KR20190110612A - 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 면역조절 치료 mrna 조성물 - Google Patents
활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 면역조절 치료 mrna 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20190110612A KR20190110612A KR1020197025725A KR20197025725A KR20190110612A KR 20190110612 A KR20190110612 A KR 20190110612A KR 1020197025725 A KR1020197025725 A KR 1020197025725A KR 20197025725 A KR20197025725 A KR 20197025725A KR 20190110612 A KR20190110612 A KR 20190110612A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- mrna
- kras
- mir
- therapeutic composition
- activating oncogene
- Prior art date
Links
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 title claims abstract description 533
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 467
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 294
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 284
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 title claims abstract description 245
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 title claims abstract description 241
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 174
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 169
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 193
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 115
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 83
- 101000584612 Homo sapiens GTPase KRas Proteins 0.000 claims description 256
- 102100030708 GTPase KRas Human genes 0.000 claims description 253
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 213
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 203
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 166
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 148
- 101000643024 Homo sapiens Stimulator of interferon genes protein Proteins 0.000 claims description 140
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 139
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 138
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 138
- 102000050022 human STING1 Human genes 0.000 claims description 138
- 101710196623 Stimulator of interferon genes protein Proteins 0.000 claims description 126
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 claims description 112
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 77
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 77
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 77
- 102200006531 rs121913529 Human genes 0.000 claims description 77
- 102200006539 rs121913529 Human genes 0.000 claims description 77
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 76
- 102200006538 rs121913530 Human genes 0.000 claims description 73
- 108091028732 Concatemer Proteins 0.000 claims description 72
- 102200006532 rs112445441 Human genes 0.000 claims description 70
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 59
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 48
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 40
- 206010069755 K-ras gene mutation Diseases 0.000 claims description 39
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 38
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 35
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 34
- -1 dihydrosudouridine Chemical compound 0.000 claims description 28
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims description 25
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 23
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 22
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 21
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 claims description 20
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 claims description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 20
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 19
- 108091007780 MiR-122 Proteins 0.000 claims description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 17
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 claims description 16
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 claims description 16
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 16
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 16
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 16
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 16
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 16
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims description 15
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 claims description 15
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 claims description 14
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 14
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 14
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 13
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 claims description 12
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 12
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 12
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 12
- LRFJOIPOPUJUMI-KWXKLSQISA-N 2-[2,2-bis[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienyl]-1,3-dioxolan-4-yl]-n,n-dimethylethanamine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCC1(CCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)OCC(CCN(C)C)O1 LRFJOIPOPUJUMI-KWXKLSQISA-N 0.000 claims description 11
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 11
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims description 11
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 claims description 11
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 claims description 10
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 10
- DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N ribothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 10
- ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 5-methoxyuridine Chemical compound O=C1NC(=O)C(OC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 9
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 9
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 9
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 9
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 9
- SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 2'-O-methyl uridine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C=C1 GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 8
- 230000005012 migration Effects 0.000 claims description 8
- 238000013508 migration Methods 0.000 claims description 8
- SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methyluridine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 0.000 claims description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 7
- 230000011712 cell development Effects 0.000 claims description 7
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 claims description 7
- KYEKLQMDNZPEFU-KVTDHHQDSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1,3,5-triazine-2,4-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)N=C1 KYEKLQMDNZPEFU-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 6
- MUSPKJVFRAYWAR-XVFCMESISA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)thiolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)S[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MUSPKJVFRAYWAR-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 6
- JUMHLCXWYQVTLL-KVTDHHQDSA-N 2-thio-5-aza-uridine Chemical compound [C@@H]1([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)N1C(=S)NC(=O)N=C1 JUMHLCXWYQVTLL-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 6
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 102200006541 rs121913530 Human genes 0.000 claims description 6
- 229950002916 avelumab Drugs 0.000 claims description 5
- 229960005386 ipilimumab Drugs 0.000 claims description 5
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 claims description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 5
- 102200006537 rs121913529 Human genes 0.000 claims description 5
- 102200006540 rs121913530 Human genes 0.000 claims description 5
- 229950007217 tremelimumab Drugs 0.000 claims description 5
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 claims description 4
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 claims description 4
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 claims description 4
- DGNMJYUPWDTKJB-ZDSKVHJSSA-N bis[(z)-non-2-enyl] 9-[4-(dimethylamino)butanoyloxy]heptadecanedioate Chemical compound CCCCCC\C=C/COC(=O)CCCCCCCC(OC(=O)CCCN(C)C)CCCCCCCC(=O)OC\C=C/CCCCCC DGNMJYUPWDTKJB-ZDSKVHJSSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 claims description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 claims description 3
- 101000840545 Bacillus thuringiensis L-isoleucine-4-hydroxylase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 claims description 3
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 206010052358 Colorectal cancer metastatic Diseases 0.000 claims description 3
- 101150012162 H-RAS gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 claims description 3
- 108010036972 HLA-A11 Antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 claims description 3
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 claims description 3
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims description 3
- 101001037256 Homo sapiens Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 claims description 3
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 claims description 3
- 102100040061 Indoleamine 2,3-dioxygenase 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001037255 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 claims description 3
- 101100215487 Sus scrofa ADRA2A gene Proteins 0.000 claims description 3
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 claims description 3
- 108010079206 V-Set Domain-Containing T-Cell Activation Inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 claims description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims description 3
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 claims description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 claims description 2
- NRLNQCOGCKAESA-KWXKLSQISA-N [(6z,9z,28z,31z)-heptatriaconta-6,9,28,31-tetraen-19-yl] 4-(dimethylamino)butanoate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCC(OC(=O)CCCN(C)C)CCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC NRLNQCOGCKAESA-KWXKLSQISA-N 0.000 claims 3
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 claims 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 claims 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 2
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 claims 1
- QCNWZROVPSVEJA-UHFFFAOYSA-N Heptadecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QCNWZROVPSVEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960003852 atezolizumab Drugs 0.000 claims 1
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 claims 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical group O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 claims 1
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 claims 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 abstract description 80
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 39
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 abstract 1
- 206010003402 Arthropod sting Diseases 0.000 description 109
- 208000003014 Bites and Stings Diseases 0.000 description 109
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 101001011382 Homo sapiens Interferon regulatory factor 3 Proteins 0.000 description 48
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 48
- 101001032342 Homo sapiens Interferon regulatory factor 7 Proteins 0.000 description 46
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 45
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 44
- 102100029843 Interferon regulatory factor 3 Human genes 0.000 description 38
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 38
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 36
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 35
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 34
- 102100038070 Interferon regulatory factor 7 Human genes 0.000 description 28
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 24
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 23
- 230000004044 response Effects 0.000 description 22
- 102100038192 Serine/threonine-protein kinase TBK1 Human genes 0.000 description 19
- 101710106944 Serine/threonine-protein kinase TBK1 Proteins 0.000 description 18
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 16
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 15
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 15
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 102100025752 CASP8 and FADD-like apoptosis regulator Human genes 0.000 description 12
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 12
- 102000053956 human IRF7 Human genes 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 101710100501 CASP8 and FADD-like apoptosis regulator Proteins 0.000 description 11
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 11
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 11
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 11
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 11
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 10
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 10
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 10
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 9
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 101000826387 Homo sapiens Signal transducer and activator of transcription 6 Proteins 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 9
- 102000053955 human IRF3 Human genes 0.000 description 9
- 102000054044 human STAT6 Human genes 0.000 description 9
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 9
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000598002 Homo sapiens Interferon regulatory factor 1 Proteins 0.000 description 8
- 101100452374 Mus musculus Ikbke gene Proteins 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 8
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 8
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 8
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 102100039788 GTPase NRas Human genes 0.000 description 7
- 101000744505 Homo sapiens GTPase NRas Proteins 0.000 description 7
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 7
- 101000595554 Homo sapiens TIR domain-containing adapter molecule 2 Proteins 0.000 description 7
- 101000649115 Homo sapiens Translocating chain-associated membrane protein 1 Proteins 0.000 description 7
- 102100036981 Interferon regulatory factor 1 Human genes 0.000 description 7
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 7
- 102100027965 Translocating chain-associated membrane protein 1 Human genes 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 7
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 7
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 6
- 101001109145 Homo sapiens Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 Proteins 0.000 description 6
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 6
- 102000010168 Myeloid Differentiation Factor 88 Human genes 0.000 description 6
- 108010077432 Myeloid Differentiation Factor 88 Proteins 0.000 description 6
- 102100022501 Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 Human genes 0.000 description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 6
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 229960002566 papillomavirus vaccine Drugs 0.000 description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 5
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 5
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 5
- 101000914211 Homo sapiens CASP8 and FADD-like apoptosis regulator Proteins 0.000 description 5
- 101001011442 Homo sapiens Interferon regulatory factor 5 Proteins 0.000 description 5
- 101001032341 Homo sapiens Interferon regulatory factor 9 Proteins 0.000 description 5
- 108091054729 IRF family Proteins 0.000 description 5
- 102100030131 Interferon regulatory factor 5 Human genes 0.000 description 5
- 102100038251 Interferon regulatory factor 9 Human genes 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 5
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 5
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 5
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- VRVXMIJPUBNPGH-XVFCMESISA-N 2-thio-dihydrouridine Chemical compound OC[C@H]1O[C@H]([C@H](O)[C@@H]1O)N1CCC(=O)NC1=S VRVXMIJPUBNPGH-XVFCMESISA-N 0.000 description 4
- 102100033189 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Human genes 0.000 description 4
- 101710101225 Diablo IAP-binding mitochondrial protein Proteins 0.000 description 4
- 101710156605 Diablo homolog, mitochondrial Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 4
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 4
- 101150103227 IFN gene Proteins 0.000 description 4
- 102000043138 IRF family Human genes 0.000 description 4
- 102100038069 Interferon regulatory factor 8 Human genes 0.000 description 4
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 4
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 4
- 101001043758 Mus musculus Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta Proteins 0.000 description 4
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 102000044116 human CFLAR Human genes 0.000 description 4
- 230000037449 immunogenic cell death Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 102100031256 Cyclic GMP-AMP synthase Human genes 0.000 description 3
- 108030002637 Cyclic GMP-AMP synthases Proteins 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 101001032345 Homo sapiens Interferon regulatory factor 8 Proteins 0.000 description 3
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 3
- 108010044012 STAT1 Transcription Factor Proteins 0.000 description 3
- 108010081691 STAT2 Transcription Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000004265 STAT2 Transcription Factor Human genes 0.000 description 3
- 102100029904 Signal transducer and activator of transcription 1-alpha/beta Human genes 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- RFCBNSCSPXMEBK-INFSMZHSSA-N c-GMP-AMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@@H](O)[C@H](N4C5=NC=NC(N)=C5N=C4)O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 RFCBNSCSPXMEBK-INFSMZHSSA-N 0.000 description 3
- PKFDLKSEZWEFGL-MHARETSRSA-N c-di-GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@@H](O)[C@H](N4C5=C(C(NC(N)=N5)=O)N=C4)O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 PKFDLKSEZWEFGL-MHARETSRSA-N 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 3
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 3
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 3
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 238000000734 protein sequencing Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 3
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 102100029647 Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD Human genes 0.000 description 2
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 101100508533 Drosophila melanogaster IKKbeta gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102100029974 GTPase HRas Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000584633 Homo sapiens GTPase HRas Proteins 0.000 description 2
- 101001043764 Homo sapiens Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101001043754 Homo sapiens Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 101000665442 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase TBK1 Proteins 0.000 description 2
- 101100540311 Human papillomavirus type 16 E6 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 description 2
- 102000016854 Interferon Regulatory Factors Human genes 0.000 description 2
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 2
- 102100026688 Interferon epsilon Human genes 0.000 description 2
- 101710147309 Interferon epsilon Proteins 0.000 description 2
- 102100022469 Interferon kappa Human genes 0.000 description 2
- 101150105104 Kras gene Proteins 0.000 description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 101100072787 Mus musculus Irf3 gene Proteins 0.000 description 2
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010019992 STAT4 Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000005886 STAT4 Transcription Factor Human genes 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100035533 Stimulator of interferon genes protein Human genes 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 102000049555 human KRAS Human genes 0.000 description 2
- 210000003297 immature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002743 insertional mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 108010080375 interferon kappa Proteins 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000014567 type I interferon production Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- RQFCJASXJCIDSX-UHFFFAOYSA-N 14C-Guanosin-5'-monophosphat Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O RQFCJASXJCIDSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GYBYENDYMBEUMS-QYCRHRGJSA-N 2-[2,2-bis[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienyl]-1,3-dioxolan-4-yl]-n-methylethanamine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCC1(CCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)OCC(CCNC)O1 GYBYENDYMBEUMS-QYCRHRGJSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- DZHQWVMWRUHHFF-GBNDHIKLSA-N 6-amino-5-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DZHQWVMWRUHHFF-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 102100037435 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Human genes 0.000 description 1
- 101710127675 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Proteins 0.000 description 1
- 230000028728 B cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000005724 C-terminal phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102100025597 Caspase-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710090338 Caspase-4 Proteins 0.000 description 1
- 102100038916 Caspase-5 Human genes 0.000 description 1
- 101710090333 Caspase-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100026693 FAS-associated death domain protein Human genes 0.000 description 1
- 102100039928 Gamma-interferon-inducible protein 16 Human genes 0.000 description 1
- 102100037388 Gasdermin-D Human genes 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000728679 Homo sapiens Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD Proteins 0.000 description 1
- 101000983528 Homo sapiens Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000911074 Homo sapiens FAS-associated death domain protein Proteins 0.000 description 1
- 101000960209 Homo sapiens Gamma-interferon-inducible protein 16 Proteins 0.000 description 1
- 101001026262 Homo sapiens Gasdermin-D Proteins 0.000 description 1
- 101100341161 Homo sapiens IRF7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001043761 Homo sapiens Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon Proteins 0.000 description 1
- 101001011663 Homo sapiens Mixed lineage kinase domain-like protein Proteins 0.000 description 1
- 101000981728 Homo sapiens Myeloid differentiation primary response protein MyD88 Proteins 0.000 description 1
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 1
- 101001089266 Homo sapiens Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000595548 Homo sapiens TIR domain-containing adapter molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101710090028 Inositol-3-phosphate synthase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010032038 Interferon Regulatory Factor-3 Proteins 0.000 description 1
- 108010092954 Interferon Regulatory Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100036342 Interleukin-1 receptor-associated kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710199015 Interleukin-1 receptor-associated kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023533 Interleukin-1 receptor-associated kinase 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710199010 Interleukin-1 receptor-associated kinase 4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012773 Laboratory assay Methods 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102100023727 Mitochondrial antiviral-signaling protein Human genes 0.000 description 1
- 101710142315 Mitochondrial antiviral-signaling protein Proteins 0.000 description 1
- 102100030177 Mixed lineage kinase domain-like protein Human genes 0.000 description 1
- 101000933115 Mus musculus Caspase-4 Proteins 0.000 description 1
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001043765 Mus musculus Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101100238610 Mus musculus Msh3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100079026 Mus musculus Myd88 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100141312 Mus musculus Ripk1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100098966 Mus musculus Ticam2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100022691 NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010001946 Pyrin Domain-Containing 3 Protein NLR Family Proteins 0.000 description 1
- 229940022005 RNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102100033729 Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102100036073 TIR domain-containing adapter molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091021474 TMEM173 Proteins 0.000 description 1
- 102000004399 TNF receptor-associated factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000922 TNF receptor-associated factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000003714 TNF receptor-associated factor 6 Human genes 0.000 description 1
- 108090000009 TNF receptor-associated factor 6 Proteins 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100040310 Z-DNA-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710181770 Z-DNA-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002223 anti-pathogen Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008350 antigen-specific antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008236 biological pathway Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000008711 chromosomal rearrangement Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 1
- PDXMFTWFFKBFIN-XPWFQUROSA-N cyclic di-AMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@@H](O)[C@H](N4C5=NC=NC(N)=C5N=C4)O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 PDXMFTWFFKBFIN-XPWFQUROSA-N 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000037437 driver mutation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012645 endogenous antigen Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N guanosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O RQFCJASXJCIDSX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000053365 human CHUK Human genes 0.000 description 1
- 102000053341 human IKBKB Human genes 0.000 description 1
- 102000053347 human IKBKE Human genes 0.000 description 1
- 102000054014 human IRF1 Human genes 0.000 description 1
- 102000051360 human TBK1 Human genes 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 238000011502 immune monitoring Methods 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 108010051621 interferon regulatory factor-8 Proteins 0.000 description 1
- 230000008316 intracellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 1
- 229940126582 mRNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 108091051828 miR-122 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 230000036438 mutation frequency Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005937 nuclear translocation Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 230000030648 nucleus localization Effects 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000006508 oncogene activation Effects 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000037438 passenger mutation Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000016412 positive regulation of cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000027317 positive regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000006010 pyroptosis Effects 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- 102000030938 small GTPase Human genes 0.000 description 1
- 108060007624 small GTPase Proteins 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000037436 splice-site mutation Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 208000015339 staphylococcus aureus infection Diseases 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 108091006106 transcriptional activators Proteins 0.000 description 1
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 1
- 230000010472 type I IFN response Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001164—GTPases, e.g. Ras or Rho
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/5005—Wall or coating material
- A61K9/5015—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 및 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA, 예를 들면, 면역 증강제를 인코드하는 mRNA의 면역조절 치료 조성물을 특징으로 한다. 본 발명은, 예를 들면, 항암 면역 반응을 자극하기 위한, 이의 사용 방법을 또한 특징으로 한다.
Description
관련 출원
본 출원은 2017년 2월 1일 출원된 미국 가특허출원 제 62/453,465; 2017년 3월 3일 출원된 미국 가특허출원 제 62/467,063; 2017년 4월 26일 출원된 미국 가특허출원 제 62/490,523; 및 2017년 8월 4일 출원된 미국 가특허출원 제 62/541,571의 이익을 주장한다. 상기 출원들의 전문은 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.
발명의 배경
면역 반응을 조절하는 능력은 암 및 병원성 감염의 치료를 비롯한 다양한 임상 상황들에서, 뿐만 아니라 백신 반응들을 강력하게 하여 보호 면역을 제공함에 있어서 유익하다. 질병들, 가령, 암 및 병원성 감염들에 관여하는 생물학적 경로 및/또는 분자들의 기능을 조절하기 위한 수많은 치료 툴들이 존재한다. 이들 툴들에는, 예를 들어, 소분자 억제제, 사이토카인 및 치료 항체들이 포함된다. 이들 툴들의 일부는 대상체에서의 면역 반응들을 조절함을 통해, 가령, 면역 반응들의 규칙(조절)을 조절하는 면역계 또는 면역 관문 억제제 항체들, 가령, 항-CTLA-4 또는 항-PD-L1 내에서 세포들의 활성을 조절하는 사이토카인에 의해 기능한다.
추가적으로, 병원체 항원들에 대한 면역 반응을 자극하고, 이로써 병원체들에 대한 차후 노출에 보호 면역을 제공하기 위해 백신들이 사용되어 왔다. 더욱 최근에는, 백신들은 종양 세포들에서 발견되는 항원들을 사용하여 개발되었으며 이로써 항-종양 면역반응을 개선시켰다. 백신에서 사용되는 항원(들) 이외에도, 백신에 대한 면역 반응을 더욱 북돋우기 위한 다른 물질들이 백신 제재에 포함되거나, 백신 제재와 함께 사용될 수 있다. 백신 반응을 개선시키는 이러한 제제들은 해당 분야에서 보강제로 지칭된다. 통상적으로 사용되는 백신 보강제의 예들에는 알루미늄 겔 및 염, 모노포스포릴 지질 A, MF59 수중유 에멀전, 프로인트 완전 보강제, 프로인트 불완전 보강제, 세척제 및 식물 사포닌이 포함된다. 이들 보강제는 전형적으로 단백질 또는 펩티드계 백신과 함께 사용된다. 다른 유형들의 백신들, 가령, RNA계 백신들을 현재 개발 중이다.
관심 항원에 대한 면역 반응을 개선시키기에 유효한 추가 물질들에 대한 수요가 해당 분야에 존재한다.
발명의 요약
본 명세서는 신체의 세포 기전이 관심 암 단백질 또는 이의 단편, 예컨대, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 생성하도록 안전하게 유도할 수 있는 RNA (예컨대, 전령 RNA (mRNA))를 포함하는 지질계 조성물, 가령, 지질 나노입자들을 포함하는, 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 구체예들에서, RNA는 변형된 RNA이다. mRNA 조성물 및/또는 이를 포함하는 지질 나노입자들을 포함하는 면역조절 치료 조성물은, 예를 들면, 삽입 돌연변이유발 가능성의 위험 없이 세포성 및 체액성 면역 모두를 포함하는, 균형잡힌 암에 대한 면역 반응을 유도함에 유용하다.
본 발명의 mRNA 조성물 및/또는 지질 나노입자들을 포함하는 면역조절 치료 조성물은 암의 유병률 또는 충족되지 않은 의학적 필요성의 수준에 따라 다양한 설정에서 이용될 수 있다. 본 발명의 mRNA 조성물 및 지질 나노입자들을 포함하는, 면역조절 치료 조성물은 다양한 단계 또는 전이 정도의 암을 치료 및/또는 예방하기 위해 이용될 수 있다. 본 발명의 면역조절 치료 조성물 및 지질 나노입자들은 훨씬 더 큰 항체 역가를 생성하고 암 백신을 비롯한 대안적인 항암 치료제보다 더 조기에 반응을 생성한다는 점에서 보다 우수한 성질을 가진다. 특정 이론에 제한되지 않고, 제공되는 조성물, 가령, mRNA 폴리뉴클레오티드는, RNA가 자연 세포 기전을 공동-선택 (co-opt)하기 때문에 번역시 적절한 단백질 입체형태를 생성하도록 보다 잘 설계된다. 생체외에서 제조되고 예상밖의 세포 반응을 촉발할 수 있는 종래의 치료제 및 백신과 달리, 제공된 조성물의 RNA는 보다 고유한 방식으로 세포 시스템에 제공된다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물을 제공한다: 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA, 그리고 선택적으로 대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA, 이 때 면역 반응은 다음을 특징으로 하는 세포성 또는 체액성 면역 반응을 포함함: (i) I형 인터페론 경로 신호전달을 자극, (ii) NFkB 경로 신호전달을 자극, (iii) 염증 반응을 자극, (iv) 사이토카인 생성을 자극, (v) 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극, 및 (vi) (i)-(v)의 임의의 조합; 및 제약학적으로 허용가능한 담체.
일부 양상들에서, 본 발명은 mRNA 조성물 및/또는 이를 포함하는 지질 나노입자들을 포함하고, 예를 들면, I형 인터페론 경로 신호전달을 자극, NFkB 경로 신호전달을 자극, 염증 반응을 자극, 사이토카인 생성을 자극 또는 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극함으로써 면역 반응을 개선하는 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 면역 증강제 mRNA에 의한 관심 항원에 대한 면역 반응의 개선은, 예를 들면, 사이토카인 생성의 자극, 세포성 면역 (T 세포 반응들), 가령, 항원-특이적 CD8+ 또는 CD4+ T 세포 반응들의 자극 및/또는 체액성 면역 (B 세포 반응들), 가령, 항원-특이적 항체 반응들의 자극을 가져온다.
일부 양상들에서, 본 발명은 활성화 종양유전자 돌연변이가 KRAS 돌연변이인 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, KRAS 돌연변이는 G12 돌연변이이다. 일부 양상들에서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, 및 G12R KRAS 돌연변이에서 선택된다. 다른 양상들에서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, 및 G12C KRAS 돌연변이에서 선택된다. 일부 양상들에서, KRAS 돌연변이는 G13 돌연변이이다. 일부 양상들에서, G13 KRAS 돌연변이는 G13D KRAS 돌연변이이다. 다른 양상들에서, 본 발명은 활성화 종양유전자 돌연변이가 H-RAS 또는 N-RAS 돌연변이인 면역조절 치료 조성물을 제공한다.
일부 구체예들에서 숙련된 기술자는 본 명세서에서 제공되는 지침을 기준으로 KRAS 돌연변이, HLA 아형 및 종양 유형을 선택하고 치료용 KRAS 백신을 제조할 것이다. 일부 구체예들에서 KRAS 돌연변이는 다음에서 선택된다: G12C, G12V, G12D, G13D. 일부 구체예들에서 HLA 아형은 다음에서 선택된다: A*02:01, C*07:01, C*04:01, C*07:02, HLA-A11 및/또는 HLA-C08. 일부 구체예들에서 종양 유형은 결장직장, 이자, 폐 (예컨대., 미소세포 폐암 (NSCLC)), 및 자궁내막에서 선택된다.
일부 구체예들에서, HRAS 돌연변이는 코돈 12, 코돈 13, 또는 코돈 61에서의 돌연변이이다. 일부 구체예들에서, HRAS 돌연변이는 12V, 61L, 또는 61R 돌연변이이다.
일부 구체예들에서, NRAS 돌연변이는 코돈 12, 코돈 13, 또는 코돈 61에서의 돌연변이이다. 일부 구체예들에서, NRAS 돌연변이는 12D, 13D, 61K, 또는 61R 돌연변이이다.
일부 양상들에서, 본 발명은 mRNA가 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물을 제공한다: 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA, 이 때 연쇄체는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 그리고 대상체에서 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함한다.
본 발명의 일부 구체예들은 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA를 포함하는 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 구체예들에서, 상기 펩티드 에피토프들 중 최소한 두 개는 하나의 글리신에 의해 서로 분리된다. 일부 구체예들에서, 연쇄체는 3-10개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함한다. 이러한 일부 구체예들에서, 펩티드 에피토프들 모두는 하나의 글리신에 의해 서로 분리된다. 다른 구체예들에서, 상기 펩티드 에피토프들 중 최소한 두 개는 링커없이 서로에 직접 연결된다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물을 제공한다: 1, 2, 3, 또는 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개 mRNA; 및 대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA. 일부 양상들에서, 상기 조성물은 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 4개의 mRNA는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 인코드한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 상기 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드가 10-30, 15-25, 또는 20-25개 아미노산 길이를 포함하는, 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함한다. 일부 양상들에서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 대상체에서 상기 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA가 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는, 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 V147L, N154S, V155M, R284M, R284K, R284T, E315Q, R375A, 및 이의 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이들을 포함한다.
일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 (예컨대, 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 가지는 또는 서열 번호: 139 또는 170에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는) V155M을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이들 V147L/N154S/V155M을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이들 R284M/V147L/N154S/V155M을 포함한다.
다른 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1-10 및 164 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 양상에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 139-148, 165,168, 170, 201-209 및 225 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위, 가령, 서열번호: 149에 제시된 것을 포함하는 3' UTR을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 대상체에서 상기 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA가 항시적 활성 인간 IRF3 폴리펩티드를 인코드하는, 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 한 양상에서, 항시적 활성 인간 IRF3 폴리펩티드는 S396D 돌연변이를 포함한다. 한 양상에서, 항시적 활성 인간 IRF3 폴리펩티드는 서열 번호: 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 서열 번호: 151 또는 212에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다. 한 양상에서, 항시적 활성 IRF3 폴리펩티드는, 예를 들면, 서열 번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 서열 번호: 150 또는 211에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 생쥐 IRF3 폴리펩티드이다.
일부 양상들에서, 본 발명은 대상체에서 상기 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA가 항시적 활성 인간 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는, 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 한 양상에서, 항시적 활성 인간 IRF7 폴리펩티드는 S475D, S476D, S477D, S479D, L480D, S483D, S487D, 및 이들의 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이들; 아미노산 247-467의 결실; 및 전술한 돌연변이들 및/또는 결실들의 조합을 포함한다. 한 구체예에서, 항시적 활성 인간 IRF7 폴리펩티드는 서열 번호: 14-18 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 한 구체예에서, 항시적 활성 인간 IRF7 폴리펩티드는 서열번호: 153-157 및 214-218 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다.
또 다른 양상들에서, 본 명세서는 MyD88, TRAM, IRF1, IRF8, IRF9, TBK1, IKKi, STAT1, STAT2, STAT4, STAT6, c-FLIP, IKKβRIPK1, TAK-TAB1 융합, DIABLO, Btk, 자기-활성화 카스파제-1 및 Flt3으로 구성된 그룹에서 선택된 폴리펩티드를 인코드하는 면역 증강제 mRNA를 제공한다.
일부 양상들에서, 본 명세서는 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물들을 제공하며, 상기 조성물은 암 치료제를 추가로 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 조성물은 억제성 면역관문 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 양상들에서, 억제성 면역관문 폴리펩티드는 PD-1, PD-L1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3으로 구성된 그룹에서 선택된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편이다.
다른 구체예들에서, 상기 조성물은 리콜 항원을 추가로 포함한다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 리콜 항원은 감염성 질병 항원이다.
일부 구체예들에서, 상기 조성물은 안정화제를 포함하지 않는다.
일부 양상들에서, 본 발명은 mRNA가 지질 나노입자에 제제화된, 전술한 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 양상들에서, 상기 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물 25이다.
일부 양상들에서, 본 명세서는 전술한 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물들을 제공하며, 이 때 각각의 mRNA는 최소한 하나의 화학적 변형을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4'-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2'-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 수도우리딘 또는 수도우리딘 유사체이다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘이다. 일부 양상들에서, 각 mRNA는 완전히 변형된 N1-메틸수도우리딘을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는, mRNA 조성물 및 지질계 조성물, 가령, 지질 나노입자들을 포함하는, 면역조절 치료 조성물을 제공한다: KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA, 및 선택적으로 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA; 및 및 제약학적으로 허용가능한 담체. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함한다.
일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드가 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, G12R, 및 G13D에서 선택되는, 전술한 구체예들 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D에서 선택된다.
일부 양상들에서, 본 발명은 mRNA가 둘 이상의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 전술한 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 1, 2, 3, 또는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개의 mRNA들을 포함하는, 전술한 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 상기 조성물은 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드가 10-30, 15-25, 또는 20-25개 아미노산 길이를 포함하는, 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함한다. 일부 양상들에서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 mRNA가 둘 이상의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지며 상기 연쇄체는 서열번호: 42-47, 73 및 137에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 상기 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 129-131, 133, 138, 167, 169, 193-195 및 197-198에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 조성물이 1, 2, 3, 또는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3 또는 4개의 mRNA를 포함하고, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드가 서열번호: 36-41, 72 및 125에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128, 132, 190-192 및 196에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 돌연변이체 인간 KRAS 항원 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 구조체를 포함하는, mRNA 조성물 및/또는 이를 포함하는 지질 나노입자들을 비롯한, 면역조절 치료 조성물을 제공하며, 예를 들면, 이 때 상기 mRNA (예컨대, 변형된 mRNA)는 서열번호: 48-71 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 인코드한다.
일부 양상들에서, 본 명세서는 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물들을 제공하며, 이 때 각각의 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화된다. 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화된다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING을 인코드하는 각 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화된다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mNRA는 동일한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 각 mRNA는 상이한 지질 나노입자에 제제화된다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 동일한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 mRNA는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA와 동일한 지질 나노입자에 제제화된다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 상이한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 mRNA는 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA와 동일한 지질 나노입자에 제제화된다.
일부 양상들에서, 본 명세서는 전술한 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 제공하며, 이 때 면역조절 치료 조성물은 지질 나노입자에 제제화되고, 지질 나노입자는 약 20-60%의 이온화가능한 아미노 지질: 5-25%의 인지질: 25-55%의 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 양상들에서, 상기 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물 25이다.
특정 구체예들에서, 지질 나노입자는 화합물 25 (화합물 25) (이온화가능한 아미노 지질로서), DSPC (인지질로서), 콜레스테롤 (스테롤로서) 및 PEG-DMG (PEG-변형된 지질로서)를 포함한다. 특정 구체예들에서, 지질 나노입자는 약 20-60%의 화합물 25:5-25%의 DSPC:25-55%의 콜레스테롤; 및 0.5-15%의 PEG-DMG의 몰비를 포함한다. 한 구체예에서, 지질 나노입자는 약 50%의 화합물 25: 약 10%의 DSPC: 약 38.5%의 콜레스테롤: 약 1.5%의 PEG-DMG의 몰비 (즉, 약 50:10:38.5:1.5 비율의 화합물 25:DSPC:콜레스테롤:PEG-DMG)를 포함한다. 한 구체예에서, 지질 나노입자는 50%의 화합물 25:10%의 DSPC:38.5%의 콜레스테롤:1.5%의 PEG-DMG의 몰비를 포함한다 (즉, 50:10:38.5:1.5 비율의 화합물 25:DSPC:콜레스테롤:PEG-DMG).
일부 양상들에서, 본 명세서는 전술한 또는 관련 구체예들 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물들을 제공하며, 이 때 각각의 mRNA는 최소한 하나의 화학적 변형을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4'-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2'-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 수도우리딘 또는 수도우리딘 유사체이다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘이다. 일부 양상들에서, 각 mRNA는 완전히 변형된 N1-메틸수도우리딘을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 지질 나노입자를 제공한다: 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA, 이 때 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드가 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는, 전술한 구체예들 중 어느 하나의 지질 나노입자를 제공한다. 일부 양상들에서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 지질 나노입자를 제공한다: 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA, 이 때 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고, 상기 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA. 일부 양상들에서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 138, 서열번호: 167 또는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139, 서열번호: 168, 또는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 지질 나노입자를 제공한다:
G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 1 mRNA;
G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA;
G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 3 mRNA;
G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 4 mRNA; 및
항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 포함하는 제 5 mRNA. 특정 구체예들에서, 상기 mRNA들은 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 및 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 한 구체예에서, mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
전술한 지질 나노입자의 일부 양상들에서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함한다. 일부 양상들에서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함한다.
전술한 지질 나노입자의 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128, 132, 190-192 및 196에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
전술한 지질 나노입자의 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139, 서열번호: 168, 또는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 명세서는 전술한 구체예들 중 어느 하나의 지질 나노입자를 제공하며, 이 때 지질 나노입자는 약 20-60%의 이온화가능한 아미노 지질: 5-25%의 인지질: 25-55%의 스테롤; 및 0.5-15%의 PEG-변형된 지질의 몰비를 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 양상들에서, 상기 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물 25이다.
일부 양상들에서, 본 명세서는 전술한 구체예들 중 어느 하나의 지질 나노입자를 제공하며, 이 때 각각의 mRNA는 최소한 하나의 화학적 변형을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4'-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2'-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 수도우리딘 또는 수도우리딘 유사체이다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘이다. 일부 양상들에서, 각 mRNA는 완전히 변형된 N1-메틸수도우리딘을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 암 치료요법에서 사용하기 위한 전술한 또는 관련 지질 나노입자들 중 어느 하나를 포함하는 약품을, 선택적으로 암 치료요법에서 사용하기 위한 지침들과 함께 제공한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 제 1 지질 나노입자를 제공한다: G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 제 2 지질 나노입자를 제공한다: G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 제 3 지질 나노입자를 제공한다: G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 제 4 지질 나노입자를 제공한다: G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA.
전술한 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 지질 나노입자의 일부 양상들에서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함한다. 일부 양상들에서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함한다.
전술한 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 지질 나노입자의 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126 또는 190에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
전술한 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 지질 나노입자의 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 127 또는 191에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
전술한 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 지질 나노입자의 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 72에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 132 또는 196에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
전술한 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 지질 나노입자의 일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 41에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 128 또는 192에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
전술한 제 1, 제 2, 제 3, 및 제 4 지질 나노입자의 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139, 서열번호: 168, 또는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 암 치료요법에서 사용하기 위한 전술한 또는 관련 지질 나노입자들 중 어느 하나를 포함하는 약품을, 선택적으로 암 치료요법에서 사용하기 위한 지침들과 함께 제공한다. 일부 양상들에서, 본 발명은 암 치료요법에서 사용하기 위한 전술한 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 지질 나노입자들 중 어느 하나를 포함하는 약품을, 선택적으로 암 치료요법에서 사용하기 위한 지침들과 함께 제공한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 암 치료요법에서 사용하기 위한 제 1, 제 2, 제 3 및 제 4 지질 나노입자들 중 어느 하나를 포함하는 약품을, 선택적으로 암 치료요법에서 사용하기 위한 지침들과 함께 제공하며, 이 때:
(i) 제 1 지질 나노입자는 다음을 포함한다: G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(ii) 제 2 지질 나노입자는 다음을 포함한다: G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(iii) 제 3 지질 나노입자는 다음을 포함한다: G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및
(iv) 제 4 지질 나노입자는 다음을 포함한다: G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA; 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA.
전술한 또는 관련된 임의의 양상들에서, 본 명세서는 다음을 포함하는 대상체 치료 방법을 제공한다: 전술한 또는 관련된 임의의 면역조절 치료 조성물들 또는 전술한 또는 관련된 임의의 지질 나노입자를 암을 가지는 대상체에 투여하는 것. 일부 양상들에서, 면역조절 치료 조성물 또는 지질 나노입자는 암 치료제와 조합하여 투여된다. 일부 양상들에서, 면역조절 치료 조성물 또는 지질 나노입자는 억제성 면역관문 폴리펩티드와 조합하여 투여된다. 일부 양상들에서, 억제성 면역관문 폴리펩티드는 PD-1, PD-L1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3으로 구성된 그룹에서 선택된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편이다.
본 명세서에서 제공되는 방법들은 암을 가진 대상체를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구체예들에서, 암은 이자, 복막, 대장, 소장, 담관, 폐, 자궁내막, 난소, 생식관, 위장관, 자궁경부, 위, 요로, 결장, 직장, 및 조혈 및 림프 조직의 암에서 선택된다. 일부 구체예들에서, 암은 결장직장암이다. 일부 구체예들에서, 암은 췌장암이다. 일부 구체예에서, 암은 폐암, 가령, 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 일부 구체예들에서, 암은 결장직장암, 이자암 및 폐암 (예컨대, NSCLC)으로 구성된 그룹에서 선택된다.
본 명세서의 mRNA (예컨대, mmRNA) 구조체 (예컨대, 면역 증강제 mRNA, 항원-인코딩 mRNA, 또는 이의 조합)는, 예를 들면, 5' UTR, 상기 폴리펩티드를 인코드하는 코돈 최적화된 개방 해독 프레임, 3' UTR 및 연결된 뉴클레오시드들의 3' 꼬리 영역을 포함할 수 있다. 한 구체예에서, mRNA는 하나 이상의 마이크로RNA (miRNA) 결합 부위들을 추가로 포함한다.
한 구체예에서, 본 명세서의 변형된 mRNA 구조체는 완전히 변형된다. 예를 들면, 한 구체예에서, mmRNA는 수도우리딘 (ψ수도우리딘 (ψ및 5-메틸-시티딘 (m5C), 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ), 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ) 및 5-메틸-시티딘 (m5C), 2-싸이오우리딘(s2U), 2-싸이오우리딘 및 5-메틸-시티딘 (m5C), 5-메톡시-우리딘 (mo5U), 5-메톡시-우리딘 (mo5U) 및 5-메틸-시티딘 (m5C), 2'-O-메틸 우리딘, 2'-O-메틸 우리딘 및 5-메틸-시티딘 (m5C), N6-메틸-아데노신 (m6A) 또는 N6-메틸-아데노신 (m6A) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)을 포함한다. 또 다른 구체예에서, mmRNA는 수도우리딘 (ψN1-메틸수도우리딘 (m1ψ), 2-싸이오우리딘, 4'-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메톡시우리딘, 또는 2'-O-메틸 우리딘, 또는 이의 조합을 포함한다. 또한 또 다른 구체예에서, mmRNA는 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ), 5-메톡시-우리딘 (mo5U), 5-메틸-시티딘 (m5C), 수도우리딘 (ψα-싸이오-구아노신, 또는 α-싸이오-아데노신, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 양상들에서, mmRNA는 수도우리딘 또는 수도우리딘 유사체를 포함한다. 일부 양상들에서, mmRNA는 N1-메틸수도우리딘을 포함한다. 일부 양상들에서, 각 mmRNA는 완전히 변형된 N1-메틸수도우리딘을 포함한다.
일부 구체예들에서 면역조절 치료 조성물에서 RNA 폴리뉴클레오티드의 용량은 1-5 μg, 5-10 μg, 10-15 μg, 15-20 μg, 10-25 μg, 20-25 μg, 20-50 μg, 30-50 μg, 40-50 μg, 40-60 μg, 60-80 μg, 60-100 μg, 50-100 μg, 80-120 μg, 40-120 μg, 40-150 μg, 50-150 μg, 50-200 μg, 80-200 μg, 100-200 μg, 100-300 μg, 120-250 μg, 150-250 μg ,180-280 μg, 200-300 μg ,30-300 μg ,50-300 μg ,80-300 μg, 100-300 μg, 40-300 μg, 50-350 μg ,100-350 μg, 200-350 μg, 300-350 μg, 320-400 μg, 40-380 μg, 40-100 μg, 100-400 μg, 200-400 μg, 또는 투약 당 300-400 μg이다. 일부 구체예들에서, 면역조절 치료 조성물은 진피내 또는 근육내 주사로 대상체에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 면역조절 치료 조성물은 대상체에게 0일차에 투여된다. 일부 구체예들에서, 면역조절 치료 조성물의 2차 투약은 대상체에게 21일차에 투여된다.
일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 25 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 10 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 30 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 100 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 50 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 75 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 150 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 400 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 300 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드 200 마이크로그램 용량이 대상체에 투여되는 면역조절 치료 조성물에 포함된다. 일부 구체예들에서, RNA 폴리뉴클레오티드는 말단 림프절과 비교하여 국소 림프절에서 100배 더 높은 수준으로 축적된다. 다른 구체예들에서 면역조절 치료 조성물은 화학적으로 변형되며 다른 구체예들에서 면역조절 치료 조성물은 화학적으로 변형되지 않는다.
일부 구체예들에서, 유효량은 총 1-100 μg 용량이다. 일부 구체예들에서, 유효량은 총 100 μg 용량이다. 일부 구체예들에서, 유효량은 25 μg 용량으로 대상체에게 총 1 또는 2회 투여된다. 일부 구체예들에서, 유효량은 100 μg 용량으로 대상체에게 총 2회 투여된다. 일부 구체예들에서, 유효량은 1 μg -10 μg, 1 μg -20 μg, 1 μg -30 μg, 5 μg -10 μg, 5 μg -20 μg, 5 μμg -30 μg, 5 μg -40 μg, 5 μg -50 μg, 10 μg -15 μg, 10 μg -20 μg, 10 μg -25 μg, 10 μg-30 μg ,10 μg-40 μg ,10 μg-50 μg ,10 μg-60 μg ,15 μg g-20 μg, 15μg -25 μg, 15 μg -30 μg, 15 μg g-40 μg, 15μg -50μg, 20 μg-25μg, 20 μg-30 μg ,20 μg-40 μg, 20 μg-50 μg, 20 μg-60 μg, 20 μg -70 μg, 20 μg -75μg, 30 μg -35 μg, 30 μg -40 μg, 30 μg -45 μg, 30 μg -50 μg, 30 μg -60 μg, 30 μg -70 μg, 30 μg -75μg 용량이며, 이는 총 1 또는 2회 이상 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 양상들에서, 본 발명은 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA를 포함하는 조성물 (예컨대, 백신)을 제공하며, 이 때 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 또는 20:1의 KRAS:STING 질량비로, 또는 대안적으로 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 또는 1:20의 STING:KRAS 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, 상기 mRNA는 5:1의 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 대 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 질량비 (5:1의 KRAS:STING 질량비 또는 대안적으로 1:5의 STING:KRAS 질량비)로 존재한다. 일부 양상들에서, 상기 mRNA는 10:1의 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 대 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 질량비 (10:1의 KRAS:STING 질량비 또는 대안적으로 1:10의 STING:KRAS 비율)로 존재한다.
본 발명의 다른 양상들은 다음을 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다:
4개 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA, 이 때 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고;
항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 포함하는 mRNA;
이 때 상기 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함.
일부 양상들에서, 본 발명의 다른 양상들은 다음을 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다:
G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 1 mRNA;
G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA;
G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 3 mRNA;
G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 4 mRNA;
항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 포함하는 제 5 mRNA;
이 때 상기 제 1, 제 2, 제 3, 제 4 및 제 5 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함.
일부 전술한 그리고 관련 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함한다. 일부 양상들에서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함한다. 일부 양상들에서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 138, 서열번호: 167 또는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139, 서열번호: 168, 또는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 전술한 및 관련 양상들에서, 지질 나노입자는 1:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 mRNA를 포함한다. 일부 양상들에서, mRNA는 2:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 3:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 4:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 6:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 7:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 8:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 9:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, mRNA는 10:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 변형된 mRNA를 포함하는 지질 나노입자에 관한 것이다. 한 구체예에서, 지질 나노입자는 리포좀이다. 또 다른 구체예에서, 지질 나노입자는 양이온성 및/또는 이온화가능한 아미노 지질을 포함한다. 한 구체예에서, 양이온성 및/또는 이온화가능한 아미노 지질은 2,2-다이리놀레일-4-메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA) 또는 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA)이다. 일부 양상들에서, 상기 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 한 구체예에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화합물 25이다. 한 구체예에서, 지질 나노입자는 지질 나노입자의 외부 표면에 접합된 표적화 모이어티를 추가로 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 본 발명의 변형된 mmRNA 또는 본 발명의 지질 나노입자, 및 제약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약학적 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양상에서, 본 명세서는 관심 항원(들)에 대한 면역 반응 개선 방법에 관한 것으로, 이 방법은 관심 항원(들) 및 관심 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 본 명세서의 mRNA 조성물, 또는 이의 지질 나노입자, 또는 이의 제약학적 조성물을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 그 결과 관심 항원에 대한 면역 반응이 대상체에서 개선된다. 한 양상에서, 대상체에서 면역 반응을 개선하는 것은 사이토카인 생성을 자극하는 것을 포함한다 (예컨대, IFN-γ 또는 TNF-α). 또 다른 양상에서, 대상체에서 면역 반응을 개선하는 것은 항원-특이적 CD8+ T 세포 활성, 예컨대, 프라이밍, 증식 및/또는 생존을 자극하는 것 (예컨대, 효과기/기억 T 세포 집단을 증가시키는 것)을 포함한다. 한 양상에서, 대상체에서 면역 반응을 개선하는 것은 항원-특이적 CD4+ T 세포 활성을 자극하는 것 (예컨대, 도움 T 세포 활성을 증가시키는 것)을 포함한다. 다른 양상들에서, 대상체에서 면역 반응을 개선하는 것은 B 세포 반응들을 자극하는 것 (예컨대, 항체 생성을 증가시키는 것)을 포함한다.
한 양상에서, 본 발명은 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응 개선 방법을 제공하며, 이 때 대상체에게 두 개의 상이한 면역 증강제 mRNA (예컨대, mmRNA) 구조체들을 동시에 또는 순차적으로 투여한다 (이 때 하나 또는 둘 모두의 구조체들은 또한 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA) 구조체를 인코드하거나 이와 함께 투여됨). 한 양상에서, 대상체에게 I형 인터페론 경로 신호전달을 자극하는 면역 증강제 mRNA 조성물을 대상체에게 투여하기 전에 수지상 세포 발달 또는 활성을 자극하는 면역 증강제 mmRNA 조성물을 투여한다.
다른 양상들에서, 본 명세서는 필요로 하는 대상체에서 종양에 대한 면역 반응 자극 방법을 제공하며, 이 때 이 방법은 종양 항원(들)을 인코드하는 최소한 하나의 mRNA 구조체 및 종양 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 구조체를 포함하는 조성물, 또는 이의 지질 나노입자, 또는 이의 제약학적 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 그 결과 종양에 대한 면역 반응이 대상체에서 자극된다. 한 양상에서, 종양은 간암, 결장직장암, 이자암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 흑색종, 자궁경부암 또는 두경부암이다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 다음을 포함하는 조성물을 제공한다:
(i) 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고, 이 때 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하는, 제 1 mRNA, 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재하고;
그리고 제약학적으로 허용가능한 담체.
전술한 조성물의 일부 양상들에서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 제 1 mRNA는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열 번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 2 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 제 2 mRNA는 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, miR-122 마이크로RNA 결합 부위는 서열번호: 175에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA 각각은 폴리 A 꼬리를 포함한다. 일부 양상들에서, 폴리 A 꼬리는 약 100개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 5' 캡 1 구조를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 최소한 하나의 화학적 변형을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘이다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형된다. 일부 양상들에서, 상기 제 2 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형된다. 일부 양상들에서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 완충용액을 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 다음을 포함하는 조성물을 제공한다:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA, 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA,
이 때 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 각각 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되고, 그리고
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재하고;
그리고 제약학적으로 허용가능한 담체.
전술한 조성물의 한 양상에서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 완충용액을 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 1:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 2:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 3:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 4:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 6:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 7:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 8:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 9:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 제 1 및 제 2 mRNA가 10:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물을 제공한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 지질 나노입자에 제제화되는 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함한다. 일부 양상들에서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 및 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 근육내 전달을 위해 제제화되는 조성물을 제공한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 지질 나노입자를 제공한다:
(i) 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고, 이 때 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하는, 제 1 mRNA; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
전술한 지질 나노입자의 일부 양상들에서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 제 1 mRNA는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열 번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 2 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 제 2 mRNA는 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함한다. 일부 양상들에서, miR-122 마이크로RNA 결합 부위는 서열번호: 175에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 폴리 A 꼬리를 포함한다. 일부 양상들에서, 폴리 A 꼬리는 약 100개의 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 5' 캡 1 구조를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 최소한 하나의 화학적 변형을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘이다. 일부 양상들에서, 상기 제 1 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형된다. 일부 양상들에서, 상기 제 2 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형된다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 지질 나노입자를 제공한다:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA; 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA,
이 때 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 각각 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되고, 그리고
이 때 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
전술한 지질 나노입자의 일부 양상들에서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I)의 화합물을 포함한다. 일부 양상들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물 25이다. 일부 양상들에서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 및 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 명세서는 상기 지질 나노입자, 및 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 제약학적 조성물은 근육내 전달을 위해 제제화된다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체, 또는 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연함에 사용하기 위한 제약학적 조성물을 제공하며, 이 때 상기 치료는 제 2 조성물과 조합된 조성물의 투여를 포함하고, 제 2 조성물은 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 명세서는 개체에서 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 약제의 제조에서 지질 나노입자, 및 선택적으로 허용가능한 담체의 용도를 제공하며, 이 때 약제는 지질 나노입자 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하고 상기 치료는 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합된 약제의 투여를 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 명세서는 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체, 또는 제약학적 조성물을 포함하는 용기, 및 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물의 투여 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 양상들에서, 패키지 삽입물은 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물을, 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한, 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합으로 투여하기 위한 지침들을 추가로 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 명세서는 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제, 또는 제약학적 조성물, 및 상기 약제를 단독으로 또는, 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한, 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합으로 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 양상들에서, 키트는 제 1 약제를 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 제 2 약제 이전에, 이와 동시에 또는 이에 후속하여 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 명세서는 지질 나노입자, 조성물, 또는 이의 용도, 또는 본 명세서에 기재된 지질 나노입자 또는 조성물을 포함하는 키트를 제공하며, 이 때 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항-PD1 항체이고, 이 때 항-PD1 항체는 펨브롤리주맙이다.
관련 양상들에서, 본 명세서는 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 지질 나노입자들, 또는 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 조성물들을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기를 축소 또는 감소 또는 종양 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
관련 양상들에서, 본 명세서는 대상체에게 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 지질 나노입자들, 또는 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 조성물들을 투여하는 것을 포함하는, 암을 보유한 대상체에서 항-종양 반응 유도 방법을 제공한다. 일부 양상들에서, 항-종양 반응은 T-세포 반응을 포함한다. 일부 양상들에서, T-세포 반응은 CD8+ T 세포들을 포함한다.
전술한 방법들의 일부 양상들에서, 조성물은 근육내 주사로 투여된다.
전술한 방법들의 일부 양상들에서, 상기 방법은 면역관문 억제제 폴리펩티드, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제 2 조성물을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항-PD1 항체이고, 이 때 항-PD1 항체는 펨브롤리주맙이다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 정맥내 주사로 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2 내지 3주 마다 1회 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2주 마다 1회 또는 3주 마다 1회 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 지질 나노입자 또는 이의 제약학적 조성물의 투여 이전에, 이와 동시에, 또는 이에 후속하여 투여된다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 G12D, G12V, G13D 또는 G12C에서 선택된 조직학적으로 확인된 KRAS 돌연변이를 가진다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 전이성 결장직장암을 가진다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 비소 세포 폐암 (NSCLC)을 가진다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 이자암을 가진다.
다른 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함함으로써, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기의 축소 또는 감소, 종양 성장의 억제 또는 항-종양 반응의 유도 방법을 제공하며, 이로써 대상체에서 종양 크기가 축소 또는 감소, 종양 성장이 억제 또는 항-종양 반응이 유도된다: KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 1 mRNA, 및 선택적으로, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 2 mRNA, 및 선택적으로 이 때 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 질량비로 존재하고; 그리고 제약학적으로 허용가능한 담체. 일부 양상들에서, 상기 조성물은 1, 2, 3, 또는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개의 mRNA들을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 조성물은 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함한다.
다른 양상들에서, 상기 방법은 제 1, 제 2, 제 3, 제 4, 및 제 5 mRNA를 포함하는 면역조절 치료 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 이 때
제 1 mRNA는 G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 2 mRNA는 G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 3 mRNA는 G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 4 mRNA는 G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고; 및
제 5 mRNA는 항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 포함하고,
이 때 상기 제 1, 제 2, 제 3, 제 4 및 제 5 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
일부 양상들에서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128 및 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
다른 양상들에서, 상기 방법은 둘 이상의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA를 포함하는 면역조절 치료 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함한다. 일부 양상들에서, 연쇄체는 서열번호: 42-47, 73 및 137에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상들에서, 상기 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 129-131, 133 및 138에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 지질 나노입자를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기의 감소 또는 축소, 종양 성장의 억제 또는 항-종양 반응의 유도 방법을 제공한다:
(i)
다음으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제 1 mRNA:
(a)
G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(b)
G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(c)
G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(d)
G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(e)
2, 3, 또는 4개 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA, 이 때 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 그리고
(f)
(a)-(d)에 제시된 mRNA들의 임의의 조합; 그리고
(ii)
항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 2 mRNA, 선택적으로
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재하며,
이로써 대상체에서 종양 크기가 감소 또는 축소, 종양 성장이 억제 또는 항-종양 반응이 유도된다.
일부 양상들에서, 지질 나노입자는 다음을 포함한다:
(i) (a)-(d)에 제시된 mRNA들의 조합; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함.
일부 양상들에서, 지질 나노입자는 다음을 포함한다:
(i) 제 1 mRNA는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고, 이 때 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하고; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는 지질 나노입자를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기의 감소 또는 축소, 종양 성장의 억제 또는 항-종양 반응의 유도 방법을 제공한다:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA; 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA,
이 때 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 각각 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되고, 그리고 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 질량비로 존재한다. 일부 양상들에서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 및 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함한다.
일부 양상들에서, 지질 나노입자 또는 조성물은 근육내 주사로 투여된다.
일부 양상들에서, 상기 항-종양 반응은 T-세포 반응, 가령, CD8+ T 세포 반응을 포함한다.
일부 양상들에서, 본 발명은 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 면역조절 치료 조성물 또는 지질 나노입자를, 면역관문 억제제 폴리펩티드 또는 이를 인코드하는 폴리뉴클레오티드, 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제 2 조성물과 조합하여 (이전에, 동시에 또는 연속하여) 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 종양 크기의 축소 또는 감소, 종양 성장의 억제 또는 항-종양 반응의 유도 방법을 제공한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체이다.
일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체이다.
일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 정맥내 주사로 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2 내지 3주 마다 1회 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2주 마다 1회 또는 3주 마다 1회 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 지질 나노입자 또는 조성물의 투여 이전에, 이와 동시에, 또는 이에 후속하여 투여된다.
일부 양상들에서, 본 발명은 G12D, G12V, G13D 또는 G12C에서 선택된 조직학적으로 확인된 KRAS 돌연변이를 가지는 대상체의 치료 방법을 제공한다. 일부 양상들에서, 대상체는 HLA-A11 및/또는 HLA-C*08에서 선택된 조직학적으로 확인된 HLA 아형을 가진다.
일부 양상들에서, 종양은 전이성 결장직장암이다. 일부 양상들에서, 종양은 비소세포 폐암 (NSCLC)이다. 일부 양상들에서, 종양은 이자암이다.
일부 양상들에서, 상기 지질 나노입자 또는 조성물의 투여 이전에, 이와 동시에, 또는 이에 후속하여 대상체에게 화학치료제가 투여된다.
도면의 간단한 설명
도 1은 항시적 활성 STING mmRNA 구조체들로 형질감염된 TF1a 세포들에서 IFN-γ 생성의 자극을 보여주는 막대 그래프이다.
도 2는 항시적 활성 STING 구조체들에 의한 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)의 활성화를 보여주는 막대 그래프이다. STING 변이체 23a 및 23b는 서열 번호: 1에 해당하고, STING 변이체 42는 서열 번호: 2에 해당하고, STING 변이체 19, 21a 및 21b는 서열 번호: 3에 해당하고, STING 변이체 41은 서열 번호: 4에 해당하고, STING 변이체 43은 서열 번호: 5에 해당하고, STING 변이체 45는 서열 번호: 6에 해당하고, STING 변이체 46은 서열 번호: 7에 해당하고, STING 변이체 47은 서열 번호: 8에 해당하고, STING 변이체 56은 서열 번호: 9에 해당하고 그리고 STING 변이체 57은 서열 번호: 10에 해당한다.
도 3A-3B는 항시적 활성 IRF3 구조체들 (도 3A) 또는 항시적 활성 IRF7 구조체들 (도 3B)에 의한 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)의 활성화를 보여주는 막대 그래프이다. IRF3 변이체 1, 3 및 4는 서열 번호: 12에 해당하고 IRF3 변이체 2 및 5는 서열 번호: 11에 해당한다 (변이체들은 상이한 태그들을 가진다). IRF7 변이체 36은 서열 번호: 18에 해당하고 변이체 31은 서열 번호: 18의 쥐과 버전이다. IRF7 변이체 32는 서열 번호: 17에 해당하고 IRF7 변이체 33은 서열 번호: 14에 해당한다.
도 4는 항시적 활성 cFLIP 및 IKKβ mRNA 구조체들에 의한 NFκ루시페라제 리포터 유전자의 활성화를 보여주는 막대 그래프이다.
도 5는 항시적 활성 RIPK1 mRNA 구조체들에 의한 NFκ루시페라제 리포터 유전자의 활성화를 보여주는 그래프이다.
도 6은 DIABLO mmRNA 구조체들로 형질감염된 SKOV3 세포들에서 TNF-α 유도를 보여주는 막대 그래프이다.
도 7은 DIABLO mmRNA 구조체들로 형질감염된 SKOV3 세포들에서 인터루킨 6 (IL-6) 유도를 보여주는 막대 그래프이다.
도 8A-8B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 MC38 항원-특이적 백신 구조체 (ADRvax)로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 8A) 또는 35일차 (도 8B) CD8+ 비장세포들의 IFN-γ 세포내 염색 (ICS)에 의한 MC38 신생항원-특이적 반응들을 보여주는 그래프이다.
도 9A-9B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 MC38 신생-항원 백신 구조체 (ADRvax)로 면역화된 생쥐들의, 비장 또는 PBMC에서의 간 CD45+ 세포들 중 CD8b+ 세포들의 백분율 (도 9A) 또는 비장 또는 PBMC에서의 CD8b+ 세포들 중 CD62L저 세포들의 백분율 (도 9B)을 보여주는 그래프이다.
도 10은 cBioPortal을 사용하여 식별된 결장직장암에서의 NRAS 및 KRAS 돌연변이 빈도를 도시한다.
도 11A-11B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 제 1 면역화 후 21일차에 면역화된 생쥐들의 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. 도 11A는 IFN-γICS에 대한 E7-특이적 반응들을 보여준다. 도 11B는 TNF-α ICS에 대한 E7-특이적 반응들을 보여준다.
도 12A-12B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 D8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. 도 12A는 IFN-γ ICS에 대한 E6-특이적 반응들을 보여준다. 도 12B는 TNF-α ICS에 대한 E6-특이적 반응들을 보여준다.
도 13A-13B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 13A) 또는 53일차 (도 13B) CD8+ 비장세포들의 IFN-γ 세포내 염색 (ICS)에 대한 E7-특이적 반응들을 보여주는 그래프이다.
도 14A-14B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체로 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 14A) 또는 53일차 (도 14B) 비장 세포들에 대한 간 CD45+ 세포들 중의 CD8b+ 세포들의 백분율을 보여주는 그래프이다.
도 15A-15B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 15A) 또는 53일차 (도 15B) CD8b+ 비장세포들의 E7-MHC1-사합체 염색을 보여주는 그래프이다.
도 16A-16D는 다수의 E7-사합체+ CD8+ 세포들이 “효과기 기억” CD62L저 표현형을 가짐을 21일차 대 53일차 E7-사합체+ CD8 세포들을 비교하여 보여주는 그래프로서, 이는 이러한 “효과기-기억” CD62L저 표현형이 본 연구 전체에 걸쳐 유지되었음을 나타낸다. 도 16A (21일차) 및 16B (53일차)는 효과기 기억 CD62L저 표현형을 가진 CD8의 증가된 %를 보여준다. 도 16C 및 16D는 E7-사합체+ CD8의 증가된 %가 CD62L저 임을 보여준다.
도 17A-17C는 HPV E7을 발현시키는 TC1 종양으로 시험감염 전 또는 시험감염시에 STING 면역 증강제 mRNA 구조체 (단독 또는 항-CTLA-4 또는 항-PD1 치료와 조합하여)와 함께 HPV E6/E7 구조체로 제시된 바와 같이 예방적으로 백신화된 생쥐의 종양 부피를 보여주는 그래프로서, HPV E6/E7 + STING 치료에 의한 종양 성장의 억제를 보여준다. 특정 생쥐들을 -14일차 및 -7일차에 용해성 E6/E7 + STING으로 (도 17A) 또는 세포내 E6/E7 + STING으로 (도 17B) 처리하고 1일차에 종양 시험감염시켰다. 다른 생쥐들을 1일차 및 8일차에 용해성 E6/E7 + STING으로 처리하고 (도 17C), 1일차에 종양 시험감염시켰다.
도 18A-18I는 HPV E7을 발현시키는 TC1 종양으로 시험감염 후, 단독으로 또는 항-CTLA-4 (도 18B) 또는 항-PD1 치료와 조합하여 (도 18C), STING 면역 증강제 mRNA 구조체 (도 18A)와 함께 HPV E6/E7 구조체로 제시된 바와 같이 치료적으로 백신화된 생쥐의 종양 부피를 보여주는 그래프로서, HPV E6/E7 + STING 치료에 의한 종양 성장 억제를 보여준다. 도 18D-18I는 대조 치료를 보여준다.
도 19는 1차 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 STING 면역 증강제와 공동제제화된 ADR 백신 구조체로 면역화된 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. CD8+ 세포들은 돌연변이체 ADR 항원 조성물 (3개의 펩티드들을 포함) 또는 야생형 ADR 조성물 (대조)로 재자극되었다.
도 20은 1차 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 STING 면역 증강제와 공동제제화된 ADR 백신 구조체로 면역화된 생쥐들의 TNF-α에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. CD8+ 세포들은 돌연변이체 ADR 항원 조성물 (3개의 펩티드들을 포함) 또는 야생형 ADR 조성물 (대조)로 재자극되었다.
도 21A-21C는 1차 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 STING 면역 증강제와 공동제제화된 ADR 백신 구조체로 면역화된 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. CD8+ 세포들은 ADR 항원 조성물 내 함유된 돌연변이체 또는 야생형 (대조) 펩티드로 재자극되었다. 도 21A는 ADR 조성물 내 Adpk1 펩티드에 대한 반응들을 보여준다. 도 21B는 ADR 조성물 내 Reps1 펩티드에 대한 반응을 보여준다. 도 21C는 ADR 조성물 내 Dpagt1 펩티드에 대한 반응을 보여준다.
도 22는 제시된 상이한 Ag: STING 비율의 CA-132 및 STING 면역 증강제의 공동제제로 처리된 생쥐들로부터 IFN-γ에 대한 ELISpot 분석으로 측정한, CA-132 백신 내 MHC I형 에피토프에 대한 항원-특이적 T 세포 반응들을 보여주는 그래프이다.
도 23A-23B는 STING 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체로 면역화된 생쥐의 Ag:STING 비율 연구에 대한 결과를 보여준다. 도 23A는 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 면역화된 생쥐의, IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포의 세포내 염색 (ICS)를 보여준다. 도 23B는 제시된 Ag:STING 비율로 면역화된 생쥐의 21일차 CD8+ 비장세포의 H2-Kb/E7 펩티드-사량체 염색을 보여준다.
도 24A-24C는 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화 후, HPV16 E6 펩티드 풀 (pool)(도 24A), HPV16 E7 펩티드 풀 (도 24B) 또는 배지 (음성 대조) (도 24C)로 체외 자극한 시노몰구스 원숭이의 CD8+ T 세포들에 대한 TNF 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 막대 그래프이다.
도 25A-25C는 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화 후, HPV16 E6 펩티드 풀 (pool)(도 25A), HPV16 E7 펩티드 풀 (도 25B) 또는 배지 (음성 대조) (도 25C)로 체외 자극한 시노몰구스 원숭이의 CD8+ T 세포들에 대한 IL-2 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 막대 그래프이다.
도 26은 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화된/면역화된 시노몰구스 원숭이의 혈청에서 항-E6 IgG에 대한 ELISA 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 27은 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화된/면역화된 시노몰구스 원숭이의 혈청에서 항-E7 IgG에 대한 ELISA 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 28은 1:10 STING:Ag 비율의 HPV 백신 + STING 구조체로 처리된 시노몰구스 원숭이의 25일차 혈청의 2배 연속 희석에서 항-E6 IgG 에 대한 ELISA 결과를 보여주는 그래프이다.
도 29A-29B는 제시된 STING:Ag 비율의 HPV 백신 + STING 구조체로 처리된 시노몰구스 원숭이의 25일차 혈청에서 항-E6 IgG (도 29A) 또는 항-E7 IgG (도 29B)에 대한 ELISA 결과의 계산된 역가 값들을 보여주는 그래프이다.
도 30은 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 KRAS-G12V 펩티드로 체외 자극한 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 31은 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 KRAS-G12D 펩티드로 체외 자극한 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 32는 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 HLA*A11 대립유전자로 바이러스 형질전환되고 KRAS-G12V로 펄스된 Cos7 세포들과 체외 공배양된 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 33은 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 HLA*A11 대립유전자로 바이러스 형질전환되고 KRAS-G12D로 펄스된 Cos7 세포들과 체외 공배양된 생쥐들의 IFN-g에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 34는 A11 바이러스 에피토프 연쇄체 + STING 구조체로 면역화된 후 개개 바이러스 에피토프로 체외 자극된 생쥐들의 IFN-g에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 1은 항시적 활성 STING mmRNA 구조체들로 형질감염된 TF1a 세포들에서 IFN-γ 생성의 자극을 보여주는 막대 그래프이다.
도 2는 항시적 활성 STING 구조체들에 의한 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)의 활성화를 보여주는 막대 그래프이다. STING 변이체 23a 및 23b는 서열 번호: 1에 해당하고, STING 변이체 42는 서열 번호: 2에 해당하고, STING 변이체 19, 21a 및 21b는 서열 번호: 3에 해당하고, STING 변이체 41은 서열 번호: 4에 해당하고, STING 변이체 43은 서열 번호: 5에 해당하고, STING 변이체 45는 서열 번호: 6에 해당하고, STING 변이체 46은 서열 번호: 7에 해당하고, STING 변이체 47은 서열 번호: 8에 해당하고, STING 변이체 56은 서열 번호: 9에 해당하고 그리고 STING 변이체 57은 서열 번호: 10에 해당한다.
도 3A-3B는 항시적 활성 IRF3 구조체들 (도 3A) 또는 항시적 활성 IRF7 구조체들 (도 3B)에 의한 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)의 활성화를 보여주는 막대 그래프이다. IRF3 변이체 1, 3 및 4는 서열 번호: 12에 해당하고 IRF3 변이체 2 및 5는 서열 번호: 11에 해당한다 (변이체들은 상이한 태그들을 가진다). IRF7 변이체 36은 서열 번호: 18에 해당하고 변이체 31은 서열 번호: 18의 쥐과 버전이다. IRF7 변이체 32는 서열 번호: 17에 해당하고 IRF7 변이체 33은 서열 번호: 14에 해당한다.
도 4는 항시적 활성 cFLIP 및 IKKβ mRNA 구조체들에 의한 NFκ루시페라제 리포터 유전자의 활성화를 보여주는 막대 그래프이다.
도 5는 항시적 활성 RIPK1 mRNA 구조체들에 의한 NFκ루시페라제 리포터 유전자의 활성화를 보여주는 그래프이다.
도 6은 DIABLO mmRNA 구조체들로 형질감염된 SKOV3 세포들에서 TNF-α 유도를 보여주는 막대 그래프이다.
도 7은 DIABLO mmRNA 구조체들로 형질감염된 SKOV3 세포들에서 인터루킨 6 (IL-6) 유도를 보여주는 막대 그래프이다.
도 8A-8B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 MC38 항원-특이적 백신 구조체 (ADRvax)로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 8A) 또는 35일차 (도 8B) CD8+ 비장세포들의 IFN-γ 세포내 염색 (ICS)에 의한 MC38 신생항원-특이적 반응들을 보여주는 그래프이다.
도 9A-9B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 MC38 신생-항원 백신 구조체 (ADRvax)로 면역화된 생쥐들의, 비장 또는 PBMC에서의 간 CD45+ 세포들 중 CD8b+ 세포들의 백분율 (도 9A) 또는 비장 또는 PBMC에서의 CD8b+ 세포들 중 CD62L저 세포들의 백분율 (도 9B)을 보여주는 그래프이다.
도 10은 cBioPortal을 사용하여 식별된 결장직장암에서의 NRAS 및 KRAS 돌연변이 빈도를 도시한다.
도 11A-11B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 제 1 면역화 후 21일차에 면역화된 생쥐들의 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. 도 11A는 IFN-γICS에 대한 E7-특이적 반응들을 보여준다. 도 11B는 TNF-α ICS에 대한 E7-특이적 반응들을 보여준다.
도 12A-12B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 D8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. 도 12A는 IFN-γ ICS에 대한 E6-특이적 반응들을 보여준다. 도 12B는 TNF-α ICS에 대한 E6-특이적 반응들을 보여준다.
도 13A-13B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 13A) 또는 53일차 (도 13B) CD8+ 비장세포들의 IFN-γ 세포내 염색 (ICS)에 대한 E7-특이적 반응들을 보여주는 그래프이다.
도 14A-14B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체로 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 14A) 또는 53일차 (도 14B) 비장 세포들에 대한 간 CD45+ 세포들 중의 CD8b+ 세포들의 백분율을 보여주는 그래프이다.
도 15A-15B는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체들로 면역화된 생쥐들의 21일차 (도 15A) 또는 53일차 (도 15B) CD8b+ 비장세포들의 E7-MHC1-사합체 염색을 보여주는 그래프이다.
도 16A-16D는 다수의 E7-사합체+ CD8+ 세포들이 “효과기 기억” CD62L저 표현형을 가짐을 21일차 대 53일차 E7-사합체+ CD8 세포들을 비교하여 보여주는 그래프로서, 이는 이러한 “효과기-기억” CD62L저 표현형이 본 연구 전체에 걸쳐 유지되었음을 나타낸다. 도 16A (21일차) 및 16B (53일차)는 효과기 기억 CD62L저 표현형을 가진 CD8의 증가된 %를 보여준다. 도 16C 및 16D는 E7-사합체+ CD8의 증가된 %가 CD62L저 임을 보여준다.
도 17A-17C는 HPV E7을 발현시키는 TC1 종양으로 시험감염 전 또는 시험감염시에 STING 면역 증강제 mRNA 구조체 (단독 또는 항-CTLA-4 또는 항-PD1 치료와 조합하여)와 함께 HPV E6/E7 구조체로 제시된 바와 같이 예방적으로 백신화된 생쥐의 종양 부피를 보여주는 그래프로서, HPV E6/E7 + STING 치료에 의한 종양 성장의 억제를 보여준다. 특정 생쥐들을 -14일차 및 -7일차에 용해성 E6/E7 + STING으로 (도 17A) 또는 세포내 E6/E7 + STING으로 (도 17B) 처리하고 1일차에 종양 시험감염시켰다. 다른 생쥐들을 1일차 및 8일차에 용해성 E6/E7 + STING으로 처리하고 (도 17C), 1일차에 종양 시험감염시켰다.
도 18A-18I는 HPV E7을 발현시키는 TC1 종양으로 시험감염 후, 단독으로 또는 항-CTLA-4 (도 18B) 또는 항-PD1 치료와 조합하여 (도 18C), STING 면역 증강제 mRNA 구조체 (도 18A)와 함께 HPV E6/E7 구조체로 제시된 바와 같이 치료적으로 백신화된 생쥐의 종양 부피를 보여주는 그래프로서, HPV E6/E7 + STING 치료에 의한 종양 성장 억제를 보여준다. 도 18D-18I는 대조 치료를 보여준다.
도 19는 1차 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 STING 면역 증강제와 공동제제화된 ADR 백신 구조체로 면역화된 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. CD8+ 세포들은 돌연변이체 ADR 항원 조성물 (3개의 펩티드들을 포함) 또는 야생형 ADR 조성물 (대조)로 재자극되었다.
도 20은 1차 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 STING 면역 증강제와 공동제제화된 ADR 백신 구조체로 면역화된 생쥐들의 TNF-α에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. CD8+ 세포들은 돌연변이체 ADR 항원 조성물 (3개의 펩티드들을 포함) 또는 야생형 ADR 조성물 (대조)로 재자극되었다.
도 21A-21C는 1차 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 STING 면역 증강제와 공동제제화된 ADR 백신 구조체로 면역화된 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS)을 보여주는 그래프이다. CD8+ 세포들은 ADR 항원 조성물 내 함유된 돌연변이체 또는 야생형 (대조) 펩티드로 재자극되었다. 도 21A는 ADR 조성물 내 Adpk1 펩티드에 대한 반응들을 보여준다. 도 21B는 ADR 조성물 내 Reps1 펩티드에 대한 반응을 보여준다. 도 21C는 ADR 조성물 내 Dpagt1 펩티드에 대한 반응을 보여준다.
도 22는 제시된 상이한 Ag: STING 비율의 CA-132 및 STING 면역 증강제의 공동제제로 처리된 생쥐들로부터 IFN-γ에 대한 ELISpot 분석으로 측정한, CA-132 백신 내 MHC I형 에피토프에 대한 항원-특이적 T 세포 반응들을 보여주는 그래프이다.
도 23A-23B는 STING 면역 증강제 mRNA 구조체와 공동제제화된 HPV E6/E7 백신 구조체로 면역화된 생쥐의 Ag:STING 비율 연구에 대한 결과를 보여준다. 도 23A는 면역화 후 21일차에 제시된 Ag:STING 비율로 면역화된 생쥐의, IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포의 세포내 염색 (ICS)를 보여준다. 도 23B는 제시된 Ag:STING 비율로 면역화된 생쥐의 21일차 CD8+ 비장세포의 H2-Kb/E7 펩티드-사량체 염색을 보여준다.
도 24A-24C는 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화 후, HPV16 E6 펩티드 풀 (pool)(도 24A), HPV16 E7 펩티드 풀 (도 24B) 또는 배지 (음성 대조) (도 24C)로 체외 자극한 시노몰구스 원숭이의 CD8+ T 세포들에 대한 TNF 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 막대 그래프이다.
도 25A-25C는 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화 후, HPV16 E6 펩티드 풀 (pool)(도 25A), HPV16 E7 펩티드 풀 (도 25B) 또는 배지 (음성 대조) (도 25C)로 체외 자극한 시노몰구스 원숭이의 CD8+ T 세포들에 대한 IL-2 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 막대 그래프이다.
도 26은 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화된/면역화된 시노몰구스 원숭이의 혈청에서 항-E6 IgG에 대한 ELISA 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 27은 HPV 백신 + STING 구조체들로 백신화된/면역화된 시노몰구스 원숭이의 혈청에서 항-E7 IgG에 대한 ELISA 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 28은 1:10 STING:Ag 비율의 HPV 백신 + STING 구조체로 처리된 시노몰구스 원숭이의 25일차 혈청의 2배 연속 희석에서 항-E6 IgG 에 대한 ELISA 결과를 보여주는 그래프이다.
도 29A-29B는 제시된 STING:Ag 비율의 HPV 백신 + STING 구조체로 처리된 시노몰구스 원숭이의 25일차 혈청에서 항-E6 IgG (도 29A) 또는 항-E7 IgG (도 29B)에 대한 ELISA 결과의 계산된 역가 값들을 보여주는 그래프이다.
도 30은 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 KRAS-G12V 펩티드로 체외 자극한 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 31은 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 KRAS-G12D 펩티드로 체외 자극한 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 32는 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 HLA*A11 대립유전자로 바이러스 형질전환되고 KRAS-G12V로 펄스된 Cos7 세포들과 체외 공배양된 생쥐들의 IFN-γ에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 33은 돌연변이체 KRAS 백신 + STING 구조체로 면역화된 후 HLA*A11 대립유전자로 바이러스 형질전환되고 KRAS-G12D로 펄스된 Cos7 세포들과 체외 공배양된 생쥐들의 IFN-g에 대한 CD8+ 비장세포들에 있어서의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
도 34는 A11 바이러스 에피토프 연쇄체 + STING 구조체로 면역화된 후 개개 바이러스 에피토프로 체외 자극된 생쥐들의 IFN-g에 대한 CD8+ 비장세포들의 세포내 염색 (ICS) 결과들을 보여주는 그래프이다.
상세한 설명
본 발명은 신체의 세포 기전이 관심 암 단백질 또는 이의 단편, 예컨대, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 생성하도록 안전하게 유도할 수 있는 하나 이상의 RNA (예컨대, 전령 RNA (mRNAs))를 포함하는, mRNA 조성물 및/또는 이를 포함하는 지질 나노입자들을 비롯한, 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 구체예들에서, RNA는 변형된 RNA이다. 본 발명의 면역조절 치료 조성물 및 지질 나노입자는, 예를 들면, 삽입 돌연변이유발 가능성의 위험 없이 세포성 및 체액성 면역 모두를 포함하는, 균형잡힌 암에 대한 면역 반응을 유도함에 유용하다.
따라서, 일부 양상들에서, 본 발명은 다음을 포함하는, 지질계 조성물, 가령, 지질 나노입자를 비롯한, 면역조절 치료 조성물을 제공한다: 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 가지는 하나 이상의 mRNA, 그리고 선택적으로 대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 가지는 하나 이상의 mRNA, 이 때 면역 반응은 다음을 특징으로 하는 세포성 또는 체액성 면역 반응을 포함함: (i) I형 인터페론 경로 신호전달을 자극, (ii) NFkB 경로 신호전달을 자극, (iii) 염증 반응을 자극, (iv) 사이토카인 생성을 자극, (v) 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극, 및 (vi) (i)-(v)의 임의의 조합; 및 제약학적으로 허용가능한 담체.
한 양상에서, 본 발명은 4가지 상이한 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 (예컨대, KRAS G12D, G12C, G12V 및 G13D)를 포함하는 면역조절 치료 조성물을 제공하며, 이는 결장직장암, 이자 암종, 및 비소 세포 폐 암종 중 어느 하나를 가지는 환자들을 치료할 수 있다. 4가지 상이한 돌연변이들 그리고 3가지 상이한 암들을 표적하는 능력은 본 명세서에 제공되는 조성물 및 방법의 중요한 이점이다.
대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 또한 본 명세서에서 "면역 증강제 mRNA" 또는 "면역 증강제를 인코드하는 mRNA" 또는 간단히 "면역 증강제"로 지칭된다. 개선된 면역 반응은 세포성 반응, 체액성 반응 또는 둘 모두일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 “세포성” 면역 반응은 T 세포가 관여하는 또는 T 세포에 의해 배개되는 면역 반응을 포함하고자 하는 것이며, 반면 “체액성” 면역 반응은 B 세포가 관여하는 또는 B 세포에 의해 매개되는 면역 반응을 포함하고자 하는 것이다. 면역 증강제를 인코드하는 mRNA는, 예를 들면, 다음에 의하여 면역 반응을 개선할 수 있다:
(i) I형 인터페론 경로 신호전달을 자극;
(ii) NFkB 경로 신호전달을 자극;
(iii) 염증 반응을 자극;
(iv) 사이토카인 생성을 자극; 또는
(v) 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극; 그리고
(vi) (i)-(v)의 임의의 조합.
본 명세서에서 사용되는 “형 인터페론 경로 신호전달을 자극하는 것”은 I형 인터페론 신호전달 경로의 하나 이상의 성분들을 활성화하는 것 (예컨대, 이러한 성분들의 인산화, 이량체화 등을 변형시켜 상기 경로를 활성화하는 것), 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)로부터의 전사를 자극하는 것 및/또는 I형 인터페론 (예컨대, IFN-α, IFN-β, IFN-ε, IFN-κ 및/또는 IFN-ω의 생성 또는 분비를 자극하는 것을 포함하고자 한다. 본 명세서에서 사용되는 “경로 신호전달을 자극하는 것”은 NFkB 신호전달 경로의 하나 이상의 성분들을 활성화하는 것 (예컨대, 이러한 성분들의 인산화, 이량체화 등을 변형시켜 상기 경로를 활성화하는 것), NFkB 부위로부터의 전사를 자극하는 것 및/또는 NFkB에 의해 발현이 조절되는 유전자 산물의 생성을 자극하는 것을 포함하고자 한다. 본 명세서에서 사용되는 “염증 반응을 자극하는 것”은 염증성 사이토카인 (I형 인터페론, IL-6 및/또는 TNFα을 포함하나 이에 제한되는 것은 아님)의 생성을 자극하는 것을 포함하고자 한다. 본 명세서에서 사용되는 "수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극하는 것”은 수지상 세포 성숙, 증식 및/또는 기능적 활성을 직접 또는 간접적으로 자극하는 것을 포함하고자 한다.
본 발명은 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 (본 명세서에서 "관심 항원"으로도 지칭됨)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하고 화학적으로 변형된 mRNA (mmRNA)를 비롯한 면역 증강제 mRNA 또는 면역 증강제 mRNA들로도 지칭되는, 하나 이상의 mRNA 구조체들을 포함하는, mRNA 조성물 및/또는 이를 포함하는 지질 나노입자들을 비롯한 조성물을 제공한다. 본 발명의 면역 증강제 mRNA는, 예를 들면, I형 인터페론 경로 신호전달을 활성화함으로써, 그 결과 관심 항원 (즉, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들))에 대한 항원-특이적 반응들이 자극되어, 면역 반응을 개선한다.
본 명세서의 면역 증강제 mRNA는 면역 증강제 mRNA와 함께 대상체에 투여되는 외인성 항원에 대한 면역 반응들을 개선한다 (예컨대, 면역 증강제 mRNA와 함께 공동제제화되어 공동투여되는 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드들)을 인코드하는 mRNA 구조체 또는 면역 증강제 mRNA와 별도로 제제화되고 투여되는 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들)을 인코드하는 mRNA 구조체). 면역 증강제 mRNA의 투여는 대상체에서, 예를 들면, 사이토카인 생성, T 세포 반응 (예컨대, 항원-특이적 CD8+ 또는 CD4+ T 세포 반응) 또는 B 세포 반응 (예컨대, 항원-특이적 항체 생성)을 자극함으로써 대상체의 면역 반응을 개선한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 하나 이상의 mRNA 구조체 (예컨대, 하나 이상의 mmRNA 구조체)를 포함하는 mRNA 조성물 및 지질 나노입자들을 비롯한 조성물을 제공하며, 이 때 하나 이상의 mRNA 구조체는 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들)을 인코드하고, 동일 또는 별도의 mRNA 구조체에서, 관심 항원에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드한다. 일부 양상들에서, 본 발명은 면역 반응을 개선하는 면역 증강제 mRNA를, 단독으로 또는 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들)을 인코드하는 mRNA와 조합하여 포함하는, 나노입자들, 예컨대, 지질 나노입자들을 제공한다. 본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 임의의 mRNA를 포함하는 제약학적 조성물들 또는 본 명세서에 기재된 임의의 mRNA를 포함하는 나노입자들, 예컨대, 지질 나노입자들을 제공한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들)을 인코드하는 하나 이상의 mRNA 및 관심 펩티드(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA, 또는 이의 지질 나노입자, 또는 이의 제약학적 조성물을 대상체에 투여함으로써, 대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들)에 대한 면역 반응이 개선되는, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들)에 대한 면역 반응 개선 방법들을 제공한다. 이러한 면역 반응 개선 방법들은 예를 들면, 대상체에서 종양에 대한 면역원성 반응을 자극하기 위해 사용될 수 있다.
관심 암 항원
본 발명의 면역 증강제 mRNA는 면역 반응의 개선이 필요한 임의의 유형의 항원과의 조합에 유용하며, 관심 항원, 가령, 종양 항원에 대한 면역 반응들을 개선하기 위한 최소한 하나의 관심 항원을 인코드하는 mRNA 서열들을 함께 (동일 또는 별도의 mRNA 구조체 상에) 포함한다. 그러므로, 본 발명의 면역 증강제 mRNA는, 예를 들면, mRNA 백신 반응들을 개선함으로써, 유전 보강제로 작용한다.
활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드
한 구체예에서, 관심 항원(들)은 종양 항원이다. 한 구체예에서, 종양 항원은 종양 네오에피토프, 예컨대, 종양 항원의 돌연변이체 펩티드를 포함한다. 한 구체예에서, 종양 항원은 Ras 항원이다. 암에서 Ras 돌연변이들의 종합적인 연구결과가 해당 분야에 기재되어 있다 (Prior, I.A. 등 (2012) Cancer Res. 72:2457-2467). 따라서, 암과 관련된 최소한 하나의 돌연변이를 포함하는 Ras 아미노산 서열이 관심 항원으로 사용될 수 있다. 한 구체예에서, 종양 항원은 돌연변이체 KRAS 항원이다. 돌연변이체 KRAS 항원들은 특정 치료제들에 대한 후천 내성에 관계되어 있다 (예컨대, Misale, S. 등 (2012) Nature 486:532-536; Diaz, L.A. 등 (2012) Nature 486:537-540 참고).
mRNA 조성물을 비롯한 기능적 면역조절 치료 조성물을 제조하기 위한 시도가 이루어져 왔으나, 이들 RNA 조성물의 치료적 효능은 아직 완전히 구축되지 못했다. 꽤 놀랍게도, 발명자들은 유의하게 개선된, 그리고 많은 면에서 개선된 T 세포 반응들을 비롯한 상승작용적 면역 반응을 가져오는 mRNA 면역조절 치료 조성물을 전달하기 위한 일 분류의 제제들을 발견하였다. KRAS는 사람 암에 있어서 가장 빈번히 돌연변이되는 종양유전자이다(~15%). 이러한 KRAS 돌연변이들은 대부분 몇 군데 "핫스팟"에서 보존되며 종양유전자를 활성화시킨다.
본 발명의 면역조절 치료 조성물은 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드, 가령, KRAS 돌연변이 펩티드를 포함한다. 기존의 연구는 종양발생 돌연변이에 특이적인 T 세포들을 상승시키는 제한된 능력을 보여주었다. 이러한 연구 대부분은 가장 흔한 HLA 대립유전자와 관련하여 이루어졌다 (A2, 백인의 ~50%에서 발생). 보다 최근의 연구는 덜 흔한 HLA 대립유전자 (A11, C8)와 관련하여 점 돌연변이들에 대한 특이적 T 세포들의 생성을 조사하였다. 이들의 결과는 암 치료에 있어서 중요한 의미를 가진다. 종양발생 돌연변이는 많은 암들에서 흔하다. 이들 돌연변이들을 표적하고 종양을 사멸시키기에 충분한 T 세포를 생성하는 능력은 암 치료요법에 폭넓게 적용될 수 있다. mRNA를 사용한 항원들의 전달이 펩티드 백신들의 전달에 비해 이러한 현저한 이점을 가질 것이라는 점은 꽤 놀랍다. 그러므로 본 발명은, 일부 양상들에서, mRNA 형태로 생체내 전달되는 활성화 종양발생 돌연변이 항원들이 T 세포 효과기의 생성 및 기억 반응들을 유의하게 개선한다는 놀라운 결과와 연관된다.
HLA 분류 I 분자들은 2개의 폴리펩티드 사슬들 (중쇄 및 경쇄)로 이루어진 매우 다형의 막경유 당단백질이다. 인간에서 주조직 적합성 복합체인 인간 백혈구 항원은 각 개체에 특이적이며 유전적 특성들을 가진다. 분류 I 중쇄들은 다음 3가지 유전자들에 의해 인코드된다: HLA-A, HLA-B 및 HLA-C. HLA 분류 I 분자들은 T 림프구에 내인성 항원들을 제시함으로써 면역 반응을 구축함에 중요하며, 이는 세포독성 T 세포들에 의한 종양 세포 제거를 초래하는 면역 반응들의 연쇄를 개시한다. HLA 분류 I 항원들의 생성 수준 변화는 악성종양에서 광범위한 현상이며 항-종양 T-세포 기능의 유의한 억제를 수반한다. 이는 면역-감시를 피하기 위해 암 세포들에 의해 사용되는 주된 기전 중 하나를 나타낸다. 하향조절된 HLA 분류 I 항원 수준이 NSCLC 종양의 90%에서 탐지되었다 (n=65). HLA의 감소 또는 손실이 이자 종양 샘플들의 76%에서 탐지되었다 (n=19). 결장암에서 HLA 분류 I 항원의 발현은 종양 샘플들의 96%에서 두드러지게 감소되거나 탐지할 수 없었다 (n=25).
축적되는 증거는 종양 세포들이 면역 감시를 벗어나기 위해 다음과 같은 2가지 일반적인 전략들을 이용함을 제시한다: 면역선택 (열등한 면역원성 종양 세포 변이체) 및 면역파괴 (면역계의 파괴). HLA 분류 I 항원의 변화와 KRAS 코돈 12 돌연변이들의 존재 간의 상관관계가 입증되었으며, 이는 암 진행에 있어서 HLA 분류 I 항원 조절에 대한 KRAS 코돈 12 돌연변이들의 유발 효과 가능성을 제시한다. 많은 흔한 암 돌연변이들은 고-친화성 (IC50 <= 50 nM)으로 HLA 분류 I 대립유전자들에 결합하는 것으로 예측되며 이는 예방적 암 백신화에 적합할 수 있다.
면역조절 치료제 개발에 있어서 표적되는 폴리펩티드 서열들에 대해 원하는 면역 반응 (예컨대, T-세포 반응들)을 이끌어내는 암 항원들의 생성은 여전히 도전 과제로 남아있다. 본 발명은 이러한 개발과 관련된 장애물을 극복하기 위한 기술에 관한 것이다. 본 발명의 기술을 이용함으로써, 적절한 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 선택하고 생체내 효과적인 전달을 위한 펩티드를 인코드하는 mRNA를 제제화함으로써 원하는 면역 반응을 이끌어낼 수 있다.
면역조절 치료 조성물은 펩티드계 또는 DNA 백신에 대한 독특한 치료적 대안을 제공한다. 면역조절 치료 조성물을 내포하는 mRNA가 세포에 전달될 때, mRNA는 세포내 기전에 의해 폴리펩티드로 번역될 것이며, 이러한 세포내 기전은 이후 이러한 폴리펩티드를 MDC 상에서 제시되어 종양에 대한 면역 반응을 자극할 수 있는 민감성 단편들로 가공할 수 있다.
본 명세서에 기재된 면역조절 치료 조성물은 최소한 하나의 암 항원 폴리펩티드 또는 이의 면역원성 단편 (예컨대, 암에 대한 면역 반응을 유도할 수 있는 면역원성 단편)을 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 최소한 하나의 리보핵산 (RNA) 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 항원 펩티드는 활성화 종양발생 돌연변이를 포함한다. 일부 바람직한 구체예들에서 상기 조성물은 활성화 종양발생 돌연변이들의 혼합물의 복수의 에피토프들이다. 많은 활성화 종양발생 돌연변이들은 해당 분야에 공지되어 있다.
종양유전자들이 활성화될 때 이들은 세포 예정사를 억제하고 및/또는 이상 세포 증식을 유발할 수 있다. 이러한 종양유전자 활성화는 암을 초래할 수 있다. KRAS 유전자 (Ki-ras2 Kirsten 쥐 육종 바이러스 종양유전자 동족체)는 소형 GTPase 트랜스덕터 (transductor) 단백질을 인코드하는 종양유전자이다. KRAS는 외부 신호들을 세포 핵으로 전달하고 세포 분열 조절에 기여한다. KRAS 유전자에서 활성화 돌연변이들은 활성과 비활성 상태 사이를 전환시키는 KRAS 단백질의 능력을 손상시킨다. KRAS 활성화는 세포 형질전환 및 표피 성장 인자 수용체들을 표적하는 화학요법 및 생물학적 요법들에 대한 증가된 내성을 초래한다. (Jancik, Sylwia 외 Clinical Relevance of KRAS in Human Cancers, Journal of Biomedicine and Biotechnology,Volume 2010 Article ID 150960 (2010)). 인간 KRAS 아미노산 서열이 아래 제공된다 (UniProtKB P01116). KRAS 돌연변이는 많은 암들에서 흔하며, G12는 가장 흔한 KRAS 돌연변이들의 부위이다.
>sp|P01116|1-186
MTEYKLVVVGAGGVGKSALTIQLIQNHFVDEYDPTIEDSYRKQVVIDGETCLLDILDTAGQEEYSAMRDQYMRTGEGFLCVFAINNTKSFEDIHHYREQIKRVKDSEDVPMVLVGNKCDLPSRTVDTKQAQDLARSYGIPFIETSAKTRQRVEDAFYTLVREIRQYRLKKISKEEKTPGCVKIKKC (서열번호: 166)
돌연변이체 N-RAS 단백질들은 특정 유형의 암들에서 매우 보편적이며 암 백신으로 유용하다. 예를 들어, 피부 흑색종의 29%가 RAS 돌연변이와 관련되며, 이들 중 94%가 N-RAS 기원이다. 이는 흑색종 사망의 대다수를 차지하는 가장 공격적인 형태의 흑색종의 약 2,500건의 새로운 US 사례/년을 나타낸다. (Channing Der, Are All RAS Proteins Created Equal in Cancer?, September 22, 2014, cancer.gov). 매년 30,280건의 새로운 다발골수종 사례들이 존재하며 이들 중 26%는 NRAS*이다. 이는 매년 ~6,100건의 새로운 NRAS* 사례들을 나타낸다. 그러므로, 본 명세서에 기재된 N-Ras 백신들은 일부 구체예들에서 흑색종 및 다발 골수종 뿐만 아니라 NRAS 돌연변이들이 상주하는 다른 악성종양들의 치료에서 유용하다.
따라서, 일부 양상들에서, 본 발명은 치료 백신접종의 표적으로 사용하기 위하여, 하나 이상의 종양유전자들에서 특정 활성화 돌연변이들 (미스센스 SNV에 제한되지 않음)로부터 생성된 펩티드 서열들을 인코드하는 그리고 종종 대안적 스플라이싱을 가져오는, mRNA를 제공한다. 일부 구체예들에서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 KRAS 돌연변이이다. 일부 구체예들에서, KRAS 돌연변이는 G12 돌연변이이다. 일부 구체예들에서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, 및 G12R KRAS 돌연변이에서 선택되고, 예컨대, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, 및 G12S KRAS 돌연변이에서 선택된다. 일부 구체예들에서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, 및 G12C KRAS 돌연변이에서 선택된다. 다른 구체예들에서, KRAS 돌연변이는 G13 돌연변이이고, 예컨대, G13 KRAS 돌연변이는 G13D KRAS 돌연변이이다. 일부 구체예들에서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 H-RAS 또는 N-RAS 돌연변이이다.
한 구체예에서, 하나 이상의 mRNA들은 G12D, G12V, G13D 및 G12C, 그리고 이의 조합에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 돌연변이체 KRAS 펩티드(들)를 인코드한다. 돌연변이체 KRAS 항원들의 비-제한적 예들에는 서열 번호: 36-41 및 72, 125에 제시된 아미노산 서열들 중 하나 이상을 포함하는 항원들을 포함한다.
G12D 또는 G12V 돌연변이들에 특이적인 CD8+ T 세포들은 HLA-A*02:01, A*03:01; -A*11:01, -B*35:01, -Cw*08:02, 및 잠재적인 그 외 것들에 의해 제한될 수 있다. 따라서, 일부 구체예들에서, KRAS 돌연변이는 HLA-A*02:01, A*03:01; -A*11:01, -B*35:01, 또는 -Cw*08:02에 의해 제한되는 T 세포들을 가지는 대상체를 위한 면역조절 치료 조성물에 포함시키기 위해 선택된다. 일부 구체예들에서, 대상체는 HLA-A*02:01 제한되는 T 세포들이다.
한 구체예에서, 돌연변이체 KRAS 항원은 G12D, G12V, G13D 및 G12C에서 선택된 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 돌연변이체 KRAS 15량체 펩티드이며, 이의 비-제한적 예들이 서열 번호: 36-38 및 125에 제시되어 있다.
또 다른 구체예에서, 돌연변이체 KRAS 항원은 G12D, G12V, G13D 및 G12C에서 선택된 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 돌연변이체 KRAS 25량체 펩티드이며, 이의 비-제한적 예들이 서열 번호: 39-41 및 72에 제시되어 있다.
또 다른 구체예에서, 돌연변이체 KRAS 항원은 G12D, G12V, G13D 및 G12C에서 선택된 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 돌연변이체 KRAS 3x15량체 펩티드들 (15량체 펩티드의 3개 복제본)이며, 이의 비-제한적 예들이 서열 번호: 42-44 및 183에 제시되어 있다.
또 다른 구체예에서, 돌연변이체 KRAS 항원은 G12D, G12V, G13D 및 G12C에서 선택된 돌연변이를 포함하는 하나 이상의 돌연변이체 KRAS 3x25량체 펩티드 (25량체 펩티드의 3개 복제본)이며, 이의 비-제한적 예들이 서열 번호: 45-47 및 73에 제시되어 있다.
또 다른 구체예에서, 돌연변이체 KRAS 항원은 G12D, G12V, G13D 및 G12C 돌연변이들을 내포하는 25량체 펩티드들의 100량체 연쇄체 펩티드 (즉, 서열 번호: 39, 40, 41 및 72의 100량체 연쇄체)이다. 따라서, 한 구체예에서, 돌연변이체 KRAS 항원은 서열 번호: 39, 40, 41 및 72를 인코드하는 mRNA 구조체를 포함한다. G12D, G12V, G13D 및 G12C 돌연변이들을 내포하는 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 뉴클레오티드 서열의 비-제한적 예들에는 서열번호: 138, 서열번호: 167 및 서열번호: 169가 포함된다. 돌연변이체 KRAS 항원들, 이의 아미노산 서열들, 및 이를 인코드하는 mRNA 서열들에 관한 추가적인 설명은, 미국 출원 제 62/453,465에 개시되어 있으며, 이의 내용 전문은 본 명세서에 명확히 참고문헌으로 포함된다.
본 발명의 일부 구체예들은 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA를 포함하는 면역조절 치료 조성물을 제공한다. 일부 구체예들에서, 상기 펩티드 에피토프들 중 최소한 두 개는 하나의 글리신에 의해 서로 분리된다. 일부 구체예들에서, 연쇄체는 3-10개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함한다. 이러한 일부 구체예들에서, 펩티드 에피토프들 모두는 하나의 글리신에 의해 서로 분리된다. 다른 구체예들에서, 상기 펩티드 에피토프들 중 최소한 두 개는 링커없이 서로에 직접 연결된다.
한 구체예에서, 종양 항원은 면역 증강제를 또한 포함하는 (즉, 종양 항원에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 또한 인코드하는) mRNA 구조체에 의해 인코드된다. 이러한 구조체들의 비-제한적 예들은 서열 번호: 48-71에 제시된 아미노산 서열들 중 하나를 인코드하는 KRAS-STING 구조체들을 포함한다. KRAS-STING 구조체들을 인코드하는 뉴클레오티드 서열들의 비-제한적 예들은 서열 번호: 160-163 및 221-224에 제시되어 있다.
본 발명은 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물을 제공한다: 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA, 이 때 연쇄체는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 그리고 대상체에서 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 가지는 하나 이상의 mRNA, 가령, STING 면역 증강제 mRNA. 이러한 면역조절 조성물은 KRAS의 체세포 점 돌연변이들을 표적하며, 이는 정교하게 특이적인 종양 신생항원들 뿐만 아니라 다양한 악성종양들에서 유의한 종양발생 유발 돌연변이(driver mutations)들을 구성한다. 대부분이 일과성 돌연변이 (passenger mutations)인 많은 신생항원들과 달리, KRAS 돌연변이체 발현의 유지는 암 세포들의 생존에 중요한데, 왜냐하면 이는 이상 세포 증식을 유발하는 것을 돕고 트렁크 발생 (truncal event) (조기 발생되므로 많은 종양 세포들에 존재함) 되기 쉽기 때문이다.
STING의 면역 증강 능력을 조사하는 본 명세서에 기재된 전임상 연구들에서 KRAS 돌연변이체 항원들을 모델하기 위해, 다음과 같은 두 가지 모델 항원들이 선택되었다: (1) HPV E6 및 E7 그리고 (2) 쥐과 세포주 MC38에서 발견되는 3가지 유전자들로부터의 3개의 점 돌연변이들의 ADR 연쇄체. 이들 항원들은 수많은 이유들로 적합한 KRAS 돌연변이체 항원 모델이다. 예를 들면, HPV E6 및 E7은 그 발현이 돌연변이체 KRAS와 같은 형질전환된 표현형에 필수적인 바이러스 종양발생 단백질들이다. 따라서, HPV E6 및 E7은 돌연변이체 KRAS와 유사하게, 종양발생 유발자들이기 때문에 적합한 모델 항원들이다. 상기 3가지 ADR 돌연변이체 에피토프들은, 대조적으로, 가장 흔한 일과성 돌연변이인 점에서 상동형 신생항원이다. 그러나, ADR은 다음과 같은 점에서 우리 백신에 의해 인코드되는 KRAS 항원들의 다른 성질들을 보다 효과적으로 모델화한다: (1) 각 항원은 바이러스 항원 보다 면역계에 의해 "비-자기"로 인식되기 더욱 어려울 수 있는 그 야생형 대응체와 비교하여 하나의 미스센스 돌연변이를 내포하며 (2) 이들은 연쇄체화된다.
본 발명의 면역조절 치료 조성물은 하나 이상의 암 항원들을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에서 면역조절 치료 조성물은 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상의 항원들, 예컨대, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드로 이루어진다. 다른 구체예들에서, 면역조절 치료 조성물은 1000개 미만, 900개 미만, 500개 미만, 100개 미만, 75개 미만, 50개 미만, 40개 미만, 30개 미만, 20개 미만 또는 100개 미만의 암 항원, 예컨대, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드로 이루어진다. 또 다른 구체예들에서 면역조절 치료 조성물은 3-10, 3-100, 5-100, 10-100, 15-100, 20-100, 25-100, 30-100, 35-100, 40-100, 45-100, 50-100, 55-100, 60-100, 65-100, 70-100, 75-100, 80-100, 90-100, 5-50, 10-50, 15-50, 20-50, 25-50, 30-50, 35-50, 40-50, 45-50, 100-150, 100-200, 100-300, 100-400, 100-500, 50-500, 50-800, 50-1,000, 또는 100-1,000개의 암 항원들, 예컨대, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 가진다.
항원 결정인자로도 공지되어 있는, 본 명세서에서 사용되는 에피토프는 적절한 내용에서, 면역계에 의해, 특히, 항체, B 세포, 또는 T 세포에 의해 인식되는 항원의 일부분이다. 에피토프는 B 세포 에피토프 및 T 세포 에피토프를 포함한다. B-세포 에피토프는 B-세포들을 생성하는 특이적 항체에 의한 인식에 필요한 펩티드 서열들이다. B 세포 에피토프는 항체에 의해 인식되는 항원의 특정 영역을 지칭한다. 에피토프에 결합하는 항체의 일부분은 파라토프라 불린다. 에피토프는 그 구조 및 파라토프와의 상호작용에 기초하여 입체형태 에피토프 또는 선형 에피토프가 될 수 있다. 선형, 또는 연속 에피토프는 단백질의 특정 영역의 일차 아미노산 서열에 의해 정의된다. 항체와 상호작용하는 서열들은 상기 단백질 상에서 서로에 이웃하여 순차적으로 위치하며, 에피토프는 통상적으로 단일 펩티드에 의해 모사될 수 있다. 입체형태 에피토프는 고유 단백질의 입체형태 구조에 의해 정의되는 에피토프이다. 이들 에피토프는 연속적 또는 불연속적일 수 있다, 즉, 에피토프의 성분들은 단백질의 비대응 부분들 상에 위치할 수 있으며, 폴딩된 고유 단백질 구조에서 서로 가까워지게 된다.
T-세포 에피토프는 APC 상의 단백질들과 관련하여, 특이적 T-세포들에 의한 인식에 필요한 펩티드 서열들이다. T 세포 에피토프는 세포내 가공되어 APC의 표면 상에 제시되며, 이 표면에서 이는 MHC II형 및 MHC I형을 비롯한 MHC 분자들에 결합된다. 펩티드 에피토프는 하나의 에피토프에 타당한 임의의 길이가 될 수 있다. 일부 구체예들에서 펩티드 에피토프는 9-30개의 아미노산이다. 다른 구체예들에서 길이는 9- 22, 9-29, 9-28, 9-27, 9-26, 9-25, 9-24, 9-23, 9-21, 9-20, 9-19, 9-18, 10-22, 10-21, 10-20, 11-22, 22-21, 11-20, 12-22, 12-21, 12-20,13-22, 13-21, 13-20, 14-19, 15-18, 또는 16-17개 아미노산이다.
일부 구체예들에서 면역조절 치료 조성물은, 때때로 기억 항원으로도 지칭되는 리콜 항원을 포함할 수 있다. 리콜 항원은 개체가 이전에 만났던 그리고 이에 대한 기존의 기억 림프구가 존재하는 항원이다. 일부 구체예들에서 리콜 항원은 개체가 만났을 가능성이 있는 감염성 질병 항원, 가령, 인플루엔자 항원일 수 있다. 리콜 항원은 보다 강한 면역 반응을 촉진하도록 돕는다.
치료적 mRNA는 단독으로 또는 다른 암 치료제, 가령, 면역관문 억제제와 조합하여 전달되어, 종양에 대하여 유의하게 개선된 면역 반응을 제공할 수 있다. 면역관문 억제제들은 장애물들 중 일부를 제거함으로써 활성화 종양발생 펩티드를 인코드하는 mRNA의 효과를 개선하여 면역 반응을 촉진시킬 수 있으며, 그리하여 활성화된 T 세포들로 하여금 종양에 대한 면역 반응을 효율적으로 촉진시킬 수 있다.
mRNA는 담체, 가령, 지질 나노입자 (LNP)의 형태로 대상체에 전달될 수 있다. 수많은 LNP들이 해당 분야에 공지되어 있다. 예를 들어 일부 LNP들, 가령, 동물 모델에서 뿐만 아니라 인간에서 다양한 siRNA를 전달하기 위해 기존에 사용되었던 것들은, 통상적으로 항원 생성의 감소 및 절충된 면역 반응을 초래하는 일과성 IgM 반응과 관련된 바람직하지 않은 염증 반응을 유발함이 관찰되었다. siRNA에 대해 관찰된 결과들과 대조적으로, 일과성 IgM 반응을 촉진시키기 보다는 치료 방법들에 충분한 T 세포 반응들을 생성하는 지질 나노입자-mRNA 면역조절 치료 조성물이 본 명세서에서 제공된다. 본 명세서에 기재된 LNP는 리포좀이 아니다. 본 명세서에서 사용되는 리포좀은 코어에 핵산 페이로드를 가지는 단순한 지질 이중층을 가진 지질 기반 구조이다.
관심 항원(들)을 인코드하는 mRNA 구조체는 전형적으로 항원-인코딩 서열들 이외에도, mRNA 구조체에 관해 본 명세서에 기재되어 있는 다른 구조적 성질들 (예컨대, 본 명세서에 기재된, 변형된 핵염기들, 5' 캡, 5' UTR, 3' UTR, miR 결합 부위(들), 폴리A 꼬리)을 포함한다. 적합한 mRNA 구조체 성분들이 본 명세서에 기재되어 있다.
맞춤형 암 항원- 네오에피토프
암 항원은 맞춤형 암 항원일 수 있다. 예를 들면, 맞춤형 면역조절 치료 조성물은, 각 대상체에 특이적인 종양 또는 암 항원들에 특이적인 하나 이상의 공지된 암 항원들을 인코드하며 네오에피토프 또는 대상체 특이적 에피토프 또는 항원으로 지칭되는 RNA를 포함할 수 있다. “대상체 특이적 암 항원”은 특정 환자의 종양에서 발현되는 것으로 확인된 바 있는 항원이다. 대상체 특이적 암 항원은 일반적으로 종양 샘플에 통상적으로 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 비-암 세포들에서 발현되지 않거나 드물게 발현되는, 또는 비-암 세포들에서의 발현이 암 세포들에서의 발현에 비해 충분히 감소되고, 백신접종시 유도되는 면역 반응을 유도하는 종양 관련 항원들을 네오에피토프라 지칭한다. 종양 관련 항원들과 같은 네오에피토프들은 신체에 대해 완전히 외부이므로, 건강한 조직에 대해서는 면역 반응을 생성하지 않거나 면역계의 보호 성분들에 의해 차단되지 않을 것이다. 일부 구체예들에서 네오에피토프에 기초한 맞춤형 면역조절 치료 조성물들이 바람직한데, 왜냐하면 이러한 백신 제제들은 환자의 특이적 종양에 대한 특이성을 최대화할 것이기 때문이다. 돌연변이-유래 네오에피토프는 점 돌연변이들, 단백질에서 상이한 아미노산을 가져오는 비-동의 돌연변이들; 정지 코돈이 변형된 또는 결실되어, C-말단에 새로운 종양-특이적 서열을 가지는 보다 긴 단백질의 번역을 초래하는 번역-초과 돌연변이들; 성숙 mRNA에서 인트론을 포함시켜 독특한 종양-특이적 단백질 서열을 초래하는 스플라이스 부위 돌연변이들; 2개 단백질들의 접합부 (즉, 유전자 융합)에 종양-특이적 서열들을 가지는 키메라 단백질을 발생시키는 염색체 재배열; 새로운 종양-특이적 단백질 서열을 가지는 새로운 개방 해독 프레임을 초래하는 틀이동 돌연변이 또는 결실; 및 전위로부터 생길 수 있다. 그러므로, 일부 구체예들에서 면역조절 치료 조성물은 틀-이동 돌연변이 및 재조합 또는 본 명세서에 기재된 임의의 다른 돌연변이들로 구성된 그룹에서 선택된 돌연변이를 포함하는 최소한 1개의 암 항원들을 포함한다.
맞춤형 면역조절 치료 조성물을 생성하는 방법들은 일반적으로, 예컨대, 딥 핵산 또는 단백질 시퀀싱 기술을 사용한, 돌연변이들의 확인, 예컨대, 환자의 HLA 대립유전자들에 결합할 수 있고 종양들에 존재하는 돌연변이들에 기반한 일련의 후보 T 세포 에피토프를 생성하기에 적합한 펩티드-MHC 결합 예측 알고리즘 또는 다른 분석 기술들을 사용한, 네오에피토프의 확인, 선택된 네오에피토프에 대한 항원-특이적 T 세포들의 선택적 입증 또는 후보 네오에피토프가 종양 표면 상의 HLA 단백질들에 결합함을 입증 그리고 백신 개발을 포함한다. 본 발명의 면역조절 치료 조성물은 하나의 네오에피토프의 다수의 복제본, 하나의 돌연변이 유형, 즉, 점 돌연변이에 기초한 다수의 상이한 네오에피토프, 다양한 돌연변이 유형들, 네오에피토프 및 다른 항원들, 가령, 종양 관련 항원들 또는 리콜 항원들에 기초한 다수의 상이한 네오에피토프를 포함할 수 있다.
돌연변이들을 확인하는 기술들의 예들에는 동적 대립유전자-특이적 혼성화 (DASH), 마이크로플레이트 어레이 대각 겔 전기영동 (MADGE), 파이로시퀀싱, 올리고뉴클레오티드-특이적 결찰, TaqMan 시스템 뿐만 아니라 다양한 DNA "칩" 기술들, 즉, Affymetrix SNP 칩, 그리고 침습적 절단 후 질량 분광분석법 또는 부동화 자물쇠 프로브 (immobilized padlock probes) 및 롤링-서클 증폭에 의한 작은 신호 분자들의 생성에 기초한 방법들이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
딥 핵산 또는 단백질 시퀀싱 기술들은 해당 분야에 공지이다. 임의의 유형의 서열 분석법이 사용될 수 있다. 전체 종양 유전체, 종양 진유전체 (exomes) (단백질-인코딩 DNA), 종양 전사체 (전사체omes) 또는 엑소좀에 대한 핵산 시퀀싱이 실시될 수 있다. 실시간 단일 분자 시퀀싱-합성 기술들은 형광 뉴클레오티드들이 시퀀싱되는 주형에 상보적인 초기 DNA 가닥에 통합될 때 이들의 탐지에 의존한다. 다른 고속 처리량 시퀀싱 방법 또한 존재한다. 종양 프로테오좀에 대한 종양 단백질 시퀀싱이 실시될 수 있다. 추가적으로, 종양 세포들 상의 MHC 단백질에 결합되는 돌연변이된 펩티드들의 존재를 확인 또는 입증하기 위하여 단백질 질량 분광분석법이 사용될 수 있다. 펩티드는 종양 세포들로부터 또는 종양 세포들로부터 면역침강된 HLA 분자들로부터 산-용리된 후, 질량 분광분석법을 사용하여 확인될 수 있다. 시퀀싱 결과들을 공지되어 있는 대조 세트와 또는 환자의 정상 조직에 대해 실시된 시퀀싱 분석결과와 비교할 수 있다.
따라서, 본 발명은 항원의 네오에피토프, 가령, T-세포 에피토프를 확인 및/또는 탐지하기 위한 방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 대상체에서 종양 특이적 면역 반응을 유도함에 유용한 종양 특이적 네오에피토프를 확인 및/또는 탐지하는 방법을 제공한다. 선택적으로, 이들 네오에피토프는 야생형 펩티드 보다 큰 친화도로 I형 HLA 단백질들에 결합하고 및/또는 항-종양 CD8 T-세포들을 활성화시킬 수 있다. 임의의 특정 유전자에서 동일한 돌연변이들은 종양들 전반에 걸쳐 거의 발견되지 않는다.
MHC I형 단밸질들은 대부분의 종양 세포들을 비롯하여, 신체 거의 모든 세포들의 표면 상에 존재한다. MHC I형 단백질들에 세포들 내부에 존재하는 병원체들 또는 내인성 단백질로부터 통상적으로 유래하는 항원들이 부하된 후, 세포독성 T-림프구 (CTLs)에 제시된다. T-세포 수용체들은 MHC I형 분자들과 복합체를 형성한 펩티드들을 인식하여 결합할 수 있다. 각 세포독성 T-림프구는 특이적 MHC/펩티드 복합체들을 결합시킬 수 있는 독특한 T-세포 수용체를 발현시킨다.
컴퓨터 알고리즘을 사용하여, 펩티드-제시 복합체의 형태로 I형 또는 II형 MHC 분자들에 의해 결합된 다음, 이 형태로, T-림프구의 T-세포 수용체들에 의해 인식되는 잠재적 네오에피토프, 가령, T-세포 에피토프, 즉, 펩티드 서열들을 예상할 수 있다. MHC에 결합하게 되는 펩티드들을 확인함에 유용한 프로그램들의 예들에는 다음과 같은 예가 포함된다: Lonza Epibase, SYFPEITHI (Rammensee 등, Immunogenetics, 50 (1999), 213-219) 및 HLA_BIND (Parker 등, J. Immunol., 152 (1994), 163-175).
일단 추정 네오에피토프가 선택되면, 이를 시험관내 및/또는 생체내 분석법들을 사용하여 추가로 테스트할 수 있다. 상기 알고리즘의 예측 결과에 기초하여 선택된 네오에피토프의 목록을 개선하기 위해, 전통적인 시험관내 실험실 분석법들, 가령, Elispot 분석법들을 각 환자의 분리주와 함께 사용할 수 있다. 네오에피토프 백신, 이의 사용 방법 및 제조 방법은 모두 PCT/US2016/044918에 기재되어 있으며 이는 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다.
내인성 종양 항원
또 다른 구체예에서, 종양 항원은 내인성 종양 항원, 가령, 원위치에서 종양 세포들 파괴시 방출되는 종양 항원이다. 생체내 세포 사멸을 생성하여 세포내 성분들의 방출을 가져오는 자연적인 메커니즘이 존재하며 그리하여 면역 반응이 세포내 성분들에 대해 자극될 수 있음이 해당 분야에 잘 알려져 있다. 이러한 메커니즘은 본 명세서에서 면역원성 세포 사멸로 지칭되며 네크롭토시스 및 파이롭토시스가 포함된다. 따라서, 한 구체예에서, 본 발명의 면역 증강제 mRNA 구조체는 내인성 면역원성 세포 사멸이 발생하여 하나 이상의 내인성 종양 항원들이 방출되는 조건하에서 종양-보유 대상체에 투여되고, 이로써 종양 항원들에 대한 면역 반응을 개선한다. 한 구체예에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 대상체에서 종양 세포들의 면역원성 세포 사멸을 자극하는, “실행자 mRNA 구조체”를 인코드하는 제 2 mRNA 구조체와 함께 종양-보유 대상체에 투여된다. 실행자 mRNA 구조체들의 예들에는 MLKL, RIPK3, RIPK1, DIABLO, FADD, GSDMD, 카스파제-4, 카스파제-5, 카스파제-11, 피린, NLRP3 및 ASC/PYCARD를 인코드하는 구조체들이 포함된다. 실행자 mRNA 구조체, 및 면역 증강제 mRNA 구조체와 조합한 이의 사용은, 미국 출원 제 62/412,933에 더 상세히 기재되어 있으며, 이들 내용 전문은 본 명세서에 명확히 참고문헌으로 포함된다.
암 항원들의 특성
전형적으로 면역조절 치료 조성물에 포함시키기 위해 선택되는 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 고 친화도 결합 펩티드가 될 것이다. 일부 양상에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 야생형 펩티드 보다 큰 친화도를 가지는 HLA 단백질에 결합한다. 일부 구체예들에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 최소한 5000 nM 미만, 최소한 500 nM 미만, 최소한 250 nM 미만, 최소한 200 nM 미만, 최소한 150 nM 미만, 최소한 100 nM 미만, 최소한 50 nM 미만의 IC50을 가진다. 전형적으로, 예상 IC50<50 nM을 가지는 펩티드들은 일반적으로 중간 내지 고 친화도 결합 펩티드들로 간주되며 HLA-결합의 생화학적 분석법들을 사용하여 이들의 친화도를 실험적으로 테스트하기 위해 선택될 것이다.
일부 구체예들에서,대상체 특이적 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 환자의 샘플에서 확인될 수 있다. 예를 들면, 이러한 샘플은 조직 샘플 또는 종양 샘플일 수 있다. 예를 들면, 하나 이상의 종양 세포들의 샘플은 대상체 특이적 활성화 종양유전자 돌연변이의 존재에 대해 검사될 수 있다. 대상체 특이적 활성화 종양유전자 돌연변이들을 확인하기 위하여 종양 샘플은 전체 유전체, 엑솜 또는 전사체 분석을 사용하여 검사될 수 있다.
대안적으로 대상체 특이적 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 대상체의 엑소좀에서 확인될 수 있다. 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드가 대상체의 엑소좀에서 확인되는 경우, 이러한 펩티드는 대상체의 엑소좀 펩티드를 대표한다고 말한다.
엑소좀은 통상적으로 대략 30-100 nm의 직경을 가지는 세포들에 의해 흘려지는 작은 미세소포이다. 엑소좀은 내부로의 함입 및 후기 엔도좀 막의 핀치 오프로부터 전형적으로 형성되며, 이는 소형 지질 이중층 소포, 각각 환자 세포의 세포질 샘플을 내포하는, 소형 지질 이중층 소포가 적재된 다소포체 (MVB)를 형성하게 된다. 세포막과 MVB의 융합은 세포로부터 이들 엑소좀의 방출, 및 혈액, 소변, 뇌척수액, 또는 그 외 체액들로 이들을 전달하게 된다. 엑소좀은 추가 분석을 위해 이들 생물학적 유체들 중 어느 하나로부터 회수될 수 있다.
엑소좀 내부 핵산들은 종양 항원들에 대한 생물표지자로서의 역할을 가진다. 대상체 특이적 암 항원을 확인하기 위하여 엑소좀을 분석하는 것의 이점은, 이 방법이 생검할 필요가 없게 한다는 것이다. 이러한 점은 암 항원들의 확인을 포함하는 수회의 치료요법, 그리고 백신화를 받을 필요가 있는 경우에 특히 유익할 수 있다.
