KR101928695B1 - Lipid-photosensitizer nanocomposite and process of preparation thereof - Google Patents
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Abstract
본 발명은 지질-광감작제 나노결합체 및 이의 제조 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 지질 리포좀 내부에 광감작제가 봉입되거나, 지질 리포좀 외부에 광감작제가 결합되어 구성되며, 지질과 광감작제를 연결하는 연결자는 미생물이 분비하는 효소에 의하여 특이적으로 분해되는 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 지질-광감작제 나노결합체는 피부 투과성이 우수하여 진피층에 존재하는 균의 사멸률을 높일 수 있고, 균이 분비하는 분해효소인 리파아제에 의해 지질-광감작제 나노결합체가 분해되어 무좀균, 여드름균을 포함하는 효소를 분비하는 미생물이 존재하는 부위에서 특이적으로 균을 사멸시킬 수 있다. 또한, 광역학 치료법으로 치료함으로써 기존의 항진균제를 장기간 복용할 시 일어날 수 있는 간독성 등의 부작용의 위험을 낮추며, 항생제 내성균 발생 위험 역시 낮출 수 있어, 무좀, 여드름 치료를 비롯한 효소를 분비하는 미생물에 의해 발생하는 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a lipid-photosensitizer nano-conjugate and a method for producing the same, and more particularly, to a lipid-photosensitizer nano-conjugate and a method for preparing the same. More particularly, Wherein the linker is specifically cleaved by an enzyme secreted by a microorganism, and a method for producing the same. The lipid-photosensitizer nano-conjugate according to the present invention has an excellent skin permeability and can increase the killing rate of the bacteria existing in the dermis layer. The lipid-photo-sensitizer nano-conjugate is decomposed by lipase, It is possible to specifically kill the bacterium at a site where microorganisms that secrete an enzyme including anthracnose and acne bacteria are present. In addition, treatment with photodynamic therapy reduces the risk of side effects such as hepatotoxicity, which can occur when taking a conventional antifungal drug for a long time, and also reduces the risk of developing an antibiotic resistant bacterium. Therefore, the microorganism secretes an enzyme And can be usefully used for the prevention or treatment of diseases that occur.
Description
본 발명은 미생물이 분비하는 효소에 의해 특이적으로 분해되는 지질-광감작제 나노결합체 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a lipid-photosensitizer nano-conjugate which is specifically degraded by an enzyme secreted by a microorganism and a method for producing the same.
약물은 화학물질 상태 그대로 인체에 투여하는 것이 아니라 환자가 복용 또는 사용하기 편리한 제형으로, 또는 약리 효과를 효율적/효과적으로 발현할 수 있는 제형으로 가동하여 여러 가지 경로를 거쳐 투여된다. 투여된 약물은 투여된 위치에서 또는 적당한 곳으로 이동하여 흡수되어 혈류를 타고 각 장기로 분포되고, 대사과정을 거쳐 오줌을 통하거나 때로는 호기를 토하여 배설됨으로써 인체로부터 소실이 된다. 약효는 생체내의 작용 부위에 도달한 약물의 분자에 의하여 발현되고, 다른 부위에 도달한 약물은 대개 부작용을 나타내는 수가 많다. 따라서 약물의 치료를 효과적으로 하기 위하여 목적하는 신체 부위에 약물을 집중적으로 정확히 전달할 필요가 있다.The drug is not administered to the human body as a chemical state, but is administered through various routes, in a formulation that is easy for a patient to take or use, or in a formulation capable of effectively and effectively expressing a pharmacological effect. The administered medicines are transferred from the administered position or the appropriate place, and are absorbed and distributed to the respective organs in the bloodstream, and they disappear from the human body through urination or excretion through excretion through metabolic processes. The drug efficacy is expressed by the molecules of the drug reaching the action site in the living body, and the drug reaching the other site usually shows many side effects. Thus, in order to effectively treat the drug, it is necessary to concentrate and accurately deliver the drug to the target body part.
일반적으로 무좀은 흔히 관찰되는 진균 감염 증상의 하나로서, 곰팡이가 피부의 각질을 녹여 영양분으로 삼아 기생, 번식하는 피부질환이다. 주로 발가락이나 발바닥에 생기지만, 각질이 풍부하고 습하며 따뜻한 곳(예컨대, 발가락, 발바닥, 발톱, 손톱, 옆구리, 사타구니 주변, 살이 겹치는 곳 등)의 신체 대부분의 주위에서 발병된다. In general, athlete's foot is a commonly observed symptom of fungal infection, and it is a skin disease that fungus dissolves keratin of skin and becomes parasitic and propagates as nutrient. It occurs mainly on the toes or soles, but it occurs in most of the body's body, which is rich in keratin and moist and warm (eg, toes, soles, claws, nails, flank, groin,
구체적으로, 통풍이 안 되는 습한 상태에서 피부에 친화력을 갖는 곰팡이 (더마토파이트) 중에서 주로 트리코피톤 루브룸, 트리코피톤 메타그로파이트 및 에피더모피톤 플로코섬에 의해 발병되며, 이들이 피부의 각질에 침투하여 가려움, 발적, 염증 등의 증상을 일으키게 된다.Specifically, it is mainly caused by tricophyton rubrum, tricophyton metagrophite and epidermophyton tromphocosum among fungi (dermatophytes) having an affinity to skin in a non-ventilated wet state, It causes infestation, itching, redness, and inflammation.
무좀은 주로 기온이 15℃, 습도가 70% 정도 되는 시기에 갑자기 상태가 악화되며, 보통 장마가 시작될 무렵에 갑자기 더 가려워진다. 무좀균이 가장 번식하기 쉬운 환경은 37℃의 온도와 적당한 습기, 그리고 영양분 등인데, 여름철은 이같은 조건들을 모두 갖추고 있기 때문에 여름이면 무좀균이 왕성하게 번식하고 기승을 부리게 된다. 그러나, 균은 겨울철에도 피부에 달라붙어 있으며, 다만 활동이 약화될 뿐이다.Athlete's foot suddenly worsens at the time when the temperature is about 15 ℃ and humidity is about 70%, and usually it gets worse when the rainy season starts. The most prosperous environment for athlete's foot is 37 ℃ temperature, moderate moisture and nutrients. In summer, all of these conditions are enough for athlete's foot to grow and survive in the summer. However, the fungus stuck to the skin even in the winter, only to weaken the activity.
또한, 현대사회는 신발이나 양말 등을 장시간 착용하는 생활을 주로 하는데, 상기와 같은 진균류의 감염 후, 신발, 양말 등에 의해 피부가 외부와 폐쇄된 채로 장시간 유지되면, 감염 부위의 열과 습기로 인해 진균류들의 증식이 향상되고, 무좀이 발생하게 된다. 통계상 전체 인구의 10% 이상이 무좀으로 고생하고 있으며 20~40대에 가장 많이 발병한다. 드물게는 소아에게도 발병한다.In addition, contemporary society is mainly engaged in wearing shoes or socks for a long time. When the skin is kept for a long time with shoes and socks after being infected with fungi as described above, And athlete's foot is generated. Statistics show that more than 10% of the population is suffering from athlete's foot and the most in 20- to 40-year-olds. Rarely, it also affects children.
무좀 치료에 주로 사용되는 치료제는 국소 외용제를 들 수 있으며, 일반적으로 스테로이드제와 항생제를 포함한다. 상기 스테로이드제 및 항생제는 사용하기 편리하면서도 부작용이 적고, 증상 완화 및 억제의 효과 때문에 많이 사용되지만, 항생제에 대항한 내성균주의 발현이 문제가 되고 있다. Therapeutic agents mainly used for the treatment of athlete's foot include topical topical agents, and generally include steroids and antibiotics. These steroids and antibiotics are convenient to use, have few side effects, and are often used because of the effects of symptom relief and inhibition, but the expression of resistant bacteria against antibiotics has been a problem.
다음으로는 경구제가 있는데, 경구제의 경우 완치의 효과를 기대할 수 있으나 감염 부위와 유형에 따라 6~12개월간 장기 복용이 필요하지만, 간독성, 신독성 등의 부작용이 발생하고 있다.The following is an oral agent. Oral preparations can be expected to have a cure effect. Depending on the site and type of infection, long-term use is required for 6 to 12 months. However, side effects such as hepatotoxicity and nephrotoxicity are occurring.
따라서, 대개의 경우 무좀은 꾸준히 치료하지 않으면 완치가 어렵기 때문에, 부작용이 없으면서도 안전성 및 완치 가능한 새로운 형태의 무좀 치료제가 요구되고 있는 실정이다.Therefore, in most cases, athlete's foot is difficult to cure unless it is treated constantly. Therefore, there is a need for a new form of athlete's foot treatment which is safe and can be cured without side effects.
