JP4053586B2 - ガンマインターフェロンの安定液体組成物 - Google Patents

Description

発明の背景
Ｉ．発明の分野
本発明はガンマインターフェロン（ＩＦＮ−γ、免疫インターフェロンとしても知られている）を含有する安定な液体医薬組成物に関する。本発明には、特に反復投与のための治療的有効量のＩＦＮ−γの複数用量を含有する安定化水性医薬組成物が含まれる。
ＩＩ．背景および関連分野の説明
ＩＦＮ−γはインターフェロン−αおよび−γ（ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β）に特徴的な抗ウイルス特性および抗増殖特性を有するインターフェロンファミリーの一員であるが、これらのインターフェロンとは異なりｐＨ２で不安定なインターフェロンである。ＩＦＮ−γはリンパ球のマイトージェン誘導により最初に産生された。ヒトＩＦＮ−γの組換えによる産生は、Ｇｒａｙ、Ｇｏｅｄｄｅｌ、およびその共同研究者（Ｇｒａｙらの、Ｎａｔｕｒｅ ２９５，５０３−５０８（１９８２））によって最初に報告され、米国特許４，７６２，７９１、４，９２９，５４４、４，７２７，１３８、および４，９２５，７９３号の主題を成している。大腸菌中で産生されるＧｒａｙおよびＧｏｅｄｄｅｌの組換えヒトＩＦＮ−γは分子のＮ−末端部位が配列ＣｙｓＴｙｒＣｙｓで始まる１４６アミノ酸からなる。その後、天然ヒトＩＦＮ−γ（すなわち、ヒト末梢血リンパ球のマイトージェン誘導によって生じ、次いで精製したもの）は、Ｇｒａｙら（上記）の示したＣｙｓＴｙｒＣｙｓ Ｎ−末端を欠くポリペプチドであることがわかっている。より最近になって、大腸菌由来の組換えヒトＩＦＮ−γ（ｒｈＩＦＮ−γ）の結晶構造が決定され（Ｅａｌｉｃｋらの、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２，６９８−７０２（１９９１））、この蛋白が２本の同一のポリペプチド鎖が逆平行に配置しているかたく捻り合わされた非共有ホモダイマーとして存在することが判明した。
ＩＦＮ−γは、抗腫瘍、抗菌、および免疫調節活性を含む広範囲の生物活性を有することが知られている。組換えヒトＩＦＮ−γ（ｒｈｉｆｎ−γ、アクティミュン（Ａｃｔｉｍｍｕｎｅ），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）は、食細胞の機能不全による皮膚、リンパ節、肝臓、肺、および骨の重症の再発感染を特徴とする慢性肉芽腫性疾患を治療するための免疫調節薬として市販されている（Ｂａｅｈｎｅｒ，Ｒ．Ｌ．の、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｐａｔｈｏｌ．１０，１４３−１５３（１９９０））。ＩＦＮ−γによって、アトピー性皮膚炎、重度のかゆみを特徴とする一般的炎症性皮膚炎、頻回の再燃期間を伴う慢性的再発経過、皮膚病変の特有の臨床的形態ならびに分布（ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０７９８４（１９９１年６月１３日公開）参照）、血管形成外科ならびに／もしくは血管外科手術後の再狭窄の治療を含む血管狭窄（ＰＣＴ公開ＷＯ９０／０３１８９（１９９０年４月５日公開））、および成人型呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）ならびに特発性ＲＤＳ、もしくはヒアリン膜病と様々に名付けられている新生児型呼吸困難症候群の様な呼吸困難症候群（ＲＤＳ）を含む様々な肺の病的状態（ＰＣＴ公開ＷＯ８９／０１３４１（１９８９年２月２３日公開）を治療することも提唱されている。さらに、ＩＦＮ−γを用いて、様々なアレルギー（例えば喘息）、および日和見感染（例えばニューモシスチスカリニ肺炎ならびに外傷性敗血症）の様なＨＩＶ感染性の病的状態の治療に成功している。有効量の非凍結乾燥ＩＦＮ−γと、ｐＨを４．０〜６．０に維持することができる緩衝剤、マンニトールの様な安定化剤、および非イオン性界面活性剤とを含む安定な液体医薬組成物が米国特許第５，１５１，２６５号（１９９２年９月２９日発行）に開示されている。
