JP6126327B2 - Adsorbent for IgM-type antibody adsorption and IgM-type antibody removal system - Google Patents

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Description

本発明は、IgM型抗体吸着用吸着材及びIgM型抗体除去システムに関する。   The present invention relates to an adsorbent for IgM type antibody adsorption and an IgM type antibody removal system.

近年、ドナーの適応を拡大するひとつの方法として、ABO血液型不適合生体腎移植が数多く実施されている。血液型不適合腎移植においては、移植腎血管内皮細胞に発現されている血液型抗原に対してレシピエント体内に存在する自然抗体であるIgM型抗体(抗A抗体や抗B抗体等)が反応することによって、いわゆる抗体関連型拒絶反応(antibody−mediated rejection,AMR)により引き起こされ得る、移植後早期の移植腎機能廃絶をいかにして回避するかが最大の問題であった。   In recent years, many ABO blood group-incompatible living donor kidney transplants have been implemented as one method for expanding donor indications. In blood type incompatible kidney transplantation, IgM type antibodies (anti-A antibody, anti-B antibody, etc.) that are natural antibodies present in the recipient body react with blood type antigens expressed in transplanted renal vascular endothelial cells. Therefore, how to avoid the abolition of transplanted kidney function early after transplantation, which can be caused by so-called antibody-associated rejection (AMR), was the biggest problem.

これに対して、術前に血漿交換を行うことで、IgM型抗体である抗A抗体や抗B抗体を除去し、さらに脾臓摘出を加えることにより、ABO血液型不適合生体腎移植を計画的に安全に施行できることを報告されている(非特許文献1)。また、わが国において、1989年に二重濾過血漿分離交換法(double filtration plasmapheresis,DFPP)を行うことでIgM型抗体である抗A抗体や抗B抗体を除去することと脾臓摘出により血液型不適合腎移植を実施し、安定した成績が得られることが報告されている(非特許文献2)。さらに、血液型のA抗原やB抗原を固定化した樹脂を詰めたカラムに血漿を通過させ、IgM型抗体である抗A抗体や抗B抗体を除去することと脾臓摘出により血液型不適合腎移植を実施することで良好な成績が得られることが報告されている(非特許文献3)。   In contrast, by exchanging plasma before surgery, anti-A and anti-B antibodies, which are IgM antibodies, are removed, and further, splenectomy is performed, so that ABO blood type-incompatible living donor kidney transplantation is planned. It has been reported that it can be safely implemented (Non-Patent Document 1). In Japan, the double filtration plasma separation and exchange method (DFPP) was performed in 1989 to remove IgM-type anti-A and anti-B antibodies, and spleenctomy to remove blood type incompatible kidneys. It has been reported that transplantation is performed and stable results are obtained (Non-patent Document 2). Furthermore, plasma is passed through a column packed with a resin in which blood group A and B antigens are immobilized, and anti-A and anti-B antibodies, which are IgM antibodies, are removed, and blood type incompatible kidney transplantation is performed by splenectomy. It has been reported that good results can be obtained by carrying out (Non-patent Document 3).

一方、免疫複合体やIgG抗体を除去する製品としては、トリプトファンやフェニルアラニンをリガンドとする旭化成クラレメディカル製のイムソーバ−TRTMやイムソーバ−PHTMが知られている(非特許文献4)。また、特許文献1には、チエニル基を有するリガンドが、天疱瘡の病因物質である抗デスモグレイン抗体(IgG型抗体)を除去できることが記載されている。 On the other hand, as a product for removing immune complexes and IgG antibodies, tryptophan and phenylalanine Imusoba of Asahi Kasei Kuraray Medical to ligand -TR TM and Imusoba -PH TM is known (Non-Patent Document 4). Patent Document 1 describes that a ligand having a thienyl group can remove an anti-desmoglein antibody (IgG type antibody) that is a pathogen of pemphigus.

特開2008−194304号公報JP 2008-194304 A

Alexandre GPJ,De Bruyere M et al.:Splenectomy as a prerequisite for successful human ABO−incompatible renal transplantation.Transplant Proc 17:138−143,1985.Alexandre GPJ, De Bruyer M et al. : Splenectomy as a prequesity for successful human ABO-incompatible real translation. Transplant Proc 17: 138-143, 1985. Takahashi K,Tanabe K, Ooda S et al.:Prophylactic use of a new immunosuppressive agent, deoxyspergualin, in oatients with kidney transplantation from ABO−incompatible or preformed antibodey positive donores. Transplant Proc 26:1078−1082,1991.Takahashi K, Tanabbe K, Ooda S et al. : Prophylactic use of a new immunosuppressive agent, deoxyspergualin, inoaients withkidneytransplantorbidoporbidpremandoroporbidoporbid. Transplant Proc 26: 1078-1082, 1991. Ota K,Takahashi K,Agishi T,Sonda T,Oka T,Ueda S,Amemiya H, Shiramizu T,Okazaki H,Akiyama N,Hasegawa A,Kawamura T,Takagi H,Ueno A.:Multicentre trial of ABO−incompatible kidney transplantation. Japanese Byosymsorb ABO−incompatible kidney transplant study group. Transpl Int. 1992;5 Suppl 1:S40−3.Ota K, Takahashi K, Ashishi T, Sonda T, Oka T, Ueda S, Amemiya H, Shiramizu T, Okazaki H, Akiyama N, Hasegawa A, KawaTau. : Multicentre trial of ABO-incompatible kidney translation. Japan Byossorb ABO-incompatible kidney transform study group. Transpl Int. 1992; 5 Suppl 1: S40-3. Yoshida M,Tamura Y,Yamada Y,Yamawaki N,Yamashita Y.:Immusorba TR and Immusorba PH:Basics of Design and Features of Functions. Therapeutic apheresis, vol2,page185−192(1998).Yoshida M, Tamura Y, Yamada Y, Yamawaki N, Yamashita Y. et al. : Immusorba TR and Immusorba PH: Basics of Design and Features of Functions. Therapeutic apheresis, vol2, pages 185-192 (1998).

非特許文献1では、血漿交換をすることでIgM型抗体である抗A抗体や抗B抗体を除去する方法が記載されているが、この方法では、患者以外の血漿を補充する必要がある。すなわち、血漿の補充には健康な方から献血された血漿(あるいはアルブミン)を使用するため、輸血と同様の副作用があり、特にウイルス感染に関しては、B型肝炎、C型肝炎、エイズ(後天性免疫不全症候群)、成人T型細胞性白血病などの検査を行い陰性であることを確認しているものの、これらのウイルスが感染する可能性はゼロではなく感染のリスクがあり、さらに医療費コストが高額になるという欠点があった。   Non-Patent Document 1 describes a method of removing anti-A antibody and anti-B antibody, which are IgM antibodies, by exchanging plasma, but in this method, it is necessary to supplement plasma other than that of the patient. That is, since plasma (or albumin) donated by a healthy person is used for plasma supplementation, there are side effects similar to those of blood transfusion. Especially regarding viral infections, hepatitis B, hepatitis C, AIDS (acquired) Although immunodeficiency syndrome) and adult T-cell leukemia have been tested and confirmed to be negative, the possibility of infection with these viruses is not zero and there is a risk of infection, and the cost of medical expenses There was a drawback of being expensive.

