo 1 0 1 1 LO Exemplo 4 co 1-* o 2 10"8 Exemplo 5 7 10“7 1"-· I o i—1 OO Exemplo 6 3 10'7 3 10‘7 Exemplo 7 2 10"6 Exemplo 30 3 10“7 Exemplo 31 8 10'7 2 10"8 Exemplo 32 1 o I—1 co Exemplo 33 3 10"7 Exemplo 34 3 10"7 PROBUCOL 3 10'6 4 IO-6 VITAMINA E > IO-4 4 10“6 -27-

Estes resultados indicam claramente a muito maior potência especialmente dos compostos dos exemplos 1, 3, 4, 5, 6 e 31 em relação ao probucol ou à vitamina E para proteger as LDL humanas em relação âs modificações induzidas pelo sulfato de cobre e as células endoteliais.

Estes compostos, cujas CI^q em relação ã peroxidaçao -6 - induzida pelo sulfato de cobre (5 10" M) estão compreendidas entre 3.10”^ e 8.10”^, são 10 vezes mais potentes do que o probucol neste ensaio; no que diz respeito ao ensaio que utiliza as células endoteliais, os derivados relativos especialmente aos exemplos 1, 3, 4 e 32 com CI^q compreendidas entre o o 2.10” M e 5.10 M demonstraram ser 100 vezes mais potentes que o probucol. A titulo de exemplo, os efeitos dos exemplos 1 e 3 estão ilustrados nas figuras 1 e 2 a seguir : -28- -28-

Figura 1 PEROXIDAÇÃO DAS LDL PELO CuS04 5 10-6M COMPARAÇÃO DOS EFEITOS DO PROBUCOL E DOS DERIVADOS DOS EXEMPLOS 1 E 3 % Peroxidaçao Probucol

Concentração em moles -29-

Figura 2 PEROXIDAÇÃO DAS LDL PELAS CÉLULAS ENDOTELIAIS COMPARAÇÃO DOS EFEITOS DO PROBUCOL E DOS DERIVADOS DOS EXEMPLOS 1 E 3

Probucol — Derivados do Exemplo 1 a · · · -a Derivados do Exemplo 3 t Peroxidação

Concentração em moles -30-

1.2.2. Efeitos sobre a necrose oxidativa das células cardíacas 0 Quadro B reúne os índices de necrose de células cardíacas induzida pelo sistema hipoxantina/xantina-oxidase só ou na presença de concentrações crescentes dos derivados de acordo com a presente invenção ou dos compostos de referência: probucol e vitamina E.

Os derivados dos Exemplos 1, 3 e 4 (particularmente representativos da presente invenção), em concentrações de 10” M e 10” M, reduzem respectivamente em mais de 80 7* e 95 % a necrose oxidativa dos cardiomiocitos e são nitidamente superiores aos compostos de referência, cuja actividade, mais fraca, apenas aparece a 10 ^ M. O derivado do Exemplo 1 destingue-se particularmente por um efeito protector de mais de 50 % a partir da concentração de 10'7 M.

ILUSTRAÇÃO GRÁFICA DOS RESULTADOS :

EFEITO DOS DERIVADOS DE ACORDO COM A PRESENTE INVENÇÃO SOBRE A NECROSE OXIDATIVA DE CARDIOMIOCITOS (xantino-oxidase lOmU/ml; hipoxantina lmM) ÍNDICE DE NECROSE EM 4 HORAS (BASE 100) índice 100 = 43,6+1,0 1 -HBDH libertado 200-