既知の市販されているＩＦＮ−γの液体製剤、アクティミュン（Ａｃｔｉｍｍｕｎｅ ｒｈｕＩＦＮ−γ−１ｂ，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）は、皮下注射用の１用量バイアル中に保存処理がなされていない無色透明の無菌溶液が充填されている。アクティミュンの０．５ｍＬバイアルは、各々マンニトール２０ｍｇ、コハク酸ナトリウム０．３６ｍｇ、ポリソルベート２０ ０．０５ｍｇ、および注射用無菌水中に製剤化したＩＦＮ−γ−１ｂ １００μｇ（３×１０⁶Ｕ、比活性：３×１０⁷Ｕ／ｍｇ）を含有している。これらの製剤は保存剤を含有していないため、単回治療用量を含む１回使用のためのものであり、未使用量は廃棄しなければならない。
アトピー性皮膚炎または腎細胞癌の治療の様な反復投与を含む長期使用を必要とする適用症では、ＩＦＮ−γが推奨保存条件下で長期間生物活性および物理的安定性を保持しているＩＦＮ−γの複数用量を含有する安定な液体医薬組成物を開発することが望ましいであろう。この様な組成物は、意図する治療に使用するために治療的有効量の約３０倍までのＩＦＮ−γを含有し、初回投与後少なくとも約１４日間安定であることが好ましい。しかし、そのような複数用量製剤を製造することは容易なことではない。
蛋白は伝統的な（有機または無機）薬剤とは異なりサイズが大きい。コンホメーションを傷つけないために、そのアミノ酸の少なくともコア配列が完全に保存されていることが生物活性にとって必須である。さらに、蛋白はその構成アミノ酸の様々な側鎖の様な複数の官能基を有するため、同じ時間枠で多くの分解反応が起きる可能性がある。そのような複数の分解経路が存在すると、おそらく活性化エネルギーの違いにより、その分解挙動は温度によってかなり差があるようである。
そのような複雑さがあるため、蛋白はしばしば不安的であり、蛋白の分解に応じた蛋白分解機序の決定、および律速反応の特定を含むそれらの分解挙動の特徴づけもきわめて複雑なものとなっている。分解生成物が何であるかを化学的に決定し、該生成物の量を測定することは容易ではないことが多い。一般的に、賦形剤は物理的条件ならびに生化学的条件において蛋白の安定性および活性アッセイに有意な影響を及ぼし、賦形剤を注意深く選択することは製剤計画において重要かつむつかしい面がある。
前記の問題は、熱不安定性であり、凝集傾向ならびに蛋白分解傾向を有することがよく知られている一連の１４３（１４６）アミノ酸によって表される約１５０００Ｄの蛋白であるＩＦＮ−γにおいて特に当てはまる（Ｗｅｔｚｅｌ，Ｒ．Ｌ．らの、「Unfolding and Inactivation」in: Protein Design and the Development of New Therapeutics and Vaccines，Ｈｏｏｋ，Ｊ．Ｂ．およびＰｏｓｔｅ，Ｇ．編、Plenum Publishing Corp．，１９９０，７９頁；Ｍｕｌｋｅｒｒｉｎ，Ｍ．Ｇ．およびＷｅｔｚｅｌ，Ｒ．の、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８，６５５６（１９８９））。
発明の要約
本発明は、あらかじめ凍結乾燥していないＩＦＮ−γの医薬的有効量、ｐＨを約４．０〜６．０の範囲内に維持する酢酸緩衝剤、非イオン性界面活性剤、等張化剤、およびフェノール、ベンジルアルコール、ならびにベンゼトニウムハライド（例えばクロリド）から選ばれる保存剤を含有する安定な水性医薬組成物に関する。ＩＦＮ−γは複数用量で存在し、少なくとも約２週間まで凍結することなく（好ましくは２〜８℃で）生物活性ならびに物理的安定性を保持することが好ましい。
別の態様において、本発明は少なくとも１医薬的有効量のＩＦＮ−γを含む量の前記の液体医薬組成物を含有する容器に関する。この容器は、シリンジまたはエアロゾル容器もしくはネブライザーなどの様な液体医薬組成物を含有し、その処理が可能な瓶もしくはバイアル、または用具であってよい。
