JPH09512554A

JPH09512554A - Increased sensitivity of tumor cells to therapy

Info

Publication number: JPH09512554A
Application number: JP7528398A
Authority: JP
Inventors: ジャーセット，ルース・エイ; ソボル，ロバート・イー
Original assignee: シドニー・キンメル・カンサー・センター
Priority date: 1994-04-29
Filing date: 1995-04-28
Publication date: 1997-12-16
Also published as: WO1995030002A3; WO1995030002A2; EP0758382A1; JP2007099780A; CA2189032A1; AU2462895A; AU697088B2; KR970702915A

Abstract

(57)【要約】突然変異した療法感作遺伝子活性を有する腫瘍細胞に野生型の療法感作遺伝子活性を付与し、そして腫瘍細胞に癌の療法、たとえば化学療法、放射線療法、生物学的療法（免疫療法を含む）、寒冷療法および高熱療法を施すことによる、癌の療法の効果を増大させる方法。 (57) [Summary] Contribute to tumor cells with mutated therapy-sensitizing gene activity wild-type therapy-sensitizing gene activity, and to tumor cells for cancer therapy, eg chemotherapy, radiation therapy, biological therapy (including immunotherapy) , A method of increasing the efficacy of cancer therapy by applying cryotherapy and hyperthermia.

Description

【発明の詳細な説明】療法に対する腫瘍細胞の感受性の増大発明の背景本出願は、米国特許出願第０８／２３６，２２１号、表題“治療に対する腫瘍細胞の感受性の増大”、１９９４年５月２４日出願、の一部継続出願であり、これは米国特許出願第０８／２３６，２２１号、表題“治療に対する腫瘍細胞の感受性の増大”、１９９４年４月２９日出願、の一部継続出願であり、これら両出願明細書の記載は本明細書に参考として含まれるものとする。本発明は癌の療法に関するものである。本発明は特に癌の治療効果を高める方法に関するものである。癌の治療の主力は手術、放射線療法、化学療法および生物学的療法である（全般的に以下を参照されたい：ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＴｅｘｔｂｏｏｋｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，編者ムーサー（Ａ．Ｒ．Ｍｏｏｓｓｏｒ）ら（ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス，１９９１）；Ｃａｎｃｅｒ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄｐｒａｃｔｉｃｅｏｆｏｎｃｏｌｏｇｙ，編者デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（ＶｉｎｃｅｎｔＴ．ＤｅＶｉｔａ，Ｊｒ．，ＳａｍｕｅｌＨｅｌｌｍａｎ，ＳｔｅｖｅｎＡ．Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ），第４版（フィラデルフィア：Ｊ．Ｂ．リッピンコット・カンパニー，１９９３））。放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙ、ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙとも言われる）は、正常組織に対する許容線量を越えない高エネルギーのＸ線、電子線、放射性同位体、および当業者に既知の他の形の放射線を用いて癌細胞を殺すものである。化学療法とは薬物を用いて癌細胞を殺すことを意味する。異なる作用様式をもつ幾つかの群の化学療法薬がある。たとえば多くの代謝拮抗薬は正常な細胞成分と構造的に類似し、正常な細胞プロセスを阻害することによりそれらの効果を及ぼす。多くのアルキル化剤は増殖性および非増殖性の癌細胞集団に対して有効である。一般にこれらの薬物は種々の様式で細胞のＤＮＡと結合して、的確な複製および／または転写を阻害する。多くの抗腫瘍性抗生物質はそれ自身をＤＮＡに挿入し、そこでＤＮＡの破壊を誘発するか、または転写を阻害する。一般にアルカロイドは細胞分裂に必要な染色体紡錘体の機能を阻害する。ホルモン薬、たとえばタモキシフェンおよびフルタミドは、ある癌の増殖を阻害する。ただしそれらの作用メカニズムは完全には分かっていない。一般に生物学的療法は宿主の生物学的プロセスに由来するか、またはそれを有益な形で模倣した物質を利用する。インターフェロン−αおよびインターロイキン−２は癌の治療に現在用いられている生物学的療法薬の２例である。ある癌の療法には標準的治療法の効果を高めるために変更剤を用いる（全般的に以下を参照されたい：コールマン、グローバー、タリシ（ＣｏｌｅｍａｎＣＮ，ＧｌｏｖｅｒＤＪ，ＴｕｒｒｉｓｉＡＴ）,“放射線および化学療法の感作薬および保護薬”，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄｐｒａｃｔｉｃｅ，フィラデルフィア：ＷＢソーンダース，２２５−２５２，１９８９）。変更剤は通常はそれ自身は細胞毒性でなく、標準的療法、たとえば放射線療法に対する腫瘍組織の応答性を変更または増大させる。感作剤の有効性は一般に感作増大比（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｒａｔｉｏ，ＳＥＲ）として表される。ＳＥＲは、増感剤なしで一定水準の細胞死を生じるのに必要な治療用量を、増感剤を併用して同水準の細胞死を得るのに必要な治療用量で割ったものである。放射線療法および化学療法の改良のための臨床的方法の２例は、低酸素性−細胞感作（ｈｙｐｏｘｉｃ−ｃｅｌｌｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）およびチオール枯渇である。放射線およびアルキル化剤により生じる損傷は一部はＤＮＡおよび他の重要な細胞性高分子における遊離基形成に関係する。チオール化合物はＤＮＡ遊離基を阻止し、またはそれらを修復する。ＤＮＡ遊離基が酸素または酸素に類する低酸素性−細胞感作剤、たとえばニトロイミダゾールに暴露されると、ＤＮＡに対する損傷が固定され、すなわち酸化によって不可逆的となる。ブトニンスルホキシミン（ＢＳＯ）などの薬物によるチオール枯渇も、放射線および放射線様作用性化学療法薬、たとえばアルキル化剤による毒性を増大させる。発明の概要本発明は、野生型の療法感作遺伝子（ｔｈｅｒａｐｙ−ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇｇｅｎｅ）活性の喪失を特色とする、癌の治療方法である。本方法は、腫瘍細胞に野生型の療法感作遺伝子活性の供給源を導入し、そして細胞に癌の療法を施すことを含む。本発明によってその効果が高められる癌の療法には放射線療法、化学療法、生物学的療法−免疫療法、寒冷療法および高熱療法を含む−が含まれるが、これらに限定されない。本発明により治療しうる癌には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない：癌腫、肉腫、中枢神経系腫、黒色腫、白血病、リンパ腫、造血系癌、卵巣癌、骨原性肉腫、肺癌、結腸直腸癌、肝細胞癌、神経膠芽腫、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、腎癌、膵癌、胃癌、食道癌、肛門癌、胆道癌、尿生殖器癌、および頭頚部癌。したがって本発明は、野生型の療法感作遺伝子活性を喪失していることを特色とする腫瘍細胞に野生型の療法感作遺伝子活性の供給源を付与し、そして腫瘍細胞に癌の療法を施すことにより癌の療法の効果を高める方法である。 “付与（ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ）”とは、薬物を哺乳動物に投与するための、当業者に既知の方法を採用することを意味する。これらの方法には、遺伝子または遺伝子のｃＤＮＡをベクターに挿入して腫瘍細胞に付与すること、遺伝子または遺伝子のｃＤＮＡをウイルスキャプシドと結合させることにより腫瘍細胞に付与すること、遺伝子または遺伝子のｃＤＮＡをリガンドと結合させることにより、またはリポソームに封入することにより腫瘍細胞に付与すること、腫瘍細胞遺伝子の点突然変異または挿入突然変異または欠失突然変異を組換え法により補正すること、あるいは蛋白質を直接に、またはハイブリッド分子中において、または封入法により細胞に付与することが含まれるが、これらに限定されない。腫瘍細胞内に野生型の療法感作遺伝子活性を存在させる結果をもたらす他の物質および方法、たとえば以下に記載されるものも採用しうる：サムブルック、フリッチュおよびマニアチス（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ），ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，第２版，コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク、１９８９、ならびにオースベル(Ａｕｓｕｂｅｌ)ら，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９４。これらが本明細書に参考として含まれるものとする。 “療法感作遺伝子”とは、それの正常な機能または調節の喪失により癌細胞が療法に対してより耐性となる遺伝子または遺伝子生成物を意味する。療法感作遺伝子機能を修復すると、療法に対する癌細胞の感受性が高まる。特にそれはアポトーシスを促進するか、またはその機能もしくは調節の変化が腫瘍化および療法耐性に寄与する遺伝子を意味し、これには以下のものが含まれるが、これらに限定されない：腫瘍サプレッサー遺伝子、たとえばｐ５３；細胞周期調節遺伝子、たとえばサイクリン、サイクリン依存性キナーゼ(スチール(Ｓｔｅｅｌ，Ｍ.)，Ｌａｎｃｅｔ３４３：９３１−９３２，１９９４)、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ(ブレニス（Ｂｌｅｎｉｓ，Ｊ．），Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：５８８９−５８９２，１９９３：マーシャル(Ｍａｒｓｈａｌｌ,Ｃ.Ｊ.)，Ｎａｔｕｒｅ，３６７：６８６，１９９４)、細胞周期遺伝子の阻害物質、たとえばｐ１６(多重腫瘍サプレッサー１(ｍｕｌｔｉｐｌｅｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ１))(カム(Ｋａｍｂ)ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２６４：４３６−４９０，１９９４)；およびアポトーシス遺伝子、たとえばｆａｓ。有望な療法感作遺伝子は、療法感作遺伝子ｐ５３につき本発明の詳細な記述に示した方法で、ｐ５３をその有望な遺伝子で置き換えることにより同定しうる。たとえば腫瘍細胞をまず、ルーティンな配列分析または当業者に既知である他の診断アッセイ法により、試験すべき候補となる療法感作遺伝子をコードする遺伝子が突然変異したものまたはメッセンジャーＲＮＡが突然変異したものを含むことを解明する。次いでその遺伝子に対する正常な野生型コード配列を当業者に既知の標準法で、選択マーカー遺伝子、たとえばネオマイシン耐性遺伝子を含む適切な真核細胞発現ベクター中へサブクローニングする。たとえば正常なコード配列を正常な線維芽細胞のメッセンジャーＲＮＡ集団のｃＤＮＡから、コード配列の３′および５′末端に適切なプライマーを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により増幅することができる。適切な真核細胞性発現ベクター中へのサブクローニング後に、問題となっている正常な候補となる療法感作遺伝子を含むこのベクターを、突然変異した形の遺伝子を発現している腫瘍細胞中へトランスフェクションすることができる。トランスフェクションは当業者に既知の多数の方法で行うことができ、これにはリン酸カルシウムトランスフェクション、リポフェクション（カチオン性リポソームを用いる）、エレクトロポレーションおよびＤＥＡＥ−デキストラン促進トランスフェクションが含まれるが、これらに限定されない。トランスフェクションした細胞を適切な選択試薬、たとえばネオマイシンの存在下で拡張する。クローンが拡張および選択された時点で、それらを１）候補となる療法感作遺伝子の発現を証明するために当業者に既知のルーティンな方法で解明し、そして２）化学療法薬および／または放射線療法に対する感受性につき、ｐ５３に関する本発明の詳細な記述に記載した標準的増殖アッセイ法またはクローン原性アッセイ法により試験する。候補となる療法感作遺伝子を発現する多数のクローンにおいて母腫瘍細胞と比較して感受性が増大している場合、そのトランスフェクションした遺伝子は療法感作遺伝子であることが示される。 “野生型の療法感作遺伝子活性”とは、正常な非新生細胞における療法感作遺伝子の活性を意味する。詳細には、それは療法感作遺伝子によりコードされる蛋白質または蛋白質の一部が腫瘍細胞を癌の療法に対して感作する能力を意味する。それの療法感作能に影響を及ぼさない“突然変異”を１または２以上含む療法感作蛋白質も、本発明の目的にとって“野生型”とみなされる。その活性は、野生型の療法感作遺伝子のコード配列またはその一部から発現する蛋白質に具体化される。 “野生型の療法感作遺伝子活性の喪失”とは、正常な療法感作遺伝子活性の不在または変化、たとえば細胞内に突然変異型の療法感作蛋白質が存在すること、野生型の療法感作蛋白質が存在しないこと、または野生型の療法感作蛋白質が阻害されていることを意味する。正常なものとの療法感作活性の相異は、１または２以上の遺伝子座における遺伝子の相異により起こる可能性がある。遺伝子の相異には幾つかの異なるタイプがあり、これには以下のものが含まれるが、これらに限定されない：１塩基対が他の塩基対に変化した点突然変異、１もしくは２以上の塩基対の挿入、１もしくは２以上の塩基対から療法感作遺伝子の全長にまで及ぶ欠失、１遺伝子と他の遺伝子の融合、既存の療法感作遺伝子の付加的コピーの導入、以前は存在しなかった非−療法感作遺伝子のコピー１もしくは２以上の導入、当業者に既知の他の遺伝子転写、翻訳および蛋白質機能の変化、または上記のいずれかの組み合わせ。 “腫瘍細胞”とは、インビボで動物に生じる、組織の望ましくない増殖、または異常な存続もしくは異常な浸潤を起こしうる細胞を意味する。本発明は好ましい態様においては、野生型の療法感作蛋白質の療法感作部分を腫瘍細胞に導入し、そしてその腫瘍細胞に癌の療法を施す。 “野生型の療法感作蛋白質の療法感作部分”とは、野生型の療法感作蛋白質において、突然変異した療法感作活性を発現する腫瘍細胞を癌の療法に対して感作する能力をもつ部分を意味する。野生型の療法感作蛋白質の療法感作部分は当業者に既知のルーティンな配列分析により確認することができる。これには以下のものが含まれるが、これらに限定されない：欠失突然変異、点突然変異、ならびにウンガー（Ｕｎｇｅｒ）ら，“転写調節、トランスドミナント（ｔｒａｎｓｄｏｍｉｎａｎｔ）阻害、およびトランスフォーメーション抑制に関与する野生型および突然変異型の療法感作蛋白質の機能性ドメイン”，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３：５１８６−９４，１９９４、ならびにサムブルック、フリッチュおよびマニアチス（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ），ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，第２版，コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク、１９８９、ならびにオースベル(Ａｕｓｕｂｅｌ)ら，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１９９４。これらが本明細書に参考として含まれるものとする。本発明は他の好ましい態様においては、野生型の療法感作遺伝子、そのｃＤＮＡ、またはその療法感作遺伝子活性をコードする部分を腫瘍細胞に導入し、療法感作遺伝子を発現させ、そしてその腫瘍細胞に癌の療法を施す。さらに他の好ましい態様においては、療法感作遺伝子、そのｃＤＮＡ、またはその一部を、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、およびパピローマウイルスベクターよりなる群から選ばれるウイルスベクター（これらに限定されない）により腫瘍細胞に導入する。療法感作遺伝子、そのｃＤＮＡ、またはその一部は、ポリリシンを介してウイルスのキャプシドもしくは粒子に結合させるか、またはアシアログリコプロテインなどのリガンドに結合させ、またはリポソームに封入することにより、腫瘍細胞に導入することもできる。動物への導入手段には直接注射、またはエーロゾル化製剤、動脈内注入、腔内注入および静脈内注入が含まれるが、これらに限定されない。場合により、突然変異した、または異常な療法感作活性が異常に増大した遺伝子発現または遺伝子生成物活性を反映する可能性があり、これらはトランスドミナント陰性突然変異または当業者に既知の他のダウンレギュレーション法によりダウンレギュレーションすることができる。本発明の他の特色および利点は以下の本発明の詳細な記述および請求の範囲から明らかであろう。図面の簡単な説明図１は、Ｔ９８Ｇ神経膠芽腫細胞（黒丸）、および野生型ｐ５３を発現した同細胞Ｔ９８Ｇｐ５３細胞（白丸）のシスプラチン感受性を示す。図２は、Ｔ９８Ｇ神経膠芽腫細胞（上側の曲線）、およびＴ９８Ｇｐ５３細胞（下側の曲線）の放射線感受性を示す。発明の詳細な記述本発明は、腫瘍細胞から失われている療法感作活性の供給源を腫瘍細胞に導入することにより（遺伝子、ｃＤＮＡまたは蛋白質の導入により）癌の療法の効果を高める新規な方法である。それらの活性の例にはｆａｓ遺伝子、網膜芽腫遺伝子、ｐ５３腫瘍サプレッサー遺伝子および他の腫瘍サプレッサー遺伝子、細胞周期調節遺伝子およびアポトーシス遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。ヒトの癌に対する腫瘍感作遺伝子ｐ５３の関連突然変異、欠失または不活性化による正常なｐ５３機能の喪失は、ヒトの癌において極めて頻繁に遭遇する変化の１つであり、ヒトの癌のほぼ５０％に起こる（ニグロ（Ｎｉｇｒｏ）ら，“ｐ５３遺伝子における突然変異は種々のヒト腫瘍タイプに起こる”，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：７０５−７０８（１９８９）；タカハシ（Ｔａｋａｈａｓｈｉ）ら，“ｐ５３：肺癌における遺伝子異常の頻繁な標的”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：４９１−１９４（１９８９））。さらに、ｐ５３の遺伝性突然変異を伴う個体は種々の癌を生じやすいことを幾つかの研究が示唆している（マーキン（Ｍａｌｋｉｎ）ら，“乳癌、肉腫その他の新生物の家族性症候群における生殖細胞系ｐ５３突然変異”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５０：１２３３−１２３８（１９９０）；スリバスタバ（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ）ら，“リー−フラウメニ症候群を伴う癌傾向家族における突然変異ｐ５３遺伝子の生殖細胞系伝達”，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：７４７−７４９（１９９０）：リー（Ｌｉ）ら，“２４人の血族における癌家族症候群”，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，４８：５３５８−５３６２（１９８８））。これらの個体の腫瘍は野生型ｐ５３対立遺伝子を喪失していることが示され、これは網膜芽腫その他の腫瘍における網膜芽腫サプレッサー遺伝子のヘテロ接合性の喪失を連想させる（ヌッソン（Ｋｎｕｄｓｏｎ，Ａ．Ｇ．）“突然変異と癌：網膜芽腫の統計学的研究”，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，６８：８２０−８２３（１９７１）；カミングズ（Ｃｏｍｉｎｇｓ，Ｄ．Ｅ．）“発癌の一般論”，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，７Ｕ：３３２４−３３２８（１９７３））。多様な腫瘍細胞系に野生型ｐ５３遺伝子をインビトロ導入すると培養において細胞増殖がダウンレギュレーションされ、またはインビボでの細胞の再移植に際して腫瘍形成性表現型が抑制されることを幾つかの研究が示している。これらの研究には以下のものが含まれる：神経膠芽腫由来の腫瘍細胞（マーセル（Ｍｅｒｃｅｒ）ら，“ヒト野生型ｐ５３を条件付き発現する神経膠芽腫腫瘍細胞系における負の増殖調節”，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８７：６１６６−６１７０（１９９０））、結腸癌（ベーカー（Ｂａｋｅｒ）ら，“野生型ｐ５３によるヒト結腸直腸癌細胞増殖の抑制”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：９１２−９１５（１９９０）、骨肉腫（ディラー（Ｄｉｌｌｅｒ）ら，“骨肉腫における細胞周期制御蛋白質としてのｐ５３の機能”，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１０：５７７２−５７８１（１９９０）；チェン（Ｃｈｅｎ）ら,“ヒトｐ５３遺伝子による腫瘍抑制の遺伝的メカニズム”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５０：１７５６−１５８０（１９９０））、白血病（チェン（Ｃｈｅｎｇ）ら，“ヒト野生型ｐ５３遺伝子による急性リンパ芽球性白血病の抑制”，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５３：２２２−２２６（１９９２））、および肺癌（タカハシ（Ｔａｋａｈａｓｈｉ）ら,“野生型ｐ５３は多重遺伝子病変を伴うヒト肺癌細胞の増殖を抑制するが、突然変異ｐ５３は抑制しない”，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５２：２３４０−２３４３（１９９２））。しかし野生型ｐ５３遺伝子を非悪性細胞にインビトロ導入しても、腫瘍細胞系に見られるような細胞増殖低下は生じない（ベーカー（Ｂａｋｅｒ）ら，前掲）。ｐ５３突然変異を伴う腫瘍細胞すべてが野生型ｐ５３の発現によって著しい増殖ダウンレギュレーションを示すわけではない。ヒンズ（Ｈｉｎｄｓ）ら，ＣｅｌｌＧｒｏｗｔｈａｎｄＤｉｆｆｅｒｎｔｉａｔｉｏｎ１：５７１−８０（１９９０）は、必ずしもすべてのｐ５３突然変異体が同等な表現型を生じるわけではないことを示している。ミカロビッツ（Ｍｉｃｈａｌｏｖｉｔｚ）ら，Ｃｅｌｌ６２：６７１−６８０（１９９０）は、ある突然変異体は増殖調節に関して野生型ｐ５３に対し優性である可能性があることを示している。野生型ｐ５３の発現は、ある腫瘍細胞系の増殖性には影響を及ぼさない。これにはヒトパピローマウイルス発現細胞系、およびＡ６７３横紋筋肉腫細胞（チェン（Ｃｈｅｎ）ら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ６：１７９９−１８０５，１９９１）が含まれる。ｐ５３が細胞増殖を抑制したと報告された例では、効果は時に小さいことがあった（チェン（Ｃｈｅｎ）ら，１９９２，前掲）。さらに、腫瘍細胞をダウンレギュレーションするために野生型ｐ５３を単独で用いる方法は、腫瘍細胞において安定な野生型ｐ５３の発現を必要とする。ｐ５３の温度感受性突然変異体の研究に際して、野生型ｐ５３がトランスフォームした細胞の増殖に及ぼす抑制効果は野生型ｐ５３の発現が停止した時点で失われるのが観察された(ミカロビッツ（Ｍｉｃｈａｌｏｖｉｔｚ）ら，１９９０，前掲) 。現在用いられている大部分の有効な遺伝子伝達方法は一時的なｐ５３発現をもたらすにすぎないので、これはｐ５３単独による療法の効果を制限する。ｐ５３の機能は著しく複雑であり、以下を含めた多様な細胞プロセスに関与している：増殖（ベーカー（Ｂａｋｅｒ）ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：９１２− ９１５，１９９０；ミカロビッツ（Ｍｉｃｈａｌｏｖｉｔｚ）ら，Ｃｅｌｌ６２：６７１−６８０，１９９０）、分化（シャウルスキー（Ｓｈａｕｌｓｋｙ）ら，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８８：８９８２−８９８６（１９９１）、プログラミングされた細胞死（すなわちアポトーシス）（ヨニシュールーチ（Ｙｏｎｉｓｈ−Ｒｏｕａｃｈ）ら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：３４５−３４７，１９９１）、細胞老化（シェイ（Ｓｈａｙ）ら，Ｅｘｐ．ＣｅｌｌＲｅｓｅａｒｃｈ，１９６：３３−３９，１９９１）、ＤＮＡの結合（ケルン（Ｋｅｒｎ）ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５２：１７０８−１７１１，１９９１；バルゴネッチ（Ｂａｒｇｏｎｅｔｔｉ）ら，Ｃｅｌｌ６５：１０８３−１０９１，１９９１）、およびＤＮＡ損傷により誘導されるＧ１期停止（カスタン（Ｋａｓｔａｎ）ら，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，５１：６３０４−６３１１，１９９１；クルビッツ（Ｋｕｅｒｂｉｔｚ）ら，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：７４９１−７４９５，１９９２）。癌の療法に関して、ＤＮＡ損傷により誘導されるＧ１期停止におけるｐ５３の改善が、療法の最も興味ある役割の１つである。野生型および突然変異型のｐ５３遺伝子を、内因性ｐ５３を欠如する腫瘍細胞に導入した。これらの細胞をガンマ線で照射すると、野生型ｐ５３の発現はＧ１／Ｓ期境界での一時的な細胞周期停止状態になる（カスタン（Ｋａｓｔａｎ）ら，“ＤＮＡ損傷に対する細胞応答へのｐ５３蛋白質の関与”，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５１：６３０４−６３１１（１９９１）；クルビッツ（Ｋｕｅｒｂｉｔｚ）ら，“野生型ｐ５３は照射後の細胞周期チェックポイント決定基である”，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：７４９１−７４９５（１９９２）；ヨニシュ−ルーチ（Ｙｏｎｉｓｈ−Ｒｏｕａｃｈ）ら，“野生型ｐ５３がインターロイキン−６により阻害された骨髄性白血病細胞のアポトーシスを誘導する”，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：３４５−３４７（１９９１））。ｐ５３を欠如するか、または突然変異ｐ５３を発現する細胞は、停止しなかった（カスタン（Ｋａｓｔａｎ）ら，前掲；クルビッツ（Ｋｕｅｒｂｉｔｚ）ら，前掲）。ｐ５３はＤＮＡ損傷が修復されるまでＳ期に入るのを阻止する重要なチェックポイント機能を果たすということが提唱された（フォーゲルスタイン（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ）ら，Ｃｅｌｌ７０：５２３−５２６，１９９２）。したがってＤＮＡ損傷を与える放射線または化学療法が癌細胞にもたらす結果は、突然変異ｐ５３または野生型ｐ５３の発現により影響される可能性がある。これに関して、野生型ｐ５３機能を喪失した癌細胞はＤＮＡ損傷を与える薬物および放射線に対して、より感受性が高いことを幾つかの系統の証拠が示唆している。酵母における類似のチェックポイントとの相似性によれば、ｐ５３誘導Ｇ１期停止の欠損は、細胞分裂前に行われる致死的ＤＮＡ損傷の修復を阻害することにより細胞破壊を促進する可能性がある（フォーゲルスタイン（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ）ら，前掲）。フォーゲルスタイン（Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ）ら，前掲，は以下のように述べている：腫瘍細胞はＤＮＡ損傷を与えるもの、たとえば放射線療法および化学療法に用いられるものに対して、より感受性であることが多い；この感受性はｐ５３機能の喪失がもたらす有益な副作用であり、これがなければ細胞の死が制限されるであろう。したがってｐ５３突然変異は抗腫瘍薬に対する細胞の感受性を低下させるのではなく増大させる幾つかの変化の１つをなす。この見解は、突然変異ｐ５３遺伝子伝達に伴って放射線および化学療法に対する腫瘍細胞の感受性が増大することを証明する研究により支持される（ペティ（Ｐｅｔｔｙ）ら，“ｐ５３腫瘍サプレッサー遺伝子生成物の発現は化学的感受性の決定因子である”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９９：２６４−２７０，１９９４，先行技術とは認められない）。しかしｐ５３ヌルトランスジェニックマウス由来の正常な造血細胞、線維芽細胞および胃腸細胞につき実施した他の研究は、アポトーシスにｐ５３が必要であることを示した（ローウェ（Ｌｏｗｅ）ら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：８４７−８４９，１９９３；クラーク（Ｃｌａｒｋｅ）ら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：８４９ −８５２，１９９３；ローテムおよびザクス(ＬｏｔｅｍＪ，ＳａｃｈｓＬ) ，Ｂｌｏｏｄ，８２：１０９２−１０９６，１９９３；ローウェ（Ｌｏｗｅ）ら，Ｃｅｌｌ７４：９５７−９６７，１９９３；およびメリット（Ｍｅｒｒｉｔｔ）ら，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，５４：６１４−６１７，１９９４，先行技術とは認められない）。これらの研究においては、ｐ５３を欠如する正常細胞は放射線またはＤＮＡ損傷を与える薬物に暴露されたのちのアポトーシスに対して、より耐性であった。同様にバーキットリンパ腫細胞系の研究により、野生型ｐ５３遺伝子配置をもつ若干の細胞（すべてではない）が放射線に対して、より感受性であることを明らかにした（オコンナー（Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ）ら，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，５３：４７７６−４７８０，１９９３，先行技術とは認められない）。しかし頭頚部癌細胞系の評価は、放射線感受性と内因性野生型ｐ５３または突然変異ｐ５３との関連を示さなかった（ブラッハマン（Ｂｒａｃｈｍａｎ）ら，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，５３：３６６７−３６６９，１９９３，先行技術とは認められない）。ローウェ（Ｌｏｗｅ）ら，“ｐ５３依存性アポトーシスは抗癌薬の細胞毒性に類似する”Ｃｅｌｌ，７４：９５７−９６７，１９９３（先行技術とは認められない）は以下のように述べている：ｐ５３欠失マウス胚線維芽細胞を用いて、広範な群の抗癌薬に対する細胞感受性および耐性におけるｐ５３の必要性を系統的に調べた。それらの結果は、腫瘍遺伝子、特にアデノウイルスＥＩＡ遺伝子は電離性放射線、５−フルオロウラシル、エトポシドおよびアドリアマイシンにより誘導されるアポトーシスに対して線維芽細胞を感作しうることを証明する。さらに、死のプログラムを効果的に執行するためにはｐ５３腫瘍サプレッサーが必要である。ローテムおよびザクス（Ｌｏｔｅｍ，Ｓａｃｈｓ），“野生型ｐ５３を欠失するマウスに由来する造血細胞はいくつかの薬剤によるアポトーシス誘導に対して、より耐性である”Ｂｌｏｏｄ，８２：１０９２−１０９６（１９９３）（先行技術とは認められない）は以下のように述べている：正常な線維芽細胞において、照射およびＤＮＡ損傷を与える他の薬剤は野生型ｐ５３の発現を誘導し、この野生型ｐ５３発現の誘導が細胞をＧ１期の制御時点に停止させる。