JP6842093B2 - Learning memory enhancer - Google Patents
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Description
本発明は、プラズマローゲンを含む学習記憶能力増強剤に関する。 The present invention relates to a learning memory capacity enhancer containing plasmalogen.
プラズマローゲンはグリセロリン脂質の1種であり、ヒトにおいては、神経、心血管、
免疫系などに多く存在することが知られている。さらに、プラズマローゲンは、細胞核や
シナプス間隙にも存在することが知られており、プラズマローゲンは神経活動において広
範に機能していることが示唆されている。
Plasmalogen is a type of glycerophospholipid, and in humans, nerves, cardiovascular,
It is known that it is abundant in the immune system. Furthermore, plasmalogens are also known to be present in cell nuclei and synaptic clefts, suggesting that plasmalogens function extensively in neural activity.
これまでに、プラズマローゲンの機能として、脳神経細胞新生作用(特許文献1)、抗
中枢神経系炎症作用(特許文献2)などが明らかにされている。
So far, the functions of plasmalogen have been clarified, such as a cerebral nerve cell renewal action (Patent Document 1) and an anti-central nervous system inflammatory action (Patent Document 2).
本発明は、プラズマローゲンの新たな用途を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a new use of plasmalogen.
本発明者らは、驚くべきことに、プラズマローゲンが学習記憶能力増強作用を有するこ
とを見出し、さらに研究を重ねることにより本発明を完成させるに至った。
Surprisingly, the present inventors have found that plasmalogen has a learning and memory ability-enhancing effect, and have completed the present invention through further research.
即ち、本発明は、代表的には以下の項に記載の学習記憶能力増強剤を提供するものであ
る。
[項1]
プラズマローゲンを含む、学習記憶能力増強剤。
[項2]
前記プラズマローゲンが、生体組織から抽出されたプラズマローゲンである、請求項1に
記載の学習記憶能力増強剤。
[項3]
前記生体組織が、鳥組織である、請求項2に記載の学習記憶能力増強剤。
[項4]
前記プラズマローゲンが、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲ
ンを含む、請求項1〜3のいずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
[項5]
前記プラズマローゲンの90質量%以上が、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリ
ンプラズマローゲンである、請求項4に記載の学習記憶能力増強剤。
[項6]
前記プラズマローゲンに含有される(エタノールアミンプラズマローゲン:コリンプラズ
マローゲン)の質量比が、(1:5)〜(5:1)である、請求項4又は5に記載の学習
記憶能力増強剤。
[項7]
経口剤である、請求項1〜6のいずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
[項8]
健常な哺乳動物に対して投与されるように用いられることを特徴とする、請求項1〜7の
いずれかに記載の学習記憶能力増強剤。
That is, the present invention typically provides the learning memory ability enhancing agent described in the following section.
[Item 1]
A learning memory enhancer containing plasmalogen.
[Item 2]
The learning memory ability enhancer according to claim 1, wherein the plasmalogen is a plasmalogen extracted from a living tissue.
[Item 3]
The learning memory ability enhancer according to claim 2, wherein the living tissue is a bird tissue.
[Item 4]
The learning memory ability enhancer according to any one of claims 1 to 3, wherein the plasmalogen contains ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen.
[Item 5]
The learning memory ability enhancer according to claim 4, wherein 90% by mass or more of the plasmalogen is ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen.
[Item 6]
The learning memory ability enhancer according to claim 4 or 5, wherein the mass ratio of (ethanolamine plasmalogen: choline plasmalogen) contained in the plasmalogen is (1: 5) to (5: 1).
[Item 7]
The learning memory ability enhancing agent according to any one of claims 1 to 6, which is an oral preparation.
[Item 8]
The learning memory capacity enhancer according to any one of claims 1 to 7, wherein the learning memory enhancing agent is used so as to be administered to a healthy mammal.
本発明によれば、学習記憶能力を増強させることができる。 According to the present invention, the learning memory ability can be enhanced.
以下、本発明について詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
本発明の学習記憶能力増強剤は、プラズマローゲンを含有する。 The learning memory ability enhancer of the present invention contains plasmalogen.
プラズマローゲンとは、通常、グリセロール骨格の1位(sn−1位)にビニルエーテ
ル結合を介した長鎖アルケニル基をもつグリセロリン脂質をいう。以下にプラズマローゲ
ンの一般式を示す。
Plasmalogen usually refers to a glycerophospholipid having a long-chain alkenyl group mediated by a vinyl ether bond at the 1-position (sn-1-position) of the glycerol skeleton. The general formula of plasmalogen is shown below.
[式中、R1及びR2は脂肪族炭化水素基を表す。R1は通常、炭素数1〜20の脂肪
族炭化水素基であり、例えば、ドデシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデ
シル基、イコサニル基等が挙げられる。R2は通常、脂肪酸残基由来の脂肪族炭化水素基
であり、例えば、オクタデカジエノイル基、オクタデカトリエノイル基、イコサテトラエ
ノイル基、ドコサテトラエノイル基、ドコサペンタエノイル基、ドコサヘキサエノイル基
等が挙げられる。また、式中、Xは極性基を表す。Xは好ましくは、エタノールアミン、
コリン、セリン、イノシトール、又はグリセロールである。]
[In the formula, R 1 and R 2 represent aliphatic hydrocarbon groups. R 1 is usually an aliphatic hydrocarbon group having 1 to 20 carbon atoms, and examples thereof include a dodecyl group, a tetradecyl group, a hexadecyl group, an octadecyl group, and an icosanyl group. R 2 is usually an aliphatic hydrocarbon group derived from a fatty acid residue, for example, an octadecadienoyl group, an octadecaterienoyl group, an icosatetetraenoyl group, a docosatetraenoyl group, a docosapentaenoyl group, Examples thereof include a docosahexaenoyl group. Further, in the formula, X represents a polar group. X is preferably ethanolamine,
It is choline, serine, inositol, or glycerol. ]
特に、上記式中、Xがエタノールアミンであるエタノールアミンプラズマローゲン、及
びXがコリンであるコリンプラズマローゲンは、自然界に広く存在するプラズマローゲン
である。
In particular, in the above formula, ethanolamine plasmalogen in which X is ethanolamine and choline plasmalogen in which X is choline are plasmalogens widely present in nature.
