JP2008029440A - Method and kit for estimating effect of leukoreduction treatment - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、潰瘍性大腸炎治療において白血球除去治療による治療効果を予測する方法、並びに潰瘍性大腸炎患者に対する白血球除去治療の効果の予測キットに関する。 The present invention relates to a method for predicting the therapeutic effect of leukocyte removal therapy in the treatment of ulcerative colitis, and to a kit for predicting the effect of leukocyte removal therapy for ulcerative colitis patients.
白血球除去治療は、末梢血中のリンパ球、顆粒球、単球などの白血球を体外循環によって除去することにより、免疫あるいは炎症を制御して、病態の改善を図る治療法であり、潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患や、関節リウマチの治療に有効であり、有力な治療方法として医療現場において利用されている。しかしながら、白血球除去治療の効果が症例によって異なることも事実である。従って、白血球除去治療の効果を予測する方法が確立されれば、さらに効率的に治療を行うことができる。安藤らは、白血球除去治療の治療効果に関わる分子機構を明らかにする研究のなかで、TNF-αあるいはIL-1βで刺激を受けた潰瘍性大腸炎患者の末梢血単核球細胞の核内因子であるNF-κBの発現が、白血球除去治療の前後で低下すること、更に白血球除去治療開始前の潰瘍性大腸炎患者の末梢血単核球をTNF-αあるいはIL-1βで刺激した際に産生される炎症性サイトカインIL-6及びIL-8の産生量が、白血球除去治療有効例に比し、無効例では低値を示す傾向があるというデータを示した（非特許文献１）。該文献は、無効例患者における炎症性サイトカイン産生量の低下傾向を明らかにしたものであるが、治療反応性予測の方法にまで言及したものではない。 Leukocyte removal therapy is a treatment that improves the pathological condition by controlling immunity or inflammation by removing leukocytes such as lymphocytes, granulocytes and monocytes in peripheral blood through extracorporeal circulation. It is effective in the treatment of inflammatory bowel diseases such as inflammation and rheumatoid arthritis, and is used in the medical field as an effective treatment method. However, it is also true that the effect of leukocyte removal treatment varies from case to case. Therefore, if a method for predicting the effect of leukocyte removal treatment is established, treatment can be performed more efficiently. Ando et al. Investigated the molecular mechanisms involved in the therapeutic effect of leukocyte removal therapy in the nucleus of peripheral blood mononuclear cells of ulcerative colitis patients stimulated with TNF-α or IL-1β. The expression of NF-κB, a factor, decreases before and after leukapheresis, and when peripheral blood mononuclear cells from patients with ulcerative colitis before leukocyte abatement treatment are stimulated with TNF-α or IL-1β The amount of inflammatory cytokines IL-6 and IL-8 produced in this study showed data that tends to be lower in ineffective cases than in cases where leukocyte removal treatment is effective (Non-patent Document 1). This document clarifies the tendency of decrease in inflammatory cytokine production in patients with ineffective cases, but does not mention a method for predicting treatment response.
本発明の課題は、潰瘍性大腸炎の治療において、白血球除去治療の効果を予測する方法を提供することにある。また本発明の課題は、白血球除去治療の効果の予測を容易に実施することを可能とするキットを提供することにある。 An object of the present invention is to provide a method for predicting the effect of leukocyte removal treatment in the treatment of ulcerative colitis. Moreover, the subject of this invention is providing the kit which enables the prediction of the effect of leukocyte removal treatment to be implemented easily.
本発明者らは、潰瘍性大腸炎患者由来の末梢血単核球を用いて、in vitroで刺激した時の、種々のサイトカインの産生量を検索することによって、白血球除去治療の治療効果と関連するサイトカイン群を見出した。さらに、それらのサイトカインの産生量を調べることによって潰瘍性大腸炎治療における白血球除去治療の効果を予測する方法を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は下記に関する。 The present inventors searched for the production amount of various cytokines when stimulated in vitro using peripheral blood mononuclear cells derived from patients with ulcerative colitis, and related to the therapeutic effect of leukocyte removal therapy. A cytokine group was found. Furthermore, the present inventors have completed the present invention by finding a method for predicting the effect of leukocyte removal treatment in the treatment of ulcerative colitis by examining the production amount of these cytokines. That is, the present invention relates to the following.
