JP2006137678A - Interleukin-2 composition - Google Patents
Interleukin-2 composition Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006137678A JP2006137678A JP2004326291A JP2004326291A JP2006137678A JP 2006137678 A JP2006137678 A JP 2006137678A JP 2004326291 A JP2004326291 A JP 2004326291A JP 2004326291 A JP2004326291 A JP 2004326291A JP 2006137678 A JP2006137678 A JP 2006137678A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- composition
- sugar
- solution
- amount
- methionine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
本発明は、安定なインターロイキン−２組成物、詳しくはインターロイキン−２の酸化を防止するためのインターロイキン−２組成物に関するものである。 The present invention relates to a stable interleukin-2 composition, and more particularly to an interleukin-2 composition for preventing the oxidation of interleukin-2.
インターロイキン−２（以下、「ＩＬ−２」と略す）は、Ｔ細胞やナチュラルキラー細胞を増殖させる生理活性を有するタンパク質であり、種々の癌、特に血管肉腫や腎癌、また免疫不全の治療薬として、また、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の治療薬として大きな期待が寄せられている。
ＩＬ−２は、通常の保存状態では不安定な物質であるために、種々の安定化方法が試みられている。例えば、安定化剤としてヒト血清アルブミン（以下、「ＨＳＡ」と略す）を配合したＩＬ−２を含む溶液に、塩基および酸を加え、中性とすることによりＩＬ−２の組成物を得ているもの（例えば、特許文献１参照）や還元物質さらにはＨＳＡを配合することによってＩＬ−２組成物を得ているものがある（例えば、特許文献２参照）。しかしながら、上記特許文献１および特許文献２に安定化剤として開示されているＨＳＡ等の温熱動物由来の血清アルブミンは、最近、ウイルス感染や狂牛病などの危険性が指摘されており、このような特定生物由来製品は製剤処方に含まれないことが望まれている。そこで、ＨＳＡを含まない処方が種々検討されており、その一つとして、ＨＳＡを配合せず、アミノ酸としてアルギニン、糖または糖アルコールとしてマルトースまたはスクロースを配合することによって、ＩＬ−２を安定化した組成物が知られている（例えば、特許文献３参照）。
Interleukin-2 (hereinafter abbreviated as “IL-2”) is a protein having physiological activity to proliferate T cells and natural killer cells, and treats various cancers, particularly hemangiosarcomas, renal cancers, and immunodeficiencies. There is great expectation as a drug and as a therapeutic drug for acquired immune deficiency syndrome (AIDS).
Since IL-2 is an unstable substance under normal storage conditions, various stabilization methods have been attempted. For example, a composition of IL-2 is obtained by adding a base and an acid to a solution containing IL-2 containing human serum albumin (hereinafter abbreviated as “HSA”) as a stabilizer to neutralize the solution. Some have obtained an IL-2 composition by blending a reducing substance and further HSA (for example, see Patent Document 1) (for example, see Patent Document 2). However, the serum albumin derived from a thermal animal such as HSA disclosed as a stabilizer in Patent Document 1 and Patent Document 2 has recently been pointed out to be at risk of viral infection and mad cow disease. It is hoped that such specific biological products are not included in the pharmaceutical formulation. Therefore, various prescriptions not containing HSA have been studied, and as one of them, IL-2 was stabilized by adding arginine as an amino acid, maltose or sucrose as a sugar or sugar alcohol without adding HSA. Compositions are known (see, for example, Patent Document 3).
しかしながら、特許文献３のＩＬ−２組成物の場合、ＨＳＡを配合しなくても、ＩＬ−２の含量は、経時安定性試験においてほとんど低下しなかったにも関わらず、ＩＬ−２の酸化体（Met105酸化体［以下、「酸化体」と略す］）が発生し、その後試験期間が長くなるにつれ、酸化体の量が増大した。ＩＬ−２の酸化体は、未酸化体と同様の生物学的活性を有するが、蛋白鎖中のアミノ酸残基の酸化に伴う立体構造の微細な変化が、物性、毒性等に影響をおよぼす可能性も考えられる。このように、ＩＬ−２組成物として、長期保存してもＩＬ−２の含量はほとんど低下せず、しかも酸化体がほとんど生じないＩＬ−２組成物が望まれていた。 However, in the case of the IL-2 composition of Patent Document 3, even if HSA is not added, the content of IL-2 hardly decreased in the stability test over time, but the oxidized form of IL-2 (Met 105 oxidant [hereinafter abbreviated as “oxidant”]) was generated, and thereafter the amount of oxidant increased as the test period became longer. The oxidized form of IL-2 has the same biological activity as that of the unoxidized form, but minute changes in the three-dimensional structure associated with oxidation of amino acid residues in the protein chain can affect physical properties, toxicity, etc. Sex is also conceivable. Thus, as an IL-2 composition, there has been a demand for an IL-2 composition in which the content of IL-2 hardly decreases even after long-term storage, and an oxidant is hardly generated.
上記事情に鑑み、本発明者らは、ある種の安定化剤、すなわちメチオニン、エデト酸ナトリウムおよびチオグリコール酸ナトリウムから選択される１または２以上の安定化剤を含有することを特徴とする、ＩＬ−２、糖および／または糖アルコールおよびアミノ酸を含有する組成物であれば、長期保存してもＩＬ−２の酸化体がほとんど生じず、しかもＩＬ−２の含量がほとんど低下しないＩＬ−２組成物を見出し、以下に示す本発明を完成した。
（１）メチオニン、エデト酸ナトリウムおよびチオグリコール酸ナトリウムからなる群から選択される１または２以上の安定化剤を含有することを特徴とする、インターロイキン−２、糖および／または糖アルコール、およびアミノ酸を含有する医薬組成物。
（２）温血動物由来の血清アルブミンを含有しない上記（１）記載の医薬組成物。
（３）更に酸および／または塩基を含有する上記（１）または（２）記載の医薬組成物。
（４）更に界面活性剤を含有する上記（１）から（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（５）糖および／または糖アルコールがマルトースおよび／またはスクロースである上記（１）から（４）のいずれかに記載の医薬組成物。
（６）糖および／または糖アルコールがスクロースである上記（１）から（４）のいずれかに記載の医薬組成物。
（７）アミノ酸がアルギニンである上記（１）から（６）のいずれかに記載の医薬組成物。
（８）安定化剤がメチオニンおよび／またはチオグリコール酸ナトリウムである上記（１）から（７）のいずれかに記載の医薬組成物。
（９）組成物中のＩＬ−２に対するメチオニンの配合割合が重量比で２．５〜２５倍である上記（８）記載の医薬組成物。
（１０）組成物中のＩＬ−２に対するチオグリコール酸ナトリウムの配合割合が重量比で１０〜２３０倍である上記（８）記載の医薬組成物。
（１１）凍結乾燥品である上記（１）から（１０）のいずれかに記載の組成物。
（１２）メチオニン、エデト酸ナトリウムおよびチオグリコール酸ナトリウムからなる群から選択される１または２以上の安定化剤と、インターロイキン−２、糖および／または糖アルコール、およびアミノ酸を混合することを特徴とする、医薬組成物の製造方法。
（１３）安定化剤がメチオニンおよび／またはチオグリコール酸ナトリウムである、上記（１２）記載の医薬組成物の製造方法。
（１４）メチオニン、エデト酸ナトリウムおよびチオグリコール酸ナトリウムからなる群から選択される１または２以上の安定化剤を含有させることを特徴とする、インターロイキン−２、糖および／または糖アルコール、およびアミノ酸を含有する医薬組成物中のインターロイキン−２を安定化する方法。
（１５）安定化剤がメチオニンおよび／またはチオグリコール酸ナトリウムである、上記（１４）記載のインターロイキン−２を安定化する方法。
In view of the above circumstances, the present inventors are characterized by containing a certain stabilizer, that is, one or more stabilizers selected from methionine, sodium edetate and sodium thioglycolate, If the composition contains IL-2, sugar and / or sugar alcohol and amino acid, IL-2 oxidant is hardly generated even after long-term storage, and IL-2 content is hardly decreased. The present inventors found the composition and completed the present invention shown below.
(1) Interleukin-2, sugar and / or sugar alcohol, characterized by containing one or more stabilizers selected from the group consisting of methionine, sodium edetate and sodium thioglycolate, and A pharmaceutical composition containing an amino acid.
(2) The pharmaceutical composition according to the above (1), which does not contain serum albumin derived from a warm-blooded animal.
(3) The pharmaceutical composition according to the above (1) or (2), further comprising an acid and / or a base.
(4) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (3), further comprising a surfactant.
(5) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (4) above, wherein the sugar and / or sugar alcohol is maltose and / or sucrose.
(6) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (4) above, wherein the sugar and / or sugar alcohol is sucrose.
(7) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (6) above, wherein the amino acid is arginine.
(8) The pharmaceutical composition according to any one of (1) to (7), wherein the stabilizer is methionine and / or sodium thioglycolate.
(9) The pharmaceutical composition according to the above (8), wherein the mixing ratio of methionine to IL-2 in the composition is 2.5 to 25 times by weight.
(10) The pharmaceutical composition according to the above (8), wherein the mixing ratio of sodium thioglycolate to IL-2 in the composition is 10 to 230 times by weight.
(11) The composition according to any one of (1) to (10) above, which is a lyophilized product.
(12) One or more stabilizers selected from the group consisting of methionine, sodium edetate and sodium thioglycolate, interleukin-2, sugar and / or sugar alcohol, and amino acid are mixed. A method for producing a pharmaceutical composition.
(13) The method for producing a pharmaceutical composition according to the above (12), wherein the stabilizer is methionine and / or sodium thioglycolate.
(14) Interleukin-2, sugar and / or sugar alcohol, characterized by containing one or more stabilizers selected from the group consisting of methionine, sodium edetate and sodium thioglycolate, and A method of stabilizing interleukin-2 in a pharmaceutical composition containing an amino acid.
(15) The method for stabilizing interleukin-2 according to (14) above, wherein the stabilizer is methionine and / or sodium thioglycolate.
本発明のＩＬ−２組成物は、ＩＬ−２および下記の添加物を溶解した溶液（例：注射剤）として用いることができるが、該溶液の液媒体を乾燥し、固形剤（例：凍結乾燥製剤）とする場合もある。本発明の組成物を長期保存しても、ＩＬ−２の含量がほとんど低下せず、しかもＩＬ−２酸化体の量はほとんど増加しない。 The IL-2 composition of the present invention can be used as a solution (eg, injection) in which IL-2 and the following additives are dissolved, but the liquid medium of the solution is dried to obtain a solid agent (eg, frozen). (Dry preparation). Even when the composition of the present invention is stored for a long period of time, the content of IL-2 hardly decreases, and the amount of oxidized IL-2 hardly increases.
本発明において、安定化剤としては、メチオニン、エデト酸ナトリウムおよびチオグリコール酸ナトリウムからなる群から選択される１または２以上の安定化剤を添加すればよく、好ましくはメチオニン、チオグリコール酸ナトリウムである。 In the present invention, as the stabilizer, one or more stabilizers selected from the group consisting of methionine, sodium edetate and sodium thioglycolate may be added, preferably methionine or sodium thioglycolate. is there.
本発明の組成物の溶液１ｍＬ中に安定化剤は、メチオニンの場合、固形成分全量に対し０．００１〜５重量％、好ましくは０．００５〜２．５重量％、より好ましくは０．０１〜１重量％、ＩＬ−２に対するメチオニンの配合割合は重量比で０．１〜１００倍、好ましくは１〜５０倍、より好ましくは２．５〜２５倍である。また他の安定化剤の場合、
固形成分全量に対し０．１〜１０重量％、好ましくは０．５〜７．５重量％、より好ましくは１．０〜５．０重量％、ＩＬ−２に対する安定化剤の配合割合は重量比で１〜２５０倍、好ましくは５〜２４０倍、より好ましくは１０〜２３０倍である。安定化剤の含量は、前記配合量よりも少なければ、ＩＬ−２の酸化体の量を十分に低減できない可能性がある。前記配合量よりも多ければ、溶液中に安定化剤が完全に溶解しない恐れや使用時に添加剤の過剰な投与による副作用の懸念がある。
When the stabilizer is methionine in 1 mL of the solution of the composition of the present invention, the stabilizer is 0.001 to 5% by weight, preferably 0.005 to 2.5% by weight, more preferably 0.01%. The blending ratio of methionine to IL-2% by weight is 0.1 to 100 times, preferably 1 to 50 times, more preferably 2.5 to 25 times by weight. In the case of other stabilizers,
0.1 to 10% by weight, preferably 0.5 to 7.5% by weight, more preferably 1.0 to 5.0% by weight, based on the total amount of solid components, and the blending ratio of the stabilizer to IL-2 is weight. The ratio is 1 to 250 times, preferably 5 to 240 times, and more preferably 10 to 230 times. If the content of the stabilizer is less than the blending amount, there is a possibility that the amount of oxidized IL-2 cannot be reduced sufficiently. If the amount is more than the above-mentioned blending amount, the stabilizer may not be completely dissolved in the solution, and there are concerns about side effects due to excessive administration of the additive during use.
本発明では、天然由来または遺伝子組換えＩＬ−２の全てを用いることができるが、特に遺伝子組換えヒトＩＬ−２が好ましい。
本発明の組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中にＩＬ−２は、０．１〜５００μｇ、好ましくは０．５〜２５０μｇ、より好ましくは１〜１００μｇ配合すればよい。また、本発明の組成物を固形剤として使用する場合、固形剤全量に対しＩＬ−２は、０．００１〜５重量％、好ましくは０．００５〜２．５重量％、より好ましくは０．０１〜１重量％配合すればよい。ＩＬ−２含量が前記配合量よりも少なければ、投与液量が増え患者に負担をかける、あるいは投与方法に制限を受ける可能性があり、多量のＩＬ−２組成物を投与しなければ、薬効が生じない可能性がある。前記配合量よりも多ければ、溶液中にＩＬ−２が完全に溶解しない恐れがある。
In the present invention, all of naturally-derived or recombinant IL-2 can be used, but recombinant human IL-2 is particularly preferable.
When the composition of the present invention is used as a solution, IL-2 may be blended in an amount of 0.1 to 500 μg, preferably 0.5 to 250 μg, more preferably 1 to 100 μg in 1 mL of the composition solution. Moreover, when using the composition of this invention as a solid agent, IL-2 is 0.001 to 5 weight% with respect to solid agent whole quantity, Preferably it is 0.005 to 2.5 weight%, More preferably, it is 0.00. What is necessary is just to mix | blend 01 to 1 weight%. If the IL-2 content is less than the above compounded amount, the amount of liquid to be administered increases, which may place a burden on the patient or may limit the administration method. If a large amount of IL-2 composition is not administered, the drug efficacy May not occur. If the amount is more than the above amount, IL-2 may not be completely dissolved in the solution.
本発明において、糖および／または糖アルコールは、単糖類、二糖類、多糖類あるいは水溶性グルカン類を意味し、生理的に許容されるものであれば使用できる。糖および／または糖アルコールは、ＩＬ−２の安定化のために添加されるが、溶解補助剤、賦形剤あるいは等張化剤としても添加されうる。糖として、具体的にはグルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、ラクトース、フルクトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、カルボキシメチルセルロース−Ｎａ等が挙げられる。また、糖アルコールとしてはＣ４〜Ｃ８の糖アルコールが好ましく、具体的には、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、ズルシトール、キシリトール、アラビトール、ラフィノース、エリスリトール、マルチトール、ラクチトール、パラチニット、トレハロース等が挙げられる。前記糖および／または糖アルコールの中で、好ましくはマルトース、マンニトール、ラクトース、スクロースおよびソルビトール等であり、さらに好ましくはマルトース、マンニトール、ラクトースおよびスクロース等であり、特に好ましくはマルトース、スクロース等である。 In the present invention, sugar and / or sugar alcohol means monosaccharide, disaccharide, polysaccharide or water-soluble glucan, and any physiologically acceptable one can be used. Sugar and / or sugar alcohol is added for the stabilization of IL-2, but can also be added as a solubilizer, excipient or isotonic agent. Specific examples of the sugar include glucose, mannose, sorbose, xylose, maltose, lactose, fructose, sucrose, dextran, pullulan, dextrin, cyclodextrin, soluble starch, hydroxyethyl starch, carboxymethylcellulose-Na and the like. The sugar alcohol is preferably a C4 to C8 sugar alcohol, and specific examples include mannitol, sorbitol, inositol, dulcitol, xylitol, arabitol, raffinose, erythritol, maltitol, lactitol, palatinit, trehalose and the like. Among the sugars and / or sugar alcohols, maltose, mannitol, lactose, sucrose, sorbitol and the like are preferable, maltose, mannitol, lactose and sucrose are more preferable, and maltose, sucrose and the like are particularly preferable.
前記の糖および／または糖アルコールは、単独または混合物で用いることができる。配合量は特に限定されるものではなく、組成物の溶液に溶解可能でＩＬ−２の安定性を高める量であればよい。ＩＬ−２に対する糖および／または糖アルコールの配合割合は重量比で１〜１００００倍、好ましくは５〜５０００倍、より好ましくは２０〜４０００倍であればよい。また、本発明組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中に糖および／または糖アルコールを５〜５００ｍｇ、好ましくは１０〜２５０ｍｇ、より好ましくは２０〜２００ｍｇ添加すればよい。前記配合量よりも少なければ、ＩＬ−２を安定化することができない恐れがあり、多ければ、組成物全量に対するＩＬ−２含量が相対的に低下し、多量のＩＬ−２組成物を投与しなければ、薬効が生じない可能性がある。 The sugars and / or sugar alcohols can be used alone or in a mixture. The blending amount is not particularly limited as long as it is an amount that can be dissolved in the solution of the composition and enhance the stability of IL-2. The blending ratio of sugar and / or sugar alcohol to IL-2 may be 1 to 10,000 times, preferably 5 to 5000 times, more preferably 20 to 4000 times by weight. When the composition of the present invention is used as a solution, 5 to 500 mg, preferably 10 to 250 mg, more preferably 20 to 200 mg of sugar and / or sugar alcohol may be added to 1 mL of the solution of the composition. If the amount is less than the above-mentioned amount, IL-2 may not be stabilized. If the amount is too large, the IL-2 content relative to the total amount of the composition is relatively lowered, and a large amount of IL-2 composition is administered. Otherwise, there is a possibility that no medicinal effect will occur.
本発明において、アミノ酸は、ＩＬ−２の安定化のために添加されうるが、賦形剤としても添加されうる。アミノ酸とは、分子内にアミノ基とカルボキシル基とをもつ化合物を意味するが、プロリンおよびヒドロキシプロリンのようなイミノ酸も含まれ、生理的に許容されるものであれば使用できる。アミノ酸としては、中性アミノ酸、酸性アミノ酸および塩基性アミノ酸が挙げられる。具体的には中性アミノ酸として、グリシン、アラニン、バリン、ノルバリン、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、ジヨードチロシン、スルナミン、トレオニン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロキシン、メチオニン、シスチン、システイン、α―アミノ酪酸等が挙げられる。酸性アミノ酸として、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン等が挙げられる。塩基性アミノ酸としては、リジン、塩酸リジン、アルギニン、ヒスチジン、ヒドロキシリジン等が挙げられる。前記アミノ酸のうち、好ましくはアラニン、塩酸リジン、アルギニンであり、特に好ましくはアルギニンである。 In the present invention, amino acids can be added for IL-2 stabilization, but can also be added as an excipient. An amino acid means a compound having an amino group and a carboxyl group in the molecule, but also includes imino acids such as proline and hydroxyproline, and any physiologically acceptable one can be used. Examples of amino acids include neutral amino acids, acidic amino acids, and basic amino acids. Specifically, as neutral amino acids, glycine, alanine, valine, norvaline, leucine, norleucine, isoleucine, phenylalanine, tyrosine, diiodotyrosine, thramine, threonine, serine, proline, hydroxyproline, tryptophan, thyroxine, methionine, cystine, Examples include cysteine and α-aminobutyric acid. Examples of acidic amino acids include aspartic acid, glutamic acid, asparagine, and glutamine. Examples of basic amino acids include lysine, lysine hydrochloride, arginine, histidine, hydroxylysine and the like. Among the amino acids, alanine, lysine hydrochloride and arginine are preferable, and arginine is particularly preferable.
前記のアミノ酸は、単独または混合物で用いることができる。添加量は特に限定されるものではなく、組成物の溶液に溶解可能でＩＬ−２の安定性を高める量であればよい。ＩＬ−２に対するアミノ酸の配合割合は重量比で１〜５０００倍、好ましくは１０〜２５００倍、より好ましくは２０〜２０００倍であればよい。また、本発明組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中にアミノ酸を０．１〜２５０ｍｇ、好ましくは０．５〜１２５ｍｇ、より好ましくは１〜１００ｍｇ添加すればよい。前記添加量よりも少なければ、ＩＬ−２を安定化できない恐れがあり、多ければ、組成物全量に対するＩＬ−２含量が相対的に低下し、多量のＩＬ−２組成物を投与しなければ、薬効が生じない可能性がある。 The aforementioned amino acids can be used alone or in a mixture. The addition amount is not particularly limited, and may be any amount that can be dissolved in the solution of the composition and increase the stability of IL-2. The mixing ratio of amino acids to IL-2 may be 1 to 5000 times, preferably 10 to 2500 times, and more preferably 20 to 2000 times by weight. When the composition of the present invention is used as a solution, 0.1 to 250 mg, preferably 0.5 to 125 mg, more preferably 1 to 100 mg of amino acid may be added to 1 mL of the solution of the composition. If the amount is less than the above amount, IL-2 may not be stabilized. If the amount is large, the IL-2 content relative to the total amount of the composition is relatively lowered, and if a large amount of IL-2 composition is not administered, Medicinal effects may not occur.
本発明組成物は、前記したように、糖および／または糖アルコール、ならびにアミノ酸を配合しているために、固体状態でも液体状態でもメイラード反応を生じる場合がある。メイラード反応とは、アミノ酸、ペプチド、タンパク質のアミノ基とケトン、アルデヒド、特に還元糖が反応して褐色色素を生成するものである。しかし、本発明の組成物においては、特に糖および／または糖アルコールがマルトース、マンニトール、ラクトース、スクロース、好ましくはマルトース、スクロースであり、アミノ酸がアラニン、塩酸リジン、アルギニン、好ましくはアルギニンとの組合せの場合には、例えば４０℃で３０日間程度、該組成物を保存してもメイラード反応は生じる恐れが少なく、ＩＬ−２の含量が低減する可能性も少ない。 As described above, the composition of the present invention contains a sugar and / or a sugar alcohol and an amino acid, and therefore may cause a Maillard reaction in a solid state or a liquid state. The Maillard reaction is a reaction in which amino groups of amino acids, peptides and proteins react with ketones, aldehydes, particularly reducing sugars, to produce brown pigments. However, in the composition of the present invention, in particular, the sugar and / or sugar alcohol is maltose, mannitol, lactose, sucrose, preferably maltose, sucrose, and the amino acid is a combination of alanine, lysine hydrochloride, arginine, preferably arginine. In some cases, for example, when the composition is stored at 40 ° C. for about 30 days, the Maillard reaction is less likely to occur, and the IL-2 content is less likely to decrease.
上記、糖および／または糖アルコールとアミノ酸の含量の比率は、糖および／または糖アルコールに対し、重量比でアミノ酸が０．０１〜４倍、好ましくは０．０２５〜３倍、より好ましくは０．０５〜２倍である。なお、タンパク質製剤の場合、添加物が同じでも主薬であるタンパク質が異なれば、メイラード反応の有無も異なるので、メイラード反応を生じないようにするためには、主薬であるタンパク質の種類によって、製剤中の添加物の種類、量等を検討する必要がある。 The ratio of the content of the sugar and / or sugar alcohol to the amino acid is 0.01 to 4 times, preferably 0.025 to 3 times, more preferably 0, in terms of the weight ratio of the amino acid to the sugar and / or sugar alcohol. 0.05 to 2 times. In the case of protein preparations, the presence or absence of the Maillard reaction also varies depending on the protein used as the active ingredient even if the same additive is used.Therefore, in order to prevent the Maillard reaction from occurring, depending on the type of protein as the active ingredient, It is necessary to consider the type and amount of additives.
本発明において、酸としては、生理的に許容される酸を用いることができる。例えば、酢酸、乳酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン等の有機酸や、塩酸、リン酸等の無機酸が挙げられ、単独でも、２種以上の混合物で用いてもよく、好ましくはクエン酸、酒石酸である。また、これらの薬理学的に許容される塩であってもよい。酸の添加量は用いる酸の種類によっても異なるが、所望のｐＨに調整できる必要量を添加すればよい。一般的には、ＩＬ−２に対する酸の配合割合は重量比で５〜２０００倍、好ましくは１０〜１０００倍、より好ましくは２５〜５００倍であればよい。本発明組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中に酸を０．２５〜５０ｍｇ、好ましくは０．５〜２０ｍｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ添加すればよい。また、前記量よりも少なければｐＨは塩基性となり、また多ければｐＨが酸性となり、いずれの状態でもＩＬ−２を安定化できない恐れがある。
なお、有機酸のうち、酸性アミノ酸であるアスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミンは、構成成分中の酸であると同時にアミノ酸でもありうる。
In the present invention, a physiologically acceptable acid can be used as the acid. Examples include organic acids such as acetic acid, lactic acid, succinic acid, tartaric acid, citric acid, aspartic acid, glutamic acid, asparagine, and glutamine, and inorganic acids such as hydrochloric acid and phosphoric acid, which are used alone or in a mixture of two or more. Of these, citric acid and tartaric acid are preferred. These pharmacologically acceptable salts may also be used. Although the addition amount of an acid changes with kinds of acid to be used, what is necessary is just to add the necessary amount which can be adjusted to desired pH. In general, the mixing ratio of the acid to IL-2 is 5 to 2000 times, preferably 10 to 1000 times, and more preferably 25 to 500 times by weight. When the composition of the present invention is used as a solution, 0.25 to 50 mg, preferably 0.5 to 20 mg, more preferably 1 to 10 mg of acid may be added to 1 mL of the solution of the composition. Moreover, if it is less than the said amount, pH will become basic, and if it is more, pH will become acidic, and there is a possibility that IL-2 cannot be stabilized in any state.
Among organic acids, acidic amino acids aspartic acid, glutamic acid, asparagine, and glutamine can be amino acids as well as acids in the constituent components.
本発明において、塩基としては、生理的に許容される塩基を全て用いることができる。例えば、Ｎ−メチルグルカミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミン等のアルコールアミン、モノ、ジまたはトリエチルアミン等のアルキルアミン、アルギニン、リジン、塩酸リジン、ヒスチジン等の塩基性アミノ酸、ならびに炭酸ナトリウム等の無機塩基等が用いられ、これらは単独でも、２種以上の混合物で用いてもよい。炭酸ナトリウム等の無機塩基を用いる際には、上記アミン等との併用が好ましい。好ましい塩基としては、Ｎ−メチルグルカミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、アルギニンであり、より好ましくは、ジエタノールアミン、アルギニンである。前記塩基は、単独でも、２種以上の混合物で用いてもよい。塩基の添加量は用いる塩基の種類によっても異なるが、所望のｐＨに調整できる必要量を添加すればよい。一般的には、ＩＬ−２に対する塩基の配合割合は重量比で１０〜５０００倍、好ましくは２５〜２５００倍、より好ましくは５０〜２０００倍であればよい。本発明組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中に酸を０．１〜１００ｍｇ、好ましくは０．２５〜１００ｍｇ、より好ましくは１〜５０ｍｇ添加すればよい。また、本発明組成物を固形剤として使用する場合、前記量よりも少なければ、溶液のｐＨが酸性となり、また多ければ、溶液のｐＨが塩基性となり、いずれの状態でもＩＬ−２を安定化できない恐れがある。
なお、塩基性アミノ酸であるアルギニン、リジン、塩酸リジン、ヒスチジン等は、構成成分の塩基であると同時にアミノ酸でもありうる。
In the present invention, as the base, any physiologically acceptable base can be used. For example, alcohol amines such as N-methylglucamine, monoethanolamine, diethanolamine and triethanolamine, alkylamines such as mono, di or triethylamine, basic amino acids such as arginine, lysine, lysine hydrochloride, histidine, and sodium carbonate These may be used alone or in a mixture of two or more. When an inorganic base such as sodium carbonate is used, it is preferably used in combination with the above amine. Preferred bases are N-methylglucamine, diethanolamine, triethanolamine, and arginine, and more preferred are diethanolamine and arginine. The bases may be used alone or in a mixture of two or more. Although the addition amount of a base changes also with the kind of base to be used, what is necessary is just to add the required quantity which can be adjusted to desired pH. Generally, the blending ratio of the base to IL-2 may be 10 to 5000 times, preferably 25 to 2500 times, more preferably 50 to 2000 times by weight. When the composition of the present invention is used as a solution, 0.1 to 100 mg, preferably 0.25 to 100 mg, more preferably 1 to 50 mg of acid may be added to 1 mL of the solution of the composition. Further, when the composition of the present invention is used as a solid agent, the pH of the solution becomes acidic if it is less than the above amount, and if it is more, the pH of the solution becomes basic, and IL-2 is stabilized in any state. There is a fear that it cannot be done.
The basic amino acids arginine, lysine, lysine hydrochloride, histidine and the like may be amino acids as well as the constituent bases.
本発明において、更に界面活性剤を添加することも可能である。界面活性剤としては、生理的に許容される界面活性剤であればよく、該界面活性剤の添加により、固形剤調製における乾燥前の組成物溶液調製時または固形剤を蒸留水に再溶解する時のＩＬ−２の溶解性改善ならびに、組成物溶液の液媒体を乾燥した時におけるＩＬ−２の安定性を向上（特に乾燥時におけるＩＬ−２の容器壁面の吸着を防止して、組成物中のＩＬ−２含量の低下を抑制する）するなどの効果が得られる。界面活性剤として、組成物の溶液に溶解または懸濁でき、ＩＬ−２の安定性を高めるものであればよいが、好ましくは非イオン性界面活性剤であり、具体的にはポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等が挙げられる。ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油として具体的には、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油２０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油５０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０等がある。ポリエチレングリコールとして具体的には、マクロゴール２００、マクロゴール３００、マクロゴール４００、マクロゴール６００、マクロゴール１０００、マクロゴール１５００、マクロゴール１５４０、マクロゴール２０００、マクロゴール４０００、マクロゴール６０００、マクロゴール２００００等がある。ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールとして具体的には、ポリオキシエチレン（１０５）ポリオキシプロピレン（５）グリコール、ポリオキシエチレン（１２０）ポリオキシプロピレン（４０）グリコール［プルロニックＦ８７］、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール［プルロニックＦ６８］、ポリオキシエチレン（４２）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール［プルロニックＰ１２３］、ポリオキシエチレン（５４）ポリオキシプロピレン（３９）グリコール［プルロニックＦ８５］、ポリオキシエチレン（１９６）ポリオキシプロピレン（６７）グリコール［プルロニックＦ１２７］、ポリオキシエチレン（２０）ポリオキシプロピレン（２０）グリコール［プルロニックＬ４４］等がある。ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとして具体的には、ポリソルベート２０［Ｔｗｅｅｎ２０］、ポリソルベート４０［Ｔｗｅｅｎ４０］、ポリソルベート６０［Ｔｗｅｅｎ６０］、ポリソルベート６５［Ｔｗｅｅｎ６５］、ポリソルベート８０［Ｔｗｅｅｎ８０］等がある。より好ましくはポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、特に好ましくはポリソルベート８０［Ｔｗｅｅｎ８０］である。 In the present invention, it is also possible to add a surfactant. As the surfactant, any physiologically acceptable surfactant may be used, and by adding the surfactant, the solid agent is redissolved in distilled water at the time of preparing the composition solution before drying in the preparation of the solid agent. Improved solubility of IL-2 and improved stability of IL-2 when the liquid medium of the composition solution is dried (especially the composition prevents the adsorption of the wall surface of the IL-2 container during drying) The effect of suppressing the decrease of the IL-2 content in the medium is obtained. Any surfactant can be used as long as it can be dissolved or suspended in a solution of the composition and can enhance the stability of IL-2, but is preferably a nonionic surfactant, specifically a polyoxyethylene cured agent. Castor oil, sucrose fatty acid ester, polyethylene glycol (PEG), polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester and the like. Specifically, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 5, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 10, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 20, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 20, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 40, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 50, polyoxyethylene hydrogenated castor oil 60 and the like. Specific examples of polyethylene glycol include Macrogol 200, Macrogol 300, Macrogol 400, Macrogol 600, Macrogol 1000, Macrogol 1500, Macrogol 1540, Macrogol 2000, Macrogol 4000, Macrogol 6000, Macrogol There are 20000 etc. Specifically, as polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, polyoxyethylene (105) polyoxypropylene (5) glycol, polyoxyethylene (120) polyoxypropylene (40) glycol [Pluronic F87], polyoxyethylene (160 ) Polyoxypropylene (30) glycol [Pluronic F68], Polyoxyethylene (42) Polyoxypropylene (67) Glycol [Pluronic P123], Polyoxyethylene (54) Polyoxypropylene (39) Glycol [Pluronic F85], Poly Oxyethylene (196) polyoxypropylene (67) glycol [Pluronic F127], polyoxyethylene (20) polyoxypropylene (20) glycol [Pluronic L44 And the like. Specific examples of the polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester include polysorbate 20 [Tween 20], polysorbate 40 [Tween 40], polysorbate 60 [Tween 60], polysorbate 65 [Tween 65], polysorbate 80 [Tween 80], and the like. More preferred is polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, and particularly preferred is polysorbate 80 [Tween 80].
界面活性剤の配合量は用いる界面活性剤の種類によっても異なるが、ＩＬ−２に対する界面活性剤の配合割合は重量比で１〜３００倍、好ましくは２．５〜２５０倍、より好ましくは５〜２００倍であればよい。本発明組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中に０．０５ｍｇ〜１５ｍｇ、好ましくは０．０７５ｍｇ〜７．５ｍｇ、より好ましくは０．１ｍｇ〜４ｍｇを添加すればよい。また、本発明組成物を固形剤として使用する場合、前記添加量よりも少なければ、ＩＬ−２の溶解性が改善せず、またＩＬ−２の安定性低下やバイアル、調製時の器具等への吸着によるＩＬ−２含量低下の恐れがあり、逆に多ければ、調製の際、泡立ちにより組成物溶液の調製が困難となり、凍結乾燥物が調製できない（ポリソルベート80〔室温下で液体〕）、あるいは、酸化体の生成が促進される可能性がある。 The blending amount of the surfactant varies depending on the type of the surfactant used, but the blending ratio of the surfactant to IL-2 is 1 to 300 times, preferably 2.5 to 250 times, more preferably 5 by weight. It may be ~ 200 times. When the composition of the present invention is used as a solution, 0.05 mg to 15 mg, preferably 0.075 mg to 7.5 mg, more preferably 0.1 mg to 4 mg may be added to 1 mL of the composition solution. Further, when the composition of the present invention is used as a solid agent, the solubility of IL-2 is not improved if the amount is less than the above-mentioned addition amount, and the stability of IL-2 is reduced, and vials, preparation equipment, etc. On the other hand, if the amount is too large, it becomes difficult to prepare a composition solution due to foaming and a lyophilized product cannot be prepared (polysorbate 80 [liquid at room temperature]). Or the production | generation of an oxidant may be accelerated | stimulated.
本発明では、固形剤調製における乾燥前の組成物溶液製造時または固形剤を蒸留水に再溶解する時のｐＨ変動を最小限にするために緩衝剤を用いることが好ましい。緩衝剤としては、生理的に許容される緩衝剤であればよく、例えば、リン酸系またはクエン酸系の緩衝剤が挙げられる。 In the present invention, it is preferable to use a buffering agent in order to minimize pH fluctuations during the preparation of the composition solution before drying in the preparation of the solid agent or when the solid agent is redissolved in distilled water. The buffering agent may be any physiologically acceptable buffering agent, and examples thereof include phosphate-based and citrate-based buffering agents.
緩衝剤の添加量は用いる緩衝剤の種類によっても異なるが、所望のｐＨ、すなわち、組成物の溶液のｐＨを６．１〜９に保持するのに必要な量を用いればよい。具体的には、ＩＬ−２に対する緩衝剤の配合割合は重量比で２０〜２０００倍、好ましくは５０〜１５００倍、より好ましくは１００〜１０００倍であればよい。本発明組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中に緩衝剤を１〜１００ｍｇ、好ましくは２．５〜７５ｍｇ、より好ましくは５〜５０ｍｇ添加すればよい。前記量よりも少なければ、組成物溶液製造時または固形剤を蒸留水に再溶解する時のｐＨ変動が大きくなり、多ければ、組成物全量に対するＩＬ−２含量が相対的に低下し、多量のＩＬ−２組成物を投与しなければ、薬効が生じない可能性がある。 The addition amount of the buffering agent varies depending on the type of the buffering agent to be used, but an amount necessary for maintaining the desired pH, that is, the pH of the solution of the composition at 6.1 to 9 may be used. Specifically, the blending ratio of the buffer with respect to IL-2 may be 20 to 2000 times, preferably 50 to 1500 times, more preferably 100 to 1000 times by weight. When the composition of the present invention is used as a solution, 1 to 100 mg, preferably 2.5 to 75 mg, more preferably 5 to 50 mg of a buffer may be added to 1 mL of the solution of the composition. If the amount is less than the above amount, the pH fluctuation during the production of the composition solution or when the solid agent is redissolved in distilled water is large. If the amount is large, the IL-2 content relative to the total amount of the composition is relatively reduced, and a large amount If the IL-2 composition is not administered, there may be no effect.
本発明の製剤は、製剤の形態に応じ、製剤学上許容される添加物を含有しうる。例えば、注射剤の場合、フェノール、クレゾール等の保存剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール等の無痛化剤、塩化ナトリウム、グリセリン等の等張化剤を添加してもよい。
温血動物由来の血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ブタ血清アルブミン等を配合した場合、ウイルス感染や狂牛病などの危険性を生じる可能性があるが、アルブミンであっても遺伝子組換えアルブミンであれば、上記副作用を生じる可能性が低く、組成物の添加剤として配合する場合もありうる。遺伝子組換えアルブミンの添加は、ＩＬ−２の安定性低下の防止に有用である。ＩＬ−２に対する遺伝子組換えアルブミンの配合割合は、重量比で１〜１０００倍、好ましくは２．５〜５００倍、より好ましくは５〜２５０倍であればよい。本発明組成物を溶液として使用する場合、組成物の溶液１ｍＬ中に０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０．２５ｍｇ〜５０ｍｇ、より好ましくは０．５ｍｇ〜２５ｍｇを添加すればよい。
The preparation of the present invention may contain pharmaceutically acceptable additives depending on the form of the preparation. For example, in the case of injections, preservatives such as phenol and cresol, soothing agents such as benzyl alcohol and chlorobutanol, and isotonic agents such as sodium chloride and glycerin may be added.
Serum albumin derived from warm-blooded animals such as human serum albumin, bovine serum albumin, porcine serum albumin, etc. may cause a risk of viral infection, mad cow disease, etc. Recombinant albumin has a low possibility of causing the above side effects and may be added as an additive of the composition. The addition of recombinant albumin is useful for preventing a decrease in IL-2 stability. The blending ratio of the recombinant albumin to IL-2 may be 1 to 1000 times, preferably 2.5 to 500 times, more preferably 5 to 250 times by weight. When the composition of the present invention is used as a solution, 0.1 mg to 100 mg, preferably 0.25 mg to 50 mg, more preferably 0.5 mg to 25 mg may be added to 1 mL of the composition solution.
本発明の組成物は、少なくともＩＬ−２、安定化剤、糖および／または糖アルコール、アミノ酸、酸ならびに塩基、要すれば界面活性剤、またｐＨの調節のために緩衝剤等の配合成分を含む。 The composition of the present invention comprises at least IL-2, a stabilizer, a sugar and / or a sugar alcohol, an amino acid, an acid and a base, a surfactant if necessary, and a buffering agent for adjusting pH. Including.
安定化剤としてメチオニンを使用する場合、これら組成物の配合成分の好ましい組合せとして、１）ＩＬ−２、メチオニン、マルトース、アルギニン、クエン酸、要すればポリソルベート８０およびリン酸緩衝液、２）ＩＬ−２、メチオニン、スクロース、アルギニン、クエン酸、要すればポリソルベート８０およびリン酸緩衝液の組合せの組成物である。特に、糖または糖アルコールとして、スクロースを用いた場合、ＩＬ−２の酸化体量を低減することができる。これら好ましい組合せの配合成分の配合量について、メチオニンは、固形成分全量に対し０．００１〜５重量％、好ましくは０．００５〜２．５重量％、より好ましくは０．０１〜１重量％、ＩＬ−２に対するメチオニンの配合割合は重量比で０．１〜１００倍、好ましくは１〜５０倍、より好ましくは２．５〜２５倍である。安定化剤の含量は、前記配合量よりも少なければ、ＩＬ−２の酸化体の量を十分に低減できない可能性がある。前記配合量よりも多ければ、溶液中に安定化剤が完全に溶解しない恐れ、あるいは使用時に安定化剤の過剰投与による副作用の懸念がある。ＩＬ−２に対するマルトースまたはスクロースの配合割合は重量比で１〜１００００倍、好ましくは５〜５０００倍、より好ましくは２０〜４０００倍、ＩＬ−２に対するアルギニンの配合割合は重量比で１〜５０００倍、好ましくは１０〜２５００倍、より好ましくは２０〜２０００倍、ＩＬ−２に対するクエン酸の配合割合は重量比で５〜２０００倍、好ましくは１０〜１０００倍、より好ましくは２５〜５００倍、ＩＬ−２に対するポリソルベート８０の配合割合は、重量比で１〜３００倍、好ましくは２．５〜２５０倍、より好ましくは５〜２００倍、リン酸緩衝剤を添加するならば、ｐＨ６．１〜９に保持するのに必要な配合割合で添加すればよいが、具体的にはＩＬ−２に対する緩衝剤の配合割合は、重量比で２０〜２０００倍、好ましくは５０〜１５００倍、より好ましくは１００〜１０００倍であればよい。本発明の組成物を溶液として使用する場合、ＩＬ−２は、組成物の溶液１ｍＬ中に０．１〜５００μｇ、好ましくは０．５〜２５０μｇ、より好ましくは１〜１００μｇ、マルトースまたはスクロースは、組成物の溶液１ｍＬ中に５〜５００ｍｇ、好ましくは１０〜２５０ｍｇ、より好ましくは２０〜２００ｍｇ、アルギニンは、組成物の溶液１ｍＬ中に０．１〜２５０ｍｇ、好ましくは０．５〜１２５ｍｇ、より好ましくは１〜１００ｍｇ、クエン酸は、組成物の溶液１ｍＬ中に０．２５〜５０ｍｇ、好ましくは、０．５〜２０ｍｇ、より好ましくは１〜１０ｍｇ、ポリソルベート８０を添加するならば、組成物の溶液１ｍＬ中に０．０５ｍｇ〜１５ｍｇ、好ましくは０．０７５ｍｇ〜７．５ｍｇ、より好ましくは０．１ｍｇ〜４ｍｇ、リン酸緩衝剤を添加するならば、ｐＨ６．１〜９に保持するのに必要な配合割合で添加すればよいが、具体的には組成物の溶液１ｍＬ中に１〜１００ｍｇ、好ましくは２．５〜７５ｍｇ、より好ましくは５〜５０ｍｇ添加すればよい。本発明の組成物を固形剤として使用する場合、また、マルトースとアルギニン、およびスクロースとアルギニンとの含量の比率は、マルトースまたはスクロースに対し、重量比でアルギニンが０．０１〜４倍、好ましくは０．０５〜３倍、より好ましくは０．１〜２倍である。 When methionine is used as a stabilizer, preferred combinations of the components of these compositions are 1) IL-2, methionine, maltose, arginine, citric acid, polysorbate 80 and phosphate buffer if necessary, 2) IL -2, a composition comprising a combination of methionine, sucrose, arginine, citric acid, polysorbate 80 if necessary and phosphate buffer. In particular, when sucrose is used as the sugar or sugar alcohol, the oxidant amount of IL-2 can be reduced. About the compounding quantity of these preferable combination ingredients, methionine is 0.001 to 5% by weight, preferably 0.005 to 2.5% by weight, more preferably 0.01 to 1% by weight, based on the total amount of the solid components. The mixing ratio of methionine to IL-2 is 0.1 to 100 times, preferably 1 to 50 times, and more preferably 2.5 to 25 times by weight. If the content of the stabilizer is less than the blending amount, there is a possibility that the amount of oxidized IL-2 cannot be reduced sufficiently. If the amount is more than the above-mentioned blending amount, the stabilizer may not be completely dissolved in the solution, or there may be side effects due to excessive administration of the stabilizer during use. The mixing ratio of maltose or sucrose with respect to IL-2 is 1 to 10,000 times by weight, preferably 5 to 5000 times, more preferably 20 to 4000 times, and the mixing ratio of arginine to IL-2 is 1 to 5000 times by weight. , Preferably 10 to 2500 times, more preferably 20 to 2000 times, and the mixing ratio of citric acid to IL-2 is 5 to 2000 times, preferably 10 to 1000 times, more preferably 25 to 500 times, IL. The blending ratio of polysorbate 80 to -2 is 1 to 300 times, preferably 2.5 to 250 times, more preferably 5 to 200 times by weight, and pH 6.1 to 9 if a phosphate buffer is added. It is sufficient to add at a blending ratio necessary to maintain the weight, but specifically, the blending ratio of the buffer to IL-2 is 20 to 2000 times by weight. Preferably 50 to 1500 times, more preferably as long as 100 to 1000 times. When the composition of the present invention is used as a solution, IL-2 is 0.1 to 500 μg, preferably 0.5 to 250 μg, more preferably 1 to 100 μg, and maltose or sucrose in 1 mL of the composition solution. 5 to 500 mg, preferably 10 to 250 mg, more preferably 20 to 200 mg in 1 mL of the composition solution, and arginine is 0.1 to 250 mg, preferably 0.5 to 125 mg, more preferably in 1 mL of the composition solution. 1 to 100 mg, citric acid is 0.25 to 50 mg, preferably 0.5 to 20 mg, more preferably 1 to 10 mg, and polysorbate 80 is added to 1 mL of the composition solution. In 1 mL, 0.05 mg to 15 mg, preferably 0.075 mg to 7.5 mg, more preferably 0.1 mg to 4 mg, phosphorus If a buffering agent is added, it may be added at a blending ratio necessary for maintaining the pH at 6.1 to 9, but specifically, 1 to 100 mg, preferably 2.5 to 1 in 1 mL of the composition solution. 75 mg, more preferably 5 to 50 mg may be added. When the composition of the present invention is used as a solid agent, the ratio of the content of maltose and arginine, and sucrose and arginine is 0.01 to 4 times, preferably arginine by weight ratio to maltose or sucrose. 0.05 to 3 times, more preferably 0.1 to 2 times.
安定化剤としてエデト酸ナトリウムを使用する場合、これら組成物の配合成分の好ましい組合せとして、１）ＩＬ−２、エデト酸ナトリウム、マルトース、アルギニン、クエン酸、要すればポリソルベート８０およびリン酸緩衝液、２）ＩＬ−２、エデト酸ナトリウム、スクロース、アルギニン、クエン酸、要すればポリソルベート８０およびリン酸緩衝液の組合せの組成物である。特に、糖または糖アルコールとして、スクロースを用いた場合、ＩＬ−２の酸化体量を低減することができる。これら好ましい組合せの配合成分の配合量について、エデト酸ナトリウムは、固形成分全量に対し０．１〜１０重量％、好ましくは０．５〜７．５重量％、より好ましくは１．０〜５．０重量％、ＩＬ−２に対するエデト酸ナトリウムの配合割合は重量比で１〜２５０倍、好ましくは５〜２４０倍、より好ましくは１０〜２３０倍である。他の添加物のＩＬ−２に対する配合割合は、上記と同様である。安定化剤の含量は、前記配合量よりも少なければ、ＩＬ−２の酸化体の量を十分に低減できない可能性がある。前記配合量よりも多ければ、溶液中に安定化剤が完全に溶解しない恐れ、あるいは使用時に安定化剤の過剰投与による副作用の懸念がある。 When sodium edetate is used as a stabilizer, preferred combinations of the ingredients of these compositions are 1) IL-2, sodium edetate, maltose, arginine, citric acid, polysorbate 80 and phosphate buffer if necessary. 2) A composition comprising a combination of IL-2, sodium edetate, sucrose, arginine, citric acid, polysorbate 80 if necessary, and phosphate buffer. In particular, when sucrose is used as the sugar or sugar alcohol, the oxidant amount of IL-2 can be reduced. About the compounding quantity of the compounding component of these preferable combinations, sodium edetate is 0.1 to 10 weight% with respect to the total amount of a solid component, Preferably it is 0.5 to 7.5 weight%, More preferably, it is 1.0 to 5. The blending ratio of sodium edetate to 0% by weight and IL-2 is 1 to 250 times, preferably 5 to 240 times, more preferably 10 to 230 times by weight. The mixing ratio of other additives to IL-2 is the same as described above. If the content of the stabilizer is less than the blending amount, there is a possibility that the amount of oxidized IL-2 cannot be reduced sufficiently. If the amount is more than the above-mentioned blending amount, the stabilizer may not be completely dissolved in the solution, or there may be side effects due to excessive administration of the stabilizer during use.
安定化剤としてチオグリコール酸ナトリウムを使用する場合、これら組成物の配合成分の好ましい組合せとして、１）ＩＬ−２、チオグリコール酸ナトリウム、マルトース、アルギニン、クエン酸、要すればポリソルベート８０およびリン酸緩衝液、２）ＩＬ−２、チオグリコール酸ナトリウム、スクロース、アルギニン、クエン酸、要すればポリソルベート８０およびリン酸緩衝液の組合せの組成物である。これら好ましい組合せの配合成分の配合量について、チオグリコール酸ナトリウムは、固形成分全量に対し０．１〜１０重量％、好ましくは０．５〜７．５重量％、より好ましくは１．０〜５．０重量％、ＩＬ−２に対するチオグリコール酸ナトリウムの配合割合は重量比で１〜２５０倍、好ましくは５〜２４０倍、より好ましくは１０〜２３０倍である。他の添加物のＩＬ−２に対する配合割合は、上記と同様である。安定化剤の含量は、前記配合量よりも少なければ、ＩＬ−２の酸化体の量を十分に低減できない可能性がある。前記配合量よりも多ければ、溶液中に安定化剤が完全に溶解しない恐れ、あるいは使用時に安定化剤の過剰投与による副作用の懸念がある。 When sodium thioglycolate is used as a stabilizer, preferred combinations of the ingredients of these compositions are: 1) IL-2, sodium thioglycolate, maltose, arginine, citric acid, polysorbate 80 and phosphoric acid if necessary Buffer solution, 2) Composition of IL-2, sodium thioglycolate, sucrose, arginine, citric acid, polysorbate 80 if necessary, and phosphate buffer. About the compounding quantity of these preferable combination ingredients, sodium thioglycolate is 0.1 to 10% by weight, preferably 0.5 to 7.5% by weight, more preferably 1.0 to 5%, based on the total amount of solid components The blending ratio of sodium thioglycolate to 0.0% by weight and IL-2 is 1 to 250 times, preferably 5 to 240 times, and more preferably 10 to 230 times by weight. The mixing ratio of other additives to IL-2 is the same as described above. If the content of the stabilizer is less than the blending amount, there is a possibility that the amount of oxidized IL-2 cannot be reduced sufficiently. If the amount is more than the above-mentioned blending amount, the stabilizer may not be completely dissolved in the solution, or there may be side effects due to excessive administration of the stabilizer during use.
本発明溶液から固形剤を製造する際の溶液の乾燥法としては、組成物溶液の液媒体を乾燥しさえすればよいが、好ましくは凍結乾燥法、噴霧乾燥法、より好ましくは凍結乾燥法がある。凍結乾燥法によって固形状にした凍結乾燥品は、ＩＬ−２のようなタンパク質を含む製剤の場合、熱等のストレスがかからず、安定なタンパク質製剤を製造することができる。 As a method for drying the solution in producing the solid preparation from the solution of the present invention, it is sufficient to dry the liquid medium of the composition solution, but preferably a freeze drying method, a spray drying method, more preferably a freeze drying method. is there. In the case of a preparation containing a protein such as IL-2, a freeze-dried product made into a solid state by a freeze-drying method is not subjected to stress such as heat, and a stable protein preparation can be produced.
組成物溶液のｐＨを約６以上に調節すれば、ＩＬ−２は安定に保たれ、かつ液媒体の乾燥操作中及び固形状製剤の再溶解時における液性も透明に保たれうる。従って、本発明目的のためには、特にｐＨの上限はないが、好ましくは最終的なｐＨ調節は溶液状態でｐＨ６．１〜９である。本発明組成物を注射剤として用いる場合には、該組成物を生理的なｐＨ領域付近に調整することが好ましく、この場合には最終的なｐＨ領域をｐＨ６．１〜８、さらに好ましくはｐＨ６．５〜７．５にすればよい。前記下限のｐＨよりも酸性側では、再溶解時の液状を透明に保つことが困難である恐れがあり、上限のｐＨよりも塩基性側では、組成物の安定性および溶液の透明性は満足されても、皮膚や血管等への刺激性が増す可能性があり、必ずしも好ましいものではない。 When the pH of the composition solution is adjusted to about 6 or more, IL-2 can be kept stable, and the liquid property during the drying operation of the liquid medium and at the time of re-dissolution of the solid preparation can be kept transparent. Thus, for the purposes of the present invention, there is no particular upper limit on the pH, but preferably the final pH adjustment is pH 6.1-9 in solution. When the composition of the present invention is used as an injection, it is preferable to adjust the composition in the vicinity of a physiological pH range. In this case, the final pH range is pH 6.1 to 8, more preferably pH 6 5 to 7.5. On the acidic side of the lower limit pH, it may be difficult to keep the liquid state at the time of re-dissolution transparent, and on the basic side of the upper limit pH, the stability of the composition and the transparency of the solution are satisfactory. However, there is a possibility that irritation to the skin, blood vessels and the like may increase, which is not always preferable.
本発明において、長期保存してＩＬ−２の酸化体が増大した理由は必ずしも明らかではないが、ＩＬ−２のメチオニン残基が酸化された可能性が高い。本発明組成物において、安定化剤としてメチオニン、エデト酸ナトリウム、チオグリコール酸ナトリウムを配合すれば、ＩＬ−２の酸化体の増加を抑制でき、しかもＩＬ−２の含量もほとんど低下しない。その他の安定化剤であれば、酸化体の増加は抑制できない可能性が高く、または二量体の生成等により、ＩＬ−２の含量が低下する恐れがある。 In the present invention, the reason why the oxidized form of IL-2 increased after long-term storage is not necessarily clear, but it is highly possible that the methionine residue of IL-2 was oxidized. In the composition of the present invention, when methionine, sodium edetate, or sodium thioglycolate is added as a stabilizer, an increase in the oxidized form of IL-2 can be suppressed, and the content of IL-2 is hardly reduced. If other stabilizers are used, there is a high possibility that the increase in oxidant cannot be suppressed, or the content of IL-2 may decrease due to formation of a dimer or the like.
本発明組成物の製法は、特に限定されないが、好ましくは以下のような方法で製造する。糖および／または糖アルコールならびに安定化剤であるアミノ酸の必要量を蒸留水に溶解した溶液に、ＩＬ−２原液および要すれば更に界面活性剤の適当量を加える。次いで塩基の適当量（アミノ酸として、塩基性アミノ酸を添加した場合、塩基を添加しない場合がある）を添加してｐＨ約８〜１１、好ましくはｐＨ約９〜１１、さらに好ましくはｐＨ約９．５〜１０．５とし、緩衝液を加えた後、速やかに酸を加えてｐＨ約７〜７．７とする。残りの蒸留水を加えて液量を調節し、組成物の溶液を製造後、無菌濾過、容器へ分注、次いで凍結乾燥させる。また、別法として、糖および／または糖アルコールならびに安定化剤あるアミノ酸の必要量を蒸留水に溶解した溶液に、ＩＬ−２および要すれば更に界面活性剤の適当量を加える。次いで酸の適当量（アミノ酸として、酸性アミノ酸を添加した場合、酸を添加しない場合がある）を添加して、一旦ｐＨ約２〜６、好ましくはｐＨ約２〜４、さらに好ましくはｐＨ約２〜３とし、緩衝液を加えた後、速やかに塩基を加えてｐＨ約７〜７．７とし、以下上記と同様の方法で組成物を製造する。該製造法のうち、ＩＬ−２の安定性の面から、前者の製造方法が好ましい。凍結乾燥は、上記調製した組成物の溶液を約−６０℃〜約−１０℃、好ましくは約−５０℃〜約−４０℃で急速凍結した後、要すれば、昇華熱を供給しながら、好ましくは４８〜７２時間、−５℃で１〜１００Paに保って所定含水量になるまで水分を昇華、除去し、要すれば窒素など不活性気体または乾燥空気を充填して、密栓する。
上記製造法中、塩基または酸を添加して所要のｐＨとした後、「速やかに」酸または塩基を添加しｐＨを約７〜７．７とするが、この「速やかに」酸または塩基を添加しはじめ、ｐＨを約７〜７．７とするまでの時間は、組成物の製造量によっても異なるが、約６０分間、好ましくは約４５分間、より好ましくは約３０分間以内であればよい。
Although the manufacturing method of this invention composition is not specifically limited, Preferably it manufactures with the following methods. An appropriate amount of the IL-2 stock solution and, if necessary, a surfactant is added to a solution in which the necessary amount of sugar and / or sugar alcohol and amino acid as a stabilizer is dissolved in distilled water. Next, an appropriate amount of a base (when a basic amino acid is added as an amino acid, a base may not be added) is added to a pH of about 8 to 11, preferably about pH 9 to 11, more preferably about pH 9. 5 to 10.5, and after adding a buffer solution, quickly add an acid to a pH of about 7 to 7.7. The remaining distilled water is added to adjust the amount of the solution, and after the composition solution is produced, it is sterile filtered, dispensed into a container, and then freeze-dried. Alternatively, an appropriate amount of IL-2 and, if necessary, a surfactant is added to a solution in which the necessary amount of sugar and / or sugar alcohol and amino acid as a stabilizer is dissolved in distilled water. Next, an appropriate amount of acid (when an acidic amino acid is added as an amino acid, an acid may not be added) is added, and once the pH is about 2 to 6, preferably about pH 2 to 4, more preferably about pH 2 After adding a buffer solution, a base is quickly added to obtain a pH of about 7 to 7.7, and a composition is produced in the same manner as described above. Among the production methods, the former production method is preferable from the viewpoint of the stability of IL-2. In lyophilization, the solution of the composition prepared above is rapidly frozen at about −60 ° C. to about −10 ° C., preferably about −50 ° C. to about −40 ° C., and if necessary, while supplying sublimation heat, Preferably, water is sublimed and removed for 48 to 72 hours at -5 ° C. at 1 to 100 Pa until a predetermined water content is reached. If necessary, inert gas such as nitrogen or dry air is filled and sealed.
In the above production method, a base or an acid is added to obtain a required pH, and then a “rapidly” acid or base is added to adjust the pH to about 7 to 7.7. The time from the start of addition until the pH is adjusted to about 7 to 7.7 varies depending on the production amount of the composition, but may be within about 60 minutes, preferably about 45 minutes, more preferably within about 30 minutes. .
本発明組成物は、ＩＬ−２、上記安定化剤、糖および／または糖アルコール、アミノ酸ならびに酸および塩基の成分を配合し、さらに要すれば界面活性剤や緩衝剤等を配合することによって、ＩＬ−２を長期間、例えば４０℃約２ヶ月間程度にわたって保存しても、ＩＬ−２の酸化体の増加を抑制することができた。 The composition of the present invention comprises IL-2, the above-mentioned stabilizer, sugar and / or sugar alcohol, amino acid, and acid and base components, and if necessary, a surfactant, a buffer, etc. Even when IL-2 was stored for a long period of time, for example, at about 40 ° C. for about 2 months, an increase in the oxidized form of IL-2 could be suppressed.
本発明組成物の使用方法は特に限定されるものではないが、非経口的に用いることが好ましい。注射剤として用いる際には、凍結乾燥された該組成物を注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖液、適当な点滴用輸液等に用時溶解して静脈内、筋肉内、皮下または皮内に投与する。また、本組成物に適当な担体、賦形剤等を加えて口、鼻、耳腔内投与等の局所投与製剤としてもよい。投与量としては、例えば血管肉腫の場合は成人に対してＩＬ−２として一日あたり、７０万〜１４０万JRU（国内標準単位）、腎癌を適用症とした場合は、成人に対してＩＬ−２として一日あたり、７０万〜２１０万ＪRＵ（国内標準単位）が一般的である。 Although the usage method of this invention composition is not specifically limited, It is preferable to use parenterally. When used as an injection, the freeze-dried composition is dissolved at the time of use in distilled water for injection, physiological saline, glucose solution, appropriate infusion solution, and the like, and is intravenously, intramuscularly, subcutaneously or intradermally. To be administered. In addition, a suitable carrier, excipient or the like may be added to the present composition to prepare a preparation for topical administration such as oral, nasal or intrathecal administration. For example, in the case of hemangiosarcoma, the daily dose of IL-2 is 700,000 to 1.4 million JRU (domestic standard unit) for adults. -2 is generally 700,000 to 2.1 million JRU (national standard unit) per day.
以下に本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、これは単に例示であって、本発明を制限するものではない。以下に示す製造方法に準じて、組成物を製造した。
（実施例１製剤の製造方法）
安定化剤としては、エデト酸ナトリウム、糖または糖アルコールとしては、マルトース、アミノ酸としては、アルギニンを用いた。界面活性剤としてはポリソルベート８０、酸としてはクエン酸、緩衝液としてはリン酸緩衝液を用いた。
試製を行う処方を表１に示す。また、表１中の各溶液の上からの順番は試製の際に添加混合する順番である。最終の溶液のｐＨを７．４に調整することを考慮して、酸性の抗酸化剤はクエン酸添加前に添加することとした。
参考例１
The present invention will be described more specifically with reference to the following examples. However, this is merely an example and does not limit the present invention. A composition was produced according to the production method shown below.
(Example 1 preparation method)
As the stabilizer, sodium edetate, maltose as the sugar or sugar alcohol, and arginine as the amino acid were used. Polysorbate 80 was used as the surfactant, citric acid was used as the acid, and phosphate buffer was used as the buffer.
Table 1 shows the prescription for trial manufacture. Moreover, the order from the top of each solution in Table 1 is the order of addition and mixing at the time of trial manufacture. In consideration of adjusting the pH of the final solution to 7.4, the acidic antioxidant was added before the addition of citric acid.
Reference example 1
安定化剤を配合しないこと以外は、実施例１と同様である。
参考例２
The same as Example 1 except that no stabilizer is blended.
Reference example 2
安定化剤としてエデト酸ナトリウムのかわりに塩酸システインを配合すること以外は、実施例１と同様である。
参考例３
Example 1 is the same as Example 1 except that cysteine hydrochloride is added in place of sodium edetate as a stabilizer.
Reference example 3
安定化剤としてエデト酸ナトリウムのかわりにアスコルビン酸を配合すること以外は、実施例１と同様である。 Example 1 is the same as Example 1 except that ascorbic acid is added in place of sodium edetate as a stabilizer.
（試験方法）
調製した溶液を調製直後に、下記の条件でＨＰＬＣ分析をおこない、酸化体の量を測定した。
含量測定（ＨＰＬＣ）条件
装置 ： Waters 2690 Alliance
カラム ： コスモジル 5C18-300 ４．６f×１５０ｍｍ
カラム温度 ： ３０°C
移動相 ： A液 ０．１%ＴＦＡ（トリフロロ酢酸）−水／アセトニトリル (９５／５)、B液０．０７%ＴＦＡ−アセトニトリルを用いて、表 ２に示すグラジェント法を実施。
流速 ： １．０ｍＬ／分
注入量 ： １００ μL
サンプル温度： ５°C
検出波長 ： ２２０ｎｍ
測定時間 ： ６０分
(Test method)
Immediately after preparation of the prepared solution, HPLC analysis was performed under the following conditions to measure the amount of oxidant.
Content measurement (HPLC) conditions Equipment: Waters 2690 Alliance
Column: Cosmosil 5C18-300 4.6f × 150mm
Column temperature: 30 ° C
Mobile phase: The gradient method shown in Table 2 was performed using solution A, 0.1% TFA (trifluoroacetic acid) -water / acetonitrile (95/5), solution B, 0.07% TFA-acetonitrile.
Flow rate: 1.0 mL / min Injection volume: 100 μL
Sample temperature: 5 ° C
Detection wavelength: 220 nm
Measurement time: 60 minutes
解析 ： Waters ミレニアム
測定対象 ： ＩＬ−２および酸化体
酸化体の含量は、以下の式で算出した。
また、無添加製剤と安定化剤を添加した製剤との酸化体の量比は、以下の式で算出した。
（試験結果）
表３に酸化体の量、無添加の酸化体に対する安定化剤を添加した場合の酸化体の量比および溶液外観の変化を示した。その結果、安定化剤として、塩酸システインおよびアスコルビン酸を使用した場合、酸化体の量比は１を超え、安定化剤無添加時よりも酸化体量が増加した。また、塩酸システインおよびアスコルビン酸を配合した溶液は、沈殿が生じたり、溶液が着色した。一方、エデト酸ナトリウムを添加した場合、酸化体の量比は１以下であり、安定化剤無添加時よりも酸化体量が低下し、かつ沈殿や着色等の外観変化は生じなかった。
Analysis: Waters Millennium Measurement object: IL-2 and oxidant
The oxidant content was calculated by the following formula.
Moreover, the amount ratio of the oxidant between the additive-free preparation and the preparation added with the stabilizer was calculated by the following formula.
(Test results)
Table 3 shows the amount of the oxidant, the amount ratio of the oxidant and the change in the solution appearance when the stabilizer for the additive-free oxidant is added. As a result, when cysteine hydrochloride and ascorbic acid were used as stabilizers, the amount ratio of oxidants exceeded 1, and the amount of oxidants increased compared to when no stabilizer was added. Further, in the solution containing cysteine hydrochloride and ascorbic acid, precipitation occurred or the solution was colored. On the other hand, when sodium edetate was added, the amount ratio of oxidant was 1 or less, the amount of oxidant was lower than when no stabilizer was added, and appearance changes such as precipitation and coloring did not occur.
（実施例２製剤の製造方法）
安定化剤としては、メチオニンを、糖または糖アルコールとしては、マルトースを、アミノ酸としては、アルギニンを、界面活性剤としてはポリソルベート８０を、酸としてはクエン酸、緩衝液としてはリン酸緩衝液を用いた。
０．８３ｍｇ／ｍＬのＩＬ−２の水溶液０．９ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬのメチオニンの水溶液０．３ｍＬ、２８９．５ｍｇ／ｍＬのマルトース一水和物水溶液９ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０水溶液１．５ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬのアルギニン水溶液４．５ｍＬを混合溶解し、ｐＨ約１０とした。次いでリン酸緩衝液１４５．８ｍｇ／ｍLを３ｍLおよびクエン酸を適量添加して、該溶液のｐＨを約７．４に調整し、注射用水で全量３０ｍＬとなるように調整した。その後、上記製造した組成物の溶液１ｍＬを３ｍＬ容のガラスバイアルに分注し、凍結乾燥を行った。製剤の処方は、表４に、凍結乾燥の条件は、表５に示す。
(Example 2 preparation method)
As a stabilizer, methionine is used as a sugar or sugar alcohol, maltose is used as an amino acid, arginine is used as an amino acid, polysorbate 80 is used as a surfactant, citric acid is used as an acid, and a phosphate buffer is used as a buffer. Using.
0.83 mg / mL IL-2 aqueous solution 0.9 mL, 25 mg / mL methionine aqueous solution 0.3 mL, 289.5 mg / mL maltose monohydrate aqueous solution 9 mL, 10 mg / mL polysorbate 80 aqueous solution 1.5 mL Then, 4.5 mL of a 100 mg / mL arginine aqueous solution was mixed and dissolved to a pH of about 10. Subsequently, 3 mL of phosphate buffer solution 145.8 mg / mL and an appropriate amount of citric acid were added to adjust the pH of the solution to about 7.4, and the total volume was adjusted to 30 mL with water for injection. Thereafter, 1 mL of the solution of the produced composition was dispensed into a 3 mL glass vial and freeze-dried. The formulation of the preparation is shown in Table 4, and the lyophilization conditions are shown in Table 5.
安定化剤として、メチオニンのかわりにチオグリコール酸ナトリウムを用い、１００ｍｇ／ｍＬのチオグリコール酸ナトリウムの水溶液１．２ｍＬを添加した以外は、実施例２と同様である。
参考例４
The same as Example 2 except that sodium thioglycolate was used instead of methionine as a stabilizer and 1.2 mL of a 100 mg / mL aqueous solution of sodium thioglycolate was added.
Reference example 4
安定化剤を配合しないこと以外は、実施例２と同様である。
参考例５
The same as Example 2 except that no stabilizer is blended.
Reference Example 5
安定化剤として、メチオニンのかわりにアルファチオグリセリンを用い、１００ｍｇ／ｍＬのアルファチオグリセリンの水溶液１．２ｍＬを添加した以外は、実施例２と同様である。 The same as Example 2 except that alpha thioglycerin was used instead of methionine as a stabilizer and 1.2 mL of an aqueous solution of 100 mg / mL alpha thioglycerin was added.
糖または糖アルコールとして、マルトースのかわりにスクロース（３００ｍｇ／ｍLを９ｍL 以下スクロース水溶液はこの濃度）を用いた以外は、実施例２と同様である。 As in the case of Example 2, except that sucrose (9 mg or less of 300 mg / mL of sucrose aqueous solution at this concentration) is used as sugar or sugar alcohol instead of maltose.
安定化剤として、メチオニンのかわりにチオグリコール酸ナトリウムを用い、１００ｍｇ／ｍＬのチオグリコール酸ナトリウム水溶液１．２ｍＬを添加し、糖または糖アルコールとして、マルトースのかわりにスクロースを用いた以外は、実施例２と同様である。
参考例６
As a stabilizer, sodium thioglycolate was used in place of methionine, 1.2 mL of 100 mg / mL sodium thioglycolate aqueous solution was added, and sucrose was used as sugar or sugar alcohol instead of maltose. Similar to Example 2.
Reference Example 6
安定化剤を配合せず、糖および／または糖アルコールとして、マルトースのかわりにスクロースを用いた以外は、実施例２と同様である。
参考例７
Example 2 is the same as Example 2 except that sucrose is used in place of maltose as the sugar and / or sugar alcohol without adding a stabilizer.
Reference Example 7
安定化剤として、メチオニンのかわりにアルファチオグリセリンを用い、１００ｍｇ／ｍＬのアルファチオグリセリンの水溶液１．２ｍＬを添加し、糖および／または糖アルコールとして、マルトースのかわりにスクロースを用いた以外は、実施例２と同様である。 As a stabilizer, alpha thioglycerin was used instead of methionine, 1.2 mL of 100 mg / mL aqueous solution of alpha thioglycerin was added, and sucrose was used as sugar and / or sugar alcohol instead of maltose. Similar to the second embodiment.
（試験方法）
調製した凍結乾燥品を２５℃、６０％RH下で２ヶ月間および４０℃、７５％RH下で２ヶ月間保存した。その後、１ｍＬの蒸留水に溶解し、その溶液を実施例１と同様、
ＨＰＬＣ分析をおこない、酸化体の量比およびＩＬ−２の含量を測定した。
酸化体量の算出方法、酸化体の量比の算出方法は、実施例１と同様である。また、ＩＬ−２の含量％は以下の式で算出した。
表６に糖および／または糖アルコールをマルトースとした場合の酸化体の量比、表７に糖および／または糖アルコールをスクロースとした場合の酸化体の量比をそれぞれ示した。その結果、メチオニン、チオグリコール酸ナトリウムおよびアルファチオグリセリンを配合した凍結乾燥品は、安定化剤を配合していない凍結乾燥品に比べ、酸化体の量が低減でき、特に保存後の酸化体量の低減に高い効果がみられた。さらに、糖をスクロースにした場合、マルトースに比べ、酸化体の量比は低い傾向にあった。
表８に糖および／または糖アルコールをマルトースとした場合のＩＬ−２含量、表９に糖および／または糖アルコールをスクロースとした場合のＩＬ−２含量をそれぞれ示した。なお、イニシャル時の含量が１００％に達していないのは、主に標準品と実施例の検体とのＩＬ−２仕込み量の若干の差による。その結果、安定化剤を配合しない場合に比べ、メチオニンおよびチオグリコール酸ナトリウムを配合した凍結乾燥品のＩＬ−２の含量は２ヶ月保存後もイニシャルと同様、ほぼ保持された。一方、アルファチオグリセリンを配合した凍結乾燥品において、凍結乾燥品のＩＬ−２の含量は、安定化剤を配合しない場合に比べ低く、保存後はＩＬ−２の二量体形成の影響により含量が低下した。さらに、メチオニンおよびチオグリコール酸ナトリウムを配合した凍結乾燥品は、酸化体の量の結果と同様、糖をスクロースにした場合、マルトースの場合に比べＩＬ−２の含量はイニシャルと同様、高く保持された。
(Test method)
The prepared lyophilized product was stored at 25 ° C. under 60% RH for 2 months and at 40 ° C. under 75% RH for 2 months. Thereafter, it was dissolved in 1 mL of distilled water, and the solution was the same as in Example 1.
HPLC analysis was performed to determine the amount ratio of oxidant and the content of IL-2.
The method for calculating the amount of oxidant and the method for calculating the amount ratio of oxidant are the same as in Example 1. The IL-2 content% was calculated by the following formula.
Table 6 shows the ratio of the oxidant when sugar and / or sugar alcohol is maltose, and Table 7 shows the ratio of the oxidant when sugar and / or sugar alcohol is sucrose. As a result, the lyophilized product containing methionine, sodium thioglycolate and alpha thioglycerin can reduce the amount of oxidant compared to the lyophilized product not containing the stabilizer, especially the amount of oxidant after storage. High effect was seen in reduction of Furthermore, when the sugar was sucrose, the amount ratio of the oxidant tended to be lower than that of maltose.
Table 8 shows IL-2 content when sugar and / or sugar alcohol is maltose, and Table 9 shows IL-2 content when sugar and / or sugar alcohol is sucrose. The reason why the initial content does not reach 100% is mainly due to a slight difference in the IL-2 preparation amount between the standard product and the sample of the example. As a result, the IL-2 content of the lyophilized product containing methionine and sodium thioglycolate was almost retained after the storage for 2 months, as compared to the case where no stabilizer was added. On the other hand, in the freeze-dried product formulated with alpha thioglycerin, the content of IL-2 in the freeze-dried product is lower than when no stabilizer is added, and after storage due to the effect of dimer formation of IL-2 Decreased. Furthermore, in the lyophilized product containing methionine and sodium thioglycolate, the content of IL-2 is maintained higher when the sugar is changed to sucrose as with the result of the oxidant, as compared with the case of maltose. It was.
本発明の組成物は、酸化体をほとんど生じず、しかもインターロイキン−２（ＩＬ−２）の含量がほとんど低下しない組成物として、利用できる。
The composition of the present invention can be used as a composition that hardly generates an oxidant and that hardly reduces the content of interleukin-2 (IL-2).
Claims (15)
The method for stabilizing interleukin-2 according to claim 14, wherein the stabilizer is methionine and / or sodium thioglycolate.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004326291A JP2006137678A (en) | 2004-11-10 | 2004-11-10 | Interleukin-2 composition |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004326291A JP2006137678A (en) | 2004-11-10 | 2004-11-10 | Interleukin-2 composition |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2006137678A true JP2006137678A (en) | 2006-06-01 |
Family
ID=36618726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2004326291A Pending JP2006137678A (en) | 2004-11-10 | 2004-11-10 | Interleukin-2 composition |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2006137678A (en) |
Cited By (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011001273A (en) * | 2009-06-16 | 2011-01-06 | Eci Inc | WATER-SOLUBLE PREPARATION COMPRISING eMIP AS ACTIVE INGREDIENT |
| JP2013510821A (en) * | 2009-11-13 | 2013-03-28 | サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | Pharmaceutical composition comprising a GLP-1 agonist and methionine |
| US9364519B2 (en) | 2011-09-01 | 2016-06-14 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| US9408893B2 (en) | 2011-08-29 | 2016-08-09 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for use in glycemic control in diabetes type 2 patients |
| US9526764B2 (en) | 2008-10-17 | 2016-12-27 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Combination of an insulin and a GLP-1-agonist |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| US9950039B2 (en) | 2014-12-12 | 2018-04-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin glargine/lixisenatide fixed ratio formulation |
| US9981013B2 (en) | 2010-08-30 | 2018-05-29 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Use of AVE0010 for the treatment of diabetes mellitus type 2 |
| US10004747B2 (en) | 2010-05-05 | 2018-06-26 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination therapy |
| US10022379B2 (en) | 2008-04-03 | 2018-07-17 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | DPP-IV inhibitor combined with a further antidiabetic agent, tablets comprising such formulations, their use and process for their preparation |
| US10023574B2 (en) | 2002-08-21 | 2018-07-17 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | 8-[3-amino-piperidin-1-yl]-xanthines, the preparation thereof and their use as pharmaceutical compositions |
| US10034877B2 (en) | 2008-08-06 | 2018-07-31 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Treatment for diabetes in patients inappropriate for metformin therapy |
| US10080754B2 (en) | 2006-05-04 | 2018-09-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Uses of DPP IV inhibitors |
| US10092571B2 (en) | 2009-11-27 | 2018-10-09 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Treatment of genotyped diabetic patients with DPP-IV inhibitors such as linagliptin |
| US10155000B2 (en) | 2016-06-10 | 2018-12-18 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Medical use of pharmaceutical combination or composition |
| US10159713B2 (en) | 2015-03-18 | 2018-12-25 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Treatment of type 2 diabetes mellitus patients |
| US10195203B2 (en) | 2012-05-14 | 2019-02-05 | Boehringr Ingelheim International GmbH | Use of a DPP-4 inhibitor in podocytes related disorders and/or nephrotic syndrome |
| US10301313B2 (en) | 2006-05-04 | 2019-05-28 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Polymorphs |
| US10434147B2 (en) | 2015-03-13 | 2019-10-08 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Treatment type 2 diabetes mellitus patients |
| US11033552B2 (en) | 2006-05-04 | 2021-06-15 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | DPP IV inhibitor formulations |
| US11911387B2 (en) | 2010-11-15 | 2024-02-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Vasoprotective and cardioprotective antidiabetic therapy |
| US11911388B2 (en) | 2008-10-16 | 2024-02-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Treatment for diabetes in patients with insufficient glycemic control despite therapy with an oral or non-oral antidiabetic drug |
Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0327320A (en) * | 1989-06-26 | 1991-02-05 | Ajinomoto Co Inc | Human b cell differentiation factor pharmaceutical composition |
| WO1992004041A1 (en) * | 1990-08-31 | 1992-03-19 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | Remedy for corneal damages |
| JPH06145063A (en) * | 1992-11-04 | 1994-05-24 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | Preventive and therapeutic agent for hepatic disease |
| JPH09301891A (en) * | 1996-03-15 | 1997-11-25 | Senju Pharmaceut Co Ltd | Ocular axial length control agent, preventive and therapeutic agent for hypometropia or hypermetropia |
| JPH10158188A (en) * | 1996-11-29 | 1998-06-16 | Senju Pharmaceut Co Ltd | Composition for treating cornea |
| JP2002101879A (en) * | 2000-09-29 | 2002-04-09 | Toray Ind Inc | Useful protein composition and method for producing the same |
| JP2002154985A (en) * | 2000-01-31 | 2002-05-28 | Santen Pharmaceut Co Ltd | Therapeutic agent for eye disease |
| WO2003006501A2 (en) * | 2001-07-11 | 2003-01-23 | Maxygen Holdings, Ltd. | G-csf conjugates |
| JP2003519478A (en) * | 2000-01-10 | 2003-06-24 | マキシゲン・ホールディングズ・リミテッド | G-CSF conjugate |
| WO2003055512A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Novo Nordisk Health Care Ag | Liquid composition of factor vii polypeptides |
| WO2003055511A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Novo Nordisk A/S | Liquid composition of modified factor vii polypeptides |
| JP2003522735A (en) * | 1999-07-15 | 2003-07-29 | ジェネティクス インスティチュート，エルエルシー | Composition for IL-11 |
| JP2003533487A (en) * | 2000-05-15 | 2003-11-11 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | New pharmaceutical composition |
| WO2004028557A1 (en) * | 2002-09-26 | 2004-04-08 | Shionogi & Co., Ltd. | Stabilized protein compositions |
| JP2004529180A (en) * | 2001-05-11 | 2004-09-24 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | Compositions for use in treating IgE-related disorders |
-
2004
- 2004-11-10 JP JP2004326291A patent/JP2006137678A/en active Pending
Patent Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0327320A (en) * | 1989-06-26 | 1991-02-05 | Ajinomoto Co Inc | Human b cell differentiation factor pharmaceutical composition |
| WO1992004041A1 (en) * | 1990-08-31 | 1992-03-19 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | Remedy for corneal damages |
| JPH06145063A (en) * | 1992-11-04 | 1994-05-24 | Fujisawa Pharmaceut Co Ltd | Preventive and therapeutic agent for hepatic disease |
| JPH09301891A (en) * | 1996-03-15 | 1997-11-25 | Senju Pharmaceut Co Ltd | Ocular axial length control agent, preventive and therapeutic agent for hypometropia or hypermetropia |
| JPH10158188A (en) * | 1996-11-29 | 1998-06-16 | Senju Pharmaceut Co Ltd | Composition for treating cornea |
| JP2003522735A (en) * | 1999-07-15 | 2003-07-29 | ジェネティクス インスティチュート，エルエルシー | Composition for IL-11 |
| JP2003519478A (en) * | 2000-01-10 | 2003-06-24 | マキシゲン・ホールディングズ・リミテッド | G-CSF conjugate |
| JP2002154985A (en) * | 2000-01-31 | 2002-05-28 | Santen Pharmaceut Co Ltd | Therapeutic agent for eye disease |
| JP2003533487A (en) * | 2000-05-15 | 2003-11-11 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | New pharmaceutical composition |
| JP2002101879A (en) * | 2000-09-29 | 2002-04-09 | Toray Ind Inc | Useful protein composition and method for producing the same |
| JP2004529180A (en) * | 2001-05-11 | 2004-09-24 | ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト | Compositions for use in treating IgE-related disorders |
| WO2003006501A2 (en) * | 2001-07-11 | 2003-01-23 | Maxygen Holdings, Ltd. | G-csf conjugates |
| WO2003055512A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Novo Nordisk Health Care Ag | Liquid composition of factor vii polypeptides |
| WO2003055511A1 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Novo Nordisk A/S | Liquid composition of modified factor vii polypeptides |
| WO2004028557A1 (en) * | 2002-09-26 | 2004-04-08 | Shionogi & Co., Ltd. | Stabilized protein compositions |
Cited By (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10202383B2 (en) | 2002-08-21 | 2019-02-12 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | 8-[3-amino-piperidin-1-yl]-xanthines, the preparation thereof and their use as pharmaceutical compositions |
| US10023574B2 (en) | 2002-08-21 | 2018-07-17 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | 8-[3-amino-piperidin-1-yl]-xanthines, the preparation thereof and their use as pharmaceutical compositions |
| US11919903B2 (en) | 2006-05-04 | 2024-03-05 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Polymorphs |
| US11291668B2 (en) | 2006-05-04 | 2022-04-05 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Uses of DPP IV inhibitors |
| US11084819B2 (en) | 2006-05-04 | 2021-08-10 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Polymorphs |
| US11033552B2 (en) | 2006-05-04 | 2021-06-15 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | DPP IV inhibitor formulations |
| US10301313B2 (en) | 2006-05-04 | 2019-05-28 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Polymorphs |
| US10080754B2 (en) | 2006-05-04 | 2018-09-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Uses of DPP IV inhibitors |
| US10022379B2 (en) | 2008-04-03 | 2018-07-17 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | DPP-IV inhibitor combined with a further antidiabetic agent, tablets comprising such formulations, their use and process for their preparation |
| US10973827B2 (en) | 2008-04-03 | 2021-04-13 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | DPP-IV inhibitor combined with a further antidiabetic agent, tablets comprising such formulations, their use and process for their preparation |
| US10034877B2 (en) | 2008-08-06 | 2018-07-31 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Treatment for diabetes in patients inappropriate for metformin therapy |
| US11911388B2 (en) | 2008-10-16 | 2024-02-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Treatment for diabetes in patients with insufficient glycemic control despite therapy with an oral or non-oral antidiabetic drug |
| US10117909B2 (en) | 2008-10-17 | 2018-11-06 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Combination of an insulin and a GLP-1 agonist |
| US9526764B2 (en) | 2008-10-17 | 2016-12-27 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Combination of an insulin and a GLP-1-agonist |
| JP2011001273A (en) * | 2009-06-16 | 2011-01-06 | Eci Inc | WATER-SOLUBLE PREPARATION COMPRISING eMIP AS ACTIVE INGREDIENT |
| US9707176B2 (en) | 2009-11-13 | 2017-07-18 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical composition comprising a GLP-1 agonist and methionine |
| JP2013510821A (en) * | 2009-11-13 | 2013-03-28 | サノフィ−アベンティス・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | Pharmaceutical composition comprising a GLP-1 agonist and methionine |
| US10028910B2 (en) | 2009-11-13 | 2018-07-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical composition comprising a GLP-1-agonist and methionine |
| US10092571B2 (en) | 2009-11-27 | 2018-10-09 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Treatment of genotyped diabetic patients with DPP-IV inhibitors such as linagliptin |
| US10004747B2 (en) | 2010-05-05 | 2018-06-26 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination therapy |
| US9981013B2 (en) | 2010-08-30 | 2018-05-29 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Use of AVE0010 for the treatment of diabetes mellitus type 2 |
| US11911387B2 (en) | 2010-11-15 | 2024-02-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Vasoprotective and cardioprotective antidiabetic therapy |
| US9821032B2 (en) | 2011-05-13 | 2017-11-21 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for improving glycemic control as add-on therapy to basal insulin |
| US9408893B2 (en) | 2011-08-29 | 2016-08-09 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical combination for use in glycemic control in diabetes type 2 patients |
| US9364519B2 (en) | 2011-09-01 | 2016-06-14 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| US9987332B2 (en) | 2011-09-01 | 2018-06-05 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Pharmaceutical composition for use in the treatment of a neurodegenerative disease |
| US10195203B2 (en) | 2012-05-14 | 2019-02-05 | Boehringr Ingelheim International GmbH | Use of a DPP-4 inhibitor in podocytes related disorders and/or nephrotic syndrome |
| US9950039B2 (en) | 2014-12-12 | 2018-04-24 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Insulin glargine/lixisenatide fixed ratio formulation |
| US10434147B2 (en) | 2015-03-13 | 2019-10-08 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Treatment type 2 diabetes mellitus patients |
| US10159713B2 (en) | 2015-03-18 | 2018-12-25 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Treatment of type 2 diabetes mellitus patients |
| US10155000B2 (en) | 2016-06-10 | 2018-12-18 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Medical use of pharmaceutical combination or composition |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2006137678A (en) | Interleukin-2 composition | |
| CN101141975B (en) | Vegf antagonist formulations | |
| ES2408784T3 (en) | Lyophilized HGF preparations | |
| HU202761B (en) | Process for producing stabilized erythropoietin compositions | |
| RU2345772C2 (en) | Lyophilised compositions cci-779 | |
| JP2005533056A (en) | Parenteral antifungal products | |
| KR960012064B1 (en) | Preparation method of interleukin-2 composition | |
| CA2792965A1 (en) | Stable aqueous mia/cd-rap formulations | |
| KR101024511B1 (en) | Liquid preparation comprising oligopeptides and etherified cyclodextrin | |
| JP2002503704A (en) | Pharmaceutical formulations of didemnin compounds | |
| KR101492511B1 (en) | HGF preparation | |
| JP2010120966A (en) | Stabilized protein composition | |
| US8481589B2 (en) | Taxoid-based compositions | |
| CN1802171B (en) | Stable, aqueous solution of human erythropoietin, not containing serum albumin | |
| CZ20023969A3 (en) | Pharmaceutical form for administering peptides, processes of its preparation and use | |
| KR100700963B1 (en) | Lyophilized and liquid preparations comprising a polysaccharide derivative of camptothecin | |
| JP4142149B2 (en) | Vancomycin lyophilized formulation | |
| KR101699677B1 (en) | Formulation for gonadotropins | |
| EP3156071A1 (en) | Stable aqueous adalimumab preparation | |
| US20230068866A1 (en) | Daptomycin formulation | |
| JP7317804B2 (en) | Pharmaceutical compositions and methods of preparation of docetaxel conjugates | |
| WO2019130228A1 (en) | Stable liquid compositions of melphalan | |
| JP2007269793A (en) | STABILIZED INTERFERON-gamma COMPOSITION | |
| JP6706988B2 (en) | Pharmaceutical composition containing bortezomib | |
| JP2006096751A (en) | Sustained-release medicine composition of interleukin 11 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060301 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090414 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090611 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100330 |