非特許文献2には、二重濾過血漿分離交換法(double filtration plasmapheresis, DFPP)を行うことでIgM型抗体である抗A抗体や抗B抗体を除去する方法が記載されているが、この方法は、1次膜によって血球と血漿成分を分離した後、分離された血漿成分を2次膜によって、さらに抗体成分を除去する方法である。しかしながら、この方法では、抗体成分を除去する際に、血液凝固因子の重要な成分であるフィブリノーゲンも除去されてしまうために、血液凝固能が低下し、出血のリスクがあった。また、出血のリスクを回避するために、場合によっては、施行後にフィブリノーゲン製剤を補充する必要が出てくるため、この場合もフィブリノーゲン製剤中に存在する未知のウイルスによる感染のリスクもあった。   Non-Patent Document 2 describes a method for removing anti-A antibody and anti-B antibody, which are IgM antibodies, by performing double filtration plasma separation (DFPP). In this method, blood cells and plasma components are separated by a primary membrane, and then the separated plasma components are further removed by a secondary membrane. However, in this method, when the antibody component is removed, fibrinogen, which is an important component of the blood coagulation factor, is also removed, so that the blood coagulation ability is reduced and there is a risk of bleeding. In addition, in order to avoid the risk of bleeding, it may be necessary to replenish the fibrinogen preparation after the operation, and in this case, there was also a risk of infection by an unknown virus present in the fibrinogen preparation.

非特許文献3は、血液型のA抗原やB抗原を固定化した樹脂を詰めたカラムに血漿を通過させ、IgM型抗体である抗A抗体や抗B抗体を除去する方法が記載されている。この方法によると、フィブリノーゲンなどの他の血漿成分の吸着を抑制し、特異的にIgM型抗体を除去することが可能になると推定されるが、樹脂に固定化されたA抗原やB抗原は、主に糖鎖でできており、安全性や安定性が悪く、また、この抗原を製造するためには非常にコストがかかるという欠点があった。   Non-Patent Document 3 describes a method of removing anti-A antibody and anti-B antibody, which are IgM antibodies, by passing plasma through a column packed with a resin in which blood type A antigen and B antigen are immobilized. . According to this method, it is presumed that the adsorption of other plasma components such as fibrinogen can be suppressed and the IgM antibody can be specifically removed, but the A antigen and B antigen immobilized on the resin are Since it is mainly composed of sugar chains, its safety and stability are poor, and there is a disadvantage that it is very expensive to produce this antigen.

非特許文献4は、リガンドとして、トリプトファンやフェニルアラニンが固定化されたポリビニルアルコール樹脂を詰めたカラムを用いることで、IgG型抗体やIgM型抗体が吸着されることが記載されている。しかしながら、これらのカラムでは、IgM型抗体を十分には吸着することができず、また、フィブリノーゲンを吸着するという欠点があった。   Non-Patent Document 4 describes that an IgG type antibody or an IgM type antibody is adsorbed by using a column packed with a polyvinyl alcohol resin to which tryptophan or phenylalanine is immobilized as a ligand. However, these columns cannot sufficiently adsorb IgM-type antibodies and have the disadvantages of adsorbing fibrinogen.

特許文献1には、IgG型抗体の抗デスモグレイン抗体を吸着することが記載されているが、IgM型抗体の吸着については、一切、述べられておらず、さらには、フィブリノーゲン吸着の抑制についても、一切述べられておらず、その示唆もない。   Patent Document 1 describes that an anti-desmoglein antibody of an IgG type antibody is adsorbed, but there is no mention of the adsorption of an IgM type antibody, and further, regarding the suppression of fibrinogen adsorption. There is no mention or suggestion.

上記のような現状に鑑み、本発明は、血漿などの血液成分から、フィブリノーゲンの吸着を抑制しつつ、IgM型抗体を選択的かつ高率で吸着する、安全性、安定性に優れたIgM型抗体吸着用吸着材及びIgM型抗体除去システムを提供することを課題とする。   In view of the above situation, the present invention is an IgM type that adsorbs an IgM type antibody selectively and at a high rate from blood components such as plasma while suppressing the adsorption of fibrinogen. An object is to provide an adsorbent for antibody adsorption and an IgM-type antibody removal system.

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドが水不溶性担体に固定化されている吸着材が、フィブリノーゲンの吸着を抑制し、かつ、IgM型抗体を選択的に、かつ高率に吸着し、安全性、安定性に優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that an adsorbent in which a ligand composed of a compound having a thienyl group and a carboxyl group is immobilized on a water-insoluble carrier suppresses the adsorption of fibrinogen. In addition, the inventors have found that IgM-type antibodies are selectively and highly adsorbed and are excellent in safety and stability, and the present invention has been completed.

すなわち、本発明は、以下に関する。
[1]
水不溶性担体と、
前記水不溶性担体に固定されたリガンドと、を含み、
前記リガンドが、チオフェン又はその誘導体から複素環を構成する炭素原子に結合した水素原子1個を除いた残りの原子団からなる1価の基、及びカルボキシル基を有する、
IgM型抗体吸着用吸着材。
[2]
前記1価の基と前記カルボキシル基とが、5個以下の原子を介して結合している、[1]に記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[3]
前記1価の基が、チエニル基である、[1]又は[2]に記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[4]
前記リガンドが、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなる、[1]〜[3]のいずれかに記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[5]
前記リガンドの炭素原子数が5個〜13個である、[1]〜[4]のいずれかに記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[6]
前記リガンドが、チエニルグリシン、チエニルアラニン及びチエニルセリンからなる群より選択される少なくとも1種である、[1]〜[5]のいずれかに記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[7]
血液型の抗A抗体及び抗B抗体から選ばれるIgM型抗体の吸着用である、[1]〜[6]のいずれかに記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[8]
固定化された前記リガンドの量が、前記水不溶性担体1mLゲルあたり10μmol〜200μmolである、[1]〜[7]のいずれかに記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[9]
前記水不溶性担体が粒子状の多孔質体であり、前記多孔質体の排除限界分子量が15万〜1000万である、[1]〜[8]のいずれかに記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[10]
フィブリノーゲンの吸着率をPf、IgM型抗体の吸着率をPmとしたときに、Pm/Pf≧3である、[1]〜[9]のいずれかに記載のIgM型抗体吸着用吸着材。
[11]
血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器と、
該容器に充填された請求項1〜7のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着材と、を備える体外循環モジュールからなる、血液又は血漿中IgM型抗体除去システム。
[12]
血液又は血漿中IgM型抗体除去システムの製造における、
水不溶性担体と、前記水不溶性担体に固定化された、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドとを含む吸着材の使用。
That is, the present invention relates to the following.
[1]
A water-insoluble carrier;
A ligand immobilized on the water-insoluble carrier,
The ligand has a monovalent group consisting of the remaining atomic group excluding one hydrogen atom bonded to the carbon atom constituting the heterocyclic ring from thiophene or a derivative thereof, and a carboxyl group.
Adsorbent for IgM type antibody adsorption.
[2]
The adsorbent for IgM antibody adsorption according to [1], wherein the monovalent group and the carboxyl group are bonded via 5 or less atoms.
[3]
The adsorbent for IgM-type antibody adsorption according to [1] or [2], wherein the monovalent group is a thienyl group.
[4]
The adsorbent for IgM antibody adsorption according to any one of [1] to [3], wherein the ligand comprises a compound having a thienyl group and a carboxyl group.
[5]
The adsorbent for IgM antibody adsorption according to any one of [1] to [4], wherein the ligand has 5 to 13 carbon atoms.
[6]
The adsorbent for IgM type antibody adsorption according to any one of [1] to [5], wherein the ligand is at least one selected from the group consisting of thienylglycine, thienylalanine and thienylserine.
[7]
The adsorbent for IgM type antibody adsorption according to any one of [1] to [6], which is for adsorbing an IgM type antibody selected from blood type anti-A antibody and anti-B antibody.
[8]
The adsorbent for IgM type antibody adsorption according to any one of [1] to [7], wherein the amount of the immobilized ligand is 10 μmol to 200 μmol per 1 mL gel of the water-insoluble carrier.
[9]
The adsorption for IgM antibody adsorption according to any one of [1] to [8], wherein the water-insoluble carrier is a particulate porous body, and the exclusion limit molecular weight of the porous body is 150,000 to 10 million. Wood.
[10]
The adsorbent for IgM-type antibody adsorption according to any one of [1] to [9], wherein Pm / Pf ≧ 3 when the adsorption rate of fibrinogen is Pf and the adsorption rate of IgM-type antibody is Pm.
[11]
A container having an inlet port through which blood or plasma flows in and an outlet port through which blood or plasma flows out;
A blood or plasma IgM antibody removal system comprising an extracorporeal circulation module comprising the IgM antibody adsorption adsorbent according to any one of claims 1 to 7 filled in the container.
[12]
In the production of an IgM type antibody removal system in blood or plasma,
Use of an adsorbent comprising a water-insoluble carrier and a ligand comprising a compound having a thienyl group and a carboxyl group immobilized on the water-insoluble carrier.