（１） 潰瘍性大腸炎患者に対する白血球除去治療の効果を予測する方法であって、該患者から採取した末梢血単核球をin vitroで薬剤により刺激した時のインターフェロン−γ、インターロイキン−10及びインターロイキン−4の産生量が、各々１０6個の細胞当たり４０pg未満、４pg未満、及び４０pg未満である場合には前記患者は白血球除去治療に反応しないと予測する、白血球除去治療の効果の予測方法。
（２） 前記薬剤がフォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテート及びイオノマイシンである、（１）に記載の白血球除去治療の効果の予測方法。
（３） 末梢血単核球をin vitroで刺激する際に使用するフォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートの濃度が２０ng/mL〜７０ng/mLであり、イオノマイシンの濃度が１μg/mL〜３μg/mLである、（２）に記載の白血球除去治療の効果の予測方法。
（４） フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートとイオノマイシンを含む、潰瘍性大腸炎患者に対する白血球除去治療の効果の予測キット。
(1) A method for predicting the effect of leukocyte removal treatment on ulcerative colitis patients, and interferon-γ and interleukin-10 when peripheral blood mononuclear cells collected from the patients are stimulated with drugs in vitro And if the production of interleukin-4 is less than 40 pg per 10 6 cells, less than 4 pg, and less than 40 pg, the effect of the leukocyte removal therapy is predicted to predict that the patient will not respond to leukocyte removal therapy. Prediction method.
(2) The method for predicting the effect of leukocyte removal therapy according to (1), wherein the drugs are phorbol-12-myristate-13-acetate and ionomycin.
(3) The concentration of phorbol-12-myristate-13-acetate used for stimulating peripheral blood mononuclear cells in vitro is 20 ng / mL to 70 ng / mL, and the concentration of ionomycin is 1 μg / mL The method for predicting the effect of the leukocyte removal treatment according to (2), which is 3 μg / mL.
(4) A kit for predicting the effect of leukocyte removal treatment for ulcerative colitis patients, comprising phorbol-12-myristate-13-acetate and ionomycin.
本発明によれば、潰瘍性大腸炎における白血球除去治療において、治療効果の期待できる患者を治療開始前に判別することによって高額な医療器具の無駄使いを無くすことにより、患者の医療費負担を軽減することができる。また、本発明によれば、白血球除去治療が有効となるように患者状態を誘導することにより、適切な白血球除去治療の治療時期を決定できるという効果がある。 According to the present invention, in the leukocyte removal treatment in ulcerative colitis, the medical cost burden of the patient is reduced by eliminating the wasteful use of expensive medical instruments by discriminating the patient who can expect the therapeutic effect before the start of treatment can do. Further, according to the present invention, there is an effect that an appropriate treatment time for leukocyte removal treatment can be determined by inducing the patient state so that leukocyte removal treatment is effective.
以下、本発明による潰瘍性大腸炎患者に対する白血球除去治療の効果を予測する方法及び予測キットについて詳細に説明する。 Hereinafter, a method and a prediction kit for predicting the effect of leukocyte removal treatment for ulcerative colitis patients according to the present invention will be described in detail.