생물학적 샘플로부터 엑소좀을 분리하는 수많은 방법들이 해당 분야에 설명되어 있다. 예를 들면, 다음과 같은 방법들이 사용될 수 있다: 분별 원심분리, 저속 원심분리, 음이온 교환 및/또는 겔 침투 크로마토그래피, 수크로스 밀도 기울기 또는 소기관 전기영동, 자기 활성 세포 분리법 (MACS), 나노막 초미세여과 농축, Percoll 기울기 분리 및 미세유체 장치 사용. 예시적인 방법들이, 예를 들어, 미국 공개특허공보 제 2014/0212871호에 기재되어 있다.
면역 증강제 mRNA
본 발명의 한 양상은 하나 이상의 관심 항원들에 대한 면역 반응을 자극 또는 개선하는 폴리펩티드 (활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들))를 인코드하는 mRNA에 관한 것이다. 관심 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 이러한 mRNA는 본 명세서에서 면역 증강제 mRNA 구조체 또는 화학적으로 변형된 mRNAs (mmRNAs)를 포함하는 면역 증강제 mRNA로 지칭된다. 일부 양상들에서, 본 명세서는 필요로 하는 대상체에서, 예를 들면, 적응 면역을 유도 (예컨대, I형 인터페론 생성을 자극함으로써), 염증 반응을 자극, NFkB 신호전달을 자극 및/또는 수지상 세포 (DC) 발달, 활성 또는 이동을 자극함으로써 면역 반응을 자극 또는 개선 (예컨대, 대상체에서 면역 반응을 증강)하는, 대상체에서의 면역 반응을 자극 또는 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA를 제공한다. 일부 양상들에서, 필요로 하는 대상체에 대한 면역 증강제 mRNA의 투여는 대상체에서 세포 면역 (예컨대, T 세포-매개 면역), 체액성 면역 (예컨대, B 세포-매개 면역) 또는 세포성 및 체액성 면역 모두를 개선한다. 일부 양상들에서, 면역 증강제 mRNA의 투여는 사이토카인 생성 (예컨대, 염증성 사이토카인 생성)을 자극하고, 항원-특이적 CD8+ 효과기 세포 반응들을 자극하고, 항원-특이적 CD4+ 도움 세포 반응들을 자극하고, 효과기 기억 CD62L저 T 세포 집단을 증가시키고, B 세포 활성을 자극하고 또는 항원-특이적 항체 생성을 자극하며, 전술한 반응들의 조합을 포함한다.
일부 양상들에서, 면역 증강제 mRNA의 투여는 사이토카인 생성 (예컨대, 염증성 사이토카인 생성)을 자극하고 항원-특이적 CD8+ 효과기 세포 반응들을 자극한다. 일부 양상들에서, 면역 증강제 mRNA의 투여는 사이토카인 생성 (예컨대, 염증성 사이토카인 생성)을 자극하고 항원-특이적 CD4+ 도움 세포 반응들을 자극한다. 일부 양상들에서, 면역 증강제 mRNA의 투여는 사이토카인 생성 (예컨대, 염증성 사이토카인 생성)을 자극하고, 효과기 기억 CD62L저 T 세포 집단을 증가시킨다. 일부 양상들에서, 면역 증강제 mRNA의 투여는 사이토카인 생성 (예컨대, 염증성 사이토카인 생성)을 자극하고, B 세포 활성을 자극하고 또는 항원-특이적 항체 생성을 자극한다.
I형 인터페론을 자극하는 면역 증강제 mRNA
일부 양상들에서, 본 발명은 I형 인터페론 경로 신호전달을 자극 또는 개선함으로써 관심 항원에 대한 면역 반응을 자극 또는 개선함으로써, I형 인터페론 (IFN) 생성을 자극 또는 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 면역 증강제 mRNA를 제공한다. 항-종양 또는 항-미생물 적응 면역의 성공적 유도는 I형 IFN 신호전달을 필요로 함이 잘 알려져있다 (예컨대, Fuertes, M.B. 등 (2013) Trends Immunol. 34:67-73 참고). I형 IFN들 (IFN-α, IFN-β, IFN-ε, IFN-κ 및/또는 IFN-ω포함)의 생성은 미생물 감염, 가령, 바이러스 감염의 제거에 일정 역할을 한다. (예를 들면, 손상 또는 사멸 세포들로부터 유래한) 숙주 세포 DNA는 I형 인터페론 생성을 유도할 수 있고 I형 IFN 신호전달 경로는 적응 항-종양 면역의 발달에 있어 일정 역할을 함 또한 알려져있다. 그러나, 많은 병원체들과 암 세포들은 I형 인터페론 반응들을 감소 또는 억제하는 기전을 발달시켜왔다. 그러므로, 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 면역 증강제 mRNA를 제공함에 의한 대상체에서 I형 IFN 신호전달 경로의 활성화 (자극 및/또는 개선을 포함)는 암 및 병원성 감염들의 치료를 비롯한 널리 다양한 임상 상황에서, 뿐만 아니라 보호 면역을 제공하기 위하여 백신 반응들을 증강시킴에 있어서 대상체에서 면역 반응을 자극 또는 개선한다.
I형 인터페론 (IFNs)은 다수의 상이한 세포 유형들, 전형적으로 바이러스 감염시 급속하게 생성되는 전-염증성 사이토카인으로, 널리 다양한 효과를 가지는 것으로 공지되어 있다. 생체내에서 I형 IFN 생성의 표준적인 결과는 항미생물 세포 프로그램들의 활성화 및 선천 및 적응 면역 반응들의 발달이다. I형 IFN은 감염 물질들, 특히 바이러스 병원체들의 확산을 제한하는, 감염된 이웃 세포들에서의 세포-고유의 항미생물 상태를 유도한다. I형 IFN은 또한 선천 면역 세포 활성화 (예컨대, 수지상 세포들의 성숙)를 조절하여 항원 제시 및 자연 살해 세포 기능들을 촉진시킨다. I형 IFN은 또한 높은-친화도 항원-특이적 T 및 B 세포 반응들 및 면역학적 기억의 발달을 촉진시킨다 (Ivashkiv and Donlin (2014) Nat Rev Immunol 14(1):36-49).
I형 IFN은 수지상 세포 (DCs)를 활성화시키고 자가분비 신호전달을 통해 수지상 세포의 T 세포 자극 능력을 촉진시킨다 (Montoya 등, (2002) Blood 99:3263-3271). I형 IFN 노출은 케모카인 수용체들 및 (예컨대, 배출 림프절로의 DC 이동을 촉진시키는) 부착 분자들의 발현, 공동-자극 분자들, 및 MHC I형 및 II형 항원 제시를 증가시킴으로써 DC들의 성숙을 용이하게 한다. I형 IFN 노출 후 성숙한 DC들은 효과적으로 보호 T 세포 반응들을 효과적으로 프라이밍할 수 있다 (Wijesundara 등, (2014) Front Immunol 29(412) 및 본 명세서의 참고문헌들).
I형 IFN은 T 세포 수용체 신호전달에 비해 I형 IFN 신호전달 시기에 따라 크게 좌우되는 T 세포 활성화, 증식, 분화 및 생존을 촉진 또는 억제할 수 있다 (Crouse 등, (2015) Nat Rev Immunol 15:231-242). 초기 연구들은 최적의 T 세포 자극, 분화, 팽창 및 세포용해 활성에 필요한 MHC-I 발현이 다수의 세포 유형들에서 I형 IFN에 대한 반응에서 상향조절됨을 밝혀내었다 (Lindahl 등, (1976), J Infect Dis 133(Suppl):A66-A68; Lindahl 등, (1976) Proc Natl Acad Sci USA 17:1284-1287). I형 IFN은 CD8 T 세포들에 대한 효능있는 공동-자극 효과들을 발휘하여, enhancing CD8 T 세포 증식 및 분화를 개선할 수 있다 (Curtsinger 등, (2005) J Immunol 174:4465-4469; Kolumam 등, (2005) J Exp Med 202:637-650).
T 세포들에 대한 효과와 유사하게, I형 IFN 신호전달은 노출 시기 및 내용에 따라 B 세포 반응들에 대해 양성 및 음성 효과들 모두를 가진다 (Braun 등, (2002) Int Immunol 14(4):411-419; Lin 등, (1998) 187(1):79-87). 미성숙 B 세포들의 생존 및 성숙은 I형 IFN 신호전달에 의해 억제될 수 있다. 미성숙 B 세포들과 대조적으로, I형 IFN 노출은 바이러스 감염 후 또는 실험적 면역화 후 B 세포 활성화, 항체 생성 및 아이소형 스위치를 촉진시키는 것으로 밝혀졌다 (Le Bon 등, (2006) J Immunol 176:4:2074-2078; Swanson 등, (2010) J Exp Med 207:1485-1500).
STING, 인터페론 조절 인자들 (Interferon Regulatory Factors), 가령, IRF1, IRF3, IRF5, IRF7, IRF8, 및 IRF9, TBK1, IKKi, MyD88, 및 TRAM을 비롯하여 I형 IFN 경로 신호전달에 관여하는 많은 성분들이 잘 알려져 있다. I형 IFN 경로 신호전달에 관여하는 추가 성분들에는 TRAF3, TRAF6, IRAK-1, IRAK-4, TRIF, IPS-1, TLR-3, TLR-4, TLR-7, TLR-8, TLR-9, RIG-1, DAI 및 IFI16이 포함된다.
따라서, 한 구체예에서, 면역 증강제 mRNA는 I형 IFN 경로 신호전달에 관여하는 임의의 전술한 성분들을 인코드한다.
STING을 인코드하는 면역 증강제 mRNA
본 발명은 면역 증강제와 같은 STING의 항시적 활성 형태들을 포함하여 STING을 인코드하는 mRNA (mmRNA 포함)를 포함한다. STING (인터페론 유전자들의 자극인자 (STimulator of INterferon Genes); 막경유 단백질 173 (TMEM173)으로도 공지됨, IRF3 활성화 (MITA), 메티오닌-프롤린-티로신-세린 (MPYS), 및 ER IFN 자극인자 (ERIS)의 매개자)은 I형 IFNs 및 전-염증성 사이토카인을 비롯한 면역 반응 유전자들의 전사를 조절하는 신호전달 분자로서 기능하는, 379개 아미노산의, 세포질 세망 (ER) 상주 막경유 단백질이다 (Ishikawa & Barber, (2008) Nature 455:647-678; Ishikawa 등, (2009) Nature 461:788-792; Barber (2010) Nat Rev Immunol 15(12):760-770).
STING은 TBK1/IRF3/I형 IFN 신호전달 축에 DNA의 세포액 탐지를 연결시키는 신호전달 어댑터로 기능한다. STING의 신호전달 어댑터 기능들은 사이클릭 다이뉴클레오티드 (CDNs)의 직접 센싱 (센싱)을 통해 활성화된다. CDN들의 예들에는 사이클릭 다이-GMP (구아노신 5'-모노포스페이트), 사이클릭 다이-AMP (아데노신 5'-모노포스페이트) 및 사이클릭 GMP-AMP (cGAMP)가 포함된다. 처음에 유비쿼터스 세균 이차 전령물질로 특징된, CDN들은 이제 STING과의 직접적인 상호작용을 통해 TBK1/IRF3/I형 IFN 신호전달 축을 활성화시키는 병원체-관련 분자 패턴 분자들 (PAMPs)의 한 분류를 구성하는 것으로 알려져있다. STING은 세포의 세포액에서 이상 DNA 종들 및/또는 세균에서 유래한, 및/또는 숙주 단백질 사이클릭 GMP-AMP 합성효소 (cGAS)에서 유래한 CDN들을 비롯한 CDN들을 센싱할 수 있다. cGAS 단백질은 세포액에서 DNA 탐지에 반응하여 cGAMP를 생성하는 DNA 센서이다 (Burdette 등, (2011) Nature 478:515-518; Sun 등, (2013) Science 339:786-791; Diner 등, (2013) Cell Rep 3:1355-1361; Ablasser 등, (2013) Nature 498:380-384).
CDN에 결합시, STING은 이량체화되고 TANK-결합 키나아제 1 (TBK1)과의 복합체 형성을 촉진하는 입체형태 변화를 거친다 (Ouyang 등, (2012) Immunity 36(6):1073-1086). 이러한 복합체는 핵주위 골지로 전위되고, IRF3 및 NF-κ전사 인자들을 인산화하는 엔도리소좀 구획들로 TBK1을 전달시킨다 (Zhong 등, (2008) Immunity 29:538-550). 최근의 연구는 STING이 스캐폴드로 기능하여 TBK1 및 IRF3 모두에 결합함으로써 TBK1에 의한 IRF3의 인산화를 특이적으로 촉진시킴을 밝혀내었다 (Tanaka & Chen, (2012) Sci Signal 5(214):ra20). IRF3-, IRF7- 및 NF-κ의존성 신호전달 경로들의 활성화는 사이토카인 및 항-병원체 및/또는 항-종양 활성을 촉진시키는 다른 면역 반응-관련 단백질들, 가령, I형 IFN의 생성을 유도한다.
많은 연구들은 체액성 및 세포성 면역 반응을 유도하는 잠재적 백신 보강제 또는 면역조절 물질들로서의 STING의 CDN 작용제들의 용도를 조사하였다 (Dubensky 등, (2013) Ther Adv 백신s 1(4):131-143 및 본 명세서의 참고문헌들). 초기 연구들은 CDN c-다이-GMP의 투여가 생체내 스타필로코쿠스 아우레우스 감염을 약화시켜, 생쥐 감염 모델에서 회복된 세균 세포들의 수를 감소시키지만 c-다이-GMP는 시험관내에서 세균 세포들에 대한 관찰가능한 억제 또는 살균 효과가 전혀 없었음을 입증하였는데, 이는 세균 세포들의 감소가 숙주 면역계에 대한 효과로 인한 것이었음을 제시하는 것이다 (Karaolis 등, (2005) Antimicrob Agents Chemother 49:1029-1038; Karaolis 등, (2007) Infect Immun 75:4942-4950). 최근의 연구들은 과립구-대식세포 집락-자극 인자 (GM-CSF)-생성 암 백신들 (STINGVAX로 명명)과 함께 제제화된 합성 CDN 유래 분자들이 암의 치료 동물 모델들에서 GM-CSF 백신 단독의 면역화에 비해 생체내에서 개선된 항종양 효과들을 유도함을 보여주었으며 (Fu 등, (2015) Sci Transl Med 7(283):283ra52), 이는 CDN이 효능있는 백신 보강제임을 제시하는 것이다.
인간 TMEM173 유전자에 맵핑된 다형태들로부터 생성된 돌연변이체 STING 단백질들은 기능 또는 항시적 활성 표현형의 수득을 나타내는 것으로 기재된 바 있다. 시험관내 발현시, 돌연변이체 STING 대립유전자들은 I형 IFN의 유도를 효능있게 자극하는 것으로 나타났다 (Liu 등, (2014) N Engl J Med 371:507-518; Jeremiah 등, (2014) J Clin Invest 124:5516-5520; Dobbs 등, (2015) Cell Host Microbe 18(2):157-168; Tang & Wang, (2015) PLoS ONE 10(3):e0120090; Melki 등, (2017) J Allergy Clin Immunol In Press; Konig 등, (2017) Ann Rheum Dis 76(2):468-472; Burdette 등 (2011) Nature 478:515-518).
본 명세서는, 본 명세서에 기재된 바와 같이 면역 증강제로서 사용하기 위한, 돌연변이체 인간 STING 아이소형들을 비롯한 STING의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNAs (예컨대, mmRNAs)를 제공한다. 돌연변이체 인간 STING 아이소형들을 비롯한 STING의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mmRNA가 본 명세서의 서열 목록에 제시되어 있다. 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 인간 STING 폴리펩티드들에 대한 아미노산 잔기 넘버링은 Genbank 승인 번호 NP_938023으로 해당 분야에서 이용가능한 379개 아미노산 잔기의 야생형 인간 STING (아이소형 1)에 대해 사용된 넘버링에 해당한다.
따라서, 한 양상에서, 본 발명은 아미노산 잔기 155에서의 돌연변이, 특히, 아미노산 치환, 가령, V155M 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 한 구체예에서, mRNA (예컨대, mmRNA)는 서열 번호:1에 제시된 아미노산 서열을 인코드한다. 한 구체예에서, STING V155M 돌연변이체는 서열번호: 139, 서열번호: 168 또는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다. 한 구체예에서, mRNA (예컨대, mmRNA)는 서열 번호: 149에 제시된 3' UTR 서열을 포함하며, 이는 miR122 결합 부위를 포함한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 아미노산 잔기 284에서 돌연변이, 가령, 아미노산 치환을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 잔기 284 치환의 비-제한적 예들에는 R284T, R284M 및 R284K가 포함된다. 특정 구체예들에서, 돌연변이체 인간 STING 단백질은 R284T 돌연변이를 가지며, 이는 예를 들면, 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 가지거나 서열번호: 140 또는 201에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다. 특정 구체예들에서, 돌연변이체 인간 STING 단백질은 R284M 돌연변이를 가지며, 이는 예를 들면, 서열 번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 가지거나, 서열번호: 141 또는 202에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다. 특정 구체예들에서, 돌연변이체 인간 STING 단백질은 R284K 돌연변이를 가지며, 이는 예를 들면, 서열 번호: 4 또는 164에 제시된 아미노산 서열을 가지거나, 서열 번호: 142, 165, 203 또는 225에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다.
다른 양상들에서, 본 발명은 아미노산 잔기 154에서의 돌연변이, 가령, 아미노산 치환, 가령, N154S 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 특정 구체예들에서, 돌연변이체 인간 STING 단백질은 N154S 돌연변이를 가지며, 이는 예를 들면, 서열 번호: 5에 제시된 아미노산 서열을 가지거나, 서열번호: 143 또는 204에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다.
또 다른 양상들에서, 본 발명은 아미노산 잔기 147에서의 돌연변이, 가령, 아미노산 치환, 가령, V147L 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 특정 구체예들에서, V147L 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질은 서열 번호: 6에 제시된 아미노산 서열을 가지거나 서열 번호: 144 또는 서열 번호: 205에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다.
다른 양상들에서, 본 발명은 아미노산 잔기 315에서의 돌연변이, 가령, 아미노산 치환, 가령, E315Q 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 특정 구체예들에서, E315Q 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질은 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 가지거나 서열 번호: 145 또는 206에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다.
다른 양상들에서, 본 발명은 아미노산 잔기 375에서의 돌연변이, 가령, 아미노산 치환, 가령, R375A 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 특정 구체예들에서, R375A 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 가지거나 서열 번호: 146 또는 207에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다.
다른 양상들에서, 본 발명은 전술한 돌연변이들을 하나 이상 또는 둘, 셋, 넷, 또는 그 이상의 조합을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 따라서, 한 양상에서 본 발명은 다음으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이들을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다: V147L, N154S, V155M, R284T, R284M, R284K, E315Q 및 R375A, 및 이의 조합. 다른 양상들에서, 본 발명은 다음으로 구성된 그룹에서 선택된 돌연변이들의 조합을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다: V155M과 R284T; V155M과 R284M; V155M과 R284K; V155M과 V147L; V155M과 N154S; V155M과 E315Q; 및 V155M과 R375A.
다른 양상들에서, 본 발명은 V155M 그리고 다음 돌연변이들 중 하나, 둘, 셋, 또는 그 이상을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다: R284T; R284M; R284K; V147L; N154S; E315Q; 및 R375A. 다른 양상들에서, 본 발명은 V155M, V147L 및 N154S 돌연변이들을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 다른 양상들에서, 본 발명은 V155M, V147L, N154S 돌연변이들, 및, 선택적으로, 아미노산 284에서의 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA를 제공한다. 또 다른 양상들에서, 본 발명은 V155M, V147L, N154S 돌연변이들, 및, R284T, R284M 및 R284K에서 선택된 아미노산 284에서의 돌연변이를 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 다른 양상들에서, 본 발명은 V155M, V147L, N154S 및 R284T 돌연변이들을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 다른 양상들에서, 본 발명은 V155M, V147L, N154S 및 R284M 돌연변이들을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 다른 양상들에서, 본 발명은 V155M, V147L, N154S 및 R284K 돌연변이들을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다.
다른 구체예들에서, 본 발명은 아미노산 잔기 147, 154, 155 및, 선택적으로, 284에서의 돌연변이들, 특히 아미노산 치환, 가령, V147L, N154S, V155M 및, 선택적으로, R284M의 조합을 가지는 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 특정 구체예들에서, 돌연변이체 인간 STING 단백질은 V147N, N154S 및 V155M 돌연변이들, 가령, 서열 번호: 9에 제시된 또는 서열 번호: 147에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 아미노산 서열을 가진다. 특정 구체예들에서, 돌연변이체 인간 STING 단백질은 R284M, V147N, N154S 및 V155M 돌연변이들, 가령, 서열 번호: 10에 제시된 또는 서열 번호: 148 또는 209에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 아미노산 서열을 가진다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 전장 379개 아미노산 야생형 단백질의 항시 활성 절두 형태, 가령, 아미노산 137-379로 구성된 항시 활성 인간 STING 폴리펩티드인 돌연변이체 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다.
면역 조절 인자 (IRF)를 인코드하는 면역 증강제 mRNA
본 발명은 인터페론 조절 인자들 (Interferon Regulatory Factors), 가령, IRF1, IRF3, IRF5, IRF7, IRF8, 및 IRF9를 인코드하는 mRNA (mmRNA 포함)를 면역 증강제들로서 제공한다. IRF 전사 인자 군은 유전자 발현의 조절에 관여하여 선천 면역 반응 동안 I형 인터페론 (IFN)의 생성을 가져온다. 지금까지 9가지 인간 IRF들이 확인되었으며 (IRF-1-IRF-9), 각 군 구성원은 그 N-말단 결합 도메인들 (DBDs) 내에 광범위한 서열 상동성을 공유한다 (Mamane 등, (1999) Gene 237:1-14; Taniguchi 등, (2001) Annu Rev Immunol 19:623-655). IRF 군 중에서, IRF1, IRF3, IRF5, 및 IRF7은 구체적으로 I형 IFN 유전자 전사의 양성 조절인자들로 관련되어왔다 (Honda 등, (2006) Immunity 25(3):349-360). IRF1은 I형 IFN 유전자 프로모터를 활성화하는 것으로 발견된 첫번째 군 구성원이었다 (Miyamoto 등, (1988) Cell 54:903-913). IRF1이 I형 IFN 유전자 발현에 관여한다는 연구 결과가 있으나, 바이러스-감염된 IRF1-/-쥐과 섬유모세포에서 I형 IFN의 정상적인 유도가 관찰되었으며, 이는 불필요함(dispensability)을 제시하는 것이다 (Matsuyama 등, (1993) Cell 75:83-97). IRF5 또한 바이러스 또는 TLR 작용제에 의한 I형 IFN 유도에 불필요한 것으로 나타났다 (Takaoka 등, (2005) Nature 434:243-249).
따라서, 일부 양상들에서, 본 발명은 인간 IRF1, IRF3, IRF5, IRF7, IRF8, 및 IRF9의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNA를 면역 증강제로서 제공한다. 일부 양상들에서, 본 발명은 인간 IRF3 및/또는 IRF7의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNA를 제공한다.
선천 면역 반응 동안, IRF-3은 I형 IFNs의 초기 유도에 있어서 중요한 역할을 한다. IRF3 전사 인자는 항시적으로 발현되고 세포들의 핵과 세포질 사이에서 잠복 형태로 왕복하고, 인산화 이전에는 우세하게 세포액 국소화되어 있다 (Hiscott (2007) J Biol Chem 282(21):15325-15329; Kumar 등, (2000) Mol Cell Biol 20(11):4159-4168). TBK-1 (TANK 결합 키나아제 1; T2K 및 NAK로도 공지됨) 및/또는 IKKε(유도성 Iκ키나아제; IKKi로도 공지됨)에 의해 C-말단의 세린 잔기들이 인산화시, IRF3은 세포질로부터 핵으로 전위된다 (Fitzgerald 등, (2003) Nat Immuno 4(5):491-496; Sharma 등, (2003) Science 300:1148-1151; Hemmi 등, (2004) J Exp Med 199:1641-1650). IRF3의 전사 활성은 이들 인산화 및 전위 발생에 의해 매개된다. IRF3 활성화 모델은 C-말단 인산화가 동종- 및/또는 이종이량체화 (예컨대 IRF7와; Honda 등, (2006) Immunity 25(3):346-360 참고)를 촉진시키는 IRF3에서의 입체형태 변화, 핵 국소화, 및 전사 공동-활성화제 CBP 및/또는 p300과의 결합(association)을 유도함을 제시한다 (Lin 등, (1999) Mol Cell Biol 19(4):2465-2474). 불활성 IRF3은 항시적으로 핵 내부와 외부를 왕복하는 반면, 인산화된 IRF3 단백질들은 CBP 및/또는 p300과 결합된 채 유지되며, 핵 내에 보유되고, IFN 및 다른 유전자들의 전사를 유도한다 (Kumar 등, (2000) Mol Cell Biol 20(11):4159-4168).
IRF3와 대조적으로, IRF7은 대부분의 세포들에서 낮은 발현 수준을 나타내지만, I형 IFN-매개 신호전달에 의해 강력하게 유도되는데, 이는 IRF3이 주로 IFN 유전자들의 초기 유도를 담당하며 IRF7은 후기 유도 단계에 관여함을 제시하는 것이다 (Sato 등, 2000) Immunity 13(4):539-548). I형 IFN 수용체에 대한 리간드-결합은 IFN-자극된 유전자 인자 3 (ISGF3)으로 명명되는 이종삼량체 전사 활성화제를 활성화시키는데, 이 활성화제는 IRF9, STAT1, 및 STAT2로 구성되며, IRF7 유전자의 유도를 담당한다 (Marie 등, (1998) EMBO J 17(22):6660-6669). IRF3와 유사하게, IRF7은 C-말단 영역의 세린 인산화 후 세포질과 핵 사이를 분할시켜, 이의 이량체화 및 핵 전위를 가능하게 한다. IRF7은 IRF3와 동종이량체 또는 이종이량체를 형성하고 이들 상이한 이량체들 각각은 I형 IFN 유전자 군 구성원들에 대해 차등적으로 작용한다. IRF3은 IFN-α 유전자들 보다는 IFN-β유전자를 활성화시킴에 있어 더욱 효능있는 반면, IRF7은 IFN-α 및 IFN-β유전자들 모두를 효율적으로 활성화시킨다 (Marie 등, (1998) EMBO J 17(22):6660-6669).
본 명세서는, 본 명세서에 기재된 바와 같이 면역 증강제로서 사용하기 위한, 돌연변이체 인간 IRF3 및 돌연변이체 인간 IRF7 아이소형들을 비롯한 IRF3 및 IRF7의 항시적 활성 형태들을 인코딩하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 돌연변이체 인간 IRF3 및 IRF7 아이소형들을 비롯하여 IRF3 및 IRF7의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)들은 본 명세서의 서열 목록에 제시되어 있다. 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 인간 IRF3 폴리펩티드들에 대한 아미노산 잔기 넘버링은 Genbank 승인 번호 NP_001562로 해당 분야에서 이용가능한 427개 아미노산 잔기의 야생형 인간 IRF3 (아이소형 1)에 대해 사용된 넘버링에 해당한다. 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 인간 IRF7 폴리펩티드에 대한 아미노산 잔기 넘버링은 Genbank 승인 번호 NP_001563으로 해당 분야에서 이용가능한 503개 아미노산 잔기의 야생형 인간 IRF7 (아이소형 a)에 대해 사용된 넘버링에 해당한다.
따라서, 일부 양상들에서, 본 명세서는, 예를 들면, 서열 번호: 12의 아미노산 서열에 제시된 또는 서열 번호: 151 또는 212에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는, 예컨대, 아미노산 잔기 396에서의 돌연변이, 가령, 아미노산 치환, 가령, S396D 돌연변이를 가지는, 항시적 활성인 돌연변이체 인간 IRF3 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 다른 양상들에서, mRNA (예컨대, mmRNA) 구조체는, 예를 들면, 서열 번호: 11의 아미노산 서열에 제시된 또는 서열 번호: 150 또는 211에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 S396D 돌연변이를 포함하는 항시 활성 생쥐 IRF3 폴리펩티드를 인코드한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 항시적 활성인 돌연변이체 인간 IRF7 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 한 양상에서, 본 발명은 하나 이상의 점 돌연변이들 (야생형과 비교하여 아미노산 치환)을 포함하는 항시 활성 IR7 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 다른 양상들에서, 본 발명은 단백질의 절두 형태 (야생형과 비교하여 아미노산 결실)를 포함하는 항시 활성 IR7 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 또 다른 양상들에서, 본 발명은 하나 이상의 점 돌연변이들 (야생형과 비교하여 아미노산 결실과 아미노산 치환의 조합)을 또한 포함하는, 단백질의 절두 형태를 포함한 항시 활성 IR7 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다.
인간 IRF7 (아이소형 a)의 야생형 아미노산은 서열 번호: 13에 제시되며, 서열 번호: 152 또는 213에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드된다. 야생형 서열에 비해 점 돌연변이들, 결실, 또는 둘 모두를 포함하는 인간 IRF7의 일련의 항시적 활성 형태들을 제조하였다. 한 양상에서, 본 발명은 다음 돌연변이들 중 하나 이상을 포함하는 항시 활성 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는 면역 증강제 mRNA 구조체를 제공한다: S475D, S476D, S477D, S479D, L480D, S483D 및 S487D, 및 이의 조합. 다른 양상들에서, 본 발명은 서열 번호: 14의 아미노산 서열에 제시된, 서열 번호: 153 또는 214에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 돌연변이들 S477D 및 S479D를 포함하는 항시 활성 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 서열 번호: 15의 아미노산 서열에 제시된, 서열 번호: 154 또는 215에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 돌연변이들 S475D, S477D 및 L480D를 포함하는 항시 활성 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 다른 양상들에서, 본 발명은 서열 번호: 16의 아미노산 서열에 제시된, 서열 번호: 155 또는 216에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는 돌연변이들 S475D, S476D, S477D, S479D, S483D 및 S487D를 포함하는 항시 활성 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은, 서열 번호: 17의 아미노산 서열에 제시된, 서열 번호: 156 또는 217에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는, 아미노산 잔기 247-467의 결실을 포함하는 (즉, 아미노산 잔기 1-246 및 468-503을 포함하는) 항시 활성 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 또 다른 양상들에서, 서열 번호: 18의 아미노산 서열에 제시된, 서열 번호: 157 또는 218에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는, 아미노산 잔기 247-467의 결실을 포함 (즉, 아미노산 잔기 1-246 및 468-503을 포함)하고 돌연변이들 S475D, S476D, S477D, S479D, S483D 및 S487D를 추가로 포함하는, 항시 활성 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 서열 번호: 19의 아미노산 서열에 제시된, 서열 번호: 158 또는 219에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는, 잔기 152-246의 결실을 포함 (즉, 아미노산 잔기 1-151 및 247-503을 포함)하는 절두된 IRF7 불활성 “널(null)”폴리펩티드 구조체를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다 (예를 들면, 대조 목적으로 사용됨). 다른 양상들에서, 본 발명은 서열 번호: 20의 아미노산 서열에 제시된, 서열 번호: 159 또는 220에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코드되는, 잔기 1-151의 결실을 포함 (즉, 아미노산 잔기 152-503을 포함)하는 절두된 IRF7 불활성 “널(null)”폴리펩티드 구조체를 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다 (예를 들면, 대조 목적으로 사용됨).
I형 IFN을 활성화시키는 추가 면역 증강제 mRNA
상기 STING 및 IRF mRNA 구조체들 이외에도, 본 발명은 I형 IFN 신호전달 경로의 활성화를 통해 면역 반응들을 개선하기 위한 면역 증강제들로서 사용될 수 있는 I형 IFN 신호전달 경로의 추가 성분들을 인코드하는 mRNA 구조체들을 제공한다. 예를 들면, 한 구체예에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 MyD88 단백질을 인코드한다. MyD88은 IRF7의 상류에서 신호전달함이 해당 분야에 공지이다. 한 양상에서, 본 발명은 항시 활성 MyD88 단백질, 가령, 하나 이상의 점 돌연변이들을 가지는 돌연변이체 MyD88 단백질을 인코드하는 mmRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 한 양상에서, 본 발명은 각각 서열 번호: 75 및 76에 제시된, L265P 치환을 가지는 돌연변이체 인간 또는 생쥐 MyD88 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다.
또 다른 양상에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 TRAM (TICAM2) 단백질을 인코드한다. TRAM이 IRF3의 상류에서 신호전달함은 해당 분야에 공지이다. 한 양상에서, 본 발명은 항시 활성 TRAM 단백질, 가령, 하나 이상의 점 돌연변이들을 가지는 돌연변이체 TRAM 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 포함한다. 또 다른 양상에서, 본 발명은 과발현된 야생형 TRAM 단백질을 포함한다. 한 양상에서, 본 발명은 서열 번호: 77에 제시된 생쥐 TRAM 단백질을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다.
또 다른 양상들에서, 본 발명은 TBK1 또는 IKKi의 항시적 활성 형태들을 비롯하여, TANK-결합 키나아제 1 (TBK1) 또는 유도성 Iκ키나아제 (IKKi, IKKε로도 공지됨)를 인코드하는 면역 증강제 mRNA 구조체를, 면역 증강제로서 제공한다. TBK1 및 IKKi는 IRF3 및 IRF7을 인산화시켜, I형 IFN 신호전달 경로에서 IRF3 및 IRF7의 상류에서 작용하는 바이러스-활성화된 키나아제의 성분들임이 밝혀졌다 (Sharma, S. 등 (2003) Science 300:1148-1151). TBK1 및 IKKi는 I형 IFN 유전자들 뿐만 아니라 IFN-유도성 유전자들의 발현을 유도하는 전사 인자들 (예컨대 IRF3/7 & NF-κ의 인산화 및 활성화에 관여한다 (Fitzgerald, K.A. 등, (2003) Nat Immunol 4(5):491-496).
따라서, 한 양상에서, 본 발명은 돌연변이체 인간 TBK1 아이소형들을 포함하여 TBK1의 항시 활성 형태를 비롯한 TBK1 단백질을 인코드하는 면역 증강제 mRNA 구조체를 제공한다. 또 다른 양상들에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 돌연변이체 인간 IKKi 아이소형들을 포함하여 IKKi의 항시 활성 형태를 비롯한 IKKi 단백질을 인코드한다.
염증 반응들을 자극하는 면역 증강제 mRNA
다른 양상들에서, 본 발명은 염증 반응을 자극함으로써 면역 반응을 개선하는 면역 증강제 mRNA 구조체를 제공한다. 염증 반응을 자극하는 비-제한적 예들은 STAT1, STAT2, STAT4 및 STAT6을 포함한다. 따라서, 본 발명은, 항시 활성 형태를 포함하는, 이들 염증-유도 단백질들 중 하나 또는 이들의 조합을 인코드하는 면역 증강제 mRNA 구조체를 제공한다.
본 명세서는, 본 명세서에 기재된 바와 같이 면역 증강제로서 사용하기 위한, 돌연변이체 인간 STAT6 아이소형들을 비롯한 STAT6의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 돌연변이체 인간 STAT6 아이소형들을 비롯한 STAT6의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)들은 본 명세서의 서열 목록에 제시되어 있다. 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 인간 STAT6 폴리펩티드들에 대한 아미노산 잔기 넘버링은 Genbank 승인 번호 NP_001171550.1로 해당 분야에서 이용가능한 847개 아미노산 잔기의 야생형 인간 STAT6 (아이소형 1)에 대해 사용된 넘버링에 해당한다.
한 구체예에서, 본 발명은 S407D, V547A, T548A, Y641F, 및 이의 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 아미노산 돌연변이들을 포함하는 항시 활성 인간 STAT6 구조체를 인코드하는 mRNA 구조체를 제공한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 78에 제시된 서열의 V547A 및 T548A 돌연변이들을 포함하는 항시 활성 인간 STAT6 구조체를 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 79에 제시된 서열의 S407D 돌연변이들을 포함하는 항시 활성 인간 STAT6 구조체를 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 80에 제시된 서열의 S407D, V547A 및 T548A 돌연변이들을 포함하는 항시 활성 인간 STAT6 구조체를 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 81에 제시된 서열의 V547A, T548A 및 Y641F 돌연변이들을 포함하는 항시 활성 인간 STAT6 구조체를 인코드한다.
NFkB 신호전달을 자극하는 면역 증강제 mRNA
다른 양상들에서, 본 발명은 면역 반응들의 자극에 관여하는 것으로 공지된 NFkB 신호전달을 자극함으로써 면역 반응을 개선하는 면역 증강제 mRNA 구조체를 제공한다. NFkB 신호전달을 자극하는 단백질들의 비-제한적 예들에는 c-FLIP, IKKβRIPK1, Btk 및 TAK-TAB1이 포함된다. 따라서, 본 발명의 면역 증강제 mRNA 구조체는 예를 들면, 항시 활성 형태의, 이러한 임의의 NFkB 경로-유도 단백질들을 인코드 할 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명은 항시 활성 c-FLIP를 비롯하여 c-FLIP (세포상 카스파제 8 (FLICE)-유사 억제 단백질) 단백질 (해당 분야에서 CASP8 및 FADD-유사 세포사멸 조절자로도 공지됨)을 인코드하는 NFκB 신호전달을 활성화하는 면역 증강제 mRNA 구조체를 제공한다. 본 명세서는 본 명세서에 기재된 면역 증강제로서 사용하기 위한 돌연변이체 인간 c-FLIP 아이소형들을 비롯한 c-FLIP의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)를 제공한다. 돌연변이체 인간 c-FLIP 아이소형들을 비롯한 c-FLIP의 항시적 활성 형태들을 인코드하는 mRNA (예컨대, mmRNA)는 본 명세서의 서열 목록에 제시되어 있다. 본 명세서에서 사용되는 돌연변이체 인간 c-FLIP 폴리펩티드들에 대한 아미노산 잔기 넘버링은 Genbank 승인 번호 NP_003870으로 해당 분야에서 이용가능한 480개 아미노산 잔기의 야생형 인간 c-FLIP (아이소형 1)에 대해 사용된 넘버링에 해당한다.
한 구체예에서, mRNA는, 가령, 서열 번호: 82에 제시된 서열을 가지는, 두 개의 DED 도메인인 p20 도메인과 p12 도메인을 포함하는 c-FLIP 긴 (L) 아이소형을 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA는, 가령, 서열 번호: 83에 제시된 서열을 가지는, 두 개의 DED 도메인들을 포함하는, 아미노산 1-227을 인코드하는 c-FLIP 짧은 (들) 아이소형을 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA는, 가령, 서열 번호: 84에 제시된 서열을 가지는, 아미노산 1-198을 인코드하는 c-FLIP p22 절단 생성물을 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA는, 가령, 서열 번호: 85에 제시된 서열을 가지는, 아미노산 1-376을 인코드하는 c-FLIP p43 절단 생성물을 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA는, 가령, 서열 번호: 86에 제시된 서열을 가지는, 아미노산 377-480을 인코드하는 c-FLIP p12 절단 생성물을 인코드한다.
또 다른 구체예에서, NFkB 신호전달을 활성화시키는 면역 증강제 mRNA 구조체는 항시 활성 IKKα mRNA 구조체 또는 항시 활성 IKKβ mRNA 구조체를 인코드한다. 한 구체예에서, 항시적 활성 인간 IKKα 폴리펩티드는, 가령, 서열 번호: 87에 제시된 서열의 S177E 및 S181E 돌연변이들을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 항시적 활성 인간 IKKβ 폴리펩티드는, 가령, 서열 번호: 88에 제시된 서열의, S177A 및 S181A 돌연변이들을 포함한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는 항시 활성 생쥐 IKKβ 폴리펩티드를 인코드한다. 한 구체예에서, 항시적 활성 생쥐 IKKβ 폴리펩티드는, 가령, 서열 번호: 148에 제시된 서열의 S177E 및 S181E 돌연변이들을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 항시적 활성 생쥐 IKKβ 폴리펩티드는 서열 번호: 89에 제시된 서열의 S177A 및 S181A 돌연변이들을 포함한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는 서열번호: 91-92 (인간) 또는 95-96 (생쥐)에 제시된 서열을 가지는, PEST 돌연변이를 포함하는 항시 활성 인간 또는 생쥐 IKKα 폴리펩티드를 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는 서열번호: 93-94 (인간) 또는 97-98 (생쥐)에 제시된 서열을 가지는, PEST 돌연변이를 포함하는 항시 활성 인간 또는 생쥐 IKKβ 폴리펩티드를 인코드한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 수용체-상호작용 단백질 키나아제 1 (RIPK1) 단백질을 인코드하는 NFkB 신호전달을 활성화시키는 면역 증강제 mRNA 구조체를 제공한다. 면역원성 세포 사멸을 유도하는 RIPK1 구조체들을 인코드하는 DNA 구조체들의 구조는 해당 분야에, 예를 들면, Yatim, N. 등 (2015) Science 350:328-334 또는 Orozco, S. 등 (2014) Cell Death Differ. 21:1511-1521에 기재되어 있으며, 또한 활성 NFkB 신호전달에 적합한 본 명세서에 제시된 RNA 구조체들의 설계에서 사용될 수 있다 (실시예 참고). 한 구체예에서, 상기 mRNA 구조체는 인간 또는 생쥐 RIPK1 폴리펩티드의 RIPK1 아미노산 1-555 뿐만 아니라, 가령, 서열 번호: 99 (인간) 또는 102 (생쥐)에 제시된 서열을 가지는 IZ 도메인을 인코드한다. 한 구체예에서, 상기 mRNA 구조체는 인간 또는 생쥐 RIPK1 폴리펩티드의 RIPK1 아미노산 1-555 뿐만 아니라, 가령, 서열 번호: 100 (인간) 또는 103 (생쥐)에 제시된 서열을 가지는 EE 및 DM 도메인들을 인코드한다. 한 구체예에서, 상기 mRNA 구조체는 인간 또는 생쥐 RIPK1 폴리펩티드의 RIPK1 아미노산 1-555 뿐만 아니라, 가령, 서열 번호: 101 (인간) 또는 104 (생쥐)에 제시된 서열을 가지는 RR 및 DM 도메인들을 인코드한다.
또한 또 다른 구체예에서, NFkB 신호전달을 활성화시키는 면역 증강제 mRNA 구조체는 Btk 폴리펩티드, 가령, 돌연변이체 Btk 폴리펩티드, 가령, Btk(E41K) 폴리펩티드 (예컨대, 서열 번호: 114에 제시된 ORF 아미노산 서열을 인코딩함)를 인코드한다.
또한 또 다른 구체예에서, NFkB 신호전달을 활성화시키는 면역 증강제 mRNA 구조체는 TAK-TAB1 단백질, 가령, 항시 활성 TAK-TAB1을 인코드한다. 한 구체예에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 서열 번호: 105에 제시된 서열을 가지는 인간 TAK-TAB1 단백질을 인코드한다.
추가적인 면역 증강제 mRNA
본 발명은 추가의 면역 증강제 mRNA 구조체들을 제공한다. 예를 들면, 한 구체예에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 낮은 pI (DIABLO)를 가지는 직접 IAP 결합 단백질을 인코드한다 (SMAC/DIABLO로도 공지됨). 본 명세서의 실시예들에 기재된 바와 같이, DIABLO 구조체들은 사이토카인의 방출을 유도한다. 한 구체예에서, 본 발명은 야생형 인간 DIABLO 아이소형 1 서열을 인코드하는, 가령, 서열 번호: 106에 제시된 서열을 가지는 mRNA 구조체를 제공한다 (해당 분야에 Genbank 승인 번호. NP_063940.1로 개시된 239개 아미노산 인간 DIABLO 아이소형 1 전구체에 해당). 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 107에 제시된 서열을 가지는 S126L 돌연변이를 포함하는 인간 DIABLO 아이소형 1 서열을 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 108에 제시된 서열을 가지는 인간 DIABLO 아이소형 1의 아미노산 56-239를 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는 인간 DIABLO 아이소형 1의 아미노산 56-239를 인코드하며 서열 번호: 109에 제시된 서열을 가지는 S126L 돌연변이를 포함한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 110에 제시된 서열을 가지는 야생형 인간 DIABLO 아이소형 3 서열을 인코드한다 (Genbank 승인 번호 NP_001265271.1로 해당 분야에 개시된 195개 아미노산 인간 DIABLO 아이소형 3에 해당). 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 110에 제시된 서열을 가지는 S82L 돌연변이를 포함하는 인간 DIABLO 아이소형 3 서열을 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는, 가령, 서열 번호: 111에 제시된 서열을 가지는, 인간 DIABLO 아이소형 3의 아미노산 56-195를 인코드한다. 또 다른 구체예에서, mRNA 구조체는 인간 DIABLO 아이소형 3의 아미노산 56-195를 인코드하며 서열 번호: 112에 제시된 서열을 가지는 S82L 돌연변이를 포함한다.
또 다른 구체예들에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 SOC3 폴리펩티드를 인코드하거나 (예컨대, 서열 번호: 115에 제시된 ORF 아미노산 서열을 인코드함) 또는 자기-활성화 카스파제-1 폴리펩티드를 인코드하며 (예컨대, 서열 번호: 116-119에 제시된 임의의 ORF 아미노산 서열을 인코드함), 이는 전-IL1 및 전-IL18의 그 각각의 성숙 형태들로의 절단을 촉진시킬 수 있다.
또한 다른 구체예들에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 수지상 세포 (DC) 활성을 조절하는, 가령, DC 생성, 활성 또는 이동을 자극하는 단백질을 인코드한다. DC 이동을 자극하는 단백질의 비-제한적 예는 FLT3이다. 따라서, 한 구체예에서, 면역 증강제 mRNA 구조체는 FLT3 단백질을 인코드한다.
면역 증강제 mRNA 구조체는 전형적으로 폴리펩티드-인코딩 서열들 이외에도, mRNA 구조체에 관해 본 명세서에 기재되어 있는 다른 구조적 성질들 (예컨대, 본 명세서에 기재된, 변형된 핵염기들, 5' 캡, 5' UTR, 3' UTR, miR 결합 부위(들), 폴리A 꼬리)을 포함한다. 적합한 mRNA 구조체 성분들이 본 명세서에 기재되어 있다.
관심 암 항원 및 면역 증강제의 조성물
또 다른 양상에서, 본 발명은 다음을 인코드하는 최소한 하나의 전령 RNA (예컨대, 변형된 mRNA (mmRNA))를 포함하는 조성물을 제공한다: (i) 최소한 하나의 관심 항원 (활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들)); 및 (ii) 최소한 하나의 mRNA가 대상체에 투여될 때 최소한 하나의 관심 항원(활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들))에 대한 면역 반응을 개선하는 최소한 하나의 폴리펩티드, 이 때 상기 mRNA는 하나 이상의 변형된 핵염기들을 포함한다. 그러므로, 본 발명은 면역 증강제 mRNA 및 관심 항원(활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드(들))을 인코드하는 mRNA를 포함하는 조성물을 제공하며, 이 때 단일 mRNA 구조체는 관심 항원(들) 및 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드 모두를 인코드할 수 있으며, 또는, 대안적으로, 상기 조성물은 둘 이상의 별도의 mRNA 구조체들, 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA (또는 제 3 또는 제 4 mRNA)를 포함할 수 있고, 이 때 제 1 mRNA는 최소한 하나의 관심 항원을 인코드하고 제 2 mRNA는 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드한다 (즉, 제 2 mRNA는 면역 증강제를 포함한다).
관심 항원(들)을 인코드하는 제 1 mRNA 및 관심 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 제 2 mRNA를 포함하는 구체예들에서, 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 함께 공동제제화 (예컨대, 공동투여 이전), 가령, 동일한 지질 나노입자에서 공동제제화 될 수 있다.
관심 항원(들) 및 관심 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드 모두를 인코드하는 단일 mRNA를 포함하는 구체예들에서, 폴리펩티드를 인코드하는 서열들은 관심 항원을 인코드하는 서열들의 상류 또는 하류에 있는 mRNA 구조체 상에 위치될 수 있다. 예를 들면, 항원 및 면역자극성 폴리펩티드 모두를 인코드하는 mRNA 구조체들의 비-제한적 예들은 최소한 하나의 돌연변이체 KRAS 항원 및 항시 활성 STING 폴리펩티드를 인코드하는, 예컨대, 서열 번호: 48-71 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 인코드하는 구조체들을 포함한다. 한 구체예에서, 항시적 활성 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 48-57에 도시된 바와 같이, 구조체의 N-말단 단부 (즉, 항원-인코드 서열들의 상류)에 위치한다. 또 다른 구체예에서, 항시적 활성 STING 폴리펩티드는 서열 번호: 58-71에 도시된 바와 같이, 구조체의 C-말단 단부 (즉, 항원-인코드 서열들의 하류)에 위치한다.
본 발명의 면역 증강제 mRNA와 병용하여 사용될 수 있는 관심 항원들을 인코드하는 다양한 mRNA (예컨대, mRNA 백신)는 하기 더욱 상세히 기재된다.
mRNA 구조체 성분들
mRNA는 자연적으로 또는 비-자연적으로 발생하는 mRNA일 수 있다. mRNA는 하기 기재되는 하나 이상의 변형된 핵염기, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드를 포함할 수 있으며, 이러한 사례에서 이는 “변형된 mRNA”또는 “”로 지칭될 수 있다. 본 명세서에 기재된 “뉴클레오시드”는 유기 염기 (예컨대, 퓨린 또는 피리미딘) 또는 이의 유도체 (또한 본 명세서에서 “핵염기”로 지칭됨)와 함께 당 분자 (예컨대, 오탄당 또는 리보오스)를 내포하는 화합물 또는 이의 유도체로 정의된다. 본 명세서에 기재된 “뉴클레오티드”는 포스페이트 그룹을 포함하는 뉴클레오시드로 정의된다.
mRNA는 5' 비번역 영역 (5'-UTR), 3' 비번역 영역 (3'-UTR), 및/또는 코드화 영역 (예컨대, 개방 해독 프레임)을 포함할 수 있다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 5' UTR이 서열 번호: 21에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 3' UTR이 서열 번호: 22에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 miR-122 및 miR-142.3p 결합 부위들을 포함하는 예시적인 3' UTR이 서열 번호: 23에 제시된다. mRNA는 수십 (예컨대, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100), 수백 (예컨대, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 또는 900) 또는 수천 (예컨대, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10,000)개의 염기쌍을 포함한, 임의의 적합한 수의 염기쌍을 포함할 수 있다. 임의의 수 (예컨대, 모두, 일부, 또는 0)의 핵염기, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드들은 치환된, 변형된, 또는 그 외에 비-자연적으로 발생하는 일반적인 종들의 유사체들 일 수 있다. 특정 구체예들에서, 특정 핵염기 유형 모두는 변형될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 mRNA는 5' 캡 구조, 사슬 종결 뉴클레오티드, 선택적으로 Kozak 서열 (Kozak 공통 서열로도 공지됨), 스템 루프, 폴리A 서열, 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다.
5' 캡 구조 또는 캡 종들은 링커에 의해 결합되는 2개의 뉴클레오시드 모이어티들을 포함하는 화합물이며 자연 발생 캡, 비-자연 발생 캡 또는 캡 유사체, 또는 항-역전사 캡 유사체 (ARCA)로부터 선택될 수 있다. 캡 종들은 하나 이상의 변형된 뉴클레오시드 및/또는 링커 모이어티를 포함할 수 있다. 예를 들면, 자연 mRNA 캡은 구아닌 뉴클레오티드 및 이의 5' 위치에서 트리포스페이트 링키지에 의해 결합된 7 위치에서 메틸화된 구아닌 (G) 뉴클레오티드, 예컨대, m7GpppG로 일반적으로 표기되는 m7G(5')ppp(5')G를 포함할 수 있다. 캡 종들은 또한 항-역전사 캡 유사체 일 수 있다. 가능한 캡 종들의 비-제한적 목록에는 m7GpppG, m7Gpppm7G, m73′m2 7,O3′GpppG, m2 7,O3′GppppG, m2 7,O2′GppppG, m7Gpppm7G, m73′m2 7,O3′GpppG, m2 7,O3′GppppG, 및 m2 7,O2′GppppG가 포함된다.
mRNA는 사슬 종결 뉴클레오시드를 대신 또는 추가적으로 포함할 수 있다. 예를 들면, 사슬 종결 뉴클레오시드는 그 당 그룹의 2' 및/또는 3' 위치에 탈산소화된 뉴클레오시드들을 포함할 수 있다. 이러한 종들은 3'-데옥시아데노신 (코르디세핀), 3'-데옥시우리딘, 3'-데옥시시토신, 3'-데옥시구아노신, 3'-데옥시티민, 및 2',3'-다이데옥시뉴클레오시드, 가령, 2',3'-다이데옥시아데노신, 2',3'-다이데옥시우리딘, 2',3'-다이데옥시시토신, 2',3'-다이데옥시구아노신, 및 2',3'-다이데옥시티민을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에서, 사슬 종결 뉴클레오티드를 mRNA 내부에, 예를 들면, 3'-말단에 혼입시키면, 예를 들면, 국제 특허 출원 공개 공보 WO 2013/103659에 기재된 바와 같이 mRNA를 안정화시킬 수 있다.
mRNA는 스템 루프, 가령, 히스톤 스템 루프를 대신 또는 추가로 포함할 수 있다. 스템 루프는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8개, 또는 그 이상의 뉴클레오티드 염기쌍들을 포함할 수 있다. 예를 들면, 스템 루프는 4, 5, 6, 7, 또는 8개 뉴클레오티드 염기쌍을 포함할 수 있다. 스템 루프는 임의의 mRNA 영역에 위치할 수 있다. 예를 들면, 스템 루프는 비번역 영역 (5' 비번역 영역 또는 3' 비번역 영역), 코드화 영역, 또는 폴리A 서열 또는 꼬리에, 이들 앞에, 또는 이들 뒤에 위치할 수 있다. 일부 구체예들에서, 스템 루프는 mRNA의 하나 이상의 기능(들), 가령, 번역 개시, 번역 효율, 및/또는 전사 종결에 영향을 줄 수 있다.
mRNA는 폴리A 서열 및/또는 폴리아데닐화 신호를 대신 또는 추가로 포함할 수 있다. 폴리A 서열은 전적으로 또는 대부분 아데닌 뉴클레오티드 또는 이의 유사체 또는 유도체로 구성될 수 있다. 폴리A 서열은 mRNA의 3' 비번역 영역에 인접하여 위치한 꼬리일 수 있다. 일부 구체예들에서, 폴리A 서열은 mRNA의 핵 방출, 번역, 및/또는 안정성에 영향을 줄 수 있다.
mRNA는 마이크로RNA 결합 부위를 대신 또는 추가적으로 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, mRNA는 제 1 및 제 2 코드화 영역들 사이에서 내부 번역 개시를 가능하게 하는 내부 리보솜 유입 부위 (IRES) 서열을 포함하는 개재 서열, 또는 자기-절단 펩티드, 가령, 2A 펩티드를 인코드하는 개재 서열을 가지는 제 1 코드화 영역 및 제 2 코드화 영역을 포함하는 바이시스트론 mRNA이다. IRES 서열 및 2A 펩티드들은 전형적으로 동일한 벡터로부터 다수의 단백질들의 발현을 개선하기 위해 사용된다. 다수의 IRES 서열들이 해당 분야에 공지되고 이용가능하며 예컨대, 뇌심근염 바이러스 IRES를 비롯한 것들이 사용될 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 자기-절단 펩티드를 인코드하는 서열을 포함할 수 있다. 자기-절단 펩티드는 2A 펩티드 일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 수많은 2A 펩티드들이 해당 분야에 공지되고 이용가능하며 예컨대, 수족구병 바이러스 (FMDV) 2A 펩티드, 마 비염 A 바이러스 2A 펩티드, 토세아 아시그나 (Thosea asigna) 바이러스 2A 펩티드, 및 돼지 테스코바이러스-1 2A 펩티드를 비롯한 것들이 사용될 수 있다. 2A 펩티드들은 여러 바이러스들에 의해 사용되어 리보솜-스킵핑에 의해 하나의 전사체로부터 2개의 단백질들을 생성하고, 그리하여 2A 펩티드 서열에서 정상 펩티드 결합이 손상되고, 이는 하나의 번역 사례로부터 생성되는 2개의 불연속 단백질들을 생성하게 된다. 비-제한적 예로서, 2A 펩티드는 다음과 같은 단백질 서열을 가질 수 있다: GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 번호: 24), 이의 단편 또는 변이체. 한 구체예에서, 2A 펩티드는 마지막 글리신과 마지막 프롤린 사이를 절단한다. 또 다른 비-제한적 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 단백질 서열 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열 번호: 24)을 가지는 2A 펩티드, 이의 단편 또는 변이체를 인코드하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 2A 펩티드를 인코드하는 폴리뉴클레오티드 서열의 한 예는 다음과 같다: GGAAGCGGAGCTACTAACTTCAGCCTGCTGAAGCAGGCTGGAGACGTGGAGGAGAACCCTGGACCT (서열번호: 25). 한 설명적 구체예에서, 2A 펩티드는 다음 서열에 의해 인코드된다: 5'-TCCGGACTCAGATCCGGGGATCTCAAAATTGTCGCTCCTGTCAAACAAACTCTTAACTTTGATTTACTCAAACTGGCTGGGGATGTAGAAAGCAATCCAGGTCCACTC-3'(서열번호: 26). 2A 펩티드의 폴리뉴클레오티드 서열은 본 명세서에 기재된 및/또는 해당 분야에 공지된 방법들에 의해 변형 또는 코돈 최적화 될 수 있다.
한 구체예에서, 이 서열은 둘 이상의 관심 폴리펩티드들의 코드화 영역들을 분리하기 위해 사용될 수 있다. 비-제한적 예로서, F2A 펩티드를 인코드하는 서열은 제 1 코드화 영역 A와 제 2 코드화 영역 B (A-F2Apep-B) 사이에 존재할 수 있다. F2A 펩티드의 존재는 F2A 펩티드 서열 단부에 있는 글리신과 프롤린 사이의 하나의 긴 단백질을 절단시켜 (NPGP는 절단되어 NPG 및 P를 생성함) 별도의 단백질 A (부착된 F2A 펩티드의 21개 아미노산을 가짐, NPG로 끝남)와 별도의 단백질 B (부착된 F2A 펩티드의 1개 아미노산, P를 가짐)를 생성한다. 유사하게, 다른 2A 펩티드들 (P2A, T2A 및 E2A)에 있어서, 긴 단백질 내 펩티드의 존재는 2A 펩티드 서열 단부에서 글리신과 프롤린 사이를 절단시킨다 (NPGP는 절단되어 NPG 및 P를 생성함). 단백질 A 및 단백질 B는 동일 또는 상이한 관심 펩티드 또는 폴리펩티드 일 수 있다. 특정 구체예들에서, 단백질 A는 면역원성 세포 사멸을 유도하는 폴리펩티드이고 단백질 B는 염증성 및/또는 면역 반응을 자극하고 및/또는 면역 반응성을 조절하는 또 다른 폴리펩티드이다 (하기 추가로 기재됨).
변형된 mRNA
일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 하나 이상의 변형된 핵염기들, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드를 포함한다 (“변형된 mRNA”또는 "mmRNA"로 명명함). 일부 구체예들에서, 변형된 mRNA는, 비변형된 기준 mRNA와 비교하여, mRNA가 도입되는 세포의 개선된 안정성, 세포내 잔류, 개선된 번역, 및/또는 선천 면역 반응의 실질적 유도가 없음을 비롯한 유용한 성질들을 가질 수 있다. 그러므로, 변형된 mRNA의 사용은 단백질 생성의 효율성, 핵산의 세포내 잔류를 개선할 수 있을 뿐만 아니라 감소된 면역원성을 가진다.
일부 구체예들에서, mRNA는 하나 이상의 (예컨대, 1, 2, 3 또는 4개) 상이한 변형된 핵염기들, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드들을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 하나 이상의 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100개, 또는 그 이상) 상이한 변형된 핵염기, 뉴클레오시드, 또는 뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구체예들에서, 변형된 mRNA는 상응하는 비변형된 mRNA와 비교하여, mRNA가 도입되는 세포에서 분해가 감소될 수 있다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 변형된 우라실이다. 변형된 우라실을 가지는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 수도우리딘 (ψ),피리딘-4-온 리보뉴클레오시드, 5-아자-우리딘, 6-아자-우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-우리딘 (s2U), 4-싸이오-우리딘 (s4U), 4-싸이오-수도우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 5-하이드록시-우리딘 (ho5U), 5-아미노알릴-우리딘, 5-할로-우리딘 (예컨대, 5-아이오도-우리딘 또는 5-브로모-우리딘), 3-메틸-우리딘 (m3U), 5-메톡시-우리딘 (mo5U), 우리딘 5-옥시아세틱 애시드 (cmo5U), 우리딘 5-옥시아세틱 애시드 메틸 에스터 (mcmo5U), 5-카르복시메틸-우리딘 (cm5U), 1-카르복시메틸-수도우리딘, 5-카르복시하이드록시메틸-우리딘 (chm5U), 5-카르복시하이드록시메틸-우리딘 메틸 에스터 (mchm5U), 5-메톡시카르보닐메틸-우리딘 (mcm5U), 5-메톡시카르보닐메틸-2-싸이오-우리딘 (mcm5s2U), 5-아미노메틸-2-싸이오-우리딘 (nm5s2U), 5-메틸아미노메틸-우리딘 (mnm5U), 5-메틸아미노메틸-2-싸이오-우리딘 (mnm5s2U), 5-메틸아미노메틸-2-셀레노-우리딘 (mnm5se2U), 5-카르바모일메틸-우리딘 (ncm5U), 5-카르복시메틸아미노메틸-우리딘 (cmnm5U), 5-카르복시메틸아미노메틸-2-싸이오-우리딘 (cmnm5s2U), 5-프로피닐-우리딘, 1-프로피닐-수도우리딘, 5-타우리노메틸-우리딘 (τ5U), 1-타우리노메틸-수도우리딘, 5-타우리노메틸-2-싸이오-우리딘(τ5s2U), 1-타우리노메틸-4-싸이오-수도우리딘, 5-메틸-우리딘 (m5U, 즉, 핵염기 데옥시티민을 가짐), 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ), 5-메틸-2-싸이오-우리딘 (m5s2U), 1-메틸-4-싸이오-수도우리딘 (m1s4ψ), 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 3-메틸-수도우리딘 (m3ψ), 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 다이하이드로우리딘 (D), 다이하이드로수도우리딘, 5,6-다이하이드로우리딘, 5-메틸-다이하이드로우리딘 (m5D), 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-메톡시-우리딘, 2-메톡시-4-싸이오-우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, N1-메틸-수도우리딘, 3-(3-아미노-3-카르복시프로필)우리딘 (acp3U), 1-메틸-3-(3-아미노-3-카르복시프로필)수도우리딘 (acp3 ψ5-(아이소펜테닐아미노메틸)우리딘 (inm5U), 5-(아이소펜테닐아미노메틸)-2-싸이오-우리딘 (inm5s2U), α-싸이오-우리딘, 2′메틸-우리딘 (Um), 5,2′다이메틸-우리딘 (m5Um), 2′메틸-수도우리딘 (ψ, 2-싸이오-2′메틸-우리딘 (s2Um), 5-메톡시카르보닐메틸-2′메틸-우리딘 (mcm5Um), 5-카르바모일메틸-2′메틸-우리딘 (ncm5Um), 5-카르복시메틸아미노메틸-2′메틸-우리딘 (cmnm5Um), 3,2′다이메틸-우리딘 (m3Um), 및 5-(아이소펜테닐아미노메틸)-2′메틸-우리딘 (inm5Um), 1-싸이오-우리딘, 데옥시티미딘, 2'-F-아라-우리딘, 2'-F-우리딘, 2'-OH-아라-우리딘, 5-(2-카르보메톡시비닐) 우리딘, 및 5-[3-(1-E-프로페닐아미노)]우리딘을 포함한다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 변형된 시토신이다. 변형된 시토신을 가지는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 5-아자-시티딘, 6-아자-시티딘, 수도아이소시티딘, 3-메틸-시티딘 (m3C), N4-아세틸-시티딘 (ac4C), 5-포르밀-시티딘 (f5C), N4-메틸-시티딘 (m4C), 5-메틸-시티딘 (m5C), 5-할로-시티딘 (예컨대, 5-아이오도-시티딘), 5-하이드록시메틸-시티딘 (hm5C), 1-메틸-수도아이소시티딘, 피롤로-시티딘, 피롤로-수도아이소시티딘, 2-싸이오-시티딘 (s2C), 2-싸이오-5-메틸-시티딘, 4-싸이오-수도아이소시티딘, 4-싸이오-1-메틸-수도아이소시티딘, 4-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도아이소시티딘, 1-메틸-1-데아자-수도아이소시티딘, 제불라린, 5-아자-제불라린, 5-메틸-제불라린, 5-아자-2-싸이오-제불라린, 2-싸이오-제불라린, 2-메톡시-시티딘, 2-메톡시-5-메틸-시티딘, 4-메톡시-수도아이소시티딘, 4-메톡시-1-메틸-수도아이소시티딘, 리시딘 (k2C), α-싸이오-시티딘, 2′메틸-시티딘 (Cm), 5,2′다이메틸-시티딘 (m5Cm), N4-아세틸-2′메틸-시티딘 (ac4Cm), N4,2′다이메틸-시티딘 (m4Cm), 5-포르밀-2′메틸-시티딘 (f5Cm), N4,N4,2′트라이메틸-시티딘 (m4 2Cm), 1-싸이오-시티딘, 2'-F-아라-시티딘, 2'-F-시티딘, 및 2'-OH-아라-시티딘을 포함한다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 변형된 아데닌이다. 변형된 아데닌을 가지는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 α-싸이오-아데노신, 2-아미노-퓨린, 2, 6-다이아미노퓨린, 2-아미노-6-할로-퓨린 (예컨대, 2-아미노-6-클로로-퓨린), 6-할로-퓨린 (예컨대, 6-클로로-퓨린), 2-아미노-6-메틸-퓨린, 8-아지도-아데노신, 7-데아자-아데닌, 7-데아자-8-아자-아데닌, 7-데아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-8-아자-2-아미노-퓨린, 7-데아자-2,6-다이아미노퓨린, 7-데아자-8-아자-2,6-다이아미노퓨린, 1-메틸-아데노신 (m1A), 2-메틸-아데닌 (m2A), N6-메틸-아데노신 (m6A), 2-메틸싸이오-N6-메틸-아데노신 (ms2m6A), N6-아이소펜테닐-아데노신 (i6A), 2-메틸싸이오-N6-아이소펜테닐-아데노신 (ms2i6A), N6-(시스-하이드록시아이소펜테닐)아데노신 (io6A), 2-메틸싸이오-N6-(시스-하이드록시아이소펜테닐)아데노신 (ms2io6A), N6-글리시닐카르바모일-아데노신 (g6A), N6-트레오닐카르바모일-아데노신 (t6A), N6-메틸-N6-트레오닐카르바모일-아데노신 (m6t6A), 2-메틸싸이오-N6-트레오닐카르바모일-아데노신 (ms2g6A), N6,N6-다이메틸-아데노신 (m6 2A), N6-하이드록시노르발릴카르바모일-아데노신 (hn6A), 2-메틸싸이오-N6-하이드록시노르발릴카르바모일-아데노신 (ms2hn6A), N6-아세틸-아데노신 (ac6A), 7-메틸-아데닌, 2-메틸싸이오-아데닌, 2-메톡시-아데닌, α-싸이오-아데노신, 2′메틸-아데노신 (Am), N6,2′다이메틸-아데노신 (m6Am), N6,N6,2′트라이메틸-아데노신 (m6 2Am), 1,2′다이메틸-아데노신 (m1Am), 2′리보실아데노신 (포스페이트) (Ar(p)), 2-아미노-N6-메틸-퓨린, 1-싸이오-아데노신, 8-아지도-아데노신, 2'-F-아라-아데노신, 2'-F-아데노신, 2'-OH-아라-아데노신, 및 N6-(19-아미노-펜타옥사노나데실)-아데노신을 포함한다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 변형된 구아닌이다. 변형된 구아닌을 가지는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드는 α-싸이오-구아노신, 이노신 (I), 1-메틸-이노신 (m1I), 와이오신 (imG), 메틸와이오신 (mimG), 4-디메틸-와이오신 (imG-14), 아이소와이오신 (imG2), 와이부토신 (yW), 퍼옥시와이부토신 (o2yW), 하이드록시와이부토신 (OhyW), 변형중인 하이드록시와이부토신 (OhyW*), 7-데아자-구아노신, 쿠에오신 (Q), 에폭시쿠에오신 (oQ), 갈락토실-쿠에오신 (galQ), 만노실-쿠에오신 (manQ), 7-시아노-7-데아자-구아노신 (preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아노신 (preQ1), 아르캐오신 (G+), 7-데아자-8-아자-구아노신, 6-싸이오-구아노신, 6-싸이오-7-데아자-구아노신, 6-싸이오-7-데아자-8-아자-구아노신, 7-메틸-구아노신 (m7G), 6-싸이오-7-메틸-구아노신, 7-메틸-이노신, 6-메톡시-구아노신, 1-메틸-구아노신 (m1G), N2-메틸-구아노신 (m2G), N2,N2-다이메틸-구아노신 (m2 2G), N2,7-다이메틸-구아노신 (m2,7G), N2, N2,7-다이메틸-구아노신 (m2,2,7G), 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신, 1-메틸-6-싸이오-구아노신, N2-메틸-6-싸이오-구아노신, N2,N2-다이메틸-6-싸이오-구아노신, α-싸이오-구아노신, 2′메틸-구아노신 (Gm), N2-메틸-2′-O-메틸-구아노신 (m2Gm), N2,N2-다이메틸-2′메틸-구아노신 (m2 2Gm), 1-메틸-2′메틸-구아노신 (m1Gm), N2,7-다이메틸-2′메틸-구아노신 (m2,7Gm), 2′메틸-이노신 (Im), 1,2′다이메틸-이노신 (m1Im), 2′리보실구아노신 (포스페이트) (Gr(p)) , 1-싸이오-구아노신, O6-메틸-구아노신, 2'-F-아라-구아노신, 및 2'-F-구아노신을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기들의 하나 이상의 조합 (예컨대, 전술한 변형된 핵염기들의 2, 3, 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 수도우리딘 (ψN1-메틸수도우리딘 (m1ψ), 2-싸이오우리딘, 4'-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘 , 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메톡시우리딘, 또는 2'-O-메틸 우리딘이다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기들의 하나 이상의 조합 (예컨대, 전술한 변형된 핵염기들의 2, 3, 또는 4개의 조합)을 포함한다. 한 구체예에서, 일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 N1-메틸수도우리딘 (m1ψ)이고 본 발명의 mRNA는 N1-메틸수도우리딘 (m1ψ)으로 완전히 변형된다. 일부 구체예들에서, N1-메틸수도우리딘 (m1ψ)은 mRNA에서 우라실의 75-100%를 나타낸다. 일부 구체예들에서, N1-메틸수도우리딘 (m1ψ)은 mRNA에서 우라실의 100%를 나타낸다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 변형된 시토신이다. 변형된 시토신을 가지는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드에는 N4-아세틸-시티딘 (ac4C), 5-메틸-시티딘 (m5C), 5-할로-시티딘 (예컨대, 5-아이오도-시티딘), 5-하이드록시메틸-시티딘 (hm5C), 1-메틸-수도아이소시티딘, 2-싸이오-시티딘 (s2C), 2-싸이오-5-메틸-시티딘이 포함된다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기들의 하나 이상의 조합 (예컨대, 전술한 변형된 핵염기들의 2, 3, 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 변형된 아데닌이다. 변형된 아데닌을 가지는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드에는 7-데아자-아데닌, 1-메틸-아데노신 (m1A), 2-메틸-아데닌 (m2A), N6-메틸-아데노신 (m6A)이 포함된다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기들의 하나 이상의 조합 (예컨대, 전술한 변형된 핵염기들의 2, 3, 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 변형된 구아닌이다. 변형된 구아닌을 가지는 예시적인 핵염기 및 뉴클레오시드에는 이노신 (I), 1-메틸-이노신 (m1I), 와이오신 (imG), 메틸와이오신 (mimG), 7-데아자-구아노신, 7-시아노-7-데아자-구아노신 (preQ0), 7-아미노메틸-7-데아자-구아노신 (preQ1), 7-메틸-구아노신 (m7G), 1-메틸-구아노신 (m1G), 8-옥소-구아노신, 7-메틸-8-옥소-구아노신이 포함된다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기들의 하나 이상의 조합 (예컨대, 전술한 변형된 핵염기들의 2, 3, 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 변형된 핵염기는 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ), 5-메톡시-우리딘 (mo5U), 5-메틸-시티딘 (m5C), 수도우리딘 (ψα-싸이오-구아노신, or α-싸이오-아데노신이다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 전술한 변형된 핵염기들의 하나 이상의 조합 (예컨대, 전술한 변형된 핵염기들의 2, 3, 또는 4개의 조합)을 포함한다.
일부 구체예들에서, mRNA는 수도우리딘 (ψ을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 수도우리딘 (ψ및 5-메틸-시티딘 (m5C)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 2-싸이오우리딘(s2U)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 2-싸이오우리딘 및 5-메틸-시티딘 (m5C)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 5-메톡시-우리딘 (mo5U)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 5-메톡시-우리딘 (mo5U) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 2'-O-메틸 우리딘을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 2'-O-메틸 우리딘 및 5-메틸-시티딘 (m5C)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 N6-메틸-아데노신 (m6A)을 포함한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 N6-메틸-아데노신 (m6A) 및 5-메틸-시티딘 (m5C)을 포함한다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 특정 변형을 위해 균일하게 변형된다 (즉, 완전히 변형된다, 전체 서열 전체에 걸쳐 변형된다). 예를 들면, mRNA는 N1-메틸수도우리딘 (m1ψ) 또는 5-메틸-시티딘 (m5C)으로 균일하게 변형될 수 있는데, 이는 mRNA 서열 내 모든 우리딘 또는 모든 시토신 뉴클레오시드들이 N1-메틸수도우리딘 (m1ψ) 또는 5-메틸-시티딘 (m5C)으로 대체됨을 의미한다. 유사하게, 본 발명의 mRNA는 변형된 잔기, 가령, 상기 제시된 잔기들로 대체됨으로써 서열 내에 존재하는 임의의 유형의 뉴클레오시드 잔기에 대해 균일하게 변형될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 코딩 영역 (예컨대, 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임)에서 변형될 수 있다. 다른 구체예들에서, mRNA는 코딩 영역 이외의 영역들에서 변형될 수 있다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 5′및/또는 3′이 제공되고, 이 때 둘 중 하나 또는 둘 모두는 하나 이상의 상이한 뉴클레오시드 변형들을 독립적으로 내포할 수 있다. 이러한 구체예들에서, 뉴클레오시드 변형들은 또한 코드화 영역에 존재할 수 있다.
본 발명의 mmRNA에 존재할 수 있는 뉴클레오시드 변형들 및 이의 조합의 예들은 PCT 특허출원 공개공보에 기재된 것들을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다: WO2012045075, WO2014081507, WO2014093924, WO2014164253, 및 WO2014159813.
본 발명의 mmRNA는 당, 핵염기, 및/또는 뉴클레오시드간 링키지의 변형들의 조합을 포함할 수 있다. 이들 조합들은 본 명세서에 기재된 임의의 하나 이상의 변형들을 포함할 수 있다.
변형된 뉴클레오시드와 변형된 뉴클레오시드 조합들의 예들이 하기 표 1 및 표 2에 제공된다. 이러한 변형된 뉴클레오티드의 조합들은 본 발명의 mmRNA를 형성하기 위해 사용될 수 있다. 특정 구체예들에서, 변형된 뉴클레오시드는 본 발명의 mRNA의 자연 뉴클레오티드들로 부분적으로 또는 완전히 치환될 수 있다. 비-제한적 예로서, 자연 뉴클레오티드 우리딘은 본 명세서에 기재된 변형된 뉴클레오시드로 치환될 수 있다. 또 다른 비-제한적 예에서, 자연 뉴클레오시드 우리딘은 본 명세서에 개시된 변형된 뉴클레오시드 중 최소한 하나로 부분적으로 (예컨대, 자연 우리딘의 약 0.1%, 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99.9%) 치환될 수 있다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 표 1 또는 표 2의 변형들 중 하나 또는 조합을 포함하도록 합성될 수 있다.
단일 변형이 열거된 경우, 열겨된 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드는 변형되어 있는 해당 A, U, G 또는 C 뉴클레오티드 또는 뉴클레오시드 100%를 나타낸다. 백분율이 열거된 경우, 이는 존재하는 A, U, G, 또는 C 트라이포스페이트의 전체양 중 해당 특정 A, U, G 또는 C 핵염기 트라이포스페이트의 백분율을 나타낸다. 예를 들면, 조합은 다음과 같다: 25 % 5-아미노알릴-CTP + 75 % CTP/ 25 % 5-메톡시-UTP + 75 % UTP는 시토신 트라이포스페이트의 25%가 5-아미노알릴-CTP이고 시토신의 75%는 CTP인 반면; 우라실의 25%는 5-메톡시 UTP이고 우라실의 75%는 UTP인 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 변형된 UTP가 전혀 열거되지 않은 경우 자연 발생 ATP, UTP, GTP 및/또는 CTP는 폴리뉴클레오티드에서 발견되는 뉴클레오티드 부위들의 100%에서 사용된다. 이러한 예에서 모든 GTP 및 ATP 뉴클레오티드는 변형되지 않고 남아있다.
본 발명의 mRNA, 또는 이의 영역들은 코돈 최적화될 수 있다. 코돈 최적화 방법들은 해당 분야에 공지이며 다음과 같은 다양한 목적에 유용할 수 있다: 적절한 폴딩을 확보하기 위한 숙주 유기체에서 코돈 빈도 매칭, mRNA 안정성을 증가시키거나 또는 2차 구조들을 감소시키도록 GC 함량을 편향(bias), 유전자 구조 또는 발현을 손상시킬 수 있는 탠덤 반복 코돈 또는 염기 런 (base runs) 최소화, 전사 및 번역 제어 영역 사용자지정, 단백질 트래픽킹 서열들을 삽입 또는 제거, 인코드되는 단백질들에서 번역후 변형 부위들 (예컨대, 당화 부위)을 제거/추가, 단백질 도메인들을 추가, 제거 또는 섞음 (shuffle), 제한 부위들을 삽입 또는 결실, 리보솜 결합 부위들 및 mRNA 분해 부위들을 변형, 단백질의 다양한 도메인들을 적절하게 배가(fold) 시킬 수 있도록 번역 속도 조절, 또는 폴리뉴클레오티드 내부에서 문제가 되는 2차 구조들을 감소 또는 제거. 코돈 최적화 툴, 알고리즘 및 서비스가 해당 분야에 공지되어 있으며; 비-제한적 예들에는 GeneArt (Life Technologies사), DNA2.0 (Menlo Park, CA) 및/또는 전매(proprietary) 방법들로부터의 서비스가 포함된다. 한 구체예에서, mRNA 서열은 최적화 알고리즘, 예컨대, 포유동물 세포들에서의 발현을 최적화하는 또는 mRNA 안정성을 개선하는 최적화 알고리즘을 사용하여 최적화된다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오티드 서열들에 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 서열 동일성을 가지는 폴리뉴클레오티드들을 포함한다.
본 발명의 mRNA는 시험관내 전사 (IVT) 및 합성 방법들을 비롯하여 (그러나 이에 제한되는 것은 아님), 해당 분야에서 이용가능한 수단들에 의해 생성될 수 있다. 효소 (IVT), 고체상, 액체상, 조합된 합성 방법들, 작은 영역 합성, 및 결찰 방법들이 이용될 수 있다. 한 구체예에서, mRNA는 IVT 효소 합성 방법들을 사용하여 제조된다. IVT로 폴리뉴클레오티드들을 제조하는 방법들은 해당 분야에 공지로서 국제 출원 PCT/US2013/30062에 기재되어 있고, 그 내용은 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다. 따라서, 본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 mRNA를 시험관내 전사하기 위해 사용될 수 있는 폴리뉴클레오티드, 예컨대, DNA, 구조체 (예컨대, 벡터)을 포함한다.
비-자연 변형된 핵염기들은 합성 중 또는 합성 후 폴리뉴클레오티드, 예컨대, mRNA에 도입될 수 있다. 특정 구체예들에서, 변형들은 뉴클레오시드간 링키지, 퓨린 또는 피리미딘 염기, 또는 당에 존재할 수 있다. 특정 구체예들에서, 변형은 화학적 합성 또는 중합효소에 의해 폴리뉴클레오티드 사슬의 말단에 또는 폴리뉴클레오티드 사슬 어디에라도 도입될 수 있다. 변형된 핵산 및 이의 합성의 예는 PCT 출원 제 PCT/US2012/058519에 개시되어 있다. 변형된 폴리뉴클레오티드의 합성은 또한 Verma 및 Eckstein, Annual Review of Biochemistry, vol. 76, 99-134 (1998)에 기재되어 있다.
상이한 기능적 모이어티, 가령, 표적화 또는 전달 물질, 형광 표지, 액체, 나노입자들, 등을 가지는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 영역들을 접합시키기 위해 효소 또는 화학적 결찰 방법들이 사용될 수 있다. 폴리뉴클레오티드 및 변형된 폴리뉴클레오티드의 접합체는 Goodchild, Bioconjugate Chemistry, vol. 1(3), 165-187 (1990)에 검토되어 있다.
마이크로RNA (miRNA) 결합 부위
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 조절 요소, 예를 들면, 마이크로RNA (miRNA) 결합 부위들, 전사 인자 결합 부위들, 구조화된 mRNA 서열 및/또는 모티프, 내인성 핵산 결합 분자들에 대한 수도-수용체들로 작용하도록 조작된 인공 결합 부위들, 및 이의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에서, 이러한 조절 요소들을 포함하는 폴리뉴클레오티드들은 “센서 서열”을 포함하는 것으로 언급된다. 센서 서열들의 비-제한적 예들은 미국 공개공보 2014/0200261에 기재되어 있으며, 그 내용은 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.
일부 구체예들에서, 폴리뉴클레오티드 (예컨대, 본 발명의 리보핵산 (RNA), 예컨대, 전령 RNA (mRNA))는 관심 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임 (ORF)을 포함하고 하나 이상의 miRNA 결합 부위(들)를 추가로 포함한다. miRNA 결합 부위(들)의 포함 또는 통합은 자연-발생 miRNA의 조직-특이적 및/또는 세포-유형 특이적 발현을 기준으로 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 조절, 그리고 나아가, 이로부터 인코드되는 폴리펩티드들의 조절을 제공한다.
miRNA, 예컨대, 자연-발생 miRNA는 19-25개 뉴클레오티드 길이의 비코드화 RNA로, 폴리뉴클레오티드에 결합하여 폴리뉴클레오티드의 안정성을 감소시키거나 이의 번역을 억제함으로써 유전자 발현을 하향조절한다. miRNA 서열은 “씨드” 영역, 즉, 성숙 miRNA의 2-8 위치 영역의 서열을 포함한다. miRNA 씨드는 성숙 miRNA의 2-8 또는 2-7 위치를 포함할 수 있다. 일부 구체예들에서, miRNA 씨드는 7개 뉴클레오티드 (예컨대, 성숙 miRNA의 2-8 뉴클레오티드)를 포함할 수 있고, 이 때 상응하는 miRNA 결합 부위 내 씨드-상보적 부위는 miRNA 위치 1에 대향하는 아데노신 (A)에 의해 연접된다. 일부 구체예들에서, miRNA 씨드는 6개 뉴클레오티드 (예컨대, 성숙 miRNA의 2-7 뉴클레오티드)를 포함할 수 있고, 이 때 상응하는 miRNA 결합 부위 내 씨드-상보적 부위는 miRNA 위치 1에 대향하는 아데노신 (A)에 의해 연접된다. 예를 들면, Grimson A, Farh KK, Johnston WK, Garrett-Engele P, Lim LP, Bartel DP; Mol Cell. 2007 Jul 6;27(1):91-105를 참고하라. 표적 세포들 또는 조직들의 miRNA 프로파일링을 수행하여 이러한 세포들 또는 조직들 내 miRNA의 존재 또는 부재를 결정할 수 있다. 일부 구체예들에서, 폴리뉴클레오티드 (예컨대, 본 발명의 리보핵산 (RNA), 예컨대, 전령 RNA (mRNA))는 하나 이상의 마이크로RNA 결합 부위들, 마이크로RNA 표적 서열들, 마이크로RNA 상보적 서열들, 또는 마이크로RNA 씨드 상보적 서열들을 포함한다. 이러한 서열들은, 임의의 공지된 마이크로RNA, 가령, 미국 특허 공개공보 US2005/0261218 및 미국 특허 공개공보 US2005/0059005에 개시되어 있는 것들에 상응, 예컨대, 이에 상보성을 가질 수 있으며, 상기 각 문헌의 내용은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “마이크로RNA (miRNA 또는 miR) 결합 부위”는 해당 miRNA 모두 또는 이의 일 영역에 대해 해당 miRNA와 상호작용하거나, 이와 연관되거나, 이에 결합하기에 충분한 상보성을 가지는, 5′및/또는 3′에서를 비롯한, 폴리뉴클레오티드 내부, 예컨대, DNA 내부 또는 RNA 전사체 내부에 존재하는 서열을 지칭한다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 관심 폴리펩티드를 인코드하는 ORF를 포함하고 하나 이상의 miRNA 결합 부위(들)을 추가로 포함한다. 예시적인 구체예들에서, 폴리뉴클레오티드 (예컨대, 리보핵산 (RNA), 예컨대, 전령 RNA (mRNA))의 5'UTR 및/또는 3'UTR은 하나 이상의 miRNA 결합 부위(들)을 포함한다.
miRNA 결합 부위가 miRNA에 충분한 상보성을 가진다는 것은 상보성 정도가 폴리뉴클레오티드의 miRNA-매개 조절, 예컨대, 폴리뉴클레오티드의 miRNA-매개 번역 억제 또는 분해를 용이하게 하기에 충분함을 지칭한다. 본 발명의 예시적 양상들에서, miRNA 결합 부위가 miRNA에 충분한 상보성을 가진다는 것은 상보성 정도가 폴리뉴클레오티드의 miRNA-매개 분해, 예컨대, mRNA의 miRNA-안내된 RNA-유도 침묵 복합체 (RISC)-매개 절단을 용이하게 하기에 충분함을 지칭한다. miRNA 결합 부위는, 예를 들면, 19-25개 뉴클레오티드 miRNA 서열, 19-23개 뉴클레오티드 miRNA 서열, 또는 22개 뉴클레오티드 miRNA 서열에 상보성을 가질 수 있다. miRNA 결합 부위는 miRNA의 일 부분에 대해서만, 예컨대, 자연-발생 miRNA 전장 서열의 1, 2, 3, 또는 4개 미만의 뉴클레오티드 부분에 대해 상보적일 수 있다. 원하는 조절이 mRNA 분해일 때 전체 또는 완전한 상보성 (예컨대, 자연-발생 miRNA 길이의 전부 또는 상당 부분에 걸친 전체 상보성 또는 완전 상보성)이 바람직하다.
일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 씨드 서열과 상보성 (예컨대, 부분 또는 완전 상보성)을 가지는 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 씨드 서열과 완전 상보성을 가지는 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 서열과 상보성 (예컨대, 부분 또는 완전 상보성)을 가지는 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 서열과 완전 상보성을 가지는 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miRNA 서열과 완전 상보성을 가지지만 1, 2, 또는 3개 뉴클레오티드의 치환, 말단 부가, 및/또는 절두가 존재한다.
일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 상응하는 miRNA와 동일한 길이이다. 다른 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 5' 말단, 3' 말단, 또는 둘 모두에서 상응하는 miRNA보다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개 뉴클레오티드(들)가 더 짧다. 또 다른 구체예들에서, 마이크로RNA 결합 부위는 5' 말단, 3' 말단, 또는 둘 모두에서 상응하는 마이크로RNA 보다 2개 뉴클레오티드가 더 짧다. 상응하는 miRNA 보다 더 짧은 miRNA 결합 부위들은 여전히 mRNA를 분해하거나, 하나 이상의 miRNA 결합 부위들을 통합시키거나, 또는 mRNA의 번역을 방해할 수 있다.
일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 활성 RISC 내포 다이서(Dicer)의 일부인, 상응하는 성숙 miRNA에 결합한다. 또 다른 구체예에서, miRNA 결합 부위가 RISC 내 상응하는 miRNA에 결합하면 miRNA 결합 부위를 내포하는 mRNA를 분해하거나 또는 mRNA가 번역되지 않게 된다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miRNA에 대한 충분한 상보성을 가지므로 이러한 miRNA를 포함하는 RISC 복합체는 miRNA 결합 부위를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 절단한다. 다른 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 불완전한 상보성을 가지므로 miRNA를 포함하는 RISC 복합체는 miRNA 결합 부위를 포함하는 폴리뉴클레오티드에서 불안정성을 유도한다. 또 다른 구체예에서, miRNA 결합 부위는 불완전한 상보성을 가지므로 miRNA를 포함하는 RISC 복합체는 miRNA 결합 부위를 포함하는 폴리뉴클레오티드의 전사를 억제한다.
일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 상응하는 miRNA와 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개의 미스매치(들)을 가진다.
일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 상응하는 miRNA의 최소한 약 10, 최소한 약 11, 최소한 약 12, 최소한 약 13, 최소한 약 14, 최소한 약 15, 최소한 약 16, 최소한 약 17, 최소한 약 18, 최소한 약 19, 최소한 약 20, 또는 최소한 약 21개의 연속 뉴클레오티드 각각에 상보적인 최소한 약 10, 최소한 약 11, 최소한 약 12, 최소한 약 13, 최소한 약 14, 최소한 약 15, 최소한 약 16, 최소한 약 17, 최소한 약 18, 최소한 약 19, 최소한 약 20, 또는 최소한 약 21개의 연속 뉴클레오티드를 가진다.
의문의 miRNA를 이용할 수 있다면, 하나 이상의 miRNA 결합 부위들을 본 발명의 폴리뉴클레오티드로 조작함으로써, 폴리뉴클레오티드는 분해 또는 감소된 번역에 대한 표적이 될 수 있다. 이는 해당 폴리뉴클레오티드 전달 시 오프-타겟 효과들을 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 조직 또는 세포에 전달하려고 하는 것은 아니지만 조직 또는 세포가 종료되는 경우, 이 때 하나 또는 다수의 miRNA 결합 부위들이 폴리뉴클레오티드의 5면UTR 및/또는 3′내부에 유전자조작된다면, 이러한 조직 또는 세포에 풍부한 miRNA는 관심 유전자의 발현을 억제할 수 있다.
역으로, miRNA 결합 부위들은 특정 조직들에서 단백질 발현을 증가시키기 위해 자연적으로 발생하는 폴리뉴클레오티드 서열들로부터 제거될 수 있다. 예를 들면, 특정 miRNA에 대한 결합 부위는 miRNA를 내포하는 조직 또는 세포들에서 단백질 발현을 개선하기 위해 폴리뉴클레오티드로부터 제거될 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 특정 세포들, 가령, 정상 및/또는 암 세포들 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에 대한 세포독성 또는 세포보호 mRNA 치료요법을 조절하기 위하여 5'UTR 및/또는 3′에 최소한 하나의 miRNA-결합 부위를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 특정 세포들 가령, 정상 및/또는 암 세포들 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에 대한 세포독성 또는 세포보호 mRNA 치료요법을 조절하기 위하여 5'-UTR 및/또는 3′에 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9. 10 또는 그 이상의 miRNA-결합 부위들을 포함할 수 있다.
다수의 조직에서 발현의 조절은 하나 이상의 miRNA 결합 부위들, 예컨대, 하나 이상의 구별되는 miRNA 결합 부위들의 도입 또는 제거를 통해 이루어질 수 있다. miRNA 결합 부위를 제거 또는 삽입할지 여부의 결정은 발달 및/또는 질병에 있는 조직 및/또는 세포들에 있어서 miRNA 발현 패턴 및/또는 이들의 프로파일링에 기초하여 이루어질 수 있다. miRNA, miRNA 결합 부위들, 및 이들의 발현 패턴의 확인 및 생물학에 있어서의 역할은 보고되어 있다 (예컨대, Bonauer 등, Curr Drug Targets 2010 11:943-949; Anand and Cheresh Curr Opin Hematol 2011 18:171-176; Contreras and Rao Leukemia 2012 26:404-413 (2011 Dec 20. doi: 10.1038/leu.2011.356); Bartel Cell 2009 136:215-233; Landgraf 등, Cell, 2007 129:1401-1414; Gentner and Naldini, Tissue Antigens. 2012 80:393-403 그리고 본 명세서의 모든 참고문헌들; 이들 각각은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함됨).
miRNAs 및 miRNA 결합 부위들은 미국 특허 공개공보 제 2014/0200261, 2005/0261218, 및 2005/0059005에 기재된 비-제한적 예들을 포함하는 임의의 공지된 서열에 상응할 수 있으며, 상기 문헌 각각은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다.
miRNA가 mRNA를 조절하고, 이로써 단백질 발현을 조절하는 것으로 공지된 조직들의 예들에는, 간 (miR-122), 근육 (miR-133, miR-206, miR-208), 내피 세포들 (miR-17-92, miR-126), 골수 세포들 (miR-142-3p, miR-142-5p, miR-16, miR-21, miR-223, miR-24, miR-27), 지방 조직 (let-7, miR-30c), 심장 (miR-1d, miR-149), 신장 (miR-192, miR-194, miR-204), 및 폐 상피 세포들 (let-7, miR-133, miR-126)이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적으로, miRNA는 면역 세포들 (조혈 세포들로도 불림), 가령, 항원 제시 세포들 (APCs) (예컨대, 수지상 세포 및 대식세포), 대식세포, 단핵구, B 림프구, T 림프구, 과립구, 자연 살해 세포들 등에서 차등적으로 발현되는 것으로 공지되어 있다. 면역 세포 특이적 miRNA들은 면역원성, 자가면역, 감염에 대한 면역 반응 ,염증, 뿐만 아니라 유전자 치료요법 및 조직/장기 이식 후 면역 반응에 관여한다. 면역 세포 특이적 miRNA는 또한 조혈 세포들 (면역 세포들)의 발달, 증식, 분화 및 세포사멸의 많은 양상들을 조절한다. 예를 들면, miR-142 및 miR-146은 골수 수지상 세포에 특히 풍부한 면역 세포들에서 독점적으로 발현된다. 폴리뉴클레오티드에 대한 면역 반응은 miR-142 결합 부위들을 폴리뉴클레오티드의 3′에 추가함으로써 차단(shut-off) 될 수 있으며, 이는 조직 및 세포들에서 더욱 안정한 유전자 전달을 가능하게 함이 입증되었다. miR-142는 항원 제시 세포들에서 외인성 폴리뉴클레오티드들을 효율적으로 분해하여 형질도입된 세포들의 세포독성 제거를 억제한다 (예컨대, Annoni A 등, blood, 2009, 114, 5152-5161; Brown BD, 등, Nat med. 2006, 12(5), 585-591; Brown BD, 등, blood, 2007, 110(13): 4144-4152, 이들 각각은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함됨).
항원-매개 면역 반응은 외부 항원들에 의해 촉발되는 면역 반응을 지칭할 수 있으며, 외부 항원이 유기체에 유입할 때, 외부 항원은 항원 제시 세포들에 의해 처리되고, 항원 제시 세포들의 표면에 나타난다. T 세포들은 제시된 항원을 인식하여 항원을 발현시키는 세포들의 세포독성 제거를 유도할 수 있다.
miR-142 결합 부위를 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 5'UTR 및/또는 3′에 도입하는 것은 miR-142 매개된 분해를 통해 항원 제시 세포들에서 유전자 발현을 선택적으로 억제하여, 항원 제시 세포들 (예컨대, 수지상 세포들)에서 항원 제시를 제한하고, 이로써 폴리뉴클레오티드의 전달 후 항원-매개 면역 반응을 방해할 수 있다. 그 후 폴리뉴클레오티드는 표적 조직 또는 세포들에서 세포독성 제거를 촉발시키지 않고 안정하게 발현된다.
한 구체예에서, 면역 세포들, 특히, 항원 제시 세포들에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에 대한 결합 부위들은, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 내부에 유전자 조작되어 miRNA 매개된 RNA 분해를 통해 항원 제시 세포들에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 억제하고, 항원-매개 면역 반응을 억제할 수 있다. 폴리뉴클레오티드의 발현은 면역 세포 특이적 miRNA가 발현되지 않는 비-면역 세포들에서 유지된다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 간 특이적 단백질에 대한 면역원성 반응을 방지하기 위해, 임의의 miR-122 결합 부위는 제거될 수 있으며 miR-142 (및/또는 mirR-146) 결합 부위는 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 5'UTR 및/또는 3'UTR 내부로 유전자 조작될 수 있다.
APC 및 대식세포에서 선택적 분해 및 억제를 더욱 추진하기 위하여, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 5'UTR 및/또는 3'UTR에 음성 조절 요소를 단독으로 또는 miR-142 및/또는 miR-146 결합 부위들과의 조합으로 추가로 포함할 수 있다. 비-제한적 예로서, 또 다른 음성 조절 요소는 항시발현 붕괴 요소 (Constitutive Decay Element) (CDE)이다.
면역 세포 특이적 miRNA는, hsa-let-7a-2-3p, hsa-let-7a-3p, hsa-7a-5p, hsa-let-7c, hsa-let-7e-3p, hsa-let-7e-5p, hsa-let-7g-3p, hsa-let-7g-5p, hsa-let-7i-3p, hsa-let-7i-5p, miR-10a-3p, miR-10a-5p, miR-1184, hsa-let-7f-1--3p, hsa-let-7f-2--5p, hsa-let-7f-5p, miR-125b-1-3p, miR-125b-2-3p, miR-125b-5p, miR-1279, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-132-3p, miR-132-5p, miR-142-3p, miR-142-5p, miR-143-3p, miR-143-5p, miR-146a-3p, miR-146a-5p, miR-146b-3p, miR-146b-5p, miR-147a, miR-147b, miR-148a-5p, miR-148a-3p, miR-150-3p, miR-150-5p, miR-151b, miR-155-3p, miR-155-5p, miR-15a-3p, miR-15a-5p, miR-15b-5p, miR-15b-3p, miR-16-1-3p, miR-16-2-3p, miR-16-5p, miR-17-5p, miR-181a-3p, miR-181a-5p, miR-181a-2-3p, miR-182-3p, miR-182-5p, miR-197-3p, miR-197-5p, miR-21-5p, miR-21-3p, miR-214-3p, miR-214-5p, miR-223-3p, miR-223-5p, miR-221-3p, miR-221-5p, miR-23b-3p, miR-23b-5p, miR-24-1-5p,miR-24-2-5p, miR-24-3p, miR-26a-1-3p, miR-26a-2-3p, miR-26a-5p, miR-26b-3p, miR-26b-5p, miR-27a-3p, miR-27a-5p, miR-27b-3p,miR-27b-5p, miR-28-3p, miR-28-5p, miR-2909, miR-29a-3p, miR-29a-5p, miR-29b-1-5p, miR-29b-2-5p, miR-29c-3p, miR-29c-5p,, miR-30e-3p, miR-30e-5p, miR-331-5p, miR-339-3p, miR-339-5p, miR-345-3p, miR-345-5p, miR-346, miR-34a-3p, miR-34a-5p, , miR-363-3p, miR-363-5p, miR-372, miR-377-3p, miR-377-5p, miR-493-3p, miR-493-5p, miR-542, miR-548b-5p, miR548c-5p, miR-548i, miR-548j, miR-548n, miR-574-3p, miR-598, miR-718, miR-935, miR-99a-3p, miR-99a-5p, miR-99b-3p, 및 miR-99b-5p를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 더욱이, 새로운 miRNA는 마이크로-어레이 혼성화 및 마이크로톰 분석을 통해 면역 세포내에서 확인될 수 있다 (예컨대, Jima DD 등, Blood, 2010, 116:e118-e127; Vaz C 등, BMC Genomics, 2010, 11,288, 상기 각 문헌의 내용은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다.)
간에서 발현되는 것으로 공지된 miRNA들에는, miR-107, miR-122-3p, miR-122-5p, miR-1228-3p, miR-1228-5p, miR-1249, miR-129-5p, miR-1303, miR-151a-3p, miR-151a-5p, miR-152, miR-194-3p, miR-194-5p, miR-199a-3p, miR-199a-5p, miR-199b-3p, miR-199b-5p, miR-296-5p, miR-557, miR-581, miR-939-3p, 및 miR-939-5p이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 임의의 간 특이적 miRNA로부터 miRNA 결합 부위들은 간에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 간 특이적 miRNA 결합 부위들은 단독으로 또는 추가로 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 면역 세포 (예컨대, APC) miRNA 결합 부위들과 조합하여 유전자조작될 수 있다.
폐에서 발현되는 것으로 공지된 miRNA에는, let-7a-2-3p, let-7a-3p, let-7a-5p, miR-126-3p, miR-126-5p, miR-127-3p, miR-127-5p, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-130b-3p, miR-130b-5p, miR-133a, miR-133b, miR-134, miR-18a-3p, miR-18a-5p, miR-18b-3p, miR-18b-5p, miR-24-1-5p, miR-24-2-5p, miR-24-3p, miR-296-3p, miR-296-5p, miR-32-3p, miR-337-3p, miR-337-5p, miR-381-3p, 및 miR-381-5p가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 임의의 폐 특이적 miRNA로부터 miRNA 결합 부위들은 폐에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 폐 특이적 miRNA 결합 부위들은 단독으로 또는 추가로 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 면역 세포 (예컨대, APC) miRNA 결합 부위들과 조합하여 조작될 수 있다.
심장에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에는, miR-1, miR-133a, miR-133b, miR-149-3p, miR-149-5p, miR-186-3p, miR-186-5p, miR-208a, miR-208b, miR-210, miR-296-3p, miR-320, miR-451a, miR-451b, miR-499a-3p, miR-499a-5p, miR-499b-3p, miR-499b-5p, miR-744-3p, miR-744-5p, miR-92b-3p, 및 miR-92b-5p가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 임의의 심장 특이적 마이크로RNA로부터 miRNA 결합 부위들은 심장에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 심장 특이적 miRNA 결합 부위들은 단독으로 또는 추가로 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 면역 세포 (예컨대, APC) miRNA 결합 부위들과 조합하여 조작될 수 있다.
신경계에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에는, miR-124-5p, miR-125a-3p, miR-125a-5p, miR-125b-1-3p, miR-125b-2-3p, miR-125b-5p,miR-1271-3p, miR-1271-5p, miR-128, miR-132-5p, miR-135a-3p, miR-135a-5p, miR-135b-3p, miR-135b-5p, miR-137, miR-139-5p, miR-139-3p, miR-149-3p, miR-149-5p, miR-153, miR-181c-3p, miR-181c-5p, miR-183-3p, miR-183-5p, miR-190a, miR-190b, miR-212-3p, miR-212-5p, miR-219-1-3p, miR-219-2-3p, miR-23a-3p, miR-23a-5p,miR-30a-5p, miR-30b-3p, miR-30b-5p, miR-30c-1-3p, miR-30c-2-3p, miR-30c-5p, miR-30d-3p, miR-30d-5p, miR-329, miR-342-3p, miR-3665, miR-3666, miR-380-3p, miR-380-5p, miR-383, miR-410, miR-425-3p, miR-425-5p, miR-454-3p, miR-454-5p, miR-483, miR-510, miR-516a-3p, miR-548b-5p, miR-548c-5p, miR-571, miR-7-1-3p, miR-7-2-3p, miR-7-5p, miR-802, miR-922, miR-9-3p, 및 miR-9-5p가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 신경계에 풍부한 miRNA는 miR-132-3p, miR-132-3p, miR-148b-3p, miR-148b-5p, miR-151a-3p, miR-151a-5p, miR-212-3p, miR-212-5p, miR-320b, miR-320e, miR-323a-3p, miR-323a-5p, miR-324-5p, miR-325, miR-326, miR-328, miR-922를 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 뉴런에서 특이적으로 발현되는 것들 그리고, miR-1250, miR-219-1-3p, miR-219-2-3p, miR-219-5p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-3065-3p, miR-3065-5p, miR-30e-3p, miR-30e-5p, miR-32-5p, miR-338-5p, 및 miR-657을 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 신경아교 세포들에서 특이적으로 발현되는 것들을 추가로 포함한다. 임의의 CNS 특이적 miRNA의 miRNA 결합 부위들은 신경계에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 신경계 특이적 miRNA 결합 부위들은 단독으로 또는 추가로 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 면역 세포 (예컨대, APC) miRNA 결합 부위들과 조합하여 조작될 수 있다.
이자에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에는, miR-105-3p, miR-105-5p, miR-184, miR-195-3p, miR-195-5p, miR-196a-3p, miR-196a-5p, miR-214-3p, miR-214-5p, miR-216a-3p, miR-216a-5p, miR-30a-3p, miR-33a-3p, miR-33a-5p, miR-375, miR-7-1-3p, miR-7-2-3p, miR-493-3p, miR-493-5p, 및 miR-944가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 임의의 이자 특이적 miRNA의 miRNA 결합 부위들은 이자에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 이자 특이적 miRNA 결합 부위들은 단독으로 또는 추가로 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 면역 세포 (예컨대, APC) miRNA 결합 부위들과 조합하여 조작될 수 있다.
신장에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에는, miR-122-3p, miR-145-5p, miR-17-5p, miR-192-3p, miR-192-5p, miR-194-3p, miR-194-5p, miR-20a-3p, miR-20a-5p, miR-204-3p, miR-204-5p, miR-210, miR-216a-3p, miR-216a-5p, miR-296-3p, miR-30a-3p, miR-30a-5p, miR-30b-3p, miR-30b-5p, miR-30c-1-3p, miR-30c-2-3p, miR30c-5p, miR-324-3p, miR-335-3p, miR-335-5p, miR-363-3p, miR-363-5p, 및 miR-562가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 임의의 신장 특이적 miRNA의 miRNA 결합 부위들은 신장에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 신장 특이적 miRNA 결합 부위들은 단독으로 또는 추가로 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 면역 세포 (예컨대, APC) miRNA 결합 부위들과 조합하여 조작될 수 있다.
근육에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에는, let-7g-3p, let-7g-5p, miR-1, miR-1286, miR-133a, miR-133b, miR-140-3p, miR-143-3p, miR-143-5p, miR-145-3p, miR-145-5p, miR-188-3p, miR-188-5p, miR-206, miR-208a, miR-208b, miR-25-3p, 및 miR-25-5p가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 임의의 근육 특이적 miRNA의 miRNA 결합 부위들은 근육에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다. 근육 특이적 miRNA 결합 부위들은 단독으로 또는 추가로 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 면역 세포 (예컨대, APC) miRNA 결합 부위들과 조합하여 조작될 수 있다.
miRNA는 또한 상이한 유형의 세포들, 가령, 내피 세포들, 상피 세포들, 및 지방세포들 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에서 차등적으로 발현된다.
내피 세포들에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에는, let-7b-3p, let-7b-5p, miR-100-3p, miR-100-5p, miR-101-3p, miR-101-5p, miR-126-3p, miR-126-5p, miR-1236-3p, miR-1236-5p, miR-130a-3p, miR-130a-5p, miR-17-5p, miR-17-3p, miR-18a-3p, miR-18a-5p, miR-19a-3p, miR-19a-5p, miR-19b-1-5p, miR-19b-2-5p, miR-19b-3p, miR-20a-3p, miR-20a-5p, miR-217, miR-210, miR-21-3p, miR-21-5p, miR-221-3p, miR-221-5p, miR-222-3p, miR-222-5p, miR-23a-3p, miR-23a-5p, miR-296-5p, miR-361-3p, miR-361-5p, miR-421, miR-424-3p, miR-424-5p, miR-513a-5p, miR-92a-1-5p, miR-92a-2-5p, miR-92a-3p, miR-92b-3p, 및 miR-92b-5p가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 많은 새로운 miRNA가 딥-시퀀싱 분석으로부터 내피 세포들에서 발견된다 (예컨대, Voellenkle C 등, RNA, 2012, 18, 472-484, 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함됨). 임의의 내피 세포 특이적 miRNA의 miRNA 결합 부위들은 내피 세포들에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다.
상피 세포들에서 발현되는 것으로 공지되어 있는 miRNA에는, 호흡 섬모 상피 세포들에 특이적인 let-7b-3p, let-7b-5p, miR-1246, miR-200a-3p, miR-200a-5p, miR-200b-3p, miR-200b-5p, miR-200c-3p, miR-200c-5p, miR-338-3p, miR-429, miR-451a, miR-451b, miR-494, miR-802 and miR-34a, miR-34b-5p, miR-34c-5p, miR-449a, miR-449b-3p, miR-449b-5p, 폐 상피 세포들에 특이적인 let-7 family, miR-133a, miR-133b, miR-126, 신장 상피 세포들에 특이적인 miR-382-3p, miR-382-5p 및 각막 상피 세포들에 특이적인 miR-762가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 임의의 상피 세포 특이적 miRNA의 miRNA 결합 부위들은 상피 세포들에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 도입되거나 이로부터 제거될 수 있다.
또한, 큰 miRNA 그룹이 줄기 세포 자가-재생, 뿐만 아니라 다양한 세포 계통들, 가령, 신경 세포들, 심장, 조혈 세포들, 피부 세포들, 골형성 세포들 및 근육 세포들의 발달 및/또는 분화를 제어하는 배아 줄기 세포들에 풍부하다 (예컨대, Kuppusamy KT 등, Curr. Mol Med, 2013, 13(5), 757-764; Vidigal JA and Ventura A, Semin Cancer Biol. 2012, 22(5-6), 428-436; Goff LA 등, PLoS One, 2009, 4:e7192; Morin RD 등, Genome Res,2008,18, 610-621; Yoo JK 등, Stem Cells Dev. 2012, 21(11), 2049-2057, 이들 각각은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함됨). 배아 줄기 세포들에 풍부한 miRNA에는, let-7a-2-3p, let-a-3p, let-7a-5p, let7d-3p, let-7d-5p, miR-103a-2-3p, miR-103a-5p, miR-106b-3p, miR-106b-5p, miR-1246, miR-1275, miR-138-1-3p, miR-138-2-3p, miR-138-5p, miR-154-3p, miR-154-5p, miR-200c-3p, miR-200c-5p, miR-290, miR-301a-3p, miR-301a-5p, miR-302a-3p, miR-302a-5p, miR-302b-3p, miR-302b-5p, miR-302c-3p, miR-302c-5p, miR-302d-3p, miR-302d-5p, miR-302e, miR-367-3p, miR-367-5p, miR-369-3p, miR-369-5p, miR-370, miR-371, miR-373, miR-380-5p, miR-423-3p, miR-423-5p, miR-486-5p, miR-520c-3p, miR-548e, miR-548f, miR-548g-3p, miR-548g-5p, miR-548i, miR-548k, miR-548l, miR-548m, miR-548n, miR-548o-3p, miR-548o-5p, miR-548p, miR-664a-3p, miR-664a-5p, miR-664b-3p, miR-664b-5p, miR-766-3p, miR-766-5p, miR-885-3p, miR-885-5p,miR-93-3p, miR-93-5p, miR-941,miR-96-3p, miR-96-5p, miR-99b-3p 및 miR-99b-5p가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 예상된 많은 새로운 miRNA는 인간 배아 줄기 세포들에서 딥 시퀀싱에 의해 발견된다 (예컨대, Morin RD 등, Genome Res,2008,18, 610-621; Goff LA 등, PLoS One, 2009, 4:e7192; Bar M 등, Stem cells, 2008, 26, 2496-2505, 상기 문헌 각각의 내용은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다).
한 구체예에서, 배아 줄기 세포 특이적 miRNA의 결합 부위들은 배아 줄기 세포들의 발달 및/또는 분화를 조절하기 위해, 퇴행성 병태 (예컨대 퇴행성 질병)에서 줄기 세포들의 노화를 억제하기 위해, 또는 질병 상태의 줄기 세포들 (예컨대 암 줄기 세포들)의 노화 및 세포사멸을 자극하기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 3'UTR에 포함되거나 이로부터 제거될 수 있다.
많은 miRNA 발현 연구들이 다양한 암 세포들/조직들 및 다른 질병들에서 miRNA의 차등적 발현을 특성화하기 위해 수행된다. 일부 miRNA는 특정 암 세포들에서 비정상적으로 과발현되고 그 외 miRNA는 발현저하된다. 예를 들면, miRNA는 암 세포들 (WO2008/154098, US2013/0059015, US2013/0042333, WO2011/157294); 암 줄기 세포들 (US2012/0053224); 이자 암 및 질병들 (US2009/0131348, US2011/0171646, US2010/0286232, US8389210); 천식 및 염증 (US8415096); 전립선 암 (US2013/0053264); 간세포 암종 (WO2012/151212, US2012/0329672, WO2008/054828, US8252538); 폐 암 세포들 (WO2011/076143, WO2013/033640, WO2009/070653, US2010/0323357); 피부 T 세포 림프종 (WO2013/011378); 결장직장암 세포들 (WO2011/0281756, WO2011/076142); 암 양성 림프절 (WO2009/100430, US2009/0263803); 코인두 암종 (EP2112235); 만성 폐쇄성 폐질환 (US2012/0264626, US2013/0053263); 갑상선 암 (WO2013/066678); 난소 암 세포들 ( US2012/0309645, WO2011/095623); 유방암 세포들 (WO2008/154098, WO2007/081740, US2012/0214699), 백혈병 및 림프종 (WO2008/073915, US2009/0092974, US2012/0316081, US2012/0283310, WO2010/018563)에서 차등적으로 발현되며, 상기 문헌 각각의 내용은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.
비-제한적 예들로서, 특정 암 및/또는 종양 세포들에서 과-발현되는 miRNA에 대한 miRNA 결합 부위들은 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 3'UTR로부터 제거되어, 암 세포들에서 과-발현된 miRNA에 의해 억제된 발현을 회복시키므로, 상응하는 생물학적 기능, 예를 들어, 전사 자극 및/또는 억제, 세포 주기 정지, 세포사멸 및 세포 사멸을 개선할 수 있다. miRNA 발현이 상향 조절되지 않은 정상 세포들 및 조직들은 영향받지 않은 상태로 남을 것이다.
miRNA는 또한 복잡한 생물학적 과정들, 가령, 혈관형성을 조절할 수도 있다 (예컨대, miR-132) (Anand and Cheresh Curr Opin Hematol 2011 18:171-176). 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서, 이러한 과정들에 관여하는 miRNA 결합 부위들은 폴리뉴클레오티드들의 발현을 생물학적으로 관련 세포 유형들 또는 관련 생물학적 과정들에 맞추기 위해 제거되거나 도입될 수 있다. 이러한 내용에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드들은 영양요구생물 폴리뉴클레오티드로 정의된다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리펩티드의 치료 범위(window) 및/또는 차등적 발현 (예컨대, 조직-특이적 발현)은 이러한 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA에 miRNA 결합 부위를 통합시킴으로써 변형될 수 있다. 한 예에서, mRNA는 하나의 조직 유형에서 다른 조직에 비해 보다 높은 발현을 가지는 miRNA들에 의해 결합되는 하나 이상의 miRNA 결합 부위들을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, mRNA는 동일 기원 조직의 비-암 세포에 비해 암 세포에서 보다 낮은 발현을 가지는 miRNA들에 의해 결합되는 하나 이상의 miRNA 결합 부위들을 포함할 수 있다. 이러한 miRNA를 낮은 수준 발현시키는 암 세포에 존재할 때, mRNA에 의해 인코드되는 폴리펩티드는 전형적으로 증가된 발현을 보여줄 것이다.
간 암 세포들 (예컨대, 간세포 암종 세포들)은 전형적으로 정상 간 세포들과 비교하여 miR-122를 낮은 수준 발현한다. 그러므로, 최소한 하나의 miR-122 결합 부위 (예컨대, mRNA의 3'-UTR에서)를 포함하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 전형적으로 정상 간 세포들에서 비교적 낮은 수준의 폴리펩티드를 그리고 간 암 세포들에서 비교적 높은 수준의 폴리펩티드를 발현할 것이다.
일부 구체예들에서, mRNA는 최소한 하나의 miR-122 결합 부위, 최소한 2개의 miR-122 결합 부위들, 최소한 3개의 miR-122 결합 부위들, 최소한 4개의 miR-122 결합 부위들, 또는 최소한 5개의 miR-122 결합 부위들을 포함한다. 한 양상에서, miRNA 결합 부위는 miR-122에 결합하거나 miR-122에 상보적이다. 또 다른 양상에서, miRNA 결합 부위는 miR-122-3p 또는 miR-122-5p에 결합한다. 특정 양상에서, miRNA 결합 부위는 서열 번호: 175에 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 이 때 miRNA 결합 부위는 miR-122에 결합한다. 또 다른 특정 양상에서, 특정 양상에서, miRNA 결합 부위는 서열 번호: 173에 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 이 때 miRNA 결합 부위는 miR-122에 결합한다. 이들 서열들이 하기 표 3에 제시된다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 miRNA 결합 부위를 포함하고, 이 때 miRNA 결합 부위는 표 3에서 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열들을 포함하며, 여기에는 임의의 하나 이상의 miRNA 결합 부위 서열들의 하나 이상의 복제본들이 포함된다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 표 3에서 선택된 동일 또는 상이한 miRNA 결합 부위들을 최소한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 또는 그 이상 (이의 임의의 조합을 포함)을 추가로 포함한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miR-142에 결합하거나 miR-142에 상보적이다. 일부 구체예들에서, miR-142는 서열 번호: 27을 포함한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miR-142-3p 또는 miR-142-5p에 결합한다. 일부 구체예들에서, miR-142-3p 결합 부위는 서열 번호: 29를 포함한다. 일부 구체예들에서, miR-142-5p 결합 부위는 서열 번호: 31을 포함한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 서열 번호: 29 또는 서열 번호: 31에 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다
일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 폴리뉴클레오티드의 임의의 위치에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드 (예컨대, the 5'UTR 및/또는 3'UTR)에 삽입된다. 일부 구체예들에서, 5'UTR은 miRNA 결합 부위를 포함한다. 일부 구체예들에서, 3'UTR은 miRNA 결합 부위를 포함한다. 일부 구체예들에서, 5'UTR 및 3'UTR은 miRNA 결합 부위를 포함한다. 폴리뉴클레오티드 내 삽입 부위는 폴리뉴클레오티드 내 miRNA 결합 부위의 삽입이 상응하는 miRNA의 부재시 기능적 폴리펩티드의 번역을 방해하지 않는 한 폴리뉴클레오티드 내 어디라도 될 수 있으며; miRNA 존재시, 폴리뉴클레오티드 내 miRNA 결합 부위의 삽입 및 상응하는 miRNA에 대한 miRNA 결합 부위의 결합은 폴리뉴클레오티드를 분해하거나 또는 폴리뉴클레오티드의 번역을 방지할 수 있다.
일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 ORF를 포함하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 ORF의 시작 코돈으로부터 최소한 약 30개 뉴클레오티드 하류에 삽입된다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 ORF의 시작 코돈으로부터 최소한 약 10개 뉴클레오티드, 최소한 약 15개 뉴클레오티드, 최소한 약 20개 뉴클레오티드, 최소한 약 25개 뉴클레오티드, 최소한 약 30개 뉴클레오티드, 최소한 약 35개 뉴클레오티드, 최소한 약 40개 뉴클레오티드, 최소한 약 45개 뉴클레오티드, 최소한 약 50개 뉴클레오티드, 최소한 약 55개 뉴클레오티드, 최소한 약 60개 뉴클레오티드, 최소한 약 65개 뉴클레오티드, 최소한 약 70개 뉴클레오티드, 최소한 약 75개 뉴클레오티드, 최소한 약 80개 뉴클레오티드, 최소한 약 85개 뉴클레오티드, 최소한 약 90개 뉴클레오티드, 최소한 약 95개 뉴클레오티드,또는 최소한 약 100개 뉴클레오티드 하류에 삽입된다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 ORF의 시작 코돈으로부터 약 10개 뉴클레오티드 내지 약 100개 뉴클레오티드, 약 20개 뉴클레오티드 내지 약 90개 뉴클레오티드, 약 30개 뉴클레오티드 내지 약 80개 뉴클레오티드, 약 40개 뉴클레오티드 내지 약 70개 뉴클레오티드, 약 50개 뉴클레오티드 내지 약 60개 뉴클레오티드, 약 45개 뉴클레오티드 내지 약 65개 뉴클레오티드 하류에 삽입된다.
miRNA 유전자 조절은 miRNA를 둘러싼 서열, 가령, 주위 서열의 종들, 서열의 유형 (예컨대, 이종성, 동종성, 외인성, 내인성, 또는 인공), 주위 서열 내 조절 요소 및/또는 주위 서열 내 구조 요소 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에 의해 영향 받을 수 있다. miRNA는 5′및/또는 3′에 의해 영향받을 수 있다. 비-제한적 예로서, 비-인간 3′은 관심 폴리펩티드의 발현에 대한 miRNA 서열의 조절 효과를 동일한 서열 유형의 인간 3′와 비교하여 증가시킬 수 있다.