本発明に係るIgM型抗体吸着用吸着材は、血漿中のフィブリノーゲンの吸着を抑制し、かつ、IgM型抗体を選択的に、かつ高率に吸着し、該吸着材は、安全性、保存安定性に優れている。また該吸着材を封入した体外循環モジュールを用いることにより、ABO不適合の腎移植、肝移植、骨髄移植の際のIgM型自己抗体の除去やIgM型自己抗体を病因物質とするマクログロブリン血症、及び高IgM症候群の患者からIgM型自己抗体を安全に除去できる。   The adsorbent for IgM-type antibody adsorption according to the present invention suppresses the adsorption of fibrinogen in plasma and selectively adsorbs IgM-type antibody at a high rate, and the adsorbent is safe and stable in storage. Excellent in properties. In addition, by using an extracorporeal circulation module encapsulating the adsorbent, removal of IgM autoantibodies during ABO-incompatible kidney transplantation, liver transplantation, and bone marrow transplantation, and macroglobulinemia using IgM autoantibodies as a causative agent, And IgM autoantibodies can be safely removed from patients with high IgM syndrome.

IgM型抗体吸着用吸着材を使用した体外循環モジュールの一実施形態を示す模式断面図である。It is a schematic cross section showing one embodiment of an extracorporeal circulation module using an adsorption material for IgM type antibody adsorption.

以下、本発明について詳細に述べる。   The present invention will be described in detail below.

本発明のIgM型抗体吸着用吸着材は、IgM型抗体を選択的かつ高率で吸着することができ、同時にフィブリノーゲン等の吸着を抑制できるため、IgM型抗体の吸着材として極めて有効である。IgM型抗体は、5個のサブユニットから構成された分子量約90万、沈降定数19Sの免疫グロブリンの中でも最も巨大なタンパクで、マクログロブリンとも呼ばれる。各サブユニットは、ヒンジ領域を欠いたH鎖(2本のμ鎖)とL鎖(χ、λ鎖)から構成され、CH3、CH4ドメイン間に形成されるS−S結合で互いに結びつき、さらに1本のJ鎖によって5量体構造が構成されている。μ鎖にはμ1、μ2の2つのサブクラスがある。IgM型抗体は、B細胞の分化に伴って細胞表面に発現し、B細胞の分化や抗体産生、アポトーシスなどの免疫系に関与する多様な機能をつかさどることが明らかになってきている。また、IgM型抗体は、赤血球のABO式血液型の由来となるA抗原、B抗原に対する主な抗体である。   The adsorbent for adsorbing IgM antibodies of the present invention is extremely effective as an adsorbent for IgM antibodies because it can selectively adsorb IgM antibodies at a high rate and at the same time suppress adsorption of fibrinogen and the like. IgM type antibody is the largest protein among immunoglobulins composed of 5 subunits and having a molecular weight of about 900,000 and a sedimentation constant of 19S, and is also called macroglobulin. Each subunit is composed of an H chain (two μ chains) and an L chain (χ, λ chain) lacking a hinge region, and is linked to each other by an SS bond formed between CH3 and CH4 domains. A pentamer structure is constituted by one J chain. There are two subclasses of μ chain, μ1 and μ2. IgM type antibodies are expressed on the cell surface as B cells differentiate, and it has become clear that they control various functions involved in the immune system such as B cell differentiation, antibody production, and apoptosis. IgM type antibodies are the main antibodies against the A and B antigens derived from the ABO blood group of erythrocytes.

免疫グロブリンには5つのクラスが存在する。IgG及びIgMは、これらのクラスの一つである。異なるクラスの免疫グロブリンは、それぞれが異なる構造を持ち、異なる物理的/化学的性質を有している。例えば、IgG型抗体は単量体で存在し、IgMは5量体で存在するため、分子量が大きく異なっている。また、IgG型抗体は、プロテインA、プロテインGとのアフィニティーが高い一方で、IgM型抗体は、極めて低いアフィニティーしか示さない。このように異なる構造、異なる物理的/化学的性質を有しているため、IgG型抗体の吸着・除去が可能なリガンドであっても、IgM型抗体の吸着・除去に適用可能であるとは通常考えられない。特許文献1には、チエニル基を有するリガンドがIgG型抗体を吸着除去できることが記載されているものの、IgM型抗体の吸着除去については記載も示唆もない。すなわち、チエニル基及びカルボキシル基を有するリガンドが有するIgM型抗体の吸着除去能(更に、同時にフィブリノーゲンの吸着を抑制できる)という性質は、引用文献1の記載からは全く予測できない未知の属性である。本発明のIgM型抗体吸着用吸着材は、この未知の属性を利用して新たな用途を提供するものである。   There are five classes of immunoglobulins. IgG and IgM are one of these classes. Different classes of immunoglobulins have different structures and different physical / chemical properties. For example, IgG-type antibodies exist as monomers, and IgM exists as a pentamer, so the molecular weights differ greatly. In addition, IgG-type antibodies have high affinity with protein A and protein G, while IgM-type antibodies show very low affinity. Because it has such a different structure and different physical / chemical properties, it can be applied to adsorption / removal of IgM antibody even if it is a ligand that can adsorb / remove IgG type antibody. Usually not considered. Although Patent Document 1 describes that a ligand having a thienyl group can adsorb and remove IgG type antibodies, there is no description or suggestion about adsorption and removal of IgM type antibodies. That is, the property of adsorption removal ability of IgM antibody possessed by a ligand having a thienyl group and a carboxyl group (and the ability to suppress fibrinogen adsorption at the same time) is an unknown attribute that cannot be predicted at all from the description of the cited document 1. The adsorbent for IgM-type antibody adsorption of the present invention provides a new application using this unknown attribute.

本発明のIgM型抗体吸着用吸着材は、水不溶性担体と、水不溶性担体に固定化されたリガンドと、を含む。   The adsorbent for IgM-type antibody adsorption of the present invention includes a water-insoluble carrier and a ligand immobilized on the water-insoluble carrier.

本発明に係るリガンドは、チオフェン又はその誘導体から複素環を構成する炭素原子に結合した水素原子1個を除いた残りの原子団からなる1価の基、及びカルボキシル基を有する。   The ligand according to the present invention has a monovalent group consisting of the remaining atomic group obtained by removing one hydrogen atom bonded to the carbon atom constituting the heterocyclic ring from thiophene or a derivative thereof, and a carboxyl group.

本明細書において、「チオフェンの誘導体」とは、置換基を有するチオフェン、又は複素環を構成する硫黄原子が、硫黄原子の有する非共有電子対と電子受容性の官能基との間で配位結合を形成しているチオフェンを意味する。   In this specification, “derivative of thiophene” means a thiophene having a substituent, or a sulfur atom constituting a heterocyclic ring is coordinated between a lone pair of a sulfur atom and an electron-accepting functional group. It means thiophene forming a bond.

