JP3504963B2 - DNA fragment encoding amino acid sequence of anti-human high affinity IgE receptor monoclonal antibody - Google Patents
DNA fragment encoding amino acid sequence of anti-human high affinity IgE receptor monoclonal antibodyInfo
- Publication number
- JP3504963B2 JP3504963B2 JP26479293A JP26479293A JP3504963B2 JP 3504963 B2 JP3504963 B2 JP 3504963B2 JP 26479293 A JP26479293 A JP 26479293A JP 26479293 A JP26479293 A JP 26479293A JP 3504963 B2 JP3504963 B2 JP 3504963B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cag
- acc
- tct
- tat
- gga
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトの高親和性ＩｇＥ
受容体（以下ＦｃεＲＩと称することもある）を特異的
に認識することができるアミノ酸配列を有するポリペプ
チド及びこれをコードする塩基配列を有するＤＮＡ断片
に関する。The present invention relates to human high affinity IgE.
The present invention relates to a polypeptide having an amino acid sequence capable of specifically recognizing a receptor (hereinafter sometimes referred to as FcεRI) and a DNA fragment having a base sequence encoding the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術、及び発明が解決しようとする課題】従
来、Ｉ型アレルギーの治療には、ステロイドをはじめと
した抗炎症剤が広く用いられているが、その非特異性故
に副作用の問題があり、そのため、Ｉ型アレルギーの特
異的な治療法が検討されている。2. Description of the Related Art Conventionally, anti-inflammatory agents such as steroids have been widely used for the treatment of type I allergy, but there is a problem of side effects due to their non-specificity. Therefore, a specific treatment method for type I allergy is being investigated.
【０００３】ここで、肥満細胞、好塩基球の細胞膜上に
発現する高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）は、Ｉ型
アレルギー反応効果相においてこれらの細胞の活性化の
生化学的過程を始動させる鍵を握る糖蛋白分子である。
ＦｃεＲＩに結合した抗原特異的ＩｇＥが、対応する多
価抗原（例えばスギ花粉症の患者ではスギ花粉、ダニア
レルギー患者ではダニ抗原）によって架橋されると、こ
のレセプター（ＦｃεＲＩ）は凝集し、シグナル伝達機
構が作動し、肥満細胞は初めて活性化される。その結
果、アレルギー性炎症を惹起する種々の化学伝達物資、
すなわち予め細胞内顆粒に貯えられていたヒスタミンの
放出をはじめとして、細胞膜代謝産物であるロイコトリ
エン、プロスタグランジンなどの新たな合成、放出が爆
発的に誘導される。また、ＦｃεＲＩからのシグナルは
一方で核を経由して、アレルギー性炎症に直接、間接に
関与するサイトカインの合成を誘導する。Here, the high-affinity IgE receptor (FcεRI) expressed on the cell membranes of mast cells and basophils initiates the biochemical process of activation of these cells in the type I allergic reaction effect phase. It is a glycoprotein molecule that holds the key.
When the antigen-specific IgE bound to FcεRI is cross-linked by the corresponding multivalent antigen (eg, cedar pollen in patients with cedar pollinosis, mite antigen in patients with mite allergy), this receptor (FcεRI) aggregates and signals. The mechanism is activated and mast cells are activated for the first time. As a result, various chemical substances that cause allergic inflammation,
That is, new synthesis and release of histamine, which has been previously stored in intracellular granules, and leukotriene and prostaglandin, which are cell membrane metabolites, are explosively induced. On the other hand, the signal from FcεRI, via the nucleus, induces the synthesis of cytokines directly or indirectly involved in allergic inflammation.
【０００４】従って、ＩｇＥによって媒介されるＩ型ア
レルギーの特異的な治療を考えるとき、Ｉ型アレルギー
反応効果相を特異的に支配するＦｃεＲＩを標的にし
て、その反応の根幹を遮断するために、ＩｇＥ−Ｆｃε
ＲＩ結合を特異的に阻害する戦略はきわめて有望であ
る。かかる見地から、ＩｇＥ結合阻害剤の候補として、
可溶化ヒトＦｃεＲＩ、抗ヒトＦｃεＲＩ抗体Ｆａｂ断
片、ヒトＩｇＥ定常領域（Ｆｃε）、抗ヒトＦｃε抗体
などが考慮され、それぞれ研究が進められている。Therefore, when considering a specific treatment of type I allergy mediated by IgE, in order to target FcεRI, which specifically governs the effect phase of type I allergic reaction, and block the basis of the reaction, IgE-Fcε
Strategies that specifically inhibit RI binding hold great promise. From this point of view, as a candidate IgE binding inhibitor,
Solubilized human FcεRI, anti-human FcεRI antibody Fab fragment, human IgE constant region (Fcε), anti-human Fcε antibody, etc. have been considered and are being studied.
【０００５】前述のように、抗ヒトＦｃεＲＩモノクロ
ーナル抗体は、Ｉ型アレルギーの特異的な治療薬として
期待される。またそれだけでなく、診断薬、さらにはＦ
ｃεＲＩ発現細胞を標的としたミサイル療法など様々な
応用が期待される。そこで、後述するように、まず本発
明者らは、抗ヒトＦｃεＲＩモノクローナル抗体を産生
するマウス・ハイブリドーマを樹立した。しかし、マウ
ス等の異種抗体はヒトにとっては異物であり、ヒトに頻
回投与することは投与抗体に対する免疫反応を惹起し、
その結果、副作用並びに抗体の治療または予防効果の低
下を引き起こす。以上の点から、実際に抗体をヒトに投
与する臨床分野を考えると、ヒト型の抗体を用いること
が望ましい。As mentioned above, the anti-human FcεRI monoclonal antibody is expected as a specific therapeutic drug for type I allergy. Not only that, but also diagnostic agents and even F
Various applications such as missile therapy targeting cεRI-expressing cells are expected. Therefore, as described below, the present inventors first established a mouse hybridoma that produces an anti-human FcεRI monoclonal antibody. However, xenoantibodies such as mice are foreign to humans, and frequent administration to humans induces an immune reaction against the administered antibody,
As a result, side effects and a decrease in the therapeutic or prophylactic effect of the antibody are caused. From the above points, considering the clinical field in which an antibody is actually administered to humans, it is desirable to use a human antibody.
【０００６】ここで、抗体の特異性が可変領域の中でも
ＣＤＲという特定の領域に限定されることは当分野では
よく知られていることで、ヒト型の抗体を作製する目的
で、マウス等の異種抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を抗体
遺伝子のクローニングにより明らかにした後、ヒト抗体
の可変領域へ移植することが行われている。更に、この
ような抗体工学と呼ばれる研究分野ではこの他に、二種
の異なった抗原特異性を有する双特異キメラ抗体、一本
鎖抗体、及び抗体活性を持つ単一ＣＤＲに相当するオリ
ゴペプチドなどの開発がなされつつある。[0006] Here, it is well known in the art that the specificity of an antibody is limited to a specific region called CDR among the variable regions. After clarifying the amino acid sequence of CDR of a heterologous antibody by cloning an antibody gene, transplantation into a variable region of a human antibody has been performed. Furthermore, in the field of research called such antibody engineering, in addition to this, bispecific chimeric antibodies having two different antigen specificities, single chain antibodies, oligopeptides corresponding to a single CDR having antibody activity, and the like. Is being developed.
【０００７】また、モノクローナル抗体産生細胞株は、
一般に継代と共にその抗体産生能の低下することが知ら
れており、この問題を解決するために抗体遺伝子をクロ
ーニングした後、遺伝子導入することによって大量発現
させることなどが行われている。このように、遺伝子工
学的手法による抗体の産生、更に、改良抗体の開発にお
いては、その遺伝子の分離、更にアミノ酸配列を含めた
構造の解明は重要であり、特に、ＣＤＲのＤＮＡ塩基、
アミノ酸配列及びＣＤＲをコードするＤＮＡ塩基配列の
解明は極めて重要である。The monoclonal antibody producing cell line is
It is generally known that the antibody-producing ability decreases with passage, and in order to solve this problem, the antibody gene is cloned and then gene-transferred for large-scale expression. Thus, in the production of antibodies by genetic engineering techniques, and further in the development of improved antibodies, it is important to separate the gene and elucidate the structure including the amino acid sequence.
Elucidation of the amino acid sequence and the DNA base sequence encoding the CDR is extremely important.
【０００８】本発明は、このような技術背景の下になさ
れたものであり、その目的とするところは、抗ヒトＦｃ
εＲＩモノクローナル抗体の抗原認識領域、特にそのＣ
ＤＲのアミノ酸配列及びこれをコードするＤＮＡ塩基配
列を解明し、治療や診断において有用な、ヒトＦｃεＲ
Ｉを特異的に認識することのできるアミノ酸配列を有す
るポリぺプチド、及びこれをコードする塩基配列を有す
るＤＮＡ断片を提供することにある。The present invention has been made under such a technical background, and an object thereof is anti-human Fc.
Antigen recognition region of εRI monoclonal antibody, especially its C
Human FcεR useful for therapeutic and diagnostic purposes by elucidating the amino acid sequence of DR and the DNA base sequence encoding the same
It is intended to provide a polypeptide having an amino acid sequence capable of specifically recognizing I, and a DNA fragment having a base sequence encoding the polypeptide.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗ヒトＦ
ｃεＲＩモノクローナル抗体生産株について種々検討し
た結果、５株の抗ヒトＦｃεＲＩモノクローナル抗体生
産株を得、更に該抗体のＣＤＲを含む可変領域をコード
するｃＤＮＡを分離し該ＤＮＡ塩基配列を解明し、特に
ＣＤＲ領域のアミノ酸配列を特定することにより、上記
目的が達成できることを見出し、本発明を完成するに至
った。The present inventors have found that anti-human F
As a result of various studies on the cεRI monoclonal antibody-producing strain, 5 strains of anti-human FcεRI monoclonal antibody-producing strains were obtained, and the cDNA encoding the variable region containing the CDR of the antibody was isolated to elucidate the DNA base sequence. The inventors have found that the above object can be achieved by specifying the amino acid sequence of the region, and have completed the present invention.
【００１０】従って、本発明のポリペプチドは、それぞ
れ、下記一般式（１）と（２）、（３）と（４）、
（５）と（６）、（７）と（８）、及び（９）と（１
０）との組み合わせより選択され、ヒトの高親和性Ｉｇ
Ｅ受容体を特異的に認識することができるものであるこ
とを特徴とする。
ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ−ＦＲ３−Ｃ
ＤＲ３Ｈ−ＦＲ４…（１）
（上式中のＦＲ１は２９〜３６個の、ＦＲ２は１０〜１
６個の、ＦＲ３は３２〜３５個の、ＦＲ４は１２〜１４
個のそれぞれアミノ酸から構成されるポリペプチド残基
であり、ＣＤＲ１Ｈは配列表の配列番号１で、ＣＤＲ２
Ｈは配列表の配列番号２で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列
番号３でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化
状態において架橋を形成していることがある。）
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８…（２）
（上式中のＦＲ５は２３〜２８個の、ＦＲ６は１４〜１
６個の、ＦＲ７は３０〜３４個の、ＦＲ８は９〜１１個
のそれぞれアミノ酸から構成されるポリペプチド残基で
あり、ＣＤＲ１Ｌは配列表の配列番号４で、ＣＤＲ２Ｌ
は配列表の配列番号５で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番
号６でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状
態において架橋を形成していることがある。）Therefore, the polypeptide of the present invention comprises the following general formulas (1) and (2), (3) and (4), respectively.
