JP6849615B2 - チアジドアミド誘導体とその利用 - Google Patents

Description

本発明は、医学の技術分野に属する。本発明は特に、チアジドアミド誘導体化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物と、その化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物を含む医薬組成物と、その化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物を調製する方法と、その化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物の利用に関する。例えば本発明のその化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物を用いることで、神経変性疾患、または身体外傷や関連疾患によって起こる神経障害疾患を予防および／または治療することができる。

神経変性疾患は、神経系の進行性病変によって起こる一群の疾患を意味し、その中には、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）などが含まれる。これら一群の疾患が進行する原因は複雑であることに加え、発症メカニズムがまだ明確になっていないため、効果的な治療剤はまだ存在していない。

免疫抑制剤ＦＫ５０６（タクロリムス）に結合する能力があることから名づけられたＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）は、ＦＫ５０６が免疫抑制作用を及ぼす際の重要なメディエータだが、その生理的機能はまだ完全に突き止められたわけではない。Ｓｔｅｉｎｅｒ Ｊ． Ｐ．らは、１９９２年に、脳と末梢におけるＦＫＢＰの濃度が免疫組織におけるよりもはるかに大きいことを見いだし、そこから、ＦＫＢＰと神経系の間にはある関係が存在している可能性があると推測した。Ｄａｗｓｏｎらが得た結果は、ＦＫ５０６が、グルタミン酸によるＮＭＤＡ受容体（Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体）の活性化によって生じる神経興奮毒性を阻止できることを示している。それは、ＦＫＢＰによってカルシニューリンが抑制された後に一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）のリン酸化レベルが上昇してＮＯＳの触媒活性が抑制され、そのことによってＮＯによるニューロンの損傷が回避されるからであろうと考えられている。それに加え、さまざまな研究により、ニューロンの成長に密接に関係する１つのタンパク質、ＧＡＰ４３（成長関連タンパク質４３）もカルシニューリンの基質であること、損傷された顔面神経と座骨神経の神経再生には常にＧＡＰ４３のｍＲＮＡレベルの顕著な上昇が伴っていること、その一方でＦＫＢＰのｍＲＮＡレベルも対応して上昇することが見いだされている。これらの知見は、ＦＫＢＰが神経の成長と関連している可能性があることを示している。上記の結果に触発され、神経成長を促進することのできる有機小分子化合物がＦＫＢＰリガンドから最終的に見いだされているため、ＦＫＢＰはニューロイムノフィリンとしても知られる。

このように想像力をかき立てる考え方に基づき、１９９４年、Ｌｙｏｎｓらは、さまざまな研究により、免疫抑制剤ＦＫ５０６がインビトロで神経成長を促進する顕著な活性を持つことを見いだし、小分子神経成長プロモータに関する研究するための先例となった。神経成長の促進とＦＫＢＰファミリーリガンドの保護の基礎となるメカニズムはまだ完全に同定されているわけではないが、ＦＫＢＰがこのプロセスに関与していることを示す研究がますます増えている。インビトロアッセイ（例えば、ニワトリ胚後根神経節成長アッセイ、ＰＣ１２細胞分化アッセイ、神経細胞系の酸化損傷に関するアッセイ）と多数の動物モデル（例えば、ラット末梢座骨神経切断モデル、末梢神経変性疾患の糖尿病マウスモデル、パーキンソン病の動物モデル、初老期認知症動物モデル）を利用した評価の結果は、ＦＫＢＰの構造に基づいて設計されて合成されたいくつかの化合物が、神経成長を促進し保護する顕著な機能を有することを示している。そうした化合物の中の典型的な１つが、Ｇｕｉｌｆｏｒｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．社からのＧＰＩ１４８５である。この会社はＧＰＩ１４８５をパーキンソン病と卒中のための予防薬および治療薬として使用していて、その第ＩＩ相臨床試験が終了し、第ＩＩＩ相臨床試験が進行中である。その一方で、多数の非常に活性な化合物が常に出現しているため、ＦＫＢＰは、神経変性疾患を予防、治療する薬のための重要な標的となっている。

中国発明特許第ＺＬ０１１４２７４４．２号（置換された６員Ｎ−複素環化合物と、神経調節物質としてのその利用）には、神経再生を促進できる新規な構造を持つ一群のＦＫＢＰが開示されていて、その中の化合物４が最適な化合物である。しかしさまざまな研究により、化合物４は、血液脳関門に侵入する能力が低く、融点が低くて室温で油の状態であるため、神経変性疾患を予防／治療する薬の製造に用いるのに適していないことが見いだされている。中国発明特許第ＣＮ１０２６７５２４４号には、それを最適化した化合物が開示されているが、それら化合物は、神経線維の成長促進活性と生体内での効率をさらに改善することが可能である。

本出願の明細書と請求項では、化合物は、その化学構造式に基づいて命名する。本明細書で用いるある化合物の名称が化学構造式と合致していない場合には、化学構造式が優先する。

本発明では、特に断わらない限り、本明細書で用いる科学技術用語は、当業者が一般に理解する意味を持つ。さらに、本明細書で用いる実験室の操作は、対応する分野で広く用いられている定型的な操作である。それに加え、本発明をよりよく理解するため、関連する用語の定義と説明を以下に提示する。

本明細書では、「チアジン」という用語は、環に４個の炭素原子と１個の窒素原子と１個のイオウ原子を含む６員環構造を意味し、その非限定的な例には、１，３−チアジン、１，４−チアジン、ジヒドロ−１，３−チアジン、ジヒドロ−１，４−チアジン、テトラヒドロ−１，３−チアジン、テトラヒドロ−１，４−チアジンなどが含まれる。「チアジドアミド」という用語は、アミド基で置換されたチアジン構造を意味する。

本発明では、「Ｃ_1-4アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を含む直線状のアルキルまたは分岐したアルキルを意味し、その非限定的な例には、Ｃ_1-2アルキル、Ｃ_1-3アルキル、Ｃ_2-4アルキル、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルなどが含まれる。

本発明では、「Ｃ_1-4アルコキシ」という用語は、Ｃ_1-4アルキルが酸素原子を介して別の構造に連結した基を意味し、その非限定的な例には、Ｃ_1-2アルコキシ、Ｃ_1-3アルコキシ、Ｃ_2-4アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、イソブトキシなどが含まれる。

本発明では、「医薬として許容可能な塩」という用語の非限定的な例に、無機塩（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩）と、有機塩（例えば酢酸塩、プロピオン酸塩、ブチル酸塩、シュウ酸塩、酢酸トリメチル、シュウ酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、ピクリン酸塩、グルコン酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、コハク酸塩、パモ酸塩）が含まれる。

本発明による化合物の「溶媒和物」は、その化合物に溶媒分子が会合して形成される物質を意味する。溶媒として、有機溶媒（例えばメタノール、エタノール、プロパノール、アセトニトリルなど）、水などが可能である。例えば本発明による式（Ｉ）の化合物は、エタノールとアルコラートを形成すること、または水と水和物を形成することができる。

本発明では、「神経変性疾患」という用語は、神経系の進行性病変によって起こる疾患を意味し、その非限定的な例には、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、脳脊髄多発性硬化症が含まれる。

本発明では、「身体外傷」という用語の非限定的な例には、熱損傷、寒冷損傷、物理的損傷、電気的損傷が含まれる。

本発明では、「関連疾患によって起こるニューロパチー」という用語の非限定的な例には、後天性免疫不全症によって起こるニューロパチー、糖尿病によって起こるニューロパチー、脳卒中によって起こるニューロパチーが含まれる。