さらなる態様において、本発明はあらかじめ凍結乾燥していないＩＦＮ−γと水、ｐＨを約４．０〜６．０の範囲内に維持する酢酸緩衝剤、非イオン性界面活性剤、等張化剤、およびフェノール、ベンジルアルコール、ならびにベンゼトニウムハライドから選ばれる保存剤を混合することによって、水性製剤中のＩＦＮ−γを安定化する方法に関する。
さらなる態様において、本発明はあらかじめ凍結乾燥していないＩＦＮ−γの医薬的有効量、ｐＨを約４．０〜６．０の範囲内に維持する酢酸緩衝剤、非イオン性界面活性剤、等張化剤、およびフェノール、ベンジルアルコール、ならびにベンゼトニウムハライドから選ばれる保存剤からなる吸入エアロゾル粒子（該粒子のサイズは患者の肺から肺胞内に浸透しさらに肺胞から血流中に浸透できるように十分に小さい）を、ＩＦＮ−γを必要とする患者に投与することからなるＩＦＮ−γの肺内投与法に関する。
これらおよびさらなる態様は当業者に明らかであろう。
図の簡単な説明
図１は、２５℃における保存処理を行っていない液体医薬組成物中のｒｈｕＩＦＮ−γ（アクティミュン，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｆｏｒｎｉａ）の生物活性に対する様々な保存剤の影響を示す。
図２Ａおよび２Ｂは、２５℃における液体医薬組成物中のｒｈｕＩＦＮ−γの生物活性に対する異なる濃度のフェノール保存剤の影響を示す。
図３は、２５℃におけるそれぞれ１ｍＭサクシネートおよび５ｍＭサクシネートを含有する液体製剤中のｒｈｕＩＦＮ−γの生物活性に対する０．９％ベンジルアルコールの影響を示す。
図４は、２５℃におけるそれぞれ５ｍＭサクシネートおよび１ｍＭサクシネートを含有する液体医薬組成物中のｒｈｕＩＦＮ−γの生物活性に対する０．４％フェノール保存剤の影響を示す。
図５は、２５℃における１ｍＭサクシネート対１０ｍＭアセテート製剤中のｒｈｙＩＦＮ−γの生物活性に対するフェノールの影響を示す。
発明の詳細な説明
初回投与後、ＩＦＮ−γの残りの医薬的有効量が保存されており、長期間の治療的適用に適している複数用量のＩＦＮ−γ製剤を提供する試みの中で、本発明者は多くの既知の医薬的に許容される保存剤がＩＦＮ−γの液体医薬製剤に通常使用されている他の成分と配合できず、この配合禁忌が安定性の劇的な低下を招いていることを明らかにした。特に本発明者は、様々な医薬的に許容される保存剤の添加がＩＦＮ−γの市販液体医薬製剤（アクティミュン，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）を不安定にし、凝集の形成、ならびに活性の低下をもたらすことを明らかにした。本発明は、ＩＦＮ−γの安定な保存剤含有水性医薬組成物を製造することに成功した研究結果を示すものである。本明細書で使用している「ガンマインターフェロン」、「インターフェロンガンマ」、および「ＩＦＮ−γ」は同義であり、適切な細胞株におけるウイルス複製の抑制（ヒトＩＦＮ−γによるヒト肺癌細胞株Ａ５４９における脳心筋炎ウイルス複製の抑制）、クラスＩＩ抗原の誘発、熱不安定性、他の抗ウイルス・抗腫瘍もしくは免疫調節アッセイ、またはＩＦＮ−γに対する免疫応答性は有するがＩＦＮ−αならびにＩＦＮ−βに対する免疫応答性を有しない抗体による中和試験、の様な一般に認められているＩＦＮ−γアッセイにおいて生物活性を有することが知られている全ての形（ヒトおよびヒト以外の動物）のＩＦＮ−γを意味しており、天然資源から得られるものであれ、組換えＤＮＡ技術の技法によって得られるものであれ、または化学的に合成されるものであれ、成熟、プロ、ｍｅｔ、もしくはｄｅｓ（１−３）（ｄｅｓＣｙｓＴｙｒＣｙｓ ＩＦＮ−γとしても表される）形のＩＦＮ−γを含む。ｃＤＮＡ配列およびアミノ酸配列を含む組換えヒトＩＦＮ−γ（ｒｈｕＩＦＮ−γ）の製造法の完全な説明は、例えば米国特許第４，７６２，７９１号の様な既述の米国特許に示されている。