(5) and (6), (7) and (8), and (9) and (1
0) in combination with human high affinity Ig
It is characterized in that it can specifically recognize the E receptor. FR1-CDR1H-FR2-CDR2H-FR3-C
DR3H-FR4 ... (1) (FR1 in the above formula is 29 to 36, FR2 is 10 to 1)
Six, FR3 is 32 to 35, FR4 is 12 to 14
CDR1H is a polypeptide residue composed of individual amino acids, and CDR1H is SEQ ID NO: 1 in the sequence listing, and CDR2 is
H is represented by SEQ ID NO: 2 in the sequence listing, and CDR3H is represented by SEQ ID NO: 3 in the sequence listing, in which the amino acid Cys may form a bridge in the oxidation state. ) FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (2) (FR5 in the above formula is 23 to 28, FR6 is 14 to 1)
6, FR7 is a polypeptide residue composed of 30 to 34 amino acids and FR8 is a polypeptide residue composed of 9 to 11 amino acids, and CDR1L is SEQ ID NO: 4 in the sequence listing and CDR2L is
Is represented by SEQ ID NO: 5 in the sequence listing, and CDR3L is represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing, wherein the amino acid Cys may form a bridge in the oxidation state. )
【００１１】ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ
−ＦＲ３−ＣＤＲ３Ｈ−ＦＲ４…（３）
（上式中のＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｈは配列表の配列番号７で、ＣＤＲ２Ｈは配列表
の配列番号８で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号９でそ
れぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態におい
て架橋を形成していることがある。）
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８…（４）
（上式中のＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｌは配列表の配列番号１０で、ＣＤＲ２Ｌは配列
表の配列番号１１で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号１
２でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態
において架橋を形成していることがある。）FR1-CDR1H-FR2-CDR2H
-FR3-CDR3H-FR4 (3) (FR1 to FR4 in the above formula are the same as above, and C
DR1H is represented by SEQ ID NO: 7 in the sequence listing, CDR2H is represented by SEQ ID NO: 8 in the sequence listing, and CDR3H is represented by SEQ ID NO: 9 in the sequence listing, in which amino acid Cys may form a bridge in an oxidized state. . ) FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (4) (FR5 to FR8 in the above formula are the same as above, and C
DR1L is SEQ ID NO: 10 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID NO: 11 in the sequence listing, CDR3L is SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
Each is represented by 2 where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. )
【００１２】ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ
−ＦＲ３−ＣＤＲ３Ｈ−ＦＲ４…（５）
（上式中のＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｈは配列表の配列番号１３で、ＣＤＲ２Ｈは配列
表の配列番号１４で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号１
５でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態
において架橋を形成していることがある。）
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８…（６）
（上式中のＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｌは配列表の配列番号１６で、ＣＤＲ２Ｌは配列
表の配列番号１７で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号１
８でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態
において架橋を形成していることがある。）FR1-CDR1H-FR2-CDR2H
-FR3-CDR3H-FR4 (5) (FR1 to FR4 in the above formula are the same as above, and C
DR1H is SEQ ID NO: 13 in the sequence listing, CDR2H is SEQ ID NO: 14 in the sequence listing, CDR3H is SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
5, respectively, where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. ) FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (6) (FR5 to FR8 in the above formula are the same as above, and C
DR1L is SEQ ID NO: 16 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID NO: 17 in the sequence listing, CDR3L is SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
Each is represented by 8 where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidised state. )
【００１３】ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ
−ＦＲ３−ＣＤＲ３Ｈ−ＦＲ４…（７）
（上式中のＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｈは配列表の配列番号１９で、ＣＤＲ２Ｈは配列
表の配列番号２０で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号２
１でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態
において架橋を形成していることがある。）
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８…（８）
（上式中のＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｌは配列表の配列番号２２で、ＣＤＲ２Ｌは配列
表の配列番号２３で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号２
４でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態
において架橋を形成していることがある。）FR1-CDR1H-FR2-CDR2H
-FR3-CDR3H-FR4 (7) (FR1 to FR4 in the above formula are the same as above, and C
DR1H is SEQ ID NO: 19 in the sequence listing, CDR2H is SEQ ID NO: 20 in the sequence listing, CDR3H is SEQ ID NO: 2 in the sequence listing.
Each is represented by 1 where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidised state. ) FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (8) (FR5 to FR8 in the above formula are the same as above, and C
DR1L is SEQ ID NO: 22 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID NO: 23 in the sequence listing, CDR3L is SEQ ID NO: 2 in the sequence listing.
Each of which is represented by 4 where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. )
【００１４】ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ
−ＦＲ３−ＣＤＲ３Ｈ−ＦＲ４…（９）
（上式中のＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｈは配列表の配列番号２５で、ＣＤＲ２Ｈは配列
表の配列番号２６で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号２
７でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態
において架橋を形成していることがある。）
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８…（１０）
（上式中のＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、Ｃ
ＤＲ１Ｌは配列表の配列番号２８で、ＣＤＲ２Ｌは配列
表の配列番号２９で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号３
０でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態
において架橋を形成していることがある。）FR1-CDR1H-FR2-CDR2H
-FR3-CDR3H-FR4 (9) (FR1 to FR4 in the above formula are the same as above, and C
DR1H is SEQ ID NO: 25 in the sequence listing, CDR2H is SEQ ID NO: 26 in the sequence listing, CDR3H is SEQ ID NO: 2 in the sequence listing.
Each is represented by 7 where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. ) FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (10) (FR5 to FR8 in the above formula are the same as above, and C
DR1L is SEQ ID NO: 28 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID NO: 29 in the sequence listing, CDR3L is SEQ ID NO: 3 in the sequence listing.
Each is represented by 0, where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. )
【００１５】また、本発明のＤＮＡ断片は、上記各ポリ
ペプチドをコードする塩基配列を有することを特徴とす
る。The DNA fragment of the present invention is characterized by having a nucleotide sequence encoding each of the above polypeptides.
【００１６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明の
ポリペプチド及びＤＮＡ断片、並びにこれらと関連する
抗ヒトＦｃεＲＩモノクローナル抗体生産株及びモノク
ローナル抗体は、下記の方法により得ることができる。
即ち、まず、例えば、羅らの報告した方法（インターナ
ショナル・イムノロジー (International Immunology)
、第５巻、第４７−５４頁（１９９３））により調製
した可溶化ヒトＦｃεＲＩα鎖を抗原として、抗ヒトＦ
ｃεＲＩモノクローナル抗体生産株（ミエローマ細胞及
び脾細胞より得られるハイブリドーマ）を得る。この生
産株から、例えばバイオテクニックス (Bio Technique
s) 、第６巻、第１１４−１１６頁（１９８８）に記載
の方法で、ｍＲＮＡを調製することができる。The present invention will be described in detail below. The polypeptide and DNA fragment of the present invention, and the anti-human FcεRI monoclonal antibody-producing strain and monoclonal antibody related thereto can be obtained by the following method.
That is, first, for example, the method reported by Ra et al. (International Immunology)
, Vol. 5, pp. 47-54 (1993)), using the solubilized human FcεRI α chain as an antigen, anti-human F
A cεRI monoclonal antibody-producing strain (hybridoma obtained from myeloma cells and splenocytes) is obtained. From this production strain, for example, Bio Techniques
s), Vol. 6, pages 114-116 (1988), mRNA can be prepared.
【００１７】次いで、得られたｍＲＮＡを逆転写するこ
とによりｃＤＮＡを調製し、マウス抗体重（Ｈ）鎖可変
領域あるいは軽（Ｌ）鎖可変領域のＮ末端をコードする
プライマー及びＣ末端をコードするプライマーを用い
て、ＰＣＲ法（Ｓ．サイキ（Ｓ．Ｓａｉｋｉ）ら、サイ
エンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第２３０巻、第１３５０−
１３５４頁（１９８５））によりマウス抗体Ｈ鎖可変領
域あるいはＬ鎖可変領域のｃＤＮＡを特異的に増幅する
ことができる。例えば、ファルマシア社のｓｃＦｖ ｍ
ｏｄｕｌｅキット等を利用してｃＤＮＡの合成及びＰＣ
Ｒ法によるマウス抗体Ｈ鎖可変領域遺伝子及びＬ鎖可変
領域遺伝子の増幅を行うことができる。Next, cDNA is prepared by reverse transcription of the obtained mRNA, and encodes a primer encoding the N-terminus of the mouse antibody heavy (H) chain variable region or the light (L) chain variable region and the C-terminus. PCR method (S. Saiki et al., Science), Volume 230, 1350-, using primers.
1354 (1985)), cDNA of mouse antibody H chain variable region or L chain variable region can be specifically amplified. For example, Pharmacia scFv m
cDNA synthesis and PC using module kit etc.
The mouse antibody H chain variable region gene and L chain variable region gene can be amplified by the R method.
【００１８】しかる後、増幅されたＤＮＡを、例えばア
ガロースゲル電気泳動した後、ゲルから切り出し、精製
後、ブランティングキット（宝酒造社）を用いて末端を
平滑化し、例えばプラスミドベクターｐＵＣ１１９のＳ
ｍａｌサイトにサブクローニングし、ジデオキシ法によ
りシーケンシングすることによりその塩基配列を決定す
ることができる。その塩基配列よりマウス抗体Ｈ鎖可変
領域及びＬ鎖可変領域のアミノ酸配列を決定し、さらに
ＣＤＲ領域のアミノ酸配列を特定することができる。Thereafter, the amplified DNA is subjected to, for example, agarose gel electrophoresis, cut out from the gel, purified, and then blunted with a blunting kit (Takara Shuzo) to obtain, for example, S of the plasmid vector pUC119.
The nucleotide sequence can be determined by subcloning into the mal site and sequencing by the dideoxy method. The amino acid sequences of the mouse antibody H chain variable region and L chain variable region can be determined from the nucleotide sequences, and the amino acid sequences of the CDR regions can be specified.
【００１９】本発明は、上述のようにして明らかにした
下記〜に示す５種類のマウス抗ヒトＦｃεＲＩモノ
クローナル抗体のＨ鎖可変領域のＣＤＲ及びＬ鎖可変領
域のＣＤＲを含むポリペプチド、及び〜に示すポリ
ペプチドをコードするＤＮＡ塩基配列に関するものであ
る。ここで、に示したポリペプチドは、ＣＲＡ１と命
名されたハイブリドーマ細胞が産生するマウス抗ヒトＦ
ｃεＲＩモノクローナル抗体のＨ鎖可変領域のＣＤＲ及
びＬ鎖可変領域のＣＤＲを含むポリペプチドである。同
様に、〜に示したポリペプチドは、それぞれ、ＣＲ
Ａ２〜ＣＲＡ５と命名されたハイブリドーマ細胞が産生
するマウス抗ヒトＦｃεＲＩモノクローナル抗体のＨ鎖
可変領域のＣＤＲ及びＬ鎖可変領域のＣＤＲを含むポリ
ペプチドである。The present invention provides a polypeptide containing the CDRs of the H chain variable region and the CDRs of the L chain variable region of the following five types of mouse anti-human FcεRI monoclonal antibodies, which have been clarified as described above, and It relates to a DNA base sequence encoding the polypeptide shown. Here, the polypeptide shown in is a mouse anti-human F produced by a hybridoma cell named CRA1.
It is a polypeptide containing the CDR of the H chain variable region and the CDR of the L chain variable region of the cεRI monoclonal antibody. Similarly, the polypeptides shown in
It is a polypeptide containing CDRs of the H chain variable region and CDRs of the L chain variable region of a mouse anti-human FcεRI monoclonal antibody produced by hybridoma cells designated A2 to CRA5.
【００２０】 下記一般式（１）及び一般式（２）よ
り選択され、ヒトの抗親和性ＩｇＥ受容体を特異的に認
識することができるものであることを特徴とするポリペ
プチド。
ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ−ＦＲ３−Ｃ
ＤＲ３Ｈ−ＦＲ４・・・（１）
上式中において、ＦＲ１は２９〜３６個の、ＦＲ２は１
０〜１６個の、ＦＲ３は３２〜３５個の、ＦＲ４は１２
−１４個のそれぞれアミノ酸から構成されるポリペプチ
ド残基であり、ＣＤＲ１Ｈは配列表の配列番号１で、Ｃ
ＤＲ２Ｈは配列表の配列番号２で、ＣＤＲ３Ｈは配列表
の配列番号３でそれぞれ表される。また、この場合、ア
ミノ酸Ｃｙｓは酸化状態において架橋を形成しているこ
とがある。そして、ＦＲはフレームワークであり各ＦＲ
は天然に存在するアミノ酸及び修飾されたアミノ酸で構
成されていればよいが、一般式（１）により選択される
ポリペプチドとしては、配列表の配列番号３１で示され
るポリペプチドが最も好ましい。
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８・・・（２）
上式中において、ＦＲ５は２３〜２８個の、ＦＲ６は１
４〜１６個の、ＦＲ７は３０〜３４個の、ＦＲ８は９〜
１１個のそれぞれアミノ酸から構成されるポリペプチド
残基であり、ＣＤＲ１Ｌは配列表の配列番号４で、ＣＤ
Ｒ２Ｌは配列表の配列番号５で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の
配列番号６でそれぞれ表され、アミノ酸Ｃｙｓは酸化状
態において架橋を形成していることがある。ＦＲはフレ
ームワークであり各ＦＲは天然に存在するアミノ酸及び
修飾されたアミノ酸で構成されていればよいが、一般式
（２）により選択されるポリペプチドとしては、配列表
の配列番号３２で示されるポリペプチドが最も好まし
い。A polypeptide selected from the following general formula (1) and general formula (2), which is capable of specifically recognizing human anti-affinity IgE receptor. FR1-CDR1H-FR2-CDR2H-FR3-C
DR3H-FR4 (1) In the above formula, FR1 is 29 to 36 and FR2 is 1.
