KR20080106928A - 파킨슨병의 치료를 위한 방법들 및 조성물들 - Google Patents

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KR20080106928A
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김덕중
김천형
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더 맥클린 하스피털 코퍼레이션
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Abstract

본 발명은 예컨대, 아모다이아퀸(amodiaquine) 또는 글라페닌(glafenine)과 같은 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물들(7-chloro-4-aminoquinoline compounds)을 투여하여 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법들 및 키트들을 특징으로 한다. 줄기 세포들도 본 발명의 방법들에 유용하며 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물들과 분리하여 또는 병용하여 투여될 수 있다. 본 발명은 또한 파킨슨병의 치료 또는 파킨슨병 발달의 억제에 유용한 다른 화합물들을 확인하는 방법들을 특징으로 한다.
파킨슨병, 아모다이아퀸, 글라페닌, 티로신 히드록실라제, 줄기 세포

Description

파킨슨병의 치료를 위한 방법들 및 조성물들{METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF PARKINSON'S DISEASE}
파킨슨병(PD)은 만성 진행성 운동 신경계 이상이다. 약 5만 정도의 미국인들이 매년 PD로 진단된다. 이러한 퇴행성신경 질환의 주증세들은 떨림, 경직, 운동 완서 및 균형 장애이다. 또한, 많은 PD 환자들은 감정변화, 기억 상실, 언어 장애 또는 수면 곤란을 포함하는 다양한 다른 증세들을 겪는다.
PD는 중뇌 도파민(DA) 신경세포들의 특이성 및 진행성 신경세포 손실에 의하여 유발된다. 주로, 이러한 신경세포들은 흑색질 및 선조체 사이의 신호 전달을 담당하는 화학 전달물질인 도파민을 생성하여 매끄럽고 의도적인 근육 활성을 발생시킨다. 그러나, 도파민의 손실은 선조체의 신경세포들이 제어할 수 없을 만큼 흥분하게 하여 환자들이 자신의 운동을 지시하고 제어하는 능력에 손상을 입게 한다.
PD에 대하여 현재 이용되는 요법은 도파민 전구체인 L-DOPA(L-디히드록시페닐-알라닌(L-dihydroxyphenyl-alanine))을 환자에게 경구 투여하여 도파민을 보충하는데 크게 의존한다. 이러한 요법은 치료가 계속됨에 따라 투여량의 증가를 필요로 하고, 결국 심각한 부작용들을 도출하게 된다. PD에 대한 다른 요법들에 대한 요구가 있다.
본 출원인들은 파킨슨병에 대한 신규한 치료법들, 줄기 세포들을 도파민성 신경세포들로 분화시키는 방법들 및 파킨슨병 치료를 위한 화합물들의 확인에 유용한 선별 방법들을 개발하였다.
따라서, 일 예로, 본 발명은 (a) 환자가 파킨슨병을 가지거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있는지의 여부를 결정하는 단계 및 (b) 상기 환자가 파킨슨병을 가지거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있다면, 상기 환자에게 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는데 충분한 양 또는 상기 환자의 세포들에서 Nurr1을 활성화시키는데 충분한 양의 예컨대, 아모다이아퀸(amodiaquine) 또는 글라페닌(glafenine) 같은 7-클로로-4-아미노퀴놀린(7-chloro-4-aminoquinoline) 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 예에서, 본 발명은 상기 화합물을 파킨슨병을 가진 것으로 진단되거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있는 환자에게 투여하는 지시사항과 함께 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 포함하는 키트를 특징으로 한다.
본 발명은 또한 예컨대, 인간 배아 줄기 세포와 같은 생체 외 줄기 세포를 상기 줄기 세포의 분화를 유도하는데 충분한 양으로 존재하는 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물과 접촉시켜 상기 생체 외 줄기 세포를 도파민성 신경세포로 분화시키는 방법을 특징으로 한다.
본 발명은 또한 (a) 줄기 세포들을 포함하는 조성물을 환자의 두뇌로 주입하는 단계; 및 (b) 단계 (a) 이후에, 상기 환자에게 상기 줄기 세포들의 분화를 유도하는데 충분한 양의 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법을 특징으로 한다.
본 발명은 또한 줄기 세포들 및 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 포함하는 조성물을 환자의 두뇌로 주입하여 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 예에서, 본 발명은 줄기 세포들 및 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 특징으로 한다.
본 발명은 또한 (a) 예컨대, SK-N-BE(2)C 세포와 같은 포유류 세포를 Nurr1 유전자의 영역을 포함하는 제1 플라스미드 및 리포터 유전자(reporter gene)와 실시가능하게 연결된(operably linked) 프로모터를 포함하는 제2 플라스미드와 공통전달감염시키는(cotransfecting) 단계; (b) 상기 세포를 후보 화합물과 접촉시키는 단계; (c) 상기 리포터 유전자의 발현의 결과 레벨을 측정하는 단계; 및 (d) 상기 발현 레벨이 대조 수치보다 적어도 20 %를 초과한다면, 상기 후보 화합물은 파킨슨병의 치료용 화합물로 확인되는 것으로 하는 상기 리포터 유전자의 발현 레벨을 대조 수치와 비교하는 단계를 포함하는 화합물을 파킨슨병의 치료용으로 확인하는 방법을 특징으로 한다. 몇몇 경우들에서, 단계 (b)에서 생성된 화합물은 단계 (c) 이전에 18 시간 동안 배양된다. 상기 제1 플라스미드 및 상기 제2 플라스미드 사이의 몰비는 예컨대, 0.1 내지 10 사이의 임의의 비율일 수 있다. 상기 제2 플라스미드는 예컨대, 티로신 히드록실라제(hydroxlase) 프로모터의 100 개 염기들 또는 2,600 개 염기들과 같이 티로신 히드록실라제 프로모터의 전부 또는 일부를 을 포함할 수 있다. 예컨대, 반딧불 루시페라제인와 같은 임의의 리포터 유전자가 사용될 수 있다. 몇몇 경우들에서, 상기 제1 플라스미드는 상기 Nurr1 영역 유전자에 실시가능하게 연결된 GAL4 DNA-결합 영역을 포함하고, 상기 제2 플라스미드는 상기 리포터 유전자에 실시가능하게 연결된 GAL4 결합 부위를 포함한다.
본 발명은 또한 (a) 도파민을 생성할 수 있는 포유류 세포 및 본 발명의 방법을 이용하여 확인된 화합물을 제공하는 단계; (b) 상기 세포를 그렇게 확인된 상기 화합물과 접촉시키는 단계; (c) 티로신 히드록실라제 또는 도파민의 발현의 결과 레벨을 측정하는 단계; 및 (d) 상기 발현 레벨이 대조 수치보다 적어도 20 %를 초과한다면, 상기 화합물은 파킨슨병의 치료용 화합물로 확인되는 것으로 하는 상기 발현 레벨을 대조 수치와 비교하는 단계를 포함하는 화합물을 파킨슨병의 치료용으로 확인하는 방법을 특징으로 한다. 상기 단계 (c)의 측정 단계는 예컨대, 실시간 PCR을 이용한 티로신 히드록실라제의 정량화 또는 HPLC 분석을 이용한 도파민의 정량화를 포함할 수 있다. 단계 (a)의 확인은 화합물 확인의 임의의 방법의 이용을 포함할 수 있다; 예를 들어, (i) 예컨대, SK-N-BE(2) 세포와 같은 포유류 세포를 Nurr1 유전자 영역을 포함하는 제1 플라스미드 및 리포터 유전자에 실시가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 제2 플라스미드와 공통감염시키는(cotransfecting) 단계; (ii) 상기 세포를 후보 화합물과 접촉시키는 단계; (iii) 상기 리포터 유전자의 발현의 그 결과 레벨을 측정하는 단계; 및 (iv) 상기 리포터 유전자의 발현 레벨을 대조 수치와 비교하여, 만약 상기 발현 레벨이 상기 대조 수치보다 적어도 20 %를 초과한다면 상기 후보 화합물은 파킨슨병의 치료적 사용을 위한 화합물로 확인되는 단계를 포함하는 방법을 이용할 수 있다.
본 발명의 임의의 방법들, 조성물들 및 키트들에서, 사용되는 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물은 예컨대, 아모다이아퀸 또는 글라페닌일 수 있다. 본 발명의 임의의 방법들, 조성물들 및 키트들에서의 사용에 적당한 줄기 세포들은 예컨대 인간 배아 줄기 세포들을 포함한다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 일부 방법들은 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 채용한다. 이러한 화합물들은 하기의 식을 가진다:
Figure 112008065108721-PCT00001
(I)
여기서, R1, R2 및 R3 각각은 독립적으로 H, OH, OC(O)-R4, C(O)-O-R5, 할로겐, C1 -7 알킬, C2 -7 알케닐, C2 -7 알키닐 및 C1 -7 헤테로알킬로부터 선택되며; 그리고 R4 및 R5 각각은 독립적으로 C1 -7 알킬, C2 -7 알케닐, C2 -7 알키닐 및 C1 -7 헤테로알킬로부터 선택된다. 그러한 화합물들은 예를 들어, 미국 특허 번호 제 2,474,821 호 및 제 3,232,944 호에 기술된 바와 같이 제조될 수 있으며, 그 각각은 여기에 참고로 포함되어 있다. 대표적인 상용 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물들은 아모다이아퀸 및 글라페닌이다.
Figure 112008065108721-PCT00002
(II)
아모다이아퀸
(III)
글라페닌
본 발명의 방법들 및 키트들에 사용될 수 있는 다른 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물들은 4-(3'-N-피페리딜메틸-4'-히드록시아닐리노)-7-클로로퀴논(4-(3'-N-piperidylrnethyl-4'-hydroxyanilino)-7-chloroquinone); 4-(3'-디에틸아미노메틸-4'-히드록시아닐리노)-7-클로로퀴논(4-(3'-diethylaminomethyl-4'-hydroxyanilino)-7-chloroquinone); 4-(3'-에틸아미노에틸-4'-히드록시아닐리노)-7-클로로퀴논(4-(3'-ethylaminoethyl-4'-hydroxyanilino)-7-chloroquinone); 4-(3'-디-n-부틸아미노에틸-4'-히드록시아닐리노)-7-클로로퀴논(4-(3'-di-n-butylaminomethyl-4'-hydroxyanilino)-7-chloroquinone); 4-(3'-N-피페리딜메틸-4',6'-디히드록시아닐리노)-7-클로로퀴논(4-(3'-N-piperidylmethyl-4',6'-dihydroxyanilino)-7-chloroquinone); 4-(3'-디에틸아미노에틸-4'-히드록시아닐리노)-7-클로로퀴논(4-(3'-diethylaminomethyl-4'-hydroxyanilino)-7-chloroquinone); 2-((7-클로로-4-퀴놀리닐)아미노)-벤조산(2-((7-chloro-4-quinolinyl)amino)-benzoic acid); 벤조산, 2-((7-클로로-4-퀴놀리닐)아미노)-, 메틸에스테르(2-((7-chloro-4-quinolinyl)amino)-, methylester); 및 벤조산, 2-((7-클로로-4-퀴놀리닐)아미노)-, 에틸에스테르(2-((7-chloro-4-quinolinyl)amino)-, ethylester)를 포함한다.
