JP3313854B2 - TNF production inducing material - Google Patents

TNF production inducing material

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JP3313854B2
JP3313854B2 JP29315893A JP29315893A JP3313854B2 JP 3313854 B2 JP3313854 B2 JP 3313854B2 JP 29315893 A JP29315893 A JP 29315893A JP 29315893 A JP29315893 A JP 29315893A JP 3313854 B2 JP3313854 B2 JP 3313854B2
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Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、血液とを接触させるこ
とにより、ＴＮＦを産生誘導するための材料に関する。The present invention relates, by contacting the blood, to materials for inducing produce TNF.

【０００２】[0002]

【従来の技術】周知のごとく、生体の悪性腫瘍に対する
免疫監視機構を担う抗腫瘍性細胞としては、キラー細
胞、ＮＫ細胞、ＬＡＫ細胞及び、活性化マクロファージ
等が重要な役割を果たしている。また、これらの細胞や
リンパ球から分泌されるインターロイキン、インターフ
ェロン、ＴＮＦ等も生体の抗腫瘍性に大きく関与してい
る。したがって、悪性腫瘍に対する免疫学的治療方法と
しては、患者のこれらの細胞を活性化して抗腫瘍効果を
効率的に誘導することや、これらのサイトカインを誘導
することで抗腫瘍効果を発揮させることが考えられる。
しかしながら、癌患者では一般的に癌の進行とともに免
疫能が低下することが報告されており、癌患者の生体内
においては免疫抑制因子等により、免疫能が抑制されて
いる状態にあると考えられている。2. Description of the Related Art As is well known, killer cells, NK cells, LAK cells, activated macrophages, and the like play an important role as antitumor cells that play a role in monitoring the immune system against malignant tumors in a living body. In addition, interleukins, interferons, TNF, and the like secreted from these cells and lymphocytes are also significantly involved in the antitumor properties of living organisms. Therefore, as an immunological treatment method for malignant tumors, it is necessary to activate these cells of a patient to efficiently induce an antitumor effect or to induce an antitumor effect by inducing these cytokines. Conceivable.
However, it has been reported that immunity is generally reduced in cancer patients as the cancer progresses, and it is considered that immunity is suppressed by immunosuppressive factors and the like in cancer patients. ing.

【０００３】このような免疫能の低下した癌患者の生体
内においては、抗腫瘍効果の効率的な誘導は困難である
と言える。したがって、癌患者の体内で免疫系を賦活
し、抗腫瘍性を誘導するためには、免疫能の低下した患
者の体内に、誘導された抗腫瘍性細胞を導入する方法、
あるいは免疫賦活作用をもつサイトカインを体内に投与
する方法が癌治療法として考えられる。[0003] It can be said that it is difficult to efficiently induce an antitumor effect in the body of a cancer patient having such reduced immunological ability. Therefore, in order to activate the immune system in the body of a cancer patient and induce antitumor properties, a method of introducing the induced antitumor cells into the body of a patient with reduced immunity,
Alternatively, a method of administering a cytokine having an immunostimulatory effect into the body is considered as a cancer treatment method.

【０００４】最近、体外に取り出した癌患者のリンパ球
に遺伝子組み換えヒト・インターロイキン２を加えて培
養し、活性化してＬＡＫ細胞を誘導した後に癌患者体内
に戻して、抗腫瘍効果を発揮させる養子免疫療法や、腫
瘍細胞を特異的に攻撃するＴＮＦ等を癌患者体内に投与
する治療法が試みられている（Rosenberg,S.A.,Lotze,
M.T.,Muul,L.M.et al.:A Progress report on the tre
atment of 157 patients with advanced cancer using
lymphokine-activated killer cells and interleukin
2 or high-dose interleukin 2 alone. N.Engl.J.Med.
316:889-897,1987)。[0004] Recently, recombinant human interleukin 2 is added to lymphocytes of a cancer patient taken out of the body, cultured, activated and induced to induce LAK cells, and then returned to the cancer patient to exert an antitumor effect. Adoptive immunotherapy and therapeutic methods in which TNF or the like that specifically attacks tumor cells is administered to cancer patients have been attempted (Rosenberg, SA, Lotze,
MT, Muul, LMet al.:A Progress report on the tre
atment of 157 patients with advanced cancer using
lymphokine-activated killer cells and interleukin
2 or high-dose interleukin 2 alone.N.Engl.J.Med.
316: 889-897,1987).

【０００５】また、細菌の菌体成分等を癌患者に投与し
て、内因性のＴＮＦを誘導する試みも行われている（大
島治之、杣源一郎、水野伝一：腫瘍壊死因子（ＴＮ
Ｆ）：内発性ＴＮＦ産生の人癌への応用とその展望． B
IOTHERAPY, 1:145-151,1987 、加藤幹雄、岡田耕一、杣
源一郎、竹内正七、水野伝一：内因性及び外因性ＴＮ
Ｆ（ＦＥＴ）療法 多施設共同研究による臨床成績．BI
OTHERAPY, 5:473-477,1991) 。Attempts have also been made to induce endogenous TNF by administering bacterial cell components and the like to cancer patients (Haruyuki Oshima, Genichiro Soma, Denichi Mizuno: Tumor necrosis factor (TN)
F): Application of endogenous TNF production to human cancer and its prospects. B
IOTHERAPY, 1: 145-151,1987, Mikio Kato, Koichi Okada, Genichiro Soma, Shoichi Takeuchi, Denichi Mizuno: intrinsic and extrinsic TN
F (FET) therapy Clinical results from a multicenter study. BI
OTHERAPY, 5: 473-477, 1991).

【０００６】さらに、ＴＮＦを産生誘導するリポポリサ
ッカライド（ＬＰＳ）を固定化した材料に血液を循環し
て癌患者の治療を行おうとする基礎的な研究も進められ
ている（阿部元：ＬＰＳ固定化ビーズによる抗腫瘍効
果．日外会誌，92:627-635,1991)。同様に、ＬＰＳを半
透膜や選択性透過膜を介して血液と接触させて、体外で
ＬＰＳ処理した血液を患者に戻して免疫系を賦活するこ
とも考えられている（特開昭61-113465)。[0006] Furthermore, basic research has been conducted to treat cancer patients by circulating blood through a material on which lipopolysaccharide (LPS) for inducing TNF production is immobilized (Gen Abe: LPS immobilization). Antitumor effect of modified beads, Nihon Gakkaishi, 92: 627-635, 1991). Similarly, it has been considered that LPS is brought into contact with blood through a semi-permeable membrane or a selectively permeable membrane, and the LPS-treated blood is returned to the patient outside the body to activate the immune system (Japanese Patent Application Laid-Open No. 61-1986). 113465).

【０００７】[0007]

【発明が解決しようとする課題】前記の養子免疫療法で
は、癌患者から大量のリンパ球を取り出し、無菌的に長
期間、インターロイキン２の存在下で培養した後に、癌
患者に注入するという操作を行うため、非常に手間がか
かること並びに、培養に長時間を要することなどの、多
くの問題があった。In the above adoptive immunotherapy, a large amount of lymphocytes are taken out from a cancer patient, cultured for a long time in the presence of interleukin 2 aseptically, and then injected into the cancer patient. However, there are many problems such as that it takes much time and time for culturing.

【０００８】また、最近、遺伝子組み換えにより、ＴＮ
Ｆの製造が可能となり、遺伝子組み換え型ヒトＴＮＦを
用いた癌治療の臨床検査が進められている（池田重雄、
石原和之：皮膚悪性腫瘍に対する遺伝子組み換え型ヒト
腫瘍壊死因子Sertenef(PT-050)の臨床第２相試験．Skin
Cancer,5:210-226,1991) 。しかし、ＴＮＦは、免疫賦
活効果と、腫瘍細胞を直接殺す効果の双方を併せ持って
いるサイトカインであるが、組み換え型ＴＮＦの効果
は、期待されたほど大きくはなかった。これは、組み換
え型は患者自身からの内因性のものではないため、効果
が少なく、副作用が大きいためと考えられる。[0008] Recently, TN has been
F has become possible, and clinical tests for cancer treatment using recombinant human TNF are underway (Shigeo Ikeda,
Kazuyuki Ishihara: Phase II study of Sertenef (PT-050), a recombinant human tumor necrosis factor for skin malignancies. Skin
Cancer, 5: 210-226, 1991). However, although TNF is a cytokine having both an immunostimulatory effect and an effect of directly killing tumor cells, the effect of recombinant TNF was not as great as expected. This is considered to be because the recombinant type is not endogenous from the patient itself, and therefore has little effect and large side effects.

【０００９】そこで、ＢＣＧなどの菌体成分やＯＫ−４
３２などの薬剤を患者に投与して、内因性のＴＮＦを誘
導して癌の治療を行おうとする試みが進められている。
しかし、菌体成分等によるＴＮＦ等の誘導は、癌患者体
内で菌体成分等が様々な反応をするため、副作用が起こ
る。Therefore, bacterial components such as BCG and OK-4
Attempts have been made to administer drugs such as 32 to patients to induce endogenous TNF to treat cancer.
However, induction of TNF or the like by a cell component or the like causes side effects because the cell component or the like reacts variously in a cancer patient.

【００１０】また、ＬＰＳ固定化材料を用いた血液循環
法では、ＬＰＳが脱離し、体内に移行し、副作用を起こ
すという問題がある。また、一般に強い免疫賦活作用を
持つ免疫刺激物質は毒性なども強いものが多く、それら
を半透膜に包んだり、固定化したりした場合、血液中へ
の漏出や、脱離を完全に抑えることは難しく、安全性の
保証ができない。[0010] Further, in the blood circulation method using the LPS-immobilized material, there is a problem that LPS is detached, translocates into the body, and causes side effects. In general, immunostimulants with strong immunostimulatory activity are often highly toxic, so if they are wrapped or immobilized in a semipermeable membrane, they can completely prevent leakage into the blood and desorption. Is difficult and cannot guarantee safety.

【００１１】また、ＴＮＦは生体内において、多様な生
理活性を示すことが知られており、体内のＴＮＦの動態
と各種疾患の病態との関連性が注目されている。そのた
め、従来遺伝子組替え型のＴＮＦを標準品として血液中
のＴＮＦ量を測定することが行われているが、この遺伝
子組替え型のＴＮＦが血液中に存在する天然型ＴＮＦと
同じ反応性を示す保証はない。そのため、正確な測定結
果を得るため天然型ＴＮＦを標準品とすることが望まれ
ている。TNF is known to exhibit various physiological activities in vivo, and attention has been paid to the relationship between the dynamics of TNF in the body and the pathology of various diseases. Therefore, conventionally, the amount of TNF in blood has been measured using a genetically modified TNF as a standard product, but it is guaranteed that the genetically modified TNF exhibits the same reactivity as natural TNF present in blood. There is no. Therefore, it is desired to use natural TNF as a standard product in order to obtain accurate measurement results.

【００１２】本発明は、上記の問題点を解決すべく、従
来の方法よりも操作性、実用性、有効性、安全性の点で
飛躍的に向上させたＴＮＦ産生誘導材料を提供するもの
である。The present invention, in order to solve the above problems, provides a TNF production-inducing material which is dramatically improved in terms of operability, practicality, effectiveness and safety as compared with the conventional method. is there.

