JPH09504308A - Non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymer nanoparticles and microparticles - Google Patents

Non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymer nanoparticles and microparticles

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JPH09504308A
JPH09504308A JP7505337A JP50533795A JPH09504308A JP H09504308 A JPH09504308 A JP H09504308A JP 7505337 A JP7505337 A JP 7505337A JP 50533795 A JP50533795 A JP 50533795A JP H09504308 A JPH09504308 A JP H09504308A
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acid
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polymer
poly
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ジェイ． ドンブ，アブラハム
グレ，ルクサンドラ
義春 南竹
テレサ ペラッチャ，マリア
エス． ランガー，ロバート
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Abstract

(57)【要約】 網内細胞系のマクロファージにより血流から迅速に除去されない粒子が提供され、そしてそれは改変されて可変放出速度を達成しまたは特定の細胞または器官を標的にする。この粒子は、多官能性化合物と、１つまたはそれ以上の疎水性ポリマーおよび１つまたはそれ以上の親水性ポリマーとを共有結合することにより形成し、そして生物学的活性な物質を含む。ポリ(アルキレングルコール)の末端ヒドロキシル基が、特定細胞または器官を標的にする抗体、もしくは粒子の電荷、親油性または親水性に影響を与える分子を含む生物学的に活性な分子の表面に共有結合するために使用され得る。この粒子の表面はまた、粒子のコアを形成する構造と同一構造の生分解性ポリマーを結合することにより改変され得る。本明細書に記載のように、マイクロ粒子もまた形成され得るが、この粒子の代表的なサイズは、180nmと10,000nmとの間、好ましくは、180nmと240nmとの間である。この粒子は、診断画像法のための磁気粒子または放射線不透過性材料、所定の部位に送達されるべき生物学的に活性な分子、もしくはこの粒子を標的するための化合物を含み得る。この粒子は、表面にポリ(アルキレングリコール)成分を含まない粒子に比べて血液中で延長された半減期を有する。   (57) [Summary] Particles that are not rapidly cleared from the bloodstream by the reticuloendothelial macrophages are provided, which are modified to achieve variable release rates or to target specific cells or organs. The particles are formed by covalently linking a multifunctional compound with one or more hydrophobic polymers and one or more hydrophilic polymers, and include a biologically active substance. The terminal hydroxyl groups of poly (alkylene glycols) are shared on the surface of biologically active molecules, including molecules that affect the charge, lipophilicity or hydrophilicity of antibodies or particles that target specific cells or organs. Can be used to bind. The surface of the particles can also be modified by attaching biodegradable polymers of the same structure as the structure forming the core of the particles. Microparticles can also be formed as described herein, but the typical size of the particles is between 180 nm and 10,000 nm, preferably between 180 nm and 240 nm. The particles can include magnetic particles or radiopaque materials for diagnostic imaging, biologically active molecules to be delivered to a site, or compounds for targeting the particles. The particles have an extended half-life in blood as compared to particles that do not have a poly (alkylene glycol) component on their surface.

Description

【発明の詳細な説明】 非直鎖状の親水性−疎水性マルチブロックコポリマーの ナノ粒子およびマイクロ粒子 本発明は、生物学的に活性な物質およびポリマーから作製される診断用目的の 制御された送達のための生分解性ブロックコポリマーおよびナノ粒子およびマイ クロ粒子の分野に関する。 発明の背景 生物学的に活性な物質の非経口投与の分野における主な試みは、制御された送 達用デバイスの開発であり、このデバイスは静脈から投与し得るほど小さく、そ して長い循環半減期を有する。制御された方法で組織または血液に投与された生 物学的に活性な物質は、それが溶液の形態で注入された場合と比べて、有毒な副 次的効果の低減が期待され、そして血漿中の不安定な化合物の分解を減少させ得 る。 マイクロカプセル、マイクロ粒子、リポソームおよびエマルションを含む数多 くの注入可能な薬剤送達システムが検討されてきた。これらの注入可能な薬剤送 達物質の使用において重要な障害は、網内系(RES)のマクロファージによる血流 からの物質の速やかなクリアランスである。例えば、直径60ナノメーターほどの 小さいポリスチレン粒子は、２〜３分内で血液から除去される。これらの粒子を ポリ(エチレングリコール)(poly(ethylene glycol))およびポリ(プロピレングリ コール)(poly(propylene glycol))を基にしたブロックコポリマーでコーティン グすることにより、それらの半減期は著しく増大した。L．Illum，S.S．Davis, 「静脈内に投与されるコロイド粒子の器官の取り込みは、非イオン性界面活性剤 (poloxamer 338)を用いることにより変化され得る」，FEBS Lett.，167，79(198 4)。 リポソーム薬剤送達システムは、生物学的に活性な物質の静脈投与用に広範囲 に渡って考慮されてきた。なぜなら、それらは血液中を自由に循環することが期 待されたからである。しかし、リポソームは網内系に捕らえられて迅速に血液か ら除去されることが見出された。ポリ(エチレングリコール)を用いたリポソーム のコーティングは、それらの半減期を実質的に増大させる。柔軟で比較的親水性 のPEG鎖は、明らかにリポソーム表面で立体的効果を誘起し、これはタンパク質 の吸着を減少、すなわちRES捕捉を減少させる。T.M．Allen，C．Hansen，Biochi mica et Biophysica Acta ，1068，133-141(1991); T.M．Allenら，Biochimica e t Biophysica Acta ，1066，29-36(1991); V．Torchilin，A．Klibanov，「核療 法および診断用の抗体結合キレートポリマー」，Critical Reviews in Therapeu tic Drug Carrier Systems ，7(4)，275-307(1991); K．Maruyamaら，Chem．Phar m．Bull. ，39(6)，1620-1622(1991); M.C．Woodleら,Biochimica et Biophysica Acta，193-200(1992) ; およびD.D．Lassicら，Biochimica et Biophysica Acta ，1070，187-192(1991); およびA．Klibanovら，Biochimica et Biophysica Act a ，1062，142-148(1991)。 欧州特許出願番号第0 520 888 A1号および同第0 520 889 A1号は、生物学的に 活性な物質の注入可能な制御された投与のためのポリ乳酸(polylactic acid)と ポリ(エチレングリコール)との直鎖状ブロックコポリマーのナノ粒子を開示して いる。この出願は、薬剤放出プロファイルを変化させるためにコポリマーをどの ように改変するかも、コポリマーの改変がインビボでの送達デバイスの分布およ びクリアランスにどのように影響するかも開示していない。この出願はまた、特 定の細胞または器官に対して標的にされるナノ粒子をどのようにして調製するの か、あるいは診断用途用ガンマ線イメージングに有用なナノ粒子をどのように調 製するのかを教示していない。 1993年7月23日に出願された米国出願番号第08/690,370号には、注入可能な粒 子が開示されている。この粒子は、表面に生物学的に活性な物質およびポリ(ア ルキレングリコール)部分を含有する生分解性の固体のコアから、あるいはポリ( アルキレン)グリコール部分と生分解性ポリマーとのブロックコポリマーから形 成され、網内系による取込みに対する耐性が増加することを示す。 網内系のマクロファージにより血流から速やかに浄化されず、そして特定の細 胞または器官に対して標的にされる必要性または物質の送達速度を操作する必要 性に応じて改変され得る、物質の制御された送達用の他のタイプの粒子を得るこ とが望まれる。 本発明の目的は、網内系による取込みを減少し、そして容易に送達されるマイ クロ粒子またはナノ粒子またはコーティングを調製するためのコポリマーを提供 することである。 本発明の他の目的は、血流から速やかに浄化されない、診断および治療用の物 質の制御された送達用の粒子を提供することである。 本発明の他の目的は、特定の細胞または器官に対して標的にされる必要性また は物質の送達速度を操作する必要性に応じて改変され得る、マイクロ粒子または ナノ粒子を提供することである。 本発明の他の目的は、診断用イメージングのために検出可能な物質を含有する 生分解性マイクロ粒子またはナノ粒子を提供することである。 発明の要旨 非直鎖状マルチブロックコポリマーは、多官能性の化合物と、１つまたはそれ 以上の親水性ポリマーおよび１つまたはそれ以上の疎水性の生腐食性(bioerodib le)ポリマーとを共有結合させて、少なくとも３つのポリマーブロックを含むポ リマーを形成することにより調製される。１つの実施態様において、ポリエチレ ングリコール(PEG)鎖または多糖類部分のような、１つまたはそれ以上の親水性 ポリマーは、クエン酸(citric acid)または酒石酸(tartaric acid)のような多官 能性分子に共有結合され、１つまたはそれ以上の活性ヒドロキシ、カルボン酸ま たは疎水性ポリマーに結合し得る他の多官能性の反応性官能基を残す。次いで、 疎水性ポリマー、例えば、ポリ乳酸(PLA)、ポリグリコール酸(polyglycolic aci d)(PGA)、ポリ酸無水物(polyanhydride)、ポリホスファゼン(polyphosphazene) またはポリカプロラクトン(polycaprolactone)(PCL)は、開環重合または縮合重 合のような適切な反応により、多官能性化合物に共有結合される。１つの実施態 様において、マルチブロックコポリマーは、多官能性化合物に結合されるいくつ かの短いPEG鎖（例えば、分子量1000未満）を有し得る。リガンドは、１つまた はそれ以上のポリマー鎖に結合して、広範な用途のための種々の性質を達成し得 る。 ブロックコポリマーは、移植デバイスに、ならびに最も好ましい実施態様にお いては、ナノ粒子およびマイクロ粒子にコーティングを形成するに有用である。 このナノ粒子およびマイクロ粒子は、網内系のマクロファージによって血流から 急速に浄化されず、そして種々の放出速度を達成するようにあるいは所望の特定 の細胞または器官を標的とするように必要に応じて改変され得る。この粒子は、 その内部にまたはその表面に、治療または診断のいずれかの目的で送達されるべ き物質を取り込み得る。好ましい実施態様において、親水性ポリマーは、ポリ( アルキレングリコール)(poly(alkylene glycol))(PAG)である。ポリ(アルキレン グリコール)または他の親水性ポリマーの末端ヒドロキシル基は、粒子の表面に 分子を共有結合的に付着するために用いられ得る。粒子上にまたは粒子内に取り 込まれる物質には、生物学的活性分子および標的分子が包含され、例えば、特定 の細胞または器官と免疫反応性の抗体、細胞表面成分と特異的に反応する化合物 、磁気粒子、診断画像用の放射線不透過性物質のような検出可能な物質、空気の ようにＸ線または超音波、蛍光、磁気共鳴画像法により検出可能な他の物質、な らびに粒子の電荷、親油性または親水性に影響する分子が包含される。 粒子の典型的なサイズは、約80nmと10,000nmとの間、好ましくは80nmと400nm との間であるが、マイクロ粒子は本明細書に記載のようにもまた形成され得る。 粒子は、種々の方法で投与され得るが、好ましい実施態様は静脈内投与によるも のである。粒子は、容易に、凍結乾燥されそして水溶液に再分散される。生体分 散(biodistribution)実験は、粒子の表面にポリ(アルキレングリコール)部分を 含んでいない粒子と比較して、血中における粒子の半減期が延長されていること を示す。 図面の簡単な説明 図１a、１b、および１cは、多官能性化合物を１つまたはそれ以上の親水性ポ リマーおよび１つまたはそれ以上の疎水性の生腐食性ポリマーと共有結合するこ とにより作製される、マルチブロックコポリマーから形成されるナノ粒子の概略 図である。 図２aは、ポリエチレングリコールブロックがリガンドにより官能化され得る 、 (PEG)3-シトレート-ポリラクチド((PEG)3-citrate-polylactide)、(PEG)3-シト レート-ポリカプロラクトン((PEG)3-citrate-polycaprolactone)、および(PEG)3 -シトレート-ポリセバシン酸((PEG)3-citrate-polysebacic acid)の合成の概略 図である。 図２bは、酒石酸(tartaric acid)およびムチン酸(mucic acid)と、ポリ乳酸（ PLA）、ポリカプロラクトン（PCL）、ポリセバシン酸（PSA）、およびポリグリ コール酸（PGA）との疎水性ブロック、ならびにポリエチレングリコール（PEG） 親水性ブロックのマルチブロックコポリマーの概略図である。 図２cは、PEG-ジ-PLAの概略図である。 図２dは、ベンゼンテトラカルボン酸と、ポリエチレングリコール（PEG）およ びポリ乳酸（PLA）またはポリ無水セバシン酸(polysebacic anhydride)（PSA） ブロックとのマルチブロックコポリマーの概略図である。 図２eは、ポリ乳酸（PLA）およびポリエチレングリコール（PEG）ブロックを 有するブタンジグリシジルエーテルベースの(butane diglycidyl ether-based) ４本の腕を有するジブロックコポリマーの合成の概略図である。 図２fは、グルカル酸(glucaric acid)の1,4-3,6-ジラクトンと、リガンド、ポ リ乳酸（PLA）およびポリエチレングリコール（PEG）ブロックとのマルチブロッ クコポリマーの概略図である。 図２gは、PEGブロックがリガンドまたはPLAによりさらに官能化される、(PEG)3 -シトレート-ポリラクチド((PEG)3-citrate-polylactide)の概略図である。 図２hは、PLA-シトレート-デキストラン(PLA-citrate-dextran)およびPLA-2- ヒドロキシアジプアルデヒド-デキストラン(PLA-2-hydroxyadipaldehyde-Dextra n)の概略図である。 図２iは、PEGがリガンドまたはメチル基により官能化され得る、PEG-2-ヒドロ キシアジプアルデヒド-PLA(PEG-2-hydroxyadipaldehyde-PLA)の概略図である。 図２a〜２iのそれぞれの非直鎖状ブロックコポリマーは、分子量600、1900、5 ,000；12,000；および20,000のポリ(エチレングリコール)[PEG]、ならびにポリ ラクチド(polylactide)（PLA）、ポリグリコリド(polyglycolide)、ポリカプロ ラクトン（PCL）、またはポリ無水セバシン酸（PSA）から合成された。 発明の詳細な説明 非直鎖状マルチブロックコポリマーは、多官能性化合物と１つまたはそれ以上 の親水性ポリマーおよび１つまたはそれ以上の疎水性の生腐食性ポリマーとを共 有結合して、少なくとも３つのポリマー性ブロックを含むポリマーを形成するこ とにより調製される。１つの実施態様において、１つまたはそれ以上の親水性ポ リマー（例えば、ポリエチレングリコール(PEG)鎖または多糖類(polysaccharide )部分）は、クエン酸または酒石酸のような多官能性分子に共有結合されて、１ つまたはそれ以上の活性ヒドロキシル、カルボン酸または疎水性ポリマーとの結 合に利用され得る他の反応性官能基を残す。次いで、疎水性ポリマー（例えば、 ポリ乳酸(PLA)、ポリグリコール酸(PGA)、ポリ酸無水物、ポリホスファゼン、ま たはポリカプロラクトン(PCL)）は、開環重合または縮合重合のような適切な反 応により多官能性化合物に共有結合される。 コブロックポリマーから形成される粒子は、親水性ポリマーで表面を改変して いない粒子の場合、網内系のマクロファージによって血流中から急速に浄化され ず、そして種々の放出速度を達成するようにあるいは所望の特定の細胞または器 官を標的とするように必要に応じて改変され得るということが開示される。粒子 は、広範な目的のために制御された方法で生物学的に活性な物質を投与するのに 有用である。Ｉ. 非直鎖状ブロックコポリマー ポリマーの選択 親水性ポリマー ポリ(アルキレングリコール)（ポリマーがグリコールの代わりにオキシドから 調製された場合は、ポリ(アルキレンオキシド)としてもまた呼ばれ得る）および 多糖類を包含するがこれに限定されない親水性ポリマーは、マルチブロックコポ リマーの親水性部分として用いられる。ポリ(アルキレングリコール)以外に用い られ得る親水性ポリマーには、ポリピロリドン、ポリ(アミノ酸)（短い非毒性の タンパク質および非免疫原性のタンパク質、およびヒトアルブミン、フィブリン 、 ゼラチン、およびそれらのフラグメントのペプチドを包含する）、デキストラン 、およびポリ(ビニルアルコール)が包含される。他の物質には、ポリオキシエチ レンとポリオキシプロピレンとのコポリマーであるPluronicTM F68（BASF Corpo ration）が包含され、これは米国食品医薬品局（FDA）により承認されている。 本明細書で用いられるように、用語「ポリ(アルキレングリコール)」は、式HO -[(アルキル)O]y-OHのポリマーを意味し、ここでアルキルは、C1〜C4の直鎖状ま たは分岐状のアルキル部分を意味し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル 、ブチル、およびイソブチルを包含するがこれらに限定されない。Ｙは４を超え る整数であり、典型的には８と500との間、さらに好ましくは40と500との間であ る。 インビボの結果により、より高分子量(MW)のPEGほど、血中の循環時間（半減 期）がより長いことが示される。 ポリ(アルキレングリコール)の具体例には、ポリ(エチレングリコール)、ポリ プロピレン1,2-グリコール(polypropylene 1,2-glycol)、ポリ(プロピレンオキ シド)、およびポリプロピレン1,3-グリコール(polypropylene 1,3-glycol)が包 含される。好ましい親水性ポリマー性部分は、分子量約300〜20,000の間のPEGで ある。 体からの排出を保証するために、ポリエチレングリコールの分子量は、約300 と20,000ダルトンとの間にあるべきであり、多糖類の分子量は、40,000以下であ るべきであり、タンパク質の分子量は70,000以下であるべきである。 疎水性ポリマー 疎水性ポリマーは、生腐食性で、生体適合性で、そして例えば、ヒドロキシル 基、チオール基、アミノ基、カルボキシ基、アルデヒド基、または多官能性分子 の他の官能基のような末端官能基と反応して共有結合を形成し得る末端基を有す るべきである。ポリ乳酸部分を含有するマルチブロックコポリマーは、好ましい 実施態様である。しかし、乳酸とグリコール酸とのコポリマー、ならびに他のポ リマー、例えば、ポリ酸無水物、ポリホスファゼン、α-ヒドロキシカルボン酸 のポリマー、ポリヒドロキシ酪酸(polyhydroxybutyric acid)、ポリオルトエス テル(polyorthoesters)、ポリカプロラクトン、ポリホスフェート(polyphosphat e)、またはこれらのポリマーのモノマーから調製されるコポリマーは、本明細書 に記載されるマルチブロックコポリマーを形成するために用いられ得る。粒子を 形成するブロックコポリマーを調製するために用いられ得る種々の物質は、イン ビボで達成され得る放出速度および放出プロファイルの多様性を有意に増加させ る。 好ましい実施態様において、ポリ(乳酸-コ-グリコール)酸(poly(lactic-co-gl ycolic)acid)（PLGA）のポリエステルは、多官能性化合物に結合した疎水性腐食 性(erodible)ポリマーとして用いられる。これらのポリマーは、FDAにより非経 口投与が承認されている。PLGAはインビボで加水分解により分解するので、分解 速度は、インビトロのデータから予測され得るからである。PLGAは、体内に通常 見られる物質である、乳酸とグリコール酸とに分解する。さらに、乳酸とグリコ ール酸とのモル比およびコポリマーの分子量を変えることにより、異なる分解パ ターンが得られ得る。 ポリマーの分子量および化学組成および立体化学配置は、種々の有機溶媒にお けるポリマーの溶解度、およびポリマーの結晶性に影響する。この点において、 乳酸とグリコール酸とのコポリマーは好ましい。 好ましくは、疎水性で生腐食性のポリマーは、酢酸エチルまたはアセトンに溶 解する。酢酸エチルまたはアセトンは、ジクロロメタンおよびクロロホルムのよ うな他の有機溶媒よりも好ましい。なぜなら、酢酸エチルまたはアセトンは、イ ンビボでの適用について毒性が少ないからである。 ポリL-ラクチドは、高度の結晶性を有するポリマーである。ポリD,L-ラクチド はより少ない結晶性であり、そして有機溶媒により可溶である。D,L-ラクチドと グリコリドとの75：25の比のランダムコポリマーは、有機溶媒に、特に酢酸エチ ルに非常に可溶である。このコポリマーは完全にアモルファスであり、制御した 放出のためのナノスフェアおよびマイクロスフェアを作製するために有用なポリ マーを提供する。 ポリ-L-ラクチドは、インビトロで数ヶ月から数年の分解時間を有する。この 長い分解時間は、ポリマーを水の浸透から保護するより高い結晶性が原因である 。D,L-ラクチドはアモルファスであるため、分解時間は、典型的には１ヶ月から 数 ヶ月である。ポリグリコリドもまた結晶性構造を有し、そして１ヶ月から数ヶ月 の分解時間を有する。D,L-PLGAはアモルファスであり、インビトロで数週間から 数ヶ月の分解時間を有する。グリコール酸の比が増加するにつれ、分解速度は高 まる。乳酸は、α炭素にかさ高いメチル基（-O-CH(CH3)-CH-)）を有する。この ことにより、水分子がエステルに接近することを困難にする。一方グリコール酸 はα炭素にプロトン（-O-CH2-CO-)）を有し、このことは、水分子がエステル結 合に容易に接近することを可能にする。 粒子の親水性および疎水性領域の分子量は、粒子の水の溶解度に影響を与え、 従って、水溶液中での安定性に影響を与える。 マルチブロックコポリマーの調製 多官能性化合物を、１つまたはそれ以上の親水性ポリマー、好ましくはポリ( アルキレングリコール)(poly(alkylene glycol))(PAG)、さらに好ましくはポリ( エチレングリコール)(poly(ethylene glycol))、および１つまたはそれ以上の疎 水性ポリマーと共有結合させることにより形成されるマルチブロックコポリマー は、多くの方法により調製され得る。１つの方法は、疎水性ポリマー(例えばポ リエチレングリコール(polyethylene glycol))の一方の末端を保護する工程、お よび官能基を、保護されていない末端で、多官能性化合物の１つまたはそれ以上 の反応性基と反応させる工程を包含する。次いで、多官能性化合物に残っている 反応性基は、１つまたはそれ以上の疎水性生腐食性ポリマーと反応し得、続いて 保護基が除去され得る。保護基の選択的除去により、疎水性ポリマーおよび親水 性ポリマーの選択的な改変が可能となり、そしてこの選択的除去は、ポリマー合 成の分野の当業者に周知である。 好ましい保護されたポリアルキレングリコール(polyalkylene glycol)は、モ ノメトキシポリ(アルキレングリコール)(monomethoxy poly(alkylene glycol)) 、例えばモノメトキシ-PEG(monomethoxy-PEG)または当業者に公知の別の酸素保 護基で保護されたPEGを含み、これらは、一方の末端ヒドロキシル基が保護され 、そして他方がポリマーと自由に反応し得る。 第２の方法は、疎水性の生腐食性ポリマーを、１つの保護された末端官能基と 、 多官能性化合物の１つまたはそれ以上の反応性基とを反応させる工程、次いで、 保護された親水性ポリマーを、多官能性化合物に残された１つまたはそれ以上の 反応性基と反応させる工程を包含する。 別の実施態様において、多官能性化合物のカルボン酸基は、アミノ官能性末端 のポリ(アルキレングリコール)(poly(alkylene glycol))(Shearwater Polymers ，Inc.)と反応し得、アミド結合を生成し得る。アミド結合は、一般にエステル 結合より強力である。アミド結合は、ナノ粒子表面のポリ(アルキレングリコー ル)(poly(alkylene glycol))の保持力のより長い期間を提供する。アミノ基をカ ルボン酸基と結合させてアミドを生成する方法は、当業者に周知である。 さらに別の実施態様において、ポリマーのチオール基は、多官能性化合物のカ ルボキシ基と反応しチオエステル結合を生成し得る。チオエステル結合を生成す る方法は、当業者に公知である。 さらに別の実施態様において、ポリマーのアミノ基は、グルタルアルデヒド(g lutaraldehyde)のような架橋剤を使用して、多官能性化合物のアミノ基とカップ リングし得る。これらのカップリング反応は、当業者に公知である。 ポリ(アルキレングリコール)(poly(alkylene glycol))末端の、および特に、 ポリ(エチレングリコール)(poly(ethylene glycol))末端の他のマルチブロック コポリマーは、上述の反応を使用し、分岐状のまたは他の適切なポリ(アルキレ ングリコール)(poly(alkylene glycol))を使用し、そして反応すべきでない末端 基を保護して調製され得る。Shearwater Polymers，Inc.は、広範なポリ(アルキ レングリコール)(poly(alkylene glycol))誘導体を提供する。 １つの実施態様において、PLAまたはPLGAのような疎水性ポリマー部分の末端 基を、1,3,5-ベンゼントリカルボン酸(1,3,5-benzenetricarboxylic acid)、ブ タン-1,1,4-トリカルボン酸(butane-1,1,4-tricarboxylic acid)、(プロパン-1, 2,3-トリカルボン酸)(tricarballylic acid(propane-1,2,3-tricarboxylic acid ))、およびブタン-1,2,3,4-テトラカルボン酸(butane-1,2,3,4-tetracarboxylic acid)を含むがこれらに限定されない適切なポリカルボン酸モノマー(polycarbo xylic acid monomer)と反応させることにより、マルチブロックコポリマーが調 製される。ここで、反応を意図されないカルボン酸部分は、当業者に公知の手段 により保護される。次いで、保護基を除去し、そして残るカルボン酸基を、ポリ (アルキレングリコール)(poly(alkylene glycol))のような親水性ポリマーと反 応させる。別の実施態様において、ジアミン、トリアミン、またはポリアミンは 、同様に分岐剤として使用される。II.ブロックコポリマーからの粒子の調製 ナノ粒子の調製およびキャラクタリゼーション ナノスフェアを、ブロックコポリマーから、予め生成されたコポリマーを使用 するエマルジョン/蒸発技術により調製し得る。予め生成されたポリマーおよび 随意に送達されるべき物質は(有機溶媒に可溶な場合には)、有機溶媒に溶解され 得る。装填物は、約25mgのポリマー/2ml塩化メチレン(methylene chloride)、お よびポリマー重量のおよそ10%と50%との間の送達されるべき物質であり得る。得 られる有機溶液は、水相を用いてボルテックスすることによりエマルジョン化さ れ得、そして次いで代表的には１分間、およそ40ワットの出力で超音波処理され 得る。溶媒を蒸発させ得、ナノスフェアを遠心分離(30分、5,000rpm)により回収 し、２回洗浄し、そして凍結乾燥し得る。 両親媒性マルチブロックコポリマーは、薬剤または他の化合物を捕らえること が可能な生分解性で高密度なコアと免疫系による迅速な認識を防止するために有 効なコーティングとを有するナノスフェアを生成し得る。親水性ブロックおよび 疎水性ブロック(例えばPEGおよびポリエステル(polyester)またはポリ酸無水物( polyanhydride))の水中および有機溶媒中での異なる溶解性により、ナノスフェ アの所望の相分離構造を得る。ポリマーおよび薬剤を含有する有機相を、いかな るさらなる安定化剤も用いずに、水を用いてマルチブロックコポリマーの界面活 性剤特性によりエマルジョン化し得る。２つの相をエマルジョン化することによ り、親水性ブロックは水との界面に移動し、そして疎水性ブロックは小滴の内側 に残り、そして溶媒蒸発の後、固体の生分解性コアを形成する。表面上で高いPE G密度を有する200nm未満のサイズを有する粒子が、超音波のような高エネルギー 形態を使用して得られ得る。AFM分析により、この様式で調製されるナノスフェ アは球状であることが示され、QELSより、この様式で調製されるナノスフェアの 粒子サイズが、I80nmと240nmとの間の範囲にあり、単一モードのサイズ分布を有 する。 例えば、ブロックコポリマーおよび送達されるべき物質の混合物を、酢酸エチ ル(ethyl acetate)または塩化メチレン(methylene chloride)のような共通溶媒 中で混合し得る。好ましくは、有機溶媒は、親水性ポリマーに対する非溶媒であ り、かつ疎水性ポリマーに対する溶媒である。溶液に水、好ましくは蒸留脱イオ ン水を添加することにより、エマルジョンを生成し得る。有機溶媒の緩慢な蒸発 により、小滴内部および小滴表面でのポリマー鎖の再編成が可能になる。好まし くは有機溶媒に不溶性である親水性ポリマーは、水相へ移動する傾向にある。一 方、水に溶けない疎水性ポリマーは、小滴の内部に留まり、そして溶媒が蒸発し た後ナノスフェアのコアを形成する。コア内部のPEG鎖は、避けられるべきであ る。なぜなら、このことが、コアによる水の吸収と、引き続く加速された未制御 の薬剤放出とを導き得るからである。 有機溶媒の除去後、粒子を、水相から遠心分離により単離し得る。これらは、 後に容易に水に再分散し得る。 別の実施態様において、アセトン(acetone)、メタノール(methanol)、または エタノール(ethanol)およびこれらの水溶液が、蒸留脱イオン水の代わりに使用 され得る。一般に、水が好ましい。なぜなら、より高濃度のポリ(アルキレング リコール)(poly(alkylene glycol))を粒子の表面に押しやるからである。しかし 、疎水性ポリマー、例えばポリ酸無水物(polyanhydride)が水に反応しやすい場 合には、アセトン(acetone)が沈澱剤として使用され得る。 さらに別の実施態様において、マルチブロックコポリマーは、粒子作製前に直 鎖状の疎水性-親水性コポリマー(例えばPLGAまたはPLAと混合したPLGA-PEG)とブ レンドされ得、粒子上の異なる性質を提供し得る(例えばインビボでのそれらの 半減期を変化させる)。