JP6886667B2 - Cancer cell capture method - Google Patents
Cancer cell capture method Download PDFInfo
- Publication number
- JP6886667B2 JP6886667B2 JP2019060211A JP2019060211A JP6886667B2 JP 6886667 B2 JP6886667 B2 JP 6886667B2 JP 2019060211 A JP2019060211 A JP 2019060211A JP 2019060211 A JP2019060211 A JP 2019060211A JP 6886667 B2 JP6886667 B2 JP 6886667B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydrophilic polymer
- blood
- cancer cells
- body fluid
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 53
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 42
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 42
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims description 40
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 38
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 38
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 8
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 74
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 12
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 6
- 238000002558 medical inspection Methods 0.000 description 6
- XLPJNCYCZORXHG-UHFFFAOYSA-N 1-morpholin-4-ylprop-2-en-1-one Chemical compound C=CC(=O)N1CCOCC1 XLPJNCYCZORXHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 4
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 3
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 3
- -1 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 2
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- HFCUBKYHMMPGBY-UHFFFAOYSA-N 2-methoxyethyl prop-2-enoate Chemical compound COCCOC(=O)C=C HFCUBKYHMMPGBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 150000003926 acrylamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004712 cancer cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011247 coating layer Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001925 cycloalkenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000010339 medical test Methods 0.000 description 1
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920003050 poly-cycloolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920001225 polyester resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004645 polyester resin Substances 0.000 description 1
- 229920013716 polyethylene resin Polymers 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Description
本発明は、体液（血液等）中のがん細胞を捕捉するがん細胞捕捉方法に関する。 The present invention relates to a method for capturing cancer cells in body fluid (blood, etc.).
がん細胞が発生するとやがて、血液・体液中に出て来ることが知られており、血液中に出て来たがん細胞は、血中循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）と呼ばれている。そして、この血中循環腫瘍細胞を調べることによるがんの治療効果の確認、予後寿命、投与前の抗がん剤の効果予測、がん細胞の遺伝子解析を用いた治療方法の検討、等が期待されている。 It is known that when cancer cells develop, they eventually appear in blood and body fluids, and the cancer cells that appear in the blood are called blood circulating tumor cells (CTCs). Then, confirmation of the therapeutic effect of cancer by examining these circulating tumor cells in the blood, prognosis lifespan, prediction of the effect of anticancer drugs before administration, examination of therapeutic methods using gene analysis of cancer cells, etc. Expected.
しかしながら、血中循環腫瘍細胞は非常に数が少なく（数個〜数百個／血液１ｍＬ）、がん細胞を捕捉することが難しいという問題がある。 However, the number of circulating tumor cells in the blood is very small (several to several hundreds / 1 mL of blood), and there is a problem that it is difficult to capture cancer cells.
例えば、血中循環腫瘍細胞の捕捉技術として、Ｃｅｌｌ Ｓｅａｒｃｈシステムと呼ばれるものが知られているが、これは、抗原抗体反応（ＥｐＣＡＭ抗体で捕捉）を用いる技術であるため、ＥｐＣＡＭを発現しているがん細胞しか捕捉できず、補足可能ながん細胞の種類に制限がある。 For example, as a technique for capturing blood-circulating tumor cells, a technique called the Cell Search system is known, which expresses EpCAM because it is a technique that uses an antigen-antibody reaction (captured by EpCAM antibody). Only cancer cells can be captured, and there are restrictions on the types of cancer cells that can be captured.
本発明は、前記課題を解決し、ＥｐＣＡＭを発現していないがん細胞も含め、多くのがん細胞を捕捉できるがん細胞捕捉方法を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to solve the above-mentioned problems and to provide a cancer cell capture method capable of capturing a large number of cancer cells including cancer cells that do not express EpCAM.
本発明は、体液中に含まれるがん細胞捕捉方法であって、採取した体液のたんぱく質濃度を減少させた後、親水性ポリマー層にがん細胞を捕捉させるがん細胞捕捉方法に関する。 The present invention relates to a method for capturing cancer cells contained in body fluid, which is a method for capturing cancer cells in a hydrophilic polymer layer after reducing the protein concentration of the collected body fluid.
前記親水性ポリマー層は、下記式（Ｉ）で表されるポリマー及びポリ（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性ポリマーで形成されていることが好ましい。
前記親水性ポリマー層は、下記式（Ｉ−１）で表される化合物及び（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性モノマーと、他のモノマーとの共重合体で形成されていることが好ましい。
前記たんぱく質濃度を減少させる方法は、採取した体液を希釈するものであることが好ましい。ここで、前記希釈は、緩衝溶液又は液体培地を用いて行われることが好ましい。
前記たんぱく質濃度を減少させる方法は、採取した体液に遠心分離を施して上澄みを除去するものであることが好ましい。
The method for reducing the protein concentration is preferably to dilute the collected body fluid. Here, the dilution is preferably carried out using a buffer solution or a liquid medium.
