【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、低分子キトサン及び／又はそれらの塩を有効成分として含む経口糖尿病治療薬効果促進剤に関する。より具体的には、糖尿病治療薬と併用して投与することにより、糖尿病治療の効果を高めることができ、糖尿病治療薬の投与量を低減することが可能となる糖尿病治療薬効果促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病はインスリンの分泌不全、もしくはその作用不足によって起こる高血糖を特徴とする代謝疾患であり、大別すると１型（インスリン依存型、一部はインスリン非依存型から始まる緩徐進行性）糖尿病と、２型（インスリン非依存型）糖尿病に分類される。更に、２型糖尿病は、肥満で高インスリン血症、インスリン抵抗性（インスリン作用障害）を特徴とするもの、非肥満でインスリン分泌障害を特徴とするもの、及び両障害を持つものに分類される。
【０００３】
２型糖尿病は、成人期以降に発症することが多く、過栄養、運動不足、ストレス、肥満等の生活要因が加わって発症することから「生活習慣病」であると認識されている。
【０００４】
糖尿病の治療法には、運動療法、食物療法、薬物療法があり、薬物療法には、糖尿病のタイプに応じて、糖尿病治療薬として、インスリン製剤や、経口血糖降下剤であるスルフォニル尿素剤、ビグアナイド剤、チアゾリジン誘導体、α−グルコシダーゼ阻害剤、フェニルアラニン誘導体等が用いられている。
【０００５】
一方、キトサンは、カニ、エビ等の甲殻類の殻等から調製されるキチン（Ｎ−アセチルグルコサミンのポリマー）を脱アセチル化することによって得られるグルコサミンのポリマーであり、様々な生理効果を有していることが知られている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、従来の糖尿病治療薬は、その使用に際しては充分な注意が必要とされ、投与量や投与するタイミング等を間違えると、低血糖症状、胃腸障害、肝障害、皮膚障害等の副作用が現われることがあり、特に、長期間投与する場合に問題となっていた。
【０００７】
したがって、本発明の目的は、糖尿病治療薬と併用することにより、糖尿病治療の効果を高め、糖尿病の諸症状を効果的に改善することができ、該糖尿病治療薬の投与量を低減して、その副作用を回避することが可能となる糖尿病治療薬効果促進剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するため、本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、糖尿病治療薬と併用した際に、その効果を高めるための糖尿病治療薬効果促進剤であって、低分子化キトサン及び／又はそれらの塩を有効成分として含む経口摂取用の組成物からなることを特徴とする。
【０００９】
本発明の糖尿病治療薬効果促進剤においては、前記低分子化キトサンの平均分子量は、１０，０００〜３０，０００であることが好ましい。
【００１０】
また、前記低分子化キトサン及び／又はそれらの塩を０．０１〜１０質量％含むことが好ましい。
【００１１】
更に、本発明の糖尿病治療薬効果促進剤と併用される糖尿病治療薬は、インスリン製剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジン誘導体、ビグアナイド剤、フェニルアラニン誘導体、スルフォニル尿素剤から選ばれた少なくとも１種であることが好ましい。
【００１２】
本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、低分子化キトサン及び／又はそれらの塩を有効成分として含み、従来から用いられている糖尿病治療薬と併用して投与することにより、糖尿病治療の効果を高め、高血糖、高インスリン血症、高トリグリセリド血症等の糖尿病に伴う諸症状を効果的に改善することができる。その結果、糖尿病治療薬の投与量を減らすことが可能となるので、懸念される副作用を回避することができる。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明の糖尿病治療薬効果促進剤の有効成分である低分子化キトサンとは、キチンの脱アセチル化物であるキトサンの加水分解物であり、好ましくは平均分子量１０，０００〜３０，０００のものが用いられ、より好ましくは平均分子量１５，０００〜２５，０００のものが用いられ、特に好ましくは平均分子量２０，０００のものが用いられる。例えば、平均分子量２０，０００の低分子化キトサンは、分子量１，０００〜１００，０００の範囲に分布するキトサン分解物の混合物である。
【００１４】
上記低分子化キトサンは、遊離体であってもよく塩を形成していてもよい。低分子化キトサンの塩類としては、薬学的に許容されるものであればよく、具体的には、塩酸塩、乳酸塩、酢酸塩、硫酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、アジピン酸塩、グルコン酸塩、酒石酸塩等が例示できる。
【００１５】
低分子化キトサンは、キトサンを酸又は酵素で加水分解することにより調製することができ、例えば、キトサンを塩酸、酢酸、蟻酸等の酸と共に加熱した後、酸を除去するか又は中和脱塩し、結晶化等により粉末化する方法、あるいはキトサンを希酸に溶解後、キトサナーゼ、Ｄ−グルコサミニダーゼ等のキトサン分解酵素を作用させる方法等によって行うことができる。このようにして得られたキトサン加水分解物はそのまま用いてもよく、カラムクロマトグラフィーや溶剤分画等の方法によって精製してから用いてもよい。なお、加水分解条件は、上記の平均分子量範囲のキトサン分解物（低分子化キトサン）が得られるように適宜設定すればよい。