ＤＮＡ損傷の伝播を阻止するためにＤＮＡ複製の開始前にＤＮＡを修復するのに、このＧ１期停止が必要であることが示唆された。ｐ５３欠失マウス由来の線維芽細胞はこのＧ１期制御を喪失し、照射後に細胞周期を継続し、したがってＤＮＡ損傷が伝播された。我々の得た結果は、生存力因子が高濃度である条件下では野生型ｐ５３の有無によってマウスの骨髄性コロニー形成細胞数に差がなかった。しかし骨髄前駆細胞が低濃度の生存力因子、たとえばＧＭ− ＣＳＦ、ＩＬ−１α、ＩＬ−３、ＩＬ−６もしくはＳＣＦを含むにすぎない場合、またはこれらの細胞において照射もしくは熱ショックによりアポトーシスを誘導した場合、ｐ５３欠失マウス由来の細胞の方が高い生存力を備えていた。ｐ５３欠失につきホモ接合性のマウスとヘテロ接合性のマウスとを比較すると、アポトーシス誘導に対する耐性の増大には野生型ｐ５３の１対立遺伝子の喪失で十分であることが示された。ｐ５３欠失マウスの方がアポトーシスの誘導に対する耐性が高いことは照射された胸腺細胞においても認められたが、グルココルチコイドであるデキサメタゾンで処理した胸腺細胞、または成熟した腹腔顆粒球においては認められなかった。照射した骨髄前駆細胞および胸腺細胞における耐性の程度は野生型ｐ５３の投与量に関係していた。このように、突然変異および野生型ｐ５３が化学療法および放射線感受性に及ぼす影響はこれら従来の研究からははっきりせず、またこれらの従来の研究はいずれも内因性突然変異ｐ５３を発現している腫瘍細胞の治療感受性に野生型ｐ５３遺伝子伝達が及ぼす影響に向けたものではない。癌の療法の効果の増大本発明は、腫瘍細胞に療法を施す前に野生型の療法感作遺伝子活性の供給源を腫瘍細胞に導入することにより癌の療法の効果を増大させるための新規方法である。療法感作遺伝子の例としてｐ５３を用いると、本発明は以下に従って実施することができる：まず患者の腫瘍がｐ５３突然変異を含むことを標準的診断法により判定する。次いで野生型ｐ５３活性、たとえばｐ５３蛋白質の療法感作活性を示す部分、またはｐ５３蛋白質のその部分をコードする遺伝子発現ベクターを腫瘍細胞に導入する。これによって、ｐ５３突然変異を含む腫瘍細胞は野生型ｐ５３活性期間中に施された癌療法に対して、より感受性となる。この方法で効果を高めることができる癌療法には、放射線療法、化学療法、生物学的療法、たとえば免疫療法、寒冷療法および高熱療法が含まれるが、これらに限定されない。突然変異した療法感作遺伝子活性、たとえば突然変異ｐ５３蛋白質を含む細胞においては、修復されないＤＮＡ損傷がＳ期への進行を遮断せず、またはアポトーシスを始動させない可能性がある。本発明者らは、いかなる理論にも拘束されないが、内因性の突然変異した療法感作遺伝子活性をもち、かつ野生型ｐ５３の遺伝子または蛋白質を再生された腫瘍細胞は、ゲノム損傷および修復プロセスの過負荷または障害があるとすれば、療法様式によるアポトーシスの誘導に対して特に感受性であると考える。腫瘍細胞中に野生型の療法感作遺伝子活性が存在すると、それらの細胞はこれらのＤＮＡ損傷を与える薬剤に対して、また恐らくアポトーシスを誘導しうる他の多様な療法様式に対しても感作されるであろう。ｐ５３感作療法と他の療法を組み合わせる方法は、いずれか単独の療法より効果的である。外因性の野生型ｐ５３活性を腫瘍細胞に導入すると、細胞を死滅させるのに必要な薬物または放射線の量が少なくなり、薬物または放射線を投与しても毒性を生じない療法ウインドウ濃度を高めることができる。腫瘍抑制のためには持続的なｐ５３遺伝子発現が必要であるｐ５３遺伝子療法単独と対比して、ｐ５３感作療法と他の療法との組み合わせ効果によれば、腫瘍細胞を死滅させる処置期間中、一時的に腫瘍細胞中に野生型ｐ５３蛋白質の療法感作部分が存在する必要があるにすぎない。この方法は生物学的療法の効率も改善する。これには以下のものが含まれるが、これらに限定されない：免疫療法、たとえば受動免疫療法（たとえば抗体）；活性化された免疫系のエフェクター細胞を投与する養子免疫療法；抗腫瘍免疫を誘導するための免疫化を伴う能動免疫療法；種々のサイトカイン（インターロイキン、たとえばＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ− １２、腫瘍壊死因子、腫瘍増殖因子、インターフェロン、増殖因子、たとえばＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦが含まれるが、これらに限定されない）により仲介される療法であって、これらのサイトカインに対する、またはこれらのサイトカインにより活性化される免疫系のエフェクターメカニズムに対する腫瘍細胞の感受性を高めることによる療法。さらに、本発明のｐ５３仲介による感作療法は、細胞毒性免疫細胞（細胞毒性Ｔ細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、天然キラー細胞、マクロファージ、単球および顆粒球が含まれるが、これらに限定されない）による死滅に必要なアポトーシス経路の再生により、腫瘍細胞を免疫系に対するより良い標的となす。療法感作活性は野生型ｐ５３遺伝子／蛋白質の部分に例示される。療法感作部分は当業者に既知のルーティンな突然変異分析、たとえば点突然変異および欠失突然変異により確認することができる。癌の療法を増強するために野生型の療法感作遺伝子生成物活性を模倣した小型の分子を用いることもでき、これにはペプチド、修飾したペプチド、または有機化合物が含まれるが、これらに限定されない。他の有用な物質には、突然変異した療法感作遺伝子の生成物に結合してその遺伝子生成物の野生型療法感作活性を確立する立体配置の変化を誘導するアロステリック調節剤として作用する小型の分子が含まれる。ｐ５３または他の療法感作遺伝子の突然変異は、検査した癌の実質的にすべてに見られたので、本発明は著しく広範な用途をもつ。好ましい態様においては、野生型ｐ５３遺伝子の療法感作活性をコードする部分を、現在利用しうる遺伝子付与用ベヒクルによって直接付与することにより、局在化した腫瘍を治療することができる。これにはｐ５３アデノウイルスベクターの感染、ｐ５３レトロウイルスベヒクルパッケージング系列の移植、または結合コンプレックス中のアデノウイルスキャプシドにより促進させたｐ５３ｃＤＮＡのトランスフェクションが含まれるが、これらに限定されない。遺伝子伝達ベクターを腫瘍部位に蓄積しうるターゲティング法の開発に伴って、この方法は散在性癌にも拡大することができる。他の遺伝子発現ベクター系を利用することもでき、これにはリポフェクション（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ）または直接ＤＮＡ注射が含まれるが、これらに限定されない。当業者に既知の他の遺伝子伝達および発現方法も利用しうる。療法感作遺伝子ｐ５３につき以下に示す例を、当業者は癌の治療のために他の療法感作遺伝子にも適用することができる。実施例１．腫瘍細胞へのｐ５３遺伝子の伝達野生型ｐ５３遺伝子またはその遺伝子の一部をベクター中において、その遺伝子が染色体外に残留するように導入することができる。染色体外にある野生型ｐ５３遺伝子またはその遺伝子の一部から野生型ｐ５３蛋白質が発現される。あるいは野生型ｐ５３遺伝子を、細胞中に存在する内因性突然変異ｐ５３遺伝子を置換するように腫瘍細胞中へ導入することができる。この方法によればｐ５３遺伝子突然変異が補正されるであろう（レベット（Ｒｅｖｅｔ）ら，“ＲｅｃＡ蛋白質コーティングした短いＤＮＡプローブによる同種ＤＮＡターゲティング、および線状二重らせん分子上における電子顕微鏡マッピング”,ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２３２（３）：７７９−９１，１９９３；トーマス（Ｔｈｏｍａｓ）ら，“胚幹細胞における配列置換ベクターを用いた高精度遺伝子ターゲティング”，ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１２（７）：２９１９−２３，１９９２；マンスール（Ｍａｎｓｏｕｒ）ら，“同種組換えによるマウスｉｎｔ−２遺伝子座中へのｌａｃＺリポーター遺伝子の導入”，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８７（１９）：７６８８−９２，１９９０；キャペチ（Ｃａｐｅｃｃｈｉ）,“ 同種組換えによるゲノムの変更”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４（４９１０）：１２８８−９２，１９８９；セディビイおよびジョイナー（Ｓｅｄｉｖｙ，Ｊｏｙｎｅｒ），“ＧｅｎｅＴａｒｇｅｔｔｉｎｇ”，Ｗ．Ｈ．フリーマン発行，１９９２；本明細書に参考として引用する）。ｐ５３遺伝子伝達のための好ましいベクターは、標的細胞集団内のすべてまたは大部分の細胞に遺伝子を伝達し、かつ目的とする効果を促進するのに十分なほど長い発現期間および十分なほど高い発現水準で達成する能力をもつ。可能なベクター設計および遺伝子伝達方法には以下のものが含まれるが、これらに限定されない：１）アデノウイルスベクター。アデノウイルスベクターはレトロウイルスベクターより高い力価のものが得られ、より高い遺伝子付与効率が得られる可能性がある。それらは分裂している細胞および分裂していない細胞の両方の広範な細胞タイプに感染しうるという点で、特に関心がもたれる（グラハム、プレベック（ＧｒａｈａｍＦＬ，ＰｒｅｖｅｃＬ），アデノウイルスベクターの取り扱い，ムレイ（ＭｕｒｒａｙＥＪ）編，“ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”ｖｏｌ．７，ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰｒｏｔｏｃｏｌｓ”，クリフトン，ニュージャージー；ザ・ヒューマナ・プレス・インコーポレーテッド（１９９１），ｐｐ．１０９−１２８；本明細書に参考として引用する）。これらのベクターはウイルスの複製に必要な初期領域遺伝子の一部が、目的とするトランスジーン（すなわち細胞に伝達すべき外因性遺伝子）で置換される。失われた複製機能を供給する適切なパッケージング細胞系内へ、このＤＮＡをトランスフェクションすることにより、ウイルス粒子が得られる。そのようなベクターの例は文献に記載されている（ベルナー（ＢｅｒｎｅｒＫＬ），“異種遺伝子の発現のためのアデノウイルスベクターの開発”，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９８８）６：６６１６−６２９；本明細書に参考として引用する）。肝癌および頭頚部癌には動脈内注入が適切であろうが、これらに限定されない。２）レトロウイルスベクター。これらのベクターはヒト遺伝子の伝達に極めて良好な特性をもち、遺伝子療法プロトコールに用いられている（ウー（Ｗｕ）ら，Ｊ．ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２６６：１４３３８−１４３４２，１９９１；本明細書に参考として引用する）。レトロウイルスベクターは伝達すべき目的遺伝子（すなわちトランスジーン）を含む変更レトロウイルスゲノム、およびしばしば選択マーカー遺伝子からなる。ベクター自体は遺伝子の安定な組込みに必要なウイルスＬＴＲ（ＬｏｎｇＴｅｒｍｉｎａｌＲｅｐｅａｔ）配列を提供するが、複製に関しては欠失性であり、トランス作用性複製因子を提供するパッケージング細胞系を必要とする。レトロウイルスベクターおよびパッケージング細胞系の例は文献に記載されている（クリーグラー（Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ）（１９９０），“ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ−−ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”，ストックトン・プレス，ニューヨーク、およびジョリー（Ｊｏｌｌｙ，Ｄ），ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，１：５１−６４，１９９４；本明細書に参考として引用する）。ｐ５３レトロウイルスベクターは文献に記載されている（チェン（Ｃｈｅｎ）ら（１９９２）“ヒト野生型ｐ５３遺伝子による急性リンパ芽球性白血病の抑制 ”,ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５２：２２２−２２６；本明細書に参考として引用する）。レトロウイルスベクターは細胞タイプに関して広範な感染性をもつ。トランスジーン発現は通常は、広範な組織特異性をもつ強力なウイルスプロモーターにより駆動される。その例はウイルスＬＴＲ（ＬｏｎｇＴｅｒｍｉｎａｌＲｅｐｅａｔ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーターである（ミラーおよびロスマン（ＭｉｌｌｅｒＡＤ，ＲｏｓｍａｎＧＪ），“遺伝子の伝達および発現のための改良されたレトロウイルスベクター”，（１９８９）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ７：９８０−９９０；本明細書に参考として引用する）。ｐ５３レトロウイルスベクターを分泌するパッキング細胞系を腫瘍部位に移植して、レトロウイルス遺伝子伝達の効率を高めることができる。この細胞系は連続的なベクター供給源を提供し、遺伝子伝達の効率を改良する（クルバー、ラム、ウォールブリッジ、イシイ、オールドフィールド、ブレーゼ（ＣｕｌｖｅｒＫＷ，ＲａｍＺ，ＷａｌｌｂｒｉｄｇｅＳ，ＩｓｈｉｉＨ，ＯｌｄｆｉｅｌｄＥＨ，ＢｌａｅｓｅＲＭ），実験的脳腫瘍の治療のためのレトロウイルスベクター産生細胞を用いたインビボ遺伝子伝達，（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ２５６：１５５０−２）。３）アデノ随伴ウイルス。アデノ随伴ウイルスに基づくベクターはアデノウイルスがもつ範囲の感染性をもつ。さらに、これらのベクターは宿主ゲノムの好みの部位に外因性ＤＮＡを安定に組み込む可能性をもたらす。そのようなベクターについての考察は“ＣｕｒｒｅｎｔＴｏｐｉｃｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”ｖｏｌ．１５８，（ムジツカ（ＭｕｚｙｃｚｋａＮ）編），スプリンガー・フェルラーク，ｐｐ．９７−１２９（１９９２）に見られ、これを本明細書に参考として引用する。４）他のウイルスベクター。ヘルペス、ワクシニア、パピローマウイルスに基づくベクターも遺伝子を腫瘍細胞に伝達するために使用しうる。これらのベクターについての考察はクリーグラー（Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ），“ＧｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｒａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”，ストックトン・プレス，ニューヨーク（１９９０）、およびジョリー（Ｊｏｌｌｙ，Ｄ），“遺伝子療法のためのウイルスベクター”ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，ｖｏｌ．１：５１−６４（１９９４）に見られ、これを本明細書に参考として引用する。５）結合したアデノウイルスキャプシド。外因性ＤＮＡをアデノウイルスキャプシドにより腫瘍細胞に伝達することができる。この方法では伝達すべきＤＮＡをウイルスキャプシドの外側にポリリシン橋により結合させる（キュリー（Ｃｕｒｉｅｌ）ら，“ＤＮＡ−ポリリシンコンプレックスに結合したアデノウイルスにより仲介される高効率遺伝子伝達”（１９９２）ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ，３：１４７−１５４；本明細書に参考として引用する）。細胞内へのＤＮＡの進入は天然のウイルスインターナリゼーション経路により達成されるが、遺伝子の伝達および発現はウイルスゲノムとは無関係である。たとえばｐ５３遺伝子をアデノウイルスのキャプシドに結合させ、次いでこれを受容体介在性エンドサイトーシスにより肺癌細胞内へ付与することができる。したがってこの方法ではウイルス粒子は感染のためのベヒクルとしてではなく、ＤＮＡトランスフェクションのためのキャリヤーとして利用される。この方法で、特にウイルスとＤＮＡのコンプレックスが付加的リガンド、たとえばトランスフェリン（これに限定されない）を含む場合、遺伝子伝達の高効率を達成しうる（ワーグナー（Ｗａｇｎｅｒ）ら，“トランスフェリン−ポリリシン／ＤＮＡコンプレックスへのアデノウイルスの結合は、トランスフェクションした遺伝子の受容体介在性遺伝子付与および発現を大幅に高める”，（１９９２）Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：６０９９−６１０３；本明細書に参考として引用する）。標的組織へのコンプレックスの蓄積を促進するために、組織および細胞タイプに特異性のリガンドを含んでもよい。６）他の方法。リポソーム仲介による遺伝子伝達はインビボ遺伝子伝達に有効である（チュー（Ｚｈｕ）ら，“マウス成体に静脈内ＤＮＡ付与したのちの全身的な遺伝子発現”，（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６１：２０９−１１；ヨシムラ（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ）ら，（１９９２）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０：３２３３−３２４０；本明細書に参考として引用する）。ＤＮＡ−リポソームコンプレックスを局所的または全身的に投与することができる。この方法の利点は、低毒性であること、およびウイルスゲノムが存在しないことである。適切なプロモーター（たとえばＣＭＶプロモーター）を選ぶと、長期間の発現を達成しうる（チュー（Ｚｈｕ）ら，“マウス成体に静脈内ＤＮＡ付与したのちの全身的な遺伝子発現”，（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６１：２０９−１１；本明細書に参考として引用する）。さらに、トランスジーン発現を特定の細胞タイプにターゲティングするためにリガンド−ＤＮＡコンジュゲートが用いられている。たとえばアシアログリコプロテイン−ＤＮＡコンジュゲートが、アシアログリコプロテイン受容体を介して外因性遺伝子を肝細胞に特異的にターゲティングするために用いられている。ある組織、たとえば筋肉（これに限定されない）には裸のＤＮＡの直接遺伝子伝達も有効であろう。当業者がこれらの遺伝子伝達方法を単独で、または組み合わせて用いて、野生型ｐ５３遺伝子または他の療法感作遺伝子の、療法感作活性をコードする部分を腫瘍内で発現させることができる。実施例２．腫瘍細胞へのｐ５３蛋白質の導入野生型ｐ５３蛋白質、または野生型ｐ５３蛋白質の療法感作活性をもつ部分を、突然変異ｐ５３対立遺伝子を保有する細胞に供給することができる。これはインビボでいくつかの方法により達成され、これらには静脈内、腫瘍内、動脈内、腔内またはくも膜内注入が含まれるが、これらに限定されない。エーロゾル化製剤は呼吸管への付与に用いることができ、また局所製剤も使用しうる。有効分子をマイクロインジェクション、リポソームまたはエレクトロポレーションなどの方法で細胞に導入することもできる。ｐ５３蛋白質を受容体介在性エンドサイトーシスにより腫瘍細胞に導入することもできる。あるいはｐ５３蛋白質を細胞が能動的に取り込み、または拡散により取り込み、細胞にｐ５３活性を再生することができる。ｐ５３とターゲティング配列を含むキメラ蛋白質を用いて、ターゲティング配列の受容体を保有する細胞に野生型ｐ５３活性を導入することができる。たとえばインスリン様増殖因子（ＩＧＦ−Ｉ）またはインターロイキン−２（ＩＬ−２）のターゲティング特異性を利用して、ｐ５３蛋白質をＩＧＦ−Ｉ受容体またはＩＬ−２受容体保有細胞に付与することができる。キメラ蛋白質は組換え法によりキメラｃＤＮＡを構築し、それらを原核細胞系または真核細胞系において発現させることにより得られる。したがってｐ５３を、肺癌細胞の特異的細胞表面受容体に結合する増殖因子ＩＧＦ−Ｉにキメラ化した場合、このキメラ蛋白質を受容体介在性エンドサイトーシスにより肺癌細胞にターゲティングすることができる。実施例３．薬剤の投与本発明方法を実施するに際しては、組成物、たとえば前記の実施例１および２に述べたものを単独で、または互いに組み合わせて、または他の治療薬もしくは診断薬と組み合わせて使用しうる。これらの組成物をインビボでヒト患者に、またはインビトロで使用しうる。インビボで使用する際には、組成物を患者に多様な様式で投与することができ、これらには非経口、静脈内、皮下、筋肉内、結腸、直腸、膣、鼻、経口、経皮、局所、眼、腹腔内、腔内、くも膜下に、または適切に配合された外科用移植体として多様な投与形態を用いる様式が含まれるが、これらに限定されない。本発明の組成物の投与量は目的とする効果および適応症に応じて広範に及びうる。当業者に自明のとおり、有用なインビボ投与量および個々の投与方式は患者の状態、治療すべき癌、および用いる個々の組成物に応じて異なるであろう。有効な投与水準、すなわち目的とする結果を達成するために必要な投与水準は当業者が容易に判定しうるであろう。一般に投与は低い方の投与水準から開始し、目的とする効果が達成されるまで投与水準を高める。有効な付与のためには薬剤が腫瘍細胞に侵入する必要がある。化学的修飾は透過に必要なすべてであってよい。ただしそのような修飾が不十分であったとしても、修飾された薬剤を透過促進剤、たとえばアゾン（Ａｚｏｎｅ）またはオレイン酸（これらに限定されない）と共に、リポソーム中に配合することができる。リポソームは徐放性をもたらすベヒクルであって、修飾された薬剤および透過促進剤がリポソームからトランスフェクションされた細胞内へ伝達されるものでもよい。あるいはリポソームのリン脂質が修飾された薬剤および透過促進剤と共に直接に細胞への付与に関与してもよい。薬物付与ベヒクルを全身または局所投与に使用しうる。薬剤の局所投与が有利である。これによって全身吸収を最少にして投与部位に局所濃縮することができるからである。これによって疾患部位への薬剤の付与方式が簡略化され、中毒性の程度が低くなる。さらに、物質の投与量は他の投与経路に必要なものよりはるかに少ない。薬剤を全身投与することもできる。全身吸収とは、薬物が血流中に蓄積され、次いで全身に分散することを意味する。全身吸収をもたらす投与経路には経口、静脈内、動脈内、リンパ管内、皮下、腹腔内、鼻内、筋肉内、くも膜下および眼内が含まれるが、これらに限定されない。これらの投与経路はいずれも到達可能な組織を薬剤に暴露する。皮下投与は局所リンパ節に流入し、これによってリンパ網を通して循環系に進入する。循環系への進入速度は分子量または大きさの関数であることが示されている。腹腔内投与も循環系に進入し、薬剤付与ベヒクルコンプレックスの分子量または大きさが進入速度を制御する。薬物付与ベヒクルは徐放性のレザバーとして作用するように、またはそれらの内容物を直接に標的細胞に付与するように設計することができる。直接付与型の薬物ベヒクルを用いる利点は、１回のベヒクル取込み事象当たり多数の分子が付与されることである。それらのベヒクルは、他の場合には血流から急速に消失する薬物の循環半減期を高めることも示されている。このカテゴリーに属するこのような特殊な薬物付与ベヒクルの若干の例にはリポソーム、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生物分解性ポリマー（外科用移植片またはナノカプセル）、および生体接着性マイクロスフィアが含まれるが、これらに限定されない。リポソームは幾つかの利点をもたらす：それらは一般に無毒性かつ生物分解性の組成をもち；それらは長い循環半減期を示すことができ；また組織のターゲティングのための認識分子を容易にその表面に付着させることができる。最後に、脂質懸濁液または凍結製品の形のリポソーム系薬剤を安価に製造しうることは、この技術が許容しうる薬剤付与システムとして存続しうることを証明する。経口投与配合物は幾つかの形態で製造することができ、これにはカプセル剤、そしゃく錠、腸溶コーチング錠、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、または投与前に液体に溶解もしくは懸濁するのに適した固体の形のものが含まれるが、これらに限定されない。適切な賦形剤は、たとえば水、食塩水、デキストロース、マンニトール、乳糖、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、塩酸システインなどである。さらに所望により、薬剤組成物は少量の無毒性補助物質、たとえば湿潤剤、ｐＨ緩衝剤などを含有しうる。所望により吸収促進製剤（たとえばリポソーム）を使用しうる。実施例４．化学療法に対する腫瘍細胞の感受性の増大１）．細胞。Ｔ９８Ｇ神経膠芽腫細胞（マーセル（Ｍａｒｃｅｒ）ら“ヒト野生型ｐ５３を条件付き発現する神経膠芽腫腫瘍細胞系における負の増殖調節”，（１９９０）Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８７：６１６６ −６１７０）をＡＴＣＣから入手し、３７℃で１０％ＣＯ₂中において、１０％の熱不活性化したウシ胎児血清、ゲンタマイシン、非必須アミノ酸およびピルビン酸ナトリウムを補充したダルベッコの変更イーグル培地中で培養した。これらの細胞は多形性神経膠芽腫を伴う患者の生検により得られたものであり、コドン２３７（ｍｅｔからｉｌｅまで、ＡＴＧからＡＴＡまで）にホモ接合性突然変異を含むことが示された（ウルリッヒ（Ｕｌｌｒｉｃｈ）ら，“ヒト野生型ｐ５３はインビボで神経膠芽腫細胞の増殖停止期間中、特異なコンホメーションおよびリン酸化の状態をとる”（１９９２）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，７（８）：１６３５− ４３）。２）プラスミド。野生型ｐ５３遺伝子およびネオマイシン（Ｇ４１８）耐性遺伝子を含むプラスミド（ｐＬｐ５３ＲＮＬ）を用いた。プラスミドｐＬｐ５３ＲＮＬはＤｒ．マーチン・ハース（カリフォルニア大学、サンディエゴ）により好意的に提供され、これは先に文献に記載されている（チェン（Ｃｈｅｎｇ）ら， “ヒト野生型ｐ５３遺伝子による急性リンパ芽球性白血病の抑制”（１９９２）ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５３：２２２−２２６）。このプラスミドはレトロウイルス配列Ｌｐ５３ＲＮＬを保有し、これにおいて野生型ｐ５３発現はモロネー（Ｍｏｌｏｎｅｙ）ネズミ白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲにより駆動される。ネオマイシン耐性遺伝子はラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーターにより駆動される。３）トランスフェション。プラスミドをカチオン性リポソームによりＴ９８Ｇ細胞に導入した。Ｔ９８Ｇ細胞を１０ｃｍの培養皿内に平板当たり５×１０⁵個接種した。翌日、細胞に１５μｇのＤＮＡをリポフェクタミン（ＢＲＬ）により、製造業者の指示に従ってトランスフェションした。トランスフェションの５日後に、培養物を１００μｇ／ｍｌのＧ４１８中で選択した。クローンを約３週間後に採取し、拡張させた。増殖動態および平板効率を測定する前に、培養物をＧ４１８の不在下で７−１０日間、増殖適応させた。１コロニーが外因性の野生型ｐ５３遺伝子を含むので、これをＴ９８Ｇｐ５３と表示する。３）平板効率。細胞を６ｃｍの平板当たり１００−５００個の低密度で３重に接種し、２週間増殖させた。平板をメタノール中の０．５％メチレンブルーで染色し、コロニーを計数した。トランスフェションした細胞の平板効率は２０％であった。母細胞は平板効率５０％であった。４）抗生物質Ｇ４１８の不在下で２週間適応させた対照の母体Ｔ９８Ｇ細胞およびＴ９８Ｇｐ５３細胞を、２４ウェルのプレートに２×１０⁴個／ウェルで接種した。翌日、それらを１時間、１０μＭから４０μＭまで１０μＭずつ増大する種々の濃度のシスプラチン（化学療法薬）に暴露した。１時間後にシスプラチンを除去し、完全培地（ＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎児血清）と交換し、細胞を７日間増殖させた。７日後に細胞を計数し、またはクリスタルバイオレットで染色した。後者の場合、５４０ｎｍにおける吸収は細胞生存力に比例する。クローン原性アッセイのために、細胞を処理後に６ウェルプレートに５００−１０００個／ウェルで再接種した。７−１０日後に０．５％メチレンブルー、７０％ＥＴＯＨ中で染色することによりクローンを計数した。ｐ５３トランスフェション体と母体Ｔ９８Ｇ神経膠芽腫細胞とから得たコロニー数を比較した。図１に示すように、Ｔ９８Ｇｐ５３細胞の方が母体Ｔ９８Ｇ細胞よりシスプラチンの作用に対してかなり感受性であった。後続アッセイによりこの感受性の増大を確認した。コロニー数の５０％減少を達成するのに必要なシスプラチンの濃度は、Ｔ９８Ｇ母細胞および空のベクター形質導入細胞の場合の約３０μＭから、野生型ｐ５３遺伝子形質導入細胞の場合の約１５−２０μＭに低下した。実施例５．放射線療法に対する腫瘍細胞の感受性の増大対照の母体Ｔ９８Ｇ細胞およびＴ９８Ｇｐ５３細胞をＧ４１８の不在下で２週間増殖させ、次いでＴ２５フラスコ当たり約５，０００個で接種した。翌日、細胞をコバルト６０源からのγ線により、１００ラドから１５００ラドまで１００ラドずつ増大する線量で照射した。次いで細胞をさらに５−１２日間インキュベートし、コロニーを０．５％メチレンブルー−メタノール中で染色し、計数し、対照の非処理細胞と比較した。図２に示すように、野生型ｐ５３を形質導入したＴ９８Ｇｐ５３細胞は放射線に対して増大した感受性を示し、コロニー数の５０％減少は母細胞の４００ラドと比較して約２００ラドで起こった。実施例６．ｐ５３遺伝子感作療法以下に記載する処理を突然変異ｐ５３活性をもつ腫瘍に適用する。１．ｐ５３異常を含む腫瘍の同定ｐ５３異常を含む腫瘍を同定するために、ルーティンな分子生物学的診断法を用いることができ、これには以下のものが含まれるが、これらに限定されない：一本鎖コンホメーション多形（ＳＳＣＰ）、ＰＣＲ、配列決定法、および遺伝子異常を検出するための、当業者に既知の関連する分子生物学的方法（“ＧｅｎｅｒａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＭｅｔｈｏｄｓＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ，１９９４；およびサムブルック、フリッチュ、マニアチス（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ），ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク、１９８９；参考として本明細書に引用する）。２．直接注射またはエーロゾル化製剤によるｐ５３ベクターを用いた腫瘍感作この適用に際しては、適切な野生型ｐ５３ベクターおよび／または産生細胞系を腫瘍に、または外科的切除もしくは剥離後の過去の腫瘍部位に（残留腫瘍細胞を処理するために）注射し、腫瘍細胞に野生型ｐ５３遺伝子の療法感作活性をコードする部分を発現させる。エーロゾル化したベクター製剤も切除部分または呼吸管内の腫瘍に野生型ｐ５３遺伝子を付与するために使用しうる。次いで患者を、腫瘍の治療に適した当業者に既知の化学療法、放射線療法、生物学的療法、寒冷療法または高熱療法で、下記に従って治療する：“Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ”，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット、１９９３；“ＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット、１９９３；および“ＢｉｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｙｏｆＣａｎｃｅｒ”，デビタ（Ｄｅｖｉｔａ）ら編、リッペンコット、１９９１；参考として本明細書に引用する）。この方法は局所原発腫瘍の治療に用いることができ、これには以下のものが含まれるが、これらに限定されない：中枢神経系腫瘍、肉腫、および初期癌腫（肺癌、前立腺癌、乳癌、膀胱癌、腎癌、肝細胞癌、膵癌、胃癌、食道癌、結腸直腸癌、肛門癌、頭頚部癌、胆道癌および尿生殖器癌）。この方法はこれらおよび他の腫瘍の転移性病変の治療にも用いることができる。