【発明の詳細な説明】
試験装置
本発明は、体液のサンプル、特に血清サンプル以外のサンプルにおける被検体
の存在を検出する装置に関するものである。このような被検体は具体的には免疫
グロブリン分子であるが、他のタンパク質であってもよい。
免疫グロブリン分子、またはその断片は、唾液や尿等の血清以外の体液中に存
在することが知られている。特に、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＭクラスの免疫グロ
ブリン分子は唾液中に多く存在する。唾液や尿は分泌された体液であり、サンプ
ルの収集は容易かつ簡単に行われる。
医学的な診断の分野において、特定の体液サンプルにおける被検体を検出する
試験や装置は数多く知られている。これらの試験としては、特殊なタンパク質ま
たは免疫グロブリンの量および／または存在の生化学的なアッセイ；いわゆる免
疫グロブリンに対する「サンドイッチアッセイ(sandwich assay)」および個々の
免疫グロブリンのクラスを特定する電気泳動の使用が挙げられる。
唾液中の免疫グロブリン等の被検体を検出するのに用いられる装置としては、
一端に吸収剤を含むスティックまたは吸着剤パッド材料(adsorbent pad of mate
rial)から構成される様々なプローブが挙げられる。このようなプローブは、Ｅ
Ｐ−Ａ−０４１８７３９号、ＥＰ−Ａ−０４４２２３１号及びＵＳ−Ａ−５１０
３８３８号に開示されている。従来のプローブとしては、さらに、唾液中の抗体
を同定できる検出システムが挙げられる。
このようなタイプの診断プローブに関して従来使用されている検出シ
ステムは、検出可能な結果を目視できる酵素結合検定または粒子凝集検定(parti
cle-agglutinalion assay)を用いるものであった。
しかしながら、診断試験装置には重大な欠点があった。抗体−抗原結合による
すべての免疫診断試験は、特殊なサンプルでは偽陰性の結果を生じる。標準的な
酵素結合イムノソルベント検定では、目的とする抗体と特異的に結合する抗原は
固体基材に結合される。目的とする抗体を含むサンプルを添加すると、抗体が結
合している抗原と特異的な複合体を形成する。さらに、結合しない抗体は、洗浄
除去され、標識された抗体を添加することによって試験装置表面に形成された複
合体を検出する。しかしながら、この検定法は、非常に多量の被検体がサンプル
中に存在しないと信頼性に欠ける。臨床医が検定したいと考えている尿や唾液の
サンプルは、通常、血清または血漿サンプル中に見られる量より２ないし３倍の
オーダー低い量の抗体を含むものである。尿や唾液サンプル中の抗体濃度は様々
な因子の影響を受け、本来ばらつきのあるものである。抗体濃度は、サンプリン
グ前に多量の液体を摂取することにより尿の排出量が増加すると、または唾液の
生成がクエン酸または他の酸による刺激によって人工的に増加する際には、減少
する。
サンプル中の抗体濃度が酵素結合検定あるいは同様の試験過程において陽性の
反応が生じるのには不十分である際には、ばらつきによって偽陰性の結果が出て
しまう。偽陰性の結果によって、臨床医による医学的な症状の診断が不正確にな
ってしまう。試験が特定の病原性の細菌若しくはウィルスに対する抗体、または
自己免疫疾患若しくはアレルギー性疾患に関連した抗体の存在に対するものであ
る際には、不適切なサンプルの使用による偽陰性の結果により患者に関する結論
がめちゃくちゃになり、患者に不必要な苦痛を与える。この問題はヒト免疫不全
ウィルス（ＨＩＶ）感染症の場合に特にいえることである。近年、アメリカ合衆
国の食品医薬品局(United States Food and Drug Administration)（ＦＤＡ）が
免疫診断分野におけるすべての試験装置はサンプルの生存能を示さなければなら
ないことを決定したことが報告された。
本発明は、不適切なサンプル(invalid sample)を用いることから生じる偽陰性
の結果を検出する組立て手段(inbuilt means)を備えた装置を提供することによ
って上記問題を解決しようとするものである。
本発明の第一の概念によると、基材および基材上のそれぞれ別の位置に以下の
部材からなる、動物種の体液中に存在する被検体の検出装置を提供する：
（ａ）試験される種の特徴的な分子(characteristic molecule)に結合すること
により二成分系複合体(binary complex)を形成することができる可動性の(mobil
e)標識された第一の特異的な結合分子；
（ｂ）被検体を検出する手段；及び
（ｃ）二成分系複合体(binary complex)またはこの成分に結合できる固定された
第二の特異的な結合分子。
この装置の特長は、特徴的な分子を第二の固定された特異的な結合分子に結合
させる最終段階にある。この段階は、十分な量の特徴的な分子が存在することに
より有意な結果を得、これにより特定の試験を容易に確認することができるもの
である。試験サンプル中の特徴的な分子の全濃度は容易に定量化３４され、十分
高い量である際には偽陰性の結果が出る危険性が非常に減少する。
ＧＢ−Ａ−２２０４３９８号は、可動性の標識された第一の特異的な結合分子
、被検体を検出する手段及び固定された第二の特異的な結合分子を含む検定装置
に関するものである。しかしながら、第一の特異的な結合分子は本発明において
いう試験される種の特徴的な分子にではなく被検体に特異的であるため、上記装
置は本発明の装置とは全く異なるも
のである。このことは、ＧＢ−Ａ−２２０４３９８号の装置を用いてはサンプル
が生存しているかどうかを決定する、即ち、偽陰性を排除することができないこ
とを意味する。
本明細書において、「二成分系複合体(binary complex)」という言葉は、基材
上の粒子に結合する特異的な結合分子および被検体分子等の特徴的な分子によっ
て形成される複合体を定義するために用いられる。被検体は抗体であってもよい
。
第一の特異的な結合分子に関して用いられる際の「可動性(mobile)」という言
葉は、第一の特異的な結合分子が基材上に固定されていないことを示すものであ
る。
「特徴的な分子(characteristic molecule)」という言葉は、試験されるべき
タイプのサンプル中に典型的に認められる、従って、サンプルが生存しているな
らば検出可能な濃度で存在する分子を意味するものである。例えば、唾液サンプ
ルでは、一般的に検出可能な量のＩｇＧを見付けることができるため、ＩｇＧは
唾液サンプルに関しては好ましい特徴的な分子となる。この場合では、第一の特
異的な結合分子はＩｇＧイソタイプのすべての抗体に特異的に結合する。
本発明の装置は、体液中の被検体を検出するのに適しているが、被検体の濃度
が変化しやすい唾液や尿サンプル中の被検体を検出する際の問題を解決するのに
特に有用である。また、本発明の装置は血液等の他の体液にも使用できる。
本発明の装置で試験される被検体は、細菌(bacterial)、ウィルス、菌類(fung
al)若しくは原生動物の病原体、例えば、ヘリコバクター ピロリ(Hericobacter
pylori)、ヒト免疫不全ウィルス(Human Immunodeficiency virus）（ＨＩＶ
１及び２）、サルモネラ亜種(Salmonella spp.）、ストレプトコッカス種(Strep
tococcus species)、ポリオウィル
ス(polio virus)、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎表面抗原若しくはＢ型肝炎核抗原、カン
ジダ亜種(Candida spp.)、アスペルギルス亜種(Aspergillus spp.)、アメーバ属
(Entamoeba spp.)またはジアルジア亜種(Giardia spp.)に対する抗体が挙げられ
る。また、被検体は、自己免疫疾患若しくはアレルギー性疾患に関連した組織ま
たは種に特異的な抗体に対する抗体であってもよい。
または、被検体は、抗原、例えば、病原体タンパク質またはホルモン、血液型
を特定するタンパク質または検出する必要のある他のタンパク質若しくは糖タン
パク質であってもよい。核酸もまた本発明の装置を用いて検出できる。