本発明に用いるプラズマローゲンは、生体組織から抽出されるものが好ましい。生体組
織とは、生物におけるプラズマローゲンを含有する組織をいう。プラズマローゲンを抽出
するために用いる生物としては、例えば、動物及び微生物が挙げられる。微生物としては
嫌気性細菌が好ましく、例えば、腸内細菌のAcidaminococcaceae科の
細菌などは特に好ましい。なお、細菌の場合、「生体組織」は細菌そのものである。動物
としては、鳥類、哺乳類、魚類、貝類等が好ましい。哺乳類としては、供給安定性及び安
全性の観点から家畜や家禽が好ましく、例えば、牛、豚、馬、羊、山羊、鳥類等が挙げら
れる。哺乳類の場合、プラズマローゲンを含有する組織としては、主に、皮膚、脳、腸、
心臓、生殖器等が挙げられ、これらの組織からプラズマローゲンを抽出することができる
。また、鳥類としては、鶏、家鴨、鶉、鴨、雉、七面鳥等が挙げられる。入手のし易さ、
コスト面、及び口にすることに対する抵抗感等も考慮すると、鶏が特に好ましい。また、
鳥組織としては、特に制限されないが、例えば、鳥肉(特に、鳥ムネ肉)、鳥皮、鳥の内
臓等が好ましい。なお、1又は複数種の生物の異なる組織を2種以上組み合わせてもよい
。
The plasmalogen used in the present invention is preferably one extracted from a living tissue. Living tissue refers to tissue containing plasmalogen in an organism. Organisms used to extract plasmalogens include, for example, animals and microorganisms. As the microorganism, anaerobic bacteria are preferable, and for example, bacteria of the family Acidaminococcaceae, which are intestinal bacteria, are particularly preferable. In the case of bacteria, the "living tissue" is the bacterium itself. As the animal, birds, mammals, fish, shellfish and the like are preferable. As mammals, livestock and poultry are preferable from the viewpoint of supply stability and safety, and examples thereof include cattle, pigs, horses, sheep, goats, and birds. In the case of mammals, the tissues containing plasmalogen are mainly skin, brain, intestine, and so on.
Examples include the heart and genital organs, and plasmalogens can be extracted from these tissues. Examples of birds include chickens, domestic ducks, quails, ducks, pheasants, and turkeys. Easy to obtain,
Chickens are particularly preferable in consideration of cost and resistance to eating. Also,
The bird tissue is not particularly limited, but for example, chicken meat (particularly bird breast meat), bird skin, bird internal organs and the like are preferable. In addition, two or more kinds of different tissues of one or more kinds of organisms may be combined.
本発明では、生体組織から抽出されたプラズマローゲンとして、鳥組織から抽出された
プラズマローゲンを用いることが特に好ましい。中でも、従来から食用とされてきた鳥(
食鳥)は、安全性が確認されており、安定供給もし易いため、好適である。中でも、鶏が
最適である。
In the present invention, it is particularly preferable to use plasmalogen extracted from bird tissue as the plasmalogen extracted from living tissue. Among them, birds that have traditionally been edible (
Eating birds) are suitable because their safety has been confirmed and stable supply is easy. Among them, chicken is the best.
生体組織からプラズマローゲンを抽出する方法としては、プラズマローゲンが抽出(及
び必要に応じて精製)できる限り特に限定されないが、簡便さ及びコスト等の観点からは
、後述する方法により抽出及び精製を行うことが好ましい。また、後述する抽出及び精製
の方法は、生体組織に含まれるジアシル型グリセロリン脂質を分解及び除去でき、得られ
るプラズマローゲンの純度をより一層高めることができるため、好ましい。
The method for extracting plasmalogen from living tissue is not particularly limited as long as plasmalogen can be extracted (and purified as necessary), but from the viewpoint of convenience and cost, extraction and purification are performed by the method described later. Is preferable. Further, the extraction and purification methods described later are preferable because they can decompose and remove diacyl-type glycerophospholipids contained in living tissues and further increase the purity of the obtained plasmalogen.
具体的には、プラズマローゲンの抽出及び精製は、(1)生体組織からプラズマローゲ
ンを抽出する工程、(2)抽出物中のプラズマローゲンを精製する工程(具体的には、中
性脂質及び/又はスフィンゴ脂質を除去する工程)、及び(3)抽出物を加水分解処理後
、精製する工程(具体的には、ジアシル型グリセロリン脂質を加水分解した後、遊離脂肪
酸及びリゾリン脂質を除去する工程)を含む方法で行うことができる。ここで、工程(1
)はプラズマローゲンの抽出工程であり、工程(2)及び(3)はプラズマローゲンの精
製工程である。よって、工程(2)及び(3)は任意の工程であり、これらの工程はそれ
ぞれ含まれていなくてもよいが、精製により濃縮されたプラズマローゲンを用いる方が好
ましいため、これらの工程のうち少なくとも1つが含まれている方が好ましい。特に、工
程(1)〜(3)を全て含む方法により抽出及び精製されたプラズマローゲンを含む学習
記憶能力増強剤はその効果がより優れるため好ましい。
Specifically, the extraction and purification of plasmalogen includes (1) a step of extracting plasmalogen from living tissue, and (2) a step of purifying plasmalogen in the extract (specifically, neutral lipid and /). Alternatively, a step of removing sphingolipids) and (3) a step of hydrolyzing the extract and then purifying it (specifically, a step of hydrolyzing diacyl-type glycerophospholipids and then removing free fatty acids and lysophospholipids). It can be done by a method including. Here, the process (1
) Is a plasmalogen extraction step, and steps (2) and (3) are plasmalogen purification steps. Therefore, steps (2) and (3) are arbitrary steps, and these steps may not be included, but it is preferable to use plasmalogen concentrated by purification, and therefore, among these steps, It is preferable that at least one is contained. In particular, a learning memory ability enhancer containing plasmalogen extracted and purified by a method including all of steps (1) to (3) is preferable because its effect is more excellent.
なお、以下、「生体組織から抽出されたプラズマローゲン」を「生体組織抽出プラズマ
ローゲン」と記載することがある。また、「鳥組織から抽出されたプラズマローゲン」を
「鳥組織抽出プラズマローゲン」と記載することがある。
Hereinafter, "plasmalogen extracted from living tissue" may be referred to as "plasmalogen extracted from living tissue". In addition, "plasmalogen extracted from bird tissue" may be described as "plasmalogen extracted from bird tissue".
プラズマローゲンを抽出する際に用いる溶媒としては、水、有機溶媒、又は含水有機溶
媒が好ましい。有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール
、ヘキサン等、又はこれらからなる群から選択される少なくとも2種以上の混合溶媒が挙
げられる。含水有機溶媒の含水率は特に制限されず、例えば、含水率が10〜90%(v
/v)である含水有機溶媒が挙げられる。これらの中でも、エタノール又は含水エタノー
ルが好ましい。また、抽出に供される生体組織は、生であってもよいし、予め何らかの処
理がなされたものであってもよい。例えば、予め乾燥処理及び/又は脱油処理がなされた
ものであってもよい。
As the solvent used for extracting the plasmalogen, water, an organic solvent, or a hydrous organic solvent is preferable. Examples of the organic solvent include methanol, ethanol, isopropanol, hexane, and the like, or at least two or more mixed solvents selected from the group consisting of these. The water content of the water-containing organic solvent is not particularly limited, and for example, the water content is 10 to 90% (v).
A hydrous organic solvent of / v) can be mentioned. Among these, ethanol or hydrous ethanol is preferable. Further, the living tissue to be extracted may be raw or may have been subjected to some kind of treatment in advance. For example, it may be previously dried and / or deoiled.
抽出処理方法としては特に制限されず、例えば、冷浸、温浸等の浸漬法やパーコレーシ
ョン法等により抽出処理を行うことができる。好ましい例としては、鶏ムネ肉1kgに対
して1〜10L、好ましくは1〜6L、より好ましくは2〜4Lのエタノールを加え、3
0℃以上で60分以上、好ましくは40℃以上で180分以上、静置又は攪拌を行う方法
が挙げられる。
The extraction treatment method is not particularly limited, and for example, the extraction treatment can be performed by a dipping method such as cold immersion or warm immersion, a percolation method, or the like. As a preferred example, 1 to 10 L, preferably 1 to 6 L, more preferably 2 to 4 L of ethanol is added to 1 kg of chicken breast meat, and 3
Examples thereof include a method of allowing to stand or stir at 0 ° C. or higher for 60 minutes or longer, preferably 40 ° C. or higher for 180 minutes or longer.
得られた有機溶媒抽出液は、濃縮乾固した後、加水分解処理工程に供されることが好ま
しい。濃縮乾固は公知の方法によって行うことができ、例えば、エバポレーターを用いて
行うことができる。このようにして得られた有機溶媒抽出物(有機溶媒抽出乾固物)には
、プラズマローゲン等の脂質が濃縮されて含まれている。
The obtained organic solvent extract is preferably concentrated to dryness and then subjected to a hydrolysis treatment step. Concentrated dryness can be carried out by a known method, for example, using an evaporator. The organic solvent extract (organic solvent-extracted dry matter) thus obtained contains a concentrated lipid such as plasmalogen.
さらに、当該有機溶媒抽出乾固物を、例えば、アセトンで遠心処理後、沈殿を回収し、
さらにヘキサン及びアセトンを混合した溶媒(ヘキサン/アセトン混合溶媒)で遠心処理
後、液層を回収することが好ましい。限定的な解釈を望むものではないが、アセトンで遠
心処理後、沈殿を回収することで中性脂質を除去することができ、ヘキサン/アセトン混
合溶媒で遠心処理後、液層を回収することでスフィンゴ脂質を除去することができる。
Further, the organic solvent-extracted dry matter is centrifuged with, for example, acetone, and then the precipitate is recovered.
Further, it is preferable to recover the liquid layer after centrifugation with a solvent (hexane / acetone mixed solvent) in which hexane and acetone are mixed. Although not limited interpretation is desired, neutral lipids can be removed by recovering the precipitate after centrifugation with acetone, and by recovering the liquid layer after centrifugation with a mixed solvent of hexane / acetone. Sphingolipids can be removed.
このようにして得られた液層を濃縮乾固することによって、リン脂質濃縮乾固物が得ら
れる。当該リン脂質濃縮乾固物を加水分解処理工程に供し、ジアシル型グリセロリン脂質
を加水分解することで、プラズマローゲンを好ましく濃縮することができる。
By concentrating and drying the liquid layer thus obtained, a phospholipid-concentrated dry product can be obtained. Plasmalogen can be preferably concentrated by subjecting the phospholipid-concentrated dry matter to a hydrolysis treatment step and hydrolyzing the diacyl-type glycerophospholipid.
加水分解処理としては、例えば、ホスホリパーゼA1(PLA1)による処理が挙げら
れる。PLA1は、ジアシル型グリセロリン脂質において、sn−1位の脂肪酸とグリセ
リン骨格との間のエステル結合を特異的に加水分解する。加水分解されたジアシル型グリ
セロリン脂質は、遊離脂肪酸及びリゾリン脂質へと分解される。一方、プラズマローゲン
は、sn−1位がビニルエーテル結合であるため、PLA1の作用を受けない。そのため
、PLA1で処理することにより、プラズマローゲンを分解することなく、ジアシル型グ
リセロリン脂質を特異的に分解することができる。プラズマローゲンと共存しているジア
シル型グリセロリン脂質をPLA1によりリゾ体へと変換し、遊離脂肪酸及びリゾリン脂
質を除去することにより、プラズマローゲンを精製することができる。遊離脂肪酸及びリ
ゾリン脂質の除去は、例えば、アセトン及びヘキサンを用いた分配により行うことができ
る。
Examples of the hydrolysis treatment include treatment with phospholipase A1 (PLA1). PLA1 specifically hydrolyzes the ester bond between the fatty acid at position sn-1 and the glycerin skeleton in diacyl-type glycerophospholipids. The hydrolyzed diacyl-type glycerophospholipid is decomposed into free fatty acid and lysophospholipid. On the other hand, plasmalogen is not affected by PLA1 because the sn-1 position is a vinyl ether bond. Therefore, by treating with PLA1, diacyl-type glycerophospholipids can be specifically decomposed without decomposing plasmalogen. Plasmalogen can be purified by converting the diacyl-type glycerophospholipid coexisting with plasmalogen into a lyso form by PLA1 and removing free fatty acids and lysophospholipids. Removal of free fatty acids and lysophospholipids can be carried out, for example, by partitioning with acetone and hexane.
PLA1は、上述した作用が得られるものであれば、その由来等は特に制限されない。
例えば、Aspergillus orizae由来のPLA1が挙げられる。また、P
LA1は市販品を用いてもよく、例えば、三菱化学フーズ株式会社等から購入することが
できる。また、PLA1の使用量は、加水分解処理に供される有機溶媒抽出乾固物量に応
じて適宜設定することができる。例えば、有機溶媒抽出乾固物1mgあたり、0.2〜2
00unit程度、好ましくは2〜200unit程度とすることができる。なお、1u
nitは、1分間あたり1μmolの基質(ジアシル型グリセロリン脂質)を変化させる
量(1μmol/min)を意味する。
The origin of PLA1 is not particularly limited as long as it can obtain the above-mentioned action.
For example, PLA1 derived from Aspergillus oryzae can be mentioned. Also, P
LA1 may be a commercially available product, and can be purchased from, for example, Mitsubishi Chemical Foods Co., Ltd. Further, the amount of PLA1 used can be appropriately set according to the amount of the organic solvent-extracted dry matter to be subjected to the hydrolysis treatment. For example, 0.2 to 2 per 1 mg of organic solvent-extracted dry matter.
It can be about 00 units, preferably about 2 to 200 units. In addition, 1u
Nit means an amount (1 μmol / min) that changes 1 μmol of the substrate (diacyl-type glycerophospholipid) per minute.
また、使用するバッファーも使用するPLA1の種類に応じて適宜設定することができ
る。バッファーとしては、例えば、0.1Mクエン酸+HClバッファー(pH4.5)
などが挙げられる。バッファーの使用量は、酵素反応を進行させることができる量であれ
ば特に制限されない。例えば、有機溶媒抽出乾固物1gあたり、1〜30mL程度、好ま
しくは5〜15mL程度とすることができる。なお、PLA1は、有機溶媒抽出乾固物に
バッファーを加えて溶解させた後に加えればよい。
Further, the buffer to be used can be appropriately set according to the type of PLA1 to be used. As a buffer, for example, 0.1 M citric acid + HCl buffer (pH 4.5)
And so on. The amount of buffer used is not particularly limited as long as it can allow the enzymatic reaction to proceed. For example, it can be about 1 to 30 mL, preferably about 5 to 15 mL per 1 g of the organic solvent-extracted dry matter. PLA1 may be added after adding a buffer to the dry solid product extracted with an organic solvent to dissolve it.
さらに、反応条件も適宜設定することができ、好ましくは50℃で攪拌しながら、1〜
2時間反応させる。
Further, the reaction conditions can be appropriately set, preferably 1 to 1 with stirring at 50 ° C.
Allow to react for 2 hours.
なお、PLA1には失活処理を施してもよい。例えば、加水分解反応後、温度を70℃
程度まで上昇させることにより、PLA1の失活処理を行うことができる。
The PLA1 may be deactivated. For example, after the hydrolysis reaction, the temperature is changed to 70 ° C.
By raising it to a certain degree, PLA1 can be deactivated.
上記した方法により、ジアシル型グリセロリン脂質が分解された処理液(加水分解処理
液)を得ることができる。当該加水分解処理液に、例えば、2〜3倍量程度のヘキサンを
加え、遠心処理後、上層(ヘキサン層)を回収することで、酵素バッファー及び酵素タン
パク質を除去することができる(酵素バッファー及び酵素タンパク質は下層の水層に溶解
し、ヘキサン層には含まれない。)。
By the above method, a treatment liquid (hydrolysis treatment liquid) in which diacyl-type glycerophospholipids are decomposed can be obtained. The enzyme buffer and enzyme protein can be removed by adding, for example, about 2 to 3 times the amount of hexane to the hydrolysis treatment solution, centrifuging, and then recovering the upper layer (hexane layer) (enzyme buffer and hexane layer). The enzyme protein dissolves in the underlying aqueous layer and is not contained in the hexane layer).
さらに、プラズマローゲンは、ヘキサンには溶解するが、アセトンに対しては難溶性で
あるため、これらの溶媒及び水を適宜組み合わせて分配を行い、さらに水又は水溶液によ
り溶液分配することにより、リゾリン脂質を除去してプラズマローゲンを得ることができ
る。即ち、アセトンによりリン脂質以外の中性脂質を除去することができ、液−液分配に
よりプラズマローゲンとリゾリン脂質を分離することができる。
Furthermore, since plasmalogen is soluble in hexane but sparingly soluble in acetone, lysophospholipids are distributed by appropriately combining these solvents and water, and then distributing the solution with water or an aqueous solution. Can be removed to obtain plasmalogen. That is, neutral lipids other than phospholipids can be removed with acetone, and plasmalogen and lysophospholipids can be separated by liquid-liquid partitioning.
なお、以上の記載から解るように、上記工程(1)〜(3)をより具体的に記載すると
、例えば、以下のようになる。
(1)生体組織をエタノール又は含水エタノールで抽出処理する工程、
(2)工程(1)で得られた抽出物をアセトンで遠心処理後、沈殿を回収し、さらにヘキ
サン/アセトン混合溶媒で遠心処理後、液層を回収する工程、及び
(3)工程(2)で回収した液をホスホリパーゼA1(PLA1)により処理する工程(
さらに、必要に応じて、アセトン及びヘキサンを用いた分配により、遊離脂肪酸及びリゾ
リン脂質を除去する工程)。
As can be seen from the above description, the above steps (1) to (3) can be described more specifically, for example, as follows.
(1) Step of extracting biological tissue with ethanol or hydrous ethanol,
(2) A step of centrifuging the extract obtained in step (1) with acetone, recovering the precipitate, further centrifuging with a hexane / acetone mixed solvent, and then recovering the liquid layer, and step (3) (2). ) Is treated with phospholipase A1 (PLA1) (
Further, if necessary, a step of removing free fatty acids and lysophospholipids by partitioning with acetone and hexane).
上記の方法により抽出及び精製された生体組織抽出プラズマローゲンは、本発明の学習
記憶能力増強剤の有効成分として好ましく用いることができる。また、プラズマローゲン
を含有する生体組織から抽出された組成物(即ち、プラズマローゲン含有生体組織抽出物
)も、本発明の学習記憶能力増強剤の有効成分として好ましく用いることができる。
The biological tissue extract plasmalogen extracted and purified by the above method can be preferably used as an active ingredient of the learning memory ability enhancing agent of the present invention. Further, a composition extracted from a plasmalogen-containing biological tissue (that is, a plasmalogen-containing biological tissue extract) can also be preferably used as an active ingredient of the learning memory ability enhancing agent of the present invention.
生体組織抽出プラズマローゲンは、主にエタノールアミンプラズマローゲン及び/又は
コリンプラズマローゲンを含む。特に制限されないが、生体組織抽出プラズマローゲンは
、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンの含有量が、50質量
%以上であることが好ましく、60質量%以上であることがより好ましく、70質量%以
上であることがさらに好ましく、80質量%以上であることがよりさらに好ましく、90
質量%以上であることが特に好ましい。
Living tissue extraction plasmalogens mainly include ethanolamine plasmalogens and / or choline plasmalogens. Although not particularly limited, the plasmalogen extracted from biological tissue has a content of ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen of preferably 50% by mass or more, more preferably 60% by mass or more, and 70% by mass or more. Is even more preferable, and 80% by mass or more is even more preferable, 90% by mass.
It is particularly preferable that it is mass% or more.
また、特に制限されないが、生体組織抽出プラズマローゲンにおける、エタノールアミ
ンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンの質量比(エタノールアミンプラズマロ
ーゲン:コリンプラズマローゲン)は、(1:5)〜(1:0)であることが好ましく、
(1:5)〜(1:0.01)であることがより好ましく、(1:5)〜(5:1)であ
ることがさらに好ましく、(1:3)〜(3:1)であることがよりさらに好ましく、(
1:2)〜(2:1)であることがいっそう好ましく、(1:1.5)〜(1.5:1)
であることが特に好ましい。
Further, although not particularly limited, the mass ratio of ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen (ethanolamine plasmalogen: choline plasmalogen) in the plasmalogen extracted from biological tissue is (1: 5) to (1: 0). Is preferable
It is more preferably (1: 5) to (1: 0.01), further preferably (1: 5) to (5: 1), and (1: 3) to (3: 1). It is even more preferable to have (
It is more preferably 1: 2) to (2: 1), and (1: 1.5) to (1.5: 1).
Is particularly preferable.
なお、脳に存在する主要なプラズマローゲンはエタノールアミンプラズマローゲンであ
り、コリンプラズマローゲンは脳内にほとんど存在しないことが知られている。そのため
、コリンプラズマローゲンを含む生体組織抽出プラズマローゲンが、学習記憶能力の増強
に好ましく用いることができるのは、全く意外なことであるといえる。
It is known that the main plasmalogen present in the brain is ethanolamine plasmalogen, and choline plasmalogen is almost absent in the brain. Therefore, it can be said that it is quite surprising that the biological tissue-extracted plasmalogen containing choline plasmalogen can be preferably used for enhancing the learning and memory ability.
また、上記した、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンの含
有量及び質量比は、例えば、生体組織抽出プラズマローゲンを高速液体クロマトグラフィ
ー(HPLC)で解析することにより算出ことができる。具体的には、HPLCにおいて
、蒸発光散乱検出(ELSD:Evaporative Light Scatteri
ng Detector)により(即ち、HPLC−ELSDにより)、クロマトグラム
を得、当該クロマトグラムにおけるエタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズ
マローゲンを示すピーク面積がクロマトグラム全体のピーク面積の何%にあたるかを算出
することで含有量を算出することができる。また、当該クロマトグラムにおけるエタノー
ルアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンを示すそれぞれのピーク面積の比
を求めることで質量比を求めることができる。ELSDでは、類似した構造を有する物質
であれば同様のエリアレスポンスを示すためである。なお、コリン型は電気的に中性であ
る一方、エタノールアミン型はリン酸のマイナス電荷を有し弱酸性であることから、例え
ば、溶媒として酢酸及びトリエチルアミンを用いて酸性脂質をチャージさせて分析するこ
とが好ましい。チャージすることで、より同様のエリアレスポンスを示し得るからである
。
Further, the above-mentioned content and mass ratio of ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen can be calculated by, for example, analyzing the plasmalogen extracted from biological tissue by high performance liquid chromatography (HPLC). Specifically, in HPLC, evaporation light scattering detection (ELSD: Evaporative Light Scatteri)
To obtain a chromatogram by (ng Detector) (ie, by HPLC-ELSD) and calculate what percentage of the peak area of the entire chromatogram is the peak area indicating ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen in the chromatogram. The content can be calculated with. Further, the mass ratio can be obtained by obtaining the ratio of the peak areas indicating ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen in the chromatogram. This is because ELSD shows a similar area response if the substances have a similar structure. The choline type is electrically neutral, while the ethanolamine type has a negative charge of phosphoric acid and is weakly acidic. Therefore, for example, acetic acid and triethylamine are used as solvents to charge an acidic lipid for analysis. It is preferable to do so. This is because by charging, a more similar area response can be shown.
また、例えば、LC−MS等によりエタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラ
ズマローゲンの量を定量し、含有量及び質量比を算出こともできる。
Further, for example, the amounts of ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen can be quantified by LC-MS or the like, and the content and mass ratio can be calculated.
本発明の学習記憶能力増強剤は、食品分野において好ましく用いることができる。例え
ば、本発明の学習記憶能力増強剤は、飲食品、食品添加剤等として用いることができる。
The learning memory ability enhancer of the present invention can be preferably used in the food field. For example, the learning memory ability enhancer of the present invention can be used as a food or drink, a food additive, or the like.
本発明の学習記憶能力増強剤を飲食品として用いる場合、当該飲食品は、プラズマロー
ゲン、及び食品衛生学上許容される基剤、担体、添加剤、その他飲食品として利用される
成分や材料等が適宜配合されたものである。このような飲食品としては、例えば、プラズ
マローゲンを含む、加工食品、飲料、健康食品(栄養機能食品、特定保健用食品等)、栄
養補助食品(サプリメント)、病者用食品(病院食、病人食、介護食等)などの食品組成
物を挙げることができる。
When the learning memory ability enhancer of the present invention is used as a food or drink, the food or drink includes plasmalogen, a base, a carrier, an additive that is permitted in terms of food hygiene, and other components and materials used as the food and drink. Is appropriately blended. Such foods and drinks include, for example, processed foods, beverages, health foods (foods with nutritional function, foods for specified health use, etc.), dietary supplements (supplements), foods for the sick (hospital foods, sick people, etc.) containing plasmalogen. Food compositions such as foods, nursing foods, etc.) can be mentioned.
また、特に制限されるものではないが、当該飲食品に含まれるプラズマローゲンが、家
畜や家禽等の組織から抽出されたものである場合には、例えば、当該プラズマローゲンが
配合されたハンバーグ、ミートボール、ウインナー、鳥そぼろ、鳥皮チップス等の加工食
肉製品、及び加工された肉食品を含む健康食品(栄養機能食品、特定保健用食品等)、栄
養補助食品(サプリメント)、病者用食品等であることが好ましい。
Further, although not particularly limited, when the plasmalogen contained in the food or drink is extracted from tissues such as livestock and poultry, for example, a hamburger or meat containing the plasmalogen. Processed meat products such as balls, wieners, bird shavings, and chicken skin chips, health foods including processed meat foods (foods with functional nutrition, foods for specified health use, etc.), nutritional supplements (supplements), foods for the sick, etc. Is preferable.
また、プラズマローゲンを、例えば、粉末状にするなどして、飲料類(ジュース類等)
、菓子類(例えば、ガム、チョコレート、キャンディー、ビスケット、クッキー、おかき
、煎餅、プリン、杏仁豆腐等)、パン類、スープ類(粉末スープ等を含む)、加工食品等
の各種飲食品に配合したものであってもよい。
In addition, plasmalogen is made into powder, for example, to make beverages (juices, etc.).
, Confectionery (for example, gum, chocolate, candy, biscuits, cookies, okaki, rice crackers, pudding, almond tofu, etc.), breads, soups (including powdered soup, etc.), processed foods, etc. It may be a thing.
なお、本発明の学習記憶能力増強剤を、健康食品(栄養機能食品、特定保健用食品等)
、栄養補助食品(サプリメント)として用いる場合、これらを継続的に摂取し易くするよ
うにするために、例えば、顆粒、カプセル、錠剤(チュアブル錠等を含む)、飲料(ドリ
ンク剤)などの形態とすることが好ましい。中でも、摂取の簡便さの観点から、カプセル
又は錠剤の形態とすることがより好ましい。顆粒、カプセル、錠剤等の形態は、薬学的及
び/又は食品衛生学的に許容される担体等を用いて、常法に従って適宜調製することがで
きる。
In addition, the learning memory ability enhancer of the present invention is used as a health food (food with nutritional function, food for specified health use, etc.).
When used as a dietary supplement, in order to facilitate continuous ingestion of these, for example, in the form of granules, capsules, tablets (including chewable tablets), beverages (drinks), etc. It is preferable to do so. Above all, from the viewpoint of convenience of ingestion, it is more preferable to take the form of capsules or tablets. The forms of granules, capsules, tablets and the like can be appropriately prepared according to a conventional method using pharmaceutically and / or food hygiene-acceptable carriers and the like.
本発明の学習記憶能力増強剤を飲食品として用いる場合、当該飲食品におけるプラズマ
ローゲンの配合量は、学習記憶能力増強作用が発揮される量であれば特に制限されないが
、飲食品全量を基準として、0.0005〜100質量%程度であることが好ましく、0
.005〜90質量%程度がより好ましく、0.05〜80質量%程度であることがさら
に好ましい。
When the learning memory ability enhancing agent of the present invention is used as a food or drink, the amount of plasmalogen blended in the food or drink is not particularly limited as long as it exerts the learning and memory ability enhancing effect, but is based on the total amount of the food or drink. , 0.0005 to 100% by mass, preferably 0
.. It is more preferably about 005 to 90% by mass, and further preferably about 0.05 to 80% by mass.
本発明の学習記憶能力増強剤を飲食品として用いる場合、当該飲食品は、学習記憶能力
の増強のために好ましく用いることができる。換言すると、当該飲食品は、学習記憶能力
増強用の飲食品、好ましくは、学習記憶能力増強用の、健康食品、栄養機能食品、特定保
健用食品等として用いることができる。また、当該飲食品の摂取量、摂取期間や摂取対象
、当該飲食品に含まれるプラズマローゲンの測定方法については特に制限されない。
When the learning memory ability enhancer of the present invention is used as a food or drink, the food or drink can be preferably used for enhancing the learning and memory ability. In other words, the food or drink can be used as a food or drink for enhancing learning and memory ability, preferably as a health food, nutritionally functional food, food for specified health use or the like for enhancing learning and memory ability. In addition, the intake amount of the food and drink, the period and target of intake, and the method for measuring plasmalogen contained in the food and drink are not particularly limited.
摂取量は、摂取対象の年齢、摂取対象の健康状態、その他の条件等によって適宜設定す
ることができ、例えば、成人に対する一日あたりの摂取量が、1〜1000mg程度、好
ましくは10〜100mg程度となる量を目安とすることができる。また、摂取間隔につ
いては、例えば上記した量を摂取する場合、1日1回摂取してもよいし、複数回(好まし
くは2〜3回)に分けて摂取してもよい。
The intake amount can be appropriately set according to the age of the intake target, the health condition of the intake target, other conditions, etc. For example, the daily intake for an adult is about 1 to 1000 mg, preferably about 10 to 100 mg. Can be used as a guide. Regarding the intake interval, for example, when the above-mentioned amount is ingested, it may be ingested once a day, or may be ingested in a plurality of times (preferably 2 to 3 times).
本発明の学習記憶能力増強剤を食品添加剤として用いる場合、当該食品添加剤は、プラ
ズマローゲンそのものであってもよいし、プラズマローゲン及び食品衛生学上許容される
基剤、担体、添加剤や、その他食品添加剤として利用され得る成分や材料等が適宜配合さ
れた食品添加物用組成物であってもよい。
When the learning memory ability enhancer of the present invention is used as a food additive, the food additive may be plasmalogen itself, plasmalogen, a base, a carrier, an additive that is acceptable in terms of food hygiene, and the like. , Other ingredients and materials that can be used as food additives may be appropriately blended into the composition for food additives.
食品添加剤の形態としては特に制限されず、例えば、液状、粉末状、フレーク状、顆粒
状、ペースト状などのものが挙げられる。具体的には、調味料(例えば、醤油、ソース、
ケチャップ、ドレッシング等)、フレーク(ふりかけ)、焼肉のたれ、スパイス、ルーペ
ースト(例えば、カレールーペースト等)などを例示することができる。このような食品
添加剤は、常法に従って適宜調製することができる。
The form of the food additive is not particularly limited, and examples thereof include liquid, powder, flakes, granules, and pastes. Specifically, seasonings (eg, soy sauce, sauce, etc.
Examples include ketchup (dressing, etc.), flakes (sprinkle), grilled meat sauce, spices, roux paste (for example, curry roux paste, etc.). Such food additives can be appropriately prepared according to a conventional method.
本発明の学習記憶能力増強剤を食品添加剤として用いる場合、当該食品添加剤における
プラズマローゲンの配合量は、学習記憶能力増強作用が発揮される量であれば特に制限さ
れないが、食品添加剤全量を基準として、0.0005〜100質量%程度であることが
好ましく、0.005〜90質量%程度がより好ましく、0.05〜80質量%程度であ
ることがさらに好ましい。
When the learning memory ability enhancing agent of the present invention is used as a food additive, the amount of plasmalogen blended in the food additive is not particularly limited as long as it exerts the learning memory ability enhancing effect, but the total amount of the food additive. It is preferably about 0.0005 to 100% by mass, more preferably about 0.005 to 90% by mass, and even more preferably about 0.05 to 80% by mass.
なお、本発明の学習記憶能力増強剤を食品添加剤として用いる場合、当該食品添加剤は
、当該食品添加剤が添加された食品を食べることにより摂取される。なお、当該食品添加
剤の食品への添加は、食品の調理中又は製造中に行ってもよいし、調理又は製造済みの食
品を食べる直前又は食べながら行ってもよい。
When the learning memory ability enhancer of the present invention is used as a food additive, the food additive is ingested by eating a food to which the food additive is added. The food additive may be added to the food during cooking or production of the food, or may be performed immediately before or while eating the cooked or manufactured food.
上記した飲食品及び食品添加剤は、学習記憶能力の増強のために好ましく用いることが
できる。特に、学習記憶能力増強用の、健康食品、栄養機能食品、特定保健用食品等の飲
食品や、学習記憶能力増強作用を食品に付与するための食品添加剤として好ましく用いる
ことができる。
The above-mentioned foods and drinks and food additives can be preferably used for enhancing learning and memory ability. In particular, it can be preferably used as a food or drink such as a health food, a nutritionally functional food, or a food for specified health use for enhancing learning and memory ability, or as a food additive for imparting a learning and memory ability enhancing effect to food.
また、本発明は、上記した学習能力増強剤を対象に摂取させる工程を含む、学習記憶を
増強させる方法も提供する。
The present invention also provides a method for enhancing learning memory, which comprises a step of ingesting the above-mentioned learning ability enhancing agent to a subject.
摂取させる対象としては、哺乳動物であれば特に制限されず、ヒトのみならず、非ヒト
哺乳動物も含まれる。中でも、健常な哺乳動物に対して摂取させることが好ましい。なお
、本明細書において「健常な」とは、学習記憶能力が低下するような疾患、例えば、認知
症(アルツハイマー病、パーキンソン病等)などの疾患に罹患していないことを意味する
。また、健常なヒトに対して学習能力増強剤を摂取させる場合、これは、いわゆる医療行
為を指向するものではない。例えば、食事指導を謳った講習会やサロンなどで学習能力増
強を所望する人などに薦めたり、パッケージなどに学習能力の増強を所望する人に訴求す
る文章やイラスト等を表示したりすることなどが挙げられる。
The target to be ingested is not particularly limited as long as it is a mammal, and includes not only humans but also non-human mammals. Above all, it is preferable to feed it to healthy mammals. In addition, in this specification, "healthy" means not suffering from a disease such as dementia (Alzheimer's disease, Parkinson's disease, etc.) that deteriorates learning and memory ability. In addition, when a healthy human is ingested with a learning ability enhancer, this is not oriented toward so-called medical practice. For example, recommending to people who want to improve their learning ability at seminars and salons that offer dietary guidance, or displaying sentences and illustrations that appeal to people who want to improve their learning ability on packages, etc. Can be mentioned.
このように、本発明の学習記憶増強剤を上記した対象に摂取させることにより、当該対
象の学習記憶を増強させることができる。
In this way, by ingesting the learning memory enhancer of the present invention to the above-mentioned subject, the learning memory of the subject can be enhanced.
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は下記の例に限定され
るものではない。
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to the following examples.
生体組織抽出プラズマローゲンの調製
鳥組織である鶏ムネ肉を常法に従って採取し、約8mmのミンチへチョッピングし、微
生物制御のために加熱工程を経た後、これをチルド冷凍保存した。その後、常法により凍
結乾燥を行い、グラインダー処理により粉砕し、乾燥鶏ムネ肉粉末を得た。なお、乾燥鶏
ムネ肉粉末は、抽出に使用するまでは脱酸素剤と共に密封保存した。
Preparation of Living Tissue Extraction Plasmalogen Chicken breast meat, which is a bird tissue, was collected according to a conventional method, chopped into minced meat of about 8 mm, subjected to a heating step for microbial control, and then stored frozen in a chilled state. Then, it was freeze-dried by a conventional method and pulverized by a grinder treatment to obtain dried chicken breast meat powder. The dried chicken breast meat powder was sealed and stored together with an oxygen scavenger until it was used for extraction.
<有機溶媒抽出工程>
工程(1)
上述の方法により得られた乾燥鶏ムネ肉粉末1kgにエタノール4Lを加えて12時間
、40℃で攪拌・静置した後、抽出液を固形物と分離した。固形物には再度エタノール2
.5Lを加えて上記と同様の操作を行い、得られた抽出液を合わせて濾紙で濾過した後、
減圧乾燥して濃縮された抽出乾固物を得た。
<Organic solvent extraction process>
Process (1)
4 L of ethanol was added to 1 kg of dried chicken breast meat powder obtained by the above method, and the mixture was stirred and allowed to stand at 40 ° C. for 12 hours, and then the extract was separated from the solid matter. Ethanol 2 again for solids
.. Add 5 L and perform the same operation as above, combine the obtained extracts and filter with filter paper, and then
The extract was dried under reduced pressure to obtain a concentrated dry extract.
工程(2)
工程(1)で得られた抽出乾固物に水8mLを加えて攪拌及び遠心し、上層を除去する
ことにより沈殿を回収した。当該沈殿に、アセトン200mLを加えて攪拌及び4℃で遠
心し、沈殿を回収した。当該沈殿にさらにヘキサン/アセトン(7:3)混合溶媒100
mLを加えて攪拌及び遠心し、液層(プラズマローゲン含有画分)を回収した。液層は速
やかにロータリーエバポレーターで濃縮乾固して、濃縮乾固体物20gを得た。なお、遠
心は、3000rpm×10分で行い、アセトン単一及びヘキサン/アセトン混合溶媒を
用いた操作は4℃で、その他の操作は15℃で行った。
Process (2)
8 mL of water was added to the extracted dry matter obtained in step (1), and the mixture was stirred and centrifuged to remove the upper layer to recover the precipitate. To the precipitate, 200 mL of acetone was added, and the mixture was stirred and centrifuged at 4 ° C. to recover the precipitate. Hexane / acetone (7: 3) mixed solvent 100 is further added to the precipitate.
mL was added, and the mixture was stirred and centrifuged to collect the liquid layer (plasmalogen-containing fraction). The liquid layer was rapidly concentrated to dryness with a rotary evaporator to obtain 20 g of a concentrated dry solid. Centrifuging was performed at 3000 rpm × 10 minutes, the operation using a single acetone and a hexane / acetone mixed solvent was performed at 4 ° C, and the other operations were performed at 15 ° C.
工程(3)
工程(2)で得られたプラズマローゲン含有画分20gを、ホスホリパーゼA1(三菱
化学フーズ株式会社製)溶液400mL(10mg/mL 0.1クエン酸−HClバッ
ファー)中に分散させ、窒素ガス充填下50℃で2時間攪拌した。その後、冷却し、2倍
容量のヘキサンを加えて2回攪拌、分配し、ヘキサン層を回収して濃縮乾固した。さらに
、当該乾固物にアセトン60mLを加えて撹拌及び遠心し、沈殿を回収する操作を2回繰
り返した。さらに、当該沈殿にヘキサン/アセトン(7:3)混合溶媒60mLを加えて
攪拌及び遠心し、液層(高純度プラズマローゲン含有画分)を回収した。当該液層に、ヘ
キサン198mLとアセトン222mL(即ち、合計でヘキサン/アセトン(1:1)と
なる)を加えて分液漏斗に移し、水72mLを加えて攪拌及び分配した。下層(アセトン
層)を除去し、上層(ヘキサン層)にアセトン/水(5:3)192mLを加えて、攪拌
及び分配した。上層(ヘキサン層)を回収し、速やかに減圧乾燥して鶏ムネ肉由来高純度
プラズマローゲン含有物を得た。
Process (3)
20 g of the plasmalogen-containing fraction obtained in step (2) was dispersed in 400 mL (10 mg / mL 0.1 citric acid-HCl buffer) of a phospholipase A1 (manufactured by Mitsubishi Chemical Foods Co., Ltd.) solution and filled with nitrogen gas. The mixture was stirred at 50 ° C. for 2 hours. Then, the mixture was cooled, hexane having a double volume was added, the mixture was stirred and distributed twice, and the hexane layer was recovered and concentrated to dryness. Further, 60 mL of acetone was added to the dry matter, and the mixture was stirred and centrifuged to collect the precipitate, and the operation was repeated twice. Further, 60 mL of a hexane / acetone (7: 3) mixed solvent was added to the precipitate, and the mixture was stirred and centrifuged to recover the liquid layer (high-purity plasmalogen-containing fraction). To the liquid layer, 198 mL of hexane and 222 mL of acetone (that is, hexane / acetone (1: 1) in total) were added and transferred to a separating funnel, 72 mL of water was added, and the mixture was stirred and distributed. The lower layer (acetone layer) was removed, and 192 mL of acetone / water (5: 3) was added to the upper layer (hexane layer), and the mixture was stirred and distributed. The upper layer (hexane layer) was recovered and quickly dried under reduced pressure to obtain a high-purity plasmalogen-containing product derived from chicken breast meat.
<鶏ムネ肉由来高純度プラズマローゲン含有物の純度の検討>
上述の方法により得られた鶏ムネ肉由来高純度プラズマローゲン含有物をHPLCによ
り解析し、クロマトグラムを得た。HPLCの解析条件を以下に示す。
<Examination of purity of high-purity plasmalogen-derived chicken breast meat>
The chicken breast meat-derived high-purity plasmalogen-containing substance obtained by the above method was analyzed by HPLC to obtain a chromatogram. The HPLC analysis conditions are shown below.
[HPLC解析条件]
・機器:Shimadzu LC−10AD
・カラム:LiChrospher Diol 100(250−4、Merk社製)
(プレカラムなし)
・溶媒;A液:ヘキサン/2−プロパノール/酢酸(87:17:1、v/v)、B液
:2−プロパノール/水/酢酸(85:14:1、v/v)+0.2% トリエチルアミ
ン
・グラジエント条件:
[HPLC analysis conditions]
・ Equipment: Shimadzu LC-10AD
-Column: LiChrospher Diol 100 (250-4, manufactured by Merck & Co., Ltd.)
(No pre-column)
Solvent: Solution A: Hexane / 2-propanol / acetic acid (87: 17: 1, v / v), Solution B: 2-propanol / water / acetic acid (85: 14: 1, v / v) + 0.2% Triethylamine-gradient condition:
・流速:1.0mL/min
・検出:ELSD蒸発光散乱検出器(島津製作所社製)
・ Flow velocity: 1.0 mL / min
-Detection: ELSD Evaporative Light Scattering Detector (manufactured by Shimadzu Corporation)
HPLC−ELSDにより分析して得られたクロマトグラムを図1に示す。鶏ムネ肉由
来高純度プラズマローゲン含有物に含まれるプラズマローゲンは、エタノールアミンプラ
ズマローゲン(plPE)及びコリンプラズマローゲン(plPC)の混合物であること
が分った。検出された全ピーク面積を100%としたとき、プラズマローゲンの面積比率
は約94.6%であり、エタノールアミンプラズマローゲンが約47.9%、コリンプラ
ズマローゲンが約46.7%であった。従って、鶏ムネ肉由来高純度プラズマローゲン含
有物には、約94.6質量%のプラズマローゲンが含まれることが分かった。なお、プラ
ズマローゲンのピーク位置は、例えば、予め標品を分析することにより知ることができる
。
The chromatogram obtained by analysis by HPLC-ELSD is shown in FIG. It was found that the plasmalogen contained in the high-purity plasmalogen-derived chicken breast meat-derived substance was a mixture of ethanolamine plasmalogen (plPE) and choline plasmalogen (plPC). When the total peak area detected was 100%, the area ratio of plasmalogen was about 94.6%, ethanolamine plasmalogen was about 47.9%, and choline plasmalogen was about 46.7%. .. Therefore, it was found that the high-purity plasmalogen-derived material derived from chicken breast meat contained about 94.6% by mass of plasmalogen. The peak position of plasmalogen can be known, for example, by analyzing the standard in advance.