0 to 16, 32 to 35 for FR3, 12 for FR4
-1 is a polypeptide residue composed of 14 amino acids, and CDR1H is C in SEQ ID NO: 1 in the sequence listing.
DR2H is represented by SEQ ID NO: 2 in the sequence listing, and CDR3H is represented by SEQ ID NO: 3 in the sequence listing. In this case, the amino acid Cys may form a crosslink in the oxidation state. And FR is a framework and each FR
May be composed of naturally occurring amino acids and modified amino acids, but the polypeptide selected by the general formula (1) is most preferably the polypeptide represented by SEQ ID NO: 31 in the sequence listing. FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (2) In the above formula, FR5 has 23 to 28 pieces and FR6 has 1
4-16, FR7 30-34, FR8 9-
It is a polypeptide residue composed of 11 amino acids, and CDR1L is represented by
R2L is represented by SEQ ID NO: 5 in the sequence listing and CDR3L is represented by SEQ ID NO: 6 in the sequence listing, and the amino acid Cys may form a crosslink in the oxidation state. FR is a framework, and each FR may be composed of naturally occurring amino acids and modified amino acids. The polypeptide selected by the general formula (2) is shown by SEQ ID NO: 32 in the sequence listing. Most preferred are those polypeptides.
【００２１】 下記一般式（３）及び一般式（４）よ
り選択され、ヒトの高親和性ＩｇＥ受容体を特異的に認
識することができるものであることを特徴とするポリペ
プチド。
ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ−ＦＲ３−Ｃ
ＤＲ３Ｈ−ＦＲ４・・・（３）
上式中、ＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｈは配列表の配列番号７で、ＣＤＲ２Ｈは配列表の
配列番号８で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号９でそれ
ぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態において
架橋を形成していることがある。ＦＲは上記の場合と同
様であるが、一般式（３）により選択されるポリペプチ
ドのうち最も好ましいのは、配列表の配列番号３３で示
されるポリペプチドである。
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８・・・（４）
上式中、ＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｌは配列表の配列番号１０で、ＣＤＲ２Ｌは配列表
の配列番号１１で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号１２
でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態に
おいて架橋を形成していることがある。ＦＲは上記と同
様であり、最も好ましい一般式（４）により選択される
ポリペプチドは、配列表の配列番号３４で示されるポリ
ペプチドである。A polypeptide selected from the following general formulas (3) and (4), which is capable of specifically recognizing a human high-affinity IgE receptor. FR1-CDR1H-FR2-CDR2H-FR3-C
DR3H-FR4 (3) In the above formula, FR1 to FR4 are the same as above, and CD
R1H is represented by SEQ ID NO: 7 in the sequence listing, CDR2H is represented by SEQ ID NO: 8 in the sequence listing, and CDR3H is represented by SEQ ID NO: 9 in the sequence listing, in which amino acid Cys may form a bridge in an oxidized state. . The FR is the same as in the above case, but the most preferred polypeptide selected by the general formula (3) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 33 in the sequence listing. FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (4) In the above formula, FR5-FR8 are the same as above, and CD
R1L is SEQ ID NO: 10 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID NO: 11 in the sequence listing, CDR3L is SEQ ID NO: 12 in the sequence listing.
, Where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. FR is the same as above, and the most preferred polypeptide selected by the general formula (4) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 34 in the sequence listing.
【００２２】 下記一般式（５）及び一般式（６）よ
り選択され、ヒトの高親和性ＩｇＥ受容体を特異的に認
識することができるものであることを特徴とするポリペ
プチド。
ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ−ＦＲ３−Ｃ
ＤＲ３Ｈ−ＦＲ４・・・（５）
上式中、ＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｈは配列表の配列番号１３で、ＣＤＲ２Ｈは配列表
の配列番号１４で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号１５
でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態に
おいて架橋を形成していることがある。ＦＲは上記と同
様であり、最も好ましい一般式（５）により選択される
ポリペプチドは、配列表の配列番号３５で示されるポリ
ペプチドである。
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８・・・（６）
上式中、ＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｌは配列表の配列番号１６で、ＣＤＲ２Ｌは配列表
の配列番号１７で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号１８
でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態に
おいて架橋を形成していることがある。ＦＲは上記と同
様であり、最も好ましい一般式（６）により選択される
ポリペプチドは、配列表の配列番号３６で示されるポリ
ペプチドである。A polypeptide which is selected from the following general formulas (5) and (6) and is capable of specifically recognizing a human high-affinity IgE receptor. FR1-CDR1H-FR2-CDR2H-FR3-C
DR3H-FR4 (5) In the above formula, FR1 to FR4 are the same as above, and CD
R1H is SEQ ID NO: 13 in the sequence listing, CDR2H is SEQ ID NO: 14 in the sequence listing, CDR3H is SEQ ID NO: 15 in the sequence listing.
, Where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. FR is the same as above, and the most preferred polypeptide selected by the general formula (5) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 35 in the sequence listing. FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (6) In the above formula, FR5 to FR8 are the same as above, and CD
R1L is SEQ ID No. 16 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID No. 17 in the sequence listing, and CDR3L is SEQ ID No. 18 in the sequence listing.
, Where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. FR is the same as above, and the most preferred polypeptide selected by the general formula (6) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 36 in the sequence listing.
【００２３】 下記一般式（７）及び一般式（８）よ
り選択され、ヒトの高親和性ＩｇＥ受容体を特異的に認
識することができるものであることを特徴とするポリペ
プチド。
ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ−ＦＲ３−Ｃ
ＤＲ３Ｈ−ＦＲ４・・・（７）
上式中、ＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｈは配列表の配列番号１９で、ＣＤＲ２Ｈは配列表
の配列番号２０で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号２１
でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態に
おいて架橋を形成していることがある。ＦＲは上記と同
様で、最も好ましい一般式（７）により選択されるポリ
ペプチドは配列表の配列番号３７で示されるポリペプチ
ドである。
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８・・・（８）
上式中、ＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｌは配列表の配列番号２２で、ＣＤＲ２Ｌは配列表
の配列番号２３で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号２４
でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態に
おいて架橋を形成していることがある。ＦＲは上記度同
様で、最も好ましい一般式（８）により選択されるポリ
ペプチドは配列表の配列番号３８で示されるポリペプチ
ドである。A polypeptide selected from the following general formula (7) and general formula (8), which is capable of specifically recognizing a human high-affinity IgE receptor. FR1-CDR1H-FR2-CDR2H-FR3-C
DR3H-FR4 (7) In the above formula, FR1 to FR4 are the same as above, and CD
R1H is SEQ ID No. 19 in the sequence listing, CDR2H is SEQ ID No. 20 in the sequence listing, and CDR3H is SEQ ID No. 21 in the sequence listing.
, Where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. FR is the same as above, and the most preferred polypeptide selected by the general formula (7) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 37 in the sequence listing. FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (8) In the above formula, FR5 to FR8 are the same as above, and CD
R1L is SEQ ID NO: 22 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID NO: 23 in the sequence listing, CDR3L is SEQ ID NO: 24 in the sequence listing.
, Where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. FR is the same as above, and the most preferred polypeptide selected by the general formula (8) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 38 in the sequence listing.
【００２４】 下記一般式（９）及び一般式（１０）
より選択され、ヒトの高親和性ＩｇＥ受容体を特異的に
認識することができるものであることを特徴とするポリ
ペプチド。
ＦＲ１−ＣＤＲ１Ｈ−ＦＲ２−ＣＤＲ２Ｈ−ＦＲ３−Ｃ
ＤＲ３Ｈ−ＦＲ４・・・（９）
上式中、ＦＲ１〜ＦＲ４は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｈは配列表の配列番号２５で、ＣＤＲ２Ｈは配列表
の配列番号２６で、ＣＤＲ３Ｈは配列表の配列番号２７
でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態に
おいて架橋を形成していることがある。ＦＲは上記と同
様であり、最も好ましい一般式（９）により選択される
ポリペプチドは、配列表の配列番号３９で示されるポリ
ペプチドである。
ＦＲ５−ＣＤＲ１Ｌ−ＦＲ６−ＣＤＲ２Ｌ−ＦＲ７−Ｃ
ＤＲ３Ｌ−ＦＲ８・・・（１０）
上式中、ＦＲ５〜ＦＲ８は上記と同じものであり、ＣＤ
Ｒ１Ｌは配列表の配列番号２８で、ＣＤＲ２Ｌは配列表
の配列番号２９で、ＣＤＲ３Ｌは配列表の配列番号３０
でそれぞれ表され、ここでアミノ酸Ｃｙｓは酸化状態に
おいて架橋を形成していることがある。ＦＲは上記と同
様で、最も好ましい一般式（１０）により選択されるポ
リペプチドは、配列表の配列番号４０で示されるポリペ
プチドである。The following general formula (9) and general formula (10)
A polypeptide which is further selected and is capable of specifically recognizing a human high-affinity IgE receptor. FR1-CDR1H-FR2-CDR2H-FR3-C
DR3H-FR4 (9) In the above formula, FR1 to FR4 are the same as above, and CD
R1H is SEQ ID No. 25 in the sequence listing, CDR2H is SEQ ID No. 26 in the sequence listing, and CDR3H is SEQ ID No. 27 in the sequence listing.
, Where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. FR is the same as above, and the most preferred polypeptide selected by the general formula (9) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 39 in the sequence listing. FR5-CDR1L-FR6-CDR2L-FR7-C
DR3L-FR8 (10) In the above formula, FR5 to FR8 are the same as above, and CD
R1L is SEQ ID NO: 28 in the sequence listing, CDR2L is SEQ ID NO: 29 in the sequence listing, CDR3L is SEQ ID NO: 30 in the sequence listing.
, Where the amino acid Cys may form a bridge in the oxidized state. FR is the same as above, and the most preferred polypeptide selected by the general formula (10) is the polypeptide represented by SEQ ID NO: 40 in the sequence listing.
【００２５】 次に、本発明のポリペプチドをコードす
る塩基配列を有するＤＮＡ断片としては、本発明のポリ
ペプチドをコードするＤＮＡ塩基配列を有するものであ
ればどのような塩基配列でもよい。ここで、上記一般式
（１）で表されるポリペプチドをコードする一例の塩基
配列を、配列表の配列番号４１に示す。同様に、上記一
般式（２）〜（１０）で表されるポリペプチドをコード
する一例の塩基配列を、それぞれ配列表の配列番号４２
〜５０に示す。中でも、配列表の配列番号４３と４４、
および４７と４８で示されるものが、段落００３５の表
１に示すデータから明らかな通り、上記のポリペプチド
をコードするＤＮＡ断片として、本発明において好適に
使用される。 Next, the DNA fragment having the base sequence encoding the polypeptide of the present invention may be any base sequence as long as it has the DNA base sequence encoding the polypeptide of the present invention. Here, an example of the base sequence encoding the polypeptide represented by the above general formula (1) is shown in SEQ ID NO: 41 of the sequence listing. Similarly, an example of the nucleotide sequence encoding the polypeptide represented by the above general formulas (2) to (10) is represented by SEQ ID NO: 42 in the sequence listing, respectively.
~ 50. Among them, SEQ ID NOs: 43 and 44 in the sequence listing,
And 47 and 48 are the table in paragraph 0035.
As is clear from the data shown in 1, the above-mentioned polypeptide
Suitable as a DNA fragment encoding the present invention
used.
【００２６】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
あるいは例えば部位特異的変異導入法等で改変した変異
体ＤＮＡは、これに遺伝子工学的な手法を施すことによ
り、ベクター例えばｐＳＶ２型ベクターに組み込むこと
ができ、次いで、発現細胞、例えばＣＨＯ細胞を形質転
換し、該ポリペプチド誘導体を得ることができる。ま
た、同様な手法で全遺伝子を決定し、本発明のポリペプ
チドを含む抗体を生産することもできる。DNA encoding the polypeptide of the present invention
Alternatively, for example, a mutant DNA modified by a site-directed mutagenesis method or the like can be incorporated into a vector such as a pSV2-type vector by subjecting it to a genetic engineering technique, and then expressing cells such as CHO cells It can be converted to obtain the polypeptide derivative. In addition, all genes can be determined by a similar method to produce an antibody containing the polypeptide of the present invention.