PLGA-PEGを他のポリマーに添加することにより、粒子の インビボ半減期を増加させ得る。 代表的な実施態様において、直鎖状コポリマーを、０重量%より大きく100重量 %まで、好ましくは10重量%と100重量%との間の比率でマルチブロックコポリマー と混合し得る。 送達されるべき物質は、０より大きく99までの比率で、好ましくは、１〜70の 比率で、コポリマーまたはコポリマーの混合物と混合され得る。 PEG-ポリ酸無水物(PEG-polyanhydride)およびPEG-ポリエステル(PEG-polyeste r)ナノスフェアのカプセル化性質および形態特性を調べるために、異なる薬物装 填において特性研究を行った。粒子サイズを準弾性光散乱（quasi-elastic ligh t scattering(QELS)）により測定した。使用した装置は、ゴニオメーターおよび 136チャンネルデジットコリレーター(136 channel digit correlator)およびシ グナルプロセッサー(signal prosessor)からなるブロークハーベン装置(Brookha ven apparatus)を有するレキセルアルゴンイオンレーザー（Lexel Argon-ion la ser、Fremont，CA，USA）（model BI-200SM）であった。測定を、90°の散乱角 度で波長488nmのレーザーで行った。ナノスフェアの画像を、原子力顕微鏡（AFM ）により撮影した。装置（ナノスコープIII(Nanoscope III)、Digital Instrume nts、Santa Barbara，CA，USA）は、350kHzの周波数で垂直に振動する（タッピ ングモード(tapping mode)）の片持バリ(cantilever)から構成された。 ナノスフェア表面のPEGの存在を調べるために、およびこの表面に配置されて いる薬物分子の存在を調査するために、化学的表面分析(XPS)を行った。データ を、Perkin-Elmer 5100装置において出力300WのMgKαX線により収集した。 ポリマーの分解を調べるため、乳酸(lactic acid)を、乳酸塩試薬(Lactate Re agent)(Sigma)を用いる比色法により、540nmでの乳酸塩の定量測定について検出 した。 ナノスフェア内の薬物の結晶化を調べるために、および薬物とポリマーとの間 のあらゆる可能な相互作用を調査するために、示差走査熱量測定(DSC)を行った 。 凍結破断により得られたサンプル断面の透過型電子顕微鏡分析によりナノスフ ェア内部コアの形態分析を行った。 薬物装填を、凍結乾燥ナノスフェアを適切な溶媒に溶解し、そして薬物（リド カイン(lidocaine)またはプレドニゾロン(prednisolone)）の量を分光分析的に アッセイすることにより測定した。 PEGコートされたナノスフェアは、好適なナノスフェアの例であり、そして多 官能性化合物を、少なくとも１つのポリ（エチレングリコール）(PEG)および少 なくとも１つの疎水性生腐食性のポリマー、例えば、ポリ(D、L乳酸)(poly(D,Ll actic acid))、またはポリ(乳酸−コ−グリコール酸(poly(lactic co-glycolic acid))、ε-ポリカプロラクトン(ε-polycaprolactone)のようなポリラクトンな どのポリエステルあるいはポリ（セバシン酸）(poly(sebacic acid))のようなポ リ酸無水物と共有結合させることにより形成されるマルチブロックコポリマーか ら調製され得る。 光散乱研究により、得られる粒子のサイズは、有機相の粘性、有機相と水相と の比率、ならびに超音波処理の出力および時間により決定され得ることが示され た。粘性の増加はより大きい粒子を生じ、そして有機相に比べて水相容積のより 高い比率はより小さい粒子を生じる。超音波処理の出力および時間の影響は以下 の通りである：25mgのポリマー／2ml CH2Cl2を30mlの0.3％ポリビニルアルコー ル(polyvinyl alcohol)溶液に加える。混合物を最大強さで30秒間ボルテックス し、次いで、出力７でプローブ超音波処理装置(probe sonicator)で30秒間超音 波処理する。この条件により、180と240nmとの間の粒子サイズのナノ粒子を再現 的に生成し得る。これらのパラメーターは、約200nmの狭い単一モードサイズ分 布という所望のサイズ範囲を有するナノスフェアを得るために、最適化され得る 。 直鎖状ブロックコポリマーを用いる場合に比べて、非直鎖状ブロックコポリマ ーを用いると、ナノスフェア表面の親水性ブロックの密度が増加され得、そして これらのキャリアの血液循環が延長され得る。マルチPEGブロックを含有するマ ルチブロックコポリマーが使用される場合には、ESCAにより示されるように、PE Gが、典型的に、直鎖状コポリマーから調製されたナノスフェアの表面よりもく し形コポリマーから調製されたナノスフェアの表面に多く存在する。直鎖状コポ リマーを用いる場合に比べて、非直鎖状マルチブロックコポリマーを用いると、 PEGの量（Cピークコンボリューション(C peaks convolution)を比較してPEGとPL AまたはPLGAとの間の比率から差し引かれた）は、35.65％から44％より上に増加 され得る。 他の特性研究を、PEG-ポリ酸無水物およびPEG-ポリエステルナノスフェアの形 態特性およびカプセル化性質を調査するため、異なる薬物装填において行った。 凍結破断したナノスフェアの断面画像はTEMにより得られ、粒子密集コアを示し た。薬物の部分的結晶化はDSCデータにより示された。 ナノスフェアの化学組成は、最終の粒子サイズの決定に重要であり得る。粒子 の表面にかなりの量のPEGを含む、マルチブロックくし形コポリマーから調製さ れたナノスフェアは、典型的に、180nmまたはそれ以上のサイズ範囲である。(PE G 20K)3-PLA粒子における最大のPEG分子量の場合には、直径が240nmまで増加さ れ得、それに対して、PLAナノ粒子の場合には、直径が120nm未満であり得る。意 外に、これは、直鎖状コポリマーから調製された粒子（例えば、PEG-PLGA粒子（ ここで、コートされない粒子に比べて、PEF-PLGA粒子中のPEGがナノスフェアサ イズを低減させ得た））とは対照的である。疎水性ブロックの組成もまた、粒子 サイズに影響する。例えば、塩化メチレンにさらに溶解し得るポリカプロラクト ンを用いてナノスフェアコアを形成すると、100nm未満の直径を有する粒子が得 られ得る。薬物装填は、粒子サイズに対して影響をほとんど有しないようである 。リドカインおよびプレドニゾロンで装填された粒子は、装填された薬物の量が 45％の程度のときにも同じサイズを示し得る。 マイクロ粒子の調製 マイクロ粒子は、超音波バスを使用せずに、先に記載されているナノ粒子を調 製する方法を用いて調製され得る。このマイクロ粒子はまた、有機溶媒中のマル チブロックコポリマー溶液を水溶液にスプレーすることにより、調製され得る。 粒子の組成 先に記載されているように、粒子は、多官能性化合物を、少なくとも１つの親 水性ポリマー（例えば、300と20,000との間の分子量を有するポリ（アルキレン グリコール）または多糖類部分）、および少なくとも１つの疎水性ポリマー（例 えば・ポリオルトエステル(polyorthoesters)、ポリホスフェートエステル(poly phosphate esters)、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）、ポリ（乳酸）、ポリ（ グリコール酸）、ポリ酸無水物、ポリホスファゼン(polyphosphazenes)、ポリカ プロラクトンまたはその他の生分解性ポリマー、生体適合性ポリマー、およびそ れらのコポリマー）と共有結合させることにより調製されたマルチブロックコ ポリマーから形成される。この多官能性化合物は、１個と10個との間の親水性ポ リマーおよび１個と10個との間の疎水性ポリマーで置換され得、そして好ましく は、１個と６個との間の親水性ポリマーおよび１個と６個との間の疎水性ポリマ ーで置換される。 本明細書中で使用されるように、親水性ポリマーとは、水性媒体に溶解し得、 そして医療用途に使用されるときに生体適合性で、かつ人体から容易に排出され るポリマーを意味する。好適な分子量は、PEGでは、300と20,000との間であり、 多糖類では、1,000と40,000との間であり、そしてポリアミノ酸（ペプチド）で は、1,000と70,000との間である。 本明細書中で使用されるように、疎水性の生腐食性ポリマーとは、水性媒体に 溶解しないが、その重量の30％までの水を吸収し得、そして生体適合性かつ分解 性のポリマーを意味する。好ましい分子量範囲は、500と500,000との間である。 本明細書中で使用されるように、多糖類とは、多くの単糖類(monosaccharides )から構成された炭水化物(carbohydrate)を意味する。 本明細書中で使用されるように、多官能性化合物とは、ポリマーの官能基とカ ップリングされ得る少なくとも２個の官能基を有する化合物を意味する。この化 合物は、直鎖状、分枝状または環式のアルキル基、芳香族基、複素環式基、また はそれらの組み合わせであり得る。これらの基のタイプは、限定されないが、ヒ ドロキシル(hydroxyl)、チオール(thiol)、アミノ(amino)、カルボン酸(carboxy lic acid)、アルデヒド(aldehyde)、スルホン酸(sulfonic acid)、リン酸(phosp horic acid)、アミド(amide)、イソシアネート(isocyanate)、イミン(imine)お よびそれらの誘導体を包含する。好ましくは、この化合物は、非毒性かつ生分解 性である。好適な多官能性化合物の例は、限定されないが、酒石酸(tartaric ac id)、ムチン酸(mucic acid)、クエン酸(citric acid)、グルカロン酸(glucaroni c acid)ならびにトリ−、テトラ−およびポリカルボン酸（ベンゼンテトラカル ボン酸を含む）、デキストリン(dextrins)ならびにトリ、テトラおよびポリアル コール、ならびにカルボキシル基およびヒドロキシル基の組み合わせを有する分 子を包含する。 粒子のサイズ 本明細書中に記載されるように、粒子の典型的なサイズは、80nmと10,000nmと の間、好ましくは、80nmと400nmとの間である。この方法は、80と10,000nmとの 間の粒子、すなわち、ナノ粒子および１ミクロンまたはそれ以上の直径を有する マイクロ粒子の両方を作る。本明細書中で一般的説明を容易にするために、マイ クロ粒子およびナノ粒子の両方は、特に指定されなければ、粒子として呼ばれる 。 本明細書中で使用されるように、用語「ナノ粒子」とは、10〜1000nmの範囲の 固体粒子を意味する。「理想」のナノ粒子は、生分解性、生体適合性であり、20 0nm未満のサイズを有し、そして剛直な生分解性のコア（そこへは、送達される べき物質が取り込まれ得る）を有する。 本明細書中で使用されるように、用語「マイクロ粒子」とは、１ミクロン以上 で1000ミクロンまでの範囲のサイズの粒子を意味する。 本明細書中で具体的に記載されているナノ粒子は、所望の用途に応じてより適 切な場合、マイクロ粒子として作製され得る。 粒子の構造 図1a、1b、および1cは、本明細書中に記載されるように調製されるナノ粒子の 実施態様の概略図である。図1aでは、粒子10は、生物学的に活性な物質14を含有 する生分解性の固体コア12と、表面に１つ以上のポリ（アルキレングリコール） 部分16とを有する。表面のポリ（アルキレングリコール）部分16が水に高い親和 性を有し、これは粒子表面へのタンパク質の吸着を減少させる。従って、網内系 (RES)によるナノ粒子の認識および取り込みは減少される。図1bに示されるよう に、ポリ（アルキレングリコール）の末端ヒドロキシル基は、ナノ粒子の表面に おいて、生物学的に活性な分子、または粒子の電荷、親油性および親水性に影響 を与える分子をナノ粒子表面に共有結合的に付着させるために使用され得る。図 1c中のPEGは、図1a中のPEGよりも短い分枝状PEG分子である。 ナノスフェアとは、形状が球状のナノ粒子を意味する。本明細書中またはその 他の周知の手順に従って調製されるナノ粒子の形状は、走査電子顕微鏡で容易に 測定される。球状に成形されたナノ粒子は、血流中の循環に好適である。所望で あれば、粒子は、周知の技法を用いて特定の用途に対してより有用な他の形状に 作製され得る。 分解特性 本明細書中で使用されるように、用語「生分解性の」または「生腐食性の」と は、所望の用途（通常インビボでの治療）において受容可能な期間内（通常、５ 年未満、好ましくは、１年未満）で、６と８との間のpHで25℃と37℃との間の温 度を有する生理学的溶液に曝すときに、溶解または分解するポリマーを意味する 。好適な実施態様では、ナノ粒子が所望の用途に依存して、１時間と数週間との 間の期間内で分解する。 ナノスフェアを構成するためのコポリマー ナノ粒子からの物質の放出期間、放出動力学はコポリマーまたはコポリマー混 合物またはこのナノ粒子を作製するために選択されたブレンドに依存して変化す る。本明細書中の開示を提供すると、当業者は、所望の効果を得るために適切な ポリマーまたはポリマーの組み合わせを選択し得る。III.粒子の表面にまたは内部に取り込まれる物質 送達されるべき物質 広範な生物学的に活性な物質または薬物は、粒子の表面にまたは内部へ組み入 れられ得る。組み入れられる物質は、粒子作製の間、または放出プロセスの間に ポリマーと化学的に相互作用すべきではない。添加剤（例えば、無機塩、BSA（ ウシ血清アルブミン）、および不活性の有機化合物）が、当業者に周知のように 、物質放出の様式を改変するために使用され得る。生物学的に不安定な物質（例 えば、細菌、酵母のような原核生物または真核生物の細胞、またはヒトの細胞を 含む哺乳動物の細胞、またはそれらの要素（例えば、細胞壁）、または細胞の複 合体）もまた、粒子に含まれ得る。用語「生物学的に活性な物質」とは、インビ ボで動物（限定されないが、鳥類およびヒトを含む哺乳類を包含する）に投与さ れるときに生物学的効果を生じさせるペプチド、タンパク質、炭水化物、核 酸、脂質、多糖類またはそれらの組み合わせ、または合成無機分子または有機分 子を意味する。非限定的な例は、抗原、酵素、ホルモン、レセプター、およびペ プチドである。取り込まれ得る他の分子の例は、ヌクレオシド(nucleosides)、 ヌクレオチド(nucleotides)、アンチセンス(antisense)、ビタミン(vitamines) 、ミネラル(minerals)、およびステロイド(steroids)を包含する。 このプロセスに従って調製された粒子は、非ステロイド性抗炎症化合物、麻酔 剤、化学療法剤、イムノトキシン、免疫抑制剤、ステロイド、抗生物質、抗ウイ ルス剤、抗真菌剤、およびステロイド性抗炎症薬、抗凝血薬のような薬物を送達 するために使用され得る。例えば、リドカイン(lidocaine)またはテトラカイン( tetracaine)のような疎水性薬物は、粒子に導入され得、そして数時間にわたっ て放出される。ナノ粒子において40（重量）％程度の装填が得られた。疎水性物 質のカプセル化はより困難であり、そして一般に、その装填効率が、親水性物質 のそれよりも低い。 １つの実施態様では、抗原がナノ粒子に取り込まれる。用語「抗原」は、抗体 の形成を刺激する、または細胞仲介の体液性応答を誘発するあらゆる化学構造を 包含し、限定されないが、タンパク質、多糖類、ヌクレオタンパク質(nucleopro tein)、リポタンパク質(lipoprotein)、合成ポリペプチド、またはタンパク質キ ャリアと結合した小分子（ハプテン(hapten)）を包含する。抗原は所望のアジュ バントと共に投与され得る。適切なアジュバントの例は、合成グリコペプチド(s ynthetic glycopeptide)、ムラミルジペプチド(muramyl dipeptide)を包含する 。他のアジュバントは、死亡ボルデテラ属百日咳菌（Bordetella pertussis）、 グラム陰性細菌のリポ多糖(liposaccharides)、および大きなポリマー性アニオ ン（例えば、硫酸デキストラン(dextran sulfate)）を包含する。ポリ電解質の ようなポリマーもまた、アジュバント活性を与えるナノ粒子の作製のために選択 され得る。 本明細書中に記載のナノ粒子に装填され得る抗原の具体例は、限定されないが 、弱毒化または死亡ウイルス、トキソイド、多糖類、細胞壁ならびにウイルスお よび細菌の表面または被覆タンパク質を包含する。これらはまた、複合体、アジ ュバント、または他の抗原と組み合わせて使用され得る。例えば、精製された莢 膜 多糖(Hib)の形態でのインフルエンザ菌(Haemophilius influenzae)は、単独でま たはジフテリアトキソイド(diphtheria toxoid)との複合体として使用され得る 。これらの抗原が由来する生物体の例は、ポリオウイルス、ロタウイルス、A型 、B型、およびC型肝炎ウイルス、インフルエンザウイルス、狂犬病ウイルス(rab ies)、HIV、麻疹ウイルス(measles)、おたふくかぜウイルス(mumps)、風疹ウイ ルス(rubella)、ボルデテラ属百日咳菌、肺炎球菌（Streptococcus pneumoniae ）、C.ジフテリア(C．diphtheria)、C.テタニ(C．tetani)、コレラ菌、サルモネ ラ菌、ナイセリア(Neisseria)、および赤痢菌(Shigella)を包含する。 粒子の非薬学的使用は、安定剤および分散剤または他の粘性改変剤を含む食物 添加剤の送達、農薬、除草剤、殺虫剤、肥料、およびフェロモンの制御された選 択的送達、ならびに印刷およびインク産業における発色およびインク処方物を包 含する。 診断目的の物質の取り込み 他の実施態様では、γ線で標識されたナノ粒子が提供され、これは、粒子のイ ンビボでの生体分配をモニターするために使用され得る。限定されないが、イン ジウム(indium)およびテクネチウム(technetium)を含むあらゆる薬学的受容可能 なγ線放射部分が使用され得る。磁性粒子が本明細書中に記載されるように調製 され得、他方、表面改変磁性ナノ粒子を含む磁性ナノ粒子が市販で購入され得、 その表面は親水性ポリマー性コートを付着することによりさらに改変される。 例えば、磁性ナノ粒子は、親水性ポリマーをナノ粒子と共有結合させる方式で 、親水性ポリマーの溶液と混合され得る。他方、γ線放射磁性部分は、粒子の親 水性または疎水性生腐食性ポリマー物質に共有結合される。磁性部分のサイズが 大きいほど、得られる粒子のサイズが大きい。 他の材料もまた、空気またはバリウムおよび蛍光化合物のような放射線不透過 性材料を含む、診断目的のための粒子内に取り込まれ得る。ローダミン(rhodami ne)のような疎水性蛍光化合物は、粒子のコアに取り込まれ得る。親水性蛍光化 合物もまた、取り込まれ得るが、親水性材料と疎水性の生分解性コアとの適合性 が低下するために、カプセル化の効率がより小さい。親水性材料は、水中で分離 して溶解し、そして多相エマルジョン技術が粒子製造のために用いられなければ ならない。 １つの実施態様では、粒子は、送達されるべき物質とマルチブロックコポリマ ーとを含有する。このマルチブロックコポリマーは、生物学的に活性な分子（例 えば、FabまたはFab2抗体フラグメントのような抗体または抗体フラグメント） に共有結合される。ここで、この粒子は、生物学的に活性な分子が粒子の外表面 に存在するような方法で調製される。 粒子の表面特性の改変 粒子の電荷、親油性、または親水性は、適切な化合物を粒子の表面の親水性ポ リマーに付与することにより改変させられ得る。粒子はまた、デキストランでコ ートされ得る。これらは、一般にポリ（アルキレングリコール）よりも親水性で あるが柔軟ではない。デキストランをコートしたナノ粒子は、磁気共鳴画像法(M RI)に有用である。 粒子表面への特異的リガンドの付与。 本明細書中に記載のように調製される粒子は、細胞混合物中の所定の細胞につ いての特異的リガンドを粒子表面に付与することにより、細胞分離に用いられ得 るか、または特異的組織に標的され得る。磁気粒子がさらに取り込まれる際に、 粒子は、組織特異的表面タンパク質に対する組織特異的レセプターまたは抗体の ようなリガンドを用いて標的され得、次いで、粒子のイメージングが行われるか 、または送達され得る化合物が放出される間、磁場を用いて標的された細胞に維 持され得る。 例えば、１つの実施態様では、カルムスチン(carmustine)(BCNU)、またはシス プラチン(cisplatin)のような他の抗癌剤が粒子のコアに取り込まれ、そして標 的癌細胞に対する抗体が粒子の表面に共有結合される。 ナノスフェアの薬学的投与 本明細書中に記載の粒子は、液体、クリーム、ゲル、または固体で種々のルー ト（例えば、経口的、非経口的、静脈内、皮内、皮下的、または局所的）で患者 に投与され得る。 粒子は凍結乾燥され、次いで、使用前にμg/ml〜100mg/mlの範囲で水性懸濁液 に処方され得る。あるいは、粒子はペースト、軟膏、クリーム、またはゲル、も しくは経皮パッチに処方され得る。 ナノ粒子は、治療した患者に重篤な毒性の効果を引き起こすことなく、治療学 的に効果的な量の化合物を患者に送達するに充分な量で、送達されるべき物質を 含有すべきである。ナノ粒子内の活性化合物の所望の濃度は、薬剤の吸収速度、 失活速度、および排出速度、ならびにナノ粒子からの化合物の送達速度に依存す る。用量値もまた、緩和されるべき状態の重篤度と共に変化することに留意すべ きである。さらに、特定の被験体についての特定の用量処方箋は、個々の必要性 、および投与するまたは組成物の投与を管理する者の専門的な判断に従った時間 にわたって調節されるべきであることを理解すべきである。 粒子は、粒子の放出速度および所望の用量に依存して、一度に投与され得るか 、または多くのより小さな用量に分けて、時間間隔を変化させて投与され得る。IV. 移植用デバイス(implantable device)のコーティング 本明細書中に記載のように装填されるポリマーはまた、ステント、カテーテ ル、人工血管移植片、およびペースメーカーのような移植用デバイスをコートす るために用いられ得る。このデバイスは、粒子を凍結乾燥した粉末、または当業 者に公知の他のものを用いてコートされ得る。コーティングは、抗生物質、抗炎 症剤、または抗凝固剤を所定の速度で放出し得、移植したデバイスに関連した合 併症を予防し得る。本明細書中に記載されるように調製した制御送達デバイスは また、眼に対する薬剤の放出を延長させるための眼内挿入物(ocular insert)と して用いられ得る。 実施例 PLAおよびPLGAのような疎水性の生腐食性(bioerodible)ポリマーおよびPEGの ような親水性のポリアルキレングルコール(polyalkylene glycol)と、酒石酸(ta rtaric acid)、ムチン酸(mucic acid)、クエン酸(citric acid)、ベンゼンテト ラカルボン酸(benzene tetracarboxylic acid)、グルカロン酸(glucaronic acid )、およびブタンジグリシジルエーテル(butane diglycidyl ether)のような多官 能性化合物との特異的マルチブロックコポリマーの調製を以下に詳述する。これ らのポリマーを、種々の鎖長のPEGおよび種々の疎水性ポリマーを用いて調製し た。この詳細な記載が得られれば、当業者は、ナノスフェアの中に、製造に適し た広範なマルチブロックコポリマーをどのように生成するかを理解するであろう 。 材料および方法 毒性の低いオクテン酸第１スズ(stannous octoate)をICNから入手した。D,L- ラクチドをAldrich Chemical Companyから入手し、そしてグリコリドをPolyscie nces，Inc.から入手した。これらの化合物を、使用する前に酢酸エチルから再結 晶した。分子量5,000、12,000、および20,000を有する高純度のモノメトキシPEG （monomethoxy PEG；M-PEG）をShearwater Polymers，Inc.から入手した。ポリ マーの数平均分子量を、Phenomenexの５μmの粒子で満たされた混合床Phenogel カラムを備えたLC-25屈折率検出器を有するPerkin-Elmer GPCシステムを用いて 測定した。クロロホルム(chloroform)を、溶離液として流速0.9ml／分で用いた 。分子量を、分子量分布の狭いPolysciencesのポリスチレン(polystyrene)およ びポリ（エチレングリコール）(poly(ethyleneglycol))標準に関して測定した。 熱転移のデータをPerkin-Elmer DSC-7（Newton Centaer、MA）を用いて集めた 。試料の重量は20mg〜25mgであった。インジウムを温度およびエンタルピーのキ ャリブレーションのために用いた。各試料を、10℃／分の速度で-60℃〜150℃の 加熱-冷却-加熱サイクルにかけた。S=0.05でニッケル(Nickel)でフィルターされ たCu Kα線源を用いるRigaku Corporation（Danvers、MA）のRigaku Rotaflex回 折計を用いて、広角Ｘ線回折スペクトルを得た。このデータをMicro Vax IIコン ピュータで解析した。塩化ナトリウム(sodium chloride)結晶上に溶融したポリ マー粉末を用いて薄層フィルムを得、IRスペクトルをNicolet 500分光計に記録 した。13C NMRの研究を、Nicolet NT-360分光器を用いて、重水素化クロロホル ム (deuterated chloroform)中に溶解させた試料について行った。ピークの適性化 をVGデータシステムを用いて行った。 実施例１：(メトキシ-PEG-NH2)3、シトレート(citrate)（化合物Ａ）の合成 ３つのPEGシトレートを以下のように調製した： PEG-NH2（１ｇ、MW=5,000、Sherewater）を、ジシクロヘキシルカルボジイミ ド(dicyclohexylcarbodiimide；DCC)（54mg、１当量）およびDMAP（４mg、触媒 ）の10ml乾燥ジクロロメタン(dichloromethane)溶液を用いてクエン酸（14mg、0 .33当量）と反応させた。マグネチックスターラーで撹拌しながら、室温で２日 間反応を継続した。DCU副生成物を濾過によって単離し、そして濾液を、100mlの エーテル(ether)：石油エーテル(petroleum ether)の1:1混合物に注いだ。沈殿 したポリマーをエーテルで洗浄し、そして乾燥させて0.8ｇの白色粉末を得た。 生成物は酸基を含まず（ブロモフェノール(Bromophenol)試験）、そしてGPCクロ マトグラムで15,000の領域に単一のピークを示した。IRは、典型的なエステル(e ster)のピーク(1720cm-1)を示した。以下の分子量、すなわち1,900、12,000、お よび20,000のPEGを有するメトキシ-PEGシトレートトリマーをこの手順を用いて 調製した。 種々のPEG鎖長を有する酒石酸［（メトキシ-PEG）2-タートレート］(tartaric acid[(methoxy-PEG)2-tartrate])、ムチン酸［（メトキシ-PEG）-2-ムコエート ］(mucic acid[(methoxy-PEG)-2-mucoate])、およびグルカロン酸（メトキシ-PE G-ムコエート）(glucaronic acid(methoxy-PEG-mucoate))のPEG誘導体を同様に 調製した。全ての誘導体は、適切な分子量（PEG標準を用いてGPCにより測定され る）を有するカルボン酸についてのブロモフェノール試験で負の結果を示し、そ してアミド結合について典型的な1720で吸収ピークを有していた。 実施例２：DCCを用いるメトキシPEG-OHとクエン酸との間のエステル化反応 反応条件を上記と同様にし、そしてGPCで測定して、80％の転化率を得た（化 合物A-1）。 実施例３：メトキシPEG-OHとクエン酸との間の直接エステル化反応 Dean-Stark共沸装置を備えた100mlの丸底フラスコ中で、メトキシPEG-OH（MW 1900、Polysciences）を、トルエン(toluene)および触媒として硫酸(sulfuric a cid)（１％）中のクエン酸（0.33当量）と反応させた。反応を、H2O除去のため に共沸混合物を用い、還流下で行った。GPC測定によると約75％の収率が得られ た。 実施例４：メトキシPEG-OHとメチルシトレートエステル(methyl citrate e ster)との間のトランスエステル化反応 シトレートメチルエステル(citrate methyl ester)を、還流によりクエン酸と 補助メタノール(access methanol)との間の反応から得た。 得られたトリメチルシトレート(trimethyl citrate)（１当量）を、メトキシP EG（MW-1900、３当量）の還流トルエン溶液と３時間反応させた。トルエンの蒸 留およびジエチルエーテル(diethyl ether)による抽出後、GPCで測定して、約70 ％の収率で生成物を単離した。 実施例５：(PEG)3-シトレート-ポリラクチド[PEG3-PLA]またはPEG3-カプロ ラクトン[PEG3-PCL]ジブロックコポリマー（化合物Ａ１、図２ ａ）の合成 PEG3-シトレート（１ｇ）（Sherewater、MW-5,000、12,000および20,000）を2 0mlのベンゼン(benzene)に溶解した。ラクチド（５ｇ）（Aldrich、99％＋）を 添加し、そして溶液を60分間還流し共沸した。オクテン酸第１スズ（（ラクチド 当たり）0.2重量％）をベンゼンの１％溶液として添加した。反応物を５時間還 流し、溶媒を共沸的に除去し、そして粘性の物質を得た。重合を130℃で２時間 継続した。得られたポリマーは透明であり、わずかに黄色いかたまりであり、そ して高分子量を有していた（表１）。PEG-ポリカプロラクトン(PEG-polycaprola ctone)のマルチブロックコポリマーを同様に合成した。このポリマーは一般の有 機溶媒に可溶であった。 実施例６：マルチブロック(くし型)PEG-リガンド-PLA(化合物Ｂ、図２a)の合成 クエン酸(0.1モル)を、100mlの乾燥ジクロロメタン(dichloromethane)中のDCC (0.33当量)およびDMAP(0.01モル、触媒)を用いて、メトキシ-PEGアミン(methoxy -PEG amine)(MW 1900)(0.2モル)およびベンジルエステルカルボキシ-PEG-アミン (benzyl ester carboxy-PEG-amine)(MW 5,000)(0.1モル)の混合物と反応させた 。マグネチックスタラーで撹拌しながら、室温で２日間反応を継続した。DCU副 生成物を濾過により単離し、そして濾液を、500mlのエーテル：石油エーテルの １：１混合物中に注いだ。沈殿したポリマーをエーテルで洗浄し、そして乾燥し て90％の収率で白色粉末を得た。生成物は、酸基を含まず(ブロモフェノール(Br omophenol)試験)、そしてGPCクロマトグラムで分子量9,000の単一ピークを示し た。IRは、代表的なエステルピーク(1720 cm-1)。ラクチド(lactide)およびカプ ロラクトン(caprolactone)のブロックコポリマーを、PLA-PEGくし型ブロックコ ポリマーについて記載された同一の方法を用いて合成した。 PLA-PEGシトレートトリマー(PLA-PEG citrate trimer)を、テトラヒドロフラ ン中に溶解し、そして水素-パラジウム触媒で水素化し、PEG 5000鎖でベンジル( benzylic)保護基を除去した。末端鎖カルボン酸PEGを、次いで、アミドカップリ ングのための活性化剤としてDCCを用いてウシ血清アルブミン(リガンドに相当す る)と反応させた。 同様に、上記の方法を用いて、２つまたは３つのリガンドを、２または３当量 のベンジルカルボキシレートを末端に有するPEG-アミンを用いて(PEG)３-シトレ ート((PEG)３-citrate)に結合され得る。 実施例７：PEG2-タートレート(tartrate)-PLA2の調製(化合物Ｃ、図２b) ジ-PEGタートレートを、(PEG)3-シトレートの合成について記載された手順を 用い、活性化剤としてDCCを用いてアミノ末端メトキシPEGと酒石酸との間の反応 から調製した。このジ-PEGタートレート誘導体を、ラクチドまたはグリコリド(g lycolide)混合物と反応させ透明ポリマーを形成した（表１）。 実施例８：ジ-メトキシPEG-ムコエート(mucoate)-テトラPLAの調製(化合物Ｄ、 図２b) ムチン酸(mucic acid)(Aldrich)を、DMF中のDCCの存在下で２当量のメトキシP EGと反応させてジ-PEG-ムコエートを形成し、ラクチド、グリコリドまたはカプ ロラクトンと共重合させ、高分子量(MW=65,000〜95,000)の６本腕のブロックコ ポリマーを形成した。 実施例９：ペンタ-メトキシPEG-グルコロネート(glucoronate)無水物の調製 (化合物Ｅ、図２b) グルカロン酸(glucaronic acid)を、DCCの存在下でカルボン酸末端を有するメ トキシPEG(MW=5,000、Sherewater)と反応させ、(PEG)5-グルコネート(gluconate )を形成した。ペンタ-PEG化合物を、脱水剤として無水酢酸を用いて、セバシン 酸と重合した(1:5重量比)。分子量約75,000のポリマーを得た。 実施例10：モノ-PEG-ペンタPLAグルコロネートの調製(化合物Ｆ、図２b) グルカロン酸を、DMFのジクロロメタン中DCCの存在下でアミノ末端を有するメ トキシPEG(MW=5,000、Sherewater)と反応させ、PEG-グルコネートアミドを形成 した。