FR2640628A1 - beta -(1->6) Bonded oligosaccharides, in particular 2-acetamido-2-deoxy-glucoses or -galactoses and their preparation. - Google Patents

beta -(1->6) Bonded oligosaccharides, in particular 2-acetamido-2-deoxy-glucoses or -galactoses and their preparation. Download PDF

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FR2640628A1
FR2640628A1 FR8816648A FR8816648A FR2640628A1 FR 2640628 A1 FR2640628 A1 FR 2640628A1 FR 8816648 A FR8816648 A FR 8816648A FR 8816648 A FR8816648 A FR 8816648A FR 2640628 A1 FR2640628 A1 FR 2640628A1
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sep
substituted
oligosaccharides
deoxy
radical
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Inventor
Jacques Defaye
Andree Gadelle
Christian Pedersen
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Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Commissariat a lEnergie Atomique et aux Energies Alternatives CEA
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Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Commissariat a lEnergie Atomique CEA
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof

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Abstract

The invention relates to new (1->6) bonded oligosaccharides: in which x is an integer ranging from 3 to 6, R<1> and R<2>, which are different, represent H or OH and R<3> is an amido or imido radical. These oligosaccharides may be prepared by dissolving the corresponding 2-acylamido- alpha -deoxy-hexose in hydrofluoric acid followed by a slow evaporation of the solution.

Description

Oliaosaccharides Liés ss-(1#6) en oarticutier des
2-acétamido-2-désoxy-glucoses ou - galactoses, et
leur préparation
La présente invention concerne de nouveaux
oLigosaccharides Liés ss-(1#6), en particuLier
Les otigosaccharides dérivés du 2-acétamido-2-dXsoxy-
D-gLucose et du 2-acetamido-2-désoxy-D-galactose,
ainsi qu'un procédé pour la préparation d'oligosac-
charides de 2-acylamido-2-desoxy-hexoses liés ss-(1#6) à partir des 2-acylamido-2-désoxy-hexoses
correspondants ou à partir de polysaccharides
naturels comportant ces unites Liées par des ponts
beta-(1 4) glycosidiques, comme La chitine
Ces oligosaccharides d'acylamido-hexoses
Liés B-(1 6) ou Leurs dérivés peuvent trouver
des applications dans Le domaine des immunostimu
Lants. En effet, on sait que Le Lipide A qui est
un composant de Liposaccharîdes de bactéries gram
négatives et qui comporte un motif disaccharidique
2-acylamido-2-désoxy-D-glucopyranose Lié ss-(1#6)
a des propriétés immunostimulantes.Oliaosaccharides Related to ss- (1 # 6) in joint
2-acetamido-2-deoxy-glucoses or - galactoses, and
their preparation
The present invention relates to new
ss- bound oligosaccharides (1 # 6), in particular
Otigosaccharides derived from 2-acetamido-2-dXsoxy-
D-gLucose and 2-acetamido-2-deoxy-D-galactose,
as well as a process for the preparation of oligosac-
ss- (1 # 6) linked 2-acylamido-2-deoxy-hexoses charides from 2-acylamido-2-deoxy-hexoses
corresponding or from polysaccharides
natural comprising these units Linked by bridges
beta-(1 4) glycosidics, such as chitin
These acylamido-hexoses oligosaccharides
Related B- (1 6) or Their derivatives can be found
applications in the field of immunostimu
Lants. Indeed, we know that Lipid A which is
a component of Liposaccharides from gram bacteria
negative and which has a disaccharide unit
2-acylamido-2-deoxy-D-glucopyranose Bound ss- (1 # 6)
has immunostimulatory properties.

Les oligosaccharides d'acyLamido-hexoses
Liés S -(1-6) de L'invention peuvent aussi trouver
d'autres applications, par exempLe comme synthons,
agents hémostatiques, agents anti-tumoraux ou agents chelatants. Acylamido-hexose oligosaccharides
Related S - (1-6) of the invention can also be found
other applications, for example as building blocks,
hemostatic agents, anti-tumor agents or chelating agents.

Les procédés connus actuellement pour
préparer des oLigosaccharides liés ss-(1#6) ont
permis uniquement de préparer les structures disac
charidiques du 2-acétamido-2-désoxy-D-glucopyranose
et du 2-acétamido-2-désoxy-D-galactopyranose.The methods currently known for
preparing ss- (1 # 6) linked oligosaccharides have
only allowed to prepare disac structures
2-acetamido-2-deoxy-D-glucopyranose charidics
and 2-acetamido-2-deoxy-D-galactopyranose.

Dans te cas des oligosaccharides dérivés
du glucose, La structure disaccharidique peut être obtenue, soit par réversion du 2-acétamido-2-désoxy-
D-glucose en presence de vapeurs de chlorure d'hydrogène, ce qui conduit à un mélange anomérique, comme il est décrit par Foster et al dans J. Chem. Soc., (1958), p. 1890-94, soit par une suite de réactions en pLusieurs étapes impliquant une condensation de type Koenigs-Knorr, comme il est decrit par
Excoffier et aL dans Tetrahedron Lett., 50, (1972), p. 5065-5068 et par BundLe et aL dans Carbohydr.In the case of derived oligosaccharides
glucose, The disaccharide structure can be obtained either by reversion of 2-acetamido-2-deoxy-
D-glucose in the presence of hydrogen chloride vapors, which leads to an anomeric mixture, as described by Foster et al in J. Chem. Soc., (1958), p. 1890-94, or by a series of reactions in several stages involving a condensation of the Koenigs-Knorr type, as described by
Excoffier et al in Tetrahedron Lett., 50, (1972), p. 5065-5068 and by BundLe et aL in Carbohydr.

Res., 21, (1972), p. 211-217.Res., 21, (1972), p. 211-217.

Dans Le cas des oligosaccharides dérivés du gaLactose, le disaccharide a pu etre préparé en utilisant un procédé de condensation comme iL est décrit par King et aL dans Can. J. Chem., 53, (1975), p. 1970-72. In the case of oligosaccharides derived from gaLactose, the disaccharide could be prepared using a condensation process as described by King et al in Can. J. Chem., 53, (1975), p. 1970-72.

Ces procédés qui sont pour La plupart difficiles à mettre en oeuvre ne conduisent pas à un rendement satisfaisant et ne permettent pas de produire et d'isoler les oligosaccharides homologues supérieurs recherchés, ayant un d.p. -supérieur à 2. These processes, which are for the most part difficult to carry out, do not lead to a satisfactory yield and do not make it possible to produce and isolate the desired higher homologous oligosaccharides, having a d.p. - greater than 2.

La présente invention a précisément pour objet des oligosaccharides Liés ss-(1# 6) dérivés de 2-acyLami do-2-désoxy-hexoses ou 2-acyLimido-2-désoxy-hexoses, qui peuvent etre prépares par des procédés plus faciles à mettre en oeuvre, avec de bons rendements, en donnant La possibiLite d'iso 1er Les différents oLigosaccharides produits. The present invention specifically relates to ss- (1 # 6) linked oligosaccharides derived from 2-acyLami do-2-deoxy-hexoses or 2-acyLimido-2-deoxy-hexoses, which can be prepared by more easily processed methods. implement, with good yields, giving the possibility of iso 1er the different oligosaccharides produced.