【００２７】更に、本発明に係るポリペプチドの誘導体
としては、ヒトＦｃεＲＩへの認識特異性を保有してい
る断片、例えば、一価のＦａｂ断片、及び二価の（Ｆａ
ｂ’）２断片、マウス−ヒトキメラモノクローナル抗
体、ヒト化抗体（ＣＤＲ移植抗体）、一本鎖抗体、酵
素、蛍光マーカー、金属キレート、細胞増殖抑制物質ま
たは細胞毒性物質、アビジン、ビオチン、抗炎症剤、抗
アレルギー剤、免疫抑制剤等との接合体、並びに放射能
ラベル化抗体等を例示でき、これらは、それぞれ公知の
方法で調製し、目的に応じて使用することができる。Furthermore, as the derivative of the polypeptide of the present invention, a fragment having recognition specificity for human FcεRI, for example, a monovalent Fab fragment, and a divalent (Fa
b ′) 2 fragment, mouse-human chimeric monoclonal antibody, humanized antibody (CDR transplant antibody), single chain antibody, enzyme, fluorescent marker, metal chelate, cytostatic or cytotoxic substance, avidin, biotin, anti-inflammatory Examples thereof include agents, antiallergic agents, conjugates with immunosuppressive agents and the like, as well as radiolabeled antibodies, which can be prepared by known methods and used according to the purpose.
【００２８】[0028]
【実施例】以下、本発明を実施例により、更に詳細かつ
具体的に説明するが、本発明はこれら実施例になんら限
定されるものではない。
（実施例１）抗ヒトＦｃεＲＩモノクローナル抗体生産
株の取得
１）培地
ＲＰＭＩ１６４０倍地に、リラシリン１００μｇ／ｍ
ｌ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ、グルタミン
２ｍＭ、炭酸水素ナトリウム１．６ｇ／ｍｌを加えた
後、二酸化炭素を吹き込み、ｐＨ７．２前後とし牛胎児
血清（ＦＣＳ）を１０％になるように加えて使用した。The present invention will be described in more detail and specifically below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples. (Example 1) Acquisition of anti-human FcεRI monoclonal antibody-producing strain 1) Liracillin 100 μg / m 2 in medium RPMI1640 medium
1, streptomycin 100 μg / ml, glutamine 2 mM, sodium hydrogencarbonate 1.6 g / ml were added, and then carbon dioxide was blown to adjust the pH to around 7.2, and fetal calf serum (FCS) was added to 10% for use. .
【００２９】２）ミエローマ細胞株
Ｂａｌｂ／ｃマウス由来の骨髄細胞ＭＯＰ−ＰＣ−２１
の株化細胞δアザグアニン耐性のＰ３−Ｘ６３−Ａｇ−
δＵ／（Ｐ３Ｕ１）を用いた。2) Myeloma cell line Balb / c mouse-derived bone marrow cells MOP-PC-21
Cell line of P3-X63-Ag- resistant to delta-azaguanine
δU / (P3U1) was used.
【００３０】３）抗原感作
羅らの報告した方法（インターナショナル・イムノロジ
ー(International Immunology)、第５巻、第４７−５４
頁（１９９３）により調製した可溶化ヒトＦｃεＲＩα
鎖を、フロイント完全アジュバンドと混合した抗原をＢ
ａｌｂ／ｃマウスに一匹あたり０．２５ｍｇ／０．５ｍ
ｌずつ腹腔に接種し、一次感作した。５週間後、更に上
記抗原を０．５ｍｇ／０．５ｍｌずつ尾静脈に接種し、
二次感作した。その４日後の脾臓細胞を上記ミエローマ
細胞株と下記４）のようにして細胞融合させた。3) Method reported by Antigen Sensitora et al. (International Immunology, Volume 5, 47-54)
Solubilized human FcεRIα prepared according to page (1993).
Antigen mixed with Freund's complete adjuvant
0.25mg / 0.5m per alb / c mouse
The cells were inoculated into the abdominal cavity one by one and sensitized by the primary method. Five weeks later, 0.5 mg / 0.5 ml of the above antigen was further inoculated into the tail vein,
Secondary sensitized. Four days later, the spleen cells were fused with the myeloma cell line as described in 4) below.
【００３１】４）細胞融合法
ミエローマ細胞、脾細胞共に食塩リン酸緩衝液（ＰＢ
Ｓ：１０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．５、０．９％食塩）
で３回洗浄後、ＲＰＭＩ１６４０、１０％ＦＣＳに浮遊
し細胞数を算定した。１×１０6個のＰ３Ｕ１に対して
７．５〜１０×１０8個の脾細胞を２〜３週間培養し
た。次に、ＲＰＭＩ１６４０で遠心洗浄してＦＣＳを除
き、ガラススピッツ遠心管に細胞を集める。上清を完全
に取り去った後、ペレット状の細胞をほぐし、予め３７
℃に温めておいたポリエチレングリコール液（ＰＥＧ）
を０．５ｍｌ加え、室温で１分間反応させた後、３７℃
のＲＰＭＩ１６４０（１ｍｌ）を３０秒毎に１０回加え
た。その間、試験官をゆっくり回転し続ける。こうして
細胞融合した細胞を遠心洗浄し、Ｐ３Ｕ１細胞数が、５
〜１０×１０5個／ｍｌになるようにＲＰＭＩ１６４
０、１０％ＦＣＳを加える。その０．２ｍｌをマイクロ
タイタープレートに分注した。２４時間培養して上清を
半量捨て、ＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン及
びチミジンを含有）倍地を加える。 以後、この操作を
４８時間毎に２週間繰り返す。ミエローマ細胞及び脾細
胞共にＨＡＴ倍地中では増殖できないので、増殖してく
る細胞はハイブリドーマと考えられる。従って、１０〜
１４日後、増殖してきたハイブリドーマの認められる培
養液について抗体活性を調べた。4) Cell fusion method Both myeloma cells and splenocytes were treated with a saline phosphate buffer solution (PB).
S: 10 mM phosphate buffer pH 7.5, 0.9% sodium chloride)
After washing 3 times with, the cells were suspended in RPMI1640 and 10% FCS to count the number of cells. 7.5-10 × 10 8 splenocytes were cultured for 1 to 10 6 P3U1 for 2-3 weeks. Next, FCS is removed by centrifugal washing with RPMI1640, and the cells are collected in a glass Spitz centrifuge tube. After removing the supernatant completely, loosen the pelleted cells and
Polyethylene glycol solution (PEG) warmed to ℃
0.5 ml, and react at room temperature for 1 minute, then at 37 ℃
RPMI 1640 (1 ml) was added 10 times every 30 seconds. Meanwhile, keep the examiner spinning slowly. The cells thus fused were centrifuged and washed, and the number of P3U1 cells was increased to 5
RPMI164 to be 10 × 10 5 cells / ml
Add 0, 10% FCS. 0.2 ml thereof was dispensed into a microtiter plate. After culturing for 24 hours, half the supernatant is discarded, and HAT (containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine) medium is added. Thereafter, this operation is repeated every 48 hours for 2 weeks. Since both myeloma cells and splenocytes cannot grow in HAT medium, the growing cells are considered to be hybridomas. Therefore, 10
After 14 days, the antibody activity was examined in the culture medium in which the growing hybridoma was observed.
【００３２】５）抗体活性のスクリーニング
抗体活性のスクリーニングは次に示すようなエンザイム
イムノアッセイによった。
ＰＢＳに溶解した抗原（１ｍｇ／ｍｌ）を５０μ１
とり、マイクロタイタープレート（９６穴、Ｆａｌｃｏ
ｎ３１２９）に吸着させた（４℃、一晩）。
抗原溶液を除き、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含ん
だＰＢＳ（ＰＢＳＴ）により４回洗浄した後、５％牛ア
ルブミン（ＢＳＡ）を含んだＰＢＳを１００μｌ加え３
７℃１時間放置した。
ＢＳＡ溶液を除いた後、ＰＢＳＴにより４回洗浄す
る。次に、ハイブリドーマの培養上清を５０μ１加え、
２時間反応させた。
ＰＢＳＴで４回洗浄した後、１％ＢＳＡを含むＰＢ
Ｓで１０００倍に希釈したペルオキシダーゼ結合抗マウ
スＩｇＧ抗体を５０μｌ加え、３７℃で２時間反応させ
た。
ＰＢＳＴにより４回洗浄した後、０．５Ｍクエン酸
１．２２ｍｌ、０．５Ｍリン酸二ナトリウム２．５６ｍ
ｌ、オルトフェニレンジアミン１０ｍｇ、３０％過酸化
水素水１０μｌ／２５ｍｌを５０μｌ加え発色させた。
十分発色させた後、２Ｍ硫酸を５０μｌ加え発色を停止
させる。
発色はイムノリーダーにより光学的に測定した。
抗原に特異的な抗体を産生している細胞のうち５株
を分離し、クローニング操作を重ね、抗ヒトＦｃεＲＩ
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株５
株を樹立した。それぞれＣＲＡ１、ＣＲＡ２、ＣＲＡ
３、ＣＲＡ４、そしてＣＲＡ５と命名した。5) Screening of antibody activity Screening of antibody activity was carried out by an enzyme immunoassay as shown below. 50 μl of antigen (1 mg / ml) dissolved in PBS
Microtiter plate (96 holes, Falco
n3129) (4 ° C., overnight). After removing the antigen solution and washing 4 times with PBS containing 0.05% Tween 20 (PBST), 100 μl of PBS containing 5% bovine albumin (BSA) was added 3
It was left at 7 ° C for 1 hour. After removing the BSA solution, the plate is washed 4 times with PBST. Next, add 50 μl of the culture supernatant of the hybridoma,
The reaction was carried out for 2 hours. After washing 4 times with PBST, PB containing 1% BSA
50 μl of a peroxidase-conjugated anti-mouse IgG antibody diluted 1000-fold with S was added, and the mixture was reacted at 37 ° C. for 2 hours. After washing 4 times with PBST, 1.22 ml of 0.5 M citric acid, 2.56 m of 0.5 M disodium phosphate
l, orthophenylenediamine 10 mg, 30% hydrogen peroxide solution 10 μl / 25 ml, and 50 μl were added to develop color.
After sufficient color development, 50 μl of 2M sulfuric acid is added to stop color development. Color development was measured optically with an immunoreader. Anti-human FcεRI was isolated by isolating 5 strains of cells producing antigen-specific antibodies and repeating cloning operations.
Hybridoma cell line 5 producing monoclonal antibody
Established a stock. CRA1, CRA2, CRA respectively
3, CRA4, and CRA5.
【００３３】６）ヒトＩｇＥ結合阻害実験
樹立したハイブリドーマ細胞株５株が産生する抗ヒトＦ
ｃεＲＩモノクローナル抗体が、ヒトＩｇＥのヒトＦｃ
εＲＩへの結合を阻害するかどうかを競争阻害実験によ
り確認した。ヒトＦｃεＲＩα鎖をマイクロタイタープ
レートに吸着させておき、そこにヨウ素１２５で標識し
たヒトＩｇＥと、標識していないモノクローナル抗体あ
るいはヒトＩｇＥを同時に加えた。反応後、洗浄し、マ
イクロタイタープレートに固定化したヒトＦｃεＲＩα
鎖に結合したヨウ素１２５標識ヒトＩｇＥの放射能をシ
ンチレイションカウンターで測定した。ここで、標識し
ていないモノクローナル抗体あるいはヒトＩｇＥの量は
変化させてあり、放射能がヨウ素１２５で標識したヒト
ＩｇＥのみを反応させた際の５０％になるときの、標識
していないモノクローナル抗体あるいはヒトＩｇＥの量
を、ＩＣ50とした。得られた結果を表１に示した。6) Human IgE binding inhibition experiment Anti-human F produced by 5 established hybridoma cell lines
cεRI monoclonal antibody binds to human Fc of human IgE
Whether or not the binding to εRI was inhibited was confirmed by a competitive inhibition experiment. Human FcεRIα chain was adsorbed on a microtiter plate, and human IgE labeled with iodine-125 and unlabeled monoclonal antibody or human IgE were simultaneously added thereto. After the reaction, the human FcεRIα was washed and immobilized on a microtiter plate.