本発明では、「有効な量」という用語は、望む効果を少なくとも部分的に達成するのに十分な量を意味する。例えばある疾患（例えば神経変性疾患、身体外傷によって起こるニューロパチー、関連疾患によって起こるニューロパチー）を予防するのに有効な量は、その疾患（例えば神経変性疾患、身体外傷によって起こるニューロパチー、関連疾患によって起こるニューロパチー）の進行を予防する、または抑制する、または遅延させるのに十分な量を意味する。治療に有効な量は、ある疾患と、その疾患を抱えている患者の合併症を、治癒させる、または少なくとも部分的に抑制するのに十分な量を意味する。そのような有効な量の決定は、完全に当業者の能力範囲である。例えば治療に用いるための有効な量は、治療する疾患の重篤度、患者の免疫系の全体的な状態、患者の全体的条件（例えば年齢、体重、性別）、薬の投与手段、同時に利用している追加の治療法などに依存する。

本発明では、「約」という用語は、当業者であれば理解でき、文脈に基づいてある程度変化する。この用語が当業者にとって文脈から明確でない場合には、「約」という用語は、具体的な数値または範囲の±１０％以下の変動を有することを意味する。

発明者は、深く掘り下げた研究と創造的な作業によってチアジドアミド誘導体を得た。発明者は、化学式（Ｉ）のチアジドアミド誘導体でＲ１基および／またはＲ２基および／またはＲ３基を適切に選択することにより、得られる化合物が、卒中のマウスにおいて、既存のチアジドアミド誘導体と比べていくつかの態様（例えば神経栄養活性、および／または生体内効率、および／または血液脳関門を通過する能力）を向上させることを見いだした。したがって以下の発明が提供される。

１つの態様では、本発明により、化学式（Ｉ）の化合物：

（式中、
Ｒ１はＣ_1-4アルキルから選択され；
Ｒ２とＲ３は独立に、Ｃ_1-4アルキルから選択され、場合によってはそのＣ_1-4アルキルはフェニルで置換されており；
場合によっては、そのフェニルは、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシル、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシルからなる群から選択された置換基で置換されている）またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物が提供される。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｒ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｓ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ１は、Ｃ_2-3アルキルから、例えばエチル、ｎ−プロピル、イソプロピルから選択される。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はエチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２とＲ３は独立に、Ｃ_1-4アルキルから、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルから選択される。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は、Ｃ_3-4アルキルから、例えばｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルから選択される。

好ましい一実施態様では、Ｒ２はイソブチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３は、Ｃ_3-4アルキルから、例えばｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルから選択される。

好ましい一実施態様では、Ｒ３は、Ｃ_1-3アルキルから、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルから選択される。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はイソプロピルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｒ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｓ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は、Ｃ_1-4アルキル（例えばＣ_1-2アルキル）から選択され、そのＣ_1-4アルキル（例えばＣ_1-2アルキル）はフェニルで置換されていて、場合によってはそのフェニルは、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_1-4アルコキシル、ヒドロキシル、アミノ、カルボキシルからなる群から選択された置換基で置換されている。

好ましい一実施態様では、Ｒ２はベンジルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２はフェネチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はメチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はエチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はイソプロピルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はｔｅｒｔ−ブチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はベンジルである。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はベンジルまたはフェネチルであり；Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジルのいずれかである。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はベンジルまたはフェネチルであり；Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｒ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｓ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２はベンジルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２はフェネチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はエチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はイソプロピルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はｔｅｒｔ−ブチルである。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はベンジルまたはフェネチルであり；Ｒ３は、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はベンジルまたはフェネチルであり；Ｒ３はエチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はベンジルまたはフェネチルであり；Ｒ３はイソプロピルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はベンジルまたはフェネチルであり；Ｒ３はｔｅｒｔ−ブチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はベンジルであり；Ｒ３は、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はフェネチルであり；Ｒ３は、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｒ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｓ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は、Ｃ_2-4アルキルから、例えばエチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルから選択される。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は、Ｃ_3-4アルキルから、例えばｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチルから選択される。

好ましい一実施態様では、Ｒ２はイソプロピルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２はｓｅｃ−ブチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はメチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はエチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はｔｅｒｔ−ブチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ３はベンジルである。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はＣ_2-4アルキルから選択され；Ｒ３は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジルのいずれかである。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はＣ_3-4アルキルから選択され；Ｒ３は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジルのいずれかである。

より好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり；Ｒ２はイソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり；Ｒ３は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｒ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｓ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はイソプロピルであり、Ｒ３は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ３は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチルのいずれかである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はイソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ３はメチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はイソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ３はエチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はイソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ３はｔｅｒｔ−ブチルである。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｒ」立体配置を持つ。

好ましい一実施態様では、Ｒ２は「Ｓ」立体配置を持つ。

本発明のいくつかの化合物を以下の表に示す。

別の態様では、本発明により、上の任意の態様に規定されている化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物を含む医薬組成物が提供される。この組成物は、医薬として許容可能な１種類以上の基剤および／または賦形剤をさらに含むことが好ましい。基剤および／または賦形剤の非限定的な例には、イオン交換体、アルミニウム酸化物、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（例えばヒト血清タンパク質）；緩衝物質（例えばリン酸塩）、グリセロール、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩、電解質が含まれ、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸エステル、蜜蝋、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ラノリンがある。

この医薬組成物は、医薬として許容可能な任意の形に調製することができる。この医薬組成物は、この組成物を必要とする患者または対象に、適切な任意の経路（例えば経口、非経口、直腸、肺内など）で投与することができる。この医薬組成物は、経口投与するときには、通常の固体形態（例えば錠剤、カプセル、ピル、顆粒）にすること、または経口液体製剤（例えば経口溶液、経口懸濁液、シロップ）にすることができる。この医薬組成物を経口製剤にするときには、適切な充填剤、結合剤、崩壊剤、潤滑剤などを添加することができる。この医薬組成物は、非経口投与するときには、注射液（注射剤、注射用の無菌粉末、注射用の濃縮溶液が含まれる）にすることができる。この医薬組成物を注射液にするときには、医薬の分野における既存の従来法を利用することができる。注射液を調製するとき、添加剤を添加しなくてもよく、薬の性質に応じて適切な添加剤を添加してもよい。この医薬組成物は、直腸投与するときには、座薬などにすることができる。この医薬組成物は、肺内投与するときには、吸入剤やスプレー剤などにすることができる。

別の態様では、本発明により、対象における神経変性疾患、または身体外傷によって起こるニューロパチー、または関連疾患によって起こるニューロパチーを予防および／または治療するための薬の製造における、上記の任意の態様に規定されている化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物の利用が提供され、
神経変性疾患の選択は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、脳脊髄多発性硬化症からなる群からなされることが好ましく；
身体外傷の選択は、熱損傷、寒冷損傷、物理的損傷、電気的損傷からなる群からなされることが好ましく；
関連疾患の選択は、後天性免疫不全症、糖尿病、脳卒中からなる群からなされることが好ましく；
対象は、哺乳動物、例えばウシ、ウマ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、齧歯類、霊長類であることが好ましく；対象はヒトであることが好ましい。

別の態様では、本発明により、対象における神経変性疾患、または身体外傷によって起こるニューロパチー、または関連疾患によって起こるニューロパチーを予防および／または治療する方法として、上記の任意の態様に規定されている化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物を、それを必要とする対象に、治療および／または予防に有効な量で投与することを含む方法が提供される。

神経変性疾患の選択は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、脳脊髄多発性硬化症からなる群からなされることが好ましく；
関連疾患の選択は、後天性免疫不全症、糖尿病、脳卒中からなる群からなされることが好ましく；
対象は、哺乳動物、例えばウシ、ウマ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、齧歯類、霊長類であることが好ましく；対象はヒトであることが好ましい。

