JP4936595B2 - Echinocandine pharmaceutical formulations containing micelle-forming surfactants - Google Patents

Abstract

Pharmaceutical formulations are described comprising an echinocandin compound or echinocandin/carbohydrate complex and a pharmaceutically acceptable micelle-forming surfactant in a non-toxic aqueous solvent such that the solubilization of the echinocandin compound is optimized and the ability to freeze-dry the solution is maintained. Both the solution and freeze-dried formulations have increased stability. A bulking agent, tonicity agent buffer and/or a stabilizing agent may optionally be added to the formulations to further enhance the stability of the formulation.

Description

を有し、Ｒがアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、またはそれらの組合せであり；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₆、Ｒ₇およびＲ₁₀が、独立して、ヒドロキシまたは水素であり；Ｒ₄が水素、メチルまたは−ＣＨ₂Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂であり；Ｒ₅およびＲ₁₁が、独立して、メチルまたは水素であり；Ｒ₈が、−ＯＨ、−ＯＰＯ₃Ｈ₂、−ＯＰＯ₃ＨＣＨ₃、−ＯＰＯ₂ＨＣＨ₃、または−ＯＳＯ₃Ｈであり；そしてＲ₉が、−Ｈ、−ＯＨ、または−ＯＳＯ₃Ｈである、化合物をいう。
【００１７】
用語「アルキル」は、他に示されない限り１〜３０個の炭素原子を含む一般式Ｃ_nＨ_2n+1の炭化水素ラジカルをいう。アルカンラジカルは、直鎖、分岐、環式、または多環式であり得る。アルカンラジカルは、置換されても置換されていなくともよい。同様に、アルコキシ基またはアルカノエートのアルキル部分は、上記と同じ定義を有する。
【００１８】
用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素間二重結合を含む非環式炭化水素をいう。アルケンラジカルは、直鎖、分岐、環式、または多環式であり得る。アルケンラジカルは、置換されても置換されていなくともよい。
【００１９】
用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素間三重結合を含む非環式炭化水素をいう。アルキンラジカルは、直鎖であっても分岐していてもよい。アルキンラジカルは、置換されても置換されていなくともよい。
【００２０】
用語「アリール」は、単環（例えば、フェニル）または融合環系（例えば、ナフタレン、アントラセン、フェナントレンなど）を有する芳香族部分をいう。アリール基は、置換されても置換されていなくともよい。置換されたアリール基は、芳香族部分の鎖（例えば、ビフェニル、テルフェニル、フェニルナフタリルなど）を含む。
【００２１】
用語「ヘテロアリール」は、芳香族環系内に少なくとも１つのヘテロ原子を含む芳香族部分（例えば、ピロール、ピリジン、インドール、チオフェン、フラン、ベンゾフラン、イミダゾール、ピリミジン、プリン、ベンズイミダゾール、キノリンなど）をいう。芳香族部分は、単環または融合環系からなり得る。ヘテロアリール基は、置換されても置換されていなくともよい。
【００２２】
有機化学の分野において、および特に有機生化学の分野において、化合物の重要な置換が慣用されるかまたは有用でさえあることが、広範に理解されている。本発明において、例えば、用語アルキル基は、古典的アルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、イソブチル、三級ブチル、ヘキシル、イソオクチル、ドデシル、ステアリルなど）である置換基を許容する。この用語の基は、当該分野で一般的なアルキル上の置換基（例えば、ヒドロキシ、ハロゲン、アルコキシ、カルボニル、ケト、エステル、カルバメート（ｃａｒｂａｍａｔｏ）など）を特異的に想定し、かつ許容し、そして非置換アルキル部分を含む。しかし、一般的に、置換基は、この化合物の薬理学的特徴に有害に影響しないか、または医薬の使用と有害に相互作用しないように選択されるべきであることが、当業者によって理解される。上記の基のいずれかについて適切な置換基としては、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、モノアルキルアミノおよびジアルキルアミノ、４級アンモニウム塩、アミノアルコキシ、ヒドロキアルキルアミノ、アミノアルキルチオ、カルバミル、カルボニル、カルボキシ、グリコリル、グリセイル、ヒドラジノ、グアニル、およびそれらの組合せが挙げられる。
【００２３】
「エキノカンジン／糖類複合体」は、エキノカンジンが糖類の存在下で溶媒から再結晶化される場合に、エキノカンジン化合物と糖類との間に形成される結晶性複合体をいう。エキノカンジン／糖類複合体のより詳細な記載は、１９９９年３月３日出願のＬａｒｅｗら、表題「Ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ／Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ」（ＷＯ００５２０３７）中に見出され得る。
【００２４】
「糖類」は、式Ｃ_n（Ｈ₂Ｏ）_nによって表される多価アルコールのアルデヒド誘導体またはケトン誘導体（例えば、グルコース、Ｃ₆（Ｈ₂Ｏ）₆；スクロース、Ｃ₁₂（Ｈ₂Ｏ）₁₁）をいう。糖類は、単糖のような比較的に小さな分子（例えば、モノサッカリド、ジサッカリドなど）、ならびにデンプン、グリコーゲン、およびセルロースポリサッカリドのような高分子（ポリマー性）物質の化合物を含む。糖は、一般的な組成（ＣＨ₂Ｏ）_nを有する糖類（サッカリド）およびその単純な誘導体である。単純なモノマー糖（例えば、グリコーセス（ｇｌｙｃｏｓｅｓ）は、ポリヒドロキシアルデヒドまたはポリヒドロキシケトン（例えば、アルドヘキソースについてはＨＯＣＨ₂−（ＣＨＯＨ）₄−ＣＨＯ（例えば、グルコース）または２−ケトースについてはＨＯＣＨ₂−（ＣＨＯＨ）₃−ＣＯ−ＣＨ₂ＯＨ（例えば、フルクトース））として記載されるが、構造は、５員環（フラノース）または６員環（ピラノース）の環式エーテルとして一般的に記載される。この環式エーテルは、例えば、以下である：
【００２５】
【化１０】

。
【００２６】
用語「ミセル形成性界面活性剤」は、水溶性凝集体を自発的かつ可逆的に形成する両親媒性物質をいう。ミセル形成のより詳細な記載およびミセル形成性界面活性剤の列挙に関しては、Ａｔｔｗｏｏｄら、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｔｈｅｉｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ（１９８３）を参照のこと。プロピレンオキシドおよびエチレンオキシドのブロックコポリマーは、本発明の処方物において十分に機能しない；従って、これらのブロックコポリマーは、ミセル形成性界面活性剤の意味の範囲内にあるとはみなされない。
【００２７】
用語「薬学的に受容可能」は、本明細書中で付加的に使用される場合、レシピエントに対して実質的に非毒性かつ実質的に有害ではないことを意味する。
【００２８】
（詳細な説明）
本発明に使用される環式ペプチドは、種々の微生物を培養することによって産生される。エキノカンジン環式ペプチドファミリーに属する適切な天然産物の出発物質としては、Ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ Ｂ、Ｅｃｎｉｎｏｃａｎｄｉｎ Ｃ、Ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ Ｄ、Ａｃｕｌｅａｃｉｎ Ａγ、Ｍｕｌｕｎｄｏｃａｎｄｉｎ、Ｓｐｏｒｉｏｆｕｎｇｉｎ Ａ、Ｐｎｅｕｍｏｃａｎｄｉｎ Ａ₀、ＷＦ１１８９９Ａ、およびＰｎｅｕｍｏｃａｎｄｉｎ Ｂ₀が挙げられる。一般に、環式ペプチドは、アミノ酸の１つにアシル化されたアミノ基を有する環式ヘキサペプチドの核として特徴付けられ得る。天然に存在する環式ペプチド上のアミノ基は、代表的には、核から脱離する側鎖を形成している脂肪酸基でアシル化される。天然に存在するアシル基の例としては、リノレオイル（ｌｙｎｏｌｅｏｙｌ）（Ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ Ｂ、ＣおよびＤ）、パルミトイル（Ａｃｕｌｅａｃｉｎ ＡγおよびＷＦ１１８９９Ａ）、ステアロイル、１２−メチルミリストイル（Ｍｕｌｕｎｄｏｃａｎｄｉｎ）、１０，１２−ジメチルミリストイル（Ｓｐｏｒｉｏｆｕｎｇｉｎ ＡおよびＰｎｅｕｍｏｃａｎｄｉｎ Ａ₀）などが挙げられる。
【００２９】
半合成誘導体は、環式ペプチドの核から脂肪酸側鎖を除去して、遊離アミノ基を生成すること（すなわち、付属のアシル基−Ｃ（Ｏ）Ｒがない）によって調製され得る。次いで、この遊離アミンを適切なアシル基で再びアシル化する。例えば、エキノカンジンＢの核は、特定の天然に存在しない側鎖部分で再びアシル化されて、多数の抗真菌剤を提供する。すなわち、米国特許第４，２９３，４８９号を参照のこと。当業者は、Ｎ−アセチル側鎖が当該分野で公知の種々の側鎖部分を含むことを理解する。適切な側鎖部分としては、置換および非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、およびそれらの組合せが挙げられる。好ましくは、側鎖は、抗真菌効力を最大化するように、線状の強固な区画と可撓性のアルキル区画の両方を含む。好ましいアシル側鎖の代表例としては、以下の構造式：
【００３０】
【化１１】

を有し、Ａ、Ｂ、ＣおよびＤが、独立して、ハロゲン、Ｃ₁〜Ｃ₁₂アルキル、Ｃ₂〜Ｃ₁₂アルキニル、Ｃ₁〜Ｃ₁₂アルコキシ、Ｃ₁〜Ｃ₁₂アルキルチオ、ハロ、または−Ｏ−（ＣＨ₂）_m−［Ｏ−（ＣＨ₂）_n］_p−Ｏ−（Ｃ₁〜Ｃ₁₂アルキル）もしくは−Ｏ−（ＣＨ₂）_q−Ｘ−Ｅであり：ｍは、２、３、または４であり；ｎは、２，３または４であり；ｐは、０または１であり；ｑは、２，３または４であり；Ｘは、ピロリジノ、ピペリジノまたはピペラジノであり；そしてＥは水素、Ｃ₁〜Ｃ₁₂アルキル、Ｃ₃〜Ｃ₁₂シクロアルキル、ベンジルまたはＣ₃〜Ｃ₁₂シクロアルキルメチルである、Ｒ基を含む。
【００３１】
上記のように、本明細書中に記載される環式ペプチドは、当該分野において記載されるような公知の微生物の発酵によって調製され得る。その後の脱アシル化は、代表的には、当該分野において記載される公知の物質および手順により脱アシル化酵素を使用して酵素的に実行される。
【００３２】
例えば、米国特許第４，２９３，４８２号は、式Ｉ（ここでＲ_４，Ｒ_５およびＲ_１１は、メチルであり、Ｒ_９が水素であり、そしてＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_１０は各々ヒドロキシである）の環式ペプチドの脱アシル化および調製を記載している。米国特許第４，２９９，７６３号は、式Ｉ（ここでＲ_４、Ｒ_５およびＲ_１１がメチルであり、Ｒ_２がヒドロキシであり、Ｒ_７およびＲ_９が水素であり、そしてＲ_１、Ｒ_３、Ｒ_６、Ｒ_８およびＲ_１０が各々ヒドロキシである）の環式ペプチドの脱アシル化および調製を記載している。米国特許第３，９７８，２１０号は、アクレアシン（ａｃｕｌｅａｃｉｎ）の調製を記載している。米国特許第４，３０４，７１６号は、式Ｉ（ここでＲ_５は−ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）ＮＨ_２であり；Ｒ_１１はメチルであり；Ｒ_４およびＲ_９は水素であり；Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_１０は各々ヒドロキシであり、そして置換基Ｒのアシル基はミリストイルである）の環式ペプチドの脱アシル化および調製を記載している。
【００３３】
Ｒ₂およびＲ₇が各々水素である環式ペプチドは、約−５℃と７０℃との間の温度で、適切な溶媒中で、対応する化合物（ここでＲ₂およびＲ₇が各々水素であり；オルニチンのαアミノ基は、遊離アミノ基であってもアシル化されていてもよい）を、強酸および還元剤に供することによって調製され得る。適切な強酸としては、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸またはボロントリフルオリドエテレート（ｂｏｒｏｎ ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄｅ ｅｔｈｅｒａｔｅ）が挙げられる。好ましい強酸は、トリフルオロ酢酸である。適切な還元剤としては、シアノ水素化ナトリウムまたはトリエチルシランが挙げられる。好ましい還元剤は、トリエチルシランである。適切な溶媒としては、メチレンクロリド、クロロホルムまたは酢酸、好ましくはメチレンクロリドが挙げられる。強酸は、基質１モルあたり約２〜６０モルの量で存在し、そして還元剤は、基質１モルあたり約２〜６０モルの量で存在する。酸還元プロセスは、アミナル（ａｍｉｎａｌ）（Ｒ₂）およびベンゼン（ｂｅｎｚｙｌｉｃ）（Ｒ₇）のヒドロキシ基を選択的に除去する。
【００３４】
オルニチン単位上のα−アミノ基のアシル化は、当業者に周知の種々の様式において達成され得る。例えば、アミノ基は、好ましくは酸スカベンジャー（例えば、三級アミン（例えば、トリエチルアミン））の存在下で、適切に置換されたアシルハライドと反応させることによってアシル化され得る。この反応は、代表的には、約−２０℃〜２５℃の間の温度で実行される。適切な反応溶媒としては、極性の非プロトン性溶媒（例えば、ジオキサンまたはジメチルホルムアミド）が挙げられる。溶媒の選択は、用いられる溶媒が進行中の反応に不活性であり、かつ反応物が所望の反応をもたらすように十分に溶解される限り、重要ではない。
【００３５】
アミノ基はまた、共役剤の存在下で、適切に置換されたカルボン酸との反応によってアシル化され得る。適切な共役剤としては、ジクロロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジミダゾール、ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィニッククロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ）、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）などが挙げられる。
【００３６】
あるいは、アミノ基は、カルボン酸の活性化エステル（ｐ−ニトロフェニルエステル、２，４，５−トリクロロフェニルエステル、ヒドロキシベンゾトリアゾールヒドレートエステル（ＨＯＢＴ／Ｈ₂Ｏ）、ペンタフルオロフェノールエステル、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミドカルボキシレートエステル）とアシル化され得る。好ましいアシル化部分は、２，４，５−トリクロロフェニルおよびＨＯＢＴカルボキシレートエステルである。この反応は、代表的に、非プロトン性溶媒中で、約０℃〜３０℃の温度で、１〜６５時間行われる。この反応は、一般的に、約１５℃〜３０℃の間の温度で行われる場合に、約２４〜４８時間後に終了する。適切な溶媒としては、テトラヒドロフランおよびジメチルホルムアミドまたはそれらの混合物が挙げられる。アミノ基は、一般に、活性化エステルに対して当モルの割合で存在するか、またはアミノ基がわずかに過剰である。
【００３７】
Ｒ−ＣＯＯＨ前駆体の酸は、式Ｒ−ＣＮのニトリルまたは式Ｒ−ＣＯＯ（Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル）のエステルを加水分解させることによって調製される。このニトリルおよびエステル中間体は、当該分野で公知の手順を使用して調製され得る。例えば、Ｒがアルコキシアリール部分であるニトリルおよびエステル中間体は、手順Ａまたは手順Ｂを使用して調製され得る。
【００３８】
（手順Ａ）１当量のアルキルブロミド、ヨージド、またはｐ−トルエンスルホネートを、１当量の塩基（例えば、ｔ−ブトキシドカリウムまたは炭酸カリウム（Ｋ₂ＣＯ₃））、および１当量のヒドロキシアリール化合物を２００〜３００ｍｌのアセトニトリル（ＣＨ₃ＣＮ）中に含む混合液に添加する。この反応混合液を、６時間還流して、次いで真空下で濃縮して残渣を提供し、これをＥｔ₂Ｏ／２Ｎ ＮａＯＨ混合液に溶解する。得られた層を分離して、そして有機層を硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ₄）で乾燥させ、濾過して、そして乾燥させて、アルコキシアリール生成物を提供する。
【００３９】
（手順Ｂ）ジエチルアゾジカルボキシレート（１当量）を、ヒドロキシアリール化合物（１当量）、アルキルアルコール（１当量）、およびトリフェニルホスフィン（１当量）を２００〜３００ｍｌのＴＨＦ中に含む混合液に、滴下して添加する。１７時間後に、この溶媒を、真空下で除去して、残渣を提供して、この残渣をＥｔ₂Ｏに溶解する。得られた混合液を、２Ｎ ＮａＯＨ溶液で洗浄して、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過して、そして濃縮して生成物を提供して、次いでこの生成物をＥｔ₂Ｏ／ペンタン混合液から再結晶するか、またはこの生成物が三級アミンを含む場合、塩酸塩を形成させ、そしてメタノール（ＭｅＯＨ）／ＥｔＯＡｃ混合液から再結晶する。Ｒがアルキニルアリール部分であるニトリルおよびエステル中間体は、手順Ｃを使用して調製され得る。
【００４０】
（手順Ｃ）Ｅｔ₂Ｏ（２当量）、二塩化パラジウム（０．０５当量）、トリフェニルホスフィン（０．１当量）、ヨウ化銅（０．０２５当量）、およびアルキン（１当量）を含む混合液を、窒素（Ｎ₂）下で、ＣＨ₃ＣＮ中の１当量のアリールブロミド、ヨージド、またはトリフルオロメタンスルホネート（６００ｍｌ／０．１ｍｏｌのアリール反応物）に添加する。得られた混合液を１７時間還流して、次いで溶媒を真空下で除去して残渣を提供し、これを、３００ｍｌのＥｔ₂Ｏ中でスラリーにして、次いで濾過する。ろ液を、１Ｎ ＨＣｌ溶液で洗浄して、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、ろ過して、そして乾燥させて生成物を提供する。Ｒがトリフェニル部分であるエステル中間体を、手順Ｄを使用して調製する。
【００４１】
（手順Ｄ）
（１．ホウ酸（ｂｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）の処方）
ブチルリチウム（１．２当量）を、ＴＨＦ中の１当量の冷（−７８℃）アリールハライドに添加する。１５分後に、トリイソプロピルボレート（２当量）を添加する。１０分後に、反応混合液を室温まで温めて、そして水（Ｈ₂Ｏ）の添加、続いて１Ｎ ＨＣｌの添加によって停止させる。得られた層を分離して、そして有機層を真空下で濃縮して固体を提供して、この固体をろ過によって回収して、そしてヘキサンでの洗浄する。
【００４２】
（２．テルフェニルエステルの処方）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．０３当量）を、Ｎ₂パージしたトルエン中のアリールホウ酸（ａｒｙｌ ｂｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）（１当量）、Ｋ₂ＣＯ₃（１．５当量）、およびメチル４−ヨードベンゾエート（１当量）（またはヨードベンゼンのトリクロロフェニルエステル）を含む混合液に添加する。この反応混合液を７時間還流して、次いでデカントしてＫ₂ＣＯ₃を除去し、そして真空下で乾燥させて、残渣を提供する。この残渣をＣＨ₂ＣＮ中でトリチル化し、そしてろ過して生成物を提供する。上記のアリールニトリルおよびエステルを、手順Ｅまたは手順Ｆを使用する加水分解によって対応するカルボン酸に変換し得る。
【００４３】
（手順Ｅ）アリールニトリルを、エタノール（ＥｔＯＨ）および５０％過剰のＮａＯＨ溶液中に溶解して、そして２時間還流する。固体が沈殿するまで、水をこの反応混合液に添加する。この固体を、ろ過によって回収して、ジオキサン／６Ｎ ＨＣｌ混合液に添加して、そして得られた混合液を１７時間還流する。反応が実質的に終了したときに、カルボン酸生成物を、Ｈ₂Ｏの添加によって再結晶化し、次いでろ過によって回収して、そして真空下で乾燥させる。
【００４４】
（手順Ｆ）過剰の２Ｎ ＮａＯＨを、ＭｅＯＨ中のアリールエステルに添加して、そして得られた溶液を５時間還流して、次いで過剰のＨＣｌの添加によって酸性にする。固体（カルボン酸）が沈殿するまで、水を反応混合液に添加する。カルボン酸をろ過によって回収して、そして真空下で乾燥させる。カルボン酸を、以下の手順Ｇを使用して、対応する２，４，５−トリクロロフェニルエステルに変換し得る。次いで、活性化エステルを使用して、アミノ核をアシル化する。
【００４５】
（手順Ｇ）アリールカルボン酸（１当量）、２，４，５−トリクロロフェノール（１当量）およびＤＣＣ（１当量）をＣＨ₂Ｃｌ₂中に含む混合液を、１７時間攪拌して、次いでろ過する。ろ液を濃縮して残渣を提供し、この残渣をＥｔ₂Ｏ中に溶解し、ろ過して、次いで結晶化が始まるまでペンタンを添加する。結晶をろ過によって回収して、そして真空下で乾燥させる。あるいは、カルボン酸は、手順Ｈを使用する、対応するヒドロキシベンゾトリアゾールエステルへの変換によって活性化され得る。
【００４６】
（手順Ｈ）アリールカルボン酸（１当量）およびわずかに過剰のＮ−メシレート置換ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．２当量）を、わずかに過剰の塩基（例えば、トリエチルアミン（Ｅｔ₃Ｎ）（１．３当量））の存在下においてＤＭＦ中、Ｎ₂下で反応させた。反応が終結した場合、混合物をトルエンで希釈し、Ｈ₂Ｏで洗浄した。有機部分を、Ｈ₂Ｏで希釈し、次いでｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）を使用して、物質を移すためにろ過した。生じた固体を、ＭＴＢＥを用いて洗浄し、次いで減圧下で乾燥した。
【００４７】
エキノカンジン（ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ）化合物を単離し、そしてそれ自体かまたはその薬学的受容可能な塩もしくは水和物の形態においてか、あるいはエキノカンジン／糖類複合体として使用し得る。用語「薬学的に受容可能な塩」とは、無機酸および有機酸から誘導される非毒性酸添加塩をいう。適切な塩誘導体としては、ハロゲン化合物、チオシアネート、硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、アリールスルホネート、硫酸アルキル、ホスホネート、モノヒドロゲン−ホスフェート、ジヒドロゲンホスフェート、メタホスフェート、ピロホスホネート、アルカノエート、シクロアルキルアルカノエート、アリールアルカノエート、アジパート、アルギネート、アスパルテート、ベンゾエート、フマレート、グルコヘプタノエート、グリセロホスフェート、ラクテート、マレアート、ニコチネート、オキザラート、パルミテート、ペクチネート、ピクレート、ピバレート（ｐｉｖａｌａｔｅ）、スクシネート、タータレート（ｔａｒｔａｒａｔｅ）、シトレート、カンホレート（ｃａｍｐｈｏｒａｔｅ）、カンホスルホネート、ジグルコネート、トリフルオロアセテートなどが挙げられる。
【００４８】
「エキノカンジン／糖類複合体」とは、エキノカンジンが糖類の存在下において溶液から再結晶化される場合、エキノカンジン化合物と糖類（または糖）との間に形成されたクリスタリン複合体をいう。エキノカンジン／糖類複合体のより詳細な説明は、１９９９年３月３日に提出された「Ｅｃｈｉｎｏｃａｎｄｉｎ／Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ」と表題をつけられたＬａｒｅｗら（ＷＯ００５２０３７）、において見出され得、そしてそれは本明細書中に参考として援用される。この複合体は、標準的な結晶化手順（例えば、代表的には、再結晶化によって化合物を精製するために実施される手順）を使用して形成される。このエキノカンジン物質および糖類は、溶媒において、上昇した温度にて溶解する（およそ、４５℃〜６０℃、好ましくは５５℃未満）。次いで、その溶液を、結晶化が始まるまでゆっくりと冷却する。種結晶（例えば、以前に結晶化された複合体または不溶性糖）を添加して、結晶化を開始させ得る。適切な溶媒としては、進行中の反応に対して不活性な任意の溶媒、または溶媒の混合物が挙げえられ、これらは、媒体がその中で糖類とエキノカンジン化合物との間の所望の複合体生成に影響を及ぼすことを可能にするように十分に反応物を可溶化し、たとえば、メタノール、エタノール、ベンジルアルコールを含むプロトン性溶媒またはケトン溶媒、ならびにベンジルアルコールと、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、ｔ−ブタノール、２−ペンタノール、２−メチル−１−プロパノール、ＭＥＫ、アセトン、酢酸エチル、トルエン、アセトニトリル、フルオロベンゼン、メチレンクロリド、ニトロメタン、または環状ケトン（例えば、シクロペンタノンおよびシクロヘキサノン）のような溶媒との混合物が挙げられる。好ましい溶媒としては、メタノール、エタノール、ベンジルアルコール、およびベンジルアルコールとメチルエチルケトン、酢酸エチル、およびアセトニトリルとの混合物が挙げられる。
【００４９】
適切な糖類としては、アドニトール、アラビノース、アラビトール、アスコルビン酸、キチン、Ｄ−セルビオース、２−デオキシ−Ｄ−リボース、ズルシトール、（Ｓ）−（＋）−エリスロース、フルクトース、フコース、ガラクトース、グルコース、イノシトール、ラクト−ス、ラクツロース、リキソース（ｌｙｘｏｓｅ）、マルチトール、マルトース、マルトトリオース、マンニトール、マンノース、メレジトース（ｍｅｌｅｚｉｔｏｓｅ）、メリビオース、ミクロクリスタリンセルロース、パラチノース、ペンタエリトリトール、ラフィノース、ラムノース、リボース、ソルビトール、ソルボース、スターチ、スクロース、トレハロース、キシリトール、キシロース、およびそれらの水和物が挙げられる。また、適切な糖類としては、上記の化合物のＤおよびＬエナンチオマーならびにαおよびβアノマーが挙げられる。好ましい糖類は、単糖（例えば、モノ−サッカリドおよびジ−サッカリド）である。
【００５０】
このエキノカンジン化合物は、１ｍｇ／ｍｌ以上の濃度でフリーズドライする前に、本発明の処方物内に存在し得る。一般的に、エキノカンジン化合物は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの範囲内、好ましくは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約４０ｍｇ／ｍｌの範囲内の濃度にて、より好ましくは約１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの範囲内そして最も好ましくは、約８ｍｇ／ｍｌ〜約１２ｍｇ／ｍｌの範囲内に存在する。
【００５１】
本発明の処方物は、水中で非水可溶性薬物を可溶化し得る疎水性かつ親水性単位もしくは基を有する薬学的に受容可能な両親媒性賦形剤であるミセル形成界面活性剤を含む。１０〜１８のＨＬＢ値が、エキノカンジン化合物の可溶化のために一般的に最も好ましい。この界面活性剤は、エキノカンジン対界面活性剤の重量比が、約１：１．７５〜約１：２．５、より好ましくは約１：２〜約１：３の比で処方物内に存在する。処方物に添加される界面活性剤の上限は、薬学的医薬の用途におけるその毒性によって制限され得る；従って、上限は、選択される特定の界面活性剤のよって、変動し得る。適切な界面活性剤としては、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０、ポリソルベート４０、ポリソルベート２０）、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒｓ^ＴＭ（ポリオキシル３５ヒマシ油、ポリオキシル４０水素化ヒマシ油、およびポリオキシル６０水素化ヒマシ油）（ＢＡＳＦより入手可能））、ポリオキシエチレンステアラート（例えば、Ｓｏｌｕｔｏｌ^ＴＭＨＳ１５（マクロゴール−６６０−ヒドロキシステアラート、（ＢＡＳＦより入手可能））、ソルビタントリオレート（ｔｒｉｏｌｅａｔｅ）、胆汁酸塩（例えば、コール酸、デオキシコール酸およびその塩（例えば、デオキシコール酸ナトリウムまたはタウロデオキシコール酸ナトリウム））、レシチンなどが挙げられる。好ましい界面活性剤としては、ポリソルベート８０、ポリソルベート４０、ポリソルベート２０および減少したヒスタミン効果を有するポリエチレンヒドロキシステアラート（例えば、Ｓｏｌｕｔｏｌ^ＴＭＨＳ１５）が挙げられる。十分に可溶化しない界面活性剤は、プロピレンオキシドおよびエチレンオキシドのブロックコポリマーである特定のポリオキサマーを含む。
【００５２】
「ポリソルベート」とは、以下の一般構造を有する物質をいう：
【００５３】
【化２１】

ここで、ｘ＋ｙ＋ｗ＋ｚは、５と２０との間の整数と等しい。
【００５４】
商品Ｔｗｅｅｎ^TM２０、４０および８０（ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＬより入手可能）が、ｘ＋ｙ＋ｗ＋ｚ＝２０の場合、上記構造によって表わされる。
【００５５】
「レシチン」とは、以下の一般構造を有する物質をいう：
【００５６】
【化１３】

Ｒは、代表的にステアリン酸、パルミチン酸またはオレイン酸からの残基である。
【００５７】
「胆汁酸塩」とは、以下の一般構造を有する物質をいう。
【００５８】
【化１４】

ここで、Ｒ３、Ｒ７およびＲ１２は、−ＯＨ、−Ｈまたは−ＳＯ₃ ^-基であり、そしてＲ２４は、−ＯＨまたはＣＯ₂ ^-−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ₂）_nＳＯ₃ ^-、または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ₂）_nＣＯ₂ ^-のアルカリ塩であり、そしてｎは、１と４との間の整数と等しい。
【００５９】
代表的な溶液処方物は、エキノカンジン化合物およびミセル形成界面活性剤を含む。出願人は、ミセル形成界面活性剤の取りこみが、エキノカンジン化合物の可溶化を最適化するだけでなく、その溶液の安定性をも増強させることを観察した。この処方物は、必要に応じて、一つ以上の緩衝剤、安定化剤、および／または緊張度調節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）を含み得る。次いでこの処方物が溶液の形態にある場合、溶媒がまた存在する。溶媒は哺乳動物に非経口的に投与され得るように安全なものとして認識される溶媒に基づいて一般的に選択される（ＧＲＡＳ）。一般的に、安全な溶媒は、非毒性水性溶媒（例えば、水および水中で可溶性であるか、もしくは混和性の他の非毒性溶媒）である。適切な溶媒としては、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）など、およびそれらの混合物が挙げられる。好ましい溶媒は、水である。
【００６０】
代表的なフリーズドライ処方物は、エキノカンジン化合物、薬学的に受容可能なミセル形成界面活性剤、充填剤および／または安定化剤を含む。この処方物は、必要に応じて、一つ以上の緩衝化剤を含み得る。出願人が、ミセル形成界面活性剤の添加が非毒性水性溶媒中にフリーズドライ処方物の再構築を最適化するだけでなく、そのフリーズドライ物質に、増強された安定性を提供するということを観察した。
【００６１】
溶液およびフリーズドライ処方物の両方は、必要に応じて。安定化剤を含み得る。安定化剤は、一般的に、約０．５％〜約４０％（ｗｇｔ．／ｖｏｌ．）の範囲の濃度で、より好ましくは約１％〜約６％の範囲の濃度で存在する。用語「安定化剤」とは、この処方物における活性成分の化学的または物理的安定性を増大させる薬学的に受容可能な賦形剤をいう。適切な安定化剤としては、ポリオール（例えば、ポリエチレンおよびプロピレングリコールおよび糖類（例えば、スクロース、トレハロース、フルクトース、ラクトース、およびマンニトール）、アミノ酸および界面活性剤（例えば、ポリソルベートおよび胆汁酸塩）が挙げられる。フリーズドライ処方物のために好ましい安定化剤としては、マンニトール、スクロース、トレハロース、フルクトース、ラクトースおよびそれらの組み合わせが挙げられる。溶液において、最も好ましい安定化剤は、胆汁酸塩、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールである。
【００６２】
溶液およびフリーズドライ処方物の両方はまた、必要に応じて緩衝剤を含む。この緩衝剤は、約０．０３％〜約５．０％（ｗｇｔ．／ｖｏｌ．）の範囲の濃度で、より好ましくは、約０．１％〜約１．０％の範囲の濃度で存在する。用語「緩衝剤」とは、緩衝化システムに特異的な特定の範囲内に溶液のｐＨを維持する薬学的に受容可能な賦形剤をいう。適切なｐＨの範囲は、ｐＨ３．０〜７．０である。好ましくは、ｐＨ範囲は、４．０〜５．５であり、より好ましくは、４．０〜５．０である。適切な緩衝剤としては、アセテート、シトレート、ホスフェート、タータラート、ラクテート、スクシネート、アミノ酸などが挙げられる。溶液処方物のための好ましい緩衝剤としては、アセテート、シトレート、タータラート、リン酸塩およびそれらの組み合わせが挙げられる。フリーズドライ処方物のための好ましい緩衝剤は、酒石酸である。
【００６３】
溶液処方物は、必要に応じて一つ以上の緊張度調節剤を含み得る。緊張度調節剤は、一般に、約１〜約１００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で、より好ましくは約９〜約５０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。用語「緊張度調節剤」とは、血液に適合する溶液を作製する薬学的に受容可能な賦形剤をいう。緊張度調節剤は、注射可能な処方物において所望される。適切な緊張度調節剤としては、グリセリン、ラクトース、マンニトール、デキストロース、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、ソルビトールなどが挙げられる。好ましい緊張度調節剤としては、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、および塩化ナトリウムならびにそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６４】
フリーズドライした場合、この処方物は必要に応じて充填剤を含み得る。この充填剤は、処方物中に、約２％〜約１０％（ｗｇｔ／ｖｏｌ）の範囲の濃度で、より好ましくは約３％〜約６％（ｗｇｔ／ｖｏｌ）の範囲の濃度で存在する。用語「充填剤」とは、フリーズドライの際に良く形成されたケーキ（ｃａｋｅ）を生じる処方物にバルクを添加する薬学的に受容可能な賦形剤をいう。適切な充填剤としては、マンニトール、グリシン、ラクトース、スクロース、トレハロース、デキストラン、ヒドロキシエチルスターチ、フィコールおよびゼラチンが挙げられる。好ましい充填剤としては、マンニトール、スクロース、トレハロース、ラクトースおよびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００６５】
処方物は、従来の溶解手順および混合手順を使用して調製され得る。例えば、バルク薬物物質（例えば、エキノカンジン化合物またはエキノカンジン／糖類複合体）は、薬学的に受容可能なミセル形成界面活性剤および必要に応じて一つ以上の充填剤、緩衝剤、安定化剤および／または緊張度調節剤の存在下で非毒性水性溶媒に溶解される。次いで生じた溶液は、滅菌ろ過されて、そして好ましくは所望の処方物を提供するためにフリーズドライされる。フリーズドライをする前に、この界面活性剤は一般的に、溶液の容量当たり１％重量よりも多くの量で存在する。
【００６６】
あるいは、この薬学的溶液は、約３．０〜７．０のｐＨ（好ましくは、４．０〜５．５、より好ましくは４．０〜５．０）に緩衝化された水性緩衝溶液を形成することによって調製され得る。使用される緩衝剤は、以前に記載された任意の緩衝剤であり得る。次いで、ミセル形成界面活性剤を緩衝化溶液および約５℃〜１５℃に冷却された溶液（好ましくは、約７℃〜１０℃）に添加する。非毒性水性溶媒（これは、緩衝溶液にて使用される溶媒と同じものであっても良いし、相でなくても良い）中のエキノカンジン化合物またはエキノカンジン／糖類複合体のスラリーを、界面活性剤を含む冷却された溶液に添加する。一つ以上の充填剤、安定化剤および／または緊張度調節剤は、フリーズドライの前に溶液に添加され得る。次いで、生じた溶液をさらなる溶媒で希釈し、ろ過し、そして所望の処方物を提供するためにフリーズドライする。
【００６７】
フリーズドライするための適切な方法は、Ｎａｉｌら、Ｆｒｅｅｚｅ Ｄｒｙｉｎｇ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ 第２版、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．ＮＹ，１６３−２３３頁（１９９３）において記載される。この処方物は好ましくは、必要とされるまで保存され得るバイアル中でフリーズドライされる。非毒性水性溶媒をバイアルに添加し、フリーズドライした物質を溶かす、それによって非経口的な治療用途において使用され得る溶液を形成する。当業者は、この水性溶媒がそのような用途に使用される他の通常の溶液（例えば、生理食塩水溶液、デキストロース溶液など）を含むということを理解する。
【００６８】
一般に、バルキンング剤および非フリーズドライ処方物を含むフリーズドライした処方物は、一つ以上の緊張度調節剤を含む。用途において、この処方物は、投与の前に、代表的には希釈されるか、または（フリーズドライした場合）再構成され、そして必要な場合さらに希釈される。フリーズドライ製品についての再構成手順の例は、注射（ＷＦＩ）のために、１０ｍｌの水をバイアルに添加し、そして溶かすために穏やかに撹拌することである。代表的な再構成の時間は、１分未満である。次いで、生じた溶液を、投与の前に、注入溶液（例えば、水中デキストロース５％（Ｄ５Ｗ））でさらに希釈する。
【００６９】
活性成分は、薬物の容易に制御可能な投薬量を提供し、そして患者が簡潔かつ容易に取り扱うことのできる製品を与えるように、代表的に薬学的投薬量形態に処方される。処方物は、活性成分の０．１％〜６０％重量、より一般的には約１０％〜約３０％重量を含み得る。
【００７０】
本明細書中で使用される場合、用語「単回用量」または「単回投薬量」とは、所望の治療効果を生成するために計算された活性成分の予め決定された量を含む物理的な個々の単位である。単回用量が、非経口的に投与された場合、単回用量は、アンプル（またはバイアル）内に正確に測定された単位の形態で代表的に提供される。
【００７１】
投与されるべき投薬量は、患者の身体的な特徴、患者の症状の重篤度、および薬物を投与するために使用される手段に依存して変動し得る。所定の患者に対する特定の用量は、通常、主治医の判断によって、設定される。
【００７２】
適切なキャリア、希釈剤および賦形剤は、当該分野において公知であり、そしてそれらとしては、例えば、糖類、ワックス、水溶性ポリマーおよび／または膨潤可能なポリマー、疎水性物質もしくは親水性物質、ゼラチン、油、溶媒、水などのような物質が挙げられる。使用される特定のキャリア、希釈剤もしくは賦形剤は、適用される活性成分の手段および目的に依存する。この処方物はまた、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤、甘味料、香料剤、矯味矯臭剤およびそれらの組み合わせを含み得る。
【００７３】
薬学的組成物は、種々の方法を使用して投与され得る。適切な方法としては、注射が挙げられる。使用される特定の処置方法は、行われる注射の型に依存する。
【００７４】
エキノカンジンおよび半合成エキノカンジン化合物は、以下を含む種々の感染性真菌の増殖阻害のような抗真菌活性および抗寄生虫活性を示すことが示されている：Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ．（すなわち、Ｃ．Ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．Ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．Ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．Ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．Ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、またはＣ．Ｌｕｓｉｔａｎｉａｗ）；Ｔｏｒｕｌｏｐｕｓ ｓｐｐ．（すなわち、Ｔ．Ｇｌａｂｒａｔａ）；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．（すなわち、Ａ．Ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）；Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｓｐｐ．（すなわち、Ｈ．Ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）；Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．（すなわち、Ｃ．Ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）；Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．（すなわち、Ｂ．Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）；Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．；Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ．、Ｐｓｅｕｄｏｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ ｂｏｙｄｉｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｄｅｓ ｉｍｍｉｔｓ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｔｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉなど。
【００７５】
この型の化合物はまた、免疫抑制された個体における日和見感染を主に担う特定の生物の増殖を阻害する（例えば、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ（ＡＩＤＳおよび他の免疫無防備の患者におけるＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ（ＰＣＰ）の原因生物）の増殖阻害）。エキノカンジン型の化合物により阻害される他の原生動物亜界としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｓｐｐ．Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．Ｉｓｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．、Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．、Ｔｒｉｃｈｏｍｎａｓ ｓｐｐ．Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ ｓｐｐ．などが挙げられる。
【００７６】
結果的に、本発明の処方物は、全身性真菌感染または真菌皮膚感染のいずれかと闘う際に有用である。従って、本発明のプロセスおよび処方物は、本明細書中に記載される治療適用のための医薬の製造に使用され得る。例えば、真菌活性（好ましくは、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓもしくはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｉｓ活性）または寄生虫活性は、本発明によって調製された薬学的処方物と真菌または寄生虫とをそれぞれ接触させることによって阻害され得る。用語「接触（ｃｏｎｔａｃｔ）」は、一つにすること（ｕｎｉｏｎ）または接合すること（ｊｕｎｃｔｉｏｎ）、あるいは本発明の化合物と寄生虫もしくうは真菌とをみかけ上触れさせることまたは相互に接触させることを含む。この用語は、機構の阻害によるような、このプロセスに対する任意のさらなる限界を暗示しない。この方法は、化合物の作用およびそれらに固有の抗寄生虫および抗真菌特性によって、寄生虫活性および真菌活性を阻害することを含むように規定される。
【００７７】
真菌感染の処置を必要としている宿主に本発明の薬学的処方物を有効量投与することを含む、真菌感染を処置するための方法もまた、提供される。好ましい方法としては、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓまたはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｉｓ感染を処置することが挙げられる。用語「有効量」は、真菌活性を阻害し得る化合物の量をいう。投与される用量は、感染の性質および重篤度、宿主の年齢および一般的な健康、ならびに抗真菌剤に対する宿主の寛容性のような因子に依存して変動する。特定の用量レジメンは同様に、これらの因子に従って変動し得る。医薬は、一日単回用量で、または一日の間に複数回用量で与えられ得る。このレジメンは、約２〜３日から約２〜３週以上続き得る。代表的な一日用量（単回または分割用量で投与される）は、体重１ｋｇあたり活性化合物が約０．０１ｍｇ〜１００ｍｇの間の投薬量レベルを含む。一般に、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜６０ｍｇ／ｋｇ、およびより好ましくは、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの間の一日用量が、好ましい。
【００７８】
以下の実施例は、本発明を例示するために提供されるが本発明を限定しない。本明細書中に引用される全ての参考文献は、本明細書によって本明細書中に参考として援用される。
【００７９】
（実施例）
本発明の処方物を例示するために使用されるエキノカンジン化合物を、以下の調製に記載されるように調製した。詳細には、以下の一連が、以下の構造を有する抗真菌化合物６（ａ）の調製を記載する：
【００８０】
【化１５】

以下が例示的な実施例として役立つこと、および抗真菌剤として有用な他の半合成エキノカンジン化合物が、類似の手順または本明細書の最初に引用された参考文献に記載の手順を使用して合成され得ることを当業者は理解する。以下の調製に使用される物質は、他に示さない限り、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）から入手可能である。
【００８１】
（化合物調製）
（４−ブロモ−４’−ペンチルオキシビフェニル １（ａ）の調製）
無水Ｋ₂ＣＯ₃（４１６ｇ、３ｍｏｌ）を、４−ブロモ−４’−ヒドロキシビフェニル（３００ｇ、１．２ｍｏｌ）、１−ヨードペンタン（２３４ｍｌ、１．７９ｍｏｌ）および２−ブタノン（６００ｍｌ）の混合物に加えた。反応混合物を、ＴＬＣ（８５：１５ ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）がブロモアルコールの完全な消費を示すまで、４４時間還流した。混合物を、約３０℃に冷却し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（６００ｍｌ）で希釈し、次いで濾過した。濾液をＨ₂Ｏで２回洗浄し、そして飽和水性ＮａＣｌ溶液で２回洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で乾燥させ、固体を得た。この固体を濾過により単離し、合計２Ｌの氷冷ヘプタンで繰り返し洗浄し、全ての微量のヨードペンタンを除去し、次いで、高減圧下で一晩乾燥させた。収率：３４０ｇ（８８％）の白色粉末。
【００８２】
（４−ブロモ−４’−ペンチルオキシビフェニル １（ａ）の代替の調製）
４−ブロモ−４’−ヒドロキシビフェニル（１２．５ｇ、５０．２ｍｍｏｌ）を脱イオンＨ₂Ｏ（１５０ｍｌ）中のＮａＯＨ（２．２８ｇ、純度９７％、５５．２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、続いて、１−ヨードペンタン（１１．９ｇ、６０．２ｍｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムブロマイド（０．８２ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を、固体が溶液になるまで９０℃で３．７５時間攪拌した。次いで、反応が進行するにつれて、所望の生成物が沈澱し始めた。この混合物を、ゆっくり冷却し、次いで濾過して、固体を得、これを濾液のｐＨが中性になるまで脱イオン水で洗浄し、次いで３０℃で真空オーブン中で１６時間乾燥した。
【００８３】
収率：１５．４１ｇ（９６％）（５ａに対して）Ｒ_f０．５（９７：３ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）。
【００８４】
【数１】

（４−ホウ酸−４’−ペンチルオキシビフェニル ２（ａ）の調製）
ｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）（１Ｌ）中の化合物１（ａ）（１００ｇ、０．３１ｍｏｌ）の冷（−２０℃）混合物に、ｎ−ブチルリチウム（１５０ｍｌの２．５Ｍヘキサン溶液、０．３７ｍｏｌ）を、内部温度を−１９℃と−１８℃の間に維持しながら、Ｎ₂下でゆっくり滴下した。得られた混合物を３．５時間−１７℃と−１６℃の間で攪拌し、淡黄緑色溶液を生じた。この溶液を、−７８℃に冷却し、１００ｍｌの無水ＴＨＦで希釈し、白色沈澱を生じた。次いで、窒素下で、ＭＴＢＥ（２００ｍｌ）中のトリイソプロピルボレート（１４５ｍｌ、０．６２ｍｏｌ）の冷（−７８℃）溶液を、反応温度を−７８℃と−７４℃の間の反応温度を維持しながら１．５時間にわたって滴下した。得られた反応混合物を、１．５時間−７８℃で攪拌し、次いで、一時間にわたって−５０℃に温め、このとき、冷却浴を除去し、そして混合物を一晩（１６〜２１時間）攪拌し、白色沈澱を得た。この混合物を、２Ｍ ＨＣｌ（１０００ｍｌ）で５分間激しく振盪し、次いで生じた層を分離し、有機層を減圧下で乾燥させ、残渣を得た。この残渣をＭＴＢＥ（１００ｍｌ）で希釈し、続いてヘプタン（８００ｍｌ）で洗浄し、吸引濾過によって単離される白色粉末を得、ヘプタン（３００ｍｌ）で３回洗浄した。
【００８５】
【数２】

化合物３（ａ）の調製：
【００８６】
【化１６】

トルエン（１７４ｍｌ）およびプロパノール（２０ｍｌ）の溶液を、溶液に２０〜３０秒間減圧を適用し、続いてＮ₂でパージすることによって３回脱気した。Ｎａ₂ＣＯ₃の２Ｍ溶液もまた脱気した。トルエン／プロパノール溶液（９７ｍｌ）を、４−ヨウ化安息香酸メチル（１４．１２ｇ、５３．９ｍｍｏｌ）および化合物２（ａ）（１５．０ｇ、５２．８ｍｍｏｌ）の混合物に加え、続いて、脱気２Ｍ水性Ｎａ₂ＣＯ₃溶液（２９ｍｌ、５８．０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、２０〜３０秒間、２回、それぞれＮ₂の陽圧下で脱気し、続いて酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．２４ｇ、１．１ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（０．８４ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、さらに２回脱気した。次いで、反応混合物を、Ｎ₂下で５時間還流させ、淡黄色混合物を得た。この混合物を２３℃に冷却し、沈澱物の形成を得、濾過によりこれを集め、連続的に、トルエン（１２３ｍｌ）、２：１ＭＴＢＥ／ＥｔＯＡｃ（１４３ｍｌ）、脱イオン水（１２３ｍｌ）、および２：１ ＭＴＢＥ／ＥｔＯＡｃ（４２ｍｌ）で洗浄し、次いで、３５℃で減圧オーブン下で１６時間乾燥させた。
【００８７】
【数３】

（化合物４（ａ）の調製）
【００８８】
【化１７】

キシレン（８００ｍｌ）中の化合物３（ａ）（８０ｇ、０．２１ｍｏｌ）、５Ｍ ＫＯＨ（１６０ｍｌ）およびセチルトリメチルアンモニウムブロマイド（４．８ｇ、０．０１３ｍｏｌ）の混合物を、３時間還流し、次いで、１０℃に冷却し、濾過して、白色固体を得た。この固体を、３回、Ｈ₂Ｏ（それぞれ５００ｍｌ）で洗浄し、触媒および大部分の塩基を除去した。得られた物質を、ＤＭＥ（５０ｍｌ）で処理した。溶液のｐＨを６Ｍ ＨＣｌ（１００ｍｌ）の添加によってｐＨに調整した。生じた混合物を、酸性のままであることを確かめるためにｐＨを周期的にチェックしながら、３０分間還流し、次いで、冷却し、そして濾過した。生じた固体を連続的に、ＭＴＢＥ（４００ｍｌ）および水（４×４００ｍｌ）で洗浄した（洗浄液がリトマスで中性になるまで）。
【００８９】
【数４】

（化合物４（ａ）のＨＯＢＴエステルの調製）
（Ａ．ＨＯＢＴメシレートの形成）
無水ＣＨ₂Ｃｌ₂（１．５Ｌ）中のヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（２００ｇ、１．４８ｍｏｌ）の冷（０℃）混合物に、０℃〜１０℃の温度を維持しながら、無水Ｅｔ₃Ｎ（２６８ｍｌ、１．９２ｍｏｌ）をゆっくり加え、続いて、０〜５℃の温度に維持しながら、塩化メタンスルホニル（１２６ｍｌ、１．６３ｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、３時間０℃で攪拌し、連続的に冷水（２×１．２Ｌ）およびブライン（１．２Ｌ）で洗浄した。合わせた有機抽出物を、減圧下で濃縮し、固体を得た。この固体をＣＨ₂Ｃｌ₂（１００ｍｌ）およびヘプタン（１Ｌ）から再結晶させた。結晶を吸引濾過によって回収し、合計１Ｌのヘプタンで繰り返し洗浄し、次いで、高減圧（０．５ｍｍＨｇ）下で一晩乾燥させた。
【００９０】
【数５】

（Ｂ．ＨＯＢＴエステルの形成）
ＤＭＦ（６５０ｍｌ）中の化合物４（ａ）（５０ｇ、０．１４ｍｏｌ）およびＡの部分に記載された物質（３６ｇ、０．１７ｍｏｌ）の混合物を、Ｎ₂下で、Ｅｔ₃Ｎ（２５ｍｌ、０．１８ｍｏｌ）とともに滴下処理した。得られた混合物を、ＴＬＣ（９５：５ ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ）によって決定して全ての酸が消費するまで室温で４時間攪拌した。全ての酸を消費した場合、反応混合物のアリコート（約３滴（ｐｉｐｅｓ ｄｒｏｐｓ））は、３ｍｌの１：１ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＴＨＦで希釈すると、透明な均一な溶液を与えた。次いで、反応混合物をトルエン（５００ｍｌ）で希釈し、水（５００ｍｌ）で洗浄した。有機層（固体生成物を含む）を水（５００ｍｌ）で希釈し、移すためにＭＴＢＥを用いて濾過した。固体をＭＴＢＥ（２×４００ｍｌ）でリンスし、そして減圧下で乾燥させて、物質の緑白フレークを得た。注記：この物質は、ＴＨＦ中に溶解し得、濾過して任意の残りの金属混入物を除き得る。
【００９１】
【数６】

（抗真菌化合物６（ａ）の調製）
脱イオン水を手順にわたって使用した。無水ＤＭＦ（２７５ｍｌ）中の化合物５（ａ）（１１ｇ、２３ｍｍｏｌ）および化合物６（ａ）の核（ここで、Ｒが水素であり、ＨＰＬＣにより９２％の純度である、１９．２５ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ₂下で、４時間攪拌した（ＨＰＬＣが、開始物質の環式ペプチドの完全な消費を示すまで）。この混合物を、セライト床を通して濾過し、そして濾液を、減圧下３５℃で濃縮し、攪拌され得るペーストを得た。このペーストをＭＴＢＥ（５００ｍｌ）に注ぎ、微細な粉末の沈澱を得、減圧濾過によってこれを回収し、乾燥させて２７ｇの粗物質を得た。この物質を乳鉢および乳棒を用いて粉末に粉砕し、５分間トルエン（２００ｍｌ）中でスラリーにし、吸引濾過（ゆっくりと濾過）し、ＭＴＢＥ（１００ｍｌ）でリンスし、次いで、減圧下で乾燥させ、黄色固体を得た。収率：２３ｇ（ＨＰＬＣにより９５％の純度、保持時間＝７．７９分）。
【００９２】
あるいは、この変換は、過剰の環式核（１．１当量）を使用して行われ得る。ＨＰＬＣによって示されるように、反応が実質的に完了した場合、粗物質（１０ｇの粉末）を、９：１のアセトン／水（６０ｍｌ）の激しく攪拌した混合物に部分ごとに加える。セライト（２．５ｇ、９：１アセトン／水混合物を用いて予備洗浄される）を、得られた懸濁液に加える。２分間攪拌した後に、この混合物をセライト床（９：１アセトン／水で予備洗浄される）を通して濾過し、このケークを９：１アセトン／水（１０ｍｌ）で２回リンスする。濾液を、混合物を穏やかに攪拌しながら、脱イオン水（２００ｍｌ）のビーカーに注ぎ、沈澱の形成を得た。この沈澱を、吸引濾過によって回収し、Ｈ₂Ｏ（４×２５ｍｌ）でリンスし、次いで、室温で減圧下で乾燥させた。収率：６．８１ｇ（ＨＰＬＣによって９７％純度）。
【００９３】
この生成物を、さらに、分取用ＨＰＬＣクロマトグラフィーを使用して精製した。
【００９４】
【数７】

（薬学的処方物）
以下の実施例は、本発明の処方物およびそれらの調製のための方法を例示する。この実施例は、いずれの観点においても本発明の範囲を限定するとは意図せず、このように解釈されるべきではない。
【００９５】
以下の処方物は、方法Ａ、方法Ｂ、または方法Ｃによって調製された。化合物６（ａ）の量を、実験に必要とされる理論的効力を計算し、化合物の「そのままの（ａｓ−ｉｓ）」ＨＰＬＣ効力による値で割ることによって決定した。
【００９６】
（方法Ａ）５０ｍｌの０．１Ｍクエン酸緩衝液ストック溶液のｐＨを、ｐＨ４に調整した後に、２．５ｇのポリソルベート８０を加え、その得られた混合物を溶解するまで混合し、続いて、調製物６（ａ）（効力）の化合物１ｇを添加した。得られた混合物を、溶解するまで混合し、続いて、３ｇのマンニトール（充填剤）および２ｇのトレハロース（安定化剤）を添加した。得られた混合物を、溶解するまで再び混合した。得られた溶液を、水を用いてメスフラスコ中で１００ｍｌまで希釈した。この溶液の３ｍｌのサンプルをバイアルに移し、次いでフリーズドライ器でフリーズドライした。
【００９７】
（方法Ｂ）５０ｍｌの水中の０．３００５ｇの酢酸の溶液のｐＨを、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を使用してｐＨ４．０に調節した。混合しながら、２．５ｇのポリソルベート８０および５．０ｇのマンニトール（充填剤）を加え、得られた混合物を溶解するまで混合し、続いて１ｇの化合物６（ａ）（効力）を添加した。得られた混合物を再び溶解するまで混合した。得られた溶液を水を用いてメスフラスコ中で１００ｍｌに希釈し、濾過し、次いで、バイアルに充填した。バイアルは、フリーズドライ器中でフリーズドライされ得るか、または５℃で保存され得る。
【００９８】
（方法Ｃ）５０ｍｌの水中の０．１１３ｇの酒石酸の溶液のｐＨを、１０％水酸化ナトリウム溶液を使用してｐＨ４．３に調節した。混合しながら、２．５ｇのポリソルベート８０を加え、溶解するまで混合した。この溶液の温度を５〜１５℃に下げ、続いて水中のスラリーとして１ｇの化合物６（ａ）（効力）を添加した。得られた混合物を溶解するまで再び混合し、続いて１．０ｇのフルクトース（安定化剤）および５．０ｇのマンニトール（充填剤）を添加した。得られた混合物を、溶解するまで再び混合した。得られた溶液を水を用いてメスフラスコ中で１００ｍｌまで希釈し、濾過し、そしてバイアルに充填した。このバイアルは、フリーズドライ器中でフリーズドライされ得るか、または５℃で保存され得る。
【００９９】
以下の処方実施例１〜２７を、上記の方法ＡおよびＢに実質的に従って調製した。記号「−」は、示された成分が処方物から省かれたことを意味する。表１および続く表において、全ての重量は、グラムであり；濃度はｍｇ／ｍｌであり；ＣＡは、クエン酸を表し；Ｙは、イエスを表し、Ｎは、ノーを表し；Ｍａｎは、マンニトールを表し；Ｔｒｅは、トレハロースを表し；Ｃｏｌは、崩壊ケーク（Ｃｏｌｌａｐｓｅ Ｃａｋｅ）を表し；Ｃは、シトレート（ｃｉｔｒａｔｅ）を表し；ＢＡは、充填剤を表し；Ｂは、緩衝液を表し；ＰＥＧは、ポリエチレングリコールであり；ＰＰＧは、ポリプロピレングリコールであり；ＳＡは、安定化剤を表し；Ａｃｅは、アセテートであり；Ｐｏｌｙ８０は、ポリソルベート８０であり；Ｃｏｍは、化合物であり；Ｓｕｃは、ショ糖であり；Ｈｉｓは、ヒスチジンであり；Ｓｕｒは界面活性剤であり；Ｌａｃは、乳糖であり；Ｆｒｕはフルクトースであり；ＴＡは、酒石酸であり；ＡＡは、酢酸である。
【０１００】
【表１】

（溶解性研究）
溶解性研究は、５ｍｌの試験溶液（水中の界面活性剤、必要に応じて充填剤、緩衝液または安定化剤を含む）および５０ｍｇのＣｏｍ（ａ）をガラス試験管に移すことによって、室温で行った。試験管を一晩攪拌し、過剰の固体について調べた。過剰の固体を含む試験管を分析のために除去した。さらに５０ｍｇの化合物６（ａ）を試験管（過剰の固体を含まない）に加え、得られた混合物を再び攪拌した。このプロセスを、過剰の固体が試験管において観測されるまで、繰り返した。すべてのサンプルを１時間静置し、上清を除き、濾過し、逆相ＨＰＬＣによって分析し、溶液のＭｌ当たりのＣｏｍ６（ａ）の効力を決定した。
【０１０１】
【表２】

溶液およびフリーズドライした処方物の安定性を、関連物質中の割合の増加について、逆相ＨＰＬＣによって、初期、２週間、および４週間の４０℃での保存にて、処方物のサンプルをモニタリングすることによって評価した。
【０１０２】
【表３】

[0001]
(Field of Invention)
The present invention relates to pharmaceutical formulations comprising echinocandin compounds, and in particular to the incorporation of micelle-forming surfactants that enhance stability and water solubility.
[0002]
(Background of the Invention)
Parenteral (ip) formulations of pharmaceutical drugs can be administered to a patient through intramuscular (im), intravenous (iv) or subcutaneous methodologies. Formulations developed for specific drugs depend on various problems. For example, it is well known in the art that formulations should be water soluble and stable. When freeze-dried, the formulation should be able to form a well formed mass and be easily reconstituted (usually less than 1 minute). Finally, the formulation should have an acceptable appearance and be prepared from generally accepted safe excipients.
[0003]
Stability is an important issue when designing formulations, especially for ip applications. For practical reasons, it should be possible to store the formulation for at least 2 years. Thus, it is often desirable to freeze dry the formulation to achieve better shelf life and storage at room temperature.
[0004]
The instability and low water solubility (<0.1 mg / ml) of the echinocandin compound makes it particularly difficult to formulate this compound. Most formulations tested to date have a shelf life of less than one year. Generally, a shelf life of 2 years or longer is required. As a result, formulations containing echinocandin compounds may require freeze drying to achieve the required stability.
[0005]
The low water solubility of echinocandin compounds provides an additional challenge when formulating ip formulations containing echinocandin actives. One way to formulate such compounds is by the addition of surfactants that enhance the solubility of the drug. However, it is generally well known in the art that the use of specific concentrations of the above surfactants generally limits the ability of the formulation to freeze dry. A typical freeze-dried formulation has a surfactant concentration of less than 5% by weight. According to market research for freeze-dried pharmaceutical formulations containing surfactants, the surfactant concentration is usually less than 5% by weight in the freeze-dried product. Carpenter et al., Pharm. Res. 14 (8), 969-975, 1977-1997, Physicians' Desk Reference, 50th Edition, Medical Economics, Co. See NJ (1996). In general, it is believed that formulations containing higher concentrations of surfactant do not appear to form freeze-dried products with the desired characteristics. Specifically, the presence of the surfactant causes the freeze-dried mass to “collapse”, resulting in a residue at the bottom of the vial instead of a fully formed mass. This residue is generally not stable, difficult to reconstitute, and is not reproducible.
[0006]
Due to the low water solubility of echinocandin compounds, generally 2-4 wt% / volume surfactant is required to obtain an echinocandin compound at a concentration acceptable in solution. As discussed above, freeze drying is hindered by this level of surfactant. Thus, there is a need for a formulation that improves the solubility of echinocandin compounds in water that still allows freeze drying to obtain optimal stability.
[0007]
(Summary of the Invention)
The present application has discovered a group of surfactants that dissolve echinocandin compounds at higher concentrations and surprisingly retain the ability to freeze dry the formulation. In one embodiment of the invention, a parenteral pharmaceutical formulation is provided comprising: (i) an echinocandin compound (or a pharmaceutically acceptable salt thereof), (ii) a pharmaceutically acceptable micelle. Forming surfactants such as polysorbates, lecithins, bile salts, polyoxyethylene castor oil and mixtures thereof, and (iii) non-toxic aqueous solvents. The pharmaceutical solution formulation can optionally include one or more stabilizers, tonicity agents, and / or buffers. The weight ratio of echinocandin to surfactant is about 1: 1.75 to about 1:25 (more preferably a ratio of about 1: 2 to about 1: 3) and the echinocandin compound is greater than 1 mg / ml Present in the amount of. This surfactant is generally present in an amount greater than 1% by weight / volume.
[0008]
In one embodiment of the invention, a freeze-dried pharmaceutical formulation is provided comprising: (i) an echinocandin compound (or a pharmaceutically acceptable salt thereof), (ii) a pharmaceutically acceptable. Micellar-forming surfactants (eg, polysorbates, lecithins, bile salts, polyoxyethylene castor oil and mixtures thereof), and (iii) bulking agents. The micelle-forming surfactant is present in the freeze-dried product in an amount greater than 5% by weight, and the ratio of echinocandin to surfactant is about 1: 1.75 to about 1:25 (preferably Ratio of about 1: 2 to about 1: 3). The freeze-dried pharmaceutical formulation can optionally include one or more stabilizers and / or buffers. Parenteral pharmaceutical formulations prepared from freeze-dried formulations are also provided.
[0009]
In yet another embodiment of the present invention, a process for preparing a parenteral formulation is provided. This process involves mixing an echinocandin compound (or echinocandin / saccharide complex) and a pharmaceutically acceptable micelle-forming surfactant in an aqueous solvent.
[0010]
In yet another embodiment of the invention, a process for making a freeze-dried formulation is provided. This process includes the following steps in the following order: (i) echinocandin compound (or echinocandin / saccharide complex) in an aqueous solvent in the presence of a pharmaceutically acceptable micelle-forming surfactant. Dissolving, wherein the surfactant is present in an amount greater than 1% by weight / volume, (ii) sterile filtering the solution; and (iii) freeze drying the solution. . Generally, the filler is added before the solution is freeze-dried. Optionally, one or more buffers, stabilizers, tonicity adjusting agents, or combinations thereof can be added prior to step (iii).
[0011]
Alternative preparations for freeze-dried formulations are also provided. The preparation includes: (i) buffering a non-toxic aqueous solvent between pH 4.0 and 5.0 to form a buffered solution; (ii) pharmaceutical in the buffered solution Adding an acceptable micelle-forming surfactant to: (iii) cooling the solution from step (ii) to between 5 ° C and 15 ° C (preferably between 7 ° C and 10 ° C) (Iv) adding a slurry comprising an echinocandin compound or echinocandin / saccharide complex and a second non-toxic aqueous solvent to the cooled solution; (v) Sterile filtering the solution from step (iv); and (vi) freeze-drying the solution from step (v). One or more fillers, stabilizers, and / or tonicity modifiers may be added prior to step (v), if desired.
[0012]
In another embodiment of the invention, a parenteral pharmaceutical product is provided. This product is prepared by: forming a solution by dissolving an echinocandin compound (or echinocandin / saccharide complex) in an aqueous solvent in the presence of a pharmaceutically acceptable micelle-forming surfactant. The surfactant is present in an amount greater than 1% by weight / volume; (ii) sterile filtering the solution; and (iii) freeze-drying the solution in a vial. Wherein the weight ratio of echinocandin to surfactant is from about 1: 1.75 to about 1:25. When ready for use, a non-toxic aqueous solvent is added to the vial.
[0013]
In yet another embodiment of the invention, a method is provided for treating an antifungal infection in a mammal in need of treatment. This method comprises administering to a mammal a parenteral formulation prepared by adding a pharmaceutically acceptable aqueous solvent to one of the parenteral formulations described above or the freeze-dried formulation described above. Is included.
[0014]
Amounts and percentages are described herein as weight units unless otherwise stated.
[0015]
The term “echinocandin” has the following general structure:
[0016]
[Chemical 9]

And R is an alkyl group, alkenyl group, alkynyl group, aryl group, heteroaryl group, or a combination thereof;₁, R₂, R_Three, R₆, R₇And R_TenAre independently hydroxy or hydrogen; R_FourIs hydrogen, methyl or -CH₂C (O) NH₂And R_FiveAnd R₁₁Are independently methyl or hydrogen; R₈-OH, -OPO_ThreeH₂, -OPO_ThreeHCH_Three, -OPO₂HCH_ThreeOr -OSO_ThreeH; and R₉Is —H, —OH, or —OSO_ThreeRefers to a compound that is H.
[0017]
The term “alkyl” has the general formula C containing 1 to 30 carbon atoms unless otherwise indicated._nH_{2n + 1}The hydrocarbon radical. The alkane radical can be linear, branched, cyclic, or polycyclic. The alkane radical may be substituted or unsubstituted. Similarly, the alkyl group of an alkoxy group or alkanoate has the same definition as above.
[0018]
The term “alkenyl” refers to an acyclic hydrocarbon containing at least one carbon-carbon double bond. The alkene radical can be linear, branched, cyclic, or polycyclic. The alkene radical may be substituted or unsubstituted.
[0019]
The term “alkynyl” refers to an acyclic hydrocarbon containing at least one carbon-carbon triple bond. The alkyne radical may be linear or branched. The alkyne radical may be substituted or unsubstituted.
[0020]
The term “aryl” refers to an aromatic moiety having a single ring (eg, phenyl) or a fused ring system (eg, naphthalene, anthracene, phenanthrene, etc.). The aryl group may be substituted or unsubstituted. Substituted aryl groups include a chain of aromatic moieties (eg, biphenyl, terphenyl, phenylnaphthalyl, etc.).
[0021]
The term “heteroaryl” refers to an aromatic moiety that contains at least one heteroatom within the aromatic ring system (eg, pyrrole, pyridine, indole, thiophene, furan, benzofuran, imidazole, pyrimidine, purine, benzimidazole, quinoline, etc.). Say. The aromatic moiety can consist of a single ring or a fused ring system. A heteroaryl group may be substituted or unsubstituted.
[0022]
It is widely understood that in the field of organic chemistry, and especially in the field of organic biochemistry, important substitutions of compounds are commonly used or even useful. In the present invention, for example, the term alkyl group allows substituents that are classical alkyls (eg, methyl, ethyl, isopropyl, isobutyl, tertiary butyl, hexyl, isooctyl, dodecyl, stearyl, etc.). The term group specifically contemplates and allows for substituents on alkyl common in the art (eg, hydroxy, halogen, alkoxy, carbonyl, keto, ester, carbamate, etc.), and Contains an unsubstituted alkyl moiety. However, it will be appreciated by those skilled in the art that, in general, substituents should be selected so as not to adversely affect the pharmacological characteristics of the compound or to adversely interact with the use of the drug. The Suitable substituents for any of the above groups include alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, halo, hydroxy, alkoxy, aryloxy, mercapto, alkylthio, arylthio, monoalkylamino and dialkylamino, quaternary ammonium salts, amino Examples include alkoxy, hydroxyalkylamino, aminoalkylthio, carbamyl, carbonyl, carboxy, glycolyl, glyceyl, hydrazino, guanyl, and combinations thereof.
[0023]
  “Echinocandin / saccharide complex” refers to a crystalline complex formed between an echinocandin compound and a saccharide when echinocandin is recrystallized from a solvent in the presence of the saccharide. A more detailed description of the echinocandin / saccharide complex can be found in Larew et al., Entitled “Echinocandin / Carbohydrate Complexes” filed March 3, 1999.(WO0052037)Can be found inside.
[0024]
“Sugar” is a compound of formula C_n(H₂O)_nAn aldehyde derivative or a ketone derivative of a polyhydric alcohol represented by (for example, glucose, C₆(H₂O)₆Sucrose, C₁₂(H₂O)₁₁). Saccharides include relatively small molecules such as monosaccharides (eg, monosaccharides, disaccharides, etc.), and compounds of macromolecular (polymeric) materials such as starch, glycogen, and cellulose polysaccharides. Sugar has a general composition (CH₂O)_nSugars (saccharides) having the following and simple derivatives thereof. Simple monomeric sugars (eg, glycoses) are polyhydroxy aldehydes or polyhydroxy ketones (eg, HOCH for aldohexoses).₂-(CHOH)_FourHOCH for -CHO (eg glucose) or 2-ketose₂-(CHOH)_Three-CO-CH₂Although described as OH (eg, fructose)), the structure is generally described as a 5-membered (furanose) or 6-membered (pyranose) cyclic ether. This cyclic ether is for example:
[0025]
[Chemical Formula 10]

.
[0026]
The term “micelle-forming surfactant” refers to an amphiphile that spontaneously and reversibly forms water-soluble aggregates. For a more detailed description of micelle formation and a listing of micelle-forming surfactants, see Atwood et al., Surfactant Systems. See Their Chemistry, Pharmacy and Biology, Chapman and Hall (1983). Propylene oxide and ethylene oxide block copolymers do not function well in the formulations of the present invention; therefore, these block copolymers are not considered within the meaning of micelle-forming surfactants.
[0027]
The term “pharmaceutically acceptable”, as used herein additionally, means substantially non-toxic and not substantially harmful to the recipient.
[0028]
(Detailed explanation)
The cyclic peptide used in the present invention is produced by culturing various microorganisms. Suitable natural product starting materials belonging to the echinocandin cyclic peptide family include Echinocandin B, Ecninocandin C, Echinocandin D, Acculecin Aγ, Mulundocandin, Sporofundin A, Pneumocandin A₀, WF11899A, and Pneumocandin B₀Is mentioned. In general, a cyclic peptide can be characterized as the nucleus of a cyclic hexapeptide having an amino group acylated to one of the amino acids. The amino group on a naturally occurring cyclic peptide is typically acylated with a fatty acid group forming a side chain leaving the nucleus. Examples of naturally occurring acyl groups include linoleoyl (Echinocandin B, C and D), palmitoyl (Aculeacin Aγ and WF11899A), stearoyl, 12-methylmyristoyl, 10,12-dimethylmyristoyl (Sporin). A and Pneumocandin A₀) And the like.
[0029]
Semi-synthetic derivatives can be prepared by removing the fatty acid side chain from the nucleus of the cyclic peptide to generate a free amino group (ie, without an attached acyl group —C (O) R). The free amine is then acylated again with a suitable acyl group. For example, the core of echinocandin B is reacylated with certain non-naturally occurring side chain moieties to provide a number of antifungal agents. That is, see US Pat. No. 4,293,489. One skilled in the art understands that the N-acetyl side chain includes various side chain moieties known in the art. Suitable side chain moieties include substituted and unsubstituted alkyl groups, alkenyl groups, alkynyl groups, aryl groups, heteroaryl groups, and combinations thereof. Preferably, the side chain comprises both a linear rigid compartment and a flexible alkyl compartment so as to maximize antifungal efficacy. Representative examples of preferred acyl side chains include the following structural formula:
[0030]
Embedded image

And A, B, C and D are independently halogen, C₁~ C₁₂Alkyl, C₂~ C₁₂Alkynyl, C₁~ C₁₂Alkoxy, C₁~ C₁₂Alkylthio, halo, or —O— (CH₂)_m-[O- (CH₂)_n]_p-O- (C₁~ C₁₂Alkyl) or -O- (CH₂)_q-X-E: m is 2, 3, or 4; n is 2, 3 or 4; p is 0 or 1; q is 2, 3 or 4; X is pyrrolidino, piperidino or piperazino; and E is hydrogen, C₁~ C₁₂Alkyl, C_Three~ C₁₂Cycloalkyl, benzyl or C_Three~ C₁₂Contains the R group, which is cycloalkylmethyl.
[0031]
As noted above, the cyclic peptides described herein can be prepared by fermentation of known microorganisms as described in the art. Subsequent deacylation is typically performed enzymatically using a deacylase with known materials and procedures described in the art.
[0032]
  For example, US Patent No.4, 293, 482 are compounds of formula I (where R₄, R₅And R₁₁Is methyl and R₉Is hydrogen and R₁, R₂, R₃, R₆, R₇, R₈And R₁₀Describes the deacylation and preparation of cyclic peptides (each of which is hydroxy). U.S. Pat. No. 4,299,763 describes Formula I (where R₄, R₅And R₁₁Is methyl and R₂Is hydroxy and R₇And R₉Is hydrogen and R₁, R₃, R₆, R₈And R₁₀Deacylation and preparation of cyclic peptides (wherein each is hydroxy). US Pat. No. 3,978,210 describes the preparation of aculaecin. U.S. Pat. No. 4,304,716 describes Formula I (where R₅Is -CH₂C (O) NH₂And R₁₁Is methyl; R₄And R₉Is hydrogen; R₁, R₂, R₃, R₆, R₇, R₈And R₁₀Describes the deacylation and preparation of cyclic peptides of each of which is hydroxy and the acyl group of substituent R is myristoyl.
[0033]
R₂And R₇Cyclic peptides, each of which is hydrogen, are prepared in a suitable solvent at a temperature between about −5 ° C. and 70 ° C.₂And R₇Are each hydrogen; the α-amino group of ornithine, which may be a free amino group or acylated, may be prepared by subjecting to a strong acid and a reducing agent. Suitable strong acids include trichloroacetic acid, trifluoroacetic acid or boron trifluoride etherate. A preferred strong acid is trifluoroacetic acid. Suitable reducing agents include sodium cyanohydride or triethylsilane. A preferred reducing agent is triethylsilane. Suitable solvents include methylene chloride, chloroform or acetic acid, preferably methylene chloride. The strong acid is present in an amount of about 2 to 60 moles per mole of substrate and the reducing agent is present in an amount of about 2 to 60 moles per mole of substrate. The acid reduction process can be performed using the amino (R₂) And benzene (R)₇) Is selectively removed.
[0034]
Acylation of the α-amino group on the ornithine unit can be accomplished in various ways well known to those skilled in the art. For example, an amino group can be acylated by reacting with an appropriately substituted acyl halide, preferably in the presence of an acid scavenger (eg, a tertiary amine (eg, triethylamine)). This reaction is typically carried out at a temperature between about −20 ° C. and 25 ° C. Suitable reaction solvents include polar aprotic solvents such as dioxane or dimethylformamide. The choice of solvent is not critical as long as the solvent used is inert to the ongoing reaction and the reactants are sufficiently dissolved to effect the desired reaction.
[0035]
Amino groups can also be acylated by reaction with an appropriately substituted carboxylic acid in the presence of a conjugating agent. Suitable conjugating agents include dichlorohexyl carbodiimide (DCC), N, N′-carbonyldimidazole, bis (2-oxo-3-oxazolidinyl) phosphinic chloride (BOP-Cl), N-ethoxycarbonyl-2- Examples include ethoxy-1,2-dihydroquinoline (EEDQ), benzotriazol-1-yloxy-tripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBOP), and the like.
[0036]
Alternatively, the amino group may be an activated ester of carboxylic acid (p-nitrophenyl ester, 2,4,5-trichlorophenyl ester, hydroxybenzotriazole hydrate ester (HOBT / H₂O), pentafluorophenol esters, and N-hydroxysuccinimide carboxylate esters). Preferred acylating moieties are 2,4,5-trichlorophenyl and HOBT carboxylate esters. This reaction is typically performed in an aprotic solvent at a temperature of about 0 ° C. to 30 ° C. for 1 to 65 hours. This reaction is generally complete after about 24-48 hours when carried out at temperatures between about 15 ° C and 30 ° C. Suitable solvents include tetrahydrofuran and dimethylformamide or mixtures thereof. The amino groups are generally present in equimolar proportions relative to the activated ester or there is a slight excess of amino groups.
[0037]
The acid of the R-COOH precursor can be a nitrile of formula R-CN or a formula R-COO (C₁~ C_FourPrepared by hydrolyzing esters of alkyl). The nitrile and ester intermediates can be prepared using procedures known in the art. For example, nitrile and ester intermediates where R is an alkoxyaryl moiety can be prepared using Procedure A or Procedure B.
[0038]
(Procedure A) One equivalent of an alkyl bromide, iodide, or p-toluenesulfonate is added to one equivalent of a base (eg, potassium t-butoxide or potassium carbonate (K₂CO_Three)), And 1 equivalent of hydroxyaryl compound in 200-300 ml of acetonitrile (CH_ThreeCN) is added to the mixture. The reaction mixture is refluxed for 6 hours and then concentrated in vacuo to provide a residue which is₂Dissolve in O / 2N NaOH mixture. The resulting layers were separated and the organic layer was magnesium sulfate (MgSO_Four), Filtered and dried to provide the alkoxyaryl product.
[0039]
(Procedure B) Diethyl azodicarboxylate (1 equivalent) into a mixture containing hydroxyaryl compound (1 equivalent), alkyl alcohol (1 equivalent), and triphenylphosphine (1 equivalent) in 200-300 ml of THF. Add dropwise. After 17 hours, the solvent was removed under vacuum to provide a residue that was removed from Et.₂Dissolve in O. The resulting mixture was washed with 2N NaOH solution and washed with MgSO._FourDried, filtered and concentrated to provide the product, which is then₂Recrystallize from an O / pentane mixture, or if the product contains a tertiary amine, the hydrochloride is formed and recrystallized from a methanol (MeOH) / EtOAc mixture. Nitrile and ester intermediates where R is an alkynylaryl moiety can be prepared using Procedure C.
[0040]
(Procedure C) Et₂A mixture containing O (2 eq), palladium dichloride (0.05 eq), triphenylphosphine (0.1 eq), copper iodide (0.025 eq), and alkyne (1 eq) was added to nitrogen ( N₂) Under CH_ThreeAdd to 1 equivalent of aryl bromide, iodide, or trifluoromethanesulfonate (600 ml / 0.1 mol of aryl reactant) in CN. The resulting mixture was refluxed for 17 hours, then the solvent was removed in vacuo to provide a residue that was added to 300 ml of Et.₂Slurry in O and then filter. The filtrate was washed with 1N HCl solution and MgSO_Four, Filtered and dried to provide the product. An ester intermediate where R is a triphenyl moiety is prepared using Procedure D.
[0041]
(Procedure D)
(1. Boronic acid)
Butyllithium (1.2 eq) is added to 1 eq of cold (−78 ° C.) aryl halide in THF. After 15 minutes, triisopropyl borate (2 eq) is added. After 10 minutes, the reaction mixture was warmed to room temperature and water (H₂Stop by the addition of O) followed by the addition of 1N HCl. The resulting layers are separated and the organic layer is concentrated under vacuum to provide a solid that is collected by filtration and washed with hexane.
[0042]
(2. Prescription of terphenyl ester)
Tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0.03 equivalents) was replaced with N₂Aryl boronic acid (1 equivalent) in purged toluene, K₂CO_Three(1.5 equivalents) and methyl 4-iodobenzoate (1 equivalent) (or trichlorophenyl ester of iodobenzene) is added to the mixture. The reaction mixture is refluxed for 7 hours and then decanted to K₂CO_ThreeAnd dried under vacuum to provide a residue. This residue is CH₂Tritylated in CN and filtered to provide the product. The above aryl nitriles and esters can be converted to the corresponding carboxylic acids by hydrolysis using Procedure E or Procedure F.
[0043]
(Procedure E) The aryl nitrile is dissolved in ethanol (EtOH) and 50% excess NaOH solution and refluxed for 2 hours. Water is added to the reaction mixture until a solid precipitates. This solid is collected by filtration, added to the dioxane / 6N HCl mixture and the resulting mixture is refluxed for 17 hours. When the reaction is substantially complete, the carboxylic acid product is converted to H₂Recrystallize by addition of O, then collect by filtration and dry under vacuum.
[0044]
(Procedure F) Excess 2N NaOH is added to the aryl ester in MeOH and the resulting solution is refluxed for 5 hours and then acidified by addition of excess HCl. Water is added to the reaction mixture until a solid (carboxylic acid) precipitates. The carboxylic acid is recovered by filtration and dried under vacuum. The carboxylic acid can be converted to the corresponding 2,4,5-trichlorophenyl ester using Procedure G below. The activated ester is then used to acylate the amino nucleus.
[0045]
(Procedure G) Arylcarboxylic acid (1 eq), 2,4,5-trichlorophenol (1 eq) and DCC (1 eq) in CH₂Cl₂The mixture contained therein is stirred for 17 hours and then filtered. The filtrate was concentrated to provide a residue that was₂Dissolve in O, filter, and then add pentane until crystallization begins. The crystals are collected by filtration and dried under vacuum. Alternatively, the carboxylic acid can be activated by conversion to the corresponding hydroxybenzotriazole ester using Procedure H.
[0046]
(Procedure H) Aryl carboxylic acid (1 eq) and a slight excess of N-mesylate substituted hydroxybenzotriazole (1.2 eq) are added to a slight excess of base (eg triethylamine (Et_ThreeN) (1.3 eq)) in DMF in the presence of N₂Reacted below. When the reaction has ended, the mixture is diluted with toluene and H₂Washed with O. Organic part is H₂Diluted with O and then filtered to transfer material using t-butyl methyl ether (MTBE). The resulting solid was washed with MTBE and then dried under reduced pressure.
[0047]
Echinocandin compounds can be isolated and used on their own or in the form of their pharmaceutically acceptable salts or hydrates, or as echinocandin / saccharide complexes. The term “pharmaceutically acceptable salts” refers to non-toxic acid addition salts derived from inorganic and organic acids. Suitable salt derivatives include halogen compounds, thiocyanates, sulfates, bisulfates, sulfites, bisulfites, aryl sulfonates, alkyl sulfates, phosphonates, monohydrogen phosphates, dihydrogen phosphates, metaphosphates, pyrophosphonates, alkanoates, Cycloalkylalkanoates, arylalkanoates, adipates, alginate, aspartate, benzoate, fumarate, glucoheptanoate, glycerophosphate, lactate, maleate, nicotinate, oxalate, palmitate, pectinate, picrate, pivalate, succinate, tartrate (Tartrate), citrate, camphorate, camphorsulfonate, di- Rukoneto, such as trifluoroacetic acetate.
[0048]
  An “echinocandin / saccharide complex” refers to a crystallin complex formed between an echinocandin compound and a saccharide (or sugar) when the echinocandin is recrystallized from a solution in the presence of the saccharide. A more detailed description of the echinocandin / saccharide complex can be found in Larew et al. Entitled “Echinocandin / Carbohydrate Complexes” filed March 3, 1999.(WO0052037), Which is incorporated herein by reference. This complex is formed using standard crystallization procedures (eg, procedures typically performed to purify compounds by recrystallization). The echinocandin material and saccharide dissolve in the solvent at an elevated temperature (approximately 45 ° C. to 60 ° C., preferably less than 55 ° C.). The solution is then slowly cooled until crystallization begins. A seed crystal (eg, a previously crystallized complex or insoluble sugar) can be added to initiate crystallization. Suitable solvents include any solvent, or mixture of solvents, that is inert to the ongoing reaction, in which the medium forms the desired complex between the saccharide and the echinocandin compound. Sufficient to solubilize the reactants so that they can affect, for example, protic or ketone solvents including methanol, ethanol, benzyl alcohol, and benzyl alcohol, such as methanol, ethanol, n- Propanol, isopropanol, n-butanol, 2-butanol, t-butanol, 2-pentanol, 2-methyl-1-propanol, MEK, acetone, ethyl acetate, toluene, acetonitrile, fluorobenzene, methylene chloride, nitromethane, or cyclic Ketones (eg, cyclopentanone and Mixture of solvents such as Rohekisanon) can be mentioned. Preferred solvents include methanol, ethanol, benzyl alcohol, and mixtures of benzyl alcohol with methyl ethyl ketone, ethyl acetate, and acetonitrile.
[0049]
Suitable sugars include adonitol, arabinose, arabitol, ascorbic acid, chitin, D-cellbioose, 2-deoxy-D-ribose, dulcitol, (S)-(+)-erythrose, fructose, fucose, galactose, glucose, Inositol, lactose, lactulose, lyxose, maltitol, maltose, maltotriose, mannitol, mannose, melezitose, melibiose, microcrystalline cellulose, palatinose, pentaerythritol, raffinose, rhamnose, ribose, sorbitol, Examples include sorbose, starch, sucrose, trehalose, xylitol, xylose, and hydrates thereof. Suitable saccharides also include the D and L enantiomers and α and β anomers of the above compounds. Preferred saccharides are monosaccharides such as mono-saccharides and di-saccharides.
[0050]
This echinocandin compound may be present in the formulations of the present invention prior to freeze drying at a concentration of 1 mg / ml or higher. Generally, the echinocandin compound is at a concentration in the range of about 1 mg / ml to about 50 mg / ml, preferably in the range of about 1 mg / ml to about 40 mg / ml, more preferably from about 1 mg / ml to about 50 mg / ml. It is in the range of 30 mg / ml and most preferably in the range of about 8 mg / ml to about 12 mg / ml.
[0051]
  The formulations of the present invention include micelle-forming surfactants that are pharmaceutically acceptable amphiphilic excipients having hydrophobic and hydrophilic units or groups that can solubilize non-water soluble drugs in water. An HLB value of 10-18 is generally most preferred for solubilization of echinocandin compounds. The surfactant is present in the formulation in a weight ratio of echinocandin to surfactant of about 1: 1.75 to about 1: 2.5, more preferably about 1: 2 to about 1: 3. To do. The upper limit of surfactant added to the formulation can be limited by its toxicity in pharmaceutical pharmaceutical applications; therefore, the upper limit can vary depending on the particular surfactant selected. Suitable surfactants include polysorbates (eg, polysorbate 80, polysorbate 40, polysorbate 20), polyoxyethylene castor oil derivatives (eg, Cremphors^TM(Polyoxyl 35 castor oil, polyoxyl 40 hydrogenated castor oil, and polyoxyl 60 hydrogenated castor oil) (available from BASF)), polyoxyethylene stearate (eg, Solutol^TMHS15 (Macrogol-660-hydroxystearate (available from BASF)), sorbitan trioleate, bile salts (eg cholic acid, deoxycholic acid and its salts (eg sodium deoxycholate or tauro) Sodium deoxycholate)), lecithin and the like. Preferred surfactants include polysorbate 80, polysorbate 40, polysorbate 20, and polyethylene hydroxystearate having a reduced histamine effect (eg, Solutol).^TMHS15). Surfactants that do not solubilize well include certain polyoxamers that are block copolymers of propylene oxide and ethylene oxide.
[0052]
“Polysorbate” refers to a substance having the following general structure:
[0053]
Embedded image

  Here, x + y + w + z is equal to an integer between 5 and 20.
[0054]
Product Tween^TM20, 40 and 80 (available from ICI America Inc., Wilmington, DL) are represented by the above structure when x + y + w + z = 20.
[0055]
“Lecithin” refers to a substance having the following general structure:
[0056]
Embedded image

R is typically a residue from stearic acid, palmitic acid or oleic acid.
[0057]
“Bile salt” refers to a substance having the following general structure.
[0058]
Embedded image

Here, R 3, R 7 and R 12 are —OH, —H or —SO_Three ^-And R24 is -OH or CO₂ ^--C (O) NH (CH₂)_nSO_Three ^-Or -C (O) NH (CH₂)_nCO₂ ^-And n is equal to an integer between 1 and 4.
[0059]
A typical solution formulation includes an echinocandin compound and a micelle forming surfactant. Applicants have observed that the incorporation of micelle-forming surfactants not only optimizes the solubilization of the echinocandin compound, but also enhances the stability of the solution. The formulation can optionally include one or more buffers, stabilizers, and / or tonicity agents. If the formulation is then in the form of a solution, a solvent is also present. Solvents are generally selected based on solvents that are recognized as safe so that they can be administered parenterally to mammals (GRAS). In general, safe solvents are non-toxic aqueous solvents such as water and other non-toxic solvents that are soluble or miscible in water. Suitable solvents include water, ethanol, propylene glycol, polyethylene glycol (eg, PEG 400, PEG 300), and the like, and mixtures thereof. A preferred solvent is water.
[0060]
A typical freeze-dried formulation includes an echinocandin compound, a pharmaceutically acceptable micelle-forming surfactant, a filler and / or a stabilizer. The formulation can optionally include one or more buffering agents. Applicants have stated that the addition of micelle-forming surfactants not only optimizes the reconstruction of freeze-dried formulations in non-toxic aqueous solvents, but also provides enhanced stability to the freeze-dried material. Observed.
[0061]
Both solution and freeze-dried formulations are needed. Stabilizers can be included. Stabilizers are generally present at concentrations ranging from about 0.5% to about 40% (wgt./vol.), More preferably at concentrations ranging from about 1% to about 6%. The term “stabilizer” refers to a pharmaceutically acceptable excipient that increases the chemical or physical stability of the active ingredient in the formulation. Suitable stabilizers include polyols such as polyethylene and propylene glycol and saccharides such as sucrose, trehalose, fructose, lactose, and mannitol, amino acids and surfactants such as polysorbates and bile salts. Preferred stabilizers for freeze-dried formulations include mannitol, sucrose, trehalose, fructose, lactose and combinations thereof In solution, the most preferred stabilizers are bile salts, polyethylene glycol and propylene. Glycol.
[0062]
Both solution and freeze-dried formulations also include buffering agents as needed. The buffer is present at a concentration in the range of about 0.03% to about 5.0% (wgt./vol.), More preferably at a concentration in the range of about 0.1% to about 1.0%. To do. The term “buffering agent” refers to a pharmaceutically acceptable excipient that maintains the pH of the solution within a specific range specific to the buffering system. A suitable pH range is pH 3.0-7.0. Preferably, the pH range is 4.0 to 5.5, more preferably 4.0 to 5.0. Suitable buffering agents include acetate, citrate, phosphate, tartrate, lactate, succinate, amino acids and the like. Preferred buffering agents for solution formulations include acetate, citrate, tartrate, phosphate and combinations thereof. A preferred buffer for freeze-dried formulations is tartaric acid.
[0063]
Solution formulations may optionally include one or more tonicity modifiers. The tonicity modifier is generally present at a concentration ranging from about 1 to about 100 mg / ml, more preferably at a concentration ranging from about 9 to about 50 mg / ml. The term “tonicity modifier” refers to a pharmaceutically acceptable excipient that produces a solution that is compatible with blood. Tonicity modifiers are desirable in injectable formulations. Suitable tonicity modifiers include glycerin, lactose, mannitol, dextrose, sodium chloride, sodium sulfate, sorbitol and the like. Preferred tonicity modifiers include mannitol, sorbitol, lactose, and sodium chloride and combinations thereof.
[0064]
When freeze dried, the formulation may optionally include a filler. The filler is present in the formulation at a concentration ranging from about 2% to about 10% (wgt / vol), more preferably at a concentration ranging from about 3% to about 6% (wgt / vol). . The term “filler” refers to a pharmaceutically acceptable excipient that adds bulk to a formulation that produces a well-formed cake upon freeze drying. Suitable fillers include mannitol, glycine, lactose, sucrose, trehalose, dextran, hydroxyethyl starch, ficoll and gelatin. Preferred fillers include mannitol, sucrose, trehalose, lactose and combinations thereof.
[0065]
Formulations can be prepared using conventional dissolution and mixing procedures. For example, bulk drug substances (eg, echinocandin compounds or echinocandin / saccharide complexes) can be prepared from pharmaceutically acceptable micelle-forming surfactants and optionally one or more fillers, buffers, stabilizers and / or Alternatively, it is dissolved in a non-toxic aqueous solvent in the presence of a tonicity modifier. The resulting solution is then sterile filtered and preferably freeze dried to provide the desired formulation. Prior to freeze drying, the surfactant is generally present in an amount greater than 1% by weight per volume of solution.
[0066]
Alternatively, the pharmaceutical solution comprises an aqueous buffer solution buffered to a pH of about 3.0-7.0 (preferably 4.0-5.5, more preferably 4.0-5.0). Can be prepared by forming. The buffer used can be any buffer previously described. The micelle forming surfactant is then added to the buffered solution and the solution cooled to about 5 ° C to 15 ° C (preferably about 7 ° C to 10 ° C). A slurry of the echinocandin compound or echinocandin / saccharide complex in a non-toxic aqueous solvent (which may or may not be the same as the solvent used in the buffer solution) is added to the surfactant. To the cooled solution containing. One or more fillers, stabilizers and / or tonicity modifiers can be added to the solution prior to freeze drying. The resulting solution is then diluted with additional solvent, filtered, and freeze dried to provide the desired formulation.
[0067]
Suitable methods for freeze-drying are described in Nail et al., Freeze Drying Principle and Practice, Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition, Marcel Dekker, Inc. NY, pages 163-133 (1993). The formulation is preferably freeze-dried in a vial that can be stored until needed. A non-toxic aqueous solvent is added to the vial to dissolve the freeze-dried material, thereby forming a solution that can be used in parenteral therapeutic applications. Those skilled in the art will appreciate that this aqueous solvent includes other conventional solutions used in such applications (eg, saline solution, dextrose solution, etc.).
[0068]
In general, freeze-dried formulations, including bulking agents and non-freeze-dried formulations, contain one or more tonicity modifiers. In use, the formulation is typically diluted or reconstituted (if freeze-dried) and further diluted as needed prior to administration. An example of a reconstitution procedure for freeze-dried products is to add 10 ml of water to the vial for injection (WFI) and gently agitate to dissolve. A typical reconstruction time is less than 1 minute. The resulting solution is then further diluted with an infusion solution (eg, 5% dextrose in water (D5W)) prior to administration.
[0069]
The active ingredient is typically formulated in a pharmaceutical dosage form to provide an easily controllable dosage of the drug and to provide a product that is concise and easily handled by the patient. Formulations may contain from 0.1% to 60% by weight of active ingredient, more usually from about 10% to about 30%.
[0070]
As used herein, the term “single dose” or “single dose” is a physical term that includes a predetermined amount of active ingredient calculated to produce the desired therapeutic effect. Individual unit. When a single dose is administered parenterally, the single dose is typically provided in the form of an accurately measured unit within an ampoule (or vial).
[0071]
The dosage to be administered can vary depending on the physical characteristics of the patient, the severity of the patient's symptoms, and the means used to administer the drug. The specific dose for a given patient is usually set at the discretion of the attending physician.
[0072]
Suitable carriers, diluents and excipients are known in the art and include, for example, sugars, waxes, water-soluble polymers and / or swellable polymers, hydrophobic or hydrophilic materials, gelatin , Oils, solvents, water and the like. The particular carrier, diluent or excipient used will depend upon the means and purpose of the active ingredient being applied. The formulation may also include wetting agents, lubricants, emulsifiers, suspending agents, preservatives, sweeteners, flavoring agents, flavoring agents and combinations thereof.
[0073]
The pharmaceutical composition can be administered using a variety of methods. Suitable methods include injection. The particular treatment method used will depend on the type of injection being performed.
[0074]
Echinocandins and semi-synthetic echinocandin compounds have been shown to exhibit antifungal and antiparasitic activities such as growth inhibition of various infectious fungi including: Candida spp. (Ie, C. Albicans, C. Parapsilosis, C. Krusei, C. Glabrata, C. Tropicalis, or C. Lusitania); Torulopus spp. (Ie, T. Glabrata); Aspergillus spp. (Ie, A. Fumigatus); Histoplasma spp. (Ie H. Capsulatum); Cryptococcus spp. (Ie, C. Neoformans); Blastomyces spp. (Ie, B. Dermatitidis); Fusarium spp. Trichophyton spp. , Pseudolescheria boydi, Cocidiodes immits, Sporotrtx schenckii, etc.
[0075]
This type of compound also inhibits the growth of certain organisms that are primarily responsible for opportunistic infections in immunosuppressed individuals (eg, Pneumocystis carinii (AIDS and other Pneumocystis pneumonia (PCP) causative organisms in immunocompromised patients) ) Growth inhibition). Other protozoan subclasses that are inhibited by compounds of the echinocandin type include Plasmodium spp. Leishmania spp. , Trypanosoma spp. Cryptospodium spp. Isospora spp. Cyclospora spp. , Trichomnas spp. Microsporidiosis spp. Etc.
[0076]
As a result, the formulations of the present invention are useful in combating either systemic fungal infection or fungal skin infection. Thus, the processes and formulations of the present invention can be used in the manufacture of a medicament for the therapeutic applications described herein. For example, fungal activity (preferably Candida albicans or Aspergillus fumigatis activity) or parasitic activity can be inhibited by contacting the pharmaceutical formulation prepared according to the invention with a fungus or parasite, respectively. The term “contact” means to union or to join, or to make the compounds of the present invention apparently come into contact with or in contact with parasites or fungi. including. The term does not imply any additional limitations on this process, such as by mechanism inhibition. This method is defined to include inhibiting parasitic and fungal activity by the action of the compounds and their inherent antiparasitic and antifungal properties.
[0077]
Also provided is a method for treating a fungal infection comprising administering an effective amount of a pharmaceutical formulation of the invention to a host in need of treatment for the fungal infection. Preferred methods include treating Candida albicans or Aspergillus fumigatis infections. The term “effective amount” refers to the amount of a compound that can inhibit fungal activity. The dose administered will vary depending on factors such as the nature and severity of the infection, the age and general health of the host, and the host's tolerance to antifungal agents. The specific dosage regimen can likewise vary according to these factors. The medicament may be given in a single daily dose or in multiple doses during the day. This regimen can last from about 2-3 days to about 2-3 weeks or more. A typical daily dose (administered in single or divided doses) comprises a dosage level of between about 0.01 mg and 100 mg of active compound per kg body weight. In general, a daily dose between about 0.1 mg / kg to 60 mg / kg and more preferably between about 2.5 mg / kg to 40 mg / kg is preferred.
[0078]
The following examples are provided to illustrate the invention but do not limit the invention. All references cited in this specification are hereby incorporated by reference herein.
[0079]
(Example)
The echinocandin compound used to illustrate the formulations of the present invention was prepared as described in the following preparation. Specifically, the following series describes the preparation of antifungal compound 6 (a) having the following structure:
[0080]
Embedded image

The following serve as illustrative examples, and other semi-synthetic echinocandin compounds useful as antifungal agents were synthesized using similar procedures or the procedures described in the references cited at the beginning of this specification. Those skilled in the art will understand that this can be done. Materials used in the following preparations are available from Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wisconsin) unless otherwise indicated.
[0081]
(Compound preparation)
(Preparation of 4-bromo-4'-pentyloxybiphenyl 1 (a))
Anhydrous K₂CO_Three(416 g, 3 mol) was added to a mixture of 4-bromo-4'-hydroxybiphenyl (300 g, 1.2 mol), 1-iodopentane (234 ml, 1.79 mol) and 2-butanone (600 ml). The reaction mixture was refluxed for 44 hours until TLC (85:15 hexane / EtOAc) showed complete consumption of the bromoalcohol. The mixture is cooled to about 30 ° C. and CH₂Cl₂(600 ml) and then filtered. The filtrate is H₂Wash twice with O and twice with saturated aqueous NaCl solution and dry Na₂SO_Four, Filtered and then dried under reduced pressure to give a solid. This solid was isolated by filtration and washed repeatedly with a total of 2 L of ice-cold heptane to remove all traces of iodopentane and then dried overnight under high vacuum. Yield: 340 g (88%) of white powder.
[0082]
(Alternative preparation of 4-bromo-4'-pentyloxybiphenyl 1 (a))
4-Bromo-4'-hydroxybiphenyl (12.5 g, 50.2 mmol) was deionized H₂To a solution of NaOH (2.28 g, 97% purity, 55.2 mmol) in O (150 ml) followed by 1-iodopentane (11.9 g, 60.2 mmol) and tetrabutylammonium bromide (0.82 g 2.51 mmol). The mixture was stirred at 90 ° C. for 3.75 hours until the solid became a solution. The desired product then began to precipitate as the reaction proceeded. The mixture was cooled slowly and then filtered to give a solid which was washed with deionized water until the pH of the filtrate was neutral and then dried in a vacuum oven at 30 ° C. for 16 hours.
[0083]
Yield: 15.41 g (96%) (relative to 5a) R_f0.5 (97: 3 hexane / EtOAc).
[0084]
[Expression 1]

(Preparation of 4-boric acid-4'-pentyloxybiphenyl 2 (a))
To a cold (−20 ° C.) mixture of compound 1 (a) (100 g, 0.31 mol) in t-butyl methyl ether (MTBE) (1 L) was added n-butyl lithium (150 ml of 2.5 M hexane solution, 0. 37 mol) while maintaining the internal temperature between −19 ° C. and −18 ° C.₂Slowly dropped underneath. The resulting mixture was stirred for 3.5 hours between −17 ° C. and −16 ° C., resulting in a pale yellow green solution. The solution was cooled to −78 ° C. and diluted with 100 ml of anhydrous THF, resulting in a white precipitate. Then, under nitrogen, add a cold (−78 ° C.) solution of triisopropyl borate (145 ml, 0.62 mol) in MTBE (200 ml) to maintain the reaction temperature between −78 ° C. and −74 ° C. The mixture was added dropwise over 1.5 hours. The resulting reaction mixture was stirred for 1.5 hours at −78 ° C. and then warmed to −50 ° C. over 1 hour, at which time the cooling bath was removed and the mixture was stirred overnight (16-21 hours). A white precipitate was obtained. The mixture was shaken vigorously with 2M HCl (1000 ml) for 5 minutes, then the resulting layers were separated and the organic layer was dried under reduced pressure to give a residue. The residue was diluted with MTBE (100 ml) followed by washing with heptane (800 ml) to give a white powder which was isolated by suction filtration and washed 3 times with heptane (300 ml).
[0085]
[Expression 2]

Preparation of compound 3 (a):
[0086]
Embedded image

A solution of toluene (174 ml) and propanol (20 ml) is applied to the solution under reduced pressure for 20-30 seconds, followed by N₂Was degassed three times by purging with. Na₂CO_ThreeA 2M solution of was also degassed. Toluene / propanol solution (97 ml) was added to a mixture of methyl 4-iodobenzoate (14.12 g, 53.9 mmol) and compound 2 (a) (15.0 g, 52.8 mmol) followed by degassing. 2M aqueous Na₂CO_ThreeSolution (29 ml, 58.0 mmol) was added. The resulting mixture was washed twice for 20-30 seconds, each N₂Was degassed under positive pressure followed by the addition of palladium (II) acetate (0.24 g, 1.1 mmol) and triphenylphosphine (0.84 g, 3.22 mmol) and then degassed twice more. The reaction mixture is then washed with N₂Under reflux for 5 hours, a pale yellow mixture was obtained. The mixture was cooled to 23 ° C., resulting in the formation of a precipitate, which was collected by filtration, successively, toluene (123 ml), 2: 1 MTBE / EtOAc (143 ml), deionized water (123 ml), and 2: Washed with 1 MTBE / EtOAc (42 ml) and then dried in a vacuum oven at 35 ° C. for 16 hours.
[0087]
[Equation 3]

(Preparation of compound 4 (a))
[0088]
Embedded image

A mixture of compound 3 (a) (80 g, 0.21 mol), 5M KOH (160 ml) and cetyltrimethylammonium bromide (4.8 g, 0.013 mol) in xylene (800 ml) was refluxed for 3 hours, then 10 Cool to 0 C and filter to give a white solid. This solid is washed three times with H₂Wash with O (500 ml each) to remove the catalyst and most of the base. The resulting material was treated with DME (50 ml). The pH of the solution was adjusted to pH by the addition of 6M HCl (100 ml). The resulting mixture was refluxed for 30 minutes, periodically checking the pH to ensure it remained acidic, then cooled and filtered. The resulting solid was washed sequentially with MTBE (400 ml) and water (4 × 400 ml) (until the wash became neutral with litmus).
[0089]
[Expression 4]

(Preparation of HOBT ester of compound 4 (a))
(A. Formation of HOBT mesylate)
Anhydrous CH₂Cl₂To a cold (0 ° C.) mixture of hydroxybenzotriazole hydrate (200 g, 1.48 mol) in (1.5 L) is added anhydrous Et while maintaining a temperature of 0 ° C. to 10 ° C._ThreeN (268 ml, 1.92 mol) was added slowly followed by addition of methanesulfonyl chloride (126 ml, 1.63 mol) while maintaining the temperature at 0-5 ° C. The resulting mixture was stirred for 3 hours at 0 ° C. and washed successively with cold water (2 × 1.2 L) and brine (1.2 L). The combined organic extracts were concentrated under reduced pressure to give a solid. This solid is CH₂Cl₂(100 ml) and recrystallized from heptane (1 L). The crystals were collected by suction filtration, washed repeatedly with a total of 1 L heptane and then dried overnight under high vacuum (0.5 mmHg).
[0090]
[Equation 5]

(B. Formation of HOBT ester)
A mixture of compound 4 (a) (50 g, 0.14 mol) and the substance described in part A (36 g, 0.17 mol) in DMF (650 ml) was added to N₂Below, Et_ThreeDrop-treated with N (25 ml, 0.18 mol). The resulting mixture was purified by TLC (95: 5 CH₂Cl₂/ MeOH) and stirred at room temperature for 4 hours until all the acid was consumed. When all the acid has been consumed, an aliquot of the reaction mixture (about 3 drops (pipes drops)) is taken up with 3 ml of 1: 1 CH.₂Cl₂Dilution with / THF gave a clear homogeneous solution. The reaction mixture was then diluted with toluene (500 ml) and washed with water (500 ml). The organic layer (containing the solid product) was diluted with water (500 ml) and filtered using MTBE for transfer. The solid was rinsed with MTBE (2 × 400 ml) and dried under reduced pressure to give a greenish white flake of material. Note: This material can be dissolved in THF and filtered to remove any remaining metal contaminants.
[0091]
[Formula 6]

(Preparation of antifungal compound 6 (a))
Deionized water was used throughout the procedure. Compound 5 (a) (11 g, 23 mmol) and the nucleus of compound 6 (a) in anhydrous DMF (275 ml), where R is hydrogen and is 92% pure by HPLC, 19.25 g, 22. 2 mmol) of N₂Under stirring for 4 hours (until HPLC shows complete consumption of the starting cyclic peptide). The mixture was filtered through a celite bed and the filtrate was concentrated under reduced pressure at 35 ° C. to give a stirrable paste. This paste was poured into MTBE (500 ml) to give a fine powder precipitate which was collected by vacuum filtration and dried to give 27 g of crude material. This material is ground into a powder using a mortar and pestle, slurried in toluene (200 ml) for 5 minutes, filtered with suction (slow filtration), rinsed with MTBE (100 ml) and then dried under reduced pressure, A yellow solid was obtained. Yield: 23 g (95% purity by HPLC, retention time = 7.79 minutes).
[0092]
Alternatively, this transformation can be performed using excess cyclic nucleus (1.1 equivalents). When the reaction is substantially complete, as shown by HPLC, the crude material (10 g of powder) is added in portions to a vigorously stirred mixture of 9: 1 acetone / water (60 ml). Celite (2.5 g, prewashed with 9: 1 acetone / water mixture) is added to the resulting suspension. After stirring for 2 minutes, the mixture is filtered through a celite bed (prewashed with 9: 1 acetone / water) and the cake is rinsed twice with 9: 1 acetone / water (10 ml). The filtrate was poured into a beaker of deionized water (200 ml) while gently stirring the mixture, resulting in the formation of a precipitate. The precipitate is collected by suction filtration and H₂Rinse with O (4 × 25 ml), then dry under reduced pressure at room temperature. Yield: 6.81 g (97% purity by HPLC).
[0093]
The product was further purified using preparative HPLC chromatography.
[0094]
[Expression 7]

(Pharmaceutical formulation)
The following examples illustrate the formulations of the present invention and methods for their preparation. This example is not intended to limit the scope of the invention in any way and should not be construed in this way.
[0095]
The following formulations were prepared by Method A, Method B, or Method C. The amount of compound 6 (a) was determined by calculating the theoretical potency required for the experiment and dividing by the value due to the “as-is” HPLC potency of the compound.
[0096]
(Method A) After adjusting the pH of 50 ml of 0.1 M citrate buffer stock solution to pH 4, add 2.5 g polysorbate 80 and mix until the resulting mixture is dissolved, followed by preparation 1 g of compound 6 (a) (efficacy) was added. The resulting mixture was mixed until dissolved, followed by the addition of 3 g mannitol (filler) and 2 g trehalose (stabilizer). The resulting mixture was mixed again until dissolved. The resulting solution was diluted to 100 ml in a volumetric flask with water. A 3 ml sample of this solution was transferred to a vial and then freeze dried in a freeze dryer.
[0097]
(Method B) The pH of a solution of 0.3005 g acetic acid in 50 ml water was adjusted to pH 4.0 using 1N sodium hydroxide solution. While mixing, 2.5 g polysorbate 80 and 5.0 g mannitol (filler) were added and the resulting mixture was mixed until dissolved, followed by 1 g compound 6 (a) (efficacy). The resulting mixture was mixed until dissolved again. The resulting solution was diluted to 100 ml in a volumetric flask with water, filtered and then filled into vials. Vials can be freeze-dried in a freeze-dryer or stored at 5 ° C.
[0098]
(Method C) The pH of a solution of 0.113 g tartaric acid in 50 ml water was adjusted to pH 4.3 using 10% sodium hydroxide solution. While mixing, 2.5 g of polysorbate 80 was added and mixed until dissolved. The temperature of the solution was lowered to 5-15 ° C., followed by the addition of 1 g of compound 6 (a) (efficacy) as a slurry in water. The resulting mixture was mixed again until dissolved, followed by the addition of 1.0 g fructose (stabilizer) and 5.0 g mannitol (filler). The resulting mixture was mixed again until dissolved. The resulting solution was diluted to 100 ml in a volumetric flask with water, filtered and filled into vials. The vial can be freeze-dried in a freeze-dryer or stored at 5 ° C.
[0099]
The following Formulation Examples 1-27 were prepared substantially according to Methods A and B above. The symbol “-” means that the indicated ingredient has been omitted from the formulation. In Table 1 and the following table, all weights are in grams; concentration is in mg / ml; CA represents citric acid; Y represents yes, N represents no; Man represents mannitol Tre represents trehalose; Col represents Collapse Cake; C represents citrate; BA represents filler; B represents buffer; PEG represents PPG is polypropylene glycol; SA stands for stabilizer; Ace is acetate; Poly80 is polysorbate 80; Com is a compound; Suc is sucrose His is histidine; Sur is a surfactant; Lac is lactose; Fru is fructose ; TA is an tartrate; AA is acetic acid.
[0100]
[Table 1]

(Solubility study)
Solubility studies were conducted at room temperature by transferring 5 ml of test solution (containing surfactant in water, optionally containing filler, buffer or stabilizer) and 50 mg of Com (a) to a glass test tube. went. The test tube was stirred overnight and checked for excess solids. Tubes containing excess solids were removed for analysis. An additional 50 mg of compound 6 (a) was added to the test tube (without excess solids) and the resulting mixture was stirred again. This process was repeated until an excess of solid was observed in the test tube. All samples were left for 1 hour, the supernatant removed, filtered and analyzed by reverse phase HPLC to determine the potency of Com6 (a) per Ml of solution.
[0101]
[Table 2]

Monitor the stability of solutions and freeze-dried formulations by reverse-phase HPLC for an increase in percentage in the relevant substances, initial, 2 and 4 weeks storage at 40 ° C. Was evaluated by
[0102]
[Table 3]

Claims (9)

A freeze dry formulation, the following:
(I) an echinocandin compound, or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
(Ii) a pharmaceutically acceptable micelle-forming surfactant;
(Iii) a filler; and (iv) a stabilizer, wherein the stabilizer is fructose, trehalose, or mixtures thereof ;
Here, the micelle-forming surfactant is :

(Where x + y + z + w is equal to an integer between 5 and 20)
And is present in the freeze-dried formulation in an amount greater than 5% by weight,
Here, the filler is mannitol, sucrose, La Kutosu, and the mixtures or Ranaru group thereof,
Where the echinocandin compound is:

Where:

And
R ₁ , R ₂ , R ₃ , R ₆ , R ₇ , and R ₁₀ are hydroxy;
R ₄ is methyl;
R ₅ and R ₁₁ are methyl;
R ₈ is —OH;
R ₉ is —H;
Further, a formulation wherein the weight ratio of echinocandin: surfactant is 1: 2 to 1: 3 .   The formulation of claim 1, wherein the stabilizer is fructose.   The formulation of claim 1, further comprising a buffer. 4. The formulation of claim 3 , wherein the buffer is selected from the group consisting of acetate, tartrate, citrate, phosphate and amino acids. A pharmaceutical composition for treating fungal infections in a mammal, containing freeze dried formulation according to claim 1, pharmaceutical compositions.   The formulation of claim 1, wherein the filler is mannitol. The formulation of claim 4 , wherein the buffer is citrate, acetate, or tartrate.   The formulation of claim 1, wherein the micelle-forming surfactant is polysorbate 80, polysorbate 20, or polysorbate 40. A formulation according to claim 1, wherein the stabilizing agent is a fructose, wherein the filler is a mannitol Le formulation.