The method for reducing the protein concentration is preferably a method of centrifuging the collected body fluid to remove the supernatant.
前記体液は、血液であることが好ましい。
前記親水性ポリマー層の厚みは、２〜２００ｎｍであることが好ましい。
The body fluid is preferably blood.
The thickness of the hydrophilic polymer layer is preferably 2 to 200 nm.
本発明によれば、体液中に含まれるがん細胞捕捉方法であって、採取した体液のたんぱく質濃度を減少させた後、親水性ポリマー層にがん細胞を捕捉させるがん細胞捕捉方法であるため、ＥｐＣＡＭを発現していないがん細胞も含め、多くのがん細胞を捕捉できる。そのため、例えば、体液中からがん細胞を充分に捕捉でき、また、同時に他のタンパク質や細胞の粘着・接着も抑制できる。従って、がん細胞等を選択的に捕捉することが可能となる。 According to the present invention, it is a method for capturing cancer cells contained in body fluid, which is a method for capturing cancer cells in a hydrophilic polymer layer after reducing the protein concentration of the collected body fluid. Therefore, many cancer cells can be captured, including cancer cells that do not express EpCAM. Therefore, for example, cancer cells can be sufficiently captured from body fluids, and at the same time, adhesion / adhesion of other proteins and cells can be suppressed. Therefore, it becomes possible to selectively capture cancer cells and the like.
本発明は、体液中に含まれるがん細胞捕捉方法であって、採取した体液のたんぱく質濃度を減少させた後、親水性ポリマー層にがん細胞を捕捉させるがん細胞捕捉方法である。 The present invention is a method for capturing cancer cells contained in body fluid, which is a method for capturing cancer cells in a hydrophilic polymer layer after reducing the protein concentration of the collected body fluid.
先ず、採取した体液に、希釈、遠心分離等の処理を施すことで、採取した体液に比べ、たんぱく質濃度が減少した試料を作製した後、作製された試料を親水性ポリマー層に接触させ、試料中のがん細胞を捕捉する方法である。よって、アルブミン等のたんぱく質による細胞接着抑止効果が減じ、親水性ポリマーに対するがん細胞の本来の接着能力が発揮されるので、がん細胞の捕捉性が大きく向上すると共に、血小板等の捕捉性が低下し、たんぱく質が多い状態では到底発揮し得ないがん細胞の選択的な捕捉効果を奏する。 First, the collected body fluid is subjected to treatments such as dilution and centrifugation to prepare a sample having a reduced protein concentration as compared with the collected body fluid, and then the prepared sample is brought into contact with the hydrophilic polymer layer to prepare a sample. It is a method of capturing cancer cells inside. Therefore, the effect of suppressing cell adhesion by proteins such as albumin is reduced, and the original ability of cancer cells to adhere to hydrophilic polymers is exhibited, so that the ability to capture cancer cells is greatly improved and the ability to capture platelets and the like is improved. It has a selective effect of capturing cancer cells, which cannot be exerted when it is low and high in protein.
具体的に説明すると、血中循環腫瘍細胞（数個〜数百個／血液１ｍＬ）等の体液中にでてきた腫瘍細胞（がん細胞等）は、非常に数が少なく、検査に供するには、採取した体液中に存在する腫瘍細胞をできる限り多く捕捉することが重要であり、腫瘍細胞の接着を抑制するたんぱく質の数を減じることが必要と考えられる。本発明は、予め、採取した体液に比べ、たんぱく質濃度が減少した試料を作製した後、該試料を親水性ポリマー層に接触させる方法であるので、体液中の腫瘍細胞が親水性ポリマー層に、より多く吸着・接着される。そして、吸着された腫瘍細胞の数を測定することで、体液中の腫瘍細胞数が判り、がん治療効果の確認等を期待できる。また、捕捉した腫瘍細胞を培養し、その培養した細胞で抗がん剤等の効き目を確認することで、抗がん剤等の投与前に、体の外で、抗がん剤等の効き目を確認できると同時に、抗がん剤等の選定にも役立つ。 Specifically, the number of tumor cells (cancer cells, etc.) that have appeared in body fluids such as circulating tumor cells in the blood (several to several hundreds / 1 mL of blood) is extremely small and can be used for examination. It is important to capture as many tumor cells as possible in the collected body fluid, and it is necessary to reduce the number of proteins that suppress the adhesion of tumor cells. The present invention is a method in which a sample having a reduced protein concentration as compared with the collected body fluid is prepared in advance, and then the sample is brought into contact with the hydrophilic polymer layer. Therefore, tumor cells in the body fluid are formed on the hydrophilic polymer layer. More is adsorbed and adhered. Then, by measuring the number of adsorbed tumor cells, the number of tumor cells in the body fluid can be known, and confirmation of the cancer therapeutic effect can be expected. In addition, by culturing the captured tumor cells and confirming the efficacy of the anti-cancer drug, etc. in the cultured cells, the efficacy of the anti-cancer drug, etc. outside the body before administration of the anti-cancer drug, etc. At the same time, it is useful for selecting anticancer drugs.
