JP2016210727A - Microneedle agent containing culture supernatant - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は，間葉系幹細胞の培養上清を封入したマイクロニードル剤に関する。 The present invention relates to a microneedle preparation encapsulating a culture supernatant of mesenchymal stem cells.
例えば，脂肪組織，臍帯，又は骨髄から分離された間葉系幹細胞（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ, ＭＳＣ）は，プラスチック培養皿への接着，培養による増殖，骨芽細胞，軟骨細胞，及び脂肪細胞などへの分化能を有するといった性質を持つ。ＭＳＣは，コラーゲンや種々のサイトカインを分泌することにより，例えば，細胞増殖促進，血管新生，抗酸化，抗炎症，及び免疫抑制に働くことが知られている。 For example, mesenchymal stem cells (MSCs) isolated from adipose tissue, umbilical cord, or bone marrow can adhere to plastic culture dishes, proliferate by culture, osteoblasts, chondrocytes, adipocytes, etc. It has the property of having differentiation ability. It is known that MSC works by, for example, promoting cell proliferation, angiogenesis, antioxidant, anti-inflammatory, and immunosuppression by secreting collagen and various cytokines.
ＭＳＣおよびその分泌物を含む培養上清は，コラーゲンや種々のサイトカインを分泌する。このため，この培養上清は，様々な効果をもたらすと考えられる。 The culture supernatant containing MSC and its secretion secretes collagen and various cytokines. For this reason, this culture supernatant is considered to bring about various effects.
例えば特開２０１３−０１８７５６号公報には，間葉系幹細胞の培養上清を含む腸炎の予防・治療剤が開示されている。間葉系幹細胞の培養上清を経口投与した場合，例えば，胃酸により間葉系幹細胞の培養上清が消化されるため，培養上清が有効に機能しなかった。また，経皮投与の場合，皮脂膜や角質層のため培養上清の吸収効率が低く，期待される効果が得られなかった。このため，間葉系幹細胞の培養上清を効果的に投与できる剤の開発が望まれた。 For example, JP 2013-018756 A discloses a prophylactic / therapeutic agent for enteritis containing a culture supernatant of mesenchymal stem cells. When the culture supernatant of mesenchymal stem cells was orally administered, for example, the culture supernatant of mesenchymal stem cells was digested by gastric acid, so the culture supernatant did not function effectively. In the case of transdermal administration, the absorption efficiency of the culture supernatant was low due to the sebum membrane and stratum corneum, and the expected effect was not obtained. Therefore, the development of an agent that can effectively administer the culture supernatant of mesenchymal stem cells has been desired.
そこで，本発明は，間葉系幹細胞の培養上清の効果を効果的に発揮できる剤を提供することを目的とする。 Then, an object of this invention is to provide the agent which can exhibit the effect of the culture supernatant of a mesenchymal stem cell effectively.
また，本発明は，間葉系幹細胞の培養上清を効果的に利用した美容方法（ヒトの治療行為に相当する方法を除く）を提供することを目的とする。 Another object of the present invention is to provide a cosmetic method (excluding a method corresponding to a human therapeutic action) that effectively uses the culture supernatant of mesenchymal stem cells.
本発明は，後述する実施例により実証されたとおり，間葉系幹細胞の培養上清は小さな傷部分から投与されると，極めて高い効果を発揮する。すなわち，無痛であるマイクロニードルを用いて，患者や対象の皮膚に小さな傷を形成し，その部位から間葉系幹細胞の培養上清を浸透させた場合に，間葉系幹細胞の培養上清は予想を絶する効果を発揮した。特にこの効果は，マイクロニードルに間葉系幹細胞の培養上清が塗布されているか，マイクロニードル自体が溶解性を有するものであって，マイクロニードル自体に間葉系幹細胞の培養上清が含まれている場合に顕著であった。本発明は，このような間葉系幹細胞の培養上清の特質に基づき，その効果を飛躍的に高める剤形を見出したことに基づくものである。 As demonstrated by the examples described later, the present invention exhibits a very high effect when the culture supernatant of mesenchymal stem cells is administered from a small wound. That is, when a painless microneedle is used to form a small wound on the patient's or subject's skin and the mesenchymal stem cell culture supernatant penetrates from that site, the mesenchymal stem cell culture supernatant is Demonstrated an unexpected effect. In particular, the mesenchymal stem cell culture supernatant is applied to the microneedle or the microneedle itself has solubility, and the microneedle itself contains the mesenchymal stem cell culture supernatant. It was noticeable if The present invention is based on the discovery of a dosage form that dramatically enhances the effect based on the characteristics of the culture supernatant of such mesenchymal stem cells.
本発明の第１の側面は，間葉系幹細胞の培養上清を含むマイクロニードル剤に関する。
マイクロニードル剤は，例えば，１又は複数のマイクロニードルを含む。このマイクロニードルは，溶解性があるものであってもよい。その場合，間葉系幹細胞の培養上清は，１又は複数のマイクロニードル内に収容されているものが好ましい。間葉系幹細胞の培養上清は，マイクロニードル剤を構成する１又は複数のマイクロニードルの表面に塗布されていてもよい。
The 1st side surface of this invention is related with the microneedle agent containing the culture supernatant of a mesenchymal stem cell.
The microneedle agent includes, for example, one or a plurality of microneedles. The microneedle may be soluble. In that case, the culture supernatant of mesenchymal stem cells is preferably contained in one or more microneedles. The culture supernatant of mesenchymal stem cells may be applied to the surface of one or a plurality of microneedles constituting the microneedle agent.
先に説明した，間葉系幹細胞の培養上清は，取得された培養上清そのものでも良いし，精製されたものでも良い。間葉系幹細胞の培養上清は，間葉系幹細胞の培養上清の成分濃縮物であってもよい。さらに，間葉系幹細胞の培養上清は，間葉系幹細胞の培養上清の粉体であってもよい。間葉系幹細胞の培養上清における間葉系幹細胞は，ヒト間葉系幹細胞であるものが好ましい。 The culture supernatant of the mesenchymal stem cells described above may be the obtained culture supernatant itself or may be purified. The culture supernatant of mesenchymal stem cells may be a component concentrate of the culture supernatant of mesenchymal stem cells. Further, the culture supernatant of the mesenchymal stem cell may be a powder of the culture supernatant of the mesenchymal stem cell. The mesenchymal stem cells in the culture supernatant of mesenchymal stem cells are preferably human mesenchymal stem cells.
マイクロニードル剤の好ましい用途は，アトピー性皮膚炎，創傷，又は褥瘡の治癒剤である。 A preferred use of the microneedle is a healing agent for atopic dermatitis, wounds, or pressure ulcers.
本発明の第２の側面は，上記したいずれかのマイクロニードル剤を対象の皮膚に挿入する工程を含む，美容方法に関する。 The 2nd side surface of this invention is related with the cosmetics method including the process of inserting one of above-mentioned microneedle agents into the skin of object.
