JPH10509324A

JPH10509324A - Methods for the production of polypeptides with suppressed allergenicity

Info

Publication number: JPH10509324A
Application number: JP8516467A
Authority: JP
Inventors: エスケランブジョーンバズ，マズ; プレンテ，アネーテ
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 1994-11-24
Filing date: 1995-11-23
Publication date: 1998-09-14
Also published as: AU3924095A; EP0793726A1; WO1996016177A1

Abstract

(57)【要約】本発明は抑制されたアレルゲン性を有すポリペプチドを製造するための方法であって、ａ）前記ポリペプチドを生産可能な微生物を培養する、ｂ）前記ポリペプチドを実質的に純粋な状態で回収することによる方法に関連し、ここでこの微生物は発現されたポリペプチドが自己多量化するように改良されている。更に、かかるポリペプチドをコードする遺伝子を含んで成るDNA構築体、前記DNA構築体を含んで成る組換発現ベクター又は形質転換ビヒクル、前記DNA構築体又はベクターを担持する細胞を考慮する。更に、本発明の方法に従って製造した抑制されたアレルゲン性を有する微生物産生型ポリペプチド及びかかるポリペプチドを含んで成る組成物を考慮する。最後に、本発明はポリペプチドのアレルゲン性の抑制のためのジッパードメインの利用に関する。 (57) [Summary] The present invention provides a method for producing a polypeptide having suppressed allergenicity, comprising: a) culturing a microorganism capable of producing the polypeptide; b) transforming the polypeptide in a substantially pure state. In connection with the method of recovering, the microorganism has been modified such that the expressed polypeptide self-amplifies. Further, consider a DNA construct comprising a gene encoding such a polypeptide, a recombinant expression vector or transformation vehicle comprising said DNA construct, and a cell carrying said DNA construct or vector. Further, consider microbial-produced polypeptides having reduced allergenicity produced according to the methods of the present invention and compositions comprising such polypeptides. Finally, the invention relates to the use of a zipper domain for suppressing the allergenicity of a polypeptide.

Description

【発明の詳細な説明】抑制されたアレルゲン性を有するポリペプチドの製造のための方法発明の分野本発明は、抑制されたアレルゲン性を有するポリペプチドを製造するための方法に関する。更には、かかるポリペプチドをコードする遺伝子を含んで成るDN A構築体、前記DNA構築体を含んで成る組換発現ベクター又は形質転換ビヒクル、前記DNA構築体又はベクターを担持する細胞に関する。また、本発明の方法に従って製造された抑制されたアレルゲン性を有するポリペプチド、抑制されたアレルゲン性を有するオリゴマーポリペプチド、及び前記ポリペプチドを含んで成る組成物に関する。最後に、本発明はポリペプチドのアレルゲン性を抑制するためのジッパードメインの利用に関する。発明の背景工業、家庭、食品／飼料、化粧品、医薬品等において利用するための酵素及び非酵素タンパク質を含むポリペプチドがどんどん工業的に製造されてきている。ポリペプチドであるので、それらは動物及びヒトの免疫系を刺激することができる。ポリペプチドのアレルゲン性一般に、ほとんどの人はポリペプチドに対して有害な作用が生ずるであろう程度にまでさらされることはないが、このような現象が極めて重要である一定の危険性のある集団が存在する。このような危険性のある集団には、酵素を含んで成る製品の製造を扱う従業者、及びポリペプチドを含んで成る製品に毎月直接触れる美容士の如き職人が含まれる。かかる危険性のある集団に関し、一定のポリペプチドは様々な種類の抗体の製造を誘引する及び／又は細胞応答を供することがある。これらのルートの少なくとも一つはヒト及び動物において有害な作用を与えることがあり、なぜならポリペプチドに対する曝露は感作、それに続くアレルギーをもたらしうるからである。感作は免疫状態として定義されるが、アレルギーは臨床疾患として特性づけられている。アレルギーは一般に抗原との２回以上の遭遇を必要とする。第一回目の曝露は一次免疫反応を招き、それは個体の感作をもたらす。感作された個体が同一の抗原と再度接触すると、それはアレルギー反応を誘引しうる。より詳しくは、IgE（又は同等の物質）が肥満細胞の表層上の特異的なレセプターに付着する。その肥満細胞は化学媒介物質で充満された数多くの大型細胞質顆粒を含む。肥満細胞に一旦付着すると、IgE分子はその抗体反応部位において何週間も存続し得、特異的なアレルゲンを相互作用できるようになる。 IgE媒介式アレルギーを有する個体は肥満細胞に定着した数多くのIgE抗体を有する。曝露により、その特異的なアレルゲン分子は細胞に定着した対応のIgE抗体と結合する。これは化学媒介物質の細胞質顆粒の細胞放出を招き、鼻炎、結膜炎、ウリカリア（uricaria）又はその他のアレルギー反応の如き症状を供する。かかるアレルギー反応のアレルゲンへの曝露後数分又は数時間以内に起こり、そして往々にして「即時型過敏反応」と呼ばれる。 IgE媒介式過敏反応はアレルゲンが吸入により気道を介して導入されるときに生じうる。アレルギー反応の発生は曝露の態様に少なくとも一部依存するものと信じられている。例えば、アレルゲン性タンパク質の鼻内負荷は、たとえ特定の血清IgE についての皮膚検査及びラジオアレルゴソルベント検査（RAST）が陰性であったとしても、アレルギー反応を誘引することが認められている(Ivan Roitt，「Essential Immunology」第５版、p.152及び p.240，1984)。ポリペプチドのアレルゲン性の抑制一般に、ポリペプチドのアレルゲン性の抑制のための従来技術の方法は、特に塵状形態のポリペプチドが免疫系を刺激することを回避するため、ポリペプチドを固定化、顆粒化、コーティング又は溶解する様々な方法より成る。どのようにしてもポリペプチド塵又は曝露状の溶解ポリペプチドが発生する危険性が未だある。従って、ポリペプチドの多少の放出が生ずることがあり、それは可能性のある感作及びそれに引き続くアレルギー反応を引き起こしうる。この問題を軽減するための別の方法は、例えば細菌又は哺乳細胞培養物において、製造のためにヒト起源のポリペプチドを選定することであった。これはヒトにとってのいくつかの問題は解決しうるが、動物については解決しない。更に、所望の特性を有するヒト起源のポリペプチドを見い出すのは多くのケースにおいて不可能であり、この理由のためその他の起源が考えられている。これは所望の性質を供する分子の中に１又は複数の位置が改変された任意のヒトポリペプチドでありうる。それはまた細菌、糸状菌等を含むその他の種に由来する分子でもありうる。この後者の生成物の群は全て免疫刺激の潜在能を有するであろう。アレルゲン性を低下させるための更なる提案はポリペプチド分子のサイズの縮小にある（例えば日本国公開公報第4,112,753号又はResearch Disclosure No.33 5102を参照のこと）。しかしながら、これはポリペプチドの活性が重要でないとき、又は注目のポリペプチドの活性がポリペプチドの分解にかかわらず保持されるときにのみ有効な解決案である。プロテインエンジニアリングの利用は、エピトープマッピング及びそれに引き続くアレルゲン性エピトープの改変を通じてポリペプチドのアレルゲン性を抑制するために提案されている（WO92／10755(Novo Nordisk A/S)参照）。医療分野において、ポリペプチドに対する一又は複数のポリマー分子の付加を通じるポリペプチドの抗原性又は免疫原性の低下を行う提案がなされている。これは通常、ポリペプチドとその他の巨大分子構造体との相互作用を妨害する効果をもつ。かかるコンジュゲートは新規の特性をも発揮しうる：例えば、EP38,154（Beec ham Group Ltd.）は免疫抑制特性をもつポリサルコシンとのアレルゲンのコンジュゲートを開示している。米国特許第4,179,337号（Ｅ_nzon）はポリエチレングリコール(PEG）又はポリプロピレングリコールに複合された非免疫原性ポリペプチド、例えば酵素及びペプチドホルモンを考慮している。１モルのポリペプチド当り10〜100モルのポリマーが利用され、そして15％以上の生理活性が保持されている。この保持されたポリペプチドを水性溶液において哺乳動物循環系又は筋肉内に注射する。その非免疫原性は皮内注射検査より評価される。一般に１又は複数のポリマー分子のポリペプチド分子への付加は、例えば酵素の活性を抑制する効果又は酵素とその基質との相互作用を妨害する効果を及ぼすことが見い出された。 EP 183,503号(Beecham Group PLC)は、可逆性連結基により少なくとも一種の水溶性ポリマーに連結された薬理学的に有用なポリペプチドを含んで成るコンジュゲートを提供することによる上記の概念の発案を開示する。 EP 471,125号(カネボウ(株))は、抗原性及び皮膚過敏症に対する抑制効果をもたらしめる、トリアジン環を介して多糖類に連結された改良プロテアーゼを発表している。利用された多糖類は10,000以上の平均分子量を有する。この改良プロテアーゼ中の表層アミノ酸基についての修飾率は30％以上である。一般に、気道に侵入するアレルゲンは、プラスマ膜を通過してアレルギー反応を引き起こすためには約100kDa未満の分子量を有さなくてはならないものと信じられている。 WO94／10191(Novo Nordisk A/S)は低アレルゲン性タンパク質の製造のための方法を開示しており、それにおいてはモノマーの親タンパク質分子は連結し合って、オリゴマーを形成している。これは例えばリンカーもしくはスペーサー分子を利用することにより、又はモノマー分子同志をペプチド結合を介し、第一モノマーのＣ末端と第二モノマーのＮ−末端との間で連結することにより行われる。 Folkesonら、Acta Physiol-Scand，139，p.437-354，1990は、導入したタンパク質マーカーの分子量と、気道を通じて血流に至る輸送量（生物有効率）との間に反比例的な関係があることを示している。 EP 215,662号（マスダヒロシ）は抗腫瘍剤の如き医薬品において使用するための微生物に由来する修飾又は非修飾プロテアーゼを考慮している。プロテアーゼの修飾はプロテアーゼ分子を架橋させることによりダイマー又はオリゴマーを形成することにより実施し得る。ジッパードメインの利用によるポリペプチドの拡大化以上からわかる通り、ポリペプチドを拡大化するための種々の技術が最近公知となっている。「ジッパー技術」「ジッパー技術」と呼ばれるその他の技術がポリペプチドの多量化（オリゴマー化）を引き起こすことで知られる。ジッパー技術はポリペプチド分子同志を自己多量化ポリペプチドドメイン（以降、ジッパードメインと呼ぶ）を通じて連結させることを可能とする。かかるジッパードメインの例は、公知のα−らせん束、架橋束、多重束、平行巻状コイル（porallel coiled coil）、ポリ（Ｌ−グルタミン）鎖が含まれる。ジッパードメインの最も簡単なケースには、双性ヘリックスより成るらせん束、例えばロイシンジッパー及び四重α−らせん束(four α-helical bundles)が含まれる。これらのドメインは(ａ，ｂ，ｃ，ｄ，ｅ，ｆ，ｇ)n型の特徴的な７個のアミノ酸リピートを共有している。このペプタッドリピートの「ａ」及び「ｄ」位は一般に疎水性であり、Cridkにより提唱されているようにα−ヘリックスのインターロッキングのためのポテンシャルを供する特性をもつ(Acta crysta llogr.，6，p.689-697，1953)。この共有パターンにもかかわらず、それぞれの配列は二本鎖、三本鎖、四本鎖、そして更にはそれより高い次元の鎖の数のらせん束さえも形成する（Cohenら、TIBS，11，245-248，1986; Cohen，Proteins，vol.7，p.1-15，1990; Cohen， Science 263，p.488-489，1994; O'Sheaら、Cell，68，p.699-708，1992; O'She aら、Science，254，p.539-545，1991; O'Sheaら、Science，243，p.538-542，1 989; Eisenbergら、Proteins，1，p.16-22，1986; Hoら、J．Am．Chem．Soc，10 9，p.6751-6758，1987）。ロイシンジッパーの例は、DNA結合性ポリペプチドのクラスに属する酵母転写因子GCN4のＣ−末端に位置する33個のアミノ酸配列である(O'Sheaら、Science， 243，p.538-542，1989)。遺伝子操作を介して、特異的なGCN4ロイシンジッパーが種々のポリペプチドに融合されており、そしてモノマーポリペプチドの二量化を媒介することが示された。 Huら、Science，Vol.250，p.1400-1403，1990には、GCN4ロイシンジッパーがバクテリオファージλレプレッサーのＮ−末端ドメインに融合され、そして二量化についてのリポーターとして用いられる遺伝子系が記載されている。 Blondel及びBedouelle（Protein Engineering．4，p.457-461，1991）は、Ｅ．コリ(E．coli)においてマルトース結合性タンパク質（MalE）を二量化した。一般に、ロイシンジッパーはホモダイマーを形成するが、しかしロイシンジッパーの群内では、ヘテロダイマーの形成を優先する特定のモチーフがある。その二つの例はFos及びJunロイシンジッパー(O'Sheaら、Science，245，p.646,1989; Turner and Tjian，Science，243 p.1689，1989)並びにO'Shea（Current Biolo gy，vol.3，no.10，p.658-667，1993）に記載の人工ヘテロ二量型巻状コイルである。また、上記の四重α−らせん束の自己多量化は、Ｅ．コリにおいて発現されるネズミのScFv抗体フラグメントと二量化することが示されている。この抗体フラグメントはEisenbergら前掲、1986及びHoら前掲、1987によりデザインされたアンチパラレルの四重らせん束に由来する２つの同一のらせん（それにおいては、２つのらせんは一の回転で隔てられている）のポリペプチドモチーフと融合している（figure 7参照）。この四重らせん束は２つのらせんをそれぞれが構成する２個の分子から成る（PackらBio/Technology，Vol.11，p.1271-1277，1993）。高次元の多量化をもたらしめるジッパードメインに関し、Lovejoyら、Science ，259，p.1288，1993は三重鎖のα−ヘリックス束の合成を報告しており、それにおいてはらせんは上・上・下へと流れている。この構築体は、それがなければ二量化するGCN4ロイシンジッパーの中に特定の突然変異を導入することにより作られている。グルタミンリピート(ポリ(Ｌ−グルタミン))の導入は、タンパク質が多量化して極性ジッパーを形成するようにもする(Stottら(1995)，Proceedings of the N ational Academy of Sciences of the United States of America 92(14)，p.65 09-6513)。三量化を媒介しうるその他のポリペプチドモチーフは、PeteranderlらBochemi stry，31，p.12272-12276，1992に記載のサッカロマイセス・セレビジエ（Sacch aromyces cerevisiae）及びクルベロマイセス・ラクチス(Kluveromyces lactis) のショック転写因子の天然モチーフである。四量化形成の例は、GCN4ロイシンジッパーのアミノ酸残基の改変を包含する(H arburyら、Science，262，p.1401-1407，1993)。これは小型ペプチドのみについて示されている。組換タンパク質に融合した多量化モチーフは高次元のポリペプチドオリゴマーの形成を媒介する（Wolberら、BIO/TECHNOLOGY，10，p.900-904，1992）。発現された融合ポリペプチドは低塩濃度においてオリゴマーを形成し、そして高塩濃度において解離する。従来技術の説明ポリペプチドのアレルゲン性を抑制するための従来述べられている方法は全て、対応の親ポリペプチドとの対比において、少なくとも一の追加の製造工程を含む。これはその方法をめんどうにし、そして抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドの製造費を高めてしまう。従来技術は、ポリペプチドの多量化のための手段としてのみ、ジッパーを述べている。ポリペプチドのアレルゲン性を、ポリペプチドの製造工程の一体化部分としてポリペプチドのサイズを増大させることにより抑制できることが所望されるであろう。発明の概要本発明の目的は、アレルゲン性の抑制されたポリペプチドを製造するための一体式の産業上利用できる方法を提供することにある。本発明者は産業上利用するためにジッパードメインを利用する潜在能力を認識し、そして驚くべきことに抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドを製造するための方法であってａ）前記ポリペプチドを生産可能な微生物を培養する；そしてｂ）前記ポリペプチドを実質的に純粋な形態で回収する；ここで前記微生物は発現されたポリペプチド分子が自己多量化するように改良されている、ことによる方法の提供を成し遂げた。本発明の態様において、前記微生物は少なくとも一本のポリペプチド及び少なくとも一本のジッパードメインをコードするDNA配列を含んで成る１又は複数のD NA構築体の導入により改良されている。本発明の別の目的は抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドの製造のためのDNA構築体であって、少なくとも一本のポリペプチド分子及び少なくとも一本のジッパードメインをコードするDNA配列を含んで成る構築体の提供にある。本発明は更に、本発明の前記DNA構築体を含んで成る組換ベクター又は形質転換ビヒクル、そして更には前記DNA構築体又は前記組換ベクターもしくは形質転換ビヒクルを含んで成る細胞に関する。更に、本発明は本発明の方法に従って製造された抑制されたアレルゲン性を有する微生物性ポリペプチドに関する。更には、本発明の少なくとも一種のポリペプチド成分を含んで成る組成物も考慮する。最後に、本発明はポリペプチドのアレルゲン性を抑制するためのジッパードメインの利用に関する。図面の簡単な説明図１は、リンカー、GCN4ロイシンジッパー、及びシステインアミノ酸基を含む柔軟性Ｃ末端延長ペプチドのDNA配列及びそれに由来するアミノ酸配列を示す。図２はpAZ-1プラスミドの構築工程を示す。図３は非還元条件下で泳動させたクマジーブルー染色SDS-PAGEを示し、ここでレーン４は分子量マーカーSeeBlue(商標)(Cat.：＃LC5625，Novex，Inc.，Ca，U SA)であり、そしてレーン２及び３はDNA構築体pAZ-1を含んで成るＥ．コリJM105 により発現されたポリペプチドである。図４は還元条件下で泳動させたクマジーブルー染色SDS-PAGEを示し、ここでレーン１は分子量マーカーSeeBlue(商標)(Cat.：＃LC5625，Novex，Inc.，Ca，USA )であり、そしてレーン２及び３はDNA構築体pAZ-1を含んで成るＥ．コリJM105により発現されたポリペプチドである。図５はウェスタンブロットを示す。レーン１は分子量マーカーである。レーン２及び３は非還元条件下で泳動させた。誘導型JM105/pAZ-1に由来するサンプルである。レーン４及び５は還元条件下で泳動させた同じサンプルである。図６は、IgG₁陽性と認められた1.0μｇのモノマー及び１.0μｇのダイマーのT ermamyl(ターマミル)(登録商標)に気管内曝露したDunkin Hartleyモルモットの数、対曝露開始日からの経過日数を示す。発明の詳細な説明本発明者は驚くべきことに、抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドを製造するための一体式の産業利用性のある方法であって、ポリペプチドの生物活性が少なくとも実質的に維持されている方法の提供の成功に収めた。「実質的に」維持された活性とは、本発明との関連においては、修飾されていない親ポリペプチドの活性と比べ、少なくとも20％〜30％、好ましくは30％〜40 ％、より好ましくは40〜60％、より良くは60％から80％に至るまで、更により良くは80％から約100％に至るまでの活性と定義される。前記ポリペプチドは、以下に例示する多大な数の産業上の用途のために利用されうる。ポリペプチドの産業上の利用性に関連して、アレルギー反応の危険性を及ぼしうるのは主にアレルゲンの吸入であるものと理解される。従って、本発明は重要な長所の一つは、本発明者がアレルゲンの呼吸負荷の問題を解決したことにあり、一方、従来技術の解決策は主として疑わしい免疫原の皮膚負荷を考慮している。呼吸負荷ははるかに高感度な問題である。「抑制されたアレルゲン性」なる語は、アレルギー状態に至りうる（ヒトにおける）IgE（及び特定の動物においては、同等の効果をもつ分子、例えばモルモットではIgG₁）の生産量が、対応の親ポリペプチドに比べ、本発明のポリペプチドを吸入したときに有意に低まっていることを意味する。「免疫原」、「抗原」及び「アレルゲン」なる語は以下に定義し、なぜならこれらの語は往々にして、科学者によってさえも不明瞭な態様で使用されているからである。「免疫原」は、ヒト及び動物の中に導入されたときに免疫反応を刺激できる物質と定義する。「抗原」なる語は、免疫系により非自己分子として認識されたときに単独で抗体を発生させることのできる物質を意味する。更に、「アレルゲン」はアレルギー感作を引き起こしうる又は(ヒトにおいては)IgE抗体（そして動物においては同等の効果をもつ分子）によるアレルギー反応を引き起こしうる抗原と定義できうる。「免疫原」なる語はより広義な語であり、そして「抗原」及び「アレルゲン」を含むものと理解される。上記の通り、皮膚検査では陰性であっても、吸入検査ではアレルギー反応を誘発しうるという公知の事実に基づき、皮膚接触により引き起こされるアレルギー反応を媒介する皮膚アレルゲンと、気管支樹における細胞結合型IgEとの接触によりアレルギー反応を引き起こす呼吸性アレルゲンとを区別することが、少なくとも本発明のポリペプチドとの関係において重要である。従って、アレルゲン性の評価は、気管支内投与した親ポリペプチドと、抑制されたアレルゲン性をもつ本発明の対応のポリペプチドとの効果を比較する吸入検査によりなされうる。動物モデル及びin vitroモデルのそれぞれにおいて二通りの有害評価手法が存在する。ECETOCにより推奨される動物モデル（Monografi ECETOC no.19，p17-27 ）はマウス及びモルモットモデルの双方を含む。マウスモデルは、課題の物質の一次遭遇を経た感作の誘導期の際に起こる現象を焦点とする。しかしながら、マウスはポリペプチドを調べるために適当でないと考えられている。これに反して、モルモットモデルは事前に感作しておいた動物において誘導した誘引反応の関数として呼吸性アレルゲンを同定するものである。ECETOCは、モルモットを利用した研究の結果を、ヒトにおける有害評価の適切な基準と認定している。詳しくは、本発明に係るアレルゲン性の評価との関係において、モルモットにおけるポリペプチドの気管支導入を包括するモデルが適当である。モルモットの一の適当な品種Dunkin Hartley種はアレルギー反応との関係でIg E抗体を（ヒトのように）産生しない。しかしながら、それらは別のタイプの抗体、即ちIgG₁A及びIgG₁Bであって、吸入されたポリペプチドに対するそのアレルゲン性を特性化するものを産生する（例えば、Prento，ATLA，19，P8-14，1991 参照）。従って、Dunkin Hartley動物モデルを利用したとき、IgG₁A及びIgG₁Bの相対量はアレルゲンレベルの尺度である。その他の動物モデル、例えばラット、ウサギ等も同等の研究のために利用できうる。本発明に係る抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドの製造は、詳しくは、ａ）前記ポリペプチドを生産可能な微生物を培養する；そしてｂ）前記ポリペプチドを実質的に純粋な状態で回収する；ここで前記微生物は、発現されるポリペプチド分子が自己多量化するような態様で改良されている、ことを含んで成る。このポリペプチドのアレルゲン性はポリペプチドの拡大化により抑制されるものと信じられている。「自己多量化」なる語は、本発明との関係では、いくつかの所望のポリペプチド分子を、例えばジッパードメインの利用により連結させ合うことを意味し、そして二量化、三量化、四量化、多重量化、重合、等を含む。本発明の好適な態様において、この微生物はその中に１又は複数種のDNA構築体を導入することにより改良される。前記DNA構築体は、少なくとも一本のジッパードメインに作用可能式に連結された注目の少なくとも一本のポリペプチドをコードするDNA配列を含んで成る。任意的に、このDNA配列は、ポリペプチドとジッパードメインをコードする配列の間にショートリンカー配列を、及び／又は精製用タッグをコードするDNA配列を更に含んで成りうる。多量化したポリペプチドの回収は任意の適当な方法で実施してよい。ポリ-His テール精製用タッグを利用する場合、ポリペプチドは例えばYipら(1994)，Molec ular Biotechnology，vol.1，p.151-164；Fatiadiら、(1987)，CRC Critical Re v．Anal．Chem．18，pl-44に記載の手順に従い、IMAC（固定化金属アフィニティークロマトグラフィー）により回収されうる。リンカー配列は課題のポリペプチドをジッパードメインに連結するアミノ酸配列をコードするDNA配列である。ポリペプチドの拡大化は培養中に起こる。ジッパードメインのアミノ酸配列は注目のポリペプチドのＮ−又はＣ−末端にグラフトされて発現される。この融合ポリペプチドが発現されると、ジッパードメインは例えば二つづつ会合し、そして疎水性及び静電気相互作用により束ねられる。使用するジッパードメインに依存して、融合ポリペプチドは三量体、四量体等も形成しうる。本発明の方法は、抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチド生成物を獲得するために培養の後及び回収の前に追加の工程を必要としない事実により有利である。更に、本発明に係る方法は注目の任意のポリペプチドであって、親形態にあってはアレルギー反応を引き起こしうる任意のポリペプチドでありうるもののために利用されうる。この群は約100kDa未満の分子量をもつポリペプチドを含んで成る。一般に、前記分子量は約５kDa〜150kDa、好ましくは約20kDa〜100kDa、特に約20kDa〜80kDa の範囲に属する。このポリペプチドは微生物又は哺乳類起源であってよく、そして天然ポリペプチド又はその変異体であってよい。本発明の態様において、注目のポリペプチドは少なくとも一種の触媒活性を示す酵素である。かかる酵素はプロテアーゼ（金属、酸性、中性又はアルカリ性）、リパーゼ、キュチナーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、リアーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、プルラナーゼ、ポリガラクシロナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシドリダクターゼ、トランスグルタミナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ及びペルオキシダーゼを含んで成る群から選ばれる。かかる酵素の特定の例はTermamyl(登録商標)(Novo Nordisk A/S)、即ち、約55 kDaの分子量を有するα−アミラーゼである。本発明の方法は複数種の生物活性を発揮するハイブリド生成物、例えば脂質分解及びタンパク質分解活性の如き２種類の触媒活性を示すヘテロダイマー酵素の製造を可能にする。更に、１又は複数種の触媒活性を発揮する三量化、四量化、多量化ポリペプチド及び／又は酵素である。抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドは以下に記載の任意の適当な細菌又は菌類生物により生産されうる。DNA 構築体本発明の別の目的は少なくとも一本のポリペプチド及び少なくとも一本のジッパードメインをコードするDNA配列を含んで成る抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドの製造用のDNA構築体の提供にある。本明細書において用いる語「DNA構築体」とは、cDNA、ゲノムDNA、合成DNA，R NA又はPNA起源の任意の核酸分子を意味する。「構築体」なる語は核酸セグメントであって、一本鎖でも二本鎖でもよく、そして少なくとも一本のジッパードメインに融合した注目のポリペプチドをコードするDNA配列に基づきうるものを意味するつもりである。この構築体は任意的にその他のDNAセグメント、例えばショートリンカー配列及び／又は特に精製の目的のために使用されるペプチドセグメントをコードする配列を含みうる。本発明のDNA構築体は適宜、ゲノム又はcDNA起源であってよく、例えばゲノム又はcDNAライブラリーを調整し、そして注目のポリペプチドの全て又は一部をコードするDNA配列を標準の技術に従って（Sambrookら、Molecular cloning，A La boratory Manual，cold Spring Harbor，NY，1989参照）合成オリゴヌクレオチドプローブを用いるハイブリダイゼーションによりスクリーニングすることにより得られるものであってよい。このDNA配列は触媒活性を発揮するポリペプチドをコードしうる。特に、このD NA配列はプロテアーゼ（金属、酸性、中性又はアルカリ性）、リパーゼ、キュチナーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、リアーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、ポリガラクシロナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシドリダクターゼ、トランスゲルタミナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ又はペルオキシダーゼを含んで成る群から選ばれる少なくとも一種の酵素をコードしうる。本発明のDNA構築体は確立された標準の方法、例えばBeaucage and Caruthers，Tetrahedron Letters，22，p，p.1859-1869，1981に記載のホスホラミジット法又はMatthesら、EMBO Journal，3，p.801-805，1984に記載の方法により合成的に調製もされうる。ホスホラミジット法に従うと、オリゴヌクレオチドは例えば自己DNAシンセサイザーで合成され、精製され、アニーリングされ、ライゲーションされ、そして適当なベクターの中にクローニングされる。更に、このDNA構築体は合体起源とゲノム起源の複合体、合成起源とcDNA起源の複合体、又はゲノム起源とcDNA起源との複合体であって、合成、ゲノム又はcD NA起源のフラグメントを（適宜）ライゲーションすることにより標準の技術に従って調製されたものであってよく、そのフラグメントは全DNA構築体の様々な部分に対応する。このDNA構築体は例えばUS 4,683,202号又はSaikiらScience，239，p.487-491 ，1988に記載の通りにして、特異的なプライマーを利用するポリメラーゼ連鎖反応によっても調製されうる。特定の態様において、本発明のDNA構築体はSEQ ID No.1に示すDNA配列、更にはSEQ ID No.2に示すアミノ酸配列をコードするが遺伝子コードの縮重によりSEQ ID No.1に示すDNA配列とは異なりうる核酸配列を含んで成る。組換ベクター更なる観点において、本発明は本発明のDNA構築体を含んで成る組換ベクター又は形質転換ビヒクルに関する。本発明のDNA構築体を挿入する組換ベクターは任意のベクターであって組換DNA手順に簡単にかけることができるものであってよく、そしてベクターの選定は往々にしてそれを導入すべき宿主細胞に依存するであろう。即ち、このベクターは自己複製ベクター、即ち、染色体外質として依存するベクターであって、その複製が染色体の複製とは独立したもの、例えばプラスミドであってよい。または、このベクターは宿主細胞に導入したときに、宿主細胞ゲノムに組込まれ、そしてそれが組込まれた染色体と一緒に複製されるものであってよい。このベクターは好ましくは自己多量化すべき注目のポリペプチドをコードする DNA配列がDNAの転写のために必要とされる別のセグメントに作用可能式に連結されている発現ベクターである。一般に、この発現ベクターはプラスミドもしくはウィルスDNAに由来するか、又は双方の因子を含みうる。「作用可能式に連結」なる語は、セグメントがその意図する目的のために適正に機能するように、例えば転写がプロモーターにおいて開始され、そして注目のポリペプチドをコードするDNA配列にわたって進むように配列されていることを意味する。このプロモーターは選定の宿主細胞の中で転写活性を示し、且つ宿主細胞に対して同種又は異種であるポリペプチドをコードする遺伝子に由来しうる任意のDN A配列であってよい。酵母宿主細胞における使用にとって適当なプロモーターの例には酵母解糖系遺伝子（Hitzemanら、J．Biol．Chem.，255，p.12073-12080，1980; Alber and Ka wasaki，J．Mol．Appl．Gen.，1，p.419-434，1982）又はアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子(Youngら、Genetio Engineering of Microorganisms for Chemical s（Hollaenderら、縮）、Plenum Press，New York）、又はIPII（US 4,599,311 ）又はADH2-4c（Russellら、Nature，304，p.652-654，1983）プロモーターが含まれる。糸状菌宿主細胞における使用にとって適当なプロモーターの例は、例えばADH3 プロモーター(McKnightら、The EMBO J.，4，p.2093-2099，1985)又はTpiAプロモーターである。その他の有用なプロモーターの例は、Ａ．オリガ（A．Oryzae ）TAKAアミラーゼ、リゾムコール・ミーヘイ(Rhizomucor miehei)アスパラギン酸プロテイナーゼ、Ａ．ニガー（A．niger）中性α−アミラーゼ、Ａ．ニガー酸安定性α−アミラーゼ、Ａ．ニガー又はＡ．アワモリ（A．awamori）グルコアミラーゼ（gluA）、リゾムコール・ミーヘイ・リパーゼ、Ａ．オリガアルカリ性プロテアーゼ、Ａ．オリザ・トリオースホスフェートイソメラーゼ又はＡ．ニドゥランス(A．nidulans)アセトアミダーゼをコードする遺伝子に由来するものである。TAKA−アミラーゼ及び gluAプロモーターが好ましい。細菌宿主細胞における使用にとって適当なプロモーターの例には、バチルス・ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)マルトジェニックアミラーゼ遺伝子、バチルス・リシェニホルミス（B．licheniformis）アルファ−アミラーゼ遺伝子、バチルス・アミロリケファシエンス（B．amyloliquefaciens） BANアミラーゼ遺伝子、バチルス・スブチリス・アルカリ性プロテアーゼgenもしくはバチルス・ピュミルス（B．pumilus）キシロシダーゼ遺伝子のプロモーター、又はファージラムダＰ_RもしくはＰ_Lプロモーター、又はＥ．コリ lac，Trpもしくはfacプロモーターが含まれる。このDNA配列は、必要ならば、適当なターミネーターに使用可能式に連結されていてもよい。本発明の組換ベクターは更に注目の宿主細胞の中でベクターを複製させるようにするDNA配列を含んで成りうる。このベクターは更には選択マーカー、例えばその産物が宿主細胞の欠陥を補う遺伝子、例えばジヒドロホレートリダクターゼ（DHFR）もしくはシゾサッカロマイセス・ポンペ（Schizosaccharomyces pombe）TRI遺伝子(P．R．Russell，Gene 40，1985，p.125-130に記載)をコードする遺伝子、又はアンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン、フレオマイシン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、ヒグロマイシンもしくはメトトレキセートの如き薬剤に対する耐性を授けるものを含んで成りうる。糸状菌に関しては、選択マーカーにはomdS，pyrG，argB，niaD，tr pC及びsCが含まれる。ポリペプチドを宿主細胞の分泌経路へと導くため、分泌シグナル配列（リーダー配列、プレプロ配列又はプレ配列としても知られる）を組換ベクターの中に施してよい。この分泌シグナル配列はポリペプチドをコードするDNA配列と適正なリーディングフレーム内で連結されている。分泌シグナル配列は一般にポリペプチドをコードするDNA配列に対して５′側に配置されている。この分泌シグナル配列はポリペプチドに通常一体化したものであるか、又は別の分泌型ポリペプチドをコードする遺伝子に由来しうる。酵母細胞からの分泌のため、この分泌シグナル配列は発現ポリペプチドの細胞の分泌経路に至る効率的な誘導を確実なものとする任意のシグナルペプチドをコードしうる。このシグナルペプチドは天然シグナルペプチド、又はその機能的な一部、又は合成ペプチドであってよい。適当なシグナルペプチドはα因子シグナルペプチド（US 4,870,008参照）、マウス唾液腺アミラーゼ（O．Hagenbuchleら、Nature，289，p643-646，1981参照）、改良カルボキシペプチダーゼシグナルペプチド（L.A．Valkら、Cell，48，p.887-897，1987参照）、酵母BARIシグナルペプチド（WO87/02670参照）、又は酵母アスパラギン酸プロテアーゼ３（YAP3）シグナルペプチド（M．Egel-Mitaniら、Yeast，6，p.127-137，1990参照）であることが認められた。酵母の中での効率的な分泌のため、リーダーペプチドをコードする配列をシグナル配列の下流、且つポリペプチドをコードするDNA配列の上流に挿入してもよい。リーダーペプチドの機能は発現ポリペプチドを小胞体からゴルジ装置へと導き、そして更には培養培地への分泌のために分泌用分泌小胞へと導くことを可能にすることにある（即ち、細胞壁を横断する又は少なくとも細胞膜を介し酵母細胞のペリプラズマ空間に至る輸送）。このリーダー配列は酵母α−因子リーダーであってよい（その利用はUS4,546,082 ，EP16,201,EP123,294，EP123,544及びEP163,529に記載されている）。または、このリーダーペプチドは合成リーダーペプチド、即ち、天然には古いリーダーペプチドであってよい。合成リーダーペプチドは例えばWO89/02463又はWO92/11378 に記載の通りにして構築されうる。糸状菌における使用のため、シグナルペプチドは好都合にはアスペルギルス種アミラーゼ又はグルコアミラーゼをコードする遺伝子、リゾムコール・ミーヘイ・リパーゼもしくはプロテアーゼをコードする遺伝子、又はヒュミコラ・ラヌギノーザ(Humicola lanuginosa)リパーゼをコードする遺伝子に由来しうる。このシグナルペプチドは好ましくはＡ．オリザTAKAアミラーゼ、Ａ．ニガー中性α−アミラーゼ、Ａ．ニガー酸安定性アミラーゼ、又はＡ．ニガーグルコアミラーゼをコードする遺伝子に由来する。本発明の好適な態様において、前記ベクターはpAZ-1発現のベクターである。注目のポリペプチドをコードするDNA配列、プロモーター並びに任意的にターミネーター及び／又は分泌シグナル配列をそれぞれライゲーションするのに、更には複製にとって必須の情報を含む適当なベクターにそれらを挿入するのに利用する手順は当業者に公知である（例えば、Sambrookら、前掲、1989参照）。宿主細胞宿主細胞に導入された注目の融合ポリペプチドをコードするDNA配列は注目の宿主にとって同種でも異種であってもよい。もし宿主細胞に対して同種なら、即ち、天然においてその宿主細胞により産生されるものなら、それは一般に別のプロモーター配列に作用可能式に連結されているか、又は許されるのなら、その天然環境とは異なる別の分泌シグナル配列及び／もしくはターミネーター配列に作用可能式に連結されているであろう。「同種」なる語は注目の宿主生物にとって天然のポリペプチドをコードするcDNA配列を含むことを意図する。「異種」は宿主細胞により天然では発現されないDNA配列を含むことを意図する。即ち、このDNA配列は別の起源に由来しうるか、又は合成配列であってよい。本発明のDNA構築体又は組換ベクターを導入する宿主細胞は注目のポリペプチドを産生可能な任意の細胞であってよく、そして細菌、酵母、糸状菌が含まれる。培養に基づき注目のポリペプチドを産生可能な細菌宿主細胞の例はグラム陽性菌、例えばバチルス株、例えばＢ．スブチリス、Ｂ．リシェニホルミス、Ｂ．レンタス(B．lentus)、Ｂ．ブレビス(B．brevis)、Ｂ．ステアロサーモフィルス、Ｂ．アルカロフィルス(B．alkalophilus)、Ｂ．アミロリケファシエンス、Ｂ．コアギュランス(B．coagulans)、Ｂ．サーキュランス(B．circulans)、Ｂ．ロータス(B．lautus)、Ｂ．メガテリウム(B．megaterium)又はＢ．スリンジエンシス（B．thuringiensis）、又はストレプトマイセス（Streptomyces）の株、例えばＳ．リビダンス（S．lividans）、Ｓ．ムリヌス（S．murinus）又はＳ．グリセウス（S．griseus）、又はグラム陰性菌、例えばエッシェリヒア・コリ（Escher ichia coli）である。細菌の形質転換はプロトプラスト形質転換により、又はコンピテント細胞の利用により、周知の態様で行われうる（Sambrookら、前掲参照）。ポリペプチドをＥ．コリの如き細菌の中で発現させる場合、ポリペプチドは細胞質の中に、一般には不溶性顆粒（封入体として知られる）として保持されうるか、又は細菌の分泌配列によりペリプラズマ空間へと導かれうる。前者の場合、細胞を溶菌し、そして顆粒を回収及び変性させ、その後ポリペプチドを変性剤の希釈によりリフォルディングする。後者の場合、ポリペプチドは、例えば音波処理又は浸透圧ショックによる細胞の破砕によりペリプラズマ空間の内容物を放出させ、次いでそのポリペプチドを回収することにより、ペリプラズマ空間から回収される。適当な酵母細胞の例にはサッカロマイセス種又はシゾサッカロマイセス種の細胞、特にサッカロマイセス・セレビシエ又はサッカロマイセス・クリイベリ(S． kluyveri)の株が含まれる。酵母細胞を異種DNAにより形質転換させ、そしてそれから異種ポリペプチドを生産するための方法は例えば米国特許第4,599,311号、同4,931,373号、同4,870,008号、同5,037,743号及び同4,845,075号に記載され、それらは全て引用することで本明細書に組入れる。形質転換細胞は選択マーカーにより決定される表現型、一般には薬剤耐性により、又は特定の養分、例えばロイシンの非存在下で増殖する能力により選別される。酵母における利用にとって好適なベクターは米国特許第4,931,373号に開示のPOT1ベクターである。本発明はポリペプチドをコードするDNAには例えば上記の如きシグナル配列及び任意的にリーダー配列が先行していてよい。適当な酵母細胞の更なる例はクルイベロマイセスの株、例えばＫ．クラチス、ハンセヌラ(Hansenula)、例えばＨ．ポリモルファ(H．polymorpha)、又はピシア（Pichia）、例えばＰ．パストリス(P．pas toris)である(Gleesonら、J．Gen．Microbiol，132，1986，p.3459-3465；米国特許第4,882,279号参照)。その他の菌類細胞の例は糸状菌、例えばアスペルギルス種、ニューロスポラ（Newrospora）種、フサリウム（Fusarium）種、又はトリコデルマ(T richoderma)種、特にＡ．オリガ、Ａ．ニドゥランス又はＡ．ニガーの細胞である。ポリペプチドの発現のためのアスペルギルス種の利用は例えばEP272,277号、EP238,023号及びEP184,438号に記載されている。例えば、Ｆ．オキシスポルムの形質転換はMalardierら、Gene，78，p.147-156，1989に記載の通りにして実施できうる。宿主細胞として糸状菌を使用するとき、それは好都合には本発明のDNA構築体により、組換宿主細胞が得られるように宿主染色体の中にそのDNA構築体を組込むことにより形質転換されうる。この組込みは遺伝学的に有利と考えられ、なぜならDNA配列は細胞の中で安定維持される傾向にあるからである。宿主染色体へのDNA構築体の組込みは慣用の方法に従い、例えば相同又は異種組換により実施されうる。上記の形質転換細胞を次に適当な栄養培地の中で、注目のポリペプチドの発現が可能となる条件下で培養し、その後得られるポリペプチドをその培養物から回収する。細胞を培養するのに用いる培地は宿主細胞の増殖のために適当な任意の慣用の培地、例えば最少培地又は適当な添加物を含む複合培地であってよい。適当な培地は商業的供給者から入手するか、又は公開の処方に従って調製できる（例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションのカタログ）。細胞により産生されるポリペプチドは次にその培養培地から、遠心分離又は濾過による宿主細胞の培地からの分離、その上清液又は濾過のタンパク質成分の塩、例えば硫酸アンモニウムによる沈殿、注目のポリペプチドのタイプに依存する種々のクロマトグラフィー手順、例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等による精製を含む、慣用の手順により、回収してよい。ポリペプチド本発明は本発明の方法に従って製造された抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドにも関連する。本発明のポリペプチドは注目のポリペプチドに融合したジッパードメインより成る。このポリペプチドのアミノ酸配列のＮ−又はＣ−末端はジッパードメインにグラフトされている。このジッパードメインは製造段階におけるポリペプチドを多量化できる任意のドメインであってよい。特定の態様において、このジッパードメインはロイシンジッパー、例えばGCN4ロイシンジッパーである。好ましくは、モノマーのポリペプチドは５kDa〜150kDa、好ましくは20kDa〜10 0kDa、特に20kDa〜80kDaの分子量を有する。２個のポリペプチド分子、例えばTermamyl（登録商標）分子より成るポリペプチドを多量化するためのロイシンジッパーを使用する場合、ロイシンジッパーは通常ホモダイマーを安定にするのに十分な親和力を有する。しかしながら、ダイマーを更に安定化するために、システインをロイシンジッパーの中に含ませてよい。この構築体はハイブリドポリペプチドの２個のモノマーの間でのジスルフィド結合の形成をもたらしうる。本発明のポリペプチドは２〜10個又はそれより多くのポリペプチド分子を含んで成る。好適な態様において、自己多量化ポリペプチドはダイマー、トリマー、テトラマー又はオリゴマーである。ポリペプチドの生物活性、例えば二量体酵素の酵素活性は維持又は擬態されることが可能である。更に、本発明のポリペプチドは複数の生物活性、例えば２以上の異なる酵素活性、例えば脂質分解及びタンパク質分解活性を発揮しうる。