JPS6296541A - 生物学的物質の抽出、純化、濃縮または分離用の２相または多相系に使用するための組成物 - Google Patents

生物学的物質の抽出、純化、濃縮または分離用の２相または多相系に使用するための組成物

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JPS6296541A
JPS6296541A JP61186123A JP18612386A JPS6296541A JP S6296541 A JPS6296541 A JP S6296541A JP 61186123 A JP61186123 A JP 61186123A JP 18612386 A JP18612386 A JP 18612386A JP S6296541 A JPS6296541 A JP S6296541A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、生物学的物質（バイオロジカル・サブスタ
ンス）の抽出、純化、濃縮および／または分離のための
２相系または多相系（ツウフェース又はマルチフェース
システム）に使用するための組成物に関するものである
。
〔発明の背景〕
２相または多相系は、１９７１年にニューヨークで発行
されたベル・オーク・アルベルトジン（ＰｅｒＡｋｅ　
Ａｌｂｅｒｔｓｓｏｎ　）教授著の「細胞粒子および巨
大分子の分配（Ｐａｒｔｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｅ１ｌ　
Ｐａｒｔｉｃｌｅｓａｎｄ　Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌ
ｅｓ　）　Ｊ中に発表されている。
上記の装置は、たとえば蛋臼および核酸のような生物学
的巨大分子、およびたとえば細胞膜、細胞器官、細胞お
よびビールスのような粒子の液体−液体抽出ができるよ
うにすることを目的とするものである。
上記の装置は、２種類またはそれ以上の数の重合体（ポ
リメリック）物質の水溶液を混合して得られる。異種の
重合体（ポリマー）溶液はそれぞれ１つの相中に多量に
含まれている。これらの相の組成と体積は、それら重合
体の種類と分子量、重合体の濃度および温度によって決
まる。
これらの系として斬新で、かつこれらの系を生物学的物
質の抽出、純化、濃縮および／または分離に有効なもの
とする性質は、その液相中の水分が屡々８５乃至９９％
という様に非常に高い比率であることと、粒子形成物質
と共に可溶性に処理できることである。
重合体の相と相の間での生物学的物質の分離時および分
配に最も有利な特性を持っていると前述したこの系は、
デキストランとポリエチレングリコール（ＰＥＧ）との
両型合体から成るものであった。しかし、デキストラン
重合体は非常に高価であるから経済的な面で工業上２相
系に使用することはできなかった。更に、デキストラ／
は、それが含まれる相の粘度を相当高くするので、処理
時間を長くする。
アルベルトジン教授は、ＰＥＧとデキストランから成る
もの以外の他の水溶性重合体をベースとする２相重合体
系を多数試験した。その様な他の重合体系には、安定性
が悪いこと、分配特性が悪いこと、高い粘度とそれに伴
なって分離時間が不要に長くなるという様な幾つもの欠
点があった。
上記の系においてデキストランの代りに、生物学的物質
を大量に処理する場合に使用できる重合体として要求さ
れることは、その価格が充分安いこと、粘度が低いこと
、およびその系の分配特性がデキストランを含む系と同
等またはそれ以上であること、などである。
〔発明の概要〕
この発明によれば、驚くべきことに、上記の要求事項を
満足させて、生物学的物質の抽出、純化、濃縮および／
または分離用の２相または多相系に使用できる組成物を
得ることが可能になった。この組成物は、ヒドロキシア
ルキル基に対してグルコース単位当り平均０．０２の置
換度をもちかつ平均分子量が８０００００未溝のヒドロ
キシアルキルスターチを含むことを特徴とするものであ
る。
このヒドロキシアルキルスターチの平均分子量は好まし
くは最大４０００００で、最大２５００００が最も好ま
しい。
グルコース単位当り平均０．０２ヒドロキシアルキル基
よりも置換度が低いと、重合体溶液の安定度が悪くなり
、すなわちゲルができる。
上記の様に、ヒドロキシアルキルスターチの分子量は最
大２５００００であることが最も望ましい。
その状態にすると、系中の相間で生物学的物質の分布に
ついて一層良好な特性を有する２相系が得られる。更に
、ヒドロキシアルキルスターチの分子量が小さいと、た
とえば、分子量が大きい場合に比べて水中に溶解された
重合体の単位体積当シより多量の蛋白質を処理すること
ができる。
この発明によってヒドロキシアルキルスターチを使用す
ると工業的に充分使用可能な程度に粘度の低い系を得る
ことができる。またこの重合体溶液は安定性も良好であ
る。
この発明による組成物は、好ましくはヒドロキシアルキ
ルスターチ（ＨＰＳ）を含んでいる。
この発明による組成物は、更に通常は、ポリエチレング
リコール、ポリプロピレングリコール、メトキシポリエ
チレングリコール、ポリビニルアルコール、ホリビニル
ピロリドン、／Ｆ−ルセルロース、エチルヒドロキシエ
チルセルローズ、ヒドロキシエチルセルローズオヨヒフ
イコール（Ｆｉｃｏｌｌ）より成る群から選択した少く
とも１種の重合体も含んでいる。
この発明による上記組成物の使用に際しては、ヒドロキ
シアルキルスターチと上記の付加重合体の１種または複
数種を適当に水に溶かす。
ヒドロキシアルキルスターチとこの付加重合体とで１通
常、１〜４０パーセントの水溶液を作るようにする。
次に、処理しようとする生物学的物質を添加して、攪拌
する。
攪拌が止まると、明白な境界を有する液体の複数の層（
相）が形成される。生物学的物質中の相異なる成分は眉
間に分配される。
最後に、相異なる成分をそれぞれ特定の相から回収する
。次いで、大抵は、これら成分を適当な方法で更に純化
（または精製）する。
この発明の一実施例に従えば、相異なる相の相互間に生
物学的物質の諸成分をより選択的に分配させることがで
きる。その場合には、いわゆる親和性（アクィニティ）
分配を使用するもので、重合体溶液中に少くとも１種の
置換された配位子（置換配位子）を添加する。
使用する配位子は、荷電された基でも荷電されていない
基でも良い。正に荷電された配位子の例としては、トリ
メチルアミノ基、ジエチルアミンエチル基および第４ア
ミノエチル基などがある。
また負に荷電された配位子としては、たとえば。
カルボキシル基、スルホン酸基、カルボキシメチル基、
カルボキシエチル基、硫酸基および燐酸基などがある。
上記の他の適当な配位子の例としては、脂肪酸および脂
肪酸の誘導体、シバクロン青（ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕ
ｅ）とプＯ’／　；Ｊ　７黄（Ｐｒｏｃｉｏｎ　Ｙｅｌ
ｌｏｗ）のようなトリアジン色素、植物凝集素（１ｅｃ
ｔｉｎ　）、コエンチーム（補酵素）、アデノシン３燐
酸やアデノシン２燐酸およびアデノシン汚ノ燐酸の類縁
物、チアミン結合蛋白質、糖蛋白質、フラビン結合蛋白
質、およびビオチン結合蛋白質などを挙げることができ
る。
親和性分配を実現するには、上述の配位子を２相系中の
少くとも１つの重合体、すなわち、ヒドロキシアルキル
スターチ、および／またはポリエチレンクリコール、ポ
リプロピレングリコール、メトキシポリエチレングリコ
ール、ポリビニルアルコール、ホリビニルビロリドン、
メチルセルローズ、ヒドロキシエチルセルローズ、エチ
ルヒドロキシエチルセルローズおよびフィコール（Ｆｉ
ｃ−ｏｌｌ　）より成る群中から選択した重合体の中の
少くとも１つと結合させる。
通常、配位子と重合体は共有結合によって互に結合する
。
配位子の使用による利点は、配位子が生物学的物質の或
種の成分と選択的に結合することである。
そのために、特定化合物がより高い割合で成る相中に取
込まれ、収率が高くなる。
生物学的成分を各相間に分配させる別の方法は重合体溶
液中に水溶性塩を添加することである。
上記の分配はまたそこに存在する重合体の分子量にも影
響される。
〔実施例の説明〕　　。
以下、後記の表と添付図面を参照しつつこの発明を実施
例について詳述する。なお、以下では説明の便宜上５実
施例と比較例に通し番号をつけて示したが、これら比較
例はこの発明を構成するものではない。
実施例　１ ヒドロキシプロピル基に対してグルコース単位当り平均
０．１４の置換度を有しかつ平均分子量が１２５０００
であるようなヒドロキシプロピルスターチを平均分子量
が８０００のポリエチレングリコールと共に、と−カ中
で水に溶かした。
ヒドロキシプロピルスターチとポリエチレングリコール
の割合を、水の量を一定として、変化させた。得られた
混合物を短時間攪拌し、その後攪拌を止めた。そして、
２相が形成されているか否かを確認した。その結果は、
いわゆる状態図（または＜！ｌ！２１）の形で第１図（
こ示す通りである。
実施例　２ ヒドロキシプロピル基に対してグルコース単位当り平均
０．１４の置換度を有し平均分子量が１２５０００のヒ
ドロキンプロピルスターチ０．７１を、平均分子量が８
０００のポリエチレングリコールｏ、２５ト共に水に溶
かした。
こうして得られた重合物溶液に燐酸ナトリウムを濃度が
１０ｍＭになるまで添加した。この２相系の全量は５ｙ
である。
エンチーム　β−ガラクトシダーゼ９１４　位ヲ’？ｌ
Ｉ。
拌しながら添加し、更に攪拌は小時間続けた。
攪拌を止めると溶液は２相になっていた。次いで、この
２つの相中のエンチームの量を測定し、両相間の分配に
関する指標を算出した。その結果は表１の通りである。
実施例　３ ポリエチレングリコールとして、平均分子量が２０００
０のものを使用した点で異なる以外は上記実施例２と同
じ工程を繰返えした。結果は表１の通りである。
実施例　４ 塩化ナトリウムを０．１Ｍの濃度に添加した点で異なる
ことを除いて他は上記実施例２と同様の工程を繰返えし
た。結果は表１の通りである。
実施例　５ 塩化ナトリウムを０．１Ｍの濃度に添加した点で異なる
こと以外は上記実施例３と同じ工程を行なった。その結
果は表１の通りである。
実施例　６ エンチームとしてカタラーゼを使用した点で異なる以外
は上記実施例２と同じ工程を行った。結果は表１に示す
通りである。
実施例　７ エンチームがカタラーゼである点で異なることを除き上
記実施例３の工程を繰返えした。結果を表１に示す。
実施例　８ エンチームがカタラーゼである点で異なる以外は上記実
施例４の工程を繰返えした。結果は表１に示す通りであ
る。
実施例　９ エンチームがカメラーゼである点で異なる以外は上記実
施例５の工程を福返えした。結果は表１の通りである。
実施例　１０ ヒドロキシプロピルスターチの代りに平均分子量が８０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例２と同じ工程を行なった。結果は表１に示す通
りである。
比較例　１１ ヒドロキシプロピルスターチの代りに平均分子量が５０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例３の工程を行なった。結果は表１に示す通りで
ある。
比較例　１２ ヒドロキシプロピルスターチの代りに平均分子量が５０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例４の工程を行なった。結果は表１に示す通りで
ある。
比較例　１３ ヒドロキシプロピルスターチの代りに平均分子量が５０
００００のデキストラ／を使用した点で異なる以外は上
記実施例５の工程を行なった。
比較例　１４ ヒドロキシプロピルスターチの代りに平均分子量が５０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例６の工程を行なった。結果は表１に示す通シで
ある。
比較例　１５ ヒドロキシプロピルスターチの代υに平均分子量が５０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例７の工程を行なった。結果は表１に示す通りで
ある。
比較例　１６ ヒドロキシプロピルスターチの代シに平均分子量が８０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例８の工程を行なった。結果は表１に示す通りで
ある。
゛比較例　１７ ヒドロキシプロピルスターチの代りに平均分子量が５０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例９の工程を行なった。
結果ハ表１に示す通りで、これによれば実施例２．６、
比較例１０．１４の方法では６０ノ（−セント以上のエ
ンチームがポリエチレングリコール相中に見出せること
が明らかである。実施例２ではエンチームの９５パーセ
ントがポリエチレングリコール相の中にあることが判る
。
また、表１から、実施例５．９、比較例１３．１７の工
程によればエンチーム８５パーセント以上を下側相（各
々、ヒドロキシプロピルスターチとデキストラン）中に
見出すことができる。
この様に、ヒドロキシプロピルスターチとポリエチレン
グリコールの組合せはデキストランとポリエチレングリ
コールの組合せと同様に有効な２相系を作ることが、上
記結果から判る。
実施例　１８ 平均分子量が８０００００でヒドロキシプロピル基に対
してグルコース単位当り０．１４の置換度を有するヒド
ロキシプロピルスターチ０．０２５１を水１ｍｌ中に溶
解した。
ラビットから採取したガンマグロブリン３．７５ｍｇを
その重合体溶液中に攪拌しながら加えた。
スターチ溶液中にガンマグロブリンの９０７く−セント
が見出された〇 ヒドロキシプロピルスターチの添加量を増加させながら
、この実験を続けた。すると、第２図に示されるように
、ヒドロキシプロピルスターチの量の増加と共にガンマ
グロブリンの沈澱が増加した。
実施例　１９ 平均分子量が１２５０００のヒドロキシプロピルスター
チを使用した点で異なる以外は上記実施例１８の工程と
同じ工程を繰返光した。この場合には、第２図から判る
通り、ヒドロキシプロピルスターチの濃度如何にかかわ
らずガンマグロブリンは沈澱しなかった。
実施例１８と１９の双方の結果を比較すると、この発明
の範囲内の平均分子量を持つヒドロキシプロピルスター
チは重合体濃度を増加してもガンマグロブリンの沈澱効
果が無いことを示している。しかし、この発明の範囲外
の分子量を持つヒドロキシプロピルスターチを使用する
と相当の沈澱効果がある。
実施例　２０ ヒドロキシプロピル基に対してグルコース単位当り平均
０．１４の置換度を有し平均分子量が１２５０００のヒ
ドロキシプロピルスターチ０．９１　ヲ、平均分子量が
２００００のポリエチレングリコール０．６ｆおよびシ
バクロン青−ポリエチレングリコールより成る置換配位
子０．０６　ｙと共に、ｐＨ値７．０の、１０ｍＭの燐
酸ナトリウム７．５ｇにビーカ内で溶かした。後者のポ
リエチレングリコールは上記の分子量を持つものであっ
た。
これに、攪拌しながら、たとえばエンチームホスホフル
クトキナーゼを含むパン酵母１ｙを添加した。
この攪拌操作は短時間続けた。次に攪拌を止めると溶液
は２相を形成した。下側相はヒドロキシプロピルスター
チより成るものであった。
２相間でのエンチームの分配結果は表２に示す通りであ
る。
実施例　２１ ヒドロキシプロピルスターチの代りに平均分子量が５０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例２０の工程を行なった。２相間のエフチームの
分配結果は表２に示す通りである。
実施例　２２ パン酵母から抽出する代りにエンチームダルコース−６
−燐酸デヒドロゲナーゼを使用した点で異なる他は上記
実施例２０の工程と同じ工程を行なった。２相間のエン
チームの分配結果は表２に示す通りである。
比較例　２３ ヒドロキシプロピルスターチの代シに平均分子量が８０
００００のデキストランを使用した点で異なる以外は上
記実施例２２の工程を行なった。結果は表２に示す通り
である。
実施例　２４ 置換配位子を添加しない点で異なる以外は上記実施例２
０の工程を行なった。結果は表２に示す通りである。
実施例　２５ 置換配位子を添加しない点で異なる以外は上記実施例２
１と同じ工程を行なった。結果は表２に示す通りである
。
実施例　２６ 置換配位子を添加しない点で異なる以外は上記実施例２
２と同じ工程を行なった。結果は表２に示す通シである
。
比較例　２７ 置換配位子を添加しない点で異なることを除いて他は上
記比較例２３と同じ工程を行なった。結果は表２に示す
通シである。
実施例および比較例２０〜２７は、ＨＰＳと配位子を添
加したＰＥＧとより成る２相系は、エンチームス　ホス
ホフルクトキナーゼとグルコース−６−ホスクニートデ
ヒドロゲナーゼの純化に関して、デキストランと配位子
を添加したＰＥＧとをベースとする２相系と同じ様に働
くことを示している。
実施例　２８ ヒドロキシプロピル基に対してグルコース単位当シ平均
０．１４である置換度を有しかつ平均分子量が１２５０
００であるヒドロキシプロピルスターチ０．７ｙを、平
均分子量が５ｏｏｏであるポリエチレングリ−ｙ　−、
＃　０．２５１と共に、ｐ＝Ｈ値７．０の１０ｍＭの燐
酸ナトリウム緩衝剤に第１のビーカ内で溶かした。この
２相系の全量は５ｙであった。
第２のビーカ内で、ポリエチレングリコールの０．５〜
２．５パーセントがシバクロン青−ポリエチレングリコ
ールより成る置換配位子から成シしたがってポリエチレ
ングリコールが上記の分子量を持っていることを除いて
、上述のように２つの２相系を混合した。更にヒドロキ
シプロピルスターチの３パーセントをプロジオン黄−ヒ
ドロキシプロピルスターチから成る置換配位子で置き換
えて、ヒドロキシプロピルスターチが上記の仕様を持つ
ようにした。
特ニエンチーム　グルコース−６−ボスフェート＼デヒ
ドロゲナーゼを含むパン酵素の抽出液０．４１を攪拌し
ながら添加した。攪拌操作は小時間続けて後止めて、２
つの相を形成させた。上側相はポリエチレングリコール
より成るものであった。
配位子シバクロノ青−ポリエチレングしコールを添加し
たことによって、エンチームはよす多量に上側相に分布
することになる。同様にプロジオン黄−ヒドロキシプロ
ピルスターチを添加するとエンチームは下側相に分布す
ることになる。これらの結果は第３図に示す通シである
。
置換度がグルコース単位当５０．１４で平均分子量が１
２５０００のヒドロキシプロピルスターチ２．８ｇを、
平均分子量が８０００のポリエチレングリコール１．Ｏ
ｆと共に、２０　ｍｌの水中に溶かした。
攪拌操作の後２つの相が形成され、そのうちの下側相は
ヒドロキシプロピルスターチより成るものであった。こ
の相の粘度は、５ｍｌの溶液が１０ｍ１のピペットを通
過する所要時間を測って決定した。この所要時間は２１
．６秒であった。
比較例　３０ ヒドロキシプロピルスターチの代シに平均分子量が５０
００００のデキストランを使用した点で異なることを除
き上記実施例と同じ工程を繰返えした攪拌後、下側相が
デキストラ／から成る２つの相が形成された。ピペット
を通過するに要した時間は３７．５秒であった。
上記２つの例２９と３０による結果を比較すると。
この発明によるヒドロキシプロピルスターチはデキスト
ランより相当粘度が低いことが判る。このことは、即ち
、ヒドロキシプロピルスターチ−ポリエチレングリコー
ルを有する２相系における処理時間が、デキストラン−
ポリエチレングリコールを有する２相系におけるよりも
短くなることを意味している。
実施例　３１ ２相系においていわゆる向流分配法によってエンチーム
を分離した。緩衝剤として、５　ｍＭのβ−メルカプト
エタノール、０．１ｍＭのＥＤＴＡおよび０．０２　ｍ
ＭのＭｇＣｌ２を含むｐＨ値が７．０の０．２５Ｍ燐酸
ナトリウムを使用した。
平均分子量が１２５０００で、ヒドロキシプロピル基に
対する置換度がグルコース単位当、９０．１４であるよ
うなヒドロキシプロピルスターチ２１ｇを、上記の緩衝
剤５３ｆ中に溶かした。この緩衝剤とＨｐｓで溶液点１
が出来た。
平均分子量が２００００ポリエチレングリコールを７．
１１と置換配位子シバクロン青−ポリエチレングリコー
ル０．３７ｆとを、上記の緩衝剤６９ｙ中に溶かした。
この緩衝剤とＰＥＧおよび配位子とで溶液ＮＩＩＬ２が
できる。このポリエチレングリコールの仕様は上記の通
シである。
溶液ＮＩＩＬ１を０．８７ｍ１！ずつ５５個のビー力に
分割投入した。溶液点２を１．１３ｍ１と、エンチーム
　ヘヤ キソキナーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、３−ホスホグ
リセレートキナーゼ、グルコース−６−ホスフェートデ
ヒドロゲナーゼ、グリセルアルデヒド−３−ホスフェー
