JPH07502011A - Immunosuppressive and tolerogenic oligosaccharide derivatives - Google Patents

Immunosuppressive and tolerogenic oligosaccharide derivatives

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JPH07502011A
JPH07502011A JP4511195A JP51119592A JPH07502011A JP H07502011 A JPH07502011 A JP H07502011A JP 4511195 A JP4511195 A JP 4511195A JP 51119592 A JP51119592 A JP 51119592A JP H07502011 A JPH07502011 A JP H07502011A
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スミス，リチャード，エッチ．
ベノット，アンドレ，ピー．
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。 (57) [Abstract] This bulletin contains application data before electronic filing, so abstract data is not recorded.

Description

【発明の詳細な説明】 免疫抑制性および寛容原性のオリゴ糖誘導体発明の背景 １、発明の分野 本発明は、細胞性免疫応答の処置にオリゴ糖グリコシドを使用する方法、ならび にこれらのオリゴ糖グリコシドを含有する医薬組成物に関するものである。特に 、本発明は、細胞性炎症応答を含む細胞性免疫応答の調整（例えば抑制）に血液 型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを使用する方法に関するものである。 ２、参考刊行物 本田願書において、下記の参考刊行物を本田願書の相当する箇所に上付きの数字 により引用する：１１９８４）。 ４゜　Ｆｒａｚｉ＠ｒ等、Ａｎｎｕ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、。 弧：４９１　（１９７９）。 ３４、Ｔｏｏｎｅ＊　、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　Ｎｏ、　１７゜公：５３ ６５−５４２２１１９８９）。 ３７、Ｚｂｌｒａ１％、Ｍｏｎａｆｓｈ、Ｃｈｅｍ、。 、　Ｊｊｊｌ：１２７−１４１　（１９８Ｂ＋。 ５６５０（１９６０１゜ ４３、Ｌｅｍｉｅｕｘ等、ＵＳ、特許Ｎｏ。 ４．１３７，４０１　（１９７６１゜ ４４、Ｌｅｍｉｅｕｘ等、υ、Ｓ−特５’Ｔ　Ｎｏ。 ４．１９５，１７４（１９７８１゜ ４５、Ｐａｕｌｓｅｎｔ！　、　Ｃｄｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、。 、１３：２１−４５１１９８４１゜ ４６．５ａｂｅｓａｎ％、　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ、。 ｆｉ２：６４４−６５２　（１９Ｂ４ン。 ４ｇ、Ｌｅｍｉ＠ｕｘ等、ｕ、ｓ、特許Ｎｏ。 ４．７６７．８４５　（１９８７１゜ ４９、ＭａｚｉｄｖＰ、　Ｕ、Ｓ、　、特許出願５ｅｒｉａｌ　Ｎｏ、　０７／ ３３６，９３２　（１９８９）。 ２５１：１３８３５−１３８４４　（１９８２１゜５３、　９ｍｔｔｈ等、　Ｉ ｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｒｒｖｎｕｎｌｔｙ、　３ユニ１２９１１９８０ １゜ ５４、Ｒａｔｃｌｉｆｆ等、υ、５．５ｅｒｉａｌ　Ｎｏ、　０７７２７８，１ ０６゜１９８８年Ｉ＋月３０日出願 ５５、Ｚｉｏｌａ等、　Ｊ、　ｏｆ　１ｍｍｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈｏｄｓ、　旦 ｚ：１５９゜（１９８７１゜ ５６、Ｅｋｂｅｒｇ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　ｊｊｆｉ：５５ −６７　（１９８２）。 ５Ｂ、Ｒａｎａ等バ’：ａｒｂｏｈｙｄｒ、Ｒａｓ、４１：１４９−１５７　（ １９Ｂ１１゜５９、Ａｍｖｓｍ−Ｚｏｌｌｏ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒａ ｓ、、　上澄：１９シ２１２（１９８６１゜ ６０、Ｐａｕｌｓｅｎ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒａｇ、、ＪＱ４：１９シ ２１９（１９８２）。 旦：５３１−５３７　（１９８９）。 ６３、Ｌｅｅ等、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　３２：１９３以降（１ ９７４）。 本明細書に記載の刊行物および特許出願書はいずれも、本発明か関連する分野の 当業者１ノベルに示すものである。 これらの刊行物または特許出願書はそれぞれ、詳細にかつまた個別に示している ことか、その全体を引用することによって組み入れられるものと同一程度で、こ れらの刊行物または特許出願書をそれぞれ、その全体を引用することによってこ こに組み入ねる。 ３、技術状況 成長、運動、形感学的発達、および分化のような哺乳動物の細胞か関与する重要 なプロセスは、細胞の表面に対して作用する細胞外からのシグナルによって部分 的に制御される１−３゜ある程度の刺激は細胞外流体により細胞に到達するか、 その他のシグナルは細胞表面の近くからもしくは細胞表面に近ついて受け取られ 、直接的細胞−細胞接触によりそれらの作用を発揮する４、５０証拠は、特異的 細胞−表面レセプターが特異結合により並置する細胞の分子シグナルを［感受（ ｓｅｎｓｅ）Ｊすることかでき、この結合を細胞応答中に書き写す生物学的メカ ニズムが存在することを示唆している。例えば、■雑な細胞−表面相互作用は、 病原体の標的組織への結合６７、精子−非相互作用８、免疫系における細胞間の 相互作用１１０、および胚発生＋＋などの直接プロセスを助けるものと信じられ ている。さらにまた、細胞−細胞の認識の欠落は、新生物の形質転換および転移 を特徴とする無制御の細胞増殖および運動能を強めるものと考えられている１１ ＋２゜別の証拠は、細胞−認識プロセスは複合糖質の炭水化物鎖またはグリカン 部分によって媒介されることを示唆している４１４・＋６゜例えば−個の細胞の 表面複合糖質の、もう一つの細胞上の相補炭水化物−結合蛋白質（レクチン）へ の結合は、特異的相互作用の開始をもたらすことができる。 炭水化物−結合蛋白質の重要な一部に、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質［レクチン十ＥＧ Ｆ十相補調節ドメイン細胞接着分子（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ　Ｒｅｇｕｌ ａｔｏｒｙ　Ｄｏｍａｉｎｓ−ＣｅｌｌＡｄｈｅｓｉｏｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌｅｓ ）　］がある。これらの、蛋白質または機能的に類似する蛋白質あるいはレクチ ンは、細胞−細胞接触を経る、およびまた白血球の溢出による、免疫応答（炎症 応答を含む）で必須の役割を演じることができるＩＴ−２１０特定の炭水化物リ ガンドが、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質に関わる推定上のレセプター構造体の一部とし て、最近に同定されている−７−２１゜これらの同定された構造体には、下記の 構造体が含まれる。 これらの式において、Ｑは別の適当に結合した一種または二種以上の糖を表す。 しかしながら、インビボでは、このような炭水化物は一般に、容易には合成する ことができず、また治療量では容易に単離することができない天然産生の複合糖 質の一部である。 成る種のオリゴ糖グリコシドが以前に開示されたが、細胞性免疫応答（細胞性炎 症応答を含む）の抑制におけるそれらの使用は教示されていない。 本発明の要旨 ここに、上記ソアリルールイスＸまたはルイスＸグリカン鎖を含む細胞表面複合 糖質は、レクチンと機能的に相互作用して、哺乳動物における細胞性免疫応答を 抑制することができる由−のりガントてはない、ことか見出だされた。詳細に言 えは、本発明は、低分子量（ＭＷは一般に、約２０００ダルトンより小さい）の 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドがまた、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質とまた 相互作用することおよび（または）細胞性炎症応答を含む哺乳動物細胞性免疫応 答をインビボて抑制するのに充分の強さを有するその他のレクチンと相互作用す ることを見出だしたことに関するものである。本発明はまた、このような血液型 抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドが抗原チャレンジの応答に係わり哺乳動物に 投与された場合に、この投与が同一抗原からの追加のチャレンジに対する寛容性 を誘発させることを見出だしたことに関するものである。 従って、その方法の一態様において、本発明は哺乳動物における細胞性免疫応答 を抑制する方法に関するものであり、この方法は血液型抗原決定基関連オリゴ糖 グリコシドを当該免疫応答を抑制するのに有効な量で投与することからなる。 好適態様において、この方法によって抑制される免疫応答は、炎症応答である。 もう一つの好適態様では、この方法に使用する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドはまた、結合抑制性オリゴ糖グリコシド（下記で定義する）であると特 徴付けすることができる。その方法の態様のもう一つにおいて、本発明は哺乳動 物における抗原に対する細胞性免疫応答を処置する方法に関し、この方法は血液 型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、約０．５ｍｇ／ｋｇ−約５０ｍｇ／ｋ ｇの量で当該哺乳動物に投与することからなる。その方法の態様のさらにもう一 つにおいて、本発明は抗原に対する哺乳動物の感受性を減少させる方法に関し、 この方法は、抗原にさらすと同時的に血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド の有効量を哺乳動物に投与することからなる。 その組成物態様の一つにおいて、本発明は哺乳動物に非口経投与するのに適する 医薬組成物に関し、この組成物は当該哺乳動物における 細胞性免疫応答の処置に有効な量の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドお よび調剤用不活性担体からなる。 図面の簡単な説明 図１は、ＬＩＩＩＳ一層（Ｓ−Ｌａｙｅｒ）蛋白質抗原１０μｇによりチャレン ジした後の２４時間の時点で測定した、免疫感作したマウスにおけるＤＴＨ炎症 応答から生じた足裏ふくらみ部の膨潤の増加を示すものである。この実験におい て、マウスの数匹は、このチャレンジ後の　５時間の時点て、種々の血液型抗原 決定基関連オリゴ糖グリコシド１００μｇにより処置した。 図２は、ＬＩＩＩＳ一層（Ｓ−Ｌａｙｅｒ）蛋白質抗原２０μｇによりチャレン ジした後の２４時間の時点て測定した、免疫感作したマウスにおけるＤＴＨ炎症 応答から生じた足裏ふくらみ部の膨潤の増ＩＪＤを示すものである。この実験に おいて、マウスの数匹は、このチャレンジ後の５時間の時点て、血液型抗原決定 基関連オリゴ糖グリコシドを含む種々の単糖グリコノドおよびオリゴ糖グリコン ドの種々の量で処置した。 図３は、Ｌｌｌｌ　５−ＩＮ蛋白質抗原による一次免疫感作後の２週間そしてチ ャレンジ後の１週間の時点における二次抗体応答（すなわち、４９０μｍにおけ る０−）工ニレンンアミン０．Ｄ、の定量分析により測定した抗体の量により決 定した）を示しており、この図はまた、マウスを、チャレンジ後の５時間の時点 て各種血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドにより処置した場合のこれらオ リゴ糖グリコシドのこれらの応答に対する効果を示している。 図４は、免疫感作したマウスにＬＩＩＩＳ一層重白質抗原をチャレンジした後に おける、ＤＴＨ炎症応答に対する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド、す なわちシアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシド、化合 物Ｉ１１の効果を示すものであり、この場合に、マウスはチャレンジの前および 後の種々の時点て、ソアリルールイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリ コシド、化合物ｌｌ１ １００μｇにより処置した。 図５は、免疫感作したマウスにおいて、７日目に、Ｌｌｌｌ　Ｓ一層重白質抗原 ２０μｇをチャレンジした後の５時間の時点て、血液型抗原決定基関連オリゴ糖 グリコノド５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇを注射した後に生じた長期間（８週間）免疫 抑制を示すものである。 図６は、免疫感作したマウスにおいて、７日目に、ＬＩＩＩＳ一層重白質抗原２ ０μｇをチャレンジした後の５時間の時点て、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドを含む種々の単糖グリコシドおよびオリゴ糖グリコシドを種々の量で注 射した後に生じた長期間（６週間）免疫抑制を示すものである。 図７は、免疫感作したマウスにおいて、−日７日目に、ＬＩＩＩＳ一層重白質抗 原２０μｇでチャレンジする前、チャレンジした時点およびチャレンジした後の 種々の時点で、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシ ド、化合物ＩＩＩを５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇの量で注射した後に生じた長期間（ １０週間）免疫抑制を示すものである。 図８は、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシト、化 合物ＩＩＩにより処置することにより予め抑制されている、免疫感作マウスにお けるＤＴＨ炎症応答のシクロホスファミド誘発回復を示すものである。 図９は、炎症応答の誘発に使用された抗原の種類が、シアリル−ルイスＸの８− メトキシカルボニルオクチルグリコシド、化合物］１１のＤＴＨ応答調整能力に 影響しないことを示すものである。 図１Ｏは、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシト、 化合物［１１が、ＴＮＦα活性化活性化ヒト篩脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）　へ のＵ９３７またはＨＬ６０の結合を阻止できることを示すものである。 図１１は、本発明に係わり使用するのに好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドの「骨格」構造を示すものである。 図１２は、本発明に係わり使用される血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド の構造を示すものであり、この式において、Ｒは−（ＣＨ，）Ｉ　Ｃ（０）ＯＣ Ｒ，である。 図１３は、いくつかの例で使用されている単糖グリコシドと一個の二糖グリコシ ドとの結合体の構造を示すものであり、この式において、Ｒは −（ＣＨＩ　）、Ｃ（０）ＯＣＨ，である。 図１４は、Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体の合成に使用される一般合成経路を示すもので ある。 図１５は、単糖グリコシドおよびオリゴ糖グリコシド３ｂ−７ａの構造を示すも のである。 図１６は、例８に例示されているオリゴ糖グリコシド図１７は、βＧａ　Ｉ　（ １→３／４）βＧＩＣＮＡＣ（Ｚ（２→３′）シアリルトランスフェラーゼによ る、Ｎｅ　ｕ　５Ａｃおよびその類縁体（正確には、「シアリル酸」）のβＧａ １（１→３）βＧＩｃＮＡｃ−末端構造への酵素による転移を示すものである。 図１７はまた、Ｌ−フコースのシアリル化オリゴ糖グリコシドへの酵素による転 移を示している。 図１８は、βＧａ１（１→３／４）βＧＩｃＮＡｃα（２→３′）シアリルトラ ンスフェラーゼによる、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、［シアリル酸」 ）のβＧａ　Ｉ　（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−木端構造への酵素による転移を示 すものである。Ｕ！Ｊ１８はまた、Ｌ−フコースのシアリル化オリゴ糖グリコシ ド・＼の酵素による転移を示している。 図１９は、βＧａ１（１−−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃα（２→６゛）シアリルト ランスフェラーゼによる、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、「シアリル酸 」）のβＧａ　Ｉ　（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−末端構造への酵素による転移を 示すものである。 図２０は、βＧａ　Ｉ　（１−３／４）βＧＩＣＮＡＣ（２（２→３′）シアリ ルトランスフェラーゼによる、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、「シアリ ル酸」）のβＧａ１（１→４）βＧｌｃ（ラクト−ス）末端構造への酵素による 転移を示すものである。 図２１は、βＧａ　Ｉ　（１−３）ａＧａ　ＩＮＡＣ（２（２→３゛）シアリル トランスフェラーゼによる、Ｎ　ｅ　ｕ　５　Ａ　ｃ　、その類縁体（正確には 、「シアリル酸」）のβＧａ　Ｉ　（１→３）ａＧａ　ｌＮＡｃ−じＴ“）末端 構造への酵素による転移を示すものである。 図２２および２３は、シアリル化ハプテンの化学修飾によるシアリルールイスＡ の類縁体の合成に含まれる反応経路を示すものである。 図２４は、シアリル化ハプテンの化学修飾によるシアリル−ルイスＸの類縁体の 合成に含まれる反応経路を示すものである。 図２５は、シアリルダイマー状ルイス”　（Ｓｉａｌｙｌｄｉｍｅｒｉｃ　Ｌｅ ｗｉｓ　’″）およびその内部モノフコシル化誘導体を導く合成経路を示すもの である。この図２５において、化合物６１ａで示されている化合物の名称はβＧ ａｌ　（＋−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ　（１−３）βＧａ１（１−４）β　Ｇｌ ｃＮＡｃ−ＯＲであり、これはまたジーＮ−アセチルアセトサミニルテトラサツ カライドとも称される。同様に、図１の化合物６５ａおよび６５ｂに存在する木 簡部分は時には、ＶＴＭ−２エピトープまアリルダイマー状　ルイス１と称され る。 図２６は、ソアリルジーＮ−アセチルアセトサミニルハブテンの外部モノフコシ ル化誘導体を導く合成経路を示すものである。 図２７は、免疫感作したマウスにおいて、Ｈ３Ｖ抗原でチャレンジした後の２４ 時間の時点で測定した、ＤＴＨ炎症応答から生じた足裏ふくらみ部の膨潤の増加 を示すものである。マウスの数匹は、免疫感作の時点でシアリル−ルイスＸ、化 合物１］１て処置し、またマウスの数匹は、このチャレンジ後の５時間の時点て 、シアリル−ルイスＸ、化合物ＩＩＩにより処置した。 図２８は、−次免疫感作した後の２週間そしてＨ３Ｖ抗原によりチャレンジした 後の１週間の時点における二次抗体応答（すなわち、４９０ｎｍにおける０−フ ェニレンジアミン０．Ｄ、の定量分析により測定した抗体の量により決定した） を示しており、この図はまた、シアリル−ルイスＸ、化合物１１１の投与の時点 における、これらの応答に対する効果を示している。 図２９は、シアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシド、 化合物１１［による処置により予め抑制されている、免疫感作マウスにおけるＤ ＴＨ炎症応答のシクロホスファミド（ＣＰ）誘発　回復を示すものである。 図３０は、免疫感作したマウスにおいて、ＯＶＡ抗原でチャレンジした場合の、 ＤＴＨ炎症応答に対するシアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチル グリコシド、化合物ｉｌ＋の効果を示すものであり、この実験で、マウスは、種 々の異なる方法（ＩＶ静脈投与；ＩＮ鼻内投与）によりチャレンジした後の５時 間の時点で、化合物１１［で処置した。 図３１は、免疫感作したマウスにおいて、ＯＶＡ抗原でチャレンジした場合の、 ＤＴＨ炎症応答に対するシアリル−ルイスＸの８−メトキシカルボニルオクチル グリコシド、化合物ＩＩＩの効果を示すものであり、この実験で、マウスは、種 々の異なる方法（ＩＶ静脈投与：ＩＮ鼻内投与）によりチャレンジした後の５時 間の時点て、種々の投与量で化合物１Ｈにより処置した。 図３２は、免疫感作したマウスにおいて、ＯＶＡ抗原でチャレンジした場合の、 ＤＴＨ炎症応答に対するソアリルールイスＸの８−メトキシカルボニルオクチル グリコシド、化合物Ｉｌ＋の効果を示すものであり、この実験で、マウスは、そ の免疫感作の時点で、種々の異なる方法（ＴＶ静脈投与、ＩＮ鼻内投与；■Ｍ筋 肉内投与）により化合物Ｉ１１により処置した。 図３３は、ＬＰＳを鼻内投与され、その５時間後に、各種化合物を静脈投与され た、マウスの肺における炎症応答に対する各種オリゴ糖グリコシドおよび単糖グ リコシドの効果を示すものである。 図３４は、リンパ球増殖応答に係わる、種々の投与量のシアリル−ルイスＸおよ びシアリル−ルイスへの効果を示すものである。 好適態様の詳細な説明 本発明は、低分子量（約２０００ダルトンより小さいＭＷ）の成る種のオリゴ糖 グリコシドが、哺乳動物の細胞性免疫応答を抑制するのに有効であることを見出 だしたことに関するものであり、この細胞性免疫応答には哺乳動物における抗原 に対する免疫関連炎症応答（例えばＤＴＨ応答）および細胞性炎症応答が含まれ る。さらにまた、本発明は、これらのオリゴ糖グリコシドによる処置かまた、こ のように処置された哺乳動物における抗原に対する寛容性を誘発させることを見 出だしたことに関するものである。 Ａ、定義 本明細書で使用されるものとして、下記の用語に係わる定義を以下に示す。 ｒ　ｆｆ１ｉ乳動物における細胞性免疫応答」の用語は、細胞−細胞相互作用を 経由する哺乳動物における免疫応答を意味する。この用語には、抗原に対する細 胞性炎症応答、例えば遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答、例えば心筋炎症、ウィルス 誘発肺炎、ショックおよび後遺症（例えば多発性臓器不全）から生じる細胞性炎 症応答、成人呼吸器疾患症候群などが含まれる。好ましくは、細胞性免疫応答は 、白血球性応答である。 「血液型物質」の用語（よ、赤血球上の特異複合糖質抗原を意味し、これは血液 を免疫学的適合性にしたかい種種のクラスに分類する基礎となる。 「血液型抗原決定基Ｊの用語は、血液型物質のグリカン鎖を構成する非還元性− 末端、３−９グリコジル残基の各天然産生オリゴ糖セグメントを意味する。 ［血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシド」の用語は、（ａ）３−９個の糖単 位からなるオリゴ糖基を有するオリゴ糖グリコシド、（ｂ）末端に非還元性部上 のアグリコン基を有するオリゴ糖グリコシド、および（Ｃ）そのオリゴ糖基か血 液型抗原決定基（上記定義のとおりのもの）またはその類縁体であるオリゴ糖グ リコシドを意味する。 血液型抗原決定基の類縁体には、血液型抗原決定基の単糖単位の一個または二個 以上か化学的に修飾されて、糖用位の一つまたは二つ以上に、一種または二種以 上の官能性基が導入されているか、および（または）糖単位の一つまたは二つ以 上から、一種または二種以上の官能性基か取り除かれているものを包含する。例 えば、このような修飾は、−ＯＨ官能性基の除去、糖単位（−個または二個以上 ）の除去、アミン官能性基の導入、ハロ官能性基の導入、−個または二個以上の 糖単位の導入などをもたらすことができる。 このような血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、次式て表すことがてき る ＯＬ　ＩＧＯ３ＡＣＣＨＡＲＩＤＥ−Ｙ−Ｒ式中、オリゴ糖は３個−約９個の糖 単位を存し、血液型抗原決定基またはその類縁体を含有する炭水化物構造基を表 し：Ｙは０、Ｓ、＞ＮＨおよび結合からなるＩＴから選はれ、そしてＲは少なく とも一個の炭素原子を有するアグリコン部分を表す。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、そのアグリコン部分かミセルを形 成てきる蛋白質または脂質を有しておらず、またはその他の大型凝集構造基を有 していないことから、血液型物質を含む複合糖質とは異なっている。 好適態様において、アグリコン部分Ｒは、−（Ａ）−Ｚ′からなる群から選はれ 、ここてＡは結合、炭素原子２−１０個を有するアルキレン基、および式−（Ｃ Ｈ２−ＣＲ４Ｇ）　、、（式中ｎは１−５に等しい整数であり：Ｒ４は水素、メ チルまたはエチルからなる群から選ばれ：そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、 フェニルおよび置換基として、アミン、ヒドロキシル、ハロ、炭素原子１−４個 を仔するアルキルおよび炭素原子１−４個を存するアルコキシからなる群から選 ばれる１−３個を有するフェニルからなる群から選ばれる）からなるｌ？ｌから 選ばれ：そしてＺ′は水素、メチル、フェニルおよびニトロフェニルからなる群 から選ばれるが、あるいはまたＧが酸素、硫黄または窒素ではなく、そしてＡが 結合ではない場合には、Ｚ′はまた一０Ｈ１−３Ｈ１，Ｎ　Ｈ２、ＮＨＲｓ　、 −Ｎ　（Ｒａ　）２、−Ｃ（０）ＯＨ１−Ｃ（０）ＯＲ＠　、−Ｃ（０）Ｎｌ（ −ＮＨ，、−Ｃ（０）ＮＨ２、−Ｃ（０）’ＮＨＲ，、および−Ｃ（０）Ｎ　（ Ｒ，）　２からなる群から選ばれることがてき、ここてＲ６はそれぞれ独立して 、炭素原子１−４個を佇するアルキルである。 多数のアグリコンか当技術で公知である。例えは、パラ−ニトロフェニル基（す なわち−ＹＲ＝ＱＣ＠　Ｈ４ｐＮＯ２）からなる結合手はＥｋｂｅｒｇ等により 開示されている５＠。合成の適当な時点て、ニトロ基をアミノ基に還元し、この アミノ基はＮ−１−リフルオロアセトアミドにより保護することができる。支持 体に結合させる曲に、このトリフルオロアセトアミド基を除去して、アミノ基を 提供することができる。 硫黄を含む結合手は、Ｄａｈｍｅｎ等により開示されている６７゜詳細には、こ の結合手は、２−ブロモメチル基がら誘導され、この２−ブロモメチル基は、請 求核性基との引き続く反応で、 ＯＣＨ＊　ＣＨｔ　Ｓ　ＣＨ＊　Ｓ　ＣＯ＊　ＣＯｓおよび一０ＣＨｚ　ＣＨｔ 　ＳＣ＠　Ｈ４ｐＮＨｚなどの種々の末端官能性基を有する結合手を導くことが 証明されている。 Ｒａ０８等６ｓは、ロートリフルオロアセトアミド）−ヘキシル結合手（−０（ ＣＨｔ　）＊　ＮＨＣＯＣＦｓ　）を開示しており、このトリフルオロアセトア ミド保護基は、除去でき、結合反応に使用される一部アミノ基を提供することか できる。 その他の公知の結合手の例には、７−メドキシカルボニルー３．６−シオキサヘ ブチル結合手６−−　（ＯＣＨｔ−ＣＨ２’）、０ＣＨ２Ｃｏｗ　ＣＨＩ　；２ −（４−メトキシカルボニルブタンカルボキシアミド）：ｘ、チルａ０（−ＱＣ ）−Ｉ２ＣＨ，ＮＨＣ（０）（ＣＨ□）、ｃｏ、ｃｏ３　＋適当なモノマーとの 基共重合によりコポリマーを導くアリル結合手６′（ＯＣＨ２ＣＨ＝　ＣＨｔ　 ）　；その他のアリル結合手６！［−０（ＣＨ２ＣＨ，Ｏ）、ＣＨ，ＣＨ＝ＣＨ ，］が包含される。さらに、アリル結合手は、２−アミノエタンチオールの存在 の下で誘導体化させて６３、結合手ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｓ　ＣＨ２ＣＨ２Ｎ　 Ｈ２を提供することもできる。 さらにまた、Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ等により示されているように６４、Ｒ基は還元 性糖末端に結合手を有する糖またはオリゴ糖であることもできる。 好適には、このアグリコン部分は疎水性基であり、最も好ましくは、−ＣＨ２） ８　Ｃ００ＣＲ，、−（ＣＨ２）６０ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ，、および−ＣＨ２’） ８　ＣＨ２０Ｈからなる群から選ばれる疎水性基である。特に、疎水性基、さら に特に−（ＣＨ２’）。 Ｃ００ＣＨ，、また１、ｔ−（ＣＨ２）Ｓ　０ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２あるいはまた −（ＣＨ２）ｓ　ＣＨ２０８基を使用すると、このシアリルトランスフェラーゼ によるシア１リル酸の転移に係わる受容性を幾分増強させることができる。 いかなる理論にも制限されないものとして、我々は、血液型抗原決定基関連オリ ゴ糖グリコンドが、抗原に対する免疫応答、特に炎症免疫応答を効果的に抑制し 、このような免疫応答を処置するために適する　手段を提供するものと信してい る。 好ましくは、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドはまた、結合抑制性オリ ゴ糖グリコシドであるという特徴を存する。すなわちこのオリゴ糖グリコシドは 細胞表面レクチンに対し、白血球が他の細胞と結合するのを阻止するのに充分に 結合する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドである。このような結合抑制 性オリゴ糖グリコシドは、白血球性免疫応答の抑制に特に有効である。 さらにまた、いかなる理論にも制限されないものとして、我々は、細胞表面への 白血球の結合（多分、ＬＥＣ−ＣＡＭ蛋白質および（または）細胞表面上のその 他の蛋白質による）が、白血球性炎症応答および免疫性炎症応答を包含する、白 血球性免疫応答の必要不可欠の一部であるものと信じている。従って、結合抑制 性オリゴ糖グリコシドは、白血球性免疫応答の処置に好適である。 細胞表面に充分に結合して、白血球がその細胞にヘテロタイプで、またはホモタ イプで結合するのを抑制する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの能力は 、簡単なインビトロ実験によって容易に測定することかできる。例えば、リンパ 球の抗原に対する応答能力を測定するインビトロのリンパ球増殖実験を、この応 答の阻止または増強に係わるオリゴ糖グリコシドの能力の評価に採用することが できる。この能力の中の必須部分は、抗原提供細胞の認識能力およびこの細胞に 対する結合能力であり、この認識がリンパ球増殖の引き金となる。このようなイ ンビトロ実験は、Ｚｉｏｌａ等により開示されているように５５、当技術で公知 である。さらに、白血球の細胞表面への結合能力を測定する、別のインビトロ実 験を採用して、このような細胞の表面にヘテロタイプで、またはホモタイプで、 白血球を結合させる当該細胞の能力を阻害することに係わる、候補者オリゴ糖グ リコシドの能力を評価することもできる。このようなインビトロ実験も当技術て 公知てあり、Ｃａｍｐａｎｅｒｏ等により２′およびまたＬｏｗｅ等により１８ 開示されている。Ｃａｍｐａｎｅｒｏ等は、白血球の別の白血球へのホモタイプ 結合の測定方法を開示しており、モしてＬｏｗｅ等は、白血球の別の細胞の表面 へのへテロタイプ結合の測定方法を開示している。 これらのインビトロ実験は一般に、候補者オリゴ糖グリコシドの存在または非存 在（対照）の下に、例えば約ｌＯμｇ／ｍｌの候補者オリゴ糖グリコシド濃度で 、細胞結合を測定することによって行われる。両方の場合に、細胞表面に対する 白血球結合の程度を測定し、その白血球結合を、対照と比較して少なくとも２０ ％（好ましくは少なくとも約３０％、さらに好ましくは少なくとも約５０％）減 少させる候補者オリゴ糖グリコシドを結合抑制性オリゴ糖グリコシドであると見 做す。本発明において使用される血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドに有 用な語単位（すなわち糖）には、例として、グルコース、ガラクトース、Ｎ−ア セチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、フコース、シアリル酸 （以下で定義する）、３−デオキシ−Ｄ、Ｌ−オクツロソン酸などのあらゆる天 然および合成誘導体が包含される。それらのピラノース壓に加えて、血液型抗原 決定基関連オリゴ糖グリコシド中の語単位はいずれも、そのＬ型であるフコース を除いて、それらのＤ型である。 好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、３−８個の語単位を含有す るもの、特にβＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡｃ基またはβＧａｌ’（１→３） βＧＩｃＮＡｃ基を含有するものを包含する。本発明で使用するのに特に好適な 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドには、図ｉｔおよび１２に記載のもの が含まれる。図１１において、Ｒはアグリコン、好ましくは上記定義のとおりの アグリコンであり、Ｒ，はそれぞれ独立して、水素、糖および適合性糖からなる 群から選ばれ、モしてＲ２はそれぞれ独立して、水素、糖および適合性糖からな る群から選ばれ、そしてＲ１およびＲ２の少なくとも一方は糖である。 特に好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは次式で示されるものを包 含する： 式中ＹおよびＲは上記定義のとおりである。 さらに特に好適な血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、特にオリゴ糖の 非還元性糖末端として、Ｎ−アセチルノイラミン酸残基を存するものである。 ［適合性糖Ｊ　（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　５ａｃｃｈａｒｉｄｅ　）の用語は、 存在する血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドが置換基を有する場合に、生 成する構造体が依然として免疫応答を干渉して、免疫応答を減少もしくは阻止す ることができる置換基を有する語単位を意味する。明白なように、特定の糖また は糖組み合わせの置換か血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの特性を変更 させて、免疫応答を阻止することかできないような構造が生成される場合には、 このような糖置換基または糖組み合わせ置換基は、少なくとも血液型抗原決定基 関連オリゴ糖グリコシド構造のこの点に関して、不適合性置換基であると見做す 。 「シアリル酸」の用語は、（Ｎ−アセチル化）５−アミノ−３，５−ジデオキシ ーＤ−グリセローＤ−ガラクトーノヌロソン酸（ｎｏｎｕｌｏｓｏｎｉｃ　ａｃ ｉｄ）　（”Ｎｅｕ５Ａｃ”）およびその誘導体を表す。シアリル酸の誘導体を 表すために、本明細書で使用されている命名法は、Ｒｅ１Ｊｔｅｒ等により開示 された方法２５によるものである。 Ｂ、　オリゴ糖グリコントの製造 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを包含するオリゴ糖グリコシドは、完 全化学合成により、または化学／酵素合成により、容易に製造することかできる 。化学／酵素合成方法では、グリコシルトランスフエラーセを使用して、糖また はオリゴ糖に、−個または二個以上の語単位を順次付加する。化学合成は、完全 オリゴ糖グリフントの製造に二または引き続いてオリゴ糖グリコシドに化学的に 、または酵素を用いて結合させることがてきる語単位の製造に、または−個また は二個以上の語単位を酵素により結合させることがてきるオリゴ糖グリコシドの 化学的製造に適する方法である。 語単位の化学的修飾は当技術で周知である。−例として、９−アジｌ”　−Ｎｅ ｕ５Ａｃ、９−アミノ−Ｎｅｕ５ＡＣ１９−デオキシ−Ｎ　ｅ　ＩＩ　５　Ａ　 ｃ、９−フルオロ−Ｎｅｕ５Ａｃ、９−ブロモ−Ｎｅｕ５Ａｃ、８−デオキシ− Ｎｅｕ５Ａｃ、８−エビ−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−デオキ’／−Ｎｅｕ５Ａｃ、　７ −ニビーＮｅｕ５Ａｃ、　７．　８−ビス−エビ−Ｎｅｕ５Ａｃ、　４−０−メ チル−Ｎｅｕ５Ａｃ、　４−Ｎ−アセチル−Ｎｅｕ５Ａｃ、４，７−シーデオギ シーＮｅｕ５Ａｃ、４−オキソ−Ｎｅｕ５Ａｃ、　３−ヒト°ロキンーＮｅｕ５ Ａｃ、３−フルオロ−Ｎｅｕ５Ａｃ酸、ならびにＮｅｕ５Ａｃの６−チオ類縁体 を包含する化学修飾されたＮｅｕ５Ａｃは、当技術で知られている。 その他の語単位の化学的修飾も当技術で知られている。 さらにまた、オリゴ糖グリコシドを製造するための化学的方法も当技術で周知で あり、この方法は一般に、個個の構造の合成に適しており、また個々の構造の合 成を最適にすることかできる。一般に、オリゴ糖グリコシドの全体または一部の 化学合成は、初めに還元性糖の芳香族炭素原子にグリコシド結合を形成すること を包含する。 詳細に言えば、適当に保護されている形態の天然産生の、または化学修飾された 糖溝造体（グリコジル供与体）をその還元性単位の芳香族中心で修飾して、ハラ イド、トリクロロアセトイミデート、チオグリコシドなどを含む脱離性基を導入 する。この供与体を次いて、当技術で周知の接触条件の下に、アグリコンまたは グリコシド結合を生成させる位置に一個の遊離ヒドロキシル基を有する相当する 形態の炭水化物受容体と反応させる。多数の種種のアグリコン部分は当技術で知 られており、還元性単位の芳香族中心に、適当な配置で付加することかできる。 炭水化物合成技術において周知の、適応する保護基を適当に使用すると、合成さ れた構造を選択的に修飾することができ、あるいはこの受容構造体に追加の糖単 位または糖ブロックを付加することかできる。グリコシド結合を生成させる従来 の方法の詳細な検討は、アトーニイトケット（Ａｔｔｏｒｎｅｙ　Ｄｏｃｋｅｔ ）　Ｎｏ、ＯＯＯ４７５−０１１および０００４７５−０２９として、それぞれ ［修飾シアリルルイス５化合物」および「修飾シアリルルイス１化合物」の題名 で、両方ともに１９９２年５月２２日付けて出願された、Ｖｅｎｏｔ等による　 Ｕ、　Ｓ、　５ｅｒｉａｉＮｏ、　０７／　およびＵ、　Ｓ、　Ｓｅｒ　ｉａ　 ｌＮｏ、　７／に記載されている。これらの場合の両方の記載をそれらの全体を 引用してここに組み入れる。 グリコシド結合を生成させた後に、この糖グリコシドを使用して、追加の糖単位 （一つまたは二つ以上）の結合を行うか、または選択された位置における化学的 修飾を行うことかでき、あるいは慣用の保護基の分離の後に、酵素を用いる合成 に使用することかてきる。一般に、天然産生の、または化学的に修飾された、糖 単位を糖グリコシド゛に化学的に結合させるには、刊行物中で充分に報告され、 確立されている化学的方法を採用して、達成される。例として、次の刊行物を参 照することがてきる：Ｏｋａｍｏｔｏ等２７、Ｒａｔｃｌｉｆｆｅ等”、　Ａｂ ｂａｓ等２９、Ｐａｕｌｓｏｎ”　、Ｓｃｈｍｉｄｔ”　、Ｆｕｅｇｅｄｉ　等 ３２、Ｋａｍｅｙａｍａ等３３、およびＲａｔｃｌｉｆｆ等６４゜これらの刊行 物のそれぞれの記載を、それらの全体を引用してここに組み入れる。 他方、酵素を用いる結合は、グリコジルトランスフェラーゼを使用することによ って達成される。この酵素は、それらの相当するヌクレオチド供与体として活性 化されている糖単位を、一般に糖またはオリゴ糖の非還元性糖部分の部位で、特 定の糖またはオリゴ糖受容体に転移させる。例えば、Ｔｏｏｎｅ等３４を参照で きる。さらにまた、糖またはオリゴ糖受容体の、糖供与体の、または酵素反応生 成物の、選択的化学修飾を行うこともでき、これにグリコトランスフェラーゼの 代表例には、シアリルトランスフェラーゼがあり、この酵素は、そのシチジンモ ノホスフェート（ＣＭＰ）誘導体として活性化されているＮ−アセチルノイラミ ン酸を、糖脂質または糖蛋白質の末端オリゴ糖構造基に転移させる酵素群を構成 するものである。複合糖質に下記の末端構造基を構築する特別のトランスフェラ ーゼが同定されている：ｏＮｅｕ５Ａｃ（２−６）ａＧａｌＮＡｃ−ｃ＃ｅｕ５ Ａｃ（２−６）ノ９Ｇ署ｃＮＡｃ−。 Ｎｅｕ５Ａｃおよびその類縁体の酵素による転移には、先立ってそれらのヌクレ オチド（ＣＭＰ）誘導体を合成する必要がある。Ｎｅｕ５Ａｃの活性化は通常、 酵素ＣＭ　Ｐ−シアリル酸シンターゼを使用することによって行われる。このン ンターゼは容易に入手することができ、Ｎｅｕ５Ａｃの各種類縁体、例えば９− 置換Ｎｅｕ５Ａｃ、　７−　：ｒ−ビーＮｅｕ５Ａｃ、７．８−ビス−エビ−Ｎ ｅｕ５Ａｃ、４−０−メチル−Ｎｅｕ５Ａｃ。 ４−デオキシ−Ｎｅｕ５Ａｃ、４−アセトアミド−Ｎｅｕ５Ａｃ、７−ジオキシ −Ｎｅｕ５Ａｃ、４．７−シブオキシ−Ｎｅｕ５ＡＣならびにＮｅｕ５Ａｃの６ −チオ誘導体の活性化の例は刊行物に記載されている。別法として、Ｎｅｕ５Ａ ｃの類縁体かＣＭＰ−シアリル酸ソンターゼによる活性化を施されていない場合 に、このＮｅｕ５Ａｃの類縁体を、当技術で公知の化学的手段によりオリゴ糖に 結合させることもてきる。 Ｎｅｕ５Ａｃまたはその類縁体のヌクレオチド誘導体と糖受容体とを、Ｎｅυ５ Ａｃまたはその類縁体か受容体に転移される条件の下に、適当なシアリルトラン スフェラーゼを存在させて、相互に配合する。明白なように、使用する糖受容体 は、使用される特定のシアリルトランスフェラーゼの基質として機能するもので なければならない。 この点に関して、Ｎｅｕ５Ａｃは通常、天然の受容体（すなわち、糖蛋白質およ び酵素により認識される末端受容性三糖構造基およびアグリコンを有していない 末端受容性三糖を存するグリｈン鎖を有する、他の複合糖質、これらの場合に、 Ｒ＝Ｈである）に酵素により転移されるか、若干のシアリルトランスフェラーゼ は、受容体の構造中の成る種の修飾に耐えることができるが、別のシアリルトラ ンスフェラーゼは、−ｍの受容体に対してのみの特異性を有するものと認識され ている。化学的に修飾された受容体（「人工受容体」）、例えばオリゴ糖部分が 修飾されていてもよいオリゴ糖グリコシドは、幾つかの場合に、シアリルトラン スフェラーゼにより許容される。 他方、受容体のあらゆる化学的修飾が許容されるわけではない。例えは、βＧａ １（１→３／４）βＧＩｃＮＡＣα（２→３）シアリルトランスフェラーゼはＮ ｅｕ５Ａｃを末端βＧａ１（１→４）βＧＩｃＮＡｃ−二糖構造基に転移させる ことができる。しかしながら、この場合に、βガラクト−スの３．４および６　 位置に存在するヒドロキシル基は、この酵素による認識に必要不可欠であり、従 ってこれらの位置の一つまたは二つ以上の部位での化学的修飾は酵素による認識 の欠落をもたらすことができる。 同様に、Ｎｅｕ５Ａｃの類縁体を酵素により転移させようとする場合には、この 類縁体のＣＭＰ誘導体がまた、シアリルトランスフェラーゼにより認識される必 要がある。 シアリルトランスフェラーゼは、Ｎｅｕ５Ａｃを転移もしくは供与するように自 然に設計されているので、Ｎｅｕ５Ａｃの修飾はいづれも、「人工受容体」の生 成をもたらす。この点に関して、成る種のシアリルトランスフェラーゼは、Ｎｅ ｕ５ＡＣに対するいくらかの修飾を許容することかでき、依然としてこのＮｅｕ ５Ａｃを、適当な末端受容体構造基を存する１％！詣質に転移させることができ るものと認識される。 驚くべきことに、シアリルトランスフェラーゼは、人工供与体を人工受容体に転 移させるに充分の認識柔軟性を有することが見出だされた。このような柔軟性は 、オリゴ糖グリコシドを含有する多数のシアリル酸の合成を容易にすることがで きる。 上記したように、Ｎｅｕ５Ａｃまたはその類縁体の適当なヌクレオチド誘導体は 、Ｎｅｕ５Ａｃまたはその類縁体か受容体に転移される条件の下に、適当なシア リルトランスフェラーゼを存在させて、適当な受容体（すなわち、シアリルトラ ンスフェラーゼにより認識される非還元性末端に末端糖単位（１個または２個以 上）を有するオリゴ糖グリコシド）と相互に配合する。当技術で知られている適 当な条件には、適当な緩衝液、例えば０．１Ｍナトリウムカ゛コシレート（ｃａ ｃｏｄｙｌａｔｅ）中の糖受容体とシアリル酸のＣＭＰ誘導体との混合物に、適 当なｐＨおよび温度条件、例えば６．５−７．５のｐＨおよび２５−４５°Ｃ１ 好ましくは３５−４０°Ｃの温度て、１２時間ないし４日間の条件の下に、適当 なシアリルトランスフェラーゼを添加することが包含される。生成するオリゴ糖 は、ＨＰＬＣ、ゲル−、イオン交換−１逆相−または吸着−クロマトグラフィを 含む慣用の方法によって単離し、また精製することかできる。 同様に、シアリルトランスフェラーゼによる転移に係わり上記した方法と同様の 方法によって、適当なグリコジルトランスフェラーゼを使用して、別種の糖を糖 またはオリゴ糖構造中に転移させることもできる。この点に関して、シアリルト ランスフェラーゼおよびまたその他のグリコジルトランスフェラーゼは、当業者 に周知であり、Ｔｏｏｎｅ等″４およびＢｅｙｅｒ等１ｓにより記載されている 。 Ｃ１効用 いかなる理論にも制限されないものとして、オリゴ糖グリコシドは、多数の方法 で細胞性免疫応答に作用するものと信じられる。オリゴ糖グリコシドは、免疫系 が最初に抗原にさらされた時点で同時的にこのオリゴ糖グリコシドか投与される と、その免疫応答がその抗原に係わり教育される能力を阻害することができる。 また、オリゴ糖グリコシドは、免疫系が抗原に二次またはそれ以上さらされた後 に投与されると、細胞性免疫応答（例えば、ＤＴＨ応答の炎症部分）のエフェク ター相を抑制することがてきる。さらにまた、オリゴ糖グリコシドは、免疫系か 抗原に二次またはそれ以上さらされた後に投与されると、その抗原に対する寛容 性を誘発させることができる。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドによる免疫応答の炎症部分の抑制は、 二次免疫応答（すなわち、抗原に対する二回目の露呈）の開始に必要であるもの と信じられる。血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは一般に、炎症エピソ ード後の少なくとも約０．５時間、好ましくは炎症エピソード後の少なくとも約 １時間、最も好ましくは炎症エピソード後の少なくとも約５時間の時点で、患者 に投与する。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、約０．５ｍｇ−約５０ｍｇ／体重 ｋｇ、好ましくは約０．５−約５ｍｇ／体重ｋｇの用量範囲で投与されると、抗 原に対する細胞性免疫応答（例えばＤＴＨ応答の炎症部分）の抑制に有効である 。使用する特定の投与量は、処置しようとする特定の細胞性免疫応答により、お よびまたＹ１害な免疫応答の　重篤度、患者の年齢および一般健康状態なとの因 子に依存して担当医師の判断により、調節される。本発明に係わる血液型抗原決 定基関連オリゴ糖グリコシドは一般に、非口紅投与、例えば鼻内投与、肺投与、 経皮投与および静脈投与されるか、その他の投与形態も意図される。好適態様に おいて、哺乳動物に対するチャレンジ投与後の２４時間の時点て、そして本発明 に係わるオリゴ糖グリコシド投与後の１９時間の時点て測定して、細胞性免疫応 答、例えばＤＴＨ応答の炎症部分の抑制は、対照に対して少なくとも約１０％減 少される。 抗原に対する細胞性免疫応答の炎症部分の抑制に加えて、本発明に係わる血液型 抗原決定基関連オリゴ糖グリコノドの投与はまた、同一抗原の追加のチャレンジ に対する寛容性を付与する。この点に関して、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドの投与後の数週間における、同一抗原の再チャレンジは、有意に減少さ れた免疫応答をもたらす。 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、抗原への最初の露呈と同時的に投 与すると、この抗原に対する細胞性免疫応答か抑制され、この抗原に対する追加 のチャレンジに対する寛容性かもたらされる。この点に関し”て、「感受性を減 少させる」の用語１よ、免疫応答を誘発させるのに充分の有効量の抗原とともに 、有効量て哺乳動物に投与された場合に、当該化合物か、この哺乳動物の免疫系 を、化合物と同時に投与された抗原に対して教育され、感作されるようになる免 疫系の能力を減少させることを意味する。化合物の「有効量」の用語は、足裏ふ くらみ部チャレンジ試験により試験して、ＤＴＨのような抗原に対する細胞性免 疫応答の減少により測定されたものとして、同時的に投与された抗原に対する哺 乳動物の感受性（免疫学的教育）を減少させる量を意味する。 好適態様において、この感受性の減少は、少なくとも約２０９６、さらに好まし くは少なくとも約３０％である。 一般に、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドは、約０．５ｍｇ−約５０ｍ ｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０．５ｍｇ−約５ｍｇ／体重ｋｇの用量範囲で投与 された場合に、感受性の減少に有効である。使用される特定の投与量は、処置さ れる感作、および患者の年齢および一般状態によって担当医師の判断により調節 される。感受性の抑制に係わる、化合物の抗原との「同時的」投与は、当該化合 物を抗原の投与後の３時間以内の時点で、１回または連続的に、投与することを 表し、好ましくは当該化合物は抗原投与後の１時間以内に投与する。 上記の本発明の方法は一般に、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの有効 量を非口経投与するのに適する医：Ｊｉ組成物の使用により達成される。これら の組成物は、水、緩衝されている塩類溶液などの調剤用不活性担体および患者に 投与された時に、上記用量のオリゴ糖グリコシドが付与されるような、有効量の 血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドからなる。適当な医薬組成物は、助剤 、保存剤などの任意の成分をさらに介在することかできるものとする。 その他の適当な医薬組成物どしては、経Ｌ１組成物、経皮組成物またはハントエ イジなとを包含でき、これらは当技術で公知である。 以下の例は、本発明を説明するものであり、いがなる方法でも、本発明の範囲を 制限しようとするものではない。 これらの例において、別段の定義が以下でなされていないかぎり、使用されてい る略語は、一般に受入れられている下記の意味を存するものとする：ＢＳＡ　＝ ウソ血清アルブミン ｄ　＝二重線 ｄｄ　＝＝二重線の二重線 ｄｄｄ　＝二重線の二重線の二重線 ＤＴＨ：＝遅延型過敏症 ｅｑ　＝エカトリアル ｉ、ｒ、　＝赤外部 ｍ　＝多重線 ｑ　＝四重線 ｔ、Ｉ、’ｃ、　：薄層クロマトグラフィＡＧ］Ｘ８（ホーメート形）　＝Ｂｉ ｏ−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。 Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、　ＣＡがら入手できるイオン交換樹脂ＡＧＩＸ８（ホーメー ト形）ドーペックス（Ｄｏｗｅｘ）　５０　ｘ　８　（Ｈ”形）　＝＝Ｄｏｗ　 Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｍｉｄｌａｎｄ、Ｍｌから入手できるイオン交換樹脂ドーペ ックス５０Ｘ８（Ｈ４形） ＩＲ−Ｃ５０樹脂（Ｈ”形）　＝Ｒｏｈｍ　＆　Ｈａａｓ、Ｐｈ１ｌａｄ２０ｅ ｌｐｈｉａ、ＰＡがら入手てきるイオン交換樹脂ＩＰＵ−Ｃ５０’（Ｈ“形） 市販されているものは、製造業者によるリストに記載されており、また相当する 場合に、注文番号を記載する。 利用した製造業者の例を以下に示す： ａｐａｎ メルク（Ｍｅｒｃｋ　）　＝Ｅ、Ｍｅｒｃｋ　ＡＧ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅ ｒｍａｎｙミリボール（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　）　＝Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏ ｒｐ、Ｂｅｄｆｏｒｄ。 ＭＡ つオーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）　＝Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｅｓ、　Ｉ ｎｃ、。 Ｍｉ　１ｆｏｒｄ、ＭＡ 例 下記の例において、例１−１９は、多くのオリゴ糖グリコツトの合成を例示する ものてあり、一方例２０−３７は、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの 投与による抗原に対する細胞性免疫応答の抑制および同一抗原による後続のチャ レンジに対する寛容性の誘発を例示するものである。例１−１３において、使用 したオリゴ糖グリコシドは、図１４−２４に記載されているアラビア数字で示さ れており、また例２０−３５のオリゴ糖グリコシドは、図ｌｌ−１３に記載され ているローマ数字て示されている。 例１−１３の一つまたは二つ以上において、分析用ｔ。 １、ｃには、シリカゲル（Ｍｅｒｃｋ　、　６０　Ｆ２％４　）の予めコートし たプレートを使用し、またスポットはエタノール中の５９６硫酸溶液の噴霧後の 炭化により検出した。カラムクロマトグラフィには、シリカゲル６０（λ（ｅｒ ｃｋ、４０−６３μｍ）を使用した。イアトロビーズ（Ｉａｔｒｏｂｅａｄｓ） はイアトロンからのものであった（注文番号６Ｒ３−８０６０）　、ミレックス （Ｍｉ　ｌ　１ｅｘ）　−Ｇ　Ｖフィルター（０２２μｍ）はミリボールからの ものであった。 Ｃ＋ｓセブーバック（Ｓｅｐ−Ｐａｋ）カートリッジおよびバルクＣＩＩシリカ ゲルはウォータース　アソシエーツからのものであった。 化学反応には、市販の試薬を使用し、溶剤は慣用の方法で精製し、乾燥させた。 別段の記載がないかぎり、反応混合物は、ジクロロメタンにより稀釈し、桶型炭 酸ナトリウム溶液により、次いで水により洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥 させた後に、溶剤を減圧の下に、３５°Ｃの浴温度または必要な場合には、それ 以下の温度で、蒸発により除去した。 ’　Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、は、内部標準として、Ｄ、Ｏ中で２．２２５にセットした アセトン、またはＣＤＣｌ２中のテトラメチルシランを用いて、別段の記載がな いかぎり、室温において、３００　Ｍ　Ｈｚ　（ＢｒｕｋｅｒＡＭ−３００）で 測定した。 化学シフトおよび結合定数（スプリットにより測定）は、これらが−次オーダー であるものとして記録し、部分ｎ。 叱「、データのみを記録した。＋３（：、叱「、スペクトルは、対照としてり、 Ｏ中で６７．４にセットしたジオキサンまたはＣＤＣｌ２中のテトラメチルシラ ンを用いて、７５．５ＭＨｚで記録した。 Ａ、　Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体の合成 別設の記載がないかぎり、Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体は、必要に応じて出発物質を適 当に置換して、公知方法にしたがい製造した。刊行物に記載されている方法を適 当に変更して、次の誘導体を製造した： 図１４は、Ｎｅｕ５Ａｃの誘導体の合成に使用された一般合成経路を示すもので ある。下記の例１−４において、下線付きのアラビア数字で示されている化合物 は、表Ｉおよび図１４に記載されている。 例１ ５−アセトアミド−９−アジド−３，５，９−１−リゾオキシ−Ｄ−グリセロ− Ｄ−ガラクト−２−ノヌロビラノシロン酸（９−Ｎ、　−Ｎｅｕ５Ａｃ）　１　 ｂの合成乾燥ジクロロメタン（１３ｍｌ）中のグリコジルクロライド３８　（２ ，８３ｇ、５．５７ミリモル）を、ジクロロメタン（８ｍｌ）中のベンジルアル コール（５，０ｍ１．４８．２ミリモル）、分子ふるい４オングストローム（１ ８，５ｇ、粉砕したもの）、乾燥炭酸銀（４，２ｇ、１５．２ミリモル）の混合 物中に添加した。 この混合物を暗所で４日間攪拌し、ジクロロメタン（５０ｍｌ）により稀釈し、 次いでセライトに通して濾過した。慣用の仕上げ処理の後に、残留物を、溶出剤 としてヘキサンと酢酸エチルとの３＝２混合物を使用するシリカゲルにおけるク ロマトグラフィに付した。生成物を次いて、同一溶剤の４：５混合物により溶出 し、純粋な物質（１，９６ｇ、６０％）および少量の不純物を含有する物質０． ３３ｇ（１０％）を得た。 ’Ｈｎ、ｍ、ｒ、　：　５．　４３６　（ｄｄｄ、Ｉ　Ｈ，Ｊｌ、＊８．５．Ｊ ｓ、２．５．Ｊｓ、ｓ　５．５Ｈｚ、Ｈ８）　。 ５．３１７　（ｄｄ、ＩＨ，、Ｌ、ｆｆ　１．８）ｔＺ、Ｈ−７）。 ５．１１０　（ｄ、ＩＨ，Ｊｓ、＋、ｓ９．５Ｈｚ、ＮＨ）。 ４．８４９　（ｄｄｄ、Ｌ　Ｈ，Ｊｘ−−、ａ　’Ｉ　２．０゜Ｊｉ、、４４． ５．Ｊｌ、５９．５Ｈ２，Ｈ−４）。 ４．７８８および４．３９７　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、。 １２．０Ｈｚ、ベンジル）、３．６４２　（Ｓ。 ｃｏ、ｃ旦２　）、　２．６２９　（ｄｄ、ＩＨ，、Ｌ、、、３．。 １２．５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．１４０．２．１１３゜２．０１７．１．９９ ７．１．８５７．（５ｓ、１５Ｈ。 ４０Ａｃ、ＩＮＡｃ）、１．９８６　（ｄｄ、ＩＨ，Ｈ−３ａｘ）。 上記物質（１，５ｇ、２．５８ミリモル）を触媒量のナトリウムメトキシドを含 有する乾燥メタノール（２０ｍｌ）中で、２２°Ｃにおいて５時間、脱０−アセ チル化させた。ドーペックス５０Ｘ８（Ｈ’形）により脱イオン化させた後に、 溶剤を蒸発させ、生成物３９（１，０ｇ、９４％）を得た。この生成物を次の工 程で使用した；　’Ｈｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩｓ　）　：　４８１５および４ 、　６１９　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、−１１，５Ｈｚ、ベンジル）、３．８０２　 （Ｓ、ＣＯ２ＣＨ２）　、３．５８２（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、ａ　９．Ｏ，、Ｌ、 ｔ　０．５Ｈｚ、Ｈ−６）、２．７５２　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３−１．３．、＋２ ．５゜Ｊｌ、、、４　４．　５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑ）、２．　０３９　（ｓ。 ３Ｈ，Ｎ　Ａｃ）、１．　８６　１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３−−．４１　１、　０ Ｈｚ、Ｈ−３ａｘ）。 ピリジン（０，１ｍ１）中のパラ−トルエンスルホニルクロライド（０，１２５ ｇ、０．６５ミリモル）の溶液を、ソリンジにより０°Ｃにおいて、ピリジン（ １，１ｍ１）中の４−ジメチルアミノピリジン（０，０１ｇ）、溶液−と９　（ ０，２４８ｇ、０．６０ミリモル）に加えた。 ０°Ｃて４時間攪拌した後に、メタノール（０，０１ｍ１）を加え、この混合物 を乾燥ｌ−ルエンとともに共蒸発させた。この残留物を迅速に、溶出剤としてア セトニトリルを使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、依然とし て若干の不純物を含有するトシレート（０．２１ｇ，６２９６）を得た。この生 成物（０．２１ｇｔ　ｏ．３７ミリモル）のジメチルホルムアミド（０．５ｍｌ ）溶液に、ナトリウムアジド（０．１９ｇ。 ２、９２ミリモル）を＋ＪＩ＋えた。この混合物を６５°Ｃにおいて１８時間攪 拌し、引き続いてセライトに通し、次いて溶剤を減圧の下に、蒸発させた。この 残留物を、溶出剤として酢酸エチルとアセトニトリルとの６．１混合物を使用す るシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、生成物４０　（０．１３６ｇ， ８５９６）を得た；ｉ．ｒ．θｃｍ−’２１　１０　（Ｎ３　）　；　’Ｈーｎ ．ｍ．ｒ．：５．　７７５（ｄ，Ｉ　Ｈ，ＪｓＮＩ＋９．０Ｈｚ，ＮＨ）、４． 、８　１　６および４．４７０　（ＡＢ，２Ｈ，Ｊ，。、　Ｉ　１．　５Ｈｚ。 ベンジル）、３．７　３　８　（Ｓ，ＣＯ２　ＣＨ２　）　。 ２、８　７　１　（ｄｄ，　ＩＨ，Ｊｚ−−　４　４．８，Ｊｚ−、ｚ−１３、 ０Ｈｚ，Ｈ−３ｅｐ）、２．　０８６　（ｓ，　３Ｈ。 ＮＡｃ）、１．　９６４　（ｄｄ．　ＩＨ，、Ｌ．、、４　１　１．　５Ｈｚ， 　Ｈ−３ａｘ）。 上記化合物上０　（０．１０５ｇ．０．２４ミリモル）を、０．２５Ｎ水酸化す ｌ・リウム（２ｍｌ）中で、２２°Ｃで３時間放置した。ドーペックス５０Ｘ８ （Ｈ″″形）の添加によりｐＨを６に調整し、次いて濾過した後に、生成物を凍 結乾燥させて採取し、次いで溶出剤としてクロロホルム、メタノールおよび水の ６５：３５：５混合物を使用するイアトロビーズにおけるクロマトグラフィに付 した。相当するフラクションから生成物（０．０８７ｇ，８６％）を得た。この 化合物（０．ｔｏｏｇ。 ０、２３５ミリモル）を、０．０２５Ｎ塩酸（３ｍｌ）中で、８０°Ｃて６時間 加熱した。この溶液を水酸化ナトリウムにより中和し、次いて凍結乾燥させた。 この生成物を溶出剤としてクロロホルム、メタノールおよび水の６５：３５：５ 混合物を使用するイアトロビーズ（０．６０ｇ）におけるクロマトグラフィに付 し、１ｂ（０．０６７ｇ，８５％）を得た；　’Ｈーｎ．ｍ．ｒ．：４、１０６ −３．８９５　（ｍ，５Ｈ）、３．６３９（ｄｄ，ＩＨ，Ｊｉ．＊　３．０，Ｊ ｓ．＊Ｉ　３．ＯＨｚ．Ｈ−９）、３．５２８　（ｄｄ，ＩＨ．Ｊ．、　６．０ Ｈｚ。 Ｈ−９“）、２．２４９　（ｄｄ，ＩＨ，Ｊ３。ｓ　４．５。 Ｊｓ、、、ｓ、、Ｉ　２．　５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．　０９０（ｓ、３Ｈ， ＮＡｃ）、１．　８５２　（ｄｄ、ＩＨ。 Ｊｌａｍ、１　１　１．　ＯＨｚ、Ｈ−３ａｘ）。 例２ ５−プロピオンアミド−３，５−ジデオキソーＤ−グリセロ−Ｄ−がラクト−２ −ノヌロビラノシロン酸５ｇ、０．１８ミリモル）の溶液を２２°Ｃで０．５時 間、次いて９５°Ｃて７時間放置した。ＩＲ−Ｃ５０ｔ１脂（Ｈ”形）の添加に よりｐＨを７．５に調整した。この樹脂の濾過後に得られた濾液を減圧の下に蒸 発させ、この残留物を五酸化リン上で乾燥させた。 ０°Ｃて攪拌した、乾燥メタノール（１，５ｍ１）とトリエチルアミン（０，２ ｍ１）との混合物中の−Ｌ記生成物の懸濁液に、無水プロピオン酸（０゜１２　 ｍ　ｌ　。 ０．９４ミリモル）を次いて、シリンジにより添加した。 ３時間後に、無水プロピオン酸（０，０２５ｍ１゜０．１９５ミリモル）をさら に添加し、このｌ昆合物をＯｏＣてさらに２時間攪拌した。この混合物をメタノ ールとともに共蒸発させ、残留物の水（２ｍ　ｌ　）中の溶液を、トー・＼ソク ス５０Ｘ８（Ｈ’形、６ｇ）に通した。採取したフラクションを減圧の下に蒸発 させ、この残留物を溶出剤としてクロロホルムとメタノールとの３：１混合物を 使用するイアトロヒーズ（５ｇ）におけるクロマトグラフィに付し、土工（０， ０６４６ｇ、８６．５％）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　：　４．８００，４ ．５７８　（ＡＢ。 ２Ｈ，Ｊ、、、ｌ　１．ＯＨｚ、ベンジル）、３゜５８０（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、 ｓ　９．　０．　Ｊａ、ｔ　１．　０Ｈｚ。 Ｈ６）２．　７７６　（ｄｄ、　ＩＨ，Ｊｚ−、ａ　４．５゜、Ｌ、＠、３．． １２．５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑ）、２．３１６（ｑ、２Ｈ，Ｊ７．５Ｈ２，ＣＨ２Ｃ ｏ）、、１．７６２（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｚ＝−、−１２，０Ｈ２）、　１．　１２ ９（ｔ、３Ｈ，ＣＨ３）。 上記ベンジルグリコシド（０，ｌｌ５ｇ、０．