【００１３】[0013]

【課題を解決するための手段】本願の第１の発明は、１
５℃〜５２℃の温度で体外にて血液と接触されることに
より、ＴＮＦの産生を誘導するＴＮＦ産生誘導材料であ
って、該材料が、天然多糖類及び／または天然多糖類の
誘導体からなる高分子材料（但し、水溶性のものを除
く。）であることを特徴とするＴＮＦ産生誘導材料であ
る。 第１の発明の特定の局面では、上記天然多糖類が、
アガロース、セルロース、デンプン、プルラン、デキス
トラン、グリサーゲン、マンナン、グルコマンノグリカ
ン、ガラクトマンノグリカン、ペクチン、アルギン酸、
ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、キチン及びキトサ
ンからなる群より選ばれる少なくとも１種である。 第１
の発明の他の特定の局面では、上記天然多糖類が、アル
ギン酸、キトサン及びアガロースからなる群より選ばれ
る少なくとも１種である。 本願の第２の発明に係るＴＮ
Ｆ産生誘導材料は、体外にて血液と接触されることによ
り、ＴＮＦの産生を誘導するＴＮＦ産生誘導材料であっ
て、該材料が、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシ
エチルアクリレート、ポリヒドロキシメチルアクリレー
ト、ポリフェノール、ポリビニルピロリドン、ポリアク
リルアミド、ポリリジン、ポリアクリル酸エステル及び
ポリメタクリル酸エステルからなる群より選ばれる少な
くとも１種の高分子材料、及び／またはこれらの誘導体
であることを特徴とする。 第２の発明のある特定の局面
では、上記材料が、ポリアクリル酸エステル、ポリメタ
クリル酸エステル及びポリビニルアルコールからなる群
より選ばれる少なくとも１種の高分子材料、及び／また
はこれらの誘導体である。 本願の第３の発明は、体外に
て血液と接触されることにより、ＴＮＦの産生を誘導す
るＴＮＦ産生誘導材料であって、カチオン性官能基が導
入された天然多糖類及び／またはポリスチレンからなる
ことを特徴とするＴＮＦ産生誘導材料である。 第３の発
明のある特定の局面では、上記カチオン性官能基が、１
級アミノ基、２級アミノ基、３級アミノ基、４級アミノ
基、スルホニウム基及びホスホニウム 基からなる群より
選ばれる少なくとも１種である。 Means for Solving the Problems The first invention of the present application has the following features.
Being in contact with blood outside the body at a temperature of 5 ° C to 52 ° C
Is a TNF production inducing material that induces the production of TNF.
The material is a natural polysaccharide and / or a natural polysaccharide
Derivative polymer materials (excluding water-soluble materials)
Good. ) Is a TNF production-inducing material,
You. In a specific aspect of the first invention, the natural polysaccharide is
Agarose, cellulose, starch, pullulan, dex
Tolan, glycergen, mannan, glucomannoglyca
, Galactomannoglycan, pectin, alginic acid,
Hyaluronic acid, chondroitin sulfate, chitin and chitosa
At least one selected from the group consisting of First
In another specific aspect of the invention, the natural polysaccharide is
Selected from the group consisting of formic acid, chitosan and agarose
At least one. TN according to the second invention of the present application
The F production inducing material is brought into contact with blood outside the body.
Is a TNF production inducing material that induces the production of TNF.
The material is polyvinyl alcohol, polyhydroxy,
Ethyl acrylate, polyhydroxymethyl acrylate
, Polyphenol, polyvinylpyrrolidone, polyac
Lilamide, polylysine, polyacrylate and
A few selected from the group consisting of polymethacrylates
At least one polymer material and / or a derivative thereof
It is characterized by being. Certain aspects of the second invention
In the above, the material is a polyacrylate, a polymeta
Group consisting of acrylates and polyvinyl alcohol
At least one polymer material selected from the group consisting of:
Are their derivatives. The third invention of the present application
Induces TNF production by contact with blood
A TNF production-inducing material, wherein a cationic functional group is
Consisting of natural polysaccharide and / or polystyrene
It is a TNF production inducing material characterized by the above. Third departure
In certain specific aspects, the cationic functional group is 1
Secondary amino group, secondary amino group, tertiary amino group, quaternary amino
Group, a sulfonium group and a phosphonium group
At least one selected.

【００１４】血液中の単球や好中球などの白血球が異物
と反応すると、種々の酵素、メディエーターを放出す
る。また、これらの細胞が材料と接触するときも同じよ
うな反応が起こる。これは、材料が異物とみなされて起
こるものであるが、この反応は材料の性質によって大き
く変わってくる。そのため、材料の性質を制御すること
によって、この反応を制御できると考えられる。When leukocytes such as monocytes and neutrophils in blood react with foreign substances, they release various enzymes and mediators. A similar reaction occurs when these cells come into contact with the material. This occurs when the material is regarded as a foreign substance, but this reaction greatly depends on the nature of the material. Therefore, it is considered that this reaction can be controlled by controlling the properties of the material.

【００１５】我々は、この反応の中で、白血球によるＴ
ＮＦの産生に注目し、種々の天然及び合成高分子材料と
血液との接触によるＴＮＦの産生誘導について、鋭意研
究を行い、種々の高分子材料が血液中でＴＮＦの顕著な
産生誘導を引き起こすことを発見した。特に、水酸基、
アミド基及び／またはエステル基を有する高分子材料
や、カチオン性官能基を有する高分子材料と血液とを接
触させることによって、顕著なＴＮＦの産生誘導が認め
られたのに対して、ポリスチレンやポリエチレン、ポリ
プロピレン、ポリ塩化ビニルのような高分子材料では、
ほとんどＴＮＦの産生誘導が認められてなかった。スル
ホン酸やカルボキシル基のようなアニオン性基だけを有
する高分子材料では、低いレベルのＴＮＦの産生誘導を
認めたに過ぎなかった。[0015] In this reaction, we determined that T
Focusing on the production of NF, intensive studies have been conducted on the induction of TNF production by contact of various natural and synthetic polymer materials with blood, and various polymer materials cause remarkable induction of TNF production in blood. Was found. In particular, hydroxyl,
By contacting blood with a polymer material having an amide group and / or an ester group or a polymer material having a cationic functional group, remarkable induction of TNF production was observed, whereas polystyrene and polyethylene were observed. In high polymer materials like polypropylene, polyvinyl chloride,
Almost no induction of TNF production was observed. With a polymer material having only an anionic group such as a sulfonic acid or a carboxyl group, only a low level of induction of TNF production was observed.

【００１６】本発明で用いられる、水酸基、アミド基、
エステル基から選ばれる１つあるいは１つ以上の官能基
を有する高分子材料には、アガロース、セルロース、デ
ンプン、プルラン、デキストラン、グリサーゲン、マン
ナン、グルコマンノグリカン、ガラクトマンノグリカ
ン、ペクチン、アルギン酸、ヒアルロン酸、コンドロイ
チン硫酸、キチン、キトサンのような天然多糖類やそれ
らをカルボキシメチル化、スクシニル化、糖側鎖グラフ
ト、ペプチド側鎖グラフト、グリコール化、アシル化、
アミノ化によって修飾した種々の誘導体が挙げられる。A hydroxyl group, an amide group,
Polymer materials having one or more functional groups selected from ester groups include agarose, cellulose, starch, pullulan, dextran, glycergen, mannan, glucomannoglycan, galactomannoglycan, pectin, alginic acid, Natural polysaccharides such as hyaluronic acid, chondroitin sulfate, chitin and chitosan and their carboxymethylation, succinylation, sugar side chain graft, peptide side chain graft, glycolation, acylation,
Various derivatives modified by amination may be mentioned.

【００１７】例えば、本発明者らが得た知見では、キチ
ン及びそのＮ−脱アセチル化物であるキトサンやキトサ
ンのアミノ基に１、２、３、４級アミンを導入したキト
サン誘導体、アルキル基を導入した誘導体、また、水酸
基にスルホン基、カルボキシメチル基を導入した誘導体
などは血液との接触によって、ＴＮＦの大きな産生誘導
を示した。また、アルガロースやアガロースに２、３−
ジプロモプロパノールを強アルカリ条件下で作用させて
架橋することで強度を高めた架橋型アガロースや、それ
にジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基等のイオン交換
基をエーテル結合させたアガロース誘導体、４級アミン
等で修飾したアガロース誘導体よりなるゲルビーズと血
液との接触によっても、ＴＮＦの顕著な産生誘導方法が
見られた。また、アルギン酸ナトリウムなどを水に溶解
させ、これらと多価金属イオンを含む水溶液とを接触さ
せることにより作製したアルギン酸ゲルビーズと血液と
の接触によっても、ＴＮＦの顕著な産生誘導が見られ
た。For example, the present inventors have found that chitin and its N-deacetylated product, chitosan and chitosan derivatives in which 1, 2, 3, and quaternary amines are introduced into the amino group of chitosan, and an alkyl group. Derived derivatives, derivatives having a sulfon group or a carboxymethyl group introduced into a hydroxyl group, and the like showed a large induction of TNF production by contact with blood. In addition, 2,3-
Cross-linked agarose, whose strength has been enhanced by cross-linking by acting dipromopropanol under strong alkaline conditions, or an agarose derivative having an ion-exchange group such as diethylaminoethyl (DEAE) group ether-bonded thereto, a quaternary amine, etc. A remarkable method of inducing the production of TNF was also found by contacting blood with gel beads composed of a modified agarose derivative. In addition, remarkable induction of TNF production was also observed by contacting blood with alginate gel beads prepared by dissolving sodium alginate and the like in water and bringing them into contact with an aqueous solution containing polyvalent metal ions.

【００１８】また、本発明で用いられる、水酸基、アミ
ド基、エステル基を有する高分子材料には、ポリビニル
アルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリ
ヒドロキシメチルアクリレート、ポリフェノール、ポリ
ビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリリジン、
ポリビニルピロリドン、ポリアクリル酸エステル、ポリ
メタクリル酸エステル等の合成高分子材料やその種々の
誘導体や架橋物及びそれらとスチレン、メタクリル酸エ
ステル等のビニルモノマーとの種々の共重合体が挙げら
れる。The polymer material having a hydroxyl group, an amide group, and an ester group used in the present invention includes polyvinyl alcohol, polyhydroxyethyl acrylate, polyhydroxymethyl acrylate, polyphenol, polyvinylpyrrolidone, polyacrylamide, polylysine, and the like.
Examples include synthetic polymer materials such as polyvinylpyrrolidone, polyacrylate and polymethacrylate, various derivatives and crosslinked products thereof, and various copolymers thereof with vinyl monomers such as styrene and methacrylate.

【００１９】例えば、本発明者らが得た知見では、ポリ
ビニルアルコールゲルは、血液との接触によってＴＭＦ
の顕著な産生誘導を示した。このポリビニルアルコール
ゲルは、ほう酸添加により架橋を導入したり、側鎖に光
感応性の官能基であるスチリルピリジニウム基やスチリ
ルキノリニウム基を有する光架橋性ポリビニルアルコー
ルを用いたり、ゲル化剤と称する種々の有機及び無機化
合物を添加したり、該水溶液の真空凍結乾燥や凍結融解
の反復操作によって作製することができる。For example, according to the findings obtained by the present inventors, polyvinyl alcohol gel can be converted into TMF by contact with blood.
Remarkable induction of production. This polyvinyl alcohol gel introduces a crosslink by adding boric acid, uses a photocrosslinkable polyvinyl alcohol having a styrylpyridinium group or a styrylquinolinium group that is a photosensitive functional group in a side chain, or uses a gelling agent. The aqueous solution can be prepared by adding various organic and inorganic compounds, or by repeatedly freeze-thawing or freeze-thawing the aqueous solution.

【００２０】また、本発明者らが得た知見では、上記官
能基を有するメタクリル酸エステルモノマーを重合及
び、各種のビニル・モノマーなどと共重合することによ
って、水酸基を導入した修飾体や、アルキル基、フェニ
ル基を導入した材料でも、ＴＮＦの顕著な産生誘導が確
認された。Further, the present inventors have found that a methacrylic acid ester monomer having the above functional group is polymerized and copolymerized with various vinyl monomers to obtain a modified compound having a hydroxyl group introduced therein, an alkylated monomer, It was also confirmed that TNF production was remarkably induced even in a material into which a phenyl group was introduced.

【００２１】また、本発明で用いられるカチオン性官能
基を有する高分子材料は、１〜４級アミノ基、スルホニ
ウム基、ホスホニウム基等を有する高分子材料であり、
例えば、ポリビニルピリジン及びその塩、イオネンポリ
マー、Ｎ−トリアルキルアミノメチルポリスチレン、ア
ミノアセタール化ポリビニルアルコール、ポリビニルイ
ミダゾール、ポリエチレンイミン、ポリジアルキルジア
リルアンモニウム塩、ポリジアルキルジアリルアンモニ
ウム塩−ＳＯ2 共重合体、ポリビニルベンジルスルホニ
ウム塩、ポリビニルベンジルホスホニウム塩等が挙げら
れる。The polymer material having a cationic functional group used in the present invention is a polymer material having a primary to quaternary amino group, a sulfonium group, a phosphonium group and the like.
For example, polyvinyl pyridine and salts thereof, ionene polymer, N-trialkylaminomethyl polystyrene, aminoacetalized polyvinyl alcohol, polyvinyl imidazole, polyethylene imine, polydialkyl diallylammonium salt, polydialkyl diallylammonium salt-SO 2 copolymer, Polyvinylbenzylsulfonium salts, polyvinylbenzylphosphonium salts and the like can be mentioned.