トデヒドロゲナーゼ、エノラーゼ、ホスホグリセレート
ムターゼおよびアルコールデヒドロゲナーゼを含むパン
酵素抽出液０．２７１を、攪拌しながら最初の３個のピ
ー力に加えた。
攪拌操作を終えると２つの相が形成され、そのうちの一
方はヒドロキシプロピルスターチト水ヨり成るものであ
った。こうして最初のエンチームの分配が行なわれた。
この分配を改善するために第１のビー力の上側相を第２
ビーカの溶液中に移し、第１のビー力には溶液Ｎ１１Ｌ
２を１．１３ｍｊ’添加した。
更に攪拌を行なった後、第１および第２の両ピー力中に
はそれぞれ２つの相が形成された。同時にエンチームは
両相間に分配された。第２ビーカの上側相を第３ビーカ
の溶液中に移した。同時に第１ビーカの上側相を第２ビ
ーカに移し、第１ビー力には更に溶液Ｎａ２を１．１３
ｍＩ！加えた。
５５個のビー力全部が２つの相を持つまでこの工程を繰
返えした。こうしてエンチームの分離が行なわれ、上側
相に強い分配を有するエンチームはピー力のうち順番の
高いものの中に見られ、下側層に強く分配されたエンチ
ームは順番の低いものに見られた。
結果は第４図の通りである。
実施例　３２ ヒドロキシプロピル基に対する平均置換度がグ子量が８
０００のポリエチレングリコール２５ｇと共に、ビーカ
内で１８ｇの水に溶かした。
攪拌操作後、２つの相が形成された。
この２相系の安定度は、温度が＋４℃の冷蔵庫に保存す
ることで制御した。１４日経過してもゲルが形成される
傾向は認められなかった。
実施例　３３ ヒドロキシプロピル基に対する置換度がグルコース単位
当り０．０１でかつ平均分子量が１４０００でアルヒド
ロキシプロピルスターチを使用した点を除いて上記実施
例３２の工程を繰返した。
３日後にゲル形成の傾向が観測された。
実施例３２と３３の結果を比較すると、ヒドロキシプロ
ピル基に対する置換度が特定の２相系の安定度に影響の
あることが判る。
低温（コールド）で安定な２相系の有利である点は成る
種の生物学的物質は低温で処理することが求められるこ
とによる。
実施例　３４ 異なったスターチ誘導体がポリエチレングリコ−ルと２
相系を形成する能力の試験を行なった。
表３に示スように、スターチのヒドロキシアルキル誘導
体のみがポリエチレングリコールと官能２相系を形成す
る。
実施例　３５ 実施例３１に示されるように、２相同流分配系を使って
デオキシリボ核酸、ＤＮＡおよびリボ核酸、ＲＮＡを分
離した。
緩衝剤としては、０．１ｍＭの塩化ナトリウムを含むｐ
Ｈ値が７．０の１０ｍＭ燐酸ナトリウムを使用した。
平均分子量が１２５０００でヒドロキシプロピル基に対
する平均置換度がグルコース単位当り０．１４であるよ
うなヒドロキシプロピルスターチ７．８１　ヲ上記の緩
衝剤２２．２　ｆ中に溶解した。この溶液のことを溶液
克１と言うことにする。平均分子量が８０００のポリエ
チレングリコール３．Ｏｆを上記の緩衝剤２７１中に溶
かした。この溶液を溶液ＮＣＬ２と呼ぶ。
３ｙの溶液ＩＶＪｃＬ１を１０本の試験管中にそれぞれ
入れた上、３１の溶液Ｎ１１２を５ｍｙのＤＮＡおよび
５ｍｙのＲＮＡと共に１番試験管に加え、短時間この試
験管を振盪した。振盪を止めると２つの相が形成された
。上側相を２番試験管の溶液中に移し、次いで１番試験
管には溶液Ｎ１１２を３ｙ添加した。
この工程を、１０本の試験管についてだけ実施例３１に
従って続けた。ＲＮＡからのＤＮＡの分離結果を第５図
に示す。
実施例　３６ 平均分子量が１２５０００でヒドロキシプロピル基に対
する平均置換度がグルコース当、９０．１４であるヒド
ロキシプロピルスターチ０．６５ｇと平均分子量が８０
００であるポリエチレングリコール０．２５　ｆとを、
ｐＨ値−が７．０の１０　ｍＭ燐酸ナトリウムにピーカ
中で溶かして総量５ノの溶液とした。
これに攪拌しながらパン酵母１０　ｍｇを添加し、この
攪拌操作を暫時続けた。攪拌を止めると２つの相が形成
された。
酵母細胞（イースト・セル）の分配は表４に示されるよ
うな結果になった。
実施例　３７ 緩衝剤として塩化ナトリウム１２．５ｍＭ含むものを使
用した点で異なる以外は実施例３６と同じ工程を行なっ
た。その結果得られた酵母細胞の分配は表４に示す通り
