FR2924947A1

FR2924947A1 - Use of calmodulin-like skin protein or related substances to prevent or treat signs of skin aging

Info

Publication number: FR2924947A1
Application number: FR0759934A
Authority: FR
Inventors: Dominique Bernard; Lucie Simonetti; Isabelle Castiel
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2007-12-18
Filing date: 2007-12-18
Publication date: 2009-06-19
Anticipated expiration: 2027-12-18
Also published as: FR2924947B1

Abstract

Calmodulin-like skin protein (I) or a fragment of (I) or a nucleic acid encoding (I) or a modulator of the activity, stability or expression of (I) is used cosmetically to prevent or treat signs of skin aging or to prepare a therapeutic composition for this purpose. The polypeptide (I) encoded by SEQ ID NO:1 (defined sequence of 858 nucleotides given in the specification) or a fragment of (I) or a nucleic acid encoding (I) or a modulator of the activity, stability or expression of (I) is used cosmetically to prevent or treat signs of skin aging or to prepare a therapeutic composition for this purpose. Independent claims are also included for: (1) use of (I) to screen for compounds capable of modulating the expression or activity of (I); (2) characterizing the condition of epithelial tissue by determining the amount of (I) or (I)-encoding nucleic acid in a tissue sample and comparing the result with a reference value; (3) screening for antiaging compounds by contacting a (I)-expressing cell with a test compound and determining the amount of (I) expressed; (4) characterizing the efficacy of a cosmetic or therapeutic treatment intended to compensate for signs of skin aging by qualitatively or quantitatively characterizing the expression or biological activity of (I); (5) use of (I) or a modulator of the expression of (I) to prepare or improve a multilayer cellular model, especially a reconstructed skin model.

Description

La présente invention a pour objet l'utilisation de la protéine calmodulin-like skin protein (CLSP), de polypeptides dérivés de cette protéine ou d'analogues de ceux-ci, ou d'une séquence nucléique codant pour un tel polypeptide à titre de marqueur pour l'évaluation d'un état notamment chronologique, d'un épithélium, et notamment de l'épiderme. L'invention concerne également l'utilisation, notamment cosmétique et/ou thérapeutique, de la protéine calmodulin-like skin protein (CLSP), de polypeptides dérivés de cette protéine ou d'analogues de ceux-ci, d'une séquence nucléique codant pour un tel polypeptide ou d'un agent modulateur de l'activité, de l'expression et/ou de la stabilité d'un tel polypeptide, notamment pour prévenir les signes de vieillissement cutané, notamment pour prévenir et/ou traiter les peaux âgées. Les épithéliums sont des tissus dont les cellules sont jointives et solidaires les unes des autres et reposent sur une membrane basale. Ils forment un revêtement soit externe, par exemple en surface de la peau, ou l'épiderme, soit interne, en surface d'une muqueuse. Ils peuvent également former des glandes. Plus précisément, ces épithéliums sont des structures dont l'homéostasie résulte de la mise en oeuvre d'un ensemble, finement régulé, de signaux intracellulaires et extracellulaires agissant à toutes les étapes de la prolifération, de la migration, de la différenciation cellulaire, ainsi que de la synthèse des différents composants de la matrice extracellulaire. Ces signaux peuvent, notamment, résulter de l'action de facteurs produits par des kératinocytes. Le maintien des bonnes fonctions physiologiques d'un épithélium implique notamment la différenciation épithéliale terminale et/ou la synthèse de protéoglycannes. En ce qui concerne plus particulièrement l'épiderme, il s'agit d'un épithélium, conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes contenant, notamment, des cellules souches cutanées et constituant la couche germinative de l'épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyhédriques disposées sur la couche basale, une couche dite granuleuse comprenant une à trois couches dites de cellules aplaties contenant des inclusions cytoplasmiques distinctes, les grains de kératohyaline, et enfin, un ensemble de couches supérieures, appelé couche cornée (ou stratum corneum) constituée de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation appelés cornéocytes. The present invention relates to the use of the protein calmodulin-like skin protein (CLSP), polypeptides derived from this protein or analogs thereof, or a nucleic sequence encoding such a polypeptide as a marker for the evaluation of a particular chronological state, of an epithelium, and in particular of the epidermis. The invention also relates to the use, in particular cosmetic and / or therapeutic, of the calmodulin-like skin protein (CLSP) protein, polypeptides derived from this protein or analogs thereof, a nucleic acid sequence coding for such a polypeptide or an agent modulating the activity, the expression and / or the stability of such a polypeptide, in particular for preventing the signs of skin aging, in particular for preventing and / or treating aged skin. Epithelia are tissues whose cells are contiguous and integral with one another and rest on a basement membrane. They form an outer coating, for example on the surface of the skin, or the epidermis, or internal, on the surface of a mucosa. They can also form glands. More specifically, these epithelia are structures whose homeostasis results from the implementation of a finely regulated set of intracellular and extracellular signals acting at all stages of proliferation, migration, cell differentiation and than the synthesis of the different components of the extracellular matrix. These signals may, in particular, result from the action of factors produced by keratinocytes. Maintaining the good physiological functions of an epithelium involves, in particular, terminal epithelial differentiation and / or proteoglycan synthesis. As regards more particularly the epidermis, it is an epithelium, conventionally divided into a basal layer of keratinocytes containing, in particular, cutaneous stem cells and constituting the germinal layer of the epidermis, a so-called thorny layer constituted several layers of polyhedric cells disposed on the basal layer, a so-called granular layer comprising one to three layers of flattened cells containing distinct cytoplasmic inclusions, keratohyaline grains, and finally, a set of upper layers, called the horny layer (or stratum corneum) consisting of end-stage keratinocytes of their differentiation called corneocytes.

Le stratum corneum, la partie la plus externe de la peau qui assure la fonction barrière entre l'organisme et l'environnement, et la tige pilaire, partie émergente du follicule pileux qui constitue la chevelure, représentent tous deux l'aboutissement du processus de différenciation des kératinocytes. La différenciation épidermique suit un processus de maturation dans lequel des kératinocytes de la couche basale se différencient et migrent pour aboutir à la formation des cornéocytes, cellules mortes totalement kératinisées. Cette différenciation est la résultante de phénomènes parfaitement coordonnés qui vont conduire au maintien d'une épaisseur constante et assurer ainsi l'homéostasie de l'épiderme. The stratum corneum, the outermost part of the skin that provides the barrier function between the body and the environment, and the hair shaft, the emergent part of the hair follicle that makes up the hair, are both the culmination of the healing process. differentiation of keratinocytes. Epidermal differentiation follows a maturation process in which basal layer keratinocytes differentiate and migrate to form corneocytes, dead cells that are completely keratinized. This differentiation is the result of perfectly coordinated phenomena that will lead to the maintenance of a constant thickness and thus ensure the homeostasis of the epidermis.

De nombreux troubles ou pathologies cutanées peuvent résulter d'un dysfonctionnement de l'homéostasie de l'épiderme. Ainsi, dans le cas de la peau âgée, ce dysfonctionnement se manifeste généralement par l'apparition de rides (micro-relief et rides profondes), une perte de l'élasticité, un toucher rugueux et une sécheresse. Sur le plan histologique, un aplatissement de la jonction dermo-épidermique et une diminution d'épaisseur du derme et de l'épiderme sont observés. Le contenu en collagène et en glycosaminoglycannes diminue. La fonction barrière de la peau est altérée. L'ensemble de ces phénomènes est accru par l'exposition solaire chronique. De même, ce dysfonctionnement peut être exacerbé chez les femmes, lors de la 20 ménopause. La présente invention résulte plus particulièrement de la caractérisation par les inventeurs au niveau du stratum corneum d'une nouvelle protéine cible, à savoir la protéine calmodulin-like skin protein (CLSP), dont l'expression s'avère être modulée de manière différente au cours du viellissement chronobiologique d'un épithélium. Ainsi, les 25 inventeurs ont, de manière inattendue, constaté une augmentation de l'expression de la CLSP dans le stratum corneum de l'épiderme humain âgé et sec. La CLSP est une protéine de liaison au calcium appartenant à la famille des calmodulines dont la forme précurseur comprend 146 acides aminés. Elle présente un poids moléculaire d'environ 16 kDa et une homologie de séquences d'acides aminés 30 d'environ 52 % avec la calmoduline. Le document US 2004/0142335 observe par le biais d'une analyse transcriptomique une augmentation de l'expression de l'ARNm codant pour la protéine CLSP dans une peau d'un individu âgé comparativement à celle d'un individu jeune. La structure de la CLSP comprend 4 sites de liaison potentiels au calcium de type EF-hand , des sites potentiels de N-glycosylation, de multiples sites potentiels de phosphorylation et un site de myristylation. Many disorders or skin diseases can result from a dysfunction of the homeostasis of the epidermis. Thus, in the case of aged skin, this dysfunction is generally manifested by the appearance of wrinkles (micro-relief and deep wrinkles), a loss of elasticity, a rough feel and dryness. Histologically, a flattening of the dermal-epidermal junction and a decrease in thickness of the dermis and epidermis are observed. The content of collagen and glycosaminoglycans decreases. The barrier function of the skin is impaired. All of these phenomena are increased by chronic sun exposure. Likewise, this dysfunction may be exacerbated in women during the menopause. The present invention results more particularly from the characterization by the inventors at the level of the stratum corneum of a new target protein, namely the protein calmodulin-like skin protein (CLSP), the expression of which appears to be modulated in a different manner than course of chronobiological aging of an epithelium. Thus, the inventors unexpectedly found an increase in the expression of CLSP in the stratum corneum of the aged and dry human epidermis. CLSP is a calcium binding protein belonging to the family of calmodulines whose precursor form comprises 146 amino acids. It has a molecular weight of about 16 kDa and a homology of amino acid sequences of about 52% with calmodulin. Document US 2004/0142335 observes, by means of transcriptomic analysis, an increase in the expression of the mRNA coding for the CLSP protein in a skin of an aged individual compared with that of a young individual. The structure of the CLSP includes 4 potential EF-hand calcium binding sites, potential N-glycosylation sites, multiple potential phosphorylation sites and a myristylation site.