한편, 광역학 치료는 1990년대 피부암을 치료하는 기술로서, 캐나다의 FDA승인을 받았고, 이후 미국, 일본, 유럽 등 주요국으로부터 치료 승인을 받았다. 현재는 암 뿐만 아니라 감염, 상처의 치료 및 다양한 피부과 질병을 포함하는 악성이 아닌 질병을 위해서도 광역학 치료가 사용되고 있다.Photodynamic therapy was the treatment of skin cancer in the 1990s and was approved by the Canadian FDA and subsequently approved by major countries in the US, Japan and Europe. Currently, photodynamic therapy is used not only for cancer, but also for non-malignant diseases, including infections, wound healing, and various dermatological diseases.
광역학 치료에 사용되는 광감작제(photosensitizer)는 빛에 노출되지 않을 경우 비활성상태로 있다가, 특정 파장의 빛을 조사하면 광감작제가 빛을 받아 광 에너지를 발생시켜 형광 신호를 생성하거나, 주변의 기질 또는 산소와 반응하여 반응성 산소종(reactive oxygen species)를 생성하고, 생성된 반응성 산소종은 주변 종양 세포를 자멸 또는 괴사시키는 효과가 있다.The photosensitizer used in photodynamic therapy is inactive when it is not exposed to light. When light of a specific wavelength is irradiated, the photosensitizer generates light energy to generate a fluorescent signal, Reactive oxygen species by reacting with the substrate or oxygen of the tumor cells, and the produced reactive oxygen species has an effect of self-destroying or necrosising peripheral tumor cells.
상기 광역학 치료와 관련된 종래 기술로는 대한민국 등록특허 제10-1183732호에서 광역학 진단 또는 치료를 위한 아세틸화된 다당류 및 광감작제가 결합된 결합체가 암세포만을 특이적으로 표적할 수 있음을 개시하였고, 대한민국 공개특허 제10-2014-0048008호에서는 효소 반응성 그라핀 옥사이드/생체 고분자-광감작제 나노결합체가 암의 형광 영상 진단뿐 아니라 광역학/광열 치료에 적용할 수 있음이 개시되어 있다.In the prior art related to the above photodynamic therapy, Korean Patent Registration No. 10-1183732 discloses that a conjugate in which an acetylated polysaccharide and a photosensitizer are combined for photodynamic diagnosis or treatment can specifically target cancer cells only Korean Patent Publication No. 10-2014-0048008 discloses that enzyme-reactive graphene oxide / biopolymer-photosensitizer nano-conjugate can be applied to photodynamic / photothermal treatment as well as fluorescence imaging of cancer.
다만, 현재 피부 질환에 사용되는 광감작제를 이용한 치료법은 제형화가 되지 않아 질병 부위뿐만 아니라 정상 부위까지 독성 효과를 나타내는 문제가 있다.However, there is a problem that the treatment using the photosensitizer, which is currently used in skin diseases, is not formulated and thus shows a toxic effect not only in the disease site but also in the normal site.
따라서, 무좀균이 존재하는 부위에서 특이적으로 균을 사멸할 수 있는 무좀 치료제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.Accordingly, there is a need to develop a therapeutic agent for athlete's foot that can specifically kill bacteria at a site where athomycosis is present.
한편, 최근 리포좀을 이용한 약물전달시스템의 유용성이 대두되면서, 피부로의 약물 전달에 리포좀이 많이 사용되고 있다.On the other hand, recently, the availability of liposome-mediated drug delivery system has become popular, and liposomes are widely used for drug delivery to the skin.
리포좀은 내부에는 친수성의 공간이 있으며 외부로는 닫힌 이중의 지질막을 가지고 있다. 리포좀은 중앙의 친수성 공간에 수용성 분자나 혹은 약물을 내포시키며, 외부의 지질 이중막에는 지용성 약물을 내포시킬 수 있다.The liposomes have a hydrophilic space inside and a closed double lipid membrane outside. Liposomes contain water-soluble molecules or drugs in the central hydrophilic space, and lipid bilayers on the outside can contain lipophilic drugs.
리포좀을 통해 피부에 전달하는 경우 표피층을 통과한다는 보고와 모낭을 통하여 전달된다는 보고가 있다. 모낭을 통한 전달에는 리포좀 형태의 운반체나 지방산과 같은 지질을 포함하는 복합물이 효율적인 것으로 보고되었다.It has been reported that when it is delivered to the skin through the liposome, it passes through the epidermal layer and is transmitted through the hair follicle. Compositions containing lipids such as liposomal carriers and fatty acids have been reported to be efficient for delivery through hair follicles.
이에 본 발명자들은 새로운 무좀 치료제를 연구하던 중, 지질-광감작제 결합체를 함유한 외용제가 피부 투과성이 우수하여 진피층에 존재하는 균의 사멸률을 높일 수 있고, 균이 분비하는 리파아제에 의해 분해되어 무좀균이 존재하는 부위에서 특이적으로 균을 사멸시킬 수 있으며, 광역학적 치료법에 의해 치료하므로 기존의 항진균제를 장기간 복용할 시 일어날 수 있는 간독성 등의 부작용의 위험을 낮추며, 항생제 내성균 발생 위험 역시 낮출 수 있어, 무좀 치료를 비롯한 효소를 분비하는 미생물에 의해 발생하는 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have found that when a new athlete's foot treatment agent is studied, a topical agent containing a lipid-photosensitizer conjugate is superior in skin permeability and can increase the mortality rate of the bacteria existing in the dermal layer and is decomposed by the lipase secreted by the bacterium It is possible to specifically kill bacteria at a site where athlete's foot is present. Because it is treated by photodynamic therapy, it lowers the risk of side effects such as hepatotoxicity which may occur when taking a conventional antifungal drug for a long time, And can be effectively used for the prevention or treatment of diseases caused by microorganisms that secrete enzymes including athlete's foot treatment, and completed the present invention.
따라서 본 발명의 목적은 미생물이 분비하는 효소에 의해 특이적으로 분해되는 지질-광감작제 나노결합체를 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a lipid-photosensitizer nano-conjugate that is specifically degraded by an enzyme secreted by a microorganism.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for producing the above-mentioned lipid-photosensitizer nanocomposite.
나아가, 본 발명은 상기 지질-광감작제 나노결합체를 유효성분으로 함유하는 효소를 분비하는 미생물에 의해 발생하는 질환의 예방 또는 치료용 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.Furthermore, the present invention provides a composition for external application for skin for preventing or treating diseases caused by a microorganism that secretes an enzyme containing the lipid-photosensitizer nano-conjugate as an active ingredient.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, In order to achieve the above-mentioned object of the present invention,
본 발명은 지질 리포좀 내부에 광감작제가 봉입되거나, 지질 리포좀 외부에 광감작제가 결합되어 구성되며, 다당류와 광감작제를 연결하는 연결자는 미생물이 분비하는 효소에 의하여 특이적으로 분해되는 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체를 제공한다.The present invention is characterized in that a liposome is encapsulated with a photosensitizer or a photosensitizer is bonded to the outside of a lipid liposome, and the linker connecting the polysaccharide and the photosensitizer is specifically decomposed by an enzyme secreted by the microorganism Lt; RTI ID = 0.0 > nano < / RTI >
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 광감작제는 단독으로 사용되거나 친수성 양이온 고분자 또는 다당류에 접합된 형태로 사용될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the photosensitizer may be used alone or in the form of being bonded to a hydrophilic cationic polymer or a polysaccharide.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 지질 리포좀은 약물을 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid liposome may further comprise a drug.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체는 지질 리포좀 내부에 친수성 양이온 고분자가 접합된 광감작제가 봉입된 형태인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid-photosensitizer nano-conjugate may be a lipid-liposome encapsulated with a photosensitizer to which a hydrophilic cationic polymer is conjugated.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체는 약물이 봉입된 지질 리포좀에 다당류가 접합된 광감작제가 코팅된 형태인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid-photosensitizer nano-conjugate may be a lipid-liposome encapsulated with a drug coated with a photosensitizer to which a polysaccharide is conjugated.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 지질은 인지질, 콜레스테롤, PEG-PE, 폴리에틸렌글리콜화 지질, 폴리옥시에틸렌피마자유 유도체, 폴리에틸렌글리콜소르비 탄지방산 에스테르류, 폴리에틸렌글리콜스테아린산에스테르류, 에틸렌글리콜프로필렌글리콜 공중합체, 글리세린에스테르류, 폴리에틸렌이민 유도체, 폴리비닐알콜 유도체, 폴리아크릴산 유도체, 폴리아크릴아미드 유도체, 덱스트란 유도체, 폴리글리세린 유도체, 키토산 유도체, 폴리비닐피롤리돈 유도체, 폴리아스파라긴산 아미드 유도체, 폴리-L-리신 유도체, 만난 유도체, 및 풀루란 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid is selected from the group consisting of phospholipids, cholesterol, PEG-PE, polyethylene glycolated lipids, polyoxyethylene castor oil derivatives, polyethylene glycol sorbitan fatty acid esters, polyethylene glycol stearic acid esters, A polyacrylic acid derivative, a polyacrylamide derivative, a dextran derivative, a polyglycerin derivative, a chitosan derivative, a polyvinylpyrrolidone derivative, a polyaspartic acid amide derivative, a polyglycerol derivative, a polyglycerol derivative, a polyglycerol derivative, -L-lysine derivatives, mannan derivatives, and pullulan derivatives.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 지질은 인지질과 콜레스테롤의 혼합물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid may be a mixture of phospholipids and cholesterol.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 광감작제는 포르피린계(phorphyrins) 화합물, 클로린계(chlorins) 화합물, 박테리오클로린계(bacteriochlorins) 화합물, 프탈로시아닌계(phtalocyanine) 화합물, 나프탈로시아닌계(naphthalocyanines) 화합물 및 5-아미노레불린 에스테르계(5-aminoevuline esters) 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the photosensitizer is selected from the group consisting of a phorphyrins compound, a chlorins compound, a bacteriochlorins compound, a phthalocyanine compound, a naphthalocyanines compound, And 5-aminoevuline esters compounds. The term " 5-aminoevuline esters "
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 광감작제는 클로린 e6(Chlorin e6), 프탈로시아닌(ZnPc) 및 피오포바이드 a(Pheophorbide A, Pheo a)로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 클로린계 화합물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the photosensitizer is at least one chlorine compound selected from the group consisting of chlorin e6, phthalocyanine (ZnPc) and pheophorbide A (Pheo a) .