別の態様では、本発明により、対象における神経変性疾患、または身体外傷によって起こるニューロパチー、または関連疾患によって起こるニューロパチーの予防および／または治療において利用するための、上記の任意の態様に規定されている化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物が提供され；
神経変性疾患の選択は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、脳脊髄多発性硬化症からなる群からなされることが好ましく；
身体外傷の選択は、熱損傷、寒冷損傷、物理的損傷、電気的損傷からなる群からなされることが好ましく；
関連疾患の選択は、後天性免疫不全症、糖尿病、脳卒中からなる群からなされることが好ましく；
対象は、哺乳動物、例えばウシ、ウマ、ヤギ、ブタ、イヌ、ネコ、齧歯類、霊長類であることが好ましく；対象はヒトであることが好ましい。

本発明によりさらに、化学式（Ｉ）の化合物を調製する方法が提供される。そのスキームは以下の通りである。

ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、上に定義したのと同じ意味を持つ。

調製において略号で表わした物質は、ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＨＦ：テトラヒドロフランである。

調製の工程を例示すると以下の通りである。

（１）Ｌ−システインを極性溶媒（例えば水）に溶かし、ｐＨを７．０に調節し、エチレンオキシドを０〜１０℃で一滴ずつ添加し、反応させて化合物１を得る。

（２）化合物１を濃塩酸に溶かし、９０〜９５℃で反応させて化合物２を得る。

（３）化合物２を水に溶かし、アルカリ溶液（例えば炭酸水素ナトリウム水溶液）を一滴ずつ添加する。抽出、乾燥、濃縮の後に有機相が得られる。極性溶媒（例えばメタノール）を添加し、室温で反応させると化合物３が得られる。

（４）化合物３を極性溶媒（例えばＴＨＦ）に溶かす。アルカリ溶液（例えば炭酸水素ナトリウム水溶液）と原材料１を添加し、室温で反応させると化合物４が得られる。原材料１は、上のスキームに示したようにＲ１で置換された塩化ベンゼンスルホニルであることが好ましい。

（５）化合物４と原材料２を脱水剤（例えばＤＣＣ）と触媒（例えばＤＭＡＰ）と塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下で反応させると標的生成物が得られる。原材料２は、上のスキームに示したようにＲ２基とＲ３基を含むアミノ酸エステルであること、またはその塩（例えばその塩酸塩）であることが好ましい。

先行技術と比較すると、本発明による化学式（Ｉ）の化合物は、以下に示す有利な効果の１つ以上を有する：
（１）本発明の化合物は、既存のチアジドアミド誘導体と比べて神経栄養活性が改善されている；
（２）本発明の化合物は、卒中のマウスにおける生体内効率に関して既存のチアジドアミド誘導体よりも優れている；
（３）本発明の化合物は、血液−脳関門を通過する能力に関して既存のチアジドアミド誘導体よりも優れている。

本発明の化合物を用いて神経変性疾患（例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、脳脊髄多発性硬化症）；身体外傷または関連疾患（例えば後天性免疫不全症、糖尿病、脳卒中）によって起こるニューロパチーを予防および／または治療することができる。

以下の実施例との組み合わせによって本発明の実施態様を記述する。しかし当業者であれば、以下の実施例は、本発明を記述することのみを目的としたものであり、本発明の範囲を規定すると見なされてはならないことを理解する。具体的な条件が実施例に示されていない場合には、実施例は、通常の条件、または製造者が推奨する条件で実施される。試薬または装置は、その製造者が示されていなければ、市販されている通常の製品である。

試薬：原材料は、その合成方法が提示されていなければ、市販されているものであり、反応のための溶媒は、標準的な前処理をされている。

装置：化合物の融点はＲＹ−１融点測定装置によって求め、¹Ｈ ＮＭＲは、ＡＲＸ−４００ ＮＭＲ装置によって求め、質量スペクトルは、ＶＧ−ＺａｂＳｐｅｃ ＭＳ装置によって求める。

実施例１：２−ヒドロキシエチルシステイン（化合物１）の合成

２０００ｍｌの丸底フラスコに１０９ｇ（０．９モル）のＬ−システインを添加し、１０００ｍｌの蒸留水に溶かし、氷浴の中で１０℃まで冷却した。２４ｍｌの１Ｍ ＮａＯＨ水溶液を添加して溶液を中和し、ｐＨを約７にした。あらかじめ冷却したエチレンオキシド（１００ｍｌ）をピペットで量って１０℃で添加した。その後、１０℃の一定温度で１時間反応させ、次いで室温で１．５時間反応させた。

得られた混合物をジエチルエーテル（４００ｍｌ×４）で抽出し、反応しなかったエチレンオキシドを除去した。６０℃未満の温度で水相を蒸留によって系から除去すると黄色の固形物が得られた。混合溶媒（水：エタノール＝８５ｍｌ：３５０ｍｌ）を用いて再結晶させ、濾過した後、固形物を９５重量％のエタノールで十分に洗浄すると、生成物が白色の鱗状固形物として得られた（約１００ｇ、収率：６７．５％）。

融点１９５〜１９６℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ）δ：３．９６１３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ₁＝４．２７２Ｈｚ，Ｊ₂＝７．８１６Ｈｚ），３．８０６８０〜３．７７２９３（ｍ，２Ｈ）、３．１７８８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ₁＝４．２６８Ｈｚ，Ｊ₂＝１４．８１４Ｈｚ）、３．０８２２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ₁＝７．４８０Ｈｚ，Ｊ₂＝１４．８１４Ｈｚ）、２．８０１０３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０３６Ｈｚ）。

実施例２：２−クロロエチルシステイン塩酸塩（化合物２）の合成

１０００ｍｌの丸底フラスコに４４ｇの２−ヒドロキシエチルシステインを添加し、６００ｍｌの濃塩酸に溶かした。この混合物を９０〜９５℃に加熱し、撹拌しながら７時間反応させた。反応後、得られた混合物を冷蔵庫の中で保管し、一晩放置した。大量の針状固形物が系から沈殿した。吸引濾過によって溶媒を除去し、得られた固形物を大気中で乾燥させると、生成物が灰白色の固形物として得られた（約４０ｇ、収率：７０％超）。

融点１８５〜１８６℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ）δ：４．３０４７７〜４．２６９５２（ｍ，１Ｈ）、３．８１９１３〜３．７８４０９（ｍ，２Ｈ）、３．２５９０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ₁＝４．４４４Ｈｚ，Ｊ₂＝１４．９８４Ｈｚ）、３．１８８７７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ₁＝７．３５２Ｈｚ，Ｊ₂＝１５．０７２Ｈｚ）、３．０４４１０〜３．００６２５（ｍ，２Ｈ）。

実施例３：Ｌ−１，４−チアジン−３−カルボン酸塩酸塩（化合物３）の合成

２０ｇの２−クロロエチルシステイン塩酸塩を水に溶かし、氷浴の中で７．２ｇのＮａＨＣＯ₃水溶液を一滴ずつ添加した。添加後、溶液をよく撹拌して中和させた。酢酸エチルで３回抽出した後、有機相をまとめ、Ｎａ₂ＳＯ₄を用いて乾燥させた。減圧下で蒸留することによって溶媒を除去した後、４００ｍｌの無水メタノールを添加した。室温で５日間反応させた。減圧下で蒸留することによって溶媒を除去し、混合溶媒（メタノール−ジエチルエーテル）を用いて再結晶させると、薄い白色の固形物が得られた（約６ｇ）。比旋光度［α］_D ^24.5＝−２７．１°（Ｈ₂Ｏ）。