Radioactivity of iodine-125 labeled human IgE bound to the chains was measured with a scintillation counter. Here, the amount of unlabeled monoclonal antibody or human IgE was changed, and the unlabeled monoclonal antibody when the radioactivity was 50% of that obtained by reacting only human IgE labeled with iodine-125. Alternatively, the amount of human IgE was used as the IC 50 . The obtained results are shown in Table 1.
【００３４】ＣＲＡ２、ＣＲＡ３、及びＣＲＡ４由来の
モノクローナル抗体は、そのＩＣ50の値がヒトＩｇＥで
阻害したときよりも小さく、それぞれのＩｇＥ結合阻害
剤としての有効性が確認された。一方、ＩＣ50の値の大
きいＣＲＡ１及びＣＲＡ５はＩｇＥ結合阻害剤としては
有効ではないと推定することもできるが、ヒトＦｃεＲ
Ｉへの特異的な結合能を有する故、ＣＲＡ２、ＣＲＡ
３、及びＣＲＡ４と同様、診断及びミサイル療法などＩ
ｇＥ結合阻害が必ずしも要求されない場合に十分有効で
ある。The monoclonal antibodies derived from CRA2, CRA3, and CRA4 have smaller IC 50 values than those when they were inhibited by human IgE, confirming their effectiveness as IgE binding inhibitors. On the other hand, although it can be presumed that CRA1 and CRA5 having a large IC 50 value are not effective as IgE binding inhibitors, human FcεR
CRA2 and CRA because they have specific binding ability to I
3 and CRA4 as well as diagnostics and missile therapy I
It is fully effective when inhibition of gE binding is not always required.
【００３５】[0035]
【表１】 [Table 1]
【００３６】（実施例２） 抗ヒトＦｃεＲＩモノクロ
ナール抗体遺伝子の取得及び解折
１）ｍＲＮＡの調製
上記ハイブリドーマ細胞約５×１０7個の細胞より、
Ｊ．Ｅ．バッドレイ（J.E.Badley)らの方法（バイオテ
クニックス(Bio Techniques)、第６巻、第１１４−１１
６頁（１９８８）に従い、ポリＡを有するＲＮＡを下記
の如く精製した。該ハイブリドーマ細胞をＰＢＳ３０ｍ
ｌで遠心洗浄し、１０ｍｌのリシス・バッファ（２００
ｍＭ ＮａＣ１、２００ｍＭ ＴｒｉｓＣｌ ｐＨ７．
５、０．１５ｍＭ ＭｇＣ１２、２％ ＳＤＳ、０．２
ｍｇ／ｍｌ プロテイネースＫ）に懸濁させた。この懸
濁液を１８Ｇの注射針に５回、２１Ｇの注射針に１回通
して細胞を破砕した後、４５℃の水浴上で緩徐に揺動さ
せながら２時間放置した。この間にオリゴｄＴセルロー
ス担体（コラボレイティブ・リサーチ社）０．１ｇを１
０ｍｌのエルーション・バッファ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ
Ｃｌ ｐＨ７．５）で一回、１０ｍｌのバインディング
・バッファ（１０ｍＭ ＴｒｉｓＣｌ ｐＨ７．５、５
００ｍＭ ＮａＣｌ）で３回、遠心洗浄した。このオリ
ゴｄＴセルロース担体に先の細胞抽出液及び６００μｌ
の５Ｍ−ＮａＣｌを加え、室温で２０分間穏やかに撹拌
した。続いて１０ｍｌのバインディング・バッファで５
回、遠心洗浄した後、カラムに充填した。カラムに計３
ｍｌのエルーション・バッファを少量づつ加え、溶出液
を１０滴づつ分画した。各画分の一部をとり、エチジウ
ム・ブロマイドを添加後、ＵＶ照射し、よく光る画分を
回収した。回収画分をエタノール沈澱し、２５μｌの滅
菌水に再溶解させた。(Example 2) Acquisition and disintegration of anti-human FcεRI monoclonal antibody gene 1) Preparation of mRNA From about 5 × 10 7 cells of the above hybridoma cells,
J. E. The method of JE Badley et al. (Bio Techniques, Vol. 6, 114-11)
According to page 6 (1988), RNA having poly A was purified as follows. The hybridoma cells are PBS 30m
Centrifuge and wash with 10 ml of lysis buffer (200
mM NaCl, 200 mM TrisCl pH7.
5, 0.15 mM MgC12, 2% SDS, 0.2
It was suspended in mg / ml proteinase K). The suspension was passed through an 18 G needle 5 times and once through a 21 G needle to crush the cells, and then left for 2 hours on a 45 ° C. water bath with gentle rocking. During this period, 0.1 g of oligo dT cellulose carrier (Collaborative Research Co.) was added.
0 ml Elution buffer (10 mM Tris
Cl pH 7.5) once, 10 ml of binding buffer (10 mM TrisCl pH 7.5, 5
Centrifugation and washing were carried out 3 times with (00 mM NaCl). This oligo dT cellulose carrier was added to the above cell extract and 600 μl
5M-NaCl was added and the mixture was gently stirred at room temperature for 20 minutes. Then 5 with 10ml binding buffer
After centrifugal washing, the column was packed. 3 on the column
ml Elution buffer was added little by little, and the eluate was fractionated into 10 drops. A part of each fraction was taken, and after ethidium bromide was added, UV irradiation was carried out to collect a well-lit fraction. The collected fractions were ethanol precipitated and redissolved in 25 μl of sterile water.
【００３７】２）相補鎖ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の合成及び
ＰＣＲ法によるクローニング
１）で精製したｍＲＮＡを鋳型として、ファルマシア社
のｓｃＦｖｍｏｄｕｌｅキットを利用してｃＤＮＡの合
成及びＰＣＲ法によりマウス抗体Ｈ鎖可変領域あるいは
Ｌ鎖可変領域のｃＤＮＡを特異的に増幅した。アガロー
スゲル電気永動により、約３５０塩基対のＨ鎖可変領域
のｃＤＮＡ、あるいは約３２５塩基対のＬ鎖可変領域の
ｃＤＮＡが特異的に増幅していることを確認した。2) Synthesis of complementary strand DNA (cDNA) and cloning by PCR method Using the mRNA purified in 1) as a template, scFv module kit from Pharmacia was used to synthesize cDNA and mouse antibody H chain variable region by PCR method. Alternatively, the L chain variable region cDNA was specifically amplified. It was confirmed by agarose gel electrophoretic amplification that the cDNA of the H chain variable region of about 350 base pairs or the cDNA of the L chain variable region of about 325 base pairs was specifically amplified.
【００３８】３）塩基配列の決定
増幅されたＤＮＡを１％アガロースゲル電気永動後、ゲ
ルから切り出し、マーメイド（ＢＩＯ１０１社）を用い
て精製した後、ブランティングキット（宝酒造社）を用
いて末端を平滑化した。このＤＮＡ断片をプラスミドベ
クターｐＵＣ１１９のＳｍａＩサイトにサブクローニン
グし、ジデオキシ法によりシーケンシングすることによ
りその塩基配列を決定した。このようにして配列表の配
列番号４１〜５０で示した塩基配列を決定した。配列表
の配列番号４１、４３、４５、４７及び４９に、それぞ
れハイブリドーマ細胞株ＣＲＡ１，ＣＲＡ２，ＣＲＡ
３，ＣＲＡ４及びＣＲＡ５からクローニングしたＨ鎖可
変領域のｃＤＮＡの塩基配列を示した。配列表の配列番
号４２、４４、４６、４８及び５０に、それぞれハイブ
リドーマ細胞株ＣＲＡ１，ＣＲＡ２，ＣＲＡ３，ＣＲＡ
４及びＣＲＡ５からクローニングしたＬ鎖可変領域のｃ
ＤＮＡの塩基配列を示した。3) Determination of nucleotide sequence The amplified DNA was electrophoresed on a 1% agarose gel, cut out from the gel, purified using Mermaid (BIO101), and then terminated using a blunting kit (Takara Shuzo). Was smoothed. This DNA fragment was subcloned into the SmaI site of plasmid vector pUC119, and its nucleotide sequence was determined by sequencing by the dideoxy method. In this way, the base sequences shown in SEQ ID NOS: 41 to 50 in the sequence listing were determined. The hybridoma cell lines CRA1, CRA2 and CRA are shown in SEQ ID NOS: 41, 43, 45, 47 and 49 of the sequence listing, respectively.
The nucleotide sequences of the H chain variable region cDNAs cloned from 3, CRA4 and CRA5 are shown. The hybridoma cell lines CRA1, CRA2, CRA3 and CRA are shown in SEQ ID NOs: 42, 44, 46, 48 and 50 of the sequence listing, respectively.
4 and C of the light chain variable region cloned from CRA5
The nucleotide sequence of DNA is shown.
【００３９】４）超可変領域の決定
３）で決定した塩基配列よりマウス抗体Ｈ鎖可変領域及
びＬ鎖可変領域のアミノ酸配列を決定し、更にＣＤＲ領
域のアミノ酸配列を特定した。配列表の配列番号３１、
３３、３５、３７、及び３９に、それぞれハイブリドー
マ細胞株ＣＲＡ１，ＣＲＡ２，ＣＲＡ３，ＣＲＡ４及び
ＣＲＡ５からクローニングしたＨ鎖可変領域のｃＤＮＡ
の塩基配列より決定したアミノ酸配列を示した。配列表
の配列番号３２、３４、３６、３８、及び４０に、それ
ぞれハイブリドーマ細胞株ＣＲＡ１，ＣＲＡ２，ＣＲＡ
３，ＣＲＡ４及びＣＲＡ５からクローニングしたＬ鎖可
変領域のｃＤＮＡの塩基配列より決定したアミノ酸配列
を示した。なお、ＣＤＲ領域のアミノ酸配列を、それぞ
れ配列表に説明した。4) Determination of hypervariable region The amino acid sequences of the mouse antibody H chain variable region and L chain variable region were determined from the nucleotide sequences determined in 3), and further the CDR region amino acid sequences were specified. SEQ ID No. 31 in the sequence listing,
33, 35, 37, and 39, cDNAs of H chain variable regions cloned from hybridoma cell lines CRA1, CRA2, CRA3, CRA4, and CRA5, respectively.
The amino acid sequence determined from the nucleotide sequence of The hybridoma cell lines CRA1, CRA2 and CRA are shown in SEQ ID NOs: 32, 34, 36, 38 and 40 of the sequence listing, respectively.
The amino acid sequence determined from the nucleotide sequence of the L chain variable region cDNA cloned from 3, CRA4 and CRA5 is shown. The amino acid sequences of the CDR regions are described in the sequence listing.
【００４０】[0040]
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
抗ヒトＦｃεＲＩモノクローナル抗体の抗原認識領域、
特にそのＣＤＲを解明し、治療や診断において有用な、
ヒトＦｃεＲＩを特異的に認識することのできるアミノ
酸配列を有するポリぺプチド、及びこれをコードする塩
基配列を有するＤＮＡ断片を提供することができる。即
ち、本発明により、ヒトＦｅεＲＩを認識するモノクロ
ーナル抗体の抗原認識部位が特定され、該認識部位を含
有するポリペプチドの遺伝子工学的製造手段が提供され
た。As described above, according to the present invention,
An antigen recognition region of an anti-human FcεRI monoclonal antibody,
In particular, its CDR is elucidated, and it is useful in treatment and diagnosis.
It is possible to provide a polypeptide having an amino acid sequence capable of specifically recognizing human FcεRI, and a DNA fragment having a base sequence encoding the same. That is, the present invention has identified the antigen recognition site of a monoclonal antibody that recognizes human FeεRI, and provided a means for genetically engineering a polypeptide containing the recognition site.