본 발명의 화합물들의 일반적인 기술들에서, 치환기에 있는 특정한 유형의 원자들의 숫자는 예컨대, 1 내지 7 개의 탄소 원자들을 포함하는 알킬기 또는 C1 -7 알킬의 범위로 일반적으로 주어진다. 그러한 범위에 대한 참조는 특정 범위 내의 원자들의 각각의 정수를 지닌 기들을 포함한다는 의미이다. 예를 들어, 1 내지 7 개의 탄소 원자들로 된 알킬기는 C1, C2, C3, C4, C5, C6 및 C7의 각각을 포함한다. C1-7 헤테로알킬은 예를 들어, 하나 이상의 헤테로원자들에 더하여 1 내지 6 개의 탄소 원자들을 포함한다. 다른 숫자의 원자들 및 다른 유형의 원자들은 유사한 방식으로 나타낼 수 있다.
여기에 사용된 "알킬"이라는 용어들 및 "알크-(alk-)"라는 접두사는 직쇄 및 분지쇄기들 양쪽 모두와 사이클릭기들, 즉, 사이클로알킬을 포함한다. 사이클릭기들은 모노사이클릭(monocyclic) 또는 폴리사이클릭(polycyclic)일 수 있으며 바람직하게는 3 내지 6 개의 탄소 원자 고리들을 포함한다. 대표적인 사이클릭기들은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실기들을 포함한다. C1 -7 알킬기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 대표적인 치환체들은 알콕시, 아릴옥시, 설프히드릴, 알킬티오(alkylthio), 아릴티오(arylthio), 할로겐화물, 히드록실, 불소알킬(fluoroalkyl), 과불소알킬(perfluoralkyl), 아미노, 아미노알킬, 이치환 아미노(disubstituted amino), 4차 아미노(quaternary amino), 히드록시알킬, 카복시알킬 및 카복실기들을 포함한다. C1 -7 알킬들은 제한 없이 메틸; 에틸; n-프로필; 이소프로필; 사이클로프로필; 사이클로프로필메틸; 사이클로프로필에틸; n-부틸; iso-부틸; sec-부틸; tert-부틸; 사이클로부틸; 사이클로부틸메틸; 사이클로부틸에틸; n-펜틸; 사이클로펜틸; 사이클로펜틸메틸; 사이클로펜틸에틸; 1-메틸부틸; 2-메틸부틸; 3-메틸부틸; 2,2-디메틸프로필; 1-에틸프로필; 1,1-디메틸프로필; 1,2-디메틸프로필; 1-메틸펜틸; 2-메틸펜틸; 3-메틸펜틸; 4-메틸펜틸; 1,1-디메틸부틸; 1,2-디메틸부틸; 1,3-디메틸부틸; 2,2-디메틸부틸; 2,3-디메틸부틸; 3,3-디메틸부틸; 1-에틸부틸; 2-에틸부틸; 1,1,2-트리메틸프로필; 1,2,2-트리메틸프로필; 1-에틸-l-메틸프로필; l-에틸-2-메틸프로필; 및 사이클로헥실을 포함한다.
"C2 -7 알케닐"은 하나 이상의 이중 결합들을 포함하고 2 내지 7 개의 탄소 원자들을 가지는 분지된 또는 분지되지 않은 탄화수소기를 의미한다. C2 -7 알케닐은 각각의 고리가 바람직하게는 3 내지 6 개 탄소 원자(member)들을 가지는 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 고리들을 선택적으로 포함할 수 있다. 상기 C2 -7 알케닐기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 대표적인 치환체들은 알콕시, 아릴옥시, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 할로겐화물, 히드록실, 불소알킬, 과불소알킬, 아미노, 아미노알킬, 이치환 아미노, 4차 아미노, 히드록시알킬, 카복시알킬 및 카복실기들을 포함한다. C2 -7 알케닐들은 제한 없이, 비닐; 알릴(allyl); 2-사이클로프로필-1-에틸; 1-프로페닐; 1-부테닐(butenyl); 2-부테닐; 3-부테닐; 2-메틸-l-프로페닐; 2-메틸-2-프로페닐; 1-펜테닐(pentenyl); 2-펜테닐; 3-펜테닐; 4-펜테닐; 3-메틸-1-부테닐; 3-메틸-2-부테닐; 3-메틸-3-부테닐; 2-메틸-l-부테닐; 2-메틸-2-부테닐; 2-메틸-3-부테닐; 2-에틸-2-프로페닐; 1-메틸-1-부테닐; l-메틸-2-부테닐; l-메틸-3-부테닐; 2-메틸-2-펜테닐; 3-메틸-2-펜테닐; 4-메틸-2-펜테닐; 2-메틸-3-펜테닐; 3-메틸-3-펜테닐; 4-메틸-3-펜테닐; 2-메틸-4-펜테닐; 3-메틸-4-펜테닐; 1,2-디메틸-1-프로페닐; 1,2-디메틸-1-부테닐; 1,3-디메틸-1-부테닐; 1,2-디메틸-2-부테닐; l,l-디메틸-2-부테닐; 2,3-디메틸-2-부테닐; 2,3-디메틸-3-부테닐; l,3-디메틸-3-부테닐; l,l-디메틸-3-부테닐 및 2,2-디메틸-3-부테닐을 포함한다.
"C2 -7 알키닐"은 하나 이상의 3중 결합들을 포함하고 2 내지 7 개의 탄소 원자들을 가지는 분지된 또는 분지되지 않은 탄화수소기를 의미한다. C2 -7 알키닐은 각각의 고리가 바람직하게는 5 또는 6 개 탄소 원자들을 가지는 모노사이클릭, 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 고리들을 선택적으로 포함할 수 있다. 상기 C2 -7 알키닐기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 대표적인 치환체들은 알콕시, 아릴옥시, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 할로겐화물, 히드록시, 불소알킬, 과불소알킬, 아미노, 아미노알킬, 이치환 아미노, 4차 아미노, 히드록시알킬, 카복시알킬 및 카복실기들을 포함한다. C2 -7 알키닐들은 제한 없이, 에티닐(ethynyl), 1-프로피닐(propynyl), 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐, 1-펜티닐(pentyl), 2-펜티닐, 3-펜티닐, 4-펜티닐, 5-헥센(hexene)-l-이닐(ynyl), 2-헥시닐(hexynyl), 3-헥시닐, 4-헥시닐, 5-헥시닐; l-메틸-2-프로피닐; l-메틸-2-부티닐; l-메틸-3-부티닐; 2-메틸-3-부티닐; 1,2-디메틸-3-부티닐; 2,2-디메틸-3-부티닐; l-메틸-2-펜티닐; 2-메틸-3-펜티닐; l-메틸-4-펜티닐; 2-메틸-4-펜티닐; 및 3-메틸-4-펜티닐을 포함한다.
"C1 -7 헤테로알킬"은 N, O, S 및 P로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3 또는 4 개의 헤테로원자들에 더하여 1 내지 7 개의 탄소 원자들을 가지는 분지되거나 분지되지 않은 알킬, 알케닐 또는 알키닐기를 의미한다. 헤테로 알킬들은 제한 없이, 삼차 아민들, 이차 아민들, 에테르들, 티오에테르들, 아미드들, 티오아미드들, 카르바민산염들, 티오카르바민산염들, 히드라존들(hydrazones), 이민들, 포스포디에스테르들(phosphodiesters), 포스포아미데이트들(phosphoramidates), 설폰아미드들(sulfonamides) 및 이황화물들을 포함한다. 헤테로알킬은 각각의 고리가 바람직하게는 3 내지 6 개 탄소 원자들을 가지는 모노사이클릭, 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 고리들을 선택적으로 포함할 수 있다. 상기 헤테로알킬기는 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 대표적인 치환체들은 알콕시, 아릴옥시, 설프히드릴, 알킬티오, 아릴티오, 할로겐화물, 히드록실, 불소알킬, 과불소알킬, 아미노, 아미노알킬, 이치환 아미노, 4차 아미노, 히드록시알킬, 히드록시알킬, 카복시알킬 및 카복실기들을 포함한다.
"투여하는(aministering)"은 환자에게 약물의 투여량을 주는 방법을 의미한다. 본 발명의 방법들에 사용되는 조성물들은 제한 없이 흡입, 눈, 비경구, 피부, 경피, 볼, 직장, 설하(sublingual), 혀 주위(perilingual), 비강, 국소 투여 및 경구 투여로부터 선택되는 경로에 의하여 투여될 수 있다. 비경구 투여는 정맥 내, 복강 내, 피하 및 근육 내 투여를 포함한다. 투여의 바람직한 방법은 예컨대, 투여되는 조성물의 성분들 및 치료되는 상태의 중증도와 같은 다양한 인자들에 따라 변할 수 있다.
"치료에 충분한 양"은 환자의 상태 또는 질병의 증세를 임상적으로 적절히 개선, 억제하거나 낫게 하는데 필요한 화합물의 양을 의미한다. 환자에서의 임의의 개선사항은 치료를 달성하는데 충분하다고 여겨진다. 파킨슨병의 치료를 위하여 본 발명을 실시하는데 사용되는 충분한 양의 활성 화합물은 투여 방식, 환자의 연령, 체중 및 전체적인 건강에 따라 변한다. 결국, 처방자들 또는 연구자들이 적절한 양 및 투여 방법(dosage regimen)을 결정할 것이다.
"세포 내의 Nurr1을 활성시키는데 충분한 양"은 세포에서 티로신 히드록실라제 프로모터(hydroxylase promoter)에 실시가능하게 연결된 유전자의 전사를 검출가능하고 재현가능한 방식으로 증가시키는데 필요한 본 발명의 화합물의 양을 의미한다. 바람직하게는, 상기 전사에서의 증가는 기준 또는 대조 레벨에 비하여 적어도 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % 또는 100 %이다. 상기 유전자는 티로신 히드록실라제 또는 예컨대, 반딧불 루시페라제와 같은 리포터 유전자일 수 있다. 상기 티로신 히드록실라제 프로모터는 Nurr1의 직접 표적이기 때문에, 티로신 히드록실라제 활성화는 Nurr1 레벨들의 증가를 나타낸다.
줄기 세포의 "분화를 유도하는데 충분한 양"은 미분화된 줄기 세포를 예컨대, 신경세포와 같은 원하는 세포 유형으로 분화시키는데 필요한 본 발명의 화합물의 양을 의미한다.
"후보 화합물"은 유전자 또는 단백질 발현 레벨들을 변화시킬 수 있는 능력 또는 여기에 기술된 분석 방법들 중 하나를 채용하여 유전자 또는 단백질의 생물학적 활성에 대하여 분석되는 임의의 화합물을 의미한다. 후보 화합물들은 예를 들어, 펩티드들, 폴리펩티드들, 합성 유기 분자들, 자연발생적 유기 분자들, 핵산 분자들 및 그 구성요소들을 포함한다.
"분화"는 분화되지 않은(unspecialized) 줄기 세포가 예컨대, 신경 세포와 같은 분화된 세포의 특징들을 획득하는 공정을 의미한다. 분화는 또한 자가 갱신(self-renew)하는 세포의 잠재력의 제한을 뜻할 수도 있으며, 세포의 기능적 능력에서의 변화와 일반적으로 연관되어 있다. 줄기 세포의 분화는 세포 표지들 또는 명확히 분화된 상태의 세포들과 연관된 형태학적 특징들에 대한 분석을 포함하여, 업계에 잘 알려진 방법들에 의하여 측정될 수 있다. 그러한 표지들 및 특징들의 예들은 당단백질, 알칼리성 포스파타아제 및 암배아성 항원 발현의 측정을 포함하며, 이러한 단백질들 중 임의의 것에서 발현의 증가는 분화의 지표이다.
"치료적 사용을 위한 화합물"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응 등이 없이, 알맞은 장점/위험율이 있으며, 그 의도된 사용에 효과적이어서 인간의 조직들뿐만 아니라 가능하다면 본 발명의 조성물들의 양성(zwitterionic) 형태들과 접촉하여 사용하는데 적당한 화합물을 의미한다.