さらに、被検体は、特徴的な分子の一部を形成するものでなければならない、
または二成分系複合体を形成する第一の特異的な結合分子に結合する、特徴的な
分子のサブセット(subset)でなければならない。
したがって、被検体が特定のイソタイプ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥま
たはＩｇＡの抗体である場合には、特徴的な分子はそのイソタイプの抗体であり
、第一の特異的な結合分子はそのイソタイプの抗体すべてに結合するように選択
される。同様にして、被検体が糖タンパク質である場合には、第一の特異的な結
合分子はサンプル中に存在するすべての糖タンパク質に結合しこれらを標識する
レクチンであり、被検体が核酸である場合には、第一の特異的な結合分子は標識
された特異性の低い核酸プローブであることが好ましい。
被検体は特徴的な分子のサブセットであるため、標識された二成分系複合体の
一部は被検体を含むが、このことは、１つ超の検出可能な標識を必要としないの
で、本発明の特に好ましい特徴である。
好ましい実施態様としては、本発明による装置は、ヒトがかかる医学的な症状
(condition)を診断するのに使用できるように設計される。
上記したように、第一の特異的な結合分子は、ＩｇＧまたはＩｇＭのイソタイ
プであることが好ましい抗体であることが多い。他のイソタイプの抗体も、必要
であれば、同様にして使用される。第一の特異的な結合分子はポリクローナルま
たはモノクローナル源(origin)であってもよく、また、そのままの分子であって
もまたは酵素による若しくは化学的な切断によって得られる特異的な部位を含む
断片であってもよく、あるいは、組換ＤＮＡ技術若しくはペプチド合成を適用す
ることによって得られるものであってもよい。
第一の特異的な結合分子は、既知の標識で標識されている。標識によって、特
に、特異的な結合分子が、固定化された際に、目視できる、さもなければ検出す
ることができる。粒子が本目的に好ましい標識を構成する。試験装置上で第一の
特異的な結合分子に連結される粒子は、ラテックス、コロイド金属(colloidal m
etal)、リポソームまたはポリスチレン等の既知の材料で作製される。発色団、
発蛍光団、および／または他の標識を代わりにまたはさらに用いてもよい。
試験装置において被検体を検出する手段は、被検体に特異的な固定された結合
分子を含む１つ以上の分離した領域からなることが好ましい。被検体は特徴的な
結合分子の一部を形成するまたは特徴的な結合分子のサブセットであるため、被
検体は検出可能なように標識された第一の特異的な結合分子にすでに結合してお
り、このため、検出領域で一旦固定されると検出可能になる。
被検体を定量できるので、装置に複数個の被検体検出領域を設けることが特に
有用である。したがって、被検体が少量しか存在しない場合には、第一の検出領
域において固定された結合分子とは相互作用するが、他の検出領域を通過するこ
とができる過剰の被検体は存在しない。より多くの被検体が存在する場合には、
被検体の存在量が検出される検出領
域の数によって分かるように、過剰な被検体はさらなる次の検出領域に移動して
いく。
または、同一サンプル中の２つ以上の異なる被検体の存在を同時に検出できる
ように、それぞれの被検体に特異的な２つ以上の固定された結合分子を試験装置
の離れた領域に配置してもよい。
被検体が上記した抗体の一つである際には、検出領域中の固定された結合分子
は、通常、固定された病原体タンパク質、炭水化物若しくは他の断片、またはヒ
ト組織由来のタンパク質、炭水化物若しくは他の断片、またはヒト以外の種由来
のタンパク質、炭水化物若しくは他の断片である。固定された結合分子は抗イデ
ィオタイプ抗体であってもよい。
被検体がタンパク質である際には、固定された結合分子は、タンパク質に特異
的に結合するモノクローナルまたはポリクローナル抗体または検出されるべき特
定のタンパク質に特異的な他の結合分子である。核酸に関しては、固定された結
合分子は特異性の高い核酸プローブであることが好ましい。
被検体以外の特徴的な分子を含む二成分系複合体は固定されずまたはそうでな
ければ位置（ｂ）で除去され、被検体は位置（ｂ）で検出され確認場所(verific
ation station)として機能する位置（ｃ）に移る。第二の特異的な結合分子は複
合体を固定した後、この複合体は標識によって検出可能になる。第二の特異的な
結合分子は複合体のどの部分にも特異的に結合する。第二の特異的な結合分子が
特徴的な分子に結合することが好ましい；このため、例えば、特徴的な分子がヒ
ト抗体のイソタイプである際には、第二の特異的な結合分子は再度抗ヒトＩｇＧ
等の抗ヒト抗体である。他の好ましい結合分子は、第一の特異的な結合分子に関
して上記したのと同様であり、被検体及び特徴的な分子によって選ばれる。
装置は、基材と共にあるいは基材とは別に連続した吸着材料からなるサンプル
収納部位をさらに有していてもよい。このように構造に柔軟性を付与することに
よって、サンプルの使用形態による操作の利用可能性を最大限にすることができ
る。
試験装置の基材材料は紙または膜から構成される。基材材料は、必要であれば
、炭水化物であってもよく、好ましくはニトロセルルロース材料である。
装置は、体液（またはその成分）が、例えば、毛細管作用により、順次位置（
ａ）、（ｂ）若しくは（ｃ）に流れるように構成されることが好ましい。各位置
に体液を運ぶ他の手段も本発明の概念に含まれる。
上述したように、本発明の好ましい概念によると、サンプルを毛細管作用によ
り膜または紙基材に沿って吸い上げる。さらなる溶剤は必要としないが、特定の
サンプル希釈液によって結果を得る速度を上昇させる、または陽性の試験結果と
共に得られるシグナルを高めてもよい。
本発明の第二の概念によると、以下よりなる、動物の体液中に存在する被検体
の検出方法を提供する：
（ｉ）吸着基材上にサンプルを吸着させる段階；
（ｉｉ）サンプル中に存在する試験種の特徴的な分子が特異的な結合分子に結合
して二成分系複合体を形成するように、サンプルを可動性の標識された特異的な
結合分子と接触させる段階；
（ｉｉｉ）被検体を含む二成分系複合体が被検体に特異的な結合分子に結合して
検出可能な反応生成物を生じるように、被検体を含む二成分系複合体を固定され
た被検体に特異的な結合分子と接触させる段階；および
（ｉｖ）被検体を含まない二成分系複合体を二成分系複合体と反応することによ
って目視で検出可能な生成物を形成する固定された特異的な結
合分子と接触させる段階。
段階（ｉｉ）で使用された標識が粒子である際の検出可能な生成物と同様、段
階（ｉｉｉ）及び（ｉｖ）における検出可能な生成物は目視で検出できることが
好ましい。
本発明の第二の概念の好ましい態様は、必要な変更を加えて(mutatis mutandi
s)、第一の概念と同様である。
本発明を以下の図面を参照しながら実施例によってさらに説明する：
図１は、本発明による装置の斜視図を示すものである。
図１に示されるように、サンプリング装置１０は、吸着材料、好ましくはニト
ロセルロース紙、から形成される基材１２、およびこの基材に接着される形態で
、サンプル収納部位１４からなる。基材上には、粒子に連結した抗ヒトＩｇＧ抗
体が含まれる第一の領域１６が配置される。この粒子は、例えば、ラテックス、
コロイド金属、リポソームまたはポリスチレン等の既知の材料で作製される。サ
ンプル検出領域１８，２０は、ニトロセルロース基材１２上に固定された被検体
に特異的な抗体を含む。本装置を用いて検出するのが特に好ましい被検体は、ヘ
リコバクター ピロリ(H．pylori)に対する抗体であり、したがって、この場合
においては、検出領域１８，２０はヘリコバクター ピロリ(H．pylori)抗体に
特異的な固定された抗原を含む。
本装置の最後の領域は、固定された抗ヒトＩｇＧを含む確認領域２２である。
これは、粒子に結合した抗ヒトＩｇＧと同様であるが、必ずしも同様である必要
はない。
使用する際には、サンプルをサンプル収納部位１４に置くと、基材１２の吸着
性により、サンプルは第一の領域１６に達するまで基材に沿って吸い上げられる