様々なトランケート誘導体を含むＣｙｓＴｙｒＣｙｓを欠く組換えヒトＩＦＮ−γは、例えばヨーロッパ特許公開第１４６，３５４号に開示されている。ＩＦＮ−γを含む非ヒト動物インターフェロンは、例えばヨーロッパ公開第８８，６２２号に開示されている。本用語には、当該分野で知られているかまたは将来利用できるようになると思われる、様々にグリコシル化された形、およびそのような天然（野生型）インターフェロンの他の変異体ならびに誘導体が含まれる。そのような変異体の例にはアレル遺伝子、および残基が欠落、挿入および／または置換されている部位指向性突然変異誘発性生成物がある（例えば、前述のヨーロッパ公開第１４６，３５４号参照）。ＩＦＮ−γは宿主範囲が狭いことが知られているため、治療する動物と同種のＩＦＮ−γを用いるべきである。ヒトの治療では、米国特許第４，７１７，１３８号、および対応するＥＰ７７，６７０に記載の配列のｄｅｓＣｙｓＴｙｒＣｙｓ変異体を使用するのが好ましく、また最後の４個のアミノ酸残基が翻訳後プロセッシングにおいて欠如しているＣ末端変異体を用いることがあってもよい。
本発明においては、薬理学的意味において、ＩＦＮ−γの「医薬的有効量」とは、その治療にＩＦＮ−γが有効である病理学的状態を予防または治療するのに有効な量をいう。そのような病的状態の例には、様々な腫瘍、細菌感染、慢性肉芽腫性疾患、アトピー性皮膚炎、血管形成外科ならびに／もしくは血管外科手術後の再狭窄の治療を含む血管狭窄、成人型呼吸困難症候群（ＡＲＤＳ）ならびに特発性ＲＤＳもしくはヒアリン膜病と様々に名付けられている新生児型呼吸困難症候群の様な呼吸困難症候群（ＲＤＳ）など、さらに、アレルギー（例えば喘息）、および日和見感染（例えばニューモシスチスカリニ肺炎ならびに結核など）の様なＨＩＶ感染関連性の病的状態が含まれるが、これらに制限されるものではない。
用語「医薬組成物」とは、活性成分の生物活性を明らかに有効にさせる様な形であり、該組成物を投与しようとする対象に対して毒性を示すような補助成分を含んでいない製剤をいう。
「医薬的に許容される」賦形剤（ビークル、添加剤）とは、対象哺乳動物に合理的に投与することができ、用いられている活性成分の有効量を提供することができるものをいう。
例えばＡ５４９抗ウイルスバイオアッセイの様な標準的なＩＦＮ−γの生物活性アッセイにおいて、投与時における生物活性が医薬組成物の製造時における生物活性の約２０％以内である場合は、ＩＦＮ−γは医薬組成物中で「生物活性を保持している」という。
ＩＦＮ−γが肉眼検査もしくはサイズ排除ＨＰＬＣ法で凝集の徴候を示さない場合は、ＩＦＮ−γは液体医薬組成物中で「物理的安定性を保持している」という。
４．０〜６．０のｐＨ範囲は、水溶液中のＩＦＮ−γの安定性において最適であることが以前に記載されている。またさらに、約５℃およびそれ以上での保存では、あらかじめ凍結乾燥していないｒｈｕＩＦＮ−γを含有する保存処理していない液体製剤は凍結乾燥したｒｈｕＩＦＮ−γ製剤よりかなり良好な安定性を有しており、また特に液体製剤において、凝集形成は有意に低いことが示されている。（米国特許第５，１５２，２６５号（１９９２年９月２９日発行）参照）。
本発明において、ｐＨがサクシネート緩衝剤で維持されているＩＦＮ−γの液体製剤への保存剤（抗菌剤）の添加は、望ましくない凝集形成を招き、該蛋白は該溶液中で急速な活性の低下を示すことが明らかとなった。保存剤含有溶液の安定性が低下する理由を明らかにする試みのなかで、本発明者は、凝集形成がＩＦＮ−γと使用した保存剤の配合禁忌によるのではなく、むしろサクシネート緩衝剤と試験した保存剤が同時に存在することによって生じることを明らかにした。凝集形成を生じる反応の真相はわかっておらず、分解生成物は分離されていないが、驚くべきことに、サクシネート緩衝剤を、ｐＨを所望のｐＨ範囲に保つことができる酢酸緩衝剤に置き換えることによって、この分解を避け、安定な水性医薬組成物を形成できることがわかった。