グルコネートPEG誘導体を、ラクチド、グリコリドまたはカプロラクトン と重合した(１：５重量比)。 実施例11：PEG-ジ-PLAの調製(化合物Ｇ、図２c) メトキシ-PEG-エポキシド末端(Sherewater)を、炭酸ナトリウム(sodium carbo nate)溶液中で一晩室温で加水分解した。得られた２つの水酸基を有するPEGを、 エーテル：メタノール１：１混合物中の沈殿により単離し、そして乾燥した。ヒ ドロキシ末端PEGを、ラクチド、グリコリド、およびカプロラクトンとブロック 共重合し、高分子量のポリマーを得た(分子量は、70,000−115,000の範囲であっ た)。 実施例12：トリメトキシPEG-シトレート-ポリ(無水セバシン酸)ジブロックコ ポリマーの調製(化合物Ｈ、図２a) トリメトキシ-PEG-シトレート(0.01モル、上記のように調製)を、プロトンア クセプターとしてトリエチルアミンとともにジクロロメタン中で過剰量のアジポ イルクロライド(adipoyl chloride)(0.012モル)と反応させた。室温で24時間後 、水を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌し、そしてポリマーを、メタノー ル-ジエチルエーテル１：１の混合物を添加することにより単離した。得られる トリメトキシ-PEG-シトレート-アジペート(adipate)を無水酢酸と反応させ、ア セテート無水物誘導体を形成し、無水セバシン酸プレポリマーと重合し、分子量 MW＝58,000；Mn＝31,000を有するマルチブロックコポリマーを形成した。MP＝65 〜74℃。 実施例13：無水ベンゼンテトラカルボン酸(benzene tetracarboxylic anhydr ide)(BTCA)誘導体(化合物Ｉ、図２d) BTCAを、環流THF中２当量のメトキシPEGアミンと５時間反応させ、２つの残留 カルボキシル基を有するジメトキシ-PEGテトラカルボキシベンゾエート(dimetho xy-PEG tetracarboxybenzoate)を生成した。PEGダイマーを、無水酢酸、そして 次いで無水セバシン酸と反応させ、４本腕のジブロックPEG2-ベンゼン-PSA2を形 成した。 あるいは、ポリカプロラクトンジオール(MW＝3,000、Polysciences)を、２つ のカルボン酸を含むジメトキシ-PEGテトラカルボキシベンゾエートと反応させ、 ４本腕のPEG-PCLジブロックコポリマーを形成した。PLAまたはPCLブロックコポ リマーを調製し、そして次いでPEG-ベンゼンテトラカルボキシレートのカルボン 酸基を、プロピレンオキシド(propylene oxide)と反応させ、ラクチド、グリコ リドおよびカプロラクトンとのブロック共重合に利用可能なヒドロキシル誘導体 を形成した。 実施例14：ブタンジグリシジルエーテル(butane diglycidyl ether)ベースの テトラジブロックコポリマー(化合物Ｊ、図２e) ブタンジグリシジルエーテルを、環流THF中で２当量のメトキシ-PEG-OHと10時 間反応させた。PEGダイマーを、触媒としてオクテン酸錫を用いてトルエン中で ラクチド、グリコリドまたはカプロラクトンとブロック共重合した。高分子量ポ リマーを得た(高分子量を規定する)。 実施例15：グルカル酸の１,４；３,６-ジラクトンに基づくマルチブロックコ ポリマー(化合物Ｋ、図２f) PLAを、ベンゼン中で触媒としてオクテン酸第１スズを用いて、ジラクトンと 共重合した(５：１重量比)。２つのカルボン酸基を用いて、アミド結合を介して メトキシ-PEG-アミンを結合した。 実施例16：PLA-シトレート-デキストランの合成(化合物Ｎ、図２h) 臨床的に用いられる生分解性の材料であるデキストランを、PEGに対する代替 えの親水性ポリマーとして使用した。クエン酸のベンジルエステルをラクチドと 重合し、PLA-末端シトレートエステルを形成し、それを水素化してベンジル基を 除去した。このクエン酸末端PLAをデキストランでエステル化してPLA-シトレー ト-デキストラン3を形成した。 実施例17：PEG２-ヒドロキシアジプアルデヒド(2-hydroxyadipaldehyde)の誘 導体(化合物Ｍ、図２i) ２-ヒドロキシアジプアルデヒド(Aldrich)を、アミノ末端PEGと反応させ、シ ッフ(Shciff)塩基を形成し、それをNaBH4で水素化し、対応するアミンを形成し た。ジ-PEG誘導体を、オクテン酸錫の存在下でラクチドまたはカプロラクトンと 反応させ、PLAまたはPCL-PEG2ジブロックコポリマーを形成した。 実施例18：デキストランまたはリガンド２-ヒドロキシアジプアルデヒドの誘 導体(化合物Ｍ-１、図２h) ２-ヒドロキシアジプアルデヒドを、オクテン酸錫の存在下でラクチドと反応 させ、アジプアルデヒド末端PLAを形成する。アルデヒド基を、リガンド(ペプチ ドまたはタンパク質)のアミノ側鎖基と反応させ、ジリガンド-PLAジブロックを 形成する。あるいは、アルデヒド末端をエチレンジアミン(ethylene diamine)と 反応させ、ジアミノ基を有するPLA末端を形成する。このポリマーを、デキスト ランまたはアミロースのような酸化された多糖類と反応させ、PLA-ジ(多糖類)誘 導体を形成する。 実施例19：ポリ酸無水物-PEG ポリ酸無水物末端PEGを、セバシン酸プレポリマー(無水酢酸中でセバシン酸を 還流し、そして得られるポリマーを、エーテル/石油エーテル溶液中で沈殿する ことにより合成した)およびメトキシPEG-OH、または無水メトキシPEG-カルボキ シレートアセテートと溶融縮合することにより調製した。代表的な実験では、メ トキシ-PEG-カルボキシレート(１g)をセバシン酸プレポリマー(３g)と混合した 。この混合物を、180℃で真空下(0.1mmHg)90分間重合してポリマーを得た。この ポリマーは、1805および1740cm-1のIR吸収を示し(脂肪族の無水物結合に典型的 である)、そして1H-NMRスペクトルはポリマー構造に一致する。 実施例20：非直鎖状マルチブロックコポリマーならびに直鎖状ポリマーおよ びコポリマーの混合物からのナノ粒子の調製 PEG3-シトレート-PLA、PLGA-PEGコポリマーおよびポリカプロラクトンホモポ リマーの重量比１：１：３の混合物から、上記のようなエマルジョン/蒸発技術 を用いてナノスフェアを調製した。あらかじめ形成されたポリマーを、有機溶媒 中に所定濃度のポリマー/溶媒で溶解した。得られる有機溶液を、ボルテックス によりそして次いで40-W出力で１分間超音波処理することにより水相とエマルジ ョン化した。溶媒を蒸発し、そしてナノスフェアを遠心分離により集め(30分、5 ,000rpm)、２回洗浄し、そして凍結乾燥して平均サイズ約200nmを有するナノス フェアを得た。 実施例21：薬剤放出特性 リドカイン(Lidocaine)およびプレドニゾロン(prednisolone)(Sigma)をカプセ ル化のために選択した。なぜならそれらは、低水溶性(水中で５mg/ml未満)であ り、有機溶媒(塩素化ハイドロカーボン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルム アミドまたはジオキサン)中で高溶解度(20mg/mlを超える)であり、およびUV分光 測光法により検出容易だからである。 放出試験は、異なる量(20％wt、33％wt)のリドカインを装填したナノスフェア を用いて、リン酸緩衝溶液(PBS、pH7.4)中、37℃で行った。透析膜(50,000カッ トオフ)を、凍結乾燥ナノスフェアの懸濁液(10mg/５mlPBS)で満たし、そして次 いで25mlのPBS中に置いた。試料を外液から取り、次いでその度に新しい溶液で 置き換えた。薬剤放出は、240nmの分光測定で検出した。 マルチブロックくし型コポリマーから作成された粒子を用いて、高いカプセル 化効率が達成され得るが、マルチブロックコポリマーの疎水性のため100％のカ プセル化効率を得ることは困難であり得る。カプセル化効率は、PEGとのPEG3-シ トレート-PLAマルチブロックコポリマー(５、12、20kDaの分子量)について70％ 未満であり得ることが観察された。 PEGでコートされたナノスフェアの放出特性、特にナノスフェア表面のPEGの存 在の影響、および薬剤放出動力学に関するナノスフェアコア組成(ポリマーおよ び薬剤特性、薬剤装填)の影響を調査するためにインビトロ研究を行った。ナノ スフェアの懸濁液は、さらなる添加物なしで、凍結乾燥粒子を水溶液中にボルテ ックスにより再分散することにより容易に得られた。リドカインをモデル薬剤と して用いた。リドカインの放出は、直鎖状PEG-PGLAコポリマーおよび非直鎖状く し型コポリマーから作成された粒子において試験された。 両方のタイプの粒子は、数時間にわたってインビトロで連続放出を示すが、異 なる放出動力学を有する。分子量は、PEG-PLGAナノスフェアの放出パターンに影 響を与えない。なぜなら、薬剤は、分子量５、12、20KDaのPEGとのコポリマーを 用いて約10時間で完全に放出されるからである。ナノスフェア表面のPEGの存在 は、薬剤放出を改変することが期待されない。しかし、マルチブロックコポリマ ーを用いると、より高いPEG密度およびPEG鎖長さのような因子が薬剤放出を遅延 し得る。10時間で、90％を超えるリドカインがPLAナノスフェアから放出された が、(PEG 20K)3-PLA粒子からは60％しか放出されなかった。 PEG-ε-ポリカプロラクトンから作成されるナノスフェアからの薬剤放出は、 ２相性である。 ポリマー腐食のため、ポリ酸無水物から作られるコアがより速い薬剤放出を導 き得ることが通常期待される。しかし、最初の２時間における初期の速い放出の 後、次の８時間の間は薬剤は一定速度で放出されたが、薬剤放出はプラトー(pla teau)に到達した。 ポリマー分解動力学をまたインビトロで調査した。PEG-PLGA、PEG-PCL、およ び(PEG)3-PLA粒子では、ポリマーは数週間後分解を開始する。ポリ酸無水物から 作成されるナノスフェアコアはすぐに分解を開始する。最初の場合では、薬剤放 出は、拡散メカニズムに支配される。なぜなら、薬剤は、ポリマー分解が起こる 前に完全に放出され得るからである。ポリ酸無水物では、ポリマー腐食は、薬剤 放出に影響し、そして薬剤の特性は、放出動力学においてより重要な役割を有す る。粒子の小さなサイズと大きな表面積は、スラブ(slab)のような他の薬剤送達 系に対してポリマー腐食の速度を増加し、そしてその後薬剤溶解度が溶解動力学 を支配する。 薬剤装填量は、放出動力学に強い影響を有し得る。33％wtのリドカインを含む PEG-PLGAナノスフェアは、12時間にわたり薬剤を放出し得る。驚くべきことに、 10％の薬剤を装填した粒子は、６時間で完全な薬剤の放出を示し得る。増加する 薬剤装填は、DSCにより示されるように、装填された薬剤の一部をコア中に再結 晶化させ得る。リドカインのような、疎水性薬剤の結晶の存在は、放出動力学を 遅延し得る。薬剤負荷ナノスフェアについて行われたESCA研究は、薬剤結晶がナ ノスフェア表面に位置しないことを確認した。ポリマー組成がまた改変され、そ して薬剤装填は45％wtまで増加した。 実施例22：インビボでの111In標識ナノ粒子の生体分布の評価 インジウム111(「In」)は、複合体形成によりマルチブロックコポリマーに直 接結合され得る。Inおよびジエチルトリアミノペンタ酢酸(diethyltriamiopenta acetic acid)(DTPA)を、ステアリルアミン(stearylamine)と反応させる。得られ る化合物、In-DTPA-ステアリルアミドは、疎水性コア内でカプセル化されるため に相互作用するに十分疎水性である。この場合、親水性および疎水性ポリマーの 分子量は、相互作用にほとんど影響を有さない。PBS中またはウマ血清中で37℃ での24時間を超えるインキュベーションの後、標識の損失は、遠心分離後の上澄 み溶液の放射活性を測定することにより評価され得る。この標識方法は、従って 、γ-シントグラフィー(scintography)によりまたは血液および/または異なる器 官中の放射活性の直接測定によりインビボ研究に対して有用であり得る。 本発明を、その好ましい実施態様を参照して記載してきた。本発明の変更およ び改変は、上記の本発明の詳細な記載から当業者に自明である。これらの変更お よび改変のすべてが添付の請求項の範囲内に含まれることが意図される。Detailed Description of the Invention             Of non-linear hydrophilic-hydrophobic multi-block copolymer                         Nanoparticles and microparticles   The present invention is for diagnostic purposes made from biologically active substances and polymers. Biodegradable block copolymers and nanoparticles and particles for controlled delivery Related to the field of black particles.                               BACKGROUND OF THE INVENTION   A major challenge in the field of parenteral administration of biologically active substances is controlled delivery. Is the development of a delivery device, which is small enough to be administered intravenously, And has a long circulation half-life. Raw administered to tissue or blood in a controlled manner A physically active substance is a toxic by-product as compared to when it is injected in the form of a solution. A reduction in secondary effects is expected and may reduce the degradation of unstable compounds in plasma. You.   Many, including microcapsules, microparticles, liposomes and emulsions Many injectable drug delivery systems have been investigated. Delivery of these injectable drugs An important obstacle in the use of substances is blood flow by macrophages of the reticuloendothelial system (RES). The immediate clearance of substances from. For example, about 60 nanometers in diameter Small polystyrene particles are removed from the blood within 2-3 minutes. These particles Poly (ethylene glycol) and poly (propylene glycol) Block copolymer based on poly (propylene glycol) The half-life was significantly increased by the treatment. L. Illum, S.S. Davis, "Organic uptake of intravenously administered colloidal particles is a non-ionic surfactant. can be altered by using (poloxamer 338). "FEBS Lett.167, 79 (198 Four).   Liposome drug delivery system is extensive for intravenous administration of biologically active substances Has been taken into consideration. Because they are supposed to circulate freely in the blood. Because I was waited. However, the liposomes are trapped in the reticuloendothelial system and rapidly become blood. It was found to be removed from Liposomes using poly (ethylene glycol) Coatings substantially increase their half-life. Flexible and relatively hydrophilic PEG chains clearly induce a steric effect on the surface of liposomes, which is a protein Of RES trapping, ie, RES trapping. T.M. Allen, C. Hansen,Biochi mica et Biophysica Acta , 1068, 133-141 (1991); T.M. Allen et al.Biochimica e t Biophysica Acta , 1066, 29-36 (1991); Torchilin, A. Klibanov, “Nuclear Therapy Antibody-bound chelating polymers for methods and diagnostics, "Critical Reviews in Therapeu tic Drug Carrier Systems , 7 (4), 275-307 (1991); Maruyama et al.Chem. Phar m. Bull. , 39 (6), 1620-1622 (1991); M.C. Woodle,Biochimica et Biophysica Acta, 193-200 (1992) And D.D. Lassic et al.Biochimica et Biophysica Acta , 1070, 187-192 (1991); and A. Klibanov et al.Biochimica et Biophysica Act a , 1062, 142-148 (1991).   European Patent Application Nos. 0 520 888 A1 and 0 520 889 A1 are biological With polylactic acid for injectable controlled administration of active substances Disclosed are nanoparticles of linear block copolymers with poly (ethylene glycol) I have. This application describes which copolymers to modify the drug release profile. The modification of the copolymer may affect the distribution and delivery of the delivery device in vivo. And how it affects clearance. This application also How to prepare nanoparticles targeted to a given cell or organ Or how to prepare nanoparticles useful for gamma-ray imaging for diagnostic applications. I do not teach you how to make it.   No. 08 / 690,370, filed July 23, 1993, contains injectable particles. The child is disclosed. The particles contain biologically active substances and poly ( From a biodegradable solid core containing a (ruylene glycol) moiety, or poly ( Formed from a block copolymer of (alkylene) glycol moiety and biodegradable polymer And shows increased resistance to uptake by the reticuloendothelial system.   Macrophages in the reticulum do not promptly clear the bloodstream and Need to be targeted to the vesicle or organ or to manipulate the delivery rate of the substance To obtain other types of particles for controlled delivery of substances, which can be modified depending on the sex. And is desired.   It is an object of the present invention to reduce uptake by the reticuloendothelial system and to facilitate delivery of microbes. Provide copolymers for preparing black particles or nanoparticles or coatings It is to be.   Another object of the present invention is a diagnostic and therapeutic product that is not rapidly cleared from the bloodstream. To provide particles for controlled quality delivery.   Another object of the invention is the need to be targeted to specific cells or organs or Can be modified according to the need to manipulate the delivery rate of the substance, microparticles or The purpose is to provide nanoparticles.   Another object of the present invention is to contain a detectable substance for diagnostic imaging. The purpose is to provide biodegradable microparticles or nanoparticles.                               Summary of the Invention   Non-linear multi-block copolymers include multifunctional compounds and one or more More than one hydrophilic polymer and one or more more hydrophobic bioerodible le) a polymer containing at least three polymer blocks covalently linked to the polymer. Prepared by forming a limer. In one embodiment, polyethylene One or more hydrophilic, such as a glycol (PEG) chain or a polysaccharide moiety Polymers are multi-functional such as citric acid or tartaric acid. Covalently attached to a potent molecule, one or more active hydroxy, carboxylic acid or Or leaving other multifunctional reactive functional groups that may be attached to the hydrophobic polymer. Then Hydrophobic polymers such as polylactic acid (PLA), polyglycolic acid d) (PGA), polyanhydride, polyphosphazene Or polycaprolactone (PCL) is a ring-opening polymerization or condensation It is covalently attached to the polyfunctional compound by a suitable reaction such as coupling. One embodiment In a multi-block copolymer, a multi-block copolymer is May have short PEG chains (eg, molecular weight less than 1000). One ligand Can be attached to further polymer chains to achieve various properties for a wide range of applications You.   Block copolymers are found in implantable devices as well as in the most preferred embodiments. It is also useful for forming coatings on nanoparticles and microparticles. These nanoparticles and microparticles are released from the bloodstream by macrophages in the reticuloendothelial system. It is not cleared rapidly and is specific to achieve different release rates or desired Can be modified as needed to target the cells or organs of. This particle is It should be delivered internally or to its surface, either for therapeutic or diagnostic purposes. It can take up some substance. In a preferred embodiment, the hydrophilic polymer is poly ( Alkylene glycol) (PAG). Poly (alkylene The terminal hydroxyl groups of glycol) or other hydrophilic polymers are It can be used to covalently attach molecules. On or within particles The substances to be incorporated include biologically active molecules and target molecules, for example, specific Antibodies immunoreactive with cells or organs of Escherichia coli, compounds that specifically react with cell surface components , Magnetic particles, detectable substances such as radiopaque substances for diagnostic imaging, of air X-rays or other substances detectable by ultrasound, fluorescence, magnetic resonance imaging, such as Also included are molecules that affect the charge, lipophilicity or hydrophilicity of the particles.   Typical sizes of particles are between about 80 nm and 10,000 nm, preferably 80 nm and 400 nm. However, microparticles can also be formed as described herein. The particles may be administered in a variety of ways, although the preferred embodiment is by intravenous administration. Of. The particles are easily lyophilized and redispersed in aqueous solution. Living body A biodistribution experiment involves the placement of poly (alkylene glycol) moieties on the surface of particles. Prolonged half-life of particles in blood compared to particles that do not contain Is shown.                             Brief description of the drawings   1a, 1b, and 1c show a multifunctional compound containing one or more hydrophilic moieties. Covalently bond with limers and one or more hydrophobic bioerodible polymers Outline of nanoparticles formed from multi-block copolymers produced by FIG.   Figure 2a shows that the polyethylene glycol block can be functionalized with a ligand. , (PEG)Three-Citrate-Polylactide ((PEG)Three-citrate-polylactide), (PEG)Three-Sito Rate-Polycaprolactone ((PEG)Three-citrate-polycaprolactone), and (PEG)Three -Citrate-Polysebacic acid ((PEG)Three-citrate-polysebacic acid) synthesis FIG.   Figure 2b shows tartaric acid and mucic acid and polylactic acid ( PLA), polycaprolactone (PCL), polysebacic acid (PSA), and polyglycan Hydrophobic block with cholic acid (PGA), as well as polyethylene glycol (PEG) 1 is a schematic diagram of a multi-block copolymer of hydrophilic blocks.   FIG. 2c is a schematic diagram of PEG-di-PLA.   