"배아 줄기 세포"는 배반포 단계의 배아로부터 유도되거나 세 배엽층들로 세포가 실질적으로 분화하기 전에 미분화된 세포들의 형태학적 특징들을 자가 갱신하고 보일 수 있어서, 미분화된 세포들을 배아 또는 성체 기원의 분화된 세포들과 구분하게 하는 세포를 의미한다. 대표적인 형태학적 특징들은 현미경에서 볼 수 있는 높은 핵/세포질 비율들 및 두드러진 핵소체들(nucleoli)을 포함한다. 당업자에게 알려진 적절한 조건들 하에서, 배아 줄기 세포들은 내배엽, 중배엽 및 외배엽의 세 배엽층들의 세포들 또는 조직들로 분화할 수 있다. 배아 줄기 세포의 확인을 위한 분석들은 적당한 숙주 내에서 기형종을 형성하거나 Oct-4와 같은 미분화된 세포의 표지들에 대하여 염색되는 능력을 포함한다.
화합물의 선별의 맥락에서 "히트(hit)"는 주어진 분석에서 양성으로 시험되는 후보 화합물을 의미한다. 예를 들어, 양성 결과가 리포터 유전자 활성에서의 증가로 나타나는 선별법에서, 그 결과가 특정 역치인 리포터 유전자 활성의 레벨, 예컨대, 활성의 대조 레벨보다 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 200 % 또는 500 %를 초과한다면 히트라고 여겨진다.
"Nurr1 생물학적 활성"은 Nurr1 폴리펩티드에 의하여 생체 내 또는 생체 외에서 유발되는 것으로 알려진 임의의 활성을 의미한다. 예를 들어, 그러한 활성은 티로신 히드록실라제의 전사의 활성화를 포함할 수 있다.
"Nurr1 핵산" 및 "Nurr1 유전자"는 여기에 번갈아 쓰이며, Nurr1 폴리펩티드의 전부 또는 일부를 엔코딩하는 핵산 또는 유전자은행 등록 번호 제 AB017586 호(Ichinose et al., Gene 230:233-239, 1999)의 핵산 서열의 전부 또는 일부 또는 그 유사체와 실질적으로 동일한 핵산을 지칭한다..
"Nurr1 폴리펩티드"는 유전자은행 등록 번호 제 BAA75666 호의 폴리펩티드 서열의 전부 또는 일부 또는 그 유사체와 실질적으로 동일하고, Nurr1 생물학적 활성을 지니는 폴리펩티드를 의미한다.
"실시가능하게 연결된"은 예컨대, 전사 활성체 단백질들과 같은 적절한 분자들이 조절 요소(들)에 결합되는 경우에 유전자 발현을 가능하게 하도록 유전자 및 하나 이상의 조절 요소들의 연결을 의미한다.
"환자"는 의학적 치료를 받고 있는 임의의 인간을 의미한다.
"프로모터"는 실시가능하게 연결된 코딩 영역 전사의 개시를 용이하게 하는 유전자의 조절 요소를 의미한다.
"리포터 유전자"는 예컨대, 효소와 같은 리포터 분자를 엔코딩하는 유전자 서열을 의미한다. 리포터 분자는 형광, 효소(예컨대, 효소 기반 조직화학적 분석뿐만 아니라 ELISA), 방사성 및 발광 시스템들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는 임의의 검출 시스템에서 검출될 수 있다. 대표적인 리포터 유전자들은 반딧불 루시페라제, 녹색 형광 단백질(GFP), E. coli 베타-갈락토시다제 또는 글루쿠로니다아제, 인간 태반 알칼리 포스파타제 및 클로람페니콜 아세틸트란스페라제(CAT)를 포함한다; 다른 리포터 유전자들은 업계에 알려져 있으며 원하는 대로 이용될 수 있다.
"줄기 세포"는 자가 갱신하는 잠재력을 지니고, 적절한 조건 하에서 전용(dedicated) 선조 세포 또는 특이적인 세포 또는 조직으로 분화하는 임의의 세포를 의미한다. 줄기 세포들은 분화다능(pluripotent) 또는 다분화능(multipotent)일 수 있다. 줄기 세포들은 배아 줄기 세포들, 배아 생식 세포들, 성체 줄기 세포들 및 제대혈 세포들을 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다.
"실질적으로 동일한"은 기준 아미노산 또는 핵산 서열과 적어도 75 %, 85 %, 90 % 또는 심지어 99 % 동일성을 보이는 폴리펩티드 또는 핵산을 의미한다. 폴리펩티드들에 대하여, 비교 서열들의 길이는 일반적으로 적어도 35 아미노산들, 45 아미노산들, 55 아미노산들 또는 심지어 70 아미노산들일 것이다. 핵산들에 대하여, 비교 서열들의 길이는 일반적으로 적어도 60 뉴클레오티드들, 90 뉴클레오티드들 또는 심지어 120 뉴클레오티드들일 것이다.
서열 동일성은 통상적으로는 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램들을 이용하여 측정된다. 두 서열들 사이의 동일성을 측정하는 컴퓨터 프로그램 방법들은 GCG 프로그램 패키지(Devereux et al., Nucleic Acids Research 12: 387, 1984), BLASTP, BLASTN 및 FASTA(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403, 1990)를 포함하지만, 여기에 한정되지 않는다. 잘 알려진 스미스 워터맨 알고리즘(Smith Waterman algorithm)은 동일성을 측정하는데 이용될 수도 있다. BLAST 프로그램은 NCBI 및 다른 소스들(예컨대, BLAST 매뉴얼, Altschul et al., NCBI NLM NIH, Bethesda, MD 20894)로부터 공개적으로 이용가능하다. 이러한 소프트웨어 프로그램들은 다양한 치환들, 결실들 및 다른 변형들에 상동도(degree of homology)를 지정하여 유사한 서열들을 매치시킨다. 아미노산 비교를 위한 보존적 치환들은 통상적으로 하기의 군들 내에서의 치환들을 포함한다: 글리신, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신; 아스파르트산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민; 세린, 트레오닌; 라이신, 아르기닌; 및 페닐알라닌, 티로신.
"티로신 히드록실라제 프로모터"는 전사의 개시를 용이하게 하여 티로신 히드록실라제 유전자의 발현을 조절할 수 있는 티로신 히드록실라제 유전자의 업스트림 요소(upstream element)를 의미한다. 티로신 히드록실라제 프로모터는 임의의 유전자의 발현을 조절하기 위하여 상기 유전자에 실시가능하게 연결될 수 있다. 임의의 티로신 히드록실라제 프로모터는 Kim et al., J. Neurochem., 85: 622-634, 2003에서 제공되는 바와 같이 본 발명에 사용될 수 있다.
본 발명의 태양들은 수많은 장점들을 제공한다. 예를 들어, 7-클로로-4-아미노퀴놀린을 사용하여 파킨슨병 환자들을 치료하면 균형 장애 및 운동신경 장애; 팔, 하악(jaw), 다리 또는 얼굴의 리듬성 떨림; 근육 경직; 및 예컨대, 수의 운동의 느려짐과 같은 운동 완서와 같은 증세들을 완화시킬 수 있다. 또한, 줄기 세포들 및 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물 양쪽 모두를 사용하여 파킨슨병 환자들을 치료하면 치료 효능의 증가 또는 치료를 위하여 필요되는 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물의 투여량의 감소와 같은 다른 장점을 제공할 수 있다.
여기에 기술된 선별 분석법들은 파킨슨병의 치료에 유용할 수 있는 다른 화합물들을 확인하는 방법들을 제공한다는 점에서 또한 유리하다.
본 발명의 다른 특징들 및 장점들은 하기의 상세한 기술 및 청구항들로부터 명확해 질 것이다.
도 1은 도파민 신경세포들의 발달에서의 Nurr1의 역할을 도시하는 개략도이다.
도 2는 Nurr1, 티로신 히드록실라제 및 도파민 사이의 관계를 도시하는 개략도이다.
도 3은 Nurr1 활성체들을 발견하고 시험하는 방법을 도시하는 흐름도이다.
도 4는 SK-N-BE(2) 세포들에서의 일시적 전달감염 분석들의 결과들을 도시하는 도표이다. SK-N-BE(2)C 세포들에서의 일시적으로 발현된 Nurr1 활성은 각각 2.6 kb-TH 프로모터 및 6.0-TH 프로모터을 사용한 공통전달감염(cotransfection)에 의하여 측정되었다. 전달감염에 사용된 리포터 플라스미드에 대한 작동체 플라스미드(effector plasmid)의 몰비는 각각의 실험에서 0.5였다. 루시페라제 활성은 측정되어 내부 대조로서 베타-갈락토시다제의 활성으로 정규화되었다.
도 5A는 작은 화학적 라이브러리를 사용한 예비 선별 데이터를 도시하는 도표이다. SK-N-BE(2)C 세포들에서 일시적으로 발현된 Nurr1 활성은 각각의 화합물과 18 시간 동안 배양한 이후에 2.6-TH 프로모터를 사용하여 루시페라제 활성에 의하여 측정되었다. 세포기반 분석 시스템은 DMSO와의 대조와 비교하여 루시페라제 활성에서 뚜렷한 증가를 보였던 양성 히트 후보인 폴스콜린(forskolin)을 발생시켰다. 각각의 칼럼은 8 개의 다른 화합물들을 가진다. 도 5B는 작은 화학적 라이브러리를 사용한 예비 선별 데이터를 더 도시하는 도표이다. SK-N-BE(2)C 세포들에서 일시적으로 발현된 Nurr1 활성은 각각의 화합물과 18 시간 동안 배양한 이후에 2.6-TH 프로모터를 사용하여 루시페라제 활성에 의하여 측정되었다. 세포기반 분석 시스템은 DMSO와의 대조와 비교하여 루시페라제 활성에서 뚜렷한 증가를 보였던 양성 히트 후보인 클로로퀸 이인산염(chloroquine diphosphate)을 발생시켰다. 각각의 칼럼은 8 개의 다른 화합물들을 가진다.
도 6은 제1 히트 후보들을 사용한 반복된 제1 선별 데이터를 도시하는 도표를 포함한다. SK-N-BE(2)C 세포들에서 일시적으로 발현된 Nurr1 활성은 pcDNA-Nurr1 구조체로 각각의 화합물을 18 시간 동안 배양한 이후에 루시페라제 활성에 의하여 측정되었다. 아모다이아퀸 및 글라페닌의 두 히트 후보들이 확인되었다.
도 7은 제1 히트 화학물질들을 사용한 제2 선별 데이터를 도시하는 도표를 포함한다. SK-N-BE(2)C 세포들에서 일시적으로 발현된 Nurr1 활성은 Nurr1-LBD와 융합된 GAL4-DBD 구조체로 각각의 화합물을 18 시간 동안 배양한 이후에 루시페라제 활성에 의하여 측정되었다. 아모다이아퀸 및 글라페닌의 두 히트 후보들이 확인되었다. 반딧불 루시페라제 리포터 유전자를 활성화시키는 GAL4-DBD-Nurr1-LBD 융합 구조체의 개략적인 묘사도 도시되어 있다.
도 8A는 일시적인(transient) 전달감염 리포터 분석을 도시하는 개략도이다. 도 8B는 Nurr1이 작동체 유전자이고, 프로모터가 TH 유전자로부터 유래하며, 그리고 반딧불 루시페라제가 리포터 유전자인 일시적인 전달감염 리포터 분석을 도시하는 개략도이다.