【００４１】[0041]
【配列表】配列番号：１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ [Sequence listing] SEQ ID NO: 1 Sequence length: 5 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA1
【００４２】配列番号：２ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ 配列 Thr Ile Ser Gly Asp Gly Ser Tyr Thr Phe Tyr Pro Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys GlySEQ ID NO: 2 Sequence length: 17 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA1 Array Thr Ile Ser Gly Asp Gly Ser Tyr Thr Phe Tyr Pro Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly
【００４３】配列番号：３ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ SEQ ID NO: 3 Sequence length: 9 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA1
【００４４】配列番号：４ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ SEQ ID NO: 4 Sequence length: 11 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA1
【００４５】配列番号：５ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ SEQ ID NO: 5 Sequence length: 7 Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA1
【００４６】配列番号：６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ SEQ ID NO: 6 Sequence length: 9 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA1
【００４７】配列番号：７ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ SEQ ID NO: 7 Sequence length: 5 Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA2
【００４８】配列番号：８ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ 配列 Phe Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 1 5 10 15 Lys GlySEQ ID NO: 8 Sequence length: 17 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA2 Array Phe Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 1 5 10 15 Lys Gly
【００４９】配列番号：９ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ SEQ ID NO: 9 Sequence length: 8 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA2
【００５０】配列番号：１０ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ 配列 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15SEQ ID NO: 10 Sequence length: 15 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA2 Array Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15
【００５１】配列番号：１１ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ SEQ ID NO: 11 Sequence length: 7 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA2
【００５２】配列番号：１２ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ SEQ ID NO: 12 Sequence length: 9 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA2
【００５３】配列番号：１３ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ SEQ ID NO: 13 Sequence length: 5 Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA2
【００５４】配列番号：１４ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ 配列 Tyr Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Ile 1 5 10 15 Met GlySEQ ID NO: 14 Sequence length: 17 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA3 Array Tyr Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Ile 1 5 10 15 Met Gly
【００５５】配列番号：１５ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ SEQ ID NO: 15 Sequence length: 8 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA3
【００５６】配列番号：１６ 配列の長さ：１５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ 配列 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15SEQ ID NO: 16 Sequence length: 15 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA3 Array Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15
【００５７】配列番号：１７ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ SEQ ID NO: 17 Sequence length: 7 Sequence type: Amino acid Chain number: Single-chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA3
【００５８】配列番号：１８ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ SEQ ID NO: 18 Sequence length: 9 Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA3
【００５９】配列番号：１９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ SEQ ID NO: 19 Sequence length: 5 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA4
【００６０】配列番号：２０ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ 配列 Trp Ile Tyr Pro Lys Asn Val Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 1 5 10 15 Lys GlySEQ ID NO: 20 Sequence length: 17 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA4 Array Trp Ile Tyr Pro Lys Asn Val Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 1 5 10 15 Lys Gly
【００６１】配列番号：２１ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ SEQ ID NO: 21 Sequence length: 9 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA4
【００６２】配列番号：２２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ SEQ ID NO: 22 Sequence length: 11 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA4
【００６３】配列番号：２３ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ SEQ ID NO: 23 Sequence length: 7 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA4
【００６４】配列番号：２４ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ SEQ ID NO: 24 Sequence length: 9 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA4
【００６５】配列番号：２５ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ SEQ ID NO: 25 Sequence length: 5 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA5
【００６６】配列番号：２６ 配列の長さ：１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ 配列 Tyr Ile Ser Asp Gly Asp Ile Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 1 5 10 15 Lys GlySEQ ID NO: 26 Sequence length: 17 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA5 Array Tyr Ile Ser Asp Gly Asp Ile Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 1 5 10 15 Lys Gly
【００６７】配列番号：２７ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ SEQ ID NO: 27 Sequence length: 11 Sequence type: Number of amino acid chains: Single chain topology: Linear Sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA5
【００６８】配列番号：２８ 配列の長さ：１２ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ SEQ ID NO: 28 Sequence length: 12 Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA5
【００６９】配列番号：２９ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ SEQ ID NO: 29 Sequence length: 7 Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA5
【００７０】配列番号：３０ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ SEQ ID NO: 30 Sequence length: 9 Sequence type: Number of amino acid chains: Single-chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA5
【００７１】配列番号：３１ 配列の長さ：１１８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ 配列の特徴 ３１−３５ Ｓ ＣＤＲ領域 ５０−６６ Ｓ ＣＤＲ領域 ９９−１０７ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Asn Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Asp Gly Ser Tyr Thr Phe Tyr 50 55 60 Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 65 70 75 Lys Asn Asn Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ile Ser Leu Phe Tyr Arg Ser Ser Phe 95 100 105 Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115SEQ ID NO: 31 Sequence length: 118 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA1 Sequence features 31-35 S CDR regions 50-66 S CDR region 99-107 S CDR region Array Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Glu Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Asn Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Gly Asp Gly Ser Tyr Thr Phe Tyr 50 55 60 Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 65 70 75 Lys Asn Asn Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Leu Tyr Phe Cys Ile Ser Leu Phe Tyr Arg Ser Ser Phe 95 100 105 Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115
【００７２】配列番号：３２ 配列の長さ：１０４ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ 配列の特徴 ２１−３１ Ｓ ＣＤＲ領域 ４７−５３ Ｓ ＣＤＲ領域 ８６−９４ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg 1 5 10 15 Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu 20 25 30 Ser Trp Phe His Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Lys Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu 80 85 90 Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 95 100SEQ ID NO: 32 Array length: 104 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA1 Sequence features 21-31 S CDR regions 47-53 S CDR region 86-94 S CDR region Array Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg 1 5 10 15 Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu 20 25 30 Ser Trp Phe His Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Lys Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 Glu Tyr Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu 80 85 90 Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 95 100
【００７３】配列番号：３３ 配列の長さ：１１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ 配列の特徴 ３１−３５ Ｓ ＣＤＲ領域 ５０−６６ Ｓ ＣＤＲ領域 ９８−１０６ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Thr Tyr Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Phe Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 Pro Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala 65 70 75 Lys Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg His Asn Tyr Gly Gly Met Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115SEQ ID NO: 33 Sequence length: 117 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA2 Sequence features 31-35 S CDR regions 50-66 S CDR region 98-106 S CDR region Array Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Thr Tyr Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Phe Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 Pro Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala 65 70 75 Lys Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg His Asn Tyr Gly Gly Met Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115
【００７４】配列番号：３４ 配列の長さ：１１２ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ 配列の特徴 ２４−３８ Ｓ ＣＤＲ領域 ５４−６０ Ｓ ＣＤＲ領域 ９２−１０１ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Asp Ile Gln Met Pro Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp 20 25 30 Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Gln Ser Pro Lys Leu Leu Met Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ala Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 95 100 105 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 110SEQ ID NO: 34 Sequence length: 112 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA2 Sequence features 24-38 S CDR regions 54-60 S CDR region 92-101 S CDR region Array Asp Ile Gln Met Pro Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp 20 25 30 Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Gln Ser Pro Lys Leu Leu Met Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ala Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 95 100 105 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 110
【００７５】配列番号：３５ 配列の長さ：１１７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ 配列の特徴 ３１−３５ Ｓ ＣＤＲ領域 ５０−６６ Ｓ ＣＤＲ領域 ９９−１０６ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Thr Tyr Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 Pro Asp Thr Ile Met Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg His Asn Tyr Gly Gly Met Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115SEQ ID NO: 35 Sequence length: 117 Sequence type: Amino acid Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA3 Sequence features 31-35 S CDR regions 50-66 S CDR region 99-106 S CDR region Array Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 20 25 30 Thr Tyr Pro Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu 35 40 45 Glu Trp Val Ala Tyr Ile Ser Asn Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr 50 55 60 Pro Asp Thr Ile Met Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala 65 70 75 Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp 80 85 90 Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg His Asn Tyr Gly Gly Met Asp 95 100 105 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115
【００７６】配列番号：３６ 配列の長さ：１１２ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ 配列の特徴 ２４−３８ Ｓ ＣＤＲ領域 ５４−６０ Ｓ ＣＤＲ領域 ９３−１０１ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp 20 25 30 Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Met Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr His Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 95 100 105 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 110SEQ ID NO: 36 Sequence length: 112 Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA3 Sequence features 24-38 S CDR regions 54-60 S CDR region 93-101 S CDR region Array Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu 1 5 10 15 Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp 20 25 30 Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly 35 40 45 Gln Pro Pro Lys Leu Leu Met Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 50 55 60 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr His Phe 65 70 75 Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr 80 85 90 Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 95 100 105 Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 110