オリゴマーポリペプチド本発明は抑制されたアレルゲン性をもつオリゴマーポリペプチドであって、少なくとも一本のジッパードメインに結合又は連結された少なくとも一本のポリペプチドに複合した少なくとも一本のジッパードメインに結合又は連結された少なくとも一本のポリペプチドを含んで成るオリゴマーポリペプチドにも関連する。前記オリゴマーポリペプチドは任意の適当な方法により作られた又は任意の適当な方法により調製されたホモオリゴマー、ヘテロオリゴマー又はより高次元なオリゴマーポリペプチドであってよい。前記ジッパードメインは従来述べられている任意のジッパードメインでよい。一の態様において、前記オリゴマーポリペプチドは少なくとも一つの先に述べた酵素活性を示す。前記ジッパードメインは注目のポリペプチドのＣ−又はＮ−末端のいづれかに連結されていてよい。以下において、「ポリペプチド」なる語は本発明の方法に従って製造したポリペプチド及び本発明の前記オリゴマーポリペプチドの双方を含む。本発明に係るポリペプチドは高度に制御された安定性を示しうる。あるケースにおいては、このポリペプチドは好都合には不可逆的に融合し合ってよく、これはその生成物が無視できる程にしか、アレルギー状態を引き起こしうる症状の再発をよび起こしうる分解の傾向をもたないことを意味する。しかしながら、一定のその他のケースにおいては、ポリペプチドが製造及び／又はバルクでの取扱い段階ではオリゴマー化状態を保ち、その後解離することが、そのポリペプチドがヒト又は動物への曝露の危険性を及ぼさないとき、好都合である。ポリペプチド間の連結の切断は例えば物理状態、例えばpH、イオン強度、温度、還元又は酸化電位等により活性化されうる。更に、特定の化合物の存在は例えば低次元のオリゴマー又はモノマーへの解離をもたらしうる。特に、ポリペプチドの活性がオリゴマー状態のときに低下する場合は解離は好都合でありうる。組成物本発明は本発明の少なくとも一本のポリペプチド及び／又は少なくとも１個のオリゴマーポリペプチドを含んで成る組成物にも関連する。この組成物は更に、洗剤、例えば石けん、家庭用品、農薬、パーオナルケア製品、化粧品、香水、薬品、織物の処理に用いられる組成物、食品及び／又は飼料に通常用いられるその他の成分を含んで成りうる。洗剤本発明に従うと、本発明のポリペプチドは洗剤に用いられる酵素であってよい。それは洗剤の中に無塵顆粒、安定化液又は保護酵素の形態で含ませてよい。無塵顆粒は例えば米国特許第4,106,991号及び4,661,452号(共にNovo Industri A/S )に開示の通りに製造され得、そして当業界公知の方法により任意的にコーティングされていてよい。ワキシーコーティング材の例は1,000〜20,000の平均分子量を有するポリ（エチレンオキシド）製品（ポリエチレングリコール；PEG）；1 6〜50個のエチレンオキシド単位を有するエトキシル化ノニルフェノール；そのアルコールが12〜20個の炭素原子を含み、そして15〜80個のエチレンオキシド単位のあるエトキシル化脂肪アルコール；脂肪酸；並びに脂肪酸のモノ−及びジ−及びトリ−グリセリドである。流動層技術による塗布に適する膜形成性コーティング材の例は特許GB1,483,591号に記載されている。液体酵素は、例えばポリオール、例えばプロピレングリコール、糖又は糖アルコール、乳酸又は硼酸を樹立された方法に従って添加することにより安定化されうる。その他の酵素安定化剤が当業界において公知である。保護酵素はEP238,216号に開示の方法に従って調製されうる。洗剤は任意の慣用の形態、例えば粉末、顆粒、ペースト又は液体であってよい。液体洗剤は水性であってよく、一般に70％以下の水及び０〜30％の有機溶媒を含むものであるか、又は非水性であってよい。この洗剤は１又は複数種の界面活性剤を含んで成り、それぞれはアニオン、非イオン、カチオン又は双イオン性であってよい。この洗剤は通常０〜50％のアニオン性界面活性剤、例えば線形アルキルゲンゼンスルホネート(LAS)、アルファ −オレフィンスルホネート(AOS)、アルキルスルフェート(脂肪アルコールスルフェート)(AS)、アルコールエトキシスルフェート(AEOS又はAES)、第二アルカンスルホネート(SAS)、アルファースルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル−又はアルケニルコハク酸、又は石けんを含むであろう。それはた０〜40％の非イオン性界面活性剤、例えばアルコールエトキシレート（AEO又はAE）、カルボキシル化アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシ、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミン、又はポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド（例えばWO92/06154号記載）をも含みうる。洗剤は更に１又は複数種の酵素、例えばアミラーゼ、リパーゼ、キュチナーゼ、プロテアーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ及びオキシダーゼを含んで成ってよい。洗剤は１〜65％の洗浄ビルダー又は錯形成剤、例えばゼオライト、ジホスフェート、トリホスフェート、ホスホネート、シトレート、ニトリロトリ酢酸(NTA) 、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）、ジエチレントリアミン五酢酸(DTMPA)、アルキル−又はアルケニルコハク酸、可溶性シリケート又は層状シリケート(例えばHoechst由来のSKS-6)を含みうる。洗剤はビルダー抜き、即ち洗浄ビルダーを本質的に含まなくてもよい。洗剤は一又は複数種のポリマーを含んで成ってよい。その例はカルボキシメチルセルロース(CMC)、ポリ(ビニルピロリドン)(PVP)、ポリエチレングリコール(P EG)、ポリ(ビニルアルコール)(PVA)、ポリカルボキシレート、例えばポリアクリレート、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、及びラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーであってもよい。洗剤は漂白剤を含んでよく、それはH₂O₂起源、例えば過硼酸塩又は過炭酸塩であって、テトラアセチルエチレンジアミン（TAED）又はノナノイルオキシベンゼンスルホネート（NOBS）の如き過酸形成漂白活性化剤と組合されうるものを含んで成ってよい。または、この漂白剤は例えばアミド、イミド又はスルホンタイプの過酸を含んで成ってよい。本発明のポリペプチドを含んで成る本発明の洗剤は慣用の安定化剤、例えばポリオール、例えばプロピレングルコール又はグリセロール、糖又は糖アルコール、乳酸、硼酸、又は硼酸誘導体、例えば芳香族硼酸エステルを利用して安定化され得、そして本組成物は例えばWO92/19709及びWO92/19708号に記載の通りにして処方されうる。この洗剤は更にその他の慣用の洗浄成分、例えば布帛コンディショナー、例えば粘土、発泡促進剤、発泡抑制剤、腐蝕防止剤、汚れ懸濁剤、汚れ再付着防止剤、染料、殺菌剤、蛍光増白剤又は香料を含んでよい。 pH（使用濃度において水性溶液中で測定）は通常中性又はアルカリ性、例えば７〜11の範囲にあってよい。本発明の範囲に属する洗剤の特定の態様には以下のものが含まれる：１）600ｇ／β以上のバルク密度を有する顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）７〜12％ −アルコールエトキシスルフェート（例えばC_12-18アルコール、１〜2EO）又はアルキルスルフェート（例えばC_16-18）１〜４％ −アルコールエトキシレート（例えばC_14-15アルコール、7EO）５〜９％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃） 14〜20％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）２〜６％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 15〜22％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）０〜６％ −クエン酸ナトリウム／クエン酸（C₆H,Na₃O₇/C₆H₈O₇）０〜15％ −過硼酸ナトリウム(NaBO₃・H₂O) 11〜18％ −TAED ２〜６％ −カルボキシメチルセルロース０〜２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）０〜３％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤、光学漂白剤）０〜５％２）600ｇ／ｌ以上のバルク密度を有する顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）６〜11％ −アルコールエトキシスルフェート（例えばC_12-18アルコール、１〜2EO）又はアルキルスルフェート（例えばC_16-18）１〜３％ −アルコールエトキシレート（例えばC_14-15アルコール、7EO）５〜９％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃） 15〜21％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）１〜４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 24〜34％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）４〜10％ −クエン酸ナトリウム／クエン酸（C₆H₅Na₃O₇/C₆H₈O₇）０〜15％ −カルボキシメチルセルロース０〜２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）１〜６％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、発泡抑制剤、香料）０〜５％３）600ｇ／ｌ以上のバルク密度を有する顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）５〜９％ −アルコールエトキシレート（例えばC_12-15アルコール、7EO）７〜14％ −脂肪酸として石けん（例えばC_16-22脂肪酸）１〜３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃） 10〜17％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）３〜９％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 23〜33％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）０〜４％ −過硼酸ナトリウム(NaBO₃・H₂O）８〜16％ −TAED ２〜８％ −ホスホネート（例えばEDTMPA）０〜１％ −カルボキシメチルセルロース０〜２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）０〜３％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）０〜５％４）600ｇ／ｌ以上のバルク密度を有する顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）８〜12％ −アルコールエトキシレート（例えばC_12-15アルコール、7EO） 10〜25％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃） 14〜22％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）１〜５％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 25〜35％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）０〜10％ −カルボキシメチルセルロース０〜２％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）１〜３％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、発泡抑制剤、香料）０〜５％５）以下を含んで成る水性液体洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算） 15〜21％ −アルコールエトキシレート（例えばC_12-15 アルコール、7EO又はC_12-15アルコール、5EO） 12〜18％ −脂肪酸として石けん（例えばオレイン酸）３〜13％ −アルケニルコハク酸（C_12-14）０〜13％ −アミノエタノール８〜18％ −クエン酸２〜18％ −ホスホネート０〜３％ −ポリマー（例えばPVP，PEG）０〜３％ −硼酸塩（例えばB₄O₇）０〜２％ −エタノール０〜３％ −プロピレングリコール８〜14％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、分散剤、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）０〜５％６）以下を含んで成る水性構築液体洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算） 15〜21％ −アルコールエトキシレート（例えばC_12-15 アルコール、7EO又はC_12-15アルコール、5EO）３〜９％ −脂肪酸として石けん（例えばオレイン酸）３〜10％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 14〜22％ −クエン酸カリウム９〜18％ −カルボキシメチルセルロース０〜２％ −ポリマー（例えばPVP，PEG）０〜３％ −硼酸塩（例えばB₄O₇）０〜２％ −定着用ポリマー、例えばラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー；25：１のモル比；MW3800 ０〜３％ −グリセロール０〜５％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば分散剤、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）０〜５％７）600ｇ／ｌ以上のバルク密度を有する顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −脂肪アルコールスルフェート５〜10％ −エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド３〜９％ −石けんとして脂肪酸０〜３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃）５〜10％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）１〜４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 20〜40％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）２〜８％ −過硼酸ナトリウム(NaBO₃・H₂O) 12〜18％ −TAED ２〜７％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PEG）１〜５％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）０〜５％８）顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）８〜14％ −エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド５〜11％ −脂肪酸として石けん０〜３％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃）４〜10％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）１〜４％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 30〜50％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）３〜11％ −クエン酸ナトリウム（C₆H₅Na₃O₇）５〜12％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、PVP，PEG）１〜５％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、発泡抑制剤、香料）０〜５％９）顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算）６〜12％ −非イオン界面活性剤１〜４％ −脂肪酸として石けん２〜６％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃） 14〜22％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 18〜32％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）５〜20％ −クエン酸ナトリウム（C₆H₅Na₃O₇）３〜８％ −過硼酸ナトリウム(NaBO₃・H₂O) ４〜９％ −漂白活性化剤（例えばNOBS又はTAED）１〜５％ −カルボキシメチルセルロース０〜２％ −ポリマー（例えばポリカルボキシレート又はPEG）１〜５％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、香料、蛍光増白剤）０〜５％ 10）以下を含んで成る水性液体洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算） 15〜23％ −アルコールエトキシスルフェート（例えばC_12-15アルコール、２〜３EO）８〜15％ −アルコールエトキシレート（例えばC_12-15 アルコール、7EO又はC_12-15アルコール、5EO）３〜９％ −脂肪酸として石けん（例えばラウリル酸）０〜３％ −アミノエタノール１〜５％ −クエン酸ナトリウム５〜10％ −吸湿剤（例えばトルエンスルホン酸ナトリウム）２〜６％ −硼酸塩（例えばB₄O₇）０〜２％ −カルボキシメチルセルロース０〜１％ −エタノール１〜３％ −プロピレングリコール２〜５％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えばポリマー、分散剤、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）０〜５％ 11）以下を含んで成る水性液体洗剤 −線形アルキルベンゼンスルホネート（酸として計算） 20〜32％ −アルコールエトキシレート（例えばC_12-15 アルコール、7EO又はC_12-15アルコール、5EO）６〜12％ −アミノエタノール２〜６％ −クエン酸８〜14％ −硼酸塩（例えばB₄O₇）１〜３％ −ポリマー（例えばマレイン酸／アクリル酸コポリマー、定着用ポリマー、例えばラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー）０〜３％ −グリセロール３〜８％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば吸湿剤、分散剤、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）０〜５％ 12）600ｇ／ｌ以上のバルク密度を有する顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −アニオン界面活性剤（線形アルキルベンゼンスルホネート、アルキルスルフェート、アルファ−オレフィンスルホネート、アルファ− スルホ脂肪酸メチルエステル、アルカンスルホネート、石けん） 25〜40％ −非イオン性界面活性剤（例えばアルコールエトキシレート）１〜10％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃）８〜25％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）５〜15％ −硫酸ナトリウム（Na₂SO₄）０〜５％ −ゼオライト（NaAlSiO₂） 15〜28％ −過硼酸ナトリウム(NaBO₃・4H₂O) ０〜20％ −漂白活性化剤（TAED又はNOBS）０〜５％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、香料、蛍光増白剤）０〜３％ 13）線形アルキルベンゼンスルホネートの全体又は一部を（Ｃ₁₂−Ｃ₁₈）アルキルスルフェートに置き換えた１〜12）に記載の洗剤 14）600ｇ／ｌ以上のバルク密度を有する顆粒として配合された、以下を含んで成る洗剤 −(C_12-18)アルキルスルフェート９〜15％ −アルコールエトキシレート３〜６％ −ポリヒドロキシ脂肪酸アミド１〜５％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃）３〜12％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）０〜６％ −ゼオライト（NaAlSiO₄） 10〜20％ −層状ジシリケート（例えばHoechst由来の SK56） 10〜20％ −クエン酸ナトリウム４〜８％ −過炭酸ナトリウム(NaBO₃・H₂O) 13〜22％ −TAED ３〜８％ −ポリマー（例えばポリカルボキシレート及びPVP）０〜５％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば、発泡抑制剤、香料、蛍光増白剤、光学漂白剤）０〜５％ 15）600ｇ／ｌ以上のバルク密度を有する顆粒として配合した、以下を含んで成る洗剤 −（C_12-C₁₈）アルキルスルフェート４〜８％ −アルコールエトキシレート 11〜15％ −石けん１〜４％ −ゼオライトMAP又はゼオライトＡ 35〜45％ −炭酸ナトリウム（Na₂CO₃）２〜８％ −可溶性シリケート（Na₂O・2SiO₂）０〜４％ −過炭酸ナトリウム 13〜22％ −TAED １〜８％ −カルボキシメチルセルロース０〜３％ −ポリマー（例えばポリカルボキシレート及びPVP）０〜３％ −酵素０〜５％ −微量成分（例えば蛍光増白剤、ホスホネート、香料）０〜３％ 16）追加の成分として、又は上述の漂白剤の代わりとして安定化又は封入化過酸を含む、１）〜15）記載の洗剤。 17）過硼酸塩が過炭酸塩を置き代わっている１），３），７），９）及び12）記載の洗剤。 18）マンガン触媒を更に含む、１），３），７），９），12），14）及び15）記載の洗剤。マンガン触媒は例えば「Efficient manganese catalysts for low-te mperature bleaching」Nature，369，p.637-639，1994に記載の化合物のいづれかであってよい。 19）液体非イオン性界面活性剤、例えば線形アルコキシル化第一アルコール、ビルダー剤（例えばホスホネート）、酵素及びアルカリを含む、非水性洗浄液として配合された洗剤。この洗剤はアニオン性界面活性剤及び／又は漂白剤をも含んで成ってよい。本発明の注目の酵素は洗剤において常用されている濃度で組込まれてよい。本発明の洗剤において、抑制されたアレルゲン性をもつ注目の酵素は洗剤液１リットル当り、0.001〜100mgの酵素に相当する量で加えてよい。食器洗剤抑制されたアレルゲン性をもつ本発明のポリペプチドは食器洗剤においても好適に利用されうる。食器洗剤はアニオン、非イオン、カチオン、両性又はこれらのタイプの混合型であってよい界面活性剤を含んで成る。洗剤は０〜90％の非イオン界面活性剤、例えば低から非発泡性のエトキシル化プロポキシル化直鎖アルコールを含むであろう。洗剤は無機及び／又は有機系の洗浄ビルダ一塩を含んでよい。洗浄ビルダーは有燐と無燐型とに副分類されうる。洗剤は通常１〜90％の洗浄ビルダーを含む。存在しているなら、有燐無機系アルカリ洗浄ビルダーの例には、水溶性塩、特にアルカリ金属ピロホスフェート、オルトホスフェート、及びポリホスフェートが含まれる。存在しているなら、有燐有機系アルカリ洗浄ビルダーには、水溶性アルカリ金属炭酸塩、硼酸塩及びシリケート、並びに様々なタイプの水不溶性結晶又はアモルファスアルミノシリケート（そのうちゼオライトが最も良く知られた代表例である）が含まれる。適当な有機系ビルダーの例には、アルカリ金属、アンモニウム及び置換化アンモニウム、クエン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、脂肪酸スルホン酸塩、カルボキシメトキシコハク酸塩、アンモニウムポリアセテート、カルボキシレート、ポリカルボキシレート、アミノポリカルボキシレート、ポリアセチルカルボキシレート及びポリヒドロキシスルホネートが含まれる。その他の適当な有機系ビルダーには高分子量ポリマー及びコポリマーであってビルダー特性を有することで知られるもの、例えば適当なポリアクリル酸、ポリマレイン酸及びポリアクリル酸／ポリマレイン酸コポリマー、並びにその塩が含まれる。食器洗剤は塩素／臭素系又は酸素系の漂白剤を含みうる。無機系の塩素／臭素系漂白剤の例は次亜塩素酸及び次亜臭素酸リチウム、ナトリウム又はカルシウム、及び塩素化リン酸三ナトリウムである。有機系の塩素／臭素系漂白剤の例は複素環式Ｎ−ブロモ及びＮ−クロロイミド、例えばトリクロロイソシアヌル酸、トリブロモイソシアヌル酸、ジブロモイソシアヌル酸及びジクロロイソシアヌル酸、並びにカリウム及びナトリウムの如き水溶性カチオンを有するその塩である。ヒダンチオン化合物も適当である。酸素系漂白剤、例えば無機過塩の形態のものが好ましく、漂白前駆体として、又はペルオキシ酸化合物が好ましい。適当なペルオキシ漂白化合物の典型例はアルカリ金属過硼酸塩（四水和物及び一水和物の双方）、アルカリ金属過炭酸塩、過珪酸塩及び過リン酸塩である。好適な活性化材料はTAED及びグリセロールトリアセテートである。本発明の食器洗剤は酵素のための慣用の安定化剤、例えばポリオール、例えばプロピレングリコール、糖又は糖アルコール、乳酸、硼酸、又は硼酸誘導体、例えば芳香族硼酸エステルを用いることで安定化されうる。本発明の食器洗剤は更に慣用の洗浄成分、例えば浮遊防止材料、充填剤、発泡抑制剤、腐蝕防止剤、汚れ懸濁剤、封鎖剤、汚れ再付着防止剤、脱水剤、染料、殺菌剤、蛍光体、増粘剤及び香料を含んでよい。最後に、本発明のポリペプチドは慣用の食器洗剤、例えば以下の特許公開物のいづれかに記載の洗剤のいづれかの中に使用されうる： EP518719，EP518720，EP518721，EP516533，EP516554，EP516555，GB2200132，D E3741617，DE3727911，DE4212166，DE4137470，DE3833047，WO93/17089，DE4205 071，WO52/09680，WO93/18129，WO93/04153，WO92/06157，WO92/08777，EP42912 4，WO93/21299，US5141664，EP561452，EP561446，GB2234980，WO93/03129，EP4 81547，EP530870，EP533239，EP554943，EP346137，US5112518，EP318204，EP31 8279，EP271155，EP271156，EP346136，GB2228945，CA2006687，WO93/25651，EP 530635，EP414197，US5240632。織物用途抑制されたアレルゲン性をもつ本発明の酵素を含む更なるポリペプチドは酵素顆粒又は粉末の取扱いを包含する織物産業における目的のための用途において利用されうる。織物用途の例を以下に列挙する：ｉ．セルロース分解酵素は布帛の色調密度におる局部バリエーションを供するためにデニム衣料の最終仕上げに幅広く利用されている（酵素助長式「ストーンウォッシュ」）。 ii．バイオ−ポリシング更に、セルロース分解酵素はバイオ−ポリシング工程において有用である。バイオ−ポリシングは布帛の湿潤性を損うことなく取り扱い及び外観に関する布帛の品質を改善する糸表面の特異的な処理である。バイオ−ポリシングは例えばWO 93/20278号に記載の方法の適用により得られうる。 iii．サイズ除去織物の製織の際、糸はかなりの機械的応力にかけられる。破断を防ぐため、それらは通常ゼラチン状物質（サイズ）によるコーティング（サイジング）により補強される。最も一般的なサイズ剤は天然又は改質形態のデンプンである。従って、均一性及び耐久性は布帛からのサイズの除去、いわゆるサイズ除去を経たときにのみ得られる。デンプン又は改質デンプンを含むサイズによりサイジングされた布帛のサイズ除去は好ましくはアミロース分解酵素の利用により助長される。 iv．漂白清浄漂白において、清浄カタラーゼが過剰の過酸化水素の除去のために働きうる。ｖ．絹のがん除去絹繊維上のがんのプロテアーゼによる除去。(「Novo Enzymes for Silk Degum ming」の出願書類が注問に応じて入手できる）。パーソナルケアー用途また、パーソナルケアー技術分野において、本発明に係るポリペプチドが注目される。以下に用途例を列挙する。１）プロテアーゼ：プロテアーゼはコンタクトレンズの洗浄のためのよく知られた活性成分である。これらはレンズ上のタンパク質性の汚れを加水分解し、それを可溶性にする。タンパク質性の汚れの除去は快適な装着のために必須である。プロテアーゼは肌洗浄用製品の有効な成分でもある。それらは死んだケラチン様皮膚細胞の上膚を除去し、それ故肌をより明るく、且つよりフレッシュに見せる。プロテアーゼは口内ケア製品、特に義歯の洗浄用製品、更には歯みがき粉において利用されうる。２）リパーゼ：リパーゼは可撓な皮膚脂質の除去のための肌洗浄用製品及び耐にきび製品の活性成分として化粧品に、更には肌ケアの活性成分としてクリーム及びローションに適用されうる。リパーゼは毛髪の表面からの皮脂及びその他の脂肪物質の効果的な除去のための洗髪用製品（例えばシャンプー）にも利用されうる。リパーゼはコンタクトレンズの洗浄用製品の有効な成分でもあり、その場合それらはレンズ表面から脂質付着物を除去する。３）オキシドリダクターゼ：オキシドリダクターゼの数多くのよく知られたパーソナルケア製品がある。最も一般的なのはオキシダーゼ（通常はグルコースオキシダーゼ）とH₂O₂との生成を確実にする基質（例えばグルコース）とであり、それらはペルオキシダーゼ（通常はラクトペルオキシダーゼ）による例えばSCN^-又はＩ^-の抗微生物剤（SCNO^- ¹ 又はＩ₂）に至る酸化を開始させる。この酵素複合体は天然では例えば乳及びだ液に由来するものが知られる。これは口内ケア製品（マウスリンス、歯みがき粉、チューイングガム）中の抗微生物剤として商業的に利用され、その場合それらはグルコースを生成するアミログルコシダーゼと組合せても利用できうる。これらの剤は保存のための化粧品においても知られる。オキシダーゼとペルオキシダーゼとの組合せを含んで成る抗微生物剤はコンタクトレンズの洗浄において公知である。オキシドリダクターゼのその他の用途は酸化毛染め品におけるオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ及びラッカーゼの利用である。更に、肌（及び毛髪）の表面上に形成されるフリーラジカルは肌の老化過程（毛髪の損傷）に関係することがわかっている。フリーラジカルは脂肪膜、コラーゲン及び細胞の破壊を招きうる連鎖反応を活性化する。フリーラジカルスキャベンジャー、例えばスーパーオキサイドジスムターゼの化粧品への利用は公知である(R.L．Goldemberg，DCI，Nov .93，48-52)。タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ(PDI)もオキシドリダクターゼである。それは毛髪のウェービング（毛髪のジスルフィド結合の還元及び再酸化）のために、並びに損傷した毛髪の修復（この場合、その損傷は主に現存のジスルフィド結合の還元である）のために利用されうる。４）グルカナーゼ／カルボヒドラーゼ歯の表面上に形成される歯垢は主に多糖類より成る。それらは歯の表面性及び微生物に付着する。多糖類は主にα−１，６−結合型グルコース（デキストラン）及びα−１，３−結合型グルコース（ムタン）である。様々なタイプのグルカナーゼ、例えばムタナーゼ及びデキストラナーゼの利用は歯垢の加水分解を助け、機械的作用により除去し易くする。また、その他の種類の生物膜、例えばレンズケースにおいて形成される生物膜はグルカナーゼの作用により除去できうる。５）抗微生物ポリペプチド抗微生物ポリペプチドは化粧品、耐にきび製品、デオドラント及びシャンプーの保存の如き幅広い用途をもつ。食品及び飼料本発明に係る抑制されたアレルゲン性をもつポリペプチドは食品及び飼料において更に好適に利用されうる。特に関連するポリペプチドは、プロテアーゼ、β −グルカナーゼ、アミラーゼ、ペクチナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ、キシラナーゼ及びリパーゼの群から選ばれる酵素である。ジッパードメインの利用最後に、本発明はポリペプチドの抑制されたアレルゲン性のためのジッパードメインの利用に関連し、そしてそれは微生物により発現されたポリペプチドを自己多量化できる任意の分子であってよい。いくつかのジッパードメインの例が既に発表されている。ある態様において、このジッパードメインはロイシンジッパーである。ロイシンジッパーは任意の公知のロイシンジッパーであってよく、それはポリペプチドにグラフトされており、２個以上のロイシンジッパーの平行の一らせんコイルの会合の結果として自己多量化できる。特定の態様において、ロイシンジッパーは酵母転写因子GCN4又はその改質体である。ヘテロ二量化分子を得ることが所望されるなら、ジッパードメインは好都合にはFosロイシンジッパー及びJunロイシンジッパーでりうる。本発明の別の態様において、ジッパードメインは四重らせん束又はその改質体である。ジッパードメインは好都合には洗剤、家庭用物品、農薬、パーソナルケア製品、化粧品、香水、薬品、織物の処理のために用いられる組成物、食料及び飼料等の中のポリペプチドのアレルゲン性を抑制するために利用されうる。詳しくは、少なくとも一本のジッパードメインを含んで成るポリペプチドが上記の組成物及び／又は例えば産業用途に好適に利用されうる。本発明を以下の実施例において更に説明し、それは本発明の範囲を何ら限定するものでもない。方法及び材料宿主細胞：エッシェリヒア．コリJM105(Yanisch-Perronら、Gene，33，p.103-119，1985) エピキュリアン・コリ（Epicurian coli）XL−ブルー細胞（Stratagene Cloning Systems，Ca.，USA）エッシェリヒア・コリMC1061(Casadaban，M.J.ら、J．Mol ．Biol．138，p.179-207，1989)。ベクター： pFab３発現ベクターはpFab４の先租である(Orum，H.ら、Nucleic Acids Resea rch，21，p.4491-4498，1993)。このベクターはpelBシグナル配列(Leiら、J．of Bacteriol，vol.169，p.4379-4383，1987)を含む、それは誘導性lacZプロモーターの制御下にある。pelBシグナルにおけるSfiI部位は所望の配列のクローニングを可能にし、これにより遺伝生成物はシグナル配列とイン・フレームで発現されるであろう。 pFab３ベクターの一部はこの研究に関係ないため、それをSfiI及びXmaI消化により除去した。これらの部位を次に下記の通り、PCRフラグメントの導入用の部位として用いた。対照のpFab４と異なり、pFab３はlacZの開始コドンとpelBシグナルとの間に131bpの領域を含む。プライマー：Ａ−ターマミル（SEQ ID NO 9）：Ｂ−ターマミル(SEQ ID NO 10）：下線を付したヌクレオチドはターマミル配列に相当する。プライマーＡ−ターマミルはSfiI制限部位とpelBシグナルの最後の２個のコドンとをも含む。プライマーＢ−ターマミルはリンカー配列(IgG3の短いヒンジドメイン)(Pluckthur，Aら、Biochemistry，31，p.1579-1584，1992)及びXmaIクローニング部位を含む。プラスミド： pDN1528（PCT/DK94/00370）シグナル配列： pelB(Leiら、J．of Bacteriol，vol.169，p.4379-4383，1987)リンカー配列： IgG₃ヒンジの一部(Pluckthun，A．ら、Biochemistry，31，p.1579-1584，1992 )、材料： fmol（商標）DNA−配列決定用システム（Cat.：#Q4100，Promega Corporation ，WI，USA）。 α−アミラーゼEPSアッセイ(Cat.：#1442295，Boehringer Mannheim GmbH，Ma nnheim，Germany)。酵素： Termamyl(登録商標）(Novo Nordisk A/Sより入手可能)。 Sfil（Cat.：#R6391，Promega Corporation，WI，USA）。 XmaI（Cat.：#R6491，Promega Corporation，WI，USA）。 SacI（Cat.：#R6061，Promega Corporation，WI，USA）。 T4-DNAリガーゼ（Cat.：#M1801，Promega Corporation，WI，USA）。 AmpliTag（登録商標）DNAポリメラーゼ(PartNo.：N8O1-0060，Perkin Elmer， Roche Molecular Systems，New Jersey，USA.)。溶液： PCR反応バッファー：dNTP（0.25mMづつ）、MgCl₂ 2.5mM及びｌｘのPCR反応バッファー−II（PartNo.：N808-0009，Perkin Elmer，Roche Molecular Systems ，New Jersey，USA）。 T4-DNAリガーゼバッファー（Cat.：#M1801，Promega Corporation，WI，USA）。 SOC培地（Sambrook，J．ら、1989，Molecular Cloning. A Laboratory Manual．第２版。Cold Spring Harbor Laboratory，New York，USA）。 2xTY培地（Ausubel，F.M.ら（編）、1994。 LB−アガー Current Protocols in Molecular Biology，Jo hn Wiley & Sons，Inc．and Greene Publishin g Associates，Inc.，New York，USA)。 PEG-8000(Cat.：#p2139，Sigma Chemical Company，MO，USA)。 PBSウイーン20 Ausubel，F.M．ら（編）、1994。アルカリホスファターゼバッファー(pH＝9.0)。 NaCl 5.844ｇ MgCl₂ ：6H₂O 1.02ｇジエタノールアミン 10.51ｇ pHを9.0にHClで合わせ、そしてMilli-Q水を１リットルとなるように加える。停止液 EDTA二ナトリウム 74.44ｇ K₂HPO₄ 174.2ｇ NAH₃ 0.2ｇ pHを10に約22.5ｇのKOHで合わせ、Milli-Q水で１リットルにする。装置： Bio-Rad E.コリパルサー(#165-2103，Bio-Rad Laboratories，Ca.，USA)。水平11.14アガロースゲル装置（#580-1068IL，Life Thechnologies，Inc.，MD ，USA）。 Applied Biosystems 394 DNA/RNAシンセサイザー(Applied Biosystems，CA，U SA)。サーモサイクラーVarius V 45（Hans Landgraf，GmbH，Langenhagen，Germany ）。 Mini-PROTEAN II電気泳動セル(#165-2940，Bio-Rad Laboratories，Ca,．USA) 。セミドライエレクトロブロッター（JKA-Biotech，Denmark）。 HiTrap（商標）キレートカラム（Code no.17-0409-01，Pharmacia LKB，Biote chnology AB，Uppsala，Sweden）。 ELISAリーダー：Ceres 900 HDi。方法：全ての汎用の技術はSambrook，J.らMolecular Cloning．A Laboratory Manual ．第２版、Cold Spring Harbor Laboratory，New York，USA,1989、及び／又はA usubel，F.M.ら（編）、Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，Inc．and Greene Publishing Associates，Inc.，New York，USA，199 4に記載の通りに実施する。 Geneclean II手順（BIO IOI，Inc.，CA，USA）。Termamyl （登録商標）をコードする遺伝子のPCR増幅 PCR反応を50μｌの容量のPCR反応バッファー、１mMづつのプライマーＡ−及びＢ−ターマミル、並びに10ngのDNA鋳型の中で実施する。反応混合物に鉱物油をかぶせ、そして94℃で５分保存する。次いで0.5μｌのAmpliTaq(登録商標)(５Ｕ／μｌ)を加える。この混合物を70℃のアニーリング温度に５分保ち、そして72℃の伸長温度は２分保つ。この一次インキュベーションの後、PCRサーモサイクラーVarius V45を用い、この混合物を30回のサイクル（94℃で１分、70℃で１分、72℃で１分）にかけ、次いで、72℃で10分のインキュベートする。GCN4 に由来するロイシンジッパー及びリンカーをコードする配列の調製４種のオリゴヌクレオチドを、Applied Biosystems 394 DNA/RNAシンセサイザーで、その供給者のプロトコールに従って合成する。合成後、そのオリゴヌクレオチドをAusubel，F.M．ら前掲、1994に従って変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動を利用して精製する。20pmolづつのオリゴヌクレオチドを全容量40μｌの10 0mMのNaClの中で混合し、95℃で５分のインキュベーションによりアニーリングし、そして３時間かけてゆっくりと16℃にまで冷却し、このアニーリング混合物をライゲーションに用いる。４種のオリゴヌクレオチドは下記の通りである：アンチセンスZip Cys(1)(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 3) アンチセンスZip(2)，(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 4) センスZip(1)，(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 5) センスZip Cys(2)，(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 6) Ｐは５′末端にホスホリル基をもつオリゴヌクレオチドを意味する。XL −１ブルーＥ．コリの形質転換形質転換はエレクトロポレーションにより実施する。この目的のため、エピキュラン−コリXL１−ブルー・エレクトロポレーション・コンピテント細胞を使用し、80μｌの細胞当り３μｌのライゲーションDNAを使用する。エレクトロポレーションは25μＦ，2.5kV及び200 Ohmに設定したBio-Rad Ｅ．コリパルサーを用いて実施する。Ｅ．コリJM105の形質転換Ｅ．コリJM105の形質転換は100μｌのヒートショック・コンピテント細胞当り３μｌのライゲーション混合物を加えることにより行う。この細胞の調製及び形質転換はSambrookら1989前掲に本質的に記載の通りにして行う。ペリプラズマポリペプチドの発現及び単離Ｅ．コリJM105におけるTermamyl（登録商標）ダイマーの発現は下記の通りに実施する。100μｇ／mlのアンビシリン及び１％のＤ（＋）グルコースを有する２ＸのTY培地中のpAZ-1プラスミドを担持するJM105の一夜培養物を、単一のコロニーをその培地に移し、そしてこれを37℃で16時間強力に撹拌しながらインキュベーションすることにより調製する。その100μｌを100μｇ／mlのアンピシリン及び0.1％のＤ（＋）−グルコースを有する100mlの２ＸのTY培地の出発培養物として用い、それを１ｌの振盪フラスコの中で37℃で強力に撹拌しながらインキュベーションする。OD550＝1.0に到達したら、その温度で30℃に調節し、そして発現をイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（IPTG）の１〜５mMの内の最終濃度に至る添加により誘導する。誘導を５時間にわたり行い、次いで細胞を軽い遠心分離によりペレット化し、そして細胞のペリプラズマ写空間内に存在するポリペプチドの放出のために浸透圧ショックを与える。これはNeu，H.C．及びHeppel，L.A.，J．Biol．Chem ．240，p.3685-3692，1965の手順に従って実施できる。発現したTermamy(登録商標)−ジッパードメインの特性決定 pAZ-1プラスミドを抱える誘導及び未誘導細胞のペリプラズマ画分をSDS-PAGE ゲル４〜20％アクリルアミド(Laemmli，Nature，227，p.680，1970)上で、Mini- Protean II（Bio-Rad Laboratories，Richmond，Ca，USA）を用いて分析する。サンプルを還元剤ジチオスレイトール入りで及び抜きで泳動させる。Clelands試薬とも呼ばれるジチオスレイトール(DTT)はジスルフィド結合を定量的に還元できる還元剤である(Cleland，W.W.，Biochemistry，3，p.480，1964)。一枚のゲルはクマジーブリリアントブルーG250によりNeuhoffら、Electrophoresis，9，p .255-262，1988)に従って染色し、そして他方のゲルはポリペプチドをPVDF膜lmo billin-P（Cat.：#IPVH 20200，Millipore Corporation，MA，USA）に対するセミドライエレクトロブロッターを用いるブロッティングのために用いる。これらの膜を第一抗体としてのTermamyl（登録商標）に対してウサギにおいて生起させた抗−ターマミル抗体(Ausubel，F.F.ら第11章、第12及び13欄、前掲、1994記載 )及び第二抗体としての抗−ウサギIgG西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート（Cat.：L42007，medac，GmbH，Hamburg，Germany）を用いてプロービングする。これらのポリペプチドはECL(商標)ウェスタンブロッティング検出試薬(Cat. ：#RPN2106，Amersham Int.，Buckinghamshire，England)で検出し、そして常用のＸ線フィルム上で発光を記録する。Termamyl （登録商標）ジッパーダイマーの精製発現したTermamyl（登録商標）ジッパーダイマーを発酵培養液から精製した。これはアフィニティータッグとして付加されたポリ-Hisテールを用いて行った。より詳しくは、精製は５mlのHiTrap（商標）キレートカラムを用い、その供給者の推奨に従って実施する。IMAC（固定化金属アフィニティークロマトグラフィー）手順についての更なる詳細はYipら(1994)Molecular Biotechnology vol.1,p.1 51-164; Fatiadiら(1987)，CRC Critical Rev．Anal．Chem．18，p.1-44に記載されている。タンパク質決定 Termamyl（登録商標）ジッパードメインサンプルの精製及び分析後、スペクトル測定を行う。280nmでのサンプルの光学密度をサンプルのタンパク質濃度の計算のために用いた。この目的のため、ランベール・ベールの法則をTermamyl（登録商標）ジッパーダイマーの算定タンパク質励起係数と共に、Gillら、Analytic al Biochemistry，182，p.319-326，1989に記載のこれについての原理を利用して用いた。IgG₁ 陽性モルモットの決定のためのELISA手順 ELISAマイクロタイタープレートを炭酸バッファー中のウサギ抗−Termamyl（登録商標）AAN4080K 452-453 １：4000でコーティングし、そして４℃で一夜インキュベーションする。