도 9A는 pcDNA-Nurr1이 작동체 유전자이고, 프로모터가 TH 유전자의 2.6 Kb 업스트림으로부터 유래하며, 그리고 반딧불 루시페라제가 리포터 유전자인 일시적인 전달감염 리포터 분석을 도시하는 개략도이다. 도 9B는 상기 2.6 Kb TH 프로모터 및 반딧불 루시페라제 리포터 유전자가 존재하는 곳에 어떠한 작동체 유전자도 첨가되지 않은 일시적인 전달감염 리포터 분석을 도시하는 개략도이다. 이러한 시스템에서 증가된 루시페라제 활성을 보이는 히트 화합물들은 가양성(false positive)들인 것을 결정된다.
도 10A는 간접 면역조직화학적 분석(TH+/Tuj1+염색)을 거친 배아 줄기(ES) 세포 유도 신경세포들을 도시하는 한 쌍의 사진이다. ES-유도 신경세포들은 항-β-튜불린 III(anti-β-tubulin III) 및 항-TH로 면역라벨링 되었다. 형광 현미경 하에서 양쪽 단백질들의 겹침은 백색으로 도시된다. DMSO는 대조로서 사용되었다. 도 10B는 아모다이아퀸이 대조 DMSO와 비교하여 생체 내 ES 세포 분화하는 도중에 TH+ 세포들의 숫자를 증가시켰다는 것을 도시하는 막대 그래프이다.
본 발명은 파킨슨병에 대한 독특한 요법들을 특징으로 한다. 치료 방법들은 파킨슨병을 치료하는데 충분한 양의 7-클로로-4-아미노퀴놀린의 투여를 특징으로 한다; 이는 일반적으로 치료되는 환자의 세포에서 Nurr1을 활성시키는데 충분한 양의 투여를 포함한다. 줄기 세포들은 본 발명의 다른 치료 태양들에서 사용될 수도 있다; 예를 들어, 배아 줄기 세포들, 골수 줄기 세포들, 제대혈 줄기 세포들 및 말초 혈액 줄기 세포들이 각각 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 배아 줄기 세포들을 도파민성 신경세포들로 분화시키는 방법들을 특징으로 하며, 그러한 방법들은 7-클 로로-4-아미노퀴놀린 화합물의 사용을 특징으로 한다. 본 발명은 또한 파킨슨병의 치료를 위한 화합물들의 확인에 유용한 선별 방법들을 특징으로 한다. 확인 방법들은 DA 신경세포들의 생존 및/또는 유지를 촉진하는 역할을 하는 하나 이상의 전사 인자들의 활성화를 위한 작은 분자들의 선별을 특징으로 한다. 예를 들어, 중뇌 도파민 신경세포들에 대한 핵심적인 운명 결정 전사 인자인 Nurr1은 본 발명의 선별 분석들에 유용한 표적이다.
7- 클로로 -4- 아미노퀴놀린 화합물들
상기 정의된 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물들은 본 발명의 방법들, 키트들 및 조성물들에 유용하다. 본 발명의 방법들에 사용되는 대표적인 화합물들은 분열체박멸(schizonticidal) 활성이 있는 항말라리아성 화합물인 아모다이아퀸 및 통증 완화를 위해 사용되는 진통제 특성이 있는 안트라닐산 유도체인 글라페닌이다.
요법
본 발명에 따른 요법은 단독으로 또는 다른 요법과 연계하여 수행될 수 있으며, 가정, 의원, 진료소, 병원 외래과 또는 병원에서 제공될 수 있다. 치료는 일반적으로 의사가 요법의 결과들을 면밀히 관찰하고 필요한 임의의 조정들을 할 수 있도록 병원에서 시작한다. 상기 요법의 진행 기간은 환자의 연령 및 상태, 환자의 파킨슨병 단계 및 환자가 치료에 어떻게 반응하느냐에 의존한다. 또한, 파킨슨병을 발달시킬 위험이 더 큰 사람(예컨대, 유전적으로 소인이 있는 자)은 파킨슨병의 증세를 억제시키거나 지연시킬 예방 치료를 받을 수 있다.
환자가 파킨슨병을 가지거나 가질 위험이 있는 것으로 진단하는 방법들은 업 계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 하나 이상의 하기 증세들이 존재한다는 것은 파킨슨병 진단의 일부로 이용될 수 있다: 예컨대, 한쪽 팔 또는 한쪽 다리의 불수의적인 리듬성 떨림과 같은 떨림; 근육 경직, 뻣뻣함 또는 부자유; 예컨대, 운동 불능 또는 운동 완서와 같은 임의의 일상 생활의 활동에서의 전체적인 느려짐; 보행, 균형 또는 자세에서의 곤란; 필기 변화(alteration in handwriting); 감정 변화; 기억 상실; 언어 장애; 및 수면 곤란. 환자 증세, 활성, 약물처치, 동시발생 의학적 문제들 또는 가능한 독성 노출들을 검토해 보면 파킨슨병 진단을 하는데 유용할 수 있다. 또한, 환자는 파킨슨병을 가질 가능성이 높다고 나타낼 수 있는 유전적 돌연변이들의 유무에 대하여 검사될 수 있다. 예를 들어, NURR1, 알파-시누클레인(alpha-synuclein), 파킨(parkin), MAPT, DJ-1, PINK1, SNCA, NAT2 또는 LRRK2 유전자들에서의 하나 이상의 돌연 변이들 또는 다형태성들이 존재한다는 것은 환자가 파킨슨병을 가지거나 가질 위험이 있다고 진단하는데 이용될 수 있다. 예컨대, 여기에 그 각각이 참고로 포함되어 있는 미국 특허 출원 공개 번호 제 2003-0119026 호 및 제 2005-0186591 호; Bonifati, Minerva Med. 96:175-186, 2005; 및 Cookson et al., Curr. Opin. Neurol. 18:706-711, 2005를 참조.
약학적 조성물들의 제형
본 발명의 약학적 조성물들은 예를 들어, 기존의 용해, 동결건조, 혼합, 과립화 또는 당의(confectioning) 공정들을 이용하는 당업자에게 알려진 방식으로 제조된다. 제형들을 제조하는데 업계에 잘 알려진 방법들은 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., ed. A.R.Gennaro, 2000, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York에서 찾을 수 있다.
투여의 적당한 방식들은 구강, 직장, 정맥 내, 근육 내, 피하, 흡입, 국소 또는 경피, 질 및 눈을 포함하지만 여기에 한정되지 않는다.
본 발명의 조성물들의 투여는 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는데(예컨대, 지연시켜) 효과적인 화합물 농도를 만들어 내는 임의의 적당한 수단에 의할 수 있다. 상기 화합물은 예컨대, 함께 투여되어 상기 화합물의 치료적 특성을 보존하는 약학적으로 수용가능한 부형제와 같은 적당한 담체 물질과 혼합된다. 대표적인 약학적으로 수용가능한 부형제는 생리 식염수이다. 상기 적당한 담체 물질은 일반적으로 조성물의 전체 중량의 중량비 1 내지 95 %의 양으로 존재한다. 구강, 직장, 정맥 내, 근육 내, 피하, 흡입, 비강, 국소 또는 경피, 질 또는 눈 투여에 적당한 투여량 형태로 투여 형태로 제공될 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 예컨대, 정제, 캡슐, 알약, 분말, 과립, 현탁액, 유탁액, 용액, 히드로겔을 포함하는 겔, 페이스트, 연고, 크림, 고약, 드렌치(drench), 전달 장치, 좌약, 관장제, 주사제, 이식제(implant), 스프레이 또는 에어로졸의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물들은 실질적으로 투여 즉시 활성 화합물을 방출하거나 서방성 제형들을 사용하여 투여 이후에 소정의 기간에 방출하도록 제형될 수 있다.
서방성 제형들로 화합물들을 투여하면 단독으로 또는 병용하여 투여되는 상 기 화합물은 (i) 좁은 치료 지수(예컨대, 유해한 부작용 또는 독성 반응에 이르는 혈장 농도 및 치료 효과에 이르는 플라스마 농도 사이의 차이가 적다; 일반적으로, 치료 지수 TI는 중간 유효량(ED50)에 대한 중간 치사량(LD50)의 비율로 정의된다); (ii) 위장관에서의 좁은 흡수창(absorption window); 또는 (iii) 혈장 레벨을 치료 레벨에서 유지하기 위하여 낮 동안 빈번한 투여가 필요하도록 짧은 생물학적 반감기를 가진다.
약물 방출 속도가 치료 화합물의 대사 속도보다 훨씬 큰 조절 방출을 이루기 위하여 수많은 전략들이 추구될 수 있다. 예를 들어, 조절 방출은 제형 매개변수들 및 예컨대, 적절한 서방성 조성물들 및 코팅들을 포함하는 성분들을 적절히 선택하여 얻어질 수 있다. 적당한 제형들은 당업자에게 알려진 것들이다. 이의 예들은 단일 또는 복수 단위 정제 또는 캡슐 조성물들, 지 용액들(oil solutions), 현탁액들, 유탁액들, 마이크로캡슐들, 마이크로스피어들(microspheres), 나노입자들, 패치들 및 리포솜들을 포함한다.
경구용 고체 제형들
경구용 제형들은 비독성 약학적으로 수용가능한 부형제들과 혼합된 활성 성분을 포함하는 정제들을 포함한다. 이러한 부형제들은 예를 들어, 비활성 희석제들 또는 충진제들(fillers)(예컨대, 설탕 및 소르비톨), 윤활제들, 활택제들(glidants) 및 항접착제들(antiadhesives)(예컨대, 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 아연, 스테아린산, 실리카들, 수소화 식물성 기름 또는 활석)일 수 있다.
경구용 제형들은 저작정(chewable tablet)들로 또는 활성 성분이 비활성 고체 희석제와 혼합된 딱딱한 젤라틴 캡슐들로 또는 활성 성분이 물 또는 기름 매체와 혼합된 부드러운 젤라틴 캡슐들로 제공될 수도 있다.
투여량
본 발명의 방법들에 사용되는 화합물들의 적절한 투여량은 투여 방법, 파킨슨병의 중증도 및 치료받는 환자의 연령, 체중 및 건강 상태를 포함하는 몇몇 인자들에 의존한다. 또한, 특정 환자에 대한 약제유전체학적(치료제의 약동학적, 약역학적 또는 효능 프로파일에 미치는 유전자형의 효과) 정보는 이용된 투여량에 영향을 줄 수 있다.
본 발명의 방법들에 사용되는 화합물들을 연속적으로 매일 투여하는 것은 필요하지 않을 수 있다. 치료 요법은 약물이 투여되지 않는 시간 동안의 주기를 필요로 할 수 있거나, 요법이 필요에 따라(as-needed) 제공될 수 있다.
상술한 바와 같이, 당해 화합물 또는 조성물은 정제, 캡슐, 일릭서제 또는 시럽의 형태로 구강으로 또는 좌약의 형태로 직장으로 투여될 수 있다. 화합물의 비경구 투여는 예를 들어, 식염수 용액들의 형태로 또는 리포솜들로 혼합된 화합물과 함께 적절히 수행된다. 상기 화합물 그 자체가 용해될 만큼 충분히 가용성이지 않는 경우들에서, 에탄올과 같은 가용화제가 응용될 수 있다.
본 발명의 방법들에 사용되는 임의의 화합물들의 투여량은 당업자에 의하여 용이하게 결정될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 방법들에 사용되는 임의의 화합물들의 투여량은 환자의 파킨슨병 증세를 낫게 할 만큼 충분할 것이다. 또한, 투 여량은 환자의 세포에서 Nurr1을 활성화시킬 만큼 충분할 것이다. 생체 외 줄기 세포들의 분화를 포함하는 본 발명의 방법들에 대하여, 투여량은 바람직하게는 줄기 세포 분화를 유도할 만큼 충분할 것이다.