これらの適用に際しては、適切な野生型ｐ５３ベクターおよび／または産生細胞系を転移性腫瘍に、または外科的切除もしくは剥離後の過去の転移性腫瘍部位に注射し、腫瘍細胞に野生型ｐ５３遺伝子の療法感作活性をコードする部分を発現させる。エーロゾル化したベクター製剤も切除部分または呼吸管内の腫瘍に野生型ｐ５３遺伝子を付与するために使用しうる。次いで患者を、腫瘍の治療に適した当業者に既知の化学療法、放射線療法、生物学的療法、寒冷療法または高熱療法で、下記に従って治療する：Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット，１９９３；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および“ＢｉｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｙｏｆＣａｎｃｅｒ”，デビタ（Ｄｅｖｉｔａ）ら編、リッペンコット、１９９１；参考として本明細書に引用する）。３．動脈内注入によるｐ５３ベクターを用いた腫瘍感作動脈内注入用の化学療法薬および他の薬物を、多様な原発癌および転移性癌の治療に用いることができる（Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット）。このｐ５３療法感作法の適用に際しては、これらの動脈内注入法を用いて適切な野生型ｐ５３ベクターおよび／または産生細胞系を付与し、腫瘍細胞に野生型ｐ５３遺伝子の療法感作活性をコードする部分を発現させる。次いで患者を、原発または転移性腫瘍の治療に適した当業者に既知の化学療法、放射線療法、生物学的療法、寒冷療法または高熱療法で、下記に従って治療する：Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および“ＢｉｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｙｏｆＣａｎｃｅｒ”，デビタ（Ｄｅｖｉｔａ）ら編、リッペンコット、１９９１；参考として本明細書に引用する）。この方法は原発性肝細胞癌腫、転移性肝癌および頭頚部腫瘍などの腫瘍の治療に適用することができるが、これらに限定されない。この方法は動脈注入の分野の専門家が、注入可能な動脈管につきいかなる腫瘍の治療にも適用することができる。４．腔内注入によるｐ５３ベクターを用いた腫瘍感作これらの適用に際しては、腫瘍細胞を含む体腔に、適切な野生型ｐ５３ベクターおよび／または産生細胞系をまず付与し、腫瘍細胞に野生型ｐ５３遺伝子の療法感作活性をコードする部分を発現させる。次いで患者を、原発または転移性腔内腫瘍の治療に適した当業者に既知の化学療法、放射線療法、生物学的療法、寒冷療法または高熱療法で、下記に従って治療する：Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および “ＢｉｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｙｏｆＣａｎｃｅｒ”，デビタ（Ｄｅｖｉｔａ）ら編、リッペンコット、１９９１；参考として本明細書に引用する）。この方法は悪性の胸膜浸出液腫瘍（胸膜腔）、腹水腫瘍（腹腔）、軟髄膜腫瘍（脳脊髄／脳室系）、心膜浸出液癌（心膜腔）および膀胱癌（膀胱注入）の治療に適用することができるが、これらに限定されない。５．ｐ５３感作による造血幹／前駆細胞の腫瘍のパージこの適用に際しては、患者を骨髄抑止／切除式癌療法の影響から救済するために、自己造血幹／前駆細胞から使用前に残留腫瘍細胞をｐ５３感作によりパージする。造血幹／前駆細胞試料を標準法により患者から採取し（Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および“ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”，フォルマン（Ｆｏｒｍａｎ）ら編，１９９３；参考として本明細書に引用する）、ｅｘｖｉｖｏで適切な野生型ｐ５３ベクターおよび／または産生細胞系形質導入し、野生型ｐ５３遺伝子の療法感作活性をコードする部分を発現させる。次いで形質導入した細胞調製物を当業者に既知の細胞毒性パージ法で処理する（Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および“ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”，フォルマン（Ｆｏｒｍａｎ）ら編，１９９３；参考として本明細書に引用する）。次いで患者を骨髄抑止／切除式癌療法で治療し、次いで残留腫瘍細胞をｐ５３感作によりパージじた造血幹／前駆細胞を患者に注入して、極めて攻撃的な癌療法の骨髄抑止の影響から患者を救済する。骨髄抑止／切除式治療の実施および造血幹／前駆細胞注入による救済は先行技術に十分に述べられており、多様な充実性および造血系の悪性疾患の治療に用いられている（Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウイッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および“ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”，フォルマン（Ｆｏｒｍａｎ）ら編，１９９３；参考として本明細書に引用する）。残留腫瘍細胞を細胞毒性パージ剤により破壊するためにｐ５３感作すると、患者の救済に用いられる造血幹前駆細胞注入液中の腫瘍細胞の数が減少するであろう。これにより、残留腫瘍細胞を含有する造血幹／前駆細胞調製物の注入により起こる可能性のある腫瘍再発の可能性が低下するであろう。６．ｐ５３感作による散在性転移性腫瘍の治療これらの適用に際しては、適切な野生型ｐ５３ベクターおよび／または産生細胞系を全身的または非経口的に注射し、腫瘍細胞に野生型ｐ５３遺伝子の療法感作活性をコードする部分を発現させる。次いで患者を、転移性腫瘍の治療に適した当業者に既知の化学療法、放射線療法、生物学的療法、寒冷療法または高熱療法で、下記に従って治療する：Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ (Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ)編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および“ＢｉｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｙｏｆＣａｎｃｅｒ”，デビタ（Ｄｅｖｉｔａ）ら編、リッペンコット、１９９１；参考として本明細書に引用する）。上記に概説したｐ５３仲介による感作療法の個々の適用を組み合わせて用いることができ、これは多重様式の癌療法の技術分野における専門家が下記に従って適用することができる：Ｃａｎｃｅｒ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，デビタ、ヘルマン、ローゼンバーグ（Ｄｅｖｉｔａ，Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）編、リッペンコット；およびＭａｎｕａｌｏｆＯｎｃｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ウィッテス（Ｗｉｔｔｅｓ）編、リッペンコット；および“ＢｉｏｌｏｇｉｃＴｈｅｒａｐｙｏｆＣａｎｃｅｒ”，デビタ（Ｄｅｖｉｔａ）ら編、リッペンコット、１９９１；参考として本明細書に引用する）。７．ｐ５３仲介感作療法による多形神経膠芽腫の治療多形神経膠芽腫は最も頻繁に遭遇する頭蓋内脳腫瘍であり、米国では毎年ほぼ２０，０００の新たな症例が診断されている。それは中枢神経系の外へはめったに転移しないが、それにもかかわらず最も悪性の神経膠星状細胞腫であり、現行の一般的方法を用いる医師の療法を撃退する。これらの方法には外科処置、放射線療法および化学療法が含まれ、あらゆる分野で進歩が得られてはいるが、診断からの平均生存時間はなおわずか１年である。神経膠芽腫は放射線療法に対してかなり耐性であり、大部分の化学療法薬に対してわずかしか応答しない。最初はある程度の有効性をもつことが示されたこれらの化学療法薬−−シスプラチン、ＢＣＮＵ（カルムスチン）およびＰＶＣ（プロカルバジンＣＣＮＵ、ビンクリスチン）を含む−−のうちに持続的有効性を示すものはない。それらが脳内に位置するため、神経膠芽腫患者においては中程度の腫瘍進行であっても病的状態が高い。腫瘍体積のわずかな減少が患者にとって有益な効果があると期待される。さらに、神経膠芽腫は中枢神経系の外へ転移することはまれであり、このためこの疾患は、腫瘍部位におけるｐ５３保有アデノウイルスの局所感染、またはアデノウイルスキャプシドで促進されたｐ５３ｃＤＮＡの局所トランスフェクション、またはｐ５３保有ウイルスベクターパッケージング系列の移植を含めた局所遺伝子伝達にとって理想的な標的となる。またこの方法は、腫瘍体積のわずかな減少ですら病的状態の減少が生じる他の癌の脳内転移にとっても有益であろう。８．ｐ５３仲介感作療法による肝細胞癌および頭頚部癌の治療肝細胞癌および頭頚部癌はｐ５３突然変異の頻度が高い（最高３０％）ことを特色とし、アデノウイルス系ｐ５３仲介感作療法および関連のｐ５３仲介感作療法にとって卓越した標的である。ｐ５３ベクターを動脈内付与すると、高い効率で腫瘍内へ野生型ｐ５３療法感作活性を付与することができる。しかし多くの場合は、臨床効果を得るためにｐ５３遺伝子を全身付与する必要はない。肝細胞癌および頭頚部癌は神経膠芽腫と同様に局所的に病的状態を生じる場合が多いからである。ｐ５３突然変異を伴う結腸直腸癌および他の腫瘍の肝臓転移も、ｐ５３ベクターの動脈内注入により治療し、次いで癌治療の分野の専門家に既知である適切な腫瘍療法により治療することができる。９．ｐ５３仲介感作療法による肺癌の治療肺上皮もアデノウイルス系ｐ５３仲介感作療法にとって卓越した標的である。最初は化学療法に著しく感受性である小細胞性肺癌が疾患の進行に伴って耐性を獲得する。野生型ｐ５３の導入は、腫瘍細胞を療法に対して感作することにより、この腫瘍の治療に利用しうる。同様にほぼ５０％の症例においてｐ５３突然変異を特色とする非−小細胞性肺癌はしばしば化学療法に対して抵抗性である。したがってｐ５３仲介感作療法をこれらの腫瘍の治療に用いることができる。実施例７．療法感作活性をもつ小型分子のスクリーニング療法感作性をもつ小型分子は、候補となる小型分子を含有しない対照溶液に対比してそれらが癌治療効率を高めうることにより同定される。それぞれの候補分子を、細胞系、動物モデルおよび制御された臨床研究において癌療法を感作する効率につき、当業者に既知の、かつ食品医薬品局が承認した方法、たとえば連邦官報４７（ｎｏ．５６）：１２５５８−１２５６４，１９８２年３月２３日、に公布された方法（これに限定されない）で試験する。療法感作活性または増強活性をもつ小型分子を、野生型の療法感作活性をもつ蛋白質につき先に記載した方法を採用した癌療法に用いることができる。小型分子は投与後に容易に組織内へ拡散するので、この方法を他の療法と併用して、局在化した腫瘍および転移性腫瘍の両方を治療することができる。野生型の療法感作活性を模倣した、またはそれを与える小型分子は、適切な標的を用いる結合アッセイによりスクリーニングすることができる（ホーテン（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．），“ペプチドライブラリー、基準および動向”，ＴｒｅｎｄｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓ９：２３５−２３９，１９９３参照）。ペプチド、修飾ペプチドまたは有機化合物の組合わせライブラリーは当業者に既知の方法で形成することができる（ジャヤリクレーム（Ｊａｙａｔｉｃｋｒｅｍｅ）ら，“多用途ペプチドライブラリーの形成および機能スクリーニング”，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：１６１４−１６１８；ホーテン（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．），“ペプチドライブラリー、基準および動向”,ＴｒｅｎｄｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓ９：２３５−２３９，１９９３；フィリップス（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ）ら，“移行状態の解明；阻害薬類似体および酵素構造の変更を組み合わせた新規方法”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９２，３１（４）：９５９−６３；アイヒラーおよびホーテン（Ｅｉｃｈｌｅｒ，Ｈｏｕｇｈｔｅｎ），“合成ペプチド組み合わせライブラリーのスクリーニングによる基質類似トリプシン阻害薬の同定”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３２：１１０３５−１１０４１，１９９３；ハストン（Ｈｕｓｔｏｎ）ら，“単鎖抗体の医療応用”，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９３，１０（２−３）：１９５−２１７；ファン・デ・ウォータービームド（ＶａｎｄｅＷａｔｅｒｂｅｅｍｄＨ．），“ＱＳＡＲ技術における最近の進歩”，ＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎａｎｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，１９９３，９（３−４）：２７７−８５）。推定小型分子は同様に機能に関する生物学的アッセイ法で分析することができる。具体例においては、ペプチドをコードおよび発現するレトロウイルスベクターライブラリーを療法感作活性につき、前記実施例に記載した方法およびグッドコブ（Ｇｕｄｋｏｖ）ら，１９９３，“ヒトトポイソメラーゼＩＩＣＤＮＡからの、トポイソメラーゼＩＩ作用性細胞毒性薬物に対する耐性を誘導する遺伝子サプレッサー要素の単離”，Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：３２３１−３２３５（参考として本明細書に引用する）により、直接にスクリーニングすることができる。実施例８．推定される療法感作分子の毒性試験前記のいずれかの方法において活性である薬剤が健康な細胞に対してほとんど、または全く作用しないか否かを判定する方法を提供する。次いでそれらの薬剤を薬剤学的に許容しうる緩衝剤または標準的な動物試験に用いられる緩衝剤中に配合する。 “薬剤学的に許容しうる緩衝剤”とは、貯蔵および後続の投与のために調製される、薬剤学的に許容しうるキャリヤーまたは希釈剤中における薬剤学的に有効な量の本明細書に記載する薬剤を含む薬剤組成物に使用しうる任意の緩衝剤を意味する。療法用として許容しうるキャリヤーまたは希釈剤は当技術分野で周知であり、たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ、マック・パブリシング・コーポレーション（ジェナロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）編，１９８５）に記載されている。防腐薬、安定剤、色素、さらには矯味矯臭薬を薬剤組成物に含有させることができる。たとえば安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルを防腐薬として添加することができる。同上、１４４９に。さらに、酸化防止剤および懸濁化剤を使用しうる。同上。Ａ．毒性に関する追加のスクリーニング：方法１療法感作活性をもつと同定された薬剤を培養ヒト細胞に対する毒性に関して評価する。この評価は生細胞が２，３−ビス［２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホニルフェニル］−５−［（フェニルアミノ）カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロキシド］（以下、ＸＴＴと呼ぶ）を還元する能力に基づく（パウル（Ｐａｕｌｌ）ら，Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｌ．Ｃｈｅｍ．２５：７６３−７６７（１９８７）；ウイスロウ（Ｗｉｓｌｏｗ）ら，（１９８９）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ．Ｉｎｓｔ．８１：５７７）。生存力のある哺乳動物細胞はＸＴＴのテトラゾール環のＮ−Ｎ結合を還元開裂してＸＴＴホルマザンを形成しうる。死細胞またはエネルギー代謝が損傷を受けた細胞はこの開裂反応を行うことができない。開裂の程度は被験生細胞数に正比例する。ヒト細胞系由来の細胞、たとえばＨｅＬａ細胞を、９６ウェルのミクロタイタープレートのウェルにウェル当たり１０³個で０．１ｍｌの細胞培地（１０％ウシ胎児血清を補充した変更ダルベッコ最小必須培地）中に接種する。３７℃で９５％空気、５％ＣＯ₂の雰囲気中における培養によりプレートに付着させる。一夜培養したのち、被験物質の溶液を８回の半１０進（ｈａｌｆ−ｄｅｃａｄｅ）対数希釈である濃度で２重にウェルに添加する。平行して、被験物質の溶解に用いた溶剤を他のウェルに２重に添加する。細胞培養を一般に２４時間続ける。その期間が終了した時点でＸＴＴおよびカップラー（硫酸メチルフェナゾニウム）を被験ウェルそれぞれに添加し、さらに４時間インキュベーションを続けたのち、各ウェルの光学濃度を４５０ｎｍで自動プレート読取り装置により測定する。哺乳動物細胞を死滅させ、またはそれらのエネルギー代謝に損傷を与え、またはそれらの増殖を遅延させる物質を、被験物質を添加しなかったウェルと比較した４５０ｎｍにおけるウェルの光学濃度の低下により判定する。Ｂ．毒性に関する追加のスクリーニング：方法２療法感作分子を培養ヒト細胞系に対する細胞毒作用に関して、細胞生存力の指示体としての蛋白質中への³⁵Ｓメチオニンの取り込みにより試験する。ＨｅＬａ細胞を９６ウェルのプレート内で、１０％ウシ胎児血清ならびに５０μｇ／ｍｌのペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したダルベッコ最小必須培地中において増殖させる。細胞をまず１０₃個／ウェル、０．１ｍｌ／ウェルで接種する。細胞を療法感作分子に暴露せずに４８時間増殖させ、次いで培地を除去し、完全培地中に調製した療法感作分子の種々の希釈液を各ウェルに添加し、対照ウェルにはサイトカインモジュレーターを添加しない。細胞をさらに４８−７２時間インキュベートする。培地を２４時間毎に交換し、同濃度の療法感作分子を含有する新鮮な培地と入れ替える。次いで培地を除去し、抗真菌薬を含有しない完全培地と入れ替える。細胞を療法感作分子の不在下で２４時間インキュベートし、次いで蛋白質中への³⁵Ｓの取込みにより生存力を推定する。培地を除去し、メチオニンを含有しない完全培地と入れ替え、３０分間インキュベートする。培地を再度除去し、メチオニンを含有しないが、０．１μＣｉ／ｍｌの³⁵Ｓメチオニンを含有する完全培地と入れ替える。細胞を３時間インキュベートする。ウェルをＰＢＳで３回洗浄し、次いで細胞を１００％メタノールの添加により１０分間、透過性処理する。氷冷１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加してウェルを満たす；プレートを氷上で５分間インキュベートする。このＴＣＡ洗浄をさらに２回反復する。ウェルを再度メタノール中で洗浄し、風乾する。５０μｌのシンチレーションカクテルを各ウェルに添加し、遠心分離によりウェル上で乾燥させる。プレートを用いてＸ線フィルムを露光する。抗真菌薬を含有しないウェルも含めたオートラジオグラムの濃度計走査を用いて、５０％の細胞が生存しえない用量（ＩＤ₅₀）を測定する（ＣｕｌｔｕｒｅｏｆＡｎｉｍａｌＣｅｌｌｓ．Ａｍａｎｕａｌｏｆｂａｓｉｃｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．（１９８７）．フレッシュニー（Ｒ．ＩａｎＦｒｅｓｈｎｅｙ）、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレーテッド、ニューヨーク）。実施例９．療法感作分子の投与本発明は、前記方法で見出した新規な療法感作分子である。本発明は、薬剤学的に許容しうる配合物中に配合した、前記方法で見出した新規な療法感作分子を含有する新規な薬剤組成物をも包含する。 “薬剤学的に有効な量”とは、患者の疾患または状態の１または２以上の症状を軽減する（ある程度は）量を意味する。さらに、“療法上有効な量”とは、真菌性の疾患または状態に付随するか、またはその原因である生理学的または生化学的パラメーターを部分的または完全に正常に戻す量を意味する。一般にそれはそのＥＣ₅₀、ならびに患者の年齢、体格および付随する疾患に応じて、約１ｎｍｏｌ−１μｍｏｌの量である。引用する刊行物はすべて、各刊行物に挙げられたアミノ酸配列をも含めて、本明細書に参考として含まれるものとする。他の態様は以下の請求の範囲に包含されるものである。Detailed Description of the Invention Increased sensitivity of tumor cells to therapy Background of the Invention No. 08 / 236,221, entitled "Tumor to Treatment." Increased Cell Sensitivity ", filed May 24, 1994, is a continuation-in-part application. This is described in US patent application Ser. No. 08 / 236,221, entitled "Sensitivity of Tumor Cells to Treatment." Increasing acceptability ", filed on April 29, 1994, is a continuation-in-part application. The description of the application specification is included in the present specification as a reference. The present invention relates to cancer therapy. The present invention is particularly useful for enhancing the therapeutic effect on cancer. It is about law. The mainstays of cancer treatment are surgery, radiation therapy, chemotherapy and biological therapy (all See generally:Comprehensive Textbook f Oncology , Editor Moores (AR Moossor) (Willia Muz and Wilkins, 1991);Cancer: principle s and practice of oncology ， Editor Devita, Helma Vincent T. DeVita, Jr., Samue l Hellman, Steven A .; Rosenberg, 4th edition (Fi Radelphia: J. B. Lippincott Company, 1993)). Radiation therapy Also called law (radiation therapy, radiotherapy) Is a high-energy X-ray, electron beam, which does not exceed the allowable dose for normal tissue, Killing cancer cells with radioactive isotopes and other forms of radiation known to those skilled in the art It is. Chemotherapy refers to the use of drugs to kill cancer cells. Different modes of action There are several groups of chemotherapy drugs. For example, many antimetabolites have normal cellular components And exert their effects by inhibiting normal cellular processes. Blur. Many alkylating agents are effective against proliferative and non-proliferative cancer cell populations. is there. In general, these drugs bind to cellular DNA in a variety of ways to ensure proper replication. And / or inhibit transcription. Many antitumor antibiotics convert themselves into DNA Insert, where it induces DNA destruction or inhibits transcription. In general Calloids inhibit the function of the chromosome spindle required for cell division. Hormonal drugs Tamoxifen and flutamide, for example, inhibit the growth of certain cancers. However Their mechanism of action is not completely understood. Biological therapy generally originates from or has a biological process in the host. Use beneficially imitated substances. Interferon-α and interleuk N-2 is two examples of biotherapeutic agents currently used to treat cancer. Modifiers are used to enhance the effectiveness of standard treatments for the treatment of certain cancers (generally See: Coleman, Glover, Talishi (Coleman C N, Glover DJ, Turrisi AT), “Radiation and Chemotherapy Sensitizers and protectants ”,Chemotherapy: Principles a nd practice , Philadelphia: WB Saunders, 225-2 52, 1989). Modifiers are usually not cytotoxic in their own right For example, it modifies or increases the responsiveness of tumor tissue to radiation therapy. Sensitizer Efficacy is generally determined by the sensitization enhancement ratio. ratio, SER). SER is a certain level of cells without sensitizer The therapeutic dose required to cause death was used in combination with a sensitizer to achieve the same level of cell death. It is divided by the therapeutic dose required. Two examples of clinical methods for improving radiotherapy and chemotherapy are hypoxia-specific. Hypoxic-cell sensitization and thio It is exhausted. Some of the damage caused by radiation and alkylating agents is DNA and And other important cellular macromolecules involved in free radical formation. Thiol compounds Blocks DNA free radicals or repairs them. DNA free radical is oxygen or acid When exposed to elemental-like hypoxic-cell sensitizers, such as nitroimidazole , The damage to the DNA is fixed, ie it becomes irreversible by oxidation. Buto Depletion of thiols by drugs such as ninsulfoximine (BSO) is also associated with radiation and Increases toxicity with radiomimetic chemotherapeutic agents such as alkylating agents. Summary of the invention The present invention provides a wild-type therapy-sensitizing gene. g gene) is a method of treating cancer, which is characterized by a loss of activity. This method is for tumor Introduce a source of wild-type therapy-sensitizing gene activity into cells, and treat cells with cancer therapy Including applying. Radiation therapy is used for cancer therapy whose effect is enhanced by the present invention. , Chemotherapy, biological therapy-including immunotherapy, cryotherapy and hyperthermia- But not limited to these. The cancers that can be treated by the present invention include the following: Includes but is not limited to: carcinoma, sarcoma, central nervous system tumor, melanoma, leukemia. Disease, lymphoma, hematopoietic cancer, ovarian cancer, osteogenic sarcoma, lung cancer, colorectal cancer, hepatocellular carcinoma, Glioblastoma, prostate cancer, breast cancer, bladder cancer, renal cancer, pancreatic cancer, gastric cancer, esophageal cancer, anal cancer, gall Road cancer, genitourinary cancer, and head and neck cancer. Thus, the invention features loss of wild-type therapeutic sensitizing gene activity. Tumor cells to provide a source of wild-type therapy-sensitizing gene activity and This is a method of enhancing the effect of cancer therapy by applying cancer therapy to the cells. "Delivering" refers to the administration of a drug to a mammal, This means adopting methods known to those skilled in the art. These methods include gene or Is to insert the cDNA of the gene into a vector and impart it to tumor cells. Attaches to the tumor cells by coupling the gene's cDNA to the viral capsid. By giving a gene or a cDNA of the gene with a ligand , Or by encapsulating it in a liposome to give it to a tumor cell, Correction of point mutations or insertion mutations or deletion mutations of genes by recombination method Or the protein directly or in a hybrid molecule, and Include, but are not limited to, being applied to cells by the encapsulation method. tumor Other substances that result in the presence of wild-type therapeutic sensitizing gene activity in cells And methods, such as those described below: Sambrook, Flitch And Maniatis (J. Sambrook, EF Fritsch, TM aniatis),Molecular Cloning: A Laborat ory Manual , Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory -Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989 Bini Ausubel et al.Current Protocols i n Molecular Biology, 1994. These are referenced in this specification Shall be included as. A "therapeutic sensitizing gene" is one that causes cancer cells to lose its normal function or regulation. By a gene or gene product that becomes more resistant to therapy. Therapy sensation remains Restoring gene function makes cancer cells more sensitive to therapy. Especially it is apo Tumorization and therapy that promote torosis, or changes in its function or regulation Genes that contribute to resistance, including but not limited to: Not determined: tumor suppressor gene, eg p53; cell cycle regulatory gene, For example, cyclin, cyclin-dependent kinase (Steel, M.), Lancet343: 931-932, 1994), mitogen activation pro Thein kinase (Blenis, J., Pro. Natl. Aca d. Sci.90: 5889-5892, 1993: Marshall ll, C.J.), Nature,367: 686, 1994), of the cell cycle gene Inhibitors such as p16 (multiple tumor suppressor 1) orsuppressor 1)) (Kamb et al., Science 264). : 436-490, 1994); and apoptotic genes such as fas. A promising therapeutic sensitization gene is described in detail in the present invention for the therapeutic sensitization gene p53. It can be identified by replacing p53 with its promising gene in the manner shown. Tumor cells, for example, are first subjected to routine sequence analysis or other The genetic signature that encodes the candidate therapeutic sensitization gene to be tested by the diagnostic assay. Including mutated offspring or messenger RNA To clarify. The normal wild-type coding sequence for that gene is then known to those of skill in the art. Any known standard method may be used to include a selectable marker gene, such as the neomycin resistance gene. Subcloning into a truncated eukaryotic expression vector. For example, normal code distribution From the cDNA of the messenger RNA population of normal fibroblasts, the coding sequence Using the appropriate primers at the 3'and 5'ends of the polymerase chain reaction (P CR). Substituting into a suitable eukaryotic expression vector After cloning, include the normal candidate therapeutic sensitization gene in question. Of the vector into a tumor cell expressing a mutated form of the gene. Can be operated. Transfection can be done by a large number Method, which includes calcium phosphate transfection, lipofus Eh S. (using cationic liposomes), electroporation and D EAE-dextran facilitated transfection, including but not limited to Not. Transfect the transfected cells with an appropriate selection reagent, e.g. Expand in the presence of Once the clones have been expanded and selected, 1) Routine routines known to those skilled in the art to demonstrate expression of candidate therapeutic sensitization genes. Method, and 2) sensitivity to chemotherapeutic agents and / or radiation therapy To the standard proliferation assay method described in the detailed description of the invention for p53. Or by a clonogenic assay. Expression of candidate therapeutic sensitization genes If the sensitivity is increased compared to the mother tumor cells in a large number of clones that The transfected gene is shown to be a therapy sensitizing gene. “Wild-type therapeutic sensitization gene activity” means therapeutic sensitization in normal non-neoplastic cells Means the activity of the gene. In particular, it is the protein encoded by the therapy-sensitizing gene. White matter or part of a protein implies the ability to sensitize tumor cells to cancer therapies . Therapy containing one or more "mutations" that do not affect its therapeutic sensitization potential Sensitizing proteins are also considered "wild type" for the purposes of the present invention. Its activity is Embodied in a protein expressed from the coding sequence of a live-type therapeutic sensitization gene or part Is done. “Loss of wild-type therapy-sensitizing gene activity” means the absence of normal therapy-sensitizing gene activity. Presence or alteration, for example, the presence of a mutant therapeutic sensitizing protein in the cell, Absence of wild-type therapy-sensitizing protein or inhibition of wild-type therapy-sensitizing protein. Means being harmed. The difference in therapeutic sensitization activity from normal is 1 or It can be caused by gene differences at two or more loci. Gene phase There are several different types of differences, which include Not limited to: point mutation in which one base pair is changed to another base pair, 1 or 2 or more Insertion of the above base pairs, from 1 or more base pairs to the full length of therapeutic sensitization gene Extensive deletion, fusion of one gene with another gene, additional copy of existing therapeutic sensitization gene Introduction of one or more copies of a non-therapeutic sensitization gene that did not previously exist Introduction, changes in other gene transcription, translation and protein function known to those of skill in the art, or Any combination of the above. "Tumor cells" are unwanted growths of tissue that occur in animals in vivo, Means cells that can undergo abnormal survival or abnormal infiltration. The present invention, in a preferred embodiment, comprises a therapeutically sensitized portion of a wild-type therapeutically sensitized protein. It is introduced into tumor cells and the tumor cells are treated for cancer. "Therapeutic sensitization part of the wild-type therapeutic-sensitized protein" refers to the wild-type therapeutic-sensitized protein. Sensitize tumor cells expressing mutated therapeutic sensitization activity to cancer therapy. Means the part that has the ability to Wild-type therapy-sensitized protein therapy It can be confirmed by routine sequence analysis known to those skilled in the art. For this Include, but are not limited to: deletion mutations, point mutations, and Unger et al., "Transcriptional regulation, transdominant (transd)." wild type involved in inhibition and transformation suppression And mutant functional domains of therapeutic sensitizing proteins ", Mol. Cell. B iol.13: 5186-94, 1994, and Sambrook, Fritsch And Maniatis (J. Sambrook, EF Fritsch, T. Ma. niatis),Molecular Cloning: A Laborato ry Manual , 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989, Navi Ausubel et al.Current Protocols in Molecular Biology , 1994. These are referred to in this specification. Included. In another preferred embodiment of the present invention, a wild-type therapeutic sensitizing gene, its cDNA A, or a portion encoding the therapeutic sensitizing gene activity thereof is introduced into tumor cells to The sensitizing gene is expressed and the tumor cells are treated for cancer. In yet another preferred embodiment, the therapy sensitizing gene, its cDNA, or A part of it is used for adenovirus vector, retrovirus vector, adeno-associated Illus vector, herpes virus vector, vaccinia virus vector, And a papilloma virus vector selected from the group consisting of (But not limited thereto). Therapy sensitization gene, its cDNA A, or a part thereof, is a viral capsid or particle via polylysine. Or to a ligand such as asialoglycoprotein, Alternatively, they can be introduced into tumor cells by encapsulating them in liposomes. Movement Direct injection, aerosolized formulation, intraarterial injection, intracavitary injection And intravenous infusion, but is not limited thereto. Possibly inherited mutated or abnormal therapeutic sensitization activity Child expression or gene product activity, which may be transdominated. By a Nantes negative mutation or other down-regulation method known to those of skill in the art. Can be down-regulated. Other features and advantages of the invention are the following detailed description of the invention and the claims. It will be obvious. Brief description of the drawings Figure 1 shows T98G glioblastoma cells (filled circles) and the same expressing wild-type p53. Cell sensitivity of T98Gp53 cells (open circles) is shown. FIG. 2 shows T98G glioblastoma cells (upper curve), and T98Gp53 cells. The radiation sensitivity (lower curve) is shown. Detailed description of the invention The present invention introduces into tumor cells a source of therapeutic sensitizing activity that is lost from the tumor cells. The effect of cancer therapy (by introducing a gene, cDNA or protein) Is a new way to increase Examples of their activity are fas gene, retinoblastoma inheritance Offspring, p53 tumor suppressor gene and other tumor suppressor genes, cell perimeter Includes, but is not limited to, phase regulatory genes and apoptotic genes.Association of tumor sensitizing gene p53 with human cancer Loss of normal p53 function due to mutations, deletions or inactivation is associated with human cancer Is one of the most frequently encountered changes in humans and occurs in nearly 50% of human cancers (Nigro et al., "Mutations in the p53 Gene Cause Different Human Tumors" Type happens ”,Nature, 342: 705-708 (1989); Taka Takahashi et al., "P53: A frequent marker of genetic abnormalities in lung cancer." Target ”,Science, 246: 491-194 (1989)). Furthermore, p5 Several studies have shown that individuals with 3 inherited mutations are susceptible to various cancers. Inviting (Malkin et al., “Family of breast cancer, sarcoma and other neoplasms Germline p53 mutations in sexual syndrome ”,Science, 250: 12 33-1238 (1990); Srivastava et al. -Reproductive parameters of mutant p53 gene in cancer-prone families with Fraumeni syndrome Cell system transmission ”,Nature, 348: 747-749 (1990): Li (Li ) Et al., “Family Cancer Syndrome in 24 Consanguineas”Cancer Res. , 48 : 5358-5362 (1988)). The tumors in these individuals were wild-type p53 alleles It has been shown to be missing the gene, which is the retina in retinoblastoma and other tumors. Reminiscent of loss of heterozygosity for the blastoma suppressor gene (Nusson (Knu dson, A .; G. FIG. ) “Mutations and cancer: a statistical study of retinoblastoma”,Pro. N atl. Acad. Sci. , USA , 68: 820-823 (1971); Comings, DE “General Theory of Carcinogenesis”,Pro. Natl. Acad. Sci. , USA , 7U: 3324-3328 (1973)). In vitro transfection of wild-type p53 gene into various tumor cell lines When cell growth is down-regulated or cells are re-implanted in vivo Several studies have shown that tumorigenic phenotypes are then suppressed. these Studies include the following: Glioblastoma-derived tumor cells (Mersel cer, et al., “Glioblastoma tumor cell lines that conditionally express human wild-type p53. Negative growth regulation ”,Pro. Natl. Acad. Sci. , USA, 87: 6166-6170 (1990)), colon cancer (Baker et al. Inhibition of human colorectal cancer cell proliferation by live p53 ",Science, 249: 912-915 (1990), Osteosarcoma (Diller, et al., “Osteosarcoma. Of p53 as a cell cycle control protein inMol. Cell. Bi ol. 10: 5772-5781 (1990); Chen et al., "Hee. Genetic mechanism of tumor suppression by the p53 gene ”,Science, 250 : 1756-1580 (1990)), leukemia (Cheng et al., “Hee. Suppression of acute lymphoblastic leukemia by wild-type p53 gene ",Cancer Res. , 53: 222-226 (1992)), and lung cancer (Takahashi (Ta). Kahashi) et al., "Wild-type p53 augments human lung cancer cells with multigenic lesions." Breeding Suppresses but not mutant p53 ",Cancer Res., 52: 2340-2343 (1992)). However, the wild-type p53 gene was transformed into non-malignant cells In vitro transfection does not result in the decreased cell proliferation seen in tumor cell lines ( Baker et al., Supra). All tumor cells with p53 mutations were significantly increased by expression of wild-type p53. It does not indicate a down regulation. Hinds et al.Ce ll Growth and Differentiation 1: 571-8 0 (1990), not all p53 mutants produce an equivalent phenotype It does not mean that. Mikalovitz et al.,Cell 62: 671-680 (1990), one mutant regulates growth. It is shown that it may be dominant to wild-type p53. Wild type p Expression of 53 does not affect the proliferative properties of certain tumor cell lines. This is Pilomavirus-expressing cell lines and A673 rhabdomyosarcoma cells (Che (Che n) et al., Oncogene6: 1799-1805, 1991). In cases where p53 was reported to suppress cell proliferation, the effect was sometimes small. (Chen et al., 1992, supra). In addition, wild-type p53 alone to downregulate tumor cells The method used requires stable expression of wild-type p53 in tumor cells. p5 In the study of 3 temperature-sensitive mutants, wild-type p53 was transformed Suppressive effect on cell proliferation is lost when wild-type p53 expression is stopped Were observed (Michalovitz et al., 1990, supra). . Most effective gene transfer methods currently in use also involve transient p53 expression. This only limits the effectiveness of therapy with p53 alone, as it is only slow. The function of p53 is remarkably complex and is involved in a variety of cellular processes including: Have: Proliferation (Baker et al., Science,249: 912- 915, 1990; Micalovitz et al., Cell.6 2 : 671-680, 1990), differentiation (Shaulsky) Et al., Pro. Natl. Acad. Sci. ,88: 8982-8986 (19 91), programmed cell death (ie apoptosis) (Yoni Sur Yonish-Rouach et al., Nature,352: 345-34 7, 1991), cell aging (Shay et al., Exp. Cell Res. search,196: 33-39, 1991), DNA binding (Kerne (Ker n) et al., Science,252: 1708-1711, 1991; Bargonet Bargonetti et al., Cell65: 1083-1091,199 1) and G1 phase arrest induced by DNA damage (Kastan (Kastan ) Et al., Cancer Research,51: 6304-6311, 1991. Kuerbitz et al., Pro. Natl. Acad. Sci. USA,89: 7491-7495, 1992). DNA loss in cancer therapy Improvement of p53 in wound-induced G1 arrest is the most interesting role of therapy It is one of the ratios. Tumor cells lacking endogenous p53 with wild-type and mutant p53 genes Introduced. When these cells were irradiated with gamma rays, the expression of wild-type p53 was G1. / Transmits a temporary cell cycle arrest at the S phase boundary (Kastan et al. , "Involvement of p53 protein in cellular response to DNA damage",Cancer R es. , 51: 6304-6311 (1991); Kuerbits z) et al., "Wild-type p53 is a cell cycle checkpoint determinant after irradiation",Pro. Natl. Acad. Sci. USA , 89: 7491-7495 (1 992); Yonish-Rouach et al., "Wild-type p5. 3 inhibits apoptosis of myeloid leukemia cells inhibited by interleukin-6 Induce",Nature, 352: 345-347 (1991)). p53 Cells lacking or expressing the mutant p53 did not arrest (casta Kastan et al., Supra; Kuerbitz et al., Supra). p53 is an important check that blocks entry into S phase until DNA damage is repaired It was proposed that the point function be fulfilled (Vogelstein lstein) et al., Cell70: 523-526, 1992). Therefore The consequences of DNA damaging radiation or chemotherapy on cancer cells are mutations It may be affected by the expression of p53 or wild type p53. In this regard, cancer cells that have lost wild-type p53 function are DNA damaging drugs. And several lines of evidence suggest that it is more sensitive to I have. Similarity with similar checkpoints in yeast indicates that p53-induced G Defects in single-phase arrest can interfere with the repair of lethal DNA damage that occurs before cell division. May promote cell destruction by (Vogelstein (Vogels tein) et al., supra). Vogelstein et al., Supra, states that ing: Tumor cells are susceptible to DNA damaging agents such as radiation and chemotherapy. Often more sensitive to what is used; this sensitivity is the p53 machine Loss of function is a beneficial side effect that would otherwise limit cell death Will. Therefore, p53 mutations reduce the sensitivity of cells to antineoplastic drugs. It makes one of several changes that increase rather than let it happen. This view addresses radiation and chemotherapy associated with mutant p53 gene transfer Supported by studies demonstrating increased susceptibility of tumor cells (Petty ( Petty) et al., "The expression of the p53 tumor suppressor gene product is chemosensitive. Is the determinant ofBiochem. Biophys. Res. Comm., 199: 264-270, 1994, not recognized as prior art). However, normal hematopoietic cells derived from p53 null transgenic mice, fibroblasts, Other studies performed on vesicles and gastrointestinal cells require p53 for apoptosis (Lowe et al., Nature,362: 847-8 49, 1993; Clark et al., Nature,362: 849 -852, 1993; Lotem J, Sachs L. , Blood,82: 1092-1096, 1993; Lowe et al. , Cell74: 957-967, 1993; and merits (Merrit t) et al., Cancer Research,54: 614-617, 1994, Not recognized as prior art). In these studies, normal lacking p53 Cells undergo apoptosis after exposure to radiation or drugs that damage DNA In contrast, it was more resistant. Similarly, studies of Burkitt lymphoma cell lines have shown that Some (but not all) cells with a live p53 gene arrangement were Than It was shown to be sensitive (O'Connor et al., Can cer Research,53: 4776-4780, 1993, with prior art It is not allowed). However, evaluation of head and neck cancer cell lines was based on radiosensitivity and endogenous wild It showed no association with type p53 or mutant p53 (Brachmann (Bra chman) et al., Cancer Research,53: 3667-3669 , 1993, not recognized as prior art). Lowe et al., "P53-dependent apoptosis contributes to cytotoxicity of anticancer drugs" Similar ”Cell, 74: 957-967, 1993 (recognized as prior art. No) said: Using p53-deficient mouse embryo fibroblasts, cytosensitization to a wide range of anticancer drugs The need for p53 in acceptability and tolerance was systematically investigated. Those results are tumors Tumor gene, especially the adenovirus EIA gene, is ionizing radiation, 5-fluoroura Against apoptosis induced by sill, etoposide and adriamycin To sensitize fibroblasts. In addition, effective death programs The p53 tumor suppressor is required for execution. Lotem, Sachs, "Deletes wild-type p53. Hematopoietic cells derived from mice that induce apoptosis by several drugs Is more resistant,Blood, 82: 1092-1096 (1993) (preceding Not recognized as a technology) states: In normal fibroblasts, other agents that cause irradiation and DNA damage are wild Induction of p53-type expression, and the induction of wild-type p53 expression in cells during G1 phase regulation Stop at a point. DN before initiation of DNA replication to prevent the spread of DNA damage It was suggested that this G1 arrest is required to repair A. p53 deletion Mouse-derived fibroblasts lost this G1 phase control and continued the cell cycle after irradiation. Therefore, DNA damage was propagated. Our results show that high levels of viability factors Myeloid colony forming cells of mouse with or without wild-type p53 under certain conditions There was no difference in the numbers. However, bone marrow progenitor cells have low concentrations of viability factors such as GM- When it only contains CSF, IL-1α, IL-3, IL-6 or SCF , Or irradiation in these cells Cells derived from p53-deficient mice when apoptosis is induced by heat shock Had a higher viability. Homozygous mice and heterozygous for p53 deletion Increased resistance to induction of apoptosis is wild compared to zygotic mice Loss of one allele of type p53 was shown to be sufficient. p53-deficient mouse Is more resistant to the induction of apoptosis in irradiated thymocytes. However, thymic cells treated with the glucocorticoid dexamethasone Vesicles or mature peritoneal granulocytes. Irradiated bone marrow precursor The degree of resistance in cells and thymocytes was related to the dose of wild-type p53 . Thus, mutations and wild-type p53 affect chemotherapy and radiosensitivity. The effect of blurring is not clear from these previous studies, and these previous studies The wild-type p5 was also found in the therapeutic sensitivity of tumor cells expressing the endogenous mutation p53. It is not aimed at the effect of three gene transfer.Increased effectiveness of cancer therapy The present invention provides a source of wild-type therapy-sensitizing gene activity prior to therapy of tumor cells. A novel method for increasing the efficacy of cancer therapy by introducing it into tumor cells You. Using p53 as an example of a therapy sensitizing gene, the invention is carried out according to Can be: First, it is determined by standard diagnostic methods that the patient's tumor contains a p53 mutation. Then, a portion showing wild-type p53 activity, for example, a therapeutic sensitizing activity of p53 protein, or Or a gene expression vector encoding that part of the p53 protein is introduced into tumor cells I do. This allows tumor cells containing the p53 mutation to remain active during wild-type p53 activity. Becomes more sensitive to cancer therapy given to. This way you can increase the effect Possible cancer therapies include radiation therapy, chemotherapy, biological therapy such as immunotherapy, Includes, but is not limited to, cryotherapy and hyperthermia. Cells containing mutated therapy-sensitizing gene activity, eg mutant p53 protein In, unrepaired DNA damage does not block progression to S phase, or May not start the system. We are not bound by any theory But with endogenous mutated therapy-sensitizing gene activity and of wild-type p53 Tumor cells that have regenerated genes or proteins are involved in genomic damage and repair processes. If overloaded or impaired, the modalities of induction of apoptosis I think it is particularly sensitive. Wild-type therapy-sensitizing gene activity is present in tumor cells The cells then respond to these DNA damaging agents, and possibly It will also be sensitized to a variety of other therapeutic modalities that can induce potosis. The combination of p53 sensitization and other therapies is more effective than either treatment alone. It is fruitful. Introduction of exogenous wild-type p53 activity into tumor cells kills them. The dose of the drug or radiation needed to It is possible to increase the therapeutic window concentration that does not cause toxicity. For tumor suppression In contrast to p53 gene therapy alone, which requires sustained p53 gene expression, The combined effect of p53 sensitization and other therapies kills tumor cells During the treatment period, there is a transient sensitization of wild-type p53 protein in tumor cells You just need to This method also improves the efficiency of biological therapy. This includes May include but are not limited to: immunotherapy, eg passive immunization. Therapy (eg antibodies); Adoptors that administer effector cells of the activated immune system Immunotherapy; active immunotherapy with immunization to induce anti-tumor immunity; Tocaine (interleukins such as IL-2, IL-6, IL-7, IL- 12, tumor necrosis factor, tumor growth factor, interferon, growth factor, eg G Mediated by (including but not limited to, M-CSF, G-CSF) Therapy to or against these cytokines Of Tumor Cells to Effector Mechanisms of the Immune System Activated by Calcium Therapy by increasing. Furthermore, the p53-mediated sensitization therapy of the present invention Toxic immune cells (cytotoxic T cells, lymphokine-activated killer cells, natural killer cells Vesicles, macrophages, monocytes and granulocytes, but are not limited to) Regenerates the apoptotic pathways required for killing tumor cells against the immune system Make it a better target. The therapeutic sensitizing activity is exemplified in the wild-type p53 gene / protein portion. Therapy sensitization department Routine mutation analysis known to those skilled in the art, such as point mutations and deletions. It can be confirmed by mutation. Small size mimicking wild-type therapy-sensitized gene product activity to enhance cancer therapy Can also be used, including peptides, modified peptides, or organic Compounds are included, but are not limited to. Mutated to other useful substances Binding to the product of a therapeutic sensitization gene to enhance the wild-type therapeutic sensitization activity of that gene product. A miniature that acts as an allosteric modulator that induces established conformational changes The molecule is included. Mutations in p53 or other therapy-sensitizing genes are associated with virtually all cancers tested The invention has a remarkably broad range of uses. In a preferred embodiment, Genes currently available for the portion of the wild-type p53 gene encoding therapeutic sensitizing activity Treat localized tumors by direct application with the application vehicle. Can be. This includes infection with p53 adenovirus vector, p53 retrovirus Rus vehicle packaging line transplant, or adeno in the binding complex Transfection of p53 cDNA facilitated by viral capsid But are not limited to these. Accumulate gene transfer vector at tumor site With the development of a targeted targeting method, this method can be extended to sporadic cancers. it can. Other gene expression vector systems may also be used, including lipofex Including lipofection or direct DNA injection, Not limited to. Other gene transfer and expression methods known to those of skill in the art may also be utilized. The examples given below for the therapy-sensitizing gene p53 are well known to those skilled in the art for the treatment of cancer. It can also be applied to legal sensitization genes.Example 1. Transfer of p53 gene to tumor cells In the vector, the wild-type p53 gene or a part of the gene is inherited. The offspring can be introduced extrachromosomally. Extra-chromosomal wild-type p Wild-type p53 protein is expressed from 53 genes or a part of the genes. Alternatively, the wild-type p53 gene is replaced by an endogenous mutant p53 gene existing in the cell. It can be introduced into tumor cells to replace the offspring. According to this method, p5 Three-gene mutations will be corrected (Revet et al., “Rec Homologous DNA targeting with a short DNA probe coated with A protein , And Electron Microscopic Mapping on Linear Double Helical Molecules ", Journa l of Molecular Biology,232 (3): 779-91, 1 993; Thomas et al., "Sequence replacement vector in embryonic stem cells High-Precision Gene Targeting Using ", Molecular and Cell ural Biology,12 (7): 2919-23, 1992; Mansu Mansour et al., "Into the mouse int-2 locus by homologous recombination. Introduction of lacZ Reporter Gene ", Pro. Natl. Acad. Sci.,87 (19) : 7688-92, 1990; Capecchi, " Genome modification by homologous recombination ", Science,244 (4910): 12 88-92, 1989; Sedivy and Joiner. er), "Gene Targeting", W.A. H. Published by Freeman, 19 92; incorporated herein by reference). The preferred vectors for p53 gene transfer are all within the target cell population. Is sufficient to transfer the gene to most cells and to promote the desired effect. It has the ability to achieve long expression periods and sufficiently high expression levels. Possible Vector design and gene transfer methods include, but are not limited to: Not: 1) Adenovirus vector. Adenovirus vector is a retrovirus vector It is possible that a higher titer than that of is there. They are a wide variety of cells, both dividing and non-dividing cells. Of particular interest is that it can infect a type (Graham, Prebeck ( Graham FL, Prevec L), handling of adenovirus vector , Murray EJ, “Methods in Molecule” ar Biology "vol.7, Gene Transfer and Ex compression protocols ", Clifton, NJ; The Humana Press Incorporated (1991), pp. 109-1 28; incorporated herein by reference). These vectors are useful for viral replication Some of the required early region genes have a transgene of interest (ie Exogenous gene to be reached). Appropriate packaging that supplies the lost replication functionality. By transfecting this DNA into a caging cell line, Viral particles are obtained. Examples of such vectors are described in the literature (see Berner KL, “Adenovirus vector for expression of heterologous genes. Development of Kuta ", Biotechniques (1988) 6: 6616-62. 9; incorporated herein by reference). Intraarterial injection is suitable for liver and head and neck cancers It may be, but is not limited to. 2) Retrovirus vector. These vectors are extremely important for human gene transfer. It has good properties and is used in gene therapy protocols (Wu et al. J. of Biochemistry,266: 14338-14342,1 991; incorporated herein by reference). The retrovirus vector should be transmitted A modified retroviral genome that contains the target gene (ie, transgene), And often consists of a selectable marker gene. The vector itself is a stable integration of the gene Virus LTR (Long Terminal Repeat) sequence necessary only for But is defective in replication and provides a trans-acting replication factor. Packaging cell line. Retrovirus vector and package Examples of Sing cell lines have been described in the literature (Kriegler, M) (1990), "Gene Transfer and Expressi". on-A Laboratory Manual ", Stockton Press, New York, and Jolly (D), Cancer Gene Therapy, 1: 51-64, 1994; incorporated herein by reference). . The p53 retroviral vector has been described in the literature (Chen). (1992) "Suppression of acute lymphoblastic leukemia by human wild-type p53 gene. , Cancer Res., 52: 222-226; incorporated herein by reference. Use). Retroviral vectors have widespread infectivity with respect to cell type. Trance Gene expression is usually driven by a strong viral promoter with broad tissue specificity. Driven. An example is the virus LTR (Long Terminal Rep). eat), cytomegalovirus (CMV) promoter, SV40 promoter -(Miller AD, Rosman GJ) , "Improved retroviral vector for gene transfer and expression", ( 1 989) Biotechniques7: 980-990; referenced herein And quote). Transplanting packing cell line secreting p53 retroviral vector at tumor site Thus, the efficiency of retroviral gene transfer can be increased. This cell line is Providing a continuous vector source to improve the efficiency of gene transfer (Kurber, Lamb , Wallbridge, Ishii, Oldfield, Brese (Culver KW, Ram Z, Wallbridge S, Ishii H, Oldfie ld EH, Blaese RM), a retrovirus for the treatment of experimental brain tumors In Vivo Gene Transfer Using Svector-Producing Cells, (1992) Science 256: 1550-2). 3) Adeno-associated virus. Vectors based on adeno-associated virus are adenovirus Infectious within the range of Ruth. In addition, these vectors have host genome preference The possibility of stably incorporating exogenous DNA at the site of Such a vector For the discussion about "Current Topics in Microbiol ology and Immunology "vol.158, (Muzika (Muz yczka N)), Springer Verlag, pp. 97-129 (1 992), which is incorporated herein by reference. 4) Other viral vectors. Based on herpes, vaccinia and papillomavirus Subsequent vectors may also be used to transfer the gene to tumor cells. These vectors For a discussion of the "Kriegler, M," Gene Tr transfer and Expression. A Laboratory M anual ”, Stockton Press, New York (1990), and Jo Jolly, D, "Viral Vectors for Gene Therapy", Cance r Gene Therapy, vol. 1: 51-64 (1994) Which is incorporated herein by reference. 5) Bound adenovirus capsid. Exogenous DNA is transferred to the adenovirus carrier. Psid can be transmitted to tumor cells. DNA to be transmitted by this method Bound to the outside of the viral capsid by a polylysine bridge (Curie (Cu Riel) et al., "Adenovirus bound to DNA-polylysine complex" Efficient Gene Transfer Mediated by "" (1992) Human Gene Th erase,3147-154; incorporated herein by reference). Into the cell DNA entry is accomplished by the natural viral internalization pathway However, gene transfer and expression is independent of the viral genome. For example p5 3 genes linked to adenovirus capsid, which was then receptor mediated It can be imparted into lung cancer cells by endocytosis. So this In the method, viral particles are not used as a vehicle for infection but rather in DNA trans Used as a carrier for fuctions. In this way, especially viruses The DNA and DNA complex forms additional ligands, such as transferrin (this High efficiency of gene transfer can be achieved (Wagner ( Wagner et al., "To Transferrin-Polylysine / DNA Complex" Adenovirus binding of Escherichia coli is receptor-mediated Significantly enhances gene transfer and expression ", (1992) Pro. Natl. Aca d. Sci. USA,89: 6099-6103; incorporated herein by reference. ). To promote the accumulation of complex in target tissue, tissue and cell It may also contain a ligand specific for ip. 6) Other methods. Liposome-mediated gene transfer is effective for in vivo gene transfer Zhu et al., "Whole body after intravenous DNA addition to adult mice. Gene expression ", (1993) Science261: 209-11; Yoshi Yoshimura et al., (1992) Nucleic Acids R essearch,20: 3233-3240; incorporated herein by reference). . The DNA-liposome complex can be administered locally or systemically. Wear. The advantages of this method are the low toxicity and the absence of viral genome. That is. If you choose an appropriate promoter (eg CMV promoter), Long-term expression can be achieved (Zhu et al., “Intravenous DNA in adult mice. Systemic gene expression after addition ", (1993) Science261: 209-11; incorporated herein by reference). Furthermore, to target transgene expression to specific cell types, Ligand-DNA conjugates have been used. For example asialoglycop Rotein-DNA conjugate mediated by asialoglycoprotein receptor It has been used to specifically target exogenous genes to hepatocytes. Ah Direct gene transfer of naked DNA to tissues such as, but not limited to, muscle Would also be effective. Those skilled in the art can use these gene transfer methods alone or in combination. Used to determine the therapeutic sensitizing activity of the wild-type p53 gene or other therapeutic sensitizing genes. The loading moiety can be expressed in the tumor.Embodiment 2. FIG. Introduction of p53 protein into tumor cells Wild-type p53 protein, or a portion of wild-type p53 protein having therapeutic sensitizing activity , Can provide a cell carrying a mutated p53 allele. This is a It has been accomplished in vivo by several methods, including intravenous, intratumoral, intraarterial, Includes, but is not limited to, intraluminal or intrathecal injection. Made of aerosol The agents can be used for application to the respiratory tract and topical formulations can also be used. Effective molecule Such as microinjection, liposome or electroporation It can also be introduced into cells by a method. Receptor-mediated endocytosis of p53 protein It can also be introduced into tumor cells by infection. Alternatively, the p53 protein It can be actively taken up or taken up by diffusion to regenerate p53 activity in cells. Can be. Using a chimeric protein containing p53 and the targeting sequence, targeting Wild-type p53 activity can be introduced into cells harboring the array of receptors. for example For example, insulin-like growth factor (IGF-I) or interleukin-2 (IL-2 ) Targeting specificity of p53 protein to IGF-I receptor or It can be imparted to IL-2 receptor-bearing cells. The chimeric protein is produced by the recombinant method. Construct chimeric cDNAs and express them in prokaryotic or eukaryotic cell lines To be obtained. Therefore, growth factor I binds p53 to specific cell surface receptors on lung cancer cells. When chimerized to GF-I, this chimeric protein is used as a receptor-mediated endocytosis Lung cancer cells can be targeted by cis.Embodiment 3 FIG. Drug administration In practicing the method of the present invention, a composition, such as Examples 1 and 2 above. , Alone or in combination with each other, or with other therapeutic agents or It may be used in combination with a diagnostic agent. These compositions can be administered in vivo to human patients. Alternatively, it may be used in vitro. When used in vivo, the composition can be Can be administered in various ways, including parenteral, intravenous, subcutaneous, intramuscular, colon , Rectal, vaginal, nasal, oral, transdermal, topical, eye, intraperitoneal, intracavity, subarachnoid, or suitable Including the use of various dosage forms as surgical implants that are cut into slices, It is not limited to these. The dose of the composition of the present invention may vary widely depending on the intended effect and indication. You. As will be apparent to one of skill in the art, useful in vivo dosages and individual modes of administration will vary from patient to patient. The condition, the cancer to be treated, and the particular composition used will vary. Existence Effective dosage levels, that is, the dosage levels required to achieve the desired result, are The person could easily judge. Generally, dosing should start at the lower dose level and The dosage level is increased until the desired effect is achieved. Drugs need to enter tumor cells for effective delivery. Chemical modification is transparent It may be all you need to do. However, if such modification is insufficient, Also modified agents may be permeation enhancers, such as Azone or Olei. It can be formulated into liposomes with, but not limited to, acid. Liposomes are vehicles that provide sustained release and are modified by modified drugs and penetration enhancers. Even if the delivery agent is delivered from the liposome into the transfected cells Good. Or with liposomal phospholipid modified drug and permeation enhancer It may be directly involved in giving to cells. The drug delivery vehicle may be used for systemic or local administration. Advantageous local administration of drugs It is. This will minimize systemic absorption and allow local concentration at the site of administration. This is because that. This simplifies the method of applying the drug to the disease site and To a lesser degree. Furthermore, the dose of the substance may be higher than that required for other routes of administration. There are few. The drug can also be administered systemically. Systemic absorption is the accumulation of drugs in the bloodstream, It then means dispersed throughout the body. Oral route of administration that results in systemic absorption Intravenous, intraarterial, intralymphatic, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intramuscular, subarachnoid and ocular Including, but not limited to. All of these routes of administration are reachable Exposure of various tissues to the drug. Subcutaneous administration drains into the regional lymph nodes, which Enters the circulatory system through PA net. The rate of entry into the circulatory system is a function of molecular weight or size. It has been shown to be a number. Intraperitoneal administration also enters the circulatory system, and drug delivery vehicle The molecular weight or size of the complex controls the entry rate. The drug-delivered vehicle may act as a sustained release reservoir, or It can be designed to impart the contents directly to the target cells. Direct-attached The advantage of using a drug vehicle is that there are many molecules per vehicle uptake event. To be given. Those vehicles otherwise rapidly disappear from the bloodstream It has also been shown to increase the circulating half-life of drugs. This belongs to this category Some examples of special drug delivery vehicles such as liposomes, hydrogels, cyclo Dextrin, biodegradable polymer (surgical implant or nanocapsule), and And bioadhesive microspheres, but are not limited thereto. Liposomes offer several advantages: they are generally non-toxic and biodegradable. Have a composition of; they can exhibit a long circulating half-life; The recognition molecule for the probe can be easily attached to its surface. Finally, The low cost of producing liposomal drugs in the form of lipid suspensions or frozen products is Demonstrate that this technology can survive as an acceptable drug delivery system. Oral formulations can be made in several forms, including capsules, Chewing tablets, enteric coated tablets, syrups, emulsions, suspensions or solutions before administration Includes, but is not limited to, solid forms suitable for dissolution or suspension in the body. Not determined. Suitable excipients are, for example, water, saline, dextrose, mannite. , Lactose, lecithin, albumin, sodium glutamate, cysteine hydrochloride And so on. In addition, if desired, the pharmaceutical composition may comprise a small amount of a non-toxic auxiliary substance, such as Wetting agents, pH buffering agents and the like may be included. If desired, absorption-promoting agents (such as lipo Can be used.Example 4. Increased sensitivity of tumor cells to chemotherapy 1). cell. T98G glioblastoma cells (Marcer et al. Negative Growth Regulation in Glioblastoma Tumor Cell Lines Conditionally Expressing Live p53 ", (1990) Pro. Natl. Acad. Sci. , USA,87: 6166 -6170) was obtained from ATCC and 10% CO at 37 ° C.₂10% in Heat-Inactivated Fetal Bovine Serum, Gentamicin, Non-essential Amino Acids and Pyrubi Cultures were performed in Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with sodium citrate. these Cells from a biopsy of a patient with glioblastoma multiforme Homozygous mutations in 237 (met to ile, ATG to ATA) (Ullrich et al., “Human wild-type p53”). In vivo during glioblastoma cell growth arrest, a unique conformation and It takes on the state of phosphorylation "(1992) Oncogene,7 (8)1635- 43). 2) Plasmid. Wild type p53 gene and neomycin (G418) resistance A plasmid containing the gene (pLp53RNL) was used. Plasmid pLp53R NL is Dr. Better by Martin Haas (University of California, San Diego) Provided voluntarily and has been previously described in the literature (Cheng et al., "Suppression of acute lymphoblastic leukemia by human wild-type p53 gene" (1992) Cancer Res. ,53: 222-226). This plasmid Carries the Ils sequence Lp53RNL, in which wild-type p53 expression is (Moloney) Driven by the murine leukemia virus (MoMLV) LTR You. The neomycin resistance gene is driven by the Rous sarcoma virus (RSV) promoter. Driven. 3) Transfection. T98G plasmid with cationic liposomes Introduced into cells. 5x10 T98G cells per plate in 10 cm culture dish^FivePieces I inoculated. The next day, cells were treated with 15 μg of DNA by lipofectamine (BRL). Transfected according to the manufacturer's instructions. 5 days of transfection Later, cultures were selected in 100 μg / ml G418. Clone for about 3 weeks It was later harvested and expanded. Before measuring the growth kinetics and plate efficiency, cultures were Growth adapted in the absence of 418 for 7-10 days. One colony is exogenous wild type Since it contains the p53 gene, it is designated as T98Gp53. 