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 지질은 광감작제 1몰에 대해 1~30몰의 몰비로 결합될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid may be combined at a molar ratio of 1 to 30 moles relative to the first photo sensitization mole.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 친수성 양이온 고분자는 글라이콜 키토산(GC), 키토산, 폴리-L-리신 (PLL), 폴리-베타-아미노 에스터 고분자, 폴리에틸렌이민(PEI), 폴리에틸렌글리콜, 폴리(아미도아민) (PAMAM) 덴드리머 및 이들의 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the hydrophilic cationic polymer is selected from the group consisting of glycol chitosan (GC), chitosan, poly-L-lysine (PLL), poly-beta-amino ester polymer, polyethyleneimine (PEI) Poly (amidoamine) (PAMAM) dendrimers, and derivatives thereof.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 폴리에틸렌이민은 가지형이며, 분자량이 100~250,000(Da)인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the polyethyleneimine may be branched and have a molecular weight of 100 to 250,000 (Da).
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 다당류는 풀루란, 히알유론산, 덱스트란 및 콘드로이틴 설페이트로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the polysaccharide may be at least one selected from the group consisting of pullulan, hyaluronic acid, dextran, and chondroitin sulfate.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 풀루란은 분자량이 100~1,000,000(Da), 상기 히알유론산은 분자량이 100~5,000,000(Da)인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the pullulan may have a molecular weight of 100 to 1,000,000 (Da), and the hyaluronic acid may have a molecular weight of 100 to 5,000,000 (Da).
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 광감작제는 친수성 양이온 고분자 또는 다당류 1몰에 대해 1~30몰의 몰비로 결합될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the photosensitizer may be combined at a molar ratio of 1 to 30 moles per mole of the hydrophilic cationic polymer or polysaccharide.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 약물은 살리실산(salicyclic acid), 그리세오풀빈(griseofulvin), 톨나프테이트(tolnaftate), 미코나졸(miconazole), 클로트리마졸(dotrimazole), 케토코나졸(ketoconazole), 이트라코나졸(itraconazole), 플루코나졸(fluconazole), 아다팔레인 (adapalene), 트레티노인 (tretinoin), 에리스로마이신 (erythromycin), 벤조일퍼옥사이드 (benzoyl peroxide), 아젤라익 엑시드 (azelaic acid) 및 테르비나핀(terbinafine)으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.In one embodiment of the invention the drug is selected from the group consisting of salicyclic acid, griseofulvin, tolnaftate, miconazole, dotrimazole, ketoconazole, But are not limited to, itraconazole, fluconazole, adapalene, tretinoin, erythromycin, benzoyl peroxide, azelaic acid and terbinafine. ≪ RTI ID = 0.0 > and / or < / RTI >
또한, 본 발명은In addition,
(a) 지질을 유기용매에 용해시키는 단계;(a) dissolving lipids in an organic solvent;
(b) 광감작제와 촉매를 유기용매에 용해시키는 단계; 및(b) dissolving the photosensitizer and the catalyst in an organic solvent; And
(c) 상기 (a)단계에서 제조된 지질 용액에 (b)단계에서 제조된 용액을 혼합하여 반응시키는 단계를 포함하는 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법을 제공한다.(c) mixing the lipid solution prepared in step (a) with the solution prepared in step (b) and reacting the lipid solution with the lipid solution prepared in step (a).
또한, 본 발명은In addition,
(a) 지질을 유기용매에 용해시키는 단계;(a) dissolving lipids in an organic solvent;
(b) 광감작제와 촉매를 유기용매에 용해시키는 단계;(b) dissolving the photosensitizer and the catalyst in an organic solvent;
(b’) 친수성 양이온 고분자를 유기용매에 용해시키는 단계;(b ') dissolving the hydrophilic cationic polymer in an organic solvent;
(b’‘) 상기 (b’)단계와 (b’‘)단계에서 제조된 용행을 혼합하여 반응시킨 뒤 투석하여 동결건조하여 친수성 양이온 고분자가 접합된 광감작제를 제조하는 단계; 및preparing a photosensitizer to which the hydrophilic cationic polymer is conjugated by mixing the reactants prepared in the step (b '') and the enzyme prepared in the step (b '), followed by dialysis and lyophilization; And
(c) 상기 (a)단계에서 제조된 지질 용액에 (b‘’)단계에서 제조된 광감작제를 혼합하여 반응시키는 단계를 포함하는 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법을 제공한다.(c) mixing and reacting the photosensitizer prepared in step (b ") with the lipid solution prepared in step (a).
또한, 본 발명은In addition,
(a) 지질과 약물을 유기용매에 용해시키는 단계;(a) dissolving a lipid and a drug in an organic solvent;
(b) 다당류, 광감작제 및 촉매를 유기용매에 용해시키는 단계; 및(b) dissolving the polysaccharide, photosensitizer and catalyst in an organic solvent; And
(c) 상기 (a)단계에서 제조된 약물이 봉입된 지질 리포좀 용액에 (b)단계에서 제조된 용액을 혼합하여 반응시키는 단계를 포함하는 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법을 제공한다.(c) mixing the solution prepared in step (b) with the lipid-liposome solution encapsulating the drug prepared in step (a) and reacting the solution.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 유기용매는 상기 유기용매는 디메틸설폭사이드(Dimethylsulfoxide: DMSO), 클로로포름(Chlorform), 메틸렌클로라이드(Methylenchloride: MC), 에탄올(Ethanol) 및 메탄올(Methanol)로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, in the organic solvent, the organic solvent is selected from the group consisting of dimethylsulfoxide (DMSO), chloroform, methylenechloride (MC), ethanol, and methanol Lt; / RTI >
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 촉매는 4-디메틸아미노피리딘(4-Dimethylaminopyridine: DMAP), N-하이드록시술포숙신이마이드(N-hydroxysulfosuccinimide, HOSU), 1,3-디사이클로 헥실카보디미드(1,3-dicyclohexylcarbodiimide; DCC) 또는 이들의 혼합물인 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the catalyst is selected from the group consisting of 4-dimethylaminopyridine (DMAP), N-hydroxysulfosuccinimide (HOSU), 1,3-dicyclohexylcarbodi 1,3-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), or a mixture thereof.
나아가, 본 발명은 지질-광감작제 나노결합체와 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 미생물의 효소 분비에 의해 발생하는 질환의 예방 또는 치료용 피부 외용제 조성물을 제공한다.Further, the present invention provides a composition for external application for skin for the prevention or treatment of diseases caused by enzyme secretion of a microorganism including a lipid-photosensitizer nano-conjugate and a pharmaceutically acceptable carrier.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 질환은 효소를 분비하는 미생물을 원인으로 하여 발생되는 질병인 무좀, 여드름, 수부백선, 안면백선, 두피백선, 귀의 백선, 체부백선, 잠행성 진균증, 완선, 조갑백선, 칸디다증, 어루러기(전풍), 종기, 습진, 스포로트리쿰증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the disease is caused by a microorganism that secretes an enzyme, which is a disease such as athlete's foot, acne, swollen tongue, facial tongue, scalp tongue, ear tongue, facial tongue, Nasal mucus, nasal psoriasis, candidiasis, swollen (swollen), boils, eczema, and spore trachomatosis.
이상에서와 같이, 본 발명에 따른 지질-광감작제 나노결합체는 피부 투과성이 우수하여 진피층에 존재하는 균의 사멸률을 높일 수 있고, 균이 분비하는 분해효소인 리파아제에 의해 지질-광감작제 나노결합체가 분해되어 무좀균, 여드름균을 포함하는 효소를 분비하는 미생물이 존재하는 부위에서 특이적으로 균을 사멸시킬 수 있다. 또한, 광역학 치료법으로 치료함으로써 기존의 항진균제를 장기간 복용할 시 일어날 수 있는 간독성 등의 부작용의 위험을 낮추며, 항생제 내성균 발생 위험 역시 낮출 수 있어, 무좀, 여드름 치료를 비롯한 효소 분비 미생물에 의해 발생하는 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.As described above, the lipid-photosensitizer nano-conjugate according to the present invention has an excellent skin permeability and can increase the mortality rate of the bacteria existing in the dermis layer. The lipid-photosensitizer nano- The nano-complex may be degraded to specifically kill bacteria at a site where a microorganism that secretes an enzyme including anthracnose and acne is present. In addition, treatment with photodynamic therapy reduces the risk of side effects such as hepatotoxicity that can occur when taking a conventional antifungal drug for a long period of time, and also reduces the risk of developing an antibiotic resistant bacterium. Thus, Can be usefully used for preventing or treating diseases.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 지질-광감작제 나노결합체 제조의 반응과정을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예 따라 제조된 지질-광감작제 나노결합체의 주사전자현미경(FE-SEM) 사진이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예 따라 제조된 약물이 봉입된 지질-광감작제 나노결합체의 주사전자현미경(FE-SEM) 사진이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예 따라 제조된 약물이 봉입된 지질-광감작제 나노결합체의 ¹H-NMR의 구조분석을 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예 따라 제조된 지질-광감작제 나노결합체의 투과전자현미경(TEM) 사진이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예 따라 제조된 약물 봉입된 지질-광감작제 나노결합체의 효소 활성을 시간별로 본 도면이다.FIG. 1 illustrates a reaction process of preparing a lipid-photo-sensitizer nano-conjugate according to an embodiment of the present invention.
2 is a scanning electron microscope (FE-SEM) photograph of a lipid-photosensitizer nano-conjugate prepared according to an embodiment of the present invention.
FIG. 3 is a scanning electron microscope (FE-SEM) photograph of a drug-encapsulated lipid-photosensitizer nano-conjugate prepared according to an embodiment of the present invention.
FIG. 4 shows a structural analysis of 1H-NMR of lipid-photosensitizer nanoparticles encapsulated with a drug prepared according to an embodiment of the present invention.
FIG. 5 is a transmission electron microscope (TEM) photograph of a lipid-photosensitizer nanocomposite prepared according to an embodiment of the present invention.
FIG. 6 is a time chart of the enzymatic activity of a drug-encapsulated lipid-photosensitizer nano-conjugate prepared according to an embodiment of the present invention.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 무좀을 비롯한 피부질환의 치료용 피부 외용제를 제공함에 있어서, 피부 투과성이 우수하고, 무좀균, 여드름균을 비롯한 효소를 분비하는 미생물이 존재하는 부위에서 특이적으로 균을 사멸시킬 수 있도록 지질 리포좀에 광감작제가 결합된 지질-광감작제 나노결합체를 제공함에 그 특징이 있다.Disclosure of Invention Technical Problem [10] The present invention provides an external preparation for skin for treating a skin disease including athlete's foot, which is excellent in skin permeability and capable of specifically killing bacteria at a site where microorganisms including anthracnose and acne- The present invention is characterized by providing a liposome with a photosensitizer-coupled lipid-photo sensitizer nano-conjugate.
본 발명에서 사용되는 용어 '광감작제'는, 특정 파장의 빛에 조사되었을 때 여기(excitation)된 후, 형광 신호를 생성하거나, 주변의 기질 또는 산소와 반응하여 반응성 산소종(reactive oxygen species)를 생성하고, 생성된 반응성 산소종은 주변 종양 세포를 자멸 또는 괴사시키는 효과가 있다. 본 발명의 광감작제는 유리염기(free base) 또는 금속 착물(metal complex) 형태의 포르피린계(phorphyrins) 화합물, 클로린계(chlorins) 화합물, 박테리오클로린계(bacteriochlorins) 화합물, 프탈로시아닌계(phtalocyanine) 화합물, 나프탈로시아닌계(naphthalocyanines) 화합물 및 5-아미노레불린 에스테르계(5-aminoevuline esters) 화합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다. 바람직하게는 상기 광감작제는 클로린계 화합물일 수 있고, 더욱 바람직하게는 클로린 e6(Chlorin e6), 프탈로시아닌(ZnPc) 및 피오포바이드 a(Pheophorbide A, Pheo a)로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 클로린계 화합물일 수 있다.The term " photosensitizer " used in the present invention refers to a compound that excites when irradiated with light of a specific wavelength, generates a fluorescence signal, reacts with surrounding substrate or oxygen to form reactive oxygen species, , And the generated reactive oxygen species has the effect of self-destroying or necrosis of surrounding tumor cells. The photosensitizer of the present invention may be a phorphyrins compound in the form of a free base or a metal complex, a chlorins compound, a bacteriochlorins compound, a phthalocyanine compound , Naphthalocyanines, and 5-aminoevuline esters. These compounds may be used alone or in combination of two or more. Preferably, the photosensitizer may be a chlorine-based compound, and more preferably one species selected from the group consisting of chlorin e6, phthalocyanine (ZnPc) and pheophorbide A (Pheo a) Or a chlorine-based compound.
다만, 현재 피부 질환에 사용되는 광감작제를 이용한 치료법은 제형화가 되지 않아 질병 부위뿐만 아니라 정상 부위까지 독성 효과를 나타내는 문제가 있다. 따라서, 상기와 같은 문제를 극복하기 위하여 본 발명에서는 일반적인 세균환경에서 다량 생성되는 효소로 알려진 리파아제(lipase)가 지질을 분해시키는 특성을 반영하여, 지질을 이용한 지질-광감작제 나노결합체를 제작하여, 세균이 존재하지 않는 정상 피부에서는 광감작제가 활성화 되지 못해 기존의 광감작제에서 문제가 되는 광 민감성 부작용을 회피할 수 있고, 세균 감염 피부에서 특이적으로 광감작제가 활성화 되어 더 높은 치료 효과를 나타낼 수 있음을 특징으로 한다.However, there is a problem that the treatment using the photosensitizer, which is currently used in skin diseases, is not formulated and thus shows a toxic effect not only in the disease site but also in the normal site. Therefore, in order to overcome the above-mentioned problem, the present invention reflects the lipase-decomposing property of lipase, which is known as a large amount of enzyme generated in a general bacterial environment, to prepare a lipid-photo sensitizer nano- , The photosensitizer can not be activated in the normal skin without bacteria and thus the photo-sensitive side effect which is a problem in the conventional photosensitizer can be avoided and the photosensitizer is specifically activated in the bacterial infection skin, .
이에, 본 발명에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체는 리파아제에 의하여 특이적으로 분해될 수 있는, 지질과 광감작제를 연결하는 연결자를 포함할 수 있다. 상기 연결자는 펩타이드 결합 또는 에스테르 결합인 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.Accordingly, in the present invention, the lipid-photosensitizer nano-conjugate may include a linker that links the lipid and the photosensitizer, which can be specifically degraded by lipase. The linker is preferably a peptide bond or an ester bond, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체는 지질 리포좀 내부에 광감작제가 봉입되거나, 지질 리포좀 외부에 광감작제가 결합됨으로써 구성될 수 있다.In the present invention, the lipid-photosensitizer nano-conjugate may be constituted by encapsulating the photosensitizer in the lipid liposome or coupling the photosensitizer to the outside of the lipid liposome.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 광감작제는 단독으로 사용되거나 친수성 양이온 고분자 또는 다당류에 접합된 형태로 사용될 수 있고, 상기 지질 리포좀은 약물을 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the photosensitizer may be used alone or in a form conjugated with a hydrophilic cationic polymer or polysaccharide, and the lipid liposome may further include a drug.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체는 여러 형태로 이루어질 수 있는데, 예컨대, 지질 리포좀 내부에 친수성 양이온 고분자가 접합된 광감작제가 봉입된 형태일 수 있고, 약물이 봉입된 지질 리포좀에 다당류가 접합된 광감작제가 코팅된 형태일 수도 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the lipid-photosensitizer nano-conjugate may be in various forms, for example, a form in which a photosensitizer in which a hydrophilic cationic polymer is conjugated to lipid liposome is encapsulated, But not limited to, a form in which a photosensitizer coated with a polysaccharide is coated on the lipid liposome.