La liaison du calcium à la CLSP induit un changement de sa conformation qui entraîne son activation, en permettant notamment son interaction avec différentes protéines cibles. Il a été montré une augmentation de l'ARNm codant pour la CLSP au cours du vieillissement photo-induit (Urschitz, J. et al., J. Invest. Dermatol., 2002, 119 :3-13) c'est- à-dire du vieillissement résultant d'une exposition répétée de la peau aux rayons du soleil, un processus distinct de celui du vieillissement chronologique, c'est-à-dire du vieillissement physiologique lié à l'écoulement du temps. La CLSP pourrait notamment être impliquée dans la différenciation terminale des kératinocytes (B. Méhul et al., J. Biol. Chem., 2000, Apr. 28 ; 275(17) :12841-7), (EP 1 204 744). Ainsi, selon un de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'au moins un polypeptide dérivé de la CLSP et, notamment, de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence représentée par SEQ ID NO 1, un analogue de celle-ci ou un fragment de celle-ci, ou d'au moins une séquence nucléique codant pour un tel polypeptide, à titre d'outil de caractérisation in vitro ou ex vivo d'un état d'un épithélium, et notamment d'un épiderme. Comme il ressort de la description figurant ci-après, l'utilisation de la protéine CLSP à des fins de diagnostic de l'état d'un épiderme est avantageuse à plusieurs titres. Ainsi, un tel mode de diagnostic s'avère simple de mise en oeuvre, rapide et indolore pour le sujet considéré. De manière avantageuse, il peut être réalisé sur un échantillon de stratum corneum du sujet considéré, simplement prélevé par stripping. La méthode de prélèvement peut par exemple être une technique de type stripping consistant à appliquer sur l'épithélium considéré, tel qu'un épiderme, une portion de ruban adhésif. En décollant ce ruban adhésif, une fraction de l'épithélium, par exemple une fraction épidermique, est prélevée. Après extraction protéique, celle-ci est ensuite analysée par des méthodes conventionnelles, telles que le dosage immuno-enzymatique ou plus particulièrement une analyse Western-Blot. Calcium binding to CLSP induces a change in its conformation which leads to its activation, notably by allowing its interaction with different target proteins. An increase in mRNA coding for CLSP during photoinduced aging has been shown (Urschitz, J. et al., J. Invest Dermatol., 2002, 119: 3-13). -definition of aging resulting from repeated exposure of the skin to sunlight, a process distinct from that of chronological aging, that is physiological aging associated with the passage of time. CLSP could in particular be involved in the terminal differentiation of keratinocytes (B. Méhul et al., J. Biol Chem., 2000, Apr. 28, 275 (17): 12841-7), (EP 1 204 744). Thus, according to one of its aspects, the present invention relates to the use of at least one polypeptide derived from CLSP and, in particular, from an amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence represented in whole or in part by a sequence represented by SEQ ID NO 1, an analogue thereof or a fragment thereof, or at least one nucleic sequence coding for such a polypeptide, as an in vitro or ex vivo characterization tool for a state of an epithelium, and in particular of an epidermis. As is apparent from the description below, the use of the CLSP protein for diagnostic purposes of the condition of an epidermis is advantageous for several reasons. Thus, such a diagnostic mode is simple to implement, fast and painless for the subject. Advantageously, it can be performed on a stratum corneum sample of the subject considered, simply removed by stripping. The sampling method may for example be a stripping type of technique of applying to the epithelium considered, such as an epidermis, a portion of adhesive tape. By detaching this adhesive tape, a fraction of the epithelium, for example an epidermal fraction, is removed. After protein extraction, it is then analyzed by conventional methods, such as the enzyme immunoassay or more particularly a Western-Blot analysis.

En outre et contre toute attente, les inventeurs ont constaté que l'estimation du niveau d'expression et/ou de l'activité biologique de cette protéine dans le stratum corneum s'avère suffisant pour pouvoir qualifier de manière fiable et précise l'état de l'épiderme correspondant. In addition and against all odds, the inventors have found that the estimation of the level of expression and / or the biological activity of this protein in the stratum corneum proves to be sufficient to be able to reliably and accurately qualify the condition. of the corresponding epidermis.

Plus précisément, la présente invention concerne, selon un autre de ses aspects, un procédé, notamment cosmétique, non invasif, pour caractériser l'état de surface d'un épithélium, notamment d'un épiderme, comprenant au moins la caractérisation qualitative ou quantitative de l'expression et/ou de l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention c'est-à-dire la CLSP, de l'un de ses dérivés ou fragments. More precisely, the present invention relates, according to another of its aspects, to a method, in particular a cosmetic, non-invasive method for characterizing the surface state of an epithelium, in particular an epidermis, comprising at least the qualitative or quantitative characterization. the expression and / or the biological activity of a polypeptide according to the invention, that is to say the CLSP, one of its derivatives or fragments.

Selon une variante de réalisation, la donnée ou valeur obtenue peut être appréciée comparativement à une donnée ou valeur de référence, obtenue par exemple à partir d'au moins un épithélium, notamment un épiderme, distinct de celui faisant l'objet de la caractérisation, et dont l'état est connu. La présente invention vise encore selon un autre de ses aspects un procédé, notamment cosmétique, non invasif, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique ou thérapeutique visant à suppléer aux signes de vieillissement cutané liés au vieillissement chronologique, tels que les rides et ridules comprenant au moins la caractérisation qualitative ou quantitative de l'expression et/ou de l'activité biologique d'un polypeptide conforme à l'invention, c'est-à-dire de la CLSP, de l'un de ses dérivés ou fragments. Selon une variante de réalisation, la donnée obtenue à l'issue de la caractérisation peut être également examinée comparativement à une valeur ou donnée de référence. Cette valeur ou donnée de référence peut être une donnée obtenue à partir de l'épithélium, notamment de l'épiderme, à soumettre au traitement, antérieurement à l'administration dudit traitement ou dans un délai chronologique plus court au regard de la date de début de traitement. Comme il ressort de la description qui suit, les procédés selon l'invention sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne requiert pas d'opération invasive. According to an alternative embodiment, the datum or value obtained can be appreciated in comparison with a datum or reference value, obtained for example from at least one epithelium, in particular an epidermis, distinct from that which is the subject of the characterization, and whose state is known. According to another of its aspects, the present invention also aims at a process, in particular a cosmetic, non-invasive method for characterizing the effectiveness of a cosmetic or therapeutic treatment intended to supplement the signs of skin aging associated with chronological aging, such as wrinkles and fine lines comprising at least the qualitative or quantitative characterization of the expression and / or the biological activity of a polypeptide according to the invention, that is to say of the CLSP, of one of its derivatives or fragments. According to an alternative embodiment, the data obtained at the end of the characterization can also be examined compared to a reference value or datum. This value or reference datum may be data obtained from the epithelium, in particular from the epidermis, to be subjected to treatment, prior to the administration of said treatment or in a shorter chronological time with respect to the start date. treatment. As is apparent from the description which follows, the methods according to the invention are particularly advantageous insofar as their implementation does not require an invasive operation.

Les procédés de l'invention peuvent être effectués in vitro, ex vivo ou in vivo. En effet, la localisation par les inventeurs du nouveau biomarqueur du vieillissement qu'est la CLSP, dans le stratum corneum rend possible une caractérisation quantitative ou qualitative de l'expression de cette protéine par simple prélèvement topique. The methods of the invention can be carried out in vitro, ex vivo or in vivo. Indeed, the location by the inventors of the new aging biomarker CLSP in the stratum corneum makes possible a quantitative or qualitative characterization of the expression of this protein by simple topical sampling.

Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet une utilisation cosmétique ou encore non thérapeutique, d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide dérivé de la CLSP et, notamment, de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence représentée par SEQ ID NO 1, un analogue de celle-ci ou un fragment de celle-ci, d'au moins une séquence nucléique codant pour un tel polypeptide ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression et/ou de la stabilité d'un tel polypeptide à titre d'agent utile pour prévenir et/ou traiter les signes de vieillissement cutané. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention a également pour objet une utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide dérivé de la CLSP et, notamment, de séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée en tout ou partie par une séquence représentée par SEQ ID NO 1, un analogue de celle-ci ou un fragment de celle-ci, d'au moins une séquence nucléique codant pour un tel polypeptide ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression et/ou de la stabilité d'un tel polypeptide pour la préparation d'une composition, notamment thérapeutique, destinée à prévenir et/ou traiter les signes de vieillissement cutané. According to another of its aspects, the subject of the present invention is a cosmetic or non-therapeutic use of an effective amount of at least one polypeptide derived from CLSP and, in particular, from an amino acid sequence coded by a sequence. nucleic acid represented in whole or in part by a sequence represented by SEQ ID NO 1, an analogue thereof or a fragment thereof, at least one nucleic sequence coding for such a polypeptide or at least one an agent modulating the activity, the expression and / or the stability of such a polypeptide as a useful agent for preventing and / or treating the signs of cutaneous aging. According to yet another of its aspects, the subject of the present invention is also a use of an effective amount of at least one polypeptide derived from CLSP and, in particular, from an amino acid sequence encoded by a nucleic acid sequence. represented in whole or in part by a sequence represented by SEQ ID NO 1, an analogue thereof or a fragment thereof, at least one nucleic sequence coding for such a polypeptide or at least one the activity, expression and / or stability of such a polypeptide for the preparation of a composition, in particular a therapeutic composition, intended to prevent and / or treat the signs of cutaneous aging.

Par signes de vieillissement cutané, on entend toutes les modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement chronologique, comme par exemple les rides et ridules, la peau flétrie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, l'amincissement du derme et/ou la dégradation des fibres de collagène ce qui entraîne l'apparence de peau molle et ridée. By signs of skin aging is meant all the changes in the external appearance of the skin due to chronological aging, such as, for example, wrinkles and fine lines, wilted skin, lack of elasticity and / or tone of the skin, thinning of the dermis and / or degradation of collagen fibers resulting in the appearance of soft and wrinkled skin.

Une composition conforme à l'invention peut, en particulier, être destinée à prévenir et/ou traiter les effets du vieillissement chronologique d'un épithélium, notamment d'un épiderme ou des lèvres ou du cuir chevelu. Au sens de la présente invention, on entend désigner par l'expression quantité efficace la quantité minimale nécessaire à l'observation de l'effet attendu, à savoir un effet cosmétique ou un effet thérapeutique, étant entendu que les quantités efficaces nécessaires à l'obtention d'un effet cosmétique ou d'un effet thérapeutique peuvent être, le cas échéant, identiques ou différentes. A composition in accordance with the invention may, in particular, be intended to prevent and / or treat the effects of the chronological aging of an epithelium, in particular of an epidermis or of the lips or the scalp. For the purposes of the present invention, the term "effective amount" is intended to denote the minimum amount necessary for observing the expected effect, namely a cosmetic effect or a therapeutic effect, it being understood that the effective amounts required for obtaining a cosmetic effect or a therapeutic effect may be, where appropriate, the same or different.