3) Plate efficiency. Cells in triplicate at a low density of 100-500 per 6 cm plate Inoculated and grown for 2 weeks. Stain the plate with 0.5% methylene blue in methanol Colored and colonies counted. Plated efficiency of transfected cells is 20% there were. The mother cells had a plate efficiency of 50%. 4) Control maternal T98G cells that had been adapted for 2 weeks in the absence of antibiotic G418. And T98Gp53 cells in a 24-well plate at 2 x 10^FourContact with individual / well Seeded The next day, increase them for 1 hour from 10 μM to 40 μM in 10 μM increments Were exposed to various concentrations of cisplatin (chemotherapeutic drug). 1 hour later cisplatin Cells were removed and replaced with complete medium (DMEM + 10% fetal bovine serum), and the cells were kept for 7 days. Growth. Count cells after 7 days or stain with crystal violet Was. In the latter case, the absorption at 540 nm is proportional to cell viability. Clone original For sex assay, cells are treated with 500-1000 cells / well in 6-well plates. Re-inoculated in wells. After 7-10 days 0.5% methylene blue, 70% ETOH Clones were counted by staining in. p53 transfectants and mother The number of colonies obtained from somatic T98G glioblastoma cells was compared. As shown in Figure 1 , T98Gp53 cells are more effective than maternal T98G cells in the action of cisplatin It was quite sensitive. Subsequent assays confirmed this increased sensitivity. Coro The concentration of cisplatin required to achieve a 50% reduction in knee number was determined by the T98G matrix. Cells and wild-type p53 gene from about 30 μM in empty vector transduced cells. It decreased to about 15-20 μM in the case of progeny transduced cells.Embodiment 5 FIG. Increased sensitivity of tumor cells to radiation therapy Control maternal T98G and T98Gp53 cells for 2 weeks in the absence of G418. And then inoculated at approximately 5,000 per T25 flask. Next day, fine 100 cells from 100 rads to 1500 rads with gamma rays from a cobalt 60 source Irradiation was done at increasing doses in rad increments. The cells are then incubated for an additional 5-12 days. And stained the colonies in 0.5% methylene blue-methanol, counted, Compared to control untreated cells. As shown in FIG. 2, wild-type p53 was transduced. T98Gp53 cells show increased sensitivity to radiation with a colony count of 50 The% reduction occurred at approximately 200 rads compared to 400 rads of mother cells.Embodiment 6 FIG. p53 gene sensitization therapy The treatments described below are applied to tumors with mutant p53 activity. 1.Identification of tumors containing p53 abnormalities Use routine molecular biology diagnostics to identify tumors containing p53 abnormalities It can be used and includes, but is not limited to: Single Strand Conformation Polymorphism (SSCP), PCR, Sequencing and Genes Related molecular biology methods known to those skilled in the art for detecting abnormalities ("Gene Ral Molecular Biology Methods Curren t Protocols in Molecular Biology ”, Jo N. Wiley and Sons, 1994; and Sambrook, Fritsch, Maniatis (J. Sambrook, EF Fritsch, T. Mania tis),Molecular Cloning: A Laboratory M annual , Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press Cold Spring Harbor, New York, 1989; Quoting in the detailed book). 2.Tumor sensitization with p53 vector by direct injection or aerosolized formulation In this application, a suitable wild type p53 vector and / or production cell line To the tumor, or to the tumor site in the past after surgical resection or detachment (residual tumor cells To treat tumor cells with therapeutic sensitizing activity of wild-type p53 gene. Express the part to be read. Aerosolized vector formulations may also be excised or called It can be used to confer the wild-type p53 gene on tumors in the sucking tube. Then the patient , Chemotherapy, radiation therapy, biological therapy, cold known to those skilled in the art suitable for treating tumors Treat with cold therapy or hyperthermia according to the following: "Cancer: Prince. “Iples and Practice of Oncology”, Devita, Hermann, Rosenberg (Devita, Hellman, Rosenber g) eds. Lippencott, 1993; “Manual of Oncologi. cTherapeutics ”, edited by Wittes, Rippenkopp T., 1993; and "Biological Therapy of Cance. r ”, edited by Devita et al., Lippencott, 1991; book for reference Cited in the description). This method can be used to treat local primary tumors, including: But not limited to: CNS tumors, sarcomas, and early carcinomas (lungs). Cancer, prostate cancer, breast cancer, bladder cancer, renal cancer, hepatocellular carcinoma, pancreatic cancer, gastric cancer, esophageal cancer, colorectal Cancer, anal cancer, head and neck cancer, biliary tract cancer and genitourinary cancer). This method can also be used to treat metastatic lesions of these and other tumors . In these applications, the appropriate wild type p53 vector and / or production cell Cystic system to metastatic tumor or past metastatic tumor site after surgical resection or ablation And injected into the tumor cells with a portion encoding the therapeutic sensitizing activity of the wild-type p53 gene. Let it manifest. Aerosolized vector preparations may also be found in tumors in the resected area or respiratory tract. It can be used to confer the live p53 gene. The patient is then made eligible for tumor treatment. Chemotherapy, radiation therapy, biological therapy, cryotherapy or hyperthermia known to those skilled in the art With therapy, treat according to: Cancer: Principles and Practice of Oncology, Devita, Hermann, Rosenba Edited by Devita, Hellman, Rosenberg, Rippenkopp Toh, 1993; and Manual of Oncology Therap. eutics, edited by Wittes, Lippencott; and "Bi "Logic Therapy of Cancer", Devita ) Et al., Lippencott, 1991; incorporated herein by reference). 3.Tumor sensitization with p53 vector by intra-arterial injection Chemotherapy drugs and other drugs for intra-arterial infusion of various primary and metastatic cancers Can be used for treatment (Cancer: Principles and P ractice of Oncology, Devita, Hermann, Rosenberg (Devita, Hellman, Rosenberg), Rippencott; And Manual of Oncology Therapeutics, Wittes, Lippencott). Suitable for this p53 therapy sensitization method For use, an appropriate wild-type p53 vector and And / or producer cell lines to sensitize tumor cells to the wild type p53 gene Express the part that encodes The patient is then treated to treat the primary or metastatic tumor. Suitable chemotherapy, radiation therapy, biological therapy, cryotherapy or high known to those skilled in the art. Treat with heat therapy according to the following: Cancer: Principles an d Practice of Oncology, Devita, Hermann, Rosen Rippenko, edited by Berg (Devita, Hellman, Rosenberg) And Manual of Oncology Therapeuti cs, edited by Wittes, Lippencott; and "Biolog. ic Therapy of Cancer ”, edited by Devita et al., Lippencott, 1991; incorporated herein by reference). This method is nuclear May be applied to the treatment of tumors such as primary hepatocellular carcinoma, metastatic liver cancer and head and neck tumors Yes, but not limited to. This method is used by experts in the field of arterial It is applicable to the treatment of any tumor per possible arterial vessel. 4.Tumor sensitization with p53 vector by intracavitary injection For these applications, the wild-type p53 vector suitable for the body cavity containing tumor cells should be used. And / or producer cell line to treat tumor cells with the wild-type p53 gene. It expresses the part that codes for the sensitizing activity. The patient is then placed in the primary or metastatic space Chemotherapy, radiation therapy, biological therapy, cold known in the art suitable for treatment of internal tumors Treat with cold or hyperthermia according to the following: Cancer: Princi plus and Practice of Oncology, Devita, Hell Man, Rosenberg (Devita, Hellman, Rosenberg) Chapter, Lippencott; and Manual of Oncology The rapeuteics, edited by Wittes, Lippencott; and "Biological Therapy of Cancer", Devita ita) et al., Lippencott, 1991; incorporated herein by reference). This method is used for malignant pleural effusion tumor (pleural cavity), ascites tumor (peritoneal cavity), leptomeningeal tumor (Cerebrospinal / Ventricular system), Pericardial exudate cancer (pericardial space) and Bladder cancer (bladder injection) Can be applied to, but is not limited to. 5.Tumor purging of hematopoietic stem / progenitor cells by p53 sensitization In this application, to relieve patients from the effects of bone marrow suppression / resection cancer therapy Purge residual tumor cells from autologous hematopoietic stem / progenitor cells by p53 sensitization prior to use I do. Hematopoietic stem / progenitor cell samples were collected from patients by standard methods (Cancer: P rinciples and Practice of Oncology, De Vita, Hermann, Rosenberg (Devita, Hellman, Rosen Berg), Lippencott; and Manual of Oncologi. c Therapeutics, Wittes, Rippenkopp And “Bone Marrow Transplantation”, Forman et al., Eds., 1993; incorporated herein by reference), Ex vivo suitable wild type p53 vector and / or producer cell line transduction Then, the portion encoding the therapeutic sensitizing activity of the wild-type p53 gene is expressed. Next The cell preparation transduced with C. is treated with the cytotoxic purging method known to those skilled in the art (Ca ncer: Principles and Practice of Onco LOGY, Devita, Hermann, Rosenberg (Devita, Hellman , Rosenberg), Lippencott; and Manual of On. colopic Therapeutics, edited by Wittes, Lippencott; and "Bone Marrow Transplantat Ion ", edited by Forman et al., 1993; incorporated herein by reference. Quote)). The patient is then treated with myelosuppressive / resecting cancer therapy, followed by residual tumor cell p53 Injecting hematopoietic stem / progenitor cells that have been purged by sensitization into a patient for extremely aggressive cancer treatment Rescue patients from the effects of bone marrow suppression of the law. Bone marrow suppression / ablation treatment and rescue by hematopoietic stem / progenitor cell injection are prior art Well described in surgery and used to treat a variety of solid and hematopoietic malignancies. (Cancer: Principles and Practice) of Oncology, Devita, Hermann, Rosenberg (Devita , Hellman, Rosenberg), Lippencott; and Manu. al of Oncology Therapeutics, Witness (W Ittes), Lippencott; and “Bone Marrow Tran. splanation ”, edited by Forman et al., 1993; Reference Are referred to herein as). Destruction of residual tumor cells by cytotoxic purging agent Tumors in hematopoietic stem progenitor cell infusion used to rescue patients when sensitized with p53 Ulcer The number of cells will decrease. This allows for hematopoietic stem / pre The likelihood of tumor recurrence that may result from injection of a Would. 6.Treatment of disseminated metastatic tumors by p53 sensitization In these applications, the appropriate wild type p53 vector and / or production cell Systemic or parenteral injection of the cystic system to the tumor cells to induce wild-type p53 gene therapy Expresses the part that codes the activity. The patient is then suitable for the treatment of metastatic tumors Chemotherapy, radiation therapy, biological therapy, cryotherapy or hyperthermia known to those skilled in the art. Method, treatment is as follows: Cancer: Principles and P ractice of Oncology, Devita, Hermann, Rosenberg (Devita, Hellman, Rosenberg), Lippencott; Oh And Manual of Oncologic Therapeutics, U Wittes, Lippencott; and “BiologicTh "erapy of Cancer", edited by Devita et al., Lippenco , 1991; incorporated herein by reference). Use in combination with individual applications of p53-mediated sensitization therapy outlined above This can be done by experts in the art of multimodal cancer therapy according to Applicable: Cancer: Principles and Pra citice of Oncology, Devita, Hermann, Rosenberg (D Evita, Hellman, Rosenberg), Lippencott; and And Manual of Oncologic Therapeutics, WI Witttes, Lippencott; and “Biologic Th e rapy of Cancer ”, edited by Devita et al., Lippen Cott, 1991; incorporated herein by reference). 7.Treatment of glioblastoma multiforme with p53-mediated sensitization therapy Glioblastoma multiforme is the most frequently encountered intracranial brain tumor, almost every year in the United States. 20,000 new cases have been diagnosed. It ran out of the central nervous system It is the most malignant astrocytoma, although it does not metastasize to Repel the doctor's therapy using the general method of. These methods include surgery, radiation Diagnostics, with advances in all areas, including radiation and chemotherapy The average survival time from is still only 1 year. Glioblastoma against radiation therapy It is fairly resistant and responds poorly to most chemotherapeutic drugs. Initially These chemotherapeutic agents, which have been shown to have some efficacy--cisplatin, BCNU (carmustine) and PVC (procarbazine CCNU, vincris) None of them, including chin), show sustained efficacy. Moderate tumor progression in glioblastoma patients due to their location in the brain Even if there is, morbidity is high. A slight reduction in tumor volume has a beneficial effect on the patient Expected to be. Furthermore, glioblastoma rarely spreads outside the central nervous system. Therefore, the disease is localized to p53-carrying adenovirus at the tumor site. Local infection or adenovirus capsid-promoted p53 cDNA local Transfection or p53-carrying viral vector packaging line It is an ideal target for local gene transfer, including transplantation. Also, this method Even in the brain metastases of other cancers, even a slight reduction in tumor volume results in a reduction in morbidity. But it would be beneficial. 8.Treatment of hepatocellular carcinoma and head and neck cancer with p53-mediated sensitization therapy Hepatocellular carcinoma and head and neck cancer have a high frequency of p53 mutations (up to 30%) Featuring adenovirus-based p53-mediated sensitization and related p53-mediated sensitization An excellent target for law. High efficiency when p53 vector is given in the artery It is possible to impart wild-type p53 therapy sensitizing activity into the tumor by. But in many places In this case, it is not necessary to give the p53 gene systemically to obtain the clinical effect. Hepatocellular carcinoma And head and neck cancer often cause local morbidity similar to glioblastoma It is. Liver metastases of colorectal cancer and other tumors with p53 mutations are also associated with p53 Treated by intra-arterial infusion of vector, then known to experts in the field of cancer treatment It can be treated by appropriate tumor therapy. 