翌日、プレートを２％のBSAで時間ブロキングし、そしてPBSツイーン20で３回洗う。Termamyl（登録商標）PPX3328 １μｇ酵素タンパク質／mlをプレートに加え、１時間インキュベーションし、次いでPBSツイーン2 0で３回洗った。モルモットサンプルを全て25μｌの血清及び25μｌのPBSバッファーの入ったELISAプレートに加え、３時間インキュベーションし、そしてPBSツイーン20で３回洗う。次いでヤギ抗−モルモットIgG₁(PBSバッファーに１：4000に希釈)をプレートに加え、１時間インキュベーションし、そしてPBSツイン20で３回洗う。アルカリホスファターゼウサギ抗−ヤギを加え（１：8000に希釈）、そして１時間インキュベーションし、PBSツイーン20で２回、そしてジエタノールアミンバッファーで１回洗う。アルカリホスファターゼをｐ−ニトロフェニルホスフェートで37℃で30分かけて発色させ、そしてEDTAを含むカルシウム／ナトリウムバッファー（pH＝10）で停止させ、そしてELISAリーダーを用いてOD405/650で測定する。６組の二重ブラインドを全てのELISAプレートに含ませる。陽性及び陰性血清値は平均ブラインド値に２倍の標準偏差を足した値として計算する。これは95％の精度を供する。この検査はNovo Nordisk A/Sより注問に応じて入手できるED-951542により詳しく記載されている。実施例実施例１Termamyl （登録商標）をコードする遺伝子のPCR増幅及びクローニングプライマーＡ−ターマミル及びＢ−ターマミルをデザインし、そしてApplied Biosystems 394 DNA/RNAシンセサイザーで合成した。 Termamyl（登録商標）をコードする遺伝子を鋳型としてTermamyl（登録商標）をコードする遺伝子を含むプラスミドpDN1528を用いてPCR増幅させた。 1.5kbのフラグメントのPCR生成物をGeneclean-II手順(BIO IOI，Inc.，Ca.，U SA)に従う調製アガロース電気泳動により精製した。実施例２PCR 生成物のクローニング Termamyl（登録商標）をコードする配列を含む精製した1.5kbのDNAフラグメントを10ＵのSfiI／１μｇのDNAで50℃で２時間かけて消化した。その際、反応混合物に鉱物油をかぶせておいた。 Geneclean-II手順に従い、DNAフラグメントを10ＵのXmaI／１μｇのDNAにより 37℃で２時間かけて更に消化した。消化したDNAを再びGeneclean-II手順を用いて精製し、そして調製しておいたSfiI及びXmaI消化pFab3に最後にライゲーションさせた。10μｌのライゲーション混合物には0.2μｇのインサートDNA及び0.2 μｇの消化ベクターpFab3を含ませた。このライゲーションは１ＵのT4-DNAリガーゼにより16℃で２時間及び４℃で14時間行った。ライゲーションした材料を上記の通りエピキュリアン・コリXL 1−ブルーエレクトロポレーションコンピテント細胞を形質転換させるのに用いた。実施例３適切なクローンの同定エレクトロポレーションの直後、１mlの調製したばかりのSOC培地を加え、そして形質転換細胞を37℃で１時間強力に振盪し、100μｇ／mlのアンピシリン及び12.5μｇ／mlのテトラサイクリンを含むLB−アガープレート上に入れ、そして 37℃で一夜インキュベーションした。翌日、クローンをランダムに拾い、100μ ｇ／mlのアンピシリン及び12.5μｇ／mlのテトラサイクリンを含む14mlのポリプロピレンチューブに移した。37℃での一夜のインキュベーション及び250rpmでの振盪後、プラスミドDNAミニプレップをSambrookら1989に記載の通りに調製した。単離したプラスミドDNAをSfiI及びXmaIによる消化により分析し、そして消化したプラスミドDNAを１％のアガロース、１％のTBEゲル上で分析した。 1.5kbのDNAフラグメントの出現は適正なフラグメントサイズを含むクローンの存在を示した。クローニングした遺伝子の更なる確認を、Promega Corporation 由来のfmol（商標）DNA配列決定システムを用い、DNA配列決定として行った。Te rmamyl（登録商標）の実施例４ロイシンジッパー酵母転写アクチベーターGCN4のロイシンジッパーをコード(O'SheaらCcience， 243，p.538-542，1989)、そして更にはシステインアミノ酸残基を含む柔軟性Ｃ末端伸長ペプチドをもコードする配列の導入は、４本の重複オリゴヌクレオチドを用いて実施した（方法の章参照）。ライゲーションのため、５μｌのアニーリング混合物をT4-DNAリガーゼバッファーに加え、それに５％のPEG-8000、１単位のT4-DNA ライゲーションした材料を上記の通り、Ｅ．コリJM105を形質転換するために用いた。実施例５Termamyl （登録商標）ロイシンジッパー構築体を含むクローンの同定形質転換の直後、１mlの調製したばかりのSOC培地を加え、そして細胞を37℃ で１時間強力に振盪し、選択プレートに入れ、そして37℃で一夜インキュベーションした。翌日、クローンをランダムに拾い、100μｇ／mlのアンピシリンを含む２mlのL B培地を含む14mlのポリプロピレンチューブに移した。37℃で一夜のインキュベーション及び250rpmでの振盪の後、プラスミドDNAミニプレップをSambrookら、前掲、1989に従って調製した。単離したプラスミドDNAをNruI（ロイシンジッパーDNAフラグメントにより導入）により分析し、消化及び未消化プラスミドDNAを１％のアガロース、１ｘのTBEゲル上で分析した。NruI消化サンプル中の4606bp の線形プラスミドの出現はロイシンジッパーフラグメントを含んで成るクローンの存在を示唆した。クローニングしたフラグメントの更なる確認は、Promega Co rporation由来のfmol（商標）DNA配列決定用システムを用いる配列決定により行った。実施例６二量化Termamyl（登録商標）の発現プラスミドpAZ-1を抱えるJM105細胞を上記の通りにして融合ポリペプチドpelB シグナル−Termamyl（登録商標）−リンカー一ロイシンジッパーを発現するように誘導した。各融合ポリペプチドは発現中にその他の同一の融合ポリペプチドと二量化する。ペリプラズマの中に存在するタンパク質を遊離させるために細胞を浸透圧ショックにかけた。誘導化及び未誘導細胞の双方に由来する単離体のアリコートをSDS-PAGEで分析した。サンプルを還元(DTTを含むサンプル)及び非還元( DTT抜きのサンプル)条件下で分析した。ポリペプチドバンドをクマジーブルー染料による染色により識別化した。誘導細胞の非還元サンプルは、未誘導細胞のサンプルの中には存在しない明確なバンドを約120kDaにおいて示した（図３参照）。誘導細胞由来の還元サンプルは約60kDaにおいて明確なバンドを示し、一方そのとき、120kDaにはバンドはなかった（図４参照）。未誘導細胞のサンプルにおいて、60kDaのバンドが認められた。上記と類似のゲルを、上記の通り、ウェスタンブロット手順を介してタンパク質をPVDP膜に移すために用いた。120kDaのバンドの非還元サンプルはTermamyl（登録商標）として特異的に認識され、ダイマーとしてのTermamyl（登録商標）の発現を確証した（図５参照）。実施例７未精製Termamyl−ダイマーのα−アミラーゼ活性 Termamyl（登録商標）−ダイマーのα−アミラーゼ活性についての試験として、ペリプラズマ単離体のサンプルを分析した。電気泳動分析により、このサンプルは約0.5mg／mlのTermamyl（登録商標）−ダイマーを含むことが推定された。サンプルの希釈系列をα−アミラーゼアッセイにおいて試験し（材料及び方法の章参照）、そして既知の活性のTermamyl（登録商標）の希釈系列として比較した。このアッセイは、ダイマーが野生型の活性の50％以上を保持することを示した。実施例８精製用タッグの導入間にインフレーム挿入としてTermamyl（登録商標）−ジッパータンパク質のＣ末端部分に精製用タッグを導入した。これはXa因子部位及びアミノ酸配列His-His- Hisより成るＣ−末端テールを有するTermamyl（登録商標）−ジッパータンパク質をコードするヌクレオチド配列をもたらす（配列データー参照）。この目的のために４種のオリゴヌクレオチドを使用した（以下参照）。 Applied Biosystems 394 DNA/RNAシンセサイザーで、その供給者のプロトコールに従い、４種のオリゴヌクレオチドを合成した。合成後、そのオリゴヌクレオチドをAusubel，F.M.ら、前掲、1994に従う変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動を利用して精製した。 20pmolづつのオリゴヌクレオチドを全容量40μｌの100mMのNaClと混合し、95 ℃で５分のインキュベーションによりアニーリングし、そして３時間かけて16℃ にゆっくりと冷却した。このアニーリング混合物をライゲーションのために用いた。４種類のオリゴヌクレオチドは下記の通りであった：アンチセンスZip-Xa-His(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 7) アンチセンスZip，(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 4) センスZip，(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 5) センスZip-Xa-His，(XmaI-SacI)(SEQ ID NO 8) Ｐは５′末端にホスホリル基を有するオリゴヌクレオチドを示す。オリゴヌクレオチドはハイブリダイズしたときに突き出しを有す他方がSacI部位に対合する。ハイブリダイズしたオリゴヌクレオチン及びコンピテントＥ．コリJM105の形質転換は、実施例４並びに材料及び方法の章に本質的に記載の通りにして行った。この形質転換より、陽性クローンが実施例５記載の通りにして同定され、そして再びDNA配列をDNA配列決定により確認した。更に、ダイマーTerm amyl（登録商標）を実施例６に記載の通りにして発現させた。実施例９ダイマーTermamyl（登録商標）のアレルゲン性追跡 20匹のDunkin Hartleyモルモットを、Novo Nordisk A/Sより注問に応じて入手できるED-9513462に記載の通りにして、1.0μｇのTermamyl（登録商標）モノマー及び1.0μｇのTermamyl（登録商標）ダイマーの気管内投与にかけた。全モルモットを上記のELISA手順を利用し、８日間にわたりIgG₁の生産について試験した（アレルギー反応を示唆）。図６は追跡期間中にIgG₁陽性と認められたDunkin Hartleyモルモットの数を示す。図６から、全追跡期間にわたってIgG₁陽性とされたモルモットの数は、Termam yl（登録商標）モノマーと比べ、Termamyl（登録商標）ダイマーに関して少ないことがわかる。これは、Termamyl（登録商標）のアレルゲン性が、Termamyl（登録商標）をジッパードメインに複合させることにより抑制できることを証明する。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Methods for the production of polypeptides with suppressed allergenicity Field of the invention The present invention provides a method for producing a polypeptide having suppressed allergenicity. About the method. Further, a DN comprising a gene encoding such a polypeptide A construct, a recombinant expression vector or a transformation vehicle comprising the DNA construct, It relates to a cell carrying the DNA construct or the vector. Further, according to the method of the present invention, Polypeptide having reduced allergenicity produced by the method described above, Oligomeric polypeptides having rugenic properties, and comprising said polypeptides Composition. Finally, the present invention provides a method for suppressing the allergenicity of a polypeptide. Regarding the use of zipper domains. Background of the Invention Enzymes for use in industry, home, food / feed, cosmetics, pharmaceuticals, etc. Polypeptides, including non-enzymatic proteins, are increasingly being manufactured industrially. Being polypeptides, they can stimulate the immune system of animals and humans You.Allergenicity of polypeptide Generally speaking, most people will have a detrimental effect on the polypeptide. Although not exposed to extremes, certain phenomena where such phenomena are extremely important There are rugged populations. Groups at risk include workers handling the production of products containing enzymes. Includes artisans, such as hairdressers, who make direct monthly contact with products comprising It is. For such at-risk populations, certain polypeptides may produce different types of antibodies. And / or may provide a cellular response. Less of these routes Both can have deleterious effects in humans and animals, Exposure to peptides can result in sensitization and subsequent allergies . Sensitization is defined as an immune status, while allergy is characterized as a clinical disease. Have been. Allergies generally require more than one encounter with the antigen. First time Exposure results in a primary immune response, which results in sensitization of the individual. Sensitized individuals When contacted again with the same antigen, it can trigger an allergic reaction. More specifically, IgE (or equivalent) is a specific receptor on the surface of mast cells. Adheres to the tar. The mast cells contain numerous large cytoplasms filled with chemical mediators Contains granules. Once attached to mast cells, IgE molecules are It can last for weeks, allowing specific allergens to interact. Individuals with IgE-mediated allergies have numerous IgE antibodies established on mast cells I do. Upon exposure, the specific allergen molecule will have a corresponding IgE Joins the body. This leads to the cellular release of chemical mediator cytoplasmic granules, rhinitis, conjunctiva Provides symptoms such as flames, uricaria or other allergic reactions. Such allergic reactions occur within minutes or hours after exposure to the allergen, And it is often called "immediate hypersensitivity reaction". IgE-mediated hypersensitivity reactions occur when allergens are introduced through the respiratory tract by inhalation Can occur. The occurrence of allergic reactions is believed to depend at least in part on the mode of exposure. ing. For example, the nasal load of allergenic proteins can be increased even if certain serum IgE Skin examination and radio allergo Even if the solvent test (RAST) is negative, it may cause an allergic reaction. (Ivan Roitt, "Essential Immunology" 5th edition, p. 152 and p.240, 1984).Inhibition of allergenicity of polypeptide In general, prior art methods for the suppression of allergenicity of a polypeptide include, inter alia, Polypeptides to avoid dusty forms of the polypeptide from stimulating the immune system By various methods of immobilizing, granulating, coating or dissolving. Whatever the danger of polypeptide dust or exposure of dissolved polypeptide, There is still ruggedness. Thus, some release of the polypeptide may occur, which Can cause potential sensitization and subsequent allergic reactions. Another method to alleviate this problem is for example in bacteria or mammalian cell culture. And to select a polypeptide of human origin for production. This is human Can solve some problems, but not animals. Furthermore, Finding polypeptides of human origin with desired properties is often the case Is impossible, and other origins are considered for this reason. This is the desired Any human polypeptide with one or more positions altered in the molecule providing the property It can be. It is also a molecule from other species, including bacteria, molds, etc. Can be. This latter group of products would all have immunostimulatory potential. Further proposals for reducing allergenicity include reducing the size of polypeptide molecules. (For example, Japanese Patent Publication No. 4,112,753 or Research Disclosure No. 33 See 5102). However, this is because the activity of the polypeptide is not important. Or the activity of the polypeptide of interest is retained regardless of the degradation of the polypeptide When Only a valid solution. The use of protein engineering is important for epitope mapping and Suppresses allergenicity of polypeptide through subsequent modification of allergenic epitope (See WO92 / 10755 (Novo Nordisk A / S)). In the medical field, the addition of one or more polymer molecules to a polypeptide Proposals have been made to reduce the antigenicity or immunogenicity of the resulting polypeptide. This It usually has the effect of disrupting the interaction of the polypeptide with other macromolecular structures. With. Such conjugates may also exhibit novel properties: for example, EP 38,154 (Beec ham Group Ltd.) is an allergen conjugation with polysarcosine with immunosuppressive properties Ligates. U.S. Pat. No. 4,179,337 (E_nzon) Is polyethylene glycol (PEG) or poly Non-immunogenic polypeptides conjugated to propylene glycol, such as enzymes and peptides Considering peptide hormones. 10-100 moles of poly per mole of polypeptide Mers are utilized and more than 15% of the biological activity is retained. This retained The polypeptide is injected in an aqueous solution into the mammalian circulation or intramuscularly. That non Immunogenicity is assessed by an intradermal injection test. In general, the addition of one or more polymer molecules to a polypeptide molecule can be, for example, an enzyme. Has the effect of inhibiting the activity of the enzyme or preventing the interaction of the enzyme with its substrate That was found. EP 183,503 (Beecham Group PLC) discloses that at least one Conduit comprising a pharmacologically useful polypeptide linked to a water-soluble polymer Disclose the invention of the above concept by providing a gate. EP 471,125 (Kanebo Co., Ltd.) Improved pro-linked to a polysaccharide via a triazine ring Announces thease. The utilized polysaccharide has an average molecular weight of 10,000 or more . Modification rate of surface amino acid groups in this improved protease is 30% or more . In general, allergens that enter the respiratory tract pass through the plasma membrane and allergic reactions Believe that it must have a molecular weight of less than about 100 kDa to cause Have been. WO94 / 10191 (Novo Nordisk A / S) is for the production of hypoallergenic proteins Discloses a method in which the parent protein molecules of the monomer are linked together Thus, an oligomer is formed. This is, for example, a linker or spacer molecule Or by linking the monomer molecules to each other via a peptide bond. This is accomplished by linking between the C-terminus of the mer and the N-terminus of the second monomer. Folkeson et al., Acta Physiol-Scand, 139, p. Between the molecular weight of the cytoplasmic marker and the amount transported to the bloodstream through the respiratory tract (bioavailability) Has an inversely proportional relationship. EP 215,662 (Masuda Hiroshi) for use in pharmaceuticals such as antitumor agents Modified or unmodified proteases from different microorganisms are considered. Protease Modification forms dimers or oligomers by crosslinking protease molecules Can be implemented.Expanding polypeptides by using zipper domains As can be seen, various techniques for enlarging polypeptides have recently been known. It has become."Zipper technology" Another technique called “zipper technology” is used to generate large amounts of polypeptides. It is known to cause oligomerization. Zipper technology combines polypeptide molecules into self-multimerizing polypeptide domains (hereinafter Zipper domain). Such di Examples of the upper domain include known α-helix bundles, cross-linked bundles, multiple bundles, and parallel-wound coils. (Porallel coiled coil), poly (L-glutamine) chains. The simplest case of a zipper domain is a spiral bundle consisting of a twin helix For example, leucine zippers and four α-helical bundles included. These domains have the characteristic 7 of the (a, b, c, d, e, f, g) n type. Shares amino acid repeats. The "a" and " The “d” position is generally hydrophobic and is α-helical as proposed by Cridk. With the potential to provide potential for interlocking of llogr., 6, pp. 689-697, 1953). Despite this shared pattern, each sequence is double-stranded, triple-stranded, quadruple-stranded And even helical bundles of higher dimensional chain numbers (Cohen et al. Cohen, Proteins, vol.7, p.1-15, 1990; Cohen, TIBS, 11, 245-248, 1986; Science 263, p.488-489, 1994; O'Shea et al., Cell, 68, p.699-708, 1992; O'She. a et al., Science, 254, pp. 539-545, 1991; O'Shea et al., Science, 243, pp. 538-542, 1 989; Eisenberg et al., Proteins, 1, p. 16-22, 1986; Ho et al. Am. Chem. Soc, 10 9, p. 6751-6758, 1987). Examples of leucine zippers are yeast transcripts belonging to the class of DNA-binding polypeptides. 33 amino acid sequence located at the C-terminus of factor GCN4 (O'Shea et al., Science, 243, p.538-542, 1989). Through genetic engineering, specific GCN4 leucine zippers convert various polypeptides Fused and dimeric monomeric polypeptide Has been shown to mediate metabolism. Hu et al., Science, Vol. 250, p. 1400-1403, 1990, featured a GCN4 leucine zipper. Fused to the N-terminal domain of the bacteriophage lambda repressor and A genetic system has been described that is used as a reporter for transformation. Blondel and Bedouelle (Protein Engineering. 4, p. 457-461, 1991) . Maltose binding protein (MalE) was dimerized in E. coli. In general, leucine zippers form homodimers, but leucine zippers. Within the par group there are certain motifs that favor the formation of heterodimers. That Two examples are Fos and Jun leucine zippers (O'Shea et al., Science, 245, p.646,1989; Turner and Tjian, Science, 243 p. 1689, 1989) and O'Shea (Current Biolo gy, vol.3, no.10, p.658-667, 1993). is there. In addition, the self-multimerization of the quadruple α-helix bundle is described in E. Expressed in E. coli It has been shown to dimerize with a murine ScFv antibody fragment. This antibody flag Was designed by Eisenberg et al., Supra, 1986, and Ho et al., Supra, 1987. Two identical helices from a multiparallel quadruplex bundle (in which Two helices are separated by a single turn) (See figure 7). This quadruplex bundle consists of two helices each It consists of two molecules (Pack et al. Bio / Technology, Vol. 11, p. 1271-1277, 1993). Lovejoy et al., Science, on zipper domains that enable high-dimensional multiplication , 259, p. 1288, 1993 report the synthesis of triple-stranded α-helical bundles, The spiral flows up, down, up ing. This construct is in a GCN4 leucine zipper that would otherwise dimerize It is made by introducing certain mutations. Introduction of glutamine repeat (poly (L-glutamine)) To form a polar zipper (Stott et al. (1995), Proceedings of the N ational Academy of Sciences of the United States of America 92 (14), p.65 09-6513). Other polypeptide motifs that can mediate trimerization are described by Peteranderl et al. stry, 31, p.12272-12276, 1992 (Sacch. cerevisiae) aromyces cerevisiae) and Kluveromyces lactis Is the natural motif of the shock transcription factor. Examples of tetramerization include modification of amino acid residues of GCN4 leucine zipper (H arbury et al., Science, 262, pp. 1401-1407, 1993). This is only for small peptides. Shown. Multimerization motif fused to recombinant protein is a high-dimensional polypeptide oligomer (Wolber et al., BIO / TECHNOLOGY, 10, p.900-904, 1992). Expression The fused fusion polypeptide forms oligomers at low salt concentrations and Dissociates in degrees.Description of the prior art All previously described methods for suppressing the allergenicity of a polypeptide Includes at least one additional manufacturing step relative to the corresponding parent polypeptide. No. This complicates the process, and inhibits allergenic poly This increases the cost of peptide production. The prior art describes zippers only as a means for polypeptide multimerization. ing. The allergenicity of a polypeptide is integrated into the polypeptide manufacturing process That it can be suppressed by increasing the size of the polypeptide Will be desired. Summary of the Invention An object of the present invention is to provide a method for producing a polypeptide in which allergenicity is suppressed. It is an object of the present invention to provide a method that can be used for industrial purposes. We recognize the potential of using zipper domains for industrial use To produce polypeptides with surprisingly suppressed allergenicity A way to a) culturing a microorganism capable of producing the polypeptide; b) recovering said polypeptide in substantially pure form; wherein said microorganism is Expressed polypeptide molecules have been modified to self-multiply, We have achieved the provision of a method. In aspects of the invention, the microorganism comprises at least one polypeptide and One or more D comprising a DNA sequence encoding at least one zipper domain Improved with the introduction of the NA construct. Another object of the present invention is for the production of polypeptides with reduced allergenicity. A DNA construct comprising at least one polypeptide molecule and at least one And a construct comprising a DNA sequence encoding the zipper domain of The present invention further provides a recombinant vector or a transformant comprising said DNA construct of the present invention. A recombinant vehicle, and even said DNA construct or said recombinant vector or transformation. A cell comprising a replacement vehicle. In addition, the present invention has a reduced allergenicity produced according to the method of the present invention. Microbial polypeptides. Furthermore, the present invention Also contemplated are compositions comprising at least one polypeptide component of Finally, the present invention provides a zipper domain for inhibiting the allergenicity of a polypeptide. About the use of the Inn. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES FIG. 1 contains linker, GCN4 leucine zipper, and cysteine amino acid groups 1 shows a DNA sequence of a flexible C-terminal extension peptide and an amino acid sequence derived therefrom. FIG. 2 shows the construction steps of the pAZ-1 plasmid. FIG. 3 shows Coomassie blue stained SDS-PAGE run under non-reducing conditions. Lane 4 shows the molecular weight marker SeeBlue ™ (Cat .: # LC5625, Novex, Inc., Ca, U SA), and lanes 2 and 3 comprise the DNA construct pAZ-1. Kori JM105 Is a polypeptide expressed by Figure 4 shows Coomassie blue stained SDS-PAGE run under reducing conditions. 1 is a molecular weight marker SeeBlue ™ (Cat .: # LC5625, Novex, Inc., Ca, USA ) And lanes 2 and 3 comprise the DNA construct pAZ-1. Kori JM105 Is a more expressed polypeptide. FIG. 5 shows a Western blot. Lane 1 is the molecular weight marker. lane 2 and 3 were run under non-reducing conditions. Sample derived from inducible JM105 / pAZ-1 It is. Lanes 4 and 5 are the same sample run under reducing conditions. FIG.