置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリールオキシ基、アミノ基、ハロゲン原子、アシル基、アミド基、ヒドロキシ基、シアノ基、ニトロ基が挙げられる。置換基が複数個存在する場合、それぞれ同一であってもよく、又は異なっていてもよい。中でも、置換基としては、アルキル基が望ましく、メチル基、エチル基、及びプロピル基が好ましい。   Examples of the substituent include an alkyl group, an alkoxy group, an aryl group, an aryloxy group, an amino group, a halogen atom, an acyl group, an amide group, a hydroxy group, a cyano group, and a nitro group. When a plurality of substituents are present, they may be the same or different. Especially, as a substituent, an alkyl group is desirable and a methyl group, an ethyl group, and a propyl group are preferable.

電子受容性の官能基としては、例えば、水素原子、アンモニウムイオン、1価の金属イオンが挙げられる。   Examples of the electron-accepting functional group include a hydrogen atom, an ammonium ion, and a monovalent metal ion.

リガンドは、1価の基とカルボキシル基とが5個以下の原子を介して結合している化合物であることが好ましい。また、1価の基とカルボキシル基とが、1個又は2個の炭素原子を介して結合している化合物であることがより好ましい。   The ligand is preferably a compound in which a monovalent group and a carboxyl group are bonded via 5 or less atoms. In addition, a compound in which a monovalent group and a carboxyl group are bonded via one or two carbon atoms is more preferable.

1価の基としては、チエニル基が好ましい。また、リガンドとしては、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物が好ましい。リガンドに含まれるチエニル基の数には、特に限定はないが、リガンドの化学的安定性や血液適合性を考慮すると1個〜5個が好ましい。また、リガンドがカルボキシル基を有することにより、フィブリノーゲンの吸着を抑制することができる。なお、本明細書において、「チエニル基」とは、チオフェン(化学式:CS)から水素原子を1個除いた残基をいう。 As the monovalent group, a thienyl group is preferable. Moreover, as a ligand, the compound which has a thienyl group and a carboxyl group is preferable. The number of thienyl groups contained in the ligand is not particularly limited, but is preferably 1 to 5 in view of the chemical stability and blood compatibility of the ligand. Further, since the ligand has a carboxyl group, adsorption of fibrinogen can be suppressed. In this specification, “thienyl group” refers to a residue obtained by removing one hydrogen atom from thiophene (chemical formula: C 4 H 4 S).

リガンドの炭素原子数は、5個以上13個以下であることが好ましく、5個以上8個以下であることがより好ましい。炭素原子数が5個以上であると、IgM型抗体に対する吸着性が十分に発揮される。また、リガンドの炭素原子数が13個以下であると、リガンドの疎水性が適度なものとなり、血漿中の他のタンパクが吸着してしまう非特異的吸着を十分に抑制することができ、血液適合性がよいものとなる。また、リガンド固定時の溶解性や保存安定性も良好であるため好ましい。さらに、リガンドの炭素原子数が8個以下であると、上述の効果がより一層顕著なものとなるため、より好ましい。   The number of carbon atoms of the ligand is preferably 5 or more and 13 or less, and more preferably 5 or more and 8 or less. When the number of carbon atoms is 5 or more, the adsorptivity to the IgM antibody is sufficiently exhibited. Moreover, when the number of carbon atoms of the ligand is 13 or less, the hydrophobicity of the ligand becomes moderate, and nonspecific adsorption that other proteins in plasma are adsorbed can be sufficiently suppressed. Good compatibility. Further, it is preferable because solubility and storage stability at the time of ligand fixation are good. Furthermore, it is more preferable that the number of carbon atoms of the ligand is 8 or less because the above-described effect becomes more remarkable.

リガンドは、担体への固定化やIgM型抗体の吸着に有効なアンモニアから水素原子を1個除いた1価の基を一つ以上有していることが好ましい。   The ligand preferably has one or more monovalent groups obtained by removing one hydrogen atom from ammonia effective for immobilization on a carrier and adsorption of an IgM type antibody.

具体的には、チエニル基を含むアミノ酸であるチエニルグリシン、チエニルアラニン、チエニルセリンなどが挙げられる。カルボキシル基を有さないと、フィブリノーゲンの吸着が増大し、体外循環中に重要な血液凝固因子が失われるので、出血のリスクなどが生じてしまう。カルボキシル基を有することによるフィブリノーゲン吸着の抑制のメカニズムは、これに限定されるものではないが、本発明者らは、フィブリノーゲンの等電点が比較的、負側にあることに起因していると考えている。   Specific examples include thienylglycine, thienylalanine, and thienylserine, which are amino acids containing a thienyl group. Without a carboxyl group, the adsorption of fibrinogen increases and an important blood coagulation factor is lost during extracorporeal circulation, resulting in a risk of bleeding and the like. Although the mechanism of suppression of fibrinogen adsorption by having a carboxyl group is not limited to this, the present inventors have attributed that the isoelectric point of fibrinogen is relatively on the negative side. thinking.

なお、本明細書において記載されるアミノ酸及びアミノ酸誘導体は、特に断りのない限りL体である。   The amino acids and amino acid derivatives described in this specification are L-forms unless otherwise specified.

本発明でいう水不溶性担体とは、水に溶けない担体を意味する。例えば、血液に接触した場合、血液中に溶け出さないものである。   The water-insoluble carrier in the present invention means a carrier that is not soluble in water. For example, when it comes into contact with blood, it does not dissolve in the blood.

低分子リガンドを固定化する際に使用する担体としては、親水性の表面を有し、かつ低分子リガンドとの間で共有結合を形成させるために利用し得るアミノ基、カルボキシル基、水酸基などの反応性の官能基を有するものが好ましい。また、上記の水不溶性担体は吸着させ得る有効表面積が広い多孔性であるもの(多孔質体)が望ましい。   As a carrier used for immobilizing a low molecular ligand, an amino group, a carboxyl group, a hydroxyl group, etc. that have a hydrophilic surface and can be used to form a covalent bond with the low molecular ligand. Those having a reactive functional group are preferred. The water-insoluble carrier is preferably a porous material having a large effective surface area that can be adsorbed (porous material).

担体は粒子状、繊維状、シート状、中空糸状などの任意の形状を用いることができるが、リガンドの保持量や吸着材としての取扱い性を考慮すると、粒子状のものが好ましい。   The carrier can be in any shape such as particulate, fiber, sheet, hollow fiber, etc. However, in consideration of the amount of ligand retained and the handling property as an adsorbent, the carrier is preferably particulate.

粒子状担体の平均粒径は、25μm〜2500μmのものを利用できるが、その比表面積(吸着材としての吸着能力)と体液の流通性を考慮すると、50μm〜1500μmのものが好ましい。   The average particle diameter of the particulate carrier can be from 25 μm to 2500 μm, but considering the specific surface area (adsorption capacity as an adsorbent) and the fluidity of the body fluid, those having a particle diameter of 50 μm to 1500 μm are preferable.

担体としては、セルロース系ゲル、デキストラン系ゲル、アガロース系ゲル、ポリアクリルアミド系ゲル、多孔質ガラス、ビニルポリマーゲル等の有機又は無機の多孔体が使用でき、通常のアフィニティクロマトグラフィーに用いられる担体用の材料は全て用いることができる。   As the carrier, organic or inorganic porous materials such as cellulose gel, dextran gel, agarose gel, polyacrylamide gel, porous glass, vinyl polymer gel, etc. can be used. For carriers used in ordinary affinity chromatography Any of these materials can be used.