【００２２】上記カチオン性官能基を有する高分子材料
は、天然多糖類及びポリスチレン等の合成高分子に種々
の化学修飾方法を用いて、上記カチオン性官能基を導入
したり、これらの官能基を有するビニルモノマー間の共
重合、架橋反応により得ることができる。例えば、スチ
レンとジビニルベンゼンを共重合し、Ｆｒｉｅｄｉｌ−
Ｃｒａｆｔｓ反応を介して、クロロメチル基をベンゼン
核に導入し、クロロメチル基をアミンで処理することに
よって、アミノ化し、しかる後にアルキル置換を行うこ
とにより、ポリスチレンにカチオン性官能基を導入する
ことができる。The polymer material having a cationic functional group can be introduced into the synthetic polymer such as a natural polysaccharide or polystyrene by using various chemical modification methods, or the cationic functional group can be introduced into the synthetic polymer. It can be obtained by copolymerization and cross-linking reaction between the vinyl monomers. For example, styrene and divinylbenzene are copolymerized, and Friedil-
Introducing a cationic functional group into polystyrene by introducing a chloromethyl group into the benzene nucleus and treating the chloromethyl group with an amine, followed by an alkyl substitution, via the Crafts reaction. it can.

【００２３】また、他の方法として、例えば、エピクロ
ルヒドリンのような分子内にクロルメチル基とオキシラ
ン環とを有する化合物にイミダゾール類を反応させ、変
性イミダゾールを合成し、これを多官能性エポキシ化合
物で樹脂化することによっても得ることができる。ま
た、カチオン性官能基を有する高分子材料については、
他にも種々の合成法が考えられるが、本発明はその方法
によって限定されるものではない。As another method, for example, a compound having a chloromethyl group and an oxirane ring in a molecule such as epichlorohydrin is reacted with an imidazole to synthesize a modified imidazole, which is then converted into a resin with a polyfunctional epoxy compound. Can also be obtained by converting In addition, for a polymer material having a cationic functional group,
Various other synthetic methods are conceivable, but the present invention is not limited by these methods.

【００２４】本発明者らが得た知見では、カチオン性基
として、４級アンモニウムのトリアルキル置換窒素原子
をもつトリメチルアンモニウム基やジアルキルエタノー
ルであるジメチルエタノールアンモニウム基を導入した
ポリスチレン修飾体は、未修飾のポリスチレンやアニオ
ン性基で修飾したポリスチレンからなる材料に比較し
て、著しく大きなＴＮＦの産生誘導を示した。また、カ
チオン性基として、１級または２級アミノ基をもつもの
や３級アミノ基をもつものでも、ＴＮＦの大きな産生誘
導が確認された。一方、アニオン性基であるスルホン酸
基を導入したポリスチレン誘導体では、ほとんどＴＮＦ
の産生誘導が見られなかった。According to the findings obtained by the present inventors, polystyrene modified products in which a trimethylammonium group having a quaternary ammonium trialkyl-substituted nitrogen atom or a dimethylethanolammonium group which is a dialkylethanol are introduced as cationic groups. Compared to a material made of modified polystyrene or a material made of polystyrene modified with an anionic group, the induction of TNF production was significantly larger. In addition, a large induction of TNF production was confirmed for those having a primary or secondary amino group or those having a tertiary amino group as the cationic group. On the other hand, in polystyrene derivatives into which a sulfonic acid group which is an anionic group is introduced, almost no TNF is used.
No production induction was observed.

【００２５】また、ジメチルエタノールアンモニウム
基、ジエチルアミノ基、末端に１級アミノ基のようなカ
チオン性基を有するメタクリル酸エステルモノマーの共
重合により得られたポリメタクリル酸エステル系材料
は、顕著なＴＮＦの産生誘導を示した。一方アニオン性
基であるカルボキシル基を有するメタクリル酸エステル
系材料では、ほとんどＴＮＦの産生誘導が見られなかっ
た。The polymethacrylate-based material obtained by copolymerization of a methacrylate monomer having a cationic group such as a dimethylethanolammonium group, a diethylamino group and a terminal amino group at the terminal is a remarkable TNF. Production induction was indicated. On the other hand, in the methacrylate-based material having a carboxyl group as an anionic group, almost no induction of TNF production was observed.

【００２６】また、キチン及びそのＮ−脱アセチル化物
であるキトサンやキトサンのアミノ基に１〜４級アミン
を導入したキトサン誘導体、ジエチルアミノエチル（Ｄ
ＥＡＥ）基等のイオン交換基をエーテル結合させたアガ
ロース誘導体、４級アミン等で修飾したアガロース誘導
体は、上述したように、特に高いＴＮＦの産生誘導を示
した。Also, chitin and its N-deacetylated product, chitosan and a chitosan derivative obtained by introducing a quaternary amine into an amino group of chitosan, diethylaminoethyl (D
As described above, the agarose derivative in which an ion exchange group such as an EAE) group is ether-bonded, and the agarose derivative modified with a quaternary amine and the like showed particularly high induction of TNF production.

【００２７】本発明において用いられる種々のＴＮＦ産
生誘導材料の形状は、粒子状、繊維状、中空糸状、膜状
等いずれの公知の形状のものでも用いることができる。
例えば、スチレンモノマーにジビニルベンゼンとラジカ
ル開始剤ベンゾイルパーオキサイドを加えて、水中で６
０℃、５時間懸濁攪拌を続けるとスチレン・ジビニルベ
ンゼン共重合体球状粒子を容易に得ることができる。粒
子径は攪拌速度、水中に加える安定剤の種類と濃度、モ
ノマーと水の容量比などで制御できる。また、希釈剤と
モノマーの混液の懸濁重合を行うことで、多孔質化を行
うことも容易である。また、各種メタクリル酸エステル
モノマーの重合をモノマーに対する良溶媒でかつポリマ
ーに対する貧溶媒中で懸濁重合を行うと、ポリメタクリ
ル酸エステルの球状粒子を容易に得ることができる。粒
子形は攪拌速度、添加する安定剤の種類と濃度などで制
御することができる。こうして合成した球状粒子に、上
記したような化学修飾反応を行い、種々のＴＮＦ産生誘
導材料が得られる。The TNF production-inducing material used in the present invention may have any known shape such as a particle shape, a fibrous shape, a hollow fiber shape and a membrane shape.
For example, divinylbenzene and a radical initiator benzoyl peroxide are added to styrene monomer,
By continuing the suspension and stirring at 0 ° C. for 5 hours, spherical particles of a styrene / divinylbenzene copolymer can be easily obtained. The particle size can be controlled by the stirring speed, the type and concentration of the stabilizer added to water, the volume ratio of monomer to water, and the like. It is also easy to make the porous material by performing suspension polymerization of a mixture of a diluent and a monomer. When suspension polymerization of various methacrylate monomers is carried out in a good solvent for the monomers and in a poor solvent for the polymer, spherical particles of polymethacrylate can be easily obtained. The particle shape can be controlled by the stirring speed, the type and concentration of the stabilizer to be added, and the like. By performing the above-described chemical modification reaction on the spherical particles thus synthesized, various TNF production-inducing materials can be obtained.

【００２８】血液と上記材料とを接触させる方法につい
ては、血液と上記材料が十分に接触され得る限り、任意
の方法を用いることができる。例えば、繊維状の上記材
料をカラムに充填し、該カラムに血液を循環させる方法
や、粒径５０μｍ〜５ｍｍのビーズ状の材料をカラムに
充填し、血液を循環させる方法を用いることができる。
さらに、血液中に種々の形状の上記材料を浮遊させるこ
とにより、血液と上記材料を接触させてもよい。As for the method of bringing blood into contact with the above material, any method can be used as long as blood can be sufficiently brought into contact with the above material. For example, a method in which the above-mentioned fibrous material is filled in a column and blood is circulated in the column, or a method in which bead-like material having a particle size of 50 μm to 5 mm is filled in the column and blood is circulated can be used.
Furthermore, blood may be brought into contact with the material by suspending the material in various shapes in blood.

【００２９】上記材料と血液を接触させる際の温度は、
１５℃〜５２℃の範囲がＴＮＦの産生誘導を高める上で
好ましい。本発明者らが得た知見では、後述の実施例か
ら明らかなように、接触温度が１５℃未満の時には、Ｔ
ＮＦの産生誘導は見られなかった。また、接触温度が５
２℃より高温度の場合には、血漿タンパク質の変性、著
しい溶血、白血球の崩壊が起こり、ＴＮＦの産生誘導は
激減した。The temperature at which the above material is brought into contact with blood is
The range of 15 ° C to 52 ° C is preferable for enhancing the induction of TNF production. According to the knowledge obtained by the present inventors, when the contact temperature is lower than 15 ° C., the T
No induction of NF production was observed. When the contact temperature is 5
At a temperature higher than 2 ° C., denaturation of plasma proteins, remarkable hemolysis, and leukocyte destruction occurred, and the induction of TNF production was drastically reduced.

【００３０】本発明では、上記材料と血液とを接触させ
ることにより、上記材料と細胞との相互作用が起こり、
ＴＮＦの産生誘導が行われる。このＴＮＦ産生細胞と
は、抹消血中の細胞に限らず、リンパ管、リンパ節、膵
臓等から得られる細胞も含まれる。血液中にはＴＮＦを
産生するこれらの細胞が多く含まれている。血液中のこ
れらの細胞が上記材料と作用し、ＴＮＦが産生誘導させ
るが、直接作用せずとも、上記材料と血液中の何らかの
因子とが作用して誘導された別の因子を介して、ＴＮＦ
の産生が誘導されても良い。In the present invention, by contacting the above-mentioned material with blood, an interaction between the above-mentioned material and cells occurs,
Induction of TNF production is performed. The TNF-producing cells are not limited to cells in peripheral blood, but also include cells obtained from lymph vessels, lymph nodes, pancreas and the like. The blood is rich in these cells that produce TNF. These cells in the blood act on the material to induce TNF production, but without direct action, TNF is induced by another factor induced by the action of the material and some factor in the blood.
May be induced.

【００３１】上記材料を用いて、癌患者の血液からＴＮ
Ｆの産生誘導を行い、癌等の治療に用いることや天然型
のＴＮＦを得ることが可能となる。治療においては、体
外循環システム等を用いて、ＴＮＦが産生誘導された血
液を癌患者に戻すことにより、癌患者由来の内因性ＴＮ
Ｆが患者体内で抗腫瘍効果を発揮する。また、接触させ
た血液から血漿などを分離し、ＴＮＦを産生誘導した癌
患者自身の血漿などを適時、全身もしくは腫瘍局所に投
与することも可能である。Using the above-mentioned materials, TN is obtained from the blood of a cancer patient.
By inducing the production of F, it becomes possible to use it for the treatment of cancer and the like and to obtain natural TNF. In the treatment, the blood in which TNF production is induced is returned to the cancer patient by using an extracorporeal circulation system or the like, whereby endogenous TN derived from the cancer patient is returned.
F exerts an antitumor effect in the patient. Further, it is also possible to separate plasma or the like from the contacted blood, and to administer the plasma or the like of the cancer patient who has induced TNF production to the whole body or the tumor locally in a timely manner.