。この時点で、サンプル中に存在するヒトＩｇＧ抗体は粒子に連結した抗ＩｇＧ
に結合し、二成分系複合体を形成する。この
二成分系複合体は第一のサンプル検出領域１８に到達するまで基材１２に沿って
吸い上げられ続ける。この領域において、被検体を含む二成分系複合体は固定さ
れた抗体に結合し、サンプル検出領域１８上で分離した(discrete)目視できるク
ラスター(clustering)を形成する。結合しなかった二成分系複合体は、第二のサ
ンプル検出領域２０に達するまで基材に沿って移動し続け、ここで残りの被検体
含有二成分系複合体は固定されて第二の分離した目視できるクラスターを形成す
る。最終的には、残りの二成分系複合体は、確認領域２２に到達するまで基材に
沿って移動し、ここでこの領域にある抗ＩｇＧに結合し、さらに分離した目視可
能なクラスターを形成する。この確認領域における目視可能なシグナルによって
、初期サンプルがサンプルが目視でき、それにより陽性の結果を得るのに十分な
量のヒトＩｇＧを含んでいたことが示される。
したがって、明らかに、本発明の装置は簡単に使用でき、これによりサンプル
が目視できるものであることを確認する迅速かつ容易な方法が提供される。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Test apparatus The present invention is a body fluid sample, and more particularly to a device for detecting the presence of the analyte in the sample other than a serum sample. Such analytes are specifically immunoglobulin molecules, but may be other proteins. Immunoglobulin molecules, or fragments thereof, are known to exist in body fluids other than serum such as saliva and urine. In particular, IgA, IgG and IgM class immunoglobulin molecules are abundant in saliva. Saliva and urine are secreted body fluids and sample collection is easy and straightforward. In the field of medical diagnosis, many tests and devices for detecting an analyte in a specific body fluid sample are known. These tests include biochemical assays for the quantity and / or presence of specific proteins or immunoglobulins; so-called "sandwich assays" for immunoglobulins and electrophoresis to identify individual immunoglobulin classes. Use is mentioned. As a device used to detect an analyte such as immunoglobulin in saliva, various probes composed of a stick or an adsorbent pad of mate rial containing an absorbent at one end can be mentioned. Such probes are disclosed in EP-A-0418739, EP-A-0422231 and US-A-510 3838. Further conventional probes include detection systems that can identify antibodies in saliva. The detection system conventionally used for these types of diagnostic probes has used an enzyme-linked assay or a particle-agglutinalion assay that allows visual detection of detectable results. However, the diagnostic test equipment has serious drawbacks. All immunodiagnostic tests by antibody-antigen binding give false negative results in special samples. In a standard enzyme-linked immunosorbent assay, antigens that specifically bind the antibody of interest are bound to a solid substrate. When a sample containing the antibody of interest is added, it forms a specific complex with the antigen to which the antibody is bound. In addition, unbound antibody is washed away and the complex formed on the test device surface is detected by adding labeled antibody. However, this assay is unreliable unless very large amounts of analyte are present in the sample. The urine and saliva samples that the clinician wishes to assay will typically contain an amount of antibody that is on the order of two to three times less than that found in serum or plasma samples. The antibody concentrations in urine and saliva samples are affected by various factors and are inherently variable. Antibody concentrations decrease when urine output is increased by ingesting a large amount of fluid prior to sampling, or when saliva production is artificially increased by stimulation with citric acid or other acids. If the antibody concentration in the sample is insufficient to produce a positive reaction in the enzyme-linked assay or similar test process, variability will give false-negative results. False negative results can lead to inaccurate diagnosis of medical symptoms by clinicians. When the test is for the presence