【００１６】
本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、上記の有効成分の他に、薬学的に許容される添加剤を適宜含むことができる。このような添加剤としては、賦形剤、ミネラル類、ビタミン類、糖類、香料、油脂、アミノ酸等が挙げられる。
【００１７】
一方、本発明の糖尿病治療薬効果促進剤と併用される糖尿病治療薬としては、既知の糖尿病治療薬を用いることができる。具体的には、インスリン製剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、チアゾリジン誘導体、ビグアナイド剤、フェニルアラニン誘導体、スルフォニル尿素剤から選ばれた少なくとも１種が好ましく用いられる。
【００１８】
インスリン製剤は、基本的にはインスリン分泌不全の１型糖尿病にホルモン補充療法として使用されている注射剤であるが、経口血糖降下剤で血糖をコントロールできない２型糖尿病にも頻繁に使用されており、具体的には、速効型、混合型、中間型、持続型インスリン製剤等が例示できる。
【００１９】
α−グルコシダーゼ阻害剤は、食事による糖類の消化、吸収を阻害することで一時的に食後の高血糖を抑制する経口薬であり、具体的にはアカルボース、ボグリボース、ミグリトール等が例示できる。
【００２０】
チアゾリジン誘導体は、細胞レベルでインスリン感受性を高めてインスリンの作用発現を正常化する経口薬であり、具体的にはピオグリタゾン、ロシグリタゾン等が例示できる。
【００２１】
ビグアナイド剤は、肝臓からのブドウ糖の放出を妨げ、また、筋肉等へのブドウ糖の取り込みを促進させるなどして血糖を低下させる経口薬であり、最近そのインスリン抵抗性改善作用が注目され、インスリン抵抗性改善薬と共に肥満合併糖尿病患者に有効な薬剤と考えられており、具体的にはメトフォルミン、ブホルミン等が例示できる。
【００２２】
スルフォニル尿素剤は、膵臓のβ細胞に作用してインスリンの分泌を促進することにより血糖を低下させる経口薬であり、具体的にはトリブタミド、グリクラジド、グリベンクラミド、グリメピド等が例示できる。
【００２３】
フェニルアラニン誘導体は、スルフォニル尿素剤と同様に膵β細胞からのインスリン分泌を促進することにより血糖を低下させるが、スルフォニル尿素剤と比較して、腸管からの吸収と血中からの消失が速いことから、α−グルコシダーゼ阻害剤と同様に主に食後の高血糖が認められる場合に使用されている経口薬であり、具体的にはナテグリニド等が例示できる。
【００２４】
本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、上記のような糖尿病治療薬を使用している患者に対して経口的に投与されるものである。したがって、その製品形態は、経口投与に適した形態であれば特に制限されず、例えば、錠剤、粉末、顆粒、溶液、カプセル剤等が挙げられる。
【００２５】
本発明の糖尿病治療薬効果促進剤の服用量は、成人１日当たり低分子化キトサン及び／又はそれらの塩換算で０．１〜５，０００ｍｇが好ましく、１００〜１，０００ｍｇがより好ましい。なお、低分子化キトサンの安全性については、既に確認されているところであるが、念のためラットにおける経口投与での急性毒性試験結果を記載すると、ＬＤ５０＞５ｇ／ｋｇ以上であった。
【００２６】
また、上記の糖尿病治療薬については、各薬剤に成人１日当たりの投与量が決められているため、それに基づいて投与量を設定すればよい。例えば、アカルボース（α−グルコシダーゼ阻害剤）は、成人では通常１回１００ｍｇを１日３回、食前に服用するように定められている。また、ピオグリタゾン（チアゾリジン誘導体）は、成人では１日１回、塩酸ピオグリタゾンとして１５ｍｇあるいは３０ｍｇ服用するように定められている。
【００２７】
また、本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、例えば、滋養強壮ドリンク、ミネラルウォーター、調味料、たれ、ドレッシング等の飲食品や、経口的に投与される上記糖尿病治療薬（経口血糖降下剤）に配合して摂取することもできる。上記飲食品や経口血糖降下剤への糖尿病治療薬効果促進剤の配合量は、上記の服用量に基づいて設定すればよいが、通常、低分子化キトサン及び／又はそれらの塩換算で０．０１〜１０質量％が好ましく、０．１〜１質量％がより好ましい。
【００２８】
なお、本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、上記糖尿病治療薬と同時に服用してもよく、個別に服用してもよい。
【００２９】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
製造例
キトサン３．０ｋｇを３００Ｌの水に分散させ、撹拌しながら乳酸を加えて溶解させた（ｐＨ５．０）。この溶液に、キトサナーゼ（商品名「キトサナーゼ−Ｕ」、明治製菓株式会社製）を１５００Ｕ（力価はメーカー表示による）加え、４５℃で分解反応を行った。この反応液をフィルタープレス濾過して不溶物を除去した後、限外濾過膜処理した。限外濾過膜処理は、マイクローザＡＣＶ−３０１０（商品名、旭化成工業株式会社製、分画分子量１３，０００）で処理した非透過側液を回収し、次いでマイクローザＡＨＶ−３０１０（商品名、旭化成工業株式会社製、分画分子量５０，０００）で処理して透過側の液を回収した。この透過液を凍結乾燥して、５７０ｇの低分子化キトサンを得た。この低分子化キトサンを用いて後述する実施例の実験を行った。
【００３０】
なお、ゲル浸透クロマトグラフィー（カラム：「ＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ２５００ＰＷＸＬ」、「ＴＳＫ−ＧＥＬ Ｇ３０００ＰＷＸＬ」（いずれも東ソー製）、移動相：０．２Ｍ ＮａＣｌ、流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ、検出：ＲＩ、ＨＰＬＣポンプ：日立Ｌ−７１００）で得られた低分子化キトサンの分子量を測定した結果、分子量分布は１５，０００〜３０，０００の範囲で、平均分子量は約２２，０００であった。
【００３１】
実施例１（α−グルコシダーゼ阻害剤との併用）
８週齢雄性ＩＣＲマウス（日本ＳＬＣ株式会社より購入）４０匹を５群（ｎ＝８）に分け、▲１▼群には、０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．５）を腹腔内投与し、▲２▼〜▲５▼群には、インスリン分泌障害を持つ緩徐進行性２型糖尿病（緩徐進行性１型糖尿病を含む）を誘発させるためにクエン酸緩衝液に溶解したストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を体重ｋｇ当たり１００ｍｇとなるように腹腔内投与して、通常飼料及び蒸留水を与えて２週間飼育した。そして、２週間目以降、各群のマウスには、以下に示す被験物質（飼料と飲料水）を与えた。
▲１▼正常群（以下、Ｎ群）：通常飼料、蒸留水を与えた。
▲２▼糖尿病対照群（以下、ＤＣ群）：通常飼料、蒸留水を与えた。
▲３▼アカルボース群（以下、ＤＣ＋Ａ群）：アカルボース含有飼料（アカルボース４００ｍｇ／粉末ｋｇとなるように通常飼料に混ぜたもの。以下同じ。）、蒸留水を与えた。
▲４▼低分子キトサン群（以下、ＤＣ＋ＬＣ群）：通常飼料、０．４（ｗ／ｖ）％低分子キトサン含有水を与えた。
▲５▼アカルボース及び低分子キトサン群（以下、ＤＣ＋Ａ＋ＬＣ群）：アカルボース含有飼料、０．４（ｗ／ｖ）％低分子キトサン含有水を与えた。
【００３２】
そして、各群のマウスからＳＴＺあるいはクエン酸緩衝液処理後１２週間まで適当な間隔で採血を行い、非絶食時の血清グルコース量（血糖値）を、「グルコースＣＩＩ−テストワコー」（商品名、和光純薬工業製）を用いて測定した。
【００３３】
更に、各群のマウスを用いて経口グルコース負荷試験を行った。すなわち、ＳＴＺ処理後１１週目にマウスを１８時間絶食させ、グルコース（２ｇ／ｋｇ体重）を経口投与し、グルコース負荷前（−０．５時間）及び負荷後（０．５、１、２及び４時間）に採血し、血清グルコース量（血糖値）を測定した。
【００３４】
図１は、実験期間中の各群の非絶食時の血清グルコース量（血糖値）の変動の推移を表したものである。図１から、Ｎ群の血糖値は安定した推移（１７９〜１９４ｍｇ／ｄｌ）を示しているのに対して、ＤＣ群の血糖値はＳＴＺ処理後、経週的に増加を続け、ＳＴＺ処理後２週目以降、Ｎ群に対して有意に高い値を示し、糖尿病が誘発されていることが分かる。
【００３５】
一方、ＤＣ＋Ａ群、ＤＣ＋ＬＣ群、ＤＣ＋Ａ＋ＬＣ群では、被験物質投与開始後２週間目（ＳＴＺ処理後４週目）までの血糖値は、ＤＣ群との間に明らかな差は認められなかったが、被験物質投与開始後４週間目（ＳＴＺ処理後６週目）以降、ＤＣ群との差が広がり、血糖値の増加を顕著に抑制していることが分かる。特に、被験物質投与開始後１０週間目（ＳＴＺ処理後１２週目）の血糖値は、ＤＣ群（６５６±３８ｍｇ／ｄｌ）に対して、ＤＣ＋Ａ群（３４１±３３ｍｇ／ｄｌ）、ＤＣ＋ＬＣ群（３６９±２４ｍｇ／ｄｌ）、ＤＣ＋Ａ＋ＬＣ群（２７２±２９ｍｇ／ｄｌ）は有意に低く、ＤＣ＋Ａ＋ＬＣ群が最も低値を示していることが分かる。
【００３６】
図２は、経口グルコース負荷試験の結果を表している。図２から、グルコース負荷前（絶食時）のＤＣ群の血糖値は、Ｎ群（１３５±１７ｍｇ／ｄｌ）と比較して２．５倍の高値を示していることが分かる。グルコース負荷後、いずれの群においても０．５時間後に血糖値はピークに達し、以後４時間まで徐々に減少した。特に、Ｎ群（２８８±２９ｍｇ／ｄｌ）に比べて、ＤＣ群（６４２±４１ｍｇ／ｄｌ）では著しく上昇していることが分かる。
【００３７】
グルコース負荷後の血糖値は、ＤＣ＋Ａ群及びＤＣ＋ＬＣ群では、ＤＣ群とＮ群のほぼ中間の値を示し、ＤＣ＋Ａ＋ＬＣ群では、ほぼＮ群に近い値を示しており、低分子キトサンとアカルボースを併用することによって、相乗的な血糖値降下作用が確認された。
【００３８】
以上の結果から、低分子キトサンとアカルボースを併用することによって、緩徐進行性２型糖尿病（緩徐進行性１型糖尿病を含む）の症状を効果的に改善できることが示唆された。
【００３９】
実施例２（チアゾリジン誘導体との併用）
肥満遺伝子を導入した肥満・インスリン抵抗性糖尿病マウスモデル（ＫＫ−Ａｙマウス）を使用して実験を行った。ＫＫ−Ａｙマウスは、生後４週齢から肥満と高血糖が観察され、高インスリン血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性を特徴としている。
【００４０】
５週齢の雄性ＫＫ−Ａｙマウスを日本クレア株式会社より購入し、１３週齢（糖尿病がかなり進行した状態）から、下記▲２▼〜▲５▼に示す被験物質の投与を開始した。また、比較として同じ週齢の正常ＩＣＲマウスを使用し、下記▲１▼に示す被験物質を与えた。
▲１▼正常ＩＣＲ群（以下、ＩＣＲ群）：通常飼料、蒸留水を与えた。
▲２▼ＫＫ−Ａｙマウス群（以下、ＫＫ群）：通常飼料、蒸留水を与えた。
▲３▼ピオグリタゾン群（以下、ＫＫ＋Ｐ群）：ピオグリタゾン含有飼料（ピオグリタゾン６４０ｍｇ／粉末ｋｇとなるように通常飼料に混ぜたもの。以下同じ。）、蒸留水を与えた。
▲４▼低分子キトサン群（以下、ＫＫ＋ＬＣ群）：通常飼料、０．８（ｗ／ｖ）％低分子キトサン含有水を与えた。
▲５▼ピオグリタゾン及び低分子キトサン群（以下、ＫＫ＋Ｐ＋ＬＣ群）：ピオグリタゾン含有飼料、０．８（ｗ／ｖ）％低分子キトサン含有水を与えた。
【００４１】
そして、被験物質投与開始後３日目、１週間目（１４週齢）、７週間目（２０週齢）及び１１週間目（２４週齢）に、各群のマウスから採血を行い、非絶食時の血清グルコース量（血糖値）、インスリン量及びトリグリセリド量を測定した。血清グルコース量はムタローゼ・ＧＯＤ法（商品名「グルコースＣＩＩ−テストワ
コー」、和光純薬工業製）、血清インスリン量はＥＩＡサンドイッチ法（商品名「インスリン測定キット」、森永生化学研究所製）、血清トリグリセリド量はＧＰＯ・ＤＡＯＳ法を用いて測定した。
【００４２】
図３は、実験期間中の各群の血清グルコース量（血糖値）の変動の推移を表したものである。図３から、ＩＣＲ群の非絶食時の血糖値は、安定した推移（１６７〜１８３ｍｇ／ｄｌ）を示しているのに対して、ＫＫ群の血糖値は実験期間中を通して高く（３４５ｍｇ／ｄｌ（１３週齢）、４１６ｍｇ／ｄｌ（１４週齢）、４６５ｍｇ／ｄｌ（２４週齢））、糖尿病状態であることが分かる。
【００４３】
一方、ＫＫ＋Ｐ群、ＫＫ＋ＬＣ群、ＫＫ＋Ｐ＋ＬＣ群では、被験物質投与開始１週目（１４週齢）から、血糖値が顕著に低下し、ＫＫ群に対して有意差が認められた。
【００４４】
図４は、実験期間中の各群の血清インスリン量に対する被験物質投与の影響を示したものである。図４から、ＩＣＲ群マウスの非絶食時の血清インスリン量は、安定した値（約５６０ｐｇ／ｍｌ）を示しているのに対して、ＫＫ群では、高インスリン血症（３０，０００〜３９，０００ｐｇ／ｍｌ）を示していることが分かる。
【００４５】
一方、ＫＫ＋Ｐ群、ＫＫ＋Ｐ＋ＬＣ群では、被験物質投与開始後１週間目（１４週齢）以降、ＫＫ＋ＬＣ群では被験物質投与開始後７週目（２０週齢）以降から、ＫＫ群に対して有意に低い血清インスリン量を示し、高インスリン血症が軽減されていることが分かる。特に、ＫＫ＋Ｐ＋ＬＣ群は、被験物質投与開始後１週間目（１４週齢）以降、最も低値を示していることが分かる。
【００４６】
図５は、実験期間中の血清トリグリセリド量に対する被験物質投与の影響を示したものである。図５から、ＩＣＲ群マウスの非絶食時の血清トリグリセリド量は、安定した値（６５〜１０３ｍｇ／ｄｌ）を示しているのに対して、ＫＫ群では、高トリグリセリド血症（２７２〜３２８ｍｇ／ｄｌ）を示していることが分かる。
【００４７】
一方、ＫＫ＋Ｐ群及びＫＫ＋Ｐ＋ＬＣ群では被験物質投与開始後３日目以降、ＫＫ＋ＬＣ群では被験物質投与開始後１週間目以降、ＫＫ群に比べて有意に低値を示していることが分かる。特に、ＫＫ＋Ｐ＋ＬＣ群は、ほぼＩＣＲ群に近い値を示しており、低分子キトサンとピオグリタゾンを併用することにより、糖尿病に伴う高トリグリセリド血症を顕著に改善できることが分かる。
【００４８】
以上の結果から、低分子キトサンとピオグリタゾンとを併用することにより、肥満でインスリン抵抗性を特徴とする２型糖尿病の諸症状を効果的に改善できることが示唆された。
【００４９】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、低分子化キトサン及び／又はそれらの塩を有効成分として含み、従来から用いられている糖尿病治療薬と併用して投与することにより、糖尿病治療の効果を高め、高血糖、高インスリン血症、高トリグリセリド血症等の糖尿病に伴う諸症状を効果的に改善することができる。その結果、糖尿病治療薬の投与量を減らすことが可能となり、懸念される副作用を回避することができる。
【００５０】
本発明の糖尿病治療薬効果促進剤は、特にインスリン分泌障害を持つ緩徐進行性２型糖尿病（緩徐進行性１型糖尿病を含む）及び肥満でインスリン抵抗性を持つ２型糖尿病に対して有効であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ストレプトゾトシン誘発糖尿病マウスに、低分子化キトサン及び／又はα−グルコシダーゼ阻害剤を投与した際の、各群マウスの非絶食時の血清グルコース量（血糖値）の変動の推移を表した図である。
【図２】低分子化キトサン及び／又はα−グルコシダーゼ阻害剤を投与したストレプトゾトシン誘発糖尿病マウスの経口グルコース負荷試験の結果を表した図である。
【図３】ＫＫ−Ａｙマウスに、低分子化キトサン及び／又はチアゾリジン誘導体を投与した際の、各群マウスの非絶食時の血清グルコース量（血糖値）の変動の推移を表した図である。
【図４】ＫＫ−Ａｙマウスを用いた上記実験における、各群の血清インスリン量の変化を示した図である。
【図５】ＫＫ−Ａｙマウスを用いた上記実験における、各群の血清トリグリセリド量の変化を示した図である。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
TECHNICAL FIELD The present invention relates to an oral diabetes therapeutic agent effect promoter comprising low molecular weight chitosan and / or a salt thereof as an active ingredient. More specifically, the present invention relates to a diabetic therapeutic effect enhancer that can enhance the effect of diabetic treatment and reduce the dose of the diabetic therapeutic drug when administered in combination with the diabetic therapeutic agent.
[0002]
[Prior art]
Diabetes is a metabolic disease characterized by hyperglycemia caused by insufficient secretion of insulin or insufficient action of insulin, and is roughly classified into type 1 (insulin-dependent, slowly progressing partially starting from non-insulin-dependent) diabetes, It is classified as type 2 (non-insulin dependent) diabetes. Further, type 2 diabetes is classified into obesity characterized by hyperinsulinemia, insulin resistance (insulin dysfunction), non-obesity characterized by impaired insulin secretion, and those having both disorders. .
[0003]
Type 2 diabetes often occurs after adulthood and is recognized as a "lifestyle-related disease" because it develops due to the addition of living factors such as overnutrition, lack of exercise, stress, and obesity.
[0004]
Treatment methods for diabetes include exercise therapy, food therapy, and drug therapy.The drug therapy includes insulin preparations, oral hypoglycemic sulfonyl urea drugs, and biguanides, depending on the type of diabetes. Agents, thiazolidine derivatives, α-glucosidase inhibitors, phenylalanine derivatives, and the like.
[0005]
On the other hand, chitosan is a glucosamine polymer obtained by deacetylating chitin (a polymer of N-acetylglucosamine) prepared from crustacean shells such as crabs and shrimps, and has various physiological effects. It is known that
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
However, conventional antidiabetic drugs require careful precautions when used, and improper dosage or timing of administration may cause side effects such as hypoglycemia, gastrointestinal disorders, liver disorders, and skin disorders. This has been a problem especially when administered for a long period of time.
[0007]
Accordingly, an object of the present invention is to enhance the effect of treating diabetes and to effectively improve various symptoms of diabetes by using it in combination with a diabetes treating drug, to reduce the dose of the diabetes treating drug, It is an object of the present invention to provide a therapeutic agent for treating diabetes, which can avoid the side effects.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the diabetes therapeutic agent effect enhancer of the present invention is a diabetes therapeutic agent effect enhancer for enhancing its effect when used in combination with a diabetes therapeutic agent, and includes a low molecular weight chitosan and / or It is characterized by comprising a composition for oral ingestion containing those salts as an active ingredient.
[0009]
In the diabetes drug remedy effect promoter of the present invention, the average molecular weight of the low molecular weight chitosan is preferably 10,000 to 30,000.
[0010]
Further, it is preferable that the low molecular weight chitosan and / or a salt thereof is contained in an amount of 0.01 to 10% by mass.
[0011]
Further, the antidiabetic agent used in combination with the antidiabetic agent effect enhancer of the present invention is at least one selected from an insulin preparation, an α-glucosidase inhibitor, a thiazolidine derivative, a biguanide agent, a phenylalanine derivative, and a sulfonylurea agent. Is preferred.
[0012]
The agent for promoting the therapeutic effect of diabetes of the present invention contains low molecular weight chitosan and / or a salt thereof as an active ingredient, and is administered in combination with a conventionally used therapeutic agent for diabetes, thereby improving the effect of treating diabetes. It can effectively improve various symptoms associated with diabetes, such as hyperglycemia, hyperinsulinemia, and hypertriglyceridemia. As a result, the dose of the therapeutic agent for diabetes can be reduced, so that a side effect of concern can be avoided.
[0013]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The low molecular weight chitosan which is an active ingredient of the antidiabetic drug effect promoter of the present invention is a hydrolyzate of chitosan which is a deacetylated product of chitin, and preferably has an average molecular weight of 10,000 to 30,000. Used, more preferably those having an average molecular weight of 15,000 to 25,000, and particularly preferably those having an average molecular weight of 20,000. For example, low molecular weight chitosan having an average molecular weight of 20,000 is a mixture of chitosan decomposition products distributed in a molecular weight range of 1,000 to 100,000.
[0014]
The low molecular weight chitosan may be in a free form or may form a salt. The salts of low molecular weight chitosan may be pharmaceutically acceptable, specifically, hydrochloride, lactate, acetate, sulfate, citrate, ascorbate, malate, Examples include succinate, adipate, gluconate, tartrate and the like.
[0015]
Low molecular weight chitosan can be prepared by hydrolyzing chitosan with an acid or an enzyme.For example, after heating chitosan with an acid such as hydrochloric acid, acetic acid, formic acid, the acid is removed or neutralized and desalted. Then, the method can be carried out by a method of powdering by crystallization or the like, or a method of dissolving chitosan in a dilute acid and then reacting with chitosan-degrading enzyme such as chitosanase or D-glucosaminidase. The chitosan hydrolyzate thus obtained may be used as it is, or may be used after purification by a method such as column chromatography or solvent fractionation. The hydrolysis conditions may be appropriately set so as to obtain a decomposed product of chitosan (low-molecular-weight chitosan) having the above average molecular weight range.
[0016]
The diabetes therapeutic agent effect promoter of the present invention can appropriately contain a pharmaceutically acceptable additive in addition to the above active ingredients. Such additives include excipients, minerals, vitamins, sugars, fragrances, fats, amino acids, and the like.
[0017]
On the other hand, as the diabetes therapeutic agent used in combination with the diabetes therapeutic agent effect promoter of the present invention, a known diabetes therapeutic agent can be used. Specifically, at least one selected from an insulin preparation, an α-glucosidase inhibitor, a thiazolidine derivative, a biguanide agent, a phenylalanine derivative, and a sulfonylurea agent is preferably used.
[0018]
Insulin preparations are basically injections that are used as hormone replacement therapy for type 1 diabetes with insulin secretion deficiency, but are also frequently used for type 2 diabetes where oral glucose-lowering drugs cannot control blood sugar. Specific examples include a fast-acting, mixed, intermediate, and sustained-type insulin preparation.
[0019]
The α-glucosidase inhibitor is an oral drug that temporarily suppresses postprandial hyperglycemia by inhibiting digestion and absorption of saccharide by meal, and specific examples thereof include acarbose, voglibose, and miglitol.
[0020]
Thiazolidine derivatives are oral drugs that increase insulin sensitivity at the cellular level and normalize the expression of insulin action, and specific examples include pioglitazone, rosiglitazone, and the like.
[0021]
Biguanides are oral drugs that lower the blood glucose level by preventing the release of glucose from the liver and promoting the uptake of glucose into muscle and the like. It is considered to be an effective drug for obese and diabetic patients together with a sex improving drug, and specific examples include metformin and buformin.
[0022]
A sulfonylurea agent is an oral drug that lowers blood glucose by acting on β cells of the pancreas to promote secretion of insulin, and specific examples include tributamide, gliclazide, glibenclamide, and glimepid.
[0023]
Phenylalanine derivatives reduce blood glucose by promoting insulin secretion from pancreatic β-cells, similar to sulfonylurea drugs.However, compared with sulfonylurea drugs, absorption from the intestinal tract and disappearance from the blood are faster. And α-glucosidase inhibitors are oral drugs mainly used when postprandial hyperglycemia is observed, and specific examples include nateglinide and the like.
[0024]
The anti-diabetic drug effect promoter of the present invention is orally administered to a patient using the above-mentioned anti-diabetic drug. Therefore, the product form is not particularly limited as long as it is a form suitable for oral administration, and examples thereof include tablets, powders, granules, solutions, capsules and the like.
[0025]
The dosage of the therapeutic agent for diabetes drug remedy of the present invention is preferably 0.1 to 5,000 mg, more preferably 100 to 1,000 mg in terms of low molecular weight chitosan and / or a salt thereof per adult per day. Although the safety of the low molecular weight chitosan has already been confirmed, an acute toxicity test result by oral administration to rats is LD 50 > 5 g / kg or more, just in case.
[0026]
In addition, as for the above-mentioned drugs for treating diabetes, since the dose per adult for each drug is determined, the dose may be set based on the dose. For example, acarbose (α-glucosidase inhibitor) is prescribed to be taken in an adult usually 100 mg at a time, three times a day before meals. In addition, pioglitazone (thiazolidine derivative) is prescribed so that adults take 15 mg or 30 mg of pioglitazone hydrochloride once a day.
[0027]
In addition, the diabetes therapeutic agent effect enhancer of the present invention includes, for example, foods and drinks such as nutrient tonic drinks, mineral water, seasonings, sauces, and dressings, and the above-mentioned diabetes therapeutic agents orally administered (oral hypoglycemic agents). It can also be taken in combination with. The compounding amount of the diabetes therapeutic agent effect enhancer in the food or drink or the oral hypoglycemic agent may be set based on the above-mentioned dose, and is usually 0.1% in terms of low molecular weight chitosan and / or a salt thereof. It is preferably from 01 to 10% by mass, more preferably from 0.1 to 1% by mass.
[0028]
The antidiabetic drug effect promoter of the present invention may be taken simultaneously with the above-mentioned antidiabetic drug, or may be taken individually.
[0029]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to examples.
Production Example 3.0 kg of chitosan was dispersed in 300 L of water, and lactic acid was added and dissolved while stirring (pH 5.0). Chitosanase (trade name “Chitosanase-U”, manufactured by Meiji Seika Co., Ltd.) was added to the solution (1500 U) (titer is indicated by the manufacturer), and a decomposition reaction was performed at 45 ° C. The reaction solution was filtered through a filter press to remove insolubles, and then subjected to an ultrafiltration membrane treatment. In the ultrafiltration membrane treatment, the non-permeate-side liquid treated with Microza ACV-3010 (trade name, manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd., molecular weight cut off 13,000) is collected, and then Microza AHV-3010 (trade name, The liquid on the permeate side was recovered by treating with a molecular weight cutoff of 50,000 (manufactured by Asahi Kasei Corporation). This permeate was freeze-dried to obtain 570 g of low molecular weight chitosan. Using this low molecular weight chitosan, an experiment of an example described later was performed.
[0030]
In addition, gel permeation chromatography (column: "TSK-GEL G2500PWXL", "TSK-GEL G3000PWXL" (all manufactured by Tosoh), mobile phase: 0.2 M NaCl, flow rate: 0.5 mL / min, detection: RI, HPLC (Pump: Hitachi L-7100) As a result of measuring the molecular weight of the low molecular weight chitosan obtained, the molecular weight distribution was in the range of 15,000 to 30,000, and the average molecular weight was about 22,000.
[0031]
Example 1 (combination use with α-glucosidase inhibitor)
Forty male 8-week-old ICR mice (purchased from SLC Japan) were divided into 5 groups (n = 8), and group (1) was intraperitoneally administered with 0.05 M citrate buffer (pH 4.5). In the groups (2) to (5), streptozotocin (STZ) dissolved in a citrate buffer to induce slowly progressive type 2 diabetes (including slowly progressive type 1 diabetes) with impaired insulin secretion is included. Was administered intraperitoneally to give 100 mg per kg of body weight, and fed with normal feed and distilled water for 2 weeks. From the second week onward, the mice in each group were given the test substances (feed and drinking water) shown below.
{Circle around (1)} Normal group (N group): Normal feed and distilled water were given.
{Circle around (2)} Diabetes control group (hereinafter, DC group): Normal feed and distilled water were given.
{Circle around (3)} Acarbose group (hereinafter referred to as DC + A group): Acarbose-containing feed (mixed with normal feed so as to give acarbose 400 mg / kg of powder; the same applies hereinafter) and distilled water.
{Circle around (4)} Low-molecular-weight chitosan group (hereinafter referred to as DC + LC group): a normal feed and water containing 0.4 (w / v)% low-molecular-weight chitosan were given.
(5) Acarbose and low molecular weight chitosan group (hereinafter referred to as DC + A + LC group): Acarbose-containing feed and 0.4 (w / v)% low molecular weight chitosan-containing water were given.
[0032]
Then, blood from each group of mice was collected at appropriate intervals for up to 12 weeks after treatment with STZ or citrate buffer, and the serum glucose level (blood glucose level) during non-fasting was determined using “Glucose CII-Test Wako” (trade name, (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
[0033]
Further, an oral glucose tolerance test was performed using the mice of each group. That is, 11 weeks after STZ treatment, mice were fasted for 18 hours, and glucose (2 g / kg body weight) was orally administered, before glucose loading (−0.5 hours) and after glucose loading (0.5, 1, 2, and 5). (4 hours), and the blood glucose level (blood sugar level) was measured.
[0034]
FIG. 1 shows changes in the serum glucose level (blood sugar level) of each group during non-fasting during the experiment. From FIG. 1, the blood glucose level of the N group shows a stable transition (179 to 194 mg / dl), whereas the blood glucose level of the DC group continues to increase weekly after the STZ treatment, and after the STZ treatment, From the second week onward, the value significantly increased with respect to the N group, indicating that diabetes was induced.
[0035]
On the other hand, in the DC + A group, the DC + LC group, and the DC + A + LC group, the blood glucose level up to 2 weeks after the start of the administration of the test substance (4 weeks after STZ treatment) was not clearly different from the DC group, From 4 weeks after the start of the administration of the test substance (6 weeks after the STZ treatment), it can be seen that the difference from the DC group has widened and the increase in blood glucose level has been significantly suppressed. In particular, the blood glucose level at 10 weeks after the start of test substance administration (12 weeks after STZ treatment) was higher in the DC group (656 ± 38 mg / dl), in the DC + A group (341 ± 33 mg / dl), and in the DC + LC group (369 weeks). ± 24 mg / dl) and the DC + A + LC group (272 ± 29 mg / dl) were significantly lower, indicating that the DC + A + LC group showed the lowest value.
[0036]
FIG. 2 shows the results of an oral glucose tolerance test. From FIG. 2, it can be seen that the blood glucose level of the DC group before glucose load (during fasting) is 2.5 times higher than that of the N group (135 ± 17 mg / dl). After glucose loading, the blood glucose level reached a peak after 0.5 hour in all groups, and gradually decreased until 4 hours thereafter. In particular, it is found that the DC group (642 ± 41 mg / dl) is significantly increased in comparison with the N group (288 ± 29 mg / dl).
[0037]
In the DC + A group and the DC + LC group, the blood glucose level after the glucose load showed a value almost in the middle between the DC group and the N group, and the DC + A + LC group showed a value almost close to the N group. Both low molecular weight chitosan and acarbose were used in combination. As a result, a synergistic blood glucose lowering effect was confirmed.
[0038]
The above results suggest that the combined use of low molecular weight chitosan and acarbose can effectively improve the symptoms of slowly progressive type 2 diabetes (including slowly progressive type 1 diabetes).
[0039]
Example 2 (combined use with thiazolidine derivative)
The experiment was performed using an obesity / insulin-resistant diabetes mouse model (KK- Ay mouse) into which an obesity gene was introduced. KK- Ay mice are obese and hyperglycemic from 4 weeks of age, and are characterized by hyperinsulinemia, hypertriglyceridemia, and insulin resistance.
[0040]
Five-week-old male KK- Ay mice were purchased from CLEA Japan, and administration of the test substances shown in the following (2) to (5) was started at 13 weeks of age (diabetes significantly advanced). For comparison, normal ICR mice of the same age were used and given the test substances shown in the following (1).
(1) Normal ICR group (hereinafter, ICR group): Normal feed and distilled water were given.
(2) KK- Ay mouse group (hereinafter referred to as KK group): Normal feed and distilled water were given.
{Circle around (3)} Pioglitazone group (hereinafter referred to as KK + P group): A pioglitazone-containing feed (mixed with a normal feed to give pioglitazone 640 mg / kg of powder; the same applies hereinafter) and distilled water were given.
{Circle around (4)} Low molecular weight chitosan group (hereinafter referred to as KK + LC group): a normal feed and water containing 0.8 (w / v)% low molecular weight chitosan were given.
(5) Pioglitazone and low molecular weight chitosan group (hereinafter referred to as KK + P + LC group): Pioglitazone-containing feed and 0.8 (w / v)% low molecular weight chitosan-containing water were given.
[0041]
On the third day, the first week (14 weeks of age), the 7th week (20 weeks of age) and the 11th week (24 weeks of age) after starting the administration of the test substance, blood was collected from the mice of each group and non-fasted. At this time, the serum glucose level (blood glucose level), insulin level and triglyceride level were measured. Serum glucose was measured by the Mutalose GOD method (trade name "Glucose CII-Test Wako", manufactured by Wako Pure Chemical Industries), serum insulin level was measured by EIA sandwich method (trade name "insulin measurement kit", manufactured by Morinaga Chemical Laboratory), Serum triglyceride levels were measured using the GPO / DAOS method.
[0042]
FIG. 3 shows changes in the serum glucose level (blood glucose level) of each group during the experimental period. From FIG. 3, the blood glucose level of the ICR group during non-fasting shows a stable transition (167 to 183 mg / dl), whereas the blood glucose level of the KK group is high throughout the experiment (345 mg / dl (345 mg / dl)). 13 weeks old), 416 mg / dl (14 weeks old), 465 mg / dl (24 weeks old)), indicating that they are in a diabetic state.
[0043]
On the other hand, in the KK + P group, the KK + LC group, and the KK + P + LC group, the blood glucose level was remarkably decreased from the first week (14 weeks of age) of the administration of the test substance, and a significant difference was observed from the KK group.
[0044]
FIG. 4 shows the effect of the administration of the test substance on the serum insulin level of each group during the experimental period. From FIG. 4, the serum insulin level in the non-fasted mice of the ICR group shows a stable value (about 560 pg / ml), whereas in the KK group, hyperinsulinemia (30,000-39, 000 pg / ml).
[0045]
On the other hand, in the KK + P group and the KK + P + LC group, from the first week (14 weeks of age) after the start of the administration of the test substance, and in the KK + LC group, from the 7th week (20 weeks of age) after the start of the administration of the test substance, the KK + P group is significantly different from the KK group. It shows a low serum insulin level, indicating that hyperinsulinemia is reduced. In particular, it can be seen that the KK + P + LC group shows the lowest value after one week (14 weeks of age) after the start of the administration of the test substance.
[0046]
FIG. 5 shows the effect of test substance administration on serum triglyceride levels during the experiment. From FIG. 5, the serum triglyceride amount of the ICR group mice during non-fasting shows a stable value (65 to 103 mg / dl), whereas in the KK group, hypertriglyceridemia (272 to 328 mg / dl) ).
[0047]
On the other hand, it can be seen that the KK + P group and the KK + P + LC group show significantly lower values than the KK group after 3 days after the start of the test substance administration, and the KK + LC group after 1 week after the start of the test substance administration. In particular, the KK + P + LC group shows a value almost close to that of the ICR group, indicating that the combined use of low molecular weight chitosan and pioglitazone can remarkably improve hypertriglyceridemia associated with diabetes.
[0048]
The above results suggest that the combined use of low molecular weight chitosan and pioglitazone can effectively improve various symptoms of type 2 diabetes, which is characterized by insulin resistance and obesity.
[0049]
【The invention's effect】
As described above, the therapeutic agent for diabetes therapeutic agent of the present invention comprises low molecular weight chitosan and / or a salt thereof as an active ingredient, and is administered in combination with a conventionally used therapeutic agent for diabetes. In addition, it can enhance the effects of diabetes treatment and effectively improve various symptoms associated with diabetes such as hyperglycemia, hyperinsulinemia, and hypertriglyceridemia. As a result, it is possible to reduce the dose of the therapeutic agent for diabetes, and to avoid side effects of concern.
[0050]
The therapeutic effect of the therapeutic agent for diabetes of the present invention is particularly effective against slowly progressive type 2 diabetes having insulin secretion disorder (including slowly progressive type 1 diabetes) and obese type 2 diabetes having insulin resistance. it is conceivable that.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows a change in serum glucose level (blood glucose level) of non-fasted mice of each group when a low molecular weight chitosan and / or an α-glucosidase inhibitor was administered to streptozotocin-induced diabetic mice. FIG.
FIG. 2 is a diagram showing the results of an oral glucose tolerance test of streptozotocin-induced diabetic mice to which low molecular weight chitosan and / or α-glucosidase inhibitor was administered.
FIG. 3 is a graph showing changes in the serum glucose level (blood glucose level) of non-fasted mice of each group when a low molecular weight chitosan and / or thiazolidine derivative is administered to KK- Ay mice. is there.
FIG. 4 is a graph showing changes in the amount of serum insulin in each group in the above experiment using KK- Ay mice.
FIG. 5 is a graph showing changes in serum triglyceride levels in each group in the above experiment using KK- Ay mice.