한 구체예에서, 5′의 다른 조절 요소 및/또는 구조 요소는 miRNA 매개된 유전자 조절에 영향을 줄 수 있다. 조절 요소 및/또는 구조 요소의 한 예는 is a 5′내 구조화된 IRES (내부 리보솜 유입 부위)이며, 이는 단백질 번역을 개시하기 위한 번역 신장 인자들의 결합에 필요하다. 5′내 이러한 2차 구조화 요소에 대한 EIF4A2 결합은 miRNA 매개된 유전자 발현에 필요하다 (Meijer HA 등, Science, 2013, 340, 82-85, 본 명세서에 그 전문에 참고문헌으로 포함됨). 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 마이크로RNA 매개된 유전자 조절을 개선하기 위하여 구조화된 5′을 추가로 포함할 수 있다.
최소한 하나의 miRNA 결합 부위는 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 3′에로 조작될 수 있다. 이와 관련하여, 최소한 2, 최소한 3, 최소한 4, 최소한 5, 최소한 6, 최소한 7, 최소한 8, 최소한 9, 최소한 10개, 또는 그 이상의 miRNA 결합 부위들이 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 3′에 조작될 수 있다. 예를 들면, 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 2, 또는 1개 miRNA 결합 부위들이 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 3′에 조작될 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 통합되는 miRNA 결합 부위들은 동일할 수 있거나 또는 상이한 miRNA 부위일 수 있다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 통합되는 상이한 miRNA 결합 부위들의 조합은 임의의 상이한 miRNA 부위들의 1 이상의 복제본이 통합되어 있는 조합들을 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 통합되는 miRNA 결합 부위들은 동일 또는 상이한 신체 조직들을 표적할 수 있다. 비-제한적 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 3′에서 조직-, 세포-유형-, 또는 질병-특이적 miRNA 결합 부위들의 도입을 통해, 특정 세포 유형들 (예컨대, 간세포, 골수 세포들, 내피 세포들, 암 세포들 등)에서 발현 정도는 감소될 수 있다.
한 구체예에서, miRNA 결합 부위는 본 발명의 폴리뉴클레오티드에서 3′의 5′말단 근방, 3′의 5′말단과 3′말단 사이의 중간쯤 및/또는 3′의 3′말단 근방에 조작될 수 있다. 비-제한적 예로서, miRNA 결합 부위는 3′의 5′말단 근방에 그리고 3′의 5′말단과 3′말단 사이 중간쯤에 조작될 수 있다. 또 다른 비-제한적 예로서, miRNA 결합 부위는 3′의 3′말단 근방 그리고 3′의 5′말단과 3′말단 사이 중간쯤에 조작될 수 있다. 또한 또 다른 비-제한적 예로서, miRNA 결합 부위는 3′의 5′말단 근방 및 3′의 3′말단 근방에 조작될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 3′은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 miRNA 결합 부위들을 포함할 수 있다. miRNA 결합 부위들은 miRNA, miRNA 씨드 서열, 및/또는 이러한 씨드 서열을 연접시키는 miRNA 서열에 상보적일 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 대상체의 상이한 조직 또는 상이한 세포 유형에서 발현되는 하나 이상의 miRNA 부위를 포함하도록 조작될 수 있다. 비-제한적 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 대상체의 간과 신장에서 폴리뉴클레오티드의 발현을 조절하기 위하여 miR-192 및 miR-122를 포함하도록 조작될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 동일한 조직에 대해 하나 이상의 miRNA 부위를 포함하도록 조작될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 인코드되는 폴리펩티드와 관련된 치료 범위 (window) 및 또는 차등적 발현은 miRNA 결합 부위에 따라 변화될 수 있다. 예를 들면, 사멸 신호를 제공하는 폴리펩티드를 인코드하는 폴리뉴클레오티드는 이들 세포들의 miRNA 특성에 의해 암 세포들에서 더 많이 발현되도록 고안될 수 있다. 암 세포가 특정 miRNA를 낮은 수준으로 발현하는 경우, 해당 miRNA (또는 miRNA들)에 대한 결합 부위를 인코드하는 폴리뉴클레오티드는 보다 많이 발현될 것이다. 그러므로, 사멸 신호를 제공하는 폴리펩티드는 암 세포에서 세포 사멸을 촉발 또는 유도한다. 동일한 miRNA를 보다 많이 발현시키는 이웃한 비암 세포들은, 3′에서 인코드되는 결합 부위 또는 "센서"에 대한 miRNA 결합 효과로 인해 폴리뉴클레오티드가 보다 낮은 수준으로 발현될 것이기 때문에 상기 인코드된 사멸 신호에 의한 영향을 더 적게 받을 것이다. 역으로, 세포 생존 또는 세포보호 신호들은 miRNA가 암 세포들에서 더 많이 발현되는 암 및 비-암 세포들을 내포하는 조직들로 전달될 수 있고 - 그 결과 암 세포에 대한 생존 신호는 더 낮아지고 정상 세포에 대한 생존 신호는 더 커진다. 본 명세서에 기재된 miRNA 결합 부위들의 사용에 기초하여 상이한 신호들을 가지는 다수의 폴리뉴클레오티드가 고안 및 투여될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 발현은 폴리뉴클레오티드에 최소한 하나의 센서 서열을 통합시키고 투여를 위해 폴리뉴클레오티드를 제제화함으로써 제어될 수 있다. 비-제한적 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 miRNA 결합 부위를 통합시키고 본 명세서에 기재된 임의의 지질들을 비롯한 양이온성 지질을 포함하는 지질 나노입자로 폴리뉴클레오티드를 제제화함으로써 조직 또는 세포에 표적될 수 있다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 상이한 조직, 세포 유형들, 또는 생물학적 조건들에서의 miRNA 발현 패턴들에 기초하여 특정 조직들, 세포 유형들, 또는 생물학적 조건들에서 보다 많은 표적된 발현을 위해 조작될 수 있다. 조직-특이적 miRNA 결합 부위들의 도입을 통해, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 조직 또는 세포에서, 또는 생물학적 조건과 관련하여 최적의 단백질 발현을 위해 고안될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 공지된 miRNA 씨드 서열들에 100% 동일성을 가지거나 miRNA 씨드 서열들에 대해 100% 미만의 동일성을 가지는 miRNA 결합 부위들을 통합하도록 고안될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 공지된 miRNA 씨드 서열에 최소한: 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 가지는 miRNA 결합 부위들을 통합하도록 고안될 수 있다. miRNA 씨드 서열은 miRNA 결합 친화도를 감소시켜 그 결과 폴리뉴클레오티드의 하향조절을 감소시키기 위해 부분적으로 돌연변이될 수 있다. 본질적으로, miRNA 결합 부위와 miRNA 씨드 사이의 매치 또는 미스매치 정도는 단백질 발현을 조절하는 miRNA의 능력을 보다 미세하게 조정하기 위한 가변저항기로서 작용할 수 있다. 또한, miRNA 결합 부위의 비-씨드 영역에서 돌연변이는 또한 단백질 발현을 조절하는 miRNA의 능력에 영향을 줄 수도 있다.
한 구체예에서, miRNA 서열은 스템 루프의 루프 내부에 통합될 수 있다.
또 다른 구체예에서, miRNA 씨드 서열은 스템 루프의 루프에 통합될 수 있고 miRNA 결합 부위는 스템 루프의 5′또는 3′스템에 통합될 수 있다.
한 구체예에서, 번역 인핸서 요소 (TEE)는 스템 루프의 스템의 5'단부 상에 통합될 수 있고 miRNA 씨드는 스템 루프의 스템 내부에 통합될 수 있다. 또 다른 구체예에서, TEE는 스템 루프의 스템의 5' 단부 상에 통합될 수 있으며 miRNA 씨드는 스템 루프의 스템으로 통합될 수 있고 miRNA 결합 부위는 스템 루프 이후 스템 또는 서열의 3' 단부에 통합될 수 있다. miRNA 씨드 및 miRNA 결합 부위는 동일한 및/또는 상이한 miRNA 서열에 대해 존재할 수 있다.
한 구체예에서, miRNA 서열 및/또는 TEE 서열과의 통합은 번역을 증가 및/또는 감소시킬 수 있는 스템 루프 영역의 형상을 변화시킨다 (예컨대, Kedde 등, "A Pumilio-induced RNA structure switch in p27-3′controls miR-221 and miR-22 accessibility." Nature Cell Biology. 2010 참고, 이는 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함됨).
한 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 5′은 최소한 하나의 miRNA 서열을 포함할 수 있다. miRNA 서열은 씨드가 없는 19 또는 22개 뉴클레오티드 서열 및/또는 miRNA 서열일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
한 구체예에서 5′에서 miRNA 서열은 본 명세서에 기재된 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 안정화시키기 위해 사용될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 5′에 있는 miRNA 서열은 번역 개시 부위, 가령, 시작 코돈 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)의 접근성을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 예컨대, Matsuda 등, PLoS One. 2010 11(5):e15057을 참고하며; 이 문헌은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함됨, 이는 제 1 시작 코돈 (AUG)에 대한 접근성을 감소시키기 위하여 시작 코돈 (-4 내지 +37, 여기서 AUG 코돈의 A는 +1임) 주위에 엑손-접합 복합체들 (EJCs) 및 안티센스 잠금 핵산 (LNA) 올리고뉴클레오티드를 사용하였다. Matsuda는 LNA 또는 EJC로 시작 코돈 주위의 서열을 변형시키는 것이 폴리뉴클레오티드의 효율성, 길이 및 구조적 안정성에 영향을 주었음을 보여주었다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 번역 개시 부위에 대한 접근성을 감소시키기 위하여, 번역 개시 부위 근방에 Matsuda 등에 의해 기재된 LNA 또는 EJC 서열 대신, miRNA 서열을 포함할 수 있다. 번역 개시 부위는 miRNA 서열 이전에, 이후에 또는 내부에 존재할 수 있다. 비-제한적 예로서, 번역 개시 부위는 miRNA 서열, 가령, 씨드 서열 또는 결합 부위 내부에 위치할 수 있다. 또 다른 비-제한적 예로서, 번역 개시 부위는 miR-122 서열, 가령, 씨드 서열 또는 mir-122 결합 부위 내부에 위치할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 항원 제시 세포들에 의한 항원 제시를 약화시키기 위하여 최소한 하나의 miRNA를 포함할 수 있다. miRNA는 완전한 miRNA 서열, miRNA 씨드 서열, 씨드 없는 miRNA 서열, 또는 이의 조합일 수 있다. 비-제한적 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 통합되는 miRNA는 조혈 시스템에 특이적일 수 있다. 또 다른 비-제한적 예로서, 항원 제시를 약화시키기 위해 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 통합되는 miRNA는 miR-142-3p이다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 관심 조직 또는 세포에서 인코드되는 폴리펩티드의 발현을 약화시키기 위하여 최소한 하나의 miRNA를 포함할 수 있다. 비-제한적 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 간에서 인코드되는 관심 폴리펩티드의 발현을 약화시키기 위해 최소한 하나의 miR-122 결합 부위를 포함할 수 있다. 또 다른 비-제한적 예로서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 최소한 하나의 miR-142-3p 결합 부위, miR-142-3p 씨드 서열, 씨드 없는 miR-142-3p 결합 부위, miR-142-5p 결합 부위, miR-142-5p 씨드 서열, 씨드 없는 miR-142-5p 결합 부위, miR-146 결합 부위, miR-146 씨드 서열 및/또는 씨드 서열 없는 miR-146 결합 부위를 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 치료적 전달에 의해 유발되는 원치않은 면역원성 반응들을 억제하기 위하여 면역 세포들에서 mRNA 치료제를 선택적으로 분해하기 위해 3′에 최소한 하나의 miRNA 결합 부위를 포함할 수 있다. 비-제한적 예로서, miRNA 결합 부위는 항원 제시 세포들에서 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 더욱 불안정하게 만들 수 있다. 이러한 miRNA들의 비-제한적 예들에는 mir-142-5p, mir-142-3p, mir-146a-5p, 및 mir-146-3p가 포함된다.
한 구체예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 RNA 결합 단백질과 상호작용 할 수 있는 폴리뉴클레오티드의 영역에 최소한 하나의 miRNA 서열을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드 (예컨대, RNA, 예컨대, mRNA)는 (i) 서열-최적화된 뉴클레오티드 서열 (예컨대, ORF) 및 (ii) miRNA 결합 부위 (예컨대, miR-142에 결합하는 miRNA 결합 부위)를 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 본 명세서에 개시된 miRNA 결합 부위, 예컨대, miR-142 또는 miR-122에 결합하는 miRNA 결합 부위 및 본 명세서에 개시된 폴리펩티드를 인코드하는 우라실-변형된 서열을 포함한다. 일부 구체예들에서, 폴리펩티드를 인코드하는 우라실-변형된 서열은 최소한 하나의 화학적으로 변형된 핵염기, 예컨대, 5-메톡시우라실을 포함한다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 폴리펩티드를 인코드하는 우라실-변형된 서열에서 핵염기 (예컨대, 우라실) 유형의 최소한 95%는 변형된 핵염기들이다. 일부 구체예들에서, 폴리펩티드를 인코드하는 우라실-변형된 서열에서 우라실의 최소한 95%는 5-메톡시우리딘이다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위 및 본 명세서에 개시된 폴리펩티드를 인코드하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 전달 물질, 예컨대, 화학식 (I)을 가지는 화합물, 예컨대, 화합물 1-147 중 어느 하나와 함께 제제화된다.
기능적 RNA 요소들을 포함하는 변형된 폴리뉴클레오티드
본 발명은 변형을 포함하는 합성 폴리뉴클레오티드 (예컨대, RNA 요소)를 제공하며, 이 때 변형은 필요한 번역 조절 활성을 제공한다. 일부 구체예들에서, 본 발명은 5' 비번역 영역 (UTR), 개시 코돈, 폴리펩티드를 인코드하는 전체 개방 해독 프레임, 3' UTR, 및 최소한 하나의 변형을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공하며, 이 때 최소한 하나의 변형은 필요한 번역 조절 활성, 예를 들면, mRNA 번역의 번역 충실성을 촉진 및/또는 개선하는 변형을 제공한다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 시스-작용 조절 활성이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 개시 코돈에서 또는 개시 코돈 근방에서 43S 개시-전 복합체 (PIC) 또는 리보솜의 체류 시간 증가이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 개시 코돈에서 또는 개시 코돈으로부터 폴리펩티드 합성의 개시 증가이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 전체 개방 해독 프레임으로부터 번역되는 폴리펩티드의 양 증가이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 PIC 또는 리보솜에 의해 디코드되는 (decoding) 개시 코돈의 충실성 증가이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 PIC 또는 리보솜에 의한 누출 스캔의 억제 또는 감소이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 PIC 또는 리보솜에 의한 개시 코돈 디코드 속도의 감소이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 개시 코돈 이외의 mRNA 내부에 있는 임의의 코돈에서 폴리펩티드 합성 개시의 억제 또는 감소이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 전체 개방 해독 프레임 이외의 mRNA 내부에 있는 임의의 개방 해독 프레임으로부터 번역되는 폴리펩티드의 양 억제 또는 감소이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 이상 번역 생성물의 생성 억제 또는 감소이다. 일부 구체예들에서, 필요한 번역 조절 활성은 전술한 번역 조절 활성들 중 하나 이상의 조합이다.
따라서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 필요한 번역 조절 활성을 제공하는 서열 및/또는 RNA 2차 구조(들)을 포함하는 RNA 요소를 포함하는 폴리뉴클레오티드, 예컨대, mRNA를 제공한다. 일부 양상들에서, mRNA는 mRNA 번역의 번역 충실성을 촉진 및/또는 개선하는 서열 및/또는 RNA 2차 구조(들)을 포함하는 RNA 요소를 포함한다. 일부 양상들에서, mRNA는 필요한 번역 조절 활성, 가령, 누출 스캐닝의 억제 및/또는 감소를 제공하는 서열 및/또는 RNA 2차 구조(들)을 포함하는 RNA 요소를 포함한다. 일부 양상들에서, 본 발명은 누출 스캐닝을 억제 및/또는 감소시킴으로써 mRNA의 번역 충실성을 촉진시키는 서열 및/또는 RNA 2차 구조(들)을 포함하는 RNA 요소를 포함하는 mRNA를 제공한다.
일부 구체예들에서, RNA 요소는 자연 및/또는 변형된 뉴클레오티드들을 포함한다. 일부 구체예들에서, RNA 요소는 본 명세서에 기재된 필요한 번역 조절 활성을 제공하는 연결된 뉴클레오티드들의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체로 구성된다. 일부 구체예들에서, RNA 요소는 안정한 RNA 2차 구조를 형성하거나 이러한 구조로 폴드하는 연결된 뉴클레오티드들의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하며, 이 때 RNA 2차 구조는 본 명세서에 기재된 필요한 번역 조절 활성을 제공한다. RNA 요소들은 해당 요소 (예컨대, GC-풍부 요소)의 일차 서열을 기준으로, 해당 요소에 의해 형성되는 RNA 2차 구조에 의해 (예컨대 스템-루프), RNA 분자 내 해당 요소의 위치에 의해 (예컨대, mRNA의 5' UTR 내부에 위치함), 해당 요소의 생물학적 기능 및/또는 활성 (예컨대, “번역 인핸서 요소”), 및 이의 임의의 조합에 의해 확인 및/또는 특성화 될 수 있다.
일부 양상들에서, 본 발명은 누출 스캐닝을 억제하고 및/또는 mRNA 번역의 번역 충실성을 촉진시키는 하나 이상의 구조적 변형들을 가지는 mRNA를 제공하며, 이 때 이러한 구조적 변형들 중 최소한 하나는 GC-풍부 RNA 요소이다. 일부 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하며, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하여, 연결된 뉴클레오티드들의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이다. 한 구체예에서, GC-풍부 RNA 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 약 30, 약 25, 약 20, 약 15, 약 10, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 또는 약 1개 뉴클레오티드(들) 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, GC-풍부 RNA 요소는 Kozak 공통 서열의 15-30, 15-20, 15-25, 10-15, 또는 5-10개 뉴클레오티드들 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, GC-풍부 RNA 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 바로 인접하여 위치한다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 발명은 임의의 순서로 연결된, 3-30, 5-25, 10-20, 15-20, 약 20, 약 15, 약 12, 약 10, 약 7, 약 6 또는 약 3개 뉴클레오티드들의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소를 제공하며, 이 때 서열 조성은 70-80% 시토신, 60-70% 시토신, 50%-60% 시토신, 40-50% 시토신, 또는 30-40% 시토신 염기이다. 임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 발명은 임의의 순서로 연결된, 3-30, 5-25, 10-20, 15-20, 약 20, 약 15, 약 12, 약 10, 약 7, 약 6 또는 약 3개 뉴클레오티드들의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소를 제공하며, 이 때 서열 조성은 약 80% 시토신, 약 70% 시토신, 약 60% 시토신, 약 50% 시토신, 약 40% 시토신, 또는 약 30% 시토신이다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 발명은 임의의 순서로 연결된, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개 뉴클레오티드의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소를 제공하며, 이 때 서열 조성은 70-80% 시토신, 60-70% 시토신, 50%-60% 시토신, 40-50% 시토신, 또는 30-40% 시토신이다. 임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 발명은 임의의 순서로 연결된, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3개 뉴클레오티드의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소를 제공하며, 이 때 서열 조성은 약 80% 시토신, 약 70% 시토신, 약 60% 시토신, 약 50% 시토신, 약 40% 시토신, 또는 약 30% 시토신이다.
일부 구체예들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하며, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하는, 연결된 뉴클레오티드의 서열, 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이며, 여기서 GC-풍부 RNA 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 약 30, 약 25, 약 20, 약 15, 약 10, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 또는 약 1개 뉴클레오티드(들) 상류에 위치하고, GC-풍부 RNA 요소는 임의의 순서로 연결된, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 뉴클레오티드의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하고, 이 때 서열 조성은 >50% 시토신이다. 일부 구체예들에서, 서열 조성은 >55% 시토신, >60% 시토신, >65% 시토신, >70% 시토신, >75% 시토신, >80% 시토신, >85% 시토신, 또는 >90% 시토신이다.
다른 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하며, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하는, 연결된 뉴클레오티드의 서열, 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이며, 여기서 GC-풍부 RNA 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 약 30, 약 25, 약 20, 약 15, 약 10, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 또는 약 1개 뉴클레오티드(들) 상류에 위치하고, 이 때 GC-풍부 RNA 요소는 약 3-30, 5-25, 10-20, 15-20개 또는 약 20, 약 15, 약 12, 약 10, 약 6 또는 약 3개 뉴클레오티드의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하고, 이 때 서열은 반복 GC-모티프를 포함하고, 이 때 반복 GC-모티프는 [CCG]n이며, 이 때 n = 1 내지 10, n= 2 내지 8, n= 3 내지 6, 또는 n= 4 내지 5이다. 일부 구체예들에서, 상기 서열은 반복 GC-모티프 [CCG]n를 포함하고, 이 때 n = 1, 2, 3, 4 또는 5이다. 일부 구체예들에서, 상기 서열은 반복 GC-모티프 [CCG]n를 포함하고, 이 때 n = 1, 2, 또는 3이다. 일부 구체예들에서, 상기 서열은 반복 GC-모티프 [CCG]n를 포함하고, 이 때 n = 1이다. 일부 구체예들에서, 상기 서열은 반복 GC-모티프 [CCG]n를 포함하고, 이 때 n = 2이다. 일부 구체예들에서, 상기 서열은 반복 GC-모티프 [CCG]n를 포함하고, 이 때 n = 3이다. 일부 구체예들에서, 상기 서열은 반복 GC-모티프 [CCG]n를 포함하고, 이 때 n = 4 (서열 번호: 1382)이다. 일부 구체예들에서, 상기 서열은 반복 GC-모티프 [CCG]n를 포함하고, 이 때 n = 5 (서열 번호: 178)이다.
또 다른 양상에서, 일부 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하며, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하여, 연결된 뉴클레오티드들의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이고, 이 때 GC-풍부 RNA 요소는 표 4에 제시된 서열들 중 어느 하나를 포함한다. 한 구체예에서, GC-풍부 RNA 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 약 30, 약 25, 약 20, 약 15, 약 10, 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 또는 약 1개 뉴클레오티드(들) 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, GC-풍부 RNA 요소는 Kozak 공통 서열의 약 15-30, 15-20, 15-25, 10-15, 또는 5-10개 뉴클레오티드들 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, GC-풍부 RNA 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 바로 인접하여 위치한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하고, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하는, 표 4에 제시된 서열 V1 [CCCCGGCGCC] (서열 번호: 179) , 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이다. 일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 바로 인접하게 그리고 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V1을 포함한다. 일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V1을 포함한다. 다른 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1-3, 3-5, 5-7, 7-9, 9-12, 또는 12-15개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V1을 포함한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하고, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하는, 표 4에 제시된 서열 V2 [CCCCGGC] , 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이다. 일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 바로 인접하게 그리고 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V2를 포함한다. 일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V2를 포함한다. 다른 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1-3, 3-5, 5-7, 7-9, 9-12, 또는 12-15개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V2를 포함한다.
다른 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하고, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하는, 표 4에 제시된 서열 EK [GCCGCC] , 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이다. 일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 바로 인접하게 그리고 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 EK를 포함한다. 일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 EK를 포함한다. 다른 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1-3, 3-5, 5-7, 7-9, 9-12, 또는 12-15개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 EK를 포함한다.
또 다른 양상들에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하고, 이 때 최소한 하나의 변형은 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열에 선행하는, 표 4에 제시된 서열 V1 [CCCCGGCGCC] (서열 번호: 179) , 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이며, 이 때 5' UTR은 표 4에 제시된 다음 서열을 포함한다:
GGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGA (서열번호: 180).
일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 표 4에 제시된 5' UTR 서열에서 Kozak 공통 서열에 바로 인접하게 그리고 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V1을 포함한다. 일부 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V1을 포함하며, 이 때 5' UTR은 표 4에 제시된 다음 서열을 포함한다:
GGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGA (서열번호: 180).
다른 구체예들에서, GC-풍부 요소는 mRNA의 5' UTR에서 Kozak 공통 서열의 1-3, 3-5, 5-7, 7-9, 9-12, 또는 12-15개 염기 상류에 위치한 표 4에 제시된 서열 V1을 포함하며, 이 때 5' UTR은 표 4에 제시된 다음 서열을 포함한다:
GGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGA (서열번호: 180).
일부 구체예들에서 5' UTR은 표 4에 제시된 다음 서열을 포함한다:
GGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGACCCCGGCGCCGCCACC (서열번호: 181)
일부 구체예들에서 5' UTR은 표 4에 제시된 다음 서열을 포함한다:
GGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGACCCCGGCGCCACC (서열번호: 182)
또 다른 양상에서, 본 발명은 최소한 하나의 변형을 포함하는 변형된 mRNA를 제공하며, 이 때 최소한 하나의 변형은 헤어핀 또는 스템-루프를 형성하는 순서로 연결된, 뉴클레오티드들의 서열, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는 안정한 RNA 2차 구조를 포함하는 GC-풍부 RNA 요소이다. 한 구체예에서, 안정한 RNA 2차 구조는 Kozak 공통 서열의 상류에 존재한다. 또 다른 구체예에서, 안정한 RNA 2차 구조는 Kozak 공통 서열의 약 30, 약 25, 약 20, 약 15, 약 10, 또는 약 5개 뉴클레오티드 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, 안정한 RNA 2차 구조는 Kozak 공통 서열의 약 20, 약 15, 약 10 또는 약 5개 뉴클레오티드 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, 안정한 RNA 2차 구조는 Kozak 공통 서열의 약 5, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1 뉴클레오티드 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, 안정한 RNA 2차 구조는 Kozak 공통 서열의 약 15-30, 약 15-20, 약 15-25, 약 10-15, 또는 약 5-10개 뉴클레오티드 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, 안정한 RNA 2차 구조는 Kozak 공통 서열의 12-15개 뉴클레오티드 상류에 위치한다. 또 다른 구체예에서, 안정한 RNA 2차 구조는 약 -30 kcal/mol, 약 -20 내지 -30 kcal/mol, 약 -20 kcal/mol, 약 -10 내지 -20 kcal/mol, 약 -10 kcal/mol, 약 -5 내지 -10 kcal/mol의 델타G를 가진다.
또 다른 구체예에서, 상기 변형은 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임에 작동적으로 연결되며 상기 변형 및 개방 해독 프레임은 이종이다.
또 다른 구체예에서, GC-풍부 RNA 요소의 서열은 전적으로 구아닌 (G) 및 시토신 (C) 핵염기들로 구성된다.
본 명세서에 기재된 필요한 번역 조절 활성을 제공하는 RNA 요소는 공지 기술들, 가령, 리보솜 프로파일링을 사용하여 확인 및 특성화될 수 있다. 리보솜 프로파일링은 mRNA에 결합되는 PICs 및/또는 리보솜 위치들을 결정할 수 있게 하는 기술이다 (예컨대, Ingolia 등, (2009) Science 324(5924):218-23 참고, 이 문헌은 본 명세서에 참고문헌으로 포함됨). 이 기술은 핵산분해효소 소화로부터, PIC 및/또는 리보솜에 의하여, mRNA의 일 영역 또는 분절을 보호하는 것에 기초한다. 보호는 '풋프린트'로 명명되는 RNA의 30-bp 단편을 생성한다. RNA 풋프린트들의 서열 및 빈도는 해당 분야에 공지된 방법들에 의해 분석될 수 있다 (예컨대, RNA-seq). 풋프린트는 리보솜의 A-부위 상에 대략 집중되어 있다. PIC 또는 리보솜이 mRNA를 따라 특정 위치 또는 배치에 존재하는 경우, 이들 위치에서 생성된 풋프린트들은 비교적 일반적일 것이다. 연구들은PIC 및/또는 리보솜이 감소된 진행성을 나타내는 위치들에서 보다 많은 풋프린트가 생성되고 PIC 및/또는 리보솜이 증가된 진행성을 나타내는 위치들에서 보다 적은 풋프린트가 생성됨을 밝혀내었다 (Gardin 등, (2014) eLife 3:e03735). 일부 구체예들에서, 임의의 하나 이상의 본 명세서에 기재된 RNA 요소들을 포함하는 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 따라 일정한 별도 위치 또는 배치에서 PIC 또는 리보솜의 체류 시간 또는 점유 시간은 리보솜 프로파일링에 의해 결정된다.
고순도 RNA의 제조
합성 제조된 RNA의 순도를 향상시키기 위하여, 종래의 IVT 공정을 사용하여 제조된 RNA와 대단히 상이한 성질들을 가지는 RNA 제재들을 제조하는 변형된 시험관내 전사 (IVT) 공정들이 사용될 수 있다. 이러한 방법들에 따라 제조된 RNA 제재들은 정성적으로 그리고 정량적으로 우수한 조성물의 제조를 가능하게 하는 성질들을 가진다. 대규모 정제 공정들과 결합시에도, 종래의 IVT 방법들을 사용하여 제조된 RNA는 변형된 IVT 공정들에 의해 제조된 RNA 제재들과 정성적으로 그리고 정량적으로 구별된다. 예를 들어, 정제된 RNA 제재들은 종래의 IVT를 사용하여 제조된 RNA 제재들과 비교하여 면역원성이 더 적다. 추가적으로, 보다 높은 순도의 증가된 단백질 발현 수준들이 정제된 RNA 제재들로부터 생성된다.
종래의 IVT 반응들은 DNA 주형을 RNA 중합효소 및 GTP, ATP, CTP, 및 UTP를 포함하는 등몰 양의 뉴클레오티드 트라이포스페이트와 함께 전사 완충액에서 배양함으로써 실시된다. 5' 말단 구아노신 트라이포스페이트를 가지는 RNA 전사체가 이 반응으로부터 생성된다. 이들 반응들은 또한 면역자극성이며 부가적인 영향을 미칠 수 있는 수많은 불순물들, 가령, 이중 가닥 및 단일 가닥 RNA들을 생성하는 결과를 가져온다. 본 명세서에 기재된 순도 방법들은 역 보체들의 형성을 저해하므로 두 가지 종류 모두의 선천 면역 인식을 저해한다. 일부 구체예들에서 변형된 IVT 방법들은 등몰의 NTP들을 이용하여 선행 기술의 방법들을 사용하여 제조된 RNA 제재보다 현저히 감소된 T 세포 활성을 가지는 RNA를 생성한다. 선행 기술은 일련의 후속 정제 단계들을 사용하여 이러한 바람직하지 않은 성분들을 제거하려고 시도하였다. 이러한 정제 방법들은 추가 시간 및 자원들을 요하고 또한 최종 생성물에서 제약학적 생성물에 바람직하지 않은 잔부 유기 용매들을 혼입시키게 되므로 바람직하지 않다. 역상 크로마토그래피 (RP)와 같은 공정들을 확장시키는 것은 노동 및 자본 집약적이다: 예를 들어, 고압, 고온, 인화성 용매 등을 위한 방폭 설비, HPLC 컬럼 및 정제 시스템을 이용. 대규모 생산을 위한 규모와 처리량은 이러한 인자들에 의해 제한된다. 또한 공정에서 이용되는 알킬암모늄 이온쌍을 제거하기 위해 후속 정제가 필요하다. 대조적으로, 본 명세서에 기재된 방법들은 심지어 현재 이용되는 방법들 (예컨대 RP)를 향상시킨다. 불순물 부하가 낮을 수록 사이토카인 유도 오염물질이 없는 전장 RNA, 예컨대, 처음부터 높은 품질의 재료들의 정제 회수율이 더 높아진다.
변형된 IVT 방법들은 선행 기술 공정들을 사용하여 생성되는 바람직하지 않은 하나 이상의 오염물질들이 없는 매우 기능적인 RNA의 RNA 제재를 생성하기 위한 IVT 반응에서 반응 매개변수 중 하나 이상의 조작을 포함한다. 조작될 수 있는 IVT 반응 내 하나의 매개변수는 반응 혼합물에서 하나 이상의 다른 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체들과 비교한 상대양 (예컨대, 이질적인 뉴클레오티드 양 또는 농도)이다. 예를 들어, IVT 반응은 과량의 뉴클레오티드, 예컨대, 뉴클레오티드 모노포스페이트, 뉴클레오티드 다이포스페이트 또는 뉴클레오티드 트라이포스페이트 및/또는 과량의 뉴클레오티드 유사체 및/또는 뉴클레오시드 유사체를 포함할 수 있다. 상기 방법들은 종래의 IVT 방법들에 의해 생성된 생성물들 보다 현저히 더 순수한 고수율의 생성물을 생성한다.
뉴클레오티드 유사체는 뉴클레오티드의 일반적인 구조를 가지거나 뉴클레오티드 또는 이의 일부와 구조적으로 유사한 화합물들이다. 특히, 뉴클레오티드 유사체는, 예를 들면, 뉴클레오티드의 핵산 부분, 당 부분 및/또는 포스페이트 그룹의 유사체를 함유하는 뉴클레오티드이다. 뉴클레오티드는, 예를 들어, 뉴클레오티드 모노포스페이트, 뉴클레오티드 다이포스페이트, 및 뉴클레오티드 트라이포스페이트를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 뉴클레오티드 유사체들은 뉴클레오티드 또는 이의 일부와 구조적으로 유사하지만 통상적인 뉴클레오티드 구조 (핵염기-리보오스-포스페이트)를 가지지 않는다. 뉴클레오시드 유사체는 뉴클레오시드의 일반적인 구조를 가지거나 또는 뉴클레오시드 또는 이의 일부와 구조적으로 유사한 화합물이다. 특히, 뉴클레오시드 유사체는, 예를 들면, 뉴클레오시드의 핵산 및/또는 당 부분의 유사체를 함유하는 뉴클레오시드이다.
이러한 방법들에서 유용한 뉴클레오티드 유사체는 뉴클레오티드 또는 이의 일부분과 구조적으로 유사하지만, 예를 들면, T7에 의해 중합가능하지 않다. 본 발명에서 사용되는 뉴클레오티드/뉴클레오시드 유사체 (C, T, A, U, G, dC, dT, dA, dU, 또는 dG 유사체 포함)는 예를 들면, 항바이러스 뉴클레오티드 유사체, 포스페이트 유사체 (가용성 또는 고정화된, 가수분해성 또는 비-가수분해성), 다이뉴클레오티드, 트라이뉴클레오티드, 테트라뉴클레오티드, 예컨대, 캡 유사체, 또는 효소적 캡핑을 위한 전구물질/기질 (백시니아, 또는 연결효소), 캡 또는 5' 모이어티 (IRES)의 결찰/접합을 용이하게 하기 위해 작용기로 표지된 뉴클레오티드, 캡 또는 5' 모이어티의 결찰을 용이하게 하기 위해 5' PO4로 표지된 뉴클레오티드, 또는 화학적으로 또는 효소적으로 절단가능할 수 있는 작용기/보호기로 표지된 뉴클레오티드를 포함한다. 항바이러스 뉴클레오티드/뉴클레오시드 유사체는 칸시클로비르, 엔테카비르, 텔비부딘, 비다라빈 및 시도포비르를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
IVT 반응은 통상적으로 다음을 포함한다: 예컨대, 1000-12000 U/mL, 예컨대, 7000 U/mL의 최종 농도의 RNA 중합효소, 예컨대, T7 RNA 중합효소; 예컨대, 10-70 nM, 예컨대, 40 nM의 최종 농도의 DNA 주형; 예컨대, 12-60 mM, 예컨대, 40 mM의 마그네슘 아세테이트; 완충액, 가령, 예컨대, 7-8.5 pH의 예컨대, HEPES 또는 Tris, 예컨대, 40 mM Tris HCl. 일부 구체예들에서 5 mM 다이싸이오쓰레이톨 (DTT) 및/또는 1 mM 스페르미딘이 포함될 수 있다. 일부 구체예들에서, RNase 억제제는 IVT 반응에 포함되어, 전사 반응 동안 RNase 유도된 분해가 전혀 없게 한다. 예를 들면, 쥐과 RNase 억제제는 1000 U/mL의 최종 농도로 이용될 수 있다. 일부 구체예들에서 파이로포스파타제는 2개의 무기 포스페이트 유닛들에 각 뉴클레오티드 혼입 후 생성되는 무기 파이로포스페이트를 절단하기 위하여 IVT 반응에 포함된다. 이는 마그네슘이 용액 중에 남아있게 하고 마그네슘 파이로포스페이트로서 침전하지 않도록 한다. 예를 들면, 대장균 무기 파이로포스파타제는 1 U/mL의 최종 농도로 이용될 수 있다.
종래의 방법들과 유사하게, 변형된 방법은 또한 DNA 주형, 및 하나 이상의 NTP, 가령, ATP, CTP, UTP, GTP (또는 전술한 성분들의 상응하는 유사체) 및 완충액을 포함하는 반응 혼합물을 형성함으로써 생성될 수도 있다. 그 후 반응은 일정 조건들하에서 배양되어, RNA가 전사된다. 그러나, 변형된 방법들은 최종 생성물에 현저한 영향을 줄 수 있는 하나 이상의 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오티드 유사체의 과량의 존재를 이용한다. 이들 방법들은 반응 혼합물 내 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오티드 유사체의 양(예컨대, 몰양 또는 양)의 변형을 포함한다. 일부 양상들에서, 하나 이상의 뉴클레오티드 및/또는 하나 이상의 뉴클레오티드 유사체는 반응 혼합물에 과량으로 추가될 수 있다. 과량의 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오티드 유사체는 하나 이상의 다른 뉴클레오티드들, 가령, 반응 혼합물에서 NTP의 양 보다 많은 임의의 양이다. 예를 들어, 과량의 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오티드 유사체는 반응 혼합물에서 다른 개개 NTP 중 최소한 하나 또는 각각의 양 보다 많은 양일 수 있거나 다른 NTP의 등몰 양보다 많은 양을 지칭할 수 있다.
반응 혼합물에 포함되는 뉴클레오티드 및/또는 뉴클레오티드 유사체가 NTP일 때, NTP는 반응 혼합물에 포함되는 세가지 다른 NTP들 모두 보다 높은 농도로 존재할 수 있다. 다른 세 가지 NTP들은 서로 등몰 농도로 존재할 수 있다. 대안적으로, 세 가지 다른 NTP들 중 하나 이상은 그 외 NTP들 중 하나 이상과 상이한 농도로 존재할 수 있다.
그러므로, 일부 구체예들에서 IVT 반응은 최소한 하나의 다른 뉴클레오티드 트라이포스페이트에 비해 등몰 양의 뉴클레오티드 트라이포스페이트를 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서 RNA는 다음을 포함하는 공정에 의해 생성되거나 준비된다
(a)
DNA 주형 및 아데노신 트라이포스페이트 (ATP), 시티딘 트라이포스페이트 (CTP), 우리딘 트라이 포스페이트 (UTP), 구아노신 트라이포스페이트 (GTP) 및 선택적으로 구아노신 다이포스페이트 (GDP)를 포함하는 NTP를 포함하는 반응 혼합물 (예컨대, T7 공동-인자, 예컨대, 마그네슘을 함유하는 완충액)을 형성하는 단계, 및
(b)
상기 반응 혼합물을 RNA가 전사되도록 하는 조건하에서 배양하는 단계,
이 때 GTP, CTP, ATP, 및 UTP 중 최소한 하나의 농도는 ATP, CTP 또는 UTP 중 하나 이상의 농도 보다 최소한 2X 크거나 상기 반응은 뉴클레오티드 유사체를 추가로 포함하고 그리고 뉴클레오티드 유사체의 농도는 하나 이상의 ATP, CTP 또는 UTP의 농도보다 최소한 2X 더 크다.
일부 구체예들에서 GTP의 농도 대 어느 하나의 ATP, CTP 또는 UTP의 농도의 비율은 최소한 2:1, 최소한 3:1, 최소한 4:1, 최소한 5:1 또는 최소한 6:1이다. GTP의 농도 대 ATP, CTP 및 UTP의 농도의 비율은, 일부 구체예들에서 각각 2:1, 4:1 및 4:1이다. 다른 구체예들에서, GTP의 농도 대 ATP, CTP 및 UTP의 농도의 비율은 각각 3:1, 6:1 및 6:1이다. 반응 혼합물은 GTP 및 GDP를 포함할 수 있으며 이 때 GTP + GDP의 농도 대 ATP, CTP 또는 UTP 중 어느 하나의 농도의 비율은 최소한 2:1, 최소한 3:1, 최소한 4:1, 최소한 5:1 또는 최소한 6:1이다. 일부 구체예들에서 GTP + GDP의 농도 대 ATP, CTP 및 UTP의 농도의 비율은 각각 3:1, 6:1 및 6:1이다.
일부 구체예들에서 상기 방법은 RNA가 전사되는 조건하에서 반응 혼합물을 배양하는 단계를 포함하며, 반응에서 유효 포스페이트 농도는 최소한 150 mM 포스페이트, 최소한 160 mM, 최소한 170 mM, 최소한 180 mM, 최소한 190 mM, 최소한 200 mM, 최소한 210 mM 또는 최소한 220 mM이다. 반응 내 포스페이트의 유효 농도는 180 mM 일 수 있다. 반응에서 포스페이트의 유효 농도는 일부 구체예에서 195 mM이다. 다른 구체예들에서 반응에서 포스페이트의 유효 농도는 225 mM이다.
다른 구체예들에서 RNA는 DNA 주형 및 ATP, CTP, UTP, GTP를 포함하는 반응 혼합물을 형성할 때 마그네슘-함유 완충액이 사용되는 완충액을 포함하는 공정에 의해 생성되거나 이러한 공정에 의해 준비가능하다. 일부 구체예들에서 마그네슘-함유 완충액은 Mg2+를 포함하며 이 때 ATP + CTP + UTP + GTP의 농도 대 Mg2+의 농도의 몰비는 최소한 1.0, 최소한 1.25, 최소한 1.5, 최소한 1.75, 최소한 1.85, 최소한 3 또는 그 보다 높다. ATP + CTP + UTP + GTP의 농도 대 Mg2+의 농도의 몰비는 1.5일 수 있다. ATP + CTP + UTP + GTP의 농도 대 Mg2+의 농도의 몰비는 일부 구체예들에서 1.88이다. ATP + CTP + UTP + GTP의 농도 대 Mg2+의 농도의 몰비는 일부 구체예들에서 3이다.
일부 구체예들에서 조성물은 dsRNase (예컨대, RNaseIII) 처리 단계를 포함하지 않는 공정에 의해 생성된다. 다른 구체예들에서 조성물은 역상 (RP) 크로마토그래피 정제 단계를 포함하지 않는 공정에 의해 생성된다. 또한 다른 구체예들에서 조성물은 고-성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 정제 단계를 포함하지 않는 공정에 의해 생성된다.
일부 구체예들에서 RNA를 생성하기 위한 GTP의 농도 대 어느 하나의 ATP, CTP 또는 UTP의 농도의 비율은 최소한 2:1, 최소한 3:1, 최소한 4:1, 최소한 5:1 또는 최소한 6:1이다.
생성물의 순도는 공지의 분석법들 및 측정법들을 사용하여 평가될 수 있다. 예를 들어, 역 보체 전사 생성물 또는 사이토카인-유도 RNA 오염물질의 양은 고-성능 액체 크로마토그래피 (가령, 역상 크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피), 생물분석장치 칩-기반 전기영동 시스템, ELISA, 유세포분석, 아크릴아마이드 겔, 재구성 또는 대리 유형 분석법 (reconstitution or surrogate type assay)에 의해 결정될 수 있다. 분석법들은 RNA 제재의 핵산분해효소 처리 (P1, RNase III, RNase H 등)와 함께 또는 처리 없이 실시될 수 있다. 핵산분해효소 소화 생성물들의 전기영동/ 크로마토그래피/질량 분석법 또한 실시될 수 있다.
일부 구체예들에서 정제된 RNA 제재들은 전장 전사체 미만, 가령, 예를 들어, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 또는 900개 뉴클레오티드 이상 전장 미만의 길이를 가지는 오염물질 전사체들을 포함한다. 오염물질 전사체들은 전장 전사체 미만, 가령, 예를 들어, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 또는 900개 뉴클레오티드 이상 전장 미만의 길이를 가지는 역 또는 정방향 전사 생성물들 (전사체들)을 포함할 수 있다. 예시적인 정방향 전사체들은, 예를 들어, 부전형 전사체들을 포함한다. 특정 구체예들에서 조성물은 30개 미만의 뉴클레오티드의 트라이-포스페이트 폴리-U 역 보체를 포함한다. 일부 구체예들에서 조성물은 전장 전사체에 혼성화된 임의의 길이의 트라이-포스페이트 폴리-U 역 보체를 포함한다. 다른 구체예들에서 조성물은 단일 가닥 트라이-포스페이트 정방향 전사체를 포함한다. 다른 구체예들에서 조성물은 말단 트라이-포스페이트-G를 가지는 단일 가닥 RNA를 포함한다. 다른 구체예들에서 조성물은 12개 미만의 뉴클레오티드 또는 염기쌍들 (정방향 또는 역보체 전사체들 포함)의 단일 또는 이중 가닥 RNA를 포함한다. 임의의 이러한 구체예들에서 조성물은 전장 미만의 이러한 전사체들 중 어느 하나 또는 이의 조합을 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0.5% 미만 포함할 수 있다.
전달 비히클
일반
본 발명의 mRNA는, 예컨대, 대상체에 전달될 때 이를 분해로부터 보호하기 위해, 나노입자들 또는 그 외 전달 비히클들에서 제제화될 수 있다. 예시적인 나노입자들이 Panyam, J. & Labhasetwar, V. Adv. Drug Deliv. Rev. 55, 329-347 (2003) 및 Peer, D. 등 Nature Nanotech. 2, 751-760 (2007)에 기재되어 있다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 나노입자 내부에 캡슐화된다. 특정 구체예들에서, 나노입자는 1000 nM 이하, 500 nM 이하 또는 100 nM 이하의 최소한 하나의 크기 (예컨대, 직경)를 가지는 입자이다. 특정 구체예들에서, 나노입자는 지질을 포함한다. 지질 나노입자들은, 리포좀 및 마이셀을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 양이온성 및/또는 이온화가능한 지질, 음이온성 지질, 중성 지질, 양친매성 지질, 페길화 지질, 및/또는 구조적 지질을 비롯한 수많은 임의의 지질들이 존재할 수 있다. 이러한 지질은 단독으로 또는 조합되어 사용될 수 있다. 특정 구체예들에서, 지질 나노입자는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 mRNA를 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 mRNA들의 지질 나노입자 제제들은 하나 이상의 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개) 양이온성 및/또는 이온화가능한 지질을 포함할 수 있다. 이러한 양이온성 및/또는 이온화가능한 지질에는, 3-(다이도데실아미노)-N1,N1,4-트라이도데실-1-피페라진에탄아민 (KL10), N1-[2-(다이도데실아미노)에틸]-N1,N4,N4-트라이도데실-1,4-피페라진다이에탄아민 (KL22), 14,25-다이트라이데실-15,18,21,24-테트라아자-옥타트라이아콘탄 (KL25), 1,2-다이리놀레일옥시-N,N-다이메틸아미노프로판 (DLin-DMA), 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노메틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-K-DMA), 헵타트라이아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(다이메틸아미노)부타노에이트 (DLin-MC3-DMA), 2,2-다이리놀레일-4-(2-다이메틸아미노에틸)-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 2-({8-[(3β콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-다이메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-다이엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA), (2R)-2-({8-[(3β콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-다이메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-다이엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2R)), (2S)-2-({8-[(3β콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸}옥시)-N,N-다이메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-다이엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2S)).N,N-다이올레일-N,N-다이메틸암모늄 클로라이드 (“”N-(2,3-다이올레일옥시)프로필-N,N--N-트라이에틸암모늄 클로라이드 (“”N,N-다이스테아릴-N,N-다이메틸암모늄 브로마이드 (“”N-(2,3-다이올레오일옥시)프로필)-N,N,N-트라이메틸암모늄 클로라이드 (“”1,2-다이올레일옥시-3-트라이메틸아미노프로판 클로라이드 염 (“”3-β다이메틸아미노에탄)-카르바모일)콜레스테롤 (“”N-(1-(2,3-다이올레일옥시)프로필)-N-2-(스페르민카르복스아마이도)에틸)-N,N-다이메틸- 암모늄 트라이플루오르아세테이트 (“”다이옥타데실아마이도글리실 카르복시스페르민 (“”1,2-다이올레오일-3-다이메틸암모늄 프로판 (“”N,N-다이메틸-2,3-다이올레일옥시)프로필아민 (“”및 N-(1,2-다이미리스틸옥시프로프-3-일)-N,N-다이메틸-N-하이드록시에틸 암모늄 브로마이드 (“”가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 추가적으로, 양이온성 및/또는 이온화가능한 지질의 수많은 시판 제재들, 가령, 예컨대, LIPOFECTIN®(DOTMA 및 DOPE 포함, GIBCO/BRL로부터 구입가능), 및 리포펙타민® (DOSPA 및 DOPE 포함, GIBCO/BRL로부터 구입가능)이 사용될 수 있다. KL10, KL22, 및 KL25는, 예를 들면, 미국 특허 공보 8,691,750에 기재되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 거 전문이 참고문헌으로 포함된다. 특정 구체예들에서, 지질은 DLin-MC3-DMA 또는 DLin-KC2-DMA이다.
본 발명의 지질 나노입자들에서 사용하기에 적합한 음이온성 지질에는, 포스파티딜글리세롤, 카르디오리핀, 다이아실포스파티딜세린, 다이아실포스파티딕 애시드, N-도데카노일 포스파티딜에탄올로아민, N-숙시닐 포스파티딜에탄올아민, N-글루타릴 포스파티딜에탄올아민, 리실포스파티딜글리세롤, 및, 중성 지질에 결합되는 그 외 음이온성 변형 그룹이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 지질 나노입자들에 사용하기에 적합한 중성 지질에는, 다이아실포스파티딜콜린, 다이아실포스파티딜에탄올아민, 세라마이드, 스핑고미엘린, 다이하이드로스핑고미엘린, 세팔린, 및 세레브로시드가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 사슬 길이 및 포화도가 달라지는 수많은 아실 사슬 그룹들을 가지는 지질을 이용가능하고 또는 공지 기술들에 의해 분리되거나 합성될 수 있다. 추가적으로, 포화 및 불포화 지방산 사슬들의 혼합물을 가지는 지질이 사용될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명에서 사용되는 중성 지질은 DOPE, DSPC, DPPC, POPC, 또는 임의의 관련 포스파티딜콜린이다. 일부 구체예들에서, 중성 지질은 스핑고미엘린, 다이하이드로스핑고미엘린, 또는 다른 머리 그룹들, 가령, 세린 및 이노시톨을 가지는 인지질로 구성될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 나노입자들에 양친매성 지질이 포함된다. 본 발명의 나노입자들에서 사용하기에 적합한 예시적인 양친매성 지질에는, 스핑고지질, 인지질, 및 아미노지질이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예들에서, 인지질은 1,2-다이리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DLPC), 1,2-다이미리스토일-sn-글리세로-포스포콜린 (DMPC), 1,2-다이올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DOPC), 1,2-다이팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DPPC), 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (DSPC), 1,2-다이운데카노일-sn-글리세로-포스포콜린 (DUPC), 1-팔미토일-2-올레오일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (POPC), 1,2-다이-O-옥타데켄일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (18:0 다이에터 PC), 1-올레오일-2-콜레스테릴헤미숙시노일-sn-글리세로-3-포스포콜린 (OChemsPC), 1-헥사데실-sn-글리세로-3-포스포콜린 (C16 Lyso PC), 1,2-다이리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-다이아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 1,2-다이오코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포콜린,1,2-다이올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (DOPE), 1,2-다이파이타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 (ME 16.0 PE), 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-다이리놀레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-다이리놀레노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-다이아라키도노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-다이오코사헥사에노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, 1,2-다이올레오일-sn-글리세로-3-포스포-rac-(1-글리세롤) 소듐 염 (DOPG), 및 스핑고미엘린으로 구성된 그룹에서 선택된다. 다른 인-결핍 화합물들, 가령, 스핑고지질, 글리코스핑고지질 과(families), 다이아실글리세롤, 및 β아실옥시애시드 또한 사용될 수 있다. 추가적으로, 이러한 양친매성 지질은 다른 지질, 가령, 트라이글리세라이드 및 스테롤과 용이하게 혼합될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 나노입자의 지질 성분은 하나 이상의 페길화 지질을 포함할 수 있다. 페길화 지질 (PEG 지질 또는 PEG-변형된 지질로도 공지됨)은 폴리에틸렌 글리콜로 지질 변형된다. 지질 성분은 하나 이상의 페길화 지질을 포함할 수 있다. 페길화 지질은 PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형된 포스파티딕 애시드, PEG-변형된 세라마이드, PEG-변형된 다이알킬아민, PEG-변형된 다이아실글리세롤, 및 PEG-변형된 다이알킬글리세롤로 구성된 비-제한적 그룹으로부터 선택될 수 있다. 예를 들면, 페길화 지질은 PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEG-DMPE, PEG-DPPC, 또는 PEG-DSPE 지질일 수 있다.
본 발명의 지질 나노입자는 하나 이상의 구조적 지질을 포함할 수 있다. 본 발명의 지질 나노입자들에 존재할 수 있는 예시적인, 비-제한적 구조적 지질에는 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 에르고스테롤, 토마티딘, 토마틴, 우르솔릭 애시드, 또는 알파-토코페롤이 포함된다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 하나 이상의 mRNA는 약 1 nm 내지 약 900 nm, 예컨대, 약 1 nm 내지 약 100 nm, 약 1 nm 내지 약 200 nm, 약 1 nm 내지 약 300 nm, 약 1 nm 내지 약 400 nm, 약 1 nm 내지 약 500 nm, 약 1 nm 내지 약 600 nm, 약 1 nm 내지 약 700 nm, 약 1 nm 내지 800 nm, 약 1 nm 내지 약 900 nm의 직경을 가지는 지질 나노입자로 제제화될 수 있다. 일부 구체예들에서, 나노입자는 약 10 nm 내지 약 300 nm, 약 20 nm 내지 약 200 nm, 약 30 nm 내지 약 100 nm, 또는 약 40 nm 내지 약 80 nm의 직경을 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, 나노입자는 약 30 nm 내지 약 300 nm, 약 40 nm 내지 약 200 nm, 약 50 nm 내지 약 150 nm, 약 70 내지 약 110 nm, 또는 약 80 nm 내지 약 120 nm의 직경을 가질 수 있다. 한 구체예에서, mRNA는, 가령, 약 10 내지 약 20 nm, 약 10 내지 약 30 nm, 약 10 내지 약 40 nm, 약 10 내지 약 50 nm, 약 10 내지 약 60 nm, 약 10 내지 약 70 nm, 약 10 내지 약 80 nm, 약 10 내지 약 90 nm, 약 20 내지 약 30 nm, 약 20 내지 약 40 nm, 약 20 내지 약 50 nm, 약 20 내지 약 60 nm, 약 20 내지 약 70 nm, 약 20 내지 약 80 nm, 약 20 내지 약 90 nm, 약 20 내지 약 100 nm, 약 30 내지 약 40 nm, 약 30 내지 약 50 nm, 약 30 내지 약 60 nm, 약 30 내지 약 70 nm, 약 30 내지 약 80 nm, 약 30 내지 약 90 nm, 약 30 내지 약 100 nm, 약 40 내지 약 50 nm, 약 40 내지 약 60 nm, 약 40 내지 약 70 nm, 약 40 내지 약 80 nm, 약 40 내지 약 90 nm, 약 40 내지 약 100 nm, 약 50 내지 약 60 nm, 약 50 내지 약 70 nm 약 50 내지 약 80 nm, 약 50 내지 약 90 nm, 약 50 내지 약 100 nm, 약 60 내지 약 70 nm, 약 60 내지 약 80 nm, 약 60 내지 약 90 nm, 약 60 내지 약 100 nm, 약 70 내지 약 80 nm, 약 70 내지 약 90 nm, 약 70 내지 약 100 nm, 약 80 내지 약 90 nm, 약 80 내지 약 100 nm, 및/또는 약 90 내지 약 100 nm (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 범위를 비롯하여, 약 10 내지 약 100 nm 직경을 가지는 지질 나노입자로 제제화될 수 있다. 한 구체예에서, mRNA는 약 30 nm 내지 약 300 nm, 약 40 nm 내지 약 200 nm, 약 50 nm 내지 약 150 nm, 약 70 내지 약 110 nm, 또는 약 80 nm 내지 약 120 nm 직경을 가지는 지질 나노입자로 제제화될 수 있으며, 상기 범위들 사이의 범위들이 포함된다.
일부 구체예들에서, 지질 나노입자는 100 nm 초과, 150 nm 초과, 200 nm 초과, 250 nm 초과, 300 nm 초과, 350 nm 초과, 400 nm 초과, 450 nm 초과, 500 nm 초과, 550 nm 초과, 600 nm 초과, 650 nm 초과, 700 nm 초과, 750 nm 초과, 800 nm 초과, 850 nm 초과, 900 nm 초과, 또는 950 nm 초과의 직경을 가질 수 있다.
일부 구체예들에서, 지질 나노입자의 입경은 증가 및/또는 감소될 수 있다. 입경의 변화는 생물학적 반응, 가령, 염증 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에 대처함에 도움을 줄 수 있으며, 또는 환자 또는 대상체에 전달되는 mRNA의 생물학적 효과를 증가시킬 수 있다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 나노입자, 예컨대, 지질 나노입자를, 세포 유형 및/또는 조직 유형에 특이적인 표적화 모이어티를 사용하여 표적하는 것이 바람직하다. 일부 구체예들에서, 나노입자는 표적화 모이어티를 사용하여 특정 세포, 조직, 및/또는 장기에 대해 표적될 수 있다. 특정 구체예들에서, 나노입자는 본 발명에 기재된 하나 이상의 mRNA 및 표적화 모이어티를 포함한다. 예시적인 비-제한적 표적화 모이어티에는, 리간드, 세포 표면 수용체들, 당단백질, 비타민 (예컨대, 리보플라빈) 및 항체 (예컨대, 전장 항체, 항체 단편 (예컨대, Fv 단편, 단일쇄 Fv (scFv) 단편, Fab' 단편, 또는 F(ab')2 단편), 단일 도메인 항체, 카멜리드 항체 및 이의 단편, 인간 항체 및 이의 단편, 단클론 항체, 및 다중특이적 항체 (예컨대, 이중특이적 항체))가 포함된다. 일부 구체예들에서, 표적화 모이어티는 폴리펩티드 일 수 있다. 표적화 모이어티는 전체 폴리펩티드 (예컨대, 펩티드 또는 단백질) 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 표적화 모이어티는 전형적으로 표적화 모이어티가 표적, 예를 들면, 세포 표면 수용체와 상호작용할 수 있도록 나노입자의 외부 표면 상에 위치된다. 수많은 상이한 표적화 모이어티 및 방법들이 해당 분야에 공지되어 있어 이용가능하며, 예컨대, in Sapra 등, Prog. Lipid Res. 42(5):439-62, 2003 and Abra 등, J. Liposome Res. 12:1-3, 2002에 기재된 것들이 포함된다.
일부 구체예들에서, 지질 나노입자 (예컨대, 리포좀)는 친수성 중합체 사슬들, 가령, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬들의 표면 코팅제을 포함할 수 있다 (예컨대, Allen 등, Biochimica et Biophysica Acta 1237: 99-108, 1995; DeFrees 등, Journal of the American Chemistry Society 118: 6101-6104, 1996; Blume 등, Biochimica et Biophysica Acta 1149: 180-184,1993; Klibanov 등, Journal of Liposome Research 2: 321-334, 1992; 미국 특허 공보 제 5,013,556; Zalipsky, Bioconjugate Chemistry 4: 296-299, 1993; Zalipsky, FEBS Letters 353: 71-74, 1994; Zalipsky, in Stealth Liposomes Chapter 9 (Lasic and Martin, Eds) CRC Press, Boca Raton Fla., 1995 참고). 한 방법에서, 지질 나노입자를 표적하기 위한 표적화 모이어티는 나노입자를 형성하는 지질의 극성 헤드 그룹에 연결된다. 또 다른 방법에서, 표적화 모이어티는 친수성 폴리머 코팅제을 형성하는 PEG 사슬들의 원위 단부들에 부착된다 (예컨대, Klibanov 등, Journal of Liposome Research 2: 321-334, 1992; Kirpotin 등, FEBS Letters 388: 115-118, 1996 참고).
표적화 모이어티 또는 모이어티들을 커플링시키는 표준 방법들이 사용될 수 있다. 예를 들면, 표적화 모이어티의 부착을 위해 활성화될 수 있는 포스파티딜에탄올아민, 또는 유도된 친유성 화합물, 가령, 지질-유도된 블레오마이신이 사용될 수 있다. 항체-표적화된 리포좀들은 단백질 A를 통합시킨 리포좀들을 사용하여 제작될 수 있다 (예컨대, Renneisen 등, J. Bio. Chem., 265:16337-16342, 1990 및 Leonetti 등, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 87:2448-2451, 1990 참고). 다른 항체 접합의 예시는 미국 특허 공보 제 6,027,726에 개시되어 있다. 표적화 모이어티의 예들은 또한 신생물 또는 종양과 관련된 항원들을 비롯하여, 세포 성분들에 특이적인 다른 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 표적화 모이어티로 사용되는 폴리펩티드들은 공유 결합을 통해 리포좀에 부착될 수 있다 (예를 들면 Heath, Covalent Attachment of Proteins to Liposomes, 149 Methods in Enzymology 111-119 (Academic Press, Inc. 1987) 참고). 다른 표적화 방법들은 비오틴-아비딘 시스템을 포함한다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 지질 나노입자는, 간세포, 결장 세포들, 상피 세포들, 조혈 세포들, 상피 세포들, 내피 세포들, 폐 세포들, 골 세포들, 줄기 세포들, 중간엽 세포들, 신경 세포들, 심장 세포들, 지방세포들, 혈관 평활근 세포들, 심근세포, 골격근 세포들, 베타 세포들, 뇌하수체 세포들, 활액막 세포들, 난소 세포들, 고환 세포들, 섬유모세포, B 세포, T 세포, 망상적혈구, 백혈구, 과립구, 및 종양 세포들 (원발성 종양 세포들 및 전이성 종양 세포들 포함)을 비롯한 세포 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에 대해 지질 나노입자를 표적하는 표적화 모이어티를 포함한다. 특정 구체예들에서, 표적화 모이어티는 간세포에 대해 지질 나노입자를 표적한다. 다른 구체예들에서, 표적화 모이어티는 결장 세포에 대해 지질 나노입자를 표적한다. 일부 구체예들에서, 표적화 모이어티는 간 암 세포 (예컨대, 간세포 암종 세포) 또는 결장직장암 세포 (예컨대, 원발성 종양 또는 전이)에 대해 지질 나노입자를 표적한다.
지질 나노입자들
한 구체예 세트에서, 지질 나노입자들 (LNPs)이 제공된다. 한 구체예에서, 지질 나노입자는 이온화가능한 지질, 구조적 지질, 인지질, 및 하나 이상의 mRNA들을 비롯한 지질을 포함한다. 본 명세서에 기재된 LNP 각각은 본 명세서에 기재된 mRNA에 대한 제형으로서 사용될 수 있다. 한 구체예에서, 지질 나노입자는 이온화가능한 지질, 구조적 지질, 인지질, PEG-변형된 지질 및 하나 이상의 mRNA를 포함한다. 일부 구체예들에서, LNP는 이온화가능한 지질, PEG-변형된 지질, 스테롤 및 인지질을 포함한다. 일부 구체예들에서, LNP는 약 20-60% 이온화가능한 지질: 약 5-25% 인지질: 약 25-55% 스테롤; 및 약 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 약 50% 이온화가능한 지질, 약 1.5% PEG-변형된 지질, 약 38.5% 콜레스테롤 및 약 10% 인지질을 포함한다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 약 55% 이온화가능한 지질, 약 2.5% PEG 지질, 약 32.5% 콜레스테롤 및 약 10% 인지질을 포함한다. 일부 구체예들에서, 이온화가능한 지질은 이온화가능한 아미노 또는 양이온성 지질이고 중성 지질은 인지질이고, 스테롤은 콜레스테롤이다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 이온화가능한 지질: 콜레스테롤: DSPC (1,2-다이옥타데카노일-sn-글리세로-3-포스포콜린): PEG-DMG를 가진다.
a.
이온화가능한 지질
본 발명은 유익한 성질들을 가지는 제약학적 조성물들을 제공한다. 예를 들면, 본 명세서에 기재된 지질 (예컨대, 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (III), (IV), (V), 또는 (VI) 중 어느 하나를 가지는 지질)은 포유동물 세포들 또는 장기들로 치료 및/또는 예방 물질들을 전달하기 위한 지질 나노입자 조성물들에서 유리하게 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 명세서에 기재된 지질은 면역원성을 거의 또는 전혀 가지지 않는다. 예를 들면, 본 명세서에 개시된 지질 화합물들은 기준 지질 (예컨대, MC3, KC2, 또는 DLinDMA)과 비교하여 더 낮은 면역원성을 가진다. 예를 들면, 본 명세서에 개시된 지질 및 치료 또는 예방 물질을 포함하는 제제는 기준 지질 (예컨대, MC3, KC2, 또는 DLinDMA) 및 동일한 치료 또는 예방 물질을 포함하는 상응하는 제제와 비교하여 증가된 치료 지수를 가진다. 특히, 본 출원은 다음을 포함하는 제약학적 조성물들을 제공한다:
(a)
관심 폴리펩티드를 인코드하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및
(b)
전달 물질.
일부 구체예들에서, 전달 물질은 화학식 (I)을 가지는 지질 화합물, 또는 이의 염 또는 입체이성질체를 포함하고
이 때
R1은 C530 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’으로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 카르보사이클, 헤테로사이클, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, N(R)2, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, N(R)R8, O(CH2)nOR, N(R)C(=NR9)N(R)2, N(R)C(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, N(OR)C(O)R, N(OR)S(O)2R, N(OR)C(O)OR, N(OR)C(O)N(R)2, N(OR)C(S)N(R)2, N(OR)C(=NR9)N(R)2, N(OR)C(=CHR9)N(R)2, C(=NR9)N(R)2, C(=NR9)R, C(O)N(R)OR, 및 C(R)N(R)2C(O)OR에서 선택되며, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, SS, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
R8은 C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
R9는 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체 의 부분집합에는 다음과 같은 화합물들이 포함된다:
R1은 C520 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 카르보사이클, 헤테로사이클, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, N(R)2, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, 및 C(R)N(R)2C(O)OR에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
이 때 알킬 및 알케닐 그룹들은 선형 또는 분지형 일 수 있다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들의 부분집합은 R4가 (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 또는 CQ(R)2인 경우, (i) n이 1, 2, 3, 4 또는 5인 경우 Q는 N(R)2 가 아니고, 또는 (ii) n이 1 또는 2인 경우 Q는 5, 6, 또는 7-원 헤테로사이클로알킬이 아닌 화합물들을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C530 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’으로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, N(R)R8, O(CH2)nOR, N(R)C(=NR9)N(R)2, N(R)C(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, N(OR)C(O)R, N(OR)S(O)2R, N(OR)C(O)OR, N(OR)C(O)N(R)2, N(OR)C(S)N(R)2, N(OR)C(=NR9)N(R)2, N(OR)C(=CHR9)N(R)2, C(=NR9)N(R)2, C(=NR9)R, C(O)N(R)OR, 및 N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지며 옥소 (=O), OH, 아미노, 및 C13 알킬에서 선택된 하나 이상의 치환기들로 치환된 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, SS, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
R8은 C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
R9는 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C530 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’으로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, 및 N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지며 옥소 (=O), OH, 아미노, 및 C13 알킬에서 선택된 하나 이상의 치환기들로 치환된 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C520 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로사이클, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, N(R)R8, O(CH2)nOR, N(R)C(=NR9)N(R)2, N(R)C(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, N(OR)C(O)R, N(OR)S(O)2R, N(OR)C(O)OR, N(OR)C(O)N(R)2, N(OR)C(S)N(R)2, N(OR)C(=NR9)N(R)2, N(OR)C(=CHR9)N(R)2, C(=NR9)R, C(O)N(R)OR, 및 C(=NR9)N(R)2에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고; Q가 5- 내지 14-원 헤테로사이클일 때 (i) R4는 (CH2)nQ 이고 이 때 n은 1 또는 2이고, 또는 (ii) R4는 (CH2)nCHQR이고 이 때 n은 1이고, 또는 (iii) R4는 CHQR, 및 CQ(R)2이고, 이 때 Q는 5- 내지 14-원 헤테로아릴 또는 8- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, SS, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
R8은 C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
R9는 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C520 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되며, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로사이클, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR에서 선택되며, 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고; 그리고 Q가 5- 내지 14-원 헤테로사이클이고 (i) R4가 (CH2)nQ이고 이 때 n은 1 또는 2이고, 또는 (ii) R4가 (CH2)nCHQR이고 이 때 n은 1이고, 또는 (iii) R4가 CHQR, 및 CQ(R)2인 경우, 이 때 Q는 5- 내지 14-원 헤테로아릴 또는 8- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 또 다른 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C530 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’으로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR, N(R)R8, O(CH2)nOR, N(R)C(=NR9)N(R)2, N(R)C(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, N(OR)C(O)R, N(OR)S(O)2R, N(OR)C(O)OR, N(OR)C(O)N(R)2, N(OR)C(S)N(R)2, N(OR)C(=NR9)N(R)2, N(OR)C(=CHR9)N(R)2, C(=NR9)R, C(O)N(R)OR, 및 C(=NR9)N(R)2에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, SS, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
R8은 C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
R9는 H, CN, NO2, C1-6 알킬, -OR, -S(O)2R, -S(O)2N(R)2, C2-6 알케닐, C3-6 카르보사이클 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 또 다른 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C520 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, CQ(R)2, 및 비치환된 C16 알킬로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, -OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, CRN(R)2C(O)OR에서 선택되고, 각각의 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C530 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’으로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C214 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 (CH2)nQ 또는 (CH2)nCHQR이고, 이 때 Q는 N(R)2이고, n은 3, 4, 및 5에서 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, -S-S-, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C112 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 또 다른 구체예에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C520 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 H, C214 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 (CH2)nQ 또는 (CH2)nCHQR이고, 이 때 Q는 N(R)2이고, n은 3, 4, 및 5에서 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C112 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 다른 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C530 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’으로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 및 CQ(R)2로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 N(R)2이고, n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, -S-S-, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C112 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
또한 다른 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체의 또 다른 부분집합은 다음과 같은 화합물들을 포함한다:
R1은 C520 알킬, C520 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R”M’R’로 구성된 그룹에서 선택되고;
R2 및 R3는 C114 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되거나, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며;
R4는 (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 및 CQ(R)2로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 N(R)2이고, n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 선택되고;
각 R5는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R6는 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R7은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 선택되고;
각 R은 C13 알킬, C23 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C118 알킬, C218 알케닐, R*YR”, YR”, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R*은 C112 알킬 및 C112 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C36 카르보사이클이고;
각 X는 F, Cl, Br, 및 I로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
m은 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 및 13에서 선택된다.
특정 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들의 부분집합에는 다음과 같은 화학식 (IA)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체가 포함된다:
, 이 때 l은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 선택되고; m은 5, 6, 7, 8, 및 9에서 선택되고; M1은 결합 또는 M’이고; R4는 비치환된 C13 알킬, 또는 (CH2)nQ이고, 이 때 Q는 OH, NHC(S)N(R)2, NHC(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)R8, NHC(=NR9)N(R)2, NHC(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), P(O)(OR’)O, -S-S-, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
R2 및 R3는 H, C114 알킬, 및 C214 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들의 부분집합에는 화학식 (IA)의 화합물, 또는 이의 염 또는 입체이성질체가 포함되며,
이 때
l은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 선택되고; m은 5, 6, 7, 8, 및 9에서 선택되며;
M1은 결합 또는 M’이고;
R4는 비치환된 C13 알킬, 또는 (CH2)nQ이고, 이 때 Q는 OH, NHC(S)N(R)2, 또는 NHC(O)N(R)2이고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), P(O)(OR’)O, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
R2 및 R3는 H, C114 알킬, 및 C214 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다.
특정 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들의 부분집합에는 다음과 같은 화학식 (II)의 화합물들, 또는 이의 염 또는 입체이성질체가 포함된다:
, 이 때 l은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 선택되고; M1은 결합 또는 M’이고; R4는 비치환된 C13 알킬, 또는 (CH2)nQ이고, 이 때 n은 2, 3, 또는 4이고 그리고 Q는 OH, NHC(S)N(R)2, NHC(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)R8, NHC(=NR9)N(R)2, NHC(=CHR9)N(R)2, OC(O)N(R)2, N(R)C(O)OR, 헤테로아릴, 또는 헤테로사이클로알킬이고; M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), P(O)(OR’)O, -S-S-, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
R2 및 R3는 H, C114 알킬, 및 C214 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물들의 부분집합에는 화학식 (II)의 화합물, 또는 이의 염 또는 입체이성질체가 포함되며, 이 때
l은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 선택되고;
M1은 결합 또는 M’이고;
R4는 비치환된 C13 알킬, 또는 (CH2)nQ이고, 이 때 n은 2, 3, 또는 4이고, 그리고 Q는 OH, NHC(S)N(R)2, 또는 NHC(O)N(R)2이고;
M 및 M’은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), P(O)(OR’)O, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
R2 및 R3는 H, C114 알킬, 및 C214 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (IIa)의 화합물,
또는 이의 염이고, 이 때 R4는 상기 기재한 바와 같다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (IIb)의 화합물,
또는 이의 염이고, 이 때 R4는 상기 기재한 바와 같다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (IIc)의 화합물,
또는 이의 염이고, 이 때 R4는 상기 기재한 바와 같다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (IIe)의 화합물,
또는 이의 염이고, 이 때 R4는 상기 기재한 바와 같다.
일부 구체예들에서, 화학식 (IIa), (IIb), (IIc), 또는 (IIe)의 화합물은 (CH2)nQ 및 (CH2)nCHQR에서 선택되는 R4를 포함하고, 이 때 Q, R 및 n은 상기 정의한 바와 같다.
일부 구체예들에서, Q는 OR, OH, O(CH2)nN(R)2, OC(O)R, CX3, CN, N(R)C(O)R, N(H)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(H)(R), N(R)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(H)(R), 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 R은 상기 정의한 바와 같다. 일부 양상들에서, n은 1 또는 2이다. 일부 구체예들에서, Q는 OH, NHC(S)N(R)2, 또는 NHC(O)N(R)2이다.
일부 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (IId)의 화합물,
또는 이의 염이며, 이 때 R2 및 R3는 C514 알킬 및 C514 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고, n은 2, 3, 및 4에서 선택되며, 그리고 R’, R’’, R5, R6 및 m은 상기 정의한 바와 같다.
화학식 (IId)의 화합물의 일부 양상들에서, R2는 C8 알킬이다. 화학식 (IId)의 화합물의 일부 양상들에서, R3는 C5C9 알킬이다. 화학식 (IId)의 화합물의 일부 양상들에서, m은 5, 7, 또는 9이다. 화학식 (IId)의 화합물의 일부 양상들에서, 각 R5는 H이다. 화학식 (IId)의 화합물의 일부 양상들에서, 각 R6는 H이다.
또 다른 양상에서, 본 출원은 다음을 포함하는 지질 조성물 (예컨대, 지질 나노입자 (LNP))를 제공한다: (1) 화학식 (I)을 가지는 화합물; (2) 선택적으로 도움 지질 (예컨대 인지질); (3) 선택적으로 구조적 지질 (예컨대 스테롤); 및 (4) 선택적으로 지질 접합체 (예컨대 PEG-지질). 예시적 구체예들에서, 지질 조성물 (예컨대, LNP)은 관심 폴리펩티드를 인코드하는 폴리뉴클레오티드, 예컨대, 내부에 캡슐화되는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “알킬” 또는 “알킬 그룹”은 하나 이상의 탄소 원자들 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 그 이상의 탄소 원자들)을 포함하는 선형 또는 분지형의, 포화 탄화수소를 의미한다.
표기 “C114 알킬”은 114개 탄소 원자들을 포함하는 선형 또는 분지형의, 포화 탄화수소를 의미한다. 알킬 그룹은 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “알케닐” 또는 “알케닐 그룹”은 둘 이상의 탄소 원자들 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 또는 그 이상의 탄소 원자들) 및 최소한 하나의 이중 결합을 포함하는 선형 또는 분지형의 탄화수소를 의미한다.
표기 “C214 알케닐”은 214개 탄소 원자들 및 최소한 하나의 이중 결합을 포함하는 선형 또는 분지형의 탄화수소를 의미한다. 알케닐 그룹은 1, 2, 3, 4개, 또는 그 이상의 이중 결합을 포함할 수 있다. 예를 들면, C18 알케닐은 하나 이상의 이중 결합을 포함할 수 있다. 2개의 이중 결합을 포함하는 C18 알케닐 그룹은 리놀레일 그룹일 수 있다. 알케닐 그룹은 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “카르보사이클” 또는 “카르보사이클릭 그룹”은 하나 이상의 탄소 원자 고리를 포함하는 모노- 또는 멀티-사이클릭 시스템을 의미한다. 고리는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15원 고리일 수 있다.
표기 “C36 카르보사이클”은 3-6개 탄소 원자들을 가지는 단일 고리를 포함하는 카르보사이클을 의미한다. 카르보사이클은 하나 이상의 이중 결합을 포함할 수 있고 방향족 (예컨대, 아릴 그룹)일 수 있다. 카르보사이클의 예에는 사이클로프로필, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 페닐, 나프틸, 및 1,2다이하이드로나프틸 그룹들이 포함된다. 카르보사이클은 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “헤테로사이클” 또는 “헤테로사이클릭 그룹”은 하나 이상의 고리를 포함하는 모노- 또는 멀티-사이클릭 시스템을 의미하며, 이 때 최소한 하나의 고리는 최소한 하나의 헤테로원자를 포함한다. 헤테로원자는, 예를 들면, 질소, 산소, 또는 황 원자일 수 있다. 고리는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12원 고리일 수 있다. 헤테로사이클은 하나 이상의 이중 결합을 포함할 수 있고 방향족 (예컨대, 헤테로아릴 그룹)일 수 있다. 헤테로사이클의 예에는 이미다졸릴, 이미다졸리디닐, 옥사졸릴, 옥사졸리디닐, 싸이아졸릴, 싸이아졸리디닐, 피라졸리디닐, 피라졸릴, 아이속사졸리디닐, 아이속사졸릴, 아이소싸이아졸리디닐, 아이소싸이아졸릴, 모르폴리닐, 피롤릴, 피롤리디닐, 퓨릴, 테트라하이드로퓨릴, 싸이오페닐, 피리디닐, 피페리디닐, 퀴놀릴, 및 아이소퀴놀릴 그룹들이 포함된다. 헤테로사이클은 선택적으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "생분해성 그룹”은 대상체에서 보다 빠른 지질 대사를 촉진시킬 수 있는 그룹이다. 생분해성 그룹은, C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 “아릴 그룹”은 하나 이상의 방향족 고리를 포함하는 카르보사이클릭 그룹이다. 아릴 그룹의 예에는 페닐 및 나프틸 그룹이 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 “헤테로아릴 그룹”은 하나 이상의 방향족 고리를 포함하는 헤테로사이클릭 그룹이다. 헤테로아릴 그룹의 예에는 피롤릴, 퓨릴, 싸이오페닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 및 싸이아졸릴이 포함된다. 아릴 및 헤테로아릴 그룹 모두는 선택적으로 치환될 수 있다. 예를 들면, M 및 M’은 선택적으로 치환된 페닐, 옥사졸, 및 싸이아졸로 구성된 비-제한적 그룹에서 선택될 수 있다. 본 명세서의 화학식들에서, M 및 M’은 상기 생분해성 그룹들의 목록에서 독립적으로 선택될 수 있다.
알킬, 알케닐, 및 사이클릴 (예컨대, 카르보사이클릴 및 헤테로사이클릴) 그룹들은 달리 언급이 없는 한 선택적으로 치환될 수 있다. 선택적 치환기들은 할로겐 원자 (예컨대, 클로라이드, 브로마이드, 플루오라이드, 또는 아이오다이드 그룹), 카르복시산 (예컨대, C(O)OH), 알콜 (예컨대, 하이드록실, OH), 에스터 (예컨대, C(O)OR 또는 OC(O)R), 알데하이드 (예컨대, C(O)H), 카르보닐 (예컨대, C(O)R, 대안적으로 C=O로 나타냄), 아실 할라이드 (예컨대, C(O)X, 이 때 X는 브로마이드, 플루오라이드, 클로라이드, 및 아이오다이드에서 선택된 할라이드이고), 카보네이트 (예컨대, OC(O)OR), 알콕시 (예컨대, OR), 아세탈 (예컨대, C(OR)2R”“, 이 때 각 OR은 동일 또는 상이할 수 있는 알콕시 그룹이고 R”“은 알킬 또는 알케닐 그룹), 포스페이트 (예컨대, P(O)4 3), 싸이올 (예컨대, SH), 술폭사이드 (예컨대, S(O)R), 술피닉 애시드 (예컨대, S(O)OH), 술포닉 애시드 (예컨대, S(O)2OH), 싸이알 (예컨대, C(S)H), 술페이트 (예컨대, S(O)4 2), 술포닐 (예컨대, S(O)2), 아마이드 (예컨대, C(O)NR2, 또는 N(R)C(O)R), 아지도 (예컨대, N3), 니트로 (예컨대, NO2), 시아노 (예컨대, CN), 아이소시아노 (예컨대, NC), 아실옥시 (예컨대, OC(O)R), 아미노 (예컨대, NR2, NRH, 또는 NH2), 카르바모일 (예컨대, OC(O)NR2, OC(O)NRH, 또는 OC(O)NH2), 술폰아마이드 (예컨대, S(O)2NR2, S(O)2NRH, S(O)2NH2, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)S(O)2H, 또는 N(H)S(O)2H), 알킬 그룹, 알케닐 그룹, 및 사이클릴 (예컨대, 카르보사이클릴 또는 헤테로사이클릴) 그룹으로 구성된 그룹에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
임의의 전술한 예들에서, R은 본 명세서에서 정의된 바와 같이 알킬 또는 알케닐 그룹이다. 일부 구체예들에서, 치환기 그룹들 자체는, 예를 들면, 본 명세서에 정의된 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 치환기들로 추가 치환될 수 있다. 예를 들면, C16 알킬 그룹은 본 명세서에 기재된 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 치환기들로 추가 치환될 수 있다.
화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물들은 가능한 경우 다음 특징들 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구체예들에서, R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 및 CQ(R)2로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, S, 및 P에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 방향족 또는 비-방향족 헤테로사이클, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, N(R)2, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, 및 C(R)N(R)2C(O)OR에서 선택되고, 그리고 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택된다.
또 다른 구체예에서, R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 및 CQ(R)2로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, C(R)N(R)2C(O)OR, 및 N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지며 옥소 (=O), OH, 아미노, 및 C13 알킬에서 선택된 하나 이상의 치환기들로 치환되는 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택된다.
또 다른 구체예에서, R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 및 CQ(R)2로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로사이클, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, C(R)N(R)2C(O)OR에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택되고; Q가 5- 내지 14-원 헤테로사이클이고 (i) R4가 (CH2)nQ이고 이 때 n은 1 또는 2이고, 또는 (ii) R4는 (CH2)nCHQR이고 이 때 n은 1이고, 또는 (iii) R4는 CHQR, 및 CQ(R)2인 경우, Q는 5- 내지 14-원 헤테로아릴 또는 8- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이다.
또 다른 구체예에서, R4는 C36 카르보사이클, (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 및 CQ(R)2로 구성된 그룹에서 선택되고, 이 때 Q는 C36 카르보사이클, N, O, 및 S에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원 헤테로아릴, OR, O(CH2)nN(R)2, C(O)OR, OC(O)R, CX3, CX2H, CXH2, CN, C(O)N(R)2, N(R)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(R)C(S)N(R)2, C(R)N(R)2C(O)OR에서 선택되고, 각 n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 독립적으로 선택된다.
또 다른 구체예에서, R4는 비치환된 C14 알킬, 예컨대, 비치환된 메틸이다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 화학식 (I)을 가지는 화합물을 제공하며, 이 때 R4는 (CH2)nQ 또는 (CH2)nCHQR이고, Q는 N(R)2이고, n은 3, 4, 및 5에서 선택된다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 화학식 (I)을 가지는 화합물을 제공하며, 이 때 R4는 (CH2)nQ, (CH2)nCHQR, CHQR, 및 CQ(R)2로 구성된 그룹에서 선택되고, Q는 N(R)2이고, n은 1, 2, 3, 4, 및 5에서 선택된다.
특정 구체예들에서, 본 발명은 화학식 (I)을 가지는 화합물을 제공하며, 이 때 R2 및 R3는 C214 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성하며, 그리고 R4는 (CH2)nQ 또는 (CH2)nCHQR이고, 이 때 Q는 N(R)2이고, n은 3, 4, 및 5에서 선택된다.
특정 구체예들에서, R2 및 R3는 C214 알킬, C214 알케닐, R*YR”, YR”, 및 R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고, 또는 R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성한다.
일부 구체예들에서, R1은 C520 알킬 및 C520 알케닐로 구성된 그룹에서 선택된다.
다른 구체예들에서, R1은 R*YR”, YR”, 및 R”M’R’로 구성된 그룹에서 선택된다.
특정 구체예들에서, R1은 R*YR” 및 YR”에서 선택된다. 일부 구체예들에서, Y는 사이클로프로필 그룹이다. 일부 구체예들에서, R*는 C8 알킬 또는 C8 알케닐이다. 특정 구체예들에서, R”은 C312 알킬이다. 예를 들면, R”은 C3 알킬 일 수 있다. 예를 들면, R”은 C48 알킬 (예컨대, C4, C5, C6, C7, 또는 C8 알킬)일 수 있다.
일부 구체예들에서, R1은 C520 알킬이다. 일부 구체예들에서, R1은 C6 알킬이다. 일부 구체예들에서, R1은 C8 알킬이다. 다른 구체예들에서, R1은 C9 알킬이다. 특정 구체예들에서, R1은 C14 알킬이다. 다른 구체예들에서, R1은 C18 알킬이다.
일부 구체예들에서, R1은 C520 알케닐이다. 특정 구체예들에서, R1은 C18 알케닐이다. 일부 구체예들에서, R1은 리놀레일이다.
특정 구체예들에서, R1은 분지형 (예컨대, 데칸-2-일, 운데칸-3-일, 도데칸-4-일, 트라이데칸-5-일, 테트라데칸-6-일, 2-메틸운데칸-3-일, 2-메틸데칸-2-일, 3-메틸운데칸-3-일, 4-메틸도데칸-4-일, 또는 헵타데카-9-일)이다. 특정 구체예들에서, R1은 
이다.
특정 구체예들에서, R1은 비치환된 C520 알킬 또는 C520 알케닐이다. 특정 구체예들에서, R’은 치환된 C520 알킬 또는 C520 알케닐 (예컨대, C36 카르보사이클 가령, 1-사이클로프로필노닐로 치환됨)이다.
다른 구체예들에서, R1은 R”M’R’이다.
일부 구체예들에서, R’은 R*YR” 및 YR”에서 선택된다. 일부 구체예들에서, Y는 C38 사이클로알킬이다. 일부 구체예들에서, Y는 C610 아릴이다. 일부 구체예들에서, Y는 사이클로프로필 그룹이다. 일부 구체예들에서, Y는 사이클로헥실 그룹이다. 특정 구체예들에서, R*는 C1 알킬이다.
일부 구체예들에서, R”은 C3-12 알킬 및 C312 알케닐로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 구체예들에서, Y에 인접한 R”은 C1 알킬이다. 일부 구체예들에서, Y에 인접한 R”은 C49 알킬 (예컨대, C4, C5, C6, C7 또는 C8 또는 C9 알킬)이다.
일부 구체예들에서, R’은 C4 알킬 및 C4 알케닐에서 선택된다. 특정 구체예들에서, R’은 C5 알킬 및 C5 알케닐에서 선택된다. 일부 구체예들에서, R’은 C6 알킬 및 C6 알케닐에서 선택된다. 일부 구체예들에서, R’은 C7 알킬 및 C7 알케닐에서 선택된다. 일부 구체예들에서, R’은 C9 알킬 및 C9 알케닐에서 선택된다.
다른 구체예들에서, R’은 C11 알킬 및 C11 알케닐에서 선택된다. 다른 구체예들에서, R’은 C12 알킬, C12 알케닐, C13 알킬, C13 알케닐, C14 알킬, C14 알케닐, C15 알킬, C15 알케닐, C16 알킬, C16 알케닐, C17 알킬, C17 알케닐, C18 알킬, 및 C18 알케닐에서 선택된다. 특정 구체예들에서, R’은 분지형 (예컨대, 데칸-2-일, 운데칸-3-일, 도데칸-4-일, 트라이데칸-5-일, 테트라데칸-6-일, 2-메틸운데칸-3-일, 2-메틸데칸-2-일, 3-메틸운데칸-3-일, 4-메틸도데칸-4-일 또는 헵타데카-9-일)이다. 특정 구체예들에서, R’은 
이다.
특정 구체예들에서, R’은 비치환된 C118 알킬이다. 특정 구체예들에서, R’은 치환된 C118 알킬 (예컨대, C36 카르보사이클 가령, 1-사이클로프로필노닐로 치환된 C115 알킬)이다.
일부 구체예들에서, R”은 C314 알킬 및 C314 알케닐로 구성된 그룹에서 선택된다. 일부 구체예들에서, R”은 C3 알킬, C4 알킬, C5 알킬, C6 알킬, C7 알킬, 또는 C8 알킬이다. 일부 구체예들에서, R”은 C9 알킬, C10 알킬, C11 알킬, C12 알킬, C13 알킬, 또는 C14 알킬이다.
일부 구체예들에서, M’은 C(O)O이다. 일부 구체예들에서, M’은 OC(O)이다.
다른 구체예들에서, M’은 아릴 그룹 또는 헤테로아릴 그룹이다. 예를 들면, M’은 페닐, 옥사졸, 및 싸이아졸로 구성된 그룹에서 선택될 수 있다.
일부 구체예들에서, M은 C(O)O이다. 일부 구체예들에서, M은 OC(O)이다. 일부 구체예들에서, M은 C(O)N(R’)이다. 일부 구체예들에서, M은 P(O)(OR’)O이다.
다른 구체예들에서, M은 아릴 그룹 또는 헤테로아릴 그룹이다. 예를 들면, M은 페닐, 옥사졸, 및 싸이아졸로 구성된 그룹에서 선택될 수 있다.
일부 구체예들에서, M은 M’과 같다. 다른 구체예들에서, M은 M’과 상이하다.
일부 구체예들에서, 각 R5은 H이다. 이러한 특정 구체예들에서, 각 R6는 또한 H이다.
일부 구체예들에서, R7은 H이다. 다른 구체예들에서, R7은 C13 알킬 (예컨대, 메틸, 에틸, 프로필, 또는 i-프로필)이다.
일부 구체예들에서, R2 및 R3는 독립적으로 C514 알킬 또는 C514 알케닐이다.
일부 구체예들에서, R2 및 R3는 동일하다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 C8 알킬이다. 특정 구체예들에서, R2 및 R3는 C2 알킬이다. 다른 구체예들에서, R2 및 R3는 C3 알킬이다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 C4 알킬이다. 특정 구체예들에서, R2 및 R3는 C5 알킬이다. 다른 구체예들에서, R2 및 R3는 C6 알킬이다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 C7 알킬이다.
다른 구체예들에서, R2 및 R3는 상이하다. 특정 구체예들에서, R2는 C8 알킬이다. 일부 구체예들에서, R3는 C17 (예컨대, C1, C2, C3, C4, C5, C6, 또는 C7 알킬) 또는 C9 알킬이다.
일부 구체예들에서, R7 및 R3는 H이다.
특정 구체예들에서, R2는 H이다.
일부 구체예들에서, m은 5, 7, 또는 9이다.
일부 구체예들에서, R4는 (CH2)nQ 및 (CH2)nCHQR에서 선택된다.
일부 구체예들에서, Q는 OR, OH, O(CH2)nN(R)2, OC(O)R, CX3, CN, N(R)C(O)R, N(H)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(H)(R), N(R)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(H)(R), C(R)N(R)2C(O)OR, 카르보사이클, 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택된다.
특정 구체예들에서, Q는 OH이다.
특정 구체예들에서, Q는 치환된 또는 비치환된 5- 내지 10-원 헤테로아릴이고, 예컨대, Q는 이미다졸, 피리미딘, 퓨린, 2-아미노-1,9-다이하이드로-6H-퓨린-6-온-9-일 (또는 구아닌-9-일), 아데닌-9-일, 시토신-1-일, 또는 우라실-1-일이다. 특정 구체예들에서, Q는 치환된 5- 내지 14-원 헤테로사이클로알킬이다, 예컨대, 옥소 (=O), OH, 아미노, 및 C1-3 알킬에서 선택된 하나 이상의 치환기들로 치환된다. 예를 들면, Q는 4-메틸피페라지닐, 4-(4-메톡시벤질)피페라지닐, 또는 아이소인돌린-2-일-1,3-다이온이다.
특정 구체예들에서, Q는 비치환된 또는 치환된 C610 아릴 (가령, 페닐) 또는 C36 사이클로알킬이다.
일부 구체예들에서, n은 1이다. 다른 구체예들에서, n은 2이다. 다른 구체예들에서, n은 3이다. 다른 특정 구체예들에서, n은 4이다. 예를 들면, R4는 (CH2)2OH 일 수 있다. 예를 들면, R4는 (CH2)3OH 일 수 있다. 예를 들면, R4는 (CH2)4OH 일 수 있다. 예를 들면, R4는 벤질 일 수 있다. 예를 들면, R4는 4-메톡시벤질 일 수 있다.
일부 구체예들에서, R4는 C36 카르보사이클이다. 일부 구체예들에서, R4는 C36 사이클로알킬이다. 예를 들면, R4는 예컨대, OH, 할로, C16 알킬, 등으로 선택적으로 치환된 사이클로헥실일 수 있다. 예를 들면, R4는 2-하이드록시사이클로헥실 일 수 있다.
일부 구체예들에서, R은 H이다.
일부 구체예들에서, R은 비치환된 C13 알킬 또는 비치환된 C23 알케닐이다. 예를 들면, R4는 CH2CH(OH)CH3 또는 CH2CH(OH)CH2CH3 일 수 있다.
일부 구체예들에서, R은 치환된 C13 알킬, 예컨대, CH2OH이다. 예를 들면, R4는 CH2CH(OH)CH2OH일 수 있다.
일부 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성한다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께, N, O, S, 및 P에서 선택된 하나 이상의 헤테로원자들을 가지는 5- 내지 14-원의 방향족 또는 비-방향족 헤테로사이클을 형성한다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께, 방향족 또는 비-방향족인, 선택적으로 치환된 C320 카르보사이클 (예컨대, C318 카르보사이클, C315 카르보사이클, C312 카르보사이클, 또는 C310 카르보사이클)을 형성한다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 C36 카르보사이클을 형성한다. 다른 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 C6 카르보사이클, 가령, 사이클로헥실 또는 페닐 그룹을 형성한다. 특정 구체예들에서, 헤테로사이클 또는 C36 카르보사이클은 하나 이상의 알킬 그룹들로 치환된다 (예컨대, 동일 고리 원자 또는 인접 또는 비-인접 고리 원자들에서). 예를 들면, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 하나 이상의 C5 알킬 치환을 가지는 사이클로헥실 또는 페닐 그룹을 형성할 수 있다. 특정 구체예들에서, R2 및 R3에 의해 형성된 헤테로사이클 또는 C36 카르보사이클은 카르보사이클 그룹으로 치환된다. 예를 들면, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 사이클로헥실로 치환된 페닐 그룹 또는 사이클로헥실을 형성할 수 있다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께, C715 카르보사이클, 가령, 사이클로헵틸, 사이클로펜타데카닐, 또는 나프틸 그룹을 형성한다.
일부 구체예들에서, R4는 (CH2)nQ 및 (CH2)nCHQR에서 선택된다. 일부 구체예들에서, Q는 OR, OH, O(CH2)nN(R)2, OC(O)R, CX3, CN, N(R)C(O)R, N(H)C(O)R, N(R)S(O)2R, N(H)S(O)2R, N(R)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(R)2, N(H)C(O)N(H)(R), N(R)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(R)2, N(H)C(S)N(H)(R), 및 헤테로사이클로 구성된 그룹에서 선택된다. 다른 구체예들에서, Q는 이미다졸, 피리미딘, 및 퓨린으로 구성된 그룹에서 선택된다.
일부 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 헤테로사이클 또는 카르보사이클을 형성한다. 일부 구체예들에서, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 C36 카르보사이클, 가령, 페닐 그룹을 형성한다. 특정 구체예들에서, 헤테로사이클 또는 C36 카르보사이클은 하나 이상의 알킬 그룹들로 치환된다 (예컨대, 동일 고리 원자 또는 인접 또는 비-인접 고리 원자들에서). 예를 들면, R2 및 R3는 이들이 부착되는 원자와 함께 하나 이상의 C5 알킬 치환을 가지는 페닐 그룹을 형성할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 제약학적 조성물들, 화학식 (I)의 화합물은 다음으로 구성된 그룹에서 선택된다:
다른 구체예들에서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물 1-화합물 147, 또는 이의 염 또는 입체이성질체로 구성된 그룹에서 선택된다.
일부 구체예들에서 중심 피페라진 모이어티를 포함하는 이온화가능한 지질이 제공된다. 본 명세서에 기재된 지질은 포유동물 세포들 또는 장기들에 치료 및/또는 예방 물질들을 전달하기 위한 지질 나노입자 조성물에서 유리하게 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 명세서에 기재된 지질은 면역원성을 거의 또는 전혀 가지지 않는다. 예를 들면, 본 명세서에 개시된 지질 화합물들은 기준 지질 (예컨대, MC3, KC2, 또는 DLinDMA)과 비교하여 더 낮은 면역원성을 가진다 예를 들면, 본 명세서에 개시된 지질 및 치료 또는 예방 물질을 포함하는 제제는 기준 지질 (예컨대, MC3, KC2, 또는 DLinDMA) 및 동일한 치료 또는 예방 물질을 포함하는 상응하는 제제와 비교하여 증가된 치료 지수를 가진다.
일부 구체예들에서, 전달 물질은 화학식 (III)을 가지는 지질 화합물
또는 이의 염 또는 입체이성질체를 포함하고, 이 때
고리 A는 
또는 
이고;
t는 1 또는 2이고;
A1 및 A2는 CH 또는 N에서 각각 독립적으로 선택되고;
Z는 CH2이거나 존재하지 않고 이 때 Z가 CH2인 경우, 점선 (1) 및 (2) 각각은 단일 결합을 나타내고; Z가 존재하지 않는 경우, 점선 (1) 및 (2)는 모두 존재하지 않으며;
R1, R2, R3, R4, 및 R5는 C5-20 알킬, C5-20 알케닐, R”MR’, R*YR”, YR”, 및 R*OR”으로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 M은 C(O)O, OC(O), OC(O)O, C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹으로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
X1, X2, 및 X3는 결합, CH2, (CH2)2-, CHR, CHY, C(O), C(O)O, OC(O), -C(O)-CH2-, -CH2-C(O)-, C(O)O-CH2, OC(O)-CH2, CH2-C(O)O, CH2-OC(O), CH(OH), C(S), 및 CH(SH)로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C3-6 카르보사이클이고;
각 R*은 C1-12 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R은 C1-3 알킬 및 C3-6 카르보사이클로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C1-12 알킬, C2-12 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
각 R”은 C3-12 알킬 및 C312 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고,
이 때 고리 A가 
인 경우,
i) X1, X2, 및 X3 중 최소한 하나는 CH2가 아니고; 및/또는
ii) R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최소한 하나는 R”MR’이다.
일부 구체예들에서, 화합물은 화학식 (IIIa1)-(IIIa6) 중 어느 하나이고:
화학식 (III) 또는 (IIIa1)-( IIIa6) 중 어느 하나의 화합물들은 가능한 경우 다음 특징들 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구체예들에서, 고리 A는 
이다.
일부 구체예들에서, 고리 A는 
또는 
이다.
일부 구체예들에서, 고리 A는 
이다.
일부 구체예들에서, 고리 A는 
이다.
일부 구체예들에서, 고리 A는 
, 
, 또는 
이다.
일부 구체예들에서, 고리 A는 
또는 
이고, 이 때 고리에서 N 원자는 X2와 연결된다.
일부 구체예들에서, Z는 CH2이다.
일부 구체예들에서, Z는 존재하지 않는다.
일부 구체예들에서, A1 및 A2 중 최소한 하나는 N이다.
일부 구체예들에서, 각 A1 및 A2는 N이다.
일부 구체예들에서, 각 A1 및 A2는 CH이다.
일부 구체예들에서, A1은 N이고 A2는 CH이다.
일부 구체예들에서, A1은 CH이고 A2는 N이다.
일부 구체예들에서, X1, X2, 및 X3 중 최소한 하나는 CH2이 아니다. 예를 들면, 특정 구체예들에서, X1은 CH2이 아니다. 일부 구체예들에서, X1, X2, 및 X3 중 최소한 하나는 -C(O)-이다.
일부 구체예들에서, X2는 -C(O)-, -C(O)O, OC(O), -C(O)-CH2-, -CH2-C(O)-, C(O)O-CH2, OC(O)-CH2, CH2-C(O)O, 또는 CH2-OC(O)이다.
일부 구체예들에서, X3는 -C(O)-, C(O)O, -OC(O), -C(O)-CH2-, -CH2-C(O)-, C(O)O-CH2, OC(O)-CH2, CH2-C(O)O, 또는 CH2-OC(O)이다. 다른 구체예들에서, X3는 -CH2-이다.
일부 구체예들에서, X3는 결합 또는 -(CH2)2-이다.
일부 구체예들에서, R1 및 R2는 동일하다. 특정 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 동일하다. 일부 구체예들에서, R4 및 R5는 동일하다. 특정 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5는 동일하다.
일부 구체예들에서, 최소한 하나의 of R1, R2, R3, R4, 및 R5는 R”MR’이다. 일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최대 하나는 R”MR’이다. 예를 들면, R1, R2, 및 R3 중 최소한 하나는 R”MR’일 수 있고, 및/또는 R4 및 R5 중 최소한 하나는 R”MR’이다. 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 M은 C(O)O이다. 일부 구체예들에서, 각 M은 C(O)O이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 M은 OC(O)이다. 일부 구체예들에서, 각 M은 OC(O)이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 M은 OC(O)O이다. 일부 구체예들에서, 각 M은 OC(O)O이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 R”은 C3 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R”은 C3 알킬이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 R”은 C5 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R”은 C5 알킬이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 R”은 C6 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R”은 C6 알킬이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 R”은 C7 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R”은 C7 알킬이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 R’은 C5 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R’은 C5 알킬이다. 다른 구체예들에서, 최소한 하나의 R’은 C1 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R’은 C1 알킬이다. 일부 구체예들에서, 최소한 하나의 R’은 C2 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R’은 C2 알킬이다.
일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최소한 하나는 C12 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각 R1, R2, R3, R4, 및 R5는 C12 알킬이다.
특정 구체예들에서, 화합물은 다음으로 구성된 그룹에서 선택된다:
일부 구체예들에서, 전달 물질은 화합물 236을 포함한다.
일부 구체예들에서, 전달 물질은 화학식 (IV)를 가지는 화합물
또는 이의 염 또는 입체이성질체를 포함하고, 이 때
A1 및 A2는 CH 또는 N에서 각각 독립적으로 선택되고 A1 및 A2 중 최소한 하나는 N이며;
Z는 CH2이거나 존재하지 않고 이 때 Z가 CH2인 경우, 점선 (1) 및 (2) 각각은 단일 결합을 나타내고; Z가 존재하지 않는 경우, 점선 (1) 및 (2)는 모두 존재하지 않으며;
R1, R2, R3, R4, 및 R5는 C620 알킬 및 C620 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
이 때 고리 A가 
인 경우,
i) R1, R2, R3, R4, 및 R5는 동일하고, 이 때 R1은 C12 알킬, C18 알킬, 또는 C18 알케닐이 아니고;
ii) R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 단 하나만 C620 알케닐에서 선택되고;
iii) R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최소한 하나는 최소한 하나의 다른 R1, R2, R3, R4, 및 R5와 상이한 수의 탄소 원자들을 가지며;
iv) R1, R2, 및 R3는 C620 알케닐에서 선택되고, R4 및 R5는 C620 알킬에서 선택되고; 또는
v) R1, R2, 및 R3는 C620 알킬에서 선택되고, R4 및 R5는 C620 알케닐에서 선택된다.
일부 구체예들에서, 화합물은 화학식 (IVa)의 화합물이다:
화학식 (IV) 또는 (IVa)의 화합물들은 가능한 경우 다음 특징들 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구체예들에서, Z는 CH2이다.
일부 구체예들에서, Z는 존재하지 않는다.
일부 구체예들에서, A1 및 A2 중 최소한 하나는 N이다.
일부 구체예들에서, 각 A1 및 A2는 N이다.
일부 구체예들에서, 각 A1 및 A2는 CH이다.
일부 구체예들에서, A1은 N이고 A2는 CH이다.
일부 구체예들에서, A1은 CH이고 A2는 N이다.
일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5는 동일하고, C12 알킬, C18 알킬, 또는 C18 알케닐이 아니다. 일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5는 동일하고 C9 알킬 또는 C14 알킬이다.
일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 단 하나만 C620 알케닐에서 선택된다. 이러한 특정 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5는 동일한 수의 탄소 원자들을 가진다. 일부 구체예들에서, R4는 C520 알케닐에서 선택된다. 예를 들면, R4는 C12 알케닐 또는 C18 알케닐일 수 있다.
일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최소한 하나는 최소한 하나의 다른 R1, R2, R3, R4, 및 R5와 상이한 수의 탄소 원자들을 가진다.
특정 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 C620 알케닐에서 선택되고, R4 및 R5는 C620 알킬에서 선택된다. 다른 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 C620 알킬에서 선택되고, R4 및 R5는 C620 알케닐에서 선택된다. 일부 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 동일한 수의 탄소 원자들을 가지고, 및/또는 R4 및 R5는 동일한 수의 탄소 원자들을 가진다. 예를 들면, R1, R2, 및 R3, 또는 R4 및 R5는 6, 8, 9, 12, 14, 또는 18개 탄소 원자들을 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, R1, R2, 및 R3, 또는 R4 및 R5는 C18 알케닐 (예컨대, 리놀레일)이다. 일부 구체예들에서, R1, R2, 및 R3, 또는 R4 및 R5는 6, 8, 9, 12, 또는 14개 탄소 원자들을 포함하는 알킬 그룹이다.
일부 구체예들에서, R1은 R2, R3, R4, 및 R5와 상이한 수의 탄소 원자들을 가진다. 다른 구체예들에서, R3는 R1, R2, R4, 및 R5와 상이한 수의 탄소 원자들을 가진다. 다른 구체예들에서, R4는 R1, R2, R3, 및 R5와 상이한 수의 탄소 원자들을 가진다.
일부 구체예에서, 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
다른 구체예들에서, 전달 물질은 화학식 (V)의 화합물
또는 이의 염 또는 입체이성질체를 포함하고, 이 때
A3는 CH 또는 N이고;
A4는 CH2 또는 NH이고; A3 및 A4 중 최소한 하나는 N 또는 NH이고;
Z는 CH2이거나 존재하지 않고 이 때 Z가 CH2인 경우, 점선 (1) 및 (2) 각각은 단일 결합을 나타내고; Z가 존재하지 않는 경우, 점선 (1) 및 (2)는 모두 존재하지 않으며;
R1, R2, 및 R3는 C5-20 알킬, C5-20 알케닐, R”MR’, R*YR”, YR”, 및 R*OR”으로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 M은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹에서 독립적으로 선택되고;
X1 및 X2는 CH2, (CH2)2, CHR, CHY, C(O), C(O)O, OC(O), -C(O)-CH2-, -CH2-C(O)-, C(O)OCH2, OC(O)CH2, CH2-C(O)O, CH2OC(O), CH(OH), C(S), 및 CH(SH) 로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C3-6 카르보사이클이고;
각 R*은 C1-12 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R은 C1-3 알킬 및 C3-6 카르보사이클로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C1-12 알킬, C2-12 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
각 R”은 C3-12 알킬 및 C312 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예들에서, 화합물은 화학식 (Va)의 화합물이다:
화학식 (V) 또는 (Va)의 화합물들은 가능한 경우 다음 특징들 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구체예들에서, Z는 CH2이다.
일부 구체예들에서, Z는 존재하지 않는다.
일부 구체예들에서, A3 및 A4 중 최소한 하나는 N 또는 NH이다.
일부 구체예들에서, A3는 N이고 A4는 NH이다.
일부 구체예들에서, A3는 N이고 A4는 CH2이다.
일부 구체예들에서, A3는 CH이고 A4는 NH이다.
일부 구체예들에서, X1 및 X2 중 최소한 하나는 CH2이 아니다. 예를 들면, 특정 구체예들에서, X1은 CH2이 아니다. 일부 구체예들에서, X1 및 X2 중 최소한 하나는 -C(O)-이다.
일부 구체예들에서, X2는 -C(O)-, C(O)O, OC(O), -C(O)-CH2-, -CH2-C(O)-, C(O)O-CH2, OC(O)-CH2, CH2-C(O)O, 또는 CH2-OC(O)이다.
일부 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 C520 알킬 및 C5-20 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다. 일부 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 동일하다. 특정 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 C6, C9, C12, 또는 C14 알킬이다. 다른 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 C18 알케닐이다. 예를 들면, R1, R2, 및 R3는 리놀레일 일 수 있다.
일부 구체예에서, 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
다른 구체예들에서, 전달 물질은 화학식 (VI)를 가지는 화합물:
또는 이의 염 또는 입체이성질체를 포함하고, 이 때
A6 및 A7은 CH 또는 N에서 각각 독립적으로 선택되고, 이 때 A6 및 A7 중 최소한 하나는 N이고;
Z는 CH2이거나 존재하지 않고 이 때 Z가 CH2인 경우, 점선 (1) 및 (2) 각각은 단일 결합을 나타내고; Z가 존재하지 않는 경우, 점선 (1) 및 (2)는 모두 존재하지 않으며;
X4 및 X5는 -CH2-, CH2)2-, CHR, CHY, C(O), C(O)O, OC(O), -C(O)-CH2-, -CH2-C(O)-, C(O)OCH2, OC(O)-CH2, CH2-C(O)O, CH2-OC(O), CH(OH), C(S), 및 CH(SH)로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
R1, R2, R3, R4, 및 R5 각각은 C5-20 알킬, C520 알케닐, -R”MR’, -R*YR”, -YR”, 및 -R*OR”로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 M은 C(O)O, OC(O), C(O)N(R’), N(R’)C(O), C(O), C(S), C(S)S, SC(S), CH(OH), P(O)(OR’)O, S(O)2, 아릴 그룹, 및 헤테로아릴 그룹으로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 Y는 독립적으로 C3-6 카르보사이클이고;
각 R*은 C1-12 알킬 및 C212 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R은 C1-3 알킬 및 C3-6 카르보사이클로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고;
각 R’은 C1-12 알킬, C2-12 알케닐, 및 H로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택되고; 그리고
각 R”은 C3-12 알킬 및 C312 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5 각각은 C6-20 알킬 및 C620 알케닐로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예들에서, R1 및 R2는 동일하다. 특정 구체예들에서, R1, R2, 및 R3는 동일하다. 일부 구체예들에서, R4 및 R5는 동일하다. 특정 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5는 동일하다.
일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최소한 하나는 C9-12 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, 및 R5는 독립적으로 C9, C12 또는 C14 알킬이다. 특정 구체예들에서, 각각의 R1, R2, R3, R4, 및 R5는 C9 알킬이다.
일부 구체예들에서, A6는 N이고 A7은 N이다. 일부 구체예들에서, A6는 CH이고 A7은 N이다.
일부 구체예들에서, X4는-CH2-이고 X5는 -C(O)-이다. 일부 구체예들에서, X4 및 X5는 -C(O)-이다.
일부 구체예들에서, A6가 N이고 A7이 N인 경우, X4 및 X5 중 최소한 하나는 -CH2-가 아니다, 예컨대, X4 및 X5 중 최소한 하나는 -C(O)-이다. 일부 구체예들에서, A6가 N이고 A7이 N인 경우, R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최소한 하나는 -R”MR’이다.
일부 구체예들에서, R1, R2, R3, R4, 및 R5 중 최소한 하나는 -R”MR’이 아니다.
일부 구체예들에서, 화합물은
다른 구체예들에서, 전달 물질은 다음 화학식을 가지는 화합물이다:
본 명세서에 개시된 지질 화합물들의 아민 모이어티는 특정 조건들하에서 양성자화 될 수 있다. 예를 들면, 화학식 (I)에 따른 지질의 중심 아민 모이어티는 전형적으로 아미노 모이어티의 pKa 이하의 pH에서 양성자화 (즉, 양으로 하전)되고 pKa 이상의 pH에서 실질적으로 하전되지 않는다. 이러한 지질은 이온화가능한 아미노 지질로 지칭될 수 있다.
한 특정 구체예에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화합물 18이다. 또 다른 구체예에서, 이온화가능한 아미노 지질은 화합물 236이다.
일부 구체예들에서, 이온화가능한 아미노 지질, 예컨대, 화학식 (I)의 화합물의 양은 지질 조성물에서 약 1 몰 % 내지 99 몰 % 범위이다.
한 구체예에서, 이온화가능한 아미노 지질, 예컨대, 화학식 (I)의 화합물의 양은 지질 조성물에서 최소한 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 또는 99 몰 %이다.
한 구체예에서, 이온화가능한 아미노 지질, 예컨대, 화학식 (I)의 화합물의 양은 지질 조성물에서 약 30 몰 % 내지 약 70 몰 %, 약 35 몰 % 내지 약 65 몰 %, 약 40 몰 % 내지 약 60 몰 %, 및 약 45 몰 % 내지 약 55 몰 % 범위이다.
한 특정 구체예에서, 이온화가능한 아미노 지질, 예컨대, 화학식 (I)의 화합물의 양은 지질 조성물에서 약 50 몰 %이다.
본 명세서에 개시된 이온화가능한 아미노 지질, 예컨대, 화학식 (I)의 화합물 이외에도, 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물은 추가 성분들, 가령, 인지질, 구조적 지질, PEG-지질, 및 이의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
b.
인지질
본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물은 하나 이상의 인지질, 예를 들면, 하나 이상의 포화 또는 (다중)불포화 인지질 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 일반적으로, 인지질은 인지질 모이어티 및 하나 이상의 지방산 모이어티를 포함한다.
인지질 모이어티는, 예를 들면, 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜 세린, 포스파티딕 애시드, 2-라이소포스파티딜 콜린, 및 스핑고미엘린으로 구성된 비-제한적 그룹에서 선택될 수 있다.
지방산 모이어티는, 예를 들면, 라우르산, 미리스트산, 미리스톨레산, 팔미트산, 팔미톨레산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산, 알파-리놀렌산, 에루스산, 파이타노산 (phytanoic acid), 아라키드산, 아라키돈산, 에이코사펜타에노산, 베헨산, 도코사펜타에노산, 및 도코사헥사에노산으로 구성된 비-제한적 그룹에서 선택될 수 있다.
특정 인지질은 막에 대한 융합을 용이하게 할 수 있다. 예를 들면, 양이온성 인지질은 막 (예컨대, 세포 또는 세포내 막)의 하나 이상의 음으로 하전된 인지질과 상호작용할 수 있다. 막에 대한 인지질의 융합은 지질-내포 조성물 (예컨대, LNP)의 하나 이상의 요소들 (예컨대, 치료제)이 막을 통과할 수 있게 하여, 예컨대, 표적 조직에 대한 하나 이상의 요소들의 전달을 가능하게 한다.
분지화, 산화, 고리화, 및 알카인을 포함하는 변형 및 치환된 자연 종들을 비롯한 비-자연 인지질 종들 또한 고려된다. 예를 들면, 인지질은 하나 이상의 알카인 (예컨대, 하나 이상의 이중 결합이 삼중 결합으로 대체되어 있는 알케닐 그룹)으로 작용기화되거나 이에 교차결합될 수 있다. 적절한 반응 조건하에서, 알카인 그룹은 아자이드에 대한 노출시 구리-촉매화된 고리화첨가가 일어날 수 있다. 이러한 반응들은 막 투과 또는 세포 인식을 용이하게 하기 위하여 나노입자 조성물의 지질 이중층을 작용기화함에 있어서 또는 유용한 성분, 가령, 표적화 또는 영상화 모이어티 (예컨대, 염료)에 대한 나노입자 조성물의 접합에 있어서 유용할 수 있다.
인지질에는 글리세로인지질, 가령, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티디 글리세롤, 및 포스파티딕 애시드가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 인지질은 또한 포스포스핑고지질, 가령, 스핑고미엘린을 포함한다.
인지질의 예에는 다음이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다:
특정 구체예들에서, 본 발명에 유용한 또는 잠재적으로 유용한 인지질은 DSPC (1,2-다이옥타데카노일-sn-글리세로-3-포스포콜린)의 유사체 또는 변이체이다. 특정 구체예들에서, 본 발명에 유용한 또는 잠재적으로 유용한 인지질은 화학식 (IX)의 화합물:
(IX),
또는 이의 염이고, 이 때:
각 R1은 독립적으로 선택적으로 치환된 알킬이고; 또는 선택적으로 2개의 R1은 개재 원자들과 함께 결합되어 선택적으로 치환된 모노사이클릭 카르보사이클릴 또는 선택적으로 치환된 모노사이클릭 헤테로사이클릴을 형성하고; 또는 선택적으로 3개의 R1은 개재 원자들과 함께 결합되어 선택적으로 치환된 바이사이클릭 카르보사이클릴 또는 선택적으로 치환된 바이사이클릭 헤테로사이클릴을 형성하고;
n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
A는 다음 화학식 중 하나이고: 
또는 
;
각 경우 L2는 독립적으로 결합 또는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌이고, 이 때 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌의 하나의 메틸렌 단위는 O, N(RN), S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, 또는 NRNC(O)N(RN)으로 선택적으로 대체되고;
각 경우 R2는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-30 알킬, 선택적으로 치환된 C1-30 알케닐, 또는 선택적으로 치환된 C1-30 알카인일이고; 선택적으로 이 때 R2의 하나 이상의 메틸렌 단위는 선택적으로 치환된 카르보사이클릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴렌, 선택적으로 치환된 아릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 독립적으로 대체되고;
각 경우 RN은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 또는 질소 보호 그룹이고;
고리 B는 선택적으로 치환된 카르보사이클릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 아릴, 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고; 그리고
p는 1 또는 2이고;
상기 화합물은 다음 화학식의 화합물은 아니며:
이 때 각 경우 R2는 독립적으로 비치환된 알킬, 비치환된 알케닐, 또는 비치환된 알카인일이다.
i) 인지질 머리 변형들
특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용한 또는 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 인지질 머리 (예컨대, 변형된 콜린 그룹)를 포함한다. 특정 구체예들에서, 변형된 머리를 보유한 인지질은 DSPC, 또는 이의 유사체이고, 변형된 4차 아민을 가진다. 예를 들면, 화학식 (IX)의 구체예들에서, 최소한 하나의 R1은 메틸이 아니다. 특정 구체예들에서, 최소한 하나의 R1은 수소 또는 메틸이 아니다. 특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이고, 이 때:
각 t는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
각 u는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고; 그리고
각 v는 독립적으로 1, 2, 또는 3이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 다음 중 하나:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 화학식 (IX-a)의 화합물:
(IX-a),
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용한 또는 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 코어를 포함한다. 특정 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 변형된 코어를 가지는 인지질은 DSPC, 또는 이의 유사체이며, 변형된 코어 구조를 가진다. 예를 들면, 화학식 (IX-a)의 특정 구체예들에서, 그룹 A는 다음 화학식의 화합물이 아니다:
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-a)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 다음 중 하나:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용한 또는 잠재적으로 유용한 인지질은 글리세라이드 모이어티 대신에 사이클릭 모이어티를 포함한다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용한 인지질은 DSPC (1,2-다이옥타데카노일-sn-글리세로-3-포스포콜린), 또는 이의 유사체이고, 글리세라이드 모이어티 대신에 사이클릭 모이어티를 가진다. 특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 화학식 (IX-b)의 화합물:
(IX-b),
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-b)의 화합물은 화학식 (IX-b-1)의 화합물:
또는 이의 염이고, 이 때:
w는 0, 1, 2, 또는 3이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-b)의 화합물은 화학식 (IX-b-2)의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-b)의 화합물은 화학식 (IX-b-3)의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-b)의 화합물은 화학식 (IX-b-4)의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-b)의 화합물은 다음 중 하나:
또는 이의 염이다.