融点２３０℃超。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：３．６７６７２〜３．６４３０８（ｍ，１Ｈ）、３．５５０４４〜３．５０１０８（ｍ，１Ｈ）、３．１６６２２〜３．０８３２２（ｍ，１Ｈ）、２．９２０４５〜２．９０３２６（ｍ，１Ｈ）、２．８３６７８〜２．７５４０６（ｍ，２Ｈ）、２．６１３９０〜２．５９２７２（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：１４８。

実施例４：Ｌ−４−ｐ−トルエンスルホニル−１，４−チアジン−３−カルボン酸（化合物４）の合成

２．３ｇ（１５．７ミリモル）のＬ−１，４−チアジン−３−カルボン酸塩酸塩を１７ｍｌのＴＨＦに溶かし、７７ｍｌの１０重量％ＮａＨＣＯ₃水溶液を添加し、２．９０ｇ（１５．２ミリモル）の塩化ｐ−トルエンスルホニルを含む１７ｍｌのＴＨＦ溶液を一滴ずつ添加した。この混合物を室温で１９〜２４時間撹拌した。反応後、塩酸を添加してｐＨ値を１〜２に調節し、酢酸エチル（１０ｍｌ×３）を用いて抽出した。無水硫酸マグネシウムを用いて上清溶液を乾燥させた。吸引濾過とロータリーエバポレーションによって溶媒を除去すると、茶色の油が得られた。酢酸エチルとシクロヘキサンの混合溶媒を用いて再結晶させると白色の結晶が得られた（４．３ｇ、収率：９３．５％）。融点６６°（分解）。比旋光度［α］_D ^24.5＝−８１．６°（Ｈ₂Ｏ）。

¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．６８２６８〜７．６６２３４（ｄ，２Ｈ）、７．３０６４２〜７．２６４３４（ｍ，２Ｈ）、５．１２４０６〜５．１０７２８（ｍ，１Ｈ）、４．０３３２２〜３．９９１９６（ｍ，１Ｈ）、３．４６６４２〜３．４０８４８（ｍ，１Ｈ）、３．０２３０１〜２．９９２９２（ｍ，２Ｈ）、２．７６８７５〜２．７３７２４（ｍ，１Ｈ）、２．４２６８８（ｓ，３Ｈ）、２．３８０６２（ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：３０１．２。

実施例５：（３Ｒ）−４−［（４−メチルベンゼンスルホニル）］−１，４−チアジン−３−カルボニル−Ｌ−ロイシンエチルエステル（化合物５、ＺＬ０１１４２７４４．２）の合成

４．２ｇ（０．１４モル）のＬ−４−ｐ−トルエンスルホニル−１，４−チアジン−３−カルボン酸、３．０ｇ（０．０１７ミリモル）のＬ−ロイシンエチルエステル塩酸塩（原材料２）、３．２ｇ（０．０１４モル）のＤＣＣ、１．７ｇ（０．０１４モル）のＤＭＡＰを２００ｍｌのジクロロメタンに溶かし、６ｍｌ（０．０４２モル）のトリエチルアミンを添加した。室温で２４時間反応させた。濾過によって固形物を除去し、蒸留によって溶媒を除去した。残留物を適量の酢酸エチルに溶かした。溶けなかった物質を濾過によって除去し、得られた混合物を酢酸エチルで希釈した。得られた溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃溶液と飽和ＮａＣｌ溶液で順番に洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄を用いて乾燥させた。この乾燥剤を除去し、酢酸エチルの一部を蒸留によって除去した。フラッシュクロマトグラフィカラム（溶離液はＤＣＭ：ＣＨ₃Ｃｌ＝１：１であった）を利用して分離すると、油が４．０ｇ得られた。比旋光度［α］_D ^24.5＝−１１０．１°（ｃ２．００、ＤＣＭ）。

¹Ｈ−ＮＭＲ（４００Ｍ Ｈｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７７２３７〜７．７４０７７（ｍ，２Ｈ）、７．３６３８２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．９８８Ｈｚ）、６．７４０９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２４４Ｈｚ）、４．８００９８〜４．７７４６６（ｍ，１Ｈ）、４．６８２４４〜４．５８８９８（ｍ，１Ｈ）、４．２８１７４〜４．１５７０８（ｍ，３Ｈ）、３．５３７８９〜３．２８６７４（ｍ，１Ｈ）、３．１３０９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．６７６）、２．５６９５４〜２．４２２４７（ｍ，５Ｈ）、２．２４６２０〜２．２０５４５（ｍ，１Ｈ）、１．６６３５２〜１．５３４５０（ｍ，３Ｈ）、１．３０７０２〜１．２６７４５（ｍ，３Ｈ）、０．９６１５９〜０．９１８９１（ｍ，６Ｈ）。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ：４４３．４、３９７．２、３６９．２、２６３．１、２５６．１、１５５．０、１３９．２、１０１．１。

実施例６：（３Ｒ）−４−［（４−メチルベンゼンスルホニル）］−１，４−チアジン−３−カルボニル−Ｄ−ロイシンイソプロピルエステル（化合物６、ＣＮ１０２６７５２４４）の合成

原材料２としてＤ−ロイシンエチルエステル塩酸塩を用いることにより、（３Ｒ）−４−［（４−メチルベンゼンスルホニル）］−１，４−チアジン−３−カルボニル−Ｄ−ロイシンイソプロピルエステルを実施例５の工程に従って調製した。生成物は白色の結晶であった（収率９１．５％）。比旋光度［α］_D ^24.5＝−１０３．７°。

融点８１〜８３℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６２３７−７．７４０７７（ｄ，２ＨＪ＝８．２０８Ｈｚ）、７．３７３８２〜７．２６５１１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２０８Ｈｚ）、６．７５０９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９４４Ｈｚ）、５．４０１１２（ｍ，１Ｈ）、４．７９２９８〜４．２５１６６（ｍ，３Ｈ）、３．５４９８９〜３．５３６７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３１１１０）、３．１５２９２〜３．１１８００（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．６７６ＨＺ）、２．５６０５４〜２．４６２４７（ｍ，４Ｈ）、２．２３２２０〜２．２０３４５（ｍ，１Ｈ）、１．６２５５２〜１．４３４５０（ｍ，４Ｈ）、１．２６２０２〜１．２４７４５（ｍ，６Ｈ）、０．９４６５９〜０．９３１９１（ｍ，６Ｈ）。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ：４５７．３、３９７．２、３６９．２、２５６．２、１５４．７、１０１．１。

実施例７：（２Ｓ，３Ｒ）−エチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）バレレート（化合物７）の合成

原材料２としてＬ−イソロイシンエチルエステル塩酸塩（１．４５ｇ）を用いることにより、実施例５の工程に従って（２Ｓ，３Ｒ）−エチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）バレレートを合成した。生成物は白色の結晶であった（収率６５％）。

融点８８〜９０℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ）、４．７９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．８２Ｈｚ）、４．５８（１Ｈ，ｍ）、４．２０（３Ｈ，ｍ）、３．６６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．４３Ｈｚ）、３．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７１Ｈｚ）、３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．８６Ｈｚ）、２．５６〜０．９３（１４Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４４３．１６６９［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例８：（２Ｓ，３Ｒ）−メチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）バレレート（化合物８）の合成

原材料２として１．０２ｇ（７ミリモル）のＬ−イソロイシンメチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．５２ｇ、収率：７１％）が白色の固形物として調製された。

融点９２〜９４℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ）、４．８１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．１４Ｈｚ）、４．５８（１Ｈ，ｍ）、４．２０（１Ｈ，ｍ）、３．７５（３Ｈ，ｍ）、３．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．６０Ｈｚ）、３．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．８２Ｈｚ）、２．５７〜０．９３（１５Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４２９．１５１２［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例９：（２Ｓ，３Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）バレレート（化合物９）の合成