₁T of 1.0 μg of monomer and 1.0 μg of dimer recognized as positive ermamyl® from Dunkin Hartley guinea pigs exposed intratracheally. Number, number of days elapsed since the start of exposure You. Detailed description of the invention The present inventors have surprisingly produced polypeptides with reduced allergenicity. An integrated, industrially-available method for making polypeptides comprising the biological activity of a polypeptide At least substantially succeeded in providing a method that is substantially maintained. An activity that is "substantially" maintained, in the context of the present invention, is modified. At least 20% to 30%, preferably 30% to 40%, compared to the activity of the parent polypeptide %, More preferably 40-60%, even better from 60% to 80%, even better Or 80% to about 100% activity. The polypeptides are utilized for a large number of industrial applications, exemplified below. Can be. Risk of allergic reactions in relation to the industrial utility of the polypeptide It is understood that what is gained is mainly inhalation of the allergen. Therefore, the present invention is important One of the strong points is that the inventor has solved the problem of allergen respiratory load. On the other hand, prior art solutions mainly consider the skin load of the suspect immunogen . Respiratory load is a much more sensitive problem. The term “suppressed allergenic” can lead to an allergic condition (in humans IgE (and in certain animals, molecules with equivalent effects, such as guinea pigs) In the IgG₁) Of the polypeptide of the present invention as compared to the corresponding parent polypeptide. Significantly lower when inhaled. The terms "immunogen", "antigen" and "allergen" are defined below and These words are often obscure, even by scientists This is because they are used in various modes. "Immunogen" is a substance that can stimulate an immune response when introduced into humans and animals. Defined as quality. The term "antigen" is used alone when recognized by the immune system as a non-self molecule. Means a substance that can generate the body. In addition, an `` allergen '' can cause allergic sensitization or (in humans) Is) allergic to IgE antibodies (and molecules with equivalent effects in animals) It can be defined as an antigen that can cause a response. The term "immunogen" is a broader term, and "antigen" and "allergen" It is understood to include. As mentioned above, even if the skin test is negative, an inhalation test causes an allergic reaction. Allergy caused by skin contact, based on the known fact that it can occur Contact between skin allergens that mediate reactions and cell-associated IgE in the bronchial tree Less distinction from respiratory allergens that cause more allergic reactions Both are important in relation to the polypeptide of the present invention. Therefore, assessment of allergenicity is dependent on parental polypeptide administered intrabronchially and suppressed. Inhalation test comparing the effects of the corresponding polypeptides of the invention with improved allergenicity Can be done by inspection. There are two hazard assessment methods in animal models and in vitro models, respectively. Exist. Animal models recommended by ECETOC (Monografi ECETOC no.19, p17-27 ) Includes both mouse and guinea pig models. The mouse model is a phenomenon that occurs during the induction period of sensitization after the first encounter of the substance in question Focus on However, mice are not suitable for examining polypeptides It is believed that. In contrast, the guinea pig model was induced in pre-sensitized animals. To identify respiratory allergens as a function of induced responses. ECETOC is Recognizing the results of studies using lumots as appropriate criteria for hazard assessment in humans ing. Specifically, in relation to the evaluation of allergenicity according to the present invention, guinea pigs A model encompassing the bronchial transduction of the polypeptide in is appropriate. One suitable guinea pig cultivar, Dunkin Hartley, is Ig in relation to allergic reactions. Does not produce E antibodies (like humans). However, they are another type of Body, i.e., IgG₁A and IgG₁B, its allele for an inhaled polypeptide Produce those that characterize their genetic properties (eg, Prento, ATLA, 19, P8-14, 1991) reference). Therefore, when using the Dunkin Hartley animal model, IgG₁A and IgG₁Relative amount of B Is a measure of allergen levels. Other animal models, such as rats, rabbits, etc., are also available for equivalent research. sell. The production of the polypeptide with suppressed allergenicity according to the present invention is described in detail , a) culturing a microorganism capable of producing the polypeptide; b) recovering the polypeptide in a substantially pure state; Have been improved in such a way that the expressed polypeptide molecule self-multiplies, Comprising. The allergenicity of this polypeptide is suppressed by expansion of the polypeptide. It is believed that The term "self-multimerization" is used in the context of the present invention to describe some desired polypeptides. Molecules, for example, by using a zipper domain Means dimerization, dimerization, trimerization, tetramerization, polymerization, polymerization, etc. Including. In a preferred embodiment of the invention, the microorganism has one or more DNA constructs therein. It is improved by introducing the body. The DNA construct has at least one zipper. At least one polypeptide of interest operably linked to the per domain Comprising the encoding DNA sequence. Optionally, the DNA sequence may be A short linker sequence between the sequences encoding the It may further comprise a DNA sequence encoding a production tag. Recovery of the multiplied polypeptide may be performed by any appropriate method. Poly-His When a tag for tail purification is used, the polypeptide can be prepared, for example, by Yip et al. (1994), Molec. ular Biotechnology, vol.1, p.151-164; Fatiadi et al., (1987), CRC Critical Re. v. Anal. Chem. 18, IM-C (immobilized metal affinity) -Chromatography). The linker sequence is an amino acid sequence that connects the polypeptide of interest to the zipper domain. DNA sequence encoding the sequence. Enlargement of the polypeptide occurs during culture. The amino acid sequence of the zipper domain is It is expressed grafted to the N- or C-terminus of the polypeptide of interest. This fusion When the polypeptide is expressed, the zipper domains associate, for example, in pairs, and Bundled by hydrophobic and electrostatic interactions. Depending on the zipper domain used, the fusion polypeptide can be a trimer, tetramer, etc. Can also be formed. The method of the invention obtains a polypeptide product with reduced allergenicity This is advantageous due to the fact that no additional steps are required after culturing and before harvesting. You. Furthermore, the method according to the present invention can be any polypeptide of interest, Or any polypeptide that can cause an allergic reaction It can be used for This group comprises polypeptides having a molecular weight of less than about 100 kDa. Generally, before The molecular weight is about 5 kDa to 150 kDa, preferably about 20 kDa to 100 kDa, especially about 20 kDa to 80 kDa Belongs to the range. The polypeptide may be of microbial or mammalian origin, and may be a naturally occurring polypeptide. It may be a tide or a variant thereof. In embodiments of the invention, the polypeptide of interest exhibits at least one catalytic activity. Is an enzyme. Such enzymes include proteases (metallic, acidic, neutral or alkaline), lipases, Cutinase, cellulase, amylase, lyase, xylanase, pectiner Ze, pullulanase, polygalactylonase, oxidase, laccase, oxy Doreductase, transglutaminase, α-galactosidase, phytase And peroxidase. A specific example of such an enzyme is Termamyl® (Novo Nordisk A / S), ie, about 55 α-amylase having a molecular weight of kDa. The method of the present invention can be used for multiple biological activities. Hybrid products that exhibit lipolytic and proteolytic activities It enables the production of heterodimeric enzymes that exhibit different catalytic activities. Furthermore, trimerization, tetramerization, and multimerization of polypeptides exhibiting one or more kinds of catalytic activities And / or enzymes. The polypeptide with suppressed allergenicity may be any suitable bacterium described below. Or it can be produced by fungal organisms.DNA Construct Another object of the invention is to provide at least one polypeptide and at least one Repressed allele comprising a DNA sequence encoding a single zipper domain It is an object of the present invention to provide a DNA construct for producing a polypeptide having a genic property. The term "DNA construct" as used herein refers to cDNA, genomic DNA, synthetic DNA, R Any nucleic acid molecule of NA or PNA origin is meant. The term "construct" is a nucleic acid segment And can be single-stranded or double-stranded and have at least one zipper Based on the DNA sequence encoding the polypeptide of interest fused to the I will taste it. This construct may optionally contain other DNA segments, for example, Short linker sequences and / or peptide segments used especially for purification purposes And a sequence encoding the fragment. The DNA constructs of the present invention may be of genomic or cDNA origin, as appropriate, e.g., genomic Alternatively, prepare a cDNA library and copy all or part of the polypeptide of interest. The DNA sequence to be loaded is prepared according to standard techniques (Sambrook et al., Molecular cloning, A La. boratory Manual, cold Spring Harbor, NY, 1989) Synthetic oligonucleotides Screening by hybridization with probe May be obtained. This DNA sequence may encode a polypeptide that exerts catalytic activity. In particular, this D NA sequences are protease (metallic, acidic, neutral or alkaline), lipase, cuticle Nase, cellulase, amylase, lyase, xylanase, pectinase, Regalactylonase, oxidase, laccase, oxidoreductase, tiger Sgeltaminase, α-galactosidase, phytase or peroxidase May encode at least one enzyme selected from the group consisting of The DNA constructs of the present invention can be established using standard methods, such as Beaucage. and Caruthers, Tetrahedron Letters, 22, p. Holamidite method or the method described in Matthes et al., EMBO Journal, 3, pp. 801-805, 1984. It can also be prepared synthetically by the method. According to the phosphoramidite method, oligonucleotide Otides are synthesized, e.g., on a self-DNA synthesizer, purified and annealed. Ligated, and cloned into an appropriate vector. In addition, this DNA construct is a complex of coalescent and genomic origin, synthetic and cDNA origin. Or a complex of genomic and cDNA origin, wherein the complex is synthetic, genomic or cDNA. The ligation of NA-derived fragments (as appropriate) allows standard techniques to be followed. The fragments may comprise various parts of the total DNA construct. Corresponding to minutes. This DNA construct is described, for example, in US Pat. No. 4,683,202 or Saiki et al., Science, 239, pp. 487-491. Polymerase chain reaction using specific primers as described in US Pat. Can also be prepared. In certain embodiments, the DNA construct of the present invention comprises the DNA sequence set forth in SEQ ID No. 1, further comprising: Encodes the amino acid sequence shown in SEQ ID No. 2, but due to the degeneracy of the genetic code, It comprises a nucleic acid sequence that may differ from the DNA sequence shown in ID No. 1.Recombination vector In a further aspect, the present invention relates to a recombinant vector comprising a DNA construct of the present invention. Or a transformation vehicle. The recombinant vector for inserting the DNA construct of the present invention is Any vector that can be easily submitted to recombinant DNA procedures Well, and the choice of vector often depends on the host cell into which it is to be introduced Will. That is, this vector is a self-replicating vector, i.e., as extrachromosomal material. Existing vector whose replication is independent of chromosomal replication. For example, a plasmid. Alternatively, the vector may be introduced into a host cell. When it is integrated into the host cell genome, and along with the chromosome in which it was integrated It may be duplicated. This vector preferably encodes the polypeptide of interest to be self-multiplied A DNA sequence is operably linked to another segment required for transcription of DNA. Expression vector. Generally, the expression vector is a plasmid or It may be derived from viral DNA or include both factors. `` Link to operable expression '' The words are analogous so that the segment functions properly for its intended purpose. Transcription is initiated at the promoter and encodes the polypeptide of interest Means that it is arranged to proceed over the DNA sequence. This promoter exhibits transcriptional activity in the host cell of choice and is compatible with the host cell. Any DN that can be derived from a gene encoding a homologous or heterologous polypeptide It may be an A sequence. Examples of suitable promoters for use in yeast host cells include yeast glycolysis. Gene (Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255, p. 12073-12080, 1980; Alber and Ka wasaki, J .; Mol. Appl. Gen., 1, p.419-434, 1982) or alcohol dehydrogen Nase gene (Young et al., Genetio Engineering of Microorganisms for Chemical (Hollaender et al., Plenum Press, New York) or IPII (US 4,599,311). ) Or ADH2-4c (Russell et al., Nature, 304, p.652-654, 1983) promoter. I will. Examples of suitable promoters for use in filamentous fungal host cells include, for example, ADH3 Promoter (McKnight et al., The EMBO J., 4, p. 2093-2099, 1985) or TpiA pro It is a motor. Examples of other useful promoters are described in Origae (A. Oryzae) ) TAKA amylase, rhizome Rhizomucor miehei aspartate proteinase, A. D A. niger neutral α-amylase; Nigaric acid stable α-amylase, A . Niger or A. Awamori (A. awamori) glucoamylase (gluA), Rhizomuco Le Mehey Lipase, A. Oliga alkaline protease, A.I. Oriza Triose phosphate isomerase or A. A. nidulans Ase It is derived from a gene encoding toamidase. TAKA-amylase and The gluA promoter is preferred. Examples of suitable promoters for use in bacterial host cells include Bacillus sp. Stearothermophilus (Bacillus stearothermophilus) maltogenic ami Lase gene, B. licheniformis alfa-A Millase gene, B. amyloliquefaciens BAN amylase gene, Bacillus subtilis alkaline protease gen Or the promoter of the B. pumilus xylosidase gene Or phage lambda P_ROr P_LA promoter, or E. coli. Kori lac, Trp Or the fac promoter. This DNA sequence is operably linked to a suitable terminator if necessary. May be. The recombinant vector of the present invention may further replicate the vector in a host cell of interest. DNA sequence. The vector may further comprise a selectable marker, such as a product, which complements the host cell defect. Genes such as dihydrofolate reductase (DHFR) or Schizosaccharoma Ichs Pompe (Schizosaccharomyces pombe) TRI gene (PR Russell, Gene 40, 1985, pp. 125-130), or ampicillin, Isin, Tet Lacyclin, phleomycin, chloramphenicol, neomycin, hygro Includes those that confer resistance to drugs such as mycin or methotrexate It can consist of For filamentous fungi, selectable markers include omdS, pyrG, argB, niaD, tr pC and sC are included. To direct the polypeptide into the secretory pathway of the host cell, a secretory signal sequence (leader Sequence, also known as a prepro sequence or pre sequence) in a recombinant vector. May do it. This secretory signal sequence is compatible with the DNA sequence encoding the polypeptide. Connected in the reading frame. The secretory signal sequence is generally It is located 5 'to the DNA sequence encoding the tide. This secretion signal The sequence is usually integrated into the polypeptide, or may be another secreted polypeptide. Derived from the gene encoding the code. For secretion from yeast cells, this secretory signal sequence is Any signal peptide that ensures efficient induction into the secretory pathway of Can be loaded. This signal peptide is a natural signal peptide, or its functional It may be a partial or synthetic peptide. A suitable signal peptide is α-factor signal Peptide (see US 4,870,008), mouse salivary gland amylase (O. Hagenbuchle et al.) , Nature, 289, p643-646, 1981), improved carboxypeptidase signal. Peptide (see L.A. Valk et al., Cell, 48, p.887-897, 1987), yeast BARI signal Peptide (see WO87 / 02670) or yeast aspartic protease 3 (YAP3) Signal peptide (see M. Egel-Mitani et al., East, 6, p. 127-137, 1990). Was recognized. Sequence the coding sequence for the leader peptide for efficient secretion in yeast May be inserted downstream of the null sequence and upstream of the DNA sequence encoding the polypeptide. No. The function of the leader peptide is expressed poly It directs the peptide from the endoplasmic reticulum to the Golgi apparatus and further secretes it into the culture medium. (Ie traversing the cell wall) Or at least transport through the cell membrane to the periplasmic space of the yeast cells). This May be the yeast α-factor leader (see U.S. Pat. No. 4,546,082). , EP16,201, EP123,294, EP123,544 and EP163,529). Or This leader peptide is a synthetic leader peptide, that is, the naturally occurring leader peptide. It may be a peptide. Synthetic leader peptides are for example WO89 / 02463 or WO92 / 11378 Can be constructed as described in For use in filamentous fungi, the signal peptide is advantageously of Aspergillus species Rhizomucor mihei, a gene encoding amylase or glucoamylase ・ Genes encoding lipases or proteases, or Humicola langi It may be derived from a gene encoding Humicola lanuginosa lipase. The signal peptide is preferably A. Oryza TAKA amylase, A. Niger Medium Sex α-amylase, A. Niger acid stable amylase; Niger Glucoami Derived from the gene encoding the enzyme. In a preferred embodiment of the present invention, the vector is a pAZ-1 expression vector. The DNA sequence encoding the polypeptide of interest, the promoter and optionally Additional ligation of the minator and / or secretion signal sequence, respectively. Used to insert them into a suitable vector that contains essential information for replication Procedures known to those skilled in the art are known (see, eg, Sambrook et al., Supra, 1989).Host cells The DNA sequence encoding the fusion polypeptide of interest introduced into the host cell is It may be the same or different for the host. If the host If allogeneic to the cell, that is, naturally produced by the host cell If so, it is generally operably linked to another promoter sequence, or If possible, another secretory signal sequence different from its natural environment and / or Will be operably linked to the terminator sequence. The word "like" Contains a cDNA sequence encoding a polypeptide native to the host organism of interest Intended. “Heterologous” includes DNA sequences that are not naturally expressed by the host cell. And intended. That is, the DNA sequence may be from another source or may be a synthetic sequence. May be. The host cell into which the DNA construct or the recombinant vector of the present invention is introduced is a polypeptide of interest. Can be any cell capable of producing the enzyme, including bacteria, yeast, and filamentous fungi . Gram-positive examples of bacterial host cells capable of producing the polypeptide of interest based on culture Fungi such as Bacillus strains such as B. Subtilis, B. Licheniholmis, B.S. Les B. lentus, B. B. brevis, B. brevis Stearothermophilus, B. B. alcalophilus, B. alcalophilus. Amyloliquefaciens, B.A. B. coagulans, B. coagulans Circulans, B. circulans Low B. lautus, B. lautus Megaterium or B. megaterium Slingensis (B. thuringiensis) or a strain of Streptomyces, for example, S. Lividans, S. lividans S. murinus or S. murinus Glyce S. griseus, or Gram-negative bacteria, such as Escherichia coli ichia coli). Bacterial transformation can be by protoplast transformation or This can be done in a well-known manner by utilizing competent cells (see Sambrook et al., Supra). ). The polypeptide may be E. coli. When expressed in bacteria such as E. coli, Peptides are found in the cytoplasm, generally as insoluble granules (known as inclusion bodies) It can be retained or directed to the periplasmic space by bacterial secretory sequences. In the former case, the cells are lysed and the granules are recovered and denatured, followed by polypeptide Is refolded by dilution of the denaturant. In the latter case, the polypeptide is For example, sonication or disruption of cells by osmotic shock The periplasm is released by releasing the contents and then recovering the polypeptide. Recovered from space. Examples of suitable yeast cells include Saccharomyces spp. Or Schizosaccharomyces spp. Vesicles, especially Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces culibergii (S. kluyveri). Transforming the yeast cells with the heterologous DNA, and Methods for producing heterologous polypeptides from, for example, U.S. Pat. No. 4,931,373, No. 4,870,008, No. 5,037,743 and No. 4,845,075 They are all incorporated herein by reference. Transformed cells are selection markers Phenotype, generally determined by drug resistance, or specific nutrients, e.g. Sorted by the ability to grow in the absence of isin. For use in yeast A preferred vector is the POT1 vector disclosed in US Pat. No. 4,931,373. The present invention Is a DNA encoding the polypeptide, for example, a signal sequence as described above and optionally May be preceded by a leader sequence. Further examples of suitable yeast cells are Kluyveroma Strains of Isis, such as K. Kratis, Hansenula, e.g. Polimo H. polymorpha, or Pichia, e.g. Pastoris (P. pas (Gleeson et al., J. Gen. Microbiol, 132, 1986, p. 3459-3465; USA) Patent No. 4,882,279). Examples of other fungal cells are filamentous fungi, such as Aspergillus sp. -Newrospora species, Fusarium species, or Trichoderma (T richoderma) species, especially A. Olga, A. Nidurans or A. Niger cells You. The use of Aspergillus species for expression of polypeptides is described, for example, in EP 272,277. And EP 238,023 and EP 184,438. For example, F. Oxysporum Was performed as described in Malardier et al., Gene, 78, pp. 147-156, 1989. I can do it. When using a