9.Treatment of lung cancer with p53-mediated sensitization therapy Lung epithelium is also an excellent target for adenovirus p53-mediated sensitization. Small cell lung cancer, which is initially highly sensitive to chemotherapy, becomes resistant as the disease progresses. To win. Introduction of wild-type p53 is by sensitizing tumor cells to therapy , It can be used to treat this tumor. Similarly, p53 mutations in almost 50% of cases Non-small cell lung cancers that are characterized by are often resistant to chemotherapy. did Thus, p53-mediated sensitization therapy can be used to treat these tumors.Example 7. Screening for small molecules with therapeutic sensitizing activity Small molecules with therapeutic sensitization should be compared to control solutions that do not contain candidate small molecules. In comparison, they are identified by their ability to enhance cancer treatment efficiency. Each candidate Sensitize Offspring to Cancer Therapy in Cell Lines, Animal Models, and Controlled Clinical Studies Methods known for those skilled in the art and approved by the Food and Drug Administration, such as Federal Official gazette47(No. 56): 12558-12564, March 23, 1982, Test with published methods, including but not limited to. Therapy sensitization activity or enhancement activity A small molecule with sexuality as described above for a protein with wild-type therapeutic sensitizing activity The method can be used for cancer therapy. Small molecules easily enter tissues after administration This method can be used in combination with other therapies to spread localized and metastatic tumors. Both ulcers can be treated. Small molecules that mimic or provide wild-type therapeutic sensitizing activity are suitable markers. Can be screened by a binding assay using Oughten, R .; A. ), “Peptide libraries, standards and trends”,T reds in Genetics 9: 235-239, 1993). Combinatorial libraries of peptides, modified peptides or organic compounds are known to those of skill in the art. It can be formed by a known method (Jayatickrem e) et al., “Formation and functional screening of versatile peptide libraries”,P ro. Natl. Acad. Sci. USA , 91: 1614-1618; Ho Hughten, RA, "Peptide Libraries, References and Dynamics. "Trends in Genetics 9: 235-239, 1993. Phillips et al., "Elucidation of transitional status; inhibitor analogs and And a new method combining enzyme structure changes ”,Biochemistry, 19 92, 31 (4): 959-63; Eichler and Horten. , Hughten), “Screening of synthetic peptide combinatorial libraries. Identification of Substrate-Like Trypsin InhibitorsBiochemistry, 32 : 11035-11041, 1993; Huston et al., "Single chain antibody. Medical application ”,International Review of Immun logic , 1993, 10 (2-3): 195-217; Van de War. Van de Waterbeemd H., “QSAR Technology Recent advances inDrug Design and Discovery , 1993, 9 (3-4): 277-85). Putative small molecules can be analyzed in biological assays for function as well. You. In a specific embodiment, a retroviral vector encoding and expressing the peptide -The library was tested for therapeutic sensitization activity using the methods and methods described in the previous examples. Gudkov et al., 1993, "Human topoisomerase II CDNA? , A gene that induces resistance to topoisomerase II acting cytotoxic drugs Isolation of suppressor elements ",Pro. Natl. Acad. Sci. USA, 9 0: 3231-3235 (incorporated herein by reference). You can lean.Embodiment 8 FIG. Toxicity studies of putative therapy-sensitizing molecules Most of the drugs that are active in any of the above methods are against healthy cells. , Or no action at all is provided. Then those drugs In a pharmaceutically acceptable buffer or buffer used in standard animal studies. Mix. "Pharmaceutically acceptable buffer" means a buffer prepared for storage and subsequent administration. Pharmacologically effective in a pharmaceutically acceptable carrier or diluent Any buffering agent that may be used in a pharmaceutical composition containing an amount of the agents described herein. To taste. Therapeutically acceptable carriers or diluents are well known in the art. Yes, for exampleRemington's Pharmaceutical Sc ienses , Mac Publishing Corporation (Jenaro (AR Gennaro), ed., 1985). Preservatives, stabilizers, pigments, Further, a flavoring agent can be included in the pharmaceutical composition. For example, benzoic acid Thorium, sorbic acid, and p-hydroxybenzoate as preservatives Can be added. Same as above, at 1449. In addition, antioxidants and suspending agents Can be used. Same as above. A. Additional Screening for Toxicity: Method 1 Drugs identified as having therapeutic sensitizing activity evaluated for toxicity to cultured human cells Worth. This evaluation shows that live cells are 2,3-bis [2-methoxy-4-nitro-5-su Rufonylphenyl] -5-[(phenylamino) carbonyl] -2H-tetrazo Based on the ability to reduce [rium hydroxide] (hereinafter referred to as XTT) (Paul (Paull) et al.J. Heterocyl. Chem.25: 763-767 (1987); Wislow et al., (1989).J. Natl. C anc. Inst. 81: 577). Viable mammalian cells are TTT of XTT The N—N bond of the razole ring can be reductively cleaved to form XTT formazan. Dead cell Or cells with damaged energy metabolism cannot perform this cleavage reaction . The degree of cleavage is directly proportional to the number of live cells tested. Cells from human cell lines, such as HeLa cells, were added to 96-well microtiter plates. ー 10 per well in plate wells^Three0.1 ml of cell culture medium (10% Inoculate in modified Dulbecco's minimum essential medium supplemented with fetal calf serum). 9 at 37 ° C 5% air, 5% CO₂Attach to the plate by culturing in the atmosphere of. one After culturing at night, the test substance solution was divided into eight half-decades. Duplicate wells are added at concentrations that are log dilutions. In parallel, for dissolution of test substance The existing solvent is added to the other wells in duplicate. Cell culture is generally continued for 24 hours. So XTT and coupler (methylphenazonium sulfate) at the end of the period Was added to each test well and the incubation was continued for another 4 hours. The optical density of each well is measured at 450 nm with an automated plate reader. Kill mammalian cells, or damage their energy metabolism, or Substances that retard their growth were compared to wells to which no test substance was added It is judged by the decrease in the optical density of wells at 450 nm. B.Additional Screening for Toxicity: Method 2 The cell viability index is related to the cytotoxic effect of therapeutic sensitizing molecules on cultured human cell lines. Into the protein as an indicator³⁵Test by incorporation of S-methionine. HeLa Cells were plated in 96-well plates with 10% fetal bovine serum and 50 μg / ml In Dulbecco's minimal essential medium supplemented with penicillin and streptomycin Let it grow. First 10 cells_ThreeInoculate at 1 / well, 0.1 ml / well You. Cells were allowed to grow for 48 hours without exposure to therapeutic sensitizing molecules, then medium was removed, Various dilutions of the therapy sensitizing molecule prepared in complete medium were added to each well and control wells were added. No cytokine modulator is added to the cells. Cells at 48-72 o'clock Incubate for The medium is replaced every 24 hours and contains the same concentration of therapeutic sensitizing molecules. Replace with fresh medium. The medium is then removed to a complete free of antifungal drug. Replace with all medium. Incubate cells for 24 hours in the absence of therapeutic sensitizing molecules , Then into the protein³⁵Viability is estimated by the uptake of S. Remove the medium and Replace with complete medium without thionine and incubate for 30 minutes. Culture medium Was removed again and contained no methionine but 0.1 μCi / ml³⁵S Methioni Replace with complete medium containing Incubate the cells for 3 hours. Well Were washed 3 times with PBS, then cells were added for 10 minutes by addition of 100% methanol. , Transparency treatment. Add ice-cold 10% trichloroacetic acid (TCA) to fill the wells. Incubate; plate on ice for 5 minutes. 2 more of this TCA wash Repeat it. The wells are washed again in methanol and air dried. 50 μl cinch Ration cocktail is added to each well and dried on the wells by centrifugation. . Expose the X-ray film using the plate. Includes wells containing no antifungal drug If 50% of the cells cannot survive using the densitometer scan of the autoradiogram Quantity (ID₅₀) Is measured (Culture of Animal Cells. A manual of basic technique. (1987). H R. Ian Freshney, John Wiley & Sands Incorporated, New York).Embodiment 9 FIG. Administration of therapeutic sensitizing molecules The present invention is a novel therapeutic sensitizing molecule found by the above method. The present invention is A novel therapeutic sensitizing molecule found by the method described above, which is incorporated into a therapeutically acceptable formulation. It also includes the novel pharmaceutical composition containing. “Pharmaceutically effective amount” means one or more symptoms of a patient's disease or condition. Means (to a certain extent) the amount to reduce. Furthermore, “therapeutically effective amount” is true Physiological or biogenic associated with or responsible for a fungal disease or condition An amount that partially or completely returns the biological parameter to normal. Generally it is The EC₅₀, And about 1 nm depending on the patient's age, physique and associated illness ol-1 μmol. All publications cited, including the amino acid sequences listed in each publication, It is included as a reference in the description. Other embodiments are within the following claims.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 9282−4ＢＣ１２Ｎ 5/00 Ｂ 15/09 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号０８／３３５，４６１ (32)優先日 1994年11月７日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＫＲ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification number Internal reference number FI C12N 5/10 9282-4B C12N 5/00 B 15/09 9051-4C A61K 37/02 (31) Claiming priority No. 08 / 335,461 (32) Priority date November 7, 1994 (33) Priority claiming country United States (US) (81) Designated country EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB , GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), AU, CA, JP, KR

Claims

[Claims] 1. A method of increasing the effectiveness of cancer therapy: The wild-type therapy-sensitizing gene activity is characterized by the loss of the wild-type therapy-sensitizing gene activity. To the tumor cells to be identified, and Giving cancer therapy to tumor cells A method comprising a step. 2. Introducing a portion of the therapeutic sensitizing protein having the therapeutic sensitizing gene activity into tumor cells The method of claim 1. 3. A portion of the therapy-sensitizing gene encoding the therapy-sensitizing gene activity, or cDNA The portion encoding the therapeutic sensitization gene activity of spleen is introduced into tumor cells. How to list. 4. The method of claim 1, wherein the cancer therapy is radiation therapy. 5. The method of claim 1, wherein the cancer therapy is chemotherapy. 6. The method of claim 1, wherein the cancer therapy is biological therapy. 7. The method of claim 1, wherein the cancer therapy is cryotherapy. 8. The method of claim 1, wherein the cancer therapy is hyperthermia. 9. Tumor cells are carcinoma cells, sarcoma cells, central nervous system tumor cells, melanoma cells, leukocytes Diseased cells, lymphoma cells, hematopoietic tumor cells, ovarian cancer cells, osteosarcoma cells, lung cancer cells, Colorectal cancer cells, hepatocellular carcinoma cells, glioblastoma cells, prostate cancer cells, breast cancer cells, bladder Bladder cancer cells, renal cancer cells, pancreatic cancer cells, gastric cancer cells, esophageal cancer cells, anal cancer cells, biliary tract cancer cells The cell according to claim 1, which is selected from the group consisting of cysts, genitourinary cancer cells and head and neck cancer cells. How to list. 10. A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA 4. The portion according to claim 3, wherein the portion encoding the therapeutic sensitizing gene activity of A is in the vector. How to list. 11. Vector is adenovirus vector, retrovirus vector, adeno Associated virus vector, herpes virus vector, vaccinia virus vector And a papillomavirus vector, according to claim 10. How to list. 12. A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA The portion encoding the therapeutic sensitization gene activity of A is a viral capsid or virus. 4. The method of claim 3, wherein the method is bound to particles. 13. A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA The portion encoding the therapeutic sensitization gene activity of A is a viral capsid or virus. 13. The method of claim 12, wherein the particles are attached to the particles by a polylysine bridge. 14． A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA The portion encoding the therapeutic sensitization gene activity of A is encapsulated in liposomes. The method of claim 3. 15. A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA The portion of A encoding the therapeutic sensitizing gene activity is bound to a ligand. 3. The method according to 3. 16. 16. The method of claim 15, wherein the ligand is asialoglycoprotein. . 17． A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA A portion encoding the therapeutic sensitizing gene activity of A is directly injected into tumor cells or The method according to claim 3, which is introduced by a sol preparation. 18. A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA A portion encoding the therapeutic sensitizing gene activity of A is introduced into tumor cells by intraarterial injection The method of claim 3, wherein 19. A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA A portion encoding the therapeutic sensitizing gene activity of A is introduced into tumor cells by intraluminal injection The method of claim 3, wherein 20. A portion of the therapy-sensitizing gene that codes for therapy-sensitizing gene activity, or cDNA A portion encoding the therapeutic sensitization gene activity of A is introduced into tumor cells by intravenous injection The method of claim 3, wherein 21. The method according to claim 1, wherein the therapy-sensitizing gene activity is fas therapy-sensitizing activity. Law. 22. The method according to claim 1, wherein the therapy-sensitizing gene activity is p53 therapy-sensitizing activity. Law.