DE4244894C2 - New compsns. for vaccination against tumours and auto-immune disorders - Google Patents
New compsns. for vaccination against tumours and auto-immune disordersInfo
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Abstract
Description
Die Erfindung betrifft eine Vakzine nach dem Oberbegriff des Anspruches 1.The invention relates to a vaccine according to the preamble of claim 1.
Es sind Vakzine bekannt, die in einem flüssigen Träger aus menschlichen Tumorzellen gewonnene, insbesondere wenigstens zum Teil einer Behandlung mit Neuraminidase unterzogene Zellpräparate enthalten. Für diese Zellpräparate werden von beliebigen Fremdspendern stammende Tumorgewebsarten verwendet, die bestimmte Antigene tragen, wobei Zellkulturen angelegt, aufgearbeitet und mit einem Zytostatikum in aktiviert sowie schließlich lyophilisiert werden, um auf diese Weise Zellwandpräparate zu erhalten, die Antigene tragen.Vaccines are known which are in a liquid carrier from human tumor cells obtained, in particular at least in part, treatment with neuraminidase containing cell preparations. For these cell preparations, any Foreign donor-derived tumor tissue types used certain antigens wear, with cell cultures created, processed and with a cytostatic in activated and finally lyophilized to make cell wall preparations in this way to get to carry the antigens.
Bei der Anlegung von Kulturen von Krankheitserregern und Mikroparasiten werden bisher im wesentlichen ausschließlich von fremden Quellen stammende Nährlösungen verwendet, wobei, unter anderem, aseptisch gewonnene, embrionale Proteinextrakte, z. B. zellfreie, aus Gehirn, Herz, Lunge, Muskel, Leber, Haut von Tierembryos gewon nene Proteinextrakte eingesetzt werden. Es ist bekannt, solche Kulturen für die Züchtung spezifischer Krankheitserreger zu verwenden und dann die Krankheits erreger nach bekannten Verfahren z. B. durch Erhitzung zu inaktivieren, um sie als Immunogen ver wenden zu können. Eine Vielzahl bekannter Impfverfahren, insbesondere gegen Viruserkrankungen, beruht auf der Her stellung entsprechender Vorkulturen. Nachteilig ist hier immer, daß das art- bzw. individuenfremde Eiweiß bei der Verwendung als Impfvakzine zu unerwünschten Allergiereak tionen seitens des Patienten führen kann.When creating cultures of pathogens and microparasites So far essentially exclusively nutrient solutions originating from external sources used, among other things, aseptically obtained, embryonic protein extracts, e.g. B. cell-free, from brain, heart, lungs, muscle, liver, skin of animal embryos protein extracts are used. It is known such cultures for the Breeding specific pathogens to use and then the disease exciter by known methods z. B. inactivate by heating to ver as an immunogen to be able to turn. A variety of known vaccination procedures, especially against viral diseases, is based on the her provision of appropriate pre-cultures. The disadvantage here always that the alien or individual protein in the Use as vaccine vaccine for unwanted allergy reactions tion on the part of the patient.
Bei der mikroskopischen Untersuchung von Nativblut fallen, insbesondere bei bestimmten Erkrankungen, und praktisch immer bei Präkanzerose und Kanzerose lebhaft bewegliche Formen auf, die normalerweise hämatologisch nicht beachtet werden. Es handelt sich hier um annähernd kugelige, stark bewegliche Gebilde, welche bei der Phasenkonstrastuntersuchung optisch als im Zentrum aufgehellte Ringe erscheinen. Für die Betrach tung von Kleinstformen dieser Gebilde eignet sich besonders die Dunkelfeld-Blutuntersuchung. Die Größe dieser Gebilde reicht von der Grenze des Sichtbaren bis zu etwa 1/3 jener von Erythrocyten. Übliche Blutfärbemethoden reihen diese Formen als große Randkörnchen der Erythrocyten oder als freie Howell-Jolly-Körperchen (rundliche Reste des verschwin denden Zellkernes im Protoplasma der Erythrocyten) ein. Das obligate Auftreten dieser Formen in Tumorpräparaten wird durch das Procedere der Färbung (Fixierung und Abpülen) ver hindert. Diese Formen können wachsen, sprossen, sich vermeh ren und sind bei geeigneter Präparation auch innerhalb der Erythrocyten zu sehen, wo sie solitär, paarig und in Gruppen auftreten und angenommen werden kann, daß sie das Zytoplasma der Erythrocyten fermentativ verbrauchen, wodurch dieses va kuolisiert wird. Auch unter Heranziehung dieser Beobachtun gen kann angenommen werden, daß das gesunde, insbesondere jedoch das vom kranken Patienten stammende Blut symbiontische bzw. parasitäre Mikroorganismen mit wahrscheinlich mykoti scher Natur enthält. Bereits Enderlein hat auf die Phänomene des obligaten Blutparasitismus hingewiesen. Mit steigender Alkalität des Blutes und sinkender Abwehr des Organismus ist immer eine zunehmende Virulenz sowie ein Überwiegen des zel lulären Befalles gegenüber dem Serum festzustellen. Die be schriebenen Mikroorganismen werden auch innerhalb der weißen Blutkörperchen, vor allem auch innerhalb der Makrophagen, ge sehen. Da diese Mikroorganismen auch innerhalb der Zellorga nellen vital bleiben, scheint es, daß sie sich von der kör pereigenen Abwehr verborgen vermehren können. Von den einzel nen Wissenschaftlern werden die erwähnten Mikroorganismen verschieden bezeichnet. So spricht Enderlein von Endobionten, v. Bremer von Syphonosporen, Gerlach von Mikromyceten, Scheller von Viromyceten, Körnchen und Ringen usw. Die Be obachtung, daß Leukämie der Mäuse durch zellfreie Übertra gung übertragbar sind, hat schon Versuche ausgelöst im Blut oder Knochenmark zytopathogene Organismen nachzuweisen.When microscopic