filamentous fungus as a host cell, it is advantageously a DNA construct of the invention. Integrates the DNA construct into the host chromosome so that a recombinant host cell is obtained. Can be transformed. This integration is considered genetically advantageous and why This is because the DNA sequence tends to be stably maintained in the cell. To host chromosome Incorporation of the DNA construct according to a conventional method, for example, by homologous or heterologous recombination Can be done. The above transformed cells are then expressed in a suitable nutrient medium in the form of a polypeptide of interest. And the resulting polypeptide is recovered from the culture. Take it. The medium used to culture the cells may be any conventional medium suitable for growing host cells. The medium may be a minimal medium or a complex medium with suitable additives. Suitable culture The land can be obtained from commercial suppliers or prepared according to published recipes (eg, Catalog of the American Type Culture Collection). Produced by cells The produced polypeptide is then isolated from the culture medium by host centrifugation or filtration. Separation of the vesicles from the culture medium, the supernatant thereof or salts of the protein components of filtration, such as Precipitation with ammonium, various chromatographs depending on the type of polypeptide of interest Chromatography procedures, such as ion exchange chromatography, gel filtration chromatography Fee, affinity Recovery may be accomplished by conventional procedures, including purification by chromatography and the like.Polypeptide The present invention relates to a suppressed allergenic polyether produced according to the method of the present invention. Also related to peptides. The polypeptides of the present invention are characterized by a zipper domain fused to the polypeptide of interest. Become. The N- or C-terminus of the amino acid sequence of this polypeptide is a zipper domain Has been grafted on. This zipper domain can be any arbitrary It can be a domain. In certain embodiments, the zipper domain is leucine A zipper, such as a GCN4 leucine zipper. Preferably, the monomeric polypeptide is between 5 kDa and 150 kDa, preferably between 20 kDa and 10 kDa. It has a molecular weight of 0 kDa, especially 20 kDa to 80 kDa. Polypep consisting of two polypeptide molecules, for example a Termamyl® molecule When using leucine zipper to increase the amount of tide, leucine zipper Usually has sufficient affinity to stabilize homodimers. However, die Include cysteine in the leucine zipper to further stabilize the No. This construct provides a disulfide bond between the two monomers of the hybrid polypeptide. Can result in the formation of a bond. The polypeptides of the invention comprise 2 to 10 or more polypeptide molecules Consists of In a preferred embodiment, the self-multimerizing polypeptide is a dimer, trimer, It is a tetramer or oligomer. The biological activity of the polypeptide, eg, the enzymatic activity of a dimeric enzyme, is maintained or mimicked It is possible. Further, the polypeptides of the present invention may have multiple biological activities, for example, two or more biological activities. It may exert different enzymatic activities, such as lipolytic and proteolytic activities.Oligomeric polypeptide The present invention relates to oligomeric polypeptides having reduced allergenicity, At least one polypeptide attached or linked to at least one zipper domain A small number bound or linked to at least one zipper domain conjugated to the peptide It also relates to an oligomeric polypeptide comprising at least one polypeptide. The oligomeric polypeptide can be made by any suitable method or by any suitable method. Homo-oligomers, hetero-oligomers or higher dimensional It may be an oligomeric polypeptide. The zipper domain may be any zipper domain previously described. In one embodiment, the oligomeric polypeptide comprises at least one of the foregoing Shows the enzyme activity. The zipper domain may be at either the C- or N-terminus of the polypeptide of interest. They may be linked. In the following, the term "polypeptide" refers to a polypeptide produced according to the method of the present invention. It includes both peptides and the oligomeric polypeptides of the invention. The polypeptides according to the invention can exhibit a highly regulated stability. In some cases, the polypeptides advantageously fuse irreversibly This may cause an allergic condition to a negligible level It means that it does not have a propensity for degradation that can lead to recurrence of possible symptoms. However, in certain other cases, the polypeptide Remain oligomerized during the manufacturing and / or bulk handling stages, Release does not pose a risk of exposure of the polypeptide to humans or animals Sometimes it is convenient. Cleavage of a linkage between polypeptides may be, for example, in a physical state, such as pH, , Reduction or oxidation potential. Furthermore, the presence of certain compounds can be determined, for example, by dissociation into lower dimensional oligomers or monomers. Can be obtained. Dissociation is particularly favorable when the activity of the polypeptide is reduced in the oligomer state. It may be convenient.Composition The present invention relates to at least one polypeptide of the present invention and / or at least one Also related to compositions comprising the oligomeric polypeptide. The composition may further comprise a detergent, such as soap, household goods, pesticides, manufactured by Personal Care. , Food and / or feed used for the treatment of cosmetics, cosmetics, perfumes, medicines, textiles And other components commonly used in the present invention.detergent According to the present invention, the polypeptide of the present invention may be an enzyme used in detergents. . It may be included in the detergent in the form of dust-free granules, stabilizing solutions or protected enzymes. Nothing Dust granules are, for example, U.S. Pat.Nos. 4,106,991 and 4,661,452 (both Novo Industri A / S ) And optionally coated by methods known in the art. May be used. Examples of waxy coatings are average molecules of 1,000-20,000 Poly (ethylene oxide) product with quantity (polyethylene glycol; PEG); 1 Ethoxylated nonylphenols having 6 to 50 ethylene oxide units; The alcohol contains 12 to 20 carbon atoms And ethoxylated fatty alcohols having 15 to 80 ethylene oxide units; Fatty acids; and mono- and di- and tri-glycerides of fatty acids. Fluid bed technology An example of a film-forming coating material suitable for surgical application is described in Patent GB1,483,591 Have been. Liquid enzymes include, for example, polyols, such as propylene glycol, sugars Or by adding a sugar alcohol, lactic acid or boric acid according to established methods Can be stabilized. Other enzyme stabilizers are known in the art. Protective enzyme Can be prepared according to the method disclosed in EP 238,216. The detergent may be in any conventional form, such as a powder, granules, paste or liquid . Liquid detergents may be aqueous and generally contain up to 70% water and 0-30% organic solvent. May be included or non-aqueous. The detergent comprises one or more surfactants, each of which is anionic and non-ionic. It may be ionic, cationic or zwitterionic. This detergent is usually 0-50% On-surfactants such as linear alkylgensulfonate (LAS), alpha -Olefin sulfonate (AOS), alkyl sulfate (fatty alcohol sulf (AS), alcohol ethoxy sulfate (AEOS or AES), secondary alkance Rufonate (SAS), alpha-sulfo fatty acid methyl ester, alkyl- It will contain lucenyl succinic acid, or soap. It is only 0-40% non-ionic Surfactants such as alcohol ethoxylate (AEO or AE), carboxylation Alcohol ethoxylate, nonylphenol ethoxylate, alkyl polyg Lycoside, alkyldimethylamineoxy, ethoxylated fatty acid monoethanol Amide, fatty acid monoethanolamine, or polyhydroxyalkyl fatty acid amide (For example, described in WO92 / 06154). The detergent may further comprise one or more enzymes such as amylase, lipase, Cutinase, protease, cellulase, peroxidase and oxidase May be included. The detergent may be 1-65% of a washing builder or complexing agent such as zeolite, diphospho Phosphate, triphosphate, phosphonate, citrate, nitrilotriacetic acid (NTA) , Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), diethylenetriaminepentaacetic acid (DTMPA), Alkyl- or alkenyl succinic acid, soluble silicate or layered silicate (e.g. For example, SKS-6) derived from Hoechst may be included. Detergent does not use builders, that is, cleaning builders It may not be essentially contained. The detergent may comprise one or more polymers. An example is carboxymethi Cellulose (CMC), poly (vinyl pyrrolidone) (PVP), polyethylene glycol (P EG), poly (vinyl alcohol) (PVA), polycarboxylates such as polyacrylic , Maleic acid / acrylic acid copolymer, and lauryl methacrylate / a It may be a crylic acid copolymer. The detergent may contain bleach, which is H_TwoO_TwoOf origin, for example perborate or percarbonate There is tetraacetylethylenediamine (TAED) or nonanoyloxybenze Including those that can be combined with peracid-forming bleach activators, such as sulfonates (NOBS) May consist of Alternatively, the bleach may be of the amide, imide or sulfone type, for example. May be comprised of a peracid. The detergents of the present invention comprising the polypeptides of the present invention can be prepared using conventional stabilizers, such as Riol, such as propylene glycol or glycerol, sugar or sugar alcohol Stabilized using lactic acid, boric acid, or boric acid derivatives, such as aromatic borate esters And the composition can be prepared, for example, as described in WO92 / 19709 and WO92 / 19708. Can be prescribed. The detergent may also contain other conventional cleaning ingredients, such as fabric conditioners, such as Clay, foam accelerator, foam inhibitor, corrosion inhibitor, soil suspending agent, soil redeposition inhibitor , Dyes, bactericides, optical brighteners or fragrances. pH (measured in aqueous solution at working concentration) is usually neutral or alkaline, eg It may be in the range of 7-11. Particular embodiments of the detergent falling within the scope of the present invention include the following: 1) Formulated as granules having a bulk density of 600 g / β or more, including Detergent consisting of -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 7-12% -Alcohol ethoxy sulfate (Eg C_12-18Alcohol, 1-2EO) Or an alkyl sulfate (eg, C_16-18) 1-4% -Alcohol ethoxylate (Eg C_14-15Alcohol, 7EO) 5-9% -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 14-20% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 2-6% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 15-22% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 0-6% -Sodium citrate / citric acid (C₆H, Na_ThreeO₇/ C₆H₈O₇) 0-15% -Sodium perborate (NaBO_Three・ H_TwoO) 11-18% -TAED 2-6% -Carboxymethyl cellulose 0-2% Polymer (eg maleic / acrylic acid) Copolymer, PVP, PEG) 0-3% -Enzyme 0-5% -Minor components (e.g. foam inhibitors, fragrances, Fluorescent brightener, optical bleach) 0-5% 2) formulated as granules having a bulk density of 600 g / l or more, including Detergent consisting of -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 6-11% -Alcohol ethoxy sulfate (Eg C_12-18Alcohol, 1-2EO) Or an alkyl sulfate (eg, C_16-18) 1-3% -Alcohol ethoxylate (Eg C_14-15Alcohol, 7EO) 5-9% -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 15-21% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 1-4% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 24-34% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 4-10% -Sodium citrate / citric acid (C₆H_FiveNa_ThreeO₇/ C₆H₈O₇) 0-15% -Carboxymethyl cellulose 0-2% Polymer (eg maleic / acrylic acid) Copolymer, PVP, PEG) 1-6% -Enzyme 0-5% -Trace components (e.g., foam inhibitors, fragrances) 0-5% 3) Formulated as granules having a bulk density of 600 g / l or more, including Detergent consisting of -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 5-9% -Alcohol ethoxylate (Eg C_12-15Alcohol, 7EO) 7-14% Soap as a fatty acid (eg C_16-22Fatty acids) 1-3% -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 10-17% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 3-9% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 23-33% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 0-4% -Sodium perborate (NaBO_Three・ H_TwoO) 8-16% -TAED 2-8% -Phosphonates (eg EDTMPA) 0-1% -Carboxymethyl cellulose 0-2% Polymer (eg maleic / acrylic acid) Copolymer, PVP, PEG) 0-3% -Enzyme 0-5% -Minor components (e.g. foam inhibitors, fragrances, Fluorescent whitening agent) 0-5% 4) Formulated as granules having a bulk density of 600 g / l or more, including Detergent consisting of -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 8-12% -Alcohol ethoxylate (Eg C_12-15Alcohol, 7EO) 10-25% -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 14-22% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 1-5% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 25-35% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 0-10% -Carboxymethyl cellulose 0-2% Polymer (eg maleic / acrylic acid) Copolymer, PVP, PEG) 1-3% -Enzyme 0-5% -Trace components (e.g., foam inhibitors, fragrances) 0-5% 5) an aqueous liquid detergent comprising: -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 15-21% -Alcohol ethoxylates (eg C_12-15 Alcohol, 7EO or C_12-15Alcohol, 5EO) 12-18% -Soap (eg oleic acid) as fatty acid 3-13% Alkenyl succinic acid (C_12-14) 0-13% -Aminoethanol 8-18% -Citric acid 2-18% -Phosphonate 0-3% -Polymers (eg PVP, PEG) 0-3% -Borate (e.g. B_FourO₇) 0-2% -Ethanol 0-3% -Propylene glycol 8-14% -Enzyme 0-5% -Minor components (e.g., dispersants, foam inhibitors, Perfume, fluorescent whitening agent) 0-5% 6) Aqueous structured liquid detergent comprising: -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 15-21% -Alcohol ethoxylates (eg C_12-15 Alcohol, 7EO or C_12-15Alcohol, 5EO) 3-9% Soap as fatty acid (eg oleic acid) 3-10% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 14-22% -Potassium citrate 9-18% -Carboxymethyl cellulose 0-2% -Polymers (eg PVP, PEG) 0-3% -Borate (e.g. B_FourO₇) 0-2% Fixing polymers such as lauryl methacrylate Rate / acrylic acid copolymer; 25: 1 Molar ratio; MW3800 0-3% -Glycerol 0-5% -Enzyme 0-5% -Minor components (eg dispersants, foam inhibitors, Perfume, fluorescent whitening agent) 0-5% 7) formulated as granules having a bulk density of 600 g / l or more, including Detergent consisting of -Fatty alcohol sulfate 5-10% -Ethoxylated fatty acid monoethanolamide 3-9% -0-3% fatty acids as soap -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 5-10% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 1-4% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 20-40% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 2-8% -Sodium perborate (NaBO_Three・ H_TwoO) 12-18% -TAED 2-7% Polymer (eg maleic / acrylic acid) Copolymer, PEG) 1-5% -Enzyme 0-5% -Minor components (e.g. foam inhibitors, fragrances, Fluorescent whitening agent) 0-5% 8) a detergent, formulated as granules, comprising: -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 8-14% -Ethoxylated fatty acid monoethanolamide 5-11% -0-3% soap as fatty acid -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 4-10% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 1-4% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 30-50% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 3-11% -Sodium citrate (C₆H_FiveNa_ThreeO₇) 5-12% Polymer (eg maleic / acrylic acid) Copolymer, PVP, PEG) 1-5% -Enzyme 0-5% -Trace components (e.g., foam inhibitors, fragrances) 0-5% 9) Detergent formulated as granules, comprising: -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 6-12% -Nonionic surfactant 1-4% -2-6% soap as fatty acid -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 14-22% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 18-32% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 5-20% -Sodium citrate (C₆H_FiveNa_ThreeO₇) 3-8% -Sodium perborate (NaBO_Three・ H_TwoO) 4-9% -Bleach activator (eg NOBS or TAED) 1-5% -Carboxymethyl cellulose 0-2% -Polymers (eg polycarboxylates) Or PEG) 1-5% -Enzyme 0-5% -Trace components (eg, fragrances, optical brighteners) 0-5% 10) Aqueous liquid detergent comprising: -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 15-23% -Alcohol ethoxy sulfate (Eg C_12-15Alcohol, 2-3EO) 8-15% -Alcohol ethoxylates (eg C_12-15 Alcohol, 7EO or C_12-15Alcohol, 5EO) 3-9% Soap as fatty acid (eg lauric acid) 0-3% -Aminoethanol 1-5% -Sodium citrate 5-10% -Hygroscopic agents (eg toluene sulfonic acid Sodium) 2-6% -Borate (e.g. B_FourO₇) 0-2% -Carboxymethyl cellulose 0-1% -Ethanol 1-3% -Propylene glycol 2-5% -Enzyme 0-5% -Minor components (eg polymers, dispersants, Foam inhibitor, fragrance, fluorescent whitening agent) 0-5% 11) Aqueous liquid detergent comprising: -Linear alkyl benzene sulfonate (Calculated as acid) 20-32% -Alcohol ethoxylates (eg C_12-15 Alcohol, 7EO or C_12-15Alcohol, 5EO) 6-12% -Aminoethanol 2-6% -Citric acid 8-14% -Borate (e.g. B_FourO₇) 1-3% Polymer (eg maleic / acrylic acid) Copolymers, fixing polymers such as lauryl (Methacrylate / acrylic acid copolymer) 0-3% -Glycerol 3-8% -Enzyme 0-5% -Minor components (e.g., desiccants, dispersants, Foam inhibitor, fragrance, fluorescent whitening agent) 0-5% 12) Formulated as granules having a bulk density of 600 g / l or more, including Detergent consisting of -Anionic surfactant (linear alkyl benzene Sulfonate, alkyl sulfate, al Far-olefin sulfonate, alpha- Sulfo fatty acid methyl ester, alkane sulf (Honate, soap) 25-40% -Nonionic surfactants (For example, alcohol ethoxylate) 1 to 10% -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 8-25% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two5-15% -Sodium sulfate (Na_TwoSO_Four) 0-5% -Zeolite (NaAlSiO_Two) 15-28% -Sodium perborate (NaBO_Three・ 4H_TwoO) 0-20% -Bleaching activator (TAED or NOBS) 0-5% -Enzyme 0-5% -Trace components (eg, fragrances, optical brighteners) 0-3% 13) All or part of the linear alkylbenzene sulfonate is (C₁₂-C₁₈) Archi The detergent according to 1 to 12), which has been replaced with rusulfate 14) formulated as granules having a bulk density of 600 g / l or more, including Detergent consisting of − (C_12-18) Alkyl sulfate 9-15% -Alcohol ethoxylate 3-6% -Polyhydroxy fatty acid amide 1-5% -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 3-12% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 0-6% -Zeolite (NaAlSiO_Four) 10-20% -Layered disilicate (e.g. from Hoechst) SK56) 10-20% -Sodium citrate 4-8% -Sodium percarbonate (NaBO_Three・ H_TwoO) 13-22% -TAED 3-8% -Polymers (eg polycarboxylates) And PVP) 0-5% -Enzyme 0-5% -Minor components (e.g. foam inhibitors, fragrances, Fluorescent brightener, optical bleach) 0-5% 15) Formulated as granules having a bulk density of 600 g / l or more, including: Detergent − (C_12-C₁₈) Alkyl sulfate 4-8% -Alcohol ethoxylate 11-15% -Soap 1-4% -Zeolite MAP or Zeolite A 35-45% -Sodium carbonate (Na_TwoCO_Three) 2-8% -Soluble silicate (Na_TwoO ・ 2SiO_Two) 0-4% -Sodium percarbonate 13-22% -TAED 1-8% -Carboxymethylcellulose 0-3% -Polymers (eg polycarboxylates) And PVP) 0-3% -Enzyme 0-5% -Minor components such as optical brighteners, phosphonates, Fragrance) 0-3% 16) Stabilized or encapsulated peracid as an additional ingredient or in place of the bleach mentioned above The detergent according to 1) to 15), comprising: 17) Perborate replaces percarbonate 1), 3), 7), 9) and 12) On the detergent. 18) Including manganese catalyst, 1), 3), 7), 9), 12), 14) and 15) On the detergent. Manganese catalysts are, for example, `` Efficient manganese catalysts for low-te mperature bleaching ”Nature, 369, p.637-639, 1994 It may be. 19) Liquid nonionic surfactants such as linear alkoxylated primary alcohols, Non-aqueous cleaning solution containing ruder agent (for example, phosphonate), enzyme and alkali Detergent blended. This detergent is an anion It may also comprise a surfactant and / or a bleach. The enzymes of interest of the present invention may be incorporated at concentrations commonly used in detergents. Book In the detergent of the invention, the enzyme of interest having suppressed allergenicity is one liter of detergent solution. It may be added in an amount corresponding to 0.001 to 100 mg of enzyme per torr.Dishwashing liquid The polypeptide of the present invention having suppressed allergenicity is also effective in dishwashing detergent. It can be used appropriately. Dishwashing detergents can be anionic, nonionic, cationic, amphoteric or a mixture of these types Comprising a surfactant, which may be: Detergent is 0-90% nonionic surfactant, For example, containing low to non-effervescent ethoxylated propoxylated linear alcohols. Would. The detergent may comprise inorganic and / or organic cleaning builder monosalts. Cleaning builder It can be subclassified into phosphorus and non-phosphorus. Detergents usually contain from 1 to 90% of wash builders. If present, examples of phosphorus-containing inorganic alkali wash builders include water-soluble salts, Alkali metal pyrophosphate, orthophosphate, and polyphosphate Is included. If present, it is soluble in phosphorus-containing organic alkaline cleaning builders Alkali metal carbonates, borates and silicates and various types of water-insoluble binders Amorphous or amorphous aluminosilicate (of which zeolite is best known) Which is a typical example). Examples of suitable organic builders include alkali metals, ammonium and substituted anions. Monium, citrate, succinate, malonate, fatty acid sulfonate, carbo Xymethoxysuccinate, ammonium polyacetate, carboxylate, Recarboxylate, aminopolycarboxylate, polyacetylcarboxylate And poly Hydroxysulfonates. Other suitable organic builders include high molecular weight polymers and copolymers. Those known to have builder properties, such as suitable polyacrylic acids, poly Maleic and polyacrylic / polymaleic acid copolymers and salts thereof I will. Dishwashing detergents may include chlorine / bromine or oxygen based bleaches. Inorganic chlorine / bromine Examples of system bleaching agents are lithium hypochlorite and lithium hypobromite, sodium or calcium. , And chlorinated trisodium phosphate. Examples of organic chlorine / bromine bleach Cyclic N-bromo and N-chloroimides such as trichloroisocyanuric acid, Libromoisocyanuric acid, dibromoisocyanuric acid and dichloroisocyanuric acid And salts thereof having water-soluble cations such as potassium and sodium. Hydanthion compounds are also suitable. Oxygen bleaching agents, for example, those in the form of inorganic persalts are preferred, and as a bleaching precursor, Or a peroxyacid compound is preferred. Typical examples of suitable peroxy bleaching compounds are Lucali metal perborate (both tetrahydrate and monohydrate), alkali metal percarbonate, Persilicate and superphosphate. Preferred activating materials are TAED and glycerol tri Acetate. The dishwashing detergents according to the invention are customary stabilizers for enzymes, such as polyols, for example polyols. Propylene glycol, sugar or sugar alcohol, lactic acid, boric acid, or boric acid derivative, eg For example, it can be stabilized by using an aromatic borate. The dishwashing detergent according to the invention may further comprise conventional cleaning ingredients such as anti-floating materials, fillers, foams. Inhibitors, corrosion inhibitors, soil suspending agents, sealants, soil redeposition inhibitors, dehydrating agents, dyes, It may include bactericides, phosphors, thickeners and fragrances. Finally, the polypeptides of the present invention can be used in conventional dishwashing detergents, such as the following patent publications: Can be used in any of the listed detergents: EP518719, EP518720, EP518721, EP516533, EP516554, EP516555, GB2200132, D E3741617, DE3727911, DE4212166, DE4137470, DE3833047, WO93 / 17089, DE4205 071, WO52 / 09680, WO93 / 18129, WO93 / 04153, WO92 / 06157, WO92 / 08777, EP42912 4, WO93 / 21299, US5141664, EP561452, EP561446, GB2234980, WO93 / 03129, EP4 81547, EP530870, EP533239, EP554943, EP346137, US5112518, EP318204, EP31 8279, EP271155, EP271156, EP346136, GB2228945, CA2006687, WO93 / 25651, EP 530635, EP414197, US5240632.Textile applications A further polypeptide comprising an enzyme of the present invention with suppressed allergenicity is an enzyme Useful in applications for purposes in the textile industry, including the handling of granules or powders Can be used. Examples of textile applications are listed below: i. Cellulolytic enzymes provide a local variation in the color density of fabrics. Is widely used in the final finishing of denim clothing (enzyme-assisted Osh "). ii. Bio-policing In addition, cellulolytic enzymes are useful in bio-polishing processes. Ba Io-polishing fabrics for handling and appearance without compromising the wettability of the fabric This is a specific treatment of the yarn surface to improve the quality of the yarn. Bio-polishing is described, for example, in WO It can be obtained by applying the method described in 93/20278. iii. Size removal During the weaving of textiles, the yarn is subjected to considerable mechanical stress. Break To prevent them, they are usually coated with gelatinous material (size) )). The most common sizing agent is starch in its natural or modified form It is. Therefore, uniformity and durability are dependent on size removal from the fabric, so-called size Obtained only after removal. Depending on the size containing starch or modified starch Size reduction of the sized fabric is preferably through the use of an amylose degrading enzyme. Is encouraged. iv. Bleaching cleanliness In bleaching, clean catalase can serve to remove excess hydrogen peroxide. v. Silk cancer removal Protease removal of cancer on silk fibers. (`` Novo Enzymes for Silk Degum ming "application documents are available upon request.)Personal care applications In the field of personal care technology, the polypeptide according to the present invention attracts attention. Is done. The application examples are listed below. 1) Protease: Proteases are well-known active ingredients for contact lens cleaning . These hydrolyze the proteinaceous soil on the lens, rendering it soluble. Removal of proteinaceous soil is essential for comfortable wearing. Proteases are also an active ingredient in skin cleansing products. They are dead keratin Removes the upper skin of skin cells, thus making the skin appear brighter and fresher You. Proteases can be used in oral care products, especially in denture cleaning products and even toothpastes. Can be used. 2) Lipase: Lipase is an active ingredient in skin cleansing and acne resistant products for the removal of flexible skin lipids. Ingredients for cosmetics, and creams and lotions as active ingredients for skin care May be applied. Lipase is used for the effective removal of sebum and other fatty substances from the surface of the hair Hair washing products (eg, shampoos). Lipase is also an active ingredient in contact lens cleaning products, in which case They remove lipid deposits from the lens surface. 3) oxidoreductase: There are many well-known personal care products of oxidoreductase. Most Also common are oxidase (usually glucose oxidase) and H_TwoO_TwoGeneration with (Eg, glucose), which are peroxidases (eg, glucose). Usually with lactoperoxidase) eg SCN^-Or I^-Antimicrobial agents (SCNO^- ¹ Or I_Two) To initiate oxidation. This enzyme complex naturally occurs, for example, in milk and Those derived from liquids are known. This is an antidote to oral care products (mouth rinse, toothpaste, chewing gum) It is used commercially as microbial agents, where they produce glucose-forming amino acids. It can also be used in combination with loglucosidase. These agents are cosmetics for preservation Also known as Antimicrobial agents comprising a combination of oxidase and peroxidase are It is known in the cleaning of cut lenses. Other uses for oxidoreductase include oxidase in oxidized hair dyes, The use of peroxidase and laccase. In addition, free radicals formed on the surface of the skin (and hair) can cause aging of the skin ( Hair damage). Free radicals can cause fat film, collagen and cell destruction Activate the chain reaction. Free radical scavengers, such as Super Oki The use of side dismutase in cosmetics is known (R.L. Goldemberg, DCI, Nov. .93, 48-52). Protein disulfide isomerase (PDI) is also an oxidoreductase. It is for hair waving (reduction and re-oxidation of hair disulfide bonds) As well as the repair of damaged hair (where the damage is mainly due to existing disulfides Which is the reduction of a bond). 4) Glucanase / carbohydrase The plaque formed on the tooth surface consists mainly of polysaccharides. They are tooth surface Attach to microorganisms. Polysaccharides are mainly α-1,6-linked glucose (dextran ) And α-1,3-linked glucose (mutane). Various types of gluka Utilization of enzymes such as mutanase and dextranase helps hydrolysis of plaque , Making it easier to remove by mechanical action. Also, other types of biofilms, such as biofilms formed in lens cases Can be removed by the action of glucanase. 5) Antimicrobial polypeptide Antimicrobial polypeptides include cosmetics, acne resistant products, deodorants and shampoos It has a wide range of uses such as preservation.Food and feed The polypeptide with suppressed allergenicity according to the present invention is used in foods and feeds. And can be more preferably used. Particularly relevant polypeptides are proteases, β -Glucanase, amylase, pectinase, α-galactosidase, phytase It is an enzyme selected from the group of ze, xylanase and lipase.Use of zipper domains Finally, the present invention provides a zippered polypeptide for the suppressed allergenicity of a polypeptide. Related to the main use, which is to automatically transcribe polypeptides expressed by microorganisms. It can be any molecule that can self-multiply. Several zipper domain examples have already been published. In some embodiments, the zipper domain is a leucine zipper. The leucine zipper may be any known leucine zipper, A parallel helix of two or more leucine zippers grafted on a peptide Self-multiplication can occur as a result of coil association. In certain embodiments, the leucine zipper is the yeast transcription factor GCN4 or a variant thereof. is there. If it is desired to obtain a heterodimerized molecule, a zipper domain Can be Fos leucine zipper and Jun leucine zipper. In another embodiment of the invention, the zipper domain is a quad helix bundle or a modified version thereof It is. Zipper domains are conveniently for detergents, household items, pesticides, personal care products Used for the treatment of cosmetics, perfumes, medicines, textiles, food and feedstuffs Can be used to suppress the allergenicity of the polypeptide in In particular, a polypeptide comprising at least one zipper domain is The composition described above and / or, for example, can be suitably used for industrial use. The invention is further described in the following examples, which do not limit the scope of the invention in any way. Not something. Methods and materialsHost cells: Escherichia. Coli JM105 (Yanisch-Perron et al., Gene, 33, p.103-119, 1985) Epicurian coli XL-Blue cells (Stratagene Cloning Systems, Ca., USA) Escherichia coli MC1061 (Casadaban, M.J. et al., J. Mol. . Biol. 138, p.179-207, 1989).vector: The pFab3 expression vector is a precursor to pFab4 (Orum, H. et al., Nucleic Acids Resea rch, 21, p.4491-4498, 1993). This vector contains the pelB signal sequence (Lei et al., J. of. Bacteriol, vol. 169, p. 4379-4383, 1987), which is an inducible lacZ promoter. Under the control of The SfiI site in the pelB signal is a clone of the desired sequence Genetic products are expressed in frame with the signal sequence. Will be. Some parts of the pFab3 vector are not relevant to this study, so More removed. These sites are then used as follows for the introduction of the PCR fragment. Used as a place. Unlike control pFab4, pFab3 contains the start codon of lacZ and the pelB signal. Includes a 131 bp region with the null.Primer: A-Termamyl (SEQ ID NO 9): B-Termamyl (SEQ ID NO 10): The underlined nucleotides correspond to the termamyl sequence. Primer A-Termamyl is the SfiI restriction site and the last two codons of the pelB signal. Including Primer B-termamyl is a linker sequence (short hinged version of IgG3). Main) (Pluckthur, A et al., Biochemistry, 31, p. 1579-1584, 1992) and XmaI Includes the aging site.Plasmid: pDN1528 (PCT / DK94 / 00370)Signal sequence: pelB (Lei et al., J. of Bacteriol, vol. 169, p. 4379-4383, 1987)Linker sequence: IgG_ThreePart of the hinge (Pluckthun, A. et al., Biochemistry, 31, p. 1579-1584, 1992). ), material: fmol ™ DNA-Sequencing System (Cat .: # Q4100, Promega Corporation) , WI, USA). α-amylase EPS assay (Cat .: # 1442295, Boehringer Mannheim GmbH, Ma nnheim, Germany).enzyme: Termamyl® (available from Novo Nordisk A / S). Sfil (Cat .: # R6391, Promega Corporation, WI, USA). XmaI (Cat. # R6491, Promega Corporation, WI, USA). SacI (Cat .: # R6061, Promega Corporation, WI, USA). T4-DNA ligase (Cat .: # M1801, Promega Corporation, WI, USA). AmpliTag® DNA polymerase (Part No .: N8O1-0060, Perkin Elmer, Roche Molecular Systems, New Jersey, USA.).solution: PCR reaction buffer: dNTP (0.25 mM each), MgCl_Two 2.5 mM and lx PCR reaction Buffer-II (Part No .: N808-0009, Perkin Elmer, Roche Molecular Systems) , New Jersey, USA). T4-DNA ligase buffer (Cat .: # M1801, Promega Corporation, WI, USA) . SOC medium (Sambrook, J. et al., 1989, Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Second edition. Cold Spring Harbor Laboratory, New York, USA). 2xTY medium (Ausubel, FM et al. (Eds.), 1994. LB-Agar Current Protocols in Molecular Biology, Jo hn Wiley & Sons, Inc. and Greene Publishin g Associates, Inc., New York, USA). PEG-8000 (Cat .: # p2139, Sigma Chemical Company, MO, USA). PBS Vienna 20 Ausubel, F.M. (Eds.), 1994. Alkaline phosphatase buffer (pH = 9.0). NaCl 5.844g MgCl_Two : 6H_TwoO 1.02g Diethanolamine 10.51g The pH is adjusted to 9.0 with HCl, and Milli-Q water is added to make up 1 liter. Stop solution Disodium EDTA 74.44g K_TwoHPO_Four 174.2g NAH_Three 0.2g The pH is adjusted to 10 with about 22.5 g of KOH and made up to 1 liter with Milli-Q water.apparatus: Bio-Rad E. coli pulser (# 165-2103, Bio-Rad Laboratories, Ca., USA). Horizontal 11.14 agarose gel device (# 580-1068IL, Life Thechnologies, Inc., MD , USA). Applied Biosystems 394 DNA / RNA Synthesizer (Applied Biosystems, CA, U SA). Thermocycler Varius V 45 (Hans Landgraf, GmbH, Langenhagen, Germany ). Mini-PROTEAN II electrophoresis cell (# 165-2940, Bio-Rad Laboratories, Ca, USA) . Semi-dry electroblotter (JKA-Biotech, Denmark). HiTrap ™ chelate column (Code no. 17-0409-01, Pharmacia LKB, Biote chnology AB, Uppsala, Sweden). ELISA reader: Ceres 900 HDi. Method: All general techniques are described in Sambrook, J. et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual . Second edition, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, USA, 1989, and / or A usubel, F.M. et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. and Greene Publishing Associates, Inc., New York, USA, 199 Perform as described in 4. Geneclean II procedure (BIO IOI, Inc., CA, USA).Termamyl Amplification of Gene Encoding ® The PCR reaction was carried out in a volume of 50 μl of PCR reaction buffer, 1 mM each of primer A- and Performed in B-termamil and 10 ng DNA template. The reaction mixture is covered with mineral oil and stored at 94 ° C. for 5 minutes. Next Add 0.5 μl of AmpliTaq® (5 U / μl) with. This mixture is heated to 70 ° C. Hold at the annealing temperature for 5 minutes and the extension temperature of 72 ° C. for 2 minutes. After this primary incubation, use the PCR thermocycler Varius V45, The mixture was cycled 30 times (94 ° C for 1 minute, 70 ° C for 1 minute, 72 ° C for 1 minute) Then incubate at 72 ° C. for 10 minutes.GCN4 Of Leucine Zipper and Linker-Encoding Sequences Derived from Escherichia coli Four oligonucleotides were combined with an Applied Biosystems 394 DNA / RNA synthesizer. And synthesize according to the supplier's protocol. After synthesis, the oligonucleotide Autide, Ausubel, F.M. Denatured polyacrylamide gel according to 1994, supra. Purify using electrophoresis. Add 20 pmol of each oligonucleotide to a total volume of 40 μl Mix in 0 mM NaCl and anneal by incubation at 95 ° C for 5 minutes And slowly cooled to 16 ° C. over 3 hours. Is used for ligation. The four oligonucleotides are as follows:Antisense Zip Cys (1) (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 3) Antisense Zip (2), (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 4) Sense Zip (1), (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 5) Sense Zip Cys (2), (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 6) P means an oligonucleotide having a phosphoryl group at the 5 'end.XL -1 blue E.I. E. coli transformation Transformation is performed by electroporation. For this purpose, Epiki Uses Hulan-Coli XL1-Blue electroporation competent cells Use 3 μl of ligation DNA per 80 μl of cells. Electro Pole The Bio-Rad E.E. set at 25 μF, 2.5 kV and 200 Ohm. For use with a coli pulser And implement it.E. FIG. Transformation of E. coli JM105 E. FIG. Transformation of E. coli JM105 per 100 μl heat shock competent cells Perform by adding 3 μl of the ligation mixture. Preparation and shape of this cell Transformation is performed essentially as described in Sambrook et al. 1989 supra.Expression and isolation of periplasmic polypeptide E. FIG. Expression of Termamyl® dimer in E. coli JM105 is as follows: carry out. Has 100 μg / ml Ambicillin and 1% D (+) glucose An overnight culture of JM105 carrying the pAZ-1 plasmid in 2X TY medium was transferred to a single colony. Transfer the knee to the medium and incubate it with vigorous shaking at 37 ° C for 16 hours. It is prepared by preservation. 100 μl of this was added to 100 μg / ml ampicillin. And a starting culture of 100 ml of 2X TY medium with 0.1% D (+)-glucose and And incubate it in a 1 l shake flask at 37 ° C with vigorous stirring. Revise. OD550 = 1.0 Once reached, the temperature is adjusted to 30 ° C. and expression is reduced to isopropyl-β-D-thio. Induced by the addition of ogalactopyranoside (IPTG) to a final concentration of 1-5 mM I do. Induction is performed for 5 hours, then cells are pelleted by light centrifugation And release of polypeptides present in the periplasmic space of the cell Give osmotic shock. This is Neu, H.C. And Heppel, L.A., J. et al. Biol. Chem . 240, p.3685-3692, 1965.Characterization of the expressed Termamy®-zipper domain SDS-PAGE of periplasmic fractions of induced and uninduced cells harboring the pAZ-1 plasmid Gel 4-20% acrylamide (Laemmli, Nature, 227, p.680, 1970) Analyze using Protean II (Bio-Rad Laboratories, Richmond, Ca, USA). The sample is run with and without the reducing agent dithiothreitol. Clelands trial Dithiothreitol (DTT), also called a drug, can quantitatively reduce disulfide bonds (Cleland, W.W., Biochemistry, 3, p.480, 1964). One piece By Neuhoff et al., Electrophoresis, 9, p. .255-262, 1988) and the other gel binds the polypeptide to a PVDF membrane. billin-P (Cat .: #IPVH 20200, Millipore Corporation, MA, USA) Used for blotting using a mid-dry electroblotter. these Membranes were raised in rabbits against Termamyl® as primary antibody Anti-termamyl antibody (described in Ausubel, F.F. et al., Chapter 11, columns 12 and 13, supra, 1994. ) And anti-rabbit IgG horseradish peroxidase conjugate as second antibody (Cat .: L42007, medac, GmbH, Hamburg, Germany) You. These polypeptides are ECLTM Western Blotting Detection Reagent (Cat. : Detected by # RPN2106, Amersham Int., Buckinghamshire, England) And record the luminescence on a conventional X-ray film.Termamyl Purification of zipper dimer The expressed Termamyl® zipper dimer was purified from the fermentation broth. This was done with a poly-His tail added as an affinity tag. More specifically, purification used a 5 ml HiTrap ™ chelating column and its supplier Perform according to the recommendations of IMAC (Immobilized metal affinity chromatography ) Further details on the procedure can be found in Yip et al. (1994) Molecular Biotechnology vol.1, p.1 51-164; Fatiadi et al. (1987), CRC Critical Rev. Anal. Chem. 18, see p.1-44 Have been.Protein determination After purification and analysis of the Termamyl® zipper domain sample, Make a measurement. Measure the optical density of the sample at 280 nm to determine the protein concentration of the sample. Used for calculations. For this purpose, Lambert-Beer's law was changed to Termamyl (registered). Gill et al., Analytic, with calculated protein excitation coefficients for zipper dimers. al Biochemistry, 182, pp. 319-326, 1989. Used.IgG ₁ ELISA procedure for determination of positive guinea pigs ELISA microtiter plates were incubated with rabbit anti-Termamyl (carbonate buffer). ® AAN4080K 452-453 1: coated at 4000 and incubated overnight at 4 ° C. Incubate. The following day, plates were time-blocked with 2% BSA and And wash three times with PBS Tween 20. Termamyl® PPX3328 1 μg enzyme protein Plate / ml and added to the plate, incubate for 1 hour, then PBS Tween 2 Washed three times with 0. Transfer all guinea pig samples to 25 μl serum and 25 μl PBS buffer. Plates, add 3 hours incubation, and add PBS Wash 3 times with Ine 20. Then goat anti-guinea pig IgG₁(Diluted 1: 4000 in PBS buffer) Incubate for 1 hour and wash 3 times with PBS Twin 20. Arca Rephosphatase rabbit anti-goat was added (diluted 1: 8000) and incubated for 1 hour. Incubate twice with PBS Tween 20 and diethanolamine buffer And wash once. Alkaline phosphatase with p-nitrophenyl phosphate at 37 ° C for 30 minutes And develop with calcium / sodium buffer (pH = 10) containing EDTA Stop and measure at OD405 / 650 using an ELISA reader. Six sets of double blinds are included in all ELISA plates. Positive and negative serum values were calculated as the mean blind value plus two standard deviations. Calculate. This provides 95% accuracy. This inspection is detailed in ED-951542, available on request from Novo Nordisk A / S. It is described well. Example Example 1Termamyl Amplification and Cloning of Gene Encoding ® Design primers A-termamyl and B-termamyl and apply Synthesized on a Biosystems 394 DNA / RNA synthesizer. Termamyl (registered trademark) is used as a template with a gene encoding Termamyl (registered trademark). Was amplified using the plasmid pDN1528 containing the gene encoding The PCR product of the 1.5 kb fragment was subjected to the Geneclean-II procedure (BIO IOI, Inc., Ca., U Purified by preparative agarose electrophoresis according to (SA). Example 2PCR Product cloning A purified 1.5 kb DNA fragment containing the sequence encoding Termamyl® The digest was digested with 10 U of SfiI / 1 μg of DNA at 50 ° C. for 2 hours. At that time, The mixture was covered with mineral oil. Following the Geneclean-II procedure, the DNA fragment was digested with 10 U of XmaI / 1 μg DNA. Further digestion was performed at 37 ° C. for 2 hours. Digest the DNA again using the Geneclean-II procedure And purified, and finally ligated to the prepared SfiI and XmaI digested pFab3. I did. 10 μl of the ligation mixture contained 0.2 μg of insert DNA and 0.2 μg. μg of digestion vector pFab3 was included. This ligation is for 1U T4-DNA ligature The reaction was performed at 16 ° C for 2 hours and at 4 ° C for 14 hours. The ligated material is placed as described above under Epicurean Cori XL 1-Blue Element. It was used to transform competent cells. Example 3Identification of appropriate clones Immediately after electroporation, add 1 ml of freshly prepared SOC medium, The transformed cells were vigorously shaken at 37 ° C. for 1 hour to give 100 μg / ml ampicillin and And 12.5 μg / ml tetracycline on an LB-agar plate containing Incubate overnight at 37 ° C. The next day, pick a clone randomly and 100μ 14 ml polyp containing g / ml ampicillin and 12.5 μg / ml tetracycline Transferred to ropylene tubes. Incubate overnight at 37 ° C After shaking at 250 and 250 rpm, the plasmid DNA minipreps were passed through Sambrook et al. Prepared. The isolated plasmid DNA was analyzed by digestion with SfiI and XmaI. The digested plasmid DNA was analyzed on a 1% agarose, 1% TBE gel. Was. The appearance of a 1.5 kb DNA fragment indicates that the clone contains the correct fragment size. Showed presence. For further confirmation of cloned genes, see Promega Corporation DNA sequencing was performed using the derived fmol ™ DNA sequencing system. Te rmamyl® Example 4Leucine zipper Encodes the leucine zipper of the yeast transcriptional activator GCN4 (O'Shea et al., Science, 243, pp. 538-542, 1989), and even more flexible C containing cysteine amino acid residues. Introduction of a sequence that also encodes a terminal extension peptide requires four overlapping oligonucleotides (See method section). For ligation, add 5 μl of the annealing mixture to T4-DNA ligase buffer. 