| jVitamina E H Probucol

Derivado do Exemplo 1 PH Derivado do Exemplo 3 150--

Derivado do Exemplo 4

CONCENTRAÇÃO (μΜ) -31- U-

QUADRO B

EFEITO SOBRE A NECROSE OXIDATIVA DE CÉLULAS CARDÍACAS

Derivados controlo IO-7 M 10“6 M 10"5 M XO+HX XO+HX XO+HX XO+HX Vitamina E 100,0+12,5 83,5+ 8,0 79,0+ 7,4 61,1+ 2,5 Probucol 100,0+ 6,2 103,0+ 2,0 68,8+ 3,9 26,6+ 6,3 Exemplo 1 100,0+ 6,5 42,8+11,3 19,1+ 7,3 3,8+ 1,9 Exemplo 3 100,0+12,4 60,6+17,1 12,0+ 4,4 4,2+ 2,7 Exemplo 4 100,0+ 6,9 79,1+ 8,0 2,1+ 1,0 2,6+ 0,7 O índice de necrose 100 corresponde a uma libertação de 43,6+1,0 % em 4 horas do conteúdo citosolítico em -HBDH no sobrenadante.

Os resultados são expressos sob a forma de média + sem (4 C n 4 5, 3 repetições por experiência). -33-

2. ESTUDO "EX VIVO"

2.1 MATERIAIS E MÉTODOS São utilizados coelhos Watanobe (coelhos geneticamente hiperlipidémicos), de peso compreendido entre 3 kg e 5 kg. Os animais são tratados por via oral quer com o veiculo dos compostos a ensaiar (grupo testemunha) quer com os compostos ensaiados em doses de 10,50 e 250 mg/kg/dia durante 3 dias.

Uma vez terminado o tratamento, as LDL destes animais são preparadas mediante ultracentrifugação e submetidas a uma - -6 oxidação com sulfato de cobre (5.10" M). Determina-se a peroxi-dação lipídica das LDL, após diferentes tempos de incubação com o sulfato de cobre (de 2 a 24 horas) mediante medida da formação do MDA.

2.2. RESULTADOS O Quadro C reúne os valores de produção de MDA segundo o tempo de incubação como o sulfato de cobre das LDL provenientes dos animais testemunhas e tratados pelos derivados dos Exemplos 1, 3 e 32 com diferentes doses ou pelo probucol.

QUADRO C PRODUÇÃO DE MDA (nM/mg proteínas) COMPOSTOS NÚMERO DE ANIMAIS Tempo de incubação das de cobre LDL com o (horas) sulfato 2 4 6 8 24 Controlo 6 3,31 +0,41 4,84 +0,59 13.,41 +2,29 26,04 +2,82 28,06 +2,87 Exemplo 1 250 mg/kg/j 6 0,2 +0,2 1,27 +0,91 0 0 1,02 +0,53 Exemplo 3 250 mg/kg/j 3 0,66 +0,18 0 0 0,69 +0,29 0,91 +0,16 Exemplo 3 50 mg/kg/j 3 0,16 +0,15 0 1,06 +0,29 1,44 +0,46 7,30 +1,66 Exemplo 3 3 1,27 0,27 3,29 6,85 22,78 10 mg/kg/j +0,10 +0,27 +0,72 +2,22 +0,70 Exemplo 31 3 0,19 0,51 0,16 0,71 0,99 250 mg/kg/j +0,19 +0,31 +0,16 +0,12 +0,15 Exemplo 31 3 0,33 0,72 1,03 1,04 3,16 50 mg/kg/j +0,24 +0,30 +0,47 +0,34 +0,14 Probucol 5 1,85 3,50 4,90 12,26 23,81 250 mg/kg/j +0,27 +0,27 +0,89 +2,45 +0,37 -35-

A partir destes resultados, igualmente ilustrados pela figura 3, verifica-se que a peroxidação das LDL dos coelhos Watanabe tratados com o probucol e retardada em cerca de 2 horas em relação ã dos animais testemunhas.

