DE3214287A1 - Tube for carrying out a radioimmunoassay - Google Patents

Tube for carrying out a radioimmunoassay

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    • G01N33/538—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody by sorbent column, particles or resin strip, i.e. sorbent materials

Abstract

The tube according to the invention for carrying out a radioimmunoassay has a funnel-like constriction (2) at one end which merges into a suction connection (3). Situated at the start of the constriction (2) is a fine-pored filter (4) or a layer of fine-grain material (4). The fine-pored filter (4) preferably has a retentivity for a mu m particle. The layer of fine-grain material (4) is preferably composed of silica gel, aluminium oxide or glass spheres having a particle diameter of 1 to 100 mu m. Both the fine-pored filter (4) and the layer of fine-grain material (4) are preferably supported by two frit plates (5, 6). The tube according to the invention is preferably composed of plastic and is dimensioned in such a way that it can be introduced into a standard well scintillation detector. <IMAGE>

Description

Röhrchen zur Durchführung eines Radioimmunoassa@sTubes for carrying out a radioimmunoassa @ s

Die Erfindung betrifft ein Röhrchen zur Durchführung eines Radioimmunoassays.The invention relates to a tube for carrying out a radioimmunoassay.

Bei der Bestimmung von zahlreichen biologischen Substanzen wird die Radioimmunoassay (RIA)-Methode in großem Umfang eingesetzt. Bei der RIA-Methode reagiert die zu bestimmende Substanz mit einem spezifischen Antikörper.When determining numerous biological substances, the Radioimmunoassay (RIA) method used extensively. With the RIA method the substance to be determined reacts with a specific antibody.

Die gebildeten Antikörper-Antigen- bzw. Antikörper-Hapten-Komplexe werden dann anschließend vom Reaktionsgemisch abgetrennt. Die sogenannte "bound-free"-Trennung, kann auf verschiedene Weise erfolgen. Gewöhnlich werden die gebildeten Antikörper-Komplexe abzentrifugiert. Voraussetzung für die Abtrennung durch Zentrifugieren ist jedoch, daß der Antikörper-Komplex groß genug ist. Daher läßt man den Antikörper entweder mit einem zweiten Antikörper reagieren (Doppelantikörper-Technik) oder bindet den Antikörper chemisch an Partikel mit wenigen um Durchmesser (solid phase RIA).The antibody-antigen or antibody-hapten complexes formed are then subsequently separated from the reaction mixture. The so-called "bound-free" separation, can be done in several ways. Usually the antibody complexes formed are centrifuged off. The prerequisite for separation by centrifugation is, however, that the antibody complex is large enough. Therefore, leave the antibody either react with a second antibody (double antibody technique) or bind the Antibodies chemically attached to particles with a diameter of a few µm (solid phase RIA).

Diese Art der Abtrennung durch Zentrifugieren stellt im Routinebetrieb mit großem Probendurchsatz jedoch einen zeitaufwendigen und umständlichen Arbeitsschritt dar.This type of separation by centrifugation is part of routine operation with a large sample throughput, however, a time-consuming and cumbersome work step represent.

Weiterhin ist es bekannt, die Antikörper-Komplexe mit Hilfe von Membranfiltern mit einem Porendur.chmesser von ca. 1 um abzufiltrieren. Die dazu benötigte Vorrichtung ist jedoch sehr aufwendig und teuer.It is also known that the antibody complexes with the aid of membrane filters with a Porendur.chmesser of approx. 1 um to filter off. The device required for this however, it is very complex and expensive.

Außerdem ist es bekannt, zur Abtrennung der Antigen-Komplexe eine Filtervorrichtung zu verwenden, bei der ein Glasfaserfilter an der Peripherie einer Nutsche fest eingespannt wird, so daß am Rand keine Flüssigkeit vorbeigeht. Diese bekannte Vorrichtung besitzt den Nachteil, daß sie aufgrund ihrer Dimensionen nicht direkt in den Detektor des Radioaktivitätsmeßplatzes eingeführt werden kann.It is also known to separate the antigen complexes a To use a filter device in which a glass fiber filter is attached to the periphery of a Nutsche is firmly clamped so that there is no liquid at the edge passes by. This known device has the disadvantage that, because of its dimensions cannot be introduced directly into the detector of the radioactivity measuring station.

Weiterhin bekannt ist ein Filterscheibenhalter, bei dem die Filterscheibe auf ein Stützsieb gelegt wird. Dieses Stützsieb wird zwischen zwei Metallrohren eingespannt, die durch eine Schraubverbindung zusammengehalten werden.Also known is a filter disc holder in which the filter disc is placed on a support screen. This support screen is placed between two metal pipes clamped, which are held together by a screw connection.