である。
実施例　３８ 緩衝剤が２５ｍＭの塩化ナトリウムを含む点で異なる以
外は上記実施例３６と同じ工程を行なった。
得られた酵母細胞の分配は表４の通りである。
実施例　３９ 緩衝剤が５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む点で異なる以
外は上記実施例３６と同じ工程を行なった。
酵母細胞の分配結果は表４の通りである。
実施例　４０ 緩衝剤が７５　ｍＭの塩化ナトリウムを含む点で異なる
以外は上記実施例３６の工程を行なった。得られた酵母
細胞の分配結果は表４の通りである。
実施例　４１ 緩衝剤が１０ｒｎＭの塩化ナトリウムを含む点で異なる
他は上記実施例３６の工程を行なった。酵母細胞の分配
結果は表４の通りである。
実施例３６〜４１は酵母細胞の分配が塩含量を変えるこ
とによって制御できることを示している。その結果は第
６図ａ　−ｂに示されている。
実施例　４２ ビーカ内で、平均分子量が１２５０００でヒドロキシプ
ロピル基に対する平均置換度がグルコース単位当り０．
１４であるヒドロキシプロピルスターチ０．６５１と平
均分子量が８０００のポリエチレングリコール０．２５
ｆとを、１０　ｍＭの塩化ナトリウムを含むｐ′Ｈ値が
７．０の１０　ｍＭ燐酸ナトリウム中に溶解して、総量
４．７５１の溶液を作った。
これを攪拌しながら、子牛の脳から取った接合膜（５ｙ
ｎａｐｔｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ　）　０．２５ｇを
添加した。短時間この攪拌を継続し、それを停止すると
２つの相が形成された。
膜の分配は第７図に示されるような結果になった。
実施例　４３ 緩衝剤が２５ｍＭの塩化ナトリウムを含んでいる点で異
なる以外は上記実施例４２の工程を繰返えした。膜の分
配は第７図に示されるような結果となった。
実施例　４４ 緩衝剤が５０　ｍＭの塩化ナトリウムを含んでいる点で
異なる以外は上記実施例４２の工程をそのまま行なった
。膜の分配は第７図に示されるような結果になった。
実施例　４５ 緩衝剤が１００　ｍＭの塩化ナトリウムを含んでいる点
で異る以外上記実施例４２の工程を行なった。膜の分配
結果は第７図に示される通シである。
実施例４２〜４５は、塩の含量を増やすと膜を上側相か
ら界面へ導き得ることを示している。
実施例　４６ 平均分子量が１２５０００でヒドロキシプロピル基に対
する平均置換度がグルコース単位当り０．１４であるよ
うなヒドロキシプロピルスターチ４０００　ｆ　（！：
、平均分子量８０００を有するポリエチレングリコール
１５２０ダと、乳酸脱水酵素を含む豚からとった筋肉抽
出液４０００　ｆとを、ｐＨ値が７．９の４０　ｍＭ燐
酸ナトリウム中に溶解して、総量２００００１の溶液を
得た。
こうして得た混合物は、アルファーラバル分離器ＬＡＰ
Ｘ２０２を使用して２相に分離された。各相中の乳酸脱
水酵素の量を測定した。結果は表５に示す通シである。
実施例　４７ １．５バーセントのポリエチレングリコールが共有結合
プロジオン黄配位子を持っている点で異なる以外は上記
実施例４６と同じ工程を行なった。この配位子はＬＤＨ
に対して親和性を持っている。
結果は表５に示す通りである。
実施例４６と４７は、上側相の重合体に付着した配位子
を使用することによってエンチームＬＤＨを大量に上側
相に抽出できることを示している。
上述した各実施例は、この発明の範囲内で種々改変する
ことができるから、これら実施例はこの発明を制限する
ものではない。　゛ 表１　分配係数の上側相における重合体の分子量と溶液
のイオン組成とに対する依存性緩衝剤Ａ　：　１０ｍＭ
燐酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ７，０ 緩衝剤Ｂ　：　１０ｍＭ燐酸ナトリウム緩衝剤、ｐＨ７
，０と０．１　Ｍ塩化ナトリ ウム 表２　上側相の重合体ポリエチレングリコールに結合し
たシバクロン青である配位子に対する分配係数の依存性 表３　相異なるスターチ誘導体の、ポリエチレングリコ
ールと２相系を形成する能力 表４　塩化ナトリウム濃度を変えた場合の２相系中の酵
母細胞の分配 表５　豚の筋肉からの抽出液を使用した大規模２相系に
おけるＬＤＨの分配
【図面の簡単な説明】
第１図はＰＥＧ３０００−ＨＰＳの状態（相）図、第２
図は種々の下側相重合体の溶液中のガンマグロブリンの
溶解度を示す線図、第３図はグルコース−６−ホスフェ
ート　デヒドロゲナーゼの分配に対する重合体結合配位
子の影響を示す線図、第４図（ａ）〜（ｉ）はそれぞれ
５％のシバクロン青−ＰＥＧを添加した種々のＰＥＧ　
８０００−ＨＰＳ　２相系においてビーカ番号の関数と
してエンチームの活性度を示す線図、第５図は２相系を
使用したＤＮＡとＲＮＡの混合物の向流分配状態を示す
線図、第６ａ図はＮａＣ１の濃度に対する２相系の上側
相中の酵母細胞の景を示す線図、第６ｂ図はＮａＣ４の
濃度に対する２相系の界面における酵母細胞の量を示す
線図、第６Ｃ図はＮａＱの濃度に対する２相系の下側相
中の酵母細胞の量を示す線図、第６ｄ図は第６ａ〜６０
図の結果を総合して示す線図、第７図は２相系の上側相
における接合膜の量をＮａＣｆの濃度に対して示す線図
である。

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）ヒドロキシアルキル基に対する置換度がグルコー
    ス単位当り平均０．０２よりも大で平均分子量が８００
    ０００より小さなヒドロキシアルキルスターチを含んで
    成る、生物学的物質の抽出、純化、濃縮または／および
    分離用の２相または多相系に使用するための組成物。
  2. （２）ヒドロキシアルキルスターチの平均分子量が最大
    ４０００００であるような、特許請求の範囲第（１）項
    に記載の組成物。
  3. （３）ヒドロキシアルキルスターチの平均分子量が最大
    ２５００００であるような、特許請求の範囲第（１）項
    に記載の組成物。
  4. （４）ヒドロキシアルキル基に対する置換度がグルコー
    ス単位当り平均０．０２よりも大で平均分子量が８００
    ０００よりも小さなヒドロキシアルキルスターチと、ポ
    リエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、メ
    トキシポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール
    、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルローズ
    、メチルセルローズ、エチルヒドロキシエチルセルロー
    ズおよびフィコールより成る群から選択された少くとも
    １つのポリマーとを含んで成る、生物学的物質の抽出、
    純化、濃縮または／および分離用の２相または多相系に
    使用するための組成物。
  5. （５）ヒドロキシアルキル基に対する置換度がグルコー
    ス単位当り平均０．０２よりも大で平均分子量が８００
    ０００より小さなヒドロキシアルキルスターチと、少く
    とも１つの置換された配位子とを含む、生物学的物質の
    抽出、純化、濃縮または／および分離用の２相または多
    相系に使用するための組成物。
  6. （６）配位子が、ヒドロキシアルキルスターチ、および
    ／またはポリエチレングリコール、ポリプロピレングリ
    コール、メトキシポリエチレングリコール、ポリビニル
    アルコール、ポリビニルピロリジン、メチルセルローズ
    、エチルヒドロキシエチルセルローズ、ヒドロキシエチ
    ルセルローズおよびフィコールから成る群から選ばれた
    少くとも１つのポリマーで置換されまたはそれらに結合
    していることを特徴とする特許請求の範囲第（５）項に
    記載の組成物。
  7. （７）ヒドロキシアルキル基に対する置換度がグルコー
    ス単位当り平均０．０２よりも大であり平均分子量が８
    ０００００よりも小さなヒドロキシアルキルスターチの
    水溶液を、生物学的物質の抽出、純化、濃縮および／ま
    たは分離のための２相または多相系に使用する方法。
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