最初の実験において、アクティミュン（ｒｈｕＩＦＮ−γ−１ｂ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）中のｒｈｕＩＦＮ−γの生物活性に対する様々な保存剤の影響を試験した。ＩＦＮ−γを対象とする緩衝剤で透析した。ＩＦＮ−γ濃度は０．２ｍｇ／ｍＬに調節した。保存剤を加え、溶解するまで混合した。部分標本１ｍＬを３ｍＬ Ｉ型ガラスバイアルに移し、５℃および２５℃で保存した。定期的にバイアルを選び（１バイアル／時点／保存温度）アッセイした。アッセイにはＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＥＬＩＳＡ、Ａ５４９抗ウイルスバイオアッセイ（Ｆｉｓｈ，Ｅ．Ｎ．らの、Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ２，１９１−２０６（１９８８）参照）、およびより少ない頻度で、逆相ＨＰＬＣ、イオン交換クロマトグラフィーならびにサイズ排除クロマトグラフィーが含まれる。生物活性およびＳＤＳ−ＰＡＧＥが変化を反映するのに最も鋭敏であるので、これらのデータのみについて考察した。５℃で変化を認めるには有意に長い時間が必要と思われるため、示した実際の実験データは２５℃で得た（安定性増進試験）。
図１に示すように、保存剤として１％ベンジルアルコールまたは０．４％フェノールの添加は、保存処理していない対照および異なる２濃度のベンゼトニウムクロリドを含む製剤に比べて、２５℃におけるＩＦＮ−γの生物活性の劇的な低下をもたらした。
図２Ａに、２５℃における液体製剤中のｒｈｕＩＦＮ−γ（アクティミュン，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）の生物活性に対する異なる濃度のフェノールの影響を示す。ＩＦＮ−γの生物活性は、それぞれ０．１％および０．２％フェノールによって溶液中で十分に保存されたが、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）で試験した凝集形成はこれらの溶液中で増加した（図２Ｂ）。
図３はそれぞれ１ｍＭサクシネートおよび５ｍＭサクシネート緩衝製剤中の２５℃におけるｒｈｕＩＦＮ−γ生物活性に対する０．９％ベンジルアルコールの影響を示す。より低濃度のサクシネートを含有する製剤では生物活性の低下が少ないという事実は、サクシネート緩衝剤の存在が保存処理されたｒｈｕＩＦＮ−γ溶液において経験される安定性の問題の少なくとも一因であることを示唆するようである。図４に示した結果はこの結論を裏づける。ＩＦＮ−γの生物活性の低下は、１ｍＭサクシネートでｐＨを５．０に維持した水性溶液では５ｍＭサクシネートを含む水性溶液ほど劇的ではなかった。
次に、ｒｈｕＩＦＮ−γの生物活性に対する０．４％フェノールの影響を、それぞれ１ｍＭサクシネート緩衝剤および１０ｍＭ酢酸緩衝剤を含有する液体製剤において試験した。図５に示すように、ＩＦＮ−γの生物活性で判定した酢酸緩衝溶液の安定性は、それぞれサクシネートおよびアセテートで緩衝した保存処理していない対照溶液の安定性と本質的に同じであり、視覚検査またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動において凝集物を検出しなかった。
本発明の医薬組成物には：
ａ）あらかじめ凍結乾燥されていないＩＦＮ−γ、
ｂ）ｐＨを約４〜約６（溶液中の蛋白が最も安定であるｐＨ範囲）に保つことができる酢酸緩衝剤、
ｃ）主として、かくはん誘発性の凝集に対して該蛋白を安定化する非イオン性界面活性剤、
ｄ）等張化剤、
ｅ）フェノール、ベンジルアルコール、およびベンゼトニウムハライド（例えばクロリド）の群から選ばれる保存剤、および
ｆ）水
が含まれる。
非イオン性界面活性剤（サーファクタント）は、例えば、ポリソルベート類（例えば、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）２０、８０など）またはポロキサマー類（例えばポロキサマー１８８）であってよい。非イオン性界面活性剤を使用することによって、該製剤をばく露し、該蛋白の変性を生じることなく表面の緊張を除去することができる。さらに、そのような界面活性剤を含有する製剤は、肺投与で使用するエアロゾル用具のようなエアロゾル用具および針無しジェットインジェクターガン中で使用することができる（例えばＥＰ２５７，９５６参照）。