(ii) 인지질 꼬리 변형들
특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용한 또는 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 꼬리를 포함한다. 특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용한 또는 잠재적으로 유용한 인지질은 DSPC (1,2-다이옥타데카노일-sn-글리세로-3-포스포콜린), 또는 이의 유사체이고, 변형된 꼬리를 가진다. 본 명세서에 기재된 “변형된 꼬리”는 보다 짧은 또는 보다 긴 지방족 사슬, 분지화 도입된 지방족 사슬, 치환기 도입된 지방족 사슬, 하나 이상의 메틸렌이 사이클릭 또는 헤테로원자 그룹으로 대체된 지방족 사슬, 또는 이의 임의의 조합을 가지는 꼬리일 수 있다. 예를 들면, 특정 구체예들에서, (IX)의 화합물은 화학식 (IX-a)의 화합물, 또는 이의 염이며, 이 때 최소한 하나의 R2는 각 R2 경우에 선택적으로 치환된 C1-30 알킬이고, 이 때 R2의 하나 이상의 메틸렌 단위는 선택적으로 치환된 카르보사이클릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴렌, 선택적으로 치환된 아릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 독립적으로 대체된다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 화학식 (IX-c)의 화합물:
또는 이의 염이고, 이 때:
각 x는 독립적으로 0-30 사이 (0과 30 포함)의 정수이고; 그리고
각 경우 G는 선택적으로 치환된 카르보사이클릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴렌, 선택적으로 치환된 아릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 구성된 그룹에서 독립적으로 선택된다. 각 경우는 본 발명의 별도의 구체예를 나타낸다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-c)의 화합물은 화학식 (IX-c-1)의 화합물:
또는 이의 염이고, 이 때:
각 경우 v는 독립적으로 1, 2, 또는 3이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-c)의 화합물은 화학식 (IX-c-2)의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-c)의 화합물은 다음 화학식의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-c)의 화합물은 다음 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-c)의 화합물은 화학식 (IX-c-3)의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-c)의 화합물은 다음 화학식의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX-c)의 화합물은 다음 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 변형된 포스포콜린 모이어티를 포함하고, 4차 아민을 포스포릴 그룹에 결합시키는 알킬 사슬은 에틸렌이 아니다 (예컨대, n은 2가 아니다). 그러므로, 특정 구체예들에서, 본 발명에서 유용하거나 잠재적으로 유용한 인지질은 화학식 (IX)의 화합물이고, 이 때 n은 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이다. 예를 들면, 특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (IX)의 화합물은 다음 중 하나:
또는 이의 염이다.
c. 대체 지질
특정 구체예들에서, 대체 지질은 본 발명의 인지질 대신 사용된다. 이러한 대체 지질의 비-제한적 예들에는 다음이 포함된다:
d.
구조적 지질
본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물은 하나 이상의 구조적 지질을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “구조적 지질”은 스테롤을 지칭하며 또한 스테롤 모이어티를 내포하는 지질을 지칭한다.
지질 나노입자에 구조적 지질의 통합은 해당 입자에서 다른 지질의 응집을 완화함에 도움을 줄 수 있다. 구조적 지질은, 콜레스테롤, 페코스테롤, 시토스테롤, 에르고스테롤, 캄페스테롤, 스티그마스테롤, 브라시카스테롤, 토마티딘, 토마틴, 우르솔릭 애시드, 알파-토코페롤, 호파노이드, 파이토스테롤, 스테로이드, 및 이의 혼합물을 포함하는 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 그룹에서 선택될 수 있다. 일부 구체예들에서, 구조적 지질은 스테롤이다. 본 명세서에서 정의된 “스테롤”은 스테로이드 알콜로 구성된 스테로이드의 하위그룹이다. 특정 구체예들에서, 구조적 지질은 스테로이드이다. 특정 구체예들에서, 구조적 지질은 콜레스테롤이다. 특정 구체예들에서, 구조적 지질은 콜레스테롤의 유사체이다. 특정 구체예들에서, 구조적 지질은 알파-토코페롤이다. 구조적 지질의 예에는 다음이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다:
한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물에서 구조적 지질 (예컨대, 스테롤, 가령, 콜레스테롤)의 양은 약 20 몰 % 내지 약 60 몰 %, 약 25 몰 % 내지 약 55 몰 %, 약 30 몰 % 내지 약 50 몰 %, 또는 약 35 몰 % 내지 약 45 몰 % 범위이다.
한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 지질 조성물에서 구조적 지질 (예컨대, 스테롤, 가령, 콜레스테롤)의 양은 약 25 몰 % 내지 약 30 몰 %, 약 30 몰 % 내지 약 35 몰 %, 또는 약 35 몰 % 내지 약 40 몰 % 범위이다.
한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 지질 조성물에서 구조적 지질 (예컨대, 스테롤, 가령, 콜레스테롤)의 양은 약 24 몰 %, 약 29 몰 %, 약 34 몰 %, 또는 약 39 몰 %이다.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 개시된 지질 조성물에서 구조적 지질 (예컨대, 스테롤, 가령, 콜레스테롤)의 양은 최소한 약 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60 몰 %이다.
e.
폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-지질
본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물은 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 지질을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “PEG-지질”은 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)-변형된 지질을 지칭한다. PEG-지질의 비-제한적 예들에는 PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민 및 포스파티딕 애시드, PEG-세라마이드 접합체 (예컨대, PEG-CerC14 또는 PEG-CerC20), PEG-변형된 다이알킬아민 및 PEG-변형된 1,2-다이아실옥시프로판-3-아민이 포함된다. 이러한 지질은 또한 페길화 지질로 지칭된다. 예를 들면, PEG 지질은 PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEGDMPE, PEG-DPPC, 또는 PEG-DSPE 지질일 수 있다.
일부 구체예들에서, PEG-지질에는, 1,2-다이미리스토일-sn-글리세롤 메톡시폴리에틸렌 글리콜 (PEG-DMG), 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[아미노(폴리에틸렌 글리콜)] (PEG-DSPE), PEG-다이스테릴 글리세롤 (PEG-DSG), PEG-다이팔미톨레일, PEG-다이올레일, PEG-다이스테아릴, PEG-다이아실글리카미드 (PEG-DAG), PEG-다이팔미토일 포스파티딜에탄올아민 (PEG-DPPE), 또는 PEG-1,2-다이미리스틸록실프로필-3-아민 (PEG-c-DMA)이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
한 구체예에서, PEG-지질은 PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형된 포스파티딕 애시드, PEG-변형된 세라마이드, PEG-변형된 다이알킬아민, PEG-변형된 다이아실글리세롤, PEG-변형된 다이알킬글리세롤, 및 이의 혼합물로 구성된 그룹에서 선택된다.
일부 구체예들에서, PEG-지질의 지질 모이어티는 약 C14 내지 약 C22, 바람직하게는 약 C14 내지 약 C16 길이를 가지는 모이어티들을 포함한다. 일부 구체예들에서, PEG 모이어티, 예를 들면, mPEG-NH2는 약 1000, 2000, 5000, 10,000, 15,000 또는 20,000 달톤의 크기를 가진다. 한 구체예에서, PEG-지질은 PEG2k-DMG이다.
한 구체예에서, 본 명세서에 기재된 지질 나노입자들은 비-융합성 PEG인 PEG 지질을 포함할 수 있다. 비-융합성 PEG의 비-제한적 예들에는 PEG-DSG 및 PEG-DSPE가 포함된다.
PEG-지질은 해당 분야에 공지이며, 가령, 미국 특허 공보 제 8158601 및 국제 특허 출원 공개 공보 제 WO 2015/130584 A2에 기재된 것들이 있고, 이들 문헌은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다.
일반적으로, 본 명세서에 기재된, 다양한 화학식의 다른 지질 성분들 (예컨대, PEG 지질) 중 일부는 2016년 12월 10일에 출원된, 발명의 명칭 “Compositions and Methods for Delivery of Therapeutic Agents”의 국제 특허 출원 제 PCT/US2016/000129에 기재된 바와 같이 합성될 수 있으며, 이 문헌은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.
지질 나노입자 조성물의 지질 성분은 폴리에틸렌 글리콜, 가령, PEG 또는 PEG-변형된 지질을 포함하는 하나 이상의 분자들을 포함할 수 있다. 이러한 종들은 다르게는 페길화 지질로 지칭될 수 있다. PEG 지질은 폴리에틸렌 글리콜로 변형된 지질이다. PEG 지질은 PEG-변형된 포스파티딜에탄올아민, PEG-변형된 포스파티딕 애시드, PEG-변형된 세라마이드, PEG-변형된 다이알킬아민, PEG-변형된 다이아실글리세롤, PEG-변형된 다이알킬글리세롤, 및 이의 혼합물을 포함하는 비-제한적 그룹에서 선택될 수 있다. 예를 들면, PEG 지질은 PEG-c-DOMG, PEG-DMG, PEG-DLPE, PEGDMPE, PEG-DPPC, 또는 PEG-DSPE 지질일 수 있다.
일부 구체예들에서 PEG-변형된 지질은 PEG DMG의 변형된 형태이다. PEG-DMG는 다음 구조를 가진다:
한 구체예에서, 본 발명에 유용한 PEG 지질은 국제 특허 출원 공개 공보 제 WO2012099755에 기재된 페길화 지질 일 수 있으며, 이 문헌의 내용은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다. 본 명세서에 기재된 임의의 이러한 예시적인 PEG 지질은 PEG 사슬에 하이드록실 그룹을 포함하도록 변형될 수 있다. 특정 구체예들에서, PEG 지질은 PEG-OH 지질이다. 본 명세서에 일반적으로 정의되는 “PEG-OH 지질” (또한 본 명세서에서 "하이드록시-페길화 지질”로도 지칭됨)은 지질에 하나 이상의 하이드록실 (-OH) 그룹들을 가지는 페길화 지질이다. 특정 구체예들에서, PEG-OH 지질은 PEG 사슬에 하나 이상의 하이드록실 그룹을 포함한다. 특정 구체예들에서, PEG-OH 또는 하이드록시-페길화 지질은 PEG 사슬의 말단에 -OH 그룹을 포함한다. 각 경우는 본 발명의 별도의 구체예를 나타낸다.
특정 구체예들에서, 본 발명에 유용한 PEG 지질은 화학식 (VII)의 화합물이다. 본 명세서는 화학식 (VII)의 화합물:
또는 이의 염을 제공하며, 이 때:
R3는 -ORO이고;
RO는 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 또는 산소 보호 그룹이고;
r은 1 내지 100 (1과 100 포함)의 정수이고;
L1은 선택적으로 치환된 C1-10 알킬렌이고, 이 때 선택적으로 치환된 C1-10 알킬렌의 최소한 하나의 메틸렌은 선택적으로 치환된 카르보사이클릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴렌, 선택적으로 치환된 아릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로아릴렌, O, N(RN), S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, 또는 NRNC(O)N(RN)으로 독립적으로 대체되고;
D는 클릭 화학에 의해 수득되는 모이어티 또는 생리학적 조건하에서 절단가능한 모이어티이고;
m은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이고;
A는 다음 화학식이고: 
또는 
;
각 경우 L2는 독립적으로 결합 또는 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌이고, 이 때 선택적으로 치환된 C1-6 알킬렌의 하나의 메틸렌은 O, N(RN), S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, 또는 NRNC(O)N(RN)으로 선택적으로 대체되고;
각 경우에 R2는 독립적으로 선택적으로 치환된 C1-30 알킬, 선택적으로 치환된 C1-30 알케닐, 또는 선택적으로 치환된 C1-30 알카인일이고; 선택적으로 이 때 R2의 하나 이상의 메틸렌 단위들은 선택적으로 치환된 카르보사이클릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴렌, 선택적으로 치환된 아릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O) , OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 독립적으로 대체되고;
각 경우 RN은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 또는 질소 보호 그룹이고;
고리 B는 선택적으로 치환된 카르보사이클릴, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴, 선택적으로 치환된 아릴, 또는 선택적으로 치환된 헤테로아릴이고; 그리고
p는 1 또는 2이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 PEG-OH 지질이다 (즉, R3는 -ORO이고, RO는 수소이다). 특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 화학식 (VII-OH)의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, D는 클릭 화학에 의해 수득되는 모이어티 (예컨대, 트라이아졸)이다. 특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 화학식 (VII-a-1) 또는 (VII-a-2)의 화합물:
(VII-a-1) (VII-a-2),
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이고, 이 때
s는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, D는 생리학적 조건하에서 절단가능한 모이어티 (예컨대, 에스터, 아마이드, 카르보네이트, 카르바메이트, 우레아)이다. 특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 화학식 (VII-b-1) 또는 (VII-b-2)의 화합물:
(VII-b-1)
(VII-b-2),
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 화학식 (VII-b-1-OH) 또는 (VII-b-2-OH)의 화합물:
(VII-b-1-OH)
(VII-b-2-OH),
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다.
특정 구체예들에서, 본 발명에 유용한 PEG 지질은 페길화 지방산이다. 특정 구체예들에서, 본 발명에 유용한 PEG 지질은 화학식 (VIII)의 화합물이다. 본 명세서는 화학식 (VIII)의 화합물:
또는 이의 염을 제공하고, 이 때:
R3는-ORO이고;
RO는 수소, 선택적으로 치환된 알킬 또는 산소 보호 그룹이고;
r은 1 내지 100 (1과 100 포함)의 정수이고;
R5는 선택적으로 치환된 C10-40 알킬, 선택적으로 치환된 C10-40 알케닐, 또는 선택적으로 치환된 C10-40 알카인일이고; 그리고 선택적으로 R5 의 하나 이상의 메틸렌 그룹들은 선택적으로 치환된 카르보사이클릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로사이클릴렌, 선택적으로 치환된 아릴렌, 선택적으로 치환된 헤테로아릴렌, N(RN), O, S, C(O), C(O)N(RN), NRNC(O), NRNC(O)N(RN), C(O)O, OC(O), OC(O)O, OC(O)N(RN), NRNC(O)O, C(O)S, SC(O), C(=NRN), C(=NRN)N(RN), NRNC(=NRN), NRNC(=NRN)N(RN), C(S), C(S)N(RN), NRNC(S), NRNC(S)N(RN), S(O), OS(O), S(O)O, OS(O)O, OS(O)2, S(O)2O, OS(O)2O, N(RN)S(O), S(O)N(RN), N(RN)S(O)N(RN), OS(O)N(RN), N(RN)S(O)O, S(O)2, N(RN)S(O)2, S(O)2N(RN), N(RN)S(O)2N(RN), OS(O)2N(RN), 또는 N(RN)S(O)2O로 대체되고; 그리고
각 경우 RN은 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 알킬, 또는 질소 보호 그룹이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VIII)의 화합물은 화학식 (VIII-OH)의 화합물:
또는 이의 염이다. 일부 구체예들에서, r은 45이다.
특정 구체예들에서, 화학식 (VIII)의 화합물은 다음 화학식 중 어느 하나의 화합물:
또는 이의 염이다. 일부 구체예들에서, r은 45이다.
또 다른 구체예들에서 화학식 (VIII)의 화합물은:
또는 이의 염이다.
한 구체예에서, 화학식 (VIII)의 화합물은
한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물에서 PEG-지질의 양은 약 0.1 몰 % 내지 약 5 몰 %, 약 0.5 몰 % 내지 약 5 몰 %,약 1 몰 % 내지 약 5 몰 %, 약 1.5 몰 % 내지 약 5 몰 %, 약 2 몰 % 내지 약 5 몰 % 몰 %, 약 0.1 몰 % 내지 약 4 몰 %, 약 0.5 몰 % 내지 약 4 몰 %, 약 1 몰 % 내지 약 4 몰 %, 약 1.5 몰 % 내지 약 4 몰 %, 약 2 몰 % 내지 약 4 몰 %, 약 0.1 몰 % 내지 약 3 몰 %, 약 0.5 몰 % 내지 약 3 몰 %, 약 1 몰 % 내지 약 3 몰 %, 약 1.5 몰 % 내지 약 3 몰 %, 약 2 몰 % 내지 약 3 몰 %, 약 0.1 몰 % 내지 약 2 몰 %, 약 0.5 몰 % 내지 약 2 몰 %, 약 1 몰 % 내지 약 2 몰 %, 약 1.5 몰 % 내지 약 2 몰 %, 약 0.1 몰 % 내지 약 1.5 몰 %, 약 0.5 몰 % 내지 약 1.5 몰 %, 또는 약 1 몰 % 내지 약 1.5 몰 % 범위이다.
한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 지질 조성물에서 PEG-지질의 양은 약 2 몰 %이다. 한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 지질 조성물에서 PEG-지질의 양은 약 1.5 몰 %이다.
한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 지질 조성물에서 PEG-지질의 양은 최소한 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 또는 5 몰 %이다.
일부 양상들에서, 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물은 PEG-지질을 포함하지 않는다.
f.
그 외 이온화가능한 아미노 지질
본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물은 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), 또는 (VI)에 따른 지질 이외에 또는 지질 대신에 하나 이상의 이온화가능한 아미노 지질을 포함할 수 있다.
이온화가능한 지질은 3-(다이도데실아미노)-N1,N1,4-트라이도데실-1-피페라진에탄아민 (KL10), N1-[2-(다이도데실아미노)에틸]-N1,N4,N4-트라이도데실-1,4-피페라진다이에탄아민 (KL22), 14,25-다이트라이데실-15,18,21,24-테트라아자-옥타트라이아콘탄 (KL25), 1,2-다이리놀레일옥시-N,N-다이메틸아미노프로판 (DLin-DMA), 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노메틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-K-DMA), 헵타트라이아콘타-6,9,28,31-테트라엔-19-일 4-(다이메틸아미노)부타노에이트 (DLin-MC3-DMA), 2,2-다이리놀레일-4-(2-다이메틸아미노에틸)-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 1,2-다이올레일옥시-N,N-다이메틸아미노프로판 (DODMA), (13Z,165Z)-N,N-다이메틸-3-노니도코사-13-16-다이엔-1-아민 (L608), 2-(8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸옥시)-N,N-다이메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-다이엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA), (2R)-2-(8-[(3β)-콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸옥시)-N,N-다이메틸-3-[(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-다이엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2R)), 및 (2S) -2- (8- [(3β) -콜레스트-5-엔-3-일옥시]옥틸옥시) -N,N-다이메틸-3- [(9Z,12Z)-옥타데카-9,12-다이엔-1-일옥시]프로판-1-아민 (옥틸-CLinDMA (2S))로 구성된 비-제한적 그룹에서 선택될 수 있다. 이들 외에도, 이온화가능한 아미노 지질은 또한 사이클릭 아민 그룹을 포함하는 지질이 될 수 있다.
이온화가능한 지질은 또한 국제 특허 출원 공개 공보 제 WO 2017/075531 A1에 개시된 화합물들이 될 수 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다. 예를 들면, 이온화가능한 아미노 지질은 다음을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다:
및 이의 임의의 조합.
이온화가능한 지질은 또한 국제 특허 출원 공개 공보 제 WO 2015/199952 A1에 개시된 화합물들이 될 수 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다. 예를 들면, 이온화가능한 아미노 지질은 다음을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다:
및 이의 임의의 조합.
g.
나노입자 조성물
본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 지질 조성물은 상기 기재한 것들 이외에 하나 이상의 성분들을 포함할 수 있다. 예를 들면, 지질 조성물은 하나 이상의 투과성 인핸서 분자들, 탄수화물, 폴리머, 표면 개질제 (예컨대, 계면활성제), 또는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 예를 들면, 투과성 인핸서 분자는 미국 특허출원 공개 공보 제 2005/0222064에 기재된 분자일 수 있다. 탄수화물은 단순 당 (예컨대, 글루코오스) 및 다당류 (예컨대, 글리코겐 및 이의 유도체 및 유사체)를 포함할 수 있다.
폴리머는 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물을 캡슐화하기 위해 또는 부분적으로 캡슐화하기 위해 (예컨대, 지질 나노입자 형태의 제약학적 조성물) 사용되거나 및/또는 제약학적 조성물에 포함될 수 있다. 폴리머는 생분해성 및/또는 생체적합성 일 수 있다. 폴리머는, 폴리아민, 폴리에터, 폴리아마이드, 폴리에스터, 폴리카르바메이트, 폴리우레아, 폴리카르보네이트, 폴리스티렌, 폴리이미드, 폴리술폰, 폴리우레탄, 폴리아세틸렌, 폴리에틸렌, 폴리에틸렌이민, 폴리아이소시아네이트, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴로니트릴, 및 폴리아릴레이트에서 선택될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
지질 조성물과 폴리뉴클레오티드 간의 비율 범위는 약 10:1 내지 약 60:1 (중량/중량) 일 수 있다.
일부 구체예들에서, 지질 조성물과 폴리뉴클레오티드 간의 비율은 약 10:1, 11:1, 12:1, 13:1, 14:1, 15:1, 16:1, 17:1, 18:1, 19:1, 20:1, 21:1, 22:1, 23:1, 24:1, 25:1, 26:1, 27:1, 28:1, 29:1, 30:1, 31:1, 32:1, 33:1, 34:1, 35:1, 36:1, 37:1, 38:1, 39:1, 40:1, 41:1, 42:1, 43:1, 44:1, 45:1, 46:1, 47:1, 48:1, 49:1, 50:1, 51:1, 52:1, 53:1, 54:1, 55:1, 56:1, 57:1, 58:1, 59:1 또는 60:1 (중량/중량) 일 수 있다. 일부 구체예들에서, 지질 조성물 대 치료제를 인코드하는 폴리뉴클레오티드의 중량/중량 비율은 약 20:1 또는 약 15:1이다.
한 구체예에서, 본 명세서에 기재된 지질 나노입자들은 5:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1, 30:1, 35:1, 40:1, 45:1, 50:1, 55:1, 60:1 또는 70:1의 지질:폴리뉴클레오티드 중량비로, 또는 이들 비율들의 범위 또는 이들 중 어느 하나, 가령, 5:1 내지 약 10:1, 약 5:1 내지 약 15:1, 약 5:1 내지 약 20:1, 약 5:1 내지 약 25:1, 약 5:1 내지 약 30:1, 약 5:1 내지 약 35:1, 약 5:1 내지 약 40:1, 약 5:1 내지 약 45:1, 약 5:1 내지 약 50:1, 약 5:1 내지 약 55:1, 약 5:1 내지 약 60:1, 약 5:1 내지 약 70:1, 약 10:1 내지 약 15:1, 약 10:1 내지 약 20:1, 약 10:1 내지 약 25:1, 약 10:1 내지 약 30:1, 약 10:1 내지 약 35:1, 약 10:1 내지 약 40:1, 약 10:1 내지 약 45:1, 약 10:1 내지 약 50:1, 약 10:1 내지 약 55:1, 약 10:1 내지 약 60:1, 약 10:1 내지 약 70:1, 약 15:1 내지 약 20:1, 약 15:1 내지 약 25:1,약 15:1 내지 약 30:1, 약 15:1 내지 약 35:1, 약 15:1 내지 약 40:1, 약 15:1 내지 약 45:1, 약 15:1 내지 약 50:1, 약 15:1 내지 약 55:1, 약 15:1 내지 약 60:1 또는 약 15:1 내지 약 70:1로 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 폴리뉴클레오티드 (예컨대, mRNA)를 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 본 명세서에 기재된 지질 나노입자들은 폴리뉴클레오티드를 대략 0.1 mg/ml 내지 2 mg/ml, 가령, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml, 0.3 mg/ml, 0.4 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.6 mg/ml, 0.7 mg/ml, 0.8 mg/ml, 0.9 mg/ml, 1.0 mg/ml, 1.1 mg/ml, 1.2 mg/ml, 1.3 mg/ml, 1.4 mg/ml, 1.5 mg/ml, 1.6 mg/ml, 1.7 mg/ml, 1.8 mg/ml, 1.9 mg/ml, 2.0 mg/ml 또는 2.0 mg/ml 이상 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)의 농도로 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물들은 지질 나노입자 (LNP)로서 제제화된다. 따라서, 본 발명은 또한 (i) 전달 물질, 가령, 본 명세서에 기재된 화학식 (I) 또는 (III)의 화합물을 포함하는 지질 조성물, 및 (ii) 관심 폴리펩티드를 인코드하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 나노입자 조성물들을 제공한다. 이러한 나노입자 조성물에서, 본 명세서에 개시된 지질 조성물은 관심 폴리펩티드를 인코드하는 폴리뉴클레오티드를 캡슐화할 수 있다.
나노입자 조성물은 전형적으로 마이크로미터 크기 또는 그 보다 작은 크기로 제조되며 지질 이중층을 포함할 수 있다. 나노입자 조성물은 지질 나노입자 (LNPs), 리포좀 (예컨대, 지질 소포), 및 리포플렉스를 포함한다. 예를 들면, 나노입자 조성물은 500 nm 이하의 직경을 가지는 지질 이중층을 가지는 리포좀 일 수 있다.
나노입자 조성물은, 예를 들면, 지질 나노입자 (LNP), 리포좀, 및 리포플렉스를 포함한다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 하나 이상의 지질 이중층을 포함하는 소포이다. 특정 구체예들에서, 나노입자 조성물은 수성 구획들에 의해 분리되는 둘 이상의 동심 이중층을 포함한다. 지질 이중층은 작용기화되거나 및/또는 서로에 교차결합 될 수 있다. 지질 이중층은 하나 이상의 리간드, 단백질, 또는 통로를 포함할 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 나노입자 조성물은 화학식 (I), (III), (IV), (V), 또는 (VI)에 따른 최소한 하나의 화합물을 포함한다. 예를 들면, 나노입자 조성물은 화합물 1-147 중 하나 이상, 또는 화합물 1-342 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 나노입자 조성물은 또한 다양한 다른 성분들을 포함할 수 있다. 예를 들면, 나노입자 조성물은 화학식 (I), (II), (III), (IV), (V), 또는 (VI)에 따른 지질 이외에 하나 이상의 다른 지질, 가령, (i) 최소한 하나의 인지질, (ii) 최소한 하나의 구조적 지질, (iii) 최소한 하나의 PEG-지질, 또는 (iv) 이의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 구조적 지질의 포함은, 예를 들면, 화학식 III에 따른 지질이 본 발명의 지질 나노입자 조성물들에서 사용될 때, 선택적일 수 있다.
일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (I)의 화합물 (예컨대, 화합물 18, 25, 26 또는 48)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (I)의 화합물 (예컨대, 화합물 18, 25, 26 또는 48) 및 인지질 (예컨대, DSPC)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (III)의 화합물 (예컨대, 화합물 236)을 포함한다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (III)의 화합물 (예컨대, 화합물 236) 및 인지질 (예컨대, DOPE 또는 DSPC)을 포함한다.
일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (I)의 화합물 (예컨대, 화합물 18, 25, 26 또는 48)로 구성되거나 본질적으로 구성되는 지질 조성물을 포함한다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (I)의 화합물 (예컨대, 화합물 18, 25, 26 또는 48) 및 인지질 (예컨대, DSPC)로 구성되거나 본질적으로 구성되는 지질 조성물을 포함한다.
일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (III)의 화합물 (예컨대, 화합물 236)로 구성되거나 본질적으로 구성되는 지질 조성물을 포함한다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (III)의 화합물 (예컨대, 화합물 236) 및 인지질 (예컨대, DOPE 또는 DSPC)로 구성되거나 본질적으로 구성되는 지질 조성물을 포함한다.
한 구체예에서, 지질 나노입자는 이온화가능한 지질, 구조적 지질, 인지질, PEG-변형된 지질, 및 mRNA를 포함한다. 일부 구체예들에서, LNP는 이온화가능한 지질, PEG-변형된 지질, 스테롤 및 인지질을 포함한다. 일부 구체예들에서, LNP는 약 20-60% 이온화가능한 지질: 약 5-25% 인지질: 약 25-55% 스테롤; 및 약 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 약 50% 이온화가능한 지질, 약 1.5% PEG-변형된 지질, 약 38.5% 콜레스테롤 및 약 10% 인지질을 포함한다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 약 55% 이온화가능한 지질, 약 2.5% PEG 지질, 약 32.5% 콜레스테롤 및 약 10% 인지질을 포함한다. 일부 구체예들에서, 이온화가능한 지질은 이온화가능한 아미노 지질이고, 중성 지질은 인지질이고, 스테롤은 콜레스테롤이다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 이온화가능한 지질: 콜레스테롤: DSPC: PEG 지질을 가진다. 일부 구체예들에서, 이온화가능한 지질은 화합물 18 또는 화합물 236이고, PEG 지질은 화합물 428 또는 PEG-DMG이다.
일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: 인지질: 화합물 428을 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: DSPC: 화합물 428을 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: 인지질: PEG-DMG를 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: DSPC: PEG-DMG를 가진다.
일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 화합물 236: 콜레스테롤: 인지질: 화합물 428을 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 50:38.5:10:1.5의 화합물 236: 콜레스테롤: DSPC: 화합물 428을 가진다.
일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 40:38.5:20:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: 인지질: 화합물 428을 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 40:38.5:20:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: DSPC: 화합물 428을 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 40:38.5:20:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: 인지질: PEG-DMG를 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 몰비로 40:38.5:20:1.5의 화합물 18: 콜레스테롤: DSPC: PEG-DMG를 가진다.
일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 50:10:38.5:1.5 몰비의 화합물 18:인지질:Chol:화합물 428의 배합을 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 50:10:38.5:1.5 몰비의 화합물 18:DSPC:Chol:화합물 428의 배합을 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 50:10:38.5:1.5 몰비의 화합물 18:인지질:Chol:PEG-DMG의 배합을 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 50:10:38.5:1.5 몰비의 화합물 18:DSPC:Chol:PEG-DMG의 배합을 가질 수 있다.
일부 구체예들에서, LNP는 0.4 미만의 다분산도 값을 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 중성 pH에서 알짜 중성 전하를 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 50-150 nm의 평균 직경을 가진다. 일부 구체예들에서, LNP는 80-100 nm의 평균 직경을 가진다.
본 명세서에서 일반적으로 정의되는 용어 “지질”은 소수성 또는 양친매성 성질을 가지는 소형 분자를 지칭한다. 지질은 자연 발생 또는 합성일 수 있다. 지질 분류의 예들에는, 지방, 왁스, 스테롤-내포 대사산물, 비타민, 지방산s, 글리세로지질, 글리세로인지질, 스핑고지질, 사카로지질, 및 폴리케타이드, 및 프레놀 지질이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 예들에서, 일부 지질의 양친매성 성질들은 지질들을 수성 매질에서 리포좀, 소포, 또는 막들을 형성하게 한다.
일부 구체예들에서, 지질 나노입자 (LNP)는 이온화가능한 지질을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “이온화가능한 지질”은 해당 분야에서의 통상적인 의미를 가지며 하나 이상의 하전된 모이어티를 포함하는 지질을 지칭할 수 있다. 일부 구체예들에서, 이온화가능한 지질은 양으로 하전되거나 음으로 하전될 수 있다. 이온화가능한 지질은 양으로 하전될 수 있으며, 이 경우 이는 “양이온성 지질”로 지칭될 수 있다. 특정 구체예들에서, 이온화가능한 지질 분자는 아민 그룹을 포함할 수 있으며, 이는 이온화가능한 아미노 지질로 지칭될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 “하전된 모이어티”는 형식적인 전자 전하, 예컨대, 일가 (+1, 또는 -1), 이가 (+2, 또는 -2), 삼가 (+3, 또는 -3), 등을 나르는 화학적 모이어티이다. 하전된 모이어티는 음이온성 (즉, 음으로 하전된) 또는 양이온성 (즉, 양으로 하전된) 일 수 있다. 양으로-하전된 모이어티들의 예에는 아민 그룹 (예컨대, 일차, 이차, 및/또는 삼차 아민), 암모늄 그룹, 피리디늄 그룹, 구아니딘 그룹, 및 이미디졸리움 그룹이 포함된다. 한 특정 구체예에서, 하전된 모이어티는 아민 그룹을 포함한다. 음으로-하전된 그룹들 또는 이의 전구체들의 예에는, 카르복실레이트 그룹, 설포네이트 그룹, 술페이트 그룹, 포스포네이트 그룹, 포스페이트 그룹, 하이드록실 그룹, 등이 포함된다. 하전된 모이어티의 전하는, 일부 사례들에서, 환경 조건들에 따라 달라질 수 있는데, 예를 들면, pH의 변화는 해당 모이어티의 전하를 변화시키고, 및/또는 해당 모이어티가 하전되도록 또는 하전되지 않도록 할 수 있다. 일반적으로, 분자의 전하 밀도는 필요에 따라 선택될 수 있다.
용어 “하전된” 또는 “하전된 모이어티”는 분자에서 “부분 음 전하" 또는 “부분 양 전하"를 지칭하는 것이 아님을 이해하여야 한다. 용어 “부분 음 전하" 및 “부분 양 전하"는 해당 분야의 통상의 의미를 가진다. “부분 음 전하"는 작용기가 편극화되는 결합을 포함하여, 전자 밀도가 해당 결합의 하나의 원자 쪽으로 당겨져, 해당 원자에서 부분 음 전하를 생성하게 되는 경우에 생성될 수 있다. 해당 분야의 숙련된 기술자들은 이러한 방식으로 편극화 될 수 있는 결합들을 일반적으로 알고 있을 것이다.
일부 구체예들에서, 이온화가능한 지질은 이온화가능한 아미노 지질이고, 이는 종종 해당 분야에서 “이온화가능한 양이온성 지질”로 지칭된다. 한 구체예에서, 이온화가능한 아미노 지질은 링커 구조를 통해 연결되는 양으로 하전된 친수성 머리 및 소수성 꼬리를 가질 수 있다.
이들 이외에도, 이온화가능한 지질은 사이클릭 아민 그룹을 포함하는 지질이 될 수도 있다.
한 구체예에서, 이온화가능한 지질은 국제 특허 출원 공개 공보 제 WO2013086354 및 WO2013116126에 기재된 이온화가능한 지질들 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에서 선택되며; 이들 각각의 내용은 그 전문이 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다.
또한 또 다른 구체예에서, 이온화가능한 지질은 미국 특허 공보 제 7,404,969호의 화학식 CLI-CLXXXXII에서 선택될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며; 이는 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다.
한 구체예에서, 지질은 절단가능한 지질, 가령, 국제 특허 출원 공개 공보 WO2012170889에 기재된 지질이 될 수 있으며, 이는 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다. 한 구체예에서, 지질은 해당 분야에 공지된 방법들 및/또는 국제 특허 출원 공개 공보 제 WO2013086354에 기재된 방법들에 의해 합성될 수 있으며; 이 문헌의 내용은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다.
나노입자 조성물들은 다양한 방법들에 의해 특성화될 수 있다. 예를 들면, 나노입자 조성물의 형태 및 크기 분포를 조사하기 위해 현미경 (예컨대, 투과 전자 현미경 또는 주사 전자 현미경)이 사용될 수 있다. 동적 광 산란 또는 전위측정법 (예컨대, 전위차 적정)은 제타 전위를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 동적 광 산란은 또한 입경을 결정하기 위해 이용될 수도 있다. 또한 나노입자 조성물, 가령, 입경, 다분산도 지수, 및 제타 전위의 다수 특성들을 측정하기 위해 기기들, 가령, Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Malvern, Worcestershire, UK)가 사용될 수도 있다.
일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (I)의 화합물 (예컨대, 화합물 18, 25, 26 또는 48)로 구성되거나 본질적으로 구성되는 지질 조성물을 포함한다. 일부 구체예들에서, 나노입자 조성물은 화학식 (I)의 화합물 (예컨대, 화합물s 18, 25, 26 또는 48) 및 인지질 (예컨대, DSPC 또는 MSPC)로 구성되거나 본질적으로 구성되는 지질 조성물을 포함한다.
나노입자 조성물들은 다양한 방법들에 의해 특성화될 수 있다. 예를 들면, 나노입자 조성물의 형태 및 크기 분포를 조사하기 위해 현미경 (예컨대, 투과 전자 현미경 또는 주사 전자 현미경)이 사용될 수 있다. 동적 광 산란 또는 전위측정법 (예컨대, 전위차 적정)은 제타 전위를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 동적 광 산란은 또한 입경을 결정하기 위해 이용될 수도 있다. 또한 나노입자 조성물, 가령, 입경, 다분산도 지수, 및 제타 전위의 다수 특성들을 측정하기 위해 기기들, 가령, Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments Ltd, Malvern, Worcestershire, UK)가 사용될 수도 있다.
나노입자들의 크기는 생물학적 반응들, 가령, 염증 (그러나 이에 제한되는 것은 아님)에 대응할 수 있고, 또는 폴리뉴클레오티드의 생물학적 효과를 증가시킬 수 있다.
본 명세서에서 나노입자 조성물들에 관한 내용에서 사용되는 “크기” 또는 “평균 크기”는 나노입자 조성물의 평균 직경을 지칭한다.
한 구체예에서, 관심 폴리펩티드를 인코드하는 폴리뉴클레오티드는 약 10 내지 약 100 nm, 가령, 약 10 내지 약 20 nm, 약 10 내지 약 30 nm, 약 10 내지 약 40 nm, 약 10 내지 약 50 nm, 약 10 내지 약 60 nm, 약 10 내지 약 70 nm, 약 10 내지 약 80 nm, 약 10 내지 약 90 nm, 약 20 내지 약 30 nm, 약 20 내지 약 40 nm, 약 20 내지 약 50 nm, 약 20 내지 약 60 nm, 약 20 내지 약 70 nm, 약 20 내지 약 80 nm, 약 20 내지 약 90 nm, 약 20 내지 약 100 nm, 약 30 내지 약 40 nm, 약 30 내지 약 50 nm, 약 30 내지 약 60 nm, 약 30 내지 약 70 nm, 약 30 내지 약 80 nm, 약 30 내지 약 90 nm, 약 30 내지 약 100 nm, 약 40 내지 약 50 nm, 약 40 내지 약 60 nm, 약 40 내지 약 70 nm, 약 40 내지 약 80 nm, 약 40 내지 약 90 nm, 약 40 내지 약 100 nm, 약 50 내지 약 60 nm, 약 50 내지 약 70 nm, 약 50 내지 약 80 nm, 약 50 내지 약 90 nm, 약 50 내지 약 100 nm, 약 60 내지 약 70 nm, 약 60 내지 약 80 nm, 약 60 내지 약 90 nm, 약 60 내지 약 100 nm, 약 70 내지 약 80 nm, 약 70 내지 약 90 nm, 약 70 내지 약 100 nm, 약 80 내지 약 90 nm, 약 80 내지 약 100 nm 및/또는 약 90 내지 약 100 nm (그러나 이에 제한되는 것은 아님)의 직경을 가지는 지질 나노입자들로 제제화된다.
한 구체예에서, 나노입자들은 약 10 내지 500 nm의 직경을 가진다. 한 구체예에서, 나노입자는 100 nm 초과, 150 nm 초과, 200 nm 초과, 250 nm 초과, 300 nm 초과, 350 nm 초과, 400 nm 초과, 450 nm 초과, 500 nm 초과, 550 nm 초과, 600 nm 초과, 650 nm 초과, 700 nm 초과, 750 nm 초과, 800 nm 초과, 850 nm 초과, 900 nm 초과, 950 nm 초과, 또는 1000 nm 초과의 직경을 가진다.
일부 구체예들에서, 나노입자 조성물의 최대 크기는 1 μm 이하 (예컨대, 1 μm, 900 nm, 800 nm, 700 nm, 600 nm, 500 nm, 400 nm, 300 nm, 200 nm, 175 nm, 150 nm, 125 nm, 100 nm, 75 nm, 50 nm, 또는 그 이하)이다.
나노입자 조성물은 비교적 균일할 수 있다. 다분산도 지수는 나노입자 조성물의 균일성, 예컨대, 나노입자 조성물의 입경 분포를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 작은 (예컨대, 0.3 미만) 다분산도 지수는 일반적으로 좁은 입경 분포를 나타낸다. 나노입자 조성물은 약 0 내지 약 0.25, 가령, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.10, 0.11, 0.12, 0.13, 0.14, 0.15, 0.16, 0.17, 0.18, 0.19, 0.20, 0.21, 0.22, 0.23, 0.24, 또는 0.25의 다분산도 지수를 가질 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에 개시된 나노입자 조성물의 다분산도 지수는 약 0.10 내지 약 0.20 일 수 있다.
나노입자 조성물의 제타 전위는 조성물의 전기역학적 전위를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 예를 들면, 제타 전위는 나노입자 조성물의 표면 전하를 설명할 수 있다. 비교적 낮은 양 또는 음 전하를 가지는 나노입자 조성물들이 일반적으로 바람직한데, 보다 높게 하전된 종들이 체내 세포, 조직, 및 다른 요소들과 바람직하지 않게 상호작용할 수 있기 때문이다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에 개시된 나노입자 조성물의 제타 전위는 약 -10 mV 내지 약 +20 mV, 약 -10 mV 내지 약 +15 mV, 약 10 mV 내지 약 +10 mV, 약 -10 mV 내지 약 +5 mV, 약 -10 mV 내지 약 0 mV, 약 -10 mV 내지 약 -5 mV, 약 -5 mV 내지 약 +20 mV, 약 -5 mV 내지 약 +15 mV, 약 -5 mV 내지 약 +10 mV, 약 -5 mV 내지 약 +5 mV, 약 -5 mV 내지 약 0 mV, 약 0 mV 내지 약 +20 mV, 약 0 mV 내지 약 +15 mV, 약 0 mV 내지 약 +10 mV, 약 0 mV 내지 약 +5 mV, 약 +5 mV 내지 약 +20 mV, 약 +5 mV 내지 약 +15 mV, 또는 약 +5 mV 내지 약 +10 mV 일 수 있다.
일부 구체예들에서, 지질 나노입자들의 제타 전위는 약 0 mV 내지 약 100 mV, 약 0 mV 내지 약 90 mV, 약 0 mV 내지 약 80 mV, 약 0 mV 내지 약 70 mV, 약 0 mV 내지 약 60 mV, 약 0 mV 내지 약 50 mV, 약 0 mV 내지 약 40 mV, 약 0 mV 내지 약 30 mV, 약 0 mV 내지 약 20 mV, 약 0 mV 내지 약 10 mV, 약 10 mV 내지 약 100 mV, 약 10 mV 내지 약 90 mV, 약 10 mV 내지 약 80 mV, 약 10 mV 내지 약 70 mV, 약 10 mV 내지 약 60 mV, 약 10 mV 내지 약 50 mV, 약 10 mV 내지 약 40 mV, 약 10 mV 내지 약 30 mV, 약 10 mV 내지 약 20 mV, 약 20 mV 내지 약 100 mV, 약 20 mV 내지 약 90 mV, 약 20 mV 내지 약 80 mV, 약 20 mV 내지 약 70 mV, 약 20 mV 내지 약 60 mV, 약 20 mV 내지 약 50 mV, 약 20 mV 내지 약 40 mV, 약 20 mV 내지 약 30 mV, 약 30 mV 내지 약 100 mV, 약 30 mV 내지 약 90 mV, 약 30 mV 내지 약 80 mV, 약 30 mV 내지 약 70 mV, 약 30 mV 내지 약 60 mV, 약 30 mV 내지 약 50 mV, 약 30 mV 내지 약 40 mV, 약 40 mV 내지 약 100 mV, 약 40 mV 내지 약 90 mV, 약 40 mV 내지 약 80 mV, 약 40 mV 내지 약 70 mV, 약 40 mV 내지 약 60 mV, 및 약 40 mV 내지 약 50 mV 일 수 있다. 일부 구체예들에서, 지질 나노입자들의 제타 전위는 약 10 mV 내지 약 50 mV, 약 15 mV 내지 약 45 mV, 약 20 mV 내지 약 40 mV, 및 약 25 mV 내지 약 35 mV 일 수 있다. 일부 구체예들에서, 지질 나노입자들의 제타 전위는 약 10 mV, 약 20 mV, 약 30 mV, 약 40 mV, 약 50 mV, 약 60 mV, 약 70 mV, 약 80 mV, 약 90 mV, 및 약 100 mV 일 수 있다.
폴리뉴클레오티드에 관한 용어 “캡슐화 효율”은 제조 후 나노입자 조성물에 의해 캡슐화되는 또는 그 외 다른 방식으로 나노입자 조성물과 결합되는 폴리뉴클레오티드의 양을, 제공된 초기 양과 비교하여 기재한다. 본 명세서에서 사용되는 “캡슐화”는 완전한, 실질적인, 또는 부분적인 봉입, 밀폐, 둘러쌈, 또는 감쌈을 지칭할 수 있다.
캡슐화 효율은 높은 것이 바람직하다 (예컨대, 거의 100%). 캡슐화 효율은, 예를 들면, 나노입자 조성물을 하나 이상의 유기 용매 또는 세척제로 분해하기 전과 후에 나노입자 조성물을 내포하는 용액 중의 폴리뉴클레오티드의 양을 비교함으로써 측정될 수 있다.
형광은 용액 중 유리 폴리뉴클레오티드의 양을 측정하기 위해 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 나노입자 조성물들에 있어서, 폴리뉴클레오티드의 캡슐화 효율은 최소한 50%, 예를 들면 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 일 수 있다. 일부 구체예들에서, 캡슐화 효율은 최소한 80% 일 수 있다. 특정 구체예들에서, 캡슐화 효율은 최소한 90% 일 수 있다.
본 명세서에 개시된 제약학적 조성물에 존재하는 폴리뉴클레오티드의 양은 다수의 인자, 가령, 폴리뉴클레오티드의 크기, 원하는 표적 및/또는 응용, 또는 나노입자 조성물의 다른 성질들 뿐만 아니라 폴리뉴클레오티드의 성질들에 따라 달라질 수 있다.
예를 들면, 나노입자 조성물에 유용한 mRNA의 양은 mRNA의 크기 (길이 또는 분자질량으로 표현됨), 서열, 및 다른 특성들에 따라 달라질 수 있다. 나노입자 조성물에서 폴리뉴클레오티드의 상대량 또한 변화할 수 있다.
본 발명의 지질 나노입자 조성물에 존재하는 지질 조성물 및 폴리뉴클레오티드의 상대량은 효능 및 내약성을 고려하여 최적화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드로서 mRNA를 포함하는 조성물들에 있어서, N:P 비율이 유용한 측정치로 기능할 수 있다.
나노입자 조성물의 N:P 비율이 발현 및 내약성 모두를 제어하므로, 낮은 N:P 비율 및 강한 발현을 가지는 나노입자 조성물들이 바람직하다. N:P 비율은 나노입자 조성물에서 지질 대 RNA의 비율에 따라 변화한다.
일반적으로, 보다 낮은 N:P 비율이 바람직하다. 하나 이상의 RNA, 지질, 및 이의 양은 약 2:1 내지 약 30:1, 가령, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1, 12:1, 14:1, 16:1, 18:1, 20:1, 22:1, 24:1, 26:1, 28:1, 또는 30:1의 N:P 비율을 제공하도록 선택될 수 있다. 특정 구체예들에서, N:P 비율은 약 2:1 내지 약 8:1 일 수 있다. 다른 구체예들에서, N:P 비율은 약 5:1 내지 약 8:1 일 수 있다. 특정 구체예들에서, N:P 비율은 5:1 내지 6:1이다. 한 특정 양상에서, N:P 비율은 약 5.67:1이다.
나노입자 조성물들을 제공하는 것 이외에도, 본 발명은 또한 폴리뉴클레오티드를 캡슐화하는 것을 포함하는 지질 나노입자 제조 방법들을 제공한다. 이러한 방법은 본 명세서에 개시된 임의의 제약학적 조성물들을 이용하는 것 그리고 해당 분야에 공지된 지질 나노입자들의 생성 방법들에 따라 지질 나노입자들을 제조하는 것을 포함한다. 예컨대, Wang 등 (2015) “Delivery of oligonucleotides with lipid nanoparticles” Adv. Drug Deliv. Rev. 87:68-80; Silva 등 (2015) “Delivery Systems for Biopharmaceuticals. Part I: Nanoparticles and Microparticles” Curr. Pharm. Technol. 16: 940-954; Naseri 등 (2015) “Solid Lipid Nanoparticles and Nanostructured Lipid Carriers: Structure, Preparation and Application” Adv. Pharm. Bull. 5:305-13; Silva 등 (2015) “Lipid nanoparticles for the delivery of biopharmaceuticals” Curr. Pharm. Biotechnol. 16:291-302, 그리고 이 문헌들에서 인용된 문헌들을 참고하라.
나노입자 관련 분야
본 명세서에 기재된 면역조절 치료 조성물은 몇 가지 면에서 현재의 조성물보다 우수한 것으로 밝혀졌다. 먼저, 지질 나노입자 (LNP) 전달은 문헌에 기재된 리포좀 또는 프로타민 기반 접근법들을 포함하는 다른 제제들 보다 우수하며 추가 보강제를 필요로 하지 않는다. LNP를 사용하면 화학적으로 변형된 또는 비변형된 mRNA 조성물을 효과적으로 전달할 수 있다. 변형된 및 비변형된 LNP 제제화된 mRNA 조성물 모두는 종래의 조성물 보다 상당한 정도로 더 우수하다. 일부 구체예들에서 본 발명의 면역조절 치료 조성물은 종래의 조성물 보다 최소한 10 배, 20 배, 40 배, 50 배, 100 배, 500 배 또는 1,000 배 만큼 더 우수하다.
mRNA 백신 및 자가-복제 RNA 백신들을 비롯한, 기능적 RNA 백신들을 제조하기 위한 시도가 이루어져왔으나, 이들 RNA 백신들의 치료적 효능은 아직 완전히 확인되지 못했다. 꽤 놀랍게도, 발명자들은 본 발명의 양상들에 따라, 유의하게 개선된, 그리고 많은 면에서 개선된 항원 생성 및 중화 능력을 가지는 기능적 항체 생성을 비롯한 상승작용적 면역 반응을 가져오는 면역조절 치료 조성물을 생체내에서 전달하기 위한 일 분류의 제제들을 발견하였다. 이러한 결과는 다른 분류의 지질계 제제들에서 사용되는 mRNA 용량과 비교하여 상당히 더 낮은 용량의 mRNA가 투여되는 경우에도 구현될 수 있다. 본 발명의 제제들은 면역조절 치료제로서 기능적 mRNA 조성물의 효능을 구현하기에 충분한 예상밖의 상당한 생체내 면역 반응들을 나타내었다. 추가적으로, 자가-복제 RNA 백신은 바이러스 복제 경로에 의존하여 세포에 충분한 RNA를 전달하여 면역원성 반응을 생성한다. 본 발명의 제제들은 강한 면역 반응을 생성하기에 충분한 단백질을 생성하기 위하여 바이러스 복제를 필요로 하지 않는다. 그러므로, 본 발명의 mRNA는 자가-복제 RNA가 아니며 바이러스 복제에 필요한 성분들을 포함하지 않는다.
본 발명은, 일부 양상들에서, 지질 나노입자 (LNP) 제제들이 화학적으로 변형된 그리고 변형되지 않은 mRNA 면역조절 치료 조성물을 포함한, mRNA 조성물의 유효성을 유효하게 개선한다는 놀라운 관찰결과를 포함한다. LNP에 제제화된 면역조절 치료 조성물을 함유하는 mRNA의 효능은 몇 가지 상이한 종양 항원들을 사용하여 생체내에서 조사되었다. 개선된 면역 반응을 제공하는 것 이외에도, 본 발명의 제제들은 테스트한 다른 조성물 보다 적은 양의 항원으로 보다 신속한 면역 반응을 생성한다. 본 발명의 mRNA-LNP 제제들은 또한 다른 담체들에서 제제화된 조성물 보다 정량적으로 그리고 정성적으로 우수한 면역 반응을 생성한다. 추가적으로, 본 발명의 mRNA-LNP 제제들은 mRNA의 용량이 다른 조성물 보다 적을 때에도 다른 조성물보다 우수하다.
본 명세서에 기재된 연구들에서 사용된 LNP는 다양한 동물 모델들에서 뿐만 아니라 인간에서 siRNA를 전달하기 위해 기존에 사용되어 왔다. LNP 제제들의 siRNA 전달과 관련하여 이루어진 관찰결과들에 비추어 보아, LNP가 암 면역조절 치료 조성물에서 유용하다는 사실은 꽤 놀랍다. LNP에서 제제화된 siRNA의 치료적 전달은 통상적으로 항원 생성을 감소시키고 면역 반응을 손상시키는, 일과성 IgM 반응과 관련된 바람직하지 않은 염증 반응을 유발함이 관찰된 바 있다. siRNA에 대해 관찰된 관찰결과들과 대조적으로, 본 발명의 LNP-mRNA 제제들은 일과성 IgM 반응 보다는 예방적 치료적 방법들에 충분한, 개선된 IgG 수준들을 생성하는 것으로 본 명세서에서 증명된다.
제약학적 조성물
본 발명은 본 명세서에 기재된 mRNA 또는 나노입자 (예컨대, 지질 나노입자)를, 하나 이상의 제약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제와 조합하여 포함하는 제약학적 조성물들을 포함한다. 특정 구체예들에서, mRNA는 나노입자, 예컨대, 지질 나노입자에 존재한다. 특정 구체예들에서, mRNA 또는 나노입자는 제약학적 조성물에 존재한다. 다양한 구체예들에서, 제약학적 조성물에 존재하는 하나 이상의 mRNA는 나노입자, 예컨대, 지질 나노입자에 캡슐화된다. 특정 구체예들에서, 제 1 mRNA 대 제 2 mRNA의 몰비는 약 1:50, 약 1:25, 약 1:10, 약 1:5, 약 1:4, 약 1:3, 약 1:2, 약 1:1, 약 2:1, 약 3:1, 약 4:1, 또는 약 5:1, 약 10:1, 약 25:1 또는 약 50:1이다. 특정 구체예들에서, 제 1 mRNA 대 제 2 mRNA의 몰비는 1:1 보다 크다.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 관심 항원(Ag)을 인코드하는 mRNA 및 관심 항원에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드 (예컨대, 면역 증강제, 예컨대, STING 폴리펩티드(IP))를 인코드하는 mRNA를 포함하는 조성물을 제공하며, 이 때 관심 항원 (Ag)을 인코드하는 mRNA 및 관심 항원에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드 (예컨대, 면역 증강제, 예컨대, STING 폴리펩티드)(IP)를 인코드하는 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 또는 20:1의 Ag:IP 질량비 (또는 대안적으로, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 또는 1:20의 IP:Ag 질량비)로 제제화된다. 일부 구체예들에서, 조성물은 관심 항원을 인코드하는 mRNA 대 관심 항원에 대한 면역을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, 면역 증강제, 예컨대, STING 폴리펩티드)를, 1:1. 1.25:1, 1.50:1, 1.75:1, 2.0:1, 2.25:1, 2.50:1, 2.75:1, 3.0:1, 3.25:1, 3.50:1, 3.75:1, 4.0:1, 4.25:1, 4.50:1, 4.75:1 또는 5:1의 Ag:IP 질량비로 하여 제조된다. 일부 구체예들에서, 조성물은 관심 항원을 인코드하는 mRNA 대 관심 항원에 대한 면역을 증가시키는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, 면역 증강제, 예컨대, STING 폴리펩티드)를 5:1 질량비로 하여 제조된다 (5:1의 Ag:IP 질량비율; 또는 대안적으로, 1:5의 IP:Ag 질량비율). 일부 구체예들에서, 조성물은 관심 항원을 인코드하는 mRNA 대 관심 항원에 대한 면역을 증가시키는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, 면역 증강제, 예컨대, STING 폴리펩티드)를 10:1 질량비로 하여 제조된다 (10:1의 Ag:IP 질량비율; 또는 대안적으로, 1:10의 IP:Ag 질량비율).
일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 조성물은 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA를 포함하며, 이 때 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 및 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 또는 20:1의 KRAS:STING 질량비로, 또는 대안적으로 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10 또는 1:20의 STING:KRAS 질량비로 존재한다. 일부 구체예들에서, mRNA는 관심 항원을 인코드하는 mRNA 대 관심 항원에 대한 면역을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA (예컨대, 면역 증강제, 예컨대, STING 폴리펩티드)의, 1:1. 1.25:1, 1.50:1, 1.75:1, 2.0:1, 2.25:1, 2.50:1, 2.75:1, 3.0:1, 3.25:1, 3.50:1, 3.75:1, 4.0:1, 4.25:1, 4.50:1, 4.75:1 또는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다. 일부 구체예들에서, 상기 mRNA는 5:1의 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 대 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 질량비 (5:1의 KRAS:STING 질량비 또는 대안적으로 1:5의 STING:KRAS 질량비)로 존재한다. 일부 구체예들에서, 상기 mRNA는 10:1의 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA 대 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 질량비 (10:1의 KRAS:STING 질량비 또는 대안적으로 1:10의 STING:KRAS 질량비)로 존재한다.
제약학적 조성물들은 하나 이상의 추가 활성 물질들, 예를 들면, 치료 및/또는 예방 활성 물질들을 선택적으로 포함할 수 있다. 본 발명의 제약학적 조성물들은 멸균 및/또는 무-발열원일 수 있다. 제약학적 물질의 제제 및/또는 제조에 있어서 일반적인 고려사항은, 예를 들면, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2005 (본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함됨)에서 찾을 수 있다. 특정 구체예들에서, 제약학적 조성물은 mRNA 및 지질 나노입자, 또는 이의 복합체들을 포함한다.
본 명세서에 기재된 제약학적 조성물들의 제제들은 약리학 분야에서 공지된 또는 그 후 개발된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 제조 방법들은 활성 성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 부속 성분들과 조합하는 단계, 그리고 그 후, 필요한 경우 및/또는 바람직한 경우, 생성물을 원하는 단회- 또는 다회-용량 단위로 분할, 성형 및/또는 포장하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 제약학적 조성물에서 활성 성분의 상대량, 제약학적으로 허용가능한 부형제, 및/또는 임의의 추가 성분들은 치료되는 대상체의 신원, 크기, 및/또는 조건에 따라, 그리고 또한 조성물이 투여되는 경로에 따라 변화할 것이다. 예로서, 조성물은 0.1% 내지 100%, 예컨대, 0.5% 내지 70%, 1% 내지 30%, 5% 내지 80%, 또는 최소한 80% (w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다.
본 발명의 mRNA는 다음을 위해 하나 이상의 부형제들을 사용하여 제제화 될 수 있다: (1) 안정성을 증가; (2) 세포 형질감염을 증가; (3) 서방형 또는 지연형 방출을 가능 (예컨대, mRNA의 데포 제제로부터); (4) 생물학적 분배를 변화 (예컨대, mRNA를 특정 조직 또는 세포 유형들에 대해 표적); (5) 생체내에서 mRNA에 의해 인코드되는 폴리펩티드의 번역을 증가; 및/또는 (6) 생체내에서 mRNA에 의해 인코드되는 폴리펩티드의 방출 프로파일을 변형. 종래의 부형제들 이외에도, 가령, 본 발명의 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 희석제, 또는 다른 액체 비히클, 분산 또는 현탁 보강제, 표면 활성제, 등장화제, 증점 또는 유화제, 보존제, 부형제는, 제한 없이, 리피도이드, 리포좀, 지질 나노입자들 (예컨대, 리포좀 및 마이셀), 폴리머, 리포플렉스, 코어-쉘 나노입자들, 펩티드, 단백질, 탄수화물, mRNA로 형질감염된 세포들 (예컨대, 대상체로의 이식을 위해), 하이알루로니다아제, 나노입자 모방체 및 이의 조합을 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 제제들은 하나 이상의 부형제를, 각각을 함께 mRNA의 안정성을 증가시키고, mRNA에 의한 세포 형질감염을 증가시키고, mRNA에 의해 인코드되는 폴리펩티드의 발현을 증가시키고, 및/또는 mRNA-인코드된 폴리펩티드의 방출 프로파일을 변화시키는 양으로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 mRNA는 자기-조립된 핵산 나노입자들을 사용하여 제제화될 수 있다.
제약학적 조성물들을 제제화하기 위한 다양한 부형제 및 제약학적 조성물을 제조하기 위한 기술들은 해당 분야에 공지이다 (Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006 참고; 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함됨). 임의의 종래의 부형제 매질이, 가령, 임의의 바람직하지 않은 생물학적 효과를 생성함으로써 또는 그 외에 제약학적 조성물의 임의의 다른 성분(들)과 유해한 방식으로 상호작용함으로써 물질 또는 이의 유도체와 양립불가능한 경우를 제외하고, 종래의 부형제 매질 사용은 본 발명의 범위에 속하는 것으로 간주될 수 있다. 부형제는, 예를 들면, 다음을 포함할 수 있다: 항부착제, 항산화제, 결합제, 코팅제, 압축 보강제, 붕해제, 염료 (색), 피부연화제, 유화제, 충전제 (희석제), 필름 형성제 또는 코팅제, 활택제 (유동 증강제), 윤활제, 보존제, 프린팅 잉크, 흡착제, 현탁 또는 분산제, 감미제, 및 수화수. 예시적인 부형제에는 다음이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다: 부틸레이티드 하이드록시톨루엔 (BHT), 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트 (2염기), 칼슘 스테아레이트, 크로스카멜로스, 교차결합된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로오스, 젤라틴, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 락토오스, 마그네슘 스테아레이트, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로오스, 메틸 파라벤, 미세결정질 셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 전호화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 셸락, 실리콘 다이옥사이드, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 소듐 시트레이트, 소듐 스타치 글리콜레이트, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 수크로오스, 활석, 티타늄 다이옥사이드, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 자일리톨.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 제제들은 최소한 하나의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 본 발명의 제제에 포함될 수 있는 제약학적으로 허용가능한 염의 예에는, 산 부가염, 알칼리 또는 알칼리 토금속 염, 염기성 잔기, 가령, 아민의 무기 또는 유기산 염; 산성 잔기, 가령, 카르복시산의 알칼리 또는 유기 염; 등이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 대표적인 산 부가염에는 아세테이트, 아세트산, 아디페이트, 알지네이트, 아스코르베이트, 아스파테이트, 벤젠설포네이트, 벤젠 설폰산, 벤조에이트, 바이설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄퍼설포네이트, 시트레이트, 시클로펜테인프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로아이오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락토바이오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발러레이트 염 등이 포함된다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염에는 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등, 뿐만 아니라 비독성 암모늄, 4차 암모늄, 및 아민 양이온이 포함되며, 이는 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 제제들은 최소한 하나의 유형의 폴리뉴클레오티드를 내포할 수 있다. 비-제한적 예로서, 제제는 본 명세서에 기재된 1, 2, 3, 4, 5 또는 5개 이상의 mRNA를 내포할 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 제제들은 폴리펩티드를 인코드하는 최소한 하나의 mRNA 및 최소한 하나의 핵산 서열, 가령, siRNA, shRNA, snoRNA, 및 miRNA (그러나 이에 제한되는 것은 아님)을 내포할 수 있다.
예컨대, 비경구 투여를 위한 액체 투약형에는, 제약학적으로 허용가능한 에멀전, 마이크로에멀전, 나노에멀전, 용액, 현탁액, 시럽, 및/또는 엘릭서제가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다. 활성 성분들 이외에도, 액체 투약형은 기술 분야에서 흔히 사용되는 비활성 희석제, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알코올, 아이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-뷰틸렌 글리콜, 다이메틸폼아마이드, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자, 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라하이드로퍼퓨릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스터, 및 이의 혼합물을 내포할 수 있다. 비활성 희석제 이외에, 경구 조성물들은 보강제, 가령, 습윤제, 유화제 및/또는 현탁제를 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 특정 구체예들에서, 조성물은 가용화제 가령, CREMAPHOR®, 알콜, 오일, 변형된 오일, 글리콜, 폴리소르베이트, 사이클로덱스트린, 폴리머, 및/또는 이의 조합과 혼합된다.
주사용 제재, 예를 들어, 멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액은 적합한 분산제, 습윤제 및/또는 현탁화제를 사용하여 기술 분야의 공지 기술에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사용 제재는 비독성의 비경구적으로 허용가능한 희석제 및/또는 용매에서의 멸균 주사용 용액, 현탁액, 및/또는 에멀전, 예를 들면, 1,3-부탄다이올에서의 용액으로서 존재할 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액, U.S.P. 및 등장성 소듐 클로라이드 용액이 있다. 멸균, 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위하여 합성된 모노- 또는 다이글리세라이드를 비롯한 임의의 블랜드 고정 오일이 사용될 수 있다. 지방산, 가령, 올레산이 주사용 제재에서 사용될 수 있다. 주사용 제제는 예를 들어, 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 및/또는 사용하기 전, 멸균수 또는 다른 멸균 주사용 매체에 용해되거나 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입함으로써 멸균될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 명세서에 기재된 최소한 하나의 mRNA를 포함하는 제약학적 조성물들은 포유동물 (예컨대, 인간)에게 투여된다. 본 명세서에 제공된 제약학적 조성물에 관한 설명은 원칙적으로 인간에 투여하기에 적합한 제약학적 조성물에 관한 것이지만, 이러한 조성물은 임의의 다른 동물, 예컨대, 비-인간 포유동물에 대한 투여에 일반적으로 적합함을 숙련된 기술자는 이해할 것이다. 이러한 제약학적 조성물을 다양한 동물들에게 투여하기 적합하게 하기 위하여, 인간에 투여하기에 적합한 이러한 조성물들의 변형이 잘 알려져 있으며, 숙련된 수의학 약리학자는 단지 통상적인 실험을 통해 이러한 변형을 설계 및/또는 수행할 수 있다. 제약학적 조성물의 투여가 고려되는 대상체에는, 인간 및/또는 다른 영장류; 상업적으로 관련된 포유동물을 비롯한 포유동물, 가령, 소, 돼지, 말, 양, 고양이, 개, 생쥐, 및/또는 쥐; 및/또는 상업적으로 관련된 새, 가령, 가금류, 닭, 오리, 거위, 및/또는 칠면조를 비롯한 새가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 특정 구체예들에서, 대상체에게 본 명세서에 기재된 둘 이상의 mRNA가 제공된다. 특정 구체예들에서, 제 1 및 제 2 mRNA가 동일한 시간에 또는 상이한 시간에, 예컨대, 순차적으로 대상체에게 제공된다. 특정 구체예들에서, 제 1 및 제 2 mRNA는, 예컨대, 동일한 세포들에 의한 두 가지 mRNA 모두의 흡수를 용이하게 하기 위해, 동일한 제약학적 조성물 또는 제제로 대상체에 제공된다.
본 발명은 또한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA를 포함하는 용기를 포함하는 키트를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 키트는 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA, 뿐만 아니라 하나 이상의 관심 항원들을 인코드하는 하나 이상의 추가 mRNA를 포함하는 용기를 포함한다. 다른 구체예들에서, 키트는 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 및 하나 이상의 관심 항원들을 인코드하는 하나 이상의 mRNA를 포함하는 제 2 용기를 포함한다. 특정 구체예들에서, 면역 반응을 개선하는 mRNA 및 항원(들)을 인코드하는 mRNA(들)은 동일 또는 상이한 나노입자들 및/또는 제약학적 조성물들로 제공된다. 특정 구체예들에서, mRNA는 냉동건조(lyophilize)되거나, 건조되거나, 또는 동결-건조된다.
면역 반응 개선 방법
본 발명은 대상체, 예컨대, 인간 대상체에서 관심 항원에 대한 면역 반응 개선 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 방법은 다음: (i) 최소한 하나의 관심 항원 및 (ii) 관심 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 최소한 하나의 mRNA 구조체를 포함하는 본 발명의 조성물 (또는 이의 지질 나노입자, 또는 이의 제약학적 조성물)을 투여하는 것을 포함하며, 그 결과 관심 항원(들)에 대한 면역 반응이 개선된다. 한 구체예에서, 면역 반응을 개선하는 것은 사이토카인 생성을 자극하는 것을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 면역 반응을 개선하는 것은 세포 면역 (T 세포 반응들)을 개선하는 것, 가령, 항원-특이적 CD8+ T 세포 활성을 자극하는 것, 항원-특이적 CD4+ T 세포 활성을 자극하는 것 또는 “효과기 기억” CD62L저 T 세포의 백분율을 증가시키는 것을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 면역 반응을 개선하는 것은 체액성 면역 (B 세포 반응들)을 개선하는 것, 가령, 항원-특이적 항체 생성을 자극하는 것을 포함한다.
상기 방법의 한 구체예에서, 면역 증강제 mRNA는 I형 인터페론 경로 신호전달을 자극하는 폴리펩티드를 인코드한다 (예컨대, 면역 증강제는 폴리펩티드, 가령, STING, IRF3, IRF7 또는 본 명세서에 기재된 또 다른 임의의 면역 증강제를 인코드한다). 상기 방법의 다양한 다른 구체예에서, 면역 증강제는 NFkB 경로 신호전달을 자극하는, 염증 반응을 자극하는 또는 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극하는 폴리펩티드를 인코드한다. 한 구체예에서, 상기 방법은 I형 인터페론 경로 신호전달을 자극하는 mRNA 조성물을 대상체에 투여하기 이전에 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극하는 mRNA 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 예를 들면, 수지상 세포 발달 또는 활성을 자극하는 mRNA 조성물은 I형 인터페론 경로 신호전달을 자극하는 mRNA 조성물을 투여하기 1-30 일, 예컨대, 3 일, 5 일, 7 일, 10 일, 14 일, 21 일, 28 일 이전에 투여될 수 있다.
대상체에서 관심 항원(들)에 대한 본 발명의 면역 증강제에 의한 면역 반응 개선은 면역 반응을 평가하는 해당 분야에서 확립된, 실시예에 기재된 방법들을 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 다양한 방법들에 의해 평가될 수 있다. 예를 들면, 다양한 구체예들에서, 개선은 IFN-γ 또는 TNF-α에 대한 CD8+ 세포들의 세포내 염색 (ICS) 수준, 비장 또는 말초 CD8b+ 세포들의 백분율, 또는 비장 또는 말초 “효과기 기억” CD62L저 세포들의 백분율로 평가된다.
본 발명의 조성물들은 유효량으로 대상체에 투여된다. 일반적으로, 유효량의 조성물은 인코드되는 폴리펩티드를 세포에서 효율적으로 생성하게 할 것이다. 효율에 관한 측정치는 폴리펩티드 번역 (폴리펩티드 발현으로 나타남), mRNA 분해 수준, 및 면역 반응 지표를 포함할 수 있다.
치료 방법
대상체에서 관심 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하기 위한 본 발명의 방법들은 다양한 임상 또는 치료 분야에서 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법들은 종양을 보유한 대상체에서 항-종양 면역을 자극하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 한 양상에서, 본 발명은 필요로 하는 대상체에서 종양에 대한 면역원성 반응을 자극하는 방법에 관한 것으로, 이 방법은 대상체에게 다음: (i) 최소한 하나의 관심 종양 항원 및 (ii) 관심 종양 항원(들)에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 최소한 하나의 mRNA 구조체를 포함하는 본 발명의 조성물 (또는 이의 지질 나노입자, 또는 이의 제약학적 조성물)을 투여하는 단계를 포함하며, 그 결과 관심 종양 항원(들)에 대한 면역 반응이 개선된다. 적합한 관심 종양 항원들에는 본 명세서에 기재된 항원들이 포함된다 (예컨대, 돌연변이체 KRAS 항원들을 비롯한 종양 신생항원). 상기 방법의 한 구체예에서, 대상체에게 서열 번호: 107-130 중 어느 하나에 제시된 서열을 인코드하는 돌연변이체 KRAS 항원-STING mRNA 구조체를 투여한다.
본 발명은 또한, 대상체에게 본 명세서에 기재된 최소한 하나의 mRNA 조성물 (즉, 동일 또는 별도의 mRNA 구조체들에서 면역 증강제 mRNA 및 항원-인코딩 mRNA)을 제공하는 단계 또는 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법들을 제공한다. 관련 구체예들에서, 대상체에게 상기 mRNA(들)을 포함하는 나노입자 (예컨대, 지질 나노입자)를 제공 또는 투여한다. 추가 관련 구체예들에서, 대상체에게 본 발명의 제약학적 조성물을 제공 또는 투여한다. 특정 구체예들에서, 제약학적 조성물은 본 명세서에 기재된 항원 및 면역자극 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA(들)을 포함하거나, 또는 이러한 mRNA(들)을 포함하는 나노입자를 포함한다. 특정 구체예들에서, mRNA(들)은 나노입자, 예컨대, 지질 나노입자에 존재한다. 특정 구체예들에서, mRNA(들) 또는 나노입자는 제약학적 조성물에 존재한다.
특정 구체예들에서, 필요로 하는 대상체는 암을 진단받았거나, 또는 암 발병 위험이 있는 것으로 간주된다. 일부 구체예들에서, 암은 간 암, 결장직장암, 흑색종, 이자암, NSCLC, 자궁경부암 또는 두경부암이다. 특정 구체예들에서, 간암은 간세포 암종이다. 일부 구체예들에서, 결장직장암은 원발성 종양 또는 전이이다. 일부 구체예들에서, 암은 조혈 암 (hematopoetic cancer)이다. 일부 구체예들에서, 암은 급성 골수 백혈병, 만성 골수 백혈병, 만성 골수단핵구 백혈병, 골수형성이상 증후군 (myelodystrophic syndrome) (무반응성 빈혈 및 무반응성 혈구감소증 포함) 또는 골수증식성 신생물 또는 질환 (진성적혈구증가증, 특발성 혈소판증가증 및 원발성 골수섬유증 포함)이다. 다른 구체예들에서, 암은 혈액계 암 또는 조혈 암이다. 특정 암 유형에 대한 선택성은 (예컨대, 특정 세포 유형들을 표적하는) 적절한 LNP 제제를 해당 mRNA 구조체들 내부로 조작되는 적절한 조절 부위(들) (예컨대, 마이크로RNA)과 조합하여 사용하는 것을 통해 구현될 수 있다.
일부 구체예들에서, mRNA(들), 나노입자, 또는 제약학적 조성물은 환자에게 비경구적으로 투여된다. 특정 구체예들에서, 대상체는 포유동물, 예컨대, 인간이다. 다양한 구체예들에서, 대상체에게 유효량의 mRNA(들)을 제공한다.
상기 암 치료 방법들은 대상체에서 항-종양 반응을 개선하는 및/또는 종양에 대해 세포독성인 추가 물질들 (예컨대, 화학치료제)을 이용한 대상체의 치료를 또한 포함할 수 있다. 병용 요법에서 사용하기에 적합한 치료제들은, 단백질 티로신 키나아제 저해제를 비롯한 소형 분자 화학치료제, 뿐만 아니라 하기 자세히 논의되는 것들을 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 생물학적 항-암 물질들, 가령, 항-암 항체를 포함한다. 병용 요법은 대상체에게 항-종양 면역을 개선하는 면역 관문 억제제, 가령, PD-1 저해제, PD-L1 저해제 및 CTLA-4 저해제를 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 다른 면역 관문 조절인자들은 OX-40, OX-40L 또는 ICOS를 표적할 수 있다. 한 구체예에서, 면역 관문을 조절하는 물질은 항체이다. 또 다른 구체예에서, 면역 관문을 조절하는 물질은 단백질 또는 소형 분자 조절인자이다. 또 다른 구체예에서, 이러한 물질 (가령, mRNA)은 면역 관문의 항체 조절인자를 인코드한다. 병용 요법에서 사용될 수 있는 면역 관문 억제제들의 비-제한적 예들에는 펨브롤리주맙, 알렘투주맙, 니볼루맙, 피딜리주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, MEDI0680 및 PDR001, AMP-224, PF-06801591, BGB-A317, REGN2810, SHR-1210, TSR-042, 아피머, 아벨루맙 (MSB0010718C), 아테졸리주맙 (MPDL3280A), 두발루맙 (MEDI4736), BMS936559, 이필리무맙, 트레멜리무맙, AGEN1884, MEDI6469 및 MOXR0916이 포함된다.
본 발명의 하나 이상의 mRNA를 포함하는 제약학적 조성물은 임의의 적합한 경로로 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 조성물들은 비경구 (예컨대, 피하, 피내, 정맥내, 복강내, 근육내, 관절내, 동맥내, 활액막내, 흉골내, 척수강내, 병소내, 또는 두개내 주사, 뿐만 아니라 임의의 적합한 융합 기술), 경구, 경피- 또는 진피내, 진피간 (interdermal), 직장, 질내, 국소 (예컨대, 분말, 연고, 크림, 겔, 로션 및/또는 점안액에 의해), 점막, 코, 볼, 창자, 유리체, 종양내, 설하, 코내; 기관내 점적, 기관지 점적, 및/또는 흡입에 의해; 경구 스프레이 및/또는 분말, 코 스프레이, 및/또는 에어로졸로서, 및/또는 간문맥 카테터를 통해서를 비롯하여, 다양한 하나 이상의 경로들에 의해 투여된다. 일부 구체예들에서, 조성물은 정맥내, 근육내, 진피내, 동맥내, 종양내, 피하, 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 조성물은 근육내 투여된다. 그러나, 본 발명은 약물 전달 과학에 있어서 가능한 발달을 고려하여 임의의 적합한 경로에 의한 본 발명의 조성물들의 전달을 포함한다. 일반적으로, 가장 적절한 투여 경로는 하나 이상의 mRNA를 포함하는 제약학적 조성물의 성질 (예컨대, 다양한 신체 환경들, 가령, 혈류 및 위장관에서의 그 안정성), 및 환자의 상태 (예컨대, 환자가 특정 투여 경로들을 견딜 수 있는지 여부)를 비롯한 다양한 인자들에 따라 달라질 것이다.
특정 구체예들에서, 본 발명의 조성물들은 주어진 용량에서 약 0.0001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.0001 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.001 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.005 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg를 전달하기에 충분한 용량 수준으로 투여될 수 있으며, 이 때 1 mg/kg의 용량은 대상체 체중 1 kg 당 1 mg의 mRNA 또는 나노입자를 제공한다. 특정 구체예들에서, 본 발명의 mRNA 또는 나노입자 약 0.005 mg/kg 내지 약 5 mg/kg 용량이 투여될 수 있다.
용량은 원하는 수준의 mRNA 발현 및/또는 효과 (예컨대, 치료 효과)를 얻기 위해 동일 또는 상이한 양으로 1일 1회 이상 투여될 수 있다. 원하는 용량은, 예를 들면, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 3일마다, 매주, 2주 마다, 3주 마다, 또는 4주 마다 전달될 수 있다. 특정 구체예들에서, 원하는 용량은 다수의 투여 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14회, 또는 그 이상 투여)를 사용하여 전달될 수 있다. 일부 구체예들에서, 예를 들면, 외과 수술 이전 또는 이후에 또는 급성 질병, 장애 또는 병태의 경우 단회 용량이 투여될 수 있다. 임의의 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량, 예방적 유효량, 또는 그 외 적절한 용량 수준은, 존재하는 경우, 치료할 장애의 중증도 및 식별 (identify); 사용되는 하나 이상의 mRNA; 사용되는 구체적 조성; 환자의 연령, 체중, 전반적 건강, 성별, 및 식이; 투여 시간, 투여 경로, 및 사용되는 특정 제약학적 조성물의 배출 속도; 치료 지속시간; 사용되는 특정 제약학적 조성물과 병용하여 또는 동시에 사용되는 약물; 및 약물학 분야에 널리 공지된 유사한 인자들을 비롯한 다양한 인자들에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 면역조절 치료 조성물 RNA (예컨대, mRNA) 및 지질 나노입자들은 치료적으로 유효한 결과를 생성하는 임의의 경로로 투여될 수 있다. 이러한 경로는 진피내, 근육내, 비강내, 및/또는 피하 투여를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.본 발명은 본 발명의 RNA 조성물 및 지질 나노입자들을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법들을 제공한다. 정확한 필요량은 대상체의 종, 연령, 및 일반적인 상태, 질병의 중증도, 특정 조성물, 조성물의 투여 방식, 활성 방식, 등에 따라 대상체 마다 달라질 것이다. 본 발명의 RNA 조성물 및 지질 나노입자들은 전형적으로 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 용량 단위 형태로 제제화된다.그러나, RNA (예컨대, mRNA) 조성물의 일일 총 사용량은 건전한 의학적 판단 범위내에서 주치의에 의해 결정될 수 있음이 이해될 것이다.임의의 특정 환자에 대한 구체적인 치료적 유효량, 예방적 유효량, 또는 적절한 예상 용량 수준은, 치료할 장애 및 장애의 중증도; 사용되는 구체적 조성; 환자의 연령, 체중, 전반적 건강, 성별, 및 식이; 투여 시간, 투여 경로, 및 사용되는 화합물의 배출 속도; 치료 지속시간; 사용되는 특정 화합물과 병용하여 또는 동시에 사용되는 약물; 및 약물학 분야에 널리 공지된 유사한 인자들을 비롯한 다양한 인자들에 따라 달라질 것이다.
본 발명에서 제공되는, 본 발명의 RNA 조성물 또는 지질 나노입자의 유효량은, 10 μg 만큼 적을 수 있으며, 예를 들어, 단회 용량 또는 2회 5 μg 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 유효량은 총 10 μg-300 μg의 용량이다. 예를 들면, 유효량은 총 10 μg, 20 μg, 25 μg, 30 μg, 35 μg, 40 μg, 45 μg, 50 μg, 55 μg, 60 μg, 65 μg, 70 μg, 75 μg, 80 μg, 85 μg, 90 μg, 95 μg, 100 μg, 110 μg, 120 μg, 130 μg, 140 μg, 150 μg, 160 μg, 170 μg, 180 μg, 190 μg 또는 200 μg, 210 μg, 220 μg, 230 μg, 240 μg, 250 μg, 260 μg, 270 μg, 280 μg, 290 μg 또는 300 μg의 용량일 수 있다. 일부 구체예들에서, 유효량은 총 10 μg-300 μg의 용량이다. 일부 구체예들에서, 유효량은 총 30 μg-100 μg 또는 50 μg-200 μg의 용량이다.
일부 구체예들에서, RNA (예컨대, mRNA) 조성물 및 지질 나노입자들은 원하는 치료, 진단, 예방 또는 영상화 효과를 얻기 위해 일일 대상체 체중의 0.0001 mg/kg 내지 100 mg/kg, 0.001 mg/kg 내지 0.05 mg/kg, 0.005 mg/kg 내지 0.05 mg/kg, 0.001 mg/kg 내지 0.005 mg/kg, 0.05 mg/kg 내지 0.5 mg/kg, 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 40 mg/kg, 0.5 mg/kg 내지 30 mg/kg, 0.01 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 또는 1 mg/kg 내지 25 mg/kg를 전달하기에 충분한 용량 수준으로, 1일, 1주, 1개월 등에 1회 이상 투여될 수 있다 (예컨대, 국제 공개 특허출원 제 WO2013078199에 기재된 단위 용량 범위 참고, 본 명세서에 이의 전문이 참고문헌으로 포함됨). 원하는 용량은, 예를 들면, 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일로, 3일마다, 매주, 2주 마다, 3주 마다, 또는 4주 마다, 2개월 마다, 3개월 마다, 6개월 마다 등으로 전달될 수 있다. 특정 구체예들에서, 원하는 용량은 다수의 투여 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14회, 또는 그 이상 투여)를 사용하여 전달될 수 있다. 다회 투여가 이용되는 경우, 본 명세서에 기재된 바와 같은 분할 투약 요법이 사용될 수 있다. 예시 구체예들에서, RNA (예컨대, mRNA) 조성물은 0.0005 mg/kg 내지 0.01 mg/kg, 예컨대, 약 0.0005 mg/kg 내지 약 0.0075 mg/kg, 예컨대, 약 0.0005 mg/kg, 약 0.001 mg/kg, 약 0.002 mg/kg, 약 0.003 mg/kg, 약 0.004 mg/kg 또는 약 0.005 mg/kg을 전달하기에 충분한 용량 수준으로 투여될 수 있다.
일부 구체예들에서, RNA (예컨대, mRNA) 조성물은 0.025 mg/kg 내지 0.250 mg/kg, 0.025 mg/kg 내지 0.500 mg/kg, 0.025 mg/kg 내지 0.750 mg/kg, 또는 0.025 mg/kg 내지 1.0 mg/kg을 전달하기에 충분한 용량 수준으로 1회 또는 2회 (또는 그 이상) 투여될 수 있다.
일부 구체예들에서, RNA (예컨대, mRNA) 조성물은 총 0.0100 mg, 0.025 mg, 0.050 mg, 0.075 mg, 0.100 mg, 0.125 mg, 0.150 mg, 0.175 mg, 0.200 mg, 0.225 mg, 0.250 mg, 0.275 mg, 0.300 mg, 0.325 mg, 0.350 mg, 0.375 mg, 0.400 mg, 0.425 mg, 0.450 mg, 0.475 mg, 0.500 mg, 0.525 mg, 0.550 mg, 0.575 mg, 0.600 mg, 0.625 mg, 0.650 mg, 0.675 mg, 0.700 mg, 0.725 mg, 0.750 mg, 0.775 mg, 0.800 mg, 0.825 mg, 0.850 mg, 0.875 mg, 0.900 mg, 0.925 mg, 0.950 mg, 0.975 mg, 또는 1.0 mg의 용량을 전달하기에 충분한 용량 수준으로 또는 총 용량으로 2회 (예컨대, 0일차 및 7일차, 0일차 및 14일차, 0일차 및 21일차, 0일차 및 28일차, 0일차 및 60일차, 0일차 및 90일차, 0일차 및 120일차, 0일차 및 150일차, 0일차 및 180일차, 0일차 및 3개월 후, 0일차 및 6개월 후, 0일차 및 9개월 후, 0일차 및 12개월 후, 0일차 및 18개월 후, 0일차 및 2년 후, 0일차 및 5년 후, 또는 0일차 및 10년 후) 투여 될 수 있다. 본 발명은 보다 많은 그리고 적은 투여 용량 및 투여 빈도를 포함한다. 예를 들면, RNA (예컨대, mRNA) 조성물은 3회 또는 4회 투여될 수 있다.
일부 구체예들에서, RNA (예컨대, mRNA) 조성물 또는 이를 포함하는 지질 나노입자들은 0.010 mg, 0.025 mg, 0.100 mg 또는 0.400 mg의 총 용량을 전달하기에 충분한 용량 수준으로 또는 총 용량으로 2회 (예컨대, 0일차 및 7일차, 0일차 및 14일차, 0일차 및 21일차, 0일차 및 28일차, 0일차 및 60일차, 0일차 및 90일차, 0일차 및 120일차, 0일차 및 150일차, 0일차 및 180일차, 0일차 및 3개월 후, 0일차 및 6개월 후, 0일차 및 9개월 후, 0일차 및 12개월 후, 0일차 및 18개월 후, 0일차 및 2년 후, 0일차 및 5년 후, 또는 0일차 및 10년 후) 투여 될 수 있다.
일부 구체예들에서, 대상체를 백신화하는 방법에서 사용하기 위한 RNA (예컨대, mRNA) 조성물 또는 이를 포함하는 지질 나노입자들은 대상체를 백신화하기 위한 유효량에서 10 μg/kg 내지 400 μg/kg의 단회 용량의 핵산 백신으로 대상체에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체를 백신화하는 방법에서 사용하기 위한 RNA 조성물 또는 이를 포함하는 지질 나노입자들은 대상체를 백신화하기 위한 유효량에서 10 μg 내지 400 μg의 단회 용량의 핵산 백신으로 대상체에게 투여된다. 일부 구체예들에서, 대상체를 백신화하는 방법에서 사용하기 위한 RNA (예컨대, mRNA) 조성물 또는 이를 포함하는 지질 나노입자들은 단회 용량의 25-1000 μg (예컨대, 단회 용량의, 항원을 인코드하는 mRNA)으로 대상체에 투여된다. 일부 구체예들에서, RNA 조성물은 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000 μg의 단회 용량으로 대상체에 투여된다. 예를 들면, RNA 조성물은 25-100, 25-500, 50-100, 50-500, 50-1000, 100-500, 100-1000, 250-500, 250-1000, 또는 500-1000 μg의 단회 용량으로 대상체에 투여될 수 있다. 일부 구체예들에서, 대상체를 백신화하는 방법에서 사용하기 위한 RNA (예컨대, mRNA) 조성물 또는 이를 포함하는 지질 나노입자들은 2회 용량으로 대상체에게 투여되며, 2회 용량을 조합하면 25-1000 μg의 RNA (예컨대, mRNA) 조성물과 같다.
본 명세서에 기재된 RNA (예컨대, mRNA) 조성물 또는 이를 포함하는 지질 나노입자들은 본 명세서에 기재된 투약 형태, 가령, 비강내, 기관내, 또는 주사 (예컨대, 정맥내, 안구내, 유리체내, 근육내, 진피내, 심장내, 복강내, 및 피하)로 제제화될 수 있다.
일부 구체예들에서, 본 발명의 제약학적 조성물은 또 다른 물질, 예를 들면, 또 다른 치료제, 예방 물질, 및/또는 진단 물질과 조합하여 투여될 수 있다. "~와 조합하여”는 해당 물질이 동시에 투여되어야 한다거나 및/또는 함께 전달하기 위해 제제화되어야 함을 의미하고자 하는 것이 아니지만, 이러한 전달 방법들은 본 발명의 범위에 속한다. 예를 들면, 하나 이상의 상이한 mRNA를 포함하는 하나 이상의 조성물들은 조합하여 투여될 수 있다. 조성물들은, 하나 이상의 다른 필요한 치료제 또는 의학 절차들과 동시에, 이전에 또는 이에 후속하여 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 물질은 해당 물질에 대해 결정된 투여량 및/또는 일정으로 투여될 것이다. 일부 구체예들에서, 본 발명은 본 발명의 조성물들, 또는 이의 영상화, 진단, 또는 예방 조성물들을 신체내에서 이의 생체이용성을 개선하는, 이의 대사를 감소 및/또는 변형시키는, 이의 배출을 억제하는, 및/또는 이의 분포를 변형시키는 물질들과 조합하여 전달하는 것을 포함한다.
본 발명의 조성물들과 조합하여 투여될 수 있는 예시적인 치료제들에는 세포독성제, 화학치료제, 및 그 외 치료제들이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 세포독성제들에는, 예를 들면, 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브롬, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테니포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 다이하이드록시안트라신다이온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-디하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 메이탄시노이드, 라켈마이신, 및 이의 유사체가 포함될 수 있다. 방사성 이온들 또한 치료제로서 사용될 수 있으며, 예를 들면, 방사성 아이오딘, 스트론튬, 인, 팔라듐, 세슘, 이리듐, 코발트, 이트륨, 사마륨, 및 프라세오디뮴이 포함될 수 있다. 다른 치료제들에는, 예를 들면, 항대사제 (예컨대, 메토트렉세이트, 6머캅토퓨린, 6싸이오구아닌, 시타라빈, 및 5플루오로우라실, 및 데카르바진), 알킬화제 (예컨대, 메클로레타민, 티오테파, 클로람부실, 라켈마이신, 멜팔란, 카르무스틴, 로무스틴, 사이클로포스파미드, 부설판, 다이브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-다이클로로다이아민 플래티늄 (II) (DDP), 및 시스플라틴), 안트라사이클린 (예컨대, 다우노루비신 및 독소루비신), 항생제 (예컨대, 닥티노마이신, 블레오마이신, 미트라마이신, 및 안트라마이신), 및 항유사분열제 (예컨대, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 탁솔, 및 메이탄시노이드)가 포함될 수 있다.
병용 요법에서 이용하기 위한 특정 치료요법들 (치료제 또는 시술들)의 조합은 원하는 치료제 및/또는 시술들의 적합성 (compatibility) 및 구현하고자 하는 원하는 치료 효과를 고려할 것이다. 또한 이용되는 치료요법들이 동일한 장애에 대해 원하는 효과를 구현할 수 있고 (예를 들면, 암 치료에 유용한 조성물은 화학치료제와 동시에 투여될 수 있다), 또는 이들은 상이한 효과를 구현할 수 있음 (예컨대, 임의의 유해 효과 제어)이 이해될 것이다.
예정사 수용체 1/예정사 리간드 1 (PD-1/PD-L1)과 PD-L2 사이의 상호작용을 표적하는 면역 관문 억제제, 가령, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙은, 다양한 악성종양의 치료용으로 최근 승인되었으며 흑색종, 두경부 편평 세포 암종 (HNSCC)을 비롯한 다양한 암에 관한 임상 시험에서 현재 연구 중에 있다.
따라서, 본 발명의 한 양상은 본 발명의 지질 나노입자 또는 조성물 투여 이전에 PD-1 길항제로 사전에 치료받은 경우의 병용 요법에 관한 것이다. 또 다른 양상에서, 대상체는 본 발명의 지질 나노입자 또는 조성물 투여 이전에 PD-1에 결합하는 단클론 항체로 치료받았다. 또 다른 양상에서, 대상체는 항-PD-1 단클론 항체 치료제로 치료하기 이전에 본 발명의 지질 나노입자 또는 조성물을 투여받았다. 일부 양상들에서, 항-PD-1 단클론 항체 치료제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 또는 임의의 이의 조합을 포함한다. 일부 양상들에서, 항-PD-1 단클론 항체는 펨브롤리주맙을 포함한다.
또 다른 양상에서, 대상체는 본 발명의 지질 나노입자 또는 조성물 투여 이전에 PD-L1에 결합하는 단클론 항체로 치료받았다. 또 다른 양상에서, 대상체는 항-PD-L1 단클론 항체 치료제로 치료하기 이전에 지질 나노입자 또는 조성물이 투여된다. 일부 양상들에서, 항-PD-L1 단클론 항체 치료제는 두발루맙, 아벨루맙, MEDI473, BMS-936559, 아에졸리주맙 (aezolizumab), 또는 임의의 이의 조합을 포함한다.
일부 양상들에서, 대상체는 본 발명의 조성물들로 치료하기 이전에 CTLA-4 길항제로 치료받았다. 또 다른 양상에서, 대상체는 본 발명의 지질 나노입자 또는 조성물 투여 이전에 CTLA-4에 결합하는 단클론 항체로 사전에 치료받았다. 일부 양상들에서, 대상체는 항-CTLA-4 단클론 항체로 치료하기 이전에 지질 나노입자 또는 조성물로 치료받았다. 일부 양상들에서, 항-CTLA-4 항체 치료제는 이필리무맙 또는 트레멜리무맙을 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 발명은 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체, 또는 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연함에 사용하기 위한 제약학적 조성물을 제공하며, 이 때 상기 치료는 제 2 조성물과 조합된 조성물의 투여를 포함하고, 제 2 조성물은 관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 명세서는 개체에서 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 약제의 제조에서 지질 나노입자, 및 선택적으로 허용가능한 담체의 용도를 제공하며, 이 때 약제는 지질 나노입자 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하고 상기 치료는 관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합된 약제의 투여를 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련 양상들에서, 본 명세서는 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체, 또는 제약학적 조성물을 포함하는 용기, 및 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물의 투여 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 양상들에서, 패키지 삽입물은 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물을, 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한, 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합으로 투여하기 위한 지침들을 추가로 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 명세서는 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제, 또는 제약학적 조성물, 및 상기 약제를 단독으로 또는, 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한, 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합으로 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 양상들에서, 키트는 제 1 약제를 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 제 2 약제 이전에, 이와 동시에 또는 이에 후속하여 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함한다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 명세서는 지질 나노입자, 조성물, 또는 이의 용도, 또는 본 명세서에 기재된 지질 나노입자 또는 조성물을 포함하는 키트를 제공하며, 이 때 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항-PD1 항체이고, 이 때 항-PD1 항체는 펨브롤리주맙이다.
관련 양상들에서, 본 명세서는 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 지질 나노입자들, 또는 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 조성물들을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기를 축소 또는 감소 또는 종양 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
관련 양상들에서, 본 명세서는 대상체에게 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 지질 나노입자들, 또는 본 명세서의 임의의 전술한 또는 관련된 조성물들을 투여하는 것을 포함하는, 암을 보유한 대상체에서 항-종양 반응 유도 방법을 제공한다. 일부 양상들에서, 항-종양 반응은 T-세포 반응을 포함한다. 일부 양상들에서, T-세포 반응은 CD8+ T 세포들을 포함한다.
전술한 방법들의 일부 양상들에서, 상기 방법은 면역관문 억제제 폴리펩티드, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제 2 조성물을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제한다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체이다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항-PD1 항체이고, 이 때 항-PD1 항체는 펨브롤리주맙이다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 정맥내 주사로 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2 내지 3주 마다 1회 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2주 마다 1회 또는 3주 마다 1회 투여된다. 일부 양상들에서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 지질 나노입자 또는 이의 제약학적 조성물의 투여 이전에, 이와 동시에, 또는 이에 후속하여 투여된다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 G12D, G12V, G13D 또는 G12C에서 선택된 조직학적으로 확인된 KRAS 돌연변이를 가진다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 전이성 결장직장암을 가진다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 비소 세포 폐암 (NSCLC)을 가진다.
임의의 전술한 또는 관련된 방법들의 일부 양상들에서, 대상체는 이자암을 가진다.
임의의 전술한 또는 관련된 양상들에서, 본 명세서는 상기 지질 나노입자, 및 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 일부 양상들에서, 제약학적 조성물은 근육내 전달을 위해 제제화된다.
본 발명의 다른 구체예들
구체예1. 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물:
활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 가지는 하나 이상의 mRNA;
대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 가지는 하나 이상의 mRNA, 이 때 면역 반응은 다음을 특징으로 하는 세포성 또는 체액성 면역 반응을 포함함:
(i) I형 인터페론 경로 신호전달을 자극;
(ii) NFkB 경로 신호전달을 자극;
(iii) 염증 반응을 자극;
(iv) 사이토카인 생성을 자극;
(v) 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극; 그리고
(vi) (i)-(v)의 임의의 조합; 그리고
제약학적으로 허용가능한 담체.
구체예2. 구체예 1에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 KRAS 돌연변이임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예3. 구체예 2에 있어서, KRAS 돌연변이는 G12 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 4. 구체예 3에 있어서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, 및 G12R KRAS 돌연변이에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 5. 구체예 3에 있어서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, 및 G12C KRAS 돌연변이에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 6. 구체예 2-5 중 어느 하나에 있어서, KRAS 돌연변이는 G13 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 7. 구체예 6에 있어서, G13 KRAS 돌연변이는 G13D KRAS 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 8. 구체예 1에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 H-RAS 또는N-RAS 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 9. 구체예 1-8 중 어느 하나에 있어서, mRNA는 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 면역조절 치료 조성물.
구체예 10. 구체예 9에 있어서, 연쇄체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 11. 구체예 9에 있어서, 연쇄체는 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 12. 구체예 11에 있어서, 연쇄체는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 13. 구체예 12에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 14. 구체예 12에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 15. 구체예 1-8 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 1, 2, 3, 또는 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개의 mRNA들을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 16. 구체예 15에 있어서, 상기 조성물은 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 17. 구체예 16에 있어서, 상기 4개의 mRNA는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 인코드하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 18. 구체예 1-17 중 어느 하나에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 10-30, 15-25, 또는 20-25개 아미노산 길이를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 19. 구체예 18에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 20. 구체예 19에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 21. 구체예 1-20 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 상기 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는, 면역조절 치료 조성물.
구체예 22. 구체예 21에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 V147L, N154S, V155M, R284M, R284K, R284T, E315Q, R375A, 및 이의 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이들을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 23. 구체예 22에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 24. 구체예 22에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V147L/N154S/V155M을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 25. 구체예 22에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이들 R284M/V147L/N154S/V155M을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 26. 구체예 22에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1-10 및 164 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 27. 구체예 21-26 중 어느 하나에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 28. 구체예 1-20 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 상기 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 항시적 활성 인간 IRF3 폴리펩티드를 인코드하는, 면역조절 치료 조성물.
구체예 29. 구체예 28에 있어서, 항시적 활성 인간 IRF3 폴리펩티드는 S396D 돌연변이를 포함하는, 면역조절 치료 조성물.
구체예 30. 구체예 28에 있어서, 항시적 활성 인간 IRF3 폴리펩티드는 서열번호: 12에 제시된 아미노산 서열을 포함하는, 면역조절 치료 조성물.
구체예 31. 구체예 1-20 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 상기 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 항시적 활성 인간 IRF7 폴리펩티드를 인코드하는, 면역조절 치료 조성물.
구체예 32. 구체예 31에 있어서, 항시적 활성 인간 IRF7 폴리펩티드는 S475D, S476D, S477D, S479D, L480D, S483D, S487D, 아미노산 247-467의 결실, 아미노산 잔기 152-246의 결실, 아미노산 잔기 1-151의 결실 , 및 이의 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 33. 구체예 31에 있어서, 항시적 활성 인간 IRF7 폴리펩티드는 서열 번호: 14-18 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 34. 구체예 1-33 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 암 치료제를 추가로 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 35. 구체예 1-33 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 억제성 면역관문 폴리펩티드를 추가로 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 36. 구체예 35에 있어서, 억제성 면역관문 폴리펩티드는 PD-1, PD-L1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3으로 구성된 그룹에서 선택된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편인 면역조절 치료 조성물.
구체예 37. 구체예 1-33 중 어느 하나에 있어서, mRNA는 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 38. 구체예 37에 있어서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 39. 구체예 38에 있어서, 이온화가능한 아미노 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 40. 구체예 1-39 중 어느 하나에 있어서, 각 mRNA는 최소한 하나의 화학적 변형을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 41. 구체예 40에 있어서, 상기 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4’-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2’-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 42. 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물:
KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 가지는 하나 이상의 mRNA;
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 하나 이상의 mRNA; 및
제약학적으로 허용가능한 담체.
구체예 43. 구체예 42에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 44. 구체예 43에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 45. 구체예 42-44 중 어느 하나에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 46.
구체예 42-45 중 어느 하나에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, G12R, 및 G13D에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 47. 구체예 46에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 48. 구체예 42-47 중 어느 하나에 있어서, mRNA는 둘 이상의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 면역조절 치료 조성물.
구체예 49. 구체예 48에 있어서, 연쇄체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 50. 구체예 49에 있어서, 연쇄체는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 51. 구체예 50에 있어서, 연쇄체는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예52. 구체예 51에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예53. 구체예 51에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 54. 구체예 42-47 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 1, 2, 3, 또는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개의 mRNA들을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예55. 구체예 54에 있어서, 상기 조성물은 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예56. 구체예 54에 있어서, 상기 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예57. 구체예 42-56 중 어느 하나에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 10-30, 15-25, 또는 20-25개 아미노산 길이를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예58. 구체예 57에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예59. 구체예 58에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예60. 구체예 51에 있어서, 연쇄체는 서열번호: 42-47, 73 및 137에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예61. 구체예 51에 있어서, 상기 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 129-131, 133 및 138에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예62. 구체예 54에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 36-41, 72 및 125에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예63. 구체예 54에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예64. 구체예 55에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예65. 구체예 63에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예66. 구체예 64에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128 및 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예67. 구체예 42-66 중 어느 하나에 있어서, 각 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예68. 구체예 67에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예69. 구체예 68에서, 항시적 활성 인간 STING을 인코드하는 각 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예70. 구체예 68-69 중 어느 하나에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mNRA는 동일한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 각 mRNA는 상이한 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예71. 구체예 68-69 중 어느 하나에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 동일한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 mRNA는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA와 동일한 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예72. 구체예 68-69 중 어느 하나에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 상이한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 mRNA는 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA와 동일한 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예73. 구체예 68-72 중 어느 하나에 있어서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예74. 구체예 73에 있어서, 이온화가능한 아미노 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예75. 구체예 42-74 중 어느 하나에 있어서, 각 mRNA는 최소한 하나의 화학적 변형을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예76. 구체예 75에 있어서, 상기 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4’-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2’-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예77. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
4개 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA, 이 때 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 그리고
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 mRNA.
구체예78. 구체예 77에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하는 지질 나노입자.
구체예79. 구체예 77에 있어서, 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
구체예80. 구체예 77 내지 79 중 어느 하나에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예81. 구체예 80에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예82. 구체예 77에 있어서, 상기 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예83. 구체예 77에 있어서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 138에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예84. 구체예 77-83 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 지질 나노입자.
구체예85. 구체예 84에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예86. 구체예 84에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예87. 구체예 84에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예88. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA;
G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA;
G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA;
G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA; 및
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 mRNA.
구체예89. 구체예 88에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예90. 구체예 89에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예91. 구체예 88에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예92. 구체예 88에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128 및 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예93. 구체예 88-92 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 지질 나노입자.
구체예94. 구체예 93에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예95. 구체예 94에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예96. 구체예 94에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예97. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA; 및
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 mRNA.
구체예98. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA; 및
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 mRNA.
구체예99. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA; 및
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 mRNA.
구체예100. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 mRNA; 및
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 mRNA.
구체예101. 구체예 97-100 중 어느 하나에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예102. 구체예 101에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예103. 구체예 97에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예104. 구체예 97에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예105. 구체예 98에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예106. 구체예 98에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 127에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예107. 구체예 99에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예108. 구체예 99에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예109. 구체예 100에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 41에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예110. 구체예 100에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 128에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예111. 구체예 97-110 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 지질 나노입자.
구체예112. 구체예 111에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예113. 구체예 111에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예114. 구체예 111에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예115. 다음을 포함하는, 대상체의 치료 방법:
구체예 1-76 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물 또는 구체예 77-114 중 어느 하나의 지질 나노입자를 암을 가진 대상체에게 투여하는 단계.
구체예116.
구체예 115에 있어서, 면역조절 치료 조성물 또는 지질 나노입자는 암 치료제와 조합하여 투여되는 방법.
구체예117. 구체예 115 또는 116에 있어서, 면역조절 치료 조성물 또는 지질 나노입자는 억제성 면역관문 폴리펩티드와 조합하여 투여되는 방법.
구체예118. 구체예 117에 있어서, 억제성 면역관문 폴리펩티드는 PD-1, PD-L1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3으로 구성된 그룹에서 선택된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편인 방법.
구체예119. 구체예 115-118 중 어느 하나에 있어서, 암은 이자, 복막, 대장, 소장, 담관, 폐, 자궁내막, 난소, 생식관, 위장관, 자궁경부, 위, 요로, 결장, 직장, 및 조혈 및 림프 조직의 암에서 선택되는 방법.
구체예120. 구체예 113에 있어서, 암은 결장직장암인 방법.
구체예121. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
4개 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 1 mRNA, 이 때 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 그리고
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 제 2 mRNA,
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
구체예122. 구체예 121에 있어서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하는 지질 나노입자.
구체예123. 구체예 121에 있어서, 연쇄체는 N- 에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함하는 지질 나노입자.
구체예124. 구체예 121 내지 123 중 어느 하나에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예125. 구체예 124에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예126. 구체예 121에 있어서, 상기 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예127. 구체예 121에 있어서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 138에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예128. 구체예 121-127 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 지질 나노입자.
구체예129. 구체예 128에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예130. 구체예 128에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예131. 구체예 128에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예132. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 1 mRNA;
G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 2 mRNA;
G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 3 mRNA;
G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 4 mRNA; 및
항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 가지는 제 5 mRNA,
이 때 상기 제 1, 제 2, 제 3, 제 4 및 제 5 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
구체예133. 구체예 132에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예134. 구체예 133에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함하는 지질 나노입자.
구체예135. 구체예 132에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예136. 구체예 132에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128 및 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예137. 구체예 132-136 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 지질 나노입자.
구체예138. 구체예 137에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예139. 구체예 138에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예140. 구체예 137에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 139에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예141. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 1:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예142. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 2:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예143. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 3:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예144. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 4:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예145. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예146. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 6:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예147. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 7:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예148. 구체예 121-131 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 8:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예149. 구체예 121-140 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 9:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예150. 구체예 121-140 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 10:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 지질 나노입자.
구체예151. 다음을 포함하는 조성물:
(i) 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 1 mRNA, 이 때 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하고; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재하고;
그리고 제약학적으로 허용가능한 담체.
구체예152. 구체예 151에 있어서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 조성물.
구체예153. 구체예 151 또는 152에 있어서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 제 1 mRNA는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물.
구체예154. 구체예 151-153 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 조성물.
구체예155.
구체예 151-154 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물.
구체예156. 구체예 151-155 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5’ UTR을 포함하는 조성물.
구체예157. 구체예 151-155 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 2 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5’ UTR을 포함하는 조성물.
구체예158. 구체예 151-157 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 제 2 mRNA는 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 조성물.
구체예159. 구체예 158에 있어서, miR-122 마이크로RNA 결합 부위는 서열번호: 175에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 조성물.
구체예160. 구체예 151-159 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA 각각은 폴리 A 꼬리를 포함하는 조성물.
구체예161. 구체예 160에 있어서, 폴리 A 꼬리는 약 100개의 뉴클레오티드를 포함하는 조성물.
구체예162. 구체예 151-161 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 5’ 캡 1 구조를 포함하는 조성물.
구체예163. 구체예 151-162 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 최소한 하나의 화학적 변형을 포함하는 조성물.
구체예164. 구체예 163에 있어서, 상기 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘인 조성물.
구체예165. 구체예 164에 있어서, 상기 제 1 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되는 조성물.
구체예166. 구체예 164에 있어서, 상기 제 2 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되는 조성물.
구체예167. 구체예 151-166 중 어느 하나에 있어서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 완충용액을 포함하는 조성물.
구체예168. 다음을 포함하는 조성물:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA, 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA,
이 때 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 각각 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되고, 그리고
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재하고;
그리고 제약학적으로 허용가능한 담체.
구체예169. 구체예 168에 있어서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 완충용액을 포함하는 조성물.
구체예170. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 1:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예171. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 2:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예172. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 3:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예173. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 4:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예174. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예175. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 6:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예176. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 7:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예177. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 8:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예178. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 9:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예179. 구체예 151-169 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 10:1의 KRAS:STING 질량비로 존재하는 조성물.
구체예180. 구체예 151-179 중 어느 하나에 있어서, 지질 나노입자에 제제화되는 조성물.
구체예181. 구체예 180에 있어서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함하는 조성물.
구체예182. 구체예 181에 있어서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 및 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함하는 조성물.
구체예183. 구체예 151-182 중 어느 하나에 있어서, 근육내 전달용으로 제제화되는 조성물.
구체예184. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 1 mRNA, 이 때 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하고; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
구체예185. 구체예 184에 있어서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예186. 구체예 184 또는 185에 있어서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 제 1 mRNA는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예187. 구체예 184-186 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예188. 구체예 184-187 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예189. 구체예 184-188 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5’ UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예190. 구체예 184-188 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 2 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5’ UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예191. 구체예 184-190 중 어느 하나에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 제 2 mRNA는 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 지질 나노입자.
구체예192. 구체예 191에 있어서, miR-122 마이크로RNA 결합 부위는 서열번호: 175에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질 나노입자.
구체예193. 구체예 184-192 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 폴리 A 꼬리를 포함하는 지질 나노입자.
구체예194. 구체예 193에 있어서, 폴리 A 꼬리는 약 100개의 뉴클레오티드를 포함하는 지질 나노입자.
구체예195. 구체예 184-194 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 5’ 캡 1 구조를 포함하는 지질 나노입자.
구체예196. 구체예 184-195 중 어느 하나에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 최소한 하나의 화학적 변형을 포함하는 지질 나노입자.
구체예197. 구체예 196에 있어서, 상기 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘인 지질 나노입자.
구체예198. 구체예 197에 있어서, 상기 제 1 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되는 지질 나노입자.
구체예199. 구체예 197에 있어서, 상기 제 2 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되는 지질 나노입자.
구체예200. 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA; 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA,
이 때 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 각각 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되고, 그리고
이 때 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재한다.
구체예201. 구체예 184-200 중 어느 하나에 있어서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함하는 지질 나노입자.
구체예202. 구체예 201에 있어서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 및 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함하는 지질 나노입자.
구체예203. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 및 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
구체예204. 구체예 203에 있어서, 근육내 전달을 위해 제제화되는 제약학적 조성물.
구체예205. 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연함에 사용하기 위한, 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체, 또는 구체예 203-204 중 어느 하나의 제약학적 조성물로서, 상기 치료는 제 2 조성물과 조합한, 상기 조성물의 투여를 포함하고, 이 때 상기 제 2 조성물은 면역관문 억제제 폴리펩티드, 및 선택적인 제약학적으로 허용되는 담체를 포함함.
구체예206. 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연시키기 위한 약제의 제조에 있어서의, 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체의 용도로서, 이 때 약제는 지질 나노입자 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하고 치료는 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합한 약제의 투여를 포함함.
구체예207. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 및 선택적인 제약학적으로 허용되는 담체, 또는 구체예 203-204 중 어느 하나의 제약학적 조성물을 포함하는 용기, 및 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연시키기 위한, 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물의 투여 지침을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
구체예 208. 구체예 207에 있어서, 패키지 삽입물은 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물을, 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한, 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합으로 투여하기 위한 지침들을 추가로 포함하는 키트.
구체예 209. 개체에서 암을 치료 또는 암 진행을 지연시키기 위한, 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제, 또는 구체예 203-204 중 어느 하나의 제약학적 조성물, 및 상기 약제를 단독으로, 또는 면역관문 억제제 폴리펩티드, 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합하여 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
구체예 210. 구체예 209에 있어서, 키트는 제 1 약제를 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 제 2 약제 이전에, 이와 동시에 또는 이에 후속하여 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함하는 키트.
구체예 211. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 구체예 203-204 중 어느 하나의 조성물, 구체예 205-206의 용도 또는 구체예 207-210 중 어느 하나의 키트로서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제하는 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
구체예 212. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 구체예 203-204 중 어느 하나의 조성물, 구체예 205-206의 용도 또는 구체예 207-210 중 어느 하나의 키트로서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체인 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
구체예 213. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 구체예 203-204의 조성물, 구체예 205-206의 용도 또는 구체예 207-210 중 어느 하나의 키트로서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체인 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
구체예 214. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 구체예 203-204의 조성물, 구체예 205-206의 용도 또는 구체예 207-210 중 어느 하나의 키트로서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 더발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체인 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
구체예 215. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 구체예 203-204의 조성물, 구체예 205-206의 용도 또는 구체예 197-200 중 어느 하나의 키트로서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체인 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
구체예 216. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자, 구체예 203-204의 조성물, 구체예 205-206의 용도 또는 구체예 197-200 중 어느 하나의 키트로서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체인 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
구체예 217. 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자 또는 구체예 203-204 중 어느 하나의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기의 감소 또는 축소 또는 종양 성장 억제 방법.
구체예 218. 대상체에게 구체예 184-202 중 어느 하나의 지질 나노입자 또는 구체예 203-204 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암을 가진 대상체에서 항-종양 반응의 유도 방법.
구체예 219. 구체예 218에 있어서, 항-종양 반응은 T-세포 반응을 포함하는 방법.
구체예 220. 구체예 219에 있어서, 상기 T-세포 반응은 CD8+ T 세포들을 포함하는 방법.
구체예 221. 구체예 217-220 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 근육내 주사로 투여되는 방법.
구체예 222. 구체예 217-220 중 어느 하나에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제 2 조성물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
구체예 223. 구체예 222에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제하는 방법.
구체예 224. 구체예 223에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체인 방법.
구체예 225. 구체예 224에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체인 방법.
구체예 226. 구체예 225에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체인 방법.
구체예 227. 구체예 225에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체인 방법.
구체예 228. 구체예 225에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체인 방법.
구체예 229. 구체예 222-228 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 정맥내 주사로 투여되는 방법.
구체예 230. 구체예 229에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2 내지 3주 마다 1회 투여되는 방법.
구체예 231. 구체예 229에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2주 마다 1회 또는 3주 마다 1회 투여되는 방법.
구체예 232. 구체예 222-231 중 어느 하나에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 상기 지질 나노입자 또는 이의 제약학적 조성물의 투여 이전에, 이와 동시에, 또는 이에 후속하여 투여되는 방법.
구체예 233. 구체예 217-232 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 G12D, G12V, G13D 또는 G12C에서 선택된 조직학적으로 확인된 KRAS 돌연변이를 가지는 방법.
구체예 234. 구체예 217-233 중 어느 하나에 있어서, 종양은 전이성 결장직장암인 방법.
구체예 235. 구체예 217-233 중 어느 하나에 있어서, 종양은 비소세포 폐암 (NSCLC)인 방법.
구체예 236. 구체예 217-233 중 어느 하나에 있어서, 종양은 이자암인 방법.
구체예 237. 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물:
KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 보유하는 하나 이상의 mRNA, 및 제약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제.
구체예 238. 구체예 237에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 KRAS 돌연변이임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 239. 구체예 238에 있어서, KRAS 돌연변이는 G12 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 240. 구체예 239에 있어서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, 및 G12R KRAS 돌연변이에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 241. 구체예 239에 있어서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, 및 G12S KRAS 돌연변이에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 242. 구체예 238에 있어서, KRAS 돌연변이는 G13 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 243. 구체예 242에 있어서, G13 KRAS 돌연변이는 G13D KRAS 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 244. 구체예 237에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 H-RAS 또는N-RAS 돌연변이인 면역조절 치료 조성물.
구체예 245. 구체예 237-244 중 어느 하나에 있어서, mRNA는 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가지는 면역조절 치료 조성물.
구체예 246. 구체예 245에 있어서, 상기 펩티드 에피토프들 중 최소한 두 개는 하나의 글리신에 의해 서로 분리되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 247. 구체예 245-246 중 어느 하나에 있어서, 연쇄체는 3-10개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 248. 구체예 245-247 중 어느 하나에 있어서, 펩티드 에피토프들 모두는 하나의 글리신에 의해 서로 분리되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 249. 구체예 245-247 중 어느 하나에 있어서, 상기 펩티드 에피토프들 중 최소한 두 개는 링커없이 서로에 직접 연결되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 250. 구체예 237-249 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 암 치료제를 추가로 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 251. 구체예 237-250 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 억제성 면역관문 폴리펩티드를 추가로 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 252. 구체예 251에 있어서, 억제성 면역관문 폴리펩티드는 PD-1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3으로 구성된 그룹에서 선택된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편인 면역조절 치료 조성물.
구체예 253. 구체예 237-252 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 리콜 항원를 추가로 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 254. 구체예 253에 있어서, 리콜 항원은 감염성 질병 항원인 면역조절 치료 조성물.
구체예 255. 구체예 237-254 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 안정화제를 포함하지 않는 면역조절 치료 조성물.
구체예 256. 구체예 237-255 중 어느 하나에 있어서, mRNA는 지질 나노입자 담체에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 257. 구체예 256에 있어서, 지질 나노입자 담체는 약 20-60% 양이온성 지질: 5-25% 비-양이온성 지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 258. 구체예 257에 있어서, 양이온성 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 259. 구체예 237-258 중 어느 하나에 있어서, 상기 mRNA는 최소한 하나의 화학적 변형을 포함하는 면역조절 치료 조성물.
구체예 260. 구체예 259에 있어서, 상기 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4’-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2’-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택되는 면역조절 치료 조성물.
구체예 261. 다음을 포함하는 대상체의 치료 방법: 구체예 237-260 중 어느 하나의 면역조절 치료 조성물을 암을 가진 대상체에게 투여하는 단계.
구체예 262. 구체예 261에 있어서, 면역조절 치료 조성물은 암 치료제와 조합하여 투여되는 방법.
구체예 263. 구체예 260 또는 261에 있어서, 면역조절 치료 조성물은 억제성 면역관문 폴리펩티드와 조합하여 투여되는 방법.
구체예 264. 구체예 263에 있어서, 억제성 면역관문 폴리펩티드는 PD-1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3으로 구성된 그룹에서 선택된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편인 방법.
구체예 265. 구체예 261-264 중 어느 하나에 있어서, 암은 이자, 복막, 대장, 소장, 담관, 폐, 자궁내막, 난소, 생식관, 위장관, 자궁경부, 위, 요로, 결장, 직장, 및 조혈 및 림프 조직의 암에서 선택되는 방법.
구체예 266. 구체예 265에 있어서, 암은 결장직장암인 방법.
정의
투여: 본 명세서에서 사용되는, "투여"는 대상체 또는 환자에게 조성물을 전달하는 방법을 지칭한다. 투여 방법은 신체의 특정 영역 또는 체계로 전달을 표적 (예컨대, 특이적으로 전달)하기 위해 선택될 수 있다. 예를 들면, 투여는 비경구 (예컨대, 피하, 피내, 정맥내, 복강내, 근육내, 관절내, 동맥내, 활액막내, 흉골내, 척수강내, 병소내, 또는 두개내 주사, 뿐만 아니라 임의의 적합한 융합 기술), 경구, 경피- 또는 진피내, 진피간 (interdermal), 직장, 질내, 국소 (예컨대, 분말, 연고, 크림, 겔, 로션 및/또는 점안액에 의해), 점막, 코, 볼, 창자, 유리체, 종양내, 설하, 코내; 기관내 점적, 기관지 점적, 및/또는 흡입에 의해; 경구 스프레이 및/또는 분말, 코 스프레이, 및/또는 에어로졸로서, 및/또는 간문맥 카테터를 통한 것일 수 있다.
대략, 약: 본 명세서에서 하나 이상의 관심 값들에 대해 적용될 때 사용되는 용어 “대략” 또는 “약”은 언급된 기준 값과 유사한 값을 지칭한다. 특정 구체예들에서, 용어 “대략” 또는 “약”은, 달리 언급이 없거나 내용으로부터 명확하지 않은 한, 어느 한 방향으로 (이상으로 또는 이하로) 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 그 미만에 속하는 값들의 범위를 지칭한다 (이러한 숫자가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우는 제외).
암: 본 명세서에서 사용되는 “암”은 이상 및/또는 조절되지 않는 세포 성장에 관여하는 병태이다. 용어 암은 양성 및 악성 암을 포함한다. 예시적인 비-제한적 암들에는 부신 피질 암, 진행 암, 항문 암, 재생불량 빈혈, 담관암, 방광암, 골암, 골 전이, 뇌 종양, 뇌 암, 유방암, 소아 암, 원인 불명 암, 캐슬만 병, 자궁경부 암, 결장직장암, 자궁내막암, 식도암, 유잉계 종양, 눈 암, 담낭암, 위장관 카르시노이드 종양, 위장관 기질 종양, 임신 영양막 병, 호지킨 병, 카포시 육종, 신장 세포 암종, 후두 및 하인두 암, 급성 림프구 백혈병, 급성 골수 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수 백혈병, 만성 골수단핵구 백혈병, 골수형성이상 증후군 (무반응성 빈혈 및 무반응성 혈구감소증 포함), 골수증식성 신생물 또는 질병 (진성적혈구증가증, 특발성 혈소판증가증 및 원발성 골수섬유증 포함), 간암 (예컨대, 간세포 암종), 비-소 세포 폐 암, 소세포 폐암, 폐 카르시노이드 종양, 피부 림프종, 악성 중피종, 다수의 골수종, 척수형성이상 증후군, 비강 및 부비동 암, 코인두 암, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 구강 및 입인두 암, 골육종, 난소 암, 이자 암, 음경 암, 뇌하수체 종양s, 전립선 암, 망막모세포종, 횡문근육종, 침샘암, 성인 연조직 육종, 기저 및 편평세포 피부 암, 흑색종, 소장 암, 위 암, 고환 암, 인두 암, 흉선 암, 갑상선 암, 자궁 육종, 질 암, 음문 암, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 빌름스 종양 및 암 치료로 유발된 속발암이 포함된다. 특정 구체예들에서, 암은 간암 (예컨대, 간세포 암종) 또는 결장직장암이다. 다른 구체예들에서, 암은 혈액계 암 또는 조혈 암이다.
절단가능 링커: 본 명세서에서 사용되는 용어 “절단가능 링커”는 멀티시스트로닉 mRNA 구조체들에 통합될 수 있는 링커, 전형적으로 펩티드 링커 (예컨대, 약 5-30개 아미노산 길이, 전형적으로 약 10-20개 아미노산 길이)를 지칭하며, 그 결과 동일한 mRNA로부터 등몰 수준의 다수의 유전자들이 생성될 수 있다. 절단가능 링커들의 비-제한적 예들에는 피코르나바이러스에서 처음 발견된, F2A, P2A, T2A 및 E2A를 비롯한 2A 과의 펩티드들이 포함되며, 이들은 mRNA 구조체에 통합될 때 (예컨대, 2개 폴리펩티드 도메인들 사이) 리보솜으로 하여금 2A 요소의 C-말단에서 펩티드 결합의 합성을 중단하게 하는 기능을 하고, 이로써 2A 서열의 단부와 다음 펩티드 하류 사이를 분리시킨다.
접합된: 본 명세서에서 사용되는 용어 "접합된”은 둘 이상의 모이어티에 대해 사용될 때, 모이어티들이 직접적으로 또는 연결 물질 (linking agent)로 기능하는 하나 이상의 또 다른 모이어티를 통해 서로에 물리적으로 결합 또는 연결되어, 구조가 사용되는 조건들, 예컨대, 생리학적 조건하에서 해당 모이어티가 물리적으로 결합된 채 유지되기에 충분히 안정한 구조를 형성하는 것을 의미한다. 일부 구체예들에서, 둘 이상의 모이어티는 직접 공유 화학 결합에 의해 접합될 수 있다. 다른 구체예들에서, 둘 이상의 모이어티는 이온 결합 또는 수소 결합에 의해 접합될 수 있다.
접촉시키는 것: 본 명세서에서 사용되는 용어 “접촉시키는 것”은 둘 이상의 엔터티들 사이에 물리적 연결을 확립하는 것을 의미한다. 예를 들면, 세포를 mRNA 또는 지질 나노입자 조성물과 접촉시키는 것은 해당 세포 및 mRNA 또는 지질 나노입자가 물리적 연결을 공유하게 되는 것을 의미한다. 생체내, 시험관내, 및 체외 모두에서 세포들을 외부 엔터티들과 접촉시키는 방법들은 생물학 분야에 널리 공지되어 있다. 본 발명의 예시적 구체예들에서, 포유동물 세포를 조성물 (예컨대, 본 발명의 단리된 mRNA, 나노입자, 또는 제약학적 조성물)과 접촉시키는 단계는 생체내에서 수행된다. 예를 들면, 유기체 (예컨대, 포유동물) 내에 존재할 수 있는 세포 (예를 들면, 포유동물 세포)를 지질 나노입자 조성물과 접촉시키는 것은 임의의 적합한 투여 경로 (예컨대, 정맥내, 근육내, 진피내, 및 피하 투여를 비롯한 유기체에 대한 비경구 투여)에 의해 수행될 수 있다. 시험관내 존재하는 세포에 대하여, 조성물 (예컨대, 지질 나노입자 또는 단리된 mRNA)과 세포는, 예를 들면, 세포의 배양 배지에 조성물을 추가함으로써 접촉될 수 있고 형질감염을 포함하거나 형질감염을 가져올 수 있다. 더욱이, 하나 이상의 세포는 나노입자 조성물에 의해 접촉될 수 있다.
캡슐화하다: 본 명세서에서 사용되는 용어 “캡슐화하다”는 봉입하는 것, 둘러싸는 것 또는 감싸는 것을 의미한다. 일부 구체예들에서, 화합물, 폴리뉴클레오티드 (예컨대, mRNA), 또는 다른 조성물은 완전히 캡슐화되거나, 부분적으로 캡슐화되거나, 또는 실질적으로 캡슐화될 수 있다. 예를 들면, 일부 구체예들에서, 본 발명의 mRNA는 지질 나노입자, 예컨대, 리포좀에 캡슐화될 수 있다.
유효량: 본 명세서에서 사용되는 용어 물질의 "유효량”은 유익한 또는 원하는 결과, 예를 들면, 임상 결과를 가져오기에 충분한 양으로서, “유효량”은 이 용어가 사용되는 내용에 따라 달라진다. 예를 들면, 암을 치료하는 물질을 투여하는 것에 관한 내용에서, 물질의 유효량은, 예를 들면, 물질을 투여하지 않을 때 얻어지는 반응과 비교하여, 본 명세서에 정의된, 암의 치료를 구현하기에 충분한 양이다. 일부 구체예들에서, 치료적 유효량은 감염, 질병, 장애, 및/또는 병태에 걸린 또는 이에 취약한 대상체에게 투여시, 해당 감염, 질병, 장애, 및/또는 병태의 증상들을 치료하거나, 개선하거나, 이의 발병을 진단, 예방 및/또는 지연시키기에 충분한, 전달되는 물질 (예컨대, 핵산, 약물, 치료제, 진단제 또는 예방 물질)의 양이다.
발현: 본 명세서에서 사용되는, 핵산 서열의 “발현”은 다음 중 하나 이상이 발생되는 것을 지칭한다: (1) DNA 서열로부터 RNA 주형의 생성 (예컨대, 전사에 의해); (2) RNA 전사체의 가공 (예컨대, 5′ 캡 형성을 스플라이싱, 편집, 및/또는 3′ 단부 가공에 의해); (3) RNA의 폴리펩티드 또는 단백질로의 번역; 및 (4) 폴리펩티드 또는 단백질의 번역 후 변형.
동일성: 본 명세서에서 사용되는 용어, “동일성”은 폴리머 분자들 간의, 예컨대, 폴리뉴클레오티드 분자들 (예컨대, DNA 분자들 및/또는 RNA 분자들) 간의 및/또는 폴리펩티드 분자들 간의 전체적인 관련성을 지칭한다. 2개 폴리뉴클레오티드 서열들의 퍼센트 동일성의 계산은, 예를 들면, 최적의 비교를 위해 2개의 서열들을 정렬함으로써 수행될 수 있다 (예컨대, 최적 정렬을 위해 제 1 및 제 2 핵산 서열들 중 하나 또는 둘 모두에 갭이 도입될 수 있고 비-동일성 서열들은 비교 목적에서 무시될 수 있다). 특정 구체예들에서, 비교 목적을 위해 정렬된 서열의 길이는 기준 서열의 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 90%, 최소한 95%, 또는 100% 길이이다. 그 후 상응하는 뉴클레오티드 위치들에서의 뉴클레오티드들을 비교한다. 제 1 서열에서의 위치가 제 2 서열의 상응하는 위치에서와 동일한 뉴클레오티드에 점유되면, 이 때 이 분자들은 해당 위치에서 동일하다. 2개 서열들 간 퍼센트 동일성은, 갭의 수, 그리고 2개 서열들의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 각 갭의 길이를 고려한, 해당 서열들이 공유하는 동일한 위치들의 수의 함수이다. 2개 서열들 간의 퍼센트 동일성의 서열 비교 및 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 이루어질 수 있다. 예를 들면, 2개 뉴클레오티드 서열들 간의 퍼센트 동일성은, 가령, Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991에 기재된 방법들을 사용하여 결정될 수 있으며; 이들 각각은 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다. 예를 들면, 2개 뉴클레오티드 서열들 간의 퍼센트 동일성은 Meyers 및 Miller의 알고리즘 (CABIOS, 1989, 4:11-17)을 사용하여 결정될 수 있는데, 이 알고리즘은 PAM120 잔기 중량표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 사용하는 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)에 통합되어 있다. 뉴클레오티드 서열들 간의 퍼센트 동일성은, 대안적으로, NWSgapdna.CMP 행렬을 사용하는 GCG 소프트웨어 패키지에 있는 GAP 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다. 서열들 간의 퍼센트 동일성을 결정하기 위해 통상적으로 이용되는 방법들에는, Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48:1073 (1988)에 개시된 방법들이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니며; 이 문헌은 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다. 동일성을 결정하기 위한 기술들은 공중이 이용가능한 컴퓨터 프로그램들에 암호화되어 있다. 2개 서열들 간의 상동성을 결정하기 위한 예시적인 컴퓨터 소프트웨어에는, GCG 프로그램 패키지, Devereux 등, Nucleic Acids Research, 12(1): 387,1984, BLASTP, BLASTN, 및 FASTA, Altschul, S. F. 등, J. Molec. Biol., 215, 403, 1990이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
단편: 본 명세서에서 사용되는 “단편”은 일 부분을 지칭한다. 예를 들면, 단백질의 단편은 전장 단백질을 분해시켜 얻은, 배양된 세포들로부터 분리된 또는 재조합 DNA 기술들을 통해 얻은 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
GC-풍부: 본 명세서에서 사용되는 용어 “GC-풍부”는 구아닌 (G) 및/또는 시토신 (C) 핵염기들, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는, 폴리뉴클레오티드 (예컨대, mRNA), 또는 이의 임의의 일부 (예컨대, RNA 요소)의 핵염기 조성을 지칭하며, 이 때 GC-함량은 약 50% 이상이다. 용어 “GC-풍부”는 약 50% GC-함량을 포함하는, 유전자, 비-코드화 영역, 5’ UTR, 3’ UTR, 개방 해독 프레임, RNA 요소, 서열 모티프, 또는 임의의 별개 서열, 이의 단편, 또는 분절을 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 폴리뉴클레오티드 전체 또는 이의 일부를 지칭한다. 본 발명의 일부 구체예들에서, GC-풍부 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 임의의 일부는 전적으로 구아닌 (G) 및/또는 시토신 (C) 핵염기로 구성된다.
GC-함량: 본 명세서에서 사용되는 용어 “GC-함량”은 (DNA에서 그리고 RNA에서, 아데닌 (A) 및 티민 (T) 또는 우라실 (U), 및 이의 유도체 또는 유사체를 포함하는, 가능한 핵염기들의 총 수로부터)폴리뉴클레오티드 (예컨대, mRNA), 또는 이의 일부 (예컨대, RNA 요소)에서, 구아닌 (G) 또는 시토신 (C) 핵염기인 핵염기들, 또는 이의 유도체 또는 유사체의 백분율을 지칭한다. 용어 “GC-함량”은 유전자, 비-코드화 영역, 5’ 또는 3’ UTR, 개방 해독 프레임, RNA 요소, 서열 모티프, 또는 임의의 별개 서열, 이의 단편, 또는 분절을 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 폴리뉴클레오티드 전체 또는 이의 일부를 지칭한다.
유전학적 보강제: 본 명세서에서 사용되는 “유전학적 보강제”는, 예를 들면, 사이토카인 생성을 자극함으로써 및/또는 항원-특이적 효과기 세포들 (예컨대, CD8 T 세포들)의 생성을 자극함으로써 백신에 대한 면역 반응을 개선하는 mRNA 구조체 (예컨대, mmRNA 구조체)를 지칭한다. 유전학적 보강제 mRNA 구조체는, 예를 들면, I형 인터페론을 자극하는 (예컨대, I형 인터페론 경로 신호전달을 활성화하는) 또는 수지상 세포 발달 또는 활성을 촉진하는 폴리펩티드를 인코드할 수 있다.
이종: 본 명세서에서 사용되는, “이종”은 서열 (예컨대, 아미노산 서열 또는 아미노산 서열을 인코드하는 폴리뉴클레오티드)이 주어진 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드에 일반적으로 존재하지 않음을 나타낸다. 예를 들면, 하나의 단백질의 도메인 또는 모티프에 상응하는 아미노산 서열은 제 2 단백질에 대하여 이종일 수 있다.
소수성 아미노산: 본 명세서에서 사용되는, “소수성 아미노산”은 하전되지 않은 비극성의 측쇄를 가지는 아미노산이다. 자연 발생 소수성 아미노산들의 예들에는 알라닌 (Ala), 발린 (Val), 류신 (Leu), 아이소류신 (Ile), 프롤린 (Pro), 페닐알라닌 (Phe), 메티오닌 (Met), 및 트립토판 (Trp)이 있다.
면역 증강제: 본 명세서에서 사용되는 “면역 증강제”는, 예를 들면, 사이토카인 생성을 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) T 세포, B 세포 또는 수지상 세포 반응을 자극함으로써, 항체 생성을 자극함으로써 또는 항원-특이적 면역 세포들 (예컨대, CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포)의 생성을 자극함으로써, 예컨대, 관심 항원 (면역 증강제가 투여되는 대상체의 내인성 항원 또는 면역증강제와 함께 공동투여되는 외인성 항원)에 대한 면역 반응을 개선하는 mRNA 구조체 (예컨대, mmRNA 구조체)를 지칭한다.
개시 코돈: 본 명세서에서 사용되는 용어 “개시 코돈”은, 용어 “시작 코돈”과 호환적으로 사용되며, 리보솜에 의해 번역되는 개방 해독 프레임의 제 1 코돈을 지칭하며 연결된 아데닌-우라실-구아닌 핵염기들의 트리플렛으로 구성된다. 개시 코돈은 아데닌 (A), 우라실 (U), 및 구아닌 (G)의 첫번째 글자 코드로 표시되고 종종 간단히 “AUG”로 표기된다. 자연 mRNA가 개시 코돈으로서 AUG 이외의 코돈들을 사용할 수 있는 경우, 이는 “대체 개시 코돈”으로 본 명세서에서 지칭되며, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드들의 코돈들은 AUG 코돈을 사용한다. 번역 개시 과정 중, 개시 코돈을 포함하는 서열은 리보솜에 의해 결합되는 개시제 tRNA (Met-tRNAi Met)의 안티코돈에 대한 상보적 염기-페어링을 통해 인식된다. 개방 해독 프레임은 하나 이상의 AUG 개시 코돈을 내포할 수 있으며, 이는 본 명세서에서 “대체 개시 코돈”으로 지칭된다.
개시 코돈은 번역 개시에서 중요한 역할을 한다. 개시 코돈은 리보솜에 의해 번역되는 개방 해독 프레임의 첫번째 코돈이다. 전형적으로, 개시 코돈은 뉴클레오티드 트리플렛 AUG를 포함하지만, 일부 경우들에서 번역 개시는 별개의 뉴클레오티드들로 구성되는 다른 코돈들에서 발생할 수 있다. 진핵 생물에서 번역의 개시는 전령 RNA 분자들 (mRNA), 40S 리보좀 아단위, 번역 기전의 다른 성분들 (예컨대, 진핵생물 개시 인자; eIF) 간의 수많은 단백질-단백질, 단백질-RNA, 및 RNA-RNA 상호작용에 관여하는 다단계의 생물학적 과정이다. 현재 mRNA 번역 개시 모델은 개시-전 복합체 (대안적으로 “43S 개시-전 복합체”; “PIC”로 약칭됨)가 특정한 번역-촉진 뉴클레오티드 컨텍스트 (Kozak 서열) 내 위치하는 첫번째 AUG 코돈을 만날때까지 5′ 에서 3′ 방향으로 뉴클레오티드들을 스캔함으로써 mRNA 상의 동원 부위 (전형적으로 5’ 캡)로부터 개시 코돈으로 이동함을 상정한다 (Kozak (1989) J Cell Biol 108:229-241). PIC에 의한 스캐닝은 개시제 Met-tRNAi Met 전달 RNA의 안티코돈을 포함하는 뉴클레오티드들 그리고 mRNA의 개시 코돈을 포함하는 뉴클레오티드들 사이의 상보적 염기-페어링시 끝난다. AUG 코돈과 Met-tRNAi Met 안티코돈 사이의 생성적인 염기-페어링은 대형 60S 리보좀 아단위를 PIC에 결합시켜 번역 연장 능력이 있는 활성 리보솜을 형성하게 되는 일련의 구조적 및 생화학적 사건들을 유도한다.
삽입: 본 명세서에서 사용되는 “삽입” 또는 “부가”는 기준 서열, 예를 들면, 자연-발생 분자에서 발견되는 서열과 비교하여 분자에 대해 각각 하나 이상의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 부가를 가져오는 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 변화를 지칭한다. 일부 구체예들에서, 삽입은 대체가 될 수 있다.
삽입 부위: 본 명세서에서 사용되는, “삽입 부위”는 이종 폴리펩티드의 아미노산 서열의 삽입이 가능한 스캐폴드 폴리펩티드의 위치 또는 영역이다. 삽입 부위는 또한 폴리펩티드를 인코드하는 폴리뉴클레오티드의 위치 또는 영역 (예컨대, 스캐폴드 폴리펩티드에서 주어진 아미노산을 코드화하는 폴리뉴클레오티드의 코돈)을 지칭할 수 있는 것으로 이해된다. 일부 구체예들에서, 이종 폴리펩티드의 아미노산 서열의 스캐폴드 폴리펩티드 내부로의 삽입은 안정성 (예컨대, 입체형태 안정성), 발현 수준, 또는 스캐폴드 폴리펩티드의 전체 2차 구조에 영향을 거의 내지 전혀 미치지 않는다.
단리된: 본 명세서에서 사용되는 용어 “단리된”은 결합되어 있는 (자연에서든 또는 실험 세팅에서든) 성분들의 최소한 일부로부터 분리되어 있는 물질 또는 엔터티를 지칭한다. 단리된 물질들은 결합되어 있었던 물질을 기준으로 다양한 순도 수준을 가질 수 있다. 단리된 물질 및/또는 엔터티는 초기에 결합되어 있었던 다른 성분들의 최소한 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 그 이상으로부터 분리될 수 있다. 일부 구체예들에서, 단리된 물질은 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 이상, 또는 약 99% 이상의 순도이다. 본 명세서에서 사용될 때, 다른 성분들이 실질적으로 없는 경우, 해당 물질은 "순수"하다.
Kozak 서열: 용어 “Kozak 서열” (또한 “Kozak 공통 서열”로도 지칭됨)은 유전자 또는 개방 해독 프레임의 발현을 개선하는 번역 개시 인핸서 요소를 지칭하며, 진핵 생물에서, 이는 5’ UTR에 위치한다. Kozak 공통 서열은 최초에, 프리프로인슐린유전자의 번역시 개시 코돈 (AUG)을 둘러싼 단일 돌연변이들의 효과를 분석한 후 서열 GCCRCC로 정의되었으며, 이 때 R = 퓨린이다 (Kozak (1986) Cell 44:283-292). 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 Kozak 공통 서열, 또는 이의 유도체 또는 변형을 포함한다. (번역 인핸서 조성물들 및 이의 이용 방법들의 예들은, 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함되는 Andrews 등에 허여된 미국 등록특허 제 5,807,707; 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함되는, Chernajovsky에 허여된 미국 등록특허 제 5,723,332; 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함되는, Wilson에 허여된, 미국 등록특허 제 5,891,665를 참고하라.)
누출 스캐닝: “누출 스캐닝”으로 공지되어 있는 현상은 PIC가 개시 코돈을 우회함으로써 그리고 그 대신 대안적 또는 대체 개시 코돈이 인식될 때까지 하류로 스캐닝을 계속함으로써 발생할 수 있다. 발생 빈도에 따라, PIC에 의한 개시 코돈의 우회는 번역 효율의 감소를 가져올 수 있다. 더욱이, 이러한 하류 AUG 코돈으로부터의 번역이 발생할 수 있고, 이는 원하는 치료 반응을 유도할 수 없을 수도 있는 불필요한 이상 번역 생성물의 생성을 가져올 것이다. 일부 경우들에서, 이상 번역 생성물은 사실상 유해한 반응을 유발할 수 있다 (Kracht 등, (2017) Nat Med 23(4):501-507).
리포좀: 본 명세서에서 사용되는, “리포좀”은 수성 내부를 에워싸는 지질-내포 막을 포함하는 구조를 의미한다. 리포좀은 하나 이상의 지질 막들을 가질 수 있다. 리포좀들은 단일-층 리포좀 (또한 해당 분야에 단층구 리포좀으로도 공지됨) 및 다중-층 리포좀 (또한 해당 분야에 다층구 리포좀으로도 공지됨)을 포함한다.
전이: 본 명세서에서 사용되는 용어 “전이”는 암이 처음에 원발성 종양으로 발생된 위치로부터 신체 내 원위 위치들로 확산하는 과정을 의미한다. 이 과정의 결과로서 발생한 속발성 종양은 “전이”로서 지칭될 수 있다.
변형된: 본 명세서에서 사용되는 “변형된” 또는 “변형”은 본 명세서에서 제공되는 폴리뉴클레오티드 (예컨대, mRNA)의 조성 또는 구조의 변화 또는 변화된 상태를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드들은 화학적으로, 구조적으로, 및/또는 기능적으로를 비롯한 다양한 방식으로 변형될 수 있다. 예를 들면, 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 RNA 요소들의 통합에 의해 구조적으로 변형될 수 있으며, 이 때 RNA 요소는 하나 이상의 기능 (예컨대, 번역 조절 활성)을 제공하는 서열 및/또는 RNA 2차 구조(들)을 포함한다. 따라서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드들은 하나 이상의 변형들로 이루어질 수 있다 (예컨대, 하나 이상의 화학적, 구조적, 또는 기능적 변형들을 포함할 수 있음, 이의 임의의 조합을 포함).
mRNA: 본 명세서에서 사용되는 “mRNA”는 전령 리보핵산을 지칭한다. mRNA는 자연적으로 또는 비-자연적으로 발생할 수 있다. 예를 들면, mRNA는 변형된 및/또는 비-자연적으로 발생하는 성분들, 가령, 하나 이상의 핵염기, 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 링커들을 포함할 수 있다. mRNA는 캡 구조, 사슬 종결 뉴클레오시드, 스템 루프, 폴리A 서열, 및/또는 폴리아데닐화 신호를 포함할 수 있다. mRNA는 폴리펩티드를 인코드하는 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있다. mRNA의 번역, 예를 들면, 포유동물 세포 내부에서 mRNA의 생체내 번역은 폴리펩티드를 생성할 수 있다. 전형적으로, mRNA 분자의 염기성 성분들은 최소한 코딩 영역, 5'-비번역 영역 (5’-UTR), 3' UTR, 5' 캡 및 폴리A 서열을 포함한다.
마이크로RNA (miRNA): 본 명세서에서 사용되는 “마이크로RNA (miRNA)”는 (예컨대, RNA 침묵에 의해, 가령, mRNA의 절단, 폴리A 꼬리를 단축시킴에 의한, 및/또는 리보솜에 의한 폴리펩티드로의 mRNA의 번역 효율에 지장을 줌에 의한 mRNA의 탈안정화에 의해) 유전자 발현의 전사후 조절에서 기능할 수 있는 소형 비-코딩 RNA 분자이다. 성숙 miRNA는 전형적으로 약 22개 뉴클레오티드 길이이다.
마이크로RNA-122 (miR-122): 본 명세서에서 사용되는 “마이크로RNA-122 (miR-122)”는 달리 지시가 없는 한, 예를 들면, 인간을 비롯한 임의의 척추동물로부터 얻은 임의의 고유 miR-122를 지칭한다. miR-122는 전형적으로 간에서 높게 발현되며, 이는 지방산 대사를 조절할 수 있다. miR-122 수준은 간암, 예를 들면, 간세포 암종에서 감소된다. miR-122는 간에서 가장 높게 발현되는 miRNA들 중 하나로, 이는 CAT-1, CD320, AldoA, Hjv, Hfe, ADAM10, IGFR1, CCNG1, 및 ADAM17을 비롯한 (그러나 이에 제한되는 것은 아님) 표적들을 조절한다. 성숙 인간 miR-122는 AACGCCAUUAUCACACUAAAUA (서열 번호: 172, hsa-miR-122-3p에 해당) 또는 UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG (서열 번호: 174, hsa-miR-122-5p에 해당)의 서열을 가질 수 있다.
마이크로RNA-21 (miR-21): , “마이크로RNA-21 (miR-21)”는 달리 언급이 없는 한, 예를 들면, 인간을 비롯한 임의의 척추동물원으로부터 얻은 고유의 miR-21을 지칭한다. miR-21 수준은 정상 간과 비교하여, 간암, 예를 들면, 간세포 암종에서 증가된다. 성숙 인간 miR-21은 UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA (서열 번호: 34, has-miR-21-5p에 해당) 또는 5’ - CAACACCAGUCGAUGGGCUGU - 3’ (서열 번호: 35, has-miR-21-3p에 해당)의 서열을 가질 수 있다.
마이크로RNA-142 (miR-142): 본 명세서에서 사용되는, “마이크로RNA-142 (miR-142)”는 달리 언급이 없는 한, 예를 들면, 인간을 비롯한 임의의 척추동물원으로부터 얻은 고유 miR-142를 지칭한다. miR-142는 전형적으로 골수 세포에서 높게 발현된다. 성숙 인간 miR-142는 uguaguguuuccuacuuuaugga (서열 번호: 28, hsa-miR-142-3p에 해당) 또는 cauaaaguagaaagcacuacu (서열 번호: 30, hsa-miR-142-5p에 해당)의 서열을 가질 수 있다.
마이크로RNA (miRNA) 결합 부위: 본 명세서에서 사용되는 “마이크로RNA (miRNA) 결합 부위”는 miRNA가 결합 또는 연결되는 miRNA 표적 부위 또는 miRNA 인식 부위, 또는 임의의 뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 일부 구체예들에서, miRNA 결합 부위는 miRNA의 최소한 “씨드” 영역이 결합하는 폴리뉴클레오티드 (예컨대, mRNA)의 뉴클레오티드 위치 또는 영역을 나타낸다. “결합”은 종래의 왓슨-크릭 혼성화 규칙들을 따를 수 있고 또는 마이크로RNA 부위의 또는 이에 인접한 표적 서열과 miRNA의 안정한 결합을 반영할 수 있음을 이해하여야 한다.
miRNA 씨드: 본 명세서에서 사용되는 miRNA의 “씨드” 영역은 성숙 miRNA의 위치 2-8의 영역에 있는 서열을 지칭하며, 이는 전형적으로 miRNA 결합 부위에 대해 완전한 왓슨-크릭 상보성을 가진다. miRNA 씨드는 성숙 miRNA의 위치 2-8 또는 2-7을 포함할 수 있다. 일부 구체예들에서, miRNA 씨드는 7개 뉴클레오티드 (예컨대, 성숙 miRNA의 뉴클레오티드 2-8)를 포함할 수 있고, 이 때 해당 miRNA 결합 부위 내 씨드-상보성 부위는 miRNA 위치 1에 대면하는 아데닌 (A)에 의해 연접된다. 일부 구체예들에서, miRNA 씨드는 6개 뉴클레오티드 (예컨대, 성숙 miRNA의 뉴클레오티드 2-7)를 포함할 수 있고, 이 때 해당 miRNA 결합 부위 내 씨드-상보성 부위는 miRNA 위치 1에 대면하는 아데닌 (A)에 의해 연접된다. miRNA 결합 부위를 언급할 때, miRNA 씨드 서열은 miRNA 결합 부위에 결합하는 miRNA의 씨드 서열과 상보성 (예컨대, 부분적, 실질적, 또는 완전한 상보성)을 가지는 것으로 이해하여야 한다.
변형된: 본 명세서에서 사용되는 “변형된”은 본 발명의 분자의 변화된 상태 또는 구조를 지칭한다. 분자들은 화학적, 구조적 그리고 기능적을 포함하는 낳은 방식으로 변형될 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 mRNA 분자는, 예컨대, 자연 리보뉴클레오티드 A, U, G 및 C에 관한 것일 때 비-자연 뉴클레오시드 및/또는 뉴클레오티드의 도입에 의해 변형된다. 비일반적 뉴클레오티드, 가령, 캡 구조는 A, C, G, U 리보뉴클레오티드의 화학적 구조와 상이할 수 있으나 “변형된” 것으로 간주되지 않는다.
나노입자: 본 명세서에서 사용되는, “나노입자” 는 약 1000nm 미만 스케일에서 어느 하나의 구조적 특징을 가지는 입자를 지칭하며, 동일한 물질의 벌크 샘플과 비교하여 새로운 성질들을 나타낸다. 관례적으로, 나노입자들은 약 500 nm 미만, 약 200 nm 미만, 또는 약 100 nm의 스케일에서 어느 하나의 구조적 특징을 가진다. 또한 관례적으로, 나노입자들은 약 50 nm 내지 약 500 nm, 약 50 nm 내지 약 200 nm 또는 약 70 내지 약 120 mn의 스케일에서 어느 하나의 구조적 특징을 가진다. 예시적 구체예들에서, 나노입자는 약 1 - 1000nm 정도의 하나 이상의 크기를 가지는 입자이다. 다른 예시적 구체예들에서, 나노입자는 약 10- 500 nm 정도의 하나 이상의 크기를 가지는 입자이다. 다른 예시적 구체예들에서, 나노입자는 약 50- 200 nm 정도의 하나 이상의 크기를 가지는 입자이다. 구형 나노입자는, 예를 들면, 약 50-100 또는 70-120 나노미터의 직경을 가질 것이다. 나노입자는 대부분 종종 그 운반 및 성질과 관련하여 하나의 유닛으로 거동한다. 상응하는 벌크 물질과 나노입자들을 구별시키는 새로운 성질은 전형적으로 1000nm 이하의 크기 스케일에서, 또는 약 100nm의 크기에서 발달하지만, 나노입자들은, 예를 들면, 타원형, 관형 등의 입자에 있어서 더 큰 크기일 수 있음을 유념하여야 한다. 대부분의 분자들의 크기는 상기 개략적으로 기재한 바와 일치하지만, 개개 분자들은 통상적으로 나노입자들로 지칭되지 않는다.
핵산: 본 명세서에서 사용되는 용어 “핵산”은 가장 넓은 의미로 사용되며 뉴클레오티드의 폴리머를 포함하는 임의의 화합물 및/또는 물질을 포함한다. 이들 폴리머는 폴리뉴클레오티드로 종종 지칭된다. 본 발명의 예시적인 핵산 또는 폴리뉴클레오티드에는, 리보핵산 (RNA), 데옥시리보핵산 (DNA), DNA-RNA 하이브리드, RNAi-유도 물질, RNAi 물질, siRNA, shRNA, miRNA, 안티센스 RNA, 리보자임, 촉매 DNA, 삼중 나선 형성을 유도하는 RNA, 트레오스 핵산 (TNAs), 글리콜 핵산 (GNA), 펩티드 핵산 (PNA), 잠금 핵산 (LNA, β-D-리보 구조를 가지는 LNA, α-L-리보 구조를 가지는 α-LNA (LNA의 부분입체이성질체), 2'-아미노 작용기화된 2'-아미노-LNA, 및 2'-아미노 작용기화된 2'-아미노-α-LNA) 또는 이의 하이브리드가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
핵산 구조: 본 명세서에서 사용되는 용어 “핵산 구조” (“폴리뉴클레오티드 구조”와 호환적으로 사용됨)는 핵산 (예컨대, mRNA)을 포함하는, 연결되는 뉴클레오티드들, 이의 유도체 또는 유사체의 원자, 화학적 구성성분, 요소, 모티프, 및/또는 서열의 배열 또는 조직화를 지칭한다. 이 용어는 또한 핵산의 2-차원 또는 3-차원 상태를 지칭한다. 따라서, 용어 “RNA 구조”는 RNA 분자 (예컨대, mRNA)를 포함하는, 연결되는 뉴클레오티드, 또는 이의 유도체 또는 유사체의 원자, 화학적 구성성분, 요소, 모티프 및/또는 서열의 배열 또는 조직화를 지칭하거나 및/또는 RNA 분자의 2-차원 및/또는 3-차원 상태를 지칭한다. 핵산 구조는 본 명세서에서 조직화 복잡성 증가를 기준으로 “분자 구조”, “일차 구조”, “이차 구조”, 및 “삼차 구조로 지칭되는 4 개의 조직화 범주로 추가로 경계 표시될 수 있다.
핵염기: 본 명세서에서 사용되는 용어 “핵염기” (대안적으로 “뉴클레오티드 염기” 또는 “질소함유 염기”)는 핵산들에서 발견되는 퓨린 또는 피리미딘 헤테로사이클릭 화합물을 지칭하며, 핵산 또는 이의 일부 또는 분절에 개선된 성질들 (예컨대, 결합 친화도, 핵산분해효소 내성, 화학적 안정성)을 제공하는 자연 발생 퓨린 및 피리미딘들의 임의의 유도체 또는 유사체를 포함한다. 아데닌, 시토신, 구아닌, 티민, 및 우라실은 자연 핵산들에서 주로 발견되는 핵염기들이다. 해당 분야에 공지된 및/또는 본 명세서에 기재된 그 외 자연, 비-자연, 및/또는 합성 핵염기들이 핵산에 통합될 수 있다.
뉴클레오시드/뉴클레오티드: 본 명세서에서 사용되는 용어 “뉴클레오시드”는 핵염기 (예컨대, 퓨린 또는 피리미딘), 또는 이의 유도체 또는 유사체 (본 명세서에서 “핵염기”로도 지칭됨)에 공유 결합되어 있으나, 뉴클레오시드간 연결 그룹 (예컨대, 포스페이트 그룹)은 없는, 당 분자 (예컨대, RNA에서 리보오스 또는 DNA에서 데옥시리보오스)를 내포하는 화합물, 또는 이의 유도체 또는 유사체를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 “뉴클레오티드”는 핵산 또는 이의 일부 또는 분절에 개선된 화학적 및/또는 기능적 성질 (예컨대, 결합 친화도, 핵산분해효소 내성, 화학적 안정성)을 제공하는, 뉴클레오시드간 연결 그룹 (예컨대, 포스페이트 그룹)에 공유 결합된 뉴클레오시드, 또는 이의 임의의 유도체, 유사체, 또는 변형을 지칭한다.
개방 해독틀: 본 명세서에서 사용되는 용어 “개방 해독 프레임”은 “ORF”로 약칭되며, 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA 분자의 분절 또는 영역을 지칭한다. ORF는 비-중첩, 인-프레임 코돈들의 연속 스트레치를 포함하며 개시 코돈으로 시작하여 정지 코돈으로 끝나고, 리보솜에 의해 번역된다.
환자: 본 명세서에서 사용되는 "환자”는 특정 질병 또는 병태에 대한 치료를 찾거나 치료 필요성이 존재할 수 있는, 치료를 요하는, 치료를 받고 있는, 치료를 받게 될 대상체 또는 숙련된 전문가가 진료 중인 대상체를 지칭한다. 특정 구체예들에서, 환자는 인간 환자이다. 일부 구체예들에서, 환자는 암 (예컨대, 간암 또는 결장직장암)에 걸린 환자이다.
제약학적으로 허용가능한: 어구 “제약학적으로 허용가능한”은 적절한 의학적 판단 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응, 또는 그 외 문제 또는 합병증 없이, 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고 타당한 유익/유해 비율에 상응하는 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭하기 위해 본 출원에서 사용된다.
제약학적으로 허용가능한 부형제: 본 명세서에서 사용되는 어구 “제약학적으로 허용가능한 부형제는 환자에서 실질적으로 비독성이고 비-염증성인 성질들 가지는, 본 명세서에 기재된 화합물 이외의 임의의 성분 (예를 들면, 활성 화합물을 현탁 또는 용해가능한 비히클)을 지칭한다. 부형제는, 예를 들면, 다음을 포함할 수 있다: 항부착제, 항산화제, 결합제, 코팅제, 압축 보조제, 붕해제, 염료 (색), 피부연화제, 유화제, 충전제 (희석제), 필름 형성제 또는 코팅제, 착향제, 향료, 활택제 (유동 증강제), 윤활제, 보존제, 프린팅 잉크, 흡착제, 현탁 또는 분산제, 감미제, 및 수화수. 예시적인 부형제에는 다음이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다: 부틸레이티드 하이드록시톨루엔 (BHT), 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트 (2염기), 칼슘 스테아레이트, 크로스카멜로스, 교차결합된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로오스, 젤라틴, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 락토오스, 마그네슘 스테아레이트, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로오스, 메틸 파라벤, 미세결정질 셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 전호화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 셸락, 실리콘 다이옥사이드, 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 소듐 시트레이트, 소듐 스타치 글리콜레이트, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 수크로오스, 활석, 티타늄 다이옥사이드, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 자일리톨.
제약학적으로 허용가능한 염: 본 명세서에서 사용되는 “제약학적으로 허용가능한 염”은 상기 개시된 화합물들의 유도체를 지칭하며, 이 때 모체 화합물은 기존의 산 또는 염기 모이어티를 그 염 형태로 전환함으로써 (예컨대, 유리 염기 그룹을 적합한 유기산과 반응시킴으로써) 변형된다. 제약학적으로 허용가능한 염의 예들에는, 염기성 잔기들, 가령, 아민의 무기 또는 유기산 염; 산성 잔기, 가령, 카르복시산의 알칼리 또는 유기 염; 등이 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다. 대표적인 산 부가염에는 아세테이트, 아세트산, 아디페이트, 알지네이트, 아스코르베이트, 아스파테이트, 벤젠설포네이트, 벤젠 설폰산, 벤조에이트, 바이설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄퍼설포네이트, 시트레이트, 시클로펜테인프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로아이오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트, 락토바이오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발러레이트 염 등이 포함된다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염에는 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등, 뿐만 아니라 비독성 암모늄, 4차 암모늄, 및 아민 양이온이 포함되며, 이는 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 제약학적으로 허용가능한 염은 비-독성 무기 또는 유기산으로부터 형성된 모체 화합물의 전형적인 비-독성 염을 포함한다. 본 발명의 제약학적으로 허용가능한 염은 염기성 또는 산성 모이어티를 내포하는 모체 화합물로부터 종래의 화학적 방법들에 의해 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 물에서 또는 유기 용매에서, 또는 이 둘의 혼합물에서의 적절한 염기 또는 산의 화학양론적양과 상기 화합물들의 유리 산 또는 염기 형태들을 반응시켜 제조될 수 있으며; 일반적으로, 에터, 에틸 아세테이트, 에탄올, 아이소프로판올, 또는 아세토나이트릴과 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염들의 목록은 Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, 및 Berge 등, Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)에서 찾을 수 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 포함된다.
폴리펩티드: 본 명세서에서 사용되는 용어 “폴리펩티드” 또는 “관심 폴리펩티드”는 자연적으로 (예컨대, 분리 또는 정제) 또는 합성적으로 제조될 수 있는, 통상적으로 펩티드 결합에 의해 결합된 아미노산 잔기들의 폴리머를 지칭한다.
개시-전 복합체 (PIC): 본 명세서에서 사용되는 용어 “개시-전 복합체” (대안적으로 “43S 개시-전 복합체”; “PIC”로 약칭됨)는 40S 리보좀 아단위, 진핵 개시 인자 (eIF1, eIF1A, eIF3, eIF5), 및 eIF2-GTP-Met-tRNAi Met 3원 복합체를 포함하는 리보핵산단백질 복합체를 지칭하며, 본래 mRNA 분자의 5’ 캡에 부착할 수 있고, 부착 후에는 5’ UTR의 리보솜 스캐닝을 수행할 수 있다.
RNA 요소: 본 명세서에서 사용되는 용어 “RNA 요소”는 생물학적 기능을 제공하는 및/또는 생물학적 활성 (예컨대, 번역 조절 활성)을 가지는 RNA 분자의 일부, 단편 또는 분절을 지칭한다. 하나 이상의 RNA 요소들, 가령, 본 명세서에 기재된 것들의 통합에 의한 폴리뉴클레오티드의 변형은, 변형된 폴리뉴클레오티드에 하나 이상의 필요한 기능적 성질들을 제공한다. 본 명세서에 기재된 RNA 요소들은, 자연-발생이거나, 비-자연 발생이거나, 합성이거나, 조작되거나, 또는 이의 임의의 조합일 수 있다. 예를 들면, 조절 활성을 제공하는 자연-발생 RNA 요소들에는 바이러스, 원핵 및 진핵 생물 (예컨대, 인간)의 전사체 전반에 걸쳐 발견되는 요소들이 포함된다. RNA 요소, 특히 진핵 mRNA 및 번역된 바이러스 RNA는 세포들에서 많은 기능들을 매개함에 관여하는 것으로 밝혀졌다. 예시적인 자연 RNA 요소들에는, 번역 개시 요소 (예컨대, 내부 리보솜 유입 부위 (IRES), Kieft 등, (2001) RNA 7(2):194-206 참고), 번역 인핸서 요소 (예컨대, APP mRNA 번역 인핸서 요소, Rogers 등, (1999) J Biol Chem 274(10):6421-6431 참고), mRNA 안정성 요소 (예컨대, AU-풍부 요소 (AREs), Garneau 등, (2007) Nat Rev Mol Cell Biol 8(2):113-126 참고), 번역 억제 요소 (예컨대, Blumer 등, (2002) Mech Dev 110(1-2):97-112 참고), 단백질-결합 RNA 요소 (예컨대, 철-반응성 요소, Selezneva 등, (2013) J Mol Biol 425(18):3301-3310 참고), 세포질 폴리아데닐화 요소 (Villalba 등, (2011) Curr Opin Genet Dev 21(4):452-457 참고), 및 촉매 RNA 요소 (예컨대, 리보자임, Scott 등, (2009) Biochim Biophys Acta 1789(9-10):634-641 참고)가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.
체류 시간: 본 명세서에서 사용되는 용어 “체류 시간”은 mRNA 분자를 따라 별도의 위치 또는 배치에서 개시-전 복합체 (PIC) 또는 리보솜의 점유 시간을 지칭한다.
실질적으로: 본 명세서에서 사용되는 용어 “실질적으로”는 관심 특성 또는 성질 전체를 또는 거의 전체 정도 또는 수준을 나타내는 정성적인 상태를 지칭한다. 생물학 분야의 숙련된 기술자는, 생물학적 및 화학적 현상들이, 좀처럼, 설령 있따 하더라도 완료되지 않고 및/또는 절대 결과를 완료하기 위해 진행 또는 구현 또는 회피하지 않음을 이해할 것이다. 그러므로 용어 "실질적으로"는 본 명세서에서 많은 생물학적 및 화학적 현상에 고유한 완전성의 결핍 가능성을 포착하기 위해 사용된다.
걸린: 질병, 장애, 및/또는 병태에 "걸린" 개체는 질병, 장애, 및/또는 병태의 하나 이상의 증후들을 진단 받았거나 이들을 나타낸다.
표적화 모이어티: 본 명세서에서 사용되는 “표적화 모이어티”는 특정 세포, 조직, 및/또는 장기 유형에 나노입자를 표적할 수 있는 화합물 또는 물질이다.
치료제: 용어 “치료제”는 대상체에 투여될 때, 치료, 진단, 및/또는 예방 효과를 가지는 및/또는 원하는 생물학적 및/또는 약리학적 효과를 이끌어내는 임의의 물질을 지칭한다.
형질감염: 본 명세서에서 사용되는 "형질감염”은 세포 내로 종들 (예컨대, 폴리뉴클레오티드, 가령, mRNA)을 도입시키는 방법들을 지칭한다.
번역 조절 활성: 본 명세서에서 사용되는 용어 “번역 조절 활성” (“번역 조절 기능”과 호환적으로 사용됨)은 PIC 및/또는 리보솜의 활성을 비롯하여, 번역 장치의 활성을 조절하는 (예컨대, 조절하는, 영향을 미치는, 제어하는, 변화시키는) 생물학적 기능, 기전, 또는 과정을 지칭한다. 일부 양상들에서, 필요한 번역 조절 활성은 mRNA 번역의 번역 충실성을 촉진 및/또는 개선한다. 일부 양상들에서, 필요한 번역 조절 활성은 누출 스캐닝을 감소 및/또는 억제한다. 대상체: 본 명세서에서 사용되는 용어 “대상체”는 본 발명에 따른 조성물이, 예컨대, 실험적, 진단적, 예방적, 및/또는 치료적 목적을 위해 투여될 수 있는 임의의 유기체를 지칭한다. 전형적인 대상체들에는 동물 (예컨대, 포유동물 가령, 생쥐, 쥐, 토끼, 비-인간 영장류, 및 인간) 및/또는 식물이 포함된다. 일부 구체예들에서, 대상체는 환자일 수 있다.
치료하는 것: 본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하는 것"은 특정 감염, 질병, 장애, 및/또는 병태의 하나 이상의 증상들 또는 특징들을 부분적으로 또는 완전히 경감, 호전, 개선, 완화, 이의 발병 지연, 이의 진행 억제, 이의 중증도 감소, 및/또는 이의 발생률 감소를 지칭한다. 예를 들면, 암을 "치료하는 것"은 종양의 생존, 성장, 및/또는 확산을 억제하는 것을 지칭할 수 있다. 치료제는 질병, 장애, 및/또는 병태 징후를 나타내지 않는 대상체에게 및/또는 질병의 초기 증후만을 나타내는 대상체에게 질병, 장애, 및/또는 병태와 관련된 병리학을 발달시킬 위험을 감소시키기 위해 투여될 수 있다.
예방하는 것: 본 명세서에서 사용되는 용어 "예방하는 것"은 특정 감염, 질병, 장애, 및/또는 병태의 하나 이상의 증상들 또는 특징들의 발병을 부분적으로 또는 완전히 억제하는 것을 지칭한다.
종양: 본 명세서에서 사용되는 "종양"은 양성인지 악성인지에 관계없이 조직의 비정상적인 성장이다.
비변형된: 본 명세서에서 사용되는 “비변형된”은 임의의 방식으로 변화되기 전의 임의의 물질, 화합물 또는 분자를 지칭한다. 비변형된은, 항상 그런 것은 아니지만, 생체분자의 야생형 또는 고유형을 지칭할 수 있다. 분자들은 일련의 변형들을 거칠 수 있고 그에 따라 각 변형된 분자는 후속 변형을 위한 "비변형된" 출발 분자로 기능할 수 있다.
우리딘 함량: 용어 "우리딘 함량" 또는 "우라실 함량"은 호환가능하며 특정 핵산 서열에 존재하는 우라실 또는 우리딘의 양을 지칭한다. 우리딘 함량 또는 우라실 함량은 절대값 (서열 내 우리딘 또는 우라실의 총 수) 또는 상대값 (핵산 서열 내 핵염기들의 총 수에 대한 우리딘 또는 우라실 백분율)으로 표현될 수 있다.
우리딘-변형된 서열: 용어 "우리딘-변형된 서열"은 후보 핵산 서열의 우리딘 함량 및/또는 우리딘 패턴과 관련하여 상이한 전체 또는 국소 우리딘 함량 (보다 높거나 보다 낮은 우리딘 함량) 또는 상이한 우리딘 패턴 (예컨대, 기울기 분포 또는 집락화)을 가지는 서열 최적화된 핵산 (예컨대, 합성 mRNA 서열)을 지칭한다. 본 발명의 내용에서, 용어 "우리딘-변형된 서열" 및 "우라실-변형된 서열"은 동일하고 호환가능한 것으로 간주된다.
"고 우리딘 코돈"은 2 또는 3개 우리딘을 포함하는 코돈으로 정의되고, "저 우리딘 코돈"은 1개의 우리딘을 포함하는 코돈으로 정의되며, "우리딘 코돈 없음"은 임의의 우리딘이 없는 코돈이다. 일부 구체예들에서, 우리딘-변형된 서열은 고 우리딘 코돈의 저 우리딘 코돈으로의 치환, 고 우리딘 코돈의 우리딘 코돈 없음으로의 치환, 저 우리딘 코돈의 고 우리딘 코돈으로의 치환, 저 우리딘 코돈의 우리딘 코돈 없음으로의 치환, 우리딘 코돈 없음의 저 우리딘 코돈으로의 치환, 우리딘 코돈 없음의 고 우리딘 코돈으로의 치환 및 이의 조합을 포함한다. 일부 구체예들에서, 고 우리딘 코돈은 또 다른 고 우리딘 코돈으로 대체될 수 있다. 일부 구체예들에서, 저 우리딘 코돈은 또 다른 저 우리딘 코돈으로 대체될 수 있다. 일부 구체예들에서, 저 우리딘 코돈 없음은 또 다른 저 우리딘 코돈으로 대체될 수 있다. 우리딘-변형된 서열은 우리딘이 풍부하거나 우리딘이 희박할 수 있다.
우리딘 풍부한: 본 명세서에서 사용되는 용어 "우리딘 풍부한" 및 문법적 변화형은 상응하는 후보 핵산 서열의 우리딘 함량에 대한 열 최적화된 핵산 (예컨대, 합성 mRNA 서열)에서의 우리딘 함량 (절대값 또는 백분율 값으로 표현됨) 증가를 지칭한다. 우리딘 풍부화는 후보 핵산 서열 내 코돈들을 우리딘 핵염기를 더 적게 내포하는 균등한 코돈들로 치환함으로써 수행될 수 있다. 우리딘 풍부화는 전체 (즉, 후보 핵산 서열의 전체 길이에 비례함) 또는 국소 (즉, 후보 핵산 서열의 하위서열 또는 영역에 비례함) 일 수 있다.
우리딘 희박한: 본 명세서에서 사용되는 용어 "우리딘 희박한" 및 문법적 변화형은 상응하는 후보 핵산 서열의 우리딘 함량에 대한 열 최적화된 핵산 (예컨대, 합성 mRNA 서열)에서의 우리딘 함량 (절대값 또는 백분율 값으로 표현됨) 감소를 지칭한다. 우리딘 희박화는 후보 핵산 서열 내 코돈들을 우리딘 핵염기를 더 적게 내포하는 균등한 코돈들로 치환함으로써 수행될 수 있다. 우리딘 희박화는 전체 (즉, 후보 핵산 서열의 전체 길이에 비례함) 또는 국소 (즉, 후보 핵산 서열의 하위서열 또는 영역에 비례함) 일 수 있다.
균등물 및 범위
해당 기술 분야의 숙련된 기술자들은 통상적인 실험을 통해 본 출원에 기재된 본 발명에 따른 특정 구체예들에 대한 많은 균등예들을 인식 또는 알 수 있을 것이다. 본 발명의 범위가 하기 설명으로 제한되는 것은 아니며, 그보다는 첨부한 청구범위에 제시된 바와 같다.
청구범위에서, 관사, 가령, “하나(a)”, “하나 (an)” 및 “그것”은 내용상 반대 또는 달리 자명하게 나타나 있지 않은 한, 하나 또는 하나 이상을 의미할 수 있다. 그룹의 하나 또는 그 이상의 구성원들 사이에 "또는"을 포함하는 청구범위 또는 상세한 설명은, 내용상 역으로 명시되지 않거나 달리 내용으로부터 자명하지 않는 한, 그룹 구성원들 중 하나, 하나 이상, 또는 모두가 주어진 생성물 또는 과정에서 존재하거나, 사용되거나, 또는 다른 방식으로 관련되는 경우 만족되는 것으로 고려된다. 본 발명은 그룹 중 정확히 하나의 구성원이 주어진 생성물 또는 과정에서 존재하거나, 사용되거나, 또는 다른 방식으로 관련되는 구체예들을 포함한다. 본 발명은 그룹 구성원들 중 하나 이상 또는 모두가 주어진 생성물 또는 과정에서 존재하거나, 사용되거나, 또는 다른 방식으로 관련되는 구체예들을 포함한다.
또한 용어 “포함하는”, "포함하다 (comprise, comprises)", "가지는 (having)", "가지다 (have, has)"는 추가 요소 또는 단계들의 포함에 개방되어 있고 이를 허용하지만 이를 필요로 하지 않음을 의미함을 유의하라. 그러므로 이러한 용어들이 본 명세서에서 사용될 때, 용어 “~로 구성된" 또한 포함되고 개시된다.
범위가 주어지는 경우, 끝점이 포함된다. 더욱이, 달리 지시가 없는 한 또는 발명의 내용 및 해당 분야의 통상의 기술자가 이해하는 것으로부터 자명하지 않은 한, 범우로 표현된 값들은, 내용에서 명확히 달리 언급이 없는 한, 발명의 상이한 구체예들에서 언급된 범위 내 임의의 특정 값 또는 하위범위를 범위의 하한 단위의 10분의 1까지 가정할 수 있음을 이해하여야 한다.
모든 인용된 출처들, 예를 들면, 본 명세서에서 인용된 참고문헌 간행물, 데이터베이스, 데이터베이스 엔트리, 및 기술분야는 인용문헌에 명시적으로 언급되지 않은 경우에도 본 명세서에 참고문헌으로 포함된다. 인용 출처와 본 명세서의 설명이 상충하는 경우, 본 명세서의 설명이 우선하여야 한다.
실시예
본 발명은 하기 실시예를 참고하면 더욱 완전히 이해될 것이다. 그러나 이 실시예들은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서에 기재된 실시예 및 구체예들은 단지 설명을 위한 것일 뿐이며, 숙련된 기술자는 이들에 비추어 다양한 변형 또는 변화를 제시할 수 있을 것이며 이러한 다양한 변형 또는 변화는 본 출원의 사상 및 범위 그리고 첨부된 청구범위에 속함이 이해된다.
실시예 1: STING 면역 증강제 mRNA 구조체
본 실시예에서, 인간 STING의 항시적 활성화 형태들을 인코드한 일련의 mmRNA 구조체들이 제조되었으며 이의 인터페론-β (IFN-β) 생성을 자극하는 이들의 능력에 대해 테스트하였다. 이러한 구조체들에 의해 인코드된 인간 STING 단백질은 하나 이상의 점 돌연변이의 도입을 통해 항시적으로 활성화되었다. 다음과 같은 단일 또는 조합 점 돌연변이들을 테스트하였다: (i) V155M; (ii) R284T; (iii) V147L/N154S/V155M; 및 (iv) R284M/V147L/N154S/V155M. 이들 구조체들은 탐지를 용이하게 하기 위하여 전형적으로 또한 N-말단 또는 C-말단에서 에피토프 태그를 인코드하였다. 상이한 에피토프 태그들을 테스트하였다 (FLAG, Myc, CT, HA, V5). 추가적으로, 모든 구조체들은 Cap 1 5’ Cap (7mG(5')ppp(5')NlmpNp), 5’ UTR, 3’ UTR, 폴리 A 꼬리의 100개 뉴클레오티드를 내포하였으며 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ)으로 완전히 변형되었다. 에피토프 태그가 없는 대표적인 항시적 활성 인간 STING 구조체의 ORF 아미노산 서열들은 서열 번호: 1-10에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 5’ UTR이 서열 번호: 21에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 22에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 miR-122 및 miR-142.3p 결합 부위들을 포함하는 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 23에 제시된다.
항시적 활성 STING 구조체들이 IFN-β 생성을 자극할 수 있는지 여부를 결정하기 위하여, 구조체들을 인간 TF1a 세포들에 형질감염시켰다. 야생형 (비-항시적 활성) 인간 및 생쥐 STING 구조체들을 음성 대조로 사용하였다. 2만 5천개 세포들/웰을 96 웰 플레이트에 도말하였으며 리포펙타민 2000을 사용하여 이들에 mmRNA 구조체들 (250 ng)을 형질감염시켰다. 24 및 48 시간 후, 상청액들을 수확하고, IFN-β 수준을 표준 ELISA로 결정하였다. 결과는 도 1에 제시되며, 이는 항시적 활성 STING 구조체들이 야생형 (비-항시적 활성) 인간 및 생쥐 STING 대조에 비하여 IFN-β생성을 자극하였음을 나타낸다. 4개 돌연변이체 STING 구조체들 모두가 IFN-β생성을 자극하였으며, V155M 돌연변이체 및 R284T 돌연변이체는 최고 활성을 보여주었다. 이러한 결과들은 IFN-β생성 자극을 통해 면역 반응을 개선하는 항시적 활성 STING mRNA 구조체들의 능력을 나타낸다.
제 2 실험 세트에서, 전사가 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)에 의해 추진되었던 리포터 유전자들을 사용하여 STING KO 리포터 생쥐 세포주에서 ISRE를 활성화시키는 항시적 활성 STING mRNA 구조체들의 패널의 능력을 테스트하였다. 결과는 도 2에 제시되며, 항시적 활성 STING 구조체들이 리포터 유전자 발현을 자극하였음을 나타내며, 이는 이 구조체들이 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)를 활성화시킬 수 있었음을 나타내는 것이다.
실시예 2: IRF3 및 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체
본 실시예에서, IRF3 또는 IRF7의 항시적 활성화 형태들을 인코드한 일련의 mmRNA 구조체들을 제조하고 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)를 활성화시키는 이들의 능력에 대해 테스트하였다. 에피토프 태그가 없는, S396D 점 돌연변이를 포함하는, 대표적인 항시적 활성 생쥐 및 인간 IRF3 구조체들의 ORF 아미노산 서열들은 서열 번호: 11-12에 제시된다. 에피토프 태그가 없는 야생형 인간 IRF7 구조체의 ORF 아미노산 서열은 서열 번호: 13에 제시된다. 에피토프 태그가 없는 대표적인 항시적 활성 인간 IRF7 구조체의 ORF 아미노산 서열들은 서열 번호: 14-18에 제시된다. 에피토프 태그가 없는, 대표적인 절두된 인간 IRF7 구조체들 (불활성 “영” 돌연변이들)의 ORF 아미노산 서열들은 서열 번호: 19-20에 제시된다. 이들 구조체들은 탐지를 용이하게 하기 위하여 전형적으로 또한 N-말단 또는 C-말단에서 에피토프 태그를 인코드하였다. 상이한 에피토프 태그들을 테스트하였다 (FLAG, Myc, CT, HA, V5). 추가적으로, 모든 구조체들은 Cap 1 5’ Cap (7mG(5')ppp(5')NlmpNp), 5’ UTR, 3’ UTR, 폴리 A 꼬리의 100개 뉴클레오티드를 내포하였으며 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ)으로 완전히 변형되었다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 5’ UTR이 서열 번호: 21에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 22에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 miR-122 및 miR-142.3p 결합 부위들을 포함하는 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 23에 제시된다.
인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)에 의해 전사가 추진되었던 리포터 유전자를 사용하여 ISRE를 활성화시키는 항시적 활성 IRF3 및 IRF7 mRNA 구조체들의 능력을 테스트하였다. 결과는 도 3A-3B에 제시되며, 항시적 활성 IRF3 구조체들 (도 3A) 및 항시적 활성 IRF7 구조체들 (도 3B)이 리포터 유전자 발현을 자극하였음을 나타내며, 이는 이 구조체들이 인터페론-민감성 반응 요소 (ISRE)를 활성화시킬 수 있었음을 나타내는 것이다.
실시예 3: IKKβ, cFLIP 및 RIPK1 면역 증강제 mRNA 구조체
본 실시예에서, NFkB 신호전달 경로에 의해 전사가 추진되었던 루시페라제 리포터 유전자를 사용하여 NFkB 신호전달을 활성화시키는 항시적 활성 IKKβ, cFLIP 및 RIPK1 mRNA 구조체의 능력을 테스트하였다.
항시적 활성 IKKβ 구조체는 다음 2가지 점 돌연변이들을 포함하였다: S177E/S181E. 항시적 활성 IKKα 또는 IKKβ 구조체들은 PEST 돌연변이들을 포함하였다. 에피토프 태그가 없는 항시적 활성 IKKβ 구조체들의 ORF 아미노산 서열은 서열 번호: 87-90에 제시된다. PEST 돌연변이를 포함하고 에피토프 태그가 없는 항시적 활성 IKKα 또는 IKKβ 구조체들의 ORF 아미노산 서열은 서열 번호: 91-98에 제시된다. 항시적 활성 cFLIP 구조체들은 cFLIP-L, cFLIP-S (aa 1-227), cFLIP p22 (aa 1-198), cFLIP p43 (aa 1-376) 또는 cFLIP p12 (aa 377-480)를 포함하였다. 에피토프 태그가 없는 cFLIP 구조체들의 ORF 아미노산 서열은 서열 번호: 82-86에 제시된다. 다양한 항시적 활성 RIPK1 구조체들의 구조들은, 예를 들면, Yatim, N. 등 (2015) Science 350:328-334 또는 Orozco, S. 등 (2014) Cell Death Differ. 21:1511-1521에 상세히 기재되어 있다. 에피토프 태그가 없는 항시적 활성 RIPK1 구조체의 ORF 아미노산 서열들은 서열 번호: 99-104에 제시된다. 개방 해독 프레임 이외에도, 모든 구조체들은 Cap 1 5’ Cap (7mG(5')ppp(5')NlmpNp), 5’ UTR, 3’ UTR, 폴리 A 꼬리의 100개 뉴클레오티드를 내포하였으며 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ)으로 완전히 변형되었다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 5’ UTR이 서열 번호: 21에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 22에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 miR-122 및 miR-142.3p 결합 부위들을 포함하는 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 23에 제시된다.
첫번째 일련의 실험들에서, NFkB -luc 리포터 유전자와 함께 cFLIP 또는 IKKβ 구조체들 (12.5 ng RNA)을 B16F10, MC38 또는 HEK293 세포들에 형질감염시켰으며, NFkB 신호전달의 활성화 지표로서 형질감염 24시간 후에 Dual Luc 분석을 수행하였다. 결과는 도 4에 제시되며, 항시적 활성 cFLIP 및 IKKβ 구조체들이 리포터 유전자 발현을 자극하였음을 나타내며, 이는 이 구조체들이 NFkB 신호전달 경로를 활성화시킬 수 있었음을 나타내는 것이다. 두번째 일련의 실험들에서, NFkB -luc 리포터 유전자와 함께 RIPK1 구조체들을 B16F10 세포들에 형질감염시켰으며, NFkB 신호전달의 활성화 지표로서 형질감염 24시간 후에 Dual Luc 분석을 수행하였다. 결과는 도 5에 제시되며, 항시적 활성 RIPK1 구조체들이 리포터 유전자 발현을 자극하였음을 나타내며, 이는 이 구조체들이 NFkB 신호전달 경로를 활성화시킬 수 있었음을 나타내는 것이다.
실시예 4: DIABLO 면역 증강제 mRNA 구조체
본 실시예에서, DIABLO를 인코드한 일련의 mmRNA 구조체들을 제조하고 사이토카인 생성을 유도하는 이들의 능력에 대해 테스트하였다. 이들 구조체들은 탐지를 용이하게 하기 위하여 전형적으로 또한 N-말단 또는 C-말단에서 에피토프 태그를 인코드하였다. 상이한 에피토프 태그들을 테스트하였다 (FLAG, Myc, CT, HA, V5). 추가적으로, 모든 구조체들은 Cap 1 5’ Cap (7mG(5')ppp(5')NlmpNp), 5’ UTR, 3’ UTR, 폴리 A 꼬리의 100개 뉴클레오티드를 내포하였으며 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ)으로 완전히 변형되었다. 에피토프 태그가 없는 DIABLO 구조체들의 ORF 아미노산 서열은 서열 번호: 106-113에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 5’ UTR이 서열 번호: 21에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 22에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 miR-122 및 miR-142.3p 결합 부위들을 포함하는 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 23에 제시된다.
DIABLO 구조체들이 사이토카인 생성을 유도할 수 있는지 여부를 결정하기 위하여, 구조체들을 SKOV3 세포들에 형질감염시켰다. 1만개 세포들/웰을 96 웰 플레이트에 도말하였으며 리포펙타민 2000을 사용하여 이들에 mmRNA 구조체들을 형질감염시켰다. SKOV3 세포들에서 DIABLO mmRNA 구조체들에 의한 사이토카인 생성의 자극을 측정하였다. TNF-α에 대해 도 6 그리고 인터루킨 6 (IL-6)에 대해 도 7에 도시된 결과들은, 수많은 DIABLO mmRNA 구조체들이 SKOV3 세포들에 의한 사이토카인의 생성을 자극함을 나타낸다.
실시예 5: 면역 증강제 mRNA는 MC38 암 백신 반응을 개선한다
본 실시예에서, STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체들과 함께 사용된 MC38 mRNA-계 암 백신에 대한 반응의 효능 및 내구성을 조사하였다. MC38 쥐과 종양 모델은 항-종양 T 세포 반응들을 자극할 수 있는 네오에피토프를 내포하는 면역원성 돌연변이체 펩티드들을 확인하기 위해 사용된 바 있다 (예컨대, Yadav, M. 등 (2014) Nature 515:572-576 참고). 그러므로, 종양 네오에피토프에 대한 강하고 지속적인 면역 반응을 초래하는 암 백신접종법이 매우 바람직하다.
본 실시예에서 사용된 MC38 백신은 Adpgk, Dpagt1, 및 Reps1로부터 유래한 종양 네오에피토프를 내포하는 3개의 25량체 돌연변이체 펩티드들의 ADR 연쇄체를 인코드하는 mRNA 구조체였다 (이 백신은 또한 본 명세서에서 ADRvax로도 지칭된다). 이 mRNA 구조체는 서열 번호: 120에 제시된 개방 해독 프레임을 인코드하며, 또한 용이한 탐지를 위해 N-말단 His-태그를 포함한다. 생쥐를 0일차 및 14일차에, 대조 mRNA 구조체 (NTFIX), 또는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체 (0.25 mg/kg의 용량으로)와 조합하여 ADRvax mRNA 백신 (0.25 mg/kg의 용량으로)으로 근육내 면역화하였다. 항시적 활성 STING 면역 증강제는 V155M 돌연변이 (서열 번호: 1에 상응하는 생쥐 버전)를 내포하였다. 항시적 활성 IRF3 면역 증강제는 S396D 돌연변이 (서열 번호: 12에 상응함)를 내포하였다. 항시적 활성 IRF7 면역 증강제는 내부 결실 및 6개 점 돌연변이들 (서열 번호: 18에 상응하는 생쥐 버전)을 내포하였다. MC38 백신 구조체 및 유전자 보강제 구조체들을 MC3 지질 나노입자들에서 공동제제화하였다.
21일차 및 35일차에, 각 테스트 그룹의 생쥐로부터 얻은 CD8+ 비장 세포들은 야생형 또는 돌연변이체 MC38 ADR 펩티드 (펩티드 당 1 μg/ml)와 함께 GolgiPlug™ (브레펠딘 A 내포; BD Biosciences)의 존재하에서 섭씨 37도에서 4시간 동안 체외에서 재자극되었으며 및 CD8 백신 반응들을 IFN-γ에 대한 세포내 염색 (ICS)으로 평가하였다. IFN-γ에 대한 21일차 및 35일차 CD8+비장 세포들에 의한 MC38 ADR-특이적 반응들에 관한 대표적인 ICS 결과들이 도 8A (21일차) 및 도 8B (31일차)에 도시된다. 유사한 결과가 TNF-α 및 CD8+PBMC에 대한 ICS에서 관찰되었다. 이러한 결과들은 CD8 백신 반응들은 STING 면역 증강제 구조체에 의해 상당히 개선되었으며, IRF3 및 IRF7 면역 증강제 구조체에 의해 보통으로 개선되었음을 나타낸다. 면역 증강제로 치료받은 생쥐에 대한 항원-특이적 CD8 반응에서 초기 개선은 21일차에서 관찰되었으며 (STING 치료 대 대조에 대해 대략 5% 대 1%), 이는 35일차까지 지속적으로 개선되었고 (대조와 비교하여 STING 치료에 대해 최대 15%), 이로써 상기 반응에 대한 내구성을 증명하였다.
살아있는 CD45+ 세포들 중 CD8b+ 세포들의 백분율을 또한 조사하였다. 35일차 비장 세포들 및 PBMC에 대한 결과들이 도 9A에 제시되며, 유전자 보강제가 총 CD8b+ 집단을 확장시킴을 나타낸다. 도 9B에 나타낸 바와 같이, CD8+ 비장 세포들 및 PBMC 대다수는 “효과기 기억” CD62L저 표현형을 가짐이 밝혀졌다. 추가 염색 실험들은 STING 및 IRF7 면역 증강제 구조체는 총 Foxp3+ T조절 CD4 T 세포들의 %를 약간 감소시켰음을 나타내었다 (데이터 도시되지 않음). 추가 염색 실험들은 면역 증강제들이 CD138+ 형질모세포의 %를 변화시키지 않았음을 나타내었다 (데이터 도시되지 않음).
실시예 6: KRAS-STING mRNA 구조체
다양한 암 유형들에서 Ras 돌연변이들의 종합적인 연구결과가 보고된 바 있다 (Prior, I.A. 등 (2012) Cancer Res. 72:2457-2467). 이러한 연구는 결장직장암, 이자암 및 비-소 세포 폐암에서 가장 빈번한 상위 4가지 KRAS 돌연변이들이 G12D, G12V, G13D 및 G12C임을 증명하였다. KRAS 항-종양 mRNA-계 백신들로 사용하기 위해, 이들 4가지 돌연변이들 중 하나를 내포하는 하나 이상의 KRAS 펩티드들을 인코드한 일련의 돌연변이체 KRAS mRNA 구조체들을 준비하였다. 더욱이, KRAS 백신 반응들에 대한 mRNA-계 면역 증강제들의 효과를 조사하기 위하여, N-말단 또는 C-말단에서 면역 증강제로서 STING을 인코드하는 서열에 연결된 하나 이상의 돌연변이체 KRAS 펩티드들을 인코드한 일련의 mRNA 구조체들을 준비하였다. 그러므로, 이러한 KRAS-STING mRNA 구조체들에서, 백신 항원(들) 및 면역 증강제는 동일한 mRNA 구조체에 의해 인코드된다.
다음을 인코드한 돌연변이체 KRAS 펩티드 mRNA 구조체들을 준비하였다: G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 15량체 펩티드 (각각 서열 번호: 36-38에 제시된 아미노산 서열); G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 25량체 펩티드 (각각 서열 번호: 39-41); G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 15량체 펩티드의 3가지 복제본 (각각 서열 번호: 42-44); 또는 G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 25량체 펩티드의 3가지 복제본 (각각 서열 번호: 45-47). 추가적인 구조체들은 G12C 돌연변이를 가지는 25량체 펩티드 (각각 서열 번호: 72-73) 또는 야생형 25량체 펩티드 (서열 번호: 74)의 1가지 또는 3가지 복제본을 인코드하였다. 특정 구체예들에서, G12C KRAS 돌연변이는 G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이, 또는 이의 조합과 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 돌연변이체 KRAS 펩티드들을 인코드하는 뉴클레오티드 서열들은 실시예 7에 제공된다.
다음을 인코드한, N-말단에서 STING 코딩 서열을 가지는 돌연변이체 KRAS 펩티드-STING mRNA 구조체들을 준비하였다: G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 15량체 펩티드 (이의 아미노산 서열은 각각 서열 번호: 48-50에 제시됨); G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 25량체 펩티드 (각각 서열 번호: 51-53); G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 15량체 펩티드의 3가지 복제본 (각각 서열 번호: 54-56); 또는 G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 25량체 펩티드의 3가지 복제본 (각각 서열 번호: 57-59). 특정 구체예들에서, G12C KRAS 돌연변이는 G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이, 또는 이의 조합과 조합하여 사용될 수 있다. N-말단에 STING 코딩 서열을 가지는 이들 KRAS 펩티드-STING 구조체들을 인코드하는 대표적인 뉴클레오티드 서열들은 서열 번호: 160 및 162에 제시된다.
다음을 인코드한, C-말단에서 STING 코딩 서열을 가지는 돌연변이체 KRAS 펩티드-STING mRNA 구조체들을 준비하였다: G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 15량체 펩티드 (이의 아미노산 서열은 각각 서열 번호: 60-62에 제시됨); G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 25량체 펩티드 (각각 서열 번호: 63-65); G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 15량체 펩티드의 3가지 복제본 (각각 서열 번호: 66-68); 또는 G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이를 가지는 25량체 펩티드의 3가지 복제본 (각각 서열 번호: 69-70). 특정 구체예들에서, G12C KRAS 돌연변이는 G12D, G12V 또는 G13D 돌연변이, 또는 이의 조합과 조합하여 사용될 수 있다. C-말단에 STING 코딩 서열을 가지는 이들 KRAS 펩티드-STING 구조체들을 인코드하는 대표적인 뉴클레오티드 서열들은 서열 번호: 161 및 163에 제시된다.
3개 구조체들은 탐지를 용이하게 하기 위하여 또한 N-말단 또는 C-말단에서 에피토프 태그를 인코드할 수 있다. 상이한 에피토프 태그들이 사용될 수 있다 (예컨대, FLAG, Myc, CT, HA, V5). 추가적으로, 모든 구조체들은 Cap 1 5’ Cap (7mG(5')ppp(5')NlmpNp), 5’ UTR, 3’ UTR, 폴리 A 꼬리를 내포하였으며 1-메틸-수도우리딘 (m1ψ)으로 완전히 변형되었다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 5’ UTR이 서열 번호: 21에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 22에 제시된다. 이러한 구조체들에서 사용하기 위한 miR-122 및 miR-142.3p 결합 부위들을 포함하는 예시적인 3’ UTR이 서열 번호: 23에 제시된다.
KRAS 돌연변이체 펩티드(들) mRNA 백신 구조체 또는 KRAS 돌연변이체 펩티드(들) 백신-STING 면역 증강제 mRNA 구조체로 면역화된 생쥐에서 백신 반응을 테스트하기 위하여, 생쥐 (HLA-A*11:01 또는 HLA-A*2:01; Taconic)는 KRAS 돌연변이체 펩티드 백신 mRNA 구조체 (예컨대, 서열 번호: 36-47 중 하나를 인코드함) 또는 KRAS 돌연변이체 펩티드 백신-STING 면역 증강제 mRNA 구조체 (예컨대, 서열 번호: 48-71 중 하나를 인코드함)로 치료받는다. 생쥐는 1일차 및 15일차에 근육내 면역화되며 (0.5 mg/kg) 22일차에 희생된다. CD8 백신 반응을 테스트하기 위하여, CD8+ 비장 세포들 및 PBMC는 돌연변이체 KRAS 펩티드 (G12D, G12V 또는 G13D) 또는 야생형 KRAS 펩티드 (펩티드 당 2 μg/ml)와 함께 GolgiPlug™ (브레펠딘 A 내포; BD Biosciences)의 존재하에서 섭씨 37도에서 5시간 동안 체외에서 재자극된다. 그 다음 CD8 백신 반응들은 IFN-γ 및/또는 TNF-α에 대한 세포내 염색 (ICS)으로 평가할 수 있다. KRAS 돌연변이체 펩티드 백신 mRNA 구조체를 이용한 치료와 비교하여, KRAS 돌연변이체 펩티드 백신-STING 면역 증강제 mRNA 구조체로 치료받은 생쥐에서 IFN-γ 및/또는 TNF-α에 대한 개선된 ICS 반응들은 STING 면역 증강제가 KRAS-특이적 CD8 백신 반응들을 개선시킴을 나타낸다.
실시예 7:
활성화 종양유전자 KRAS 돌연변이체 펩티드 mRNA 구조체들과 조합한 면역 증강제 mRNA 구조체의 사용
본 실시예에서, 돌연변이체 KRAS 펩티드 mRNA 구조체들은 돌연변이체 KRAS 펩티드들에 대한 면역 반응을 개선하기 위하여 별도의 항시적 활성 STING 면역 증강제 mRNA 구조체와 조합하여 사용된다.
암에서 가장 빈번하게 돌연변이되는 종양유전자는 KRAS로서, 이는 상피성 암, 주로 폐, 결장직장 및 이자암의 대략 30%에서 돌연변이된다 (Pylayeva-Gupta Y, 외, Nat Rev Cancer, Vol. 11(11): 761-774, 2011). 이러한 3가지 악성종양들 중에서 가장 우세한 4가지 KRAS 돌연변이체 항원들은 G12D, G12V, G13D and G12C로서, 이는 KRAS 돌연변이의 80-90%를 구성한다 (Prior 외, Cancer Res. 2012 May 15; 72(10): 2457-2467; Cox AD 외, Nat Rev Drug Discov, Vol. 13(11): 828-851, 2011). KRAS 돌연변이는 대부분 두 곳의 “핫스팟”에서 일어나며 종양유전자를 활성화시킨다. 기존의 연구는 종양발생 돌연변이에 특이적인 T 세포들을 상승시키는 제한된 능력을 보여주었다. 그러나, 이러한 능력의 대부분은 가장 흔한 HLA 대립유전자와 관련하여 이루어졌다 (A2, 백인의 ~50%에서 발생). 보다 최근에, (a) 특이적 T 세포들은 덜 흔한 HLA 대립유전자들 (A11, C8)과 관련하여 점 돌연변이에 대해 생성될 수 있으며, 그리고 (b) 이들 세포들을 생체외에서 성장시키고 환자에게 다시 전달하는 것은 폐암 환자에서 두드러진 종양 반응을 매개하였음이 증명되었다. (N Engl J Med 2016; 375:2255-2262December 8, 2016DOI: 10.1056/NEJMoa1609279).
KRAS 돌연변이는 결장직장암의 대략 40%에서 발생한다. 아래 표 5에서 보는 바와 같이, CRC (결장직장암)에서, 단 3가지 돌연변이들 (G12V, G12D, 및 G13D)이 이러한 악성종양에서의 KRAS 돌연변이들의 96%를 차지한다. 더욱이, 모든 CRC 환자들은 KRAS 돌연변이에 대해 돌봄 표준으로 입력된다.
또 다른 COSMIC 데이터 세트에서, 결장직장암에서 KRAS 돌연변이들의 73.68%을 이들 3가지 돌연변이들 (G12V, G12D, 및 G13D)이 차지한다 (표 6).
Prior 등은 HRAS, KRAS, 및 NRAS 각각에 대한 아이소형-특이적 점 돌연변이 특이성을 조사하여 요약하였다. 각 점 돌연변이를 가지는 종양들의 총 수를 나타내는 데이터를 COSMIC v52 방출(release)로부터 대조하였다. 각 암 유형에 대한 각각의 아이소형에 가장 빈번한 돌연변이들을 기록한다 (Prior 등의 표 2 참고).
부가적으로, 2차 KRAS 돌연변이들이 EGFR 차단 내성 환자들에서 확인되었다. RAS는 EGFR의 하류에 존재하며 EGFR 차단 요법들에 대한 내성 기전을 구성하는 것으로 밝혀졌다. EGFR 차단 내성 KRAS 돌연변이체 종양들은 본 명세서에 개시된 조성물들 및 방법들을 사용하여 표적될 수 있다. 몇몇 사례에서, 하나 이상의 KRAS 돌연변이가 동일한 환자에서 확인되었다 (최대 4개의 상이한 돌연변이들이 함께 발생함). Diaz 등은 EGFR 차단 획득 후 이러한 2차 KRAS 돌연변이들을 보고하며 (보충 표 2 참고), 그리고 Misale 등은 EGFR 차단 후 2차 KRAS 돌연변이들을 보고한다 (도 3b 참고) (Diaz 등 The molecular evolution of acquired resistance to targeted EGFR blockade in colorectal cancers, Nature 486:537 (2012); Misale 등 Emergence of KRAS mutations and acquired resistance to anti-EGFR therapy in colorectal cancer, Nature 486:532 (2012)). 이러한 돌연변이 스펙트럼은 결장직장암에서 원발성 종양 미스센스 돌연변이체와 최소한 어느 정도 상이한 것으로 보인다.
도 10에서 보는 바와 같이, NRAS 또한 결장직장암에서 돌연변이 되지만, cBioPortal 및 Prior 외.의 문헌에서 이용가능한 분석에 기초하여, KRAS 보다 낮은 빈도로 발생한다.
결장직장암에서의 KRAS 돌연변이들의 확인에 더하여, 이러한 돌연변이들은 비-소 세포 폐 암종 및 이자암에서 발견되었다. 표 7은 이러한 3 가지 암들에서의 4가지 KRAS 돌연변이들의 빈도를 제공한다.
1Mellema 외, Comparison of clinical outcome after first-line platinum-based chemotherapy in different types of KRAS mutated advanced NSCLC, Lung Cancer 90:2 (2015) (표 1)
2Neumann 외, Frequency and type of KRAS mutations in routine diagnostic analysis of metastatic colorectal cancer, Pathology Research and Practice 205 (2009) (도 1)
3Kirsten L. Bryant, Joseph D. Mancias, Alec C. Kimmelman, Channing J. Der, KRAS: feeding pancreatic cancer proliferation, In Trends in Biochemical Sciences, 39:2, 2014 (도 2)
4Adrienne D. Cox 외, Drugging the undruggable RAS: Mission Possible?, Nature Reviews Drug Discovery 13, 828851 (2014) (표 1)
본 실시예에서, 동물은 최소한 하나의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드, 예컨대, 최소한 하나의 활성화 KRAS 돌연변이를 인코드하는 mRNA를, 단독으로 또는 면역 증강제 mRNA 구조체, 예컨대, 서열 번호: 1-10 중 어느 하나에 제시된 서열을 인코드하는, 예컨대, 항시 활성 STING mRNA 구조체, 가령, 예를 들면, 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 가지며 서열 번호: 139에 제시된 뉴클레오티드 서열을 인코드한, V155M 돌연변이를 포함하는 항시 활성 인간 STING 단백질을 인코드하는 mRNA 구조체와 함께 포함하는 면역조절 치료 조성물을 투여받는다.
예시적인 KRAS 돌연변이체 펩티드 서열 및 mRNA 구조체들은 표 8-10에 제시되어 있다.
화학: 우리딘 변형된 N1-메틸 수도우리딘 (m1Ψ)
캡: C1
꼬리: T100
5’ UTR 서열 (표준 5' 플랭크 (생성 FP + T7 부위 + 5'UTR 포함)): TCAAGCTTTTGGACCCTCGTACAGAAGCTAATACGACTCACTATAGGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACC (서열번호: 21)
5’ UTR 서열 (프로모터 없음): GGGAAATAAGAGAGAAAAGAAGAGTAAGAAGAAATATAAGAGCCACC
(서열번호: 134)
3’ UTR 서열 (XbaI 없는 인간 3' UTR): TGATAATAGGCTGGAGCCTCGGTGGCCATGCTTCTTGCCCCTTGGGCCTCCCCCCAGCCCCTCCTCCCCTTCCTGCACCCGTACCCCCGTGGTCTTTGAATAAAGTCTGAGTGGGCGGC (서열번호: 22)
생체내 KRAS 항원 반응들에 대한 STING 면역 증강제 mRNA 구조체의 효과를 조사하기 위한 첫번째 연구에서, HLA-A*2:01 Tg 생쥐 (Taconic, 계통 9659F, n=4)들은 다음과 같이 다양한 형태의 돌연변이된 KRAS 펩티드 항원들을 인코드하는 mRNA를 투여받는다: 돌연변이된 KRAS를 인코드하는 mRNA (단독 또는 STING과 조합으로)를 1일차에 투여받고, 8일차에 채혈하고, 돌연변이된 KRAS를 인코드하는 mRNA (단독으로 또는 STING과 조합으로)를 15일차에 투여받고, 동물은 22일차에 희생됨. 테스트 그룹들은 다음과 같이 표 11에 제시된다:
mRNA는 0.5 mg/kg 용량 (20-g 동물 당 10ug)으로 동물에게 투여된다. KRAS 및 STING 구조체들은 1:1 비율로 투여된다. 체외 재자극 (펩티드 당 2ug/ml)은 GolgiPlug (브레펠딘 A)의 존재하에서 섭씨 37도에서 4시간 동안 테스트된다. 세포내 사이토카인 염색 (ICS)은 KRAS G12D, KRAS G12V, KRAS G13D, KRAS WT, 및 펩티드 없음에 대해 테스트된다.
KRAS 돌연변이들을 인코드하는 mRNA는, 단독으로 또는 항시적 활성 STING을 인코드하는 mRNA와 조합으로 T 세포들을 생성하는 능력에 대해 테스트된다. KRAS 돌연변이들을 인코드하는 mRNA의 효능은, 예를 들면, 펩티드 백신접종과 비교된다. STING 면역 증강제의 효과는 KRAS 돌연변이체 펩티드 단독 대 STING 면역 증강제와 조합을 이용한 치료를 비교하여 결정된다. 예를 들면, CD8 백신 반응들은 본 명세서에 기재된 바와 같이 IFN-γ 및/또는 TNF-α에 대한 세포내 염색 (ICS)에 의해 평가될 수 있다. KRAS 돌연변이체 펩티드 백신 mRNA 구조체 단독을 이용한 치료와 비교하여, STING 면역 증강제 mRNA 구조체와 조합된 KRAS 돌연변이체 펩티드 백신으로 치료받은 생쥐에서 IFN-γ 및/또는 TNF-α에 대한 개선된 ICS 반응들은 STING 면역 증강제가 KRAS-특이적 CD8 백신 반응들을 개선시킴을 나타낸다.
돌연변이체 KRAS 펩티드 항원 mRNA 구조체들의 다양한 상이한 형태들에 대한 면역 반응에 대한 STING 면역 증강제 mRNA 구조체의 효과를 조사하기 위한 두번째 연구에서, HLA*A*11:01 Tg 생쥐 (Taconic, 계통 9660F, n=4)는 STING 면역 증강제 mRNA 구조체와 조합된 돌연변이된 KRAS 펩티드 항원 mRNA 구조체들의 다양한 상이한 형태들을 인코드하는 mRNA를 다음과 같이 투여받는다: 돌연변이된 KRAS를 인코드하는 mRNA를 STING과 조합하여 1일차에 투여, 8일차에 채혈, KRAS를 인코드하는 mRNA를 STING과 조합하여 15일차에 투여, 동물을 22일차에 희생시킴.
테스트된 돌연변이된 KRAS 구조체들의 유형들은 다음과 같았다: (i) G12D, G12V, G13D 또는 G12C 돌연변이를 내포하는 단일 돌연변이체 KRAS 25량체 펩티드 항원을 인코드하는 mRNA (“단일체”); (ii) 3개 25량체 펩티드 항원들의 연쇄체 (그러므로 75량체 생성)를 인코드하는 mRNA, 각각 하나는 G12D, G12V 및 G13D 돌연변이들 (“KRAS-3MUT”)을 내포함; (iii) 4개 25량체 펩티드 항원들의 연쇄체 (그리하여 100량체를 생성)를 인코드하는 mRNA, 각각 하나는 G12D, G12V, G13D 및 G12C 돌연변이들 (“KRAS-4MUT”)을 내포함; 또는 (iv) 함께 공동투여되는 4개의 별도 mRNA, 각각 G12D, G12V, G13D 또는 G12C 돌연변이를 내포하는 단일 돌연변이체 KRAS 25량체 펩티드 항원을 인코드함 (“단일 x 4”).
G12D 25량체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호: 39 및 126에 제시된다. G12V 25량체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호: 40 및 127에 제시된다. G13D 25량체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호: 41 및 128에 제시된다. G12C 25량체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호: 72 및 132에 제시된다. KRAS-3MUT 75량체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호: 135 및 136에 제시된다. KRAS-4MUT 100량체의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열은 각각 서열 번호: 137및 138에 제시된다.
테스트 그룹들은 다음과 같이 표 12에 제시된다:
mRNA는 0.5 mg/kg 용량 (20-g 동물 당 10ug)으로 동물에게 투여된다. KRAS 및 STING 구조체들은 5:1 비율로 투여된다. 체외 재자극 (펩티드 당 2ug/ml)은 GolgiPlug (브레펠딘 A)의 존재하에서 섭씨 37도에서 5시간 동안 실시되었다. 세포내 사이토카인 염색 (ICS)은 KRAS G12D, KRAS G12V, KRAS G13D, G12C, KRAS WT, 및 펩티드 없음에 대해 테스트된다.
항시적 활성 STING을 인코드하는 mRNA와 조합된, KRAS 돌연변이들을 인코드하는 다양한 mRNA들의 T 세포 반응 생성 능력을 테스트하여 다양한 상이한 KRAS 구조체들에 대한 STING 면역 증강제의 효과를 비교할 수 있다. 예를 들면, CD8 백신 반응들은 본 명세서에 기재된 바와 같이 IFN-γ 및/또는 TNF-α에 대한 세포내 염색 (ICS)에 의해 평가될 수 있다.
실시예 8: 면역 증강제 mRNA는 HPV 백신 반응을 개선한다
본 실시예에서, STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제들과 조합하여 사용된 인간 파필로마바이러스 (HPV) E6/E7 mRNA-계 백신에 대한 반응의 효능 및 내구성을 조사하였다. 자궁경부 미세환경에서 인간 파필로마바이러스 (HPV)에 대한 특이적 면역 반응은 감염을 박멸하고 돌연변이된 세포들을 제거함에 중요한 역할을 함은 공지되어 있다. 그러나, 고-위험 HPV들은 면역 세포들을 조절하여 면역억제성 미세환경을 생성함이 공지되어 있다 (예컨대, Prata, T.T. 등 (2015) Immunology 146:113-121 참고). 그러므로, 강하고 지속적인 면역 반응을 가져오는 HPV 백신접종법이 가장 바람직하다.
본 실시예에서 사용된 HPV 백신들은 본 명세서에서 각각 iE6/E7 및 sE6/E7HPV로 지칭되는 HPV 16 항원들 E6 및 E7의 세포내 또는 용해성 형태를 인코드하는 mRNA 구조체들이다. 용해성 형식을 생성하기 위하여, 분비에 필요한 단일 펩티드를 항원의 N-말단에 융합시켰다. 단일 펩티드의 서열은 Ig 카파 사슬 V-III 영역 HAH로부터 유래하였다. 0일차 및 14일차에 생쥐들을, 대조 mRNA 구조체 (NTFIX), 또는 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제 mRNA 구조체 (0.25 mg/kg의 용량으로)와 함께 iE6/E7 또는 sE6/E7 mRNA 백신 (0.25 mg/kg의 용량으로)으로 근육내 면역화시켰다. 항시적 활성 STING 면역 증강제는 V155M 돌연변이 (서열 번호: 1에 상응하는 생쥐 버전)를 내포하였다. 항시적 활성 IRF3 면역 증강제는 S396D 돌연변이 (서열 번호: 12에 상응함)를 내포하였다. 항시적 활성 IRF7 면역 증강제는 내부 결실 및 6개 점 돌연변이들 (서열 번호: 18에 상응하는 생쥐 버전)을 내포하였다. HPV 백신 구조체 및 면역 증강제 구조체들을 MC3 지질 나노입자들에서 공동제제화하였다.
21일 및 53일차에, 각 테스트 그룹의 생쥐들로부터 얻은 비장 세포들 및 말초 혈액 단핵 세포들 (PBMC)은 다음 중 어느 하나와 GolgiPlug™ (브레펠딘 A 내포; BD Biosciences)의 존재하에서 섭씨 37도에서 4시간 동안 체외에서 재자극되었다: E6 펩티드 풀 (37개 E6 펩티드 내포, 이의 서열들은 서열 번호: 36-72에 제시됨), E7 펩티드 풀 (22개 E7 펩티드 내포, 이의 서열들은 서열 번호: 73-94에 제시됨), E6 단일 펩티드 (8개 개개의 펩티드), E7 단일 펩티드 (7개 개개의 펩티드) 또는 펩티드 없음 (대조). CD8 백신 반응들을 IFN-γ 또는 TNF-α에 대한 세포내 염색 (ICS)으로 평가하였다.
IFN-γ 및 TNF-α에 대한 21일차 비장 세포들에 의한 E7-특이적 반응들에 관한 대표적인 ICS 결과들이 도 11A (IFN-γ) 및 도 11B (TNF-α)에 제시된다. IFN-γ 및 TNF-α에 대한 21일차 비장 세포들에 의한 E6-특이적 반응들에 관한 대표적인 ICS 결과들이 도 12A (IFN-γ) 및 도 12B (TNF-α)에 제시된다. 도 11A-11B 및 12A-12B의 결과들은 STING, IRF3 또는 IRF7 면역 증강제들이 상기 백신과 공동제제화되었을 경우 (세포내 및 용해성 항원 형식 모두에 대한) CD8 백신 반응들이 상당히 개선되었으며, 이 때 E7 에피토프는 E6 에피토프보다 강하고 덜 가변적이며 항원의 용해성 형태가 항원의 세포내 형태보다 강함을 나타낸다. 면역 증강제에 의한 이러한 개선된 CD8 백신 반응들은 도 13A 및 13B에 각각 제시된 대표적인 21일차 대 53일차 E7-특이적 비장 세포 IFN-γ ICS 데이터에 의해 증명된 바와 같이, 지속적인 것으로 나타났다. 비장 세포 데이터에 대한 유사한 결과들이 PBMC 실험들 (데이터 도시되지 않음)에 대해서 관찰되었다.
살아있는 CD45+ 세포들 중 CD8b+ 세포들의 백분율을 또한 조사하였다. 21일차 대 53일차 비장 세포들에 대한 결과들이 각각 도 14A 및 14B에 도시된다. 상기 결과들은 면역 증강제들 (특히 STING 구조체)은 21일차에서 총 CD8b+ 집단을 확장시키나 53일차에서는 그렇지 않음을 나타낸다.
CD8 백신 반응을 개선하는 면역 증강제 구조체의 능력은 E7-MHC1-사합체 염색에 의해 추가로 확인되었다. 21일차 대 53일차 비장 세포들에 대한 대표적인 결과들은 각각 도 15A 및 15B에 도시된다. E7-MHC-1-사합체 염색 결과들은 더 가변적이긴 하였으나 상기 논의한 ICS 결과들과 일치하였다. 도 16A-16D에 나타낸 바와 같이, 사합체 양성 CD8 세포들 대다수는 “효과기 기억” CD62L저 표현형을 가지는 것으로 밝혀졌다. 21일차 대 53일차 E7-사량체+ CD8 세포들의 비교는 이러한 “효과기-기억” CD62L저 표현형이 연구 전반에 걸쳐 유지되었음을 나타내었다. 추가 염색 실험들은 면역 증강제들이 총 Foxp3+ T조절 CD4 T 세포의 %를 약간 감소시켰으며 (데이터 도시되지 않음) CD138+ 형질모세포의 %를 변화시키지 않았음을 나타내었다 (데이터 도시되지 않음).
실시예 9: STING 면역 증강제와 조합된 HPV 백신을 이용한 예방적 또는 치료적 백신접종은 종양 성장을 억제한다
본 실시예에서, 생쥐들은 STING 면역 증강제와 조합된 HPV 백신으로 TC1 종양 세포들 시험감염 전, 동시, 또는 후에 처리되었다. TC-1은 해당 분야에 공지된 HPV16 E7-발현 쥐과 종양 모델이다 (예컨대, Bartkowiak 등 (2015) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 112:E5290-5299 참고). 본 실시예에서 사용된 HPV 백신들은 실시예 8에 기재된 바와 같은, 본 명세서에서 각각 iE6/E7 및 sE6/E7HPV로 지칭되는 HPV 16 항원들 E6 및 E7의 세포내 또는 용해성 형태를 인코드하는 mRNA 구조체들이다. 본 실시예에서 사용된 항시적 활성 STING 면역 증강제는 실시예 8에 기재된 바와 같은 V155M 돌연변이를 내포하였다. HPV 백신 구조체 및 면역 증강제 구조체들을 MC3 지질 나노입자들에서 공동제제화하였다. 특정 생쥐는 면역 관문 억제제 (항-CTLA-4 또는 항-PD-1)로도 처리되었다.
HPV + STING 백신접종의 예방적 활성을 조사하는 제 1 실험 세트에서, C57/B6 생쥐는 (i) -7일차 및 -14일차, 또는 (ii) 1일차 및 8일차에 0.5 mg/kg의 HPV + STING 백신 (sE6/E7 또는 iE6/E7을 인코드함)을 근육내 주사 후, 후속하여 1일차에 2 x 105 TC1 세포들을 피하 주사하여 치료되었다. 특정 생쥐들은 6, 9 및 12일차에 항-CTLA-4 또는 항-PD-1으로도 처리되었다. 시간 경과에 따른 종양 부피로 기록된 대표적인 결과들이 도 17A-17C의 그래프에 제시되며, 여기서 도 17A 및 17B는 -14 및 -7일차에 sE6/E7 (도 17A) 또는 iE6/E7 (도 17B)로 처리된 생쥐에 대한 데이터를 보여주고 도 19C는 sE6/E7로 1 및 8일차에 처리된 생쥐들에 대한 데이터를 보여준다. 결과는 대조 생쥐에 비해 (대조 mRNA 구조체 NTFIX를, 단독 또는 면역 관문 억제제와 조합하여 처리함), HPV + STING 백신 (단독 또는 면역 관문 억제제와 조합으로)으로 처리된 생쥐들 모두가 수 주에 걸쳐 완벽한 종양 성장 억제를 보여주었음을 나타낸다. 그러므로, 이들 실험들은 STING 면역 증강제와 함께 HPV 백신을 이용한 예방적 백신접종 (즉, 종양 시험감염 이전 또는 이와 동시에)이 생체내 HPV-발현 종양 세포들의 성장을 저해함에 효과적임을 나타낸다.
HPV + STING 백신접종의 치료적 활성을 조사하는 제 2 실험 세트에서, C57/B6 생쥐는 1일차에 2 x 105 TC1 세포들을 피하 투여받고, 후속하여 8 및 15일차에 0.5 mg/kg의 HPV + STING 백신 (sE6/E7을 인코드함)으로 근육내 주사 처리되었다. 특정 생쥐들은 13, 16 및 19일차에 항-CTLA-4 또는 항-PD-1으로도 처리되었다. 시간 경과에 따른 종양 부피로 기록된 대표적인 결과들이 도 18A-18I의 그래프로 제시된다. 결과들은 대조 mRNA 구조체 NTFIX를 단독 또는 면역 관문 억제제와 조합으로 처리한 대조 생쥐(도 18D-18F) 또는 sE6/E7 구조체를 대조 DMXAA 구조체와 조합하여, 단독으로 또는 면역 관문 억제제와 조합하여 처리한 대조 생쥐 (도 18G-18I)와 비교할 때, HPV + STING 백신 (단독 또는 면역 관문 억제제와 조합으로)으로 처리된 생쥐는 종양 퇴행을 보였음 (도 18A-18C)을 나타낸다. 그러므로, 이들 실험들은 STING 면역 증강제와 함께 HPV 백신을 이용한 치료적 백신접종 (즉, 종양 시험감염에 후속하여)은 생체내에서 HPV-발현 종양들의 퇴행을 유도함에 효과적임을 나타낸다.
실시예 10. mRNA 백신 설계에서 최적 항원:면역 증강제 질량비 결정
본 실시예에서, 관심 항원을 상이한 Ag:면역 증강제 비율의 면역 증강제와 조합하여 처리한 후, 항원에 대한 T 세포 반응을 조사하여, 관심 항원에 대한 면역 반응을 개선함에 있어서 최적의 Ag:면역 증강제 비율을 결정하는 연구를 실시하였다.
제 1 실험 세트에서, 실시예 5에 기재된 바와 같이, 생쥐들을 항시 활성 STING 면역 증강제 구조체와 조합하여, Adpgk, Dpagt1, 및 Reps1에서 유래한 종양 네오에피토프를 내포하는 3개 25량체 돌연변이체 펩티드들의 ADR 연쇄체를 인코드하는 MC38 백신으로 처리하였다 (본 출원에서 이 백신은 또한 ADRvax로 지칭된다). 본 실시예에서 사용된 항시적 활성 STING 면역 증강제는 실시예 1에 기재된 바와 같은 V155M 돌연변이를 내포하였다. 아래 표 13에 요약된 연구 설계에 따라, 지질 나노입자 (화합물 25 (Cmp25)를 포함)에서 변화하는 Ag:STING 비율로 ADRvax 및 STING 구조체들을 공동제제화 하였다.
생쥐들에게 1 및 15일차에 근육내 투약하였다. 21일차에, 각 테스트 그룹의 생쥐로부터 얻은 CD8+ 비장 세포들은 야생형 또는 돌연변이체 MC38 ADR 펩티드 (펩티드 당 1 μg/ml, 풀)와 함께 GolgiPlug™ (브레펠딘 A 내포; BD Biosciences)의 존재하에서 섭씨 37도에서 4시간 동안 체외에서 재자극되었으며 및 CD8 백신 반응들을 IFN-γ 또는 TNF-α에 대한 세포내 염색 (ICS)으로 평가하였다. IFN-γ에 대한 21일차 CD8+비장 세포들에 의한 MC38 ADR-특이적 반응들에 관한 대표적인 ICS 결과들이 도 19에 도시되고 TNF-α에 대해서는 도 20에 도시된다. 추가적으로, ADRvax에 속하는 3개의 개개 에피토프 각각 (즉, 펩티드 Adpk1, Reps1 및 Dpagt1)에 대한 CD8 백신 반응들을, 상기 개개의 에피토프로 자극 후 IFN-γ에 대해 ICS로 평가하였다. 결과는 도 21A (펩티드 Adpk1에 대해), 도 21B (펩티드 Reps1에 대해) 그리고 도 21C (펩티드 Dpagt1에 대해)에 제시된다.
결과는 테스트한 모든 Ag:STING 비율 (1:1 내지 20:1 범위)은 대조에 비하여 STING의 보강 효과를 보여주었음을 나타낸다. 전체적으로 ADRvax 항원에 대해, 최적의 Ag:STING 비율은 5:1인 것으로 밝혀졌다. ADRvax에 속하는 개개 펩티드 에피토프에 있어서, Adpgk1 펩티드에 대한 최적의 Ag:STING 비율은 5:1이었던 반면, Reps1 펩티드에 대한 최적의 Ag:STING 비율은 10:1 이었다 (세번째 펩티드, Dpagt1에 대한 반응은 STING의 유무에 관계없이 매우 낮았으며, 이 결과는 이것이 해당 분야에서 공지되었던 우세하지 않은 에피토프인 것과 일치한다). 또한 STING은 CD45+ T 세포 중 CD8+ 세포의 총 백분율을 증가시키는 것으로 나타났으며 투약 반응이 관찰되었고 (데이터 도시되지 않음), CD44고 CD8+ 세포 중 CD62L 세포들 (효과기/기억 부분집합)의 총 백분율을 증가시키는 것으로 나타났으며, 투약 반응은 관찰되지 않았다 (데이터 도시되지 않음). 더욱이, PBMC 세포들로부터 얻은 결과는 비장 세포 결과와 일치하였다 (데이터 도시되지 않음). 그러므로, 이들 실험들은 ADRvax 항원에 대한 면역 반응을 개선함에 면역 증강제로서 작용하는 STING의 능력을 확인시켜 주었으며, 또한, 치료를 위한 최적의 Ag:면역 증강제 비율을 결정하는 것을 나타내었는데, 1:1 이외의 비율이 가장 최적인 것으로 나타났다 (예컨대, 5:1 또는 10:1 비율이 1:1 보다 더 효과적임). 이러한 결과들은 최적의 Ag:면역 증강제 비율이 사용된 특정 관심 항원에 따라 다를 수 있음을 추가로 나타낸다.
제 2 실험 세트에서, 비-인간 영장류들을, 아래 표 14에 요약된 연구 설계에 따라 실시예 8에 기재된 바와 같은 세포내 E6/E7 (iE6/E7)을 인코드하는 HPV 백신으로, 다양한 Ag:STING 비율의 항시적 활성 STING 면역 증강제 구조체와 조합하여 (화합물 25를 포함하는 지질 나노입자들) 처리하였다:
1차 용량 (근육내 투여됨) 후 24시간에 어떠한 임상 소견도 관찰되지 않았는데, 이는 주사 부위 반응이 없고 초기 처리가 안전하게 이루어졌음을 나타낸다. 1일차 초기 투약 후, 동물은 2주의 회복 기간을 가진 다음, 14일차에 2차 용량이 제공되고, 그 후 2주의 회복 기간이 또 제공된다. 추가 안전성 분석은 2, 16 및 30일차에 임상 병리학 (임상 화학, 혈액학 및 응고)으로 결정된다. CD4 및 CD8 세포들에 대한 IFN-γ에 관한 항-항체 및 ELISpot 분석 또는 ICS를 실시하여 테스트하는 다양한 비율에서 HPV 백신에 대한 면역 반응의 STING에 의한 개선을 평가한다.
제 3 실험 세트에서, 공지의 쥐과 에피토프를 사용하여 모델 연쇄체성 항원을 다양한 비율의 항시적 활성 STING 면역 증강제와 조합하여 생쥐에서 테스트하였다. 본 명세서에서 CA-132로 지칭되는 연쇄체성 항원은, CB6 생쥐의 MHC I형 및 II형 항원들에서 제시되는 것으로 생각되는 20가지 공지된 쥐과 에피토프를 포함한다. 이들 에피토프들은 문헌으로부터 얻은 에피토프의 공중 데이터베이스인 IEDB.org 웹사이트로부터 얻었다. I형 에피토프는 MHC I형 분자들에서 제시되는 것으로 예상되며 CD8+ 반응을 촉발시키는 반면, II형 에피토프는 MHC II형 분자들에서 제시되는 것으로 예상되고 CD4+ T 세포 반응들을 촉발시킨다. CA-132 항원 구조체는 I형 및 II형 에피토프 모두를 인코드하므로, CD4 및 CD8 T 세포 반응들 모두를 평가할 수 있게 한다. 더욱이, 연쇄체성 항원에 II형 에피토프 포함시키는 것은 (그리하여 CD4 반응을 촉발) 보다 강한 CD8 T 세포 반응을 유도함에 도움을 주는 것으로 생각된다. 그러므로, CA-132 항원의 설계에 대한 접근법은 또한 다른 연쇄체성 항원 구조체들의 설계에서 사용될 수도 있다.
CA-132 항원 구조체 및 STING 면역 증강제 구조체는 화합물 25를 포함하는 지질 나노입자들에 공동제제화되어 다음 투여량으로 CB6 생쥐에 근육내 투여되었다: 1 μg, 3 μg 또는 10 μg의 CA-132 단독, 3 μg의 STING 단독, 각각 3 μg 또는 각각 1 μg의 CA-132 + STING (1:1 비율), 3 μg의 CA-132 및 1 μg의 STING (3:1의 Ag:STING 비율) 또는 1 μg의 CA-132 및 3 μg의 STING (1:3의 Ag:STING 비율). CA-132 항원 구조체 내에서 I형 에피토프에 대한 항원-특이적 T 세포 반응들을 IFN-γ에 대해 ELISpot 분석으로 조사하였으며, 그 결과를 도 22에 제시한다. 이 결과들은 STING과 함께 제제화된 경우 I형 에피토프에 대한 IFN-γ 반응들의 증가를 나타내었다.
네 번째 일련의 실험들에서, 실시예 8에 기재된 HPV 백신 모델을 사용하여 E6/E7 항원 대 항시적 활성 STING 면역 증강제의 비율 변화의 효과를 연구하였다. 생쥐들을 iE6/E7 mRNA 백신 (3 μg 또는 5 μg)을 V155M 항시적 활성 STING 면역 증강제 mRNA 구조체와 1:1, 5:1, 10:1, 20:1 또는 0.4:1의 Ag:STING 비율로 조합하여 근육내 면역화시켰다. HPV 백신 구조체 및 면역 증강제 구조체들을 MC3 지질 나노입자들에서 공동제제화하였다. HPV 백신 또는 STING을 오직 대조 mRNA (NTFIX)와만 조합하여 대조로 사용하였다.
21일차에, 각 테스트 그룹 생쥐의 21일차 비장 세포들을 GolgiPlug™ (브레펠딘 A 내포; BD Biosciences)의 존재하에서 섭씨 37도에서 4시간 동안 E7 펩티드 풀 (실시예 8에 기재)로 재자극하였다. CD8 백신 반응들을 IFN-γ에 대한 세포내 염색 (ICS)으로 평가하였다. 결과는 도 23A에 나타낸다. 결과는 STING이 테스트한 모든 Ag:STING 비율에서 항원-특이적 T 세포 반응들을 개선하였음을 증명한다. STING과 1:1 비율의 보다 높은 용량의 항원 (5 μg)으로 처리한 생쥐들에 있어서 그리고 0.4:1의 Ag:STING 비율 (3 μg Ag 대 7μg STING)로 처리된 생쥐들에 있어서 가장 큰 개선이 관찰되었다.
테스트한 다양한 Ag: STING 비율의 HPV 모델에서 CD8 백신 반응을 개선하는 STING의 능력은 H2-Kb/E7 펩티드-사량체 염색에 의해 추가로 확인되었다. 21일차 비장 세포들에 대한 대표적인 결과들이 도 23B에 도시된다. E7-MHC-1-사합체 염색 결과들은 더 가변적이긴 하였으나 상기 논의한 ICS 결과들과 일치하였다.
요약하면, 이들 연구들은 관심 항원에 대한 면역 반응을 개선하는 STING 면역 증강제 구조체의 능력을 확인시켜 주었으며 치료를 위한 최적의 Ag:STING 비율 결정을 나타내었다.
실시예 11: 비-인간 영장류에서 STING에 의한 면역 증강
본 실시예에서, 비-인간 영장류 (시노몰구스 원숭이)를 STING 면역 증강제와 조합된 HPV 백신을 인코드하는 mRNA로 처리한 후, 항원-특이적 T 세포 및 항체 반응을 평가하였다. 본 실시예에서 사용되는 HPV 백신 구조체는 실시예 8에 기재되어 있다. 본 실시예에서 사용된 항시적 활성 STING 면역 증강제 구조체는 실시예 8에 기재된 바와 같은 V155M 돌연변이를 내포하였다. 다음을 포함하는 지질 나노입자들에서 HPV 백신 구조체 및 면역 증강제 mRNA 구조체들을 공동제제화하였다: 각각 50:38.5:10:1.5 비율의 화합물 25:콜레스테롤:DSPC:PEG-DMG. 상이한 비율의 STING:Ag를 테스트하였다. 대조 동물들을 HPV 항원 단독 또는 STING 면역 증강제 단독을 인코드하는 mRNA로 처리하였다.
2-5년령의 체중 2-5 kg인 15마리의 수컷 시노몰구스 원숭이들을 아래 표 15에 제시된 연구 설계에 따라 처리하였다:
표 15
PBMC의 투약 전 샘플들을 -4일차에 수집한 다음, 1 및 15일차에 mRNA LNP와 함께 동물에게 근육내 처리하였다. PBMC의 투약 후 샘플을 29일차에 수집하였다. 연구하는 동안 독성 없음 또는 다른 주요 임상 관찰결과들은 발견되지 않았으며, 이는 mRNA LNP가 내약성이 우수함을 나타낸다.
항원-특이적 CD8+ T 세포 반응들을 개선하는 STING 면역 증강제의 능력을 조사하기 위하여, TNFα 및 IL-2에 대한 세포내 사이토카인 염색 (ICS)을 수행하였다. PBMC들을 HPV16 E6 펩티드 풀 또는 HPV16 E7 펩티드 풀로 6 시간 동안 37℃에서 체외 자극하였다. 양성 대조로 PMA/이오노마이신을 이용한 자극을 사용하였으며 배지 단독으로의 자극을 음성 대조로 사용하였다.
TNFα에 대한 ICS에 관한 대표적인 결과들이 도 24A-24C에 제시되어 있는데, 여기서 도 24A는 E6 펩티드 풀을 이용한 체외 자극에 대한 결과를 보여주며, 도 24B는 E7 펩티드 풀을 이용한 체외 자극에 대한 결과를 보여주며 도 24C는 배지 대조를 이용한 체외 자극에 대한 결과를 보여준다. 항원 단독으로 면역화된 투약-전 및 투약-후 그룹 간에 TNFα+ CD8 T 세포 빈도 증가가 없음이 관찰되었다 (그룹 1). STING 처리 단독의 면역화 (그룹 2)는 TNFα+ CD8 T 세포 빈도에 미미한 영향을 주었다. 대조적으로, STING + Ag로 면역화된 그룹들 (그룹 3, 4, 5)은 항원-특이적 TNFα+ CD8 T 세포들에서 유의한 증가를 보여주었다. 또한, “매칭” 항원 용량의 STING:Ag (1:10 비율)로 면역화된 그룹 5는 그룹 1 및 그룹 2 대조와 비교할 때 항원-특이적 TNFα+ CD8 T 세포들에서 유의한 증가를 보여주었다.
IL-2 에 대한 ICS에 관한 대표적인 결과들이 도 25A-25C에 제시되어 있는데, 여기서 도 25A는 E6 펩티드 풀을 이용한 체외 자극에 대한 결과를 보여주며, 도 25B는 E7 펩티드 풀을 이용한 체외 자극에 대한 결과를 보여주며 도 25C는 배지 대조를 이용한 체외 자극에 대한 결과를 보여준다. 모든 면역화된 동물에서 (그룹 1-5) 투약-전 및 투약-후 사이의 IL-2+ CD8 T 세포 빈도에서 보통의 증가가 관찰되었다. 그러나, 1:1 및 1:5 비율의 STING:Ag로 처리된 그룹들 (그룹 3 및 4)에서 IL-2+ CD8 T 세포의 증가가 가장 크게 탐지가능 하였으며, 반면 1:10 비율의 STING:Ag로 처리된 동물은 대조에 비해 IL-2+ CD8 T 세포 증가를 보여주지 않았다. IL-2의 증가는 활성 T 세포 반응 동안 T 세포들의 부분집합들이 IL-2를 분비하는 공지된 능력과 일치한다.
항원-특이적 항체 반응에 대한 NHP에서의 STING:Ag 처리 효과를 조사하기 위하여, E6-특이적 및 E7-특이적 ELISA를 실시하였다. 플레이트를 재조합 E6 (Prospec; #HPV-005 His HPV16 E6) 또는 재조합 E7 (ProteinX; #2003207 His HPV16 E7)로 코팅하였다. Alpha Diagnostics International사의 생쥐 항-E6 단클론 항체 (#HPV16E6 1-M)를 양성 대조로 사용하였다. Fisher/Life Technologies사의 생쥐 항-E7 단클론 항체 (#280006-EA)를 양성 대조로 사용하였다. Jackson ImmunoResearch사의 항-생쥐 IgG-HRP 항체 (#715-035-150)를 양성 대조를 위한 2차 항체로 사용하였다. Abcam사의 항-원숭이 IgG-HRP (#ab112767)를 NHP 혈청에 대한 2차 항체로 사용하였다.
플레이트를 재조합 E6 또는 E7 (500 ng/웰; 100 μl/웰)로 4℃에서 하룻밤 동안 코팅한 다음 실온에서 1시간 동안 TBS SuperBlock으로 차광시켰다. 1차 항체를 추가하였으며 (100 μl/웰) 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 양성 대조 항체를 연속 희석하였다. NHP 혈청을 1:5000으로 희석하였다. 세척 후, 2차 항체를 추가하였으며 (100 μl/웰) 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 양성 대조 항-생쥐 IgG-HRP를 1:5000으로 희석하였다. NHP 혈청에 대해, 항-원숭이 IgG-HRP를 1:30,000으로 희석하였다. 색상을 5분 (항-E6) 또는 10분 (항-E7) 동안 전개시킨 다음, 중단하고 450 nm에서 판독하였다.
항-HPV16 E6 IgG에 대한 대표적인 결과들이 도 26에 제시된다. 항-HPV16 E7 IgG에 대한 대표적인 결과들이 도 27에 제시된다. 항-E6 및 항-E7에 대한 결과들 모두 STING:Ag를, 특히, 1:5 및 1:10의 비율로 처리 시 항원-특이적 항체 반응을 증가시켰음을 나타낸다.
항원-특이적 IgG 반응들을 추가로 연구하기 위하여, 25일차 혈청의 2배 연속 희석물을 사용하여 추가 ELISA 연구들을 실시하였다. 도 28에서 보는 바와 같이, 1:10 STING:Ag 비율로 처리된 동물들에 관한 2-배 연속 희석물은 HPV 백신 단독으로 처리된 동물들과 비교하여 항-HPV16 E6-특이적 IgG 항체들의 수준의 명확한 개선을 보여주었다. 항-E6 IgG 및 항-E7 IgG에 대한 25일차 혈청 2배 연속 희석물을 사용한 이들 ELISA 연구로부터 계산된 역가 값들이 각각 도 29A 및 29B에 제시된다. 특히 항-E6 특이적 반응에 대하여 계산된 역가 값들은 STING 면역 증강제에 의한 개선을 확인시켜주며, 1:10 STING:Ag 비율이 가장 큰 개선을 보여준다.
따라서, 비-인간 영장류 연구에 대해 본 명세서에 기재된 결과들은 STING이 생체내에서 mRNA 백신 항원에 대한 항원-특이적 T 세포 및 항체 반응을 면역증강시킴을 확인시켜 준다.
실시예 12:
HLA*A11 유전자삽입 생쥐에서 다양한 KRAS-STING 백신 형식들의 면역원성
본 실시예에서, 돌연변이체 KRAS 펩티드 항원 mRNA 구조체들의 다양한 상이한 형태들에 대한 면역 반응에 대한 STING 면역 증강제 mRNA 구조체의 효과를 조사하기 위한 두번째 연구에서, HLA*A*11:01 Tg 생쥐 (Taconic, 계통 9660F, n=3)는 STING 면역 증강제 mRNA 구조체와 조합된 돌연변이된 KRAS 펩티드 항원 mRNA 구조체들의 다양한 상이한 형태들을 인코드하는 mRNA를 다음과 같이 투여받았다: KRAS를 인코드하는 mRNA를 STING과 조합하여 0 및 14일차에 투여, 동물을 21일차에 희생시킴. 생쥐들은 0일차에 6-9주령이었다. mRNA를 0.5 mg/kg의 용량으로 (20-g 동물 당 10ug) 동물에게 투여하였다. KRAS 및 STING 구조체들은 5:1 비율(Ag:STING)로 투여된다.
테스트된 돌연변이된 KRAS 구조체들의 유형들은 다음과 같았다: (i) G12D, G12V, G13D 또는 G12C 돌연변이를 내포하는 단일 돌연변이체 KRAS 25량체 펩티드 항원을 인코드하는 mRNA (“단량체”); (ii) 3개 25량체 펩티드 항원들의 연쇄체 (그러므로 75량체 생성)를 인코드하는 mRNA, 각각 하나는 G12D, G12V 및 G13D 돌연변이들 (“KRAS-3MUT 연쇄체”)을 내포함; (iii) 4개 25량체 펩티드 항원들의 연쇄체 (그리하여 100량체를 생성)를 인코드하는 mRNA, 각각 하나는 G12D, G12V, G13D 및 G12C 돌연변이들 (“KRAS-4MUT 연쇄체”)을 내포함; 또는 (iv) 함께 공동투여되는 4개의 별도 mRNA, 각각 G12D, G12V, G13D 또는 G12C 돌연변이를 내포하는 단일 돌연변이체 KRAS 25량체 펩티드 항원을 인코드함 (“풀 단량체”). 상기 구조체들의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열들은 실시예 7에 기재되어 있다. A11-바이러스 에피토프 연쇄체 항원은 또한 STING 또는 대조 mRNA (NTFIX)와 조합하여 테스트되었다 (“검증된 A11 Ag”).
테스트 그룹들은 다음과 같이 표 16에 제시된다:
표 16
KRAS 항원들에 대한 항원-특이적 CD8+ T 세포 반응들을 평가하기 위한 제 1 실험 세트에서, 생쥐의 21일차 비장 세포들은 GolgiPlug (브레펠딘 A)의 존재하에서 섭씨 37도에서 5시간 동안 KRAS 단량체 펩티드 (펩티드 당 2ug/ml)로 체외 재자극되었다. KRAS G12D (aa*7/8-16), KRAS G12V (aa*7/8-16), KRAS G13D (aa*7/8-16), G12C (aa*7/8-16), KRAS WT (aa*7/8-16) 및 펩티드 없음에 대해 세포내 사이토카인 (IFN-γ) 염색 (ICS)을 실시하였다.
KRAS-G12V-특이적 반응에 대한 ICS 결과들은 도 30에 제시된다. KRAS-G12D-특이적 반응에 대한 ICS 결과들은 도 31에 제시된다. 이들 결과들은 항-KRAS-G12V 및 항-KRAS-G12D 특이적 CD8+ T 세포들은 상응하는 KRAS-STING 백신 (단량체 또는 연쇄체)으로 면역화되고 동질의 펩티드로 재자극된 생쥐에서 탐지되었음을 나타낸다. KRAS 돌연변이들을 단량체로 또는 연쇄체로 생쥐에게 투여하였을 경우 비슷한 %의 IFN-감마 양성 CD8+ T 세포들이 보였다. G12V에 대해 관찰된 반응이 G12D에 대해 관찰된 반응보다 더 강했다. 본 실험에서, 항-KRAS G12C 및 항-KRAS G13D 반응들은 관찰되지 않았다 (데이터 도시되지 않음).