【００３２】これらの治療方法をより詳しく述べる。ま
ず、癌患者などの治療には、これらの材料を充填したカ
ラムを用いた血液の体外循環治療を行うことができる。
癌患者などの血液を血液チューブなどを用いて体外循環
システムに導き、繊維状またはビーズ状にしたＴＮＦ誘
導材料を充填したカラムに導入する。カラム内で、血液
と材料が接触することで内因性のＴＮＦが血液内で誘導
される。高密度の内因性ＴＮＦを含む血液を再び癌患者
などの体内に返還することで、患者体内に患者由来のＴ
ＮＦが投与されることになる。また、上記ＴＮＦ産生誘
導材料を充填した血液バッグ等に、予め採血した患者の
血液を入れ、この中でＴＮＦの産生誘導を行い、患者由
来の内因性ＴＮＦを高密度に含有する血漿などを採取す
る。この血漿などを凍結した保存しておき、必要に応じ
て患者に投与することで、有効な治療を行うことができ
る。例えば、腫瘍を外科的に切除するときなどに予め凍
結しておいた自己のＴＮＦ産生血漿を全身もしくは腫瘍
局所に投与し、腫瘍の増大、移転を阻止することができ
る。[0032] These treatment methods will be described in more detail. First, for the treatment of cancer patients and the like, extracorporeal blood circulation treatment using a column filled with these materials can be performed.
Blood from a cancer patient or the like is led to an extracorporeal circulation system using a blood tube or the like, and is introduced into a column filled with a fibrous or bead-like TNF-inducing material. In the column, endogenous TNF is induced in the blood by contact of the material with the blood. By returning the blood containing high-density endogenous TNF to the body of a cancer patient or the like again, the patient-derived T
NF will be administered. In addition, a patient's blood collected in advance is placed in a blood bag or the like filled with the above-mentioned TNF production inducing material, and TNF production is induced in the blood, and plasma or the like containing a patient-derived endogenous TNF at a high density is collected. I do. An effective treatment can be performed by preserving this plasma or the like frozen and storing it and administering it to a patient as necessary. For example, when a tumor is surgically resected or the like, self-frozen TNF-producing plasma that has been frozen beforehand can be administered systemically or locally to a tumor to prevent the tumor from growing and transferring.

【００３３】また、種々のＴＮＦ産生誘導材料を用いて
患者血液から簡便にＴＮＦを誘導することができ、その
誘導量の程度を測定することにより、患者のＴＮＦ産生
能を検出することができる。つまり、患者自身のもつＴ
ＮＦ産生能を簡便に調べることができる。これは、患者
の病態を反映する有効な免疫学的パラメーターとなり得
る。In addition, TNF can be easily induced from patient blood using various TNF production inducing materials, and the TNF producing ability of the patient can be detected by measuring the amount of the induction. That is, the patient's own T
NF production ability can be easily examined. This can be an effective immunological parameter that reflects the patient's condition.

【００３４】一方、従来の方法によって血液中のＴＮＦ
濃度を測定する場合、標準品として遺伝子組替え型ＴＮ
Ｆが用いられているが、天然型ＴＮＦを高密度に含む血
漿、天然型ＴＮＦ、患者自身由来のＴＮＦなどは、非常
に信頼性の高い標準品となる。従って、種々のＴＮＦ産
生誘導材料と血液との接触によって産生されたＴＮＦ
は、非常に信頼性の高い標準品として用いることがで
き、またこうしたＴＮＦは簡便に得ることができる。On the other hand, TNF in blood is obtained by a conventional method.
When measuring the concentration, use a genetically modified TN
Although F is used, plasma containing natural TNF at a high density, natural TNF, and TNF derived from patients themselves are very reliable standard products. Therefore, TNF produced by contact of various TNF production inducing materials with blood
Can be used as a very reliable standard, and such TNF can be easily obtained.

【００３５】[0035]

【作用】本発明では、水酸基、アミド基、エステル基を
有する高分子材料やカチオン性官能基を有する高分子材
料が血液と接触されるため、後述の実施例に示すよう
に、上記材料の性質によるため、血液中のＴＮＦを産生
する細胞と該材料との相互作用が促進されることによ
り、あるいは上記材料と何らかの因子とが相互作用し、
それによって誘導された別の因子により、ＴＮＦの産生
が効率よく誘導され得る。In the present invention, since a polymer material having a hydroxyl group, an amide group, or an ester group or a polymer material having a cationic functional group is brought into contact with blood, the properties of the material described above will be described as shown in Examples below. Therefore, the interaction between the TNF-producing cells in the blood and the material is promoted, or the material interacts with some factor,
TNF production can be efficiently induced by another factor induced thereby.

【００３６】[0036]

【実施例】以下、本発明の実施例及び比較例を挙げるこ
とにより、本発明を詳細に説明するが、本発明は、以下
の実施例に限定されるものではない。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described in detail by giving Examples and Comparative Examples of the present invention, but the present invention is not limited to the following Examples.

【００３７】（キトサンまたはキトサン誘導体によるＴ
ＮＦの産生誘導）実施例１ キトサンのアミノ基がそのまま残っているキトサンゲル
粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３
（富士紡績社製商品名）を１５ｍｌ用ポリプロピレンチ
ューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で１ｍｌ入れた。
これに注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ添
加して軽く攪拌した。次に、５００ｒｐｍで５分間遠心
し、遠心後、上澄みを吸引して捨てさった。さらに、同
様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ加え
て攪拌し、５００ｒｐｍで５分間遠心し、しかる後上澄
みを吸引して捨てた。この洗浄操作を３回行い、４℃に
て一晩放置した。その後、同じ洗浄操作を５回行い、最
後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。(T by chitosan or chitosan derivative
Induction of NF production) Example 1 Chitosan gel particles Chitosan basic AL-03 in which amino groups of chitosan remain as they are
1 ml of bulk volume (trade name, manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.) was placed in a 15 ml polypropylene tube (manufactured by Iwaki Glass Co., Ltd.).
To this, 12 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added and lightly stirred. Next, the mixture was centrifuged at 500 rpm for 5 minutes, and after centrifugation, the supernatant was aspirated and discarded. Further, similarly, 12 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added, followed by stirring, centrifugation at 500 rpm for 5 minutes, and then the supernatant was aspirated and discarded. This washing operation was performed three times and left at 4 ° C. overnight. Thereafter, the same washing operation was performed five times, and finally, physiological saline was removed as much as possible.

【００３８】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社）に上記のよ
うにして洗浄したキトサンゲル粒子を、かさ体積で５０
０μｌ充填し、実施例１とした。The chitosan gel particles washed as described above were placed in a 2 ml tube (Eppendorf), which was filled with physiological saline for injection and sterilized and washed, in a bulk volume of 50 ml.
0 μl was filled to prepare Example 1.

【００３９】実施例２ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基がアセチル化されたｃｈｉｔｏｐｅａ
ｒｌ ｂａｓｉｃ ＢＬ−０３（富士紡績社製）に変更
したこと以外は実施例１と同様にして、実施例２のキト
サン誘導体充填チューブを得た。 Example 2 Chitopearl basic AL-03 was prepared using chitopea in which the amino group of chitosan was acetylated.
A chitosan derivative-filled tube of Example 2 was obtained in the same manner as in Example 1 except that rl basic BL-03 (manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.) was used.

【００４０】実施例３ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に芳香族アルキル基を介して１級アミ
ンが導入されたＣｈｉｔｏｐｅａｒｌ ＢＣＷ−３５０
３（富士紡績社製）に変更したこと以外は実施例１と同
様にして、実施例３のキトサン誘導体充填チューブを得
た。 Example 3 Chitopearl basic AL-03 was prepared by using Chitopear BCW-350 in which a primary amine was introduced into the amino group of chitosan via an aromatic alkyl group.
3 (manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.), and a chitosan derivative-filled tube of Example 3 was obtained in the same manner as in Example 1.

【００４１】実施例４ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に直鎖アルキル基を介して１級アミン
が導入されたＣｈｉｔｏｐｅａｒｌ ＢＣＷ−３００３
（富士紡績社製）に変更したこと以外は実施例１と同様
にして、実施例４のキトサン誘導体充填チューブを得
た。 Example 4 Chitopearl basic AL-03 was prepared by using Chitopearl BCW-3003 in which a primary amine was introduced into the amino group of chitosan via a linear alkyl group.
A tube filled with a chitosan derivative of Example 4 was obtained in the same manner as in Example 1 except that the tube was changed to (manufactured by Fuji Spinning Co., Ltd.).

【００４２】実施例５ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に３級アミンが導入されたＣｈｉｔｏ
ｐｅａｒｌ ＢＣＷ−２６０３（富士紡績社製）に変更
したこと以外は実施例１と同様にして、実施例５のキト
サン誘導体充填チューブを得た。 Example 5 Chitopearl basic AL-03 was prepared using Chitosan having a tertiary amine introduced into the amino group of chitosan.
A chitosan derivative-filled tube of Example 5 was obtained in the same manner as in Example 1 except that the structure was changed to Pearl BCW-2603 (manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.).

【００４３】実施例６ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンのアミノ基に４級アミンが導入されたＣｈｉｔｏ
ｐｅａｒｌ ＢＣＷ−２５０３（富士紡績社製）に変更
したこと以外は実施例１と同様にして、実施例６のキト
サン誘導体充填チューブを得た。 Example 6 Chitopearl basic AL-03 was prepared using Chitosan having a quaternary amine introduced into the amino group of chitosan.
A chitosan derivative-filled tube of Example 6 was obtained in the same manner as in Example 1 except that the structure was changed to Pearl BCW-2503 (manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.).

【００４４】実施例７ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンの６位の水酸基にカルボキシメチル基が導入され
たＣｈｉｔｏｐｅａｒｌ ＣＭ−０３（富士紡績社製）
に変更したこと以外は実施例１と同様にして、実施例７
のキトサン誘導体充填チューブを得た。 Example 7 Chitopearl basic AL-03 was prepared using Chitopearl CM-03 (manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.) in which a carboxymethyl group was introduced into the 6-position hydroxyl group of chitosan.
Example 7 is the same as Example 1 except that
A chitosan derivative-filled tube was obtained.

【００４５】実施例８ Ｃｈｉｔｏｐｅａｒｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３を、キ
トサンの６位の水酸基にスルホン基が導入されたＣｈｉ
ｔｏｐｅａｒｌ ＳＵ−０３（富士紡績社製）に変更し
たこと以外は実施例１と同様にして、実施例８のキトサ
ン誘導体充填チューブを得た。 Example 8 Chitopearl basic AL-03 was prepared using Chitosan having a sulfone group introduced into the 6-position hydroxyl group of chitosan.
A chitosan derivative-filled tube of Example 8 was obtained in the same manner as in Example 1 except that the type was changed to topear SU-03 (manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.).

【００４６】実施例９ ＣＨＩＴＯＳＡＮ １０Ｂ（ヒゲタ醤油社製商品名）の
粉末５ｇを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）３０ｍｌ
に懸濁し、１５００ｒｐｍで１分間の条件で高速遠心し
た。遠心後、上澄みを吸引して捨て、同様に注射用生理
食塩水（大塚製薬社製）を３０ｍｌ加えて懸濁し、５０
０ｒｐｍで１分間遠心し、次に上澄みを吸引して捨て
た。この洗浄操作を３回行い、４℃にて一晩放置した。
その後、上記と同じ洗浄操作を５回行い、最後にできる
だけ生理食塩水を取り除いた。 Example 9 5 ml of powder of CHITOSAN 10B (trade name, manufactured by Higeta Shoyu Co., Ltd.) was added to 30 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.).
And centrifuged at 1500 rpm for 1 minute at high speed. After centrifugation, the supernatant was aspirated and discarded. Similarly, 30 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added and suspended, and
Centrifuged at 0 rpm for 1 minute, then aspirated and discarded supernatant. This washing operation was performed three times and left at 4 ° C. overnight.
Thereafter, the same washing operation as described above was performed five times, and finally, physiological saline was removed as much as possible.

【００４７】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社）中に、上記
のようにして洗浄したキトサン粉末をかさ体積で５００
μｌ充填し、実施例９とした。In a 2 ml tube (Eppendorf), which was filled with physiological saline for injection and sterilized and washed, put the chitosan powder washed as described above in a bulk volume of 500 ml.
Filling was performed in the same manner as in Example 9.

【００４８】実施例１〜９で得た各チューブに、ヘパリ
ン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に
取り付けて、３７℃で２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒
混和した。To each of the tubes obtained in Examples 1 to 9, 1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added, attached to a rotating disk, and mixed by inversion at 37 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【００４９】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。The mixed blood was centrifuged to collect the plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured using a TNF monoclonal antibody by the immunoenzyme antibody method (Quantitative Quantum Analyzer manufactured by R & D System).
ikineTNF-α). Note that the detection limit concentration in this measurement method was 25 pg / ml.

【００５０】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表１に示す。The blood immediately after blood collection was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured in the same manner. Table 1 shows the results.

【００５１】[0051]

【表１】 [Table 1]

【００５２】（アガロース及びアガロース誘導体による
ＴＮＦの産生誘導）実施例１０ アガロース（ナカライ化学社製、 電気泳動用特製試薬
ＧＰ−３６）を５重量％濃度で蒸留水に溶解させ、１
２１℃で２０分間オートクレープを行った。この溶液を
６０℃に保温しておき、冷蒸留水（４℃）中にマイクロ
シリンジを用いて滴下して、アガロースゲルビーズ（粒
径５ｍｍ）を作製した。(Induction of TNF Production by Agarose and Agarose Derivative) Example 10 Agarose (Nacalai Chemical Co., special reagent for electrophoresis GP-36) was dissolved in distilled water at a concentration of 5% by weight, and
Autoclave was performed at 21 ° C. for 20 minutes. This solution was kept at 60 ° C., and dropped into cold distilled water (4 ° C.) using a microsyringe to prepare agarose gel beads (particle diameter: 5 mm).

【００５３】このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用チューブ（eppendorf 社) に充填した。充填量は
アガロースゲルビーズ２０個とした。The beads were washed with saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.), and then washed with saline for injection.
The tube was filled into a tube for ml (eppendorf). The filling amount was 20 agarose gel beads.

【００５４】実施例１１ 約２重量％濃度のアガロースよりなる、 Sepharose 2B
(Pharmacia LKB Biotechnolgy社) の懸濁液３ｍｌを、
１５ｍｌ用ポリプロピレンチューブ（岩城硝子社製）に
入れた。これを１０００ｒｐｍで５分間遠心して、上澄
みを吸引して捨て、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）
を１２ｍｌ加えて攪拌し、同じ条件で遠心し、上澄みを
吸引して捨てた。この洗浄操作を３回行い、４℃にて一
晩放置した。 Example 11 Sepharose 2B consisting of agarose at a concentration of about 2% by weight
(Pharmacia LKB Biotechnolgy) 3 ml
It was placed in a 15 ml polypropylene tube (manufactured by Iwaki Glass). This is centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes, the supernatant is aspirated and discarded, and physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.)
Was added and stirred, centrifuged under the same conditions, and the supernatant was aspirated and discarded. This washing operation was performed three times and left at 4 ° C. overnight.

【００５５】このゲル担体５００μｌ（かさ体積）を実
施例１と同様に、２ｍ１用ポリプロピレンチューブ (ep
pendorf 社) に入れて、注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）にて洗浄した。In the same manner as in Example 1, 500 μl (bulk volume) of this gel carrier was used for a 2 ml polypropylene tube (ep
pendorf) and washed with saline for injection (Otsuka Pharmaceutical).

【００５６】実施例１２ 約６重量％濃度の架橋型アガロースよりなる、Sepharos
e CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnolgy 社）を用いたこ
と以外は、実施例１１と同様にしてビーズを作製した。 Example 12 Sepharos consisting of cross-linked agarose at a concentration of about 6% by weight
eBeads were produced in the same manner as in Example 11, except that CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnolgy) was used.

【００５７】実施例１３ 約６重量％濃度の架橋型アガロースにジエチルアミノエ
チル（ＤＥＡＥ）基をエーテル結合で導入した、DEAE S
epharose CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnolgy社）を用
いたこと以外は、実施例１１と同様にして、ビーズを作
製した。 Example 13 DEAE S in which a diethylaminoethyl (DEAE) group was introduced into a crosslinked agarose having a concentration of about 6% by weight through an ether bond.
Beads were produced in the same manner as in Example 11, except that epharose CL-6B (Pharmacia LKB Biotechnolgy) was used.

【００５８】実施例１４ 約４重量％濃度の架橋型アガロースにエーテル結合を介
してフェニル基を導入した、Phenyl Sepharose CL-4B(P
harmacia LKB Biotechnolgy 社）を用いたこと以外は、
実施例１１と同様にしてビーズを得た。 Example 14 Phenyl Sepharose CL-4B (P) was prepared by introducing a phenyl group into an approximately 4% by weight crosslinked agarose via an ether bond.
harmacia LKB Biotechnolgy)
Beads were obtained in the same manner as in Example 11.

【００５９】実施例１５ 約６重量％濃度の架橋型アガロースに４級アミンを導入
した、Q Sepharose FF(Pharmacia LKB Biotechnology
社）を用いたこと以外は、実施例１１と同様にしてビー
ズを得た。 Example 15 Q Sepharose FF (Pharmacia LKB Biotechnology) was prepared by introducing a quaternary amine into a cross-linked agarose having a concentration of about 6% by weight.
Except for using the above method, beads were obtained in the same manner as in Example 11.

【００６０】実施例１０〜１５の各ビーズを充填したチ
ューブにヘパリン採血した健常人鮮血１．６ｍｌを加え
て回転円盤に取り付けて、３７℃で２時間、回転数２６
ｒｐｍで転倒混和した。To a tube filled with each of the beads of Examples 10 to 15, 1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added and attached to a rotating disk.
Invert and mix at rpm.

【００６１】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。The blood after mixing was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured using a TNF monoclonal antibody by an immunoenzymatic antibody method (Quantitative filter manufactured by R & D System).
ikineTNF-α). Note that the detection limit concentration in this measurement method was 25 pg / ml.

【００６２】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表２に示す。Further, the blood immediately after blood collection was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured in the same manner. Table 2 shows the results.

【００６３】[0063]

【表２】 [Table 2]

【００６４】（アルギン酸ゲルによるＴＮＦの産生誘
導）実施例１６ ２重量％のアルギン酸ナトリウム（ＡＬ−１、中粘度タ
イプ、新田ゼラチン社製）を生理食塩水に懸濁して、オ
ートクレーブにより１２１℃、２０分で処理すること
で、加熱滅菌と同時にアルギン酸ナトリウムを溶解させ
た。これを滅菌済み１．５重量％塩化カルシウム溶液中
へ滴下してゲル化させることにより、粒径約２．５ｍｍ
のアルギン酸カルシウムのゲルビーズを作製した。この
ゲルビーズを１５ｍｌ用ポリピロプレンチューブ（岩城
硝子社製）に、かさ体積で１ｍｌ入れた。これに注射用
生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ添加して軽く攪
拌した。５００ｒｐｍで１分間遠心し、上澄みを吸引し
て捨て、同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１
２ｍｌ加えて攪拌し、遠心して上澄みを吸引して捨て
た。この洗浄操作を３回行い、一晩４℃にて放置した。
その後、同じ洗浄操作を５回行い、最後にできるだけ生
理食塩水を取り除いた。(Induction of TNF Production by Alginate Gel) Example 16 2% by weight of sodium alginate (AL-1, medium viscosity type, manufactured by Nitta Gelatin Co., Ltd.) was suspended in physiological saline, and autoclaved at 121 ° C. By treating for 20 minutes, sodium alginate was dissolved at the same time as heat sterilization. This is dropped into a sterilized 1.5% by weight calcium chloride solution to cause gelation, whereby a particle size of about 2.5 mm
Gel beads of calcium alginate were prepared. The gel beads were put into a 15-ml polypyroprene tube (manufactured by Iwaki Glass Co., Ltd.) in a volume of 1 ml. To this, 12 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added and lightly stirred. The mixture was centrifuged at 500 rpm for 1 minute, the supernatant was aspirated and discarded. Similarly, physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added for 1 minute.
2 ml was added and the mixture was stirred, centrifuged, and the supernatant was aspirated and discarded. This washing operation was performed three times and left at 4 ° C. overnight.
Thereafter, the same washing operation was performed five times, and finally, physiological saline was removed as much as possible.

【００６５】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Eppendorf 社製）にこのゲルビーズ
を７０個充填した。70 gel beads were filled in a 2 ml tube (manufactured by Eppendorf) which was filled with physiological saline for injection and sterilized and washed.

【００６６】実施例１７ ２重量％のアルギン酸ナトリウムを５重量％の濃度のも
のに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。 Example 17 A bead-filled tube was obtained in the same manner as in Example 16, except that 2% by weight of sodium alginate was changed to a concentration of 5% by weight.

【００６７】実施例１８ ２重量％のアルギン酸ナトリウムを１０重量％の濃度の
ものに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。 Example 18 A bead-filled tube was obtained in the same manner as in Example 16, except that 2% by weight of sodium alginate was changed to a concentration of 10% by weight.

【００６８】実施例１９ １．５重量％の塩化カルシウム溶液を３重量％の濃度の
ものに変更した以外はすべて実施例１６と同様に操作し
て、ビーズ充填チューブを得た。 Example 19 A bead-filled tube was obtained in the same manner as in Example 16, except that the 1.5% by weight calcium chloride solution was changed to a concentration of 3% by weight.

【００６９】実施例２０ １．５重量％の塩化カルシウム溶液を１．５重量％の塩
化バリウム溶液に変更した以外はすべて実施例１６と同
様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。 Example 20 A bead-filled tube was obtained in the same manner as in Example 16 except that the 1.5% by weight calcium chloride solution was changed to a 1.5% by weight barium chloride solution.

【００７０】実施例２１ １．５重量％の塩化カルシウム溶液を１．５重量％の塩
化バリウム溶液に変更し、５重量％のアルギン酸ナトリ
ウムを３重量％の濃度のものに変更した以外はすべて実
施例１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得
た。 Example 21 All procedures were carried out except that the 1.5% by weight calcium chloride solution was changed to a 1.5% by weight barium chloride solution and the 5% by weight sodium alginate was changed to a concentration of 3% by weight. By operating in the same manner as in Example 16, a bead-filled tube was obtained.

【００７１】実施例２２ アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（100 〜
150cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。 Example 22 Sodium alginate was replaced with sodium alginate (100 to
Except for changing to 150 cps (manufactured by Wako Pure Chemical Industries), the same operation as in Example 16 was performed to obtain a bead-filled tube.

【００７２】実施例２３ アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（300 〜
400cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。 Example 23 Sodium alginate was replaced with sodium alginate (300 to
Except for changing to 400 cps, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., the same procedure as in Example 16 was performed to obtain a bead-filled tube.

【００７３】実施例２４ アルギン酸ナトリウムをアルギン酸ナトリウム（500 〜
600cps、和光純薬社製）に変更した以外はすべて実施例
１６と同様に操作して、ビーズ充填チューブを得た。 Example 24 Sodium alginate was replaced with sodium alginate (500 to
Except for changing to 600 cps (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), the same procedure as in Example 16 was performed to obtain a bead-filled tube.

【００７４】実施例１６〜２４の各ビーズを充填したチ
ューブにヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加
えて回転円盤に取り付けて、３７℃で２時間、回転数２
６ｒｐｍで転倒混和した。To a tube filled with each of the beads of Examples 16 to 24, 1.6 ml of heparin-collected fresh blood from a healthy person was added, and the mixture was mounted on a rotating disk.
Invert and mix at 6 rpm.

【００７５】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。The blood after mixing was centrifuged to collect plasma, and the concentration of TNF in the plasma was determined by the immunoenzymatic antibody method (Quantitative analysis by R & D System) using a TNF monoclonal antibody.
ikineTNF-α). Note that the detection limit concentration in this measurement method was 25 pg / ml.

【００７６】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表３に示す。The blood immediately after blood collection was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured in the same manner. Table 3 shows the results.

【００７７】[0077]

【表３】 [Table 3]

【００７８】（ポリビニルアルコールゲルによるＴＮＦ
の産生誘導）実施例２５ 重合度；約１４００、けん化度；９９ｍｏｌ％のポリビ
ニルアルコールゲル（キシダ化学社製）の１０重量％水
溶液を調製した。この水溶液は、Ｒ＝［ポリビニルアル
コールモノマー単位］／［金属イオン］と定義された、
Ｒ＝１０となるようにＦｅ3+を含んでいる。この粘ちょ
う溶液を、滅菌済み１ＭのＮａＯＨ水溶液中にシリンジ
を用いて滴下し、約３０分放置した。これによって、粒
径約２．５ｍｍのポリビニルアルコールゲルビーズを調
製した。［横井弘：ＰＶＡおよびＰＡＡの錯体ゲル、高
分子加工，Ｖｏｌ．４０，Ｎｏ．１１，９９１］。(TNF by polyvinyl alcohol gel)
Example 25 A 25 % by weight aqueous solution of a polyvinyl alcohol gel (manufactured by Kishida Chemical Co., Ltd.) having a degree of polymerization of about 1400 and a degree of saponification of 99 mol% was prepared. This aqueous solution was defined as R = [polyvinyl alcohol monomer unit] / [metal ion],
Fe 3+ is included so that R = 10. This viscous solution was dropped into a sterilized 1 M NaOH aqueous solution using a syringe, and allowed to stand for about 30 minutes. Thus, polyvinyl alcohol gel beads having a particle size of about 2.5 mm were prepared. [Hiroshi Yokoi: Complex Gel of PVA and PAA, Polymer Processing, Vol. 40, no. 11,991].

【００７９】上記ゲルビーズを１５ｍｌ用ポリプロピレ
ンチューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で１ｍｌ入れ
た。これに注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を１２ｍ
ｌ添加し、軽く攪拌した。次に、５００ｒｐｍで１分間
遠心し、上澄みを吸引して捨て、同様に注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を１２ｍｌ加えて攪拌し、上記と同
条件で遠心し、上澄みを吸引して捨てた。この洗浄操作
を３回行い、４℃にて一晩放置した。その後、同じ洗浄
操作を５回行い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除
いた。The above gel beads were placed in a 15 ml polypropylene tube (manufactured by Iwaki Glass Co., Ltd.) in a volume of 1 ml. 12m of saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.)
1 and stirred gently. Next, the mixture was centrifuged at 500 rpm for 1 minute, the supernatant was aspirated and discarded. Similarly, 12 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added thereto, followed by stirring, centrifugation under the same conditions as above, and aspiration of the supernatant. Threw away. This washing operation was performed three times and left at 4 ° C. overnight. Thereafter, the same washing operation was performed five times, and finally, physiological saline was removed as much as possible.

【００８０】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に、得ら
れたゲルビーズを７０個充填した。A 2 ml tube (manufactured by Eppendorf) filled with physiological saline for injection and sterilized and washed was filled with 70 gel beads obtained.

【００８１】実施例２６ 用いたポリビニルアルコールを重度；約２０００、けん
化度；９８．５〜９９．４ｍｏｌ％のポリビニルアルコ
ール（キシダ化学社製）に変更したこと以外はすべて実
施例２５と同様にして、実施例２６のポリビニルアルコ
ールゲル充填チューブを得た。 Example 26 The same procedure as in Example 25 was carried out except that the polyvinyl alcohol used was changed to heavy alcohol of about 2000 and saponification degree of 98.5 to 99.4 mol% of polyvinyl alcohol (manufactured by Kishida Chemical Co., Ltd.). Thus, a polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 26 was obtained.

【００８２】実施例２７ 用いたポリビニルアルコールの濃度を１５重量％に変更
したこと以外はすべて実施例２５と同様にして、実施例
２７のポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。[0082] In the same manner as all except for changing the concentration of the polyvinyl alcohol used in Example 27 to 15% by weight Example 25, to obtain a polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 27.

【００８３】実施例２８ 用いたポリビニルアルコールの濃度を１５重量％に変更
したこと以外はすべて実施例２６と同様にして、実施例
２８のポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。[0083] In the same manner as in Example 26 except for changing the concentration of the polyvinyl alcohol used in Example 28 to 15 wt%, to obtain a polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 28.

【００８４】実施例２９ 用いた金属イオン量をＲ＝２０となるように変更したこ
と以外はすべて実施例２５と同様にして、実施例２９の
ポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。[0084] The quantity of metal ions used in Example 29 in the same manner as in Example 25 except for changing such that R = 20, to obtain a polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 29.

【００８５】実施例３０ 用いた金属イオン量をＲ＝２０となるように変更したこ
と以外はすべて実施例２６と同様にして、実施例３０の
ポリビニルアルコールゲル充填チューブを得た。[0085] The quantity of metal ions used in Example 30 in the same manner as in Example 26 except for changing such that R = 20, to obtain a polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 30.

【００８６】実施例３１ 用いた金属イオン量をＣｕ2+に変更したこと以外はすべ
て実施例２５と同様にして、実施例３１のポリビニルア
ルコールゲル充填チューブを得た。[0086] In the same manner as all except that the quantity of metal ions used in Example 31 was changed to Cu 2+ Example 25, to obtain a polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 31.

【００８７】実施例３２ 用いた金属イオン量をＣｕ2+に変更したこと以外はすべ
て実施例２６と同様にして、実施例３２のポリビニルア
ルコールゲル充填チューブを得た。[0087] In the same manner as in Example 26 except that the quantity of metal ions used in Example 32 was changed to Cu 2+, was obtained polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 32.

【００８８】実施例３３ 光架橋性ポリビニルアルコール（重合度；１７００、け
ん化度；８８ｍｏｌ％及びスチリルピリジニウム置換基
の割合；１．３％）を、５重量％となるように注射用生
理食塩水に加え、オートクレーブにより１２１℃、２０
分で処理することで加熱滅菌と同時に光架橋性ポリビニ
ルアルコールを溶解させ、光架橋性ポリビニルアルコー
ル溶液を得た。 Example 33 Photocrosslinkable polyvinyl alcohol (degree of polymerization: 1700, degree of saponification: 88 mol%, ratio of styrylpyridinium substituent; 1.3%) was added to physiological saline for injection so as to be 5% by weight. In addition, 121 ° C, 20
By dissolving the photocrosslinkable polyvinyl alcohol at the same time as heat sterilization by treating in a minute, a photocrosslinkable polyvinyl alcohol solution was obtained.

【００８９】得られた溶液を流動パラフィン中に加えて
充分に攪拌し、溶液を懸濁させた。この後に３００Ｗの
ハロゲンランプを装着したスライドプロジェクターを用
いて、３０分間攪拌しながら光を照射することにより、
光架橋性ポリビニルアルコールをゲル化し、粒径２．５
ｍｍのゲルビーズを作製した。このゲルビーズを注射用
生理食塩水を用いて充分に洗浄し、付着していた流動パ
ラフィンを除いた。The obtained solution was added to liquid paraffin and stirred well to suspend the solution. Thereafter, by using a slide projector equipped with a halogen lamp of 300 W, light is emitted while stirring for 30 minutes.
Gelled photocrosslinkable polyvinyl alcohol, particle size 2.5
mm gel beads were prepared. The gel beads were sufficiently washed with physiological saline for injection to remove attached liquid paraffin.

【００９０】上記ゲルビーズ作製法以外は実施例２５と
同様にして、実施例３３のポリビニルアルコールゲル充
填チューブを得た。A polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 33 was obtained in the same manner as in Example 25 except for the above gel bead preparation method.

【００９１】実施例３４ 用いた光架橋性ポリビニルアルコール濃度を１０重量％
に変更したこと以外はすべて実施例３３と同様にして、
実施例３４のポリビニルアルコールゲル充填チューブを
得た。 Example 34 The concentration of the photocrosslinkable polyvinyl alcohol used was 10% by weight.
Except that it was changed to the same as in Example 33,
A polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 34 was obtained.

【００９２】実施例３５ 用いた光架橋性ポリビニルアルコール濃度を１５重量％
に変更したこと以外はすべて実施例３３と同様にして、
実施例３５のポリビニルアルコールゲル充填チューブを
得た。 Example 35 The concentration of the photocrosslinkable polyvinyl alcohol used was 15% by weight.
Except that it was changed to the same as in Example 33,
A polyvinyl alcohol gel-filled tube of Example 35 was obtained.

【００９３】実施例２５〜３５で得た各チューブに、ヘ
パリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円
盤に取り付けて、３７℃で２時間、回転数２６ｒｐｍで
転倒混和した。To each of the tubes obtained in Examples 25 to 35, 1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added, attached to a rotating disk, and mixed by inversion at 37 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【００９４】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をＴＮＦモノクローナル抗体
を用いて、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ System 社製 Quant
ikineTNF-α) にて測定した。なお、この測定方法の検
出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。また、採血直後
の血液を遠心分離して血漿を採取して、血漿中のＴＮＦ
の濃度を同様にして測定した。The mixed blood was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured using a TNF monoclonal antibody by an immunoenzymatic antibody method (Quant &
ikineTNF-α). Note that the detection limit concentration in this measurement method was 25 pg / ml. In addition, blood immediately after blood collection is centrifuged to collect plasma, and TNF in plasma is collected.
Was measured in the same manner.

【００９５】結果を表４に示す。Table 4 shows the results.

【００９６】[0096]

【表４】 [Table 4]

【００９７】（ポリスチレン修飾体によるＴＮＦの産生
誘導）実施例３６ ４級アンモニウム基であるトリメチルアンモニウム基を
もつ、スチレン・ジビニルベンゼン共重合体である、Ｄ
ｉａｉｏｎ ＳＡ１１Ａ（三菱化成社製）を５０ｍｌポ
リプロピレンチューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で
３ｍｌ入れた。これにメタノール（和光純薬社製 液体
クロマトグラム用グレード）４０ｍｌを添加して、軽く
攪拌した。静置後、上清を吸引して除去した。これを３
回行った後、同様にメタノール４０ｍｌを添加して、室
温にて一晩静置した。(Induction of TNF Production by Modified Polystyrene) Example 36 A styrene / divinylbenzene copolymer having a quaternary ammonium group, a trimethylammonium group,
3 ml of iaion SA11A (manufactured by Mitsubishi Kasei Corporation) was placed in a 50 ml polypropylene tube (manufactured by Iwaki Glass Co., Ltd.) in bulk volume. To this was added 40 ml of methanol (grade for liquid chromatogram, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and the mixture was gently stirred. After standing, the supernatant was removed by suction. This is 3
After performing the reaction twice, 40 ml of methanol was similarly added, and the mixture was allowed to stand at room temperature overnight.

【００９８】次に、メタノールを吸引して除き、同様に
メタノールを用いて２回洗浄した。これに、滅菌済み蒸
留水を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。５００ｒｐｍで
１分間遠心し、上済みを吸引して除き、同様に滅菌済み
蒸留水を用いて３回洗浄した。その後、滅菌済み蒸留水
４０ｍｌを加えて、室温にて３時間静置した。Next, methanol was removed by suction, and washing was performed twice using methanol in the same manner. To this, 40 ml of sterilized distilled water was added and lightly stirred. The mixture was centrifuged at 500 rpm for 1 minute, the supernatant was removed by suction, and the well was washed three times with sterilized distilled water. Thereafter, 40 ml of sterilized distilled water was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 3 hours.

【００９９】次に、同じ洗浄操作を３回行い、最後にで
きるだけ蒸留水を取り除いた。これに、注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。
５００ｒｐｍで１分間遠心し、上済みを吸引して除き、
同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて３回洗浄
を行い、最後に注射用生理食塩水４０ｍｌを加えて、一
晩室温にて静置した。その後、同じ洗浄操作を５回行
い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。Next, the same washing operation was performed three times, and finally distilled water was removed as much as possible. To this, 40 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added and lightly stirred.
Centrifuge at 500 rpm for 1 minute, aspirate and remove
Similarly, washing was performed three times with physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.). Finally, 40 ml of physiological saline for injection was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature overnight. Thereafter, the same washing operation was performed five times, and finally, physiological saline was removed as much as possible.

【０１００】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に、この
ポリスチレン粒子をかさ体積で５００μｌ充填した。A 2 ml tube (manufactured by Eppendorf) filled with physiological saline for injection and sterilized and washed was filled with 500 μl of the polystyrene particles in a bulk volume.

【０１０１】実施例３７ 用いたポリスチレン粒子を、４級アミモニウム基である
ジメチルエタノールアンモニウム基をもつ、Ｄｉａｉｏ
ｎ ＳＡ２１Ａ（三菱化成社製）に変更した以外はすべ
て実施例３６と同様にして行った。 Example 37 The polystyrene particles used were prepared using a Diaio having a dimethylethanolammonium group as a quaternary ammonium group.
The procedure was the same as in Example 36, except that n SA21A (manufactured by Mitsubishi Kasei) was used.

【０１０２】実施例３８ 用いたポリスチレン粒子を、１、２級アミノ基〔−ＣＨ
2 ＮＨ（ＣＨ2 ＣＨ2ＮＨ）n Ｈ（ｎ＝１〜３）〕をも
つ、Ｄｉａｉｏｎ ＷＡ２１（三菱化成社製）に変更し
た以外はすべて実施例３６と同様にして行った。 Example 38 The polystyrene particles used were converted to primary and secondary amino groups [—CH
All were carried out in the same manner as in Example 36 except that Diaion WA21 (manufactured by Mitsubishi Kasei) having 2 NH (CH 2 CH 2 NH) n H (n = 1 to 3)] was used.

【０１０３】実施例３９ 用いたポリスチレン粒子を、３級アミノ基〔−（Ｃ
Ｈ2 ）n Ｎ（ＣＨ3 ）2 （ｎ＝１〜３）〕をもつ、Ｄｉ
ａｉｏｎ ＷＡ３０（三菱化成社製）に変更した以外は
すべて実施例３６と同様にして行った。 Example 39 The polystyrene particles used were changed to tertiary amino groups [-(C
H 2 ) n N (CH 3 ) 2 (n = 1 to 3)]
All procedures were performed in the same manner as in Example 36, except that aion WA30 (manufactured by Mitsubishi Kasei) was changed.

【０１０４】比較例１ 用いたポリスチレン粒子を、未修飾のポリスチレン粒子
であるテクポリマー：ＳＢ−１００Ｓ（積水化成品工業
社製）に変更した以外はすべて実施例３６と同様にして
行った。 Comparative Example 1 The same procedure as in Example 36 was carried out except that the polystyrene particles used were changed to unmodified polystyrene particles, a techpolymer SB-100S (manufactured by Sekisui Plastics Co., Ltd.).

【０１０５】比較例２ 用いたポリスチレン粒子をスルホン酸基をもつスチレン
・ジビニルベンゼン共重合体である、Ｄｉａｉｏｎ Ｓ
Ｋ１Ｂ（三菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例
３６と同様にして行った。 Comparative Example 2 The polystyrene particles used were Diaion S, a styrene-divinylbenzene copolymer having a sulfonic acid group.
The procedure was performed in the same manner as in Example 36 except that K1B (manufactured by Mitsubishi Kasei Corporation) was changed.

【０１０６】実施例３６〜３９、比較例１，２のチュー
ブにヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて
回転円盤に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６
ｒｐｍで転倒混和した。1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added to the tubes of Examples 36 to 39 and Comparative Examples 1 and 2, which were mounted on a rotating disk.
Invert and mix at rpm.

【０１０７】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。The mixed blood was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured using a monoclonal antibody by the immunoenzyme antibody method (Qu & R manufactured by R & D System).
(antikine TNF-α). The detection limit concentration of this measurement method was 25 pg / ml.

【０１０８】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表５に示す。The blood immediately after blood collection was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured in the same manner. Table 5 shows the results.

【０１０９】[0109]

【表５】 [Table 5]

【０１１０】（ポリメタクリル酸エステル誘導体による
ＴＮＦの産生誘導）実施例４０ ジメチルエタノールアミンで修飾されている、ポリメタ
クリル酸エステル系材料である、ＳＥＰＡＢＥＡＤＳ
ＦＰ−ＱＡ１３（三菱化成社製）を５０ｍｌ用ポリプロ
ピレンチューブ（岩城硝子社製）に、かさ体積で３ｍｌ
入れた。これにメタノール（和光純薬社製 液体クロマ
トグラム用グレード）４０ｍｌを添加して、軽く攪拌し
た。静置後、上清を吸引して除去した。これを３回行っ
た後、同様にメタノール４０ｍｌを添加して、室温にて
一晩静置した。(Induction of Production of TNF by Polymethacrylate Derivative) Example 40 SEPABEADS, a polymethacrylate-based material modified with dimethylethanolamine
FP-QA13 (manufactured by Mitsubishi Kasei) into a 50 ml polypropylene tube (manufactured by Iwaki Glass Co., Ltd.) in a volume of 3 ml
I put it. To this was added 40 ml of methanol (grade for liquid chromatogram, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and the mixture was gently stirred. After standing, the supernatant was removed by suction. After this was performed three times, 40 ml of methanol was similarly added, and the mixture was allowed to stand at room temperature overnight.

【０１１１】その後、メタノールを吸引して除き、同様
にメタノールを用いて２回洗浄した。これに、滅菌済み
蒸留水を４０ｍｌ添加して軽く攪拌した。５００ｒｐｍ
で１分間遠心し、上澄みを吸引して除き、同様に滅菌済
み蒸留水を用いて３回洗浄した。その後、滅菌済み蒸留
水４０ｍｌを加えて、室温にて３時間静置した。Thereafter, methanol was removed by suction, and washing was performed twice using methanol in the same manner. To this, 40 ml of sterilized distilled water was added and lightly stirred. 500 rpm
, And the supernatant was removed by suction, followed by washing three times with sterilized distilled water. Thereafter, 40 ml of sterilized distilled water was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 3 hours.

【０１１２】次に、同じ洗浄操作を３回行い、最後にで
きるだけ蒸留水を取り除いた。これに、注射用生理食塩
水（大塚製薬社製）を４０ｍｌ添加した軽く攪拌した。
５００ｒｐｍで１分間遠心し、上澄みを吸引して除き、
同様に注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて３回洗浄
を行い、最後に注射用生理食塩水４０ｍｌを加えて、一
晩室温にて静置した。しかる後、同じ洗浄装置を５回行
い、最後にできるだけ生理食塩水を取り除いた。Next, the same washing operation was performed three times, and finally distilled water was removed as much as possible. To this, 40 ml of physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added, followed by gentle stirring.
Centrifuge at 500 rpm for 1 minute, remove the supernatant by suction,
Similarly, washing was performed three times with physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.). Finally, 40 ml of physiological saline for injection was added, and the mixture was allowed to stand at room temperature overnight. Thereafter, the same washing apparatus was performed five times, and finally, physiological saline was removed as much as possible.

【０１１３】注射用生理食塩水を充填して滅菌洗浄した
２ｍｌ用チューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ社製）に、この
ポリメタクリル酸エステル系材料の粒子をかさ体積で５
００μｌ充填した。In a 2 ml tube (manufactured by Eppendorf) filled with physiological saline for injection and sterilized and washed, the particles of the polymethacrylic acid ester-based material were added in a bulk volume of 5 ml.
Filled with 00 μl.

【０１１４】実施例４１ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、ジエチルア
ミノ基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−ＤＡ１３（三
菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０と同様
にして行った。 Example 41 The same procedure as in Example 40 was carried out except that the polymethacrylate-based material used was changed to SEPABEADS FP-DA13 (manufactured by Mitsubishi Kasei) having a diethylamino group.

【０１１５】実施例４２ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、末端に１級
アミノ基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−ＨＡ１３
（三菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０と
同様にして行った。 Example 42 The polymethacrylate-based material used was changed to SEPABEADS FP-HA13 having a primary amino group at a terminal.
(Mitsubishi Kasei Co., Ltd.) except that the procedure was the same as in Example 40.

【０１１６】実施例４３ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、水酸基をも
つＳＥＰＡＢＥＡＤＳＦＰ−ＨＧ１３（三菱化成社製）
に変更した以外はすべて実施例４０と同様にして行っ
た。 Example 43 The polymethacrylic ester-based material used was changed to SEPABEADSFP-HG13 having a hydroxyl group (manufactured by Mitsubishi Kasei Corporation).
The procedure was performed in the same manner as in Example 40 except for changing to.

【０１１７】実施例４４ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、疎水性基
〔−ＯＣ6 Ｈ5 ）をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−１
３（三菱化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０
と同様にして行った。 Example 44 The polymethacrylic ester-based material used was changed to SEPABEADS FP-1 having a hydrophobic group [—OC 6 H 5 ).
Example 40 except for changing to No. 3 (manufactured by Mitsubishi Kasei)
Was performed in the same manner as described above.

【０１１８】比較例３ 用いたポリメタクリル酸エステル系材料を、カルボキシ
ル基をもつＳＥＰＡＢＥＡＤＳ ＦＰ−ＣＭ１３（三菱
化成社製）に変更した以外はすべて実施例４０と同様に
して行った。 Comparative Example 3 The procedure was the same as in Example 40 except that the polymethacrylic acid ester-based material used was changed to SEPABEADS FP-CM13 (manufactured by Mitsubishi Kasei) having a carboxyl group.

【０１１９】実施例４０〜４４、比較例３の各チューブ
にヘパリン採血した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回
転円盤に取り付けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒ
ｐｍで転倒混和した。To each tube of Examples 40 to 44 and Comparative Example 3, 1.6 ml of heparin-collected fresh blood from a healthy person was added and attached to a rotating disk, and the rotation speed was 26 r at 37 ° C. for 2 hours.
Mix by inversion at pm.

【０１２０】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。The mixed blood was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured using a monoclonal antibody by the immunoenzymatic antibody method (Quand manufactured by R & D System).
(antikine TNF-α). The detection limit concentration of this measurement method was 25 pg / ml.

【０１２１】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表６に示す。The blood immediately after blood collection was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured in the same manner. Table 6 shows the results.

【０１２２】[0122]

【表６】 [Table 6]

【０１２３】（疎水性材料によるＴＮＦの産生誘導）比較例４ 注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄した２ｍｌ用
チューブ（eppendorf社製）。(Induction of TNF Production by Hydrophobic Material) Comparative Example 4 A 2 ml tube (manufactured by Eppendorf) washed with physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.).

【０１２４】比較例５ ポリエチレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥し
た。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ
ｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量は
ビーズ７０個とした。 Comparative Example 5 Polyethylene beads (2.5 mm in diameter) were produced by injection molding. The beads were washed with methanol and dried. Next, the beads were washed with saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.), and then washed with physiological saline for injection.
1 tube (manufactured by Eppendorf). The filling amount was 70 beads.

【０１２５】比較例６ ポリスチレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形に
より作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥し
た。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社
製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍ
ｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量は
ビーズ７０個とした。 Comparative Example 6 Polystyrene beads (particle diameter: 2.5 mm) were produced by injection molding. The beads were washed with methanol and dried. Next, the beads were washed with physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.), and then washed with physiological saline for injection in a volume of 2 m.
1 tube (manufactured by Eppendorf). The filling amount was 70 beads.

【０１２６】比較例７ ポリ塩化ビニルのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形
により作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥
した。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量
はビーズ７０個とした。 Comparative Example 7 Polyvinyl chloride beads (particle diameter: 2.5 mm) were produced by injection molding. The beads were washed with methanol and dried. Next, the beads were washed with saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.), and then washed with saline for injection.
The tube was filled in a ml tube (manufactured by Eppendorf). The filling amount was 70 beads.

【０１２７】比較例８ ポリプロピレンのビーズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形
により作製した。このビーズをメタノールで洗浄後乾燥
した。次に、このビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬
社製）で洗浄後、同じく注射用生理食塩水で洗浄した２
ｍｌ用チューブ（eppendorf 社製）に充填した。充填量
はビーズ７０個とした。 Comparative Example 8 Polypropylene beads (particle diameter: 2.5 mm) were produced by injection molding. The beads were washed with methanol and dried. Next, the beads were washed with saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.), and then washed with saline for injection.
The tube was filled in a ml tube (manufactured by Eppendorf). The filling amount was 70 beads.

【０１２８】比較例９ ポリテトラフルオロエチレンプロピレン共重合体のビー
ズ（粒径２．５ｍｍ）を射出成形により作製した。次に
このビーズをメタノールで洗浄後乾燥した。次に、この
ビーズを注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄後、
同じく注射用生理食塩水で洗浄した２ｍｌ用チューブ
（eppendorf 社製）に充填した。充填量はビーズ７０個
とした。 Comparative Example 9 Polytetrafluoroethylene propylene copolymer beads (2.5 mm in diameter) were produced by injection molding. Next, the beads were washed with methanol and dried. Next, after washing the beads with physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.),
It was filled in a 2 ml tube (manufactured by Eppendorf), which was also washed with physiological saline for injection. The filling amount was 70 beads.

【０１２９】比較例４〜９の各チューブにヘパリン採血
した健常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付
けて、３７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和
した。To each of the tubes of Comparative Examples 4 to 9, 1.6 ml of heparin-collected fresh blood from a healthy individual was added, attached to a rotating disk, and mixed by inversion at 37 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【０１３０】混和後の血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。[0130] The mixed blood was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was determined using a monoclonal antibody by an immunoenzymatic antibody method (Qu & R manufactured by R & D System).
(antikine TNF-α). The detection limit concentration of this measurement method was 25 pg / ml.

【０１３１】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表７に示す。In addition, the blood immediately after blood collection was centrifuged to collect plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured in the same manner. Table 7 shows the results.

【０１３２】[0132]

【表７】 [Table 7]

【０１３３】（接触温度のＴＮＦの産生誘導に及ぼす影
響）実施例４５ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
１５℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。(Effect of Contact Temperature on Induction of TNF Production) Example 45 Chitosan gel particles Chitopear as in Example 1
1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added to a polypropylene tube filled with l basic AL-03 (trade name, manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.), and attached to a rotating disk.
The mixture was inverted by mixing at 15 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【０１３４】実施例４６ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
２５℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。 Example 46 As in Example 1, chitosan gel particles Chitopear
1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added to a polypropylene tube filled with l basic AL-03 (trade name, manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.), and attached to a rotating disk.
The mixture was overturned at 25 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【０１３５】実施例４７ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
４７℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。 Example 47 As in Example 1, chitosan gel particles Chitopear
1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added to a polypropylene tube filled with l basic AL-03 (trade name, manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.), and attached to a rotating disk.
The mixture was inverted at 47 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【０１３６】実施例４８ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
５２℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。 Example 48 As in Example 1, chitosan gel particles Chitopear
1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added to a polypropylene tube filled with l basic AL-03 (trade name, manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.), and attached to a rotating disk.
The mixture was overturned at 52 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【０１３７】比較例１０ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
１０℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。 Comparative Example 10 As in Example 1, chitosan gel particles Chitopear
1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added to a polypropylene tube filled with l basic AL-03 (trade name, manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.), and attached to a rotating disk.
The mixture was overturned at 10 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【０１３８】比較例１１ 実施例１と同様にキトサンゲル粒子Ｃｈｉｔｏｐｅａｒ
ｌ ｂａｓｉｃ ＡＬ−０３（富士紡績社製商品名）を
充填したポリプロピレンチューブにヘパリン採血した健
常人新鮮血１．６ｍｌを加えて回転円盤に取り付けて、
６０℃にて２時間、回転数２６ｒｐｍで転倒混和した。 Comparative Example 11 As in Example 1, chitosan gel particles Chitopear
1.6 ml of heparin-collected healthy human fresh blood was added to a polypropylene tube filled with l basic AL-03 (trade name, manufactured by Fuji Boseki Co., Ltd.), and attached to a rotating disk.
The mixture was inverted at 60 ° C. for 2 hours at a rotation speed of 26 rpm.

【０１３９】混和後の各血液を遠心分離して血漿を採取
し、血漿中のＴＮＦの濃度をモノクローナル抗体を用い
て、免疫酵素抗体法（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ社製 Ｑｕ
ａｎｔｉｋｉｎｅ ＴＮＦ−α）にて測定した。この測
定方法の検出限界濃度は２５ｐｇ／ｍｌであった。[0139] Each blood after mixing was centrifuged to collect plasma, and the concentration of TNF in the plasma was determined using a monoclonal antibody by an immunoenzymatic antibody method (Qua manufactured by R & D System).
(antikine TNF-α). The detection limit concentration of this measurement method was 25 pg / ml.

【０１４０】また、採血直後の血液を遠心分離して血漿
を採取して、血漿中のＴＮＦの濃度を同様にして測定し
た。結果を表８に示す。[0140] Immediately after the blood collection, the blood was centrifuged to collect the plasma, and the TNF concentration in the plasma was measured in the same manner. Table 8 shows the results.

【０１４１】[0141]

【表８】 [Table 8]

【０１４２】採血直後の血漿中ＴＮＦ濃度は測定限界以
下であり、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）で洗浄し
た２ｍｌ用チューブに血液を充填しただけのもの（比較
例４）では、血漿中ＴＮＦ濃度濃度は２５ｐｇ／ｍｌ以
下であった。表１〜７の結果から、水酸基、アミド基、
エステル基を有する高分子材料、及びカチオン性官能基
を有する高分子材料は、血液との接触によって特に高い
ＴＮＦの産生を誘導することが明らかである。The TNF concentration in the plasma immediately after the blood collection was below the measurement limit. In the case of only filling blood in a 2 ml tube washed with physiological saline for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) (Comparative Example 4), Medium TNF concentration was 25 pg / ml or less. From the results of Tables 1 to 7, a hydroxyl group, an amide group,
It is clear that polymeric materials with ester groups and polymeric materials with cationic functional groups induce particularly high TNF production upon contact with blood.

【０１４３】他方、未修飾のポリスチレン、ポリエチレ
ン、ポリ塩化ビニルなどの疎水性高分子材料やアニオン
性官能基だけを有する高分子材料ではＴＮＦの産生をほ
とんど誘導しなかった。On the other hand, a hydrophobic polymer material such as unmodified polystyrene, polyethylene, or polyvinyl chloride or a polymer material having only an anionic functional group hardly induced the production of TNF.

【０１４４】また、表８の結果から明らかなように、血
液と上記ＴＮＦ誘導材料との接触温度が、１５℃〜５２
℃の範囲ではＴＮＦの産生誘導が見られた。また、１５
℃未満及び５２℃より高温度のときにはＴＮＦの産生誘
導は見られなかった。As is clear from the results shown in Table 8, the contact temperature between the blood and the TNF-inducing material was 15 ° C. to 52 ° C.
In the range of ° C., induction of TNF production was observed. Also, 15
When the temperature was lower than 50 ° C and higher than 52 ° C, induction of TNF production was not observed.

【０１４５】[0145]

【発明の効果】本発明によれば、体外において、水酸
基、アミド基及び／またはエステル基を有する高分子材
料あるいはカチオン性官能基を有する高分子材料と血液
を接触させることにより、ＴＮＦの産生を誘導して、天
然型のＴＮＦや癌患者由来の内因性ＴＮＦを簡便に得る
ことができ、癌などの治療や病態把握のための免疫学的
診断などに新しい方法を提供するものである。According to the present invention, TNF production can be reduced by bringing blood into contact with a polymer material having a hydroxyl group, an amide group and / or an ester group or a polymer material having a cationic functional group outside the body. The present invention can easily obtain natural TNF or endogenous TNF derived from a cancer patient, thereby providing a new method for treating cancer or the like or immunological diagnosis for grasping a disease state.

【０１４６】また、従来の生理活性物質固定化材料のよ
うに、固定化された生理活性物質等の脱離がないため安
全に人体に適用できる。Further, unlike the conventional material for immobilizing a physiologically active substance, the immobilized physiologically active substance or the like is not detached, so that it can be safely applied to the human body.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 特願平5−114576 (32)優先日 平成５年５月17日(1993．5．17) (33)優先権主張国 日本（ＪＰ） (72)発明者 小林 幸司 大阪府高槻市上土室３−15−108 (72)発明者 栗山 澄 大阪府高槻市野見町６−46 (56)参考文献 米国特許5169840（ＵＳ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61M 1/36 500 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (31) Priority claim number Japanese Patent Application No. 5-114576 (32) Priority date May 17, 1993 (May 17, 1993) (33) Priority claim country Japan (JP) (72) Inventor Koji Kobayashi 3-15-108, Kamitsumuro, Takatsuki-shi, Osaka (72) Inventor Sumi Kuriyama 6-46, Nomicho, Takatsuki-shi, Osaka (56) References US Patent 5,169,840 (US, A) (58) Survey Field (Int.Cl. 7 , DB name) A61M 1/36 500

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 １５℃〜５２℃の温度で体外にて血液と
接触されることにより、ＴＮＦの産生を誘導するＴＮＦ
産生誘導材料であって、該材料が、天然多糖類及び／ま
たは天然多糖類の誘導体からなる高分子材料（但し、水
溶性のものを除く。）であることを特徴とするＴＮＦ産
生誘導材料。 1. The method of claim 1, wherein the blood is used outside the body at a temperature of 15 ° C. to 52 ° C.
TNF that induces the production of TNF when contacted
A production-inducing material, wherein the material is a natural polysaccharide and / or
Or a polymeric material comprising a derivative of a natural polysaccharide (excluding water
Excluding soluble substances. TNF production characterized by the following
Raw induction material. 【請求項２】 上記天然多糖類が、アガロース、セルロ
ース、デンプン、プルラン、デキストラン、グリサーゲ
ン、マンナン、グルコマンノグリカン、ガラクトマンノ
グリカン、ペクチン、アルギン酸、ヒアルロン酸、コン
ドロイチン硫酸、キチン及びキトサンからなる群より選
ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１
に記載のＴＮＦ産生誘導材料。 2. The natural polysaccharide is agarose or cellulos.
Sesame, starch, pullulan, dextran, glycage
, Mannan, glucomannoglycan, galactomanno
Glycan, pectin, alginic acid, hyaluronic acid, kon
Select from the group consisting of droitin sulfate, chitin and chitosan
2. The method as claimed in claim 1, wherein said at least one kind is at least one of:
2. The TNF production-inducing material according to item 1. 【請求項３】 上記天然多糖類が、アルギン酸、キトサ
ン及びアガロースからなる群より選ばれる少なくとも１
種であることを特徴とする請求項１に記載のＴＮＦ産生
誘導材料。 3. The method of claim 1, wherein said natural polysaccharide is alginic acid, chitosa
At least one selected from the group consisting of
2. The TNF production according to claim 1, wherein the TNF is a species.
Induction material. 【請求項４】 体外にて血液と接触されることにより、4. By being brought into contact with blood outside the body,
ＴＮＦの産生を誘導するＴＮＦ産生誘導材料であって、A TNF production-inducing material for inducing the production of TNF,
該材料が、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチThe material is polyvinyl alcohol, polyhydroxyethyl
ルアクリレート、ポリヒドロキシメチルアクリレート、Acrylate, polyhydroxymethyl acrylate,
ポリフェノール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルPolyphenol, polyvinylpyrrolidone, polyacryl
アミド、ポリリジン、ポリアクリル酸エステル及びポリAmide, polylysine, polyacrylate and poly
メタクリル酸エステルからなる群より選ばれる少なくとAt least one selected from the group consisting of methacrylates
も１種の高分子材料、及び／またはこれらの誘導体であIs also a kind of polymer material and / or a derivative thereof.
ることを特徴とするＴＮＦ産生誘導材料。A TNF production-inducing material, characterized in that: 【請求項５】 上記材料が、ポリアクリル酸エステル、5. The method according to claim 1, wherein the material is a polyacrylate,
ポリメタクリル酸エステル及びポリビニルアルコールかPolymethacrylate and polyvinyl alcohol?
らなる群より選ばれる少なくとも１種の高分子材料、及At least one polymer material selected from the group consisting of
び／またはこれらの誘導体であることを特徴とする請求And / or a derivative thereof.
項４に記載のＴＮＦ産生誘導材料。Item 5. The TNF production-inducing material according to Item 4. 【請求項６】 体外にて血液と接触されることにより、6. By being brought into contact with blood outside the body,
ＴＮＦの産生を誘導するＴＮＦ産生誘導材料であって、A TNF production-inducing material for inducing the production of TNF,
カチオン性官能基が導入された天然多糖類及び／またはA natural polysaccharide into which a cationic functional group has been introduced and / or
ポリスチレンからなることを特徴とするＴＮＦ産生誘導Induction of TNF production characterized by consisting of polystyrene
材料。material. 【請求項７】 上記カチオン性官能基が、１級アミノ7. The method according to claim 7, wherein the cationic functional group is a primary amino group.
基、２級アミノ基、３級アミノ基、４級アミノ基、スルGroup, secondary amino group, tertiary amino group, quaternary amino group, sulf
ホニウム基及びホスホニウム基からなる群よりFrom the group consisting of honium and phosphonium groups 選ばれるTo be elected
少なくとも１種であることを特徴とする請求項６に記載7. The method according to claim 6, wherein at least one kind is used.
のＴＮＦ産生誘導材料。TNF production inducing material.
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KR20050042032A (en) * 2001-11-02 2005-05-04 세키스이가가쿠 고교가부시키가이샤 Cytokine-inducing material and cytokine-inducing instrument

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