하기에서, 예시의 목적으로, 아모다이아퀸 및 글라페닌에 대한 투여량이 기술되어 있다. 당업자는 본 발명에 유용한 다른 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물들 및 다른 화합물들에 대한 적당한 투여량들을 용이하게 확인할 수 있을 것이다.
경구 투여
평균적인 성인에 대한 아모다이아퀸의 일일 총 경구 투여량은 약 1 내지 600 ㎎(1 ㎏당 0.02 내지 8.5 ㎎), 바람직하게는 약 25 내지 400 ㎎(1 ㎏당 0.35 내지 5.7 ㎎) 그리고, 더 바람직하게는 약 100 내지 300 ㎎(1 ㎏당 1.4 내지 4.2 ㎎)의 전체 일일 투여량일 수 있다. 투여는 하루 내지 일 년 동안 일일 1 회 내지 3 회일 수 있으며, 심지어 환자가 살아 있는 동안 매일 투여일 수 있다. 만성 장기 투여가 많은 경우들에서 지적될 수 있을 것이다. 일일 최대 600 ㎎의 투여량들이 필요할 수 있다.
전신 작용을 위한 경구 투여로 조절된 글라페닌에 대하여, 일일 투여량은 약 0.1 내지 60 ㎎(1 ㎏당 0.002 내지 0.85 ㎎), 바람직하게는 약 2.5 내지 40 ㎎(1 ㎏당 0.035 내지 0.57 ㎎) 그리고, 더 바람직하게는 약 10 내지 30 ㎎(1 ㎏당 0.14 내지 0.42 ㎎)의 일일 총 투여량일 수 있다. 아모다이아퀸처럼, 글라페닌은 하루 내지 일년 동안 투여될 수 있으며, 심지어 환자가 살아 있는 동안일 수 있다. 일당 최대 60 ㎎의 투여량이 필요할 수 있다.
다른 투여 경로들
아모다이아퀸의 정맥 내, 근육 내, 피하, 직장, 흡입, 국소, 질 또는 눈 투여를 위하여, 일일 총 투여량은 약 1 내지 600 ㎎(1 ㎏당 0.002 내지 8.5 ㎎), 바람직하게는 약 25 내지 400 ㎎(1 ㎏당 0.35 내지 5.7 ㎎) 그리고, 더 바람직하게는 약 100 내지 300 ㎎(1 ㎏당 1.4 내지 4.2 ㎎)일 수 있다. 글라페닌의 일일 총 투여량은 약 0.1 내지 60 ㎎(1 ㎏당 0.002 내지 0.85 ㎎), 바람직하게는 약 2.5 내지 40 ㎎(1 ㎏당 0.035 내지 0.57 ㎎) 그리고, 더 바람직하게는 약 10 내지 30 ㎎(1 ㎏당 0.14 내지 0.42 ㎎)일 수 있다. 이러한 경로들에 의하여, 아모다이아퀸 또는 글라페닌의 투여는 일일 1 회 내지 4 회이다.
줄기 세포들
줄기 세포들은 본 발명의 방법들, 키트들 및 조성물들에서의 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물과 연계하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 생체 외 줄기 세포를 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물과 접촉시켜 상기 줄기 세포를 도파민성 신경세포로 분화시키는 방법들을 특징으로 한다. 본 발명은 또한 예컨대, 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물의 투여와 함께 환자의 두뇌에 줄기 세포들을 주입하여 줄기 세포들을 사용하는 생체 내 방법들을 특징으로 한다. 따라서, 본 발명에 비추어서, 줄기 세포들은 예컨대, 파킨슨병과 같이 도파민성 신경세포들의 상실 또는 열화를 포함하는 장애들을 겪는 환자들을 치료하는 강력한 도구를 제공한다.
줄기 세포들은 무한한 기간 동안 분할(자가 갱신)하는 능력, 그리고, 적정 조건들 또는 신호들 하에서 유기체를 구성하는 많은 다른 세포 유형들로 분화하는 능력을 가지는 독특한 세포군들이다. 배반포의 내세포괴(inner cell mass)로부터 유도된 줄기 세포들은 배아 줄기(ES) 세포들로 알려져 있다. 원시 생식 세포들로부터 유도되고, 성숙한 배우자들(난자 및 정자)로 발달하는 줄기 세포들은 배아 생식(EG) 세포들로 알려져 있다. 이러한 유형의 줄기 세포들 양쪽 모두는 모든 3 개의 배아 생식층들(내배엽, 중배엽 및 외배엽)의 유도체들로 분화하는 그 독특한 능력으로 인하여 분화다능 세포들로 알려져 있다.
분화다능 줄기 세포들은 성체 조직들로부터 종종 유도된 다른 유형의 다분화능 줄기 세포로 더 분화할 수 있다. 다분화능 줄기 세포들은 자가 갱신 및 분화를 겪을 수도 있지만, 배아 줄기 세포들과는 달리 특정한 기능을 가진 세포들을 발생하게 한다. 성체 줄기 세포들의 예들은 조혈 줄기 세포들(HSC)을 포함하는데, 이들은 증식하고 분화하여 림프 및 골수 세포 유형들; 지방세포들, 연골세포들, 골세포들, 간세포들, 심근세포들 및 신경세포들로 분화할 수 있는 골수 유도 줄기 세포들(BMSC); 성상세포들, 신경세포들 및 희소돌기아교세포들(oligodendrocytes)로 분화할 수 있는 신경 줄기 세포들(NSC); 및 말초 혈액 줄기 세포들을 생성한다. 다분화능 줄기 세포들은 또한 상피 및 지방 조직들 및 제대혈(UCB)로부터 유도되었다.
착상 전 배아들의 내세포괴로부터 유도된 배아 줄기 세포들은 가장 분화다능인 줄기 세포군으로 여겨져 왔으며, 따라서 본 발명의 방법들에 대하여 바람직한 세포이다. 이러한 세포들은 다양한 체조직들 및 배아 외 조직들로 분화하는 능력을 유지하면서 생체 외 무한 증식이 가능하다. 배아 줄기 세포들은 남성(XY) 또는 여성(XX)일 수 있다; 여성 배아 줄기 세포들이 바람직하다.
다분화능 성체 줄기 세포들도 본 발명의 방법들에 사용될 수 있다. 바람직한 성체 줄기 세포들은 조혈 줄기 세포들(HSC)을 포함하는데, 이들은 일생에 걸쳐서 증식하고 분화하여 림프 및 골수 세포 유형들; 지방세포들, 연골세포들, 골세포들, 간세포들, 심근세포들 및 신경세포들을 포함하는 다양한 세포 유형들로 분화할 수 있는 골수 유도 줄기 세포들(BMSC); 및 성상세포들, 신경세포들 및 희소돌기아교세포들로 분화할 수 있는 신경 줄기 세포들(NSC)을 생성할 수 있다. 상피 및 지방 조직들 및 제대혈 세포들로부터 유도된 다분화능 줄기 세포들은 또한 본 발명의 방법들에 사용될 수 있다.
줄기 세포들은 쥐, 인간 및 영장류를 포함하지만, 여기에 한정되지 않는 임의의 포유류로부터 유도될 수 있다. 줄기 세포들을 획득한 이후에, 이러한 세포들은 본 발명의 방법들에 직접 사용될 수 있다; 예를 들어, 제대혈 세포들은 치료적 목적을 위하여 직접 사용되기에 충분한 양으로 얻어질 수 있다. 또한, 줄기 세포들은 이용가능한 세포들의 숫자를 늘리기 위하여 우선 팽창될 수 있다; 예를 들어, 미국 특허 번호 제 6,338,942 호 참조. 줄기 세포 제조를 위한 바람직한 쥐 균주들은 129, C57BL/6 및 잡종 균주를 포함한다(Brook et al., Proc . Natl . Acad . Sci . U. S. A. 94:5709-5712 (1997), Baharvand et al, In Vitro Cell Dev . Biol . Anim. 40:76-81 (2004)). 쥐, 인간 또는 영장류 줄기 세포들을 제조하는 방법들은 업계에 알려져 있으며 예를 들어, Nagy et al., Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (2002); Thomson et al., Science 282: 1145- 1147 (1998), Marshall et al., Methods Mol . Biol. 158: 11-18 (2001); Thomson et al., Trends Biotechnol. 18:53-57 (2000); Jones et al., Semin . Reprod . Med. 18:219-223 (2000); Voss et al., Exp . Cell Res. 230:45-49 (1997); 및 Odorico et al., Stem Cells 19: 193-204 (2001)에 기술되어 있다.
배아 줄기 세포들은 배반포 또는 발달의 임의의 다른 초기 단계로부터 직접 유도될 수 있거나 체세포 핵 이식 및 다른 유사한 절차들로부터 유래된 "클론된(cloned)" 줄기 세포 계통일 수 있다. 배반포로부터 쥐, 인간 또는 영장류 배아 줄기 세포들을 배양하는 일반적인 방법들은 Stem Cells : Scientific Progress and Future Research Directions (June 2001)라는 제목의 줄기 세포들에 관한 NIH 보고서의 Appendix C에서 찾을 수 있다. 예를 들어, 제1 단계에서, 착상 전 배반포의 내세포괴는 이를 둘러싸는 영양외배엽으로부터 제거된다. (인간 배아 줄기 세포들의 배양에 대하여, 배반포들은 시험관 내 수정에 의하여 발생되며 연구를 위하여 기증된다.) 세포들을 성장시키는데 사용되는 작은 플라스틱 배양 접시들은 우태혈청으로 보충된 성장 배지를 함유하며, 때때로 비분할 세포들의 "영양세포"층("feeder" layer)으로 코팅된다. 영양 세포들은 종종 분할하지 않도록 화학적으로 비활성화되는 쥐 배아 섬유아세포(MEF) 세포들이다. 시토카인 백혈병 억제 인자(LIF)와 같은 다른 시약들도 쥐 배아 줄기 세포들에 대한 배지에 첨가될 수 있다. 제2 단계로, 며칠 내지 일주일 후에, 세포들의 증식 군체들은 제거되어 새로운 배양 접시들로 퍼지게 되며, 그 각각은 MEF 영양세포층을 함유하거나 함유하지 않 을 수 있다. 상기 세포들이 인간 치료 목적들에 사용되고자 한다면, 상기 MEF 영양세포층은 포함되지 않는 것이 바람직하다. 이러한 생체 외 조건들 하에서, 배아 줄기 세포들은 응집하여 군체들을 형성한다. 배아 줄기 세포 계통들을 발생시키는데 필요한 제3 주요 단계에서, 개개의 미분화 군체들은 해리되어 계대(passge)라 불리는 단계인 새로운 접시로 다시 평판배양된다(replated). 이러한 재평판배양 공정은 배아 줄기 세포들의 "계통"을 수립한다. 세포들의 계통은 단일 배아 줄기 세포가 이를 발생시키면 "클론성(clonal)"이라 칭해진다. 제한 희석 방법들은 클론성 배아 줄기 세포 계통을 발생시키는데 이용될 수 있다. 줄기 세포들의 배양에 필요한 시약들은 예를 들어, Invitrogen, Stem Cell Technologies, R&D Systems 및 Sigma Aldrich로부터 상용 구입할 수 있으며, 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 제 2004/0235159 호 및 제 2005/0037492 호 및 Stem Cells : Scientific Progress and Future Research Directions , supra의 NIH 보고서의 Appendix C에 기술되어 있다.
여기에 기술된 줄기 세포들을 사용하는 방법들은 배아 줄기 세포들로부터 유래된 분화된 세포들의 이식을 통하여 치료될 수 있는 질병들의 치료에 이용될 수 있다. 본 발명의 줄기 세포들 또는 본 발명의 방법들을 이용하여 생성된 줄기 세포들은 파킨슨병 및 예컨대, 알츠하이머병과 같은 다른 퇴행성신경 질환들 또는 바람직하게는 인간인 임의의 환자의 뇌 또는 척수에 발생하는 외상성 상해를 치료하는데 사용될 수 있다.