KRAS 항원들에 대한 항원-특이적 CD8+ T 세포 반응들을 평가하기 위한 제 2 실험 세트에서, 생쥐의 21일차 비장 세포들을 상응하는 KRAS 펩티드들 (G12V, G12D 또는 WT 대조)로, 그 후 ICS (IFN-γ)로 펄스된 HLA*A11-발현 표적 세포들 (Cos7-A11 세포들)과 공배양하였다. KRAS-G12V-특이적 반응에 대한 Cos7-A11 공배양 결과들은 도 32에 제시된다. KRAS-G12D-특이적 반응에 대한 Cos7-A11 공배양 결과들은 도 33에 제시된다. 이들 결과들은 항-KRAS-G12V 및 항-KRAS-G12D 특이적 CD8+ T 세포 반응들은 상응하는 KRAS-STING 백신 (단량체 또는 연쇄체)으로 면역화되고 G12V 또는 G12D로 펄스된 A11+ 발현 세포주로 재자극된 생쥐에서 탐지되었음을 나타낸다. 그러므로, KRAS 항원들에 대한 항원-특이적 CD8+ T 세포 반응들의 탐지에 관한 이러한 제 2 실험 세트에서 얻은 결과들은 동질의 펩티드들로 재자극한 것을 사용한 제 1 실험 세트의 결과와 매우 유사하였다.
마지막으로, 공지의 A*11-제한된 바이러스 에피토프에 대한 항원-특이적 반응을 증강시키는 STING의 능력을 A11-바이러스 에피토프 연쇄체로 면역화된 생쥐의 21일차 비장 세포들을 사용하여 평가하였다. 8가지 바이러스 에피토프 (EBV BRLF1, FLU, HIV NEF, EBV, HBV 코어 항원, HCV, CMV 및 BCL-2L1) (각 25개 아미노산)들을 연쇄체화하고, A11-유전자삽입 생쥐에서 STING과 조합한 항원으로서 사용하기 위한 mRNA에 의해 인코드되었다 (표 16에서 치료 그룹 9). A11-바이러스 에피토프 연쇄체는 또한 NTFIX 대조 mRNA와 공동-투여되었다 (표 16에서 치료 그룹 10). 8가지 중 5가지 에피토프 (EBV BRLF1, FLU, HIV NEF, EBV, HBV 코어 항원)는 비교적 낮은 예상 IC50를 가지는 검증된 A11 결합제로 검증되었였으며; 다른 3가지 에피토프 (HCV, CMV 및 BCL-2L1)는 A11에 대해 보다 보통의 예상 친화도를 가졌으나 실험적으로 검증되지는 않았다. 바이러스 에피토프에 대한 아미노산 서열, 및 그 IC50이 아래 표 17에 제시된다:
표 17
항원-특이적 CD8+ T 세포 반응을 탐지하기 위해, 21일차 비장 세포들을 개개의 A*11 바이러스 에피토프로, 후속하여 ICS (IFN-γ 및 TNF-α)로 체외 재자극하였다. 도 34에서 보는 바와 같이, 8가지 중 4가지의 바이러스 에피토프 (EBV, EBV BRLF1, FLU 및 HIV NEF)에 대해 항원-특이적 CD8+ T 세포 반응들이 관찰되었으며, STING은 이들 4가지 바이러스 에피토프들에 대한 T 세포 반응들을 증강시켰다.
낮은 용량 (10 μg) 또는 높은 용량 (30 μg)의 KRAS-4MUT 연쇄체를 5:1 Ag:STING 비율로 STING 면역 증강제 mRNA와 조합하여 사용한 HLA*A11 유전자삽입 생쥐에서 반복 연구를 실시하였다. STING 면역 증강제 구조체에 의한 G12V-특이적 CD8 T 세포 반응들의 유의한 개선이 다시 관찰되었으며, 보다 높은 용량의 테스트 항원 (30 μg)에서 가장 큰 개선이 나타났다.
따라서, HLA*A11 유전자삽입 생쥐에 관해 본 명세서에 기재된 결과들은 STING이 다른 A11-제한된 바이러스 항원들에 대한 항원-특이적 T 세포 항-KRAS 반응, 뿐만 아니라 항-바이러스 반응을 증강시키며, 다양한 형식들의 (단량체 및 연쇄체) 백신 항원들에 대한 반응을 면역증강시킬 수 있음을 나타낸다.
그 외 구체예
본 발명을 이의 상세한 설명과 관련하여 설명하였으나, 전술한 설명은 예시하기 위한 것이지, 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다. 다른 양상들, 이점 및 변형들은 하기 청구범위에 속한다.
본 명세서에 기재된 모든 문헌들은 그 전문이 참고로 포함된다.
SEQUENCE LISTING
<110> MODERNATX, INC
<120> IMMUNOMODULATORY THERAPEUTIC MRNA COMPOSITIONS ENCODING
ACTIVATING ONCOGENE MUTATION PEPTIDES
<130> MDN-015PC
<140> PCT/US2018/016510
<141> 2018-02-01
<150> US 62/453,465
<151> 2017-02-01
<150> US 62/467,063
<151> 2017-03-03
<150> US 62/490,523
<151> 2017-04-26
<150> US 62/541,571
<151> 2017-08-04
<160> 232
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huSTING(V155M); no epitope tag
<400> 1
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 2
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(R284T); no epitope tag
<400> 2
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Thr Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 3
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu STING (R284M); no epitope tag
<400> 3
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Met Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 4
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R284K); no epitope tag
<400> 4
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Lys Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 5
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(N154S); no epitope tag
<400> 5
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Ser Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 6
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(V147L); no epitope tag
<400> 6
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Leu Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 7
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (E315Q); no epitope tag
<400> 7
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Gln Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 8
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R375A); no epitope tag
<400> 8
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Ala Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 9
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(V147L/N154S/V155M); no epitope tag
<400> 9
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Leu Cys Glu Lys Gly Asn Phe Ser Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 10
<211> 379
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(R284M/V147L/N154S/V155M); no epitope tag
<400> 10
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Leu Cys Glu Lys Gly Asn Phe Ser Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Met Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
370 375
<210> 11
<211> 419
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(419)
<223> super mouse IRF3 S396D; no epitope tag
<400> 11
Met Glu Thr Pro Lys Pro Arg Ile Leu Pro Trp Leu Val Ser Gln Leu
1 5 10 15
Asp Leu Gly Gln Leu Glu Gly Val Ala Trp Leu Asp Glu Ser Arg Thr
20 25 30
Arg Phe Arg Ile Pro Trp Lys His Gly Leu Arg Gln Asp Ala Gln Met
35 40 45
Ala Asp Phe Gly Ile Phe Gln Ala Trp Ala Glu Ala Ser Gly Ala Tyr
50 55 60
Thr Pro Gly Lys Asp Lys Pro Asp Val Ser Thr Trp Lys Arg Asn Phe
65 70 75 80
Arg Ser Ala Leu Asn Arg Lys Glu Val Leu Arg Leu Ala Ala Asp Asn
85 90 95
Ser Lys Asp Pro Tyr Asp Pro His Lys Val Tyr Glu Phe Val Thr Pro
100 105 110
Gly Ala Arg Asp Phe Val His Leu Gly Ala Ser Pro Asp Thr Asn Gly
115 120 125
Lys Ser Ser Leu Pro His Ser Gln Glu Asn Leu Pro Lys Leu Phe Asp
130 135 140
Gly Leu Ile Leu Gly Pro Leu Lys Asp Glu Gly Ser Ser Asp Leu Ala
145 150 155 160
Ile Val Ser Asp Pro Ser Gln Gln Leu Pro Ser Pro Asn Val Asn Asn
165 170 175
Phe Leu Asn Pro Ala Pro Gln Glu Asn Pro Leu Lys Gln Leu Leu Ala
180 185 190
Glu Glu Gln Trp Glu Phe Glu Val Thr Ala Phe Tyr Arg Gly Arg Gln
195 200 205
Val Phe Gln Gln Thr Leu Phe Cys Pro Gly Gly Leu Arg Leu Val Gly
210 215 220
Ser Thr Ala Asp Met Thr Leu Pro Trp Gln Pro Val Thr Leu Pro Asp
225 230 235 240
Pro Glu Gly Phe Leu Thr Asp Lys Leu Val Lys Glu Tyr Val Gly Gln
245 250 255
Val Leu Lys Gly Leu Gly Asn Gly Leu Ala Leu Trp Gln Ala Gly Gln
260 265 270
Cys Leu Trp Ala Gln Arg Leu Gly His Ser His Ala Phe Trp Ala Leu
275 280 285
Gly Glu Glu Leu Leu Pro Asp Ser Gly Arg Gly Pro Asp Gly Glu Val
290 295 300
His Lys Asp Lys Asp Gly Ala Val Phe Asp Leu Arg Pro Phe Val Ala
305 310 315 320
Asp Leu Ile Ala Phe Met Glu Gly Ser Gly His Ser Pro Arg Tyr Thr
325 330 335
Leu Trp Phe Cys Met Gly Glu Met Trp Pro Gln Asp Gln Pro Trp Val
340 345 350
Lys Arg Leu Val Met Val Lys Val Val Pro Thr Cys Leu Lys Glu Leu
355 360 365
Leu Glu Met Ala Arg Glu Gly Gly Ala Ser Ser Leu Lys Thr Val Asp
370 375 380
Leu His Ile Asp Asn Ser Gln Pro Ile Ser Leu Thr Ser Asp Gln Tyr
385 390 395 400
Lys Ala Tyr Leu Gln Asp Leu Val Glu Asp Met Asp Phe Gln Ala Thr
405 410 415
Gly Asn Ile
<210> 12
<211> 427
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(427)
<223> super human IRF3 S396D; no epitope tag
<400> 12
Met Gly Thr Pro Lys Pro Arg Ile Leu Pro Trp Leu Val Ser Gln Leu
1 5 10 15
Asp Leu Gly Gln Leu Glu Gly Val Ala Trp Val Asn Lys Ser Arg Thr
20 25 30
Arg Phe Arg Ile Pro Trp Lys His Gly Leu Arg Gln Asp Ala Gln Gln
35 40 45
Glu Asp Phe Gly Ile Phe Gln Ala Trp Ala Glu Ala Thr Gly Ala Tyr
50 55 60
Val Pro Gly Arg Asp Lys Pro Asp Leu Pro Thr Trp Lys Arg Asn Phe
65 70 75 80
Arg Ser Ala Leu Asn Arg Lys Glu Gly Leu Arg Leu Ala Glu Asp Arg
85 90 95
Ser Lys Asp Pro His Asp Pro His Lys Ile Tyr Glu Phe Val Asn Ser
100 105 110
Gly Val Gly Asp Phe Ser Gln Pro Asp Thr Ser Pro Asp Thr Asn Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Thr Ser Asp Thr Gln Glu Asp Ile Leu Asp Glu Leu Leu
130 135 140
Gly Asn Met Val Leu Ala Pro Leu Pro Asp Pro Gly Pro Pro Ser Leu
145 150 155 160
Ala Val Ala Pro Glu Pro Cys Pro Gln Pro Leu Arg Ser Pro Ser Leu
165 170 175
Asp Asn Pro Thr Pro Phe Pro Asn Leu Gly Pro Ser Glu Asn Pro Leu
180 185 190
Lys Arg Leu Leu Val Pro Gly Glu Glu Trp Glu Phe Glu Val Thr Ala
195 200 205
Phe Tyr Arg Gly Arg Gln Val Phe Gln Gln Thr Ile Ser Cys Pro Glu
210 215 220
Gly Leu Arg Leu Val Gly Ser Glu Val Gly Asp Arg Thr Leu Pro Gly
225 230 235 240
Trp Pro Val Thr Leu Pro Asp Pro Gly Met Ser Leu Thr Asp Arg Gly
245 250 255
Val Met Ser Tyr Val Arg His Val Leu Ser Cys Leu Gly Gly Gly Leu
260 265 270
Ala Leu Trp Arg Ala Gly Gln Trp Leu Trp Ala Gln Arg Leu Gly His
275 280 285
Cys His Thr Tyr Trp Ala Val Ser Glu Glu Leu Leu Pro Asn Ser Gly
290 295 300
His Gly Pro Asp Gly Glu Val Pro Lys Asp Lys Glu Gly Gly Val Phe
305 310 315 320
Asp Leu Gly Pro Phe Ile Val Asp Leu Ile Thr Phe Thr Glu Gly Ser
325 330 335
Gly Arg Ser Pro Arg Tyr Ala Leu Trp Phe Cys Val Gly Glu Ser Trp
340 345 350
Pro Gln Asp Gln Pro Trp Thr Lys Arg Leu Val Met Val Lys Val Val
355 360 365
Pro Thr Cys Leu Arg Ala Leu Val Glu Met Ala Arg Val Gly Gly Ala
370 375 380
Ser Ser Leu Glu Asn Thr Val Asp Leu His Ile Asp Asn Ser His Pro
385 390 395 400
Leu Ser Leu Thr Ser Asp Gln Tyr Lys Ala Tyr Leu Gln Asp Leu Val
405 410 415
Glu Gly Met Asp Phe Gln Gly Pro Gly Glu Thr
420 425
<210> 13
<211> 503
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Wild-type Hu IRF7 isoform A; P037 without epitope tag
<400> 13
Met Ala Leu Ala Pro Glu Arg Ala Ala Pro Arg Val Leu Phe Gly Glu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gly Glu Ile Ser Ser Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Gln Trp
20 25 30
Leu Asp Glu Ala Arg Thr Cys Phe Arg Val Pro Trp Lys His Phe Ala
35 40 45
Arg Lys Asp Leu Ser Glu Ala Asp Ala Arg Ile Phe Lys Ala Trp Ala
50 55 60
Val Ala Arg Gly Arg Trp Pro Pro Ser Ser Arg Gly Gly Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Gly Trp Lys Thr Asn Phe Arg
85 90 95
Cys Ala Leu Arg Ser Thr Arg Arg Phe Val Met Leu Arg Asp Asn Ser
100 105 110
Gly Asp Pro Ala Asp Pro His Lys Val Tyr Ala Leu Ser Arg Glu Leu
115 120 125
Cys Trp Arg Glu Gly Pro Gly Thr Asp Gln Thr Glu Ala Glu Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Val Pro Pro Pro Gln Gly Gly Pro Pro Gly Pro Phe Leu Ala
145 150 155 160
His Thr His Ala Gly Leu Gln Ala Pro Gly Pro Leu Pro Ala Pro Ala
165 170 175
Gly Asp Lys Gly Asp Leu Leu Leu Gln Ala Val Gln Gln Ser Cys Leu
180 185 190
Ala Asp His Leu Leu Thr Ala Ser Trp Gly Ala Asp Pro Val Pro Thr
195 200 205
Lys Ala Pro Gly Glu Gly Gln Glu Gly Leu Pro Leu Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Ala Gly Gly Pro Gly Leu Pro Ala Gly Glu Leu Tyr Gly Trp Ala Val
225 230 235 240
Glu Thr Thr Pro Ser Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Leu Thr Thr Gly
245 250 255
Glu Ala Ala Ala Pro Glu Ser Pro His Gln Ala Glu Pro Tyr Leu Ser
260 265 270
Pro Ser Pro Ser Ala Cys Thr Ala Val Gln Glu Pro Ser Pro Gly Ala
275 280 285
Leu Asp Val Thr Ile Met Tyr Lys Gly Arg Thr Val Leu Gln Lys Val
290 295 300
Val Gly His Pro Ser Cys Thr Phe Leu Tyr Gly Pro Pro Asp Pro Ala
305 310 315 320
Val Arg Ala Thr Asp Pro Gln Gln Val Ala Phe Pro Ser Pro Ala Glu
325 330 335
Leu Pro Asp Gln Lys Gln Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Leu Leu Arg His
340 345 350
Val Ala Pro Gly Leu His Leu Glu Leu Arg Gly Pro Gln Leu Trp Ala
355 360 365
Arg Arg Met Gly Lys Cys Lys Val Tyr Trp Glu Val Gly Gly Pro Pro
370 375 380
Gly Ser Ala Ser Pro Ser Thr Pro Ala Cys Leu Leu Pro Arg Asn Cys
385 390 395 400
Asp Thr Pro Ile Phe Asp Phe Arg Val Phe Phe Gln Glu Leu Val Glu
405 410 415
Phe Arg Ala Arg Gln Arg Arg Gly Ser Pro Arg Tyr Thr Ile Tyr Leu
420 425 430
Gly Phe Gly Gln Asp Leu Ser Ala Gly Arg Pro Lys Glu Lys Ser Leu
435 440 445
Val Leu Val Lys Leu Glu Pro Trp Leu Cys Arg Val His Leu Glu Gly
450 455 460
Thr Gln Arg Glu Gly Val Ser Ser Leu Asp Ser Ser Ser Leu Ser Leu
465 470 475 480
Cys Leu Ser Ser Ala Asn Ser Leu Tyr Asp Asp Ile Glu Cys Phe Leu
485 490 495
Met Glu Leu Glu Gln Pro Ala
500
<210> 14
<211> 503
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7 S477D/S479D; P033
without epitope tag
<400> 14
Met Ala Leu Ala Pro Glu Arg Ala Ala Pro Arg Val Leu Phe Gly Glu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gly Glu Ile Ser Ser Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Gln Trp
20 25 30
Leu Asp Glu Ala Arg Thr Cys Phe Arg Val Pro Trp Lys His Phe Ala
35 40 45
Arg Lys Asp Leu Ser Glu Ala Asp Ala Arg Ile Phe Lys Ala Trp Ala
50 55 60
Val Ala Arg Gly Arg Trp Pro Pro Ser Ser Arg Gly Gly Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Gly Trp Lys Thr Asn Phe Arg
85 90 95
Cys Ala Leu Arg Ser Thr Arg Arg Phe Val Met Leu Arg Asp Asn Ser
100 105 110
Gly Asp Pro Ala Asp Pro His Lys Val Tyr Ala Leu Ser Arg Glu Leu
115 120 125
Cys Trp Arg Glu Gly Pro Gly Thr Asp Gln Thr Glu Ala Glu Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Val Pro Pro Pro Gln Gly Gly Pro Pro Gly Pro Phe Leu Ala
145 150 155 160
His Thr His Ala Gly Leu Gln Ala Pro Gly Pro Leu Pro Ala Pro Ala
165 170 175
Gly Asp Lys Gly Asp Leu Leu Leu Gln Ala Val Gln Gln Ser Cys Leu
180 185 190
Ala Asp His Leu Leu Thr Ala Ser Trp Gly Ala Asp Pro Val Pro Thr
195 200 205
Lys Ala Pro Gly Glu Gly Gln Glu Gly Leu Pro Leu Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Ala Gly Gly Pro Gly Leu Pro Ala Gly Glu Leu Tyr Gly Trp Ala Val
225 230 235 240
Glu Thr Thr Pro Ser Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Leu Thr Thr Gly
245 250 255
Glu Ala Ala Ala Pro Glu Ser Pro His Gln Ala Glu Pro Tyr Leu Ser
260 265 270
Pro Ser Pro Ser Ala Cys Thr Ala Val Gln Glu Pro Ser Pro Gly Ala
275 280 285
Leu Asp Val Thr Ile Met Tyr Lys Gly Arg Thr Val Leu Gln Lys Val
290 295 300
Val Gly His Pro Ser Cys Thr Phe Leu Tyr Gly Pro Pro Asp Pro Ala
305 310 315 320
Val Arg Ala Thr Asp Pro Gln Gln Val Ala Phe Pro Ser Pro Ala Glu
325 330 335
Leu Pro Asp Gln Lys Gln Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Leu Leu Arg His
340 345 350
Val Ala Pro Gly Leu His Leu Glu Leu Arg Gly Pro Gln Leu Trp Ala
355 360 365
Arg Arg Met Gly Lys Cys Lys Val Tyr Trp Glu Val Gly Gly Pro Pro
370 375 380
Gly Ser Ala Ser Pro Ser Thr Pro Ala Cys Leu Leu Pro Arg Asn Cys
385 390 395 400
Asp Thr Pro Ile Phe Asp Phe Arg Val Phe Phe Gln Glu Leu Val Glu
405 410 415
Phe Arg Ala Arg Gln Arg Arg Gly Ser Pro Arg Tyr Thr Ile Tyr Leu
420 425 430
Gly Phe Gly Gln Asp Leu Ser Ala Gly Arg Pro Lys Glu Lys Ser Leu
435 440 445
Val Leu Val Lys Leu Glu Pro Trp Leu Cys Arg Val His Leu Glu Gly
450 455 460
Thr Gln Arg Glu Gly Val Ser Ser Leu Asp Ser Ser Asp Leu Asp Leu
465 470 475 480
Cys Leu Ser Ser Ala Asn Ser Leu Tyr Asp Asp Ile Glu Cys Phe Leu
485 490 495
Met Glu Leu Glu Gln Pro Ala
500
<210> 15
<211> 503
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7 S475D/S477D/L480D; P034
without epitope tag
<400> 15
Met Ala Leu Ala Pro Glu Arg Ala Ala Pro Arg Val Leu Phe Gly Glu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gly Glu Ile Ser Ser Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Gln Trp
20 25 30
Leu Asp Glu Ala Arg Thr Cys Phe Arg Val Pro Trp Lys His Phe Ala
35 40 45
Arg Lys Asp Leu Ser Glu Ala Asp Ala Arg Ile Phe Lys Ala Trp Ala
50 55 60
Val Ala Arg Gly Arg Trp Pro Pro Ser Ser Arg Gly Gly Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Gly Trp Lys Thr Asn Phe Arg
85 90 95
Cys Ala Leu Arg Ser Thr Arg Arg Phe Val Met Leu Arg Asp Asn Ser
100 105 110
Gly Asp Pro Ala Asp Pro His Lys Val Tyr Ala Leu Ser Arg Glu Leu
115 120 125
Cys Trp Arg Glu Gly Pro Gly Thr Asp Gln Thr Glu Ala Glu Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Val Pro Pro Pro Gln Gly Gly Pro Pro Gly Pro Phe Leu Ala
145 150 155 160
His Thr His Ala Gly Leu Gln Ala Pro Gly Pro Leu Pro Ala Pro Ala
165 170 175
Gly Asp Lys Gly Asp Leu Leu Leu Gln Ala Val Gln Gln Ser Cys Leu
180 185 190
Ala Asp His Leu Leu Thr Ala Ser Trp Gly Ala Asp Pro Val Pro Thr
195 200 205
Lys Ala Pro Gly Glu Gly Gln Glu Gly Leu Pro Leu Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Ala Gly Gly Pro Gly Leu Pro Ala Gly Glu Leu Tyr Gly Trp Ala Val
225 230 235 240
Glu Thr Thr Pro Ser Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Leu Thr Thr Gly
245 250 255
Glu Ala Ala Ala Pro Glu Ser Pro His Gln Ala Glu Pro Tyr Leu Ser
260 265 270
Pro Ser Pro Ser Ala Cys Thr Ala Val Gln Glu Pro Ser Pro Gly Ala
275 280 285
Leu Asp Val Thr Ile Met Tyr Lys Gly Arg Thr Val Leu Gln Lys Val
290 295 300
Val Gly His Pro Ser Cys Thr Phe Leu Tyr Gly Pro Pro Asp Pro Ala
305 310 315 320
Val Arg Ala Thr Asp Pro Gln Gln Val Ala Phe Pro Ser Pro Ala Glu
325 330 335
Leu Pro Asp Gln Lys Gln Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Leu Leu Arg His
340 345 350
Val Ala Pro Gly Leu His Leu Glu Leu Arg Gly Pro Gln Leu Trp Ala
355 360 365
Arg Arg Met Gly Lys Cys Lys Val Tyr Trp Glu Val Gly Gly Pro Pro
370 375 380
Gly Ser Ala Ser Pro Ser Thr Pro Ala Cys Leu Leu Pro Arg Asn Cys
385 390 395 400
Asp Thr Pro Ile Phe Asp Phe Arg Val Phe Phe Gln Glu Leu Val Glu
405 410 415
Phe Arg Ala Arg Gln Arg Arg Gly Ser Pro Arg Tyr Thr Ile Tyr Leu
420 425 430
Gly Phe Gly Gln Asp Leu Ser Ala Gly Arg Pro Lys Glu Lys Ser Leu
435 440 445
Val Leu Val Lys Leu Glu Pro Trp Leu Cys Arg Val His Leu Glu Gly
450 455 460
Thr Gln Arg Glu Gly Val Ser Ser Leu Asp Asp Ser Asp Leu Ser Asp
465 470 475 480
Cys Leu Ser Ser Ala Asn Ser Leu Tyr Asp Asp Ile Glu Cys Phe Leu
485 490 495
Met Glu Leu Glu Gln Pro Ala
500
<210> 16
<211> 503
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7
S475D/S476D/S477D/S479D/S483D/S487D; P035 without epitope tag
<400> 16
Met Ala Leu Ala Pro Glu Arg Ala Ala Pro Arg Val Leu Phe Gly Glu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gly Glu Ile Ser Ser Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Gln Trp
20 25 30
Leu Asp Glu Ala Arg Thr Cys Phe Arg Val Pro Trp Lys His Phe Ala
35 40 45
Arg Lys Asp Leu Ser Glu Ala Asp Ala Arg Ile Phe Lys Ala Trp Ala
50 55 60
Val Ala Arg Gly Arg Trp Pro Pro Ser Ser Arg Gly Gly Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Gly Trp Lys Thr Asn Phe Arg
85 90 95
Cys Ala Leu Arg Ser Thr Arg Arg Phe Val Met Leu Arg Asp Asn Ser
100 105 110
Gly Asp Pro Ala Asp Pro His Lys Val Tyr Ala Leu Ser Arg Glu Leu
115 120 125
Cys Trp Arg Glu Gly Pro Gly Thr Asp Gln Thr Glu Ala Glu Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Val Pro Pro Pro Gln Gly Gly Pro Pro Gly Pro Phe Leu Ala
145 150 155 160
His Thr His Ala Gly Leu Gln Ala Pro Gly Pro Leu Pro Ala Pro Ala
165 170 175
Gly Asp Lys Gly Asp Leu Leu Leu Gln Ala Val Gln Gln Ser Cys Leu
180 185 190
Ala Asp His Leu Leu Thr Ala Ser Trp Gly Ala Asp Pro Val Pro Thr
195 200 205
Lys Ala Pro Gly Glu Gly Gln Glu Gly Leu Pro Leu Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Ala Gly Gly Pro Gly Leu Pro Ala Gly Glu Leu Tyr Gly Trp Ala Val
225 230 235 240
Glu Thr Thr Pro Ser Pro Gly Pro Gln Pro Ala Ala Leu Thr Thr Gly
245 250 255
Glu Ala Ala Ala Pro Glu Ser Pro His Gln Ala Glu Pro Tyr Leu Ser
260 265 270
Pro Ser Pro Ser Ala Cys Thr Ala Val Gln Glu Pro Ser Pro Gly Ala
275 280 285
Leu Asp Val Thr Ile Met Tyr Lys Gly Arg Thr Val Leu Gln Lys Val
290 295 300
Val Gly His Pro Ser Cys Thr Phe Leu Tyr Gly Pro Pro Asp Pro Ala
305 310 315 320
Val Arg Ala Thr Asp Pro Gln Gln Val Ala Phe Pro Ser Pro Ala Glu
325 330 335
Leu Pro Asp Gln Lys Gln Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Leu Leu Arg His
340 345 350
Val Ala Pro Gly Leu His Leu Glu Leu Arg Gly Pro Gln Leu Trp Ala
355 360 365
Arg Arg Met Gly Lys Cys Lys Val Tyr Trp Glu Val Gly Gly Pro Pro
370 375 380
Gly Ser Ala Ser Pro Ser Thr Pro Ala Cys Leu Leu Pro Arg Asn Cys
385 390 395 400
Asp Thr Pro Ile Phe Asp Phe Arg Val Phe Phe Gln Glu Leu Val Glu
405 410 415
Phe Arg Ala Arg Gln Arg Arg Gly Ser Pro Arg Tyr Thr Ile Tyr Leu
420 425 430
Gly Phe Gly Gln Asp Leu Ser Ala Gly Arg Pro Lys Glu Lys Ser Leu
435 440 445
Val Leu Val Lys Leu Glu Pro Trp Leu Cys Arg Val His Leu Glu Gly
450 455 460
Thr Gln Arg Glu Gly Val Ser Ser Leu Asp Asp Asp Asp Leu Asp Leu
465 470 475 480
Cys Leu Asp Ser Ala Asn Asp Leu Tyr Asp Asp Ile Glu Cys Phe Leu
485 490 495
Met Glu Leu Glu Gln Pro Ala
500
<210> 17
<211> 282
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active truncated Hu IRF7 1-246 +
468-503; P032 without epitope tag
<400> 17
Met Ala Leu Ala Pro Glu Arg Ala Ala Pro Arg Val Leu Phe Gly Glu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gly Glu Ile Ser Ser Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Gln Trp
20 25 30
Leu Asp Glu Ala Arg Thr Cys Phe Arg Val Pro Trp Lys His Phe Ala
35 40 45
Arg Lys Asp Leu Ser Glu Ala Asp Ala Arg Ile Phe Lys Ala Trp Ala
50 55 60
Val Ala Arg Gly Arg Trp Pro Pro Ser Ser Arg Gly Gly Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Gly Trp Lys Thr Asn Phe Arg
85 90 95
Cys Ala Leu Arg Ser Thr Arg Arg Phe Val Met Leu Arg Asp Asn Ser
100 105 110
Gly Asp Pro Ala Asp Pro His Lys Val Tyr Ala Leu Ser Arg Glu Leu
115 120 125
Cys Trp Arg Glu Gly Pro Gly Thr Asp Gln Thr Glu Ala Glu Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Val Pro Pro Pro Gln Gly Gly Pro Pro Gly Pro Phe Leu Ala
145 150 155 160
His Thr His Ala Gly Leu Gln Ala Pro Gly Pro Leu Pro Ala Pro Ala
165 170 175
Gly Asp Lys Gly Asp Leu Leu Leu Gln Ala Val Gln Gln Ser Cys Leu
180 185 190
Ala Asp His Leu Leu Thr Ala Ser Trp Gly Ala Asp Pro Val Pro Thr
195 200 205
Lys Ala Pro Gly Glu Gly Gln Glu Gly Leu Pro Leu Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Ala Gly Gly Pro Gly Leu Pro Ala Gly Glu Leu Tyr Gly Trp Ala Val
225 230 235 240
Glu Thr Thr Pro Ser Pro Glu Gly Val Ser Ser Leu Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Leu Ser Leu Cys Leu Ser Ser Ala Asn Ser Leu Tyr Asp Asp Ile Glu
260 265 270
Cys Phe Leu Met Glu Leu Glu Gln Pro Ala
275 280
<210> 18
<211> 282
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active truncated Hu IRF7 1-246 +
468-503 plus S475D/S476D/S477D/S479D/S483D/S487D; P036 without
epitope tag
<400> 18
Met Ala Leu Ala Pro Glu Arg Ala Ala Pro Arg Val Leu Phe Gly Glu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gly Glu Ile Ser Ser Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Gln Trp
20 25 30
Leu Asp Glu Ala Arg Thr Cys Phe Arg Val Pro Trp Lys His Phe Ala
35 40 45
Arg Lys Asp Leu Ser Glu Ala Asp Ala Arg Ile Phe Lys Ala Trp Ala
50 55 60
Val Ala Arg Gly Arg Trp Pro Pro Ser Ser Arg Gly Gly Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Gly Trp Lys Thr Asn Phe Arg
85 90 95
Cys Ala Leu Arg Ser Thr Arg Arg Phe Val Met Leu Arg Asp Asn Ser
100 105 110
Gly Asp Pro Ala Asp Pro His Lys Val Tyr Ala Leu Ser Arg Glu Leu
115 120 125
Cys Trp Arg Glu Gly Pro Gly Thr Asp Gln Thr Glu Ala Glu Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Val Pro Pro Pro Gln Gly Gly Pro Pro Gly Pro Phe Leu Ala
145 150 155 160
His Thr His Ala Gly Leu Gln Ala Pro Gly Pro Leu Pro Ala Pro Ala
165 170 175
Gly Asp Lys Gly Asp Leu Leu Leu Gln Ala Val Gln Gln Ser Cys Leu
180 185 190
Ala Asp His Leu Leu Thr Ala Ser Trp Gly Ala Asp Pro Val Pro Thr
195 200 205
Lys Ala Pro Gly Glu Gly Gln Glu Gly Leu Pro Leu Thr Gly Ala Cys
210 215 220
Ala Gly Gly Pro Gly Leu Pro Ala Gly Glu Leu Tyr Gly Trp Ala Val
225 230 235 240
Glu Thr Thr Pro Ser Pro Glu Gly Val Ser Ser Leu Asp Asp Asp Asp
245 250 255
Leu Asp Leu Cys Leu Asp Ser Ala Asn Asp Leu Tyr Asp Asp Ile Glu
260 265 270
Cys Phe Leu Met Glu Leu Glu Gln Pro Ala
275 280
<210> 19
<211> 408
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: truncated Hu IRF7 1-151 + 247-503; P038 without
epitope tag; null mutation
<400> 19
Met Ala Leu Ala Pro Glu Arg Ala Ala Pro Arg Val Leu Phe Gly Glu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Gly Glu Ile Ser Ser Gly Cys Tyr Glu Gly Leu Gln Trp
20 25 30
Leu Asp Glu Ala Arg Thr Cys Phe Arg Val Pro Trp Lys His Phe Ala
35 40 45
Arg Lys Asp Leu Ser Glu Ala Asp Ala Arg Ile Phe Lys Ala Trp Ala
50 55 60
Val Ala Arg Gly Arg Trp Pro Pro Ser Ser Arg Gly Gly Gly Pro Pro
65 70 75 80
Pro Glu Ala Glu Thr Ala Glu Arg Ala Gly Trp Lys Thr Asn Phe Arg
85 90 95
Cys Ala Leu Arg Ser Thr Arg Arg Phe Val Met Leu Arg Asp Asn Ser
100 105 110
Gly Asp Pro Ala Asp Pro His Lys Val Tyr Ala Leu Ser Arg Glu Leu
115 120 125
Cys Trp Arg Glu Gly Pro Gly Thr Asp Gln Thr Glu Ala Glu Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Val Pro Pro Pro Gln Gly Pro Gln Pro Ala Ala Leu Thr Thr
145 150 155 160
Gly Glu Ala Ala Ala Pro Glu Ser Pro His Gln Ala Glu Pro Tyr Leu
165 170 175
Ser Pro Ser Pro Ser Ala Cys Thr Ala Val Gln Glu Pro Ser Pro Gly
180 185 190
Ala Leu Asp Val Thr Ile Met Tyr Lys Gly Arg Thr Val Leu Gln Lys
195 200 205
Val Val Gly His Pro Ser Cys Thr Phe Leu Tyr Gly Pro Pro Asp Pro
210 215 220
Ala Val Arg Ala Thr Asp Pro Gln Gln Val Ala Phe Pro Ser Pro Ala
225 230 235 240
Glu Leu Pro Asp Gln Lys Gln Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Leu Leu Arg
245 250 255
His Val Ala Pro Gly Leu His Leu Glu Leu Arg Gly Pro Gln Leu Trp
260 265 270
Ala Arg Arg Met Gly Lys Cys Lys Val Tyr Trp Glu Val Gly Gly Pro
275 280 285
Pro Gly Ser Ala Ser Pro Ser Thr Pro Ala Cys Leu Leu Pro Arg Asn
290 295 300
Cys Asp Thr Pro Ile Phe Asp Phe Arg Val Phe Phe Gln Glu Leu Val
305 310 315 320
Glu Phe Arg Ala Arg Gln Arg Arg Gly Ser Pro Arg Tyr Thr Ile Tyr
325 330 335
Leu Gly Phe Gly Gln Asp Leu Ser Ala Gly Arg Pro Lys Glu Lys Ser
340 345 350
Leu Val Leu Val Lys Leu Glu Pro Trp Leu Cys Arg Val His Leu Glu
355 360 365
Gly Thr Gln Arg Glu Gly Val Ser Ser Leu Asp Ser Ser Ser Leu Ser
370 375 380
Leu Cys Leu Ser Ser Ala Asn Ser Leu Tyr Asp Asp Ile Glu Cys Phe
385 390 395 400
Leu Met Glu Leu Glu Gln Pro Ala
405
<210> 20
<211> 353
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: truncated Hu IRF7 152-503; P039 without epitope tag;
null mutation
<400> 20
Met Gly Gly Pro Pro Gly Pro Phe Leu Ala His Thr His Ala Gly Leu
1 5 10 15
Gln Ala Pro Gly Pro Leu Pro Ala Pro Ala Gly Asp Lys Gly Asp Leu
20 25 30
Leu Leu Gln Ala Val Gln Gln Ser Cys Leu Ala Asp His Leu Leu Thr
35 40 45
Ala Ser Trp Gly Ala Asp Pro Val Pro Thr Lys Ala Pro Gly Glu Gly
50 55 60
Gln Glu Gly Leu Pro Leu Thr Gly Ala Cys Ala Gly Gly Pro Gly Leu
65 70 75 80
Pro Ala Gly Glu Leu Tyr Gly Trp Ala Val Glu Thr Thr Pro Ser Pro
85 90 95
Gly Pro Gln Pro Ala Ala Leu Thr Thr Gly Glu Ala Ala Ala Pro Glu
100 105 110
Ser Pro His Gln Ala Glu Pro Tyr Leu Ser Pro Ser Pro Ser Ala Cys
115 120 125
Thr Ala Val Gln Glu Pro Ser Pro Gly Ala Leu Asp Val Thr Ile Met
130 135 140
Tyr Lys Gly Arg Thr Val Leu Gln Lys Val Val Gly His Pro Ser Cys
145 150 155 160
Thr Phe Leu Tyr Gly Pro Pro Asp Pro Ala Val Arg Ala Thr Asp Pro
165 170 175
Gln Gln Val Ala Phe Pro Ser Pro Ala Glu Leu Pro Asp Gln Lys Gln
180 185 190
Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Leu Leu Arg His Val Ala Pro Gly Leu His
195 200 205
Leu Glu Leu Arg Gly Pro Gln Leu Trp Ala Arg Arg Met Gly Lys Cys
210 215 220
Lys Val Tyr Trp Glu Val Gly Gly Pro Pro Gly Ser Ala Ser Pro Ser
225 230 235 240
Thr Pro Ala Cys Leu Leu Pro Arg Asn Cys Asp Thr Pro Ile Phe Asp
245 250 255
Phe Arg Val Phe Phe Gln Glu Leu Val Glu Phe Arg Ala Arg Gln Arg
260 265 270
Arg Gly Ser Pro Arg Tyr Thr Ile Tyr Leu Gly Phe Gly Gln Asp Leu
275 280 285
Ser Ala Gly Arg Pro Lys Glu Lys Ser Leu Val Leu Val Lys Leu Glu
290 295 300
Pro Trp Leu Cys Arg Val His Leu Glu Gly Thr Gln Arg Glu Gly Val
305 310 315 320
Ser Ser Leu Asp Ser Ser Ser Leu Ser Leu Cys Leu Ser Ser Ala Asn
325 330 335
Ser Leu Tyr Asp Asp Ile Glu Cys Phe Leu Met Glu Leu Glu Gln Pro
340 345 350
Ala
<210> 21
<211> 92
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5 UTR
<400> 21
tcaagctttt ggaccctcgt acagaagcta atacgactca ctatagggaa ataagagaga 60
aaagaagagt aagaagaaat ataagagcca cc 92
<210> 22
<211> 119
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 3 UTR
<400> 22
tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 60
ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt ggtctttgaa taaagtctga gtgggcggc 119
<210> 23
<211> 164
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 3 UTR with mi-122 and mi-142.3p sites
<400> 23
tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggccca aacaccattg 60
tcacactcca tccccccagc ccctcctccc cttcctccat aaagtaggaa acactacatg 120
cacccgtacc cccgtggtct ttgaataaag tctgagtggg cggc 164
<210> 24
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 2A peptide amino acid sequence
<400> 24
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 25
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Nucleotide sequence encoding 2A peptide
<400> 25
ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60
ggacct 66
<210> 26
<211> 108
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Nucleotide sequence encoding 2A peptide
<400> 26
tccggactca gatccgggga tctcaaaatt gtcgctcctg tcaaacaaac tcttaacttt 60
gatttactca aactggctgg ggatgtagaa agcaatccag gtccactc 108
<210> 27
<211> 87
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-142
<400> 27
gacagugcag ucacccauaa aguagaaagc acuacuaaca gcacuggagg guguaguguu 60
uccuacuuua uggaugagug uacugug 87
<210> 28
<211> 23
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-142-3p
<400> 28
uguaguguuu ccuacuuuau gga 23
<210> 29
<211> 23
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-142-3p binding site
<400> 29
uccauaaagu aggaaacacu aca 23
<210> 30
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-142-5p
<400> 30
cauaaaguag aaagcacuac u 21
<210> 31
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-142-5p binding site
<400> 31
aguagugcuu ucuacuuuau g 21
<210> 32
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-122-3p
<400> 32
aacgccauua ucacacuaaa ua 22
<210> 33
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-122-5p
<400> 33
uggaguguga caaugguguu ug 22
<210> 34
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-21-5p
<400> 34
uagcuuauca gacugauguu ga 22
<210> 35
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: miR-21-3p
<400> 35
caacaccagu cgaugggcug u 21
<210> 36
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)15mer
<400> 36
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
<210> 37
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)15mer
<400> 37
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
<210> 38
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)15mer
<400> 38
Met Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
1 5 10 15
<210> 39
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer
<400> 39
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
20 25
<210> 40
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)25mer
<400> 40
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
20 25
<210> 41
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)25mer
<400> 41
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
20 25
<210> 42
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)15mer^3
<400> 42
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys
20 25 30
Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
35 40 45
<210> 43
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)15mer^3
<400> 43
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys
20 25 30
Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
35 40 45
<210> 44
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)15mer^3
<400> 44
Met Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
1 5 10 15
Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Leu
20 25 30
Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
35 40 45
<210> 45
<211> 75
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer^3
<400> 45
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
65 70 75
<210> 46
<211> 75
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)25mer^3
<400> 46
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
65 70 75
<210> 47
<211> 75
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)25mer^3
<400> 47
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
65 70 75
<210> 48
<211> 414
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)15mer_nt.STING(V155M)
<400> 48
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Lys
385 390 395 400
Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
405 410
<210> 49
<211> 414
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)15mer_nt.STING(V155M
<400> 49
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Lys
385 390 395 400
Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
405 410
<210> 50
<211> 414
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)15mer_nt.STING(V155M
<400> 50
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Leu
385 390 395 400
Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
405 410
<210> 51
<211> 423
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer_nt.STING(V155M)
<400> 51
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Thr
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala
405 410 415
Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
420
<210> 52
<211> 423
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)25mer_nt.STING(V155M
<400> 52
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Thr
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala
405 410 415
Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
420
<210> 53
<211> 423
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)25mer_nt.STING(V155M
<400> 53
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Thr
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala
405 410 415
Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
420
<210> 54
<211> 444
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)15mer^3_nt.STING(V155M)
<400> 54
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Lys
385 390 395 400
Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys Leu
405 410 415
Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys Leu Val
420 425 430
Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
435 440
<210> 55
<211> 444
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)15mer^3_nt.STING(V155M
<400> 55
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Lys
385 390 395 400
Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys Leu
405 410 415
Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys Leu Val
420 425 430
Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
435 440
<210> 56
<211> 444
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)15mer^3_nt.STING(V155M
<400> 56
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Leu
385 390 395 400
Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Leu Val
405 410 415
Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Leu Val Val
420 425 430
Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
435 440
<210> 57
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer^3_nt.STING(V155M)
<400> 57
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Thr
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala
405 410 415
Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val
420 425 430
Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
435 440 445
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
450 455 460
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
465 470
<210> 58
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)25mer^3_nt.STING(V155M
<400> 58
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Thr
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala
405 410 415
Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val
420 425 430
Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
435 440 445
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys
450 455 460
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
465 470
<210> 59
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)25mer^3_nt.STING(V155M
<400> 59
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Ala Thr Asn Phe Ser
370 375 380
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Thr
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala
405 410 415
Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val
420 425 430
Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
435 440 445
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys
450 455 460
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
465 470
<210> 60
<211> 414
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)15mer_ct.STING(V155M)
<400> 60
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
20 25 30
Pro Gly Pro Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro
35 40 45
Arg Gly His Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys
50 55 60
Leu Val Thr Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg
65 70 75 80
Tyr Leu Val Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn
85 90 95
Gly Val Cys Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr
100 105 110
Arg Gly Ser Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu
115 120 125
Arg Arg Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu
130 135 140
Pro Asn Ala Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly
145 150 155 160
Leu Ser Gln Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro
165 170 175
Ala Glu Ile Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His
180 185 190
Gly Leu Ala Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro
195 200 205
Glu Leu Gln Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu
210 215 220
Leu Arg Gly Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp
225 230 235 240
Cys Gly Val Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe
245 250 255
Leu Asp Lys Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp
260 265 270
Arg Val Tyr Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg
275 280 285
Ala Gly Thr Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe
290 295 300
Ala Met Ser Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu
305 310 315 320
Glu Gln Ala Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp
325 330 335
Ala Pro Glu Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro
340 345 350
Ala Asp Asp Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu
355 360 365
Arg Gln Glu Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser
370 375 380
Ala Val Pro Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile
385 390 395 400
Ser Gly Met Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
405 410
<210> 61
<211> 414
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)15mer_ct.STING(V155M
<400> 61
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
20 25 30
Pro Gly Pro Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro
35 40 45
Arg Gly His Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys
50 55 60
Leu Val Thr Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg
65 70 75 80
Tyr Leu Val Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn
85 90 95
Gly Val Cys Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr
100 105 110
Arg Gly Ser Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu
115 120 125
Arg Arg Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu
130 135 140
Pro Asn Ala Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly
145 150 155 160
Leu Ser Gln Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro
165 170 175
Ala Glu Ile Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His
180 185 190
Gly Leu Ala Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro
195 200 205
Glu Leu Gln Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu
210 215 220
Leu Arg Gly Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp
225 230 235 240
Cys Gly Val Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe
245 250 255
Leu Asp Lys Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp
260 265 270
Arg Val Tyr Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg
275 280 285
Ala Gly Thr Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe
290 295 300
Ala Met Ser Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu
305 310 315 320
Glu Gln Ala Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp
325 330 335
Ala Pro Glu Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro
340 345 350
Ala Asp Asp Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu
355 360 365
Arg Gln Glu Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser
370 375 380
Ala Val Pro Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile
385 390 395 400
Ser Gly Met Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
405 410
<210> 62
<211> 414
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)15mer_ct.STING(V155M
<400> 62
Met Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
1 5 10 15
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
20 25 30
Pro Gly Pro Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro
35 40 45
Arg Gly His Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys
50 55 60
Leu Val Thr Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg
65 70 75 80
Tyr Leu Val Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn
85 90 95
Gly Val Cys Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr
100 105 110
Arg Gly Ser Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu
115 120 125
Arg Arg Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu
130 135 140
Pro Asn Ala Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly
145 150 155 160
Leu Ser Gln Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro
165 170 175
Ala Glu Ile Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His
180 185 190
Gly Leu Ala Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro
195 200 205
Glu Leu Gln Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu
210 215 220
Leu Arg Gly Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp
225 230 235 240
Cys Gly Val Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe
245 250 255
Leu Asp Lys Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp
260 265 270
Arg Val Tyr Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg
275 280 285
Ala Gly Thr Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe
290 295 300
Ala Met Ser Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu
305 310 315 320
Glu Gln Ala Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp
325 330 335
Ala Pro Glu Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro
340 345 350
Ala Asp Asp Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu
355 360 365
Arg Gln Glu Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser
370 375 380
Ala Val Pro Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile
385 390 395 400
Ser Gly Met Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
405 410
<210> 63
<211> 423
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer_ct.STING(V155M)
<400> 63
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
20 25 30
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Pro His Ser
35 40 45
Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His Gly Ala Gln Lys
50 55 60
Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Leu Trp Gly Leu
65 70 75 80
Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val Leu His Leu Ala
85 90 95
Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys Ser Leu Ala Glu
100 105 110
Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser Tyr Trp Arg Thr
115 120 125
Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly Ala Leu Leu Leu
130 135 140
Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala Val Gly Pro Pro
145 150 155 160
Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln Ala Leu Asn Ile
165 170 175
Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile Ser Ala Val Cys
180 185 190
Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala Trp Ser Tyr Tyr
195 200 205
Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg Ile Arg
210 215 220
Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val Ser Gln
225 230 235 240
Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp Asn Leu
245 250 255
Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro Gln Gln
260 265 270
Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn Ser Ile
275 280 285
Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val Leu Glu
290 295 300
Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr Ser Gln
305 310 315 320
Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu Phe Cys
325 330 335
Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln Asn Asn
340 345 350
Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser Phe Ser
355 360 365
Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys Glu Glu
370 375 380
Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro Ser Thr Ser Thr
385 390 395 400
Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met Glu Lys Pro Leu
405 410 415
Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
420
<210> 64
<211> 423
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)25mer_ct.STING(V155M
<400> 64
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
20 25 30
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Pro His Ser
35 40 45
Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His Gly Ala Gln Lys
50 55 60
Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Leu Trp Gly Leu
65 70 75 80
Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val Leu His Leu Ala
85 90 95
Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys Ser Leu Ala Glu
100 105 110
Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser Tyr Trp Arg Thr
115 120 125
Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly Ala Leu Leu Leu
130 135 140
Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala Val Gly Pro Pro
145 150 155 160
Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln Ala Leu Asn Ile
165 170 175
Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile Ser Ala Val Cys
180 185 190
Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala Trp Ser Tyr Tyr
195 200 205
Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg Ile Arg
210 215 220
Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val Ser Gln
225 230 235 240
Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp Asn Leu
245 250 255
Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro Gln Gln
260 265 270
Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn Ser Ile
275 280 285
Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val Leu Glu
290 295 300
Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr Ser Gln
305 310 315 320
Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu Phe Cys
325 330 335
Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln Asn Asn
340 345 350
Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser Phe Ser
355 360 365
Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys Glu Glu
370 375 380
Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro Ser Thr Ser Thr
385 390 395 400
Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met Glu Lys Pro Leu
405 410 415
Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
420
<210> 65
<211> 423
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)25mer_ct.STING(V155M
<400> 65
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
20 25 30
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Pro His Ser
35 40 45
Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His Gly Ala Gln Lys
50 55 60
Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Leu Trp Gly Leu
65 70 75 80
Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val Leu His Leu Ala
85 90 95
Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys Ser Leu Ala Glu
100 105 110
Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser Tyr Trp Arg Thr
115 120 125
Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly Ala Leu Leu Leu
130 135 140
Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala Val Gly Pro Pro
145 150 155 160
Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln Ala Leu Asn Ile
165 170 175
Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile Ser Ala Val Cys
180 185 190
Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala Trp Ser Tyr Tyr
195 200 205
Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg Ile Arg
210 215 220
Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val Ser Gln
225 230 235 240
Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp Asn Leu
245 250 255
Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro Gln Gln
260 265 270
Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn Ser Ile
275 280 285
Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val Leu Glu
290 295 300
Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr Ser Gln
305 310 315 320
Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu Phe Cys
325 330 335
Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln Asn Asn
340 345 350
Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser Phe Ser
355 360 365
Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys Glu Glu
370 375 380
Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro Ser Thr Ser Thr
385 390 395 400
Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met Glu Lys Pro Leu
405 410 415
Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
420
<210> 66
<211> 444
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)15mer^3_ct.STING(V155M)
<400> 66
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys
20 25 30
Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Ala Thr
35 40 45
Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
50 55 60
Pro Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly
65 70 75 80
His Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val
85 90 95
Thr Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu
100 105 110
Val Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val
115 120 125
Cys Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly
130 135 140
Ser Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg
145 150 155 160
Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn
165 170 175
Ala Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser
180 185 190
Gln Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu
195 200 205
Ile Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu
210 215 220
Ala Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu
225 230 235 240
Gln Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg
245 250 255
Gly Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly
260 265 270
Val Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp
275 280 285
Lys Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val
290 295 300
Tyr Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly
305 310 315 320
Thr Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met
325 330 335
Ser Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln
340 345 350
Ala Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro
355 360 365
Glu Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp
370 375 380
Asp Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln
385 390 395 400
Glu Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val
405 410 415
Pro Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly
420 425 430
Met Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
435 440
<210> 67
<211> 444
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)15mer^3_ct.STING(V155M
<400> 67
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu
1 5 10 15
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Lys
20 25 30
Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Ala Thr
35 40 45
Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
50 55 60
Pro Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly
65 70 75 80
His Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val
85 90 95
Thr Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu
100 105 110
Val Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val
115 120 125
Cys Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly
130 135 140
Ser Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg
145 150 155 160
Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn
165 170 175
Ala Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser
180 185 190
Gln Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu
195 200 205
Ile Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu
210 215 220
Ala Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu
225 230 235 240
Gln Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg
245 250 255
Gly Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly
260 265 270
Val Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp
275 280 285
Lys Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val
290 295 300
Tyr Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly
305 310 315 320
Thr Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met
325 330 335
Ser Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln
340 345 350
Ala Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro
355 360 365
Glu Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp
370 375 380
Asp Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln
385 390 395 400
Glu Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val
405 410 415
Pro Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly
420 425 430
Met Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
435 440
<210> 68
<211> 444
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)15mer^3_ct.STING(V155M
<400> 68
Met Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr
1 5 10 15
Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Leu
20 25 30
Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ala Thr
35 40 45
Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly
50 55 60
Pro Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly
65 70 75 80
His Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val
85 90 95
Thr Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu
100 105 110
Val Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val
115 120 125
Cys Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly
130 135 140
Ser Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg
145 150 155 160
Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn
165 170 175
Ala Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser
180 185 190
Gln Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu
195 200 205
Ile Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu
210 215 220
Ala Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu
225 230 235 240
Gln Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg
245 250 255
Gly Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly
260 265 270
Val Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp
275 280 285
Lys Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val
290 295 300
Tyr Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly
305 310 315 320
Thr Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met
325 330 335
Ser Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln
340 345 350
Ala Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro
355 360 365
Glu Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp
370 375 380
Asp Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln
385 390 395 400
Glu Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val
405 410 415
Pro Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly
420 425 430
Met Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
435 440
<210> 69
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer^3_ct.STING(V155M)
<400> 69
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Ala Thr Asn Phe Ser
65 70 75 80
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Pro
85 90 95
His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His Gly Ala
100 105 110
Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Leu Trp
115 120 125
Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val Leu His
130 135 140
Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys Ser Leu
145 150 155 160
Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser Tyr Trp
165 170 175
Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly Ala Leu
180 185 190
Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala Val Gly
195 200 205
Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln Ala Leu
210 215 220
Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile Ser Ala
225 230 235 240
Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala Trp Ser
245 250 255
Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg
260 265 270
Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val
275 280 285
Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp
290 295 300
Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro
305 310 315 320
Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn
325 330 335
Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val
340 345 350
Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr
355 360 365
Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu
370 375 380
Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln
385 390 395 400
Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser
405 410 415
Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys
420 425 430
Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro Ser Thr
435 440 445
Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met Glu Lys
450 455 460
Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
465 470
<210> 70
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12V)25mer^3_ct.STING(V155M
<400> 70
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Val Gly Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Ala Thr Asn Phe Ser
65 70 75 80
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Pro
85 90 95
His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His Gly Ala
100 105 110
Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Leu Trp
115 120 125
Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val Leu His
130 135 140
Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys Ser Leu
145 150 155 160
Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser Tyr Trp
165 170 175
Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly Ala Leu
180 185 190
Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala Val Gly
195 200 205
Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln Ala Leu
210 215 220
Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile Ser Ala
225 230 235 240
Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala Trp Ser
245 250 255
Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg
260 265 270
Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val
275 280 285
Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp
290 295 300
Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro
305 310 315 320
Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn
325 330 335
Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val
340 345 350
Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr
355 360 365
Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu
370 375 380
Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln
385 390 395 400
Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser
405 410 415
Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys
420 425 430
Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro Ser Thr
435 440 445
Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met Glu Lys
450 455 460
Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
465 470
<210> 71
<211> 473
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G13D)25mer^3_ct.STING(V155M
<400> 71
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Ala Thr Asn Phe Ser
65 70 75 80
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Pro
85 90 95
His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His Gly Ala
100 105 110
Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr Leu Trp
115 120 125
Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val Leu His
130 135 140
Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys Ser Leu
145 150 155 160
Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser Tyr Trp
165 170 175
Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly Ala Leu
180 185 190
Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala Val Gly
195 200 205
Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln Ala Leu
210 215 220
Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile Ser Ala
225 230 235 240
Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Met Ala His Gly Leu Ala Trp Ser
245 250 255
Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln Ala Arg
260 265 270
Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly Ala Val
275 280 285
Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val Pro Asp
290 295 300
Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys Leu Pro
305 310 315 320
Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr Ser Asn
325 330 335
Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr Cys Val
340 345 350
Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser Gln Tyr
355 360 365
Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Arg Leu Glu Gln Ala Lys Leu
370 375 380
Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu Ser Gln
385 390 395 400
Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp Ser Ser
405 410 415
Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu Glu Lys
420 425 430
Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro Ser Thr
435 440 445
Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met Glu Lys
450 455 460
Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser
465 470
<210> 72
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12C)25mer
<400> 72
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
20 25
<210> 73
<211> 75
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12C)25mer^3
<400> 73
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
65 70 75
<210> 74
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(WT)25mer
<400> 74
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
20 25
<210> 75
<211> 296
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(296)
<223> human myd88(L265P); P4027 without epitope tag
<400> 75
Met Ser Ala Gly Asp Pro Arg Val Gly Ser Gly Ser Leu Asp Ser Phe
1 5 10 15
Met Phe Ser Ile Pro Leu Val Ala Leu Asn Val Gly Val Arg Arg Arg
20 25 30
Leu Ser Leu Phe Leu Asn Pro Arg Thr Pro Val Ala Ala Asp Trp Thr
35 40 45
Leu Leu Ala Glu Glu Met Gly Phe Glu Tyr Leu Glu Ile Arg Glu Leu
50 55 60
Glu Thr Arg Pro Asp Pro Thr Arg Ser Leu Leu Asp Ala Trp Gln Gly
65 70 75 80
Arg Ser Gly Ala Ser Val Gly Arg Leu Leu Glu Leu Leu Ala Leu Leu
85 90 95
Asp Arg Glu Asp Ile Leu Lys Glu Leu Lys Ser Arg Ile Glu Glu Asp
100 105 110
Cys Gln Lys Tyr Leu Gly Lys Gln Gln Asn Gln Glu Ser Glu Lys Pro
115 120 125
Leu Gln Val Ala Arg Val Glu Ser Ser Val Pro Gln Thr Lys Glu Leu
130 135 140
Gly Gly Ile Thr Thr Leu Asp Asp Pro Leu Gly Gln Thr Pro Glu Leu
145 150 155 160
Phe Asp Ala Phe Ile Cys Tyr Cys Pro Asn Asp Ile Glu Phe Val Gln
165 170 175
Glu Met Ile Arg Gln Leu Glu Gln Thr Asp Tyr Arg Leu Lys Leu Cys
180 185 190
Val Ser Asp Arg Asp Val Leu Pro Gly Thr Cys Val Trp Ser Ile Ala
195 200 205
Ser Glu Leu Ile Glu Lys Arg Cys Arg Arg Met Val Val Val Val Ser
210 215 220
Asp Asp Tyr Leu Gln Ser Lys Glu Cys Asp Phe Gln Thr Lys Phe Ala
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Val Gln Gln Lys Arg Pro Ile Pro Ile Lys
245 250 255
Tyr Lys Ala Met Lys Lys Asp Phe Pro Ser Ile Leu Arg Phe Ile Thr
260 265 270
Ile Cys Asp Tyr Thr Asn Pro Cys Thr Lys Ser Trp Phe Trp Thr Arg
275 280 285
Leu Ala Lys Ala Leu Ser Leu Pro
290 295
<210> 76
<211> 296
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(296)
<223> mouse myd88(L265P); P4028 without epitope tag
<400> 76
Met Ala Ala Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Ala Ala Pro Val Ser Ser
1 5 10 15
Thr Ser Ser Leu Pro Leu Ala Ala Leu Asn Met Arg Val Arg Arg Arg
20 25 30
Leu Ser Leu Phe Leu Asn Val Arg Thr Gln Val Ala Ala Asp Trp Thr
35 40 45
Ala Leu Ala Glu Glu Met Asp Phe Glu Tyr Leu Glu Ile Arg Gln Leu
50 55 60
Glu Thr Gln Ala Asp Pro Thr Gly Arg Leu Leu Asp Ala Trp Gln Gly
65 70 75 80
Arg Pro Gly Ala Ser Val Gly Arg Leu Leu Glu Leu Leu Thr Lys Leu
85 90 95
Gly Arg Asp Asp Val Leu Leu Glu Leu Gly Pro Ser Ile Glu Glu Asp
100 105 110
Cys Gln Lys Tyr Ile Leu Lys Gln Gln Gln Glu Glu Ala Glu Lys Pro
115 120 125
Leu Gln Val Ala Ala Val Asp Ser Ser Val Pro Arg Thr Ala Glu Leu
130 135 140
Ala Gly Ile Thr Thr Leu Asp Asp Pro Leu Gly His Met Pro Glu Arg
145 150 155 160
Phe Asp Ala Phe Ile Cys Tyr Cys Pro Ser Asp Ile Gln Phe Val Gln
165 170 175
Glu Met Ile Arg Gln Leu Glu Gln Thr Asn Tyr Arg Leu Lys Leu Cys
180 185 190
Val Ser Asp Arg Asp Val Leu Pro Gly Thr Cys Val Trp Ser Ile Ala
195 200 205
Ser Glu Leu Ile Glu Lys Arg Cys Arg Arg Met Val Val Val Val Ser
210 215 220
Asp Asp Tyr Leu Gln Ser Lys Glu Cys Asp Phe Gln Thr Lys Phe Ala
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala His Gln Lys Arg Pro Ile Pro Ile Lys
245 250 255
Tyr Lys Ala Met Lys Lys Glu Phe Pro Ser Ile Leu Arg Phe Ile Thr
260 265 270
Val Cys Asp Tyr Thr Asn Pro Cys Thr Lys Ser Trp Phe Trp Thr Arg
275 280 285
Leu Ala Lys Ala Leu Ser Leu Pro
290 295
<210> 77
<211> 232
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(232)
<223> Mouse TRAM (TICAM2); P4033 without epitope tag
<400> 77
Met Gly Val Gly Lys Ser Lys Leu Asp Lys Cys Pro Leu Ser Trp His
1 5 10 15
Lys Lys Asp Ser Val Asp Ala Asp Gln Asp Gly His Glu Ser Asp Ser
20 25 30
Lys Asn Ser Glu Glu Ala Cys Leu Arg Gly Phe Val Glu Gln Ser Ser
35 40 45
Gly Ser Glu Pro Pro Thr Gly Glu Gln Asp Gln Pro Glu Ala Lys Gly
50 55 60
Ala Gly Pro Glu Glu Gln Asp Glu Glu Glu Phe Leu Lys Phe Val Ile
65 70 75 80
Leu His Ala Glu Asp Asp Thr Asp Glu Ala Leu Arg Val Gln Asp Leu
85 90 95
Leu Gln Asn Asp Phe Gly Ile Arg Pro Gly Ile Val Phe Ala Glu Met
100 105 110
Pro Cys Gly Arg Leu His Leu Gln Asn Leu Asp Asp Ala Val Asn Gly
115 120 125
Ser Ala Trp Thr Ile Leu Leu Leu Thr Glu Asn Phe Leu Arg Asp Thr
130 135 140
Trp Cys Asn Phe Gln Phe Tyr Thr Ser Leu Met Asn Ser Val Ser Arg
145 150 155 160
Gln His Lys Tyr Asn Ser Val Ile Pro Met Arg Pro Leu Asn Ser Pro
165 170 175
Leu Pro Arg Glu Arg Thr Pro Leu Ala Leu Gln Thr Ile Asn Ala Leu
180 185 190
Glu Glu Glu Ser Gln Gly Phe Ser Thr Gln Val Glu Arg Ile Phe Arg
195 200 205
Glu Ser Val Phe Glu Arg Gln Gln Ser Ile Trp Lys Glu Thr Arg Ser
210 215 220
Val Ser Gln Lys Gln Phe Ile Ala
225 230
<210> 78
<211> 847
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: STAT6 V547A/T548A); P008 with no epitope tag
<400> 78
Met Ser Leu Trp Gly Leu Val Ser Lys Met Pro Pro Glu Lys Val Gln
1 5 10 15
Arg Leu Tyr Val Asp Phe Pro Gln His Leu Arg His Leu Leu Gly Asp
20 25 30
Trp Leu Glu Ser Gln Pro Trp Glu Phe Leu Val Gly Ser Asp Ala Phe
35 40 45
Cys Cys Asn Leu Ala Ser Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Gln His Leu
50 55 60
Gln Ala Ser Val Gly Glu Gln Gly Glu Gly Ser Thr Ile Leu Gln His
65 70 75 80
Ile Ser Thr Leu Glu Ser Ile Tyr Gln Arg Asp Pro Leu Lys Leu Val
85 90 95
Ala Thr Phe Arg Gln Ile Leu Gln Gly Glu Lys Lys Ala Val Met Glu
100 105 110
Gln Phe Arg His Leu Pro Met Pro Phe His Trp Lys Gln Glu Glu Leu
115 120 125
Lys Phe Lys Thr Gly Leu Arg Arg Leu Gln His Arg Val Gly Glu Ile
130 135 140
His Leu Leu Arg Glu Ala Leu Gln Lys Gly Ala Glu Ala Gly Gln Val
145 150 155 160
Ser Leu His Ser Leu Ile Glu Thr Pro Ala Asn Gly Thr Gly Pro Ser
165 170 175
Glu Ala Leu Ala Met Leu Leu Gln Glu Thr Thr Gly Glu Leu Glu Ala
180 185 190
Ala Lys Ala Leu Val Leu Lys Arg Ile Gln Ile Trp Lys Arg Gln Gln
195 200 205
Gln Leu Ala Gly Asn Gly Ala Pro Phe Glu Glu Ser Leu Ala Pro Leu
210 215 220
Gln Glu Arg Cys Glu Ser Leu Val Asp Ile Tyr Ser Gln Leu Gln Gln
225 230 235 240
Glu Val Gly Ala Ala Gly Gly Glu Leu Glu Pro Lys Thr Arg Ala Ser
245 250 255
Leu Thr Gly Arg Leu Asp Glu Val Leu Arg Thr Leu Val Thr Ser Cys
260 265 270
Phe Leu Val Glu Lys Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys
275 280 285
Phe Gln Ala Gly Val Arg Phe Leu Leu Gly Leu Arg Phe Leu Gly Ala
290 295 300
Pro Ala Lys Pro Pro Leu Val Arg Ala Asp Met Val Thr Glu Lys Gln
305 310 315 320
Ala Arg Glu Leu Ser Val Pro Gln Gly Pro Gly Ala Gly Ala Glu Ser
325 330 335
Thr Gly Glu Ile Ile Asn Asn Thr Val Pro Leu Glu Asn Ser Ile Pro
340 345 350
Gly Asn Cys Cys Ser Ala Leu Phe Lys Asn Leu Leu Leu Lys Lys Ile
355 360 365
Lys Arg Cys Glu Arg Lys Gly Thr Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Cys
370 375 380
Ala Val Leu Phe Ser Ala Ser Phe Thr Leu Gly Pro Gly Lys Leu Pro
385 390 395 400
Ile Gln Leu Gln Ala Leu Ser Leu Pro Leu Val Val Ile Val His Gly
405 410 415
Asn Gln Asp Asn Asn Ala Lys Ala Thr Ile Leu Trp Asp Asn Ala Phe
420 425 430
Ser Glu Met Asp Arg Val Pro Phe Val Val Ala Glu Arg Val Pro Trp
435 440 445
Glu Lys Met Cys Glu Thr Leu Asn Leu Lys Phe Met Ala Glu Val Gly
450 455 460
Thr Asn Arg Gly Leu Leu Pro Glu His Phe Leu Phe Leu Ala Gln Lys
465 470 475 480
Ile Phe Asn Asp Asn Ser Leu Ser Met Glu Ala Phe Gln His Arg Ser
485 490 495
Val Ser Trp Ser Gln Phe Asn Lys Glu Ile Leu Leu Gly Arg Gly Phe
500 505 510
Thr Phe Trp Gln Trp Phe Asp Gly Val Leu Asp Leu Thr Lys Arg Cys
515 520 525
Leu Arg Ser Tyr Trp Ser Asp Arg Leu Ile Ile Gly Phe Ile Ser Lys
530 535 540
Gln Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Leu Asn Glu Pro Asp Gly Thr Phe Leu
545 550 555 560
Leu Arg Phe Ser Asp Ser Glu Ile Gly Gly Ile Thr Ile Ala His Val
565 570 575
Ile Arg Gly Gln Asp Gly Ser Pro Gln Ile Glu Asn Ile Gln Pro Phe
580 585 590
Ser Ala Lys Asp Leu Ser Ile Arg Ser Leu Gly Asp Arg Ile Arg Asp
595 600 605
Leu Ala Gln Leu Lys Asn Leu Tyr Pro Lys Lys Pro Lys Asp Glu Ala
610 615 620
Phe Arg Ser His Tyr Lys Pro Glu Gln Met Gly Lys Asp Gly Arg Gly
625 630 635 640
Tyr Val Pro Ala Thr Ile Lys Met Thr Val Glu Arg Asp Gln Pro Leu
645 650 655
Pro Thr Pro Glu Leu Gln Met Pro Thr Met Val Pro Ser Tyr Asp Leu
660 665 670
Gly Met Ala Pro Asp Ser Ser Met Ser Met Gln Leu Gly Pro Asp Met
675 680 685
Val Pro Gln Val Tyr Pro Pro His Ser His Ser Ile Pro Pro Tyr Gln
690 695 700
Gly Leu Ser Pro Glu Glu Ser Val Asn Val Leu Ser Ala Phe Gln Glu
705 710 715 720
Pro His Leu Gln Met Pro Pro Ser Leu Gly Gln Met Ser Leu Pro Phe
725 730 735
Asp Gln Pro His Pro Gln Gly Leu Leu Pro Cys Gln Pro Gln Glu His
740 745 750
Ala Val Ser Ser Pro Asp Pro Leu Leu Cys Ser Asp Val Thr Met Val
755 760 765
Glu Asp Ser Cys Leu Ser Gln Pro Val Thr Ala Phe Pro Gln Gly Thr
770 775 780
Trp Ile Gly Glu Asp Ile Phe Pro Pro Leu Leu Pro Pro Thr Glu Gln
785 790 795 800
Asp Leu Thr Lys Leu Leu Leu Glu Gly Gln Gly Glu Ser Gly Gly Gly
805 810 815
Ser Leu Gly Ala Gln Pro Leu Leu Gln Pro Ser His Tyr Gly Gln Ser
820 825 830
Gly Ile Ser Met Ser His Met Asp Leu Arg Ala Asn Pro Ser Trp
835 840 845
<210> 79
<211> 847
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: STAT6 (S407D); P009 with no epitope tag
<400> 79
Met Ser Leu Trp Gly Leu Val Ser Lys Met Pro Pro Glu Lys Val Gln
1 5 10 15
Arg Leu Tyr Val Asp Phe Pro Gln His Leu Arg His Leu Leu Gly Asp
20 25 30
Trp Leu Glu Ser Gln Pro Trp Glu Phe Leu Val Gly Ser Asp Ala Phe
35 40 45
Cys Cys Asn Leu Ala Ser Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Gln His Leu
50 55 60
Gln Ala Ser Val Gly Glu Gln Gly Glu Gly Ser Thr Ile Leu Gln His
65 70 75 80
Ile Ser Thr Leu Glu Ser Ile Tyr Gln Arg Asp Pro Leu Lys Leu Val
85 90 95
Ala Thr Phe Arg Gln Ile Leu Gln Gly Glu Lys Lys Ala Val Met Glu
100 105 110
Gln Phe Arg His Leu Pro Met Pro Phe His Trp Lys Gln Glu Glu Leu
115 120 125
Lys Phe Lys Thr Gly Leu Arg Arg Leu Gln His Arg Val Gly Glu Ile
130 135 140
His Leu Leu Arg Glu Ala Leu Gln Lys Gly Ala Glu Ala Gly Gln Val
145 150 155 160
Ser Leu His Ser Leu Ile Glu Thr Pro Ala Asn Gly Thr Gly Pro Ser
165 170 175
Glu Ala Leu Ala Met Leu Leu Gln Glu Thr Thr Gly Glu Leu Glu Ala
180 185 190
Ala Lys Ala Leu Val Leu Lys Arg Ile Gln Ile Trp Lys Arg Gln Gln
195 200 205
Gln Leu Ala Gly Asn Gly Ala Pro Phe Glu Glu Ser Leu Ala Pro Leu
210 215 220
Gln Glu Arg Cys Glu Ser Leu Val Asp Ile Tyr Ser Gln Leu Gln Gln
225 230 235 240
Glu Val Gly Ala Ala Gly Gly Glu Leu Glu Pro Lys Thr Arg Ala Ser
245 250 255
Leu Thr Gly Arg Leu Asp Glu Val Leu Arg Thr Leu Val Thr Ser Cys
260 265 270
Phe Leu Val Glu Lys Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys
275 280 285
Phe Gln Ala Gly Val Arg Phe Leu Leu Gly Leu Arg Phe Leu Gly Ala
290 295 300
Pro Ala Lys Pro Pro Leu Val Arg Ala Asp Met Val Thr Glu Lys Gln
305 310 315 320
Ala Arg Glu Leu Ser Val Pro Gln Gly Pro Gly Ala Gly Ala Glu Ser
325 330 335
Thr Gly Glu Ile Ile Asn Asn Thr Val Pro Leu Glu Asn Ser Ile Pro
340 345 350
Gly Asn Cys Cys Ser Ala Leu Phe Lys Asn Leu Leu Leu Lys Lys Ile
355 360 365
Lys Arg Cys Glu Arg Lys Gly Thr Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Cys
370 375 380
Ala Val Leu Phe Ser Ala Ser Phe Thr Leu Gly Pro Gly Lys Leu Pro
385 390 395 400
Ile Gln Leu Gln Ala Leu Asp Leu Pro Leu Val Val Ile Val His Gly
405 410 415
Asn Gln Asp Asn Asn Ala Lys Ala Thr Ile Leu Trp Asp Asn Ala Phe
420 425 430
Ser Glu Met Asp Arg Val Pro Phe Val Val Ala Glu Arg Val Pro Trp
435 440 445
Glu Lys Met Cys Glu Thr Leu Asn Leu Lys Phe Met Ala Glu Val Gly
450 455 460
Thr Asn Arg Gly Leu Leu Pro Glu His Phe Leu Phe Leu Ala Gln Lys
465 470 475 480
Ile Phe Asn Asp Asn Ser Leu Ser Met Glu Ala Phe Gln His Arg Ser
485 490 495
Val Ser Trp Ser Gln Phe Asn Lys Glu Ile Leu Leu Gly Arg Gly Phe
500 505 510
Thr Phe Trp Gln Trp Phe Asp Gly Val Leu Asp Leu Thr Lys Arg Cys
515 520 525
Leu Arg Ser Tyr Trp Ser Asp Arg Leu Ile Ile Gly Phe Ile Ser Lys
530 535 540
Gln Tyr Val Thr Ser Leu Leu Leu Asn Glu Pro Asp Gly Thr Phe Leu
545 550 555 560
Leu Arg Phe Ser Asp Ser Glu Ile Gly Gly Ile Thr Ile Ala His Val
565 570 575
Ile Arg Gly Gln Asp Gly Ser Pro Gln Ile Glu Asn Ile Gln Pro Phe
580 585 590
Ser Ala Lys Asp Leu Ser Ile Arg Ser Leu Gly Asp Arg Ile Arg Asp
595 600 605
Leu Ala Gln Leu Lys Asn Leu Tyr Pro Lys Lys Pro Lys Asp Glu Ala
610 615 620
Phe Arg Ser His Tyr Lys Pro Glu Gln Met Gly Lys Asp Gly Arg Gly
625 630 635 640
Tyr Val Pro Ala Thr Ile Lys Met Thr Val Glu Arg Asp Gln Pro Leu
645 650 655
Pro Thr Pro Glu Leu Gln Met Pro Thr Met Val Pro Ser Tyr Asp Leu
660 665 670
Gly Met Ala Pro Asp Ser Ser Met Ser Met Gln Leu Gly Pro Asp Met
675 680 685
Val Pro Gln Val Tyr Pro Pro His Ser His Ser Ile Pro Pro Tyr Gln
690 695 700
Gly Leu Ser Pro Glu Glu Ser Val Asn Val Leu Ser Ala Phe Gln Glu
705 710 715 720
Pro His Leu Gln Met Pro Pro Ser Leu Gly Gln Met Ser Leu Pro Phe
725 730 735
Asp Gln Pro His Pro Gln Gly Leu Leu Pro Cys Gln Pro Gln Glu His
740 745 750
Ala Val Ser Ser Pro Asp Pro Leu Leu Cys Ser Asp Val Thr Met Val
755 760 765
Glu Asp Ser Cys Leu Ser Gln Pro Val Thr Ala Phe Pro Gln Gly Thr
770 775 780
Trp Ile Gly Glu Asp Ile Phe Pro Pro Leu Leu Pro Pro Thr Glu Gln
785 790 795 800
Asp Leu Thr Lys Leu Leu Leu Glu Gly Gln Gly Glu Ser Gly Gly Gly
805 810 815
Ser Leu Gly Ala Gln Pro Leu Leu Gln Pro Ser His Tyr Gly Gln Ser
820 825 830
Gly Ile Ser Met Ser His Met Asp Leu Arg Ala Asn Pro Ser Trp
835 840 845
<210> 80
<211> 847
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: STAT6 (S407D/V547A/T548A); P010 with no epitope tag
<400> 80
Met Ser Leu Trp Gly Leu Val Ser Lys Met Pro Pro Glu Lys Val Gln
1 5 10 15
Arg Leu Tyr Val Asp Phe Pro Gln His Leu Arg His Leu Leu Gly Asp
20 25 30
Trp Leu Glu Ser Gln Pro Trp Glu Phe Leu Val Gly Ser Asp Ala Phe
35 40 45
Cys Cys Asn Leu Ala Ser Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Gln His Leu
50 55 60
Gln Ala Ser Val Gly Glu Gln Gly Glu Gly Ser Thr Ile Leu Gln His
65 70 75 80
Ile Ser Thr Leu Glu Ser Ile Tyr Gln Arg Asp Pro Leu Lys Leu Val
85 90 95
Ala Thr Phe Arg Gln Ile Leu Gln Gly Glu Lys Lys Ala Val Met Glu
100 105 110
Gln Phe Arg His Leu Pro Met Pro Phe His Trp Lys Gln Glu Glu Leu
115 120 125
Lys Phe Lys Thr Gly Leu Arg Arg Leu Gln His Arg Val Gly Glu Ile
130 135 140
His Leu Leu Arg Glu Ala Leu Gln Lys Gly Ala Glu Ala Gly Gln Val
145 150 155 160
Ser Leu His Ser Leu Ile Glu Thr Pro Ala Asn Gly Thr Gly Pro Ser
165 170 175
Glu Ala Leu Ala Met Leu Leu Gln Glu Thr Thr Gly Glu Leu Glu Ala
180 185 190
Ala Lys Ala Leu Val Leu Lys Arg Ile Gln Ile Trp Lys Arg Gln Gln
195 200 205
Gln Leu Ala Gly Asn Gly Ala Pro Phe Glu Glu Ser Leu Ala Pro Leu
210 215 220
Gln Glu Arg Cys Glu Ser Leu Val Asp Ile Tyr Ser Gln Leu Gln Gln
225 230 235 240
Glu Val Gly Ala Ala Gly Gly Glu Leu Glu Pro Lys Thr Arg Ala Ser
245 250 255
Leu Thr Gly Arg Leu Asp Glu Val Leu Arg Thr Leu Val Thr Ser Cys
260 265 270
Phe Leu Val Glu Lys Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys
275 280 285
Phe Gln Ala Gly Val Arg Phe Leu Leu Gly Leu Arg Phe Leu Gly Ala
290 295 300
Pro Ala Lys Pro Pro Leu Val Arg Ala Asp Met Val Thr Glu Lys Gln
305 310 315 320
Ala Arg Glu Leu Ser Val Pro Gln Gly Pro Gly Ala Gly Ala Glu Ser
325 330 335
Thr Gly Glu Ile Ile Asn Asn Thr Val Pro Leu Glu Asn Ser Ile Pro
340 345 350
Gly Asn Cys Cys Ser Ala Leu Phe Lys Asn Leu Leu Leu Lys Lys Ile
355 360 365
Lys Arg Cys Glu Arg Lys Gly Thr Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Cys
370 375 380
Ala Val Leu Phe Ser Ala Ser Phe Thr Leu Gly Pro Gly Lys Leu Pro
385 390 395 400
Ile Gln Leu Gln Ala Leu Asp Leu Pro Leu Val Val Ile Val His Gly
405 410 415
Asn Gln Asp Asn Asn Ala Lys Ala Thr Ile Leu Trp Asp Asn Ala Phe
420 425 430
Ser Glu Met Asp Arg Val Pro Phe Val Val Ala Glu Arg Val Pro Trp
435 440 445
Glu Lys Met Cys Glu Thr Leu Asn Leu Lys Phe Met Ala Glu Val Gly
450 455 460
Thr Asn Arg Gly Leu Leu Pro Glu His Phe Leu Phe Leu Ala Gln Lys
465 470 475 480
Ile Phe Asn Asp Asn Ser Leu Ser Met Glu Ala Phe Gln His Arg Ser
485 490 495
Val Ser Trp Ser Gln Phe Asn Lys Glu Ile Leu Leu Gly Arg Gly Phe
500 505 510
Thr Phe Trp Gln Trp Phe Asp Gly Val Leu Asp Leu Thr Lys Arg Cys
515 520 525
Leu Arg Ser Tyr Trp Ser Asp Arg Leu Ile Ile Gly Phe Ile Ser Lys
530 535 540
Gln Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Leu Asn Glu Pro Asp Gly Thr Phe Leu
545 550 555 560
Leu Arg Phe Ser Asp Ser Glu Ile Gly Gly Ile Thr Ile Ala His Val
565 570 575
Ile Arg Gly Gln Asp Gly Ser Pro Gln Ile Glu Asn Ile Gln Pro Phe
580 585 590
Ser Ala Lys Asp Leu Ser Ile Arg Ser Leu Gly Asp Arg Ile Arg Asp
595 600 605
Leu Ala Gln Leu Lys Asn Leu Tyr Pro Lys Lys Pro Lys Asp Glu Ala
610 615 620
Phe Arg Ser His Tyr Lys Pro Glu Gln Met Gly Lys Asp Gly Arg Gly
625 630 635 640
Tyr Val Pro Ala Thr Ile Lys Met Thr Val Glu Arg Asp Gln Pro Leu
645 650 655
Pro Thr Pro Glu Leu Gln Met Pro Thr Met Val Pro Ser Tyr Asp Leu
660 665 670
Gly Met Ala Pro Asp Ser Ser Met Ser Met Gln Leu Gly Pro Asp Met
675 680 685
Val Pro Gln Val Tyr Pro Pro His Ser His Ser Ile Pro Pro Tyr Gln
690 695 700
Gly Leu Ser Pro Glu Glu Ser Val Asn Val Leu Ser Ala Phe Gln Glu
705 710 715 720
Pro His Leu Gln Met Pro Pro Ser Leu Gly Gln Met Ser Leu Pro Phe
725 730 735
Asp Gln Pro His Pro Gln Gly Leu Leu Pro Cys Gln Pro Gln Glu His
740 745 750
Ala Val Ser Ser Pro Asp Pro Leu Leu Cys Ser Asp Val Thr Met Val
755 760 765
Glu Asp Ser Cys Leu Ser Gln Pro Val Thr Ala Phe Pro Gln Gly Thr
770 775 780
Trp Ile Gly Glu Asp Ile Phe Pro Pro Leu Leu Pro Pro Thr Glu Gln
785 790 795 800
Asp Leu Thr Lys Leu Leu Leu Glu Gly Gln Gly Glu Ser Gly Gly Gly
805 810 815
Ser Leu Gly Ala Gln Pro Leu Leu Gln Pro Ser His Tyr Gly Gln Ser
820 825 830
Gly Ile Ser Met Ser His Met Asp Leu Arg Ala Asn Pro Ser Trp
835 840 845
<210> 81
<211> 847
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: STAT6 (V547A/T548A/Y641F); P011 with no epitope tag
<400> 81
Met Ser Leu Trp Gly Leu Val Ser Lys Met Pro Pro Glu Lys Val Gln
1 5 10 15
Arg Leu Tyr Val Asp Phe Pro Gln His Leu Arg His Leu Leu Gly Asp
20 25 30
Trp Leu Glu Ser Gln Pro Trp Glu Phe Leu Val Gly Ser Asp Ala Phe
35 40 45
Cys Cys Asn Leu Ala Ser Ala Leu Leu Ser Asp Thr Val Gln His Leu
50 55 60
Gln Ala Ser Val Gly Glu Gln Gly Glu Gly Ser Thr Ile Leu Gln His
65 70 75 80
Ile Ser Thr Leu Glu Ser Ile Tyr Gln Arg Asp Pro Leu Lys Leu Val
85 90 95
Ala Thr Phe Arg Gln Ile Leu Gln Gly Glu Lys Lys Ala Val Met Glu
100 105 110
Gln Phe Arg His Leu Pro Met Pro Phe His Trp Lys Gln Glu Glu Leu
115 120 125
Lys Phe Lys Thr Gly Leu Arg Arg Leu Gln His Arg Val Gly Glu Ile
130 135 140
His Leu Leu Arg Glu Ala Leu Gln Lys Gly Ala Glu Ala Gly Gln Val
145 150 155 160
Ser Leu His Ser Leu Ile Glu Thr Pro Ala Asn Gly Thr Gly Pro Ser
165 170 175
Glu Ala Leu Ala Met Leu Leu Gln Glu Thr Thr Gly Glu Leu Glu Ala
180 185 190
Ala Lys Ala Leu Val Leu Lys Arg Ile Gln Ile Trp Lys Arg Gln Gln
195 200 205
Gln Leu Ala Gly Asn Gly Ala Pro Phe Glu Glu Ser Leu Ala Pro Leu
210 215 220
Gln Glu Arg Cys Glu Ser Leu Val Asp Ile Tyr Ser Gln Leu Gln Gln
225 230 235 240
Glu Val Gly Ala Ala Gly Gly Glu Leu Glu Pro Lys Thr Arg Ala Ser
245 250 255
Leu Thr Gly Arg Leu Asp Glu Val Leu Arg Thr Leu Val Thr Ser Cys
260 265 270
Phe Leu Val Glu Lys Gln Pro Pro Gln Val Leu Lys Thr Gln Thr Lys
275 280 285
Phe Gln Ala Gly Val Arg Phe Leu Leu Gly Leu Arg Phe Leu Gly Ala
290 295 300
Pro Ala Lys Pro Pro Leu Val Arg Ala Asp Met Val Thr Glu Lys Gln
305 310 315 320
Ala Arg Glu Leu Ser Val Pro Gln Gly Pro Gly Ala Gly Ala Glu Ser
325 330 335
Thr Gly Glu Ile Ile Asn Asn Thr Val Pro Leu Glu Asn Ser Ile Pro
340 345 350
Gly Asn Cys Cys Ser Ala Leu Phe Lys Asn Leu Leu Leu Lys Lys Ile
355 360 365
Lys Arg Cys Glu Arg Lys Gly Thr Glu Ser Val Thr Glu Glu Lys Cys
370 375 380
Ala Val Leu Phe Ser Ala Ser Phe Thr Leu Gly Pro Gly Lys Leu Pro
385 390 395 400
Ile Gln Leu Gln Ala Leu Ser Leu Pro Leu Val Val Ile Val His Gly
405 410 415
Asn Gln Asp Asn Asn Ala Lys Ala Thr Ile Leu Trp Asp Asn Ala Phe
420 425 430
Ser Glu Met Asp Arg Val Pro Phe Val Val Ala Glu Arg Val Pro Trp
435 440 445
Glu Lys Met Cys Glu Thr Leu Asn Leu Lys Phe Met Ala Glu Val Gly
450 455 460
Thr Asn Arg Gly Leu Leu Pro Glu His Phe Leu Phe Leu Ala Gln Lys
465 470 475 480
Ile Phe Asn Asp Asn Ser Leu Ser Met Glu Ala Phe Gln His Arg Ser
485 490 495
Val Ser Trp Ser Gln Phe Asn Lys Glu Ile Leu Leu Gly Arg Gly Phe
500 505 510
Thr Phe Trp Gln Trp Phe Asp Gly Val Leu Asp Leu Thr Lys Arg Cys
515 520 525
Leu Arg Ser Tyr Trp Ser Asp Arg Leu Ile Ile Gly Phe Ile Ser Lys
530 535 540
Gln Tyr Ala Ala Ser Leu Leu Leu Asn Glu Pro Asp Gly Thr Phe Leu
545 550 555 560
Leu Arg Phe Ser Asp Ser Glu Ile Gly Gly Ile Thr Ile Ala His Val
565 570 575
Ile Arg Gly Gln Asp Gly Ser Pro Gln Ile Glu Asn Ile Gln Pro Phe
580 585 590
Ser Ala Lys Asp Leu Ser Ile Arg Ser Leu Gly Asp Arg Ile Arg Asp
595 600 605
Leu Ala Gln Leu Lys Asn Leu Tyr Pro Lys Lys Pro Lys Asp Glu Ala
610 615 620
Phe Arg Ser His Tyr Lys Pro Glu Gln Met Gly Lys Asp Gly Arg Gly
625 630 635 640
Phe Val Pro Ala Thr Ile Lys Met Thr Val Glu Arg Asp Gln Pro Leu
645 650 655
Pro Thr Pro Glu Leu Gln Met Pro Thr Met Val Pro Ser Tyr Asp Leu
660 665 670
Gly Met Ala Pro Asp Ser Ser Met Ser Met Gln Leu Gly Pro Asp Met
675 680 685
Val Pro Gln Val Tyr Pro Pro His Ser His Ser Ile Pro Pro Tyr Gln
690 695 700
Gly Leu Ser Pro Glu Glu Ser Val Asn Val Leu Ser Ala Phe Gln Glu
705 710 715 720
Pro His Leu Gln Met Pro Pro Ser Leu Gly Gln Met Ser Leu Pro Phe
725 730 735
Asp Gln Pro His Pro Gln Gly Leu Leu Pro Cys Gln Pro Gln Glu His
740 745 750
Ala Val Ser Ser Pro Asp Pro Leu Leu Cys Ser Asp Val Thr Met Val
755 760 765
Glu Asp Ser Cys Leu Ser Gln Pro Val Thr Ala Phe Pro Gln Gly Thr
770 775 780
Trp Ile Gly Glu Asp Ile Phe Pro Pro Leu Leu Pro Pro Thr Glu Gln
785 790 795 800
Asp Leu Thr Lys Leu Leu Leu Glu Gly Gln Gly Glu Ser Gly Gly Gly
805 810 815
Ser Leu Gly Ala Gln Pro Leu Leu Gln Pro Ser His Tyr Gly Gln Ser
820 825 830
Gly Ile Ser Met Ser His Met Asp Leu Arg Ala Asn Pro Ser Trp
835 840 845
<210> 82
<211> 479
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu-cFLIP-L; P1006 without epitope tag
<400> 82
Ser Ala Glu Val Ile His Gln Val Glu Glu Ala Leu Asp Thr Asp Glu
1 5 10 15
Lys Glu Met Leu Leu Phe Leu Cys Arg Asp Val Ala Ile Asp Val Val
20 25 30
Pro Pro Asn Val Arg Asp Leu Leu Asp Ile Leu Arg Glu Arg Gly Lys
35 40 45
Leu Ser Val Gly Asp Leu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Val Arg Arg Phe
50 55 60
Asp Leu Leu Lys Arg Ile Leu Lys Met Asp Arg Lys Ala Val Glu Thr
65 70 75 80
His Leu Leu Arg Asn Pro His Leu Val Ser Asp Tyr Arg Val Leu Met
85 90 95
Ala Glu Ile Gly Glu Asp Leu Asp Lys Ser Asp Val Ser Ser Leu Ile
100 105 110
Phe Leu Met Lys Asp Tyr Met Gly Arg Gly Lys Ile Ser Lys Glu Lys
115 120 125
Ser Phe Leu Asp Leu Val Val Glu Leu Glu Lys Leu Asn Leu Val Ala
130 135 140
Pro Asp Gln Leu Asp Leu Leu Glu Lys Cys Leu Lys Asn Ile His Arg
145 150 155 160
Ile Asp Leu Lys Thr Lys Ile Gln Lys Tyr Lys Gln Ser Val Gln Gly
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Tyr Arg Asn Val Leu Gln Ala Ala Ile Gln Lys Ser
180 185 190
Leu Lys Asp Pro Ser Asn Asn Phe Arg Leu His Asn Gly Arg Ser Lys
195 200 205
Glu Gln Arg Leu Lys Glu Gln Leu Gly Ala Gln Gln Glu Pro Val Lys
210 215 220
Lys Ser Ile Gln Glu Ser Glu Ala Phe Leu Pro Gln Ser Ile Pro Glu
225 230 235 240
Glu Arg Tyr Lys Met Lys Ser Lys Pro Leu Gly Ile Cys Leu Ile Ile
245 250 255
Asp Cys Ile Gly Asn Glu Thr Glu Leu Leu Arg Asp Thr Phe Thr Ser
260 265 270
Leu Gly Tyr Glu Val Gln Lys Phe Leu His Leu Ser Met His Gly Ile
275 280 285
Ser Gln Ile Leu Gly Gln Phe Ala Cys Met Pro Glu His Arg Asp Tyr
290 295 300
Asp Ser Phe Val Cys Val Leu Val Ser Arg Gly Gly Ser Gln Ser Val
305 310 315 320
Tyr Gly Val Asp Gln Thr His Ser Gly Leu Pro Leu His His Ile Arg
325 330 335
Arg Met Phe Met Gly Asp Ser Cys Pro Tyr Leu Ala Gly Lys Pro Lys
340 345 350
Met Phe Phe Ile Gln Asn Tyr Val Val Ser Glu Gly Gln Leu Glu Asp
355 360 365
Ser Ser Leu Leu Glu Val Asp Gly Pro Ala Met Lys Asn Val Glu Phe
370 375 380
Lys Ala Gln Lys Arg Gly Leu Cys Thr Val His Arg Glu Ala Asp Phe
385 390 395 400
Phe Trp Ser Leu Cys Thr Ala Asp Met Ser Leu Leu Glu Gln Ser His
405 410 415
Ser Ser Pro Ser Leu Tyr Leu Gln Cys Leu Ser Gln Lys Leu Arg Gln
420 425 430
Glu Arg Lys Arg Pro Leu Leu Asp Leu His Ile Glu Leu Asn Gly Tyr
435 440 445
Met Tyr Asp Trp Asn Ser Arg Val Ser Ala Lys Glu Lys Tyr Tyr Val
450 455 460
Trp Leu Gln His Thr Leu Arg Lys Lys Leu Ile Leu Ser Tyr Thr
465 470 475
<210> 83
<211> 226
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu-cFLIP-S(1-227); P1007 without epitope tag
<400> 83
Ser Ala Glu Val Ile His Gln Val Glu Glu Ala Leu Asp Thr Asp Glu
1 5 10 15
Lys Glu Met Leu Leu Phe Leu Cys Arg Asp Val Ala Ile Asp Val Val
20 25 30
Pro Pro Asn Val Arg Asp Leu Leu Asp Ile Leu Arg Glu Arg Gly Lys
35 40 45
Leu Ser Val Gly Asp Leu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Val Arg Arg Phe
50 55 60
Asp Leu Leu Lys Arg Ile Leu Lys Met Asp Arg Lys Ala Val Glu Thr
65 70 75 80
His Leu Leu Arg Asn Pro His Leu Val Ser Asp Tyr Arg Val Leu Met
85 90 95
Ala Glu Ile Gly Glu Asp Leu Asp Lys Ser Asp Val Ser Ser Leu Ile
100 105 110
Phe Leu Met Lys Asp Tyr Met Gly Arg Gly Lys Ile Ser Lys Glu Lys
115 120 125
Ser Phe Leu Asp Leu Val Val Glu Leu Glu Lys Leu Asn Leu Val Ala
130 135 140
Pro Asp Gln Leu Asp Leu Leu Glu Lys Cys Leu Lys Asn Ile His Arg
145 150 155 160
Ile Asp Leu Lys Thr Lys Ile Gln Lys Tyr Lys Gln Ser Val Gln Gly
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Tyr Arg Asn Val Leu Gln Ala Ala Ile Gln Lys Ser
180 185 190
Leu Lys Asp Pro Ser Asn Asn Phe Arg Leu His Asn Gly Arg Ser Lys
195 200 205
Glu Gln Arg Leu Lys Glu Gln Leu Gly Ala Gln Gln Glu Pro Val Lys
210 215 220
Lys Ser
225
<210> 84
<211> 195
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu-cFLIP-p22(1-198); P1008 without epitope tag
<400> 84
Ser Ala Glu Val Ile His Gln Val Glu Glu Ala Leu Asp Thr Asp Glu
1 5 10 15
Lys Glu Met Leu Leu Phe Leu Cys Arg Asp Val Ala Ile Asp Val Val
20 25 30
Pro Pro Asn Val Arg Asp Leu Leu Asp Ile Leu Arg Glu Arg Gly Lys
35 40 45
Leu Ser Val Gly Asp Leu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Val Arg Arg Phe
50 55 60
Asp Leu Leu Lys Arg Ile Leu Lys Met Asp Arg Lys Ala Val Glu Thr
65 70 75 80
His Leu Leu Arg Asn Pro His Leu Val Ser Asp Tyr Arg Val Leu Met
85 90 95
Ala Glu Ile Gly Glu Asp Leu Asp Lys Ser Asp Val Ser Ser Leu Ile
100 105 110
Phe Leu Met Lys Asp Tyr Met Gly Arg Gly Lys Ile Ser Lys Glu Lys
115 120 125
Ser Phe Leu Asp Leu Val Val Glu Leu Glu Lys Leu Asn Leu Val Ala
130 135 140
Pro Asp Gln Leu Asp Leu Leu Glu Lys Cys Leu Lys Asn Ile His Arg
145 150 155 160
Ile Asp Leu Lys Thr Lys Ile Gln Lys Tyr Lys Gln Ser Val Gln Gly
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Tyr Arg Asn Val Leu Gln Ala Ala Ile Gln Lys Ser
180 185 190
Leu Lys Asp
195
<210> 85
<211> 375
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu-cFLIP-p43(1-376); P1009 without epitope tag
<400> 85
Ser Ala Glu Val Ile His Gln Val Glu Glu Ala Leu Asp Thr Asp Glu
1 5 10 15
Lys Glu Met Leu Leu Phe Leu Cys Arg Asp Val Ala Ile Asp Val Val
20 25 30
Pro Pro Asn Val Arg Asp Leu Leu Asp Ile Leu Arg Glu Arg Gly Lys
35 40 45
Leu Ser Val Gly Asp Leu Ala Glu Leu Leu Tyr Arg Val Arg Arg Phe
50 55 60
Asp Leu Leu Lys Arg Ile Leu Lys Met Asp Arg Lys Ala Val Glu Thr
65 70 75 80
His Leu Leu Arg Asn Pro His Leu Val Ser Asp Tyr Arg Val Leu Met
85 90 95
Ala Glu Ile Gly Glu Asp Leu Asp Lys Ser Asp Val Ser Ser Leu Ile
100 105 110
Phe Leu Met Lys Asp Tyr Met Gly Arg Gly Lys Ile Ser Lys Glu Lys
115 120 125
Ser Phe Leu Asp Leu Val Val Glu Leu Glu Lys Leu Asn Leu Val Ala
130 135 140
Pro Asp Gln Leu Asp Leu Leu Glu Lys Cys Leu Lys Asn Ile His Arg
145 150 155 160
Ile Asp Leu Lys Thr Lys Ile Gln Lys Tyr Lys Gln Ser Val Gln Gly
165 170 175
Ala Gly Thr Ser Tyr Arg Asn Val Leu Gln Ala Ala Ile Gln Lys Ser
180 185 190
Leu Lys Asp Pro Ser Asn Asn Phe Arg Leu His Asn Gly Arg Ser Lys
195 200 205
Glu Gln Arg Leu Lys Glu Gln Leu Gly Ala Gln Gln Glu Pro Val Lys
210 215 220
Lys Ser Ile Gln Glu Ser Glu Ala Phe Leu Pro Gln Ser Ile Pro Glu
225 230 235 240
Glu Arg Tyr Lys Met Lys Ser Lys Pro Leu Gly Ile Cys Leu Ile Ile
245 250 255
Asp Cys Ile Gly Asn Glu Thr Glu Leu Leu Arg Asp Thr Phe Thr Ser
260 265 270
Leu Gly Tyr Glu Val Gln Lys Phe Leu His Leu Ser Met His Gly Ile
275 280 285
Ser Gln Ile Leu Gly Gln Phe Ala Cys Met Pro Glu His Arg Asp Tyr
290 295 300
Asp Ser Phe Val Cys Val Leu Val Ser Arg Gly Gly Ser Gln Ser Val
305 310 315 320
Tyr Gly Val Asp Gln Thr His Ser Gly Leu Pro Leu His His Ile Arg
325 330 335
Arg Met Phe Met Gly Asp Ser Cys Pro Tyr Leu Ala Gly Lys Pro Lys
340 345 350
Met Phe Phe Ile Gln Asn Tyr Val Val Ser Glu Gly Gln Leu Glu Asp
355 360 365
Ser Ser Leu Leu Glu Val Asp
370 375
<210> 86
<211> 104
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu-cFLIP-p12(377-480); P1010 without epitope tag
<400> 86
Gly Pro Ala Met Lys Asn Val Glu Phe Lys Ala Gln Lys Arg Gly Leu
1 5 10 15
Cys Thr Val His Arg Glu Ala Asp Phe Phe Trp Ser Leu Cys Thr Ala
20 25 30
Asp Met Ser Leu Leu Glu Gln Ser His Ser Ser Pro Ser Leu Tyr Leu
35 40 45
Gln Cys Leu Ser Gln Lys Leu Arg Gln Glu Arg Lys Arg Pro Leu Leu
50 55 60
Asp Leu His Ile Glu Leu Asn Gly Tyr Met Tyr Asp Trp Asn Ser Arg
65 70 75 80
Val Ser Ala Lys Glu Lys Tyr Tyr Val Trp Leu Gln His Thr Leu Arg
85 90 95
Lys Lys Leu Ile Leu Ser Tyr Thr
100
<210> 87
<211> 756
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huIKK2ca(S177E/S181E); P4005 without epitope tag
<400> 87
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Thr Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Glu Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Arg Asn Arg Glu Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Thr His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Lys Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Ile Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Gln Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Glu Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Thr Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Tyr Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Thr Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Lys Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Ile Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Ile His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Ala Arg Ile Gln Gln Asp Thr Gly Ile Pro Glu Glu Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Glu Ala Gly Leu Ala Leu Ile Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Gly Lys Leu Asn Glu Gly His Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Phe Asp Asn Ser Lys Ile Thr Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Ser Pro Arg Pro Gln Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ala Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Asn Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ser Met Ala Ser Met Ser Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Ser Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Leu Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Glu Val Lys Leu Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Arg Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Lys Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ser Gly Ser
660 665 670
Pro Asp Ser Met Asn Ala Ser Arg Leu Ser Gln Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ser Gln Pro Ser Thr Ala Ser Asn Ser Leu Pro Glu Pro Ala Lys Lys
690 695 700
Ser Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Asn Leu Cys Thr Leu Leu Glu
705 710 715 720
Asn Ala Ile Gln Asp Thr Val Arg Glu Gln Asp Gln Ser Phe Thr Ala
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Thr Glu Glu Glu Glu His Ser Cys Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Ser
755
<210> 88
<211> 756
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huIKK2null(S177A/S181A); P4006 without epitope tag
<400> 88
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Thr Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Glu Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Arg Asn Arg Glu Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Thr His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Lys Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Ile Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Gln Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Ala Leu Cys Thr Ala Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Thr Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Tyr Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Thr Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Lys Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Ile Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Ile His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Ala Arg Ile Gln Gln Asp Thr Gly Ile Pro Glu Glu Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Glu Ala Gly Leu Ala Leu Ile Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Gly Lys Leu Asn Glu Gly His Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Phe Asp Asn Ser Lys Ile Thr Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Ser Pro Arg Pro Gln Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ala Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Asn Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ser Met Ala Ser Met Ser Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Ser Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Leu Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Glu Val Lys Leu Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Arg Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Lys Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ser Gly Ser
660 665 670
Pro Asp Ser Met Asn Ala Ser Arg Leu Ser Gln Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ser Gln Pro Ser Thr Ala Ser Asn Ser Leu Pro Glu Pro Ala Lys Lys
690 695 700
Ser Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Asn Leu Cys Thr Leu Leu Glu
705 710 715 720
Asn Ala Ile Gln Asp Thr Val Arg Glu Gln Asp Gln Ser Phe Thr Ala
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Thr Glu Glu Glu Glu His Ser Cys Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Ser
755
<210> 89
<211> 757
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: muIKK2ca(S177E/S181E); P4002 without epitope tag
<400> 89
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Pro Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Ala Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Lys Asn Arg Asn Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Asn His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Arg Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Val Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Lys Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Glu Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Ala Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Phe Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Gln Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Arg Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Val Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Val His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Thr Arg Ile Gln Glu Asn Thr Gly Ile Leu Glu Thr Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Lys Ala Gly Leu Val Leu Leu Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Ser Lys Thr Asn Glu Gly Leu Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Leu Asp Asn Ser Lys Ile Asn Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Thr Pro Arg Pro Pro Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ser Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Ser Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ala Met Ala Ser Thr Ala Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Lys Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Gln Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Asp Val Lys His Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Lys Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Arg Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ser Gly Ser
660 665 670
Pro Asp Ser Met Asn Val Ser Arg Leu Ser His Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ser Gln Pro Ser Ser Ala Cys Asp Ser Leu Pro Glu Ser Asp Lys Lys
690 695 700
Ser Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Ala Leu Cys Ser Arg Leu Glu
705 710 715 720
Ser Ala Leu Gln Asp Thr Val Lys Glu Gln Asp Arg Ser Phe Thr Thr
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Met Glu Asp Glu Glu Arg Cys Ser Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Cys Asp
755
<210> 90
<211> 757
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: muIKK2null(S177A/S181A); P4003 without epitope tag
<400> 90
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Pro Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Ala Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Lys Asn Arg Asn Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Asn His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Arg Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Val Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Lys Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Ala Leu Cys Thr Ala Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Ala Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Phe Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Gln Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Arg Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Val Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Val His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Thr Arg Ile Gln Glu Asn Thr Gly Ile Leu Glu Thr Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Lys Ala Gly Leu Val Leu Leu Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Ser Lys Thr Asn Glu Gly Leu Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Leu Asp Asn Ser Lys Ile Asn Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Thr Pro Arg Pro Pro Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ser Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Ser Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ala Met Ala Ser Thr Ala Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Lys Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Gln Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Asp Val Lys His Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Lys Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Arg Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ser Gly Ser
660 665 670
Pro Asp Ser Met Asn Val Ser Arg Leu Ser His Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ser Gln Pro Ser Ser Ala Cys Asp Ser Leu Pro Glu Ser Asp Lys Lys
690 695 700
Ser Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Ala Leu Cys Ser Arg Leu Glu
705 710 715 720
Ser Ala Leu Gln Asp Thr Val Lys Glu Gln Asp Arg Ser Phe Thr Thr
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Met Glu Asp Glu Glu Arg Cys Ser Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Cys Asp
755
<210> 91
<211> 744
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(744)
<223> Human constitutively active IKK alpha (PEST mutation) P.4013
without epitope tag
<400> 91
Met Glu Arg Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gly Ala Gly Gly Pro Trp Glu
1 5 10 15
Met Arg Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Cys Leu Tyr
20 25 30
Gln His Arg Glu Leu Asp Leu Lys Ile Ala Ile Lys Ser Cys Arg Leu
35 40 45
Glu Leu Ser Thr Lys Asn Arg Glu Arg Trp Cys His Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Lys Lys Leu Asn His Ala Asn Val Val Lys Ala Cys Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Glu Leu Asn Ile Leu Ile His Asp Val Pro Leu Leu Ala Met Glu
85 90 95
Tyr Cys Ser Gly Gly Asp Leu Arg Lys Leu Leu Asn Lys Pro Glu Asn
100 105 110
Cys Cys Gly Leu Lys Glu Ser Gln Ile Leu Ser Leu Leu Ser Asp Ile
115 120 125
Gly Ser Gly Ile Arg Tyr Leu His Glu Asn Lys Ile Ile His Arg Asp
130 135 140
Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Asp Val Gly Gly Lys Ile Ile
145 150 155 160
His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Asp Val Asp Gln Gly Glu
165 170 175
Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Lys Pro Tyr Thr Ala Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe Gly
195 200 205
Thr Met Val Phe Glu Cys Ile Ala Gly Tyr Arg Pro Phe Leu His His
210 215 220
Leu Gln Pro Phe Thr Trp His Glu Lys Ile Lys Lys Lys Asp Pro Lys
225 230 235 240
Cys Ile Phe Ala Cys Glu Glu Met Ser Gly Glu Val Arg Phe Ser Ser
245 250 255
His Leu Pro Gln Pro Asn Ser Leu Cys Ser Leu Val Val Glu Pro Met
260 265 270
Glu Asn Trp Leu Gln Leu Met Leu Asn Trp Asp Pro Gln Gln Arg Gly
275 280 285
Gly Pro Val Asp Leu Thr Leu Lys Gln Pro Arg Cys Phe Val Leu Met
290 295 300
Asp His Ile Leu Asn Leu Lys Ile Val His Ile Leu Asn Met Thr Ser
305 310 315 320
Ala Lys Ile Ile Ser Phe Leu Leu Pro Pro Asp Glu Ser Leu His Ser
325 330 335
Leu Gln Ser Arg Ile Glu Arg Glu Thr Gly Ile Asn Thr Gly Ser Gln
340 345 350
Glu Leu Leu Ser Glu Thr Gly Ile Ser Leu Asp Pro Arg Lys Pro Ala
355 360 365
Ser Gln Cys Val Leu Asp Gly Val Arg Gly Cys Asp Ser Tyr Met Val
370 375 380
Tyr Leu Phe Asp Lys Ser Lys Thr Val Tyr Glu Gly Pro Phe Ala Ser
385 390 395 400
Arg Ser Leu Ser Asp Cys Val Asn Tyr Ile Val Gln Asp Ser Lys Ile
405 410 415
Gln Leu Pro Ile Ile Gln Leu Arg Lys Val Trp Ala Glu Ala Val His
420 425 430
Tyr Val Ser Gly Leu Lys Glu Asp Tyr Ser Arg Leu Phe Gln Gly Gln
435 440 445
Arg Ala Ala Met Leu Ser Leu Leu Arg Tyr Asn Ala Asn Leu Thr Lys
450 455 460
Met Lys Asn Thr Leu Ile Ser Ala Ser Gln Gln Leu Lys Ala Lys Leu
465 470 475 480
Glu Phe Phe His Lys Ser Ile Gln Leu Asp Leu Glu Arg Tyr Ser Glu
485 490 495
Gln Met Thr Tyr Gly Ile Ser Ser Glu Lys Met Leu Lys Ala Trp Lys
500 505 510
Glu Met Glu Glu Lys Ala Ile His Tyr Ala Glu Val Gly Val Ile Gly
515 520 525
Tyr Leu Glu Asp Gln Ile Met Ser Leu His Ala Glu Ile Met Glu Leu
530 535 540
Gln Lys Ser Pro Tyr Arg Arg Gln Gly Asp Leu Met Glu Ser Leu Glu
545 550 555 560
Gln Arg Ala Ile Asp Leu Tyr Lys Gln Leu Lys His Arg Pro Ser Asp
565 570 575
His Ser Tyr Ser Asp Ser Thr Glu Met Val Lys Ile Ile Val His Thr
580 585 590
Val Gln Ser Gln Asp Arg Val Leu Lys Glu Leu Phe Gly His Leu Ser
595 600 605
Lys Leu Leu Gly Cys Lys Gln Lys Ile Ile Asp Leu Leu Pro Lys Val
610 615 620
Glu Val Ala Leu Ser Asn Ile Lys Glu Ala Asp Asn Thr Val Met Phe
625 630 635 640
Met Gln Gly Lys Arg Gln Lys Glu Ile Trp His Leu Leu Lys Ile Ala
645 650 655
Cys Thr Gln Ala Ala Ala Arg Ala Leu Val Gly Ala Ala Leu Glu Gly
660 665 670
Ala Val Ala Pro Gln Ala Ala Ala Trp Leu Pro Pro Ala Ala Ala Glu
675 680 685
His Asp His Ala Leu Ala Cys Val Val Ala Pro Gln Asp Gly Glu Ala
690 695 700
Ala Ala Gln Met Ile Glu Glu Asn Leu Asn Cys Leu Gly His Leu Ala
705 710 715 720
Ala Ile Ile His Glu Ala Asn Glu Glu Gln Gly Asn Ser Met Met Asn
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Thr Glu
740
<210> 92
<211> 744
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(744)
<223> Human constitutively active IKK alpha (PEST mutation) P.4014
without epitope tag
<400> 92
Met Glu Arg Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gly Ala Gly Gly Pro Trp Glu
1 5 10 15
Met Arg Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Cys Leu Tyr
20 25 30
Gln His Arg Glu Leu Asp Leu Lys Ile Ala Ile Lys Ser Cys Arg Leu
35 40 45
Glu Leu Ser Thr Lys Asn Arg Glu Arg Trp Cys His Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Lys Lys Leu Asn His Ala Asn Val Val Lys Ala Cys Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Glu Leu Asn Ile Leu Ile His Asp Val Pro Leu Leu Ala Met Glu
85 90 95
Tyr Cys Ser Gly Gly Asp Leu Arg Lys Leu Leu Asn Lys Pro Glu Asn
100 105 110
Cys Cys Gly Leu Lys Glu Ser Gln Ile Leu Ser Leu Leu Ser Asp Ile
115 120 125
Gly Ser Gly Ile Arg Tyr Leu His Glu Asn Lys Ile Ile His Arg Asp
130 135 140
Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Asp Val Gly Gly Lys Ile Ile
145 150 155 160
His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Asp Val Asp Gln Gly Glu
165 170 175
Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Lys Pro Tyr Thr Ala Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe Gly
195 200 205
Thr Met Val Phe Glu Cys Ile Ala Gly Tyr Arg Pro Phe Leu His His
210 215 220
Leu Gln Pro Phe Thr Trp His Glu Lys Ile Lys Lys Lys Asp Pro Lys
225 230 235 240
Cys Ile Phe Ala Cys Glu Glu Met Ser Gly Glu Val Arg Phe Ser Ser
245 250 255
His Leu Pro Gln Pro Asn Ser Leu Cys Ser Leu Val Val Glu Pro Met
260 265 270