原材料２として１．３１ｇ（７ミリモル）のＬ−イソロイシンｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．５３ｇ、収率：６５％）が白色の固形物として調製された。

融点８０〜８２℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４０Ｈｚ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６７Ｈｚ）、４．７８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．４７（１Ｈ，ｍ）、４．２５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２０Ｈｚ）、３．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．４３Ｈｚ）、３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７２Ｈｚ）、２．６０〜０．９３（２４Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４７１．１９８２［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１０：（Ｓ）−メチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物１０）の合成

原材料２として０．９１ｇ（７ミリモル）のＬ−バリンメチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．２６ｇ、収率：６１％）が白色の固形物として調製された。

融点９３〜９５℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４３Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４３Ｈｚ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６２Ｈｚ）、４．８１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．５８（１Ｈ，ｍ）、４．２０（１Ｈ，ｍ）、３．７５（３Ｈ，ｍ）、３．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．６０Ｈｚ）、３．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．８２Ｈｚ）、２．６０〜０．９２（１３Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４１５．１３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１１：（Ｓ）−ベンジル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物１１）の合成

原材料２として１．４４ｇ（７ミリモル）のＬ−バリンベンジルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６４ｇ、収率：６７％）が白色の固形物として調製された。

融点８５〜８７℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４３Ｈｚ）、７．３４（４Ｈ，ｍ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６２Ｈｚ）、５．２０（２Ｈ，ｄｄ）、４．８２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３１Ｈｚ）、４．１９（１Ｈ，ｍ）、３．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．６３Ｈｚ）、３．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７６Ｈｚ）、２．５６〜０．８０（１３Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４９１．１６６９［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１２：（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物１２）の合成

原材料２として１．２０ｇ（７ミリモル）のＬ−バリンｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６５ｇ、収率：７１％）が白色の固形物として調製された。

融点９０〜９２℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６５Ｈｚ）、４．７８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．４４（１Ｈ，ｍ）、４．２５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２０Ｈｚ）、３．３６（１Ｈ，ｍ）、３．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．３４Ｈｚ）、２．５９〜０．８９（２２Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４５７．１８２５［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１３：（Ｓ）−エチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物１３）の合成

原材料２として１．０１ｇ（７ミリモル）のＬ−バリンエチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．４６ｇ、収率：６８％）が白色の固形物として調製された。

融点８７〜８９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６４Ｈｚ）、４．８０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．５４（１Ｈ，ｍ）、４．２１（３Ｈ，ｍ）、３．４８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．３１Ｈｚ）、３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５２Ｈｚ）、２．５９〜０．８８（１６Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４２９．１５１２［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１４：（Ｒ）−メチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物１４）の合成

原材料２として０．９１ｇ（７ミリモル）のＤ−バリンメチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．４３ｇ、収率：６９％）が白色の固形物として調製された。

融点９０〜９２℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６５Ｈｚ）、４．８０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．５９（１Ｈ，ｍ）、４．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．５２Ｈｚ）、３．７５（３Ｈ，ｍ）、３．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．３３Ｈｚ）、３．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７５Ｈｚ）、２．５９〜０．８４（１３Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４１５．１３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１５：（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−メチル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物１５）の合成

原材料２として１．２１ｇ（７ミリモル）のＤ−バリンｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．５１ｇ、収率：６６％）が白色の固形物として調製された。

融点８８〜９０℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ）、７．３６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３５Ｈｚ）、４．８０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．４８（１Ｈ，ｍ）、４．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３２Ｈｚ）、３．５０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．９５Ｈｚ）、３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７４Ｈｚ）、２．５９〜０．８３（２２Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４５７．１８２５［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１６：（Ｓ）−メチル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物１６）の合成

原材料２として１．２５ｇ（７ミリモル）のＬ−フェニルアラニンメチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．５５ｇ、収率：６７％）が白色の固形物として調製された。

融点８５〜９８℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３０（５Ｈ，ｍ）、７．１５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、６．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６２Ｈｚ）、４．８０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４０Ｈｚ）、４．１０（１Ｈ，ｍ）、３．７５（３Ｈ，ｍ）、３．２９（１Ｈ，ｔ）、３．０７（２Ｈ，ｄ）、２．６５〜０．８８（８Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４６３．１３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１７：（Ｓ）−エチル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物１７）の合成

原材料２として１．３５ｇ（７ミリモル）のＬ−フェニルアラニンエチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６５ｇ、収率：６９％）が白色の固形物として調製された。

融点９１〜９３℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３０（５Ｈ，ｍ）、７．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６３Ｈｚ）、４．７７（２Ｈ，ｍ）、４．２２（２Ｈ，ｍ）、３．８９（１Ｈ，ｍ）、３．２９（１Ｈ，ｍ）、３．０８（２Ｈ，ｍ）、２．６９〜０．９１（１０Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４７７．１５１２［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１８：（Ｓ）−ベンジル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物１８）の合成

原材料２として１．７９ｇ（７ミリモル）のＬ−フェニルアラニンベンジルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．７０ｇ、収率：６３％）が白色の固形物として調製された。

融点８８〜９０℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．６７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３２Ｈｚ）、７．４１（５Ｈ，ｍ）、７．３０（３Ｈ，ｍ）、７．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．０６（２Ｈ，ｍ）、６．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０１Ｈｚ）、５．２１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６０Ｈｚ）、４．８４（１Ｈ，ｍ）、４．７２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．１０Ｈｚ）、３．９２（１Ｈ，ｍ）、３．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．１５Ｈｚ）、３．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６６Ｈｚ）、２．７５〜０．９４（７Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：５３９．１６６９［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例１９：（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物１９）の合成

原材料２として１．５５ｇ（７ミリモル）のＬ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．７２ｇ、収率：６８％）が白色の固形物として調製された。

融点９２〜９４℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３２Ｈｚ）、７．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１３Ｈｚ）、７．２２（５Ｈ，ｍ）、６．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１０Ｈｚ）、４．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ）、３．９６（１Ｈ，ｍ）、３．２６（１Ｈ，ｍ）、３．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ）、２．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１９．３４Ｈｚ）、２．５７〜０．９４（１６Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：５０５．１８２５［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２０：（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物２０）の合成

原材料２として１．５５ｇ（７ミリモル）のＤ−フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．５９ｇ、収率：６３％）が白色の固形物として調製された。

融点８８〜９２℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２１Ｈｚ）、７．３３（５Ｈ，ｍ）、７．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１３Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１５Ｈｚ）、４．７９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ）、４．１１（１Ｈ，ｍ）、３．３８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．３０Ｈｚ）、３．１０（２Ｈ，ｍ）、３．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１９．３６Ｈｚ）、２．５７〜０．９４（１６Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：５０５．１８２５［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２１：（Ｒ）−エチル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物２１）の合成

原材料２として１．３５ｇ（７ミリモル）のＤ−フェニルアラニンエチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６５ｇ、収率：６９％）が白色の固形物として調製された。

融点８６〜８９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４３Ｈｚ）、７．３３（５Ｈ，ｍ）、７．２７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ）、４．９４（１Ｈ，ｍ）、４．８０（１Ｈ，ｍ）、４．１２（２Ｈ，ｍ）、３．７３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．３３Ｈｚ）、３．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１１．９６Ｈｚ）、３．１０（３Ｈ，ｍ）、２．５６〜０．９４（８Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４６３．１３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２２：（Ｓ）−エチル−４−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物２２）の合成

原材料２として１．４５ｇ（７ミリモル）のＬ−ホモフェニルアラニンエチルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６４ｇ、収率：６７％）が白色の固形物として調製された。