본 발명은 분화 또는 발달의 연구를 위한 연구 목적들 및 연구 목적들에 유용한 형질전환 동물들의 발생을 위하여 사용될 수도 있다. 여기에 기술된 줄기 세 포들 및 그 사용 방법들은 예를 들어, 파킨슨병 또는 다른 신경 질환들의 동물 모델들을 발생시키고 시험하는데 이용될 수 있다. 본 발명의 줄기 세포들 및 그 사용 방법들은 또한 줄기 세포 분화, 발달 및 조직 발생 또는 재발생에 미치는 특정 화합물의 효과들을 연구하기 위하여 이용될 수 있다.
Nurr1 의 활성화를 검출하는 분석법들 및 선별법들
Nurr1은 중뇌 도파민 신경세포들에 대한 핵심적인 운명 결정 전사 인자이며(도 1), 따라서 본 발명의 선별 분석법들에서 유용한 표적이다. Nurr1은 티로신 히드록실라제(TH) 유전자의 프로모터 활성을 세포 특이적인 방식으로 직접 전사활성시킨다(Kim et al., J. Neurochem., 85: 622-634, 2003)(도 2). 또한, 도파민성 표현형 표지들의 연령 관련 감퇴는 흑색질에서 Nurr1 발현의 하향 조절과 관련되어 있다. 따라서, Nurr1 기능을 활성화시키는 분자들은 TH 유전자 발현을 증가시켜 DA 신경세포들의 신경 생존 및 도파민의 생성 증가를 용이하게 할 수 있다. 예컨대, 고효율 선별(HTS)과 같은 작은 분자 라이브러리들의 선별은 본 발명의 방법들에 따라 이용될 수 있다.
본 발명은 Nurr1 기능을 활성화시키는 화합물들에 대한 분석들을 특징으로 하며, 이로 인하여 TH 유전자 발현을 증가시켜 DA 신경세포들의 신경세포 생존 및 도파민의 생성 증가를 용이하게 한다. 본 발명의 일 분석에서, Nurr1 유전자의 전부 또는 일부를 포함하는 작동체 플라스미드는 천연 또는 변형된 티로신 히드록실라제 프로모터의 일 부분에 실시가능하게 연결된 리포터 유전자를 포함하는 리포터 플라스미드로 공통전달감염된다. 리포터 유전자 분석들은 개별 후보 화합물들 또는 화합물들의 라이브러리들의 유무에서 수행된다. 플라스미드 비율들, 작동체 플라스미드에 존재하는 Nurr1 유전자의 부분, TH 프로모터의 길이 및 서열, 리포터 유전자, 세포 계통 및 리포터 유전자 분석들을 포함하지만 여기에 한정되지 않는 다양한 매개변수들은 선별 조건들을 최적화하기 위하여 개별적으로 또는 합쳐져서 변경될 수 있다.
예를 들어, 상기 작동체 플라스미드는 예컨대, GAL4 DNA-결합 영역(DBD)과 같은 다른 영역을 엔코딩하는 유전자에 융합된 Nurr1 또는 예컨대, LBD(리간드-결합 영역)과 같은 그 영역을 엔코딩하는 유전자를 포함한다. 예컨대, GAL4 결합 부위와 같은 DNA의 해당 업스트림 활성화 영역은 리포터 플라스미드의 리포터 유전자에 실시가능하게 결합된다. 작동체 및 리포터 플라스미드들은 후보 화합물들의 유무에서 세포들로 공통전달감염되며, 히트 후보들은 리포터 유전자 분석의 결과들에 기반하여 확인된다.
바람직하게는, 후보 화합물들의 라이브러리는 생체 외 분석에서 시험되며, 본 분석으로부터 발생된 히트 후보들은 가양성 히트 후보들을 제거하기 위하여 제2의 다른 생체 외 분석에서 시험된다.
일련의 히트 후보 화합물들을 확인하는 생체 외 선별들 또는 다른 연구들을 수행한 이후에, 상기 히트 후보들을 입증하기 위하여 생체 내 연구들을 수행하는 것이 바람직하다. 예를 들어, 후보 화합물은 예컨대, 쥐들과 같은 시험 피검자들에게 투여될 수 있다; 이후 상기 히트 후보 화합물이 대조 실험들과 비교하여 도파민 발현을 증가시켰는가의 여부를 결정하기 위하여 상기 시험 피검자들로부터 나온 중 뇌 도파민성 신경세포들에 대한 연구가 수행될 수 있다.
도 3은 세포기반 분석들을 세우고, 이들을 이용하여 히트 후보 화합물들을 확인하고 세련되게 하며, 이러한 화합물들을 생체 내에서 시험하는 것과 관련된 공정의 개요를 제공한다. 선별 및 시험 실험들의 상세한 예들이 하기에 기술되어 있다.
예
하기 예들은 본 발명을 예시하는 목적으로 제공되며, 제한으로 해석되지 않아야 된다.
예 1. Nurr1 세포기반 분석 시스템
티로신 히드록실라제의 Nurr1의 활성화를 이용하는 세포기반 시스템은 Nurr1-활성화 화합물들의 확인을 위한 분석을 개발하기 위하여 만들어졌다. SK-N-BE(2)C(TH 발현) 세포들은 숙주 세포 계통으로 사용되는데, 이는 전달감염에서 리포터 플라스미드에 대한 Nurr1 작동체의 명백한 반응을 입증하는 것이다. 또한, 안정적인 세포 계통 전달감염을 이용하기보다는 제1 선별에서 낮은 친화도 히트 화학물질들을 검출하기 위하여 리포터 유전자에 대한 화합물들의 최대 반응성을 촉진하는 일시적인 전달감염이 선택되었다. 고려되는 다른 매개변수는 하나의 특이적인 종류의 NBRE-모티프보다는 모든 핵심적인 NBRE(Nurr1-결합)-유사 모티프들을 사용하는 짧은 길이의 천연 티로신 히드록실라제 프로모터들의 선택인데, 이는 다른 무관련 전사 인자들의 상호작용으로 인하여 인공적으로 복제된 프로모터 및 가양성 화학물질들보다는 생물학적인 것에 더 가까운 선별 조건을 발생시키는 천연 프로모 터는 효과적인 제2 선별 방법에 의하여 용이하게 배제될 수 있다는 가정에 기반한 것이다.
이러한 신규 Nurr1 세포기반 분석 시스템을 탐색하기 위하여, 작동체 유전자 프로모터, 내부 대조 유전자 프로모터, 티로신 히드록실라제 프로모터 크기, 내부 대조 유전자의 프로모터, 일시적인 전달감염 조건, 혈청 농도 및 DMSO 효과를 포함하는 가변성 매개변수들의 일부 조합들이 시도되었다. 예를 들어, 리포터 유전자에 대한 티로신 히드록실라제 프로모터 크기의 효과가 조사되었는데(도 4), 이는 외생성 Nurr1 발현은 SK-N-BE(2)C 세포들에서 6.0 kb-TH보다는 2.6 kb-TH에 의하여 구동된 리포터 유전자 발현을 강하게 전달활성화(transactivate)하였다는 것을 보여준다.
부분적으로 최적화된 조건들 하에서 Nurr1 활성체들의 예비 선별은 작은 화학적 라이브러리를 사용하여 수행되었다. 도 5A 및 5B 및 6에서 도시된 바와 같이, 일부 후보 화합물들은 대조와 비교하여 루시페라제 활성에서 수배 증가를 보였다.
이러한 접근법을 이용하여, 일부 제1 히트 후보들은 Nurr1 작동체 및 반딧불 루시페라제에 융합된 2.6-TH 프로모터를 사용한 최초 선별들로부터 Nurr1 활성체들로 확인되었다. 제2 선별 시스템으로서, 전체 Nurr1, Nurr1-리간드 결합 영역(LBD) 또는 Nurr1-DNA 결합 영역을 효모 GAL4 DBD에 개별적으로 융합시킨 GAL4 DNA 결합 영역(DBD) 구조체들이 사용되었다. 예를 들어, GAL4 DBD-Nurr1 LBD을 지닌 리포터 유전자에 미치는 제1 히트 후보들의 효과가 도 7에 도시되어 있는데, 이러한 제2 시스템은 제1 히트 후보들로부터 가양성들을 가려낼 수 있음을 보여주었다. 아미노 터미널에서의 일 영역을 통하여 Nurr1을 조절하는 6-MP는 본 실험에서 음성 대조로 사용되었다. 아모다이아퀸 및 글라페닌은 이러한 제2 분석에서 히트 후보 화합물들로서 확인되었다.
이러한 일련의 실험들은 파킨슨병의 치료에 유용할 수 있는 주 화합물들을 확인하는 제1 및 제2 선별들 양쪽 모두를 이용하는 가치를 입증하였다.
예 2. 7- 클로로 -4- 아미노퀴놀린 화합물들의 상대적 활성 분석
인간 신경아세포종 SK-N-BE(2)C 세포들은 10 % 우태혈청(Hyclone), 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 100 단위/㎖ 페니실린으로 보충된 Dulbecco's modified Eagle's 배지 내에 성장시켜 항생제 없이 상기 배지 내에 전달감염하기 하루 전에 96-웰 플레이트들로 25,000 세포/웰의 농도로 평판 배양시켰다. 각각의 96-웰 플레이트는 Nurr1 유전자 및 리포터 유전자를 함유하는 리포터 구조체를 포함하는 작동체 플라스미드의 1:1 몰비로 전달감염되었다(도 8A 및 8B 및 도 9A 및 9B). 전달감염들은 리포펙타민(Lipofectamine) 방법에 의하여 수행되었으며, 전달감염용 플라스미드들은 Qiagen 칼럼들(Qiagen Co., Santa Clarita, CA, USA)을 사용하여 제조되었다. 96-웰 플레이트당 사용된 전체 DNA 양은 내부 대조로 사용된 pRSV-b-gal의 0.02 ㎍과 비교하여 0.2 ㎍이었다. 전달감염하는 날짜에, DNA 0.2 ㎍이 Opti-MEM I 환원된 혈청 배지 25 ㎕에 희석되었으며, 리포펙타민 0.5 ㎕은 각각의 96-웰 플레이트에 대하여 Opti-MEM 배지 25 ㎕에 희석되었다. 5 분간 배양한 이후에, 상기 희석된 DNA 및 상기 희석된 리포펙타민은 합쳐져서 상온에서 40 분 동안 배양되어 DNA-리포펙타민 복합체들이 형성되었다.
상기 DNA-리포펙타민 복합체들 50 ㎕을 제거한 이후에, 3 % 숯조각(charcoal-stripped) 우태혈청으로 보충된 DMEM 배지 내에 적절한 농도로 각각 희석된 3 가지 화합물들(아모다이아퀸, 글라페닌 및 클로로퀸 이인산염)이 첨가되고 하룻밤 동안 배양되었다. 각각의 96-웰 플레이트로부터 나온 세포들은 이후 25 mM 트리스-인산염(Tris-phosphate)(pH 7.8), 2 mM DTT, 2 mM CDTA(1,2-디아미노사이클로헥산-N,N,N',N'-테트라아세트산(1,2-diaminocyclohexane-N,N,N',N'-tetraacetic acid), 10 % 글리세롤 및 1 % 트리톤 X-100을 함유하는 용해 완충액 50 ㎕로 용해되었다. 이후, 반딧불 루시페라제 기질의 동일 부피들이 첨가되었으며, 루시페라제 활성은 휘도계 평판 판독기를 사용하여 측정되었으며 하기 표에 도시된 바와 같이 베타-갈락토시다제 활성에 대하여 정규화되었다:
유도체들(+: 상대 활성) DMSO에 용해 1xPBS에 용해
아모다이아퀸(4E) ++++ ++++
글라페닌(11D) +++ +++
클로로퀸 이인산염 .- ++
예 3. 히트 후보들의 연구를 위한 생체 외 기능적 시스템의 수립
생체 외 기능적 연구 시스템들은 파킨슨병의 치료를 위하여 심화된 약물 주도 개발을 위한 최선의 히트 후보들을 선택하기 위하여 수립될 수 있다. Nurr1 활성체들의 다른 가능한 기능적 연구 시스템은 실시간 PCR에 의한 티로신 히드록실라제 유전자 발현의 증가, HPLC에 의한 도파민 양 검출 및 도파민성 세포 계통에서 티로신 히드록실라제 단백질의 면역염색으로 구성되어 있다.