以下、本発明の好ましい実施形態の一例を、図を用いて説明する。
本発明のがん細胞捕捉方法は、例えば、図１の医療用検査装置１（マルチウェルプレート１）を用いて実施できる。
Hereinafter, an example of a preferred embodiment of the present invention will be described with reference to the drawings.
The cancer cell capture method of the present invention can be carried out using, for example, the medical examination device 1 (multi-well plate 1) of FIG.
図１の医療用検査装置１（マルチウェルプレート１）は、がん細胞を捕捉する目的で使用される装置で、いわゆるマトリクス状にウェル１１が配置されたマルチウェルプレート１である。マルチウェルプレート１は、円形に開口された複数のウェル１１を有している。ウェル１１は、血液等の体液中のたんぱく質濃度を減少させた試料を注入する凹部であり、注入した試料を検査に供することにより、採取した体液をそのまま検査に供するより、がん細胞を効率的に捕捉することが可能となる。従って、体液中のがん細胞の有無の確認、がん細胞数の計測、がん細胞の培養、薬の効き目の確認・選定を実施できる。
The medical examination device 1 (multi-well plate 1) of FIG. 1 is a device used for the purpose of capturing cancer cells, and is a multi-well plate 1 in which
体液中のたんぱく質濃度を減少させる方法は、公知の手法を使用でき、例えば、採取した体液を希釈する方法が挙げられる。ここで、希釈方法としては、ヒト血液のｐＨ（約７．４）リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）等の緩衝溶液や、ＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）等の液体培地、を用いる方法があり、具体的には、採取した体液に緩衝溶液を加えて希釈することや、液体培地に採取した体液を加えて希釈することで、採取した体液に比べて、たんぱく質濃度を減少させた試料を作製できる。 As a method for reducing the protein concentration in the body fluid, a known method can be used, and examples thereof include a method of diluting the collected body fluid. Here, as a dilution method, there is a method of using a buffer solution such as pH (about 7.4) phosphate buffered physiological saline (PBS) of human blood or a liquid medium such as DMEM (Dalveco modified eagle medium). Specifically, by adding a buffer solution to the collected body fluid to dilute it, or by adding the collected body fluid to a liquid medium and diluting it, a sample having a reduced protein concentration as compared with the collected body fluid is prepared. it can.
体液中のたんぱく質濃度を減少させる方法としては、採取した体液に遠心分離を施して上澄みを除去する方法も挙げられる。具体的には、採取した体液を遠心分離し、作製されたたんぱく質を含む上澄みを取り除くことにより、採取した体液に比べて、たんぱく質濃度を減少させた試料を作製できる。 As a method of reducing the protein concentration in the body fluid, there is also a method of centrifuging the collected body fluid to remove the supernatant. Specifically, by centrifuging the collected body fluid and removing the supernatant containing the produced protein, a sample having a reduced protein concentration as compared with the collected body fluid can be produced.
図１では、一例として、４行６列の２４個のウェル１１を有する２４ウェルプレートを示しているが、マルチウェルプレート１は、ウェル１１を少なくとも２つ以上有していれば良く、ウェル１１の個数は任意である。２４ウェルプレートの他には、ウェル１１が、６個、９６個、３８４個等の汎用マルチウェルプレートでも良い。
FIG. 1 shows, as an example, a 24-well plate having 24
マルチウェルプレート１の構成材料としては、ポリアクリル酸メチル、ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸等のアクリル樹脂（ポリアクリル樹脂）、シクロオレフィン樹脂（ポリシクロオレフィン）、カーボネート樹脂（ポリカーボネート）、スチレン樹脂（ポリスチレン）、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）等のポリエステル樹脂、ポリジメチルシロキサン等が挙げられる。 The constituent materials of the multi-well plate 1 include acrylic resins (polyacrylic resins) such as methyl polyacrylate, polymethyl methacrylate, polyacrylic acid, and polymethacrylic acid, cycloolefin resins (polycycloolefins), and carbonate resins (polycarbonates). ), Polyethylene resin (polystyrene), polyester resin such as polyethylene terephthalate (PET), polydimethylsiloxane, and the like.
ウェル１１は非貫通孔であり、マルチウェルプレート１の表面に開口されている。ウェル１１には、開口から、体液中のたんぱく質濃度を減少させた試料が注入される。また、がん細胞の存在を確認した場合、がん細胞を培養するための培養液を注入することも可能である。 The well 11 is a non-through hole and is opened on the surface of the multi-well plate 1. A sample having a reduced protein concentration in the body fluid is injected into the well 11 through the opening. When the presence of cancer cells is confirmed, it is also possible to inject a culture solution for culturing cancer cells.