本発明でいう白血球除去治療とは、末梢血中のリンパ球、顆粒球、単球などの白血球を体外循環において除去することにより免疫あるいは炎症を制御して病態の改善を図る治療法のことを言い、白血球の分離方法により吸着式と遠心式に大別される。吸着式は吸着材或いは不織布カラムに血液を直接灌流し、吸着材或いは不織布表面に対する親和性により白血球系細胞が吸着除去される。通称「顆粒球除去治療」では顆粒球と単球の吸着選択性が高く、通称「白血球除去治療」では顆粒球、リンパ球、単球が比較的除去されるがどちらも吸着式に分類される。遠心式には遠心式血球成分分離装置を用い、リンパ球の分離選択性が比較的高いが、専用の血球分離用回路と運転条件により、白血球分画の分離特性を変え、単球の分離選択性を高めることも可能である。本発明による白血球除去治療の効果を予測する方法においては、白血球除去治療前に患者末梢血を採血し、単核球分離を行い、in vitroで刺激した時のインターフェロン−γ、IL-10及びIL-4の産生量を測定し、各々１０6個細胞当たり４０pg未満、４pg未満、及び４０pg未満である場合には、前記患者は白血球除去治療に反応しないと判別することができる。 The leukocyte removal treatment referred to in the present invention is a treatment method for improving morbidity by controlling immunity or inflammation by removing leukocytes such as lymphocytes, granulocytes and monocytes in peripheral blood in the extracorporeal circulation. In other words, it is roughly classified into an adsorption type and a centrifugal type depending on the leukocyte separation method. In the adsorption method, blood is directly perfused through an adsorbent or a nonwoven fabric column, and leukocyte cells are adsorbed and removed by affinity with the adsorbent or the nonwoven fabric surface. The so-called “granulocyte removal treatment” has high adsorption selectivity for granulocytes and monocytes, and the so-called “leukocyte removal treatment” relatively removes granulocytes, lymphocytes, and monocytes, both of which are classified as adsorption type. . Centrifugation uses a centrifugal blood cell component separator, which has relatively high lymphocyte separation selectivity. However, depending on the dedicated blood cell separation circuit and operating conditions, the separation characteristics of the white blood cell fraction can be changed and monocyte separation can be selected. It is also possible to increase the nature. In the method for predicting the effect of leukocyte removal treatment according to the present invention, interferon-γ, IL-10 and IL when blood is collected from a patient prior to leukocyte removal treatment, mononuclear cell separation is performed, and stimulation is performed in vitro. -4 is measured, and if it is less than 40 pg, less than 4 pg, and less than 40 pg per 10 6 cells, it can be determined that the patient does not respond to leukocyte removal therapy.
本発明の具体例としては、例えば、以下のようにして白血球除去治療の効果を予測することができる。潰瘍性大腸炎患者から末梢血を採取し、単核球を分離する。単核球を分離は常法にしたがって行うことができる。次いで、分離した単核球を２．０ｘ１０6／ｍLの濃度となるよう１０％ウシ胎仔血清を含むRPMI-１６４０培地（インビトロジェン社製）に懸濁する。この末梢血を１ウェル当り１００μLずつ、すなわち２．０ｘ１０5個ずつ９６穴マイクロプレートに播種し、本明細書に以下に記載するような薬剤（好ましくは、フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテート及びイオノマイシン）を添加し、３７℃ ５％炭酸ガス中で培養する。一定時間（１時間から１０時間、好ましくは２時間から６時間、より好ましくは４時間など）後の培養上清を遠心分離により回収し、インターフェロン−γ、IL-10及びIL-4の濃度を測定し、本明細書に記載した基準に従って白血球除去治療の効果を予測することができる。 As a specific example of the present invention, for example, the effect of leukocyte removal treatment can be predicted as follows. Peripheral blood is collected from patients with ulcerative colitis and mononuclear cells are isolated. Mononuclear cells can be separated according to conventional methods. Subsequently, the separated mononuclear cells are suspended in RPMI-1640 medium (manufactured by Invitrogen) containing 10% fetal calf serum so as to have a concentration of 2.0 × 10 6 / mL. This peripheral blood is seeded at 100 μL per well, that is, 2.0 × 10 5 cells in a 96-well microplate, and an agent as described herein below (preferably phorbol-12-myristate-13- Acetate and ionomycin) are added, and the cells are cultured at 37 ° C. in 5% carbon dioxide gas. The culture supernatant after a certain time (1 to 10 hours, preferably 2 to 6 hours, more preferably 4 hours, etc.) is collected by centrifugation, and the concentrations of interferon-γ, IL-10 and IL-4 are adjusted. Measure and predict the effectiveness of leukocyte removal therapy according to the criteria described herein.
本発明でいう末梢血とは血管の中を流れている血液のことをいい、本発明でいう単核球とは、白血球中の顆粒球以外の細胞すなわち単球及びリンパ球のことをいう。本発明で用いる単核球分離は公知の分離剤、例えばFicoll等で行うことができる。単核球数の計数は、公知の自動血球計算装置、血球計算盤、フローサイトメトリー等で求めることができ、測定精度及び簡便さの点より自動血球計算装置或いは血球計算盤等が用いられる。インターフェロン−γ、IL-10及びIL-4の産生量の測定は公知の酵素免疫測定法（Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay ;ELISA）法や蛍光免疫測定法（Fluorescent Immuno Assay; FIA）等を使用することができ、各社より測定キットが販売されており、これらを使用すれば、簡便に上記サイトカインの定量測定を行うことができる。例えば、Cytometric Bead Array Th1／Th2サイトカインキットII（日本ベクトン・ディキンソン社製）などを使用することができる。 Peripheral blood in the present invention refers to blood flowing in blood vessels, and mononuclear cells in the present invention refer to cells other than granulocytes in leukocytes, that is, monocytes and lymphocytes. The mononuclear cell separation used in the present invention can be performed with a known separating agent such as Ficoll. The counting of the number of mononuclear cells can be obtained by a known automatic blood cell calculator, blood cell calculator, flow cytometry or the like, and an automatic blood cell calculator or a hemocytometer is used from the viewpoint of measurement accuracy and simplicity. Measurement of the production of interferon-γ, IL-10 and IL-4 uses known enzyme immunoassay (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay; ELISA), fluorescent immunoassay (Fluorescent Immuno Assay; FIA), etc. Measurement kits are sold by various companies, and if these are used, the above cytokines can be easily quantitatively measured. For example, Cytometric Bead Array Th1 / Th2 cytokine kit II (manufactured by Nippon Becton Dickinson) can be used.
本発明で用いるフォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートは、トウダイグサ科植物ハズより得られるクロトン油に含まれる化学式C36H56O8で示される分子量６１６．８３の化学物質であり、プロテインキナーゼCを強力に活性化する化学物質として多くの研究に用いられている。本発明で使用するフォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートは、研究用試薬として市販されているものを使用すればよく、使用濃度は、単核球にサイトカイン産生刺激を与えることのできる濃度であれば特に制限はないが、低濃度ではサイトカイン産生刺激を与えることができず、また高濃度で使用すると細胞に対する毒性が現われるため、１０ｎｇ／ｍLから１００ｎｇ／ｍLの範囲、好ましくは１０ｎｇ／ｍLから７０ｎｇ／ｍL、より好ましくは２０ng/mL〜７０ng/mL、特に好ましくは２０ｎｇ／ｍLから５０ｎｇ／ｍLの範囲で使用される。 Phorbol-12-myristate-13-acetate used in the present invention is a chemical substance having a molecular weight of 616.83 represented by the chemical formula C 36 H 56 O 8 contained in croton oil obtained from Euphorbiaceae plant herbs. It is used in many studies as a chemical substance that strongly activates kinase C. As the phorbol-12-myristate-13-acetate used in the present invention, a commercially available reagent may be used, and the concentration used is a concentration capable of giving cytokine stimulation to mononuclear cells. If it is low concentration, cytokine production stimulation cannot be given, and if it is used at a high concentration, toxicity to cells appears, and it is in the range of 10 ng / mL to 100 ng / mL, preferably 10 ng / mL. To 70 ng / mL, more preferably 20 ng / mL to 70 ng / mL, and particularly preferably 20 ng / mL to 50 ng / mL.
本発明で用いるイオノマイシンは、Streptomyces conglobatusの産生するポリエーテル系抗生物質で、化学式C41H72O9で示される分子量７０９．０２の化学物質であり、細胞内のカルシウムイオン濃度を上昇させる作用があることから広く細胞に刺激を与える研究に用いられている。本発明で使用するイオノマイシンは、研究用試薬として市販されているものを使用すればよく、使用濃度は、単核球にサイトカイン産生刺激を与えることのできる濃度であれば特に制限はないが、低濃度ではサイトカイン産生刺激を与えることができず、また高濃度で使用すると細胞に対する毒性が現われるため、５００ｎｇ／ｍLから５μｇ／ｍLの範囲、好ましくは５００ｎｇ／ｍLから３μｇ／ｍL、より好ましくは１μg/mL〜３μg/mL、特に好ましくは１μｇ／ｍLから２μｇ／ｍLの範囲が使用される。また、その他の刺激剤としては、グラム陰性菌の内毒素として知られるリポポリサッカリドや、T細胞受容体に対する刺激活性を有することが知られている抗CD3抗体や抗CD28抗体など研究用試薬として市販されているものを、単核球にサイトカイン産生刺激を与えることのできる濃度で使用することができる。 Ionomycin used in the present invention is a polyether antibiotic produced by Streptomyces conglobatus, is a chemical substance having a molecular weight of 709.02 represented by the chemical formula C 41 H 72 O 9 , and has an action of increasing intracellular calcium ion concentration. It is widely used for research that stimulates cells. What is necessary is just to use what is marketed as a research reagent as ionomycin used by this invention, if a use concentration is a density | concentration which can give cytokine production stimulation to a mononuclear cell, there will be no restriction | limiting in particular, At concentrations, cytokine production cannot be stimulated, and when used at high concentrations, toxicity to cells appears, so the range is 500 ng / mL to 5 μg / mL, preferably 500 ng / mL to 3 μg / mL, more preferably 1 μg / mL. A range of mL to 3 μg / mL, particularly preferably 1 μg / mL to 2 μg / mL is used. Other stimulants include lipopolysaccharides known as endotoxins of Gram-negative bacteria, and anti-CD3 and anti-CD28 antibodies known to have stimulating activity against T cell receptors. A commercially available product can be used at a concentration capable of stimulating cytokine production in mononuclear cells.
さらに本発明は、フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートとイオノマイシンを含む、潰瘍性大腸炎患者に対する白血球除去治療の効果の予測キットに関する。本発明のキットには、少なくともフォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートとイオノマイシンが含まれていればよい。即ち、本発明のキットは、フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートとイオノマイシンのみから構成されていてもよいし、フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートとイオノマイシンに加えてさらにそれ以外の成分を適宜含めることもできる。フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテートとイオノマイシン以外の成分としては、例えば、単核球を分離するための分離剤、インターフェロン−γ、インターロイキン−10及びインターロイキン−4を測定するための試薬などを挙げることができる。また、キットには、アッセイを行うためのマイクロプレートを含めてもよい。 Furthermore, the present invention relates to a kit for predicting the effect of leukocyte removal treatment for patients with ulcerative colitis comprising phorbol-12-myristate-13-acetate and ionomycin. The kit of the present invention only needs to contain at least phorbol-12-myristate-13-acetate and ionomycin. That is, the kit of the present invention may be composed only of phorbol-12-myristate-13-acetate and ionomycin, or in addition to phorbol-12-myristate-13-acetate and ionomycin. These components can also be included as appropriate. Examples of components other than phorbol-12-myristate-13-acetate and ionomycin include, for example, a separating agent for separating mononuclear cells, interferon-γ, interleukin-10, and interleukin-4. A reagent etc. can be mentioned. The kit may also include a microplate for performing the assay.
以下、実施例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further more concretely, this invention is not limited by an Example.
（１）患者末梢血単核球の分離及びサイトカイン産生
潰瘍性大腸炎患者８名から採取した末梢血より、常法にしたがって単核球分離剤Ficoll Paque Plus（アマシャム社製）を用いて単核球を分離し、２．０ｘ１０6／ｍLの濃度となるよう１０％ウシ胎仔血清を含むRPMI-１６４０培地（インビトロジェン社製）に懸濁させた。上記患者末梢血を１ウェル当り１００μLずつ、すなわち２．０ｘ１０5個ずつ９６穴マイクロプレートに播種し、最終濃度で５０ng/mL及び２μｇ／ｍLとなるよう、フォルボール-１２-ミリステート-１３-アセテート（シグマ社製）及びイオノマイシン（シグマ社製）を添加し、３７℃ ５％炭酸ガス培養器（サンヨー社製）にて培養を行った。培養４時間後の培養上清を遠心分離により回収し、サイトカイン濃度を測定するまで−85℃超低温フリーザー（サンヨー社製）にて凍結保存した。
(1) Separation of patient peripheral blood mononuclear cells and cytokine production Mononuclear from peripheral blood collected from 8 patients with ulcerative colitis using mononuclear cell separating agent Ficoll Paque Plus (Amersham) according to conventional methods The spheres were separated and suspended in RPMI-1640 medium (Invitrogen) containing 10% fetal calf serum to a concentration of 2.0 × 10 6 / mL. The patient's peripheral blood is seeded at 100 μL per well, that is, 2.0 × 10 5 cells in a 96-well microplate, and phorbol-12-myristate-13- so that the final concentrations are 50 ng / mL and 2 μg / mL. Acetate (manufactured by Sigma) and ionomycin (manufactured by Sigma) were added, and the cells were cultured in a 37 ° C. 5% carbon dioxide gas incubator (manufactured by Sanyo). The culture supernatant after 4 hours of culture was collected by centrifugation and stored frozen in a -85 ° C ultra-low temperature freezer (manufactured by Sanyo) until the cytokine concentration was measured.
（２）サイトカイン産生能の測定
培養上清中のサイトカイン濃度は、市販のCytometric Bead Array Th1／Th2サイトカインキットII（日本ベクトン・ディキンソン社製）を使用して測定した。
(2) Measurement of cytokine production ability The cytokine concentration in the culture supernatant was measured using a commercially available Cytometric Bead Array Th1 / Th2 cytokine kit II (manufactured by Becton Dickinson, Japan).
（３）治療効果の判定
治療効果の判定にはLichtigerのClinical Activity Index (以下CAIと略す)を用いた（Lichtiger S et al. Cyclosporine in severe ulcerative colitis refractory to steroid therapy. N Engl J Med. 1994;330(26):1841-1845）。患者は旭化成メディカル社製の白血球除去治療器セルソーバTMにより１回乃至２回／週の間隔で、計５回以上の治療を受けた。治療開始前に比し治療終了後、CAIが半減以下、及び、治療終了後のCAIが５以下を実現した症例をResponder、それ以外の症例をNon-responderと定義した。CAIを指標とする潰瘍性大腸炎患者の白血球除去治療の治療効果を表１にまとめた。
(3) Determination of therapeutic effect Lichtiger's Clinical Activity Index (hereinafter abbreviated as CAI) was used to determine the therapeutic effect (Lichtiger S et al. Cyclosporine in severe ulcerative colitis refractory to steroid therapy. N Engl J Med. 1994; 330 (26): 1841-1845). The patient received a total of 5 or more treatments at an interval of 1 to 2 times / week with a leukocyte removal treatment device Cellsorba ™ manufactured by Asahi Kasei Medical. Cases in which CAI was less than half after completion of treatment and CAI after treatment was 5 or less after treatment was completed were defined as Responder, and other cases were defined as Non-responder. Table 1 summarizes the therapeutic effects of leukocyte removal treatment for patients with ulcerative colitis using CAI as an index.
治療開始前に比し治療後のCAIが1／2以下かつ、治療後のCAIが５以下の症例をResponderと定義する。患者No.１，２，３,４，７及び８がResponder、患者No.５,６がNon-responderと分類された。 A case where the CAI after treatment is 1/2 or less and the CAI after treatment is 5 or less is defined as a Responder. Patient Nos. 1, 2, 3, 4, 7 and 8 were classified as Responders and Patient Nos. 5 and 6 as Non-responders.
（４）治療効果の予測
潰瘍性大腸炎患者８名の末梢血単核球１０6個当りの、インターフェロン-γ、IL-10及びIL-4の産生量を表２にまとめた。ここで、インターフェロン-γ、IL-10及びIL-4産生量が、各々４０pg未満、４pg未満、及び４０pg未満である場合に、前記患者は白血球除去治療に反応しないと予測すると、CAIを指標とする白血球除去治療の有効・無効症例すなわち、Responder／Non-responderと、本発明によるサイトカイン産生能を指標とする治療反応性の予測の結果は、患者８名中８名で一致していた。
(4) Prediction of therapeutic effect Table 2 summarizes the production amounts of interferon-γ, IL-10 and IL-4 per 10 6 peripheral blood mononuclear cells of 8 patients with ulcerative colitis. Here, when the production of interferon-γ, IL-10, and IL-4 is less than 40 pg, less than 4 pg, and less than 40 pg, respectively, and predicting that the patient does not respond to leukocyte removal therapy, CAI is used as an index. The results of the prediction of the treatment response using the cytokine production ability as an index according to the present invention were consistent with the effective / ineffective cases of leukocyte removal therapy, that is, Responder / Non-responder.
＊１ インターフェロンγ産生量が40pg/ 106 単核球 未満の症例を網掛けで表示した。
＊２ IL-10産生量が4pg/ 106 単核球 未満の症例を網掛けで表示した。
＊３ IL-4産生量が40pg/ 106 単核球 未満の症例を網掛けで表示した。
* 1 Cases with interferon γ production less than 40 pg / 10 6 mononuclear cells are shaded.
* 2 Cases with IL-10 production less than 4 pg / 10 6 mononuclear cells are shaded.
* 3 Cases with IL-4 production less than 40 pg / 10 6 mononuclear cells are shaded.
本発明によれば、潰瘍性大腸炎における白血球除去治療の治療効果は、患者の末梢血単核球をin vitroで刺激した時のインターフェロン−γ、IL-10及びIL-4の産生量と関連していることから、これらサイトカイン群の産生量を測定することにより、白血球除去治療の治療効果を予測できる。したがって、本発明を潰瘍性大腸炎の治療に先だって用いれば、白血球除去治療による治療を効率的に実施することができる。 According to the present invention, the therapeutic effect of leukocyte removal treatment in ulcerative colitis is related to the production of interferon-γ, IL-10 and IL-4 when the peripheral blood mononuclear cells of the patient are stimulated in vitro Therefore, the therapeutic effect of leukocyte removal treatment can be predicted by measuring the production amount of these cytokine groups. Therefore, if the present invention is used prior to treatment of ulcerative colitis, treatment by leukocyte removal treatment can be carried out efficiently.
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003508047A (en) * | 1999-09-01 | 2003-03-04 | ユニバーシティ・オブ・サザン・カリフォルニア | Use of cytokines, cells and mitogens to suppress graft-versus-host disease |
| JP2004135545A (en) * | 2002-10-16 | 2004-05-13 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | Disease marker for ulcerative colitis and utilization thereof |
| JP2004527263A (en) * | 2001-05-30 | 2004-09-09 | フォンダツィオーネ テレソン | Ex vivo isolated CD25 + CD4 + T cells with immunosuppressive activity and uses thereof |
| JP2005536982A (en) * | 2001-11-07 | 2005-12-08 | 麒麟麦酒株式会社 | T cell amplification in vitro and amplified T cell population |
-
2006
- 2006-07-27 JP JP2006204084A patent/JP2008029440A/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003508047A (en) * | 1999-09-01 | 2003-03-04 | ユニバーシティ・オブ・サザン・カリフォルニア | Use of cytokines, cells and mitogens to suppress graft-versus-host disease |
| JP2004527263A (en) * | 2001-05-30 | 2004-09-09 | フォンダツィオーネ テレソン | Ex vivo isolated CD25 + CD4 + T cells with immunosuppressive activity and uses thereof |
| JP2005536982A (en) * | 2001-11-07 | 2005-12-08 | 麒麟麦酒株式会社 | T cell amplification in vitro and amplified T cell population |
| JP2004135545A (en) * | 2002-10-16 | 2004-05-13 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | Disease marker for ulcerative colitis and utilization thereof |
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