融点８７〜８９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ）、７．３３（５Ｈ，ｍ）、７．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ）、４．８５（１Ｈ，ｍ）、４．６２（１Ｈ，ｍ）、４．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１９．３３Ｈｚ）、４．０２（１Ｈ，ｍ）、３．４３（１Ｈ，ｄ）、３．１１（１Ｈ，ｍ）、２．５５〜０．９４（１３Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４９１．１６６９［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２３：（Ｓ）−イソプロピル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物２３）の合成

原材料２として１．４５ｇ（７ミリモル）のＬ−フェニルアラニンイソプロピルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６５ｇ、収率：６７％）が白色の固形物として調製された。

融点８５〜８７℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４６Ｈｚ）、７．３１（５Ｈ，ｍ）、７．１７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４６Ｈｚ）、６．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３４Ｈｚ）、５．０１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ）、４．７４（１Ｈ，ｍ）、４．１２（１Ｈ，ｍ）、４．０８（１Ｈ，ｍ）、３．２８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．３Ｈｚ）、３．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１９．３３Ｈｚ）、２．５０〜０．９４（１３Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４９１．１６６９［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２４：（Ｒ）−イソプロピル−３−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）プロピオネート（化合物２４）の合成

原材料２として１．４５ｇ（７ミリモル）のＤ−フェニルアラニンイソプロピルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６０ｇ、収率：６５％）が白色の固形物として調製された。

融点８６〜８９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４２Ｈｚ）、７．３２（５Ｈ，ｍ）、７．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ）、６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３３Ｈｚ）、５．０１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４０Ｈｚ）、４．８２（１Ｈ，ｍ）、４．１１（２Ｈ，ｍ）、３．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．４３Ｈｚ）、３．０９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．１２Ｈｚ）、２．５０〜０．９２（１３Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：４９１．１６６９［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２５：（Ｓ）−イソプロピル−４−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物２５）の合成

原材料２として１．５５ｇ（７ミリモル）のＬ−ホモフェニルアラニンイソプロピルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６７ｇ、収率：６６％）が白色の固形物として調製された。

融点８７〜８９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ）、７．３６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３３Ｈｚ）、７．２８（５Ｈ，ｍ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ）、５．０９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．１４Ｈｚ）、４．８２（１Ｈ，ｍ）、４．５８（１Ｈ，ｍ）、４．１２（２Ｈ，ｍ）、３．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ）、３．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．８６Ｈｚ）、２．６５〜０．９３（１５Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：５０５．１８２５［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２６：（Ｒ）−イソプロピル−４−フェニル−２（（Ｒ）−（４−メチルフェニル）スルホニルチアジン−３−アミノホルミル）ブチレート（化合物２６）の合成

原材料２として１．５５ｇ（７ミリモル）のＤ−ホモフェニルアラニンイソプロピルエステルを用いることにより、実施例５の工程に従うと、生成物（１．６２ｇ、収率：６４％）が白色の固形物として調製された。

融点８８〜９０℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３３Ｈｚ）、７．３６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３３Ｈｚ）、７．２６（５Ｈ，ｍ）、７．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１２Ｈｚ）、５．０６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．１４Ｈｚ）、４．８４（１Ｈ，ｍ）、４．５３（１Ｈ，ｍ）、４．０８（２Ｈ，ｍ）、３．３１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ）、３．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．８４Ｈｚ）、２．６５〜０．９３（１５Ｈ，ｍ）。ＭＳ−ＥＩ（ｍ／ｚ）：５０５．１８２５［Ｍ＋Ｈ］＋。

実施例２７：Ｌ−４−ｐ−エチルベンゼンスルホニル−１，４−チアジン−３−カルボン酸（化合物２７）の合成

塩化ｐ−トルエンスルホニルの代わりに３．０ｇの塩化ｐ−エチルベンゼンスルホニルを用いることにより、実施例４の工程に従うと、４．３ｇの油が得られた。収率：９２．５％、比旋光度［α］_D ^24.5＝−８０．２°（Ｈ₂Ｏ）。

¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．６８３５４〜７．６６１２２（ｄ，２Ｈ）、７．３０４２３〜７．２６２２１（ｍ，２Ｈ）、５．１２２０２〜５．１０５１８（ｍ，１Ｈ）、４．０３１２２〜３．９９０１２（ｍ，１Ｈ）、３．４６４３６〜３．４０６２４（ｍ，１Ｈ）、３．０２１０３〜２．９９１２２（ｍ，２Ｈ）、２．７６６５４〜２．７３５０２（ｍ，１Ｈ）、２．４２４６６〜２．３７８６２（ｍ，４Ｈ）、１．８６４５３〜１．８２３５４（ｔ，３Ｈ）。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：３１５．４。

実施例２８：（３Ｒ）−４−［（４−エチルベンゼンスルホニル）］−１，４−チアジン−３−カルボニル−Ｌ−ロイシンイソプロピルエステル（化合物２８）の合成

実施例５の工程に従い、Ｄ−ロイシンイソプロピルエステル塩酸塩を２．４５ｇのＬ−４−ｐ−エチルベンゼンスルホニル−１，４−チアジン−３−カルボン酸と反応させると、無色の油が２．０８ｇ得られた。

¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ：７．７６８１〜７．７４７４（ｄ，２Ｈ）、７．３７９３〜７．３５８９（ｍ，２Ｈ）、６．７５４３〜６．７３２６（ｄ，１Ｈ）、５．０２８８〜４．９９８０（ｍ，２Ｈ）、４．７７３８（ｍ，１Ｈ）、４．６２６７〜４．６０４２（ｍ，１Ｈ）、４．２６７３〜４．２３０１（ｍ，１Ｈ）、３．５２９５〜３．５１７６（ｍ，１Ｈ）、３．１０２９（ｍ，１Ｈ）、２．７５３２〜２．７０２３（ｍ，２Ｈ）、２．５４８７〜２．５１４４（ｍ，２Ｈ）、２．２１８８〜２．１８８８（ｍ，１Ｈ）、１．５８２６〜１．４２３７（ｍ，１Ｈ）、１．４０４７〜１．３６０５（ｍ，１Ｈ）、１．２８２１〜１．２２４６（ｍ，８Ｈ）、０．９１７８〜０．９０２４（ｍ，６Ｈ）。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ：４７０．４。

実施例２９：化合物の神経栄養活性の評価

本発明による化合物の神経栄養活性は、多くのインビトロ生物モデル（例えばニワトリ胚後根神経節のインビトロ無血清培養モデル）で実現できる。

実験方法：８日間インキュベートしてあったニワトリ胚の脊椎両側の神経節を無菌環境にて解剖レンズ下で露出させた。後根神経節を鋭い鉗子で１つずつ取り出し、ラットの尾のコラーゲンを敷き詰めた培養瓶に、瓶１つにつき神経節を５〜６個の密度で入れた。各用量につき瓶は２つであった。３７℃、５％ＣＯ₂にしたインキュベータの中で１時間接着培養した後、神経成長因子（ＮＧＦ）（０．１５ｎｇ／ｍｌ）を含む無血清培地ＤＭＥＭと本発明の化合物を添加した。対照群では、培地と、同じ用量のＮＧＦだけを添加した。インキュベータの中で４８時間培養した後、後根神経節の周囲における神経突起の成長を倒立位相差顕微鏡で観察し、神経突起の長さと密度に応じて点数化した。

評価基準：０：神経突起がない；１：長い神経突起が稀である；２：比較的長いか密な神経突起がある；３：長くて密な神経突起がある。

表１に、さまざまな用量の化合物によって促進されたニワトリ胚後根神経節の神経突起の成長に関するスコアを示す。数値は、５個の神経節の平均値である。

上記の結果から、本発明の化合物は、神経栄養活性に関して化合物５よりも優れていたことと、活性に関して化合物６と同等以上であったことがわかる。例えば１ｐＭと１００ｐＭの用量では、化合物２０は、化合物６と比べて神経栄養活性がそれぞれ２５％と３０％上昇していた。