Figure 2d shows benzenetetracarboxylic acid and polyethylene glycol (PEG) and And polylactic acid (PLA) or polysebacic anhydride (PSA) FIG. 3 is a schematic diagram of a multi-block copolymer with blocks.   Figure 2e shows polylactic acid (PLA) and polyethylene glycol (PEG) blocks. Butane diglycidyl ether-based 1 is a schematic diagram of the synthesis of a diblock copolymer having four arms.   Figure 2f shows the glucaric acid 1,4-3,6-dilactone, the ligand and the Multi-block with polylactic acid (PLA) and polyethylene glycol (PEG) blocks FIG.   Figure 2g shows that the PEG block is further functionalized with a ligand or PLA (PEG).Three -Citrate-Polylactide ((PEG)Three-citrate-polylactide).   FIG. 2h shows PLA-citrate-dextran and PLA-2-. PLA-2-hydroxyadipaldehyde-Dextra It is the schematic of n).   Figure 2i shows PEG-2-hydro, in which PEG can be functionalized with a ligand or a methyl group. FIG. 1 is a schematic diagram of PEG-2-hydroxyadipaldehyde-PLA.   Each of the non-linear block copolymers of Figures 2a-2i has a molecular weight of 600, 1900, 5 , 000; 12,000; and 20,000 poly (ethylene glycol) [PEG], and poly Lactide (PLA), polyglycolide, polycapro Synthesized from lactone (PCL) or poly sebacic anhydride (PSA).                             Detailed Description of the Invention   Non-linear multi-block copolymers are polyfunctional compounds and one or more Of a hydrophilic polymer and one or more hydrophobic bioerodible polymers of Bound to form a polymer containing at least three polymeric blocks. And is prepared by In one embodiment, one or more hydrophilic Limers (eg, polyethylene glycol (PEG) chains or polysaccharides ) Moiety) is covalently attached to a polyfunctional molecule such as citric acid or tartaric acid, Coupling with one or more active hydroxyl, carboxylic acid or hydrophobic polymers Leaving other reactive functional groups available for combination. Then, a hydrophobic polymer (eg, Polylactic acid (PLA), polyglycolic acid (PGA), polyanhydride, polyphosphazene, Or polycaprolactone (PCL) is suitable for ring-opening or condensation polymerization. Correspondingly, it is covalently bound to the polyfunctional compound.   Particles formed from coblock polymers have a surface modified with a hydrophilic polymer. In the case of non-particles, they are rapidly cleared from the bloodstream by reticuloendothelial macrophages. And to achieve different release rates or to achieve specific cells or organs as desired. It is disclosed that it can be optionally modified to target the public sector. particle To administer biologically active substances in a controlled manner for a wide range of purposes. Useful.I.  Non-linear block copolymer     Polymer selection                             Hydrophilic polymer   Poly (alkylene glycol) (the polymer is made from oxide instead of glycol If prepared, it may also be referred to as poly (alkylene oxide)) and Hydrophilic polymers, including but not limited to polysaccharides, include multiblock copolymers. Used as the hydrophilic part of limers. Used for other than poly (alkylene glycol) Possible hydrophilic polymers include polypyrrolidone, poly (amino acid) (short non-toxic Proteins and non-immunogenic proteins, and human albumin, fibrin , Gelatin, and peptides of their fragments), dextran , And poly (vinyl alcohol). Other substances include polyoxyethylene Pluronic, a copolymer of ren and polyoxypropyleneTM F68 (BASF Corpo ration), which is approved by the US Food and Drug Administration (FDA).   As used herein, the term "poly (alkylene glycol)" refers to the formula HO -[(Alkyl) O]y-OH means a polymer, where alkyl is C1~ CFourStraight chain Or branched alkyl moiety, methyl, ethyl, propyl, isopropyl , Butyl, and isobutyl. Y exceeds 4 Is an integer, typically between 8 and 500, more preferably between 40 and 500 You.   In vivo results indicate that higher molecular weight (MW) PEG has a longer circulation time in blood (half Period) is shown to be longer.   Specific examples of poly (alkylene glycol) include poly (ethylene glycol) and poly (ethylene glycol). Propylene 1,2-glycol, Poly (propylene oxide) Sid) and polypropylene 1,3-glycol. Included. A preferred hydrophilic polymeric moiety is PEG with a molecular weight between about 300 and 20,000. is there.   To guarantee its elimination from the body, the molecular weight of polyethylene glycol is around 300. And the molecular weight of the polysaccharide should be 40,000 or less. Should and the molecular weight of the protein should be below 70,000.                             Hydrophobic polymer   Hydrophobic polymers are bioerodible, biocompatible and, for example, hydroxyl Group, thiol group, amino group, carboxy group, aldehyde group, or polyfunctional molecule Has an end group capable of reacting with an end functional group such as other functional groups of to form a covalent bond Should be. Multi-block copolymers containing polylactic acid moieties are preferred It is an embodiment. However, copolymers of lactic acid and glycolic acid, as well as other Limers such as polyanhydrides, polyphosphazenes, α-hydroxycarboxylic acids Polymer, polyhydroxybutyric acid, polyorthoes Ter (polyorthoesters), polycaprolactone, polyphosphate (polyphosphat) e), or copolymers prepared from the monomers of these polymers, are described herein. Can be used to form the multi-block copolymers described in. Particles Various materials that can be used to prepare the forming block copolymer include Significantly increases the variety of release rates and release profiles that can be achieved in vivo You.   In a preferred embodiment, poly (lactic-co-glycol) acid Polyester of ycolic) acid) (PLGA) is a hydrophobic corrosion bonded to polyfunctional compounds. Used as an erodible polymer. These polymers are not Oral administration is approved. PLGA is degraded by hydrolysis in vivo, so degradation The rate can be predicted from in vitro data. PLGA is usually in the body It decomposes into the substances found, lactic acid and glycolic acid. In addition, lactic acid and glyco By varying the molar ratio with phosphoric acid and the molecular weight of the copolymer, different degradation parameters can be obtained. Turns can be earned.   The molecular weight and chemical composition and stereochemical configuration of the polymer are different in different organic solvents. It affects the solubility of the polymer and the crystallinity of the polymer. In this respect, Copolymers of lactic acid and glycolic acid are preferred.   Preferably, the hydrophobic, bioerodible polymer is soluble in ethyl acetate or acetone. Understand. Ethyl acetate or acetone is better than dichloromethane and chloroform. It is more preferable than other organic solvents. Because ethyl acetate or acetone is This is because it is less toxic for in vivo application.   Poly L-lactide is a polymer with a high degree of crystallinity. Poly D, L-lactide Is less crystalline and more soluble in organic solvents. With D, L-lactide Random copolymers with glycolide in a ratio of 75:25 can be used in organic solvents, especially ethyl acetate. It is very soluble in water. This copolymer was completely amorphous and controlled Polyspheres useful for making nanospheres and microspheres for release Offer a ma.   Poly-L-lactide has a degradation time in vitro of months to years. this The long degradation time is due to the higher crystallinity which protects the polymer from water penetration . Since D, L-lactide is amorphous, the decomposition time is typically 1 month number Months. Polyglycolide also has a crystalline structure, and can last from a few months It has a decomposition time of. D, L-PLGA is amorphous and has been in vitro for several weeks It has a decomposition time of several months. The degradation rate increases as the ratio of glycolic acid increases. Maru Lactic acid has a methyl group (-O-CH (CHThree) -CH-)). this This makes it difficult for water molecules to access the ester. Meanwhile glycolic acid Is a proton (-O-CH2-CO-)), which means that water molecules are esterified. It makes it possible to easily approach.   The molecular weight of the hydrophilic and hydrophobic regions of the particles influences the water solubility of the particles, Therefore, it affects the stability in aqueous solution.   Preparation of multi-block copolymer   The polyfunctional compound is combined with one or more hydrophilic polymers, preferably poly ( Alkylene glycol) (PAG), more preferably poly ( Poly (ethylene glycol), and one or more Multiblock copolymers formed by covalently bonding to aqueous polymers Can be prepared by many methods. One method is to use a hydrophobic polymer (eg The process of protecting one end of polyethylene glycol, And a functional group at the unprotected end of one or more of the polyfunctional compounds. Of reacting with a reactive group of. Then remain in the polyfunctional compound The reactive group may react with one or more hydrophobic bioerodible polymers, The protecting group may be removed. Hydrophobic and hydrophilic polymers by selective removal of protecting groups The selective modification of the hydrophilic polymer is possible, and this selective removal is Are well known to those skilled in the art of synthesis.   The preferred protected polyalkylene glycol is a Monomethoxy poly (alkylene glycol) , For example monomethoxy-PEG or another oxygen carrier known to those skilled in the art. Protected PEGs are included, these have one terminal hydroxyl group protected. , And the other is free to react with the polymer.   The second method involves the hydrophobic bioerodible polymer with one protected end functional group. , Reacting a polyfunctional compound with one or more reactive groups, then The protected hydrophilic polymer is provided with one or more residual polyfunctional compounds. The step of reacting with a reactive group is included.   In another embodiment, the carboxylic acid group of the polyfunctional compound has an amino functional end group. Poly (alkylene glycol) (Shearwater Polymers , Inc.) can form an amide bond. The amide bond is generally an ester It is stronger than the bond. The amide bond is the poly (alkylene glycol) on the surface of the nanoparticles. It provides a longer period of retention of poly (poly glycol). Amino group Methods for coupling rubonic acid groups to form amides are well known to those of skill in the art.   In yet another embodiment, the thiol group of the polymer is the functional group of the polyfunctional compound. It can react with a ruboxy group to form a thioester bond. Creates a thioester bond Methods are known to those skilled in the art.   In yet another embodiment, the amino groups of the polymer are glutaraldehyde (g A cross-linking agent such as lutaraldehyde) is used to You can ring. These coupling reactions are known to those skilled in the art.   Poly (alkylene glycol) (poly (alkylene glycol)) terminal, and in particular, Other multi-blocks with poly (ethylene glycol) ends Copolymers may be branched or otherwise suitable using the reactions described above. (Polyglycol) and should not react It can be prepared with the group protected. Shearwater Polymers, Inc. A poly (polyglycol) derivative is provided.   In one embodiment, the ends of hydrophobic polymer moieties such as PLA or PLGA. The group is replaced with 1,3,5-benzenetricarboxylic acid, Tan-1,1,4-tricarboxylic acid, (propane-1, 2,3-tricarboxylic acid (propane-1,2,3-tricarboxylic acid )), And butane-1,2,3,4-tetracarboxylic acid  acid), including but not limited to suitable polycarboxylic acid monomers (polycarbo xylic acid monomer) to produce a multi-block copolymer. Made. Here, carboxylic acid moieties not intended to react can be prepared by means known to those skilled in the art. Protected by. The protecting groups are then removed and the remaining carboxylic acid groups are Not compatible with hydrophilic polymers such as (poly (glycol)) Respond. In another embodiment, the diamine, triamine, or polyamine is , Similarly used as a branching agent.II. Preparation of particles from block copolymers   Preparation and characterization of nanoparticles   Use nanospheres, pre-generated copolymers from block copolymers Emulsion / evaporation techniques. Pre-generated polymer and Substances to be delivered voluntarily (if soluble in organic solvents) are dissolved in organic solvents. obtain. The charge is approximately 25 mg polymer / 2 ml methylene chloride, And the substance to be delivered between approximately 10% and 50% of the polymer weight. Profit The resulting organic solution is emulsified by vortexing with the aqueous phase. And then sonicated, typically for 1 minute at a power of approximately 40 watts obtain. Solvents can be evaporated and nanospheres collected by centrifugation (30 minutes, 5,000 rpm) , Washed twice and lyophilized.   Amphiphilic multi-block copolymers to trap drugs or other compounds Biodegradable and dense core that is capable of preventing the rapid recognition by the immune system Nanospheres with effective coatings can be produced. Hydrophilic block and Hydrophobic block (e.g. PEG and polyester or polyanhydride ( Due to the different solubilities of polyanhydride)) in water and in organic solvents, nanospheres To obtain the desired phase separation structure. The organic phase containing the polymer and drug Water without the use of additional stabilizers It may be emulsified depending on the nature of the agent. By emulsifying the two phases Hydrophilic blocks migrate to the interface with water, and hydrophobic blocks inside the droplets. Remains and after evaporation of the solvent forms a solid biodegradable core. High PE on the surface Particles with a size less than 200 nm with G density have high energy like ultrasonic waves. Can be obtained using the form. Nanospheres prepared in this manner by AFM analysis. The spheres are shown to be spherical, and QELS shows that nanospheres prepared in this manner The particle size ranges between I80 nm and 240 nm with a single mode size distribution. I do.   For example, a mixture of the block copolymer and the substance to be delivered may be mixed with ethyl acetate. Common solvent such as ethyl acetate or methylene chloride Can be mixed in. Preferably the organic solvent is a non-solvent for the hydrophilic polymer. And is a solvent for hydrophobic polymers. The solution is water, preferably distilled deionized An emulsion can be formed by adding water. Slow evaporation of organic solvents This allows the reorganization of polymer chains within and at the surface of the droplet. Preferred Hydrophilic polymers that are insoluble in organic solvents tend to migrate to the aqueous phase. one However, the water-insoluble hydrophobic polymer stays inside the droplet and the solvent evaporates. After that, the core of the nanosphere is formed. PEG chains inside the core should be avoided You. Because this is the absorption of water by the core and the subsequent accelerated uncontrolled This can lead to drug release of   After removal of the organic solvent, the particles can be isolated from the aqueous phase by centrifugation. They are, It can easily be redispersed in water later.   