等張化剤は本発明の液体組成物の等張性を保証するために存在し、多価糖アルコール、好ましくはグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールの様な三価もしくはそれ以上の糖アルコールが含まれる。これらの糖アルコールは、単独でか、または組み合わせて用いることができる。あるいはまた、塩化ナトリウムまたは他の適切な無機塩を用いて該溶液を等張とすることができる。
酢酸緩衝剤は、例えば、酢酸−酢酸ナトリウム混合液、酢酸−水酸化ナトリウム混合液などであってよい。本発明の液体製剤のｐＨは、約４．０〜６．０の範囲、好ましくは４．５〜５．５、および最も好ましくは約ｐＨ５で緩衝する。
保存剤のフェノール、ベンジルアルコール、およびベンゼトニウムハライド（例えばクロリド）は、既知の抗菌剤である。
好ましい態様において、本発明の液体医薬組成物は以下の成分を含有する：
ＩＦＮ−γ ０．１〜２．０ｍｇ／ｍＬ
酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０） ５〜１００ｍＭ
Ｔｗｅｅｎ２０ ０．１〜０．０１重量％
フェノール ０．０５〜０．４重量％
マンニトール ５重量％
注射用水、ＵＳＰ １００％とする、
ここで、量のパーセンテージは該組成物の重量に基づいている。フェノールはベンジルアルコール０．５〜１．０重量％で置き換えるか、またはマンニトールは塩化ナトリウム０．９％で置き換えることができる。
最も好ましくは該組成物は：
ＩＦＮ−γ ０．１〜１．０ｍｇ／ｍＬ
酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０） １０ｍＭ
Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０１重量％
フェノール ０．２％
マンニトール ５％
を含む。
フェノールはベンジルアルコール０．７５重量％で置き換えることができ、またマンニトールは塩化ナトリウム０．９％で置き換えることができる。
保存処理した液体製剤は、好ましくはＩＦＮ−γの医薬的有効量の複数用量を含有する。本ポリペプチドの宿主範囲が狭いことから、ヒト患者を治療するには、ヒトＩＦＮ−γ、より好ましくは天然配列ヒトＩＦＮ−γ、を含有する液体製剤が好ましい。生物学的応答調節剤としてＩＦＮ−γは、様々なヒトおよび非ヒト哺乳動物種の広範囲の細胞種において様々な活性を示す。医薬的有効量は、もちろん治療（予防を含む）する病理学的状態、患者の年齢、体重、全般的な医学的状態、病歴などの様な要因に応じて異なるであろうし、その決定は臨床医が適切に行うであろう。一般的に有効量は、約０．００１〜約１．０ｍｇ／ｋｇの、より好ましくは約０．０１〜１ｍｇ／ｋｇの、最も好ましくは約０．０１〜０．１ｍｇ／ｋｇの範囲内である。該製剤においてｈｕＩＦＮ−γは、Ａ５４９細胞で脳心筋ウイルスについて試験したとき、蛋白１ｍｇ当り約２×１０⁷Ｕまたはそれ以上のオーダーで比活性を示すことが好ましい。エンドトキシンによる汚染は例えば０．５ｎｇ／ｍｇ蛋白より低い安全なレベルで最小限に抑えるべきであると解するべきである。さらに、ヒトに投与する場合は、該液体組成物はＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ標準が要求する無菌性、発熱性、全般安全性、および純度を満たすべきである。
該製剤は静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、もしくは筋肉内（ｉ．ｍ．）反復注射薬としてか、または鼻腔内もしくは肺内輸送（肺内輸送についてはＥＰ２５７，９５６参照）に適したエアロゾル製剤として投与することが好ましい。