化合物の構造を考慮すると、Ｒ１は、化合物の神経栄養活性に対して顕著な効果を持っていた。例えば化合物６と化合物２８は、Ｒ２とＲ３がそれぞれ同じだが、化合物２８は、Ｒ１がエチルであり、化合物６はＲ１がメチルであった。１ｐＭと１００ｐＭの用量では、化合物２８は、化合物６と比べて神経栄養活性がそれぞれ１９％と１６％増大していた。したがってＲ１の炭素数が増えると、チアジドアミド誘導体の神経栄養活性が増大したことがわかる。

別の態様では、Ｒ２も化合物の神経栄養活性に対して顕著な効果を持っていた。例えば化合物２４、２５、２６は、Ｒ１とＲ３がそれぞれ同じだが、化合物２４はＲ２がベンジルであり、化合物２５と２６はＲ２がフェネチルであり、化合物６はＲ２がイソブチルであった。１ｐＭと１００ｐＭの用量では、化合物２４、２５、２６は、化合物６と比べて神経栄養活性が４．８〜１２．５％と５．１〜９．８％増大した。これは、Ｒ２の体積および／または疎水性が増大するとチアジドアミド誘導体の神経栄養活性も増大することを示している。

実施例３０：脳卒中に対する生体内薬理動態に関する化合物の評価

１．実験課題
この実施例では、実験対象として昆明マウスを用い、胃内（ｉ．ｇ．）投与を利用し、マウスＢＣＡＯ−ＬＢＰ（低血圧を伴う両側頸動脈閉塞）モデルを使用し、マウスの神経機能スコアと脳マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）含量を求めることにより、予防的に投与したときの化合物のマウスにおける不完全な全脳虚血に対する保護効果を調べた。

２．実験方法
２．１ 薬の調製
２．１．１ ０．７％カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）溶液の調製：使用する１日前にＣＭＣ−Ｎａ乾燥粉末を０．７ｇ計量し、１００ｍｌの蒸留水に添加した。この混合物を撹拌しながら適度に加熱し、ＣＭＣ−Ｎａを完全に溶解させた。一晩放置した後、この混合物をよく混合し、密封して包装した。

２．１．２ 胃内投与するための薬の調製：０．７％ＣＭＣ−Ｎａ溶液を用いて化合物の１．５ｍｇ／ｍｌ溶液を調製した。

２．２ 群分けと投与
実験室環境に１週間馴致させておいた２８匹のマウスを体重に応じて均等に群分けした。マウスに０．７％ＣＭＣ−Ｎａまたは化合物の１つを１日に１回の割合で３日間にわたって胃内投与した。群は以下の通りであった：
偽手術群：０．７％ＣＭＣ−Ｎａ溶液を胃内投与した４匹のマウス；
脳虚血モデル群：０．７％ＣＭＣ−Ｎａ溶液を胃内投与した１２匹のマウス；
投与群：０．２ｍｌ／１０ｇの用量で胃内投与した１２匹のマウス。すなわち化合物の用量は３０ｍｇ／ｋｇであった。

２．３ マウスの不完全な全脳虚血と、脳ＭＤＡ含量の測定
２．３．１ マウス両側頸動脈結索：最後に投与してから１時間後、マウスの眼窩からの瀉血により血圧を低下させ（マウスの血液の全体積の約３０％）、次いで手術台の上に仰向けの状態で固定し、首の中央に切れ込みを入れた。頸動脈を鈍的剥離させ、２本の紐を用いてそれぞれの側を結索した。第３の紐を用いた結索の後に時間の計測を開始した。頸動脈は２本の紐の間で分離し、切り込みを縫合した。偽手術群では、頸動脈を結索せずに分離しただけであった。手術後、マウスの固定をすぐに解除し、マウスの６時間以内の挙動を観察して記録する（盲検法を利用して以下の表に基づいて点数化する）とともに、死亡時刻を記録した。マウスが死んだ後ただちに脳を取り出し、小脳を取り出し、小脳全体の中のＭＤＡ含量をチオバルビツール酸（ＴＢＡ）によって求めた。６時間後に死んでいなかったマウスを殺し、脳を取り出した。

２．３．２ 神経機能スコア：点数化の基準を表２に示す

２．３．３ マウスの脳ＭＤＡの測定
マウスの脳を取り出して計量し、Ｎ．Ｓ．を用いて１５％脳ホモジェネートを調製した。１．２ｍｌの脳ホモジェネートを３７℃の水浴に１時間（１０分ごとに振盪）入れた後に取り出した。２０％トリクロロ酢酸を０．６ｍｌ添加し、得られた混合物をよく混合した後、１０分間放置した。２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、１．２ｍｌの上清に０．６７％ＴＢＡを０．６ｍｌ添加した。この混合物を沸騰した水浴の中に１０分間入れた後、取り出して冷却し、ＯＤ値を５３２ｎｍの波長で測定した。

３．統計分析
実験データは

として表わした。ＳＰＳＳ１３．０統計ソフトウエアを使用した。分散の一因子分析によって分散の等分散性または不等分散性を求めた。分散が等分散性である場合には、ＬＳＤ検定を使用し、分散が不等分散性である場合には、ダネットのＴ３検定を使用した。異なる群の間の有意差を比較し、Ｐ＜０．０５であることが、統計的に有意であることを示していた。結果を表３に示す。

結果からわかったこと：本発明の化合物は、マウスにおける不完全な全脳虚血に対する保護効果に関して化合物５および／または化合物６よりも優れていた。化合物８、１５、２３、２８を投与された群のマウスは、化合物６を投与された群のマウスと比べて神経障害スコアがそれぞれ約１５％、８％、１３％、１０％低下した。化合物９、１３、１８、２２を投与された群のマウスは、化合物５を投与された群のマウスと比べて神経障害スコアがそれぞれ約３５％、３２％、２７％、１５％低下した。したがって本発明の化合物は、既存の化合物と比較すると、卒中のマウスで生体内効率が顕著に上昇した。

化合物の構造の分析により、Ｒ１および／またはＲ２の変更が化合物の上記の効率に影響を与える可能性があることを見いだすことができた。化合物２８と化合物６の比較と、化合物２３と化合物６の比較から、Ｒ１の炭素原子の数の増加、またはＲ２の体積および／または疎水性の増大が、卒中に対する生体内効率を増大させることを見いだすことができた。

実施例３１：血液−脳関門を通過する化合物の評価
１．実験課題
ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞は、ＭＤＣＫ（メイディン−ダービーイヌ腎臓上皮細胞）にＭＤＲ１遺伝子をトランスフェクトした後にＰ−ｇｐトランスポータの発現が大きい単層細胞であった。この単層は流出タンパク質の密度と高発現が理由で血液−脳関門（ＢＢＢ）構造と類似性があるため、ＢＢＢを通過する能力を評価するためのモデルの１つとしてここで用いることができる。本発明では、ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞を用いて本発明の化合物の膜透過性を調べ、ＢＢＢを通過する能力を主に評価した。

２．実験方法
２．１ 溶液の調製
培地の調製：ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）と、１％グルタミンと、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン−ストレプトマイシン二重抗体溶液と、１％非必須アミノ酸と、１．２ｍｇ／ｌのゲネチシン（Ｇ４１８）を、使用する直前に添加した。

消化溶液の調製：計量した１ｇのトリプシンと８０ｍｇのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）に４００ｍｌのリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を添加し、０．２２μｍの濾過膜を用いて濾過殺菌し、得られた溶液をあとで使用するため−２０℃で保管した。