本発明は，マイクロニードル剤という剤形を採用したことで，間葉系幹細胞の培養上清の効果を効果的に発揮できる剤を提供できる。 The present invention can provide an agent that can effectively exert the effect of the culture supernatant of mesenchymal stem cells by adopting a dosage form called a microneedle agent.
また，本発明は，間葉系幹細胞の培養上清を効果的に利用した美容方法（ヒトの治療行為に相当する方法を除く）を提供できる。 In addition, the present invention can provide a cosmetic method (excluding a method corresponding to a human therapeutic action) that effectively uses the culture supernatant of mesenchymal stem cells.
以下，図面を用いて本発明を実施するための形態について説明する。本発明は，以下に説明する形態に限定されるものではなく，以下の形態から当業者が自明な範囲で適宜修正したものも含む。 Hereinafter, embodiments for carrying out the present invention will be described with reference to the drawings. The present invention is not limited to the embodiments described below, but includes those appropriately modified by those skilled in the art from the following embodiments.
本発明のマイクロニードル剤について説明する。このマイクロニードル剤は，間葉系幹細胞の培養上清を有効成分として有効量含むものであることが好ましい。有効量とは，目的とする効果を発揮するために必要とされる有効成分の量である。マイクロニードル剤は，例えば，１又は複数のマイクロニードルを含む。このマイクロニードルは溶解性があるものであってもよい。その場合，間葉系幹細胞の培養上清は，１又は複数のマイクロニードル内に収容されているものが好ましい。ここで収容されているとは，マイクロニードル内に空洞が存在し，その空洞に培養上清が存在してもよいし，マイクロニードルを形成する際の原料に培養上清が混合されることで，培養上清がマイクロニードル内に収容されていてもよい。間葉系幹細胞の培養上清は，マイクロニードル剤を構成する１又は複数のマイクロニードルの表面に塗布されていてもよい。 The microneedle preparation of the present invention will be described. This microneedle preparation preferably contains an effective amount of a culture supernatant of mesenchymal stem cells as an active ingredient. The effective amount is the amount of the active ingredient that is required to exert the intended effect. The microneedle agent includes, for example, one or a plurality of microneedles. This microneedle may be soluble. In that case, the culture supernatant of mesenchymal stem cells is preferably contained in one or more microneedles. The term “accommodated” means that there is a cavity in the microneedle, the culture supernatant may be present in the cavity, or the culture supernatant is mixed with the raw material for forming the microneedle. The culture supernatant may be accommodated in the microneedle. The culture supernatant of mesenchymal stem cells may be applied to the surface of one or a plurality of microneedles constituting the microneedle agent.
マイクロニードルは，一般に１ミリメートル以下の長さの針であり，非常に細いため，皮膚に刺しても痛みは小さく出血もほとんど無い。このマイクロニードルを基盤上に剣山の様に複数配置したものをマイクロニードルアレイとよぶ。マイクロニードルやマイクロニードルアレイの作成方法は複数提案されている（特開２０１２−１４３４２３号公報，特開２００８−１４２１８３号公報）。 Microneedles are generally needles with a length of 1 mm or less, and are very thin, so even if they pierce the skin, the pain is small and there is almost no bleeding. A plurality of microneedles arranged on a base like a sword mountain is called a microneedle array. A plurality of methods for creating microneedles and microneedle arrays have been proposed (Japanese Patent Laid-Open Nos. 2012-143423 and 2008-142183).
このマイクロニードルやマイクロニードルアレイは，苦痛をもたらすことなく，生体内へ種々の有効成分や薬効成分を投与する方法として優れている。有効成分をマイクロニードルに付加あるいは含有させる方法として，有効成分をマイクロニードルの先端に付着させる方法（国際公開ＷＯ２００８−１３９６４８号パンフレット，国際公開ＷＯ２０１３ー０５７８１９号パンフレット）や，生体内で溶解する素材で作成するマイクロニードルに，素材そのものとして有効成分を混ぜ込む方法などが提案されている（特開２０１２−２５７２３，国際公開ＷＯ２０１３−１２２１６０号パンフレット）。本発明は，これらの方法を適宜採用すればよい。 This microneedle or microneedle array is excellent as a method for administering various active ingredients and medicinal ingredients into a living body without causing pain. As a method of adding or containing the active ingredient to the microneedle, a method of attaching the active ingredient to the tip of the microneedle (International Publication WO2008-139648, International Publication WO2013-057819), or a material that dissolves in vivo A method of mixing an active ingredient as a raw material itself into the microneedle to be created has been proposed (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2012-25723, pamphlet of International Publication No. WO2013-122160). The present invention may adopt these methods as appropriate.
図１は，本発明のマイクロニードル剤の例を示す概略構成図である。図１は，特開特開２００７−０８９７９２号公報の図１を引用したものである。図１に示されるように，本発明のマイクロニードル剤１は，基板２と，基板上に設けられた1又は複数の突起部（マイクロニードル）３を具備する。具体的には，基板２と，基板上に設けられた１又は複数の突起部３を具備し，突起部は糖類又は生分解性ポリマーを主成分とする。突起部の高さの例は，１０μｍ〜３ｍｍであり，突起部の先端が平坦か，丸みを帯びているか，又は平坦形状でありさらに１又は複数の微小突起を有するものが好ましい。
FIG. 1 is a schematic configuration diagram showing an example of the microneedle preparation of the present invention. FIG. 1 is a citation of FIG. 1 of JP-A-2007-087992. As shown in FIG. 1, the
本発明のマイクロニードル剤は，美容や皮膚の疾患の改善に好ましく用いられる。このため，マイクロニードル剤において突起（マイクロニードル）は複数のものが好ましく，突起が比較的広い領域に渡って設けられているものが好ましい。好ましい突起の数は，４以上１０００以下であり，１０以上５００以下でもよいし，２０以上５００以下でもよい。突起が設けられている領域の面積は，１ｃｍ２以上１００ｃｍ２以下が好ましく，２ｃｍ２以上５０ｃｍ２以下でもよいし，５ｃｍ２以上４０ｃｍ２以下でもよい。 The microneedle preparation of the present invention is preferably used for the improvement of cosmetics and skin diseases. For this reason, in the microneedle agent, a plurality of protrusions (microneedles) are preferable, and it is preferable that the protrusions are provided over a relatively wide area. The number of preferable protrusions is 4 or more and 1000 or less, 10 or more and 500 or less, or 20 or more and 500 or less. The area of the region where the protrusion is provided is preferably 1 cm 2 or more and 100 cm 2 or less, 2 cm 2 or more and 50 cm 2 or less, or 5 cm 2 or more and 40 cm 2 or less.
突起部の高さは用途に応じて適宜調整すればよいが，１０μｍ〜３ｍｍがあげられ，１００μｍ〜２ｍｍでもよく，２００μｍ〜１ｍｍでもよい。特に顔などに化粧料を投与するために投与装置を用いる場合は，表皮が薄いので，突起部の長さを短くすることが望ましく，具体的には２０μｍ〜５００μｍとすればよい。 The height of the protrusion may be adjusted as appropriate according to the application, but is 10 μm to 3 mm, may be 100 μm to 2 mm, and may be 200 μm to 1 mm. In particular, when an administration device is used to administer cosmetics to the face or the like, the epidermis is thin, so it is desirable to shorten the length of the protrusion, specifically 20 μm to 500 μm.
基板は，突起部を支持できるものであれば特に限定されず，公知の基板を用いることができる。基板としてテープのような，かとう性（フレキシビリティ）のあるものを用いてもよいし，プラスチックのような定型性を有するものを用いてもよい。基板と突起部とは同じ素材を用いたものを用いてもよい。基板の大きさや厚さは用途に応じて適宜調整すればよい。基板と突起部と一体成形されてもよいし，別々に成形されてもよい。基板の厚さは用途に応じて適宜調整すればよいが，たとえば０．１ｍｍ〜５ｍｍがあげられ，０．１ｍｍ〜１ｍｍでもよく，０．２ｍｍ〜０．８ｍｍでもよい。 The substrate is not particularly limited as long as it can support the protruding portion, and a known substrate can be used. A substrate having flexibility such as tape may be used as the substrate, or a substrate having regularity such as plastic may be used. You may use what used the same raw material for a board | substrate and a projection part. What is necessary is just to adjust the magnitude | size and thickness of a board | substrate suitably according to a use. The substrate and the protrusion may be integrally formed, or may be separately formed. The thickness of the substrate may be adjusted as appropriate according to the application, but may be 0.1 mm to 5 mm, for example, 0.1 mm to 1 mm, or 0.2 mm to 0.8 mm.
この基板又は突起部の主成分として，ポリ乳酸などの生体分解性ポリマー；ブドウ糖，マルトース，フルクトース，プルラン，ヒアルロン酸などの糖類があげられるが，好ましくはマルトース，プルラン又はヒアルロン酸である。さらに，それらを主成分として，薬剤又はその医薬的に許容される塩，化粧料などの化合物や，医薬的に許容される担体などを含むものであってもよい。薬理学的に許容される担体として，賦形剤，希釈剤，滑沢剤，結合剤，安定剤，及び矯臭剤から適宜選択されるものがあげられる。 Examples of the main component of the substrate or protrusion include biodegradable polymers such as polylactic acid; sugars such as glucose, maltose, fructose, pullulan, and hyaluronic acid, with maltose, pullulan, and hyaluronic acid being preferred. Furthermore, it may contain a compound such as a drug or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a cosmetic, a pharmaceutically acceptable carrier, etc., with these as a main component. Examples of the pharmacologically acceptable carrier include those appropriately selected from excipients, diluents, lubricants, binders, stabilizers, and flavoring agents.
先に説明したとおり，本発明のマイクロニードル剤は，基剤となる糖類などの他に間葉系幹細胞の培養上清を含む。間葉系幹細胞の培養上清は，本発明のマイクロニードル剤により投与されることとなる。本発明のマイクロニードル剤は，表皮が引き伸ばされた状態で，その表皮にマイクロニードルにより小さな傷が形成され，その傷に間葉系幹細胞の培養上清が接触するか，間葉系幹細胞の培養上清を含有する突起部が溶解することにより皮膚に化合物が皮膚に付着し，表皮内へ浸透することにより間葉系幹細胞の培養上清が投与されるものが好ましい。 As described above, the microneedle preparation of the present invention includes a culture supernatant of mesenchymal stem cells in addition to a saccharide serving as a base. The culture supernatant of mesenchymal stem cells is administered by the microneedle preparation of the present invention. In the microneedle preparation of the present invention, in the state where the epidermis is stretched, a small wound is formed on the epidermis by the microneedle, and the culture supernatant of the mesenchymal stem cell comes into contact with the wound, or the mesenchymal stem cell is cultured. It is preferable that the mesenchymal stem cell culture supernatant is administered by the compound adhering to the skin by dissolving the protrusion containing the supernatant and penetrating into the epidermis.
基剤以外に含まれる化合物の例は，ペプチド類，核酸，薬剤又はその医薬的に許容される塩，化粧料，又は色素である。ペプチド類の例はポリペプチドであり，核酸として，ＤＮＡ，ＲＮＡがあげられ，薬剤として，公知の薬剤を適宜用いることができ，鎮痛剤，解熱剤，消毒薬，糖尿病の治療剤，サプリメントなどがあげられる。本発明によれば，突起部による皮膚へのダメージが迅速に回復するので，本発明のマイクロニードル剤は，薬剤や化粧料（特に美容液）の投与装置として有効に利用できる。 Examples of the compound contained in addition to the base are peptides, nucleic acids, drugs or pharmaceutically acceptable salts, cosmetics, or pigments. Examples of peptides are polypeptides, examples of which include nucleic acids such as DNA and RNA, and examples of known drugs that can be used as appropriate, such as analgesics, antipyretics, disinfectants, diabetes treatments, and supplements. It is done. According to the present invention, the damage to the skin caused by the protrusion is quickly recovered, so that the microneedle of the present invention can be effectively used as a drug or cosmetic (especially cosmetic liquid) administration device.
本発明のマイクロニードル剤の好ましい別の態様は，突起部には，間葉系幹細胞の培養上清又は間葉系幹細胞の培養上清を含む溶液が塗布されることで，突起部の表面には間葉系幹細胞の培養上清を含む層が形成され，その突起部をヒト又はヒト以外の動物（特に哺乳動物）に押し当てることで，動物内に間葉系幹細胞の培養上清が投与されるマイクロニードル剤である。間葉系幹細胞の培養上清を塗布する場合，突起部の全体に間葉系幹細胞の培養上清（間葉系幹細胞の培養上清を含む溶液であってもよい）を塗布してもよいし，先端部のみに間葉系幹細胞の培養上清を塗布してもよい。また，塗布には，浸漬塗布，刷毛などによる塗布，スプレー塗布，間葉系幹細胞の培養上清を付着させる塗布方法など公知の塗布方法を適宜利用することができる。また，突起部には，間葉系幹細胞の培養上清が塗布され，突起部は，糖類と間葉系幹細胞の培養上清とを含有し，突起部の少なくとも先端部が，動物に挿入され，溶解することにより動物内に糖類と間葉系幹細胞の培養上清とが投与されるマイクロニードル剤であってもよい。 In another preferred embodiment of the microneedle preparation of the present invention, the protrusion is coated with a mesenchymal stem cell culture supernatant or a solution containing a mesenchymal stem cell culture supernatant on the surface of the protrusion. A layer containing the mesenchymal stem cell culture supernatant is formed, and the mesenchymal stem cell culture supernatant is administered into the animal by pressing the protrusion against a human or non-human animal (especially a mammal). Microneedle agent. When applying a culture supernatant of mesenchymal stem cells, a culture supernatant of mesenchymal stem cells (may be a solution containing a culture supernatant of mesenchymal stem cells) may be applied to the entire protrusion. Alternatively, the culture supernatant of mesenchymal stem cells may be applied only to the tip. For the application, a known application method such as dip application, application with a brush, spray application, or application method for attaching a culture supernatant of mesenchymal stem cells can be appropriately used. The protrusion is coated with a culture supernatant of mesenchymal stem cells, the protrusion contains a saccharide and a culture supernatant of mesenchymal stem cells, and at least the tip of the protrusion is inserted into the animal. , A microneedle preparation in which a saccharide and a culture supernatant of mesenchymal stem cells are administered into an animal by dissolution.
突起部に間葉系幹細胞の培養上清を塗布する場合，医学的に許容される溶媒に化合物を溶解させたものを塗布すればよい（非特許文献１）。このような溶媒として，純水，生理食塩水；トレハロース，スクロース，グルコースといった糖類；ヘキサン，ヘプタンのような脂肪族炭化水素類；トルエン，キシレンのような芳香族炭化水素類；クロロホルムのようなハロゲン化炭化水素類；酢酸メチル，酢酸エチル，酢酸プロピル，酢酸ブチル，炭酸ジエチルのようなエステル類；ジエチルエーテル，ジイソプロピルエーテル，テトラヒドロフラン，ジメトキシエタン，ジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル類；メタノ−ル，エタノ−ル，ｎ−プロパノ−ル，イソプロパノ−ル，ｎ−ブタノ−ル，イソブタノ−ル，ｔ−ブタノ−ル，イソアミルアルコ−ル，ジエチレングリコール，グリセリン，オクタノール，シクロヘキサノール，メチルセロソルブのようなアルコ−ル類；アセトニトリル，イソブチロニトリルのようなニトリル類；ホルムアミド，ジメチルホルムアミド，ジメチルアセトアミドのようなアミド類；のうち１種又は２種以上を混合して用いることができる。これらのうち，有機溶媒として，好ましくは，メタノール，エタノール，ｎ−プロパノール，イソプロパノール，ｎ−ブタノール，ペンタノール，酢酸エチル，又はアセトンであり；さらに好ましくはエタノール，ｎ−プロパノール，イソプロパノール，ｎ−ブタノール，ペンタノール，酢酸エチル，又はアセトンである。なお，有効成分として用いられる間葉系幹細胞の培養上清の濃度として，０．０１重量％〜９０重量％があげられ，好ましくは１重量％〜８０重量％，さらに好ましくは１０重量％〜７０重量％である。 When a culture supernatant of mesenchymal stem cells is applied to the protrusion, a solution obtained by dissolving a compound in a medically acceptable solvent may be applied (Non-patent Document 1). Examples of such solvents include pure water, physiological saline; sugars such as trehalose, sucrose, and glucose; aliphatic hydrocarbons such as hexane and heptane; aromatic hydrocarbons such as toluene and xylene; halogen such as chloroform. Hydrocarbons; esters such as methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, diethyl carbonate; ethers such as diethyl ether, diisopropyl ether, tetrahydrofuran, dimethoxyethane, diethylene glycol dimethyl ether; methanol, ethanol Alcohols such as alcohol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, isobutanol, t-butanol, isoamyl alcohol, diethylene glycol, glycerin, octanol, cyclohexanol, methyl cellosolve Le ethers; acetonitrile, nitriles such as isobutyronitrile; formamide, dimethyl formamide, amides such as dimethylacetamide; can be used alone or in combination of two or more of. Of these, the organic solvent is preferably methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, pentanol, ethyl acetate, or acetone; more preferably ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol. , Pentanol, ethyl acetate, or acetone. The concentration of the culture supernatant of mesenchymal stem cells used as an active ingredient is 0.01% to 90% by weight, preferably 1% to 80% by weight, more preferably 10% to 70%. % By weight.
マイクロニードル剤の製造方法
本発明のマイクロニードル剤の製造方法は，例えば，基板上に1又は複数の突起部を具備し，突起部の形状を有する金型を用いて射出成型によってマイクロニードル剤を得てもよい。マイクロニードル剤の製造方法自体は上記のとおり公知であるから，公知の方法を適宜採用すればよい。
Method for Producing Microneedle Agent A method for producing a microneedle agent of the present invention includes, for example, a method for producing a microneedle agent by injection molding using a mold having one or a plurality of protrusions on a substrate and having a shape of a protrusion. May be obtained. Since the manufacturing method of the microneedle agent itself is known as described above, a known method may be appropriately employed.
マイクロニードルを構成する糖類を含む組成物は，マイクロニードル剤の原料となるものであり，糖類のみからなる組成物であってもよいし，糖類のほかに間葉系幹細胞の培養上清や所定の化合物を有するものであってもよい。いずれにせよ，ある程度の流動性が必要なので，糖類を含む組成物は，溶液とされていることが好ましい。ただし，粉末状態の原料を混合したものを用いてもよい。溶液とする場合は，具体的には，糖類を加熱するか，水又は有機溶媒に糖類を加えるか，水又は有機溶媒に糖類を加えた後加熱すればよい。この際に加熱する温度として，10℃〜150℃があげられ，好ましくは40℃〜120℃であり，より好ましくは70℃〜90℃であり，さらに好ましくは75℃〜85℃である。水や有機溶媒を用いない場合は，加熱温度として50℃〜130℃があげられ,100℃〜120℃が好ましい。このような温度であれば，容易に糖分が溶解し，化合物も溶解することとなる。化合物が溶解しない場合は，公知の溶媒を加えてもよい。溶解時間は，適宜調整すればよく，1分〜1日があげられ，10分〜5時間でもよく，30分〜2時間でもよい。なお，水分や有機溶媒を用いると，固化する際にこれらが蒸発し，マイクロニードル剤の形状が変化する場合があるので，好ましくは糖類のみ又は糖類と所定の化合物のみを組成物とするものがあげられる。すなわち，本明細書において，組成物とは，所定の糖類のみを含むものをも含むものとする。 The composition containing saccharides constituting the microneedles is a raw material for the microneedle agent, and may be a composition consisting only of saccharides. In addition to saccharides, a culture supernatant of mesenchymal stem cells or a predetermined It may have this compound. In any case, since a certain degree of fluidity is required, it is preferable that the composition containing saccharides is a solution. However, you may use what mixed the raw material of a powder state. In the case of a solution, specifically, the saccharide is heated, the saccharide is added to water or an organic solvent, or the saccharide is added to water or an organic solvent and then heated. In this case, the heating temperature is 10 ° C to 150 ° C, preferably 40 ° C to 120 ° C, more preferably 70 ° C to 90 ° C, and further preferably 75 ° C to 85 ° C. When water or an organic solvent is not used, the heating temperature is 50 ° C to 130 ° C, preferably 100 ° C to 120 ° C. If it is such temperature, sugar will melt | dissolve easily and a compound will also melt | dissolve. If the compound does not dissolve, a known solvent may be added. What is necessary is just to adjust dissolution time suitably, 1 minute-1 day is mention | raise | lifted, 10 minutes-5 hours may be sufficient, and 30 minutes-2 hours may be sufficient. In addition, when water or an organic solvent is used, these may evaporate when solidified, and the shape of the microneedle agent may change. Therefore, it is preferable that the composition contains only saccharides or only saccharides and a predetermined compound. can give. That is, in the present specification, the composition includes those containing only a predetermined saccharide.
間葉系幹細胞の培養上清や化合物を混合する場合は，溶媒の温度を一定に保った状態で，攪拌しながら，又は攪拌せずに間葉系幹細胞の培養上清や化合物を添加すればよい。このような工程は，常圧環境下において反応を進めればよく。たとえば，目視により原料が溶解した時点で，溶解工程を終了すればよい。また，所定の化合物が液体の場合は単に溶解させた糖類又は糖類を含む組成物に攪拌下所定の化合物を添加すればよい。間葉系幹細胞の培養上清と糖類の割合は，投与量やマイクロニードル剤の強度などを考慮して適宜調整すればよく，化合物と糖類との重量比として，1:100〜1:1があげられ，1:10〜1:5であってもよい。この溶解したものを金型に入れてもよいし，いったん固化させたものを金型に入れてもよい。後者の場合，たとえば，常温，常圧とすることで，迅速に固化する。また，冷却することにより固化速度をあげてもよい。固化した塊を所定の大きさに分割し，分割したものを金型に入れて，金型を過熱し（又は金型を含む系を加熱し）溶解させればよい。より具体的には，金型又は系の温度として50℃〜130℃があげられ,好ましくは80℃〜120℃であり，90℃〜110℃とすればよく，加熱時間として1秒〜1時間があげられ，好ましくは5秒〜1分があげられる。 When mixing the mesenchymal stem cell culture supernatant or compound, add the mesenchymal stem cell culture supernatant or compound with or without stirring while keeping the solvent temperature constant. Good. In such a process, the reaction may be carried out under a normal pressure environment. For example, the melting process may be terminated when the raw material is melted visually. When the predetermined compound is a liquid, the predetermined compound may be added to the composition containing saccharides or saccharides simply dissolved under stirring. The ratio of the mesenchymal stem cell culture supernatant to the saccharide may be appropriately adjusted in consideration of the dose and the strength of the microneedle, and the weight ratio of the compound to the saccharide is 1: 100 to 1: 1. May be 1:10 to 1: 5. This dissolved material may be put in a mold, or once solidified, it may be put in a mold. In the latter case, for example, it is solidified quickly at normal temperature and normal pressure. Further, the solidification rate may be increased by cooling. The solidified lump is divided into a predetermined size, the divided piece is put into a mold, and the mold is heated (or the system including the mold is heated) to be dissolved. More specifically, the temperature of the mold or system is 50 ° C to 130 ° C, preferably 80 ° C to 120 ° C, 90 ° C to 110 ° C, and the heating time is 1 second to 1 hour. Preferably, 5 seconds to 1 minute is used.
液状の組成物を金型に注入する場合は，液状の組成物を，金型に注ぎ込めばよい。また，組成物を固化させるためには，常温，常圧下で放置してもよいし，冷却を行ってもよい。冷却を行う場合は，金型の外側から冷却してもよいし，金型を含む系全体を冷却してもよい。固化工程における圧力は，常圧で行えばよいが，溶媒を蒸発させることにより結晶化を行う場合は，減圧下（たとえば，0.1気圧〜0.9気圧）にて行うことが好ましい。結晶化時間として，10秒〜24時間があげられ，好ましくは1分〜1時間であり，より好ましくは1分〜30分である。 When pouring a liquid composition into a mold, the liquid composition may be poured into the mold. Further, in order to solidify the composition, it may be left at normal temperature and normal pressure, or may be cooled. When cooling is performed, the cooling may be performed from the outside of the mold, or the entire system including the mold may be cooled. The pressure in the solidification step may be normal pressure, but when crystallization is performed by evaporating the solvent, it is preferably performed under reduced pressure (for example, 0.1 to 0.9 atm). The crystallization time is 10 seconds to 24 hours, preferably 1 minute to 1 hour, more preferably 1 minute to 30 minutes.
このようにして得られたマイクロニードル剤は，経皮投与装置として機能するものであり，好ましくは密閉容易に乾燥剤と共に封入する。水分があると，突起部が溶けるおそれがあるためである。なお，突起部の先端を丸くするためには，そのような形状を有する金型又は鋳型を用いてもよいが，比較的鋭利な先端を有するものを製造した後，所定時間（たとえば１分〜２０分），通常の湿度環境下にさらした後に，乾燥剤入りの密閉容器に封入すればよい。 The microneedle thus obtained functions as a transdermal administration device, and is preferably sealed together with a desiccant for easy sealing. This is because if there is moisture, the protrusions may melt. In order to round the tip of the protrusion, a mold or a mold having such a shape may be used, but after manufacturing a relatively sharp tip, a predetermined time (for example, 1 minute to 20 minutes), after exposure to a normal humidity environment, it may be sealed in a sealed container containing a desiccant.
上記において，マイクロニードルの基材として糖類を用いるものについて説明した。マイクロニードルは，糖類以外の生分解性ポリマーを用いてもよし，マイクロニードルが生分解性を有しないものを用いても構わない。 In the above, what used saccharide | sugar as a base material of a microneedle was demonstrated. As the microneedle, a biodegradable polymer other than saccharide may be used, or a microneedle having no biodegradability may be used.
経皮投与剤の製造方法は，上記したマイクロニードル剤の製造方法に従って製造できる。本発明の経皮投与剤による投与方法は，患部又は任意の皮膚に本発明の経皮投与剤をあてて軽く押すなどして，突起部を皮膚表面に加圧すればよい。 The manufacturing method of a transdermal administration agent can be manufactured according to the manufacturing method of a microneedle agent mentioned above. In the administration method using the transdermal administration agent of the present invention, the protrusion may be pressed against the skin surface by applying the transdermal administration agent of the present invention to the affected area or arbitrary skin and pressing it lightly.
マイクロニードル剤を新規剤型として用いる場合，マイクロニードル剤に含まれる有効成分である間葉系幹細胞の培養上清の投与量は，対象疾患，投与対象などにより差異はあるが，例えば，一日につき培養上清を約０．０１〜３０ｍｇ程度，好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度，より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を投与すればよい。糖類が溶解する温度で変性などを起こさない化合物を投与するためには，糖類と共に溶解させてマイクロニードル剤として用いればよい。ヒト以外の動物の場合も，体重６０ｋｇ当たりに換算した，上記の量を投与することができる。投与回数は有効成分によって適宜調整すればよく１日あたり１回〜数回又は隔日など適当な周期とすればよい。 When a microneedle agent is used as a new dosage form, the dosage of the mesenchymal stem cell culture supernatant, which is an active ingredient contained in the microneedle agent, varies depending on the target disease, administration subject, etc. About 0.01 to 30 mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 10 mg of the culture supernatant may be administered. In order to administer a compound that does not cause denaturation or the like at a temperature at which the saccharide dissolves, it may be dissolved with the saccharide and used as a microneedle agent. In the case of animals other than humans, the above-mentioned amount converted per 60 kg body weight can be administered. The frequency of administration may be appropriately adjusted depending on the active ingredient, and may be set to an appropriate cycle such as once to several times per day or every other day.
上記のとおり本明細書では，薬剤をヒト又はヒト以外の動物（特に哺乳動物）に投与するためのマイクロニードル剤の使用をも提供できる。さらに，上記したマイクロニードル剤を用いたヒト又はヒト以外の動物（特に哺乳動物）の特定疾患の予防又は治療方法をも提供できる。 As described above, the present specification can also provide the use of a microneedle agent for administering a drug to a human or non-human animal (particularly a mammal). Furthermore, a method for preventing or treating a specific disease of a human or non-human animal (particularly a mammal) using the above-described microneedle can be provided.
先に説明した，間葉系幹細胞の培養上清は，取得された培養上清そのものでも良いし，精製されたものでも良い。間葉系幹細胞の培養上清は，間葉系幹細胞の培養上清の成分濃縮物であってもよい。さらに，間葉系幹細胞の培養上清は，間葉系幹細胞の培養上清の粉体であってもよい。間葉系幹細胞は，ヒト間葉系幹細胞であるものが好ましい。 The culture supernatant of the mesenchymal stem cells described above may be the obtained culture supernatant itself or may be purified. The culture supernatant of mesenchymal stem cells may be a component concentrate of the culture supernatant of mesenchymal stem cells. Further, the culture supernatant of the mesenchymal stem cell may be a powder of the culture supernatant of the mesenchymal stem cell. The mesenchymal stem cell is preferably a human mesenchymal stem cell.
間葉系幹細胞由来培養上清は，上記のとおり公知であるから，公知の方法で得られた間葉系幹細胞の培養上清を用いてもよい。好ましい間葉系幹細胞の培養上清は，ＡＯＦ培地で間葉系幹細胞を培養した際に得られる培養上清である。培養上清は，例えば，遠心分離により培養上清を固液分離して得られる上澄み成分である培養上清を，凍結乾燥により水分を除去して得られる処理物，エバポレーター等を用いて培養上清を減圧濃縮して得られる処理物，限外ろ過膜等を用いて培養上清を濃縮して得られる処理物，又はフィルターを用いて培養上澄みを固液分離して得られる処理物，もしくは，上述のような処理をする前の培養上清の原液である。また，例えば，本発明の間葉系幹細胞を培養した上澄みを,遠心分離（例えば，１，０００×ｇ，１０分）した後，硫酸アンモニウム（例えば，６５％飽和）で分画し，沈殿物を適切な緩衝液で懸濁した後に透析処理を行い,シリンジフィルター（例えば，０．２μｍ）で濾過し，無菌的な培養上清を得てもよい。採取した培養上清を，そのまま用いても，また凍結保存しておき使用時に解凍して用いることもできる。また薬剤学的に許容される担体を加えて，取り扱いやすい液量，例えば０．２ｍｌ又は０．５ｍｌ等となるように滅菌容器に分注してもよい。さらに,感染性病原体リスクの対策として，培養上清をウイルスクリアランスフィルターやγ線照射により処理してもよい。 Since the mesenchymal stem cell-derived culture supernatant is known as described above, a mesenchymal stem cell culture supernatant obtained by a known method may be used. A preferable culture supernatant of mesenchymal stem cells is a culture supernatant obtained when culturing mesenchymal stem cells in an AOF medium. The culture supernatant is obtained by, for example, treating the culture supernatant, which is a supernatant component obtained by solid-liquid separation of the culture supernatant by centrifugation, using a treated product obtained by removing water by freeze-drying, an evaporator or the like. Processed product obtained by concentrating the supernatant under reduced pressure, processed product obtained by concentrating the culture supernatant using an ultrafiltration membrane, etc., or processed product obtained by solid-liquid separation of the culture supernatant using a filter, or This is a stock solution of the culture supernatant before the above-described treatment. In addition, for example, the supernatant obtained by culturing the mesenchymal stem cells of the present invention is centrifuged (for example, 1,000 × g, 10 minutes), and then fractionated with ammonium sulfate (for example, 65% saturation) to obtain a precipitate. After suspending in an appropriate buffer, dialysis treatment may be performed, followed by filtration with a syringe filter (for example, 0.2 μm) to obtain a sterile culture supernatant. The collected culture supernatant can be used as it is, or can be stored frozen and thawed at the time of use. Further, a pharmaceutically acceptable carrier may be added and dispensed into a sterilized container so that the liquid volume is easy to handle, for example, 0.2 ml or 0.5 ml. Furthermore, as a countermeasure against infectious pathogen risk, the culture supernatant may be treated with a virus clearance filter or gamma irradiation.
マイクロニードル剤の好ましい用途は，アトピー性皮膚炎，創傷，又は褥瘡の治癒剤である。この場合，罹患部位又はその周辺部位にマイクロニードル剤を直接接触させることで，間葉系幹細胞の培養上清を患部に局所投与できる。 A preferred use of the microneedle is a healing agent for atopic dermatitis, wounds, or pressure ulcers. In this case, the culture supernatant of mesenchymal stem cells can be locally administered to the affected area by directly contacting the affected site or its surrounding site with the microneedle agent.
本発明の第２の側面は，上記したいずれかのマイクロニードル剤を対象の皮膚に挿入する工程を含む，美容方法に関する（例えば，ヒトの治療方法に相当するものを除く。）。 The second aspect of the present invention relates to a cosmetic method including the step of inserting any of the microneedle preparations described above into the subject's skin (for example, excluding those corresponding to human treatment methods).
皮膚の障害の改善や美容に有効な成分を含む間葉系幹細胞の培養上清をマイクロニードル剤の原料として用いることで，肌に対し改善効果や美容効果を持つマイクロニードル剤を得ることができる。この場合，マイクロニードル剤を，美容効果を求める部位や，皺のある部位に適用することで，美容効果を発揮できる。 By using the culture supernatant of mesenchymal stem cells containing ingredients effective for skin damage improvement and cosmetics as a raw material for microneedles, it is possible to obtain microneedle agents that have an improvement effect on the skin and a cosmetic effect. . In this case, the cosmetic effect can be exerted by applying the microneedle agent to a part for which a cosmetic effect is desired or a part having wrinkles.
［製造例１］
以下のようにして，間葉系幹細胞の培養上清を得た。
[Production Example 1]
The culture supernatant of mesenchymal stem cells was obtained as follows.
適切な設備のあるクリニックや病院において，医師から説明を受け，インフォームドコンセントを得て脂肪組織の提供に同意した人から摘出された皮下脂肪の提供を受けた。この組織を酵素処理により分散させ，それを遠心分離することにより，間葉系幹細胞を含む種々の細胞を得た。得られた細胞をプラスチック培養皿に播種し，適切な培地で培養することにより，プラスチックに接着性を示す細胞を得た。得られた細胞の１）プラスチック接着性，２）培養による増殖，３）細胞表面抗原マーカーの発現パターン（ＣＤ４４，ＣＤ７３，ＣＤ９０，ＣＤ１０５陽性, ＣＤ３１，ＣＤ３４，ＣＤ４５陰性）を調べ，それが間葉系幹細胞であることを確認した。 At a well-equipped clinic or hospital, he received an explanation from a doctor and received subcutaneous fat extracted from a person who had informed consent and agreed to donate adipose tissue. Various tissues including mesenchymal stem cells were obtained by dispersing this tissue by enzyme treatment and centrifuging it. The obtained cells were seeded on a plastic culture dish and cultured in an appropriate medium to obtain cells exhibiting adhesiveness to plastic. The obtained cells were examined for 1) plastic adhesion, 2) proliferation by culture, 3) expression pattern of cell surface antigen markers (CD44, CD73, CD90, CD105 positive, CD31, CD34, CD45 negative). It was confirmed to be a stem cell.
酵素による組織の分散，培養に用いる培地，培養皿から細胞を取る時に用いる剥離剤など，細胞に触れる全ての剤は，動物由来抽出物や血清を含まないＡｎｉｍａｌ Ｏｒｉｇｉｎ Ｆｒｅｅ (ＡＯＦ) であるものが望ましいが，これに限るものではない。 All agents that come into contact with cells, such as tissue dispersal by enzymes, culture media, and exfoliants used to remove cells from culture dishes are animal origin extracts and serum-free Animal Origin Free (AOF). Desirable, but not limited to this.
ＡＯＦ培地を用いて細胞を培養し，培養後の培地を得た。これを遠心分離により混入した細胞等を除き，さらに滅菌フィルターを通す等の処置を行って無菌性を確保したものを培養上清とした。培養上清は，必要に応じて，限外濾過フィルターや凍結乾燥などの手法により成分濃縮，あるいは粉体とした。得られた培養上清あるいはその成分濃縮物あるいは粉体を原料の一部とし，マイクロニードルアレイを作成した。 Cells were cultured using an AOF medium, and a cultured medium was obtained. The culture supernatant was obtained by removing cells and the like mixed by centrifugation and further ensuring the sterility by performing a treatment such as passing through a sterilizing filter. The culture supernatant was concentrated or powdered as required by techniques such as ultrafiltration filters and freeze-drying. Using the obtained culture supernatant or its component concentrate or powder as a part of the raw material, a microneedle array was prepared.
特開特開２００７−０８９７９２号公報に記載された実施例と同様にしてマイクロニードル剤を製造した。粉末マルトースに，製造例１で得た間葉系幹細胞の培養上清（マルトースに対する重量比１０％）を均一に混合した。その後，１１０℃で過熱溶解させた。その後，溶解液を，冷却して１０重量％間葉系幹細胞の培養上清含マルトース塊を製作した。適当に分割したマルトース塊を経皮投与装置製造用の金型に設置し，その金型を１００℃に１０秒間過熱昇温することにより，マルトース塊を溶解した。その後，常温，常圧にて５秒放置すると，冷却凝固された。その後，金型を分離し，脆い突起部を最初に金型から取り外した。このようにして，マルトースを主成分とするマイクロニードル剤を製作した。なお，本実施例では，突起部の大きさや微小突起の大きさを適宜変えた鋳型を作成し，突起部や微小突起の大きさが様々な経皮投与装置を製造した。得られた突起部の高さはたとえば，５００μｍであり，微小突起の高さは５０μｍのものや，高さが５００μｍで微小突起の高さが１００μｍのもの，突起部の高さが８００μｍで，微小突起の高さが３００μｍのものなどを得た。 A microneedle agent was produced in the same manner as in the examples described in JP-A-2007-087992. To the powdered maltose, the culture supernatant of the mesenchymal stem cells obtained in Production Example 1 (weight ratio to maltose 10%) was mixed uniformly. Then, it was dissolved by heating at 110 ° C. Thereafter, the lysate was cooled to prepare a 10 wt% mesenchymal stem cell culture supernatant-containing maltose mass. An appropriately divided maltose mass was placed in a mold for manufacturing a transdermal administration device, and the mold was heated to 100 ° C. for 10 seconds to dissolve the maltose mass. After that, it was cooled and solidified when left at room temperature and pressure for 5 seconds. Thereafter, the mold was separated, and the brittle protrusion was first removed from the mold. In this way, a microneedle preparation composed mainly of maltose was produced. In this example, a template was prepared by appropriately changing the size of the projections and the size of the microprojections, and transdermal administration devices with various sizes of the projections and microprojections were manufactured. The height of the obtained protrusion is, for example, 500 μm, the height of the minute protrusion is 50 μm, the height is 500 μm, the height of the minute protrusion is 100 μm, the height of the protrusion is 800 μm, A microprojection having a height of 300 μm was obtained.
図２は，アトピー性皮膚炎に対する間葉系幹細胞ならびにその培養上清の効果を示す図面に替わる写真である。マイクロニードル剤使用前（左）と，マイクロニードル剤使用二ヶ月後（右）の皮膚を示す。図２から，本発明のマイクロニードル剤は，アトピー性皮膚炎の治療に極めて有効であることが示された。 FIG. 2 is a photograph replacing a drawing showing the effects of mesenchymal stem cells and their culture supernatant on atopic dermatitis. The skin is shown before the microneedle (left) and two months after the microneedle (right). From FIG. 2, it was shown that the microneedle preparation of the present invention is extremely effective for the treatment of atopic dermatitis.
図３は，皺に対する間葉系幹細胞培養上清の効果を示す図面に替わる写真である。マイクロニードル剤使用前とマイクロニードル剤使用後二ヶ月の皮膚の写真（上），およびそのロボスキャン（ＡＮＴＥＲＡ３Ｄ）像（下）を示す。図３中，矢じりは皺の位置を示す。図３から本発明のマイクロニードル剤は，皺の解消といった美容に極めて有効であることが示された。図４は，皮膚の水分含有量に対する間葉系幹細胞培養上清の効果を示す図面に替わるグラフである。図４は，間葉系幹細胞の培養上清を皮下注射する前，および投与一回目と二回目の，顔の各部位の皮膚の水分含有量を示す。図４から本発明のマイクロニードル剤は，皮膚の水分量を改善することが示され，この点からも美容効果が高いことがわかった。このように本発明のマイクロニードル剤は，皮膚の水分を改善することから，創傷，又は褥瘡の治癒剤として有効であることが示された。 FIG. 3 is a photograph replacing a drawing showing the effect of the mesenchymal stem cell culture supernatant on wrinkles. A photograph of the skin before using the microneedle agent and two months after using the microneedle agent (upper), and its Roboscan (ANTERA3D) image (lower) are shown. In FIG. 3, the arrowhead indicates the position of the heel. From FIG. 3, it was shown that the microneedle preparation of the present invention is extremely effective for beauty such as elimination of wrinkles. FIG. 4 is a graph instead of a drawing showing the effect of the mesenchymal stem cell culture supernatant on the moisture content of the skin. FIG. 4 shows the moisture content of the skin of each part of the face before subcutaneous injection of the culture supernatant of mesenchymal stem cells and the first and second administration. FIG. 4 shows that the microneedle preparation of the present invention improves the moisture content of the skin, and it was found that the cosmetic effect is high from this point. Thus, it was shown that the microneedle preparation of the present invention is effective as a healing agent for wounds or pressure ulcers because it improves the moisture of the skin.
実施例１において，トレハロースをマルトースに対する重量比１０％で添加した以外は，実施例１と同様にしてマイクロニードル剤を製造した。このマイクロニードル剤は，特に皺の解消において，実施例１のマイクロニードル剤に比べて極めて顕著な効果が得られた。 A microneedle agent was produced in the same manner as in Example 1 except that trehalose was added at a weight ratio of 10% to maltose in Example 1. This microneedle agent had a particularly remarkable effect as compared with the microneedle agent of Example 1 in eliminating wrinkles.
実施例１において，間葉系幹細胞の培養上清を含有させずに，複数の突起（マイクロニードル）を有する経皮投与基材を製造した。間葉系幹細胞の培養上清とトレハロースとを１：１の重量比で混合した溶液を調整した。調整した間葉系幹細胞の培養上清のトレハロース溶液を経皮投与基材にスプレー塗布した。この際，突起の先端がやや丸くなった。このマイクロニードル剤を用いて間葉系幹細胞の培養上清を投与すると，皮膚を伸ばした状態で，皮膚にマイクロニードルが刺さり，皮膚内に間葉系幹細胞の培養上清が浸潤するので，効果的に間葉系幹細胞の培養上清を投与することができた。 In Example 1, a transdermal administration substrate having a plurality of protrusions (microneedles) was produced without containing a culture supernatant of mesenchymal stem cells. A solution prepared by mixing the culture supernatant of mesenchymal stem cells and trehalose at a weight ratio of 1: 1 was prepared. The prepared trehalose solution of the culture supernatant of mesenchymal stem cells was spray-coated on the substrate for transdermal administration. At this time, the tip of the protrusion was slightly rounded. When the culture supernatant of mesenchymal stem cells is administered using this microneedle agent, the microneedle is pierced into the skin with the skin stretched, and the culture supernatant of the mesenchymal stem cells infiltrates into the skin. It was possible to administer the culture supernatant of mesenchymal stem cells.
［比較例１］
間葉系幹細胞の培養上清を混合しない以外は，実施例１と同様にしてマイクロニードル剤を製造した。この場合，アトピー性皮膚炎の改善や皺の改善が見られず，何も処方しない患者に比べて症状の回復は見られなかった。
[Comparative Example 1]
A microneedle preparation was produced in the same manner as in Example 1 except that the culture supernatant of the mesenchymal stem cells was not mixed. In this case, there was no improvement in atopic dermatitis or improvement in wrinkles, and there was no recovery of symptoms compared to patients who did not prescribe anything.
［比較例２］
間葉系幹細胞の培養上清を患部に塗布し，間葉系幹細胞の培養上清を含まないマイクロニードルアレイを患部に押し当てた以外は，実施例１と同様にして，間葉系幹細胞の培養上清を患部に投与した。この場合，培養上清を含んだマイクロニードルに比べ，間葉系幹細胞の培養上清は皮膚の内部に浸潤せず，間葉系幹細胞の培養上清による効果が小さかった。この場合，アトピー性皮膚炎について若干の改善が見られたものの，実施例１に比べると明らかに効果が小さく，皺の改善は見られなかった。
[Comparative Example 2]
The mesenchymal stem cell culture supernatant was applied to the affected area, and the microneedle array not containing the mesenchymal stem cell culture supernatant was pressed against the affected area in the same manner as in Example 1. The culture supernatant was administered to the affected area. In this case, the mesenchymal stem cell culture supernatant did not infiltrate the skin and the effect of the mesenchymal stem cell culture supernatant was less than that of the microneedle containing the culture supernatant. In this case, although a slight improvement was observed with respect to atopic dermatitis, the effect was clearly less than that of Example 1, and no improvement was observed in wrinkles.
本発明は，医療産業および美容産業において利用されうる。
The present invention can be used in the medical and beauty industries.
Claims (8)
前記マイクロニードル剤を構成する１又は複数のマイクロニードルは溶解性があり，前記間葉系幹細胞の培養上清は，前記１又は複数のマイクロニードル内に収容されている，
マイクロニードル剤。 The microneedle preparation according to claim 1,
The one or more microneedles constituting the microneedle agent are soluble, and the culture supernatant of the mesenchymal stem cells is contained in the one or more microneedles.
Microneedle agent.
前記間葉系幹細胞の培養上清は，前記マイクロニードル剤を構成する１又は複数のマイクロニードルの表面に塗布されている，
マイクロニードル剤。 The microneedle preparation according to claim 1,
The mesenchymal stem cell culture supernatant is applied to the surface of one or more microneedles constituting the microneedle agent,
Microneedle agent.
前記間葉系幹細胞の培養上清は，間葉系幹細胞の培養上清の成分濃縮物である，
マイクロニードル剤。 The microneedle preparation according to claim 1,
The mesenchymal stem cell culture supernatant is a component concentrate of the mesenchymal stem cell culture supernatant,
Microneedle agent.
前記間葉系幹細胞の培養上清は，間葉系幹細胞の培養上清の粉体である，
マイクロニードル剤。 The microneedle preparation according to claim 1,
The culture supernatant of the mesenchymal stem cell is a powder of the culture supernatant of the mesenchymal stem cell,
Microneedle agent.
前記間葉系幹細胞が，ヒト間葉系幹細胞である，
マイクロニードル剤。 The microneedle preparation according to claim 1,
The mesenchymal stem cells are human mesenchymal stem cells;
Microneedle agent.
アトピー性皮膚炎，創傷，又は褥瘡の治癒剤である，
マイクロニードル剤。 The microneedle preparation according to claim 1,
A healing agent for atopic dermatitis, wounds, or pressure ulcers,
Microneedle agent.
A cosmetic method comprising a step of inserting the microneedle preparation according to any one of claims 1 to 6 into the skin of a subject.
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