실시간 PCR 에 의한 TH mRNA 의 정량화. 도파민 세포 계통 MN9D는 히트 후보들의 기능을 연구하는데 유용한 생체 외 모델을 제공한다. MN9D는 쥐 배아 14 일(Embryonic Day 14) 주둥이 중뇌 뇌피개(rostral mesencephalic tegmentum) 및 신경아세포종 세포 계통 N18TG2로부터 나온 제1 신경세포들의 체세포 융합에 의하여 발생되었다(Choi et al., Brain Res., 552:67-76, 1991). MN9D 세포들은 카테콜아민들을 합성하며, 배아 성질을 가지며, 신경세포 특이적 표지들을 발현하며, 그리고 DA 세포 독성 N-메틸-4-페닐피리디니움(MPP)에 민감하다(Kim et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 286:659-665, 2001). 이러한 실험들에서, MN9D 세포들은 10 % 우태혈청, 100 U/㎖ 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신으로 보충된 DMEM/F12 배지에 5 % CO2를 사용하여 37 ℃에서 유지된다. 후보 화합물들에 노출된 MN9D 세포들로부터 나온 전체 RNA는 TriReagent를 사용하고 이후 DNA 분해효소 I(Dnase I)로 처리하여 제조된다. cDNA는 RT-PCR에 대한 SuperScriptTM 제1 가닥 합성 시스템을 이용하여 5 ㎍ RNA를 사용하여 구해진다. 그 결과로 발생된 cDNA는 PCR 반응들을 위한 주형으로 사용된다. 하기의 프라이머 세트들은 실시간 PCR 분석들을 위하여 사용될 수 있다:
액틴(Actin): 5'-GGCATTGTGATGGACTCCGG-3' 및
5'-TGCCACAGGATTCCATACCC-3' (358 bp);
TH: 5'-TTGGCTGACCGCACATTTG-3' 및
5'-ACGAGAGGCATAGTTCCTGAGC-3' (336 bp);
GAD:5'-GGGTTTGAGGCACACATTGATAAG-3 ' 및
5'-GCGGAAGAAGTTGACCTTGTCC-3' (279bp);
Nurrl : 5'-CATGGACCTCACCAACACTG-3' 및
5'-GAGACAGGTGTCTTCCTCTG-3' (383 bp).
실시간 PCR은 발현 레벨들을 정량화하기 위하여 수행될 수 있다. 증폭들은 DNA engine OpticonTM(MJ Research, Waltham, MA)를 사용하여 각각의 프라이머 0.5 μM, 0.5 X SYBR Green I(Molecular Probes) 및 10 배 희석된 cDNA를 2 ㎕ 함유하는 25 ㎕ 부피들에서 수행될 수 있다. 상기 PCR 반응들은 하기의 온도 프로파일을 사용하는 50 사이클들로 구성되어 있다: 95 ℃에서 30 초 동안, 60 ℃에서 30 초 동안, 72 ℃에서 30 초 동안 그리고 79 ℃에서 5 초 동안. 각각의 PCR 생성물의 녹는점이 측정된다. 각각의 PCR 사이클 이후에, 형광 신호는 프라이머 이량체들(여기에 사용된 모든 프라이머 이량체들의 Tm은 79 ℃ 미만이다)을 녹이기 위하여 79 ℃에서 검출된다. 각각의 PCR 생성물의 순도는(단일 특이적인 밴드의 존재로 정의됨) 이후 겔 전기영동법에 의하여 확인된다. GAPDH 플라스미드 DNA(103 내지 108 분자들)를 사용하여 표준 곡선이 작성된다. 특이적인 PCR 생성물들로부터 나온 형광 신호는 이후 액틴의 신호에 대하여 정규화된다. 각각의 유전자에 대하여, 2 개의 독자적인 표본들이 분석되며, 상기 모든 반응들은 적어도 2 회 반복되어야 한다.
HPLC 에 의한 도파민의 정량화. 도파민의 HPLC 분석들은 후보 화합물들에 노출시킨 이후에 세포 용해질을 사용하여 수행된다. 6 개의 웰들로부터 나온 상기 세포 용해질들은 혼주되며(pooled), 과염소산(PCA) 및 EDTA를 각각 0.33 M 및 0.17 mM의 최종 농도로 하여 200 ㎕를 첨가하여 단백질들이 침전된다. 14,000x g로 10 분 동안 원심분리시킨 이후에, 세포간 부분(상청액) 및 세포 펠렛(cell pellet)은 각각 세포간 DA 및 단백질 분석을 위하여 분리된다. 전기화학적 검출을 이용한 HPLC 분석은 분리를 위한 역상 칼럼을 사용하여 Andersson et al., Neurotoxicology, 16:201-210, 1995에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다.
TH 단백질의 면역염색. 화합물 처리 이후에, MN9D 세포들은 4 % 포름알데히드(Electro Microscopy Sciences, Ft. Washington, PA)로 30 분 동안 고정되며, PBS로 헹군 이후에 차단 완충액(blocking buffer)[PBS, 10 % 정상 당나귀 혈청(NDS) 또는 정상 염소 혈청(NGS), 0.1 % Triton X-100]을 사용하여 10 분 동안 배양된다. 세포들은 2 % NDS 또는 NGS를 함유하는 PBS에 희석된 제1 항체들로 4 ℃에서 하룻밤 동안 배양된다. 예컨대, 토끼 항-β-튜불린(rabbit anti-β-tubulin)(1:2000; Covance, Richmond, CA), 양 항-TH(sheep anti-TH)(1:200; Pel-Freez, Rogers, Arkansas), 양 항-AADC(sheep anti-AADC)(1:200; Chemicon, Temecula, CA), 쥐 항-DAT(rat anti-DAT)(1:1000; Chemicon) 또는 토끼 항-5-히드록시트립타민(HT)(1:3000; Diasorin, Stillwater, MN)과 같은 다양한 제1 항체들이 사용될 수 있다. 상기 단백질들은 이후 항-γ-아미노부티르산(GABA)(1:5000; Sigma)을 사용하여 침전된다. PBS로 세척한 이후에, 커버슬립(coverslip)들이 2 % NDS 또는 NGS로 보충된 PBS에 예컨대, Alexa Fluor 488(녹색) 또는 Alexa Fluor 568(적색)-라벨된 당나귀/염소 IgG(1:500; Molecular Probes, OR)과 같은 형광 라벨된 제2 항체들을 사용하여 상온에서 30 분 동안 배양된다. PBS에서 10 분 동안 3 회 헹군 이후에, 상기 커버슬립들은 이후 겔/마운트(Gel/Mount)(Biømeda Corp., Foster City, CA)를 사용하여 슬라이드들 상으로 장착된다. 세포들은 크립톤, 크립톤/아르곤 및 헬륨 레이저들로 장비된 Leica TCS/NT 공초점 현미경을 사용하여 검사될 수 있다. 세포들은 Chung et al., Eur. J. Neurosci., 16:1829-1838, 2002 또는 그 변형된 버전들에 기술된 프로토콜에 따라서 계수될 수 있다.
예 4. 도파민성 신경세포의 세포 분화
배아 줄기 세포들의 시험관 내 분화를 위하여, 업계에 알려져 있고(예컨대, Lee et al., Nat. Biotechnol. 18:675-679, 2000) 배아 줄기 세포들의 발달 진행의 각각의 단계를 구분하는데 유용한 5-단계 방법을 이용하였다. 쥐 배반포 유도 배아 줄기 세포 계통 D3 및 J1은 업계에 잘 알려진 방법들(예컨대, Deacon et al., Exp. Neurol., 149:28-41, 1998, and Chung et al., Stem Cells, 20:139-145, 2002)에 따라서 증식되고 유지되었다. 상기 쥐 배아 줄기 세포들은 2mM L-글루타민, 0.001 % β-메르캅토에탄올, 1X 비필수 아미노산들(Invitrogen사로부터 모두 구입) 및 10 % FBS(Hyclone)로 보충된 DMEM으로 구성된 성장 배지에서 4 일 동안 비유착성(nonadherent) 박테리아 접시들 상에 배상체들(EBs)로서 발생되었다. 상기 배상체들은 이후 유착성 조직 배양 접시 표면들 상으로 평판 배양되었다. 배양한 지 24 시간 이후에, 네스틴-양성 세포들의 선택은 무혈청 ITSFn 배지에서 실시되었다. 선택한 지 10일 후에, 네스틴-양성 세포들은 트립신처리 및 라미닌(1 ㎍/㎖) 및 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF)(10 ng/㎖)(Invitrogen)로 보충된 N2 배지 내에 폴리-L-오르니틴/피브로넥틴(ornithine/Fibronectine) 코팅된 오버슬립들 상에 이후 평판 배양을 통하여 세포들을 해리시켜 팽창되었다. 신경세포성 전구체 세포들의 분화는 라미닌을 함유하는 N2 배지로부터 bFGF를 빼내어서 유도되었다. 아모다이아퀸(4E)의 효과를 관찰하기 위하여, 4 일의 기간 동안 배아 줄기 세포 유도 신경세포성 단계의 5 일째 되는 날에 배아 줄기 세포 유도 신경세포들로 각각의 2 uM 아모다이아퀸(4E) 화합물을 첨가하였다.
세포들은 1X PBS에 4 퍼센트 파라포름알데히드에서 고정되고, 유리 슬라이드 상에 장착되며, 그리고 항-TH(Pelfreeze) 및 항-β-튜불린 III(Covance)를 포함하는 제1 항체들로 염색되었다(도 10A 및 10B). 적절한 Alexa488- 및 Alexa555-라벨된 제2 항체들(Molecular Probes) 및 4',6-디아미디노-2-페닐인돌 대조염색제(counterstain)가 눈으로 가시화(visualization)를 위하여 사용되었다.
다른 실시예들
상기 명세서에 언급된 모든 공개물들, 특허들 및 특허 출원들은 여기에 참고로 포함된다. 본 발명의 범위 및 사상을 벗어나지 않으면서 본 발명의 기술된 방법 및 시스템의 다양한 변형들 및 변경들이 있을 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명은 특이적인 실시예들과 연계하여 기술되었음에도, 청구된 본 발명은 그러한 특이적인 실시예들에 과도하게 한정되지 않아야 함을 이해하여야 한다. 진실로, 당업자에게 명백한 본 발명을 실시하기 위하여 상기 기술된 방식들의 다양한 변형들은 본 발명의 범위 내에 있음을 의미한다.
다른 실시예들은 청구항들에 있다.

Claims (35)

  1. (a) 환자가 파킨슨병을 가지거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있는지의 여부를 결정하는 단계; 및
    (b) 상기 환자가 파킨슨병을 가지거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있다면, 상기 환자에게 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는데 충분한 양의 7-클로로-4-아미노퀴놀린(7-chloro-4-aminoquinoline) 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법.
