JP2009167103A

JP2009167103A - ピラゾリル５−チオグリコシド化合物

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Publication number: JP2009167103A
Application number: JP2006128679A
Authority: JP
Inventors: Hiroyuki Kakinuma; 浩行柿沼; Yohei Kobashi; 陽平小橋
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2006-05-02
Filing date: 2006-05-02
Publication date: 2009-07-30
Also published as: WO2007129668A1

Abstract

【課題】選択的にＳＧＬＴ１活性を阻害し、消化管からのグルコース吸収を抑制することで、ＩＧＴ（耐糖能異常）をコントロールする新規なピラゾリル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド化合物を提供する。
【解決手段】下記式（Ｉ）
【化１】

［式（Ｉ）中、Ｚは、Ｃ_1-6アルキル基を示し、Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は、同一又は異なって、水素原子、又はＣ_1-6アルキル基を示し、ｎは１から４の整数を示し、Ｘは、水酸基、又は−ＯＣ_1-4アルキルフェニル等を示す。］で表されるピラゾリル５−チオグルコシド化合物若しくはその製薬学的に許容される塩又はそれらの水和物。
【選択図】なし

Description

本発明は、腎臓でのグルコース再吸収に関わるナトリウム依存性グルコース供輸送体１（ＳＧＬＴ１）の阻害活性を有するピラゾリル５−チオグリコシド化合物に関する。

糖尿病に罹患すると、空腹時の血糖値は１２６ｍｇ／ｄＬ以上を示す。また、空腹時の血糖値が正常であっても、食事の後に１４０〜２００ｍｇ／ｄＬという高い血糖値を示す場合には、耐糖能異常（以下、ＩＧＴ（impaired glucose tolerance）という。）と診断される。そして、このＩＧＴの状態は、「境界型」と呼ばれ、糖尿病予備群と位置付けられている。この境界型から糖尿病の発症を遅らせることは、心血管障害のリスクを低減させると考えられ、それを示す幾つかの知見が得られている。例えば、１９９７年に中国で行われたDa Qing IGT and Diabetes Studyでは、ダイエットや運動を行うことでＩＧＴから２型糖尿病への移行を有意に抑制したと報告されている(非特許文献１参照)。また、薬剤治療が有効な例として、糖の加水分解酵素を阻害し、小腸からの糖の吸収を遅延させるα−グルコシダーゼ阻害剤アカルボースを投与すると、ＩＧＴから２型糖尿病への移行を抑制し、さらに高血圧の発症も有意に抑制することが報告されている(非特許文献２参照)。

以上のことから、糖尿病の発症を抑えるには、食事療法、運動及び薬物療法によってＩＧＴをコントロールすることが重要である。

ここで、小腸上皮には高い頻度でナトリウム依存性グルコース共輸送体１（ＳＧＬＴ１）が発現している。このＳＧＬＴ１は小腸において、ナトリウムに依存し、グルコース又はガラクトースの能動輸送を司っている。そこで、ＳＧＬＴ１活性を阻害し、血糖値の上昇を抑制して、ＩＧＴの改善を図るピラゾール誘導体の合成例が報告されている（特許文献１〜５参照）。

また、腎臓に高頻度で発現するＳＧＬＴ２の阻害活性を有するピラゾリル５−チオグリコシド誘導体も開示されている（特許文献６参照）。

しかしながら、選択的にＳＧＬＴ１活性を阻害するピラゾリル５−チオグリコシド誘導体については知られていない。

国際公開第ＷＯ２００２／０９８８９３号パンフレット国際公開第ＷＯ２００４／０１４９３２号パンフレット国際公開第ＷＯ２００４／０１８４９１号パンフレット国際公開第ＷＯ２００４／０１９９５８号パンフレット国際公開第ＷＯ２００５／０１２１１６１号パンフレット国際公開第ＷＯ２００４／０８９９６７号パンフレット Pan XR, et al. Diabets Care, 第20巻, 534項, 1997年 J.-L. Chiasson, et al. Lancent, 第359巻, 2072項, 2002年

本発明は、選択的にＳＧＬＴ１活性を阻害し、消化管からのグルコース吸収を抑制することで、ＩＧＴをコントロールする新規なピラゾリル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド化合物を提供することを課題とする。

本発明者らは前記課題を解決するために鋭意研究した結果、ある種のピラゾール誘導体を５−チオグルコシル化した化合物が、優れたＳＧＬＴ１活性阻害作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、下記式（Ｉ）で表されるピラゾリル５−チオグルコシド化合物若しくはその製薬学的に許容される塩又はそれらの水和物である。

式（Ｉ）中、
Ｚは、Ｃ_1-6アルキル基を示す。
Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は、同一又は異なって、水素原子、又はＣ_1-6アルキル基を示す。
ｎは、１から４の整数を示す。
Ｘは、水酸基、−ＯＣ_1-4アルキルフェニル、又は−Ｎ(Ｒ^A)Ｒ^Bを示す。
ただし、Ｒ^A及びＲ^Bは、同一又は異なって、水素原子、“−ＣＯＮＨ₂で置換されたＣ_1-6アルキル基”、−ＣＯＮＨＲ^C（式中、Ｒ^Cは、水酸基で置換されたＣ_1-6アルキル基を示す。）、又は−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ^D（式中、Ｒ^Dは、水素原子、又は−ＣＯ₂Ｃ_1-4アルキルフェニルを示す）を示す。