以下の試験例では、上記の方法により得られた鶏ムネ肉由来高純度プラズマローゲン含
有物を生体組織抽出プラズマローゲンとして使用した。
In the following test examples, the high-purity plasmalogen-derived product derived from chicken breast meat obtained by the above method was used as a biological tissue-extracted plasmalogen.
生体組織抽出プラズマローゲンの学習記憶能力増強作用の検討
<飼料の調製>
実際に使用するマウスの飼料として、AIN−93M(米国国立栄養研究所により19
93年に発表されたマウス・ラットの栄養研究用標準飼料)を購入した(以下、「通常飼
料」と記載する。)。また、特別注文により、生体組織抽出プラズマローゲンを0.1質
量%含有するAIN−93M(以下、「0.1%Pls含有飼料」と記載する。)も購入
した(いずれもオリエンタル酵母株式会社製)。
Examination of learning memory capacity enhancing effect of biological tissue extraction plasmalogen <preparation of feed>
AIN-93M (National Institute of Health and Nutrition 19) as a mouse feed for actual use
We purchased a standard feed for nutritional research of mice and rats announced in 1993 (hereinafter referred to as "normal feed"). In addition, by special order, AIN-93M containing 0.1% by mass of plasmalogen extracted from biological tissue (hereinafter referred to as "0.1% Pls-containing feed") was also purchased (both manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.). ).
<試験例1:モリス水迷路試験>
8週齢の健康なC57BJ6雄マウス14匹を日本エスエルシー株式会社から購入し、
プラズマローゲン投与群(n=7)及びコントロール群(n=7)に群分けした。プラズ
マローゲン投与群には0.1%Pls含有飼料を、コントロール群には通常飼料を、それ
ぞれ6週間自由摂取させて飼育した。なお、飼育中、水は自由摂取とした。
<Test Example 1: Morris Water Maze Test>
Purchased 14 healthy 8-week-old C57BJ6 male mice from Nippon SLC Co., Ltd.
The group was divided into a plasmalogen-administered group (n = 7) and a control group (n = 7). The plasmalogen-administered group was fed a diet containing 0.1% Pls, and the control group was fed a normal diet for 6 weeks. Water was freely ingested during breeding.
飼育後、各群7匹のマウスについて、モリス水迷路試験を行った。当該試験の概要は次
の通りである。試験前日にマウスをランダムにプール内に入れ、十分に水に慣れさせた。
その翌日、直径120cmの円形プールの任意の箇所の水底に直径10cmの円柱状のア
クリル製ステージを設置し、ステージ上における水深が2cmとなるように水を入れた後
、マウスをプール内の所定の箇所に入れ、ステージに到達するまでの時間(逃避時間:E
scape latency)を測定した。試験は1匹につき計4回の試行を行い、各試
行の間隔は40分とした。なお、試行を繰り返すことにより、マウスはステージの位置を
学習・記憶するため、逃避時間が短くなる。
After breeding, a Morris water maze test was performed on 7 mice in each group. The outline of the test is as follows. Mice were randomly placed in the pool the day before the test and allowed to fully acclimatize to water.
The next day, a columnar acrylic stage with a diameter of 10 cm was installed on the bottom of a circular pool with a diameter of 120 cm, and water was poured so that the water depth on the stage was 2 cm. Time to reach the stage (escape time: E)
(scape latency) was measured. The test was conducted a total of 4 trials per animal, and the interval between each trial was 40 minutes. By repeating the trial, the mouse learns and memorizes the position of the stage, so that the escape time is shortened.
モリス水迷路試験の結果を図2に示す。試験の結果、4回目の試行において、プラズマ
ローゲン投与群はコントロール群と比較して、逃避時間が有意に減少することが確認され
た。なお、モリス水迷路試験は、海馬依存性の学習能力を評価するための試験であり、学
習記憶能力の評価に最も良く用いられる手法のひとつである。よって、当該試験結果から
、健常マウスにプラズマローゲンを投与することにより、海馬依存性の学習能力が増強さ
れること(即ち、プラズマローゲンが海馬依存性の学習記憶能力の増強作用を有すること
)が分かった。さらに、プラズマローゲンを経口投与することにより、健常マウスの海馬
依存性の学習能力が増強されることが分かった。
The results of the Morris water maze test are shown in FIG. As a result of the test, it was confirmed that in the fourth trial, the escape time was significantly reduced in the plasmalogen-administered group as compared with the control group. The Morris water maze test is a test for evaluating hippocampal-dependent learning ability, and is one of the most commonly used methods for evaluating learning memory ability. Therefore, from the test results, it can be seen that administration of plasmalogen to healthy mice enhances hippocampal-dependent learning ability (that is, plasmalogen has a hippocampal-dependent learning memory ability-enhancing effect). Do you get it. Furthermore, it was found that oral administration of plasmalogen enhances the hippocampal-dependent learning ability of healthy mice.
<試験例2:海馬に含まれるプラズマローゲン量の測定>
試験例1の試験後のプラズマローゲン投与群及びコントロール群のマウス各1匹を心腔
内から生理食塩水で灌流した後、開頭して海馬を取り出し、常法に従って脂質を抽出し、
液体クロマトグラフ質量分析計(LC−MS)により、海馬に含まれるプラズマローゲン
量を測定した。LC−MSによる測定結果を図3に示す。
<Test Example 2: Measurement of the amount of plasmalogen contained in the hippocampus>
After perfusing each mouse in the plasmalogen-administered group and the control group after the test of Test Example 1 with physiological saline from the heart chamber, the hippocampus was removed by craniotomy, and lipids were extracted according to a conventional method.
The amount of plasmalogen contained in the hippocampus was measured by a liquid chromatograph mass spectrometer (LC-MS). The measurement result by LC-MS is shown in FIG.
図3から明らかなように、プラズマローゲン投与群はコントロール群と比較して、海馬
における相対的プラズマローゲン量が有意に増加していることが確認された。
As is clear from FIG. 3, it was confirmed that the relative plasmalogen amount in the hippocampus was significantly increased in the plasmalogen-administered group as compared with the control group.
Claims (3)
前記プラズマローゲンが、鶏ムネ肉からエタノール又は含水エタノールで抽出されたプラズマローゲンであり、The plasmalogen is a plasmalogen extracted from chicken breast meat with ethanol or hydrous ethanol.
前記プラズマローゲンが、エタノールアミンプラズマローゲン及びコリンプラズマローゲンを含み、The plasmalogen comprises ethanolamine plasmalogen and choline plasmalogen.
健常な哺乳動物に対して経口投与されるように用いられ、Used to be orally administered to healthy mammals
健常な学習記憶能力を増強する効果を奏する、健常な学習記憶能力を増強するための学習記憶能力増強剤。A learning memory ability enhancer for enhancing healthy learning memory ability, which has the effect of enhancing healthy learning memory ability.
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