of antibodies to a particular pathogenic bacterium or virus, or antibodies associated with autoimmune or allergic disorders, a false negative result due to the use of an inadequate sample results in a conclusion about the patient. Is messed up and causes unnecessary pain to the patient. This problem is especially true in the case of human immunodeficiency virus (HIV) infection. Recently, it was reported that the United States Food and Drug Administration (FDA) has determined that all test devices in the immunodiagnostic field must show sample viability. The present invention seeks to solve the above problems by providing an apparatus with inbuilt means for detecting false negative results resulting from using an invalid sample. According to a first concept of the present invention, there is provided a device for detecting an analyte present in a body fluid of an animal species, which comprises the following members at different positions on the substrate: (a) tested A mobil e labeled first specific binding molecule capable of forming a binary complex by binding to a characteristic molecule of one species; (B) means for detecting an analyte; and (c) a binary complex or an immobilized second specific binding molecule capable of binding to this component. The advantage of this device lies in the final step of binding the characteristic molecule to the second immobilized specific binding molecule. This step yields significant results due to the presence of a sufficient amount of the characteristic molecule, which makes it easy to confirm the particular test. The total concentration of the characteristic molecule in the test sample is easily quantified34, and the risk of false negative results is greatly reduced when in sufficiently high amounts. GB-A-2204398 relates to an assay device comprising a mobile labeled first specific binding molecule, a means for detecting an analyte and an immobilized second specific binding molecule. However, since the first specific binding molecule is specific to the analyte rather than the characteristic molecule of the species tested in the present invention, the above device is quite different from the device of the present invention. . This means that with the device of GB-A-2204398 it is not possible to determine if the sample is alive, ie exclude false negatives. As used herein, the term “binary complex” refers to a complex formed by a specific binding molecule that binds to particles on a substrate and a characteristic molecule such as an analyte molecule. Used to define. The analyte may be an antibody. The term "mobile" when used with respect to the first specific binding molecule indicates that the first specific binding molecule is not immobilized on the substrate. The term "characteristic molecule" refers to a molecule typically found in the type of sample to be tested, and therefore present in a detectable concentration if the sample is viable. It is a thing. For example, in saliva samples, generally detectable amounts of IgG can be found, making IgG a preferred characteristic molecule for saliva samples. In this case, the first specific binding molecule specifically binds all antibodies of IgG isotype. The device of the present invention is suitable for detecting an analyte in a body fluid, but is particularly useful for solving a problem in detecting an analyte in saliva or a urine sample in which the concentration of the analyte is likely to change. Is. The device of the present invention can also be used for other body fluids such as blood. The analyte tested in the device of the present invention may be a bacterial (bacterial), virus, fungal or protozoan pathogen, for example, Helicobacter pylori, human immunodeficiency virus (HIV). 1 and 2), Salmonella spp., Strep tococcus species, poliovirus, hepatitis A, hepatitis B surface antigen or hepatitis B nuclear antigen, Candida subspecies (Candida) spp.), Aspergillus spp., Entamoeba spp. or Giardia spp. The subject may also be an antibody directed against antibodies specific to tissues or species associated with autoimmune or allergic disorders. Alternatively, the analyte may be an antigen, such as a pathogen protein or hormone, a blood group specific protein or other protein or glycoprotein that needs to be detected. Nucleic acids can also be detected using the device of the invention. Furthermore, the analyte must be one that forms part of the characteristic molecule, or a subset of the characteristic molecules that binds to the first specific binding molecule that forms the binary complex (( subset). Thus, if the analyte is an antibody of a particular isotype, eg, IgG, IgM, IgE or IgA, the characteristic molecule is that isotype of antibody and the first specific binding molecule is of that isotype. Selected to bind all antibodies. Similarly, if the analyte is a glycoprotein, the first specific binding molecule is a lectin that binds and labels all glycoproteins present in the sample, and the analyte is a nucleic acid. In this case, the first specific binding molecule is preferably a labeled low specificity nucleic acid probe. Since the analyte is a subset of the characteristic molecules, some of the labeled binary complexes contain the analyte, which does not require more than one detectable label, It is a particularly preferred feature of the invention. In a preferred embodiment, the device according to the invention is designed for use by humans in diagnosing such medical conditions. As mentioned above, the first specific binding molecule is often an antibody, preferably of the IgG or IgM isotype. Antibodies of other isotypes are similarly used, if necessary. The first specific binding molecule may be a polyclonal or monoclonal origin, and may be the intact molecule or a fragment containing a specific site obtained by enzymatic or chemical cleavage. It may be, or may be obtained by applying recombinant DNA technology or peptide synthesis. The first specific binding molecule is labeled with a known label. The label allows, in particular, the specific binding molecule to be visible or otherwise detected when immobilized. The particles constitute the preferred label for this purpose. The particles linked to the first specific binding molecule on the test device are made of known materials such as latex, colloidal metal, liposomes or polystyrene. Chromophores, fluorophores, and / or other labels may alternatively or additionally be used. The means for detecting the analyte in the test device preferably comprises one or more discrete regions containing immobilized binding molecules specific for the analyte. Since the analyte forms part of or is a subset of the characteristic binding molecule, the analyte has already bound to the detectably labeled first specific binding molecule. Therefore, once fixed in the detection area, detection becomes possible. It is particularly useful to provide the device with a plurality of analyte detection regions since the analyte can be quantified. Thus, if only a small amount of analyte is present, there will be no excess of analyte that will interact with the immobilized binding molecule in the first detection region but will be able