Au sens de l'invention, on entend désigner par utilisation cosmétique une utilisation destinée, principalement, à procurer un effet esthétique et/ou du confort. Au sens de l'invention, on entend désigner par composition thérapeutique une composition destinée à procurer un effet prophylactique ou curatif au regard de troubles épithéliaux, et notamment épidermiques, reconnus comme traduisant un état pathologique. Par prophylactique ou préventif au sens de l'invention, on entend la diminution du risque de survenue d'un phénomène, par exemple une pathologie. Une composition conforme à l'invention peut, en particulier, être destinée à prévenir et/ou traiter un amincissement d'un épiderme et/ou une perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et de ridules. Selon un autre mode de réalisation, une composition conforme à l'invention peut, notamment, être destinée à prévenir et/ou à traiter des signes cutanés de sécheresse, 15 en particulier à prévenir et/ou à traiter une déshydratation d'un épiderme. Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne également l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention à titre d'outil de criblage de composés biologiques ou chimiques susceptibles de moduler, et en particulier d'inhiber, l'expression et/ou l'activité biologique dudit polypeptide. 20 En particulier, elle concerne un procédé de criblage d'actifs anti-âge comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact, au moins un type cellulaire apte à exprimer un polypeptide conforme à l'invention, c'est-à-dire la CLSP ou l'un de ses dérivés avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, dans des conditions propices à une 25 manifestation de l'expression dudit polypeptide, et b) déterminer une teneur dudit polypeptide. For the purposes of the invention, the term "cosmetic use" denotes a use intended primarily to provide an aesthetic effect and / or comfort. Within the meaning of the invention, the term "therapeutic composition" is intended to denote a composition intended to provide a prophylactic or curative effect with regard to epithelial, and in particular epidermal, disorders recognized as reflecting a pathological state. By prophylactic or preventive in the sense of the invention is meant the reduction of the risk of occurrence of a phenomenon, for example a pathology. A composition according to the invention may, in particular, be intended to prevent and / or treat a thinning of an epidermis and / or a loss of firmness, elasticity, density and / or tonicity of an epidermis and / or the formation of wrinkles and fine lines. According to another embodiment, a composition according to the invention may, in particular, be intended for preventing and / or treating cutaneous signs of dryness, in particular for preventing and / or treating dehydration of an epidermis. According to another aspect, the present invention also relates to the use of at least one polypeptide according to the invention as a tool for screening biological or chemical compounds capable of modulating, and in particular of inhibiting, the expression and / or biological activity of said polypeptide. In particular, it relates to a method for screening anti-aging active agents comprising at least the steps of: a) contacting at least one cell type capable of expressing a polypeptide according to the invention, that is, that is, the CLSP or one of its derivatives with at least one chemical or biological compound to be tested, under conditions conducive to a manifestation of the expression of said polypeptide, and b) determining a content of said polypeptide.

DEFINITION POLYPEPTIDE Selon un mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut 30 avoir une séquence d'acides aminés représentée en tout ou partie par une séquence représentée par SEQ ID NO 2, ou un analogue de celle-ci, ou un fragment de celle-ci. POLYPEPTIDE DEFINITION According to one embodiment, a polypeptide suitable for the invention may have an amino acid sequence represented in whole or in part by a sequence represented by SEQ ID NO 2, or an analogue thereof, or a fragment of it.

Au sens de la présente invention, on entend désigner de manière générale, sauf indication contraire, par la CLSP la séquence (SEQ ID NO 2) de la protéine ayant ou non subi des modifications post-traductionnelles de type glycosylation sur les résidus asparagine en position 25 et/ou 43, de type phosphorylation et/ou de type myristylation, susceptibles de modifier son poids moléculaire apparent ou sont point isoélectrique. Il est par ailleurs connu que la séquence primaire d'un polypeptide, c'est-à-dire l'enchaînement de ses acides aminés, détermine des sites spécifiquement reconnus par des enzymes de type protéase, telles que la trypsine qui, une fois la reconnaissance de ces sites effective, vont induire le clivage du polypeptide par protéolyse. Cette protéolyse résulte en la génération de divers peptides, ou fragments de protéolyse, de la CLSP. Les inventeurs ont détecté la présence de tels peptides dans le stratum corneum. En conséquence, l'invention s'étend également aux fragments de protéolyse de la CLSP de séquence peptidique SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 10, SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12, SEQ ID NO 13, SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 16, SEQ ID NO 17, SEQ ID NO18, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 20, SEQ ID NO 21, SEQ ID NO 22, SEQ ID NO 23, SEQ ID NO 24 et SEQ ID NO 25. Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, un polypeptide conforme à l'invention peut avoir une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 10, SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12, SEQ ID NO 13, SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 16, SEQ ID NO 17, SEQ ID NO18, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 20, SEQ ID NO 21, SEQ ID NO 22, SEQ ID NO 23, SEQ ID NO 24 et SEQ ID NO 25, et leurs mélanges. Par analogue d'un polypeptide , on entend désigner tout polypeptide présentant une homologie de séquence, en particulier vis-à-vis d'une des séquences caractéristiques dudit polypeptide, ainsi qu'une activité biologique de même nature. Cet analogue peut être un agent peptidomimétique. For the purposes of the present invention, the term "general", unless otherwise indicated, refers to the sequence (SEQ ID NO 2) of the protein, whether or not it has undergone post-translational modifications of the glycosylation type on the asparagine residues in position. And / or 43, of phosphorylation and / or myristylation type, capable of modifying its apparent molecular weight or is isoelectric point. It is also known that the primary sequence of a polypeptide, that is to say the sequence of its amino acids, determines sites specifically recognized by protease enzymes, such as trypsin which, once the recognition of these sites effectively, will induce cleavage of the polypeptide by proteolysis. This proteolysis results in the generation of various peptides, or fragments of proteolysis, of CLSP. The inventors have detected the presence of such peptides in the stratum corneum. Accordingly, the invention also extends to proteolytic fragments of peptide sequence CLSP SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO. ID NO 19, SEQ ID NO 20, SEQ ID NO 21, SEQ ID NO 22, SEQ ID NO 23, SEQ ID NO 24 and SEQ ID NO 25. Thus, according to a particular embodiment, a polypeptide according to the invention may have an amino acid sequence selected from SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO. ID NO 21, SEQ ID NO 22, SEQ ID NO 23, SEQ ID NO 24 and SEQ ID NO 25, and mixtures thereof. The term "polypeptide analogue" is intended to denote any polypeptide having a sequence homology, in particular with respect to one of the characteristic sequences of said polypeptide, as well as a biological activity of the same kind. This analog may be a peptidomimetic agent.

L'homologie peut être d'au moins 85 %, par exemple d'au moins 90 %, et par exemple d'au moins 95 %. L'homologie peut être déterminée par comparaison visuelle ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tels que les programmes BLAST disponibles sur \vww _n_,biï _n m _ ïlh.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut. L'homologie de séquence peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention provenant soit de la délétion d'un ou plusieurs acides aminés, ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés dans les séquences caractéristiques d'un polypeptide selon l'invention. Au sens de l'invention, on entend désigner par fragment de polypeptide toute portion d'un polypeptide conforme à l'invention comprenant au moins 4, au moins 6, en particulier au moins 8, et plus particulièrement au moins 12 acides aminés consécutifs dudit polypeptide, et une activité biologique sensiblement similaire. Par séquence caractéristique du polypeptide , on entend viser notamment au regard de la CLSP, la séquence représentée par SEQ ID NO 2. De manière générale, les analogues polypeptidiques peuvent comprendre des substitutions conservatrices par rapport à la séquence d'acides aminés du polypeptide naturel. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105). The homology can be at least 85%, for example at least 90%, and for example at least 95%. The homology can be determined by visual comparison or by any computer tool commonly used in the field, such as the BLAST programs available on \ vww_n_, bi'_m_lh.gov and used with the default settings. The sequence homology may result from modifications resulting from mutation or variation in the sequences of the peptides according to the invention either from the deletion of one or more amino acids or from the insertion of one or more amino acids. or the substitution of one or more amino acids in the characteristic sequences of a polypeptide according to the invention. Within the meaning of the invention, the term "polypeptide fragment" is intended to denote any portion of a polypeptide according to the invention comprising at least 4, at least 6, in particular at least 8, and more particularly at least 12 consecutive amino acids of said polypeptide. polypeptide, and a substantially similar biological activity. The term "characteristic sequence of the polypeptide" is intended to include, in particular with respect to CLSP, the sequence represented by SEQ ID NO 2. In general, the polypeptide analogs may comprise conservative substitutions with respect to the amino acid sequence of the natural polypeptide. Many of these changes can be combined. By way of example of mutations which may be considered in the present invention, it may be mentioned, in a non-exhaustive manner, the replacement of one or more amino acid residues by amino acid residues having a subscript. similar hydropathic without substantially affecting the biological properties of the polypeptide. The hydropathic index is an index attributed to amino acids as a function of their hydrophobicity and charge (Kyte et al (1982) J. Mol Biol., 157: 105).

Un polypeptide ou analogue également visé par la présente invention peut être un polypeptide ayant subi une ou plusieurs modification(s) post-traductionnelle(s). Par modification(s) post-traductionnelle(s) , on entend englober l'ensemble des modifications qu'un peptide ou une protéine est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une myristylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou de type clivage à l'intérieur de la séquence peptidique. A polypeptide or the like also targeted by the present invention may be a polypeptide having undergone one or more post-translational modification (s). By post-translational modification (s), it is meant to encompass all the modifications that a peptide or a protein is likely to undergo after its synthesis in a cell, such as, for example, one or more phosphorylation. (s), one or thiolation (s), acetylation (s), glycosylation (s), lipidation (s), such as myristylation, bridging-type structural rearrangement disulfides and / or cleavage type within the peptide sequence.

L'analogue présente, par ailleurs, sensiblement la même activité biologique que le polypeptide naturel. Selon un mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise en oeuvre de l'invention peut également être un polypeptide naturel ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenu après lyse enzymatique ou chimique de la CLSP ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, comme par exemple la peau, exprimant naturellement ou après transfection de ce polypeptide, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore tout polypeptide naturel ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement (en tout ou partie) une séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants et les analogues. L'homme de l'art peut obtenir un polypeptide conforme à l'invention au moyen de procédés à base d'ADN recombinant, comme par exemple, ceux décrits dans le manuel Molecular Cloning û A Laboratory Manual (2ème édition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook). Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise en oeuvre de l'invention peut également être un polypeptide tel que défini précédemment dans lequel un résidu au moins a été remplacé par un résidu d'acide aminé d'indice hydropathique similaire, comme défini précédemment. The analogue has, moreover, substantially the same biological activity as the natural polypeptide. According to one embodiment, a polypeptide that is suitable for the implementation of the invention may also be a natural or synthetic polypeptide, if appropriate that can be obtained after enzymatic or chemical lysis of CLSP or by chemical or biological synthesis or by extraction from a biological tissue, such as for example the skin, expressing naturally or after transfection of this polypeptide, as well as the various post-translational forms thereof, or any natural or synthetic polypeptide whose sequence comprises totally or partially (in whole or in part) a aforementioned amino acid sequence, for example variants and analogs. Those skilled in the art can obtain a polypeptide according to the invention by means of recombinant DNA methods, for example, those described in the manual Molecular Cloning - A Laboratory Manual (2nd Edition), Sambrook et al. ., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook). According to another embodiment, a polypeptide suitable for the implementation of the invention may also be a polypeptide as defined above in which at least one residue has been replaced by an amino acid residue of similar hydropathic index, as defined previously.

Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à la mise de l'invention peut également être un polypeptide tel que défini précédemment, fusionné avec un autre polypeptide, un agent de ciblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bioconversion, un agent de marquage luminescent, radioactif ou colorimétrique. De manière non limitative, on peut citer comme exemple de composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention des protéines fluorescentes comme la Green Fluorescent Protein , des composés chimiques fluorescents tels que la rhodamine, la fluorescéine, ou le Texas Red , des composés phosphorescents, des éléments radioactifs, tels que 3H, 14C 35S 1211 ou 125I, ou des agents de marquage colorimétrique comme les substrats chromogènes sensibles à l'action de la galactosidase, de la peroxydase, de la chloramphénicol acétyltransférase, de la luciférase ou de la phosphatase alcaline. Selon la nature des composés susceptibles d'être couplés avec un polypeptide conforme à l'invention, le couplage peut être opéré par des procédés chimiques, notamment au moyen de fonctions chimiques réactives ou par des procédés de biologie moléculaire connus de l'homme de l'art. According to another embodiment, a polypeptide suitable for placing the invention may also be a polypeptide as defined above, fused with another polypeptide, a hydrophilic or hydrophobic targeting agent, a bioconversion precursor, a labeling agent luminescent, radioactive or colorimetric. In a nonlimiting manner, examples of compounds that may be coupled with a polypeptide according to the invention include fluorescent proteins such as Green Fluorescent Protein, fluorescent chemical compounds such as rhodamine, fluorescein, or Texas Red. , phosphorescent compounds, radioactive elements, such as 3H, 14C 35S 1211 or 125I, or colorimetric labeling agents such as chromogenic substrates sensitive to the action of galactosidase, peroxidase, chloramphenicol acetyltransferase, luciferase or alkaline phosphatase. Depending on the nature of the compounds which can be coupled with a polypeptide according to the invention, the coupling can be carried out by chemical methods, in particular by means of reactive chemical functions or by methods of molecular biology known to humans. 'art.

DEFINITION SEQUENCES ACIDES NUCLEIQUES Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également des séquences d'acides nucléiques codant pour un polypeptide de l'invention et leur mise en oeuvre dans les différentes utilisations et procédés conformes à l'invention. Ainsi, la présente invention se rapporte également à l'utilisation de séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention, notamment les séquences correspondant au moins à une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO : 1, des analogues de celle-ci ou un fragment de celle-ci pour la préparation d'une composition conforme à l'invention. DEFINITION OF NUCLEIC ACID SEQUENCES According to one embodiment, the present invention also relates to nucleic acid sequences encoding a polypeptide of the invention and their use in the various uses and processes according to the invention. Thus, the present invention also relates to the use of nucleic acid sequences, in particular of deoxyribonucleic acids, or of ribonucleic acids encoding a polypeptide according to the invention, in particular the sequences corresponding to at least one sequence of nucleic acids represented by SEQ ID NO: 1, analogs thereof or a fragment thereof for the preparation of a composition according to the invention.

Au sens de la présente invention, on entend désigner par fragment de séquence d'acides nucléiques , une séquence d'acides nucléiques codant pour tout ou partie d'un polypeptide conforme à l'invention, ou un analogue de celui-ci, et en particulier une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO 1 ou un analogue de celle-ci. For the purposes of the present invention, the term "nucleic acid sequence fragment" is intended to denote a nucleic acid sequence encoding all or part of a polypeptide according to the invention, or an analogue thereof, and particularly a nucleic acid sequence represented by SEQ ID NO 1 or an analogue thereof.

Par analogue d'une séquence d'acides nucléiques , on entend désigner toute séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour un polypeptide de séquence identique ou analogue à celle du polypeptide codée par ladite séquence d'acides nucléiques. Les séquences d'acides nucléiques peuvent être issues de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes (virus, phages, bactéries entre autres) ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine. En l'occurrence, l'invention se rapporte également à l'utilisation de fragments d'acides nucléiques isolés et purifiés codant pour les polypeptides considérés selon l'invention. Une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut comprendre une séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à une séquence codant pour une polypeptide conforme à l'invention. Ainsi, la présente invention se rapporte également à l'utilisation de séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides 5 ribonucléiques codant pour un polypeptide conforme à l'invention. Les séquences d'acides nucléiques selon l'invention peuvent notamment être utilisées pour préparer des séquences d'acides ribonucléiques correspondantes sens ou antisens. L'invention a également pour objet l'utilisation de tout polynucléotide, de 10 séquence d'acides ribonucléiques ou désoxyribonucléiques, comprenant une séquence sens ou antisens, notamment Small interferent RNA (SiRNA) correspondants au moins à la séquence d'acides nucléiques SEQ ID NO 1 ou un analogue de celle-ci. By analog of a nucleic acid sequence is meant any nucleic acid sequence, possibly resulting from the degeneracy of the nucleic acid code, and coding for a polypeptide of identical or analogous sequence to that of the polypeptide encoded by said sequence nucleic acids. The nucleic acid sequences can come from all possible origins, namely either animal, in particular mammalian and even more particularly human, or plant, or microorganisms (viruses, phages, bacteria among others) or fungi , without prejudging the fact that they are present naturally or not in said original organism. In this case, the invention also relates to the use of isolated and purified nucleic acid fragments coding for the polypeptides considered according to the invention. A nucleic acid sequence according to the invention may comprise a sense, antisense or interferential sequence corresponding to a sequence coding for a polypeptide according to the invention. Thus, the present invention also relates to the use of nucleic acid sequences, especially deoxyribonucleic acids, or ribonucleic acids encoding a polypeptide according to the invention. The nucleic acid sequences according to the invention can in particular be used to prepare corresponding sense or antisense ribonucleic acid sequences. The subject of the invention is also the use of any polynucleotide, of ribonucleic or deoxyribonucleic acid sequence, comprising a sense or antisense sequence, in particular Small Interferent RNA (SiRNA) corresponding at least to the SEQ ID nucleic acid sequence. NO 1 or an analogue thereof.

UTILISATION DE LA PROTEINE CLSP A DES FINS DE DIAGNOSTIC 15 D'UN ETAT DE L'EPIDERME Comme précisé précédemment, la présente invention concerne notamment l'utilisation d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, à titre d'outil de caractérisation in vitro ou ex vivo d'un état d'un épithélium, et notamment d'un épiderme. 20 A titre d'exemple, il est possible de caractériser selon l'invention un état de vieillissement chronologique d'un épithélium. Ainsi, comme précisé précédemment, la présente invention concerne selon un autre de ses aspects des procédés non invasifs pour caractériser l'état de surface d'un épiderme non pathologique ou encore l'efficacité d'un traitement cosmétique ou thérapeutique visant à caractériser qualitativement ou 25 quantitativement l'expression de la CLSP, de l'un de ses dérivés ou fragments. Ces procédés sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne nécessite pas de recourir obligatoirement à une technique opératoire pour procéder à une telle caractérisation. Un extrait de l'épiderme peut ainsi être obtenu par simple stripping et directement analysé par une technique d'analyse conventionnelle, 30 notamment telle que décrite précédemment. Selon un mode de réalisation, un procédé de caractérisation d'un état d'un épithélium, par exemple un épiderme, comprend au moins les étapes consistant à : a) déterminer, dans un échantillon dudit épithélium, une teneur en polypeptide conforme à l'invention, ou d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, et b) comparer ladite teneur déterminée à l'étape a) à une valeur de référence. USE OF THE CLSP PROTEIN FOR THE DIAGNOSTIC PURPOSES OF A CONDITION OF THE EPIDERM As mentioned above, the present invention relates in particular to the use of at least one polypeptide according to the invention or at least one sequence of nucleic acids encoding said polypeptide, as a tool for in vitro or ex vivo characterization of a state of an epithelium, and in particular of an epidermis. By way of example, it is possible to characterize according to the invention a state of chronological aging of an epithelium. Thus, as specified above, the present invention relates, according to another of its aspects, to non-invasive methods for characterizing the surface state of a non-pathological epidermis or the effectiveness of a cosmetic or therapeutic treatment aimed at characterizing qualitatively or Quantitatively the expression of CLSP, one of its derivatives or fragments. These methods are particularly advantageous insofar as their implementation does not require mandatory use of an operative technique to carry out such a characterization. An extract of the epidermis can thus be obtained by simple stripping and directly analyzed by a conventional analysis technique, especially as described above. According to one embodiment, a method of characterizing a state of an epithelium, for example an epidermis, comprises at least the steps of: a) determining, in a sample of said epithelium, a polypeptide content in accordance with invention, or a nucleic acid sequence encoding said polypeptide, and b) comparing said content determined in step a) to a reference value.

Avantageusement, un procédé de l'invention est non invasif. Un procédé de l'invention est avantageusement effectué sur un échantillon isolé. Selon un mode de réalisation, un procédé selon l'invention peut être effectué sur un échantillon d'épithélium, et notamment d'épiderme, prélevé chez un individu. Advantageously, a method of the invention is non-invasive. A method of the invention is advantageously carried out on an isolated sample. According to one embodiment, a method according to the invention can be carried out on a sample of epithelium, and in particular of epidermis, taken from an individual.

Un procédé selon l'invention peut également être effectué sur un échantillon d'épithélium, et notamment d'épiderme, prélevé à partir d'un modèle cellulaire épithélial, et notamment épidermique, ou d'une peau isolée reconstruite afin d'en qualifier l'état. Le prélèvement d'un échantillon d'épithélium peut se faire par toute méthode connue de l'homme de l'art. A method according to the invention can also be carried out on a sample of epithelium, and in particular of epidermis, taken from an epithelial cell model, and in particular an epidermal cell model, or from an isolated skin reconstructed in order to describe it. 'state. The sampling of an epithelium sample can be done by any method known to those skilled in the art.

Ces méthodes peuvent être effectuées par des techniques dites de stripping. Ces strippings sont des surfaces collantes appliquées à la surface de l'épiderme comme le Blenderm de 3M, le D'squam (adhésif commercial de CuDERM), la colle cyanoacrylate ou la méthode du stripping vernis. Grâce à ces strippings, les cornéocytes adhérents et le contenu de leurs espaces intercellulaires peuvent être prélevés et soumis par la suite à une extraction permettant d'avoir accès au contenu protéique. Le prélèvement d'un échantillon convenant au procédé peut aussi être effectué de façon plus directe par lavages de la surface cutanée au moyen par exemple d'accessoires de type turbine à ailette, de type cellule à spirale (tel que décrit dans le brevet FR 2 667 778) associée à un circuit fluidique, ou simplement par ajout/prélèvement d'une goutte de tampon à la surface de la peau. A titre indicatif, d'autres méthodes de prélèvement adaptées à la mise en oeuvre de l'invention, on peut mentionner des méthodes par grattage de la partie supérieure du stratum corneum au moyen d'un système bilames. Cette technique permet de recueillir des squames qui peuvent ensuite être directement analysées par différentes techniques pour déterminer les taux en minéraux, aminoacides ou lipides. These methods can be performed by so-called stripping techniques. These strippings are tacky surfaces applied to the surface of the epidermis such as 3M's Blenderm, D'squam (commercial adhesive from CuDERM), cyanoacrylate glue or the varnished stripping method. Thanks to these strippings, the adherent corneocytes and the contents of their intercellular spaces can be removed and subsequently subjected to an extraction allowing access to the protein content. The sampling of a sample suitable for the process can also be carried out more directly by washing the skin surface by means of, for example, finned turbine type spiral cell type accessories (as described in the FR 2 patent). 667 778) associated with a fluidic circuit, or simply by adding / removing a drop of buffer on the surface of the skin. As an indication, other methods of sampling adapted to the implementation of the invention can be mentioned methods by scraping the upper part of the stratum corneum by means of a bimetallic system. This technique allows the collection of scales that can then be directly analyzed by different techniques to determine the levels of minerals, amino acids or lipids.

Un procédé selon l'invention peut être effectué in vivo, in vitro ou ex vivo. A method according to the invention can be carried out in vivo, in vitro or ex vivo.

Une valeur de référence peut être, par exemple, une teneur en polypeptide ou en séquence d'acides nucléiques déterminée sur un échantillon d'épiderme prélevé sur un épithélium, et notamment une peau normale, c'est-à-dire satisfaisante sur le plan physiologique, à l'image par exemple d'une peau jeune. A reference value may be, for example, a polypeptide or nucleic acid sequence content determined on a sample of epidermis taken from an epithelium, and in particular a normal skin, that is to say satisfactory on the physiological, like for example a young skin.

La mesure d'une valeur de référence peut être effectuée parallèlement ou séquentiellement à la détermination de ladite teneur d'un polypeptide ou d'une séquence d'acides nucléiques. Une comparaison d'une teneur déterminée avec une valeur de référence peut permettre d'évaluer une déviation par rapport à cette valeur. The measurement of a reference value may be performed in parallel or sequentially to the determination of said content of a polypeptide or nucleic acid sequence. A comparison of a given content with a reference value may make it possible to evaluate a deviation from this value.

L'analyse de l'intensité et/ou de la nature de cette déviation (négative ou positive) peut être informative de l'état de l'épiderme. La caractérisation d'un état d'un épiderme peut être indicatif d'un éventuel trouble cutané qui peut être corrigé par l'utilisation de composés susceptibles de moduler l'expression d'un polypeptide de l'invention. The analysis of the intensity and / or the nature of this deviation (negative or positive) can be informative of the condition of the epidermis. The characterization of a state of an epidermis may be indicative of a possible skin disorder that can be corrected by the use of compounds capable of modulating the expression of a polypeptide of the invention.

Selon un mode de réalisation, un procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre dans un procédé de diagnostic in vivo, in vitro ou ex vivo d'un état physiologique d'un épithélium, et notamment de l'épiderme, en vue en particulier d'apprécier son état de vieillissement chronobiologique et par exemple ses carences et/ou altérations associées chez un individu. According to one embodiment, a method according to the invention can be implemented in a method of in vivo, in vitro or ex vivo diagnosis of a physiological state of an epithelium, and in particular of the epidermis, in view of particular to appreciate its state of chronobiological aging and for example its deficiencies and / or associated alterations in an individual.

Un polypeptide convenant à la mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention peut être avantageusement la CLSP. La détermination d'une teneur en polypeptide conforme à l'invention ou en acides nucléiques conformes à l'invention dans un échantillon d'épiderme peut être effectuée par tout protocole connu de l'homme de l'art. A polypeptide suitable for carrying out a process according to the invention may advantageously be CLSP. The determination of a content of polypeptide according to the invention or nucleic acids according to the invention in an epidermis sample may be carried out by any protocol known to those skilled in the art.

A titre de méthodes de détection d'un polypeptide, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d'Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l'immunofluorescence, de l'absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d'énergie par résonance de fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery after photobleaching/recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d'AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques, des méthodes mettant en oeuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d'anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse, des méthodes de spectrométrie de type SELDI-TOF (Ciphergen). Ainsi, il peut être envisagé de détecter la présence d'un polypeptide conforme à l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée. As methods of detecting a polypeptide, mention may be made of Western blot, blot-blot, Dot-blot, single-gang or multiplex Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay (ELISA) methods, proteomics or glycomics, staining polypeptides in a polyacrylamide gel with a silver dye, Coomassie blue or SYPRO, immunofluorescence, UV absorption, immunohistochemical methods in microscopy classical, electronic or confocal, FRET (fluorescence resonance energy transfer), TR-FRET methods (time resolved FRET / FRET), fluorescence lifetime imaging methods microscopy / fluorescence time microscopy imaging), FSPIM methods (fluorescence spectral imaging microscopy), FRAP methods (fluorescence recovery after photo bleaching / fluorescence recovery after photobleaching), reporter gene methods, AFM (atomic force microscopy) methods, surface plasmon resonance methods, microcalorimetry methods, flow cytometry methods , biosensor methods, radioimmunoassay (RIA) methods, isoelectric focusing methods, and enzymatic assays, methods using peptide chips, sugar chips, antibody chips, methods of mass spectrometry, SELDI-TOF spectrometry methods (Ciphergen). Thus, it may be envisaged to detect the presence of a polypeptide according to the invention by means of an antibody, where appropriate in a marked form.

Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'outil d'évaluation d'un état d'un épiderme peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans Antibodies: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990). De façon avantageuse, les anticorps utilisés peuvent être des anticorps recombinants tels que ceux développés par la société Antibodies-by-design. An antibody that can be used as a tool for assessing a condition of an epidermis can be obtained by any method known to those skilled in the art, as described in Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1990). Advantageously, the antibodies used may be recombinant antibodies such as those developed by Antibodies-by-design.

Une séquence d'acide nucléique convenant à la mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention peut être avantageusement une séquence d'acides nucléiques codant pour la CLSP, par exemple de type ARNm. A titre d'exemple de méthodes de détection de séquence d'acides nucléiques, il peut être fait mention de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR), quantitative ou non (Q-PCR), en présence ou non de la transcriptase inverse (RT-PCR ou Q-RT-PCR), du Northern-blot, de la méthode ribonuclease protection assay, des méthodes avec des puces à ADN, des méthodes avec des puces transcriptomiques, des méthodes avec des puces à oligonucléotides, des méthodes d'hybridation in situ. A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'une séquence d'acides 30 nucléiques, et en particulier d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides nucléiques marquées pouvant s'hybrider à ladite séquence. A nucleic acid sequence suitable for carrying out a method according to the invention may advantageously be a nucleic acid sequence coding for CLSP, for example of the mRNA type. By way of example of nucleic acid sequence detection methods, mention may be made of the quantitative or non-quantitative polymerase chain reaction (PCR) (Q-PCR), in the presence or absence of reverse transcriptase ( RT-PCR or Q-RT-PCR), Northern-blot, ribonuclease protection assay method, microarray methods, methods with transcriptomic chips, oligonucleotide microarray methods, methods of in situ hybridization. By way of example of agents suitable for the detection of a nucleic acid sequence, and in particular mRNA, mention may be made of labeled nucleic acid probes capable of hybridizing to said sequence.

Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute méthode connue de l'homme de l'art. Ainsi, les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent être utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou antisens, qui s'hybrident dans des conditions de forte astringence à la séquence SEQ ID NO 1 ou un analogue de celle-ci. L'expression d'une séquence d'acide nucléique conforme à l'invention peut être comparée à une valeur de référence obtenue, par exemple, en effectuant un procédé conforme à l'invention en absence de composé à tester. Such a nucleic acid probe can be easily obtained by any method known to those skilled in the art. Thus, the nucleic acid sequences in accordance with the invention can be used to produce sense and / or antisense oligonucleotide primers, which hybridize under conditions of high astringency to the sequence SEQ ID No. 1 or an analogue thereof. this. The expression of a nucleic acid sequence according to the invention may be compared with a reference value obtained, for example, by carrying out a process according to the invention in the absence of test compound.

L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut également être déterminée, de manière indirecte, par la détermination de l'expression du polypeptide codé par ladite séquence, au moyen de toute technique connue dans le domaine, telle que le Western-Blot, l'ELISA, la méthode de Bradford ou de Lowry, ou comme indiqué ci-dessus. The expression of a nucleic acid sequence can also be determined, indirectly, by determining the expression of the polypeptide encoded by said sequence, by means of any technique known in the art, such as Western Blot. , the ELISA, the Bradford or Lowry method, or as indicated above.

La présente invention concerne également un procédé, non thérapeutique, pour mettre en évidence un effet d'un traitement susceptible de faire régresser un trouble d'un épithélium, notamment un trouble cutané ou du cuir chevelu, chez un individu, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant le traitement, au moins une première détermination, dans un premier échantillon d'un épithélium prélevé chez ledit individu, d'une activité biologique et/ou de l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, ou de l'expression d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, b) effectuer, après le traitement, au moins une seconde détermination, dans un second échantillon d'un épithélium prélevé chez ledit individu, de ladite activité biologique et/ou de ladite expression dudit polypeptide ou de ladite expression de ladite séquence d'acides nucléiques déterminées à l'étape a), et c) comparer les première et deuxième déterminations, notamment afin d'en déduire une information relative à un effet au moins du traitement. The present invention also relates to a method, non-therapeutic, for demonstrating an effect of a treatment likely to regress a disorder of an epithelium, especially a skin disorder or scalp, in an individual, comprising at least the steps comprising: a) performing, before the treatment, at least a first determination, in a first sample of an epithelium taken from said individual, of a biological activity and / or the expression of a polypeptide conforming to the invention, or expression of a nucleic acid sequence encoding said polypeptide; b) performing, after the treatment, at least a second determination, in a second sample of an epithelium taken from said individual, of said activity; and / or said expression of said polypeptide or said expression of said nucleic acid sequence determined in step a), and c) comparing the first and second terminations, in particular to derive information relating to at least one effect of the treatment.

Un tel traitement peut en particulier être un traitement cosmétique. Such a treatment can in particular be a cosmetic treatment.

En particulier, le traitement dont l'effet est à évaluer peut être un traitement destiné à réduire les signes de vieillissement cutané. L'activité biologique et l'expression d'un polypeptide peuvent être déterminées comme indiqué précédemment. In particular, the treatment whose effect is to be evaluated may be a treatment intended to reduce the signs of skin aging. The biological activity and the expression of a polypeptide can be determined as indicated above.

AGENT MODULATEUR Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne l'utilisation d'un agent modulateur de l'expression et/ou de la stabilité et/ou de l'activité d'un polypeptide conforme à l'invention. En particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un agent modulateur inhibiteur de l'activité, de l'expression et/ou de la stabilité d'un polypeptide de l'invention. Au sens de l'invention, on entend par moduler , au regard d'un effet donné, l'action de stimuler ou d'inhiber cet effet. Au sens de la présente invention, on entend par l'expression agent modulateur ou composé chimique ou biologique apte à moduler l'activité biologique et/ou l'expression tout composé apte à agir, directement ou indirectement, sur au moins un polypeptide conforme à l'invention, ou une séquence d'acides nucléiques codant pour celui-ci, ou sur un élément d'une voie de signalisation intra ou extra-cellulaire, ou d'une voie métabolique, impliquant ledit polypeptide, ou sur un élément impliqué dans la régulation de la transcription et/ou de la traduction d'une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide, ainsi que dans la régulation de la stabilité de celui-ci. Par activité biologique , on entend désigner notamment au regard de la CLSP, l'activité biologique de la protéine représentée par la séquence SEQ ID NO 2, de la forme mature ainsi que de la protéine ayant ou non subi des N-glycosylations, des phosphorylations ou une myristylation conduisant à des variants de poids moléculaire. MODULATOR AGENT According to another embodiment, the invention relates to the use of a modulating agent for the expression and / or stability and / or activity of a polypeptide according to the invention. In particular, the invention relates to the use of a modulating agent inhibiting the activity, the expression and / or the stability of a polypeptide of the invention. For the purposes of the invention, it is meant by modulating, with respect to a given effect, the action of stimulating or inhibiting this effect. For the purposes of the present invention, the expression "modulating agent" or "chemical or biological compound capable of modulating the biological activity and / or expression" is intended to mean any compound capable of acting, directly or indirectly, on at least one polypeptide conforming to the invention, or a nucleic acid sequence encoding it, or an element of an intra- or extracellular signaling pathway, or a metabolic pathway, involving said polypeptide, or an element involved in regulating the transcription and / or translation of a nucleic acid sequence encoding said polypeptide, as well as regulating the stability thereof. By biological activity, is meant in particular in terms of CLSP, the biological activity of the protein represented by the sequence SEQ ID NO 2, of the mature form as well as the protein which has or has not undergone N-glycosylations, phosphorylations or myristylation leading to molecular weight variants.

Cet agent modulateur peut être un agent inhibiteur ou activateur de l'expression génique ou protéique, d'un polypeptide de l'invention, ou encore un agent régulant la stabilité dudit polypeptide. A titre illustratif et non limitatif des agents inhibiteurs de l'expression génique et protéique, peuvent notamment être cités les composés diminuant la différenciation kératinocytaire, tels que l'acide rétinoïque et ses isomères, le rétinol et ses esters, la vitamine D et ses dérivés. This modulating agent may be an inhibitory or activating agent for gene or protein expression, a polypeptide of the invention, or an agent regulating the stability of said polypeptide. By way of non-limiting illustration of the agents which inhibit gene and protein expression, mention may in particular be made of compounds which reduce keratinocyte differentiation, such as retinoic acid and its isomers, retinol and its esters, vitamin D and its derivatives .

Plus particulièrement, l'invention concerne l'utilisation d'un agent modulateur diminuant la stabilité des polypeptides de l'invention, en favorisant notamment leur dégradation protéolytique. A titre illustratif et non limitatif d'agents aptes à stimuler la protéolyse peuvent notamment être cités des protéases, des chélateurs d'ions, des dérivés sulfoniques, des dérivés d'urée, des agents réducteurs, des alpha- ou beta-hydroxyacides, l'acide ascorbique ou la nicotinamide. More particularly, the invention relates to the use of a modulating agent which reduces the stability of the polypeptides of the invention, in particular by promoting their proteolytic degradation. By way of non-limiting illustration of agents capable of stimulating proteolysis, mention may in particular be made of proteases, ion chelators, sulphonic derivatives, urea derivatives, reducing agents, alpha- or beta-hydroxy acids, ascorbic acid or nicotinamide.

COMPOSITIONS COSMETIQUES OU THERAPEUTIQUES SELON 10 L'INVENTION Il est entendu que l'ensemble des compositions cosmétiques ou thérapeutiques considérées selon l'invention, mettent en oeuvre un milieu physiologiquement acceptable. Au sens de la présente invention, on entend désigner par milieu physiologiquement acceptable , un milieu convenant à l'application d'une composition 15 sur un épithélium ou une matière kératinique, telle que la peau, le cuir chevelu, les lèvres, les muqueuses et les fibres kératiniques comme les cheveux, les ongles et les poils, ou le cas échéant par voie orale ou parentérale. Au sens de la présente invention, on entend désigner par thérapeutique une composition pouvant être mise en oeuvre dans le cadre d'un traitement prophylactique et/ou 20 curatif, ou d'une méthode d'évaluation d'un état d'un épithélium, et notamment de l'épiderme. Selon un autre mode de réalisation, une composition cosmétique ou thérapeutique conforme à l'invention peut comprendre, en outre, au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique. 25 Comme exemples d'agents actifs utilisables dans le cadre de la présente invention, il peut être fait mention d'huiles cosmétiques, telles que les huiles de silicone, les huiles végétales de type triglycérides, les huiles hydrocarbonées telles que l'huile de Parleam et les esters d'acides gras et d'alcool gras. Il peut également être possible d'utiliser d'autres agents actifs permettant 30 d'améliorer l'état de la peau, tels que des actifs hydratants ou des agents actifs permettant d'améliorer la barrière lipidique naturelle, tels que des céramides, des sulfates de cholestérol et/ou des acides gras, et leurs mélanges. COSMETIC OR THERAPEUTIC COMPOSITIONS ACCORDING TO THE INVENTION It is understood that all the cosmetic or therapeutic compositions considered according to the invention use a physiologically acceptable medium. Within the meaning of the present invention, the term "physiologically acceptable medium" means a medium that is suitable for applying a composition to an epithelium or a keratin material, such as the skin, the scalp, the lips, the mucous membranes and the like. keratinous fibers such as hair, nails and hair, or where appropriate orally or parenterally. Within the meaning of the present invention, the term "therapeutic" means a composition that can be used as part of a prophylactic and / or curative treatment, or a method for evaluating a state of an epithelium, and especially the epidermis. According to another embodiment, a cosmetic or therapeutic composition according to the invention may comprise, in addition, at least one cosmetic and / or therapeutic active agent. As examples of active agents which can be used in the context of the present invention, mention may be made of cosmetic oils, such as silicone oils, vegetable oils of the triglyceride type, hydrocarbon oils such as Parleam oil and esters of fatty acids and fatty alcohol. It may also be possible to use other active agents for improving the condition of the skin, such as moisturizing actives or active agents to enhance the natural lipid barrier, such as ceramides, sulfates, and the like. cholesterol and / or fatty acids, and mixtures thereof.

Il peut également être possible d'utiliser des enzymes ayant une activité sur la peau, telles que des protéases, des lipases, des glucosidases, des amidases, des cérébrosidases et/ou des mélanases, et leurs mélanges. Comme autres exemples d'agents actifs convenant à la mise en oeuvre de la présente invention figurent : des actifs analgésiques, des actifs anti-levures, des actifs antibactériens, des actifs anti-parasitaires, des actifs anti-fongiques, des actifs anti-viraux, des actifs anti-inflammatoires stéroïdiens, des actifs anesthésiques, des actifs anti-prurigineux, des actifs kératolytiques, des actifs anti-radicaux libres, des actifs anti-séborrhéiques, des actifs anti-pelliculaires, des actifs anti-acnéiques, des actifs visant à prévenir le vieillissement de la peau et/ou à améliorer son état, des actifs anti-dermatites, des actifs anti-irritants, des actifs immunomodulateurs, des actifs pour le traitement de la peau sèche, des actifs anti-transpirants, des actifs anti-psoriatiques, des actifs protecteurs contre les UV, des actifs anti-histaminiques, des actifs cicatrisants, des actifs auto-bronzants, des antioxydants tels que le thé vert ou des fractions actives de celui-ci, la glycérine, la laponite, la caféine, des huiles essentielles aromatiques, des colorants, des actifs dépigmentants, des liporégulateurs, des actifs adoucissants, rafraîchissants, déodorants, insensibilisants, blanchissants, nourrissants, des actifs diminuant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée, et leurs mélanges. D'une manière générale, toute composition de l'invention peut être appliquée 20 sur la peau (sur toute zone cutanée du corps) ou sur les muqueuses (buccale, jugale, gingivale, génitale, conjonctivale, ...). De façon connue, une composition cosmétique peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des 25 solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes. Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés. La quantité de composé chimique ou biologique ou de polypeptide, de 30 séquence d'acides nucléiques ou d'agent modulateur conforme à l'invention contenue dans une composition selon l'invention, encore dite quantité efficace est, bien entendu, fonction de la nature du composé et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure. Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir un agent modulateur conforme à l'invention ou un polypeptide en une quantité représentant de 0,00001 % à 50 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 10 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition. Une composition selon l'invention peut être plus particulièrement dédiée à la réduction et/ou au traitement d'affections susceptibles de détériorer l'état d'un épithélium, et notamment d'un épiderme. It may also be possible to use enzymes having activity on the skin, such as proteases, lipases, glucosidases, amidases, cerebrosidases and / or melanases, and mixtures thereof. Other examples of active agents that are suitable for carrying out the present invention include: analgesic active agents, anti-yeast active agents, antibacterial active agents, anti-parasitic active agents, anti-fungal active agents, anti-viral active agents steroidal anti-inflammatory active agents, anesthetic active agents, anti-pruriginous active agents, keratolytic active agents, anti-free radical active agents, anti-seborrhoeic active agents, anti-dandruff active agents, anti-acne active agents, active ingredients to prevent aging of the skin and / or to improve its condition, anti-dermatitis active agents, anti-irritant active agents, immunomodulatory active agents, active ingredients for the treatment of dry skin, antiperspirant active ingredients, anti-active ingredients -specific, UV protective active ingredients, anti-histamine active ingredients, healing active ingredients, self-tanning active ingredients, antioxidants such as green tea or active fractions thereof ci, glycerine, laponite, caffeine, aromatic essential oils, dyes, depigmenting active ingredients, liporegulators, softening, refreshing, deodorant, numbing, whitening, nourishing, active ingredients that reduce differentiation and / or proliferation and / or skin pigmentation, and mixtures thereof. In general, any composition of the invention may be applied to the skin (on any cutaneous zone of the body) or to the mucous membranes (buccal, jugal, gingival, genital, conjunctival, etc.). In known manner, a cosmetic composition may also contain adjuvants which are customary in the cosmetic field, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic additives, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, filters , odor absorbers and coloring matter. The amounts of the various constituents of the compositions according to the invention are those conventionally used in the fields under consideration. The amount of chemical or biological compound or polypeptide, nucleic acid sequence or modulating agent according to the invention contained in a composition according to the invention, also known as the effective amount, is of course depending on the nature of the compound and the desired effect and can therefore vary to a large extent. To give an order of magnitude, a composition may contain a modulating agent according to the invention or a polypeptide in an amount representing from 0.00001% to 50% of the total weight of the composition, in particular in an amount representing 0.001% at 10% of the total weight of the composition, and more particularly in an amount representing from 0.1% to 1% of the total weight of the composition. A composition according to the invention may be more particularly dedicated to the reduction and / or treatment of conditions likely to deteriorate the state of an epithelium, and in particular of an epidermis.

Un tel état peut être d'origine chronologique (i.e. lié au temps écoulé comme le vieillissement cutané) et/ou indicatif d'un trouble cutané, lié par exemple au photovieillissement. Ainsi, une composition conforme à l'invention, notamment cosmétique, peut, en particulier, être destinée à prévenir et/ou traiter un amincissement d'un épiderme et/ou une perte de fermeté, d'élasticité, de densité et/ou de tonicité d'un épiderme et/ou la formation de rides et ridules. Selon un autre mode de réalisation, une composition conforme à l'invention, en particulier cosmétique, peut, notamment, être destinée à prévenir et/ou à traiter des signes cutanés de sécheresse, en particulier à prévenir et/ou à traiter une déshydratation d'un épiderme. Selon un autre mode de réalisation, une composition conforme à l'invention, notamment cosmétique, peut être destinée à prévenir et/ou à traiter des signes de vieillissement épidermique. Une composition conforme à la présente invention, notamment thérapeutique, peut être plus particulièrement destinée au traitement d'un trouble cutané tel qu'un trouble de l'hydratation de la peau, tel que la xérose, une parakératose, une hyperkératose, une ichtyose, un psoriasis, une dermatite atopique, un eczéma, une rosacée, un lichen, un prurit, une pathologie cutanée ayant une composante inflammatoire ou résultant d'une altération de la réponse immunitaire, une desquamation, un dérèglement de la mélanogénèse ou de la sébogenèse, une alopécie, l'hirsutisme, un trouble de la cicatrisation, ou un trouble cutané impliquant des phénomènes de sécrétion et de processus d'invasion cellulaire, notamment dans le cadre de néoplasies malignes ou bénignes. 19 Selon un autre aspect, la présente invention se rapporte à un procédé de traitement cosmétique des signes de vieillissement cutané comprenant au moins une étape consistant à appliquer sur une partie au moins de la peau, des muqueuses et/ou des fibres kératiniques, au moins une composition cosmétique conforme à l'invention. Such a state may be of chronological origin (i.e. related to the elapsed time as cutaneous aging) and / or indicative of a skin disorder, linked for example to photoaging. Thus, a composition according to the invention, in particular a cosmetic one, may, in particular, be intended to prevent and / or treat a thinning of an epidermis and / or a loss of firmness, elasticity, density and / or tonicity of an epidermis and / or the formation of wrinkles and fine lines. According to another embodiment, a composition according to the invention, in particular cosmetic, may, in particular, be intended to prevent and / or treat cutaneous signs of dryness, in particular to prevent and / or treat a dehydration of the skin. an epidermis. According to another embodiment, a composition according to the invention, in particular cosmetic, may be intended to prevent and / or treat signs of epidermal aging. A composition according to the present invention, in particular therapeutic, may be more particularly intended for the treatment of a skin disorder such as a disorder of the hydration of the skin, such as xerosis, parakeratosis, hyperkeratosis, ichthyosis, psoriasis, atopic dermatitis, eczema, rosacea, lichen, pruritus, skin pathology with an inflammatory component or resulting from an alteration of the immune response, desquamation, dysregulation of melanogenesis or sebogenesis, alopecia, hirsutism, a healing disorder, or a skin disorder involving secretory phenomena and the process of cellular invasion, particularly in the context of malignant or benign neoplasias. According to another aspect, the present invention relates to a method of cosmetic treatment of the signs of cutaneous aging comprising at least one step of applying to at least part of the skin, mucous membranes and / or keratin fibers, at least a cosmetic composition according to the invention.

Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins un polypeptide conforme à l'invention ou d'au moins un agent modulateur de l'expression dudit polypeptide pour la préparation et/ou l'amélioration d'un modèle cellulaire pluristratifié, notamment de type épidermique ou muqueux, et en particulier un modèle de peau reconstruite. In another aspect, the present invention relates to the use of an effective amount of at least one polypeptide according to the invention or at least one agent that modulates the expression of said polypeptide for the preparation and / or the improvement of a pluristratified cellular model, in particular of epidermal or mucosal type, and in particular a reconstructed skin model.

Au sens de l'invention, on entend désigner par modèle de peau reconstruite , un modèle dans lequel sont associés différents types cellulaires, tels que notamment les constituants naturels de la peau, à l'image par exemple des kératinocytes, des fibroblastes, des cellules de Langerhans et des mélanocytes. Les cellules de type fibroblastes peuvent être irradiées ou non. Within the meaning of the invention, the term "reconstructed skin model" is intended to denote a model in which different cell types are associated, such as, in particular, the natural constituents of the skin, for example, image of keratinocytes, fibroblasts or cells. of Langerhans and melanocytes. The fibroblast type cells may be irradiated or not.

De tels modèles et leur préparation sont connus de l'homme de l'art. La présente invention se rapporte en outre à un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques ou de facteurs physico-chimiques susceptibles de moduler une activité biologique d'un polypeptide selon l'invention comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact, avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, au moins un polypeptide conforme à l'invention et/ou soumettre ledit polypeptide audit facteur physico-chimique, dans des conditions propices à la manifestation de ladite activité biologique dudit polypeptide, et b) déterminer ladite activité biologique dudit polypeptide. Such models and their preparation are known to those skilled in the art. The present invention further relates to a method for screening biological or chemical compounds or physicochemical factors capable of modulating a biological activity of a polypeptide according to the invention comprising at least the steps of: a) bringing into contact with at least one chemical or biological compound to be tested, at least one polypeptide according to the invention and / or subjecting said polypeptide to said physicochemical factor, under conditions conducive to the manifestation of said biological activity of said polypeptide, and b) determine said biological activity of said polypeptide.

Dans un tel procédé, l'activité biologique du polypeptide, en particulier son activité de différenciation épithéliale, et notamment de différenciation épidermique terminale, notamment au regard des kératinocytes, peut, par exemple, être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art. Par exemple et de manière non limitative, on peut mentionner des méthodes de culture cellulaire suivie d'une caractérisation de marqueurs de différenciation, tels que par exemple la kératine 10, la filaggrine ou de marqueurs de prolifération, tels que par exemple KI 67 et PCNA. In such a method, the biological activity of the polypeptide, in particular its epithelial differentiation activity, and in particular epidermal terminal differentiation, especially with regard to keratinocytes, may, for example, be determined by any method known to those skilled in the art. 'art. For example and in a nonlimiting manner, mention may be made of cell culture methods followed by characterization of differentiation markers, such as, for example, keratin 10, filaggrin or proliferation markers, such as, for example, KI 67 and PCNA .

Selon un mode de réalisation, l'activité biologique du polypeptide peut être comparée à une valeur de référence. Une valeur de référence peut être obtenue en mesurant l'activité biologique du polypeptide en absence de tout composé biologique ou chimique ou facteur physico- chimique à tester. Dans l'hypothèse où cette mesure de valeur de référence est effectuée préalablement à la mise en oeuvre du composé biologique ou chimique ou du facteur physico-chimique à tester, la méthode selon l'invention peut permettre en outre, le cas échéant, d'apprécier l'efficacité potentielle dudit composé. According to one embodiment, the biological activity of the polypeptide can be compared to a reference value. A reference value can be obtained by measuring the biological activity of the polypeptide in the absence of any biological or chemical compound or physicochemical factor to be tested. In the hypothesis where this reference value measurement is carried out prior to the use of the biological or chemical compound or the physicochemical factor to be tested, the method according to the invention may furthermore, where appropriate, make it possible to appreciate the potential effectiveness of said compound.

Cette activité biologique peut ne pas être affectée par la présence dudit composé ou en revanche être inhibée ou stimulée. Dans l'hypothèse où un effet inhibiteur est constaté, le composé testé est susceptible d'être utilisé par exemple à titre d'actif anti-âge. Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé, obtenu soit d'une biopsie cutanée, soit à partir de cellules en culture. Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire convenant à l'invention, on peut mentionner un échantillon de kératinocytes. Avantageusement, un polypeptide mis en oeuvre dans un procédé selon la présente invention peut être la CLSP. This biological activity may not be affected by the presence of said compound or on the other hand be inhibited or stimulated. In the event that an inhibitory effect is found, the test compound is likely to be used for example as an anti-aging active. A method according to the invention may be carried out on an isolated cell sample obtained either from a skin biopsy or from cells in culture. Advantageously, as cell sample suitable for the invention, there may be mentioned a sample of keratinocytes. Advantageously, a polypeptide used in a process according to the present invention may be CLSP.

La présente invention concerne également un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques, susceptibles de moduler l'expression et/ou la stabilité d'un polypeptide conforme à l'invention comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact, avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, au moins un type cellulaire apte à exprimer une séquence d'acides nucléiques codant pour ledit polypeptide conforme à l'invention dans des conditions propices à la manifestation de l'expression de ladite séquence, et b) déterminer l'expression de ladite séquence d'acides nucléiques. L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut être déterminée, par 30 exemple, au moyen de sondes oligonucléotidiques, par tout protocole connu de l'homme de l'art. The present invention also relates to a method for screening biological or chemical compounds capable of modulating the expression and / or stability of a polypeptide according to the invention comprising at least the steps of: a) contacting, with at least one chemical or biological compound to be tested, at least one cell type capable of expressing a nucleic acid sequence coding for said polypeptide according to the invention under conditions favorable to the expression of said sequence, and b ) determining the expression of said nucleic acid sequence. Expression of a nucleic acid sequence can be determined, for example, by means of oligonucleotide probes, by any protocol known to those skilled in the art.

A titre d'exemple de méthodes de détection d'acides nucléiques conformes à l'invention, il peut être fait mention des méthodes citées précédemment. As an example of methods for detecting nucleic acids in accordance with the invention, mention may be made of the methods mentioned above.

La présente invention se rapporte également à un procédé de criblage de composés biologiques ou chimiques, voire d'actifs anti-âge, susceptibles de moduler l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention, comprenant au moins les étapes consistant à : a) mettre en contact, avec au moins un composé chimique ou biologique à tester, au moins un type cellulaire apte à exprimer un polypeptide conforme à l'invention dans des conditions propices à la manifestation de l'expression, dudit polypeptide. b) déterminer une teneur polypeptide, et c) comparer ladite teneur déterminée à l'étape b) à une teneur dudit polypeptide déterminée en absence de composé chimique ou biologique à tester. La comparaison effectuée à l'étape c) peut permettre de déduire une information quant à la propriété dudit composé testé à moduler l'expression d'un polypeptide conforme à l'invention. Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé. La détermination d'une teneur en polypeptide conforme à l'invention peut être 20 effectuée au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre de méthodes de détection d'un polypeptide, il peut être fait mention de celles citées précédemment. The present invention also relates to a method for screening biological or chemical compounds, or even anti-aging active agents, capable of modulating the expression of a polypeptide according to the invention, comprising at least the steps of: a ) contact, with at least one chemical or biological compound to be tested, at least one cell type capable of expressing a polypeptide according to the invention under conditions conducive to the expression of expression of said polypeptide. b) determining a polypeptide content, and c) comparing said content determined in step b) with a content of said determined polypeptide in the absence of chemical or biological compound to be tested. The comparison made in step c) may make it possible to deduce information as to the property of said test compound to modulate the expression of a polypeptide according to the invention. A process according to the invention can be carried out on an isolated cell sample. Determination of a polypeptide content according to the invention can be carried out by any method known to those skilled in the art. As methods for detecting a polypeptide, mention may be made of those mentioned above.

Les procédés conformes à l'invention peuvent être effectués sur un échantillon, 25 par exemple isolé, d'épithélium, notamment d'épiderme, obtenu à partir d'une biopsie cutanée ou d'un modèle cellulaire épithéliale, par exemple épidermique ou plus avantageusement d'un prélèvement de surface non invasif notamment par adhésif ( tape stripping ) de stratum corneum ou par simple lavage. Un prélèvement d'un échantillon d'épiderme peut se faire par toute méthode 30 connue de l'homme de l'art notamment telles que définies ci-dessus. The methods according to the invention can be carried out on a sample, for example isolated, of epithelium, in particular of epidermis, obtained from a cutaneous biopsy or an epithelial cellular model, for example epidermal or more advantageously a non-invasive surface sample, especially by stratum corneum tape or simply by washing. Sampling of an epidermis sample can be done by any method known to those skilled in the art in particular as defined above.

Au sens de la présente invention, un doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de au moins un . Les exemples figurant ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention. EXEMPLE I Analyse d'échantillons prélevés par stripping vernis sur différentes zones cutanées d'un individu Les analyses sont réalisées à partir de strippings vernis effectués sur les 10 jambes. Les sujets se prêtant à l'étude sont regroupés en 4 groupes. Le groupe AS correspond au groupe 1 : ménopausées sèches n=15. Le groupe AN correspond au groupe 2 : ménopausées normales n=13. Le groupe JS correspond au groupe 3 : jeunes sèches n=16. 15 Le groupe JN correspond au groupe 4 : jeunes normales n=14. Within the meaning of the present invention, one must be understood, unless otherwise indicated, in the sense of at least one. The examples given below are presented for illustrative and non-limiting purposes of the invention. EXAMPLE I Analysis of samples taken by varnished stripping on different skin zones of an individual The analyzes are carried out using varnished strippings carried out on the legs. Subjects suitable for study are grouped into 4 groups. Group AS corresponds to group 1: dry menopause n = 15. The AN group corresponds to group 2: normal menopause n = 13. Group JS corresponds to group 3: young dry n = 16. Group JN corresponds to group 4: normal youths n = 14.

1 : Préparation de poudres acétoniques Deux strippings vernis (B. Mehul et al., J Biol. Chem. 2000, Apr. 28; 275(17): 12841-7) de 10 cm sont disposés dans 20 ml d'acétone. Les cornéocytes se décollent. Le 20 mélange est filtré sur membrane de nylon de 40 m. Trois rinçages successifs sont effectués avec le même volume d'acétone. La suspension est finalement filtrée sur pompe à vide. On obtient des poudres acétoniques de stratum corneum sous forme sèche. 2 : Extraction des échantillons 25 On procède à une extraction en conditions natives. Pour ce faire, un préûlavage est réalisé avec un volume (100 l) de tampon PBS (Phosphate Buffer Saline) +0,1 % Triton X100 qui est ajouté par mg de poudres acétoniques. Le mélange est broyé au potter à 4 °C, puis il est centrifugé 10 minutes à 10 000 g. Le surnageant est recueilli. Un dosage de protéines est réalisé selon la technique de du BCA (Pierce). Les échantillons 30 sont ajustés à 0,15 mg/ml en tampon Laemmli 0,0625 mM tris pH 6,8, 200 mM DTT, 2 % SDS, 10 % glycérol.5 3 : Analyses des protéines par Western-blot Les protéines sont séparées par électrophorèse SDS-PAGE. Après transfert semi-sec sur membrane de PVDF (Immobilon-P Milipore) selon un protocole standard, les protéines sont incubées avec l'anticorps primaire anti-CLSP (Covalab DB15C9) toute une nuit à 4 °C. Puis la seconde incubation a lieu avec l'anticorps secondaire (IgG-HRP conjugate) (Bio-Rad) dirigé contre l'anticorps primaire 1h30 à température ambiante. La présence de la CLSP sur la membrane est révélée par immunodétection à l'aide du kit ECL Plus (Amersham). La membrane est ensuite colorée à l'Amidoblack pour détecter les protéines totales présentes sur la membrane. L'image est acquise au FluorSmax (Biorad) et les bandes quantifiées à l'aide du logiciel Quantity-one (Biorad). 1: Preparation of acetone powders Two lacquered strippings (B. Mehul et al., J Biol Chem 2000, Apr. 28; 275 (17): 12841-7) of 10 cm are arranged in 20 ml of acetone. The corneocytes take off. The mixture is filtered through a 40 m nylon membrane. Three successive rinses are performed with the same volume of acetone. The suspension is finally filtered on a vacuum pump. Acetonitrile powders of stratum corneum are obtained in dry form. 2: Extraction of samples Extraction is carried out under native conditions. To do this, prewashing is performed with a volume (100 l) of buffer PBS (Phosphate Buffer Saline) + 0.1% Triton X100 which is added per mg of acetone powders. The mixture is ground with the potter at 4 ° C. and is then centrifuged for 10 minutes at 10,000 g. The supernatant is collected. A protein assay is performed according to the technique of BCA (Pierce). The samples are adjusted to 0.15 mg / ml in Laemmli buffer 0.0625 mM tris pH 6.8, 200 mM DTT, 2% SDS, 10% glycerol. 3: Protein analyzes by Western blot The proteins are separated by electrophoresis SDS-PAGE. After semi-dry membrane transfer of PVDF (Immobilon-P Milipore) according to a standard protocol, the proteins are incubated with the primary anti-CLSP antibody (Covalab DB15C9) overnight at 4 ° C. Then the second incubation takes place with the secondary antibody (IgG-HRP conjugate) (Bio-Rad) directed against the primary antibody 1h30 at room temperature. The presence of CLSP on the membrane is revealed by immunodetection using the ECL Plus kit (Amersham). The membrane is then stained with Amidoblack to detect the total proteins present on the membrane. The image is acquired with FluorSmax (Biorad) and quantified bands using Quantity-one software (Biorad).

4 : Résultats Les résultats sont exprimés en delta cnt*mm2 de la protéine d'intérêt / delta cnt*mm2 des protéines totales. 4: Results The results are expressed as delta cnt * mm2 of the protein of interest / delta cnt * mm2 of the total proteins.

Méthodologie : - analyse de variance à 2 facteurs Age et Type de peau prenant en compte l'interaction de ces deux facteurs + analyse de variance à 1 facteur (groupe) et test de comparaisons multiples de Tukey. Les conditions de normalité et d'homoscédasticité n'étant pas vérifiées, l'analyse a été réalisée après transformation logarithmique. L'analyse statistique a été effectuée avec les logiciels SAS version 8.2 et SPSS version 12. Tous les tests ont été réalisés au seuil bilatéral de 5 %. Methodology: - 2-way analysis of variance Age and Skin type taking into account the interaction of these two factors + 1-factor analysis of variance (group) and Tukey multiple comparison test. The conditions of normality and homoscedasticity not being verified, the analysis was carried out after logarithmic transformation. The statistical analysis was carried out with the software SAS version 8.2 and SPSS version 12. All the tests were carried out at the bilateral threshold of 5%.

Le tableau ci-après reprend les résultats moyennés ainsi que leurs écart-types à 25 la moyenne (sem). CLSP sem CLSP groupe AS 1,4 0,2 AN 1,7 0,3 JS 0,9 0,2 JN 1,0 0,3 On note une augmentation significative de l'expression de la CLSP au cours du vieillissement cutané (augmentation moyenne estimée de 0,6 grade, p=0,02). The table below shows the averaged results and their standard deviations at the mean (wk). CLSP sem CLSP group AS 1.4 0.2 AN 1.7 0.3 JS 0.9 0.2 JN 1.0 0.3 There is a significant increase in the expression of CLSP during skin aging ( estimated average increase of 0.6 grade, p = 0.02).

Claims

Use of at least one amino acid sequence polypeptide encoded by a nucleic acid sequence represented in whole or in part by a sequence represented by SEQ ID NO: 1, an analogue thereof, or a fragment thereof or at least one nucleic acid sequence coding for said polypeptide as a tool for in vitro or ex vivo characterization of a state of an epithelium.

The use of claim 1 wherein said polypeptide has an amino acid sequence represented in whole or in part by a sequence represented by SEQ ID NO 2, an analogue thereof, or a fragment thereof.

3. Use according to claim 1 or 2 wherein said polypeptide has an amino acid sequence selected from SEQ ID NO 3, SEQ ID NO 4, SEQ ID NO 5, SEQ ID NO 6, SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8, SEQ ID NO 9, SEQ ID NO 10, SEQ ID NO 11, SEQ ID NO 12, SEQ ID NO 13, SEQ ID NO 14, SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 16, SEQ ID NO 17, SEQ ID N018, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO 20, SEQ ID NO 21, SEQ ID NO 22, SEQ ID NO 23, SEQ ID NO 24 and SEQ ID NO 25

4. Use according to any one of the preceding claims, wherein the state of the epithelium to be characterized is its chronological aging state.

A method of characterizing a state of an epithelium comprising at least the steps of: a) determining in a sample of said epithelium a polypeptide content as defined in any one of claims 1 to 3 or a sequence of nucleic acids encoding said polypeptide, and b) comparing said content determined in step a) with a reference value.

6. Method according to the preceding claim, characterized in that it is non-invasive.

7. Cosmetic use of an effective amount of at least one polypeptide as defined according to one of claims 1 to 3, of at least one nucleic sequence coding for such a polypeptide or at least one modulating agent of the invention. activity, stability or expression of such a polypeptide as a useful agent for preventing and / or treating the signs of skin aging.

8. Use of an effective amount of at least one polypeptide as defined according to one of claims 1 to 3, of at least one nucleic sequence encoding such a polypeptide or at least one modulating agent of the activity, stability or expression of such a polypeptide for the preparation of a therapeutic composition for preventing and / or treating the signs of skin aging.

The use according to any of claims 7 or 8, wherein the modulating agent is an agent decreasing the stability of said polypeptide.

10. Use according to any one of claims 7 to 9, wherein said beneficial agent or said composition is intended to prevent and / or treat a thinning of an epidermis and / or a loss of firmness, elasticity , density, and / or tonicity of an epidermis and / or the formation of wrinkles and fine lines.

11. Use as defined in claim 8 or 9, wherein said beneficial agent or said composition is intended to prevent and / or treat cutaneous signs of dryness, in particular to prevent and / or treat dehydration of an epidermis.

12. Use of at least one polypeptide as defined according to one of claims 1 to 3, as a screening tool for biological or chemical compounds capable of modulating the expression and / or stability and / or the biological activity of said polypeptide.

13. A method for screening anti-aging active agents comprising at least the steps of: a) contacting at least one cell type capable of expressing a polypeptide as defined in claim 1 to 3 with at least one chemical compound or biological test under conditions conducive to a manifestation of the expression of said polypeptide, b) determine a content of said polypeptide.

14. Cosmetic process for characterizing the efficacy of a cosmetic or therapeutic treatment intended to supplement the signs of skin aging related to chronological aging, comprising at least the qualitative or quantitative characterization of the expression and / or biological activity of the skin. a polypeptide as defined in claim 1 to 3.

15. Use of an effective amount of at least one polypeptide as defined in any one of claims 1 to 3, or at least one agent modulating the expression of said polypeptide for the preparation and / or the improvement of a pluristratified cellular model, in particular a reconstructed skin model.5