Nachteilig an dieser bekannten Vorrichtung ist, daß sie aus Metall besteht und somit nicht direkt in den Bohrlochszintillationsdetektor eingeführt werden kann. Außerdem müssen für Reihenuntersuchungen mehrere dieser verhältnismäßig teuren Filterscheibenhalter aus Metall eingesetzt werden. Ferner müssen diese Halter vor jeder neuen Verwendung auseinandergenommen, gereinigt, getrocknet und wieder zusammengesetzt werden, was deren Einsatz sehr unwirtschaftlich macht.The disadvantage of this known device is that it is made of metal exists and thus not introduced directly into the borehole scintillation detector can be. In addition, several of these must be proportionate for serial examinations expensive metal filter disc holder can be used. Furthermore, these holders must disassembled, cleaned, dried and reassembled before each new use be put together, which makes their use very uneconomical.

Eine weitere Vorrichtung des Standes der Technik ist eine Filtrierstation für die diskontinuierliche automatische "bound-free"-Trennung. Mit dieser Vorrichtung werden jeweils mehrere Proben gleichzeitig filtriert. Dabei wird ein Filterband über die entsprechenden Absaugvorrichtungen geführt und durch einen Ring auf diese gepreßt. Dann wird die zu filtrierende Lösung automatisch auf das Filterband pipettiert und durch dieses gesaugt. Das Filterband vird danach um ein entsprechendes Stück weitertransportiert, so daß sich der Filtriervorgang wiederholen kann, und dann auf eine Spule aufgewickelt. Dieses Filterband wird anschließend mit Hilfe einer speziellen Auswertestation untersucht.Another prior art device is a filtration station for the discontinuous automatic "bound-free" separation. With this device several samples are filtered at the same time. This is a filter band guided over the appropriate suction devices and through a ring on them pressed. Then the solution to be filtered is automatically pipetted onto the filter belt and sucked through this. The filter tape is then moved around a corresponding piece transported further so that the filtering process can repeat itself, and then wound on a spool. This filter band is then with the help of a special evaluation station examined.

Diese Vorrichtung hat den Nachteil, daß hier wiederum die Auszählung nicht direkt vorgenommen werden kann, sondern das ganze Band aufgerollt und einer Auswertestation zugeführt werden muß, die das Band wieder entrollt und vermißt. Ferner sind für diese bekannten Vorrichtungen sehr hohe Investitionen nötig, die sich nur bei extrem großen Reihenuntersuchungen amortisieren.This device has the disadvantage that here again the count can not be done directly, but rolled up the whole tape and one Evaluation station must be supplied, which unrolls the tape again and measures it. Furthermore, very high investments are necessary for these known devices only pay for themselves with extremely large series examinations.

Somit ist es auch mit dieser bekannten Vorrichtung nicht möglich, die Filterscheibe bzw. das Filterband direkt mit einem üblichen Bohrlochszintillationsdetektor auszuwerten. Dieser übliche Bohrlochszintillationsdetektor ist napfförmig ausgebildet und besitzt eine Tiefe von ungefähr 30 bis 50 mm und eine lichte Weite von etwa 16 bis 18 mm.Thus it is not possible with this known device either the filter disc or the filter belt directly with a conventional borehole scintillation detector to evaluate. This conventional borehole scintillation detector is cup-shaped and has a depth of approximately 30 to 50 mm and a clear width of approximately 16 to 18 mm.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Schaffung eines Röhrchens, das einerseits die "bound-free-Abtrennung der gewünschten Antikörper-Antigen- bzw. Antikörper-Hapten-Komplexe bei Radioimmunoassays auf einfache Weise ermöglicht und andererseits die sofortige Auswertung beispielsweise mit Hilfe eines üblichen Bohrlochszintillationszählers gestattet.The object of the present invention is to create a tube, on the one hand the "bound-free separation of the desired antibody-antigen or Enables antibody-hapten complexes in radioimmunoassays in a simple manner and on the other hand, the immediate evaluation, for example with the help of a conventional borehole scintillation counter allowed.