to pass through the other detection regions. When there are more analytes, the excess analyte moves to the next detection area, as can be seen by the number of detection areas in which the amount of the analytes is detected. Alternatively, two or more immobilized binding molecules specific for each analyte can be placed in separate areas of the test device so that the presence of two or more different analytes in the same sample can be detected simultaneously. Good. When the analyte is one of the antibodies described above, the immobilized binding molecule in the detection region is usually the immobilized pathogen protein, carbohydrate or other fragment, or protein, carbohydrate or other derived from human tissue. Or a protein, carbohydrate or other fragment from a species other than human. The immobilized binding molecule may be an anti-idiotype antibody. When the analyte is a protein, the immobilized binding molecule is a monoclonal or polyclonal antibody that specifically binds to the protein or other binding molecule specific for the particular protein to be detected. For nucleic acids, the immobilized binding molecule is preferably a highly specific nucleic acid probe. Binary complexes containing characteristic molecules other than the analyte are either unfixed or otherwise removed at position (b) and the analyte is detected at position (b) and used as a verification station. Move to functional position (c). The second specific binding molecule immobilizes the complex, which is then detectable by the label. The second specific binding molecule specifically binds to any part of the complex. It is preferred that the second specific binding molecule binds to the characteristic molecule; thus, for example when the characteristic molecule is an isotype of a human antibody, the second specific binding molecule is It is an anti-human antibody such as anti-human IgG. Other preferred binding molecules are similar to those described above for the first specific binding molecule and are selected according to the analyte and characteristic molecule. The device may further have a sample storage site made of adsorbent material that is continuous with or separately from the substrate. This flexibility of the structure can maximize the operational availability of the sample usage. The base material of the test device consists of paper or a membrane. The base material may be a carbohydrate, if desired, and is preferably a nitrocellulose material. The device is preferably arranged so that the body fluid (or its components) flows sequentially to position (a), (b) or (c), for example by capillary action. Other means of delivering bodily fluid to each location are also within the concept of the present invention. As mentioned above, according to a preferred concept of the present invention, the sample is wicked by capillary action along the membrane or paper substrate. No additional solvent is required, but a particular sample diluent may increase the rate at which results are obtained or enhance the signal obtained with a positive test result. According to a second concept of the invention, there is provided a method of detecting an analyte present in an animal body fluid, comprising: (i) adsorbing the sample on an adsorbent substrate; (ii) in the sample Contacting the sample with a mobile labeled specific binding molecule so that the characteristic molecules of the test species present bind to the specific binding molecule to form a binary complex; (iii) ) The two-component complex containing the analyte is immobilized on the analyte so that the