Os derivados dos Exemplos 1, 3 e 31, contrariamente ao probucol, nas mesmas condições experimentais, inibem a peroxidação das LDL induzida pelo sulfato de cobre a partir da dose de 50 mg/kg/dia. Ό derivado do Exemplo 3 revela-se particularmente eficaz a partir da dose de 10 mg/kg/dia (cf Quadro C). -36-

Figura 3

COMPARAÇÃO DOS EFEITOS DO PROBUCOL E DO DERIVADO DO EXEMPLO 1 ADMINISTRADOS "PER OS" SOBRE A MODIFICAÇÃO DAS LDL DE COELHOS WATANABE (250 mg/kg/dia durante 3 dias) PEROXIDAÇÃO LIPlDICA Placebo Probucol

Os resultados referidos demonstram, por um lado, que os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção protegem as LDL humanas "in vitró" face ãs modificações oxidativas de modo muito mais potente que o probucol e a vitamina E e, por outro lado, que após administração ao animal, -37- 1/- por via oral, estes compostos provocam uma protecção das LDL muito nitidamente superior e de maior duração de acçao em relação ao probucol.

Além disso os compostos preparados pelo processo de acordo com a presente invenção protegem igualmente as células cardíacas, de modo muito mais potente que o probucol e a vitamina E, em relação à necrose oxidativa induzida "in vitro".

Claims

-1-

REIVINDICAÇÕES 1.- Processo para a preparação de derivados do espi ro[4.5]decano de fórmula geral

na qual X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre ; 2

A representa um radical hidrocarboneto com 2 a 10 átomos de carbono, de cadeia linear ou rami ficada, contendo eventualmente uma ligação dupla e/ou eventualmente substituído com um radi cal hidroxi; Y representa um átomo de oxigénio ou de enxofre ou um radical CH2; T representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; Z representa; . um grupo de fórmula geral CH-R^ na qual representa um átomo de hidrogénio ou um radical alquilo com 1 a 3 átomos de carbono; . ou um grupo carbonilo; R1 e *3= . ou representam, cada um, simultaneamente, um átomo de hidrogénio; . ou considerados em conjunto, formam uma ponte de fórmula geral (C^J na qual n representa o número 1 ou 2; ou R^ representa um radical metilo e simulta neamente R^ representa um átomo de hidrogénio; R2 e Rg, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou um radical me- 3

tilo; e - e Rj, iguais ou diferentes, representam, ca da um, um radical alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, de cadeia linear ou ramificada; e, quando existem, dos enantiómeros e diastereómeros correspondentes, assim como dos respectivos sais de adição de ácido, aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se condensar: - um derivado de formula geral R4

X -C -A-tf 86 82 (II) na qual X, A, R^, R£, R^r R^, e Rg têm os significa dos definidos antes; - W representa um átomo de cloro ou de bromo ou um radical tosiloxi; e R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo protector facilmente hidrolisável tal como um grupo acilado ou sililado; - com um derivado de fórmula geral Z-MH HM \ CíT (III) na qual Y, 2 e T têm os significados definidos antes; - e, no caso em que o símbolo R* não representa um áto mo de hidrogénio, de se hidrolisar o derivado assim obtido; e de, eventualmente, se tratar os derivados de fórmula geral I obtidos, com ácidos aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, para se obter os sais de adição de ácido correspondentes.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, carac-terizado pelo facto de se efectuar a condensação dos derivados de fórmula geral II e III no seio de um dissolvente apropriado, a uma temperatura compreendida entre 80° e 100°C, na presença de um aceitante do ácido formado durante a reacção. Lisboa, 05 de Setembro de 1991 • Atente Oficial da Propriedade Industriai 5

RESUMO "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS DO ESPIRO[4.5]DECANO" Descreve-se um processo para a preparação de derivados do espiro[4.5]decano de fórmula geral

(I) e quando existem, dos enantiõmeros e diastereómeros correspondeu, tes, assim como dos seus sais de adição de ácido aceitáveis sob o pon to de vista farmacêutico, que consiste nomeadamente, em condensar: - um derivado de fórmula geral É 6 {V

RH

- com um derivado de fórmula geral Z-MH HM [ (III) Ϊ-C=T Lisboa, 05 de Setembro de 1991 O Oficial da Prmpriehsfie Inriuetnat