5% PEG-8000, 1 unit T4-DNA The ligated material was used as described above for E. coli. For transforming E. coli JM105 Using. Example 5Termamyl Identification of Clones Containing Leucine Zipper Constructs Immediately after transformation, 1 ml of freshly prepared SOC medium is added and cells are incubated at 37 ° C. Shake vigorously for 1 hour, place in selection plate and incubate at 37 ° C overnight I did it. The next day, clones were picked randomly and 2 ml L containing 100 μg / ml ampicillin. Transferred to a 14 ml polypropylene tube containing B medium. Incubate overnight at 37 ° C After incubation and shaking at 250 rpm, the plasmid DNA minipreps were transferred to Sambrook et al. Prepared according to 1989, supra. The isolated plasmid DNA was transferred to NruI (leucine zipper). -Introduced by DNA fragment) and digested and undigested plasmid DNA Analyzed on 1% agarose, 1x TBE gel. 4606 bp in NruI digested sample The emergence of a linear plasmid from a clone comprising a leucine zipper fragment Suggested the existence of. For further confirmation of cloned fragments, see Promega Co. Performed by sequencing using the fmol ™ DNA sequencing system from rporation. Was. Example 6Expression of dimerized Termamyl® JM105 cells harboring plasmid pAZ-1 were fused as described above with the fusion polypeptide pelB Signal-Termamyl®-linker-to express leucine zipper Induced. Each fusion polypeptide is expressed with another identical fusion polypeptide during expression. Dimerize. Cells to release the proteins present in the periplasm Subjected to osmotic shock. Ants of isolates from both induced and uninduced cells The coat was analyzed by SDS-PAGE. Reduce the sample (sample containing DTT) and non-reduce ( (Sample without DTT). Coomassie blue staining of polypeptide bands Discrimination was performed by staining with a material. A non-reduced sample of induced cells is A distinct band not present in the sample was shown at about 120 kDa (see FIG. 3). . Reduced samples from induced cells show a distinct band at about 60 kDa, while At that time, there was no band at 120 kDa (see FIG. 4). For samples of uninduced cells And a 60 kDa band was observed. Similar to above Gel onto the PVDP membrane via Western blot procedure as described above. Used to transfer. A non-reduced sample of the 120 kDa band is available with Termamyl® To confirm the expression of Termamyl® as a dimer (See FIG. 5). Example 7Α-Amylase activity of unpurified Termamyl-dimer Termamyl®-dimer as a test for α-amylase activity A sample of the Periplasma isolate was analyzed. By electrophoresis analysis, this sample Was estimated to contain about 0.5 mg / ml Termamyl®-dimer. Sample dilution series were tested in an α-amylase assay (material and method Section) and as a dilution series of Termamyl® of known activity . This assay showed that the dimer retained more than 50% of the wild-type activity . Example 8Introduction of purification tag Termamyl®-C-terminal of zipper protein as in-frame insertion in between A purification tag was introduced at the end. This is the factor Xa site and the amino acid sequence His-His- Termamyl®-zipper protein with a C-terminal tail consisting of His This results in a nucleotide sequence encoding the quality (see sequence data). For this purpose Four oligonucleotides were used for this (see below). Applied Biosystems 394 DNA / RNA Synthesizer According to the protocol, four kinds of oligonucleotides were synthesized. After synthesis, the oligonucleotide Tide was denatured polyacrylamide gel electrophoresis according to Ausubel, FM et al., Supra, 1994. Purification was carried out using the action. Mix 20 pmol of each oligonucleotide with 40 μl total volume of 100 mM NaCl and mix Anneal by incubation at 5 ° C for 5 minutes and 16 ° C for 3 hours Cool slowly. Use this annealing mixture for ligation Was. The four oligonucleotides were as follows:Antisense Zip-Xa-His (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 7) Antisense Zip, (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 4) Sense Zip, (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 5) Sense Zip-Xa-His, (XmaI-SacI) (SEQ ID NO 8) P represents an oligonucleotide having a phosphoryl group at the 5 'end. Oligonucleotides have an overhang when hybridized The other pairs with the SacI site. Hybridized oligonucleotides And competent E. Transformation of E. coli JM105 was performed according to Example 4 and materials and methods. Section essentially as described. From this transformation, positive clones were identified as described in Example 5. And again the DNA sequence was confirmed by DNA sequencing. Furthermore, dimer Term amyl® was expressed as described in Example 6. Example 9Allergenic tracking of the dimer Termamyl® Obtain 20 Dunkin Hartley guinea pigs from Novo Nordisk A / S upon request 1.0 μg of Termamyl® monomer as described in ED-9513462. And 1.0 μg of Termamyl® dimer were administered intratracheally. All guinea pigs were immunized with IgG for 8 days using the above ELISA procedure.₁About the production of Tested (indicating an allergic reaction). Figure 6 shows the IgG during the tracking period.₁Shows the number of positive Dunkin Hartley guinea pigs You. From FIG. 6, it can be seen that the IgG₁The number of guinea pigs tested positive is Termam Less for Termamyl® dimer compared to yl® monomer You can see that. This indicates that the allergenic nature of Termamyl® is (Registered trademark) can be suppressed by combining it with a zipper domain .

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９６年１２月９日【補正内容】請求の範囲１．抑制されたアレルゲン性を有する微生物酵素を製造するための、ａ）前記酵素を製造できる微生物を培養する、そしてｂ）前記酵素を実質的に純粋な状態で回収する、ことによる方法であって、ここで前記微生物が、発現されたポリペプチド分子が自己多量化するような態様において改良されているものである、前記方法。２．前記微生物が、互いに作用可能式に連結された少なくとも一本のポリペプチド及び少なくとも一本のジッパードメインをコードする少なくとも一本のDNA 配列を含んで成る１又は複数種のDNA構築体の導入により改良されたものである、請求項１記載の方法。３．前記ジッパードメインが２，３，４，５，６又は７つのらせんを含んで成るαらせん束である、請求項２記載の方法。４．前記ジッパードメインがポリ（Ｌ−グルタミン）リピートの極性ジッパーである、請求項１及び２記載の方法。５．前記ジッパードメインが両性らせん束を含んで成る、請求項２〜３のいづれか１項記載の方法。６．前記ジッパードメインがロイシンジッパー又はその改質体である、請求項２，３及び５のいづれか１項記載の方法。７．前記ジッパードメインがヘテロダイマーの形成をもたらす、請求項６記載の方法。８．一のロイシンジッパーがFosロイシンジッパーであり、そして他方がJunロイシンジッパーである、請求項７記載の方法。９．システインが前記ロイシンジッパーの中に含まれている、請求項６〜８のいづれか１項記載の方法。 10．前記ジッパードメインがアンチパラレルの四重らせん束又はその改質体である、請求項２，３及び５のいづれか１項記載の方法。 11．前記DNA構築体が、前記ポリペプチドをコードするDNA配列と前記ジッパードメインをコードするDNA配列との間に作用可能式に挿入されたリンカー配列を含んで成る、請求項１〜10のいづれか１項記載の方法。 12．前記DNA配列がプロテアーゼ（金属、酸性、中性又はアルカリ性）、リパーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、リアーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、プルラナーゼ、ポリガラクシロナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシドリダクターゼ、トランスグルタミナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ及びペルオキシダーゼを含んで成る群から選ばれる少なくとも一種の酵素をコードする、請求項１〜11記載の方法。 13．前記DNA配列が約５kDa〜150kDa、好ましくは20kDa〜100kDa、特に20kDa〜 80kDaの分子量を有するポリペプチドをコードする、請求項１〜12のいづれか１項記載の方法。 14．前記酵素がTermamyl（登録商標）である、請求項１〜13のいづれか１項記載の方法。 15．前記多量化が二量化である、請求項１〜14のいづれか１項記載の方法。 16．前記多量化が三量化である、請求項１〜14のいづれか１項記載の方法。 17．前記多量化が四量化である、請求項１〜14のいづれか１項記載の方法。 18．前記微生物が細菌、酵母又は糸状菌である、請求項１〜17のいづれか１項記載の方法。 19．前記細菌が、グラム陽性菌、例えばバチルスの株、例えばＢ．スブチリス、Ｂ．リシェニホルミス、Ｂ．レンタス、Ｂ．ブレビス、Ｂ．ステアロサーモフィルス、Ｂ．アルカロフィルス、Ｂ．アミロリケファシエンス、Ｂ．コアギュランス、Ｂ．サーキュランス、Ｂ．ロータス、Ｂ．メガテリウムもしくはＢ．スリンジエンシスの株、又はストレプトマイセスの株、例えば、Ｓ．リビダンス、Ｓ．ミュリナスもしくはＳ．グリセウスの株、あるいはグラム陰性菌、例えばエッシェリヒア・コリを含んで成る群から選ばれる、請求項18記載の方法。 20．前記宿主細胞がＢ．リシェニホルミス又はＥ．コリである、請求項19記載の方法。 21．前記酵母が、サッカロマイセス種もしくはシゾサッカロマイセス種、特にサッカロマイセス・セレビジエもしくはサッカロマイセス・クルイベリの株、又はクルイベロマイセスの株、例えばＫ．ラクチス、ハンセヌラ、例えばＨ．ポリモルファ、又はピシア、特にＰ．パストリスを含んで成る群から選ばれる、請求項18記載の方法。 22．前記糸状菌が、アスペルギルス種、ニューロスポラ種、フサリウム種又はトリコデルマ種、特にＡ．オリザ、Ａ．ニドゥランスもしくはＡ．ニガー、又はＦ．オキシスポルムの株を含んで成る群から選ばれる、請求項18記載の方法。 23．互いに作用可能式に連結した、少なくとも一本のポリペプチド及び少なくとも一本のジッパードメインをコードするDNA配列を含んで成る抑制されたアレルゲン性を有するポリペプチドで製造するためのDNA構築体。 24．親酵素をコードするDNAと前記ジッパードメインをコードするDNAとの間に作用可能式に挿入されたリンカー配列を含んで成る、請求項23記載のDNA構築体。 25．発現されたときに少なくとも一種の酵素活性を示すDNA配列を含んで成る、請求項23及び24記載のDNA構築体。 26．プロテアーゼ（金属、酸性、中性又はアルカリ性）、リパーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、リアーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、プルラナーゼ、ポリガラクシロナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシドリダクターゼ、トランスグルタミナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ及びペルオキシダーゼを含んで成る群から選ばれる酵素を発現できる、請求項25記載のDNA構築体。 27．前記DNA配列が約５kDa〜150kDa、好ましくは20kDa〜100kDa、特に20kDa〜 80kDaの分子量を有するポリペプチドをコードする、請求項23〜26のいづれか１項記載のDNA構築体。 28．前記酵素がTermamyl（登録商標）である、請求項23〜27のいづれか１項記載のDNA構築体。 29．SEQ ID No.１に示すDNA配列を含んで成る、請求項23〜28のいづれか１項に記載のDNA構築体。 30．請求項23〜29のいづれか１項記載のDNA構築体を含んで成る、組換ベクター又は形質転換ビヒクル。 31．前記DNA構築体が分泌シグナルに作用可能式に連結されている、請求項30 記載のベクター。 32．前記DNA構築体がアフィニティータッグをコードする配列を含んで成る、請求項30及び31記載のベクター。 33．前記ベクターがpAZ-1プラスミドである、請求項30〜32のいづれか１項記載のベクター。 34．請求項23〜29のいづれか１項記載のDNA構築体又は請求項30〜33のいづれか１項記載の組換ベクター又は発現ベクターを含んで成る細胞。 35．前記細胞が細菌、酵母又は糸状菌である、請求項34記載の細胞。 36．前記細菌が、グラム陽性菌、例えばバチルスの株、例えばＢ．スブチリス、Ｂ．リシェニホルミス、Ｂ．レンタス、Ｂ．ブレビス、Ｂ．ステアロサーモフィルス、Ｂ．アルカロフィルス、Ｂ．アミロリケファシエンス、Ｂ．コアギュランス、Ｂ．サーキュランス、Ｂ．ロータス、Ｂ．メガテリウムもしくはＢ．スリンジエンシスの株、又はストレプトマイセスの株、例えば、Ｓ．リビダンス、Ｓ．ミュリナスもしくはＳ．グリセウスの株、あるいはグラム陰性菌、例えばエッシェリヒア・コリを含んで成る群から選ばれる、請求項35記載の細胞。 37．前記宿主細胞がＢ．リシェニホルミス又はＥ．コリである、請求項36記載の細胞。 38．前記酵母が、サッカロマイセス種もしくはシゾサッカロマイセス種、特にサッカロマイセス・セレビジエもしくはサッカロマイセス・クルイベリの株、又はクルイベロマイセスの株、例えばＫ．ラクチス、ハンセヌラ、例えばＨ．ポリモルファ、又はピシア、特にＰ．パストリスを含んで成る群から選ばれる、請求項35記載の細胞。 39．前記糸状菌が、アスペルギルス種、ニューロスポラ種、フサリウム種又はトリコデルマ種、特にＡ．オリザ、Ａ．ニドゥランスもしくはＡ．ニガー、又はＦ．オキシスポルムの株を含んで成る群から選ばれる、請求項35記載の細胞。 40．請求項１〜22のいづれかに従って製造された、抑制されたアレルゲン性を有する、酵素活性を示す微生物産生型ポリペプチド。 41．２〜10個のポリペプチド分子を含んで成る、請求項40記載のポリペプチド。 42．二量体である、請求項41記載のポリペプチド。 43．三量体である、請求項41記載のポリペプチド。 44．四量体である、請求項41記載のポリペプチド。 45．プロテアーゼ（金属、酸性、中性又はアルカリ性）、リパーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、リアーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、プルラナーゼ、ポリガラクシロナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシドリダクターゼ、トランスグルタミナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ及びペルオキシダーゼを含んで成る群から選ばれる酵素により発揮される少なくとも一種の酵素活性を示す、請求項40〜44のいづれか１項記載のポリペプチド。 46．約50kDa〜150kDa、好ましくは20kDa〜100kDa、特に20kDa〜80kDaの分子量をモノマーポリペプチドが有する、請求項40〜45のいづれか１項記載のポリペプチド。 47．前記酵素がα−アミラーゼ活性を示す、請求項40〜46のいづれか１項記載のポリペプチド。 48．少なくとも一本のジッパードメインに結合又は連結された少なくとも一本のポリペプチドに複合された、少なくとも一本のジッパードメインに結合又は連結された少なくとも一本のポリペプチドを含んで成る、抑制されたアレルゲン性を有する酵素活性を示すオリゴマーポリペプチド。 49．前記ジッパードメインがαらせん束を含んで成る、請求項48記載のオリゴマーポリペプチド。 50．前記αらせん束が２，３，４，５，６又は７つのらせんを含んで成る、請求項49記載のオリゴマーポリペプチド。 51．前記ジッパードメインが両性らせん束を含んで成る、請求項48〜50のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 52．前記ジッパードメインがポリ（Ｌ−グルタミン）リピートの極性ジッパー又はその改質体である、請求項48記載のオリゴマーポリペプチド。 53．前記ジッパードメインがロイシンジッパー又はその改質体である、請求項 48〜51のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 54．前記ジッパードメインがヘテロダイマーの形成をもたらす、請求項52及び 53記載のオリゴマーポリペプチド。 55．一のロイシンジッパーがFosロイシンジッパーであり、そして他方がJunロイシンジッパーである、請求項54記載のオリゴマーポリペプチド。 56．システインが前記ロイシンジッパーの中に含まれている、請求項53〜55のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 57．前記ジッパードメインがアンチパラレルの四重らせん束又はその改質体である、請求項48〜56のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 58．前記DNA構築体が、前記ポリペプチドをコードするDNA配列と前記ジッパードメインをコードするDNA配列との間に作用可能式に挿入されたリンカー配列を含んで成る、請求項48〜57のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 59．前記ポリペプチドが、プロテアーゼ（金属、酸性、中性又はアルカリ性）、リパーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、リアーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、プルラナーゼ、ポリガラクシロナーゼ、オキシダーゼ、ラッカーゼ、オキシドリダクターゼ、トランスグルタミナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、フィターゼ及びペルオキシダーゼを含んで成る群から選ばれる酵素により発揮される少なくとも一種の酵素活性を示す、請求項48〜58のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 60．約50kDa〜150kDa、好ましくは20kDa〜100kDa、特に20kDa〜80kDaの分子量をモノマーポリペプチドが有する、請求項48〜59のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 61．前記酵素がα−アミラーゼ活性を示す、請求項59〜60のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 62．前記ジッパードメインが前記ポリペプチドに、そのポリペプチドのＣ−末端において連結されている、請求項48〜58のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 63．前記ジッパードメインが前記ポリペプチドに、そのポリペプチドのＮ−末端において連結されている、請求項48〜58のいづれか１項記載のオリゴマーポリペプチド。 64．請求項40〜47のいづれか１項記載の少なくとも一種のポリペプチド及び／又は請求項48〜63のいづれか１項記載の少なくとも一種のポリペプチドを含んで成る組成物。 65．洗剤、家庭用品、農業、パーソナルケア製品、化粧品、香水、薬品、織物の処理用の組成物、食品及び／又は飼料に通常利用される成分を含んで成る、請求項64記載の組成物。 66．ポリペプチドのアレルゲン性を抑制するためのジッパードメインの利用。 67．前記ジッパードメインがポリペプチド分子の多量化のために用いられる、請求項66記載の利用。 68．請求項１〜22のいづれか１項に記載の方法のための、又は請求項48〜63のいづれか１項に記載のオリゴマーポリペプチドにおける、請求項66及び67記載の利用。 69．前記ジッパードメインが２，３，４，５，６又は７つのαらせん束を含んで成る、請求項66〜68のいづれか１項記載の利用。 70．前記ジッパードメインがポリ（Ｌ−グルタミン）リピートの極性ジッパー又はその改質体である、請求項66〜68のいづれか１項記載の利用。 71．前記ジッパードメインが両性らせん束を含んで成る、請求項68及び69のいづれか１項記載の利用。 72．前記ジッパードメインがロイシンジッパー又はその改質体である、請求項 68，69及び71のいづれか１項記載の利用。 73．前記ロイシンジッパーがFos-Junロイシンジッパーである、請求項72記載の利用。 74．システインがロイシンジッパーの中に含まれている、請求項72及び73のいづれか１項記載の利用。 75．前記ジッパードメインがアンチパラレルの四重らせん束又はその改質体である、請求項68，69及び71のいづれか１項記載の利用。 76．家庭用品における、請求項66〜75のいづれか１項記載の利用。 77．食器洗剤及び石けんバーを含む洗剤における、請求項66〜75のいづれか１項記載の利用。 78．パーソナルケア製品における、請求項66〜75のいづれか１項記載の利用。 79．義歯及び歯のための洗浄製品を含む口内ケア製品における、請求項78記載の利用。 80．クリーム及びローションを含む肌ケア製品における、請求項78記載の利用。 81．シャンプーを含むヘアーケア又はヘアートリートメント製品における、請求項78記載の利用。 82．コンタクトレンズ洗浄用製品における、請求項78記載の利用。 83．化粧品における、請求項66〜75のいづれか１項記載の利用。 84．薬品における、請求項66〜75のいづれか１項記載の利用。 85．農薬における、請求項66〜75のいづれか１項記載の利用。 86．食品及び飼料における、請求項66〜75のいづれか１項記載の利用。[Procedure of Amendment] Article 184-8, Paragraph 1 of the Patent Act [Submission date] December 9, 1996 [Correction contents] The scope of the claims 1. For producing a microbial enzyme having suppressed allergenicity, a) culturing a microorganism capable of producing said enzyme; b) recovering the enzyme in a substantially pure state; Wherein the microorganism is an expressed polypeptide molecule. Is improved in such a manner as to self-multiply. 2. At least one polypeppe wherein the microorganisms are operably linked to each other; At least one DNA encoding a tide and at least one zipper domain Improved by the introduction of one or more DNA constructs comprising the sequence The method of claim 1. 3. The zipper domain comprises 2, 3, 4, 5, 6, or 7 helices. 3. The method of claim 2, wherein the bundle is an alpha helical bundle. 4. The zipper domain is a poly (L-glutamine) repeat polar zipper The method according to claim 1, wherein 5. 4. The method of claim 2, wherein said zipper domain comprises an amphoteric helix bundle. The method according to claim 1. 6. The zipper domain is a leucine zipper or a modification thereof. 6. The method according to any one of 2, 3, and 5. 7. 7. The zipper domain results in heterodimer formation. the method of. 8. One leucine zipper is Fos leucine zipper and the other is Junro The method of claim 7, wherein the method is an isin zipper. 9. 9. The method of claim 6, wherein cysteine is contained in the leucine zipper. The method of any one of the preceding claims. Ten. The zipper domain is an antiparallel quad helix bundle or a modified product thereof. 6. The method according to any one of claims 2, 3 and 5, wherein 11． The DNA construct comprises a DNA sequence encoding the polypeptide and the zipper. A linker sequence operably inserted between the DNA sequence encoding the domain and A method according to any one of the preceding claims, comprising: 12． The DNA sequence is a protease (metallic, acidic, neutral or alkaline), Lyase, cellulase, amylase, lyase, xylanase, pectinase, pull Lanase, polygalactylonase, oxidase, laccase, oxidoreduct ターゼ, transglutaminase, α-galactosidase, phytase and pelase Encoding at least one enzyme selected from the group comprising oxidases, The method according to claim 1. 13. The DNA sequence is about 5 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 13. The method according to claim 1, which encodes a polypeptide having a molecular weight of 80 kDa. The method described in the section. 14. 14. The method according to any one of claims 1 to 13, wherein the enzyme is Termamyl (registered trademark). The method described. 15． 15. The method according to any one of claims 1 to 14, wherein said multimerization is dimerization. 16． 15. The method according to any one of claims 1 to 14, wherein the multimerization is a trimerization. 17． 15. The method according to any one of claims 1 to 14, wherein said multimerization is tetramerization. 18． 18. The method according to claim 1, wherein the microorganism is a bacterium, a yeast or a filamentous fungus. The described method. 19. The bacterium is a Gram-positive bacterium, such as a strain of Bacillus, such as B. Subtilis , B. Licheniholmis, B.S. Lentas, B. Brevis, B.S. Stearothermoff Ils, B.S. Alkaophilus, B.C. Amyloliquefaciens, B.A. Coagula B. Circulance, B. Lotus, b. Megaterium or B. Pickpocket Strains or Streptomyces strains, e.g. Livi Dance, S . Murinus or S.M. Griseus strains or Gram-negative bacteria such as 19. The method of claim 18, wherein the method is selected from the group comprising S. coli. 20. The host cell is B. Licheniformis or E. 20. The method according to claim 19, which is stiff. the method of. twenty one. The yeast is a Saccharomyces spp. Or Schizosaccharomyces spp., Especially A strain of Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces kluyberg, or Is a strain of Kluyveromyces, e.g. Lactis, Hansenula, e.g. Poly Morpha, or picia, especially Claims selected from the group comprising pastoris Item 18. The method according to Item 18. twenty two. The filamentous fungus, Aspergillus species, Neurospora species, Fusarium species or Trichoderma species, especially A. Oriza, A. Nidurans or A. Niger, or F. 19. The method of claim 18, wherein the method is selected from the group comprising a strain of Oxysporum. twenty three. At least one polypeptide and at least one polypeptide operably linked to each other; A suppressed array comprising a DNA sequence encoding both zipper domains A DNA construct to be produced with a polypeptide having rugenic properties. twenty four. Between the DNA encoding the parent enzyme and the DNA encoding the zipper domain Comprising an operably inserted linker sequence 24. The DNA construct according to claim 23. twenty five. Comprising a DNA sequence that exhibits at least one enzymatic activity when expressed The DNA construct according to any one of claims 23 and 24. 26. Protease (metallic, acidic, neutral or alkaline), lipase, cellular Ze, amylase, lyase, xylanase, pectinase, pullulanase, poly Galacylonase, oxidase, laccase, oxidoreductase, tolan Sglutaminase, α-galactosidase, phytase and peroxidase 26. The DNA construct of claim 25, wherein the DNA construct is capable of expressing an enzyme selected from the group consisting of: 27. The DNA sequence is about 5 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 27. Any one of claims 23 to 26, which encodes a polypeptide having a molecular weight of 80 kDa. The DNA construct according to the above item. 28. 28. The method according to any one of claims 23 to 27, wherein the enzyme is Termamyl (R). DNA construct shown. 29. 29. Any one of claims 23 to 28 comprising the DNA sequence shown in SEQ ID No. 1. 2. The DNA construct according to 1. 30. A recombinant vector comprising the DNA construct according to any one of claims 23 to 29. Or a transformation vehicle. 31. The DNA construct is operably linked to a secretion signal. The described vector. 32. The DNA construct comprises a sequence encoding an affinity tag, A vector according to claims 30 and 31. 33. 33. The method according to any one of claims 30 to 32, wherein the vector is a pAZ-1 plasmid. On the vector. 34. A DNA construct according to any one of claims 23 to 29 or any of claims 30 to 33. A cell comprising the recombinant vector or the expression vector according to claim 1. 35. 35. The cell of claim 34, wherein said cell is a bacterium, yeast or filamentous fungus. 36. The bacterium is a Gram-positive bacterium, such as a strain of Bacillus, such as B. Subtilis , B. Licheniholmis, B.S. Lentas, B. Brevis, B.S. Stearothermoff Ils, B.S. Alkaophilus, B.C. Amyloliquefaciens, B.A. Coagula B. Circulance, B. Lotus, b. Megaterium or B. Pickpocket Strains or Streptomyces strains, e.g. Livi Dance, S . Murinus or S.M. Griseus strains or Gram-negative bacteria such as 36. The cell of claim 35, wherein the cell is selected from the group comprising S. coli. 37. The host cell is B. Licheniformis or E. 37. The stiffness of claim 36. Cells. 38. The yeast is a Saccharomyces spp. Or Schizosaccharomyces spp., Especially A strain of Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces kluyberg, or Is a strain of Kluyveromyces, e.g. Lactis, Hansenula, e.g. Poly Morpha, or picia, especially Claims selected from the group comprising pastoris Item 36. The cell according to Item 35. 