Les oligosaccharides Liés ss-(1+ 6) répondent à La formuLe :

Figure img00020001

dans laquelle x est un nombre entier allant de 3 à 6, R1 et R2 qui sont différents, représentent
H ou OH, et R3 est un radicaL choisi parmi les radicaux de formules :
Figure img00030001

dans LesqueLLes R4 represente un atome d'hydrogene, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitue ou non substitué, ou un radicaL aryle substitué ou non substitué, R5 et R6 qui peuvent être identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitué ou un radicaL aryle substitué ou non substitué, et R7 représente un radicaL bivalent choisi parmi -(CH2)n- et
Figure img00030002

avec n étant un nombre entier de 2 à 10.The linked ss- (1+ 6) oligosaccharides correspond to the formula:
Figure img00020001

in which x is an integer ranging from 3 to 6, R1 and R2 which are different, represent
H or OH, and R3 is a radical chosen from the radicals of formulas:
Figure img00030001

in which R4 represents a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted, or a substituted or unsubstituted aryl radical, R5 and R6 which may be identical or different represent a hydrogen atom, a radical hydrocarbon, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted or a substituted or unsubstituted aryl radical, and R7 represents a divalent radical selected from - (CH2) n- and
Figure img00030002

with n being an integer from 2 to 10.

L'invention concerne également les énantiomères de la série L des oligosaccharides de formuLe (I). The invention also relates to the enantiomers of the L series of the oligosaccharides of formula (I).

Selon un premier mode de réalisation de L'invention, il s'agit d'oligosaccharides du 2-acylamido-2-désoxy-D-glucopyranose Liés ss-(1#6) répondant à la formule

Figure img00030003

dans laquelle x est un nombre entier de 3 à 6, et R3 a La signification donnee ci-dessus, ainsi que Leurs énantiomères de la série L. According to a first embodiment of the invention, they are oligosaccharides of 2-acylamido-2-deoxy-D-glucopyranose linked ss- (1 # 6) corresponding to the formula
Figure img00030003

where x is an integer from 3 to 6, and R3 has the meaning given above, as well as their L-series enantiomers.

Selon un second mode de réalisation de
L'invention, il s'agit d'oligosaccharides du 2-acylamido-2-désoxy-D-galactopyranose Liés S-(1s 6) répondant à la formule :

Figure img00040001

dans laquelLe x est un nombre entier de 3 à 6 et
R3 a la signification donnée ci-dessus, ainsi que leurs énantiomères de la série L.According to a second embodiment of
The invention is S- (1s 6) linked 2-acylamido-2-deoxy-D-galactopyranose oligosaccharides corresponding to the formula:
Figure img00040001

where x is an integer from 3 to 6 and
R3 has the meaning given above, as well as their L series enantiomers.

Dans Les oligosaccharides de L'invention, les radicaux R4, R5 et R6 peuvent représenter un atome d'hydrogène ou un radical hydrocarboné saturé ou insaturé, Linéaire ou ramifié, substitué ou non substitue, ayant par exempLe de 1 à 16 atomes de carbone, de préférence de 1 à 10 atomes de carbone. A titre d'exemple de tels radicaux hydrocarbonés, on peut citer les radicaux alkyle comme Le radicaL méthyle. In the oligosaccharides of the invention, the radicals R4, R5 and R6 may represent a hydrogen atom or a saturated or unsaturated, linear or branched, substituted or unsubstituted hydrocarbon radical, for example having from 1 to 16 carbon atoms, preferably from 1 to 10 carbon atoms. By way of example of such hydrocarbon radicals, mention may be made of alkyl radicals such as methyl radical.

Selon l'invention, R4, R5 et R6 peuvent aussi représenter un radicaL aryle substitué ou non substitué, par exempLe un radicaL phényLe ou naphtyle. According to the invention, R4, R5 and R6 may also represent a substituted or unsubstituted aryl radical, for example a phenyl or naphthyl radical.

Les substituants des radicaux hydrocarbonés ou des radicaux aryle utiLises pour R4, R5 ou R6 peuvent être de différents types. A titre d'exemples de ces substituants, on peut citer Les atomes d'haLogène et Les radicaux alcoxy de 1 à 4 atomes de carbone. The substituents of the hydrocarbon radicals or of the aryl radicals used for R4, R5 or R6 can be of different types. As examples of these substituents, mention may be made of halogen atoms and alkoxy radicals of 1 to 4 carbon atoms.

Selon I1 invention, R3 peut être un radical amido ou imido. According to the invention, R3 can be an amido or imido radical.

A titre d'exemple, R3 peut représenter
HNCOCH3, ou le radical amido de L'acide benzoique ou méthoxy benzoique.By way of example, R3 can represent
HNCOCH3, or the amido radical of benzoic or methoxy benzoic acid.

De façon plus générale, on a noté que tout dérivé de La fonction amine susceptibLe de conduire à la formation d'ions glycosyloxazolinium pouvait etre utiLise pour R3, en particuLier Le radical phtalimido. More generally, it has been noted that any derivative of the amine function capable of leading to the formation of glycosyloxazolinium ions could be used for R3, in particular the phthalimido radical.

Les oligosaccharides de L'invention peuvent être préparés facilement à partir du 2-acylamido-2-désoxy-hexose correspondant. The oligosaccharides of the invention can be prepared easily from the corresponding 2-acylamido-2-deoxy-hexose.

Aussi, L'invention a egaLement pour objet un procédé de préparation d'oligosaccharides d'un 2-acylamido-2-désoxy-hexose Liés B-(1s 6), qui consiste à préparer une soLution d'un 2-acylamido-2-désoxy-hexose de formule :

Figure img00050001

dans laquelle R1, R2 et R3 ont La signification donnée ci-dessus, ou de son énantiomère de La série
L, dans du fluorure d'hydrogène de façon à former des ions glycosyl oxazolinium, et à évaporer ensuite
Lentement La solution.Also, the invention also relates to a process for the preparation of oligosaccharides of a 2-acylamido-2-deoxy-hexose linked B- (1s 6), which consists in preparing a solution of a 2-acylamido-2 -deoxy-hexose of formula:
Figure img00050001

in which R1, R2 and R3 have the meaning given above, or its enantiomer of the series
L, in hydrogen fluoride so as to form glycosyl oxazolinium ions, and then to evaporate
Slowly The solution.

Selon L'invention, Le 2-acylamido-2-désoxy -hexose peut être en particulier le 2-acylamido-2-desoxy-D-glucose ou le 2-acylamido-2-désoxy-D-galactose, par exemple le 2-acetamido-2-désoxy-D-glucose ou Le 2-acétamido-2-désoxy-D- galactose. According to the invention, 2-acylamido-2-deoxy -hexose can in particular be 2-acylamido-2-deoxy-D-glucose or 2-acylamido-2-deoxy-D-galactose, for example 2- acetamido-2-deoxy-D-glucose or 2-acetamido-2-deoxy-D-galactose.

Dans ce procédé, il semble que Les ions oxazolinium formés dans La solution soient L'entite réactive. Ainsi, ils permettent La réalisation de réactions de substitution intermoléculaires extrêmement sélectives par l'hydroxyle en position 6 d'autres unités hexopyranosidiques, Lors de L'éva- poration lente du fluorure d'hydrogène où La concentration du mi Lieu devient propice à ce type d'autocondensation. In this process, it appears that the oxazolinium ions formed in the solution are the reactive entity. Thus, they allow the realization of extremely selective intermolecular substitution reactions with the hydroxyl in position 6 of other hexopyranosidic units, during the slow evaporation of hydrogen fluoride where the concentration of the medium becomes conducive to this type. self-condensation.

Dans ce cas, Lorsque Le radical acyle est un radicaL acétyle, on peut préparer les o Ligosacchari des du 2-acétamido-2-désoxy-D-glucopyranose Liés ss-(1#6) en préparant la solution de 2-acétamido-2-désoxy-D-glucose par réaction de
La chitine avec du fluorure d'hydrogène pendant une durée suffisante pour que La solution obtenue ne contienne que Les fragments monosatcharidiques provenant de La dégradation de la chitine. On soumet ensuite cette solution à une évaporation lente pour obtenir les oligosaccharides recherchés.In this case, when the acyl radical is an acetyl radical, we can prepare the Ligosacchari of the 2-acetamido-2-deoxy-D-glucopyranose linked ss- (1 # 6) by preparing the solution of 2-acetamido-2 -deoxy-D-glucose by reaction of
Chitin with hydrogen fluoride for a time sufficient for the resulting solution to contain only the monosatcharidic fragments resulting from the degradation of chitin. This solution is then subjected to slow evaporation to obtain the desired oligosaccharides.

On savait par Bosso et aL dans Carbohyd. We knew from Bosso and aL in Carbohyd.

Res., 156, (1986), p. 57-68, que La fluorolyse de la chitine dans du fluorure d'hydrogène anhydre conduisait aux oligosaccharides Liés ss-(1#4) du 2-acétamido-2-désoxy-D-glucopyranose avec un bon rendement. Ainsi, pour des durées allant jusqu'à 24h, à 20 C la chitine était dégradée en donnant plusieurs types d'ion oxazolinium. Après 24h à 2O0C, la chitine était complètement dégradée et L'on ne trouvait plus en solution qu'un seul type d'ion oxazolinium. Cependant, selon cet article, en soumettant ensuite Les produits à une hydrolyse, on obtenait Les oligosaccharides liés ss-(1#4) correspondants ou L'unité monosaccharidique, soit le 2-acétamido-2-désoxy-D glucose.Res., 156, (1986), p. 57-68, that the fluorolysis of chitin in anhydrous hydrogen fluoride led to the ss- (1 # 4) linked oligosaccharides of 2-acetamido-2-deoxy-D-glucopyranose in good yield. Thus, for periods of up to 24 hours, at 20 ° C., the chitin was degraded to give several types of oxazolinium ion. After 24 hours at 20 ° C., the chitin was completely degraded and only one type of oxazolinium ion was found in solution. However, according to this article, by then subjecting the products to hydrolysis, the corresponding ss- (1 # 4) linked oligosaccharides or the monosaccharide unit, ie 2-acetamido-2-deoxy-D glucose, were obtained.

En revanche, dans Le procédé de L'invention, on provoque une réaction de substitution intermoléculaire entre les unités monosaccharidiques par évaporation lente du fluorure d'hydrogène pour former les oligosaccharides lies -(16) correspondants. On the other hand, in the process of the invention, an intermolecular substitution reaction is caused between the monosaccharide units by slow evaporation of hydrogen fluoride to form the corresponding linked oligosaccharides - (16).

Les reactions qui se produisent dans le procédé de l'invention sont représentées sur la figure annexée qui illustre la préparation d'oligosaccharides liés ss-(1#6) à partir de La chitine. The reactions which occur in the process of the invention are shown in the accompanying figure which illustrates the preparation of ss- (1 # 6) linked oligosaccharides from chitin.

Sur cette figure, on voit que la chitine de formule (IV) se dégrade, par dissolution dans
Le fluorure d'hydrogene anhydre à 200C, pour former des fluorures d'oligosaccharides Liés ss-(1#4) de formule (V) et (VI) si La durée n'excède pas 8h. Après 8h de maintien dans Le fluorure d'hydrogène à 20 C, on obtient uniquement te fragment monosaccharidique de formule (VII) sous La forme de L'ion furanosyl oxazolinium. Cet ion se transforme par autocondensation, Lors de L'évaporation de L'acide fluorhydrique, en L'oligosaccharide Lié ss-(1#6) de formule (II). In this figure, it can be seen that the chitin of formula (IV) is degraded, by dissolution in
Anhydrous hydrogen fluoride at 200C, to form fluorides of linked oligosaccharides ss- (1 # 4) of formula (V) and (VI) if the duration does not exceed 8 hours. After keeping for 8 hours in hydrogen fluoride at 20 ° C., only the monosaccharide fragment of formula (VII) is obtained in the form of the furanosyl oxazolinium ion. This ion is transformed by autocondensation, during the evaporation of the hydrofluoric acid, into the bound oligosaccharide ss- (1 # 6) of formula (II).

Ainsi, selon L'invention, Lorsqu'on part de la chitine, on laisse La reaction de fluorolyse se poursuivre pendant une durée suffisante pour que seul le fragment monosaccharidique correspondant puisse être détecte dans le milieu réactionnel, par exemple par La technique de résonance magnétique nucléaire du 13C, les caractéristiques de ce fragment monosaccharidique sous la forme de cation glycosyL oxazolinium étant les suivantes (#ppm, 13,6 CH3C+, 80,6 C-4, 114,0 C-1). Thus, according to the invention, when starting from chitin, the fluorolysis reaction is allowed to continue for a sufficient time so that only the corresponding monosaccharide fragment can be detected in the reaction medium, for example by the magnetic resonance technique. nuclear 13C, the characteristics of this monosaccharide fragment in the form of glycosyl oxazolinium cation being as follows (#ppm, 13.6 CH3C +, 80.6 C-4, 114.0 C-1).

Cette duree est généralement de 8 à 10h. This duration is generally 8 to 10 hours.

Lorsqu'on met en oeuvre le procédé de
L'invention en partant d'un 2-acylamido-2-désoxy-hexose, on réalise la dissolution dans du fluorure d'hydrogène à OOC et on agite La solution jusqu'à dissolution tout en La Laissant revenir à La température ambiante.When the method of
The invention starting with 2-acylamido-2-deoxy-hexose, dissolving in hydrogen fluoride at OOC and stirring the solution until dissolved while allowing it to come to room temperature.

Dans ce cas, il n'est pas nécessaire d'attendre pour former Les ions oxazolinium et on peut réaliser immédiatement L'évaporation Lente du fluorure d'hydrogène, en plaçant par exemple le récipient contenant la solution sous une bonne hotte pour concentrer la solution par évaporation du fluorure d'hydrogène. Cette évaporation est habituellement obtenue en 10 à 15h environ.In this case, it is not necessary to wait to form the oxazolinium ions and one can immediately carry out the Slow evaporation of the hydrogen fluoride, for example by placing the container containing the solution under a good hood to concentrate the solution. by evaporation of hydrogen fluoride. This evaporation is usually obtained in about 10 to 15 hours.

On dissout alors le résidu visqueux dans de l'eau, puis on neutralise La solution aqueuse, par exemple par addition de carbonate de calcium pulvérulent. Après filtration, on lyophilise La solution et on utilise le résidu pulvérulent comme produit de départ pour La séparation des différents oligosaccharides par chromatographie. The viscous residue is then dissolved in water, then the aqueous solution is neutralized, for example by adding powdered calcium carbonate. After filtration, the solution is lyophilized and the pulverulent residue is used as the starting material for the separation of the various oligosaccharides by chromatography.

Cette séparation peut être réaLisée par chromatographie d'exclusion de gel en utilisant par exemple le Bio-Gel P-4 avec L'acétate d'ammonium comme éluant ; dans Le cas ou Les oligosaccharides sont produits à partir de La chitine, on effectue une première séparation chromatographique avec
L'acétate d'ammonium comme éluant puis une seconde purification sur le même gel avec L'eau gluant. This separation can be carried out by gel exclusion chromatography using, for example, Bio-Gel P-4 with ammonium acetate as eluent; in the case where the oligosaccharides are produced from chitin, a first chromatographic separation is carried out with
Ammonium acetate as eluent then a second purification on the same gel with sticky water.

Dans Le cas où Les oligosaccharides sont obtenus à partir d'une solution de 2-acyLamido-2-désoxy-hexose, on peut réaliser une seule séparation chromatographique sur Le Bio-GeL P-4 en utilisant uniquement l'eau comme éluant. In the case where the oligosaccharides are obtained from a solution of 2-acylamido-2-deoxy-hexose, a single chromatographic separation can be carried out on Bio-GeL P-4 using only water as eluent.

Selon L'invention, on peut également utiliser pour La préparation d'oligosaccharides
Liés ss-(1#6) de 2-acylamido-2-désoxyhexoses différents d'un 2-acyLamino-2-désoxy-glucose, des polysaccharides comportant le motif répétitif voulu en opérant dans des conditions sensiblement analogues à celles utilisées lorsqu'on part de la chitine.According to the invention, it is also possible to use for the preparation of oligosaccharides
Bound ss- (1 # 6) of 2-acylamido-2-deoxyhexoses other than 2-acylamino-2-deoxy-glucose, polysaccharides comprising the desired repeating unit by operating under conditions substantially analogous to those used when part of chitin.

Dans ce cas, la solution est généralement maintenue à la température ambiante en vase clos, pendant 8 à 10h, de façon à permettre La fluorolyse complète des Liaisons interosidiques préexistantes dans le polysaccharide.In this case, the solution is generally maintained at room temperature in a closed vessel, for 8 to 10 hours, so as to allow complete fluorolysis of the pre-existing interoside bonds in the polysaccharide.

Après cette réaction, on évapore lentement
Le fluorure d'hydrogène et on peut séparer les oligosaccharides par chromatographie d'exclusion de gel comme précédemment. Pour tenir compte d'impuretes éventuellement présentes provenant du produit de départ, il est préférable d'effectuer une séparation chromatographique en deux temps en utilisant successivement L'acétate d'ammonium, puis l'eau comme éluants.After this reaction, we evaporate slowly
Hydrogen fluoride and the oligosaccharides can be separated by gel exclusion chromatography as before. To take account of any impurities present originating from the starting product, it is preferable to carry out a chromatographic separation in two stages, successively using ammonium acetate, then water as eluents.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront mieux à la Lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illustratif et non Limitatif. Other characteristics and advantages of the invention will become more apparent on reading the following examples, which are obviously given by way of illustration and are not limiting.

Exemple 1 : Préparation d'oligosaccharides Liés ss-(1#6) du 2-acétamido-2-désoxy-D-glucopyranose. Example 1: Preparation of ss- (1 # 6) Linked Oligosaccharides of 2-acetamido-2-deoxy-D-glucopyranose.

On dissout 59 de 2-acétamido-2-desoxy-D-glucose dans 10ml. de fluorure d'hydrogène anhydre à 0 C et on agite la solution ZOOC dans un récipient ouvert. Après 15h d'agitation, on obtient un résidu pâteaux que l'on dissout dans 1ûmL d'eau, contenant une quantité de carbonate de calcium pulvérulent suffisante pour neutraliser l'acidité résiduelle. Auprès filtration, on Lyophilise la solution ce qui permet d'obtenir 59 d'un mélange d'oligosaccharides bruts. 59 of 2-acetamido-2-deoxy-D-glucose are dissolved in 10 ml. of anhydrous hydrogen fluoride at 0 C and the ZOOC solution is stirred in an open container. After 15 hours of stirring, a pastry residue is obtained which is dissolved in 1 μl of water, containing a quantity of powdered calcium carbonate sufficient to neutralize the residual acidity. After filtration, the solution is lyophilized, which makes it possible to obtain 59 of a mixture of crude oligosaccharides.

On sépare alors ce mélange par chromatographie d'exclusion de gel de la façon suivante :
L'appareillage est constitué d'une pompe à débit contrôle Milton-Roy (minipompe A, 350 bars ;
Dosapro, Pont St Pierre, France) réglée à un débit de 110mL/h, commutée à 2 colonnes de verre 5x100cm (K50/100, Pharmacia, Uppsala) remplies de Bio-Gel
P-4 (200-400mesh ; Pharmacia). On assure La détection des produits en sortie de colonne par un refractomè- tre (Waters, modèle R 401) monté en série. On dissout chaque échantillon de lg dans 5ml d'eau et on l'introduit au sommet de la colonne par
L'intermédiaire d'une boucle d'injection (Rhéodyne,
Cotati, CA ; modèle 7010).On collecte automatiquement les fractions issues de la colonne toutes les 10min, et on réunit celles qui ont un volume hydrodynamique similaire, puis on Les concentre et on Les sèche par lyophilisation.This mixture is then separated by gel exclusion chromatography as follows:
The apparatus consists of a Milton-Roy control flow pump (minipump A, 350 bars;
Dosapro, Pont St Pierre, France) regulated at a flow rate of 110mL / h, switched to 2 glass columns 5x100cm (K50 / 100, Pharmacia, Uppsala) filled with Bio-Gel
P-4 (200-400mesh; Pharmacia). Detection of the products at the column outlet is ensured by a refractometer (Waters, model R 401) mounted in series. Each 1g sample is dissolved in 5ml of water and introduced at the top of the column by
The intermediary of an injection loop (Rheodyne,
Cotati, CA; model 7010). The fractions from the column are automatically collected every 10 min, and those which have a similar hydrodynamic volume are pooled, then they are concentrated and dried by lyophilization.

On réalise un seul cycle d'élution par l'eau. A single cycle of elution with water is carried out.

On obtient ainsi 5 fractions d'oligosaccharides ayant un dp de 2 à 6. On détermine les caractéristiques de chaque fraction. Les résultats obtenus ainsi que les rendements en oligosaccharides sont donnés dans Le tableau 1 annexé. In this way 5 fractions of oligosaccharides having a dp of 2 to 6 are obtained. The characteristics of each fraction are determined. The results obtained as well as the yields of oligosaccharides are given in Table 1 attached.

Les résultats de spectrométrie RMN du 13C dans l'oxyde de deutérium utilisant Le 1,4-dioxane (d 67,4) comme standard sont données dans le tableau 2. The results of 13C NMR spectrometry in deuterium oxide using 1,4-dioxane (d 67.4) as a standard are given in Table 2.

Exemple 2 : Préparation d'olisosaccharides liés B-(1+ 6) du 2-acétamido-2-désoxy-D-glucopyranose.Example 2: Preparation of B- (1+ 6) linked olisosaccharides of 2-acetamido-2-deoxy-D-glucopyranose.

Dans cet exemple, on part de la chitine. In this example, we start with chitin.

Dans ce but, on ajoute 109 de chitine à 50ml de fluorure d'hydrogène anhydre à une température de 0 C pui on agite la suspension pendant 10min jusqu'à dissolution tout en laissant la température remonter à la température ambiante. On abandonne alors La solution claire obtenue pendant 8 à 10h à La température ambiante dans un récipient fermé.For this purpose, 109 of chitin is added to 50 ml of anhydrous hydrogen fluoride at a temperature of 0 C then the suspension is stirred for 10 min until dissolved while allowing the temperature to return to room temperature. The clear solution obtained is then left for 8 to 10 hours at room temperature in a closed container.

On ouvre ensuite le récipient en le disposant sous une hotte de façon à permettre l'évaporation du fluorure d'hydrogène. Après 15h, on obtient un résidu pateux que l'on dissout dans 20ml d'eau, puis on ajoute à La solution du carbonate de calcium pulvérulent jusqu'à réaction neutre.The container is then opened by placing it in a hood so as to allow evaporation of the hydrogen fluoride. After 15 h, a pasty residue is obtained which is dissolved in 20 ml of water, then powdered calcium carbonate is added to the solution until neutral reaction.

On filtre alors La solution, puis on ta lyophilise, et t'on obtient ainsi 129 d'un mélange brut d'oligosaccharides
On sépare alors ce mélange par chromatographie.The solution is then filtered, then it is lyophilized, and you thus obtain 129 of a crude mixture of oligosaccharides
This mixture is then separated by chromatography.

La séparation chromatographique est réalisée dans Les mêmes conditions que celles de l'exemple 1, sauf que l'on réalise deux cycles de séparation. The chromatographic separation is carried out under the same conditions as those of Example 1, except that two separation cycles are carried out.

Tout d'abord le mélange est fractionné en utilisant de L'acétate d'ammonium aqueux 50mM amené à pH 4,5 par de L'acide acétique, comme éluant. On soumet ensuite les fractions récupérées à une chromatographie sur La même colonne en utilisant L'eau comme éluant. Les caractéristiques et Les rendements en oligosaccharides, obtenus dans ces conditions sont sensiblement les mêmes que ceux obtenus dans l'exemple 1 et figurant dans les tableaux 1 et 2.First of all, the mixture is fractionated using 50 mM aqueous ammonium acetate brought to pH 4.5 with acetic acid, as eluent. The fractions recovered are then subjected to chromatography on the same column using water as eluent. The characteristics and the yields of oligosaccharides obtained under these conditions are substantially the same as those obtained in Example 1 and appearing in Tables 1 and 2.

Exemple 3 : Préparation d'oligosaccharides Liés ss-(1-6) du 2-acétamido-2-désoxy-D-galactopyranose.Example 3: Preparation of ss- (1-6) linked oligosaccharides of 2-acetamido-2-deoxy-D-galactopyranose.

Dans cet exemple, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 1, sauf que l'on utilise 59 de 2-acétamido-2-désoxy-D-galactose au lieu de 59 de 2-acétamido-2-dêsoxy-D-glucose. In this example, the same procedure is followed as in Example 1, except that 59 of 2-acetamido-2-deoxy-D-galactose is used instead of 59 of 2-acetamido-2-deoxy-D. -glucose.

Les caractéristiques et les rendements en oligosaccharides sont donnés dans Le tableau 3 annexé.The characteristics and the yields of oligosaccharides are given in Table 3 attached.

Le tableau 4 illustre les résultats obtenus lors de l'analyse par résonance magnétique nucléaire du 13C des oligosaccharides séparés ayant des dp de 2, 3, 4. Ces mesures ont été effectuées en prenant comme étalon le 1,4-dioxanne (d 67,4). Table 4 illustrates the results obtained during the analysis by nuclear magnetic resonance of 13C of the separated oligosaccharides having dp of 2, 3, 4. These measurements were carried out using 1,4-dioxane as standard (d 67, 4).

Dans les exemples, on a utilisé des oses et polyosides de la série D mais iL va de soi que les oses et les polyosides de La série L sont utilisables de la meme façon et conduisent aux dérivés correspondants (oligosaccharides de La série L). In the examples, oses and polysaccharides of the D series were used, but it goes without saying that the oses and polysaccharides of the L series can be used in the same way and lead to the corresponding derivatives (oligosaccharides of the L series).

TABLEAU 1

Figure img00130001
TABLE 1
Figure img00130001

Oligosac-Rendement <SEP> Point <SEP> de <SEP> fusion <SEP> [&alpha;]D25 <SEP> m/z <SEP> Analyse <SEP> élémentaire
<tb> charide <SEP> (%) <SEP> ( C) <SEP> ( ) <SEP> [M+H]+ <SEP> Calculée <SEP> Trouvée
<tb> <SEP> C <SEP> H <SEP> N <SEP> C <SEP> H <SEP> N
<tb> <SEP> pour <SEP> C16H28N2O11
<tb> <SEP> x=2 <SEP> 30 <SEP> 163 <SEP> (dec.) <SEP> +0,7(4,55) <SEP> 425 <SEP> 45,28 <SEP> 6,64 <SEP> 6,60 <SEP> 45,42 <SEP> 6,81 <SEP> 6,39
<tb> <SEP> pour <SEP> C24 <SEP> H41 <SEP> N3 <SEP> O16
<tb> <SEP> x=3 <SEP> 15 <SEP> 191-193(dec.) <SEP> -4,0(1,57) <SEP> 628 <SEP> 45,93 <SEP> 6,57 <SEP> 6,69 <SEP> 45,73 <SEP> 7,01 <SEP> 6,45
<tb> <SEP> pour <SEP> C32H54N4O21
<tb> <SEP> x=4 <SEP> 6,6 <SEP> 195-197(dec.) <SEP> -7,4(1,62) <SEP> 831 <SEP> 46,26 <SEP> 6,54 <SEP> 6,74 <SEP> 45,77 <SEP> 6,99 <SEP> 6,73
<tb> <SEP> pour <SEP> C40H67N5O26
<tb> <SEP> x=5 <SEP> 2 <SEP> 203-206(dec.) <SEP> -14,0(0,89) <SEP> 1034 <SEP> 46,46 <SEP> 6,52 <SEP> 6,77 <SEP> 45,60 <SEP> 6,83 <SEP> 6,82
<tb> <SEP> Pour <SEP> C40H@@N6O31
<tb> <SEP> x=6 <SEP> 1,3 <SEP> 205-207(dec.) <SEP> -20,0(0,72) <SEP> 1237 <SEP> 46,60 <SEP> 6,51 <SEP> 6,79 <SEP> 45,60 <SEP> 6,95 <SEP> 6,51
<tb> TABLEAU 2 Oligosacch@ride C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6
x=2 91,70 (&alpha;) 54,86 (&alpha;) 71,30 (&alpha; 70,92 (&alpha; 71,53 (&alpha; 69,37 (&alpha;)
95,02 (ss) 57,54 (ss) 74,72 (ss) 70,74 (ss) 75,68 (ss) 69,62 (ss)
102,49 (2&alpha;) 56,32 (2)a 74,56 (2)a 70,74 (2)a 76,68 (2)a 61,56 (2)a
102,59 (2ss)
91,70 (&alpha;) 54,87 (&alpha;) 71,24 (&alpha;) 70,93 (&alpha;) 71,56 (&alpha;) 69,28 (&alpha;)
x=3 85,83 (ss) 57,57 (ss) 74,73 (ss) 70,76 (ss) 75,61 (ss) 69,54 (ss)
102,47 (2&alpha;)a 56,27 74,56 70,76 75,49 (2)a 69,33 (2)a
(2,3)a (2,3)a (2,3)a
102,56 (2ss)a 56,31 74,51 70,84 76,69 (3)a 61,55 (3)a
102,33 (3)a
91,70 (&alpha;) 54,88 (&alpha;) 71,22 (&alpha;) 70,95 (&alpha;) 71,57 (&alpha;) 69,25 (&alpha;)
x=4 95,83 (ss) 57,58 (ss) 74,77 (ss) 70,76 (ss) 75,58 (ss) 69,51 (ss)
102,45 (2&alpha;)a 56,32 (1C) 74,55 (3C) 70,76 (1C) 75,46 69,33 (2C)
(2,3)a
102,53 (2ss)a 56,27 (2C) 70,81 (2C) 75,42 61,56 (4)a
102,36 (2C) 76,70 (4)a
91,70 (&alpha;) 54,88 (&alpha;) 71,22 (&alpha;) 70,83 (&alpha;) 71,57 (&alpha;) 69,29 (&alpha; ;)
x=5 95,83 (ss) 57,58 (ss) 74,56 (ss) 70,76 (ss) 75,46 (ss) 69,76 (ss)
102,38 (4C) 56,32 (2C) 74,56 (4C) 70,83 (2C) 75,45 (1C) 69,30 (3C)
56,27 (2C) 70,76 (2C) 75,38 2C) 61,57 (5)a
76,71 (5)a ()a. Les nombres entre parenthèses caractérisent l'unité 2-acétamido-2désoxy-D- glucopyranosyle, numérotée à partir de l'extrémité à laquelle appartiennent les carbones considérés. Oligosac-Yield <SEP> Melting point <SEP><SEP>[&alpha;] D25 <SEP> m / z <SEP> Elementary <SEP> analysis
<tb> charide <SEP> (%) <SEP> (C) <SEP> () <SEP> [M + H] + <SEP> Calculated <SEP> Found
<tb><SEP> C <SEP> H <SEP> N <SEP> C <SEP> H <SEP> N
<tb><SEP> for <SEP> C16H28N2O11
<tb><SEP> x = 2 <SEP> 30 <SEP> 163 <SEP> (dec.) <SEP> +0.7 (4.55) <SEP> 425 <SEP> 45.28 <SEP> 6 , 64 <SEP> 6.60 <SEP> 45.42 <SEP> 6.81 <SEP> 6.39
<tb><SEP> for <SEP> C24 <SEP> H41 <SEP> N3 <SEP> O16
<tb><SEP> x = 3 <SEP> 15 <SEP> 191-193 (dec.) <SEP> -4.0 (1.57) <SEP> 628 <SEP> 45.93 <SEP> 6, 57 <SEP> 6.69 <SEP> 45.73 <SEP> 7.01 <SEP> 6.45
<tb><SEP> for <SEP> C32H54N4O21
<tb><SEP> x = 4 <SEP> 6.6 <SEP> 195-197 (dec.) <SEP> -7.4 (1.62) <SEP> 831 <SEP> 46.26 <SEP> 6.54 <SEP> 6.74 <SEP> 45.77 <SEP> 6.99 <SEP> 6.73
<tb><SEP> for <SEP> C40H67N5O26
<tb><SEP> x = 5 <SEP> 2 <SEP> 203-206 (dec.) <SEP> -14.0 (0.89) <SEP> 1034 <SEP> 46.46 <SEP> 6, 52 <SEP> 6.77 <SEP> 45.60 <SEP> 6.83 <SEP> 6.82
<tb><SEP> For <SEP> C40H @@ N6O31
<tb><SEP> x = 6 <SEP> 1.3 <SEP> 205-207 (dec.) <SEP> -20.0 (0.72) <SEP> 1237 <SEP> 46.60 <SEP> 6.51 <SEP> 6.79 <SEP> 45.60 <SEP> 6.95 <SEP> 6.51
<tb> TABLE 2 Oligosacch @ ride C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6
x = 2 91.70 (&alpha;) 54.86 (&alpha;) 71.30 (&alpha; 70.92 (&alpha; 71.53 (&alpha; 69.37 (&alpha;)
95.02 (ss) 57.54 (ss) 74.72 (ss) 70.74 (ss) 75.68 (ss) 69.62 (ss)
102.49 (2 &alpha;) 56.32 (2) a 74.56 (2) a 70.74 (2) a 76.68 (2) a 61.56 (2) a
102.59 (2ss)
91.70 (&alpha;) 54.87 (&alpha;) 71.24 (&alpha;) 70.93 (&alpha;) 71.56 (&alpha;) 69.28 (&alpha;)
x = 3 85.83 (ss) 57.57 (ss) 74.73 (ss) 70.76 (ss) 75.61 (ss) 69.54 (ss)
102.47 (2 &alpha;) a 56.27 74.56 70.76 75.49 (2) a 69.33 (2) a
(2,3) a (2,3) a (2,3) a
102.56 (2ss) a 56.31 74.51 70.84 76.69 (3) a 61.55 (3) a
102.33 (3) a
91.70 (&alpha;) 54.88 (&alpha;) 71.22 (&alpha;) 70.95 (&alpha;) 71.57 (&alpha;) 69.25 (&alpha;)
x = 4 95.83 (ss) 57.58 (ss) 74.77 (ss) 70.76 (ss) 75.58 (ss) 69.51 (ss)
102.45 (2 &alpha;) a 56.32 (1C) 74.55 (3C) 70.76 (1C) 75.46 69.33 (2C)
(2.3) a
102.53 (2ss) a 56.27 (2C) 70.81 (2C) 75.42 61.56 (4) a
102.36 (2C) 76.70 (4) a
91.70 (&alpha;) 54.88 (&alpha;) 71.22 (&alpha;) 70.83 (&alpha;) 71.57 (&alpha;) 69.29 (&alpha;;)
x = 5 95.83 (ss) 57.58 (ss) 74.56 (ss) 70.76 (ss) 75.46 (ss) 69.76 (ss)
102.38 (4C) 56.32 (2C) 74.56 (4C) 70.83 (2C) 75.45 (1C) 69.30 (3C)
56.27 (2C) 70.76 (2C) 75.38 2C) 61.57 (5) a
76.71 (5) a () a. The numbers in parentheses characterize the 2-acetamido-2deoxy-D-glucopyranosyl unit, numbered from the end to which the carbons in question belong.

TABLEAU 3

Figure img00150001
TABLE 3
Figure img00150001

Oligosac- <SEP> Rendement <SEP> Point <SEP> de <SEP> fusion <SEP> [&alpha;]D25 <SEP> m/z <SEP> Analyse <SEP> élementaire
<tb> charide <SEP> (%) <SEP> ( C) <SEP> ( ) <SEP> [M+H]+ <SEP> Calculée <SEP> Trouvée
<tb> <SEP> C <SEP> H <SEP> N <SEP> C <SEP> H <SEP> N
<tb> <SEP> Pour <SEP> C16H28N2O11
<tb> <SEP> x=2 <SEP> 28 <SEP> 182 <SEP> +46,0(2,05) <SEP> 425 <SEP> 45,3 <SEP> 6,6 <SEP> 6,6 <SEP> 45,92 <SEP> 6,81 <SEP> 6,39
<tb> <SEP> pour <SEP> C24H47N3O16
<tb> <SEP> x=3 <SEP> 21 <SEP> 202 <SEP> +32,5(0,73) <SEP> 628 <SEP> 45,9 <SEP> 6,6 <SEP> 6,7 <SEP> 45,73 <SEP> 7,01 <SEP> 6,45
<tb> <SEP> pour <SEP> C32H54N4O21
<tb> <SEP> x=4 <SEP> 11 <SEP> 178-179 <SEP> +31,5(0,9) <SEP> 831 <SEP> 46,3 <SEP> 6,5 <SEP> 6,7 <SEP> 45,77 <SEP> 6,99 <SEP> 6,73
<tb> <SEP> pour <SEP> C40H67N5O26
<tb> <SEP> x=5 <SEP> 6 <SEP> 201 <SEP> +30,5(0,75) <SEP> 1034 <SEP> 46,5 <SEP> 6,5 <SEP> 6,8 <SEP> 45,60 <SEP> 6,83 <SEP> 6,82
<tb> <SEP> pour <SEP> C48H80N6O31
<tb> <SEP> x=6 <SEP> 2,6 <SEP> 215-216 <SEP> +28,5 <SEP> (0,4) <SEP> 1237 <SEP> 46,6 <SEP> 6,5 <SEP> 6,8 <SEP> 45,1 <SEP> 6,95 <SEP> 6,51
<tb> TABLEAU 4
Oligosacharide C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6
x=2 91,89 (&alpha;) 51,11 (&alpha;) 68,08 (&alpha;) 69,34 (&alpha;) 69,88 (&alpha;) 69,88 (&alpha;)
96.20 (ss) 54,60 (ss) 71,80 (ss) 68,63 (ss) 74,67 (ss) 69,80 (ss)
102,90 (2)a 53,22 (2)a 71,80 (2)a 68,63 (2)a 75,96 (2)a 61,83 (2)a
103,01 (2)
x=3 91,89 (&alpha;) 51,11 (&alpha;) 68.09 (&alpha;) 69,34 (&alpha;) 69,82 (&alpha;) 69,82 (&alpha;)
96,25 (ss) 54,61 (ss) 71,78 (ss) 68,65 (ss) 74,44 (ss) 69,82 (ss)
102.77 (2C) 53,21 (2C) 71,78 (2C) 68,65 (2C) 75,96 (2C) 69,82 (2)a
61,86 (3)a
x=4 91,89 (&alpha; 51,12 (&alpha;) 68,09 (&alpha;) 69,34 (&alpha;) 69,71 (&alpha;) 69,82 (&alpha;)
96,25 (ss) 54,61 (ss) 71,79 (ss) 68,65 (ss) 74,40 (ss) 69,82 (ss)
102,83 (3C) 53,22 (2C) 71,79 (2C) 68,64 (3C) 75,97 (3C) 69,71 (@C)
53,15 (1C) 71,64 (1C) 61,86 (4)a () a. Les nombres entre parenthèses caractérisent l'unité 2-acétamido-2
désoxy-D-galactopyranosyle, numérotée à partir de l'extrémité réductrice à
laquelle appartiennent les carbones considérés. Oligosac- <SEP> Yield <SEP> Point <SEP> of <SEP> fusion <SEP>[&alpha;] D25 <SEP> m / z <SEP> Elementary <SEP> analysis
<tb> charide <SEP> (%) <SEP> (C) <SEP> () <SEP> [M + H] + <SEP> Calculated <SEP> Found
<tb><SEP> C <SEP> H <SEP> N <SEP> C <SEP> H <SEP> N
<tb><SEP> For <SEP> C16H28N2O11
<tb><SEP> x = 2 <SEP> 28 <SEP> 182 <SEP> +46.0 (2.05) <SEP> 425 <SEP> 45.3 <SEP> 6.6 <SEP> 6, 6 <SEP> 45.92 <SEP> 6.81 <SEP> 6.39
<tb><SEP> for <SEP> C24H47N3O16
<tb><SEP> x = 3 <SEP> 21 <SEP> 202 <SEP> +32.5 (0.73) <SEP> 628 <SEP> 45.9 <SEP> 6.6 <SEP> 6, 7 <SEP> 45.73 <SEP> 7.01 <SEP> 6.45
<tb><SEP> for <SEP> C32H54N4O21
<tb><SEP> x = 4 <SEP> 11 <SEP> 178-179 <SEP> +31.5 (0.9) <SEP> 831 <SEP> 46.3 <SEP> 6.5 <SEP> 6.7 <SEP> 45.77 <SEP> 6.99 <SEP> 6.73
<tb><SEP> for <SEP> C40H67N5O26
<tb><SEP> x = 5 <SEP> 6 <SEP> 201 <SEP> +30.5 (0.75) <SEP> 1034 <SEP> 46.5 <SEP> 6.5 <SEP> 6, 8 <SEP> 45.60 <SEP> 6.83 <SEP> 6.82
<tb><SEP> for <SEP> C48H80N6O31
<tb><SEP> x = 6 <SEP> 2.6 <SEP> 215-216 <SEP> +28.5 <SEP> (0.4) <SEP> 1237 <SEP> 46.6 <SEP> 6 , 5 <SEP> 6.8 <SEP> 45.1 <SEP> 6.95 <SEP> 6.51
<tb> TABLE 4
Oligosaccharide C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6
x = 2 91.89 (&alpha;) 51.11 (&alpha;) 68.08 (&alpha;) 69.34 (&alpha;) 69.88 (&alpha;) 69.88 (&alpha;)
96.20 (ss) 54.60 (ss) 71.80 (ss) 68.63 (ss) 74.67 (ss) 69.80 (ss)
102.90 (2) a 53.22 (2) a 71.80 (2) a 68.63 (2) a 75.96 (2) a 61.83 (2) a
103.01 (2)
x = 3 91.89 (&alpha;) 51.11 (&alpha;) 68.09 (&alpha;) 69.34 (&alpha;) 69.82 (&alpha;) 69.82 (&alpha;)
96.25 (ss) 54.61 (ss) 71.78 (ss) 68.65 (ss) 74.44 (ss) 69.82 (ss)
102.77 (2C) 53.21 (2C) 71.78 (2C) 68.65 (2C) 75.96 (2C) 69.82 (2) a
61.86 (3) a
x = 491.89 (&alpha; 51.12 (&alpha;) 68.09 (&alpha;) 69.34 (&alpha;) 69.71 (&alpha;) 69.82 (&alpha;)
96.25 (ss) 54.61 (ss) 71.79 (ss) 68.65 (ss) 74.40 (ss) 69.82 (ss)
102.83 (3C) 53.22 (2C) 71.79 (2C) 68.64 (3C) 75.97 (3C) 69.71 (@C)
53.15 (1C) 71.64 (1C) 61.86 (4) a () a. The numbers in parentheses characterize the 2-acetamido-2 unit
deoxy-D-galactopyranosyl, numbered from the reducing end to
which are the carbons considered.

Claims (9)

REVENDICATIONS avec n étant un nombre entier de 2 à 10, et Leurs éantiomères de La série L. with n being an integer from 2 to 10, and their L-series eantiomers.
Figure img00170003
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 dans lesquelles R4 représente un atome d'hydrogène, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué pu non substitué, ou un radical aryle substitué ou non substitué, R5 et R6 qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogene, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitué ou un radical aryle substitué ou non substitue, et R7 représente un radical bivalent choisi parmi -(CH2)n- et in which R4 represents a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted, or a substituted or unsubstituted aryl radical, R5 and R6 which may be identical or different, represent a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted or a substituted or unsubstituted aryl radical, and R7 represents a divalent radical chosen from - (CH2) n- and
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 H ou OH, et R3 est choisi parmi les radicaux de formule :H or OH, and R3 is chosen from the radicals of formula: dans Laquelle x est un nombre entier allant de 3 à 6, R1 et R2 qui sont différents, représentent where x is an integer ranging from 3 to 6, R1 and R2 which are different, represent
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 1. Oligosaccharides liés B-(1 # 6) répondant à La formule : 1. B- (1 # 6) linked oligosaccharides corresponding to the formula: 2. Oligosaccharides du 2-acylamido-2-désoxy-D-glucopyranose liés ss-(1#6) répondant à la formule : 2. Oligosaccharides of 2-acylamido-2-deoxy-D-glucopyranose linked ss- (1 # 6) corresponding to the formula:
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 dans laquelle x est un nombre entier de 3 à 6, et R3 est choisi parmi les radicaux de formule in which x is an integer from 3 to 6, and R3 is chosen from the radicals of formula
Figure img00180002
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 dans lesquelles R4 représente un atome d'hydrogène, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitué, ou un radical aryle substitué ou non substitué, R5 et R6 qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitue ou un radical aryLe substitué ou non substitué et R7 représente un radical bivalent choisi parmi -(CH2)n- et in which R4 represents a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted, or a substituted or unsubstituted aryl radical, R5 and R6 which may be identical or different, represent a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted or a substituted or unsubstituted aryl radical and R7 represents a divalent radical chosen from - (CH2) n- and
Figure img00180003
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 avec n étant un nombre entier de 2 à 10, et leurs énantiomêres de la série L. with n being an integer from 2 to 10, and their L series enantiomers. 3. Oligosaccharides du 2-acylamido-2-désoxy-D-galactopyranose liés ss-(1#6) répondant à La formule 3. Oligosaccharides of 2-acylamido-2-deoxy-D-galactopyranose linked ss- (1 # 6) corresponding to the formula
Figure img00180004
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 dans laquelle x est un nombre entier de 3 à 6 et where x is an integer from 3 to 6 and R3 est choisi parmi les radicaux de formuleR3 is chosen from the radicals of formula
Figure img00190001
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 dans lesquelles R4 représente un atome d'hydrogène, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitué, ou un radical aryle substitué ou non substitué, R5 et R6 qui peuvent être identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogene, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitue ou un radical aryle substitué ou non substitué, et R7 représente un radical bivalent choisi parmi -(CH2)n- et in which R4 represents a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted, or a substituted or unsubstituted aryl radical, R5 and R6 which may be identical or different, represent a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted or a substituted or unsubstituted aryl radical, and R7 represents a divalent radical chosen from - (CH2) n- and
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 avec n étant un nombre entier de 2 à 10, et Leurs énantiomères de la série L. with n being an integer from 2 to 10, and Their L-series enantiomers. 4. Oligosaccharides selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que 4. Oligosaccharides according to any one of claims 1 to 3, characterized in that R3 est le radical HNCOCH3.R3 is the HNCOCH3 radical. 5. Procédé de préparation d'oligosaccharides d'un 2-acylamido-2-désoxy-hexose liés ss-(1 +6), caractérisé en ce qu'il consiste à préparer une solution d'un 2-acylamido-2-désoxy-hexose de formu 5. Process for preparing oligosaccharides of a 2-acylamido-2-deoxy-hexose linked ss- (1 +6), characterized in that it consists in preparing a solution of a 2-acylamido-2-deoxy -hexose of formu LeThe
Figure img00190003
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 dans laquelle R1 et R2 qui sont différents, représentent H ou OH, et R3 est choisi parmi les radicaux de formule :: in which R1 and R2, which are different, represent H or OH, and R3 is chosen from the radicals of formula:
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 dans lesquelles R4 représente un atome d'hydrogène, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitué, ou un radical aryle substitué ou non substitué, R5 et R6 qui peuvent être identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical hydrocarboné, saturé ou insaturé, substitué ou non substitué ou un radical aryle substitué ou non substitué, et R7 représente un radical bivalent choisi parmi -(CH2)n- et in which R4 represents a hydrogen atom, a hydrocarbon radical, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted, or a substituted or unsubstituted aryl radical, R5 and R6 which may be identical or different represent a hydrogen atom, a radical hydrocarbon-based, saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted or a substituted or unsubstituted aryl radical, and R7 represents a divalent radical chosen from - (CH2) n- and
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 avec n étant un nombre entier de 2 à 10, ou de son énantiomère de la série L, dans du fluorure d'hydrogène de façon à former de-s ions glycosyloxazolinium, et à évaporer ensuite lentement la solution. with n being an integer of 2 to 10, or its L-series enantiomer, in hydrogen fluoride so as to form glycosyloxazolinium ions, and then slowly evaporate the solution. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'hexose est le glucose. 6. Method according to claim 5, characterized in that the hexose is glucose. 7. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'hexose est le galactose. 7. Method according to claim 5, characterized in that the hexose is galactose. 8. Procédé selon la revendication 5 de préparation d'oligosaccharides de 2-acétamido-2-déso xy-D-glucopyranose liés ss-(1e 6), caractérisé en ce que I'on prépare la solution de 2-acetamido-2-désoxy-D-glucose par réaction de la chitine avec du fluorure d'hydrogène pendant une durée suffisante pour que La solution obtenue ne contienne que les fragments monosaccharidiques provenant de la dégradation de la chitine. 8. Process according to claim 5 for the preparation of ss- (1e 6) -linked 2-acetamido-2-deo xy-D-glucopyranose oligosaccharides, characterized in that the solution of 2-acetamido-2- is prepared. deoxy-D-glucose by reacting chitin with hydrogen fluoride for a time sufficient for the solution obtained to contain only the monosaccharide fragments resulting from the degradation of chitin. 9. Procedé selon la revendication 7 de préparation d'oligosaccharides du 2-acetamido-2-déso- xy-D-galactopyranose liés ss-(1#6), caractérisé en ce qu'il consiste à préparer une solution du Z-acétamido-2-desoxy-D-galactose dans du fluorure d'hydrogène et à évaporer ensuite lentement la solution. 9. Method according to claim 7 for preparing oligosaccharides of 2-acetamido-2-deo-xy-D-galactopyranose linked to ss- (1 # 6), characterized in that it consists in preparing a solution of Z-acetamido -2-deoxy-D-galactose in hydrogen fluoride and then slowly evaporate the solution.
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