【００７７】配列番号：３７ 配列の長さ：１１８ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ 配列の特徴 ３１−３５ Ｓ ＣＤＲ領域 ５０−６６ Ｓ ＣＤＲ領域 ９９−１０７ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 Ser Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Lys Asn Val Asn Thr Lys Tyr 50 55 60 Asn Glu Arg Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 65 70 75 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp 80 85 90 Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Leu Thr Ala Arg Ala Thr Ala Met 95 100 105 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115SEQ ID NO: 37 Sequence length: 118 Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA4 Sequence features 31-35 S CDR regions 50-66 S CDR region 99-107 S CDR region Array Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 Ser Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Lys Asn Val Asn Thr Lys Tyr 50 55 60 Asn Glu Arg Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser 65 70 75 Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp 80 85 90 Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Leu Thr Ala Arg Ala Thr Ala Met 95 100 105 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115
【００７８】配列番号：３８ 配列の長さ：１０８ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ 配列の特徴 ２４−３４ Ｓ ＣＤＲ領域 ５０−５６ Ｓ ＣＤＲ領域 ８９−９７ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val 1 5 10 15 Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr 20 25 30 Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln 35 40 45 Leu Leu Val Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile 65 70 75 Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His 80 85 90 Phe Trp Gly Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 95 100 105 Ile Lys ArgSEQ ID NO: 38 Sequence length: 108 Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA4 Sequence features 24-34 S CDR regions 50-56 S CDR region 89-97 S CDR region Array Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val 1 5 10 15 Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr 20 25 30 Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln 35 40 45 Leu Leu Val Tyr Ala Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile 65 70 75 Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His 80 85 90 Phe Trp Gly Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 95 100 105 Ile Lys Arg
【００７９】配列番号：３９ 配列の長さ：１１８ 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ 配列の特徴 ２９−３３ Ｓ ＣＤＲ領域 ４８−６４ Ｓ ＣＤＲ領域 ９７−１０７ Ｓ ＣＤＲ領域 配列 Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Tyr Ile Ser Asp Gly Asp Ile Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp 50 55 60 Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 65 70 75 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala 80 85 90 Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Asn Tyr Arg Tyr Gly Tyr Ala Val 95 100 105 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115SEQ ID NO: 39 Sequence length: 118 Number of chains: Single chain Topology: linear Sequence type: Peptide Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA5 Sequence features 29-33 S CDR regions 48-64 S CDR region 97-107 S CDR region Array Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Val Ala Tyr Ile Ser Asp Gly Asp Ile Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp 50 55 60 Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 65 70 75 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala 80 85 90 Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Asn Tyr Arg Tyr Gly Tyr Ala Val 95 100 105 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 110 115
【００８０】配列番号：４０
配列の長さ：１０９
鎖の数：一本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５
配列の特徴 ２４−３５ Ｓ ＣＤＲ領域
５１−５７ Ｓ ＣＤＲ領域
９０−９８ Ｓ ＣＤＲ領域
配列
Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
１ ５
１０ １５
Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｓｅｒ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
２０
２５ ３０
Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｔｒｐ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｇｌｎ
Ｌｙｓ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
３５
４０ ４５
Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｎ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｐｒｏ
５０
５５ ６０
Ａｌａ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ
６５
７０ ７５
Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｖａｌ
Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｇｌｎ
８０
８５ ９０
Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
９５
１００ １０５
Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ ＡｒｇSEQ ID NO: 40 Sequence length: 109 Number of chains: Single-chain topology: Linear sequence type: Peptide origin Cell type: Mouse hybridoma cell CRA5 Sequence characteristics 24-35 S CDR region 51- 57 S CDR region 90-98 S CDR region sequence Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Thr
Thr Met Ala Ala Ser Pro 15
10 15 Gly Glu Lys Ile Thr Ile Thr Cys Ser
Ala Ser Ser Ser Ile Ser 20
25 30 Ser Asn Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln
Lys Pro Gly Phe Ser Pro 35
40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Thr Ser Asn
Leu Ala Ser Gly Val Pro 50
55 60 Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
Thr Ser Tyr Ser Leu Thr 65
70 75 Ile Gly Thr Met Glu Ala Glu Asp Val
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln 80
85 90 Gln Gly Ser Ser Ile Pro Leu Thr Phe
Gly Ala Gly Thr Lys Leu 95
100 105 Glu Leu Lys Arg
【００８１】配列番号：４１ 配列の長さ：３５４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ 配列 CAG GTG AAG CTG CAG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTG AAG CCT GGA 45 GGG TCC CTA AAA CTC TCC TGT GTA GCC TCT GAA TTC ACT TTC AGT 90 AAT TAT GGC ATG TCT TGG GTT CGC CAG ACT CCG GAG AAG AGG CTG 135 GAG TGG GTC GCC ACC ATT AGT GGT GAT GGT AGT TAC ACC TTT TAT 180 CCA GAC AGT GTG AAG GGG CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC 225 AAG AAC AAC CTG TAC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GAC 270 ACG GCC TTG TAT TTT TGT ATA AGC CTC TTC TAT AGG TCC TCG TTT 315 CCT TTC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 354SEQ ID NO: 41 Sequence length: 354 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA1 Array CAG GTG AAG CTG CAG GAG TCT GGG GGA GGC TTG GTG AAG CCT GGA 45 GGG TCC CTA AAA CTC TCC TGT GTA GCC TCT GAA TTC ACT TTC AGT 90 AAT TAT GGC ATG TCT TGG GTT CGC CAG ACT CCG GAG AAG AGG CTG 135 GAG TGG GTC GCC ACC ATT AGT GGT GAT GGT AGT TAC ACC TTT TAT 180 CCA GAC AGT GTG AAG GGG CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC 225 AAG AAC AAC CTG TAC CTG CAA ATG AGC AGT CTG AGG TCT GAG GAC 270 ACG GCC TTG TAT TTT TGT ATA AGC CTC TTC TAT AGG TCC TCG TTT 315 CCT TTC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 354
【００８２】配列番号：４２ 配列の長さ：３１２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ１ 配列 ATG ACG CAG TCT CCA TCT TCC ATG TAT GCA TCT CTA GGA GAG AGA 45 GTC ACT ATC ACT TGC AAG GCG AGT CAG GAC ATT AAT AGC TAT TTA 90 AGT TGG TTC CAC CAG AAA CCA GGG AAA TCT CCT AAG ACC CTG ATC 135 TAT CGT GCA AAG AGA TTG GTA GAT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT 180 GGC AGT GGA TCT GGG CAA GAT TAT TCT CTC ACC ATC AGC AGC CTG 225 GAA TAT GAA GAT ATG GGA ATT TAT TAT TGT CTA CAG TAT GAT GAA 270 TTT CCG CTC ACG TTC GGT GCT GGG ACC AAG CTG GAA ATA AAA 312SEQ ID NO: 42 Sequence length: 312 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA1 Array ATG ACG CAG TCT CCA TCT TCC ATG TAT GCA TCT CTA GGA GAG AGA 45 GTC ACT ATC ACT TGC AAG GCG AGT CAG GAC ATT AAT AGC TAT TTA 90 AGT TGG TTC CAC CAG AAA CCA GGG AAA TCT CCT AAG ACC CTG ATC 135 TAT CGT GCA AAG AGA TTG GTA GAT GGG GTC CCA TCA AGG TTC AGT 180 GGC AGT GGA TCT GGG CAA GAT TAT TCT CTC ACC ATC AGC AGC CTG 225 GAA TAT GAA GAT ATG GGA ATT TAT TAT TGT CTA CAG TAT GAT GAA 270 TTT CCG CTC ACG TTC GGT GCT GGG ACC AAG CTG GAA ATA AAA 312
【００８３】配列番号：４３ 配列の長さ：３５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ 配列 CAG GTG CAG CTG CAG GAG TCA GGG GGA GGT TTA GTG CAG CCT GGA 45 GGG TCC CTG AAA CTC TCC TGT ACA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGC 90 ACC TAT CCC ATG TCT TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AGG CTG 135 GAG TGG GTC GCA TTC ATT AGT AAT CGT GGT GGT AGC ACC TAC TAT 180 CCA GAC ACT GTA AAG GGC CGA TTC ACC GTC TCC AGA GAC AAT GCC 225 AAG AAT ATC CTG TAT CTG CAA ATG ACC AGT CTG AAG TCT GAG GAC 270 ACG GCC ATG TAT TAC TGT GCA AGA CAT AAT TAT GGA GGA ATG GAC 315 TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 351SEQ ID NO: 43 Sequence length: 351 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA2 Array CAG GTG CAG CTG CAG GAG TCA GGG GGA GGT TTA GTG CAG CCT GGA 45 GGG TCC CTG AAA CTC TCC TGT ACA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGC 90 ACC TAT CCC ATG TCT TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AGG CTG 135 GAG TGG GTC GCA TTC ATT AGT AAT CGT GGT GGT AGC ACC TAC TAT 180 CCA GAC ACT GTA AAG GGC CGA TTC ACC GTC TCC AGA GAC AAT GCC 225 AAG AAT ATC CTG TAT CTG CAA ATG ACC AGT CTG AAG TCT GAG GAC 270 ACG GCC ATG TAT TAC TGT GCA AGA CAT AAT TAT GGA GGA ATG GAC 315 TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 351
【００８４】配列番号：４４ 配列の長さ：３３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ２ 配列 GAC ATC CAG ATG CCC CAG TCT CCA GCT TCT TTG GCT GTG TCT CTA 45 GGG CAG AGG GCC ACC ATA TCC TGC AGA GCC AGT GAA AGT GTT GAT 90 AGT TAT GGC AAC AGT TTT ATG CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGA 135 CAG TCA CCC AAA CTC CTC ATG TAT CTT GCA TCC AAC CTA GAA TCT 180 GGG GTC CCT GCC AGG TTC ACT GGC AGT GGG TCT AGG ACA GAC TTC 225 ACC CTC ACC ATT GAT CCT GTG GAG GCT GAT GAT GCT GCA ACC TAT 270 TAC TGT CAG CAA AAT AAT GAG GAT CCG TAC ACG TTC GGA GGG GGG 315 ACC AAG CTG GAA ATC AAA CGG 336SEQ ID NO: 44 Sequence length: 336 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA2 Array GAC ATC CAG ATG CCC CAG TCT CCA GCT TCT TTG GCT GTG TCT CTA 45 GGG CAG AGG GCC ACC ATA TCC TGC AGA GCC AGT GAA AGT GTT GAT 90 AGT TAT GGC AAC AGT TTT ATG CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGA 135 CAG TCA CCC AAA CTC CTC ATG TAT CTT GCA TCC AAC CTA GAA TCT 180 GGG GTC CCT GCC AGG TTC ACT GGC AGT GGG TCT AGG ACA GAC TTC 225 ACC CTC ACC ATT GAT CCT GTG GAG GCT GAT GAT GCT GCA ACC TAT 270 TAC TGT CAG CAA AAT AAT GAG GAT CCG TAC ACG TTC GGA GGG GGG 315 ACC AAG CTG GAA ATC AAA CGG 336
【００８５】配列番号：４５ 配列の長さ：３５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ 配列 CAG GTG AAG CTG CAG GAG TCA GGG GGA GGT TTA GTG CAG CCT GGA 45 GGG TCC CTG AAA GTC TCC TGT ACA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT 90 ACC TAT CCC ATG TCC TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AGG CTG 135 GAG TGG GTC GCA TAC ATA AGT AAT CGT GGT GGT AGC ACC TAC TAT 180 CCA GAC ACT ATA ATG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC 225 AAG AAC ACC CTG TAC CTA CAA ATG AAC AGT CTG AAG TCT GAG GAC 270 ACG GCC ATG TAT TAC TGT GCA AGA CAT AAC TAT GGA GGG ATG GAC 315 TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 351SEQ ID NO: 45 Sequence length: 351 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA3 Array CAG GTG AAG CTG CAG GAG TCA GGG GGA GGT TTA GTG CAG CCT GGA 45 GGG TCC CTG AAA GTC TCC TGT ACA GCC TCT GGA TTC ACT TTC AGT 90 ACC TAT CCC ATG TCC TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AGG CTG 135 GAG TGG GTC GCA TAC ATA AGT AAT CGT GGT GGT AGC ACC TAC TAT 180 CCA GAC ACT ATA ATG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC 225 AAG AAC ACC CTG TAC CTA CAA ATG AAC AGT CTG AAG TCT GAG GAC 270 ACG GCC ATG TAT TAC TGT GCA AGA CAT AAC TAT GGA GGG ATG GAC 315 TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 351
【００８６】配列番号：４６ 配列の長さ：３３６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ３ 配列 GAC ATC CAG ATG ACG CAG TCT CCA GCT TCT TTG GCT GTG TCT CTA 45 GGG CAG AGG GCC ACC ATA TCC TGC AGA GCC AGT GAA AGT GTT GAT 90 AGT TAT GGC AAT AGT TTT ATG CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGA 135 CAG CCA CCC AAA CTC CTC ATG TAT CTT GCA TCC AAC CTA GAA TCT 180 GGG GTC CCT GCC AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT AGG ACA CAC TTC 225 ACC CTC ACC ATT GAT CCT GTG GAG GCT GAT GAT GCT GCA ACC TAT 270 TAC TGT CAG CAA AAT AAT GAG GAT CCG TAC ACG TTC GGA GGG GGG 315 ACC AAG CTG GAA ATC AAA CGG 336SEQ ID NO: 46 Sequence length: 336 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA3 Array GAC ATC CAG ATG ACG CAG TCT CCA GCT TCT TTG GCT GTG TCT CTA 45 GGG CAG AGG GCC ACC ATA TCC TGC AGA GCC AGT GAA AGT GTT GAT 90 AGT TAT GGC AAT AGT TTT ATG CAC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGA 135 CAG CCA CCC AAA CTC CTC ATG TAT CTT GCA TCC AAC CTA GAA TCT 180 GGG GTC CCT GCC AGG TTC AGT GGC AGT GGG TCT AGG ACA CAC TTC 225 ACC CTC ACC ATT GAT CCT GTG GAG GCT GAT GAT GCT GCA ACC TAT 270 TAC TGT CAG CAA AAT AAT GAG GAT CCG TAC ACG TTC GGA GGG GGG 315 ACC AAG CTG GAA ATC AAA CGG 336