グルタミン貯蔵溶液の調製：２．９２ｇのグルタミンに１００ｍｌのＰＢＳを添加し、０．２２μｍの濾過膜を用いて濾過殺菌し、得られた溶液を１ｍｌごとに包装し、あとで使用するため−２０℃で保管した。

ペニシリン−ストレプトマイシン貯蔵溶液の調製：８０万Ｕのペニシリンに２０ｍｌの生理食塩水を添加し、１００万Ｕのストレプトマイシンに２５ｍｌの生理食塩水を添加した。２つの溶液を１：１の比でよく混合し、０．２２μｍの濾過膜を用いて濾過殺菌し、得られた溶液を１ｍｌごとに包装し、あとで使用するため−２０℃で保管した。

ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）の調製：８．０ｇのＮａＣｌ、０．４ｇのＫＣｌ、０．０４７５ｇのＮａ₂ＨＰＯ₄・Ｈ₂Ｏ、０．０６ｇのＫＨ₂ＰＯ₄、６ｇの４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）を超純水に溶かし、ｐＨ値を７．２〜７．４に調節し、水を添加して全体積を１ｌにし、０．２２μｍの濾過膜を用いて濾過殺菌し、得られた溶液をあとで使用するため−２０℃で保管した。

２．１ 細胞培養
凍結したＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞を３７℃の水浴の中で素早く解凍した。再生させた細胞に、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地を添加し、細胞を、３７℃、５％ＣＯ₂、相対湿度９０％にしたインキュベータの中で培養した。培地は２日ごとに交換した。１〜２日間で細胞が増殖して融合した後、細胞を０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡ（０．２％）混合消化溶液を用いて３７℃で消化させ、所定の比で継代培養した。実験で用いる細胞は、４０〜６０世代にわたって継代したものであった。

細胞融合の程度が８０％に達したとき、細胞を消化させ、その後完全培地の中に懸濁させ、ミリセルプレートに１×１０⁶細胞／ｍｌの割合で播種した。培地を２日ごとに交換し、１週間後からは培地を毎日交換した。５日間培養した後、抵抗値が一定値に到達した（２００Ω・ｃｍ²）ため、細胞を輸送実験に使用することができた。

２．３ ＭＤＣＫ−ＭＤＲ１細胞単層の品質制御：
２．３．１ 経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定
電極をＤＭＥＭ培地に浸して２４時間平衡させた後、取り出し、７０％アルコールの中に１５分間浸して殺菌した。電極を室温にし、大気中で乾燥させた後、減菌ＤＭＥＭ媒体の中で１５分間平衡させた。実験では、電極の両端を、２４ウエルのミリセル培養プレートの上部と下部のウエルに順番に挿入し、各ウエルのランダムな位置で抵抗値を３回求め、その抵抗値を記録した。その一方で、ブランクにしたウエルの抵抗値も求めた。経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）は、以下の式に従って計算した。

ただしＲ_tは測定された抵抗値であり；Ｒ₀はブランクにしたウエルの抵抗値であり；Ｓは実効フィルム面積である。

２．３．２ 陽性対照化合物：
陽性対照化合物としてのローダミン１２３（Ｒｈｏ−１２３）を、ＨＢＳＳを用いて５マイクロモル／ｌに希釈し、実験の前に各ウエルから培地を除去した。細胞を３７℃のＨＢＳＳを用いて２回洗浄した後、３７℃にした培養物インキュベータの中でインキュベートした。そのとき、Ｒｈｏ−１２３を上部のウエルに添加し、ＨＢＳＳを下部のウエルに添加した。定温振盪装置の中でインキュベートし、下部ウエルからの溶液を各時点（０分、３０分、９０分、１２０分）に回収し、あとで使用するため−２０℃で保管した。下部ウエルまで透過したＲｈｏ−１２３の量を蛍光分光光度計によって求めた。そのとき発光波長は４３０ｎｍであり、励起波長は５３０ｎｍであった。この実験では、Ｒｈｏ−１２３のＰ_app値が論文で報告されている値と一致した。

２．４ 薬輸送実験
実験の前に、細胞を播種したミリセルを適度の時間３７℃のＨＢＳＳに浸した後、ミリセルを軽く洗浄して細胞表面に付着した物質を除去した。

キャビティ表面から底面への透過率：薬を含有する０．３５ｍｌのＨＢＳＳを先端（ＡＰ）に添加し、１．２ｍｌのブランクＨＢＳＳを基底外側（ＢＬ）に添加した。ミリセルを振盪装置の中で３７℃にして５０ｒｐｍで振盪し、５０μｌのサンプルを０分、３０分、９０分、１２０分の各時点で下部ウエルから回収し、同体積のブランクＨＢＳＳを補足した。各濃度につき３つのウエルを用意し、サンプルに内部標準溶液（５０μｌ）と酢酸エチル（３５０μｌ）を正確に添加した。この混合物を振盪しながら均一に混合し、１２０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清（３００μｌ）を蒸発させて乾燥させ、５０μｌのアセトニトリルに再度溶かした。得られた１０μｌの溶液を用いて測定した。

底面からキャビティ表面への透過率：薬を基底外側（ＢＬ）に添加し、ＨＢＳＳを先端（ＡＰ）に添加し、他の工程は、キャビティ表面から底面への透過率を求める実験と同じであった。

薬の見かけの透過係数（Ｐ_app）は、薬が細胞単層を通過する能力と、薬の吸収速度および吸収の程度を反映している。それは、以下の式：

に従って計算することができる。ここにＱは、期間ｔに透過した薬の量を表わし、Ａは、細胞の表面積と、このモデルにおける支持フィルムの面積（０．６ｃｍ²）を表わしていて、Ｃ₀は、初期濃度を表わす。Ｐ_appはｃｍ／秒を単位として表記する。

２．５ サンプルの測定
ＬＣ／ＭＳを用いて測定することにより、標準曲線（５０ｎＭ〜１００００ｎＭ）を利用して各サンプルの濃度を定量した。

３．実験結果
化合物の見かけの透過係数の測定結果を表４に示す。

表４からわかるように、本発明の化合物は、血液−脳関門を通過する能力に関して化合物５よりも優れており、化合物６と比べると同等以上であった。化合物７、２３、２８は、化合物６と比べてＰ_app値が約７％大きかった。これらの結果は、本発明の化合物が血液−脳関門を通過する優れた能力を持っていたことを示している。

本発明の実施態様を詳細に説明してきたが、当業者であれば、開示したあらゆる教示内容や詳細は、修正したり改変したりできることと、そのような改変はすべて本発明の保護範囲に入ることが理解できよう。本発明の範囲は、請求項とそのあらゆる等価物によって規定される。

Claims (6)

1. 以下の：
   

   

   からなる群から選ばれる化合物、またはその医薬として許容される塩又は溶媒和物。
2. 請求項１に記載の化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物を含む医薬組成物。
3. 医薬として許容可能な１種類以上の基剤および／または賦形剤をさらに含む、請求項２に記載の前記医薬組成物。
4. 請求項１に記載の化合物、またはその医薬として許容可能な塩または溶媒和物を含む、対象における神経変性疾患、または身体外傷によって起こるニューロパチー、または関連疾患によって起こるニューロパチーの予防および／または治療のための医薬組成物。
5. 以下の：
   （１） 前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、及び脳脊髄多発性硬化症からなる群から選択され；
   （２） 前記身体外傷が、熱損傷、寒冷損傷、物理的損傷、電気的損傷からなる群から選択され；
   （３） 前記関連疾患が、後天性免疫不全症、糖尿病、脳卒中からなる群から選択され；そして
   （４）前記対象が、哺乳動物である、請求項４に記載の医薬組成物。
6. 前記対象がヒトである、請求項４又は５に記載の医薬組成物。