ウェル１１の開口の直径Ｒ、深さＤは、特に限定されず、通常のマルチウェルプレート１のＲ、Ｄを採用できる。図１では、マルチウェルプレート１の表面及び裏面に対して、ウェル１１の内側面が略垂直であるが、ウェル１１は、内側面が傾斜し、開口から底面にかけて窄まる形状でも良い。また、内側面が傾斜し、開口から底面にかけて拡がる形状でも良い。 The diameter R and depth D of the opening of the well 11 are not particularly limited, and the R and D of the ordinary multi-well plate 1 can be adopted. In FIG. 1, the inner surface of the well 11 is substantially perpendicular to the front surface and the back surface of the multi-well plate 1, but the well 11 may have a shape in which the inner surface is inclined and narrows from the opening to the bottom surface. Further, the shape may be such that the inner side surface is inclined and extends from the opening to the bottom surface.
図１では、ウェル１１は円形に開口しているが、ウェル１１の開口形状は任意であり、四角形等、任意の形状に開口したものでもよい。 In FIG. 1, the well 11 is opened in a circular shape, but the opening shape of the well 11 is arbitrary, and may be an arbitrary shape such as a quadrangle.
マルチウェルプレート１は、複数のウェル１１が分離可能なものを好適に使用できる。複数のウェルを有する場合、がん細胞数計測用ウェルと、がん細胞培養用ウェルとに分離使用でき、例えば、計測用ウェルでがん細胞の存在の有無を確認した上で、存在が確認された場合に培養用ウェルでがん細胞を培養し、その細胞で薬の効き目を確認できる。
As the multi-well plate 1, a plate in which a plurality of
マルチウェルプレート１（医療用検査装置１）において、ウェル１１の内側面は、少なくとも一部に親水性ポリマー層が形成されていることが好ましい。図１は、ウェルの底面及び側面の一部に親水性ポリマー層２１が形成されている例を示している。
In the multi-well plate 1 (medical inspection device 1), it is preferable that a hydrophilic polymer layer is formed at least partially on the inner surface of the well 11. FIG. 1 shows an example in which a
ウェル１１内に、体液中のたんぱく質濃度を減少させた試料を導入すると、これらに含まれるがん細胞が親水性ポリマー層２１に吸着されると共に、血小板、赤血球等の吸着が抑制される。そのため、試料の導入後に所定時間保持し、次いで、洗浄することで、がん細胞を親水性ポリマー層２１に吸着できる。そして、吸着されたがん細胞の数を測定することで、体液中のがん細胞数が判り、がん治療効果の確認等が期待される。
When a sample having a reduced protein concentration in the body fluid is introduced into the well 11, the cancer cells contained therein are adsorbed on the
親水性ポリマー層２１（親水性ポリマーにより形成される層）の膜厚（厚み）は、好ましくは２〜２００ｎｍ、より好ましくは２０〜１８０ｎｍである。上記範囲内に調整することで、良好なタンパク質や細胞に対する低吸着性、がん細胞に対する選択的吸着性・接着性が得られる。 The film thickness (thickness) of the hydrophilic polymer layer 21 (layer formed by the hydrophilic polymer) is preferably 2 to 200 nm, more preferably 20 to 180 nm. By adjusting within the above range, good protein and low adsorption to cells, and selective adsorption and adhesion to cancer cells can be obtained.
親水性ポリマーは、親水性を有するものを適宜選択できる。例えば、１種又は２種以上の親水性モノマーの単独重合体及び共重合体、１種又は２種以上の親水性モノマーと他のモノマーとの共重合体等が挙げられる。前記単独重合体、共重合体としては、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸エステル、ポリメタクリル酸、ポリメタクリル酸エステル、ポリアクリロイルモルホリン、ポリメタクリロイルモルホリン、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド等が挙げられる。 As the hydrophilic polymer, a hydrophilic polymer can be appropriately selected. For example, homopolymers and copolymers of one or more kinds of hydrophilic monomers and copolymers of one or more kinds of hydrophilic monomers and other monomers can be mentioned. Examples of the homopolymer and copolymer include polyacrylic acid, polyacrylic acid ester, polymethacrylic acid, polymethacrylic acid ester, polyacryloylmorpholine, polymethacryloylmorpholine, polyacrylamide, and polymethacrylamide.
親水性モノマーは、親水性基を有する各種モノマーを使用できる。親水性基は、例えば、アミド基、硫酸基、スルホン酸基、カルボン酸基、水酸基、アミノ基、アミド基、オキシエチレン基等、公知の親水性基が挙げられる。 As the hydrophilic monomer, various monomers having a hydrophilic group can be used. Examples of the hydrophilic group include known hydrophilic groups such as an amide group, a sulfate group, a sulfonic acid group, a carboxylic acid group, a hydroxyl group, an amino group, an amide group and an oxyethylene group.