これらの担体を例示すると、旭化成マイクロキャリア(旭化成(株)社製)、CM−セルロファイン(登録商標)CH(排除限界タンパク質分子量:約3×10、生化学工業(株)販売)などのセルロース系担体、特公平1−44725号公報記載の全多孔質活性化ゲルや、CM−トヨパール(登録商標)650C(排除限界タンパク質分子量:5×10、東ソー(株)製)などのポリビニルアルコール系担体、CM−トリスアクリルM(CM−Trisacryl M)〔排除限界タンパク質分子量:1×10、スウェーデン国ファルマシア−LKB(Pharmacia−LKB)社製〕などのポリアクリルアミド系担体、セファロースCL−4B(SepharoseCL−4B)〔排除限界タンパク質分子量:2×10、スウェーデン国ファルマシア−LKB(Pharmacia−LKB)社製〕などのアガロース系担体などの有機質担体、及びCPG−10−1000〔排除限界タンパク質分子量:1×10、平均細孔径:100nm、米国エレクトロ−ニュークレオニクス(Electro−nucleonics)社製〕などの多孔性ガラスなどの無機質担体が挙げられる。 Examples of these carriers include Asahi Kasei Microcarrier (Asahi Kasei Co., Ltd.), CM-Cellulofine (registered trademark) CH (exclusion limit protein molecular weight: about 3 × 10 6 , sold by Seikagaku Corporation), and the like. Cellulose-based carriers, all porous activated gels described in JP-B-1-44725, and polyvinyl alcohol such as CM-Toyopearl (registered trademark) 650C (exclusion limit protein molecular weight: 5 × 10 6 , manufactured by Tosoh Corporation) System carrier, polyacrylamide type carrier such as CM-Trisacryl M (CM-Trisacryl M) [exclusion limit protein molecular weight: 1 × 10 7 , Pharmacia-LKB, Sweden], Sepharose CL-4B ( SepharoseCL-4B) [exclusion limit protein molecular weight: 2 × 10 7, Swedish country Pharmacia -LKB (Pharmacia-LKB) Co. Ltd.] organic carrier such as agarose based carrier, such as, and CPG-10-1000 [exclusion limit protein molecular weight: 1 × 10 8, the average pore diameter: 100 nm, USA Electro - New Inorganic supports such as porous glass such as those manufactured by Electro-nucleonics Co., Ltd.

水不溶性担体としては、粒子状の多孔質体が好ましく、例えば、多孔性重合体粒子を用いることができる。粒子状の多孔質体は、リガンドを固定化できるものであり、排除限界分子量(タンパク質)としては、15万〜1000万が好ましい。本発明の目的に最も好ましい排除限界分子量は100〜500万である。   As the water-insoluble carrier, a particulate porous body is preferable, and for example, porous polymer particles can be used. The particulate porous body can immobilize a ligand, and the exclusion limit molecular weight (protein) is preferably 150,000 to 10,000,000. The most preferred exclusion limit molecular weight for the purposes of the present invention is between 1 and 5 million.

重合体組成は、ポリアミド系、ポリエステル系、ポリウレタン系、ビニル化合物の重合体等、多孔性構造をとりうる公知の重合体を用いることができるが、特に親水性モノマーにより親水化したビニル化合物系多孔性重合体が好ましい結果を与える。   The polymer composition may be a known polymer that can take a porous structure, such as a polyamide-based, polyester-based, polyurethane-based, or vinyl-based polymer. Particularly, a vinyl compound-based porous material that has been hydrophilized with a hydrophilic monomer. Sex polymers give favorable results.

リガンドの水不溶性担体への固定化方法としては、その様式を問わないが、共有結合が好ましい。例えば、担体がカルボキシル基を有する場合には、N−ヒドロキシコハク酸イミドと反応させることによって、スクシンイミドオキシカルボニル基に変換し、これにリガンドをアミノ基の部分で反応させる方法(活性エステル法)が挙げられる。担体がアミノ基又はカルボキシル基を有する場合には、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの縮合試薬の存在下で、リガンドのカルボキシル基又はアミノ基を縮合反応させる方法(縮合法)、担体とリガンドとをグルタルアルデヒドなどの2個以上の官能基を有する化合物を用いて結合する方法などが挙げられる。また、担体が、水酸基を有する場合には、臭化シアンなどのハロゲン化シアンを担体に作用させ、リガンドのアミノ基の部分で反応させる方法やエピクロロヒドリンなどのエポキシドを担体に作用させ、リガンドのアミノ基の部分や水酸基の部分で反応させる方法等が挙げられる。   The method for immobilizing the ligand on the water-insoluble carrier is not limited, but a covalent bond is preferred. For example, when the carrier has a carboxyl group, it is converted to a succinimideoxycarbonyl group by reacting with N-hydroxysuccinimide, and this is reacted with a ligand at the amino group (active ester method). Can be mentioned. When the carrier has an amino group or a carboxyl group, a method of condensing the carboxyl group or amino group of the ligand in the presence of a condensation reagent such as dicyclohexylcarbodiimide (condensation method), Examples include a method of bonding using a compound having two or more functional groups. In addition, when the carrier has a hydroxyl group, a cyanogen halide such as cyanogen bromide is allowed to act on the carrier, and a method of reacting with the amino group portion of the ligand or an epoxide such as epichlorohydrin is allowed to act on the carrier, Examples thereof include a method of reacting with the amino group part or hydroxyl part of the ligand.

さらに、必要に応じて水不溶性担体とリガンドとの間に任意の長さの分子(スペーサー)を導入して使用することもできる。スペーサー分子としては、ポリメチレン鎖、ポリエチレングリコール鎖等が挙げられる。例えば、アガロースの水酸基とヘキサメチレンジイソシアナートの片側のイソシアナート基を反応、結合させ、残ったイソシアナート基とリガンドのアミノ基、水酸基、カルボキシル基等を反応、結合させることができる。   Furthermore, if necessary, a molecule (spacer) having an arbitrary length can be introduced between the water-insoluble carrier and the ligand. Examples of the spacer molecule include a polymethylene chain and a polyethylene glycol chain. For example, the hydroxyl group of agarose and the isocyanate group on one side of hexamethylene diisocyanate can be reacted and combined, and the remaining isocyanate group and the amino group, hydroxyl group, carboxyl group, etc. of the ligand can be reacted and combined.

本発明で担体に結合させるリガンドの量、すなわち、リガンドの保持量(固定化されたリガンドの量)は、担体1mLゲルあたり10μmol〜200μmolの範囲であり、より好ましくは10μmol〜100μmolの範囲である。保持量が10μmol未満の場合は、IgM型抗体の吸着能の低下が起こり易い傾向があり、200μmolを超える場合は、血漿有用成分の非特異吸着が起こり易い傾向があり好ましくない。   The amount of ligand bound to the carrier in the present invention, that is, the amount of ligand retained (the amount of immobilized ligand) is in the range of 10 μmol to 200 μmol, more preferably in the range of 10 μmol to 100 μmol, per 1 mL gel of the carrier. . When the retention amount is less than 10 μmol, the adsorption ability of the IgM antibody tends to decrease, and when it exceeds 200 μmol, nonspecific adsorption of useful plasma components tends to occur.

IgM型抗体吸着用吸着材に対するIgM型抗体の吸着量を測定する方法としては、IgM型抗体吸着用吸着材に血漿成分を加え、IgM型抗体を吸着させ、血漿中のIgM型抗体の減少量率を測定する方法挙げられる。例えば、リガンドが固定化された担体を、一定時間、血漿に浸漬させ、その後、IgM型抗体の減少量率を免疫学的手法によって定量して求めることができる。あるいは、リガンドが固定化された担体が詰められたカラムに対して、一定時間、血漿を流し、その後、カラム通過前とカラム通過後の血漿中のIgM型抗体の減少量率を免疫学的手法によって定量して求めることもできる。   As a method for measuring the amount of IgM-type antibody adsorbed to the adsorbent for IgM-type antibody adsorption, a plasma component is added to the adsorbent for IgM-type antibody adsorption, the IgM-type antibody is adsorbed, and the amount of IgM-type antibody in the plasma decreased The method of measuring a rate is mentioned. For example, the carrier on which the ligand is immobilized can be immersed in plasma for a certain period of time, and then the rate of decrease in IgM antibody can be determined by quantification using an immunological technique. Alternatively, plasma is allowed to flow through a column packed with a carrier on which a ligand is immobilized, and then the rate of decrease in IgM antibody in the plasma before and after passing through the column is determined by an immunological technique. Can also be determined quantitatively.