In another embodiment, acetone, methanol, or Ethanol and these aqueous solutions used in place of distilled deionized water Can be done. Water is generally preferred. Because higher concentrations of poly (alkylene groups) This is because the recall (poly (glycol)) is pushed to the surface of the particles. However , Hydrophobic polymers, such as polyanhydrides, are sensitive to water. In that case, acetone can be used as a precipitant.   In yet another embodiment, the multi-block copolymer is directly added to the particles prior to making the particles. Chained hydrophobic-hydrophilic copolymers (e.g. PLGA or PLGA-PEG mixed with PLA) and Can be rendered to provide different properties on the particles (e.g., those in vivo Change the half-life). By adding PLGA-PEG to other polymers, In vivo half-life can be increased.   In an exemplary embodiment, the linear copolymer is greater than 0% by weight and 100% by weight. %, Preferably in a ratio between 10% and 100% by weight multiblock copolymer Can be mixed with.   The substance to be delivered is in a ratio of greater than 0 and up to 99, preferably 1 to 70 It can be mixed with the copolymer or mixture of copolymers in proportions.   PEG-polyanhydride and PEG-polyester r) To investigate the encapsulation and morphological properties of nanospheres, different drug loadings A characterization study was conducted on filling. Quasi-elastic light scattering (particle size) t scattering (QELS)). The equipment used was a goniometer and 136 channel digit correlator and serial Brookhaven device consisting of signal processor (Lexel Argon-ion la with a ven apparatus) ser, Fremont, CA, USA) (model BI-200SM). Measure the scattering angle of 90 ° Laser with a wavelength of 488 nm. An image of the nanosphere can be viewed with an atomic force microscope (AFM). ) Was taken by. Equipment (Nanoscope III, Digital Instrume nts, Santa Barbara, CA, USA) oscillates vertically at a frequency of 350kHz (tappi It consisted of a cantilever in tapping mode.   To investigate the presence of PEG on the surface of the nanospheres, and placed on this surface Chemical surface analysis (XPS) was performed to investigate the presence of drug molecules present. data Were collected on a Perkin-Elmer 5100 instrument with a 300 K output MgKα X-ray.   In order to investigate the degradation of the polymer, lactic acid was added to the lactate reagent. detected for quantitative determination of lactate at 540 nm by colorimetric method using (agent) (Sigma) did.   To study drug crystallization within nanospheres and between drug and polymer Differential scanning calorimetry (DSC) was performed to investigate all possible interactions of .   Nanoscopy was carried out by transmission electron microscopy analysis of the sample cross section obtained by freeze fracture. The inner core morphology was analyzed.   Drug loading is performed by dissolving the lyophilized nanospheres in a suitable solvent and Spectrophotometrically determining the amount of kine (lidocaine) or prednisolone) Measured by assaying.   PEG coated nanospheres are examples of suitable nanospheres and The functional compound is at least one poly (ethylene glycol) (PEG) and a small amount of At least one hydrophobic bioerodible polymer, such as poly (D, L-lactic acid) (poly (D, Ll actic acid)), or poly (lactic co-glycolic acid acid)), polylactones such as ε-polycaprolactone. Any polyester or poly (sebacic acid) -like polyester Is it a multi-block copolymer formed by covalent bonding with phosphoric anhydride? Can be prepared from   Light scattering studies show that the size of the resulting particles depends on the viscosity of the organic phase and the organic and aqueous phases. It is shown that this can be determined by the ratio of Was. The increase in viscosity results in larger particles, and more of the aqueous phase volume than the organic phase. Higher ratios result in smaller particles. The effect of ultrasonic power and time is as follows Is as follows: 25 mg polymer / 2 ml CH2Cl230 ml of 0.3% polyvinyl alcohol (Polyvinyl alcohol) solution. Vortex the mixture at maximum strength for 30 seconds Then, at output 7, ultrasonic sound for 30 seconds with a probe sonicator Wave processing. This condition reproduces nanoparticles with particle sizes between 180 and 240 nm Can be generated automatically. These parameters are for a narrow single mode size of approximately 200 nm. Can be optimized to obtain nanospheres with the desired size range of cloth .   Non-linear block copolymers compared to using linear block copolymers Can increase the density of hydrophilic blocks on the surface of nanospheres, and Blood circulation in these carriers can be extended. A machine containing multiple PEG blocks When a rutiblock copolymer is used, PE as shown by ESCA G is typically less than the surface of nanospheres prepared from linear copolymers. It is abundant on the surface of nanospheres prepared from the striated copolymer. Straight chain Compared to using a limer, using a non-linear multi-block copolymer, Compare the amount of PEG (C peaks convolution) to PEG and PL Deducted from the ratio between A or PLGA) increased from 35.65% to above 44% Can be done.   Other characterization studies were conducted on PEG-polyanhydride and PEG-polyester nanospheres in the form of It was performed at different drug loadings to investigate the morphological and encapsulation properties. Cross-sectional images of freeze-fractured nanospheres were obtained by TEM, showing particle-dense cores. Was. Partial crystallization of the drug was shown by DSC data.   The chemical composition of the nanospheres can be important in determining the final particle size. particle Prepared from a multi-block comb copolymer with a significant amount of PEG on its surface Nanospheres are typically in the 180 nm or larger size range. (PE G 20K)Three-For maximum PEG molecular weight in PLA particles, diameter increased to 240 nm. In contrast, PLA nanoparticles may have a diameter of less than 120 nm. Intention In addition, this is for particles prepared from linear copolymers (eg PEG-PLGA particles ( Here, the PEG in the PEF-PLGA particles is more likely to be nanospheres than the uncoated particles. In contrast, which could reduce noise))). The composition of the hydrophobic block is also the particle Affects size. For example, polycaprolacto which is further soluble in methylene chloride Nanosphere cores are formed using a polymer to give particles with diameters less than 100 nm. Can be done. Drug loading appears to have little effect on particle size . Particles loaded with lidocaine and prednisolone showed that the amount of drug loaded was It can show the same size when on the order of 45%.   Microparticle preparation   Microparticles prepared nanoparticles as described above without the use of an ultrasonic bath. Can be prepared using the method of manufacture. The microparticles are also It can be prepared by spraying the chiblock copolymer solution into an aqueous solution.   Particle composition   As described above, the particles contain the polyfunctional compound with at least one parent. Aqueous polymers (eg, poly (alkylene having a molecular weight between 300 and 20,000) Glycol) or polysaccharide moieties), and at least one hydrophobic polymer (eg For example, polyorthoesters, polyphosphate esters phosphate esters), poly (lactic acid-co-glycolic acid), poly (lactic acid), poly ( Glycolic acid), polyanhydrides, polyphosphazenes, polycarbonate Prolactone or other biodegradable polymers, biocompatible polymers, and Multi-block copolymers prepared by covalently bonding these copolymers) Formed from a polymer. This polyfunctional compound contains between 1 and 10 hydrophilic moieties. May be substituted with limers and between 1 and 10 hydrophobic polymers, and preferably Between 1 and 6 hydrophilic polymers and between 1 and 6 hydrophobic polymers Is replaced with.   As used herein, a hydrophilic polymer is soluble in an aqueous medium, It is biocompatible when used in medical applications and is easily excreted from the human body. Means a polymer. Suitable molecular weights for PEG are between 300 and 20,000, In polysaccharides, between 1,000 and 40,000, and in polyamino acids (peptides) Is between 1,000 and 70,000.   As used herein, a hydrophobic bioerodible polymer is an aqueous medium. It is insoluble but can absorb up to 30% of its weight in water, and is biocompatible and degradable Means a polymeric polymer. The preferred molecular weight range is between 500 and 500,000.   As used herein, polysaccharides refer to many monosaccharides. ) Means a carbohydrate (carbohydrate).   As used herein, a polyfunctional compound is a functional group of a polymer and a functional group of the polymer. By a compound having at least two functional groups that can be pulled. This transformation The compound is a linear, branched or cyclic alkyl group, an aromatic group, a heterocyclic group, or Can be a combination thereof. The types of these groups include, but are not limited to, Droxyl, thiol, amino, carboxylic acid lic acid), aldehyde (aldehyde), sulfonic acid (phosphoric acid), phosphoric acid (phosp horic acid, amide, isocyanate, imine And their derivatives. Preferably, the compound is non-toxic and biodegradable. It is sex. Examples of suitable polyfunctional compounds include, but are not limited to tartaric ac id), mucic acid, citric acid, glucaroni acid) and tri-, tetra- and polycarboxylic acids (benzenetetracarbox Boric acid), dextrins and tri-, tetra- and polyal With Cole, and a combination of carboxyl and hydroxyl groups Includes children.   Particle size   As described herein, typical sizes of particles are 80 nm and 10,000 nm. Between, preferably between 80 nm and 400 nm. This method is for 80 and 10,000 nm With particles in between, ie nanoparticles and diameters of 1 micron or more Make both micro particles. In order to facilitate the general description herein, Both black particles and nanoparticles are referred to as particles unless otherwise specified. .   As used herein, the term "nanoparticle" has a range of 10 to 1000 nm. Means solid particles. “Ideal” nanoparticles are biodegradable, biocompatible, and A rigid biodegradable core with a size of less than 0 nm, to which it is delivered The substance to be incorporated can be incorporated).   As used herein, the term "microparticle" has a size of 1 micron or more. Means particles in the size range up to 1000 microns.   The nanoparticles specifically described herein are more suitable depending on the desired application. If not, it can be made as microparticles.   Particle structure   1a, 1b, and 1c show nanoparticles prepared as described herein. FIG. 2 is a schematic diagram of an embodiment. In Figure 1a, particles 10 contain biologically active substance 14. Biodegradable solid core 12 with one or more poly (alkylene glycol) s on the surface With part 16. Surface poly (alkylene glycol) part 16 has high affinity for water Has the property of reducing protein adsorption on the particle surface. Therefore, the network system Recognition and uptake of nanoparticles by (RES) is reduced. As shown in Figure 1b In addition, the terminal hydroxyl groups of poly (alkylene glycol) are attached to the surface of the nanoparticles. Influences the charge, lipophilicity and hydrophilicity of biologically active molecules or particles It can be used to covalently attach a molecule that imparts to a nanoparticle surface. Figure The PEG in 1c is a shorter branched PEG molecule than the PEG in Figure 1a.   Nanospheres mean nanoparticles that are spherical in shape. In this specification or The shape of nanoparticles prepared according to other well-known procedures is easy with scanning electron microscopy. To be measured. The spherically shaped nanoparticles are suitable for circulation in the bloodstream. As desired If so, the particles can be shaped into other shapes that are more useful for specific applications using well-known techniques. Can be made.   Decomposition characteristic   As used herein, the term "biodegradable" or "bioerodible" Is within an acceptable time period (usually 5) for the desired application (usually in vivo therapy). Less than one year, preferably less than one year), with a pH between 6 and 8 and a temperature between 25 ° C and 37 ° C. Means a polymer that dissolves or decomposes when exposed to a physiological solution that has a degree of . In a preferred embodiment, the nanoparticles are of the order of 1 hour and weeks depending on the desired application. Decomposes within a period of time.   Copolymers for building nanospheres   The release kinetics and release kinetics of the substance from the nanoparticles depends on the copolymer or copolymer mixture. Depending on the compound or blend selected to make the nanoparticles You. Given the disclosure herein, one of ordinary skill in the art would be well-suited to obtain the desired effect. A polymer or combination of polymers may be selected.III. Substances that are incorporated on the surface of or inside particles   The substance to be delivered   A wide range of biologically active substances or drugs can be incorporated into or on the surface of particles. Can be done. The incorporated substances can be either during particle production or during the release process. It should not chemically interact with the polymer. Additives (eg inorganic salts, BSA ( Bovine serum albumin), and inert organic compounds) as known to those skilled in the art. , Can be used to modify the mode of substance release. Biologically unstable substances (eg For example, bacteria, prokaryotic or eukaryotic cells such as yeast, or human cells Mammalian cells, including those elements (eg, cell walls), or cell Coalescence) can also be included in the particles. The term "biologically active substance" means Administered to animals, including but not limited to mammals including, but not limited to, birds and humans. Peptides, proteins, carbohydrates, nuclei that produce biological effects when exposed to Acids, lipids, polysaccharides or combinations thereof, or synthetic inorganic molecules or organics Means a child. Non-limiting examples include antigens, enzymes, hormones, receptors, and peptides. It is Petit. Examples of other molecules that can be incorporated are nucleosides, Nucleotides, antisense, vitamins , Minerals, and steroids.   Particles prepared according to this process are non-steroidal anti-inflammatory compounds, anesthesia Agents, chemotherapeutic agents, immunotoxins, immunosuppressants, steroids, antibiotics, anti-viruses Delivers drugs such as lus, antifungals, and steroidal anti-inflammatory and anticoagulants Can be used to For example, lidocaine or tetracaine ( Hydrophobic drugs such as tetracaine) can be incorporated into the particles and over a period of several hours. Is released. Loadings on the order of 40 (wt)% in nanoparticles were obtained. Hydrophobic material Quality encapsulation is more difficult, and its loading efficiency is generally Lower than that.   In one embodiment, the antigen is incorporated into the nanoparticles. The term "antigen" refers to an antibody Any chemical structure that stimulates the formation of or induces a cell-mediated humoral response Include, but are not limited to, proteins, polysaccharides, nucleoproteins. tein), lipoprotein, synthetic polypeptide, or protein Includes small molecules (hapten) linked to carriers. Antigen is the desired adjuvant It can be administered with bunts. Examples of suitable adjuvants include synthetic glycopeptides (s Synthetic glycopeptide) and muramyl dipeptide . Other adjuvants include dead Bordetella pertussis, Gram-negative bacterial liposaccharides and large polymeric anions (Eg, dextran sulfate). Polyelectrolyte Such polymers have also been selected for the production of nanoparticles that provide adjuvant activity. Can be done.   Specific examples of antigens that can be loaded into the nanoparticles described herein include, but are not limited to: , Attenuated or dead viruses, toxoids, polysaccharides, cell walls and viruses. And bacterial surface or coat proteins. These are also complex, It can be used in combination with tubant, or other antigens. For example, a purified pod film Haemophilius influenzae, in the form of polysaccharides (Hib), is not alone. Or can be used as a complex with diphtheria toxoid . Examples of organisms from which these antigens are derived are poliovirus, rotavirus, type A , Hepatitis B, and C viruses, influenza virus, rabies virus (rab ies), HIV, measles virus (muasles), mumps virus (mumps), rubella virus Rubella, Bordetella pertussis, Streptococcus pneumoniae ), C. diphtheria, C. tetani, Vibrio cholerae, Salmonone Lagella, Neisseria, and Shigella.   Non-pharmaceutical use of particles is a food containing stabilizers and dispersants or other viscosity modifiers. Controlled selection of additive delivery, pesticides, herbicides, pesticides, fertilizers, and pheromones. Includes alternative delivery and color and ink formulations in the printing and ink industry. Including.   Uptake of substances for diagnostic purposes   In another embodiment, a gamma-ray labeled nanoparticle is provided, which comprises the particle's It can be used to monitor in vivo biodistribution. But not limited to Any pharmaceutically acceptable, including indium and technetium Any gamma-emitting part can be used. Magnetic particles prepared as described herein Magnetic nanoparticles, including surface-modified magnetic nanoparticles, may be purchased commercially, The surface is further modified by applying a hydrophilic polymeric coat.   For example, magnetic nanoparticles are prepared by covalently attaching a hydrophilic polymer to the nanoparticles. , Can be mixed with a solution of hydrophilic polymer. On the other hand, the γ-ray radiation magnetic part is Covalently attached to an aqueous or hydrophobic bioerodible polymeric material. The size of the magnetic part The larger the size of the obtained particles.   Other materials are also radiopaque, such as air or barium and fluorescent compounds. It can be incorporated into particles containing diagnostic materials for diagnostic purposes. Rhodamine Hydrophobic fluorescent compounds such as ne) can be incorporated into the core of the particles. Hydrophilic fluorescence Compounds may also be incorporated, but compatibility of hydrophilic materials with hydrophobic biodegradable cores The efficiency of encapsulation is lower due to the decrease of Hydrophilic material separated in water And dissolve, and unless multi-phase emulsion technology is used for particle production. I won't.   In one embodiment, the particles comprise the substance to be delivered and a multiblock copolymer. And are included. This multi-block copolymer is a biologically active molecule (eg For example, Fab or Fab2Antibodies such as antibody fragments or antibody fragments) Is covalently bound to. Here, the particles are such that biologically active molecules are on the outer surface of the particles. Is prepared by the method as described in 1.   Modification of particle surface properties   The charge, lipophilicity, or hydrophilicity of the particles can be adjusted by adding a suitable compound to the hydrophilic surface of the particles. It can be modified by adding it to the limmer. Particles can also be Can be They are generally more hydrophilic than poly (alkylene glycols) Yes, but not flexible. Dextran-coated nanoparticles were used for magnetic resonance imaging (M Useful for RI).   Application of specific ligands to the particle surface.   Particles prepared as described herein are bound to a given cell in a cell mixture. Can be used for cell separation by providing a specific ligand to the particle surface. Or can be targeted to specific tissues. When more magnetic particles are taken up, The particles contain tissue-specific receptors or antibodies for tissue-specific surface proteins. Can be targeted with a ligand such as , Or a compound that can be delivered is released to target cells using a magnetic field. Can be held.   For example, in one embodiment, carmustine (BCNU), or cis Other anti-cancer agents such as platin are incorporated into the core of the particle and Antibodies to specific cancer cells are covalently attached to the surface of the particles.   Pharmaceutical administration of nanospheres   The particles described herein can be liquid, cream, gel, or solid in various routes. Patients (eg, oral, parenteral, intravenous, intradermal, subcutaneous, or topical) Can be administered.   The particles are lyophilized and then in aqueous suspension in the range of μg / ml to 100 mg / ml before use Can be prescribed to. Alternatively, the particles are pastes, ointments, creams or gels, Alternatively, it may be formulated in a transdermal patch.   Nanoparticles can be used in therapeutics without causing serious toxic effects in the treated patient. Of the substance to be delivered in an amount sufficient to deliver a therapeutically effective amount of the compound to the patient. Should be included. The desired concentration of active compound in the nanoparticles depends on the rate of absorption of the drug, Depends on the rate of inactivation and elimination and the rate of delivery of the compound from the nanoparticles You. It should be noted that dose values also change with the severity of the condition to be alleviated. It is. In addition, specific dose prescriptions for specific subjects will vary according to individual needs. , And time according to the professional judgment of the person administering or administering the composition. It should be understood that it should be adjusted over.   Can the particles be administered at once depending on the release rate of the particles and the desired dose , Or may be divided into a number of smaller doses and administered at varying intervals of time.IV.  Coating of implantable devices     Polymers loaded as described herein also include stents, catheters. Coating implantable devices such as implants, vascular grafts, and pacemakers. Can be used to This device can be used as a lyophilized powder of particles, or Others known to those skilled in the art can be used for coating. Coating, antibiotic, anti-flame The inflammatory or anticoagulant agent may be released at a predetermined rate and may be associated with the implanted device. Complications can be prevented. Controlled delivery devices prepared as described herein are Also, with an ocular insert to prolong the release of the drug to the eye (ocular insert) Can be used.   Example   Of hydrophobic bioerodible polymers such as PLA and PLGA and PEG Such hydrophilic polyalkylene glycol and tartaric acid (ta rtaric acid), mucic acid, citric acid, benzene tet Benzene tetracarboxylic acid, glucaronic acid ), And a bureaucracy such as butane diglycidyl ether The preparation of specific multi-block copolymers with active compounds is detailed below. this These polymers were prepared using PEG of various chain lengths and various hydrophobic polymers. Was. Given this detailed description, one of ordinary skill in the art would find suitable in nanospheres suitable for manufacturing. Will understand how to produce a wide range of multi-block copolymers .   Materials and methods   The less toxic stannous octoate was obtained from ICN. D, L- Lactide was obtained from Aldrich Chemical Company, and glycolide was obtained from Polyscie Obtained from nces, Inc. Reconstitute these compounds from ethyl acetate before use. Crystallized. High-purity monomethoxy PEG with molecular weights of 5,000, 12,000, and 20,000 (Monomethoxy PEG; M-PEG) was obtained from Shearwater Polymers, Inc. Poly The number average molecular weight of the mer, mixed bed Phenogel with 5 μm particles of Phenomenex Using a Perkin-Elmer GPC system with an LC-25 refractive index detector equipped with a column It was measured. Chloroform was used as eluent at a flow rate of 0.9 ml / min . The molecular weight was determined by Polysciences with a narrow molecular weight distribution. And poly (ethylene glycol) standards.   Thermal transition data were collected using a Perkin-Elmer DSC-7 (Newton Centaer, MA) . The weight of the sample was 20 mg to 25 mg. Indium can be used for temperature and enthalpy Used for calibration. Test each sample at a rate of 10 ° C / min from -60 ° C to 150 ° C. A heat-cool-heat cycle was run. Filtered with Nickel at S = 0.05 Rigaku Rotaflex times of Rigaku Corporation (Danvers, MA) using a Cu Cu source A wide-angle X-ray diffraction spectrum was obtained using a folding meter. This data is used by the Micro Vax II computer. It was analyzed with a computer. Molten poly on sodium chloride crystals A thin film was obtained using Mer powder and the IR spectrum was recorded on a Nicolet 500 spectrometer. did.13C NMR studies were performed on a Nicolet NT-360 spectrometer using deuterated chloroform. M It was performed on a sample dissolved in (deuterated chloroform). Peak suitability Was performed using the VG data system. Example 1: (Methoxy-PEG-NH2)ThreeSynthesis of citrate (Compound A)   Three PEG citrates were prepared as follows:   PEG-NH2(1g, MW = 5,000, Sherewater), dicyclohexylcarbodiimi De (dicyclohexylcarbodiimide; DCC) (54 mg, 1 equivalent) and DMAP (4 mg, catalyst ) With 10 ml dry dichloromethane solution of citric acid (14 mg, 0 .33 eq.). 2 days at room temperature while stirring with a magnetic stirrer The reaction was continued for a while. The DCU by-product was isolated by filtration and the filtrate was added to 100 ml of Ether: poured into a 1: 1 mixture of petroleum ether. Settling The polymer obtained was washed with ether and dried to give 0.8 g of white powder. The product contains no acid groups (Bromophenol test) and GPC The matogram showed a single peak in the 15,000 region. IR is a typical ester (e ster) peak (1720 cm-1)showed that. The following molecular weights are 1,900, 12,000, A methoxy-PEG citrate trimer with PEG and 20,000 using this procedure Prepared.   Tartaric acid [(methoxy-PEG) 2-tartrate] with various PEG chain lengths (tartaric  acid [(methoxy-PEG) 2-tartrate]), mutic acid [(methoxy-PEG) -2-mucoate ] (Mucic acid [(methoxy-PEG) -2-mucoate]), and glucaronic acid (methoxy-PE G-mucoate) (glucaronic acid (methoxy-PEG-mucoate)) Prepared. All derivatives have the appropriate molecular weight (determined by GPC using PEG standards The bromophenol test for carboxylic acids having And had a typical absorption peak at 1720 for the amide bond. Example 2: Esterification reaction between methoxy PEG-OH and citric acid using DCC   The reaction conditions were the same as above and measured by GPC to give 80% conversion. Compound A-1). Example 3: Direct esterification reaction between methoxy PEG-OH and citric acid   In a 100 ml round bottom flask equipped with a Dean-Stark azeotrope, methoxy PEG-OH (MW 1900, Polysciences) with toluene (toluene) and sulfuric acid (sulfuric a cid) (1%) with citric acid (0.33 eq). The reaction is H2For O removal Was carried out under reflux using an azeotropic mixture. GPC measurement yields about 75% Was. Example 4: Methoxy PEG-OH and methyl citrate ester       transesterification reaction with ster)   Citrate methyl ester is converted to citric acid by refluxing. Obtained from the reaction with access methanol.   The obtained trimethyl citrate (1 equivalent) was added to methoxy P It was reacted with a refluxing toluene solution of EG (MW-1900, 3 equivalents) for 3 hours. Toluene steam After distilling and extraction with diethyl ether, it was measured by GPC to give about 70 The product was isolated in% yield. Example 5: (PEG)Three-Citrate-Polylactide [PEGThree-PLA] or PEGThree-Capro         Lactone [PEGThree-PCL] diblock copolymer (compound A1, Fig. 2     Synthesis of a)   PEGThree-2 citrates (1g) (Sherewater, MW-5,000, 12,000 and 20,000) Dissolved in 0 ml of benzene. Lactide (5g) (Aldrich, 99% +) Was added and the solution was refluxed and azeotroped for 60 minutes. Stannous octoate ((lactide 0.2% by weight) was added as a 1% solution of benzene. Return reaction for 5 hours Flush, solvent removed azeotropically and a viscous material obtained. Polymerization at 130 ℃ for 2 hours Continued. The resulting polymer is transparent and has a slight yellow mass. And had a high molecular weight (Table 1). PEG-polycaprola A multi-block copolymer of ctone) was similarly synthesized. This polymer is It was soluble in organic solvent. Example 6: Synthesis of multiblock (comb) PEG-ligand-PLA (Compound B, Figure 2a)   Citric acid (0.1 mol) was added to DCC in 100 ml of dry dichloromethane. (0.33 eq) and DMAP (0.01 mol, catalyst) were used to remove methoxy-PEG amine (methoxy). -PEG amine) (MW 1900) (0.2 mol) and benzyl ester carboxy-PEG-amine Reacted with a mixture of (benzyl ester carboxy-PEG-amine) (MW 5,000) (0.1 mol) . The reaction was continued for 2 days at room temperature while stirring with a magnetic stirrer. DCU deputy The product is isolated by filtration and the filtrate is filtered with 500 ml of ether: petroleum ether. Poured into 1: 1 mixture. The precipitated polymer is washed with ether and dried To give a white powder in 90% yield. The product contains no acid groups (Bromophenol (Br omophenol) test), and GPC chromatogram shows a single peak with a molecular weight of 9,000. Was. IR shows a typical ester peak (1720 cm-1). Lactide and cap PLA-PEG comb-type block copolymer Synthesized using the same method described for the polymer.   