Gelöst wird diese Aufgabe durch ein Röhrchen, das dadurch gekennzeichnet, ist, daß a) an einem Ende des Röhrchens (1) eine trichterförmige Verengung {2),die in einen Absaugstutzen (3) übergeht, angeordnet ist und b) am Ansatz der trichterförmigen Verengung (2) ein feinporiges Filter (4) oder eine Schicht aus feinkörnigem Material (4) angeordnet ist.This task is solved by a tube, which is characterized by is that a) at one end of the tube (1) a funnel-shaped constriction {2), the merges into a suction nozzle (3), is arranged and b) at the approach of the funnel-shaped Constriction (2) a fine-pored filter (4) or a layer of fine-grain material (4) is arranged.

Das feinporige Filter bzw. die Schicht aus feinkörnigem Material sind vorzugsweise zwischen zwei Trägerplatten angeordnet. Das feinporige Filter besteht vorzugsweise aus Glasfasern, Zellulose oder Kunststoff und besitzt ein Rückhaltevermögen von 1 um. Die Schicht aus feinkörnigem Material besteht vorzugsweise aus Kieselgel, Aluminiumoxid oder Glaskügelchen. Das feinkörnige Mater rial besitzt vorzugsweise einen Partikeldurchmesser von 1 bis 100 um. Die Dicke der Schicht aus feinkörnigem Material beträgt vorzugsweise 1 bis 3 mm.The fine-pored filter or the layer made of fine-grained material preferably arranged between two carrier plates. The fine-pored filter is made preferably made of glass fibers, cellulose or plastic and has a retention capacity of 1 µm. The layer of fine-grained material preferably consists of silica gel, Alumina or glass beads. The fine-grain material preferably has a particle diameter of 1 to 100 µm. The thickness of the layer of fine-grained Material is preferably 1 to 3 mm.

Die Trägerplatten sind vorzugsweise Fritten- oder Siebplatten mit einer Dicke von 0,5 bis 3 mm und einem Porendurchmesser zwischen 10 und 500 um. Vorzugsweise besteht das Röhrchen aus Kunststoff.The carrier plates are preferably frit or sieve plates with a thickness of 0.5 to 3 mm and a pore diameter between 10 and 500 µm. The tube is preferably made of plastic.

Zur Durchführung eines Radioimmunoassays mit dem erfindungsgemäßen Röhrchen können die von der Industrie gelieferten sogenannten Kits verwendet werden, Dazu werden die bereitgestellten Standardreagentien mit der Testflüssigkeit bzw. dem Testserum in dem erfindungsgemäßen Röhrchen vereinigt, durchmischt, je nach Vorschrift für den Kit einige Stunden stehengelassen, anschließend filtriert und ausgezählt.To carry out a radioimmunoassay with the inventive Tubes, the so-called kits supplied by the industry can be used, To do this, the standard reagents provided are mixed with the test liquid or the test serum combined in the tube according to the invention, mixed, depending on According to the instructions for the kit, let it stand for a few hours, then filtered and counted.

Der wesentliche Vorteil des erfindungsgemäßen Röhrchens besteht nun darin, daß alle diese Arbeitsgänge in 1 bzw mit dem Röhrchen vorgenommen werden können, So werden die Lösungen in dem erfindungsgemäßen Röhrchen vereinigt und durchmischt. Das Absaugen bzw. Filtrieren kann einfach mit einer Wasserstrahlpumpe oder einer Schlauchpumpe erfolgen.The main advantage of the tube according to the invention now exists in that all these operations are carried out in 1 or with the tube The solutions are combined and mixed in the tube according to the invention. The suction or filtration can easily be done with a water jet pump or a Peristaltic pump.

Das Röhrchen ist außerdem so dimensioniert, daß es ohne weiteres in den oben beschriebenen üblichen Bohrlochszintillationsdetektor eingeführt werden kann.The tube is also dimensioned so that it can easily be inserted into the conventional downhole scintillation detector described above can be introduced can.

Danach wird das Röhrchen in der Regel nicht wieder verwendet, sondern weggeworfen, da es nur einen geringen Gestehungspreis besitzt.After that, the tube is usually not used again, but rather thrown away because it has a low cost price.

Das erfindungsgemäße Röhrchen ermöglicht somit die vollständige, einfache, schnelle und billige Durchführung eines Radioimmunoassays.The tube according to the invention thus enables the complete, simple, quick and cheap implementation of a radioimmunoassay.

Figur 1 zeigt eine Ausführungsform eines erfindungsgemäßen Röhrchens.Figure 1 shows an embodiment of a tube according to the invention.

Das Röhrchen 1 weist an einem Ende eine trichterförmige Verengung 2 auf, die in einen Absaugstutzen 3 übergeht. Das Röhrchen 1 ist vorzugsweise aus Kunststoff gefertigt. Geeignete Kunststoffe sind z. B.The tube 1 has a funnel-shaped constriction at one end 2, which merges into a suction nozzle 3. The tube 1 is preferably made of Made of plastic. Suitable plastics are, for. B.