上記IgM型抗体吸着用吸着材は、フィブリノーゲンの吸着を抑制し、同時にIgM型抗体を選択的かつ高率で吸着することができる。ここで、上記IgM型抗体吸着用吸着材における、フィブリノーゲンの吸着率をPf、IgM型抗体の吸着率をPmとしたときに、Pm/Pfの値は、通常3以上である。Pm/Pfの値の上限は、特に制限されるものではないが、通常100以下である。   The above-mentioned adsorbent for adsorbing IgM antibodies can suppress the adsorption of fibrinogen and simultaneously adsorb IgM antibodies selectively and at a high rate. Here, in the above-mentioned adsorbent for IgM-type antibody adsorption, when the adsorption rate of fibrinogen is Pf and the adsorption rate of IgM-type antibody is Pm, the value of Pm / Pf is usually 3 or more. The upper limit of the value of Pm / Pf is not particularly limited, but is usually 100 or less.

本発明のIgM型抗体吸着用吸着材は、血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器内に充填保持して使用することができる。   The adsorbent for IgM-type antibody adsorption of the present invention can be used by being filled and held in a container having an inlet port through which blood or plasma flows and an outlet port through which blood or plasma flows out.

図1は、IgM型抗体吸着用吸着材を使用した体外循環モジュールの一実施形態を示す模式断面図である。図1に示す体外循環モジュール1は、円筒2の一端開口部に、内側にフィルター3を張ったパッキン4を介して血液又は血漿を流入させる入口ポート5を有するキャップ6をネジ嵌合し、円筒2の他端開口部に内側にフィルター3’を張ったパッキン4’を介して血液又は血漿を流出させる出口ポート7を有するキャップ8をネジ嵌合して容器を形成し、フィルター3及び3’の間隙に本発明のIgM型抗体吸着用吸着材を充填保持させて吸着材層9を形成してなるものである。体外循環モジュール1は、例えば、ABO血液型不適合生体腎移植の際に増加してくるIgM型抗体(抗A抗体、抗B抗体)の除去用として使用することができる。   FIG. 1 is a schematic cross-sectional view showing an embodiment of an extracorporeal circulation module using an adsorbent for IgM-type antibody adsorption. The extracorporeal circulation module 1 shown in FIG. 1 is screwed into a cylindrical end of a cylinder 2 having a cap 6 having an inlet port 5 through which blood or plasma flows through a packing 4 with a filter 3 on the inside. A cap 8 having an outlet port 7 for allowing blood or plasma to flow out through a packing 4 ′ with a filter 3 ′ on the inside of the other end opening 2 is screwed to form a container, and the filters 3 and 3 ′. The adsorbent layer 9 is formed by filling and holding the IgM-type adsorbing adsorbent of the present invention in the gap. The extracorporeal circulation module 1 can be used, for example, for removing IgM type antibodies (anti-A antibody and anti-B antibody) that increase at the time of ABO blood group-incompatible living body kidney transplantation.

吸着材層9には、本発明のIgM型抗体吸着用吸着材を単独で充填してもよく、他の吸着材と混合して充填してもよい。また、本発明のIgM型抗体吸着用吸着材と他の吸着材とが積層するように充填してもよい。他の吸着材としては、例えばDNA等の他の悪性物質(抗原)の吸着材や、幅広い吸着能を有する活性炭等を用いることができる。これにより吸着材の相乗効果による広範な臨床効果が期待できる。吸着材層9の容積は、体外循環に用いる場合、50mL〜400mL程度が適当である。   The adsorbent layer 9 may be filled with the adsorbent for IgM-type antibody adsorption of the present invention alone, or may be mixed with other adsorbents and filled. Moreover, you may fill so that the adsorption material for IgM type | mold antibody adsorption of this invention and another adsorption material may laminate | stack. As other adsorbents, for example, adsorbents of other malignant substances (antigens) such as DNA, activated carbon having a wide range of adsorption ability, and the like can be used. As a result, a wide range of clinical effects due to the synergistic effect of the adsorbent can be expected. The volume of the adsorbent layer 9 is suitably about 50 mL to 400 mL when used for extracorporeal circulation.

上記体外循環モジュール1は、血液又は血漿中のIgM型抗体を除去するためのIgM型抗体除去システムとして使用することができる。   The extracorporeal circulation module 1 can be used as an IgM type antibody removal system for removing IgM type antibodies in blood or plasma.

本発明の血液又は血漿中IgM型抗体除去システムを体外循環で用いる場合には、大きく次の二通りの方法がある。一つには、体内から取り出した血液を遠心分離機又は膜型血漿分離器を使用して、血漿成分と血球成分とに分離した後、血漿成分を上記IgM型抗体除去システムに通過させ、浄化した後、血球成分と合わせて体内にもどす方法であり、他の一つは、体内から取り出した血液を直接上記IgM型抗体除去システムに通過させ、浄化する方法である。   When the system for removing IgM type antibody in blood or plasma of the present invention is used in extracorporeal circulation, there are two main methods. For one thing, the blood extracted from the body is separated into a plasma component and a blood cell component using a centrifuge or a membrane plasma separator, and then the plasma component is passed through the IgM antibody removal system to be purified. Then, the blood cell component is returned to the body together with the blood cell component, and the other one is a method of purifying the blood taken out from the body directly by passing it through the IgM type antibody removal system.

また、血液又は血漿の通過速度については、IgM型抗体吸着用吸着材の吸着率が非常に高いため、該吸着材の粒度を粗くすることができ、また充填度を低くできるので、吸着材層の形状の如何にかかわりなく、高い通過速度を与えることができる、そのため多量の血液又は血漿を処理することができる。血液又は血漿の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるいは設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよいし、また断続的に通液使用してもよい。   In addition, with regard to the blood or plasma passage speed, since the adsorption rate of the adsorbent for IgM antibody adsorption is very high, the particle size of the adsorbent can be coarsened and the filling degree can be lowered. Regardless of the shape, a high passage rate can be provided so that large amounts of blood or plasma can be processed. As a method of passing blood or plasma, it may be continuously passed or used intermittently depending on clinical needs or according to the equipment status of the equipment.

上記IgM型抗体除去システムは、血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器に、吸着材を充填することにより製造することができる。上記吸着材は、水不溶性担体と、該水不溶性担体に固定化された、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドとを含む吸着材である。また、吸着材として、本発明のIgM型抗体吸着用吸着材を用いることが好ましい。   The IgM type antibody removal system can be manufactured by filling an adsorbent into a container having an inlet port through which blood or plasma flows in and an outlet port through which blood or plasma flows out. The adsorbent is an adsorbent comprising a water-insoluble carrier and a ligand made of a compound having a thienyl group and a carboxyl group, which is immobilized on the water-insoluble carrier. Moreover, it is preferable to use the IgM type | mold antibody adsorption adsorbent of this invention as an adsorbent.