two-component complex containing the analyte binds to a binding molecule specific to the analyte to produce a detectable reaction product. Contacting with a specific binding molecule; and (iv) an immobilized specific which forms a visually detectable product by reacting the analyte-free binary complex with the binary complex. Contacting with different binding molecules. As with the detectable product when the label used in step (ii) is a particle, the detectable product in steps (iii) and (iv) is preferably visually detectable. Preferred embodiments of the second concept of the invention are similar to the first concept, mutatis mutandi s. The invention will be further described by way of example with reference to the following drawings: Figure 1 shows a perspective view of a device according to the invention. As shown in FIG. 1, the sampling device 10 comprises a substrate 12 formed from an adsorbent material, preferably nitrocellulose paper, and a sample storage site 14 in a form adhered to the substrate. A first region 16 containing anti-human IgG antibody linked to particles is disposed on the substrate. The particles are made of known materials such as latex, colloidal metal, liposomes or polystyrene. The sample detection regions 18 and 20 include an antibody specific for the analyte fixed on the nitrocellulose substrate 12. A particularly preferred analyte to be detected using this device is an antibody against Helicobacter pylori (H. pylori), therefore in this case the detection regions 18, 20 are specific for Helicobacter pylori (H. pylori) antibodies. Specifically immobilized antigen. The last area of the device is the confirmation area 22 containing immobilized anti-human IgG. This is similar, but not necessarily the same, as anti-human IgG bound to the particles. In use, the sample is placed in the sample storage site 14, and due to the adsorptive nature of the substrate 12, the sample is drawn up along the substrate until it reaches the first region 16. At this point, the human IgG antibody present in the sample binds to the particle-linked anti-IgG and forms a binary complex. This binary complex continues to be drawn up along the substrate 12 until it reaches the first sample detection area 18. In this area, the binary complex containing the analyte binds to the immobilized antibody and forms discrete clusters of visible clustering on the sample detection area 18. The unbound binary complex continues to move along the substrate until it reaches the second sample detection area 20, where the remaining analyte-containing binary complex is immobilized and separated in the second separation. To form visible clusters. Eventually, the remaining binary complex migrates along the substrate until it reaches the confirmation region 22, where it binds to anti-IgG in this region and forms further discrete visible clusters. To do. A visible signal in this confirmation area indicates that the initial sample contained sufficient amount of human IgG that the sample was visible and thereby gave a positive result. Thus, clearly, the device of the present invention is simple to use, which provides a quick and easy way to verify that the sample is visible.
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(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ)，ＡＭ，ＡＴ，
ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ
Ｚ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ
，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，
ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ
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