Add PLA-PEG citrate trimer to tetrahydrofura And hydrogenated with hydrogen-palladium catalyst to give benzyl ( The benzylic) protecting group was removed. The terminal chain carboxylic acid PEG is then separated by amide coupling. Bovine serum albumin (equivalent to ligand) using DCC as activator for ).   Similarly, using the above method, two or three ligands, two or three equivalents PEG-amine with benzylcarboxylate at the end of (PEG) 3-citre ((PEG) 3-citrate). Example 7: PEG2-Tartrate-PLA2(Compound C, Figure 2b)   Di-PEG Tartrate (PEG)Three-Follow the procedure described for the synthesis of citrate Reaction between amino-terminated methoxy PEG and tartaric acid using DCC as activator Prepared from This di-PEG tartrate derivative was treated with lactide or glycolide (g lycolide) mixture to form a clear polymer (Table 1). Example 8: Preparation of di-methoxy PEG-mucoate-tetra PLA (Compound D,           (Figure 2b)   Mucic acid (Aldrich) was added to 2 equivalents of methoxy P in the presence of DCC in DMF. Reacts with EG to form di-PEG-mucoate, lactide, glycolide or cap A 6-arm block copolymer with a high molecular weight (MW = 65,000-95,000) copolymerized with rolactone. A polymer was formed. Example 9: Preparation of penta-methoxy PEG-glucoronate anhydrous       (Compound E, Figure 2b)   Glucaronic acid is a carboxylic acid-terminated polymer in the presence of DCC. React with Toxie PEG (MW = 5,000, Sherewater), (PEG)Five-Gluconate ) Formed. A penta-PEG compound was added to sebacine using acetic anhydride as a dehydrating agent. Polymerized with acid (1: 5 weight ratio). A polymer with a molecular weight of about 75,000 was obtained. Example 10: Preparation of mono-PEG-penta PLA glucoronate (Compound F, Figure 2b)   Glucaronic acid was added to the amino-terminated membrane of DMF in the presence of DCC in dichloromethane. Reacts with toxy PEG (MW = 5,000, Sherewater) to form PEG-gluconate amide did. Gluconate PEG derivative, lactide, glycolide or caprolactone Was polymerized (1: 5 weight ratio). Example 11: Preparation of PEG-di-PLA (Compound G, Figure 2c)   Methoxy-PEG-epoxide end (Sherewater) was added to sodium carbonate (sodium carbo nate) solution and hydrolyzed overnight at room temperature. The obtained PEG having two hydroxyl groups, Isolated by precipitation in a 1: 1 mixture of ether: methanol and dried. Hi Block droxy-terminated PEG with lactide, glycolide, and caprolactone Copolymerization gave a high molecular weight polymer (the molecular weight was in the range 70,000-115,000). ). Example 12: Trimethoxy PEG-citrate-poly (sebacic anhydride) diblock co         Preparation of polymer (Compound H, Figure 2a)   Trimethoxy-PEG-citrate (0.01 mol, prepared as described above) was added to the proton acetate. Excess adipo in dichloromethane with triethylamine as a cusptor. It was reacted with adipoyl chloride (0.012 mol). After 24 hours at room temperature , Water was added, the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour, and the polymer was charged with methanol. It was isolated by adding a mixture of ru-diethyl ether 1: 1. can get Reaction of trimethoxy-PEG-citrate-adipate with acetic anhydride It forms a derivative of cetate anhydride and polymerizes with sebacic anhydride prepolymer, A multi-block copolymer with MW = 58,000; Mn = 31,000 was formed. MP = 65 ~ 74 ° C. Example 13: Benzene tetracarboxylic anhydr         ide) (BTCA) derivative (Compound I, Fig. 2d)   BTCA was reacted with 2 equivalents of methoxy PEG amine in refluxing THF for 5 hours, leaving two residues Dimethoxy-PEG tetracarboxybenzoate (dimetho xy-PEG tetracarboxybenzoate) was produced. PEG dimer, acetic anhydride, and Then it is reacted with sebacic anhydride to produce 4-arm diblock PEG.2-Benzene-PSA2Shape I made it.   Alternatively, two polycaprolactone diols (MW = 3,000, Polysciences) Of dimethoxy-PEG tetracarboxybenzoate containing carboxylic acid of A 4-arm PEG-PCL diblock copolymer was formed. PLA or PCL block Copo The limer was prepared and then the carboxylic acid of PEG-benzenetetracarboxylate Acid groups are reacted with propylene oxide to give lactide, glycosyl. Hydroxyl Derivatives Available for Block Copolymerization with Lido and Caprolactone Was formed. Example 14: Based on butane diglycidyl ether         Tetradiblock Copolymer (Compound J, Figure 2e)   Butanediglycidyl ether was added to 2 equivalents of methoxy-PEG-OH in refluxing THF for 10 hours. Reaction. PEG dimer in toluene using tin octenoate as catalyst Block-copolymerized with lactide, glycolide or caprolactone. High molecular weight A limer was obtained (define high molecular weight). Example 15: Multiblock cos based on 1,4; 3,6-dilactone of glucaric acid         Polymer (Compound K, Figure 2f)   PLA was treated with dilactone in benzene using stannous octoate as a catalyst. Copolymerized (5: 1 weight ratio). Via two carboxylic acid groups, via an amide bond Methoxy-PEG-amine was attached. Example 16: Synthesis of PLA-citrate-dextran (Compound N, Figure 2h)   An alternative to PEG for dextran, a clinically used biodegradable material It was used as a hydrophilic polymer. Benzyl ester of citric acid with lactide Polymerize to form PLA-terminal citrate ester, which is hydrogenated to remove the benzyl group. Removed. This citrate-terminated PLA was esterified with dextran to produce PLA-citrate. To-dextranThreeWas formed. Example 17: Induction of PEG2-hydroxyadipaldehyde         Conductor (Compound M, Figure 2i)   2-hydroxyadipaldehyde (Aldrich) was reacted with amino-terminated PEG to give Forms a Shciff base and converts it to NaBHFourTo form the corresponding amine Was. Di-PEG derivative with lactide or caprolactone in the presence of tin octenoate React, PLA or PCL-PEG2A diblock copolymer was formed. Example 18: Induction of dextran or ligand 2-hydroxyadipaldehyde         Conductor (Compound M-1, Figure 2h)   Reaction of 2-hydroxyadipaldehyde with lactide in the presence of tin octenoate To form an adipaldehyde terminated PLA. The aldehyde group is attached to the ligand (peptidic Of the diligand-PLA diblock. Form. Alternatively, the aldehyde end may be replaced with ethylene diamine. React to form a PLA terminus with a diamino group. Dexter this polymer Reacts with oxidized polysaccharides such as orchid or amylose to induce PLA-di (polysaccharide) Form a conductor. Example 19: Polyanhydride-PEG   Polyanhydride terminated PEG, sebacic acid prepolymer (sebacic acid in acetic anhydride Reflux and precipitate the resulting polymer in ether / petroleum ether solution Synthesized) and methoxy PEG-OH, or anhydrous methoxy PEG-carboxy. It was prepared by melt condensation with silate acetate. In a typical experiment, Toxy-PEG-carboxylate (1 g) was mixed with sebacic acid prepolymer (3 g) . The mixture was polymerized at 180 ° C. under vacuum (0.1 mmHg) for 90 minutes to obtain a polymer. this Polymers are 1805 and 1740 cm-1IR absorption of (typical of aliphatic anhydride bonds ), And11 H-NMR spectrum is consistent with the polymer structure. Example 20: Non-linear multi-block copolymers and linear polymers and       Of nanoparticles from mixtures of polymers and copolymers   PEGThree-Citrate-PLA, PLGA-PEG copolymer and polycaprolactone homopo Emulsion / evaporation technique as described above from a mixture of limers in a weight ratio of 1: 1: 3 Were used to prepare nanospheres. Pre-formed polymer as an organic solvent Dissolved in a given concentration of polymer / solvent. Vortex the resulting organic solution. And then by sonicating for 1 minute at 40-W power It has been changed. The solvent was evaporated and the nanospheres were collected by centrifugation (30 min, 5 min. (000 rpm), washed twice, and lyophilized to give a nanos with an average size of about 200 nm. Got the fair. Example 21: Drug release characteristics   Capsule lidocaine and prednisolone (Sigma) Selected for conversion. Because they are poorly water soluble (less than 5 mg / ml in water) Organic solvents (chlorinated hydrocarbons, tetrahydrofuran, dimethylform High solubility (greater than 20 mg / ml) in amide or dioxane) and UV spectroscopy This is because detection is easy by the photometric method.   The release test is based on nanospheres loaded with different amounts of lidocaine (20% wt, 33% wt). Was carried out in a phosphate buffer solution (PBS, pH 7.4) at 37 ° C. Dialysis membrane (50,000 Of the lyophilized nanospheres (10 mg / 5 ml PBS), and then It was then placed in 25 ml PBS. Take a sample from the external solution and then use a fresh solution each time. Replaced. Drug release was detected spectrophotometrically at 240 nm.   High capsules with particles made from multi-block comb copolymers Although efficiency can be achieved, the hydrophobicity of the multiblock copolymer results in 100% coverage. Obtaining the efficiency of packaging can be difficult. Encapsulation efficiency is PEG and PEGThree-Shi 70% for trait-PLA multiblock copolymers (5, 12, 20 kDa MW) It was observed that it could be less than.   Release characteristics of PEG-coated nanospheres, especially the presence of PEG on the surface of the nanospheres. Of nanosphere core composition (polymer and An in vitro study was conducted to investigate the effects of drug properties and drug loading). Nano The suspension of spheres is a solution of lyophilized particles in aqueous solution without further additives. It was easily obtained by redispersion with a glass. Lidocaine as model drug I used it. Lidocaine release is consistent with linear PEG-PGLA copolymer and non-linear Tested on particles made from a slab copolymer.   Both types of particles show continuous release in vitro over several hours, but Has a release kinetics of The molecular weight influences the release pattern of PEG-PLGA nanospheres. Does not affect. Because the drug is a copolymer with PEG having a molecular weight of 5, 12, 20 KDa This is because when it is used, it is completely released in about 10 hours. Presence of PEG on nanosphere surface Are not expected to modify drug release. But multiblock copolymer Factors such as higher PEG density and PEG chain length delay drug release I can do it. Over 90% of lidocaine released from PLA nanospheres in 10 hours But (PEG 20K)Three-Only 60% was released from PLA particles.   Drug release from nanospheres made from PEG-ε-polycaprolactone is Biphasic.   Cores made from polyanhydrides lead to faster drug release due to polymer corrosion Usually expected to be obtained. However, the initial fast release in the first 2 hours After that, the drug was released at a constant rate for the next 8 hours, but the drug was released at the plateau (pla teau) has been reached.   Polymer degradation kinetics were also investigated in vitro. PEG-PLGA, PEG-PCL, and (PEG)Three-For PLA particles, the polymer begins to degrade after a few weeks. From polyanhydride The nanosphere core created begins to degrade immediately. In the first case, drug release The output is controlled by the diffusion mechanism. Because of the drug, polymer degradation occurs It can be completely released before. In polyanhydrides, polymer corrosion is a drug Affects release, and drug properties play a more important role in release kinetics You. The small size and large surface area of the particles allow other drug delivery such as slabs to be delivered. Increase the rate of polymer corrosion for the system, and then drug solubility Dominate.   Drug loading can have a strong impact on release kinetics. Contains 33% wt lidocaine PEG-PLGA nanospheres can release drug over 12 hours. Surprisingly, Particles loaded with 10% drug can show complete drug release in 6 hours. To increase Drug loading reconstitutes some of the loaded drug into the core, as shown by DSC. It can be crystallized. The presence of crystals of hydrophobic drugs, such as lidocaine, affects release kinetics. Can be delayed. ESCA studies conducted on drug loaded nanospheres show that drug crystals It was confirmed that it was not located on the surface of the nosphere. The polymer composition has also been modified, The drug loading then increased to 45% wt. Example 22: In vivo111Evaluation of biodistribution of In-labeled nanoparticles   Indium 111 (“In”) is directly converted into a multi-block copolymer by complex formation. Can be bound together. In and diethyltriaminopentaacetic acid acetic acid (DTPA) is reacted with stearylamine. Obtained The compound, In-DTPA-stearylamide, is encapsulated within a hydrophobic core. Hydrophobic enough to interact with. In this case, hydrophilic and hydrophobic polymers The molecular weight has little effect on the interaction. 37 ° C in PBS or horse serum After incubation for more than 24 hours in the It can be evaluated by measuring the radioactivity of the solution. This labeling method is therefore , Γ-scintography or blood and / or different vessels Direct measurement of radioactivity in the public may be useful for in vivo studies.   The invention has been described with reference to its preferred embodiments. Modifications of the invention and Modifications and alterations will be apparent to those skilled in the art from the above detailed description of the invention. These changes All such modifications and variations are intended to be included within the scope of the appended claims.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０８Ｇ 79/02 ＮＵＱ 0276−2Ｊ Ｇ０１Ｎ 33/545 Ｚ Ｃ０８Ｊ 3/12 ＣＦＪ 7329−4Ｃ Ａ６１Ｋ 9/14 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/545 0277−2Ｊ Ａ６１Ｂ 5/05 ３８３ (31)優先権主張番号 ２６５，４４０ (32)優先日 1994年６月24日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＡ，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者 南竹 義春 アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02146，ブルックリン，フリーマン スト リート 175，アパートメント ナンバー 610 (72)発明者 ペラッチャ，マリア テレサ イタリア国 アイ―43100 パーマ，５, ビア カルドゥシ (72)発明者 ランガー，ロバート エス. アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02158，ニュートン，ロムバード ストリ ート 77─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Internal reference number FI C08G 79/02 NUQ 0276-2J G01N 33/545 Z C08J 3/12 CFJ 7329-4C A61K 9/14 A G01N 33 / 545 0277-2J A61B 5/05 383 (31) Priority claim number 265,440 (32) Priority date June 24, 1994 (33) Priority claiming country United States (US) (81) Designated country EP (AT) , BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE), CA, JP, US (72) Inventor Yoshiharu Nantake USA Massachusetts 02146, Brooklyn, Freeman Street 175, Apartment Number 610 (72) Inventor Peraccia, Maria Teresa Italy -43,100 perm, 5, via Karudushi (72) inventor Langer, Robert S.. United States, MA 02158, Newton, Romubado string over door 77

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．１つまたはそれ以上の親水性ポリマーおよび１つまたはそれ以上の疎水性 生腐食性ポリマーと共有結合している多官能性化合物を含み、そして少なくとも ３つのポリマーブロックを含む、マルチブロックコポリマー。 ２．前記多官能性化合物が、デキストリン、ペンタエリスリトール、グルカロ ン酸、酒石酸、ムチン酸、クエン酸、ベンゼンジカルボン酸、ベンゼントリカル ボン酸、ベンゼンテトラカルボン酸、およびブタンジグリシジルエーテルからな る群から選択される、請求項１に記載のマルチブロックコポリマー。 ３．前記親水性ポリマーが、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコー ル、ポリピロリドン、ポリ(アミノ酸)、酸化セルロース、およびデキストランか らなる群から選択される、請求項１に記載のマルチブロックコポリマー。 ４．前記ポリ(アミノ酸)が、ゼラチン、フィブリノーゲン、およびアルブミン フラグメントからなる群から選択される、請求項３に記載のマルチブロックコポ リマー。 ５．前記疎水性ポリマーが、ポリホスファゼン、ポリホスフェートエステル、 ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン 、ポリ(α-ヒドロキシ酸)、ポリブチレングリコール、およびこれらポリマーの モノマーから調製されるコポリマーからなる群から選択される、請求項１に記載 のマルチブロックコポリマー。 ６．多官能性化合物と、１つまたはそれ以上の親水性ポリマーおよび１つまた はそれ以上の疎水性生腐食性ポリマーとを共有結合し、少なくとも３つのポリマ ーブロックを含むコブロックポリマーを形成することにより形成されるマルチブ ロックコポリマーで形成されるかコートされており、50nmと1000μmとの間の直 径を有する、粒子。 ７．ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、多糖類、それらの組み合 わせ、および動物に投与された場合に生物学的影響を引き起こす合成の無機また は有機分子からなる群から選択される送達されるべき物質をさらに含む、請求項 ６に記載の粒子。 ８．前記親水性ポリマーが、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコー ル、ポリピロリドン、ポリ(アミノ酸)、酸化セルロース、およびデキストランか らなる群から選択される、請求項６に記載の粒子。 ９．前記ポリ(アミノ酸)が、ゼラチン、フィブリノーゲン、およびアルブミン フラグメントからなる群から選択される、請求項８に記載の粒子。 10．前記ポリアルキレングリコールが、ポリブチレングリコール、ポリエチレ ングリコール、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのコポリマ ーからなる群から選択される、請求項８に記載の粒子。 11．前記疎水性ポリマーが、ポリホスファゼン、ポリホスフェートエステル、 ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン 、ポリ(α-ヒドロキシ酸)、およびこれらポリマーのモノマーから調製されるコ ポリマーからなる群から選択される、請求項６に記載の粒子。 12．前記多官能性化合物が、デキストリン、ペンタエリスリトール、グルカロ ン酸、酒石酸、ムチン酸、クエン酸、ベンゼンジカルボン酸、ベンゼントリカル ボン酸、ベンゼンテトラカルボン酸、およびブタンジグリシジルエーテルからな る群から選択される、請求項６に記載の粒子。 13．前記親水性ポリマーの反応性基を介して前記粒子の表面に共有結合してい る分子を含み、該分子が、生物学的に活性な分子、検出され得る非生物学的に活 性な分子、標的分子、および粒子の電荷、親油性または親水性に影響する分子か らなる群から選択される分子である、請求項６に記載の粒子。 14．前記標的分子が、細胞表面成分と特異的に反応する化合物、抗体および抗 体フラグメントからなる群から選択される、請求項13に記載の粒子。 15．前記直径が１ミクロン未満である、請求項６に記載の粒子。 16．前記直径が１ミクロンと1000ミクロンとの間である、請求項６に記載の粒 子。 17．前記検出可能な分子が、X-線、蛍光、超音波、磁気共鳴画像法、および放 射活性により検出可能な物質からなる群から選択される、請求項13に記載の粒子 。 18．前記ポリ(アルキレングリコール)がポリ(エチレングリコール)である、請 求項８に記載の粒子。 19．前記コブロックポリマーコーティングとは異なる材料のコアから形成され る、請求項６に記載の粒子。 20．多官能性化合物と、１つまたはそれ以上の親水性ポリマーおよび１つまた はそれ以上の疎水性生腐食性ポリマーとを共有結合することによりマルチブロッ クコポリマーを製造する方法であって、ポリマーブロックの数が少なくとも３つ である、方法。 21．直径50nmと1000μmとの間のコブロックポリマーを有する粒子を形成する 工程、または直径50nmと1000μmとの間の粒子をコブロックポリマーでコーティ ングする工程をさらに包含する、請求項20に記載の方法。 22．前記粒子中に物質を取り込む工程をさらに包含する、請求項21に記載の方 法。 23．前記物質が、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、多糖類、そ れらの組み合わせ、およびインビボで動物に投与された場合に生物学的影響を引 き起こす合成の無機または有機分子からなる群から選択される生物学的に活性な 物質である、請求項22に記載の方法。 24．前記親水性ポリマーが、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコー ル、ポリピロリドン、ポリ(アミノ酸)、酸化セルロース、およびデキストランか らなる群から選択される、請求項20に記載の方法。 25．前記ポリ(アミノ酸)が、ゼラチン、フィブリノーゲン、およびアルブミン フラグメントからなる群から選択される、請求項24に記載の方法。 26．前記疎水性ポリマーが、ポリホスファゼン、ポリホスフェートエステル、 ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン 、ポリ(α-ヒドロキシ酸)、およびこれらポリマーのモノマーから調製されるコ ポリマーからなる群から選択される、請求項20に記載の方法。 27．前記多官能性化合物が、デキストリン、ペンタエリスリトール、グルカロ ン酸、酒石酸、ムチン酸、クエン酸、ベンゼンジカルボン酸、ベンゼントリカル ボン酸、ベンゼンテトラカルボン酸、およびブタンジグリシジルエーテルからな る群から選択される、請求項20に記載の方法。 28．生物学的に活性な分子、検出され得る非生物学的に活性な分子、標的分子 、および粒子の電荷、親油性または親水性に影響する分子からなる群から選択さ れ る分子を、ポリ(アルキレングルコール)分子の末端ヒドロキシル基を介して前記 粒子の表面に共有結合する工程をさらに包含する、請求項21に記載の方法。 29．細胞表面成分と特異的に反応する化合物、抗体および抗体フラグメントか らなる群から選択される標的分子を前記粒子の表面に結合することにより、特定 の細胞タイプへの送達のために該粒子を標的する工程をさらに包含する、請求項 28に記載の方法。 30．前記分子が、Ｘ線、蛍光、磁気共鳴画像法、超音波、または放射活性によ り検出可能な物質である、請求項28に記載の方法。 31．患者に物質を送達する方法であって、多官能性化合物と、１つまたはそれ 以上の親水性ポリマーおよび１つまたはそれ以上の疎水性生腐食性ポリマーとを 共有結合し、少なくとも３つのポリマーブロックを含むコブロックポリマーを形 成することにより形成されるマルチブロックコポリマーで形成されるかコートさ れており、50nmと1000μmとの間の直径を有する粒子を、患者に投与する工程を 包含する方法。 32．前記送達されるべき物質が、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、脂 質、多糖類、それらの組み合わせ、および動物に投与された場合に生物学的影響 を引き起こす合成の無機または有機分子からなる群から選択される生物学的に活 性な物質である、請求項31に記載の方法。 33．前記親水性ポリマーが、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコー ル、ポリピロリドン、ポリ(アミノ酸)、酸化セルロース、およびデキストランか らなる群から選択される、請求項31に記載の方法。 34．前記ポリアルキレングルコールが、ポリブチレングルコール、ポリエチレ ングリコール、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンとのコポリマ ーからなる群から選択される、請求項33に記載の方法。 35．前記疎水性ポリマーが、ポリホスファゼン、ポリホスフェートエステル、 ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン 、ポリ(α-ヒドロキシ酸)、およびこれらポリマーのモノマーから調製されるコ ポリマーからなる群から選択される、請求項31に記載の方法。 36．前記多官能性化合物が、デキストリン、ペンタエリスリトール、グルカロ ン酸、酒石酸、ムチン酸、クエン酸、ベンゼンジカルボン酸、ベンゼントリカル ボン酸、ベンゼンテトラカルボン酸、およびブタンジグリシジルエーテルからな る群から選択される、請求項31に記載の方法。 37．患者に物質を送達する工程をさらに包含し、該工程が、患者に前記粒子を 投与する工程を包含し、該送達されるべき物質が、ペプチド、タンパク質、炭水 化物、核酸、脂質、多糖類、それらの組み合わせ、および動物にインビボで投与 された場合に生物学的影響を引き起こす合成の無機または有機分子からなる群か ら選択される生物学的に活性な物質である、請求項22に記載の方法。 38．患者に前記粒子を投与することにより該患者に物質を送達する工程をさら に包含し、前記分子がＸ線、蛍光、超音波、磁気共鳴画像法および放射活性によ り検出可能な物質からなる群から選択される、請求項30に記載の方法。 39．全ポリマー混合物の１重量％と99重量％との間の割合で直鎖状コポリマー をさらに含む、請求項１に記載のマルチブロックコポリマー。 40．全ポリマー混合物の１重量％と99重量％との間の割合で直鎖状コポリマー をさらに含む、請求項６に記載の粒子。 41．直鎖状ポリマーを、１重量％と99重量％と間の割合で、非直鎖状マルチブ ロックコポリマーと混合する工程をさらに含む、請求項20に記載の方法。 42．直鎖状ポリマーを、１重量％と99重量％との間の割合で、非直鎖状マルチ ブロックコポリマーと混合する工程をさらに含む、請求項33に記載の方法。[Claims]   1. One or more hydrophilic polymers and one or more hydrophobic Comprises a polyfunctional compound covalently bound to a bioerodible polymer, and at least A multi-block copolymer containing three polymer blocks.   2. The polyfunctional compound is dextrin, pentaerythritol, or glucaro. Acid, tartaric acid, mutic acid, citric acid, benzenedicarboxylic acid, benzenetrical It consists of boric acid, benzenetetracarboxylic acid, and butanediglycidyl ether. The multi-block copolymer of claim 1, selected from the group:   3. The hydrophilic polymer is polyalkylene glycol or polyvinyl alcohol. , Polypyrrolidone, poly (amino acid), oxidized cellulose, and dextran? The multi-block copolymer according to claim 1, selected from the group consisting of:   4. The poly (amino acid) is gelatin, fibrinogen, and albumin. The multi-block copo of claim 3, selected from the group consisting of fragments. Rimmer.   5. The hydrophobic polymer is polyphosphazene, polyphosphate ester, Polyanhydride, polyhydroxybutyric acid, polyorthoester, polycaprolactone , Poly (α-hydroxy acids), polybutylene glycol, and these polymers The method of claim 1 selected from the group consisting of copolymers prepared from monomers. Multi-block copolymer of.   6. A polyfunctional compound and one or more hydrophilic polymers and one or more Covalently binds to more hydrophobic bioerodible polymers and at least three polymers -A multiblock formed by forming a coblock polymer containing blocks Formed or coated with a lock copolymer, directly between 50 nm and 1000 μm A particle having a diameter.   7. Peptides, proteins, carbohydrates, nucleic acids, lipids, polysaccharides, combinations thereof And synthetic inorganic or inorganic substances that cause biological effects when administered to animals. Wherein the further comprises a substance to be delivered selected from the group consisting of organic molecules. 6. The particle according to item 6.   8. The hydrophilic polymer is polyalkylene glycol or polyvinyl alcohol. , Polypyrrolidone, poly (amino acid), oxidized cellulose, and dextran? 7. The particle of claim 6, selected from the group consisting of:   9. The poly (amino acid) is gelatin, fibrinogen, and albumin. 9. The particle according to claim 8, selected from the group consisting of fragments.   Ten. The polyalkylene glycol is polybutylene glycol or polyethylene. Glycol, and copolymers of polyoxyethylene and polyoxypropylene The particle according to claim 8, which is selected from the group consisting of:   11. The hydrophobic polymer is polyphosphazene, polyphosphate ester, Polyanhydride, polyhydroxybutyric acid, polyorthoester, polycaprolactone , Poly (α-hydroxy acids), and copolymers prepared from the monomers of these polymers. 7. Particles according to claim 6 selected from the group consisting of polymers.   12． The polyfunctional compound is dextrin, pentaerythritol, or glucaro. Acid, tartaric acid, mutic acid, citric acid, benzenedicarboxylic acid, benzenetrical It consists of boric acid, benzenetetracarboxylic acid, and butanediglycidyl ether. 7. The particle according to claim 6, which is selected from the group consisting of:   13. Covalently bonded to the surface of the particles via the reactive groups of the hydrophilic polymer A biologically active molecule, a non-biologically active molecule that can be detected. Molecules, target molecules, and molecules that affect particle charge, lipophilicity or hydrophilicity? The particle according to claim 6, which is a molecule selected from the group consisting of:   14. The target molecule specifically reacts with cell surface components such as compounds, antibodies and 14. The particle according to claim 13, selected from the group consisting of body fragments.   15． 7. The particle of claim 6, wherein the diameter is less than 1 micron.   16. 7. The grain according to claim 6, wherein the diameter is between 1 and 1000 microns. Child.   17． The detectable molecule may be X-ray, fluorescence, ultrasound, magnetic resonance imaging, and emission. Particles according to claim 13, selected from the group consisting of substances detectable by radioactivity. .   18． The poly (alkylene glycol) is poly (ethylene glycol). The particle according to claim 8.   19. Formed from a core of a different material than the coblock polymer coating The particle according to claim 6, wherein   20. A polyfunctional compound and one or more hydrophilic polymers and one or more Multiblocks by covalently linking more hydrophobic bioerodible polymers. A method for producing a copolymer having at least 3 polymer blocks Is the way.   twenty one. Form particles with coblock polymers between 50 nm and 1000 μm in diameter Process or coat particles between 50 nm and 1000 μm in diameter with coblock polymer 21. The method of claim 20, further comprising the step of implanting.   twenty two. 22. The method of claim 21, further comprising incorporating a substance into the particles. Law.   twenty three. The substances are peptides, proteins, carbohydrates, nucleic acids, lipids, polysaccharides, These combinations, and their biological effects when administered to animals in vivo. A biologically active substance selected from the group consisting of synthetic inorganic or organic molecules 23. The method of claim 22, which is a substance.   twenty four. The hydrophilic polymer is polyalkylene glycol or polyvinyl alcohol. , Polypyrrolidone, poly (amino acid), oxidized cellulose, and dextran? 21. The method of claim 20, selected from the group consisting of:   twenty five. The poly (amino acid) is gelatin, fibrinogen, and albumin. 25. The method of claim 24, selected from the group consisting of fragments.   26. The hydrophobic polymer is polyphosphazene, polyphosphate ester, Polyanhydride, polyhydroxybutyric acid, polyorthoester, polycaprolactone , Poly (α-hydroxy acids), and copolymers prepared from the monomers of these polymers. 21. The method of claim 20, selected from the group consisting of polymers.   27. The polyfunctional compound is dextrin, pentaerythritol, or glucaro. Acid, tartaric acid, mutic acid, citric acid, benzenedicarboxylic acid, benzenetrical It consists of boric acid, benzenetetracarboxylic acid, and butanediglycidyl ether. 21. The method of claim 20, selected from the group:   28. Biologically active molecule, non-biologically active molecule that can be detected, target molecule , And molecules that affect the charge, lipophilicity or hydrophilicity of the particles. Re The molecule through the terminal hydroxyl group of the poly (alkylene glycol) molecule. 22. The method of claim 21, further comprising the step of covalently bonding to the surface of the particles.   29. Compounds, antibodies and antibody fragments that specifically react with cell surface components A target molecule selected from the group consisting of: Further comprising the step of targeting the particles for delivery to a cell type of 28. The method according to 28.   30. The molecule is detected by X-ray, fluorescence, magnetic resonance imaging, ultrasound, or radioactivity. 29. The method of claim 28, which is a detectable substance.   31. A method of delivering a substance to a patient, comprising a multifunctional compound, one or The above hydrophilic polymer and one or more hydrophobic bioerodible polymer Covalently bound to form a coblock polymer containing at least three polymer blocks Formed by a multi-block copolymer formed by coating or coated And administering a particle having a diameter of between 50 nm and 1000 μm to the patient. How to include.   32. The substance to be delivered is a peptide, protein, carbohydrate, nucleic acid, or fat. Quality, polysaccharides, combinations thereof, and biological effects when administered to animals Biologically active selected from the group consisting of synthetic inorganic or organic molecules that cause 32. The method of claim 31, which is a sexual substance.   33. The hydrophilic polymer is polyalkylene glycol or polyvinyl alcohol. , Polypyrrolidone, poly (amino acid), oxidized cellulose, and dextran? 32. The method of claim 31, selected from the group consisting of:   34. The polyalkylene glycol is polybutylene glycol or polyethylene. Glycol, and copolymers of polyoxyethylene and polyoxypropylene 34. The method of claim 33, selected from the group consisting of:   35. The hydrophobic polymer is polyphosphazene, polyphosphate ester, Polyanhydride, polyhydroxybutyric acid, polyorthoester, polycaprolactone , Poly (α-hydroxy acids), and copolymers prepared from the monomers of these polymers. 32. The method of claim 31, selected from the group consisting of polymers.   36. The polyfunctional compound is dextrin, pentaerythritol, or glucaro. Acid, tartaric acid, mutic acid, citric acid, benzenedicarboxylic acid, benzenetrical It consists of boric acid, benzenetetracarboxylic acid, and butanediglycidyl ether. 32. The method of claim 31, selected from the group:   37. The method further comprises delivering a substance to the patient, the step comprising delivering the particles to the patient. Including the step of administering, the substance to be delivered is peptide, protein, charcoal water. Compounds, nucleic acids, lipids, polysaccharides, combinations thereof, and in vivo administration to animals A group of synthetic inorganic or organic molecules that cause biological effects when exposed to 23. The method of claim 22, which is a biologically active substance selected from:   38. Further comprising delivering the substance to the patient by administering the particles to the patient. And the molecule is characterized by X-ray, fluorescence, ultrasound, magnetic resonance imaging and radioactivity. 31. The method of claim 30, wherein the method is selected from the group consisting of:   39. Linear copolymers in proportions between 1% and 99% by weight of the total polymer mixture The multi-block copolymer of claim 1, further comprising:   40. Linear copolymers in proportions between 1% and 99% by weight of the total polymer mixture 7. The particle of claim 6, further comprising:   41. The linear polymer is added at a ratio of between 1% and 99% by weight to the non-linear multiblock polymer. 21. The method of claim 20, further comprising the step of mixing with a lock copolymer.   42. The linear polymer is added to the non-linear multipolymer at a ratio between 1% by weight and 99% by weight. 34. The method of claim 33, further comprising mixing with the block copolymer.
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