  2. (a) 환자가 파킨슨병을 가지거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있는지의 여부를 결정하는 단계; 및
    (b) 상기 환자가 파킨슨병을 가지거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있다면, 상기 환자에게 상기 환자의 세포들에서 Nurr1을 활성화시키는데 충분한 양의 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서,
    상기 화합물은 아모다이아퀸(amodiaquine)인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 청구항 1 또는 2에 있어서,
    상기 화합물은 글라페닌(glafenine)인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. (a) 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물; 및
    (b) 상기 화합물을 파킨슨병을 가진 것으로 진단되거나 파킨슨병을 발달시킬 위험이 있는 환자에게 투여하는 지시사항을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 화합물은 아모다이아퀸인 것을 특징으로 하는 키트.
  7. 청구항 5에 있어서,
    상기 화합물은 글라페닌인 것을 특징으로 하는 키트.
  8. 생체 외 줄기 세포를 도파민성 신경세포로 분화시키는 방법으로서,
    상기 방법은 상기 생체 외 줄기 세포를 상기 줄기 세포의 분화를 유도하는데 충분한 양으로 존재하는 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 청구항 8에 있어서,
    상기 줄기 세포는 인간 배아 줄기 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 청구항 8에 있어서,
    상기 화합물은 아모다이아퀸인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 상기 화합물은 글라페닌인 것을 특징으로 하는 방법.
  12. (a) 줄기 세포들을 포함하는 조성물을 환자의 두뇌로 주입하는 단계; 및
    (b) 단계 (a) 이후에, 상기 환자에게 상기 줄기 세포들의 분화를 유도하는데 충분한 양의 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법.
  13. 청구항 12에 있어서,
    상기 줄기 세포들은 인간 배아 줄기 세포들인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 청구항 12에 있어서,
    상기 화합물은 아모다이아퀸인 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 청구항 12에 있어서,
    상기 화합물은 글라페닌인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 줄기 세포들 및 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 포함하는 조성물을 환자의 두뇌로 주입하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 파킨슨병을 치료하거나 파킨슨병 발달을 억제시키는 방법.
  17. 청구항 16에 있어서,
    상기 줄기 세포들은 인간 배아 줄기 세포들인 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 청구항 16에 있어서,
    상기 화합물은 아모다이아퀸인 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 청구항 16에 있어서,
    상기 화합물은 글라페닌인 것을 특징으로 하는 방법.
  20. (a) 줄기 세포들; 및
    (b) 7-클로로-4-아미노퀴놀린 화합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  21. 청구항 20에 있어서,
    상기 줄기 세포들은 인간 배아 줄기 세포들인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  22. 청구항 20에 있어서,
    상기 화합물은 아모다이아퀸인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  23. 청구항 20에 있어서,
    상기 화합물은 글라페닌인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  24. (a) 포유류 세포를 Nurr1 유전자의 영역을 포함하는 제1 플라스미드 및 리포터 유전자(reporter gene)와 실시가능하게 연결된 프로모터를 포함하는 제2 플라스미드와 공통전달감염시키는(cotransfecting) 단계;
    (b) 상기 세포를 후보 화합물과 접촉시키는 단계;
    (c) 상기 리포터 유전자의 발현의 결과 레벨을 측정하는 단계; 및
    (d) 상기 레벨이 대조 수치보다 적어도 20 %를 초과한다면, 상기 후보 화합물은 파킨슨병의 치료용 화합물로 확인되도록 상기 레벨을 대조 수치와 비교하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물을 파킨슨병의 치료용으로 확인하는 방법.
  25. 청구항 24에 있어서,
    단계 (b)에서 생성된 화합물은 단계 (c) 이전에 18 시간 동안 배양되는 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 청구항 24에 있어서,
    상기 세포는 SK-N-BE(2)C 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 청구항 24에 있어서,
    상상기 제1 플라스미드 및 상기 제2 프라스미드 사이의 몰비는 0.1 내지 10 사이인 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 청구항 24에 있어서,
    상기 제2 플라스미드는 티로신 히드록실라제(tyrosine hydroxlase) 프로모터의 100 개 염기들을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 청구항 28에 있어서,
    상기 제2 플라스미드는 티로신 히드록실라제 프로모터의 2,600 개 염기들을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 청구항 24에 있어서,
    상기 리포터 유전자는 반딧불 루시페라제인 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 청구항 24에 있어서,
    상기 제1 플라스미드는 Nurr1 유전자의 상기 영역에 실시가능하게 연결된 GAL4 DNA-결합 영역을 포함하고, 상기 제2 플라스미드는 상기 리포터 유전자에 실시가능하게 연결된 GAL4 결합 부위를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. (a) (i) 도파민을 생성할 수 있는 포유류 세포; 및
    (ii) 청구항 24의 방법을 이용하여 확인된 화합물을 제공하는 단계;
    (b) 상기 세포를 상기 화합물과 접촉시키는 단계;
    (c) 티로신 히드록실라제 또는 도파민의 발현의 결과 레벨을 측정하는 단계; 및
    (d) 상기 레벨이 대조 수치보다 적어도 20 %를 초과한다면, 상기 화합물은 파킨슨병의 치료용 화합물로 확인되도록 상기 레벨을 대조 수치와 비교하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물을 파킨슨병의 치료용으로 확인하는 방법.
  33. 청구항 32에 있어서,
    상기 측정 단계는 실시간 PCR을 이용한 티로신 히드록실라제의 정량화를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 청구항 32에 있어서,
    상기 측정 단계는 HPLC 분석을 이용한 도파민의 정량화를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 청구항 32에 있어서,
    상기 측정 단계는 면역염색(immunostaining)을 이용한 티로신 히드록실라제의 정량화를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180118396A (ko) * 2017-04-21 2018-10-31 이화여자대학교 산학협력단 아미노퀴놀린계 화합물을 포함하는 면역 증강용 조성물, 조절 t 세포로의 분화 촉진용 조성물, 및 이를 이용한 방법

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5785948B2 (ja) * 2009-09-04 2015-09-30 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 胚性幹細胞におけるゲノムの安定性およびテロメアの伸長を促進するための方法
IN2012DE00661A (ko) * 2012-03-07 2015-08-21 Univ Delhi
CN103778171A (zh) * 2012-10-24 2014-05-07 I-昂索夫特有限公司 利用健康指数的健康媒体推荐系统
US10039758B2 (en) 2014-10-24 2018-08-07 Keck Graduate Institute Of Applied Life Sciences Compositions and methods for inhibiting bacterial and viral pathogens
JP7023442B2 (ja) 2017-01-19 2022-02-22 国立大学法人 鹿児島大学 抗重症熱性血小板減少症候群ウイルス薬
US11571416B2 (en) 2017-04-13 2023-02-07 Kagoshima University Amodiaquine analogs and methods of uses thereof
JP6959446B2 (ja) 2017-11-15 2021-11-02 コリア リサーチ インスティチュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジーＫｏｒｅａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ジテルペン系化合物を含む神経変性疾患の予防又は治療用組成物

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3232944A (en) 1966-02-01 Monoglycerides 0f (carbgxy pl-ienyl amtno) chlgroqukngltnes
US2474821A (en) 1945-11-05 1949-07-05 Parke Davis & Co Quinoline compounds and process of making same
FR2552430B1 (fr) * 1983-09-22 1985-10-25 Rhone Poulenc Sante Procede de preparation de quinolinones-4
US4963565A (en) 1986-07-30 1990-10-16 National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine In vivo treatment of mycobacterial infections with 6-cyclo octylamino-5,8-quinoline quinone
US4806537A (en) 1987-04-16 1989-02-21 City Of Hope Use of amodiaquin and related compounds in treatment of nervous system degeneration
US4831033A (en) 1987-04-16 1989-05-16 City Of Hope Use of amodiaquin in treatment of nervous system degeneration
US5430039A (en) 1990-09-28 1995-07-04 Cephalon, Inc. Treatment of neurological disorders
CA2279651A1 (en) 1996-09-05 1998-03-12 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for treatment of neurological disorders and neurodegenerative diseases
EP0966285B1 (en) 1997-03-07 2002-10-02 Vernalis Research Limited Use of (+)mefloquine for the treatment of malaria
WO1999026657A1 (en) 1997-11-25 1999-06-03 Musc Foundation For Research Development Inhibitors of nitric oxide synthase
US6284539B1 (en) 1998-10-09 2001-09-04 Neuralstem Biopharmaceuticals, Ltd. Method for generating dopaminergic cells derived from neural precursors
US6572858B1 (en) 1999-04-30 2003-06-03 Apt Pharmaceuticals, Llc Uses for anti-malarial therapeutic agents
US20020198231A1 (en) 1999-07-13 2002-12-26 Jodi Nelson Compositions and methods for the treatment of Parkinson's disease
ATE431141T1 (de) 1999-07-13 2009-05-15 Alpha Res Group Llc Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung der parkinson-krankheit
DE00993875T1 (de) * 2000-05-31 2004-04-15 Nicholas Piramal India Ltd. Kit zur behandlung von malaria die chloroquin und 3-(1-(((4-((6-methoxy-8-quinolinyl)amino)pentyl)amino)-ethylidene)-dihydro-2(3h)furanone enthält
WO2003012040A2 (en) 2001-07-27 2003-02-13 Baylor College Of Medecine Mutant nurr1 gene in parkinson's disease
GB0119911D0 (en) * 2001-08-15 2001-10-10 Novartis Ag Organic Compounds
US20040167162A1 (en) * 2001-11-09 2004-08-26 Charous B. .Lauren Uses for anti-malarial therapeutic agents
GB0201025D0 (en) * 2002-01-17 2002-03-06 Arakis Ltd The treatment of degenerative diseases
US7084157B2 (en) 2002-05-17 2006-08-01 Rajeev Raut Ophthalmic pharmaceutical compositions and methods for treating ocular inflammation
AU2003248893A1 (en) * 2002-07-09 2004-01-23 Alpha Research Group, L.L.C. Compositions and methods for the treatment of parkinson's disease and tardive dyskinesias
WO2004066940A2 (en) * 2003-01-27 2004-08-12 Baylor College Of Medicine Compositions and methods containing substituted quinolines and substituted diphenylsulfones
US20060121488A1 (en) 2003-02-26 2006-06-08 Rothstein Jeffrey D Glutamate transport modulatory compounds and methods
WO2005004794A2 (en) 2003-06-09 2005-01-20 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Method of treating neurodegenerative disease
US8452633B2 (en) 2004-09-07 2013-05-28 Siemens Corporation System and method for improved project portfolio management
US8231098B2 (en) 2004-12-07 2012-07-31 Newport Corporation Methods and devices for active vibration damping of an optical structure
WO2006108666A1 (en) 2005-04-13 2006-10-19 Proteosys Ag Mefloquine, nelfinavir and saquinavir as novel agents for neurodegenerative and (neuro-) inflammatory diseases
WO2007082206A2 (en) 2006-01-10 2007-07-19 Yu Ruey J N-(phosphonoalkyl)-amino acids, derivatives thereof and compositions and methods of use

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180118396A (ko) * 2017-04-21 2018-10-31 이화여자대학교 산학협력단 아미노퀴놀린계 화합물을 포함하는 면역 증강용 조성물, 조절 t 세포로의 분화 촉진용 조성물, 및 이를 이용한 방법

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Publication number Publication date
JP2009527478A (ja) 2009-07-30
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AU2007217892A1 (en) 2007-08-30
WO2007098047A2 (en) 2007-08-30
US20090226401A1 (en) 2009-09-10
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US8114892B2 (en) 2012-02-14

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