Glu Asn Trp Leu Gln Leu Met Leu Asn Trp Asp Pro Gln Gln Arg Gly
275 280 285
Gly Pro Val Asp Leu Thr Leu Lys Gln Pro Arg Cys Phe Val Leu Met
290 295 300
Asp His Ile Leu Asn Leu Lys Ile Val His Ile Leu Asn Met Thr Ser
305 310 315 320
Ala Lys Ile Ile Ser Phe Leu Leu Pro Pro Asp Glu Ser Leu His Ser
325 330 335
Leu Gln Ser Arg Ile Glu Arg Glu Thr Gly Ile Asn Thr Gly Ser Gln
340 345 350
Glu Leu Leu Ser Glu Thr Gly Ile Ser Leu Asp Pro Arg Lys Pro Ala
355 360 365
Ser Gln Cys Val Leu Asp Gly Val Arg Gly Cys Asp Ser Tyr Met Val
370 375 380
Tyr Leu Phe Asp Lys Ser Lys Thr Val Tyr Glu Gly Pro Phe Ala Ser
385 390 395 400
Arg Ser Leu Ser Asp Cys Val Asn Tyr Ile Val Gln Asp Ser Lys Ile
405 410 415
Gln Leu Pro Ile Ile Gln Leu Arg Lys Val Trp Ala Glu Ala Val His
420 425 430
Tyr Val Ser Gly Leu Lys Glu Asp Tyr Ser Arg Leu Phe Gln Gly Gln
435 440 445
Arg Ala Ala Met Leu Ser Leu Leu Arg Tyr Asn Ala Asn Leu Thr Lys
450 455 460
Met Lys Asn Thr Leu Ile Ser Ala Ser Gln Gln Leu Lys Ala Lys Leu
465 470 475 480
Glu Phe Phe His Lys Ser Ile Gln Leu Asp Leu Glu Arg Tyr Ser Glu
485 490 495
Gln Met Thr Tyr Gly Ile Ser Ser Glu Lys Met Leu Lys Ala Trp Lys
500 505 510
Glu Met Glu Glu Lys Ala Ile His Tyr Ala Glu Val Gly Val Ile Gly
515 520 525
Tyr Leu Glu Asp Gln Ile Met Ser Leu His Ala Glu Ile Met Glu Leu
530 535 540
Gln Lys Ser Pro Tyr Arg Arg Gln Gly Asp Leu Met Glu Ser Leu Glu
545 550 555 560
Gln Arg Ala Ile Asp Leu Tyr Lys Gln Leu Lys His Arg Pro Ser Asp
565 570 575
His Ser Tyr Ser Asp Ser Thr Glu Met Val Lys Ile Ile Val His Thr
580 585 590
Val Gln Ser Gln Asp Arg Val Leu Lys Glu Leu Phe Gly His Leu Ser
595 600 605
Lys Leu Leu Gly Cys Lys Gln Lys Ile Ile Asp Leu Leu Pro Lys Val
610 615 620
Glu Val Ala Leu Ser Asn Ile Lys Glu Ala Asp Asn Thr Val Met Phe
625 630 635 640
Met Gln Gly Lys Arg Gln Lys Glu Ile Trp His Leu Leu Lys Ile Ala
645 650 655
Cys Thr Gln Ala Ala Ala Arg Ala Leu Val Gly Ala Ala Leu Glu Gly
660 665 670
Ala Val Ala Pro Gln Ala Ala Ala Trp Leu Pro Pro Ala Ala Ala Glu
675 680 685
His Asp His Ala Leu Ala Cys Val Val Ala Pro Gln Asp Gly Glu Ala
690 695 700
Ala Ala Gln Met Ile Glu Glu Asn Leu Asn Cys Leu Gly His Leu Ala
705 710 715 720
Ala Ile Ile His Glu Ala Asn Glu Glu Gln Gly Asn Ser Met Met Asn
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Thr Glu
740
<210> 93
<211> 756
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(756)
<223> Human constitutively active IKK beta (PEST mutation) P.4015
without epitope tag
<400> 93
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Thr Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Glu Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Arg Asn Arg Glu Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Thr His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Lys Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Ile Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Gln Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Glu Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Thr Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Tyr Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Thr Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Lys Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Ile Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Ile His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Ala Arg Ile Gln Gln Asp Thr Gly Ile Pro Glu Glu Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Glu Ala Gly Leu Ala Leu Ile Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Gly Lys Leu Asn Glu Gly His Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Phe Asp Asn Ser Lys Ile Thr Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Ser Pro Arg Pro Gln Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ala Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Asn Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ser Met Ala Ser Met Ser Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Ser Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Leu Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Glu Val Lys Leu Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Arg Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Lys Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ala Gly Ala
660 665 670
Pro Asp Ala Met Asn Ala Ala Arg Leu Ala Gln Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ala Gln Pro Ala Thr Ala Ala Asn Ala Leu Pro Glu Pro Ala Lys Lys
690 695 700
Ala Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Asn Leu Cys Thr Leu Leu Glu
705 710 715 720
Asn Ala Ile Gln Asp Thr Val Arg Glu Gln Asp Gln Ser Phe Thr Ala
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Thr Glu Glu Glu Glu His Ser Cys Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Ser
755
<210> 94
<211> 756
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(756)
<223> Human constitutively active IKK beta (PEST mutation) P.4016
without epitope tag
<400> 94
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Thr Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Glu Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Arg Asn Arg Glu Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Thr His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Lys Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Ile Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Gln Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Glu Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Thr Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Tyr Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Thr Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Lys Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Ile Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Ile His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Ala Arg Ile Gln Gln Asp Thr Gly Ile Pro Glu Glu Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Glu Ala Gly Leu Ala Leu Ile Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Gly Lys Leu Asn Glu Gly His Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Phe Asp Asn Ser Lys Ile Thr Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Ser Pro Arg Pro Gln Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ala Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Asn Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ser Met Ala Ser Met Ser Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Ser Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Leu Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Glu Val Lys Leu Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Arg Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Lys Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ala Gly Ala
660 665 670
Pro Asp Ala Met Asn Ala Ala Arg Leu Ala Gln Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ala Gln Pro Ala Thr Ala Ala Asn Ala Leu Pro Glu Pro Ala Lys Lys
690 695 700
Ala Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Asn Leu Cys Thr Leu Leu Glu
705 710 715 720
Asn Ala Ile Gln Asp Thr Val Arg Glu Gln Asp Gln Ser Phe Thr Ala
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Thr Glu Glu Glu Glu His Ser Cys Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Ser
755
<210> 95
<211> 745
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(745)
<223> Mouse constitutively active IKK alpha (PEST mutation) P.4017
without epitope tag
<400> 95
Met Glu Arg Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gly Ala Gly Gly Pro Trp Glu
1 5 10 15
Met Arg Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ser Leu Tyr
20 25 30
Gln His Arg Glu Leu Asp Leu Lys Ile Ala Ile Lys Ser Cys Arg Leu
35 40 45
Glu Leu Ser Ser Lys Asn Arg Glu Arg Trp Cys His Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Lys Lys Leu Asp His Ala Asn Val Val Lys Ala Cys Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Glu Leu Asn Phe Leu Ile Asn Asp Val Pro Leu Leu Ala Met Glu
85 90 95
Tyr Cys Ser Gly Gly Asp Leu Arg Lys Leu Leu Asn Lys Pro Glu Asn
100 105 110
Cys Cys Gly Leu Lys Glu Ser Gln Ile Leu Ser Leu Leu Ser Asp Ile
115 120 125
Gly Ser Gly Ile Arg Tyr Leu His Glu Asn Lys Ile Ile His Arg Asp
130 135 140
Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Asp Val Gly Gly Lys Thr Ile
145 150 155 160
His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Asp Val Asp Gln Gly Glu
165 170 175
Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Lys Pro Tyr Thr Ala Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe Gly
195 200 205
Thr Met Val Phe Glu Cys Ile Ala Gly Tyr Arg Pro Phe Leu His His
210 215 220
Leu Gln Pro Phe Thr Trp His Glu Lys Ile Lys Lys Lys Asp Pro Lys
225 230 235 240
Cys Ile Phe Ala Cys Glu Glu Met Thr Gly Glu Val Arg Phe Ser Ser
245 250 255
His Leu Pro Gln Pro Asn Ser Leu Cys Ser Leu Ile Val Glu Pro Met
260 265 270
Glu Ser Trp Leu Gln Leu Met Leu Asn Trp Asp Pro Gln Gln Arg Gly
275 280 285
Gly Pro Ile Asp Leu Thr Leu Lys Gln Pro Arg Cys Phe Ala Leu Met
290 295 300
Asp His Ile Leu Asn Leu Lys Ile Val His Ile Leu Asn Met Thr Ser
305 310 315 320
Ala Lys Ile Ile Ser Phe Leu Leu Pro Cys Asp Glu Ser Leu His Ser
325 330 335
Leu Gln Ser Arg Ile Glu Arg Glu Thr Gly Ile Asn Thr Gly Ser Gln
340 345 350
Glu Leu Leu Ser Glu Thr Gly Ile Ser Leu Asp Pro Arg Lys Pro Ala
355 360 365
Ser Gln Cys Val Leu Asp Gly Val Arg Gly Cys Asp Ser Tyr Met Val
370 375 380
Tyr Leu Phe Asp Lys Ser Lys Thr Val Tyr Glu Gly Pro Phe Ala Ser
385 390 395 400
Arg Ser Leu Ser Asp Cys Val Asn Tyr Ile Val Gln Asp Ser Lys Ile
405 410 415
Gln Leu Pro Ile Ile Gln Leu Arg Lys Val Trp Ala Glu Ala Val His
420 425 430
Tyr Val Ser Gly Leu Lys Glu Asp Tyr Ser Arg Leu Phe Gln Gly Gln
435 440 445
Arg Ala Ala Met Leu Ser Leu Leu Arg Tyr Asn Ala Asn Leu Thr Lys
450 455 460
Met Lys Asn Thr Leu Ile Ser Ala Ser Gln Gln Leu Lys Ala Lys Leu
465 470 475 480
Glu Phe Phe Arg Lys Ser Ile Gln Leu Asp Leu Glu Arg Tyr Ser Glu
485 490 495
Gln Met Thr Tyr Gly Ile Ser Ser Glu Lys Met Leu Lys Ala Trp Lys
500 505 510
Glu Met Glu Glu Lys Ala Ile His Tyr Ser Glu Val Gly Val Ile Gly
515 520 525
Tyr Leu Glu Asp Gln Ile Met Ser Leu His Thr Glu Ile Met Glu Leu
530 535 540
Gln Lys Ser Pro Tyr Gly Arg Arg Gln Gly Asp Leu Met Glu Ser Leu
545 550 555 560
Glu Gln Arg Ala Ile Asp Leu Tyr Lys Gln Leu Lys His Arg Pro Pro
565 570 575
Asp His Leu Tyr Ser Asp Ser Thr Glu Met Val Lys Ile Ile Val His
580 585 590
Thr Val Gln Ser Gln Asp Arg Val Leu Lys Glu Leu Phe Gly His Leu
595 600 605
Ser Lys Leu Leu Gly Cys Lys Gln Lys Ile Ile Asp Leu Leu Pro Lys
610 615 620
Val Glu Val Ala Leu Ser Asn Ile Lys Glu Ala Asp Asn Thr Val Met
625 630 635 640
Phe Met Gln Gly Lys Arg Gln Lys Glu Ile Trp His Leu Leu Lys Ile
645 650 655
Ala Cys Thr Gln Ala Ala Ala Arg Ala Leu Val Gly Ala Ala Leu Glu
660 665 670
Gly Ala Val Ala Pro Pro Val Ala Ala Trp Leu Pro Pro Ala Leu Ala
675 680 685
Asp Arg Glu His Pro Leu Thr Cys Val Val Ala Pro Gln Asp Gly Glu
690 695 700
Ala Leu Ala Gln Met Ile Glu Glu Asn Leu Asn Cys Leu Gly His Leu
705 710 715 720
Ala Ala Ile Ile Arg Glu Ala Asn Glu Asp Gln Ser Ser Ser Leu Met
725 730 735
Ser Leu Asp Trp Ser Trp Leu Ala Glu
740 745
<210> 96
<211> 745
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(745)
<223> Mouse constitutively active IKK alpha (PEST mutation) P.4018
without epitope tag
<400> 96
Met Glu Arg Pro Pro Gly Leu Arg Pro Gly Ala Gly Gly Pro Trp Glu
1 5 10 15
Met Arg Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ser Leu Tyr
20 25 30
Gln His Arg Glu Leu Asp Leu Lys Ile Ala Ile Lys Ser Cys Arg Leu
35 40 45
Glu Leu Ser Ser Lys Asn Arg Glu Arg Trp Cys His Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Lys Lys Leu Asp His Ala Asn Val Val Lys Ala Cys Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Glu Leu Asn Phe Leu Ile Asn Asp Val Pro Leu Leu Ala Met Glu
85 90 95
Tyr Cys Ser Gly Gly Asp Leu Arg Lys Leu Leu Asn Lys Pro Glu Asn
100 105 110
Cys Cys Gly Leu Lys Glu Ser Gln Ile Leu Ser Leu Leu Ser Asp Ile
115 120 125
Gly Ser Gly Ile Arg Tyr Leu His Glu Asn Lys Ile Ile His Arg Asp
130 135 140
Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Asp Val Gly Gly Lys Thr Ile
145 150 155 160
His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Asp Val Asp Gln Gly Glu
165 170 175
Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu Leu
180 185 190
Phe Glu Asn Lys Pro Tyr Thr Ala Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe Gly
195 200 205
Thr Met Val Phe Glu Cys Ile Ala Gly Tyr Arg Pro Phe Leu His His
210 215 220
Leu Gln Pro Phe Thr Trp His Glu Lys Ile Lys Lys Lys Asp Pro Lys
225 230 235 240
Cys Ile Phe Ala Cys Glu Glu Met Thr Gly Glu Val Arg Phe Ser Ser
245 250 255
His Leu Pro Gln Pro Asn Ser Leu Cys Ser Leu Ile Val Glu Pro Met
260 265 270
Glu Ser Trp Leu Gln Leu Met Leu Asn Trp Asp Pro Gln Gln Arg Gly
275 280 285
Gly Pro Ile Asp Leu Thr Leu Lys Gln Pro Arg Cys Phe Ala Leu Met
290 295 300
Asp His Ile Leu Asn Leu Lys Ile Val His Ile Leu Asn Met Thr Ser
305 310 315 320
Ala Lys Ile Ile Ser Phe Leu Leu Pro Cys Asp Glu Ser Leu His Ser
325 330 335
Leu Gln Ser Arg Ile Glu Arg Glu Thr Gly Ile Asn Thr Gly Ser Gln
340 345 350
Glu Leu Leu Ser Glu Thr Gly Ile Ser Leu Asp Pro Arg Lys Pro Ala
355 360 365
Ser Gln Cys Val Leu Asp Gly Val Arg Gly Cys Asp Ser Tyr Met Val
370 375 380
Tyr Leu Phe Asp Lys Ser Lys Thr Val Tyr Glu Gly Pro Phe Ala Ser
385 390 395 400
Arg Ser Leu Ser Asp Cys Val Asn Tyr Ile Val Gln Asp Ser Lys Ile
405 410 415
Gln Leu Pro Ile Ile Gln Leu Arg Lys Val Trp Ala Glu Ala Val His
420 425 430
Tyr Val Ser Gly Leu Lys Glu Asp Tyr Ser Arg Leu Phe Gln Gly Gln
435 440 445
Arg Ala Ala Met Leu Ser Leu Leu Arg Tyr Asn Ala Asn Leu Thr Lys
450 455 460
Met Lys Asn Thr Leu Ile Ser Ala Ser Gln Gln Leu Lys Ala Lys Leu
465 470 475 480
Glu Phe Phe Arg Lys Ser Ile Gln Leu Asp Leu Glu Arg Tyr Ser Glu
485 490 495
Gln Met Thr Tyr Gly Ile Ser Ser Glu Lys Met Leu Lys Ala Trp Lys
500 505 510
Glu Met Glu Glu Lys Ala Ile His Tyr Ser Glu Val Gly Val Ile Gly
515 520 525
Tyr Leu Glu Asp Gln Ile Met Ser Leu His Thr Glu Ile Met Glu Leu
530 535 540
Gln Lys Ser Pro Tyr Gly Arg Arg Gln Gly Asp Leu Met Glu Ser Leu
545 550 555 560
Glu Gln Arg Ala Ile Asp Leu Tyr Lys Gln Leu Lys His Arg Pro Pro
565 570 575
Asp His Leu Tyr Ser Asp Ser Thr Glu Met Val Lys Ile Ile Val His
580 585 590
Thr Val Gln Ser Gln Asp Arg Val Leu Lys Glu Leu Phe Gly His Leu
595 600 605
Ser Lys Leu Leu Gly Cys Lys Gln Lys Ile Ile Asp Leu Leu Pro Lys
610 615 620
Val Glu Val Ala Leu Ser Asn Ile Lys Glu Ala Asp Asn Thr Val Met
625 630 635 640
Phe Met Gln Gly Lys Arg Gln Lys Glu Ile Trp His Leu Leu Lys Ile
645 650 655
Ala Cys Thr Gln Ala Ala Ala Arg Ala Leu Val Gly Ala Ala Leu Glu
660 665 670
Gly Ala Val Ala Pro Pro Val Ala Ala Trp Leu Pro Pro Ala Leu Ala
675 680 685
Asp Arg Glu His Pro Leu Thr Cys Val Val Ala Pro Gln Asp Gly Glu
690 695 700
Ala Leu Ala Gln Met Ile Glu Glu Asn Leu Asn Cys Leu Gly His Leu
705 710 715 720
Ala Ala Ile Ile Arg Glu Ala Asn Glu Asp Gln Ser Ser Ser Leu Met
725 730 735
Ser Leu Asp Trp Ser Trp Leu Ala Glu
740 745
<210> 97
<211> 757
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(757)
<223> Mouse constitutively active IKK beta (PEST mutation) P.4019
without epitope tag
<400> 97
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Pro Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Ala Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Lys Asn Arg Asn Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Asn His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Arg Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Val Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Lys Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Glu Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Ala Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Phe Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Gln Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Arg Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Val Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Val His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Thr Arg Ile Gln Glu Asn Thr Gly Ile Leu Glu Thr Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Lys Ala Gly Leu Val Leu Leu Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Ser Lys Thr Asn Glu Gly Leu Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Leu Asp Asn Ser Lys Ile Asn Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Thr Pro Arg Pro Pro Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ser Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Ser Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ala Met Ala Ser Thr Ala Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Lys Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Gln Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Asp Val Lys His Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Lys Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Arg Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ala Gly Ala
660 665 670
Pro Asp Ala Met Asn Val Ala Arg Leu Ala His Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ala Gln Pro Ala Ser Ala Cys Asp Ala Leu Pro Glu Ser Asp Lys Lys
690 695 700
Ala Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Ala Leu Cys Ser Arg Leu Glu
705 710 715 720
Ser Ala Leu Gln Asp Thr Val Lys Glu Gln Asp Arg Ser Phe Thr Thr
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Met Glu Asp Glu Glu Arg Cys Ser Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Cys Asp
755
<210> 98
<211> 757
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(757)
<223> Mouse constitutively active IKK beta (PEST mutation) P.4020
without epitope tag
<400> 98
Met Ser Trp Ser Pro Ser Leu Pro Thr Gln Thr Cys Gly Ala Trp Glu
1 5 10 15
Met Lys Glu Arg Leu Gly Thr Gly Gly Phe Gly Asn Val Ile Arg Trp
20 25 30
His Asn Gln Ala Thr Gly Glu Gln Ile Ala Ile Lys Gln Cys Arg Gln
35 40 45
Glu Leu Ser Pro Lys Asn Arg Asn Arg Trp Cys Leu Glu Ile Gln Ile
50 55 60
Met Arg Arg Leu Asn His Pro Asn Val Val Ala Ala Arg Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Met Gln Asn Leu Ala Pro Asn Asp Leu Pro Leu Leu Ala Met
85 90 95
Glu Tyr Cys Gln Gly Gly Asp Leu Arg Arg Tyr Leu Asn Gln Phe Glu
100 105 110
Asn Cys Cys Gly Leu Arg Glu Gly Ala Val Leu Thr Leu Leu Ser Asp
115 120 125
Ile Ala Ser Ala Leu Arg Tyr Leu His Glu Asn Arg Ile Ile His Arg
130 135 140
Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile Val Leu Gln Gln Gly Glu Lys Arg Leu
145 150 155 160
Ile His Lys Ile Ile Asp Leu Gly Tyr Ala Lys Glu Leu Asp Gln Gly
165 170 175
Glu Leu Cys Thr Glu Phe Val Gly Thr Leu Gln Tyr Leu Ala Pro Glu
180 185 190
Leu Leu Glu Gln Gln Lys Tyr Thr Val Thr Val Asp Tyr Trp Ser Phe
195 200 205
Gly Thr Leu Ala Phe Glu Cys Ile Thr Gly Phe Arg Pro Phe Leu Pro
210 215 220
Asn Trp Gln Pro Val Gln Trp His Ser Lys Val Arg Gln Lys Ser Glu
225 230 235 240
Val Asp Ile Val Val Ser Glu Asp Leu Asn Gly Ala Val Lys Phe Ser
245 250 255
Ser Ser Leu Pro Phe Pro Asn Asn Leu Asn Ser Val Leu Ala Glu Arg
260 265 270
Leu Glu Lys Trp Leu Gln Leu Met Leu Met Trp His Pro Arg Gln Arg
275 280 285
Gly Thr Asp Pro Gln Tyr Gly Pro Asn Gly Cys Phe Arg Ala Leu Asp
290 295 300
Asp Ile Leu Asn Leu Lys Leu Val His Val Leu Asn Met Val Thr Gly
305 310 315 320
Thr Val His Thr Tyr Pro Val Thr Glu Asp Glu Ser Leu Gln Ser Leu
325 330 335
Lys Thr Arg Ile Gln Glu Asn Thr Gly Ile Leu Glu Thr Asp Gln Glu
340 345 350
Leu Leu Gln Lys Ala Gly Leu Val Leu Leu Pro Asp Lys Pro Ala Thr
355 360 365
Gln Cys Ile Ser Asp Ser Lys Thr Asn Glu Gly Leu Thr Leu Asp Met
370 375 380
Asp Leu Val Phe Leu Leu Asp Asn Ser Lys Ile Asn Tyr Glu Thr Gln
385 390 395 400
Ile Thr Pro Arg Pro Pro Pro Glu Ser Val Ser Cys Ile Leu Gln Glu
405 410 415
Pro Lys Arg Asn Leu Ser Phe Phe Gln Leu Arg Lys Val Trp Gly Gln
420 425 430
Val Trp His Ser Ile Gln Thr Leu Lys Glu Asp Cys Asn Arg Leu Gln
435 440 445
Gln Gly Gln Arg Ala Ala Met Met Ser Leu Leu Arg Asn Asn Ser Cys
450 455 460
Leu Ser Lys Met Lys Asn Ala Met Ala Ser Thr Ala Gln Gln Leu Lys
465 470 475 480
Ala Lys Leu Asp Phe Phe Lys Thr Ser Ile Gln Ile Asp Leu Glu Lys
485 490 495
Tyr Lys Glu Gln Thr Glu Phe Gly Ile Thr Ser Asp Lys Leu Leu Leu
500 505 510
Ala Trp Arg Glu Met Glu Gln Ala Val Glu Gln Cys Gly Arg Glu Asn
515 520 525
Asp Val Lys His Leu Val Glu Arg Met Met Ala Leu Gln Thr Asp Ile
530 535 540
Val Asp Leu Gln Arg Ser Pro Met Gly Arg Lys Gln Gly Gly Thr Leu
545 550 555 560
Asp Asp Leu Glu Glu Gln Ala Arg Glu Leu Tyr Arg Lys Leu Arg Glu
565 570 575
Lys Pro Arg Asp Gln Arg Thr Glu Gly Asp Ser Gln Glu Met Val Arg
580 585 590
Leu Leu Leu Gln Ala Ile Gln Ser Phe Glu Lys Lys Val Arg Val Ile
595 600 605
Tyr Thr Gln Leu Ser Lys Thr Val Val Cys Lys Gln Lys Ala Leu Glu
610 615 620
Leu Leu Pro Lys Val Glu Glu Val Val Ser Leu Met Asn Glu Asp Glu
625 630 635 640
Arg Thr Val Val Arg Leu Gln Glu Lys Arg Gln Lys Glu Leu Trp Asn
645 650 655
Leu Leu Lys Ile Ala Cys Ser Lys Val Arg Gly Pro Val Ala Gly Ala
660 665 670
Pro Asp Ala Met Asn Val Ala Arg Leu Ala His Pro Gly Gln Leu Met
675 680 685
Ala Gln Pro Ala Ser Ala Cys Asp Ala Leu Pro Glu Ser Asp Lys Lys
690 695 700
Ala Glu Glu Leu Val Ala Glu Ala His Ala Leu Cys Ser Arg Leu Glu
705 710 715 720
Ser Ala Leu Gln Asp Thr Val Lys Glu Gln Asp Arg Ser Phe Thr Thr
725 730 735
Leu Asp Trp Ser Trp Leu Gln Met Glu Asp Glu Glu Arg Cys Ser Leu
740 745 750
Glu Gln Ala Cys Asp
755
<210> 99
<211> 585
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huRIPK1(1-555).IZ.TM; TH1021 without epitope tag
<400> 99
Met Gln Pro Asp Met Ser Leu Asn Val Ile Lys Met Lys Ser Ser Asp
1 5 10 15
Phe Leu Glu Ser Ala Glu Leu Asp Ser Gly Gly Phe Gly Lys Val Ser
20 25 30
Leu Cys Phe His Arg Thr Gln Gly Leu Met Ile Met Lys Thr Val Tyr
35 40 45
Lys Gly Pro Asn Cys Ile Glu His Asn Glu Ala Leu Leu Glu Glu Ala
50 55 60
Lys Met Met Asn Arg Leu Arg His Ser Arg Val Val Lys Leu Leu Gly
65 70 75 80
Val Ile Ile Glu Glu Gly Lys Tyr Ser Leu Val Met Glu Tyr Met Glu
85 90 95
Lys Gly Asn Leu Met His Val Leu Lys Ala Glu Met Ser Thr Pro Leu
100 105 110
Ser Val Lys Gly Arg Ile Ile Leu Glu Ile Ile Glu Gly Met Cys Tyr
115 120 125
Leu His Gly Lys Gly Val Ile His Lys Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile
130 135 140
Leu Val Asp Asn Asp Phe His Ile Lys Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala
145 150 155 160
Ser Phe Lys Met Trp Ser Lys Leu Asn Asn Glu Glu His Asn Glu Leu
165 170 175
Arg Glu Val Asp Gly Thr Ala Lys Lys Asn Gly Gly Thr Leu Tyr Tyr
180 185 190
Met Ala Pro Glu His Leu Asn Asp Val Asn Ala Lys Pro Thr Glu Lys
195 200 205
Ser Asp Val Tyr Ser Phe Ala Val Val Leu Trp Ala Ile Phe Ala Asn
210 215 220
Lys Glu Pro Tyr Glu Asn Ala Ile Cys Glu Gln Gln Leu Ile Met Cys
225 230 235 240
Ile Lys Ser Gly Asn Arg Pro Asp Val Asp Asp Ile Thr Glu Tyr Cys
245 250 255
Pro Arg Glu Ile Ile Ser Leu Met Lys Leu Cys Trp Glu Ala Asn Pro
260 265 270
Glu Ala Arg Pro Thr Phe Pro Gly Ile Glu Glu Lys Phe Arg Pro Phe
275 280 285
Tyr Leu Ser Gln Leu Glu Glu Ser Val Glu Glu Asp Val Lys Ser Leu
290 295 300
Lys Lys Glu Tyr Ser Asn Glu Asn Ala Val Val Lys Arg Met Gln Ser
305 310 315 320
Leu Gln Leu Asp Cys Val Ala Val Pro Ser Ser Arg Ser Asn Ser Ala
325 330 335
Thr Glu Gln Pro Gly Ser Leu His Ser Ser Gln Gly Leu Gly Met Gly
340 345 350
Pro Val Glu Glu Ser Trp Phe Ala Pro Ser Leu Glu His Pro Gln Glu
355 360 365
Glu Asn Glu Pro Ser Leu Gln Ser Lys Leu Gln Asp Glu Ala Asn Tyr
370 375 380
His Leu Tyr Gly Ser Arg Met Asp Arg Gln Thr Lys Gln Gln Pro Arg
385 390 395 400
Gln Asn Val Ala Tyr Asn Arg Glu Glu Glu Arg Arg Arg Arg Val Ser
405 410 415
His Asp Pro Phe Ala Gln Gln Arg Pro Tyr Glu Asn Phe Gln Asn Thr
420 425 430
Glu Gly Lys Gly Thr Ala Tyr Ser Ser Ala Ala Ser His Gly Asn Ala
435 440 445
Val His Gln Pro Ser Gly Leu Thr Ser Gln Pro Gln Val Leu Tyr Gln
450 455 460
Asn Asn Gly Leu Tyr Ser Ser His Gly Phe Gly Thr Arg Pro Leu Asp
465 470 475 480
Pro Gly Thr Ala Gly Pro Arg Val Trp Tyr Arg Pro Ile Pro Ser His
485 490 495
Met Pro Ser Leu His Asn Ile Pro Val Pro Glu Thr Asn Tyr Leu Gly
500 505 510
Asn Thr Pro Thr Met Pro Phe Ser Ser Leu Pro Pro Thr Asp Glu Ser
515 520 525
Ile Lys Tyr Thr Ile Tyr Asn Ser Thr Gly Ile Gln Ile Gly Ala Tyr
530 535 540
Asn Tyr Met Glu Ile Gly Gly Thr Ser Ser Ser Gly Gly Ile Lys Lys
545 550 555 560
Glu Ile Glu Ala Ile Lys Lys Glu Gln Glu Ala Ile Lys Lys Lys Ile
565 570 575
Glu Ala Ile Glu Lys Glu Ile Glu Ala
580 585
<210> 100
<211> 609
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huRIPK1(1-555).EE.DM; TH1022 without epitope tag
<400> 100
Met Gln Pro Asp Met Ser Leu Asn Val Ile Lys Met Lys Ser Ser Asp
1 5 10 15
Phe Leu Glu Ser Ala Glu Leu Asp Ser Gly Gly Phe Gly Lys Val Ser
20 25 30
Leu Cys Phe His Arg Thr Gln Gly Leu Met Ile Met Lys Thr Val Tyr
35 40 45
Lys Gly Pro Asn Cys Ile Glu His Asn Glu Ala Leu Leu Glu Glu Ala
50 55 60
Lys Met Met Asn Arg Leu Arg His Ser Arg Val Val Lys Leu Leu Gly
65 70 75 80
Val Ile Ile Glu Glu Gly Lys Tyr Ser Leu Val Met Glu Tyr Met Glu
85 90 95
Lys Gly Asn Leu Met His Val Leu Lys Ala Glu Met Ser Thr Pro Leu
100 105 110
Ser Val Lys Gly Arg Ile Ile Leu Glu Ile Ile Glu Gly Met Cys Tyr
115 120 125
Leu His Gly Lys Gly Val Ile His Lys Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile
130 135 140
Leu Val Asp Asn Asp Phe His Ile Lys Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala
145 150 155 160
Ser Phe Lys Met Trp Ser Lys Leu Asn Asn Glu Glu His Asn Glu Leu
165 170 175
Arg Glu Val Asp Gly Thr Ala Lys Lys Asn Gly Gly Thr Leu Tyr Tyr
180 185 190
Met Ala Pro Glu His Leu Asn Asp Val Asn Ala Lys Pro Thr Glu Lys
195 200 205
Ser Asp Val Tyr Ser Phe Ala Val Val Leu Trp Ala Ile Phe Ala Asn
210 215 220
Lys Glu Pro Tyr Glu Asn Ala Ile Cys Glu Gln Gln Leu Ile Met Cys
225 230 235 240
Ile Lys Ser Gly Asn Arg Pro Asp Val Asp Asp Ile Thr Glu Tyr Cys
245 250 255
Pro Arg Glu Ile Ile Ser Leu Met Lys Leu Cys Trp Glu Ala Asn Pro
260 265 270
Glu Ala Arg Pro Thr Phe Pro Gly Ile Glu Glu Lys Phe Arg Pro Phe
275 280 285
Tyr Leu Ser Gln Leu Glu Glu Ser Val Glu Glu Asp Val Lys Ser Leu
290 295 300
Lys Lys Glu Tyr Ser Asn Glu Asn Ala Val Val Lys Arg Met Gln Ser
305 310 315 320
Leu Gln Leu Asp Cys Val Ala Val Pro Ser Ser Arg Ser Asn Ser Ala
325 330 335
Thr Glu Gln Pro Gly Ser Leu His Ser Ser Gln Gly Leu Gly Met Gly
340 345 350
Pro Val Glu Glu Ser Trp Phe Ala Pro Ser Leu Glu His Pro Gln Glu
355 360 365
Glu Asn Glu Pro Ser Leu Gln Ser Lys Leu Gln Asp Glu Ala Asn Tyr
370 375 380
His Leu Tyr Gly Ser Arg Met Asp Arg Gln Thr Lys Gln Gln Pro Arg
385 390 395 400
Gln Asn Val Ala Tyr Asn Arg Glu Glu Glu Arg Arg Arg Arg Val Ser
405 410 415
His Asp Pro Phe Ala Gln Gln Arg Pro Tyr Glu Asn Phe Gln Asn Thr
420 425 430
Glu Gly Lys Gly Thr Ala Tyr Ser Ser Ala Ala Ser His Gly Asn Ala
435 440 445
Val His Gln Pro Ser Gly Leu Thr Ser Gln Pro Gln Val Leu Tyr Gln
450 455 460
Asn Asn Gly Leu Tyr Ser Ser His Gly Phe Gly Thr Arg Pro Leu Asp
465 470 475 480
Pro Gly Thr Ala Gly Pro Arg Val Trp Tyr Arg Pro Ile Pro Ser His
485 490 495
Met Pro Ser Leu His Asn Ile Pro Val Pro Glu Thr Asn Tyr Leu Gly
500 505 510
Asn Thr Pro Thr Met Pro Phe Ser Ser Leu Pro Pro Thr Asp Glu Ser
515 520 525
Ile Lys Tyr Thr Ile Tyr Asn Ser Thr Gly Ile Gln Ile Gly Ala Tyr
530 535 540
Asn Tyr Met Glu Ile Gly Gly Thr Ser Ser Ser Gly Ser Asp Gly Ser
545 550 555 560
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ile Thr Ile Arg Ala Ala Phe Leu Glu Lys
565 570 575
Glu Asn Thr Ala Leu Arg Thr Glu Ile Ala Glu Leu Glu Lys Glu Val
580 585 590
Gly Arg Cys Glu Asn Ile Val Ser Lys Tyr Glu Thr Arg Tyr Gly Pro
595 600 605
Leu
<210> 101
<211> 609
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huRIPK1(1-555).RR.DM; TH1023 without epitope tag
<400> 101
Met Gln Pro Asp Met Ser Leu Asn Val Ile Lys Met Lys Ser Ser Asp
1 5 10 15
Phe Leu Glu Ser Ala Glu Leu Asp Ser Gly Gly Phe Gly Lys Val Ser
20 25 30
Leu Cys Phe His Arg Thr Gln Gly Leu Met Ile Met Lys Thr Val Tyr
35 40 45
Lys Gly Pro Asn Cys Ile Glu His Asn Glu Ala Leu Leu Glu Glu Ala
50 55 60
Lys Met Met Asn Arg Leu Arg His Ser Arg Val Val Lys Leu Leu Gly
65 70 75 80
Val Ile Ile Glu Glu Gly Lys Tyr Ser Leu Val Met Glu Tyr Met Glu
85 90 95
Lys Gly Asn Leu Met His Val Leu Lys Ala Glu Met Ser Thr Pro Leu
100 105 110
Ser Val Lys Gly Arg Ile Ile Leu Glu Ile Ile Glu Gly Met Cys Tyr
115 120 125
Leu His Gly Lys Gly Val Ile His Lys Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile
130 135 140
Leu Val Asp Asn Asp Phe His Ile Lys Ile Ala Asp Leu Gly Leu Ala
145 150 155 160
Ser Phe Lys Met Trp Ser Lys Leu Asn Asn Glu Glu His Asn Glu Leu
165 170 175
Arg Glu Val Asp Gly Thr Ala Lys Lys Asn Gly Gly Thr Leu Tyr Tyr
180 185 190
Met Ala Pro Glu His Leu Asn Asp Val Asn Ala Lys Pro Thr Glu Lys
195 200 205
Ser Asp Val Tyr Ser Phe Ala Val Val Leu Trp Ala Ile Phe Ala Asn
210 215 220
Lys Glu Pro Tyr Glu Asn Ala Ile Cys Glu Gln Gln Leu Ile Met Cys
225 230 235 240
Ile Lys Ser Gly Asn Arg Pro Asp Val Asp Asp Ile Thr Glu Tyr Cys
245 250 255
Pro Arg Glu Ile Ile Ser Leu Met Lys Leu Cys Trp Glu Ala Asn Pro
260 265 270
Glu Ala Arg Pro Thr Phe Pro Gly Ile Glu Glu Lys Phe Arg Pro Phe
275 280 285
Tyr Leu Ser Gln Leu Glu Glu Ser Val Glu Glu Asp Val Lys Ser Leu
290 295 300
Lys Lys Glu Tyr Ser Asn Glu Asn Ala Val Val Lys Arg Met Gln Ser
305 310 315 320
Leu Gln Leu Asp Cys Val Ala Val Pro Ser Ser Arg Ser Asn Ser Ala
325 330 335
Thr Glu Gln Pro Gly Ser Leu His Ser Ser Gln Gly Leu Gly Met Gly
340 345 350
Pro Val Glu Glu Ser Trp Phe Ala Pro Ser Leu Glu His Pro Gln Glu
355 360 365
Glu Asn Glu Pro Ser Leu Gln Ser Lys Leu Gln Asp Glu Ala Asn Tyr
370 375 380
His Leu Tyr Gly Ser Arg Met Asp Arg Gln Thr Lys Gln Gln Pro Arg
385 390 395 400
Gln Asn Val Ala Tyr Asn Arg Glu Glu Glu Arg Arg Arg Arg Val Ser
405 410 415
His Asp Pro Phe Ala Gln Gln Arg Pro Tyr Glu Asn Phe Gln Asn Thr
420 425 430
Glu Gly Lys Gly Thr Ala Tyr Ser Ser Ala Ala Ser His Gly Asn Ala
435 440 445
Val His Gln Pro Ser Gly Leu Thr Ser Gln Pro Gln Val Leu Tyr Gln
450 455 460
Asn Asn Gly Leu Tyr Ser Ser His Gly Phe Gly Thr Arg Pro Leu Asp
465 470 475 480
Pro Gly Thr Ala Gly Pro Arg Val Trp Tyr Arg Pro Ile Pro Ser His
485 490 495
Met Pro Ser Leu His Asn Ile Pro Val Pro Glu Thr Asn Tyr Leu Gly
500 505 510
Asn Thr Pro Thr Met Pro Phe Ser Ser Leu Pro Pro Thr Asp Glu Ser
515 520 525
Ile Lys Tyr Thr Ile Tyr Asn Ser Thr Gly Ile Gln Ile Gly Ala Tyr
530 535 540
Asn Tyr Met Glu Ile Gly Gly Thr Ser Ser Ser Gly Ser Asp Gly Ser
545 550 555 560
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Leu Glu Ile Arg Ala Ala Phe Leu Glu Lys
565 570 575
Glu Asn Thr Ala Leu Arg Thr Arg Ala Ala Glu Leu Arg Lys Arg Val
580 585 590
Gly Arg Cys Arg Asn Ile Val Ser Lys Tyr Glu Thr Arg Tyr Gly Pro
595 600 605
Leu
<210> 102
<211> 585
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: msRIPK1(1-555).IZ.TM; TH1024 without epitope tag
<400> 102
Met Gln Pro Asp Met Ser Leu Asp Asn Ile Lys Met Ala Ser Ser Asp
1 5 10 15
Leu Leu Glu Lys Thr Asp Leu Asp Ser Gly Gly Phe Gly Lys Val Ser
20 25 30
Leu Cys Tyr His Arg Ser His Gly Phe Val Ile Leu Lys Lys Val Tyr
35 40 45
Thr Gly Pro Asn Arg Ala Glu Tyr Asn Glu Val Leu Leu Glu Glu Gly
50 55 60
Lys Met Met His Arg Leu Arg His Ser Arg Val Val Lys Leu Leu Gly
65 70 75 80
Ile Ile Ile Glu Glu Gly Asn Tyr Ser Leu Val Met Glu Tyr Met Glu
85 90 95
Lys Gly Asn Leu Met His Val Leu Lys Thr Gln Ile Asp Val Pro Leu
100 105 110
Ser Leu Lys Gly Arg Ile Ile Val Glu Ala Ile Glu Gly Met Cys Tyr
115 120 125
Leu His Asp Lys Gly Val Ile His Lys Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile
130 135 140
Leu Val Asp Arg Asp Phe His Ile Lys Ile Ala Asp Leu Gly Val Ala
145 150 155 160
Ser Phe Lys Thr Trp Ser Lys Leu Thr Lys Glu Lys Asp Asn Lys Gln
165 170 175
Lys Glu Val Ser Ser Thr Thr Lys Lys Asn Asn Gly Gly Thr Leu Tyr
180 185 190
Tyr Met Ala Pro Glu His Leu Asn Asp Ile Asn Ala Lys Pro Thr Glu
195 200 205
Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Ile Val Leu Trp Ala Ile Phe Ala
210 215 220
Lys Lys Glu Pro Tyr Glu Asn Val Ile Cys Thr Glu Gln Phe Val Ile
225 230 235 240
Cys Ile Lys Ser Gly Asn Arg Pro Asn Val Glu Glu Ile Leu Glu Tyr
245 250 255
Cys Pro Arg Glu Ile Ile Ser Leu Met Glu Arg Cys Trp Gln Ala Ile
260 265 270
Pro Glu Asp Arg Pro Thr Phe Leu Gly Ile Glu Glu Glu Phe Arg Pro
275 280 285
Phe Tyr Leu Ser His Phe Glu Glu Tyr Val Glu Glu Asp Val Ala Ser
290 295 300
Leu Lys Lys Glu Tyr Pro Asp Gln Ser Pro Val Leu Gln Arg Met Phe
305 310 315 320
Ser Leu Gln His Asp Cys Val Pro Leu Pro Pro Ser Arg Ser Asn Ser
325 330 335
Glu Gln Pro Gly Ser Leu His Ser Ser Gln Gly Leu Gln Met Gly Pro
340 345 350
Val Glu Glu Ser Trp Phe Ser Ser Ser Pro Glu Tyr Pro Gln Asp Glu
355 360 365
Asn Asp Arg Ser Val Gln Ala Lys Leu Gln Glu Glu Ala Ser Tyr His
370 375 380
Ala Phe Gly Ile Phe Ala Glu Lys Gln Thr Lys Pro Gln Pro Arg Gln
385 390 395 400
Asn Glu Ala Tyr Asn Arg Glu Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ser His
405 410 415
Asp Pro Phe Ala Gln Gln Arg Ala Arg Glu Asn Ile Lys Ser Ala Gly
420 425 430
Ala Arg Gly His Ser Asp Pro Ser Thr Thr Ser Arg Gly Ile Ala Val
435 440 445
Gln Gln Leu Ser Trp Pro Ala Thr Gln Thr Val Trp Asn Asn Gly Leu
450 455 460
Tyr Asn Gln His Gly Phe Gly Thr Thr Gly Thr Gly Val Trp Tyr Pro
465 470 475 480
Pro Asn Leu Ser Gln Met Tyr Ser Thr Tyr Lys Thr Pro Val Pro Glu
485 490 495
Thr Asn Ile Pro Gly Ser Thr Pro Thr Met Pro Tyr Phe Ser Gly Pro
500 505 510
Val Ala Asp Asp Leu Ile Lys Tyr Thr Ile Phe Asn Ser Ser Gly Ile
515 520 525
Gln Ile Gly Asn His Asn Tyr Met Asp Val Gly Leu Asn Ser Gln Pro
530 535 540
Pro Asn Asn Thr Cys Lys Glu Glu Ser Thr Ser Gly Gly Ile Lys Lys
545 550 555 560
Glu Ile Glu Ala Ile Lys Lys Glu Gln Glu Ala Ile Lys Lys Lys Ile
565 570 575
Glu Ala Ile Glu Lys Glu Ile Glu Ala
580 585
<210> 103
<211> 609
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: msRIPK1(1-555).EE.DM; TH1025 without epitope tag
<400> 103
Met Gln Pro Asp Met Ser Leu Asp Asn Ile Lys Met Ala Ser Ser Asp
1 5 10 15
Leu Leu Glu Lys Thr Asp Leu Asp Ser Gly Gly Phe Gly Lys Val Ser
20 25 30
Leu Cys Tyr His Arg Ser His Gly Phe Val Ile Leu Lys Lys Val Tyr
35 40 45
Thr Gly Pro Asn Arg Ala Glu Tyr Asn Glu Val Leu Leu Glu Glu Gly
50 55 60
Lys Met Met His Arg Leu Arg His Ser Arg Val Val Lys Leu Leu Gly
65 70 75 80
Ile Ile Ile Glu Glu Gly Asn Tyr Ser Leu Val Met Glu Tyr Met Glu
85 90 95
Lys Gly Asn Leu Met His Val Leu Lys Thr Gln Ile Asp Val Pro Leu
100 105 110
Ser Leu Lys Gly Arg Ile Ile Val Glu Ala Ile Glu Gly Met Cys Tyr
115 120 125
Leu His Asp Lys Gly Val Ile His Lys Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile
130 135 140
Leu Val Asp Arg Asp Phe His Ile Lys Ile Ala Asp Leu Gly Val Ala
145 150 155 160
Ser Phe Lys Thr Trp Ser Lys Leu Thr Lys Glu Lys Asp Asn Lys Gln
165 170 175
Lys Glu Val Ser Ser Thr Thr Lys Lys Asn Asn Gly Gly Thr Leu Tyr
180 185 190
Tyr Met Ala Pro Glu His Leu Asn Asp Ile Asn Ala Lys Pro Thr Glu
195 200 205
Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Ile Val Leu Trp Ala Ile Phe Ala
210 215 220
Lys Lys Glu Pro Tyr Glu Asn Val Ile Cys Thr Glu Gln Phe Val Ile
225 230 235 240
Cys Ile Lys Ser Gly Asn Arg Pro Asn Val Glu Glu Ile Leu Glu Tyr
245 250 255
Cys Pro Arg Glu Ile Ile Ser Leu Met Glu Arg Cys Trp Gln Ala Ile
260 265 270
Pro Glu Asp Arg Pro Thr Phe Leu Gly Ile Glu Glu Glu Phe Arg Pro
275 280 285
Phe Tyr Leu Ser His Phe Glu Glu Tyr Val Glu Glu Asp Val Ala Ser
290 295 300
Leu Lys Lys Glu Tyr Pro Asp Gln Ser Pro Val Leu Gln Arg Met Phe
305 310 315 320
Ser Leu Gln His Asp Cys Val Pro Leu Pro Pro Ser Arg Ser Asn Ser
325 330 335
Glu Gln Pro Gly Ser Leu His Ser Ser Gln Gly Leu Gln Met Gly Pro
340 345 350
Val Glu Glu Ser Trp Phe Ser Ser Ser Pro Glu Tyr Pro Gln Asp Glu
355 360 365
Asn Asp Arg Ser Val Gln Ala Lys Leu Gln Glu Glu Ala Ser Tyr His
370 375 380
Ala Phe Gly Ile Phe Ala Glu Lys Gln Thr Lys Pro Gln Pro Arg Gln
385 390 395 400
Asn Glu Ala Tyr Asn Arg Glu Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ser His
405 410 415
Asp Pro Phe Ala Gln Gln Arg Ala Arg Glu Asn Ile Lys Ser Ala Gly
420 425 430
Ala Arg Gly His Ser Asp Pro Ser Thr Thr Ser Arg Gly Ile Ala Val
435 440 445
Gln Gln Leu Ser Trp Pro Ala Thr Gln Thr Val Trp Asn Asn Gly Leu
450 455 460
Tyr Asn Gln His Gly Phe Gly Thr Thr Gly Thr Gly Val Trp Tyr Pro
465 470 475 480
Pro Asn Leu Ser Gln Met Tyr Ser Thr Tyr Lys Thr Pro Val Pro Glu
485 490 495
Thr Asn Ile Pro Gly Ser Thr Pro Thr Met Pro Tyr Phe Ser Gly Pro
500 505 510
Val Ala Asp Asp Leu Ile Lys Tyr Thr Ile Phe Asn Ser Ser Gly Ile
515 520 525
Gln Ile Gly Asn His Asn Tyr Met Asp Val Gly Leu Asn Ser Gln Pro
530 535 540
Pro Asn Asn Thr Cys Lys Glu Glu Ser Thr Ser Gly Ser Asp Gly Ser
545 550 555 560
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Ile Thr Ile Arg Ala Ala Phe Leu Glu Lys
565 570 575
Glu Asn Thr Ala Leu Arg Thr Glu Ile Ala Glu Leu Glu Lys Glu Val
580 585 590
Gly Arg Cys Glu Asn Ile Val Ser Lys Tyr Glu Thr Arg Tyr Gly Pro
595 600 605
Leu
<210> 104
<211> 609
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: msRIPK1(1-555).RR.DM; TH1026 without epitope tag
<400> 104
Met Gln Pro Asp Met Ser Leu Asp Asn Ile Lys Met Ala Ser Ser Asp
1 5 10 15
Leu Leu Glu Lys Thr Asp Leu Asp Ser Gly Gly Phe Gly Lys Val Ser
20 25 30
Leu Cys Tyr His Arg Ser His Gly Phe Val Ile Leu Lys Lys Val Tyr
35 40 45
Thr Gly Pro Asn Arg Ala Glu Tyr Asn Glu Val Leu Leu Glu Glu Gly
50 55 60
Lys Met Met His Arg Leu Arg His Ser Arg Val Val Lys Leu Leu Gly
65 70 75 80
Ile Ile Ile Glu Glu Gly Asn Tyr Ser Leu Val Met Glu Tyr Met Glu
85 90 95
Lys Gly Asn Leu Met His Val Leu Lys Thr Gln Ile Asp Val Pro Leu
100 105 110
Ser Leu Lys Gly Arg Ile Ile Val Glu Ala Ile Glu Gly Met Cys Tyr
115 120 125
Leu His Asp Lys Gly Val Ile His Lys Asp Leu Lys Pro Glu Asn Ile
130 135 140
Leu Val Asp Arg Asp Phe His Ile Lys Ile Ala Asp Leu Gly Val Ala
145 150 155 160
Ser Phe Lys Thr Trp Ser Lys Leu Thr Lys Glu Lys Asp Asn Lys Gln
165 170 175
Lys Glu Val Ser Ser Thr Thr Lys Lys Asn Asn Gly Gly Thr Leu Tyr
180 185 190
Tyr Met Ala Pro Glu His Leu Asn Asp Ile Asn Ala Lys Pro Thr Glu
195 200 205
Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Ile Val Leu Trp Ala Ile Phe Ala
210 215 220
Lys Lys Glu Pro Tyr Glu Asn Val Ile Cys Thr Glu Gln Phe Val Ile
225 230 235 240
Cys Ile Lys Ser Gly Asn Arg Pro Asn Val Glu Glu Ile Leu Glu Tyr
245 250 255
Cys Pro Arg Glu Ile Ile Ser Leu Met Glu Arg Cys Trp Gln Ala Ile
260 265 270
Pro Glu Asp Arg Pro Thr Phe Leu Gly Ile Glu Glu Glu Phe Arg Pro
275 280 285
Phe Tyr Leu Ser His Phe Glu Glu Tyr Val Glu Glu Asp Val Ala Ser
290 295 300
Leu Lys Lys Glu Tyr Pro Asp Gln Ser Pro Val Leu Gln Arg Met Phe
305 310 315 320
Ser Leu Gln His Asp Cys Val Pro Leu Pro Pro Ser Arg Ser Asn Ser
325 330 335
Glu Gln Pro Gly Ser Leu His Ser Ser Gln Gly Leu Gln Met Gly Pro
340 345 350
Val Glu Glu Ser Trp Phe Ser Ser Ser Pro Glu Tyr Pro Gln Asp Glu
355 360 365
Asn Asp Arg Ser Val Gln Ala Lys Leu Gln Glu Glu Ala Ser Tyr His
370 375 380
Ala Phe Gly Ile Phe Ala Glu Lys Gln Thr Lys Pro Gln Pro Arg Gln
385 390 395 400
Asn Glu Ala Tyr Asn Arg Glu Glu Glu Arg Lys Arg Arg Val Ser His
405 410 415
Asp Pro Phe Ala Gln Gln Arg Ala Arg Glu Asn Ile Lys Ser Ala Gly
420 425 430
Ala Arg Gly His Ser Asp Pro Ser Thr Thr Ser Arg Gly Ile Ala Val
435 440 445
Gln Gln Leu Ser Trp Pro Ala Thr Gln Thr Val Trp Asn Asn Gly Leu
450 455 460
Tyr Asn Gln His Gly Phe Gly Thr Thr Gly Thr Gly Val Trp Tyr Pro
465 470 475 480
Pro Asn Leu Ser Gln Met Tyr Ser Thr Tyr Lys Thr Pro Val Pro Glu
485 490 495
Thr Asn Ile Pro Gly Ser Thr Pro Thr Met Pro Tyr Phe Ser Gly Pro
500 505 510
Val Ala Asp Asp Leu Ile Lys Tyr Thr Ile Phe Asn Ser Ser Gly Ile
515 520 525
Gln Ile Gly Asn His Asn Tyr Met Asp Val Gly Leu Asn Ser Gln Pro
530 535 540
Pro Asn Asn Thr Cys Lys Glu Glu Ser Thr Ser Gly Ser Asp Gly Ser
545 550 555 560
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Leu Glu Ile Arg Ala Ala Phe Leu Glu Lys
565 570 575
Glu Asn Thr Ala Leu Arg Thr Arg Ala Ala Glu Leu Arg Lys Arg Val
580 585 590
Gly Arg Cys Arg Asn Ile Val Ser Lys Tyr Glu Thr Arg Tyr Gly Pro
595 600 605
Leu
<210> 105
<211> 378
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(378)
<223> human TAK1-TAB1; P4031 without epitope tag
<400> 105
Met Ser Thr Ala Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Met Ile Glu Ala Pro Ser Gln Val Leu Asn Phe Glu Glu Ile Asp
20 25 30
Tyr Lys Glu Ile Glu Val Glu Glu Val Val Gly Arg Gly Ala Phe Gly
35 40 45
Val Val Cys Lys Ala Lys Trp Arg Ala Lys Asp Val Ala Ile Lys Gln
50 55 60
Ile Glu Ser Glu Ser Glu Arg Lys Ala Phe Ile Val Glu Leu Arg Gln
65 70 75 80
Leu Ser Arg Val Asn His Pro Asn Ile Val Lys Leu Tyr Gly Ala Cys
85 90 95
Leu Asn Pro Val Cys Leu Val Met Glu Tyr Ala Glu Gly Gly Ser Leu
100 105 110
Tyr Asn Val Leu His Gly Ala Glu Pro Leu Pro Tyr Tyr Thr Ala Ala
115 120 125
His Ala Met Ser Trp Cys Leu Gln Cys Ser Gln Gly Val Ala Tyr Leu
130 135 140
His Ser Met Gln Pro Lys Ala Leu Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Pro
145 150 155 160
Asn Leu Leu Leu Val Ala Gly Gly Thr Val Leu Lys Ile Cys Asp Phe
165 170 175
Gly Thr Ala Cys Asp Ile Gln Thr His Met Thr Asn Asn Lys Gly Ser
180 185 190
Ala Ala Trp Met Ala Pro Glu Val Phe Glu Gly Ser Asn Tyr Ser Glu
195 200 205
Lys Cys Asp Val Phe Ser Trp Gly Ile Ile Leu Trp Glu Val Ile Thr
210 215 220
Arg Arg Lys Pro Phe Asp Glu Ile Gly Gly Pro Ala Phe Arg Ile Met
225 230 235 240
Trp Ala Val His Asn Gly Thr Arg Pro Pro Leu Ile Lys Asn Leu Pro
245 250 255
Lys Pro Ile Glu Ser Leu Met Thr Arg Cys Trp Ser Lys Asp Pro Ser
260 265 270
Gln Arg Pro Ser Met Glu Glu Ile Val Lys Ile Met Thr His Leu Met
275 280 285
Arg Tyr Phe Pro Gly Ala Asp Glu Pro Leu Gln Tyr Pro Cys Gln Glu
290 295 300
Phe Gly Gly Gly Gly Gly Gln Ser Pro Thr Leu Thr Leu Gln Ser Thr
305 310 315 320
Asn Thr His Thr Gln Ser Ser Ser Ser Ser Ser Asp Gly Gly Leu Phe
325 330 335
Arg Ser Arg Pro Ala His Ser Leu Pro Pro Gly Glu Asp Gly Arg Val
340 345 350
Glu Pro Tyr Val Asp Phe Ala Glu Phe Tyr Arg Leu Trp Ser Val Asp
355 360 365
His Gly Glu Gln Ser Val Val Thr Ala Pro
370 375
<210> 106
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.1; without epitope tag
<400> 106
Met Ala Ala Leu Lys Ser Trp Leu Ser Arg Ser Val Thr Ser Phe Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Arg Gln Cys Leu Cys Val Pro Val Val Ala Asn Phe Lys Lys
20 25 30
Arg Cys Phe Ser Glu Leu Ile Arg Pro Trp His Lys Thr Val Thr Ile
35 40 45
Gly Phe Gly Val Thr Leu Cys Ala Val Pro Ile Ala Gln Lys Ser Glu
50 55 60
Pro His Ser Leu Ser Ser Glu Ala Leu Met Arg Arg Ala Val Ser Leu
65 70 75 80
Val Thr Asp Ser Thr Ser Thr Phe Leu Ser Gln Thr Thr Tyr Ala Leu
85 90 95
Ile Glu Ala Ile Thr Glu Tyr Thr Lys Ala Val Tyr Thr Leu Thr Ser
100 105 110
Leu Tyr Arg Gln Tyr Thr Ser Leu Leu Gly Lys Met Asn Ser Glu Glu
115 120 125
Glu Asp Glu Val Trp Gln Val Ile Ile Gly Ala Arg Ala Glu Met Thr
130 135 140
Ser Lys His Gln Glu Tyr Leu Lys Leu Glu Thr Thr Trp Met Thr Ala
145 150 155 160
Val Gly Leu Ser Glu Met Ala Ala Glu Ala Ala Tyr Gln Thr Gly Ala
165 170 175
Asp Gln Ala Ser Ile Thr Ala Arg Asn His Ile Gln Leu Val Lys Leu
180 185 190
Gln Val Glu Glu Val His Gln Leu Ser Arg Lys Ala Glu Thr Lys Leu
195 200 205
Ala Glu Ala Gln Ile Glu Glu Leu Arg Gln Lys Thr Gln Glu Glu Gly
210 215 220
Glu Glu Arg Ala Glu Ser Glu Gln Glu Ala Tyr Leu Arg Glu Asp
225 230 235
<210> 107
<211> 239
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.1(S126L); without epitope tag
<400> 107
Met Ala Ala Leu Lys Ser Trp Leu Ser Arg Ser Val Thr Ser Phe Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Arg Gln Cys Leu Cys Val Pro Val Val Ala Asn Phe Lys Lys
20 25 30
Arg Cys Phe Ser Glu Leu Ile Arg Pro Trp His Lys Thr Val Thr Ile
35 40 45
Gly Phe Gly Val Thr Leu Cys Ala Val Pro Ile Ala Gln Lys Ser Glu
50 55 60
Pro His Ser Leu Ser Ser Glu Ala Leu Met Arg Arg Ala Val Ser Leu
65 70 75 80
Val Thr Asp Ser Thr Ser Thr Phe Leu Ser Gln Thr Thr Tyr Ala Leu
85 90 95
Ile Glu Ala Ile Thr Glu Tyr Thr Lys Ala Val Tyr Thr Leu Thr Ser
100 105 110
Leu Tyr Arg Gln Tyr Thr Ser Leu Leu Gly Lys Met Asn Leu Glu Glu
115 120 125
Glu Asp Glu Val Trp Gln Val Ile Ile Gly Ala Arg Ala Glu Met Thr
130 135 140
Ser Lys His Gln Glu Tyr Leu Lys Leu Glu Thr Thr Trp Met Thr Ala
145 150 155 160
Val Gly Leu Ser Glu Met Ala Ala Glu Ala Ala Tyr Gln Thr Gly Ala
165 170 175
Asp Gln Ala Ser Ile Thr Ala Arg Asn His Ile Gln Leu Val Lys Leu
180 185 190
Gln Val Glu Glu Val His Gln Leu Ser Arg Lys Ala Glu Thr Lys Leu
195 200 205
Ala Glu Ala Gln Ile Glu Glu Leu Arg Gln Lys Thr Gln Glu Glu Gly
210 215 220
Glu Glu Arg Ala Glu Ser Glu Gln Glu Ala Tyr Leu Arg Glu Asp
225 230 235
<210> 108
<211> 185
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.1(56-239); without epitope tag
<400> 108
Met Ala Val Pro Ile Ala Gln Lys Ser Glu Pro His Ser Leu Ser Ser
1 5 10 15
Glu Ala Leu Met Arg Arg Ala Val Ser Leu Val Thr Asp Ser Thr Ser
20 25 30
Thr Phe Leu Ser Gln Thr Thr Tyr Ala Leu Ile Glu Ala Ile Thr Glu
35 40 45
Tyr Thr Lys Ala Val Tyr Thr Leu Thr Ser Leu Tyr Arg Gln Tyr Thr
50 55 60
Ser Leu Leu Gly Lys Met Asn Ser Glu Glu Glu Asp Glu Val Trp Gln
65 70 75 80
Val Ile Ile Gly Ala Arg Ala Glu Met Thr Ser Lys His Gln Glu Tyr
85 90 95
Leu Lys Leu Glu Thr Thr Trp Met Thr Ala Val Gly Leu Ser Glu Met
100 105 110
Ala Ala Glu Ala Ala Tyr Gln Thr Gly Ala Asp Gln Ala Ser Ile Thr
115 120 125
Ala Arg Asn His Ile Gln Leu Val Lys Leu Gln Val Glu Glu Val His
130 135 140
Gln Leu Ser Arg Lys Ala Glu Thr Lys Leu Ala Glu Ala Gln Ile Glu
145 150 155 160
Glu Leu Arg Gln Lys Thr Gln Glu Glu Gly Glu Glu Arg Ala Glu Ser
165 170 175
Glu Gln Glu Ala Tyr Leu Arg Glu Asp
180 185
<210> 109
<211> 185
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.1(56-239/S126L); without epitope tag
<400> 109
Met Ala Val Pro Ile Ala Gln Lys Ser Glu Pro His Ser Leu Ser Ser
1 5 10 15
Glu Ala Leu Met Arg Arg Ala Val Ser Leu Val Thr Asp Ser Thr Ser
20 25 30
Thr Phe Leu Ser Gln Thr Thr Tyr Ala Leu Ile Glu Ala Ile Thr Glu
35 40 45
Tyr Thr Lys Ala Val Tyr Thr Leu Thr Ser Leu Tyr Arg Gln Tyr Thr
50 55 60
Ser Leu Leu Gly Lys Met Asn Leu Glu Glu Glu Asp Glu Val Trp Gln
65 70 75 80
Val Ile Ile Gly Ala Arg Ala Glu Met Thr Ser Lys His Gln Glu Tyr
85 90 95
Leu Lys Leu Glu Thr Thr Trp Met Thr Ala Val Gly Leu Ser Glu Met
100 105 110
Ala Ala Glu Ala Ala Tyr Gln Thr Gly Ala Asp Gln Ala Ser Ile Thr
115 120 125
Ala Arg Asn His Ile Gln Leu Val Lys Leu Gln Val Glu Glu Val His
130 135 140
Gln Leu Ser Arg Lys Ala Glu Thr Lys Leu Ala Glu Ala Gln Ile Glu
145 150 155 160
Glu Leu Arg Gln Lys Thr Gln Glu Glu Gly Glu Glu Arg Ala Glu Ser
165 170 175
Glu Gln Glu Ala Tyr Leu Arg Glu Asp
180 185
<210> 110
<211> 195
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.3; TH2003 without epitope tag
<400> 110
Met Ala Ala Leu Lys Ser Trp Leu Ser Arg Ser Val Thr Ser Phe Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Arg Gln Cys Leu Cys Val Pro Val Val Ala Asn Phe Lys Lys
20 25 30
Arg Cys Phe Ser Glu Leu Ile Arg Pro Trp His Lys Thr Val Thr Ile
35 40 45
Gly Phe Gly Val Thr Leu Cys Ala Val Pro Ile Ala Gln Ala Val Tyr
50 55 60
Thr Leu Thr Ser Leu Tyr Arg Gln Tyr Thr Ser Leu Leu Gly Lys Met
65 70 75 80
Asn Ser Glu Glu Glu Asp Glu Val Trp Gln Val Ile Ile Gly Ala Arg
85 90 95
Ala Glu Met Thr Ser Lys His Gln Glu Tyr Leu Lys Leu Glu Thr Thr
100 105 110
Trp Met Thr Ala Val Gly Leu Ser Glu Met Ala Ala Glu Ala Ala Tyr
115 120 125
Gln Thr Gly Ala Asp Gln Ala Ser Ile Thr Ala Arg Asn His Ile Gln
130 135 140
Leu Val Lys Leu Gln Val Glu Glu Val His Gln Leu Ser Arg Lys Ala
145 150 155 160
Glu Thr Lys Leu Ala Glu Ala Gln Ile Glu Glu Leu Arg Gln Lys Thr
165 170 175
Gln Glu Glu Gly Glu Glu Arg Ala Glu Ser Glu Gln Glu Ala Tyr Leu
180 185 190
Arg Glu Asp
195
<210> 111
<211> 195
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.3(S82L); TH2001 without epitope tag
<400> 111
Met Ala Ala Leu Lys Ser Trp Leu Ser Arg Ser Val Thr Ser Phe Phe
1 5 10 15
Arg Tyr Arg Gln Cys Leu Cys Val Pro Val Val Ala Asn Phe Lys Lys
20 25 30
Arg Cys Phe Ser Glu Leu Ile Arg Pro Trp His Lys Thr Val Thr Ile
35 40 45
Gly Phe Gly Val Thr Leu Cys Ala Val Pro Ile Ala Gln Ala Val Tyr
50 55 60
Thr Leu Thr Ser Leu Tyr Arg Gln Tyr Thr Ser Leu Leu Gly Lys Met
65 70 75 80
Asn Leu Glu Glu Glu Asp Glu Val Trp Gln Val Ile Ile Gly Ala Arg
85 90 95
Ala Glu Met Thr Ser Lys His Gln Glu Tyr Leu Lys Leu Glu Thr Thr
100 105 110
Trp Met Thr Ala Val Gly Leu Ser Glu Met Ala Ala Glu Ala Ala Tyr
115 120 125
Gln Thr Gly Ala Asp Gln Ala Ser Ile Thr Ala Arg Asn His Ile Gln
130 135 140
Leu Val Lys Leu Gln Val Glu Glu Val His Gln Leu Ser Arg Lys Ala
145 150 155 160
Glu Thr Lys Leu Ala Glu Ala Gln Ile Glu Glu Leu Arg Gln Lys Thr
165 170 175
Gln Glu Glu Gly Glu Glu Arg Ala Glu Ser Glu Gln Glu Ala Tyr Leu
180 185 190
Arg Glu Asp
195
<210> 112
<211> 141
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.3(56-195); TH2002 without epitope tag
<400> 112
Met Ala Val Pro Ile Ala Gln Ala Val Tyr Thr Leu Thr Ser Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Gln Tyr Thr Ser Leu Leu Gly Lys Met Asn Ser Glu Glu Glu Asp
20 25 30
Glu Val Trp Gln Val Ile Ile Gly Ala Arg Ala Glu Met Thr Ser Lys
35 40 45
His Gln Glu Tyr Leu Lys Leu Glu Thr Thr Trp Met Thr Ala Val Gly
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ala Ala Glu Ala Ala Tyr Gln Thr Gly Ala Asp Gln
65 70 75 80
Ala Ser Ile Thr Ala Arg Asn His Ile Gln Leu Val Lys Leu Gln Val
85 90 95
Glu Glu Val His Gln Leu Ser Arg Lys Ala Glu Thr Lys Leu Ala Glu
100 105 110
Ala Gln Ile Glu Glu Leu Arg Gln Lys Thr Gln Glu Glu Gly Glu Glu
115 120 125
Arg Ala Glu Ser Glu Gln Glu Ala Tyr Leu Arg Glu Asp
130 135 140
<210> 113
<211> 141
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Diablo.3(56-195/S82L); without epitope tag
<400> 113
Met Ala Val Pro Ile Ala Gln Ala Val Tyr Thr Leu Thr Ser Leu Tyr
1 5 10 15
Arg Gln Tyr Thr Ser Leu Leu Gly Lys Met Asn Leu Glu Glu Glu Asp
20 25 30
Glu Val Trp Gln Val Ile Ile Gly Ala Arg Ala Glu Met Thr Ser Lys
35 40 45
His Gln Glu Tyr Leu Lys Leu Glu Thr Thr Trp Met Thr Ala Val Gly
50 55 60
Leu Ser Glu Met Ala Ala Glu Ala Ala Tyr Gln Thr Gly Ala Asp Gln
65 70 75 80
Ala Ser Ile Thr Ala Arg Asn His Ile Gln Leu Val Lys Leu Gln Val
85 90 95
Glu Glu Val His Gln Leu Ser Arg Lys Ala Glu Thr Lys Leu Ala Glu
100 105 110
Ala Gln Ile Glu Glu Leu Arg Gln Lys Thr Gln Glu Glu Gly Glu Glu
115 120 125
Arg Ala Glu Ser Glu Gln Glu Ala Tyr Leu Arg Glu Asp
130 135 140
<210> 114
<211> 659
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Btk(E41K); P4029 without epitope tag
<400> 114
Met Ala Ala Val Ile Leu Glu Ser Ile Phe Leu Lys Arg Ser Gln Gln
1 5 10 15
Lys Lys Lys Thr Ser Pro Leu Asn Phe Lys Lys Arg Leu Phe Leu Leu
20 25 30
Thr Val His Lys Leu Ser Tyr Tyr Lys Tyr Asp Phe Glu Arg Gly Arg
35 40 45
Arg Gly Ser Lys Lys Gly Ser Ile Asp Val Glu Lys Ile Thr Cys Val
50 55 60
Glu Thr Val Val Pro Glu Lys Asn Pro Pro Pro Glu Arg Gln Ile Pro
65 70 75 80
Arg Arg Gly Glu Glu Ser Ser Glu Met Glu Gln Ile Ser Ile Ile Glu
85 90 95
Arg Phe Pro Tyr Pro Phe Gln Val Val Tyr Asp Glu Gly Pro Leu Tyr
100 105 110
Val Phe Ser Pro Thr Glu Glu Leu Arg Lys Arg Trp Ile His Gln Leu
115 120 125
Lys Asn Val Ile Arg Tyr Asn Ser Asp Leu Val Gln Lys Tyr His Pro
130 135 140
Cys Phe Trp Ile Asp Gly Gln Tyr Leu Cys Cys Ser Gln Thr Ala Lys
145 150 155 160
Asn Ala Met Gly Cys Gln Ile Leu Glu Asn Arg Asn Gly Ser Leu Lys
165 170 175
Pro Gly Ser Ser His Arg Lys Thr Lys Lys Pro Leu Pro Pro Thr Pro
180 185 190
Glu Glu Asp Gln Ile Leu Lys Lys Pro Leu Pro Pro Glu Pro Ala Ala
195 200 205
Ala Pro Val Ser Thr Ser Glu Leu Lys Lys Val Val Ala Leu Tyr Asp
210 215 220
Tyr Met Pro Met Asn Ala Asn Asp Leu Gln Leu Arg Lys Gly Asp Glu
225 230 235 240
Tyr Phe Ile Leu Glu Glu Ser Asn Leu Pro Trp Trp Arg Ala Arg Asp
245 250 255
Lys Asn Gly Gln Glu Gly Tyr Ile Pro Ser Asn Tyr Val Thr Glu Ala
260 265 270
Glu Asp Ser Ile Glu Met Tyr Glu Trp Tyr Ser Lys His Met Thr Arg
275 280 285
Ser Gln Ala Glu Gln Leu Leu Lys Gln Glu Gly Lys Glu Gly Gly Phe
290 295 300
Ile Val Arg Asp Ser Ser Lys Ala Gly Lys Tyr Thr Val Ser Val Phe
305 310 315 320
Ala Lys Ser Thr Gly Asp Pro Gln Gly Val Ile Arg His Tyr Val Val
325 330 335
Cys Ser Thr Pro Gln Ser Gln Tyr Tyr Leu Ala Glu Lys His Leu Phe
340 345 350
Ser Thr Ile Pro Glu Leu Ile Asn Tyr His Gln His Asn Ser Ala Gly
355 360 365
Leu Ile Ser Arg Leu Lys Tyr Pro Val Ser Gln Gln Asn Lys Asn Ala
370 375 380
Pro Ser Thr Ala Gly Leu Gly Tyr Gly Ser Trp Glu Ile Asp Pro Lys
385 390 395 400
Asp Leu Thr Phe Leu Lys Glu Leu Gly Thr Gly Gln Phe Gly Val Val
405 410 415
Lys Tyr Gly Lys Trp Arg Gly Gln Tyr Asp Val Ala Ile Lys Met Ile
420 425 430
Lys Glu Gly Ser Met Ser Glu Asp Glu Phe Ile Glu Glu Ala Lys Val
435 440 445
Met Met Asn Leu Ser His Glu Lys Leu Val Gln Leu Tyr Gly Val Cys
450 455 460
Thr Lys Gln Arg Pro Ile Phe Ile Ile Thr Glu Tyr Met Ala Asn Gly
465 470 475 480
Cys Leu Leu Asn Tyr Leu Arg Glu Met Arg His Arg Phe Gln Thr Gln
485 490 495
Gln Leu Leu Glu Met Cys Lys Asp Val Cys Glu Ala Met Glu Tyr Leu
500 505 510
Glu Ser Lys Gln Phe Leu His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Leu
515 520 525
Val Asn Asp Gln Gly Val Val Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg
530 535 540
Tyr Val Leu Asp Asp Glu Tyr Thr Ser Ser Val Gly Ser Lys Phe Pro
545 550 555 560
Val Arg Trp Ser Pro Pro Glu Val Leu Met Tyr Ser Lys Phe Ser Ser
565 570 575
Lys Ser Asp Ile Trp Ala Phe Gly Val Leu Met Trp Glu Ile Tyr Ser
580 585 590
Leu Gly Lys Met Pro Tyr Glu Arg Phe Thr Asn Ser Glu Thr Ala Glu
595 600 605
His Ile Ala Gln Gly Leu Arg Leu Tyr Arg Pro His Leu Ala Ser Glu
610 615 620
Lys Val Tyr Thr Ile Met Tyr Ser Cys Trp His Glu Lys Ala Asp Glu
625 630 635 640
Arg Pro Thr Phe Lys Ile Leu Leu Ser Asn Ile Leu Asp Val Met Asp
645 650 655
Glu Glu Ser
<210> 115
<211> 225
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: SOCS3; P4030 without epitope tag
<400> 115
Met Val Thr His Ser Lys Phe Pro Ala Ala Gly Met Ser Arg Pro Leu
1 5 10 15
Asp Thr Ser Leu Arg Leu Lys Thr Phe Ser Ser Lys Ser Glu Tyr Gln
20 25 30
Leu Val Val Asn Ala Val Arg Lys Leu Gln Glu Ser Gly Phe Tyr Trp
35 40 45
Ser Ala Val Thr Gly Gly Glu Ala Asn Leu Leu Leu Ser Ala Glu Pro
50 55 60
Ala Gly Thr Phe Leu Ile Arg Asp Ser Ser Asp Gln Arg His Phe Phe
65 70 75 80
Thr Leu Ser Val Lys Thr Gln Ser Gly Thr Lys Asn Leu Arg Ile Gln
85 90 95
Cys Glu Gly Gly Ser Phe Ser Leu Gln Ser Asp Pro Arg Ser Thr Gln
100 105 110
Pro Val Pro Arg Phe Asp Cys Val Leu Lys Leu Val His His Tyr Met
115 120 125
Pro Pro Pro Gly Ala Pro Ser Phe Pro Ser Pro Pro Thr Glu Pro Ser
130 135 140
Ser Glu Val Pro Glu Gln Pro Ser Ala Gln Pro Leu Pro Gly Ser Pro
145 150 155 160
Pro Arg Arg Ala Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gly Gly Glu Lys Ile Pro Leu
165 170 175
Val Leu Ser Arg Pro Leu Ser Ser Asn Val Ala Thr Leu Gln His Leu
180 185 190
Cys Arg Lys Thr Val Asn Gly His Leu Asp Ser Tyr Glu Lys Val Thr
195 200 205
Gln Leu Pro Gly Pro Ile Arg Glu Phe Leu Asp Gln Tyr Asp Ala Pro
210 215 220
Leu
225
<210> 116
<211> 347
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(347)
<223> IZ_hsCASP1 (self-activating human Caspase 1); P2024 without
epitope tag
<400> 116
Met Arg Met Lys Gln Ile Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys
1 5 10 15
Ile Tyr His Ile Glu Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly
20 25 30
Glu Ala Asp Gln Thr Ser Gly Asn Tyr Leu Asn Met Gln Asp Ser Gln
35 40 45
Gly Val Leu Ser Ser Phe Pro Ala Pro Gln Ala Val Gln Asp Asn Pro
50 55 60
Ala Met Pro Thr Ser Ser Gly Ser Glu Gly Asn Val Lys Leu Cys Ser
65 70 75 80
Leu Glu Glu Ala Gln Arg Ile Trp Lys Gln Lys Ser Ala Glu Ile Tyr
85 90 95
Pro Ile Met Asp Lys Ser Ser Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys
100 105 110
Asn Glu Glu Phe Asp Ser Ile Pro Arg Arg Thr Gly Ala Glu Val Asp
115 120 125
Ile Thr Gly Met Thr Met Leu Leu Gln Asn Leu Gly Tyr Ser Val Asp
130 135 140
Val Lys Lys Asn Leu Thr Ala Ser Asp Met Thr Thr Glu Leu Glu Ala
145 150 155 160
Phe Ala His Arg Pro Glu His Lys Thr Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val
165 170 175
Phe Met Ser His Gly Ile Arg Glu Gly Ile Cys Gly Lys Lys His Ser
180 185 190
Glu Gln Val Pro Asp Ile Leu Gln Leu Asn Ala Ile Phe Asn Met Leu
195 200 205
Asn Thr Lys Asn Cys Pro Ser Leu Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile
210 215 220
Ile Gln Ala Cys Arg Gly Asp Ser Pro Gly Val Val Trp Phe Lys Asp
225 230 235 240
Ser Val Gly Val Ser Gly Asn Leu Ser Leu Pro Thr Thr Glu Glu Phe
245 250 255
Glu Asp Asp Ala Ile Lys Lys Ala His Ile Glu Lys Asp Phe Ile Ala
260 265 270
Phe Cys Ser Ser Thr Pro Asp Asn Val Ser Trp Arg His Pro Thr Met
275 280 285
Gly Ser Val Phe Ile Gly Arg Leu Ile Glu His Met Gln Glu Tyr Ala
290 295 300
Cys Ser Cys Asp Val Glu Glu Ile Phe Arg Lys Val Arg Phe Ser Phe
305 310 315 320
Glu Gln Pro Asp Gly Arg Ala Gln Met Pro Thr Thr Glu Arg Val Thr
325 330 335
Leu Thr Arg Cys Phe Tyr Leu Phe Pro Gly His
340 345
<210> 117
<211> 347
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(347)
<223> DM_hsCASP1 (self-activating human Caspase 1); P2025 without
epitope tag
<400> 117
Met Arg Met Lys Gln Leu Glu Asp Lys Ile Glu Glu Leu Leu Ser Lys
1 5 10 15
Ile Tyr His Leu Glu Asn Glu Ile Ala Arg Leu Lys Lys Leu Ile Gly
20 25 30
Glu Ala Asp Gln Thr Ser Gly Asn Tyr Leu Asn Met Gln Asp Ser Gln
35 40 45
Gly Val Leu Ser Ser Phe Pro Ala Pro Gln Ala Val Gln Asp Asn Pro
50 55 60
Ala Met Pro Thr Ser Ser Gly Ser Glu Gly Asn Val Lys Leu Cys Ser
65 70 75 80
Leu Glu Glu Ala Gln Arg Ile Trp Lys Gln Lys Ser Ala Glu Ile Tyr
85 90 95
Pro Ile Met Asp Lys Ser Ser Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys
100 105 110
Asn Glu Glu Phe Asp Ser Ile Pro Arg Arg Thr Gly Ala Glu Val Asp
115 120 125
Ile Thr Gly Met Thr Met Leu Leu Gln Asn Leu Gly Tyr Ser Val Asp
130 135 140
Val Lys Lys Asn Leu Thr Ala Ser Asp Met Thr Thr Glu Leu Glu Ala
145 150 155 160
Phe Ala His Arg Pro Glu His Lys Thr Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val
165 170 175
Phe Met Ser His Gly Ile Arg Glu Gly Ile Cys Gly Lys Lys His Ser
180 185 190
Glu Gln Val Pro Asp Ile Leu Gln Leu Asn Ala Ile Phe Asn Met Leu
195 200 205
Asn Thr Lys Asn Cys Pro Ser Leu Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile
210 215 220
Ile Gln Ala Cys Arg Gly Asp Ser Pro Gly Val Val Trp Phe Lys Asp
225 230 235 240
Ser Val Gly Val Ser Gly Asn Leu Ser Leu Pro Thr Thr Glu Glu Phe
245 250 255
Glu Asp Asp Ala Ile Lys Lys Ala His Ile Glu Lys Asp Phe Ile Ala
260 265 270
Phe Cys Ser Ser Thr Pro Asp Asn Val Ser Trp Arg His Pro Thr Met
275 280 285
Gly Ser Val Phe Ile Gly Arg Leu Ile Glu His Met Gln Glu Tyr Ala
290 295 300
Cys Ser Cys Asp Val Glu Glu Ile Phe Arg Lys Val Arg Phe Ser Phe
305 310 315 320
Glu Gln Pro Asp Gly Arg Ala Gln Met Pro Thr Thr Glu Arg Val Thr
325 330 335
Leu Thr Arg Cys Phe Tyr Leu Phe Pro Gly His
340 345
<210> 118
<211> 346
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(346)
<223> IZ_mmCASP1 (self-activating mouse Caspase 1); P2026 without
epitope tag
<400> 118
Met Arg Met Lys Gln Ile Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys
1 5 10 15
Ile Tyr His Ile Glu Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly
20 25 30
Glu Arg Ser Ala Pro Ser Ala Glu Thr Phe Val Ala Thr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Gly Gly His Pro Ser Ser Ser Glu Thr Lys Glu Glu Gln Asn Lys
50 55 60
Glu Asp Gly Thr Phe Pro Gly Leu Thr Gly Thr Leu Lys Phe Cys Pro
65 70 75 80
Leu Glu Lys Ala Gln Lys Leu Trp Lys Glu Asn Pro Ser Glu Ile Tyr
85 90 95
Pro Ile Met Asn Thr Thr Thr Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys
100 105 110
Asn Thr Glu Phe Gln His Leu Ser Pro Arg Val Gly Ala Gln Val Asp
115 120 125
Leu Arg Glu Met Lys Leu Leu Leu Glu Asp Leu Gly Tyr Thr Val Lys
130 135 140
Val Lys Glu Asn Leu Thr Ala Leu Glu Met Val Lys Glu Val Lys Glu
145 150 155 160
Phe Ala Ala Cys Pro Glu His Lys Thr Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val
165 170 175
Phe Met Ser His Gly Ile Gln Glu Gly Ile Cys Gly Thr Thr Tyr Ser
180 185 190
Asn Glu Val Ser Asp Ile Leu Lys Val Asp Thr Ile Phe Gln Met Met
195 200 205
Asn Thr Leu Lys Cys Pro Ser Leu Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile
210 215 220
Ile Gln Ala Cys Arg Gly Glu Lys Gln Gly Val Val Leu Leu Lys Asp
225 230 235 240
Ser Val Arg Asp Ser Glu Glu Asp Phe Leu Thr Asp Ala Ile Phe Glu
245 250 255
Asp Asp Gly Ile Lys Lys Ala His Ile Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe
260 265 270
Cys Ser Ser Thr Pro Asp Asn Val Ser Trp Arg His Pro Val Arg Gly
275 280 285
Ser Leu Phe Ile Glu Ser Leu Ile Lys His Met Lys Glu Tyr Ala Trp
290 295 300
Ser Cys Asp Leu Glu Asp Ile Phe Arg Lys Val Arg Phe Ser Phe Glu
305 310 315 320
Gln Pro Glu Phe Arg Leu Gln Met Pro Thr Ala Asp Arg Val Thr Leu
325 330 335
Thr Lys Arg Phe Tyr Leu Phe Pro Gly His
340 345
<210> 119
<211> 346
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(346)
<223> DM_mmCASP1 (self-activating mouse Caspase 1); P2027 without
epitope tag
<400> 119
Met Arg Met Lys Gln Leu Glu Asp Lys Ile Glu Glu Leu Leu Ser Lys
1 5 10 15
Ile Tyr His Leu Glu Asn Glu Ile Ala Arg Leu Lys Lys Leu Ile Gly
20 25 30
Glu Arg Ser Ala Pro Ser Ala Glu Thr Phe Val Ala Thr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Gly Gly His Pro Ser Ser Ser Glu Thr Lys Glu Glu Gln Asn Lys
50 55 60
Glu Asp Gly Thr Phe Pro Gly Leu Thr Gly Thr Leu Lys Phe Cys Pro
65 70 75 80
Leu Glu Lys Ala Gln Lys Leu Trp Lys Glu Asn Pro Ser Glu Ile Tyr
85 90 95
Pro Ile Met Asn Thr Thr Thr Arg Thr Arg Leu Ala Leu Ile Ile Cys
100 105 110
Asn Thr Glu Phe Gln His Leu Ser Pro Arg Val Gly Ala Gln Val Asp
115 120 125
Leu Arg Glu Met Lys Leu Leu Leu Glu Asp Leu Gly Tyr Thr Val Lys
130 135 140
Val Lys Glu Asn Leu Thr Ala Leu Glu Met Val Lys Glu Val Lys Glu
145 150 155 160
Phe Ala Ala Cys Pro Glu His Lys Thr Ser Asp Ser Thr Phe Leu Val
165 170 175
Phe Met Ser His Gly Ile Gln Glu Gly Ile Cys Gly Thr Thr Tyr Ser
180 185 190
Asn Glu Val Ser Asp Ile Leu Lys Val Asp Thr Ile Phe Gln Met Met
195 200 205
Asn Thr Leu Lys Cys Pro Ser Leu Lys Asp Lys Pro Lys Val Ile Ile
210 215 220
Ile Gln Ala Cys Arg Gly Glu Lys Gln Gly Val Val Leu Leu Lys Asp
225 230 235 240
Ser Val Arg Asp Ser Glu Glu Asp Phe Leu Thr Asp Ala Ile Phe Glu
245 250 255
Asp Asp Gly Ile Lys Lys Ala His Ile Glu Lys Asp Phe Ile Ala Phe
260 265 270
Cys Ser Ser Thr Pro Asp Asn Val Ser Trp Arg His Pro Val Arg Gly
275 280 285
Ser Leu Phe Ile Glu Ser Leu Ile Lys His Met Lys Glu Tyr Ala Trp
290 295 300
Ser Cys Asp Leu Glu Asp Ile Phe Arg Lys Val Arg Phe Ser Phe Glu
305 310 315 320
Gln Pro Glu Phe Arg Leu Gln Met Pro Thr Ala Asp Arg Val Thr Leu
325 330 335
Thr Lys Arg Phe Tyr Leu Phe Pro Gly His
340 345
<210> 120
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: ADR concatemer with HIS tag
<400> 120
Met His His His His His His His His His His Gly Lys Pro Ile Pro
1 5 10 15
Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr Gly Ile Pro Val His Leu Glu
20 25 30
Leu Ala Ser Met Thr Asn Met Glu Leu Met Ser Ser Ile Val His Gln
35 40 45
Gln Val Phe Pro Thr Glu Ala Gly Gln Ser Leu Val Ile Ser Ala Ser
50 55 60
Ile Ile Val Phe Asn Leu Leu Glu Leu Glu Gly Asp Tyr Arg Gly Arg
65 70 75 80
Val Leu Glu Leu Phe Arg Ala Ala Gln Leu Ala Asn Asp Val Val Leu
85 90 95
Gln Ile Met Glu Leu Cys Gly Ala Thr Arg
100 105
<210> 121
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12D 9mer
<400> 121
Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 5
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12V 9mer
<400> 122
Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys
1 5
<210> 123
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G13D 9mer
<400> 123
Val Gly Ala Gly Asp Val Gly Lys Ser
1 5
<210> 124
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12C 9mer
<400> 124
Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys
1 5
<210> 125
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12C 15mer
<400> 125
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala
1 5 10 15
<210> 126
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12D 25mer nucleotide sequence
<400> 126
atgaccgagt acaagctggt ggtggtgggc gccgacggcg tgggcaagag cgccctgacc 60
atccagctga tccag 75
<210> 127
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12V 25mer nucleotide sequence
<400> 127
atgaccgagt acaagctggt ggtggtgggc gccgtgggcg tgggcaagag cgccctgacc 60
atccagctga tccag 75
<210> 128
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G13D 25mer nucleotide sequence
<400> 128
atgaccgagt acaagctggt ggtggtgggc gccggcgacg tgggcaagag cgccctgacc 60
atccagctga tccag 75
<210> 129
<211> 225
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12D 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 129
atgaccgagt acaagttagt ggttgtgggc gccgacggcg tgggcaagag cgccctcacc 60
atccagctta tccagatgac ggaatataag ttagtagtag tgggagccga cggtgtcggc 120
aagtccgctt tgaccattca acttattcag atgacagagt ataagctggt cgttgtaggc 180
gcagacggcg ttggaaagtc ggcactgacg atccagttga tccag 225
<210> 130
<211> 225
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12V 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 130
atgaccgagt acaagctcgt cgtggtgggc gccgtgggcg tgggcaagag cgccctaacc 60
atccagttga tccagatgac cgaatataag ctcgtggtag tcggagcggt gggcgttggc 120
aagtcagcgc taacaataca actaatccaa atgaccgaat acaagctagt tgtagtcggt 180
gccgtcggcg ttggaaagtc agcccttaca attcagctca ttcag 225
<210> 131
<211> 225
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G13D 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 131
atgaccgagt acaagctcgt agtggttggc gccggcgacg tgggcaagag cgccctaacc 60
atccagctca tccagatgac agaatataag cttgtggttg tgggagcagg agacgtggga 120
aagagtgcgt tgacgattca actcatacag atgaccgaat acaagttggt ggtggtcggc 180
gcaggtgacg ttggtaagtc tgcactaact atacaactga tccag 225
<210> 132
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12C 25mer nucleotide sequence
<400> 132
atgaccgagt acaagctggt ggtggtgggc gcctgcggcg tgggcaagag cgccctgacc 60
atccagctga tccag 75
<210> 133
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS WT 25mer nucleotide sequence
<400> 133
atgaccgagt acaagctggt ggtggtgggc gccggcggcg tgggcaagag cgccctgacc 60
atccagctga tccag 75
<210> 134
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5 UTR sequence; no promoter
<400> 134
gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccacc 47
<210> 135
<211> 75
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D G12V G13D) 75mer 3MUT aa. seq
<400> 135
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln
65 70 75
<210> 136
<211> 225
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D G12V G13D) 75mer 3MUT nt. seq
<400> 136
atgaccgagt acaagctcgt tgtagtcggc gccgacggcg tgggcaagag cgccttgacc 60
atccagttga tccagatgac cgaatataag ttggtggtgg taggcgcagt gggagttggc 120
aagtcagcac tcacaattca gctcattcaa atgacagaat acaagttagt cgttgtagga 180
gcaggcgacg tcggcaagag tgccttaacc attcaactaa tccag 225
<210> 137
<211> 100
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D G12V G13D G12C) 100mer 4MUT aa. seq
<400> 137
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val
20 25 30
Val Val Gly Ala Val Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu
35 40 45
Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Asp Val
50 55 60
Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Met Thr Glu Tyr Lys
65 70 75 80
Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Leu Thr Ile
85 90 95
Gln Leu Ile Gln
100
<210> 138
<211> 300
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D G12V G13D G12C) 100mer 4MUT nt. seq
<400> 138
atgaccgagt acaagctcgt ggtcgtcggc gccgacgggg taggcaagtc cgctctgacc 60
attcagctca tccagatgac ggagtacaaa ctcgtggtag tgggagccgt gggtgtgggc 120
aagagcgcgc tcaccatcca actcatccaa atgaccgaat ataaactcgt cgtggtggga 180
gccggcgacg tgggaaagag cgcccttacc atccagttaa tccagatgac agaatacaag 240
ctggtggtgg tcggtgcctg cggcgtgggt aagtccgccc tgacaatcca gctgatccag 300
<210> 139
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huSTING(V155M); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 139
atgccccaca gtagcctcca ccccagcatc ccctgcccca gaggccacgg cgcacagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgtctg gtgaccctgt ggggtctggg cgagcccccc 120
gagcacaccc tgcggtacct cgtgctgcat ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaagagctg agacacatcc acagcagata cagaggctcc 240
tactggagaa ccgtcagagc ctgcctcggc tgtcccctga gaagaggcgc cctgctgctc 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgccc aacgccgtgg gccccccctt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcttggcc 420
cccgccgaga tctccgccgt gtgcgagaag ggcaacttca acatggccca tggccttgcc 480
tggtcctact acatcggcta cctgagactg atcctgcccg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccaaag actgtacatc 600
ctgctgcccc tggactgcgg cgtgcccgac aaccttagca tggccgaccc caacatcaga 660
ttcctggaca agctgcccca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ccctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca agccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcg 900
gacgcccccg agagccaaaa caactgcaga ctgatcgcct accaggagcc cgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaagtgctg agacacctga gacaggaaga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gaagcctgaa gaccagcgcc gtgcccagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cccgagctgc tgatcagcgg catggagaag cccctgcccc tgagaaccga cttcagc 1137
<210> 140
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(R284T); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 140
atgcctcaca gcagcctgca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccctgt ggggcctggg cgagcctcct 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca acgtggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca ccctggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccctg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accaggagcc tgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaggtgctg agacacctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gaccagcgcc gtgcctagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cctgagctgc tgatcagcgg catggagaag cctctgcctc tgagaaccga cttcagc 1137
<210> 141
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu STING (R284M); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 141
atgccccaca gcagcctgca cccctccatc ccctgtccca gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccttat ggggcctggg cgagcccccc 120
gagcacaccc tgagatacct ggtcctgcac ctggccagcc tccagctggg cctgctgctc 180
aacggcgtgt gtagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggt tgcccactga gaagaggagc tctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta ctcgctgccc aacgctgtgg gccccccctt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggtctgag ccaggccctg aacatcctcc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cccgccgaga taagcgccgt ttgcgagaag ggcaacttca acgtggccca tggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cttacgcctg atcctgcccg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcattacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtatatc 600
ctgctgcccc tggactgcgg cgtgcccgac aacctgagca tggccgaccc caacatcaga 660
ttcctggaca agctccccca gcagaccggc gaccacgccg gaatcaaaga cagagtgtat 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtactggag 780
tacgccaccc ccttgcagac cctgtttgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca tgctggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccccg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accaagagcc cgccgacgac 960
agcagcttca gcttaagcca ggaggtgctg agacatctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctcaa gaccagcgct gtgccctcta ccagcaccat gagccaggag 1080
cccgagctgc tgatcagcgg catggagaag cccctgcccc tgagaacaga cttcagc 1137
<210> 142
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R284K); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 142
atgccccata gcagcctgca ccccagcatc ccctgcccca gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tcctgctgag cgcatgcctg gtcaccctgt ggggcctggg cgagcccccc 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctcgccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata tagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ttgcctcggc tgccccctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttttacta cagcctgccc aacgctgtgg gccccccttt cacgtggatg 360
ctcgccctgc tgggactgag ccaggccctg aacatcctgc tgggccttaa gggcctagcc 420
cccgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca atgtggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcccg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaatc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcccc tggactgcgg cgtgcccgac aacctcagca tggccgaccc caacatcaga 660
ttcctggaca agctgcccca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga tcgcgtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggaaaac ggccagagag ccggaacctg cgtgctggag 780
tacgccacac ccctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca agctggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga tatcctcgcc 900
gacgcccccg agagccagaa caactgcagg ctgatcgcgt accaggagcc cgctgacgac 960
agcagcttta gcctgagcca ggaggtgctg agacatctgc gtcaagagga aaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gctccctgaa gaccagcgcc gtgcccagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cccgagctgc tgatcagcgg catggagaag ccactgcccc tcagaaccga cttcagc 1137
<210> 143
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(N154S); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 143
atgcctcaca gcagcctgca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccctgt ggggcctggg cgagcctcct 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca gcgtggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccctg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accaggagcc tgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaggtgctg agacacctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gaccagcgcc gtgcctagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cctgagctgc tgatcagcgg catggagaag cctctgcctc tgagaaccga cttcagc 1137
<210> 144
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(V147L); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 144
atgcctcaca gcagcctgca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccctgt ggggcctggg cgagcctcct 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccct gtgcgagaag ggcaacttca acgtggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccctg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accaggagcc tgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaggtgctg agacacctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gaccagcgcc gtgcctagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cctgagctgc tgatcagcgg catggagaag cctctgcctc tgagaaccga cttcagc 1137
<210> 145
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (E315Q); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 145
atgcctcaca gcagcctgca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccctgt ggggcctggg cgagcctcct 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca acgtggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccctg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accagcagcc tgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaggtgctg agacacctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gaccagcgcc gtgcctagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cctgagctgc tgatcagcgg catggagaag cctctgcctc tgagaaccga cttcagc 1137
<210> 146
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R375A); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 146
atgcctcaca gcagcctgca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccctgt ggggcctggg cgagcctcct 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca acgtggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccctg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accaggagcc tgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaggtgctg agacacctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gaccagcgcc gtgcctagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cctgagctgc tgatcagcgg catggagaag cctctgcctc tggccaccga cttcagc 1137
<210> 147
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(V147L/N154S/V155M); no epitope tag;
nucleotide sequence
<400> 147
atgcctcaca gcagcctgca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccctgt ggggcctggg cgagcctcct 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccct gtgcgagaag ggcaacttca gcatggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccctg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accaggagcc tgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaggtgctg agacacctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gaccagcgcc gtgcctagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cctgagctgc tgatcagcgg catggagaag cctctgcctc tgagaaccga cttcagc 1137
<210> 148
<211> 1137
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(R284M/V147L/N154S/V155M); no epitope tag;
nucleotide sequence
<400> 148
atgcctcaca gcagcctgca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tgctgctgag cgcctgcctg gtgaccctgt ggggcctggg cgagcctcct 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctggccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ctgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttctacta cagcctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccctgc tgggcctgag ccaggccctg aacatcctgc tgggcctgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccct gtgcgagaag ggcaacttca gcatggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggagaac ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca tgctggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcc 900
gacgcccctg agagccagaa caactgcaga ctgatcgcct accaggagcc tgccgacgac 960
agcagcttca gcctgagcca ggaggtgctg agacacctga gacaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gaccagcgcc gtgcctagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cctgagctgc tgatcagcgg catggagaag cctctgcctc tgagaaccga cttcagc 1137
<210> 149
<211> 141
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 3 UTR used in STING V155M construct, containing miR122
binding site
<400> 149
tgataatagg ctggagcctc ggtggcctag cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 60
ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccca aacaccattg tcacactcca gtggtctttg 120
aataaagtct gagtgggcgg c 141
<210> 150
<211> 1257
<212> DNA
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1257)
<223> super mouse IRF3 S396D; no epitope tag
<400> 150
atggagaccc ccaagcctag aatcctgccc tggctggtga gccagctgga cctgggccag 60
ctggagggcg tagcctggct ggacgagagc agaaccagat tcagaatccc ctggaagcac 120
ggcctgagac aagacgccca gatggccgac ttcggcatct tccaggcctg ggccgaggcc 180
agcggcgcct acacccctgg caaggataag cccgatgtga gcacctggaa gagaaacttc 240
agaagcgccc tgaacagaaa ggaggtgctg agactggccg ccgacaatag caaggacccc 300
tacgaccccc acaaggtgta cgagttcgtt acccccggcg ccagggactt cgtgcacctg 360
ggcgccagcc ccgacaccaa cggcaagagc agcctgcccc acagccagga gaacctgccc 420
aagctgttcg atggcctgat cctgggcccc ctgaaggacg agggcagcag cgacctggcc 480
atcgtgagcg accctagcca gcagctgccc tcccccaacg tgaacaactt cctgaacccc 540
gccccccagg agaaccccct gaagcaactg ctggccgagg agcagtggga gttcgaggtg 600
accgccttct acagaggcag acaggtgttc cagcagaccc tgttctgccc cggcggcctg 660
agactggtag gcagcaccgc tgacatgacc ctgccctggc agcccgtgac cctgcccgac 720
cccgaaggct ttctgaccga caagctggtg aaggagtacg tcggccaagt gctgaagggc 780
ctgggcaacg gcctggccct gtggcaggcc ggccagtgcc tgtgggccca gagactcggc 840
cacagccacg ccttctgggc cctgggcgag gaactcctgc ccgatagcgg cagaggcccc 900
gacggcgagg tgcacaagga caaggacggc gccgtgttcg acctgcgccc cttcgtggcc 960
gacctgatcg ccttcatgga gggcagcggc cacagcccca gatataccct gtggttctgc 1020
atgggcgaga tgtggcccca ggaccagccc tgggtgaaga gactggtgat ggtgaaggtg 1080
gtgcccacct gcctgaaaga gctgctggag atggccagag agggcggcgc cagctccctg 1140
aaaaccgtgg acctgcacat tgacaacagc cagcccatca gcctgaccag cgaccagtac 1200
aaggcctacc tgcaggacct ggtggaggac atggacttcc aggccaccgg caacatc 1257
<210> 151
<211> 1281
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1281)
<223> super human IRF3 S396D; no epitope tag
<400> 151
atgggcaccc ccaagcccag aatcctgccc tggctggtga gccagctgga cctgggccag 60
ctggagggag tggcctgggt gaacaagagc agaaccagat tcagaatccc ctggaagcac 120
ggcctcagac aggacgccca gcaggaggac ttcggcattt ttcaggcttg ggccgaggcc 180
accggcgcct acgtgcccgg cagagacaag cccgacctgc ccacctggaa aagaaacttc 240
agaagcgcct tgaatagaaa ggagggcctg agactggccg aggacagaag caaggacccc 300
cacgaccctc acaagatcta cgagttcgtg aatagcggcg tgggcgactt tagccagccc 360
gacaccagcc ccgacaccaa cggcggcggc agcaccagcg acacgcagga ggacatcctg 420
gatgaactgc tgggcaacat ggtgctggcc cccctgcccg atcccggccc cccttcgctt 480
gccgtggccc ccgagccctg cccccagccc ctgagaagcc cctctctgga taaccccacc 540
cccttcccca acctgggccc cagcgagaat ccactgaaga gacttctggt ccccggcgag 600
gagtgggagt tcgaggtgac cgccttctac agaggcagac aggtgttcca gcagaccatc 660
agctgccccg aaggcctgag attagtgggc agcgaagtgg gcgacaggac cctgcccggg 720
tggcccgtga ccctgcccga tcccggcatg agcctgaccg acagaggtgt gatgagctac 780
gtgagacacg tgctgagctg cctgggcggc ggcctggcac tgtggagagc cggccagtgg 840
ctgtgggccc agagactggg ccactgccac acctactggg ccgtgagcga ggagctgctg 900
cccaacagcg gccacggccc cgacggcgag gtgcccaagg acaaggaagg gggcgtgttc 960
gacctgggcc ccttcatcgt agacctgatc acctttaccg agggcagcgg caggagcccc 1020
agatacgccc tgtggttctg cgtgggcgaa agctggcccc aggaccagcc ctggaccaag 1080
agactggtga tggtgaaggt agtgcccacc tgcctgagag ccttagtgga gatggccaga 1140
gtgggcgggg ccagcagcct ggagaacacc gtggatcttc acatcgacaa cagccacccc 1200
ctgagcctga ccagcgacca gtacaaggcc tacctgcagg acctggtgga gggcatggac 1260
ttccagggcc ccggcgagac c 1281
<210> 152
<211> 1509
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Wild-type Hu IRF7 isoform A; P037 without epitope tag
<400> 152
atggcgctgg cccccgaaag agccgccccc agagtcctct tcggcgaatg gctccttggc 60
gaaatttcgt cgggctgcta cgagggctta caatggctgg atgaggcgag aacctgtttc 120
agggtgccct ggaaacactt cgccagaaag gatctaagcg aagcagatgc tagaattttt 180
aaggcttggg ccgtggccag gggaagatgg cccccctcga gcagaggcgg cggccctccc 240
cccgaggcag aaacggccga gagagccgga tggaaaacca atttcagatg cgccctgaga 300
tctacaagaa gattcgtgat gcttagagac aacagcggag atcccgccga tccccataag 360
gtgtatgccc tgtcccggga gctgtgctgg agggaagggc ctggcactga ccagaccgaa 420
gccgaagccc ccgcggccgt gccgccgccc caaggaggcc caccaggccc tttcctcgct 480
cacacccacg ccggtctgca agccccggga cctctacctg cccctgccgg cgataaaggc 540
gacctgttgc tgcaggccgt ccaacagagc tgcctggccg atcatctgct cacagccagc 600
tggggcgctg accccgtccc aacaaaggcc cccggtgagg gccaagaagg cctgcctctg 660
accggcgcct gtgccggcgg ccctggcctg cctgctggcg agctgtacgg atgggctgtc 720
gaaaccactc cctcccccgg cccccaacct gcggccctga caaccggcga ggcagccgca 780
cccgaaagcc cccaccaggc cgaaccctac ctcagtccca gcccctccgc ctgcaccgct 840
gtgcaggagc ccagccccgg tgctctggac gtaacaatca tgtacaaagg cagaaccgtg 900
cttcagaagg tggttggaca cccctcctgt acttttctct acggcccccc cgaccctgcc 960
gtgagagcta ccgacccgca acaggtggcc tttccctcgc ccgccgaact gcccgatcaa 1020
aaacagctga gatacaccga ggagctgctg agacacgtgg cgccgggctt acacctagag 1080
ttgagaggcc cccaactctg ggccagacgc atgggcaagt gtaaggtgta ctgggaggtc 1140
gggggccctc ccggctctgc cagccccagc acccctgctt gtctcttgcc cagaaactgt 1200
gataccccca tcttcgactt ccgtgtattt ttccaggaac tggtcgagtt tagagccaga 1260
cagagacgag gcagccccag atatacaatc tacctcggct tcggccagga cctgagtgcc 1320
ggcagaccta aggagaagtc gctggtccta gtgaagttag agccctggct atgtagagtg 1380
cacctggagg gcacccagag agaaggagtg agcagcctgg acagcagcag cctgagtctg 1440
tgcctgagct ccgccaactc gctgtatgat gacatcgagt gtttcctcat ggagctggag 1500
cagcccgcc 1509
<210> 153
<211> 1509
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7 S477D/S479D; P033
without epitope tag
<400> 153
atggcccttg cccctgagcg ggccgccccc agagtgttat tcggcgagtg gctgctgggc 60
gagatcagca gcggctgcta cgagggactg cagtggctgg acgaggctag aacctgcttc 120
agagtgccct ggaagcattt cgccagaaaa gacctgagcg aggctgatgc tagaatcttc 180
aaagcctggg ctgtggcccg aggaagatgg ccccccagca gcagaggagg cggccctcct 240
cccgaggccg aaaccgcaga gcgtgctggc tggaaaacca actttaggtg tgccctgagg 300
agcaccagaa gattcgttat gctcagagac aacagcgggg accccgccga cccgcacaag 360
gtgtacgcct taagtaggga gctgtgctgg agagagggac cggggaccga ccaaaccgag 420
gctgaggcgc ccgccgccgt tccacctccc cagggtggtc ccccagggcc ctttctggca 480
cacacccacg ccggattaca ggcgccaggg cccttacccg cccccgccgg agacaaaggc 540
gacctcctgc tgcaagccgt gcaacaaagc tgcctggccg atcacttact aaccgctagc 600
tggggcgccg atcctgttcc caccaaggcc cccggtgaag ggcaagaagg actgccctta 660
accggcgcct gtgccggagg ccctggtctg ccagccggcg agctgtacgg ttgggctgtc 720
gaaacaacac ccagtccggg cccacagcct gccgctctga ccaccggcga agccgccgcc 780
cccgagagcc cacaccaggc tgaaccctac ctgagcccca gccccagcgc ctgcaccgct 840
gtgcaggagc ctagccccgg cgctcttgat gtgacaataa tgtacaaggg caggaccgtg 900
ctgcaaaagg tcgtgggcca tccgtcgtgt acctttctgt acggccctcc agaccccgcg 960
gttagagcca ccgaccccca gcaagtcgcc ttcccctccc ccgccgaact gcccgaccaa 1020
aagcagctgc ggtacacaga agaactactt agacacgtgg cccccggtct gcacttggag 1080
ctgagaggcc cccagctctg ggccagaaga atgggcaagt gcaaagtgta ctgggaggtg 1140
ggcggcccac ccggctcagc ttcgccctcc acacccgcat gcctgctgcc cagaaattgc 1200
gacacgccca tcttcgattt tagagtgttc tttcaggagt tggtggagtt cagagccaga 1260
caaagacgcg gcagccccag atacaccatt tacctcggct tcggccagga cctcagcgct 1320
ggcagaccca aggagaagag tctggtcctc gtgaagctgg agccctggct gtgcagagtg 1380
cacctggagg gcacccagcg tgaaggcgtg agcagcctgg attcaagcga cctggaccta 1440
tgcctaagca gcgctaactc actgtacgac gatatcgaat gcttcctgat ggaactggag 1500
cagcctgcc 1509
<210> 154
<211> 1509
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7 S475D/S477D/L480D; P034
without epitope tag
<400> 154
atggccctgg cacccgagag ggccgccccc agggtgctct tcggcgagtg gttactaggc 60
gaaattagca gcggctgcta tgaaggcctt cagtggctgg acgaggccag aacctgcttt 120
agagttccct ggaagcactt cgcccggaaa gatctctctg aagccgacgc cagaatattc 180
aaggcctggg ctgtcgccag gggcaggtgg ccaccctcca gccgaggtgg cggccctccc 240
cctgaggctg agactgcgga aagggcgggc tggaagacca atttcagatg cgctctgaga 300
agcaccagac gttttgtgat gctaagagac aatagcggcg atcccgccga cccccataag 360
gtatacgcac tgagccgaga gctctgttgg agagaaggcc ccggcaccga ccagaccgag 420
gctgaagccc ctgcagccgt gcccccccct caaggcgggc cccccggccc cttcctggcc 480
catacccatg cagggttaca agcacccggg cccttgcccg ccccagcggg agacaagggc 540
gacctcttac tgcaggccgt gcaacaaagt tgtctggcgg accacctgct gaccgcatca 600
tggggcgcgg atcctgtgcc caccaaggca cccggcgaag gccaggaggg cctgcccttg 660
accggcgcct gcgctggcgg acccggccta cctgctggcg aactgtatgg ctgggccgta 720
gagacgactc ccagccctgg cccacaaccc gcggctttga ccaccggcga agccgccgcc 780
cccgagtctc cgcaccaggc cgagccttac ctcagcccaa gccctagcgc ctgcaccgcc 840
gtgcaagaac ctagccccgg agccctggat gtgacaatca tgtacaaggg tagaaccgta 900
ctgcaaaagg tggtgggtca tcccagctgc acctttcttt acggcccacc cgaccctgcc 960
gtgcgagcca cagacccaca acaggtcgcc ttcccaagcc ccgccgaact gcccgatcag 1020
aaacagctga gatatacaga ggagcttctg cggcacgtag ctcccggcct acatctcgag 1080
ctgaggggcc cacaactgtg ggccagacgc atgggcaaat gcaaggtcta ctgggaagtg 1140
ggaggccccc ccggcagcgc atctcccagc acgcccgcgt gcctgctgcc tagaaattgc 1200
gacaccccca tctttgactt ccgggtattc tttcaggagc tggtagagtt cagagccagg 1260
cagcggaggg gctcccccag atacacaatc tacctgggct tcggacagga cctgtccgcc 1320
ggccgcccca aggaaaagag cctggtgctg gtgaagctgg agccctggct gtgtagggta 1380
cacctcgaag gcacccagag agaaggagtg agctcgcttg atgacagcga tctgtcggat 1440
tgccttagca gcgccaacag cctgtatgat gatatcgagt gcttccttat ggaactggag 1500
cagcccgcc 1509
<210> 155
<211> 1509
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7
S475D/S476D/S477D/S479D/S483D/S487D; P035 without epitope tag
<400> 155
atggccctag cccccgaaag agcagctccc agagtgctgt tcggcgaatg gctgcttggc 60
gagatcagca gcggctgcta cgaaggcctg cagtggctgg acgaagcccg cacctgtttc 120
agagtgccct ggaagcactt cgctagaaag gatttgagcg aggctgatgc tagaatcttt 180
aaggcttggg ctgtggcaag aggcagatgg ccgcctagta gcagaggggg cggacctccc 240
cccgaggctg agaccgctga gagagcaggg tggaaaacca acttcagatg cgcgctgaga 300
agcacccgaa gattcgtgat gctacgtgac aatagcggcg accccgccga cccccacaaa 360
gtgtacgccc tgtcccgaga actttgctgg agagagggac ccggcaccga tcaaacagag 420
gctgaggccc cggccgctgt acccccgccc caaggaggcc ccccaggccc ctttctggct 480
catacacatg ccggcctgca ggcacccggg cccctcccgg ctcctgccgg cgacaagggc 540
gatctccttc tccaggccgt gcagcagagc tgcctggccg atcacctgct gaccgcctcg 600
tggggcgccg accccgtgcc caccaaagcc ccgggtgaag gccaagaggg gctcccttta 660
accggagcat gcgccggagg ccccggcctg ccagccggcg agttatatgg ctgggctgtg 720
gagaccacac cctcccccgg ccctcaaccc gctgccctga ccaccggtga ggccgccgcc 780
cccgagagcc cacaccaggc cgaaccctac ctgagcccta gccctagcgc ctgcaccgcc 840
gtgcaagaac ccagccccgg agccctggat gtgaccatta tgtacaaggg ccggacagtg 900
ctgcaaaagg ttgtgggaca cccgagctgc acctttctgt acggtccgcc tgaccccgcc 960
gtgagagcca cggacccgca gcaggtggcc ttcccctcac ccgcggagct gcccgaccaa 1020
aagcaactca gatacacaga agaactattg cgtcacgtcg cgcccggcct gcatctggag 1080
ctgagaggcc cccagctctg ggccagaagg atgggcaaat gcaaggtgta ctgggaggtg 1140
ggaggccccc ccggcagcgc cagccccagc actcccgcgt gcctgctgcc cagaaattgc 1200
gacactccca tcttcgattt cagggtgttc ttccaggagc tggtggagtt cagagccagg 1260
cagagaaggg gtagccccag atacacaatc tatctaggct ttggacaaga tctgagcgcc 1320
ggccggccta aggaaaaaag cctggtgctg gtaaagctgg agccgtggct ttgtagagtg 1380
cacctggagg ggacgcagcg agagggcgtg agcagcttag acgacgatga cttggatctg 1440
tgtctcgaca gcgccaacga cttgtacgac gacatcgagt gcttcctgat ggaactggag 1500
cagcccgcc 1509
<210> 156
<211> 846
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active truncated Hu IRF7 1-246 +
468-503; P032 without epitope tag
<400> 156
atggccctgg cccccgagag agccgccccc agagtgctct tcggcgagtg gctgctgggc 60
gagataagca gcggctgcta cgaaggtctg cagtggctag acgaggccag aacctgcttt 120
agagtgccct ggaagcactt cgctcgaaag gacctgtccg aggccgatgc tagaattttt 180
aaggcttggg ccgtcgctag gggaagatgg ccccctagca gtagaggcgg cggcccccct 240
cccgaagccg agacggccga gagggccggc tggaaaacca atttcagatg cgccctgagg 300
agcacccgca ggttcgtaat gctgcgagac aatagcggcg atcctgcgga tcctcacaag 360
gtttacgcct tgagtagaga actgtgctgg cgggagggcc ccggaaccga ccagacggag 420
gcagaggcac ccgctgccgt gcccccccct caaggaggac cccctggacc ctttctggcc 480
cacacccacg ctggtctgca ggccccaggc ccactgcccg ccccagcggg cgataagggt 540
gacctgctcc tacaggcggt gcaacagagc tgtctggccg accacctgtt gaccgccagc 600
tggggggccg acccggtgcc caccaaagct cccggagagg gccaagaagg cctcccacta 660
actggcgcct gcgccggggg cccgggatta cccgccggcg agctgtatgg ctgggccgtg 720
gagaccacgc ccagccccga gggcgtgtcg tccctggaca gcagcagcct gagcctgtgc 780
ctgagctccg ccaacagcct gtatgacgac atcgagtgct tcctgatgga gctggaacaa 840
cccgcc 846
<210> 157
<211> 846
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active truncated Hu IRF7 1-246 +
468-503 plus S475D/S476D/S477D/S479D/S483D/S487D; P036 without
epitope tag
<400> 157
atggcactgg cgcctgaaag agccgctccg cgtgtgctct tcggcgagtg gctgctgggc 60
gagatcagct ccggctgcta cgagggtcta cagtggctgg acgaggccag aacctgtttt 120
agagtgccct ggaagcactt cgcgagaaag gacctgagcg aggccgacgc cagaatcttc 180
aaagcctggg cagtggctag gggcagatgg cctcccagca gccggggcgg cggcccaccc 240
cccgaggccg aaaccgccga aagagctggc tggaagacca acttcagatg cgccctgaga 300
agcaccagaa gatttgtcat gctgagagat aattcaggag accccgccga ccctcacaag 360
gtgtacgccc tgtccagaga gctgtgttgg agagagggcc ccggaaccga ccagaccgag 420
gccgaggctc cagctgccgt gccacccccc caaggcggac cacccggccc cttcttggca 480
catacgcacg ccggcctcca ggctcccggc cctctgcccg cccctgctgg tgacaaaggc 540
gatctgctgc tgcaagccgt ccagcaatcc tgcttggctg accacctgct gaccgctagc 600
tggggagccg accccgttcc caccaaggct cccggagaag gacaggaggg cctgcccctt 660
accggcgctt gcgcgggggg ccctggcttg cctgccggcg aactgtacgg ctgggccgtg 720
gagaccacgc cttcccccga gggcgtgtcc agcctggacg atgatgacct ggatctgtgc 780
ctggacagcg ccaacgacct gtacgatgac atcgagtgct ttttgatgga gctggagcag 840
cccgcc 846
<210> 158
<211> 1224
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: truncated Hu IRF7 1-151 + 247-503; P038 without
epitope tag; null mutation
<400> 158
atggccctgg cccccgagag agccgcgccc agagtgctgt tcggcgaatg gctgctgggc 60
gagatcagca gcggctgcta tgagggcctg cagtggctcg acgaagccag gacgtgcttc 120
agagtcccct ggaagcactt cgccagaaag gatctgagcg aggctgacgc cagaatcttc 180
aaggcctggg cagttgcgcg tgggagatgg ccccccagct cgcggggcgg cggtcccccc 240
cctgaggccg agaccgccga aagagccgga tggaaaacca actttcgatg cgccctcaga 300
agcaccagac ggtttgtgat gctgagagat aacagcggcg accctgcaga cccccataaa 360
gtgtatgccc tgagcagaga gctgtgttgg cgagagggcc ccggaaccga ccaaaccgag 420
gccgaggccc ccgccgccgt acccccccct caaggccccc agcctgctgc tctgaccacg 480
ggagaagccg ccgctcctga gagcccccac caagccgagc cctatctgag ccctagcccc 540
agcgcctgca ccgccgtgca ggagccctca ccgggcgccc tagacgtgac catcatgtac 600
aaggggcgca cggtgctgca aaaggtggtg ggccacccca gctgcacctt cctgtacggc 660
ccccccgacc ctgccgtgag agccaccgac ccccagcaag tcgccttccc cagccccgcc 720
gagctgcccg accagaagca gctgaggtac accgaggagt tgctgagaca tgtggccccc 780
ggcttgcacc tcgagctgag aggcccgcag ctctgggcca gaagaatggg caagtgcaag 840
gtgtactggg aggtgggcgg cccccccggc agcgcgagcc caagcacccc ggcctgcctg 900
ctgcctagaa actgcgacac ccctatcttc gacttcagag tatttttcca ggagctggtc 960
gagttcaggg ccagacagcg tagaggcagc cccagataca ccatctacct tggattcggc 1020
caggacctga gcgccggcag acccaaagag aagtccctgg tactggtgaa gctagagccc 1080
tggctgtgta gggtgcatct ggaaggcacc caaagagagg gcgtaagctc gcttgacagc 1140
agcagcctca gcctgtgcct gagcagcgct aacagcttat acgacgacat cgagtgcttc 1200
ctgatggagc tggaacaacc cgcc 1224
<210> 159
<211> 1059
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: truncated Hu IRF7 152-503; P039 without epitope tag;
null mutation
<400> 159
atgggcggcc ctcccgggcc tttcctggcc catacacacg ccggcctaca ggctcctggc 60
cctctgcccg ccccggccgg cgacaagggc gacctcctgc tgcaggccgt gcagcagtcc 120
tgtctggccg accacctgct gactgctagc tggggcgccg atcccgtgcc caccaaggcc 180
ccaggagagg ggcaagaggg cctgcctcta accggcgcat gcgcaggtgg accaggcctc 240
cccgccggcg agctgtatgg ttgggccgtg gagacaaccc ccagccccgg cccgcagcct 300
gctgcgctga ccacaggcga ggccgctgcc cctgagagcc cccaccaagc tgaaccctac 360
ctgagcccca gcccctctgc ctgcacagcg gtgcaggagc ccagtcccgg cgccttggac 420
gtgaccatca tgtataaggg caggactgtg ttacaaaagg tagtgggcca cccaagttgt 480
acctttctgt acgggccccc cgacccagcc gtgcgcgcca ccgaccccca gcaggtggcc 540
ttccccagcc ccgctgagtt gcccgatcag aaacaactcc ggtacaccga ggaattactt 600
agacatgtgg ctcccggcct gcatctggag cttagaggtc cacagttgtg ggccagaaga 660
atgggcaagt gcaaggttta ttgggaggtc ggaggccccc cgggcagcgc cagccccagc 720
acccccgcct gtcttctgcc cagaaactgc gacaccccaa tcttcgattt cagagtgttt 780
ttccaggaac tggtggagtt cagagcaagg caaagaagag gcagccctag atacaccatc 840
tacctgggct ttggccaaga cctgagcgcc ggcagaccca aggaaaaatc cctggtcctg 900
gtgaaactgg agccctggct gtgcagagtc cacctggagg gcacccagag agagggcgtg 960
agcagcctgg actcgagcag cctgtccctg tgtctgagca gcgcgaattc gctatatgac 1020
gacatcgaat gctttctgat ggagctggaa cagcccgcc 1059
<210> 160
<211> 1269
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer_nt.STING(V155M)
<400> 160
atgcctcaca gcagcctcca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctcg tgcttttaag cgcctgcttg gtgacccttt ggggcttggg cgagcctcca 120
gagcacacct tgagatattt ggtgctccac ctggccagcc ttcagctggg cttgttactc 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc gtgtctgggc tgccctctga gaagaggcgc cttgcttctt 300
ctcagtatct acttctacta ctccctgcct aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggcactgc tcggcctcag ccaggccctg aacatcttgt tgggcttgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca acatggccca cggattggct 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg cgcggcgcag tgagccagag actgtatatt 600
ctgctgcctc tggactgcgg cgtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaacagca tctatgagct gctcgagaat ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt atagtcaagc tggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga cattctggct 900
gacgcccctg agagccagaa caactgccga ctgatcgcct accaggaacc agccgacgac 960
agcagcttca gtctttctca ggaggttctt cgccacttgc gccaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gacctccgca gtccctagca ccagcaccat gagtcaggag 1080
ccggagctat taatcagcgg catggagaag cctcttccac tccgaaccga cttcagcgcc 1140
accaacttca gcctgctgaa gcaggcaggt gacgttgagg agaatccggg acctatgacc 1200
gagtacaagc tggtggttgt gggcgccgac ggcgtgggca agagcgccct gaccatccag 1260
ctgatccag 1269
<210> 161
<211> 1269
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer_ct.STING(V155M)
<400> 161
atgaccgagt acaagctagt agtcgtgggc gccgacggcg tgggcaagag cgccctcacc 60
atccagctaa tccaggccac caacttcagc ttgctcaagc aggccggcga cgtggaggag 120
aacccaggcc ctatgcctca cagcagcctt caccctagca tcccttgccc tagaggccac 180
ggcgcccaga aggccgccct ggtgctgctg agcgcctgcc tggtgaccct gtggggcctg 240
ggcgagcctc ctgagcacac cctgagatat ctggtgcttc acctggccag tttacagctg 300
ggcctgcttc ttaacggcgt gtgcagcctg gccgaggagc tgagacacat ccacagcaga 360
tacagaggca gctactggag aaccgtgaga gcctgcctag gctgccctct gagaagaggc 420
gctctgttgc tactttccat ctacttctac tactccctgc ctaacgccgt gggccctcct 480
ttcacttgga tgctggcgtt gctgggtctg agccaggccc tgaacatcct tctcggtctg 540
aagggcctgg cccctgccga gatcagcgcc gtgtgcgaga agggcaactt caacatggcc 600
cacggactcg cctggagcta ctacatcggc tacctgagac tgatcctgcc tgagctgcag 660
gccagaatca gaacctacaa ccagcactac aacaacctgc tgcggggcgc cgtgagccag 720
agactgtata tacttcttcc tctggactgc ggcgtgcctg acaacctgag catggccgac 780
cctaacatca gattcctgga caagctgcct cagcagaccg gcgaccacgc cggcatcaag 840
gacagagtgt acagcaactc catttatgag ctgctcgaga atggccagag agccggcacc 900
tgcgtgctgg agtacgccac ccctctgcag accctgttcg ccatgagcca gtacagtcag 960
gctggattca gcagagagga cagactggag caggccaagc tgttctgcag gacactggag 1020
gacatactag cagacgcccc tgagagccag aacaactgca gactgattgc ctaccaggag 1080
cctgcggacg acagctcctt cagtctgagt caggaggtgt tgcggcactt acgccaagaa 1140
gagaaggagg aggtgaccgt gggcagcctg aagactagcg ctgtgcctag caccagcaca 1200
atgtcacagg agccggaatt gctaatcagc ggcatggaga agcctctccc attacgtacc 1260
gacttcagc 1269
<210> 162
<211> 1419
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer^3_nt.STING(V155M)
<400> 162
atgcctcaca gcagccttca ccctagcatc ccttgcccta gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctag tgctccttag cgcctgcctc gtgaccctat ggggcttagg cgagcctcca 120
gagcacacct tgagatacct cgtcctccac ctggctagtc tacagctggg ccttctcctc 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata cagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc gtgcctgggc tgccctctga gaagaggcgc actgctgtta 300
ctcagcatct acttctacta ctcactgcca aacgccgtgg gccctccttt cacctggatg 360
ctggccttgc tcggattgag ccaggccctg aacattttac tgggattgaa gggcctggcc 420
cctgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca acatggccca cggcctagct 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcctg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaacc agcactacaa caacctgctg cgtggagcgg tgagccagag actgtatatc 600
ctcctgcctc tggactgcgg agtgcctgac aacctgagca tggccgaccc taacatcaga 660
ttcctggaca agctgcctca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga cagagtgtac 720
agcaactcaa tctacgagct gttggagaat ggccagagag ccggcacctg cgtgctggag 780
tacgccaccc ctctgcagac cctgttcgcc atgagccagt actctcaggc aggcttcagc 840
agagaggaca gactggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga catcctggcg 900
gacgcccctg agagccagaa caactgccgg cttatcgcct accaggagcc agcagacgac 960
agcagcttct ctctctcaca agaggtactg cgccatcttc gccaggagga gaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gcagcctgaa gacatccgcc gtacctagca ccagcaccat gtctcaggaa 1080
ccggaactgt tgatcagcgg catggagaag cctctgccac tgcgcaccga cttcagcgcc 1140
accaacttct ccctactgaa gcaagccggt gacgttgaag agaaccctgg ccctatgacc 1200
gagtacaagc tggtagtagt aggcgccgac ggcgtgggca agagcgccct gaccatccag 1260
ctgatccaga tgactgaata taagcttgtc gtcgtgggcg cagatggcgt tggtaagagc 1320
gcacttacaa ttcaactcat tcagatgacg gagtataagc tggtggtggt cggagctgac 1380
ggcgtaggca agagtgccct tactattcag ctaattcag 1419
<210> 163
<211> 1419
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer^3_ct.STING(V155M)
<400> 163
atgaccgagt acaagcttgt ggtggttggc gccgacggcg tgggcaagag cgccttaacc 60
atccagctta tccagatgac agagtataag ctagtggtgg tcggcgcaga cggagtggga 120
aagagtgcat taactattca actcatccaa atgaccgaat acaagctagt agttgtgggt 180
gcagatggcg tcggcaagtc tgcactgaca attcagctca tccaggccac caacttcagc 240
ctgctgaagc aggccggcga cgtggaggag aaccctggcc ctatgcctca cagcagcctg 300
caccctagca tcccttgccc tagaggccac ggcgcccaga aggccgccct ggtgctgctg 360
agcgcctgcc tggtgaccct gtggggcctg ggcgagcctc ctgagcacac cctgagatac 420
ctagttttgc acctggcttc tctgcagctg ggcctactgc tcaacggcgt gtgcagcctg 480
gccgaggagc tgagacacat ccacagcaga tacagaggca gctactggag aaccgtgaga 540
gcatgcttag gctgccctct gagaagaggc gctctgctcc tcttgtccat ctacttctac 600
tactcgctac ctaacgccgt gggccctcct ttcacctgga tgctggccct cttgggatta 660
agccaggccc tgaacatctt gctgggactg aagggcctgg cccctgccga gatcagcgcc 720
gtgtgcgaga agggcaactt caacatggcc cacggactcg cttggagcta ctacatcggc 780
tacctgagac tgatcctgcc tgagctgcag gccagaatca gaacctacaa ccagcactac 840
aacaacctgc tgcggggagc agtgagccag agactgtata ttctgctccc tctggactgc 900
ggcgtgcctg acaacctgag catggccgac cctaacatca gattcctgga caagctgcct 960
cagcagaccg gcgaccacgc cggcatcaag gacagagtgt acagcaacag catttacgag 1020
ctgctggaga acggccagag agccggcacc tgcgtgctgg agtacgccac ccctctgcag 1080
accctgttcg ccatgagcca gtactcccag gcaggattca gcagagagga cagactggag 1140
caggccaagc tgttctgccg tactcttgag gacatccttg cagacgcccc tgagagccag 1200
aacaactgcc ggttgattgc ctaccaggaa ccggcagacg acagctcatt ctccttgtct 1260
caggaggtcc ttagacacct gcggcaggag gagaaggagg aggtgaccgt gggcagcctg 1320
aagacatccg ccgtgcctag cacgtctacc atgtcccagg agccggaact gctaatcagc 1380
ggcatggaga agcctctgcc tctcaggacc gacttcagc 1419
<210> 164
<211> 380
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R284K) var; no epitope tag
<400> 164
Met Pro His Ser Ser Leu His Pro Ser Ile Pro Cys Pro Arg Gly His
1 5 10 15
Gly Ala Gln Lys Ala Ala Leu Val Leu Leu Ser Ala Cys Leu Val Thr
20 25 30
Leu Trp Gly Leu Gly Glu Pro Pro Glu His Thr Leu Arg Tyr Leu Val
35 40 45
Leu His Leu Ala Ser Leu Gln Leu Gly Leu Leu Leu Asn Gly Val Cys
50 55 60
Ser Leu Ala Glu Glu Leu Arg His Ile His Ser Arg Tyr Arg Gly Ser
65 70 75 80
Tyr Trp Arg Thr Val Arg Ala Cys Leu Gly Cys Pro Leu Arg Arg Gly
85 90 95
Ala Leu Leu Leu Leu Ser Ile Tyr Phe Tyr Tyr Ser Leu Pro Asn Ala
100 105 110
Val Gly Pro Pro Phe Thr Trp Met Leu Ala Leu Leu Gly Leu Ser Gln
115 120 125
Ala Leu Asn Ile Leu Leu Gly Leu Lys Gly Leu Ala Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ser Ala Val Cys Glu Lys Gly Asn Phe Asn Val Ala His Gly Leu Ala
145 150 155 160
Trp Ser Tyr Tyr Ile Gly Tyr Leu Arg Leu Ile Leu Pro Glu Leu Gln
165 170 175
Ala Arg Ile Arg Thr Tyr Asn Gln His Tyr Asn Asn Leu Leu Arg Gly
180 185 190
Ala Val Ser Gln Arg Leu Tyr Ile Leu Leu Pro Leu Asp Cys Gly Val
195 200 205
Pro Asp Asn Leu Ser Met Ala Asp Pro Asn Ile Arg Phe Leu Asp Lys
210 215 220
Leu Pro Gln Gln Thr Gly Asp His Ala Gly Ile Lys Asp Arg Val Tyr
225 230 235 240
Ser Asn Ser Ile Tyr Glu Leu Leu Glu Asn Gly Gln Arg Ala Gly Thr
245 250 255
Cys Val Leu Glu Tyr Ala Thr Pro Leu Gln Thr Leu Phe Ala Met Ser
260 265 270
Gln Tyr Ser Gln Ala Gly Phe Ser Arg Glu Asp Lys Leu Glu Gln Ala
275 280 285
Lys Leu Phe Cys Arg Thr Leu Glu Asp Ile Leu Ala Asp Ala Pro Glu
290 295 300
Ser Gln Asn Asn Cys Arg Leu Ile Ala Tyr Gln Glu Pro Ala Asp Asp
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Leu Ser Gln Glu Val Leu Arg His Leu Arg Gln Glu
325 330 335
Glu Lys Glu Glu Val Thr Val Gly Ser Leu Lys Thr Ser Ala Val Pro
340 345 350
Ser Thr Ser Thr Met Ser Gln Glu Pro Glu Leu Leu Ile Ser Gly Met
355 360 365
Glu Lys Pro Leu Pro Leu Arg Thr Asp Phe Ser Thr
370 375 380
<210> 165
<211> 1140
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R284K) var; no epitope tag
<400> 165
atgccccata gcagcctgca ccccagcatc ccctgcccca gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgccctgg tcctgctgag cgcatgcctg gtcaccctgt ggggcctggg cgagcccccc 120
gagcacaccc tgagatacct ggtgctgcac ctcgccagcc tgcagctggg cctgctgctg 180
aacggcgtgt gcagcctggc cgaggagctg agacacatcc acagcagata tagaggcagc 240
tactggagaa ccgtgagagc ttgcctcggc tgccccctga gaagaggcgc cctgctgctg 300
ctgagcatct acttttacta cagcctgccc aacgctgtgg gccccccttt cacgtggatg 360
ctcgccctgc tgggactgag ccaggccctg aacatcctgc tgggccttaa gggcctagcc 420
cccgccgaga tcagcgccgt gtgcgagaag ggcaacttca atgtggccca cggcctggcc 480
tggagctact acatcggcta cctgagactg atcctgcccg agctgcaggc cagaatcaga 540
acctacaatc agcactacaa caacctgctg agaggcgccg tgagccagag actgtacatc 600
ctgctgcccc tggactgcgg cgtgcccgac aacctcagca tggccgaccc caacatcaga 660
ttcctggaca agctgcccca gcagaccggc gaccacgccg gcatcaagga tcgcgtgtac 720
agcaacagca tctacgagct gctggaaaac ggccagagag ccggaacctg cgtgctggag 780
tacgccacac ccctgcagac cctgttcgcc atgagccagt acagccaggc cggcttcagc 840
agagaggaca agctggagca ggccaagctg ttctgcagaa ccctggagga tatcctcgcc 900
gacgcccccg agagccagaa caactgcagg ctgatcgcgt accaggagcc cgctgacgac 960
agcagcttta gcctgagcca ggaggtgctg agacatctgc gtcaagagga aaaggaggag 1020
gtgaccgtgg gctccctgaa gaccagcgcc gtgcccagca ccagcaccat gagccaggag 1080
cccgagctgc tgatcagcgg catggagaag ccactgcccc tcagaaccga cttcagcacc 1140
<210> 166
<211> 186
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(186)
<223> Human KRAS sp/P01116[1-186]
<400> 166
Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys
1 5 10 15
Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr
20 25 30
Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly
35 40 45
Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr
50 55 60
Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys
65 70 75 80
Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr
85 90 95
Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val
100 105 110
Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys
115 120 125
Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr
130 135 140
Ser Ala Lys Thr Arg Gln Arg Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val