慢性肉芽腫性疾患の患者を治療するための推奨用量は、体表面積が０．５ｍ²を超える患者については５０μｇ／ｍ²（１．５×１０⁶Ｕ／ｍ²）であり、体表面積が０．５ｍ²に等しいかまたはそれ未満の患者については１．５μｇ／ｋｇ／用量である。注射は１週間に３回皮下投与することを推奨する。
重症傷害が続いている患者における感染および死亡を減少させるには、ｒｈｕＩＦＮ−γを用量１００μｇで１日１回皮下投与することができる。このようにして予防または治療することができる感染には、肺炎、菌血症、腹腔内もしくは胸腔内感染、重度の創傷感染、ベクティクリティス（ｖｅｃｔｉｃｕｌｉｔｉｓ）／髄膜炎などが含まれる。
本発明の安定な液状組成物はバイアルに入れられ、約３０治療的有効量までのＩＦＮ−γを含有していることが好ましい。ＩＦＮ−γの生物活性は、初回投与後少なくとも約１４日間、より好ましくは少なくとも約２００日間、初回投与時の生物活性の約２０％以内にあることが好ましい。
本明細書全体にわたるすべての引用およびそのなかの引用文献は、本明細書の一部を構成する。
特に好ましい態様については既述しているが、それによって本発明が制限されるものではないことか理解されよう。本発明の全体の概念から逸脱することなく開示した態様に様々な変更を加えることができることは、当業者なら思いつくであろう。すべてのそのような変更は、本発明の範囲内であると解釈される。

Claims (15)

1. あらかじめ凍結乾燥されていない複数用量の医薬的有効量のＩＦＮ−γと、ｐＨを４．０〜６．０に維持する酢酸緩衝剤と、非イオン性界面活性剤と、等張化剤と、フェノールおよびベンジルアルコールからなる群から選ばれる保存剤とを含有する安定な液状複数用量医薬組成物。
2. ＩＦＮ−γがヒトＩＦＮ−γである請求項１に記載の組成物。
3. ＩＦＮ−γがｄｅｓＣｙｓＴｙｒＣｙｓ−ＩＦＮ−γである請求項２に記載の組成物。
4. ＩＦＮ−γがＣ末端の４個のアミノ酸が欠損しているｄｅｓＣｙｓＴｙｒＣｙｓ−ＩＦＮ−γである請求項２に記載の組成物。
5. ＩＦＮ−γの比活性が少なくとも２×１０⁷Ｕ／ｍｇである請求項２に記載の組成物。
6. 少なくとも２回分の治療的に有効な用量のヒトＩＦＮ−γを含有する請求項５に記載の組成物。
7. ２〜３０回分の治療的に有効な用量のヒトＩＦＮ−γを含有する請求項６に記載の組成物。
8. 非イオン性界面活性剤がポリソルベートである請求項５に記載の組成物。
9. 等張化剤が多価糖アルコールである請求項８に記載の組成物。
10. 多価糖アルコールがマンニトールである請求項９に記載の組成物。
11. あらかじめ凍結乾燥されていない複数用量の医薬的有効量のＩＦＮ−γと、ｐＨを４．０〜６．０に維持する酢酸緩衝剤と、非イオン性界面活性剤と、等張化剤と、フェノールおよびベンジルアルコールからなる群から選ばれる保存剤とを含有する安定な液状医薬複数用量組成物を含有する容器。
12. 少なくとも２回分の治療的に有効な用量のＩＦＮ−γを含有するバイアルである請求項１１に記載の容器。
13. 注射またはエアロゾル輸送によって含有する組成物を処分することができる請求項１１に記載の容器。
14. あらかじめ凍結乾燥されていない複数用量のＩＦＮ−γと、水と、ｐＨを４．０〜６．０に維持する酢酸緩衝剤と、非イオン性界面活性剤と、等張化剤と、フェノールおよびベンジルアルコールからなる群から選ばれる保存剤とを混合することによって液状組成物中のＩＦＮ−γを安定化する方法。
15. あらかじめ凍結乾燥されていない複数用量の医薬的有効量のＩＦＮ−γと、ｐＨを４．０〜６．０に維持する酢酸緩衝剤と、非イオン性界面活性剤と、等張化剤と、フェノールおよびベンジルアルコールからなる群から選ばれる保存剤とを含有し、粒子サイズが患者の肺の肺胞内に浸透しさらに肺胞から血流に浸透することができるほどに十分に小さい吸入エアロゾル粒子を形成する、肺内投与するための薬剤。

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