親水性モノマーの具体例としては、（メタ）アクリル酸、（メタ）アクリル酸エステル、（メトキシエチル（メタ）アクリレート等のアルコキシアルキル（メタ）アクリレート、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート等のヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート）、（メタ）アクリルアミド、環状基を有する（メタ）アクリルアミド誘導体（（メタ）アクリロイルモルホリン等）、などが挙げられる。 Specific examples of the hydrophilic monomer include (meth) acrylic acid, (meth) acrylic acid ester, alkoxyalkyl (meth) acrylate such as (methoxyethyl (meth) acrylate), and hydroxyalkyl (meth) such as hydroxyethyl (meth) acrylate. ) Acrylate), (meth) acrylamide, (meth) acrylamide derivative having a cyclic group ((meth) acryloylmorpholin, etc.), and the like.
他のモノマーは、親水性ポリマーの作用効果を阻害しない範囲内で適宜選択すれば良い。例えば、スチレン等の芳香族モノマー、酢酸ビニル、温度応答性を付与できるＮ−イソプロピルアクリルアミドなどが挙げられる。 Other monomers may be appropriately selected within a range that does not interfere with the action and effect of the hydrophilic polymer. For example, aromatic monomers such as styrene, vinyl acetate, N-isopropylacrylamide that can impart temperature responsiveness, and the like can be mentioned.
なかでも、親水性ポリマーとしては、下記式（Ｉ）で表されるポリマー及びポリ（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種が好ましい。
Ｒ２のアルキル基の炭素数は、１〜１０が好ましく、１〜５がより好ましい。なかでも、Ｒ２は、メチル基又はエチル基が特に好ましい。ｍは、１〜３が好ましい。ｎ（繰り返し単位数）は、１５〜１０００が好ましく、３０〜５００がより好ましい。 The carbon number of the alkyl group of R 2 is 1 to 10 preferably 1 to 5 is more preferable. Of these, R 2 is particularly preferably a methyl group or an ethyl group. m is preferably 1 to 3. n (number of repeating units) is preferably 15 to 1000, more preferably 30 to 500.
また、親水性ポリマーとして、下記式（Ｉ−１）で表される化合物及び（メタ）アクリロイルモルホリンからなる群より選択される少なくとも１種の親水性モノマーと、他のモノマーとの共重合体も好適に使用できる。
親水性ポリマーの重量平均分子量（Ｍｗ）は、がん細胞に対する選択的吸着性・接着性の観点から、好ましくは４０００〜１５００００、より好ましくは５０００〜１０００００、更に好ましくは８０００〜５００００である。なお、本明細書において、Ｍｗは、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）（東ソー（株）製ＧＰＣ−８０００シリーズ、検出器：示差屈折計、カラム：東ソー（株）製のＴＳＫＧＥＬ ＳＵＰＥＲＭＡＬＴＰＯＲＥ ＨＺ−Ｍ）による測定値を基に標準ポリスチレン換算により求めることができる。 The weight average molecular weight (Mw) of the hydrophilic polymer is preferably 4000 to 150,000, more preferably 5,000 to 100,000, and further preferably 8,000 to 50,000, from the viewpoint of selective adsorptivity and adhesiveness to cancer cells. In the present specification, Mw is gel permeation chromatography (GPC) (GPC-8000 series manufactured by Toso Co., Ltd., detector: differential refractometer, column: TSKGEL SUPERMALTPORE HZ-M manufactured by Toso Co., Ltd.). It can be obtained by standard polystyrene conversion based on the measured value according to.
医療用検査装置は、例えば、図１のウェル１１を備えたマルチウェルプレート１、更に必要に応じて他の部材（部品）を付加することにより、製造できる。 The medical inspection device can be manufactured, for example, by adding a multi-well plate 1 provided with the well 11 of FIG. 1 and, if necessary, another member (part).
具体的には、親水性ポリマー層２１が形成されたマルチウェルプレート１の場合、（１）親水性ポリマーを各種溶剤に溶解・分散した親水性ポリマー溶液・分散液を、ウェル１１の内部に注入し、所定時間保持する方法、（２）該親水性ポリマー溶液・分散液をウェル１１の内面に塗工（噴霧）する方法、等、公知の手法により、ウェル１１の内面の全部又は一部に親水性ポリマー溶液・分散液をコーティングすることで、親水性ポリマーにより形成されるポリマー層が形成されたマルチウェルプレート１を製造できる。そして、得られたマルチウェルプレート１に、必要に応じて他の部品を追加することで、医療用検査装置を製造できる。
Specifically, in the case of the multi-well plate 1 on which the
溶剤、注入方法、塗工（噴霧）方法などは、従来公知の材料及び方法を適用できる。
（１）、（２）の保持時間は、ウェル１１の大きさ、導入する液種、等により適宜設定すれば良いが、５分〜１０時間が好ましく、１０分〜５時間がより好ましく、１５分〜２時間が更に好ましい。保持後、適宜、余分な親水性ポリマー溶液・分散液を排出し、乾燥してもよい。
Conventionally known materials and methods can be applied to the solvent, injection method, coating (spraying) method, and the like.
The holding time of (1) and (2) may be appropriately set depending on the size of the well 11, the type of liquid to be introduced, etc., but is preferably 5 minutes to 10 hours, more preferably 10 minutes to 5 hours, and 15 minutes. Minutes to 2 hours are more preferred. After holding, the excess hydrophilic polymer solution / dispersion may be discharged and dried as appropriate.
以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be specifically described based on Examples, but the present invention is not limited to these.
〔医療用検査装置（マルチウェルプレート）の製造〕
ＡＩＢＮ（アゾビスイソブチロニトリル）を用いて、２−メトキシエチルアクリレートを８０℃で６時間熱重合し、ポリ２−メトキシエチルアクリレートを作製した（分子量Ｍｎ：約１５０００、Ｍｗ：約５００００）。そして、得られたポリ２−メトキシエチルアクリレートの２．５Ｗ／Ｖ％メタノール溶液を作製した。
市販ＰＭＭＡ製プレート内に、作製したポリ２−メトキシエチルアクリレート溶液（２．５Ｗ／Ｖ％）を注入し、３０分室温放置した後、液をピペットで吸出し、乾燥することで、図１の親水性ポリマー層が形成されたマルチウェルプレートを有する検査装置を作製した。
[Manufacturing of medical inspection equipment (multi-well plate)]
Using AIBN (azobisisobutyronitrile), 2-methoxyethyl acrylate was thermally polymerized at 80 ° C. for 6 hours to prepare poly2-methoxyethyl acrylate (molecular weight Mn: about 15,000, Mw: about 50,000). Then, a 2.5 W / V% methanol solution of the obtained poly2-methoxyethyl acrylate was prepared.
The prepared poly2-methoxyethyl acrylate solution (2.5 W / V%) is injected into a commercially available PMMA plate, left at room temperature for 30 minutes, and then the solution is sucked out with a pipette and dried to obtain the hydrophilicity shown in FIG. An inspection device having a multi-well plate on which a sex polymer layer was formed was prepared.
（実施例１）
ＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水）に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を懸濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、ＰＢＳ溶液内の細胞濃度がある値Ａ１になるように更にＰＢＳ溶液を加えて、細胞濃度を調整した。次に、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。この場合、血液と等量のＰＢＳ溶液を加えたことになった。
(Example 1)
After suspending fibrosarcoma (HT-1080) in PBS solution (phosphate buffered saline) and counting the number of cells with a blood cell counter, the cell concentration in the PBS solution is further increased to a certain value A1. PBS solution was added to adjust cell concentration. Next, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2. In this case, the same amount of PBS solution as blood was added.
（実施例２）
ＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水）に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を懸濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、ＰＢＳ溶液内の細胞濃度がある値Ａ２になるように更にＰＢＳ溶液を加えて、細胞濃度を調整した。次に、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。この場合、血液と血液の２倍量のＰＢＳ溶液を加えたことになった。
(Example 2)
After suspending fibrosarcoma (HT-1080) in PBS solution (phosphate buffered saline) and counting the number of cells with a blood cell counter, the cell concentration in the PBS solution is further increased to a certain value A2. PBS solution was added to adjust cell concentration. Next, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2. In this case, blood and twice the amount of PBS solution of blood were added.
（実施例３）
ＤＭＥＭ（液体培地）に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を懸濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、ＤＭＥＭ内の細胞濃度がある値Ａ１になるように更にＤＭＥＭを加えて、細胞濃度を調整した。次に、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。この場合、血液と等量のＤＭＥＭを加えたことになった。
(Example 3)
Fibrosarcoma (HT-1080) is suspended in DMEM (liquid medium), the number of cells is counted with a blood cell measuring tube, and then DMEM is further added so that the cell concentration in DMEM becomes a certain value A1, and the cells are added. The concentration was adjusted. Next, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2. In this case, DMEM equivalent to blood was added.
（実施例４）
ＤＭＥＭ（液体培地）に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を懸濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、ＤＭＥＭ内の細胞濃度がある値Ａ２になるように更にＤＭＥＭを加えて、細胞濃度を調整した。次に、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。この場合、血液と血液の２倍量のＤＭＥＭを加えたことになった。
(Example 4)
Fibrosarcoma (HT-1080) is suspended in DMEM (liquid medium), the number of cells is counted with a blood cell measuring tube, and then DMEM is further added so that the cell concentration in DMEM becomes a certain value A2, and the cells are added. The concentration was adjusted. Next, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2. In this case, blood and twice the amount of DMEM of blood were added.
（実施例５）
線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を剥離液を用いて懸濁させ、一部をＰＢＳ溶液に混濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、この値を用いて、血液に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）の入った剥離液を混濁させた。このとき、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。次に、混濁させた血液に遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）を行い、上澄みを捨てて、残った血液を取り出した。
(Example 5)
Fibrosarcoma (HT-1080) is suspended with a stripping solution, part of it is turbid in PBS solution, the number of cells is counted with a hemocytometer, and then this value is used to add fibrosarcoma (HT) to the blood. The stripping solution containing −1080) was turbid. At this time, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2. Next, the turbid blood was centrifuged (3000 rpm, 10 minutes), the supernatant was discarded, and the remaining blood was taken out.
（実施例６）
線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を剥離液を用いて懸濁させ、一部をＰＢＳ溶液に混濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、この値を用いて、血液に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）の入った剥離液を混濁させた。このとき、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。次に、混濁させた血液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、５分）を行い、上澄みを捨てて、残った血液を取り出した。
(Example 6)
Fibrosarcoma (HT-1080) is suspended with a stripping solution, part of it is turbid in PBS solution, the number of cells is counted with a hemocytometer, and then this value is used to add fibrosarcoma (HT) to the blood. The stripping solution containing −1080) was turbid. At this time, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2. Next, the turbid blood was centrifuged (3000 rpm, 5 minutes), the supernatant was discarded, and the remaining blood was taken out.
（実施例７）
線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を剥離液を用いて懸濁させ、一部をＰＢＳ溶液に混濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、この値を用いて、血液に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）の入った剥離液を混濁させた。このとき、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。次に、混濁させた血液を遠心分離（１５００ｒｐｍ、１０分）を行い、上澄みを捨てて、残った血液を取り出した。
(Example 7)
Fibrosarcoma (HT-1080) is suspended with a stripping solution, part of it is turbid in PBS solution, the number of cells is counted with a hemocytometer, and then this value is used to add fibrosarcoma (HT) to the blood. The stripping solution containing −1080) was turbid. At this time, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2. Next, the turbid blood was centrifuged (1500 rpm, 10 minutes), the supernatant was discarded, and the remaining blood was taken out.
（比較例１）
線維肉腫（ＨＴ−１０８０）を剥離液を用いて懸濁させ、一部をＰＢＳ溶液に混濁させて、細胞数を血球計測管でカウントした後、この値を用いて、血液に線維肉腫（ＨＴ−１０８０）の入った剥離液を混濁させた。このとき、播種密度（濃度）が２８５０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２に計算上なるように血液を混濁させた。
(Comparative Example 1)
Fibrosarcoma (HT-1080) is suspended with a stripping solution, part of it is turbid in PBS solution, the number of cells is counted with a hemocytometer, and then this value is used to add fibrosarcoma (HT) to the blood. The stripping solution containing −1080) was turbid. At this time, the blood was turbid so that the seeding density (concentration) was calculated to be 2850 cells / cm 2.
実施例、比較例で作製した検査試料（採取した血液に比べ、たんぱく質濃度を減少させた試料）を図１の医療用検査装置に供し、以下の方法で評価した。 The test samples prepared in Examples and Comparative Examples (samples having a reduced protein concentration as compared with the collected blood) were subjected to the medical test apparatus shown in FIG. 1 and evaluated by the following method.
〔親水性ポリマー層（コーティング層）の膜厚〕
ウェル内面の親水性ポリマー層の膜厚は、ＴＥＭを使用し、加速電圧１５ｋＶ、１０００倍で測定（撮影）した。
[Film thickness of hydrophilic polymer layer (coating layer)]
The film thickness of the hydrophilic polymer layer on the inner surface of the well was measured (photographed) using a TEM at an acceleration voltage of 15 kV and 1000 times.
〔がん細胞数の計測〕
各検査試料（がん細胞含有血液）をウェルに１ｍｌずつ注入し、３７℃で１時間接着させた。その後、ＰＢＳ溶液で未接着の細胞を洗浄した。次いで、免疫染色を行い、蛍光顕微鏡で接着したがん細胞数をカウントトした。なお、比較例１の接着数を１．０として、相対値で比較した。
[Measurement of cancer cell number]
Each test sample (cancer cell-containing blood) was injected into a well in an amount of 1 ml and adhered at 37 ° C. for 1 hour. The unadhered cells were then washed with PBS solution. Then, immunostaining was performed and the number of cancer cells adhered with a fluorescence microscope was counted. In addition, the number of adhesions of Comparative Example 1 was set to 1.0, and the comparison was made by relative values.
採取した血液をそのまま検査に供した比較例１に比べ、ＰＢＳ溶液や液体培地を用いて血液を希釈したり、血液に遠心分離処理を施して上澄みを除去することで、たんぱく質濃度を減少させた試料を供した実施例の方が、がん細胞接着量が大幅に増加することが明らかとなった。 Compared with Comparative Example 1 in which the collected blood was used as it was for the test, the protein concentration was reduced by diluting the blood with a PBS solution or a liquid medium or centrifuging the blood to remove the supernatant. It was clarified that the amount of cancer cell adhesion was significantly increased in the examples to which the sample was provided.