145 150 155 160
Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Leu Lys Lys Ile Ser Lys Glu Glu Lys
165 170 175
Thr Pro Gly Cys Val Lys Ile Lys Lys Cys
180 185
<210> 167
<211> 570
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<221> misc_feature
<223> 5' 7 MeGpppG 2'Ome - OH 3'; Where: A,C G & U = AMP, CMP, GMP &
N1-psi-UMP, respectively; Me = methyl; p = inorganic
phosphate(KRAS concatemer mRNA sequence; CX-012908)
<400> 167
ggaaauaaga gagaaaagaa gaguaagaag aaauauaaga gccaccauga ccgaguacaa 60
gcucgugguc gucggcgccg acgggguagg caaguccgcu cugaccauuc agcucaucca 120
gaugacggag uacaaacucg ugguaguggg agccgugggu gugggcaaga gcgcgcucac 180
cauccaacuc auccaaauga ccgaauauaa acucgucgug gugggagccg gcgacguggg 240
aaagagcgcc cuuaccaucc aguuaaucca gaugacagaa uacaagcugg ugguggucgg 300
ugccugcggc guggguaagu ccgcccugac aauccagcug auccagugau aauaggcugg 360
agccucggug gccaugcuuc uugccccuug ggccuccccc cagccccucc uccccuuccu 420
gcacccguac ccccgugguc uuugaauaaa gucugagugg gcggcaaaaa aaaaaaaaaa 480
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 540
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaucuag 570
<210> 168
<211> 1429
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<221> misc_feature
<223> 5' 7 MeGpppG 2'Ome - OH 3'; Where: A,C G & U = AMP, CMP, GMP &
N1-psi-UMP, respectively; Me = methyl; p = inorganic phosphate;
underline = miR-122 binding site(STING mRNA sequence; CX-012871)
<400> 168
ggaaauaaga gagaaaagaa gaguaagaag aaauauaaga gccaccaugc cccacaguag 60
ccuccacccc agcauccccu gccccagagg ccacggcgca cagaaggccg cccuggugcu 120
gcugagcgcc ugucugguga cccugugggg ucugggcgag ccccccgagc acacccugcg 180
guaccucgug cugcaucugg ccagccugca gcugggccug cugcugaacg gcgugugcag 240
ccuggccgaa gagcugagac acauccacag cagauacaga ggcuccuacu ggagaaccgu 300
cagagccugc cucggcuguc cccugagaag aggcgcccug cugcuccuga gcaucuacuu 360
cuacuacagc cugcccaacg ccgugggccc ccccuucacc uggaugcugg cccugcuggg 420
ccugagccag gcccugaaca uccugcuggg ccugaagggc uuggcccccg ccgagaucuc 480
cgccgugugc gagaagggca acuucaacau ggcccauggc cuugccuggu ccuacuacau 540
cggcuaccug agacugaucc ugcccgagcu gcaggccaga aucagaaccu acaaccagca 600
cuacaacaac cugcugagag gcgccgugag ccaaagacug uacauccugc ugccccugga 660
cugcggcgug cccgacaacc uuagcauggc cgaccccaac aucagauucc uggacaagcu 720
gccccagcag accggcgacc acgccggcau caaggacaga guguacagca acagcaucua 780
cgagcugcug gagaacggcc agagagccgg caccugcgug cuggaguacg ccaccccccu 840
gcagacccug uucgccauga gccaguacag ccaggccggc uucagcagag aggacagacu 900
ggagcaagcc aagcuguucu gcagaacccu ggaggacauc cuggcggacg cccccgagag 960
ccaaaacaac ugcagacuga ucgccuacca ggagcccgcc gacgacagca gcuucagccu 1020
gagccaggaa gugcugagac accugagaca ggaagagaag gaggagguga ccgugggaag 1080
ccugaagacc agcgccgugc ccagcaccag caccaugagc caggagcccg agcugcugau 1140
cagcggcaug gagaagcccc ugccccugag aaccgacuuc agcugauaau aggcuggagc 1200
cucgguggcc uagcuucuug ccccuugggc cuccccccag ccccuccucc ccuuccugca 1260
cccguacccc ccaaacacca uugucacacu ccaguggucu uugaauaaag ucugaguggg 1320
cggcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1380
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaucuag 1429
<210> 169
<211> 300
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D G12V G13D G12C) 100mer 4MUT nt. seq
<400> 169
augaccgagu acaagcucgu ggucgucggc gccgacgggg uaggcaaguc cgcucugacc 60
auucagcuca uccagaugac ggaguacaaa cucgugguag ugggagccgu gggugugggc 120
aagagcgcgc ucaccaucca acucauccaa augaccgaau auaaacucgu cgugguggga 180
gccggcgacg ugggaaagag cgcccuuacc auccaguuaa uccagaugac agaauacaag 240
cugguggugg ucggugccug cggcgugggu aaguccgccc ugacaaucca gcugauccag 300
<210> 170
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: huSTING(V155M); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 170
augccccaca guagccucca ccccagcauc cccugcccca gaggccacgg cgcacagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugucug gugacccugu ggggucuggg cgagcccccc 120
gagcacaccc ugcgguaccu cgugcugcau cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaagagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcucc 240
uacuggagaa ccgucagagc cugccucggc uguccccuga gaagaggcgc ccugcugcuc 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccc aacgccgugg gcccccccuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggcuuggcc 420
cccgccgaga ucuccgccgu gugcgagaag ggcaacuuca acauggccca uggccuugcc 480
ugguccuacu acaucggcua ccugagacug auccugcccg agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccaaag acuguacauc 600
cugcugcccc uggacugcgg cgugcccgac aaccuuagca uggccgaccc caacaucaga 660
uuccuggaca agcugcccca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cccugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca agccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcg 900
gacgcccccg agagccaaaa caacugcaga cugaucgccu accaggagcc cgccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaagugcug agacaccuga gacaggaaga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gaagccugaa gaccagcgcc gugcccagca ccagcaccau gagccaggag 1080
cccgagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccccugcccc ugagaaccga cuucagc 1137
<210> 171
<211> 85
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mir-122
<400> 171
ccuuagcaga gcuguggagu gugacaaugg uguuuguguc uaaacuauca aacgccauua 60
ucacacuaaa uagcuacugc uaggc 85
<210> 172
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mir-122-3p_
<400> 172
aacgccauua ucacacuaaa ua 22
<210> 173
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mir-122-3p binding site
<400> 173
uauuuagugu gauaauggcg uu 22
<210> 174
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mir-122-5p
<400> 174
uggaguguga caaugguguu ug 22
<210> 175
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: mir-122-5p binding site
<400> 175
caaacaccau ugucacacuc ca 22
<210> 176
<211> 46
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5 UTR
<400> 176
ggaaauaaga gagaaaagaa gaguaagaag aaauauaaga gccacc 46
<210> 177
<211> 12
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: GC-Rich RNA Element
<400> 177
ccgccgccgc cg 12
<210> 178
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: GC-Rich RNA Element
<400> 178
ccgccgccgc cgccg 15
<210> 179
<211> 10
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: V1 - GC-Rich RNA Element
<400> 179
ccccggcgcc 10
<210> 180
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5UTR
<400> 180
gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag a 41
<210> 181
<211> 57
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: V1-UTR
<400> 181
gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag accccggcgc cgccacc 57
<210> 182
<211> 54
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: V2-UTR
<400> 182
gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag accccggcgc cacc 54
<210> 183
<211> 45
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12C 15mer^3
<400> 183
Met Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Met
1 5 10 15
Lys Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala Met Lys
20 25 30
Leu Val Val Val Gly Ala Cys Gly Val Gly Lys Ser Ala
35 40 45
<210> 184
<211> 225
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12C 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 184
atgaccgagt acaagctcgt ggttgttggc gcctgcggcg tgggcaagag cgccctcacc 60
atccagctca tccagatgac agagtataag ttagtcgttg tcggagcttg cggagttgga 120
aagtcggcgc tcaccattca actcatacaa atgacagaat ataagttagt ggtggtgggt 180
gcgtgtggcg ttggcaagag tgcgcttact atccagctca ttcag 225
<210> 185
<211> 92
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5 UTR
<400> 185
ucaagcuuuu ggacccucgu acagaagcua auacgacuca cuauagggaa auaagagaga 60
aaagaagagu aagaagaaau auaagagcca cc 92
<210> 186
<211> 119
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 3 UTR
<400> 186
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccgu ggucuuugaa uaaagucuga gugggcggc 119
<210> 187
<211> 164
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 3 UTR with mi-122 and mi-142.3p sites
<400> 187
ugauaauagg cuggagccuc gguggccaug cuucuugccc cuugggccca aacaccauug 60
ucacacucca uccccccagc cccuccuccc cuuccuccau aaaguaggaa acacuacaug 120
cacccguacc cccguggucu uugaauaaag ucugaguggg cggc 164
<210> 188
<211> 66
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Nucleotide sequence encoding 2A peptide
<400> 188
ggaagcggag cuacuaacuu cagccugcug aagcaggcug gagacgugga ggagaacccu 60
ggaccu 66
<210> 189
<211> 108
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Nucleotide sequence encoding 2A peptide
<400> 189
uccggacuca gauccgggga ucucaaaauu gucgcuccug ucaaacaaac ucuuaacuuu 60
gauuuacuca aacuggcugg ggauguagaa agcaauccag guccacuc 108
<210> 190
<211> 75
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12D 25mer nucleotide sequence
<400> 190
augaccgagu acaagcuggu gguggugggc gccgacggcg ugggcaagag cgcccugacc 60
auccagcuga uccag 75
<210> 191
<211> 75
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12V 25mer nucleotide sequence
<400> 191
augaccgagu acaagcuggu gguggugggc gccgugggcg ugggcaagag cgcccugacc 60
auccagcuga uccag 75
<210> 192
<211> 75
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G13D 25mer nucleotide sequence
<400> 192
augaccgagu acaagcuggu gguggugggc gccggcgacg ugggcaagag cgcccugacc 60
auccagcuga uccag 75
<210> 193
<211> 225
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12D 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 193
augaccgagu acaaguuagu gguugugggc gccgacggcg ugggcaagag cgcccucacc 60
auccagcuua uccagaugac ggaauauaag uuaguaguag ugggagccga cggugucggc 120
aaguccgcuu ugaccauuca acuuauucag augacagagu auaagcuggu cguuguaggc 180
gcagacggcg uuggaaaguc ggcacugacg auccaguuga uccag 225
<210> 194
<211> 225
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12V 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 194
augaccgagu acaagcucgu cguggugggc gccgugggcg ugggcaagag cgcccuaacc 60
auccaguuga uccagaugac cgaauauaag cucgugguag ucggagcggu gggcguuggc 120
aagucagcgc uaacaauaca acuaauccaa augaccgaau acaagcuagu uguagucggu 180
gccgucggcg uuggaaaguc agcccuuaca auucagcuca uucag 225
<210> 195
<211> 225
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G13D 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 195
augaccgagu acaagcucgu agugguuggc gccggcgacg ugggcaagag cgcccuaacc 60
auccagcuca uccagaugac agaauauaag cuugugguug ugggagcagg agacguggga 120
aagagugcgu ugacgauuca acucauacag augaccgaau acaaguuggu gguggucggc 180
gcaggugacg uugguaaguc ugcacuaacu auacaacuga uccag 225
<210> 196
<211> 75
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12C 25mer nucleotide sequence
<400> 196
augaccgagu acaagcuggu gguggugggc gccugcggcg ugggcaagag cgcccugacc 60
auccagcuga uccag 75
<210> 197
<211> 225
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS G12C 25mer^3 nucleotide sequence
<400> 197
augaccgagu acaagcucgu gguuguuggc gccugcggcg ugggcaagag cgcccucacc 60
auccagcuca uccagaugac agaguauaag uuagucguug ucggagcuug cggaguugga 120
aagucggcgc ucaccauuca acucauacaa augacagaau auaaguuagu gguggugggu 180
gcguguggcg uuggcaagag ugcgcuuacu auccagcuca uucag 225
<210> 198
<211> 75
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS WT 25mer nucleotide sequence
<400> 198
augaccgagu acaagcuggu gguggugggc gccggcggcg ugggcaagag cgcccugacc 60
auccagcuga uccag 75
<210> 199
<211> 47
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 5 UTR sequence; no promoter
<400> 199
gggaaauaag agagaaaaga agaguaagaa gaaauauaag agccacc 47
<210> 200
<211> 225
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D G12V G13D) 75mer 3MUT nt. seq
<400> 200
augaccgagu acaagcucgu uguagucggc gccgacggcg ugggcaagag cgccuugacc 60
auccaguuga uccagaugac cgaauauaag uugguggugg uaggcgcagu gggaguuggc 120
aagucagcac ucacaauuca gcucauucaa augacagaau acaaguuagu cguuguagga 180
gcaggcgacg ucggcaagag ugccuuaacc auucaacuaa uccag 225
<210> 201
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(R284T); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 201
augccucaca gcagccugca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugacccugu ggggccuggg cgagccuccu 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca acguggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca cccuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgccccug agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accaggagcc ugccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaggugcug agacaccuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccagcgcc gugccuagca ccagcaccau gagccaggag 1080
ccugagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccucugccuc ugagaaccga cuucagc 1137
<210> 202
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: hu STING (R284M); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 202
augccccaca gcagccugca ccccuccauc cccuguccca gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugaccuuau ggggccuggg cgagcccccc 120
gagcacaccc ugagauaccu gguccugcac cuggccagcc uccagcuggg ccugcugcuc 180
aacggcgugu guagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggu ugcccacuga gaagaggagc ucugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cucgcugccc aacgcugugg gcccccccuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggucugag ccaggcccug aacauccucc ugggccugaa gggccuggcc 420
cccgccgaga uaagcgccgu uugcgagaag ggcaacuuca acguggccca uggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua cuuacgccug auccugcccg agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcauuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguauauc 600
cugcugcccc uggacugcgg cgugcccgac aaccugagca uggccgaccc caacaucaga 660
uuccuggaca agcuccccca gcagaccggc gaccacgccg gaaucaaaga cagaguguau 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cguacuggag 780
uacgccaccc ccuugcagac ccuguuugcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca ugcuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgcccccg agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accaagagcc cgccgacgac 960
agcagcuuca gcuuaagcca ggaggugcug agacaucuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccucaa gaccagcgcu gugcccucua ccagcaccau gagccaggag 1080
cccgagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccccugcccc ugagaacaga cuucagc 1137
<210> 203
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R284K); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 203
augccccaua gcagccugca ccccagcauc cccugcccca gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg uccugcugag cgcaugccug gucacccugu ggggccuggg cgagcccccc 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cucgccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua uagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc uugccucggc ugcccccuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuuuuacua cagccugccc aacgcugugg gccccccuuu cacguggaug 360
cucgcccugc ugggacugag ccaggcccug aacauccugc ugggccuuaa gggccuagcc 420
cccgccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca auguggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugcccg agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaauc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugcccc uggacugcgg cgugcccgac aaccucagca uggccgaccc caacaucaga 660
uuccuggaca agcugcccca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga ucgcguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggaaaac ggccagagag ccggaaccug cgugcuggag 780
uacgccacac cccugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca agcuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga uauccucgcc 900
gacgcccccg agagccagaa caacugcagg cugaucgcgu accaggagcc cgcugacgac 960
agcagcuuua gccugagcca ggaggugcug agacaucugc gucaagagga aaaggaggag 1020
gugaccgugg gcucccugaa gaccagcgcc gugcccagca ccagcaccau gagccaggag 1080
cccgagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccacugcccc ucagaaccga cuucagc 1137
<210> 204
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(N154S); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 204
augccucaca gcagccugca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugacccugu ggggccuggg cgagccuccu 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca gcguggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgccccug agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accaggagcc ugccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaggugcug agacaccuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccagcgcc gugccuagca ccagcaccau gagccaggag 1080
ccugagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccucugccuc ugagaaccga cuucagc 1137
<210> 205
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(V147L); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 205
augccucaca gcagccugca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugacccugu ggggccuggg cgagccuccu 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgcccu gugcgagaag ggcaacuuca acguggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgccccug agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accaggagcc ugccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaggugcug agacaccuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccagcgcc gugccuagca ccagcaccau gagccaggag 1080
ccugagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccucugccuc ugagaaccga cuucagc 1137
<210> 206
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (E315Q); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 206
augccucaca gcagccugca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugacccugu ggggccuggg cgagccuccu 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca acguggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgccccug agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accagcagcc ugccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaggugcug agacaccuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccagcgcc gugccuagca ccagcaccau gagccaggag 1080
ccugagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccucugccuc ugagaaccga cuucagc 1137
<210> 207
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R375A); no epitope tag; nucleotide sequence
<400> 207
augccucaca gcagccugca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugacccugu ggggccuggg cgagccuccu 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca acguggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgccccug agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accaggagcc ugccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaggugcug agacaccuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccagcgcc gugccuagca ccagcaccau gagccaggag 1080
ccugagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccucugccuc uggccaccga cuucagc 1137
<210> 208
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(V147L/N154S/V155M); no epitope tag;
nucleotide sequence
<400> 208
augccucaca gcagccugca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugacccugu ggggccuggg cgagccuccu 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgcccu gugcgagaag ggcaacuuca gcauggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgccccug agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accaggagcc ugccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaggugcug agacaccuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccagcgcc gugccuagca ccagcaccau gagccaggag 1080
ccugagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccucugccuc ugagaaccga cuucagc 1137
<210> 209
<211> 1137
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING(R284M/V147L/N154S/V155M); no epitope tag;
nucleotide sequence
<400> 209
augccucaca gcagccugca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg ugcugcugag cgccugccug gugacccugu ggggccuggg cgagccuccu 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cuggccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc cugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuucuacua cagccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcccugc ugggccugag ccaggcccug aacauccugc ugggccugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgcccu gugcgagaag ggcaacuuca gcauggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggagaac ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca ugcuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcc 900
gacgccccug agagccagaa caacugcaga cugaucgccu accaggagcc ugccgacgac 960
agcagcuuca gccugagcca ggaggugcug agacaccuga gacaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccagcgcc gugccuagca ccagcaccau gagccaggag 1080
ccugagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccucugccuc ugagaaccga cuucagc 1137
<210> 210
<211> 141
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: 3 UTR used in STING V155M construct, containing miR122
binding site
<400> 210
ugauaauagg cuggagccuc gguggccuag cuucuugccc cuugggccuc cccccagccc 60
cuccuccccu uccugcaccc guacccccca aacaccauug ucacacucca guggucuuug 120
aauaaagucu gagugggcgg c 141
<210> 211
<211> 1257
<212> RNA
<213> Mus musculus
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1257)
<223> super mouse IRF3 S396D; no epitope tag
<400> 211
auggagaccc ccaagccuag aauccugccc uggcugguga gccagcugga ccugggccag 60
cuggagggcg uagccuggcu ggacgagagc agaaccagau ucagaauccc cuggaagcac 120
ggccugagac aagacgccca gauggccgac uucggcaucu uccaggccug ggccgaggcc 180
agcggcgccu acaccccugg caaggauaag cccgauguga gcaccuggaa gagaaacuuc 240
agaagcgccc ugaacagaaa ggaggugcug agacuggccg ccgacaauag caaggacccc 300
uacgaccccc acaaggugua cgaguucguu acccccggcg ccagggacuu cgugcaccug 360
ggcgccagcc ccgacaccaa cggcaagagc agccugcccc acagccagga gaaccugccc 420
aagcuguucg auggccugau ccugggcccc cugaaggacg agggcagcag cgaccuggcc 480
aucgugagcg acccuagcca gcagcugccc ucccccaacg ugaacaacuu ccugaacccc 540
gccccccagg agaacccccu gaagcaacug cuggccgagg agcaguggga guucgaggug 600
accgccuucu acagaggcag acagguguuc cagcagaccc uguucugccc cggcggccug 660
agacugguag gcagcaccgc ugacaugacc cugcccuggc agcccgugac ccugcccgac 720
cccgaaggcu uucugaccga caagcuggug aaggaguacg ucggccaagu gcugaagggc 780
cugggcaacg gccuggcccu guggcaggcc ggccagugcc ugugggccca gagacucggc 840
cacagccacg ccuucugggc ccugggcgag gaacuccugc ccgauagcgg cagaggcccc 900
gacggcgagg ugcacaagga caaggacggc gccguguucg accugcgccc cuucguggcc 960
gaccugaucg ccuucaugga gggcagcggc cacagcccca gauauacccu gugguucugc 1020
augggcgaga uguggcccca ggaccagccc ugggugaaga gacuggugau ggugaaggug 1080
gugcccaccu gccugaaaga gcugcuggag auggccagag agggcggcgc cagcucccug 1140
aaaaccgugg accugcacau ugacaacagc cagcccauca gccugaccag cgaccaguac 1200
aaggccuacc ugcaggaccu gguggaggac auggacuucc aggccaccgg caacauc 1257
<210> 212
<211> 1281
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1281)
<223> super human IRF3 S396D; no epitope tag
<400> 212
augggcaccc ccaagcccag aauccugccc uggcugguga gccagcugga ccugggccag 60
cuggagggag uggccugggu gaacaagagc agaaccagau ucagaauccc cuggaagcac 120
ggccucagac aggacgccca gcaggaggac uucggcauuu uucaggcuug ggccgaggcc 180
accggcgccu acgugcccgg cagagacaag cccgaccugc ccaccuggaa aagaaacuuc 240
agaagcgccu ugaauagaaa ggagggccug agacuggccg aggacagaag caaggacccc 300
cacgacccuc acaagaucua cgaguucgug aauagcggcg ugggcgacuu uagccagccc 360
gacaccagcc ccgacaccaa cggcggcggc agcaccagcg acacgcagga ggacauccug 420
gaugaacugc ugggcaacau ggugcuggcc ccccugcccg aucccggccc cccuucgcuu 480
gccguggccc ccgagcccug cccccagccc cugagaagcc ccucucugga uaaccccacc 540
cccuucccca accugggccc cagcgagaau ccacugaaga gacuucuggu ccccggcgag 600
gagugggagu ucgaggugac cgccuucuac agaggcagac agguguucca gcagaccauc 660
agcugccccg aaggccugag auuagugggc agcgaagugg gcgacaggac ccugcccggg 720
uggcccguga cccugcccga ucccggcaug agccugaccg acagaggugu gaugagcuac 780
gugagacacg ugcugagcug ccugggcggc ggccuggcac uguggagagc cggccagugg 840
cugugggccc agagacuggg ccacugccac accuacuggg ccgugagcga ggagcugcug 900
cccaacagcg gccacggccc cgacggcgag gugcccaagg acaaggaagg gggcguguuc 960
gaccugggcc ccuucaucgu agaccugauc accuuuaccg agggcagcgg caggagcccc 1020
agauacgccc ugugguucug cgugggcgaa agcuggcccc aggaccagcc cuggaccaag 1080
agacugguga uggugaaggu agugcccacc ugccugagag ccuuagugga gauggccaga 1140
gugggcgggg ccagcagccu ggagaacacc guggaucuuc acaucgacaa cagccacccc 1200
cugagccuga ccagcgacca guacaaggcc uaccugcagg accuggugga gggcauggac 1260
uuccagggcc ccggcgagac c 1281
<210> 213
<211> 1509
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Wild-type Hu IRF7 isoform A; P037 without epitope tag
<400> 213
auggcgcugg cccccgaaag agccgccccc agaguccucu ucggcgaaug gcuccuuggc 60
gaaauuucgu cgggcugcua cgagggcuua caauggcugg augaggcgag aaccuguuuc 120
agggugcccu ggaaacacuu cgccagaaag gaucuaagcg aagcagaugc uagaauuuuu 180
aaggcuuggg ccguggccag gggaagaugg ccccccucga gcagaggcgg cggcccuccc 240
cccgaggcag aaacggccga gagagccgga uggaaaacca auuucagaug cgcccugaga 300
ucuacaagaa gauucgugau gcuuagagac aacagcggag aucccgccga uccccauaag 360
guguaugccc ugucccggga gcugugcugg agggaagggc cuggcacuga ccagaccgaa 420
gccgaagccc ccgcggccgu gccgccgccc caaggaggcc caccaggccc uuuccucgcu 480
cacacccacg ccggucugca agccccggga ccucuaccug ccccugccgg cgauaaaggc 540
gaccuguugc ugcaggccgu ccaacagagc ugccuggccg aucaucugcu cacagccagc 600
uggggcgcug accccguccc aacaaaggcc cccggugagg gccaagaagg ccugccucug 660
accggcgccu gugccggcgg cccuggccug ccugcuggcg agcuguacgg augggcuguc 720
gaaaccacuc ccucccccgg cccccaaccu gcggcccuga caaccggcga ggcagccgca 780
cccgaaagcc cccaccaggc cgaacccuac cucaguccca gccccuccgc cugcaccgcu 840
gugcaggagc ccagccccgg ugcucuggac guaacaauca uguacaaagg cagaaccgug 900
cuucagaagg ugguuggaca ccccuccugu acuuuucucu acggcccccc cgacccugcc 960
gugagagcua ccgacccgca acagguggcc uuucccucgc ccgccgaacu gcccgaucaa 1020
aaacagcuga gauacaccga ggagcugcug agacacgugg cgccgggcuu acaccuagag 1080
uugagaggcc cccaacucug ggccagacgc augggcaagu guaaggugua cugggagguc 1140
gggggcccuc ccggcucugc cagccccagc accccugcuu gucucuugcc cagaaacugu 1200
gauaccccca ucuucgacuu ccguguauuu uuccaggaac uggucgaguu uagagccaga 1260
cagagacgag gcagccccag auauacaauc uaccucggcu ucggccagga ccugagugcc 1320
ggcagaccua aggagaaguc gcugguccua gugaaguuag agcccuggcu auguagagug 1380
caccuggagg gcacccagag agaaggagug agcagccugg acagcagcag ccugagucug 1440
ugccugagcu ccgccaacuc gcuguaugau gacaucgagu guuuccucau ggagcuggag 1500
cagcccgcc 1509
<210> 214
<211> 1509
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7 S477D/S479D; P033
without epitope tag
<400> 214
auggcccuug ccccugagcg ggccgccccc agaguguuau ucggcgagug gcugcugggc 60
gagaucagca gcggcugcua cgagggacug caguggcugg acgaggcuag aaccugcuuc 120
agagugcccu ggaagcauuu cgccagaaaa gaccugagcg aggcugaugc uagaaucuuc 180
aaagccuggg cuguggcccg aggaagaugg ccccccagca gcagaggagg cggcccuccu 240
cccgaggccg aaaccgcaga gcgugcuggc uggaaaacca acuuuaggug ugcccugagg 300
agcaccagaa gauucguuau gcucagagac aacagcgggg accccgccga cccgcacaag 360
guguacgccu uaaguaggga gcugugcugg agagagggac cggggaccga ccaaaccgag 420
gcugaggcgc ccgccgccgu uccaccuccc cagggugguc ccccagggcc cuuucuggca 480
cacacccacg ccggauuaca ggcgccaggg cccuuacccg cccccgccgg agacaaaggc 540
gaccuccugc ugcaagccgu gcaacaaagc ugccuggccg aucacuuacu aaccgcuagc 600
uggggcgccg auccuguucc caccaaggcc cccggugaag ggcaagaagg acugcccuua 660
accggcgccu gugccggagg cccuggucug ccagccggcg agcuguacgg uugggcuguc 720
gaaacaacac ccaguccggg cccacagccu gccgcucuga ccaccggcga agccgccgcc 780
cccgagagcc cacaccaggc ugaacccuac cugagcccca gccccagcgc cugcaccgcu 840
gugcaggagc cuagccccgg cgcucuugau gugacaauaa uguacaaggg caggaccgug 900
cugcaaaagg ucgugggcca uccgucgugu accuuucugu acggcccucc agaccccgcg 960
guuagagcca ccgaccccca gcaagucgcc uuccccuccc ccgccgaacu gcccgaccaa 1020
aagcagcugc gguacacaga agaacuacuu agacacgugg cccccggucu gcacuuggag 1080
cugagaggcc cccagcucug ggccagaaga augggcaagu gcaaagugua cugggaggug 1140
ggcggcccac ccggcucagc uucgcccucc acacccgcau gccugcugcc cagaaauugc 1200
gacacgccca ucuucgauuu uagaguguuc uuucaggagu ugguggaguu cagagccaga 1260
caaagacgcg gcagccccag auacaccauu uaccucggcu ucggccagga ccucagcgcu 1320
ggcagaccca aggagaagag ucugguccuc gugaagcugg agcccuggcu gugcagagug 1380
caccuggagg gcacccagcg ugaaggcgug agcagccugg auucaagcga ccuggaccua 1440
ugccuaagca gcgcuaacuc acuguacgac gauaucgaau gcuuccugau ggaacuggag 1500
cagccugcc 1509
<210> 215
<211> 1509
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7 S475D/S477D/L480D; P034
without epitope tag
<400> 215
auggcccugg cacccgagag ggccgccccc agggugcucu ucggcgagug guuacuaggc 60
gaaauuagca gcggcugcua ugaaggccuu caguggcugg acgaggccag aaccugcuuu 120
agaguucccu ggaagcacuu cgcccggaaa gaucucucug aagccgacgc cagaauauuc 180
aaggccuggg cugucgccag gggcaggugg ccacccucca gccgaggugg cggcccuccc 240
ccugaggcug agacugcgga aagggcgggc uggaagacca auuucagaug cgcucugaga 300
agcaccagac guuuugugau gcuaagagac aauagcggcg aucccgccga cccccauaag 360
guauacgcac ugagccgaga gcucuguugg agagaaggcc ccggcaccga ccagaccgag 420
gcugaagccc cugcagccgu gccccccccu caaggcgggc cccccggccc cuuccuggcc 480
cauacccaug caggguuaca agcacccggg cccuugcccg ccccagcggg agacaagggc 540
gaccucuuac ugcaggccgu gcaacaaagu ugucuggcgg accaccugcu gaccgcauca 600
uggggcgcgg auccugugcc caccaaggca cccggcgaag gccaggaggg ccugcccuug 660
accggcgccu gcgcuggcgg acccggccua ccugcuggcg aacuguaugg cugggccgua 720
gagacgacuc ccagcccugg cccacaaccc gcggcuuuga ccaccggcga agccgccgcc 780
cccgagucuc cgcaccaggc cgagccuuac cucagcccaa gcccuagcgc cugcaccgcc 840
gugcaagaac cuagccccgg agcccuggau gugacaauca uguacaaggg uagaaccgua 900
cugcaaaagg ugguggguca ucccagcugc accuuucuuu acggcccacc cgacccugcc 960
gugcgagcca cagacccaca acaggucgcc uucccaagcc ccgccgaacu gcccgaucag 1020
aaacagcuga gauauacaga ggagcuucug cggcacguag cucccggccu acaucucgag 1080
cugaggggcc cacaacugug ggccagacgc augggcaaau gcaaggucua cugggaagug 1140
ggaggccccc ccggcagcgc aucucccagc acgcccgcgu gccugcugcc uagaaauugc 1200
gacaccccca ucuuugacuu ccggguauuc uuucaggagc ugguagaguu cagagccagg 1260
cagcggaggg gcucccccag auacacaauc uaccugggcu ucggacagga ccuguccgcc 1320
ggccgcccca aggaaaagag ccuggugcug gugaagcugg agcccuggcu guguagggua 1380
caccucgaag gcacccagag agaaggagug agcucgcuug augacagcga ucugucggau 1440
ugccuuagca gcgccaacag ccuguaugau gauaucgagu gcuuccuuau ggaacuggag 1500
cagcccgcc 1509
<210> 216
<211> 1509
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active Hu IRF7
S475D/S476D/S477D/S479D/S483D/S487D; P035 without epitope tag
<400> 216
auggcccuag cccccgaaag agcagcuccc agagugcugu ucggcgaaug gcugcuuggc 60
gagaucagca gcggcugcua cgaaggccug caguggcugg acgaagcccg caccuguuuc 120
agagugcccu ggaagcacuu cgcuagaaag gauuugagcg aggcugaugc uagaaucuuu 180
aaggcuuggg cuguggcaag aggcagaugg ccgccuagua gcagaggggg cggaccuccc 240
cccgaggcug agaccgcuga gagagcaggg uggaaaacca acuucagaug cgcgcugaga 300
agcacccgaa gauucgugau gcuacgugac aauagcggcg accccgccga cccccacaaa 360
guguacgccc ugucccgaga acuuugcugg agagagggac ccggcaccga ucaaacagag 420
gcugaggccc cggccgcugu acccccgccc caaggaggcc ccccaggccc cuuucuggcu 480
cauacacaug ccggccugca ggcacccggg ccccucccgg cuccugccgg cgacaagggc 540
gaucuccuuc uccaggccgu gcagcagagc ugccuggccg aucaccugcu gaccgccucg 600
uggggcgccg accccgugcc caccaaagcc ccgggugaag gccaagaggg gcucccuuua 660
accggagcau gcgccggagg ccccggccug ccagccggcg aguuauaugg cugggcugug 720
gagaccacac ccucccccgg cccucaaccc gcugcccuga ccaccgguga ggccgccgcc 780
cccgagagcc cacaccaggc cgaacccuac cugagcccua gcccuagcgc cugcaccgcc 840
gugcaagaac ccagccccgg agcccuggau gugaccauua uguacaaggg ccggacagug 900
cugcaaaagg uugugggaca cccgagcugc accuuucugu acgguccgcc ugaccccgcc 960
gugagagcca cggacccgca gcagguggcc uuccccucac ccgcggagcu gcccgaccaa 1020
aagcaacuca gauacacaga agaacuauug cgucacgucg cgcccggccu gcaucuggag 1080
cugagaggcc cccagcucug ggccagaagg augggcaaau gcaaggugua cugggaggug 1140
ggaggccccc ccggcagcgc cagccccagc acucccgcgu gccugcugcc cagaaauugc 1200
gacacuccca ucuucgauuu caggguguuc uuccaggagc ugguggaguu cagagccagg 1260
cagagaaggg guagccccag auacacaauc uaucuaggcu uuggacaaga ucugagcgcc 1320
ggccggccua aggaaaaaag ccuggugcug guaaagcugg agccguggcu uuguagagug 1380
caccuggagg ggacgcagcg agagggcgug agcagcuuag acgacgauga cuuggaucug 1440
ugucucgaca gcgccaacga cuuguacgac gacaucgagu gcuuccugau ggaacuggag 1500
cagcccgcc 1509
<210> 217
<211> 846
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active truncated Hu IRF7 1-246 +
468-503; P032 without epitope tag
<400> 217
auggcccugg cccccgagag agccgccccc agagugcucu ucggcgagug gcugcugggc 60
gagauaagca gcggcugcua cgaaggucug caguggcuag acgaggccag aaccugcuuu 120
agagugcccu ggaagcacuu cgcucgaaag gaccuguccg aggccgaugc uagaauuuuu 180
aaggcuuggg ccgucgcuag gggaagaugg cccccuagca guagaggcgg cggccccccu 240
cccgaagccg agacggccga gagggccggc uggaaaacca auuucagaug cgcccugagg 300
agcacccgca gguucguaau gcugcgagac aauagcggcg auccugcgga uccucacaag 360
guuuacgccu ugaguagaga acugugcugg cgggagggcc ccggaaccga ccagacggag 420
gcagaggcac ccgcugccgu gccccccccu caaggaggac ccccuggacc cuuucuggcc 480
cacacccacg cuggucugca ggccccaggc ccacugcccg ccccagcggg cgauaagggu 540
gaccugcucc uacaggcggu gcaacagagc ugucuggccg accaccuguu gaccgccagc 600
uggggggccg acccggugcc caccaaagcu cccggagagg gccaagaagg ccucccacua 660
acuggcgccu gcgccggggg cccgggauua cccgccggcg agcuguaugg cugggccgug 720
gagaccacgc ccagccccga gggcgugucg ucccuggaca gcagcagccu gagccugugc 780
cugagcuccg ccaacagccu guaugacgac aucgagugcu uccugaugga gcuggaacaa 840
cccgcc 846
<210> 218
<211> 846
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: constitutively active truncated Hu IRF7 1-246 +
468-503 plus S475D/S476D/S477D/S479D/S483D/S487D; P036 without
epitope tag
<400> 218
auggcacugg cgccugaaag agccgcuccg cgugugcucu ucggcgagug gcugcugggc 60
gagaucagcu ccggcugcua cgagggucua caguggcugg acgaggccag aaccuguuuu 120
agagugcccu ggaagcacuu cgcgagaaag gaccugagcg aggccgacgc cagaaucuuc 180
aaagccuggg caguggcuag gggcagaugg ccucccagca gccggggcgg cggcccaccc 240
cccgaggccg aaaccgccga aagagcuggc uggaagacca acuucagaug cgcccugaga 300
agcaccagaa gauuugucau gcugagagau aauucaggag accccgccga cccucacaag 360
guguacgccc uguccagaga gcuguguugg agagagggcc ccggaaccga ccagaccgag 420
gccgaggcuc cagcugccgu gccacccccc caaggcggac cacccggccc cuucuuggca 480
cauacgcacg ccggccucca ggcucccggc ccucugcccg ccccugcugg ugacaaaggc 540
gaucugcugc ugcaagccgu ccagcaaucc ugcuuggcug accaccugcu gaccgcuagc 600
uggggagccg accccguucc caccaaggcu cccggagaag gacaggaggg ccugccccuu 660
accggcgcuu gcgcgggggg cccuggcuug ccugccggcg aacuguacgg cugggccgug 720
gagaccacgc cuucccccga gggcgugucc agccuggacg augaugaccu ggaucugugc 780
cuggacagcg ccaacgaccu guacgaugac aucgagugcu uuuugaugga gcuggagcag 840
cccgcc 846
<210> 219
<211> 1224
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: truncated Hu IRF7 1-151 + 247-503; P038 without
epitope tag; null mutation
<400> 219
auggcccugg cccccgagag agccgcgccc agagugcugu ucggcgaaug gcugcugggc 60
gagaucagca gcggcugcua ugagggccug caguggcucg acgaagccag gacgugcuuc 120
agaguccccu ggaagcacuu cgccagaaag gaucugagcg aggcugacgc cagaaucuuc 180
aaggccuggg caguugcgcg ugggagaugg ccccccagcu cgcggggcgg cggucccccc 240
ccugaggccg agaccgccga aagagccgga uggaaaacca acuuucgaug cgcccucaga 300
agcaccagac gguuugugau gcugagagau aacagcggcg acccugcaga cccccauaaa 360
guguaugccc ugagcagaga gcuguguugg cgagagggcc ccggaaccga ccaaaccgag 420
gccgaggccc ccgccgccgu accccccccu caaggccccc agccugcugc ucugaccacg 480
ggagaagccg ccgcuccuga gagcccccac caagccgagc ccuaucugag cccuagcccc 540
agcgccugca ccgccgugca ggagcccuca ccgggcgccc uagacgugac caucauguac 600
aaggggcgca cggugcugca aaagguggug ggccacccca gcugcaccuu ccuguacggc 660
ccccccgacc cugccgugag agccaccgac ccccagcaag ucgccuuccc cagccccgcc 720
gagcugcccg accagaagca gcugagguac accgaggagu ugcugagaca uguggccccc 780
ggcuugcacc ucgagcugag aggcccgcag cucugggcca gaagaauggg caagugcaag 840
guguacuggg aggugggcgg cccccccggc agcgcgagcc caagcacccc ggccugccug 900
cugccuagaa acugcgacac cccuaucuuc gacuucagag uauuuuucca ggagcugguc 960
gaguucaggg ccagacagcg uagaggcagc cccagauaca ccaucuaccu uggauucggc 1020
caggaccuga gcgccggcag acccaaagag aagucccugg uacuggugaa gcuagagccc 1080
uggcugugua gggugcaucu ggaaggcacc caaagagagg gcguaagcuc gcuugacagc 1140
agcagccuca gccugugccu gagcagcgcu aacagcuuau acgacgacau cgagugcuuc 1200
cugauggagc uggaacaacc cgcc 1224
<210> 220
<211> 1059
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: truncated Hu IRF7 152-503; P039 without epitope tag;
null mutation
<400> 220
augggcggcc cucccgggcc uuuccuggcc cauacacacg ccggccuaca ggcuccuggc 60
ccucugcccg ccccggccgg cgacaagggc gaccuccugc ugcaggccgu gcagcagucc 120
ugucuggccg accaccugcu gacugcuagc uggggcgccg aucccgugcc caccaaggcc 180
ccaggagagg ggcaagaggg ccugccucua accggcgcau gcgcaggugg accaggccuc 240
cccgccggcg agcuguaugg uugggccgug gagacaaccc ccagccccgg cccgcagccu 300
gcugcgcuga ccacaggcga ggccgcugcc ccugagagcc cccaccaagc ugaacccuac 360
cugagcccca gccccucugc cugcacagcg gugcaggagc ccagucccgg cgccuuggac 420
gugaccauca uguauaaggg caggacugug uuacaaaagg uagugggcca cccaaguugu 480
accuuucugu acgggccccc cgacccagcc gugcgcgcca ccgaccccca gcagguggcc 540
uuccccagcc ccgcugaguu gcccgaucag aaacaacucc gguacaccga ggaauuacuu 600
agacaugugg cucccggccu gcaucuggag cuuagagguc cacaguugug ggccagaaga 660
augggcaagu gcaagguuua uugggagguc ggaggccccc cgggcagcgc cagccccagc 720
acccccgccu gucuucugcc cagaaacugc gacaccccaa ucuucgauuu cagaguguuu 780
uuccaggaac ugguggaguu cagagcaagg caaagaagag gcagcccuag auacaccauc 840
uaccugggcu uuggccaaga ccugagcgcc ggcagaccca aggaaaaauc ccugguccug 900
gugaaacugg agcccuggcu gugcagaguc caccuggagg gcacccagag agagggcgug 960
agcagccugg acucgagcag ccugucccug ugucugagca gcgcgaauuc gcuauaugac 1020
gacaucgaau gcuuucugau ggagcuggaa cagcccgcc 1059
<210> 221
<211> 1269
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer_nt.STING(V155M)
<400> 221
augccucaca gcagccucca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccucg ugcuuuuaag cgccugcuug gugacccuuu ggggcuuggg cgagccucca 120
gagcacaccu ugagauauuu ggugcuccac cuggccagcc uucagcuggg cuuguuacuc 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc gugucugggc ugcccucuga gaagaggcgc cuugcuucuu 300
cucaguaucu acuucuacua cucccugccu aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggcacugc ucggccucag ccaggcccug aacaucuugu ugggcuugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca acauggccca cggauuggcu 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug cgcggcgcag ugagccagag acuguauauu 600
cugcugccuc uggacugcgg cgugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacagca ucuaugagcu gcucgagaau ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu auagucaagc uggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauucuggcu 900
gacgccccug agagccagaa caacugccga cugaucgccu accaggaacc agccgacgac 960
agcagcuuca gucuuucuca ggagguucuu cgccacuugc gccaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gaccuccgca gucccuagca ccagcaccau gagucaggag 1080
ccggagcuau uaaucagcgg cauggagaag ccucuuccac uccgaaccga cuucagcgcc 1140
accaacuuca gccugcugaa gcaggcaggu gacguugagg agaauccggg accuaugacc 1200
gaguacaagc uggugguugu gggcgccgac ggcgugggca agagcgcccu gaccauccag 1260
cugauccag 1269
<210> 222
<211> 1269
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer_ct.STING(V155M)
<400> 222
augaccgagu acaagcuagu agucgugggc gccgacggcg ugggcaagag cgcccucacc 60
auccagcuaa uccaggccac caacuucagc uugcucaagc aggccggcga cguggaggag 120
aacccaggcc cuaugccuca cagcagccuu cacccuagca ucccuugccc uagaggccac 180
ggcgcccaga aggccgcccu ggugcugcug agcgccugcc uggugacccu guggggccug 240
ggcgagccuc cugagcacac ccugagauau cuggugcuuc accuggccag uuuacagcug 300
ggccugcuuc uuaacggcgu gugcagccug gccgaggagc ugagacacau ccacagcaga 360
uacagaggca gcuacuggag aaccgugaga gccugccuag gcugcccucu gagaagaggc 420
gcucuguugc uacuuuccau cuacuucuac uacucccugc cuaacgccgu gggcccuccu 480
uucacuugga ugcuggcguu gcugggucug agccaggccc ugaacauccu ucucggucug 540
aagggccugg ccccugccga gaucagcgcc gugugcgaga agggcaacuu caacauggcc 600
cacggacucg ccuggagcua cuacaucggc uaccugagac ugauccugcc ugagcugcag 660
gccagaauca gaaccuacaa ccagcacuac aacaaccugc ugcggggcgc cgugagccag 720
agacuguaua uacuucuucc ucuggacugc ggcgugccug acaaccugag cauggccgac 780
ccuaacauca gauuccugga caagcugccu cagcagaccg gcgaccacgc cggcaucaag 840
gacagagugu acagcaacuc cauuuaugag cugcucgaga auggccagag agccggcacc 900
ugcgugcugg aguacgccac cccucugcag acccuguucg ccaugagcca guacagucag 960
gcuggauuca gcagagagga cagacuggag caggccaagc uguucugcag gacacuggag 1020
gacauacuag cagacgcccc ugagagccag aacaacugca gacugauugc cuaccaggag 1080
ccugcggacg acagcuccuu cagucugagu caggaggugu ugcggcacuu acgccaagaa 1140
gagaaggagg aggugaccgu gggcagccug aagacuagcg cugugccuag caccagcaca 1200
augucacagg agccggaauu gcuaaucagc ggcauggaga agccucuccc auuacguacc 1260
gacuucagc 1269
<210> 223
<211> 1419
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer^3_nt.STING(V155M)
<400> 223
augccucaca gcagccuuca cccuagcauc ccuugcccua gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccuag ugcuccuuag cgccugccuc gugacccuau ggggcuuagg cgagccucca 120
gagcacaccu ugagauaccu cguccuccac cuggcuaguc uacagcuggg ccuucuccuc 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua cagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc gugccugggc ugcccucuga gaagaggcgc acugcuguua 300
cucagcaucu acuucuacua cucacugcca aacgccgugg gcccuccuuu caccuggaug 360
cuggccuugc ucggauugag ccaggcccug aacauuuuac ugggauugaa gggccuggcc 420
ccugccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca acauggccca cggccuagcu 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugccug agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaacc agcacuacaa caaccugcug cguggagcgg ugagccagag acuguauauc 600
cuccugccuc uggacugcgg agugccugac aaccugagca uggccgaccc uaacaucaga 660
uuccuggaca agcugccuca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga cagaguguac 720
agcaacucaa ucuacgagcu guuggagaau ggccagagag ccggcaccug cgugcuggag 780
uacgccaccc cucugcagac ccuguucgcc augagccagu acucucaggc aggcuucagc 840
agagaggaca gacuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga cauccuggcg 900
gacgccccug agagccagaa caacugccgg cuuaucgccu accaggagcc agcagacgac 960
agcagcuucu cucucucaca agagguacug cgccaucuuc gccaggagga gaaggaggag 1020
gugaccgugg gcagccugaa gacauccgcc guaccuagca ccagcaccau gucucaggaa 1080
ccggaacugu ugaucagcgg cauggagaag ccucugccac ugcgcaccga cuucagcgcc 1140
accaacuucu cccuacugaa gcaagccggu gacguugaag agaacccugg cccuaugacc 1200
gaguacaagc ugguaguagu aggcgccgac ggcgugggca agagcgcccu gaccauccag 1260
cugauccaga ugacugaaua uaagcuuguc gucgugggcg cagauggcgu ugguaagagc 1320
gcacuuacaa uucaacucau ucagaugacg gaguauaagc uggugguggu cggagcugac 1380
ggcguaggca agagugcccu uacuauucag cuaauucag 1419
<210> 224
<211> 1419
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: KRAS(G12D)25mer^3_ct.STING(V155M)
<400> 224
augaccgagu acaagcuugu ggugguuggc gccgacggcg ugggcaagag cgccuuaacc 60
auccagcuua uccagaugac agaguauaag cuaguggugg ucggcgcaga cggaguggga 120
aagagugcau uaacuauuca acucauccaa augaccgaau acaagcuagu aguugugggu 180
gcagauggcg ucggcaaguc ugcacugaca auucagcuca uccaggccac caacuucagc 240
cugcugaagc aggccggcga cguggaggag aacccuggcc cuaugccuca cagcagccug 300
cacccuagca ucccuugccc uagaggccac ggcgcccaga aggccgcccu ggugcugcug 360
agcgccugcc uggugacccu guggggccug ggcgagccuc cugagcacac ccugagauac 420
cuaguuuugc accuggcuuc ucugcagcug ggccuacugc ucaacggcgu gugcagccug 480
gccgaggagc ugagacacau ccacagcaga uacagaggca gcuacuggag aaccgugaga 540
gcaugcuuag gcugcccucu gagaagaggc gcucugcucc ucuuguccau cuacuucuac 600
uacucgcuac cuaacgccgu gggcccuccu uucaccugga ugcuggcccu cuugggauua 660
agccaggccc ugaacaucuu gcugggacug aagggccugg ccccugccga gaucagcgcc 720
gugugcgaga agggcaacuu caacauggcc cacggacucg cuuggagcua cuacaucggc 780
uaccugagac ugauccugcc ugagcugcag gccagaauca gaaccuacaa ccagcacuac 840
aacaaccugc ugcggggagc agugagccag agacuguaua uucugcuccc ucuggacugc 900
ggcgugccug acaaccugag cauggccgac ccuaacauca gauuccugga caagcugccu 960
cagcagaccg gcgaccacgc cggcaucaag gacagagugu acagcaacag cauuuacgag 1020
cugcuggaga acggccagag agccggcacc ugcgugcugg aguacgccac cccucugcag 1080
acccuguucg ccaugagcca guacucccag gcaggauuca gcagagagga cagacuggag 1140
caggccaagc uguucugccg uacucuugag gacauccuug cagacgcccc ugagagccag 1200
aacaacugcc gguugauugc cuaccaggaa ccggcagacg acagcucauu cuccuugucu 1260
caggaggucc uuagacaccu gcggcaggag gagaaggagg aggugaccgu gggcagccug 1320
aagacauccg ccgugccuag cacgucuacc augucccagg agccggaacu gcuaaucagc 1380
ggcauggaga agccucugcc ucucaggacc gacuucagc 1419
<210> 225
<211> 1140
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: Hu STING (R284K) var; no epitope tag
<400> 225
augccccaua gcagccugca ccccagcauc cccugcccca gaggccacgg cgcccagaag 60
gccgcccugg uccugcugag cgcaugccug gucacccugu ggggccuggg cgagcccccc 120
gagcacaccc ugagauaccu ggugcugcac cucgccagcc ugcagcuggg ccugcugcug 180
aacggcgugu gcagccuggc cgaggagcug agacacaucc acagcagaua uagaggcagc 240
uacuggagaa ccgugagagc uugccucggc ugcccccuga gaagaggcgc ccugcugcug 300
cugagcaucu acuuuuacua cagccugccc aacgcugugg gccccccuuu cacguggaug 360
cucgcccugc ugggacugag ccaggcccug aacauccugc ugggccuuaa gggccuagcc 420
cccgccgaga ucagcgccgu gugcgagaag ggcaacuuca auguggccca cggccuggcc 480
uggagcuacu acaucggcua ccugagacug auccugcccg agcugcaggc cagaaucaga 540
accuacaauc agcacuacaa caaccugcug agaggcgccg ugagccagag acuguacauc 600
cugcugcccc uggacugcgg cgugcccgac aaccucagca uggccgaccc caacaucaga 660
uuccuggaca agcugcccca gcagaccggc gaccacgccg gcaucaagga ucgcguguac 720
agcaacagca ucuacgagcu gcuggaaaac ggccagagag ccggaaccug cgugcuggag 780
uacgccacac cccugcagac ccuguucgcc augagccagu acagccaggc cggcuucagc 840
agagaggaca agcuggagca ggccaagcug uucugcagaa cccuggagga uauccucgcc 900
gacgcccccg agagccagaa caacugcagg cugaucgcgu accaggagcc cgcugacgac 960
agcagcuuua gccugagcca ggaggugcug agacaucugc gucaagagga aaaggaggag 1020
gugaccgugg gcucccugaa gaccagcgcc gugcccagca ccagcaccau gagccaggag 1080
cccgagcugc ugaucagcgg cauggagaag ccacugcccc ucagaaccga cuucagcacc 1140
<210> 226
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: EBV BRLF1 peptide
<400> 226
Ala Thr Ile Gly Thr Ala Met Tyr Lys
1 5
<210> 227
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: FLU peptide
<400> 227
Ser Ile Ile Pro Ser Gly Pro Leu Lys
1 5
<210> 228
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: HIV NEF peptide
<400> 228
Ala Val Asp Leu Ser His Phe Leu Lys
1 5
<210> 229
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: EBV peptide
<400> 229
Ala Val Phe Asp Arg Lys Ser Asp Ala Lys
1 5 10
<210> 230
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: HBV core antigen peptide
<400> 230
Tyr Val Asn Val Asn Met Gly Leu Lys
1 5
<210> 231
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: HC peptide
<400> 231
Arg Val Cys Glu Lys Met Ala Leu Tyr
1 5
<210> 232
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic: CMV peptide
<400> 232
Lys Leu Gly Gly Ala Leu Gln Ala Lys
1 5
Claims (189)
- 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물:
활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA, 그리고 선택적으로
대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA, 이 때 면역 반응은 다음을 특징으로 하는 세포성 또는 체액성 면역 반응을 포함함:
(i) I형 인터페론 경로 신호전달을 자극;
(ii) NFkB 경로 신호전달을 자극;
(iii) 염증 반응을 자극;
(iv) 사이토카인 생성을 자극;
(v) 수지상 세포 발달, 활성 또는 이동을 자극; 그리고
(vi) (i)-(v)의 임의의 조합; 그리고
제약학적으로 허용가능한 담체. - 청구항 1에 있어서, 대상체에서 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드에 대한 면역 반응을 개선하는 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 1 또는 2에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 KRAS 돌연변이임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 3에 있어서, KRAS 돌연변이는 G12 돌연변이임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 4에 있어서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, 및 G12R KRAS 돌연변이에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 4에 있어서, G12 KRAS 돌연변이는 G12D, G12V, 및 G12C KRAS 돌연변이에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 3-6 중 어느 한 항에 있어서, KRAS 돌연변이는 G13 돌연변이임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 7에 있어서, G13 KRAS 돌연변이는 G13D KRAS 돌연변이임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 1 또는 2에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이는 H-RAS 또는 N-RAS 돌연변이임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 1-9 중 어느 한 항에 있어서, mRNA는 둘 이상의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 가짐을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 10에 있어서, 연쇄체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 10에 있어서, 연쇄체는 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 12에 있어서, 연쇄체는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 1-9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 1, 2, 3, 또는 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개의 mRNA들을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 14에 있어서, 상기 조성물은 4개의 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 16에 있어서, 상기 4개의 mRNA는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 인코드함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 1-16 중 어느 한 항에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 10-30, 15-25, 또는 20-25개 아미노산 길이를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 17에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 18에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물:
KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 1 mRNA, 및, 선택적으로, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 2 mRNA, 그리고 선택적으로 이 때 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 질량비로 존재하고; 그리고
제약학적으로 허용가능한 담체. - 청구항 20에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 mRNA를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 21에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 V147L, N154S, V155M, R284M, R284K, R284T, E315Q, R375A, 및 이의 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 돌연변이들을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 22에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 22에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V147L/N154S/V155M을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 22에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 R284M/V147L/N154S/V155M을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 21에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1-10 및 164 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 21-26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 21에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 21에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 20-29 중 어느 한 항에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12S, G12C, G12A, G12R, 및 G13D에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 30에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 20-31 중 어느 한 항에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 10-30, 15-25, 또는 20-25개 아미노산 길이, 바람직하게는 25개 아미노산 길이를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 32에 있어서, 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 20-33 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 1, 2, 3, 또는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개의 mRNA들을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 34에 있어서, 상기 조성물은 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 35에 있어서, 상기 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 36에 있어서, 제 1, 제 2, 제 3, 제 4 및 제 5 mRNA를 포함하고, 이 때
제 1 mRNA는 G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 2 mRNA는 G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 3 mRNA는 G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 4 mRNA는 G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고; 및
제 5 mRNA는 항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 포함하고, 선택적으로
이 때 상기 제 1, 제 2, 제 3, 제 4 및 제 5 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물. - 청구항 37에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 36-41, 72 및 125에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 38에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 39에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128 및 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 20-33 중 어느 한 항에 있어서, mRNA는 둘 이상의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 41에 있어서, 연쇄체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 42에 있어서, 연쇄체는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 43에 있어서, 연쇄체는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 44에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 44에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 44에 있어서, 연쇄체는 서열번호: 42-47, 73 및 137에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 47에 있어서, 상기 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 129-131, 133 및 138에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 20에 있어서, 상기 제 1 mRNA는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고, 이 때 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하고, 제 2 mRNA는 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고, 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 49에 있어서, 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 비율로 존재함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 49-50 중 어느 한 항에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 51에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 49-52 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 49-53 중 어느 한 항에 있어서, 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 54에 있어서, 4개 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 1-55 중 어느 한 항에 있어서, 각 mRNA는 최소한 하나의 화학적 변형을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 56에 있어서, 상기 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4'-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2'-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 56에 있어서, 상기 화학적 변형은 수도우리딘 또는 수도우리딘 유사체로 구성된 그룹에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 56에 있어서, 상기 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 1-59 중 어느 한 항에 있어서, 각 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화되는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 20-59 중 어느 한 항에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mNRA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 각 mRNA는 동일 또는 상이한 지질 나노입자에 제제화됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 61에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mNRA는 동일한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 각 mRNA는 상이한 지질 나노입자에 제제화됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 61에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 동일한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 mRNA는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA와 동일한 지질 나노입자에 제제화됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 61에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA는 상이한 지질 나노입자에 제제화되고 항시적 활성 인간 STING를 인코드하는 각 mRNA는 각각의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 각 mRNA와 동일한 지질 나노입자에 제제화됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 60-64 중 어느 한 항에 있어서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 65에 있어서, 이온화가능한 아미노 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택됨을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 65에 있어서, 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물들을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 67에 있어서, 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I)의 화합물을 포함함을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 청구항 68에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물 25임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물.
- 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 다음으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제 1 mRNA:
(a) G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(b) G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(c) G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(d) G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(e) 2, 3, 또는 4개 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA, 이 때 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 그리고
(f) (a)-(d)에 제시된 mRNA들의 임의의 조합; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 2 mRNA, 선택적으로
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함. - 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 (a)-(d)에 제시된 mRNA들의 조합을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 2개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 3개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 제 1 mRNA는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-78 중 어느 한 항에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개 아미노산 길이를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 79에 있어서, 각 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 25개 아미노산 길이를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-75 중 어느 한 항에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39, 40, 72, 및 41에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-75 중 어느 한 항에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126, 127, 128, 및 132에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 78에 있어서, 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 78에 있어서, 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 78에 있어서, 상기 연쇄체는 서열번호: 137에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 78에 있어서, 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 169에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-86 중 어느 한 항에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 87에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 87에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 87-89 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 90에 있어서, miR-122 마이크로RNA 결합 부위는 서열번호: 175에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및/또는 제 2 mRNA는 서열번호: 176에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 5' UTR을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 92에 있어서, 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA 각각은 폴리 A 꼬리를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 83에 있어서, 폴리 A 꼬리는 약 100개의 뉴클레오티드를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 92-94 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은5' 캡 1 구조를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70에 있어서, 다음을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA; 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA. - 청구항 70-96 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA 각각은 최소한 하나의 화학적 변형을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 97에 있어서, 상기 화학적 변형은 수도우리딘, N1-메틸수도우리딘, 2-싸이오우리딘, 4'-싸이오우리딘, 5-메틸시토신, 2-싸이오-1-메틸-1-데아자-수도우리딘, 2-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 2-싸이오-5-아자-우리딘, 2-싸이오-다이하이드로수도우리딘, 2-싸이오-다이하이드로우리딘, 2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-2-싸이오-수도우리딘, 4-메톡시-수도우리딘, 4-싸이오-1-메틸-수도우리딘, 4-싸이오-수도우리딘, 5-아자-우리딘, 다이하이드로수도우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메틸우리딘, 5-메톡시우리딘, 및 2'-O-메틸 우리딘으로 구성된 그룹에서 선택됨을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 97에 있어서, 상기 화학적 변형은 수도우리딘 또는 수도우리딘 유사체로 구성된 그룹에서 선택됨을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 97에 있어서, 상기 화학적 변형은 N1-메틸수도우리딘임을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 97에 있어서, 상기 제 1 및/또는 제 2 mRNA는 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형됨을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-101 중 어느 한 항에 있어서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 102에 있어서, 이온화가능한 아미노 지질은, 예를 들면, 2,2-다이리놀레일-4-다이메틸아미노에틸-[1,3]-다이옥솔레인 (DLin-KC2-DMA), 다이리놀레일-메틸-4-다이메틸아미노뷰티레이트 (DLin-MC3-DMA), 및 다이((Z)-논-2-엔-1-일) 9-((4-(다이메틸아미노)뷰타노일)옥시)헵타데케인다이오에이트 (L319)로 구성된 그룹에서 선택됨을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 102에 있어서, 상기 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I), (IA), (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), 및 (IIe) 중 어느 하나의 화합물을 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 104에 있어서, 상기 이온화가능한 아미노 지질은 화학식 (I)의 화합물임을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 105에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물 25임을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-101 중 어느 한 항에 있어서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 1:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 2:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 3:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 4:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 5:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 6:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 7:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 8:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 9:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-107 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 10:1의 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 다음을 포함하는 지질 나노입자:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA; 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA,
이 때 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 각각 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되고, 그리고
상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 질량비로 존재함. - 청구항 118에 있어서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 및 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함함을 특징으로 하는 지질 나노입자.
- 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 및 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
- 청구항 120에 있어서, 제약학적으로 허용가능한 담체는 완충 용액을 포함함을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
- 청구항 120-121 중 어느 한 항에 있어서, 근육내 전달을 위해 제제화되는 제약학적 조성물.
- 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연함에 사용하기 위한, 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 및 선택적으로 제약학적으로 허용되는 담체, 또는 청구항 120-122 중 어느 한 항의 제약학적 조성물로서, 상기 치료는 제 2 조성물과 조합한, 상기 지질 나노입자 또는 조성물의 투여를 포함하고, 이 때 상기 제 2 조성물은 면역관문 억제제 폴리펩티드, 및 선택적인 제약학적으로 허용되는 담체를 포함함.
- 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연시키기 위한 약제의 제조에 있어서의, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체의 용도로서, 이 때 약제는 지질 나노입자 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하고 치료는 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합한 약제의 투여를 포함함.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 및 선택적인 제약학적으로 허용되는 담체, 또는 청구항 120-122 중 어느 한 항의 제약학적 조성물을 포함하는 용기, 및 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연시키기 위한, 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물의 투여 지침을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
- 청구항 125에 있어서, 패키지 삽입물은 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한, 면역관문 억제제 폴리펩티드 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 지질 나노입자 또는 제약학적 조성물을 조합으로 투여하기 위한 지침들을 추가로 포함하는 키트.
- 개체에서 암을 치료 또는 암 진행을 지연시키기 위한, 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제, 또는 청구항 120-122 중 어느 한 항의 제약학적 조성물, 및 상기 약제를 단독으로, 또는 면역관문 억제제 폴리펩티드, 및 선택적인 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물과 조합하여 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 키트.
- 청구항 127에 있어서, 키트는 제 1 약제를 개체에서 암을 치료 또는 암의 진행을 지연하기 위한 제 2 약제 이전에, 이와 동시에 또는 이에 후속하여 투여하기 위한 지침들을 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함하는 키트.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 청구항 120-122 중 어느 한 항의 조성물, 청구항 123-124 중 어느 한 항의 용도, 또는 청구항 125-128 중 어느 한 항의 키트에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제하는 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 청구항 120-122 중 어느 한 항의 조성물, 청구항 123-124 중 어느 한 항의 용도, 또는 청구항 125-128 중 어느 한 항의 키트에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체인 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 청구항 120-122 중 어느 한 항의 조성물, 청구항 123-124 중 어느 한 항의 용도, 또는 청구항 125-128 중 어느 한 항의 키트에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체임을 특징으로 하는 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 청구항 120-122 중 어느 한 항의 조성물, 청구항 123-124 중 어느 한 항의 용도, 또는 청구항 125-128 중 어느 한 항의 키트에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두르발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체인 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 청구항 120-122 중 어느 한 항의 조성물, 청구항 123-124 중 어느 한 항의 용도, 또는 청구항 125-128 중 어느 한 항의 키트에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체인 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 청구항 120-122 중 어느 한 항의 조성물, 청구항 123-124 중 어느 한 항의 용도, 또는 청구항 125-128 중 어느 한 항의 키트에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체인 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자, 조성물, 용도 또는 키트.
- 청구항 1-69 중 어느 한 항의 면역조절 치료 조성물, 청구항 70-119 중 어느 한 항의 지질 나노입자, 또는 청구항 120-122 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 종양 크기 감소 또는 축소 방법, 종양 성장 억제 방법, 또는 필요로 하는 대상체에서 항-종양 반응 유도 방법.
- 청구항 135에 있어서, 상기 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자 또는 조성물은 암 치료제와 조합하여 투여되는 방법.
- 청구항 136에 있어서, 면역조절 치료 조성물, 지질 나노입자 또는 조성물은 억제성 면역관문 폴리펩티드 또는 이를 인코드하는 폴리뉴클레오티드와 조합하여 투여되는 방법.
- 청구항 137에 있어서, 상기 억제성 면역관문 폴리펩티드는 PD-1, PD-L1, TIM-3, VISTA, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, CTLA-4, IDO, KIR 및 LAG3로 구성된 그룹에서 선택된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편인 방법.
- 청구항 135-138 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 이자, 복막, 대장, 소장, 담관, 폐, 자궁내막, 난소, 생식관, 위장관, 자궁경부, 위, 요로, 결장, 직장, 및 조혈 및 림프 조직의 암에서 선택되는 방법.
- 다음을 포함하는 면역조절 치료 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기 감소 또는 축소, 종양 성장 억제 또는 항-종양 반응 유도 방법
: KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 1 mRNA, 및, 선택적으로, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 2 mRNA, 그리고 선택적으로 이 때 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 질량비로 존재하고; 그리고
제약학적으로 허용가능한 담체,
이 방법에 의해 대상체에서 종양 크기가 감소 또는 축소, 종양 성장이 억제 또는 항-종양 반응이 유도됨. - 청구항 140에 있어서, 상기 조성물은 1, 2, 3, 또는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 1, 2, 3, 또는 4개의 mRNA들을 포함하는 방법.
- 청구항 141에 있어서, 상기 조성물은 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 4개의 mRNA를 포함하는 방법.
- 청구항 142에 있어서, 상기 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하는 방법.
- 청구항 140에 있어서, 제 1, 제 2, 제 3, 제 4 및 제 5 mRNA를 포함하고, 이 때
제 1 mRNA는 G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 2 mRNA는 G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 3 mRNA는 G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고;
제 4 mRNA는 G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고; 및
제 5 mRNA는 항시 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독 프레임을 포함하고,
이 때 상기 제 1, 제 2, 제 3, 제 4 및 제 5 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함을 특징으로 하는 방법. - 청구항 144에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 144에 있어서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128 및 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140에 있어서, 상기 mRNA는 둘 이상의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 방법.
- 청구항 147에 있어서, 연쇄체는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하는 방법.
- 청구항 148에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하는 방법.
- 청구항 148에 있어서, 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12C, G13D, G12V, 및 G12D를 포함하는 방법.
- 청구항 148에 있어서, 연쇄체는 서열번호: 42-47, 73 및 137에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 148에 있어서, 상기 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 129-131, 133 및 138에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 140-152 중 어느 한 항에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하는 방법.
- 청구항 153에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 154에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 153-155 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 방법.
- 다음을 포함하는 지질 나노입자를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 종양 크기 감소 또는 축소, 종양 성장 억제 또는 항-종양 반응 유도 방법:
(i) 다음으로 구성된 그룹에서 선택된 하나 이상의 제 1 mRNA:
(a) G12D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(b) G12V를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(c) G12C를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(d) G13D를 포함하는 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA;
(e) 2, 3, 또는 4개 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 mRNA, 이 때 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 G12D, G12V, G12C, 및 G13D를 포함하고; 그리고
(f) (a)-(d)에 제시된 mRNA들의 임의의 조합; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 각각 포함하는 하나 이상의 제 2 mRNA, 선택적으로
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재하며,
이 방법에 의해 대상체에서 종양 크기가 감소 또는 축소, 종양 성장이 억제 또는 항-종양 반응이 유도됨.
- 청구항 157에 있어서, 상기 지질 나노입자는 다음을 포함하는 방법:
(i) (a)-(d)에 제시된 mRNA들의 조합; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함.
- 청구항 158에 있어서, KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드는 서열번호: 39-41 및 72에 제시된 아미노산 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 159에 있어서, 상기 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 126-128 및 132에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 157에 있어서, 상기 지질 나노입자는 다음을 포함하는 방법:
(i) 제 1 mRNA는 4개의 KRAS 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드의 연쇄체를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하고, 이 때 상기 연쇄체는 N-에서 C- 말단으로 G12D, G12V, G13D, 및 G12C를 포함하고; 그리고
(ii) 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 개방 해독틀을 포함하는 제 2 mRNA, 이 때 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 돌연변이 V155M을 포함하고,
이 때 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1로 구성된 그룹에서 선택된 KRAS:STING 질량비로 존재함.
- 청구항 161에 있어서, 연쇄체는 서열번호: 42-47, 73 및 137에 제시된 그룹에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 161에 있어서, 상기 연쇄체를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 129-131, 133 및 138에 제시된 그룹에서 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 157-163 중 어느 한 항에 있어서, 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드는 서열번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 164에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 서열번호: 170에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 방법.
- 청구항 164-165 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항시적 활성 인간 STING 폴리펩티드를 인코드하는 mRNA는 최소한 하나의 miR-122 마이크로RNA 결합 부위를 포함하는 3' UTR을 포함하는 방법.
- 청구항 157에 있어서, 상기 지질 나노입자는 다음을 포함하는 방법:
(i) 서열번호: 167에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 1 mRNA; 및
(ii) 서열번호: 168에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하는 제 2 mRNA,
이 때 상기 제 1 및 제 2 mRNA는 각각 N1-메틸수도우리딘으로 완전히 변형되고, 그리고 상기 제 1 mRNA 및 제 2 mRNA는 5:1의 질량비로 존재함. - 청구항 157-167 중 어느 한 항에 있어서, 지질 나노입자는 약 20-60% 이온화가능한 아미노 지질: 5-25% 인지질: 25-55% 스테롤; 및 0.5-15% PEG-변형된 지질의 몰비를 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 168에 있어서, 지질 나노입자는 약 50% 화합물 25: 약 10% DSPC: 약 38.5% 콜레스테롤: 및 약 1.5% PEG-DMG의 몰비를 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 169에 있어서, 상기 지질 나노입자 또는 조성물은 근육내 주사로 투여됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-170 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-종양 반응은 T-세포 반응을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 171에 있어서, 상기 T-세포 반응은 CD8+ T 세포들을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-172 중 어느 한 항에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드 또는 이를 인코드하는 폴리뉴클레오티드, 및 선택적으로 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 제 2 조성물을 투여하는 것을 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 173에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 PD1, PD-L1, CTLA4, 또는 이의 조합을 억제함을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 174에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 항체임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 175에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 CTLA4에 특이적으로 결합하는 항-CTLA4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD1에 특이적으로 결합하는 항-PD1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, PD-L1에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 이의 조합에서 선택된 항체임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 176에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 또는 두발루맙에서 선택된 항-PD-L1 항체임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 176에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙에서 선택된 항-CTLA-4 항체임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 176에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에서 선택된 항-PD1 항체임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 173-179 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 정맥내 주사로 투여됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 180에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2 내지 3주 마다 1회 투여됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 180에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 2주 마다 1회 또는 3주 마다 1회 투여됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 173-179 중 어느 한 항에 있어서, 면역관문 억제제 폴리펩티드를 포함하는 조성물은 상기 지질 나노입자 또는 조성물의 투여 이전에, 이와 동시에, 또는 이에 후속하여 투여됨을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-183 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 G12D, G12V, G13D 또는 G12C에서 선택된 조직학적으로 확인된 KRAS 돌연변이를 가짐을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-184 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 HLA-A11 및/또는 HLA-C*08에서 선택된 조직학적으로 확인된 HLA 아형을 가짐을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-185 중 어느 한 항에 있어서, 종양은 전이성 결장직장암임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-185 중 어느 한 항에 있어서, 종양은 비소세포 폐암 (NSCLC)임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-185 중 어느 한 항에 있어서, 종양은 이자암임을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 140-188 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 나노입자 또는 조성물의 투여 이전에, 이와 동시에, 또는 이에 후속하여 대상체에게 화학치료제가 투여됨을 특징으로 하는 방법.
Applications Claiming Priority (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762453465P | 2017-02-01 | 2017-02-01 | |
| US62/453,465 | 2017-02-01 | ||
| US201762467063P | 2017-03-03 | 2017-03-03 | |
| US62/467,063 | 2017-03-03 | ||
| US201762490523P | 2017-04-26 | 2017-04-26 | |
| US62/490,523 | 2017-04-26 | ||
| US201762541571P | 2017-08-04 | 2017-08-04 | |
| US62/541,571 | 2017-08-04 | ||
| PCT/US2018/016510 WO2018144775A1 (en) | 2017-02-01 | 2018-02-01 | Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20190110612A true KR20190110612A (ko) | 2019-09-30 |
Family
ID=61244714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020197025725A KR20190110612A (ko) | 2017-02-01 | 2018-02-01 | 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 면역조절 치료 mrna 조성물 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20190351039A1 (ko) |
| JP (2) | JP2020514321A (ko) |
| KR (1) | KR20190110612A (ko) |
| CN (2) | CN110430894A (ko) |
| AU (1) | AU2018214556A1 (ko) |
| BR (1) | BR112019015797A2 (ko) |
| CA (1) | CA3051252A1 (ko) |
| CL (1) | CL2019002134A1 (ko) |
| CO (1) | CO2019009234A2 (ko) |
| IL (1) | IL268361A (ko) |
| MX (2) | MX2019009070A (ko) |
| SG (1) | SG11201906969PA (ko) |
| WO (1) | WO2018144775A1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210092493A (ko) * | 2020-01-16 | 2021-07-26 | 아주대학교산학협력단 | 미토콘드리아 타겟팅용 펩타이드 |
Families Citing this family (62)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11364292B2 (en) | 2015-07-21 | 2022-06-21 | Modernatx, Inc. | CHIKV RNA vaccines |
| WO2017031232A1 (en) | 2015-08-17 | 2017-02-23 | Modernatx, Inc. | Methods for preparing particles and related compositions |
| JP6921833B2 (ja) | 2015-10-22 | 2021-08-18 | モデルナティーエックス， インコーポレイテッド | ヒトサイトメガロウイルスワクチン |
| JP6925688B2 (ja) | 2015-10-22 | 2021-08-25 | モデルナティーエックス， インコーポレイテッド | 水痘帯状疱疹ウイルス（ｖｚｖ）のための核酸ワクチン |
| WO2017070624A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | Modernatx, Inc. | Tropical disease vaccines |
| DK3718565T3 (da) | 2015-10-22 | 2022-06-20 | Modernatx Inc | Vacciner mod respiratorisk virus |
| SI3386484T1 (sl) | 2015-12-10 | 2022-06-30 | Modernatx, Inc. | Sestave in metode za dovajanje terapevtskih sredstev |
| SG11201901941YA (en) | 2016-09-14 | 2019-04-29 | Modernatx Inc | High purity rna compositions and methods for preparation thereof |
| JP6980780B2 (ja) | 2016-10-21 | 2021-12-15 | モデルナティーエックス， インコーポレイテッド | ヒトサイトメガロウイルスワクチン |
| US10925958B2 (en) | 2016-11-11 | 2021-02-23 | Modernatx, Inc. | Influenza vaccine |
| US11103578B2 (en) | 2016-12-08 | 2021-08-31 | Modernatx, Inc. | Respiratory virus nucleic acid vaccines |
| US11384352B2 (en) | 2016-12-13 | 2022-07-12 | Modernatx, Inc. | RNA affinity purification |
| CN110430894A (zh) | 2017-02-01 | 2019-11-08 | 莫得纳特斯公司 | 编码活化致癌基因突变肽的免疫调节治疗性mrna组合物 |
| EP3609534A4 (en) | 2017-03-15 | 2021-01-13 | ModernaTX, Inc. | BROAD SPECTRUM VACCINE AGAINST THE INFLUENZA VIRUS |
| WO2018170260A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Respiratory syncytial virus vaccine |
| WO2018170256A1 (en) * | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Herpes simplex virus vaccine |
| WO2018170270A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Varicella zoster virus (vzv) vaccine |
| WO2018170347A1 (en) | 2017-03-17 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Zoonotic disease rna vaccines |
| US11905525B2 (en) | 2017-04-05 | 2024-02-20 | Modernatx, Inc. | Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins |
| EP3638215A4 (en) | 2017-06-15 | 2021-03-24 | Modernatx, Inc. | RNA FORMULATIONS |
| MA49913A (fr) | 2017-08-18 | 2021-05-05 | Modernatx Inc | Variants d'arn polymérase |
| WO2019036685A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Modernatx, Inc. | METHODS FOR HPLC ANALYSIS |
| WO2019036683A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Modernatx, Inc. | ANALYTICAL METHODS BY HPLC |
| AU2018326799A1 (en) | 2017-08-31 | 2020-02-27 | Modernatx, Inc. | Methods of making lipid nanoparticles |
| EP3681514A4 (en) | 2017-09-14 | 2021-07-14 | ModernaTX, Inc. | RNA VACZINE AGAINST ZIKA VIRUS |
| MA54676A (fr) | 2018-01-29 | 2021-11-17 | Modernatx Inc | Vaccins à base d'arn contre le vrs |
| CA3089117A1 (en) * | 2018-01-30 | 2019-08-08 | Modernatx, Inc. | Compositions and methods for delivery of agents to immune cells |
| MX2020013236A (es) | 2018-06-06 | 2021-02-22 | Massachusetts Inst Technology | Acido ribonucleico (arn) circular para traduccion en celulas eucariotas. |
| JP7411258B2 (ja) * | 2018-09-18 | 2024-01-11 | ユニベルシテイト ゲント | 治療用ナノ粒子およびその使用方法 |
| TW202039534A (zh) * | 2018-12-14 | 2020-11-01 | 美商美國禮來大藥廠 | KRAS變體mRNA分子 |
| US11851694B1 (en) | 2019-02-20 | 2023-12-26 | Modernatx, Inc. | High fidelity in vitro transcription |
| BR112021023411A2 (pt) | 2019-05-22 | 2022-02-01 | Massachusetts Inst Technology | Composições e métodos de rna circular |
| JP2022552286A (ja) * | 2019-10-09 | 2022-12-15 | トランスレイト バイオ， インコーポレイテッド | メッセンジャーｒｎａの組成物、方法および使用 |
| CA3160839A1 (en) * | 2019-11-15 | 2022-05-09 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Nucleic acid lipid particle vaccine encapsulating hpv mrna |
| MX2022006854A (es) | 2019-12-04 | 2022-11-30 | Orna Therapeutics Inc | Composiciones y metodos de arn circular. |
| US20230130155A1 (en) * | 2020-01-30 | 2023-04-27 | Modernatx, Inc. | Mrnas encoding metabolic reprogramming polypeptides and uses thereof |
| CN111440825A (zh) * | 2020-04-07 | 2020-07-24 | 嘉晨西海(杭州)生物技术有限公司 | 一种脂质体载mRNA的方法 |
| WO2021204179A1 (en) * | 2020-04-09 | 2021-10-14 | Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. | Nucleic acid vaccines for coronavirus |
| IL297193A (en) * | 2020-04-09 | 2022-12-01 | Verve Therapeutics Inc | Basic editing of pcks9 and methods of using it to treat diseases |
| JP2021185136A (ja) | 2020-04-22 | 2021-12-09 | ビオエンテッヒ・アールエヌエイ・ファーマシューティカルズ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | コロナウイルスワクチン |
| KR20240029786A (ko) * | 2020-04-24 | 2024-03-06 | 주식회사 제넥신 | 자궁경부암 치료방법 |
| CA3178965A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Christian COBAUGH | Messenger rna encoding cas9 for use in genome-editing systems |
| US11406703B2 (en) | 2020-08-25 | 2022-08-09 | Modernatx, Inc. | Human cytomegalovirus vaccine |
| JP2023546133A (ja) * | 2020-10-14 | 2023-11-01 | アールエヌエーイミューン、インコーポレイテッド | 汎ＲＡＳ ｍＲＮＡがんワクチン |
| JP2023549592A (ja) | 2020-10-20 | 2023-11-28 | エスティー ファーム カンパニー リミテッド | ５’－キャッピングされたｒｎａ合成用オリゴヌクレオチド |
| US11421015B2 (en) | 2020-12-07 | 2022-08-23 | Think Therapeutics, Inc. | Method of compact peptide vaccines using residue optimization |
| US11058751B1 (en) * | 2020-11-20 | 2021-07-13 | Think Therapeutics, Inc. | Compositions for optimized RAS peptide vaccines |
| JP2024508725A (ja) * | 2021-02-10 | 2024-02-28 | 上海吉倍生物技術有限公司 | Ｒａｓ ｇ１３ｄ変異体のエピトープペプチド及びｒａｓ ｇ１３ｄ変異体を認識するｔ細胞受容体 |
| CA3212877A1 (en) * | 2021-03-26 | 2022-09-29 | Sunil Sharma | Methods and compounds for neoantigen vaccines |
| US11464842B1 (en) | 2021-04-28 | 2022-10-11 | Think Therapeutics, Inc. | Compositions and method for optimized peptide vaccines using residue optimization |
| WO2022240960A1 (en) | 2021-05-14 | 2022-11-17 | Crispr Therapeutics Ag | Mrna large scale synthesis and purification |
| CN113264842B (zh) * | 2021-07-21 | 2022-03-01 | 苏州科锐迈德生物医药科技有限公司 | 一种脂质化合物及包含其的脂质载体、核酸脂质纳米粒组合物和药物制剂 |
| CN115703713A (zh) * | 2021-08-13 | 2023-02-17 | 广州谷森制药有限公司 | 一种新型阳离子脂质化合物 |
| WO2023044343A1 (en) * | 2021-09-14 | 2023-03-23 | Renagade Therapeutics Management Inc. | Acyclic lipids and methods of use thereof |
| WO2023122234A2 (en) * | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Cells expressing fas ligand and cflip polypeptides and uses thereof |
| WO2023125974A1 (zh) * | 2021-12-31 | 2023-07-06 | 广州国家实验室 | mRNA疫苗 |
| WO2023139257A1 (en) * | 2022-01-21 | 2023-07-27 | T-Knife Gmbh | Antigen recognizing construct that binds specific peptide with determinable affinity and t cell receptor having antigenic specificity for kras as well as corresponding nucleic acid sequence, vector, host cell, pharmaceutical composition and kit |
| US20240033336A1 (en) * | 2022-03-16 | 2024-02-01 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Tumor antigens, compounds comprising the tumor antigens and uses thereof |
| CN115521220B (zh) * | 2022-05-19 | 2023-06-09 | 仁景(苏州)生物科技有限公司 | 长链烷基酯胺类化合物及其制备方法和在核酸递送方面的应用 |
| CN115286674A (zh) * | 2022-06-13 | 2022-11-04 | 湖北英纳氏生物科技有限公司 | 一种阳离子脂质体及其制备方法 |
| WO2024002985A1 (en) | 2022-06-26 | 2024-01-04 | BioNTech SE | Coronavirus vaccine |
| CN115869332A (zh) * | 2022-10-27 | 2023-03-31 | 北京新合睿恩生物医疗科技有限公司 | 递送至体内后在肝脏少表达的mRNA药物及其制备方法 |
Family Cites Families (149)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8613481D0 (en) | 1986-06-04 | 1986-07-09 | Diatech Ltd | Translation of mrna |
| US6867195B1 (en) | 1989-03-21 | 2005-03-15 | Vical Incorporated | Lipid-mediated polynucleotide administration to reduce likelihood of subject's becoming infected |
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| US5013556A (en) | 1989-10-20 | 1991-05-07 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
| GB9103974D0 (en) | 1991-02-26 | 1991-04-10 | Norsk Hydro As | Therapeutically useful peptides or peptide fragments |
| AU692196B2 (en) | 1993-11-26 | 1998-06-04 | British Technology Group Limited | Translational enhancer DNA |
| WO1996010585A1 (en) | 1994-09-30 | 1996-04-11 | Inex Pharmaceuticals Corp. | Glycosylated protein-liposome conjugates and methods for their preparation |
| US5824497A (en) | 1995-02-10 | 1998-10-20 | Mcmaster University | High efficiency translation of mRNA molecules |
| US6503503B1 (en) | 1997-05-13 | 2003-01-07 | Duke University | Allogeneic cellular vaccine |
| US6080725A (en) | 1997-05-20 | 2000-06-27 | Galenica Pharmaceuticals, Inc. | Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof |
| GB2328689A (en) | 1997-08-27 | 1999-03-03 | Norsk Hydro As | Peptides based on the p21 ras proto-oncogene protein for the treatment of cancer |
| US20060009633A9 (en) | 1997-11-13 | 2006-01-12 | Genset, S.A. | Complementary DNAs encoding proteins with signal peptides |
| NO309798B1 (no) | 1999-04-30 | 2001-04-02 | Targovax As | Peptidblanding, samt farmasoytisk sammensetning og kreftvaksine som innbefatter peptidblandingen |
| EP1832603B1 (de) | 2001-06-05 | 2010-02-03 | CureVac GmbH | Stabilisierte mRNA mit erhöhtem G/C-Gehalt, enkodierend für ein bakterielles Antigen sowie deren Verwendung |
| EP2428569B1 (en) | 2001-09-28 | 2018-05-23 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Microrna molecules |
| AU2002349784A1 (en) | 2001-12-03 | 2003-06-17 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Nf-kappab activating genes |
| US20050222064A1 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-06 | Sirna Therapeutics, Inc. | Polycationic compositions for cellular delivery of polynucleotides |
| GB0221574D0 (en) | 2002-09-17 | 2002-10-23 | Isis Innovation | Treatments |
| CA2510238A1 (en) | 2002-10-22 | 2004-05-06 | Sanofi Pasteur Limited | Cancer treatment using vaccine and high-dose cytokine |
| US20070185017A1 (en) | 2002-10-29 | 2007-08-09 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| US8343502B2 (en) | 2002-12-16 | 2013-01-01 | Globeimmune, Inc. | Yeast-based vaccines as immunotherapy |
| KR101164509B1 (ko) | 2002-12-16 | 2012-07-10 | 글로브이뮨 | 면역 요법으로서의 효모계 백신 |
| US7683036B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-03-23 | Regulus Therapeutics Inc. | Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs |
| US7404969B2 (en) | 2005-02-14 | 2008-07-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules |
| PL2578685T3 (pl) | 2005-08-23 | 2020-01-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Rna zawierający zmodyfikowane nukleozydy i sposoby jego zastosowania |
| US7670840B2 (en) | 2006-01-05 | 2010-03-02 | The Ohio State University Research Foundation | Micro-RNA expression abnormalities of pancreatic, endocrine and acinar tumors |
| EP2505669A3 (en) | 2006-01-05 | 2013-02-13 | The Ohio State University Research Foundation | MicroRNA-based methods for the diagnosis of colon, pancreatic, prostate, and stomach cancer |
| US20100286232A1 (en) | 2006-03-02 | 2010-11-11 | The Ohio State University | Microrna expression profile associated with pancreatic cancer |
| WO2007133835A2 (en) * | 2006-03-27 | 2007-11-22 | Globeimmune, Inc. | Ras mutation and compositions and mehods related thereto |
| EP2115138A2 (en) | 2006-09-19 | 2009-11-11 | Asuragen, Inc. | Micrornas differentially expressed in pancreatic diseases and uses thereof |
| EP2087135B8 (en) | 2006-11-01 | 2013-07-24 | The Ohio State University Research Foundation | Microrna expression signature for predicting survival and metastases in hepatocellular carcinoma |
| WO2008073915A2 (en) | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | Micrornas differentially expressed in leukemia and uses thereof |
| US8415096B2 (en) | 2007-05-23 | 2013-04-09 | University Of South Florida | Micro-RNAs modulating immunity and inflammation |
| US20090099034A1 (en) | 2007-06-07 | 2009-04-16 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Reagents and Methods for miRNA Expression Analysis and Identification of Cancer Biomarkers |
| CA2693707A1 (en) | 2007-07-13 | 2009-03-05 | The Johns Hopkins University | B7-dc variants |
| EP2660248B1 (en) | 2007-07-27 | 2015-06-10 | Immatics Biotechnologies GmbH | Novel immunotherapy against brain tumors |
| ES2573458T3 (es) | 2007-09-14 | 2016-06-08 | Vrije Universiteit Brussel | Mejoramiento de la capacidad estimulatoria de las células T de las células que presentan antígeno humano y su uso en vacunación |
| WO2009046738A1 (en) * | 2007-10-09 | 2009-04-16 | Curevac Gmbh | Composition for treating lung cancer, particularly of non-small lung cancers (nsclc) |
| CA2707157A1 (en) | 2007-11-30 | 2009-06-04 | The Ohio State University Research Foundation | Microrna expression profiling and targeting in peripheral blood in lung cancer |
| US20110165223A1 (en) | 2008-01-02 | 2011-07-07 | The Johns Hopkins University | Antitumor Immunization by Liposomal Delivery of Vaccine to the Spleen |
| WO2009100430A2 (en) | 2008-02-08 | 2009-08-13 | Asuragen, Inc | miRNAs DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN LYMPH NODES FROM CANCER PATIENTS |
| WO2009108856A2 (en) | 2008-02-28 | 2009-09-03 | The Ohio State University Research Foundation | Microrna signatures associated with human chronic lymphocytic leukemia (ccl) and uses thereof |
| EP2112235A1 (en) | 2008-04-24 | 2009-10-28 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Compositions and methods for microRNA expression profiling of nasopharyngeal carcinoma |
| WO2009149539A1 (en) | 2008-06-10 | 2009-12-17 | Université de Montréal | Enhancing antigen-specific cd8+ t cell response using irf-7 mrna |
| CA2735710A1 (en) | 2008-08-04 | 2010-02-11 | Glen N. Barber | Sting (stimulator of interferon genes), a regulator of innate immune responses |
| WO2010018563A2 (en) | 2008-08-12 | 2010-02-18 | Rosetta Genomics Ltd. | Compositions and methods for the prognosis of lymphoma |
| WO2010037408A1 (en) | 2008-09-30 | 2010-04-08 | Curevac Gmbh | Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof |
| CN102439169B (zh) | 2008-11-13 | 2014-11-19 | 复旦大学 | 用于结肠直肠癌的微rna表达谱分析的组合物和方法 |
| US20120053224A1 (en) | 2008-12-10 | 2012-03-01 | Universitat Regensburg | Compositions and methods for micro-rna expression profiling of cancer stem cells |
| EP2246433A1 (de) * | 2009-04-30 | 2010-11-03 | Mologen AG | Concatemere zur Immunmodulation |
| US20120264626A1 (en) | 2009-05-08 | 2012-10-18 | The Ohio State University Research Foundation | MicroRNA Expression Profiling and Targeting in Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) Lung Tissue and Methods of Use Thereof |
| CN102625696B (zh) | 2009-06-10 | 2015-06-03 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 改进的脂质制剂 |
| WO2011076143A1 (en) | 2009-12-24 | 2011-06-30 | Fudan University | Compositions and methods for microrna expression profiling of lung cancer |
| WO2011076142A1 (en) | 2009-12-24 | 2011-06-30 | Fudan University | Compositions and methods for microrna expession profiling in plasma of colorectal cancer |
| EP2341145A1 (en) | 2009-12-30 | 2011-07-06 | febit holding GmbH | miRNA fingerprint in the diagnosis of diseases |
| WO2011094683A2 (en) | 2010-01-29 | 2011-08-04 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Method of identifying myelodysplastic syndromes |
| EP2354246A1 (en) | 2010-02-05 | 2011-08-10 | febit holding GmbH | miRNA in the diagnosis of ovarian cancer |
| US20130059015A1 (en) | 2010-03-11 | 2013-03-07 | H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute | Human Cancer micro-RNA Expression Profiles Predictive of Chemo-Response |
| AU2011252795B2 (en) | 2010-05-14 | 2015-09-03 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods of identifying tumor specific neoantigens |
| WO2011157294A1 (en) | 2010-06-16 | 2011-12-22 | Universita' Degli Studi Di Padova | Compositions for use in treating or preventing cancer, breast cancer, lung cancer, ovarian cancer, metastasis, heart failure, cardiac remodelling, dilated cardiomyopathy, autoimmune diseases, or diseases or disorders related thereto |
| HUE058667T2 (hu) * | 2010-08-31 | 2022-09-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Pegilált liposzómák immunogént kódoló RNS szállítására |
| BR112013004879A2 (pt) * | 2010-08-31 | 2018-04-24 | Novartis Ag | lipossomas pequenos para entrega de rna que codifica imunogénio |
| EP2625189B1 (en) | 2010-10-01 | 2018-06-27 | ModernaTX, Inc. | Engineered nucleic acids and methods of use thereof |
| WO2012055551A2 (de) | 2010-10-26 | 2012-05-03 | Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg | NFĸB-SIGNALWEG-MANIPULIERTE DENDRITISCHE ZELLEN |
| DK2663548T3 (en) | 2011-01-11 | 2017-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | PEGYLED LIPIDS AND THEIR USE FOR PHARMACEUTICAL SUPPLY |
| WO2012151212A1 (en) | 2011-05-01 | 2012-11-08 | University Of Rochester | Multifocal hepatocellular carcinoma microrna expression patterns and uses thereof |
| EP2944961A1 (en) | 2011-05-06 | 2015-11-18 | XenTech | Markers for cancer prognosis and therapy and methods of use |
| WO2012155014A1 (en) | 2011-05-11 | 2012-11-15 | Exosome Diagnostics, Inc. | Nucleic acid extraction from heterogeneous biological materials |
| BR112013029490A2 (pt) * | 2011-05-17 | 2019-09-24 | Moderna Therapeutics Inc | ácidos nucleicos projetados e métodos de uso dos mesmos para vertebrados não humanos |
| US8691750B2 (en) | 2011-05-17 | 2014-04-08 | Axolabs Gmbh | Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds |
| NZ730355A (en) | 2011-05-24 | 2022-10-28 | Tron Translationale Onkologie An Der Univ Der Johannes Gutenberg Univ Mainz Gemeinnuetzige Gmbh | Individualized vaccines for cancer |
| WO2012170889A1 (en) | 2011-06-08 | 2012-12-13 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Cleavable lipids |
| US20140272998A1 (en) | 2011-07-15 | 2014-09-18 | Leo Pharma A/S | Diagnostic microrna profiling in cutaneous t-cell lymphoma (ctcl) |
| US20150080243A1 (en) | 2011-09-01 | 2015-03-19 | Allegro Diagnostics Corp. | Methods and compositions for detecting cancer based on mirna expression profiles |
| SG11201400432VA (en) | 2011-09-06 | 2014-08-28 | Agency Science Tech & Res | Polypeptide vaccine |
| US20140243240A1 (en) | 2011-10-26 | 2014-08-28 | Georgetown University | microRNA EXPRESSION PROFILING OF THYROID CANCER |
| WO2013078199A2 (en) | 2011-11-23 | 2013-05-30 | Children's Medical Center Corporation | Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas |
| HUE21212055T1 (hu) | 2011-12-07 | 2022-11-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Biológiailag lebontható lipidek hatóanyagok bejuttatására |
| HRP20220717T1 (hr) * | 2011-12-16 | 2022-07-22 | Modernatx, Inc. | Modificirani pripravci mrna |
| WO2013103659A1 (en) | 2012-01-04 | 2013-07-11 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Stabilizing rna by incorporating chain-terminating nucleosides at the 3'-terminus |
| WO2013116126A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-08-08 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel low molecular weight, biodegradable cationic lipids for oligonucleotide delivery |
| WO2013120500A1 (en) | 2012-02-15 | 2013-08-22 | Curevac Gmbh | Nucleic acid comprising or coding for a histone stem-loop and a poly(a) sequence or a polyadenylation signal for increasing the expression of an encoded tumour antigen |
| CN103547683A (zh) * | 2012-03-22 | 2014-01-29 | 耶鲁大学 | Kras突变和肿瘤生物学 |
| CA2868391A1 (en) | 2012-04-02 | 2013-10-10 | Stephane Bancel | Polynucleotides comprising n1-methyl-pseudouridine and methods for preparing the same |
| AU2013243947A1 (en) | 2012-04-02 | 2014-10-30 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of proteins |
| CA2907616A1 (en) | 2012-04-30 | 2013-11-07 | Glen N. Barber | Modulating immune responses |
| US9353373B2 (en) * | 2012-05-09 | 2016-05-31 | Strike Bio, Inc. | Bi-functional short-hairpin RNA (bi-shRNA) specific for single-nucleotide KRAS mutations |
| KR20150022996A (ko) | 2012-06-08 | 2015-03-04 | 아두로 바이오테크 | 암 면역요법을 위한 조성물 및 방법 |
| CA2878314A1 (en) * | 2012-07-16 | 2014-01-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Rnai pharmaceutical composition for suppressing expression of kras gene |
| WO2014037124A1 (en) | 2012-09-04 | 2014-03-13 | Bavarian Nordic A/S | Methods and compositions for enhancing vaccine immune responses |
| EP2892930B1 (en) | 2012-09-07 | 2019-08-14 | University Of Miami | Fusion proteins for promoting an immune response, nucleic acids encoding same, and methods of making and use thereof |
| US20150307542A1 (en) | 2012-10-03 | 2015-10-29 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified nucleic acid molecules and uses thereof |
| ES2921623T3 (es) | 2012-11-26 | 2022-08-30 | Modernatx Inc | ARN modificado terminalmente |
| EP3417874A1 (en) | 2012-11-28 | 2018-12-26 | BioNTech RNA Pharmaceuticals GmbH | Individualized vaccines for cancer |
| US20140200261A1 (en) | 2013-01-17 | 2014-07-17 | Moderna Therapeutics, Inc. | Signal-sensor polynucleotides for the alteration of cellular phenotypes |
| CA2898474A1 (en) | 2013-02-14 | 2014-08-21 | Immunocellular Therapeutics, Ltd. | Cancer vaccines and vaccination methods |
| US20160022840A1 (en) | 2013-03-09 | 2016-01-28 | Moderna Therapeutics, Inc. | Heterologous untranslated regions for mrna |
| WO2014159813A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | Moderna Therapeutics, Inc. | Long-lived polynucleotide molecules |
| JP6445523B2 (ja) | 2013-03-15 | 2018-12-26 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | 生体分子アジュバントを含むワクチン |
| US20160166676A1 (en) | 2013-04-10 | 2016-06-16 | Skau Aps | Use of Immune Suppressive Peptides as Adjuvants |
| CA2908154C (en) | 2013-04-29 | 2023-11-28 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Compositions and methods for altering second messenger signaling |
| ES2822584T3 (es) | 2013-05-03 | 2021-05-04 | Univ California | Inducción de dinucleótidos cíclicos del interferón tipo I |
| JP6400082B2 (ja) | 2013-05-18 | 2018-10-03 | アデュロ バイオテック，インコーポレイテッド | 「インターフェロン遺伝子の刺激因子」依存性シグナル伝達を抑制するための組成物および方法 |
| JP6453855B2 (ja) | 2013-05-18 | 2019-01-16 | アドゥロ バイオテック，インク． | 「インターフェロン遺伝子の刺激因子」依存性シグナル伝達を活性化するための組成物及び方法 |
| WO2015017652A1 (en) | 2013-07-31 | 2015-02-05 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Sting crystals and modulators |
| EP3060056A4 (en) | 2013-10-21 | 2017-10-18 | Drexel University | Use of sting agonists to treat chronic hepatitis b virus infection |
| GB201319446D0 (en) | 2013-11-04 | 2013-12-18 | Immatics Biotechnologies Gmbh | Personalized immunotherapy against several neuronal and brain tumors |
| WO2015077354A1 (en) | 2013-11-19 | 2015-05-28 | The University Of Chicago | Use of sting agonist as cancer treatment |
| PL3079715T3 (pl) | 2013-12-09 | 2018-11-30 | Targovax Asa | Mieszanina peptydowa |
| US10421971B2 (en) | 2014-01-15 | 2019-09-24 | The University Of Chicago | Anti-tumor therapy |
| WO2015123532A1 (en) * | 2014-02-16 | 2015-08-20 | Globeimmune, Inc. | Ras g12r immunotherapy for ras mutation-positive cancers |
| US10821175B2 (en) | 2014-02-25 | 2020-11-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems |
| AU2015231461B2 (en) | 2014-03-17 | 2021-09-09 | Tapimmune Inc. | Nucleic acid molecule vaccine compositions and uses thereof |
| HRP20220070T1 (hr) * | 2014-04-23 | 2022-04-01 | Modernatx, Inc. | Cjepiva nukleinske kiseline |
| CA2944903A1 (en) * | 2014-04-24 | 2015-10-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Tumor suppressor and oncogene biomarkers predictive of anti-immune checkpoint inhibitor response |
| AU2015257774B2 (en) | 2014-05-06 | 2018-12-20 | Targovax Solutions AS | Peptide vaccine comprising mutant RAS peptide and chemotherapeutic agent |
| PL3766916T3 (pl) | 2014-06-25 | 2023-02-27 | Acuitas Therapeutics Inc. | Nowe lipidy i formulacje nanocząstek lipidowych do dostarczania kwasów nukleinowych |
| JP2017530114A (ja) | 2014-09-26 | 2017-10-12 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | フラジェリンをコードする組み換えｍｖａによる鼻腔内免疫のための方法と組成物 |
| MA40737A (fr) | 2014-11-21 | 2017-07-04 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Déterminants de la réponse d'un cancer à une immunothérapie par blocage de pd-1 |
| JP2018516847A (ja) | 2015-03-25 | 2018-06-28 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 生体高分子薬を送達するための組成物及び方法 |
| SG10201907164SA (en) | 2015-04-22 | 2019-09-27 | Curevac Ag | Rna containing composition for treatment of tumor diseases |
| CA2984125A1 (en) | 2015-04-27 | 2016-11-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Nucleoside-modified rna for inducing an adaptive immune response |
| MY190974A (en) | 2015-05-20 | 2022-05-25 | Massachusetts Gen Hospital | Shared neoantigens |
| CA2989157A1 (en) | 2015-06-11 | 2016-12-15 | University Of Miami | Cancer treatment and diagnosis |
| EP3310808A1 (en) * | 2015-06-16 | 2018-04-25 | Targovax Asa | Mutated fragments of the ras protein |
| US20180296663A1 (en) | 2015-06-17 | 2018-10-18 | Curevac Ag | Vaccine composition |
| EP3324979B1 (en) * | 2015-07-21 | 2022-10-12 | ModernaTX, Inc. | Infectious disease vaccines |
| MA42543A (fr) * | 2015-07-30 | 2018-06-06 | Modernatx Inc | Arn épitope peptidiques concatémériques |
| WO2017023779A1 (en) | 2015-07-31 | 2017-02-09 | Tarveda Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for immuno-oncology therapies |
| EP3359675B1 (en) | 2015-10-07 | 2024-01-03 | Nant Holdings IP, LLC | Activation of immune-related signalling pathways in cells via optofection |
| JP2018530579A (ja) | 2015-10-12 | 2018-10-18 | ナントミクス，エルエルシー | ウイルス性癌ネオエピトープのための組成物および方法 |
| CN108289946A (zh) | 2015-10-19 | 2018-07-17 | 卡迪拉保健有限公司 | 新佐剂和包含所述新佐剂的疫苗组合物 |
| HRP20230209T1 (hr) | 2015-10-28 | 2023-04-14 | Acuitas Therapeutics Inc. | Novi lipidi i lipidne formulacije nanočestica za isporuku nukleinskih kiselina |
| WO2017112830A1 (en) | 2015-12-21 | 2017-06-29 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Leveraging immune memory from common childhood vaccines to fight disease |
| EP3400005A1 (en) | 2016-01-08 | 2018-11-14 | Vaccibody AS | Neoepitope rna cancer vaccine |
| CN109415416A (zh) | 2016-03-04 | 2019-03-01 | 纽约大学 | 用于诱导抗肿瘤免疫的表达肿瘤相关抗原的多表位的病毒介体 |
| WO2017177204A1 (en) | 2016-04-09 | 2017-10-12 | La Jolla Institute For Allergy And Immunology | Leveraging immune memory from common childhood vaccines to fight disease |
| EP3452101A2 (en) | 2016-05-04 | 2019-03-13 | CureVac AG | Rna encoding a therapeutic protein |
| EP3452083A4 (en) | 2016-05-04 | 2020-01-01 | ImmunoVaccine Technologies Inc. | VACCINE COMPOSITIONS WITH AN AMPHIPATHIC COMPOUND, NEOANT AND HYDROPHOBIC CARRIER, AND METHODS FOR USE THEREOF |
| EP3735984A1 (en) | 2016-05-27 | 2020-11-11 | Etubics Corporation | Neoepitope vaccine compositions and methods of use thereof |
| EP3471778A4 (en) | 2016-06-20 | 2020-02-19 | The Regents of The University of Michigan | COMPOSITIONS AND METHOD FOR DELIVERING BIOMACROMOLECOLIC ACTIVE SUBSTANCES |
| IL264203B1 (en) | 2016-07-20 | 2024-04-01 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Selection of neoepitopes as disease-specific targets for therapy with increased efficacy |
| WO2018039303A1 (en) | 2016-08-23 | 2018-03-01 | Schentag Jerome J | Cholesteryl ester vesicles loading peptides, proteins and nucleic acids into chylomicrons and body cells |
| BR112019008369A2 (pt) | 2016-10-26 | 2019-10-01 | Modernatx Inc | ácidos ribonucleicos mensageiros para intensificar respostas imunes e métodos para uso dos mesmos |
| CN110167586B (zh) | 2016-11-04 | 2024-01-30 | 霍欧奇帕生物科技有限公司 | 作为癌症疫苗的复制-缺陷型沙粒病毒颗粒和三-节段沙粒病毒颗粒 |
| SG10202105561PA (en) | 2016-11-30 | 2021-07-29 | Advaxis Inc | Immunogenic compositions targeting recurrent cancer mutations and methods of use thereof |
| WO2018102585A1 (en) | 2016-11-30 | 2018-06-07 | Advaxis, Inc. | Personalized immunotherapy in combination with immunotherapy targeting recurrent cancer mutations |
| AU2017375958A1 (en) | 2016-12-12 | 2019-07-04 | Multivir Inc. | Methods and compositions comprising viral gene therapy and an immune checkpoint inhibitor for treatment and prevention of cancer and infectious diseases |
| CN110430894A (zh) | 2017-02-01 | 2019-11-08 | 莫得纳特斯公司 | 编码活化致癌基因突变肽的免疫调节治疗性mrna组合物 |
-
2018
- 2018-02-01 CN CN201880018964.5A patent/CN110430894A/zh active Pending
- 2018-02-01 BR BR112019015797-2A patent/BR112019015797A2/pt unknown
- 2018-02-01 MX MX2019009070A patent/MX2019009070A/es unknown
- 2018-02-01 CN CN202311184702.5A patent/CN117224710A/zh active Pending
- 2018-02-01 WO PCT/US2018/016510 patent/WO2018144775A1/en active Application Filing
- 2018-02-01 US US16/482,473 patent/US20190351039A1/en not_active Abandoned
- 2018-02-01 CA CA3051252A patent/CA3051252A1/en active Pending
- 2018-02-01 JP JP2019541287A patent/JP2020514321A/ja active Pending
- 2018-02-01 SG SG11201906969PA patent/SG11201906969PA/en unknown
- 2018-02-01 KR KR1020197025725A patent/KR20190110612A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-02-01 AU AU2018214556A patent/AU2018214556A1/en active Pending
-
2019
- 2019-02-19 US US16/279,372 patent/US10881730B2/en active Active
- 2019-07-30 CL CL2019002134A patent/CL2019002134A1/es unknown
- 2019-07-30 MX MX2022011934A patent/MX2022011934A/es unknown
- 2019-07-30 IL IL268361A patent/IL268361A/en unknown
- 2019-08-27 CO CONC2019/0009234A patent/CO2019009234A2/es unknown
-
2020
- 2020-11-18 US US16/951,092 patent/US20210128721A1/en active Pending
-
2023
- 2023-04-19 JP JP2023068492A patent/JP2023103250A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210092493A (ko) * | 2020-01-16 | 2021-07-26 | 아주대학교산학협력단 | 미토콘드리아 타겟팅용 펩타이드 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117224710A (zh) | 2023-12-15 |
| MX2022011934A (es) | 2022-10-20 |
| BR112019015797A2 (pt) | 2020-03-17 |
| US20190351039A1 (en) | 2019-11-21 |
| US20190175727A1 (en) | 2019-06-13 |
| US20210128721A1 (en) | 2021-05-06 |
| WO2018144775A1 (en) | 2018-08-09 |
| CO2019009234A2 (es) | 2019-08-30 |
| JP2023103250A (ja) | 2023-07-26 |
| JP2020514321A (ja) | 2020-05-21 |
| CN110430894A (zh) | 2019-11-08 |
| AU2018214556A1 (en) | 2019-08-15 |
| MX2019009070A (es) | 2019-10-30 |
| CL2019002134A1 (es) | 2019-11-22 |
| CA3051252A1 (en) | 2018-08-09 |
| US10881730B2 (en) | 2021-01-05 |
| SG11201906969PA (en) | 2019-08-27 |
| IL268361A (en) | 2019-09-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR20190110612A (ko) | 활성화 종양유전자 돌연변이 펩티드를 인코드하는 면역조절 치료 mrna 조성물 | |
| RU2768829C2 (ru) | Противораковые рнк-вакцины | |
| JP7246930B2 (ja) | インターロイキン－１２（ｉｌ１２）をコードするポリヌクレオチドおよびその使用 | |
| US20230285297A1 (en) | Methods of preparing lipid nanoparticles | |
| JP2022519557A (ja) | 脂質ナノ粒子の調製方法 | |
| CN113271926A (zh) | 脂质纳米颗粒的制备及其施用方法 | |
| KR20190086681A (ko) | 면역 반응을 향상시키기 위한 메신저 리보핵산 및 그의 사용 방법 | |
| KR20190020299A (ko) | 면역 조정 폴리펩타이드를 암호화하는 mRNA의 조합물 및 이의 용도 | |
| US20230257738A1 (en) | Modified messenger rna comprising functional rna elements | |
| EP3576780A1 (en) | Immunomodulatory therapeutic mrna compositions encoding activating oncogene mutation peptides | |
| WO2024026487A1 (en) | Lipid nanoparticle compositions comprising phospholipid derivatives and related uses | |
| WO2024026475A1 (en) | Compositions for delivery to hematopoietic stem and progenitor cells (hspcs) and related uses | |
| WO2020097409A9 (en) | Use of mrna encoding ox40l to treat cancer in human patients | |
| NZ793715A (en) | RNA cancer vaccines |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E601 | Decision to refuse application |