【００８７】配列番号：４７ 配列の長さ：３５４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ 配列 CAG GTG AAA CTG CAG CAG TCA GGA CCT GAG CTG GTG AAG CCT GGG 45 GCT TCA GTG AGG ATA TCC TGC AAG GCT TCT GGC TAC ACC TTC ACA 90 AGC TAC TAT ATA CAC TGG GTG AAG CAG AGG CCT GGA CAG GGA CTT 135 GAG TGG ATT GGA TGG ATT TAT CCT AAA AAT GTT AAT ACT AAG TAC 180 AAT GAG AGG TTC AAG GGC AAG GCC ACA CTG ACT ACA GAC AAA TCC 225 TCC AGC ACA GCC TAC ATG CAG CTC AGC AGC CTG ACC TCT GAG GAC 270 TCT GCG GTC TAT TTC TGT GCG CTT ACA GCT CGG GCT ACG GCT ATG 315 GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 354SEQ ID NO: 47 Sequence length: 354 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA4 Array CAG GTG AAA CTG CAG CAG TCA GGA CCT GAG CTG GTG AAG CCT GGG 45 GCT TCA GTG AGG ATA TCC TGC AAG GCT TCT GGC TAC ACC TTC ACA 90 AGC TAC TAT ATA CAC TGG GTG AAG CAG AGG CCT GGA CAG GGA CTT 135 GAG TGG ATT GGA TGG ATT TAT CCT AAA AAT GTT AAT ACT AAG TAC 180 AAT GAG AGG TTC AAG GGC AAG GCC ACA CTG ACT ACA GAC AAA TCC 225 TCC AGC ACA GCC TAC ATG CAG CTC AGC AGC CTG ACC TCT GAG GAC 270 TCT GCG GTC TAT TTC TGT GCG CTT ACA GCT CGG GCT ACG GCT ATG 315 GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 354
【００８８】配列番号：４８ 配列の長さ：３２４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ４ 配列 GAC ATC CAG ATG ACT CAG TCT CCA GCC TCC CTA TCT GTA TCT GTG 45 GGA GAA ACT GTC ACC ATC ACA TGT CGA GCA AGT GAG AAT ATT TAC 90 AGT AAT TTA GCA TGG TAT CAG CAG AAA CAG GGA AAA TCT CCT CAG 135 CTC CTG GTC TAT GCT GCA ACA AAC TTA GCA GAT GGT GTG CCA TCA 180 AGG TTC AGT GGC AGT GGA TCA GGC ACA CAG TAT TCC CTC AAG ATC 225 AAC AGC CTG CAG TCT GAA GAT TTT GGG AGT TAT TAC TGT CAA CAT 270 TTT TGG GGT ACT CCG TGG ACG TTC GGT GGA GGC ACC AAG CTG GAA 315 ATC AAA CGG 324SEQ ID NO: 48 Sequence length: 324 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA4 Array GAC ATC CAG ATG ACT CAG TCT CCA GCC TCC CTA TCT GTA TCT GTG 45 GGA GAA ACT GTC ACC ATC ACA TGT CGA GCA AGT GAG AAT ATT TAC 90 AGT AAT TTA GCA TGG TAT CAG CAG AAA CAG GGA AAA TCT CCT CAG 135 CTC CTG GTC TAT GCT GCA ACA AAC TTA GCA GAT GGT GTG CCA TCA 180 AGG TTC AGT GGC AGT GGA TCA GGC ACA CAG TAT TCC CTC AAG ATC 225 AAC AGC CTG CAG TCT GAA GAT TTT GGG AGT TAT TAC TGT CAA CAT 270 TTT TGG GGT ACT CCG TGG ACG TTC GGT GGA GGC ACC AAG CTG GAA 315 ATC AAA CGG 324
【００８９】配列番号：４９ 配列の長さ：３５１ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ 配列 CAG GTG AAG CTG CAG CAG TCT GGG GGA GGC TTA GTG CAG CCT GGA 45 GGG TCC CTG AAA CTC TCC TGT GCA ACC TCT GGA TTT ACT GAC TAT 90 TAC ATG TTT TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AAG CTG GAG TGG 135 GTC GCA TAC ATT AGT GAT GGT GAT ATT AGC ACC TAT TAT CCA GAC 180 ACT GTA AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC 225 ACC CTG TAC CTG CAA ATG AGC CGT CTG AAG TCT GAG GAC ACA GCC 270 ATG TAT TAC TGT GCA AGA GGA AAC TAT AGG TAC GGC TAT GCT GTG 315 GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 354SEQ ID NO: 49 Sequence length: 351 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA5 Array CAG GTG AAG CTG CAG CAG TCT GGG GGA GGC TTA GTG CAG CCT GGA 45 GGG TCC CTG AAA CTC TCC TGT GCA ACC TCT GGA TTT ACT GAC TAT 90 TAC ATG TTT TGG GTT CGC CAG ACT CCA GAG AAG AAG CTG GAG TGG 135 GTC GCA TAC ATT AGT GAT GGT GAT ATT AGC ACC TAT TAT CCA GAC 180 ACT GTA AAG GGC CGA TTC ACC ATC TCC AGA GAC AAT GCC AAG AAC 225 ACC CTG TAC CTG CAA ATG AGC CGT CTG AAG TCT GAG GAC ACA GCC 270 ATG TAT TAC TGT GCA AGA GGA AAC TAT AGG TAC GGC TAT GCT GTG 315 GAC TAC TGG GGC CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA 354
【００９０】配列番号：５０ 配列の長さ：３２７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ 起源 細胞の種類：マウスハイブリドーマ細胞ＣＲＡ５ 配列 GAC ATC CAG ATG ACC CAG TCT CCA ACC ACC ATG GCT GCA TCT CCC 45 GGG GAG AAG ATC ACT ATC ACC TGC AGT GCC AGC TCA AGT ATA AGT 90 TCC AAT TAC TTG CAT TGG TAT CAG CAG AAG CCA GGA TTC TCC CCT 135 AAA CTC TTG ATT TAT AGG ACA TCC AAT CTG GCT TCT GGA GTC CCA 180 GCT CGC TTC AGT GGC AGT GGG TCT GGG ACC TCT TAC TCT CTC ACA 225 ATT GGC ACC ATG GAG GCT GAA GAT GTT GCC ACT TAC TAC TGC CAG 270 CAG GGT AGT AGT ATA CCA CTC ACG TTC GGT GCT GGG ACC AAG CTG 315 GAG CTG AAA CGG 327SEQ ID NO: 50 Sequence length: 327 Sequence type: Nucleic acid Number of chains: double-stranded Topology: linear Sequence type: cDNA to mRNA Origin cell type: mouse hybridoma cell CRA5 Array GAC ATC CAG ATG ACC CAG TCT CCA ACC ACC ATG GCT GCA TCT CCC 45 GGG GAG AAG ATC ACT ATC ACC TGC AGT GCC AGC TCA AGT ATA AGT 90 TCC AAT TAC TTG CAT TGG TAT CAG CAG AAG CCA GGA TTC TCC CCT 135 AAA CTC TTG ATT TAT AGG ACA TCC AAT CTG GCT TCT GGA GTC CCA 180 GCT CGC TTC AGT GGC AGT GGG TCT GGG ACC TCT TAC TCT CTC ACA 225 ATT GGC ACC ATG GAG GCT GAA GAT GTT GCC ACT TAC TAC TGC CAG 270 CAG GGT AGT AGT ATA CCA CTC ACG TTC GGT GCT GGG ACC AAG CTG 315 GAG CTG AAA CGG 327
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者 羅 智靖 千葉県千葉市花見川区花園２−14−13 (72)発明者 奥村 康 千葉県千葉市中央区松波１−14−９ (72)発明者 高井 敏朗 東京都大田区大森北２−13−１ アサヒ ビール株式会社 中央研究所内 (72)発明者 奥村 康 東京都大田区大森北２−13−１ アサヒ ビール株式会社 中央研究所内 (72)発明者 佐藤 恵士 千葉県千葉市緑区高田町396−24 シテ ィーハイムユートピア Ｙ−102 (72)発明者 渋谷 一郎 千葉県柏市増尾字松山967番地 ニッカ ウヰスキー株式会社 生産技術研究所内 (56)参考文献 国際公開92／011018（ＷＯ，Ａ１) 代謝，1990， Ｖｏｌ．27， 増刊 号， ｐｐ．103−112 Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ ｙ，1991， Ｖｏｌ．266， Ｎｏ．４, ｐｐ．2639−2646 Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍ ｍｕｎｏｌｏｇｙ，1988， Ｖｏｌ. 140， Ｎｏ．８， ｐｐ．2585−2588 Ｎａｔｕｒｅ，1988， Ｖｏｌ．332, Ｎｏ．6162， ｐｐ．323−327 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/09 C07K 16/28 C12P 21/08 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 7 Identification code FI C12P 21/08 C12N 5/00 B (72) Inventor Chiyasu Ra, 2-14-13 Hanazono, Hanamigawa-ku, Chiba-shi, Chiba (72) Invention Yasushi Okumura 1-14-9 Matsunami, Chuo-ku, Chiba, Chiba Prefecture (72) Inventor Toshiro Takai 2-13-1, Omorikita, Ota-ku, Tokyo Asahi Breweries, Ltd. Central Research Institute (72) Yasushi Okumura Ota, Tokyo 2-13-1, Omorikita, Ward Asahi Breweries Ltd. Central Research Laboratory (72) Inventor Keiji Sato 396-24 Takadacho, Midori-ku, Chiba City, Chiba Prefecture Citiheim Utopia Y-102 (72) Inventor Ichiro Shibuya Chiba Prefecture 967 Matsuyama, Masuo, Kashiwa City, Nikka Whiskey Co., Ltd., Institute of Industrial Science (56) 27, special issue, pp. 103-112 The Journal of Biological Chemistry, 1991, Vol. 266, No. 4, pp. 2639-2646 The Journal of Immunology, 1988, Vol. 140, No. 2639-2646. 8, pp. 2585-2588 Nature, 1988, Vol. 332, No. 6162, pp. 323-327 (58) Fields investigated (Int.Cl. 7 , DB name) C12N 15/09 C07K 16/28 C12P 21/08
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26479293A JP3504963B2 (en) | 1993-10-22 | 1993-10-22 | DNA fragment encoding amino acid sequence of anti-human high affinity IgE receptor monoclonal antibody |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26479293A JP3504963B2 (en) | 1993-10-22 | 1993-10-22 | DNA fragment encoding amino acid sequence of anti-human high affinity IgE receptor monoclonal antibody |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07165799A JPH07165799A (en) | 1995-06-27 |
| JP3504963B2 true JP3504963B2 (en) | 2004-03-08 |
Family
ID=17408273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26479293A Expired - Fee Related JP3504963B2 (en) | 1993-10-22 | 1993-10-22 | DNA fragment encoding amino acid sequence of anti-human high affinity IgE receptor monoclonal antibody |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3504963B2 (en) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9422294D0 (en) * | 1994-11-04 | 1994-12-21 | Peptide Therapeutics Ltd | Peptides for anti-allergy treatment |
| US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| TWI255272B (en) * | 2000-12-06 | 2006-05-21 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
| US7786264B2 (en) * | 2001-11-08 | 2010-08-31 | Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise Co., Ltd | Monoclonal antibody against hepatitis E virus or its fragment with binding activity and use thereof |
| EP1626993B1 (en) | 2003-05-09 | 2015-03-11 | Duke University | Cd20-specific antibodies and methods of employing same |
| TWI374935B (en) | 2004-08-27 | 2012-10-21 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | Production of α-abeta |
| TWI364458B (en) | 2004-08-27 | 2012-05-21 | Wyeth Res Ireland Ltd | Production of tnfr-lg |
| TWI384069B (en) | 2004-08-27 | 2013-02-01 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | Production of polypeptides |
| PE20061329A1 (en) | 2004-12-15 | 2006-12-08 | Neuralab Ltd | HUMANIZED AB ANTIBODIES TO IMPROVE COGNITION |
| CN101687032A (en) * | 2006-12-07 | 2010-03-31 | 诺瓦提斯公司 | The antagonist antibodies of anti-EPHB3 |
| JO3076B1 (en) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Immunotherapy regimes dependent on apoe status |
| US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
| CN117693529A (en) * | 2021-06-11 | 2024-03-12 | 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 | anti-uPAR antibodies and uses thereof |
-
1993
- 1993-10-22 JP JP26479293A patent/JP3504963B2/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Ｎａｔｕｒｅ，１９８８， Ｖｏｌ．３３２， Ｎｏ．６１６２， ｐｐ．３２３−３２７ |
| Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９１， Ｖｏｌ．２６６， Ｎｏ．４， ｐｐ．２６３９−２６４６ |
| Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８８， Ｖｏｌ．１４０， Ｎｏ．８， ｐｐ．２５８５−２５８８ |
| 代謝，１９９０， Ｖｏｌ．２７， 増刊号， ｐｐ．１０３−１１２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07165799A (en) | 1995-06-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5582996A (en) | Bifunctional antibodies and method of preparing same | |
| JP3452062B2 (en) | CDR-transplanted antibody | |
| US6180377B1 (en) | Humanized antibodies | |
| JP3504963B2 (en) | DNA fragment encoding amino acid sequence of anti-human high affinity IgE receptor monoclonal antibody | |
| JPH08500487A (en) | L chain deficient immunoglobulin | |
| JPH06502997A (en) | Nucleotide sequence encoding the variable region of the β chain of human T lymphocyte receptor and corresponding peptide segment and use in diagnosis and therapy | |
| JP2001503643A (en) | Cloning and characterization of napsin, a type of aspartic protease | |
| EP0563214A1 (en) | Bifunctional antibodies and method of preparing same | |
| JP2009504136A (en) | Recombinant method for production of monoclonal antibodies against CD52 for the treatment of chronic lymphocytic leukemia | |
| JPH05509234A (en) | Nucleotide sequence encoding the variable region of human T lymphocyte receptor alpha chain and corresponding peptide segment and use in diagnosis and therapy | |
| JP2619232B2 (en) | Gene system encoding human immunoglobulin E binding factor active polypeptide | |
| EP0491878A1 (en) | Compositions for the inhibition of protein hormone formation and uses thereof. | |
| JPH06225788A (en) | Monoclonal antibody reshaped for immunoglobulin isotype | |
| BG60687B1 (en) | Pecific binding agents | |
| Ruf et al. | Purification, sequence and crystallization of an anti-tissue factor Fab and its use for the crystallization of tissue factor | |
| JPH0920798A (en) | Human anti-hbs antibody | |
| JPH04500603A (en) | Cloned nephritis antigen | |
| EP0539748B1 (en) | Polypeptides capable of binding to heavy chains of IL-2 receptors | |
| JPH06113881A (en) | Human type monoclonal antipeptide antibody and dna capable of coding the same | |
| Eilat et al. | Production of anti-RNA antibody by hybridoma cells: purification from mixed immunoglobulin products | |
| CN114426582B (en) | Nerve specific enolase monoclonal antibody and preparation method and application thereof | |
| Morse III et al. | Murine Plasma Cells Secreting More Than One Class of Immunoglobulin Heavy Chain: IV. Sequence Differences Between κ-Chains of SAMM 368 IgG2b and IgA | |
| JPH0576385A (en) | Chimera antibody and its use | |
| JPH05176790A (en) | Monoclonal antibody to brain myosin | |
| JPS62210984A (en) | Separation and purification of canine c-reactive protein using hybridoma producing monoclonal antibody against canine c-reactive protein and said antibody |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20031202 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20031212 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R360 | Written notification for declining of transfer of rights |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R360 |
|
| R370 | Written measure of declining of transfer procedure |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R370 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |