JP2022500443A - 進行性家族性肝内胆汁うっ滞障害を処置するための修飾mRNA - Google Patents
進行性家族性肝内胆汁うっ滞障害を処置するための修飾mRNA Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022500443A JP2022500443A JP2021514132A JP2021514132A JP2022500443A JP 2022500443 A JP2022500443 A JP 2022500443A JP 2021514132 A JP2021514132 A JP 2021514132A JP 2021514132 A JP2021514132 A JP 2021514132A JP 2022500443 A JP2022500443 A JP 2022500443A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- abcb4
- mir
- sequence
- utr
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 title claims abstract description 274
- 201000002150 Progressive familial intrahepatic cholestasis Diseases 0.000 title description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title description 13
- 102100039032 Phosphatidylcholine translocator ABCB4 Human genes 0.000 claims abstract description 217
- 101000955481 Homo sapiens Phosphatidylcholine translocator ABCB4 Proteins 0.000 claims abstract description 215
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 66
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 59
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 24
- -1 phosphatidylcholine Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 208000012619 Progressive familial intrahepatic cholestasis type 3 Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims abstract description 9
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 289
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 289
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 288
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 213
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 213
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 195
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 185
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 184
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 183
- 108010093662 Member 11 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 claims description 175
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 claims description 163
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 123
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 92
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 89
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 53
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 52
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 49
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 46
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 46
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 44
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 43
- 108091007420 miR‐142 Proteins 0.000 claims description 30
- 101000701363 Homo sapiens Phospholipid-transporting ATPase IC Proteins 0.000 claims description 24
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical group O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 24
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 23
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 14
- ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 5-methoxyuridine Chemical compound O=C1NC(=O)C(OC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 13
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 claims description 13
- 102100030448 Phospholipid-transporting ATPase IC Human genes 0.000 claims description 10
- UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 1-methylpseudouridine Chemical compound O=C1NC(=O)N(C)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-XUTVFYLZSA-N 0.000 claims description 9
- 208000017855 Progressive familial intrahepatic cholestasis type 1 Diseases 0.000 claims description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000005945 translocation Effects 0.000 claims description 8
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 7
- 102100028282 Bile salt export pump Human genes 0.000 claims description 7
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 claims description 7
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 claims description 7
- 201000001488 benign recurrent intrahepatic cholestasis 2 Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002162 progressive familial intrahepatic cholestasis 1 Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002149 progressive familial intrahepatic cholestasis 2 Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020709 progressive familial intrahepatic cholestasis type 2 Diseases 0.000 claims description 5
- UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 1-methylpseudouridine Natural products O=C1NC(=O)N(C)C=C1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UVBYMVOUBXYSFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 2'-O-methyl uridine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methyluridine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 0.000 claims description 4
- GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C=C1 GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 0.000 claims description 4
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 claims description 4
- VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N NSC 29409 Natural products C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N ribothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N 0.000 claims description 4
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 claims description 3
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 claims description 2
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 claims description 2
- 208000019256 Benign recurrent intrahepatic cholestasis type 2 Diseases 0.000 claims 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 127
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 90
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 90
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 84
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 abstract description 28
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 17
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 abstract description 14
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 abstract description 8
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 187
- 102000001479 Member 11 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Human genes 0.000 description 172
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 158
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 98
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 89
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 85
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 80
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 66
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 66
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 62
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 52
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 42
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 42
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 39
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 39
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 37
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 34
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 33
- 108091079658 miR-142-1 stem-loop Proteins 0.000 description 32
- 108091071830 miR-142-2 stem-loop Proteins 0.000 description 32
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 30
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 29
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 27
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 24
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 24
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 23
- 108091028066 Mir-126 Proteins 0.000 description 22
- 239000002585 base Substances 0.000 description 22
- 108090000743 multidrug resistance protein 3 Proteins 0.000 description 22
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 21
- 108091023084 miR-126 stem-loop Proteins 0.000 description 21
- 108091065272 miR-126-1 stem-loop Proteins 0.000 description 21
- 108091081187 miR-126-2 stem-loop Proteins 0.000 description 21
- 108091030790 miR-126-3 stem-loop Proteins 0.000 description 21
- 108091092317 miR-126-4 stem-loop Proteins 0.000 description 21
- 102000004233 multidrug resistance protein 3 Human genes 0.000 description 21
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 20
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 20
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 18
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 17
- 108091062140 Mir-223 Proteins 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 15
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 15
- 108091083308 miR-155 stem-loop Proteins 0.000 description 15
- 108091091301 miR-155-1 stem-loop Proteins 0.000 description 15
- 108091041686 miR-155-2 stem-loop Proteins 0.000 description 15
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 14
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 14
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 14
- 102000052926 human ATP8B1 Human genes 0.000 description 14
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 14
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 12
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 12
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 12
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 12
- 108091027943 miR-16 stem-loop Proteins 0.000 description 12
- 206010008635 Cholestasis Diseases 0.000 description 11
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 11
- 101000724352 Homo sapiens Bile salt export pump Proteins 0.000 description 11
- 108091093082 MiR-146 Proteins 0.000 description 11
- 108091033773 MiR-155 Proteins 0.000 description 11
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 230000007870 cholestasis Effects 0.000 description 11
- 231100000359 cholestasis Toxicity 0.000 description 11
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 11
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 102000053357 human ABCB11 Human genes 0.000 description 10
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 10
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 9
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 229940124447 delivery agent Drugs 0.000 description 9
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 108091062762 miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 9
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 9
- 108091046841 MiR-150 Proteins 0.000 description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 210000005134 plasmacytoid dendritic cell Anatomy 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 7
- DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 Chemical compound COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 7
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 7
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 7
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 229910052789 astatine Inorganic materials 0.000 description 7
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 7
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 7
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 108091092825 miR-24 stem-loop Proteins 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 7
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 6
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 description 6
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 108091040751 miR-130a stem-loop Proteins 0.000 description 6
- 108091047979 miR-23a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 6
- 108091036689 miR-296 stem-loop Proteins 0.000 description 6
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 5
- 108091007419 MiR-27 Proteins 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 5
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 5
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 5
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 5
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 5
- 108091051828 miR-122 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091052728 miR-132 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091027019 miR-132-1 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091047577 miR-149 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091041631 miR-21-1 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091044442 miR-21-2 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091032978 miR-24-3 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091064025 miR-24-4 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 4
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 4
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 4
- 108010042634 F2A4-K-NS peptide Proteins 0.000 description 4
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 4
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 108091093142 MiR-144 Proteins 0.000 description 4
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 4
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 208000026586 benign recurrent intrahepatic cholestasis type 1 Diseases 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 4
- 108091047626 let-7a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091050724 let-7b stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 108091084619 miR-125b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091079016 miR-133b Proteins 0.000 description 4
- 108091043162 miR-133b stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091073532 miR-143 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091062895 miR-144 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091057317 miR-151a stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091091751 miR-17 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091062221 miR-18a stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091074450 miR-200c stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091049679 miR-20a stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091053935 miR-212 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091026331 miR-214 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091048888 miR-214-1 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091078347 miR-214-2 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091035552 miR-214-3 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091086642 miR-216a stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091061917 miR-221 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091048857 miR-24-1 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091047483 miR-24-2 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091061970 miR-26a stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091043187 miR-30a stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091029750 miR-30a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091030035 miR-30a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091063344 miR-30b stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091072917 miR-30c-1 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091066131 miR-30c-2 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091023108 miR-30e stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091027549 miR-30e-1 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091029213 miR-30e-2 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091039521 miR-363 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091053306 miR-493 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091038507 miR-92b stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 108091053257 miR-99b stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 108010000222 polyserine Proteins 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- 102100037435 Antiviral innate immune response receptor RIG-I Human genes 0.000 description 3
- 101150077194 CAP1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 102220502341 Golgin subfamily A member 1_F2A_mutation Human genes 0.000 description 3
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 3
- 101000952099 Homo sapiens Antiviral innate immune response receptor RIG-I Proteins 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 101100245221 Mus musculus Prss8 gene Proteins 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000002278 Ribosomal Proteins Human genes 0.000 description 3
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 3
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 108091045440 let-7a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091047557 let-7a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 108091066112 miR-122-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091057488 miR-122-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091063409 miR-125b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091041344 miR-130a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091091365 miR-130a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091041017 miR-132-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091045692 miR-132-3 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091073227 miR-132-4 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091079012 miR-133a Proteins 0.000 description 3
- 108091024038 miR-133a stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091053592 miR-145-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091056559 miR-145-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091044046 miR-17-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091065423 miR-17-3 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091086416 miR-192 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091089177 miR-194-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091031479 miR-204 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091048308 miR-210 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091035591 miR-23a stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091045911 miR-23a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091032054 miR-23a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091029166 miR-23a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091055059 miR-30c stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091029119 miR-34a stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091025212 miR-380 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091037014 miR-7-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091030520 miR-7-2 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 3
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 3
- 108010074916 ribophorin Proteins 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- YHULXGUCQZFROV-UHFFFAOYSA-N sulfane;urea Chemical compound S.NC(N)=O YHULXGUCQZFROV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KVUXYQHEESDGIJ-UHFFFAOYSA-N 10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3,16-diol Chemical compound C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CC(O)CC1(C)CC2 KVUXYQHEESDGIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound COC1=CNC(=O)NC1=O KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150048692 ABCB11 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 description 2
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 description 2
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 102100025620 Cytochrome b-245 light chain Human genes 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102100034583 Dolichyl-diphosphooligosaccharide-protein glycosyltransferase subunit 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100030801 Elongation factor 1-alpha 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710120810 Elongation factor 1-alpha 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 2
- 101000856723 Homo sapiens Cytochrome b-245 light chain Proteins 0.000 description 2
- 101001045218 Homo sapiens Peroxisomal multifunctional enzyme type 2 Proteins 0.000 description 2
- 108091070508 Homo sapiens let-7e stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069046 Homo sapiens let-7g stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069047 Homo sapiens let-7i stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 2
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 2
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 2
- 108091007780 MiR-122 Proteins 0.000 description 2
- DSNMZBNPQVOADB-QRPNPIFTSA-N N1C(=O)NC(=O)C=C1.N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C=C1.N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O DSNMZBNPQVOADB-QRPNPIFTSA-N 0.000 description 2
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 2
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 2
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 102100022587 Peroxisomal multifunctional enzyme type 2 Human genes 0.000 description 2
- 102000003867 Phospholipid Transfer Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000216 Phospholipid Transfer Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000036758 Postinfectious cerebellitis Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 108091006296 SLC2A1 Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 101001010097 Shigella phage SfV Bactoprenol-linked glucose translocase Proteins 0.000 description 2
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 2
- 101150063830 abcB4 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 210000001601 blood-air barrier Anatomy 0.000 description 2
- 125000001369 canonical nucleoside group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 2
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 2
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 2
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical group O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012350 deep sequencing Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 2
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 2
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 2
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 230000010189 intracellular transport Effects 0.000 description 2
- 108091023663 let-7 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063478 let-7-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049777 let-7-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091033753 let-7d stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091079176 let-7d-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091036331 let-7d-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091043994 let-7g stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 2
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 108091028606 miR-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092072 miR-100 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091024975 miR-100-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091059450 miR-105-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091024075 miR-105-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091045790 miR-106b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091035155 miR-10a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091084882 miR-10a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091038228 miR-1228 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091040341 miR-1236 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091043184 miR-1246 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091044988 miR-125a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091050014 miR-125b-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091047499 miR-1271 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028466 miR-130b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091026034 miR-130b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091026523 miR-135a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091026375 miR-135b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091047498 miR-138-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091031925 miR-138-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091029379 miR-139 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091046685 miR-139-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091024530 miR-146a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091040069 miR-146a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091081537 miR-146a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091027034 miR-148a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091026495 miR-148b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091090860 miR-150 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091059964 miR-154 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091037340 miR-15a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069947 miR-15a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091031326 miR-15b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091074057 miR-16-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091056204 miR-16-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049641 miR-181-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091053227 miR-181a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092591 miR-181a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091064825 miR-181c stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091023796 miR-182 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091084881 miR-182-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091029500 miR-183 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091058866 miR-183-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091045731 miR-183-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091043778 miR-183-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091047641 miR-186 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028751 miR-188 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091038080 miR-18a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091046933 miR-18b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091054642 miR-194 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091080253 miR-194-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091054189 miR-196a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092367 miR-196a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091088515 miR-197 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091025686 miR-199a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091083769 miR-199a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091047470 miR-199a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091048350 miR-199a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091056793 miR-199a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091050874 miR-19a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028067 miR-19b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091091434 miR-19b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091059199 miR-200a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091089775 miR-200b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091056309 miR-200b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091026985 miR-200b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063796 miR-206 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091071651 miR-208 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091084446 miR-208a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091062547 miR-208a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091055375 miR-208a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091047268 miR-208b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091030817 miR-20a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086627 miR-20a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069790 miR-20a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091080321 miR-222 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091091392 miR-222-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091071617 miR-222-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086421 miR-223 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091092722 miR-23b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091085564 miR-25 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091052996 miR-26a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091023402 miR-26a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091083275 miR-26b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091079021 miR-27a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091043371 miR-27a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091039812 miR-28 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091088477 miR-29a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091047189 miR-29c stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091079151 miR-29c-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091029203 miR-301 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091026505 miR-301a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091024480 miR-301a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091084454 miR-302a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091050195 miR-302b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091056763 miR-302c stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091053185 miR-302d stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091043104 miR-3065 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091091870 miR-30a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067477 miR-30a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091057431 miR-30d stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091090925 miR-30d-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091085488 miR-30e-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091083037 miR-323a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091046551 miR-324 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091090692 miR-337 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091070038 miR-338 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091065159 miR-339 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091023791 miR-339-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049902 miR-33a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091082645 miR-33a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091048082 miR-33a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091088856 miR-345 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091051052 miR-345-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049311 miR-345-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091068963 miR-361 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091057188 miR-369 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091055954 miR-377 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091041657 miR-381 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091050135 miR-382 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091037240 miR-423 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091030938 miR-424 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091090987 miR-425 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091082652 miR-425-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091056281 miR-449b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032770 miR-451 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091030646 miR-451a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091083237 miR-451b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091044133 miR-454 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091048941 miR-499a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091051011 miR-499b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063342 miR-499b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091049413 miR-499b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091057916 miR-499b-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091034304 miR-548b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091029118 miR-548c stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091054834 miR-548g stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091062423 miR-548i stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063105 miR-548i-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091052473 miR-548i-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091058402 miR-548i-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028345 miR-548i-4 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091089916 miR-548i-5 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091024672 miR-548n stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091085840 miR-548n-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091063358 miR-548n-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091080660 miR-548o-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091081872 miR-664 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032198 miR-664a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091084078 miR-744 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091045794 miR-766 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091029509 miR-802 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091053417 miR-885 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091089992 miR-9-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091071572 miR-9-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091076838 miR-9-3 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091060187 miR-9-5 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091058972 miR-9-6 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091069965 miR-922 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028159 miR-92a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091025616 miR-92a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091081014 miR-92b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032846 miR-92b-2 stem loop Proteins 0.000 description 2
- 108091032902 miR-93 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091062136 miR-939 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091086713 miR-96 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091028482 miR-96-1 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091090007 miR-96-2 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091076732 miR-99a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 2
- 101150086837 pic gene Proteins 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- VYXXMAGSIYIYGD-NWAYQTQBSA-N propan-2-yl 2-[[[(2R)-1-(6-aminopurin-9-yl)propan-2-yl]oxymethyl-(pyrimidine-4-carbonylamino)phosphoryl]amino]-2-methylpropanoate Chemical compound CC(C)OC(=O)C(C)(C)NP(=O)(CO[C@H](C)Cn1cnc2c(N)ncnc12)NC(=O)c1ccncn1 VYXXMAGSIYIYGD-NWAYQTQBSA-N 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 108091069025 single-strand RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 2
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- PDXQSLIBLQMPJS-FDDDBJFASA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-(methoxymethyl)pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(COC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 PDXQSLIBLQMPJS-FDDDBJFASA-N 0.000 description 1
- UTAIYTHAJQNQDW-KQYNXXCUSA-N 1-methylguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)N(C)C(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O UTAIYTHAJQNQDW-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- OZNBTMLHSVZFLR-GWTDSMLYSA-N 2-amino-9-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3h-purin-6-one;6-amino-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1.C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OZNBTMLHSVZFLR-GWTDSMLYSA-N 0.000 description 1
- BGTXMQUSDNMLDW-AEHJODJJSA-N 2-amino-9-[(2r,3s,4r,5r)-3-fluoro-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3h-purin-6-one Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@]1(O)F BGTXMQUSDNMLDW-AEHJODJJSA-N 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YUDSCJBUWTYENI-VPCXQMTMSA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methyloxolan-2-yl]pyrimidin-2-one Chemical group C1=CC(N)=NC(=O)N1[C@]1(C)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O YUDSCJBUWTYENI-VPCXQMTMSA-N 0.000 description 1
- IZFJAICCKKWWNM-JXOAFFINSA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methoxypyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C(OC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IZFJAICCKKWWNM-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- GIZXLWBUPHRANC-BGZDPUMWSA-N 5-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1-(methoxymethyl)pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)N(COC)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 GIZXLWBUPHRANC-BGZDPUMWSA-N 0.000 description 1
- AMMRPAYSYYGRKP-BGZDPUMWSA-N 5-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1-ethylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)N(CC)C=C1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 AMMRPAYSYYGRKP-BGZDPUMWSA-N 0.000 description 1
- SNNBPMAXGYBMHM-JXOAFFINSA-N 5-methyl-2-thiouridine Chemical compound S=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SNNBPMAXGYBMHM-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2NC(=O)N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HCAJQHYUCKICQH-VPENINKCSA-N 0.000 description 1
- 102100027573 ATP synthase subunit alpha, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 208000007788 Acute Liver Failure Diseases 0.000 description 1
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101100107610 Arabidopsis thaliana ABCF4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000719121 Arabidopsis thaliana Protein MEI2-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 241000709750 Barley yellow dwarf virus-PAV Species 0.000 description 1
- 108050001641 Bile salt export pump Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 101150014715 CAP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710180456 CD-NTase-associated protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000841393 Candida albicans Probable NADPH dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010014419 Chemokine CXCL1 Proteins 0.000 description 1
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 description 1
- 229920001268 Cholestyramine Polymers 0.000 description 1
- 206010057573 Chronic hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 102100023580 Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-4 Human genes 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100481404 Danio rerio tie1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- 101100125027 Dictyostelium discoideum mhsp70 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000010334 End Stage Liver Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000018711 Facilitative Glucose Transport Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 206010016717 Fistula Diseases 0.000 description 1
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 1
- 101710107035 Gamma-glutamyltranspeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000058063 Glucose Transporter Type 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091052347 Glucose transporter family Proteins 0.000 description 1
- 101710173228 Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108091093094 Glycol nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100034221 Growth-regulated alpha protein Human genes 0.000 description 1
- 102000018932 HSP70 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010027992 HSP70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150031823 HSP70 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100027685 Hemoglobin subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108091005902 Hemoglobin subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- JNPRQUIWDVDHIT-GYIPPJPDSA-N Herculin Chemical compound CCC\C=C\CCCC\C=C\C(=O)NCC(C)C JNPRQUIWDVDHIT-GYIPPJPDSA-N 0.000 description 1
- JNPRQUIWDVDHIT-UHFFFAOYSA-N Herculin Natural products CCCC=CCCCCC=CC(=O)NCC(C)C JNPRQUIWDVDHIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101000866618 Homo sapiens 3-beta-hydroxysteroid-Delta(8),Delta(7)-isomerase Proteins 0.000 description 1
- 101100107622 Homo sapiens ABCB11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000936262 Homo sapiens ATP synthase subunit alpha, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000765010 Homo sapiens Beta-galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 101000905743 Homo sapiens Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-4 Proteins 0.000 description 1
- 101001069921 Homo sapiens Growth-regulated alpha protein Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001082073 Homo sapiens Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000896414 Homo sapiens Nuclear nucleic acid-binding protein C1D Proteins 0.000 description 1
- 101001043564 Homo sapiens Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001120822 Homo sapiens Putative microRNA 17 host gene protein Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000857677 Homo sapiens Runt-related transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000616556 Homo sapiens SH3 domain-containing protein 19 Proteins 0.000 description 1
- 108091070521 Homo sapiens let-7a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070522 Homo sapiens let-7a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070513 Homo sapiens let-7a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070511 Homo sapiens let-7c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070510 Homo sapiens let-7f-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070526 Homo sapiens let-7f-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000033301 Ileal fistula Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100026688 Interferon epsilon Human genes 0.000 description 1
- 101710147309 Interferon epsilon Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102100022469 Interferon kappa Human genes 0.000 description 1
- 102100027353 Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010057180 Liver and spleen enlargement Diseases 0.000 description 1
- 101710172064 Low-density lipoprotein receptor-related protein Proteins 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108091007774 MIR107 Proteins 0.000 description 1
- 108091007424 MIR27B Proteins 0.000 description 1
- 108091007772 MIRLET7C Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108091028080 MiR-132 Proteins 0.000 description 1
- 108091093073 MiR-134 Proteins 0.000 description 1
- 108091092539 MiR-208 Proteins 0.000 description 1
- 108091060568 Mir-133 microRNA precursor family Proteins 0.000 description 1
- 108091027966 Mir-137 Proteins 0.000 description 1
- 108091028232 Mir-184 Proteins 0.000 description 1
- 108091060302 Mir-320 Proteins 0.000 description 1
- 108091093189 Mir-375 Proteins 0.000 description 1
- 101100022690 Mus musculus Abcb4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481406 Mus musculus Tie1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100260872 Mus musculus Tmprss4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100038379 Myogenic factor 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100032970 Myogenin Human genes 0.000 description 1
- 108010056785 Myogenin Proteins 0.000 description 1
- 102100030856 Myoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000221960 Neurospora Species 0.000 description 1
- 101100011077 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) nnt-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 101150108935 Nucb1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004884 Nucleobindin Human genes 0.000 description 1
- 108090001016 Nucleobindin Proteins 0.000 description 1
- 108010087367 P-glycoprotein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003697 P-type ATPases Human genes 0.000 description 1
- 108090000069 P-type ATPases Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 101710163261 Phosphatidylcholine translocator ABCB4 Proteins 0.000 description 1
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034014 Prolyl 3-hydroxylase 3 Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102000007615 Pulmonary Surfactant-Associated Protein A Human genes 0.000 description 1
- 108010007100 Pulmonary Surfactant-Associated Protein A Proteins 0.000 description 1
- 102100026055 Putative microRNA 17 host gene protein Human genes 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 1
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102100025373 Runt-related transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100021782 SH3 domain-containing protein 19 Human genes 0.000 description 1
- 108091006300 SLC2A4 Proteins 0.000 description 1
- 101100068078 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GCN4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 1
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 102100033939 Solute carrier family 2, facilitated glucose transporter member 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 101150114197 TOP gene Proteins 0.000 description 1
- 241001648840 Thosea asigna virus Species 0.000 description 1
- 108091046915 Threose nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 101001023030 Toxoplasma gondii Myosin-D Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 241001504424 Zosteropidae Species 0.000 description 1
- RVWDHKGCQPULBK-BTKPBHANSA-N [(8R,9S,10R,13S,14S,17S)-10,13-dimethyl-3-oxo-1,2,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] heptanoate [(8R,9S,13S,14S,17S)-3-hydroxy-13-methyl-6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] pentanoate Chemical compound C1CC2=CC(O)=CC=C2[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](OC(=O)CCCC)[C@@]1(C)CC2.C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](OC(=O)CCCCCC)[C@@]1(C)CC2 RVWDHKGCQPULBK-BTKPBHANSA-N 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010053584 alpha-Globins Proteins 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000003030 auditory receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 108010002871 cardiotrophin-like cytokine Proteins 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000001883 cholelithiasis Diseases 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 208000011444 chronic liver failure Diseases 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101150052825 dnaK gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000003027 ear inner Anatomy 0.000 description 1
- 230000005014 ectopic expression Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000003315 endocardial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 206010016165 failure to thrive Diseases 0.000 description 1
- 230000003890 fistula Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000009716 hepatic expression Effects 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000008088 immune pathway Effects 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 108010080375 interferon kappa Proteins 0.000 description 1
- 108700027921 interferon tau Proteins 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 208000001024 intrahepatic cholestasis Diseases 0.000 description 1
- 230000007872 intrahepatic cholestasis Effects 0.000 description 1
- 231100001046 intrauterine death Toxicity 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 108091053410 let-7 family Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 108091041879 miR-100-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068974 miR-101 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091053561 miR-101-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091093015 miR-101-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091088205 miR-10a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064410 miR-1184-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091043011 miR-1184-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091090941 miR-1184-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091056924 miR-124 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092839 miR-124-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091045380 miR-124-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091048120 miR-124-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091034147 miR-124-5 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091057905 miR-1249 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091036056 miR-1249-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092614 miR-1249-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070774 miR-1250 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091091207 miR-127 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091046573 miR-1275 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091031034 miR-1279 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070946 miR-128 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091029664 miR-1286 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032604 miR-1303 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091025972 miR-130b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091023685 miR-133 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047111 miR-135a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047375 miR-135a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091040005 miR-135a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091059172 miR-135b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064811 miR-135b-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091037859 miR-138-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091029510 miR-138-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049185 miR-139-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060382 miR-140 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091030617 miR-140-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091023370 miR-140-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032392 miR-146a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091027955 miR-147 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091073193 miR-147a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091039164 miR-147b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091035696 miR-149-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091031096 miR-149-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064297 miR-151b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091037426 miR-152 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091033783 miR-153 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091074118 miR-15a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091085286 miR-181a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091078636 miR-182-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091081505 miR-190 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049762 miR-190a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091065212 miR-190b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062444 miR-196a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091041889 miR-196a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068947 miR-196a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092012 miR-199b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068975 miR-19a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091037787 miR-19b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091027597 miR-1d stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091029956 miR-200a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091088721 miR-200a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070312 miR-200a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032382 miR-204-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091085803 miR-204-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091089766 miR-204-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091073500 miR-204-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091053626 miR-204-5 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091035328 miR-217 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091039135 miR-217-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091029206 miR-217-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063841 miR-219 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091090052 miR-219-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091073060 miR-219-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091079034 miR-219-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091054264 miR-219-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091080351 miR-249 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091073699 miR-25-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091093042 miR-26a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091046387 miR-26a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049563 miR-26a-5 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064819 miR-26a-6 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091046123 miR-27a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070404 miR-27b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091027986 miR-27b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032408 miR-27b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091031881 miR-290 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091033928 miR-2909 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091057475 miR-29b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091082689 miR-302b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091089412 miR-302b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091025923 miR-302e stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047055 miR-30d-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091024082 miR-32 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062587 miR-32-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044918 miR-320b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091026895 miR-320b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091040992 miR-320b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091058314 miR-320e stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091059493 miR-322 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091041425 miR-322-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091050096 miR-322-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091072797 miR-325 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091042879 miR-326 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091089005 miR-329 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091091696 miR-331 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091074070 miR-338-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091055145 miR-342 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091073301 miR-346 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091040342 miR-34a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091035608 miR-34a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091084018 miR-34b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091090583 miR-34c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091084066 miR-34c-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091031765 miR-3665 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061759 miR-3666 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062637 miR-367 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091036633 miR-370 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091040651 miR-371 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062109 miR-372 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091043953 miR-373 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091048468 miR-383 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091029369 miR-410 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047664 miR-421 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091048131 miR-425-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091037327 miR-449 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091040525 miR-449a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091080309 miR-483 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091039994 miR-486 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092564 miR-494 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091053329 miR-510 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032623 miR-513a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091080923 miR-513a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091026498 miR-516a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086918 miR-516a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086222 miR-520c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091091333 miR-542 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068733 miR-548e stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067485 miR-548f stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091080668 miR-548j stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049014 miR-548k stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091056908 miR-548m stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091089002 miR-548o stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086597 miR-548p stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091071062 miR-557 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091029205 miR-562 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086764 miR-571 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091075061 miR-571-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091051054 miR-571-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091055140 miR-574 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091056770 miR-581 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091072761 miR-598 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091023140 miR-664a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091023818 miR-7 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091025113 miR-7-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091089851 miR-7-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091072577 miR-718 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091076478 miR-762 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091066925 miR-762-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069941 miR-762-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091042292 miR-762-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091038446 miR-9-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091084642 miR-9-7 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091034121 miR-92a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049973 miR-92a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091071148 miR-935 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091073613 miR-941-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091039878 miR-941-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091035558 miR-941-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091031187 miR-941-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091085604 miR-941-5 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091057102 miR-944 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047259 miR5481 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 108010084677 myogenic factor 6 Proteins 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004127 naloxone Drugs 0.000 description 1
- RGPDIGOSVORSAK-STHHAXOLSA-N naloxone hydrochloride Chemical compound Cl.O=C([C@@H]1O2)CC[C@@]3(O)[C@H]4CC5=CC=C(O)C2=C5[C@@]13CCN4CC=C RGPDIGOSVORSAK-STHHAXOLSA-N 0.000 description 1
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000033300 perinatal asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000026447 protein localization Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000561 purinyl group Chemical group N1=C(N=C2N=CNC2=C1)* 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 101150026538 rps9 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150030614 rpsI gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008684 selective degradation Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000007332 vesicle formation Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000004383 yellowing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0008—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition
- A61K48/0025—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid
- A61K48/0033—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'non-active' part of the composition delivered, e.g. wherein such 'non-active' part is not delivered simultaneously with the 'active' part of the composition wherein the non-active part clearly interacts with the delivered nucleic acid the non-active part being non-polymeric
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7115—Nucleic acids or oligonucleotides having modified bases, i.e. other than adenine, guanine, cytosine, uracil or thymine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
- A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
- C07K2319/43—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation containing a FLAG-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
本出願は、米国特許法119条(e)に基づき、それぞれ内容全体が参照により本明細書に援用される2018年9月13日出願の米国特許仮出願第62/731,055号、及び2019年4月29日出願の米国特許仮出願第62/840,369号の利益を請求する。
ATP結合カセットサブファミリーBメンバー4(ABCB4)(多剤耐性タンパク質3、多剤耐性3、MDR3、MDR2/3、MDR/TAP、P−糖タンパク質3、またはPGY3としても公知)は、フロッパーゼをコードする遺伝子である。ABCB4は3種のアイソフォーム:1,279アミノ酸残基を含有するアイソフォームA(アイソフォーム2)(GenBank受託番号NP_000434.1及びNM_000443.3)、1,286アミノ酸残基を含有するアイソフォームB(アイソフォーム1)(GenBank受託番号NP_061337.1及びNM_018849.2)、及び1,232アミノ酸残基を含有するアイソフォームC(アイソフォーム3)(GenBank受託番号NP_061338.1及びNM_018850.2)を有する。アイソフォームAは、アイソフォームBのアミノ酸残基1094〜1100を欠いている。アイソフォームCは、アイソフォームBのアミノ酸残基929〜975及び1094〜1100を欠いている。図21〜23は各アイソフォームの略図を示している。
ATP結合カセット、サブファミリーB、メンバー11(ABCB11)は、胆汁酸塩排出ポンプ(BSEP、sPgp(P−糖タンパク質の姉妹)としても知られる)をコードする。推定タンパク質は、多剤耐性(MDR)ファミリーの他のメンバーのものと同様の予測トポロジーを有し、それぞれ6つのスパンを伴う2つの推定上の膜貫通ドメイン、及び高度保存ATP結合カセット(ABC)を含有する2つのヌクレオチド結合フォールドを伴う。ノーザンブロット分析は、ABCB11遺伝子が、肝臓において5.5kb mRNA転写物を産生することを示している。ABCB11遺伝子の10の異なる対立遺伝子がPFIC2患者において同定されている。4つの対立遺伝子は、タンパク質の未成熟終止を引き起こし、残りの対立遺伝子は、ミスセンス変化であった。ミスセンス対立遺伝子のうちの5つは、近親婚家族で見い出され、罹患した個体はすべて、変異について同型接合型であった。ヒトABCB11によりコードされるBSEPでの例示的なタンパク質配列は、NCBI参照番号NP_003733.2として公開されている。
ATPアーゼ、アミノリン脂質輸送体、クラスI、8B型、メンバー1(ATP8B1、EC3.6.3.1)は、P型カチオン輸送ATPアーゼファミリーのメンバーであり、アミノリン脂質輸送ATPアーゼのサブファミリーに属している。ATP8B1は、P4−ATPアーゼフリッパーゼ複合体の触媒成分として役立つ。Paulusma,C.C.et al.,Hepatology 47:268−278(2008)。P4−ATPアーゼフリッパーゼ複合体は、様々な膜の外側から内側小葉へのホスファチジルセリン及びホスファチジルエタノールアミンなどのアミノリン脂質の輸送に連結したATPの加水分解を触媒し、したがって、リン脂質の非対称分布の維持を保証している。同著。
本発明は、進行性家族性肝内胆汁うっ滞(PFIC)の処置または予防において使用するためのmRNAを特徴とする。本発明における使用を特徴とするmRNAは対象に投与されると、in vivoでヒトABCB4、ABCB11、及び/またはATP8B1タンパク質をコードする。したがって、本発明は、ヒトABCB4(配列番号1)、ABCB11(配列番号7)、またはATP8B1(配列番号9)、そのアイソフォーム、その機能性断片、及びABCB4、ABCB11、またはATP8B1を含む融合タンパク質をコードする結合ヌクレオシドのオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチド、例えば、mRNAに関する。一部の実施形態では、上記オープンリーディングフレームは、配列最適化されている。特定の実施形態では、本発明は、ヒトABCB4、ヒトABCB11、もしくはヒトATP8B1のポリペプチド配列をコードするヌクレオチドを含む配列最適化ポリヌクレオチド、またはそれらの配列最適化ポリヌクレオチドと高い配列同一性を有する配列を提供する。
本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、コードされたポリペプチドの治療的に関連する部位への輸送を促進する追加の特徴をコードするヌクレオチド配列も含み得る。タンパク質輸送を援助するそのような特徴の1つは、シグナル配列、または標的配列である。これらのシグナル配列によりコードされるペプチドは、標的ペプチド、輸送ペプチド、及びシグナルペプチドを含む様々な名称で公知である。一部の実施形態では、上記ポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、本明細書に記載のABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に作動可能に結合されたシグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)を含む。
一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、目的のポリペプチドをコードする1つよりも多い核酸配列(例えば、ORF)を含み得る。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ABCB4、ABCB11、もしくはATP8B1ポリペプチド、その機能性断片、またはバリアントをコードする単一のORFを含む。しかしながら、一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、1つよりも多いORF、例えば、ABCB4、ABCB11、もしくはATP8B1ポリペプチド(第1の目的のポリペプチド)、その機能性断片、またはバリアントをコードする第1のORFと、第2の目的のポリペプチドを発現する第2のORFとを含み得る。一部の実施形態では、目的の2つ以上のポリペプチドは、遺伝子融合されていてよく、すなわち、2つ以上のポリペプチドは、同じORFによりコードされ得る。一部の実施形態では、上記ポリヌクレオチドは、2つ以上の目的のポリペプチドの間にリンカー(例えば、G4S(配列番号11)ペプチドリンカーまたは当技術分野で公知の別のリンカー)をコードする核酸配列を含み得る。
ある特定の実施形態では、本開示のmRNAは、1つよりも多いABCB4、ABCB11、もしくはATP8B1ドメインまたは異種ドメインをコードし、本明細書では多量体コンストラクトと称される。上記多量体コンストラクトのある特定の実施形態では、上記mRNAはさらに、各ドメイン間に位置するリンカーをコードする。上記リンカーは、例えば、切断可能なリンカーまたはプロテアーゼ感受性リンカーであり得る。ある特定の実施形態では、上記リンカーは、F2Aリンカー、P2Aリンカー、T2Aリンカー、ATP8B1Aリンカー、及びその組合せからなる群から選択される。2Aペプチドと称される、このファミリーの自己切断ペプチドリンカーは当技術分野で記載されている(例えば、Kim,J.H.et al.(2011)PLoS ONE 6:e18556を参照されたい)。ある特定の実施形態では、上記リンカーはF2Aリンカーである。ある特定の実施形態では、上記リンカーはGGGS(配列番号240)リンカーである。ある特定の実施形態では、上記リンカーは(GGGS)n(配列番号241)リンカーであり、ここで、n=2、3、4、または5である。ある特定の実施形態では、上記多量体コンストラクトは、3つのドメインを介在リンカーと共に含有し、構造:ドメイン−リンカー−ドメイン−リンカー−ドメイン、例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ドメイン−リンカー−ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ドメイン−リンカー−ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ドメインを有する。
一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は配列最適化されている。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)、任意選択で、目的の別のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列(例えば、ORF)、5’−UTR、3’−UTR(上記5’UTRまたは3’UTRは任意選択で少なくとも1つのマイクロRNA結合部位を含む)、任意選択でリンカーをコードするヌクレオチド配列、ポリAテイル、またはそれらの任意の組合せ)を含み、ここで、上記ORF(複数可)は配列最適化されている。
一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に開示のABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードする配列最適化ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を含み、その際、上記ORFは配列最適化されている。
本発明の一部の実施形態では、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードする本明細書に開示の配列最適化核酸を含むポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)を、少なくとも1つの核酸配列特性(例えば、ヌクレアーゼに曝露された場合の安定性)または発現特性が非配列最適化核酸に対して改善されているかどうかを決定するために試験することができる。
本発明の一部の実施形態では、ポリヌクレオチドの所望の特性は、核酸配列の固有特性である。例えば、ヌクレオチド配列(例えば、RNA、例えば、mRNA)を、in vivoまたはin vitroでの安定性のために配列最適化することができる。一部の実施形態では、上記ヌクレオチド配列を、特定の標的組織または細胞での発現のために配列最適化することができる。一部の実施形態では、上記核酸配列を配列最適化して、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼによるその分解を防止することにより、その血漿中半減期を延長する。
本発明の一部の実施形態では、上記ポリヌクレオチドの所望の特性は、本明細書に開示の配列最適化配列によりコードされるABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドの発現レベルである。タンパク質の発現レベルは、1つまたは複数の発現系を用いて測定することができる。一部の実施形態では、発現を、細胞培養系、例えばCHO細胞またはHEK293細胞で測定することができる。一部の実施形態では、例えばウサギ網状赤血球溶解産物のような生存細胞の抽出物から調製されたin vitro発現系を使用するか、あるいは精製された個々の成分の集合によって調製されたin vitro発現系を使用して、発現を測定することができる。他の実施形態では、タンパク質の発現を、in vivo系、例えば、マウス、ウサギ、サルなどにおいて測定する。
一部の実施形態では、核酸配列によってコードされる異種治療用タンパク質の発現は、標的組織もしくは細胞において有害作用を有し、タンパク質収量を減少させる、または(例えば、封入体内にタンパク質断片が存在する、または発現タンパク質が沈殿することにより)発現産物の質を低下させ得るか、あるいは毒性を惹起し得る。
場合によっては、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードする配列最適化核酸またはその機能性断片の投与は、(i)治療薬(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするmRNA)、または(ii)そのような治療薬の発現産物(例えば、mRNAによりコードされるABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチド)、または(iv)その組合せに起因し得るであろう免疫応答を誘発し得る。したがって、本開示の一部の実施形態では、本明細書に開示の核酸配列(例えば、mRNA)の配列最適化を使用して、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードする核酸の投与により、あるいはそのような核酸によりコードされるABCB4、ABCB11、またはATP8B1の発現産物により誘発される免疫応答または炎症応答を減少させることができる。
一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、RNA、例えば、mRNA)は、化学修飾されたヌクレオ塩基、例えば、化学修飾されたウラシル、例えば、シュードウラシル、N1−メチルシュードウラシル、5−メトキシウラシルなどを含む。一部の実施形態では、上記mRNAは、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするORFを含むウラシル修飾配列であり、その際、上記mRNAは、化学修飾されたヌクレオ塩基、例えば、化学修飾されたウラシル、例えば、シュードウラシル、N1−メチルシュードウラシル、または5−メトキシウラシルを含む。
本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ポリヌクレオチド、例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むmRNA)を含む修飾ポリヌクレオチドを含む。上記修飾ポリヌクレオチドは、化学修飾及び/または構造修飾されていてよい。本発明のポリヌクレオチドが化学修飾及び/または構造修飾されている場合、上記ポリヌクレオチドは、「修飾ポリヌクレオチド」と称され得る。
ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドの翻訳は、様々なシス作用性核酸構造により与えられる様々な機構により調節及び制御され得る。例えば、ヘアピンまたは他の高次(例えば、シュードノット)分子内mRNA二次構造を形成する天然に生じるシス作用性RNAエレメントは、翻訳制御活性をポリヌクレオチドに与えることができ、その際、特に、RNAエレメントが5’キャップ構造に近い5’UTRに位置している場合には、RNAエレメントは、ポリヌクレオチド翻訳の開始に影響を及ぼす、またはそれを調節する(Pelletier and Sonenberg(1985)Cell 40(3):515−526、Kozak(1986)Proc Natl Acad Sci 83:2850−2854)。
本開示は、所望の翻訳制御活性を与える修飾を含む合成ポリヌクレオチド(例えば、RNAエレメント)を提供する。一部の実施形態では、本開示は、5’非翻訳領域(UTR)、開始コドン、ポリペプチドをコードする全長オープンリーディングフレーム、3’UTR、及び少なくとも1つの修飾を含むポリヌクレオチドを提供し、その際、上記少なくとも1つの修飾は、所望の翻訳制御活性、例えば、mRNA翻訳の翻訳忠実性を促進及び/または増強する修飾を与える。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、シス作用性制御活性である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、開始コドンでの、またはその近位での43S転写前複合体(PIC)またはリボソームの滞留時間の増大である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、開始コドンでの、またはそこからのポリペプチド合成の開始の増大である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、全長オープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の増加である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、PICまたはリボソームによる開始コドン解読の忠実性の上昇である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、PICまたはリボソームによる読み漏らしの阻害または減少である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、PICまたはリボソームによる開始コドンの解読速度の低下である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、開始コドン以外のmRNA内の任意のコドンでのポリペプチド合成の開始の阻害または減少である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、全長オープンリーディングフレーム以外のmRNA内の任意のオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の阻害または減少である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、異常な翻訳産物の産生の阻害または減少である。一部の実施形態では、上記所望の翻訳制御活性は、上述の翻訳制御活性のうちの1つまたは複数の組合せである。
本発明のポリヌクレオチドは、調節エレメント、例えば、マイクロRNA(miRNA)結合部位、転写因子結合部位、構造化mRNA配列及び/またはモチーフ、内因性核酸結合分子のシュード受容体として作用するように操作された人工結合部位、ならびにそれらの組合せを含み得る。一部の実施形態では、そのような調節エレメントを含むポリヌクレオチドは、「センサー配列」を含むと称される。
miR 142−3p結合部位=下線
miR 126−3p結合部位=太字に下線
miR 155−5p結合部位=網掛け
miR 142−5p結合部位=網掛け、太字に下線
ある特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、本発明のABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)はさらに、3’UTRを含む。
本発明はまた、5’キャップと本発明のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含む、ポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)はさらに、ポリAテイルを含む。さらなる実施形態では、安定化のために、ポリAテイル上に末端基を組み込むことができる。他の実施形態では、ポリAテイルはdes−3’ヒドロキシルテイルを含む。
本発明はまた、開始コドン領域及び本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、開始コドン領域に類似する領域、または開始コドン領域と同様に機能する領域を有し得る。
本発明はまた、停止コドン領域、及び本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の両方を含むポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、3’非翻訳領域(UTR)の前に少なくとも2つの停止コドンを含み得る。DNAの場合はTGA、TAA及びTAGからコドンを選択することができ、RNAの場合はUGA、UAA及びUAGから停止コドンを選択することができる。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、DNAの場合は停止コドンTGA、またはRNAの場合は停止コドンUGA、及び1つの追加的な停止コドンを含む。さらなる一実施形態では、追加の停止コドンは、TAAまたはUAAであり得る。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、3つの連続的停止コドン、4つの停止コドン、またはそれより多くの停止コドンを含む。
ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチド、例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするmRNAヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドは、5’末端から3’末端で:上で示した5’キャップ、5’UTR(例えば、上で示した配列)、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(例えば、本明細書に開示のABCB4、ABCB11、またはATP8B1をコードする配列最適化核酸配列)、少なくとも1つの停止コドン、3’UTR(例えば、上で示した配列)、及び上で示したポリAテイルを含む。
配列番号14は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号15のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号17は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号18のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号20は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号21のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号23は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号24のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号26は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号27のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号29は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号30のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号32は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号33のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号35は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号36のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号38は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号39のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号41は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号42のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号44は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号45のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号47は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号48のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号50は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号51のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号53は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号54のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号56は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号57のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号59は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号60のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号62は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号63のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号65は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号66のABCB4ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号126は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号249のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号128は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号250のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号130は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号251のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号132は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号252のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号134は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号253のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号136は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号254のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号138は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号255のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号140は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号256のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号142は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号257のABCB11ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号258は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号93のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号259は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号94のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号260は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号95のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号261は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号96のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号262は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号97のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号263は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号98のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号264は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号99のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号265は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号100のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号266は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号101のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号267は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号102のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号268は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号103のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号269は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号104のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号270は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号105のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号271は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号106のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号272は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号107のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号273は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号108のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号274は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号109のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号275は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号110のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号276は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号111のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号277は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号112のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号278は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号113のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号279は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号114のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号280は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号115のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号281は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号116のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
配列番号282は、5’末端から3’末端で:配列番号12の5’UTR、配列番号117のATP8B1ヌクレオチドORF、及び配列番号13の3’UTRからなる。
本開示はまた、本発明のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)またはその相補体を作製するための方法を提供する。
本明細書に開示の本発明のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、in vitro転写(IVT)系を使用して転写することができる。この系は典型的に、転写緩衝液、ヌクレオチド三リン酸(NTP)、RNアーゼ阻害剤、及びポリメラーゼを含む。NTPは、限定されないが、天然及び非天然(修飾)NTPを含む、本明細書に記載のものから選択することができる。上記ポリメラーゼは、限定されないが、T7 RNAポリメラーゼ、T3RNAポリメラーゼ、及び変異型ポリメラーゼ、例えば、限定されないが、本明細書に開示のポリヌクレオチドを取り込むことができるポリメラーゼから選択することができる。全体が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開US20130259923号を参照されたい。
目的の単離ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列、例えば、本発明のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を合成するための標準的な方法を適用することができる。例えば、特定の単離されたポリペプチドをコードするコドン最適化ヌクレオチド配列を含有する単一のDNAまたはRNAオリゴマーを合成することができる。他の態様では、所望のポリペプチドの部分をコードするいくつかの小さなオリゴヌクレオチドを合成し、次いで、ライゲートすることができる。一部の態様では、個々のオリゴヌクレオチドは典型的には、相補的なアセンブリのために、5’または3’オーバーハングを含有する。
本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)の精製は、限定されないが、ポリヌクレオチドのクリーンアップ、品質保証、及び品質管理を含むことができる。クリーンアップは、当技術分野で公知の方法、例えば、限定されないが、AGENCOURT(登録商標)ビーズ(Beckman Coulter Genomics,Danvers,MA)、ポリTビーズ、LNA(商標)オリゴT捕捉プローブ(EXIQON(登録商標)Inc.,Vedbaek,Denmark)またはHPLCに基づく精製方法、例えば、限定されないが、強陰イオン交換HPLC、弱陰イオン交換HPLC、逆相HPLC(RP−HPLC)、及び疎水性相互作用HPLC(HIC−HPLC)により実施することができる。
一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)、それらの発現産物、ならびに分解産物及び代謝産物を、当技術分野で公知の方法に従って定量化することができる。
本発明は、上記ポリヌクレオチドのいずれかを含む医薬組成物及び製剤を提供する。一部の実施形態では、上記組成物または製剤は、送達剤をさらに含む。
脂質化合物
本開示は、有利な特性を有する医薬組成物を提供する。本明細書に記載の脂質組成物は、治療薬及び/または予防薬、例えば、mRNAを哺乳類細胞または器官に送達するための脂質ナノ粒子組成物において有利に使用され得る。例えば、本明細書に記載の脂質は、免疫原性がほとんどないか、または全くない。例えば、本明細書に開示の脂質化合物は、参照脂質(例えば、MC3、KC2、またはDLinDMA)と比較して低い免疫原性を有する。例えば、本明細書に開示の脂質及び治療薬または予防薬、例えば、mRNAを含む製剤は、参照脂質(例えば、MC3、KC2、またはDLinDMA)及び同じ治療薬または予防薬を含む対応する製剤と比較して、治療指数の増加を示す。
一部の実施形態では、本発明の核酸(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1 mRNA)を、脂質ナノ粒子(LNP)中で製剤化する。脂質ナノ粒子は典型的には、イオン性カチオン脂質、非カチオン脂質、ステロール及びPEG脂質成分を目的の核酸カーゴと共に含む。本発明の脂質ナノ粒子は、当技術分野で一般に知られているとおりの構成成分、組成、及び方法を使用して生成することができる。例えば、すべて全体が参照により本明細書に援用されるPCT/US2016/052352、PCT/US2016/068300、PCT/US2017/037551、PCT/US2015/027400、PCT/US2016/047406、PCT/US2016000129、PCT/US2016/014280、PCT/US2016/014280、PCT/US2017/038426、PCT/US2014/027077、PCT/US2014/055394、PCT/US2016/52117、PCT/US2012/069610、PCT/US2017/027492、PCT/US2016/059575及びPCT/US2016/069491を参照されたい。
一部の態様では、本開示のイオン性脂質は、式(I)の化合物:
[式中、
R1は、C5〜30アルキル、C5〜20アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R”M’R’からなる群から選択され、
R2及びR3は独立に、H、C1〜14アルキル、C2〜14アルケニル、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択されるか、またはR2及びR3は、それらが結合している原子と一緒に、複素環または炭素環を形成しており、
R4は、水素、C3〜6炭素環、−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、−CQ(R)2、及び非置換C1〜6アルキルからなる群から選択され、ここで、Qは、炭素環、複素環、−OR、−O(CH2)nN(R)2、−C(O)OR、−OC(O)R、−CX3、−CX2H、−CXH2、−CN、−N(R)2、−C(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)C(O)N(R)2、−N(R)C(S)N(R)2、−N(R)R8、−N(R)S(O)2R8、−O(CH2)nOR、−N(R)C(=NR9)N(R)2、−N(R)C(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、−N(OR)C(O)R、−N(OR)S(O)2R、−N(OR)C(O)OR、−N(OR)C(O)N(R)2、−N(OR)C(S)N(R)2、−N(OR)C(=NR9)N(R)2、−N(OR)C(=CHR9)N(R)2、−C(=NR9)N(R)2、−C(=NR9)R、−C(O)N(R)OR、及び−C(R)N(R)2C(O)ORから選択され、かつ各nは独立に、1、2、3、4、及び5から選択され、
各R5は独立に、C1〜3アルキル、C2〜3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R6は独立に、C1〜3アルキル、C2〜3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
M及びM’は独立に、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)−M”−C(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、ここで、M”は、結合、C1〜13アルキルまたはC2〜13アルケニルであり、
R7は、C1〜3アルキル、C2〜3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
R8は、C3〜6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
R9は、H、CN、NO2、C1〜6アルキル、−OR、−S(O)2R、−S(O)2N(R)2、C2〜6アルケニル、C3〜6炭素環及び複素環からなる群から選択され、
各Rは独立に、C1〜3アルキル、C2〜3アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R’は独立に、C1〜18アルキル、C2〜18アルケニル、−R*YR”、−YR”、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立に、C3〜15アルキル及びC3〜15アルケニルからなる群から選択され、
各R*は独立に、C1〜12アルキル及びC2〜12アルケニルからなる群から選択され、
各Yは独立に、C3〜6炭素環であり、
各Xは独立に、F、Cl、Br、及びIからなる群から選択され、かつmは、5、6、7、8、9、10、11、12、及び13から選択され、ここで、R4が−(CH2)nQ、−(CH2)nCHQR、−CHQR、または−CQ(R)2である場合、(i)nが1、2、3、4または5である場合に、Qは、−N(R)2ではないか、または(ii)nが1または2である場合に、Qは、5、6、または7員ヘテロシクロアルキルではない]。
[式中、lは、1、2、3、4、及び5から選択され、mは、5、6、7、8、及び9から選択され、M1は、結合またはM’であり、R4は、水素、非置換C1〜3アルキル、または−(CH2)nQであり、ここで、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、−NHC(O)N(R)2、−N(R)C(O)R、−N(R)S(O)2R、−N(R)R8、−NHC(=NR9)N(R)2、−NHC(=CHR9)N(R)2、−OC(O)N(R)2、−N(R)C(O)OR、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキルであり、M及びM’は独立に、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)−M”−C(O)O−、−C(O)N(R’)−、−P(O)(OR’)O−、−S−S−、アリール基、及びヘテロアリール基から選択され、かつR2及びR3は独立に、H、C1〜14アルキル、及びC2〜14アルケニルからなる群から選択される。例えば、mは、5、7、または9である。例えば、Qは、OH、−NHC(S)N(R)2、または−NHC(O)N(R)2である。例えば、Qは、−N(R)C(O)R、または−N(R)S(O)2Rである。]
[式中、
Wは、
環Aは、
tは、1または2であり、
A1及びA2はそれぞれ独立に、CHまたはNから選択され、
Zは、CH2であるか、存在せず、その際、ZがCH2である場合には点線(1)及び(2)はそれぞれ、単結合を表し、かつZが存在しない場合には、点線(1)及び(2)は両方とも存在せず、
R1、R2、R3、R4、及びR5は独立に、C5〜20アルキル、C5〜20アルケニル、−R”MR’、−R*YR”、−YR”、及び−R*OR”からなる群から選択され、
Rx1及びRx2はそれぞれ独立に、HまたはC1〜3アルキルであり、
各Mは独立に、−C(O)O−、−OC(O)−、−OC(O)O−、−C(O)N(R’)−、−N(R’)C(O)−、−C(O)−、−C(S)−、−C(S)S−、−SC(S)−、−CH(OH)−、−P(O)(OR’)O−、−S(O)2−、−C(O)S−、−SC(O)−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から選択され、
M*は、C1〜C6アルキルであり、
W1及びW2はそれぞれ独立に、−O−及び−N(R6)−からなる群から選択され、
各R6は独立に、H及びC1〜5アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、及びX3は独立に、結合、−CH2−、−(CH2)2−、−CHR−、−CHY−、−C(O)−、−C(O)O−、−OC(O)−、−(CH2)n−C(O)−、−C(O)−(CH2)n−、−(CH2)n−C(O)O−、−OC(O)−(CH2)n−、−(CH2)n−OC(O)−、−C(O)O−(CH2)n−、−CH(OH)−、−C(S)−、及び−CH(SH)−からなる群から選択され、
各Yは独立に、C3〜6炭素環であり、
各R*は独立に、C1〜12アルキル及びC2〜12アルケニルからなる群から選択され、
各Rは独立に、C1〜3アルキル及びC3〜6炭素環からなる群から選択され、
各R’は独立に、C1〜12アルキル、C2〜12アルケニル、及びHからなる群から選択され、
各R”は独立に、C3〜12アルキル、C3〜12アルケニル及び−R*MR’からなる群から選択され、かつ
nは、1〜6の整数であり、
環Aが、
X1、X2、及びX3のうちの少なくとも1つは、−CH2−ではなく、及び/または
R1、R2、R3、R4、及びR5のうちの少なくとも1つは、−R”MR’である]。
本明細書に開示の脂質ナノ粒子組成物の脂質組成物は、1つまたは複数のリン脂質、例えば、1つまたは複数の飽和もしくは(ポリ)不飽和リン脂質またはそれらの組合せを含むことができる。一般に、リン脂質は、リン脂質部分及び1つまたは複数の脂肪酸部分を含む。
[式中、
各R1は独立に、任意選択で置換されたアルキルであるか、または任意選択で、2個のR1は、間の原子と一緒になって結合して、任意選択で置換された単環式カルボシクリルもしくは任意選択で置換された単環式ヘテロシクリルを形成しているか、または任意選択で、3個のR1は、間の原子と一緒になって結合して、任意選択で置換された二環式カルボシクリルまたは任意選択で置換された二環式ヘテロシクリルを形成しており、
nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、式:
L2の各例は独立に、結合または任意選択で置換されたC1〜6アルキレンであり、任意選択で置換されたC1〜6アルキレンの1つのメチレン単位は、O、N(RN)、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、またはNRNC(O)N(RN)で任意選択で置換されており、
R2の各例は独立に、任意選択で置換されたC1〜30アルキル、任意選択で置換されたC1〜30アルケニル、または任意選択で置換されたC1〜30アルキニルであり、任意選択で、R2の1つまたは複数のメチレン単位は独立に、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、−NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、−C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、−S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置換されており、
RNの各例は独立に、水素、任意選択で置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されたカルボシクリル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアリール、または任意選択で置換されたヘテロアリールであり、
pは、1または2であり、
ただし、上記化合物は、式:
ここで、R2の各例は独立に、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである]。
ある特定の実施形態では、本発明で有用または潜在的に有用である可能性のあるリン脂質は、修飾リン脂質ヘッド(例えば、修飾コリン基)を含む。ある特定の実施形態では、修飾ヘッドを有するリン脂質は、修飾4級アミンを有するDSPCまたはそのアナログである。例えば、式(IV)の実施形態では、R1のうちの少なくとも1つは、メチルではない。ある特定の実施形態では、R1のうちの少なくとも1つは、水素またはメチルではない。ある特定の実施形態では、式(IV)の化合物は、以下の式のうちの1つの化合物:
[式中、
各tは独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
各uは独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、かつ
各vは独立に、1、2、または3である]。
ある特定の実施形態では、本発明で有用または潜在的に有用である可能性のあるリン脂質は、修飾テイルを含む。ある特定の実施形態では、本発明で有用または潜在的に有用である可能性のあるリン脂質は、修飾テイルを有するDSPCまたはそのアナログである。本明細書に記載される場合、「修飾テイル」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分岐が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、1つまたは複数のメチレンが環式もしくはヘテロ原子基により置き換えられている脂肪族鎖、またはそれらの任意の組合せを有するテイルであってよい。例えば、ある特定の実施形態では、(IV)の化合物は、式(IV−a)の化合物、またはその塩であり、式中、R2の少なくとも一例は、任意選択で置換されたC1〜30アルキルであるR2の各例であり、R2の1つまたは複数のメチレン単位は独立に、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、−S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置換される。
[式中、
各xは独立に、0及び30を含む0〜30の整数であり、かつ
Gの各例は独立に、任意選択で置換されているカルボシクリレン、任意選択で置換されているヘテロシクリレン、任意選択で置換されているアリーレン、任意選択で置換されているヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、−NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、−C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、−S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oからなる群から選択される]。各可能性は、別個の本発明の実施形態を表す。
ある特定の実施形態では、本発明で有用または潜在的に有用である可能性のあるリン脂質は、第四級アミンをホスホリル基に結合するアルキル鎖がエチレンではない(例えば、nは2ではない)修飾ホスホコリン部分を含む。したがって、ある特定の実施形態では、リン脂質が有用である。
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、1つまたは複数の構造脂質を含むことができる。本明細書で使用する場合、「構造脂質」という用語は、ステロール、さらに、ステロール部分を含有する脂質を指す。
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、1つまたは複数のポリエチレングリコール(PEG)脂質を含むことができる。
[式中、
R3は、−OROであり、
ROは、水素、任意選択で置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
rは、1及び100を含む1〜100の整数であり、
L1は、任意選択で置換されたC1〜10アルキレンであり、その際、任意選択で置換されたC1〜10アルキレンのうちの少なくとも1つのメチレンは独立に、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、O、N(RN)、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、C(O)O、−OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、またはNRNC(O)N(RN)で置換されており、
Dは、クリックケミストリーにより得られる部分または生理的条件下で切断可能な部分であり、
mは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10であり、
Aは、式:
L2の各例は独立に、結合または任意選択で置換されたC1〜6アルキレンであり、その際、任意選択で置換されたC1〜6アルキレンの1つのメチレン単位は、O、N(RN)、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、−NRNC(O)O、またはNRNC(O)N(RN)で任意選択で置換されており、
R2の各例は独立に、任意選択で置換されたC1〜30アルキル、任意選択で置換されたC1〜30アルケニル、または任意選択で置換されたC1〜30アルキニルであり、任意選択で、R2の1つまたは複数のメチレン単位は独立に、任意選択で置換されたカルボシクリレン、任意選択で置換されたヘテロシクリレン、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、C(O)N(RN)、NRNC(O)、−NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、−C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、−S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置換されており、
RNの各例は独立に、水素、任意選択で置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Bは、任意選択で置換されたカルボシクリル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアリール、または任意選択で置換されたヘテロアリールであり、かつ
pは、1または2である]。
[式中、
R3は、−OROであり、
ROは、水素、任意選択で置換されているアルキルまたは酸素保護基であり、
rは、1及び100を含む1〜100の整数であり、
R5は、任意選択で置換されているC10〜40アルキル、任意選択で置換されているC10〜40アルケニル、または任意選択で置換されている10〜40アルキニルであり、かつ任意選択で、R5の1個または複数のメチレン基は、任意選択で置換されているカルボシクリレン、任意選択で置換されているヘテロシクリレン、任意選択で置換されているアリーレン、任意選択で置換されているヘテロアリーレン、N(RN)、O、S、C(O)、−C(O)N(RN)、NRNC(O)、NRNC(O)N(RN)、C(O)O、OC(O)、OC(O)O、OC(O)N(RN)、−NRNC(O)O、C(O)S、SC(O)、C(=NRN)、C(=NRN)N(RN)、NRNC(=NRN)、NRNC(=NRN)N(RN)、C(S)、C(S)N(RN)、NRNC(S)、NRNC(S)N(RN)、S(O)、OS(O)、S(O)O、OS(O)O、OS(O)2、−S(O)2O、OS(O)2O、N(RN)S(O)、S(O)N(RN)、N(RN)S(O)N(RN)、OS(O)N(RN)、N(RN)S(O)O、S(O)2、N(RN)S(O)2、S(O)2N(RN)、N(RN)S(O)2N(RN)、OS(O)2N(RN)、またはN(RN)S(O)2Oで置換されており、
RNの各例は独立に、水素、任意選択で置換されているアルキル、または窒素保護基である]。
本明細書に開示の医薬組成物の脂質組成物は、上記のものに加えて、1つまたは複数の構成成分を含むことができる。例えば、上記脂質組成物は、1つまたは複数の透過促進分子、炭水化物、ポリマー、表面改質剤(例えば、界面活性剤)、または他の構成成分を含むことができる。例えば、透過促進分子は、米国特許出願公開第2005/0222064号に記載の分子であり得る。炭水化物は、単糖(例えば、グルコース)及び多糖(例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及びアナログ)を含むことができる。
一部の実施形態では、本明細書に開示の医薬組成物は、脂質ナノ粒子(LNP)として製剤化される。したがって、本開示は、(i)本明細書に記載の化合物などの送達剤を含む脂質組成物、及び(ii)ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むナノ粒子組成物も提供する。本開示は(i)本明細書に記載の化合物などの送達剤を含む脂質組成物、ならびに(ii)ABCB4ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ABCB11ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びATP8B1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むナノ粒子組成物も提供する。そのようなナノ粒子組成物では、本明細書に開示の脂質組成物は、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(複数可)を封入することができる。
リポソーム、リポプレックス、及び脂質ナノ粒子
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、送達剤、例えば、リポソーム、リオプレックス、脂質ナノ粒子、またはそれらの任意の組合せを含む。本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、1つまたは複数のリポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子を使用して製剤化することができる。リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子は、これらの製剤がポリヌクレオチドによる細胞のトランスフェクションを増加させ、及び/またはコードされたタンパク質の翻訳を増加させるので、タンパク質産生を目的とするポリヌクレオチドの有効性を向上させるために使用することができる。リポソーム、リポプレックス、または脂質ナノ粒子は、ポリヌクレオチドの安定性を上昇させるために使用することもできる。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、送達剤、例えば、リピドイドを含む。本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、リピドイドと共に製剤化することができる。これらのリピドイドを含有する複合体、ミセル、リポソーム、または粒子を調製すると、局所及び/または全身投与経路を介するリピドイド製剤の注射後に、コードされたタンパク質(複数可)の産生により判定されるとおり、ポリヌクレオチド(複数可)の有効な送達を達成することができる。ポリヌクレオチドのリピドイド複合体は、限定されないが、静脈内、筋肉内、または皮下経路を含む種々の手段により投与することができる。
一部の実施形態では、注射(例えば、筋肉内または皮下注射)用の本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)及びヒアルロニダーゼ。ヒアルロニダーゼは、間質障壁の構成成分であるヒアルロナンの加水分解を触媒する。ヒアルロニダーゼは、ヒアルロナンの粘度を低下させ、それにより、組織透過性を増加させる(Frost,Expert Opin.Drug Deliv.(2007)4:427−440)。別法では、ヒアルロニダーゼを、筋肉内または皮下投与されたポリヌクレオチドに曝露された細胞の数を増加させるために使用することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)は、ナノ粒子模倣物内に封入され、及び/またはナノ粒子模倣物に吸収される。ナノ粒子模倣物は、送達機能生体または粒子、例えば、限定されないが、病原体、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、プリオン、及び細胞を模倣することができる。非限定的例として、本明細書に記載のポリヌクレオチドを、ウイルスの送達機能を模倣することができる非ビリオン粒子に封入することができる(例えば、それぞれ、全体が参照により本明細書に援用される国際公開WO2012006376ならびに米国特許出願公開第20130171241号及び同第20130195968号を参照されたい)。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を、送達のための自己組織化ナノ粒子または両親媒性巨大分子(AM)中に含む。AMは、アルキル化糖骨格がポリ(エチレングリコール)に共有結合した生体適合性の両親媒性ポリマーを含む。水溶液中において、AMは、自己組織化してミセルを形成する。核酸自己組織化ナノ粒子は、国際出願第PCT/US2014/027077号に記載されており、AM及びAMを形成する方法は、米国特許出願公開第20130217753号に記載されており、これらはそれぞれ、参照によりその全体が本明細書に援用される。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)、ならびにカチオンまたはアニオン、例えばZn2+、Ca2+、Cu2+、Mg2+、及びこれらの組合せを含む。例示的な製剤は、例えば、それぞれ参照により全体が本明細書に援用される米国特許第6,265,389号及び同第6,555,525号に記載されているとおり、金属カチオンと複合体を形成したポリマー及びポリヌクレオチドを含み得る。一部の実施形態では、カチオンナノ粒子は、二価及び一価カチオンの組合せを含有し得る。カチオンナノ粒子またはカチオンナノ粒子を含む1つもしくは複数のデポ剤中でのポリヌクレオチドの送達は、長時間作用性デポ剤として作用すること及び/またはヌクレアーゼによる分解の速度を低下させることによって、ポリヌクレオチドのバイオアベイラビリティを向上させることができる。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、アミノ酸脂質と共に製剤化された本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。アミノ酸脂質は、アミノ酸残基及び1つまたは複数の親油性テイルを含む親油性化合物である。アミノ酸脂質、及びアミノ酸脂質を製造する方法の非限定的例は、米国特許第8,501,824号に記載されている。アミノ酸脂質製剤は、ポリヌクレオチドに結合し、それを放出するアミノ酸脂質を含む放出可能な形態でポリヌクレオチドを送達することができる。非限定的例として、本明細書に記載のポリヌクレオチドの放出は、例えば、それぞれ全体が参照により本明細書に援用される米国特許第7,098,032号、同第6,897,196号、同第6,426,086号、同第7,138,382号、同第5,563,250号、及び同第5,505,931号に記載されているとおりの酸不安定なリンカーにより提供することができる。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、高分子電解質間複合体中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。高分子電解質間複合体は、電荷動的ポリマーが1つまたは複数のアニオン性分子と複合化されるときに形成される。電荷動的ポリマー及び高分子電解質間複合体ならびに高分子電解質間複合体を作製する方法の非限定的例は、全体が参照により本明細書に援用される米国特許第8,524,368号に記載されている。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、結晶性ポリマー系中に、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。結晶性ポリマー系は、結晶性部分及び/または結晶性部分を含む末端単位を有するポリマーである。例示的なポリマーは、米国特許第8,524,259号(その全体が参照により本明細書に援用される)に記載されている。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)ならびに天然及び/または合成ポリマーを含む。ポリマーには、限定されないが、ポリエテン、ポリエチレングリコール(PEG)、ポリ(l−リシン)(PLL)、PLLにグラフトされたPEG、カチオン性リポポリマー、生分解性カチオン性リポポリマー、ポリエチレンイミン(PEI)、架橋分枝鎖ポリ(アルキレンイミン)、ポリアミン誘導体、修飾ポロキサマー、弾性生分解性ポリマー、生分解性コポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、多元ブロックコポリマー、ポリ[α−(4−アミノブチル)−L−グリコール酸)(PAGA)、生分解性架橋カチオンマルチブロックコポリマー、ポリカルボナート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマラート、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ(オルトエステル)、ポリシアノアクリラート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリシン、ポリ(エチレンイミン)、ポリ(セリンエステル)、ポリ(L−ラクチド−コ−L−リシン)、ポリ(4−ヒドロキシ−L−プロリンエステル)、アミン含有ポリマー、デキストランポリマー、デキストランポリマー誘導体、またはそれらの組合せが含まれる。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、ポリヌクレオチド(複数可)による細胞のトランスフェクションを増加させ、及び/または(例えば、特定の組織もしくは細胞型を標的とすることにより)ポリヌクレオチド(複数可)の生体内分布を変更し、及び/またはコードされたタンパク質(複数可)の翻訳を増加させるペプチド及び/またはタンパク質(例えば、国際公開WO2012110636及びWO2013123298)と共に製剤化されている、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。一部の実施形態では、上記ペプチドは、米国特許出願公開第20130129726号、同第20130137644号、及び同第20130164219号に記載のものであり得る。参照文献はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される。
一部の実施形態では、本開示の組成物または製剤は、コンジュゲートとして、担体もしくは標的化基に共有結合されている、または融合タンパク質を共に産生する2つのコード領域を含む(例えば、標的化基及び治療的タンパク質もしくはペプチドを持つ)、本明細書に記載のポリヌクレオチド(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド)を含む。上記コンジュゲートは、ナノ粒子を組織もしくは生体内のニューロンに選択的に向けるか、または血液脳関門の横断に役立つペプチドであり得る。
本開示は、生物学的に活性な薬剤などの反復投与される活性薬剤に対するABCの作用を低下させるための化合物、組成物、及びその使用方法を提供する。容易に分かるように、投与された活性薬剤に対するABCの作用を全体的に低下させる、または排除することは、その半減期を、したがって有効性を効果的に増加させる。
LNPを含む本明細書で提示される種々の化合物及び組成物は、in vivo投与時にABC活性を促進しない。これらのLNPは、多数のアッセイ、例えば、限定されないが、以下に記載のもののうちのいずれか、さらには、実施例の方法のサブセクションを含む実施例セクションに開示のアッセイのいずれかにより、特徴付ける、及び/または同定することができる。
本開示で提供されるある特定の組成物は、B細胞、例えば、B1aまたはB1b細胞(CD19+CD5+)及び/または従来のB細胞(CD19+CD5−)を活性化しない。B1a細胞、B1b細胞、または従来のB細胞の活性化は、様々な方法で決定することができ、これらのいくつかを以下に示す。B細胞集団は、分別B細胞集団または脾細胞または末梢血単核細胞(PBMC)の未分画集団として提供され得る。後者の場合、細胞集団は、一定の期間、選択すべきLNPとインキュベートされ、次いで、さらなる分析のために採取され得る。別法では、上清は、採取及び分析され得る。
B1a細胞、B1b細胞、または従来のB細胞の活性化は、CD86などの後期活性化マーカーを含むB細胞活性化マーカーの発現の増加として実証され得る。例示的な非限定的なアッセイでは、未分画B細胞は、脾細胞集団として、またはPBMC集団として提供され、ある特定の期間、選択すべきLNPと共にインキュベートされ、次いで、CD19などの標準的なB細胞マーカー及びCD86などの活性化マーカーについて染色され、例えば、フローサイトメトリーを使用して分析される。適切な陰性対照は、培地を用いて同じ集団をインキュベートすること、次いで、同じ染色及び可視化のステップを実施することを含む。陰性対照と比較して、試験集団におけるCD86発現の増加は、B細胞活性化を示す。
B細胞活性化は、サイトカイン放出アッセイによっても評価され得る。例えば、活性化は、目的のLNPと共に曝露されたときの、IL−6及び/またはTNF−αなどのサイトカインの産生及び/または分泌を介して評価され得る。
B細胞へのLNP会合または結合を使用して、目的のLNPを評価し、さらに、そのようなLNPを特徴付けることができる。会合/結合及び/または取り込み/内在化を、検出可能に標識された、例えば、蛍光標識されたLNPを使用し、種々の期間のインキュベーション後のB細胞内またはB細胞上でのそのようなLNPの場所を追跡して評価することができる。本明細書で提供する組成物が、認識または検出、及び任意選択で、循環IgM及び/または急性期タンパク質(例えば、C反応性タンパク質(CRP))などの急性期応答メディエーターなどのABCの下流のメディエーターによる結合を回避し得ることを、本発明はさらに企図する。
ABCを促進することなく対象に治療薬などの薬剤を封入し得るLNPを送達するための方法も本明細書で提供する。
本発明は、部分的に、LNP投与に関連する用量制限毒性の根底にある機序の解明をさらに前提とする。そのような毒性は、凝固障害、急性または慢性かどうかに関わらず、播種性血管内凝固(DIC、消耗性凝固障害とも称される)及び/または血管血栓症を含み得る。一部の場合では、LNPに関連する用量制限毒性は、急性期応答(APR)または補体活性化関連偽アレルギー(pseudoallergy)(CARPA)である。
本明細書に記載のポリヌクレオチド、医薬組成物、及び製剤は、進行性家族性肝内胆汁うっ滞関連疾患(例えば、PFIC1、PFIC2、PFIC3)、障害、または状態を処置及び/または予防するための調製、製造、及び治療用途に使用される。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、組成物、及び製剤は、PFIC(例えば、PFIC1、PFIC2、PFIC3)を処置及び/または予防するために使用される。補充療法は、PFIC1、PFIC2、及びPFIC3の有望な処置である。したがって、本発明のある特定の態様では、本明細書に開示のポリヌクレオチド、例えば、mRNAは、PFICのための遺伝子補充療法において使用するために適している、ABCB4、ABCB11、及び/またはATP8B1をコードする1つまたは複数の配列を含む。一部の実施形態では、本開示は、ポリヌクレオチド、例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするmRNAを対象に提供することにより、小管輸送体障害を処置する。
本発明のある特定の態様は、対象、例えば、動物(例えば、げっ歯類、霊長類など)またはヒト対象におけるABCB4、ABCB11、及び/またはATP8B1の発現レベル(複数可)の測定、決定及び/または監視を特徴とする。動物には、正常、健康または野生型動物、さらには、PFIC及びその処置の理解において使用するための動物モデルが含まれる。例示的な動物モデルには、げっ歯類モデル、例えば、PFICマウスとも称されるPFIC欠損マウスが含まれる。
本発明のある特定の態様は、上で開示のポリヌクレオチドのいずれかを含む組成物または製剤を対象とする。
上記の本発明のポリヌクレオチド、医薬組成物、及び製剤は、治療上有効な結果をもたらす任意の経路により投与することができる。これらには、限定されないが、経腸(腸内に)、胃腸内、硬膜外(硬膜内に)、経口(口から)、経皮、硬膜上、大脳内(大脳内に)、脳室内(脳室内に)、経皮(皮膚への適用)、皮内(皮膚自体に)、皮下(皮膚下に)、経鼻投与(鼻を通して)、静脈内(静脈内に)、静脈内ボーラス、静脈内点滴、動脈内(動脈内に)、筋肉内(筋肉内に)、心臓内(心臓内に)、骨内注入(骨髄内に)、髄腔内(脊髄管内)、腹腔内、(腹膜への注入もしくは注射)、膀胱内注入、硝子体内、(眼を通して)、空洞内注射(病理学的空洞内に)、腔内(陰茎の付け根に)、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮(全身分布のためのインタクトな皮膚を通した拡散)、経粘膜(粘膜を通した拡散)、経膣、吹送法(鼻で吸う)、舌下、唇の下、浣腸、点眼(結膜上に)、点耳、耳介(耳の中もしくは耳から)、頬側(頬に向かって)、結膜、皮膚、歯科用(歯(複数可))、電気浸透、子宮頸管内、副鼻腔内、気管内、体外、血液透析、浸潤、間質内、腹腔内、羊水内、関節内、胆管内、気管支内、嚢内、軟骨内(軟骨内に)、仙骨内(馬尾内に)、大槽内(脳延髄大槽内に)、角膜内(角膜内に)、歯科内膜、冠動脈内(冠動脈内に)、海綿体内(陰茎の陰核海綿体の拡張可能な空間内の)、椎間板内(椎間板内に)、管内(腺管内に)、十二指腸内(十二指腸内に)、硬膜内(硬膜内もしくは硬膜下に)、表皮内(表皮へ)、食道内(食道へ)、胃内(胃内に)、歯肉内(歯肉内に)、回腸内(小腸の遠位部分内に)、病巣内(局所的な病変内にもしくは局所的な病変に直接導入)、管腔内(管の管腔内に)、リンパ腺内(リンパ内に)、髄内(骨の髄腔内に)、髄膜内(髄膜内に)、眼内(眼内に)、卵巣内(卵巣内に)、心膜内(心膜内に)、胸膜腔内(胸膜内に)、前立腺内(前立腺内に)、肺内(肺もしくはその気管支内に)、副鼻腔内(鼻洞もしくは眼窩洞内に)、脊髄内(脊柱内に)、滑液嚢内(関節の滑液腔内に)、腱内(腱内に)、精巣内(精巣内に)髄腔内(脳脊髄軸の任意のレベルで脳脊髄液内に)、胸腔内(胸郭内に)、尿細管内(器官の尿細管内に)、鼓室内(中耳内に)、血管内(血管(複数可)内に)、脳室内(脳室内に)、イオントフォレーゼ(可溶性塩のイオンが身体の組織に移動する電流により)、潅注(開いた創傷もしくは体腔を浸し、もしくは洗浄する)、喉頭(喉頭に直接)、経鼻胃(鼻を通して、胃に)、閉塞性包帯技術(領域を閉塞する包帯剤で覆われる局所経路投与)、眼内(外眼部へ)、口咽頭(口及び咽頭に直接)、非経口、経皮、関節周囲、硬膜上、神経周囲、歯根膜、経直腸、呼吸器(局所的もしくは全身的効果のために経口的もしくは鼻的に吸入することにより気道内に)、眼球後(脳橋の後ろ、もしくは眼球の後ろ)、心筋内(心筋に入る)、軟組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、局所用、経胎盤(胎盤を通して、もしくは胎盤を越えて)、経気管(気管の壁を通して)、経鼓室(鼓室を越えて、もしくは通して)、尿管(尿管への)、尿道(尿道への)、膣、仙骨ブロック、診断、神経ブロック、胆汁灌流、心臓灌流、フォトフェレシス、または脊髄が含まれる。特定の実施形態では、組成物を、それらが、血液脳関門、血管関門、または他の上皮性関門を越えることができるように投与することができる。一部の実施形態では、投与経路のための製剤は、少なくとも1つの不活性成分を含むことができる。
キット
本発明は、本発明の特許請求されるヌクレオチドを、都合よく及び/または効果的に使用するための様々なキットを提供する。典型的には、キットは、ユーザが対象(複数可)の複数の処置を実施し、及び/または複数の実験を実施することを可能にするのに十分な量及び/または数の構成成分を含む。
本発明は、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組み込むことができるデバイスを提供する。これらのデバイスは、ヒト患者などのそれを必要とする対象に直ちに送達するために利用可能な製剤中でポリヌクレオチドを合成する試薬を、安定的な剤形で含有する。
カテーテル及びルーメンを使用する方法及びデバイスは、本発明のポリヌクレオチドを、単回投与、複数回投与、または分割投与スケジュールで投与するために用いることができる。そのような方法及びデバイスは、内容全体が参照により本明細書に援用される国際出願公開WO2013151666に記載されている。
電流を利用する方法及びデバイスは、本明細書に教示の単回投与、複数回投与、または分割投与レジメンに従って、本発明のポリヌクレオチドを送達するために用いることができる。そのような方法及びデバイスは、内容全体が参照により本明細書に援用される国際出願公開WO2013151666に記載されている。
本開示がより容易に理解され得るように、ある特定の用語が初めに定義される。本出願で使用する場合、本明細書に別途明示のない限り、以下の用語はそれぞれ、下記の意味を有するものとする。追加の定義は、本出願の全体にわたって記載される。
本明細書及び特許請求の範囲を通じて数値と関連して使用される「約」という用語は、当業者によく知られており、認められている精度の間隔を示す。そのような精度の間隔は、±10%である。
本明細書中で使用する場合、「組み合わせて投与される」または「組合せ投与」という用語は、2つ以上の薬剤が、同時に、または各薬剤の患者への効果の重複が可能な間隔の範囲内で、対象に投与されることを意味する。一部の実施形態では、それらは、互いに約60、30、15、10、5、または1分以内に投与される。一部の実施形態では、薬剤の投与は、コンビナトリアル(例えば、相乗的)効果が達成されるように、互いに十分に接近して配置される。
「アミノ酸置換」という用語は、親配列または参照配列(例えば、野生型ABCB4、ABCB11、またはATP8B1配列)に存在するアミノ酸残基を別のアミノ酸残基で置換することを指す。アミノ酸は、親配列または参照配列(例えば、野生型ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチド配列)内で、例えば、化学的ペプチド合成または当技術分野で公知の組換え法により置換することができる。したがって、「位置Xでの置換」への言及は、X位に存在するアミノ酸の、代替アミノ酸残基での置換を指す。一部の態様では、置換パターンは、スキーマAnYに従って記載することができ、Aは、n位に天然にまたは元々存在するアミノ酸に対応する一文字コードであり、Yは、置換アミノ酸残基である。他の態様では、置換パターンは、スキーマAn(YZ)に従って記載することができ、Aは、X位に天然にまたは元々存在するアミノ酸を置換するアミノ酸残基に対応する一文字コードであり、Y及びZは、代替置換アミノ酸残基である。
本明細書で使用する場合、「動物」という用語は、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「動物」は、任意の発生期のヒトを指す。一部の実施形態では、「動物」は、任意の発生期の非ヒト動物を指す。ある特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳類(例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類またはブタ)である。一部の実施形態では、動物には、限定されないが、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び虫が含まれる。一部の実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、またはクローンである。
本明細書で使用する場合、目的の1つまたは複数の値に付される「ほぼ」という用語は、記載された参照値に類似する値を指す。ある特定の実施形態では、「ほぼ」という用語は、別途記載のない限り、または別途文脈から明らかでない限り(そのような数が可能な値の100%を超える場合を除き)、記載された参照値のいずれかの(より大きいまたはより小さい)方向に、25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、以下の範囲に入る値を指す。
疾患に対して本明細書で使用する場合、「関連する」という用語は、問題の症状、測定値、特徴、または状態が、その疾患の診断、発症、存在、または進行に関連することを意味する。関連は、原因として疾患との関連がある可能性があるが、関連がある必要はない。例えば、症状、後遺症、またはPFICの患者の生活の質の減少を引き起こす任意の作用は、PFICと関連すると考えられており、本発明の一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドを、それを必要とする対象に投与することにより、処置、改善、または予防することができる。
本明細書で使用する場合、「二機能性」という用語は、少なくとも2つの機能の能力があるか、または維持する任意の物質、分子、または部分を指す。機能は、同じ結果または異なる結果に影響を与える可能性がある。機能を生じる構造は、同じまたは異なる可能性がある。例えば、本発明の二機能性修飾RNAは、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ペプチドをコードすることができる(第1機能)が、コード化RNAを含むヌクレオシドは、それ自体として、RNAの半減期を延長することが可能である(第2機能)。この例では、二機能性修飾RNAを、タンパク質欠乏症に罹患する対象に送達すると、疾患または状態を改善または処置することができるペプチドまたはタンパク質分子を産生するだけでなく、長い期間にわたって対象に存在する集団修飾RNAも維持するであろう。他の態様では、二機能性修飾mRNAは、例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ペプチドをコードするRNA(第1の機能)及び第1のタンパク質に融合されるか、または第1のタンパク質と同時発現される第2のタンパク質を含むキメラ分子であり得る。
本明細書で使用する場合、「生体適合性」という用語は、免疫系による傷害、毒性、または拒絶のリスクをほとんどか、全く有さない生細胞、組織、器官、または系と適合することを意味する。
本明細書で使用する場合、「生分解性」という用語は、生物の作用による無害な産物への分解が可能であることを意味する。
本明細書で使用する場合、「生物学的に活性な」という語句は、生物学的系及び/または生体内で活性を有する任意の物質の特徴を指す。例えば、生体に投与された場合に、その生体に生物学的影響を有する物質は、生物学的に活性であると考えられる。ある特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのいくつかでも生物学的活性であるか、または生物学的に関連すると考えられる活性を模倣する場合、生物学的に活性であると考えることができる。
本明細書中で使用する場合、「キメラ」は、2つ以上の不調和または異種の部分または領域を有する実体である。例えば、キメラ分子は、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドを含む第1の部分及び第2の治療用タンパク質を含む(例えば、第1の部分と遺伝子融合した)第2の部分(例えば、別個の酵素活性を有するタンパク質、抗原結合部分、またはABCB4、ABCB11、またはATP8B1の血漿中半減期を延長することが可能な部分、例えば、抗体のFc領域)を含むことができる。
「配列最適化」という用語は、参照核酸配列内のヌクレオ塩基が代替ヌクレオ塩基で置換されて、特性の向上、例えば、タンパク質発現が向上または免疫原性が減少した核酸配列をもたらすプロセスまたは一連のプロセスを指す。
配列最適化の文脈での「コドン置換(substitution)」または「コドン置換(replacement)」という用語は、参照核酸配列中に存在するコドンを、別のコドンで置換することを指す。コドンは、例えば、化学的ペプチド合成を介して、または当技術分野で公知の組換え方法により、参照核酸配列中で置換することができる。したがって、核酸配列(例えば、mRNA)中のある特定の場所での、または核酸配列(例えば、mRNA)のある特定の領域もしくは部分配列内での「置換(substitution)」または「置換(replacement)」への言及は、そのような場所または領域でのコドンの代替コドンによる置換を指す。
本明細書で使用する場合、「化合物」という用語は、示された構造のすべての立体異性体及び同位体を含むことを意味する。本明細書で使用する場合、「立体異性体」という用語は、化合物の任意の幾何異性体(例えば、シス及びトランス異性体)、エナンチオマー、またはジアステレオマーを意味する。本開示は、立体的に純粋な(例えば、幾何学的に純粋な、エナンチオマー的に純粋な、またはジアステレオマー的に純粋な)形態を含む、本明細書に記載の化合物のありとあらゆる立体異性体、ならびにエナンチオマー及び立体異性体混合物、例えば、ラセミ体を包含する。化合物のエナンチオマー及び立体的混合物、ならびにそれらを、構成成分であるエナンチオマーまたは立体異性体に分割する手段は、周知である。「同位体」は、細胞核内の異なる数の中性子の結果として生じる、原子番号が同じであるが質量数が異なる原子を指す。例えば、水素の同位体は、三重水素及び重水素を含む。さらに、本開示の化合物、塩、または複合体は、ルーチン的な方法により溶媒和物及び水和物を形成するために、溶媒または水分子と組み合わせて調製することができる。
本明細書で使用する場合、「接触」という用語は、2つ以上の実体間の物理的接続を確立することを意味する。例えば、哺乳類細胞をナノ粒子組成物と接触させることは、哺乳類細胞及びナノ粒子が物理的接続を共有させられることを意味する。in vivo及びex vivoの両方で、細胞を、外部実体と接触させる方法は、生物学的技術分野で周知である。例えば、ナノ粒子組成物及び哺乳類内に位置する哺乳類細胞を接触させることは、種々の投与経路(例えば、静脈内、筋肉内、皮内、及び皮下)により実施することができ、種々の量のナノ粒子組成物を含むことができる。さらに、2つ以上の哺乳類細胞をナノ粒子組成物と接触させることができる。
「保存的アミノ酸置換」は、タンパク質配列内のアミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。塩基性側鎖(例えば、リシン、アルギニン、またはヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸)、非荷電極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、またはシステイン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、またはトリプトファン)、β分岐側鎖(例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン)、及び芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、またはヒスチジン)を含む、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当技術分野において規定されている。したがって、ポリペプチド中のアミノ酸が、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸で置換される場合、そのアミノ酸置換は、保存的であると考えられる。別の態様では、アミノ酸のストリングは、側鎖ファミリーメンバーの順序及び/または組成が異なる構造的に類似したストリングで保存的に置換することができる。
非保存的アミノ酸置換は、(i)正電荷側鎖(例えば、Arg、His、もしくはLys)を有する残基が、負電荷残基(例えば、GluもしくはAsp)と置換され、もしくはこれにより置換され、(ii)親水性残基(例えば、SerもしくはThr)が、疎水性残基(例えば、Ala、Leu、Ile、Phe、もしくはVal)と置換され、もしくはこれにより置換され、(iii)システインもしくはプロリンが、他の任意の残基と置換され、もしくはこれにより置換され、または(iv)嵩高い疎水性もしくは芳香族側鎖(例えば、Val、His、Ile、もしくはTrp)を有する残基が、より小さい側鎖を有するもの(例えば、AlaもしくはSer)、もしくは側鎖を有さないもの(例えば、Gly)と置換され、もしくはこれにより置換されるものを含む。
本明細書で使用する場合、「保存された」という用語はそれぞれ、比較される2つ以上の配列の同じ位置で改変されていないものである、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。比較的保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列の他の箇所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連している配列の間で保存されているものである。
本明細書で使用する場合、「徐放」という用語は、治療成績を達成する放出のある特定のパターンに適合する医薬組成物または化合物放出プロファイルを指す。
本明細書で使用する場合、「環状」という用語は、連続ループの存在を指す。環状分子は、サブユニットの破壊されていない鎖を形成するために、環状である必要はなく、単に結合される。本発明の操作されたRNAまたはmRNAなどの環状分子は、単一単位もしくは多量体であるか、または複合体もしくは高次構造の1つまたは複数の構成成分を含むことができる。
本明細書で使用する場合、「細胞毒性」は、細胞(例えば、哺乳類細胞(例えば、ヒト細胞))、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生生物、プリオン、またはそれらの組合せを、死滅させること、または有害な、有毒な、もしくは致命的な影響を引き起こすことを指す。
本明細書で使用する場合、「送達」という用語は、実体を行き先に提供することを意味する。例えば、ポリヌクレオチドを対象に送達することは、ポリヌクレオチドを含むナノ粒子組成物を対象に(例えば、静脈内、筋肉内、皮内、または皮下経路により)投与することを含み得る。ナノ粒子組成物の哺乳類または哺乳類細胞への投与は、1つまたは複数の細胞をナノ粒子組成物と接触させることを含むことができる。
本明細書で使用する場合、「送達剤」は、ポリヌクレオチドの標的細胞へのin vivo、in vitro、またはex vivo送達を、少なくとも部分的に促進する任意の物質を指す。
本明細書で使用する場合、「不安定な(destable)」、「不安定化する」、または「不安定化領域」という用語は、同じ領域または分子の出発、野生型、または天然形態よりも安定性の低い領域または分子を意味する。
本明細書で使用する場合、「ジアステレオマー」という用語は、互いの鏡像でなく、かつ互いに重ね合わせることができない立体異性体を意味する。
本明細書で使用する場合、「消化」という用語は、より小さな断片または構成成分に分裂することを意味する。ポリペプチドまたはタンパク質に言及する場合、消化は、ペプチドの産生をもたらす。
本明細書で使用する場合、「遠位」という用語は、中心から離れて、または目的の点もしくは領域から離れて位置することを意味する。
本明細書で使用する場合、ポリペプチドに言及する場合、「ドメイン」という用語は、1つまたは複数の同定可能な構造的または機能的特徴または特性(例えば、タンパク質−タンパク質相互作用の部位として働く結合能力)を有するポリペプチドのモチーフを指す。
本明細書で使用する場合、「投与レジメン」または「投与レジメン」は、投与スケジュールまたは医師が決定した処置、予防、または対症ケアのレジメンである。
本明細書で使用する場合、薬剤の「有効量」という用語は、有益なまたは所望の結果、例えば、臨床結果を達成するのに十分な量であり、したがって、「有効量」は、それが適用される文脈に依存する。例えば、タンパク質異常(例えば、ABCB4、ABCB11、及び/またはATP8B1異常)を処置する薬剤を投与する状況において、薬剤の有効量は、薬剤の投与なしに観察された症状の重症度と比較して、例えば、ABCB4、ABCB11、及び/またはATP8B1異常に関連する症状を改善、減少、排除または予防するのに十分なABCB4、ABCB11、及び/またはATP8B1を発現するmRNAの量である。「有効量」という用語は、「有効用量」、「治療的有効量」、または「治療有効用量」と互換的に使用することができる。
本明細書で使用する場合、「エナンチオマー」という用語は、少なくとも80%(すなわち、1つのエナンチオマーが少なくとも90%、他のエナンチオマーが多くとも10%)、少なくとも90%、または少なくとも98%の(当技術分野で標準的な方法により決定されるとおりの)光学純度またはエナンチオマー過剰を有する本発明の化合物のそれぞれ個々の光学活性形態を意味する。
本明細書で使用する場合、「封入」という用語は、閉じ込めること、取り囲むこと、または内包することを意味する。
本明細書で使用する場合、「封入効率」は、ナノ粒子組成物の調製に使用されるポリヌクレオチドの初期総量に対する、ナノ粒子組成物の一部となるポリヌクレオチドの量を指す。例えば、組成物に最初に提供された合計100mgのポリヌクレオチドのうち97mgのポリヌクレオチドが、ナノ粒子組成物に封入される場合、封入効率は97%として与えられ得る。本明細書で使用する場合、「封入」は、完全な、実質的な、または部分的な閉じ込め、拘束、取り囲み、または内包を指し得る。
本明細書で使用する場合、「コードされたタンパク質切断シグナル」は、タンパク質切断シグナルをコードするヌクレオチド配列を指す。
本明細書で使用する場合、本発明の実施形態は、構造的または化学的に関わらず、出発点、野生型、または天然分子から変化する特徴または性質を有するように設計される場合、「操作される」。
本明細書で使用する場合、「増強された送達」という用語は、ポリヌクレオチドの対照ナノ粒子による目的の標的組織(例えばMC3、KC2、またはDLinDMA)への送達のレベルと比較して、より多く(例えば、少なくとも1.5倍多く、少なくとも2倍多く、少なくとも3倍多く、少なくとも4倍多く、少なくとも5倍多く、少なくとも6倍多く、少なくとも7倍多く、少なくとも8倍多く、少なくとも9倍多く、少なくとも10倍多く)のポリヌクレオチドのナノ粒子による目的の標的組織(例えば、哺乳類の肝臓)への送達を意味する。ナノ粒子のある特定の組織への送達レベルは、組織中で産生されたタンパク質の量を上記組織の重量と比較すること、組織中のポリヌクレオチドの量を該組織の重量と比較すること、組織中で産生されたタンパク質の量を上記組織中の総タンパク質の量と比較すること、または組織中のポリヌクレオチド量を、上記組織中の総ポリヌクレオチドの量と比較することにより測定することができる。ナノ粒子の標的組織への送達の増強は、処置される対象において決定される必要はなく、それは、動物モデル(例えば、ラットモデル)などの代用物で決定することができることを理解されるであろう。
本明細書で使用する場合、「エキソソーム」は、哺乳類細胞により分泌されるベシクル、またはRNA分解に関与する複合体である。
本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」は、以下のイベント:(1)(例えば、転写による)mRNA鋳型のDNA配列からの生成、(2)(例えば、スプライシング、編集、5’キャップ形成、及び/または3’末端プロセシングによる)mRNA転写のプロセシング、(3)mRNAのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳、及び(4)ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾のうちの1つまたは複数を指す。
本明細書で使用する場合、「ex vivo」という用語は、生体(例えば、動物、植物、もしくは微生物、またはその細胞もしくは組織)の外側で発生するイベントを指す。ex vivoイベントは、天然(例えば、in vivo)環境から最小限に変更された環境で行うことができる。
本明細書で使用する場合、「特徴」は、特徴、特性、または特有の要素を指す。ポリペプチドに言及する場合、「特徴」は、分子の異なるアミノ酸配列に基づく構成成分として定義される。本発明のポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチドの特徴は、表面症状発現、局所立体配座形状、フォールディング、ループ、ハーフループ、ドメイン、ハーフドメイン、部位、末端、またはそれらの任意の組合せを含む。
本明細書で使用する場合、「製剤」は、少なくともポリヌクレオチド、ならびに担体、添加剤、及び送達剤のうちの1つまたは複数を含む。
本明細書で使用する場合、「断片」は、部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離された全長タンパク質を消化することにより得られるポリペプチドを含むことができる。一部の実施形態では、断片は、N末端及び/またはC末端及び/または内部の部分配列が欠失している全長タンパク質(例えば、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1)の部分配列である。本発明のいくつかの好ましい態様では、本発明のタンパク質の断片は、機能性断片である。
本明細書で使用する場合、「機能性」生物学的分子は、特徴となる特性及び/または活性を示す形態の生物学的分子である。したがって、本発明のポリヌクレオチドの機能性断片は、機能性ABCB4、ABCB11、またはATP8B1断片を発現することが可能なポリヌクレオチドである。本明細書で使用する場合、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1の機能性断片は、野生型ABCB4、ABCB11、またはATP8B1の断片(すなわち、その天然に生じるアイソフォームのいずれかの断片)、またはその変異体もしくはバリアントを指し、その断片は、対応する全長タンパク質の生物学的活性の少なくとも約10%、少なくとも約15%、少なくとも約20%、少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約35%、少なくとも約40%、少なくとも約45%、少なくとも約50%、少なくとも約55%、少なくとも約60%、少なくとも約65%、少なくとも約70%、少なくとも約75%、少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、または少なくとも約95%を保持する。
本明細書で使用する場合、「ヘルパー脂質」という用語は、(脂質層、例えば、脂質二重層に挿入するための)脂質部分及び(脂質層の表面での生理学的溶液との相互作用のための)極性部分を含む化合物または分子を指す。典型的には、ヘルパー脂質は、リン脂質である。ヘルパー脂質の機能は、例えば、アミノ脂質を「補完」して二重層の融合性を増加させること、及び/または例えば、細胞に送達された核酸の、エンドソーム脱出を促進することである。ヘルパー脂質は、LNPの表面の重要な構造構成成分であるとも考えられる。
本明細書で使用する場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子(例えば、DNA分子及び/またはRNA分子)間及び/またはポリペプチド分子間の全体的な相関性を指す。一般に、「相同性」という用語は、2つの分子間の進化的関係を意味する。したがって、相同である2つの分子は、共通の進化的先祖を有するであろう。本発明の文脈では、相同性という用語は、同一性及び類似性の両方を包含する。
本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子(例えば、DNA分子及び/またはRNA分子)間の、及び/またはポリペプチド分子間の、全体的なモノマーの保存を指す。2つのポリヌクレオチド配列のパーセント同一性の計算は、例えば、最適な比較のために2つの配列をアラインする(例えば、最適なアラインメントのために、ギャップを第1及び第2の核酸配列のうちの一方または両方に導入することができ、同一でない配列は、比較のために無視してよい)ことにより実施することができる。ある特定の実施形態では、比較のためにアラインされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%、または100%である。次に、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドを比較する。第1の配列中の位置が、第2の配列中の対応する位置と同じヌクレオチドにより占有される場合、分子は、その位置で同一である。2つの配列間のパーセント同一性は、配列により共有される同一位置の数の関数であり、その際、2つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップ数及び各ギャップ長さを考慮に入れる。配列の比較及び2つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。DNA及びRNAを比較する場合、チミン(T)及びウラシル(U)は、同等と考えることができる。
「免疫応答」という用語は、例えば、リンパ球、抗原提示細胞、貪食細胞、顆粒球、ならびに上記細胞または肝臓により産生される可溶性巨大分子(抗体、サイトカイン、及び補体を含む)の作用であって、侵入する病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん細胞、または、自己免疫もしくは病理学的炎症の場合には、正常なヒト細胞もしくは組織の、選択的な損傷、破壊、または人体からの排除をもたらす作用を指す。一部の場合では、脂質構成成分及び封入された治療薬を含むナノ粒子の投与は、(i)封入された治療薬(例えば、mRNA)、(ii)そのような封入された治療薬(例えば、mRNAによりコードされたポリペプチド)の発現産物、(iii)ナノ粒子の脂質構成成分、または(iv)それらの組合せにより引き起こすことができる免疫応答を誘発し得る。
「炎症性応答」は、特異的及び非特異的な防御系を含む免疫応答を指す。特定の防御系反応は、抗原に対する特異的な免疫系反応である。特異的防御系反応の例には、抗体応答が含まれる。非特異的防御系反応は、免疫記憶が一般に不可能な白血球、例えば、マクロファージ、好酸球、及び好中球により媒介される炎症応答である。一部の態様では、免疫応答は、炎症性サイトカインの分泌を含み、炎症性サイトカインレベルの上昇をもたらす。
「炎症性サイトカイン」という用語は、炎症応答において上昇するサイトカインを指す。炎症性サイトカインの例には、インターロイキン−6(IL−6)、GROαとしても公知のCXCL1(ケモカイン(C−X−Cモチーフ)リガンド1、インターフェロンγ(IFNγ)、腫瘍壊死因子α(TNFα)、インターフェロンγ誘導性タンパク質10(IP−10)、または顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)が含まれる。炎症性サイトカインという用語には、当技術分野で公知の炎症性応答と関連する他のサイトカイン、例えば、インターロイキン−1(IL−1)、インターロイキン−8(IL−8)、インターロイキン−12(IL−12)、インターロイキン−13(IL−13)、インターフェロンα(IFN−α)なども含まれる。
本明細書で使用する場合、「in vitro」という用語は、生体(例えば、動物、植物、または微生物)内の代わりに、人工環境、例えば、試験管または反応容器、細胞培養、ペトリ皿などで生じるイベントを指す。
本明細書で使用する場合、「in vivo」という用語は、生体(例えば、動物、植物、もしくは微生物またはその細胞もしくは組織)内で発生するイベントを指す。
ポリペプチドに言及する場合の「挿入バリアント」は、天然配列または出発配列中のある特定の位置のアミノ酸に直接隣接して挿入された1つまたは複数のアミノ酸を有するものである。アミノ酸に「直接隣接する」は、アミノ酸のアルファ−カルボキシまたはアルファ−アミノ官能基のいずれかに結合していることを意味する。ポリペプチドに言及する場合の「欠失バリアント」は、天然または出発アミノ酸配列中の1つまたは複数のアミノ酸が除去されたものである。通常、欠失バリアントは、分子の特定の領域で1つまたは複数のアミノ酸が欠失しているであろう。
本明細書で使用する場合、ポリペプチドの文脈では、「インタクト」という用語は、野生型タンパク質に対応するアミノ酸を保持すること、例えば、野生型アミノ酸を変異させないまたは置換しないことを意味する。逆に、核酸との関連で、「インタクト」という用語は、野生型核酸に対応するヌクレオ塩基を保持すること、例えば、野生型ヌクレオ塩基を変異させない、または置換しないことを意味する。
「イオン性アミノ脂質」という用語は、1、2、3またはそれ以上の脂肪酸または脂肪アルキル鎖及びpH滴定可能なアミノヘッド基(例えば、アルキルアミノまたはジアルキルアミノヘッド基)を有する脂質を含む。イオン性アミノ脂質は典型的には、アミノヘッド基のpKa未満のpHでプロトン化され(すなわち、正に荷電し)、pKaを上回るpHで、実質的に荷電していない。そのようなイオン性アミノ脂質には、限定されないが、DLin−MC3−DMA(MC3)及び(13Z,165Z)−N,N−ジメチル−3−ノニドコサ−13−16−ジエン−1−アミン(L608)が含まれる。
本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、(天然または実験的設定に関わらず)関連した構成成分の少なくともいくつかから分離されている物質または実体を指す。単離された物質(例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド)は、それらが単離されている物質に関して、様々なレベルの純度を有し得る。単離された物質及び/または実体は、最初に関連した他の構成成分の少なくとも約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、またはそれ以上から分離することができる。一部の実施形態では、単離された物質は、約80%を超える、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%、または約99%を超える純度である。本明細書で使用する場合、他の構成成分を実質的に含まない場合、物質は、「純粋」である。
「実質的に単離された」は、化合物が形成または検出された環境から実質的に分離されることを意味する。部分的な分離は、例えば、本開示の化合物が豊富な組成物を含むことができる。実質的な分離は、本開示の化合物またはその塩の少なくとも約50重量%、少なくとも約60重量%、少なくとも約70重量%、少なくとも約80重量%、少なくとも約90重量%、少なくとも約95重量%、少なくとも約97重量%、または少なくとも約99重量%を含有する組成物を含むことができる。
本明細書で使用する場合、「異性体」という用語は、本発明の任意の化合物の任意の互変異性体、立体異性体、エナンチオマー、またはジアステレオマーを意味する。本発明の化合物は、1つまたは複数のキラル中心及び/または二重結合を有することができ、したがって、二重結合異性体(すなわち、幾何E/Z異性体)などの立体異性体あるいはジアステレオマー(例えば、エナンチオマー(すなわち、(+)もしくは(−))またはシス/トランス異性体)として存在することが認められる。本発明によれば、本明細書に記載の化学構造、したがって本発明の化合物は、対応する立体異性体のすべて、つまり、立体的に純粋な(例えば、幾何学的に純粋な、鏡像異性的に純粋な、またはジアステレオマー的に純粋な)形態とエナンチオマー及び立体異性体混合物、例えば、ラセミ体との両方を包含する。本発明の化合物のエナンチオマー混合物及び立体異性体混合物は典型的に、周知の方法、例えば、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高速液体クロマトグラフィー、キラル塩複合体として化合物を結晶化すること、またはキラル溶媒中で化合物を結晶化することで、それらの構成成分のエナンチオマーまたは立体異性体に分離させることができる。エナンチオマー及び立体異性体は、周知の不斉合成法により、立体異性または鏡像異性的に純粋な中間体、試薬、及び触媒から得ることもできる。
本明細書で使用する場合、「リンカー」は、原子の群、例えば、10〜1,000の原子を指し、限定されないが、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどの原子または基からなり得る。リンカーは、第1の末端で、ヌクレオ塩基または糖部分上の修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチドに、第2の末端で、ペイロード、例えば、検出可能な薬剤または治療薬に、結合させることができる。リンカーは、核酸配列への取り込みを阻害しない程度に十分であり得る。リンカーは、任意の有用な目的、例えば、(例えば、2つ以上のキメラポリヌクレオチド分子またはIVTポリヌクレオチドの結合により)ポリヌクレオチド多量体またはポリヌクレオチドコンジュゲートを形成するために、かつ本明細書に記載とおり、ペイロードを投与するために使用することができる。リンカーに組み込むことができる化学基の例には、限定されないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、またはヘテロシクリルが含まれ、これらはそれぞれ、本明細書に記載のとおり、任意選択で置換されていてよい。リンカーの例には、限定されないが、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール(例えば、エチレンまたはプロピレングリコールモノマー単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、またはテトラエチレングリコール)、及びデキストランポリマー、ならびにその誘導体が含まれる。他の例には、限定されないが、還元剤または光分解を使用して切断することができる、例えば、ジスルフィド結合(−S−S−)またはアゾ結合(−N=N−)などのリンカー内の切断可能部分が含まれる。選択的に切断可能な結合の非限定的例には、例えば、トリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)、もしくは他の還元剤の使用及び/または光分解により切断することができるアミド結合、ならびに、例えば、酸性または塩基性の加水分解により切断することができるエステル結合が含まれる。
本明細書で使用する場合、「投与方法」には、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、または組成物を対象に送達する他の方法が含まれ得る。投与方法は、身体の特異的領域または系に標的送達するために(例えば、特異的に送達するために)、選択することができる。
本明細書で使用する場合、「修飾されている」は、本発明の分子の変化した状態または構造を指す。分子は、化学的、構造的、及び機能的を含む、多くの方式で修飾することができる。一部の実施形態では、本発明のmRNA分子は、非天然ヌクレオシド及び/またはヌクレオチドの導入により修飾されており、例えば、それが天然リボヌクレオチドA、U、G、及びCに関連するような場合である。キャップ構造などの非標準ヌクレオチドは、A、C、G、Uリボヌクレオチドの化学構造とは異なるが、「修飾されている」とはみなされない。
本明細書で使用する場合、「粘液」は、粘性であり、かつムチン糖タンパク質を含む天然物質を指す。
本明細書で使用する場合、「ナノ粒子組成物」は、1つまたは複数の脂質を含む組成物である。ナノ粒子組成物は典型的には、マイクロメートル台以下の大きさであり、脂質二重層を含み得る。ナノ粒子組成物は、脂質ナノ粒子(LNP)、リポソーム(例えば、脂質ベシクル)、及びリポプレックスを包含する。例えば、ナノ粒子組成物は、500nm以下の直径を有する脂質二重層を有するリポソームであり得る。
本明細書で使用する場合、「天然に生じる」は、人工的な援助なしに、天然に存在することを意味する
本明細書で使用する場合、「非ヒト脊椎動物」には、野生種及び家畜種を含む、ホモサピエンスを除くすべての脊椎動物が含まれる。非ヒト脊椎動物の例には、限定されないが、哺乳類、例えば、アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤール、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、水牛、及びヤクが含まれる。
「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」、または「ポリヌクレオチド配列」という用語は、互換的に使用され、連続した核酸配列を指す。配列は、一本鎖または二本鎖DNAまたはRNAのいずれか、例えば、mRNAであり得る。
本明細書で使用する場合、「標的外」は、任意の1つまたは複数の標的、遺伝子、または細胞転写物に対する任意の意図しない作用を指す。
本明細書で使用する場合、「オープンリーディングフレーム」または「ORF」は、所与のリーディングフレームに停止コドンを含有しない配列を指す。
本明細書で使用する場合、「作動可能に結合された」という語句は、2つ以上の分子、コンストラクト、転写物、実体、部分などの間の機能性結合を指す。
本明細書では、「任意選択で置換されたX」(例えば、任意選択で置換されたアルキル)という形態の語句は、「X(式中、Xは任意選択で置換されている)」(例えば、「アルキル(式中、上記アルキルは、任意選択で置換されている)」と同等であるものとする。特徴「X」(例えば、アルキル)自体が任意選択であることを意味するものではない。
本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドの「一部」または「領域」は、ポリヌクレオチドの全長よりも短いポリヌクレオチドの任意の部分として定義される。
本明細書で使用する場合、「患者」は、処置を望むか、もしくは処置を必要とする可能性があるか、処置を必ず必要とするか、処置を受けているか、処置を受けることになっている対象、または、特定の疾患もしくは状態のための、訓練を受けた専門家によるケアの下にある対象を指す。一部の実施形態では、急性疾患を発症するリスクを予防し、または減少させる処置が必要とされ、必ず必要とされ、または施され、すなわち、それは、予防的処置である。
「薬学的に許容される」という語句は、適切な医学的判断の範囲内であり、合理的な利益/リスク比に見合う、過度な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症のない、ヒト及び動物の組織との接触での使用に適する化合物、材料、組成物、及び/または剤形を指すために、本明細書では用いられる。
「薬学的に許容される添加剤」という語句は、本明細書で使用する場合、かつ本明細書に記載の化合物以外の、患者において実質的に無毒及び非炎症性である特性を有する任意の成分(例えば、活性化合物を懸濁または溶解させることが可能なビヒクル)を指す。添加剤には、例えば、付着防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮補助剤、崩壊剤、染料(色)、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤(希釈剤)、フィルム形成剤またはコーティング、風味剤、香料、流動促進剤(フローエンハンサー)、滑沢剤、保存剤、印刷インキ、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味料、及び水和水が含まれ得る。例示的な添加剤には、限定されないが、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム(二塩基性)、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微晶質セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、プレゼラチン化デンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミタート、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン(トウモロコシ)、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンA、ビタミンE、ビタミンC、及びキシリトールが含まれる。
本開示は、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩も含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物が、存在する酸または塩基部分をその塩形態に変換することにより(例えば、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることにより)修飾されている開示された化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例には、限定されないが、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などが含まれる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、2−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸、パモ酸塩、ペクチナート(pectinate)、過硫酸塩、3−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、さらには、非毒性アンモニウム、四級アンモニウム、及び限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むアミンカチオンが含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、例えば、非毒性無機または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩を含む。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、水中もしくは有機溶媒中、またはその2つの混合物中で、遊離酸または塩基形態のこれらの化合物を、化学量論量の適切な塩基または酸と反応させることにより調製することができ、一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が使用される。適切な塩のリストは、Remington’s Pharmaceutical Sciences,17th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418,Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,P.H.Stahl and C.G.Wermuth(eds.),Wiley−VCH,2008,及びBerge et al.,Journal of Pharmaceutical Science,66,1−19(1977)に見出され、これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される。
本明細書で使用される「薬学的に許容される溶媒和物」という用語は、適切な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれている本発明の化合物を意味する。適切な溶媒は、投与された投薬量で生理学的に許容される。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、またはそれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶化、または沈殿により調製することができる。適切な溶媒の例は、エタノール、水(例えば、一水和物、二水和物、及び三水和物)、N−メチルピロリジノン(NMP)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、N,N’−ジメチルホルムアミド(DMF)、N,N’−ジメチルアセトアミド(DMAC)、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン(DMEU)、1,3−ジメチル−3,4,5,6−テトラヒドロ−2−(1H)−ピリミジノン(DMPU)、アセトニトリル(ACN)、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、2−ピロリドン、安息香酸ベンジルなどである。水が溶媒である場合、溶媒和物は、「水和物」と称される。
本明細書で使用する場合、「薬物動態学」は、生体に投与される物質の運命の決定に関する場合、分子または化合物の任意の1つまたは複数の特性を指す。薬物動態学は、吸収、分布、代謝、及び排泄の程度及び速度を含むいくつかの領域に分けられる。これは、(A)吸収が血液循環に入る物質のプロセスであり、(D)分布が身体の体液及び組織を通した物質の分散または拡散であり、(M)代謝(または生体内変換)が親化合物の娘代謝物への不可逆的変換であり、かつ(E)排泄(または除去)が物質の身体からの除去を指す場合、ADMEと一般に称される。まれに、いくつかの薬物が、体内組織に不可逆的に蓄積する。
本明細書で使用する場合、「物理化学的」は、物理的及び/または化学的特性を意味し、またはそれに関連する。
「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用する場合、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらのアナログ、またはそれらの混合物を含む、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指す。この用語は、分子の一次構造を指す。したがって、この用語は、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖デオキシリボ核酸(「DNA」)ならびに三本鎖、二本鎖、及び一本鎖リボ核酸(「RNA」)を含む。これはまた、例えば、アルキル化、及び/またはキャッピングによる修飾形態のポリヌクレオチド、ならびに非修飾形態のポリヌクレオチドを含む。より詳細には、「ポリヌクレオチド」という用語は、(2−デオキシ−D−リボースを含有する)ポリデオキシリボヌクレオチド、スプライシングまたは未スプライシングに関わらず、tRNA、rRNA、hRNA、siRNA、及びmRNAを含む(D−リボースを含有する)ポリリボヌクレオチド、プリンまたはピリミジン塩基のN−グリコシドまたはC−グリコシドのである他の任意のタイプのポリヌクレオチド、ならびにノルムクレオチド(normucleotidic)骨格を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド(例えば、ペプチド核酸「PNA」)及びポリモルホリノポリマー、ならびに他の合成配列特異的核酸ポリマーを含むが、ただし、ポリマーは、DNA及びRNAにみられるような塩基対合及び塩基スタッキングを可能にする立体配置のヌクレオ塩基を含有する。特定の態様では、ポリヌクレオチドは、mRNAを含む。他の態様では、mRNAは、合成mRNAである。一部の態様では、合成mRNAは、少なくとも1つの非天然ヌクレオ塩基を含む。一部の態様では、ある特定のクラスのすべてのヌクレオ塩基は、非天然ヌクレオ塩基で置換されている(例えば、本明細書に開示のポリヌクレオチド中のすべてのウリジンは、非天然ヌクレオ塩基、例えば、5−メトキシウリジンで置換することができる)。一部の態様では、ポリヌクレオチド(例えば、合成RNAまたは合成DNA)は、合成DNAの場合には、天然のヌクレオ塩基、すなわち、A(アデノシン)、G(グアノシン)、C(シチジン)、及びT(チミジン)のみを、または合成RNAの場合には、A、C、G、及びU(ウリジン)のみを含む。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために本明細書では互換的に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含むことができる。この用語は、天然に、または介入:例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または他の任意の操作もしくは修飾、例えば、標識構成成分との複合化により修飾されているアミノ酸ポリマーも包含する。さらに、例えば、アミノ酸の1つまたは複数のアナログ(例えば、非天然アミノ酸、例えば、ホモシステイン、オルニチン、p−アセチルフェニルアラニン、D−アミノ酸、及びクレアチンを含む)を含有するポリペプチド、ならびに当技術分野で公知の他の修飾が、この定義内に含まれる。
本明細書で使用する場合、「ポリペプチドバリアント」という用語は、それらのアミノ酸配列が天然または参照配列と異なる分子を指す。アミノ酸配列バリアントは、天然または参照配列と比較して、アミノ酸配列内のある特定の位置に、置換、欠失、及び/または挿入を有することができる。通常、バリアントは、天然配列または参照配列と、少なくとも約50%の同一性、少なくとも約60%の同一性、少なくとも約70%の同一性、少なくとも約80%の同一性、少なくとも約90%の同一性、少なくとも約95%の同一性、少なくとも約99%の同一性を有するであろう。一部の実施形態では、それらは、天然配列または参照配列と、少なくとも約80%同一または少なくとも約90%同一であろう。
本明細書で使用する場合、PUDすなわち単位薬物当たりの産物は、体液または組織中で測定されるような産物(例えば、ポリペプチド)の総1日用量、通常は、1mg、pg、kgなどの細別された部分として定義され、通常は、濃度、例えば、pmol/mL、mmol/mLなどで定義され、体液中での測定値で分けられる。
本明細書で使用する場合、「予防すること」という用語は、感染、疾患、障害、及び/または状態の発症を部分的もしくは完全に遅延させること、特定の感染、疾患、障害、及び/または状態の1つまたは複数の症状、特徴、もしくは臨床症状発現の発症を部分的にもしくは完全に遅延させること、特定の感染、疾患、障害、及び/または状態の1つまたは複数の症状、特徴、もしくは症状発現の発症を部分的もしくは完全に遅延させること、感染、特定の疾患、障害、及び/または状態からの進行を部分的もしくは完全に遅延させること、及び/または感染、疾患、障害、及び/または状態に関連する病状を発症するリスクを減少させることを指す。
本明細書で使用する場合、「増殖する」という用語は、成長、拡大、もしくは増加すること、または急速に成長、拡大、もしくは増加させることを意味する。「増殖性」は、増殖能力を有することを意味する。「抗増殖性」は、増殖特性に反するか、または不適当な特性を有することを意味する。
本明細書で使用する場合、「予防的」は、疾患の拡大を予防するために使用される治療薬または一連の作用を指す。
本明細書で使用する場合、「予防」は、健康を維持し、疾患の拡大を防ぐための措置を指す。「免疫予防」は、疾患の拡大を予防するための能動免疫または受動免疫を生じる措置を指す。
本明細書中で使用する場合、「タンパク質切断部位」は、化学的、酵素的、または光化学的手段により、アミノ酸鎖の制御された切断が達成され得る部位を指す。
本明細書で使用する場合、「タンパク質切断シグナル」は、切断のためにポリペプチドにフラグを立てるまたはマークする少なくとも1つのアミノ酸を指す。
本明細書中で使用する場合、「目的のタンパク質」または「所望のタンパク質」という用語は、本明細書で提供されるもの、ならびに、その断片、変異体、バリアント、及び改変体を含む。
本明細書で使用する場合、「近位」という用語は、中心または目的の点もしくは領域のより近くに位置することを意味する。
本明細書で使用する場合、シュードウリジン(Ψ)は、ヌクレオシドウリジンのC−グリコシド異性体を指す。「シュードウリジンアナログ」は、シュードウリジンの任意の改変体、バリアント、アイソフォーム、または誘導体である。例えば、シュードウリジンアナログには、限定されないが、1−カルボキシメチルシュードウリジン、1−プロピニルシュードウリジン、1−タウリノメチルシュードウリジン、1−タウリノメチル−4−チオ−シュードウリジン、1−メチルシュードウリジン(m1Ψ)(N1−メチルシュードウリジンとしても公知)、1−メチル−4−チオシュードウリジン(m1s4Ψ)、4−チオ−1−メチルシュードウリジン、3−メチル−シュードウリジン(m3Ψ)、2−チオ−1−メチル−シュードウリジン、1−メチル−1−デアザ−シュードウリジン、2−チオ−1−メチル−1−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロシュードウリジン、2−チオジヒドロシュードウリジン、2−メトキシウリジン、2−メトキシ−4−チオウリジン、4−メトキシシュードウリジン、4−メトキシ−2−チオ−シュードウリジン、1−メチル−3−(3−アミノ−3−カルボキシプロピル)シュードウリジン(acp3Ψ)、及び2’−O−メチルシュードウリジン(Ψm)が含まれる。
本明細書で使用する場合、「精製する」、「精製した」、「精製」は、望ましくない構成成分、材料汚染、混合物、または不完全性から実質的に純粋またはクリアにすることを意味する。
「参照核酸配列」または「参照核酸」または「参照ヌクレオチド配列」または「参照配列」という用語は、配列最適化することができる出発核酸配列(例えば、RNA、例えば、mRNA配列)を指す。一部の実施形態では、参照核酸配列は、野生型核酸配列、その断片またはバリアントである。一部の実施形態では、参照核酸配列は、以前に配列最適化された核酸配列である。
一部の態様では、送達のための医薬組成物は、本明細書に開示され、それらの脂質成分のいくつかの塩を含む。「塩」という用語は、任意のアニオン性及びカチオン性複合体を含む。アニオンの非限定的例には、無機及び有機アニオン、例えば、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、シュウ酸塩(例えば、ヘミシュウ酸塩)、リン酸塩、ホスホン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、酸化物、炭酸塩、重炭酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、窒化物、亜硫酸水素塩、硫化物、亜硫酸塩、重硫酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、アクリル酸塩、ポリアクリル酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、イタコン酸塩、グリコール酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、チグリン酸塩、アスコルビン酸塩、サリチル酸塩、ポリメタクリル酸塩、過塩素酸塩、塩素酸塩、亜塩素酸塩、次亜塩素酸塩、臭素酸塩、次亜臭素酸塩、ヨウ素酸塩、アルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、ヒ酸塩、亜ヒ酸塩、クロム酸塩、二クロム酸塩、シアン化物、シアン酸塩、チオシアン酸塩、水酸化物、過酸化物、過マンガン酸塩、及びそれらの混合物が含まれる。
本明細書中で使用する場合、「試料」または「生物学的試料」という用語は、その組織、細胞、または構成成分部分(例えば、限定されないが、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、臍帯血、尿、膣液、及び精液を含む体液)のサブセットを指す。試料にはさらに、限定されないが、例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部切片、呼吸器、腸、及び泌尿生殖路、涙液、唾液、乳、血液細胞、腫瘍、または器官を含む、完全な生体もしくはその組織、細胞もしくは構成成分部分のサブセット、またはその画分もしくは一部から調製されるホモジネート、溶解物、もしくは抽出物も含まれ得る。試料はさらに、タンパク質または核酸分子などの細胞構成成分を含有することができる、栄養ブロスまたはゲルなどの培地を指す。
本明細書で使用する場合、「シグナル配列」、「シグナルペプチド」、及び「輸送ペプチド」という語句は、互換的に使用され、ある特定の細胞小器官、細胞区画、または細胞外排出へのタンパク質の輸送または局在化を導くことができる配列を指す。この用語は、シグナル配列ポリペプチド及びシグナル配列をコードする核酸配列の両方を包含する。したがって、核酸の文脈でのシグナル配列への言及は、実際には、シグナル配列ポリペプチドをコードする核酸配列を指す。
「シグナル伝達経路」は、細胞のある部分から細胞の別の部分へのシグナルの伝達において役割を果たしている様々なシグナル伝達分子間の生化学的関係を指す。本明細書で使用する場合、「細胞表面受容体」という語句は、例えば、シグナル及びそのようなシグナルの、細胞の原形質膜を越える伝達を受け取ることが可能な分子及び分子の複合体を含む。
本明細書で使用する場合、「類似性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子(例えば、DNA分子及び/またはRNA分子)間の、及び/またはポリペプチド分子間の、全体的な関連性を指す。ポリマー分子の相互のパーセント類似性の計算は、パーセント類似性の計算が当技術分野で理解されるような保存的置換を考慮に入れていることを除いて、パーセント同一性の計算と同じ方法で実施することができる。
本明細書で使用する場合、「単回単位用量」は、1回の用量で/一度に/単一経路で/単一の接触点、すなわち、単回投与イベントで、投与される任意の治療薬の用量である。
本明細書で使用する場合、「分割用量」は、単回単位用量または総1日用量の2回以上の用量への分割である。
本明細書で使用する場合、「特異的送達」、「特異的に送達する」、または「特異的に送達すること」という用語は、標的外の組織(例えば、哺乳類の脾臓)と比較して、より多く(例えば、少なくとも1.5倍多く、少なくとも2倍多く、少なくとも3倍多く、少なくとも4倍多く、少なくとも5倍多く、少なくとも6倍多く、少なくとも7倍多く、少なくとも8倍多く、少なくとも9倍多く、少なくとも10倍多く)のポリヌクレオチドのナノ粒子による目的の標的組織(例えば、哺乳類の肝臓)への送達を意味する。ナノ粒子の特定の組織への送達レベルは、組織中で産生されたタンパク質の量を上記組織の重量と比較すること、組織中のポリヌクレオチドの量を上記組織の重量と比較すること、組織中で産生されたタンパク質の量を上記組織中の総タンパク質の量と比較すること、または組織中のポリヌクレオチド量を、上記組織中の総ポリヌクレオチドの量と比較することにより測定することができる。例えば、腎血管の標的化では、ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの全身投与後に肝臓または脾臓に送達されるものと比較して、組織1g当たり、1.5、2倍、3倍、5倍、10倍、15倍、または20倍多いポリヌクレオチドが腎臓に送達される場合に、肝臓及び脾臓と比較して、哺乳類の腎臓に特異的に提供される。ナノ粒子が標的組織に特異的に送達する能力は、処置される対象において決定される必要はなく、動物モデル(例えば、ラットモデル)などの代用物で決定することができると理解されるであろう。
本明細書で使用する場合、「安定性」は、反応混合物からの有用な程度の純度までの単離を耐え抜く十分な強さを有し、一部の場合では、有効な治療薬への製剤化が可能な化合物を指す。
本明細書中で使用する場合、「安定化する」、「安定化した」、「安定化した領域」という用語は、安定にさせるか、または安定になることを意味する。
本明細書中で使用する場合、「立体異性体」という用語は、化合物(例えば、本明細書に記載の任意の式の化合物)が有することができるすべての可能な異なる異性体形態及び立体配座形態、特に、基本分子構造のすべての可能な立体化学的及び立体配座的異性体形態、すべてのジアステレオマー、エナンチオマー、及び/または立体配座異性体を指す。本発明のいくつかの化合物は、異なる互変異性体形態で存在することができ、後者はすべて本発明の範囲内に含まれる。
「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳類」は、診断、予後、または治療が望まれる任意の対象、特に、哺乳類対象を意味する。哺乳類対象には、限定されないが、ヒト、飼育動物、家畜、動物園動物、スポーツ動物、ペット動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、雌ウシ、霊長類、例えば、類人猿、サル、オランウータン、及びチンパンジー、イヌ科動物、例えば、イヌ及びオオカミ、ネコ科動物、例えば、ネコ、ライオン、及びトラ、ウマ科動物、例えば、ウマ、ロバ、及びシマウマ、クマ、食用動物、例えば、雌ウシ、ブタ、及びヒツジ、有蹄動物、例えば、シカ及びキリン、げっ歯類、例えば、マウス、ラット、ハムスター、及びモルモットなどが含まれる。ある特定の実施形態では、哺乳類は、ヒト対象である。他の実施形態では、対象は、ヒト患者である。ある特定の実施形態では、対象は、処置を必要とするヒト患者である。
本明細書で使用する場合、「実質的に」という用語は、目的の特徴または特性の全体またはほぼ全体の程度(extent)または程度(degree)を示す定性的条件を指す。生物学的及び化学的特徴が、あるとしても、完結し、及び/または完全まで進行し、または絶対的な結果を達成もしくは回避することはほとんどないことを、生物学の当業者は、理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、本明細書では、多くの生物学的及び化学的特徴に固有の完全性の潜在的な欠如を捕捉するために使用される。
用量間の時間差に関連して本明細書で使用する場合、この用語は、プラス/マイナス2%を意味する。
本明細書で使用する場合、かつ複数の用量に関連する場合、この用語は、2秒以内を意味する。
疾患、障害、及び/または状態「罹患している」個体は、疾患、障害、及び/または状態の1つまたは複数の症状と診断されており、またはこれを示す。
疾患、障害、及び/または状態「に罹患しやすい」個体は、症状、障害、及び/または状態の症状と診断されておらず、及び/またはこれらを示すことができないが、疾患もしくはその症状を発症する性質を有する。一部の実施形態では、疾患、障害、及び/または状態(例えば、PFIC)に罹患しやすい個体は、以下の:(1)疾患、障害、及び/または状態の発症に関連する遺伝的変異、(2)疾患、障害、及び/または状態の発症に関連する遺伝的多型、(3)疾患、障害、及び/または状態に関連するタンパク質及び/または核酸の発現及び/または活性の増加及び/または減少、(4)疾患、障害、及び/または状態の発症に関連する習慣及び/または生活様式、(5)疾患、障害、及び/または状態の家族歴、ならびに、(6)疾患、障害、及び/または状態の発症に関連する微生物への曝露及び/または感染のうちの1つまたは複数により特徴付けることができる。一部の実施形態では、疾患、障害、及び/または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、及び/または状態を発症するであろう。一部の実施形態では、疾患、障害、及び/または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、及び/または状態を発症しないであろう。
本明細書で使用する場合、「持続放出」という用語は、ある特定の期間にわたる放出速度に適合する医薬組成物または化合物の放出プロファイルを指す。
「合成」という用語は、人の手により生成、調製、及び/または製造されることを意味する。本発明のポリヌクレオチドまたは他の分子の合成は、化学的または酵素的であり得る。
本明細書で使用する場合、「標的細胞」は、目的の1つまたは複数の任意の細胞を指す。細胞は、in vitroで、in vivo、in situ、または生体の組織もしくは器官で見出すことができる。生体は、動物、例えば、哺乳類、ヒト、対象、または患者であり得る。
本明細書で使用する場合、「標的組織」は、ポリヌクレオチドの送達が所望の生物学的及び/または薬理学的効果をもたらすであろう、目的の1つまたは複数の任意の組織型を指す。目的の標的組織の例には、特定の組織、器官、及びそれらの系または群が含まれる。特定用途では、標的組織は、肝臓、腎臓、肺、脾臓、または血管(例えば、冠動脈内または大腿内)内の血管内皮であり得る。「標的外の組織」は、コードされたタンパク質の発現が所望の生物学的及び/または薬理学的効果をもたらさない任意の1つまたは複数の組織型を指す。
本明細書で使用する場合、「標的配列」という語句は、タンパク質またはポリペプチドの輸送または局在化を導くことができる配列を指す。
本明細書で使用する場合、「末端」(複数可)という用語は、ポリペプチドに言及する場合、ペプチドまたはポリペプチドの末端を指す。そのような末端は、ペプチドまたはポリペプチドの最初または最終部位のみに限定されないが、末端領域に追加的なアミノ酸を含むことができる。本発明のポリペプチドをベースとする分子は、(遊離アミノ基(NH2)を有するアミノ酸で末端処理した)N末端及び(遊離カルボキシル基(COOH)を有するアミノ酸で末端処理した)C末端の両方を有することで特徴付けられ得る。本発明のタンパク質は、一部の場合では、ジスルフィド結合または非共有結合力により1つにされた複数のポリペプチド鎖(多量体、オリゴマー)で構成されている。これらのタイプのタンパク質は、複数のN末端及びC末端を有するであろう。別法では、ポリペプチドの末端を、それらが、場合に応じて、有機コンジュゲートなどの非ポリペプチドをベースとする部分で、開始または終了するように修飾することができる。
「治療薬」という用語は、対象に投与される場合、治療的、診断的、及び/または予防的効果を有し、及び/または所望の生物学的及び/または薬理学的効果を誘発する薬剤を指す。例えば、一部の実施形態では、ABCB4、ABCB11、またはATP8B1ポリペプチドをコードするmRNAは、治療薬であり得る。別の例では、一部の実施形態では、ATP8B1ポリペプチドをコードするmRNAは、治療薬であり得る。さらに別の例では、一部の実施形態では、ABCB4ポリペプチドをコードするmRNA、ABCB11ポリペプチドをコードするmRNA、及びATP8B1ポリペプチドをコードするmRNAは、合わさっていると考えて、一つの治療薬であり得る。
本明細書で使用する場合、「治療的有効量」という用語は、感染、疾患、障害、及び/または状態に罹患している、またはこれらに罹患しやすい対象に投与される場合、感染、疾患、障害、及び/または状態を処置し、これらの症状を改善し、診断し、予防し、及び/またはこれらの発症を遅延させるのに十分である送達されるべき薬剤(例えば、核酸、薬物、治療薬、診断薬、予防薬など)の量を意味する。
本明細書で使用する場合、「治療上有効な結果」という用語は、感染、疾患、障害、及び/または状態に罹患している、またはこれらに罹患しやすい対象において、感染、疾患、障害、及び/または状態を処置し、これらの症状を改善し、診断し、予防し、及び/またはこれらの発症を遅延させるのに十分である結果を意味する。
本明細書で使用する場合、「総1日用量」は、24時間の期間に与えられるか、または処方される量である。総1日用量を、単回単位用量または分割用量として投与することができる。
本明細書で使用する場合、「転写因子」という用語は、例えば、転写の活性化または抑制により、DNAのRNAへの転写を制御するDNA結合タンパク質を指す。いくつかの転写因子は、単独で転写の制御を行うが、他のものは、他のタンパク質と協調して作用する。いくつかの転写因子は、ある特定の条件下で転写を活性化することも抑制することもできる。一般に、転写因子は、標的遺伝子の制御領域において特異的標的配列または特異的コンセンサス配列と高度に類似する配列に結合する。転写因子は、標的遺伝子の転写を単独で、または他の分子との複合体中で、調節することができる。
本明細書で使用する場合、「転写」という用語は、DNA(例えば、DNA鋳型または配列)からmRNA(例えば、mRNA配列または鋳型)を産生する方法を指す。
本明細書中で使用する場合、「トランスフェクション」は、ポリヌクレオチド(例えば、外因性核酸)の細胞への導入を指し、ポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチドが発現されるか(例えば、mRNA)、またはポリペプチドが細胞機能を調節する(例えば、siRNA、miRNA)。本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」は、ポリヌクレオチド(例えば、mRNA)のポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳、及び/またはポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾を指す。トランスフェクションの方法には、限定されないが、化学的方法、物理的処理、及びカチオン脂質または混合物が含まれる。
本明細書で使用する場合、「処置すること」または「処置」または「治療」という用語は、疾患、例えば、PFICの1つまたは複数の症状または特徴を、部分的または完全に緩和すること、改善すること、好転させること、軽減すること、これらの発症を遅延させること、これらの進行を阻害すること、これらの重症度を低下させること、及び/またはこれらの発生率を低下させることを指す。例えば、PFICを「処置すること」は、疾患と関連する症状の減少、患者の寿命延長(生存率の増加)、疾患の重症度の低下、疾患の発症の予防または遅延などを指し得る。処置は、疾患、障害、及び/または状態に関連する病状を発症するリスクを減少させるために、疾患、障害、及び/または状態の徴候を示していない対象、及び/または疾患、障害、及び/または状態の初期徴候のみを示している対象に投与することができる。
本明細書で使用する場合、「非修飾」は、何らかの方法で変更される前の任意の物質、化合物、または分子を指す。非修飾は、必ずしも常にではないが、野生型または天然形態の生体分子を指し得る。分子は、一連の修飾を受けることができ、それにより、それぞれの修飾分子は、その後の修飾のための「非修飾」出発分子として役立ち得る。
ウラシルは、RNAの核酸の4つのヌクレオ塩基のうちの1つであり、これは、文字Uで表される。ウラシルは、N1−グリコシド結合を介して、リボース環、またはより具体的には、リボフラノースと結合して、ヌクレオシドウリジンをもたらし得る。ヌクレオシドウリジンはまた一般に、そのヌクレオ塩基の1文字コード、すなわち、Uに省略される。したがって、本開示の文脈では、ポリヌクレオチド配列中のモノマーがUである場合、そのようなUは、「ウラシル」または「ウリジン」として互換的に呼ばれる。
「ウリジン含有量」または「ウラシル含有量」という用語は、互換的であり、ある特定の核酸配列中に存在するウラシルまたはウリジンの量を指す。ウリジン含有量またはウラシル含有量は、絶対値(配列中のウリジンまたはウラシルの総数)または相対値(核酸配列中のヌクレオ塩基の総数に対するウリジンまたはウラシルパーセンテージ)として表すことができる。
「ウリジン修飾配列」という用語は、候補核酸配列のウリジン含有量及び/またはウリジンパターンに対して、異なる全体的または局所的ウリジン含有量(より高いまたはより低いウリジン含有量)を有する、または異なるウリジンパターン(例えば、勾配分布またはクラスタリング)を有する配列最適化核酸(例えば、合成mRNA配列)を指す。本開示の記載内容では、「ウリジン修飾配列」及び「ウラシル修飾配列」という用語は、同等であり互換性があると考えられる。
本明細書で使用する場合、「ウリジン富化」という用語及び文法上の変形語は、対応する候補核酸配列のウリジン含有量に対する配列最適化核酸(例えば、合成mRNA配列)中の(絶対値で、またはパーセンテージ値として表される)ウリジン含有量の増加を指す。ウリジン富化は、候補核酸配列中のコドンを、より少ないウリジンヌクレオ塩基を含有する同義コドンで置換することにより実施することができる。ウリジン富化は、全体的(すなわち、候補核酸配列の全長に対する)または局所的(すなわち、候補核酸配列の部分配列もしくは領域に対する)であり得る。
本明細書で使用する場合、「ウリジン希薄化」という用語及び文法上の変形語は、対応する候補核酸配列のウリジン含有量に対する配列最適化核酸(例えば、合成mRNA配列)中の(絶対値で、またはパーセンテージ値として表される)ウリジン含有量の減少を指す。ウリジン希薄化は、候補核酸配列中のコドンを、より少ないウリジンヌクレオ塩基を含有する同義コドンで置換することにより実施することができる。ウリジン希薄化は、全体的(すなわち、候補核酸配列の全長に対する)または局所的(すなわち、候補核酸配列の部分配列もしくは領域に対する)であり得る。
本開示で使用されるバリアントという用語は、天然バリアント(例えば、多型、アイソフォームなど)と、天然または出発配列(例えば、野生型配列)中の少なくとも1つのアミノ酸残基が除去されており、異なるアミノ酸が同じ場所のその位置に挿入されている人工バリアントとの両方を指す。これらのバリアントは、「置換バリアント」として記載することができる。置換は、分子中の1つのアミノ酸のみが置換されている単一であってもよいし、または2つ以上のアミノ酸が同じ分子中で置換されている複数であってもよい。アミノ酸を挿入する、または欠失させる場合、得られるバリアントは、それぞれ「挿入バリアント」または「欠失バリアント」であろう。
本明細書で使用する場合、「開始コドン(start codon)」という用語と互換的に使用される「開始コドン(initiation codon)」という用語は、リボソームにより翻訳されるオープンリーディングフレームの第1のコドンを指し、結合したアデニン−ウラシル−グアニンヌクレオ塩基の三重項から構成される。開始コドンは、アデニン(A)、ウラシル(U)、及びグアニン(G)の第1の1文字コードにより示され、多くの場合に簡単に「AUG」と記される。天然mRNAは、開始コドンとして、本明細書では「代替開始コドン(alternative initiation codon)」と称されるAUG以外のコドンを使用することもあるが、本明細書に記載のポリヌクレオチドの開始コドンは、AUGコドンを用いる。翻訳開始のプロセス中に、開始コドンを含む配列は、リボソームにより結合したイニシエーターtRNA(Met−tRNAi Met)のアンチコドンとの相補的塩基対合を介して認識される。オープンリーディングフレームは、1つよりも多いAUG開始コドンを含むことがあり、それらは本明細書では「交代用開始コドン(alternate initiation codon)」と称される。
「コザック配列」(「コザックコンセンサス配列」とも称される)という用語は、遺伝子またはオープンリーディングフレームの発現を増強する翻訳開始エンハンサーエレメントを指し、真核生物では、5’UTRに位置する。コザックコンセンサス配列は元々、プレプロインスリン遺伝子の翻訳に対する開始コドン(AUG)周囲の単一変異の作用の解析に従って、配列GCCRCCとして定義された(ここで、R=プリン)(Kozak(1986)Cell 44:283−292)。本明細書に開示のポリヌクレオチドは、コザックコンセンサス配列、またはその誘導体または変更形態を含む(翻訳エンハンサー組成及びその使用方法の例については、全体が参照により本明細書に援用されるAndrews et al.に付与された米国特許第5,807,707号、全体が参照により本明細書に援用されるChernajovskyに付与された米国特許第5,723,332号、全体が参照により本明細書に援用されるWilsonに付与された米国特許第5,891,665号を参照されたい)。
本明細書で使用する場合、「修飾された」または「修飾」は、ポリヌクレオチド(例えば、mRNA)の組成または構造が変化した状態またはその変化を指す。ポリヌクレオチドを、化学的、構造的、及び/または機能的を含む様々な方式で修飾することができる。例えば、ポリヌクレオチドを、1つまたは複数のRNAエレメントの組み込みにより構造的に修飾することができ、その際、RNAエレメントは、1つまたは複数の機能(例えば、翻訳制御活性)を与える配列及び/またはRNA二次構造(複数可)を含む。したがって、本開示のポリヌクレオチドは、1つまたは複数の修飾を含んでよい(例えば、1つまたは複数の化学的、構造的、または機能的修飾を、それらの任意の組合せを含めて、含んでよい)。
本明細書で使用する場合、「ヌクレオ塩基」(別法では、「ヌクレオチド塩基」または「窒素塩基」)という用語は、改良された特性(例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ抵抗性、化学的安定性)を核酸またはその部分もしくはセグメントに付与する、天然に生じるプリン及びピリミジンの任意の誘導体またはアナログを含む、核酸において見い出されるプリンまたはピリミジン複素環式化合物を指す。アデニン、シトシン、グアニン、チミン、及びウラシルが、天然核酸において主に見い出されるヌクレオ塩基である。当技術分野で公知である、及び/または本明細書に記載の他の天然、非天然、及び/または合成ヌクレオ塩基を核酸に組み込むことができる。
本明細書で使用する場合、「ヌクレオシド」という用語は、ヌクレオ塩基(例えば、プリンまたはピリミジン)、またはその誘導体もしくはアナログ(「ヌクレオ塩基」とも称される)に共有結合した糖分子(例えば、RNA中のリボースまたはDNA中のデオキシリボース)、またはその誘導体もしくはアナログを含有するが、インターヌクレオシド結合基(例えば、リン酸基)が存在しない化合物を指す。本明細書で使用する場合、「ヌクレオチド」という用語は、改良された化学的及び/または機能的特性(例えば、結合親和性、ヌクレアーゼ抵抗性、化学的安定性)を核酸またはその部分もしくはセグメントに付与するインターヌクレオシド結合基(例えば、リン酸基)、または任意のその誘導体、アナログ、もしくは変更形態に共有結合したヌクレオシドを指す。
本明細書で使用する場合、「核酸」という用語は、その最も広い意味で用いられ、ヌクレオチドのポリマー、またはその誘導体もしくはアナログを含む任意の化合物及び/または物質を包含する。これらのポリマーは多くの場合に、「ポリヌクレオチド」と称される。したがって、本明細書で使用する場合、「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は同等であり、互換的に使用される。本開示の例示的な核酸またはポリヌクレオチドには、限定されないが、リボ核酸(RNA)、デオキシリボ核酸(DNA)、DNA−RNAハイブリッド、RNAi誘発薬、RNAi薬、siRNA、shRNA、mRNA、修飾mRNA、miRNA、アンチセンスRNA、リボザイム、触媒DNA、三重らせん形成を誘発するRNA、トレオース核酸(TNA)、グリコール核酸(GNA)、ペプチド核酸(PNA)、ロック核酸(β−D−リボ配置を有するLNA、α−L−リボ配置を有するα−LNA(LNAのジアステレオ異性体)、2’−アミノ官能基化を有する2’−アミノ−LNA、及び2’−アミノ官能基化を有する2’−アミノ−α−LNAを含むLNA)またはそのハイブリッドが含まれる。
本明細書で使用する場合、「核酸構造」(「ポリヌクレオチド構造」と互換的に用いられる)という用語は、核酸(例えば、mRNA)を構成する結合したヌクレオチド、またはその誘導体もしくはアナログの原子、化学的構成成分、エレメント、モチーフ、及び/または配列の配置または組織化を指す。この用語はまた、核酸の二次元または三次元状態を指す。したがって、「RNA構造」という用語は、RNA分子(例えば、mRNA)を構成する結合したヌクレオチド、またはその誘導体もしくはアナログの原子、化学的構成成分、エレメント、モチーフ、及び/または配列の配置または編成を指し、及び/またはRNA分子の二次元または三次元状態を指す。核酸構造をさらに、組織的複雑性の上昇に基づき「分子構造」、「一次構造」、「二次構造」、及び「三次構造」と本明細書では称される4つの組織カテゴリーに区別することができる。
本明細書で使用する場合、「ORF」と略される「オープンリーディングフレーム」という用語は、ポリペプチドをコードするmRNA分子のセグメントまたは領域を指す。ORFは、開始コドンから始まって停止コドンで終了する非重複インフレームコドンの連続ストレッチを含み、リボソームにより翻訳される。
本明細書で使用する場合、「前開始複合体」(別法では「43S前開始複合体」、略して「PIC」)という用語は、40Sリボソームサブユニット、真核開始ファクター(eIFl、eIFlA、eIF3、eIF5)、及びeIF2−GTP−Met−tRNAi Met三元複合体を含むリボ核タンパク質複合体を指し、これは、内因的にmRNA分子の5’キャップに結合することができ、結合の後に、5’UTRのリボソームスキャニングを行うことができる。
本明細書で使用する場合、「RNAエレメント」という用語は、生物学的機能を提供する、及び/または生物学的活性(例えば、翻訳制御活性)を有するRNA分子の部分、断片、またはセグメントを指す。本明細書に記載されているものなどの1つまたは複数のRNAエレメントの組み込みによるポリヌクレオチドの修飾は、1つまたは複数の望ましい機能的特性を、修飾ポリヌクレオチドに与える。本明細書に記載のとおりのRNAエレメントは、天然に生じる、天然に生じない、合成されている、操作されている、またはそれらの組合せであってよい。例えば、制御活性を与える天然に生じるRNAエレメントには、ウイルス、原核及び真核生物(例えば、ヒト)のトランスクリプトームを通じて見い出されるエレメントが含まれる。RNAエレメント、特に、真核mRNA及び翻訳ウイルスRNAは、細胞における多くの機能の媒介に関与していることが示されている。例示的な天然RNAエレメントには、限定されないが、翻訳開始エレメント(例えば、配列内リボソーム進入部位(IRES)、Kieft et al.,(2001)RNA 7(2):194−206を参照されたい)、翻訳エンハンサーエレメント(例えば、APP mRNA翻訳エンハンサーエレメント、Rogers et al.,(1999)J Biol Chem 274(10):6421−6431を参照されたい)、mRNA安定性エレメント(例えば、AUリッチエレメント(ARE)、Gameau et al.,(2007)Nat Rev Mol Cell Biol 8(2):113−126を参照されたい)、翻訳抑制エレメント(例えば、Blumer et al.,(2002)Meeh Dev 110(1−2):97−112を参照されたい)、タンパク質結合RNAエレメント(例えば、鉄応答エレメント、Selezneva et al.,(2013)J Mol Biol 425(18):3301−3310を参照されたい)、細胞質ポリアデニル化エレメント(Villalba et al.,(2011)Curr Opin Genet Dev 21(4):452−457)、及び触媒RNAエレメント(例えば、リボザイム、Scott et al.,(2009)Biochim Biophys Acta 1789(9−10):634−641を参照されたい)が含まれる。
本明細書で使用する場合、「滞留時間」という用語は、mRNA分子に沿った別個の位置または場所での前開始複合体(PIC)またはリボソームの占有時間を指す。
本明細書で使用する場合、「翻訳制御活性」(「翻訳制御機能」と互換的に用いられる)という用語は、PIC及び/またはリボソームの活性を含む翻訳装置の活性を調節する(例えば、制御する、影響を及ぼす、調節する、変化させる)生物学的機能、機構、またはプロセスを指す。一部の態様では、所望の翻訳制御活性は、mRNA翻訳の翻訳忠実性を促進及び/または増強する。一部の態様では、所望の翻訳制御活性は、読み漏らしを減少させる、及び/または阻害する。
当業者らは、ルーチン的な実験のみを使用して、本明細書に記載の本発明による特定の実施形態に対する多くの均等物を認識することとなり、または確認することができるであろう。本発明の範囲は、上記明細書に限定されるものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲に記載されている。
本明細書に記載のmRNA配列のいずれも、5’UTR及び/または3’UTRを含み得ることは理解されるはずである。UTR配列は、次の配列から選択されてよいか、または他の公知のUTR配列が使用されてよい。本明細書に記載のmRNAコンストラクトのいずれもさらに、ポリAテイル及び/またはキャップ(例えば、7mG(5’)ppp(5’)N1mpNp)を含み得ることも理解されるはずである。さらに、本明細書に記載のmRNA及びコードされた抗原配列の多くは、シグナルペプチド及び/またはペプチドタグ(例えば、C末端Hisタグ)を含むが、示されているシグナルペプチド及び/またはペプチドタグは、異なるシグナルペプチド及び/またはペプチドタグで置換されていてもよいか、またはシグナルペプチド及び/またはペプチドタグは省かれていてもよいことは理解されるはずである。
本開示によれば、ポリヌクレオチド及び/またはその部分もしくは領域の作製は、内容全体が参照により本明細書に援用される「Manufacturing Methods for Production of RNA Transcripts」と標題された国際公開WO2014/152027に教示の方法を利用して達成することができる。
本開示によれば、三リン酸化学を用いてキメラポリヌクレオチドの2つの領域または部分を接合するか、またはライゲートすることができる。100ヌクレオチド以下の最初の領域または部分は、例えば、5’一リン酸及び末端の3’desOHまたはブロックされたOHを用いて化学的に合成される。この領域が80ヌクレオチドよりも長い場合、これはライゲーション用の2本鎖として合成され得る。
キメラポリヌクレオチドは、一連の出発セグメントを用いて作製することができる。そのようなセグメントには以下が含まれる:
(a)通常の3’OHを含む、キャップされ保護された5’セグメント(SEG.1)
(b)ポリペプチドのコード領域及び正常な3’OHを含んでよい、5’三リン酸セグメント(SEG.2)
(c)コルジセピンを含むか、または3’OHを含まない、キメラポリヌクレオチドの3’末端(例えば、テイル)のための5’一リン酸セグメント(SEG.3)。
cDNAの調製のためのPCR手順は、Kapa Biosystems(Woburn,MA)による2×KAPA HIFI(商標)HotStart ReadyMixを使用して行うことができる。このシステムは、2×KAPA ReadyMix12.5μl、フォワードプライマー(10μM)0.75μl、リバースプライマー(10μM)0.75μl、鋳型cDNA100ng、及び25.0μlに希釈したdH2Oを含む。反応条件は95℃で5分間であり得る。反応を、98℃で20秒間、次いで58℃で15秒間、次いで72℃で45秒間、次いで72℃で5分間、次いで終了まで4℃からなる25サイクルで行うことができる。
in vitro転写反応は、RNAポリヌクレオチドを生成する。そのようなポリヌクレオチドは、化学修飾RNA(例えば、mRNA)ポリヌクレオチドを含む本開示のポリヌクレオチドの領域または部分を含み得る。化学修飾RNAポリヌクレオチドは、均一に修飾されたポリヌクレオチドであり得る。in vitro転写反応は、ヌクレオチド三リン酸(NTP)の特注混合物を利用する。NTPは、化学修飾NTP、または天然及び化学修飾NTPの混合物、または天然NTPを含んでよい。
1)鋳型cDNA 1.0μg
2)10×転写緩衝液(400mMのトリス−HCl pH8.0、190mMのMgCl2、50mMのDTT、10mMのスペルミジン) 2.0μl
3)特注NTP(各25mM) 0.2μl
4)RNアーゼ阻害剤 20U
5)T7 RNAポリメラーゼ 3000U
6)dH2O 最高20.0μl、及び
7)37℃で3時間〜5時間のインキュベーション
を含む。
RNAポリヌクレオチドのキャッピングを次のとおりに行い、その際、混合物は、IVT RNA 60μg〜180μg及びdH2O最高72μlを含む。混合物を65℃で5分間にわたってインキュベートして、RNAを変性させ、次いで、直ちに氷に移す。
cDNA中にポリTがなければ、ポリAテイル付加反応は、最終産物を洗浄する前に実施しなければならない。これは、キャップ化IVT RNA(100μl)、RNアーゼ阻害剤(20U)、10×テイル付加緩衝液(0.5MのTris−HCl(pH8.0)、2.5MのNaCl、100mMのMgCl2)(12.0μl)、20mMのATP(6.0μl)、ポリAポリメラーゼ(20U)、最高123.5μLのdH2Oを混合することと、37℃で30分間にわたってインキュベートすることにより行う。ポリAテイルが転写物に既に存在する場合、テイル付加反応をスキップし、AmbionのMEGACLEAR(商標)キット(Austin,TX)(最大500μg)を用いるクリーンアップに直接進むことができる。ポリAポリメラーゼは、酵母で発現する組換え酵素である。
ポリヌクレオチドの5’キャッピングを、製造者プロトコルに従って、5’−グアノシンキャップ構造を生成するために、以下の化学的RNAキャップアナログを使用して、in vitro転写反応中に付随して完了させることができる:3’−O−Me−m7G(5’)ppp(5’)G[ARCAキャップ]、G(5’)ppp(5’)A、G(5’)ppp(5’)G、m7G(5’)ppp(5’)A、m7G(5’)ppp(5’)G(New England BioLabs,Ipswich,MA)。修飾RNAの5’−キャッピングは、「Cap0」構造:m7G(5’)ppp(5’)G(New England BioLabs,Ipswich,MA)を生成するために、ワクシニアウイルスキャッピング酵素を使用して転写後に完了させることができる。Cap1構造は、m7G(5’)ppp(5’)G−2’−O−メチルを生成するために、ワクシニアウイルスキャッピング酵素及び2’−Oメチルトランスフェラーゼの両方を使用して生成することができる。Cap2構造を、Cap1構造から生成し、続いて、2’−Oメチルトランスフェラーゼを使用して、5’末端から3番目のヌクレオチドを2’−O−メチル化することができる。Cap3構造を、Cap2構造から生成し、続いて、2’−Oメチルトランスフェラーゼを使用して、5’末端から4番目のヌクレオチドを2’−O−メチル化することができる。酵素は好ましくは、組換え供給源に由来する。
タンパク質発現アッセイ
本明細書に教示のキャップのいずれかを含有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(例えば、mRNA)を、等しい濃度で細胞にトランスフェクトすることができる。トランスフェクション後6、12、24、及び/または36時間目に、培養培地に分泌されたタンパク質の量を、ELISAによりアッセイすることができる。より高レベルのタンパク質を培地に分泌する合成ポリヌクレオチドは、より高い翻訳能力を有するCap構造を有する合成ポリヌクレオチドに対応する。
本明細書に教示のキャップのいずれかを含有する、ポリペプチドをコードするRNA(例えば、mRNA)ポリヌクレオチドを、変性アガロース−尿素ゲル電気泳動またはHPLC分析を使用して、純度について比較することができる。電気泳動による単一のまとまったバンドを有するRNAポリヌクレオチドは、複数のバンドまたはストリーキングバンドを有するポリヌクレオチドと比較して、より高純度の産物に対応する。単一のHPLCピークを有する化学修飾RNAポリヌクレオチドは、より高純度の産物にも対応する。より高い効率でのキャッピング反応は、より純粋なポリヌクレオチド集団を提供する。
本明細書で教示されるキャップのいずれかを含有する、ポリペプチドをコードするRNA(例えば、mRNA)ポリヌクレオチドを、複数の濃度で細胞にトランスフェクトすることができる。トランスフェクション後6、12、24、及び/または36時間目に、培地に分泌されたTNF−α及びIFN−βなどの炎症誘発性サイトカインの量は、ELISAによりアッセイすることができる。より高レベルの炎症誘発性サイトカインの培地への分泌をもたらすRNAポリヌクレオチドは、免疫活性化キャップ構造を含有するポリヌクレオチドに対応する。
本明細書で教示するキャップのいずれかを含有する、ポリペプチドをコードするRNA(例えば、mRNA)ポリヌクレオチドを、ヌクレアーゼ処理後にLC−MSにより、キャッピング反応効率について分析することができる。キャップ化ポリヌクレオチドのヌクレアーゼ処理は、遊離ヌクレオチド及びLC−MSにより検出可能なキャップ化5’−5トリホスファートキャップ構造体の混合物を生じる。LC−MSスペクトルでのキャップ化産物の量は、反応由来の総ポリヌクレオチドのパーセントとして表すことができ、キャッピング反応効率に対応する。より高いキャッピング反応効率を有するキャップ構造は、LC−MSによると、より多量のキャップ化産物を有する。
個々のRNAポリヌクレオチド(20μl体積中の200〜400ng)または逆転写PCR産物(200〜400ng)を、ウェル中の非変性1.2%のアガロースE−Gel(Invitrogen,Carlsbad,CA)上に装填し、製造業者のプロトコルに従って、12〜15分間にわたって実行することができる。
化学合成またはin vitro転写反応からの各ポリヌクレオチドの収率を定量化するためのNanodrop UV吸光度読み取りでは、TE緩衝液(1μl)中の化学修飾RNAポリヌクレオチドを使用する。
RNA(例えば、mRNA)ポリヌクレオチドを、細胞に添加する前に、ポリヌクレオチドをリピドイドと規定の比で混合することにより、in vitro実験のために製剤化することができる。in vivo製剤は、身体全体の循環を促進するために特別な成分の添加を必要とし得る。これらのリピドイドがin vivo研究に適する粒子を形成する能力を試験するために、siRNA−リピドイド製剤に使用される標準的な製剤化プロセスは、出発点として使用することができる。粒子の形成後に、ポリヌクレオチドは、添加し、複合体を一体化させることができる。封入効率は、標準的な色素排除アッセイを使用して決定することができる。
HEK293細胞に、ABCB4修飾RNA(modRNA)コンストラクトをトランスフェクトした。4種のコンストラクトを調製した:modRNAl(hABCB4、アイソフォーム1)、modRNA2(hABCB4、C末端フラグを含むアイソフォーム1)、modRNA3(hABCB4、C末端フラグを含むアイソフォーム2)、及びmodRNA4(mABCB4、C末端フラグを含む)。ウェスタンブロットを行って、HEK293細胞におけるABCB4タンパク質の発現を確認し、結果を図1に示す。左側のゲルでは、hABCB4及びmABCB4の両方を認識する抗ABCB4(C−219)を使用した。modRNA3(ヒトアイソフォーム2)及びmodRNA4(マウス)ABCB4コンストラクトの両方を見ることができた。対照的に、右側のゲルでは、hABCB4特異的である抗ABCB4抗体(P3II−26)を使用した。予測されたとおり、modRNA3(ヒトアイソフォーム2)のみが陽性であった。pC−DNA3.l−hABCB4コンストラクト及びGFPを、それぞれ陽性及び陰性対照として使用した。
マウスmdr2 P−糖タンパク質遺伝子の均質な破壊が、胆汁からのリン脂質の完全な欠損をもたらし、最終的に、肝疾患をもたらすことが以前に示された(Cell,1993,75:451−462)。胆汁の構成成分の研究において、野生型マウスと比較して、mdr2ノックアウトマウスでは、スフィンゴミエリンのみが増加していることが見い出された。
BSEP活性を検査するために、研究を行った。初めに、ヒトBSEPの半減期を、内因性BSEP発現をノックアウトすることにより改変されたHepaRG細胞において決定した。キャピラリー電気泳動を使用して、検出のために抗ABCB11を用いて、タンパク質レベルを測定した。結果は図23に示されている。
Claims (33)
- 脂質ナノ粒子(LNP)担体中で製剤化された、ATP結合カセットサブファミリーBメンバー4(ABCB4)をコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を有する修飾ポリヌクレオチドを含む組成物。
- 前記ABCB4ポリヌクレオチドが少なくとも1つの化学修飾ヌクレオ塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項1に記載の組成物。
- 前記修飾ポリヌクレオチドが少なくとも1つの修飾ヌクレオシドを含む、請求項1〜2に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの修飾ヌクレオシドが、シュードウリジン、1−メチル−シュードウリジン、5−メチルシチジン、5−メチルウリジン、2’−O−メチルウリジン、2−チオウリジン、5−メトキシウリジン及びN6−メチルアデノシンからなる群から選択される、請求項2に記載の組成物。
- 前記少なくとも1つの修飾ヌクレオシドが5−メトキシウリジンである、請求項3に記載の組成物。
- ウリジン残基の少なくとも30%が5−メトキシウリジンである、請求項4に記載の組成物。
- 前記修飾ポリヌクレオチドが、ポリA領域、コザック配列、3’非翻訳領域、5’非翻訳領域、miRNA結合部位、またはそれらの任意の組合せを含む、先行請求項のいずれかに記載の組成物。
- 前記miRNA結合部位がmiR−142結合部位である、請求項6に記載の組成物。
- 前記ABCB4ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の理論的最小ウラシルまたはチミン含有量に対する前記ORFのウラシルまたはチミン含有量(UTM%またはTTM%)が約100%〜約150%である、請求項1に記載の組成物。
- 前記ORFが、少なくとも1つの低頻度コドンをさらに含む、先行請求項のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ORFが、
a)ABCB4−CO13、ABCB4−CO22、もしくはABCB4−CO9と少なくとも92%同一であるか、または
b)ABCB4−CO1、ABCB4−CO2、ABCB4−CO3、ABCB4−CO4、ABCB4−CO5、ABCB4−CO6、ABCB4−CO10、ABCB4−CO11、ABCB4−CO12、ABCB4−CO15、ABCB4−CO16、ABCB4−CO17、ABCB4−CO20、ABCB4−CO21、ABCB4−CO23、ABCB4−CO24、ABCB4−CO25、もしくはABCB4−CO26と少なくとも91%同一であるか、または
c)ABCB4−CO7、ABCB4−CO8、ABCB4−CO14、ABCB4−CO18、もしくはABCB4−CO19と少なくとも90%同一である、先行請求項のいずれか1項に記載の組成物。 - 前記LNPがイオン性アミノ脂質を含む、先行請求項のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記イオン性アミノ脂質が化合物1である、請求項12に記載の組成物。
- ORFを含み、
a)前記ORFが、ABCB4−CO13、ABCB4−CO22、もしくはABCB4−CO9と少なくとも92%同一であるか、
b)前記ORFが、ABCB4−CO1、ABCB4−CO2、ABCB4−CO3、ABCB4−CO4、ABCB4−CO5、ABCB4−CO6、ABCB4−CO10、ABCB4−CO11、ABCB4−CO12、ABCB4−CO15、ABCB4−CO16、ABCB4−CO17、ABCB4−CO20、ABCB4−CO21、ABCB4−CO23、ABCB4−CO24、ABCB4−CO25、もしくはABCB4−CO26と少なくとも91%同一であるか、または
c)前記ORFが、ABCB4−CO7、ABCB4−CO8、ABCB4−CO14、ABCB4−CO18、もしくはABCB4−CO19と少なくとも90%同一である、ポリヌクレオチド。 - 前記ABCB4ポリペプチドが、(a)野生型ABCB4、アイソフォーム1のポリペプチド配列、(b)野生型ABCB4、アイソフォーム2のポリペプチド配列、または(c)野生型ABCB4、アイソフォーム3のポリペプチド配列と少なくとも約95%同一なアミノ酸配列を含み、その際、前記ABCB4ポリペプチドがホスファチジルコリン転座活性を有する、先行請求項のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記ABCB4ポリペプチドがホスファチジルコリン転座活性を有するバリアント、誘導体、または変異体である、請求項15に記載の組成物。
- 前記ポリヌクレオチドが、1つまたは複数の異種ポリペプチドに融合したABCB4ポリペプチドをコードする、先行請求項のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記1つまたは複数の異種ポリペプチドが前記ABCB4ポリペプチドの薬物動態特性を増大させる、請求項17に記載の組成物。
- 対象に投与した場合に、前記ポリヌクレオチドが、ABCB4、アイソフォーム1、ABCB4、アイソフォーム2、またはABCB4、アイソフォーム3を含む対応するポリヌクレオチドと比べて、(a)長い血漿中半減期、(b)前記ORFによりコードされるABCB4ポリペプチドの発現の増加、(c)発現断片をもたらす翻訳停止の低い頻度、(d)高い構造安定性、または(e)それらの任意の組合せを有する、先行請求項のいずれか1項に記載の組成物。
- ATP結合カセットサブファミリーBメンバー4(ABCB4)をコードするオープンリーディングフレーム(ORF)を有するポリヌクレオチドを生成する方法であって、少なくとも1つの同義置換を行うことにより、ABCB4ポリペプチドをコードするORFを修飾することを含む、前記方法。
- ウリジン残基の少なくとも90%を5−メトキシウリジンに置換することをさらに含む、請求項20に記載の方法。
- 進行性家族性肝内胆汁うっ滞3型(PFIC3)の処置または予防を必要とする患者においてそれを行う方法であって、前記患者に、治療有効量の、ABCB4ポリペプチドをコードする修飾mRNA分子を含む組成物を投与することを含む、前記方法。
- 前記修飾mRNA分子が少なくとも1つの修飾ヌクレオシドを含む、請求項22に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの修飾ヌクレオシドが、シュードウリジン、1−メチル−シュードウリジン、5−メチルシチジン、5−メチルウリジン、2’−O−メチルウリジン、2−チオウリジン、5−メトキシウリジン及びN6−メチルアデノシンからなる群から選択される、請求項23に記載の方法。
- 前記少なくとも1つの修飾ヌクレオシドが5−メトキシウリジンである、請求項24に記載の方法。
- 前記修飾mRNA分子がカチオン脂質ナノ粒子中で製剤化されている、請求項24〜25に記載の方法。
- PFIC2またはBRIC2の処置を必要とする患者においてそれを行う方法であって、前記患者に、治療有効量の、BSEPポリペプチドをコードする修飾mRNAを含む組成物を投与することを含む、前記方法。
- BSEPポリペプチドをコードする前記修飾mRNAが、ABCB11をコードするオープンリーディングフレームを含む、請求項27に記載の方法。
- PFIC1の処置を必要とする患者においてそれを行う方法であって、前記患者に、治療有効量の、ATP8B1をコードする修飾mRNAを含む組成物を投与することを含む、前記方法。
- 進行性家族性肝内胆汁うっ滞3型(PFIC3)を処置または予防する方法において使用するための、ABCB4ポリペプチドをコードする修飾mRNA分子を含む組成物。
- PFIC2またはBRIC2を処置する方法において使用するための、BSEP4ポリペプチドをコードする修飾mRNAを含む組成物。
- PFIC1を処置する方法において使用するための、ATP8B1をコードする修飾mRNAを含む組成物。
- 請求項22〜26のいずれか1項に記載の方法において使用するための医薬品を製造するための、ABCB4ポリペプチドをコードする修飾mRNA分子を含む組成物の使用。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862731055P | 2018-09-13 | 2018-09-13 | |
US62/731,055 | 2018-09-13 | ||
US201962840369P | 2019-04-29 | 2019-04-29 | |
US62/840,369 | 2019-04-29 | ||
PCT/US2019/051172 WO2020056370A1 (en) | 2018-09-13 | 2019-09-13 | Modified mrna for the treatment of progressive familial intrahepatic cholestasis disorders |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022500443A true JP2022500443A (ja) | 2022-01-04 |
JPWO2020056370A5 JPWO2020056370A5 (ja) | 2022-09-26 |
Family
ID=69778403
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021514132A Pending JP2022500443A (ja) | 2018-09-13 | 2019-09-13 | 進行性家族性肝内胆汁うっ滞障害を処置するための修飾mRNA |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220054653A1 (ja) |
EP (1) | EP3863645A4 (ja) |
JP (1) | JP2022500443A (ja) |
AU (1) | AU2019338557A1 (ja) |
CA (1) | CA3111836A1 (ja) |
WO (1) | WO2020056370A1 (ja) |
Families Citing this family (36)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3324979B1 (en) | 2015-07-21 | 2022-10-12 | ModernaTX, Inc. | Infectious disease vaccines |
US11364292B2 (en) | 2015-07-21 | 2022-06-21 | Modernatx, Inc. | CHIKV RNA vaccines |
WO2017031232A1 (en) | 2015-08-17 | 2017-02-23 | Modernatx, Inc. | Methods for preparing particles and related compositions |
JP6925688B2 (ja) | 2015-10-22 | 2021-08-25 | モデルナティーエックス, インコーポレイテッド | 水痘帯状疱疹ウイルス(vzv)のための核酸ワクチン |
WO2017070624A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | Modernatx, Inc. | Tropical disease vaccines |
JP6921833B2 (ja) | 2015-10-22 | 2021-08-18 | モデルナティーエックス, インコーポレイテッド | ヒトサイトメガロウイルスワクチン |
DK3718565T3 (da) | 2015-10-22 | 2022-06-20 | Modernatx Inc | Vacciner mod respiratorisk virus |
SI3386484T1 (sl) | 2015-12-10 | 2022-06-30 | Modernatx, Inc. | Sestave in metode za dovajanje terapevtskih sredstev |
SG11201901941YA (en) | 2016-09-14 | 2019-04-29 | Modernatx Inc | High purity rna compositions and methods for preparation thereof |
JP6980780B2 (ja) | 2016-10-21 | 2021-12-15 | モデルナティーエックス, インコーポレイテッド | ヒトサイトメガロウイルスワクチン |
US10925958B2 (en) | 2016-11-11 | 2021-02-23 | Modernatx, Inc. | Influenza vaccine |
US11103578B2 (en) | 2016-12-08 | 2021-08-31 | Modernatx, Inc. | Respiratory virus nucleic acid vaccines |
US11384352B2 (en) | 2016-12-13 | 2022-07-12 | Modernatx, Inc. | RNA affinity purification |
WO2018170270A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Varicella zoster virus (vzv) vaccine |
EP3609534A4 (en) | 2017-03-15 | 2021-01-13 | ModernaTX, Inc. | BROAD SPECTRUM VACCINE AGAINST THE INFLUENZA VIRUS |
WO2018170260A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Respiratory syncytial virus vaccine |
WO2018170256A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Herpes simplex virus vaccine |
WO2018170347A1 (en) | 2017-03-17 | 2018-09-20 | Modernatx, Inc. | Zoonotic disease rna vaccines |
US11905525B2 (en) | 2017-04-05 | 2024-02-20 | Modernatx, Inc. | Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins |
EP3638215A4 (en) | 2017-06-15 | 2021-03-24 | Modernatx, Inc. | RNA FORMULATIONS |
WO2019036685A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Modernatx, Inc. | METHODS FOR HPLC ANALYSIS |
WO2019036683A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Modernatx, Inc. | ANALYTICAL METHODS BY HPLC |
MA49913A (fr) | 2017-08-18 | 2021-05-05 | Modernatx Inc | Variants d'arn polymérase |
AU2018326799A1 (en) | 2017-08-31 | 2020-02-27 | Modernatx, Inc. | Methods of making lipid nanoparticles |
EP3681514A4 (en) | 2017-09-14 | 2021-07-14 | ModernaTX, Inc. | RNA VACZINE AGAINST ZIKA VIRUS |
MA54676A (fr) | 2018-01-29 | 2021-11-17 | Modernatx Inc | Vaccins à base d'arn contre le vrs |
US11351242B1 (en) | 2019-02-12 | 2022-06-07 | Modernatx, Inc. | HMPV/hPIV3 mRNA vaccine composition |
CA3130888A1 (en) | 2019-02-20 | 2020-08-27 | Modernatx, Inc. | Rna polymerase variants for co-transcriptional capping |
US11851694B1 (en) | 2019-02-20 | 2023-12-26 | Modernatx, Inc. | High fidelity in vitro transcription |
CN111041025B (zh) | 2019-12-17 | 2021-06-18 | 深圳市瑞吉生物科技有限公司 | 基于结合N-乙酰半乳糖胺多肽的mRNA靶向分子及其制备方法 |
JP2021185136A (ja) | 2020-04-22 | 2021-12-09 | ビオエンテッヒ・アールエヌエイ・ファーマシューティカルズ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | コロナウイルスワクチン |
CN111744019B (zh) * | 2020-07-01 | 2023-08-04 | 深圳瑞吉生物科技有限公司 | 基于甘露糖的mRNA靶向递送系统及其应用 |
EP3936946A1 (fr) | 2020-07-10 | 2022-01-12 | Patek Philippe SA Genève | Oscillateur horloger a pivot flexible |
US11406703B2 (en) | 2020-08-25 | 2022-08-09 | Modernatx, Inc. | Human cytomegalovirus vaccine |
WO2024002985A1 (en) | 2022-06-26 | 2024-01-04 | BioNTech SE | Coronavirus vaccine |
CN115404273B (zh) * | 2022-06-30 | 2023-06-23 | 湖南家辉生物技术有限公司 | 导致进行性家族性肝内胆汁淤积症ⅰ型的atp8b1基因突变体、蛋白和应用 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL2578685T3 (pl) * | 2005-08-23 | 2020-01-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Rna zawierający zmodyfikowane nukleozydy i sposoby jego zastosowania |
US9012219B2 (en) * | 2005-08-23 | 2015-04-21 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | RNA preparations comprising purified modified RNA for reprogramming cells |
WO2011025862A2 (en) * | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Curna, Inc. | Treatment of atp-binding cassette sub-family b member 1 (abcb1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to abcb1 |
US20140275229A1 (en) * | 2012-04-02 | 2014-09-18 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides encoding udp glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide a1 |
EP2906697A4 (en) * | 2012-10-15 | 2016-06-22 | Ionis Pharmaceuticals Inc | METHODS OF MONITORING C9ORF72 EXPRESSION |
WO2014160243A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-10-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Purification and purity assessment of rna molecules synthesized with modified nucleosides |
GB2560250A (en) * | 2015-06-30 | 2018-09-05 | Ethris Gmbh | ATP-Binding cassette family coding polyribonucleotides and formulations thereof |
CA3003267A1 (en) * | 2015-10-26 | 2017-05-04 | Translate Bio Ma, Inc. | Nanoparticle formulations for delivery of nucleic acid complexes |
EP3426775A1 (en) * | 2016-03-10 | 2019-01-16 | Novartis AG | Chemically modified messenger rna's |
EP3458106A4 (en) * | 2016-05-18 | 2020-03-18 | Modernatx, Inc. | POLYNUCLEOTIDES ENCODING LIPOPROTEIN LIPASE FOR THE TREATMENT OF HYPERLIPIDEMIA |
-
2019
- 2019-09-13 EP EP19861226.9A patent/EP3863645A4/en active Pending
- 2019-09-13 AU AU2019338557A patent/AU2019338557A1/en active Pending
- 2019-09-13 CA CA3111836A patent/CA3111836A1/en active Pending
- 2019-09-13 US US17/276,112 patent/US20220054653A1/en active Pending
- 2019-09-13 WO PCT/US2019/051172 patent/WO2020056370A1/en unknown
- 2019-09-13 JP JP2021514132A patent/JP2022500443A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2020056370A1 (en) | 2020-03-19 |
US20220054653A1 (en) | 2022-02-24 |
WO2020056370A9 (en) | 2020-05-07 |
CA3111836A1 (en) | 2020-03-19 |
AU2019338557A1 (en) | 2021-03-25 |
EP3863645A1 (en) | 2021-08-18 |
EP3863645A4 (en) | 2022-11-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2022500443A (ja) | 進行性家族性肝内胆汁うっ滞障害を処置するための修飾mRNA | |
JP7459172B2 (ja) | リラキシンをコードするポリヌクレオチド | |
JP7210287B2 (ja) | Ii型シトルリン血症の治療のためのシトリンをコードするポリヌクレオチド | |
EP3458105B1 (en) | Polynucleotides encoding galactose-1-phosphate uridylyltransferase for the treatment of galactosemia type 1 | |
JP7423522B2 (ja) | 尿素サイクル異常症の治療のためのオルニチントランスカルバミラーゼをコードするポリヌクレオチド | |
JP2023062097A (ja) | 急性間欠性ポルフィリン症の治療のためのポルホビリノゲン脱アミノ酵素をコードするポリヌクレオチド | |
EP3896164A1 (en) | Polynucleotides encoding alpha-galactosidase a for the treatment of fabry disease | |
WO2017201317A1 (en) | Polyribonucleotides containing reduced uracil content and uses thereof | |
EP3458106A1 (en) | Polynucleotides encoding lipoprotein lipase for the treatment of hyperlipidemia | |
JP7424976B2 (ja) | プロピオン酸血症の治療用のプロピオニルCoAカルボキシラーゼアルファ及びベータサブユニットをコードするポリヌクレオチド | |
JP2022532078A (ja) | 皮膚及び創傷のための組成物並びにその使用の方法 | |
JP2022500436A (ja) | 糖原病を処置するためのグルコース−6−ホスファターゼをコードするポリヌクレオチド | |
JP7423521B2 (ja) | フェニルケトン尿症の治療用のフェニルアラニンヒドロキシラーゼをコードするポリヌクレオチド | |
JP2022500444A (ja) | クリグラー−ナジャー症候群の治療のためのウリジン二リン酸グリコシルトランスフェラーゼ1ファミリー、ポリペプチドa1をコードするポリヌクレオチド | |
WO2020047201A1 (en) | Polynucleotides encoding very long-chain acyl-coa dehydrogenase for the treatment of very long-chain acyl-coa dehydrogenase deficiency |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220913 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220913 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230710 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20231010 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240110 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240507 |