なお、本発明のIgM型抗体吸着用吸着材及びIgM型抗体除去システムは、IgM型自己抗体吸着用吸着材及びIgM型自己抗体除去システムとして用いてもよい。本明細書において、「自己抗体」とは、自己の細胞又は組織(移植されたものも含む)に対して産生される抗体を意味する。すなわち、例えば、血液型のABO不適合移植の際に、増加してくるIgM型抗体は、IgM型自己抗体である。本発明のIgM型抗体吸着用吸着材及びIgM型抗体除去システムは、このようなIgM型自己抗体の吸着、除去にも適している。したがって、本発明のIgM型(自己)抗体吸着用吸着材及びIgM型(自己)抗体除去システムを用いて、血液型のABO不適合移植の際に、増加してくるIgM型自己抗体(抗A抗体、抗B抗体)を吸着除去することは、効果的な治療法となる。   The adsorbent for IgM antibody adsorption and the IgM antibody removal system of the present invention may be used as an adsorbent for IgM autoantibody adsorption and an IgM autoantibody removal system. As used herein, “autoantibody” means an antibody produced against autologous cells or tissues (including transplanted ones). That is, for example, the IgM type antibody that increases during blood type ABO incompatible transplantation is an IgM type autoantibody. The adsorbent for IgM type antibody adsorption and the IgM type antibody removal system of the present invention are also suitable for adsorption and removal of such IgM type autoantibodies. Therefore, IgM type autoantibodies (anti-A antibodies) that increase during blood type ABO incompatible transplantation using the adsorbent for adsorbing IgM type (auto) antibodies and the IgM type (auto) antibody removal system of the present invention Adsorbing and removing (anti-B antibody) is an effective treatment.

以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further in detail, this invention is not limited to these.

[実施例1〜4]
1.吸着材の作製方法
ポリ酢酸ビニル製の球状の多孔質体(旭硝子(株)、平均粒径100μm、排除限界分子量約100万以上、樹脂1mLに充填できる分子量4万のプルランの量が0.20mL/mL以上)100gを、ジメチルスルフォキシド(和光純薬株式会社製)1Lに投入し、水酸化ナトリウム(和光純薬株式会社製)120g、エピクロルヒドリン(和光純薬株式会社製)780mL、水素化ホウ素ナトリウム(和光純薬株式会社製)750mgを用いて30℃で5時間反応させてエポキシ基を導入した。反応後、メタノール(和光純薬株式会社製)で洗浄し、その後、純水で洗浄して活性化多孔質体(以下「活性化担体」ともいう。)を得た。得られた活性化多孔質体に導入されたエポキシ基の量を滴定法により確認した。具体的には、1.3mmol/Lチオ硫酸ナトリウム水溶液(和光純薬株式会社製)4mLと活性化担体2mLに1%フェノールフタレインエタノール溶液(和光純薬株式会社製)2滴を滴下した後、70℃で、赤色の呈色が確認されなくなるまで0.1N塩酸を加え、「活性化量(エポキシ基の量)=塩酸滴定量/樹脂量×100」の式により、エポキシ基の量を求めた。その結果、導入されたエポキシ基の量は、110μeq/mLゲル以上であった。
[Examples 1 to 4]
1. Production method of adsorbent Spherical porous body made of polyvinyl acetate (Asahi Glass Co., Ltd., average particle size of 100 μm, exclusion limit molecular weight of about 1 million or more, the amount of pullulan having a molecular weight of 40,000 that can be filled in 1 mL of resin is 0.20 mL 100 g / mL or more) is charged into 1 L of dimethyl sulfoxide (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 120 g of sodium hydroxide (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 120 g, epichlorohydrin (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 780 mL, hydrogenated Epoxy groups were introduced by reacting 750 mg of sodium boron (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) at 30 ° C. for 5 hours. After the reaction, it was washed with methanol (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and then washed with pure water to obtain an activated porous body (hereinafter also referred to as “activated carrier”). The amount of epoxy groups introduced into the obtained activated porous material was confirmed by a titration method. Specifically, after dropping 2 drops of 1% phenolphthalein ethanol solution (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) into 4 mL of 1.3 mmol / L sodium thiosulfate aqueous solution (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 2 mL of activated carrier. Then, add 0.1N hydrochloric acid at 70 ° C. until red coloration is not confirmed, and calculate the amount of epoxy groups according to the formula of “activation amount (epoxy group amount) = hydrochloric acid titration amount / resin amount × 100”. Asked. As a result, the amount of the introduced epoxy group was 110 μeq / mL gel or more.

2.リガンドの固定化反応
次にpH9.3の炭酸緩衝液(和光純薬株式会社、炭酸ナトリウム/炭酸水素ナトリウム)を溶媒とし、実施例1〜3については、50μeq/mLゲルの固定化量が得られるようにリガンドを溶解した。このリガンド溶液と上述の活性化担体とを、50℃で16時間反応させて、アミノ基と活性化担体のエポキシ基とを共有結合させて吸着材を得た。リガンドとして、実施例1では、チエニルグリシン(L−α−(3−THIENYL)GLYCINE)を、実施例2では、チエニルセリン(β−(2−THIENYL−DL−SERINE))を、実施例3では、チエニルアラニン(β−(2−THIENYL)−D−ALANINE))を用いた(実施例1〜3のリガンドはいずれもSIGMA社製)。リガンドの固定量は、リガンド溶液の波長200nm〜280nmの吸光度スペクトルを測定し、最も高い吸光度を示す波長を用いて、固定化反応前後の差から1mLゲルあたりの固定化量(eq/mLゲル)として算出した。
2. Ligand immobilization reaction Next, a pH 9.3 carbonate buffer (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., sodium carbonate / sodium hydrogen carbonate) was used as a solvent, and for Examples 1 to 3, an immobilized amount of 50 μeq / mL gel was obtained. The ligand was dissolved as This ligand solution and the above-mentioned activated carrier were reacted at 50 ° C. for 16 hours to covalently bond the amino group and the epoxy group of the activated carrier to obtain an adsorbent. As a ligand, thienylglycine (L-α- (3-THIENYL) GLYCINE) is used in Example 1, thienylserine (β- (2-THIENYL-DL-SERINE)) is used in Example 2, and , Thienylalanine (β- (2-THIENYL) -D-ALANINE)) was used (the ligands of Examples 1 to 3 were all manufactured by SIGMA). The amount of ligand immobilized is determined by measuring the absorbance spectrum of the ligand solution at a wavelength of 200 nm to 280 nm, and using the wavelength showing the highest absorbance, the amount immobilized per 1 mL gel (eq / mL gel) from the difference before and after the immobilization reaction. Calculated as

3.カラム法による吸着実験
2.5mLのLaboratory Column(MOLECULAR BIOTECHONOLOGY社製)に1.0mLの吸着材を充填した。そこに、CPDを血液に1:8(容積比)で添加した健常人血液から遠心分離して得られた血漿3.0mLをシリンジポンプにてカラムの入り口部から流速0.3mL/分で10分流通させ、カラム出口より流出した全ての血漿を回収した。
3. Adsorption experiment by column method 2.5 mL of Laboratory Column (manufactured by MOLECULAR BIOTECHNOLOGY) was filled with 1.0 mL of adsorbent. Then, 3.0 mL of plasma obtained by centrifuging from healthy human blood to which CPD was added to blood at a ratio of 1: 8 (volume ratio) was 10 at a flow rate of 0.3 mL / min from the inlet of the column with a syringe pump. The plasma was separated and all the plasma flowing out from the column outlet was collected.

4.分析
カラムに流す前の健常人血漿(元血漿)とカラムより流出させ回収した血漿について、それぞれ、IgM濃度及びフィブリノーゲン濃度を測定した。IgMの濃度は免疫比濁法によって測定し、フィブリノーゲン濃度は、トロンビン凝固時間法によって測定した。吸着量は、元血漿中のIgM及びフィブリノーゲンの濃度(元血漿中濃度)と、カラムより流出させ回収した血漿中のIgM及びフィブリノーゲンの濃度(吸着反応後血漿中濃度)との差として算出した。吸着性能は、吸着率(%)=(1−吸着反応後血漿中濃度/元血漿中濃度)×100で算出した。
4). Analysis The IgM concentration and the fibrinogen concentration were measured for healthy human plasma (original plasma) before flowing through the column and plasma collected from the column. The concentration of IgM was measured by the immunoturbidimetric method, and the fibrinogen concentration was measured by the thrombin clotting time method. The amount of adsorption was calculated as the difference between the concentration of IgM and fibrinogen in the original plasma (concentration in the original plasma) and the concentration of IgM and fibrinogen in the plasma that was discharged from the column and collected (the concentration in plasma after the adsorption reaction). The adsorption performance was calculated by the following equation: adsorption rate (%) = (1−plasma concentration after adsorption reaction / original plasma concentration) × 100.

[比較例1〜6及び参考例]
比較例1〜6は、チエニル基とカルボキシル基を同時に含まない化合物をリガンドとして用いたこと以外は、実施例1〜3と同様の方法で行った。また、参考例は、リガンドを固定しない活性化担体を用いたこと以外は、実施例1〜3と同様の方法で行った。リガンドとして、比較例1では、グリシン(SIGMA社製)を、比較例2では、アラニン(SIGMA社製)を、比較例3では、セリン(SIGMA社製)を、比較例4では、2−チオフェンエチルアミン(2−THIOPHENEETHYLAMINE)(和光純薬株式会社製)を、比較例5では、フェニルアラニン(SIGMA社製)を、比較例6では、トリプトファン(SIGMA社製)を用いた。
[Comparative Examples 1 to 6 and Reference Example]
Comparative Examples 1 to 6 were performed in the same manner as in Examples 1 to 3 except that a compound containing no thienyl group and a carboxyl group was used as a ligand. Moreover, the reference example was performed by the method similar to Examples 1-3 except having used the activated support | carrier which does not fix a ligand. As a ligand, in Comparative Example 1, glycine (manufactured by SIGMA) is used, in Comparative Example 2, alanine (manufactured by SIGMA) is used, in Comparative Example 3, serine (manufactured by SIGMA) is used, and in Comparative Example 4, 2-thiophene is used. Ethylamine (2-THIOPHENEETHYLAMINE) (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), phenylalanine (manufactured by SIGMA) was used in Comparative Example 5, and tryptophan (manufactured by SIGMA) was used in Comparative Example 6.

[結果]
実施例1〜4、比較例1〜6及び参考例(リガンドなし)の結果を合わせて表1に示した。実施例1〜3のチエニル基及びカルボキシル基の双方を有するリガンドを含む吸着材はいずれも比較例1〜6と比較して、フィブリノーゲンの吸着率が低く、かつ、IgM抗体の吸着率が高かった。すなわち、血漿の中から選択的にIgM抗体を吸着していることが判る。
[result]
The results of Examples 1 to 4, Comparative Examples 1 to 6 and Reference Example (no ligand) are shown together in Table 1. The adsorbents containing ligands having both thienyl groups and carboxyl groups in Examples 1 to 3 had lower fibrinogen adsorption rates and higher IgM antibody adsorption rates than Comparative Examples 1 to 6. . That is, it can be seen that IgM antibody is selectively adsorbed from plasma.

Figure 0006126327
Figure 0006126327

本発明のIgM型抗体吸着用吸着材は、フィブリノーゲン吸着を抑え、IgM型抗体を選択的かつ高率に吸着できるため、体外循環吸着療法用の治療器具用として有用である。   The adsorbent for adsorbing IgM antibodies of the present invention is useful as a therapeutic instrument for extracorporeal circulation adsorption therapy because it suppresses fibrinogen adsorption and can selectively adsorb IgM antibodies at a high rate.

1…体外循環モジュール、2…円筒、3,3’…フィルター、4,4’…パッキン、5…入口ポート、6…キャップ、7…出口ポート、8…キャップ、9…IgM型抗体吸着用吸着材。   DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 ... Extracorporeal circulation module, 2 ... Cylinder, 3, 3 '... Filter, 4, 4' ... Packing, 5 ... Inlet port, 6 ... Cap, 7 ... Outlet port, 8 ... Cap, 9 ... Adsorption for IgM antibody adsorption Wood.

Claims (12)

水不溶性担体と、
前記水不溶性担体に固定されたリガンドと、を含み、
前記リガンドが、チオフェン又はその誘導体から複素環を構成する炭素原子に結合した水素原子1個を除いた残りの原子団からなる1価の基、及びカルボキシル基を有する、
IgM型抗体吸着用吸着
A water-insoluble carrier;
A ligand immobilized on the water-insoluble carrier,
The ligand has a monovalent group consisting of the remaining atomic group excluding one hydrogen atom bonded to the carbon atom constituting the heterocyclic ring from thiophene or a derivative thereof, and a carboxyl group.
Adsorbent for IgM antibody adsorption.
前記1価の基と前記カルボキシル基とが、5個以下の原子を介して結合している、請求項1に記載のIgM型抗体吸着用吸着The monovalent group and said carboxyl group is linked via a 5 atoms or less, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to claim 1. 前記1価の基が、チエニル基である、請求項1又は2に記載のIgM型抗体吸着用吸着The monovalent group is a thienyl group, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to claim 1 or 2. 前記リガンドが、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着Said ligand, a compound having a thienyl group and a carboxyl group, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to any one of claims 1-3. 前記リガンドの炭素原子数が5個から13個である、請求項1〜4のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着The number of carbon atoms of the ligand is 13 from five, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to any one of claims 1-4. 前記リガンドが、チエニルグリシン、チエニルアラニン及びチエニルセリンからなる群より選択される少なくとも1種である、請求項1〜5のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着Wherein said ligand is at least one selected from the group consisting of thienyl glycine, thienylalanine and Chieniruserin, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to any one of claims 1-5. 血液型の抗A抗体及び抗B抗体から選ばれるIgM型抗体の吸着用である、請求項1〜6のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着It is for the adsorption of IgM antibody selected from blood anti-A antibody and anti-B antibodies of, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to any one of claims 1-6. 固定化された前記リガンドの量が、前記水不溶性担体1mLゲルあたり10μmol〜200μmolである、請求項1〜7のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着The amount of immobilized the ligand is a said 10μmol~200μmol per water-insoluble carrier 1mL gel, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to any one of claims 1 to 7. 前記水不溶性担体が粒子状の多孔質体であり、前記多孔質体の排除限界分子量が15万〜1000万である、請求項1〜8のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着The adsorption for IgM type antibody adsorption according to any one of claims 1 to 8, wherein the water-insoluble carrier is a particulate porous body, and the porous body has an exclusion limit molecular weight of 150,000 to 10,000,000. Agent . フィブリノーゲンの吸着率をPf、IgM型抗体の吸着率をPmとしたときに、Pm/Pf≧3である、請求項1〜9のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着The adsorption rate of fibrinogen Pf, the adsorption rate of IgM antibody is taken as Pm, is Pm / Pf ≧ 3, IgM antibody-adsorbing adsorbent according to any one of claims 1-9. 血液又は血漿を流入させる入口ポート、及び血液又は血漿を流出させる出口ポートを有する容器と、
該容器に充填された請求項1〜7のいずれか一項に記載のIgM型抗体吸着用吸着と、を備える体外循環モジュールからなる、血液又は血漿中IgM型抗体除去システム。
A container having an inlet port through which blood or plasma flows in and an outlet port through which blood or plasma flows out;
Either the IgM antibody-adsorbing adsorbent according to paragraph (1) consists of extracorporeal circulation module comprising a blood or plasma IgM antibody removal system according to claim 7 filled in the container.
血液又は血漿中IgM型抗体除去システムの製造における、
水不溶性担体と、前記水不溶性担体に固定化された、チエニル基及びカルボキシル基を有する化合物からなるリガンドとを含むIgM型抗体吸着用吸着の使用。
In the production of an IgM type antibody removal system in blood or plasma,
A water-insoluble carrier, the water-insoluble carrier is immobilized, the use of IgM antibody-adsorbing adsorbent comprising a ligand comprising a compound having a thienyl group and a carboxyl group.
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