본 발명에 있어서, 상기 지질로는 인지질, 콜레스테롤, PEG-PE, 폴리에틸렌글리콜화 지질, 폴리옥시에틸렌피마자유 유도체, 폴리에틸렌글리콜소르비 탄지방산 에스테르류, 폴리에틸렌글리콜스테아린산에스테르류, 에틸렌글리콜프로필렌글리콜 공중합체, 글리세린에스테르류, 폴리에틸렌이민 유도체, 폴리비닐알콜 유도체, 폴리아크릴산 유도체, 폴리아크릴아미드 유도체, 덱스트란 유도체, 폴리글리세린 유도체, 키토산 유도체, 폴리비닐피롤리돈 유도체, 폴리아스파라긴산 아미드 유도체, 폴리-L-리신 유도체, 만난 유도체, 및 풀루란 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상을 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, examples of the lipid include phospholipids, cholesterol, PEG-PE, polyethylene glycolated lipids, polyoxyethylene castor oil derivatives, polyethylene glycol sorbitan fatty acid esters, polyethylene glycol stearic acid esters, ethylene glycol propylene glycol copolymer , Polyglycerol derivatives, polyglycerol derivatives, polyvinyl pyrrolidone derivatives, polyaspartic acid amide derivatives, poly-L-lysine derivatives, polyglycerol derivatives, polyvinyl alcohol derivatives, polyacrylic acid derivatives, polyacrylamide derivatives, dextran derivatives, But are not limited to, at least one selected from the group consisting of lysine derivatives, mannan derivatives, and pullulan derivatives.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 지질로는 바람직하게 인지질을 사용할 수 있으며, 상기 인지질로는 인과 지방산 사슬을 갖는 레시틴 (난황, 대두) (lecithin), 포스파티딜콜린 (난황, 대두) (phosphatidylcholine), 디팔미토일포스파티딜콜린 (dipalmitoyl phosphatidylcholine), 디스테아로일포스파티딜콜린 (distearoylphosphatidylcholine), 스핑고마이엘린 (sphingomyelin), 포스파티딜세린 (phosphatidylserine), 디팔미토일포스파티딜세린 (dipalmitoylphosphatidylserine), 포스파티딜글리세롤 (phosphatidylglycerol), 포스파티딜이노시톨 (phosphatidylinositol), 포스파티딜에탄올아민 (phosphatidylethanolamine), 디팔미토일포스파티딜에탄올아민 (dipalmitoylphosphatidylethanolamine), 포스파티딜엑시드 (phosphatdyl acid), 디알킬포스페이트 (dialkylphosphate), 디세틸포스페이트 (dicetylphosphate), 디올레오일 (dioleoyl), 엘레오스테아로일포스파티딜콜린 (eleostearylphosphatidylcholine), 엘레오스테아르일포스파티딜에탄올아민 (eleostearylphosphatidylethaolamine)으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid is preferably a phospholipid. Examples of the phospholipid include lecithin (lucithin), phosphatidylcholine (phosphatidylcholine), phosphatidylcholine Phosphatidylserine, dipalmitoyl phosphatidylcholine, distearoylphosphatidylcholine, sphingomyelin, phosphatidylserine, dipalmitoylphosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol (phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol, phosphatidylethanolamine, phosphatidylethanolamine, dipalmitoylphosphatidylethanolamine, phosphatidyl acid, dialkylphosphate, dicetylphosphate, dioleoyl, Roil can be selected from a phosphatidylcholine (eleostearylphosphatidylcholine), eleostearic yl group consisting of phosphatidylethanolamine (eleostearylphosphatidylethaolamine).
인지질은 당지질, 콜레스테롤, 단백질과 함께 생체막의 주요 성분으로 인을 포함하는 지질의 일종으로, 2개의 지방산과 1개의 인산기가 결합되어 있는 구조이다. 인지질의 머리 부분인 인산기는 물에 닿아 있는 것을 선호하고, 지방산 꼬리 부분은 물로부터 떨어져있는 것을 선호하게 된다. 따라서 이러한 성질로 인지질은 물 속에서 이중층 (bilayer)을 형성한다. 따라서, 이러한 인지질로 만들어진 리포좀은 현재 사용 중인 화장품 분야의 대표적인 나노 기술로서, 각질 피부 세포 간극을 통하거나 (paracellular pathway) 직접 세포를 관통 (transcellular pathway)하여 유용성 물질을 피부 진피층까지 침투시킬 수 있는 강력한 성능을 나타내므로, 피부 진피층에 상재하는 무좀균까지도 사멸시킬 수 있다.Phospholipid is a lipid containing phosphorus, cholesterol, protein and phosphorus as a major component of biomembrane. It is a structure in which two fatty acids and one phosphate group are combined. Phosphoric acid, the head of the phospholipid, prefers to be in contact with water, and the tail of the fatty acid prefers being away from the water. Thus, phospholipids in this nature form bilayers in water. Therefore, liposomes made from these phospholipids are a typical nanotechnology in the field of cosmetics currently in use. They are a nanotechnology that is able to permeate the oil-soluble substances to the skin dermis layer through a transcellular pathway through paracellular pathway Performance, it is possible to kill even ancestral bacterium on the dermal layer of the skin.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 지질 리포좀 내부에 친수성 양이온 고분자가 접합된 광감작제가 봉입된 형태나 지질-광감작제 나노결합체가 약물이 봉입된 지질 리포좀에 다당류가 접합된 광감작제가 코팅된 형태인 경우에는 상기 지질로서 인지질과 콜레스테롤의 혼합물을 사용할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the lipid-liposome is encapsulated with a photosensitizer in which a hydrophilic cationic polymer is conjugated, or a liposome-photosensitizer nano-conjugate is a liposome encapsulated with a drug, A mixture of phospholipid and cholesterol may be used as the lipid.
이때, 상기 지질은 광감작제 1몰에 대해 1~30몰의 몰비로 결합되는 것이 바람직한데, 만일 이러한 범위를 벗어날 경우에는 지질과 광감작제 사이에 결합이 발생하지 않아 나노결합체가 형성되지 않을 가능성도 있다.At this time, it is preferable that the lipid is bound in a molar ratio of 1 to 30 mol based on the first mole of the photosensitizer. If the lipid is out of this range, no bond is formed between the lipid and the photosensitizer, There is also a possibility.
본 발명에 있어서, 상기 친수성 양이온 고분자는 글라이콜 키토산(GC), 키토산, 폴리-L-리신 (PLL), 폴리-베타-아미노 에스터 고분자, 폴리에틸렌이민(PEI), 폴리에틸렌글리콜, 폴리(아미도아민) (PAMAM) 덴드리머 및 이들의 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 사용할 수 있다.In the present invention, the hydrophilic cationic polymer may be selected from the group consisting of glycol chitosan (GC), chitosan, poly-L-lysine (PLL), poly-beta-amino ester polymer, polyethyleneimine (PEI), polyethylene glycol, Amine) (PAMAM) dendrimer, and derivatives thereof.
이때, 상기 폴리에틸렌이민은 가지형이며, 분자량이 100~250,000(Da)인 것을 사용하는 것이 바람직하다.At this time, it is preferable that the polyethyleneimine is branched and has a molecular weight of 100 to 250,000 (Da).
본 발명에 있어서, 상기 다당류는 풀루란, 히알유론산, 덱스트란 및 콘드로이틴 설페이트로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 사용할 수 있다.In the present invention, the polysaccharide may be at least one selected from the group consisting of pullulan, hyaluronic acid, dextran and chondroitin sulfate.
이때, 상기 풀루란은 분자량이 100~1,000,000(Da), 상기 히알유론산은 분자량이 100~5,000,000(Da)인 것을 사용하는 것이 바람직하다.At this time, the pullulan preferably has a molecular weight of 100 to 1,000,000 (Da) and the hyaluronic acid has a molecular weight of 100 to 5,000,000 (Da).
본 발명에 있어서, 상기 광감작제는 안정성을 증가시키기 위해 친수성 양이온 고분자 또는 다당류 1몰에 대해 1~30몰의 몰비로 결합되는 것이 바람직하다.In the present invention, the photosensitizer is preferably bound in a molar ratio of 1 to 30 mol based on 1 mol of the hydrophilic cationic polymer or polysaccharide to increase the stability.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 약물은 살리실산(salicyclic acid), 그리세오풀빈(griseofulvin), 톨나프테이트(tolnaftate), 미코나졸(miconazole), 클로트리마졸(dotrimazole), 케토코나졸(ketoconazole), 이트라코나졸(itraconazole), 플루코나졸(fluconazole), 아다팔레인 (adapalene), 트레티노인 (tretinoin), 에리스로마이신 (erythromycin), 벤조일퍼옥사이드 (benzoyl peroxide), 아젤라익 엑시드 (azelaic acid) 및 테르비나핀(terbinafine)으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one embodiment of the invention the drug is selected from the group consisting of salicyclic acid, griseofulvin, tolnaftate, miconazole, dotrimazole, ketoconazole, But are not limited to, itraconazole, fluconazole, adapalene, tretinoin, erythromycin, benzoyl peroxide, azelaic acid and terbinafine. , But is not limited thereto.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 약물이 봉입된 지질 리포좀에 다당류가 접합된 광감작제가 코팅된 형태의 지질-광감작제 나노복합체는 다당류에 의해서 안정성이 증가되며, 약물을 포함하고 있기 때문에 효소에 의하여 특이적으로 분해되어 광감작제에 의해 미생물을 사멸시키는 동시에 약물 치료가 가능하므로 미생물에 대한 치료 효과가 극대화될 수 있다.In an embodiment of the present invention, the liposome-photosensitizer nanocomposite in which a photosensitizer coated with a polysaccharide is coated with a drug-containing lipid liposome is increased in stability by a polysaccharide, , The microorganism is killed by the photosensitizer and the drug treatment is possible, so that the therapeutic effect on the microorganism can be maximized.
또한, 본 발명은In addition,
(a) 지질을 유기용매에 용해시키는 단계;(a) dissolving lipids in an organic solvent;
(b) 광감작제와 촉매를 유기용매에 용해시키는 단계; 및(b) dissolving the photosensitizer and the catalyst in an organic solvent; And
(c) 상기 (a)단계와 (b)단계에서 제조된 용액을 혼합하여 반응시키는 단계를 포함하는 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법을 제공한다.(c) mixing the solution prepared in the step (a) and the solution prepared in the step (b) and reacting them.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체가 지질 리포좀 내부에 친수성 양이온 고분자가 접합된 광감작제가 봉입된 형태인 경우, 상기 지질-광감작제 나노결합체는,In one embodiment of the present invention, when the liposome-photosensitizer nano-conjugate is a liposome-liposome encapsulated with a photosensitizer to which a hydrophilic cationic polymer is conjugated,
(a) 지질을 유기용매에 용해시키는 단계;(a) dissolving lipids in an organic solvent;
(b) 광감작제와 촉매를 유기용매에 용해시키는 단계;(b) dissolving the photosensitizer and the catalyst in an organic solvent;
(b’) 친수성 양이온 고분자를 유기용매에 용해시키는 단계;(b ') dissolving the hydrophilic cationic polymer in an organic solvent;
(b’‘) 상기 (b’)단계와 (b’‘)단계에서 제조된 용액을 혼합하여 반응시킨 뒤 투석하여 동결건조하여 친수성 양이온 고분자가 접합된 광감작제를 제조하는 단계; 및(b ") mixing and reacting the solution prepared in step (b ') and step (b"), followed by dialysis and lyophilization to prepare a photosensitizer to which the hydrophilic cationic polymer is conjugated; And
(c) 상기 (a)단계에서 제조된 지질 용액에 (b‘’)단계에서 제조된 광감작제를 혼합하여 반응시키는 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 제조될 수 있다.(c) mixing the photosensitizer prepared in step (b ") with the lipid solution prepared in step (a) and reacting them.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체가 물이 봉입된 지질 리포좀에 다당류가 접합된 광감작제가 코팅된 형태인 경우, 상기 지질-광감작제 나노결합체는,In one embodiment of the present invention, when the liposome-photosensitizer nanocomposite is coated with a photosensitizer having polysaccharide bonded to a lipid-liposome encapsulating water, the lipid-
(a) 지질과 약물을 유기용매에 용해시키는 단계;(a) dissolving a lipid and a drug in an organic solvent;
(b) 다당류, 광감작제 및 촉매를 유기용매에 용해시키는 단계; 및(b) dissolving the polysaccharide, photosensitizer and catalyst in an organic solvent; And
(c) 상기 (a)단계에서 제조된 약물이 봉입된 지질 리포좀 용액에 (b)단계에서 제조된 용액을 혼합하여 반응시키는 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 제조될 수 있다.(c) mixing the solution prepared in step (b) with the lipid-liposome solution in which the drug prepared in step (a) is encapsulated and reacting it.
본 발명에 따른 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법에 있어서, 상기 유기용매는 디메틸설폭사이드(Dimethylsulfoxide: DMSO), 클로로포름(Chlorform), 메틸렌클로라이드(Methylenchloride: MC), 에탄올(Ethanol) 및 메탄올(Methanol)로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상을 사용할 수 있다.In the method for preparing a lipid-photosensitizer nanocomposite according to the present invention, the organic solvent is selected from the group consisting of dimethylsulfoxide (DMSO), chloroform, methylenechloride (MC), ethanol and methanol Methanol) can be used.
본 발명에 따른 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법에 있어서, 상기 지질, 광감작제, 친수성 양이온 고분자, 다당류 및 약물, 및 반응 몰비는 전술한 바와 같으며, 공통된 내용은 반복 기재에 따른 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.In the method for producing a lipid-photosensitizer nanocomposite according to the present invention, the lipid, the photosensitizer, the hydrophilic cationic polymer, the polysaccharide and the drug, and the reaction molar ratio are as described above, The description thereof will be omitted.
본 발명에 따른 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법에 있어서, 상기 촉매로는 4-디메틸아미노피리딘(4-Dimethylaminopyridine: DMAP), N-하이드록시술포숙신이마이드(N-hydroxysulfosuccinimide, HOSU), 1,3-디사이클로 헥실카보디미드(1,3-dicyclohexylcarbodiimide; DCC) 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the method for preparing a lipid-photosensitizer nanocomposite according to the present invention, 4-dimethylaminopyridine (DMAP), N-hydroxysulfosuccinimide (HOSU) 1,3-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), or a mixture thereof may be used, but the present invention is not limited thereto.
본 발명에 따른 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법에 있어서, 지질 리포좀 제조 및 광감작제의 결합 방법은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 유기 화학 반응을 이용하여 수행할 수 있다.In the method for preparing the lipid-photosensitizer nanocomposite according to the present invention, the lipid liposome preparation and the binding of the photosensitizer may be performed using an organic chemical reaction commonly used in the art.
나아가, 본 발명은 지질-광감작제 나노결합체와 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 효소 분비 미생물에 의해 발생되는 질환의 예방 또는 치료용 피부 외용제 조성물을 제공한다.Furthermore, the present invention provides a composition for external application for skin for the prevention or treatment of a disease caused by an enzyme-secreting microorganism comprising a lipid-photosensitizer nano-binder and a pharmaceutically acceptable carrier.
상기 방법으로 제조된 지질-광감작제 나노결합체는 지질을 사용한 리포좀의 형태이므로 피부 투과성이 우수하여 진피층에 존재하는 균의 사멸률을 높일 수 있고, 균이 분비하는 리파아제에 의해 리포좀이 분해되어 무좀균, 여드름균을 포함하는 효소 분비 미생물이 존재하는 부위에서 특이적으로 균을 사멸킬 수 있다. 또한, 광역학 치료법을 이용함으로써 기존의 항진균제를 장기간 복용할 시 일어날 수 있는 간독성 등의 부작용의 위험을 낮추며, 항생제 내성균 발생 위험 역시 낮출 수 있어, 무좀, 여드름 치료를 비롯한 효소 분비 미생물에 의해 발생되는 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.Since the lipid-photosensitizer nano-conjugate prepared by the above method is in the form of a liposome using lipid, it has an excellent skin permeability and can increase the mortality rate of the bacteria existing in the dermis layer, and the liposome is decomposed by the bacterial secreted lipase, , And can specifically kill bacteria at sites where enzyme secretory microorganisms including acne bacteria are present. In addition, the use of photodynamic therapy reduces the risk of side effects such as hepatotoxicity that can occur when taking a conventional antifungal drug for a long period of time, and also reduces the risk of developing an antibiotic resistant bacterium. Thus, Can be usefully used for preventing or treating diseases.
본 발명에 있어서, 효소를 분비하는 미생물을 원인으로 하여 발생되는 질병인 무좀, 여드름, 수부백선, 안면백선, 두피백선, 귀의 백선, 체부백선, 잠행성 진균증, 완선, 조갑백선, 칸디다증, 어루러기(전풍), 종기, 습진, 스포로트리쿰증 등을 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In accordance with the present invention, there is provided a method of treating a disease caused by a microorganism that secretes an enzyme, comprising the step of administering an effective amount of at least one of (a) athlete's foot, an acne, an acupuncture needle, a facial white line, a scalp white line, Swine fever), swelling, eczema, spore trachomatis, and the like, but are not limited thereto.
본 발명에 있어서, 상기 지질-광감작제 나노결합체는 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10중량%를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 0.1 중량% 미만인 경우, 그 효과가 미미하며, 10중량%를 초과하는 경우 안전성과 제형 안정성의 문제점이 있다.In the present invention, the lipid-photosensitizer nanocomposite may contain 0.1 to 10% by weight based on the total weight of the composition. When the content is less than 0.1% by weight, the effect is insignificant. When the content is more than 10% by weight, there are problems of safety and formulation stability.
본 발명에 따른 외용제 조성물에 있어서, 이미 공지되어 사용되고 있는 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 다시 말해, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제 등을 더 포함할 수 있다.In the composition for external application according to the present invention, a pharmaceutically acceptable carrier which is already known and used may be included. In other words, it may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions, and the like.
본 발명에 따른 외용제 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것을 아니다.The composition for external application according to the present invention is a composition for external application for skin which can be applied to the skin, and is a pharmaceutical composition in the form of external preparation for skin such as cream, gel, patch, spray, ointment, warning agent, lotion, liniment, pasta or cataplasma But the present invention is not limited thereto.
상기 담체는 본 발명의 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.The carrier may be included in the external preparation composition of the present invention in an amount of about 1 wt% to about 99.99 wt%, preferably about 90 wt% to about 99.99 wt%, based on the total weight of the composition. However, since the ratio varies depending on the above-described formulation in which the composition for external application for skin of the present invention is prepared, and its specific application site (face, neck, etc.) or its preferable application amount, And should not be construed as limiting the scope of the invention.