本発明の他の態様は、前記式（Ｉ）で表されるピラゾリル５−チオグルコシド化合物若しくはその製薬学的に許容される塩又はそれらの水和物を有効成分として含有することを特徴とするＳＧＬＴ１活性阻害剤である。

本発明の他の態様は、前記式（Ｉ）で表されるピラゾリル５−チオグルコシド化合物若しくはその製薬学的に許容される塩又はそれらの水和物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病の予防又は治療剤である。

本発明により、ＳＧＬＴ１活性を選択的に阻害する新規なピラゾリル５−チオグルコシド化合物を提供することが可能となった。

本発明において使用する用語を以下に定義する。

「Ｃ_1-6アルキル基」とは、炭素原子を１−６個有する直鎖状又は分枝状のアルキル基を意味する。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基が挙げられる。

「−ＯＣ_1-4アルキルフェニル」とは、Ｃ_1-4アルコキシ基とフェニルが複合した形態を有する基である。例えば、ベンジルオキシ基、フェニルエチルオキシ基が挙げられる。

「水酸基及び−ＣＯＮＨ₂の少なくとも１つで置換されたＣ_1-6アルキル基」とは、Ｃ_1-6アルキル基上の水素原子が、水酸基及び−ＣＯＮＨ₂から選択される１つ以上の基によって置換されたＣ_1-6アルキル基を示す。例えば、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、２−ヒドロキシ−１,１−ジメチルエチル基、１，３−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル基、カルバモイルメチル基が挙げられる。

「製薬学的に許容される塩」とは、アルカリ金属類、アルカリ土類金属類、アンモニウム、アルキルアンモニウムなどとの塩、鉱酸又は有機酸との塩であり、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、アルミニウム塩、トリエチルアンモニウム塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、ぎ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、エチルコハク酸塩、ラクトビオン酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、アジピン酸塩、システインとの塩、Ｎ−アセチルシステインとの塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、よう化水素酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、ピクリン酸塩、チオシアン酸塩、ウンデカン酸塩、アクリル酸ポリマーとの塩、カルボキシビニルポリマーとの塩が挙げられる。

「水和物」とは、本発明の化合物又はその塩の製薬学的に許容される水和物である。本発明の化合物又はその塩は、大気にさらされ、あるいは再結晶することなどにより、水分を吸収し、吸着水がつく場合や、水和物となる場合がある。本発明における水和物には、そのような水和物も含まれる。

本発明の式（Ｉ）化合物の製造方法を以下に説明する。

製造法１
本発明の式（Ｉ）化合物において、Ｘが水酸基、−ＯＣ_1-4アルキルフェニル又はアミノ基である化合物は以下の方法で合成できる。
ただし、Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³及びＰ⁴は、アセチル基、ピバロイル基等のＣ_2-6アルカノイル基又はベンゾイル基を示し、その他の記号は前記と同義である。

ここに、ピラゾール誘導体１は国際公開ＷＯ２００４／０１８４９１号に準拠して合成することができる。５−チオグルコース誘導体２は、国際公開ＷＯ２００４／０１４９３１号に準拠して合成することができる。

（１）工程１（光延反応）
光延反応（国際公開ＷＯ２００４／０８９９６６号）によって、ピラゾール誘導体１と５−チオグルコース誘導体２からピラゾリル５−チオ−β−Ｄ−グルコシド誘導体３を選択的に製造することができる。この反応における試薬として必要なホスフィン類の例としては、トリフェニルホスフィン、トリ−ｎ−ブチルホスフィン、トリ−ｔ−ブチルホスフィン、トリストリルホスフィンやジフェニル−２−ピリジルホスフィン等が挙げられる。中でもトリフェニルホスフィン、ジフェニル−２−ピリジルホスフィンが好ましく、トリフェニルホスフィンがより好ましい。

アゾ試薬の例としては、ジエチルアゾジカルボキシレート、ジイソプロピルアゾジカルボキシレートやジ−ｔｅｒｔ−ブチルアゾジカルボキシレート、１,１'−アゾビス(Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド)や１，１’-(アゾジカルボニル)ジピペリジンを用いることができる。中でも、ジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）、ジイソプロピルアゾジカルボキシレートが好ましい。

本反応に用いる溶媒はテトラヒドロフラン、ジオキサン、トルエン、塩化メチレン、クロロホルム、アセトニトリル、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等であり、好ましいのは、テトラヒドロフラン、トルエンである。

反応温度は−２０℃から室温が好ましく、−５℃から＋５℃がより好ましい。

（２）工程２（脱ベンジル化）
上記で得られた化合物３をパラジウム活性炭、水酸化パラジウム、又は白金−パラジウム活性炭等の触媒を用いて水素雰囲気下にて接触水素添加することによりベンジル基を除去することができる。中でも水酸化パラジウムが触媒として好ましい。この反応に使用する溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、酢酸等を挙げることができる。反応温度は室温から還流温度であるが、室温が好ましい。

（３）工程３（アミノ基への変換）
上記で得られた化合物４の水酸基をアミノ基に変換し化合物５を得ることができる。まず、化合物４をトリエチルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン、ピリジン、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸セシウム等の塩基の存在下、メタンスルホニルクロリドやｐ−トルエンスルホニルクロリドを用いて、脱離基を導入する。この反応に使用する溶媒としては、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、酢酸エチル等が挙げられる。反応温度は０℃から室温である。

次に、アジ化ナトリウムを用いて、アジド基に変換することができる。この反応に使用する溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、酢酸エチル等が挙げられる。反応温度は室温から還流温度である。

さらに、アジド基を上記の脱ベンジル化の条件と同様な接触水素添加にてアミノ基に変換し化合物５が得られる。

（４）工程４（Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³及びＰ⁴の脱保護）
５−チオグルコースの保護基を適当な塩基を用いて除去し、本発明化合物（Ｉ）が得られる。この反応に使用する塩基として、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ナトリウムベンジルオキシド、水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、トリエチルアミン等が挙げられる。反応に適当な溶媒はメタノール、エタノール、ベンジルアルコール、水又はこれらの混合溶媒である。反応温度は０℃から室温であり、室温が好ましい。

製造法２
本発明の式（Ｉ）化合物において、Ｘが−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ^Dである化合物は以下の方法で合成できる。
ただし、記号は前記と同義である。

（１）工程５（グアニジノ基の導入）
化合物５からグアニジノ化試薬６を用いて化合物７に誘導することができる。この反応に使用する溶媒としては、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、メタノール、エタノール、イソプロパノール、酢酸エチル、トルエン等が挙げられる。反応温度は室温から還流温度である。

（２）工程６及び工程７（脱保護）
グアニジノ基の保護基Ｒ^D、ベンジルオキシカルボニル基をナトリウムベンジルオキシドで処理することで、本発明化合物（Ｉ）（Ｘ=ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＣＯＯＢｎ）が得られる。さらに、ベンジルオキシカルボニル基は、製造法１の工程２に記載した脱ベンジル化と同様な方法で除去することができる。このときの好ましい触媒は水酸化パラジウムである。

製造法３
本発明の式（Ｉ）化合物において、Ｘが−ＮＨＣＯＮＨＲ^Cである化合物は以下の方法で合成できる。
ただし、Ｒ^Cは水素原子又は水酸基で置換されてもよいＣ_1-6アルキル基を示し、他の記号は前記と同義である。

（１）工程８（ウレイド基の構築）
化合物５から適当な塩基の存在下、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメートやトリホスゲンを用いて、アミンＲ^CＮＨ₂と縮合することにより、化合物８に誘導することができる。適当な塩基としては、トリエチルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン、ピリジン、ＤＢＵ、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸セシウム等が挙げられる。また、使用する溶媒としては、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、酢酸エチル等が挙げられる。反応温度は０℃から還流温度である。

（２）工程９（脱保護）
Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³、及びＰ⁴を製造法1の工程４に記載の方法で脱保護し、本発明化合物（Ｉ）が得られる。

製造法４
本発明の式（Ｉ）化合物において、Ｘが−Ｎ(Ｒ^A)Ｒ^Bで、Ｒ^A及びＲ^Bの少なくとも一つが“水酸基、−ＣＯＮＨ₂及び−ＯＣ_1-4アルキルフェニルからなる群より選択される１〜３個の基で置換されてもよいＣ_1-6アルキル基”である化合物は以下の方法で合成できる。
ただし、Ｌ１はハロゲン原子、ＭｅＳＯ₂Ｏ-等の脱離基を示し、その他の記号は前記と同義である。

（１）工程１０
化合物５を適当な塩基の存在下、Ｒ^AＬ１又はＲ^BＬ１と反応させることにより、化合物９が得られる。適当な塩基としては、トリエチルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン、ピリジン、ＤＢＵ、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸セシウム等が挙げられる。また、使用する溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、メタノール、エタノール、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等が挙げられる。反応温度は室温から還流温度である。

（２）工程１１
化合物４から製造法１のアミノ基への変換と同様の条件で、化合物９を製造することもできる。まず、化合物４をトリエチルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン、ピリジン、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸セシウム等の塩基の存在下、メタンスルホニルクロリドやｐ−トルエンスルホニルクロリドを用いて、脱離基を導入する。この反応に使用する溶媒としては、クロロホルム、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、酢酸エチル等が挙げられる。反応温度は０℃から室温である。

次に、トリエチルアミン、Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン、ピリジン、ＤＢＵ、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸セシウム等の適当な塩基の存在下、ＮＨＲ^AＲ^Bと反応させることにより化合物９が得られる。この反応に使用する溶媒としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ジクロロメタン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、酢酸エチル等が挙げられる。反応温度は室温から還流温度である。

（３）工程１２（脱保護）
Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³及びＰ⁴を製造法1の工程４に記載の方法で脱保護し、本発明化合物（Ｉ）が得られる。

本発明の化合物は、ＳＧＬＴ１を選択的に阻害し、小腸からの糖の吸収を抑制して、ＩＧＴを改善することができる。

よって、本発明の化合物は、ＳＧＬＴ１阻害剤、あるいは、糖尿病、糖尿病関連疾患及び糖尿病合併症の予防又は治療剤として提供されうる。

ここで、「糖尿病」には、１型糖尿病、２型糖尿病の他、特定の原因によるその他の型の糖尿病が含まれる。

本発明の化合物は、医薬として、全身的又は局所的に、経口投与又は非経口投与することができる。

本発明の化合物を医薬として提供する場合、固形剤、液剤等の種々の態様の製剤形態を適宜に採択することができる。その際、製薬学的に許容される担体を配合することも可能である。そのような担体の例としては、一般的な賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、被覆剤、糖衣剤、ｐＨ調整剤、溶解剤又は水性若しくは非水性溶媒などが挙げられる。本発明の化合物とこれらの担体から、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、散剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤等を調製することができる。

また、本発明の化合物を、α、β若しくはγ−シクロデキストリン又はメチル化シクロデキストリン等に包接させて、その溶解性を改善することも可能である。

本発明の化合物の投与量は、疾患、症状、体重、年齢、性別、投与経路等により異なってくるが、成人に対し、１日当たり０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重であり、０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重が好ましく、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重がより好ましい。これを１日１回から数回に分けて投与することができる。

以下に実施例及び参考例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。

実施例１
４−｛４−［２−（ベンジルオキシ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１１）の合成

（１）４−｛４−［２−（ベンジルオキシ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−Ｄ−グルコピラノース（０．５８２ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）、４−｛［４−（２−ベンジルオキシエトキシ）−２−メチルフェニル］メチル｝−１，２−ジヒドロ−５−イソプロピル−３Ｈ−ピラゾール−３−オン（０．３０４ｇ、０．７９９ｍｍｏｌ；国際公開ＷＯ０４／０５０１２２号を参考に４−ブロモ−３−メチルフェノールより合成）及びトリフェニルホスフィン（０．４２０ｇ、１．６０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍＬ）溶液に氷冷下、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（０．８０９ｍＬ、１．６０ｍｍｏｌ）の４０％トルエン溶液をゆっくりと滴下した。氷冷下で３０分間攪拌し、室温に昇温後、さらに３時間攪拌した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）にて２回精製した後、薄層クロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１）にて精製し、無色ガム状物質として表記化合物（０．０４０ｇ、７％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CHLOROFORM-d) δppm 1.12 (d, J=6.99 Hz, 6 H) 1.80 (s, 3 H) 1.98 (s, 3 H) 2.02 (s, 3 H) 2.05 (s, 3 H) 2.26 (s, 3 H) 2.74 - 2.86 (m, 1 H) 3.38 - 3.59 (m, 3 H) 3.76 - 3.85 (m, 2 H) 4.05 - 4.18 (m, 3 H) 4.35 (dd, J=11.97, 4.51 Hz, 1 H) 4.63 (s, 2 H) 5.17 (t, J=9.79 Hz, 1 H) 5.37 (t, J=9.79 Hz, 1 H) 5.51 (t, J=8.86 Hz, 1 H) 5.86 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.61 (dd, J=8.55, 2.49 Hz, 1 H) 6.72 (d, J=2.49 Hz, 1 H) 6.79 (d, J=8.55 Hz, 1 H) 7.21 - 7.43 (m, 5 H)

（２）４−｛４−［２−（ベンジルオキシ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
４−｛４−［２−（ベンジルオキシ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（０．４０ｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍＬ）、水（１ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（２ｍＬ）を加え室温で１時間攪拌した。反応液を減圧下留去し、得られた残渣を薄層クロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１７：３）にて精製し、白色粉末として表題化合物（０．０２９ｇ、９４％）を得た。
1H NMR (300 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.13 (d, J=7.38 Hz, 3 H) 1.16 (d, J=7.38 Hz, 3 H) 2.31 (s, 3 H) 2.75 - 2.91 (m, 2 H) 3.25 (t, J=8.94 Hz, 1 H) 3.51 - 3.97 (m, 8 H) 4.07 - 4.16 (m, 2 H) 4.62 (s, 2 H) 5.41 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.67 (dd, J=8.39, 2.49 Hz, 1 H) 6.76 (d, J=2.49 Hz, 1 H) 6.90 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 7.24 - 7.43 (m, 5 H).
ESI m/z = 581 (M+Na)．

実施例２
４−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１２）の合成

（１）４−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド
２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−Ｄ−グルコピラノース（５１．１ｇ、７０．１ｍｍｏｌ）、４−｛［４−（２−ベンジルオキシエトキシ）−２−メチルフェニル］メチル｝−１，２−ジヒドロ−５−イソプロピル−３Ｈ−ピラゾール−３−オン（２６．７ｇ、７０．１ｍｍｏｌ；国際公開ＷＯ０４／０５０１２２号を参考に４−ブロモ−３−メチルフェノールより合成）及びトリフェニルホスフィン（３６．８ｇ、１４０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１７５ｍＬ）溶液に氷冷下、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（７３．８ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）の４０％トルエン溶液をゆっくりと滴下した。氷冷下で３０分間攪拌し、室温に昇温後、さらに３時間攪拌した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）にて精製し、褐色ガム状物質として粗化合物（４４．５ｇ）を得た。この粗化合物（２８．４ｇ）のメタノール（１５６ｍＬ）溶液に２０％水酸化パラジウム−活性炭素（１０．２ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温にて一晩攪拌した。反応液をセライト濾過後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（クロロホルム：メタノール＝４０：１）にて精製し、淡黄色粉末として表記化合物（９．５３ｇ、２１％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.14 (d, J=6.99 Hz, 6 H) 1.82 (s, 3 H) 1.98 (s, 3 H) 2.02 (s, 3 H) 2.05 (s, 3 H) 2.27 (s, 3 H) 2.72 - 2.89 (m, 1 H) 3.37 - 3.60 (m, 3 H) 3.89 - 3.97 (m, 2 H) 3.99 - 4.18 (m, 3 H) 4.33 (dd, J=11.89, 4.59 Hz, 1 H) 5.16 (t, J=9.71 Hz, 1 H) 5.35 (t, J=9.71 Hz, 1 H) 5.49 (t, J=8.86 Hz, 1 H) 5.85 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.62 (dd, J=8.55, 2.64 Hz, 1 H) 6.72 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 6.81 (d, J=8.55 Hz, 1 H).

（２）４−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
４−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（０．１７５ｇ、０．２７５ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍＬ）溶液にナトリウムメトキシドの２５％メタノール溶液を加え室温で３時間攪拌した。反応液にドライアイスを加え、中和した後に、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（酢酸エチル：エタノール：水＝２０：２：１〜１５：２：１）にて精製し、白色粉末として表記化合物（０．１０６ｇ、８２％）を得た。
1H NMR (300 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.12 (d, J=7.54 Hz, 3 H) 1.15 (d, J=7.54 Hz, 3 H) 2.30 (s, 3 H) 2.75 - 2.91 (m, 2 H) 3.26 (t, J=8.94 Hz, 1 H) 3.51 - 4.06 (m, 10 H) 5.42 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.67 (dd, J=8.39, 2.64 Hz, 1 H) 6.77 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 6.90 (d, J=8.39 Hz, 1 H).
ESI m/z = 491 (M+Na)．

実施例３
４−［４−（２−アミノエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１３）の合成

（１）４−［４−（２−アジドエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
実施例２（１）で合成した４−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（８．３８ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）のクロロホルム（８２ｍＬ）溶液に氷冷下、メタンスルホニルクロリド（１．２ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応液に０．５Ｎ塩酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出後、有機層を飽和重曹水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を炉別後、溶媒を減圧下留去した。残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解させアジ化ナトリウムを加えて１００℃で３時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで２回抽出した後、有機層を飽和食塩水で３回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を炉別後、溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）にて精製し、淡黄色粉末として表題化合物（６．９８ｇ、８０％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.14 (d, J=6.99 Hz, 6 H) 1.82 (s, 3 H) 1.98 (s, 3 H) 2.03 (s, 3 H) 2.06 (s, 3 H) 2.28 (s, 3 H) 2.76 - 2.89 (m, 1 H) 3.35 - 3.63 (m, 5 H) 4.05 - 4.18 (m, 3 H) 4.34 (dd, J=11.97, 4.66 Hz, 1 H) 5.15 (t, J=9.79 Hz, 1 H) 5.36 (t, J=9.79 Hz, 1 H) 5.50 (t, J=8.86 Hz, 1 H) 5.85 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.61 (dd, J=8.55, 2.64 Hz, 1 H) 6.72 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 6.81 (d, J=8.55 Hz, 1 H).

（２）４−［４−（２−アミノエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
４−［４−（２−アジドエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（６．９８ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）のメタノール溶液に１０％パラジウム−活性炭素（０．４９ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温にて一晩攪拌した。不溶物をセライト濾過後、ろ液を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（クロロホルム：メタノール＝３０：１）にて精製し、淡黄色粉末として表記化合物（６．１６ｇ、９１％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.13 (d, J=6.99 Hz, 6 H) 1.81 (s, 3 H) 1.98 (s, 3 H) 2.02 (s, 3 H) 2.05 (s, 3 H) 2.27 (s, 3 H) 2.75 - 2.91 (m, 1 H) 3.05 (t, J=5.13 Hz, 2 H) 3.34 - 3.69 (m, 3 H) 3.86 - 4.20 (m, 3 H) 4.34 (dd, J=11.97, 4.66 Hz, 1 H) 5.16 (t, J=9.79 Hz, 1 H) 5.36 (t, J=9.79 Hz, 1 H) 5.50 (t, J=8.86 Hz, 1 H) 5.85 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.60 (dd, J=8.39, 2.64 Hz, 1 H) 6.71 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 6.80 (d, J=8.39 Hz, 1 H).

（３）４−［４−（２−アミノエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
４−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの代わりに４−［４−（２−アミノエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いて、実施例２（２）に示す方法と同様の方法で表記化合物を合成した。
1H NMR (300 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.11 (d, J=7.15 Hz, 3 H) 1.13 (d, J=7.15 Hz, 3 H) 2.30 (s, 3 H) 2.72 - 2.89 (m, 2 H) 3.08 - 3.24 (m, 2 H) 3.24 - 3.29 (m, 1 H) 3.46 - 3.79 (m, 5 H) 3.83 - 3.92 (m, 1 H) 4.10 - 4.17 (m, 2 H) 5.36 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.69 (dd, J=8.55, 2.80 Hz, 1 H) 6.79 (d, J=2.80 Hz, 1 H) 6.90 (d, J=8.55 Hz, 1 H).
ESI m/z = 468 (M+H)．

実施例４
ベンジル［イミノ（｛２−［４−（｛５−イソプロピル−３−［（５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝メチル）−３−メチルフェノキシ］エチル｝アミノ）メチル］カルバマート（化合物１４）の合成

（１）ジベンジル［（Ｅ）−（｛２−［４−（｛５−イソプロピル−３−［（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝メチル）−３−メチルフェノキシ］エチル｝アミノ）メチルイリデン］ビスカルバマートの合成
実施例３（２）で合成した４−［４−（２−アミノエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（０．５０３ｇ、０．７９１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．３ｍＬ）溶液にＮ、Ｎ´−ビス（ベンジルオキシカルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキシアミジン（０．３５９ｇ、０．９４９ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧下で留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）にて精製し、淡黄色粉末として表題化合物（０．５４７ｇ、７３％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.12 (d, J=1.63 Hz, 3 H) 1.15 (d, J=1.63 Hz, 3 H) 1.81 (s, 3 H) 1.97 (s, 3 H) 2.02 (s, 3 H) 2.05 (s, 3 H) 2.27 (s, 3 H) 2.74 - 2.87 (m, 1 H) 3.30 - 3.39 (m, 1 H) 3.44 - 3.61 (m, 2 H) 3.77 - 3.86 (m, 2 H) 3.99 - 4.18 (m, 3 H) 4.34 (dd, J=11.89, 4.90 Hz, 1 H) 5.07 - 5.23 (m, 5 H) 5.36 (t, J=9.79 Hz, 1 H) 5.49 (t, J=8.86 Hz, 1 H) 5.82 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.59 (dd, J=8.39, 2.64 Hz, 1 H) 6.71 (d, J=2.64 Hz, 1 H) 6.79 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 7.34 (m, 10 H) 8.72 (t, J=5.28 Hz, 1 H) 11.72 (br. s., 1 H).

（２）ベンジル［イミノ（｛２−［４−（｛５−イソプロピル−３−［（５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝メチル）−３−メチルフェノキシ］エチル｝アミノ）メチル］カルバマートの合成
ジベンジル［（Ｅ）−（｛２−［４−（｛５−イソプロピル−３−［（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝メチル）−３−メチルフェノキシ］エチル｝アミノ）メチルイリデン］ビスカルバマート（０．５３０ｇ、０．５６０ｍｍｏｌ）のベンジルアルコール（１ｍＬ）溶液にナトリウムベンジルオキシドのベンジルアルコール溶液（１Ｍ、０．３４ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）を室温で加え６時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出後、硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を炉別後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（酢酸エチル：エタノール：水＝２０：２：１）にて精製し、淡茶色粉末として表記化合物（０．１６３ｇ、４５％）を得た。
1H NMR (300 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.11 (d, J=7.31 Hz, 3 H) 1.13 (d, J=7.31 Hz, 3 H) 2.27 (s, 3 H) 2.72 - 2.88 (m, 2 H) 3.19 (t, J=8.94 Hz, 1 H) 3.46 - 3.79 (m, 7 H) 3.82 - 3.92 (m, 1 H) 3.96 - 4.08 (m, 2 H) 5.08 (s, 2 H) 5.35 (d, J=8.70 Hz, 1 H) 6.64 (dd, J=8.47, 2.72 Hz, 1 H) 6.73 (d, J=2.72 Hz, 1 H) 6.87 (d, J=8.47 Hz, 1 H) 7.22 - 7.41 (m, 5 H).
ESI m/z = 666 (M+Na)．

実施例５
Ｎ−｛２−［４−（｛５−イソプロピル−３−［（５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝メチル）−３−メチルフェノキシ］エチル｝グアニジン（化合物１５）の合成

実施例４で合成したベンジル［イミノ（｛２−［４−（｛５−イソプロピル−３−［（５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝メチル）−３−メチルフェノキシ］エチル｝アミノ）メチル］カルバマート（０．１５４ｇ、０．２３９ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍＬ）溶液に２０％水酸化パラジウム−活性炭素（０．０３ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温にて２時間攪拌した。不溶物をセライト濾過後、ろ液を減圧下留去し、白色粉末として表記化合物（０．１０８ｇ、８５％）を得た。
1H NMR (300 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.07 - 1.23 (m, 6 H) 2.31 (s, 3 H) 2.75 - 2.93 (m, 2 H) 3.20 - 3.36 (m, 2 H) 3.50 - 3.96 (m, 7 H) 4.08 (t, J=4.82 Hz, 2 H) 5.41 (d, J=8.70 Hz, 1 H) 6.68 (dd, J=8.55, 2.33 Hz, 1 H) 6.77 (d, J=2.33 Hz, 1 H) 6.92 (d, J=8.55 Hz, 1 H).
ESI m/z = 510 (M+H).

実施例６
４−｛４−［２−（Ｎ−カルバモイルメチルアミノ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物１６）の合成

（１）４−｛４−［２−（Ｎ−カルバモイルメチルアミノ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
実施例３（２）で合成した４−［４−（２−アミノエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（０．５０７ｇ、０．７９７ｍｍｏｌ）のＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．６ｍＬ）溶液に２−クロロアセトアミド（０．１１２ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．１７ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で３時間攪拌した。反応液をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝６０：１）に付し、淡黄色粉末として表題化合物（０．１８５ｇ、３４％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.13 (d, J=6.99 Hz, 6 H) 1.82 (s, 3 H) 1.97 (s, 3 H) 2.01 (s, 3 H) 2.03 (s, 3 H) 2.26 (s, 3 H) 2.71 - 2.89 (m, 1 H) 2.99 (t, J=4.66 Hz, 2 H) 3.30 - 3.59 (m, 5 H) 3.97 - 4.17 (m, 3 H) 4.30 (dd, J=11.97, 4.66 Hz, 1 H) 5.15 (t, J=9.64 Hz, 1 H) 5.34 (t, J=9.64 Hz, 1 H) 5.47 (t, J=8.78 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=8.78 Hz, 1 H) 6.30 - 6.45 (m, 1 H) 6.58 (dd, J=8.39, 2.41 Hz, 1 H) 6.68 (d, J=2.41 Hz, 1 H) 6.80 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 7.18 - 7.30 (m, 1 H).

（２）４−｛４−［２−（Ｎ−カルバモイルメチルアミノ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
４−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドの代わりに４−｛４−［２−（Ｎ−カルバモイルメチルアミノ）エトキシ］−２−メチルベンジル｝−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いて、実施例２（２）に示す方法と同様の方法で表記化合物を合成した。
1H NMR (300 MHz, METHANOL-d4) δ ppm 1.14 (d, J=7.38 Hz, 3 H) 1.16 (d, J=7.38 Hz, 3 H) 2.31 (s, 3 H) 2.76 - 2.91 (m, 2 H) 3.03 (t, J=5.05 Hz, 2 H) 3.25 (t, J=9.01 Hz, 1 H) 3.42 (s, 2 H) 3.50 - 3.84 (m, 5 H) 3.87 - 3.95 (m, 1 H) 4.07 (t, J=5.13 Hz, 2 H) 5.41 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.68 (dd, J=8.39, 2.64 Hz, 1 H) 6.78 (d, J=2.49 Hz, 1 H) 6.91 (d, J=8.39 Hz, 1 H).
ESI m/z = 547 (M+Na)．

実施例７
Ｎ−（２−ヒドロキシ−１，１−ジメチルエチル）−Ｎ’−｛２−［４−（｛５−イソプロピル−３−［（５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシル）オキシ］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝メチル）−３−メチルフェノキシ］エチル｝ウレア（化合物１７）の合成

実施例３（２）で合成した４−［４−（２−アミノエトキシ）−２−メチルベンジル］−５−イソプロピル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（０．１４５ｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１．５ｍＬ）溶液にトリエチルミン（０．０４３ｍＬ、０．３０８ｍｍｏｌ）、クロロギ酸４−ニトロフェニル（０．０５３ｇ、０．２６２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。さらにトリエチルアミン（０．０６４ｍＬ、０．４５６ｍｍｏｌ）と２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール（０．０３３ｍＬ、０．３４２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣にメタノール（２．３ｍＬ）とナトリウムメトキシド（２５％メタノール溶液、０．２０ｍＬ、０．９１２ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。反応液にドライアイスを加え、中和した後に、溶媒を減圧留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（酢酸エチル：エタノール：水＝１０：２：１）で精製し、白色粉末として表記化合物（０．０６４ｇ、４８％）を得た。
1H NMR (300 MHz, METHANOL-d4) d ppm 1.14 (d, J=7.46 Hz, 3 H) 1.16 (d, J=7.46 Hz, 3 H) 1.27 (s, 6 H) 2.31 (s, 3 H) 2.77 - 2.91 (m, 2 H) 3.25 (t, J=8.94 Hz, 1 H) 3.39 - 4.05 (m, 12 H) 5.41 (d, J=8.86 Hz, 1 H) 6.66 (dd, J=8.47, 2.56 Hz, 1 H) 6.75 (d, J=2.56 Hz, 1 H) 6.90 (d, J=8.47 Hz, 1 H).
ESI m/z = 605 (M+Na).

実施例８

製造方法
薬物を乳糖一水和物、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム及びヒドロキシプロピルセルロースと混合し、この混合物を粉砕機で粉砕する。粉砕された混合物を撹拌造粒機で１分間混合し、その後、水で４−８分間造粒する。得られた造粒物を７０℃で４０分間乾燥する。造粒乾燥末を５００μｍの篩で篩過する。篩過後の造粒乾燥末とステアリン酸マグネシウムを、Ｖ型混合機を用いて３０ｒｐｍ、３分間混合する。ロータリー式打錠機を用いて得られた打錠用顆粒を圧縮成形し製錠する。

試験例１
（１）ヒトＳＧＬＴ１とヒトＳＧＬＴ２のクローニングと発現ベクターへの導入
ヒト小腸由来ｍＲＮＡからヒトＳＧＬＴ１配列（ＮＭ＿０００３４３）を逆転写の後増幅し、ｐＣＭＶ−ｔａｇ５Ａ（ストラタジーン社）に導入した。また、ヒトＳＧＬＴ２配列（ＮＭ＿００３０４１）はヒト腎由来ｍＲＮＡから同様な方法で調製し、ｐｃＤＮＡ３．１＋ｈｙｇｒｏ（インビトロジェン社）に導入した。それぞれのクローンの配列が、報告されている配列と一致することを確認した。

（２）ヒトＳＧＬＴ１及びヒトＳＧＬＴ２を安定に発現するＣＨＯ―ｋ１細胞の作成
ヒトＳＧＬＴ１及びヒトＳＧＬＴ２発現ベクターを、リポフェクトアミン２０００（インビトロジェン社）を用いてＣＨＯ−Ｋ１細胞へトランスフェクションした。ＳＧＬＴ発現細胞は、５００μｇ／ｍＬの濃度のジェネティシン（ＳＧＬＴ１）又はハイグロマイシンＢ（ＳＧＬＴ２）の存在下で培養し耐性株を選択し、下記に示す系により糖取り込み比活性を指標に取得した。

（３）細胞におけるナトリウム依存的糖取り込み阻害試験
ヒトＳＧＬＴ１又はヒトＳＧＬＴ２を安定に発現する細胞をナトリウム依存的グルコース取り込み活性阻害試験に用いた。
細胞を前処理用緩衝液（１４０ｍＭ塩化コリン、２ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＣａＣｌ₂、１ｍＭＭｇＣｌ₂、１０ｍＭＨＥＰＥＳ／５ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ７．４）１ｍＬ中で２０分間インキュベーションした。前処理用緩衝液を除去し、試験化合物を含む取り込み用緩衝液（［¹⁴Ｃ］メチル α−Ｄ−グルコピラノシドを含むメチル α−Ｄ−グルコピラノシド（ＳＧＬＴ１阻害では０．１ｍＭ、ＳＧＬＴ２阻害では１ｍＭ）、１４０ｍＭＮａＣｌ、２ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＣａＣｌ₂、１ｍＭＭｇＣｌ₂、１０ｍＭＨＥＰＥＳ／５ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ７．４）を２００μｌ加え、３７℃にて３０分（ＳＧＬＴ１）又は１時間（ＳＧＬＴ２）取り込み反応を行った。反応後細胞を洗浄用緩衝液（１０ｍＭメチル α−Ｄ−グルコピラノシド、１４０ｍＭ塩化コリン２ｍＭＫＣｌ、１ｍＭＣａＣｌ₂、１ｍＭＭｇＣｌ₂、１０ｍＭＨＥＰＥＳ／５ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ７．４）１ｍＬで２回洗浄し、０．２ＭＮａＯＨ溶液４００μｌに溶かした。アクアゾール２（パーキンエルマー社）を加えよく混和した後、液体シンチレーションカウンター（ベックマンコールター社）で放射活性を測定した。対照群として試験化合物を含まない取り込み用緩衝液を調製した。また基礎取り込み用としてＮａＣｌに代えて塩化コリンを含む取り込み用緩衝液を調製した。

ＩＣ₅₀値を求めるにあたり、適当な６濃度の試験化合物を用い、対照群の糖取り込み量（１００％）に対し、糖取り込み量が５０％阻害される試験化合物濃度（ＩＣ₅₀値）を算出した。試験結果を表３に示す。

本発明により、小腸上皮に発現するＳＧＬＴ１（ナトリウム依存性グルコース共輸送体１）を選択的に阻害し、小腸からの糖吸収を阻害することによって、ＩＧＴ（耐糖能異常）を制御するピラゾリル５−チオグリコシド化合物を有効成分として含有する糖尿病の予防又は治療剤を提供することが期待される。

Claims

下記式（Ｉ）で表されるピラゾリル５−チオグルコシド化合物若しくはその製薬学的に許容される塩又はそれらの水和物。

ただし、
Ｚは、Ｃ_1-6アルキル基を示す。
Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は、同一又は異なって、水素原子、又はＣ_1-6アルキル基を示す。
ｎは、１から４の整数を示す。
Ｘは、水酸基、−ＯＣ_1-4アルキルフェニル、又は−Ｎ(Ｒ^A)Ｒ^Bを示す。
ただし、
Ｒ^A及びＲ^Bは、同一又は異なって、水素原子、“−ＣＯＮＨ₂で置換されたＣ_1-6アルキル基”、−ＣＯＮＨＲ^C、又は−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ^Dを示す。
ただし、
Ｒ^Cは、水酸基で置換されたＣ_1-6アルキル基を示す。
Ｒ^Dは、水素原子、又は−ＣＯ₂Ｃ_1-4アルキルフェニルを示す。
前記式（Ｉ）で表されるピラゾリル５−チオグルコシド化合物若しくはその製薬学的に許容される塩又はそれらの水和物を有効成分として含有することを特徴とするＳＧＬＴ１活性阻害剤。
前記式（Ｉ）で表されるピラゾリル５−チオグルコシド化合物若しくはその製薬学的に許容される塩又はそれらの水和物を有効成分として含有することを特徴とする糖尿病の予防又は治療剤。