examination of native blood falls, especially with certain diseases, and practically always with precancerous and cancerous forms vividly mobile forms which are normally not considered in the haematological field. It is almost spherical, highly agile Formations, which are optical in the phase contrast examination appear as lightened rings in the center. For the viewer Small forms of these structures are particularly suitable the dark field blood test. The size of these structures ranges from the limit of the visible to about 1/3 of that of erythrocytes. Common blood staining methods rank these Forms as large marginal granules of the erythrocytes or as free Howell-Jolly bodies (rounded remnants of the vanishing the cell nucleus in the protoplasm of the erythrocytes). The obligatory occurrence of these forms in tumor preparations through the procedure of staining (fixation and rinsing) ver prevents. These forms can grow, sprout, multiply ren and are also within the Erythrocytes can be seen where they are solitary, in pairs and in groups occur and can be assumed to be the cytoplasm of the erythrocytes are used fermentatively, whereby this is collapsed. Also using this observation gene can be assumed to be healthy, especially however, the blood from the sick patient is symbiotic or parasitic microorganisms with probably mycoti contains nature. Enderlein already has an eye on the phenomena of the obligatory blood parasitism. With increasing Alkalinity of the blood and decreasing defense of the organism increasing virulence and predominance of the zel lular infestation compared to the serum. The be Written microorganisms are also inside the white one Blood cells, especially within the macrophages, ge see. Because these microorganisms also exist within the cell organ remain vital, it seems that they are different from the body hidden defense can increase. From the individual The aforementioned microorganisms become scientists differently labeled. So Enderlein speaks of endobionts, v. Bremer von Syphonosporen, Gerlach von Mikromyceten, Scheller of viromycetes, granules and rings, etc. The Be observation that leukemia of the mice by cell-free transmission transferable has already triggered experiments in the blood or bone marrow to detect cytopathogenic organisms.
Pekar spricht in diesem Zusammenhang von "Onko-Mykoplas men" oder "Kommensalen" welche bei induzierender Milieu änderung, z. B. seelischer oder körperlicher Überbelastung starke äußere Reize, insbesondere Strahlung usw. aus Symbi onten entstehend, zusammen mit chronischen Reizen, an der Bildung von Tumoren mitbeteiligt sein könnten.In this context, Pekar speaks of "Onko-Mykoplas men "or" commensals "which in an inducing environment change, e.g. B. mental or physical overload strong external stimuli, especially radiation etc. from Symbi emerging, along with chronic stimuli, at the Formation of tumors could be involved.
Luc Montagnier berichtete auf dem 8. Virologiekongress in Berlin 1990, daß die üblicherweise auf der Zelloberfläche parasitierenden Mykoplamsen in die Zelle eindringen können, wenn eine systemische Mykoplasmose besteht.Luc Montagnier reported on the 8th Virology Congress in Berlin 1990 that usually on the cell surface parasitic mycoplenses can enter the cell, if there is systemic mycoplasmosis.
Auch andere molekular-immunologische Untersuchungen haben gezeigt, daß auch das Krebsgeschehen zum Teil ein immuno logisches Problem ist, so daß ein immunologisch-therapeu tisches Vorgehen sinnvoll erscheint. Es wurden in diesem Zusammenhang verschiedene Arten der Immunisierung versucht. Von den am meist verwendeten Verfahren seien hier angeführt: Eine spezifisch aktive Immunisierung mit tumorassozierten Antigenen in Form von biologisch immunugenen Proteinen, die frei von Nukleinsäuren sind, eine Immunisierung mit von außen zugeführten monoklonalen Antikörpern als sogenannte Idiotyp zur Bildung von Antitumor-Antikörpern, z. B. des tu morassozierten Antigen CA 125; eine Immunisierung mit Extrakten von klonierten Tumorzellen und deren Oberflächenantigenen; eine Immunisierung mit autologen, virusmodifizierten Tumor-Zellvakzinen und eine Immunisierung mit inaktivierten Extrakten aus ganzen Zellen. Die bisherigen Verfahren verwenden immunogene Proteine, d. h. gentechnisch gewonnene, monogonale Antikörper, virusmodifzierte Tumorzellvakzine oder Extrakte aus klonierten Tumorzellen bzw. Extrake aus ganzen Zellen, wobei die Tumorzellen von Fremdspendern stammen oder durch Klonen erhalten werden.Also have other molecular immunological studies shown that cancer is partly immuno logical problem is so that an immunological-therapeu tical approach seems reasonable. It was in this Related different types of immunization attempts. Of the most commonly used processes are listed here: A specifically active immunization with tumor-associated Antigens in the form of biologically immunogenic proteins are free of nucleic acids, immunization with of externally supplied monoclonal antibodies as so-called Idiotype for the formation of anti-tumor antibodies, e.g. B. the tu morassociated antigen CA 125; immunization with cloned extracts Tumor cells and their surface antigens; immunization with autologous, virus-modified tumor cell vaccines and immunization with inactivated Whole cell extracts. The previous methods use immunogenic Proteins, d. H. genetically engineered, monogonal antibodies, virus-modified Tumor cell vaccine or extracts from cloned tumor cells or extracts from whole Cells, where the tumor cells come from foreign donors or by cloning be preserved.
Aufgabe der Erfindung ist die Schaffung einer neuen Vakzine für die Immuntherapie spezifischer Tumorerkrankungen.The object of the invention is to create a new vaccine for immunotherapy specific tumor diseases.
Die Aufgabe der Erfindung wird prinzipiell durch die Vakzine nach Patentanspruch 1 gelöst. Die Grundüberlegung der Erfindung besteht darin, daß man zunächst durch die beiden ersten Vakzinen wegen ihrer Herstellung aus körpereigenen Tumorzellfragmen ten eine Immunisierung bzw. Teilimmunisierung gegenüber den tatsächlich bei diesen Patienten vorhandenen Tumorzellen erreichen kann, da die Immunreaktion verstärkt und speziell auf die jeweilige Tumorerkrankung des Patienten abgestimmt wird. Es werden verschiedene Abwehrebenen angesprochen, so daß eine bessere Immunisie rung bei Vergrößerung der Wahrscheinlichkeit der Rezitivfreiheit wahrscheinlich ist. Besonders wesentlich ist aber, daß durch die Verwendung der dritten Vakzine aus inaktivierten körpereigenen Mikroparasiten auch die körpereigenen Mikroparasiten angesprochen werden und zumindest eine Teilimmunisierung gegenüber diesen Mikroprasiten erzielt wird, die nach den durchgeführten Überlegungen ihrerseits wieder günstige Bedingungen für die Entwicklung der Tumorzellen geschaffen haben, was bedeutet, daß die Therapie der Tumorerkrankung durch die zusätzliche Ver wendung der dritten Vakzine wesentlich unterstützt wird.The object of the invention is principally achieved by the vaccine according to patent claim 1 solved. The basic idea of the invention is that first by the first two vaccines because of their production from the body's own tumor cell fragments immunization or partial immunization against those actually Patients can reach existing tumor cells because the immune response is enhanced and is specifically tailored to the patient's respective tumor disease. It different defense levels are addressed, so that a better immunization If the likelihood of freedom from recurrence is increased. It is particularly important, however, that by using the third vaccine inactivated the body's own microparasites also the body's own microparasites be addressed and at least a partial immunization against them Microprasiten is achieved after the considerations themselves have created favorable conditions for the development of tumor cells, which means that the therapy of the tumor disease through the additional ver application of the third vaccine is significantly supported.
Eine Möglichkeit für die dritte Einzelvakzine ist in Anspruch 2 angegeben.A possibility for the third single vaccine is specified in claim 2.
Besonders vorteilhaft erscheint aber eine Ausgestaltung der dritten Einzelvakzine gemäß Anspruch 3, weil hier ausschließlich vom Patienten stammende körpereigene Präparate verwendet werden, so daß grundsätzlich verhindert wird, daß Allergiereaktionen durch fremdes Eiweiß auftreten und fremde Mikroparasiten in die Kultur eingeschleppt werden, so daß sie die Vakzine beeinflussen könnten.However, an embodiment of the third individual vaccine appears to be particularly advantageous according to claim 3, because here originate exclusively from the patient's own body Preparations are used so that it is fundamentally prevented that allergy reactions due to foreign protein occur and foreign microparasites are introduced into the culture so that they could influence the vaccine.
In Anspruch 4 ist ein einfaches Verfahren zur Herstellung einer Vakzine angegeben, bei der die dritte Teilvakzine der Vakzine nach Anspruch 2 entspricht. Durch die Weiterbildung nach Anspruch 5 wird die Wirksamkeit der ersten Einzelvakzine erhöht.Claim 4 specifies a simple method for producing a vaccine, in which the third partial vaccine corresponds to the vaccine according to claim 2. Through the Training according to claim 5, the effectiveness of the first single vaccine is increased.
Wenn man als dritte Einzelvakzine eine solche gemäß Anspruch 3 verwendet, dann kann man diese Vakzine nach dem Verfahren gemäß Anspruch 6 herstellen. Ergän zungen dieses letzteren Verfahrens entnimmt man den Ansprüchen 7 und 8.If one uses such as third single vaccine according to claim 3, then this vaccine can be produced by the process according to claim 6. Complement tongues of this latter method can be found in claims 7 and 8.