２７８ミリモル）の水（５ｍｌ） 中の溶液を、木炭（１０ｍｇ）上の５９６パラジウムの存在の下に、大気圧で、 ２２°Ｃにおいて５時間、水素添加した。セライトに通し、次いてミリボールに 通して濾過した後に得られた溶出液を凍結乾燥させ、化合物上±（０，０７４ｇ 、８２．５９６）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、：３．　７２−４．　１０　（ ｍ。 Ｈ−４，−５，−７，−８，−９）、３．６１４　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊｇ、ｓ、Ｇ、５．　Ｊ！ａ、ｌｌｂ　Ｉ　１．　７５Ｈｚ、＋　Ｈ−９ ａ）、３．５３０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、ｓ　９．ＯＪｓ、７１．０Ｈｚ、Ｈ− ６）、２．２５０−２．４００　［ｍ。 ２Ｈ１ｎｃ１．ｃ旦２　Ｃｏ　（ｑ、２．　３１５゜Ｊ７．５Ｈｚ）およびＨ３ ｅ　ｑ　（ｄ　ｄ　、Ｊ　２ｓｑ、　２６ｍ１１．５Ｈ２，Ｊ３゜４４．５Ｈｚ ）］、１．．８８０（ｔ、ＩＨ，Ｊａ、、、３．、Ｉ　１．５Ｈｚ、Ｈ３ａｘ） ＋例３ ５−アセトアミＩ’−３，５−ジデオキソーＤ−ガラクト−２−オクッロフン酸 （Ｃ８−Ｎｅｕ５Ａｃ）　Ｉ　ｉの合成３９からのＩｉの合成は基本的に、Ｈａ ｓｅｇａｗａ等の発行された方法３８に従うが、ここに記載されているものとは 異なる出発物質を使用する。特に、２，２−ジメトキソプロパン（３ｍｌ）中の −と９　（０，５２ｇ。 ０．１２５ミリモル）の懸濁液を２２°Ｃにおいて１．　５時間、パラトルエン スルホン酸（０，５ｍｇ）の存在の下に、攪拌した。若干のトリエチルアミンに より中和した後に、この混合物を蒸発させ、残留物を溶出剤としてクロロホルム とメタノールとの１６：１＃昆合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラ フィに付し、４２（０，０４９ｇ、８８％）を得た。 土２　（０，０５４ｇ、０．１８５ミリモル）を、無水酢酸Ｃｌ　ｍ　ｌ　）と ピリノンとの２．１混合物中で５０”Ｃにおいて５時間保持した。慣用の仕上げ 処理後に、この残留物を溶出剤として酢酸エチルを使用するシリカゲルにおける クロマトグラフィに付し、アセチル化生成物（０，０９１ｇ、９２９６）を得た ；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、：５．４２０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｓ、ｔ　１．５．Ｊ７ ．８３．５Ｈｚ、Ｈ７）、５．１９６　（ｄ、ＩＨ，ＪＲ，−−９，０Ｈｚ、Ｎ Ｈ）、５．００９　（ｄｄｄ、ＩＨ，Ｊ、３．。 １３．０．Ｊ４．３．．５．Ｏ，Ｊ４．６　１０．０Ｈｚ、Ｈ−４）、４．７９ ７および４．４９８　（ＡＢ、２Ｈ。 Ｊ、、、Ｉ　１．５Ｈｚ、ヘンシル）、３．７７６　（ｓ。 ３Ｈ，ＣＯ□　ＣＨ２）、２．　７２４　（ｄｄ、ＩＨ。 Ｊｊａｍ、ｆｆ＋ｏ　１３．　ＯＨ２，Ｈ３ｅｑ）、２．　１５１゜２、　０３ ２．　１．　８９５　（３ｓ、９Ｈ，２０Ａｃ。 ＩＮＡｃ）、２．　０３２　（ｔ、ＩＨ，Ｈ−３ａｘ）。 １．３６３および１．３５０　（２ｓ、６Ｈ，メチル）。 上記生成物（０，０９１ｇ、０．１６９ミリモル）を、７０％水性酢酸中で４０ °Ｃにおいて４時間加熱した。この混合物を減圧の下に、トルエンとともに共蒸 発させた。 この残留物を乾燥させ、乾燥メタノール中に溶解し、次いて２２°Ｃにおいて２ 時間、ナトリウムメタペリオデ−１・（０゜０５９ｇ、０．ｊ７５ミリモル）の 存在の下に攪拌した。この混合物を、メタノールにより洗浄したセライトのバッ ドに通した。濾液を集め、ホウ水素化ナトリウｌ、（０，０３６ｇ、０．９５ミ リモル）の存在の下に、０°Ｃて２５分間攪拌した。この混合物を、若干量の酢 酸（０，２ｍ１）とともに０°Ｃて攪拌し、次いて溶剤を蒸発させ、残留物を減 圧の下に１５分間乾燥させ、次いてピリジンと無水酢酸との５：１混合物（６ｍ ｌ）中で、２２°Ｃにおいて２０時間アセチル化させた。慣用の仕上げ処理後に 、この残留物を採取し、溶出剤として酢酸エチルを使用するシリカゲルにおける クロマトグラフィに付し、依然として若干量の非分離夾雑物を３存する、生成物 を得た。乾燥させた、この生成物（０，０７４ｇ。 依然として若干量の非分離夾雑物を３存する）を、乾燥メタノール（５ミリ）中 に溶解し、次いでナトリウム（３ｍｇ）の存在の下に、室温で３時間攪拌した。 ドーペックス５０Ｘ８（Ｈ＋形）により脱イオン化し、次いで濾過した後に、溶 剤を減圧の下に蒸発させ、この残留物を溶出剤としてクロロホルムとメタノール との１５：ｌ混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、純 粋な生成物土工（０，０４７ｇ、７８％）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　＋　 （ＣＤ＊　ＯＤ）　：　４．　７２４および４．　４１６　（ＡＢ、　２Ｈ，Ｊ 、、、　Ｉ　１．５Ｈｚ、べＨｚ、Ｈ−６）、２．６４２　（ｄｄ、ＩＨ，ＬＬ ｅａ、４４．５．Ｊ３．、、！、、１２．５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑ）。 １、　９３８　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．　６９９　（ｔ。 ＩＨｌ　Ｊｚｓｘ、＜　１　２．　５Ｈｚ、Ｈ３ａ　ｘ）。 上記生成物（０，０２２ｇ、０．０５７ミリモル）を、０．２５Ｎ水酸化ナトリ ウム（２ミリ）中で２２°Ｃにおいて５時間攪拌し、この溶液をトーペックス５ ｏ×８（Ｈ’形）により中和し、次いて濾液を凍結乾燥させて、白色固形物（０ ，０１９ｇ、９０％）を得た。この生成物を、水（２ミリ）中に溶解し、次いで 木炭（４ｍｇ）上の５％パラジウムの存在の下に、２２℃において３時間、水素 添加した。この混合物をセライトに通し、次いてミリボールに通して濾過した。 この濾液を凍結乾燥さた；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　：　３．　４６２−４．　０ ９３　（ｍ。 ６Ｈ）、２．　２８７　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ、、、、、、４．　５゜＋ｌ＊ａ、３ ａｍ　ｌ　２．　５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．　０５２（ｓ、３Ｈ＋　ＮＡｃ） 、１．　８５３　（ｔ、ＩＨ。 Ｊｌ、。ｓ　１　２．　５Ｈｚ、Ｈ−３ａｘ）。 例４ ５−アセトアミド−３，５，７−）リゾオキシ−β−Ｄ−ガラクトー２−ノヌノ ビラノシロン酸（７−ｄ−Ｎｅｕ５Ａｃ）　１　ｄの合成 １ｄの合成は基本的に、Ｚｂｉｒａｌ等の発行された方法３１に従うが、異なる 出発物質を使用する。特に、ジメチルホルムアミド（２ミリ）中の４２（０，１ １ｇ。 ０．１９ミリモル）の溶液に、イミダゾール（０，１３ｇ、１．９３ミリモル） およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライｌ’（０，１３５ｇ、０．８９ ミリモル）を添加する。室温で４時間後に、溶剤を減圧の下に蒸発させ、この残 留物をクロロホルムに溶解し、次いで慣用の仕上げ処理に付した。この生成物を 酢酸エチルとへキサンとの１・１混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマト グラフィに付し、モノシリル化誘導体（０，１０１ｇ、９２９６）を得た：　［ α］。−”２．６６　（ｃ、０．６．　クロロホルム）；’Ｈ−ｎ、ｍ。 ｒ、：　５．Ｉ　９５　（ｄ、ＩＨ，ＪｓＮＨ７Ｈｚ、ＮＨ）　。 ４．８５３および４．６０３　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、。 １１．５Ｈｚ、ベンジル）、３．７３６　（ｓ。 Ｃｏｔ　ＣＨ２）、２．　６９２　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３ｅａ、４４、　５．　Ｊ ｚ−、、＊−ｗ　１３．　ＯＨｚ、Ｈ３ｅｑ）。 ２、　０２２　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．　８８４　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊ３−−．４　１　１．　０Ｈｚ、Ｈ３ａｘ）１１．４０５，１．３７５ 　（２ｓ、６Ｈ，メチル）。 ０．８６８　（ｓ、９Ｈ，ｔ−ブチル）、０．０９３および０．０８４　（２ｓ 、６Ｈ，メチル）９乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中の上記化合物（０， ４３７ｇ、０．７７ミリモル）の溶液に、−３０℃で、５ｅｃ−ブチルリチウム （シクロヘキサン中の１．３Ｍ、０．６５ｍ１，０．８５ミリモル）を、次いで 二硫化炭素（１，２５ｍ１．２０．８ミリモル）を滴下して添加した。−２５° Ｃで０．５時間攪拌した後に、ヨウ化メチル（１，６ｍ１．２５．６ミリモル） をゆっくり加え、室温までゆっくり温めた。蒸発後に、この残留物を、溶出剤と してヘキサンと酢酸エチルとの４：ｌ混合物を使用するシリカゲルにおけるクロ マトグラフィに付し、相当するキサンチー）　（０，３２７ｇ、６５９６）を得 た。［Ｄコα＝９３．９　（ｃ、０．６５５．　クロロホルム）　；　’Ｈ−ｎ 、ｍ、ｒ、：　６．　３８８　（ｄｄ、ＩＨＪｇ７１．０．ＪＴ。２．５Ｈｚ、 Ｈ−７）、５．（３１０（ｄ、ＩＨ，Ｊ５Ｎ、７．ＯＨ２，ＮＨ）、４，７７８ ゜４．４６６　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、、Ｉｌ、５Ｈｚ、ベンツル）、３．７’７ ８　（Ｓ、ＣＯ２Ｃ旦、）、２．６６２（ｄｄ、Ｉ　Ｈ，Ｊ、、、４４．５．Ｊ 、、、、、、、１２．５Ｈｚ、Ｈ−３ｅｑ）、２．　５８４　（ｓ、３Ｈ。 ０ＣＨｚ　）、１．　８８３　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）　。 １、　６　９　３　（ｄｄ、　［Ｈｌ　Ｊ２ａｍ、４　１　１．　５Ｈｚ、Ｈ− ３ａｘ）、１．３１５　（ｓ、６Ｈ，メチル）０．８２５（９Ｈ，ｔ−ブチル） 、０．０２５．０．０９２　（２ｓ。 ６Ｈ，メチル）。 乾燥トルエン（３ミリ）中の上記キサンテート（０，３２ｇ、０．４８ミリモル ）の溶液に、アゾビスイソブチロニトリル（０，００４ｇ）およびトリーｎ−ブ チルスズ水素化物（０，５ミリ、１．８６ミリモル）を添加した。１００°Ｃて ７時間加熱し、溶剤を乾燥トルエンとともに共蒸発させ、次いてこの残留物を、 溶出剤としてヘキサンと酢酸エチルとの３：２混合物、次いで１：１混合物を使 用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付し、７−デオキシ生成物（０， ２６０ｇ、７０％）を得た：　’Ｈｎ−ｍ−ｒ、　：　５．　３３４　（ｄ、ｌ 　Ｈ＊Ｊい、７．０Ｈｚ、ＮＨ）、４．７４０，４．４５５（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、 、、１１．６Ｈｚ、ベンジル）。 ３．６９０　（ｓ、Ｃｏ□ＣＨ，）、２．６２８　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊ、＠。４４．　２．　Ｊ２ｍ、、２ｍ１１２．９Ｈｚ。 Ｈ−３ｅｑ）、１．９１４　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）。 １、　８０５　（ｄｄ、ｌ　Ｈ１Ｊ３−．４　１０．　９Ｈｚ。 Ｈ−３ａｘ）、１．７１８および１．５９７　（ｍ、２Ｈ。 Ｈ−７およびＨ−７’）、１．３２５　（Ｓ、６Ｈ，メチル）、０．８０４　（ ９Ｈ，ｔ−ブチル）、０．０１０゜０．００９　（２ｓ、、６Ｈ，メチル）。 上記生成物（０，２６０ｇ、０．４７ミリモル）を、７０％酢酸中で７５°Ｃに おいて７．５時間加熱した。トルエンとともに共蒸発させた後に、この残留物を 、クロロホルムとメタノールとのＩＯ：１混合物を使用するシリカゲルにおける クロマトグラフィに付し、４３（０，１５７ｇ、ｉ３４％）を得た；　’Ｈ−ｎ 、ｍ、ｒ、：４．８６０および４，６５５　（ＡＢ、２Ｈ，Ｊ、、。 Ｉｌ、５Ｈｚ、ベンジル）、３．８３４　（ｓ。 Ｃ０２Ｃ旦、）、２．８０６　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ２−＠４４．５．Ｊ、、。３− １２．５Ｈｚ、Ｈ３ｅｑ）　。 ２．０６９　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．８８１　（ｄｄ。 ＩＨ，Ｊｘ、ｗ、＜　１２．５Ｈｚ、Ｈ−３ａｘ）、１．６９８および（ｍ、２ Ｈ，Ｈ−７およびＨ−７’）。 化合物上ユ（０，４５７ｇ、０．３９６ミリモル）を、０．２５Ｎ水酸化すｌ〜 リウム（６ｍｌ）中で、室温に５時間保持した。トーヘツクス５　ｏｗｘ　８　 （Ｈ”形）により中和し、次いて濾過し、この溶液を真空凍結乾燥させて、生成 物（０，１４９ｇ、９７％）を得た。この生成物（０，１４６ｇ、０．３８ミリ モル）を、木炭（０，０１０ｇ）上の５９６パラジウムの存在下に水（５ｍｌ） 中で、室温において５時間、水素添加した。この混合物をセライトに通し、次い でミレックスーＧＶ（０，２２μｍ）フィルターに通して濾過した。この濾た； ’Ｈ−ｎｍｒはＣｈｒｉｓｔｉａｎにより報告されているとおりである３９゜ 下記表１は、製造されたＮｅｕ５Ａ（の誘導体をまとめて示すものである。 表１つづき シアリル化オリゴ糖の化学修飾により得られたシアリル化部分： １１′ＩＩＩ′ Ｂ、　Ｎｅｕ５Ａｃおよびその類縁体のＣＭＰ誘導体の合成例５ Ｎｅｕ５ＡｃのＣＭＰ誘導体の合成 ＣＭＰ−シアリル酸シンターゼは、ウシの脳から抽出し、Ｈｉｇａ等のオリジナ ルな方法４Ｇを僅かに改良した方法により、４°Ｃて部分的に精製した。慣例に 従し１、脳組織〜２００ｇをクッシュナー（Ｃｕｉｓｉｎａｒｔ）ブレンダーで 、２５ｍＭ）リス（Ｔｒｉｓ）／　ＨＣ］、ｐＨ７，５，１０ｍＭ塩化マグネシ ウム、１０ｍＭ塩化ナトリウム、２．５ｍＭジチオエリスリトール、０．５ｍＭ フェニルメチルスルホニルフルオライドの４００ｍ１とともにホモゲナイズした （３０秒の作動を１分の間隔て３回）。 この均一化生成物を、１時間攪拌し、次いて２３．００ＱＸｇで１５分間、遠心 処理した。この上澄液をデカンテーションにより分離し、このペレ・ノド状物を 上記と同一の緩衝液によりもう一度抽出した。この上澄液を集め、次いで２８． ＯＯＯＸｇて１５分間、遠心処理した。この上澄液をガラスウールに通して濾過 し、粗製抽出液（５１５ｍｌ、４．７ｍｇ蛋白質／ｍｌ酵素　〜９０Ｕ）を辱だ 。 固形の塩化カリウムにより、塩濃度を０．４Ｍに調整した後に、この粗抽出液を 攪拌し、次いて３５％飽和まで、固形硫酸アンモニウムを１５分間にオつたって 添加した。この溶液を、さらに１５分間攪拌し、氷上に１時間保持し、次いて２ ８，０００Ｘｇて３０分間、遠心処理した。この沈殿は捨て、上澄液を攪拌し、 次いで６０％飽和まで、固形硫酸アンモニウム（ｔ６３ｇ／ｌ）を１５分間にわ たって添加した。 さらに１５分間攪拌した後に、この懸濁液を一夜にわたり放置し、次いで」二記 のとおりに遠心処理した。生成するペレット状物を６０％硫酸アンモニウム溶液 １５０ｍ１により洗浄して、共沈殿物を除去した。この洗浄したペレット状物は 、ｏ、ｏｓｕ、”ｍｇ蛋白質の比活性を有する酵素７０＝８０Ｕを含有していた 。この酵素は、Ｋｅａｎ等により開示された方法により４′分析した：酵素活性 の１単位は、３７゛Ｃて１分間あたりて生成された生成物のＩμｍｏｌとして定 義される。 このペレツ）・状物中に存在する酵素は、冷たい室内で数週間保存することかで きた。この酵素を合成に使用する前に、このペレット状物を最少量の５０ｍＭト リス／ＨＣＩ、ｐＨ９，０，３５ｍＭ塩化マグネシウム、３ｍＭ２〜メルカプト エタノール（活性化緩衝液）中に懸濁し、次いで同一緩衝液＋００容量に対して 透析した。この透析した酵素を、９，０００Ｘｇで１０分間、遠心処理した。９ ０％以上の酵素活性を含有する、この上澄液を、合成に直接使用した。 シアリル酸のＣＭＰ誘導体は、上記と同様にして合成し、Ｈｉｇａ等４０および Ｇｒｏｓｓ等４２により開示された方法により精製した。例えば、７−　ｄ　− Ｎｅｕ５Ａｃ　Ｉ　ｄ　（表１．２０ｍｇ、６９μｍｏｌ）は、上記の透析した 酵素１５Ｕを用いて、上記活性化緩衝液１２ｍ１中て３７°Ｃにおいて５−６時 間、４倍過剰員のンチジントリホスフエ−１・の存在の下に、活性化させた。相 当する場合に、シアリル酸類縁体の変換は、にｅａｎ等４′により開示されてい るように、ホウ水素化すトリウムにより還元した後に、シアリル酸に係わる慣用 のチオバルビッール酸分析によって評価した。生成物は、Ｇｒｏｓｓ等４！によ り開示されているように、冷アセトンを用いて抽出した。アセトンを減圧の下に （〜１５°Ｃにおいて）蒸発させた後に、この濃縮溶液を、平衡化したパイオー ゲル（Ｂｉｏ−Ｇｅｌ）　Ｐ　−２（２，５ｘ９１ｃｍ）に負荷し、４°Ｃにお いて、６０ｍ１／時間の流速で１０ｍＭ水酸化アンモニウムにより溶出した。フ ラクション（１ｍｌ）を、２３７ｎｍにおける吸光によりシチジンに係わり分析 し、第一のピークに相当するフラクションを集め、減圧の下に濃縮し、次いで残 留物を凍結乾燥させて、ＣＭ　Ｐ　−７、−ｄ　−Ｎｅｕ５Ａｃ（２ｄ、３０ｍ ｇ、　〜９４％）を得た。この生成物は、’Ｈ−ｎｍｒにより非常に少量の夾雑 物を示した（表２）。この生成物をシアリルトランスフェラーゼとか若干の未反 応シアリル酸を含有することを示した。 下記の表２は、表１に記載のｊＪｅｕ５Ａｃ類縁体から製造されたＮｅｕ５Ａｃ 類縁体のＣＭＰ誘導体およびこれらの化合物に係わる部分的’Ｈ−ｎｍｒデータ を示すものである。 Ｃ，オリゴ糖グリコシドの合成 例６−７は、オリゴ糖グリコンドの合成を例示するものである。３ｂ−７ａの構 造は、図１５に示されている。 オリゴ糖グリｍｌ　：／　ｌ’　４　ｂ、５ｂ、５ｆ、６ａおよび７ａはそれぞ れ、Ｌｅｍｉｅｕｘ等４２、Ｌｅｍｉｅｕｘ等４４、Ｐａｕｌｓｅｎ等４５．５ ａｂｅｓａｎ等４“、およびＬｅｍｉｅｕＸ等４７の方法によりコソドー先」− および５ｂの合成に係わり開示されている方法に従うか、８−メトキシカルボニ ルオクチルの代わりに、メタノールを使用して、合成した。 オリゴ糖グリコンドにおよび土９ｇは、Ｐａｕｌｓｅｎ等４ｓおよびＡｌａｉｓ 等４＠の方法に従うが、メタノールの代わりに、８−メトキシカルボニルオクタ ツールを使用して、合成した。すへての場合に、オリゴ糖グリコシドは、適当な 溶剤混合物を使用してイアトロビーズにおけるクロマトグラフィににＪすことに よって精製し、採取された生成物をバイオゲルＰ２またはセファデックス（Ｓｅ ｐｈａｄｅｘ）ＬＨ２０におけるクロマトグラフィに付し、水により溶出した。 採取された生成物は、水から真空凍結乾燥させ、この生成物を五酸化リン上でさ らに乾燥させた。 例６ ９−ヒドロキソノニル−２−アセトアミド−２−デオキソ−［β−Ｄ−ガラクト ピラノシル−（１−３）−〇−］−β−Ｄ−グルコ ピラノノド４ａの合成 ＋４°Ｃに冷却した水とメタノールとのＩＯ：１混合物（２０ｍｌ）中ノ二糖化 合物上互（０，１００ｇ、０゜１８９ミリモルノの溶液に、酢酸ナトリウム（０ ，２００ｇ）およびホウ水素化ナトリウム（０，０６０ｇ）を添加した。２４時 間後に、＋４°Ｃに維持されているこの反応混合物に、ホウ水素化ナトリウム（ ０，０２０ｇ）をさらに加えた。同一温度で４８時間の後に、酢酸の添加により 、ｐＨを５−６にした。この溶液を次いて、過剰のメタノールとともに共蒸発さ せた。この残留物を水（１０ｍｌ）に溶解し、次いてＣ＋ｓシリカゲルのカラム に通し、水でさらに洗浄した。メタノールにより溶出した後に、溶剤を減圧の下 に蒸発させた。この残留物を水とメタノールとのＩＯ：ｌ混合物中に溶解し、そ のｐＨをＩＮ水酸化すトリウムの添加により、＋３−１４にした。この混合物を 、ｔｉｃ（６５：３５：５−クロロホルム、メタノールおよび水）が未反応出発 物質４ｂの消失を示すまで、室温で放置した。この混合物を次いで、１・−ヘノ クス５０Ｘ８（Ｈ”形）の添加により中和し、次いてこの樹ｌ旨を濾別した。生 成する溶液をＡＧＩＸ８（ホーメート形）のカラムに通した。この溶出液を凍結 乾燥させ、残留物を水とエタノールとの１：１混合物を用いて、セファデックス 　ＬＨ２０に通した。相当するフラクションを集め、濃縮し、４ａ　（０，０６ ０ｇ、６５％）を得た；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄ２０）　：　４．　５４５ （ｄ、ＩＨ，Ｊｌ、２　８．ＯＨ２，Ｈ−１）、４．４３０（ｄ、　ＩＨ，＋１ ２．７．５Ｈｚ、　Ｈ−１’　）　。 ２．０２５　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．５４３　（ｍ。 ４Ｈ）、および１．３０４　（ｍ、ｌ０Ｈ）：メチレン；１３Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、 　（Ｄ２０）　：　Ｉ　７５．　３　（Ａｃ）　。 １０４、３６　（Ｃ−１’）、　１０１．７２　（Ｃ−１）。 ６７．７２，６１．８５．６１．６０　（３個のＣＨ２０Ｈ）。 例７ ９−ヒドロキシノニル２−アセトアミド−２−デオキシ−［β−Ｄ−ガラクトピ ラノシル−（＋−４）−Ｏ旦から製造した（６０９６）　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ 、　（Ｄ２０）　：４．５２０　（ｄ、ＩＨ，Ｊｌ　□７．５Ｈｚ、Ｈ−１）。 ４．４７３　（ｄ、ＩＨ，、Ｌｌ、２．７．６Ｈｚ。 Ｈ−１’　）、２．０３３　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）。 １．５４３　（ｍ、４Ｈ）および１．３０２（ｍ。 １０Ｈ）：メチレン：ロＣ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄ２０）　：１７５．２３　（Ａ ｃ）、１０３．７１および１０１．８８（Ｃ−１およびＣ−１’）、６０．９３ ゜６１．８５および６２．７１　（３個のＣＨ２０Ｈ）。 例８ ５−アリルオキシペンチル２−アセトアミド−２−デオキシー［β−Ｄ−ガラク トピラノシル−（１−３）−〇−］−β−Ｄ−グルコピラノシド４ｃの合成この 例および例９の合成経路は、図１６に記載されて乾燥ジメチルホルムアミド中の 水素化ナトリウム（１，２ｇ、８０％油中分散液）およびｌ、５−ベンタンジオ ール（３ｇ、０．０２９モル）の混合物に、アリルブロマイド（２，５ｍｌ、０ ．０２９モル）を滴下して加えた。室温で一夜にわたり攪拌を続けた。ｔｉｃ（ ２：ｌトルエンおよび酢酸エチル）は、依然として若干の未反応ベンタンジオー ルの存在を示した。未反応の水素化ナトリウムを、メタノールの添ＩＪ１１によ り分解した。 この混合物を減圧の下での蒸発により５０ｍ１まで濃縮した。塩化メチレン（１ ５０ｍｌ）により稀釈した後に、この溶剤を水により洗浄しく３回）、硫酸マグ ネシウム上で乾燥させ、次いて減圧の下で蒸発させた。この残留物を、溶出剤と して１−ルエンと酢酸エチルとの２：１混合物を使用するシリカゲルにおけるク ロマトグラフィに付した。相当するフラクションから、化合物２９（０，９３１ ｇ、３０９６）を得た。 ’Ｈ−ｎ、ｍ、、（ＣＤＣ１，）：　５．８３　（ｍ、ＩＨ。 ＣＨ＝）、５．２０　（ｍ、２Ｈ，＝ＣＨ２）　。 ３、　９５　（ｄｃｌ、ＩＨ，Ｊ＝５．　５および１．　ＯＨ２゜アリル）、３ ．６６および３．４６（２つのｔ、それぞれ２Ｈ）　、　Ｊ＝６．５Ｈｚ、　Ｏ ＣＲ２）　、　１．６４（ｍ、４Ｈ）および１．４４　（ｍ、２Ｈ）：　（メチ レン）　；　”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＬ　）　：　ｌ　３４．　７および ２９．２および２２．２（メチレン）。 ８．５−了りルオキシペンチル２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グル コピラノシド３２の合成ジクロロメタン（５ｍｌ）中の３．４．６−１リーＯ− アセチルー２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノシルブロマイド ３０　（５，０ｇ、１０．０ミリモル）の溶液に、−７０“Ｃで、ジクロロメタ ン（１０ｍｌ）中の、アルコール化合物２９　（１，３３ｍ１．１０ミリモル） 、銀トリフルオロ−メタンスルホネート（２，５７ｇ、１０．０ミリモル）およ びコリジン（１，２３ｍ１．９．０ミリモル）の混合物を滴下して加えた。−７ ０°Ｃて３時間攪拌した後に、ｔｉｃ（２：ｌトルエンおよび酢酸エチル）は、 出発ブロマイドと反応生成物とか同一のＲｆを有することを示した。若干量のト リエチルアミンを添加した後に、この反応混合物をジクロロメタンにより稀釈し 、次いて慣用の方法で仕上げ処理した。シロップ状残留物を、１〜ルエンと酢酸 エチルとの５．１混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィにイｊ し、化合物３１　（４，０ｇ、７１％）を　ｅＩ　ｔこ。 ’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣ］　３　）　：　５．　８　０　（ｍ、　２Ｈ。 −ＣＨ＝およびＨ−３）、５．３６　（ｄ、ＩＨ，Ｊｌ、２８、　５Ｈｚ、Ｈｌ ）、５．　１　８　（ｍ、３Ｈ，＝ＣＨｚおよびＨ−４）、２．　１３．　２． ０６．　１．　８７　（３ｓ。 それぞれ３Ｈ，３０Ａｃ）、１．４０　（２Ｈ）および１、Ｉ　５　（ｍ、４Ｈ ）：メチレン。 ０°Ｃに冷却した、乾燥メタノール（３０ｍｌ）中の化合物ｌ±（４，００ｇ、 ７．１ミリモル）の溶液に、メタノール中のすトリウムメトキシド ５００ｍｌ）に滴下して加えた。この混合物を０°Ｃて２時間、ｔｌｃ（１０： Ｉクロロホルムおよびメタノール）か出発物質の消失を示すまで、攪拌した。こ の反応混合物を０°Ｃてドーヘツタス５０（Ｈ＋形、乾燥したもの）により脱イ オン化した。濾過し、溶剤を蒸発させ、得られた残留物を、溶出剤としてクロロ ホルムとメタノールとの１００・５１昆合物を使用するシリカゲルにおけるクロ マトグラ１イにより精製し、化合物３２（２．３６ｇ、７６９６）を得た。　’ Ｈ−ｎ．ｍ．ｒ．　（ＣＤＣ　］　ｚ　）　ニア、７０および７．　８０　（ｍ ，　４８，芳香族）。 ５、８２　（ｍ．ＩＨ，−ＣＨ＝）、５．１７　（ｍ，３Ｈ。 二ＣＨ．およびＨ−１）、１．３８および１．１０（ｍ。 ６Ｈ．　メチレン）　：　”Ｃ　−ｎ．ｍ．ｒ．　（ＣＤＣ　］　３　）　：１ ３４、９および１１６．６（メチレン）、９８．３（Ｃ−１）、５６．６　（Ｃ −２）。 Ｃ．５−アリルオキシペンチル４．６−０−ベンジリデン−２−デオキシ−２− フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド３３の合成 乾燥ジメチルホルムアミＦ中の３２　（１．０ｇ。 ２、３ミリモル）およびα，αージメトキシトルエン（０．６９０ｍｌ、４．６ ミリモル）の溶液に、パラトルエンスルホン酸−水和物（０．０２５ｇ）を添加 した。 ４０°Ｃて２時間攪拌した後に、ｔｌｃ（１０：Ｉクロロホルムおよびメタノー ル）は、反応の完了を示した。少量のトリエチルアミンを添加した後に、溶剤の 大部分を減圧の下で蒸発させ、次いて残留物を、ジクロロメタンにより稀釈し、 次いで慣用の方法で仕上げ処理した。溶剤を蒸発させ、残留物を、トルエンと酢 酸エチルとの９・１混合物を使用するシリカゲルにおけるクロマトグラフィに付 し、化合物３３　（１．３６ｇ，９０．１％）を得た。 ［α］　”ｏ　＋２４．１　（ｃＯ．５クロロホルム）；　’Ｈ−ｎ．ｍ．ｒ． 　（ＣＤＣ　Ｉ３）　：　７．　１　５−７．　９　０　（ｍ。 ９Ｈ，芳香族）、５．８３　（ｍ．ＩＨ，−ＣＨ＝）。 ５、５６　（ｓ．ＬＨ．ベンジリデン）、５．１０−５　、３　７　［ｍ，３　 Ｈ，＝　Ｃ　Ｈ２およびＨ−１　（５．２５。 ｄ，Ｊｌ．２　８．５Ｈｚ）］　、１．４　０　（ｍ．２Ｈ）および１．ｌ　７ 　（ｍ，４Ｈ）：メチしン。 Ｄ．５−アリルオキシペンチル４．６−０ーヘンジリデン−２−デオキシ−［２ ，３，４．６−チトラーＯーアセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−３ ）−０−］−］２−フタルイミドーβ−〇−グルコピラノシド３５の合成 トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートの溶液（ジクロロメタン１． ０ｍｌ中の、この試薬０゜０５０　ｍ　ｌから調製した溶液０，１ｍ１）を、− ２０°Ｃに冷却したトルエンとジクロロメタンとのｌ：ｌ混合物（３０ｍｌ）中 の、粉砕した分子ふるい（０’、’５００ｇ）、２．　３．　４．　６−チトラ ーＯ−アセチル−α−Ｄ２．２９ミリモル）の混合物中に、シリンジで添加した 。 この混合物を一２０°Ｃて０．５時間攪拌し、次いで１時間の間に０°Ｃまてゆ っくり高めた。ｔｉｃ（１：１へキサンおよび酢酸エチル）は、反応の完了を示 した。若干量の１−リエチルアミ〉を添加し、次いて塩化メチレンにより稀釈し 、濾過した後に、この溶液を慣用の方法で仕上げ処理した。蒸発させ、残留物を 、トルエンを使用してノリ力ゲルのカラムに通し、次いてヘキナンと酢酸エチル との２・１混合物を用いて、溶出を続けた。相当するフラクションから、三糖化 合物３５　（１，６３ｇ、７４９６）を１忰た。［ｃｒ］　”ｏ　＋４．１　（ ｃ、０．５゜ＣＨＣｌ２）；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、（ＣＤＣＩａ　）：　７．４ ０−８．　００　（ｍ、９Ｈ，芳香族）、５．８５　（ｍ、ＩＨ。 Ｈ−４′およびＨ＝　１）、５．ｏ　ｏ　（ｄａ、’　ＩＨ。 Ｊｌ　２８・　０・　ｔＪ２’、ｆｆ　１０．ＯＨ２，Ｈ−２’）。 ２、ｌ　１．’！、９０，１．８５．１．５８　（４ｓ、１２Ｈ，４０Ａｃ）、 １．３７および１．　１２　（ｍ、６Ｈ。 メチレン）　：　ｌ３Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩａ　）　：　Ｉ　３４．　 ６および１１７．０（エチレン）、＋０２．Ｉ。 １０１、　２．　９９．　４　（’＜ンシＩＪデン、Ｃ−１およびＣ−１’）。 Ｅ、５−アリルオギノペンチル２−デオキシ−［２，３゜４．６−チトラー０− アセチルーβ−Ｄ−ガラクトピラノツルー（１−３）−０−１−２−フタルイミ （１，６３ｇ、１．９１ミリモル）ノ溶液を、７ｏ″Ｃで１時間加熱した。この 時点て、ｔｌｃ（１００：５クロロホルムおよびメタノール）は、反応の完了を 示した。 残留物を過剰の１ルエンとともに共蒸発させ、残留物を溶出剤としてクロロホル ムとメタノールとの１００：２を昆合物を使用するシリカゲルにおけるクロマト グラフィに（１し、化合物３６（１，１２ｇ、７６％）を得た。 ［α］　”ｏ　＋　９．３　（ｃ、０．５５ＣＨＣＩ＊　）；　’Ｈ−ｎ、ｍ、 ｒ、（ＣＤＣＩ　３　）　：　７．　７０−７．　９５　（ｍ、　４５．３３　 （ｄｄ、ＩＨ，Ｊ、、、、、３．５．Ｊ４．、。 １．０Ｈｚ、Ｈ−４’）、５．１０−５．２７　（ｍ、３Ｈ，ｉ　ｎｃ　１．　 ：ＣＩｒ２およびＨ−２’）、５．０７（ｄ、ＩＨ，Ｊ、□　８．　５Ｈｚ、Ｈ −１）、４．　８４（ｄｄ、ｌ　Ｈ，Ｊｚ　３　１０．　ＯＨｚ、Ｈ−３’　） 。 ２、　１０．　２．　０８．　１．　９０　（３ｓ、９Ｈ，３０Ａｃ）、１．　 ０５−１．　４７　（ｍ、９Ｈ，１ｎｃ１、Ｉ　０Ａｃ）　、”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ 、　（ＣＤＣＩｚ　）　：１００３および９７．５Ｃ−１およびＣ−１’、元素 分析、計算値　Ｃ，５６，８８、Ｈ，６，＋７．　Ｎ。 １．８３　実測値・Ｃ，５５，５９；Ｈ，６，２０；Ｎ。 １、　８４゜ Ｆ、５−アリルオキソペンチル２−アセトアミｌ’　−２−デオキソ−［β−Ｄ −がラクトピラノシル−（１−３）−０−］　−］β−Ｄ−グルコピラノシトの 合成 イソプロパツールと水との５・１混合物（２０ｍｌ）中の三糖化合物３Ｇ　（０ ，７００ｇ、０．９１ミリモル）に、ポウ水素化す１〜リウム（０，６９０ｇ、 １８ミリモル）を添＋ＪＩＩ　した。この混合物を、室温で２４時間攪拌した。 この時点て、ｔｌｃ（６５：３５：５クロロホルム、メタノールおよび水）は、 出発物質の消失を示した。酢酸Ｃ８，２ｍ１）の添加後に、この混合物を１００ °Ｃて３時間ＪＪＩ＋熱した。この混合物を、過剰のトルエンとともに共蒸発さ せ、残留物を乾燥させ。次いてピリジンど無水酢酸との３．２混合物（５ｍｌ） 中で、ジメチルアミノピリジンの存在の下に、２２℃で２４時間、アセチル化さ せた。若“干量のメタノールを加え、この混合物をジクロロメタンにより稀釈し 、次いて慣用の方法で仕」ユげ処理し、？Ｌトられた残留物を、若干量のトルエ ンとともに共蒸発させた。最終のシロップ状生成物を、クロロホルムとメタノー ルとの１００＋２混合物を使用するノリ力ゲルにおけるクロマ１−グラフィに付 し、パラアセチル化されている三糖化合物（０，５００ｇ、７１％）を得た。　 ’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩ　ｓ　）　：　５．　９０　（ｍ。 ＩＨ，−Ｃ旦＝）　、５．　７７　（ｄ、Ｉ　Ｈ，ＪｘＮＨ７，５Ｈｚ、ＮＨ） 、５．３７　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ、、、・３．５゜Ｊ４　、１．ＯＨ２，Ｈ４’） 、５．１５　５．２３（ｍ、２Ｈ，＝ＣＣ２０，１，９５２，１８（７ｓ。 ２１Ｈ，６０Ａｃ、ＩＮＡｃ）、１．５８　（ｍ、４Ｈ）および１．４１　（ｍ 、２Ｈ）：メチレン。 ナトリウムメトキシドの０．５Ｎ溶液（０，３００ｍ１）を、乾燥メタノール（ ２０ｍｌ）中の上記化合物（０，５００ｇ、０．６２３　ミリモル）の溶液中に 、シリンジにより添加した。室温で一夜にわたり攪拌した後に、この混合物をド ーヘツクス５０（Ｈ’″形、乾燥したちの）により脱イオン化し、次いて減圧の 下に蒸発させた。この残留物をメタノール中に溶解し、溶剤の蒸発によりセライ ト（３ｇ）上に付着させた。このセライトを次いて、イアトロヒーズ（３０ｇ） のカラムの頂上に導入し、生成物でクロロホルム、メタノールおよび水の（０， ２６６ｇ、８０％）を得た；　［α］　＋１０．−０．１６４　（ｃ、ｌ、水） 　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄｔ　Ｏ）　二Ｈ１）、４．　４２６　（ｄ、Ｉ Ｈ，Ｊ＋　、２．７．　７Ｈｚ。 Ｈ−１’）、４．　０３１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊｌ、０゜１１．５Ｈｚ、アリル） 、２．０２３　（Ｓ、３Ｈ。 ＮＡｃ）、１．５８　（ｍ、４Ｈ）および１．３８（ｍ。 ２Ｈ）：メチレン；　”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｄｔ　０）　：１７５．２４　（ カルボニル）、１３４．７０および１１９．０５（エチレン）、１０４．３３　 （Ｃ−１’）。 １０１．６８　（Ｃ−１）、５５．４２　（Ｃ−２）。 例９ ５−アリルオキシペンチル２−アセトアミド−２−デオキソ−β−Ｄ−グルコピ ラノシドー褐１−の合成を分離した。この　粗製生成物をバラアセチル化し、得 られた生成物をヘキサンと酢酸エチルとのｌ：ｌ混合物を用いて、シリカゲルに おけるクロマトグラフィに付し、バラアセチル化されている誘導体（０，１８０ ｇ、５５９６）を得た。［αコ２０ｏ　＋　１１．　５　（ｃ、０．　７．　ク ロロポルム）　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、　（ＣＤＣＩ　３　）　：　５．　９０ ７．５Ｈｚ、Ｈ−１）、１．９５．２．０３　（２個。 ２、　０５　（３ｓ、１２Ｈ，３０Ａｃ、１ＮＡｃ）。 １．５８　（ｍ、４Ｈ）および１．４１　（ｍ、２Ｈ）：メチレン１元素分析： 計算値　Ｃ，５５，８゜Ｈ，７，５、Ｎ、２．０５．実測位：Ｃ＋　５５．８２ ；Ｈ，７，５３：Ｎ、２．９８゜ この生成物を、メタノール中で脱Ｏ−アセチル化し、ここにメタノール中のナト リウムメトキシドの０．５Ｎ溶液（０，１００ｍ１）を加えた。室温で一夜の後 に、この混合物をＩＲ−Ｃ５０樹脂（Ｈ＋形、乾燥したもの）により脱イオン化 し、次いて溶剤を蒸発させた。この残留物をクロロホルムとメタノールとの７＝ １混合物を用いてイアトロヒーズに通し、純粋な３７（０，１０３ｇ、８０９６ ）を得た、［α］１０．−０．１７　（ｃ、１．水）　；　’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、 　（Ｄｔ　０）　：Ｈ−１）、４．０３　（ｄ、２Ｈ，Ｊ６．ＯＨｚ、アリル） 、２．０３３　（ｓ、３Ｈ，ＮＡｃ）、１．５８　（ｍ。 ４Ｈ）および！、３６　（ｍ、２Ｈ）：メチレン、＋２０−ｎ、ｍ、ｒ、　（Ｉ ）２０）　：　Ｉ　７５．　２　（カルボニル）。 １３４．７および１１９．１（エチレン）、１０１．９（Ｃ−１）、６１．６　 （Ｃ−６）、５６．４　（Ｃ−２）。 ２９．１．２３．０および２２．６（メチレン）、。 Ｄ、オリゴ糖構造へのシアリル酸およびその他の糖の転倒１０ グリコツル１−ランスフェラーゼによるオリゴ糖構造へのソアリル酸石よびその 他の糖の転移 この例は、Ｎｅｕ５Ａｃ、その類縁体（正確には、「シアリル酸」）およびその 他の糖の、グリコジルＩ−ランスフェラーゼによるオリゴ糖グリコシド構造への 酵素による転移を例示するものである。図１７．１８．１９．２０および２１は 、これらの転移を示しており、下線付きのアラビア数字で示されている、製造さ れた化合物の構造をまた示している。例１０ａ−１０ｅにおいて、予備シアリル 化およびフコシル化は、下記のとおりにして行った・ １、予備シアリル化 それらのＣＭ　Ｐ誘導体として活性化されているシアリル酸を、哺乳動物シアリ ルートランスフェラーゼを使用して、βＧａｌ　（１−３）　βＧＩｃＮＡｃ− １βＧ、ａｌ（Ｉ−４）βＧＩｃＮＡｃ−１βＧａ１（１−３）ａＧａ　ｌＮＡ ｃ−１およびβＧａｌ　（１−４）βαＧｌｃ−１末端配列を存する合成オリゴ 糖構造に転移させた（例１０ａ−ｅ）。ラット肝臓からのβＧａ１（１−３／４ ）βＧＩｃＮＡｃ−α（２−３）シアリルトランスフエラーセ（ＥＣ２，４，９ ９，５）およびβＧａｌ　（１−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ−ａ　（２−６）　シ アリルトランスフェラーセ（ＥＣ２，４，９９，１）を、Ｍａｚｉｄ等の方法４ ９（この刊行物の記載を引用してここに組み入れる）に従い、当技術で公知の方 法により活性化されたセファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）に、ハブテンβＧａ １（１−３）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃｏ　（ＣＨ２）ｓ　Ｃ０２Ｈ”（Ｃｈｅｍｂｉ ｏｍｅｄ　Ｌｔｄ、　、　Ｅｄｍｏｎｔｏｎ、　Ｃａｎａｄａ）を共有結合させ ることによって得られるマトリックスにおけるアフィニテイクロマトグラフィに より均質に精製した。βＧａ１（１−３）ａＧａ　ＩＮＡｃ−ａ　（２−３）シ アリルトランスフエラーセ（ＥＣ２，４，９９，４）は、Ｇｅｎｚｙｍｅ、　Ｉ Ｃｏｒｐｏｒａｔ　ｉｏｎ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴから入手した。 予備シアリル化反応のすへてにおいて、受容体オリゴ１１（５−２０ｍｇ）は、 適当するシアリルトランスフェラーセ（１０−！’；ＯｍＵ）およびウシ腸アル カリホスファ　ターゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｍａｎｎｈ ｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）１５のｑ在の下に、ｔＪｎｖｅｒｚａｇｔ等５０の方 法と同様に、３７℃で２４−４８時間、５０ｍＭナトリウム力コジレートｐＨ６ ，５，０，５％トリＩ−ン（Ｔｒｉｔｏｎ）ＣＦ　−５４，１ｍｇ／ｍ　Ｉ　Ｂ ＳＡ　（ｒシアリル転移緩衝液」）中で、選択されたＣＭＰ−シアリル酸（５− ２０ｍｇ）とともにインキュベートした。例えば、ソアリルオリゴ糖７−ｄ−ａ 　Ｎｅｕ５Ａｃ　（２−６）βＧａ　Ｉ　（１−４）４．６ｍｇ）および ＣＭＰ　−７−ｄ　−Ｎｅｕ５Ａｃ　（２ｄ、１５．６ｍｇ）を、βＧａｌ　（ １−４）βＧ　ｌ　ｃＮＡｃ−ａ　（２−６）シアリル１、ランスフェラーゼ（ ５１ｍＵ）およびウシ腸アルカリホスファターゼ（２，４０）の存在の下に、シ アリル転移緩衝液２．５ｍｌ中で３７℃において２８時間、インキュベ−１・す ることにより合成された（例１−５参照）。完了後に、この反応混合物をｌ０ｍ １に稀釈し、次いて製造業者により指示されているように条件調整されている、 ３個のセブーバックＣ１１カートリッジに通した。これらのカートリッジはそれ ぞれ、水（４×５ｍ１）により、次いでメタノール（３ｘ５ｍｌ）により洗浄し た。このメタノール溶出液を、減圧の下に蒸発乾燥させ、残留物をクロロホルム 、メタノールおよび水の６５：３５：３ａ合物（０，５ｍ１−溶剤１）中に溶解 し、次いで同一溶剤により平衡化したイアトロビーズ（５００ｍｇ）の小型カラ ムに通した。このカラムを、溶剤ｉ、次いでクロロ、ホルム、メタノールおよび 水の６５：３５：５ａ合物（溶剤ｒ　Ｉ）　、次いでクロロホルム、メタノール および水の（ｉ５：３５：８ａ合物（溶剤ｌ１１）により順次溶出した。シリカ ゲルプレートにおけるｔｌｃ（溶出剤として、クロロホルム、メタノールおよび ０．２９６塩化カルシウム溶液の　６５：３５：８ａ合物を使用）により同定し て、生成物を介在する相当するフラクション（３０滴）を集め、次いて減圧の下 に濃縮乾燥させた。この残留物をＡＧ５０Ｗ−Ｘ８　（Ｎａ”形）の小型カラム に通し、溶出液を凍結乾燥させ、採取された生成物を’Ｈ−ｎｍｒにより確認し た。生成物はいずれの場合にも、良好な純度を示した。 ｉｉ予予備フコシル クイプ■およびタイプＩＩオリゴ糖のシアリル化類縁体は人乳βＧＩｃＮＡｃα （１−３／４）フコシルトランスフェラーゼによりさらにフコシル化することが できる。この酵素は、Ｐａｌｃｉｃ等５１により開示されたＧＤＰ−ヘキサノー ルアミン　セファロースにおけるアフィニティクロマトグラフィを用いる方法に 従い、人乳から精製した。フコシル化オリゴ糖の合成および精製は、Ｐａ１ｃｉ ｃ等の方法ｓ＋の変法により行った。例えば、フコシル化構造体９−Ｎｚ　−α Ｎｅｕ５Ａｃ　（２−３）βＧａｌ　（１−３）−［（Ｚ−Ｌ−Ｆｕｃ　（１− ４）−βＧ１ｃＮＡｃ−０−（ＣＨ２）、ＣＨ，ＯＨＩ　７ｂは、ＧＤＰ−フコ ース（２，５ｍｇ）および９−Ｎ、　−αＮｅｕ５Ａｃ（２−３）βＧａｌ　（ １−３）βＧＩｃＮＡｃ−０−（ＣＨｚ　）ｓ　ＣＨａ　ＯＨ８ｂ　（１，７ｍ ｇ）を、１００ｍＭすトリウムカコジレート（ｐＨ６，５）、１０ｍＭ塩化マグ ネシウム、１．６ｍＭＡＴＰ、１．６ｍＭナトリウムアジドの１．３ｍｌ中で、 アフィニティ精製したβＧＩＣＮＡＣ（２（＋−３／４）フコシルトランスフェ ラーゼとともにインキュベートすることによって合成された。３７°Ｃて２７時 間の後に、この反応混合物にＧＤＰ−フコース２．５ｍｇおよびフコシルトラン スフェラーゼ２．３ｍｔＪを加え、３７゛Ｃてさらに２１時間維持した。この生 成物を、シアリル化に係わり上記したとおりにして単離した。この粗製生成物の ｔ　Ｉ　ｃ’　（上記のとおり）は、このフコシル化がほとんど完了しているこ とを示した。精製およびＡＧ“５０Ｗｘ８（Ｎａ”形）におけるクロマトグラフ ィの後に、この生成物１７ｂ（１，Ｏｍｇ）の’Ｈ−ｎｍｒは、非常□に良好な 純度（表５）を示した。フコシルトランスフェラーゼが高度に精製されていない 若干の場合には、結合手のメチルエステルの部分的加水分解が生した。 例１０ａ−ｅは以下のとおりにして行った：　。 例１０ａ この例は、４ａおよび４ｂのようなβＧａｌ゛（ｌ−３）βＧｌｃＮＡｃ−（ル イス０またはタイプＩ）末端構造を存する受容体の末端　βＧａｌの３−ＯＨに 、ラソ）−肝臓からのβＧａ１（１−３／４）βＧＩｃＮＡｃα（２−３）シア リルトランスフェラーゼのようなシアリルトランスフェラーゼを用いて、上記の 開示されている実験方法に従いＩａ−Ｈのような修飾シアリル酸を転移させるこ とに関するものである。上記のとおりにして精製された、各反応生成物の’Ｈ− ｎｍｒデータを示す（表３および４）。 例１０ｂ この例は、５ａ、ｂ、ｄｇのようなβＧａ１（１−４）βＧ　ｌ　ｃＮＡｃ−（ Ｌａ　ｃＮＡｃまたはタイプ■１）末端構造を有する受容体の末端βＧａｌの３ −ＯＨに、ＩＯａで使用したもののようなシアリルトランスフに、受容体を溶解 させるために、ジメチルスルホキシド（５９６容量）を添加することがてきる。 上記のとおりにして精製された、各反応生成物の’Ｈ−ｎｍｒデータを示す（表 ６および８）。各反応混合物は上記の方法で仕上げ処理した。 βＧａｌ　（１−４）βＧｌｃ　（ラクトース）末ＩＩＭｌｉｌｌ造を有する受 容体の末端βＧａｌの３−ＯＨ構造基に１例１Ｏａで使用したもののようなシア リルトランスフェラーゼを用いて、Ｉｃのような修飾シアリル酸を転移させるこ とに関するしのである。′上記のとおりにして精製された、各反応生成物の’Ｈ −ｎｍｒデータを示す（表６）。 例１０ｄ この例は、５ｂ、ｄ−ｇのようなβＧａＬ（１−４）βＧ１ｃＮＡｃ−（Ｌａｃ ＮＡｃまたはタイプ夏Ｉ）末端単位を有する受容体の末端βＧａｌの６−ＯＨに 、公知のβＧａｌ　（１−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃａ　（２−６）シアリル］・ ランスフェラーゼのようなシアリルトランスフェラーゼを用いて、ｌ　ｂ−ｈの ような修飾シアリル酸を転移させることに関するものである。上記のとおりにし て精製された、各反１ｉ；土成物の’Ｈ−ｎｍｒデータを示す（表７および８） 。 例１０ｅ 、−の例は、７ａのようなβＧａ１（１−３）αＧａ１ＮＡｅ　（”］゛）木端 １１位を有する受容体のｋＱβＧａｌの３−〇Ｈに、βＧａ’！（１−３）ａＧ ａ　ＩＮＡｃｃｒ　（２−３）シアリルトランスフェラーゼのようなシアリルト ランスフェラーゼを用いて、：Ｃのよ−）な修飾〉アリル酸を、公知の実験方法 に従い、転移させる二とに関するものである。、Ｉ：、記のとおりにしてｔｉｓ 製された、各反応生成物の’Ｈ−ｎｍｒデータを示す（表９）。 Ｅ、完全オリゴ糖グリコシド構造の化学修飾によるオリゴ糖グリコシド類縁体の 製造 例ｌｌ−１３は、完全オリゴ糖グリコシド構造（酵素を用いて、または化学的手 段により製造）の化学修飾によるオリゴ糖グリコシド類縁体の製造を例示するも のである。図２２−２４は、これらの類縁体の製造に含まれる反応経路を示して おり、また下線付きアラビア数字により示されている、製造された類縁体の構造 を示すもの９−ヒドロキシノニル（５−アセ１−アミド−３，５−シデオキシー β−Ｌ−アラビノ−２−ヘブッロビラノンロン酸）−、、（２−３）−〇−β− Ｄ−ガラクトピラノツルー（１−３）−０−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１− ４１）−０−Ｊ−２−アセトアミド−２−デオ酸すトリウム溶液およびＩＭ過ヨ ウ化すトリウム溶液１７ｍｌ中て、→−４°Ｃて２４時間攪拌した。過剰の過ヨ ウ化ナトリウムを次いて、若干量のエチレングリコールの添加により分解した。 ホウ水素化すトリウム（２０ｍｇ）を次いて加え、攪拌を４°Ｃて２４時間続け た。この反応混合物のｐＨを、酢酸の添加により６にし、次いて溶媒をメタノー ルとともに共蒸発させた。この残留物を、水（１ｍｌ）中に溶解し、次いでセブ ーパックヵーｌ・リッジに通し、水で、次いてメタノールで、さらに洗浄した。 このメタノール溶出液を蒸発させ、この残留物を溶出剤としてクロロホルム、メ タノールおよび水の６５：３５：５混合物を使用する、イアトロビーズ（２００ ｍｇ）におけるクロマトグラフィに付した。相当するフラクションを集め、次い て蒸発させ、生成物８ｍ（１ｍｇ）を得た；’Ｈ−ｎｍｒ：上記表３参照。 三糖化合物８ａを、徊１０に記載の方法に従い、酵素を用いてフコシル化し、生 成物は同一の方法により精製参照。 ９−ヒドロキシノニル（５，９−ジアセトアミド−３゜５．９−１−リープオキ シ−α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）−（２−３ ）−〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−３）−０−［α−Ｌ−フコピラノ シル−（１−４）−０−］　−］２−アセトアミドー２−デオキシβ−Ｄ−グル コビラの溶液を、リンドラ−（Ｌｉｎｄｌａｒ）の触媒（１，０ｍｇ。 Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗ ｌ）の存在の下に、２２°Ｃにおいて１５分間水素添加した。ｔｉｃ（６５：３ ５：８−クロロホルム、メタノールおよび０２９６　塩化カルシウム）は、完全 転移を示した。こ洗浄した。この濾液を濃縮し、ミリボールフィルターに通して 濾過し、この溶出液を凍結乾燥させ、三糖化合物−望」−を？１ｔた：’Ｈ−ｎ ｍｒ：上記表３参照。 ０．００２Ｎ水酸化ナトリウムとメタノールとのｌ：ｌ溶液（０，３００ｍ１） 中の８ｊ（約１ｍｇ）の溶液に、０℃でメタノール（１０μｍ）中の無水酢酸（ 約０．２ｒｒ＋ｇ）をＩＪｌｌえた。ｔｌｃ（上記　溶剤）は、完全反応を示し た。次いて溶剤を蒸発させた。この残留物を水（２ｍ　ｌ　）に溶解し、セブー パノク力−トリッジに通したつこのカートリノンを、水で洗浄し、次いで生成物 をメタノールで溶出し、三糖化合物８ｋ（約１ｍｇ）を得た：’Ｈ−ｎｍｒ：Ｊ 二記表３参照。 三糖化合物８ｋを、例１０に記載の方法に従い、酵素を用いてフコシル化し、生 成物を同一方法により精製しく約０．５ｍｇ）か？１トられたジＨ−ｎｍｒ：上 記表５８−Ｎ−メチルアミドオクチル（５−アセトアミド−３，５−ノデオキシ ーα−Ｄ−グリセロ−ガラクト−２−ノヌロピラノンロン酸Ｎ−メチルアミド） −（２−３）−０−β−Ｄ−ガラクトピラノツルー（＋−５）−０−［α−Ｌ− フコピラノシル−（１−４）−０−］−］２−アセトアミドー２−デオキシβ− Ｄ−ス５０Ｘ８（Ｎａ”形）樹脂に導入し、水で溶出した。 相当するフラクションを凍結乾燥させ、引き続いて五酸化リン上てさらに乾燥さ せた。この残留物をジメチルスルホキシドに溶解し、ここにヨウ化メチル（０， ０５０ｍ１）を加えた。暗所で２０時間攪拌した後に、この溶液を減圧の下に蒸 発させ、水（Ｉｌｍｌ）により稀釈し、次いてセブーバックＣ，＠カートリッジ に導入した。水（１０ｍｌ）により洗浄してから、この生成物をメタノールによ り溶出した。相当するフラクションを蒸発させ、残された残留物をクロロホルム 、メタノールおよび水の６５：３５：５ｉ昆合物を使用する、イアトロビーズ（ ０，５ｇ）におけるクロマトグラフィに付し、化合物１８ａのメチルエステル（ ００２５ｇ）を得た：’Ｈ−ｎ、ｍ、ｒ、：　５．　０９９　（ｄ、　ＩＨ，Ｊ ｌ、２　３．　７５Ｈｚ、Ｈ−１αＦＵＣ）、４．５１７　（ｄ、２Ｈ。 Ｊｌ、２７．　５Ｈ２，Ｈ，ｌβＧ　ａ、ＩおよびβＧ１ｃＮＡｃ）、３．８６ ６および３．　６８３　（２ｓ。 ＣＯ２ＣＨａ　）、２．７８１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ３．、、ａ、。 １２．５Ｈｚ、Ｊ２．、．４４．５Ｈ２，Ｈ−３ｅｑＮｅｕ５Ａｃ）、”２．． ０３２および２．　０１８　（２ｓ。 ６Ｈ，２ＮＡｃ）、１．　９１３　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ！、、、４１２．　５Ｈｚ 、Ｈ−３ａｘ　Ｎｅｕ５Ａｃ）。 １、　１６０　（ｄ、３Ｈ，Ｊｓ、＊　６．　５Ｈｚ。 Ｈ−６αＦｕｃ）。 この生成物を、Ｎ−メチルアミンの４０％溶液（１ｍり中で５０°Ｃにおいて３ ．５時間加熱した。減圧の下に蒸発させた後に、この残留物を水（１ｍｌ）に溶 解し、次いでセブーパックカートリッジに通し、水でさらに洗浄した。この生成 物をメタノールにより溶出し、溶剤を蒸発させ、次いて残留物を凍結乾燥させ、 生成物１８１（０，００２５ｇ）を得た：’Ｈ−ｎｍｒ：（表５）。 Ｆ、ジーＮ−アセチルラクトサミニル構造を末端に有するモノフコシル化オリゴ 糖の合成 以下の例１４−１９は、血液型抗原決定基の類縁体がまた、免疫原性および寛容 原性を有することを例示する目的で示すものである。詳細に言えば、使用する血 液型抗原決定基の類縁体はＣＤ６５である。このＣＤ６５はシアリル　ルイスＸ の還元性糖に結合したβＧａ１（１−４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃ−ＯＲ二糖グリコ シドを存するシアリル　ルイスＸ誘導体である。ｒＭｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔ ｈｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　λＩｏｎｏｆｕｃｏｓｙ［ａｔｅｄ　Ｏｌｉｇ ｏｓａｃｃｈａｒｉｅｄｅｓＴｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ　ｉｎ　Ｄｉ−Ｎ−ａｃｅ ｔｉｌｌａｃｔｏｓａｍｉｎｙｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　Ｊと題する、１９９Ｉ 年１０月２日出願のり。 Ｓ、　５ｅｒｉａｌＮｏ、　０７／７７１２５９をさらに参照でき、これらの記 載をここに引用して組み入れる。上記したように、これらの化合物は、シアリル 　ルイスＸが、本明細書で定義されている血液型抗原決定基であることがら、血 液型抗原決定基の類縁体である。　′ 以下の例１４−１９において、予備シアリル化は下記のとおりにして行った： クツ１−肝臓βＧａ１（１−３／４）βＧ］ｃＮＡｃα（２−３）シアリルトラ ンスフェラーゼは、当技術で公知の方法によって、活性化セファロースにハブテ ンβＧａ　Ｉ　（１−３）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃｏ　（ＣＨ２）−ＣＯ２Ｈ”（Ｃ ｈｅｍｂｉｏｍｅｄ　Ｌｔｄ、、Ｅｄｍｏｎｔｏｎ、Ｃａｎａｄａ）を共有結合 させることにより得られたマトリックスにおけるアフィニティクロマトグラフィ により精製した。上記アフィニティカラムの通過物に含まれるβＧａｌ　Ｎ−４ ）βＧｌｃＮＡｃα（２−６）シアリルトランスフェラーゼは、開示されている とおりに５２、ＣＤＰ−ヘキサノールアミンセファロースにおけるクロマトグラ フィにさらに付した。 酵素を用いるシアリル化は、トリトンＣＦ−５４（０，５９６）　、ＢＳＡ　（ Ｉｍｇ／ｍｌ）およびウソ腸アルカリホスファターゼを介在するすトリウムヵコ ジレート緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ６，５）を使用して、プラスティック管て３７ °Ｃて行った５０゜この最終反応混合物をＨ２Ｃて稀釈し、次いて開示されてい るように’ｓｃ＋ｓセブーパックカートリッジに導入した。Ｈ２Ｃて洗浄した後 に、生成物本ＣＨ２０Ｈにより溶出し、次いて溶剤を蒸発させた。この残留物を ＣＨＣｌ　、　、ＣＨ２０ＨおよびＨ２Ｃの６５：３５：５混合物中に溶解し、 イアトロビーズ（０，２００−０，５００ｇ）の小型カラムに導入した。同一溶 剤混合物により洗浄してから、この生成物を同一溶剤のｆ３５：３５：８混合物 および（または）６５・４０：ＩＯ１昆合物により溶出した。相当するフラクシ ョンを集め（ｔｉｃ）、溶剤を減圧の下に蒸発させ、【（２０中のこの残留物を ＡＣ３０Ｗｘ８　（Ｎａ”形）の小型カラムに通し、生成物を減圧の下に凍結乾 燥させて採取した。ずへての場合に、８−メトギシカルポニルオクチルグリコシ トか、相当する８−カルボニルオクチルグリコシドから分離された。 以下の例＋４−１９において、予備フコシル化は下記のとおりに行った一βＧａ 　ＩＮＡｃ（Ｚ　（１−３／４）フコツルトランスフェラーゼは、開示されてい るように５′、ヒト乳から精製した。この酵素反応は、ナトリウム力コジレー１ −緩衝液（Ｉ　ＯＯｍｔ’ｖｌ、ｐＨ６，５）、ＭｎＣＬ　（Ｉ　ＯｍＭ）　、 ＡＴＰ　（１，６ｍＭ）、ＮａＮｘ　（１，６ｍ〜１）を使用して、プラスティ ック管で、３７°Ｃにおいて行った。この反応生成物は、上記のとおりに単離し 、精製した。 以下で使用するものとして、ＧＤＰ−フコースは、ｒｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｙｎ ｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ＧＤＰ−ｆｕｃｏｓｅ」　と題する１９９２年３Ｊ］９日 出願のＵ、　Ｓ、　５ｅｒｉａｌ　Ｎｏ、０７／　８４８２２３に記載の方法に よって好ましく製造される。この特許出願を引用してここに組み入れる。 詳細に言えは、ＧＤＰ−フコースは下記のとおりにして製造した。 Ａ、ヒス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）水素リン酸エステルの製造 テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム水酸化物（４０％水性重量／重量、約１５０ｇ ）を、ｐＨが７に達するまで、水（１５０ｍｌ）中のリン酸（８５％水性重量／ 重量、１８ｇ、０．１５５ミリモル）の溶液に滴下して添加した。次いて水を減 圧の下に蒸発させ、得られたシロップ状物を乾燥アセトニトリル（２Ｘ４００ｍ ｌ）とともに、次いて乾燥ｌ・ルエン（２Ｘ４００ｍｌ）とともに共蒸発させた 。精製する白色固形物（７５ｇ）を、減圧の下に乾燥させ、使用時まで減圧の下 に五酸化リン上で保存した。 Ｂ、β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェートの製造乾燥アセトニトリル（３ ００ｍｌ）中のビス（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム）水素リン酸エステル（ ５８ｇ、１２７．８ミリモル）の溶液を、窒素雰囲気の下に分子ふるい（４オン ゲス１−ローム、２０ｇ）を存在させて室温で約１時間攪拌した。この溶液をｏ ′Ｃに冷却し、ここに約０．５時間以内に、乾燥トルエン（１００ｍｌ）中のト ＩＪ　−０−アセチルフコシル−１−ブロマイド（これは、Ｎｕｎｅｚ等の方法 ６６て、Ｌ−フコーステトラアセテート３１ｇ、９３ミリモルから新しく製造し た）のｆｄ液を滴下して添加した。０“Ｃてさらに１時間後に、この混合物を室 温にし、次いで３時間攪拌した。ｔｉｃ（１：　Ｉ　）ルエン：酢酸エチル）は 、ベースライン上に主要スポットおよび数個の迅速に移動する　小さいスポット を示した。 この混合物をセライトのバット（これはアセトニトリルによりさらに洗浄する） に通し、次いで溶剤を減圧の下に蒸発させ、赤色シロップ状物を得た。この生成 物を水（４００ｍｌ）中に溶解し、次いて酢酸エチル（２５０ｍｌ、２回）によ り溶出した。この水性相を次いで、減圧の下に蒸発さ、せ、得られた帯黄色シロ ップ状物に水酸化アンモニウム（２５％水性、２００ｍ１）を加えた。 この混合物を室温で３時間　攪拌した。この時点でｔｉｃ　（６５：３５：８ク ロロホルム：メタノール：水）はヘースラインスポットを示した。溶剤を減圧の 下に蒸発させ、得られた帯黄色シロップ状物を水（４００ｍｌ）により稀釈した 。この溶液のｐＨを検査し、必要に応して、少量の塩酸の添加により７にした。 この溶液を、イオン交換樹脂ドーベツクス２Ｘ８　［２００−４００メッシュ、 ５Ｘ４５ｃｍ、樹脂をメタノール（８００ｍｌ）、水（１２００ｍｌ）、重炭酸 アンモニウム（１Ｍ、１６００ｍ１）、次いで水（１２００ｍｌ）により順次洗 浄して調製された重炭酸塩形］のカラムにゆっくりと吸着させた。次いてこのカ ラムに、水（１０００ｍｌ）を、次いて重炭酸アンモニウムの溶液（０，５Ｍ、 ２．３ｍｌ／分、−夜）を通した。この溶出液を分別して（１５ｍｌ）採取し、 ｔｉｃブレー１・上にスポットを生成させてから、炭化（ｃｈａｒｒｉｎｇ）に より検出した。フラクション２０−５７を集め、減圧の下に蒸発させ、得られた ０色固形物を水（３Ｘ３００ｍｌ）とともにさらに共蒸発させ、次いて最後の５ ０ｍ１を凍結乾燥させ、この残留物を減圧ポンプを用いて、乾燥させ、’Ｈ−ｎ ｍｒスペクトル分析てδ＝１．９４０の部位の一重項により同定される竹子の酢 酸アンモニウムを含有する、βアノマーとαアノマーとの＋　２　：　’１混合 物として、β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェート（９，５ｇ１４０９６） を得た。この生成物を、ドーヘックス５×８樹脂（＋００−２００メツシユ、ト リエチルアンモニウム形）のカラムに通し、次いて水で溶出し、この溶出液を凍 結乾燥させた１糸に、β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェ−１・のビス−ト リエチルアンモニウム塩を粘着性のガム状物として得た。　’Ｈ＝ｎ、ｍ、ｒ、 δ：４．．８４０（ｄｄ、Ｊ、□−Ｊ、、、＝７．５Ｈｚ、Ｈ−１）。 ３、　８　２　（ｑ、　ＩＨ、Ｊｓ、ｓ　６．　５Ｈｚ、　Ｈ５）　。 ３．７５０　（ｄｄ、ＩＨ，、Ｊ、、４３．５．Ｊ４．６１．０Ｈｚ、Ｈ−，４ ）、３．６７９　（ｄｄ、ｌＨ，Ｊ２．。 １０．０Ｈｚ、Ｈ−３）、３．５２０　（ｄｄ、ＪＨ，Ｈ−２）、１．９４０　 （ｓ、アセテート）、１．２６　（ｄ。 １．２８０および１．２　Ｇ　Ｏ（ＮＣＨ２ＣＨｚおよびＨ−６）におけるシグ ナルの完全性は、この生成物が過度の乾燥によって若干のトリエチルアミンを失 っていることがあるしスートリエチルーアンモニウム塩であることを示している 。”Ｃ−ｎ、ｍ、ｒ、δ：　９８．　３　（ｄ、ＪＣ，ＩＦ５．４Ｈｚ、Ｃ−１ ）、７２．８　（ｄ、ＪＣ２，７，５β−Ｌ−フコピラノンルー１−ホスフェ− １・は、２２°Ｃにおいて水中で長期間保存すると（ｌ土日）、ゆっくり分解す るようにみえる。従って、この物質は２２°Ｃまたはそれ以上に高い温度におい て、水性溶液中では、放置、取扱い、または保存すべきてはない。本例の場合に 、この物質は一１８°Ｃて保存し、後続の工程て使用する前に、五酸化リン状で 乾燥させた。 Ｃ，５’−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフエ−１・の製造 グアノノン５゛−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェートは、以下に示 す認められている２種の異なる方法を使用して、β−Ｌ−７コピラノシルー１− ホスフェートから製造した： 方法−１ β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェ−１・とグアノフン５′−モノホスホ −Ｎ．Ｎ−−シーソクロへキシル−カルボキシアミジン塩、これはＳｉｇｍａ， 　Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，から人手できる、“ＧＭＰ−モルホリ ゾート”）とを、Ｎｕｎｅｚにより最初に開示された方法６５の最近の変法６４ ６６に従い反応させた。すなわち、トリーｎ−オクチルアミン（０．８００ｇ１ 　これは、Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｉｌｗａｕ ｋｅｅ。 Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎから人手てきる）を、窒素雰囲気の下に、乾燥ピリジン（Ｉ Ｏｍｌ）中のβーＬーフコピラノシルー■ーホスフェ−１〜（トリエチルアンモ ニウム塩、１．００ｇ、約２．２０ミリモル）の混合物に加え、溶剤を減圧の下 に分離した。フラスコ中には乾燥した空気のみが入るように注意しながら、この 方法を３回反復した。 Ｇ　Ｍ　Ｐ−モルホリゾート（２．４ｇ，約３．３０ミリモル）を乾燥ジメチル ホルムアミドとピリジンとのｌ：１混合物（ＩＯｍｌ）に溶解した。この溶剤を 減圧の下に蒸発させ、この処理を上記のとおりに３回反復した。この残留物を同 一溶剤混合物（２０ｍｌ）に溶解し、この溶液を粉砕した分子ふるい（２ｇ、４ オングストローム）とともに、反応フラスコにゆっくり加えた。この混合物を、 窒素雰囲気の下に室温で攪拌した。ｔｉｃ（３：５：２　２５９６水性水酸化ア ンモニウム、イソプロパツールおよび水）は、出発ＧＭＰーモルホリゾート（Ｒ ｆ〜０．８、Ｕ，Ｖ．）　、グアノシン５′−（β−Ｉ−フコピラノシル−）− ジホスフェート（Ｒｆ〜０、５、Ｕ．Ｖ，および炭化）に相当するスポット、引 き続き出発フコース−１−ホスフェート（Ｒｆ〜０．４４、炭化）のティリング スポットを示した。追加のＵ。 ■、活性の小さいスポットもまた存在した。室温で４日間攪拌した後に、得られ た帯黄色混合物を減圧ポンプを用いてさらに一夜乾燥させ、濃厚な残留物（２， ４３ｇ）を得た。このフラスコに、水（ｌｏｍｌ）を加え、得られた黄色の濁っ た溶液をＡＣ３０Ｗ−Ｘ　ｌ　２（Ｂｉｏｒａｄから）樹脂（１００−２００メ ツツユ、２５Ｘ１．５ｃｍ５Ｎａ’形）のカラムの頂」二部に導入した。 生成物は、水で溶出し、次いでこの水は除去した。 ｔｌｃｌリプレート上ポット生成させた後に、Ｕ、Ｖ。 および炭化の両方で活性なフラクションを採取し、この溶液を減圧の下に一夜、 凍結乾燥させ、粗製生成物（１，９６ｇ）をｊ１トた。 この残留物を水（全部で１０ｍ１）に溶解し、次いで水、メタノールおよび水（ それぞれ２５０ｍ１）により洗浄することによって条件　調整されている疎水性 ｃｐｓシリカゲル（Ｗａｔｅｒｓ、２．５Ｘ３０ｃｍ）のカラムにゆっくり吸着 させ７°−０次いてこのカラムに水を通しく０．４ｍｌ／分）、溶出液を分留し く０．８ｍ１）、それぞれｔｌｃ（３：５：２　２５％水性水酸化アンモニウム 、イソプロパツールおよび水）に　より検査した。 β−Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェ−１−（Ｒｆ〜０．５４、炭化）はワラ クシ９ン２９−４５に溶出された。強力なＵ、Ｖ、活性スポラ１−（Ｒｆ〜０． ５１）を示す生成物は主として、フラクション４６−６５に溶出された。さらに 大きいＲｆまたはさらに小さいＲｆの、その池の微少Ｕ、Ｖ、活性ス活性スーツ 見出だされた。グアノシン５″−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェー ト（Ｒｆ〜０．６２）を含有するフラクション５９−８６はまた、狭いＵ、Ｖ、 活性スポット（Ｒｆ〜０．５７）を示した。フラクション５９−８６を集め、− 夜凍結乾燥させ、グアノシン５′−（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェ ー！−に富む生成物０．３５３ｇを得た。’Ｈ−ｎｍｒは、この生成物が、δ＝ ４．１２およびδ＝５．０５にシグナルを示す、少量の夾雑物により汚染されて いることを示した。 フラクション２９−４５および４７−５７は別々に集め、凍結乾燥させて、β− Ｌ−フコピラノシルー１−ホスフェートを採取した（それぞれ０．２６４ｇおよ び０．２２３ｇ、２番目のフラクションは若干の夾雑物を含有していた）。場合 により、相当するフラクションを集めることによって、若干量のグアノシン５′ −（β−１−フコピラノシル−）−ジホスフェートか良好な純度で（’Ｈ−ｎｍ ｒ）得られる。一般に、グアノシン５′−（β−１−フコピラノシル−）−ジホ スフェートに富む生成物はいづれも、少量の水に溶解し、大量のメタノール、次 いて水による洗浄により再生させた、同一カラムに通した。純粋なグアノシン５ ′−（β−Ｉ−フコピラノシル−）−ジホスフェートを含有するフラクション（ ｔｉｅ）を集め、減圧で凍結乾燥させて、白色の綿毛状生成物（１８７ｇ、１６ ９６）を得た。’Ｈ−ｎｍｒは、公知のデータと一致した。 方法−２ β−Ｌ−フコピラノンルー１−ホスフェ−Ｉ・とグアノノン５′−モノホスホモ ルホリゾート（４−モルホリン−Ｎ、Ｎ−一ソーソクロへキンルーカルボキシア ミジン塩、”　Ｇ　Ｍ　Ｐ−モルホリゾート”）とを、最初に開示された方法＠ ５に従い乾燥ピリジン中で反応させた。すなわち、β−Ｌ−フコピラノツルー１ −ホスフェート（トリエチルアンモニウム塩、０．５２８ｇ、約１．１８ミリモ ル）を乾燥ピリジン（２０ｍｌ）中に溶解し、次いて溶剤を減圧の下に分離した 。フラスコ中には乾燥した空気のみか入るように注意しなから、この方法を３回 反復した。この反応フラスコに、ＧＭＰ−モルホリゾート（１２ｇ、１．６５　 ミリモル）およびピリジン（２０ｍｌ）をＩＪＩ＋え、次いて溶剤を減圧の下に 蒸発させ、この処理を上記のとおりに３回反復した。最終残留物にピリノン（２ ０ｍｌ）を加え、次いて不均一のｌ見合物を、室温で窒素雰囲気の下に３−４０ 間攪拌した。不溶性生成物か生成された。この生成物は、場合により音波により 分解させねばならない。 この反］、Ｌ：はｔｉｃにより追跡し、方法−１に記載のとおりに仕上げ処理し 、ＧＤＰ−フコース（１２０ｍ　ｇ、１６９６’）を得た。 例１４ ８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシーα −Ｄ−グリセロ−Ｄ−がラクト−２−ノヌロピラノシロン酸）−（２−６）−０ −β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−４）−０−２−アセトアミド−２−デオ キシ−グルコピラノシルー（１−３）−０−β−Ｄ−ガラク１ヘピラノシルー（ １−４）−０−２−アセトアミド−２−デオキシ−グルコピラノシト（６２ａ） の製造 βＧａｌ　（］−４）βＧＩｃＮＡｃ　（１−３）βＧａｌ　（１−４）βＧ　 Ｉ　ｃＮＡ　ｃ−ＯＲ（化合物６１見、６．５ｍｇ）　、ＣＭＰ−Ｎｅｕ５Ａｃ （１７ｍｇ）、βＧａｌ　（１−４）βＧｌ　ｃＮＡｃａ　（２−６）シアリル トランスフェラーセ（５０ｍＵ）およびアルカリホスファターゼ（＋５Ｕ）を、 上記溶媒２．５ｍｌ中て、４８時間インキュへ−１−した。単離し、精製して、 ６２ａ（３，０ｍｇ）を得た。 例１５ ８−メＩ・キソカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオギンー α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロビラノシロン酸）−（２−６）− ０−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−４）−０−２−アセトアミド−２−デ オキシ−グルコピラノシル−（＋−５）−０−β−Ｄ−ガラクトピラノツルー（ ｌ−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１−３）０　］２−アセトアミド − ラノシド（６３ａ）およびその８−カルボキシオクチルグリコシド（６３ｂ）の 製造 化合物６２ａ　（３，０ｍｇ）　、ＧＤＰ−フコース（５，０ｍｇ）　、βＧｌ 　ｃＮＡｃａ（１−３／４）’：）コシルトランスフェラーゼ（ＩＯｍＵ）を、 緩衝液（０，５ｍｇ）　を　？忰　Ｉこ。 例１６ ８−メトキシカルボニルオクチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−４）　− 〇−２−アセトアミドー２−デオキソ−β−Ｄ−グルコビラノンルー（１−３） −〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノシ ル−（１−３）−０−１２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラ ノシド（６４ａ）およびその８−カルボキシオクチルグリコシド（６４ｂ）の製 造 化合物６３ａおよび６３ｂ　（１，７ｍｇ）を、アガロース」二に不動化されて いるクロストリジウム　ペルフリンゲンス（Ｃｌｏｓｊｒｉｄｉｕｍ　Ｐｅｒｆ ｒｉｎｇｅｎｓ　）ノイラミニダーゼ（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍ ｐａｎｙ、　を几ｏｕｉｓ、Ｍｏ、　ＩＵ）とともに、ナトリウムカコンレート 緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ５，２，２ｍ１）中で、３７°Ｃにおいてインキュベー トした。２４時間後に、この混合物を水（１０ｍｌ）により稀釈し、次いてアミ コン（Ａｍｉｃｏｎ）　Ｐ　Ｍ　−１０膜に通して濾過した。この通過液および 洗浄液を凍結乾燥させ、残留物を水（３ｍｌ）に溶解し、２木のＣ１１カートリ ッジに通した。各カートリッジを水（１０ｍｌ）により洗浄し、次いてメツノー ル（２０ｍ　ｌ　）により溶出した。 溶剤を蒸発させてから、この残留物を上記のとおりに、イアトロビーズ（２１０ ｍｇ）におけるクロマトグラフィにけし、６４ａ　（０，８ｍｇ）および６４ｂ （０，７ｍｇ）を得た。６４ｂを乾燥メタノールに溶解し、次いでｔｌｃか６４ ａへの完全な変換を示すまで、ジアゾメタンにより処理した。 例１７ ８−メＩ・キシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ− α−Ｄ−グリセローＤ−ガラクトー２−ノヌロピラノシロン酸）　−（２，−， ３）　−〇−β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（＋−４）−Ｏ＝２−アセトアミド ー２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（＋−５）−０−β−Ｄ−ガラク トピラノシルー（１−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノシル−（Ｌ−３）−０− １２−アセトアミド−２−デオキソ化合物６４ａ　（１，５ｍｇ）　、ＣＭＰ− Ｎｅｕ５Ａｃ（８ｍｇ）、βＧａ　Ｉ　（１−３／４）βＧ　Ｉ　ｃＮＡｃａ　 （２−３）シアリルト゛１ンスフエラーセ（＋７ｍＵ）、アルカリホスファター ゼ（５Ｕ）を、シアリル化緩衝液（１゜５ｍ１）中て４０時間インキュへ一トシ た。単離し、精製して、６５ａ　（０，７ｍｇ）および６５ｂ　（０，５５ｍｇ ）を？【トた。 例１８ ８−メトキシカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３，５−ノデオキシーα −Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノンロン酸）−（２−３）−０ −β−Ｄ−ガラクトピラノシルー（１−４）−’０−２−アセトアトー ノツルー（＋−３）−０−βーＤーガラクトピラノシルー（１−４）−０−２− アセトアミド−２−デオキｍｇ）　、βＧａｌ（１−３／４）βＧｌ　ｃＮＡｃ ａ　（２−３）シアリルトランスフエラーゼ（４　（３ｍＵ）　、およびアルカ リホスファターゼ（１５Ｕ）を、シアリル化緩衝液（２．５ｍｌ）中で４８時間 インキュベー１１ｊこ。 （１（離し、精製して、６６ａ　（２．５ｍｇ）を得た。 例１９ ８−メトキンカルボニルオクチル（５−アセトアミド−３．５−ジデオキシ−α ーＤーグリセローＤーガラクトー２−ノヌロビラノシロン酸）−　（２−３）− ０−βーＤーガラク１ーピラノシルー（１−４）−０−［α−Ｌ−フコピラノン ルー（１−３）−０−］　］２ーアセトアミドー２ーデオキシグルコピラノシル −（１−３）−０−βーＤーガラクトピラノシルー（１−４）−０−　［α−Ｌ −フコピラノシル−（１−３）−Ｏ−］　］２ーアセトアミドー２ーデオキソグ ルコピラノシｌ”　（　Ｇ　７　ａ　）の製造化合物６６ａ　（２．５ｍｇ）　 、ＧＤＰ−フコース（８ｍｇ）およびβＧｌ　ｃＮＡｃａ　（１−”３／４）フ コシルトランスフェラーゼ（＋９　ｍＵ）を、酵素処理用緩衝液（２．０ｍｌ） 中で４８時間インキュベートした。単ＭＬ、精製して、６７ｂ　（１．７ｍｇ） を得た。 上記例１−６で製造された化合物の’Ｈ−ｎｍｒデー表　ＩＱ Ｇ２２％阻害性オリゴ糖グリコシドの免疫抑制性例２０−３４は、血液型抗原決 定基関連オリゴ糖グリコシドの免疫抑制性を証明するものである。これらの例に おいて使用されたオリゴ糖グリコシドは図１２および１３に示されている。これ らの図において、これらの化合物の構造は、ローマ数字で示されている。 例２０ Ｄ　Ｔ　Ｈ炎症応答の抑制 ＤＴＨ炎症応答の抑制を、Ｓｍ１ｔｈおよびＺｉｏｌａにより開示されたマウス 足裏ふくらみ部膨潤検定法２１を使用して測定した。簡単に言えば、Ｂａ１ｂ／ ｃマウスの群を、クロストリジュウム　テルモヒドロサルフリクム（Ｃｌｏｓｔ ｒｉｄｉｕｍ　ｔｈｅｒｍｏｈｙｄｒｏｓｕｌｆｕｒｉｃｕｍ　）　Ｌ　−１１ １−６９からのＬｌ　ｌ　ｌＳ一層（Ｌａｙｅｒ）蛋白質、バクテリア表面蛋白 質０、ＩＯμｇにより免疫感作した。このＬ−１１１−６９は、強力な炎症ＤＴ Ｈ応答を誘発させるものとして証明されている。７日後に、各群のマウスの足裏 ふくらみ部を、ＬＩＩＩＳ一層重白質ｌＯμｇによるチャレンジに付した。チャ レンジ後の２４時間の時点て、生じる炎症による足裏ふくらみ部の膨潤をミツト ヨ　エンジニアリング　マイクロメーター（Ｍｉｔｕｔｏｙ。 Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒ）を用いて測定した。 図１２に示されている血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドＩＩＩ−Ｖｌｌ の炎症ＤＴＨ応答に係わる効果を評価するために、マウスの群に、チャレンジ後 の５時間の時点て、化合物ｌ１ｌ−ＶＩＩ１００μｇを尾静脈中に注射すること によって投与した。対照群は、処置しないか、またはリン酸塩緩衝塩類溶液（Ｐ ＢＳ）１００μｍを没！−ｊした。この実験の結果を図１に示す。オリゴ糖グリ コンドＩＩＩを注射したマウスは、対照マウスの足裏ふくらみ部膨潤の約４０９ ６を示したのみてあった。 オリゴ糖グリコンドＩＶ−Ｖｌｒ（シアリル−ルイスＸ、図１２の化合物ＩＩ＋ に関連した構造を存する）を注射したマウスは、対照マウスの足裏ふくらみ部膨 潤の５５−７０９６を示した。図２から判るように、糖ｖＩＩＩおよび■Ｘを注 射されたマウスおよび図１３に記載の三糖化合物Ｘを注射されたマウスは、実質 的に対照マウスに見出たされた足裏ふくらみ部膨潤と同程度の足裏ふくらみ部　 膨潤を示した。 例２１ ＤＴＨ炎症応答の抑制に係わる投与量依存性６群のマウスを、例２０に記載のＬ ｌｌｌ−３一層重白質による一次兄疫感作およびチャレンジに付した。チャレン ジ後の５時間の時点て、各群に図１２に記載の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グ リコシドＩＴＩを１Ｏ１２５，５０，７５または１００μｇの量て含有する溶液 １００μｍを、あるいはＰＢＳを、静脈投与した。チャレンジ後の２４時間の時 点て、各投与量肝におけるＤＴＨｃｉ；答を測定し、図２に示す。ＰＢＳまたは オリゴ糖グリコシドＩＩＩ　１０μｇか投与された群は、ＰＢＳ処置対照群と実 質的に同一程度の足裏ふくらみ部膨潤を示したのに比較して、オリゴ糖グリコシ ｌ’　Ｉ　Ｉ　１を２５．５０．７５または１００μｇの量で投与された肝はそ れぞれ、減少された足裏ふくらみ部膨潤を示した（それぞれ、ＰＢＳ対照の７８ ％、６９％、７５９６および５６Ｌｌｌｌ−３一層重白質に対する抗体応答の抑 制の欠落 例２０に記載のとおりに、免疫感作し、チャレンジに付し、次いてオリゴ糖グリ コシドＩＩＩ−Ｖｌｌて処置したマウス肝からの血清において、Ｌｌｌｌ−Ｓ一 層重白質に対する二次抗体応答を、−次免疫感作後の２週間（チャレンツ後の１ 週間）の時点て、測定した。 抗体力価は、Ｚｉｏｌａ等により開示された２１固相酵素免疫検定？１（ＥＩＡ ）を使用して測定した。簡単に言えば、Ｌｌｌｌ−３−［蛋白質２μｇを、マキ シソルブ（Ｍａ＼１ｓｏｒｂ）　Ｅ　Ｉ　Ａプレート（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒｉｅｓ、　ｌｌＩｃ、　。 Ｍｃｌｅａｎ、ＶΔ）の各四部にＩＪＩＩえた。室温て一夜にわたりインキュへ −１−１，た後に、四部を逆さにすることにより未吸着抗原を除去した。次いて 各凹部に、２９６（重量／容量）ウソ血清アルブミンおよび２％（容量／容量） ツイーン２０を含有するリン酸塩緩衝塩類溶液を用いて調製した種々の稀釈段の マウス血清２００μｍを加えた。室温で１時間の後に、四部を逆さにすることに より溶液を除去し、これらの凹部を蒸留した脱イオン水により室温で４回洗浄し た。ホースラディシュバーオキシダーゼー精合したヤギ抗マウス免疫グロブリン 抗体を次いて、各四部に加えた（リン酸塩＆ｌ＃塩類溶液／アルブミン／ツイー ン２０溶液中て調製したｌ　二２０００稀釈度の溶液２００μｌ）、、室温て１ 時間の後に、これらの凹部を再度逆さにし、洗浄し、次いで各四部に酵素基質溶 液（０，１Ｍクエン酸ナトリウム／リン酸Ｉｊ！緩衝液、ｐＨ５，５、中に新た に溶解した、０−フェニレンジアミン３ｍｇ／ｍｌおよび０．０２９１容量／容 量）過酸化水素）２００μｍを加えた。暗所で室温において３０分間、酵素反応 を進行させた後に、各四部に２Ｎ塩酸５０　／１１を加え、次いてそのＯＤ　４ 　！。値を測定した。 付したマウスから採取した血清の６稀釈系を用いて測定し、上記例２０に記載の 足裏ふくらみ部膨潤に係わり評価した力価をグラフで示すものである。図３に示 されている稀釈曲線は、Ｌｌｌｌ　Ｓ一層重白質に対する抗体の発現かオリゴ糖 グリコンドＩＩＩ−Ｖｌｌによる処置によって抑制されないか、あるいは別設の 悪影響を受けないことを示している。 例２３ 抗原チャレンジに係わる化合物ＩＩ＋の投与時期例２０に記載のとおりにして、 ＬＩ　Ｉ　Ｉｓ一層重白質に対して免疫感作し、Ｌｌ　ｌ　Ｉｓ一層重白質をチ ャレンジさせたＢａ１ｂ／ｃマウスの群に、図１２に記載の血液型抗原決定基関 連オリゴ糖グリコシド］　Ｉ　Ｉ　１００μｇのＰＢＳ（１００μｌ）中の溶液 を、抗原チャレンジに関して異なる時点て注入した。１８１には、抗原チャレン ジの１時間前に、オリゴ糖グリコシドＩＩＩを投与し１、他の１群には、チャレ ンジの直後に投与し、第３の群には、チャレンジ後の１時間の時点で投与し、そ して第４の群には、チャレンジ後の５時間の時点て投与した。対照群は、チャレ ンジの直後のＰ’Ｂ　Ｓ　（１，００μｌ）投与を包含した。 この実験の結果を図４に示す。抗原チャレンジの１時間前に、またはチャレンジ 直後に、オリゴ糖グリコシドＩ１１を投与したマウスでは、このＤ　Ｔ　Ｈ応答 は抑制されなかった。チャレンジ後の５時間の時点てオリゴ糖グ９％のみを示し た。 」二記例２０−２３は、抗原によるチャレンジ後における仔効量の血液型抗原決 定基関連オリゴ糖グリコシドによる処置か、この抗原に対する免疫応答（すなわ ちＤＴトＩ応答）を抑制し、これによりチャレンジ後の２４時間の時点て測定さ れた炎症のレベルが、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドにより処置され た動物においては、対照動物が示すレベルに比較して少なくとも２０％減少され ることを示している。 例２４ チャレンツ後の６．８または１０週間の時点におけるＤ　Ｔ　Ｈ炎症応答の抑制 の持続性 １９例２０の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドＩＩＩ−ＶＴＴにより処 置されたものと同一１１１のマウスを、−次免疫感作後の８週間の時点て、ＬＩ ＩＩＳ一層重白質による＋＋）チャレンジに付した。未処置対照は、通常の程度 の足裏ふくらみ部膨潤を伴い応答した。これに対して、他の群はいづれも、下記 のとおりの減少された足裏ふ（らみ部膨潤を示した。 一回ｌ」のチャレンツ後の５時間の時点て与られた、こ（シアリル基をイ丁して いない山−の誘導体）は、再チャレンツの時点ても、−回目のチャレンジの時点 と同様に強力であった。細胞性免疫応答の抑制か付与されるのに和えて、上記デ ータはまた、本発明に係わるオリゴ糖グリコシドによる処置かまた、同一抗原の 追加のチャレンジに対する寛容性を付与することを証明している。 １１、ソアリルールイスＸ、化合物ＩＩＩ（１０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、７ ５μｇ、１００μｇ）、または８−メトキシカルボニルオクタツールのβ−シア リルグリコシド（図１３の単糖化合物Ｖｌｌｌ、ＩＸ；１００μｇ）、またはＴ −三糖化合物の８−メトキシカルボニルオクチルグリコシド（図１３の三糖化合 物Ｘ）１００μｇにより処置されている、例２１と同−Ｄｉのマウスを、−次免 疫感作後の６週間の時点で、再チャレンジに付した。−回目のチャレンジ後の５ 時間の時点て、糖化合物に見出たされたものと同様の足裏ふくらみ部膨潤か見出 だされた。ＩＩＩの１０−１００μｇて、初めに処置されているマウスは、−回 目のチャレンジ後の２４時間の時点て生じた膨潤の９０−６５％の範囲の足裏ふ くらみ部膨潤を示した。 １１１−回目のチャレンジ後の１時間の時点で、または−回目のチャレンジ後の ５時間の時点て、オリゴ糖グリコント１１１１００μｇにより処置されている、 例２２と同一！！■のマウスを、−次免疫感作後の１０週間の時点て、抗原によ る再チャレンジに付した。チャレンジ後の短時間て、またはチャレンジの前に、 処置したマウスの足裏ふくらみ部膨潤は実験誤差の範囲内で、ＰＢＳ処置マウス のものと同一であった。これに対して、チャレンジ後の１時間または５時間の時 点て、初めから処置されていたマウスは、ＰＢＳ処置対照で見出だされた数値の 約６６％のみを示した。 この実験の結果か、図５−７に示されており、これらの図は、血液型抗原決定基 関連オリゴ糖グリコシドが、処ｒＩＬ後の少なくとも１０週間の期間にわたり、 同一抗原によるチャレンジに対する寛容性を付与することを証明している。 例２５ 化合物ＩＩＩの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシドにより誘発される抑 制に対するシクロホスファミド処置が有する効果 ソクロホスファミド（ＣＰ）でマウスを処置することによって、サプレッサー細 胞か消去されることは、刊行物で証明されている。ＣＰが化合物ＩＩＩの８−メ トキシカルボニルオクチルグリコシドにより誘発される細胞性免疫応答の抑制を 変えることかできるが否かを証明するために、実験を行った。 詳細に言えば、この例では、上記方法と同様の方法で、化合物ＩＩＩの８−メト キシカルボニルオクチルグリコシドによる処置により、ＤＴＨ炎症応答が予め抑 制され、かつまたＤＴＨ炎症応答に対して寛容性にされている、免疫感作したマ ウスを使用する。免疫感作後の１４日ロー、ＣＰ２Ｏ０ｍｇ／ｋｇを、次いて免 疫感作後の１７日ロー、ＣＰ２０　ｏｍｇ／ｋｇを、マウスに注射した。 これらのマウスを、ＬＩ　Ｉ　ＩＳ一層上白質２０μｇにょるチャレンジにＩＩ シた。このチャレンジ後の２４時間の時点で、足裏ふくらみ部膨潤の増加を測定 する（ｍｍ−’）ことにより、ＤＴＨ応答の程度を評価した。 この実験の結果か図８に示されている。この図８は、化合物ＩＩＩの８−メトキ シカルボニルオクチルグリコシドによる免疫抑制処置を　事前に受けたマウスで は、ＬＩＩＩＳ一層上白質によるチャレンジ前のＣＰの注射により、ＤＴＨ炎症 応答が復元されることを示している。 これらの結果は、図３の化合物ＩＩＩの８−メトキシカルボニルオクチルグリコ シドにより誘発される寛容性かＣＰ感感受性サプレッサー−細胞により仲介され ることを示唆している。 例２６ 化合物ＩＩＩの８−メトキシカルボニルオクチルグリコシドにより誘発された抑 制効果に対するＤＴＨ炎症応答を推進する抗原の効果この例では、化合物ＩＩＩ により誘発された抑制効果に対するＤＴＨ炎症応答を推進する抗原の作用を評価 する。例２０に既述されているように、マウスをＳ一層Ｌｕ１ｌ、ヘルペス　シ ンプレックス　ウィルスＩ　（Ｈ３ＶＩ）および陽イオン付加ウシ血清アルブミ ン［１，−バー　キャリアー（５ｕｐｅｒＣａｒｒｉｅｒ　）商標名、Ｐｉｅｒ ｃｅ、　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、　［ＬＩにより免疫感作した。図９に示されている ように、この炎症応答に使用された抗原の種類は、この応答を調節する化合物Ｉ ＩＩの能力に影響するようには見えない。 例２７ 活性化血管内皮に対するＥＬＡＭ−１依存性細胞液着に対する合成化合物ＩＩＩ の効果 この例では、合成血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドＩＩＩか、活性化し た血管内皮に対するＥＬＡＭ−１依存性細胞液着を抑制することかできるか否か を評価する。詳細には、Ｌｏｗｅ等により開示された１ｓ、インビトロ細胞結合 検定法を行った。簡単に言えば、ヒト請血管内皮細胞（Ｃｅｌｌ　Ｓｙｓｔｅｍ ｓ、５ｅａｔｔｌｅ、ＷＡから入手したＨＵＶＥＣｓ）を、ＴＮＦａ　（１０ｎ ｇ／ｍｌ）により刺激して、ＥＬＡＭ−１を発現させた。ＥＬＡＭ−１依存性様 相て、ＨＵＶＥＣｓに結合することか証明されているヒト腫瘍セルライン、Ｕ９ ３７またはＨＬ６０を使用して、ＨＵＶＥＣｓに対するＥＬＡＭ−１依存性結合 に係わり化合物ＩＩ＋か有する効果を測定した。図１Ｏは、この実験の結果を示 すものであり、化合物ＩＩＩかＨＵＶＥＣｓに対するＥＬＡＭ−１依存性結合を 抑制することを示している。 」二記例２０−２６のデータは、呻乳動物（マウス）における抗原に対する免疫 応答の処置およびまた抗原に対する寛容性の誘発、における血液型抗原決定基関 連オリゴ糖グリコシドの効果を証明している。マウスの免疫系はヒト免疫系に係 わる良好なモデルであることから、これらのオリゴ糖グリコシドはヒ１−免疫応 答の処置にも有効であるしのと見做される。このことは、血液型抗原決定基関連 オリゴ糖グリコシドかＨＵＶＥＣｓに対するＥＬＡＭ−１依存性結合を抑制する ことを証明している例２７の結果により支持されている。 例２８ 免疫感作または抗原チャレンジに係わる５１ｅＸの投与時期の効果 例２０に記載のとおりにするか、下記の点て修正して、４　ＨｆｆのＢａ１ｂ／ ｃ雌マウスをＨ３Ｖ抗原による一次免疫感作およびチャレンジに付した。 １）第１群は、２０μｇ／マウスの未活性化ヘルペスシンプレックス　ウィルス 　タイプＩ　（Ｈ３Ｖ）により免疫感作し、次いて７日後に２０μｇＨ３Ｖによ るチャレンジに付した。 ２）第２群は、２０μｇ／マウスのＨ３Ｖにより免疫感作し、次いて７日後に２ ０μｇ／マウスのＨ３Ｖによるチャレンジに付し、次いてこのチャレンジ後の５ 時間の時点て、１００μｇ／マウスの５ＩｅＸ（シアリル　ルイスＸ、化合物Ｉ 　Ｉ　Ｉ）を静脈注射した。 ３）第３群は、２０μｇ／マウスのＨ３Ｖにより免疫感作し、次いてＰＢＳ　ｌ 　００μｌ中の１００μｇ／マウス５ＩｅＸを同一部位に筋肉内注射した。７日 後に、マウスの足裏ふくらみ部において２０μｇ／マウスのＨ３Ｖ単独によるチ ャレンジを行った。 ４）第４群は、ＰＢＳ　ｌ　００μｍにより免疫感作し、次いで７０後に、２０ μｇ／マウスのＨ３Ｖによりチャレンジを行った。これにより抗原チャレンジ中 の足裏ふくらみ部に生じる、肉体的損傷から生じる足裏ふくらみ部膨潤のバック グランドレヘルの尺度か得られる。 ＤＴＨ炎症応答の程度は、チャレンジ後の２４時間の時点て、ミツトヨ　エンジ ニャリング　マイクロメーターによる足裏ふくらみ部膨潤を測定することによっ て測定した。 図２７は、見出たされた足裏ぶくらみ部膨潤度を示すものである。減少パーセン トは、下記の式により計算した： 「処置マウス」は、抗原に加えて、化合物を投与されたマウス”Ｃある。「未処 置マウス」は、化合物を投与されていないマウスである。ハックグランド膨潤は 、抗原または化合物による免疫感作を行わず、ＰＢＳ単独で免疫感作したマウ１ において見出たされた膨潤度である。 Ｈ３Ｖによる免疫感作と同時に、かつまた同一部位に、５ＩｅＸをｉｔ射したマ ウスは、Ｈ３Ｖで免疫感作し、次いてＨＳ　Ｖによるチャレンジに付したマウス に比較して、足裏ふ二らみ部膨潤の８８９６減少を示した。足裏ふくらみ部をＨ ３Ｖによるチャレンジに付した後の５時間の時点て５ｌｅＸを注射したマウスは 、ＨＳ　Ｖで免疫感作し、次いてＨＳ　Ｖによるチャレンジに付したマウスに比 較して、足裏ふくらみ部膨潤の約８６．７％の減少を示した。 この実験結果は、オリゴ糖グリコシドＩ”ＩＩが、抗原によるチャレンジ後の５ 時間の時点てマウスに投与された場合に、抗原に対する免疫応答を抑制できるこ とを示している前記例を支持している。この例はまた、免疫感作と同時にマウス に投与されたオリゴ糖グリコシドＩＩＩか、この抗原に対する免疫系の感作を抑 制できることを示している。いずれの理論にも制限されないものとして、５Ｉｅ Ｘ（化合物１１１）は、Ｔヘルパー細胞の抗原提供細胞に係わる認識ｆ１ヒカを 干渉し、また免疫系か該当抗原に対して教育されるようになることを抑制するも のと考えられる。 例２９ ＨＳ　Ｖに対する抗体応答に係わるシアリルＬｅＸの効果 ４群のマウスを、例２８に記載のとおりに処置した。 ＨＳＶ抗原　に対する二次抗体応答を、例２８に記載のマウスの８１からの血清 において、−次免疫感作後の２週間（チャレンジ後の１週間）の時点て、測定し た。 ＬＩ　Ｉ　１３層蛋白質の代わりにＨ３Ｖ抗原を使用した以外は、例２２に記載 のとおりにして、抗体力価を測定した。 図２８は、例２８に記載の免疫感作したマウス群からの血清の６稀釈系で測定さ れた力価を、グラフで示すものである。初めの２１１１の結果は、ＬＩ　Ｉ　１ ３層蛋白質に係わる例２２て１１）られた結果と相関関係を有していた。 チャレンジ後の５時間の時点でＳ］ｅＸにより処置されたマウスの抗体応答は影 響を受けなかった。しかしながら、免疫感作時点で５ＩｅＸにより処置されたマ ウスは、Ｈ３Ｖ抗原に対する抗体応答のイｒ、ｆ！、の減少を示した。いずれの 理論にも制限されないものとして、５１ｅＸ（化合物Ｉ　Ｉ　＋）は、抗体応答 に含まれるＴヘルパー細胞を干渉し、また免疫系か該当抗原に対して教育される ようになることを　抑制するものと考えられる。 例３０ ＳＩｅＸ免疫抑制の誘発に対するシクロホスファミド処置の効果 例２５に記載されているように、シクロホスファミド（ＣＰ）によるマウスの処 置により、サプレッサー細胞を消去することかできる。詳細には、ＬＩ　Ｉ　１ ３層抗原による処置によりＤＴＨ炎症応答に対して予め抑制され、寛容性にされ ている免疫感作したマウスを使用する。 Ｂａ１ｂ／ｃのｌ　Ｆ４１を、ＬＩＩＩＳ層蛋白質２ｏμｇ／マウスにより免疫 感作した。７日後に、この群のマウスの足裏ふくらみ部に、ＬＩ　Ｉ　Ｉｓ層蛋 白質２０μｇをチャレンジさせた。第２の群のマウスは、同一部位で、ＬＩＩ＋ 蛋白質２０　μｇおよび５ＩｅＸＩ００μｇにより免疫感作し、次いて７日後に 、足裏ふくらみ部にＬｌ１１２０μｇをチャレンジさせた。第３のＪＩＰのマウ スには、免疫感作前の２目の時点で、ＣＰ２Ｏ０ｍｇ／ｋｇを腹腔内注射した。 この群には次いて、第２群に係わり上記した免疫感作およびチャレンジを行った 。第４の群のマウスは、同一部位で、Ｌｌ　１１２０μｇ／マウスおよびＴ−三 糖化合物１００μｇ／マウスにより免疫感作し、次いて第１群に係わり記載した とおりに、足裏ふくらみ部チャレンジを行った。第５の群のマウスは、ＰＢＳＩ ００μｌにより免疫感作し、次いて第１群に係わり記載したとおりに、足裏ふく らみ部チャレンジを行った。 これらの結果を図２９に示す。これらの結果は、免疫感作と同時点て５ＩｅＸに より処置すると、抗原に対する免疫応答が抑制できるという、例２８に記載の結 果を確認するものである。さらにまた、この例は、免疫感作と同時点のＳ］ｅＸ による処置による免疫応答の抑制が、免疫感作する前のシクロホスファミド処置 により解除できることを示しており、これはシクロホスファミド感受性サプレッ サーＴ−細胞の関与を示唆している。 例３１ ＯＶＡにより３１発されたＤＴＨ炎症応答の抑制に係わる、足裏ふくらみ部チャ レンジ後の化合物投与部位の効果 体重約２０−２５ｍｇの８−１２週令のＢａ１ｂ／ｃ雌マウスのｆｆｆを、ＰＢ Ｓ　（リン酸塩緩衝塩類溶液）１００μｍ中のＯＶＡ　（アルブミン、鶏卵、Ｓ ｉｇｍａ、　Ｓｔ。 Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）　Ｉ　００　ｕ　ｇおよびＤＤＡ　＜ジメチルジオクタシル アンモニウムブＣＩフィト、Ｅａｓｔｍａｎ　Ｋｏｄａｋ。 Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）　２０　ｐ　ｇを、このマウスの後肢筋肉に筋肯内 投与することにより、免疫感作した。 免疫感作後の７０目に、各群のマウスの足裏ふくらみ部にＰＢＳ２０μｌ中の０ ＶＡ２０μｇをチャレンジさせた。生じる足裏ふくらみ部の膨潤を、チャレンジ 後の２４時間の時点で、ミツトヨ　エンジニアリング　マイクロメーターにより 測定した。 炎症ＤＴＨ応答の抑制に係わる５１ｅＸの投与方法の効果を評価するために、化 合物１１１（ＳｌｅＸ）を異なる経路で投与した。成る群のマウスには、足裏ふ （らみ部チャレンジの後の５時間の時点で、ＰＢＳ２００μＩ中の５ｌｅＸ１０ ０μｇ／マウスを静脈投与し、またはマウスを軽い麻酔状態にして、ＰＢＳ２０ μｌ中のＳＩｅ’１００μｇ／マウスを鼻内に投与した。 鼻経路による化合物の投与方法は、Ｓｍ１ｔｈ等により開示されており６３、こ の刊行物を引用してここに組み入れる。簡単に言えは、マウスをメトファン（λ １ｅｔｏｆａｎ；Ｐｉｔｍａｎ−Ｍｏｏｒｅ　Ｌｔｄ、、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇ ａ、０ｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）により麻酔し、次いてマウスの鼻の近くに 、滴状の化合物５０μＩを置き、吸引させる。対照群は、未処置のままに置くか 、またはＰＢ３２００μｍを静脈投与するか、またはＰＢＳ５０μｍを州内投与 した。この実験の結果か図３０に示されている。この図は、チャレンジ後の５時 間の時点て、Ｓｌｅ”化合物を鼻に投与した場合に、免疫応答の抑制が得られた ことを示している。 例３２ ＯＶＡ誘発ＤＴＨ炎症応答の抑制に係わる足裏ふくらみ部チャレンジ後の投与時 機依存性 体重約２０−７５ｇの８−１２週令のＢａ１ｂ／ｃ雌マウスの群を、ＰＢＳ　Ｉ 　００μｍ中のＯＶＡ　（アルブミン、鶏卵、Ｓｉｇｍａ、）　Ｉ　００　ｕ　 ｇおよびＰＢＳ１００μｍ中のＤＤＡ２０μｇを、このマウスの後肢筋肉に筋肉 内投与することにより、免疫感作した。免疫感作後の７日目に、各群のマウスの 足裏ふくらみ部にＰ　Ｂ、Ｓ　２０μｌ中の０ＶＡ２０μｇをチャレンジさせた 。足裏ふくらみ部チャレンジ後の、５時間、７時間、または１ｏ時間の時点て、 マウス＋：ＰＢＳ　２００　ｕ　Ｉ中（７）ＳｌｅＸ１００μｇ／マウスを静脈 投与するが、またはＰＢＳ　２００μｍのみを静脈投与するか、またはマウスを 軽い麻酔状態にして、ＰＢ３５０μｌ中（７）Ｓ　Ｉ　ｅＸ　ｌ　００μｇ／７ ウスを鼻に投与するか、またはＰＢ３５０μｍのみを鼻に投与した。足裏ふくら み部の膨潤を、チャレンジ後の２４時間の時点て、ミツ］・ヨ　エンジニアリン グ　マイクロメーターにより測定した。 図３１は、この実験の結果を示している。ＯＶＡチャレンジ後の　７時間の時点 て投与された（鼻内投与および静脈投与の両方）ＳＩｅＸは、例２８に記載の式 を用いて計算して、陽性対照マウスの足裏ふくらみ部膨潤の７０−７４％を示し た。足裏ふくらみ部チャレンジ後の５時間の時点て、鼻内投与または静脈投与に より投与された５ＩｅＸは、それぞれ膨潤の６３％および５４９６の減少を示し た。足裏ふくらみ部　チャレンジ後の１０時間の時点て、鼻内投与または静脈投 与により投与された５ＩｅＸは、それぞれ膨潤の５８％および３２％の減少免疫 感作した部位とは異なる部位にオリゴ糖グリコシドを投与した場合に係わる抑制 効果 Ｂａ１ｂ／Ｃ雌マウスの群をＰＢＳ１００ｕｌ中のＤＤＡ　２０μｇ／マウスお よびＯＶＡ　Ｉ　００μｇ／マウスの後肢筋肉中への筋肉内投与により免疫感作 し、同時に５ＩｅＸ１００μｇ／マウスを筋肉内投与、鼻内投与または静脈投与 により投与した。７０目に、マウスをＰ　Ｂ　Ｓ　２　Ｏｕ　Ｉ中（７）ＯＶＡ 　２０　μｇ／７ウスニよるチャレンジに付した。足裏ふくらみ部膨潤を、チャ レンジ後の２４時間の時点て、ミツトヨ　エンジニアリング　マイクロメーター により測定した。 ［２Ｊ３２は、免疫感作時点でのマウスへの５ＩｅＸ投与か、５ＩｅＸ投与方法 に関係なく、同程度のＤＴＨ炎症［、Ｌ：答の抑制をもたらすことを示している 。これは、５ＩｅＸ化合物か静脈投与に加えて、その池の方法によっても、患者 の処置に投与できることを示唆している。 例３４ 師障害を生じさせるＬＰＳに対するオリゴ糖グリコシドの効果 マウスにＬＰＳ　（リポポリサッカライド）を鼻内投与した後の２４時間の時点 て、犠牲にしたマウスの肺の重量を測定することによって、Ｌ　Ｐ　Ｓが肺に障 害を生じさせることを実証した。簡単に言えは、８−１０週令の５μｇ／マウス の軽い麻酔下での鼻内投与により感作した。５時間後ニ、ＰＢＳ２００μｌ中（ ７）ＳＩｅＸ、Ｃ１９−９、Ｔ−三糖（＃２７）を　マウスに静脈投与した。 ２４時間後に、マウスを犠牲にし、その肺を　取り出し、重量を測定した。 図３３の結果は、Ｓ］ｅＡ（化合物ＶＩＩ）および５ＩｅＸ（化合物１１１）か 肺におけるＤＴＨ炎症応答を少なくとも約３０９６減少させたことを示している 。この結果は、５１ｅＡおよびＳ］ｅＸ化合物が、抗原にさらされた肺における 炎症、例えば急性呼吸障害症候群（Ａｃｕｔｅ　Ｒｅ５ｐｉｒａｔｏｒｙ　Ｄｉ ｓｔｒｅｓｓ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ　）　、の炎症の減少に任用でありうることを 示唆している。 例３５ リンパ球増殖応答に対する種々の量の５ＩｅＡおよびＳＩｅＸの効果 Ｂａ１ｂ／ｃ雌マウスの群をＭＵＭＰＳ（不活性化マンブス（Ｍｕｍｐδ＼ウィ ルスおよびＤＤＡ２０μｇ／マウスの後肢筋肉中−＼の注射によって、免疫感作 した。７日後に、マウスを犠牲にし、次いてリンパ節および牌臓を取り出し、次 いでリンパ球を単離した。このリンパ球を５％ハイベルミックス（Ｈｙｂｅｒｍ ｉｘ；　Ｓｉｇｎ＋ａ、Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ。 ＭＯ）で補強されているＲＰＭＩＩ６４０培地（Ｇ　ｉ　ｂｃｏ。 Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ　０ｎｔａｒｉｏ、ａｎａｄａ）中の種々の濃度のマンブ スウイルスおよび種々の濃度の化合物とともに、５％ＣＯ２中で３７°Ｃにおい て３日間、２ＸｌＯ’細胞／凹部のａ度で培養した。３日後に、細胞に２Ｈ−チ ミジン／凹部（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｃａｎａｄａ　Ｌｔｄ、、０ａｋｖ目１ｅ、 　０ｎｔａｒｉｏ。 Ｃａｎａｄａ）　１．　Ｏμキュウリイを６時間パルス照射した。 これらの細胞をＰｈＤ細胞収穫機を用いて収穫し、ｃｐｍをベックマン（Ｂｅｃ ｋｍａｎ　）　３０００シンチレーシヨンカウンターで測定した。抗原に対する 応答に係わるリンパ球の能力と３Ｈ−チミジン取り込み量との間に直接的相関関 係か存在することは従来から証明されているこの例ては、Ｔ−ヘルパー細胞応答 のインヒドロ測定に、リンパ球増殖応答を使用した。３Ｈ−チミジンの取り込み は、抗原にさらされたマウスからのリンパ球に比較して減少されることから、図 ３４は、５ＩｅＡおよびＳ　Ｉ　ｅＸ　（Ｃｌ　９−９）がまた抗原特異性リン パ球増殖応答を抑制することかできることを示している。いろれの理論にも制限 されないものとして、５ｌｅＡおよび５ＩｅＸはイン上１−ロ増殖応答を得るの に要するマクロファージニー細胞を干渉できるものと考えられる。 例３６および３７は木簡グリコシド６５ａの免疫抑制性を例示するものである。 例３６ ＤＴＨ炎症応答の抑制 例２０に記載のマウス足裏ふくらみ部膨潤検定法を使用して、ＤＴＨ炎症応答を 測定した。簡単に言えば、Ｂａ１ｂ／ｃマウスの群を、ＬｌｌｌＳ層蛋白質１Ｏ μｇにより免疫感作した。７日後に、各群のマウスの足裏ふくらみ部に、ＬＩＩ ＩＳ層蛋白質ｌ０μｇをチャレンジさせた。生じる炎症性足裏ふくらみ部膨潤を 、チャレンジ後の２４時間の時点で、ミツトヨ　エンジニアリングマイクロメー ターにより測定した。 例１７て合成された木簡グリコシド６５ａの炎症ＤＴＨ応答に係わる効果を評価 するために、チャレンジ後の５時間の時点て、その尾静脈への注入により、マウ スの群にこの化合物１００μｇを投与した。対照群には、リン酸塩緩衝塩類溶液 （ＰＢＳ）１００μｍを投与した。 この実験の結果を下記表１１に示す。この表において、足裏ふくらみ部膨潤の対 照との比較に係わる小さい増加は、被験化合物か免疫抑制性を有する、すなわち 被験化合物か抗原に対する応答としての足裏ふくらみ部膨潤度を減少させること を証明している。 表１１ 対照　３．３ ウスが、対照マウスに比較して、５０９６より少ない足裏ふくらみ部膨潤度を有 していたことを示している。 例３７ チャレンジ後の１１週間におけるＤＴＨ炎症応答の抑制の持続 １４例７の木簡グリコツドロ５ａで処置されている、同一１′＃のマウスに、− 次免疫感作後の１１週間の時期にＬＩ　Ｉ　１３層蛋白質による再チャレンジを 行った。 ＰＢＳ対照て処置したマウスは通常の程度の足裏ふくら置されたマウスは、ＰＢ Ｓ処置マウスが示した足裏ふくらみ部膨潤の約６０９６を示したのみてあった。 −次チャレンジ後の５時間の時点（−次免疫感作後の１週間の時点）で投与され た木簡グリコシド６５ａの、この抗炎症′Ａｈ果は、−次免疫感作後の１１週間 の時点て幾分弱められたか、ＰＩ３５処置対照に比較すれば依然として炎症の有 意の減少を示した。 細胞性免疫応答の抑制の提供に加えて、上記データはまた、本発明に係わる木簡 グリコシド化合物が同一抗原からの追加のチャレンジに対する寛容性を付与する ことを証明している。 上記例３６および３７のデータは、咄乳動物（マウス）における　抗原に対する 免疫応答の処置およびまた抗原に対する寛容性の誘発に係わる、本明細書に記載 の木簡グリコシド化合物の効果を実証している。マウスの免疫系かヒト免疫系の 良好なモデルであることから、これらの木簡グリコシド化合物はまたヒト免疫応 答の処置にも有効であるものと見做される。 上記語例に記載の方法に従うことにより、これらの例に記載のオリゴ糖グリコシ ドを単に置き換えることよって、その他の血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコ シドが、抗原に対する細胞性免疫応答の抑制に使用することができる。 浄書（内容に変更なし） ０　１．０　２．０　３．０ 足裏ふくらみ部膨潤の増加（ｍｍ−１）０　１．０２．０　３．０　４．０ 足裏ふくらみ部膨潤の増加（ｍｍ−１）Ｆｉｇ、３ 稀釈度 免疫付与抗原 １１１＋＠パーセント Ｆｉｇ、１０ 工 工工 αＦｕｃ シアリルルイスＸ（シアリノ吐ｅ　Ｘ）１■ 日９．１２ ａＮａｕｓ人ａ（２−４−３）βＧａ１．（１−ａ−４）βＧ１ｃＨλｃ−ＯＲ ａＮａｕ５λｃ（２−ａ−３）βＧａｌ　（１−ａ−３）　（３ＧｌｃＮＡｃ− ＯＲノアリル　ルイスＣ（シアリル　ＬｅＣ）Ｖエニ シアリル　ルイス″（ＣＡ　工９９−９）Ｆｉ、１２　（ｃｏｎ”ヒ） ａＮａｕ５Ａｃ−ＯＲ βＮａｕＳλＣ−０Ｒ βＧａｌ　（１−＞３　）　ＣＥＧａＬＮＡｃ　−ＯＲＦｉｇ、１３ シ Ｆｉｇ、１５ 社り上５ｍ Ｆｉｇ、１７ ムよ１ １−一エＩ Ｆｉｇ−１８ Ｆｉｇ、２０ １旦 Ｆｉｇ、２：Ｌ Ｆｉｇ、２２ 二ｍ Ｈ３Ｖに対するＤＴ１１応答に対するＳＬｅＭＩ！の効果免疫付与抗原　チャレ ンジ抗原 Ｆｉｇ、２７ Ｈ３Ｖに対する抗体応答に係るシアリルＬｅＸの効果Ｆｉｇ、２Ｂ Ｓ　Ｌ　ｃ　Ｘ免疫抑制の誘発にス・１するＣＰの効果Ｆｉｇ、２９ ＯＶＡ誘発ＤＴＨに対し、７日目に化合物による処置足裏ふくらみ部膨潤の増加 　（１０−１ｍｍ　）Ｆｉｇ、３０ Ｆｉｇ、３１ ＯＶＡ誘発ＤＴＨに対する、００目の化合物第ｎＦｉｇ、３２ ＬＰＳ誘発肺障害に月するＳ　Ｌ、　ｅ　Ｘお、Ｌび５ＬｅＡの効果Ｆｉｇ、３ ３ ＰＭ Ｆｉ　３４ ｑ・ 手続補正書（方式）胃 免疫抑制性および寛容原性のオリゴ糖誘導体事件との間係　特許出願人 氏名（名称）　グライカムド　インコーホレイテッド図面の翻訳文の浄書（内容 に変更なし）国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続ぎ （３１）優先権主張番号　８８９，０１７（３２）優先臼　１９９２年５月２６ 日（３３）優先権主張国　米国（ＵＳ） （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。 ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、ＣＡ、ＪＰ （７２）発明者　ベノット、アンドレ、ピー。 カナダ国ティー６ジー　０ジー９　アルバータ、エドモントン、セブンティファ イブアベニュー　１０９６８ （７２）発明者　カシエム、モハメッド、エイ。 カナダ国ティー６ケイ　１ブイ４　アルバータ、エドモントン、トウイン　チラ ス１７ディー[Detailed description of the invention] Background of the invention of immunosuppressive and tolerogenic oligosaccharide derivatives 1. Field of invention The present invention provides methods of using oligosaccharide glycosides in the treatment of cellular immune responses, and The present invention relates to pharmaceutical compositions containing these oligosaccharide glycosides. especially , the present invention provides methods for regulating (e.g., suppressing) cellular immune responses, including cellular inflammatory responses. The present invention relates to methods of using type antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides. 2. Reference publications In the Honda application form, the following reference publications should be placed in the corresponding part of the Honda application form with a superscript number. 11984). 4゜　Frazi@r et al., Annu,　Rev,　Biochem. Arc: 491 (1979). 34, Toone*, Tetrahedron, No, 17° public: 53 65-542211989). 37, Zblra1%, Monafsh, Chem. , Jjjl:127-141 (198B+. 5650 (19601° 43, Lemieux et al., US, Patent No. 4. 137,401 (19761゜ 44, Lemieux et al., υ, S-Special 5'T No. 4. 195,174 (19781° 45, Paulsent! , Cdrbohydr, Res. , 13:21-45119841゜ 46. 5abesan%, Can, J, Chem. fi2:644-652 (19B4n. 4g, Lemi@ux et al., u, s, patent no. 4. 767. 845 (19871゜ 49, MazidvP, U, S, Patent Application 5erial No. 07/ 336,932 (1989). 251:13835-13844 (19821゜53, 9mtth et al., I nfection and Irrvnunlty, 3 uni 12911980 1゜ 54, Ratcliff et al., υ, 5. 5erial No, 077278,1 06゜Filed on I+Mon 30, 1988 55, Ziola et al., J, of 1mmuno1. Methods, z: 159° (19871° 56, Ekberg et al., Carbohydr, Res, , jjfi:55 -67 (1982). 5B, Rana et al.: arbohydr, Ras, 41:149-157 ( 19B11゜59, Amvsm-Zollo et al., Carbohydr, Ra s,, Kamisumi: 19shi 212 (19861゜ 60, Paulsen et al., Carbohydr, Rag, JQ4:19 series. 219 (1982). Dan: 531-537 (1989). 63, Lee et al., Carbohydr, Res, 32:193 et al. (1 974). All publications and patent applications mentioned in this specification are incorporated herein by reference in the art. This is a novel for those skilled in the art. Each of these publications or patent applications is indicated in detail and separately. or to the same extent that it is incorporated by citation in its entirety. Do this by citing each such publication or patent application in its entirety. Incorporate it into this. 3.Technical status Important aspects involved in mammalian cells such as growth, movement, sensory development, and differentiation The process is partially controlled by signals from outside the cell that act on the surface of the cell. A certain degree of stimulation that is controlled by the cells reaches the cells through extracellular fluid, or Other signals are received from near or near the cell surface. , 4 , 50 evidence that they exert their effects by direct cell-cell contact suggests that specific Cell-surface receptors [sensing] juxtaposed cellular molecular signals through specific binding. sense) and biological mechanisms that transcribe this binding during cellular responses. This suggests that ism exists. For example, ■ crude cell-surface interactions are binding of pathogens to target tissues67, sperm-noninteraction8, cell-to-cell interaction in the immune system interactions110, and are believed to aid in direct processes such as embryonic development++. ing. Furthermore, a lack of cell-cell recognition may lead to neoplastic transformation and metastasis. It is thought to enhance uncontrolled cell proliferation and motility characterized by +2° Another evidence is that cell-recognition processes are linked to complex carbohydrate chains or glycans. 414.+6° e.g. surface glycoconjugates to complementary carbohydrate-binding proteins (lectins) on another cell Binding of can result in the initiation of specific interactions. An important part of carbohydrate-binding proteins is LEC-CAM protein [lectin-EG]. F ten complementary regulatory domain cell adhesion molecule (complementary Regul atory Domains-Cell Adhesion Mo1ecules )]. These proteins or functionally similar proteins or lectins The immune response (inflammation) occurs through cell-cell contact and also by extravasation of leukocytes. IT-210 specific carbohydrate receptors that can play an essential role in Gand is part of the putative receptor structure involved in the LEC-CAM protein. -7-21° These identified structures include the following: Contains structures. In these formulas, Q represents one or more other appropriately linked sugars. However, in vivo, such carbohydrates are generally not readily synthesized. Naturally occurring complex sugars that cannot be purified or easily isolated in therapeutic amounts It's part of quality. Previously disclosed species of oligosaccharide glycosides consisting of Their use in suppressing symptoms (including clinical responses) is not taught. Summary of the invention Here, a cell surface complex containing the above-mentioned Soaryl Lewis X or Lewis X glycan chain Carbohydrates functionally interact with lectins to regulate cellular immune responses in mammals. It has been discovered that there is no Yunori Gantt that can be suppressed. in detail Additionally, the present invention provides low molecular weight (MW generally less than about 2000 Daltons) Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides also interact with LEC-CAM proteins. interaction and/or mammalian cellular immune responses, including cellular inflammatory responses. interact with other lectins with sufficient potency to suppress the reaction in vivo. It is about discovering that something is true. The present invention also applies to such blood types. Antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides are involved in the response to antigen challenge in mammals. When administered, this administration increases tolerance to additional challenge from the same antigen. This is related to the discovery that it induces Accordingly, in one aspect of the method, the invention provides a method for controlling cell-mediated immune responses in mammals. This method involves the inhibition of blood group antigenic determinant-related oligosaccharides. comprising administering the glycoside in an amount effective to suppress the immune response. In preferred embodiments, the immune response suppressed by this method is an inflammatory response. In another preferred embodiment, the blood group antigenic determinant-related oligosaccharide group used in this method Lycosides are also characterized as binding-inhibiting oligosaccharide glycosides (defined below). It can be marked. In another of its method embodiments, the invention provides The method relates to a method of treating a cellular immune response to an antigen in a blood cell. type antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides at a concentration of about 0. 5mg/kg - about 50mg/k g of the mammal. Yet another aspect of the method In one aspect, the invention relates to a method of reducing the susceptibility of a mammal to an antigen; This method simultaneously exposes blood group antigenic determinants to oligosaccharide glycosides associated with blood group antigenic determinants. comprising administering to the mammal an effective amount of. In one of its composition embodiments, the invention is suitable for parenteral administration to a mammal. Regarding the pharmaceutical composition, the composition blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides and an amount effective to treat a cellular immune response; and an inert pharmaceutical carrier. Brief description of the drawing Figure 1 shows the challenge with 10 μg of LIIIS S-Layer protein antigen. DTH inflammation in immunized mice measured 24 hours after injection. It shows the increased swelling of the sole bulge resulting from the response. The smell of this experiment Some of the mice were exposed to various blood group antigens at 5 hours post-challenge. Treatment was with 100 μg of determinant-related oligosaccharide glycosides. Figure 2 shows the challenge with 20 μg of LIIIS S-Layer protein antigen. DTH inflammation in immunized mice measured 24 hours after injection. This figure shows increased swelling of the sole bulge resulting from the response IJD. for this experiment At 5 hours post-challenge, some of the mice underwent blood group antigen determination. Various monosaccharide glyconodes and oligosaccharide glycosides, including group-related oligosaccharide glycosides were treated with various amounts of Figure 3 shows the 2-week and post-primary immunization with Lllll5-IN protein antigen. Secondary antibody response (i.e., at 490 μm) at 1 week post-challenge 0-) Engineering nylene amine 0. Determined by the amount of antibody measured by quantitative analysis of D. This figure also shows that mice were tested at 5 hours post-challenge. These effects when treated with various blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides The effect of oligosaccharide glycosides on these responses is shown. Figure 4 shows that after challenge of immunized mice with LIIIS heavy white matter antigen. Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides for DTH inflammatory response, That is, 8-methoxycarbonyloctyl glycoside of sialyl-Lewis X, the compound This shows the effect of compound I11, in which mice were tested before and after challenge. At various later points, the 8-methoxycarbonyloctyl glycerin of Soaryl Lewis coside, compound ll1 treated with 100 μg. Figure 5 shows that LllllS heavier white matter antigen was detected on day 7 in immunized mice. At 5 hours after challenge with 20 μg, blood group antigenic determinant-related oligosaccharides Long-term (8 weeks) immunity developed after injection of Glyconod 5 mg/kg It shows restraint. FIG. 6 shows that LIIIS heavier white matter antigen 2 At 5 hours after challenge with 0 μg, blood group antigenic determinant-related oligosaccharide Various monosaccharide glycosides and oligosaccharide glycosides, including lycosides, were injected in various amounts. This shows the long-term (6 weeks) immunosuppression that occurred after the injection. Figure 7 shows that LIIIS is more heavy white matter anti-inflammatory in immunized mice on day -7. Before, at the time of challenge and after challenge with 20μg of original At various times, 8-methoxycarbonyloctylglycosylation of sialyl-Lewis The long-term ( 10 weeks) indicates immunosuppression. Figure 8 shows the 8-methoxycarbonyloctyl glycosylation of sialyl-Lewis in immunized mice, previously suppressed by treatment with compound III. Figure 3 shows cyclophosphamide-induced recovery of the DTH inflammatory response. Figure 9 shows that the type of antigen used to induce the inflammatory response was sialyl-Lewis Methoxycarbonyloctyl glycoside, Compound 11's ability to modulate DTH response This indicates that there is no impact. FIG. 1O shows 8-methoxycarbonyloctyl glycoside of sialyl-Lewis X, Compound [11 was introduced into TNFα activated human phloem endothelial cells (HUVECs) This shows that binding of U937 or HL60 can be inhibited. FIG. 11 shows blood group antigenic determinant-related oligosaccharide groups suitable for use in connection with the present invention. This shows the ``skeletal'' structure of lycosides. Figure 12 shows blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides used in connection with the present invention. In this formula, R is -(CH,)I　C(0)OC R. Figure 13 shows the monosaccharide glycosides and one disaccharide glycoside used in some examples. In this formula, R is -(CHI), C(0)OCH,. Figure 14 shows the general synthetic route used to synthesize derivatives of Neu5Ac. be. Figure 15 shows the structures of monosaccharide glycoside and oligosaccharide glycoside 3b-7a. It is. Figure 16 shows the oligosaccharide glycosides illustrated in Example 8. Figure 17 shows the oligosaccharide glycosides illustrated in Example 8. 1→3/4) βGICNAC (Z(2→3′) sialyltransferase βGa of Neu5Ac and its analogues (more precisely, “sialylic acid”) 1(1→3)βGIcNAc-terminal structure. Figure 17 also shows the enzymatic conversion of L-fucose to sialylated oligosaccharide glycosides. It shows the change. Figure 18 shows βGa1(1→3/4)βGIcNAcα(2→3′) sialyltra Neu5Ac, its analogues (more precisely, [sialylic acid]) ) to the βGaI(1→4)βGIcNAc-wood end structure. It is something. U! J18 is also a sialylated oligosaccharide glycosylation of L-fucose. This shows the enzymatic transfer of de\. Figure 19 shows βGa1 (1--4) βG I cNAcα (2→6゛) sialyl Neu5Ac and its analogs (more precisely, “sialylic acid ”) to the βGaI(1→4)βGIcNAc-terminal structure. It shows. Figure 20 shows βGa I (1-3/4) βGICNAC (2 (2→3') siali Neu5Ac, its analogues (more precisely, ``Sialitransferase'') lactose) to the βGa1 (1 → 4) βGlc (lactose) terminal structure by enzymes. It indicates metastasis. Figure 21 shows βGa I (1-3) aGa INAC (2 (2→3゛) sialyl N eu 5 A c, its analogues (more precisely , “sialylic acid”) βGaI (1→3)aGaINAc-diT”) end It shows the enzymatic transfer to the structure. Figures 22 and 23 show sialyl Lewis A by chemical modification of sialylated hapten. This figure shows the reaction route involved in the synthesis of analogs of . Figure 24 shows the preparation of sialyl-Lewis X analogues by chemical modification of sialylated hapten. It shows the reaction routes involved in the synthesis. Figure 25 shows sialyldimeric Le wis’″) and its internal monofucosylated derivatives. It is. In this FIG. 25, the name of the compound shown as compound 61a is βG al (+-4) βG I cNAc (1-3) βGa1 (1-4) β Gl cNAc-OR, which is also di-N-acetylacetosaminyltetrasatin Also called kaleido. Similarly, the trees present in compounds 65a and 65b in Figure 1 The simple portion is sometimes referred to as the VTM-2 epitope or allyl dimeric Lewis 1. Ru. Figure 26 shows the external monofucosy of soaryldi N-acetylacetosaminylhabten. 2 shows a synthetic route leading to the compound derivatives. Figure 27 shows 24 days after challenge with H3V antigen in immunized mice. Increased swelling of the plantar bulge resulting from the DTH inflammatory response measured at time points This shows that. Some of the mice were given sialyl-Lewis X, compound at the time of immunization. Compound 1] and some mice were treated with Compound 1 at 5 hours post-challenge. , sialyl-Lewis X, treated with compound III. Figure 28 - Two weeks after immunization and challenged with H3V antigen. Secondary antibody response (i.e., 0-frame at 490 nm) at a later 1-week time point Phenylenediamine 0. (Determined by the amount of antibody measured by quantitative analysis of D.) This figure also shows the time point of administration of sialyl-Lewis X, compound 111. shows the effects on these responses. Figure 29 shows 8-methoxycarbonyloctyl glycoside of sialyl-Lewis D in immunized mice previously suppressed by treatment with compound 11 [ Figure 3 shows cyclophosphamide (CP)-induced recovery of TH inflammatory response. Figure 30 shows that when challenged with OVA antigen in immunized mice, 8-methoxycarbonyloctyl of sialyl-Lewis X on DTH inflammatory response This shows the effect of the glycoside compound il+, and in this experiment, mice were 5 hours after challenge by different methods (IV intravenous administration; IN intranasal administration) At time points in between, patients were treated with compound 11 [. Figure 31 shows that when challenged with OVA antigen in immunized mice, 8-methoxycarbonyloctyl of sialyl-Lewis X on DTH inflammatory response This study shows the effect of glycoside Compound III, and in this experiment, mice were 5 hours after challenge by different methods (IV intravenous administration: IN intranasal administration) At intervening time points, they were treated with Compound 1H at various doses. Figure 32 shows that when challenged with OVA antigen in immunized mice, 8-Methoxycarbonyloctyl of Soarylew Lewis X on DTH inflammatory response This shows the effect of the glycoside, compound Il+, and in this experiment, mice were At the time of immunization, various different methods (TV intravenous administration, IN intranasal administration; were treated with compound I11 by intramuscular administration). Figure 33 shows that LPS was administered intranasally, and 5 hours later, various compounds were administered intravenously. In addition, various oligosaccharide glycosides and monosaccharide glycosides and monosaccharide glycosides on inflammatory responses in the lungs of mice were investigated. This shows the effect of lycoside. Figure 34 shows various doses of sialyl-Lewis X and lymphocyte proliferative responses. This shows the effect on sialyl-Lewis and sialyl-Lewis. Detailed description of preferred embodiments The present invention relates to oligosaccharides of low molecular weight (MW less than about 2000 Daltons) species. discovered that glycosides are effective in suppressing cellular immune responses in mammals. This cell-mediated immune response is associated with antigens in mammals. include immune-related inflammatory responses (e.g. DTH response) and cellular inflammatory responses to Ru. Furthermore, the present invention also provides treatment with these oligosaccharide glycosides. was shown to induce tolerance to the antigen in mammals treated as It's about what started out. A. Definition As used herein, definitions for the following terms are provided below. The term "cell-mediated immune response in mammals" refers to cell-cell interactions. refers to the immune response in mammals that occurs through This term includes specific information for the antigen. cystic inflammatory responses, e.g. delayed-type hypersensitivity (DTH) responses, e.g. myocardial inflammation, viral Cellulitis resulting from induced pneumonia, shock and sequelae (e.g. multiple organ failure) This includes respiratory disease syndrome, adult respiratory disease syndrome, etc. Preferably, the cellular immune response is , a leukocyte response. The term "blood group substances" (Yo, refers to specific glycoconjugate antigens on red blood cells, which are blood group substances) It is the basis for classifying species into species classes based on their immunological compatibility. “The term blood group antigenic determinant J refers to the non-reducing terminus, each naturally occurring oligosaccharide segment of 3-9 glycosyl residues. The term "blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycoside" refers to (a) 3-9 sugar monomers; oligosaccharide glycoside having an oligosaccharide group consisting of (b) a non-reducing moiety at the end; (C) an oligosaccharide glycoside having an aglycone group of liquid-type antigenic determinants (as defined above) or their analogues, oligosaccharide groups; means lycoside. Analogs of blood group antigenic determinants include one or two monosaccharide units of blood group antigenic determinants. chemically modified, and one or more sugar positions are The above functional groups have been introduced and/or one or more of the sugar units have been introduced. Includes those from which one or more functional groups have been removed. example For example, such modifications include removal of the -OH functional group, addition of - or more than two sugar units, ), introduction of amine functional groups, introduction of halo functional groups, - or two or more This can lead to the introduction of sugar units, etc. Such blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides can be represented by the following formula: Ru OL IGO3ACCHARIDE-Y-R In the formula, oligosaccharides are 3 to about 9 sugars unit and represents a carbohydrate structural group containing blood group antigenic determinants or their analogs. : Y is selected from IT consisting of 0, S, >NH and bond, and R is less than Both represent an aglycone moiety having one carbon atom. Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides form micelles through their aglycone moieties. It does not have proteins or lipids that form, or has other large aggregated structural groups. It is different from complex carbohydrates, which contain blood group substances. In a preferred embodiment, the aglycon moiety R is selected from the group consisting of -(A)-Z' , where A is a bond, an alkylene group having 2-10 carbon atoms, and a group of the formula -(C H2-CR4G),, (where n is an integer equal to 1-5: R4 is hydrogen, metal selected from the group consisting of thyl or ethyl: and G is hydrogen, oxygen, sulfur, nitrogen, Phenyl and as substituents amine, hydroxyl, halo, 1-4 carbon atoms selected from the group consisting of alkyl having 1 to 4 carbon atoms and alkoxy having 1 to 4 carbon atoms. (selected from the group consisting of phenyl having 1-3 elements) consisting of l? from l selected: and Z' is the group consisting of hydrogen, methyl, phenyl and nitrophenyl or alternatively G is not oxygen, sulfur or nitrogen and A is If it is not a bond, Z' can also be -0H1-3H1,N H2, NHRs, -N (Ra)2, -C(0)OH1-C(0)OR@, -C(0)Nl( -NH,, -C(0)NH2, -C(0)'NHR, and -C(0)N ( R, ) 2, where each R6 is independently , alkyl having 1-4 carbon atoms. A large number of aglycones are known in the art. For example, para-nitrophenyl group (para-nitrophenyl group) In other words, the bond consisting of -YR=QC@H4pNO2) is defined by Ekberg et al. 5@ disclosed. At an appropriate point in the synthesis, the nitro group is reduced to an amino group, and this Amino groups can be protected with N-1-lifluoroacetamide. support This trifluoroacetamide group is removed and an amino group is added to the song that is to be bonded to the body. can be provided. The sulfur-containing bond is 67° as disclosed by Dahmen et al. The bond of is derived from a 2-bromomethyl group, and this 2-bromomethyl group is Upon subsequent reaction with a nucleophilic group, OCH* CHt S CH* S CO* COs and 10CHz CHt It is possible to guide bonds with various terminal functional groups such as SC@H4pNHz. It has been proven. 6s such as Ra08 is a rottrifluoroacetamide)-hexyl bond (-0( CHt) * NHCOCFs), and this trifluoroacetyl The mido protecting group can be removed and provide some amino groups that are used in the coupling reaction. can. Examples of other known bonds include 7-medoxycarbonyl-3. 6-Shioxahe Butyl bond 6--(OCHt-CH2'), 0CH2Cow CHI; 2 -(4-methoxycarbonylbutanecarboxamide):x, thyl a0(-QC )-I2CH, NHC(0)(CH□), co, co3 + with appropriate monomer Allyl bond 6' (OCH2CH=CHt) leading to copolymer by group copolymerization ) ;Other allyl bonds 6! [-0(CH2CH,O), CH,CH=CH , ] are included. Furthermore, the presence of 2-aminoethanethiol in the allyl bond Derivatized under 63, the bond OCH2CH2CH2S CH2CH2N H2 can also be provided. Furthermore, as shown by Ratcliffe et al. 64, the R group can be reduced It can also be a sugar or oligosaccharide having a bond at the terminal end. Suitably, this aglycon moiety is a hydrophobic group, most preferably -CH2) 8C00CR, -(CH2)60CH2CH=CH, and -CH2') 8. A hydrophobic group selected from the group consisting of CH20H. In particular, hydrophobic groups, Especially -(CH2'). C00CH, or 1, t-(CH2)S 0CH2CH=CH2 or -(CH2)s　When using CH208 group, this sialyltransferase The acceptability for the transfer of sialylic acid by Without being limited to any theory, we believe that the blood group determinant-related Gosaccharide glyconds effectively suppress immune responses to antigens, especially inflammatory immune responses. , which we believe provides a suitable means to treat such immune responses. Ru. Preferably, the blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides also contain binding inhibitory oligosaccharide glycosides. It is characterized by being a gosaccharide glycoside. In other words, this oligosaccharide glycoside is against cell surface lectins, sufficient to prevent leukocytes from binding to other cells. It is a blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycoside that binds. Such binding inhibition Sexual oligosaccharide glycosides are particularly effective in suppressing leukocyte-mediated immune responses. Furthermore, without being limited by any theory, we believe that Binding of leukocytes (possibly due to LEC-CAM protein and/or its binding on the cell surface) by other proteins), including leukocyte-mediated and immune-mediated inflammatory responses. believed to be an essential part of the hematopoietic immune response. Therefore, binding inhibition The oligosaccharide glycosides are suitable for the treatment of leukocyte-mediated immune responses. Binds sufficiently to the cell surface that leukocytes attach to that cell, either heterotypic or homotypic. The ability of blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides to inhibit the binding of can be easily measured by simple in vitro experiments. For example, lymph In vitro lymphocyte proliferation experiments, which measure the ability of cells to respond to antigens, It can be used to evaluate the ability of oligosaccharide glycosides to inhibit or enhance the can. An essential part of this ability is the ability to recognize antigen-providing cells and to This recognition triggers lymphocyte proliferation. This kind of In vitro experiments are performed as known in the art, as disclosed by Ziola et al. It is. In addition, another in vitro experiment measuring the ability of leukocytes to bind to the cell surface By employing a technique, heterotypic or homotypic, Candidate oligosaccharide groups involved in inhibiting the cell's ability to bind leukocytes It is also possible to evaluate the ability of lycosides. This kind of in vitro experiment is also possible with our technology. 2' by Campanero et al. and 18 by Lowe et al. Disclosed. Campanero et al. Disclose a method for measuring binding, and Lowe et al. Discloses a method for measuring heterotypic binding to. These in vitro experiments generally evaluate the presence or absence of candidate oligosaccharide glycosides. (control), e.g. at a candidate oligosaccharide glycoside concentration of about 10 μg/ml. , by measuring cell binding. In both cases, against the cell surface The degree of leukocyte binding is determined and the leukocyte binding is determined by at least 20% compared to the control. % (preferably at least about 30%, more preferably at least about 50%) Candidate oligosaccharide glycosides that reduce I do. The blood group antigen determinant-related oligosaccharide glycoside used in the present invention has Useful term units (i.e. sugars) include, by way of example, glucose, galactose, Cetyl-glucosamine, N-acetyl-galactosamine, fucose, sialic acid (defined below), 3-deoxy-D, L-octulosonic acid, etc. Natural and synthetic derivatives are included. In addition to those pyranose bottles, blood group antigens All term units in determinant-related oligosaccharide glycosides are fucose, which is its L form. except for their D type. Preferred blood group determinant-related oligosaccharide glycosides contain 3-8 word units. , especially βGa1(1→4)βGIcNAc group or βGal'(1→3) Includes those containing a βGIcNAc group. Particularly suitable for use in the present invention Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides include those listed in Figures it and 12. is included. In FIG. 11, R is an aglycone, preferably as defined above. an aglycone, where each R, independently consists of hydrogen, a sugar, and a compatible sugar. selected from the group, and each R2 independently consists of hydrogen, a sugar, and a compatible sugar. and at least one of R1 and R2 is a sugar. Particularly suitable blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides include those represented by the following formula: Contains: In the formula, Y and R are as defined above. Further particularly preferred blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides include An N-acetylneuraminic acid residue is present as a non-reducing sugar terminal. [The term compatible 5 accharide is If the blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides present have substituents, structures that make up the immune system may still interfere with the immune response, reducing or blocking it. means a word unit that can have substituents. As is clear, certain sugars and Substitution of sugar combinations or changes in the properties of blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides If this occurs, structures are created that can only block the immune response. Such sugar substituents or sugar combination substituents include at least one blood group antigenic determinant. In this respect, the related oligosaccharide glycoside structures are considered to be incompatible substituents. . The term "sialylic acid" refers to (N-acetylated) 5-amino-3,5-dideoxy -D-glycero D-galactononulosonic acid (nonulosonic ac id) ("Neu5Ac") and its derivatives. Derivatives of sialic acid The nomenclature used herein to represent This method is based on Method 25. B. Production of oligosaccharide glycoconte Oligosaccharide glycosides, including blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides, are completely Can be easily produced by total chemical synthesis or chemical/enzymatic synthesis . Chemical/enzymatic synthesis methods use glycosyltransferases to synthesize sugars or adds - or two or more word units sequentially to the oligosaccharide. Chemical synthesis is complete The production of oligosaccharide glyphants is secondary to or subsequently chemically converted into oligosaccharide glycosides. , or for the production of word units that can be combined using enzymes, or - individual or is an oligosaccharide glycoside that can enzymatically link two or more word units. This method is suitable for chemical production. Chemical modification of word units is well known in the art. - As an example, 9-azil''-Ne u5Ac, 9-amino-Neu5AC19-deoxy-N e II 5 A c, 9-fluoro-Neu5Ac, 9-bromo-Neu5Ac, 8-deoxy- Neu5Ac, 8-Shrimp-Neu5Ac, 7-Deok'/-Neu5Ac, 7 - Nibby Neu5Ac, 7. 8-bis-shrimp-Neu5Ac, 4-0-Me Chill-Neu5Ac, 4-N-acetyl-Neu5Ac, 4,7-cydeogy C-Neu5Ac, 4-oxo-Neu5Ac, 3-human ° Rokin-Neu5 Ac, 3-fluoro-Neu5Ac acid, and 6-thio analogs of Neu5Ac Chemically modified Neu5Ac is known in the art. Other chemical modifications of word units are also known in the art. Furthermore, chemical methods for producing oligosaccharide glycosides are also well known in the art. This method is generally suitable for the synthesis of individual structures and It is possible to optimize the composition. Generally, all or part of the oligosaccharide glycoside Chemical synthesis begins by forming a glycosidic bond on the aromatic carbon atom of a reducing sugar. includes. In particular, naturally occurring or chemically modified forms that are suitably protected. Modification of the sugar moiety (glycosyl donor) with the aromatic center of its reducing unit Introducing leaving groups including ido, trichloroacetimidate, thioglycoside, etc. do. This donor is then applied to the aglycone or The corresponding one with one free hydroxyl group in the position that creates the glycosidic bond form of carbohydrate receptors. The aglycone moieties of numerous species are known in the art. and can be added to the aromatic center of the reducing unit in any suitable configuration. Appropriate use of suitable protecting groups, well known in the art of carbohydrate synthesis, allows for selectively modify the accepted structure or add additional sugar molecules to this acceptor structure. It is possible to add positions or sugar blocks. Conventional method for generating glycosidic bonds A detailed discussion of the method can be found in the Attorney Docket. ) No. OOO475-011 and 000475-029 respectively. Titles of [Modified Sialyl Lewis 5 Compounds] and “Modified Sialyl Lewis 1 Compounds” and Venot et al., both filed on May 22, 1992. U, S, 5eriaiNo, 07/ and U, S, Seria It is described in No. 7/. Both of these cases are described in their entirety Cite and incorporate here. After generating glycosidic bonds, this sugar glycoside is used to form additional sugar units. (one or more) or chemically at selected positions. Modifications can be made or, after conventional separation of protecting groups, enzymatic synthesis It can be used for. Generally, naturally occurring or chemically modified sugars Chemically linking units to sugar glycosides is well documented in the literature and This is achieved employing established chemical methods. For example, see the following publications: "Okamoto et al. 27, Ratcliffe et al.", Ab bas et al. 29, Paulson", Schmidt", Fuegedi, etc. 32, Kameyama et al. 33, and Ratcliff et al. 64 These publications Each description of the object is incorporated herein by reference in its entirety. On the other hand, enzymatic conjugation is achieved by using glycosyltransferase. is achieved. This enzyme is active as their corresponding nucleotide donor The modified sugar unit is typically located at the non-reducing sugar moiety of the sugar or oligosaccharide, and transfer to specific sugar or oligosaccharide receptors. See, for example, Toone et al. Wear. Furthermore, a sugar or oligosaccharide acceptor, a sugar donor, or an enzymatic reaction product Selective chemical modification of the product can also be carried out, including the addition of glycotransferases. A typical example is sialyltransferase, an enzyme whose cytidine moiety N-acetylneurami activated as nophosphate (CMP) derivative Comprises a group of enzymes that transfer acid to the terminal oligosaccharide structural group of glycolipids or glycoproteins. It is something to do. A special transfer agent that constructs the following terminal structural groups in complex carbohydrates. oNeu5Ac(2-6)aGalNAc-c#eu5 Ac(2-6)ノ9G signature cNAc-. Enzymatic transfer of Neu5Ac and its analogs requires prior preparation of their nucleic acids. It is necessary to synthesize an otide (CMP) derivative. Activation of Neu5Ac is normally It is carried out by using the enzyme CM P-sialylate synthase. This n Intase is readily available, and various derivatives of Neu5Ac, such as 9- Substituted Neu5Ac, 7-: r-B Neu5Ac, 7. 8-Bis-Shrimp-N eu5Ac, 4-0-methyl-Neu5Ac. 4-deoxy-Neu5Ac, 4-acetamido-Neu5Ac, 7-dioxy -Neu5Ac, 4. 7-sibuoxy-Neu5AC and 6 of Neu5Ac Examples of activation of -thio derivatives are described in publications. Alternatively, Neu5A analogs of c or not activated by CMP-sialyl sontase. This Neu5Ac analog is then converted into oligosaccharides by chemical means known in the art. You can also combine them. A nucleotide derivative of Neu5Ac or its analogue and a sugar receptor are combined into Neυ5 A suitable sialyltransfer under conditions where Ac or its analogues are transferred to the receptor. Spherase is present and blended with each other. As obvious, sugar receptors used serves as a substrate for the specific sialyltransferase used. There must be. In this regard, Neu5Ac is normally linked to natural receptors (i.e., glycoproteins and It does not have terminal-accepting trisaccharide structural groups and aglycones that are recognized by enzymes. Other complex carbohydrates having a glycan chain with a terminal acceptor trisaccharide, in these cases, R=H) or some sialyltransferases can tolerate certain modifications in the structure of the receptor, but different sialyltra sferase is recognized to have specificity only for -m receptors. ing. Chemically modified receptors (“artificial receptors”), e.g. oligosaccharide moieties The optionally modified oligosaccharide glycosides are in some cases sialyltran Tolerated by spherase. On the other hand, not all chemical modifications of the receptor are permissible. For example, βGa 1(1→3/4)βGIcNACα(2→3) sialyltransferase is N Transfer eu5Ac to terminal βGa1(1→4)βGIcNAc-disaccharide structural group be able to. However, in this case, 3. 4 and 6 The hydroxyl group present in the position is essential for recognition by this enzyme and Therefore, chemical modifications at one or more of these positions cannot be recognized by enzymes. can lead to a lack of Similarly, when attempting to enzymatically transfer a Neu5Ac analogue, this Analogous CMP derivatives also need to be recognized by sialyltransferases. There is a point. Sialyltransferases act automatically to transfer or donate Neu5Ac. By natural design, any modification of Neu5Ac could result in the production of an “artificial receptor.” bring about success. In this regard, a variety of sialyltransferases include Ne Some modifications to u5AC can be tolerated and still this Neu 5Ac to 1% with appropriate terminal acceptor structure groups present! It can be transferred to a pious person. It is recognized that Surprisingly, sialyltransferases transfer artificial donors to artificial acceptors. It was found to have sufficient recognition flexibility to allow transfer. This kind of flexibility , which can facilitate the synthesis of numerous sialylic acids containing oligosaccharide glycosides. Wear. As mentioned above, suitable nucleotide derivatives of Neu5Ac or its analogs are , Neu5Ac or its analogues are transferred to the receptor under the conditions of appropriate cyanogens. Lyletransferase is present and the appropriate receptor (i.e., sialyltransferase) is present. A terminal sugar unit (one or more (above) and oligosaccharide glycosides). suitable methods known in the art. For appropriate conditions, a suitable buffer, e.g. 1M sodium cacosylate (ca suitable for mixtures of sugar acceptors and CMP derivatives of sialic acid in codylate). Appropriate pH and temperature conditions, e.g. 6. 5-7. pH of 5 and 25-45°C1 Preferably at a temperature of 35-40°C for 12 hours to 4 days, as appropriate. This includes adding a suitable sialyltransferase. Oligosaccharides produced HPLC, gel-, ion-exchange-1 reverse phase- or adsorption-chromatography It can be isolated and purified by conventional methods including. Similarly, a method similar to that described above for transfer by sialyltransferase is used. Depending on the method, the appropriate glycosyltransferase is used to convert different types of sugars into glycosyltransferases. Alternatively, it can also be transferred into the oligosaccharide structure. In this regard, Sialilt Transferases and also other glycosyltransferases are known to those skilled in the art. is well known and described by Toone et al.''4 and Beyer et al. . C1 utility Without being limited to any theory, oligosaccharide glycosides can be synthesized in a number of ways. It is believed to act on cell-mediated immune responses. Oligosaccharide glycosides are important for the immune system This oligosaccharide glycoside is administered at the same time the patient is first exposed to the antigen. and can inhibit the ability of the immune response to engage and educate the antigen. Additionally, oligosaccharide glycosides are When administered to It is possible to suppress the tar phase. Furthermore, oligosaccharide glycosides are Tolerance to an antigen when administered after two or more exposures to that antigen It can induce sex. Suppression of the inflammatory part of the immune response by blood group antigen determinant-related oligosaccharide glycosides What is required for the initiation of a secondary immune response (i.e., second exposure to the antigen) I believe that. Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides are generally associated with inflammatory episodic at least about 0. 5 hours, preferably at least about 5 hours after the inflammatory episode 1 hour, most preferably at least about 5 hours after the inflammatory episode, the patient to be administered. Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides have approximately 0. 5mg - about 50mg/body weight kg, preferably about 0.0 kg. 5 - When administered in a dose range of about 5 mg/kg body weight, the anti- effective in suppressing the cellular immune response (e.g. the inflammatory part of the DTH response) against . The particular dosage used will depend on the particular cellular immune response being treated. and also factors such as the severity of the adverse immune response, the age and general health of the patient. Adjustments will be made depending on the child and at the discretion of the attending physician. Blood group antigen determination according to the present invention Group-related oligosaccharide glycosides are generally administered by non-lipstick administration, such as intranasal administration, pulmonary administration, Transdermal and intravenous or other forms of administration are also contemplated. in a preferred manner at 24 hours after challenge administration to the mammal, and according to the present invention. Cell-mediated immune response measured 19 hours after administration of oligosaccharide glycosides related to Answer, for example, suppression of the inflammatory part of the DTH response is reduced by at least about 10% relative to control. It will be less. In addition to suppressing the inflammatory part of the cellular immune response to antigens, blood type Administration of antigenic determinant-related oligosaccharide glyconodes also allows for additional challenge of the same antigen. Grants tolerance for. In this regard, blood group antigenic determinant-related oligosaccharide Re-challenge with the same antigen in the weeks following administration of lycosides was significantly reduced. inducing an immune response. Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides are administered concurrently with initial exposure to antigen. When given, the cell-mediated immune response to this antigen is suppressed and additional responses to this antigen are suppressed. Provides tolerance for challenges. In this regard, ``reducing susceptibility'' 1, with an effective amount of antigen sufficient to induce an immune response. , when administered to a mammal in an effective amount, the compound or the mammal's immune system The immune system becomes educated and sensitized to the antigen administered at the same time as the compound. It means reducing the ability of the epidemic system. The term “effective amount” of a compound refers to Cellular immunity to antigens such as DTH is tested by the dizziness challenge test. of mammals to antigens administered at the same time, as measured by a decrease in the infectious response. Means the amount that reduces the susceptibility (immunological education) of mammals. In preferred embodiments, this decrease in susceptibility is at least about 2096, more preferably or at least about 30%. Generally, blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides are about 0. 5mg - about 50m g/kg body weight, preferably about 0. Administered in a dose range of 5 mg - approximately 5 mg/kg body weight effective in reducing susceptibility when treated. The specific dosage used will depend on the Adjustment at the discretion of the attending physician depending on the sensitization caused by the disease, as well as the age and general condition of the patient. be done. “Concomitant” administration of a compound with an antigen in relation to suppression of susceptibility means that the compound It is recommended that the drug be administered once or sequentially within 3 hours after administration of the antigen. Preferably, the compound is administered within 1 hour after antigen administration. The above-described methods of the present invention generally include the effectiveness of blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides. This is achieved through the use of a suitable pharmaceutical composition for parenteral administration of amounts. these The composition of an effective amount such that when administered, the oligosaccharide glycoside is provided in the above-mentioned dose. Consists of blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides. Suitable pharmaceutical compositions include auxiliary agents , preservatives, and other optional ingredients may be present. Other suitable pharmaceutical compositions include transdermal L1 compositions, transdermal compositions or Hunt Examples can be included, and these are known in the art. The following examples are illustrative of the invention and in no way limit the scope of the invention. It's not meant to be restrictive. In these examples, unless otherwise defined below, The abbreviations shall have the following generally accepted meanings: BSA = lie serum albumin d = double line dd == double line double line ddd = double line double line double line DTH: = delayed-type hypersensitivity eq = equatorial i, r, = infrared m = multiplet q = quartet t, I, 'c,: Thin layer chromatography AG] X8 (formate type) = Bi o-Rad Laboratories. Ion exchange resin AGIX8 (homemade) available from Richmond, CA. (G type) Dowex 50 x 8 (H” type) ==Dow Ion exchange resin dope available from Chemical, Midland, Ml. Box 50X8 (H4 type) IR-C50 resin (H” type) = Rohm & Haas, Ph1lad20e Ion exchange resin IPU-C50' (H" type) available from lphia, PA Those commercially available are listed by the manufacturer and have equivalent If applicable, please include the order number. Examples of manufacturers used include: apan Merck = E, Merck AG, Darmstadt, Ge rmany Milliball (Millipore) = Millipore Co rp, Bedford. M.A. Waters = Waters As5ociates, I nc. Mi 1ford, MA example In the examples below, Examples 1-19 illustrate the synthesis of a number of oligosaccharide glycosts. Examples 20-37, on the other hand, are examples of blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides. suppression of cellular immune responses to antigens and subsequent challenge with the same antigens. Figure 2 illustrates the induction of tolerance to microwaves. In Example 1-13, use The oligosaccharide glycosides obtained are indicated by the Arabic numerals listed in Figure 14-24. and the oligosaccharide glycoside of Example 20-35 is shown in Figure ll-13. Roman numerals are shown. In one or more of Examples 1-13, the analytical t. 1.C is pre-coated with silica gel (Merck, 60 F2%4). A plate was used and the spots were sprayed with a solution of 596 sulfuric acid in ethanol. Detected by carbonization. For column chromatography, silica gel 60 (λ(er ck, 40-63 μm) was used. Iatrobeads was from Iatron (order number 6R3-8060), Mirex (Mi　1ex)　-G　V filter (022μm) is from milliball It was something. C+s Sep-Pak cartridge and bulk CII silica The gel was from Waters Associates. Commercially available reagents were used for the chemical reactions, and the solvents were purified and dried using conventional methods. Unless otherwise stated, reaction mixtures were diluted with dichloromethane and poured onto charcoal in a pail. Washed with sodium acid solution and then with water. Dry over magnesium sulfate After drying, remove the solvent under reduced pressure at a bath temperature of 35°C or lower if necessary. It was removed by evaporation at the following temperatures: 'H-n, m, r, 2. in D, O as internal standard. set to 225 Using tetramethylsilane in acetone, or CDCl2, unless otherwise specified. At room temperature, at 300 MHz (Bruker AM-300) as long as possible. It was measured. Chemical shifts and coupling constants (determined by splitting) are of order - Part n. Only the data was recorded. +3 (:, The spectrum was used as a control, 67 in O. Tetramethylsilica in dioxane or CDCl set to 4 75. Recorded at 5MHz. A. Synthesis of Neu5Ac derivatives Unless otherwise stated, derivatives of Neu5Ac are prepared by adapting the starting materials as necessary. The product was prepared according to a known method by substituting the following. Apply the method described in the publication. The following derivatives were prepared with the following modifications: Figure 14 shows the general synthetic route used for the synthesis of Neu5Ac derivatives. be. In Examples 1-4 below, compounds indicated by underlined Arabic numerals are listed in Table I and FIG. Example 1 5-acetamido-9-azido-3,5,9-1-lysooxy-D-glycero- D-galacto-2-nonuroviranosilonic acid (9-N, -Neu5Ac) 1 Synthesis of b Glycodyl chloride 38 (2 , 83g, 5. 57 mmol) in dichloromethane (8 ml). Cole (5,0m1. 48. 2 mmol), molecular sieve 4 Å (1 8.5 g, crushed), dry silver carbonate (4.2 g, 15. 2 mmol) mixture added to the substance. The mixture was stirred in the dark for 4 days, diluted with dichloromethane (50 ml) and It was then filtered through Celite. After conventional finishing treatments, the residue is removed from the eluent. In silica gel using a 3=2 mixture of hexane and ethyl acetate as It was subjected to romatography. The product was then eluted with a 4:5 mixture of the same solvents. and pure substance (1,96 g, 60%) and substance containing small amounts of impurities 0. 33g (10%) was obtained. 'Hn, m, r, : 5. 436 (ddd, IH, Jl, *8. 5. J s, 2. 5. Js,s 5. 5Hz, H8). 5. 317 (dd, IH,, L, ff 1. 8) tZ, H-7). 5. 110 (d, IH, Js, +, s9. 5Hz, NH). 4. 849 (ddd, LH, Jx--, a'I 2. 0°Ji, 44. 5. Jl, 59. 5H2, H-4). 4. 788 and 4. 397 (AB, 2H, J,... 12. 0Hz, benzyl), 3. 642 (S. co, cdan2), 2. 629 (dd, IH,,L,,,3. . 12. 5Hz, H-3eq), 2. 140. 2. 113°2. 017. 1. 99 7. 1. 857. (5s, 15H. 40Ac, INAc), 1. 986 (dd, IH, H-3ax). The above substance (1.5g, 2. 58 mmol) containing a catalytic amount of sodium methoxide. De-0-acetic acid was removed for 5 hours at 22°C in dry methanol (20 ml) with Chilled. After deionization with Dopex 50X8 (H’ form), Evaporation of the solvent gave the product 39 (1.0 g, 94%). This product is then processed 'Hn, m, r, (CDCIs): 4815 and 4 , 619 (AB, 2H, J, -11,5Hz, benzyl), 3. 802 (S, CO2CH2), 3. 582 (dd, IH, Js, a 9. O,,L, t0. 5Hz, H-6), 2. 752 (dd, IH, J3-1. 3. ,+2 ．． 5゜Jl,,,4　4. 5H2, H-3eq), 2. 039 (s. 3H,N Ac), 1. 86 1 (dd, IH, J3--. 41 1, 0 Hz, H-3ax). para-toluenesulfonyl chloride (0,125 ml) in pyridine (0,1 ml) g, 0. A solution of 65 mmol) of pyridine ( 4-dimethylaminopyridine (0,01 g) in solution - and 9 ( 0,248g, 0. 60 mmol). After stirring for 4 hours at 0°C, methanol (0.01ml) was added and the mixture was co-evaporated with dry l-luene. This residue can be quickly applied as an eluent. Chromatographed on silica gel using setonitrile and still Tosylate containing some impurities (0. 21g, 6296) was obtained. this life Compound (0. 21gt o. 37 mmol) of dimethylformamide (0. 5ml ) solution with sodium azide (0. 19g. 2.92 mmol) was obtained. This mixture was stirred at 65°C for 18 hours. Stirred and subsequently passed through Celite, then the solvent was evaporated under reduced pressure. this The residue was purified in 6. with ethyl acetate and acetonitrile as eluent. 1 mixture used Chromatography on silica gel yielded the product 40 (0. 136g, 8596); i. r. θcm-'21 10 (N3);'H-n ．． m. r. :5. 775 (d, IH, JsNI+9. 0Hz, NH), 4. , 8 1 6 and 4. 470 (AB, 2H, J,., I 1. 　5Hz. benzyl), 3. 7 3 8 (S, CO2 CH2). 2, 8 7 1 (dd, IH, Jz-- 4 4. 8, Jz-, z-13, 0Hz, H-3ep), 2. 086 (s, 3H. NAc), 1. 964 (dd. IH,,L. ,,4 1 1. 　5Hz, H-3ax). Above compound 0 (0. 105g. 0. 24 mmol), 0. 25N hydroxide The mixture was left in L.lium (2 ml) at 22°C for 3 hours. dopex 50x8 After adjusting the pH to 6 by adding (H″″ form) and then filtering, the product was frozen. Collected by drying and then using chloroform, methanol and water as eluent. Chromatography on Iatrobeads using a 65:35:5 mixture. did. From the corresponding fractions the product (0. 087g, 86%) was obtained. this Compound (0. Toog. 0.235 mmol), 0.0.235 mmol). 025N hydrochloric acid (3 ml) at 80°C for 6 hours. Heated. The solution was neutralized with sodium hydroxide and then lyophilized. This product was used as eluent in 65:35:5 of chloroform, methanol and water. Iatro beads using a mixture (0. 60g) and 1b (0. 067g, 85%); 'H-n. m. r. :4, 106 -3. 895 (m, 5H), 3. 639 (dd, IH, Ji. *3. 0,J s. *I 3. OHz. H-9), 3. 528 (dd, IH. J. , 6. 0 Hz. H-9"), 2. 249 (dd, IH, J3.s 4. 5. Js,,,s,,I2. 5Hz, H-3eq), 2. 090(s, 3H, NAc), 1. 852 (dd, IH. Jlam, 1 1 1. OHz, H-3ax). Example 2 5-propionamide-3,5-dideoxo D-glycero-D-is lacto-2 - 5 g of nonuroviranosilonic acid, 0. 18 mmol) at 22°C. 5 o'clock The mixture was then left at 95°C for 7 hours. For addition of IR-C50t1 fat (H” type) Adjust the pH to 7. Adjusted to 5. The filtrate obtained after filtration of this resin is evaporated under reduced pressure. The residue was dried over phosphorus pentoxide. Dry methanol (1.5ml) and triethylamine (0.2ml) were stirred at 0°C. To the suspension of the product -L in a mixture with m1), propionic anhydride (0°12 ml. 0. 94 mmol) was then added via syringe. After 3 hours, add propionic anhydride (0,025ml 0. 195 mmol) The mixture was stirred for an additional 2 hours at OoC. Add this mixture to methane The solution of the residue in water (2 ml) was The mixture was passed through a 50×8 (H' type, 6 g) tube. Evaporate the collected fractions under reduced pressure This residue was eluted with a 3:1 mixture of chloroform and methanol. It was subjected to chromatography on Iatrophize (5 g) to be used, and earthworks (0, 0646g, 86. 5%) was obtained; 'H-n, m, r, : 4. 800,4 ．． 578 (AB. 2H,J,,,l　1. OHz, benzyl), 3°580 (dd, IH, Js, s　9. 0. Ja, t1. 　0Hz. H6)2. 776 (dd, IH, Jz-, a 4. 5°, L, @, 3. ．． 12. 5H2, H-3eq), 2. 316 (q, 2H, J7. 5H2, CH2C o), 1. 762 (dd, IH, Jz=-, -12,0H2), 1. 12 9(t, 3H, CH3). The above benzyl glycoside (0,115 g, 0. 278 mmol) of water (5 ml) solution in the presence of 596 palladium on charcoal (10 mg) at atmospheric pressure. Hydrogenation was carried out for 5 hours at 22°C. Pass through celite, then milliball The eluate obtained after filtration through , 82. 596) was obtained; 'H-n, m, r, :3. 72-4. 10 ( m. H-4, -5, -7, -8, -9), 3. 614 (dd. IH, Jg, s, G, 5. J! a,llb　I　1. 75Hz, +H-9 a), 3. 530 (dd, IH, Js, s 9. OJs, 71. 0Hz, H- 6), 2. 250-2. 400 [m. 2H1nc1. cdan2 Co (q, 2. 315°J7. 5Hz) and H3 e q (d d, J 2sq, 26m11. 5H2, J3゜44. 5Hz )], 1. ．． 880(t, IH, Ja,,,3. , I1. 5Hz, H3ax) +Example 3 5-acetamyl I'-3,5-dideoxo D-galacto-2-oculofonic acid (C8-Neu5Ac) Synthesis of Ii The synthesis of Ii from 39 basically consists of Ha The method 38 published by Segawa et al. is followed, but the method described here is Using different starting materials. In particular, in 2,2-dimethoxopropane (3 ml) - and 9 (0,52g. 0. 125 mmol) at 22°C. 5 hours, paratoluene Stirred in the presence of sulfonic acid (0.5 mg). Some triethylamine After more neutralization, the mixture was evaporated and the residue was purified with chloroform as eluent. Chromatography on silica gel using a 16:1 mixture of and methanol 42 (0,049 g, 88%) was obtained. Soil 2 (0,054g, 0. 185 mmol) with acetic anhydride Cl ml) 2. with pirinone. 1 mixture at 50"C for 5 hours. Conventional finishing. After treatment, this residue was analyzed in silica gel using ethyl acetate as eluent. Chromatography gave an acetylated product (0,091 g, 9296) ;'H-n, m, r, :5. 420 (dd, IH, Js, t1. 5. J7 ．． 83. 5Hz, H7), 5. 196 (d, IH, JR, --9,0Hz, N H), 5. 009 (ddd, IH, J, 3. . 13. 0. J4. 3. ．． 5. O, J4. 6 10. 0Hz, H-4), 4. 79 7 and 4. 498 (AB, 2H. J,,,I1. 5Hz, Henshil), 3. 776 (s. 3H, CO□ CH2), 2. 724 (dd, IH. Jjam, ff+o 13. OH2, H3eq), 2. 151゜2, 03 2. 1. 895 (3s, 9H, 20Ac. INAc), 2. 032 (t, IH, H-3ax). 1. 363 and 1. 350 (2s, 6H, methyl). The above product (0,091 g, 0. 169 mmol) in 70% aqueous acetic acid. Heated at °C for 4 hours. This mixture is co-evaporated with toluene under reduced pressure. I let it emanate. The residue was dried, dissolved in dry methanol and then heated at 22°C for 2 hours. time, sodium metaperiode-1 (0°059g, 0. j75 mmol) stirred in the presence of water. This mixture was added to a bag of Celite washed with methanol. I passed it to de. The filtrate was collected and sodium borohydride (0,036 g, 0. 95mi The mixture was stirred for 25 minutes at 0°C in the presence of mol. Mix this mixture with some vinegar. Stir with acid (0.2 ml) at 0 °C, then evaporate the solvent and reduce the residue. Dry under pressure for 15 minutes, then add a 5:1 mixture of pyridine and acetic anhydride (6 m Acetylation was carried out in 1) for 20 hours at 22°C. After conventional finishing treatments Collect this residue and analyte it in silica gel using ethyl acetate as the eluent. A product that is subjected to chromatography and still contains some unresolved contaminants. I got it. This product was dried (0,074 g). (still containing some unseparated contaminants) in dry methanol (5 mm). and then stirred at room temperature for 3 hours in the presence of sodium (3 mg). After deionization with Dopex 50X8 (H+ form) and then filtration, the solution The agent was evaporated under reduced pressure and this residue was purified using chloroform and methanol as eluent. Chromatography on silica gel using a 15:1 mixture of A pure product earthwork (0,047 g, 78%) was obtained; 'H-n, m, r, + (CD*OD): 4. 724 and 4. 416 (AB, 2H, J ,,, I1. 5Hz, Hz, H-6), 2. 642 (dd, IH, LL ea, 44. 5. J3. ,,! ,,12. 5H2, H-3eq). 1, 938 (s, 3H, NAc), 1. 699 (t. IHl Jzsx, <1 2. 5Hz, H3a x). The above product (0,022g, 0. 0.057 mmol) and 0.057 mmol). 25N sodium hydroxide The solution was stirred for 5 hours at 22°C in a solution of Topex 5. ox8 (H’ form) and the filtrate was then lyophilized to give a white solid (0 , 019g, 90%) was obtained. This product was dissolved in water (2 ml) and then Hydrogen in the presence of 5% palladium on charcoal (4 mg) for 3 hours at 22°C. Added. The mixture was filtered through Celite and then through Milliball. This filtrate was freeze-dried; 'H-n, m, r, : 3. 462-4. 0 93 (m. 6H), 2. 287 (dd, IH, J,,,,,,4. 5゜+l*a, 3 am　　　2. 5Hz, H-3eq), 2. 052 (s, 3H+NAc) , 1. 853 (t, IH. Jl. s　1　2. 5Hz, H-3ax). Example 4 5-acetamido-3,5,7-)lysooxy-β-D-galacto 2-nonuno Synthesis of viranosilonic acid (7-d-Neu5Ac) 1d The synthesis of 1d basically follows the published method of Zviral et al.31, but with different Using starting materials. In particular, 42 (0,1 1g. 0. imidazole (0.13 g, 1.9 mmol). 93 mmol) and tert-butyldimethylsilylchloride l' (0,135 g, 0. 89 mmol). After 4 hours at room temperature, the solvent was evaporated under reduced pressure and the residue The distillate was dissolved in chloroform and then subjected to conventional work-up. This product Chromatography on silica gel using a 1.1 mixture of ethyl acetate and hexane The monosilylated derivative (0.101 g, 9296) was obtained by α]. -”2. 66 (c, 0. 6. Chloroform);'H-n, m. r: 5. I95 (d, IH, JsNH7Hz, NH). 4. 853 and 4. 603 (AB, 2H, J,... 11. 5Hz, benzyl), 3. 736 (s. Cot CH2), 2. 692 (dd, IH, J3ea, 44, 5. J. z-,, *-w 13. OHz, H3eq). 2, 022 (s, 3H, NAc), 1. 884 (dd. IH, J3--. 4 1 1. 0Hz, H3ax)11. 405,1. 375 (2s, 6H, methyl). 0. 868 (s, 9H, t-butyl), 0. 093 and 0. 084 (2s , 6H, methyl) 9 The above compound (0, methyl) 9 in dry tetrahydrofuran (20 ml) 437g, 0. 77 mmol) at -30°C. (1. 3M, 0. 65m1,0. 85 mmol), then Carbon disulfide (1.25 m1. 20. 8 mmol) was added dropwise. -25° 0 in C. After stirring for 5 hours, methyl iodide (1.6 ml. 25. 6 mmol) was slowly added and slowly warmed to room temperature. After evaporation, this residue is combined with an eluent. chromatography on silica gel using a 4:l mixture of hexane and ethyl acetate. The corresponding xanthi) (0,327 g, 6596) was obtained by Ta. [D coα=93. 9 (c, 0. 655. Chloroform);'H-n , m, r, : 6. 388 (dd, IHJg71. 0. J.T. 2. 5Hz, H-7), 5. (310(d, IH, J5N, 7. OH2, NH), 4,778 ゜4. 466 (AB, 2H, J, , Il, 5Hz, Benzl), 3. 7’7 8 (S, CO2C Dan,), 2. 662 (dd, IH, J,, 44. 5. J , , , , , 12. 5Hz, H-3eq), 2. 584 (s, 3H. 0CHz), 1. 883 (s, 3H, NAc). 1, 6 9 3 (dd, [Hl J2am, 4 1 1. 　5Hz, H- 3ax), 1. 315 (s, 6H, methyl) 0. 825 (9H, t-butyl) ,0. 025. 0. 092 (2s. 6H, methyl). The above xanthate (0.32 g, 0.3 mm) in dry toluene (3 mm). 48 mmol ) to a solution of azobisisobutyronitrile (0,004 g) and tri-n-butyronitrile (0,004 g). Chill tin hydride (0.5 mm, 1. 86 mmol) was added. 100°C Heated for 7 hours to co-evaporate the solvent with dry toluene, then this residue was A 3:2 mixture of hexane and ethyl acetate was used as the eluent, followed by a 1:1 mixture. The 7-deoxy product (0, 260 g, 70%) was obtained: 'Hn-m-r, : 5. 334 (d, l H*J, 7. 0Hz, NH), 4. 740,4. 455 (AB, 2H, J, ,,11. 6Hz, benzyl). 3. 690 (s, Co□CH,), 2. 628 (dd. IH, J, @. 44. 2. J2m,,2m112. 9Hz. H-3eq), 1. 914 (s, 3H, NAc). 1, 805 (dd, l H1J3-. 4 10. 　9Hz. H-3ax), 1. 718 and 1. 597 (m, 2H. H-7 and H-7'), 1. 325 (S, 6H, methyl), 0. 804 ( 9H, t-butyl), 0. 010°0. 009 (2s, 6H, methyl). The above product (0,260 g, 0. 47 mmol) at 75°C in 70% acetic acid. 7. Heated for 5 hours. After coevaporation with toluene, this residue was , in silica gel using an IO:1 mixture of chloroform and methanol. Chromatography gave 43 (0,157 g, i34%); 'H-n , m, r, :4. 860 and 4,655 (AB, 2H, J, . Il, 5Hz, benzyl), 3. 834 (s. C02Cdan, ), 2. 806 (dd, IH, J2-@44. 5. J... 3- 12. 5Hz, H3eq). 2. 069 (s, 3H, NAc), 1. 881 (dd. IH, Jx, w, <12. 5Hz, H-3ax), 1. 698 and (m, 2 H, H-7 and H-7'). Compound Yu (0,457g, 0. 396 mmol), 0. 25N hydroxide sl~ (6 ml) and kept at room temperature for 5 hours. Tohx 5 owx 8 (H” form), then filtered, and the solution was lyophilized in vacuo to produce (0,149 g, 97%) was obtained. This product (0,146 g, 0. 38mm mol) in water (5 ml) in the presence of 596 palladium on charcoal (0,010 g). Hydrogenation was carried out for 5 hours at room temperature. Pass this mixture through Celite and then The mixture was filtered through a Millex-GV (0.22 μm) filter. This filter; 'H-nmr is 39° as reported by Christian. Table 1 below summarizes the produced Neu5A derivatives. Table 1 continued Sialylated moieties obtained by chemical modification of sialylated oligosaccharides: 11'III' B. Synthesis example 5 of CMP derivatives of Neu5Ac and its analogs Synthesis of CMP derivative of Neu5Ac CMP-sialylate synthase was extracted from bovine brain and produced by Higa et al. Partial purification was carried out at 4°C using a slightly modified version of the conventional method 4G. customarily 1. ~200g of brain tissue in a Cuisinart blender , 25mM) Tris/HC], pH 7, 5, 10mM magnesium chloride um, 10mM sodium chloride, 2. 5mM dithioerythritol, 0. 5mM Homogenized with 400ml of phenylmethylsulfonyl fluoride (30 second operation three times at 1 minute intervals). The homogenized product was stirred for 1 hour and then 23. Centrifuge at 00QXg for 15 minutes. Processed. This supernatant liquid is separated by decantation, and this pellet-like substance is Extracted once again with the same buffer as above. Collect this supernatant and then 28. Centrifugation was performed at OOOXg for 15 minutes. Filter this supernatant through glass wool. and crude extract (515 ml, 4. 7mg protein/ml enzyme ~90U) . With solid potassium chloride, the salt concentration is reduced to 0. After adjusting to 4M, this crude extract was Stir and then add solid ammonium sulfate over 15 minutes until 35% saturation. Added. The solution was stirred for an additional 15 minutes, kept on ice for 1 hour, and then Centrifugation was performed at 8,000×g for 30 minutes. Discard this precipitate, stir the supernatant liquid, Solid ammonium sulphate (t63g/l) was then added over 15 minutes to 60% saturation. I then added it. After stirring for a further 15 minutes, the suspension was allowed to stand overnight and then Centrifugation was performed as described below. Add the resulting pellets to a 60% ammonium sulfate solution. The coprecipitate was removed by washing with 150ml. This washed pellet-like material , o, osu,” contained 70 = 80 U of enzyme with a specific activity of mg protein. . This enzyme was 4' analyzed by the method disclosed by Kean et al.: Enzyme activity One unit of is defined as Iμmol of product formed per minute at 37°C. be justified. The enzymes present in these pellets can be stored in a cool room for several weeks. came. Before using the enzyme for synthesis, the pellet was dissolved in a minimum amount of 50mM. Lis/HCI, pH 9,0, 35mM magnesium chloride, 3mM2~mercapto Suspended in ethanol (activation buffer) and then added to the same buffer +00 volumes Dialyzed. The dialyzed enzyme was centrifuged at 9,000×g for 10 minutes. 9 This supernatant, containing more than 0% enzyme activity, was used directly for the synthesis. CMP derivatives of sialic acid were synthesized in the same manner as described above and reported by Higa et al. 40 and Purified by the method disclosed by Gross et al. For example, 7-d- Neu5Ac　I　d　(Table 1. 20 mg, 69 μmol) was dialyzed as above. using 15 U of enzyme in 12 ml of the above activation buffer at 37°C for 5-6 hours. during activation in the presence of a 4-fold excess of ntidine triphosphae-1. phase Where applicable, the transformation of sialic acid analogs is as disclosed by Ean et al. Conventional methods involving sialic acid after reduction with thorium borohydride, as shown in was evaluated by thiobarbic acid analysis. The product was produced by Gross et al.4! Yo Extraction was performed using cold acetone as described previously. acetone under vacuum After evaporation (at ~15 °C), this concentrated solution was Loaded onto gel (Bio-Gel) P-2 (2.5x91cm) and kept at 4°C. and eluted with 10 mM ammonium hydroxide at a flow rate of 60 ml/h. centre The fraction (1 ml) was analyzed for cytidine by absorbance at 237 nm. The fractions corresponding to the first peak were collected, concentrated under reduced pressure, and then the remaining The distillate was freeze-dried and CM P-7,-d-Neu5Ac (2d, 30 m g, ~94%) was obtained. This product was found to have very small amounts of contaminants by 'H-nmr. (Table 2). This product is called sialyltransferase or some unreacted It was shown that it contained reactive sialylic acid. Table 2 below shows the Neu5Ac prepared from the jJeu5Ac analogs listed in Table 1. Partial 'H-nmr data for analogous CMP derivatives and these compounds This shows that. C. Synthesis of oligosaccharide glycosides Examples 6-7 illustrate the synthesis of oligosaccharide glyconds. Structure of 3b-7a The structure is shown in FIG. Oligosaccharide glycol ml:/l' 4b, 5b, 5f, 6a and 7a are respectively Lemieux et al.42, Lemieux et al.44, Paulsen et al.45. 5 By the method of Abesan et al. 4" and Lemieux et al. 47" - and 5b, or by following the methods disclosed for the synthesis of 8-methoxycarbonyl It was synthesized using methanol instead of luoctyl. 9 g of oligosaccharide glycosides and 9 g of soil were prepared by Paulsen et al. 4s and Alais etc. 4@ method, but instead of methanol, 8-methoxycarbonyl octa Synthesized using tools. In all cases, oligosaccharide glycosides are For chromatography on Iatrobeads using a solvent mixture Therefore, the purified and collected product was transferred to Biogel P2 or Sephadex (Sephadex). phadex) LH20 and eluted with water. The product collected was lyophilized under vacuum from water and the product was dried over phosphorus pentoxide. It was dried thoroughly. Example 6 9-Hydroxononyl-2-acetamido-2-deoxo-[β-D-galacto Pyranosyl-(1-3)-〇-]-β-D-gluco Synthesis of pyranonod 4a Disaccharification in an IO:1 mixture (20 ml) of water and methanol cooled to +4 °C Add sodium acetate (0.100 g, 0.189 mmol) to a solution of the compound (0.100 g, 0.189 mmol). , 200 g) and sodium borohydride (0,060 g) were added. 24 hours After a while, sodium borohydride ( 0,020 g) was further added. After 48 hours at the same temperature, by addition of acetic acid , the pH was brought to 5-6. This solution is then co-evaporated with excess methanol. I set it. This residue was dissolved in water (10 ml) and then columned on C+s silica gel. and further washed with water. After elution with methanol, remove the solvent under reduced pressure. evaporated to. Dissolve this residue in an IO:l mixture of water and methanol and The pH of was brought to +3-14 by addition of IN thorium hydroxide. this mixture , tic (65:35:5-chloroform, methanol and water) starts unreacted. It was left at room temperature until the disappearance of substance 4b was shown. This mixture was then mixed with 1-heno The wood was neutralized by the addition of 50×8 (H” form) and the wood was then filtered off. The resulting solution was passed through a column of AGIX8 (formate form). Freeze this eluate Dry and extract the residue using Sephadex using a 1:1 mixture of water and ethanol. Passed through LH20. The corresponding fractions were collected, concentrated and 4a (0,06 0g, 65%); 'H-n, m, r, (D20): 4. 545 (d, IH, Jl, 2 8. OH2, H-1), 4. 430 (d, IH, +1 2. 7. 5Hz, H-1'). 2. 025 (s, 3H, NAc), 1. 543 (m. 4H), and 1. 304 (m, 10H): methylene; 13C-n, m, r, (D20): I 75. 3 (Ac). 104, 36 (C-1'), 101. 72 (C-1). 67. 72,61. 85. 61. 60 (3 CH20H). Example 7 9-Hydroxynonyl 2-acetamido-2-deoxy-[β-D-galactopi (6096) produced from lanosyl-(+-4)-Odan;'H-n, m, r , (D20):4. 520 (d, IH, Jl □7. 5Hz, H-1). 4. 473 (d, IH,, Ll, 2. 7. 6Hz. H-1'), 2. 033 (s, 3H, NAc). 1. 543 (m, 4H) and 1. 302 (m. 10H): Methylene: RoCn, m, r, (D20): 175. 23 (A c), 103. 71 and 101. 88 (C-1 and C-1'), 60. 93 ゜61. 85 and 62. 71 (3 CH20H). Example 8 5-allyloxypentyl 2-acetamido-2-deoxy[β-D-galac Synthesis of topyranosyl-(1-3)-〇-]-β-D-glucopyranoside 4c The synthetic route for Example and Example 9 is described in FIG. Sodium hydride (1,2 g, 80% dispersion in oil) and l,5-bentanedio (3g, 0. Allyl bromide (2.5 ml, 0 ．． 029 mol) was added dropwise. Stirring was continued overnight at room temperature. tic( 2:l toluene and ethyl acetate) still contains some unreacted bentanediol. showed the existence of Unreacted sodium hydride was added to methanol using IJ11. I took it apart. The mixture was concentrated to 50ml by evaporation under reduced pressure. Methylene chloride (1 After diluting with 50 ml of sulfuric acid mug, wash the solvent with water three times). Dry over sodium and then evaporate under reduced pressure. This residue is mixed with an eluent. in silica gel using a 2:1 mixture of 1-toluene and ethyl acetate. It was subjected to romatography. Compound 29 (0,931 g, 3096) was obtained. 'H-n, m,, (CDC1,): 5. 83 (m, IH. CH=), 5. 20 (m, 2H, = CH2). 3, 95 (dcl, IH, J=5. 5 and 1. OH2゜Allyl), 3 ．． 66 and 3. 46 (2 t, each 2H), J=6. 5Hz, O CR2), 1. 64 (m, 4H) and 1. 44 (m, 2H): (Methi Ren) ; “C-n, m, r, (CDCL): l 34. 7 and 29. 2 and 22. 2 (methylene). 8. 5-Roxypentyl 2-deoxy-2-phthalimide-β-D-glue Synthesis of Copyranoside 32 3. in dichloromethane (5 ml). 4. 6-1 Lee O- Acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-D-glucopyranosyl bromide 30 (5.0g, 10. dichloromethane at -70"C to a solution of Alcohol compound 29 (1.33 ml) in 10 ml. 10 mmol) , silver trifluoro-methane sulfonate (2,57 g, 10. 0 mmol) and Bicolidine (1,23ml 1. 9. 0 mmol) was added dropwise. -7 After stirring for 3 hours at 0 °C, tic (2:l toluene and ethyl acetate) The starting bromide and the reaction product were shown to have the same Rf. some amount After adding ethylamine, the reaction mixture was diluted with dichloromethane. , and then worked up in a conventional manner. Add the syrupy residue to 1 to toluene and acetic acid. 5. with ethyl. For chromatography on silica gel using a mixture of Then, compound 31 (4.0 g, 71%) was added. 'H-n, m, r, (CDC] 3): 5. 8 0 (m, 2H. -CH= and H-3), 5. 36 (d, IH, Jl, 28, 5Hz, Hl ), 5. 1 8 (m, 3H, =CHz and H-4), 2. 13. 2. 06. 1. 87 (3s. 3H, 30Ac), 1. 40 (2H) and 1, I 5 (m, 4H ): methylene. Compound l± (4,00 g, 7. 1 mmol) of sodium methoxide in methanol. 500 ml) dropwise. This mixture was heated at 0°C for 2 hours using TLC (10: The mixture was stirred until the starting material (chloroform and methanol) showed disappearance. child The reaction mixture was deionized with Dohetutas 50 (H+ form, dried) at 0 °C. It turned on. Filter, evaporate the solvent, and remove the resulting residue with chlorine as eluent. Chromatography in silica gel using a 100.51 mixture of form and methanol Compound 32 (2. 36g, 7696) was obtained. ’ H-n. m. r. (CDC) z) Near, 70 and 7. 80 (m , 48, aromatic). 5,82 (m. IH, -CH=), 5. 17 (m, 3H. 2CH. and H-1), 1. 38 and 1. 10 (m. 6H. Methylene): “C-n. m. r. (CDC) 3):1 34, 9 and 116. 6 (methylene), 98. 3(C-1), 56. 6 (C -2). C. 5-allyloxypentyl4. 6-0-Benzylidene-2-deoxy-2- Synthesis of phthalimide-β-D-glucopyranoside 33 32 (1. 0g. 2,3 mmol) and α,α-dimethoxytoluene (0. 690ml, 4. 6 mmol) of para-toluenesulfonic acid hydrate (0.0 mmol). 025g) added did. After stirring for 2 hours at 40°C, tlc (10:I chloroform and methanol) ) indicated the completion of the reaction. After adding a small amount of triethylamine, the solvent Most of it was evaporated under reduced pressure, then the residue was diluted with dichloromethane, It was then worked up in a conventional manner. Evaporate the solvent and remove the residue with toluene and vinegar. Chromatography on silica gel using a 9.1 mixture with ethyl acid Compound 33 (1. 36g, 90. 1%). [α]　　o　+24. 1 (cO. 5 chloroform);'H-n. m. r. (CDC I3): 7. 1 5-7. 9 0 (m. 9H, aromatic), 5. 83 (m. IH, -CH=). 5, 56 (s. LH. benzylidene), 5. 10-5, 3 7 [m, 3 H, = C H2 and H-1 (5. 25. d, Jl. 2 8. 5Hz)], 1. 4 0 (m. 2H) and 1. l 7 (m, 4H): Methicine. D. 5-allyloxypentyl4. 6-0-henzylidene-2-deoxy-[2 , 3, 4. 6-Chitler O-acetyl-β-D-galactopyranosyl-(1-3 )-0-]-]2-phthalimido β-〇-glucopyranoside 35 synthesis A solution of trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate (dichloromethane 1. A solution prepared from 0.050 ml of this reagent in 0.1 ml) is - in a l:l mixture (30 ml) of toluene and dichloromethane cooled to 20°C. of crushed molecular sieves (0', '500 g), 2. 3. 4. 6-Chitra -O-acetyl-α-D2. (29 mmol) was added via syringe into a mixture of . This mixture was heated to -20°C and heated to 0.5°C. Stir for 5 hours, then warm to 0°C for 1 hour. I raised it a lot. tic (1:1 hexane and ethyl acetate) indicates completion of the reaction. did. Add some amount of 1-ethylamide and then dilute with methylene chloride. After filtration, the solution was worked up in a conventional manner. Evaporate the residue , passed through a Nori gel column using toluene, then hequinane and ethyl acetate Elution was continued using a 2.1 mixture of From the corresponding fraction, trisaccharification One weight of Compound 35 (1,63g, 7496) was received. [cr]　　o　+4. 1 ( c, 0. 5°CHCl2); 'H-n, m, r, (CDCIa): 7. 4 0-8. 00 (m, 9H, aromatic), 5. 85 (m, IH. H-4′ and H=1), 5. o　　　(da,’　IH. Jl 28・0・tJ2', ff 10. OH2, H-2'). 2, l 1. '! ,90,1. 85. 1. 58 (4s, 12H, 40Ac), 1. 37 and 1. 12 (m, 6H. methylene): l3C-n, m, r, (CDCIa): I 34. 　 6 and 117. 0 (ethylene), +02. I. 101, 2. 99. 4 ('<Nsi IJ Den, C-1 and C-1'). E, 5-allyluoginopentyl 2-deoxy-[2,3°4. 6-Chitler 0- Acetyl-β-D-galactopyranotrue(1-3)-0-1-2-phthalimide (1.63g, 1. 91 mmol) solution was heated at 7°C for 1 hour. At this point, tlc (100:5 chloroform and methanol) indicates the reaction is complete. Indicated. The residue was co-evaporated with an excess of 1 toluene and the residue was purified with chloroform as eluent. Chromatography on silica gel using a 100:2 mixture of alcohol and methanol. Compound 36 (1.12 g, 76%) was obtained by chromatography (1). [α]”o+9. 3 (c, 0. 55CHCI*);'H-n, m, r, (CDCI 3): 7. 70-7. 95 (m, 45. 33 (dd, IH, J,,,,3. 5. J4. ,. 1. 0Hz, H-4'), 5. 10-5. 27 (m, 3H, i nc 1. 　 : CIr2 and H-2'), 5. 07(d, IH, J, □ 8. 　5Hz, H -1), 4. 84 (dd, l H, Jz 3 10. OHz, H-3') . 2, 10. 2. 08. 1. 90 (3s, 9H, 30Ac), 1. 　 05-1. 47 (m, 9H, 1nc1, I0Ac), "C-n, m, r , (CDCIz): 1003 and 97. 5C-1 and C-1', elements Analysis and calculated values: C, 56, 88, H, 6, +7. N. 1. 83 Actual measurement: C, 55, 59; H, 6, 20; N. 1, 84° F, 5-allyloxopentyl 2-acetamyl'-2-deoxo-[β-D - is lactopyranosyl-(1-3)-0-]-]β-D-glucopyranosite synthesis Trisaccharide compound 3G (0 ,700g,0. 91 mmol), 1-lithium hydride (0,690 g, 18 mmol) was added + JII. This mixture was stirred at room temperature for 24 hours. At this point, tlc (65:35:5 chloroform, methanol and water) This indicated the disappearance of starting material. After addition of acetic acid C8,2 ml), the mixture was reduced to 100 Heat at JJI+ for 3 hours at °C. This mixture was coevaporated with excess toluene. Let the residue dry. Next, 3. with pyridine and acetic anhydride. 2 mixture (5ml) acetylated in the presence of dimethylaminopyridine for 24 h at 22°C. I set it. Add some methanol and dilute the mixture with dichloromethane. , and then processed using the conventional method. Add a small amount of toluene to the It was co-evaporated with The final syrupy product was mixed with chloroform and methanol. For chroma 1-graphy in a glue gel using a 100+2 mixture of A para-acetylated trisaccharide compound (0,500 g, 71%) was obtained.　 'H-n, m, r, (CDCIs): 5. 90 (m. IH, -Cdan=), 5. 77 (d, IH, JxNH7, 5Hz, NH) ,5. 37 (dd, IH, J,,,・3. 5゜J4, 1. OH2, H4') ,5. 15 5. 23 (m, 2H, = CC20, 1,952, 18 (7s. 21H, 60Ac, INAc), 1. 58 (m, 4H) and 1. 41 (m , 2H): methylene. 0. of sodium methoxide. A 5N solution (0,300ml) was added to dry methanol ( The above compound (0,500 g, 0.20 ml) in 623 mmol) in a solution of , added by syringe. After stirring overnight at room temperature, the mixture was poured into - Deionized by Hex 50 (H’″ form, dry) and then deionized under reduced pressure. Evaporated down. This residue was dissolved in methanol and catalyzed by evaporation of the solvent. (3 g). Next to this celite, Iatrophize (30g) of chloroform, methanol and water (0, 266g, 80%); [α] +10. -0. 164 (c, l, water) ;'H-n, m, r, (Dt O) 2H1), 4. 426 (d, I H, J+, 2. 7. 7Hz. H-1'), 4. 031 (dd, IH, Jl, 0°11. 5Hz, allyl) , 2. 023 (S, 3H. NAc), 1. 58 (m, 4H) and 1. 38 (m. 2H): Methylene; "C-n, m, r, (Dt 0): 175. 24 ( carbonyl), 134. 70 and 119. 05 (ethylene), 104. 33 (C-1'). 101. 68 (C-1), 55. 42 (C-2). Example 9 5-allyloxypentyl 2-acetamido-2-deoxo-β-D-glucopi The synthesis of lanoside brown 1- was isolated. This crude product was acetylated and obtained The resulting product was applied to silica gel using a l:l mixture of hexane and ethyl acetate. The acetylated derivative (0,180 g, 5596) was obtained. [αko20o + 11. 5 (c, 0. 7. nine roroporum);'H-n, m, r, (CDCI 3): 5. 90 7. 5Hz, H-1), 1. 95. 2. 03 (2 pieces. 2, 05 (3s, 12H, 30Ac, 1NAc). 1. 58 (m, 4H) and 1. 41 (m, 2H): Methylene single element analysis: Calculated value C, 55, 8°H, 7, 5, N, 2. 05. Actual position: C+ 55. 82 ;H,7,53:N,2. 98° This product was de-O-acetylated in methanol and was prepared by 0. of lium methoxide. A 5N solution (0,100ml) was added. After overnight at room temperature Next, the mixture was deionized with IR-C50 resin (H+ form, dried). and then the solvent was evaporated. This residue was mixed with chloroform and methanol (7 = Pure 37 (0,103 g, 8096 ) was obtained, [α]10. -0. 17 (c, 1. water);'H-n, m, r, (Dt 0):H-1), 4. 03 (d, 2H, J6. OHz, allyl) , 2. 033 (s, 3H, NAc), 1. 58 (m. 4H) and! , 36 (m, 2H): methylene, +20-n, m, r, (I )20): I 75. 2 (carbonyl). 134. 7 and 119. 1 (ethylene), 101. 9(C-1), 61. 6　 (C-6), 56. 4 (C-2). 29. 1. 23. 0 and 22. 6 (methylene). D. Inversion of sialylic acid and other sugars into oligosaccharide structures 10 Soarylic acid stone and its conversion to oligosaccharide structures by glycotyl-1-transferase Transfer of other sugars Examples of this include Neu5Ac, its analogues (more precisely, "sialylic acid") and its conversion of other sugars into oligosaccharide glycoside structures by glycosyl I-transferase This exemplifies enzymatic transfer. Figure 17. 18. 19. 20 and 21 are , which indicates these transitions and is indicated by underlined Arabic numerals, is the manufactured The structure of the compound is also shown. In Examples 10a-10e, the presialyl and fucosylation were performed as follows. 1. Pre-sialylation Sialyl acids activated as those CM P derivatives are used in mammalian sialyl acids. βGal (1-3) βGIcNAc- 1βG, al(I-4)βGIcNAc-1βGa1(1-3)aGa lNA c-1 and βGal (1-4) Synthetic oligo containing βαGlc-1 terminal sequence were transferred to sugar structures (Examples 10a-e). βGa1 (1-3/4 ) βGIcNAc-α(2-3) sialyltransferase (EC2,4,9 9,5) and βGal (1-4) βG I cNAc-a (2-6) Allyltransferase (EC2,4,99,1) was transferred using method 4 of Mazid et al. 9 (incorporated herein by reference to this publication), those known in the art. Habten βGa was added to Sepharose activated by the method. 1 (1-3) βG I cNAco (CH2)s C02H” (Chembi omed Ltd, Edmonton, Canada). Affinity chromatography in matrices obtained by Purified to be more homogeneous. βGa1 (1-3) aGa INAc-a (2-3) Allyltransferase (EC2,4,99,4) is Genzyme, I Corporation, Norwalk, CT. At the end of the presialylation reaction, receptor oligo 11 (5-20 mg) Appropriate sialyltransferase (10-!'; OmU) and bovine intestinal alkaline Cali phosphatase (Boehringer, Mannheim, Mannh eim, Germany) 15, below, tJnverzagt, etc. 50 Similar to the method, 50 mM sodium vircodylate pH 6 was added for 24-48 h at 37 °C. ,5,0,5% Triton CF-54,1mg/m IB Selected CMP-sialylic acid (5- 20 mg). For example, soaryl oligosaccharide 7-d-a Neu5Ac (2-6) βGa I (1-4) 4. 6mg) and CMP-7-d-Neu5Ac (2d, 15. 6mg), βGal ( 1-4) βG l cNAc-a (2-6) Sialyl 1, transferase ( 51 mU) and bovine intestinal alkaline phosphatase (2,40). Allyl transfer buffer 2. Incubate in 5 ml at 37°C for 28 hours. (See Examples 1-5). After completion, the reaction mixture was 1 and then conditioned as directed by the manufacturer, It was passed through three Sebuvac C11 cartridges. These cartridges are Each was washed with water (4 x 5 ml) and then with methanol (3 x 5 ml). Ta. The methanol eluate was evaporated to dryness under reduced pressure and the residue was dissolved in chloroform. , dissolved in a 65:35:3a compound of methanol and water (0,5 ml - 1 solvent) and then a small column of Iatro beads (500 mg) equilibrated in the same solvent. I passed it to Mu. The column was run in solvent i, then chloro, form, methanol and 65:35:5a compound of water (solvent rI), then chloroform, methanol and water (i5:35:8a compound (solvent 11)).Silica TLC in gel plate (chloroform, methanol and 0. 296 using a 65:35:8a compound of calcium chloride solution). The corresponding fraction containing the product (30 drops) was collected and then evaporated under reduced pressure. It was concentrated and dried. This residue was collected in a small column of AG50W-X8 (Na” type). The eluate was lyophilized and the collected product was confirmed by 'H-nmr. Ta. The products showed good purity in both cases. ii Reserve Fucosil Sialylated analogs of Quip■ and type II oligosaccharides are human milk βGIcNAcα (1-3/4) Can be further fucosylated by fucosyltransferase can. This enzyme is the GDP-hexanol enzyme disclosed by Palcic et al. A method using affinity chromatography in Sepharose Therefore, it was purified from human milk. Synthesis and purification of fucosylated oligosaccharides was performed by Pa1ci It was carried out by a modified method of method s+ such as c. For example, the fucosylated structure 9-Nz-α Neu5Ac　(2-3)βGal　(1-3)-[(Z-L-Fuc　(1- 4) -βG1cNAc-0-(CH2), CH, OHI 7b is GDP-fuco (2.5 mg) and 9-N, -αNeu5Ac(2-3)βGal ( 1-3) βGIcNAc-0-(CHz　)s CHa　OH8b　(1,7m g) in 100mM thorium cacodylate (pH 6.5), 10mM chloride mag nesium, 1. 6mMATP, 1. 1. of 6mM sodium azide. In 3ml, Affinity-purified βGICNAC (2(+-3/4) fucosyltransfected was synthesized by incubation with phthalase. 37°C 27:00 After a period of 2.5 min, GDP-fucose was added to the reaction mixture. 5mg and fucosyltran Spherase 2. 3 mtJ was added and maintained at 37°C for an additional 21 hours. this life The product was isolated as described above for sialylation. This crude product tIc' (as above) indicates that this fucosylation is almost complete. and showed. Purification and chromatography in AG “50Wx8 (Na” form) After the The purity (Table 5) was shown. Fucosyltransferase is not highly purified In some cases, partial hydrolysis of the methyl ester of the bond occurred. Examples 10a-e were performed as follows:. Example 10a An example of this is βGal゛(l-3)βGlcNAc-(ruple) such as 4a and 4b. Is 0 or type I) terminal of receptor with terminal structure 3-OH of βGal , Laso)-βGa1(1-3/4)βGIcNAcα(2-3)sia from liver Using a sialyltransferase such as lylotransferase, the above Transferring modified sialic acids such as Ia-H according to the experimental methods disclosed It is related to. 'H- of each reaction product purified as above. The nmr data are shown (Tables 3 and 4). Example 10b An example of this is βGa1(1-4)βG　cNAc-( La cNAc or type ■1) 3 of terminal βGal of receptor with terminal structure Dissolve the receptor in -OH, in a sialyltransform such as that used in IOa. Dimethyl sulfoxide (596 volumes) can be added to achieve this. 'H-nmr data of each reaction product purified as described above is shown (Table 6 and 8). Each reaction mixture was worked up as described above. βGal (1-4) βGlc (lactose) terminal with IIMlill structure The 3-OH structure group of the terminal βGal of the container is coated with a sialic acid such as that used in Example 1Oa. Transfer of modified sialylic acids such as Ic using lyretransferase This is a story about. 'H of each reaction product purified as above. -nmr data are shown (Table 6). Example 10d An example of this is βGaL(1-4)βG1cNAc-(Lac NAc or type summer I) 6-OH of terminal βGal of receptor with terminal unit , known βGal (1-4) βG I cNAca (2-6) sialyl] Using a sialyltransferase such as transferase, lb-h It relates to the transfer of modified sialic acids such as. Do as above 'H-nmr data of each anti-1i; soil purified by . Example 10e , - example is βGa1(1-3)αGa1NAe　(”]゛) wood end like 7a βGa'! at 3-0H of kQβGal of the receptor having position 11. (1-3) aG a　INAccr　(2-3) Sialyltransferase such as sialyltransferase Using transferase, allyl acid (such as :C) is modified using a known experimental method. Accordingly, it relates to the second and second part of the transfer. , I:, tis as written 'H-nmr data of each reaction product prepared is shown (Table 9). E. Chemical modification of complete oligosaccharide glycoside structure to create oligosaccharide glycoside analogues. manufacturing Example 11-13 shows that the complete oligosaccharide glycoside structure (using enzymes or by chemical means) This example illustrates the production of oligosaccharide glycoside analogs by chemical modification of It is. Figures 22-24 illustrate the reaction routes involved in the production of these analogs. and the structure of the manufactured analogs, indicated by underlined Arabic numerals. 9-hydroxynonyl (5-ace1-amido-3,5-sideoxy- β-L-arabino-2-hebroviranonerononic acid)-, (2-3)-〇-β- D-galactopyranotrue(1-3)-0-[α-L-fucopyranosyl-(1- 41) -0-J-2-acetamido-2-deoacid thorium solution and IM periodontal solution The mixture was stirred in 17 ml of thorium uride solution at -4°C for 24 hours. excessive excess The sodium uride was then decomposed by the addition of some ethylene glycol. Thorium borohydride (20 mg) was then added and stirring continued for 24 hours at 4°C. Ta. The pH of the reaction mixture was brought to 6 by the addition of acetic acid, and the solvent was then evaporated with methanol. was co-evaporated with the chlorine. This residue was dissolved in water (1 ml) and then -Pac curl ridge and further washing with water and then methanol. The methanol eluate was evaporated and the residue was dissolved in chloroform and methanol as eluent. Iatro beads (200 mg). Collect the corresponding fractions and then Evaporation to give the product 8m (1 mg);'H-nmr: see Table 3 above. Trisaccharide compound 8a was fucosylated using an enzyme according to the method described in 10, and the The product was purified by the same method. 9-Hydroxynonyl (5,9-diacetamido-3゜5. 9-1-Leap Oki C-α-D-glyceroD-galacto-2-nonuropyranosilonic acid)-(2-3 )-〇-β-D-galactopyranosyl-(1-3)-0-[α-L-fucopyrano sil-(1-4)-0-]-]2-acetamido 2-deoxy β-D-glue A solution of Kobila was mixed with Lindlar's catalyst (1.0 mg). Aldrich Chemical Company, Milwaukee, W. Hydrogenation was carried out in the presence of l) for 15 minutes at 22°C. tic(65:3 5:8-Chloroform, methanol and 0296 calcium chloride) are completely It showed metastasis. I washed it. Concentrate this filtrate and pass it through a milliball filter. The eluate was filtered and the eluate was lyophilized to obtain the desired trisaccharide compound. 1t:'H-n mr: See Table 3 above. 0. 1:1 solution of 002N sodium hydroxide and methanol (0,300ml) To a solution of 8j (approximately 1 mg) in methanol (10 μm) at 0°C was added acetic anhydride (about 1 mg) in methanol (10 μm). Approximately 0. 2rr+g) was lost. tlc (solvent above) indicates complete reaction Ta. The solvent was then evaporated. Dissolve this residue in water (2ml) and The cartrinone passed through the Panok force cartridge is washed with water and then the product was eluted with methanol to obtain trisaccharide compound 8k (approximately 1 mg):'H-nmr:J See Table 3. Trisaccharide compound 8k was enzymatically fucosylated according to the method described in Example 10, and the The product was purified by the same method to approx. 5mg)? 1 diH-nmr: upper Table 58-N-Methylamidooctyl (5-acetamido-3,5-nodeoxy -α-D-glycero-galacto-2-nonuropyranonerononic acid N-methylamide) -(2-3)-0-β-D-galactopyranotrue(+-5)-0-[α-L- Fucopyranosyl-(1-4)-0-]-]2-acetamido 2-deoxy β- The mixture was introduced into D-su 50X8 (Na'' form) resin and eluted with water. The corresponding fractions were lyophilized and subsequently further dried over phosphorus pentoxide. I set it. This residue was dissolved in dimethyl sulfoxide, and methyl iodide (0, 050ml) was added. After stirring in the dark for 20 hours, the solution was evaporated under reduced pressure. diluted with water (Ilml), then Sebuvac C, @ Cartridge It was introduced in After washing with water (10 ml), the product was washed with methanol. It was eluted. The corresponding fractions were evaporated and the remaining residue was dissolved in chloroform. , using a 65:35:5i mixture of methanol and water, Iatrobeads ( The methyl ester of compound 18a ( 0025g) was obtained: 'H-n, m, r,: 5. 099 (d, IH, J l, 2 3. 75Hz, H-1αFUC), 4. 517 (d, 2H. Jl, 27. 5H2,H, lβG a, I and βG1cNAc), 3. 86 6 and 3. 683 (2s. CO2CHa), 2. 781 (dd, IH, J3. ,,a,. 12. 5Hz, J2. ,．． 44. 5H2, H-3eqNeu5Ac), “2. ．． 032 and 2. 018 (2s. 6H, 2NAc), 1. 913 (dd, IH, J!,,,412. 　5Hz , H-3ax Neu5Ac). 1, 160 (d, 3H, Js, *6. 　5Hz. H-6αFuc). This product was dissolved in a 40% solution of N-methylamine (3 mL at 50°C in 1 ml). ．． Heated for 5 hours. After evaporation under reduced pressure, the residue was dissolved in water (1 ml). It was then passed through a Sebu-Pak cartridge and further washed with water. This generation The material was eluted with methanol, the solvent was evaporated, and the residue was lyophilized, Product 181 (0,0025 g) was obtained: 'H-nmr: (Table 5). F, monofucosylated oligo with di-N-acetyllactosaminyl structure at the end sugar synthesis Examples 14-19 below demonstrate that analogs of blood group antigenic determinants also have immunogenicity and tolerability. This is shown for the purpose of illustrating that it has originality. In detail, the blood used An analog of the liquid antigenic determinant is CD65. This CD65 is Sialyl Lewis X βGa1(1-4)βGI cNAc-OR disaccharide glycoconjugated to the reducing sugar of It is a sialyl Lewis X derivative containing a sid. rMethods for t heSynthesis of λIonofucosy [ated Olig Terminating in Di-N-ace 199I entitled Tillactosaminyl Structures J. Application date: October 2nd. S, 5erialNo. 07/771259 may be further referred to, and these notes The text is incorporated herein by reference. As mentioned above, these compounds contain sialyl Since Lewis X is a blood group antigenic determinant as defined herein, blood group It is an analog of liquid type antigenic determinants.　′ In Examples 14-19 below, presialylation was carried out as follows: Shoes 1-Liver βGa1(1-3/4)βG]cNAcα(2-3) Sialyltra Transferase to activated Sepharose by methods known in the art. βGa I (1-3) βG I cNAco (CH2)-CO2H” (C covalently bonded to hembiomed Ltd., Edmonton, Canada) Affinity chromatography in the matrix obtained by It was purified by βGal N-4 contained in the material passing through the above affinity column ) βGlcNAcα(2-6) sialyltransferase has been disclosed As per 52, chromatography on CDP-hexanolamine sepharose I added more to the fi. Sialylation using enzymes was performed using Triton CF-54 (0,596), BSA ( Img/ml) and bovine intestine alkaline phosphatase-mediated Using dilate buffer (50mM, pH 6.5), in a plastic tube 37 This final reaction mixture was diluted with H2C and then It was introduced into the 'SC+S Sebu Pack Cartridge. After washing with H2C Then the product was eluted with CH20H and the solvent was evaporated. This residue CHCl, dissolved in a 65:35:5 mixture of CH20H and H2C, A small column of Iatro beads (0,200-0,500 g) was introduced. Same melt After washing with a mixture of solvents, the product was washed with a f35:35:8 mixture of the same solvents. and/or eluted with the 65.40:IO1 combination. Equivalent flax Collect (tic) the solvent, evaporate the solvent under reduced pressure and remove this residue in (20). Pass the product through a small column of AC30Wx8 (Na” form) and freeze-dry it under reduced pressure. It was dried and collected. In the case of 8-methoxycarponyloctylglycosylation It was separated from the corresponding 8-carbonyloctyl glycoside. In Example +4-19 below, prefucosylation was performed as follows: INAc (Z (1-3/4) fucotoltransferase has not been disclosed. 5', purified from human milk. This enzymatic reaction -Buffer (IOOmt'vl, pH 6,5), MnCL (IOmM), Using ATP (1,6mM), NaNx (1,6m~1), The test was carried out at 37°C in a stock tube. This reaction product was isolated as described above. , purified. As used below, GDP-fucose is the chemical 5yn 3J, 1992 entitled “Thesis of GDP-fucose”] 9th According to the method described in application U, S, 5erial No. 07/848223 Therefore, it is preferably manufactured. This patent application is incorporated herein by reference. Specifically, GDP-fucose was produced as follows. A. Production of his(tetra-n-butylammonium) hydrogen phosphate ester Tetra-n-butylammonium hydroxide (40% aqueous w/w, approximately 150 g ) in water (150 ml) until the pH reached 7. Weight, 18g, 0. 155 mmol) dropwise. Then reduce the water Evaporate under pressure and dissolve the resulting syrup in dry acetonitrile (2X400m Co-evaporated with l) and then with dry l-luene (2 x 400 ml) . The white solid to be purified (75 g) was dried under vacuum and kept under vacuum until use. stored on phosphorus pentoxide. B, Production of β-L-fucopyranosyl-1-phosphate Dry acetonitrile (3 bis(tetra-n-butylammonium) hydrogen phosphate ester ( 58g, 127. A solution of 8 mmol) was passed through molecular sieves (4 on The mixture was stirred at room temperature for about 1 hour in the presence of Ges 1-loam, 20 g). This solution is o 'C, where the temperature is about 0. within 5 hours in dry toluene (100 ml). IJ-0-acetylfucosyl-1-bromide (this was prepared using the method of Nunez et al. 66, freshly prepared from 31 g of L-fucostetraacetate, 93 mmol. The fd solution of (1) was added dropwise. After an additional hour at 0"C, the mixture was brought to room temperature. Allow to warm and then stir for 3 hours. tic (1: I) toluene: ethyl acetate) , a major spot on the baseline and a few quickly moving small spots showed that. Add this mixture to a vat of celite (this is further washed with acetonitrile) and then the solvent was evaporated under reduced pressure to give a red syrup. This generation The material was dissolved in water (400 ml) and then dissolved in ethyl acetate (2.times.250 ml). It was eluted. This aqueous phase was then evaporated under reduced pressure, resulting in a yellowish white powder. Ammonium hydroxide (25% aqueous, 200ml) was added to the top. This mixture was stirred at room temperature for 3 hours. At this point tic (65:35:8k) Loloform:methanol:water) showed Haeseline spots. Remove the solvent under reduced pressure The resulting yellowish syrup was diluted with water (400ml). . The pH of this solution was checked and, if necessary, brought to 7 by addition of a small amount of hydrochloric acid. This solution was mixed with ion exchange resin Dovex 2X8 [200-400 mesh, 5X45cm, resin in methanol (800ml), water (1200ml), bicarbonate Washed sequentially with ammonium (1M, 1600ml) and then water (1200ml). The purified bicarbonate form was slowly adsorbed onto the column. Next, this The ram was filled with water (1000 ml) followed by a solution of ammonium bicarbonate (0.5 M, 2. 3 ml/min, - night). This eluate was fractionated (15 ml) and collected. After generating a spot on the tic brake 1, start carbonization (charring). more detected. Fractions 20-57 were collected and evaporated under reduced pressure to obtain The 0 color solid was further co-evaporated with water (3X300ml) and then the final 5 0 ml was freeze-dried and the residue was dried using a vacuum pump and 'H-n mr spectrum analysis δ=1. Bamboo vinegar identified by singlet of 940 parts +2:’1 mixture of β anomer and α anomer containing acid ammonium As a substance, β-L-fucopyranosyl-1-phosphate (9,5g14096) I got it. This product was added to Dohex 5×8 resin (+00-200 mesh, ethyl ammonium form), then eluted with water, and this eluate was frozen. A bisto of β-L-fucopyranosyl-1-phosphate-1 is added to the dried yarn. The ethyl ammonium salt was obtained as a sticky gum. 'H=n, m, r, δ: 4. ．． 840(dd, J, □-J,,,=7. 5Hz, H-1). 3, 8 2 (q, IH, Js, s 6. 5Hz, H5). 3. 750 (dd, IH,, J,, 43. 5. J4. 61. 0Hz, H-, 4 ), 3. 679 (dd, lH, J2. . 10. 0Hz, H-3), 3. 520 (dd, JH, H-2), 1. 940 (s, acetate), 1. 26 (d. 1. 280 and 1. Sig in 2G O (NCH2CHz and H-6) The integrity of the nal is determined by the fact that the product loses some triethylamine through excessive drying. This indicates that it is a sootriethyl ammonium salt. . "C-n, m, r, δ: 98. 3 (d, JC, IF5. 4Hz, C-1 ), 72. 8 (d, JC2,7,5β-L-fucopyranone-1-phosphate 1 decomposes slowly when stored in water at 22°C for long periods of time (1 Saturday and Sunday). It looks like it is. Therefore, this material can be exposed to temperatures of 22°C or higher. It should not be left unattended, handled, or stored in aqueous solutions. In this example The material was stored at -18°C and purified in the form of phosphorous pentoxide before further use. Dry. Production of C,5'-(β-1-fucopyranosyl-)-diphosphae-1. Guanonone 5′-(β-1-fucopyranosyl-)-diphosphate is shown below. β-L-7copyranosyl-1- Manufactured from phosphate: Method-1 β-L-fucopyranosyl-1-phosphate-1. and guanofune 5'-monophospho -N. N--seisochlorohexyl-carboxyamidine salt, available from Sigma, St. Louis. “GMP-Morpholy” is available from Missouri. A recent variation64 of the method first disclosed by Nunez65 The reaction was carried out according to 66. That is, tri-n-octylamine (0. 800g1 This is Aldrich Chemical Company, Milwaukee. kee. Dry pyridine (I β-L-Fucopyranosyl-Phosphe-1~(triethylammo nium salt, 1. 00g, about 2. 20 mmol) and remove the solvent under reduced pressure. It was separated into Do this, taking care to ensure that only dry air enters the flask. The method was repeated three times. G M P-Morho Resort (2. 4g, about 3. 30 mmol) in dry dimethyl Dissolved in a 1:1 mixture of formamide and pyridine (IO ml). This solvent Evaporate under reduced pressure and repeat the process three times as above. This residue Molecular sieves (2 g, 4 angstrom) into the reaction flask. This mixture Stirred at room temperature under nitrogen atmosphere. tic (3:5:2 2596 aqueous hydroxide ammonium, isopropanol and water) from GMP-Morho Resorts (R f~0. 8. U, V. ), guanosine 5'-(β-I-fucopyranosyl-)- Diphosphate (Rf~0, 5, U. V, and carbonization), spots corresponding to Subsequently starting fucose-1-phosphate (Rf~0. 44, carbonization) tilling Showed the spot. Additional U. ■, Spots with small activity were also present. After stirring for 4 days at room temperature, the obtained The yellowish mixture was further dried overnight using a vacuum pump, leaving a thick residue (2, 43g) was obtained. Add water (LOML) to this flask and the resulting yellow cloudy The solution was added to AC30W-X12 (from Biorad) resin (100-200 metal). Tsutsuyu, 25X1. 5 cm of Na' form) was introduced into the top of the column in two parts. The product was eluted with water, which was then removed. U, V after pot generation on tlcl replating. The active fractions were collected both by carbonization and the solution was heated under reduced pressure overnight. After lyophilization, the crude product (1.96 g) was collected. This residue was dissolved in water (total 10 ml), then water, methanol and water ( Hydrophobic conditions are adjusted by washing with 250ml of each cps silica gel (Waters, 2. Slowly adsorb onto a 5x30cm) column. Water was then passed through the column to 7°-0. 4 ml/min) and fractionally distill the eluate. Ku0. 8 ml), respectively TLC (3:5:2 25% aqueous ammonium hydroxide) , isopropanol and water). β-L-fucopyranosyl-1-phosphate-1-(Rf~0. 54, carbonized) is straw It was eluted at Kushina 29-45. Strong U, V, active spora 1-(Rf~0. 51) was mainly eluted in fractions 46-65. moreover Large Rf or even smaller Rf, the pond's minute U, V, active suit discovered. Guanosine 5″-(β-1-fucopyranosyl-)-diphosphate (Rf~0. Fractions 59-86 containing 62) also contain narrow U, V, Active spot (Rf~0. 57) was shown. Collect fractions 59-86, - Lyophilized overnight, guanosine 5'-(β-1-fucopyranosyl-)-diphosphate -! -Products enriched in 0. 353g was obtained. 'H-nmr indicates that this product is δ= 4. 12 and δ=5. Contaminated with a small amount of contaminants, showing a signal at 05 It showed that there is. Fractions 29-45 and 47-57 were collected separately, lyophilized, and β- L-fucopyranosyl-1-phosphate was collected (0. 264g and and 0. 223g, second fraction contained some contaminants). case By collecting the corresponding fractions, some amount of guanosine 5' -(β-1-fucopyranosyl-)-diphosphate with good purity ('H-nm r) Obtained. Generally, guanosine 5'-(β-1-fucopyranosyl-)-diphosine All sphate-rich products are dissolved in a small amount of water, dissolved in a large amount of methanol, and then It was passed through the same column, which was then regenerated by washing with water. pure guanosine 5 ′-(β-I-fucopyranosyl-)-diphosphate-containing fraction ( ties) were collected and lyophilized under reduced pressure to yield a white fluffy product (187 g, 16 96) was obtained. 'H-nmr was consistent with known data. Method-2 β-L-fucopyranone-1-phosphe-I. and guanoone 5'-monophosphohomo Luhoresort (4-morpholine-N, N-one sosocrohekinrucarboxia The method first disclosed The reaction was carried out in dry pyridine according to 5. That is, β-L-fucopyrano true 1 -phosphate (triethylammonium salt, 0. 528g, about 1. 18 mm ) was dissolved in dry pyridine (20 ml) and the solvent was then separated under reduced pressure. . Repeat this process three times, being careful to let only dry air enter the flask. repeated. To this reaction flask was added GMP-Morphoresort (12 g, 1. 65 mmol) and pyridine (20 ml) and then remove the solvent under reduced pressure. Evaporated and this process was repeated three times as above. The final residue contains pyrinone (2 0 ml) and then the heterogeneous mixture was incubated for 3-40 mL at room temperature under a nitrogen atmosphere. Stir for a while. An insoluble product was formed. This product is optionally produced by sonication. It has to be disassembled. This product], L: was tracked by tic and finished as described in method-1. , GDP-fucose (120 mg, 1696') was obtained. Example 14 8-Methoxycarbonyloctyl (5-acetamido-3,5-dideoxy-α -D-glycero-D-lacto-2-nonuropyranosilonic acid)-(2-6)-0 -β-D-galactopyranosyl-(1-4)-0-2-acetamido-2-deo xy-glucopyranosyl(1-3)-0-β-D-galac 1 hepyranosyl( 1-4) -0-2-acetamido-2-deoxy-glucopyranosite (62a) Manufacturing of βGal (]-4) βGIcNAc (1-3) βGal (1-4) βG I cNA c-OR (see compound 61, 6. 5mg), CMP-Neu5Ac (17mg), βGal (1-4) βGl cNAca (2-6) Sialyl transferase (50 mU) and alkaline phosphatase (+5 U), The above solvent 2. Incubate in 5 ml for 48 hours. isolated, purified, 62a (3.0 mg) was obtained. Example 15 8-MeI xocarbonyloctyl (5-acetamido-3,5-dideogine) α-D-glycero-D-galacto-2-nonuroviranosilonic acid)-(2-6)- 0-β-D-galactopyranosyl(1-4)-0-2-acetamido-2-de Oxy-glucopyranosyl-(+-5)-0-β-D-galactopyranotrue ( l-4)-0-[α-L-fucopyranosyl-(1-3)0]2-acetamide − of lanoside (63a) and its 8-carboxyoctyl glycoside (63b). manufacturing Compound 62a (3.0mg), GDP-fucose (5.0mg), βGl cNAca (1-3/4)':) cosyltransferase (IOmU), Buffer solution (0.5mg)?忰　　　　 Example 16 8-Methoxycarbonyloctyl β-D-galactopyranosyl-(1-4)- 〇-2-acetamido-2-deoxo-β-D-glucobylanone (1-3) -〇-β-D-galactopyranosyl-(1-4)-0-[α-L-fucopyranosyl Ru-(1-3)-0-12-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyra Preparation of noside (64a) and its 8-carboxyoctylglycoside (64b) Construction Compounds 63a and 63b (1.7 mg) were immobilized in agarose. Clostridium perfringens (Closjridium Perf. ringens) neuraminidase (Sigma Chemical Com pany, ouis, Mo, IU), along with sodium caconlate Incubate at 37°C in buffer (50mM, pH 5,2,2ml) I did it. After 24 hours, the mixture was diluted with water (10 ml) and then mixed with amino acid. Filtered through Amicon PM-10 membrane. This passing liquid and The washing solution was lyophilized and the residue was dissolved in water (3 ml) and added to two wooden C11 cartridges. I passed it through the gate. Each cartridge was washed with water (10 ml) and then It was eluted using a 20ml volume. After evaporation of the solvent, this residue was treated with Iatrobeads (210 Chromatography in poppy, 64a (0,8 mg) and 64b (0.7 mg) was obtained. 64b was dissolved in dry methanol and then tlc or 64 Treated with diazomethane until showing complete conversion to a. Example 17 8-MeI-xycarbonyloctyl (5-acetamido-3,5-dideoxy- α-D-glyceroD-galacto-2-nonulopyranosilonic acid) -(2,-, 3) -　-　-β-D-galactopyranosyl(+-4)-O=2-acetamide -2-deoxy-β-D-glucopyranosyl-(+-5)-0-β-D-galac topyranosyl-(1-4)-0-[α-L-fucopyranosyl-(L-3)-0- 12-acetamido-2-deoxo compound 64a (1.5 mg), CMP- Neu5Ac (8 mg), βGa I (1-3/4) βG I cNAca (2-3) Sialyl phosphate (+7mU), alkaline phosphatase (5 U) was incubated for 40 hours in sialylation buffer (1°5 ml). Ta. Isolated and purified to produce 65a (0.7 mg) and 65b (0.55 mg )of? [Tota. Example 18 8-Methoxycarbonyloctyl (5-acetamido-3,5-nodeoxy-α -D-glycero-D-galacto-2-nonuropyranonuronic acid)-(2-3)-0 -β-D-galactopyranosyl(1-4)-'0-2-acetoato Noturu (+-3)-0-β-D-galactopyranosyl (1-4)-0-2- Acetamide-2-deoxymg), βGal (1-3/4) βGl cNAc a (2-3) sialyltransferase (4 (3 mU), and alkali Lyphosphatase (15 U) was added to sialylation buffer (2. 5ml) for 48 hours Incubation 11j. (1 (release, purify, 66a (2. 5 mg) was obtained. Example 19 8-methquine carbonyloctyl (5-acetamido-3. 5-dideoxy-α -D-glycerose D-galacto-2-nonuroviranosilonic acid)-(2-3)- 0-β-D-galac 1-pyranosyl(1-4)-0-[α-L-fucopyranone Ru(1-3)-0-]]2-acetamido-2-deoxyglucopyranosyl -(1-3)-0-β-D-galactopyranosyl(1-4)-0-[α-L -Fucopyranosyl-(1-3)-O-]]2-acetamido 2-deoxog Production of lucopyranosyl” (G7a) Compound 66a (2. 5mg) , GDP-fucose (8 mg) and βGl cNAca (1-”3/4) fucose Cosyltransferase (+9 mU) was added to enzyme treatment buffer (2. 0ml) The cells were incubated for 48 hours. Single ML, purified, 67b (1. 7mg) I got it. 'H-nmr data table IQ of the compound produced in Example 1-6 above Immunosuppressive examples 20-34 of G22% inhibitory oligosaccharide glycosides are used for blood group antigen determination. This demonstrates the immunosuppressive properties of fixed group-related oligosaccharide glycosides. In these examples The oligosaccharide glycosides used in are shown in Figures 12 and 13. this In the figure, the structures of these compounds are indicated with Roman numerals. Example 20 D　TH　H Inhibition of inflammatory response Suppression of DTH inflammatory responses in mice as disclosed by Sm1th and Ziola It was measured using sole swelling test method 21. Simply put, Ba1b/ A group of c mice were infected with Clostridium thermohydrosulfuricum (Clostridium thermohydrosulfuricum). ridium thermohydrosulfuricum) L-11 Ll l l S layer protein from 1-69, bacterial surface protein Immunization was carried out with 0 μg of IO μg. This L-111-69 is a powerful inflammatory DT. It has been proven to induce H responses. After 7 days, the soles of the mice in each group The bulge was challenged with 10 μg of LIIIS heavier white matter. Cha 24 hours after using the microwave, the swelling of the soles of the feet due to inflammation is suppressed. Yo Engineering Micrometer (Mitutoy). Engineering micrometer). Blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides III-Vll shown in FIG. To evaluate the effects of inflammatory DTH on the inflammatory DTH response, groups of mice were given post-challenge 5 hours later, inject 100 μg of compound l1l-VII into the tail vein. administered by. Control groups were either untreated or treated with phosphate buffered saline (P BS) 100 μm! -j. The results of this experiment are shown in Figure 1. oligosaccharide glycerin Mice injected with Condo III had a swelling of about 409% of the sole swelling of control mice. I saw that it showed 6. Oligosaccharide glycond IV-Vlr (sialyl-Lewis X, compound II+ in Figure 12 Mice injected with the structure related to the plantar bulge of control mice Jun's 55-7096 was shown. As can be seen from Figure 2, sugar vIII and Injected mice and mice injected with trisaccharide compound X shown in FIG. The swelling of the sole of the foot was comparable to that found in control mice. It showed swelling. Example 21 Dose Dependence on Suppression of DTH Inflammatory Response Six groups of mice were treated with L as described in Example 20. The cells were subjected to primary sensitization and challenge with Ill-3 monochrome. challenge At 5 hours post-treatment, each group was treated with the blood group antigenic determinant-related oligosaccharide group shown in Figure 12. Solution containing 1O125, 50, 75 or 100 μg of lycoside ITI 100 μm or PBS was administered intravenously. 24 hours after the challenge The DTHci response in the liver at each dose was measured and is shown in FIG. PBS or The group administered with 10 μg of oligosaccharide glycoside III was compared with the PBS-treated control group. In comparison, oligosaccharide glycosyl l'　I　I　1　25. 50. Liver dosed at doses of 75 or 100 μg each showed reduced plantar swelling (78% of the PBS control, respectively). %, 69%, 7596 and 56Lllll-3 more inhibited antibody responses to white matter. lack of system Immunization and challenge as described in Example 20 followed by oligosaccharide glycol In serum from mouse livers treated with coside III-Vll, Lllll-S- Secondary antibody responses to stratified white matter were measured for two weeks after the second immunization (one post-challenge). Measurements were taken at 1 week). Antibody titers were measured using the 21-linked enzyme immunoassay disclosed by Ziola et al. 1 (EIA ). Simply put, 2 μg of Lllll-3-[protein] was Ma\1sorb E I A plate (Flow Labora tories, llIc,. IJII was added to each quadrant of Mclean, VΔ). Incubate overnight at room temperature. -1-1, unadsorbed antigen was removed by inverting the four parts. Next In each well, add 296 (wt/vol) bovine serum albumin and 2% (vol/vol) of various dilution stages prepared using phosphate buffered saline containing Tween 20. 200 μm of mouse serum was added. After 1 hour at room temperature, invert the four parts. Remove the solution and wash the wells four times with distilled, deionized water at room temperature. Ta. Horseradish bar oxidase enriched goat anti-mouse immunoglobulin Antibodies were then added to each quadrant (phosphate &l# saline/albumin/tweet). 200 μl of a 2000 dilution solution prepared in a 2000 dilution solution at room temperature After this time, invert the wells again, wash, and then add enzyme substrate solution to each quadrant. solution (0.1 M sodium citrate/phosphate Ij! buffer, pH 5.5, freshly added to 3 mg/ml of 0-phenylenediamine and 0. 0291 capacity/capacity Amount) Hydrogen peroxide) 200 μm was added. Enzyme reaction for 30 minutes at room temperature in the dark. After allowing to proceed, 2N hydrochloric acid 50/11 was added to each quarter and then its OD 4 ! . The value was measured. Measurements were made using a 6-dilution system of serum collected from mice labeled with This is a graph showing the potency evaluated in relation to swelling of the sole bulge. Shown in Figure 3 The dilution curve shown is based on the expression of antibodies against LllllS heavier white matter or oligosaccharides. Not suppressed by treatment with glycond III-Vll or separately This indicates that there will be no adverse effects. Example 23 Administration timing of compound II+ related to antigen challenge As described in Example 20, LI　I　Is immunizes against the heavier white matter, and Ll　l　Is stimulates the heavier white matter. A group of challenged Ba1b/c mice was treated with blood group antigen determinants shown in FIG. [Continuous oligosaccharide glycosides] II A solution of 100 μg in PBS (100 μl) were injected at different time points with respect to antigen challenge. 181 contains antigen challenge One hour before treatment, oligosaccharide glycoside III was administered to one group, and the other group received a challenge. a third group was administered 1 hour post-challenge; A fourth group was dosed 5 hours post-challenge. The control group was This included administration of P'BS (1,00 μl) immediately after the treatment. The results of this experiment are shown in FIG. 1 hour before antigen challenge or challenge Immediately thereafter, in mice administered oligosaccharide glycoside I11, this DTH response was not suppressed. Only 9% of oligosaccharides were present at 5 hours post-challenge. Ta. Examples 20-23 show the determination of the effective dose of blood group antigen after antigen challenge. Treatment with fixed group-related oligosaccharide glycosides or an immune response to this antigen (i.e. DT and I responses), which were measured 24 hours post-challenge. levels of inflammation treated with blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides. reduced by at least 20% compared to the levels exhibited by control animals. Which indicates that. Example 24 6. After Challenges. Suppression of DTH inflammatory response at 8 or 10 weeks sustainability of 19 cases treated with 20 blood group antigen determinant-related oligosaccharide glycosides III-VTT. The same 111 mice were subjected to LI at 8 weeks after the second immunization. ++) challenge with IIS heavier white matter. Untreated controls are normal The patient responded with swelling of the sole of the foot. On the other hand, all other groups have the following showed decreased sole swelling. The sialyl group was given at 5 hours after the first challenge. A derivative of the mountain that does not exist) is the same at the time of the second challenge as well as at the time of the second challenge. was just as powerful. In addition to suppressing cellular immune responses, the above-mentioned Data may also be treated with oligosaccharide glycosides according to the invention or treated with the same antigen. It has been shown to confer tolerance to additional challenges. 11, Soaryl Lewis X, Compound III (10 μg, 25 μg, 50 μg, 7 5 μg, 100 μg), or β-sia of 8-methoxycarbonyl octatool lyl glycoside (monosaccharide compound Vllll, IX in Figure 13; 100 μg), or T - 8-methoxycarbonyloctyl glycoside of trisaccharide compound (trisaccharide compound in Figure 13) The same -Di mice as in Example 21 treated with 100 μg of substance Six weeks after challenge, the mice were re-challenged. -5 after the first challenge Over time, we found swelling in the sole bulge similar to that found with sugar compounds. It was issued. Mice initially treated with 10-100 μg of The soles of the feet ranged from 90-65% of the swelling that occurred 24 hours after the eye challenge. The dizziness area showed swelling. 111 - 1 hour after the 1st challenge, or - after the 111th challenge. At 5 hours, treated with 100 μg of oligosaccharide glycocont 111, Same as example 22! ! 10 weeks after the second immunization, mice were given the antigen. I submitted the challenge again. Shortly after the challenge or before the challenge. The swelling of the sole bulge of the treated mice was within the experimental error; It was the same as that of In contrast, 1 hour or 5 hours after the challenge. In contrast, mice that had been treated from the beginning had lower values than those found in PBS-treated controls. It showed only about 66%. The results of this experiment are shown in Figures 5-7, which show blood group antigen determinants. the related oligosaccharide glycosides for a period of at least 10 weeks after treatment rIL; has been shown to confer tolerance to challenge with the same antigen. Example 25 Inhibition induced by 8-methoxycarbonyloctyl glycoside of compound III The effect of cyclophosphamide treatment on suppressor cells by treating mice with socrophosphamide (CP). It has been proven in publications that the cells are erased. CP is the 8-mer of compound III. Suppression of cellular immune response induced by toxic carbonyloctyl glycoside I conducted an experiment to prove whether it can be changed or not. Specifically, in this example, 8-method of compound III was prepared in a manner similar to that described above. Treatment with oxycarbonyloctyl glycoside pre-suppresses the DTH inflammatory response. immunized mice that are suppressed and also rendered tolerant to the DTH inflammatory response. Use a mouse. 14 days after immunization, CP2O0mg/kg was administered, followed by immunization. On day 17 after challenge, mice were injected with 20 omg/kg of CP. These mice were challenged with 20 μg of LIIS superior white matter. Shita. Measurement of increase in swelling of the sole of the foot 24 hours after this challenge The degree of DTH response was evaluated by (mm-'). The results of this experiment are shown in FIG. This figure 8 shows the 8-methoxyoxygenation of compound III. In mice that received prior immunosuppressive treatment with cycarbonyloctyl glycoside. Injected CP before challenge with LIIIS suprawhite matter induced DTH inflammation. Indicates that the response will be restored. These results are consistent with the 8-methoxycarbonyloctyl glycosylation of compound III in Figure 3. Tolerance induced by CID or CP-sensitive suppressor-mediated by cells This suggests that Example 26 Inhibition induced by 8-methoxycarbonyloctyl glycoside of compound III In this example, compound III Assessing the effects of antigens promoting DTH inflammatory responses against the suppressive effects induced by do. As previously described in Example 20, the mouse was complex virus I (H3VI) and cation-added bovine serum albumin [1,-Bar Carrier (5uperCarrier) trade name, Pier CE, Rockford, [Immunized with LI. Shown in Figure 9 As such, the type of antigen used in this inflammatory response may be linked to compound I that modulates this response. Does not appear to affect II's abilities. Example 27 Synthetic Compound III for ELAM-1 Dependent Cell Adhesion to Activated Vascular Endothelium effect of In this example, synthetic blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides III or activated Is it possible to suppress ELAM-1-dependent cell adhesion to vascular endothelium? Evaluate. In particular, the in vitro cell binding method disclosed by Lowe et al. The assay method was performed. Simply put, human vascular endothelial cells (Cell System s, 5eattle, HUVECs obtained from WA) were treated with TNFa (10n g/ml) to express ELAM-1. ELAM-1 dependent U9, a human tumor cell line that has also been shown to bind to HUVECs. ELAM-1-dependent binding to HUVECs using 37 or HL60 The effects of Compound II+ were determined. Figure 1O shows the results of this experiment. Compound III inhibits ELAM-1-dependent binding to HUVECs. It shows that it is suppressed. The data in Examples 20-26 are based on immunization against antigens in mammals (mice). blood group antigen determinants in the treatment of responses and also the induction of tolerance to antigens. This proves the effectiveness of linked oligosaccharide glycosides. The mouse immune system is related to the human immune system. These oligosaccharide glycosides are a good model for human immune response. It is also considered to be effective in dealing with problems. This suggests that blood group antigenic determinant-related Oligosaccharide glycosides inhibit ELAM-1-dependent binding to HUVECs This is supported by the results of Example 27 which prove that. Example 28 Effect of 51eX administration timing on immunization or antigen challenge Do as described in Example 20 or modify as below to create 4 Hff Ba1b/ c Female mice were subjected to primary immunization and challenge with H3V antigen. 1) Group 1: 20 μg/mouse of unactivated herpes simplex virus Immunization with type I (H3V), followed by 20 μg H3V 7 days later. It was submitted to the challenge. 2) Group 2 was immunized with 20 μg/mouse of H3V, then 7 days later with 2 challenged with 0 μg/mouse of H3V and then 5 days after this challenge. At time points, 100 μg/mouse of 5IeX (Sialyl Lewis X, Compound I II) was injected intravenously. 3) Group 3 was immunized with 20 μg/mouse of H3V, followed by PBS 100 μg/mouse 5IeX in 00 μl was injected intramuscularly at the same site. 7th day Afterwards, the mice were challenged with 20 μg/mouse of H3V alone in the soles of their feet. I took on the challenge. 4) Group 4 was immunized with PBS l 00μm, then 70 days later, 20 Challenge was performed with μg/mouse of H3V. During antigen challenge Back of swelling of the sole of the foot caused by physical injury. You can get the scale of Grand Leher. The degree of DTH inflammatory response was determined by Mitutoyo Eng. 24 hours post-challenge. By measuring the swelling of the sole of the foot using a Nyaring micrometer. It was measured using FIG. 27 shows the degree of swelling of the sole bulge that was found. decrease percentage was calculated using the following formula: “Treated mice” are mice that received a compound in addition to the antigen. "Grown mice" are mice that have not received compound. hack ground swelling , mice immunized with PBS alone without antigen or compound immunization. The degree of swelling found in Mammals were injected with 5IeX at the same time and at the same site as H3V immunization. Mice were immunized with H3V and then challenged with HSV. showed an 8896 reduction in sole bulge swelling compared to . H on the bulge of the sole of the foot Mice injected with 5leX 5 hours after challenge with 3V , compared to mice immunized with HSV and then challenged with HSV. In comparison, the swelling of the sole of the foot was approximately 86. It showed a decrease of 7%. The results of this experiment showed that oligosaccharide glycoside I"II It is possible to suppress the immune response to an antigen when administered to mice at a specific time point. This supports the above example showing that. This example also shows that mice can be immunized simultaneously with Oligosaccharide glycoside III administered to the patient suppresses the sensitization of the immune system to this antigen. It shows that it can be controlled. Without being limited to any theory, 5Ie X (compound 111) inhibits T helper cell recognition f1 on antigen-providing cells. It also interferes with the immune system and inhibits it from becoming educated to the antigen in question. it is considered as. Example 29 Effect of sialyl LeX on antibody response to HSV Four groups of mice were treated as described in Example 28. Secondary antibody responses against HSV antigens were determined using serum from mouse 81 described in Example 28. 2 weeks after the next immunization (1 week after challenge) Ta. As described in Example 22, except that H3V antigen was used instead of LI I 13 layer protein. Antibody titer was measured as follows. Figure 28 shows the measurements taken in a series of 6 dilutions of serum from the immunized group of mice described in Example 28. The obtained titer is shown graphically. The first 2111 results are LI　I　1 There was a correlation with the results obtained in Example 22 and 11) regarding three-layer proteins. Antibody responses of mice treated with S]eX were unchanged at 5 hours post-challenge. It didn't resonate. However, mice treated with 5IeX at the time of immunization Mice showed antibody responses to H3V antigens. , showed a decrease in either Without being limited by theory, 51eX (Compound II+) may induce antibody responses. It interferes with the T helper cells contained in This is thought to prevent this from happening. Example 30 Effect of cyclophosphamide treatment on induction of SIeX immunosuppression Treatment of mice with cyclophosphamide (CP) as described in Example 25. Depending on the location, suppressor cells can be eliminated. For details, LI　I　1 Treatment with 3-layer antigen pre-suppresses and renders tolerant to the DTH inflammatory response. Use immunized mice. Immunization of Ba1b/c lF41 with 2oμg/mouse of LIIIS layer protein Sensitized. After 7 days, LIIs layer protein was applied to the sole bulge of this group of mice. 20 μg of white matter was challenged. A second group of mice received LII+ at the same site. Immunization with 20 μg of protein and 00 μg of 5IeXI followed by 7 days later , the sole of the foot was challenged with 1120 μg of Ll. 3rd JIP Mau Animals were injected intraperitoneally with 0 mg/kg of CP2O at the second time point prior to immunization. This group was then subjected to the immunization and challenge described above for the second group. . A fourth group of mice received Ll 1120 μg/mouse and T-3 at the same site. Immunization was carried out with 100 μg/mouse of sugar compound, and then as described for the first group. As instructed, I did the sole bulge challenge. A fifth group of mice received PBSI immunization with 00 μl and then immunization with foot swabs as described for group 1. We did the Ramibu Challenge. These results are shown in FIG. 29. These results demonstrate that 5IeX at the same time as immunization The conclusion set forth in Example 28 that the immune response to the antigen can be suppressed by treatment with This is to confirm the results. Furthermore, this example shows that S]eX at the same time as immunization Suppression of the immune response by treatment with cyclophosphamide before immunization cyclophosphamide sensitivity suppressor. This suggests the involvement of sir T-cells. Example 31 The bulge of the foot is involved in the suppression of the DTH inflammatory response caused by OVA. Effect of compound administration site after microwave fff of 8-12 week old Ba1b/c female mice weighing approximately 20-25 mg was transferred to PB OVA (albumin, egg, S igma, St. Louis, MO) I 00 u g and DDA < dimethyldioctacyl Ammonium CI Phyto, Eastman Kodak. Rochester, NY) was administered intramuscularly into the hind limb muscles of this mouse. Immunization was achieved by administering At day 70 after immunization, mice in each group were injected with 0 in 20 μl of PBS into the sole of the foot. They were challenged with 20 μg of VA. Challenge the swelling that occurs on the soles of your feet. After 24 hours, the Mitutoyo Engineering micrometer It was measured. In order to evaluate the effect of the administration method of 51eX on suppressing the inflammatory DTH response, Compound 111 (SleX) was administered by different routes. Groups of mice with (At 5 hours after the ramus challenge, 5leX10 in 200μI PBS 0 μg/mouse was administered intravenously, or the mice were placed under light anesthesia and incubated with PBS20. SIe'100 μg/mouse in μl was administered intranasally. A method for administering compounds via the nasal route is disclosed by Sm1th et al.63, which This publication is incorporated herein by reference. Simply put, mice are treated with metophane (λ 1etofan; Pitman-Moore Ltd, Mississippi a, Ontario, Canada) and then placed near the nose of the mouse. , place 50 μl of compound in drops and aspirate. Is the control group left untreated? , or intravenous administration of PB 3200 μm, or intrastate administration of PBS 50 μm. did. The results of this experiment are shown in FIG. This figure is 5 o'clock after the challenge At some point in time, suppression of the immune response was obtained when the compound Sle'' was administered nasally. It is shown that. Example 32 Administration after sole bulge challenge related to suppression of OVA-induced DTH inflammatory response machine dependence Groups of 8-12 week old Ba1b/c female mice weighing approximately 20-75 g were treated with PBS I OVA in 00 μm (albumin, egg, Sigma,) I 00 u g and 20 μg of DDA in 100 μM of PBS were administered intramuscularly into the hind limb muscles of this mouse. Immunization was achieved by intravenous administration. On day 7 after immunization, each group of mice The sole bulge was challenged with 20 μg of 0VA in 20 μl of P B, S. . At 5 hours, 7 hours, or 1 hour after the sole bulge challenge, Mouse +: (7) SleX 100 μg/mouse in PBS 200 uI intravenously or administer PBS 200μm only intravenously, or Under light anesthesia, (7) SI eX 00 μg/7 in 350 μl of PB mice were administered nasally or PB350 μm alone was administered nasally. sole calf 24 hours after the challenge, the swelling of the thigh area was measured by Mitsu Yo Engineering. It was measured using a micrometer. Figure 31 shows the results of this experiment. 7 hours after OVA challenge SIeX administered (both intranasally and intravenously) was administered with the formula described in Example 28. This represents 70-74% of the foot pad swelling of the positive control mice. Ta. For intranasal or intravenous administration, 5 hours after the sole bulge challenge. 5IeX dosed with 5IeX showed a 63% and 5496 reduction in swelling, respectively. Ta. Intranasal or intravenous administration 10 hours after challenge 5IeX administered by injection reduced immunity by 58% and 32% of swelling, respectively. Inhibition associated with administration of oligosaccharide glycosides to a site different from the sensitized site effect A group of Ba1b/C female mice was treated with 20 μg/mouse of DDA in 100 ul of PBS. Immunization by intramuscular administration of OVA I and OVA I 00 μg/mouse into the hind limb muscles At the same time, 100 μg/mouse of 5IeX was administered intramuscularly, intranasally, or intravenously. It was administered by On the 70th day, move the mouse to P B S 2 Ou I (7) OVA It was challenged with 20 μg/7 Usuni. Reduces swelling of the soles of the feet. 24 hours after microwave, Mitutoyo Engineering Micrometer It was measured by [2J32 is 5IeX administration to mice at the time of immunization or 5IeX administration method The results show that DTH produces the same degree of inhibition of inflammation [, L: . In addition to intravenous administration of 5IeX compounds, this method also allows patients to This suggests that it can be administered for the treatment of. Example 34 Effects of oligosaccharide glycosides on LPS that causes cell damage 24 hours after intranasal administration of LPS (lipopolysaccharide) to mice By measuring the weight of the lungs of the sacrificed mice, we determined that LPS caused damage to the lungs. demonstrated to cause harm. Simply put, 5μg/mouse at 8-10 weeks of age. sensitization was performed by intranasal administration of the drug under light anesthesia. After 5 hours, in 200 μl of PBS ( 7) SIeX, C19-9, and T-trisaccharide (#27) were intravenously administered to mice. After 24 hours, mice were sacrificed and their lungs were removed and weighed. The results in Figure 33 show that S]eA (compound VII) and 5IeX (compound 111) demonstrated that DTH inflammatory responses in the lungs were reduced by at least about 3096 . This result indicates that 51eA and S]eX compounds are Inflammation, such as acute respiratory syndrome It is believed that it may be useful in reducing inflammation of stress syndrome). Suggests. Example 35 Effect of various amounts of 5IeA and SIeX on lymphocyte proliferative responses Groups of Ba1b/c female mice were treated with MUMPS (inactivated Mumps). immunization by injection of 20 μg of DDA and DDA into the hind limb muscles of mice. did. After 7 days, the mice were sacrificed, and the lymph nodes and spleen were removed and then Lymphocytes were isolated. These lymphocytes were mixed with 5% Hyberm ix; Sign+a, St. Louis. RPMII640 medium (Gi bco) supplemented with MO). Burlington, Canada) at various concentrations. virus and various concentrations of compounds at 37°C in 5% CO2. The cells were cultured for 3 days at 2XlO' cells/well at a degree. After 3 days, the cells were treated with 2H-thi. Midin/recess (Amersham Canada Ltd,, 0akv 1e, 0ntario. Canada) 1. Oμ cucumber was pulse irradiated for 6 hours. These cells were harvested using a PhD cell harvester, and the cpm was collected using a Beckman (Becman) cell harvester. kman) Measured using a 3000 scintillation counter. against antigen There is a direct correlation between the ability of lymphocytes involved in response and the amount of 3H-thymidine uptake. An example of this, which has been previously proven to exist, is the T-helper cell response. The lymphocyte proliferation response was used for inhydrometry. 3H-thymidine incorporation are reduced compared to lymphocytes from mice exposed to antigen, and therefore, Fig. 34 shows that 5IeA and SIeX (Cl 9-9) also have antigen-specific phosphorus It has been shown that it is possible to suppress the cell proliferation response. There are also limits to various theories. Assuming that 5leA and 5IeX do not obtain a proliferative response on in. It is thought that it can interfere with macrophage knee cells required for Examples 36 and 37 illustrate the immunosuppressive properties of Mokkan Glycoside 65a. Example 36 Suppression of DTH inflammatory response DTH inflammatory responses were determined using the mouse plantar swelling assay described in Example 20. It was measured. Briefly, a group of Ba1b/c mice were treated with LlllS layer protein 1O Immunization was carried out with μg. After 7 days, LII was applied to the sole of each group of mice. Challenged with 10 μg of IS layer protein. Inflammatory swelling of the sole of the foot that occurs , 24 hours after the challenge, Mitutoyo Engineering Micrometer Measured using a meter. Example 17 Evaluation of the effect of synthesized wooden block glycoside 65a on inflammatory DTH response To test mice, 5 hours post-challenge, injection into their tail veins Groups were administered 100 μg of this compound. Control group received phosphate buffered saline (PBS) 100 μm was administered. The results of this experiment are shown in Table 11 below. In this table, the swelling of the sole of the foot is A small increase relative to control indicates that the test compound has immunosuppressive properties, i.e. Decreasing the degree of swelling of the sole bulge in response to a test compound or antigen proves that. Table 11 Control 3. 3 mice have a foot pad swelling degree less than 5096 compared to control mice. It shows that it was done. Example 37 Sustaining suppression of DTH inflammatory responses 11 weeks post-challenge 14 Mice of the same 1'# treated with Mokkan Glyko Doro 5a of Example 7 were given - Re-challenge with LI 13 layer protein 11 weeks after the next immunization. went. Mice treated with PBS had a normal degree of foot bulge; It was found that the S-treated mice exhibited approximately 6096 degrees of swelling of the sole bulge. - administered at 5 hours after the next challenge (-1 week after the next immunization) This anti-inflammatory 'Ah fruit of Tanimu Glycoside 65a -11 weeks after the next immunization. The presence of inflammation was somewhat attenuated or still present when compared to PI35-treated controls. showed a decrease in interest. In addition to providing suppression of cellular immune responses, the above data also demonstrate that the wooden tablets of the present invention Glycoside compounds confer tolerance to additional challenge from the same antigen It proves that. The data of Examples 36 and 37 above are for antigens in mammals (mouse). As described herein, relating to the treatment of immune responses and also the induction of tolerance to antigens This study has demonstrated the effectiveness of the glycoside compounds found in wooden tablets. mouse immune system or human immune system Being a good model, these mokkan glycoside compounds have also been implicated in human immune responses. It is also considered to be effective in dealing with problems. By following the method described in the examples above, the oligosaccharide glycosylation described in these examples can be obtained. Other blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosyl Cyds can be used to suppress cellular immune responses to antigens. Engraving (no changes to the content) 0 1. 0 2. 0 3. 0 Increase in swelling of sole bulge (mm-1) 0 1. 02. 0 3. 0 4. 0 Increase in swelling of sole bulge (mm-1) Fig, 3 degree of dilution immunizing antigen 111+@percent Fig, 10 engineering engineer αFuc Sialyl Lewis X (Sialyl Lewis X) 1■ Day 9. 12 aNaus person a(2-4-3)βGa1. (1-a-4) βG1cHλc-OR aNau5λc (2-a-3) βGal (1-a-3) (3GlcNAc- OR Noaryl Lewis C (Sialyl LeC) V Any Sialil Lewis" (CA Engineering 99-9) Fi, 12 (con" Hi) aNau5Ac-OR βNauSλC-0R βGal (1->3) CEGaLNAc-ORFig, 13 S Fig, 15 5m above the shrine Fig, 17 Muyo1 1-1E I Fig-18 Fig, 20 Once Fig, 2: L Fig, 22 2m SLeMI for DT11 response to H3V! Effect of immunizing antigen Chale antigen Fig, 27 Effect of sialyl LeX on antibody response to H3V Fig, 2B Effect of CP on induction of S L c X immunosuppression Fig, 29 Increased swelling of the sole bulge treated with compounds on day 7 for OVA-induced DTH (10-1mm)Fig, 30 Fig, 31 Compound 00 against OVA-induced DTH Fig. 32 Effects of SL, eX, L5LeA on LPS-induced lung injury Fig. 3 3 PM Fi　34 q・ Procedural amendment (method) stomach Interaction with immunosuppressive and tolerogenic oligosaccharide derivative cases Patent applicant Name (Name) Engraving of translation of Glycammed Incoholated drawing (Contents) (no change) international search report international search report Continuation of front page (31) Priority claim number 889,017 (32) Priority mill May 26, 1992 Japan (33) Priority claim country United States (US) (81) Specified times EP (AT, BE, CH, DE. DK, ES, FR, GB, GR, IT, LU, MC, NL, SE), CA, JP (72) Inventors: Bennotto, Andre, P. Canada T6G 0G9 Alberta, Edmonton, Seventifa Eve Avenue 10968 (72) Inventor Kassiem, Mohammed, Aye. Canada Tee 6 Cay 1 Buoy 4 Alberta, Edmonton, Touin Chira S17D

Claims (40)

【特許請求の範囲】[Claims] １．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを細胞性免疫応答抑制有効量で、 哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物における細胞性免疫応答を抑制する 方法。1. Blood group antigen determinant-related oligosaccharide glycosides at an effective dose to suppress cellular immune response, suppressing a cellular immune response in a mammal, comprising administering to the mammal Method. ２．免疫応答の抑制が炎症の抑制である、請求項１に記載の方法。2. 2. The method of claim 1, wherein the suppression of the immune response is the suppression of inflammation. ３．免疫応答の抑制がＤＴＨ応答の抑制および抗原に対する寛容性の誘発のであ る、請求項１に記載の方法。3. Suppression of the immune response leads to suppression of the DTH response and induction of tolerance to the antigen. 2. The method according to claim 1. ４．免疫応答の抑制が抗原に対するリンパ球応答の抑制である、請求項１に記載 の方法。4. Claim 1, wherein the suppression of the immune response is suppression of a lymphocyte response to an antigen. the method of. ５．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、０．５ｍｇ／ｋｇ−約５０ｍ ｇ／ｋｇの量で哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物における抗原チャレ ンジに対する細胞性免疫応答の処置方法。5. Blood group antigen determinant-related oligosaccharide glycoside at 0.5 mg/kg - about 50 m Antigen challenge in a mammal, comprising administering to the mammal in an amount of A method of treating cell-mediated immune responses to cancer. ６．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドを、抗原チャレンジ後の少なくと も０．５時間の時点で投与する、請求項５に記載の方法。6. blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides at least after antigen challenge. 6. The method of claim 5, wherein the method is also administered at 0.5 hours. ７．上記オリゴ糖グリコシドを、非口経投与する、請求項１−５のいづれか一項 に記載の方法。7. Any one of claims 1 to 5, wherein the oligosaccharide glycoside is administered parenterally. The method described in. ８．血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドが、結合抑制性オリゴ糖グリコシ ドとしての特徴をさらに有する、請求項１−５のいづれか一項に記載の方法。8. Blood group antigen determinant-related oligosaccharide glycosides are linked to binding-inhibiting oligosaccharide glycosides. 6. A method according to any one of claims 1 to 5, further comprising the characteristics of a code. ９．上記オリゴ糖グリコシドが、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグル コサミン、Ｎ−アセチルーガラクトサミン、フコースおよびシアリル酸からなる 群から選ばれる、２個または３個以上の糖単位からなる、請求項１−５のいづれ か一項に記載の方法。9. The above oligosaccharide glycosides include glucose, galactose, and N-acetylglucoside. Consists of cosamine, N-acetyl-galactosamine, fucose and sialic acid Any of claims 1 to 5, consisting of two or more sugar units selected from the group The method described in paragraph (1). １０．上記オリゴ糖グリコシドが、β−Ｄ−ガラクトース単位の３または６位置 に、あるいはβ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位の６位置に、αグリコシ ド結合により結合しているシアルリ酸を含有している、請求項９に記載の方法。10. The oligosaccharide glycoside is at the 3rd or 6th position of the β-D-galactose unit. or at the 6-position of the β-N-acetyl-D-glucosamine unit. 10. The method according to claim 9, comprising sialic acid bound by a bond. １１．上記オリゴ糖グリコシドが、図１１に記載の式１または式ＩＩを有してお り、これらの式において、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨおよび結合からなる群から選ばれ、 そしてＲはアグリコン基であり、Ｒ１はそれぞれ独立して、水素、糖および適合 性糖からなる群から選ばれ、そしてＲ２はそれぞれ独立して、水素、糖および適 合性糖からなる群から選ばれ、ただしＲ１およびＲ２の少なくとも一方は糖であ る、請求項１−５のいづれか一項に記載の方法。11. The oligosaccharide glycoside has formula 1 or formula II shown in FIG. In these formulas, Y is selected from the group consisting of O, S, NH and a bond, and R is an aglycone group, and R1 are each independently hydrogen, sugar, and compatible. and each R2 is independently selected from the group consisting of hydrogen, sugar and a suitable selected from the group consisting of synthetic sugars, provided that at least one of R1 and R2 is a sugar. 6. A method according to any one of claims 1-5. １２．Ｒは−（Ａ）−Ｚ′からなる群から選ばれ、この式において、Ａは結合、 炭素原子２−１０個を有するアルキレン基、および式−（ＣＨ２−ＣＲ４Ｇ）ｎ −（式中ｎは１−５に等しい整数であり；Ｒ４は水素、メチルまたはエチルから なる群から選ばれ；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒素、フェニルおよび１−３ 個の置換基を有し、この置換基がアミン、ヒドロキシル、ハロ、炭素原子１−４ 個を有するアルキルおよび炭素原子１−４個を有するアルコキシからなる群から 選ばれるフェニルからなる群から選ばれる）で示される基を表わし；そしてＺ′ は水素およびメチルからなる群から選ばれるか、あるいはＧが酸素、硫黄または 窒素ではなく、そしてＡが結合ではない場合に、Ｚ′はまた、−ＯＨ、−ＳＨ、 −ＮＨ２、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、 −Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ５および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からな る群から選ばれることができ、ここでＲ５はそれぞれ独立して、炭素原子１−４ 個を有するアルキルである、請求項１１に記載の方法。12. R is selected from the group consisting of -(A)-Z', in which A is a bond; alkylene groups having 2-10 carbon atoms and of the formula -(CH2-CR4G)n - (wherein n is an integer equal to 1-5; R4 is from hydrogen, methyl or ethyl and G is hydrogen, oxygen, sulfur, nitrogen, phenyl and 1-3 substituent, and the substituent is amine, hydroxyl, halo, carbon atom 1-4 from the group consisting of alkyl having 1 to 4 carbon atoms and alkoxy having 1 to 4 carbon atoms represents a group selected from the group consisting of selected phenyl; and Z′ is selected from the group consisting of hydrogen and methyl, or G is oxygen, sulfur or If not nitrogen and A is not a bond, Z' can also be -OH, -SH, -NH2, -NHR5, -N(R5)2, -C(O)OH, -C(O)OR5, -C(O)NH2, -C(O)NHR5 and -C(O)NH(R5)2 wherein each R5 is independently selected from the group consisting of 1-4 carbon atoms. 12. The method according to claim 11, wherein the alkyl has . １３．Ｙが、−Ｏ−であり、そしてＡが炭素原子２−１０個を有するアルキレン であり、そしてＺ′が−Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５からなる群から選 ばれる、請求項１２に記載の方法。13. Y is -O- and A is alkylene having 2-10 carbon atoms and Z' is selected from the group consisting of -C(O)OH and -C(O)OR5. 13. The method of claim 12, wherein: １４．Ｙが−Ｏ−であり、そしてＲ１がそれぞれ独立して、水素あるいはα−Ｌ −フコースおよびα−Ｌ−フコースの誘導体からなる群から選ばれる適合性糖で ある、請求項１１に記載の方法。14. Y is -O-, and R1 is each independently hydrogen or α-L - a compatible sugar selected from the group consisting of fucose and α-L-fucose derivatives; 12. The method of claim 11. １５．Ｒ２がそれぞれ独立して、水素あるいはα−シアリル酸およびα−シアリ ル酸の誘導体からなる群から選はれる適合性糖である、請求項１４に記載の方法 。15. R2 each independently represents hydrogen, α-sialylic acid and α-sialylic acid; 15. The method according to claim 14, wherein the compatible sugar is selected from the group consisting of derivatives of acid. . １６．上記オリゴ糖グリコシドが、図１２に記載の式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩま たはＶＩＩを有しており、これらの式において、Ｒは水素、メチルおよび−（Ａ ）−Ｚ′（式中、Ａは炭素原子２−１０個を有するアルキレンであり、そしてＺ ′は水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ） ＮＨＲ５および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からなる群から選ばれ、ここでＲ５は それぞれ独立して、炭素原子１−４個を有するアルキルである）からなる群から 選ばれる、請求項１−５のいづれか一項に記載の方法。16. The oligosaccharide glycosides may be of the formula III, IV, V, VI or or VII, in which R is hydrogen, methyl and -(A )-Z' (wherein A is alkylene having 2-10 carbon atoms and Z ' is hydrogen, -C(O)OH, -C(O)OR5, -C(O)NH2, -C(O) selected from the group consisting of NHR5 and -C(O)NH(R5)2, where R5 is each independently alkyl having 1-4 carbon atoms) 6. A method according to any one of claims 1-5, wherein the method is selected. １７．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であ り、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。17. The oligosaccharide has the formula III shown in FIG. , A is octylene and Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4. and R4 is methyl or ethyl. １８．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＶを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。18. The oligosaccharide has the formula IV shown in FIG. 12, in which: A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4, 17. The method of claim 16, wherein R4 is methyl or ethyl. １９．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式Ｖを有しており、この式において、Ａ はオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、そ してＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。19. The oligosaccharide has the formula V shown in FIG. 12, in which A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4, and 17. The method of claim 16, wherein R4 is methyl or ethyl. ２０．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。20. The oligosaccharide has the formula VI shown in FIG. 12, in which A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4, 17. The method of claim 16, wherein R4 is methyl or ethyl. ２１．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり 、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項１６に記載の方法。21. The oligosaccharide has the formula VII shown in FIG. , A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4 , and R4 is methyl or ethyl. ２２．哺乳動物における細胞性免疫応答調整有効量の血液型抗原決定基関連オリ ゴ糖グリコシドおよび調剤用不活性担体からなる、哺乳動物に非口経投与するの に適する医薬組成物。22. Blood group antigen determinant-related factors for effective doses for modulating cellular immune responses in mammals A compound for parenteral administration to mammals, consisting of a gosaccharide glycoside and an inert pharmaceutical carrier. Pharmaceutical composition suitable for. ２３．上記オリゴ糖グリコシドが、グルコース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグ ルコサミン、Ｎ−アセチルーガラクトサミン、フコースおよびシアリル酸からな る群から選はれる、２個または３個以上の糖単位からなる、請求項２２に記載の 医薬組成物。23. The above oligosaccharide glycoside is glucose, galactose, N-acetyl glycoside. Contains lucosamine, N-acetyl-galactosamine, fucose and sialic acid. 23. Consists of two or more sugar units selected from the group of Pharmaceutical composition. ２４．上記オリゴ糖グリコシドが、β−Ｄ−ガラクトース単位の３または６位置 に、あるいはβ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位の６位置に、αグリコシ ド結合により結合しているシアリル酸を含有している、請求項２２に記載の医薬 組成物。24. The oligosaccharide glycoside is at the 3rd or 6th position of the β-D-galactose unit. or at the 6-position of the β-N-acetyl-D-glucosamine unit. 23. The medicament according to claim 22, which contains sialic acid bound by a do bond. Composition. ２５．上記オリゴ糖グリコシドが、図１１に記載の式Ｉまたは式ＩＩを有してお り、これらの式において、Ｙは−Ｏ−、−Ｓ−または＞ＮＨあるいは結合であり ；Ｒはアグリコン基であり、Ｒ１はそれぞれ独立して、水素および適合性糖から なる群から選ばれ、そしてＲ２はそれぞれ独立して、水素および適合性糖からな る群から選ばれる、請求項２２に記載の医薬組成物。25. The oligosaccharide glycoside has formula I or formula II shown in FIG. In these formulas, Y is -O-, -S- or >NH or a bond. ; R is an aglycone group, R1 each independently from hydrogen and a compatible sugar; and R2 is each independently selected from the group consisting of hydrogen and a compatible sugar. 23. The pharmaceutical composition according to claim 22, selected from the group consisting of: ２６．Ｙは−Ｏ−であり；そしてＲは−（Ａ）−Ｚ′からなる群から選ばれ、こ の式において、Ａは結合、炭素原子２−１０個を有するアルキレン基、および式 −（ＣＨ２−ＣＲ４Ｇ）ｎ−（式中ｎは１−５に等しい整数であり；Ｒ４は水素 、メチルまたはエチルからなる群から選はれ；そしてＧは水素、酸素、硫黄、窒 素、フェニルおよび１−３個の置換基を有し、この置換基がアミン、ヒドロキシ ル、ハロ、炭素原子１−４個を有するアルキルおよび炭素原子１−４個を有する アルコキシからなる群から選ばれるフェニルからなる群から選ばれる）で示され る残基を表わし；そしてＺ′は水素およびメチルからなる群から選ばれるか、あ るいはＧが酸素、硫黄または窒素ではなく、そしてＡが結合ではない場合に、Ｚ ′はまた、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２、−Ｃ（Ｏ ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ５および−Ｃ （Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からなる群から選ばれることができ、ここでＲ５はそれぞ れ独立して、炭素原子１−４個を有するアルキルである、請求項２５に記載の医 薬組成物。26. Y is -O-; and R is selected from the group consisting of -(A)-Z'; In the formula, A is a bond, an alkylene group having 2-10 carbon atoms, and -(CH2-CR4G)n- (where n is an integer equal to 1-5; R4 is hydrogen , methyl or ethyl; and G is hydrogen, oxygen, sulfur, nitrogen. phenyl and 1-3 substituents, and this substituent is amine, hydroxy halo, alkyl having 1-4 carbon atoms and having 1-4 carbon atoms selected from the group consisting of alkoxy; selected from the group consisting of phenyl); and Z′ is selected from the group consisting of hydrogen and methyl; or when G is not oxygen, sulfur or nitrogen and A is not a bond, Z ' also represents -OH, -SH, -NH2, -NHR5, -N(R5)2, -C(O )OH, -C(O)OR5, -C(O)NH2, -C(O)NHR5 and -C (O)NH(R5)2, where R5 is 26. The pharmaceutical according to claim 25, wherein each is independently alkyl having 1-4 carbon atoms. Pharmaceutical composition. ２７．Ａが炭素原子２−１０個を有するアルキレンであり、そしてＺ′が−Ｃ（ Ｏ）ＯＨおよび−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５からなる群から選ばれる、請求項２６に記載の 医薬組成物。27. A is alkylene having 2-10 carbon atoms and Z' is -C( 27. selected from the group consisting of O)OH and -C(O)OR5. Pharmaceutical composition. ２８．Ｒ１がそれぞれ独立して、水素あるいはα−Ｌ−フコースおよびα−Ｌ− フコースの誘導体からなる群から選はれる適合性糖である、請求項２５に記載の 医薬組成物。28. R1 each independently represents hydrogen, α-L-fucose and α-L- 26. A compatible sugar selected from the group consisting of derivatives of fucose. Pharmaceutical composition. ２９．Ｒ２がそれぞれ独立して、水素あるいはα−シアリル酸およびα−シアリ ル酸の誘導体からなる群から選はれる適合性糖である、請求項２８に記載の医薬 組成物。29. R2 each independently represents hydrogen, α-sialylic acid and α-sialylic acid; The medicament according to claim 28, wherein the saccharide is a compatible sugar selected from the group consisting of derivatives of acid. Composition. ３０．上記オリゴ糖グリコシドか、図１２に記載の式ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩま たはＶＩＩを有しており、これらの式において、Ｒは水素、メチルおよび−（Ａ ）−Ｚ′（式中、Ａは炭素原子２−１０個を有するアルキレンであり、そしてＺ ′は水素、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ） ＮＨＲ５および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｒ５）２からなる群から選はれ、ここでＲ６は それぞれ独立して、炭素原子１−４個を有するアルキルである）からなる群から 選はれる、請求項２２に記載の医薬組成物。30. The above-mentioned oligosaccharide glycosides or formulas III, IV, V, VI or as shown in FIG. or VII, in which R is hydrogen, methyl and -(A )-Z' (wherein A is alkylene having 2-10 carbon atoms and Z ' is hydrogen, -C(O)OH, -C(O)OR5, -C(O)NH2, -C(O) selected from the group consisting of NHR5 and -C(O)NH(R5)2, where R6 is each independently alkyl having 1-4 carbon atoms) 23. The pharmaceutical composition according to claim 22, wherein the pharmaceutical composition is selected. ３１．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は、−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であ り、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物 。31. The oligosaccharide has the formula III shown in FIG. , A is octylene and Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4. and R4 is methyl or ethyl. . ３２．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＩＶを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。32. The oligosaccharide has the formula IV shown in FIG. 12, in which: A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4, 31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein R4 is methyl or ethyl. ３３．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式Ｖを有しており、この式において、Ａ はオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、そ してＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。33. The oligosaccharide has the formula V shown in FIG. 12, in which A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4, and 31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein R4 is methyl or ethyl. ３４．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩを有しており、この式において、 Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、 そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。34. The oligosaccharide has the formula VI shown in FIG. 12, in which A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4, 31. The pharmaceutical composition according to claim 30, wherein R4 is methyl or ethyl. ３５．上記オリゴ糖が、図１２に記載の式ＶＩＩを有しており、この式において 、Ａはオクチレンであり、Ｚ′は−Ｃ（Ｏ）ＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり 、そしてＲ４は、メチルまたはエチルである、請求項３０に記載の医薬組成物。35. The oligosaccharide has the formula VII shown in FIG. , A is octylene, Z' is -C(O)OH or -C(O)OR4 , and R4 is methyl or ethyl. ３６．抗原にさらすと同時的に、血液型抗原決定基関連オリゴ糖グリコシドの有 効量を哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物の抗原に対する感受性を減少 させる方法。36. Upon exposure to antigen, the presence of blood group antigenic determinant-related oligosaccharide glycosides increases. reducing the susceptibility of a mammal to an antigen by administering to the mammal an effective dose of How to do it. ３７．上記オリゴ糖グリコシドを非口経投与する請求項３６に記載の方法。37. 37. The method of claim 36, wherein the oligosaccharide glycoside is administered parenterally. ３８．上記オリゴ糖グリコシドを肺内に経投与する請求項３６に記載の方法。38. 37. The method of claim 36, wherein the oligosaccharide glycoside is administered intrapulmonally. ３９．上記オリゴ糖グリコシドを肺内に経投与する請求項１−５のいづれか一項 に記載の方法。39. Any one of claims 1 to 5, wherein the oligosaccharide glycoside is administered orally into the lungs. The method described in. ４０．上記オリゴ糖グリコシドが、図２５に記載の式６５ａを有する請求項９に 記載の方法。40. 10. The oligosaccharide glycoside has formula 65a as shown in FIG. 25. Method described.
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