JP5026072B2 - 二重特異性抗体の多価キャリヤー - Google Patents

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Description

発明の背景
本出願明細書は、２００３年７月１日に出願した仮出願連続番号６０／４８３，８３２号明細書に対する優先権を主張するものであり、上記明細書の内容はその全部を引用することにより本明細書の一部とされている。
発明の分野
本発明は、二重特異性抗体（ｂｓＡｂｓ）の多価キャリヤーである化合物、すなわち、該化合物のそれぞれの分子が２以上の二重特異性抗体のキャリヤーとして働くことができるものを提供する。本発明はまた、多価化合物と２以上の二重特異性抗体との会合によって形成された複合体を提供する。好ましい態様では、本発明の化合物は、増加したアフィニティー、イン・ビトロおよび／またはイン・ビボでの高安定性、および好ましい薬物動態などの所望な属性を有する複合体を形成する。本発明の化合物および複合体は、治療およびイン・ビトロ応用に有用である。
背景技術
本発明の背景の下記の記載は、本発明の理解における単なる補助として提供され、発明の従来技術を説明しまたは構成する目的で認められてはいない。
癌治療および診断の方法は、疾患組織に抗体（Ａｂｓ）または抗体断片を向け、抗体または抗体断片が治療薬を疾患部位、すなわち、標的組織に進めることができる様にすることを含む。「標的組織」は、ターゲッティング可能な構築物を優先的に送達する任意の生物学的存在（例えば、器官系、器官、組織、細胞、細胞小器官、受容体、表面抗原、膜貫通タンパク質、分泌ポリペプチド、または細胞内成分）である。「送達する」という用語は、標的組織と接触し、結合し、および／または標的組織によってインターナライズしていることを包含する。本明細書で用いられる「および／または」という用語は、「および追加的または二者択一的に」、または「および、なおその上にまたは代替的に」の意味を有する。
本発明の治療的側面では、標的組織は悪性の、感染した、炎症を起こした（ある種の自己免疫疾患部位）、機能不全または置換、または異所性（例えば、感染細胞、癌細胞、子宮内膜症など）のもの、あるいは罹患しているもの（例えば、アテローム性動脈硬化症、虚血、血餅）である。抗体は、治療薬を標的組織に送達するのに用いられる。
ｂｓＡｂ／低分子量（ＭＷ）ハプテン系の使用は、何らかの制限もないものというものではない。低ＭＷハプテンは、望ましくはｂｓＡｂによって結合されていないときには速やかに生体系を浄化するものであるので、低ＭＷハプテンに結合するｂｓＡｂのアームは高親和性で結合しなければならない。非ｂｓＡｂに結合した低ＭＷハプテンは、生体系を速やかに浄化して非標的組織の取込および保持を回避する必要がある。更に、治療薬は、用いられるｂｓＡｂプロトコール内で低ＭＷハプテンとその適用中は関連したままにしなければならない。
本出願明細書は、１９９９年６月２２日出願の「予備ターゲッティング診断および療法のための二重特異性抗体の使用」という標題の米国特許出願連続番号第０９／３３７，７５６号明細書（Docket 無．IMM 138；Atty Docket 無．018733-0884）の全体の内容を、引用することにより本明細書の一部としている。
本出願明細書は、１９９９年８月２３日出願の「予備ターゲッティング診断および療法のための二重特異性抗体の使用」という標題の米国特許出願連続番号第０９／３８２，１８６号明細書（Docket 無．IMM 138 CIP；Atty Docket 無．018733-0942）の全体の内容を、引用することにより本明細書の一部としている。
本出願明細書は、２００１年４月３日出願の「二重特異性抗体と使用するための新規なペプチドを素材とする薬剤の産生および使用」という標題の米国特許出願連続番号第０９／８２３，７４６号明細書（Docket 無．IMM 160；Atty Docket 無．018733-1015）の全体の内容を、引用することにより本明細書の一部としている。
本出願明細書は、２００２年３月１日出願の「クリアランス速度を高めるための二重特異性抗体点突然変異」という標題の米国特許仮出願連続番号第６０／３６１，０３７号明細書（Docket 無．IMM 169；Atty Docket 無．018733-1037）の全体の内容を、引用することにより本明細書の一部としている。
本出願明細書は、Hansen et al.の「予備ターゲッティング診断および療法のための二重特異性抗体の使用」という標題の国際公開されたＰＣＴ出願ＷＯ ９９／６６９５１号明細書の全体の内容を、引用することにより本明細書の一部としており、上記明細書には、本明細書における実施例に用いられる試薬の幾つかが記載されている。
ＩＭＰ １９２の合成は、Karacay et al.,「ヒト化抗ＣＥＡ ｘ ネズミ抗−［Ｉｎ−ＤＴＰＡ］二重特異性抗体構築物および（９９ｍ）Ｔｃ−／（１８８）Ｒｅで標識したペプチドを用いる癌の実験的予備ターゲッティング研究」Bioconjug. Chem. 11:842-854, 2000に記載されている。
１１１Ｉｎを用いるＡｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（−ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（−ＤＴＰＡ）−ＮＨ２の放射能標識は、Boerman et al.,「腎細胞癌の予備ターゲッティング： 二価キレートを用いる改良された腫瘍ターゲッティング」 Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５９：４４００−４４０５， １９９９に記載されている。
発明の概要
本発明は、多価および／または多重特異性であるマルチマー性のターゲッティング可能な複合体を提供する。本発明は、更にこのような複合体の製造方法、このような複合体を製造するための組成物、および本発明のマルチマー性のターゲッティング可能な複合体の使用方法も提供する。
ターゲッティング可能な複合体
本発明は、多価および／または多重特異性であるマルチマー性のターゲッティング可能な複合体に関する。マルチマー性で多価ターゲッティング可能な複合体の非制限的例は四価のターゲッティング可能な複合体であって、（ａ）ターゲッティング可能な構築物と（ｂ）２分子の二重特異性抗体であって、それぞれの分子が（ｉ）２本のアームであって、そのそれぞれがキャリヤーエピトープと結合しているもの、および（ii）２本のアームであって、そのそれぞれが標的エピトープを結合することができるものを含んでなるものである。複合体は四価であり、総数が４本のアームを含んでなり、そのそれぞれが標的エピトープと結合することができるもの（標的エピトープと結合することができる２本のアームを有する抗体２分子）を含んでなるからである。
本発明のターゲッティング可能な複合体は、多重特異性、多価または両方であってよい。
四価複合体は多価複合体の実例であり、ホモ二量体またはヘテロ二量体であることができる。
ホモ二量体（例えば、本発明の四価のターゲッティング可能な複合体）では、２つの二重特異性抗体のいずれもが同一の標的エピトープと結合する２本のアームとキャリヤーエピトープに結合する２本のアームを有する。ホモ二量体性複合体は二重特異性であるが、そのアームが（ａ）キャリヤーエピトープまたは（ｂ）標的エピトープを認識するからであり、四価であるが、標的エピトープを認識する４本のアームを有するからである。
本発明の四価ターゲッティング可能な複合体は標的エピトープに結合することができる４本のアームを有し、以下を含んでなる：
（ａ）（ｉ）分子スカフォールドと（ii）２対のキャリヤーエピトープとを含んでなるターゲッティング可能な構築物、および
（ｂ）二重特異性抗体の２つの分子であって、それぞれの抗体が（ｉ）２本のアームであって、それぞれのアームが上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなるものと（ii）２本のアームであって、それぞれが上記標的エピトープに対する結合部位を含んでなるものを含んでなるもの。
好ましくは、本発明の四価の複合体は１種類以上の下記の属性を有する：
（Ｉ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（II）上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、混合物であって、その中の複合体の約７５％を上回るものが上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有するものを生じ、
（III）１対のキャリヤーエピトープが上記二重特異性抗体によって１：１の比率で結合されていること。
ヘテロ二量体（例えば、２つの標的エピトープそれぞれに対して二価であるターゲッティング可能な複合体）では、２つの二重特異性抗体のそれぞれは異なる標的エピトープと結合する２本のアームとキャリヤーエピトープと結合する２本のアームを有する。ヘテロ二量体性複合体は二重特異性であり（２つの異なる標的エピトープを認識する）、それぞれの標的エピトープに対して二価であるが、これは４本のアームを有し、上記アームの２本は第一のキャリヤーエピトープを認識し、他の２本のアームは第二の標的エピトープを認識するからである。
２つの標的エピトープのそれぞれに対して二価である本発明のターゲッティング可能な複合体は、以下を含んでなる：
（ａ）（ｉ）分子スカフォールドと（ii）２対のキャリヤーエピトープを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、上記２対のキャリヤーエピトープの第一のものが第一の二重特異性抗体によって特異的に結合され、且つ上記２対のキャリヤーエピトープの第二のものが第二の二重特異性抗体によって特異的に結合されているものであり、
上記ターゲッティング可能な構築物が
（ｂ）第一の二重特異性抗体であって、（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）第一の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる第一の二重特異性抗体、および
（ｃ）第二の二重特異性抗体であって、（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）第二の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる第二の二重特異性抗体
と結合したときに、ターゲッティング可能な複合体を形成する。
好ましくは、２つの標的エピトープのそれぞれに対して二価である本発明のターゲッティング可能な複合体は、下記の属性の１つ以上を有する：
（Ｉ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（II）上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、その中の複合体の約７５％を上回る複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じ、
（III）それぞれの対のキャリヤーエピトープが上記二重特異性抗体の１つによって１：１の比率で結合されていること。
ホモ二量体性およびヘテロ二量体性の四量体性複合体は、ターゲッティング可能な複合体に包含されるものであり、該、ターゲッティング可能な複合体は、以下を含んでなる：
（ａ）（ｉ）分子スカフォールドと（ii）２対のキャリヤーエピトープを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、上記２対のキャリヤーエピトープの第一のものが第一の二重特異性抗体によって特異的に結合し、上記２対のキャリヤーエピトープの第二のものが第二の二重特異性抗体によって特異的に結合しているものであり、
上記ターゲッティング可能な構築物は、
（ｂ）第一の二重特異性抗体であって、（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）第一の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる上記第一の二重特異性抗体、および
（ｃ）第二の二重特異性抗体であって、（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）第二の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる上記第二の二重特異性抗体
と結合したときに、ターゲッティング可能な複合体を形成し、
上記第一の二重特異性抗体と上記第二の二重特異性抗体は同一でもまたは異なっていてもよく、上記対のキャリヤーエピトープは同一でもまたは異なっていてもよく、上記標的エピトープは同一でもまたは異なっていてもよく、下記の１以上のことが適合する：
（Ｉ）上記ターゲッティング可能な複合体の標的エピトープに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（II）ターゲッティング可能な構築物と二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、混合物であってその中の約７５％を上回る複合体が二重特異性抗体２分子とターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有するものを生じ、
（III）キャリヤーエピトープのそれぞれの対が上記二重特異性抗体の１つによって１：１の比率で結合していること。
一般に、多価および／または多重特異性複合体は、以下を含んでなる：
分子スカフォールドとＸ対のキャリヤーエピトープを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、上記対のキャリヤーエピトープのそれぞれがＸ個の二重特異性抗体の１つによって特異的に結合されおり、それぞれの二重特異性抗体は（ａ）キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ｂ）Ｙ個の標的エピトープの１つに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーを含んでなるものであり、
（ｉ）Ｘは≧２の整数であり、
（ii）Ｙは＞１の整数であり、
（iii）上記Ｘ個の二重特異性抗体は同一であってもまたは異なる二重特異性抗体の混合物であってもよく、
（iv）上記Ｘ対のキャリヤーエピトープは同一であってもまたは異なるキャリヤーエピトープの混合物であってもよく、
（ｖ）Ｙ＞２であるときには、上記Ｙ個の標的エピトープは同一であってもまたは異なる標的エピトープの混合物であってもよく、および
キャリヤーエピトープの対は二重特異性抗体によって１：１の比率で結合されている。
ターゲッティング可能な構築物
本発明は、患者に投与する前および／または後に二重特異性抗体と共にターゲッティング可能な複合体を形成するのに用いることができる多価のターゲッティング可能な構築物に関する。この構築物は二重特異性抗体のアームによって結合されている２対以上のキャリヤーエピトープを含んでなり、従って、多価構築物である。
四量体性複合体に関し、四価の（すなわち、２対のキャリヤーエピトープを含んでなる）ターゲッティング可能な構築物は、分子スカフォールドと２対のキャリヤーエピトープを含んでなり、ターゲッティング可能な構築物は（ｉ）キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）標的エピトープの結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーを含んでなる二重特異性抗体と結合するときには、ターゲッティング可能な複合体を形成する。
２つの標的エピトープのそれぞれについて二価である本発明の四量体性のターゲッティング可能な複合体は、分子スカフォールドと２対のキャリヤーエピトープを含んでなり、キャリヤーエピトープの第一の対は第一の二重特異性抗体によって特異的に結合し、キャリヤーエピトープの第二の対は第二の二重特異性抗体によって特異的に結合し、
ターゲッティング可能な構築物は、
（ａ）第一の二重特異性抗体であって、（ｉ）キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）第一の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーを含んでなる第一の二重特異性抗体と、
（ｂ）第二の二重特異性抗体であって、（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）第二の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーを含んでなる上記第二の二重特異性抗体
と結合するときには、ターゲッティング可能な複合体を形成する。
一般に、多価および／または多重特異性構築物は、分子スカフォールドとＸ対のキャリヤーエピトープを含んでなり、上記対のキャリヤーエピトープのそれぞれがＸ個の二重特異性抗体の一つによって特異的に結合しており、それぞれの二重特異性抗体は（ａ）キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ｂ）Ｙ個の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーを含んでなり、但し、
（ｉ）Ｘは≧２の整数であり、
（ii）Ｙは≧１の整数であり、
（iii）上記Ｘ二重特異性抗体は同一でもまたは異なる二重特異性抗体の混合物であってもよく、
（iv）上記Ｘ対のキャリヤーエピトープは同一でもまたは異なるキャリヤーエピトープの混合物であってもよく、
（ｖ）Ｙ＞２のときには、上記Ｙ個の標的エピトープは同一でもまたは異なる標的エピトープの混合物であってもよく、
１対のキャリヤーエピトープは二重特異性抗体によって１：１の比率で結合されている。
好ましくは、本発明のターゲッティング可能な構築物を用いて形成したターゲッティング可能な複合体は、１種類以上の下記の属性を有する：
（ａ）ターゲッティング可能な複合体の標識エピトープに対するＫｄは約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（ｂ）ターゲッティング可能な構築物と二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合すると、混合物であって、その中の複合体の約７５％を上回るものが二重特異性抗体２分子とターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有するものを生じ、
（ｃ）１対のキャリヤーエピトープが上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記の２つのコピーによって同時に結合され、上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記２つのコピーが上記二重特異性抗体の一部であること。
態様
多重特異性抗体、例えば、１種類以上の治療薬を収容(carry)することができるターゲッティング可能な構築物と特異的に結合する２本以上のアームと、標的組織と結合する２本以上のアームを有する抗体を調製して使用するのが有利であることを見出した。この手法を利用することによって、二重特異性抗体と他の多重特異性抗体、ターゲッティング可能な構築物、キレート剤、金属キレート複合体、治療薬のマルチマー化を変化させて、様々な用途に適応させることができる。
多重特異性抗体は、定義により、少なくとも２種類の標的に特異的に結合しなければならないので、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）は多重特異性抗体の最も単純な形態である。同様に、多価抗体は、定義により、単一の標的に対して少なくとも２個の結合部位を持たなければならないので、二価抗体は多価Ａｂの最も単純な形態である。従って、最低でも、本発明のＡｂは二重特異性（すなわち、２種類の標的と結合する）且つ二価（標的と結合するアームの２つのコピーを含んでなる）である。
本発明で用いられる抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、カメリド抗体、ＣＤＲ、可溶性ＴＣＲ、融合タンパク質、裸の抗体、または上記のいずれかの断片であることができる。
ターゲッティング可能な構築物は、ペプチド、炭水化物、および／またはキレート剤または金属−キレート複合体を包含するがこれらに限定されない１種類以上のハプテンを含んでなることができる。非制限的例としては、キレート剤はハード酸カチオンに対するハード塩基キレート剤であることができ、キレート剤の少なくとも１つはソフト酸カチオンに対するソフト塩基キレート剤でアルカノール、またはカルボキシレートおよびアミン基を含んでなるハード塩基キレート剤である。ハード塩基キレート剤の非制限的例としては、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡおよびＴＥＴＡが挙げられる。
本発明は、多価および／または多重特異性のターゲッティング可能な構築物および複合体を利用する方法に関する。幾つかの態様では、ターゲッティング可能な構築物または複合体は、生物活性部分、例えば、生化学的過程を開始し、高め、制限し、または防止する部分を含んでなる。本発明の生物活性部分は、薬剤、プロドラッグ、酵素、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、放射性核種、画像増強剤、および毒素からなる群から選択される。「生化学的過程」は、細胞または亜細胞部分の任意の活性または過程を変更する任意の過程である。亜細胞部分は、細胞小器官、例えば、ミトコンドリア、小胞体、核、仁、または細胞膜および／またはその上の受容体であることができる。非制限的例としては、生化学的過程は、シグナルカスケード、補体カスケード、アポトーシス、生化学的経路、または上記のいずれかで起こる１種類以上の反応であることができる。
生化学的過程は、１種類以上の反応を含んでなる。「反応」は、１種類以上の他の分子との接触に対する１種類以上の分子の任意の応答、または１種類以上の他の分子の近傍における変化に対する１種類以上の分子の任意の応答である。１つの分子が２個以上の分子に開裂する、および／または２個以上の分子が互いに反応して１種類以上の異なる分子を形成する化学反応は、反応の非制限的例である。２種類以上の分子の互いの非共有的会合は、反応のもう一つの例である。１つの分子から別の分子への電子またはイオンの移動は、反応のもう一つの例である。別の分子との接触に応答したコンホメーションの変化は、反応のもう一つの例である。分子の分子内および分子間転座は、反応である。
幾つかの態様では、ターゲッティング可能な構築物および複合体は、それらがそれ自身生物活性部分を含んでなるからではなく、ターゲッティング可能な構築物または複合体のその標的組織への結合により生化学的過程を開始し、高め、制限しまたは防止するから、生物活性である。例えば、幾つかの態様では、ターゲッティング可能な複合体の二重特異性抗体は裸の抗体であることができる。「裸の抗体」は、一般的には抗体のＦｃ部分を欠いている抗体である。抗体分子のＦｃ部分は、補体結合反応およびＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）のような機構を実行させて細胞リーシスを生じることがあるエフェクター機能を提供する。しかしながら、Ｆｃ部分は、いずれの場合においても効果を示すアポトーシスのような他の機構と共に治療上の機能に必要とされないことがある。
ターゲッティング可能な構築物および複合体は、疾病組織を殺しまたは増殖を遅らせるのに有用な１種類以上の薬剤を含んでなることがある。非制限的例としては、薬剤は、放射性同位体、特に本明細書に記載の治療上有用な治療用放射性核種でよい。薬剤は毒素、１種類以上の薬物、および／または１種類以上のプロドラッグであってもよい。非制限的例としては、ターゲッティング可能な構築物または複合体は、ドキソルビシン、ＣＰＴ−１１またはＳＮ３８を含んでなることができる。
本発明の一態様は、ホウ素ニュートロン捕捉療法（ＢＮＣＴ）における開示の組成物および方法の使用を伴う。ＢＮＣＴでは、ターゲッティング可能な構築物はホウ素原子を含んでなり、この場合には、この方法は更にホウ素原子を疾病組織に集中して照射することによって、ＢＮＣＴを行う段階を含んでなる。
本発明の様々な態様は、本発明の予備成形したターゲッティング可能な複合体を用いる予備ターゲッティングの方法および組成物を提供する。ターゲッティング可能な複合体は、多価ターゲッティング可能な構築物を含んでなり、これは所望により、１種類以上の生物活性剤、および多価ターゲッティング可能な構築物と特異的に結合する１対のアームと標的組織と結合する２本のアームを含んでなる１対以上の二重特異性抗体を収容している。
本発明のもう一つの態様は、本発明のターゲッティング可能な複合体を含んでなるキットを含み、これは、疾病組織を殺しまたは増殖を遅らせるのに有用な１種類以上の放射性同位体、１種類以上の毒素、１種類以上の薬物、および１種類以上のプロドラッグからなる群から選択される１種類以上の化合物を含んでなることがある。
もう一つの態様では、本発明は、アテローム硬化性斑、血栓および栓子などの血管血餅、心筋梗塞、および他の器官梗塞のような循環器病変のターゲッティングのための組成物および方法を提供する。
本発明は、アミロイドーシスにおけるアミロイドのような代謝疾患並びにアルツハイマー病のような神経変性疾患のターゲッティングのための組成物および方法も提供する。
もう一つの態様では、本発明は、形成不全、非存在、解剖学的に置換されているか、または異所性組織または器官を有する哺乳類を治療するための組成物および方法を提供する。
もう一つの態様では、本発明は、例えば、病原体性疾患、癌、循環器疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および自己免疫疾患などの疾患を治療するための組成物および方法を提供する。
もう一つの態様では、本発明は、本発明の組成物を含んでなる医薬組成物およびキットを提供する。
もう一つの態様では、本発明は、試料または環境中の物質を検出するのに用いることができるバイオセンサーを製造するための組成物および方法を提供する。
もう一つの態様では、本発明は、イムノアッセイおよびイムノアフィニティー精製などを含むがこれらに限定されないイン・ビトロでの免疫化学的方法のための組成物および方法を提供する。これらおよび他の態様では、本発明の組成物は固形支持体に結合させることができる。典型的な固形支持体としては、計深棒、ビーズ、マルチタイタープレート、マルチウェル／マイクロタイタープレートにおけるウェルの内部表面、および膜が挙げられる。
もう一つの態様では、本発明は、目的とする化合物を組成物中の望ましくない物質から分離するための組成物および方法を提供する。この態様では、ターゲッティング可能な構築物または複合体は固形支持体に結合しており、これに組成物が接触するのである。目的とする化合物または望ましくない物質は、固形支持体に結合しているターゲッティング可能な構築物または複合体によって結合されている。更なる段階では、目的とする化合物または望ましくない物質は固定されたターゲッティング可能な構築物または複合体によって停留されているので、目的とする化合物または望ましくない物質は互いに分離される。本発明の組成物および方法は、透析装置または器官系、並びに製造工程において用いることができる。
更に、本発明は、構造［ＩｇＧ１］−［ｓｃＦｖ］２を含んでなる二重特異性抗体であって、１対の重鎖および１対の軽鎖を含んでなり、それぞれの重鎖がＩｇＧＩ重鎖およびｓｃＦｖとを含んでなり、上記ｓｃＦｖが上記ＩｇＧ１重鎖のＣ末端に所望によりリンカーペプチドを介して融合されてなる、上記抗体を提供する。重鎖と軽鎖とによって形成された抗体結合部位は、標的組織上のエピトープに特異的に結合することができる。ｓｃＦｖ部分のそれぞれは、キャリヤーエピトープに特異的に結合することができる。ＩｇＧ１および／またはｓｃＦｖ分子ヒト、ヒト化、キメラ、またはＣＤＲを移植したものであることができる。抗体は、更に生物活性部分を含む。生物活性部分は、例えば、薬剤、プロドラッグ、酵素、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、放射性核種、画像増強剤、および／または毒素であることができる。二重特異性抗体は、医薬組成物に処方することができる。
このような二重特異性抗体の具体例としては、［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１］−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１(I253A)］−［７３４ｓｃＦｖ］２、［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１］−［６７９ｓｃＦｖ］２および［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１］−［６７９ｓｃＦｖ］２、［ｈＡ２０−ＩｇＧ１］−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈ−Ａ２０−ＩｇＧ１(I253A)］−［７３４ｓｃＦｖ］２、［ｈＡ２０−ＩｇＧ１］−［６７９ｓｃＦｖ］２および［ｈＡ２０−ＩｇＧ１(I253A)］−［６７９ｓｃＦｖ］２、［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１］−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１(I253A)］−［７３４ｓｃＦｖ］２、および［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１］−［６７９ｓｃＦｖ］２および［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１(I253A)］−［６７０ｓｃＦｖ］２が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明は更に、ターゲッティング可能な構築物に結合された、四価の結合分子を有する結合複合体であって、四価の結合分子がキャリヤーエピトープに対する２個の結合部位および標的エピトープに対する２個の結合部位を有し、ターゲッティング可能な構築物が分子スカフォールドおよび少なくとも２個のキャリヤーエピトープを有するものを提供する。ターゲッティング可能な構築物は、少なくとも２対のキャリヤーエピトープを有することができ、複合体においては少なくとも２個の四価の結合分子はターゲッティング可能な構築物に結合されてなることができる。ターゲッティング可能な構築物は、少なくとも２対の異なるキャリヤーエピトープを含むことができ、複合体においては第一の四価の結合分子が１対のキャリヤーエピトープに結合することができ、第二の四価の結合分子は第二の対のキャリヤーエピトープに結合することができる。キャリヤーエピトープの対は、異なるエピトープであることができる。第一および第二の四価の結合分子は、同一の標的エピトープに結合することができる。ターゲッティング可能な構築物は、ＩＭＰ ２４６、ＩＭＰ １５６、ＩＭＰ １９２、およびＩＭＰ ２２２からなる群から選択することができる。キャリヤーエピトープは、ハプテンでよい。キャリヤーエピトープはキレート剤であることができ、キレート剤、所望により金属イオンに結合している。キレート剤は、例えば、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ベンジルＤＴＰＡ、ＮＯＴＡ、またはＴＥＴＡであることができる。四価の結合分子は、構造［ＩｇＧ１］−［ｓｃＦｖ］２を有する二重特異性抗体であることができ、この抗体は１対の重鎖および１対の軽鎖を有し、それぞれの重鎖がＩｇＧ１重鎖およびｓｃＦｖを有し、ｓｃＦｖがＩｇＧ１重鎖のＣ末端に所望によりリンカーペプチドを介して融合されている。結合複合体においては、分子スカフォールドは、例えば、ペプチドまたはペプチド誘導体であることができる。
これらの例のそれぞれにおいて、標的エピトープは、例えば、過剰増殖性疾患、病原体性疾患、癌、循環器疾患、神経変性疾患、代謝疾患、または自己免疫疾患のような疾患と関連した抗原であることができる。癌は、例えば、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道、胃、頭および頸癌、ホジキンリンパ腫、肺癌、髄様甲状腺（medullary thyroid）、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、神経膠腫、黒色腫、肝臓癌、前立腺癌、および／または膀胱癌のような癌であることができる。標的エピトープは、例えば、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＢｒＥ３、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＮＣＡ ９５、ＮＣＡ９０、ＨＣＧおよびそのサブユニット、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ｅｐ−ＣＡＭ、Ｂａ７３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＫＣ４、ＫＳ−１、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＰＡＭ−４、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＲＳ５、Ｓ１００、ＴＡＧ−７２、ｐ５３、テネイシン、ＩＬ−６、インスリン増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、Ｔｎ抗原、トムソン−フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦ、１７−１Ａ、血管新生マーカー、サイトカイン、イムノモジュレーター、癌遺伝子マーカー、癌遺伝子産物、および他の腫瘍関連抗原からなる群から選択される腫瘍関連抗原であることができる。
本発明は、被検者における疾患を治療する方法であって、（ｉ）キャリヤーエピトープに対する２個の結合部位および標的エピトープに対する２個の結合部位を有する四価の結合分子であって、標的エピトープが疾患と関連したエピトープであるもの、（ii）所望により、浄化剤、および（iii）分子スカフォールドおよび少なくとも２個のキャリヤーエピトープを有するターゲッティング可能な構築物を疾患に罹患している被検者に投与することによる方法も提供する。疾患は、例えば、過剰増殖性疾患、病原体性疾患、癌、循環器疾患、神経変性疾患、代謝疾患、 または自己免疫疾患であることができる。この方法に用いられるターゲッティング可能な構築物は生物活性部分を含むことができる。
本発明は、被検者における疾患を診断／検出する方法であって、（ｉ）キャリヤーエピトープに対する２個の結合部位および標的エピトープに対する２個の結合部位を有する四価の結合分子、（ii）所望により、浄化剤、および（iii）分子スカフォールドおよび少なくとも２個のキャリヤーエピトープを有するターゲッティング可能な構築物であって、検出可能な標識を有する構築物を疾患への罹患が疑われる被検者に投与することによる方法も提供する。
標的エピトープは、例えば、患者の１種類以上の細胞、組織、器官、または器官系内に含まれ、によって表示され、またはから放出されることがある。
本発明は、（ｉ）キャリヤーエピトープに対する２個の結合部位および標的エピトープに対する２個の結合部位を有する四価の結合分子、（ii）所望により、浄化剤、および（iii）分子スカフォールドおよび少なくとも２個のキャリヤーエピトープを有するターゲッティング可能な構築物を有するキットも提供する。
本発明のその他の側面、特徴および利点は、下記の説明に記載されるであろうし、または部分的にはこの説明から明らかになるであろうし、または本発明の実施によって学習することができる。本発明の態様および利点は、特に追加態様で指摘した手段および組合せによって実現し、得ることができる。
発明の具体的説明
本発明は、多価の多重特異性（例えば、二重特異性）抗体を含んでなるターゲッティング可能な複合体を提供する。二重特異性抗体は、標的組織と特異的に結合する少なくとも１本のアームと、ターゲッティング可能な構築物と特異的に結合する少なくとも１本の他のアームを有する。
「標的組織」は、ターゲッティング可能な構築物を優先的に送達する器官系、器官、組織、細胞、細胞内成分、受容体、または細胞小器官である。本発明の治療的側面では、標的組織は感染しおよび／または機能不全を起こしている（例えば、癌細胞、感染細胞、異所性細胞など）。
抗体の他に、複合体は、少なくとも１個のターゲッティング可能な構築物を含んでなる。「ターゲッティング可能な構築物」とは、二重特異性抗体のアームによって認識される少なくとも２対のキャリヤーエピトープを含んでなるまたは有する分子スカフォールドを含んでなる。本明細書で用いられる「分子スカフォールド」（または単に「スカフォールド」）とは、このスカフォールドおよび／または他の部分に対してエピトープおよび他の部分が様々な位置でおよび／または様々な配向で結合することができる任意の化学構造である。分子スカフォールドの非制限的例としては、ペプチドまたはペプチド誘導体、オリゴペプチド、およびオリゴヌクレオチドが挙げられる。Skerra, 分子認識のための遺伝子工学処理したタンパク質スカフォールド， J. Mol. Recog. 13: 167-187, 2000；正誤表：J. Mol. Recog. 14: 141,2001を参照されたい。オリゴヌクレオチドは、ｐ５３に相当するアンチセンスオリゴヌクレオチド分子または遺伝子であることができる。また、ｂｃｌ−２の発現を阻害するアンチセンス分子のようなオリゴヌクレオチドは、米国特許第５，７３４，０３３号明細書（Ｒｅｅｄ）に記載されている。
ターゲッティング可能な構築物のエピトープは、本明細書では「キャリヤーエピトープ」と呼ばれる。本明細書で用いられる「エピトープ」（「免疫原性認識部分」としても知られる）は、認識部分または分子によって特異的に結合される任意の分子または部分である。認識部分および分子の非制限的例としては、抗体、抗体誘導体、抗体の抗原結合領域および最小認識単位、および受容体特異性リガンドが挙げられる。
認識可能なハプテンの非制限的例としては、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ヒスタミン−スクシニルグリシン（ＨＳＧ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、特異性抗体を生じることがあるビタミンＢ−１２および他の部分のようなキレート剤が挙げられるが、これらに限定されず、ｓｃＦｖが好ましい。ＨＳＧまたはＤＴＰＡハプテンに対して生じる抗体は既知のものであり、抗体のｓｃＦｖ部分は、二重特異性抗体のキャリヤーエピトープ結合アームとして用いることができる。キャリヤーエピトープの結合は、それぞれのｓｃＦｖ成分に対して極めて特異性である。
ターゲッティング可能な構築物は多価であり、二価ペプチドが好ましいペプチドである。ターゲッティング可能な構築物は、治療に有用な様々な薬剤に結合または接合することができるが、していなくともよい。あるいは、ターゲッティング可能な構築物は、このような薬剤と組み合わせて投与することができる。このような薬剤の例としては、金属キレート複合体、葉酸部分、薬物、毒素、およびサイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、イムノモジュレーター、酵素、放射線増感剤、アスパラギナーゼ、ＲＮアーゼ、ＤＮアーゼ、カルボラン、受容体ターゲッティング剤、および放射性ハロゲンのような他のエフェクター分子が挙げられるが、これらに限定されない。更に、プロドラッグの活性化または薬物の標的特異性毒性の増加に有用な酵素を、キャリヤーに接合させることができる。従って、ターゲッティング可能な構築物を特異的に結合する少なくとも１本のアームを有する二重特異性抗体を用いて、用途毎に新たなｂｓＡｂを生じさせることなく様々な応用を行うことができる。
「抗体断片」（「抗体誘導体」としても知られる）という用語は、特異性抗原に結合して複合体を形成することによって抗体に似た作用を行う任意の合成または遺伝子工学処理を施したタンパク質を包含する。例えば、抗体断片としては、単離断片、重および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、軽および重鎖可変領域がペプチドリンカーによって結合している組換え一本鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）、および超可変領域に似ているアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。抗体および抗体断片は、下記に更に詳細に説明する。
Ｉ．ターゲッティング可能な構築物および複合体の生物活性
ターゲッティング可能な構築物は分子スカフォールドの活性化により生物活性であることがあり、または構築物は所望により生物活性部分を含んでなることがある。ターゲッティング可能な複合体はターゲッティング可能な構築物の活性により生物活性であることがあり、または複合体は所望により生物活性部分または分子を含んでなることがある。
Ｉ．Ａ．定義
「生物活性」（「生物活性（bioactive）と同義）という用語は、組成物または化合物自身が生物学的効果を有すること、またはそれが、生物学的効果を有する内在性分子の産生または活性を改質し、引き起こし、促進し、高め、遮断し、減少させ、制限する、またはこれと反応しまたはまたはこれに結合することを示す。「生物学的効果」とは、免疫反応性応答を刺激しまたは引き起こす効果、動物の生物学的工程強い影響を与える効果、病原体または寄生生物の生物学的工程似強い影響を与える効果、検出可能な信号を生成しまたは生成させるようにする効果などでよいが、これらに限定されない。生物活性組成物、複合体または化合物は、治療、予防および診断方法および組成物似用いることができる。生物活性組成物、複合体または化合物は、動物に所望な効果を生じさせまたは刺激する作用を行う。所望な効果の非制限的例としては、例えば、疾患または疾病に罹っている動物の疾患または疾病を予防し、治療しまたは治癒し、病原体に感染している動物の病原体の増殖を制限しまたは殺し、動物の表現型または遺伝子型を増大させまたは変更し、動物の予防的免疫反応性応答を刺激することが挙げられる。
本発明の治療応用に関しては、「生物活性」という用語は、組成物、複合体または化合物が肯定的な意味において疾患または障害に罹っている動物に強い影響を与え、および／または否定的な意味において病原体または寄生生物に強い影響を与える活性を有することを示す。従って、生物活性組成物、複合体または化合物は、病原体または寄生生物、または異常増殖または生化学的特徴を有する動物の細胞、組織または器官、例えば、癌細胞、または自己免疫または炎症性疾患に冒された細胞の増殖および／または保持に有害な動物中の生物学的または生化学的活性を生じさせまたは促進することができる。
本発明の予防的用途に関しては、「生物活性」という用語は、組成物または化合物が免疫反応性応答を誘導しまたは刺激することを示す。幾つかの好ましい態様では、免疫反応性応答は予防的、すなわち、病原体による感染を防止するようにデザインされる。他の好ましい態様では、免疫反応性応答は、動物の免疫系を異常増殖または生化学的特徴を有する癌細胞のような動物の細胞の損傷に対して反応するようにデザインされる。本発明のこの用途では、抗原を含んでなる組成物、複合体または化合物はワクチンとして処方される。
所定の組成物、複合体または化合物は治療的、診断的および予防的用途では生物活性であることができることは当業者によって理解されるであろう。「細胞で生物活性」であると記載される組成物、複合体または化合物は、イン・ビトロ（すなわち、細胞培養物中）またはイン・ビボ（すなわち、動物の細胞中）で生物活性を有するものである。化合物または複合体の「生物活性部分」は、化合物または複合体から放出されてしまうと生物活性であるその部分である。しかしながら、このような成分は化合物または複合体に関しても生物活性であることがあることを留意すべきである。
生物学的効果を得るには、本発明の構築物は標的細胞によるインターナリゼーションおよび／または取込を促進するための追加部分を含んでなることができる。インターナリゼーション部分を含む本発明の態様については、インターナリゼーションを様々な方法で行うことができる。特定の態様では、インターナリゼーション部分は、葉酸受容体のような再循環受容体に結合している。葉酸受容体への結合については、インターナリゼーション部分は、例えば、葉酸またはメトトレキセート、または葉酸受容体に結合する葉酸類似体を含むことができる。他の態様では、インターナリゼーション部分としては、非受容体依存性インターナリゼーションを増大するペプチドが挙げられる。
同様に、多数のインターナリゼーション機構を葉酸またはメトトレキセートを用いる葉酸受容体の代わりに用いることができる。例えば、ステロイドホルモン、特異性ペプチド／ペプチド受容体、および非受容体依存性ペプチドインターナリゼーションのようなホルモンまたはホルモン類似体／ホルモン受容体対である。
インターナリゼーションを増強する様々な異なる種が知られており、用いることができる。例としては、葉酸受容体を介するインターナリゼーションによる葉酸（葉酸塩）またはメトトレキセート、ステロイドホルモンおよびそれらのそれぞれの受容体、受容体によって認識されるペプチド、例えば、ソマトスタチン、ＬＨＲＨボンベシン／ＣＣＫＢ、物質Ｐ、ＶＩＰが挙げられる。更に、ターゲッティング可能な構築物を速やかにインターナリゼーションする膜タンパク質に架橋する抗体を用いて、インターナリゼーションを増強することもできる。
Ｉ．Ｂ．組織および器官の療法
Ｉ．Ｂ．１．循環器病変、アテローム硬化性斑および血栓
血管内皮に対する傷害があるときには、循環血細胞、特に白血球が蓄積する。顆粒球は最大数で蓄積する傾向があるが、単球およびリンパ球も程度は少ないが蓄積する。これらの細胞は血管内皮中を移動して、損傷の部分に集中する。
顆粒球は血管外空間で約３日間まで生存し、その後、単核細胞、単球およびリンパ球が主要な個体となる。
２つの段階が、血管障害と関連している。第一期は、血管透過性の短時間の初期増加を伴う。一層長時間の第二期は、透過性増加、白血球、主に顆粒球の血管壁への結合、主に白血球の血管壁を通る血管外遊出、損傷部分における白血球の蓄積、白血球貪食作用、フィブリノーゲンおよび血小板の血管からの漏出、損傷部分におけるフィブリン沈着、血管破壊を伴う血管内凝固、壊死破片のマクロファージによる飲み込み、繊維芽細胞の移動および結合組織の形成、および毛細血管の内方発育による新血管形成を伴う。白血球、特に顆粒球による浸潤は、血管傷害に応答する比較的初期の有意な事象である。
十分に発達したアテローム硬化性斑は、炎症と修復の相互作用の結果であり、細胞外カルシウム塩、コレステロール結晶、グリコアミノグリカン、および血液細胞および血漿成分からなる病変を生じる。動脈壁の内皮透過性はアテローム性動脈硬化症の初期段階に誘発され、循環巨大分子および血液細胞、特に白血球（および主に顆粒球）を集注させることができる。第二の変化は、動脈内膜の透過性の減少、および血小板および／またはフィブリンの後での沈着、アテローム性病変を生じる増殖、変性、壊死および修復工程を伴うことがある。ここでまた、初期成分は損傷部分における白血球の集中および管外遊出である。
血栓に関しては、血管が損傷すると、フィブリンの形成、血小板の凝集、および両者の組合せによって血栓が生じることがある。これらの事象の間に、血小板凝集とは独立して白血球付着および凝集が起こる。ごく初期のフィブリン形成の前であっても、白血球の管外遊出が起こる。
深静脈血栓症（ＤＶＴ）および肺塞栓症は一般の個体に極めてよく見られ、他の点では健康な男女の３０％−６０％およびハイリスク患者の８０％までが罹っている。総ての入院患者の２０％程度が、血栓塞栓性疾患に罹っていると推定されている。アメリカ合衆国だけでは、２．５百万の症例が毎年見られると推定されている（Sherry, Senz. Nucl. Med. 7:205-211, 1977）。
深静脈血栓症（ＤＶＴ）について一般に用いられる核医学試験の大半は、放射性核種静脈造影法に用いられる非特異的放射性医薬品を必要とする。従って、非侵襲性外部シンチグラフィによる血栓の特異的で感受性の高い迅速な暴露に対する血栓症に特異的な放射性医薬が依然として必要とされている。一般の放射線学的方法であるコントラスト静脈造影法はＤＶＴに対する「最上級の標準的方法」であるが、これは副作用の発生率が高く、反復使用が限定される（Rabinov and Paulin, Arch. Surg. 104:134-144, 1972）。圧縮Ｂモード超音波も脚における血栓の存在の診断に有用であるが、これは範囲が限定され、また病変に特異的であるというものではない（Lensing et al., N. Engl. J. Med. 320:342-345, 1989）。従って、放射性医薬は、ＤＶＴの検出および診断のための簡便性、迅速性および特異性を達成するために探索されている。
上記画像化剤がＤＶＴに有用な場合に、それらは生命に関わる病変である肺栓子を明らかにすることができないことがある。異なる血栓は、異なる薬剤を必要とすることがある。静脈血栓は主として細胞が閉じ込められ、血小板の層と交互になっているフィブリンのポリマーからなり、一方動脈血栓は主として凝縮した血小板からなり、フィブリンは少ない（Ｆｒｅｉｍａｎ著：Coleman et al.監修，「止血と血栓症−−基本原理および臨床的実施」； ニューヨーク，ニューヨーク州，Lippincott, 56: 766-780, 1982）。
ほとんどの部分について、利用可能な薬剤はKnight, Sers. Nucl. Med. 20:52-67, 1990によって概説されているようにフィブリンによって指定されたまたは血小板によって指定された医薬に限定されていると思われる。フィブリンに特異性の放射性医薬としては、放射能標識したフィブリノーゲン、可溶性フィブリン、アンチフィブリン抗体および抗体断片、断片Ｅ１（架橋フィブリンの制御したプラスミン消化によって作成されたヒトフィブリンの６０ｋＤａ断片）、プラスミン（新しい血栓の溶解に関与する血液中の酵素）、プラスミノーゲン活性剤（例えば、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼおよび組織プラスミノーゲン活性剤）、ヘパリン、およびフィブロネクチン（４５０ｋＤａの粘着性血漿糖タンパク質）が挙げられる。
血小板によって指定された医薬としては、放射能標識した血小板、抗血小板抗体および抗体断片、抗活性化血小板、および抗活性化血小板因子が挙げられ、これらはＫｎｉｇｈｔ（上記引用．）並びにKoblik et al., Sem. Nucl. Med. 19:221-237 1989によって概説されており、上記文献の内容はその開示の一部として本明細書に引用されている。血小板画像化は活発な血小板凝集が起きる急性期の血栓症の際に極めて有用であり、従って、これらの血小板基礎とした画像化の方法は約２４−約４８時間より古い血栓を示すのは困難である（Oster et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3465-3468, 1985）。もう一つの懸念は、血小板画像化が、これらの患者の治療において同時ヘパリン投与によって阻害されることがあることである（Seabold et al., J. Nucl. Med. 29:1169-1180, 1988）。ヘパリン投与によって、抗フィブリン抗体を用いて見出される病変の総数も減少することがある（Alavi et al., J. Nucl. Med. 29:825, 1988）。抗フィブリン抗体と比較して、放射能標識した断片Ｅ１は、一層早期に血栓を明らかにすると思われる（Koblik et al.,上記引用）。しかしながら、断片Ｅ１は単離および調製が困難であり、その血栓への結合は一時的なものである（Knight et al, Radiology 156:509-514, 1985）。
心筋虚血または虚血性心疾患の症状を誘発する心筋層への不十分な血液および酸素供給は、狭窄性冠状動脈アテローム性動脈硬化症から生じる通常の事象である。急性且つ完全な冠状動脈閉塞により、重篤な虚血、およびその結果として心筋梗塞を生じる。時間順に説明すれば、最初に、虚血心筋の亜細胞変化がミトコンドリア顆粒、グリコーゲンおよび呼吸酵素の減少として現れる。その後の約１−約６時間、核クロマチンの縁取り（margination）および凝集、核および筋フィラメント構造の喪失、および顆粒球の浸潤が見られる。次の約６−１２時間の時期では、典型的な虚血性壊死が見られる。２４時間後には、重篤な組織学的変化が容易に見られ、２−４日間だけ異なるサイズの巣状出血と毛細血管の膨張を生じる。
従って、本発明は、フィブリンクロット、深静脈血栓症、栓子、虚血、およびアテローム硬化性斑などの循環器疾患の検出および／または治療のための組成物および方法を提供する。
Ｉ．Ｂ．２．解剖学的に変位したまたは異所性組織および器官
本発明は、形成不全、非存在、解剖学的に変位されているかまたは異所性組織または器官を有する哺乳類を治療するための組成物および方法を提供する。正常な器官または組織が異常発達し、または体内で変位しているか、または剥離手術中の除去が不十分である場合には、組織／器官関連抗体を組織を標的とした治療薬を組織に送達する手段として用いて、それらの退縮および／または同位体剥離を誘発することができる。抗体またはそれらの断片または認識部分は、Waldmann, Science 252:1657, 1991; Koppel, Bioconjug Chem. 1:13, 1990; Oeltmann and Frankel, FASEB J. 5:2334, 1991、およびvan den Bergh, Chemistry in Britain, May 1986, 430-439の総説に記載されているように、同位体、薬物、毒素、光力学的療法剤、サイトカイン、ホルモン、オートクラインなどこれらに限定されない、細胞傷害性または調節剤として用いられ且つこれまで主として癌を標的とする抗体に対する毒性接合体として用いられてきた治療モダリティーに接合させることができ、または組み合わせて投与することができ、上記文献の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
この方法は、（ａ）哺乳類患者の組織または器官に接近する位置または経路で、構造のシンチグラム画像または磁気共鳴画像を増強するのに十分なシンチグラム造影剤または磁気共鳴画像増強剤の量を非経口投与し、（ｂ）薬剤を投与した後に薬剤が構造において融合するのに十分な時点で構造のシンチグラム画像または増強した磁気共鳴画像を得る段階を含んでなる。ターゲッティング可能な複合体は、器官または組織に特異的に結合する抗体または抗体断片を含んでなり、更に生物活性（治療）薬剤を含んでなる。裸の抗体の場合には、複合体自身が生物活性でありアポトーシスのような工程を誘発することがある。
組織、器官、および目的とする疾病としては、
（１）膵臓の島細胞が萎縮しているかまたは著しく減少していることがある若年性糖尿病、胸腺形成不全または非形成、上皮小体および胸腺の形成不全または非存在があるディ・ジョージ症候群のような疾病における形成不全または非存在組織または器官、
（２）子宮内膜腺および支質の移植組織のような異所性組織および器官、（３）妊娠後の停留胎盤組織、および器官を手術により除去した後の器官残余のような停留組織、
（４）手術によって除去した器官に隣接する器官の状態、および
（５）免疫疾患またはリンパ腫の患者における脾臓のような他の治療目的のためのある種の正常な器官および組織の剥離、骨髄移植を必要とする患者の骨髄、または特定の免疫疾患におけるある種のＴリンパ球のような病理学的工程に関与する正常な細胞型
が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の上記方法としては、増殖因子受容体抗体またはホルモン受容体抗体であって、（複数の）上記受容体を有する目的器官を標的とするものの使用であって、受容体の機能を上記抗体で遮断することができるものが挙げられる。これらの抗体の同位体または薬物接合体を用いて、治療薬を上記組織および器官に届けて、上記受容体を有する組織の疾患に作用することもできる。例えば、異所性子宮内膜組織を伴う子宮内膜症では、現在行われている標準的薬物療法は、エチステロンから誘導される合成ステロイド（ダナゾールのＤＡＮＯＣＲＩＮＥ商標）であって、化学的には１７−α−プレグナ−２，３−ジエン−２０−イノ［２，３，３−ｄ］−イソオキサゾール−１７−オールであるものの投与を含む。これは、少なくとも部分的には性ステロイド代謝に性ホルモン受容体、特に標的器官での濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）と共に作用すると思われる。これらの性腺ステロイド受容体に対して抗体を単独でまたは同位体、薬物、毒素、ホルモン拮抗薬、サイトカイン、オートクラインなどとの免疫接合体として用いて、異所性子宮内膜を不活性化し、萎縮させることが可能となる。
本発明の上記方法は、卵巣および他のホルモン目的器官の機能に作用し、無月経または不妊症を誘発するなどの免疫学的方法を提供することを含む。卵巣を標的とする抗体またはＦＳＨ受容体のような卵巣関連のホルモン受容体に対する抗体を用いることによって、未接合抗体としてまたは治療成分と接合した抗体として、卵巣機能を遮断して目的器官における萎縮を誘発する比較的便利で安全な方法を得ることができる。
多数のホルモンおよび増殖因子受容体が知られており、上記受容体に結合したときに組織の機能に作用し、免疫学的、または薬物との接合体を用いることによって化学的剥離、または治療同位体との接合体として用いるときに放射線剥離を生じる抗体の標的として役立たせるのに十分な器官および組織傾向を示すことが多い。
もう一つの用途は、繊維嚢胞性胸部疾患の治療におけるものである。ＦＳＨ受容体またはエストロゲン受容体に対する抗体は、単独でまたは治療成分との免疫接合体として投与し、繊維嚢胞性疾患を減少させ、且つその症状を制御することができる。
更にもう一つの適応症は、良性前立腺過形成または前立腺癌におけるものであり、アンドロゲン受容体に対する抗体は、単独でまたは治療成分（ホルモン目的器官拮抗薬、細胞傷害性薬物、毒素、または同位体）との接合体として用いて、前立腺組織増殖を減少させることができる。
毒性薬剤と接合したこのような器官および組織を標的とする抗体のもう一つの治療的用途は、発生および分化の特定の段階の骨髄細胞に対する抗体を用いる骨髄剥離およびリンパ腫または免疫血小板減少性紫斑病などのようなある種の免疫疾患の患者の脾臓の細胞傷害性剥離におけるような別の治療方法の一部としてのある種の正常な細胞および組織の剥離のためのものである。
このような器官および組織を標的とする抗体または断片についてのもう一つの治療的用途は、それらを細胞保護剤に結合させて治療接合体を形成することである。接合体を化学療法または放射線療法を行っている患者に投与して、標的とした正常器官および組織を療法中に保護するようにする。
Ｉ．Ｂ．３．癌
本発明は、更に癌、黒色腫、肉腫、神経芽腫、白血病、神経膠腫、リンパ腫および骨髄腫からなる群から選択される疾患状態を治療するための組成物および方法を提供する。特異的腫瘍関連抗原は、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆嚢、胸部、子宮頸部、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸、子宮内膜、食道、胃、頭および頸、ホジキンリンパ腫、肺、髄様甲状腺（medullary thyroid）、非ホジキンリンパ腫、卵巣、膵臓、神経膠腫、黒色腫、肝臓癌、前立腺、および膀胱からなる群から選択される癌の１つの型と関連させることができる。腫瘍関連抗原は、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＢｒＥ３、ＣＤＣＤ１ａ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１５、ＣＤｌ９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＮＣＡ９０、ＮＣＡ９５、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ｅｐ−ＣＡＭ、Ｂａ７３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＫＣ４、ＫＳ−１、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、Ｓ１００、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＰＡＭ−４、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＡＦＰ、ＨＣＧおよびそのサブユニット、ＲＳ５、ＴＡＧ−７２、テネイシン、ＩＬ−６、インスリン増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、Ｔｎ抗原、トムソン−フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦ、１７−１Ａ、血管新生マーカー、サイトカイン、イムノモジュレーター、癌遺伝子マーカー（例えば、ｐ５３）、および癌遺伝子産物からなる群から選択することができる。
腫瘍関連マーカーは、腫瘍胎児抗原、胎盤抗原、腫瘍形成または腫瘍ウイルス関連抗原、組織関連抗原、器官関連抗原、異所性ホルモンおよび正常な抗原またはそれらの変異体など多数の範疇においてＨｅｒｂｅｒｍａｎ（例えば、「癌の免疫診断」，癌の臨床生化学（THE CLINICAL BIOCHEMISTRY OF CANCER），Ｆｌｅｉｓｈｅｒ監修，米国臨床化学者協会，１９７９年を参照されたい）によって分類されている。腫瘍関連マーカーのサブユニットを用いて、一層高い腫瘍特異性を有する抗体、例えば、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）のβ−サブユニットまたは癌胎児性抗原（ＣＥＡ）のγ領域であって、米国特許第４，３６１，６４４号明細書および第４，４４４，７４４号明細書に開示の非腫瘍物質に対する交差反応性が大幅に減少した抗体の産生を刺激するものを生じさせるのが有利なことがある。腫瘍脈管構造（例えば、ＶＥＧＦ）、腫瘍壊死、膜受容体（例えば、葉酸受容体、ＥＧＦＲ）、膜貫通抗原（例えば、ＰＳＭＡ）、および癌遺伝子産物のマーカーも、抗体または抗体断片に対する適当な腫瘍関連標的として役立つことがある。Ｂ細胞複合体抗原並びにある種の腫瘍細胞によって発現されるサイトカイン（例えば、Ｔ細胞悪性疾患におけるＩＬ−２受容体）のような腫瘍細胞上で過剰発現する正常な細胞成分のマーカーも、本発明の抗体および抗体断片に対する適当な標的である。
ＢｒＥ３抗体は、Couto et al., Cancer Res. 55:5973s-5977s, 1995に記載されている。ＥＧＰ−１抗体は、米国仮出願連続番号第６０／３６０，２２９号明細書に記載されており、ＥＧＰ−２抗体の幾つかはStaib et al., Int. J. Cancer 92:79-87, 2001、およびSchwartzberg et al., Crit. Rev. Oncol. Hemato. 40:17-24, 2001に引用されている。ＫＳ−１抗体はKoda et al., Anticancer Res. 21:621-627, 2001に引用されており、Ａ３３抗体はRitter et al., Cancer Res. 61:6854-6859, 2001に引用され、Ｌｅ（ｙ）抗体Ｂ３はジ Carlo et al., Oncol. Rep. 8:387-392, 2001に記載されており、Ａ３抗体は−rdsson et al., Int. J. Cancer 87:559-568, 2000に記載されている。
腫瘍遺伝子のマーカーまたは産物に対する抗体、またはＶＥＧＦのような血管形成因子に対する抗体も用いられる。ＶＥＧＦ抗体は米国特許第６，３４２，２２１号明細書、第５，９６５，１３２号明細書および第６，００４，５５４に記載されており、これらの明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。ＣＤ４０に対する抗体のようなある種の免疫応答モジュレーターに対する抗体は、−dryk et al., J. Immunol. Meth. 248:139-147, 2001およびTurner et al., J. Immunol. 166:89-94, 2001に記載されている。組合せ療法に適する他の抗体としては、Epstein et al.に記載されている抗壊死抗体が挙げられ、例えば、米国特許第５，０１９，３６８号明細書、第５，８８２，６２６号明細書および第６，０１７，５１４号明細書を参照されたい。
Ｉ．Ｂ．４．自己免疫疾患
本発明は、更に自己免疫疾患または障害を治療するための組成物および方法を提供する。Ｂ細胞を標的とする抗体を用いる自己免疫疾患の免疫療法は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ ００／７４７１８号明細書に記載されており、これは米国仮出願連続番号第６０／１３８，２８４号明細書に対する優先権を主張しており、上記明細書のそれぞれの内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。典型的な自己免疫疾患は、急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌腺性症候群、水疱性類天疱瘡、糖尿病、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、ポストストレプトコッカス腎炎（post-streptococcualnephritis）、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓血管炎（thromboangitisubiterans）、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、強皮症、活動性慢性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ヴェーゲナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄ロウ、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、および繊維化肺胞炎である。
Ｉ．Ｃ．治療用途
Ｉ．Ｃ．１．光力学的診断または療法（ＰＤＴ）
本発明の突然変異体ｂｓＡｂは、米国特許第６，０９６，２８９号明細書、第４，３３１，６４７号明細書、第４，８１８，７０９号明細書、第４，３４８，３７６号明細書、第４，３６１，５４４号明細書、第４，４４４，７４４号明細書、第５，８５１，５２７号明細書に記載の光力学的療法（ＰＤＴ）の方法に用いることができる。
ＰＤＴでは、光増感剤、例えば、ジヘマトポルフィリンエーテルのようなヘマトポルフィリン誘導体を患者に投与する。抗腫瘍活性は、例えば６３０ｎｍの光を用いることによって開始される。より長波長で有用で、皮膚が日光によって余り光増感されないものなどの代替光増感剤を用いることができる。このような光増感剤の例としては、ジヘマトポルフィリン、ベンゾポルフィリン一酸Ａ環（ＢＰＤ−ＭＡ）、スズエチオプルプリン（ＳｎＥＴ２）、スルホン化アルミニウムフタロシアニン（ＡｌＳＰｃ）、およびルテニウムテキサフィリン（Ｌｕｔｅｘ）が挙げられるが、これらに限定されない。
治療薬に有用であり、β粒子放出によって実質的に崩壊する放射性核種としては、Ｐ−３２、Ｐ−３３、Ｓｃ−４７、Ｆｅ−５９、Ｃｕ−６４、Ｃｕ−６７、Ｓｅ−７５、Ａｓ−７７、Ｓｒ−８９、Ｙ−９０、Ｍｏ−９９、Ｒｈ−１０５、Ｐｄ−１０９、Ａｇ−１１１、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｐｒ−１４２、Ｐｒ−１４３、Ｐｍ−１４９、Ｓｍ−１５３、Ｔｂ−１６１、Ｈｏ−１６６、Ｅｒ−１６９、Ｌｕ−１７７、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ｒｅ−１８９、Ｉｒ−１９４、Ａｕ−１９８、Ａｕ−１９９、Ｐｂ−２１１、Ｐｂ−２１２、およびＢｉ−２１３が挙げられるが、これらに限定されない。有用なβ粒子放出核種の最大崩壊エネルギーは、好ましくは、２０−５，０００ｋｅＶであり、更に好ましくは１００−４，０００ｋｅＶであり、最も好ましくは５００−２，５００ｋｅＶである。
オージェ放出粒子により実質的に崩壊する治療薬に有用な放射性核種としては、Ｃｏ−５８、Ｇａ−６７、Ｂｒ−８０ｍ、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０３ｍ、Ｐｔ−１０９、Ｉｎ−１１１、Ｓｂ−１１９、Ｉ−１２５、Ｈｏ−１６１、Ｏｓ−１８９ｍ、およびＩｒ−１９２が挙げられるが、これらに限定されない。有用なβ粒子放出核種の崩壊エネルギーは、好ましくは＜１，０００ｋｅＶであり、更に好ましくは＜１００ｋｅＶであり、最も好ましくは＜７０ｋｅＶである。
治療薬に有用でありα粒子の生成によって実質的に崩壊する放射性核種としては、Ｄｙ−１５２、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１２、Ｒａ−２２３、Ｒｎ−２１９、Ｐｏ−２１５、Ｂｉ−２１１、Ａｃ−２２５、Ｆｒ−２２１、Ａｔ−２１７、Ｂｉ−２１３、およびＦｍ−２５５が挙げられるが、これらに限定されない。有用なα粒子を放出する放射性核種の崩壊エネルギーは、好ましくは２，０００−９，０００ｋｅＶであり、更に好ましくは３，０００−８，０００ｋｅＶであり、最も好ましくは４，０００−７，０００ｋｅＶである。
Metals useful,as複合体として、光力学的療法処置の一部として有用な金属としては、亜鉛、アルミニウム、ガリウム、ルテチウム、およびパラジウムが挙げられるが、これらに限定されない。
治療上有用な免疫接合体は、光活性剤または色素を抗体複合体に接合することによって得ることができる。可視光線に感受性のポルフィリンのような蛍光および他の色原体または色素を用いて、病巣に適当な光線を当てて病巣を検出し、治療を行った。療法では、これは光放射、光療法、または光力学的療法と呼ばれている（Jori et al.監修，腫瘍および他の疾患の光力学的療法（Libreria Progetto 1985）；van den Bergh, Chem. Britain 22:430, 1986）。その上、モノクローナル抗体を光活性化色素とカップリングさせて、光療法を行った。Mew et al., J. Immunol. 130:1473, 1983；同上，Cancer Res. 45:4380, 1985；Oseroff et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:8744, 1986；同上， Photochem. Photobiol. 46:83, 1987; Hasan et al., Prog Clin. Biol. Res. 288:471, 1989; Tatsuta et al., Lasers Surg. Med. 9:422, 1989; Pelegrin et al., Cancer 67:2529, 1991。しかしながら、これらの初期の研究は、ジd not include use of endoscopic療法用途ｓ，特に抗体断片または小断片を用いる内視鏡的治療応用の使用を包含しなかった。従って、本発明は、光活性剤または色素を含んでなる免疫接合体の治療使用を考える。
Ｉ．Ｃ．２．ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）
ＢＮＣＴは、腫瘍に局在化したホウ素−１０原子の中性子照射によってイオン化放射線を腫瘍細胞に送達するようにデザインされた二成分系である。ＢＮＣＴは、安定同位体である同位体濃縮したＢ−１０（１９．８％の天然存在量で存在）に熱中性子を照射してα粒子とＬｉ−７核とを生成するときに起こる核反応に基づいている。これらの粒子は路程が約１細胞直径であり、高線形エネルギー移動を生じる。この核反応で生成したショートレンジ１．７ＭｅＶのα粒子の数個だけで、細胞核を標的としてこれを破壊するのに十分である。Barth et al., Cancer 70:2995-3007, 1992。
歴史的には、腫瘍特異性物質がほとんど知られていない時点で、ＢＮＣＴが神経膠芽腫（脳腫瘍の致命的形態）および他の脳腫瘍の治療に最初に用いられた。Hatanaka et al.,「腫瘍のホウ素中性子捕捉療法」，pp.349-78(Nishimura Co., 1986）。用いられた最初のホウ素化化合物の一つであるナトリウムボロカプテートまたはＢＳＨ（Ｎａ２，Ｂ１２Ｈ１１ＳＨ）と呼ばれるスルフヒドリル含有ホウ素物質は血液−脳関門を越えて脳に局在化し、これが脳腫瘍の中性子捕捉療法の解剖学的基礎であった。臨床試験が、日本、米国および欧州で神経膠腫の治療について行われ、または計画されてきた。以前の無機ホウ素療法の問題点は、ホウ素が標的および非標的部分のいずれにも到達することであった。従って、ホウ素を照射すると、癌細胞と同様に健康な細胞も破壊された。
ＢＮＣＴのコンセプトは他の癌に拡張され、腫瘍ターゲッティングモノクローナル抗体などの多数の腫瘍局在化物質の発見によって刺激された。例えば、ｐ−ホウ素フェニルアラニンのようなホウ素化アミノ酸は黒色腫細胞に蓄積した。癌のＢＮＣＴのため、ＣＥＡのような細胞表面抗原に対して指定されたホウ素化モノクローナル抗体の可能性が明らかにされてきた。Ichihashi et al., J. Invest. Dermatol. 78:215-18, 1982; Goldenberg et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:560-63, 1984; Mizusawa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:3011-14, 1982; Barthet al., Hybridoma 5(supp. 1):543-5540, 1986; Ranadive et al., Nucl. Med. Biol. 20:663-68, 1993。
癌のＢＮＣＴの成功には、非標的器官は本質的にホウ素が存在しないようにしたまま、高濃度のホウ素−１０を腫瘍部位に局在化する方法が必要である。ＢＮＣＴのため、ｂｓＡｂの予備ターゲッティングを用いて患者の腫瘍を治療する組成物および方法は、米国特許出願連続番号第０９／２０５，２４３号明細書に記載されており、本発明により容易に修飾することができる。更に、他の元素が、中性子捕捉反応に適している。中性子捕捉処置に基づく治療に有用な核種としては、Ｂ−１０、Ｇｄ−１５７およびＵ−２３５が挙げられるが、これらに限定されない。多量のウラニウムを、フェリチンのような天然に存在するキレート剤によって結合させることができる。
II．予備成形したターゲッティング可能な複合体
本発明の治療態様では、二重特異性抗体は、ターゲッティング可能な構築物の投与前のある時点で投与することができる。しかしながら、ターゲッティング可能な構築物と二重特異性抗体を投与前に混合することにより、「予備成形した」ターゲッティング可能な複合体を形成させ、次にこれを患者に投与することもできる。ターゲッティング可能な複合体は、エクス・ビボおよびイン・ビトロ様式でも有用である。
II．Ａ．予備ターゲッティング用途
予備ターゲッティングを含まない典型的な方法では、ターゲッティング可能な構築物は生物活性部分を含んでなる。この場合には、ターゲッティング可能な構築物は、ｂｓＡｂの投与後に投与する。生物活性剤は標的部位に向けられるが、ターゲッティング可能な構築物はｂｓＡｂによって認識され且つこれに結合され、これ自身が標的組織に結合されるからである。
代替法では、生物活性剤を含んでなるターゲッティング可能な構築物は、患者に投与する前にその同種のｂｓＡｂと混合することによって、生物活性剤を含んでなるターゲッティング可能な複合体を生成する。この方法で形成したターゲッティング可能な複合体を投与して標的組織を結合することによって、生物活性剤を含んでなるターゲッティング可能な複合体の部分としてこの薬剤を直接送達する。
後者または予備ターゲッティングの方式は、ターゲッティング可能な構築物とｂｓＡｂを別々に投与する方法と比較して幾つかの利点を有する。投与して効果を得る必要のあるターゲッティング可能な構築物とｂｓＡｂの総量は、特にターゲッティング可能な複合体が生理条件下で比較的安定である場合には非予備ターゲッティング様式より少なくてよい。更に、本発明によるターゲッティング可能な複合体は、ターゲッティング可能な構築物それ自体より標的組織に対して高いアフィニティーを有することがあり、これにより生物活性剤を標的組織に一層効果的に送達する組成物および方法が提供される。
予備成形したターゲッティング可能な複合体は、本発明の組成物および方法のいずれでも用いることができる。当業者であれば、複合体形成（すなわち、イン・ビトロまたはイン・シテューで）のどの部位が任意の所定用途に適当であるかを決定することができるであろう。
II．Ｂ．イムノアフィニティーに基づく用途
II．Ｂ．１．イムノアフィニティー
イムノアフィニティーは当該技術分野で知られており、ビーズの形態であることが多い固形支持体へ抗体を固定した後、カラムに充填することを含む。この抗体によって抗原を含む試料をカラム中を通過させると、抗原は固定された抗体によって結合して保持される。次に、当該技術分野で知られている様々な方法のいずれかを用いて、抗原をカラムから洗い落とす。特定の情況によっては、抗原は精製を行う物質でよく、または抗原は除去される汚染物質であることもある。更なる詳細および総説については、Springer,「分子生物学の簡潔プロトコール」、第２版、第１０章、１０．１１節イムノアフィニティークロマトグラフィー、Ausubel et al.監修，John Wiley and Sons，ニューヨーク，1992年，10-43-10-45頁）；「アフィニティークロマトグラフィー：実際的方法」Dean P.D.G., Johnson, W.S., Middle, F.A．監修，IRL Press, 1985年；「イムノアフィニティー精製：基本原理および操作法」， Yarmush et al., Biotech Adv. 10:412-446, 1992を参照されたい。
イムノアフィニティーは、３つの一般的段階、すなわち吸着、洗浄および溶出を含んでなる。第一段階では、吸着であり、目的とする物質が抗体によって結合される。吸着は、例えば、目的とする物質を含む試料を、カラム内部の適当な媒質中で固形支持体マトリックスに結合した抗体と接触させることによって行われる。次の段階は洗浄段階であり、カラムの流体容積に含まれる不純物並びに抗体、固形支持体またはカラム壁に非特異的に結合したものが除去される。洗浄は、洗浄溶液、例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）のような緩衝液の一定容積をカラム中を通過させることによって行う。洗浄段階で用いられる洗浄溶液の容積は、目的とする物質を損失するほど多くてはならないが、不純物が除去されないほどには限定されない。溶出段階では、標的分子は、例えば、溶媒または他の溶液の添加、または温度または圧力のような条件を変化させて、目的とする物質の抗体へのアフィニティーまたは抗体と目的とする物質の分子との間に形成した複合体の固形支持体へのアフィニティーを減少させることによって、カラムから除去される。目的とする物質にカップリングした抗体の溶出は、ｐＨを変化させる塩グラディエント、イオン強度を変化させる緩衝段階グラディエント、または当該技術分野で知られている他の方法によって行うことができる。
標的分子の溶出は、多数の方法で行うことができる。抗体と目的とする物質との間には、相互作用に伴う共有結合はない。従って、緩衝液の条件は、抗体：物質複合体のアフィニティーが互いまたは固形支持体への有効結合の量を減少させるのに十分に降下するように変化させることができる。これは、緩衝液のｐＨまたはイオン強度または両方を変化させることによって、またはカオトロピックイオン、例えば、シアネートによって行うことができる。分離は、グラディエント溶出によって向上させることができる。免疫吸着（immunosorption）の場合には、目的とする物質のその抗体への結合は極めて強いので、産生または塩基性が極めて強い緩衝液の使用などの一層過酷な溶出条件が必要である。他の溶出方法としては、ＫＳＣＮのようなカオトロピック剤、有機溶媒、例えば、エチレングリコール、ＤＭＳＯ、またはアセトニトリル、変性剤、例えば、８Ｍ尿素または６Ｍグアニン、電気泳動溶出、圧力誘導溶出、および金属イオン溶出が挙げられる。好ましくは、溶出条件は、１または２カラム容積をカラム中を通過させた後に生成物が完全にまたはほぼ完全に溶出するようにしている。
様々な不純物が含まれている可能性があり、医薬産業で用いられているように、組成物に予測し難い悪影響を及ぼすことがある。生物試料の場合には、典型的な不純物は血塊、組織破片、毛髪、粒状異物、活性化凝固因子、変性タンパク質、創傷部位に加える無血漿ヘモグロビン（例えば、灌注液）、ヒトウイルス、抗原、および抗生物質である。
非制限的例としては、試料を、目的とする物質に対して指定した固定抗体を有するイムノアフィニティーカラム中を通過させることができる。固定した抗体は試料中の目的とする物質の分子と反応して結合することによって、それらを吸着し、それらを溶液から除去する。目的とする物質はカラム上に保持され、不純物はカラムを通過する。次に、カラムを緩衝液で洗浄して、カラム上に留まっている任意の不純物、例えば、非特異的結合によって保持された不純物を除去することができる。カラムを洗浄して不純物を除き、カラムに結合した任意の物質を溶媒で溶出する。この工程は正の免疫吸着（immunoabsorption）として知られている。負の免疫吸着では、対照的に、粗製調製物に含まれる目的とするはカラムを自由に通過し、一方、抗原性不純物は抗体と結合してカラムに保持される。
II．Ｂ．２．抗体の固定
固形支持体またはマトリックスは、抗体を固定するのに用いられる。マトリックスはマクロ細孔性、機械的安定性、活性化の容易さ、親水性、および不活性などの所望な特徴、すなわち非特異的吸着が低い、を有することがある。当業者によって一般に用いられるマトリックスとしては、架橋デキストラン、アガロース、ポリアクリルアミド、セルロース、シリカおよびポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）が挙げられる。免疫吸着剤については、ビーズ状アガロースは、タンパク質に対する吸着能が高く、高細孔性であり、親水性であり、化学的に安定であり、電荷を持たず、且つ非特異的吸着に対して比較的不活性であるので、当業者により好ましい固形支持体である。
抗体は、マトリックスに物理吸着しているか、または本明細書に開示されているような二官能価試薬によりヒドロキシルまたはアミノ基を含むポリマー性マトリックスに共有結合していることがある。結合は、典型的にはマトリックスの活性化およびリガンドの活性化マトリックスへのカップリングの２段階を必要とする。活性化したマトリックスは、市販されている。リガンドをマトリックスにカップリングするための選択方法は、部分的にはマトリックスの選択によって、および部分的には抗体の選択によって指示される。抗体のようなペプチドまたはポリペプチドリガンドを固定するのに一般に用いられるほとんどの方法は、アミノ基のカップリングに基づいている。ポリペプチドリガンドは、標的分子による認識能力を妨げない方法でカップリングしなければならない。活性化およびカップリングの方法は、一般に当業者によって用いられている。
アフィニティークロマトグラフィーを良好に使用するためには、ポリマーに結合したリガンドがポリマー表面から十分に離れていて立体的干渉を最小にしなければならない。これは、抗体とマトリックスとの間に相互結合用の結合またはスペーサーを挿入することによって行う。スペーサーはマトリックスに直接結合させて、抗体がこれらのスペーサーに直接結合することができるようにすることができる。当業者によって一般に用いられるスペーサーの種類としては、シスタミン、ｐ−アミノ安息香酸、チラミン、およびｐ−ヒドロキシ−水銀安息香酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
II．Ｂ．３．ビーズ
固形支持体がビーズである態様では、ビーズは用途により、様々な種類のいずれであってもよい。免疫精製については、多孔性ビーズが用いられることが多い。ビーズは、例えば、グルタルアルデヒド、カルボジイミド、ジアゾト化合物、または任意の他の適当な架橋試薬を用いてタンパク質または他の捕捉部分への結合に用いられるアミノまたはカルボキシル基で誘導体形成した市販ビーズから調製することができる。
II．Ｂ．３．ａ．磁気ビーズ
ターゲッティング可能な複合体は、粒子を覆っている官能基を介して磁気粒子に結合することができる。精製用途では、標的エピトープを含んでなる抗原を含む試料は、結合したターゲッティング可能な複合体に結合し、接合した磁気粒子は、磁場をかけることによって懸濁液から除去される。
本発明のターゲッティング可能な複合体が結合することができる磁気ラテックスビーズおよび酸化鉄粒子のような磁気ビーズまたは粒子は、当該技術分野で知られている。例えば、磁気粒子は、米国特許第４，６７２，０４０号明細書に記載されている。捕捉部分の磁気ビーズへのカップリングは、既知の方法を用いて行うことができる。例えば、ビーズは、例えば、グルタルアルデヒド、カルボジイミド、ジアゾト化合物、または任意の他の適当な架橋試薬を用いてタンパク質または他の捕捉部分への結合に用いられるアミノまたはカルボキシル基で誘導体形成したものが市販されている。磁気的に感受性の粒子をシラン化することにより、粒子の表面上に反応性基を得る一つの方法が提供される（例えば、シラン化およびシランカップリング化学の説明については、米国特許第４，６７２，０４０号明細書を参照されたい）。結合としては、例えば、アミド、エステル、エーテル、スルホニルアミド、ジスルフィド、アゾ、および当業者に知られている他のものを挙げることができる。
ポリスチレンまたは酸化鉄と多糖類のような多数の物質から製造することができる超常磁性粒子は、磁場に置いたときに磁性を示すが、磁場から除くと残留磁気を保持しない。この残留磁気を欠くことによって、粒子を反復分離し、磁気誘導凝集なしに再懸濁することができることが確保される。
II．Ｂ．３．ｂ．イムノアフィニティー精製のためのビーズ
ビーズは、イムノアフィニティー精製に使用するため本発明のターゲッティング可能な複合体をコーティングすることができる。一般に、このようなビーズは、フロースルーカラムで使用するのに適当な粒度、組成および構造を有する。多孔性ビーズを用いることができる。非制限的例としては、このようなビーズは、セファデックス（登録商標）、セファロース、アガロース、ガラス、およびポリスチレン製であることができる。
II．Ｂ．４．イムノアフィニティーカラムの調製
イムノアフィニティーカラムでは、構築物または複合体を固定する固形支持体を含んでなるカラムを調製する。カラムの調製は、用いる固形支持体の種類、カラム中で加工される試料の化学的または物理的性質、試薬、例えば、洗浄および溶出溶液などによって変化する。
試料を適用する前に、カラムを平衡にすることが望ましいことがある。試料適用のために調製においてアフィニティーカラムを平衡にするのに用いられる緩衝条件は、用いられる相互作用系の特異的性質を反映する。ｐＨおよびイオン強度などの用いられる緩衝液の性質は、特定の抗体と目的とする物質について調整される。カラムに適用される目的とする物質を含んでなる試料は、典型的にはカラムを平衡にするのに用いられる同一緩衝液に含まれる。試料を適用して吸着させた後、カラムを出発緩衝液で洗浄し、任意の未結合試料および任意の不純物を除去する。幾つかの場合には、カラムを出発緩衝液と異なる緩衝液で洗浄し、非特異的に吸着した物質を除去するのが好ましいこともある。
II．Ｃ．製造態様
化合物の混合物から目的とする化合物を精製するのに有用であることの他に、イムノアフィニティーを用いて、製造および他の用途において混合物から望ましくない物質を除去することができる。典型的な望ましくない物質としては、汚染物質、望ましくない反応生成物および／または製造工程中に用いられる酵素などこれらに限定されない触媒が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明のイムノアフィニティー態様は、製造工程に応用することもできる。製造工程は、目的とする物質を進行中の製造または産生工程から連続的に製造して収穫する「連続工程」であることができる。対照的に、製造における「バッチ」法では、複数の調製を組み合わせた後、収穫する。製造工程の種類とは関係なく、本発明の組成物は工程の様々な段階のいずれでも用いることができる。
試料または製造製品は、更なる調製の前に「不純物を除去」して、汚染物質（化学合成において、反応副生成物および未反応化合物など、これらに限定されない）を除去し、目的とする物質のみを含むまたはを濃縮した試料を生成することができる。更にまたはあるいは、目的とする物質を部分精製する、実質的に精製する、または精製することができる。物質は、これが組成物の≧５０％ｗ／ｗを含んでなるときには、「部分精製されている」と言われ、組成物の≧７５％を含んでなるときには、「実質的に精製されている」と言われ、それが組成物の≧９０％、好ましくは≧９５％、更に好ましくは≧９９％、および最も好ましくは≧９９．９％を含んでなるときには、「精製されている」と言われる。一般に、試料の浄化では、物質の濃度を変化させずに調製物から限定された数の望ましくない化合物を除去する。対照的に、物質の精製は、一般に、物質を試料から優先的に除去し、様々な汚染物質を後に残す工程を表し、分離した物質はその濃度が一層高い新たな溶液に移すことができる。
不純物は、負または正の免疫吸着法によって目的とする物質の調製物から除くことができる。このようにして処理された調製物は目的とする物質が濃縮されていると言われ、調製物中の目的とする物質は部分精製、実質的に精製または精製されていると言われる。この方法で精製した物質は、ターゲッティング可能な構築物のキャリヤーエピトープを特異的に結合する抗体、または［標的エピトープ］：［二重特異性抗体］複合体であることができる。
後者の種類の複合体を調製するときには、標的エピトープに対する二重特異性抗体のアフィニティーを減少させる薬剤または条件で処理することによって更に精製することができる。キャリヤーエピトープを含んでなるターゲッティング可能な構築物を固形支持体に結合させ二重特異性抗体をキャリヤーエピトープに結合させる場合には、過剰量のキャリヤーエピトープを添加することによって、［標的エピトープ］：［二重特異性抗体］複合体を結合したターゲッティング可能な構築物から分離することができる。非制限的例としては、固形支持体に結合したＩＭＰ ２４６の場合には、これに結合している二重特異性抗体を含んでなる複合体を、ＩＭＰ ２４６上に存在するキレート剤部分に相当する過剰量のキレート剤、すなわち、ＤＴＰＡを加えることによって、結合したＩＭＰ ２４６から除去することができる。
例えば、試料を、目的とする物質に対して指定した固定抗体を有するイムノアフィニティーカラム中を通過させることができる。固定抗体は、試料中で目的とする物質の分子と反応して結合することによって、それらを吸着し、それらを溶液から除去する。目的とする物質はカラムに保持されるが、不純物はカラムを通過する。次に、カラムを緩衝液で洗浄し、カラム上に留まっている任意の不純物、例えば、非特異的結合によって保持されている不純物を除去することができる。カラムを洗浄して不純物を除き、カラムに結合した任意の物質を溶媒で溶出する。この工程は正の免疫吸着として知られている。負の免疫吸着では、対照的に、粗調製物に含まれる目的とする物質はカラムを自由に通過するが、抗原性不純物は抗体と結合し、カラムに保持される。
II．Ｄ．イムノアッセイおよび他のイン・ビトロでの免疫化学的方法
本発明のターゲッティング可能な複合体を、様々なイン・ビトロでの免疫化学的方法における試薬として用いることができる。免疫化学的方法としては、ウェスタンブロット分析、イムノアフィニティー精製、免疫沈澱、ＥＬＩＳＡ、ドットまたはスロットブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、免疫組織化学的染色、免疫細胞化学的染色、およびフローサイトメトリーが挙げられるが、これらに限定されない。
このような方法は、ターゲッティング可能な複合体の固形支持体への結合を伴うことがあるが、毎回は必要ない。「固形支持体」という用語は、ターゲッティング可能な複合体が固定されている固体表面を有する材料を表す。「固定された」とは、共有的に結合しているか、または疎水性吸着のような非共有的手段によって結合していることを意味する。非制限的例としては、固形支持体は、マルチウェル（マイクロタイター）プレートウェル、ビーズ、膜または計深棒の表面であることができる。固形支持体にタンパク質を共有的または非共有的に結合させる方法および手段は、当該技術分野で知られている。
適当な固形支持体としては、例えば、ラテックス、多孔性ガラス粒子などのガラス粒子、ポリアクリルアミド粒子、アガロース、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）（Pharmacia Fine 化学ｓ，Inc.）、セファロース、ガラスまたはセルロース紙のような吸水性材料、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリスチレンラテックス、またはポリフッ化ビニリデン（イムロン（Ｉｍｍｕｌｏｎ）として知られる）のようなプラスチックおよびポリマー（例えば、シート、ビーズまたはマイクロタイターウェル状）、ナイロン、ポリメタクリレートなど、シリコン、金およびインジウムのような金属、ニトロセルロース（例えば、膜またはマイクロタイターウェルの形状）、活性化ビーズ、タンパク質ビーズ、ジアゾ化紙、などが挙げられるが、これらに限定されない。
固体表面の性状は、意図した用途または方法によって変化する。マイクロタイターウェル、例えばマルチウェル（マイクロタイター）プレート中で行ったアッセイについては、固体表面はウェルまたはカップの壁である。ビーズを用いるアッセイについては、固体表面はビーズの表面である。計深棒（すなわち、布または紙のような多孔性または繊維状材料から作成された固体）を用いるアッセイでは、表面は計深棒が作成される材料の表面である。凝集アッセイでは、固体表面はラテックスまたはゼラチン粒子の表面である。個々の抗原を固体表面に結合するときには、それらは表面上に均質に分布することができ、またはバンドのようなパターンで分布し、抗原結合のパターンを識別することができる。
II．Ｄ．ｌ．イムノアッセイ
イムノアッセイのデザインは多くの変動を受けやすく、多くのフォーマットが当該技術分野で知られている。「免疫化学プロトコール（Immunochemical Protocols）」，Humana Press,-towa, NJ, 1998；「免疫学における最新のプロトコール（Current Protocols in Immunology）」，Greene Pub. Associates and Wiley- Interscience，ニューヨーク，ＮＹ，1997。プロトコールは、例えば、固形支持体または免疫沈澱を用いることができる。ほとんどのアッセイは、標識したターゲッティング可能な複合体または抗原を用いる必要がある。この節で用いられる「抗原」は、ターゲッティング可能なエピトープであるかまたはこれを含んでなる物質である。標識は、例えば、酵素、蛍光、化学発光、放射性または色素分子であることができる。シグナルを増幅するアッセイが知られており、その例は、ビオチンおよびアビジン、酵素標識および依存性イムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、免疫蛍光、化学発光および比濁法を用いるアッセイである。
典型的には、標識抗体または抗原を用いる標準的ＥＬＩＳＡ法が用いられる。標識は、酵素、蛍光物質、化学発光材料、放射性同位体、または補酵素であることができる。一般に、アルカリ性ホスファターゼまたはβ−ガラクトシダーゼのような酵素標識が適当な基質と共に用いられる。酵素／基質反応は、分光光度法のような任意の適当な手段によって検出することができる。
イムノアッセイは、不均一または均一フォーマットであり、標準的または競合的種類のものであることができる。不均一フォーマットでは、ターゲッティング可能な構築物または複合体は典型的には固形支持体に結合して、インキュベーション後に試料の分離を促進する。ターゲッティング可能な構築物または複合体を含む固形支持体は、典型的にはこれを試験試料から分離した後および結合抗原の検出前に、洗浄する。均一フォーマットでは、試験試料をターゲッティング可能な構築物または複合体の組合せと共に溶液中でインキュベーションする。例えば、これは、形成した任意のターゲッティング可能な複合体／抗原集合体を沈澱させる条件下でよい。これらのアッセイについての標準的および競合的フォーマットはいずれも、当該技術分野で知られている。
標準的フォーマットでは、固定されたターゲッティング可能な構築物または複合体に結合した抗原の量を直接観察する。これは、例えば、ｂｓＡｂまたはターゲッティング可能な構築物上のエピトープを認識する標識した抗異種（例えば、抗ヒト）抗体によって行うことができる。競合的フォーマットでは、試料中の抗原の量は、アッセイの前または後に試料に加えた既知量の標識抗原（または他の競合リガンド）の結合に対する競合効果を観察することによって推定される。
ターゲッティング可能な構築物または複合体は、マイクロタイターウェルの内部表面、およびウェルに加えた試験試料および予備標識した標的エピトープに固定することができる。選択期の後、ウェルを洗浄し、ウェルの床に発色させることにより、抗原−抗体反応を検討する。自動読み取り装置を用いることによって、多数の試験結果を数分で決定することができる。
II．Ｄ．２．イムノアッセイキット
ターゲッティング可能な複合体は、イムノアッセイで使用するためのキットの形態で包装することができる。このキットは、別々の容器に、ターゲッティング可能な構築物、ターゲッティング可能な複合体とｂｓＡｂ（固形マトリックスに既に結合しているか、またはそれらをマトリックスに結合するための試薬と共に別々に）、コントロール抗体処方（正および／または負）、標識がシグナルを直接生成しないときには、アッセイフォーマットが同一のシグナル生成試薬（例えば、酵素基質）を必要とするときには、標識抗体の別々の組合せを含んでいる。このアッセイを行うための使用説明書（多数のフォーマット、例えば、文書、テープ、ＶＣＲ、ＣＤ−ＲＯＭなどのいずれか）を、このキットに含めることができる。
イムノアッセイである固形支持体を含んでなるための本発明による試験キットは、例えば、適当な容器であって、本発明のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体でコーティングしたもの、所望により標的エピトープおよび／またはその標識誘導体の凍結乾燥または濃縮溶液、このタンパク質の標準溶液、緩衝液、および所望により非特異的吸着および凝集体形成を防止するためのポリペプチドおよび洗浄剤、ピペット、反応容器、検量線、説明書などを含む。
II．Ｄ．３．深計棒
ターゲッティング可能な構築物および複合体は、試料に挿入しまたはから引き抜くことができる「深計棒」またはシートに用いることができる。計深棒を十分に混合した尿試料に浸し、３０秒−２分後、様々な試薬バンドを色の変化について目視でまたは光学的に検討する。バンドは、予め印刷したカラーチャートと目視で比較して、測定を行う成分またはパラメーターのそれぞれの量を決定することができる。
典型的な計深棒に基づく分析法では、目的とする分析質に特異的に結合するリガンドを計深棒上の固形支持体結合させる。計深棒を、目的とする分析質の存在を測定する試料と接触させる。頻繁に、計深棒から非特異的に結合した材料の除去を促進するために、段階を用いる。最後に、計深棒を加工処理して、分析質の存在を決定する。計深棒は、一般に固形材料を含んでなり、外形は平面または円柱状である。
II．Ｅ．エクス・ビボで治療法
本発明の組成物装置、およびその使用方法を、エクス・ビボ様式で用いることができる。「エクス・ビボ様式」とは、体液のような生物試料が一時的に動物から取り出し、１以上の望ましくない物質を除去しまたは不活性化するようにデザインされたイン・ビトロ操作によって変更した後、体内へ戻す様式である。望ましくない物質を試料から除去する一つの方法は、試料を望ましくない物質を結合する薬剤と接触させることによる。本発明のエクス・ビボ様式では、患者から一時的に取り出された試料を本発明のターゲッティング可能な複合体を含んでなる固形支持体と接触させる。この態様では、望ましくない物質は、固形支持体のターゲッティング可能な複合体によって認識される標的エピトープであるかまたはを含んでなる。望ましくない物質は、例えば、毒素、過剰増殖性細胞、感染細胞または病原体であるか、またはその部分である。例えば、ウイルス血症の散りようのために、標的エピトープを含んでなるウイルスを、血液を本発明のターゲッティング可能な複合体を含んでなる固形支持体と接触させることによって血液から除去する。ターゲッティング可能な複合体はウイルスを認識して結合し、これは透析系に保持されるが、患者に戻される血液では保持されない。
本発明の典型的なエクス・ビボ様式は、透析装置を含んでなる血液透析系である。「透析装置」とは、動物の血液のような流体を一時的に除去し、望ましくない物質を除去しまたは不活性化するようにデザインされた１種類以上の物理的、化学的、生化学的または他の種類の工程で加工する装置である。身体の老廃物、毒素、毒液、過剰発現または過剰活性内在性薬剤、上記のいずれかから誘導される分子、および上記のいずれかを含んでなる病原体は、望ましくない物質の非制限的例である。典型的な様式では、ヒトは、人体の天然の腎機能を増大または置換する透析装置によって治療される。血液を身体から除去し、透析装置中を通過させ、老廃物を血液から体外に分離する。分離された老廃物は排出されて処理され、一方、処理された血液は体内に戻される。
患者と透析装置との間の血液の移動は、通常は使い捨ての血液チュービングセット内で起こる。血液チュービングセットと透析装置は、その中を噛んじゃ血液が移動する閉じた体外経路に相当する。血液チュービングセットとしては、患者から血液を抜き取るための動脈貯蔵器に連結した動脈ライン、血液を患者に戻すための静脈貯蔵器に連結した静脈ライン、および動脈および静脈貯蔵器の間のポンプと透析装置を連結するための多数の他のラインが挙げられる。血液チュービングセットと透析装置を透析治療で用いることができるようにする前に、両方に滅菌食塩溶液を満たして体外回路から空気を除去しなければならない。食塩溶液を満たしてしまったならば、これを血液チュービングセットと透析装置中を再循環させ、安定化した流れを生成させ、体外回路から更に閉じ込められた空気を除去する。呼び水および再循環工程は、透析装置を浄化し、前の使用から残っている任意の破片または化学薬品の任意の破片の透析装置膜に水を流す働きもする。
血液透析のために血液の出入りを引き起こす一般に用いられている方法は、動静脈フィステルによるものである。それぞれの透析期間について、フィステルに大きな穿孔針で穴をあけて、血液を人工腎臓（透析装置）に送り、血液をそこから戻さなければならない。麻酔薬を用いても、これらの大きな穿孔針で穴をあけることは苦痛を伴うものである。従って、穿刺をできるだけ間隔を置いて行うことができれば、透析を行う患者のためになる。更に、頻繁な穿刺は、フィステルの寿命にとって有害なことがある。
現在行われている血液透析系は、基本的に体外血液回路（血流路）を含んでなる部分と、透析物回路または流路を含んでなる他の部分の２つの部分からなっている。典型的には、全血液回路は使い捨てであり、（１）動脈および静脈フィステル針、（２）動脈（流入）および静脈（流出）血液系、（３）血液透析装置、（４）１種類以上の生理学的呼び水溶液（例えば、食塩水）、および（５）１種類以上の抗凝固薬（例えば、ヘパリンまたはクエン酸塩）を含んでなる。
動脈フィステル針は患者のフィステルから血液に到達し、動脈血液チュービングセットに連結され、血液を透析装置に導入する。動脈系は、透析装置上の血液ポンプ（例えば、回転または蠕動ポンプでよい）へのインターフェースを有する送液部分、装置の圧力または流量変換器に連結し、圧力および流量前ポンプおよび／または後ポンプを監視するチュービングを含む圧力または流量監視室、食塩水および抗凝固薬の取り入れ口、および１種類以上の例えば、採血または投薬のための注入部位を含んでなる。
血液透析装置は、典型的には、中空繊維の半透性膜の束であって、通常はセルロースまたは合成ポリマーから製造されているものを封入しているケースを含んでなる。血液を半透性膜の一方の側を循環させ、透析溶液を他の側を循環させ、両者が直接接触することはないようにする。老廃物（尿毒症毒素）は、血液から半透性膜を通って透析溶液へ濃度勾配によって拡散する。患者の血液中の過剰の水は、圧力勾配の結果として透析物に入る。
静脈血液系および静脈フィステル針は新たに透析された血液を透析装置から運び出し、動脈針部位より僅かに心臓に近い穿刺部位を介して患者の循環系に戻す。静脈セットは、装置中のもう一つの圧力変換器に導くチュービングを有する圧力監視室、注入部位、および治療中の塞栓を防止するための装置における空気検出アセンブリーに連結しているチュービングの部分から構成されている。
透析装置は、幾つかの機械装置と部品を有する。血液を患者から透析装置へ送り、次いで患者に戻す体外流路では、少なくとも１個の動脈血液ポンプとときには静脈血液ポンプが血液を移動させ、限外濾過のようなある種の透析治療を行うのを容易にする。透析物を透析装置中に導入する水力学流路は、その流路における条件を監視して制御するための多数の部品を含んでいる。流量および圧力計は、典型的には透析装置の入口と出口とに含めることができる。第一の透析物ポンプは透析物を透析装置中に移動し、第二の透析物ポンプは透析物を透析装置から取り出す。加熱装置を備えて、透析物を体温まで加熱して、患者へのまたはからの望ましくない熱移動を回避し、および／または消毒溶液を微生物を殺すのに適する温度まで加熱することができる。他の部品を、特定の用途にデザインした透析装置に備えることができる。例えば、限外濾過透析治療では、限外濾過ポンプを用いて望ましい成分の血液への送達を制御することができる。
１種類以上の透析溶液の比例ポンプを備えることができる。透析溶液は、典型的には、別個の水処理装置によって最初に精製した水と電解質の液状濃縮物を組み合わせることによって現在の装置では連続的にオンラインで調製される。透析物濃縮物は、循環アシドーシスの補正のための生理緩衝剤としてのアセテートを含む単一処方から生成して、重炭酸塩が緩衝剤としてのアセテートを置換する２容器系となり、カルシウムおよびマグネシウムとの化学的不適合性により、別々に保持しなければならない。従って、２つの比例ポンプが必要であり、第一のものは重炭酸塩を水と混合し、第二のものはこの混合物を濃縮電解質と調和させて最終的な生理学的に適合性の透析溶液を得るものである。
透析装置では、この透析装置の血液取り入れ口と出口並びに透析物回路における圧力を（血液セットに連結した圧力変換器によって）連続的に監視する。マイクロプロセッサーによって、この装置が、水の膜貫通量を測定する膜貫通圧力（ＴＭＰ）を計算する。透析装置は、透析装置に入る透析溶液および透析装置から出てくる透析物の量を測定する器具も含んでなることがあり、これにより患者からの真の水除去を算出することができる。血液に入るまたはから出てくる水の量をＴＭＰと電子的に比較することによって、この装置は、装置に予めプログラミングされた所望なターゲットまで患者から除去される水を積極的に制御することができる。低水透過セルロース膜を用いるときには、装置によって膜の透析物の側に負圧が生じ、十分な水が除去される。透析物は透析装置を通過するときにこれを吸引することができるので、これを最初に脱気室で一層高真空にして、フローセンサーによる限外濾過の計算に誤差を生じまた透析装置の効率をも減少させる気泡が透析装置内に発生しないようにする。対照的に、高水透過合成膜を用いるときには、限外濾過の速度を制御するために透析装置の側に陽圧を加える必要があることが多い。
本発明のエクス・ビボでの治療用途のもう一つの非制限的例は、手術中および手術後の血液回収の装置における本発明の組成物の使用である。この態様では、手術中および手術後の処置の際に失われた患者自身の血液は、洗浄され、濾過された後、再度患者に注入される。この種の非制限的な典型的装置については、米国特許第５，８７６，６１１号明細書を参照されたい。
III．分子スカフォールドおよびターゲッティング可能な構築物
III．Ａ．分子スカフォールドおよびターゲッティング可能な構築物の構造
ターゲッティング可能な複合体に含まれる（複数の）ターゲッティング可能な構築物は、複合体における抗体または抗体断片のアームによって認識される少なくとも２対のキャリヤーエピトープを含んでなるまたは有する分子スカフォールドを含んでなる。
ターゲッティング可能な構築物は多様な構造を採ることができるが、十分な免疫応答を誘発するだけでなく、ｂｓＡｂターゲッティング法で用いるときに速やかなイン・ビボでのクリアランスのためにも選択される。本発明の出願明細書で用いられる典型的なターゲッティング可能な構築物は、１９９９年６月２２日出願の米国特許出願連続番号第０９／３３７，７５６号明細書、および２００１年４月３日出願の米国特許出願連続番号第０９／８２３，７４６号明細書に記載されており、上記明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
疎水性薬剤は強い免疫応答を誘導する場合には最善であるが、親水性薬剤は、速やかにイン・ビボでのクリアランスを行うのに好ましく、従って、疎水性および親水性のバランスを確立する必要がある。これは、部分的には、多くの有機残基の固有の疎水性を相殺するのに親水性キレート剤を用いることに依存することによる好ましい方法で行うことができる。また、ターゲッティング可能な構築物のサブユニットであって、反対の溶液特性を有する例えば、ペプチドを選択することができ、これはアミノ酸を含み、それらのあるものは疎水性であり、またあるものは親水性である。ペプチド以外には、炭水化物を用いることができる。更に、ターゲッティング可能な構築物は、患者での循環時間を増加させるため、ＰＥＧ（ポリ［エチレン］グリコール）誘導体を含んでなることができる。
１個程度のアミン残基を有するペプチド、好ましくはキレート剤のような他の部分にもカップリングしている場合には、２−１０個のアミノ酸残基を有するものを用いることができる。例としては、ビス−ＤＴＰＡ−リシン、およびビス−ＤＴＰＡ−ジアミンのような改質アミノ酸が挙げられる。
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 これらの薬剤は、ターゲッティングされる分子に共有結合することができる。キャリヤー部分のハプテン残基は、好ましくは分子量が１００，０００ダルトン以下であり、有利には約２０，０００ダルトン、１０，０００ダルトンまたは５，０００ダルトン未満の低分子量接合体であり、キレートに金属イオンを含むものであるべきである。例えば、既知ペプチドジ−インジウム−ＤＴＰＡ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＯＨが、分子のインジウム−ＤＴＰＡ部分に対する抗体を生成させるのに用いられている。しかしながら、非インジウム含有分子および適当なスクリーニング段階を用いることによって、チロシル−リシンジペプチドに対する新規なＡｂを作成することができる。更に一般的には、抗原性ペプチドは、ペプチドＡｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２のように４個以上の残基を有する。また、非金属含有ペプチドを免疫原として用い、生成するＡｂをＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓバックボーンに対する反応性についてスクリーニングする。４個以上の残基を有する抗原性ペプチドのもう一つの非制限的例は、ペプチドＤＯＴＡ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−ＮＨ２であり、ＤＯＴＡが１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン四酢酸であり、ＨＳＧは式の基を有するヒスタミンスクシニルグリシル基である。
非金属含有ペプチドを免疫原として用い、生成するＡｂをＰｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓバックボーンに対する反応性についてスクリーニングすることができる。
一態様では、異常アミノ酸、例えば、Ｄ−アミノ酸をバックボーン構造に取り込み、最終的なｂｓＡｂ／リンカー系と共に用いるときに、リンカー部分を認識するｓｃＦｖ成分が完全に特異性となるようにする。本発明は、非天然アミノ酸、ペプトイド（ｐｅｐｔｏｉｄｓ）、擬似ペプチド、アプタマー、ペプチド核酸（ＰＮＡ）などから構築されるような他のバックボーン構造も意図する。
本発明の一態様によれば、ターゲッティング可能な構築物は炭水化物を含んでなることができる。このような適当な炭水化物としては、２−６個の糖単位長の炭水化物鎖が挙げられる。ターゲッティング可能な構築物は、デキストランのようなポリマー性炭水化物を含んでなることもできる。
本発明のもう一つの態様では、ターゲッティング可能な構築物のハプテンは、既知の免疫原性認識部分、例えば、既知ハプテンを含んでなる。既知ハプテン、例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）を用いると、抗体に対する高特異性のターゲッティング可能な構築物が示される。これは、ハプテンに対して生じた抗体が既知であり、本発明の抗体に組込むことができるからである。従って、ターゲッティング可能な構築物と結合したキレート剤または金属−キレート複合体との結合は、本発明の抗体または抗体断片に対して高特異性である。ターゲッティング可能な構築物に対して置換されるハプテンのもう一つの例としては、ビタミンＢ１２が挙げられる。ビタミンＢ１２の使用は、抗−Ｂ１２ Ｍａｂが既知であり、遊離の血清Ｂ１２が存在せず、従って、抗体に対して高特異性が示されることがあるから、有利である。キレート剤または金属カチオンとのそのキレートも、抗体を生じるハプテンとして機能することができる。ターゲッティング可能な構築物に接合させるハプテンのもう一つの例としては、ビオチンが挙げられる。
III．Ｂ．分子スカフォールドおよびターゲッティング可能な構築物の調製
分子スカフォールドまたは免疫原として用いられるペプチドなどの、これらに限定されないペプチドは、固相支持体、および反復直交脱保護（repetitive orthogonal deprotection）およびカップリングの標準的手法を用いて自動ペプチド合成装置上で好都合に合成される。
キレート接合に後で用いられるペプチドの遊離アミノ基は、Ａｌｏｃ基のような標準的保護基で有利にブロックされる。このような保護基は、当業者に知られているものである。Greene and Wuts，「有機合成の保護基」，John Wiley and Sons，ニューヨーク（1999)、およびKates SA, Albericio F．「固相合成： 実施指針」，Marcel Dekker，ニューヨーク（2000）を参照されたい。アミノ酸ベースのポリマーおよびグリコシル化ペプチドの合成方法は、それぞれ、Sanda and Endo，「アミノ酸を基剤とするポリマーの合成および機能」，Macromol. Chem. Phys. 200:2651-2661, 1999、およびSears and Wong，「オリゴ糖および糖タンパク質の自動合成」，Science 291:2344-2350, 2001に記載されている。
III．Ｃ．化学接合
分子スカフォールドは単一分子として調製することができ、または最初にサブユニットを調製した後、互いに共有結合することによって生成することができる。「接合」という用語は、２つ以上の分子の共有結合を示すのに用いられる。
ペプチドは、様々な方法を用いて互いに接合（例えば、連結または共有結合）する。非制限的例としては、第一のペプチドの天然配列に含まれるアミノ酸残基は、例えば、ジスルフィド橋における第二のペプチドの天然アミノ酸配列におけるアミノ酸残基に直接共有結合することができ、または架橋試薬（「架橋剤」としても知られている）、典型的には、２個以上のペプチドの間で共有結合形成する二官能価（２本のアームを有する）化学リンカーを用いて、ペプチドを互いに共有結合することができる。このような二官能価リンカーは、ホモ二官能価（リンカーの「アーム」が両方とも同一の化学残基である）またはヘテロ二官能価（２本の「アーム」のそれぞれが互いに異なる化学残基である）であることができる。
Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（「生物接合法」，Academic Press，1996）（この内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている）は、様々な架橋または誘導体形成試薬上に含まれる様々な反応性官能基を用いて、タンパク質および他の分子を互いに連結するのに用いられる化学的方法の多くを要約している。架橋剤は、タンパク質およびペプチド、並びに他の巨大分子のアミノ酸側鎖を改質し、これにカップリングする反応性官能基に基づいている。架橋試薬は、２個以上の官能性反応基を組込む。架橋試薬の官能性反応基は、同一でもまたは異なっていてもよい。多くの異なる架橋剤は、様々なタンパク質、ペプチド、および巨大分子を架橋するのに利用できる。表１に、それらのクラスの化学反応性によって商業的供給源から容易に入手できる架橋剤の幾つかを示す。表２に、化学的架橋剤の特性およびそれらが反応する官能基の種類を示す。
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二官能価架橋試薬は、それらの官能基、化学的特異性、それらが確立する架橋の長さ、同様な官能基または異なる官能基の存在、化学的または光化学反応性、還元または他の手段により内部開裂する能力、および放射能標識（すなわち、放射性ヨード化）によって更に改質される試薬の能力、または検出可能なタグまたは標識の追加によって分類することができる。架橋試薬上の選択基は、選択基が同一であるホモ二官能価配置で存在することができ、または選択基が異なるヘテロ二官能価配置で存在することができる。
化学修飾は、特に細胞内で翻訳後改質によって第一アミン、スルフヒドリル（チオール）基、カルボニル、カルボキシル基、ヒドロキシル、または炭水化物およびタンパク質またはペプチド上に置かれた他の基と反応する選択基を含む架橋試薬を用いて行うことができる。
選択基としては、イミドエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルまたはスルホスクシンイミジルエステル、１−ヒドロキシ−２−ニトロベンゼン−４−スルホン、マレイミド、ピリジルジスルフィド、カルボジイミド、およびハロアセチル基が挙げられるが、これらに限定されない。
スルフヒドリル反応性官能基としては、マレイミド、ハロゲン化アルキルおよびアリール、ハロアシル、ハロアセチルおよびピリジルジスルフィドが挙げられる。マレイミド、ハロゲン化アルキルおよびアリール、ハロアセチルおよびハロアセチルはチオールと反応して、２−メルカプトエタノールおよびジチオトレイトールのような試薬によって還元されない安定なチオエーテル結合を形成する。ピリジルジスルフィドはチオール基を有する混合ジスルフィドを形成し、混合ジスルフィドは、２個以上の巨大分子を架橋するための中間体として用いることができる。最初にカルボキシル基と反応して活性化中間体を形成した後、リシンのアミノ基またはアミノ末端アミノ酸のアミノ基のようなアミノ基と反応する架橋剤を用いることができる。
ジスルフィド結合またはヒンダードジスルフィド結合のようなスペーサー基または官能基からなるスペーサーアームまたは「架橋」領域は、２つの選択または官能基を結合する。スペーサーアームの長さは、変化することができる。官能基間の距離は、スペーサーアームの長さを確立する。互いに架橋している２分子間の立体障害を減少させまたはなくするには、一層長いスペーサーアームが必要となることがある。分子間架橋は、スペーサーアームを長くすることにより一層効率的になる。短いスペーサーアームは、本発明では回避されるべきである分子内架橋に有利である。
スペーサーアームは、それらの中に更に改質を行うことができる反応性結合を有することがある。例えば、内部で開裂可能な結合をジスルフィドまたはヒンダードジスルフィド、１種類以上のエステル結合、またはビシナルヒドロキシル基のようなスペーサー内に置くことができる。内部ジスルフィド結合の開裂は、２−メルカプトエタノールおよびジチオトレイトールのようなチオール含有試薬による還元を用いて行うことができる。１以上の代謝可能な結合を架橋試薬の内部に挿入して、接合体が細胞および体内に輸送された後に（複数の）結合を断った後にカップリングしたものを分離する能力を提供することができる。
ホモ二官能価架橋剤は、少なくとも２つの同一な官能基を含む。ヘテロ二官能価架橋剤は、異なる特異性で反応する２つ以上の官能性反応基を含む。ヘテロ二官能価架橋剤は異なる反応性基を含むので、それぞれの末端をタンパク質、ペプチドおよび巨大分子上の異なる官能基に個々に向けることができる。この特徴により、例えば、一つの分子上のアミノ基の別の分子上のカルボキシル基への結合、または一つの分子上のアミノ基の別の分子上のスルフヒドリル基への結合が生じる。
官能基としては、化学反応を行うことができるタンパク質、ペプチドおよび巨大分子上の反応性部分が挙げられる。官能基としては、アミノおよびカルボキシル基、ヒドロキシル基、フェノレートヒドロキシル基、カルボニル基、グアニジニル基、および炭素−炭素二重結合が挙げられる。更に、光に暴露したときに反応性になる光活性試薬を用いることができる。例えば、アリーラジドを活性化して、非選択的に炭素−水素結合に挿入する（すなわち、アリールニトレンによって）またはアミン（デヒドロアゼピン）と反応するアリールニトレンまたはデヒドロアゼピン中間体のような活性化中間体を形成することができる。他の例としては、フッ素化アリールアジド、ベンゾフェノン、ある種のジアゾ化合物、およびジアズリン誘導体が挙げられる。
所望なスルフヒドリル基がタンパク質、ペプチドまたは巨大分子上に存在しないときには、スルフヒドリルを化学修飾によって導入することができる。非制限的例としては、ｓＦｖまたは治療用巨大分子を、化学修飾によってチオールを導入するように修飾することができる。システインアミノ酸は、ペプチド合成の際にペプチドに配置することができる。スルフヒドリル基は、トラウト試薬としても知られている２−イミノチオラン（ＩＴ）を用いる化学修飾によって加えることができる。
スルフヒドリル基は、第一アミンと選択的に反応する基の他にジスルフィド結合を含む修飾試薬を用いることによって加えることもできる。例えば、ヘテロ二官能価架橋剤であるスルホスクシンイミジル６−［３’−（２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ、Pierce Chemical Co．）は、製造業者の指示に従って用いると、ペプチドをチオール化する。Ｎ−スクシンイミジル ３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ，Pierce Chemical Co．）またはＮ−スクシンイミジル６−［３’−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（ＬＣ−ＳＰＤＰ，Pierce Chemical Co．）のような他の不溶性形態を、適当な有機溶媒に２０ｍＭの濃度まで溶解させ、１０ｍｇ／ｍｌペプチド１ｍｌに２５−ｌを加えることによって、これらの反応において用いることができる。穏和な条件でＳＰＤＰ誘導体形成したペプチドを還元すると、ピリジン−２−チオンを放出し、脂肪族チオールが残る。穏和な還元条件の例は、１Ｍジチオトレイトール（ＤＴＴ）の１／１００容を上記のＳＰＤＰで誘導体形成した標的ペプチドに加え、室温で３０分間インキュベーションすること、またはＳＰＤＰで誘導体形成した標的ペプチドを５０ｍＭ ２−メルカプトエチルアミン／ＰＢＳ−ＥＤＴＡで３７℃にて９０分間インキュベーションすることである。次に、過剰のＳＰＤＰ、ＬＣ−ＳＰＤＰまたはスルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ、およびピリジン−２−チオンを、ＨＰＬＣ精製によって除去することができる。
これらの修飾試薬は、付加したチオールの近くに基を含み、酸化したときにそれらがヒンダードジスルフィドを形成するようにすることもできる。４−スクシンイミジルオキシカルボニル−メチル−（２−ピリジルジチオ）−トルエン（ＳＭＰＴ）のようなこれらの試薬は、イン・ビボで増加した安定性を示す接合体を生じる（Thorpe et al. Cancer Res. 47:5924- 5931, 1987）。他の架橋試薬をタンパク質のチオール化に用いることができ、当業者に知られている。これらの試薬の多くは、Pierce Chemical Co．カタログ、またはJi, Meth. Enzymol. 91:580-609, 1983、およびHermanson，「生物接合体の手法」，Academic Press, Inc., サン・ディエゴ，1-785, 1996に記載されている。
極めて一般的には、キャリヤー分子のスカフォールド部分は架橋試薬の標的としてのスルフヒドリルまたは第一アミンを有し、スルフヒドリルおよび第一アミンはいずれも天然に存在するかまたは上記のような化学修飾の結果であることができる。キャリヤー分子スカフォールド部分がいずれも還元スルフヒドリルを有するときには、マレイミド、ピリジルジスルフィドまたはハロアセチル基を含むホモ二官能価架橋剤を用いて架橋することができる。このような架橋試薬の例としては、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）または１，４−ジ−［３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ブタン（ＤＰＤＰＢ）が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、マレイミド、ピリジルジスルフィドまたはハロアセチル基の組合せを含むヘテロ二官能価架橋剤を用いて架橋することができる。余り好ましくはないが、架橋試薬はチオフタルイミド誘導体またはジスルフィドジオキシド誘導体を含むことができる。また、外来性スルフヒドリル基をキャリヤー分子スカフォールド部分に導入して、酸化してジスルフィド形成による架橋を行うことができる。
第一アミンをｓＦｖおよび治療用巨大分子上の標的として選択すると、スクシンイミドエステル、イミドエステル、アシルアジド、またはイソシアネート基を含むホモ二官能価架橋剤を用いて架橋を行うことができる。このような架橋試薬の例としては、ジスクシンイミジルグルタレート（ＤＳＧ）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（ＤＳＰ）、ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ）、ビス［２−（スルホスクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（スルホ−ＢＳＣＯＣＯＥＳ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、ビス−（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ３）、ジスクシンイミジルタルトレート（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジルタルトレート（スルホ−ＤＳＴ）、ジチオ−ビス−マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）、ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）、エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシネート）（スルホ−ＥＧＳ）、ジメチルマロンイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＭ）、ジメチルスクシンイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＳＣ）、ジメチルアジプイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＡ）、ジメチルピメルイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＰ）、ジメチルスベルイミデート・２ＨＣｌ（ＤＭＳ）、およびジメチル３，３’−ジチオビスプロピオンイミデート・２ＨＣｌ（ＤＴＢＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。イミドエステルまたはスクシンイミドエステル基の組合せを含むヘテロ二官能価架橋剤を用いて架橋を行うこともできる。
異なる標的に対する選択基を組み合わせるヘテロ二官能価架橋試薬は、これらにより反応を選択的且つ逐次的に行うことができ、自己会合または重合が最小限になるので、一般に好ましい。また、ヘテロ二官能価試薬により、結合を行う個々の分子に適当な化学を選択することができる。このような架橋試薬の例としては、Ｎ−スクシンイミジル ３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル６−［３’−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（ＬＣ−ＳＰＤＰ）、スルホスクシンイミジル ６−［３’−（２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノエート（スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢＳ）、スクシンイミジル４−［Ｐ−マレイミドフェニル］ブチレート（ＳＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル ４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチレート（スルホ−ＳＭＰＢ）、Ｎ−［マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、Ｎ−［マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢＳ）、Ｎ−［マレイミドカプロイルオキシ］スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［マレイミドカプロイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＥＭＣＳ）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ−ＳＩＡＢ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−ｌ−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（スルホ−ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−ｌ−カルボキシ−（６−アミド−カプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、４−スクシンイミジルオキシカルボニル−メチル−（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）、およびスルホ−ＬＣ−ＳＭＰＴが挙げられるが、これらに限定されない。
IV．キレート部分
ターゲッティング可能な構築物上に親水性キレート部分が存在すると、速やかなイン・ビボクリアランスを確実に行うことが促進される。親水性の他に、キレートはそれらの金属結合特性について選択され、少なくともｂｓＡｂエピトープがペプチドの部分でありまたは非キレート化ハプテンであるターゲッティング可能な構築物については、金属−キレート複合体の認識が最早問題ではないので、随意に変更される。
本発明の性質は、幾つかのキレート部分をターゲッティング可能な構築物または複合体に用いることができるようにすることである。例えば、２つの種類のｂｓＡｂを複合体で用いようとするときには、それらのそれぞれがキャリヤーエピトープ（すなわち、それらのそれぞれが異なる種類のキレート部分結合する）について異なる結合特異性を有し、ターゲッティング可能な構築物がいずれの種類のキレート部分も含んでなる。当業者であれば、ターゲッティング可能な構築物と用いようとするｂｓＡｂの性状および構造およびターゲッティング可能な構築物および複合体の意図した用途によって適当なキレート部分を選択することができるであろう。必要ならば、新規なキャリヤーエピトープに対して特異性を有するｓｃＦｖを生成させ、ｂｓＡｂに組込むことができる。
特に有用な金属−キレートの組合せとしては、放射性画像化およびＲＡＩＴについて４７Ｓｃ、５２Ｆｅ、５５Ｃｏ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、１６１Ｔｂ、１７７Ｌｕ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、および２２５Ａｃと共に用いる２−ベンジル−ＤＴＰＡおよびそのモノメチルおよびシクロヘキシル類似体が挙げられる。同一キレート剤は、マンガン、鉄およびガドリニウムのような非放射性金属と複合体形成するときに、ＭＲＩに用いることができ、本発明のｂｓＡｂと共に用いられる。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡおよびＴＥＴＡのような多環キレート剤は、様々な金属および放射性金属と共に、最も詳細にはそれぞれガリウム、イットリウムおよび銅の放射性核種と共に用いられる。
リガンドがカルボキシレートまたはアミン基のようなハード塩基キレート化機能を含むＤＴＰＡおよびＤＯＴＡ型キレート剤は、ハード酸カチオン、特にIIａ族およびIIIａ族金属カチオンのキレート化に極めて有効である。このような金属−キレート複合体は、目的とする金属に対する環の大きさを整えることによって極めて安定にすることができる。大環状ポリエーテルのような他の環状キレート剤であって、ＲＡＩＴについて２２３Ｒａのような核種を安定に結合するのに重要なものが、本発明によって包含される。ポルフィリンキレート剤を多数の放射性金属と共に用いることができ、ｂｓＡｂ指定免疫光療法についてのある種の非放射性金属複合体としても有用である。２種以上のキレート剤をキャリヤーに接合して、複数の金属イオン、例えば非放射性イオンおよび／または放射性核種を結合することができる。一例はビス−１１１Ｉｎ−ＤＴＰＡ接合体であり、これもまたＤＯＴＡ−９０Ｙキレートを有する。特に有用な治療用放射性核種としては、３２Ｐ、３３Ｐ、４７Ｓｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、９０Ｙ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４２Ｐｒ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、２２３Ｒａおよび２２５Ａｃが挙げられるが、これらに限定されない。
放射免疫画像化について、コバルト−５７（Goodwin et al., 米国特許第４，８６３，７１３号明細書）、１１１Ｉｎ（Barbet et al., 米国特許第５，２５６，３９５号明細書および米国特許第５，２７４，０７６号明細書；Goodwin et al., J. Nucl. Med., 33:1366-1372, 1992; Kranenborg et al., Cancer Res.(suppl.), 55:5864s-5867s, 1995，およびCancer(suppl.) 80:2390-2397, 1997)、および６８Ｇａ（Boden et al., Bio 接合体 Chem. 6:373-379, 1995、およびSchuhmacher et al., Cancer Res. 55:115-123, 1995）のような放射性核種を用いる典型的な放射性金属キレート複合体が報告されている。
Ａｂはキレート剤と金属キレート複合体に対して生じるので、それらが最初に生じた複合体に対して著しい特異性を有する。実際に、Boden et al. のｂｓＡｂは、キレート剤と金属−キレート複合体の鏡像異性体性混合物の単一鏡像異性体に対して特異性である。
米国特許第５，７５３，２０６号明細書に開示されているようなキレート剤、特にチオセミ−カルバゾニルグリオキシルシステイン（ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ）およびチオセミカルバジニル−アセチルシステイン（ＴｓｃＡ−Ｃｙｓ）キレート剤は、ソフト塩基リガンド、特に硫黄−またはリン−含有リガンドに堅く結合しているＴｃ、Ｒｅ、Ｂｉおよび他の遷移金属であるランタニドおよびアクチニドのソフト酸カチオンを結合するのに有利に用いられる。これは、２種類以上のキレート剤をペプチドに結合するのに用いることができ、例えばＩｎ（III）カチオンについて、ＤＴＰＡまたは同様なキレート剤、およびＴｃカチオンについて、チオール含有キレート剤、例えばＴｓｃＧ−Ｃｙｓを用いることができる。ジ−ＤＴＰＡハプテンに対する抗体は知られており（Ｂａｒｂｅｔ，米国特許第５，２５６，３９５号明細書）、ターゲッティング抗体に容易にカップリングしてｂｓＡｂを形成するので、ペプチドハプテンを放射性同位体を結合するための非放射性ジＤＴＰＡキレートおよび別のキレートと共に放射性同位体をターゲッティングするための予備ターゲッティングプロトコールにおいて用いることができる。このようなペプチドの一例は、Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｌｙｓ（ＴｓｃＧ−Ｃｙｓ−）−ＮＨ２である。このペプチドは、Ｉｎ（III）に次いで９９−ｍ−Ｔｃカチオンを加えることができ、Ｉｎ（III）イオンはＤＴＰＡによって優先的にキレートされ、Ｔｃカチオンはチオール含有ＴｓｃＧ−ＣｙｓＣに結合する。ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡ、ＴＥＴＡなどの他のハード酸キレート剤をＤＴＰＡ基の代わりに用いることができ、それらに特異的なＭａｂを抗−ジ−ＤＴＰＡ Ｍａｂを生成するのに用いたのと類似の手法を用いて製造することができる。
２種類のハード酸またはソフト酸キレート剤を例えば異なるキレート環の大きさを有するターゲッティング可能な構築物に組込み、２種類のハード酸またはソフト酸カチオンの大きさの差、キレート環の外形、およびカチオンの好ましい複合体イオン構造によりこれらのカチオンへ優先的に結合することができる。これにより、２種類の金属であって、その一方または両方が放射性でありまたはＭＲＩ増強に有用なことがあるものをターゲッティング可能な構築物に組込み、最終的に予備ターゲッティングしたｂｓＡｂにより捕捉することができる。
キレート剤は、標準的化学を用いてターゲッティング可能な構築物のキャリヤー部分にカップリングされる。例えば、過剰の２−（ｐ−イソチオシアナト）ベンジル−ＤＴＰＡをペプチドＮＨ２基と反応させ、ペプチドがターゲッティング可能な構築物であるときには、キレート剤のｐ−イソチオシアネートとペプチドの遊離１−αおよび６−ε−アミノ基との間にチオ尿素結合を形成する。あるいは、ＤＴＰＡの二無水物を、ペプチドの遊離アミン基に直接カップリングさせることができる。所望なキレート剤−ペプチドは、クロマトグラフィー精製し、金属結合剤として使用するのが容易である。同様に、ＤＯＴＡはカルボジイミドを用いて１つのカルボキシル基でモノ活性化され、２つのＤＯＴＡ単位はペプチドの遊離アミノ基にカップリングされ、またはＤＯＴＡトリ−ｔ−ブチルエステルはカルボジイミドで活性化され、ＤＯＴＡ単位はペプチドの遊離アミンにカップリングされる。（保護基は樹脂からの開裂時に除去される。）チオールと特異的に反応する基を有するキレート剤は、Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＮＨ２のようなペプチドとの反応に用いられる。このようなキレート剤としては、２−（ｐ−ブロモアセタミド）ベンジル−ＤＴＰＡが挙げられ、これは穏和な中性条件下でペプチドの遊離チオール基をアルキル化するのに用いることができる。
キレート剤−ペプチド接合体は、固形物として長期間保管することができる。それらは単位用量に計量して金属結合反応に用いることができ、単位用量として、固形物、水性または半水性溶液、冷凍溶液、または凍結乾燥製剤として保管することができる。それらは、周知の手順によって標識することができる。典型的には、ハード酸カチオンを好都合な塩の溶液として導入し、ハード酸キレート剤によっておよび可能ならばソフト酸キレート剤によって採取する。しかしながら、ソフト酸カチオンを後で加えると、ソフト酸キレート剤により結合し、あらゆるハード酸カチオンを置換し、キレート形成することがある。例えば、過剰の非放射性ＩｎＣｌ３の存在下でも、９９ｍＴｃ（Ｖ）グルコヘプトネートまたは塩化第一スズとＮａ９９ｍ−ＴｃＯ４を用いてイン・シテューで生成したＴｃカチオンによる標識はソフト酸キレート剤上で定量的に進行する。ｌ８６Ｒｅ、ｌ８８Ｒｅ、２ｌ３Ｂｉのような他のソフト酸カチオン、およびＭｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｐｂ、Ｃｕ、Ｃｄ、Ａｕ、Ｆｅ、Ａｇ（一価）、ＺｎおよびＨｇ、特に６４Ｃｕおよび６７Ｃｕのような二価または三価カチオンなどであって、それらのあるものは放射免疫診断または放射免疫療法に有用なものを、同様の方法によってキャリヤーペプチドに加えることができる。Ｒｅカチオンもレニウム酸塩と第一スズイオンからイン・シテューで生成させることができ、または予備還元したレニウムグルコヘプトネートまたは他のキレート交換剤（ｔranschelator）を用いることができる。過レニウム酸塩の還元にはテクネチウムの還元に要するより多くの第一スズイオンを必要とするので（典型的には２００μｇ／ｍｌ最終濃度を上回る）、高水準の第一スズイオンがジスルフィド環形成ペプチドに存在するような感受性の高いジスルフィド結合を還元しないように細心の注意を払う必要がある。ＴｓｃＧ−ＣｙｓリガンドのＲｅＯ金属複合体を調製するのに好都合な方法は、ペプチドをＲｅＯＣｌ３（Ｐ（Ｐｈ３）２と反応させることによるものであるが、ＲｅＯ（エチレンジアミン）２のような他の還元種を用いることもできる。
好ましいキレート剤としては、ＮＯＴＡ、ＤＯＴＡおよびＴｓｃｇ、およびそれらの組合せが挙げられる。これらのキレート剤は、下記の
（ａ） ＤＯＴＡ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(ＨＳＧ)−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ(ＨＳＧ)−ＮＨ２
（ｂ） ＤＯＴＡ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(ＨＳＧ)−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ(ＨＳＧ)−ＮＨ２
（ｃ） Ａｃ−Ｌｙｓ(ＨＳＧ)Ｄ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ(ＨＳＧ)−Ｌｙｓ(Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ)−ＮＨ２
（ｄ）
Figure 0005026072
 および
（ｅ）
Figure 0005026072
 の構築物に例示されているように、キレート剤−ペプチド接合体に組込まれている。
上記のキレート剤−ペプチド接合体（ｄ）および（ｅ）は６８Ｇａを結合することが示されており、従って陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）の用途に用いられる。
キレート剤を、下記の実施例で更に詳細に説明する標準的な化学的方法を用いてリンカー部分にカップリングする。簡単に説明すれば、ペプチドＡｃ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ−）−ＮＨ２は、最初にＡｌｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨをペプチド合成装置上でリンクアミド樹脂に結合することによって合成される。本明細書で用いられる保護基の略号「Ａｌｏｃ」および「Ｆｍｏｃ」は、基アリルオキシカルボニルおよびフルオレニルメチルオキシカルボニルを表す。次に、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＴｓｃＧを標準的Ｆｍｏｃ自動合成プロトコールを用いてリシンの側鎖に付加して、下記のペプチド：Ａｌｏｃ−Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−リンク樹脂を形成した。次に、Ａｌｏｃ基を外した。次に、ペプチド合成を合成装置上で継続し、下記のペプチド：（Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ））−リンク樹脂を得た。Ｎ−末端をアセチル化した後、側鎖Ａｌｏｃ保護基を除去した。次に、樹脂がカイザー試験を用いてアミンについて試験結果が負となるまで、生成するペプチドを活性化Ｎ−トリチル−ＨＳＧ−ＯＨで処理した（Karacay et al., Bio 接合体 Chem. 11:842-854, 2000）。Ａｃ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ−Ｃｙｓ−）−ＮＨ２の合成、並びにＤＯＴＡ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−Ｄ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−ＮＨ２およびＤＯＴＡ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＨＳＧ）−ＮＨ２の合成を、更に詳細に下記に説明する。
キレート剤−ペプチド接合体は、固形物として長期間保管することができる。それらは単位用量に計量して金属結合反応に用いることができ、単位用量として、固形物、水性または半水性溶液、冷凍溶液、または凍結乾燥製剤として保管することができる。それらは、周知の手順によって標識することができる。典型的には、ハード酸カチオンを好都合な塩の溶液として導入し、ハード酸キレート剤によっておよび可能ならばソフト酸キレート剤によって採取する。しかしながら、ソフト酸カチオンを後で加えると、ソフト酸キレート剤により結合し、あらゆるハード酸カチオンを置換し、キレート形成することがある。例えば、過剰の非放射性１１１ＩｎＣｌ３の存在下でも、９９ｍ−Ｔｃ（Ｖ）グルコヘプトネートまたは塩化第一スズとＮａ９９ｍ−ＴｃＯ４を用いてイン・シテューで生成したＴｃカチオンによる標識はソフト酸キレート剤上で定量的に進行する。ｌ８６Ｒｅ、ｌ８８Ｒｅ、２ｌ３Ｂｉのような他のソフト酸カチオン、およびＭｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｐｂ、Ｃｕ、Ｃｄ、Ａｕ、Ｆｅ、Ａｇ（一価）、ＺｎおよびＨｇ、特に６４Ｃｕおよび６７Ｃｕのような二価または三価カチオンなどであって、それらのあるものは放射免疫診断または放射免疫療法に有用なものを、同様の方法によってキャリヤーペプチドに加えることができる。Ｒｅカチオンもレニウム酸塩と第一スズイオンからイン・シテューで生成させることができ、または予備還元したレニウムグルコヘプトネートまたは他のキレート交換剤（transchelator）を用いることができる。過レニウム酸塩の還元にはテクネチウムの還元に要するより多くの第一スズイオンを必要とするので（典型的には２００μｇ／ｍｌ最終濃度を上回る）、高水準の第一スズイオンがジスルフィド環形成ペプチドに存在するような感受性の高いジスルフィド結合を還元しないように細心の注意を払う必要がある。レニウムによる放射能標識の際には、Ｔｃ−９９ｍで用いたのと同様な手順を用いる。ＴｓｃＧ−ＣｙｓリガンドのＲｅＯ金属複合体を調製するのに好都合な方法は、ペプチドをＲｅＯＣｌ３（Ｐ（Ｐｈ３）２と反応させることによるものであるが、ＲｅＯ（エチレンジアミン）２のような他の還元種を用いることもできる。
Ｖ．生物活性部分
ターゲッティング可能な構築物を、１種類以上の生物活性薬剤または部分に接合させまたはこれと複合体形成することができる。下記の説明は、生物活性部分および薬剤の非制限的例である。
生物活性薬剤または部分の１つの種類は、標的部位でプロドラッグを活性化することができるまたは身体の解毒経路を制御することによる通常の治療薬の効力を向上させることができる酵素である。適当なとしては、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。
ｂｓＡｂを投与した後、キャリヤーに接合した酵素を投与する。酵素を標的部位に予備ターゲッティングした後、標的部位で作用することが知られている細胞傷害性薬物または予備ターゲッティング酵素によってイン・シテューで薬物に転換されるそのプロドラッグ形態を投与する。この薬物は、解毒されて毒性の低い中間体を形成するものであり、最も一般的には、哺乳類の通常の解毒工程を用いるグルクロニドである。解毒中間体、例えばグルクロニドは予備ターゲッティング酵素によって毒性の強い形態に再転換されるので、標的部位の細胞傷害性は高くなる。これにより、薬物の再循環が得られる。同様に、投与したプロドラッグは、通常の生物学的工程を介して活性薬物に転換することができる。予備ターゲッティング酵素は、解毒薬物を再循環させることによって治療の効力を向上させる。この方法は、任意の酵素−薬物対で使用する目的で採用することができる。同様の予備ターゲッティング法は、米国特許出願連続番号第６０／１０１，０３９号明細書に記載されている。これらの方法は容易に本発明に適用することができ、上記明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
酵素−キャリヤー接合体は、患者に投与する前に、ターゲッティングｂｓＡｂと混合することができる。酵素−キャリヤー−ｂｓＡｂ接合体を標的部位に局在化させ、未結合接合体を循環から除くために十分な時間をかけた後、プロドラッグを投与する。上記のように、プロドラッグは、次に予備ターゲッティング酵素によってイン・シテューで薬物に転換される。
抗癌療法に有用なある種の細胞傷害性薬物は、血清に比較的不溶性である。幾つかは未接合形態では毒性が極めて高く、それらの毒性はプロドラッグに転換することによってかなり減少する。貧溶性薬物を可溶性の高い接合体、例えば、グルクロニド、親水性酸のエステル、または親水性アミンのアミドに転換することによって、血清の水相での溶解性、および静脈、動脈または毛細血管細胞壁中を通過し、腫瘍が入っている間質液に到達するその能力が向上する。プロドラッグが開裂することによって、標的部位に可溶性の低い薬物が沈澱する。このようなプロドラッグ−薬物転換の多くの例は、米国特許出願連続番号第０８／４４５，１１０に開示されている。
肝臓における芳香族性または脂環式アルコール、チオール、フェノールおよびアミンのグルクロニドへの転換は、それらを解毒して、それらを一層容易に尿中に排泄させる身体の方法である。このような基質に転換することができる抗腫瘍薬の一種類は、ドキソルビシン（アドリアマイシン）の４−エピマーであるエピルビシンであり、これはアントラサイクリングルコシドであり、ヒトβ−Ｄ−グルクロニダーゼの基質であることが示されている。例えば、Arcamone, Cancer Res. 45:5995, 1985を参照されたい。極性基の少ない他の類似体は、親油性が高いことが予測され、このような方法が極めて有望である。芳香族性または脂環式アルコール、チオールまたはアミン基を有する他の薬物または毒素は、このような接合体形成の候補である。これらの薬物またはそれらの他のプロドラッグ形態は、本発明の部位特異的増強方法の適当な候補である。
プロドラッグＣＰＴ−１１（イリノテカン）は、カルボキシルエステラーゼによって活性代謝物ＳＮ−３８に転換される。ＳＮ−３８は極めて有効な抗腫瘍薬であるが、その毒性のために治療的用量を患者に投与することができない。従って、本発明の一つの用途は、このような療法を腫瘍関連抗原に特異的なｂｓＡｂとハプテン（例えば、ジ−ＤＴＰＡ）を用いて腫瘍部位へ導入した後、ジ−ＤＴＰＡ−カルボキシルエステラーゼ接合体を投与することである。適当な腫瘍／バックグラウンド局在化比が得られたならば、ＣＰＴ−１１を投与して、腫瘍に局在化したカルボキシルエステラーゼは腫瘍におけるＣＰＴ−１１をＳＮ−３８に転換する働きをする。活性ＳＮ−３８は溶解性がよくないので、腫瘍の附近に留まり、従って、標的とされる抗原に対して陰性である隣接腫瘍細胞に効果を発揮することになる。これが、この方法のもう一つの利点である。改質形態のカルボキシルエステラーゼが報告されており、本発明の範囲内にある。例えば、Potter et al., Cancer Res. 58:2646-2651 および 3627-3632, 1998を参照されたい。
エトポシドは、グルクロニドの形成によって広汎に解毒される広く用いられている抗癌薬であり、本発明の範囲内にある。例えば、Hande et al., Cancer Res. 48:1829-1834, 1988を参照されたい。グルクロニド接合体は細胞傷害性薬物から調製することができ、ｍＡｂ−グルクロニダーゼ接合体で予備ターゲッティングした腫瘍の治療薬として投与することができる。例えば、Wang et al., Cancer Res. 52:4484-4491, 1992を参照されたい。従って、このような接合体を、本明細書に記載の予備ターゲッティング法と共に用いることもできる。同様に、ダウノマイシンおよびドキソルビシンの誘導体を基剤としてデザインされたプロドラッグは、カルボキシルエステラーゼおよびグルクロニダーゼとの使用が記載されている。例えば、Bakina et al., J. Med Chem. 40:4013-4018, 1997を参照されたい。本発明で用いることができるプロドラッグ／酵素の対の他の例としては、フェノールマスタードのヒドロキシ誘導体のグルクロニドプロドラッグとβ−グルクロニダーゼ、フェノールマスタードまたはＣＰＴ−１１とカルボキシペプチダーゼ、メトトレキセート置換α−アミノ酸とカルボキシペプチダーゼＡ、６−メルカプトプリンとドキソルビシンおよびβ−ラクタマーゼのような薬剤のペニシリンまたはセファロスポリン接合体、エトポシドリン酸塩およびアルカリ性ホスファターゼが挙げられるが、これらに限定されない。
標的部位でプロドラッグを活性化しまたは身体の解毒経路を制御することによって通常の治療薬の効力を向上することができる酵素を、ハプテンに接合させることができる。酵素−ハプテン接合体は、予備ターゲッティングｂｓＡｂの投与後に患者に投与され、標的部位に向けられる。酵素を標的部位に局在化した後、標的部位で作用することが知られている細胞傷害性薬物または予備ターゲッティング酵素によってイン・シテューで薬物に転換されるそのプロドラッグ形態を投与する。上記のように、この薬物は、解毒されて毒性の低い中間体を形成するものであり、最も一般的には、哺乳類の通常の解毒工程を用いるグルクロニドである。解毒中間体、例えばグルクロニドは予備ターゲッティング酵素によって毒性の強い形態に再転換されるので、標的部位の細胞傷害性は高くなる。これにより、薬物の再循環が得られる。同様に、投与したプロドラッグは、通常の生物学的工程を介して活性薬物に転換することができる。予備ターゲッティング酵素は、解毒薬物を再循環させることによって治療の効力を向上させる。この方法は、任意の酵素−薬物対で使用する目的で採用することができる。代替態様では、酵素−キャリヤー接合体は、患者に投与する前に、ターゲッティングｂｓＡｂと混合することができる。酵素−キャリヤー−ｂｓＡｂ接合体を標的部位に局在化させ、未結合接合体を循環から除くために十分な時間をかけた後、プロドラッグを投与する。上記のように、プロドラッグは、次に予備ターゲッティング酵素によってイン・シテューで薬物に転換される。
生物活性薬剤または部分の一つの型はプロドラッグである。予備ターゲッティングｂｓＡｂを患者に投与して、標的に局在化させ、実質的に循環を除く。適当な後の時点で、プロドラッグ、例えばポリ−グルタミン酸（ＳＮ−３８−エステル）１０を含んでなるターゲッティング可能な構築物を投与することによって、プロドラッグを特異的に腫瘍標的に局在化させる。腫瘍内および周辺での細胞のリーシスの速度が高いため、腫瘍は細胞内供給源から放出される酵素の量を増加していることが知られている。実施者であれば、これらの酵素によって活性化することができる適当に選択されたプロドラッグによって、この事実を利用することができる。例えば、カルボキシルエステラーゼは、腫瘍において遊離のＳＮ−３８を高濃度で放出するポリ−グルタミン酸（ＳＮ−３８−エステル）１０のエステル結合を開裂することによってプロドラッグであるポリ−グルタミン酸（ＳＮ−３８−エステル）１０を活性化する。あるいは、適当な酵素を腫瘍部位に移行させることもできる。
薬物は、ターゲッティング可能な構築物から開裂した後に、腫瘍細胞によってインターナライズされる。あるいは、薬物は、標的における架橋によって完全な複合体の部分としてインターナライズすることもできる。ターゲッティング可能な構築物は腫瘍に結合したｂｓＡｂのインターナリゼーションを誘発し、これによって、高水準の薬物をインターナライズすることによって治療の効力を向上させることができる。
ポリアミノ酸、例えばポリリシン、ポリグルタミン酸（Ｅ）およびアスパラギン酸（Ｄ）、例えばそれらのＤ−アミノ酸類似体、コポリマー、例えばポリ（Ｌｙｓ−Ｇｌｕ）｛ポリ［ＫＥ］｝、有利には１：１０−１０：１など様々なキャリヤーが、プロドラッグへの接合に極めて適している。ポリ（Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ）（ＫＡＥＹ；５：６：２：１）のようなアミノ酸混合物を基剤とするコポリマーを用いることもできる。画定した分子量の小さめのポリマー性キャリヤーは、固相合成法によって製造することができ、２−５０残基の鎖長のポリペプチドを容易に製造することができる。正確な構造が画定されること以外のこの種の試薬の第二の利点は、単一または任意の所望な数の化学的ハンドル（chemical handles）を鎖の確定した点に置くことができることである。これらを用いて、後でそれぞれの部分の選択された水準で認識および治療ハプテンを結合することができる。
ポリ（エチレン）グリコール［ＰＥＧ］は、二重特異性抗体プロドラッグ法についての所望なイン・ビボ特性を有する。ＳＮ−３８のヒドロキシル基と標準的ジヒドロキシルＰＥＧの両末端の間のエステル結合は、ＳＮ−３８とＰＥＧヒドロキシル基の間にようなコハク酸のような二酸を挿入してＳＮ−３８−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ−Ｏ−ＰＥＧ−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＯ−ＯＳＮ−３８のような種を生成することによって導入することができる。生成したジ−ＳＮ−３８−ＰＥＧは、ＳＮ−３８−ポリマープロドラッグのクラスの最短のものと考えることができる。二量体性官能基によるＰＥＧ誘導体の所望なイン・ビボ特性と限定されたローディング・キャパシティー（loading capacity）により、Poiani et al. によって報告されているような一層大きなハプテン運搬用量を有するＰＥＧコポリマーが調製される。例えば、Poiani et al., Bio 接合体 Chem. 5:621-630, 1994を参照されたい。ＰＥＧ誘導体は、活性化 at both ends as their ビス（スクシンイミジル）カーボネート誘導体としての両末端で活性化され、リシンのような多官能価ジアミンで共重合される。（−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−）ｎ反復単位（式中、リシルカルボキシル基は重合工程には含まれない）を含むこのような共重合生成物を用いて、ＳＮ−３８残基を結合することができる。ＳＮ−３８残基は遊離のカルボキシル基と反応して、（−Ｌｙｓ−（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−Ｌｙｓ（ＣＯＯＨ）−ＰＥＧ−）ｎ鎖のＳＮ−３８エステルを生成する。
認識ハプテンとプロドラッグを運ぶのに用いることができる他の合成ポリマーとしては、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＭＰＡ）コポリマー、ポリ（スチレン−コ−マレイン酸／無水物（ＳＭＡ）、ポリ（ジビニルエーテル無水マレイン酸）（ＤＩＶＥＭＡ）、ポリエチレンイミン、エトキシル化ポリエチレン−イミン、スターバースト・デンドリマー（starburst dendrimers）およびポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）が挙げられる。一例としては、多数の無水物単位から構成されるＤＩＶＥＭＡポリマーを一定量のＳＮ−３８と反応させて、ポリマーバックボーン上で所望な置換比の薬物を生成させる。残っている無水物基を水性条件下で開いて、遊離のカルボキシレート基を生成させる。一定数のカルボキシレート基を標準的水溶性ペプチドカップリング剤、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を用いて活性化し、遊離アミノ基を有する認識部分にカップリングさせる。後者の一例はヒスタミンであり、これには抗体を以前に生じさせている。
様々なプロドラッグを、ターゲッティング可能な構築物のキャリヤー部分に接合させることができる。ポリマー使用の上記の例は、プロドラッグＣＰＴ−１１（イリノテカン）の活性代謝物であるＳＮ−３８に関するものである。ＳＮ−３８は、エステラーゼ型酵素の作用を受けやすいアリールエステルを生成するのに上記説明で用いた芳香族性ヒドロキシル基を有する。同様に、化学療法で広く用いられるカンプトテシン類似体のトポテカンは、利用可能な芳香族性ヒドロキシル残基を有し、これはＳＮ−３８について記載したのと同様の方法で用いて、エステラーゼ感受性プロドラッグを生成することができる。
ドキソルビシンも芳香族性ヒドロキシル基を含んでおり、これはカンプトテシン類について記載したのと同様な酸触媒反応を用いてカルボキシレート含有ポリマー性キャリヤーにカップリングすることができる。同様に、ダウノマイシン、エピルビシンおよびイダルビシンのようなドキソルビシン類似体を、同じ方法でカップリングすることができる。ドキソルビシン、およびポリマー性キャリヤーへの化学的カップリングに十分活性なアミノ「化学的ハンドル（chemical handles）」を有する他の薬物は、多くの方法でこれらの遊離アミノ基によりキャリヤー分子に効果的にカップリングすることができる。遊離カルボキシレート基を有するポリマーはイン・シテューで活性化することができ（ＥＤＣ）、活性化したポリマーをドキソルビシンと混合して、薬物をアミド結合を介してポリマーの側鎖に結合することができる。アミノ含有薬物を、Ａｍｉｎｏ含有薬物 can also be coupled to アミノ−pendantポリマー by mixing commercially available and cleavable 架橋薬剤，のようなエチレングリコビス（スクシンイミジルスクシネート）（EGS, Pierce Chemical Co.,ロックフォード，イリノイ州）またはビス−［２−（スクシンイミド−オキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（BSOCOES, Molecular Biosciences，ハンツビル，アラバマ州）のような市販の開裂可能な架橋剤を混合することによってアミノ−ペンダントポリマーにカップリングさせ、ビス（スクシンイミジル）エステル基と反応させた後に２つのアミンを２つのアミドとして架橋することもできる。これらの基は酵素開裂を受けやすいままであるので、これは有利である。例えば、（ドキソルビシン−ＥＧＳ）ｎ−ポリ−リシンは、エステラーゼのような酵素によってＥＧＳ結合鎖におけるジエステル基の酵素開裂を受けやすいままである。ドキソルビシンは、確立された手順を用いて様々なペプチド、例えばＨｙＢｎＫ（ＤＴＰＡ）ＹＫ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２に接合させることもできる（ＨｙＢｎ＝ｐ−Ｈ２ＮＮＨＣ６Ｈ４ＣＯ２Ｈ）。Kaneko et al., J. Bioconjug Chem. 2:133-141, 1991を参照されたい。
治療薬接合体は、アミン残基とＤＴＰＡのようなキレート剤を含んでなるキャリヤーにカップリングしたドキソルビシンを含んでなり、ＤＴＰＡ−ペプチド−ドキソルビシン接合体を形成し、ＤＴＰＡが予備ターゲッティングｂｓＭＡｂについての認識部分を形成させることができる。好ましくは、キャリヤーはチロシル−リシンジペプチド、例えばＴｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２を含んでなり、更に好ましくは、Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２を含んでなる。ビス−ＤＰＴＡを含むペプチドに対するドキソルビシンフェニルヒドラゾン接合体は、治療薬に関しては特に望ましい。
メトトレキセートも、ドキソルビシンについて記載したのと同様の方法で活性化カルボキシレート含有ポリマーへのカップリングに利用できるアミノ基を有する。これは、活性化してアミノ基含有ポリマーへカップリングすることができる２つのグルタミルカルボキシル基（αおよびγ）も有する。メトトレキセートの遊離カルボキシレート基はイン・シテューで活性化することができ（ＥＤＣ）、活性化薬物はアミノ含有ポリマーと混合してこの薬物をアミド結合を介してポリマーの側鎖に直接結合することができる。過剰の未反応または交差反応した薬物は、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーを用いてポリマー−薬物接合体から容易に分離される。
メイタンシノイドおよびカリケアミシン（エスペラマイシンなど）は、開裂して科学的捜査に有用な単一のチオールを有する種を生成することができる混合ジ−およびトリ−スルフィド結合を含んでいる。チオメイテンシノイドまたはチオエスペラマイシンを、最初に、ペプチダーゼにより開裂されやすいマレイミド−ペプチドのような架橋剤とを反応させる。ペプチドのＣ末端を、次に活性化して、ポリリシンのようなアミノ含有ポリマーにカップリングさせる。
サイトカインのようなイムノモジュレーターは、代替または追加の生物活性部分に接合させまたはを形成することもできる。本明細書で用いられる「イムノモジュレーター」という用語は、サイトカイン、幹細胞増殖因子、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）のようなリンホトキシン、およびインターロイキン（例えば、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８およびＩＬ−２１）のような造血因子、コロニー刺激因子（例えば、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ））、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、−βおよび−γ）、「Ｓ１因子」と呼ばれる幹細胞増殖因子、およびエリトロポエチンおよびトロンボポエチンを包含する。適当なイムノモジュレーター部分の例としては、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、インターフェロン−γ、ＴＮＦ−αなどが挙げられる。あるいは、患者は本発明の組成物と、別途に投与されるサイトカインであって、本発明の組成物の投与の前、と同時またはの後に投与することができるものの投与を受けることができる。本発明の組成物は、イムノモジュレーターに接合させることもできる。
VI．併用療法
治療薬またはプロドラッグポリマーのイン・ビボ標的への二重特異性抗体指定送達は、放射性核種の二重特異性抗体送達と組み合わせて、組合せ療法および放射免疫療法が行われるようにすることができる。それぞれの療法薬をターゲッティング可能な構築物に接合させて同時に投与することができ、または核種を第一のターゲッティング可能な構築物部分として投与し、薬物を第二のターゲッティング可能な構築物の部分として後の段階で投与することもできる。一つの簡単な態様では、単一のプロドラッグと単一の核種を含むペプチドを構築する。例えば、トリペプチドＡｃ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ２をターゲッティング可能な構築物のキャリヤー部分として用いることができ、これによってＳＮ−３８をアリールエステルとしてのγ−グルタミルカルボキシル基に結合させ、一方、キレートＤＯＴＡをアミドとしてのε−アミノ基に結合させて複合体Ａｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）−ＮＨ２を生成する。次に、ＤＯＴＡキレートを、画像化および治療目的でＩｎ−１１１、Ｙ−９０、Ｓｍ−１５３、Ｌｕ−１７７およびＺｒ−８９などの様々な金属で放射能標識することができる。金属−ＤＯＴＡ複合体はターゲッティング可能な構築物上で認識可能なハプテンを表すことがあるので、ＤＯＴＡ複合体の部分として用いられる金属についての唯一の要件は、これもまた用いられる第二の認識抗体が十分に高いアフィニティーでその特定の金属−ＤＯＴＡ複合体を認識することである。一般的には、このアフィニティー（ｌｏｇＫａ）は６−１１である。ポリ［Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）１０−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）２］のようなポリマー性ペプチドは、上記で更に化学的に画定された低分子量試薬と同様に容易に投与することができ、極めて好ましい。また、ポリ［Ｇｌｕ（Ｓｎ−３８）１０−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）ｎ（ヒスタミン−スクシネート）ｍ（式中、ｎおよびｍは整数である）のような三置換ポリマーを用いて、認識薬剤が放射免疫療法薬剤から独立しているようにすることができる。プロドラッグを、腫瘍部位に存在するカルボキシルエステラーゼによって、または第二のターゲッティング可能な構築物を用いてこの部位にターゲッティングしたカルボキシルエステラーゼによって活性化する。
あるいは、化学療法剤と放射免疫療法薬剤を別々の段階で投与することによって併用療法を行うことができる。例えば、ＣＥＡ−腫瘍を発現している患者に、ＣＥＡと特異的に結合する少なくとも１本のアームとハプテンがイットリウム−ＤＯＴＡの接合体であるターゲッティング可能な構築物と特異的に結合する少なくとも１本の他のアームを有するｂｓＡｂを最初に投与する。後で、患者に、イットリウム−ＤＯＴＡ−β−グルクロニダーゼの接合体を含んでなるターゲッティング可能な構築物を投与する。ｂｓＡｂと酵素の局在化およびクリアランスのために十分な時間を空けた後、Ａｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）−ＮＨ２を含んでなる第二のターゲッティング可能な構築物を投与する。第二のターゲッティング可能な構築物は、第一のターゲッティング可能な構築物に既に結合していない腫瘍におけるｂｓＡｂによって腫瘍に局在化する。標的部位に局在化されている第一のターゲッティング可能な構築物は、Ａｃ−Ｇｌｕ（ＳＮ−３８）−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｙ−９０−ＤＯＴＡ）−ＮＨ２に作用して、遊離のＳＮ−３８薬物を放出する。プロドラッグとそのそれぞれの酵素が療法とも局在化すると、酵素が基質に限定されないようにすることによって活性薬物の産生が高くなる。この態様は、現在当該技術分野で実施されている最新のプロドラッグ法を著しく改良するものである。
前に投与したターゲッティング可能な構築物の部分として核種を送達した後にプロドラッグ−ポリマーを後の段階で投与することのもう一つの利点は、放射線および薬物療法の相乗効果を操作することによって最大とすることができることである。腫瘍は、放射線損傷によりＲＡＩＴの後には一層「漏れやすく」なると仮定されている。これにより、ポリマー−プロドラッグが腫瘍に一層完全に且つ深く入ることができる。これにより、化学療法が改良される。
あるいは、ＲＡＩＴ療法薬は、ターゲッティング可能な構築物よりはむしろｂｓＡｂに結合することができる。例えば、Ｙ−９０−ＤＯＴＡに結合した抗−ＣＥＡｘ抗−ＤＴＰＡ ｂｓＡｂを、最初にＣＥＡを発現している腫瘍の患者に投与する。この場合には、抗−インジウム−ＤＴＰＡ抗体はイットリウム−ＤＯＴＡキレートには結合しないということに、一定の抗キレートｍａｂの選択性を利用する。Ｙ−９０−ＤＯＴＡ−抗−ＣＥＡｘ抗−インジウム−ＤＴＰＡが腫瘍で最大になり且つ非標的組織を実質的に除去した後、インジウム−ＤＴＰＡ−グルクロニダーゼを投与し、ＣＥＡ腫瘍部位に特異的に局在化させる。次に、患者にポリ（Ｇｌｕ）（ＳＮ−３８）１０のようなポリマー−プロドラッグを投与する。後者は、腫瘍で選択的に開裂して、モノマー性ＳＮ−３８を活性化し、化学療法薬を前に投与したＲＡＩＴと組み合わせることができる。
標的部位の抗原に特異的な少なくとも１つの結合部位と酵素に特異的な少なくとも１つの他の結合部位を有する二重特異性抗体または抗体断片を本発明の方法に用いることができることにも留意すべきである。このような抗体は投与前に酵素を結合することによって、酵素を抗体に共有接合する必要をなくすることができ、またはこれを標的部位に投与して局在化させることができ、非標的抗体が哺乳類の循環系から実質的に除去された後に、十分な量の酵素を予備ターゲッティングｂｓＡｂに到達させ、これに結合して抗体−酵素接合体をイン・シテューで形成する量および経路で酵素を投与することができる。
VII．キット
本発明の更にもう一つの態様によれば、本発明は、患者の疾病組織を治療しまたは同定するのに適するキットであり、標的組織に特異的に結合する少なくとも１本のアームとターゲッティング可能な構築物に特異的に結合する少なくとも１本の他のアームを有する二重特異性抗体または抗体断片と、二重特異性抗体または抗体断片の少なくとも１本の他のアームによって認識可能な少なくとも１つのエピトープを含んでなりまたは有するキャリヤー部分を含んでなる第一のターゲッティング可能な構築物と、１種類以上の接合治療薬または酵素と、所望により非局在化抗体と抗体断片を除去するのに有用な浄化組成物とを含んでなるキットを提供する。
「浄化剤」は、未結合のターゲッティング可能な構築物を循環から除去することによって、患者の身体からの部分の循環、血液循環からの除去またはその循環での不活性化を容易にする薬剤である。好ましくは、浄化剤は、大きさ、電荷、外形またはそれらの組合せのような物理特性を有し、浄化剤と同じ治療プロトコールで用いられるターゲッティング可能な構築物によって認識される標的細胞の個体群に浄化剤が接近するのを制限する。この高まりは、腫瘍部位に結合するターゲッティング接合体の決定基に特異的な抗イディオタイプモノクローナル抗体のような抗イディオタイプ浄化剤の投与によって更に改良することができる。ガラクトシル化浄化剤は肝臓から速やかに除去されるので、クリアランス効果はガラクトシル化浄化剤を用いることによって更に増強される。
第一のターゲッティング可能な構築物が酵素を含んでなるとき、酵素が標的部位でプロドラッグを薬物に転換することができるときには、キットは所望によりプロドラッグ、酵素が解毒中間体を毒性形態へ再転換し、従って標的部位の薬物の毒性を増加することができるときには、患者において解毒して毒性の低い中間体を形成することができる薬物、または酵素が解毒中間体を毒性形態へ再転換し、従って標的部位の薬物の毒性を増加することができるときには、天然工程で患者において活性化され且つ毒性の低い中間体へ転換することによって解毒されやすいプロドラッグ、または二重特異性抗体または抗体断片の少なくとも１本の他のアームによって認識可能な少なくとも１本のエピトープを含んでなるまたは有するキャリヤー部分を含んでなる第二のターゲッティング可能な構築物、および酵素が標的部位でプロドラッグを薬物に転換することができるときには、プロドラッグを含むことができる。疾患組織の同定または治療を促進する装置をキットに含めることもできる。例としては、注射器のような投与器具が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明の治療薬キットは、下記の任意の組合せでの試薬および／または構成部分のいずれかを含んでなる。
１． １種類以上の治療薬。
２． （複数の）治療薬が舌下送達を含むがそれらに限定されない消化管を介する送達用に処方されないときには、何か他の経路を介して治療薬を送達することができる器具。非経口送達用の器具の１種類は、治療薬を必要とする動物の体内に治療薬を投与するのに用いられる注射器である。吸入器具を用いることもできる。
３． 別々になった容器であって、それぞれがキットの１種類以上の試薬を含んでなるもの。好ましい態様では、再構成に適当な治療組成物の滅菌した凍結乾燥処方物を含むバイアルである。他の容器としては、ポーチ、トレー、箱、管などが挙げられるが、これらに限定されない。キット成分を包装して、この容器に滅菌保持することができる。
４． キットの使用についてそれを用いるヒトへの使用説明書。使用説明書はキット成分、キット包装および／またはキット包装挿入物の１以上に入れておくことができる。これらの使用説明書としては、非制限的例としては、キットおよびその試薬の使用、凍結乾燥試薬の再構成、または試薬の調製についての使用説明書が挙げられる。
本発明の好ましいキットは、イムノアッセイを行うのに有用な要素を含んでなる。本発明のキットは、１種類以上の実験試料（すなわち、本発明の処方物）および少なくとも１個の予め包装した計深棒またはＥＬＩＳＡプレートに結合した１種類以上のコントロール試料、および動物の体液に含まれる抗体と計深棒またはＥＬＩＳＡプレートに結合したタンパク質との間の免疫複合体処方物（例えば、標識した第二の抗体または他の結合化合物、および上記で詳細に説明した、これらの標識を分離するのに必要とされる任意の必要な溶液）を検出するのに必要な手段を含んでなることができる。キットが単に本発明の処方物のみを含んでなることができ、検出手段は別の方法で提供することができるようにすることは、本発明の範囲内にある。
VIII．ターゲッティング可能な構築物および複合体の特性決定
下記の方法、並びに当該技術分野で知られておりおよび／または本明細書において実施例に記載されている他の方法のいずれかを、ターゲッティング可能な構築物または複合体の１以上の属性を検討するのに用いることができる。
VIII．Ａ．エピトープに対するアフィニティー
アフィニティーは、絶対的なものでもまたは相対的なものでもいずれでもよい。絶対的アフィニティーによれば、アフィニティーの分析は、１つの化合物の別の化合物に対するアフィニティーの画定された測定値を与えることを意味する。試験を行う複合体のアフィニティーを結合アフィニティーが知られているリファレンス化合物のアフィニティーと比較することによって、試験リガンドの相対的結合アフィニティーを測定することができる。
一方の分子のもう一つの分子に対する絶対的または相対的アフィニティーを、当該技術分野で知られている任意の方法によって測定することができる。非制限的例としてのこのような方法としては、競合分析法、表面プラスモン共鳴、半最大結合分析法、競合分析法、スカッチャード分析、直接力法（Wong et al.,「ストレプトアビジン−ビオチン相互作用の直接力測定」，Biomol. Eng. 16:45-55, 1999）、および質量スペクトル分析法（Downard，「構造免疫学への質量スペクトル分析法の寄与」，J. Mass Spectrom. 35:493-503, 2000）が挙げられる。
VIII．Ａ．１．絶対的アフィニティー
絶対的アフィニティーに関しては、「低アフィニティー」とは、２つの分子の会合定数（Ｋａ）が約１０５Ｍ−１０７Ｍである結合を表す。「中アフィニティー」とは、２つの分子の会合定数（Ｋａ）が少なくとも約１０７Ｍ−１０８Ｍである結合を表す。「高アフィニティー」とは、２つの分子の会合定数（Ｋａ）が少なくとも約１０８Ｍ−約１０１４Ｍであり、好ましくは約１０９Ｍ−約１０１４Ｍであり、更に好ましくは約１０１０Ｍ−約１０１４Ｍであり、最も好ましくは約１０１４Ｍを上回る結合を表す。
解離定数Ｋｄは、１つの種が２つに解離する、例えば、２つ以上の分子の複合体がその成分へ解離し、例えば、酵素から基質が解離するための平衡定数である。本発明の組成物についての典型的なＫｄ値は、約１０−７Ｍ（１００ｎＭ）−約１０−１２Ｍ（０．００１ｎＭ）である。安定定数は、その成分部分から形成する種の傾向を表す平衡定数である。安定定数が大きくなれば、種は一層安定になる。安定定数（形成定数）は、不安定定数（解離定数）の逆数である。
標的エピトープに対する本発明の複合体のアフィニティーまたはキャリヤーエピトープに対する二重特異性抗体のアフィニティーは、非共有的相互作用によって決定される。分子間には、４種類の主要な非共有的引力、（ｉ）アミノ基とカルボキシル基のような反対に帯電している分子間に生じる静電力、（ii）窒素と酸素のような電気陰性原子間で水素原子が共有されるときに形成される水素結合、（iii）隣接原子によって反対に分極した分子の周りの電子雲間に生じるファン・デル・ワールス力、および（iv）水が界面から排除されて疎水性分子が無水環境で相互作用するときに形成される疎水性相互作用がある。
非共有相互作用は、まれにではあるが、共有結合（すなわち、化学結合）の強度を有することがある。幾つかの場合には、標的エピトープに対する本発明の複合体のアフィニティーは、非共有的相互作用によって生じるが、共有結合の強度に接近するほどの高さである。これにより、他の複合体と比較して極めて安定な複合体が提供される。
好ましくは、ターゲッティング可能な複合体のその同種の標的エピトープに対するアフィニティーおよび／またはｂｓＡｂのターゲッティング可能な構築物のキャリヤーエピトープに対するアフィニティーは、Ｋｄが約１００ｎＭ−約０．０１ｎＭであり、更に好ましくは約１００ｎＭを上回るかまたは約１０ｎＭを上回り、最も好ましくは約１ｎＭを上回るかまたは約０．１ｎＭを上回る。標的エピトープに対する典型的なＫｄは、約０．１ｎＭ−１００ｎＭであり、好ましくは約０．１ｎＭ−１０ｎＭであり、更に好ましくは約０．５ｎＭ−５ｎＭまたは約１ｎＭである。
本発明において、キャリヤーエピトープの多数のコピーがターゲッティング可能な構築物上に存在するときには、その同種のキャリヤーエピトープに対する抗体のアフィニティーは遊離のキャリヤーエピトープまたはキャリヤーエピトープを含んでなる一価のターゲッティング可能な構築物に対する抗体のアフィニティーより大きいことがある。更にまたはあるいは、ｘ個のキャリヤーエピトープを有する多価ターゲッティング可能な構築物は、ｘ個の構築体より大きいその標的エピトープに対するアフィニティーを有する。もう一つの方法を説明すれば、本発明の組成物は、単なる追加的結合効果よりも相乗的効果を提供する。
VIII．Ａ．２．表面プラスモン共鳴
Ｋｄのような結合パラメーターは、固定した結合成分をコーティングしたＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）チップのようなチップ上での表面プラスモン共鳴を用いて測定することができる。表面プラスモン共鳴は、抗体または抗体断片とそのリガンドとの半の微視的会合および解離定数を特性決定するのに用いられる。このような方法は、一般的に下記の文献に記載されており、これらの文献の内容はその開示の一部として本明細書に引用されている。（Vely et al.,「試験ホスホペプチド−ＳＨ２ドメイン相互作用を試験するためのＢＩＡｃｏｒｅ分析」，Meth. Mol. Biol. 121:313-21, 2000; Liparoto et al.,「インターロイキン−２受容体複合体のバイオセンサー分析」，J. Mol. Recog. 12:316-21, 1999; Lipschultz et al.,「表面プラスモン共鳴を用いる複合体動態の分析のための実験デザイン」，Methods 20:310-8, 2000; Malmqvist.,「BIACORE：生体分子相互作用の特性決定のためのアフィニティーバイオセンサー装置」，Biochem. Soc. Transactions 27:335-40, 1999; Alfthan，「抗体の遺伝子工学処理における手段としての表面プラスモン共鳴バイオセンサー」，Biosensors & Bioelectronics 13:653-63, 1998; Fivash et al.,「巨大分子相互作用のためのBIAcore」, Curr. Opin. Biotech. 9:97-101, 1998; Price et al.,「ＩＳＯＢＭ ＴＤ−４研究会抄録：分析 of ＭＵＣ１ムチンに対する５６のモノクローナル抗体の分析」，Tumour Biol. 19 Suppl 1:1-20, 1998; Malmqvist et al.,「生体分子相互作用分析：タンパク質の官能分析についてのアフィニティーバイオセンサー法」，Curr. Opin. Chem. Biol. 1:378-83, 1997; O'Shannessy et al.,「バイオセンサー法によるリガンド結合の特性決定における擬似一次動態からの偏差の説明」，Anal. Biochem. 236:275-83, 1996; Malmborg et al.,「抗体遺伝子工学における手段としてのＢＩＡｃｏｒｅ」，J. Immunol. Meth. 183:7-13, 1995; Van Regenmortel,「組換えタンパク質の特性決定を目的としたバイオセンサーの使用」，Dev. Biol. Standardization 83:143-51, 1994; O'Shannessy,「巨大分子相互作用に対する反応速度および平衡結合定数の測定： 表面プラスモン共鳴文献の批評」，Curr. Opin. Biotechnol. 5:65-71, 1994）。多価化合物に対する固定リガンドの結合を検討するためのＢＩＡｃｏｒｅを用いるモデルが報告されている（Muller et al.,「固定リガンドに対する多価結合のモデルおよびシミュレーション」，Anal. Biochem. 261:149-158, 1998）。
ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）は、デキストランバイオセンサーマトリックスである金／ガラスセンサーチップインターフェースの表面にあるデキストランマトリックスへ結合したタンパク質濃度の変更を検出する目的で、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）の光学的特性を用いている。簡単に説明すれば、タンパク質はデキストランマトリックスに既知濃度で共有結合しており、タンパク質（例えば、抗体）に対するリガンドはデキストランマトリックスを通じて投与される。センサーチップ表面の反対側に向けられた近赤外光線は反射されて、金フィルムに一過性の波動を誘発し、これは次に共鳴角として知られる特定の角度での反射光に強度傾斜を生じる。センサーチップ表面の屈折率を（例えば、結合タンパク質に結合するリガンドによって）変更すると、共鳴角がシフトする。この角度シフトを測定することができ、共鳴単位（ＲＵ）として表し、１０００ＲＵが１ｎｇ／ｍｍ２の表面タンパク質濃度の変化に等しくなるようにする。これらの変化は、時間に関してセンサーグラムのｙ軸に沿って表示され、任意の生物学的反応の会合および解離を表している。
更に詳細な説明は、Jonsson et al.,「同時生体特異的相互作用分析のためのバイオセンサーに基づく手法の導入」，Ann. Biol. Clin. 51:19-26, 1993; Jonsson et al.,「表面プラスモン共鳴およびセンサーチップ法を用いる同時生体特異的相互作用分析」，Biotechniques 11:620-627, 1991; Johnsson et al.,「モノクローナル抗体の特異活性の分析によるカルボキシメチルデキストランセンサー表面への固定の方法の比較」，J. Mol. Recog. 8:125-131, 1995、およびJohnsson,「表面プラスモン共鳴センサーにおける生体特異的相互作用分析のためのカルボキシメチルデキストラン修飾金表面へのタンパク質の固定」，Anal. Biochem. 198:268-277, 1991; Karlsson et al.,「新たなバイオセンサーに基づく分析装置によるモノクローナル抗体−抗原相互作用の速度論的分析」，J. Immunol. Meth. 145:229, 1991; Weinberger et al.,「タンパク質バイオチップ法における最近の傾向」，Pharmacogenomics 1:395-416, 2000; Lipschultz et al.,「表面プラスモン共鳴を用いる複合体動態の分析のための実験デザイン」，Methods 20:310-8, 2000に記載されている。
VIII．Ａ．３．相対的アフィニティー
アフィニティーは、相対的用語、例えばＩＣ５０によって定義することもできる。アフィニティーに関しては、化合物のＩＣ５０は、リファレンスリガンドの５０％がイン・ビトロでの標的エピトープまたはイン・ビボでの標的組織から置換される化合物の濃度である。標的エピトープがＣＥＡであるときには、リファレンスリガンドは［ｈＭＮ］２−［７３４ｓｃＦｖ］２または［ｈＭＮ］２−［７３４ｓｃＦｖ］２二重特異性抗体を含んでなる複合体であることができる。典型的には、ＩＣ５０は競合的ＥＬＩＳＡによって決定される。
VIII．Ｂ．生体分布および浄化特性
浄化ターゲッティング可能な複合体の生体分布パターンの評価方法は、２００２年３月１日出願の「クリアランス速度を高めるための除去二重特異性抗体点突然変異」という標題の米国仮出願連続番号第６０／３６１，０３７号明細書（Atty. Docket 無．018733-1037）に記載されている。この出願明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
ターゲッティング可能な複合体のクリアランス特性の評価方法は、２００２年３月１日出願の「クリアランス速度を高めるための除去二重特異性抗体点突然変異」という標題の米国仮出願連続番号第６０／３６１，０３７号明細書（Atty. Docket 無．018733-1037）に記載されている。この出願明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
VIII．Ｃ．画定した種のマルチマーの形成
互いに結合することができる幾つかの化合物を混合することにより、様々ななマルチマーが生成することは多い。例えば、結合性化合物ＡとＢを混合すると、ＡＢ、（ＡＢ）２、（ＡＢ）３、（ＡＢ）４などの複合体の種を生じることができる。本発明の複合体の幾つかの所望な属性は、その成分を互いに混合すると、単一の型のマルチマーを主に生成することである。本発明の複合体の幾つかの場合には、例えば二量体性複合体が主として形成され、他の種のマルチマーはほとんどまたは全く存在しない。
例えば、ターゲッティング可能な構築物と１つの型の二重特異性抗体を約１０−９、１０−８、１０−７、１０−６、１０−５、１０−４、１０−３、１０−２、１０−ｌ、１、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、および約１０１０のいずれかの範囲の相対濃度で混合すると、マルチマー性複合体の約５０％を上回るものが二重特異性抗体２分子とターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる。このようにして生成したマルチマー性複合体の好ましくは≧７５％−約≧８５％、更に好ましくは≧９５％、最も好ましくは≧９９％は、二重特異性抗体２分子とターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する。
VIII．Ｄ．安定性
VIII．Ｄ．１．安定性の種類
一般に、２種類の安定性、すなわち化学的安定性とコンホメーション安定性が重要である。いずれの種類も機能的安定性に寄与しており、薬剤が適正なコンホメーションを持たなければ、化学的には安定（すなわち、耐分解性）であるが、生物活性を持たないことがある。「機能的安定性」という用語は、経時的に保持される機能的（生物活性）薬剤の量を表す。
化学安定性は、当該技術分野で知られている方法で、例えば標識薬剤の混合物を調製し、混合物を所定の組の条件（温度、ｐＨなど）でインキュベーションし、１回以上の時点で採取した試料に残っている標識薬剤の量を決定することによって、測定される。生理学的条件（下記参照）に加えて、目的とする条件は、薬剤の保管期間および／またはその操作の容易さに影響を与える条件であることがある。例えば、タンパク質、プロテアーゼの場合に、特異的分解性分子に関する薬剤の安定性は、同様の方法を用いて決定することができる。
コンホメーション安定性は、当該技術分野で知られている様々な手法、例えば円偏光二色性（ＣＤ）、蛍光、蛍光エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、蛍光エネルギー移動共焦顕微鏡法、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル分析法、中性子散乱、シンクロトロン放射線分解、質量スペクトル分析法、および電子スプレーイオン化質量スペクトル分析法などこれらに限定されない方法を用いて測定することができる。例えば、van Mierlo and Steensma,「蛍光、円偏光二色性（ＣＤ）、および核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル分析法によって検討したタンパク質フォールディングおよび安定性：フラボドキシンの場合」，J. Biotechnol. 79:281-98, 2000; Tehei et al.,「タンパク質安定性に影響する様々な溶媒条件下で中性子散乱によって測定した好塩性リンゴ酸デヒドロゲナーゼおよびＢＳＡの迅速動力学」，Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98:14356-61, 2001; Maleknia and Downard,「シンクロトロン放射線分解と質量スペクトル分析法によるアポミオグロビンへリックスのアンフォールディング」，Eur. J. Biocheen. 268:5578-88, 2001; Kim et al.,「電子スプレーイオン化質量スペクトル分析法によって測定したＥ． ｃｏｌｉチオレドキシンにおける部位特異的アミド水素／重水素交換」，J. Am. Chem. Soc. 123:9860-6, 2001; Doig et al.,「α−へリックスの構造、安定性およびフォールディング」，Biochem. Soc. Symp. 68:95-110, 2001; Kolakowski and Konermann,「低分子反応からタンパク質フォールディングへ：ストップ・フロー電子スプレー質量スペクトル分析法による生化学的動態の研究」，Anal. Biochem. 292:107-14, 2001; Helfrich and Jones,「溶液中の生体分子の安定性感知特性決定のための高処理量の流量注入法」，Am. Laboratory 33:24-29, 2001; Hammarstrom et al.,「蛍光共鳴エネルギー移動によって測定したタンパク質のコンパクトさ：ヒトカルボニックアンヒドラーゼｉｉはＧｒｏＥＬの相互作用によってかなり膨張する」，J. Biol. Chem. 276:21765-75, 2001; Talaga et al.,「蛍光エネルギー移動共焦顕微鏡法によって検討した単一の二本鎖コイルドコイルペプチドの動力学およびフォールディング」，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:13021-6, 2000 、およびKumar and Nussinov,「総説：好熱性タンパク質の熱処理法」，Cell. Mol. Life Sci. 58:1216-1233, 2001を参照されたい。
ターゲッティング可能な複合体（例えば、ターゲッティング可能な構築物とｂｓＡｂ）の個々の成分のコンホメーション安定性の他に、ターゲッティング可能な複合体自体の安定性も１因子である。好ましくは、本発明のターゲッティング可能な複合体は、イン・ビトロおよびイン・ビボで安定である。すなわち、ターゲッティング可能な構築物とｂｓＡｂを合わせて、ターゲッティング可能な複合体を形成したならば、構築物とｂｓＡｂは、複合体から解離する傾向はほとんどない。
VIII．Ｄ．２．生理学的条件下での安定性
イン・ビボでの使用を目的とする化合物のもう一つの望ましい属性は、安定性、特に生理学的条件下での安定性である。当業者であれば理解されるように、「生理学的条件」を構成するものは、例えば、イン・ビボまたはエクス・ビボの状態で考察されるかどうか、生物の種類およびその年齢、体重、健康、性別、活性の水準、代謝状態などによって変化する。様々な生理学的条件変化するパラメーターとしては、溶媒の種類、ｐＨ、緩衝容量、塩およびイオンの濃度および種類、温度などが挙げられるが、これらに限定されない。いずれにせよ、所定の生理学的状態について存在する特定の条件を画定して決定することは、通常の当業者の技術の範囲内に十分にある。
化合物の安定性は、例えば血清、血液、尿、リンパ、血漿、間質液、胆汁、消化液など、これらに限定されない体液中における化合物の半減期として表すことができる。非制限的例としては、安定性を測定し、血清または血液中での化合物のイン・ビボまたはイン・ビトロ半減期として表すことができる。
例えば、血清半減期は、ターゲッティングタンパク質またはその接合体の投与量の半分が血清中に残っている時点である。一連の時点にわたる血清測定値により、薬剤に対する全身暴露を決定するのに有用な曲線を生じることができる。
IX．バイオセンサー
IX．Ａ．一般のバイオセンサー
本発明は、患者または環境における１以上の特異的な健康および／または栄養マーカーを検出するのに適合するセンサーを含んでなる装置に関する。この装置は、看護人、患者または発生の作動装置を示すこともある。センサーは、バイオセンサーを含んでなる。本明細書で用いられる「バイオセンサー」という用語は、１以上の標的病原体性微生物または関連の生体分子で見られるリガンドを検出するのに適した１以上の結合部分を含んでなる成分として定義される。
一般に、バイオセンサーは、標的生物活性分析物と特異的結合することによってこれを検出する手段を提供することによって機能する。この方法では、多くの化学的および生物学的存在の混合物と共に提示されるときでも、極めて選択的である。標的生物学的分析物は、多数の生物学的および他の成分を含んでなる複合体混合物の少量成分であることが多い。従って、多くのバイオセンサー用途では、標的分析物は、１０億分の１、１兆分の１以下の確率で検出される。
IX．Ｂ．バイオセンサーデザイン
本発明のバイオセンサーは、特定の分析物に対する極めて特異的な結合または検出選択性を提供する生体認識要素または分子認識要素を含んでなることがある。生体認識要素または系は、抗体であることが多い。本発明のバイオセンサーでは、生体認識要素または器官系は、ｂｓＡｂを含んでなるターゲッティング可能な複合体である。生体認識要素は、分析物と、出力シグナルの基本を提供する物理化学的シグナルの選択的認識に関与している。
生体触媒的および生体アフィニティーバイオセンサー系は、J. Chromatography 510:347-354, 1990、およびKirk-Othmerの化学的手法の百科辞典，第４改訂版，(1992), John Wiley & Sons，ニューヨークに更に詳細に記載されており、それらの内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
本発明のバイオセンサーは、病原性細菌、寄生生物（例えば、卵またはその部分、シスト、または成熟生物など生活環の任意の段階）、ウイルス、真菌、病原体に対する抗体および／または微生物によって産生される毒素など、これらに限定されない（すなわち、徴候の将来の提示が起こりそうな）または現行のヒト全身性疾患状態に関する生物活性分析物を検出することができる。更に、バイオセンサーは、差し迫ったまたは現在局在化した健康な組織、例えば皮膚刺激または炎症の臨床的提示に先行することがあるストレスタンパク質（例えば、サイトカイン）およびインターロイキン １−αに関係する生物活性分析物を標的とすることがある。幾つかの態様では、バイオセンサーは患者、看護人または医師に臨床徴候の提示前に差し迫った健康状態を検出し、知らせる予防センサーとして機能する。これにより、予防的または治療処置を患者に施す時を設定することができ、これによって症状の重さおよび期間を、予防できない場合であっても、かなり軽減することができる。更に、センサーは、患者からの試料における標的生物学的分析物の存在を検出することによって、バイオセンサーと接触する皮膚または環境表面のような表面上の残留汚染物質を検出し、適当なシグナルを提供することができる。
生体認識要素または複数の要素によって生じた物理化学的シグナルは、看護人または医師に視覚的に（すなわち、ヒトの目に見える色の変化によって）伝達することができる。他の態様は、光学的シグナルを生じることがあるが、これはシグナルを増強するための他の装置を必要とすることがある。これらとしては、蛍光、生物発光、全内部反射率共鳴、表面プラスモン共鳴、ラマン法、および他のレーザーに基づく方法、例えばＬＥＤまたはレーザーダイオードセンサーが挙げられる。典型的な表面プラスモン共鳴バイオセンサーは、生体認識要素として生物接合体表面を含んでなることがあるXanTec Analysensysteme of Muenster（ドイツ）製のＩＢＩＳ ＩおよびＩＢＩＳ IIとして利用可能である。あるいは、シグナルを（例えば、ＬＥＤまたはＬＣＤディスプレーのような読み出し装置上に）表示することができる電気的シグナル（例えば、電流、電位、インダクタンスまたはインピーダンス）を生成することができ、または聞き取ることができるまたは触覚（例えば、振動）シグナルを誘発する、または本明細書に記載の通りに作動装置を誘発することができる関連変換器などを介して処理することができる。シグナルは、定性的（例えば、標的生物学的分析物の存在を示す）または定量的（すなわち、標的生物学的分析物の量または濃度の測定）であることができる。このような態様では、変換器は、所望により光学的、熱的または音響シグナルを生成することができる。任意の疾患では、シグナルは永続的（すなわち、経時的に、典型的には、少なくともその装置の寿命と同じ期間にわたって安定且つ読み取り可能）または一過性（すなわち、同時測定記録）であることがある。更に、シグナルは、（例えば、赤外またはｒｆ発信器のような電線または発信器を介して）装置または遠隔の装置内または上の他の位置など遠隔の指標部位に伝達することができる。更に、センサーまたはその成分のいずれかは、予め画定した閾値を上回る標的生物学的分析物の濃度のみを検出しおよび／または表示するのに適合することがある（例えば、標的生物学的分析物が通常身体の排泄物に含まれている場合、または分析物の濃度が既知の「危険」水準を下回るとき）。
本発明のバイオセンサーが検出するのに適合する標的分析物は、ウイルスであることもある。ＨＩＶを検出するのに適する典型的なバイオセンサーは、上記で参照した米国特許第５，８３０，３４１号明細書および第５，７９５，４５３号明細書に記載されている。バイオセンサーは、様々な組織（例えば、米国特許第６，３４２，０３７号明細書を参照）および様々な結合分子の使用（例えば、米国特許第６，３２９，１６０号明細書を参照）での使用に採用されている。
本発明のターゲッティング可能な複合体をバイオセンサーに組込むときには、それらをエントラップメント、吸着、架橋、カプセル化、共有結合、任意のそれらの組合せなどの当該技術分野で知られている手法によってバイオセンサーに固定することができる。更に、固定は、当該技術分野で知られているような多くの異なる基質上で行うことができる。ある種の好ましい態様では、固定化基質はポリマーを基剤とする材料、ヒドロゲル、組織、不織布、または織布の群から選択することができる。
ある態様では、バイオセンサー態様は、シリコンチップ、ＭＥＭ（すなわち、超小型電気機械システム）装置、または集積回路のようなマイクロチップを含んでなり、上に配置され、またはと操作上関連させることができる。マイクロチップを基剤とするバイオセンサーは、「バイオチップ」として知られることがある。センサーの種類には関係なく、マイクロチップは、様々な水準または（複数の）分析物の組合せを検出するのに適する配列で同様または異なる感度、動態、および／または標的分析物（すなわち、マーカー）を有する複数のセンサー成分を含んでなることがある。更に、このような配列でのそれぞれのセンサーは、本明細書で開示された種類のシグナルなど異なる種類のシグナルを提供することができ、異なる作動装置および／または制御装置と関連させることができる。また、ある配列のそれぞれのセンサーは、その配列のいかなる数の他のセンサーとは独立して、または関連して（例えば、並列、組合せ、または直列に）操作することができる。
本発明のバイオセンサーは、分析物が結合したならば、シグナルを生成する検出可能な化合物を含んでなることができる。非制限的例としてのBillinton et al.,「酵母遺伝毒性バイオセンサーの緑色蛍光タンパク質レポーターの発生」，Biosensors & Bioelectronics 13:831-838, 1998を参照されたい。本発明によるバイオセンサーは、微量天秤センサー系を用いることができる（Hengerer et al.,「微量天秤センサー系による抗原へのファージ抗体アフィニティーの測定」，BioTechniques 26: 956-964, 1999）。
Ｘ．標的抗原およびエピトープ
標的エピトープは、患者の標的組織、試料またはその細胞培養物内に含まれ、これによって表示され、および／またはこれから放出される。試料は体組織または流体組織であることができ、患者中に存在し、または患者、または身体の臓器の全部または任意の部分から生験または採取することができる。更に、組織は、この組織が摘出と本発明の方法との間に全く保存段階なしに患者から細菌に取り出されているという点で「試料」であることができる。組織は、本発明の方法を適用する前に、冷凍、急速冷凍、パラフィン埋設、および組織固定などこれらに限定されない標準的組織調製法によって保存することもできる。
本明細書で用いられる「患者」という用語は、ヒトおよび他の霊長類、齧歯類（例えば、マウス、ラットおよびモルモット）、ウサギ（例えば、ウサギ）、ウシ（例えば、畜牛）、ヒツジ（例えば、ヒツジ）、ヤギ（例えば、ヤギ）、ブタ（例えば、ブタ）、ウマ（例えば、ウマ）、イヌ（例えば、イヌ）、ネコ（例えば、ネコ）、家禽（例えば、ニワトリ、七面鳥、アヒル、ガチョウ、他の家禽類など）、並びに有蹄類（例えば、シカ）、熊、魚類、ウサギ、齧歯類、鳥類など、これらに限定されない野生化したまたは野生動物などこれらに限定されない任意の動物（すなわち、脊椎動物および無脊椎動物）を表す。この用語は、特定の年齢または性別に限定しようとするものではない。従って、成熟したおよび新生患者、並びに胎児は、雄または雌に関わらず、その用語に包含される。しかしながら、この手法を用いる好ましい種は、人類であり、次の好ましい使用はウマ、イヌおよびネコのような家庭用愛玩動物である。
「表示される」とは、膜タンパク質の一部が細胞、組織および／または器官の表面上にあり、従って細胞、組織または器官の外部環境と接触していることを意味する。標的エピトープは、癌および病原性感染症などこれらに限定されない疾患と関連させることができる。
Ｘ．Ａ．過剰増殖性疾患と関連した抗原およびエピトープ
本発明で用いられる突然変異性の二重特異性抗体は、過剰増殖性疾患と関連した様々な細胞表面または細胞内抗原に特異的である。正常な組織ホメオスタシスは、細胞増殖と細胞死の割合の複雑なバランスによって達成される。細胞増殖の速度を増加することによってまたは細胞死の速度を減少させることによるこのバランスの破壊は、細胞の以上成長を生じる可能性があり、癌および他の過剰増殖性疾患の発生における主因であると考えられる。「過剰増殖性疾患」とは、細胞が異常に高い細胞分裂速度および／または以上に低い壊死および／またはアポトーシスの速度を有する疾患である。非制限的例としては、腫瘍形成、腫瘍進行、白血病、固形腫瘍および転移のような癌、乾癬、良性過剰増殖性疾患、のような良性前立腺肥大、皮膚の良性過形成、および血管腫、乾癬および慢性関節リウマチのような慢性炎症性増殖性疾患、糖尿病性網膜症および黄斑変性のような増殖性眼疾患、および再狭窄のような増殖性循環器疾患が挙げられる。血管形成または他の動脈損傷後の平滑筋細胞の血管腔への再成長を特徴とする再狭窄は、血管形成の長期間の成功において頻繁に見られる再発性の問題であり、動脈再構成、アテレクトミー、ステント移植、およびレーザー血管形成後にも起こる。
これらの抗原は例えば腫瘍によって産生される物質であり、腫瘍部位、腫瘍細胞表面上、または腫瘍細胞中の細胞質、核、または細胞表面または細胞内受容体などの様々な細胞小器官または亜細胞構造などに蓄積する物質であることができる。このような腫瘍関連マーカーには、Ｈｅｒｂｅｒｍａｎ，癌の免疫診断，Ｆｌｅｉｓｈｅｒ監修，「癌の臨床生化学」，３４７頁（American Association of Clinical Chemists, 1979）および米国特許第４，１５０，１４９号明細書、第４，３６１，５４４号明細書、および第４，４４４，７４４号明細書に開示されているものが挙げられるが、これらに限定しようとするものではない。
腫瘍関連マーカーは、上記引用のＨｅｒｂｅｒｍａｎによって、腫瘍胎児抗原、胎盤抗原、腫瘍形成または腫瘍ウイルス関連抗原、組織関連抗原、器官関連抗原、異所性ホルモン、および正常な抗原またはそれらの変異体の多数の範疇に分類されている。所望により、腫瘍関連マーカーのサブユニットが、一層高い腫瘍特異性を有する抗体、例えば、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）のβ−サブユニットまたは癌胎児性抗原（ＣＥＡ）のγ領域を生じるのに有利に用いられ、これらは米国特許第４，３６１，６４４号明細書および第４，４４４，７４４号明細書に開示されている非腫瘍物質に対する交差反応性が大幅に減少した抗体の産生を刺激する。
適当な腫瘍関連マーカーまたは受容体の非制限的例としては、Ｂ細胞複合体構造（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ８０）、造血およびある種の固形腫瘍で発現される他の受容体（例えば、ＣＤ１５、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＮＣＡ９０、ＮＣＡ９５、ＣＤ７４、ＨＬＡ−ＤＲ）、および多様な癌で発現される腫瘍関連マーカー（例えば、癌胎児性抗原、Ｌｅ（ｙ）、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２、ＭＵＣ−３、ＭＵＣ−４、Ｔａｇ−７２ ［Ｔａｇ−７２に対する抗体を構成するＢ７２．３およびＣＣ４９］、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＰＡＭ−４、ＡＦＰ、ＨＣＧおよびそのサブユニット、黒色腫関連抗原（例えば、Ｓ １００）、神経膠腫関連抗原、卵巣癌関連抗原など）、並びにＶＥＧＦおよびテネイシン（例えば、脳腫瘍では後者）のような腫瘍の脈環構造によって発現される標的分子（腫瘍の針脈管形成マーカー、通常は血管内皮によって産生される）、およびｐ５３のような腫瘍遺伝子関連マーカーが挙げられる。他の腫瘍関連抗原としては、Ａ３、ＢｒＥ３、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１５、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４５、ＣＤ７９ａ、ＣＳＡｐ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ｅｐ−ＣＡＭ、Ｂａ７３３、ＫＣ４、ＫＳ−１、ＫＳ１−４、ＭＡＧＥ、ＲＳ５、ＩＬ−６、インスリン増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、Ｔｎ抗原、トムソン−フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、１７−１Ａ、血管新生マーカー、サイトカイン、イムノモジュレーター、癌遺伝子マーカー（例えば、ｐ５３）、および癌遺伝子産物が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に開示されているこのような抗原に対する典型的な抗体の他に、これらの抗原に対する抗体は当該技術分野で知られている（例えば、Kim et al.,「抗ヒトα−フェトプロテインモノクローナル抗体から誘導される組換えＦａｂ断片の発現と特性決定」，Mol. Cells 11:158-163, 2001、およびHaisma et al.,「抗体指定酵素プロドラッグ療法のための一本鎖抗−ＣＤ４０抗体とヒトβ−グルクロニダーゼの融合タンパク質の構成および特性決定」，Blood 92:184-190, 1998）。
目的とするもう一つのマーカー膜貫通活性剤およびＣＡＭＬ−インタラクター（ＴＡＣＩ）である。Yu et al., Nat. Immunol. 1:252-256, 2000を参照されたい。簡単に説明すれば、ＴＡＣＩはＢ細胞悪性疾患（例えば、リンパ腫）に対するマーカーである。更に、ＴＡＣＩおよびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）は、腫瘍壊死因子同族体である増殖誘発リガンド（ＡＰＲＩＬ）によって結合されている。ＡＰＲＩＬは、一次ＢおよびＴ細胞のイン・ビボ増殖を刺激し、イン・ビボでのＢ細胞の蓄積による脾臓重量が増加する。ＡＰＲＩＬは、受容体結合のためのＴＡＬＬ−１（ＢＬｙＳまたはＢＡＦＦとも呼ばれる）とも競合する。可溶性ＢＣＭＡおよびＴＡＣＩはＡＰＲＩＬの結合を特異的に防止し、一次Ｂ細胞のＡＰＲＩＬによって刺激される増殖をブロックする。ＢＣＭＡ−Ｆｃもマウスでのキーホールリムペットヘモシアニン（keyhole limpet hemocyanin）およびニューモバックス（Pneumovax）に対する抗体の産生を阻害し、ＢＣＭＡおよび／またはＴＡＣＩを介するＡＰＲＩＬおよび／またはＴＡＬＬ−１シグナル形成が体液性免疫の生成に必要であることを示している。従って、ＡＰＲＩＬ−ＴＡＬＬ−１およびＢＣＭＡ−ＴＡＣＩは、ＢおよびＴ細胞機能の刺激に伴う２リガンド−２受容体経路を形成する。
腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、腫瘍関連分化抗原（ＴＡＤＡ）、および癌および他の過剰増殖性疾患に関連する他の抗原としては、Ｃｌ ＬＡＣ、ヒト癌関連タンパク質（米国特許第４，１３２，７６９号明細書）、ＣＡ１２５抗原、卵巣の嚢胞腺癌関連抗原（Hanisch et al., Carbohydr. Res. 178:29-47, 1988；米国特許第４，９２１，７９０号明細書）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、多くの腺癌に存在する抗原（Horig et al.,「癌胎児性抗原ワクチンを用いる癌治療法。分子医学の専門的総説」，http://www-ermm. cbcu. cam. ac. uk:1, 2000）、-th et al.（米国特許第４，９１４，０２１）によって報告されたＣＯＲＡ（癌またはオロソムコイド関連抗原）、ヒト胸部癌由来のＤＦ３抗原（米国特許第４，９６３，４８４号明細書および第５，０５３，４８９号明細書）、ＤＵ−ＰＡＮ−２、膵臓癌抗原（Lan et al., Cancer Res. 45:305-310, 1985）、ＨＣＡ（ヒト癌抗原）（米国特許第５，６９３，７６３号明細書）、Ｈｅｒ２（胸部癌抗原）（Fendly et al.,「ＨＥＲ２／ｎｅｕの細胞外ドメインは胸部癌の有効な特異的免疫療法の有望な免疫原である」，J. Biol. Resp. Modifiers 9:449-455, 1990）、ＭＳＡ（胸部癌糖タンパク質）（Tjandra et al., Br. J. Surg. 75:811-817, 1988）、ＭＦＧＭ（胸部癌抗原）（Ishida et al., Tumor Biol. 10:12-22, 1989）、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）（Nadji et al.,「前立腺特異抗原」，Cancer 48:1229-1232, 1981）、ＳＴＥＡＰ（前立腺の６個の膜貫通上皮抗原）タンパク質（米国特許第６，３２９，５０３号明細書）、ＴＡＧ−７２（胸部癌糖タンパク質）（Kjeldsen et al., Cancer Res. 48:2214-2220, 1988）、ＹＨ２０６（肺癌抗原）（Hinoda et al., Cancer J. 42:653-658, 1988）、ヒト黒色腫のｐ９７抗原（Estin et al.,「免疫療法で用いるためのヒト黒色腫抗原ｐ９７に対する組換えワクシニアウイルスワクチン」，Proc. Natl Acad. Sci. USA 85:1052-1056, 1988）、および米国特許第６，０２５，１９１号明細書に記載の黒色腫特異性抗原）も挙げられるが、これらに限定されない。
Ｘ．Ｂ．病原体由来の抗原
Ｘ．Ｂ．１．ウイルス
非制限的例としての病原体としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスＩ型（ＨＳＶ−Ｉ）、単純ヘルペスII型（ＨＳＶ−II）、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、狂犬病ウイルス、エボラウイルス、ロタウイルス、呼吸器シンシチウムウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−１）およびヒト免疫不全ウイルスＩＩ型（ＨＩＶ−II）、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、呼吸シンシチウムウイルス（ＲＳＶ）、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス、デング熱ウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ−細胞白血病ウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ネズミ白血病ウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、天然痘（痘瘡ウイルス）、シンドビスウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、牛疫ウイルス、疣ウイルス、およびブルータングウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
Ｘ．Ｂ．２．細胞内病原体
非制限的例としての病原体としては、Chlamydia sp．、Rickettsia sp.などこれらに限定されない細胞内偏性体、Leishnzania、KokzidioaおよびTrypanosoma種などこれらに限定されない細胞内原生動物、Borrelia burgdoffei（ライム病の起因菌）などこれらに限定されない細胞内スピロヘータ、およびP. falciparum（マラリアの起因菌）、Trypafaosoffaa brucei（眠り病を引き起こす住血鞭毛虫類）、およびTrypanosoma cruzi（シャーガス病の原因）などこれらに限定されないPlasmodia種（肝臓および赤血球の原生動物偏性細胞内寄生生物）が挙げられる。これらの病原体の免疫学の総説については、Blackman,「マラリア寄生生物による赤血球侵襲に関与するプロテアーゼ：化学療法薬としての機能と可能性」，Curr Drug Targets 1:59-83, 2000; Kosma,「クラミジアのリポ多糖類」，Biochim. Biophys. Acta. 1455:387-402, 1999; Casadevall,「細胞内病原体に対する抗体依存防御」，Trends Microbiol. 6:102-7, 1998; Hoffman and Franke,「プラスモジウムのスポロゾイトおよび肝臓段階に対する防御免疫応答の誘導」，Immunol. Lett. 41:89-94, 1994; Keusch,「寄生生物疾患における免疫応答。パートＡ：一般的概念」，Rev. Infect.Dis. 4:751-5, 1982、およびColli and Alves,「Trypanosoma cruziの表面の関連糖タンパク質」
Ｘ．Ｂ．３．細菌
細菌病原体としては、Streptococcus agalactiae、Legionella pneumophilia、Streptococcus pyogenes、Escherichia coli、Salmonella typhimurium、Neisseria gonorrhoeae、Neisseria meningitidis、Pneumococcus sp.、Hemophilis influenzae B、Yersina pestis、Mycobacterium lepraeおよびMycobacterium tuberculosisなどこれらに限定されないMycobacteria sp、Treponema pallidum、Pseudom無as aeruginosa、Francisella tularensis、Brucella abortsなどのBrucella sp.、Anthrax sporesなどのBacillus anthracis、ボツリヌス中毒毒素などのClostridium botulinum、および破傷風毒素などのClostridium tetaniが挙げられるが、これらに限定されない。米国特許第５，３３２，５６７号明細書を参照されたい。
Ｘ．Ｂ．４．病原性真菌
真菌病原体としては、Candida sp.、Aspergillus sp.、Mucor sp.、Rhizopus sp.、Fusarium sp.、Penicillium marneffeiおよびMicrosporumが挙げられるが、これらに限定されない。Trichophyton mentagrophytes、Candida albicans、Histoplasma capsulatum、Blastomyces dermatitidis、およびCoccidioides immitisは、特に重要な真菌病原体である。
XI．抗体
本発明の構築物のＦｖは抗体から誘導され、標的組織と特異的に結合する。典型的なＦｖは、２００２年２月１４日出願の「抗−ＣＤ２０抗体およびそれらの融合タンパク質、および使用方法」という標題の米国仮出願連続番号第６０／３５６，１３２号明細書（Attorney Docket 無．18733-1073）に記載されている抗−ＣＤ２０抗体（上記明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている）、および米国特許第５，８７４，５４０号明細書（この明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている）に開示されているようなクラスIII抗−癌胎児性抗原抗体（抗−ＣＥＡ抗体）であるｈＭＮ−１４抗体から誘導される。
Ｆｖは、ネズミ抗体、ｃｄｒを移植した（ヒト化）抗体、またはヒト抗体に由来するものであることができる。Ｆｖは、ヒトモノクローナル抗体、ヒトＦｖ−ライブラリーを有するトランスジェニックマウス、またはファージ／リボソームヒトＩｇＧライブラリーから誘導することができる。
ＦｖをＣＤＲを移植した抗体から誘導するときには、抗原結合領域が誘導されるドナー抗体のクラスまたは種類に関して適当な可変領域枠組構造配列を用いることができる。好ましくは、用いられるヒト枠組構造の種類は、ドナー抗体と同一または類似のクラスまたは種類のものである。有利には、枠組構造は、特にＣＤＲと空間的に近いまたは隣接した位置におけるドナー抗体配列との相同性を最大または最適にするように選択される。移植した抗体を構築するのに用いることができるヒト枠組構造の例は、ＬＡＹ、ＰＯＭ、ＴＵＲ、ＴＥＩ、ＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩおよびＥＵである。ＫＯＬとＮＥＷＭが重鎖の構築に適している。ＲＥＩが軽鎖の構築に適しており、ＥＵは重鎖と軽鎖のいずれの構築にも適している。
ＣＤＲ移植抗体の軽または重鎖可変領域は、ヒト軽または重鎖定常ドメインと適宜融合することができる（本明細書で用いられる「重鎖定常ドメイン」は、特に断らない限りヒンジ領域を包含するものと理解すべきである）。ＣＤＲ移植抗体のヒト定常ドメインが存在する場合には、抗体の提供される機能、特に必要とされることがあるエフェクター機能に関して選択することができる。例えば、ＣＤＲ移植抗体を治療目的に対して指定し、抗体効果または機能が必要なときには、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプドメインを用いることができる。あるいは、ＣＤＲ移植抗体が、抗体効果または機能が必要でない目的、例えば、画像化、診断または細胞傷害性ターゲッティングの目的に指定されるときには、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプドメインを用いることができる。軽鎖可変領域に融合することができる軽鎖ヒト定常ドメインとしては、ヒトλまたは具体的には、ヒトκ鎖が挙げられる。
抗体は、望ましい突然変異、例えば、抗体構築物のクリアランスを促進する突然変異を含むこともできる。突然変異は、例えば、「保存的」変化であって、置換アミノが電荷または大きさのような同様の構造または化学的特性を有するものを包含することができる。突然変異は、例えば、「非保存的」変化（例えば、グリシンのトリプトファンによる置換）も包含する。
ｓｃＦｖ成分 of the 二重特異性突然変異抗体は、ターゲッティング可能な構築物を特異的に結合する。任意のｓｃＦｖ成分の使用は、本発明によって意図される。好ましいｓｃＦｖ成分は、６７９ｓｃＦｖ（ネズミ抗−ＨＳＧ由来）および７３４ｓｃＦｖ（ネズミ抗−ジＤＴＰＡ由来）である。ｓｃＦｖは、ネズミ、ｃｄｒ移植（ヒト化）、またはヒトであることができる。
ＣＤＲ移植抗体の軽または重鎖可変領域は、適宜ヒト軽または重鎖定常ドメインに融合させることができる（本明細書で用いられる「重鎖定常ドメイン」という用語は、特に断らない限りヒンジ領域を包含するものと理解すべきである）。ＣＤＲ移植抗体のヒト定常ドメインが存在する場合には、抗体の提供される機能、特に必要とされることがあるエフェクター機能に関して選択することができる。例えば、ＣＤＲ移植抗体を治療目的に対して指定し、抗体効果または機能が必要なときには、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプドメインを用いることができる。あるいは、ＣＤＲ移植抗体が、抗体効果または機能が必要でない目的、例えば、画像化、診断または細胞傷害性ターゲッティングの目的に指定されるときには、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプドメインを用いることができる。軽鎖可変領域に融合することができる軽鎖ヒト定常ドメインとしては、ヒトλまたは具体的には、ヒトκ鎖が挙げられる。
６７９（ＩｇＧ１、Ｋ）と呼ばれるネズミモノクローナル抗体は、トリペプチド残基のヒスタミンスクシニルグリシル（ＨＳＧ）を含む分子に高アフィニティーで結合する（Morel et al., Mol. Immunol. 27:995-1000, 1990）。６７９の可変ドメイン（ＶＨおよびＶＫ）に関するヌクレオチド配列は、決定されている（Qu et al, 未公表の結果）。ＶＫは、抗体軽鎖ＶＬの２つのアイソタイプの１つである。２つのアイソタイプの機能は、同一である。６７９をヒト化または完全にヒトのものであって、ネズミ抗体に対する有害応答を回避するのを助けることができる。ｈＭＮ１４は、ＣＥＡに特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体である（Shevitz et al., J. Nucl. Med. 34, 217P, 1993；米国特許第６，２５４，８６８号明細書）。元のＭａｂはネズミのものであったが、ヒト抗−マウス抗体応答を減少させる目的でヒト化抗体試薬が利用されている。この抗体の可変領域を、遺伝子工学処理を施して、発現構築物（ｈＭＮ１４−ｓｃＦｖ−Ｌ５）とした。好ましい突然変異体ｈＭＮ１４はｈＭＮ−１４ＩｇＧＩ２５３Ａであって、アミノ酸残基２５３がイソロイシンからアラニンに変化しているものである。
７３４は、金属−キレート複合体インジウム−ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）に高アフィニティーで結合するものといわれるネズミモノクローナル抗体である。
ヒト化抗−ｈＣＤ２０（ｈＡ２０）抗体をコードする１本の軽鎖と２本の重鎖可変領域配列を、「抗−ＣＤ２０抗体およびその融合タンパク質、および使用方法」という標題の２００２年２月１４日出願の米国仮出願連続番号第６０／３５６，１３２号明細書（Attorney Docket 無．18733-1073）、および２００３年２月１４日出願の米国仮出願連続番号第１０／３６６，７０９号明細書に記載されている方法でデザインし、構築した（上記明細書の内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている）。ｈａ２０は、プライマー対ＶＨ１ＢＡＣＫ／ＶＨ１ＦＯＲおよびＶＫ１ＢＡＣＫ／ＶＫ１ＦＯＲをそれぞれ用いるＲＴ−ＰＣＲによって得たＡ２０、すなわち抗−ＣＤ２０抗体のＶＨおよびＶＫ遺伝子を含む（Orlandi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:3833, 1989）。ヒトＲＥＩ枠組構造配列をＶＫに対して用い、ＥＵとＮＥＷＭ枠組構造配列の組合せをＶＨに対して用いた。出発のヒト抗体枠組構造と比較すると、ＣＤＲ領域のそれぞれの鎖の外側には多数のアミノ酸変化がある。ｈＡ２０の重鎖であるｈＡ２０ＶＨｌは９個の変化を含み、一方ｈＡ２０ＶＨ２はヒトＥＵ枠組構造から３個の変化を含む。ｈＡ２０ＶＨ２が好ましいが、これはｈＡ２０ＶＨ１より多くのヒト抗体枠組構造領域由来のアミノ酸を含むからである。ｈＡ２０の軽鎖であるｈＡ２０ＶＫはＲＥＩ枠組構造から７個のアミノ酸変化を含む。
ｈＬＬ−２抗体は、ネズミＬＬ−２抗体（ｍＬＬ−２）のＣＤＲ領域をヒト抗体から得られる可変領域枠組構造配列と組み合わせることによって調製されたヒト化抗体である。ｈＬＬ−２の重および軽鎖可変領域の配列は、米国特許第５，７８９，５５４号明細書の図１に示されている。その図に示されるように、ｈＬＬ−２のκ軽鎖はｍｌＬ−２からの４個の軽鎖ＣＤＲ領域とヒト抗体ＲＥＩの４個の枠組構造領域を含む。ｈＬＬ−２の重鎖は、ヒト抗体ＥＵからの３個の枠組構造領域をヒト抗体ＮＥＷＭからの４番目の枠組構造領域と一緒に組み合わせたｍｌＬ−２由来の３個の重鎖ＣＤＲを含む。
XI．Ａ．定義
「抗体」という用語は、免疫原性応答のイン・ビトロまたはイン・ビボ生成によって得られる免疫グロブリン分子を包含することを意味し、ポリクローナル、抗ペプチド、およびモノクローナル抗体が挙げられる。「抗体」という用語は、遺伝子工学処理を施した抗体および／または組換えＤＮＡ技術によって産生した抗体、および「ヒト化」抗体も包含する。上記のように、ヒト化および完全にヒトの抗体は、ファージディスプレー、遺伝子および染色体トランスフェクション法、並びに他の手段によって産生させることができる。
「免疫原性応答」または「抗原性応答」とは、適当な細胞を接触させた後の化合物に対して指定した抗体を産生する応答である。免疫原性応答を誘発するのに用いられる化合物は、免疫原または抗原と呼ばれる。免疫原性応答で産生される抗体は、この応答を誘発するのに用いた免疫原と特異的に結合する。
免疫原性応答を誘発するのに用いられる化合物は、免疫原または抗原と呼ばれる。「エピトープ」または「抗原決定基」とは、エピトープに対して指定された特異的免疫応答を刺激する免疫原の表面上の領域である。タンパク質、特に変性タンパク質では、エピトープは典型的には連続的アミノ酸配列によって定義され、表される。しかしながら、非偏性タンパク質の場合には、エピトープは、このタンパク質のアミノ酸配列の別々の部分からのアミノ酸が互いに近接した物理的接触を生じるような方法でタンパク質の三次元フォールディングによって形成される活性部位のような構造も包含する。
「ハプテン」とは、最初に免疫原性キャリヤー分子に結合しない限り免疫応答を誘発することができない小分子である。ハプテンはそれ自身では免疫応答を誘発することができないが、ハプテン−キャリヤー接合体に対する免疫原性応答の際に生成した抗体によって特異的に結合される。
「抗体断片」という用語は、抗体の官能的断片、すなわち、抗体由来の配列を有する抗体より小さいが、抗原決定基に特異的に結合する能力を有するポリペプチドを表す。抗体断片は、抗体のイン・ビトロ操作によって（例えば、抗体の限定タンパク質分解によって）または組換えＤＮＡ技術によって（例えば、ファージディスプレーライブラリーからの一本鎖抗体の調製によって）調製することができる。
XI．Ｂ．抗体の構造
天然に存在する（野生型）抗体分子は、２本の同一の重鎖と２本の同一の軽鎖であって、ジスルフィド結合によって共有結合している４本のポリペプチド鎖からなるＹ形分子である。いずれの種類のポリペプチド鎖も、定常領域であって、同一クラスの抗体（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＭなど）では変化しないまたはごく僅かしか変化しないものと、可変領域を有している。可変領域は特定の抗体に独特であり、エピトープに対する認識要素を含んでなる。重および軽鎖の両者のカルボキシ末端領域は配列で保存され、定常領域（Ｃドメインとしても知られる）と呼ばれる。アミノ末端領域（Ｖドメインとしても知られる）は配列が可変であり、抗体特異性に関与している。抗体は抗原を特異的に認識し、主にＶドメインに位置した６個の短い相補性決定領域（ＣＤＲ）を介して抗原に結合する。
抗体のそれぞれの軽鎖は１本の重鎖と会合しており、２本の鎖は、抗原結合ドメインのその部分を構成するそれぞれの鎖のアミノ末端領域から遠位であるそれぞれの鎖のカルボキシ末端領域におけるシステイン残基間で形成されるジスルフィド橋によって結合されている。抗体分子は、重および軽鎖の間のジスルフィド橋が作られる位置より重鎖のカルボキシ末端に近い位置でヒンジ領域として知られる領域における２本の重鎖間のジスルフィド橋によって更に安定化される。ヒンジ領域は、抗体の抗原結合部分に柔軟性も提供する。
抗体の特異性は、軽および重鎖のアミノ末端領域に位置する可変領域によって決定される。軽鎖の可変領域と会合した重鎖とは、特異的エピトープを認識する「抗原結合ドメイン」を形成し、従って抗体は２個の抗原結合ドメインを有する。野生型抗体での抗原結合ドメインは免疫原性タンパク質の同一エピトープに向けられており、１本の野生型抗体は同時に免疫原性タンパク質２分子を結合することができる。従って、野生型抗体はモノ特異性（すなわち、独特の抗原に向けられる）であり且つ二価（すなわち、抗原２分子を結合することができる）である。
XI．Ｃ．抗体の種類
「ポリクローナル抗体」は、多くのエピトープを有するタンパク質に対する免疫原性応答で生成する。従って、ポリクローナル抗体の組成物（例えば、血清）は、タンパク質中の同一および異なるエピトープに対して指定された様々な異なる抗体を包含する。ポリクローナル抗体を産生する方法は、当該技術分野で知られている（例えば、Cooper et al.,「分子生物学のショートプロトコール」第２版，Ausubel et al.監修の１１章第２節， John Wiley and Sons，ニューヨーク，1992, 11-37-11-41頁を参照されたい）。
「抗ペプチド抗体」（「モノ特異性抗体」としても知られる）は、誘導されるタンパク質の少数個（好ましくは、１個）の単離したエピトープに相当する短い（典型的には、５−２０アミノ酸）免疫原性ポリペプチドに対する体液性応答で生成する。複数の抗ペプチド抗体は、タンパク質の特異的部分、すなわち少なくとも１個、好ましくは１個だけのエピトープを含むアミノ酸配列に指定された様々な異なる抗体を包含する。抗ペプチド抗体は、当該技術分野で知られている（例えば、Cooper et al.,「分子生物学のショートプロトコール」第２版，Ausubel et al.監修の１１章第３節，John Wiley and Sons，ニューヨーク，1992, 11-42-11-46頁を参照されたい）。
「モノクローナル抗体」は、免疫原性タンパク質の単一の特異的エピトープを認識する特異抗体である。複数のモノクローナル抗体において、それぞれの抗体分子は複数の中の他のものと同一である。モノクローナル抗体を単離するには、特定のモノクローナル抗体を発現し、表示し、および／または分泌するクローン性細胞系を最初に同定し、このクローン細胞系を本の抗体を産生する一つの方法に用いることができる。クローン細胞系およびそれによって発現したモノクローナル抗体の調製方法は、当該技術分野で知られている（例えば、Fuller et al.,「分子生物学のショートプロトコール」第２版，Ausubel et al.監修の１１章第３節，John Wiley and Sons，ニューヨーク，1992, 11-22-11-36頁を参照されたい）。
「裸の抗体」は、野生型抗体分子のＦｃ部分を欠いている抗体である。抗体分子のＦｃ部分は、補体固定、および機構を作動させて細胞リーシスを生じることができるＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）のようなエフェクター機能提供する。例えば、Markrides,「補体系の治療阻害」，Pharmacol. Rev. 50:59- 87, 1998を参照されたい。幾つかの系では、抗体の治療作用は、Ｆｃ領域のエフェクター機能によって変化すると思われる（例えば、Golay et al.,「イン・ビトロでの抗−ＣＤ２０モノクローナル抗体ｒｉｔｕｘｉｍａｂに対するＢリンパ腫細胞の生物学的応答：ＣＤ５５およびＣＤ５９は補体依存性細胞リーシスを調節する」，Blood 95:3900-3908, 2000を参照されたい）。
しかしながら、いずれの場合にも、アポトーシスのような他の機構が作用することができるので、Ｆｃ部分が治療的機能には必要とされないこともある。更に、Ｆｃ領域を含んでなる抗体はＦｃ受容体を有する細胞によって吸収されることによって、治療抗体によって吸収される標的細胞の量が減少するので、Ｆｃ領域は幾つかの用途では有害なことがある。Vaswani and Hamilton,「有望な治療薬としてのヒト化抗体」．Ann. Allergy Asthma Immunol. 81:105-119, 1998。免疫系の成分は腫瘍細胞の表面に凝集している抗体を認識し、これと反応することができる。従って、生成する免疫応答は、腫瘍細胞を標的とし、破壊し、または少なくともこその増殖を制限すると思われる。
裸の抗体が一緒に凝集する表面に送られた裸の抗体を得る一つの方法は、ターゲッティング可能な構築物または複合体を用いて１つのターゲッティングした細胞表面上に異なる裸の抗体を一緒に集めることである。非制限的例としては、抗−Ｃ２０抗体（例えば、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ））と抗−Ｃ２２抗体を別々にまたは一緒に投与して、浄化を行って未結合抗体を系から除去することができる。いずれの種類の抗体にも結合し、連結するターゲッティング可能な構築物を添加することによって、ターゲッティング可能な構築物をイン・シテューで形成するが、これは腫瘍細胞の表面上に凝集した抗−Ｃ２０および抗−Ｃ２２抗体の群を模倣したものであると思われる。
裸の抗体は、マラリアのような寄生生物によって引き起こされる疾患の治療に重要である。Vukovic et al.,「Plasmodium yoeliiメロゾイト表面タンパク質１の１９キロダルトンのカルボキシル末端断片に特異的な免疫グロブリンＧ３抗体はＦｃ−γＲＩ受容体を欠くマウスに防御を導入する」，Infect. Immun. 68:3019-22, 2000。
一本鎖抗体抗体（ｓｃＦｖ）は、一般にはエフェクター機能に関与し、従って裸の抗体である抗体のＦｃ領域の部分を含まないが、所望ならば、これらの領域を既知のｓｃＦｖ分子に付加する方法は知られている。Helfrich et al.,「様々な生物学的機能を有するｓｃＦｖ抗体断片を利用するための迅速且つ融通性のある方法」，J.Immunol. Meth. 237:131-145, 2000、およびde Haard et al.,「免疫療法のためのヒト抗体の作成および遺伝子工学処理」，Adv. Drug Delivery Rev. 31:5-31, 1998。
XI．Ｄ．抗体断片
XI．Ｄ．ｌ．タンパク質分解性抗体断片
野生型抗体の限定タンパク質分解によって産生した抗体断片は、タンパク質分解性抗体断片と呼ばれる。これらのものとしては、下記のものが挙げられるが、これらに限定されない。
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、抗体をペプシンまたはフィシンのようなタンパク質分解酵素に抗体を限定暴露することによって、抗体から放出される。Ｆ（ａｂ’）２断片は２本のアームを含んでなり、それらのそれぞれは共通の抗原に向けられて特異的結合する可変領域を含んでなる。２つのＦａｂ’分子は、重鎖のヒンジ領域における鎖間ジスルフィド結合によって接合されており、Ｆａｂ’分子は同一の（二価）または異なる（二重特異性）エピトープに指定することかできる。
「Ｆａｂ’断片」は、Ｆａｂとヒンジ領域を介する重鎖の追加部分を含んでなる一本鎖抗結合ドメインを含む。
「Ｆａｂ’−ＳＨ断片」は、典型的にはＦ（ａｂ’）２断片から産生し、Ｆ（ａｂ’）２断片のＨ鎖間の（複数の）ジスルフィド結合によって固定されている。β−メルカプトエチルアミンなどこれに限定されない穏和な還元剤で処理することにより、（複数の）ジスルフィド結合が開裂し、２つのＦａｂ’断片が１つのＦ（ａｂ’）２断片から放出される。Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、一価であり且つモノ特異性である。
「Ｆａｂ断片」（すなわち、抗原結合ドメインを含み、軽鎖と重鎖の一部がジスルフィド結合によって架橋されたものを含んでなる抗体断片）は、完全な抗体のパパイン消化によって産生する。好都合な方法は、樹脂上に固定されたパパインを用いて、酵素を容易に除去して消化を終了することができるようにすることである。Ｆａｂ断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片に存在するＨ鎖間の（複数の）ジスルフィド結合を持たない。
XI．Ｄ．２．組換え抗体断片
「一本鎖抗体」は、抗体断片の一つの型である。一本鎖抗体という用語は、「ｓｃＦｖ」または「ｓＦｖ」と省略されることが多い。これらの抗体断片は、分子遺伝学および組換えＤＮＡ技術を用いて産生する。一本鎖抗体は、ＶＨおよびＶＬ部分を両方とも含んでなるポリペプチドからなる。２本の別々の重および軽ポリペプチド鎖が結合して一本鎖の抗原結合可変領域を形成している野生型抗体とは異なり、一本鎖抗体は、１つの抗原結合可変領域を含んでなる単一ポリペプチドである。すなわち、一本鎖抗体は、１０−２５アミノ酸の鎖によって互いに連結した抗体の単一の軽および重鎖の可変の抗原結合決定領域を含んでなる。
「一本鎖抗体」という用語は、２つの一本鎖抗体がジスルフィド結合によって互いに連結したジスルフィド結合したＦｖ（ｄｓＦｖ）、二重特異性ｓＦｖ（２つの抗原結合ドメインであって、それらのそれぞれが異なるエピトープに指定されていることがあるものを有するｓＦｖまたはｄｓＦｖ分子）、ジアボディー（第一のｓＦｖのＶＨドメインが第二のｓＦｖのＶＬドメインと会合し、第一のｓＦｖのＶＬドメインが第二のｓＦｖのＶＨドメインと会合するときに形成した二量体化ｓＦｖであり、ジアボディーの２つの抗原結合領域は同一のまたは異なるエピトープに対して指定することができる）、およびトリアボディー（３個の抗原結合ドメインが単一複合体で作成されることを除き、ジアボディーと同様な方法で形成した三量体化ｓＦｖであり、３個の抗原結合ドメインは同一のまたは異なるエピトープに対して指定することができる）を包含するが、これらに限定されない。
「カメリド抗体」は、抗原を特異的および効果的に結合するのにＶドメイン、すなわちＶＨのみを必要とする点において哺乳類抗体とは異なる。カメリド抗体またはその断片は、水溶性であり、酵母およびAspergillus属のカビで良好に発現するという利点を有する。総説については、Muyldermans,「単一ドメインラクダ抗体：最新の状態」，J. Biotechnol. 74: 277-302, 2001 、およびWerner,「カメリド免疫グロブリンおよび新生児に対するそれらの重要性−−総説」，J. Vet. Med. B. Infect. Dis. Vet. Public Health 48:561-8, 2001を参照されたい。また、Spinelli et al.,「カメリド重鎖可変ドメインはハプテンに対する効率的結合部位を提供する」，Biochemistry 39:1217-22, 2000; Muyldermans et al.,「天然に存在するラクダ重鎖抗体由来のユニーク単一ドメイン抗原結合断片」，J. Mol. Recog. 12:131-40, 1999；およびDavies et al.,「小さな認識単位としての単一抗体ドメイン： タンパク質安定性が向上したラクダ化ヒトＶＨドメインのデザインおよびイン・ビトロでの抗原選択」，Protein Eng. 9:531-7, 1996も参照されたい。他の種由来の他の免疫グロブリン様分子を用いることもできる。例えば、Roux et al.,「テンジクザメ（新）抗原受容体（ＮＡＲ）の構造分析：ＮＡＲおよび異常哺乳類免疫グロブリンの分子収束」，Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95:11804-9, 1998を参照されたい。カメリド抗体の産生方法は、当該技術分野で知られている。例えば、米国特許第６，０１５，６９５号明細書、第６，００５，０７９号明細書、第５，８７４，５４１号明細書、第５，８４０，５２６号明細書、第５，８００，９８８号明細書、および第５，７５９，８０８号明細書であって、それぞれの標題が「軽鎖を欠く免疫グロブリン」であるものを参照されたい。
「ヒト化抗体」は、抗体を投与しようとする動物の抗体または抗体断片の抗原性を減少させるため、アミノ酸配列、グリコシル化パターンなどに関して更にヒトとなる遺伝子操作および／またはイン・ビトロ処理によって改質した。Ｇｕｓｓｏｗ ａｎｄ Ｓｅｅｍａｎｎ，「モノクローナル抗体のヒト化」，Meth. Enz. 203:99-121, 1991およびVaswani and Hamilton，「有望な治療薬としてのヒト化抗体」，Ann. Allergy Astltma Immunol. 81:105-119, 1998を参照されたい。
「完全なヒト抗体」は、キセノマウスのようなトランスジェニック動物で産生したヒト抗体である。キセノマウス系は、ネズミＩｇＨおよびＩｇｋ座が酵母の人工的ＹＡＣトランスジーン上のＩｇの相対物によって機能的に置換されている遺伝子工学処理を施したマウスである。これらのヒトＩｇトランスジーンはヒト可変レパートリーの大半を運ぶことができ、ＩｇＭからＩｇＧへのアイソタイプのクラス変更を行うことができる。キセノマウスの免疫系は異物として投与されたヒト抗原を認識し、強力な体液性応答を産生する。確立されたハイブリドーマの手法と共にキセノマウスを用いると、ヒト抗原についてナノモル以下のアフィニティーを有する完全にヒトのＩｇＧｍＡｂを生じる（「異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物」という標題の米国特許第５，７７０，４２９号明細書、「外因性抗体の生成」という標題の第６，１６２，９６３号明細書、「免疫キセロマウス由来のヒト抗体」という標題の第６，１５０，５８４号明細書、「異種抗体の生成」という標題の第６，１１４，５９８号明細書、および「免疫キセノマウス由来のヒト抗体」という標題の第６，０７５，１８１号明細書を参照されたい。総説については、Ｇｒｅｅｎ，「マウスの遺伝子工学処理による抗体の工学処理：キセノマウス系は治療用ヒトモノクローナル抗体を容易に生成するための手段である」，J. Immunol. Meth. 231:11-23, 1999; Wells, Eek,「キセノマウス：Abgenix, Inc.」, Chem. Biol. 7:R185-6, 2000、およびDavis et al.,「癌の治療のための完全にヒト抗体の供給源としてのトランスジェニックマウス」，Cancer Metastasis Rev. 18:421-5, 1999を参照されたい）。
「相補性決定領域ペプチド」または「ＣＤＲペプチド」は、もう一つの形態の抗体断片である。ＣＤＲペプチド（「最小認識単位」としても知られる）は、ペプチド corresponding to a単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）に相当するペプチドであり、目的のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することによって調製することができる。このような遺伝子は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を用いて抗体産生細胞から可変領域を合成することによって調製される。例えば、Larrick et al.,「方法：酵素学の方法の手引」２：１０６，１９９１を参照されたい。
「Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）断片」とは、Ｔ細胞受容体の可変および定常領域に相当するアミノ酸配列を有する可溶性ペプチドである。可溶性ＴＣＲ断片は、一本鎖（ｓｃＴＣＲ）としてまたは離れたペプチドを互いに安定に会合させる二量体化ドメインを有する別の成分として調製することができる（Willcox et al.,「リガンド結合の生物物理分析に適する可溶性の α：βＴ細胞受容体ヘテロ二量体の産生」，Protein Science 8:2418-2423, 1999）。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を用いて作成した可溶性ＴＣＲ分子は、Lin et al.,「脂質結合形態でのＴ細胞抗原受容体ヘテロ二量体の発現」，Science 249:677-679, 1990、およびDavis et al.,「イン・ビボでのＴＣＲ認識および選択」，Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, LIV, 119-128,1989によって報告されている。これらの文献はいずれも、可溶性ＴＣＲ分子を産生するためのＧＰＩ結合法の使用を報告している。他の典型的な可溶性ＴＣＲ断片の産生方法については、例えば、米国特許第６，１６５，７４５号明細書「原生生物における免疫グロブリン様ドメインの組換え産生」、第６，０８０，８４０号明細書「可溶性Ｔ細胞受容体」、第５，７２３，３０９号明細書「同時トランスフェクションによる可溶性Ｔ細胞受容体のサブユニットの産生」、第５，５５２，３００号明細書「Ｔ細胞抗原受容体Ｖ領域タンパク質およびその調製方法」、無votny et al., Proc. Natl. Acad Sci USA. 88:8646-8650, 1991、Ward, Scand. J. Immunol. 34:215-220, 1991 、およびPecorari et al.,「Escherichia coliで発現されるネズミαβＴ細胞受容体のフォールディング、ヘテロ二量体性会合、および特異的ペプチド認識」，J. Mol. Biol. 285:1831-1843, 1999を参照されたい。
キメラＴＣＲ：Ａｂ分子のような「キメラ抗体誘導体」は、免疫グロブリンκ軽鎖の定常領域を有するネズミＴ細胞受容体の可変および定常ドメインを組み換えることによって産生されている。例えば、Gregoire et al.(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:8077-8081, 1991）は、Ｓ１０５モノクローナル抗体のκ軽鎖のＣ領域に結合したＫＢ５−Ｃ２のＣ−αおよびＶ−α遺伝子と、Ｖ−β−Ｃ−β−Ｃ−κキメラからなるネズミキメラを示している。いずれも、本来の免疫グロブリン重および軽鎖を発現しない哺乳類Ｂ細胞骨髄腫にトランスフェクションする。Weber et al., Nature 356:793-795, 1992も参照されたい。
「システイン修飾抗体」において、システインアミノ酸は遺伝子操作によって抗体の表面上で挿入または置換され、抗体をジスルフィド橋などを介して別の分子に接合するのに用いられる。抗体に対するシステイン置換または挿入は記載されている（例えば、米国特許第５，２１９，９９６号明細書を参照されたい）。抗体の位置特異的接合のためのＩｇＧ抗体の定常領域へのＣｙｓ残基を導入する方法は、Stimmel et al.(J. Biol. Chem 275:330445-30450, 2000）によって記載されている。
XII．医薬組成物
XII．Ａ．定義
「医薬組成物」とは、薬物を含んでなる組成物であって、キャリヤーが薬学上許容可能なキャリヤーであるものを表し、一方「獣医組成物」とは、キャリヤーが獣医学上許容可能なキャリヤーであるものである。「薬学上許容可能なキャリヤー」または「獣医学上許容可能なキャリヤー」は、生物学的にまたは別の点では望ましくないものではない任意の媒質または材料を包含し、すなわち、キャリヤーは生体に本発明の組成物または化合物と共に任意の望ましくない生物学的効果を引き起こしまたは有害なやり方で複合体またはその成分のいずれかまたは生体と共に相互作用することなく投与することができる。薬学上許容可能な試薬の例は、合衆国薬局方、ザ・ナショナル・フォーミュラリー、ユナイテド・ステーツ・ファーマコペイアル・コンベンション、インコーポレーテド、ロックビル、メリーランド州１９９０年に提供されており、「医薬投与形態および薬剤送達系」第７版，Ansel et al.監修，Lippincott Williams & Wilkins, 1999年に記載されているように、その内容は、その開示の一部として本明細書に引用されている。
薬物（すなわち、ターゲッティング可能な構築物または複合体）は、患者に所望な効果を生じるのに十分な量で医薬組成物に包含される。本発明の医薬組成物は、更に希釈剤および賦形剤のような他の化学的成分を含んでなることができる。「希釈剤」は、溶媒、好ましくは水性溶媒に希釈した化合物であり、溶媒への薬物の溶解を促進するものであり、薬物またはその成分の１以上の生物活性形態を安定化する働きをすることもできる。緩衝液に溶解した塩は、当該技術分野は希釈剤として用いられる。例えば、好ましい希釈剤は、リン酸塩緩衝食塩水（特に、薬学的投与を意図した組成物と共に）であり、これはヒト血液の塩の状態を模倣しているからである。緩衝剤塩は低濃度の溶液のｐＨを制御することができるので、緩衝希釈剤は生物活性ペプチドの生物活性をまれに改質することがある。
「賦形剤」とは、適当な特性、例えば適当なコンシステンシーを付与しまたは薬物を形成するために組成物に加えることができる任意の事実上不活性な物質である。適当な賦形剤およびキャリヤーとしては、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールなどの糖質、またはソルビトールセルロース製剤、例えばトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、寒天、ペクチン、キサンタン、ガム、グーアガム、イナゴマメガム、ヒアルロン酸、カゼインジャガイモ澱粉、ゼラチン、トラガカントガム、ポリアクリレート、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のような充填剤が挙げられる。所望ならば、崩壊剤を含むこともでき、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムのようなその塩である。他の適当な賦形剤およびキャリヤーとしては、ヒドロゲル、ゲル化可能なヒドロコロイド、およびキトサンが挙げられる。キトサン微小球およびマイクロカプセルは、キャリヤーとして用いることができる。ＷＯ ９８／５２５４７号明細書（胃へのターゲッティング化合物の微小球処方物を記載し、この処方物は、１種類以上の活性成分を含む内部コア（所望により、ゲル化ヒドロコロイドを含む）、（複数の）活性成分の放出速度を制御するため水不溶性ポリマー（例えば、エチルセルロース）から構成される膜、および生体吸着性カチオン性ポリマー、例えば、カチオン性多糖類、カチオン性タンパク質、および／または合成カチオン性ポリマーから構成される外層を含んでなる。米国特許第４，８９５，７２４号明細書）を参照されたい。典型的には、キトサンは、適当な薬剤、例えばグルタルアルデヒド、グリオキサール、エピクロルヒドリン、およびスクシンアルデヒドを用いて架橋する。キトサンをキャリヤーとして用いる組成物は、ピル、錠剤、微小粒子、および微小球などの様々な投薬形態、例えば（複数の）活性成分の制御放出を行う形態に処方することができる。他の適当な生体吸着性カチオン性ポリマーとしては、酸性ゼラチン、ポリガラクトサミン、ポリリシン、ポリヒスチジン、ポリオルニチンのようなポリアミノ酸、ポリ第四化合物、プロラミン、ポリイミン、ジエチルアミノエチルデキストラン（ＤＥＡＥ）、ＤＥＡＥ−イミン、ＤＥＡＥ−メタクリレート、ＤＥＡＥ−アクリルアミド、ＤＥＡＥ−デキストラン、ＤＥＡＥセルロース、ポリ−ｐ−アミノスチレン、ポリオキセタン、コポリメタクリレート、ポリアミドアミン、カチオン性澱粉、ポリチオジエチルアミノメチルエチレン、およびポリビニルピロリドンが挙げられる。
XII．Ｂ．医薬組成物の処方
本発明のターゲッティング可能な構築物および複合体は、任意の適当なやり方で処方することができる。ターゲッティング可能な構築物および複合体は、均一に（均質に）または不均一に（不均質に）キャリヤーに分散することができる。適当な処方物としては、乾燥および液体処方物が挙げられる。乾燥処方物としては、冷凍乾燥および凍結乾燥粉末であって、副鼻腔または肺へのエアゾール送達、または投与前に適当な希釈剤で再構成する前の長期間の保管に特に適しているものが挙げられる。他の好ましい乾燥処方物としては、本発明による医薬組成物を圧縮して経口投与に適する錠剤またはピル形態とし、混合して徐放性処方物とする。医薬組成物が経口投与を目的とするが、ターゲッティング可能な構築物または複合体を腸の上皮に送達しようとするときには、処方物を腸溶性コーティングでカプセル化して処方物を保護し、その中に含まれるターゲッティング可能な構築物および複合体の早期放出を防止するのが好ましい。当業者であれば理解されるように、本発明の医薬組成物は任意の適当な投薬形態にすることができる。ピルおよび錠剤は、このような投薬形態のものである。医薬組成物は、例えば圧縮、浸漬、パンコーティング、噴霧乾燥などによって任意の適当なカプセルまたは他のコーティング材料中にカプセル化することもできる。適当なカプセルとしては、ゼラチンおよび澱粉から作られているものが挙げられる。また、所望ならば、これらのカプセルを１種類以上の追加材料、例えば腸溶性コーティングでコーティングすることができる。液体処方物としては、水性処方物、ゲル、およびエマルションが挙げられる。
好ましい態様のものは、生体吸着性、好ましくは粘膜吸着性コーティングを含んでなる組成物に関する。「生体吸着性コーティング」は、このコーティングがないときより良好に生物学的表面または物質に薬剤を吸着させるコーティングである。「粘膜吸着性コーティング」は、このコーティングがないときより良好に物質、例えば本発明による組成物を粘膜に吸着させる好ましい生体吸着性コーティングである。例えば、微粒化粒子（例えば、平均直径が約５、１０、２５、５０または１００μｍである粒子）を粘膜吸着剤でコーティングすることができる。次に、コーティングした粒子を、生体への送達に適する投薬形態に凝集させることができる。好ましくは、ターゲッティングを行う細胞表面輸送部分が発現される部位によっては、投薬形態を次に別のコーティングでコートして、所望な部位にこれが到達するまで処方物を保護し、粘膜吸着剤が処方物を保持することができ、本発明の組成物または化合物が標的細胞表面輸送部分と相互作用する。
XII．Ｃ．医薬組成物の投与
本発明の医薬組成物は、モノクローナル抗体の生体、好ましくは動物、好ましくは哺乳類、鳥類、魚類、昆虫、またはクモ類への投与を容易にする。好ましい哺乳類としては、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、およびブタのような動物、およびヒト以外の霊長類が挙げられる。ヒトが特に好ましい。当該技術分野には、化合物を投与しまたは送達する多数の手法があり、経口、直腸（例えば、浣腸または座薬）、エアゾール（例えば、鼻または肺への送達）、非経口、および局所投与が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、十分な量の本発明の組成物または化合物を目的の効果を達成するために送達する。送達される組成物または化合物の特定の量は、達成すべき効果、組成物を送達する生物の種類、送達経路、投薬方法、および生物の年齢、健康および性別など多くの因子によって変化する。所定の処方物に含まれる本発明の組成物または化合物の特定の投薬量は、通常の技術を有する当業者の裁量に任される。
当業者であれば、本発明の医薬組成物を特定の所望な生物学的成果を達成するための薬剤として投与し、これらの成果が（ワクチン接種などの）（複数の）治療または防御効果を包含することがあるときには、本発明の組成物または化合物を適当な薬学キャリヤーと合わせる必要があることがあることを理解されるであろう。特定の薬学キャリヤーの選択および治療または防御薬としての組成物または化合物の調製は、所期の用途および投与の様式によって変化する。治療薬の適当な処方物および投与法としては、経口、肺、鼻、口腔、目、皮膚、直腸、または膣への送達のためのものが挙げられるが、これらに限定されない。
用いられる送達様式によっては、情況によって変化する機能的なものを、様々な薬学上許容可能な形態で送達することができる。例えば、情況によって変化する機能的なものを、固形物、溶液、エマルション、分散液、ミセル、リポソームなどピル、カプセル、錠剤、座薬、エアゾール、点滴、またはスプレーに組込んだ形態で送達することができる。ピル、錠剤、座薬、エアゾール、粉末、点滴、またはスプレーは複雑な多層構造を有し且つ大きな粒径範囲を有することができる。エアゾール、粉末、点滴およびスプレーの粒度は、小さなもの（１μｍ）から大きなもの（２００μｍ）までの範囲とすることができる。
本発明の医薬組成物は、固形物、凍結乾燥粉末、溶液、エマルション、分散液、ミセル、リポソームなどの形態で用いることができ、生成する組成物が１種類以上の本発明のターゲッティング可能な構築物または複合体を活性成分として、腸溶性または非経口用途に適する有機または無機キャリヤーまたは賦形剤と混合して含む。活性成分は、例えば、錠剤、ペレット、カプセル、座薬、溶液、エマルション、懸濁液、および使用に適する任意の他の形態用の通常の非毒性の薬学上許容可能なキャリヤーと混合することができる。用いることができるキャリヤーとしては、グルコース、ラクトース、マンノース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、澱粉ペースト、三ケイ酸マグネシウム、タルク、トウモロコシ澱粉、ケラチン、コロイド状シリカ、ジャガイモ澱粉、尿素、中鎖長のトリグリセリド、デキストラン、および固形物、半固形物または液体形態の製剤の製造に用いるのに適している他のキャリヤーを挙げることができる。更に、助剤、安定剤、増粘剤、および着色料、および香料を用いることができる。安定化乾燥剤の例としては、好ましくは０．１％以上の濃度のトリウロース挙げられる（例えば、米国特許第５，３１４， ６９５号明細書を参照されたい）。
XII．Ｄ．投薬量
個人の要望によって変化することがあるが、医薬組成物の有効料についての最適範囲の決定は、当該技術分野の技術の範囲内にある。ヒトの用量は、動物の研究から外挿することができる（「レミントンの薬科学」第１８版、Gennaro監修、Katocs et al.,第２７章，Mack Publishing Co.、イーストン、ペンシルバニア州、１９９０年）。一般に、当業者が調整することができる医薬組成物の有効料を提供するのに必要な投薬量は、年齢、健康、肉体条件、体重、患者の疾患または障害の種類および程度、治療の頻度、同時治療（もし、行う場合には）の性質、および所望な（複数の）効果の性質および範囲によって変化する。例えば、「グッドマンとギルマンの治療薬の薬理学的基礎」第９版、Hardman et al.監修、Nies et al.,第３章、McGraw-Hill、ニューヨーク、ニューヨーク州、１９９６年を参照されたい。
治療組成物の用量は、治療を行う疾患の重篤度および感受性、数日間から数ヶ月間、または治癒しまたは疾患状態の縮小が達成されるまで継続する治療経路によって変化する。最適投与計画は、患者の身体における薬剤蓄積の測定により計算することができる。「患者」という用語は、動物（例えば、ネコ、イヌ、およびウマ）並びにヒトを包含するものである。通常の技術者であれば、最適投薬量、投与法、および反復速度を容易に決定することができる。最適投薬量は個々の治療薬の相対的効力によって変化することがあり、一般にイン・ビトロおよびイン・ビボ動物モデルで有効であることが見出されているＥＤ５０に基づいて予測することができる。
一般に、異なる方法にに対する治療薬の効果は広範囲に変化し、用量は典型的にはヒトではラットの（単位体重当たり）２０、３０または４０分の１であるので、用量（ターゲッティング可能な構築物または複合体の投与量）の範囲は広い。一般に、投薬量は、体重１ｋｇ当たり０．０１μｇ−１００ｇであり、好ましくは０．０１μｇ−１０ｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１０ｍｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１ｍｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１００μｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−ｔｏ１０μｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１μｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１０μｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−１μｇ／ｋｇ体重であり、０．０１μｇ−０．１μｇ／ｋｇ体重であり、範囲は、前の濃度範囲の境界に基づいている。従って、投薬量の上記説明は、１００−１０ｇ／ｋｇ体重、１０ｇ−１０００ｍｇ／ｋｇ体重、１０００ｍｇ−１００ｍｇなどの範囲内の投薬量を包含する。
投薬は、毎日、週、月または年に１回以上、または２−２０年に１回行うことができる。当該技術分野で通常の技術を有するものであれば、体液または組織におけるターゲッティング可能な構築物または複合体の滞留時間および濃度の測定値に基づいて投与の反復速度を容易に予測することができる。良好な治療に続いて、疾患状態の再発を防止するために患者が維持療法を受けるのが望ましいことがあり、治療薬は０．０１μｇ−１００ｇ／ｋｇ体重、１日１回以上から、２０年毎に１回の範囲の維持用量で投与される。
特異的用量は、患者の近似的体重または表面積に従って計算される。適当な投薬量の決定における他の因子としては、治療または予防する疾患または疾病、疾患の重篤度、投与経路、患者の年齢、性別、および医学的条件を挙げることができる。治療のための適当な投薬量を決定するのに必要な計算の更なる改善は、特に本明細書に開示された投薬情報および分析法を考慮して当業者によって日常的に行われる。投薬量は、適当な用量−応答データーと共に用いられる投薬量を決定するための既知分析法を使用することによって決定することもできる。
個別の患者の投薬量は、疾患の進行を観察しながら、調整することができる。患者におけるターゲッティング可能な構築物または複合体の血中レベルを測定して、有効濃度に達するかまたはこれを保持するのに投薬量を調整する必要があるかどうかを見ることができる。ファーマコゲノミックス（pharmacogenomics）を用いて、どのターゲッティング可能な構築物および／または複合体、およびその総薬量が所定の個人に最も有効と思われるかを決定することができる（Schmitz et al., Clinica Chimica Acta 308:43-53, 2001; Steimer et al., Clinica Chimica Acta 308:33-41, 2001）。
XIII．文献、特許明細書、および特許出願国際公開明細書
XIH．Ａ．科学文献
Bamias, A., and Epenetos, A. A.「生体接合体による癌の診断および治療の２段階法」, Antibody, Immuno接合体s, Radiopharm. 1992; 5:385-395.
Barbet, J., Peltier, P., Bardet, S., Vuillez, JP., Bachelot, I., Denet, S., Olivier, P., Lecia, F., Corcuff, B., Huglo, D., Proye, C., Rouvier, E., Meyer, P., Chatal, J. F. 「Radioimmunodetection of medullary thyroid癌 usingインジウム-111二価ハプテンおよび抗−ＣＥＡ ｘ 抗−ＤＴＰＡ−インジウム二重特異性抗体を用いる髄質甲状腺癌の放射線免疫検出」. J. Nucl. Med. 1998; 39:1172-1178.
Bos, ES., Kuijpers, WHA., Meesters-Winters, M., Pham, DT., deHaan, AS., van Doormalen, Am., Kasperson, F. M., vanBoeckel, CAA and Gouegeon-Bertrand, F.「癌の放射線免疫療法における二段階法としてのDNA-DNAハイブリダイゼーションのイン・ビボ評価」. Cancer Res. 1994; 54:3479-3486.
Gautherot, E., Bouhou, J., LeDoussal, J-M., Manetti, C., Martin, M., Rouvier, E., Barbet, J.「二重特異性抗体でターゲッティングしたヨウ素−１３１を標識した二価ハプテンを用いる結腸癌異種移植片の治療」. Cancer suppl. 1997; 80:2618-2623.
Gautherot, E., Bouhou, J., Loucif, E., Manetti, C., Martin, M., LeDoussal, J. M., Rouvier, E., Barbet, J.「抗−ＣＥＡ ｘ 抗−インジウム−ＤＴＰ二重特異性抗体と組み合わせたヨウ素−１３１を標識した二価ハプテンを用いるヌードマウスのＬＳ １７４Ｔ結腸癌の放射線免疫療法」. J. Nucl. Med. Suppl. 1997; 38:7p.
Goodwin, D. A., Meares, CF., McCall, MJ., McTigue, M., Chaovapong, W. 「インジウム−１１１を標識した二官能価ハプテンを用いるネズミ腫瘍の予備ターゲッティングした免疫シンチグラフィー」. J. Nucl. Med. 1988; 29:226-234.
Greenwood, F. C. and Hunter, W. M.「高特異的放射性のＩ−１３１標識したヒト成長ホルモンの調製」. Biochem. 1963; 89:114-123.
Hawkins, G. A., McCabe, R. P., Kim, C.-H., Subramanian, R., Bredehorst, R., McCullers, G. A., Vogel, C.-W., Hanna, M. G. Jr., and Pomata, N.「アフィニティー系でジヒドロホレートレダクターゼおよびメトトレキセートを用いる放射性核種の予備ターゲッティングしたモノクローナル抗体への送達」.Cancer Re1993; 53: 2368-2373.
Kranenborg, M. h., Boerman, O. C., Oosterwijk-Wakka, j., weijert, M., Corstens, F., Oosterwijk, E.「腎細胞癌の二相ターゲッティングのための抗腎細胞癌ｘ抗キレート二重特異性モノクローナル抗体の開発および特性決定」. Cancer Res.(suppl) 1995; 55:5864s-5867.
Penefsky, H. S.「牛肉心臓Ｆ１によるリガンド結合の測定のための遠心分離したカラム処置。パートＧ」. Methods Enzymol. 1979; 56:527-530.
Schuhmacher, J., Klivenyi, G., Matys, R., Stadler, M., Regiert, T., Hauser, H., Doll, J., Maier-Borst, W., Zoller, M.「陽電子放射断層撮影法を用いる免疫シンチグラフィーに適する二重特異性抗体とガリウムキレートを用いるヌードマウスにおける多段階腫瘍ターゲッティング」. Cancer Res. 1995; 55,115-123.
Sharkey, RM., Karacay, H. Griffiths, GL., Behr, TM., Blumenthal, RD., Mattes, MJ., Hansen, HJ., Goldenberg, DM.「結腸直腸癌の放射免疫療法のためのストレプトアビジン-抗-癌胎児性抗原抗体、放射能標識ビオチンの予備ターゲッティング法の開発。ヒト結腸癌異種移植片モデルでの研究」. Bio接合体 Chem 1997; 8: 595-604.
Stickney, DR., Anderson, LD., Slater, JB., Ahlem, CN., Kirk, GA., Schweighardt, SA and Frincke, JM.「二官能価抗体：結腸直腸癌の画像化のための放射性医薬送達系」. Caiacer Res. 1991; 51: 6650-6655.
XIII．Ｂ．米国特許明細書
第６，３５８，４８９号明細書、「Ｆ−１８陽電子放射断層撮影法のためのタンパク質およびペプチドのフッ素化」
第６，３３１，１７５号明細書、「器官および組織の画像化および治療の方法およびキット」
第６，３１９，５００号明細書、「免疫接合体による感染症の検出および治療」
第６，３０６，３９３号明細書、「抗−ＣＤ２２抗体を用いるＢ細胞悪性疾患の免疫療法」
第６，２５４，８６８号明細書、「グリコシル化ヒト化Ｂ細胞特異性抗体」
第６，２２８，３６２号明細書、「予備ターゲッティング法を用いるホウ素中性子捕捉療法」
第６，１８７，２８７号明細書、「Ｂ細胞リンパ腫および白血病細胞に特異的な免疫接合体およびヒト化抗体」
第６，１８７，２８４号明細書、「Ｆ−１８陽電子放射断層撮影法のためのタンパク質およびペプチドのフッ素化」
第６，１８３，７４４号明細書、「抗−ＣＤ２２抗体を用いるＢ細胞悪性疾患の免疫療法」
第６，１３２，７１８号明細書、「多段階カスケード増強ワクチン」
第６，１２６，９１６号明細書、「放射性金属結合ペプチド類似体」
第６，１２０，７６８号明細書、「Ｄｏｔａ−ビオチン誘導体」
第６，０９６，２８９号明細書、「手術時、血管内および内視鏡による腫瘍および病変の検出、生験および療法」
第６，０９０，３８１号明細書、「αガラクトシルエピトープで標識した抗体による免疫応答の刺激」
第６，０８３，４７７号明細書、「非抗原性毒素−接合体、およびインターナリゼーション受容体系の融合タンパク質」
第６，０７７，４９９号明細書、「癌のターゲッティングした組合せ免疫療法」
第６，０７１，４９０号明細書、「ガリウム−６８キレートを用いる陽電子放射断層撮影法」
第６，０１０，６８０号明細書、「放射性核種を基剤とする放射免疫検出および放射免疫療法のためのタンパク質のチオール化」
第５，９７６，４９２号明細書、「ターゲッティングした放射線療法のための放射性リンを標識したタンパク質」
第５，９６５，１３１号明細書、「診断および治療薬の標的部位への送達」
第５，９５８，４０８号明細書、「診断および治療薬の標的部位への送達」
第５，９２２，３０２号明細書、「ビオチン／アビジン−金属キレート化タンパク質接合体を用いる病変の検出と療法」
第５，８７４，５４０号明細書、「ＣＤＲを移植したＩＩＩ型の抗−ＣＥＡヒト化マウスモノクローナル抗体」
第５，８５１，５２７号明細書、「治療薬の抗体ターゲッティングの方法」
第５，８４６，７４１号明細書、「予備ターゲッティング法を用いるホウ素中性子捕捉療法」
第５，８４３，３９７号明細書、「移植片拒絶反応の細胞毒性療法」
第５，７９８，１００号明細書、「多段階カスケード増強ワクチン」
第５，７８９，５５４号明細書、「Ｂ細胞リンパ腫および白血病細胞に特異的な免疫接合体およびヒト化抗体」
第５，７７６，０９５号明細書、「器官および組織の画像化および治療の方法およびキット」
第５，７７６，０９４号明細書、「器官および組織の画像化および治療の方法およびキット」
第５，７７６，０９３号明細書、「器官および組織の画像化および治療の方法」
第５，７７２，９８１号明細書、「放射性核種を基剤とする放射免疫検出および放射免疫療法のためのタンパク質のチオール化」
第５，７５３，２０６号明細書、「黄体形成ホルモン放出ホルモンの放射性金属結合類似体」
第５，７４６，９９６号明細書、「放射性核種を基剤とする放射線検出および放射線療法のためのタンパク質のチオール化」
第５，７３６，１１９号明細書、「ビオチン／アビジン−金属キレート化タンパク質接合体を用いる病変の検出および療法」
第５，７２８，３６９号明細書、「ターゲッティング放射線療法のためのタンパク質の放射性リン標識」
第５，７１６，５９５号明細書、「一価の抗体断片による手術時、血管内および内視鏡による腫瘍および病変の検出、生験および療法」
第５，７０５，１５８号明細書、「感染性および炎症性病変の治療」
第５，６９８，４０５号明細書、「免疫原性の減少方法」
第５，６９８，１７８号明細書、「多剤耐性表現型のターゲッティングのための多重特異性免疫接合体および抗体複合体」
第５，６９７，９０２号明細書、「器官および組織の画像化および治療方法」
第５，６８６，５７８号明細書、「多剤耐性表現型のターゲッティングのための多重特異性免疫接合体および抗体複合体」
第５，６７７，４２７号明細書、「感染性および炎症性病変の検出および療法のためのキメラ抗体」
第５，６７０，１３２号明細書、「腎吸収を減少させるための改質放射性抗体断片」
第５，６３７，２８８号明細書、「感染性および炎症性病変の検出および療法のためのキメラ抗体」
第５，６３５，６０３号明細書、「免疫接合体の調製と使用」
第５，６３２，９６８号明細書、「循環器疾患の検出」
第５，６１２，０１６号明細書、「抗体と二官能価リガンドの接合体」
第５，６０９，８４６号明細書、「感染性または自己免疫疾患の放射能標識抗体による細胞毒性療法」
第５，６０１，８２５号明細書、「毒素と薬物の治療接合体」
第５，５４１，２９７号明細書、「毒素と薬物の治療接合体」
第５，５２５，３３８号明細書、「ビオチン／アビジン接合体による病変の検出および療法」
第５，５１４，３６３号明細書、「抗体断片の放射能標識の方法」
第５，４８２，６９８号明細書、「ビオチン／アビジンポリマー接合体による病変の検出および療法」
第５，４４３，９５３号明細書、「免疫接合体の調製と使用」
第５，４３９，６６５号明細書、「感染性および炎症性病変の検出と治療」
第５，３６４，６１２号明細書、「循環器疾患の検出」
第５，３３４，７０８号明細書、「一価抗体断片の放射能標識の方法」
第５，３３２，５６７号明細書、「免疫接合体による感染症の検出および治療」
第５，３２８，６７９号明細書、「タンパク質のテクネチウム／レニウム標識の方法」
第５，１２８，１１９号明細書、「ｆ（ａｂ’）２断片のテクネチウム／レニウム標識の方法」
第５，１２０，５２５号明細書、「癌の放射能標識抗体の細胞毒性療法」
第５，１０１，８２７号明細書、「リンパ管造影および器官画像化の方法およびキット」
第５，０６１，６４１号明細書、「タンパク質の放射能標識の方法」
第４，９３２，４１２号明細書、「手術時および内視鏡的腫瘍検出および療法」
第４，９２５，６４８号明細書、「感染性および炎症性病変の検出および治療」
第４，９００，６８４号明細書、「ヒト抗−マウス抗体擬陽性を離れたＣＥＡイムノアッセイ」
第４，８２４，６５９号明細書、「抗体接合体」
第４，７９２，５２１号明細書、「非酵素的免疫組織化学的染色系および試薬」
第４，７３７，４５３号明細書、「分離特異性結合物質を用いるサンドイッチイムノアッセイ」
第４，７３５，２１０号明細書、「リンパ管造影および器官画像化の方法およびキット」
第４，６９９，８８０号明細書、「モノクローナル抗イディオタイプ抗体の産生方法」
第４，６８０，３３８号明細書、「二官能価リンカー」
第４，６２４，８４６号明細書、「抗体局在化の標的特異性および非標的診断薬および治療薬のクリアランスの増強方法」
第４，５９５，６５４号明細書、「血清中の免疫複合体の検出方法」
XIII．Ｃ．ＰＣＴ特許出願国際公開明細書
ＷＯ ０２／１２３４７号明細書、「慢性骨髄性白血病の免疫療法」
ＷＯ ０２／０８２９３号明細書、「多価標的結合タンパク質」
ＷＯ ０２／０２１５０号明細書、「安定な放射性ヨウ素接合体およびそれらの合成方法」
ＷＯ ０１／９７８５５号明細書、「癌および感染症のターゲッティングした組合せ免疫療法」
ＷＯ ００／７４７１８号明細書、「Ｂ細胞を標的とする抗体を用いる自己免疫疾患の免疫療法」
ＷＯ ００／６７７９５号明細書、「抗−Ｃｄ２２抗体を用いるＢ細胞悪性腫瘍の免疫療法」
ＷＯ ００／３３８７４号明細書、「予備ターゲッティング法を用いるホウ素中性子捕捉療法」
ＷＯ ００／２１５７３号明細書、「ジスルフィド含有ターゲッティングベクターの位置特異性標識」
ＷＯ ００／１６８０８号明細書、「化学療法薬の標的特異的毒性を増加する方法および組成物」
ＷＯ ００／１４５３７号明細書、「癌および感染性疾患における多剤耐性の診断」
ＷＯ９９／６６９５１号明細書、「予備ターゲッティング診断および療法のための二重特異性抗体の使用」
ＷＯ ９９／５９６３３号明細書、「二重特異性抗−ＨＬＡクラスＩＩ不変鎖 ｘ 抗病原体抗体を用いる治療薬」
ＷＯ ９９／５６７９２号明細書、「ガリウム−６８キレートを用いる陽電子放射断層撮影法」
ＷＯ ９９／４６３８９号明細書、「組換えオンコナーゼ、および組換えオンコナーゼの化学接合体および融合タンパク質」
ＷＯ ９９／３０７４５号明細書、「Ｄｏｔａ−ビオチン誘導体」
ＷＯ ９９／２４４７２号明細書、「反応性ケトン基を有するグリコシル化抗体および抗体断片」
ＷＯ ９９／１１５９０号明細書、「Ｆ−１８陽電子放射断層撮影法のためのタンパク質およびペプチドのフッ素化」
ＷＯ ９９／１１２９４号明細書、「安定な放射性ヨウ素接合体およびそれらの合成方法」
ＷＯ ９８／５０４３５号明細書、「悪性腫瘍細胞に対して指定したＯｎｃタンパク質を含んでなる免疫毒素」
ＷＯ ９８／４２３７８号明細書、「抗−ＣＤ２２抗体を用いるＢ細胞悪性腫瘍の免疫療法」
ＷＯ ９８／３４９５７号明細書、「±ガラクトシルエピトープで標識した抗体による免疫応答の刺激」
ＷＯ９８／１６２５４号明細書、「非抗原性毒素−接合体、およびインターナリゼーション受容体系の融合タンパク質」
ＷＯ ９８／０８５４８号明細書、「安定な放射性ヨウ素接合体およびそれらの合成方法」
ＷＯ ９８／０４９１７号明細書、「予備ターゲッティング法 Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ Ｉｎｃ．を用いるホウ素中性子捕捉療法」
ＷＯ ９８／０４２９３号明細書、「ビオチン−キレート接合体を用いる病変の検出および治療の改良」
ＷＯ ９８／０２１９２号明細書、「放射性金属ペプチド類似体」
ＷＯ ９７／４１８９８号明細書、「癌のターゲッティングした組合せ免疫療法」
ＷＯ ９７／４０３８４号明細書、「固相支持体による生物学的材料の質量スペクトル分析法およびＸ線結晶化分析」
ＷＯ ９７／３４６３６号明細書、「抗−癌胎児性抗原抗イディオタイプ抗体のヒト化、および腫瘍ワクチンとしてのおよびターゲッティング用途の使用」
ＷＯ ９７／３４６３２号明細書、「グリコシル化したヒト化Ｂ細胞特異的抗体」
ＷＯ ９７／２３２３７号明細書、「多段階カスケード増強ワクチンの効力を高めるための免疫接合体の使用」
ＷＯ ９７／１１３７０号明細書、「複数のジスルフィド結合およびチオール置換したその接合体を有する組換えタンパク質」
文献、特許明細書、および特許出願明細書、および本明細書で記載されまたは引用されている総ての他の書類および電子的に入手可能な情報の内容は、それぞれの個々の公表内容が具体的且つ個別的に開示の一部として本明細書に引用されたのと同じ程度まで、その開示の一部として本明細書に引用される。本出願人らは、任意の上記文献、特許明細書、および特許出願明細書、および他の書類からの任意のおよび総ての材料および情報を本出願明細書に物理的に組込む権利を保有する。
本明細書で例示的に記載した本発明は、本明細書に具体的には開示されていない任意の要素または複数の要素、制限または複数の制限の非存在下で適当に実施することができる。例えば、「含んでなる」、「包含する」、「含む」などの用語は広義に且つ制限なしで読むべきである。更に、本明細書で用いられる用語と表現は、制限ではなく説明の用語として用いられてきたのであり、示され且つ記載される特徴またはその部分の任意の同義語を除外する用語および表現の使用には意図はないが、記載された本発明の範囲内で様々な修飾が可能であることが分かる。従って、本発明を好ましい態様および任意の特徴によって具体的に開示してきたが、本発明で具体化されて本明細書に開示されている本発明の修飾および変更は当業者が再分類することができ、このような修飾および変更は本発明の範囲内にあると考えられることを理解すべきである。
本発明を、本明細書では広汎且つ一般的に記載してきた。包括的開示中に含まれるより狭い種および亜属の群のそれぞれも、本発明の一部を形成する。これは、摘出材料が具体的に本明細書に列挙されるかどうかに関わらず、属から任意の主題を取り出すという条件または消極的制限を有する本発明の包括的記載を包含している。
更に、本発明の特徴または態様をマーカッシュ（Ｍａｒｋｕｓｈ）群に関して説明する場合には、当業者であれば、本発明はマーカッシュ群の成員の任意の個々の一員に関しても記載されることを認めるであろう。
実施例
試薬
モノ−ＤＰＴＡペプチド
ＩＭＰ ２３３ Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２
本明細書に記載
ＩＭＰ ２４０ Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＰＴＡ）−Ｃｙｓ−ＮＨ２
本明細書に記載
ジ−ＤＰＴＡペプチド
ＩＭＰ １５６ Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２
Boerman et al.,「腎細胞癌の予備ターゲッティング：二価キレートを用いる腫瘍ターゲッティングの改良」， Cancer Res. 59:4400-5, 1999を参照。
ＩＭＰ １９２ Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｌｙｓ（ＴＳＣＧ−Ｃｙｓ）−ＮＨ２
Karacay et al.,「ヒト化抗−ＣＥＡ ｘ ネズミ抗−［Ｉｎ−ＤＴＰＡ］二重特異性抗体構築物および（９９ｍ）Ｔｃ−／（１８８）再標識ペプチドを用いる癌の予備ターゲッティング研究の実験」，Bioconjug Chem. 11:842-54, 2000を参照。
ＩＭＰ ２２２ Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２
本明細書に記載
ＩＭＰ ２４０ Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｃｙｓ−ＮＨ２
本明細書に記載
テトラ−ＤＰＴＡペプチド
ＩＭＰ ２４６ ［Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２］２（ａｋａ［ＩＭＰ ２２２］２）
本明細書に記載
二重特異性抗体
ｈＭＮ−１４ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２
Hansen et al.,「予備ターゲッティング診断および療法のための二重特異性抗体の使用」という標題のＰＣＴ出願国際公開ＷＯ ９９／６６９５１号明細書を参照されたい。
ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２
このｈＭＮ−１４ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２の突然変異誘導体であって、その２５３番目のアミノ酸残基がイソロイシンからアラニンに置換されているものは、２００２年３月１日出願の「クリアランス速度を高めるための二重特異性抗体点突然変異」という標題の米国特許仮出願連続番号第６０／３６１，０３７号明細書（Docket 無．IMM 169; Atty Docket 無．018733-1037）に記載されている。
実施例１ モノ−ＤＴＰＡペプチドＩＭＰ ２３３の合成
ＩＭＰ ２３３ Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２
ＩＭＰ ２３３ペプチドは、Ｆｍｏｃ法およびリンクアミド樹脂（０．２５ｇ，０．８ミリモル／ｇ置換）を用いる固相ペプチド合成によって合成した。保護したアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨおよび無水酢酸を、その順で樹脂に加えた。
Ａｌｏｃ側鎖保護基を外し、ＤＴＰＡテトラ−ｔ−ブチルエステルを加えた。ペプチドを開裂し、ＨＰＬＣによって精製し、精製ペプチド（ＥＳＭＳ ＭＨ＋ １００２）０．００９ｇを得た。
実施例２ ジ−ＤＴＰＡペプチドＩＭＰ １５６の合成
ＩＭＰ １５６ Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２
ＩＭＰ １５６ペプチドは、Ｆｍｏｃ法およびリンクアミド樹脂（またはシーバーアミド樹脂）を用いる固相ペプチド合成によって合成した。保護したアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨおよび無水酢酸をその順に樹脂に加えた。
Ａｌｏｃ側鎖保護基を外し、ＤＴＰＡテトラ−ｔ−ブチルエステルを加えた。ペプチドを開裂し、ＨＰＬＣによって精製した（ＥＳＭＳ ＭＨ＋ １３７７）。
実施例３ ジ−ＤＴＰＡペプチドＩＭＰ ２２２の合成
ＩＭＰ ２２２ Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２
ＩＭＰ ２２２ペプチドは、Ｆｍｏｃおよびリンクアミド樹脂（０．２５ｇ，０．８ミリモル／ｇ置換）を用いる固相ペプチド合成によって合成した。保護したアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよび無水酢酸をその順に樹脂に加えた。Ａｌｏｃ側鎖保護基を外し、ＤＴＰＡテトラ−ｔ−ブチルエステルを加えた。ペプチドを開裂し、ＨＰＬＣによって精製し、精製ペプチド０．１２５ｇを得た（ＥＳＭＳ ＭＨ＋ １３３３）。
実施例４ テトラ−ＤＴＰＡペプチドＩＭＰ ２４６の合成
ＩＭＰ ２４６ ［Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２］２
ペプチド（ＩＭＰ ２２２、３．９８ｘ１０−５モル、ＡＣ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２）０．０５３１ｇを、１．０ｍｌ ＤＭＳＯ、０．２ｍｌジイソプロピルエチルアミン、および０．３ｍｌ水を含む溶液に溶解した。溶液を室温で４日間インキュベーションした後、逆相ＨＰＬＣによって精製し、ジスルフィド（ＥＳＭＳ ＭＨ＋ ２６６３）０．０３３６ｇを得た。
実施例５ ＩＭＰ ２４６キット
ペプチド（０．００２２ｇ）を、クエン酸０．４１８ｇおよびｐＨ ４．３で緩衝したＨＰＣＤ １０．０６ｇを含む溶液１００ｍｌに溶解した。溶液を０．２２μＭ Ｍｉｌｌｅｘ ＧＶフィルターで１ｍｌ分量で滅菌濾過してバイアルに入れ、直ちに冷凍して凍結乾燥した。
実施例６ ＩＭＰ ２４６のＩｎ−１１１標識
Ｉｎ−１１１（０．４ｍＣｉ）を水０．５ｍｌで希釈し、凍結乾燥したＩＭＰ ２４６キットに加えた。溶液を、室温で１０分間インキュベーションした。次に、０．５Ｍ ＮａＯＡｃ緩衝液ｐＨ７．１７中２．５６ｘ１０−５Ｍインジウムを含む溶液の１．５ｍｌ分量を、キットに加えた。
実施例７ ｈＭＮ−１４１ｇＧ (1253A) −（７３４ｓｃＦｖ） ２ を含んでなるジ−ＤＴＰＡペプチドＩＭＰ １９２複合体のＨＰＬＣによるアフィニティーの評価
Ｉｎ−ＤＴＰＡペプチドの抗−Ｉｎ−ＤＴＰＡ抗体ｈＭＮ−１４１ｇＧ(1253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２への結合を、サイズ排除ＨＰＬＣによって検討した。ｂｓＭＡｂをクロラミンＴ（Greenwood and Hunter）を用いて放射性ヨード化した。放射性ヨード化したｂｓＭＡｂｓのＣＥＡ、ＷＩ２（ラット抗−ＭＮ−１４イディオタイプ抗体）、および放射能標識したペプチジルＤＴＰＡキレートへの結合を、分析用サイズ排除ＨＰＬＣで検討した。１０−２０ｘモル過剰量のＣＥＡを投与したところ、放射性ヨード化したｂｓＭＡｂの約９０％がＣＥＡに結合した。ｂｓＭＡｂは、放射能標識したインジウム−ＤＴＰＡキレートと複合体形成した（ＩＭＰ−１５６またはＩＭＰ−１９２）。
ＩＭＰ １９２キットをＴｃ−９９ｍ ２０．９ｍＣｉで標識した。キットからの分量を、ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２で下記のモル比（ペプチド／Ａｂ）１：５、１：１および２０：１で希釈して混合した。ペプチド／抗体混合物、ペプチドのみ、および抗体のみを、０．２ Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ ６．８を１ｍｌ／分で溶出したＢｉｏ−Ｓｉｌ ＳＥＣ ２５０ ３００ ｍｍ ｘ ７．８ ｍｍ ＨＰＣカラムで検討した。
ＨＰＬＣトレース（図３−７）は、本質的に１種類のペプチド／抗体複合体のみが形成されることを示している。ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２の既知の標準物は、カラムから約９．４１分に溶出した（図３）。Ｔｃ−９９ｍ ＩＭＰ １９２の既知の標準物は、カラムから約１４． ８５分に溶出した（図４）。ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２対Ｔｃ−９９ｍ ＩＭＰ １９２の１：１混合物をカラムに加えたときには、約９．５６分に１個のピークのみが見られた（図５）。対照的に、ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２対Ｔｃ−９９ｍ ＩＭＰ １９２の１：５混合物をカラムに加えたときには、２個の主要ピークが１本は約９．５６分［ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２］に、また他のピークは約１４．８０分（Ｔｃ−９９ｍ ＩＭＰ １９２）に見られた（図６）。ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２対Ｔｃ−９９ｍ ＩＭＰ １９２の２０：１混合物をカラムに加えたときには、１本のピークのみが９．５６分に見られた（図７）。
実施例８ ターゲッティング可能な複合体の化学量論
この実施例では、ターゲッティング可能な二価構築物ＩＭＰ ２４６をｂｓＡｂｓ ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２およびｈＭＮ−１４ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２と混合するときに生じる様々な種のターゲッティング可能な複合体の化学量論を決定する目的でデザインした実験を説明する。
ペプチドＩＭＰ ２４６を、クエン酸０．４１８ｇとｐＨ ４．３で緩衝したＨＰＣＤ １０．０６ｇを含む溶液１００ｍｌに溶解した。溶液を０．２２μＭ Ｍｉｌｌｅｘ ＧＶフィルターで１ｍｌ分量で滅菌濾過してバイアルに入れ、直ちに冷凍して凍結乾燥した。
ＩＭＰ ２４６は、下記の方法でＩｎ−１１１で標識した。Ｉｎ−１１１を水０．５ｍｌで希釈して、凍結乾燥したＩＭＰ ２４６キットに加えた。溶液を室温で１０分間インキュベーションした。次に、０．５Ｍ ＮａＯＡｃ緩衝液ｐＨ ７．１７中２．５６ ｘ １０−５インジウムを含む溶液の１．５ｍｌ分量をキットに加えた。
Ｉｎ−１１１で標識したＩＭＰ ２４６をｂｓＡｂと１：１０（ＩＭＰ ２４６：ｂｓＡｂ）のモル比で混合した後、サイズ排除ＨＰＬＣによって検討した。結果を図８に示す。突然変異体ｂｓＡｂ、すなわちｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２と混合したところ、Ｉｎ−１１１標識の約９０％が８．５分の明確でシャープなピークに見出された（図８Ａ）。ｈＭＮ−１４ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２と混合したところ、ピークは幾分幅広く、Ｉｎ−１１１標識約８３％を含んでなり、７．５分に見出された（図８Ｂ）。対照的に、ＩＭＰ １９２を用いたときに形成された抗体：ペプチド複合体は９．５分に見られた（図７）。
実施例９ モノ−ＤＴＰＡペプチドＩＭＰ ２４０の合成
ＩＭＰ ２４０ Ａｃ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｃｙｓ−ＮＨ２
ＤＴＰＡのテトラｔ−ブチルエステル（J Med Chem 1996 Aug 30; 39(18):3451-60，「新たに合成したモノ反応性ＤＴＰＡ誘導体を用いるポリペプチドのインジウム−１１１標識のキレート剤としてのジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の再評価」．Arano Y, Uezono T, Akizawa H, Ono M, Wakisaka K, Nakayama M, Sakahara H, Konishi J, Yokoyama A.）１．４２４ｇを、ジオキサン５．５ｍｌに溶解した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド０．３０４ｇを加えた後、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）０．４ｍｌを加え、室温で１時間混合した。残りの試薬Ｎａ２ＣＯ３ １．０４９ｇおよび Ａｃ−Ｌｙｓ−ＯＨ ０．８６２ｇを混合したのち、水５ｍｌを加えた。次に、リシン／カーボネート溶液を、活性化したＤＴＰＡ試薬と混合した。反応混合物を室温で一晩攪拌した後、１Ｍクエン酸２０ｍｌで反応を停止した。クエン酸溶液をクロロホルム２ ｘ ５０ｍｌで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧濃縮して、粗生成物２．０３１ｇを得た。粗生成物をジオキサン６ｍｌに溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド０．２６４ｇおよびＤＩＣ ０．３８ｍｌと混合した。反応を室温で２．５時間混合した後、Ｈ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＮＨ２ ０．４１４ｇを０．３ｍｌジイソプロピルエチルアミンと共に加えた。反応を室温で一晩攪拌した後、濾過した。固形生成物をジオキサンで洗浄し、濾液を合わせた。粗生成物を減圧濃縮した。粗生成物をトリフルオロ酢酸２５ｍｌ、トリイソプロピルシラン１ｍｌおよびアニソール１ｍｌの開裂溶液で処理した。開裂反応混合物を、３．５時間後に２ ｘ ４０ｍｌエーテルに投入した。ペプチドは遠心分離によって回収した。ペプチド沈殿物を３ ｘ ３０ｍｌエーテルで洗浄した。次に、沈澱を乾燥し、逆相ＨＰＬＣによって精製して、所望な生成物ＭＮａ＋６８８ ０．２１５２ｇを得た。
実施例１０ 表面プラスモン共鳴を用いる結合の検討
Ｉｎ−ＤＴＰＡペプチドの抗−Ｉｎ−ＤＴＰＡ抗体ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦＶ）２への結合を、単一のＤＰＴＡ基と、遊離スルフヒドリル基を有する第二の分子とジスルフィド橋を形成するのに用いることができる単一のＣｙｓ残基を含んでなるＩＭＰ ２４０ペプチドＡｃ−Ｌｙｓ（ＤＰＴＡ）−Ｃｙｓ−ＮＨ２を用いるアフィニティーブロッキングの研究によって検討した。
ＩＭＰ ２４０をコーティングしたＢＩＡｃｏｒｅチップの調製
結合研究は、ＢＩＡｃｏｒｅによって勧められるジスルフィド結合を用いるＩＭＰ ２４０をコーティングしたチップで行った。チップ表面は、それぞれの分析の後に、上記のＨＢＳ−Ｉｎ−クエン酸緩衝液中０．０２５Ｍ ｈ−ＤＴＰＡ １００μｌを用いて再生した。結合研究はピコモルの抗体を用いて行ったので、結合は、置換洗浄の後に残ったごく微量のＩｎ−ＤＴＰＡに対して極めて感受性が高かった。
ｈＭＮ−１４ＩｇＧ (I253A) （７３４ＳｃＦｖ） ２ へのＩＭＰ １５６の結合
アフィニティー研究は、ＩＭＰ １５６をｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２と１：１の比率で混合したときには、ＩＭＰ ２４０チップへの抗体の結合はブロックされたことを示している。これは、いずれの７３４ 結合部位も単一のペプチド上で２個のＤＴＰＡで満たされたことを示している。
ｈＭＮ−１４ＩｇＧ （１２５３Ａ） −（７３４ｓｃＦｖ） ２ へのＩＭＰ ２３３の結合
アフィニティー研究は、４当量のモノ−ＤＴＰＡペプチドを抗体と予備混合したときにも、抗体の結合は完全にはブロックされなかったことを示している。特定の理論に束縛しようとするものではないが、これは恐らくは、試験中に抗体モノ−ＤＴＰＡペプチドの一部が解離することによるものと思われる。
ｃ７３４ ＩｇＧへのＩＭＰ １５６の結合の結合研究
研究は、ｃ７３４−ＩｇＧを用いて、このＩｇＧのＩｎ−ＤＴＰＡペプチド結合挙動をｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２と比較する目的で行った。ｃ７３４のチップへの結合をブロックするには、２当量以上のＩＭＰ １５６を加える必要があったが、ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２は１当量のＩＭＰ １５６でブロックされた。
これは、ＩＭＰ １５６のいずれのＩｎ／ＤＴＰＡもｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２の両方のｓｃＦｖに同時に結合するが、ＩＭＰ １５６のＩｎ／ＤＴＰＡのみがｃ７３４−ＩｇＧの結合アームに結合し、ＩＭＰ １５６のもう一つの分子のもう一つのＩｎ／ＤＴＰＡはｃ７３４−ＩｇＧの他の結合アームをブロックするのに必要であったことを示唆している。
ＩＭＰ ２３３ｃ７３４ ＩｇＧへの結合の結合研究
アフィニティー研究は、４：１のＩＭＰ ２３３／ｃ７３４ ＩｇＧであっても、抗体のＩＭＰ ２４０チップへの結合を完全にブロックできなかったことを示した。
この実験は、単一のＩｎ−ＤＴＰＡを有するペプチド（ＩＭＰ ２３３）では、ｃ７３４ ＩｇＧのＩＭＰ ２４０チップへの結合を完全にブロックすることは困難であったことを示した。これは、一定量の遊離ｃ７３４ ＩｇＧ（または結合に利用可能な少なくとも１本の結合アーム）があったか、またはチップ上のＩｎ−ＤＴＰＡがＩＭＰ ２３３のＩｎ−ＤＴＰＡを置換することができたことを意味する。ＩＭＰ １５６が、ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２（ペプチド：抗体を１：１の比率で混合したとき）のＩＭＰ ２４０チップへの結合を完全にブロックしたという事実は、ＤＴＰＡ 結合部位が両方とも満たされており、ｉｎ２−ＩＭＰ １５６に対するｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２のアフィニティーは、ａｃ７３４ ＩｇＧ結合アームに対する単一のＩｎ−ＤＴＰＡのアフィニティーより遙かに高いことを示した。
実施例１１ ＩＭＰ ２２２のＢＩＡｃｏｒｅチップへの結合
ＣＭ−５チップは、カルボン酸と誘導体形成した金表面に結合した炭水化物を有する。表面のカルボン酸をＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）と、水溶性カルボジイミドであるＥＤＣ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸）とを用いて本質的に製造業者の指示に従って活性化した（Application 無te ９、Biacore International AB、ウプサラ、スウェーデン、http://www.biacore.com/products/pdf/ANLigandImmobilization.pdfでオンラインで公表を参照されたい）。
次に、２−（２−ピリジニルチオ）エタンアミン塩酸塩（ＰＤＥＡ）を０．１Ｍホウ酸緩衝液ｐＨ ８．５に溶解したものを、本質的に製造業者の指示に従って加えた。ＩＭＰ ２２２ペプチドＡｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ２を０．０１Ｍギ酸緩衝液ｐＨ４．３に溶解した後、上記のようにチップに加えた。
ペプチドは、この方法で加えたときには、チップに対するジスルフィド結合を形成する。最後に、残っている未反応の活性エステルと ＰＤＥＡを、０．１Ｍギ酸緩衝液ｐＨ４．３中にシステインとＮａＣｌを含む溶液を加えて反応停止する。
実施例１２ 血清安定性
血清中のｂｓＡｂの安定性
二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）を放射性ヨード化して、新鮮なヒト血清中で加湿した５％ＣＯ２雰囲気下で安定性を試験した。分量をＳＥ−ＨＰＬＣ上で検討した。血清タンパク質と会合した放射性ヨウ素を検出するため、分量をＷＩ２と混合してｂｓＭＡｂピークを初期の保持時間へとシフトした。ｂｓＭＡｂは、血清中で４８時間インキュベーションした後には、ＷＩ２への結合容量の約３−５％を損失した。ｂｓＭＡｂを血清中で７２時間インキュベーションしたところ、若干の凝集体形成（約４−７％）が見られた。
血清中でのターゲッティング可能な構築物の安定性
４０μｌ分量の標識ペプチドを新鮮なマウス血清４００μｌで希釈して、３７℃で１７．５時間インキュベーションした。１０μｌ分量を採取して、５μｌの３．２ｍｇ／ｍｌ の１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２と混合し、４０μｌの水で希釈した。次に、希釈混合物の１０μｌ分量を、サイズ排除ＨＰＬＣによって検討した。
ターゲッティング可能な複合体の血清中での安定性
ペプチド＋ｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)−（７３４ｓｃＦｖ）２の血清中での安定性
４μｌ分量の標識ペプチド溶液を３．２ｍｇ／ｍｌのｈＭＮ−１４ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２ １０μｌと混合して、新鮮なマウス血清４００μｌで希釈した。血清試料を３７℃で１６時間インキュベーションした後、サイズ排除ＨＰＬＣによって分析した。
ＩＭＰ ２４６ペプチドは、１６時間後には、ＨＰＬＣトレーシングで幾つかの重複ピークの存在によって示されるようにマウス血清中では不安定であった。３本の幅広いピークは、ＨＰＬＣトレーシングの曲線下の面積の約２０％、４１％および３７％であった。対照的に、ＩＭＰ ２４６の安定性は二重特異性抗体の存在によって大幅に増加した。ＨＰＬＣトレーシングの曲線下の≧９０％は予想した位置における明確なピークに見出された。
実施例１３ イン・ビトロでｈＡ２０−ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ） ２ を含んでなる複合体の評価
ｈＡ２０の可変鎖をコードするＤＮＡをｈＭＮ−１４可変鎖をコードするｃＤＮＡの代わりに用いること以外は、Hansen et al.のＰＣＴ出願国際公開ＷＯ ９９／６６９５１号明細書に記載の方法を用いてｈＡ２０−ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２を製造する。ｈＭＮ−１４およびｈＡ２０のいずれの定常領域をコードするｃＤＮＡは、モノクローナル抗体７３４のリンカーおよびｓｃＦｖをコードするｃＤＮＡと同じである。
培養物中のラージ細胞を、ｈＡ２０ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２とインキュベーションする。１組のウェルにＩＭＰ−２４６を加えて、ラージ細胞の表面のＣＤ２０に結合したｈＡ２０ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２の分子を架橋する。ＩＭＰ−２４６を加えない第二の組のウェルはコントロールとして用い、両方の組のウェルを３７℃でインキュベーションする。３日後、ＩＭＰ−２４６を加えた細胞を測定したところ、広汎なアポトーシスを受けていた。ＩＭＰ−２４６を加えなかったコントロールウェルでは、アポトーシスは最小限であった。
平均して５分子のＩＭＰ−２２２が、ヒト血清アルブミン（ｈＡｌｂ−２２２）に接合する。ｈＡｂ−２２２をラージ細胞の表面のＣＤ２０に結合したｈＡ２０ＩｇＧ−（７３４ｓｃＦｖ）２の分子を架橋するために、ＩＭＰ−２４６の代わりにｈＡｂ−２２２を用いることを除き、上節に記載の実験を繰り返す。ｈＡｌｂ−２２２を加えたウェルでは、細胞の広汎なアポトーシスが見られる。
説明用の態様
追加態様は、本発明の範囲内にある。例えば、本発明は、下記の番号を付した態様によって更に例示される。
１． （ｉ）分子スカフォールドと（ii）２対のキャリヤーエピトープを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、上記ターゲッティング可能な構築物が（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）標的エピトープの結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる二重特異性抗体と結合したときターゲッティング可能な複合体を形成し、下記の１以上が適合する、ターゲッティング可能な構築物：
（ａ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（ｂ）上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、混合物であってその中の約７５％を上回る複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有するものを生じ、
（ｃ）１対のキャリヤーエピトープが上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記の２つのコピーによって同時に結合され、上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記の２つのコピーが上記二重特異性抗体の部分であること。
２． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約８５％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様１のターゲッティング可能な構築物。
３． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約９５％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様１のターゲッティング可能な構築物。
４． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約９９％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様１のターゲッティング可能な構築物。
５． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．１ｎＭ−１０ｎＭである、態様１のターゲッティング可能な構築物。
６． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．５ｎＭ−約５ｎＭである、態様５のターゲッティング可能な構築物。
７． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約１ｎＭである、態様６のターゲッティング可能な構築物。
８． 上記分子スカフォールドがペプチドまたはペプチド誘導体である、態様１のターゲッティング可能な構築物。
９． 上記ターゲッティング可能な構築物がＩＭＰ ２４６である、態様１のターゲッティング可能な構築物。
１０． 上記ターゲッティング可能な構築物が互いに接合している２つの構築物を含んでなり、それぞれの構築物が分子スカフォールドと１対のキャリヤーエピトープとを含んでなる、態様１のターゲッティング可能な構築物。
１１． 上記構築物のそれぞれがＩＭＰ １５６、ＩＭＰ １９２およびＩＭＰ ２２２からなる群から独立して選択される、態様１０のターゲッティング可能な構築物。
１２． 上記キャリヤーエピトープがハプテンである、態様１のターゲッティング可能な構築物。
１３． 上記キャリヤーエピトープがキレート剤、またはキレート剤と金属イオンとの複合体である、態様１のターゲッティング可能な構築物。
１４． 上記キレート剤がＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ベンジルＤＴＰＡ、ＮＯＴＡ、およびＴＥＴＡからなる群から選択される、態様１３のターゲッティング可能な構築物。
１５． 上記二重特異性抗体が［ＩｇＧ］−［ｓｃＦｖ］２であり、但し、ＩｇＧがヒト、キメラ、またはＣＤＲ移植抗体であり、更にｓｃＦｖがハプテンに特異的なヒト、キメラまたはＣＤＲを移植した一本鎖抗体であり、更に上記ｓｃＦｖがリンカーペプチドによって上記ＩｇＧの重鎖のカルボキシル末端アミノ酸から伸長している、態様１のターゲッティング可能な構築物。
１６． 上記二重特異性抗体が［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１］−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１］−［７３４ｓｃＦｖ］２からなる群から選択されるものである、態様１５のターゲッティング可能な構築物。
１７． 上記二重特異性抗体が［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１］−［６７９ｓｃＦｖ］２および［ｈＭＮ１４−ＩｇＧ１(I253A)］−［６７９ｓｃＦｖ］２からなる群から選択されるものである、態様１５のターゲッティング可能な構築物。
１８． 上記二重特異性抗体が［ｈＡ２０−ＩｇＧ１］−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈＡ２０−ＩｇＧ１(I253A)］−［７３４ｓｃＦｖ］２からなる群から選択されるものである、態様１５のターゲッティング可能な構築物。
１９． 上記二重特異性抗体が［ｈＡ２０−ＩｇＧ１］−［６７９ｓｃＦｖ］２および［ｈＡ２０−ＩｇＧ１(I253A)］−［６７９ｓｃＦｖ］２からなる群から選択されるものである、態様１５のターゲッティング可能な構築物。
２０． 上記二重特異性抗体が［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１］−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１(I253A)］−［７３４ｓｃＦｖ］２からなる群から選択されるものである、態様１５のターゲッティング可能な構築物。
２１． 上記二重特異性抗体が［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１］−［６７９ｓｃＦｖ］２および［ｈＬＬ２−ＩｇＧ１(I253A)］−［６７０ｓｃＦｖ］２からなる群から選択されるものである、態様１５のターゲッティング可能な構築物。
２２． 上記ターゲッティング可能な構築物が更に生物活性部分を含んでなる、態様１のターゲッティング可能な構築物。
２３． 上記生物活性部分が薬剤、プロドラッグ、酵素、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、放射性核種、画像増強剤、および毒素からなる群から選択されるものである、態様２２のターゲッティング可能な構築物。
２４． 上記酵素がリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼからなる群から選択されるものである、態様２３のターゲッティング可能な構築物。
２５． 上記イムノモジュレーターがサイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血増殖因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリトロポエチン、トロンボポエチン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるものである、態様２３のターゲッティング可能な構築物。
２６． 上記イムノモジュレーターが本質的にＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、−α、−βまたは−γ、ＴＮＦ−α、および”Ｓ１因子からなる、態様２３のターゲッティング可能な構築物。
２７． 上記オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、態様２３のターゲッティング可能な構築物。
２８． 上記アンチセンスオリゴヌクレオチドがｂｃｌ−２またはｐ５３である、態様２７のターゲッティング可能な構築物。
２９． 態様１のターゲッティング可能な構築物が結合している固形支持体。
３０． 態様１のターゲッティング可能な構築物を含んでなるバイオセンサー。
１． （ｉ）分子スカフォールドと（ii）２対のキャリヤーエピトープを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、上記２対のキャリヤーエピトープの第一のものが第一の二重特異性抗体によって特異的に結合されており且つ上記２対のキャリヤーエピトープの第二のものが第二の二重特異性抗体によって特異的に結合されており、
上記ターゲッティング可能な構築物が
（ｉ）第一の二重特異性抗体であって、（ａ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ｂ）第一の標的エピトープの結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる上記第一の二重特異性抗体、および
（ii）第二の二重特異性抗体であって、（ａ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ｂ）第二の標的エピトープの結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる上記第二の二重特異性抗体であって、
上記第一の二重特異性抗体と上記第二の二重特異性抗体とは同一でもまたは異なっていてもよく、上記キャリヤーエピトープの対は同一でもまたは異なっていてもよく、上記標的エピトープは同一でもまたは異なっていてもよいもの
と結合したときターゲッティング可能な複合体を形成し、下記の１以上が適合する、ターゲッティング可能な構築物：
（ａ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープのどちらかまたは両方に対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（ｂ）上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約７５％を上回るマルチマー性複合体が上記第一の二重特異性抗体１分子と上記第二の二重特異性抗体１分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じ、
（ｃ）１対のキャリヤーエピトープが上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記２つのコピーによって同時に結合され、上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記の２つのコピーが上記二重特異性抗体の部分であること。
３２． 上記キャリヤーエピトープの対が異なっているが、上記標的エピトープは同一である、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
３３． 上記第一の抗体と上記第二の抗体異なっているが、上記標的エピトープが同一である、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
３４． 上記キャリヤーエピトープが同一であり、上記第一の二重特異性抗体の上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる上記第一のアームと上記第二の二重特異性抗体の上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる上記第一のアームが同一であるが、上記第一の標的エピトープと上記第二の標的エピトープは同一でない、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
３５． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体とを約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約８５％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体または抗体誘導体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
３６． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体とを約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約９５％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体または抗体誘導体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
３７． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体とを約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約９９％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体または抗体誘導体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
３８． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．１ｎＭ−１０ｎＭである、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
３９． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．５ｎＭ−約５ｎＭである、態様３８のターゲッティング可能な構築物。
４０． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約１ｎＭである、態様３９のターゲッティング可能な構築物。
４１． 上記ターゲッティング可能な構築物が互いに接合している２つの構築物を含んでなり、それぞれの構築物が分子スカフォールドと１対のキャリヤーエピトープとを含んでなる、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
４２． 上記構築物のそれぞれがＩＭＰ １５６、ＩＭＰ １９２、およびＩＭＰ ２２２からなる群から独立して選択される、態様４１のターゲッティング可能な構築物。
４３． 上記分子スカフォールドがペプチドまたはペプチド誘導体である、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
４４． 上記キャリヤーエピトープがハプテンである、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
４５． 上記キャリヤーエピトープがキレート剤、またはキレート剤と金属イオンとの複合体である、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
４６． 上記キレート剤がＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ベンジルＤＴＰＡ、ＮＯＴＡ、およびＴＥＴＡからなる群から選択される、態様４５のターゲッティング可能な構築物。
４７． 上記ターゲッティング可能な構築物が更に生物活性部分を含んでなる、態様３１のターゲッティング可能な構築物。
４８． 上記生物活性部分が薬剤、プロドラッグ、酵素、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、放射性核種、画像増強剤、および毒素からなる群から選択される、態様４７のターゲッティング可能な複合体。
４９． 上記酵素がリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼからなる群から選択される、態様４８のターゲッティング可能な構築物。
５０． 上記イムノモジュレーターがサイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血増殖因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリトロポエチン、トロンボポエチン、およびそれらの組合せからなる群から選択される、態様４８のターゲッティング可能な構築物。
５１． 上記イムノモジュレーターがＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、−α、−βまたは−γ、ＴＮＦ−α、および”Ｓ１因子からなる群から選択される、態様４８のターゲッティング可能な構築物。
５２． 上記オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、態様４８のターゲッティング可能な構築物。
５３． 上記アンチセンスオリゴヌクレオチドがｂｃｌ−２またはｐ５３である、態様５２のターゲッティング可能な構築物。
５４． 上記第一の二重特異性抗体の上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる上記第一のアームと上記第二の二重特異性抗体の上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる上記第一のアームが両方とも［７３４ｓｃＦｖ］２である、態様３４のターゲッティング可能な構築物。
５５． 態様３１のターゲッティング可能な構築物が結合している固形支持体。
５６． 態様３１のターゲッティング可能な構築物を含んでなるバイオセンサー。
５７． 分子スカフォールドとＸ対のキャリヤーエピトープとを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、キャリヤーエピトープの上記対のそれぞれがＸ個の二重特異性抗体の一つによって結合されており、それぞれの二重特異性抗体が（ａ）キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２コピーと（ｂ）Ｙ個の標的エピトープの１つの結合部位を含んでなる第二のアームの２コピーを含んでなり、
（ｉ）Ｘは≧３の整数であり、
（ii）Ｙは≧１の整数であり、
（iii）上記Ｘ個の二重特異性抗体は同一であってもまたは異なる二重特異性抗体の混合物であってもよく、
（iv）上記Ｘ対のキャリヤーエピトープは同一であってもまたは異なるキャリヤーエピトープの混合物であってもよく、
（ｖ）Ｙ≧２であるときには、上記Ｙ個の標的エピトープは同一であってもまたは異なる標的エピトープの混合物であってもよく、且つ
下記の１以上が適合する、ターゲッティング可能な構築物：
（ａ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープの少なくとも１つに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（ｂ）１対のキャリヤーエピトープが上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記２つのコピーによって同時に結合され、上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記の２つのコピーが上記二重特異性抗体の部分であること。
５８． 上記標的エピトープの少なくとも１つに対する上記Ｋｄが約０．１ｎＭ−１０ｎＭである、態様５７のターゲッティング可能な構築物。
５９． 上記標的エピトープの少なくとも１つに対する上記Ｋｄが約０．５ｎＭ−約５ｎＭである、態様５８のターゲッティング可能な構築物。
６０． 標的エピトープの少なくとも１つに対する上記Ｋｄが約１ｎＭである、態様５９のターゲッティング可能な構築物。
６１． 上記分子スカフォールドがペプチドまたはペプチド誘導体である、態様５７のターゲッティング可能な構築物。
６２． 上記キャリヤーエピトープの少なくとも１つがハプテンである、態様５７のターゲッティング可能な構築物。
６３． 上記ターゲッティング可能な構築物が更に生物活性部分を含んでなる、態様５７のターゲッティング可能な構築物。
６４． 上記生物活性部分が薬剤、プロドラッグ、酵素、放射性核種、画像増強剤、および毒素からなる群から選択される、態様６３のターゲッティング可能な構築物。
６５． 上記酵素がリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼからなる群から選択される、態様６４のターゲッティング可能な構築物。
６６． 上記イムノモジュレーターがサイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血増殖因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリトロポエチン、トロンボポエチン、およびそれらの組合せからなる群から選択される、態様６４のターゲッティング可能な構築物。
６７． 上記イムノモジュレーターがＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、−α、−βまたは−γ、ＴＮＦ−α、および”Ｓ１因子からなる、態様６４のターゲッティング可能な構築物。
６８． 上記オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、態様６４のターゲッティング可能な構築物。
６９． 上記アンチセンスオリゴヌクレオチドがｂｃｌ−２またはｐ５３である、態様６８のターゲッティング可能な構築物。
７０． 態様５７のターゲッティング可能な構築物が結合している固形支持体。
７１． 態様５７のターゲッティング可能な構築物を含んでなるバイオセンサー。
７２． 標的エピトープを結合することができる４本のアームを含んでなるターゲッティング可能な複合体であって、上記４価のターゲッティング可能な複合体が、
（ａ）（ｉ）分子スカフォールドと（ｉｉ）２対のキャリヤーエピトープとを含んでなるターゲッティング可能な構築物と、
（ｂ）二重特異性抗体の２つの分子であって、それぞれの抗体が（ｉ）２本のアームであって、それぞれのアームが上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなるものと（ｉｉ）２本のアームであって、それぞれが上記標的エピトープに対する結合部位を含んでなるものとを含んでなり、
下記の１以上が適合する、ターゲッティング可能な複合体：
（Ｉ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（ＩＩ）上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、混合物であって、その中の複合体の約７５％を上回るものが上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有するものを生じ、
（ＩＩＩ）１対のキャリヤーエピトープが上記二重特異性抗体によって１：１の比率で結合されていること。
７３． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、マルチマー性複合体の約８５％を上回るものが上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
７４． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、マルチマー性複合体の約９５％を上回るものが上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
７５． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、マルチマー性複合体の約９９％を上回るものが上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
７６． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．１ｎＭ−１０ｎＭである、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
７７． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．５ｎＭ−約５ｎＭである、態様７６のターゲッティング可能な複合体。
７８． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約１ｎＭである、態様７７のターゲッティング可能な複合体。
７９． 上記分子スカフォールドがペプチドまたはペプチド誘導体である、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８０． 上記ターゲッティング可能な構築物がＩＭＰ ２４６である、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８１． 上記ターゲッティング可能な構築物が互いに接合している２個の構築物を含んでなり、それぞれの構築物が分子スカフォールドと１対のキャリヤーエピトープを含んでなる、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８２． 上記構築物のそれぞれがＩＭＰ １５６、ＩＭＰ １９２、およびＩＭＰ ２２２からなる群から独立して選択される、態様８１のターゲッティング可能な複合体。
８３． 上記キャリヤーエピトープがハプテンである、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８４． 上記キャリヤーエピトープがキレート剤、またはキレート剤と金属イオンとの複合体である、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８５． 上記キレート剤がＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ベンジルＤＴＰＡ、ＮＯＴＡ、およびＴＥＴＡからなる群から選択されるものである、態様８４のターゲッティング可能な複合体。
８６． 上記二重特異性抗体が［ｈＭＮ］２−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈＭＮ(I253A)］２−［７３４ｓｃＦｖ］２からなる群から選択されるものである、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８７． 上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる少なくとも１本のアームが７３４ｓｃＦｖである、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８８． 上記ターゲッティング可能な構築物が更に生物活性部分を含んでなる、態様７２のターゲッティング可能な複合体。
８９． 上記生物活性部分が薬剤、プロドラッグ、酵素、放射性核種、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、画像増強剤、および毒素．ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、放射性核種、画像増強剤、および毒素からなる群から選択される、態様８８のターゲッティング可能な複合体。
９０． 上記酵素がリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼからなる群から選択される、態様８９のターゲッティング可能な構築物。
９１． 上記イムノモジュレーターがサイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血増殖因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリトロポエチン、トロンボポエチン、およびそれらの組合せからなる群から選択されるものである、態様８９のターゲッティング可能な構築物。
９２． 上記イムノモジュレーターがＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、−α、−βまたは−γ、ＴＮＦ−α、および”Ｓ１因子からなる群から選択されるものである、態様８９のターゲッティング可能な構築物。
９３． 上記オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、態様８９のターゲッティング可能な構築物。
９４． 上記アンチセンスオリゴヌクレオチドがｂｃｌ−２またはｐ５３である、態様９３のターゲッティング可能な構築物。
９５． 態様７２のターゲッティング可能な複合体が結合している固形支持体。
９６． 態様７２のターゲッティング可能な複合体を含んでなるバイオセンサー。
９７． 以下を含んでなるターゲッティング可能な複合体：
（ａ）（ｉ）分子スカフォールドと（ｉｉ）２対のキャリヤーエピトープを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、上記２対のキャリヤーエピトープの第一のものが第一の二重特異性抗体によって特異的に結合し、上記２対のキャリヤーエピトープの第二のものが第二の二重特異性抗体によって特異的に結合しているものであり、上記ターゲッティング可能な構築物は、
（ｂ）第一の二重特異性抗体であって、（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ｉｉ）第一の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる上記第一の二重特異性抗体、および
（ｃ）第二の二重特異性抗体であって、（ｉ）上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ｉｉ）第二の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなる上記第二の二重特異性抗体
と結合したときに、ターゲッティング可能な複合体を形成し、
上記第一の二重特異性抗体と上記第二の二重特異性抗体は同一でもまたは異なっていてもよく、上記対のキャリヤーエピトープは同一でもまたは異なっていてもよく、上記標的エピトープは同一でもまたは異なっていてもよく、下記の１以上が適合する：
（Ｉ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（ＩＩ）上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、混合物であってその中の約７５％を上回る複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有するものを生じ、
（ＩＩＩ）上記対のキャリヤーエピトープのそれぞれが上記二重特異性抗体の１つによって結合していること。
９８． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約８５％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
９９． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約９５％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１００． 上記ターゲッティング可能な構築物と上記二重特異性抗体を約１０−３−約１０３の範囲の相対濃度で混合することによって、約９９％を上回るマルチマー性複合体が上記二重特異性抗体２分子と上記ターゲッティング可能な構築物１分子の画定された化学量論を有する混合物を生じる、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１０１． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．１ｎＭ−１０ｎＭである、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１０２． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約０．５ｎＭ−約５ｎＭである、態様１０１のターゲッティング可能な複合体。
１０３． 上記標的エピトープに対する上記Ｋｄが約１ｎＭである、態様１０２のターゲッティング可能な複合体。
１０４． 上記分子スカフォールドがペプチドまたはペプチド誘導体である、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１０５． 上記ターゲッティング可能な構築物がＩＭＰ ２４６である、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１０６． 上記ターゲッティング可能な構築物が互いに接合している２つの構築物を含んでなり、それぞれの構築物が分子スカフォールドと１対のキャリヤーエピトープとを含んでなる、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１０７． 上記構築物のそれぞれがＩＭＰ １５６、ＩＭＰ １９２、およびＩＭＰ ２２２からなる群から独立して選択される、態様１０７のターゲッティング可能な複合体。
１０８． 上記キャリヤーエピトープがハプテンである、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１０９． 上記キャリヤーエピトープがキレート剤、またはキレート剤と金属イオンとの複合体である、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１１０． 上記キレート剤ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ベンジルＤＴＰＡ、ＮＯＴＡ、およびＴＥＴＡからなる群から選択される、態様１１０のターゲッティング可能な複合体。
１１１． 上記二重特異性抗体が［ｈＭＮ］２−［７３４ｓｃＦｖ］２および［ｈＭＮ(I253A)］２−［７３４ｓｃＦｖ］２である、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１１２． 上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる少なくとも１本のアームが７３４ｓｃＦｖである、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１１３． 上記ターゲッティング可能な構築物が更に生物活性部分を含んでなる、態様９７のターゲッティング可能な複合体。
１１４． 上記生物活性部分が薬剤、プロドラッグ、酵素、放射性核種、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、画像増強剤、および毒素からなる群から選択される、態様１１３のターゲッティング可能な複合体。
１１５． 上記酵素がリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼからなる群から選択される、態様１１４のターゲッティング可能な構築物。
１１６． 上記イムノモジュレーターがサイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血増殖因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリトロポエチン、トロンボポエチン、およびそれらの組合せからなる群から選択される、態様１１４のターゲッティング可能な構築物。
１１７． 上記イムノモジュレーターが本質的にＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、−α、−βまたは−γ、ＴＮＦ−α、および”Ｓ １因子からなるものである、態様１１４のターゲッティング可能な構築物。
１１８． 上記オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、態様１１４のターゲッティング可能な構築物。
１１９． 上記アンチセンスオリゴヌクレオチドがｂｃｌ−２またはｐ５３である、態様１１８のターゲッティング可能な構築物。
１２０． 態様９７のターゲッティング可能な複合体が結合している、固形支持体。
１２１． 態様９７のターゲッティング可能な複合体を含んでなるバイオセンサー。
１２２． 以下を含んでなるターゲッティング可能な複合体：
（Ａ）分子スカフォールドとＸ対のキャリヤーエピトープとを含んでなるターゲッティング可能な構築物であって、上記対のキャリヤーエピトープのそれぞれがＸ個の二重特異性抗体の１つによって結合しており、それぞれの二重特異性抗体が（ｉ）キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの２つのコピーと（ii）Ｙ個の標的エピトープに対する結合部位を含んでなる第二のアームの２つのコピーとを含んでなるもの、および
（Ｂ）Ｘ個の二重特異性抗体であって、
（１）Ｘが＞３の整数であり、
（２）Ｙが＞１の整数であり、
（３）上記Ｘ二重特異性抗体は同一でもまたは異なる二重特異性抗体の混合物であってもよく、
（４）上記Ｘ対のキャリヤーエピトープは同一でもまたは異なる二重特異性抗体の混合物であってもよく、
（５）Ｙ＞２のときには、上記Ｙ個の標的エピトープは同一でもまたは異なる標的エピトープの混合物であってもよく、
下記の１以上が適合する：
（ａ）上記ターゲッティング可能な複合体の上記標的エピトープの少なくとも１つに対するＫｄが約０．１ｎＭ−約１００ｎＭであり、
（ｂ）１対のキャリヤーエピトープが上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記２つのコピーによって同時に結合しており、上記キャリヤーエピトープに対する結合部位を含んでなる第一のアームの上記２つのコピーが上記二重特異性抗体の部分であること。
１２３． 上記標的エピトープの少なくとも１つに対する上記Ｋｄが約０．１ｎＭ−１０ｎＭである、態様１２２のターゲッティング可能な構築物。
１２４． 上記標的エピトープの少なくとも１つに対する上記Ｋｄが約０．５ｎＭ−約５ｎＭである、態様１２３のターゲッティング可能な構築物。
１２５． 上記標的エピトープの少なくとも１つに対する上記Ｋｄが約１ｎＭである、態様１２４のターゲッティング可能な構築物。
１２６． 上記分子スカフォールドがペプチドまたはペプチド誘導体である、態様１２２のターゲッティング可能な構築物。
１２７． 上記キャリヤーエピトープの少なくとも１つがハプテンである、態様１２２のターゲッティング可能な構築物。
１２８． 上記ターゲッティング可能な構築物が更に生物活性部分を含んでなる、態様１２２のターゲッティング可能な構築物。
１２９． 上記生物活性部分が薬剤、プロドラッグ、酵素、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、放射性核種、画像増強剤、および毒素からなる群から選択されるものである、態様１２３のターゲッティング可能な複合体。
１３０． 上記酵素がリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、スタフィロコッカスヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、およびアセチルコリンエステラーゼからなる群から選択されるものである、態様１２９のターゲッティング可能な構築物。
１３１． 上記イムノモジュレーターがサイトカイン、幹細胞増殖因子、リンホトキシン、造血増殖因子、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、エリトロポエチン、トロンボポエチン、およびそれらの組合せからなる群から選択される、態様１２９のターゲッティング可能な構築物。
１３２． 上記イムノモジュレーターがＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロン−γ、−α、−βまたは−γ、ＴＮＦ−α、および”Ｓ１因子からなる群から選択される、態様１２９のターゲッティング可能な構築物。
１３３． 上記オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである、態様１２９のターゲッティング可能な構築物。
１３４． 上記アンチセンスオリゴヌクレオチドがｂｃｌ−２またはｐ５３である、態様１３３のターゲッティング可能な構築物。
１３５． 態様１２２のターゲッティング可能な構築物が結合している固形支持体。
１３６． 態様１２２のターゲッティング可能な構築物を含んでなるバイオセンサー。
１３７． 上記ターゲッティング可能な構築物または上記ターゲッティング可能な複合体の半減期が約２４時間−約５００日間の画定された条件の組である、態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１３８． 上記ターゲッティング可能な構築物または上記ターゲッティング可能な複合体の半減期が約２４時間−約１０日間の画定された条件の組である、態様１３７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１３９． 上記ターゲッティング可能な構築物または上記ターゲッティング可能な複合体の半減期が約２４時間−約７２時間の画定された条件の組である、態様１３７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４０． 上記の画定された条件の組が生理学的条件の組である、態様１３７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４１． 画定された条件の組における半減期がイン・ビトロでの血清の半減期である、態様１３７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４２． 上記標的エピトープが過剰増殖性疾患と関連している、態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４３． 上記標的エピトープが急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道、胃、頭および頸癌、ホジキンリンパ腫、肺癌、髄様甲状腺（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｔｈｙｒｏｉｄ）、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、神経膠腫、黒色腫、肝臓癌、前立腺癌、および膀胱癌からなる群から選択される癌の種類と関連した腫瘍関連抗原である、態様１４３のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４４． 上記標的エピトープがＡ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＢｒＥ３、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＨＣＧおよびそのサブユニット、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ｅｐ−ＣＡＭ、Ｂａ７３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＫＣ４、ＫＳ−１、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＰＡＭ−４、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＲＳ５、Ｓ１００、ＴＡＧ−７２、ｐ５３、テネイシン、ＩＬ−６、インスリン増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、Ｔｎ抗原、トムソン−フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦ、１７−１Ａ、血管新生マーカー、サイトカイン、イムノモジュレーター、癌遺伝子マーカー、癌遺伝子産物、および他の腫瘍関連抗原からなる群から選択される腫瘍関連抗原である、態様１４２のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４５． 態様１４２のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体をそれを必要する被検者に投与することを含んでなる、過剰増殖性疾患の治療方法。
１４６． 更に上記過剰増殖性疾患の治療に適する少なくとも１つの追加薬剤を投与することを含んでなる、態様１４８の方法。
１４７． 上記標的エピトープが病原体によって引き起こされる疾患と関連している、態様１、３１、５７、７２、９７および１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４８． 上記病原体が細菌、細胞内病原体、真菌、寄生生物、およびウイルスからなる群から選択される、態様１４７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１４９． 上記病原体がStreptococcus agalactiae、Legionella pneumophilia、Streptococcus pyogenes、Escherichia coli、Salmonella typhimurium、Neisseria gonorrhoeae、Neisseria meningitidis、Pneumococcus sp.、Hemophilis influenzae B、Yersina pestis、Mycobacteria sp.、Mycobacterium leprae、Mycobacterium tuberculosis、Treponema pallidum、Pseudomonas aerugiyaosa、Francisella tularensis、Brucella sp.、Brucella abortus、Bacillus anthracis、Clostridium botulinum、およびClostridium tetaniからなる群から選択される細菌である、態様１４７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１５０． 上記病原体がChlamydia sp.、Rickettsia sp.、Leishmania sp.、KokzEdioa sp.、Borrelia burgdorfei、Plasmodia sp.、Plasmodium falciparum、Trypanosoma sp.、Trypanosoma brucei、およびTryparaosoma cruziからなる群から選択される細胞内病原体である、態様１４７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１５１． 上記病原体がCandida sp.、Candida albicans、Aspergillus sp.、Mucor sp.、Rhizopus sp.、Fusarium sp.、Penicillium marneffei、Microsporum sp.、Trichophyton mentagrophytes、His最上部lasma capsulatum、Blastomyces dermatitidis、およびCoccidioides immitisからなる群から選択される真菌である、態様１４７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１５２． 上記病原体がＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、ＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、狂犬病ウイルス、エボラウイルス、ロタウイルス、呼吸器シンシチウムウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、ＣＭＶ、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、ＨＩＶ−Ｉ、ＨＩＶ−II、センダイウイルス、ネコ白血病ウイルス、レオウイルス、ポリオウイルス、ヒト血清パルボ様ウイルス、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＭＭＴＶ、水痘−帯状疱疹ウイルス、デング熱ウイルス、風疹ウイルス、麻疹ウイルス、アデノウイルス、ヒトＴ−細胞白血病ウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ネズミ白血病ウイルス、ＶＳＶ、痘瘡ウイルス、シンドビスウイルス、リンパ球脈絡髄膜炎ウイルス、牛疫ウイルス、疣ウイルス、およびブルータングウイルスからなる群から選択されるウイルスである、態様１４７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。．
１５３． 態様１４７のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体をそれを必要とする患者に投与することを含んでなる、病原体性疾患の治療方法。
１５４． 患者の非悪性細胞または組織を除去する方法であって、患者に態様１、２６、４７、５７、７７または９７のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を投与することを含んでなり、上記非悪性細胞または組織が異所性組織、停留組織、正常な器官組織、および骨髄からなる群から選択される、上記方法。
１５５． 被検者に態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を生化学的過程を調節するのに有効な量で投与することを含んでなり、上記標的エピトープが上記疾患を含んでなる患者の１種類以上の細胞、組織、器官、または器官系内に含まれ、によって表示され、またはから放出される、上記被検者の治療方法。
１５６． 上記二重特異性抗体が裸の抗体である、態様１５５の方法。
１５７． 上記１種類以上の生化学的過程の調節が細胞静止、壊死、アポトーシス、または補体カスケード、突然変異誘発または発癌を引き起こし、増強し、制限し、または予防する、態様１５５の方法。
１５８． 上記標的エピトープが循環器疾患と関連している、態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１５９． 態様１５８のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体をこれを必要とする被検者に投与することを含んでなる、循環器疾患の治療方法。
１６０． 更に上記循環器疾患の治療に適する少なくとも１種類の追加薬剤を投与することを含んでなる、態様１５９の方法。
１６１． 上記標的エピトープが自己免疫疾患と関連している、態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体。
１６２． 態様１６１のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体をこれを必要とする被検者に投与することを含んでなる、自己免疫疾患の治療方法。
１６３． 自己免疫疾患が急性特発性血小板減少性紫斑病、慢性特発性血小板減少性紫斑病、皮膚筋炎、シドナム舞踏病、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、リウマチ熱、多内分泌腺性症候群、水疱性類天疱瘡、糖尿病、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、ポストストレプトコッカス腎炎（post-streptococcualnephritis）、結節性紅斑、高安動脈炎、アジソン病、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、サルコイドーシス、潰瘍性大腸炎、多形性紅斑、ＩｇＡ腎症、結節性多発性動脈炎、強直性脊椎炎、グッドパスチャー症候群、閉塞性血栓血管炎（thromboangitisubiterans）、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、甲状腺中毒症、強皮症、活動性慢性肝炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発性軟骨炎、尋常性天疱瘡、ヴェーゲナー肉芽腫症、膜性腎症、筋萎縮性側索硬化症、脊髄ロウ、巨細胞性動脈炎／多発性筋痛、悪性貧血、急速進行性糸球体腎炎、および繊維化肺胞炎からなる群から選択される、態様１６２の方法。
１６４． 更に上記過剰増殖性疾患の治療に適する少なくとも１種類の追加薬剤を投与することを含んでなる、態様１６２の方法。
１６５． 態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を含んでなる、医薬組成物。
１６６． 被検者に態様１６５の医薬組成物を投与することを含んでなる、上記被検者における疾患の治療方法。
１６７． 態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を含んでなる、キット。
１６８． 試料を態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体と接触させることを含んでなる上記試料中の物質の検出方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはこれを含んでなる、方法。
１６９． 試料中の物質の検出方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、態様１、３０、５６、７１、９６または１２１のいずれか一項に記載のバイオセンサーと接触させ、そこからシグナルを検出することを含んでなる、方法。
１７０． 上記試料が生物学的試料である、態様１６９の方法。
１７１． 上記生物学的試料が血清、血液、血漿、リンパ、尿、糞便、皮膚、眼房水、滑液、粘液質、軟骨および骨の試料、および生験試料からなる群から選択される、態様１７０の方法。
１７２． 環境中の物質の検出方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、態様１、３０、５６、７１、９６または１２１のいずれか一項に記載のバイオセンサーを上記環境に暴露し、そこからシグナルを検出することを含んでなる、方法。
１７３． 態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を含んでなる、固形支持体。
１７４． 上記固形支持体が計深棒、ビーズ、マルチウェルプレートのウェルの内表面、および膜からなる群から選択される、態様１７３の固形支持体。
１７５． 物質の精製方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、上記物質を含んでなる試料を態様１７３の固形支持体に接触させることを含んでなる、上記方法。
１７６． 試料中の物質の検出方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、上記試料を態様１７３の固形支持体に接触させることを含んでなる、上記方法。
１７７． 態様１７３の固形支持体を含んでなる、計深棒。
１７８． 流体試料中の物質の検出方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、上記流体試料を態様１７７の計深棒と接触させることを含んでなる、上記方法。
１７９． 態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を含んでなる、マルチウェルプレート。
１８０． 試料中の物質の検出方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、上記試料を態様１７９のマルチウェルプレートと接触させることを含んでなる、上記方法。
１８１． 物質のイムノアッセイであって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、上記物質を態様１７９のマルチウェルプレートと接触させることを含んでなる、上記方法。
１８２． 態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を含んでなる、膜。
１８３． 物質の検出方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、上記物質を態様１８２の膜と接触させることを含んでなる、上記方法。
１８４． 態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を含んでなる、ビーズ。
１８５． 物質の精製方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたは含んでなり、上記物質を態様１８４のビーズと接触させることを含んでなる、上記方法。
１８６． 物質を固形支持体に結合させる方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたは含んでなり、上記物質を態様１７３の固形支持体と接触させることを含んでなる、上記方法。
１８７． 組成物から物質の総てまたは幾らかを除去する方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたは含んでなり、上記組成物を態様１７３の固形支持体と接触させることを含んでなる、上記方法。
１８８． 上記組成物が流体である、態様１８７の方法。
１８９． 上記組成物が生物学的試料である、態様１８７の方法。
１９０． 上記試料が血清、血液、血漿、リンパ、尿、糞便、汗、眼房水、精液、滑液、粘液、滲出液、骨髄および生験試料からなる群から選択される生物学的試料である、態様１８９の方法。
１９１． 患者の組織から物質の総てまたは幾らかを除去する方法であって、上記物質が標的エピトープであるかまたは含んでなり、上記組織を態様１７３の固形支持体と接触させ、上記組織を上記患者に再導入することを含んでなる、上記方法。
１９２． 上記組織が血清、血液、血漿、リンパ、眼房水、骨髄からなる群から選択される、態様１９１の方法。
１９３． 上記物質が毒素、病原体、過剰増殖性細胞、および感染細胞であるかまたはの部分である、態様１９１の方法。
１９４． 患者の流体を処理してそこから物質を取り出して、上記流体を上記患者に再導入する装置であって、上記物質が標的エピトープであるかまたはを含んでなり、態様１７３の固形支持体を含んでなる、上記装置。
１９５． 患者の治療方法であって、患者から流体を取り出し、上記流体を態様１９４の装置を通過させ、上記流体を上記患者に再導入することを含んでなる、上記方法。
１９６． 更に上記物質を上記固形支持体から分離することを含んでなる、態様１８７の方法。
１９７． 上記物質が望ましくない物質である、態様１８７の方法。
１９８． 上記物質が目的とする化合物である、態様１８７の方法。
１９９． 上記方法が製造方法の部分である、態様１８７の方法。
２００． 上記循環器疾患がアテローム硬化性プラーク、虚血、フィブリン血餅、血管血栓形成、および心筋梗塞である、態様１５９の方法。
２０１． 上記血管血栓形成が塞栓または血栓症である、態様２００の方法。
２０２． 上記組織が形成不全、非存在、解剖学的に置換されているか、または異所性である、態様１５５の方法。
２０３． 上記疾患または障害が神経変性または代謝疾患である、態様１５５の方法。
２０４． 上記代謝疾患がアミロイドーシスであり、上記ターゲッティング可能な構築物がアミロイドを結合している、態様２０３の方法。
２０５． 上記神経変性疾患がアルツハイマー病である、態様２０３の方法。
２０６． 被検者における疾患を診断／検出する方法であって、上記被検者に態様１、３１、５７、７２、９７または１２２のいずれか一項に記載のターゲッティング可能な構築物またはターゲッティング可能な複合体を生化学的過程を調節するのに有効な量を投与することを含んでなり、上記標的エピトープが上記疾患を含んでなる被検者の１種類以上の細胞、組織、器官、または器官系内に含まれ、それらによって表示され、またはそれらから放出される、方法。
２０７． 態様２０６の方法であって、循環器病変を検出するのに適している、上記方法。
２０８． 態様２０７の方法であって、光力学的診断に適している、上記方法。
２０９． 上記ターゲッティング可能な構築物がジヘマトポルフィリン、ベンゾポルフィリン一酸Ａ環、スズエチオプルプリン、スルホン化アルミニウムフタロシアニン、およびルテニウムテキサフィリンからなる群から選択される光増感剤を含んでなる、態様２０８の方法。
本発明の二重特異性および二価抗体の一例であるｈＭＮ１４−７３４ｓｃＦｖの図解説明。ｈＭＮ１４−７３４ｓｃＦｖの構造および調製の詳細については、ＰＣＴ出願ＷＯ ９９／６６９５１号明細書を参照されたい。記号：黒塗り長方形，分子スカフォールド；→キャリヤーエピトープ；白抜き円，所望により生物活性部分；黒塗り菱形，標的エピトープ；および楕円，抗体ドメイン。黒塗りおよび白抜き楕円（底部）のそれぞれの対は、キャリヤーエピトープと結合している二重特異性抗体のアームを表し、縞模様および綾目模様の楕円（最上部）のそれぞれの対は、標的エピトープと結合する二重特異性のアームを表す。 本発明の四価のターゲッティング可能な複合体の図解説明。２つの二重特異性の二価抗体分子がターゲッティング可能な構築物に結合することが示されている。記号は、図１と同じである。 ペプチド／抗体複合体のＨＰＬＣトレース。 ペプチド／抗体複合体のＨＰＬＣトレース。 ペプチド／抗体複合体のＨＰＬＣトレース。 ペプチド／抗体複合体のＨＰＬＣトレース。 ペプチド／抗体複合体のＨＰＬＣトレース。 ＩＭＰ ２４６をｈＭＮ−１４ＩｇＧ(I253A)（７３４ｓｃＦｖ）２（パネルＡ）と１：１０（ペプチド：抗体）の比率で混合することによって形成したターゲッティング可能な複合体のＨＰＬＣトレース。 ＩＭＰ ２４６をｍ７３４ ＩｇＧ（パネルＢ）と１：１０（ペプチド：抗体）の比率で混合することによって形成したターゲッティング可能な複合体のＨＰＬＣトレース。

Claims (8)

  1. ターゲッティング可能な構築物に結合した、２個の四価の結合分子を含んでなる結合複合体であって、
    前記各四価の結合分子が、ＤＴＰＡに対する２個の結合部位および標的エピトープに対する２個の結合部位を含んでなり、
    前記四価の結合分子が構造［ＩｇＧ１］−［ｓｃＦｖ］ ２ を含んでなる二重特異性抗体であり、
    前記抗体が１対の重鎖および１対の軽鎖を含んでなり、
    それぞれの重鎖が、ヒト化、キメラまたはヒトのＩｇＧ１重鎖およびｓｃＦｖを含んでなり、前記ｓｃＦｖが前記ＩｇＧ１重鎖のＣ末端に所望によりリンカーペプチドを介して融合されてなり、
    前記ターゲッティング可能な構築物が、２個の以下の化合物Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）−ＮＨ ２ が直接またはリンカーを介して共有結合してなる二量体であり、
    前記２個の四価の結合分子のそれぞれにおける各ＤＴＰＡに対する結合部位が、ｓｃＦｖであり、ターゲッティング可能な構築物におけるＤＴＰＡに結合してなる、結合複合体。
  2. 前記２対のＤＴＰＡが第一の対および第二の対を含んでなり、第一の四価の結合分子がＤＴＰＡの前記第一の対に結合し、第二の四価の結合分子がＤＴＰＡの前記第二の対に結合してなる、請求項１に記載の結合複合体。
  3. 前記第一および第二の四価の結合分子が同一の標的エピトープに結合する、請求項１に記載の結合複合体。
  4. 前記標的エピトープが疾患に関連した抗原である、請求項１に記載の結合複合体。
  5. 前記疾患が、過剰増殖性疾患、感染性疾患、癌、循環器疾患、神経変性疾患、代謝疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択されるものである、請求項４に記載の結合複合体。
  6. 前記標的エピトープが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、胆嚢癌、乳癌、子宮頸癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭癌および頸癌、ホジキンリンパ腫、肺癌、髄様甲状腺（medullary thyroid）、非ホジキンリンパ腫、卵巣癌、膵臓癌、神経膠腫、黒色腫、肝臓癌、前立腺癌および膀胱癌からなる群から選択される癌の１種類と関連した腫瘍関連抗原である、請求項１に記載の結合複合体。
  7. 前記標的エピトープが、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、ＢｒＥ３、ＣＤ１、ＣＤｌａ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＨＣＧおよびそのサブユニット、ＣＥＡ、ＣＳＡｐ、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−１、ＥＧＰ−２、Ｅｐ−ＣＡＭ、Ｂａ７３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＫＣ４、ＫＳ−１、ＫＳ１−４、Ｌｅ−Ｙ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＰＡＭ−４、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＲＳ５、Ｓ１００、ＴＡＧ−７２、ｐ５３、テネイシン、ＩＬ−６、インスリン増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、Ｔｎ抗原、トムソン−フリーデンライヒ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦ、１７−１Ａ、血管新生マーカー、サイトカイン、イムノモジュレーター、癌遺伝子マーカー、癌遺伝子産物および他の腫瘍関連抗原からなる群から選択される腫瘍関連抗原である、請求項６に記載の結合複合体。
  8. 前記ターゲッティング可能な構築物が、薬剤、プロドラッグ、酵素、ホルモン、イムノモジュレーター、オリゴヌクレオチド、放射性核種、画像増強剤および毒素からなる群から選択される生物活性部分をさらに含んでなる、請求項１に記載の結合複合体。
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