한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.Examples of the carrier include alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, humectants, moisturizers, viscosifiers, emulsifiers, stabilizers, sunscreens, coloring agents and perfumes. The compounds / compositions that can be used as the above-mentioned alcohol, oil, surfactant, fatty acid, silicone oil, humectant, humectant, viscosifier, emulsion, stabilizer, ultraviolet screening agent, coloring agent and fragrance are already known in the art The appropriate substance / composition can be selected and used.
본 발명의 일실시예로서, 본 발명에 따른 외용제 조성물은 상기 지질-광감작제 나노결합체 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 색소, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition for external application according to the present invention may contain glycerin, butylene glycol, propylene glycol, polyoxyethylene hardened castor oil, ethanol, triethanolamine, etc. in addition to the lipid- Preservatives, antioxidants, pigments, and purified water can be included as needed.
특히, 상기 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조 방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.In particular, the composition for external application may be prepared in the form of a general emulsified formulation and a solubilized formulation, in addition to the preparation methods specifically disclosed in the present invention, using a conventionally known production method.
이하, 본 발명을 실시 예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시 예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples. However, these examples are intended to further illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
<실시예 1>≪ Example 1 >
지질-광감작제 나노결합체의 제조Preparation of lipid-photosensitizer nanocomposites
인지질인 포스파티딜콜린(L-α-phosphatidyl choline)을 10mg/mL로 클로로포름(chloroform) 5mL에 녹인 후, 클로린계 광감작제인 피오포바이드 에이(Pheophorbide A) 5mg을 메탄올(methanol) 1mL에 녹인 용액을 넣고 교반시킨 후 40℃의 에바포레이션(Evaporation)에서 1시간 동안 유기용매를 증발시켜 얇은 막 층을 형성시켰다. 이후, 0.1M 암모늄 설페이트(ammonium sulfate) 용액을 10mL 넣고 60℃에서 수화(hydration)시켜 만든 리포좀을 2분간 3번 초음파처리하고, 마지막으로 2분 30초 초음파 처리하여, 작은 단일막 리포좀을 형성시켰다. 위와 같이 만들어진 리포좀 크기를 균일하게 만들기 위해 압출기(extruder)를 이용하여 실린저를 10회 왕복하여 리포좀 형태의 지질-광감작제 나노결합체를 제조하였다. 이때 압출기의 온도는 60℃로 조절하였다.L-α-phosphatidylcholine (phosphatidylcholine) was dissolved in 5 mL of chloroform at 10 mg / mL. A solution of 5 mg of Pheophorbide A, a chlorine-based photosensitizer, dissolved in 1 mL of methanol was added After stirring, the organic solvent was evaporated for 1 hour in an evaporation at 40 ° C to form a thin film layer. Thereafter, 10 ml of a 0.1 M ammonium sulfate solution was added, and liposomes prepared by hydration at 60 ° C were sonicated three times for 2 minutes and finally sonicated for 2 minutes and 30 seconds to form small single-membrane liposomes . In order to make the size of the liposome made uniform as described above, the liposome-type lipid-photo-sensitizer nanocomposite was prepared by reciprocating the
<실시예 2> ≪ Example 2 >
지질-광감작제 나노결합체의 제조Preparation of lipid-photosensitizer nanocomposites
도 1에 나타낸 바와 같이, 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민-N-(폴리에틸렌글리콜 2000), DSPE-PEG(2000) 50 mg을 클로로포름 (chloroform) 10 mL에 녹이고, 피오포바이드 에이(Pheo A) 12.85 mg과, 촉매인 디사이클로헥실카보디마이드 (N,N'-Dicyclohexylcarbodiimide) 6.63 mg, N-하이드록시술포숙신이마이드(N-hydroxysulfosuccinimide) 3.69 mg을 클로로포름 (chloroform) 10 mL에 넣어 4시간 동안 교반시켰다. 이후, 클로로포름에 녹인 Pheo A 용액에 클로로포름에 녹인 DSPE-PEG(2000)을 떨어뜨려 하루 동안 합성시킨 후, 40℃의 에바포레이션 (Evapration)에서 클로로포름을 1시간 동안 증발시켜 얇은 필름 층을 형성시켰다. 다음으로, 1mM 암모늄 설페이트 (Ammonium sulfate) 용액 20mL로 수화 (hydration)하여 리포좀을 형성 시킨 후에 초음파처리 (sonication)을 5분씩 6번 진행하였다. 액체질소 내 -196℃에서 5분 간 리포좀을 얼린 후, 40℃의 워터배스 (water bath)에서 5분간 녹여주며 이 과정을 10번 반복하는 프리즈 쏘잉 방법을 (freeze-thawing method) 진행하여 리포좀 형태의 지질-광감작제 나노결합체를 제조하였고, 제조된 나노결합체를 4℃에서 사용시까지 냉장보관하였다.As shown in FIG. 1, 50 mg of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine-N- (polyethylene glycol 2000) and DSPE-PEG (2000) were dissolved in 10 mL of chloroform 12.85 mg of Pheo A and 6.63 mg of the catalyst N, N'-Dicyclohexylcarbodiimide and 3.69 mg of N-hydroxysulfosuccinimide were added to the solution, Was added to 10 mL of chloroform and stirred for 4 hours. Then, DSPE-PEG (2000) dissolved in chloroform was added to the Pheo A solution dissolved in chloroform and synthesized for one day. Then, chloroform was evaporated at 40 ° C for 1 hour by evaporation to form a thin film layer . Next, liposomes were formed by hydration with 20 mL of 1 mM ammonium sulfate solution, followed by sonication six times for 5 minutes each. The liposomes were frozen in liquid nitrogen at -196 ° C. for 5 minutes and then dissolved in a water bath at 40 ° C. for 5 minutes. The freeze-thawing method was repeated 10 times, And the prepared nanocomposite was stored in a refrigerator at 4 ° C. until use.
<실시예 3> ≪ Example 3 >
약물이 봉입된 지질-광감작제 나노결합체의 제조Preparation of Drug-Enriched Lipid-Photo-sensitizer Nanocomposites
인지질인 포스파티딜콜린 (L-α-phosphatidyl choline)과 지질인 콜레스테롤 (Cholesterol)을 3:1의 몰 비로 클로로포름 (choloroform) 1mL에 충분히 녹여준 후 약물을 인지질의 양과 동일하게 넣어 충분히 녹여 40℃의 에바포레이션 (evaporation)에서 30분간 유기용매를 증발시켜 얇은 필름 층을 형성시켰다. 이후, 1mM ammonium sulfate 용액 10mL 넣어 수화 (hydration)시키고 3분간 초음파 처리 (sonication)하여 약물이 봉입된 지질 리포좀을 형성시켰다.Phosphatidylcholine phosphatidylcholine and lipid cholesterol were dissolved in 1 mL of choloroform in a molar ratio of 3: 1, and the drug was dissolved in the same amount of phospholipid, The organic solvent was evaporated for 30 minutes in evaporation to form a thin film layer. Then, 10 mL of 1 mM ammonium sulfate solution was hydrated and sonicated for 3 minutes to form a drug-encapsulated lipid liposome.
다당류인 플루란(pullulan) 50mg을 디메틸설폭사이드 (DMSO) 10mL에 넣어 교반시킨 후, 광감작제인 피오포바이드 에이 (pheophorbide A) 2.5mg, 5mg, 10mg을 촉매인 DMAP, DCC와 함께 DMSO 용매 10mL에 넣고 4시간 동안 교반시켰다. 4시간 뒤, 플루란 용액에 광감작제와 촉매가 있는 용액을 떨어뜨린 후, 48시간 교반시켜 반응시켰다. cut-off 12,000 투석막에 2-3일간 투석 후 동결건조를 2-3일간 진행하여 생성물을 얻었다.50 mg of pullulan, a polysaccharide, was added to 10 mL of dimethylsulfoxide (DMSO) and stirred. Then, 2.5 mg, 5 mg and 10 mg of pheophorbide A, which is a photosensitizer, were added to 10 mL of DMSO solvent And stirred for 4 hours. After 4 hours, the photosensitizer and the solution containing the catalyst were dropped in the pullulan solution, followed by stirring for 48 hours. cut-off 12,000 dialysis membrane for 2-3 days, followed by lyophilization for 2-3 days to obtain the product.
이후, 다당류와 광감작제가 결합된 물질을 1mg/mL의 농도로 총 10mL를 증류수에 녹인 후 0.45μm 필터를 이용하여 여과한 후 약물이 봉입된 지질 리포좀 용액에 혼합시킨 후 24시간 동안 교반시켜 반응시킴으로써 약물이 봉입된 지질-광감작제 나노복합체를 제조하였다.Thereafter, a total of 10 mL of the substance bound to the polysaccharide and the photosensitizer at a concentration of 1 mg / mL was dissolved in distilled water, filtered through a 0.45 μm filter, mixed with the drug-encapsulated lipid liposome solution, To prepare a drug-encapsulated lipid-photosensitizer nanocomposite.