Polyäthylen, Polystyrol, Polypropylen oder die üblichen thermoplastischen Kunststoffe.Polyethylene, polystyrene, polypropylene or the usual thermoplastic Plastics.

Am Ansatz der trichterförmigen Verengung 2 ist eine Frittenplatte 5 angebracht, auf der das feinporige Filterscheibchen 4 liegt. Eine weitere Frittenplatte 6 ist auf der anderen Seite des Filterscheibchens 4 angeordnet. Die Frittenplatten 5, 6 besitzen einen solchen Durchmesser, daß sie in das Kunststoffrohr eingepreßt werden können. Durch die trichterförmige Verengung 2 werden die Frittenplatten 5, 6 festgesetzt, so daß sie dicht an der Röhrchenwandung anliegen.At the approach of the funnel-shaped constriction 2 is a frit plate 5 attached, on which the fine-pored filter disc 4 lies. Another plate of fries 6 is arranged on the other side of the filter disc 4. The frit plates 5, 6 have such a diameter that they are pressed into the plastic pipe can be. Through the funnel-shaped constriction 2, the frit plates 5, 6 set so that they lie tightly against the tube wall.

Das zwischen den Frittenplatten 5, 6 eingelegte Filterscheibchen 4 wird durch die Frittenplatten 5, 6 fest und dicht an die Röhrchenwandung gepreßt, so daß die Flüssigkeit nicht am Rande des Filterscheibchens 4 vorbeifließen kann.The filter disc 4 inserted between the frit plates 5, 6 is pressed firmly and tightly against the tube wall by the frit plates 5, 6, so that the liquid cannot flow past the edge of the filter disc 4.

Zwischen den Fri+annplatten 5, 6 kann auch eine Schicht (oder Schichten) aus feinkörnigem Material 4 angeordnet sein. Das feinkörnige Material besteht zweckmäßigerweise aus Kieselgel, Aluminiumoxid oder Glaskugelchen mit einem Partikeldurchmesser von 1 bis 100 um. Die Schicht besitzt eine Dicke von zweckmäßigerweise 1 bis 3 mm; sie kann jedoch auch dünner bzw. dicker sein.A layer (or layers) can also be placed between the Fri + ann plates 5, 6 be arranged from fine-grained material 4. The fine-grained material is expediently made made of silica gel, aluminum oxide or glass spheres with a particle diameter of 1 to 100 µm. The layer is expediently 1 to 3 mm thick; she however, it can also be thinner or thicker.

Die als Filterscheibchen verwendbaren Filter sind standardisiert und typisiert und können in verschiedenen Porenweiten geliefert werden. Das Filterscheibchen 4 besteht vorzugsweise aus Glasfasern, Zellulose oder Kunststoff und besitzt ein Rückhaltevermögen für 1 pm-Partikel.The filters that can be used as filter discs are standardized and typed and can be delivered in different pore sizes. The filter disc 4 is preferably made of glass fibers, cellulose or plastic and has a Retention for 1 pm particles.

Die Frittenplatten 5, 6 gewährleisten die entsprechende mechanische Festigkeit, während das dazwischenliegende Filterscheibchen 4 oder die Schicht aus feinkörnigem Material 4 zur Abtrennung der nur wenige pm großen Antikörper-Komplexe dienen.The frit plates 5, 6 ensure the corresponding mechanical Strength, while the intermediate filter disc 4 or the layer of fine-grained material 4 for the separation of the antibody complexes, which are only a few μm in size to serve.

Das Röhrchen 1 kann außerdem an einem Ende einen erweiterten Einfüllstutzen 8 besitzen und am Absaugstutzen 3 durch eine Verschlußkappe 7 verschlossen werden.The tube 1 can also have an enlarged filler neck at one end 8 and are closed by a cap 7 on the suction nozzle 3.

In de#r einfachsten Ausführungsform ist das Teströhrchen im Bereich der Verengung 2 nur mit dem bereits beschriebenen Filtermaterial gefüllt, d. h. die Trägerplatten 5, 6 fehlen in diesem Falle. In einer anderen Ausführungsform liegt das Filter auf einer der oben beschriebenen Fritten- oder Siebplatten ohne Deckplatte. Natürlich kann das Röhrchen auch rechteckigen oder polygonalen Querschnitt besitzen.In the simplest embodiment, the test tube is in the area the constriction 2 is only filled with the filter material already described, d. H. the carrier plates 5, 6 are missing in this case. In another embodiment if the filter is on one of the frit or sieve plates described above without Cover plate. Of course, the tube can also have a rectangular or polygonal cross-section own.

Zur Durchführung eines Radioimmunoassays mit dem erfindungsgemäßen Röhrchen vermischt man die Reagentien im Röhrchen. Nach beendeter Reaktion wird an den Absaugstutzen 3 beispielsweise eine Wasserstrahlpumpe oder eine Schlauchpumpe angeschlossen, die die im Röhrchen 1 befindliche Flüssigkeit durch das feinporige Filterscheibchen 4 oder die Schicht aus feinkörnigem Material 4 und durch die Frittenplatten 5, 6 saugt. Dabei werden die Antikörper-Antigen- bzw. Antikörper-Hapten-Komplexe durch das feinporige Filterscheibchen 4 oder die Schicht aus feinkörnigem Material 4 zurückgehalten. Das trockengesaugte Röhrchen wird dann unmittelbar in den Bohrlochszintillationsdetektor eingeführt und vermessen.To carry out a radioimmunoassay with the inventive Tube, mix the reagents in the tube. When the reaction is complete on the suction nozzle 3, for example, a water jet pump or a hose pump connected, the liquid in the tube 1 through the fine-pored Filter disc 4 or the layer of fine-grained material 4 and through the frit plates 5, 6 sucks. The antibody-antigen or antibody-hapten complexes through the fine-pored filter disc 4 or the layer of fine-grained material 4 withheld. The tube, which has been sucked dry, is then put directly into the borehole scintillation detector introduced and measured.

In der Regel werden die Filterröhrchen nach einmaligem Gebrauch verworfen.As a rule, the filter tubes are discarded after a single use.

Claims (8)

P a t e n t a n s p r ü c h e Röhrchen zur Durchführung eines Radioimmunoassays, dadurch gekennzeichnet, daß a) an einem Ende des Röhrchens (1) eine trichterförmige Verengung (2),die in einen Absaugstutzen (3) übergeht, angeordnet ist und b) am Ansatz der trichterförmigen Verengung (2) ein feinporiges Filter (4) oder eine Schicht aus feinkörnigem Material (4) angeordnet ist. P a t e n t a n s p r ü c h e tubes for performing a radioimmunoassay, characterized in that a) at one end of the tube (1) a funnel-shaped Constriction (2), which merges into a suction nozzle (3), is arranged and b) on Approach the funnel-shaped constriction (2) a fine-pored filter (4) or a layer is arranged from fine-grain material (4). 2. Röhrchen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Filter (4) oder die Schicht aus feinkörnigem Material (4) zwischen zwei Trägerplatten (5, 6) angeordnet ist. 2. Tube according to claim 1, characterized in that the filter (4) or the layer of fine-grained material (4) between two carrier plates (5, 6) is arranged. 3. Röhrchen nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Trägerplatten (5, 6) Fritten- oder Sieb platten sind. 3. Tube according to claim 2, characterized in that the carrier plates (5, 6) Frit or sieve plates are. 4. Röhrchen nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das Röhrchen 1;#s Kunststoff besteht. 4. Tube according to one of the preceding claims, characterized in that that the tube 1; #s is made of plastic. 5. Röhrchen nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß das feinporige Filter (4) aus Glasfasern, Zellulose oder Kunststoff besteht und ein Rückhaltevermögen von 1 um besitzt.5. Tube according to one of the preceding claims, characterized in that that the fine-pored filter (4) consists of glass fibers, cellulose or plastic and has a retention of 1 µm. 6. Röhrchen nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Schicht aus feinkörnigem Material (4) aus Kieselgel, Aluminiumoxid oder Glaskügelchen mit einem Durchmesser von 1 bis 100 um besteht.6. Tube according to one of claims 1 to 4, characterized in that that the layer of fine-grained material (4) made of silica gel, aluminum oxide or Consists of glass beads with a diameter of 1 to 100 µm. 7. Röhrchen nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Schicht aus feinkörnigem Material (4) 1 bis 3 mm dick ist.7. Tube according to claim 6, characterized in that the layer made of fine-grained material (4) 1 to 3 mm thick. 8. Röhrchen nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Frittenplatten (5,6) 0,5 bis 3 mm dick sind und einen Porendurchmesser von 10 bis 500 um besitzen.8. Tube according to one of the preceding claims, characterized in that that the frit plates (5,6) are 0.5 to 3 mm thick and have a pore diameter of 10 to 500 µm.
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