Weitere Einzelheiten und Vorteile des Erfindungsgegenstandes entnimmt man der nachfolgenden Beschreibung von zwei möglichen Ausführungsbeispielen, wobei das erste Ausführungsbeispiel sich mit der Herstellung einer Dreifachvakzine unter Verwendung operativ gewonnener Tumorpräparate und das Beispiel 2 mit einer Ausführungsvariante befaßt, bei der die ersten beiden Teilvakzinen gemäß Beispiel 1, die dritte Teilvakzine aber aus dem Eigenblut des Patienten gewonnen wird.Further details and advantages of the subject matter of the invention can be found in following description of two possible embodiments, the first embodiment deals with the manufacture of a triple vaccine Use of tumor preparations obtained by surgery and Example 2 with a Design variant in which the first two partial vaccines according to Example 1, the third partial vaccine is obtained from the patient's own blood.
Ein operativ gewonnenes Tumorpräparat wird nativ ohne jeden Zusatz unter sterilen Kautelen ehemöglichst so präpariert, daß mit Schere und Pinzette unspezifische Gewebsanteile ent fernt und das Tumorgewebe, das beispielsweise einen Ge wichtsanteil von 8 bis 10 g besitzt, in kleine Stücke zerlegt wird. Diese werden mit 12 ml steriler Kochsalzlö sung suspendiert und mit einem Turbogenerator (10 K, 20.000 U/min Ultra-Turrax, IKA-Werke, Staufen/Breisgau) so lange zerkleinert, bis die mikroskopische Kontrolle nur noch Zellfragmente zeigt. Die Kontrolle erfolgt z. B. unter Ölimmersion mittels eines Phasenkontrastmikroskopes. Wenn die mikrfoskopische Prüfung zufriedenstellende Ergebnisse ergibt, wird zentrifugiert, wonach die Satzoberschicht über dem Bodensatz dekantiert wird.A tumor preparation obtained by surgery becomes native without anyone Additive prepared under sterile cauldrons as that with scissors and tweezers ent unspecific tissue distant and the tumor tissue, for example, a Ge has a weight percentage of 8 to 10 g, in small pieces is disassembled. These are mixed with 12 ml of sterile saline suspended and with a turbogenerator (10 K, 20,000 rpm Ultra-Turrax, IKA works, Staufen / Breisgau) see above long crushed until microscopic control only Shows cell fragments. The control takes place e.g. More colorful Oil immersion using a phase contrast microscope. If the microscopic examination satisfactory results is centrifuged, after which the top layer is over the sediment is decanted.
Der Bodensatz wird noch ein oder zweimal in physiologischer Kochsalzlösung aufgeschwemmt, neuerlich zentrifugiert und der Überstand dekantiert und verworfen. Damit sind die Zell fragmente von zytoplasmatischen Beimengungen befreit und der Zentrifugensatz enthält nur mehr die Zellwandbestand teile mit den verschiedenen Antigenen, Rezeptoren der Oberfläche, aktivem Protein der Matrix, wobei alle diese Faktoren individuell dem Tumor des Patienten entsprechen. Von diesen tumorassozierten Antigenen wird die spezifische Abwehrkaskade bei der Vakzination am stärksten angesprochen und angeregt, weil man in dem hochkomplexen Abwehrsystem nicht einen molekularen Baustein, sondern eine ganze Palette solcher Bausteine zur Interaktion anbietet. In der weiteren Präparation werden die so erhaltenen Zellwandfragmente nach Aufschwemmung in 5 ml physiologischer Kochsalzlösung mit Neuraminidase (Enzym, aus Vibrio comma cholerae hergestellt, Fa. Merck) versetzt und 15-20 min stehen und reagieren gelassen. Dadurch wird die negative Oberflächenladung der Zellmembran durch Abspaltung von Neuraminsäure entfernt und damit eine Umwandlung der Zellwandbestandteile in ein Immunugen eingeleitet, wobei eine Umpolung in der Zellwand bzw. deren Fragmenten stattfindet und die spezifischen Er kennungssignale der Rezeptoren verändert werden. In der weiteren Präparation erfolgt eine mehrfache Aufschwemmung mit physiologischer Kochsalzlösung, Zentrifugierung und Dekantierung um den Neuraminidase-Überschuß zu entfernen. Mit den jetzt verwendungsfähigen Zellbestandteilen werden drei Fläschchen zu je 10 ml gestuft mit 0,5 g, 0,2 g und 0,1 g beschickt und dann mit je 10 ml steriler, physiolo gischer Kochsalzlösung aufgeschwemmt. Im letzten Schritt werden jeder Suspensionslösung 5 U/mg Phenol und 2 U/mg Kieselsäure zugesetzt.The sediment becomes physiological once or twice Saline solution, centrifuged again and the supernatant decanted and discarded. With that are the cells fragments freed from cytoplasmic admixtures and the centrifuge set only contains the cell wall population share with the different antigens, receptors of the Surface, active protein of the matrix, all of these Factors individually match the patient's tumor. Of these tumor-associated antigens, the specific one Defense cascade most strongly addressed in vaccination and excited because you are in the highly complex defense system not a molecular building block, but a whole range offers such building blocks for interaction. In the further The cell wall fragments obtained in this way are prepared Suspension in 5 ml of physiological saline with Neuraminidase (enzyme, made from Vibrio comma cholerae, Merck) and stand and react for 15-20 minutes calmly. This eliminates the negative surface charge of the Cell membrane removed by splitting off neuraminic acid and a conversion of the cell wall components into one Immunogen initiated, reversing the polarity in the cell wall or their fragments takes place and the specific Er identification signals of the receptors are changed. In the further preparation, there is a multiple suspension with physiological saline, centrifugation and Decant to remove excess neuraminidase. With the now usable cell components three vials of 10 ml each with 0.5 g, 0.2 g and 0.1 g loaded and then with 10 ml of sterile, physiolo saline solution. In the last step each suspension solution will be 5 U / mg phenol and 2 U / mg Silica added.
Der Obersatz des Zentrifugates enthält alle zytoplas matischen Bestandteile der Zelle und somit auch die fehl programmierten Nukleinsäuren. Für die Herstellung der Vak zine II wird dieser Obersatz des Zentrifugates allenfalls nach entsprechender Aufschwemmung und Zwischenreinigung im Wasserbad auf 70°C für wenigstens zwei Stunden erhitzt, wonach ein Zusatz eines unspezifischen Adjuvans, wie bei Vakzine I angegeben, erfolgt. Durch die Erhitzung tritt eine verläßliche Inaktivierung ein, die diesen entsprechend zu bereiteten Obersatz des Zentrifugates als Auslöser eines immunitären Vorganges brauchbar macht. Die weitere Vor bereitung bzw. Fertigstellung erfolgt wie bei Vakzine I angegeben.The top of the centrifugate contains all cytoplasm matical components of the cell and thus also the faulty ones programmed nucleic acids. For the production of the vac This top set of the centrifugate becomes zine II at best after appropriate washing and intermediate cleaning in Water bath heated to 70 ° C for at least two hours, after which an addition of an unspecific adjuvant, as in Vaccine I specified, takes place. Due to the heating occurs one reliable inactivation, which accordingly prepared top set of the centrifugate as a trigger makes the immunitarian process useful. The further before Preparation or completion is the same as for vaccine I specified.
Hier wird nach einer Möglichkeit eine Vakzine gemäß dem Beispiel 1 hergestellt und eingesetzt. Nach einer anderen Möglichkeit werden zwei bis drei Fläschchen a 10 ml mit einer Kulturlösung aus aseptisch gewonnenen Extrakten aus verschiedenen Organen (Herz, Muskel, Lunge, Leber Haut) eines Schafembryos, zellfrei, Proteingehalt 30 mg pro 1 ml Extrakt in der Lösung einer sterilen physiologischen Koch salzlösung zur Hälfte gefüllt und mit 2 ml der auch bei der Vakzine II eingesetzten Zytoplasmalösung vor der Inakti vierung versetzt. In einem Fläschchen wird die Lösung zur Gewinnung einer anaeroben Kultur mit 0,5 ml entkeimtem Paraffinöl überschichtet. Nach vier Tagen wird die Hälfte des Fläschcheninhaltes, vor allem der Bodensatz, auf neue Kulturfläschchen übertragen und dieser Vorgang wird dreimal wiederholt. Nach der letzten Passage wird scharf zentrifu giert, der Obersatz des Zentrifugates verworfen und der verbleibende Untersatz in 5 ml physiologischer Kochsalz lösung suspendiert. Danach erfolgt eine Inaktivierung im Wasserbad für wenigstens zwei Stunden bei 70°C und schließlich der Zusatz von Adjuvans wie bei der Vakzine I bzw. II angegeben.If possible, a vaccine according to the Example 1 produced and used. Another one Possibility to use two to three vials of 10 ml each a culture solution from aseptically obtained extracts various organs (heart, muscle, lungs, liver skin) a sheep embryo, cell-free, protein content 30 mg per 1 ml Extract in the solution of a sterile physiological cook salt solution half filled and with 2 ml of the same Vaccine II used cytoplasmic solution before the inactivity crossing. In a vial, the solution becomes Obtain an anaerobic culture with 0.5 ml of sterilized Paraffin oil overlaid. After four days, half will be of the bottle contents, especially the sediment, to new ones Culture vials are transferred and this process is done three times repeated. After the last passage, the centrifuge becomes sharp greed, discarded the top of the centrifugate and the remaining base in 5 ml of physiological common salt solution suspended. This is then deactivated in the Water bath for at least two hours at 70 ° C and finally the addition of adjuvant as with vaccine I or II specified.
Es liegt nun eine Vakzine aus drei Einzelvakzinen für eine getrennte, aufeinanderfolgende Anwendung in der durch die Numerierung bestimmten Reihenfolge vor. There is now a vaccine consisting of three individual vaccines for one separate, sequential application in the by the Numbering in certain order.
Die Vakzine I wird bei Einzelimpfungen in der Form ein gesetzt, daß pro Vakzination 3 ml der gut aufgeschüttelten Vakzine auf drei bis vier Stellen verteilt, z. B. auf der Bauchdecke, verabreicht werden.The vaccine I is in the form of single vaccinations set that 3 ml of the well-shaken per vaccination Vaccine spread over three to four places, e.g. B. on the Abdominal wall.
Es wird mit dem 0,5 g verwendungsfähige Zellbestandteile enthaltenden Fläschchen begönnen und die Impfung aus dem gleichen Fläschchen nach drei Tagen wiederholt. Dann fol gen neuerliche Impfungen aus dem Fläschen 0,2 und nach 21 Tagen Impfungen mit dem Fläschen 0,1. Der Sinn, mit der stärksten Lösung zu beginnen, liegt darin, daß das Immun system bei größerer bzw. länger dauernder Beanspruchung ermüdet.It comes with the 0.5 g of usable cell components contain vials and vaccination from the same vial repeated after three days. Then fol against new vaccinations from the vial 0.2 and after 21 Days vaccinations with the vial 0.1. The sense with which strongest solution to begin with is that the immune system system for larger or longer-term use tired.
Nach einer Pause von drei Wochen wird mit der Impfung mit
der Vakzine II begonnen, wobei zwei Anwendungsmodifikatio
nen möglich sind:
After a break of three weeks, vaccination with vaccine II is started, whereby two application modifications are possible:
- a) aus dem Fläschchen mit der Stammlösung werden 2 ml entnommen und mit 10 ml physiologischer Kochsalzlösung verdünnt. Davon wird einmal pro Woche 1 ml subkutan ins gesamt dreimal verimpft. Eine vierte Impfung erfolgt nach drei Monaten.a) The vial with the stock solution becomes 2 ml removed and with 10 ml of physiological saline diluted. 1 ml of it is injected subcutaneously once a week vaccinated three times in total. A fourth vaccination follows three months.
- b) Zur Erzielung einer Anti-Antikörperreaktion erfolgt eine Vakzination in Hochverdünnung, ähnlich der von Dr. Karl Theurer entwickelten "Gegensensibilisierung". Die Begründung für diese Vorgangsweise ergibt sich aus einer Reihe wissen schaftlicher Arbeiten, nach denen zwar bei Krebspatienten tumoraktive zytotoxische T-Zellen und Antikörper nachge wiesen werden konnten, aber keine Anzeichen einer Tumor abwehr ermittelt wurden. Es bestehen gravierende Erkennt nisse, daß die Toleranzentwicklung gegen Tumorzellen durch Expression bestimmter Peptide durch Kopplung an HLA-Moleküle aus dem Zellinneren an die Zelloberfläche kommen. Auf diese Weise werden zytotoxische T-Lymphozyten getäuscht bzw. blockiert. Durch Auslösen einer entsprechenden Reaktion soll die erwähnte Maskierung durch einen Anti-Idiotyp-Antikörper in Form einer vakzinalen Gegensensibiliserung behoben wer den. Zur Hochverdünnung enthält die Ausgangslösung 2 ml Grundsubstanz auf 10 ml physiologischer Kochsalzlösung. Davon werden drei Verdünnungsstufen hergestellt. 0,2 ml der Ausgangslösung werden mit 10 ml isotonischer Lösung ver mischt und von dieser letzteren Lösung wieder 0,2 ml mit 10 ml Lösung verdünnt. Eine parenterale Vakzionation beginnt mit der höchsten Verdünnung, wobei während einiger Tage je drei bis vier Impfquadeln gesetzt werden. Danach erfolgt ein Übergang auf subkuntane Injektionen unter allmählicher Steigerung der Injektionsmenge auf jeweils 0,5 bis 1 ml. Nach einer Serie von 5 bis 6 Injektionen erfolgt ein Übergang auf die nächst höhere Konzentration. Die Verab reichung kann jeden dritten Tag stattfinden, wobei die ersten 12 bis 15 Injektionen keinen größeren Abstand als drei Tage aufweisen sollen, da es sonst zu einer Umstimmung der Immuntoleranz kommen könnte und die Reaktionslage dann einer Hyposensibilisierung gleicht. Bei möglichen, aber äußerst seltenen Hautreaktionen kann auch auf eine höhere Verdünnung zurückgegriffen werden. Die Vakzine ist nach sechs Monaten nicht mehr zu gebrauchen. Alle Impffläschchen sind kühl, z. B. bei 5-6°C aufzubewahren.b) To achieve an anti-antibody reaction, a Vaccination in high dilution, similar to that of Dr. Karl Moreurer developed "mutual sensitization". The reasoning knowing for this procedure results from a number scientific work, according to which in cancer patients tumor-active cytotoxic T cells and antibodies could be shown, but no evidence of a tumor defense were determined. There are serious findings nisse that the tolerance development against tumor cells by Expression of certain peptides by coupling to HLA molecules come from the cell interior to the cell surface. To this In this way, cytotoxic T lymphocytes are deceived or blocked. By triggering a corresponding reaction the aforementioned masking by an anti-idiotype antibody in the form of a vaccinal counter-sensitization the. The starting solution contains 2 ml for high dilution Base substance on 10 ml of physiological saline. Three stages of dilution are produced. 0.2 ml of Starting solution are mixed with 10 ml isotonic solution mixes and again 0.2 ml of this latter solution Diluted 10 ml solution. Parenteral vaccionation begins with the highest dilution, whereby for a few days each three to four vaccination squares are placed. After that is done a transition to subcutaneous injections under gradual Increase the injection quantity to 0.5 to 1 ml each. After a series of 5 to 6 injections, a Transition to the next higher concentration. The Adm Submission can take place every third day, with the first 12 to 15 injections no greater distance than should have three days, otherwise there will be a change of heart immune tolerance and then the reaction situation is like hyposensitization. With possible, however extremely rare skin reactions can also lead to a higher one Dilution can be used. The vaccine is after six months out of use. All vaccine vials are cool, e.g. B. store at 5-6 ° C.
Nach 7 Wochen wird die Impfung mit der Vakzine III begonnen. Es werden 1 ml subkuntan in Abständen von 14 Tagen verab reicht, wobei der Fläschcheninhalt für 5 Impfungen reicht. Sichtbare Reaktionen sind, da es sich bei der Vakzine III um ein Eigenantigen handelt, nicht zu erwarten. Vaccination III is started after 7 weeks. 1 ml is administered subcutaneously at intervals of 14 days enough, the vial content is sufficient for 5 vaccinations. Visible reactions are because vaccine III is a self-antigen, not to be expected.
Es werden Vakzine I und II gemäß dem Beispiel 1 hergestellt und angewendet. Anstelle der Vakzine III nach dem Beispiel I wird eine Vakzine IIIa, wie in der Folge beschrieben, hergestellt und angewendet: Vaccines I and II are produced and used in accordance with Example 1. Instead of the vaccine III according to Example I, a vaccine IIIa, as in the following described, manufactured and applied:
Von einem nüchternen Patienten wurden 10 cm3 Blut aus der Vene abgenommen. 2 cm3 davon werden mit 4 cm3 Aqua ad injec tionem gemischt und gut geschüttelt, so daß Hämolyse (Plat zen der Blutzellen) auftritt.10 cm 3 of blood was taken from the vein from a fasting patient. 2 cm 3 of it are mixed with 4 cm 3 of aqua ad injection and shaken well so that hemolysis (blood cell rupture) occurs.
Das so gewonnene Hämolysat wird drei Tage bei 37°C im Brut schrank inkubiert.The hemolysate obtained in this way is incubated for three days at 37 ° C incubated in the cabinet.
Die restlichen 8 cm3 Blut werden zur Gewinnung von Serum ver wendet. 2 ml dieses Serums wird in Fläschchen abgefüllt und ebenfalls inkubiert.The remaining 8 cm 3 of blood are used to collect serum. 2 ml of this serum is filled into vials and also incubated.
Nach drei Tagen wird das Hämolysat zentrifugiert, durch ein Filter mit der Porengröße < 0,3 Nanometer steril filtriert und nach mikroskopischer Kontrolle, um das Vorhandensein von Zellen sicher ausschließen zu können, werden 2 ml des fil trierten Hämolysates in das Serum als homologes Nährmedium eingebracht.After three days, the hemolysate is centrifuged through a Filters with a pore size of <0.3 nanometers are sterile filtered and after microscopic inspection to check for the presence of To be able to exclude cells safely, 2 ml of the fil hemolysates entered the serum as a homologous nutrient medium brought in.
Das Hämolysat erscheint bei der mikroskopischen Nachkontrolle im Phasenkontrastverfahren zellfrei, zeigt aber bei der Be trachtung mittels Dunkelfeld-Technik ein ganz anderes Bild. Es zeigen sich in großer Anzahl virusähnliche Kleinstformen an der Grenze der mikroskopischen Sichtbarkeit. Dabei han delt es sich offensichtlich um Vorstufen von sich später in der Kultur entwickelnden mykoplasmaähnlichen Wuchsformen.The hemolysate appears during the microscopic follow-up inspection cell-free in the phase contrast method, but shows in the case of loading a completely different picture using dark field technology. A large number of virus-like tiny forms can be seen at the limit of microscopic visibility. Here han it is obviously a preliminary stage of itself later the mycoplasma-like growth forms developing in culture.
Die erwähnte Mischung aus 2 cm3 Serum und 2 cm3 Hämolysat bleibt für drei Tage im Brutschrank, wobei ein Teil dieser Kultur mit sterilem Paraffinöl überschichtet wird, um auch Formen zu züchten, die nur im anaeroben Milieu gedeihen. Schon nach wenigen Stunden wachsen jene schon besprochenen Mikroorganismen, die im Phasenkontrastverfahren als myko plasmaähnliche Körper, also eindeutig als Erreger zu erken nen sind, die aus der Blutaufbereitung entstanden sind.The mixture of 2 cm 3 serum and 2 cm 3 hemolysate mentioned remains in the incubator for three days, a part of this culture being covered with sterile paraffin oil in order to grow forms which only thrive in the anaerobic environment. After just a few hours, the microorganisms already discussed that are to be recognized in the phase contrast process as myco plasma-like bodies, that is to say clearly as pathogens, that have arisen from the blood preparation.
Gewöhnlich befindet sich die Kulter nach Ablauf von drei Tagen auf dem Höhepunkt der Entwicklung. Es werden dann die aerobe und die anaerobe Kultur zusammengeführt, der Über stand verworfen und der Bodensatz mit 5 cm3 physiologischer "Kochsalzlösung" aufgefüllt. Es ist auch möglich, die beschrie bene Kultur durch Überimpfen des Bodensatzes in frische wie der aus dem Serum erzeugte Nährlösung ein- oder mehrmals zu wiederholen, wobei auch hier aerobe und anaerobe Bedingungen eingehalten werden. Die schließlich erhaltene Suspension des Bodensatzes in physiologischer Kochsalzlösung wird für die Verwendung als spezifisches Immunogen (hinsichtlich der nyko plasmaähnlichen Körper) und als unspezifisches Immunogen (hin sichtlich der veränderten Zytoplasmafraktion) zwei Stunden lang bei 70°C inaktiviert. Schließlich werden aus dieser Sus pension sechs Verdünnungsstufen für die parenterale Applika tion und nach den Regeln der Homöopathie sieben Potenzierun gen für die enterale Verabreichung hergestellt.The cult is usually at its peak after three days. The aerobic and anaerobic cultures are then brought together, the supernatant is discarded and the sediment is filled with 5 cm 3 of physiological “saline solution”. It is also possible to repeat the described culture one or more times by inoculating the sediment in fresh nutrient solution such as the nutrient solution produced from the serum, aerobic and anaerobic conditions also being maintained here. The suspension of the sediment finally obtained in physiological saline is inactivated for two hours at 70 ° C. for use as a specific immunogen (with regard to the nyko plasma-like bodies) and as a non-specific immunogen (with regard to the changed cytoplasmic fraction). Finally, six levels of dilution for parenteral administration and, according to the rules of homeopathy, seven potentizations for enteral administration are produced from this suspension.
Um die immunologisch relevanten Rezeptoren aller drei Keim blätter erfassen zu können, wird bei einer möglichen Art der Anwendung die Vakzinebehandlung sowohl enteral als auch par enteral durchgeführt. Es wird mit der höchsten Stufe begon nen. Für die parenterale Behandlung erfolgt die Applikation subcutan und intracutan. Als Dosis wird für die erste Injek tion 1/2 ml der "Stärke 6" empfohlen. Nach einer Woche kann auf 1 ml gesteigert werden. Wird diese Dosis gut vertragen, kann im wöchentlichen Abstand rasch auf eine Injektion der "Stärke 3" übergegangen werden. Ab "Stärke 3" sollte nur mehr alle drei Wochen 1 ml subcutan gegeben werden.To the immunologically relevant receptors of all three germs To be able to record sheets is possible with a possible type of Application of vaccine treatment both enterally and par performed enterally. It starts with the highest level nen. The application is carried out for parenteral treatment subcutaneously and intracutaneously. The dose is given for the first injection tion 1/2 ml of "strength 6" recommended. After a week you can be increased to 1 ml. If this dose is well tolerated, can be promptly injected at weekly intervals "Strength 3" to be transferred. From "strength 3" should only more 1 ml subcutaneously every three weeks.
Gleichzeitig wird vom Patienten die Einnahme der homöopa thisch aufbereiteten Potenzierungen vorgenommen. Dabei wird mit der höchsten Potenzierung und 3 × 5 Tropfen täglich be gonnen. Über den Verdauungstrakt wird das inmunologische Substrat der Abwehr, wie der Waldeyer'sche Rachenring und die Peyer'schen Plaques angesprochen.At the same time, the patient stops taking homeopathy prepared potentizations. Doing so with the highest potentiation and 3 × 5 drops daily fine. This becomes immunological via the digestive tract Defense substrate, like Waldeyer's throat ring and addressed the Peyer plaques.
Störende Nebenerscheinungen konnten bisher nicht beobachtet werden, was auch nicht zu erwarten war, da es sich bei der Aufbereitung bzw. Vakzine um Eigenantigen handelt. So far, disturbing side effects have not been observed , which was also not to be expected, since it was the Preparation or vaccine is self-antigen.
Eine Erfolgsbilanz auf dem Gebiet der Tumorvakzination kann wegen der zu geringen Fallzahl derzeit nicht in statisti scher Form gegeben werden. Es wurden aber sehr gute Ergeb nisse in Einzelfällen erzielt. Die häufigste Anwendung erfolgte bei Tumoren der Mamma, des Darmes und auch bei Melanoblastomen. Erklärend sei noch festgehalten, daß die eingesetzten, bei der Operation gewonnenen Präparate nicht von vorbestrahlten Tumoren stammen sollen. Bei der Vorbe handlung des Patienten mit Hormonen oder bei vorhergehender Chemotherapie soll zwischen dieser Behandlung und der Ge winnung des Operationspräparates eine Karenzzeit von min destens zwei Monaten liegen.A track record in tumor vaccination can due to the insufficient number of cases currently not in statistics form. But there were very good results nisse achieved in individual cases. The most common application occurred in tumors of the breast, intestine and also in Melanoblastoma. Explanatory note that the preparations used during the operation are not from pre-irradiated tumors. In the past act of the patient with hormones or previous Chemotherapy is said to be between this treatment and the Ge recovery of the surgical preparation a waiting period of min at least two months.
Nebenwirkungen der Vakzination wurden nur bei Anwendung der Vakzine I beobachtet. Sie sind regionaler Art und manchmal von Fieber und Lymphdrüsenschwellung begleitet. Eine ent sprechende Reaktion ist möglich, aber nicht voraussagbar. Es wurde aber beobachtet, daß sie immer bei sogenannten Vollrespondern, deren Metastasen verschwunden waren, auftrat. Side effects of vaccination were only seen when using the Vaccine I observed. They are regional and sometimes accompanied by fever and lymphatic swelling. An ent speaking response is possible, but not predictable. It was observed, however, that they always occur with so-called Full responders whose metastases had disappeared occurred.
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