<실험예 1> <Experimental Example 1>
지질-광감작제 나노결합체의 제조과정Manufacturing process of lipid-photo-sensitizer nanocomposite
상기 실시예 2에서 제조된 지질-광감작제 나노결합체에서 지질과 광감작제가 접합하는 과정을 도 1에 나타내었다.FIG. 1 shows a process of bonding the lipid and the photosensitizer to the lipid-photosensitizer nanocomposite prepared in Example 2. FIG.
<실험예 2> <Experimental Example 2>
지질-광감작제 나노결합체의 형태 및 크기 분석Analysis of morphology and size of lipid-photosensitizer nanocomposites
상기 실시예 2 및 3에서 제조된 지질-광감작제 나노결합체의 표면 특성분석을 위하여, 주사전자현미경(FE-SEM)과 투과전자현미경(TEM)을 이용하여 분석하고, 그 결과를 도 2와 3 및 도 5에 나타내었다.For the analysis of the surface characteristics of the lipid-photosensitizer nanocomposites prepared in Examples 2 and 3, analysis was performed using a scanning electron microscope (FE-SEM) and a transmission electron microscope (TEM) 3 and Fig.
도 2와 3은 각각 실시예 2에서 제조된 지질-광감작제 나노결합체의 주사전자현미경과 투과전자현미경 사진이고, 도 5는 각각 실시예 3에서 제조된 약물이 봉입된 지질-광감작제 나노결합체의 주사전자현미경과 투과전자현미경 사진이다.2 and 3 are a scanning electron microscope and transmission electron microscope photographs of the lipid-photosensitizer nanocomposite prepared in Example 2, respectively, and FIG. 5 is a photograph of the lipid-photosensitizer nanocomposite prepared in Example 3, Scanning electron microscope and transmission electron microscope photographs of the assemblies.
도 2와 3에 나타낸 바와 같이, 제조된 지질-광감작제 나노결합체는 50~80 nm의 나노 크기로 리포좀 형태의 둥근 모양을 유지하는 것으로 나타났으며, 도 3에 나타낸 바와 같이, 약물이 봉입된 지질-광감작제 나노결합체 또한 리포좀 둘레에 광감작제가 잘 코팅되어 있는 것으로 나타났다. As shown in FIGS. 2 and 3, the lipid-photosensitizer nano-conjugate thus prepared showed a liposome-like round shape at a nanometer size of 50 to 80 nm. As shown in FIG. 3, The lipid-photosensitizer nano-binders also showed that the photosensitizer was well coated around the liposome.
<실험예 3> <Experimental Example 3>
다당류-광감작제 구조분석Polysaccharide-photosensitizer structure analysis
상기 실시예 3에서 제조된 약물이 봉입된 지질-광감작제 나노결합체에 다당류와 광감작제 접합체를 코팅하는데 이 다당류와 광감작제 접합체를 ¹H-NMR로 구조를 분석하고 도 4에 나타냈다. 다당류와 광감작제의 접합체의 피크가 나타난 것으로 보아 접합이 잘 되었다고 할 수 있다.The polysaccharide and the photosensitizer conjugate were coated on the drug-encapsulated lipid-photosensitizer nanocomposite prepared in Example 3. The polysaccharide and the photosensitizer conjugate were analyzed by < 1 > H-NMR analysis and shown in FIG. The peak of the conjugate of the polysaccharide and the photosensitizer showed that the junction was good.
<실험예 4> <Experimental Example 4>
지질-광감작제 나노결합체의 효소 활성실험Enzyme activity experiment of lipid-photo-sensitizer nano-conjugate
상기 실시예 3에서 제조된 약물이 봉입된 지질-광감작제 나노결합체의 효소 활성실험을 도 6에 나타내었다. 효소의 농도를 7 Unit으로 고정하고 진행하였다. 이 때, 효소를 처리하지 않은 대조군에서는 지질-광감작제 나노결합체의 광감작제 간의 거리가 가까운 경우에는 상호간 에너지 전달현상에 의해서 형광신호가 억제되었지만 효소를 처리한 후에는 지질-광감작제 나노결합체가 풀리면서 광감작제간의 거리가 멀어져 형광이 뜨는 것을 확인할 수 있었다.FIG. 6 shows the enzyme activity of the drug-encapsulated lipid-photosensitizer nano-conjugate prepared in Example 3 above. Enzyme concentration was fixed at 7 units. When the distance between the photosensitizer of the lipid-photosensitizer and the photosensitizer of the photo-sensitizer was close to that of the enzyme-untreated control group, the fluorescence signal was suppressed by mutual energy transfer. However, after the enzyme treatment, It was confirmed that the distance between the photosensitizer and the fluorescence increased due to the loosening of the conjugate.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.
Claims (14)
상기 지질은 인지질, 콜레스테롤 및 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스파티딜에탄올아민-N-(폴리에틸렌글리콜 2000)(DSPE-PEG 2000)으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상이며, 광감작제 1몰 당 1 내지 30몰의 몰비로 결합되고,
상기 광감작제는 클로린 e6(Chlorin e6), 프탈로시아닌(ZnPc) 및 피오포바이드 a(Pheophorbide A, Pheo a)로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 클로린계(chlorins) 화합물인 지질-광감작제 나노결합체.A linker connecting the lipid and the photosensitizer is decomposed by the enzyme secreted by the microorganism,
The lipid is at least one selected from the group consisting of phospholipids, cholesterol and 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine-N- (polyethylene glycol 2000) (DSPE-PEG 2000) , 1 to 30 moles per mole of photosensitizer,
Wherein the photosensitizer is at least one chlorins compound selected from the group consisting of chlorin e6, phthalocyanine (ZnPc) and pheophorbide A (Pheo a) concrete.
상기 광감작제는 단독으로 사용되는 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체.The method according to claim 1,
Wherein the photosensitizer is used alone. ≪ RTI ID = 0.0 > 18. < / RTI >
상기 지질 리포좀은 약물을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체.The method according to claim 1,
Wherein the lipid liposome further comprises a drug. ≪ RTI ID = 0.0 > 18. < / RTI >
상기 지질은 인지질과 콜레스테롤의 혼합물인 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체.The method according to claim 1,
Wherein the lipid is a mixture of phospholipids and cholesterol.
상기 약물은 살리실산(salicyclic acid), 그리세오풀빈(griseofulvin), 톨나프테이트(tolnaftate), 미코나졸(miconazole), 클로트리마졸(dotrimazole), 케토코나졸(ketoconazole), 이트라코나졸(itraconazole), 플루코나졸(fluconazole), 아다팔레인 (adapalene), 트레티노인 (tretinoin), 에리스로마이신 (erythromycin), 벤조일퍼옥사이드 (benzoyl peroxide), 아젤라익 엑시드 (azelaic acid) 및 테르비나핀(terbinafine)으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체.The method of claim 3,
The drug may be selected from the group consisting of salicyclic acid, griseofulvin, tolnaftate, miconazole, dotrimazole, ketoconazole, itraconazole, fluconazole, At least one member selected from the group consisting of adenosine, adapalene, tretinoin, erythromycin, benzoyl peroxide, azelaic acid and terbinafine. ≪ / RTI > wherein said lipid-photoimageable agent is a lipid-photoinitiator.
(b) 광감작제와 촉매를 유기용매에 용해시키는 단계; 및
(c) 상기 (a)단계와 (b)단계에서 제조된 용액을 혼합하여 반응시키는 단계를 포함하는 제1항의 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법.(a) dissolving lipids in an organic solvent;
(b) dissolving the photosensitizer and the catalyst in an organic solvent; And
(c) mixing and reacting the solution prepared in step (a) and step (b).
상기 유기용매는 디메틸설폭사이드(Dimethylsulfoxide: DMSO), 클로로포름(Chlorform), 메틸렌클로라이드(Methylenchloride: MC), 에탄올(Ethanol) 및 메탄올(Methanol)로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법.11. The method of claim 10,
Wherein the organic solvent is at least one selected from the group consisting of dimethylsulfoxide (DMSO), chloroform, methylenechloride (MC), ethanol, and methanol. A method for producing a photosensitizer nanocomposite.
상기 촉매는 4-디메틸아미노피리딘(4-Dimethylaminopyridine: DMAP), N-하이드록시술포숙신이마이드(N-hydroxysulfosuccinimide, HOSU), 1,3-디사이클로 헥실카보디미드(1,3-dicyclohexylcarbodiimide; DCC) 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 지질-광감작제 나노결합체의 제조 방법.11. The method of claim 10,
The catalyst may be selected from the group consisting of 4-dimethylaminopyridine (DMAP), N-hydroxysulfosuccinimide (HOSU), 1,3-dicyclohexylcarbodiimide ) Or a mixture thereof. ≪ RTI ID = 0.0 > 11. < / RTI >
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| Pharmaceutical Research, 2008, Vol. 25, No. 9, pp.2065-2073.* |
| Photochem. & Photobiol. Sci., 2012, vol.11, pp.1905-1913.* |
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