39. The filamentous fungus, Aspergillus species, Neurospora species, Fusarium species or Trichoderma species, especially A. Oriza, A. Nidurans or A. Niger, or F. 36. The cell of claim 35, wherein the cell is selected from the group comprising a strain of Oxysporum. 40. A reduced allergenicity produced according to any of claims 1 to 22. A microorganism-produced polypeptide having enzymatic activity. 41. The polypeptide of claim 40, comprising 2-10 polypeptide molecules. . 42. 42. The polypeptide of claim 41, which is a dimer. 43. 42. The polypeptide of claim 41, which is a trimer. 44. 42. The polypeptide of claim 41, which is a tetramer. 45. Protease (metallic, acidic, neutral or alkaline), lipase, cellular Ze, amylase, lyase, xylanase, pectinase, pullulanase, poly Galacylonase, oxidase, laccase, oxidoreductase, tolan Sglutaminase, α-galactosidase, phytase and peroxidase Exhibits at least one enzyme activity exerted by an enzyme selected from the group consisting of A polypeptide according to any one of claims 40 to 44. 46. Molecular weight of about 50 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 80 kDa The polypeptide of any one of claims 40 to 45, wherein the monomer polypeptide has Chid. 47. 47. The method according to any one of claims 40 to 46, wherein the enzyme exhibits α-amylase activity. Polypeptide. 48. At least one attached or linked to at least one zipper domain Binds or is linked to at least one zipper domain conjugated to Inhibited allergenicity comprising at least one ligated polypeptide An oligomeric polypeptide exhibiting enzymatic activity having 49. The oligo of claim 48, wherein said zipper domain comprises an alpha helix bundle. Mer polypeptide. 50. Wherein the alpha helix bundle comprises 2, 3, 4, 5, 6, or 7 helices. 50. The oligomer polypeptide according to claim 49. 51. The method of any of claims 48 to 50, wherein the zipper domain comprises an amphoteric helix bundle. An oligomer polypeptide according to any one of the preceding claims. 52. The zipper domain is a poly (L-glutamine) repeat 49. The oligomer polypeptide according to claim 48, which is a polar zipper or a modified product thereof. 53. The zipper domain is a leucine zipper or a modification thereof. 52. The oligomer polypeptide according to any one of 48 to 51. 54. 52.The zipper domain results in heterodimer formation. 53. The oligomer polypeptide according to 53. 55. One leucine zipper is Fos leucine zipper and the other is Junro 55. The oligomer polypeptide according to claim 54, which is an isin zipper. 56. The method of claim 53, wherein cysteine is contained in the leucine zipper. The oligomer polypeptide according to any one of claims 1 to 7. 57. The zipper domain is an antiparallel quad helix bundle or a modified product thereof. 57. The oligomeric polypeptide of any one of claims 48-56. 58. The DNA construct comprises a DNA sequence encoding the polypeptide and the zipper. A linker sequence operably inserted between the DNA sequence encoding the domain and 58. The oligomeric polypeptide of any one of claims 48-57, comprising: 59. The polypeptide is a protease (metal, acidic, neutral or alkaline) , Lipase, cellulase, amylase, lyase, xylanase, pectinase , Pullulanase, polygalactylonase, oxidase, laccase, oxide Reductase, transglutaminase, α-galactosidase, phytase and At least exerted by an enzyme selected from the group consisting of 58. The oligomer polypeptide according to any one of claims 48 to 58, wherein the oligomer polypeptide also exhibits a type of enzyme activity. Puchido. 60. Molecular weight of about 50 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 80 kDa 60. The oligomer according to any one of claims 48 to 59, wherein the monomer polypeptide has -A polypeptide. 61. 61. The enzyme of any one of claims 59 to 60, wherein said enzyme exhibits [alpha] -amylase activity. Oligomeric polypeptides. 62. The zipper domain is attached to the polypeptide, the C-terminal of the polypeptide. The oligomeric polym according to any one of claims 48 to 58, linked at the ends. peptide. 63. The zipper domain is attached to the polypeptide at the N-terminus of the polypeptide. The oligomeric polym according to any one of claims 48 to 58, linked at the ends. peptide. 64. 48. At least one polypeptide according to any one of claims 40 to 47 and / or Or comprising at least one polypeptide according to any one of claims 48 to 63. A composition comprising: 65. Detergents, household goods, agriculture, personal care products, cosmetics, perfumes, chemicals, textiles A composition comprising a composition commonly used in the treatment of food, food and / or feed, 64. The composition of claim 64. 66. Use of zipper domains to suppress allergenicity of the polypeptide. 67. The zipper domain is used for multimerization of a polypeptide molecule, Use according to claim 66. 68. A method according to any one of claims 1 to 22, or of claims 48 to 63. 67. The oligomeric polypeptide of any one of claims 66 and 67. Use. 69. The zipper domain comprises 2, 3, 4, 5, 6, or 7 alpha-helical bundles 70. The use according to any one of claims 66 to 68, wherein 70. The zipper domain is a poly (L-glutamine) repeat 69. The use according to any one of claims 66 to 68, wherein the use is a polar zipper or a modified version thereof. 71. 70. The method of claims 68 and 69, wherein the zipper domain comprises an amphoteric helix bundle. Use as described in paragraph 1. 72. The zipper domain is a leucine zipper or a modification thereof. Use according to any one of items 68, 69 and 71. 73. 73.The leucine zipper is a Fos-Jun leucine zipper. Use of 74. 74. The method of claims 72 and 73 wherein the cysteine is contained in a leucine zipper. Use as described in paragraph 1. 75. The zipper domain is an antiparallel quad helix bundle or a modified product thereof. Use according to any one of claims 68, 69 and 71. 76. Use according to any one of claims 66 to 75 in household goods. 77. 76. Any one of claims 66 to 75 in detergents including dishwashing detergents and soap bars. Use described in section. 78. Use according to any one of claims 66 to 75 in a personal care product. 79. 78. An oral care product including a denture and tooth cleaning product. Use of 80. 78. Use according to claim 78 in skin care products including creams and lotions. . 81. Contracts for hair care or hair treatment products, including shampoos Use according to claim 78. 82. 79. Use according to claim 78 in a product for cleaning contact lenses. 83. Use according to any one of claims 66 to 75 in cosmetics. 84. 76. Use according to any one of claims 66 to 75 in medicine. 85. Use according to any one of claims 66 to 75 in pesticides. 86. Use according to any one of claims 66 to 75 in food and feed.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 7/46 Ａ６１Ｋ 7/46 Ｚ 7/48 7/48 Ｃ１１Ｄ 3/386 Ｃ１１Ｄ 3/386 Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/19 1/21 1/21 9/00 9/00 Ｇ０２Ｃ 13/00 Ｇ０２Ｃ 13/00 // Ｄ０６Ｍ 15/15 Ｄ０６Ｍ 15/15 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code FI A61K 7/46 A61K 7/46 Z 7/48 7/48 C11D 3/386 C11D 3/386 C12N 1/19 C12N 1/19 1 / 21 1/21 9/00 9/00 G02C 13/00 G02C 13/00 // D06M 15/15 D06M 15/15 (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG) , AP (KE, LS, MW, SD, SZ, UG), AL, AM, AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, GE, HU, I , JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TT, UA, UG, US, UZ, VN

Claims

[Claims] 1. For producing a polypeptide having suppressed allergenicity, a) culturing a microorganism capable of producing said polypeptide; b) recovering said polypeptide in a substantially pure state; Wherein the microorganism expresses the expressed polypeptide automatically. Such a method, which is improved in a self-multiplying manner. 2. At least one polypeppe wherein the microorganisms are operably linked to each other; At least one DNA encoding a tide and at least one zipper domain Improved by the introduction of one or more DNA constructs comprising the sequence The method of claim 1. 3. The zipper domain comprises 2, 3, 4, 5, 6, or 7 helices. 3. The method of claim 2, wherein the bundle is an alpha helical bundle. 4. The zipper domain is a poly (L-glutamine) repeat polar zipper The method according to claim 1, wherein 5. 4. The method of claim 2, wherein said zipper domain comprises an amphoteric helix bundle. The method according to claim 1. 6. The zipper domain is a leucine zipper or a modification thereof. 6. The method according to any one of 2, 3, and 5. 7. 7. The zipper domain results in heterodimer formation. the method of. 8. One leucine zipper is Fos leucine zipper and the other is Junro The method of claim 7, wherein the method is an isin zipper. 9. 9. The method of claim 6, wherein cysteine is contained in the leucine zipper. The method of any one of the preceding claims. Ten. The zipper domain is an antiparallel quad helix bundle or a modified product thereof. 6. The method according to any one of claims 2, 3 and 5, wherein 11． The DNA construct comprises a DNA sequence encoding the polypeptide and the zipper. A linker sequence operably inserted between the DNA sequence encoding the domain and A method according to any one of the preceding claims, comprising: 12． 12. The method according to claim 1, wherein the DNA sequence encodes an enzyme. Law. 13. The DNA sequence is a protease (metallic, acidic, neutral or alkaline), Lyase, cellulase, amylase, lyase, xylanase, pectinase, pull Lanase, polygalactylonase, oxidase, laccase, oxidoreduct ターゼ, transglutaminase, α-galactosidase, phytase and pelase Encoding at least one enzyme selected from the group comprising oxidases, 13. The method according to claim 12. 14. The DNA sequence is about 5 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 14. The method according to claim 1, which encodes a polypeptide having a molecular weight of 80 kDa. The method described in the section. 15． 15. The method according to any one of claims 1 to 14, wherein the enzyme is Termamyl (registered trademark). The method described. 16． 16. The method according to any one of claims 1 to 15, wherein said multimerization is dimerization. 17． 16. The method according to any one of claims 1 to 15, wherein the multimerization is a trimerization. 18． 16. The method according to any one of claims 1 to 15, wherein said multimerization is tetramerization. 19. 19. The method according to claim 1, wherein the microorganism is a bacterium, a yeast or a filamentous fungus. The described method. 20. The bacterium is a Gram-positive bacterium, such as a strain of Bacillus, such as B. Subtilis , B. Licheniholmis, B.S. Lentas, B. Brevis, B.S. Stearothermoff Ils, B.S. Alkaophilus, B.C. Amyloliquefaciens, B.A. Coagula B. Circulance, B. Lotus, b. Megaterium or B. Pickpocket Strains or Streptomyces strains, e.g. Livi Dance, S . Murinus or S.M. Griseus strains or Gram-negative bacteria such as 20. The method of claim 19, wherein the method is selected from the group comprising S. coli. twenty one. The host cell is B. Licheniformis or E. 21. The stiffness according to claim 20. the method of. twenty two. The yeast is a Saccharomyces spp. Or Schizosaccharomyces spp., Especially A strain of Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces kluyberg, or Is a strain of Kluyveromyces, e.g. Lactis, Hansenula, e.g. Poly Morpha, or picia, especially Claims selected from the group comprising pastoris Item 19. The method according to Item 19. twenty three. The filamentous fungus, Aspergillus species, Neurospora species, Fusarium species or Trichoderma species, especially A. Oriza, A. Nidurans or A. Niger, or F. 20. The method of claim 19, wherein the method is selected from the group comprising a strain of Oxysporum. twenty four. At least one polypeptide and at least one polypeptide operably linked to each other; A suppressed array comprising a DNA sequence encoding both zipper domains A DNA construct to be produced with a polypeptide having rugenic properties. twenty five. DNA encoding the parent polypeptide and DNA encoding the zipper domain 25.The DN of claim 24, comprising a linker sequence operably inserted between A construct. 26. Comprising a DNA sequence that exhibits at least one enzymatic activity when expressed The DNA construct according to claims 24 and 25. 27. Protease (metallic, acidic, neutral or alkaline), lipase, cellular Ze, amylase, lyase, xylanase, pectinase, pullulanase, poly Galacylonase, oxidase, laccase, oxidoreductase, tolan Sglutaminase, α-galactosidase, phytase and peroxidase 27. The DNA construct of claim 26, wherein the DNA construct is capable of expressing an enzyme selected from the group comprising. 28. The DNA sequence is about 5 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 28. Any one of claims 24-27 encoding a polypeptide having a molecular weight of 80 kDa. The DNA construct according to the above item. 29. 29. The method according to any one of claims 24 to 28, wherein the enzyme is Termamyl (R). DNA construct shown. 30. 30. Any one of claims 24-29 comprising the DNA sequence shown in SEQ ID No. 1. 2. The DNA construct according to 1. 31. A recombinant vector comprising the DNA construct according to any one of claims 24 to 30. Or a transformation vehicle. 32. 32.The DNA construct is operably linked to a secretion signal. The described vector. 33. The DNA construct comprises a sequence encoding an affinity tag, A vector according to claims 31 and 32. 34. 34. The method according to any one of claims 31 to 33, wherein the vector is a pAZ-1 plasmid. On the vector. 35. 31. The DNA construct according to any one of claims 24 to 30, or claim 31. A cell comprising the recombinant vector or the expression vector according to any one of claims to 34. 36. 36. The cell of claim 35, wherein said cell is a bacterium, yeast or filamentous fungus. 37. The bacterium is a Gram-positive bacterium, such as a strain of Bacillus, such as B. Subtilis , B. Licheniholmis, B.S. Lentas, B. Brevis, B.S. Stearothermoff Ils, B.S. Alkaophilus, B.C. Amyloliquefaciens, B.A. Coagula B. Circulance, B. Lotus, b. Megaterium or B. Pickpocket Strains or Streptomyces strains, e.g. Livi Dance, S . Murinus or S.M. Griseus strains or Gram-negative bacteria such as 37. The cell of claim 36, wherein the cell is selected from the group comprising S. coli. 38. The host cell is B. Licheniformis or E. 38. The stiffness of claim 37. Cells. 39. The yeast is a Saccharomyces spp. Or Schizosaccharomyces spp., Especially A strain of Saccharomyces cerevisiae or Saccharomyces kluyberg, or Is a strain of Kluyveromyces, e.g. Lactis, Hansenula, e.g. Poly Morpha, or picia, especially Claims selected from the group comprising pastoris Item 36. The cell according to Item 36. 40. The filamentous fungus, Aspergillus species, Neurospora species, Fusarium species or Trichoderma species, especially A. Oriza, A. Nidurans or A. Niger, or F. 37. The cell of claim 36, wherein the cell is selected from the group comprising a strain of Oxysporum. 41. A reduced allergenicity produced according to any of claims 1 to 23. A microorganism-produced polypeptide. 42. The polypeptide of claim 41, comprising 2 to 10 polypeptide molecules. . 43. 43. The polypeptide of claim 42, which is a dimer. 44. 43. The polypeptide of claim 42, which is a trimer. 45. 43. The polypeptide of claim 42, which is a tetramer. 46. 46. The polypeptide according to any one of claims 41 to 45, wherein the polypeptide exhibits enzymatic activity. 47. Protease (metallic, acidic, neutral or alkaline), lipase, cellular Ze, amylase, lyase, xylanase, pectinase, pullulanase, poly Galacylonase, oxidase, laccase, oxidoreductase, tolan Sglutaminase, α-galactosidase, phytase and peroxidase Exhibits at least one enzyme activity exerted by an enzyme selected from the group consisting of 47. The polypeptide of claim 46. 48. Molecular weight of about 50 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 80 kDa 48. The polypeptide of any one of claims 41 to 47, wherein the monomeric polypeptide has Chid. 49. 49. The method according to any one of claims 41 to 48, wherein the enzyme exhibits α-amylase activity. Polypeptide. 50. At least one attached or linked to at least one zipper domain Binds or is linked to at least one zipper domain conjugated to Inhibited allergenicity comprising at least one ligated polypeptide An oligomeric polypeptide having the formula: 51. The oligo of claim 50, wherein said zipper domain comprises an alpha helix bundle. Mer polypeptide. 52. The α-helix bundle contains 2, 3, 4, 5, 6, or 7 helices; 52. The oligomeric polypeptide of claim 51, wherein the oligomeric polypeptide comprises: 53. 53. The method of any of claims 50-52, wherein the zipper domain comprises an amphoteric helix bundle. An oligomer polypeptide according to any one of the preceding claims. 54. The zipper domain is a poly (L-glutamine) repeat polar zipper 51. The oligomer polypeptide according to claim 50, which is a modified product thereof. 55. The zipper domain is a leucine zipper or a modification thereof. 54. The oligomeric polypeptide according to any one of 50 to 53. 56. 55.The zipper domain results in heterodimer formation. 56. The oligomer polypeptide according to 55. 57. One leucine zipper is Fos leucine zipper and the other is Junro 57. The oligomeric polypeptide of claim 56 which is an isin zipper. 58. The cysteine is contained in the leucine zipper, wherein the cysteine is contained in the leucine zipper. The oligomer polypeptide according to any one of claims 1 to 7. 59. The zipper domain is an antiparallel quad helix bundle or a modified product thereof. 58. The oligomeric polypeptide of any one of claims 50-58. 60. The DNA construct comprises a DNA sequence encoding the polypeptide and the zipper. A linker sequence operably inserted between the DNA sequence encoding the domain and 60. The oligomeric polypeptide of any one of claims 50-59, comprising: 61. The method according to any one of claims 50 to 60, wherein the polypeptide exhibits enzymatic activity. Oligomeric polypeptide. 62. The polypeptide is a protease (metal, acidic, neutral or alkaline) , Lipase, cellulase, amylase, lyase, Silanases, pectinases, pullulanases, polygalactylonase, oxidizers , Laccase, oxidoreductase, transglutaminase, α-galact An enzyme selected from the group consisting of tosidases, phytases and peroxidases The oligomer of claim 61, which exhibits at least one enzymatic activity exerted by Polypeptide. 63. Molecular weight of about 50 kDa to 150 kDa, preferably 20 kDa to 100 kDa, especially 20 kDa to 80 kDa The oligomer according to any one of claims 61 to 62, wherein the monomer polypeptide has -A polypeptide. 64. 64. The method according to any one of claims 61 to 63, wherein the enzyme exhibits α-amylase activity. Oligomeric polypeptides. 65. The zipper domain is attached to the polypeptide, the C-terminal of the polypeptide. 60. The oligomeric polym according to any one of claims 50 to 59, linked at the ends. peptide. 66. The zipper domain is attached to the polypeptide at the N-terminus of the polypeptide. 60. The oligomeric polym according to any one of claims 50 to 59, linked at the ends. peptide. 67. 50. At least one polypeptide according to any one of claims 41 to 49 and / or Or comprising at least one polypeptide according to any one of claims 50 to 66. A composition comprising: 68. Detergents, household goods, agriculture, personal care products, cosmetics, perfumes, chemicals, textiles A composition comprising a composition commonly used in the treatment of food, food and / or feed, 68. The composition of claim 67. 69. Use of zipper domains to suppress allergenicity of the polypeptide. 70. The zipper domain is used for multimerization of a polypeptide molecule, 70. The use according to claim 69. 71. A method according to any one of claims 1 to 23 or of claims 50 to 66. 70. The oligomeric polypeptide of any one of claims 69 and 70. Use. 72. The zipper domain comprises 2, 3, 4, 5, 6, or 7 alpha-helical bundles 72. The use according to any one of claims 69 to 71, wherein 73. The zipper domain is a poly (L-glutamine) repeat polar zipper 73. The use according to any one of claims 69 to 71, which is a modified product thereof. 74. 73. The method of claim 71, wherein the zipper domain comprises an amphoteric helix bundle. Use as described in paragraph 1. 75. The zipper domain is a leucine zipper or a modification thereof. Use according to any one of items 71, 72 and 74. 76. 78.The leucine zipper is a Fos-Jun leucine zipper. Use of 77. 77. The method of claims 75 and 76 wherein the cysteine is contained in a leucine zipper. Use as described in paragraph 1. 78. The zipper domain is an antiparallel quad helix bundle or a modified product thereof. 75. Use according to any one of claims 71, 72 and 74. 79. Use according to any one of claims 69 to 78 in household goods. 80. 78. Any one of claims 69 to 78 in a dishwashing detergent and a detergent including a soap bar. Use described in section. 81. Use according to any one of claims 69 to 78 in a personal care product. 82. 83. An oral care product including a denture and tooth cleaning product according to claim 81. Use as described in paragraph 1. 83. Use according to claim 81 in skin care products including creams and lotions. . 84. Contracts for hair care or hair treatment products, including shampoos Use according to claim 81. 85. 81. Use according to claim 81 in a contact lens cleaning product. 86. Use according to any one of claims 69 to 78 in cosmetics. 87. Use according to any one of claims 69 to 78 in medicine. 88. Use according to any one of claims 69 to 78 in pesticides. 89. Use according to any one of claims 69 to 78 in food and feed.