１ 医療用検査装置（マルチウェルプレート）
１１ ウェル
２１ 親水性ポリマー層
1 Medical inspection device (multi-well plate)
11
Claims (3)
採取した体液のアルブミン濃度を減少させた後、親水性ポリマー層にがん細胞を捕捉させ、
前記親水性ポリマー層は、非貫通孔のウェルの内側面の少なくとも一部に形成されており、
アルブミン濃度を減少させる方法が、採取した体液に遠心分離を施して上澄みを除去するものであり、
前記親水性ポリマー層は、
下記式（Ｉ）で表されるポリマー、及び、
下記式（Ｉ−１）で表される化合物と他のモノマーとの共重合体
からなる群より選択される少なくとも１種の親水性ポリマーで形成されているがん細胞捕捉方法。
After reducing the albumin concentration in the collected body fluid, the hydrophilic polymer layer was used to capture the cancer cells.
The hydrophilic polymer layer is formed on at least a part of the inner surface of the well of the non-through hole .
The method of reducing the albumin concentration is to centrifuge the collected body fluid to remove the supernatant.
The hydrophilic polymer layer is
The polymer represented by the following formula (I) and
Copolymer of a compound represented by the following formula (I-1) and another monomer
A method for capturing cancer cells formed of at least one hydrophilic polymer selected from the group consisting of.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019060211A JP6886667B2 (en) | 2019-03-27 | 2019-03-27 | Cancer cell capture method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019060211A JP6886667B2 (en) | 2019-03-27 | 2019-03-27 | Cancer cell capture method |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016191618A Division JP6518985B2 (en) | 2016-09-29 | 2016-09-29 | Cancer cell capture method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2019129836A JP2019129836A (en) | 2019-08-08 |
| JP6886667B2 true JP6886667B2 (en) | 2021-06-16 |
Family
ID=67546896
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019060211A Active JP6886667B2 (en) | 2019-03-27 | 2019-03-27 | Cancer cell capture method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6886667B2 (en) |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4518767B2 (en) * | 2003-09-09 | 2010-08-04 | チッソ株式会社 | Stimulus-responsive polymer-immobilized magnetic fine particles and adsorbent using the same |
| WO2005043121A2 (en) * | 2003-10-31 | 2005-05-12 | Vitatex, Inc. | Blood test prototypes and methods for the detection of circulating tumor and endothelial cells |
| NZ617520A (en) * | 2008-02-25 | 2015-05-29 | Nestec Sa | Drug selection for breast cancer therapy using antibody-based arrays |
| JP6474540B2 (en) * | 2010-11-17 | 2019-02-27 | 国立大学法人山形大学 | Cell separation method for separating cells from solution, hydrating composition for cell adsorption, and cell separation system |
| JPWO2012108087A1 (en) * | 2011-02-10 | 2014-07-03 | エドワーズ株式会社 | Vacuum pump |
| US9372136B2 (en) * | 2011-06-13 | 2016-06-21 | Hitachi Chemical Company, Ltd. | Agent for improving cancer cell adhesiveness |
| JP2014105159A (en) * | 2012-11-22 | 2014-06-09 | Nippon Koden Corp | Monoclonal antibody to human-derived epithelial cell adhesion molecule and method for detecting circulating tumor cells using the same |
| EP2857495B1 (en) * | 2013-07-24 | 2017-09-20 | Optnics Precision Co., Ltd. | Device for isolating peripheral circulating tumor cells or rare cells, and method for isolating peripheral circulating tumor cells or rare cells |
| JP2015224332A (en) * | 2014-05-30 | 2015-12-14 | 株式会社日立製作所 | Stimulation response type material and cell culture vessel using the same |
| JP2016131561A (en) * | 2015-01-22 | 2016-07-25 | 国立大学法人山形大学 | Method of recovering cells, and polymer used for the same |
| JP6762082B2 (en) * | 2015-03-13 | 2020-09-30 | 静岡県公立大学法人 | Method of detecting a detection target using stimulus-responsive magnetic nanoparticles |
-
2019
- 2019-03-27 JP JP2019060211A patent/JP6886667B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2019129836A (en) | 2019-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6518985B2 (en) | Cancer cell capture method | |
| JP6485783B2 (en) | Medical inspection apparatus and cell inspection method | |
| EP3301443B1 (en) | Medical analysis device and cell analysis method | |
| JP6468520B2 (en) | Medical inspection apparatus and cell inspection method | |
| JP6779483B2 (en) | Medical testing equipment and cell testing method | |
| JP7158671B2 (en) | Specific cell capture method | |
| US10786812B2 (en) | Medical analysis device and cell analysis method | |
| EP3527986B1 (en) | Method for capturing specific cells | |
| JP6895662B2 (en) | Fractionation method and capture method of specific cells | |
| JP6886667B2 (en) | Cancer cell capture method | |
| JP7109719B2 (en) | Specific cell capture method | |
| EP3686598B1 (en) | Specific cell fractionating and capturing methods | |
| JP2020115787A (en) | Cell culture apparatus and cell culture method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190410 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200303 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200501 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20201104 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210203 |
|
| C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20210203 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20210210 |
|
| C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20210216 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210413 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210506 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6886667 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |